MX2007015676A - Conjugacion de la hormona de crecimiento mediada por transglutaminasa. - Google Patents

Conjugacion de la hormona de crecimiento mediada por transglutaminasa.

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MX2007015676A
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bis
ethyl
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MX2007015676A
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Florencio Zaragoza Dorwald
Lars Fogh Iversen
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Novo Nordisk Healthcare Ag
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Abstract

La presente invencion se refiere a un metodo para conjugar con PEG una hormona de crecimiento, el metodo comprende hacer reaccionar la hormona de crecimiento con un nucleofilo que comprende amina el cual comprende ademas un primer grupo funcional en presencia de TGasa para formar una hormona de crecimiento transaminada, seguido por una reaccion de la hormona de crecimiento transaminada con un PEG el cual ha sido funcionalizado con un segundo grupo funcional, en donde el primer y segundo grupos funcionales se seleccionan de manera que reaccionen para formar un enlace covalente.

Description

CONJUGACIÓN DE LA HORMONA DE CRECIMIENTO MEDIADA POR TRANSGLUTAMINASA CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método novedoso para la conjugación postraduccional de la hormona de crecimiento en donde la transglutaminasa se utiliza para incorporar un punto de unión en posiciones especificas en el péptido a donde puede unirse selectivamente el PEG. Las hormonas de crecimiento conjugadas tienen características alteradas y de esta manera pueden utilizarse en aplicaciones terapéuticas .
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Es bien conocida la modificación de las propiedades y características de péptidos al conjugar grupos al péptido los cuales cambian apropiadamente las características del péptido. Esta conjugación requiere generalmente algún grupo funcional en el péptido para reaccionar con otro grupo funcional en un grupo de conjugación. Típicamente, los grupos amino, tal como el grupo amino N-terminal o el grupo e-amino en Usinas, se han utilizado en combinación con un reactivo de acilación adecuado. Frecuentemente se desea o aún se requiere ser capaz de controlar la reacción de conjugación, es decir controlar donde se unen los compuestos de REF: 188182 conjugación y controlar como se unen muchos grupos de conjugación. Esto es referido frecuentemente como especificidad. La conjugación de péptidos ha sido conocida en general durante mucho tiempo y la Patente Norteamericana No. 4,179,337 dio a conocer más de 20 años atrás péptidos y en particular una hormona de crecimiento conjugada con polietileno o polipropilenglicoles . Se han descrito diferentes tipos de químicas que son efectivas en la formación de un enlace entre el péptido y la porción que es conjugada al péptido. El documento EP 605 963 describe el injerto de polímeros acuosos los cuales forman una unión de oxima con un grupo aldehido en una proteína. Ninguno de los aminoácidos naturales comprende un aldehido, de manera que un grupo hidroxilo tiene que ser oxidado de esta manera como un primer paso en el proceso de conjugación. El documento WO 96/41813 da a conocer polímeros los cuales son funcionalizados con un grupo que forma amino-oxi-oxima que es útil en las reacciones de conjugación. El documento WO 98/05363 da a conocer un compuesto que comprende un péptido y un polímero soluble en agua, en donde los dos se enlazan covalentemente a través de un enlace de oxima en el residuo de aminoácido N-terminal. Adicionalmente, se conoce el uso de enzimas para hacer posible una conjugación más especifica de los péptidos.
El documento EP 243 929 da a conocer el uso de enzimas proteolíticas, tal como carboxipeptidasa para incorporar un compuesto con un grupo funcional en la C-terminal de un péptido, donde el grupo funcional puede utilizarse subsecuentemente para unir grupos citotóxicos, otros péptidos o grupos reporteros utilizados para facilitar el análisis del péptido, tales como por ejemplo grupos fluorescentes. Sin embargo, esta técnica limita el punto de unión al residuo de aminoácido C-terminal, algo que constituye una limitación severa si el residuo C-terminal es esencial para la actividad del péptido. La transglutaminasa se ha utilizado previamente para alterar las propiedades de los péptidos. En la industria alimenticia y en particular en la industria láctea están disponibles muchas técnicas para por ejemplo reticular péptidos utilizando transglutaminasas . Otros documentos dan a conocer el uso de la transglutaminasa para alterar las propiedades de péptidos fisiológicamente activos. El documento EP 950665, el documento EP 785276 y Sato, Adv. Drug Delivery Rev. _5_4, 487-504 (2002) dan a conocer la reacción directa entre péptidos que comprenden al menos un PEG funcionalizado con Gln y amina o ligandos similares en presencia de transglutaminasa y Wada, Biotech. Lett. 23, 1367-1372 (2001) da a conocer la conjugación directa de ß-lactoglobulina con ácidos grasos por medio de una transglutaminasa. La solicitud de patente internacional publicada como WO2005/070468 da a conocer el uso de transglutaminasa para incorporar una asa donde se pueden unir grupos de conjugación. Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método por medio del cual una hormona de crecimiento puede conjugarse con un PEG en posiciones específicas con un alto grado de especificidad. Los conjugados obtenidos por medio de este método tienen características mejoradas o alternativas, por ejemplo características farmacológicas, las cuales los hacen adecuados, particularmente en la terapia.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la invención se refiere a un método para unir covalentemente una porción de PEG a una hormona de crecimiento, el método comprende hacer reaccionar en uno o más pasos una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representado por la fórmula fia] O NH2 [la] en donde GH representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina presente en una hormona de crecimiento, con un nucleófilo que contiene nitrógeno de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] en donde D representa -0- o un enlace individual; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2)-C0-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; X representa -0-NH2, un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, un aldehido o una cetona; en presencia de transglutaminasa para formar una hormona de crecimiento transaminada de la fórmula [Illa] [Illa] opcionalmente, si X es un grupo latente, transformar el grupo latente en -0-NH2, un aldehido o una cetona, la hormona de crecimiento transaminada se hace reaccionar adicionalmente con un segundo compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] en donde Y, si X representa un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en un aldehido o una cetona, representa -0-NH2; o si X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, representa un aldehido o una cetona; y Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O^C C H2 H, mPEG-O -a H, en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición - Z es entonces PEG es un PEG de 10 kDa para formar una hormona de crecimiento conjugada con PEG de la fórmula [Va] [Va] en donde A representa un enlace de oxima. En una modalidad, la invención proporciona compuestos de la fórmula [V] o [Va] y cualquier sal, profármaco o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos. En una modalidad, la invención proporciona una hGH, la cual ha sido conjugada con PEG en la posición que corresponde a la posición 40 y/o 141 en la SEC ID No. 1. En una modalidad adicional, la invención proporciona composiciones que comprenden compuestos de la fórmula [V] o [Va] y en particular composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la fórmula [Va] . En una modalidad, la invención proporciona el uso de compuestos de la fórmula [Va] en la terapia. En una modalidad, la invención proporciona un método para tratar enfermedades las cuales se benefician de un incremento en el nivel en el plasma de hormona de crecimiento, el método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula [Va] . En una modalidad, la invención proporciona el uso de un compuesto de la fórmula [Va] en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que se benefician de un incremento en el nivel en el plasma de hormona de crecimiento. En una modalidad, la invención proporciona un método para mejorar o modificar las propiedades farmacológicas de una hormona de crecimiento, el método comprende conjugar con PEG la hormona de crecimiento de acuerdo con los métodos de la presente invención.
BREVE DESCRIPCIÓN DEL LISTADO DE SECUENCIAS La SEC ID No. 1 es la secuencia de aminoácidos de la hormona de crecimiento humana, también conocida como 22K-hGH.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se basa en la observación que la conjugación con PEG en la N-terminal y en particular en la C-terminal de hGH da origen a una disminución mucho más grande en la actividad que la conjugación con PEG en ciertos aminoácidos entre las dos terminales, es decir la conjugación con PEG dentro de la cadena. En particular, la conjugación con PEG en las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y/o 141 en una hGH que tiene la secuencia de la SEC ID No. 1 da origen a la hGH conjugada con PEG en donde se ha retenido una gran proporción de la actividad. Las posiciones 40 y 141 son ambas glutamina y, de hecho, una hGH que tiene la secuencia de la SEC ID No. 1 comprende 11 residuos adicionales de glutamina, específicamente en las posiciones 22, 29, 46, 49, 68, 69, 84, 91, 122, 137 y 181. Sin embargo, se ha descubierto sorprendentemente que el uso de transglutaminasa (TGasa) y en particular TGasa de Streptoverti cilli um mobaraenae o Streptomyces lydicus permite una conjugación con PEG selectiva en las posiciones 40 y/o 141, y que los 11 residuos de glutamina restantes se dejan intactos a pesar del hecho que la glutamina es un substrato para la transglutaminasa. El método de la presente invención también puede ser útil para la conjugación con PEG dentro de la cadena de cualquier polipéptido que comprenda uno o más residuos de glutamina, por ejemplo polipéptidos terapéuticamente interesantes. Esto es particularmente útil para la conjugación con PEG de polipéptidos, los cuales comprenden más de un residuo de glutamina, y en donde se desea una conjugación con PEG específica para un sitio, pero el método puede utilizarse para transglutaminar cualquier polipéptido que comprenda un residuo de glutamina. La presente invención proporciona de esta manera un método para unir covalentemente un PEG a un polipéptido que comprende al menos un residuo de glutamina, el método comprende hacer reaccionar en uno o más pasos este polipéptido que comprende un residuo de glutamina representado por la fórmula [I] [i] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido, con un nucleófilo que contiene nitrógeno de la fórmula [II] H2N-D-R-X [||] en donde D representa -0- o un enlace individual; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, - (CH2)4-CH(NH2) -C0-NH-CH2-, - (CH2) -CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; X representa -0-NH2, un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, un aldehido o una cetona; en presencia de transglutaminasa para formar un polipéptido transaminado de la fórmula [III] opcionalmente, si X es un grupo latente, transformar el grupo latente en -0-NH2, un aldehido o una cetona, el polipéptido transaminado se hace reaccionar adicionalmente con un segundo compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] en donde Y, si X representa un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en un aldehido o una cetona, representa -0-NH2; o si X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, representa un aldehido o una cetona; y Z representa una porción seleccionada entre H mPEG-—O rv -C H„ en donde , a menos que se indique de otra manera , mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa -y 10 kDa ; con la condición es entonces el PEG es un PEG de 10 kDa para formar una polipéptido de la fórmula [V] [V] en donde A representa un enlace de oxima; o cualquier sal, profármaco o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. El término polipéptido utilizado en este documento incluye cualquier polipéptido adecuado y puede utilizarse simultáneamente con los términos péptido y proteína, a menos que se establezca de otra manera o se contradiga por el contexto. El término polipéptido en este documento debe entenderse en general como que se refiere a cualquier polipéptido adecuado de cualquier tamaño y composición adecuado (con respecto al número de aminoácidos y número de cadenas asociadas en una molécula de proteína) . Además, los polipéptidos en el contexto de los métodos inventivos y composiciones descritos en este documento pueden comprender residuos de aminoácidos que no son de origen natural y/o diferentes de L, a menos que se establezca de otra manera o se contradiga por el contexto. Los polipéptidos también pueden derivatizarse . Se debe entender en general que un polipéptido derivatizado se refiere a un polipéptido en el cual uno o más de los residuos de aminoácidos del polipéptido han sido modificados químicamente (por ejemplo por medio de la alquilación, acilación, formación de éster o formación de amida) o han sido asociados con uno o más sustituyentes atómicos o moleculares, orgánicos y/o inorgánicos diferentes de aminoácidos y también pueden comprender o alternativamente residuos de aminoácidos no esenciales, que no son de origen natural y/o diferentes de L, a menos que se establezca de otra manera o se contradiga por el contexto. Los ejemplos no limitantes de estos residuos de aminoácidos incluyen por ejemplo los aminoácidos halogenados ácido 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, ß-alanina, ácido ß-aminopropiónico, ácido 2-aminobutírico, ácido 4-aminobutírico, ácido 6-aminocapróico, ácido 2-aminoheptanóico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido 3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimélico, ácido 2, 4-diaminobutírico, desmosina, ácido 2, 2' -diaminopimélico, ácido 2, 3-diaminopropiónico, N-etilglicina, N-etilasparagina, hidroxilisina, alohidroxilisina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, aloisoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina, norvalina, norleucina, ornitina y estatina. Los polipéptidos, los cuales son terapéuticamente útiles y donde la terapia utilizando los polipéptidos se beneficiaría de por ejemplo un tiempo de retención incrementado, son particularmente adecuados para el uso en un método de la presente invención.
