KR20080110987A - 항-ｅｇｆｒ 및 항-ｈｅｒ２ 항체를 이용하는 조합 요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 암치료를 위한 특히 고수준의 EGFR 유형 및 저수준의 HER2 를 발현하는 암에 적절한 항-EGFR 항체 및 항-Her2 항체의 조합된 용도에 관한 것이다. 본 발명은 특히 EGF 수용체로 지향되는 모노클로날 항체 '마투주맙'(hmAB 425, EMD 72000)과 조합된 경우 그의 효능이 생체내에서 유의하게 증가될 수 있는, HER2 수용체로 지향되는 모노클로날 항체 '트라스투주맙'(HERCEPTIN®)을 언급한다. 상기 조합 치료는 상기 수용체 프로필을 지닌 암, 바람직하게는 췌장암으로 고생하는 환자에게 적절하다.

Description

항-ＥＧＦＲ 및 항-ＨＥＲ２ 항체를 이용하는 조합 요법{COMBINATION THERAPY USING ANTI-EGFR AND ANTI-HER2 ANTIBODIES}

본 발명은 암치료를 위한 항-EGFR(ErbB1) 항체 및 항-Her2(ErbB2) 항체의 조합된 용도에 관한 것이다. 본 발명은 더욱이 상기 항체에 의한 개체내 종양의 치료에 관한 것으로서, 여기서 상기 종양 세포는 고수준의 EGFR 유형 및 저수준 또는 유의하지 않은 수준의 HER2 를 발현한다. 특히, 본 발명은 HER2 수용체로 지향되는 모노클로날 항체 "트라스투주맙"(HERCEPTIN®) 및 EGF 수용체로 지향되는 "마투주맙"(hmAb 425, EMD 72000), 또는 또다른 항-EGFR 항체를 이용하는 조합 치료를 언급한다. 상기 조합 치료는 바람직하게는, 그의 조직이 HER2 를 과발현하거나 HER2 를 적은 양으로 발현하지는 않으나, EGFR 은 과발현하는, 암으로 고생하는 환자에게 적합하다.

수용체 티로신 키나아제(RTK) 수퍼패밀리의 서브클래스 I 은 ErbB 수용체들로 이루어지고 다음 4 개의 멤버를 포함한다: EGFR/ErbB1, HER2/ErbB2, ErbB3 및 ErbB4. 모든 멤버가 세포외 리간드-결합 영역, 단일막-편재 영역 및 세포질 티로신-키나아제-함유 도메인을 갖는다. 티로신 키나아제는 단백질 기질 내에서 아데노신 트리포스페이트의 말단 포스페이트를 티로신 잔기로 전이시키는 것을 촉 진하는 효소의 클래스이다.

ErbB 수용체는 상피, 중간엽 및 신경세포 기원의 다양한 조직 내에서 발현된다. 정상 조건하에서 ErbB 수용체의 활성화는, 성장 인자의 EGF 패밀리의 멤버인 그의 리간드의 공간적 및 시간적 발현에 의해 제어된다. ErbB 수용체에 결합된 리간드는 수용체 동형- 및 이형이합체의 형성 및 내재성 키나아제 도메인의 활성화를 유도하여, 세포질 트레일 내에서 특정 티로신 키나아제 잔기 상의 인산화를 초래한다. 상기 인산화된 잔기는, 그의 동원이 세포내 신호전달 경로의 활성화를 유도하는, 다양한 단백질에 대한 도킹 부위로서의 역할을 한다.

EGFR 및 HER2 는 세포 증식 및 분화를 조절하는 데 필수적인 역할을 하는 것으로 공지되었다. 그들은 세포외 성장 인자가 결합하면 다른 HER 수용체와 함께 동형- 및/또는 이형이합체로 조립되는 강한 경향성을 갖고, 이는 다양한 형태의 신호 전달 경로 활성화를 초래하여, 세포자멸, 생존, 또는 세포 증식을 유도한다. 점증하는 증거는 수용체 발현 또는 수용체 과발현 뿐만 아니라 HER 수용체 사이의 의사소통도 또한 종양 행태에 중대한 역할을 함을 시사한다(Kumagai et al., 2001, PNAS 98, 5526). 특히, 수용체-특이적 리간드의, EGFR 의 세포막외 도메인에 대한 결합은 흔히 바람직한 이형이합체화 상대로서 HER2 의 동원을 초래한다(예 Klapper et al., 1999, PNAS 96, 4995). HER2 는 공지된 특이적 리간드에 결합하지 않는 유일한 HER 패밀리 멤버이므로, 신호 전달자로서의 그의 주요 생물학적 기능은 EGFR 또는 다른 HER 수용체와의 이형이합체성 수용체 복합체 형성으로부터 기인하는 것으로 보인다(예 Konecny et al., 2006, Cancer Res. 96, 1630).

최근의 연구(J. Schlessinger, 2002, Cell 110, 669)는 수용체 이합체화가, 인접 수용체로부터 튀어나온 루프가 수용체 이합체화 및 활성화를 매개하는, 수용체-수용체 상호작용에 의해 매개됨을 보여준다. 수용체 이합체화는 내재성 효소 활성의 자극 및, 티로신 잔기 상의 성장 인자 수용체의 자가-인산화에 필수적이다.

수용체 단백질 티로신 키나아제가 동형- 및 이형이합체화를 둘다 겪을 수 있음이 주목되어야 하는데, 여기서 동형이합체성 수용체 조합은 상응하는 이형이합체성 조합보다 덜 분열촉진성이고 형질전환성(신호전달의 개시가 없거나 약한)이다. ErbB2 를 함유하는 이형이합체가 가장 효력있는 복합체이다(Yarden and Sliwkowski, 2001, Nature Reviews, Molecular cell Biology, Volume 2, 127-137; Tzahar and Yarden, 1998, BBA 1377, M25-M37).

하기 두가지 중요한 유형의 ErbB 억제제가 임상적으로 이용된다: EGFR 또는 ErbB2 의 세포외 도메인으로 지향되는 키메라, 인간화 또는 완전한 인간 항체, 및 수용체의 티로신-키나아제 도메인 내에서 ATP 와 경쟁하는 작은-분자 티로신-키나아제 억제제(TKIs).

상기 ErbB(HER) 패밀리의 두 멤버, EGFR 및 HER2 에 대한 높은 친화도로 결합하는 mAbs 결합의 이용은, 따라서 수용체 이합체화를 억제하는 잠재력을 갖는 신규한 암 치료 전략의 개발에 합리적으로 보인다. 그러나, 지금까지는 두 개의 mAbs 각각이 암 치료에서 개별적으로 다양한 화학치료 약물들과 결합하거나(Slamon et al., 2001, New Engl. J. Med 344, 783; Baselga et al., 2000, J Clin Oncol. 18, 904) 더 최근에는 티로신 키나아제 수용체 억제 성질을 갖는 상이한 약물들과 연합하여(예 Normanno et al., 2002, Ann Oncol 13, 65) 이용되어 왔다. 작은 티로신 키나아제 억제제 분자의 작용은, 그러나, 고분자량 항체 분자의 결합에 의해 유도되는 잠재적 생물학적 활성과 비교될 수 없다.

개별적 항-ErbB/HER 수용체 mAbs 의 항-종양 활성의 메카니즘이 완전히 이해되지는 않는다. 마우스 KO 에서 Fc 수용체에 대한 일련의 실험 결과들은 대부분의 항-종양 효과가 항체 의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 메카니즘에 의한 효과기 NK 세포의 동원으로 인한 것임을 강하게 시사한다. 그러나, 항-ErbB/HER 수용체 mAbs 에 의해 종양 세포 상에 유도된 수용체 인산화 및 수용체 내입의 억제의 증거는 수용체를 통해 변환된 세포자멸 또는 세포증식억제 신호를 뒷받침한다(예 Friedman et al., 2005, PNAS 102, 1915).

몇몇 항-HER/ErbB 항체들은 임상 연구 중이며, 이미 승인되어 시판 중인 것은, 예를 들면 마투주맙, 세투시맙, 파니투무맙 및 트라스투주맙이다.

둘다 EGF 수용체로 지향되는, 마투주맙(hMAb 425, US 5,558,864; EP 0531 472) 및 키메라 모노클로날 항체 225(cMAb 225)로도 칭해지는, 인간화 모노클로날 항체 425 가 임상 시험에서 그 효능을 나타냈다.

c225 항체(세투시맙, ERBITUX®)는 EGF-매개 종양 세포 성장을 시험관내 억제하고 인간 직장결장 종양을 생체내 억제하는 것으로 증명되었고, 2003 년도에 표시된 승인을 받았다. 일반적인 모든 항-EGFR 항체 뿐만 아니라 상기 항체도, 무엇보다도, 이종이식편 마우스 모델(예 EP 0667165)에서 인간 종양을 생체내 근절 시키기 위한 특정 화학치료적 제제(즉, 독소루비신, 아드리아마이신, 탁솔, 및 시스플라틴)와 시너지적으로 작용하는 것으로 보인다. 더욱이, 항-EGFR 항체 c225 와 제 2 항-EGFR 항체 마투주맙의 조합이 시험관내 모델에서 시너지 효과를 나타냄이 밝혀질 수 있었고, 이는 동일한 수용체로 지향되는 이들 두 항체가 EGFR 의 상이한 에피토프에 결합함을 지시한다(WO 2004/032960).

HER2/ErbB2 로 지향되는 마우스 항체 4D5 는 또한 ErbB2-발현 유방 종양 세포주를 TNFα의 세포독성 효과에 대해 감작화하는 것으로 밝혀졌다(US 5,677,171). huMAb4D5-8, rhuMAb HER2, 트라스투주맙, 또는 HERCEPTIN® (US 5,821,337)로 칭해지는 재조합 인간화 버전은 광범위한 사전 항-암 치료를 받은 ErbB2-과발현 전이성 유방암 환자에서 임상적으로 활성이다(Baselga et al ., J. Clin . Oncol . 14:737-744 (1996)). HERCEPTIN® 은 그의 종양이 ErbB2 단백질을 과발현하는 전이성 유방암 환자의 치료용으로 1998 년도에 판매 허가를 받았다.

상기와 같이, 유방암종에서 트라스투주맙의 치료 효능이 잘 증명되었음에도 불구하고, 그것은 그의 종양이 HER2 를 과발현하는 30 % 의 유방암 환자에만 엄격히 한정되고 승인되었다. 70 % 의 유방암 환자가 트라스투주맙에 대해 반응하지 않거나 불충분하게 반응하는 이유는, 그들의 개별적 종양이 HER2 를 과발현하지 않거나 충분히 발현하지 않기 때문이다. 다른 암 또는 개별적 암에 있어서, HER2 는 43 - 69 % 범위의 상당한 퍼센트의 케이스에서 과발현되는 반면, EGFR 은 통상 45 - 95 % 범위에서 과발현된다. 그러나, 일반적으로, HER2 발현의 수준은 대부분의 종양에서 대체로 저도이다. 더욱이, EGFR 및 HER2 수용체의 과발 현은 흔히 암호화 유전자 증폭에 의해 야기된다(Hynes et al., 2005, Nat Rev Cancer 5, 341 ). 따라서, 본일의 합의는 HER2 를 저발현하거나 또는 과발현이 없어진 종양에서 항-HER2 mAb 가 비효율적이라는 것이며, 이는 예를 들어 임상에서 대부분의 췌장 암종에 대한 경우이다(예 Saxby et al., 2005, J Surg Pathol 29, 1125).

파니투무맙(VECTIBIX®)은 완전한 인간 항-EGFR 항체이고 최근 미국에서 표시된 승인을 받았다(Schwartz et al., 2002, Proc. Am Soc Clin Oncol 21, 24).