En una modalidad, el polipéptido es un residuo de glutamina que comprende una hormona de crecimiento y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento. La presente invención proporciona de esta manera un método para unir covalentemente un PEG a una hormona de crecimiento, el método comprende hacer reaccionar en uno o más pasos una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representada por la fórmula [la] [la] en donde GH representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hormona de crecimiento, con un nucleófilo que contiene nitrógeno de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] en donde D representa -O- o un enlace individual; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, - (CH2)4-CH(NH2) -CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; X representa -0-NH2, un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, un aldehido o una cetona; en presencia de transglutaminasa para formar una hormona de crecimiento transaminada de la fórmula [Illa] O GH-< N-D-R—X H [Illa] opcionalmente, si X es un grupo latente, transformar el grupo latente en -0-NH2, un aldehido o una cetona, la hormona de crecimiento transaminada se hace reaccionar adicionalmente con un segundo compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] en donde Y representa -0-NH2, aldehido, cetona; y Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O C H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa- y 10 kDa; con la condición ' Z es entonces PEG es un PEG de 10 kDa para formar una hormona de crecimiento conjugada con PEG de la fórmula [Va] [Va] en donde A representa un enlace de oxima; o cualquier sal, profármaco o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. En el presente contexto, "hormona de crecimiento" (GH, por sus siglas en inglés) se propone para indicar una proteína que exhibe actividad de hormona de crecimiento como se determina en el ensayo I en este documento. Una proteína que exhibe una actividad superior a 20%, tal como superior a 40%, tal como superior a 60%, tal como superior a 80% de aquella de hGH en el ensayo se define como una hormona de crecimiento. En el presente contexto, el término "transaminación" y términos relacionados se proponen para indicar una reacción donde el nitrógeno en la cadena lateral de glutamina es intercambiado por nitrógeno de otro compuesto, en particular nitrógeno de otro nucleófilo que contiene nitrógeno. El término "radical" o "bi-radical" se propone para indicar un fragmento molecular con uno o dos electrones no apareados, respectivamente. Este fragmento puede generarse formalmente por medio de la remoción de uno (por ejemplo un átomo de hidrógeno) o dos átomos o grupos de átomos (por ejemplo, un grupo hidroxilo) por medio de la escisión homolítica de enlace, es decir una escisión de enlace en la cual cada uno de los dos fragmentos resultantes contiene uno de los dos electrones los cuales formaron el enlace original. Como se utiliza en este documento, "hGH (141)" significa un radical formado por medio de la remoción formal del grupo CONH2 de glutamina (141) en hGH, "hGH (40)" significa un radical formado por medio de la remoción formal del grupo CONH2- de glutamina (40) en hGH y "hGH (40, 141) " significa un radical formado por medio de la remoción formal de los grupos CONH2 de glutamina (40) y glutamina (141) en hGH. hGH(40/141) significa un radical formado por medio de la remoción formal de los grupos CONH2 de glutamina (40) y/o glutamina (141) en hGH, abarcando las mezclas de dos o más de hGH(40), hGH. (141) y (hGH(40,141) . El término "alquileno" se propone para indicar un bi-radical de un hidrocarburo saturado, lineal, ramificado y/o cíclico. A menos que se especifique con otro número de átomos de carbono, el término se propone para indicar hidrocarburos con de 2 a 6 (ambos incluidos) átomos de carbono, tal como de 2 a 5 (ambos incluidos) , tal como de 2 a 4 (ambos incluidos) , por ejemplo de 2 a 3 (ambos incluidos) . Los ejemplos particulares incluyen etileno, propileno, butileno, pentileno y hexileno. El término heteroalquileno se propone para indicar un grupo alquileno como se indicara anteriormente en el cual uno o más grupos metileno han sido sustituidos por -O- . Los ejemplos particulares incluyen diradicales de polietilenglicol . El término "PEG" o "Peg" significa un diradical polidisperso o monodisperso de la estructura en donde n es un número entero mayor que 1 y su peso molecular es entre aproximadamente 100 y aproximadamente 1,000,000 Da. El término "mPEG" o "mPeg" significa un radical polidisperso o monodisperso de la estructura H3C *O' m en donde m es un número entero mayor que 1. De esta manera, un mPEG en donde m es 90 tiene un peso molecular de 3991 Da, es decir aproximadamente 4kDa. Del mismo modo, un mPEG con un peso molecular promedio de 20 kDa tiene un m promedio de 454. Debido al proceso para generar un mPEG, estas moléculas tienen frecuentemente una distribución de pesos moleculares. Esta distribución es descrita por el índice de polidispersidad. El término "Índice de polidispersidad" utilizado en este documento significa la relación entre el peso molecular promedio en peso y el peso molecular promedio en número, como se conocen en el campo de la química de los polímeros (véase por ejemplo "Polymer Synthesis and Characterization", J. A. Nairn, University of Utah, 2003) . El índice de polidispersidad es un número el cual es mayor que o igual a uno y puede calcularse a partir de los datos de la Cromatografía de Permeación de Gel. Cuando el índice de polidispersidad es 1, el producto es monodisperso y de esta manera está constituido de compuestos con un peso molecular individual. Cuando el índice de polidispersidad es mayor que 1, es una medida de la polidispersidad de ese polímero, es decir cuan amplia es la distribución de polímeros con diferentes pesos moleculares. El uso de por ejemplo "mPEG20000" o "mPEG(20k)" en las fórmulas, nombres de compuestos o en estructuras moleculares indica un residuo de mPEG en donde el mPEG es polidisperso y tiene un peso molecular de aproximadamente 20 kDa. El Índice de polidispersidad incrementa típicamente con el peso molecular del PEG o mPEG. Cuando se hace referencia a PEG de 20 kDa y en particular mPEG de 20 kDa se propone para indicar un compuesto (o de hecho una mezcla de compuestos) con un Índice de polidispersidad inferior a 1.06, tal como inferior a 1.05, tal como inferior a 1.04, tal como inferior a 1.03, tal como entre 1.02 y 1.03. Cuando se hace referencia a PEG de 30 kDa y en particular mPEG de 30 kDa se propone para indicar un compuesto (o de hecho una mezcla de compuestos) con un índice de polidispersidad inferior a 1.06, tal como inferior a 1.05, tal como inferior a 1.04, tal como inferior a 1.03, tal como entre 1.02 y 1.03. Cuando se hace referencia a PEG de 40 kDa y en particular mPEG de 40 kDa se propone para indicar un compuesto (o de hecho una mezcla de compuestos) con un índice de polidispersidad inferior a 1.06, tal como inferior a 1.05, tal como inferior a 1.04, tal como inferior a 1.03, tal como entre 1.02 y 1.03. El término "GH conjugada con PEG" o "hGH conjugada con PEG" se propone para indicar una GH o hGH que ha sido unida covalentemente a PEG, es decir indica un conjugado que comprende GH o hGH y PEG, en donde la GH o hGH y el PEG se enlazan covalentemente entre sí. La unión puede ser por vía de un conector. El término "conjugado" como un sustantivo se propone para indicar un péptido modificado, es decir un péptido con una porción enlazada a éste para modificar las propiedades del péptido. Como un verbo, el término se propone para indicar el proceso para enlazar una porción a un péptido para modificar las propiedades del péptido. El término "enlace de oxima" se propone para indicar una subestructura química de la estructura -0-N=. En las fórmulas estructurales utilizadas en este documento, el enlace de oxima representado por A en la fórmula puede colocarse en cualquier dirección, que es ya sea -0-N= o =N-0-. En una modalidad, la dirección del enlace de oxima en la fórmula estructural proporcionada es -0-N=. En otra modalidad, la dirección del enlace de oxima en la fórmula estructural proporcionada es =N-0-. En el presente contexto, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se propone para indicar sales las cuales no son peligrosas para el paciente. Estas sales incluyen sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables, sales metálicas farmacéuticamente aceptables, sales de amonio y sales de amonio alquilado. Las sales de adición de ácido incluyen sales de ácidos inorgánicos así como también ácidos orgánicos. Los ejemplos representativos de ácidos inorgánicos adecuados incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, yodhidrico, fosfórico, sulfúrico, nítrico y similares. Los ejemplos representativos de ácidos orgánicos adecuados incluyen ácido fórmico, acético, tricloroacético, trifluoroacético, propiónico, benzoico, cinámico, cítrico, fumárico, glicólico, láctico, maleico, mélico, malónico, mandélico, oxálico, pícrico, pirúvico, salicílico, succínico, metanosulfónico, etanosulfónico, tartárico, ascórbico, pamoico, bismetilen-salicílico, etanodisulfónico, glucónico, citracónico, aspártico, esteárico, palmítico, EDTA, glicólico, p-aminobenzoico, glutámico, bencensulfónico, p-toluensulfónico y similares. Los ejemplos adicionales de sales de adición de ácido orgánicas o inorgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen las sales farmacéuticamente aceptables listadas en J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2, el cual se incorpora en este documento a manera de referencia. Los ejemplos de sales metálicas incluyen sales de litio, sodio, potasio, magnesio y similares. Los ejemplos de sales de amonio y amonio alquilado incluyen amonio, metilamonio, dimetilamonio, trimetilamonio, etilamonio, hidroxietilamonio, dietilamonio, butilamonio, tetrametilamonio y similares. El término "profármaco" utilizado en este documento se propone para indicar un compuesto el cual no tiene o el cual no tiene necesariamente una actividad terapéutica pero el cual con la administración se transforma en un compuesto terapéuticamente activo por medio de una reacción que toma lugar en el cuerpo. Típicamente, estas reacciones son hidrólisis, por ejemplo por esterasas u oxidaciones. Los ejemplos de profármacos incluyen amidas biohidrolizables y esteres biohidrolizables y también abarcan a) compuestos en los cuales la funcionalidad biohidrolizable en este profármaco es abarcada en el compuesto de acuerdo con la presente invención y b) compuestos los cuales pueden oxidarse o reducirse biológicamente en un grupo funcional dado para producir sustancias de fármaco de acuerdo con la presente invención. Los ejemplos de estos grupos funcionales incluyen 1, 4-dihidropiridina, N-alquilcarbonil-1, 4-dihidropiridina, 1, 4-ciclohexadieno, tere-butilo y similares. Como se utiliza en este documento, el término "amida biohidrolizable" es una amida de una sustancia de fármaco (en el caso, un compuesto de acuerdo con la presente invención) la cual ya sea) no interfiere con la actividad biológica de la sustancia precursora pero confiere sobre esa sustancia propiedades ventajosas in vivo tales como duración de acción, comienzo de acción y similares o b) es biológicamente inactiva pero es convertida fácilmente in vivo por el sujeto al principio biológicamente activo. La ventaja es, por ejemplo, una solubilidad incrementada o que la amida biohidrolizable es absorbida por la ruta oral desde el intestino y es transformada a un compuesto de acuerdo con la presente invención en el plasma. Muchos ejemplos de ese tipo son conocidos en el campo e incluyen a manera de ejemplo amidas alquílicas inferiores , amidas de a-aminoácido , amidas de alcoxiacilo y amidas de alquilaminoalquilcarbonilo . Como se utili za en este documento , el término "éster biohidroli zable" es un éster de una sustancia de fármaco ( en el caso , un compuesto de acuerdo con la invención) el cual ya sea a ) no interfiere con la actividad biológica de la sustancia precursora pero confiere sobre esa sustancia propiedades ventaj osas in vivo tales como duración de acción, comienzo de acción y similares o b) es biológicamente inactivo pero es convertido fácilmente in vivo por el sujeto al principio biológicamente activo. La ventaja es, por ejemplo, una solubilidad incrementada o que el éster biohidrolizable es absorbido por la ruta oral desde el intestino y es transformado a un compuesto de acuerdo con la presente invención en el plasma. Muchos ejemplos de ese tipo son conocidos en el campo e incluyen a manera de ejemplo esteres alquílicos de 1 a 4 átomos de carbono, esteres aciloxialquílicos de 1 a 4 átomos de carbono, esteres alcoxiaciloxialquílicos de 1 a 4 átomos de carbono, esteres de alcoxiaciloxi, esteres alilquil-acilamino-alquílicos y esteres de colina. La transglutaminasa ( E . C . 2 . 3 . 2 . 13 ) también es conocida como proteina-glutamina-?-glutamiltransferasa y catali za la reacción general Q-C(0)-NH2 (aceptante de amina) puede representar un péptido que contiene un residuo de glutamina y Q' -NH2 (donador de amina) representa un nucleófilo que contiene amina. Alternativamente, Q-C(0)-NH2 y Q' -NH2 pueden representar un aceptante de amina y un péptido que contiene usina, respectivamente. En la presente invención, sin embargo, Q-C(0)-NH2 representa una hormona de crecimiento que contiene un residuo de glutamina y Q' -NH2 representa un nucleófilo que contiene amina como se indicara anteriormente. Un donador de amina común in vivo es lisina enlazada a un péptido y la reacción anterior entonces proporciona la reticulación de péptidos. El factor de coagulación Factor XIII es una transglutaminasa la cual afecta la coagulación de la sangre en las heridas. Las diferentes transglutaminasas difieren entre sí, por ejemplo en que residuos de aminoácidos alrededor del residuo de glutamina (o Gln) se requieren para que la proteína sea un substrato, es decir las diferentes transglutaminasas tendrán diferentes péptidos que contienen Gln como substratos dependiendo de que residuos de aminoácidos son vecinos del residuo de Gln. Este aspecto puede ser explotado si una hormona de crecimiento que es modificada contiene más de un residuo de Gln. Si se desea conjugar selectivamente la hormona de crecimiento únicamente en algunos de los residuos de Gln presentes, esta selectividad se puede obtener por medio de la selección de una transglutaminasa la cual solo acepta el (los) residuo (s) de Gln relevante (s) como substrato. Alternativamente, uno o más residuos de aminoácidos cercanos a la Gln pueden alterarse, por ejemplo, por medio de la ingeniería genética para modificar la actividad de una transglutaminasa dada al residuo de Gln. Los residuos de glutamina también pueden suprimirse, por supuesto, de la hormona de crecimiento o pueden sustituirse por otro aminoácido para obtener una hormona de crecimiento con menos residuos o solo un residuo de glutamina para conjugarse. Se reconoce que si un compuesto es un substrato o no para una enzima dada en principio depende de las condiciones de reacción, por ejemplo el margen de tiempo, la temperatura, etcétera. Dado un tiempo suficiente, muchos compuestos no considerados normalmente como substratos son, de hecho, substratos. Cuando se establece anteriormente que para una transglutaminasa dada algunos residuos de Gln pueden ser substratos mientras que otros no, se propone para indicar que "otros no son substratos" a un grado donde la selectividad deseada aún se puede lograr. Si uno o más residuos de Gln, los cuales se desea dejar sin conjugar, son de hecho un substrato para la transglutaminasa cuando están en contacto con la transglutaminasa durante un período de tiempo extendido, la selectividad se puede lograr al retirar o inactivar la transglutaminasa después de un tiempo adecuado.
Los ejemplos de transglutaminasas útiles incluyen transglutaminasas microbianas, tales como por ejemplo aquellas de Streptomyces mobaraense, Streptomyces cinnamoneum y Streptomyces griseocarneum (todas dadas a conocer en la Patente Norteamericana No. 5,156,956, la cual se incorpora en este documento a manera de referencia) y de Streptojnyces lavendulae (dada a conocer en la Patente Norteamericana 5,252,469, la cual se incorpora en este documento a manera de referencia) y Streptomyces ladakanum (documento JP 2003199569, el cual se incorpora en este documento a manera de referencia) . Se debe observar que los miembros del último genero Streptoverticillium ahora están incluidos en el genero Streptomyces (Kaempfer, J. Gen. Microbiol. 137, 1831-1892 (1991)). Otras transglutaminasas microbiana útiles se han aislado de Bacil lus subtilis (dadas a conocer en la Patente Norteamericana 5,731,183, la cual se incorpora en este documento a manera de referencia) y de diversos Myxomycetes. Otros ejemplos de transglutaminasas microbianas útiles son aquellas dadas a conocer en el documento WO 96/06931 (por ejemplo transglutaminasa de Bacil us lydicus) y el documento WO 96/22366, ambos se incorporan en este documento a manera de referencia. Las transglutaminasas no microbianas útiles incluyen la transglutaminasa de hígado de cobayo y las transglutaminasas de diversas fuentes marinas como el pez plano Pagrus maj or (dadas a conocer en el documento EP-0555649, el cual se incorpora en este documento a manera de referencia) y la ostra japonesa Crassostrea gigas (dadas a conocer en la Patente Norteamericana 5,736,356, la cual se incorpora en este documento a manera de referencia) . En una modalidad, la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina que es conjugada con PEG es una hormona de crecimiento humana (hGH) , la cual también se conoce como somatotropina humana. Existen diferentes variantes de hGH como se da a conocer por ejemplo en la base de datos pública SwissProt. Comprende un péptido de señal de 26 aminoácidos y un péptido maduro de 191 aminoácidos. En una modalidad, la hGH tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID No. 1 en este documento (también conocida como una 22K-hGH) . En una modalidad, la hGH es hGH de 20 kDa (o 20K-hGH) como se describe en J. Clin. Endocrin. Metabol. 89, 1562-1571 (2004) y Endocrine J. , 4_ , S49-S52 (2000). La hGH de 20 kDa es una hGH con un peso molecular de 20 kDa (20K-hGH) , la cual es secretada por la glándula pituitaria anterior como una variante de empalme (empalme alternativo del exon 3) y se ha reportado que representa aproximadamente 5-10% de la hGH del plasma en circulación (Baumann, Endocr. Rev. 12, 424-449 (1991)). La 20K-hGH carece de 15 aminoácidos en comparación con la 22K-hGH (residuos 32-46) . La 22K-hGH está aprobada actualmente y se utiliza en terapias de reemplazo de hGH y farmacología, sin embargo la 20K-hGH nunca se ha utilizado en estas terapias. La 20K-hGH es un agonista completo para la promoción del crecimiento en ratas sometidas a la hipofisectomía y ratas enanas, por lo tanto es tan potente como la 22K-hGH (Wada y colaboradores, Mol. Cellu. Endocr. 113, 99-107 (1997), Ishikawa y colaboradores, Growth Horm. IGF Res. 10, 199-206 (2000)). Además, el efecto osteoanabólico de la 20K-hGH en células de osteoblastos humanos también es equipotente con aquel de la 22K-hGH. En un estudio de infusión durante 24 horas de tres brazos (en ratas) utilizando la 20K-hGH recombinante, 22K-hGH y un grupo de control, la 20K-hGH no tuvo un efecto significativo sobre la velocidad de infusión de glucosa (GIR, por sus siglas en inglés) en pinzamientos euglicémicos en comparación con un control. En contraste, la 22K-hGH disminuyó significativamente la GIR en comparación con tanto la 20K-hGH y el grupo de control (Takahashi y colaboradores, Growth Horm. IGF Res. 11, 110-116 (2001)). De esta manera, un perfil en el plasma de 20K-hGH sin picos (estable) parece tener menos diabetogenecidad y una acción antagonizante de insulina reducida que 22K-hGH. Además, en ratas normales la 20K-hGH exhibió menos potencia para causar la retención de orina (formación de edema) que la 22K-hGH (Satozawa y colaboradores, Growth Horm. IGF Res. 10, 187-192 (2000)). Un producto de la hormona de crecimiento de acción prolongada tendrá un perfil en el plasma cercano a aquel obtenido utilizando una infusión. Por lo tanto, el uso de un derivado de 20K-hGH podría ofrecer una farmacología deseada similar como un derivado de 22K-hGH, sin embargo con un perfil mejorado de efectos adversos. Además, la 20K-hGH podría tener una probabilidad mejorada para proporcionar un producto de hormona de crecimiento de acción prolongada ya que tienen una vida media en el plasma inherente 30% más prolongada en humanos en comparación con la 22K-hGH. Se cree que la eliminación reducida es debido a una eliminación disminuida mediada por receptores (Leung y colaboradores, Am. J. Pisiol Endocr. Metab. 283, 836-843 (2002)). Además, a una concentración baja (0.1 nM) la 20K-hGH mostró que era aproximadamente tres veces más eficiente que la 22K-hGH para inducir la expresión de IGF-1 (Yoshizato y colaboradores, Endocr. J. 47_, 37-40 (2000)) - indicando nuevamente un mejor perfil para un producto de hormona de crecimiento de acción prolongada . En una modalidad, la hormona de crecimiento que es conjugada con PEG es una variantes de hGH, en donde se entiende que una variante es el compuesto obtenido al sustituir uno o más residuos de aminoácidos en la secuencia de hGH por otro aminoácido natural o no natural; y/o al agregar uno o más aminoácidos naturales o no naturales a la secuencia de hGH; y/o al suprimir uno o más residuos de aminoácidos de la secuencia de hGH, en donde cualquiera de estos pasos puede estar seguido opcionalmente por una derivatización adicional de uno o más residuos de aminoácidos, por ejemplo por medio de la conjugación con PEG dando por resultado una variante de hormona de crecimiento di- o multi-conjugada con PEG. En particular, estas sustituciones son conservadoras en el sentido que un residuo de aminoácido es sustituido por otro residuo de aminoácido del mismo grupo, es decir por otro residuo de aminoácido con propiedades similares. Los aminoácidos pueden dividirse convenientemente en los siguientes grupos basados en sus propiedades: aminoácidos básicos (tales como arginina y lisina) , aminoácidos ácidos (tales como ácido glutámico y ácido aspártico) , aminoácidos polares (tales como glutamina, histidina, cisteína y asparagina) , aminoácidos hidrófobos (tales como leucina, isoleucina, prolina, metionina y valina) , aminoácidos aromáticos (tales como fenilalanina, triptófano, tirosina) y aminoácidos pequeños (tales como glicina, alanina, serina y treonina) . En una modalidad, la hGH es una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido. En una modalidad, la hGH es una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimida o sustituida por otro aminoácido. En una modalidad, la hGH es una hGH, en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 han sido suprimidos o sustituidos cada uno por otro aminoácido y donde el residuo de glutamina está presente en otra posición en la hormona de crecimiento. En una modalidad adicional, el otro aminoácido es asparagina. En una modalidad, la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina que es conjugada con PEG tiene al menos 80%, tal como al menos 85%, tal como al menos 90%, tal como al menos 95% tal como al menos 98% de identidad con la hGH. En una modalidad, las identidades con hGH se acoplan a al menos 20%, tal como al menos 40%, tal como al menos 60%, tal como al menos 80% de la actividad de hormona de crecimiento de la hGH como se determina en el ensayo I en este documento. El término "identidad" conocido en el campo se refiere a una relación entre las secuencias de dos o más proteínas, determinada al comparar las secuencias. En el campo, "identidad" también significa el grado de relación de secuencias entre proteínas, determinada por el número de coincidencias entre cadenas de dos o más residuos de aminoácidos. La "identidad" mide el porcentaje de coincidencias idénticas entre la más pequeña de las dos o más secuencias con alineamientos de espacios (si existen) dirigidos por un modelo matemático particular o programa de computadora (es decir, "algoritmos") . La identidad de proteínas relacionadas puede calcularse fácilmente por medio de métodos conocidos. Estos métodos incluyen, pero no están limitados a, aquellos descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, A. M. , ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing : Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Parte 1, Griffin, A. M. y Griffin, H. G., eds . , Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J. , eds., M. Stockton Press, Nueva York, 1991; y Carillo y colaboradores, SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988). Los métodos preferidos para determinar la identidad están diseñados para proporcionar la coincidencia más grande entre las secuencias sometidas a prueba. Los métodos para determinar la identidad se describen en programas de computadora públicamente disponibles. Los métodos de programas de computadora preferidos para determinar la identidad entre dos secuencias incluyen el paquete de programas GCG, que incluye GAP (Devereux y colaboradores, Nucí. Acid. Res., 12:387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), BLASTP, BLASÓN y FASTA (Altschul y colaboradores, J. Mol. Biol., 215:403-410 (1990)). El programa BLASTX es públicamente disponible de the National Center for Biotechnology Information (NCBI) y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul y colaboradores NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul y colaboradores, supra) . El algoritmo Smith Waterman bien conocido también se puede utilizar para determinar la identidad. Por ejemplo, utilizando el algoritmo de computadora GAP (Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.), dos proteínas para las cuales debe determinarse el porcentaje de identidad de secuencias se alinean para la equiparación óptima de sus aminoácidos respectivos (el "tramo equiparado", determinado por el algoritmo) . Una penalización por abertura de espacio (la cual es calculada como 3. veces, la diagonal promedio; la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se utiliza; la "diagonal" es el registro o número asignado a cada coincidencia perfecta de aminoácidos por la matriz de comparación particular) y una penalización por extensión de espacio (la cual es usualmente {fracción entre (1/10)} veces la penalización por abertura de espacio), así como también una matriz de comparación tal como PAM 250 o BLOSUM 62 se utilizan en conjunto con el algoritmo. Una matriz de comparación estándar (véase Dayhoff y colaboradores, Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3 (1978) para la matriz de comparación PAM 250; Henikoff y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci EUA, 89:10915-10919 (1992) para la matriz de comparación BLOSUM 62) también es utilizada por el algoritmo. Los parámetros preferidos para una comparación de secuencias de proteínas incluyen los siguientes: Algoritmo: Needleman y colaboradores, J. Mol. Biol, 48:443-453 (1970); Matriz de comparación: BLOSUM 62 de Henikoff y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. EUA, 89:10915-10919 (1992); Penalización por Espacio: 12, Penalización por Longitud de Espacio: 4, Umbral de Similitud: 0. El programa GAP es útil con los parámetros anteriores. Los parámetros mencionados anteriormente son los parámetros por omisión para las comparaciones de proteínas (junto con la ausencia de penalización para los espacios de extremo) utilizando el algoritmo GAP. Se debe entender que las hormonas de crecimiento descritas anteriormente que son conjugadas con PEG deben comprender al menos un residuo de glutamina. El término "residuo de glutamina" utilizado en este documento también incluye un análogo de residuo de glutamina que es adecuado para la transaminación. Los análogos de residuos de glutamina adecuados incluyen, pero no están limitados a, análogos de residuos de glutamina parcialmente fluorados, alquilado o deuterados o un homólogo de un residuo de glutamina, es decir un compuesto que resulta de la inserción formal de uno, dos o más grupos metileno (-CH2-) en un enlace C-C, C-H o C-N de glutamina. La hormona de crecimiento es puede obtener por medio de métodos de síntesis de proteínas estándar o la hormona de crecimiento se puede obtener al transfectar una célula hospedante adecuada con un ADN que codifica la hormona de crecimiento de interés. Esto se encuentra dentro de las capacidades de una persona experta. Las hormonas de crecimiento conjugadas con PEG que se pueden obtener por medio del uso de un método utilizado de acuerdo con la invención también se pueden derivatizar por medio de otros medios diferentes de la conjugación con PEG, si así se desea. Esta derivatización adicional se puede realizar antes, durante o después del uso de los pasos del método de la invención. Dentro de la habilidad de una persona experta en el campo está el determinar la sincronización de esta derivatización adicional. La hormona de crecimiento utilizada también puede estar ya conjugada con PEG en una o más posiciones adicionales además del sitio o sitios que son conjugados con PEG utilizando un método de acuerdo con la presente invención. En una modalidad, D representa -O- . En otra modalidad, D representa un enlace individual.
El conector R proporciona la separación apropiada de la amina del nucleófilo y el grupo funcional o el grupo funcional latente que es incorporado en la hormona de crecimiento. En una modalidad, R representa - (CH2) -CH (NH ) -CO-NH-CH2- o - (CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-. En una modalidad, R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. En una modalidad, R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono. En una modalidad, R representa metileno, etileno o propileno. En una modalidad, R es metileno o propileno. En una modalidad, Z representa 2 mPEG-O^C> c- H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa. Se debe entender que el grupo funcional comprendido en X puede ser latente en el sentido que tiene que ser activado antes de la reacción con Y-Z. A manera de ejemplo, X puede comprender una porción la cual con una reacción con un reactivo adecuado se transforma a un aldehido o una cetona. Los ejemplos de estas porciones incluyen en donde R ,9 representa H, alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, arilo o heteroarilo. Los ejemplos particulares incluyen metilo, etilo y propilo. Las porciones se pueden transformar a un aldehido o cetona por medio de la oxidación con un agente adecuado, tal como por ejemplo peryodato o por medio de la hidrólisis con un ácido acuoso, opcionalmente en presencia de un catalizador, tal como las sales de cobre, plata o mercurio. En el presente contexto, el término "arilo" se propone para indicar un radical de anillos aromáticos homocíclicos o un radical de sistema de anillos homocíclicos fusionados en donde al menos uno de los anillos es aromático. Los grupos arilo típicos incluyen fenilo, bifenililo, naftilo, tetralinilo y similares. El término "heteroarilo", utilizado en este documento, solo o en combinación, se refiere a un radical de anillo aromático con por ejemplo de 5 a 7 átomos en el anillo o a un radical de sistema de anillos aromáticos fusionados con por ejemplo de 7 a 18 átomos en el anillo, en donde al menos un anillo es aromático y contiene uno o más heteroátomos como átomos en el anillo seleccionados de heterbátomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, en donde los N-óxidos y monóxidos de azufre y dióxidos de azufre son sustituciones heteroaromáticas permisibles. Los ejemplos incluyen furanilo, tienilo, tiofenilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, isotiazolilo, piridinilo, piridazinilo, pirazinilo, pirimidinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofuranilo, benzotiofenilo, indolilo e indazolilo y similares. También se debe entender que X e Y deben ser complementarios en el sentido que deben ser capaces de reaccionar entre sí para formar un enlace de oxima. Esto significa que si X es (o se puede activar para ser) un aldehido o cetona, entonces Y debe ser un aminoxi. Si X es un aminoxi, entonces Y debe ser un aldehido o una cetona. Si Y es un aldehido o una a cetona, entonces X debe ser un aminoxi. Si Y es un aminoxi, entonces X debe ser (o debe ser activado a) un aldehido o una cetona. Los ejemplos particulares del compuesto de la fórmula [II] incluyen 1, 3-diaminooxi-propano y 1, 3-diamino-2-propanol . Si se utiliza el último compuesto, el grupo aldehido latente tiene que ser oxidado, por ejemplo por medio de peryodato, para ser convertido a un aldehido. En una modalidad, Y representa -0-NH2 y X representa un aldehido o un grupo latente, el cual puede hacerse reaccionar adicionalmente para formar un aldehido. En una modalidad, Y representa -0-NH2 y X representa una cetona o un grupo latente el cual puede hacerse reaccionar adicionalmente para formar una cetona. En una modalidad, el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diamino-2-propanol e Y representa -O-NH . En una modalidad adicional, el compuesto de la fórmula [IV] [IV] representa un compuesto seleccionado de donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. En una modalidad, Y representa un aldehido y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2. En una modalidad adicional, el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diaminooxi-propano e Y representa un aldehido. En una modalidad adicional, el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [iv] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. En una modalidad, Y representa una cetona y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2. En una modalidad adicional el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diaminooxi-propano e Y representa una cetona. En una modalidad adicional, el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. Los compuestos de la fórmula [IV] son comercialmente disponibles, por ejemplo de las compañías Shearwater o NOF o se pueden obtener fácilmente a partir de compuestos comercialmente disponibles con una modificación química simple. Los compuestos de la fórmula V pueden tener propiedades farmacológicas mejoradas o alternativas en comparación con la hormona de crecimiento no conjugada correspondiente, también referida como la hormona de crecimiento precursora. Por lo tanto, en una modalidad, la presente invención se refiere a un método para modificar las propiedades farmacológicas de una hormona de crecimiento, el método comprende unir un PEG a la hormona de crecimiento de acuerdo con los métodos de la presente invención. Los ejemplos de estas propiedades farmacológicas incluyen la vida media in vivo funcional, inmunogenecidad, filtración renal, protección de proteasa y enlace a albúmina. El término "vida media in vivo funcional" se utiliza en su significado normal, es decir, el tiempo en el cual 50% de la actividad biológica de la hormona de crecimiento u hormona de crecimiento conjugada está aún presente en el cuerpo/órgano objetivo o el tiempo en el cual la actividad de la hormona de crecimiento o conjugado de hormona de crecimiento es 50% de su valor inicial. Como una alternativa para determinar la vida media in vivo funcional, se puede determinar la "vida media en plasma in vivo" , es decir el tiempo en el cual 50% de la hormona de crecimiento o conjugado de hormona de crecimiento circula en el plasma o torrente sanguíneo antes de que sea eliminada. La determinación de la vida media en plasma es frecuentemente más simple que la determinación de la vida media funcional y la magnitud de la vida media en plasma es usualmente una buena indicación de la magnitud de la vida media in vivo funcional. Los términos alternativos para la vida media en plasma incluyen vida media en el suero, vida media en circulación, vida media circulatoria, eliminación del suero, eliminación del plasma y vida media de eliminación. El término "incrementado" utilizado en conexión con la vida media in vivo funcional o la vida media en plasma se utiliza para indicar que la vida media relevante del conjugado de hormona de crecimiento se incrementa de manera estadísticamente significativa con relación a aquella de la hormona de crecimiento precursora, determinado bajo condiciones comprables. Por ejemplo, la vida media relevante se puede incrementar por al menos aproximadamente 25%, tal como por al menos aproximadamente 50%, por ejemplo por al menos aproximadamente 100%, 150%, 200%, 250% o 500%. En una modalidad, los compuestos de la presente invención exhiben un incremento en la vida media en al menos aproximadamente 5 horas, preferiblemente al menos aproximadamente 24 horas, más preferiblemente al menos aproximadamente 72 horas y mucho más preferiblemente al menos aproximadamente 7 días, con relación a la vida media de la GH precursora. La medición de la vida media en plasma in vivo se puede llevar a cabo en una variedad de formas como se describe en la bibliografía. Un incremento en la vida media en plasma in vivo se puede cuantificar como una disminución en la eliminación (CL) o como un incremento en el tiempo de residencia promedio (MRT, por sus siglas en inglés) . La hormona de crecimiento conjugada de la presente invención para la cual se disminuye la CL a menos de 70%, tal como menos de 50%, tal como menos de 20%, tal como menos de 10% de la CL de la hormona de crecimiento precursora determinado en un ensayo adecuado se dice que tiene una vida media en plasma in vivo incrementada. La hormona de crecimiento conjugada de la presente invención para la cual el MRT se incrementa a más de 130%, tal como más de 150%, tal como más de 200%, tal como más de 500% del MRT de la hormona de crecimiento precursora en un ensayo adecuado se dice que tiene un vida media en plasma in vivo incrementada. La eliminación y el tiempo de residencia promedio pueden evaluarse en estudios farmacocinéticos estándar utilizando animales de prueba adecuados. Dentro de las capacidades de una persona experta en el campo está el seleccionar a un animal de prueba adecuado para una proteína dada. Por supuesto que las pruebas en humanos representan la última prueba. Los animales de prueba adecuados incluyen ratas macho normales Sprague-Dawley, ratones y mono cynomolgus. Típicamente, los ratones y las ratas son inyectados en un bolo subcutáneo individual, mientras que los monos pueden inyectarse en un bolo subcutáneo individual o en una dosis iv individual. La cantidad inyectada depende del animal de prueba. Subsecuentemente, las muestras de sangre se toman durante un período de uno a cinco días como sea apropiado para la evaluación de la CL y el MRT. Las muestras de sangre se analizan convenientemente por medio de técnicas de ELISA. El término "Inmunogenecidad" de un compuesto se refiere a la capacidad del compuesto, cuando se administra a un humano, para producir una respuesta inmune dañina, ya sea humoral, celular o ambas. En cualquier sub-población humana, pueden existir individuos quienes exhiban sensibilidad a proteínas administradas particulares. La inmunogenecidad se puede medir al cuantificar la presencia de anticuerpos de hormona de crecimiento y/o células T sensibles a la hormona de crecimiento en un individuo sensible, utilizando métodos convencionales conocidos en el campo. En una modalidad, la GH conjugada de la presente invención exhibe una disminución en la inmunogenecidad en un individuo sensible de al menos aproximadamente 10%, preferiblemente al menos aproximadamente 25%, más preferiblemente al menos aproximadamente 40% y mucho más preferiblemente al menos aproximadamente 50%, con relación a la inmunogenecidad para ese individuo de la GH precursora. En otro aspecto, la inmunogenecidad puede referirse a la respuesta típica en una población de sujetos similares, tal como la respuesta típica en una población de pacientes en una prueba clínica. El término "protección de proteasa" o "protegido de proteasa" utilizado en este documento se propone para indicar que la hormona de crecimiento conjugada de la presente invención es más resistente a las peptidasas o proteasas del plasma que la hormona de crecimiento precursora. Se sabe que las enzimas proteasa y peptidasa que están presentes en el plasma están implicadas en la degradación de proteínas circulantes, tales como por ejemplo hormonas peptidicas circulantes, tal como la hormona de crecimiento. La resistencia de una proteína a la degradación por ejemplo por la dipeptidilaminopeptidasa IV (DPPIV) se determina por medio del siguiente ensayo de degradación: las alícuotas de la proteína (5 nmol) se incuban a 37°C con 1 µl de la dipeptidilaminopeptidasa IV purificada que corresponde a una actividad enzimática de 5 mU durante 10-180 minutos en 100 µl de amortiguador de trietilamina-HCl 0.1 M, pH 7.4. Las reacciones enzimáticas se terminan por la adición de 5 µl de ácido trifluoroacético al 10% y los productos de degradación de proteínas se separan y se cuantifican utilizando el análisis de CLAR. Un método para realizar este análisis es: las mezclas se aplican a una columna Vydac C18 de poros anchos (poros de 30 nm, partículas de 5 µm) 250 x 4.6 mm y se eluyen a una velocidad de flujo de 1 ml/minuto con gradientes progresivos lineales de acetonitrilo en ácido trifluoroacético al 0.1% (acetonitrilo al 0% durante 3 minutos, acetonitrilo al 0-24% durante 17 minutos, acetonitrilo al 24-48% durante 1 minuto) de acuerdo con Siegel y colaboradores, Regul. Pept . 