췌장의 샘암종은 치료하기 가장 곤란한 악성종양 중 하나로 남아 있다. 지난 40 년간 발생이 꾸준히 증가해왔고, 조기 진단 및 치료에서의 굉장한 노력에도 불구하고 그 예후는 여전히 비참하다. 진단 시점에, 대부분의 환자(80-90 %)는 국소적 또는 전이성 종양을 갖는다. 완벽한 외과적 절제술에 의하더라도, 5 년 생존률이 20 % 미만이다(Wagner et al., Br J Surg 2004;91: 586-94). 단독 또는 화학요법과 조합된, 수술 및 방사선요법 둘다를 연합시키는 종래의 요법은 국소적 제어 및 완화에서 중등도의 효능을 보이고, 환자의 생존에는 실질적 진전을 보이지 않는다(Azria et al., Bull Cancer 2002;89: 369-79, Azria et al., Pancreas 2002;25: 360-5, Li et al. Lancet 2004;363:1049-57.2-4). 따라서, 인간 췌장 암종 요법에 대한 신규한 접근이 긴급하게 요구된다.

췌장 샘암종 및 이형성증은 빈번히 티로신 키나아제 수용체를 과발현한다는 것이 잘 증명되었다. 췌장암에서 EGFR 의 과발현은 제시된 진행 질환 및 감소된 중앙 생존 기간과 연관된다. 췌장암 예후에서 HER2 발현/과발현의 유의성은 명확하지 않다. 사실, 인간 췌장 표본에서 종양 분화 정도와 HER2 발현의 수준 사이의 어떠한 상관관계도 보고되지 않았다(Dugan et al., Pancreas 1997;14: 229-36). 이는 HER2 의 수준이 그 자체로 분열촉진을 매개하지 않고 이형이합체화가 활성화되어야 한다는 것을 상기함으로써 설명될 수 있다.

EGFR 및 HER2 를 차단하는 개념은 원칙적으로 공지되었고, 고수준의 EGFR 및/또는 HER2 를 발현하는 다른 모델에 적용되었다. 인간 난소암 세포주 OVCAR 420(Ye et al. 1999, Oncogene 18, 731)에 대해 키메라 항-EGFR 항체 mAb c225(세투시맙) 및 인간화 항-HER2 항체 4D5(트라스투주맙)를 사용하는, 또는 EGFR-의존성 결장암 세포주(Kuwada et al., Int J Cancer 2004;109: 291-301)에 대해 트라스투주맙 및 mAb 225 의 마우스 변이체를 사용하는, 조합된 치료를 이용할 때, 시험관내 세포 증식의 감소에 대해 시너지 효과가 아닌 부가 효과가 나타났다.

더욱이, 상이한 집단들이 화학적 EGFR 키나아제 억제제 ZD1839(Iressa)를 트라스투주맙(Normanno et al., Ann Oncol 2002;13: 65-72)과 연합함으로써 HER1 및 HER2 를 동시에 공격하는 것에 대해 검토했고, 세포주 SK-BR-3 및 BT-474 내에서 이들 최근 화합물들의 조합이 두 화합물이 개별적으로 이용된 경우보다, 특히 세포자멸의 유도의 면에서, 더 나은 항증식 효과를 유도함을 발견했다.

그러나, 특정 항-ErbB 항체에 의해 표적화되는 EGFR 및 HER2 수용체의, 이들 수용체 중 하나 이상을 저수준으로 발현하는 췌장암과 같은 특정 암 조직에서의, 실제 기능 및 항체 효능에 관하여 입수가능한 정보가 거의 없고, 오늘날까지 어떠한 임상 연구도 상기 종양 내의 상기 두 수용체를 적절한 모노클로날 항체에 의해 동시에 표적화하는 것의 효능을 평가하지 않았다.

상기 두가지 유형의 수용체 중 하나 이상을 저수준으로 발현하는 특정 암에서 효과적인 요법의 결여 및 EGFR 및 HER2 의 영향에 기초하는, 바람직하게는 고도의 EGFR 발현을 나타내고 유의하거나 저수준의 발현은 나타내지 않는 암 특정 모델에서 EGFR 및 HER2 를 동시에 차단하려는 동기가 존재하며, 여기서 상기 발현 양상은 면역세포화학적 분석에 의해 또는 유동세포계수법 분석 기술을 이용함에 의해 평가된다.

발명의 요약

본 발명에 따르면 트라스투주맙과 같은 항-HER2 항체와 마투주맙과 같은 항-EGFR 항체의 조합은 생체내 종양 퇴화 또는 적어도 감소되고/거나 연기된 생체내 종양 성장을 제공하지만, 바람직하게는 유의하지 않거나 저수준의 HER2, 및 바람직하게는 고수준의 EGFR 을 발현하는 암 및 종양 조직에서만 그러함을 알 수 있다. 상기 ErbB 수용체들 사이의 상기 상이한 발현 양상은 췌장암과 같은 많은 암들에서 발견될 수 있다. 특정 종양 조직의 상이한 발현 양상은 또한 개별적 성질일 수 있다. 바꾸어 말하면, 특정 종양은, 상기 종양으로 고생하는 상이한 개체/환자 내의 상기 HER/ErbB 수용체에 관하여 상이한 발현 양상을 전개하는 것이 가능하다.

놀랍게도, 치료되는 암이 EGFR 을 과발현하나 HER2 는 그렇지 않은 경우, 또는 치료되는 암이 HER2 를 발현하지 않거나 유의하게 발현하지 않고(저수준 발현) EGFR 을 상응하는 정상(비-종양) 조직에서보다 더 고수준으로 발현하는 경우, 암 요법에 있어서 트라스투주맙과 같은 항-Her2 항체의 마투주맙과 같은 적절한 항-EGFR 항체와의 조합된 치료가 강하게 시너지적이다. 또한, 사용된 항-HER2 항체가 HER2 이합체화를 억제할 능력이 없거나 유의한 능력은 없지만, 사용된 항-EGFR 항체가 EGFR 이합체화를 유의하게 억제할 능력을 갖는 경우에, 상기 조합 치료의 효능이 시너지적으로 증가한다. 심지어 EGFR 및 HER2, 또는 EGFR 및 EGFR 을 상기와 같은 상이한 에피토프에 의해 차단한다는 주로 공지된 개념의 관점에서도 상기 발견은 신규하고 예견할 수 없다.

개별적 암이 HER2 는 과발현하지 않으나 EGFR 은 과발현하는 경우 상기 조합의 시너지 효과는 매우 독특하다.

예를 들어, 트라스투주맙(Herceptin) 및 마투주맙(EMD72000)의 종양 성장에 대한 본 발명에 따라 기술된 시너지 효과는, 어떤 이론 또는 가설에 구속되지 않으면서, EGFR/HER2 이형이합체화에 대한 각 항체의 상이한 역학적 작용에 의해 설명될 수 있다. 본 발명에 따르면 트라스투주맙, 및 임의의 잠재적인 기능적 유사 항-HER2 항체는, 본 발명에 따라 이합체화를 억제하지 않는 방식으로 도메인 IV 에 결합하는 것으로 생각되지만, 대신 HER2 수용체의 세포내이입 및 그의 세포막으로부터의 소멸을 증진시키는 것으로 보인다.

그와 대조적으로, EMD72000, 및 임의의 잠재적인 기능적 유사 항-EGFR 항체는 EGFR 의 이합체화를 직접적으로 억제하는 것으로 생각된다. Natha et al.(Cancer Res 2004;64: 2343-6)은 트라스투주맙 및, 퍼투주맙으로 불리는 또다른 항-Her2 항체가 시너지적으로 작용함을 발견했다. 퍼투주맙은 HER2 이합체화를 억제하는 것으로 공지되었으므로, 항-EGFR 항체 마투주맙 및 임의의 다른 기능적 유사 항-EGFR 항체는 놀랍게도 본 발명에 따라 EGFR 이합체화에서 유사한 역할을 할 수 있다.

본 발명의 발견들은 상이한 HER/ErbB 수용체들 사이의 의사소통의 중요성을 보여주고 확증한다. HER2 는 HER 패밀리의 다른 멤버들과 함께 협력하여, 그의 이합체화 상대의 신호전달 잠재력을 여러 수준에서 개선하면서, 선호되는 보조-수용체로서 작용하는 것으로 드러났다.

본 발명의 결과에 따르면, 적절한 모노클로날 항체에 의한 EGFR 및 HER2 의 동시 표적화 전략은 특정 필요조건 하에 병적 상태에서 HER2 수용체를 저발현하는 생물 시스템 내에서 시너지 효능을 제공하는 치료적 이익을 가져올 수 있다. 본 발명에 따르면, 적절히 조합된 EGFR/HER2 모노클로날 항체의 영향 및 효능은 그들의 개별적 수용체 발현 뿐만 아니라 세포의 동형- 및/또는 이형이합체화 잠재 능력에도 의존하는 것으로 보인다. 비록 EGFR 및 HER2 또는 EGFR 및 EGFR 을 상이한 에피토프들(상기 참조)에 의해 차단하는 공지된 개념을 바탕으로 고려한다 할지라도 상기 결과는 신규하고 예견할 수 없다.

HER2 를 중등도로 발현하는 두 개의 췌장 암종 라인 및 HER 수용체를 둘다 과발현하는 하나의 난소암종 라인에 대한 두 개의 항-EGFR 및 -HER2 mAbs 의 시너지적 치료 효과에 대한 본 증명의 관점에서, 상기 실험 결과가 췌장 및 다른 유형의 암종의 관리에 영향을 미칠 수 있는 정도가 고려된다. 췌장 암종에 있어서, 상당한 비율의 사례들에서 EGFR 및 HER2 가 둘다 발현되는 것으로 공지되었고(예 Tobita et al., 2003, Int J Mol Med 11, 305), 이들 수용체들의 발현이 이 종양의 개시 및 진행에 관여하는 것으로 밝혀졌다.

따라서, 이 유형의 암(예 Czito et al., 2006, J Clin Oncol 24, 656)에 있어서 가장 진보되고 집중적인 화학- 및 방사선요법의 매우 온건한 결과 및 독성의 관점에서, 두 개의 HER 수용체 중 하나 이상을 저수준으로 발현하는 암종 환자에 있어서 두 개의 항-EGFR 및 항-HER2 mAbs 에 의한 조합된 치료를 고려하는 것이 바람직할 것이다. 항-HER2 mAb 에 있어서, 임상 이익이 수용체를 현저히 과발현하는 종양에 한정된다는 사실이 잘 정립된 반면(Slamon et al., 2001, Semin Oncol 28, 13), 본 실험에 의해, HER2 를 중등도로 발현하는 두 개의 췌장 암종에 대한 특이적 항-HER2 항체와 특이적 항-EGFR 항체의 시너지효과가 증명되었다.

다양한 암종 세포주에서 티로신 키나아제 수용체를 억제하는 작은 분자, 예컨대 EGFR 에 대한 이레사(Iressa)(Normanno et al., 2002, ann Oncol 13, 65) 또는 EGFR 및 HER2 둘다에 대한 이중 키나아제 억제제 라파티닙(lapatinib)(Konecny et al., 2006, Cancer Res 66, 1630)을 이용한 치료가, 항-HER2 mAb 치료와 함께 시너지 효과를 가질 수 있음이 밝혀졌다. 그러나, 시너지 효과는 주로 시험관내에서 오직 HER2 를 과발현하는 표적 암종 라인에 대해서만 증명되었다. 더욱이, 티로신 키나아제 억제 성질을 갖는 작은 분자의 효과가 수용체의 외부 도메인에 결합하는 큰 항체 분자의 효과와 동일하게 여겨질 수는 없다.

수년 동안 여러 단체들이 종양 세포 현탁액에 대한 시험관내 연구를 발표했는데, 이는 두가지 항-EGFR 및 -HER2 mAbs 와의 동시 배양이 하나의 mAb 단독과의 배양 보다(21- 24) 수용체 인산화의 더욱 효율적인 억제 및/또는 수용체의 특이적 내입을 유도했음을 보여준다. 그러나, 그 단체들 중 오직 하나(23)만 제한된 생체내 연구를 수행했으나 두 개의 mAbs 사이의 임의의 시너지효과를 증명하는 데 실패했다.

따라서, 본원에 제시된 결과들은 두 개의 항-EGFR 및 HER2 mAbs 의 시너지 작용에 의한 오랫동안 기대되어온 암 요법의 새로운 개선의 첫번째 생체내 실험적 증명을 나타낸다. 더욱이, 본원에 제시된 결과는 항-HER2 mAb 요법으로 치료될 수 없는 HER2 를 중등도로 발현하는 유방암종 환자가, 종양이 EGFR 을 또한 발현한다고 가정할 때, 두 개의 항-HER/ErbB mAbs 의 시너지적 치료로부터 수혜받을 것임을 시사한다.

상이한 특이성을 갖는 두가지 mAbs 의 시너지 효과에 기초한 세개의 다른 암 치료가 현재 연구 중이다. 첫째로, 항-CD20 및 CD22 mAbs 의 조합에 의한 비호지킨(non-Hodgkin's) 림프종의 치료(Leonard et al., 2005, J Clin Oncol 23, 5044)에 대한 단계 I 임상 시험이 진행중이다. 그러나, 이들 두가지 mAbs 에 의해 인지되는 항원은 매우 상이하고, 본 연구의 목적인 두가지 HER 수용체 항체에 특유한 이형이합체화 성질을 갖지 않는다.

둘째로, 완전히 실험적인 연구는 유방 및 폐 암종 이종이식편 모델(Goetsch et al., 2005, Int J Cancer 113, 316)에서 화학치료적 제제(vinorelbine)와 또는 항-EGFR mAb 와 시너지적 항-종양 효과를 갖는 것으로 보고된 항-인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGF-IR) mAb 를 포함한다. 그러나, IGF-IR 은 HER 수용체 패밀리에 속하지 않고, 잠재적 치료의 측면에서 IGF-IR 의 적용은 HER2 수용체보다 덜 종양 제한적이다.

세번째 실험적 연구는 췌장 암종 이종이식편 모델에서의 항-EGFR 및 항-VEGFR mAb 를 포함한다(Tonra et al., 2006, Clin Cancer Res 12, 2197). 본 연구에 이용된 두가지 mAbs 는 동일한 종양 표적 세포로 지향되지 않는다. 사실, 항-VEGFR mAb 는 내피 세포 상에 발현된 수용체에는 결합하나 췌장 암종 세포 상에서는 그렇지 않다. 따라서 그 연구에서 두가지 mAbs 의 작용 메카니즘은 종양 혈관신생 파라미터에 관계되는 것으로 보이고, 본원에 제시된 시너지적 항-종양 효과의 원인으로 보이는, 동일한 표적 암종 세포 상에 위치한 두가지 HER/ErbB 수용체에 대한 두가지 mAbs 의 결합과 다르다.

요약하면 본 발명은 하기에 관한 것이다:

·항-EGFR 항체 및 항-HER2(ErbB2) 항체 또는 그의 면역학적 유효 조각을 임의로 약학적 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 유효량으로 포함하는 약학 조성물로서, 여기서 상기 항-EGFR 항체는 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙, EMD7-72000)이고 항-HER2 항체는 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙, HERCEPTIN®)이고, 바람직하게는 상기 항체 각각의 인간화 변이체이다.

·상기 항-EGFR 항체가 종양 세포에 결합하고, 상기 EGF 수용체가 중등도로 또는 고도로 발현되거나 과발현되는, 상응하는 약학 조성물.

·상기 항-HER2 항체가 종양 세포에 결합하고, 상기 HER2 수용체 발현이 저도이거나, EGFR 발현보다 저도인, 상응하는 약학적 정의.

·상기 종양 세포가 췌장 종양 세포인, 상응하는 약학 조성물.

·세포독성 제제를 추가로 포함하는, 상응하는 약학 조성물.

·상기 세포독성 제제가 바람직하게는 시스플라틴, 독소루비신, 젬시타빈, 도세탁셀, 파클리탁셀, 블레오마이신 및 이리노테칸으로 이루어진 군에서 선택되는 화학치료적 제제인, 상응하는 약학 조성물.

·상기 세포독성 제제가 제 3 ErbB 수용체 억제제, VEGF 수용체 억제제, 티로신 키나아제 억제제, 단백질 키나아제 A 억제제, 항-혈관형성제 또는 사이토카인인, 상응하는 약학 조성물.

·상기 항체 중 하나 또는 각각이 그의 C-말단에서, 임의로 링커 펩티드를 통해, 생물학적 유효 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에 융합되어 면역접합체, 바람직하게는 면역사이토카인을 형성하는, 상응하는 약학 조성물.

·하기를 포함하는 약학적 키트: (i) 상기와 같은 항-EGFR 항체 또는 항-EGFR 항체 면역접합체 또는 그의 면역학적 유효 부위를 포함하는 제 1 패키지, 및 (ii) 상기와 같은 항-HER2 항체 또는 항-HER2 항체 면역접합체 또는 그의 면역학적 유효 부위를 포함하는 제 2 패키지.

·하기를 포함하는 상응하는 약학적 키트: (iii) 상기와 같은 세포독성 제제를 포함하는 제 3 패키지.

·상기와 같은 약학 조성물의, ErbB 수용체를 발현하는 종양의 치료용 약물의 제조를 위한 용도.

·상기 종양이 HER2 를 과발현하지 않거나 HER2 를 오직 EGFR 보다 저량으로 발현하는, 상기 약학 조성물의 상응하는 용도.

·상기 종양 세포가 EGFR 을 과발현하나 HER2 는 그렇지 않는, 상기 약학 조성물의 상응하는 용도.

·췌장암의 치료를 위한, 상기 약학 조성물의 상응하는 용도.

·기술된 바와 같은 모든 약학 조성물의, 방사선요법 및/또는 화학요법과 조합된 암으로 지향되는 약물의 제조를 위한 용도.

·임의의 항-EGFR 항체 및 임의의 항-HER2 항체를 본 발명의 일반적 관점 및 원칙으로 포함하는 약학 조성물로서, 여기서 상기 항체 단독으로는 EGFR 및 HER2 의 이형이합체화를 억제하지 않으나, 조합으로 주어진 경우에는 그러한다.

·상기 항-EGFR 항체가 EGFR 을 과발현하도록 처리된 종양 세포에 결합하고, 상기 항-Her2 항체가 HER2 를 과발현하지 않거나 HER2 를 상기 EGFR 과발현과 비교하여 저량 또는 중등도의 양으로 발현하도록 처리된 종양 세포에 결합하는, 상응하는 약학 조성물.

·상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)의 군에서 선택되고, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)의 군에서 선택되는, 상응하는 약학 조성물.

·바람직하게는 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)에서 유래된 EGFR 에 결합하는 제 1 항원 결합 부위, 및 바람직하게는 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)에서 유래된 HER2 에 결합하는 제 2 항원 결합 부위를 포함하는 이중특이적 항체.

·항-HER2 항체 및 항-EGFR 항체를 포함하는 약학 조성물의 개체내 암치료용 약물의 제조를 위한 용도로서, 여기서 상기 개체 내 상기 암은 EGFR 및 HER2 를 발현하고, 여기서 HER2 는 저수준 또는 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로 발현된다.

·상기 항-HER2 항체가, 단독으로 주어진 경우, HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않고, 상기 항-EGFR 항체가, 단독으로 주어진 경우, EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는, 상응하는 용도.

·상기 암이 HER2 를 과발현하지 않고/거나 EGFR 을 과발현하지 않는, 상응하는 용도.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)인, 상응하는 용도.

·상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 용도.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 용도.

·상기 암이 췌장암 또는 유방암인, 상응하는 용도.

·상기 항체가 Fab'-(Fab')2 조각과 같은 면역학적 유효 조각인, 상응하는 용도.

·세포독성 제제, 예를 들어 바람직하게는 시스플라틴, 독소루비신, 젬시타빈, 도세탁셀, 파클리탁셀, 블레오마이신 및 이리노테칸, 또는 VEGF 수용체 억제제, 작은 분자 티로신 키나아제 억제제, 항-혈관형성제, 또는 사이토카인으로 이루어진 군에서 선택되는 화학치료적 제제가 추가로 투여되는, 상응하는 용도.

·상기 항체 중 하나 또는 둘다가 바람직하게는 그의 C-말단에서, 임의로 링커 펩티드를 통해, 생물학적 유효 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에 융합됨으로써 면역접합체를 형성하는, 상응하는 용도.

·상기 면역접합체가 면역사이토카인인, 상응하는 용도.

·상기 및 하기와 같은 두가지 항체의 특이성을 갖는 이중특이적 항체를 포함하는, 상응하는 용도.

·항-HER2 및 항-EGFR 항체를 포함하는 약학 조성물의 상기 항-HER2 항체에 의한 개체내 암치료 효능 개선용 약물의 제조를 위한 용도로서, 여기서 상기 개체 내 상기 암은 HER2 를 저수준 또는 상기 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로, EGFR 을 항-EGFR-항체에 유의하게 반응하기에 충분한 수준으로 발현한다.

·상기 항-HER2 항체가, 단독으로 주어진 경우, HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않고, 상기 항-EGFR 항체가, 단독으로 주어진 경우, EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는, 상응하는 용도.

·상기 암 HER2 가 과발현되지 않고 EGFR 이 과발현되는, 상응하는 용도.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 용도.

·상기 암이 췌장암 또는 유방암인, 상응하는 용도.

·개체내에서 HER2 및 EGFR 을 발현하는 암의 치료 방법으로서, 여기서 상기 개체내 상기 암은 HER2 를, 단독으로 개체에 주어진 경우, 항-HER2 항체에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로 발현하고, 상기 방법은, 단독으로 주어진 경우 HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않는 항-HER2 항체, 및 단독으로 주어진 경우 EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 항-EGFR 항체를 개체에게 투여함을 포함한다.

·HER2 가 과발현되지 않고/거나 EGFR 이 과발현되는, 상응하는 방법.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)인, 상응하는 방법.

·상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 방법.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 방법.

·상기 암이 췌장암 또는 유방암인, 상응하는 방법.

·항-HER2 항체를 이용한 HER2 를 발현하고 바람직하게는 EGFR 을 과발현하는 암의 치료 효능 개선 방법으로서, 여기서 상기 암은 HER2 를 과발현하지 않거나 HER2 를 저수준 또는 상기 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로 발현하고; 상기 방법은, 단독으로 주어진 경우 HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않는 항-HER2 항체, 및 단독으로 주어진 경우 EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 항-EGFR 항체를 개체에게 투여함을 포함한다.

·상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고/거나, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인, 상응하는 방법.

·상기 암이 췌장암 또는 유방암인, 상응하는 방법.

상세한 설명

EGFR 및 HER2 수용체 세포 표면 발현:

인간 췌장 암종 BxPC-3 세포에 대한 면역세포화학적 분석은, 인간 암종 난소 세포 SK-OV-3 및 표피 암종 참조 세포 A-431 과 비교하여, 고수준의 EGFR(+++ 으로 분류됨) 그러나 탐지가능하지 않은 수준의 HER2 수용체 발현을 보여주며, 동일한 분석에 의해 각각 HER2 에 대해 +++ 및 EGFR 에 대해 +++ 로 분류된다(도 1).

제 2 췌장암 세포주 MiaPaCa-2 가 또한 HER2 에 대해 음성으로 및 EGFR 에 대해 ++ 로 분류된다.

대조적으로, 더 민감한 유동세포계수법 이용하여(Mimura et al., 2005, Clin Cancer Res 11, 4898), SK-OV-3 세포와 비교하여 중등도의 HER2 의 발현이 BxPC-3 및 MiaPaCa-2 세포 상에서 발견될 수 있다.

BxPC-3 세포에 의한 EGFR 의 과발현이 확인될 수 있으나 참조 A-431 세포보다 약간 저수준에서이다. MiaPaCa-2 는 EGFR 및 HER2 수용체 둘다의 중등도 및 동등한 발현을 보인다. SK-OV-3 은 EGFR 의 중등도 발현 및 HER2 의 고발현을 보인다(도 1).

BxPC-3 종양 세포 상에서 HER2 의 상당한 저발현 수준 및 생체분포 결과에 기초하여, 시험관내 및 생체내 수득된 트라스투주맙의 제한된 종양 활성이 예상될 수 있다. 사실, HER2 의 과발현은 유방암 환자를 트라스투주맙 요법에 대해 평가하는 정립된 진단 툴이고(Slamon et al., 2001, Semin Oncol; 28, 13), 따라서, 오직 면역세포화학적 3+ HER2-종양 발현 환자만이 이 표적화 요법으로부터 수혜받는다.