79, 93-102 (1999) y Mentlein y colaboradores Eur. J. Biochem. 214, 829-35 (1993) . Las proteínas y sus productos de degradación se pueden supervisar por su absorbancia a 220 nm (enlaces peptídicos) o 280 nm (aminoácidos aromáticos) y se cuantifican por medio de la integración de sus áreas pico relacionadas con aquellas de los estándares. La proporción de hidrólisis de una proteína por la dipeptidil-aminopeptidasa IV se calcula en tiempos de incubación los cuales dan por resultado menos de 10% del péptido que es hidrolizado. La resistencia a otras proteasas o peptidasas del plasma se puede determinar de maneras similares. En una modalidad, la proporción de hidrólisis del conjugado de hormona de crecimiento es menor que 70%, tal como menor que 40%, tal como menor que 10% de aquélla de la hormona de crecimiento precursora. El componente de proteína más abundante en la sangre en circulación de las especies de mamíferos es la albúmina de suero, la cual está presente normalmente en una concentración de aproximadamente 3 a 4.5 gramos por 100 mL de sangre entera. La albúmina de suero es una proteína sanguínea de aproximadamente 70,000 daltons la cual tiene varias funciones importantes en el sistema circulatorio. Funciona como un transportador de una variedad de moléculas orgánicas encontradas en la sangre, como el transportador principal de varios metabolitos tales como ácidos grasos y bilirrubina a través de la sangre y debido a su abundancia, como un regulador osmótico de la sangre en circulación. La albúmina de suero tiene una vida media de más de una semana y un planteamiento para incrementar la vida media en el plasma de las proteínas ha sido conjugar a la proteína un grupo que se enlaza a la albúmina de suero. La propiedad de enlace a la albúmina se puede determinar como se describe en J. Med. Chem, 4_3, 1986-1992 (2000), el cual se incorpora en este documento a manera de referencia. En una modalidad, la presente invención se refiere a un compuesto de acuerdo con la fórmula [V] p PP- N-D-R-A-Z H [V] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido; D representa -O- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2) -CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O C v H, en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo. En una modalidad, el polipéptido es un residuo de glutamina que comprende una hormona de crecimiento y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento. En una modalidad, la invención se refiere a una hormona de crecimiento, tal como hGH, la cual está unida covalentemente a una o más porciones que comprenden PEG y en particular mPEG, en donde la porción que comprende PEG está unida a la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento. En una modalidad, la invención se refiere a hGH la cual está unida covalentemente a una porción que comprende PEG y en particular mPEG, en donde la porción que comprende PEG está unida a la cadena lateral del residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40, posición 141 o posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1, a condición de que no sea Nel41-[2- (4- (4-(mPEG(20k)ilbutanoil) -amino-butiloxiimino) -etilo] -hGH, Nel41- [2- (1- (hexadecanoil) piperidin-4-il) etiloxiimino) -etilo] -hGH, Nel41(2- (4- (4-(l,3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) butiloxi-imino) etilo) -hGH, Nel41 (2- (4- (2, 6-bis (mPEG(20k) iloxicarbonilamino) -hexanoilamino) butiloxiimino) etilo) -hGH, Nel41(2-(4-(4- (mPEG(30k) iloxi) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, Nel41 (2- (4- (4- (mPEG(20k) iloxi) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, o N6141 (2- (4- (3- (mPEG (30k) iloxi) propanoilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH. En una modalidad, la invención se refiere a un compuesto de la fórmula [Va] [Va] en donde GH representa un radical de la hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento; D representa -0- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2) -CH(NH2) -C0-NH-CH2-, - (CH2) 4"CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H2 mPEG-O c- H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo; con la condición que si Z es entonces mPEG es un mPEG de 10 kDa. En una modalidad, D representa -O-, En una modalidad, D representa un enlace individual . En una modalidad, R representa - (CH2) 4-CH (NH2) -CO-NH-CH2- o - (CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-. En una modalidad, R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. En una modalidad adicional, R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono. En una modalidad adicional, R representa metileno, etileno o propileno. En una modalidad adicional, R representa metileno o propileno. En una modalidad, Z representa H2 H2 mPEG-O C H, H, mPEG —-0- C** H, en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa. En una modalidad, GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1. En una modalidad, GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH de 20 kDa. En una modalidad, GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de glutamina 40 de hGH. En particular, la hGH puede haber sido modificada adicionalmente al suprimir la glutamina 141 o al sustituir la glutamina 141 por otro aminoácido y en particular asparagina. En una modalidad, GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de glutamina 141 de hGH. En particular, la hGH puede haber sido modificada adicionalmente al suprimir la glutamina 40 o al sustituir la glutamina 40 por otro aminoácido y en particular asparagina. En una modalidad, GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y diferente de la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1, y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 cada una que ha sido suprimida o sustituida por otro aminoácido y en particular asparagina. Los ejemplos particulares de los compuestos de la fórmula [Va] incluyen Wdl41/40-2-(O-(4-{4-(l,3-bis(mPEG(10k)ilaminocarboniloxi)prop-2-iloxi) butiriljaminobutil) -oximino) etilo-hGH; A^141/40-2-(0-(4-{4-(mPEG(10k)iloxi)butiril}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; ?ldl 1 40-2-(O-(4-{3-(mPEG(10k)iloxi)propionil}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; Mdl41/40-2-(O-(4-{4-(2,3-bis(mPEG(10k)iloxi)prop-l-iloxi) butiril }aminobutil) oximino) etilo-hGH; Wdl41 40-2-(O-(4-{5-(mPEG(10k) iloxi-5-oxopentanoil }aminobutil) -oximino) etilo-hGH; wdi4i/40_3_ ( { 4_ (2_ (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilamino-carboniloxi) prop-2-iloxi) butiril-amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; AJdi4i/o_3_ ( { _ (i^ 3_bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; A)dl41 0-3-({4-(mPEG(10k) iloxi) butiliden}aminoxi) propiloxi-hGH; ?ldl41 0-3-({4-(2,3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; -Vdl 140-3-({3-(mPEG(10k) iloxi) propiliden}aminoxi) propiloxi-hGH; ?ldl41 40-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; Aldl 1 40-3- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; A/di4i/4o_2_ (0_ ( _{ 4_ (?f 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril }aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Mdl4140-2-(0-(4-{3-(mPEG(20k)iloxi)propionil}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; ?|di4i/40_2_ (0_ (4_{ 4_ (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiril }aminobutil) oximino) etilo-hGH; Mdl41 40-2-(0-(4-{5-(mPEG(20k)iloxi-5-oxopentanoil}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; Aldl41 40-3- ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden}aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; A|di4i/40_3_ ( { 4_ (1? 3_bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Wdl 1 0-3-({4-(mPEG(20k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; A|di4i/40_3_ ( { 4_ (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Ndi4i/40_3_ ( { 3_ (mPEG (2ok) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?|di4i/40_2_ (0_ (2_ (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; 7?/di4i/40_3_ ( ( 4_ (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?)dl 1 40-2- (O- (4-{ 4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril }aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ]^141 40-2- (O- (4-{ 3- (mPEG (30k) iloxi) propionil }aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?/di4i/40_2_ (Q_ (4_{ 4_ (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril }aminobutil) oximino) etilo-hGH; N5l 1/40-2-(O-(4-{5-(mPEG(30k)iloxi-5-oxopentanoil}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; Jdi4i/4o_3_ ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?75i4i/40_3_ ( { 4- (?f 3_bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi)butiliden}-aminoxi) -propiloxi-hGH; 41 0-3- ({4- (mPEG(30k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Wdl 1 40-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) butiliden }-aminoxi) propiloxi-hGH; ?/dl41 40-3- ({ 3- (mPEG ( 30k) iloxi ) propiliden } aminoxi ) propiloxi-hGH; ?dl 1 40-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?di4i/40_3_ ( {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden } aminoxi ) propiloxi-hGH ; /di4i/40_3_ ( { 4-{ (2, 3-bis (mPEG (20k) il) prop-1-iloxi) PEGiloxi }-butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; A/di4i/40_2_ ( (4_ (4_ ( (2, 3-bis (mPEG (20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) -etilo-hGH; ?/dl 1-2- (O- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; A/dl41-2- (O- (4- {4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril Jaminobutil) oximino) -etilo-hGH; N5l41-2- (O- (4- {3- (mPEG (lOk) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?^141-2- (O- (4-{ 4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; ?ldl41-2- (O- (4-{5- (mPEG(lOk) iloxi-5-oxo?entanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; rful-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; rf l-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?dl 1-3-({4-(mPEG(10k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ^141-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; i\^141-3- ( {3- (mPEG(lOk) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Adl 1-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ^?n-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi ) prop-1-iloxi) propiliden }-aminoxi) propiloxi-hGH; ?/dl41-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril }-minobutil) -oximino) etilo-hGH; A/dl41-2- (O- (4- {3- (mPEG (20k) iloxi) propionil Jaminobutil ) -oximino) etilo-hGH; ?/dl41-2- (O- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; iv5l41-2- (O- (4- {5- (mPEG (20k) iloxi-5-oxo?entanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ? 41-3- ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocar-boniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; 1-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?^141-3-({ 4- (mPEG(20k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ]\^141-3- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; rflll l-3- ({3- (mPEG(20k) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; N5l41-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?/5141^- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?ldl 1-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; Wdl41-2- (0-( 4- {3- (mPEG(30k) iloxi) propionil Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; A/dl 1-2- (0- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; ?^141-2- (0- (4- {5- (mPEG (30k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; rful-3- ( {4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; iV5l41-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; iv5l*J1-3- ({4- (mPEG(30k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; rf1?1-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/dl41-3- ( (3- (mPEG(30k) iloxi) propiliden}aminoxi) propiloxi-hGH; Wdl41-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; i^141-3- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; A^141-3- ( { 4-{ (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-il) PEGiloxi } -butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?ldl41-2-( (4-(4-( (2,3-bis(mPEG(20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; iV540-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?/d40-2- (O- (4-{4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (0- (4- { 3- (mPEG ( lOk) iloxi) propionil } aminobutil ) oximino) • etilo-hGH; A^0-2- (0- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) pro?-1-iloxi) butiril } aminobutil) oximino) etilo-hGH; ¿vd40-2- (0- (4- {5- (mPEG (lOk) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; rf*°-3- ( {4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; iv540-3- ({ 4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; rfiQ-3- ({4- (mPEG(lOk) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; rf*°-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi ) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi ) propiloxi-hGH; rf*°-3- ({3- (mPEG( 10k) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; A/d40-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) 2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?/d40-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ?/d40-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; A/d40-2-(O-(4-{3-(mPEG(20k)iloxi)propionil}aminobutil)-oximino) etilo-hGH; iV540-2- (O- (4-{4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiril } -aminobutil ) oximino) etilo-hGH; -Vd40-2- (O- (4- {5- (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; rf*°-3- ( {4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ^i0-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden } -aminoxi) -propiloxi-hGH; ^0-3- ({4- (mPEG(20k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; _V540-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi ) prop-1-iloxi) butiliden }-aminoxi) propiloxi-hGH; ?^40-3-({3-(mPEG(20k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/d 0-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) • 2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; N540-3- ( { 4- ( 2 , 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden J-aminoxi) propiloxi-hGH; A?d40-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril} -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; i^40-2- (0- (4- { 3- (mPEG (30k) iloxi) propionil Jaminobutil) oximino) -etilo-hGH; Wd40-2- (0-( 4- {4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) butiril }-aminobutil ) oximino) etilo-hGH; Wd 0-2- (0- (4-{5- (mPEG (30k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; iV540-3- ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilamino-carboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; rfi0-3- ({4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; rf*°-3- ( {4- (mPEG(30k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; rf"l0-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/d 0-3- ({3- (mPEG(30k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; iV540-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) 2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; lSpi0-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden J -aminoxi) propiloxi-hGH; A^°-3- ({4-{ (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-il) PEGiloxiJ-butilidenj aminoxi) propiloxi-hGH; N540-2- ( (4- (4- ( (2, 3-bis (mPEG (20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; 2^141- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20K) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; Al41- [2- (0- (4- (4- (mPEG (30K) oxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; ?fl41-(3-( ( 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; ?fl41-[2- (2- (2, 3- (mPEG(20K) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; ?l41-[2-(0- (2-(2-(mPEG(40K) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo] -hGH; Al41- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG (30K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxi) -propiloxiimino) etilo] -hGH; 1^141/40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20K) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; ^141/40- [2- (O- (4- (4- (mPEG (30K) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; Afl41/40-(3-( (4-(2-(2-(2-(2-(4-(l,3-bis (mPEG (20K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 7 141/40- [2- (2- (2,3- (mPEG (20K) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; 2/141/40- [2- (O- (2- (2- (mPEG(40K) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo] -hGH; 2/141/40- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG(30K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) -aminoxi) propiloxiimino) etilo] -hGH; 2/40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20K) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; 2/40- [2- (O- (4- (4- (mPEG(30K) oxi) butirilamino) butil) oxiimino) -etilo] -hGH; 2 40- (3- ( (4- (2- (2- (2- (2- ( 4- ( 1, 3-bis (mPEG (20K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 2/40- [2- (2- (2,3- (mPEG (20K) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] hGH; 2/40- [2- (O- (2- (2- (mPEG (40K) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo] -hGH; 2/40- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG (30K) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxi) -propiloxiimino) etilo] -hGH; Algunas de las representaciones gráficas anteriores pueden representarse también o alternativamente como 2V5141- (2- (O- (2- (2, 3-Bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxicarbonilamino) etil) oximino) etilo) -hGH, 2^141-(2- (O- (3- (2, 3-Bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxi-carbonilamino) propil) oximino) etilo) -hGH, 2V540- (2- (O- (2- (2, 3-Bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxicarbonilamino) etil ) oximino) etilo) -hGH, 2^40- (2- (O- (3- (2, 3-Bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxicarbonilamino) propil) oximino) etilo) -hGH, Tv/5141- (2-0- (2-OXO-2- (3- (2, 3-Bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, 2^40- (2-0- (2-OXO-2- (3- (2, 3-Bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, 2^141- (2-0- (4- (5- (3- (omega- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) -propiloxi) propiloxi) polioxi-etileniloxi) propilamino) -1, 5-dioxopentilamino) butil) oximinoetilo) -hGH, 25141- (2- (0- (2- (2, 3-Bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) etil) oximino) etilo) -hGH, 2^141- (2- (0- (3- (2, 3-Bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi-carbonilamino) propil) oximino) etilo) -hGH, 2\?d40- (2- (O- (2- (2, 3-Bis (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) etil) oximino) etilo) -hGH, 2\ld°- (2- (0- (3- (2, 3-Bis (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) propil) oximino) etilo) -hGH, TN/5141- (2-0- (2-oxo-2- (3- (2, 3-Bis (mPEG(20k) iloxi ) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, 2^°- (2-0- (2-oxo-2-(3- (2,3-Bis (mPEG(20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, 2V5141- (2-0- (4- (5- (3- (omega- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) -propiloxi) propiloxi) polioxi-etileniloxi) propilamino) -1,5-dioxopentilamino) butil) oximinoetilo) -hGH, 2^141- (2- (0- (2- (2, 3-Bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxicarbonilamino) etil) oximino) etilo) -hGH, TN5141- (2- (0- (3- (2, 3-Bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxi-carbonilamino) propil) oximino) etilo) -hGH, 2^40-(2-(O-(2- (2,3-Bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etil) oximino) etilo) -hGH, ^40- (2- (0- (3- (2, 3-Bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -propil) oximino) etilo) -hGH, 2\?d141- (2-0-(2-oxo-2- (3- (2,3-Bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, 2^40-(2-O- (2-oxo-2-(3-(2,3-Bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) etil) oximinoetilo) -hGH, y 2^141- (2-0- (4- (5- (3- (omega- (3- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) -propiloxi) propiloxi) polioxi-etileniloxi) propilamino) -1, 5-dioxopentilamino) butil) oximinoetilo) -hGH . En una modalidad, la presente invención se refiere a un compuesto de acuerdo con la fórmula [VI] [VI] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en el polipéptido; D representa -0- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono: A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo. En una modalidad, el polipéptido es un residuo de glutamina que comprende una hormona de crecimiento y PP representa un radical de la hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hormona de crecimiento. En una modalidad, la presente invención proporciona un compuesto de acuerdo con la fórmula [Vía] [Via] en donde GH representa un radical de la hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hormona de crecimiento; D representa -0- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2) -C0-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2-, o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo. En una modalidad, D representa -0-. En una modalidad, D representa un enlace individual . En una modalidad, R representa - (CH2) 4-CH (NH2) -C0-NH-CH2- o - (CH2)4-CH(NHC0CH3)-C0-NH-CH2-. En una modalidad, R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. En una modalidad adicional, R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono. En una modalidad adicional, R representa metileno, etileno o propileno. En una modalidad adicional, R representa metileno o propileno. En una modalidad, Z representa H2 H2 mPEG-O C H en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa. En una modalidad, GH en la fórmula [Vía] representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1. En una modalidad, GH en la fórmula [Vía] representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hGH de 20 kDa. En una modalidad, GH en la fórmula [Vía] representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y de la cadena lateral del residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ; o representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 4, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 de la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido y por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C (=0) -NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID NO. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido y por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos glutaminas que están presentes en una hGH en posiciones diferentes de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1, en donde cualquier residuo de glutamina que está presente en las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otros aminoácidos. En una modalidad adicional o alternativa, la invención proporciona los métodos y compuestos descritos en este documento, en donde cada instancia de "mPEG" es reemplazada por un compuesto de alcoxi-PEG o "aPEG" de la fórmula en donde m es un número entero más grande que 1. Cada Rl puede ser cualquier grupo alquilo de 1 a 10 átomos de carbono adecuado, ramificado o no ramificado (por 3 a 10 átomos de carbono) que incluye, pero no está limitado a, metilo, etilo, propilo y butilo. La presente invención también proporciona un compuesto obtenido por medio del uso de un método de acuerdo con la invención. La presente invención también proporciona un compuesto que se puede obtener por medio del uso de un método de acuerdo con la invención. Los compuestos de la presente invención ejercen una actividad de hormona de crecimiento y se pueden utilizar como tales en el tratamiento de enfermedades o estados los cuales se beneficiarán de un incremento en la cantidad de hormona de crecimiento circulante. En particular, la invención proporciona un método para el tratamiento de la deficiencia de hormona de crecimiento (GHD, por sus siglas en inglés) ; Síndrome de Turner; síndrome de Prader- illi (P S, por sus siglas en inglés) ; síndrome de Noonan; síndrome de Do n; enfermedad renal crónica, artritis reu atoide juvenil; fibrosis quística, infección por VIH en niños que reciben el tratamiento HAART (niños con VIH/HALS) ; niños pequeños nacidos de baja estatura por la edad gestacional (SGA, por sus siglas en inglés); baja estatura en niños nacidos con un peso muy bajo al nacer (VLB , por sus siglas en inglés) excepto SGA; displasia esquelética; hipocondroplasia; acondroplasia; baja estatura idiopática (ISS, por sus siglas en inglés) ; GHD en adultos; fracturas en o de huesos largos, tales como tibia, peroné, fémur, húmero, radio, cubito, clavícula, metacarpo, metatarso y dígito; fracturas en o de huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano y la base del pie; pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo una mano, rodilla u hombro; pacientes que tienen o que atraviesan una osteogénesis por desatención; pacientes después del reemplazo de cadera o disco, reparación de meniscos, fusiones espinales o fijación de prótesis, tal como en la rodilla, cadera, hombro, codo, muñeca o mandíbula; pacientes en los cuales se ha fijado el material de osteosíntesis, tal como clavos, tornillos y placas; pacientes con falta de unión o con una unión incorrecta de fracturas; pacientes después de la osteotomía, por ejemplo de la tibia o 1er dedo del pie; pacientes después del implante de injertos; degeneración de cartílago articular en rodillas causado por traumatismo o artritis; osteoporosis en pacientes con síndrome de Turner; osteoporosis en hombres; pacientes adultos en diálisis crónica (APCD, por sus siglas en inglés) ; enfermedad cardiovascular asociada con desnutrición en APCD; regresión de caquexia en APCD; cáncer en APCD; enfermedad pulmonar obstructiva crónica en APCD; VIH en APCD; personas de edad avanzada con APCD; enfermedad hepática crónica en APCD, síndrome de fatiga en APCD; enfermedad de Crohn; función hepática deteriorada; varones con infecciones por VIH; síndrome de intestino corto; obesidad central; síndrome de lipodistrofia asociada con el VIH (HALS, por sus siglas en inglés) ; infertilidad masculina; pacientes después de cirugía optativa mayor, desintoxicación de alcohol/drogas o traumatismo neurológico; envejecimiento; personas de edad avanzada frágiles; osteoartritis; cartílago dañado por traumatismo; disfunción eréctil; fibromialgia; trastornos de memoria; depresión; lesión traumática del cerebro; lesión traumática de la médula espinal; hemorragia subaracnoidea; peso muy bajo al nacer; síndrome metabólico; miopatía glucocorticoidea; baja estatura debido al tratamiento con glucucorticoides en niños, el método comprende administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la presente invención. En particular, el compuesto es un compuesto de la fórmula [Va] o la fórmula [Vía] . Los términos "tratamiento" y "tratar" utilizados en este documento significan el manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir una condición, tal como una enfermedad o un trastorno. Se propone que el término incluya el espectro completo de tratamientos para una condición dada de la cual está sufriendo el paciente, tal como la administración del compuesto activo para aliviar los síntomas o complicaciones, para retardar el progreso de la enfermedad, trastorno o condición, para aliviar o mejorar los síntomas y complicaciones y/o para curar o eliminar la enfermedad, trastorno o condición así como también para prevenir la condición, en donde la prevención debe entenderse como el manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir la enfermedad, condición o trastorno e incluye la administración de los compuestos activos para prevenir el comienzo de los síntomas o complicaciones. El paciente que es tratado es preferiblemente un mamífero, en particular un ser humano, pero también puede incluir animales, tales como perros, gatos, vacas, ovejas y cerdos. No obstante, se debe reconocer que los regímenes terapéuticos y los regímenes profilácticos (preventivos) representan aspectos separados de la invención. Una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto utilizado en este documento significa una cantidad suficiente para curar, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de una enfermedad dada y sus complicaciones. Una cantidad adecuada para realizar esto se define como una "cantidad terapéuticamente efectiva". Las cantidades efectivas para cada propósito dependerán de por ejemplo la gravedad de la enfermedad o lesión así como también el peso, sexo, edad y estado general del sujeto. Se debe entender que la determinación de una dosificación apropiada puede lograrse utilizando la experimentación de rutina, al construir una matriz de valores y someter a prueba diferentes puntos en la matriz, todo lo cual está dentro de la experiencia ordinaria de un médico o veterinario capcitado. De esta manera, la presente invención proporciona un compuesto de acuerdo con la invención para el uso en la terapia.
En una aspecto, la invención proporciona un método para la aceleración de la curación de un tejido muscular, tejido nervioso o heridas; la aceleración o mejoramiento del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la proporción de infección en el tejido dañado, el método comprende la administración a un paciente en necesidad del mismo en una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención. En particular, el compuesto es un compuesto de la fórmula [Va] o la fórmula [Vía] . En una modalidad, la invención se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la presente invención en la manufactura de enfermedades que se benefician de un incremento en el nivel en el plasma de hormona de crecimiento, tal como la enfermedad mencionada anteriormente. En particular, el compuesto es un compuesto de la fórmula [Va] o la fórmula [Vía] . Una dosis parenteral típica está en el rango de 10~9 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por administración. Las dosis de administración típicas son de aproximadamente 0.0000001 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por administración. La dosis exacta dependerá de por ejemplo la indicación, medicamento, frecuencia y modo de administración, el sexo, edad o condición general del sujeto que es tratado, el carácter y la gravedad de la enfermedad o condición que es tratada, el efecto deseado del tratamiento y otros factores evidentes para la persona experta en el campo. Las frecuencias de dosificación típicas son dos veces al día, una vez al día, cada dos días, dos veces a la semana, una vez a la semana o con intervalos de dosificación aún más prolongados. Debido a las vidas medias prolongadas de los compuestos de la presente invención en comparación con una hormona de crecimiento no conjugada correspondiente, un régimen de dosificación con intervalos de dosificación prolongados, tales como dos veces a la semana, una vez a la semana o con intervalos de dosificación aún más prolongados es una modalidad particular de la invención. Muchas enfermedades son tratadas utilizando más de un medicamento en el tratamiento, ya sea administrados concomitantemente o administrados secuencialmente. Por lo tanto, está dentro del alcance de la presente invención utilizar los compuestos de la presente invención en métodos terapéuticos para el tratamiento de una de las enfermedades mencionadas anteriormente en combinación con uno o más diferentes compuestos terapéuticamente activos que se utilizan normalmente en el tratamiento de las enfermedades. Por analogía, también está dentro del alcance de la presente invención el utilizar los compuestos de la presente invención en combinación con otros compuestos terapéuticamente activos que se utilizan normalmente en el tratamiento de una de las enfermedades mencionadas anteriormente en la manufactura de un medicamento para la enfermedad.
COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Otro propósito es proporcionar una composición farmacéutica que comprenda un compuesto de la presente invención el cual está presente en un concentración de 10"15 mg/ml a 200 mg/ml, tal como por ejemplo 10"10 mg/ml a 5 mg/ml y en donde la composición tiene un pH de 2.0 a 10.0. La composición puede comprender además un sistema de amortiguador, conservado (es) , agente (s) de tonicidad, agente (s) quelatante (s) , solubilizadores y surfactantes . En una modalidad de la invención, la composición farmacéutica es una composición acuosa, es decir una composición que comprende agua. Esta composición es típicamente una solución o una suspensión. En una modalidad adicional de la invención, la composición farmacéutica es una solución acuosa. El término "composición acuosa" se define como una composición que comprende al menos 50% p/p de agua. Del mismo modo, el término "solución acuosa" se define como una solución que comprende al menos 50% p/p de agua y el término "suspensión acuosa" se define como una suspensión que comprende al menos 50% p/p de agua. En otra modalidad, la composición farmacéutica es una composición secada por congelamiento, a la cual el médico o el paciente agrega solventes y/o diluyentes antes del uso. En otra modalidad, la composición farmacéutica es una composición seca (por ejemplo secada por congelamiento o secada por pulverización) que está lista para el uso sin ninguna disolución anterior. Es un aspecto adicional, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una solución acuosa de un compuesto de la presente invención y un amortiguador, en donde el compuesto está presente en una concentración de 0.1-100 mg/ml o superior y en donde la composición tiene un pH de aproximadamente 2.0 a aproximadamente 10.0. En otra modalidad de la invención, el pH de la composición se selecciona de la lista que consiste de 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9 y 10.0. En una modalidad adicional de la invención, el amortiguador se selecciona del grupo que consiste de acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, usina, arginina, fosfato diácido de sodio, fosfato ácido de disodio, fosfato de sodio y tris (hidroximetil) -aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico o mezclas de los mismos. Cada uno de estos amortiguadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un conservador farmacéuticamente aceptable. En una modalidad adicional de la invención, el conservador se selecciona del grupo que consiste de fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol y tiomerosal, bronopol, ácido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de benzetonio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropano-l, 2-diol) o mezclas de los mismos. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 5 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 5 mg/ml a 10 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 10 mg/ml a 20 mg/ml. Cada uno de estos conservadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un conservador en composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Remington: The Science and Practi ce of Pharma cy, 20a edición, 2000. En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un agente isotónico. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico se selecciona del grupo que consiste de una sal (por ejemplo cloruro de sodio) , un azúcar o alcohol de azúcar, un aminoácido (por ejemplo, L-glicina, L-histidina, arginina, usina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina) , un alditol (por ejemplo glicerol (glicerina) , 1, 2-propanodiol (propilenglicol), 1, 3-propanodiol, 1 , 3-butanodiol) polietilenglicol (por ejemplo PEG400) o mezclas de los mismos. Se puede utilizar cualquier azúcar tal como mono-, di- y polisacáridos o glucanos solubles en agua, inclusive por ejemplo fructosa, glucosa, mañosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, almidón soluble, almidón de hidroxietilo y carboximetilcelulosa-Na . En una modalidad, el aditivo de azúcar es sacarosa. El alcohol de azúcar se define como un hidrocarburo de 4 a 8 átomos de carbono que tiene al menos un grupo -OH e incluyen, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol. En una modalidad, el aditivo de alcohol de azúcar es manitol. Los azucares o alcoholes de azúcar mencionados anteriormente pueden utilizarse individualmente o en combinación. No existe un límite fijo para la cantidad utilizada, siempre y cuando el azúcar o alcohol de azúcar sea soluble en la preparación líquida y no afecte de manera adversa los efectos de estabilización obtenidos utilizando los métodos de la invención. En una modalidad, la concentración de azúcar o alcohol de azúcar está entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 150 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 1 mg/ml a 50 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 1 mg/ml a 7 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 8 mg/ml a 24 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 25 mg/ml a 50 mg/ml. Cada uno de estos agentes isotónicos específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un agente isotónico en composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Remington: The Science and Pra ctice of Pharma cy, 20a edición, 2000.