드문 HER2/neu 과발현은 트라스투주맙이 현재 진료소에서 췌장암 치료를 위해 이용되지 않는 이유를 설명할 수 있다. 연구들은 트라스투주맙의 단일요법이 저 HER2 발현을 나타내는 종양 성장을 늦추는 데 무능함을 확인했다. 상기 연구들에 이용된 트라스투주맙의 투여량이 본 발명에 따른 실험에 이용된 것보다 3 내지 12 배 높음을 유의해야 한다.

두개의 췌장 및 난소암 종 이종이식편에 대한 마투주맙 및/또는 트라스투주맙의 항-종양 활성.

항-EGFR 및 항-HER2 mAbs 의 단독 또는 조합의 치료 효능이 먼저 누드 마우스에서 BxPC-3 이종이식편에 대해 시험되었다. 다양한 크기의 종양 이종이식편에 대한 상이한 형태의 mAb 요법을 평가하기 위해, 첫째는 상대적으로 작은 부피의 종양(77 + 49 mm³, 실험 S)에 대한 및 둘째는 더 큰 종양(503 ± 205 mm³, 실험 L)에 의한, 두 시리즈의 대표적 실험 결과가 분석되었다. 50 ㎍ 의 각각의 항체로 4 주 동안 1 주일에 2 회 처리된 8 마리의 마우스의 군에서 수득된, 실험 S 로부터의 결과(도 2)는, 각각의 항체 단독으로 처리된 군과 비교하여 조합된 항체 군에서 종양 성장의 현저히 더 높은 억제를 보여준다(P = 0.002). 동일한 실험 결과의 추가적 분석은 처리 마지막의 종양 증가 인자가 항-EGFR 및 항-HER2 mAb 단독으로 처리된 마우스에서 4.9 ± 2.1 및 6.4 ± 4.4 로, 조합된 mAb 군의 0.7 ± 0.5 와 비교하여 현저히 더 높다는 것을 보여준다(표 1, 상부). 더욱이, 오직 조합된 mAb 처리만이 두 개의 완전한 종양 완화를 유도한다. 4 배 더 많은 투여량의 각 mAb(200 ㎍)의 단독 또는 조합으로 처리된 유사한 크기의 BxPC-3 이종이식편에 의한 마우스에 대한 추가적 실험으로부터의 결과는 이전의 결과를 완전히 확증하며, 단일 mAb 처리에 대한 종양 증가 인자가 조합된 mAb 요법과 비교하여 훨씬 높다(표 1, 하부).

처리 마지막에 BxPC-3 이종이식편 부피의 증가 인자
mAb	처리a	증가 인자b	% 종양 없는 마우스
- 50	C M T T+M	8.0 ± 4.0 4.9 ± 2.1 6.4 ± 4.4 0.7 ± 0.5	0 0 0 25(2/8)
- 200	C M T T+M	21.3 ± 7.0 4.3 ± 2.8 5.5 ± 2.1 0.8 ± 0.3	0 0 0 60(3/5)
aC:대조군, M:마투주맙, T:트라스투주맙, T+M:mAbs 둘다. b증가 인자: (처리 마지막의 종양 부피)/(처리 시작에서의 종양 부피)

또한, 처리 마지막에 오직 조합 요법 군에서만 마우스 5 마리 중 3 마리에서 완전한 종양 완화가 관찰되었다. 표 1 에 보고된, 상이한 항체 투여량을 이용한 요법의 비교는 50 ㎍ 의 각 mAb 의 조합이, 4 배 더 많은 투여량의 단일 mAb 로 처리된 마우스에서 수득된 것보다(4.3 및 5.5), 현저히 낮은 종양 증가(0.7+/-0.5)를 유도함을 보여준다. 50 과 200 ㎍ 치료 사이에 탐지가능한 투여량 효과가 관찰될 수 없고, 이는 두 개의 HER 수용체에 결합하는 두 개의 mAbs 의 시너지효과가 항체의 절대량보다 더 중요함을 시사한다. 상기 관찰은 부가 효과보다는 시너지 효과를 명확히 옹호한다. 200 ㎍ 의 각각의 항체로 주사된 6 마리의 마우스로 이루어진 4 개의 군에서 수득된 BxPC-3 종양으로부터의 더 큰 이종이식편으로부터의 결과(실험 L)는, 적용된 카플란-마이에르(Kaplan-Meier) 생존 곡선(도 3A)에서, 종양이 1500 mm³ 부피에 도달하는 중앙 지연이 오직 하나의 mAb 로 처리된 마우스(항-HER2, 30 일, 항-EGFR, 34 일)에서 보다 mAb 조합으로 처리된 마우스(73 일)에서 현저히 더 길다는 것을 보여준다(P = 0.001). 동일한 실험(도 3B)으로부터의 시간 종양 진행 곡선은 3 배 더 큰 종양에 도달하는 시간이 두 개의 단일 mAb 처리에서 보다 조합된 처리 군에서 현저히 더 길다(P<0.001)는 것을 확증한다. 흥미롭게도, 오직 50 ㎍ 의 각각의 mAb 의 조합으로 처리된 큰 종양을 갖는 6 마리의 마우스의 추가적 군에서, 종양이 부피 1500 mm³ 에 도달하는 시간(70 일)이, 200 ㎍ 의 각각의 mAb 단독으로 처리된 군에서의 종양(30 및 34 일)과 비교하여 훨씬 길다(도 3A). 이는 더 큰 종양에 대해서도 두가지 mAb 의 이중 특이성이 mAb 의 절대 투여량보다 더욱 효과적이고, 더 큰 항-종양 효과가 두 개의 mAbs 의 부가 효과보다는 시너지 효과로 인한 것임을 확증한다. 조합된 항-EGFR 및 항-HER2 mAbs 의 종양 성장 억제 성질이, HER2 를 또한 저수준으로 발현하는, 제 2 인간 췌장 암종 라인 MiaPaCa-2 로부터의 이종이식편에 대해 추가로 시험된다. 50 ㎍ 의 각각의 mAb 를 단독 또는 조합으로 2 주에 한 번 주사하는 것이 6 마리의 마우스의 군에서 평균 종양 부피가 64 mm³ ± 5 에 도달했을 때 개시되고 4 주 동안 계속되었다. 종양이 부피 2000 mm³ 에 도달했을 때 동물을 안락사시켰다. 종양이 상기 부피에 도달하는 것에 대해 적용된 생존 곡선은(도 4A), 120 일째에 2000 mm³ 보다 큰 종양이 조합된 항체 군에서 관찰될 수 없는 반면, 단일 mAb 로 처리된 두개의 군으로부터의 마우스 6 마리 중 4 마리가 그 부피에 도달한 종양을 가짐을 보여준다(P = 0.0072). 더욱이, 완전한 종양 완화가 오직 조합된 mAb 요법 군에서만 관찰될 수 있다. 흥미롭게도, 개별 실험에 있어서, 유사한 크기(65 ± 6 mm³)의 MiaPaCa-2 이종이식편들을 오직 25 ㎍ 의 각각의 항체의 조합으로 처리하는 것이 효율적인 항-종양 효과를 갖는 반면, 단일 mAb 주사는 거의 성장 억제 효과를 갖지 않고, 이는 이 종양에 대해서도 또한, 상이한 HER 수용체로 지향되는 두가지 mAbs 에 의한 공격이 중요한 역할을 함을 확증한다. 두 개의 췌장 암종 세포주에 대항하는 것으로 관찰되는 두가지 항-HER 수용체 mAbs 의 조합된 작용의 치료 이점이 또한 또다른 유형의 암종에 대해서도 기능하는지 여부를 증명하기 위해, 단일 및 조합된 mAb 주사 사이의 동일한 비교를 EGF 및 HER-2 수용체를 둘다 과발현하는 것으로 공지된 참조 난소암종 라인 SK-OV-3 에 대해 시험했다. 200 ㎍ 의 항-EGFR 또는 항-HER-2 mAb, 또는 두가지 mAbs 의 조합으로 이루어지는 요법이, 6 마리의 마우스의 4 개의 군(비처리 대조군을 포함함)에서 SK-OV-3 이종이식편이 중간 부피 42 ± 4mm³ 을 가질 때 개시되었다. 예상과 같이, 상기 종양 세포 상의 HER 수용체 둘다의 과발현의 관점에서, 각각의 단일 mAb 의 치료 활성이 항-EGFR 및 항-HER2 로 각각 주사된 마우스의 군에서 1 및 2 의 완전한 완화에 의해 관찰될 수 있다. 그러나, mAbs 둘다의 주사는 세 개의 완전한 완화를 포함하여 모든 마우스에서 명백히 우수한 종양 성장 억제를 제공한다. 종양이 부피 1000 mm³ 에 도달하는 것에 대해 적용된 생존 곡선의 결과(도 4B)는 mAb 조합으로 처리된 모든 6 마리의 마우스의 종양이 120 일의 관찰 기간 동안 1000 mm³ 에 도달하지 않은 한편, 항-EGFR 및 HER2 로 각각 처리된 마우스의 군에 대해 50% 의 마우스가 상기 종양 부피에 도달할 때까지의 지연이 69 일 및 85 일이었음을 보여준다(P = 0.0001). 상기 결과는 인간 난소암종 이종이식편에 대항하는 두가지 항-HER 마우스 mAbs 의 치료적 시너지효과를 확증하고, 이들 두가지 mAbs 의 조합된 주사가 EGF 및 HER2 수용체를 발현하는 많은 유형의 암종의 치료에 유용할 수 있음을 시사한다.

수용체 자가-인산화의 억제.

단독 또는 조합으로 이용되는 마투주맙 또는 트라스투주맙이 시험관내 BxPC-3 및 MiaPaCa-2 세포 상에서 EGFR 및 HER2 의 티로신 키나아제 활성을 억제하는 능력이, 웨스턴 블롯을 농도계측에 의한 인산화 단백질의 정량화와 함께 및 NIH 이미저(imager) 6.3 을 이용한 분석에 의해 평가될 수 있다(도 5). 두 개의 췌장 암종 세포주에 대한 분석이 두가지 mAbs 의 단독 또는 조합과의 48-시간 배양에 이어, EGF 와의 10-분 활성화 후에 비교된다. 양쪽 세포주가 EGFR 및 HER2 수용체에 대해 상대적으로 높은 인산화 기준 선을 나타냈음이 먼저 유의되어야 한다. 예상과 같이, 외인성 EGF 에 의한 처리는 양쪽 세포주에서 EGFR 및 HER2 의 티로신 자가인산화를 고수준으로 유도한다. 흥미롭게도, mAbs 조합과의 배양은 항-HER2 mAb 단독으로 수득되는 것보다 양쪽 세포주에서 HER2 의 인산화의 훨씬 높은 억제를 초래한다. EGFR 에 있어서, 두가지 mAbs 에 의한 인산화 억제는 덜 대조적이다; 그것은 거의 동일하고 각각 MiaPaCa-2 및 BxPC-3 세포 상에서 항-EGFR mAb 단독에 의해 수득되는 것보다 오직 약간 우세하다. 문헌 (22-24) 로부터의 더 광범위한 시험관내 연구 뿐만 아니라 상기 결과도, 본원에 기술된 인간 암종 이종이식편에 대항한 두가지 항-HER 수용체 Mabs 의 현저한 생체내 치료 시너지효과를 설명할 수 있다.