En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un agente quelatante. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelatante se selecciona de sales de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) , ácido cítrico y ácido aspártico y mezclas de los mismos. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelatante está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 5 mg/ml. En una modalidad de la invención, el agente quelatante está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 2 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelatante está presente en una concentración de 2 mg/ml a 5 mg/ml. Cada uno de estos agentes quelatantes específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un agente quelatante en composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Remington: The Science and Pra ctice of Pharma cy, 20a edición, 2000. En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un estabilizador. El uso de un estabilizador en composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Remington: The Science and Pra ctice of Pharmacy, 20a edición, 2000. Más particularmente, las composiciones de la invención son composiciones farmacéuticas, líquidas, estabilizadas cuyos componentes terapéuticamente activos incluyen una proteína que exhibe posiblemente la formación de agregado durante el almacenamiento en composiciones farmacéuticas líquidas. Por la "formación de agregados" se propone una interacción física entre las moléculas de proteína que da por resultado la formación de oligómeros, los cuales pueden permanecer solubles o grandes agregados visibles que se precipitan de la solución. Por "durante el almacenamiento" se propone que una composición farmacéutica líquida o una composición una vez preparada, no se administra inmediatamente a un sujeto. Preferiblemente, después de la preparación, se empaca para el almacenamiento, ya sea en una forma líquida, en un estado congelado o en una forma seca para la reconstitución posterior en una forma líquida u otra forma adecuada para la administración a un sujeto. Por "forma seca" se propone la composición farmacéutica líquida o la composición se seca ya sea por medio del secado por congelamiento (es decir, liofilización; véase, por ejemplo, Williams y Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59) , secado por pulverización (véase Masters (1991) in Spray-Drying Handbook (5° edición; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), páginas 491 - 676; Broadhead y colaboradores (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; y Mumenthaler y colaboradores (1994) Pharm. Res. 11:12-20) o secado al aire (Carpenter y Cro e (1988) Cryobiology 25:459-470; y Roser (1991) Biopharm. 4:47-53). La formación de agregados por una proteína durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida puede afectar de manera adversa la actividad biológica de esa proteína, dando por resultado la pérdida de eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agregados puede causar otros problemas tales como bloqueo de tuberías, membranas o bombas cuando la composición farmacéutica que contiene proteínas se administra utilizando un sistema de infusión. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender además una cantidad de una base de aminoácidos suficiente para disminuir la formación de agregados por la proteína durante el almacenamiento de la composición. Por una "base de aminoácido" se propone un aminoácido o una combinación de aminoácidos, donde cualquier aminoácido dado está presente ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Donde se utiliza una combinación de aminoácidos, todos los aminoácidos pueden estar presentes en sus formas de bases libres, todos pueden estar presentes en sus formas de sales o algunos pueden estar presentes en sus formas de bases libres mientras que otros están presentes en sus formas de sales. En una modalidad, los aminoácidos para el uso en la preparación de las composiciones de la invención son aquellos que llevan una cadena lateral cargada, tal como arginina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico. Cualquier estereoisómero (es decir, isómero L o D o mezclas de los mismos) de un aminoácido particular (metionina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina y mezclas de los mismos) o combinaciones de estos estereoisómeros o glicina o una base orgánica tal como pero no limitada a imidazol, pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas de la invención siempre y cuando el aminoácido o base orgánica particular esté presente ya sea en su forma de base libre o su forma de sal. En una modalidad, se utiliza el L-estereoisómero de un aminoácido. En una modalidad se utiliza el L-estereoisómero. Las composiciones de la invención también se pueden formular con análogos de estos aminoácidos. Por "análogo de aminoácido" se propone un derivado del aminoácido de origen natural que produce el efecto deseado de disminución de la formación de agregados por la proteína durante el almacenamiento de las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención. Los análogos de arginina adecuados incluyen, por ejemplo, aminoguanidina, ornitina y N-monoetil-L-arginina, los análogos de metionina adecuados incluyen etionina y butionina y los análogos de cisteína adecuados incluyen S-metil-L-cisteína. Como con los otros aminoácidos, los análogos de aminoácidos se incorporan en las composiciones en ya sea su forma de base libre o su forma de sal. En una modalidad adicional de la invención, los aminoácidos o análogos de aminoácidos se utilizan en una concentración, la cual es suficiente para prevenir o retardar la agregación de la proteína . En una modalidad adicional de la invención, la metionina (u otros aminoácidos sulfúricos o análogos de aminoácidos) se puede agregar para inhibir la oxidación de residuos de metionina a sulfóxido de metionina cuando la proteína que actúa como el agente terapéutico es una proteína que comprende al menos un residuo de metionina susceptible a esta oxidación. Por "inhibir" se propone la acumulación mínima de especies oxidadas de metionina a través del tiempo. La inhibición de la oxidación de metionina da por resultado una mayor retención de la proteína en su forma molecular apropiada. Se puede utilizar cualquier estereoisómero de metionina (isómero L o D) o cualquier combinación de los mismos. La cantidad que se agrega debe ser una cantidad suficiente para inhibir la oxidación de los residuos de metionina de tal manera que la cantidad de sulfóxido de metionina sea aceptable para las agencias reguladoras. Típicamente, esto significa que la composición contiene no más de aproximadamente 10% a aproximadamente 30% de sulfóxido de metionina. Generalmente, esto se puede obtener al agregar metionina de tal manera que la relación de metionina agregada con respecto a los residuos de metionina varíe de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1000:1, tal como de 10:1 a aproximadamente 100:1. En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un estabilizador seleccionado del grupo de polímeros de alto peso molecular o compuestos de bajo peso molecular. En una modalidad adicional de la invención, el estabilizador se selecciona de polietilenglicol (por ejemplo PEG 3350), alcohol polivinílico (PVA), polivinilpirrolidona, carboxi/hidroxicelulosa o derivados de la misma (por ejemplo HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC) , ciclodextrinas, sustancias que contienen azufre como monotioglicerol, ácido tioglicólico y 2-metiltioetanol y diferentes sales (por ejemplo cloruro de sodio). Cada uno de estos estabilizadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender agentes de estabilización adicionales, los cuales mejoran adicionalmente la estabilidad de una proteína terapéuticamente activa en las mismas. Los agentes de estabilización de interés particular para la presente invención incluyen, pero no están limitados a, metionina y EDTA, los cuales protegen a la proteína contra la oxidación de metionina y un surfactante no iónico, el cual protege a la proteina contra la agregación asociada con la congelación -descongelación o cizallamiento mecánico.
En una modalidad adicional de la invención, la composición comprende además un surfactante. En una modalidad adicional de la invención, el surfactante se selecciona de un detergente, aceite de ricino etoxilado, glicéridos poliglicolizados, monoglicéridos acetilados, esteres de ácidos grasos de sorbitan, polímeros de bloque de polioxipropileno-polioxietileno (por ejemplo poloxámeros tales como Pluronic F68MR, poloxámero 188 y 407, Tritón X-100MR) , esteres de ácidos grasos de polioxietilen-sorbitan, derivados de polioxietileno y polietileno tales como derivados alquilados y alcoxilados (tweens, por ejemplo Tween-20MR, T een-40MR, Tween-80MR y Brij-35MR), monoglicéridos o derivados etoxilados de los mismos, diglicéridos o derivados de polioxietileno de los mismos, alcoholes, glicerol, lectinas y fosfolípidos (por ejemplo fosfatidil-serina, fosfatidil-colina, fosfatidil-etanolamina, fosfatidil-inositol, difosfatidil-glicerol y esfingomielina) , derivados de fosfolípidos (por ejemplo ácido dipalmitoil-fosfatídicos) y lisofosfolípidos (por ejemplo palmitoil-lisofosfatidil-L-serina y esteres de l-acil-sn-glicero-3-fosfato de etanolamina, colina, serina o treonina) y derivados de alquilo, alcoxilo (éster alquílico) , alcoxi (éter alquílico) de lisofosfatidilo y fosfatidilcolinas, por ejemplo derivados de lauroilo y miristoilo de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina y modificaciones del grupo principal polar, es decir, colinas, etanolaminas, ácido fosfatídico, serinas, treoninas, glicerol, inositol y DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, lisofosfatidilserina y lisofosfatidiltreonina cargados positivamente y glicerofosfolípidos (por ejemplo cefalinas) , gliceroglicolipidos (por ejemplo galactopiransoide) , esfingoglicolípidos (por ejemplo ceramidas, gangliosidas) , dodecilfosfocolina, lisolecitina de huevo de gallina, derivados de ácido fusídico (por ejemplo tauro-dihidrofusidato de sodio etcétera) , ácidos grasos de cadena larga y sales de los mismos de 6 a 12 átomos de carbono (por ejemplo ácido oleico y ácido caprílico) , acilcarnitinas y derivados, derivados Na-acilados de lisina, arginina o histidina o derivados acilados de cadena lateral de lisina o arginina, derivados N -acilados de dipéptidos que comprenden cualquier combinación de lisina, arginina o histidina y un aminoácido neutro o ácido, derivado Na-acilado de un tripéptido que comprende cualquier combinación de un aminoácido neutro y dos aminoácidos cargados, DSS (docusato de sodio, registro de CAS número [577-11-7]), docusato de calcio, registro de CAS número [128-49-4]), docusato de potasio, registro de CAS número [7491-09-0]), SDS (dodecil-sulfato de sodio o lauril-sulfato de sodio) , caprilato de sodio, ácido cólico o derivados de los mismos, ácidos biliares y sales de los mismos y conjugados de glicina o taurina, ácido ursodeoxicólico, colato de sodio, desoxicolato de sodio, taurocolato de sodio, glicocolato de sodio, N-Hexadecil-N, N-dimetil-3-amonio-l-propanosulfonato, surfactantes monovalentes (alquil-aril-sulfonatos) aniónicos, surfactantes z itteriónicos (por ejemplo N-alquil-N, N-dimetilamonio-1-propanosulfonatos, 3-colamido-1-propil-dimetilamonio-1-propanosulfonato, surfactantes catiónicos (bases de amonio cuaternario) (por ejemplo bromuro de cetil-trimetilamonio, cloruro de cetilpiridinio) , surfactantes no iónicos (por ejemplo, dodecil-ß-D-glucopiranosida) , poloxaminas (por ejemplo de Tetronic's), las cuales son copolímeros de bloque tetrafuncionales derivados de la adición secuencial de óxido de propileno y óxido de etileno a etilendiamina o el surfactante puede seleccionarse del grupo de derivados de imidazolina o mezclas de los mismos. Cada uno de estos surfactantes específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un surfactante en composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a edición, 2000. Es posible que otros ingredientes puedan estar presentes en la composición farmacéutica de la presente invención. Estos ingredientes adicionales pueden incluir agentes de humedecimiento, emulsionantes, antioxidantes, agentes de carga, modificadores de tonicidad, agentes quelatantes, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, albúmina de suero humano, gelatina o proteínas) y un zwiterion (por ejemplo, un aminoácido tal como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina) . Por supuesto que estos ingredientes adicionales no deben afectar de manera adversa la estabilidad total de la composición farmacéutica de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la presente invención se pueden administrar a un paciente en necesidad de este tratamiento en varios sitios, por ejemplo, en sitios tópicos, por ejemplo, sitios de la piel y mucosas, sitios los cuales desvían la absorción, por ejemplo, la administración en una arteria, en una vena, en el corazón y en sitios los cuales involucran la absorción, por ejemplo, la administración en la piel, bajo la piel, en un músculo o en el abdomen. La administración de composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención puede ser a través de varias rutas de administración, por ejemplo, lingual, sublingual, bucal, en la boca, oral, en el estómago e intestino, nasal, pulmonar, por ejemplo a través de los bronquiolos y alvéolos o una combinación de los mismos, epidérmica, dérmica,, transdérmica, vaginal, rectal, ocular, por ejemplo a través de la conjuntiva, uretral y parenteral a pacientes en necesidad de este tratamiento. Las composiciones de la presente invención pueden administrarse en varias formas de dosificación, por ejemplo como soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, emulsión múltiple, espumas, bálsamos, pastas, emplastos, ungüentos, tabletas, tabletas revestidas, enjuagues, cápsulas por ejemplo cápsulas de gelatina dura y cápsulas de gelatina suave, supositorios, cápsulas rectales, gotas, geles, pulverizaciones, polvos, aerosoles, inhalantes, colirio, ungüentos oftálmicos, enjuagues oftálmicos, pesarios vaginales, anillos vaginales, ungüentos vaginales, solución para inyección, soluciones para transformación in situ por ejemplo gelificación in situ, endurecimiento in situ, precipitación in situ, cristalización in situ, solución para infusión e implantes. Las composiciones de la invención pueden combinarse adicionalmente en, o unirse a, por ejemplo a través de interacciones covalentes, hidrófobas y electrostáticas, un portador de fármaco; sistema de suministro de fármaco y sistema de suministro de fármaco avanzado a fin de mejorar adicionalmente la estabilidad del conjugado de GH, incrementar la biodisponiblidad, incrementar la solubilidad, disminuir los efectos adversos, lograr una cronoterapia bien conocida para aquellas personas expertas en el campo e incrementar el consentimiento del paciente o cualquier combinación de los mismos. Los ejemplos de portadores, sistemas de suministro de fármacos y sistema de suministro de fármacos avanzados incluyen, pero no están limitados a, polímeros, por ejemplo celulosa y derivados, polisacáridos, por ejemplo dextrano y derivados, almidón y derivados, alcohol poli (vinílico) , polímeros de acrilato y metacrilato, ácido poliláctico y poliglicólico y copolímeros de bloque de los mismos, polietilenglicoles, proteínas portadoras por ejemplo albúmina, geles, por ejemplo sistemas de termogelificación, por ejemplo sistemas copoliméricos de bloque bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo, micelas, liposomas, microesferas, nanopartículas, cristales líquidos y dispersiones de los mismos, fase L2 y dispersiones de la misma bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo del comportamiento de las fases en sistemas de lipidos-agua, micelas poliméricas, emulsiones múltiples, ciclodextrinas autoemulsionantes, automicroemulsionantes y derivados de las mismas y dendrímeros . Las composiciones de la presente invención son útiles en la composición de sólidos, semisólidos, polvo y soluciones para la administración pulmonar de un compuesto de la fórmula [Va] o la fórmula [Vía] utilizando, por ejemplo, un inhalador de dosis medida, un inhalador de polvo seco y un nebulizador, todos los dispositivos son bien conocidos para aquellas personas expertas en campo. Las composiciones de la presente invención son específicamente útiles en la composición de sistemas de suministro de fármacos de liberación controlada, sostenida, prolongada, retardada y lenta. Más específicamente, pero no limitado a, las composiciones son útiles en una composición de sistemas parenterales de liberación controlada y liberación sostenida (ambos sistemas conducen a una reducción de múltiples veces en el número de administraciones), bien conocidos para aquellas personas expertas en el campo. Aún más preferiblemente, son sistemas de liberación controlada y liberación sostenida administrados por la ruta subcutánea. Sin limitar el alcance de la invención, los ejemplos de sistemas y composiciones de liberación controlada útiles son hidrogeles, geles oleaginosos, cristales líquidos, micelas poliméricas, microesferas, nanopartículas. Los métodos para producir sistemas de liberación controlada que son útiles para las composiciones de la presente invención incluyen, pero no están limitados a, cristalización, condensación, co-cristalización, precipitación, co-precipitación, emulsificación, dispersión, homogenización de alta presión, encapsulamiento, secado por pulverización, microencapsulamiento, co-acervación, separación de fases, evaporación de solventes para producir microesferas, extrusión y procesos de fluidos supercríticos.