췌장 BxPC-3 세포주 내의 고도의 EGFR 발현에도 불구하고, 마투주맙(EMD72000)은 50 또는 200 ㎍/주사 투여량으로 단독으로 이용된 경우 종양 성장 억제에 대해 효과적이지 않거나 오직 약간 효과적이며, 이는 EGFR 발현과 항-EGFR 항체의 치료 효능 사이의 상관관계의 부재를 확증한다. 이는 마우스가 4 주 동안 1 주일에 2 회 50 ㎍/주사의 EMD72000 으로 처리되는, 제 2 생체내 췌장암 모델(MiaPaca)에 의해 설명될 수 있다. 조합의 항-종양 활성은, 그러나, 단일 성분으로서 단독으로 이용된 항체의 무시해도 좋은 항-종양 활성보다 훨씬 강하다. 감소된 종양 부피 및 시험관내 활성 연구와 관련하여, 조합된 항체의 효과는 BxPC-3 모델에서 명확히 시너지적이며 단일 성분의 효능으로부터 계산되는 단순한 부가 효과가 아니다. 상기 효과는 상기 4-주 치료 기간 동안 특히 현저하며, 이때 조합된 치료 군에서 어떠한 종양 진행도 관찰될 수 없었다. 상기 치료의 유사한 효능이 작은 및 큰 췌장 종양 둘다에서 관찰될 수 있다.

동일 또는 상이한 수용체 상의 항원 구조에 대해 상이한 특이성을 갖는, 모노클로날 항체에 의한 조합된 치료의 원칙이, 본원에서 대표적으로 EGFR 및 HER 2 양성 췌장 종양의 치료에 대해 기술된다. 그러나, 상기 원칙은 췌장암에 한정되지 않고, 동일 또는 유사한 수용체 발현 프로필을 보이는 임의의 다른 암에의 이용에 적용될 수 있다. 달리 지시되지 않으면 본 발명에서 이용된 용어 및 구절은 하기 의미 및 정의를 갖는다. 더욱이, 이들 정의 및 의미는 본 발명을 더욱 상세히 기술하며, 바람직한 구현예가 포함된다.

정의로서, 용어 "과발현되는" 은 본 발명에 따라, 바람직하게는 동일한 조직에서 유래된 정상, 비-종양 세포의 표면 상에서 보다 종양 세포의 표면 상에서, 해당되는 수용체가 더 높은, 바람직하게는 현저히 더 높은 속도 및/또는 양으로 발현됨을 의미한다.

통상, EGFR 및 HER2 는 많은 정상 조직 세포 상에서, 특정 조직 및 표본에 따라, 매우 낮은 속도 내지 낮은 속도로 발현된다. 종양 조직 내 또는 상에서 상기 속도는, 일반적으로, 특히 EGFR 에 관하여 현저히 더 높다. 유방암과 관련하여, 예를 들어, HER2 는 30 % 이상의 환자에서 현저히 과발현되고, EGFR 보다 더 고수준으로 발현된다. 췌장암에 있어서 그 상황은, 일반적으로, 반대이다. 많은 경우에 있어서 그 상황은 또한 처리되는 개체의 유전적 소인에도 의존하는 것으로 보인다. 따라서, 용어 "중등도 발현", "유의한 발현" 등은 상대적 용어이며 특정 상황의 배경에서 이해되어야 한다. 그러나, 일반적으로 본 발명에 따라, 용어 "저발현"은, 달리 특정되지 않으면, 상기와 같은 의미에서 "과발현되는" 이 아님을 의미한다. 용어 "중등도 발현" 또는 "유의한" 발현은, 달리 지시되지 않으면, 더 낮은/중등도 또는 유의한/더 높은 속도로 "과발현되는" 을 의미한다. "유의한" 은 이러한 배경에서 상응하는 종양 세포가 특정 개체의 정상 비-종양 세포보다 수용체를 측정가능하게 더 고량으로 발현하는 것을 의미한다. "수용체" 또는 "수용체 분자" 는 리간드가 결합하여 수용체-리간드 복합체를 형성하는 도메인을 하나 이상 포함하는 가용성 또는 막 결합된/연합된 단백질 또는 글리코단백질이다. 작용제 또는 길항제일 수 있는 리간드를 결합함으로써, 수용체가 활성화되거나 비활성화되고, 경로 신호전달을 개시하거나 차단할 수 있다.

"ErbB 수용체" 는, 이미 상기한 바와 같이, ErbB 수용체 패밀리에 속하는 수용체 단백질 티로신 키나아제이고, EGFR/HER1(ErbB1), HER2(ErbB2), ErbB3 및 ErbB4 수용체 및 앞으로 확인될 이 패밀리의 다른 멤버를 포함한다. ErbB 수용체는 ErbB 리간드에 결합할 수 있는 세포외 도메인; 친지질성 막관통 도메인; 보존 세포내 티로신 키나아제 도메인; 및 인산화될 수 있는 몇개의 티로신 잔기를 포함하는 카르복실-말단 신호전달 도메인을 일반적으로 포함할 것이다. ErbB 수용체는 "선천적 서열" ErbB 수용체 또는 그의 "아미노산 서열 변이체"일 수 있다. 바람직하게는 ErbB 수용체는 선천적 서열 인간 ErbB 수용체이다. 표현 "ErbB1" 및 "HER1" 및 "EGFR" 은 본원에서 호환가능하게 이용되고 인간 HER1 단백질을 언급한다. 표현 "ErbB2" 및 "HER2" 는 본원에서 호환가능하게 이용되고 인간 HER2 단백질을 언급한다. ErbB1 수용체(EGFR)가 본 발명에 따라 바람직하다.

용어 "ErbB 수용체 길항제/억제제" 는 ErbB 수용체와 결합하여 차단 또는 억제하는 생물학적 유효 분자를 언급한다. 이처럼, 수용체를 차단함으로써 길항제는 ErbB 리간드(작용제)의 결합 및 작용제/리간드 수용체 복합체의 활성화를 방지한다. ErbB 길항제는 HER1(ErbB1, EGFR), HER2(ErbB2) 및 ErbB3 및 ErbB4 로 지향될 수 있다.

본 발명의 바람직한 항체는 항-Her1 및 항-Her2 항체이다. 바람직한 항-Her1 항체는 MAb 425, 바람직하게는 인간화 MAb 425(hMAb 425, 마투주맙, EMD 72000, US 5,558,864; EP 0531 472) 및 키메라 MAb 225(세투시맙, ERBITUX®)이다. 가장 바람직한 항-HER2 항체는 Genentech/Roche 에 의해 상품화된 HERCEPTIN® 이다.

용어 "티로신 키나아제 길항제/억제제" 는 본 발명에 따르면 수용체 티로신 키나아제를 포함하는 티로신 키나아제를 억제 또는 차단할 수 있는 천연 또는 합성 제제를 언급한다. 따라서, 상기 용어는 상기와 같은 ErbB 수용체 길항제/억제제를 그자체로 포함한다. 상기 및 하기 항-ErbB 수용체 항체를 제외하고는, 상기 정의 하에서 더욱 바람직한 티로신 키나아제 길항제 제제는 유방암 및 전립선암에 대한 단일-약물 요법에서 효능을 나타낸 화학적 화합물이다. 이 문맥에서 가장 장래성 있는 항-암 제제 중 하나는 제피티닙(IRESSA®, Astra Zeneca)이며, 이는 비소(non-small) 세포성 폐암(NSCLC) 뿐만 아니라 진행 두경부암 환자에서 현저한 치료 효능 및 뛰어난 허용성을 갖는 것으로 보고되었다. 바람직하게는, 상기 화학적 티로신 키나아제 억제제의 투여량은 하루에 1 pg/kg(체중) 내지 1 g/kg(체중)이다. 더욱 바람직하게는, 티로신 키나아제 억제제의 투여량은 하루에 0.01 ㎎/㎏(체중) 내지 100 ㎎/㎏(체중)이다.

본 발명은 언급된 바와 같은 항-HER/ErbB 항체 뿐만 아니라 그의 생물학적 활성 조각 및 하기 면역접합체, 특히 면역사이토카인에 관한 것이다.

불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 완전한 항체가 상이한 "항체 (면역글로불린) 클래스" 로 분류될 수 있다. 완전한 항체의 5 개의 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 이 존재하고, 이들 중 몇몇은 더 나아가 "서브클래스"(동형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2 로 분류될 수 있다. 상이한 클래스의 항체들에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ 로 불린다. 본 발명에 따르면 항체에 대한 바람직한 주요 클래스는 IgG, 더욱 상세히 IgG1 및 IgG2 이다.

본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체" 는 실질적으로 균질한 항체의 집단, 즉, 그 집단을 구성하는 개별적 항체가 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단으로부터 수득된 항체를 언급한다. 모노클로날 항체는 매우 특이적이고, 단일 항원 부위로 지향된다. 더욱이, 상이한 결정기(에피토프)로 지향되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기로 지향된다. 모노클로날 항체의 제조 방법은 Kohler and Milstein(1975, Nature 256, 495)에 의해 및 "Monoclonal Antibody Technology, The Production and Characterization of Rodent and Human Hybridomas" (1985, Burdon et al., Eds, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Volume 13, Elsevier Science Publishers, Amsterdam)에 기술된 하이브리도마 방법을 포함하고, 또는 공지된 재조합 DNA 방법(예, US 4,816,567 참조)에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한, 예를 들면, Clackson et al ., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol . Biol ., 222:58, 1-597(1991) 에 기술된 기술을 이용하여, 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다.

용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종에서 유래된 또는 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 한편, 사슬(들)의 나머지는 또다른 종에서 유래된 또는 또다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 항체, 뿐만 아니라, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 상기 항체의 조각을 의미한다(예: US 4,816,567; Morrison et al., Proc . Nat. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). 키메라 및 인간화 항체의 제조 방법이 또한 당 기술분야에서 공지되었다. 예를 들어, 키메라 항체의 제조 방법은 Boss(Celltech) 및 Cabilly(Genentech)에 의한 특허(US 4,816,397;US 4,816,567)에 기술된 것을 포함한다.

"인간화 항체" 는 비-인간 면역글로불린에서 유래된 최소 서열을 함유하는 비-인간(예, 설치류) 키메라 항체의 형태이다. 대부분의 부위에 대해, 인간화 항체는 수용자의 과가변 영역(CDRs)으로부터의 잔기가 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼 또는 비 인간 영장류의 과가변 영역으로부터의 원하는 특이성, 친화도 및 용량을 갖는 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 골격 영역(FR) 잔기가 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수용자 항체 내에서 또는 공여자 항체 내에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 상기 변형은 항체 성능을 추가로 정제하기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 두개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 과가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 그것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FRs 은 인간 면역글로불린 서열의 그것이다. 인간화 항체는 임의로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 그것의 적어도 일부를 포함할 것이다. 인간화 항체의 제조 방법은, 예를 들면, Winter (US 5,225,539) 및 Boss (Celltech, US 4,816,397)에 의해 기술된다.

"항체 조각" 은 바람직하게는 그의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함하는, 완전한 항체의 일부를 포함한다. 항체 조각의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 Fc 조각, 다이아바디(diabodies), 선형 항체, 단일-사슬 항체 분자; 및 항체 조각(들)로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함한다. "완전한" 항체는 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, CH2 및 CH3 뿐만 아니라 항원-결합 가변 영역을 포함하는 것이다. 바람직하게는, 완전한 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 갖는다. 항체의 파파인 소화는, 각각 단일 항원-결합 부위 및 CL 및 CH1 영역을 포함하는, "Fab" 조각으로 불리는, 두개의 동일한 항원-결합 조각, 및 그의 이름이 용이하게 결정화하는 능력을 반영하는 잔류 "Fc" 조각을 생산한다. 항체의 "Fc" 영역은, 일반적으로, CH2, CH3, 및 IgG1 또는 IgG2 항체 주요 클래스의 경첩 영역을 포함한다. 경첩 영역은 CH1 영역을 CH2-CH3 영역과 조합시키는 약 15 아미노산 잔기의 군이다. 펩신 처리는 두 개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원을 교차-연결할 수 있는 "F(ab')2" 조각을 산출한다. "Fv" 는 완전한 항원-인지 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 조각이다. 상기 영역은 빈틈없이 비-공유적으로 연결된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이합체로 이루어진다. 상기 구조에서 각각의 가변 도메인의 세 개의 과가변 영역(CDRs)이 상호작용하여 VH - VL 2합체의 표면 상의 항원-결합 부위를 결정한다. 집합적으로, 6 개의 과가변 영역은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일한 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 과가변 영역을 오직 3 개를 포함하는 Fv 의 절반) 조차, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도로이지만, 항원을 인지하고 결합하는 능력을 갖는다. "Fab" 조각은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제 1 불변 도메인(CH1)을 함유하고 오직 하나의 항원-결합 부위를 갖는다. "Fab'" 조각은 항체 경첩 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에서 약간의 잔기가 첨가되었다는 점에서 Fab 조각과 다르다. F(ab')2 항체 조각은 원래 그들 사이에 경첩 시스테인을 갖는 Fab' 조각의 쌍으로써 생산된다. 항체 조각의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되었다(예 Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, 1996; US 4,342,566 참조). "단일-사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 조각은 V, 및 항체의 V 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인들은 단일 폴리펩티드 사슬 내에 존재한다. 바람직하게는, Fv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv 가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다. 단일-사슬 FV 항체가, 예를 들어, Pluckthun(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)), WO93/16185; US 5,571,894; US 5,587,458; Huston et al.(1988, Proc.Natl. Acad. Sci. 85, 5879) 또는 Skerra 및 Plueckthun(1988, Science 240, 1038) 으로부터 공지되었다. "이중특이적 항체"(BAbs)는 두개의 상이한 특이적 항원 결합 부위를 갖는 단일한, 2가 항체(또는 그의 면역치료적 유효 조각)이다. 본 발명에 따르면 BAbs 는 BAb <MAb 1, MAb 2> 로 특징되며, 여기서 <MAb 1> 및 <MAb 2> 는 MAb 1 및 MAb 2 에서 유래된 항원-결합 부위를 의미한다. 예를 들어 제 1 항원 결합 부위가 혈관형성 수용체(예 인테그린 또는 VEGF 수용체)로 지향되는 반면, 제 2 항원 결합 부위는 ErbB 수용체(예 EGFR 또는 HER2)로 지향된다. 이중특이적 항체는 화학적 기술(예, Kranz et al. (1981) Proc. Natl.Acad. Sci. USA 78, 5807 참조)에 의해, "폴리도마(polydoma)" 기술(US 4,474,893 참조)에 의해 또는 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있으며, 이들은 모두 그 자체로 공지되었다. 추가적 방법이 WO 91/00360, WO 92/05793 및 WO 96/04305 에서 기술된다. 이중특이적 항체는 또한 단일 사슬 항체(예, Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85, 5879; Skerra and Plueckthun (1988) Science 240, 1038 참조)로부터 제조될 수 있다. 이들은 단일 폴리펩티드 사슬로서 생산되는 항체 가변 영역의 유사체일다. 2중특이성 결합 제제를 형성하기 위해, 단일 사슬 항체가 함께 화학적으로 또는 당 기술분야에서 공지된 유전 공학 방법에 의해 커플링될 수 있다. 류신 지퍼 서열을 이용함으로써 본 발명에 따른 이중특이적 항체를 생산하는 것이 또한 가능하다. 이용된 서열은 전사 인자 Fos 및 Jun (Landschulz et al., 1988, Science 240, 1759; 검토를 위해, Maniatis and Abel, 1989, Nature 341, 24 참조)의 류신 지퍼 영역에서 유래된다. 류신 지퍼는 매 7 번째 잔기마다 류신이 전형적으로 나타나는 약 20-40 잔기 길이의 특정 아미노산 서열이다. 상기 지퍼 서열은 류신 잔기들이 이합체 형성을 위해 소수성 측면 상에 늘어서 있는 양친매성 α-나선을 형성한다. Fos 및 Jun 단백질의 류신 지퍼에 해당하는 펩티드는 이형이합체를 우선적으로 형성한다(O'Shea et al., 1989, Science 245, 646). 이중특이적 항체를 함유하는 지퍼 및 그의 제조 방법이 또한 WO 92/10209 및 WO 93/11162 에서 개시되었다.

용어 "면역접합체" 는 융합 단백질을 언급하며, 비면역학적 유효 분자에 공유적 연결에 의해 융합된 항체 또는 면역글로불린, 각각, 또는 그의 면역학적 유효 조각을 의미한다. 바람직하게는 상기 융합 상대 상대는 글리코실화될 수 있는 펩티드 또는 단백질이다. 상기 비-항체 분자는 항체의 불변 중쇄의 C-말단 또는 가변 경쇄 및/또는 중쇄의 N-말단에 연결될 수 있다. 융합 상대는, 일반적으로 3 - 15 개의 아미노산 잔기를 함유하는 펩티드인, 링커 분자를 통해 연결될 수 있다. 본 발명에 따른 면역접합체는 면역글로불린 또는 그의 면역치료적 유효 조각으로 이루어지고, ErbB 수용체, 및 바람직하게는 사이토카인, 예컨대 TNFα, IFNγ 또는 IL-2, 또는 또다른 독성 제제로 지향되는 융합 단백질이다. 바람직하게는, 상기 펩티드- 또는 단백질-기재 분자는 그의 N-말단이 그의 Fc 부위인 상기 면역글로불린의 C-말단에 연결된다. 용어 "사이토카인" 은 하나의 세포 집단에 의해 방출된 또다른 세포상에서 세포간 매개물질로서 작용하는 단백질에 대한 일반명이다. 상기 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인, 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 하기가 포함된다: 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 파라티로이드 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 프로릴랙신; 글리코단백질 호르몬 예컨대 난포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH), 및 황체형성 호르몬(LH); 간 성장 인자; 피브로블라스트 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 마우스 생식샘자극호르몬-연관 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자(VEGF); 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); 신경 성장 인자 예컨대 NGFβ; 혈소판-성장 인자; 전환 성장 인자(TGFs) 예컨대 TGFα 및 TGFβ; 적혈구성장인자(EPO); 인터페론 예컨대 IFNα, IFNβ, 및 IFNγ; 콜로니 자극 인자 예컨대 M-CSF, GM-CSF 및 G-CSF; 인터류킨 예컨대 IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; 및 TNF-α 또는 TNF-β. 본 발명에 따른 바람직한 사이토카인은 인터페론, TNFα 및 IL-2 이다.

용어 "면역치료적 또는 면역생물학적 유효" 는 포유류에서 면역 반응을 야기시키는 생물학적 분자를 언급한다. 더욱 구체적으로, 상기 용어는 항원을 인지하여 결합할 수 있는 분자를 언급한다. 전형적으로, 그의 항원 결합 부위(상보성 결정 영역, CDR)를 포함하는 항체, 항체 조각 및 항체 융합 단백질은 면역치료적으로 유효하다.

본 발명의 치료적 접근은 원하는 효과, 예를 들어 종양 독성 또는 세포증식억제 효능을 지지하거나, 원하지 않는 부작용을 감소 또는 예방하는 추가의 치료적 유효 제제의 투여를 특정 구현예로서 포함한다. 이처럼 본 발명은 상기 제제와 상기 및 하기에서 정의되고 청구된 약학 조성물과의 조합을 포함하며, 여기서 상기 제제는 일반적으로 다른 ErbB 수용체 길항제, VEGF 수용체 길항제, 사이토카인, 사이토카인-면역접합체, 항-혈관형성제, 항-호르몬 제제, 또는 세포독성 제제일 수 있다. 본원에 정의된 조성물들을 공지된 방법에 따른 방사선요법과 조합하는 것 또한 본 발명의 목적이다.

본원에 이용된 용어 "세포독성 제제" 는 매우 넓게 정의되며, 세포의 기능을 억제 또는 방지하고/거나 세포의 파괴(세포사)를 야기하고/거나, 항-종양/항-증식 효과를 발휘하는, 예를 들어, 신생 종양 세포의 발달, 성숙 또는 확산을 직접적 또는 간접적으로 방지하는 물질을 언급한다. 상기 용어는 표현적으로 또한 단순한 세포독성 효과가 아닌 세포증식억제 효과만을 야기하는 상기 제제를 포함한다.

용어 "화학치료적 제제" 는 용어 "세포독성 제제" 의 부분집합이며, 구체적으로 항-종양 효과를, 바람직하게는 직접적으로 종양 세포 상에, 및 덜 간접적으로 생물학적 반응 변형과 같은 메카니즘을 통해 발휘하는 화학적 제제를 의미한다. 본 발명에 따른 적절한 화학치료적 제제는 바람직하게는 천연 또는 합성 화학적 화합물이다. 상업적 용도, 임상적 평가 및 임상전 개발에서 입수가능한 다수의 항-종양 화학적 제제가 존재하며, 이들은 본 발명에서 청구 및 기술된 수용체 길항제를 이용한 조합 요법에 의한 종양/신생물의 치료를 위해 본 발명에 포함될 수 있다. 상기 용어는 다른 ErbB 길항제(예컨대 항-ErbB 항체) 뿐만 아니라 특히 하기와 같은 제제를 포함한다: 항-혈관형성제, 티로신 키나아제 억제제, 단백질 키나아제 A 억제제, 사이토카인 패밀리의 멤버, 방사성 동위원소, 및 독소 예컨대 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소도 포함한다. 바람직한 화학치료적 제제는 아미포스틴(에티올), 시스플라틴, 다카르바진(DTIC), 닥티노마이신, 메클로레타민(질소 머스타드), 스트렙토조신, 시클로포스파미드, 카르누스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 독소루비신(아드리아마이신), 독소루비신 리포(독실), 젬시타빈(젬자르), 다우노루비신, 다우노루비신 리포(다우노좀), 프로카르바진, 미토마이신, 시타라빈, 에토포시드, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실(5-FU), 빈블라스틴, 빈크리스틴, 블레오마이신, 파클리탁셀(탁솔), 도세탁셀(탁소텔), 알데스류킨, 아스파라기네이즈, 부술판, 카르보플라틴, 클라드리빈, 캄프토테신, CPT-11, 10-히드록시-7-에틸-캄프토테신(SN38), 제피티닙(이레사), 다카르바진, 플록스우리딘, 플루다라빈, 히드록시우레아, 이포스파미드, 이다루비신, 메스나, 인터페론 알파, 인터페론 베타, 이리노테칸, 미톡산트론, 토포테칸, 류프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 머캅토퓨린, 플리카마이신, 미토테인, 페가스파르게이즈, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포시드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 클로람부실 및 그의 조합이다.

본 발명에 따른 가장 바람직한 화학치료적 제제는 시스플라틴, 젬시타빈, 독소루비신, 파클리탁셀(탁솔) 및 블레오마이신이다.

용어 "암" 및 "종양" 은 전형적으로 통제되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유류 내 생리적 조건을 언급하거나 기술한다. 본 발명에 따른 약학 조성물에 의해 종양, 예컨대 유방, 심장, 폐, 소장, 결장, 비장, 신장, 방광, 두경부, 난소, 전립선, 뇌, 췌장, 피부, 골, 골수, 혈액, 갑상선, 자궁, 고환, 자궁경부, 및 간의 종양이 치료될 수 있다. 본 발명에 따른 항체 분자에 의해 바람직하게 치료될 수 있는 종양은 ErbB 수용체, 특히 ErbB1 수용체를 고량으로, 그러나 ErbB2 (HER2) 수용체는 또한 저량으로 발현하는, 고체 종양 또는 종양 전이, 예컨대 유방암, 전립선암, 두경부암, SCLC, 췌장암이다.

용어 "생물학적/기능적 유효" 또는 "치료적 유효(량)" 은 생체내 또는 시험관내 생물학적 기능 또는 생물학적 기능의 변화를 야기하고, 특정 양으로 포유류, 바람직하게는 인간의 질병 또는 장애를 치료하는 데 효과적인 약물/분자를 언급한다.

"방사선요법": 본 발명에 따르면 종양은 방사선 또는 방사선약물에 의해 추가로 치료될 수 있다. 방사선의 원천은 치료되는 환자에 대해 외부 또는 내부에 있을 수 있다. 원천이 환자에 대해 외부에 있는 경우, 그 치료는 외부 조사 방사선 요법(EBRT)으로 공지되었다. 방사선의 원천이 환자에 대해 내부에 있는 경우, 그 치료는 근접치료(BT)로 불린다. 이용된 몇가지 전형적인 방사성 원소는 라듐, 세슘-137, 및 이리듐-192, 아메리슘-241 및 금-198, 코발트-57, 구리-67; 테크네튬-99; 아이오다이드-123; 아이오다이드-131; 및 인듐-111 을 포함한다. 본 발명에 따른 제제를 방사성 동위원소로 표지하는 것 또한 가능하다. 오늘날 방사선 요법은 절제불가능한 또는 수술불가능한 종양 및/또는 종양 전이를 제어하는 표준 치료이다. 방사선 요법이 화학요법과 조합된 경우 개선된 결과가 나타났다.