Se hace referencia general a Handbook of Pharmaceutical Controlled Reléase (Wise, D. L., ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000) y Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Composition and Delivery (MacNally, E. J. , ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000) . La administración parenteral se puede realizar por medio de una inyección subcutánea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa similar a un lapicero. Alternativamente, la administración parenteral se puede realizar por medio de una bomba de infusión. Una opción adicional es una composición la cual puede ser una solución o suspensión para la administración del compuesto de la presente invención en la forma de una pulverización nasal o pulmonar. Como una opción aún adicional, las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de la invención también se pueden adaptar para la administración transdérmica, por ejemplo por medio de una inyección libre de agujas o de un parche, opcionalmente un parche iontoforético o la administración transmucosa, por ejemplo bucal. El término "composición estabilizada" se refiere a una composición con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementada. El término "estabilidad física" de la composición proteica utilizado en este documento se refiere a la tendencia de la proteína a formar agregados biológicamente inactivos y/o insolubles de la proteína como resultado de la exposición de la proteína a tensiones termomecánicas y/o la interacción con interfases y superficies que son desestabilizadoras, tales como las superficies e interfases hidrófobas. La estabilidad física de las composiciones proteicas acuosas se evalúa por medio de la inspección visual y/o mediciones de turbiedad después de la exposición de la composición vertida en recipientes adecuados (por ejemplo cartuchos o frasquitos) a tensiones mecánicas/físicas (por ejemplo agitación) a diferentes temperaturas durante varios períodos de tiempo. La inspección visual de las composiciones se realiza en una luz brillante enfocada con un fondo oscuro. La turbiedad de la composición se caracteriza por un registro visual que varía el grado de turbiedad por ejemplo en una escala de 0 a 3 (una composición que no muestra turbiedad corresponde a un registro visual 0 y una composición que muestra una turbiedad visual a la luz del día corresponde a un registro visual 3) . Una composición se clasifica como físicamente inestable con respecto a la agregación de proteínas cuando muestra turbiedad visual a la luz del día. Alternativamente, la turbiedad de la composición se puede evaluar por medio de mediciones simples de turbiedad bien conocidas para la persona experta. La estabilidad física de las composiciones proteicas acuosas también se puede evaluar por medio del uso de un agente espectroscópico o sonda del estado conformacional de la proteína. La sonda es preferiblemente una molécula pequeña que se enlaza preferentemente a un conformómero no nativo de la proteína. Un ejemplo de una sonda espectroscópica molecular pequeña de una estructura proteica es Thioflavin TMR. El Thioflavin TMR es un tinte fluorescente que se ha utilizado ampliamente para la detección de fibrillas amiloides. En presencia de fibrillas, y quizás también otras configuraciones proteicas, el Thioflavin TMR da origen a un nuevo límite superior de excitación a aproximadamente 450 nm y mejora la emisión a aproximadamente 482 nm cuando se enlaza a una forma proteica de fibrilla. El Thioflavin TMR no enlazado no es fluorescente esencialmente en las longitudes de onda. Otras moléculas pequeñas se pueden utilizar como sondas de los cambios en la estructura de la proteína de estados nativos a no nativos. Por ejemplo, las sondas de "parche hidrófobo" que se enlazan preferentemente a parches hidrófobos expuestos de una proteína. Los parches hidrófobos son sepultados generalmente dentro de la estructura terciaria de una proteína en su estado nativo, pero llegan a ser expuestos cuando una proteína comienza a desdoblarse o desnaturalizarse. Los ejemplos de estas sondas espectroscópicas, moleculares, pequeñas son tintes hidrófobos aromáticos, tales como antraceno, acridina, fenantrolina o similares. Otras sondas espectroscópicas son complejos de metal-aminoácido, tales como complejos con el metal cobalto de aminoácidos hidrófobos, tales como fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina y valina o similares. El término "estabilidad química" de la composición proteica utilizado en este documento se refiere a cambios covalentes químicos en la estructura de la proteína que conducen a la formación de productos de degradación química con menos potencia biológica probable y/o propiedades inmunogénicas incrementadas probables en comparación con la estructura de la proteína nativa. Se pueden formar varios productos de degradación química dependiendo del tipo y el carácter de la proteína nativa y el ambiente al cual se expone la proteína. Más probablemente, la eliminación de la degradación química puede no evitarse completamente y el incremento de cantidades de productos de degradación química se observa frecuentemente durante el almacenamiento y el uso de la composición proteica como es bien sabido para la persona experta en el campo. La mayoría de proteínas son propensas a la desamidación, un proceso en el cual el grupo amida de cadena lateral en residuos de glutaminilo o asparaginilo se hidroliza para formar un ácido carboxílico libre. Otras vías de degradación implican la formación de productos de transformación de alto peso molecular donde dos o más moléculas de proteír a se enlazan covalentemente entre sí a través de la trapsamidación y/o interacciones de disulfuro que conducen a la formación de productos de degradación diméricos, oligoméricos y poliméricos enlazados covalentemente { Stabili ty of Protein Pharmaceuti cals , Ahern. T. J. & Manníng M. C, Plenum Press , Nueva York 1992). La oxidación (por ejemplo de los residuos de metionina) se puede mencionar como otra variante de degradación química. La estabilidad química de la composición proteica se puede evaluar al medir la cantidad de los productos de degradación química en varios puntos de tiempo después de la exposición a diferentes condiciones ambientales (la formación de producto de degradación se puede acelerar frecuentemente por ejemplo al incrementar la temperatura) . La cantidad de cada producto de degradación individual se determina frecuentemente por medio de la separación de los productos de degradación dependiendo del tamaño y/o carga de la molécula utilizando varias técnicas cromatográficas (por ejemplo SEC-CLAR y/o CLAR-FI) . Por lo tanto, como se resumiera anteriormente, una "composición estabilizada" se refiere a una composición con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementadas. En general, una composición debe ser estable durante el uso y el almacenamiento (de conformidad con las condiciones recomendadas de uso y almacenamiento) hasta que se llegue la fecha de caducidad. En una modalidad de la invención, la composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención es estable durante más de 6 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento. En otra modalidad de la invención, la composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento. En una modalidad adicional de la invención, la composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento. En una modalidad aún adicional de la invención, la composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención es estable durante más de 2 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento. Lo siguiente es una lista numerada de modalidades y no debe considerarse como limitante de la invención: Modalidad 1. Un método para unir covalentemente un PEG a un polipéptido que comprende al menos un residuo de glutamina, el método comprende hacer reaccionar en uno o más pasos este polipéptido que comprende un residuo de glutamina representado por la fórmula [I] [I] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido, con un nucleófilo que contiene nitrógeno de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] en donde D representa -O- o un enlace individual; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4- CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) -CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; X representa -0-NH , un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, un aldehido o una cetona; en presencia de transglutaminasa para formar un polipéptido transaminado de la fórmula [III] opcionalmente, si X es un grupo latente, transformar el grupo latente en -0-NH2, un aldehido o una cetona, el polipéptido transaminado se hace reaccionar adicionalmente con un segundo compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] en donde Y, si X representa un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en un aldehido o una cetona, representa -O-NH?; o si X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, representa un aldehido o una cetona; y Z representa una porción seleccionada entre H •2„ 2 mPEG-O C H, H2 mPEG-O H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es , entonces PEG es un PEG de 10 kDa para formar un polipéptido conjugado con PEG de la fórmula [V] .O PP- - N-D-R-A-Z H [V] en donde A representa un enlace de oxima; o cualquier sal, profármaco o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. Modalidad 2. El método de acuerdo con la modalidad 1, en donde D representa -O- . Modalidad 3. El método de acuerdo con la modalidad 1, en donde D representa un enlace individual. Modalidad 4. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde R representa - (CH2) 4-CH (NH2) - CO-NH-CH2- o - (CH2)4-CH(NHCOCH3)-CO-NH-CH2-. Modalidad 5. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 3, en donde R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. Modalidad 6. El método de acuerdo con la modalidad 5, en donde R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono.
Modalidad 7. El método de acuerdo con la modalidad 6, en donde R representa metileno o propileno. Modalidad 8. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 7, en donde Z representa H2 H2 mPEG-0"C"c"C" H, H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es , entonces PEG es un PEG de 10 kDa. Modalidad 9. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde Y representa -0-NH2 y X representa un aldehido o un grupo latente, el cual se puede hacer reaccionar adicionalmente para formar un aldehido. Modalidad 10. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde Y representa -0-NH2 y X representa una cetona o un grupo latente el cual se puede hacer reaccionar adicionalmente para formar una cetona. Modalidad 11. El método de acuerdo con la modalidad 9 o la modalidad 10, en donde el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. Modalidad 12. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde Y representa un aldehido y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2. Modalidad 13. El método de acuerdo con la modalidad 12, en donde el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [iv] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. Modalidad 14. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde Y representa una cetona y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2. Modalidad 15. El método de acuerdo con la modalidad 14, en donde el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa. Modalidad 16. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diamino-2-propanol, e Y representa -0-NH2. Modalidad 17. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 8, en donde el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diaminooxi-propano, y Y representa un aldehido. Modalidad 18. Un método para modificar las propiedades farmacológicas de una hormona de crecimiento, el método comprende unir covalentemente un PEG a la hormona de crecimiento de acuerdo con un método de cualquiera de las modalidades 1 a 17. Modalidad 19. El método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 18, en donde el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento . Modalidad 20. El método de acuerdo con la modalidad 19, en donde la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representa una hormona de crecimiento humana. Modalidad 21. El método de acuerdo con la modalidad 20, en donde la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representa: a) una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1, b) una hGH de 20 kDa, c) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido, d) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido o e) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 han sido suprimidos o sustituidos cada uno por otro aminoácido y en donde un residuo de glutamina está presente en otra posición en la hormona de crecimiento . Modalidad 22. El método de acuerdo con la modalidad 21, en donde la hormona de crecimiento representa una hGH. Modalidad 23. Un compuesto de acuerdo con la fórmula [V] [V] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido; D representa -0- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHC0CH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre O mPEG- -N- H •Hrt 2 2-5 H2 mPEG-O c- H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo; con la condición que si Z es ,• entonces PEG es un PEG de 10 kDa. Modalidad 24. El compuesto de acuerdo con la modalidad 23, en donde D representa -O- . Modalidad 25. El compuesto de acuerdo con la modalidad 23, en donde D representa un enlace individual.
Modalidad 26. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 23 a 25, en donde R representa -(CH2)4-CH(NH2) -CO-NH-CH2- o - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- . Modalidad 27. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 23 a 25, en donde R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. Modalidad 28. El compuesto de acuerdo con la modalidad 27, en donde R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono. Modalidad 29. El compuesto de acuerdo con la modalidad 28, en donde R representa metileno o propileno. Modalidad 30. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 23 a 29, en donde Z representa en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es entonces el PEG es un PEG de 10 kDa.
Modalidad 31. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 23 a 30, en donde el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento. Modalidad 32. El compuesto de acuerdo con la modalidad 31, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1. Modalidad 33. El compuesto de acuerdo con la modalidad 31, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH de 20 kDa. Modalidad 34. El compuesto de acuerdo con la modalidad 31, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C (=0) -NH2 de la cadena lateral de a) el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1; o b) el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otra aminoácido; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C (=0) -NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y diferente de la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 han sido suprimidos o sustituidos cada uno por otro aminoácido.
Modalidad 35. Un compuesto de acuerdo con la modalidad 23 seleccionado de ?7di4i/4o_2_ (o_(4_{4_ (lí 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop- 2-iloxi) butiril Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?dl41 40-2- (0-( 4- {4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril} aminobutil )-oximino) etilo-hGH; Ñ?lil ¿í0-2- (0-( 4- {3- (mPEG(lOk) iloxi) propionil Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; AJd?4?/40_2_ (o- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiril } aminobutil) oximino) etilo-hGH; ?/d?-?/4o_2_ (0_ (4_{ 5_ (mpEG(10k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; Ndi4i 4o_3_ ({4_(2-(2-(2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi ) etoxi ) etoxi ) -butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; Ndi4i/40_3_ ( { 4_ {1/ 3_bis (mPEG (10k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden } -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?/di4i/40_3_ ({4_(mpEG(l?k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?r*141 40-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi ) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; wdi4i/40_3_ ( { 3_ (mPEG (iok) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH ; A|di4i/40_2_ (0_ (2_ (3_ (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; wdi4i/40_3_ ({ 4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden } aminoxi) propiloxi-hGH; ?/dl41 40-2-(0-(4-{4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop- 2-iloxi) butiril Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; wdi4i 40_2_ (0_ (4_{ 3_ (mpEG (20k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; A/di4i/4o_2_ (o- (4- { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; A/di4i/40_2_ (0_ (4_{5_ (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?f5i4i 40_3_ ( { 4_ (2_ (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; wdi4i/40_3_ ({4_ (1/ 3_bis (mpEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; Adi4i/4?_3_ ( {4_ (mPEG(20k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; wdi4i/40_3_ ( {4_ (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; Wdl41 40-3- ({3- (mPEG(20k) iloxi) propiliden} aminoxi )propiloxi-hGH; A/5i4i/4o_2_ (Q_ (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?|di4i/40_3_ ( { 4_ (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?ídl41 40-2-(O-( 4- { 4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?ldl 1 40-2-(O-(4-{3-(mPEG(30k) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; wdi i/40_2_ (o- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi ) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; wdi4i/4o_2_ (0_ (4_{5_ ( PEG(30k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Ajdi4i 40_3_ ( { - (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2- iloxi) butiril -amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?/di4i/40_3_ ({4_(lf 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden } -aminoxi) -propiloxi-hGH; A/di4i/40_3_ ({4_ (mPEG(30k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; wdi4i/40_3_ ( { 4_ (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ?/di4i/40_3_ ({3_ (mPEG(30k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH ; Wdl41 40-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; N5l 1 40-3-({4-(2,3-bis(mPEG(30k)iloxi)prop-l-iloxi)-propilidenj aminoxi) propiloxi-hGH; A)di4i/40_3_ ( {4-{ (2, 3-bis (mPEG (20k) il) prop-1-iloxi) PEGiloxi } -butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?|di4i/40_2_( (4_(4_( (2, 3-bis (mPEG(20k)il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; N5l41-2- (O- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; A/dl 1-2-(0- (4- {4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril } aminobutil) oximino) -etilo-hGH; Ar*1 1-2-(0- (4- {3- (mPEG(lOk) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wdl41-2- (0- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; A/Sl41-2- (O-(4-{5-(mPEG(10k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; NSu ?-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden } aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?/dl41-3-({4-(l, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden } -aminoxi) -propiloxi-hGH; A/5141-3- ( {4- (mPEG(lOk) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Ndl41-3-({4-(2,3-bis (mPEG ( 10k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; rflil-3- ( {3- (mPEG(lOk) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/dl41-2- ( O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) -etilo-hGH; rf,li l-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; iVdl41-2-(0- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -minobutil) -oximino) etilo-hGH; ?r*141-2-(0- (4- {3- (mPEG(20k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; N?141-2- (0- (4- { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; Wdl 1-2- (0- (4-{5- (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Ndl 1-3-({4-(2-(2- ( 2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ({4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; Wdl41-3- ({4-(mPEG(20k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?*dl41-3- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; A/dl 1-3- ( {3- (mPEG(20k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; -Vdl41-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?r*141-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; A^141-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; Ndi4i_2_ (0_ (4-{3-(mPEG(30k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; A^^^S- (0- (4-{4-(2,3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; AJdl 1-2- (O- (4- {5- (mPEG(30k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; i^141-3- ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; 7/5I41-3-({4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; rfu l-3- ( { 4- (mPEG (30k) iloxi) butiliden } aminoxi) propiloxi-hGH; A^141-3-( {4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; 2vdl 1-3- ( {3- (mPEG(30k) iloxi ) propiliden } aminoxi ) propiloxi-hGH; Nddl41-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?/dl41-3-({4-(2,3-bis(mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ?Jdl41-3-({4-{ (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-il) PEGiloxi } -butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Wdl41-2-( (4-(4-( ( 2, 3-bis (mPEG (20k) il) propil) PEGiloxi )-butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; A^40-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril} -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; i^40-2- (O- (4- {4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; Wd 0-2- (O- (4- {3- (mPEG(lOk) iloxi) propionil Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (O- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; Aid40-2- (O- (4-{ 5- (mPEG (lOk) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?r*40-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; N i0-3- ({4-(l,3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; Wd40-3-({4-(mPEG(10k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; AJd 0-3-({4-(2,3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; 2\^40-3- ( { 3- (mPEG (lOk) iloxi) propiliden Jaminoxi) propiloxi-hGH; AJd40-2-(O-(2-(3- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?^0-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; Wd 0-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (O- (4-{3- (mPEG(20k) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?