"약학적 치료": 본 발명의 제제는 주사에 의해 또는 시간에 걸친 점진적 주입에 의해 비경구적으로 투여될 수 있다. 치료되는 조직이 전형적으로 전신 투여에 의해 체내에서 접근될 수 있고 따라서 가장 흔히 치료 조성물의 정맥내 투여에 의해 치료됨에도 불구하고, 표적화된 조직이 표적 분자를 함유할 가능성이 있는 곳에는 다른 조직 및 전달 수단이 고려된다. 이처럼, 본 발명의 제제는 안내, 정맥내, 복막내, 근육내, 피하, 강내, 경피, 동소 주사 및 주입에 의해 투여될 수 있고, 또한 연동 수단에 의해 전달될 수 있다. 본 발명의 치료 조성물은 생리학적 허용가능 담체를, 활성 성분으로서 그안에 용해 또는 분산된 본원에 기술된 적절한 제제와 함께, 함유한다.

본원에 사용된 용어 "약학적 허용가능" 은 바람직하지 않은 생리적 효과 예컨대 구역, 현기증, 급성위연동이상항진 등을 야기하지 않으면서 포유류에 또는 상에 투여될 수 있는 물질을 나타내는 조성물, 담체, 희석제 및 시약을 언급한다. 그안에 용해 또는 분산된 활성 성분을 함유하는 약리학 조성물의 제조는 당 기술분야에서 잘 이해되고 공식에 기초하여 제한될 필요가 없다. 전형적으로, 상기 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사가능하게 제조되나, 용액 또는 현탁액에 적절한 고체 형태가 액체 내에서 사용되기 전에 또한 제조될 수 있다. 상기 제제는 또한 유화될 수 있다. 활성 성분이 약학적으로 허용가능하고 그 활성 성분과 상용성인 부형제와 함께 및 본원에 기술된 치료 방법에의 이용에 적절한 양으로 혼합될 수 있다. 적절한 부형제는, 예를 들면, 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤, 에탄올 등 및 그의 조합이다. 추가로, 원하는 경우, 상기 조성물은 활성 성분의 효과를 증진시키는 소량의 보조 물질 예컨대 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등을 함유할 수 있다. 본 발명의 치료 조성물은 성분의 약학적 허용가능 염을 그안에 포함할 수 있다. 약학적 허용가능 염은 무기산 예컨대 염산 또는 인산, 또는 유기산 예컨대 아세트산, 타르타르산, 만델산 등에 의해 형성되는 산 첨가 염(폴리펩티드의 유리 아미노기에 의해 형성됨)을 포함한다. 유리 카르복실기에 의해 형성된 염은 또한 무기 염기 예컨대 소듐, 포타슘, 암모늄, 칼슘 또는 페릭 히드록시드, 및 유기 염기 예컨대 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래될 수 있다. 생리학적 허용가능 담체는 당 기술분야에서 잘 공지되었다. 액체 담체의 전형은 활성 성분 및 물에 더하여 물질을 함유하지 않거나, 완충액 예컨대 생리적 pH 수치의 소듐 포스페이드, 생리 식염수 또는 둘다를 함유하는 멸균 수용액, 예컨대 포스페이트-완충 식염수이다. 다시 또한, 수성 담체는 염 예컨대 소듐 및 포타슘 클로리드, 덱스트로오스, 폴리에틸렌 글리콜 및 다른 용질 뿐만 아니라, 하나 이상의 완충 염을 함유할 수 있다. 액체 조성물은 또한 물에 더하여 및 물을 제외할 만큼 액상을 함유할 수 있다. 상기 추가적 액상의 전형은 글리세린, 식물성 오일 예컨대 면씨유, 및 물-오일 에멀젼이다.

전형적으로, 예를 들어, ErbB (ErbB1, ErbB2) 수용체 차단 항체 또는 상응하는 항체 접합체 형태의, 면역치료적 제제의 치료적 유효량은, 생리학적 허용가능 조성물로 투여된 경우, 혈장 농도 약 0.01 마이크로그램(㎍)/밀리리터(ml) 내지 약 100 ㎍/㎖, 바람직하게는 약 1 ㎍/㎖ 내지 약 5 ㎍/㎖ 및 통상 약 5 ㎍/㎖ 를 달성하기에 충분한 양이다. 달리 말하면, 상기 투여량은 하루 또는 며칠 동안 하나 이상의 투여량 투여에서, 약 0.1 ㎎/㎏ 내지 약 300 ㎎/㎏, 바람직하게는 약 0.2 ㎎/㎏ 내지 약 200 ㎎/㎏, 가장 바람직하게는 약 0.5 ㎎/㎏ 내지 약 20 ㎎/㎏ 에서 다를 수 있다. 면역치료적 제제가 모노클로날 항체 또는 접합체의 조각의 형태인 경우, 전체 항체의 질량에 대한 조각/접합체의 질량에 기초하여 양이 용이하게 조정될 수 있다. 바람직한 플라즈마 몰농도는 약 2 마이크로몰(μM) 내지 약 5 밀리몰(mM) 및 바람직하게는, 약 100 μM 내지 1 mM 항체 길항제이다.

바람직하게는 본 발명에 따른 화학적 세포독성 또는 화학치료적 제제(면역치료적 제제 또는 비-면역치료적 펩티드/단백질 둘다 아님)인, 활성 제제의 전형적 투여량은 하루에 체중 1 kg 당 10 mg 내지 1000 mg, 바람직하게는 약 20 내지 200 mg, 및 더욱 바람직하게는 50 내지 100 mg 이다.

본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 조합 요법과 연관된 부작용을 감소 또는 회피하는 제제("보조 요법"), 예를 들면, 항암 약물의 독성 효과를 감소시키는 제제, 예컨대, 골-흡수 억제제, 심장보호 제제를 포함하나 이에 한정되지는 않는 제제에 의한 환자의 치료를 포함하는 구를 포함할 수 있다. 상기 보조 제제는 화학요법, 방사선요법 또는 수술과 연관된 구역 및 구토의 발생을 예방 또는 감소시키고, 또는 골수억제 항암 약물의 투여와 연관된 감염의 발생을 감소시킨다. 보조 제제는 당 기술분야에서 공지되었다. 본 발명에 따른 면역치료적 제제는 추가로 BCG 및 면역계 자극제와 같은 아주반트와 함께 투여될 수 있다. 더욱이, 상기 조성물은 세포독성 유효 방사성-표지된 동위원소, 또는 다른 세포독성 제제, 예컨대 세포독성 펩티드(예 사이토카인) 또는 세포독성 약물 등을 함유하는 화학치료적 제제 또는 면역치료적 제제를 포함할 수 있다.

세포주의 원천

세포주 및 배양 조건. 인간 췌장(BxPC-3 및 MiaPaCa-2), 난소(SK-OV-3), 및 외음부 표피양(A-431) 암종 세포주를 American Type Culture Collection(ATCC; Rockville, MD, USA)로부터 수득했다. BxPC-3 세포주를 RPMI-1640 배지(Gibco, Paisley, UK) 내에서 배양했다; MiaPaCa-2, SK-OV-3, 및 A-431 세포주를 DMEM 배지(Gibco) 내에서 배양했다. 배양 배지를 ATCC 에 의해 추천되는 바와 같이 영양보충했다.

도 1. 두 개의 췌장 암종 세포주 BxPC-3 및 MiaPaCa-2 상의 및, 각각 EGFR 및 HER2 에 대한 양성 대조군으로서 이용된 두 개의 참조 세포주 A-431 및 SK-OV-3 상의 EGFR 및 HER2 발현의 면역세포화학적 및 유동세포계수법 분석. NC(음성 대조군): 오직 면역과산화효소 접합체와 함께 배양된 조직. 유동세포계수법 분석에 있어서, 흑색 및 회색 피크는 각각 항-EGFR 및 항-HER2 항체에 의해 염색된 세포 표면을 묘사한다. 백색 피크는 오직 FITC-표지된 제 2 항체와 함께 배양된 세포에 의해 수득되는 대조군을 나타낸다.

도 2. 누드 마우스에서 소형 BxPC-3 이종이식편의 성장에 대한 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합의 효과(실험 S). 평균 치료전 종양 부피가 77 ± 49 mm³ 였다. 마우스(1 군 당 8 마리)를 4 주 동안 1 주일에 2 회 50 ng 의 각각의 mAb 로 i.p. 주사했다. 결과를 종양 진행으로서 표현했다: [(최종 부피)-(최초 부피)]/(최초 부피). C: 대조군; T: 트라스투주맙; M: 마투주맙; T+M: 트라스투주맙+마투주맙.

도 3. 누드 마우스에서 대형 BxPC-3 이종이식편의 성장에 대한 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합의 효과(실험 L). 평균 치료전 종양 부피가 502 ± 205 mm³ 였다. 마우스(1 군 당 5 마리)를 4 주 동안 1 주일에 2 회 50 ng 또는 200 ng 의 각각의 mAb 로 i.p. 주사했다. A, 원발성 종양이 부피 1500 mm³ 에 도달하는 것에 대해 적용된 시간의 함수로서 수득되는 카플란-마이에르 생존 곡선. C: 대조군; T: 트라스투주맙(주사 당 200 ㎍); M: 마투주맙(주사 당 200 ㎍); T+M: 트라스투주맙+마투주맙(주사 당 50 또는 200 ㎍ 의 각각의 mAb). B, 종양 진행 곡선으로서 표현된, 동일한 실험으로부터의 결과. 쌍촉 화살표는 치료 기간을 지시한다.

도 4. A, 누드 마우스에서 MiaPaCa-2 이종이식편의 성장에 대한 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합의 효과. 평균(1 군 당 6 마리) 치료전 종양 부피가 64 ± 5 mm³ 였다. 마우스를 15 일째부터 43 일째까지 4 주 동안 1 주일에 2 회 50 ㎍ 의 각각의 mAb 로 i.p. 주사했다. 원발성 종양이 부피 2000 mm³ 에 도달하는 것에 대해 적용된 시간의 함수로서 수득되는 카플란-마이에르 생존 곡선. C: 대조군; T: 트라스투주맙; M: 마투주맙; T+M: 트라스투주맙+마투주맙. B, 누드 마우스에서 SK-OV-3 이종이식편의 성장에 대한 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합의 효과. 평균(1 군 당 6 마리) 치료전 종양 부피가 42 ± 4 mm³ 였다. 마우스를 11 일째부터 40 일째까지 4 주 동안 1 주일에 2 회 200 ㎍ 의 각각의 mAb 로 i.p. 주사했다. 원발성 종양이 부피 1000 mm³ 에 도달하는 것에 대한 카플란-마이에르 생존 곡선. C: 대조군; T: 트라스투주맙; M: 마투주맙; T+M: 트라스투주맙+마투주맙.

도 5. BxPC-3 및 MiaPaCa-2 세포주 상의 EGFR 및 HER2 인산화에 대한 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합의 시험관내 효과. 세포를 10 ng/㎖ 의 각각의 mAb 와 함께 48 시간 동안, 이어서 10 분 동안 100 ng/㎖ 의 EGF 와 함께 또는 EGF 없이 배양했다. 상부 판넬: 웨스턴 블롯 분석, GAPDH = 로딩 대조군. 하부 판넬: 수용체 인산화의 정량으로서, 대조군의 백분율로 표현되고 막대 그래프로 도시되며, 지시된 처리 조건으로 유도된 억제를 나타낸다. C: 대조군; T: 트라스투주맙; M: 마투주맙; T/M: 트라스투주맙+마투주맙.

도 6. 인간 췌장 암종 BxPC-3 (A) 또는 MiaPaCa-2 (B) 이종이식편을 보유하는 무흉선 NMRI 마우스에서 방사성표지된 마투주맙 및 트라스투주맙 항체의 생체 분포 및 종양 위치결정. 마우스를 ¹²⁵I-마투주맙 및 ¹³¹I-트라스투주맙으로 i.v. 공동-주사했다. 마우스를 주사후 48 시에 희생시켰다. 종양, 및 모든 정상 기관을 칭량하고, 분별(differential) 방사능을 2중 채널 섬광 계수기에서 측정했다. 결과를 조직 1 그램 당 존재하는 방사능의 주사된 투여량의 백분율로서 표현했다(% ID/g).

도 7. 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 조합으로 처리된 BxPC-3 세포의 시험관내 성장 억제. BxPC-3 세포를 96-웰 플레이트 내에 10,000 세포/웰로 파종하고, 부착되도록 밤새 놔두었다. 다음날, 세포를 트라스투주맙 및 마투주맙의 단독 또는 고정비 1:1 의 조합으로 처리했다. 5 일 후, 재료 및 방법에 기술된 바와 같이 MTS 분석을 수행했다. 각 수치는 평균 ± SEM (n = 6)을 나타낸다.

실시예 1

생체내 종양 성장 억제 연구.

모든 생체내 실험을 실험적 동물 연구에 대한 프랑스 지침(French guidelines)(Agreement No. B34-172-27)에 따라 수행했다. 누드 마우스, 생후 6-8 주 암컷 무흉선 NMRI 마우스 및 BALB/c 무흉선 마우스를 각각 Janvier, Le Genest(St Isle, France) 및 Charles Rivers Laboratories(L'Arbresle, France)로부터 구입했다. BxPC-3(3.5 X 10⁶), MiaPaCa-2(5 X 10⁶) 및 SK-OV-3(5 X 10⁶) 세포를 무흉선 NMRI(BxPC-3 모델) 및 BALB/c(MiaPaCa-2 및 SK-OV-3) 누드 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하(s.c.) 주사했다. MiaPaCa-2 세포를 50 % 배양 배지 및 50 % Matrigel(BD biosciences, Le Pont De claix, France) 내에 현탁시켰다. 종양이 각 실험에서 지시된 대략적 부피에 도달했을 때 종양-보유 마우스를 상이한 처리 군들에 무작위배치했다. BxPC-3 모델에 있어서, 항체 치료의 효과를 작은 종양(실험 S)에 대해 및 큰 종양(실험 L)에 대해 연구했다. 마우스를 0.9 % NaCl, 트라스투주맙, 마투주맙, 또는 1:1 비율의 mAbs 둘다에 의한 복막내 주 사(i.p.)로 처리했다. 각각 주사된 mAb 의 양은 4 주 연속 동안 1 주일에 2 회 실험에 따라 주사당 50 ng 또는 200 ng 이었다. 종양 크기를 캘리퍼로 매주 2 회 측정하고, 부피를 공식: D1 x D2 x D3 / 2 로 계산했다. 종양 진행을 공식: [(최종 부피)-(최초 부피)]/(최초 부피) 를 이용하여 계산했다. 결과를 또한, 종양 성장의 신속도에 의존하는, 종양이 SK-OV-3 에 대해 1000 mm³, BxPC-3 에 대해 1500 mm³ 및 MiaPaCa-2 이종이식편에 대해 2000 mm³ 로 정해진 부피에 도달하는 데 걸린 시간을 이용하여, 적용된 카플란-마이에르 생존 곡선으로 표현했다. 중앙 지연은 50% 의 마우스가 정해진 부피에 도달한 종양을 갖는 시간으로서 정의된다. BxPC-3 모델에서의 실험 S 에 있어서, 치료 기간 동안의 증가 인자를 치료 마지막(55 일째)의 종양 부피를 치료 시작(27 일째)의 부피로 나눔으로써 계산했다.

실시예 2:

면역세포화학적 분석.

수용체의 발현을 AFA(알콜 포르몰 아세트산)에 고정된 파라핀-함몰 세포에서 분석했다. EGFR 발현의 분석을 제조업자의 추천에 따라 EGFR pharmDx kit(DakoCytomation, Carpinteria, CA, USA)를 이용하여 수행했다. 디아미노벤지딘(Dakocytomation)을 색소원으로서 이용하고, 절편들을 헤마톡실린으로 약간 대조염색했다. HER2 의 탐지에 이용된 1 차 항체는 토끼 폴리클로날 항체(Dakocytomation)였다.

실시예 3:

면역블롯팅 분석.

페트리 접시 내에 24 시간 동안 106 개의 세포로 플레이팅된 BxPC-3 및 MiaPaCa-2 세포를 2 일 동안 성장 인자가 없는 배지(SM 배지) 내에서 굶기고, 10 ng/㎖ 의 트라스투주맙, 마투주맙 또는 고정비 1:1 의 항체 둘다(또는 항체가 없는 대조군)로 처리했다. 48 시간 후, 세포를 100 ng/㎖ 의 EGF 를 함유 또는 미함유하는 SM 배지 내에서 10 분 동안 배양하고, 2 회 세정하고, 100 NM PMSF, 100 mM 소듐 불화물(fluorure), 1 mM 소듐 오르토바네이트, 및 하나의 완전한 단백질분해효소 억제제 혼합물 정제(Sigma, St Louis, MO)를 함유하는 완충액으로 용해했다. 비-환원 조건하에 8 % SDS-PAGE 상의 전기영동 후, 단백질을 0.1 % Tween 20 및 5 % 무지방 건조 우유를 함유하는 PBS 내에서 포화시킨 폴리피닐리덴 다이플루오라이드 막(Millipore Co., Bedford, MA)으로 전달한 후, Cell Signaling Technology(Beverly, MA)로부터 수득한 인산화 형태의 EGFR 및 HER2 에 대항하는 항체와 함께 배양했다. 동등한 로딩을 보장하기 위해, 면역블롯을 또한 항-GAPDH(글리세르알데하이드-3-포스페이트 디하이드로지네이즈) 항체(Chemicon international, Australia)로 프로빙(probe)했다.

실시예 4:

세포 생존력 검정.

세포 생존력에 대한 트라스투주맙 및/또는 EMD72000 의 효과를 테트라졸륨 염(MTS) 및 전자 커플링 시약(PMSF) 검정을 이용하여 평가했다. 간단히, BxPC-3 세포를 96-웰 마이크로타이터 플레이트 내에 10,000 세포/웰로 100 HI 의 배지에 서 플레이팅했다. 24 시간 후, 세포를 5 내지 100 Hg/ml 범위의 농도에서 항체로 처리했다. 96 시간의 배양 후, 세포를 MTS (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨) 시약에 노출시키고, 37 ℃ 에서 2 시간 동안 배양했다. 흡광도를 490 nm 에서 측정하고, 생존률 억제의 백분율을 미처리 배양 대한 증식 세포의 백분율로서 계산했다. 모든 실험을 3 회 수행했다.

Claims (37)

1. 항-HER2 항체 및 항-EGFR 항체를 포함하는 약학 조성물의 개체내 암치료용 약물의 제조를 위한 용도로서, 여기서 상기 개체 내 상기 암은 EGFR 및 HER2 를 발현하고, 여기서 HER2 는 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 저수준으로 발현되는 용도.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가, 단독으로 주어진 경우, HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않고, 상기 항-EGFR 항체가, 단독으로 주어진 경우, EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 약학 조성물의 용도.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 암이 HER2 를 과발현하지 않는 약학 조성물의 용도.
4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 암이 EGFR 을 과발현하는 약학 조성물의 용도.
5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 암이 HER2 를 과발현하지 않으나 EGFR 을 과발현하는 약학 조성물의 용도.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)인 약학 조성물의 용도.
7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 약학 조성물의 용도.
8. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 약학 조성물의 용도.
9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 췌장암 또는 유방암인 약학 조성물의 용도.
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 면역학적 유효 조각인 약학 조성물의 용도.
11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 세포독성 제제가 추가로 투여되는 약학 조성물의 용도.
12. 제 11 항에 있어서, 상기 세포독성 제제가 바람직하게는 시스플라틴, 독소루비신, 젬시타빈, 도세탁셀, 파클리탁셀, 블레오마이신 및 이리노테칸으로 이루어진 군에서 선택되는 화학치료적 제제인 약학 조성물의 용도.
13. 제 11 항에 있어서, 상기 세포독성 제제가 VEGF 수용체 억제제, 작은 분자 티로신 키나아제 억제제, 항-혈관형성제, 또는 사이토카인인 약학 조성물의 용도.
14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 중 하나 또는 둘다가 그의 C-말단에서, 임의로 링커 펩티드를 통해, 생물학적 유효 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질에 융합됨으로써 면역접합체를 형성하는 약학 조성물의 용도.
15. 제 14 항에 있어서, 상기 면역접합체가 면역사이토카인인 약학 조성물의 용도.
16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 기술된 두가지 항체의 특이성을 갖는 이중특이적 항체를 포함하는 약학 조성물의 용도.
17. 항-HER2 및 항-EGFR 항체를 포함하는 약학 조성물의 상기 항-HER2 항체에 의한 개체내 암치료 효능 개선용 약물의 제조를 위한 용도로서, 여기서 상기 개체 내 상기 암은 HER2 를 상기 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분 하지 않은 수준으로, EGFR 을 항-EGFR-항체에 유의하게 반응하기에 충분한 수준으로 발현하는 용도.
18. 제 17 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가, 단독으로 주어진 경우, HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않고, 상기 항-EGFR 항체가, 단독으로 주어진 경우, EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 약학 조성물의 용도.
19. 제 17 항 또는 제 18 항에 있어서, 상기 암 HER2 가 과발현되지 않고 EGFR 이 과발현되는 약학 조성물의 용도.
20. 제 17 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 약학 조성물의 용도.
21. 제 17 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 췌장암 또는 유방암인 약학 조성물의 용도.
22. 개체내에서 HER2 및 EGFR 을 발현하는 암의 치료 방법으로서, 여기서 상기 개체내 상기 암은 HER2 를, 단독으로 개체에 주어진 경우, 항-HER2 항체에 대해 유 의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로 발현하고, 상기 방법은, 단독으로 주어진 경우 HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않는 항-HER2 항체, 및 단독으로 주어진 경우 EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 항-EGFR 항체를 개체에게 투여함을 포함하는 방법.
23. 제 22 항에 있어서, HER2 가 과발현되지 않는 방법.
24. 제 22 항에 있어서, EGFR 이 과발현되는 방법.
25. 제 22 항에 있어서, HER2 가 과발현되지 않으나 EGFR 이 과발현되는 방법.
26. 제 22 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)인 방법.
27. 제 22 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 방법.
28. 제 22 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 방법.
29. 제 22 항에 있어서, 상기 암이 췌장암 또는 유방암인 방법.
30. 항-HER2 항체를 이용한 HER2 및 EGFR 을 발현하는 암의 치료 효능 개선 방법으로서, 여기서 상기 암은 HER2 를 상기 항-HER2 항체 치료 단독에 대해 유의하게 반응하기에 충분하지 않은 수준으로 발현하고; 상기 방법은, 단독으로 주어진 경우 HER2 이합체화 및/또는 HER2/EGFR 이형이합체화를 억제하지 않거나 유의하게 억제하지 않는 항-HER2 항체, 및 단독으로 주어진 경우 EGFR 이합체화 및/또는 EGFR/HER2 이형이합체화를 유의하게 억제하는 항-EGFR 항체를 개체에게 투여함을 포함하는 방법.
31. 제 30 항에 있어서, HER2 가 발현되지 않는 방법.
32. 제 30 항에 있어서, EGFR 이 상기 암에서 과발현되는 방법.
33. 제 30 항에 있어서, HER2 가 발현되지 않으나 EGFR 이 과발현되는 방법.
34. 제 30 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)인 방법.
35. 제 30 항에 있어서, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 방법.
36. 제 30 항에 있어서, 상기 항-HER2 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 4D5(트라스투주맙)이고, 상기 항-EGFR 항체가 마우스, 키메라 또는 인간화 mAb 425(마투주맙)인 방법.
37. 제 30 항에 있어서, 상기 암이 췌장암 또는 유방암인 방법.

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