/d40-2-(O-(4-{4-(2,3-bis(mPEG(20k)iloxi)prop-l-iloxi)butirilJ aminobutil) oximino) etilo-hGH; -vd 0-2- (O- (4-{5- (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; ?r*40-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?r*40-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; A*d40-3- ( {4- (mPEG (20k) iloxi) butiliden Jaminoxi) propiloxi-hGH; ATd40-3-({4-(2,3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden } -aminoxi) propiloxi-hGH; ?d40-3- ( { 3- (mPEG (20k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Wd 0-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo-hGH; Wd 0-3-({4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ZV50-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ZV540-2- (0-(4-{3- (mPEG(30k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wd40-2-(O- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi ) butiril } • aminobutil) oximino) etilo-hGH; ?/d40-2- (O- ( 4- { 5- (mPEG(30k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; rf*°-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden } aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?/d 0-3-({4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; A/840-3- ( {4- (mPEG (30k) iloxi ) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Ar*40-3-({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ?ld 0-3- ( {3- (mPEG (30k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; A/d40-2-(O (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo-hGH; A/d40-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; Ad40-3- ({4-{ (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-il) PEGiloxi } -butiliden } aminoxi) propiloxi-hGH; ?r*40-2-( (4-(4-( (2, 3-bis (mPEG (20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; 7/141- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; 7 141- [2- (0- (4- (4- (mPEG (30k) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; 7 141- (3- ( ( 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiril-amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 7 141- [2- (2- (2, 3- (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; 7 141- [2- (0- (2- (2-(mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo] -hGH; 7/141- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxí ) -propiloxiimino) etilo] -hGH; 7/141/40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; 7/141/40- [2- (O- (4- (4- (mPEG ( 30k) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; 7/141/40- (3- ( ( 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 7/141/40- [2- (2- (2, 3- (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; 7/l41/40-[2-(O-(2-(2- (mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo] -hGH; 7/141/40- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) -aminoxi) propiloxiimino) etilo] -hGH; 7/40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; 7/40- [2- (O- (4- (4- (mPEG (30k) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; 7/40- (3- ( (4-(2-(2-(2-(2-(4-(l,3-bis(mPEG(20k)ilamino-carboniloxi) -2-propiloxi ) butiril-amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 7/40- [2- (2- (2, 3- (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; 7/40- [2- (O- (2- (2-(mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo] -hGH; 7/40- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxi) -propiloxiimino) etilo] -hGH; Modalidad 36. Un compuesto de acuerdo con la fórmula [VI] [VI] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en el polipéptido; D representa -O- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H •2„ H2 mPEG-O C H, en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo; con la condición que si Z es entonces el mPEG es un mPEG de 10 kDa. Modalidad 37. El compuesto de acuerdo con la modalidad 36, en donde D representa -O- . Modalidad 38. El compuesto de acuerdo con la modalidad 36, en donde D representa un enlace individual. Modalidad 39. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 36 a 38, en donde R representa -(CH2)4-CH(NH2) -CO-NH-CH2- o - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- . Modalidad 40. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 36 a 38, en donde R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono. Modalidad 41. El compuesto de acuerdo con la modalidad 40, en donde R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono. Modalidad 42. El compuesto de acuerdo con la modalidad 41, en donde R representa metileno o propileno. Modalidad 43. El compuesto de conformidad con cualquiera de las modalidades 36 a 42, en donde Z representa H2 H2 mPEG-O C H, H2 mPEG-O H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es entonces el PEG es un PEG de 10 kDa. Modalidad 44. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 36 a 43, en donde el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hormona de crecimiento. Modalidad 45. El compuesto de acuerdo con la modalidad 44, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1. Modalidad 46. El compuesto de acuerdo con la modalidad 44, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hGH de 20 kDa. Modalidad 47. El compuesto de acuerdo con la modalidad 44, en donde GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y de la cadena lateral del residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido o por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido y por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos glutaminas que están presentes en una hGH en posiciones diferentes de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1, en donde cualquier residuo de glutamina que está presente en las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otros aminoácidos. Modalidad 48. Una hormona de crecimiento humana, la cual es unida covalentemente a una porción que comprende PEG, y en particular mPEG, en donde la porción que comprende PEG se une a la cadena lateral del residuo de glutamina 40, a la cadena lateral de la glutamina 141 o a las cadenas laterales de la glutamina 40 y la glutamina 141 de la hormona de crecimiento humana, a condición de que no sea T 141- [2- (4- (4- (mPEG (20k) ilbutanoil) -amino-butiloxiimino) -etilo] -hGH, T/141- [2- (1- (hexadecanoil) piperidin-4-il) etiloxiimino) etilo] -hGH, - 1'51(2- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) butiloxi-imino) etilo) -hGH, T/141 (2- (4- (2, 6-bis (mPEG (20k) iloxicarbonilamino) -hexanoilamino) butiloxiimino) etilo) -hGH, 7/141 (2- (4- (4- (mPEG (30k) iloxi ) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, 7141(2- (4- (4- (mPEG(20k) iloxi) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, o T/141 (2- (4- (3- (mPEG (30k) iloxi) propanoilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH. Modalidad 49. Un compuesto obtenido por medio del uso de un método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 22. Modalidad 50. Un compuesto que se puede obtener por medio del uso de un método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 1 a 22. Modalidad 51. Un compuesto obtenido por medio del uso de un método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 19 a 22. Modalidad 52. Un compuesto que se puede obtener por medio del uso de un método de acuerdo con cualquiera de las modalidades 19 a 22. Modalidad 53. El compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 31 a 35, cualquiera de las modalidades 44 a 52, modalidad 51 o modalidad 52 para el uso en la terapia. Modalidad 54. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 31 a 35, cualquiera de las modalidades 44 a 52, modalidad 51 o modalidad 52. Modalidad 55. Un método para el tratamiento de la deficiencia de hormona de crecimiento (GHD) ; Síndrome de Turner; síndrome de Prader- illi (PWS) ; síndrome de Noonan; síndrome de Down; enfermedad renal crónica, artritis reumatoide juvenil; fibrosis quística, infección por VIH en niños que reciben el tratamiento HAART (niños con VIH/HALS) ; niños pequeños nacidos de baja estatura por la edad gestacional (SGA); baja estatura en niños nacidos con un peso muy bajo al nacer (VLBW) excepto SGA; displasia esquelética; hipocondroplasia; acondroplasia; baja estatura idiopática (ISS) ; GHD en adultos; fracturas en o de huesos largos, tales como tibia, peroné, fémur, húmero, radio, cubito, clavícula, metacarpo, metatarso y dígito; fracturas en o de huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano y la base del pie; pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo una mano, rodilla u hombro; pacientes que tienen o que atraviesan una osteogénesis por desatención; pacientes después del reemplazo de cadera o disco, reparación de meniscos, fusiones espinales o fijación de prótesis, tal como en la rodilla, cadera, hombro, codo, muñeca o mandíbula; pacientes en los cuales se ha fijado el material de osteosíntesis, tal como clavos, tornillos y placas; pacientes con falta de unión o con una unión incorrecta de fracturas; pacientes después de la osteotomía, por ejemplo de la tibia o 1er dedo del pie; pacientes después del implante de injertos; degeneración de cartílago articular en rodillas causado por traumatismo o artritis; osteoporosis en pacientes con síndrome de Turner; osteoporosis en hombres; pacientes adultos en diálisis crónica (APCD) ; enfermedad cardiovascular asociada con desnutrición en APCD; regresión de caquexia en APCD; cáncer en APCD; enfermedad pulmonar obstructiva crónica en APCD; VIH en APCD; personas de edad avanzada con APCD; enfermedad hepática crónica en APCD, síndrome de fatiga en APCD; enfermedad de Crohn; función hepática deteriorada; varones con infecciones por VIH; síndrome de intestino corto; obesidad central; síndrome de lipodistrofia asociada con el VIH (HALS) ; infertilidad masculina; pacientes después de cirugía optativa mayor, desintoxicación de alcohol/drogas o traumatismo neurológico; envejecimiento; personas de edad avanzada frágiles; osteoartritis; cartílago dañado por traumatismo; disfunción eréctil; fibromialgia; trastornos de memoria; depresión; lesión traumática del cerebro; hemorragia subaracnoidea; peso muy bajo al nacer; síndrome metabólico; miopatia glucocorticoidea; baja estatura debido al tratamiento con glucucorticoides en niños; aceleración de la curación de un tejido muscular, tejido nervioso o heridas; la aceleración o mejoramiento del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la proporción de infección en el tejido dañado, el método comprende la administración a un paciente en necesidad del mismo en una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 31 a 35, cualquiera de las modalidades 44 a 52, modalidad 51 o modalidad 52 o una composición farmacéutica de acuerdo con la modalidad 54. Modalidad 56. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las modalidades 31 a 35, cualquiera de las modalidades 44 a 52, modalidad 51 o modalidad 52 en la manufactura de un medicamento que se utiliza en el tratamiento de la deficiencia de hormona de crecimiento (GHD) ; Síndrome de Turner; síndrome de Prader-Willi (PWS) ; síndrome de Noonan; síndrome de Down; enfermedad renal crónica, artritis reumatoide juvenil; fibrosis quística, infección por VIH en niños que reciben el tratamiento HAART (niños con VIH/HALS) ; niños pequeños nacidos de baja estatura por la edad gestacional (SGA); baja estatura en niños nacidos con un peso muy bajo al nacer (VLBW) excepto SGA; displasia esquelética; hipocondroplasia; acondroplasia; baja estatura idiopática (ISS); GHD en adultos; fracturas en o de huesos largos, tales como tibia, peroné, fémur, húmero, radio, cubito, clavícula, metacarpo, metatarso y dígito; fracturas en o de huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano y la base del pie; pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo una mano, rodilla u hombro; pacientes que tienen o que atraviesan una osteogénesis por desatención; pacientes después del reemplazo de cadera o disco, reparación de meniscos, fusiones espinales o fijación de prótesis, tal como en la rodilla, cadera, hombro, codo, muñeca o mandíbula; pacientes en los cuales se ha fijado el material de osteosíntesis, tal como clavos, tornillos y placas; pacientes con falta de unión o con una unión incorrecta de fracturas; pacientes después de la osteotomía, por ejemplo de la tibia o 1er dedo del pie; pacientes después del implante de injertos; degeneración de cartílago articular en rodillas causado por traumatismo o artritis; osteoporosis en pacientes con síndrome de Turner; osteoporosis en hombres; pacientes adultos en diálisis crónica (APCD) ; enfermedad cardiovascular asociada con desnutrición en APCD; regresión de caquexia en APCD; cáncer en APCD; enfermedad pulmonar obstructiva crónica en APCD; VIH en APCD; personas de edad avanzada con APCD; enfermedad hepática crónica en APCD, síndrome de fatiga en APCD; enfermedad de Crohn; función hepática deteriorada; varones con infecciones por VIH; síndrome de intestino corto; obesidad central; síndrome de lipodistrofia asociada con el VIH (HALS) ; infertilidad masculina; pacientes después de cirugía optativa mayor, desintoxicación de alcohol/drogas o traumatismo neurológico; envejecimiento; personas de edad avanzada frágiles; osteoartritis; cartílago dañado por traumatismo; disfunción eréctil; fibromialgia; trastornos de memoria; depresión; lesión traumática del cerebro; hemorragia subaracnoidea; peso muy bajo al nacer; síndrome metabólico; miopatía glucocorticoidea; baja estatura debido al tratamiento con glucucorticoides en niños; aceleración de la curación de un tejido muscular, tejido nervioso o heridas; la aceleración o mejoramiento del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la proporción de infección en el tejido dañado. Todas las referencias, inclusive publicaciones, solicitudes de patente y patentes, citadas en este documento se incorporan por este acto a manera de referencia en su totalidad y al mismo grado como si cada referencia fuera indicada individual y específicamente para incorporarse a manera de referencia y se expusiera en su totalidad en este documento (al grado máximo permitido por la ley) , independientemente de alguna incorporación proporcionada por separado de documentos particulares hecha en alguna otra parte en este documento. Todos los títulos y subtítulos se usan en este documento por conveniencia únicamente y de ninguna manera deben considerarse como limitantes de la invención. Cualquier combinación de los elementos descritos anteriormente en todas las variaciones posibles de los mismos está incluida por la invención a menos que se indique de otra manera en este documento o se contradiga claramente de otra manera por el contexto. Se debe considerar que el uso de los términos "un" y "una" y "el", "la", "los" y "las" y referencia similares en el contexto de la descripción de la invención cubre tanto la forma singular como la forma plural, a menos que se indique de otra manera en este documento o se contradiga claramente por el contexto. Por ejemplo, se debe entender que la frase "el compuesto" se refiere a varios "compuestos" de la invención o un aspecto particular descrito, a menos que se indique de otra manera.
La relación de rangos de valores en este documento se propone solamente para servir como un método abreviado para referirse individualmente a cada valor separado que se encuentra dentro del rango, a menos que se indique de otra manera en este documento, y cada valor separado se incorpora en la especificación como si fuera citado individualmente en este documento. A menos que se indique de otra manera, todos los valores exactos proporcionados en este documento son representativos de los valores aproximados correspondientes (por ejemplo, se puede considerar que todos los valores ejemplares exactos proporcionados con respecto a un factor o medición particular también proporcionan una medición aproximada correspondiente, modificada por "aproximadamente" donde sea apropiado) . Todos lo métodos descritos en este documento se pueden realizar en cualquier orden adecuado a menos que se indique de otra manera en este documento o se contradiga claramente de otra manera por el contexto. El uso de cualquiera y la totalidad de ejemplos, o un lenguaje ejemplar (por ejemplo, "tal como") proporcionado en este documento, se propone solamente para ilustrar mejor la invención y no coloca una limitación sobre el alcance de la invención a menos que se indique de otra manera. No se debe considerar que el lenguaje en la especificación indica que algún elemento es esencial para la práctica de la invención a menos que se establezca más explícitamente. La citación e incorporación de documento de patente en este documento se hace para conveniencia únicamente y no refleja alguna perspectiva de validez, patentabilidad y/o aplicabilidad de estos documentos de patente. La descripción en este documento de cualquier aspecto o aspecto de la invención utilizando términos tales como "que comprende", "que tiene", "que incluye" o "que contiene" con referencia a un elemento o elementos se propone para proporcionar soporte para un aspecto similar o un aspecto de la invención que "consiste de", "consiste esencialmente de" o "comprende sustancialmente" ese elemento o elementos particulares, a menos que se establezca de otra manera o se contradiga claramente por el contexto (por ejemplo, se debe entender que una composición descrita en este documento como que comprende un elemento particular también describe una composición que consiste de ese elemento, a menos que se establezca claramente de otra manera o se contradiga claramente por el contexto) . Las propiedades básicas y novedosas con respecto a estos aspectos de la invención se proporcionan en este punto. Esta invención incluye todas las modificaciones y equivalente del contenido citado en los aspectos o reivindicaciones presentados en este documento al grado máximo permitido por la ley aplicable.
EJEMPLOS La TGasa utilizada en los ejemplos es transglutaminasa microbiana de Streptoverticillium mobaraenae de acuerdo con la Patente Norteamericana No, 5156956 o de Streptomyces Lydicus de acuerdo con el documento WO 9606931-A1.
Métodos Analíticos: Espectrometría de masas Maldi-TofMR Los pesos moleculares se determinan utilizando el instrumento Autoflex Maldi-TofMR (Bruker) . Las muestras se prepararon de acuerdo con el método de emparedado. La matriz 1 fue una solución de 10 mg de ácido alfa-ciano-4-hidroxi-cinámico en 1 mi de acetona. La matriz 2 fue una solución de 10 mg de ácido alfa-ciano-4-hidroxi-cinámico en 1 mi de acetonitrilo al 50% en agua. Las muestras se prepararon en la placa objetivo por medio de la aplicación secuencial de 1 µl de la matriz 1, secado con aire, aplicación de 1 µl de ácido trifluoroacético al 3%, aplicación de 1 µl de muestra, aplicación de 1 µl de la matriz 2, secado con aire, lavado al inundar la placa objetivo con agua y finalmente el secado con aire. Los espectros se adquirieron utilizando una potencia de láser del 20% y el método estándar para el rango de 3-20 kDa el cual se suministró con el instrumento.
Cuantificación de proteína Las concentraciones de proteínas se calcularon al medir la absorbancia a 280 nm utilizando un espectrofotómetro UV. Se utilizó un coeficiente de extinción molar de 16170 M"1 cm"1. Las cantidades se calcularon a partir de volúmenes y concentraciones .
SDS page La electroforesis en gel de SDS poli-acrilamida se realizó utilizando geles de Bis-Tris al 4% - 12% NuPAGEMR (Invitrogen NP0321 BOX) . Los genes se tiñeron con plata (Invitrogen LC6100) o se tiñeron con Coomassie (Invitrogen LC6065) y donde fue relevante también se tiñeron para PEG con yoduro de bario como se describe en M. M. Kurfurst, Anal. Biochem. 200(2), 244-248 (1992).
Análisis de CLAR-FI Sistema A: sistema Merck-Hitachi que consiste de: detector UV L-7400, tomamuestras automático L-7200 y bomba L-7100. Una columna de sílice C-18 5 µm Zorbax SB-300MR de 4.6 mm x 50 mm (Agilent Technologies) se utilizó y la detección fue por medio de luz ultravioleta a 214 nm. La columna se equilibró con ácido trifluoroacético al 0.1%/H2O y se eluyó por medio de un gradiente de 0 a 90% de acetonitrilo contra ácido trifluoracético al 0.1%/H2O durante 10 minutos a temperatura ambiente, con un flujo de 1 ml/minuto.
Análisis de CE (eletroforesis capilar) La electroforesis capilar se llevó a cabo utilizando un sistema Agilent Technologies 3DCEMR (Agilent Technologies) . La adquisición de datos y el procesamiento de señales se realizaron utilizando el dispositivo Agilent Technologies 3DCE ChemStationMR. El tubo capilar fue "Extended Light Path Capillary" 50 µm i.d. de 64.5 cm (56.0 cm de longitud deficiente) de Agilent. La detección con luz ultravioleta se realizó a 200 nm (Bw 16 nm, Referencia 380 nm y Bw 50 nm) . El electrolito de conducción fue amortiguador de fosfato 50 mM pH 7 (método A) o amortiguador de fosfato 50 mM pH 2.5 (método B) . El tubo capilar se acondicionó con NaOH 0.1 M durante 3 minutos, luego con agua Milli-QMR durante 2 minutos y con el electrolito durante 3 minutos. Después de cada conducción, el tubo capilar se inundó con agua Milli-QMR durante 2 minutos, luego con ácido fosfórico durante 2 minutos y con agua Milli-QMR durante 2 minutos. La inyección hidrodimámica se realizó a 50 mbares durante 4.0 segundos. El voltaje fue +25 kV. La temperatura del tubo capilar fue 30°C y el tiempo de conducción fue 10.5 minutos (método A) o 20 minutos (método B) .
Los ejemplos 1 y 2 se proponen para proporcionar un ejemplo ilustrativo de la conjugación con PEG de hGH utilizando la transaminación con un aldehido latente - véase también el documento WO2005070468. hGH, hormona de crecimiento humana II NF.0/Nen?_ (2-hidroxi-3-amino-propilo) -hGH III N ee440U/ /N,el41 '2-oxoetilo)-hGH IV. Ne40/Ne141- [2- (O- (4- (4- (mPEGiloxi)butirilamino)butil) oxiimino) etilo] -hGH Ejemplo 1 Preparación de N 41- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20000) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] hGH (a) Transaminación de hGH (I.) para proporcionar Nel41- (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH (II . ) La hGH (I.) (200 mg) se disolvió en oxi de fosfato (50 mM, pH 8.0, 14 mi) . Esta solución se mezcló con una solución de 1,3-diaminopropan-2-ol (4 mmol, 378 mg) disuelto en amortiguador de fosfato (50 mM, 1 mi, pH 8.0, el pH se ajustó a 8.0 con ácido clorhídrico diluido después de la disolución de 1,3-diamino-propan-2-ol) . Finalmente, una solución de TGasa (18 mg ~ 40 U) disuelta en amortiguador de fosfato (50 mM, pH 8.0, 1 mi) se agregó y el volumen se ajustó a 20 mi por medio de la adición de amortiguador de fosfato (50 mM, pH 8.0) proporcionando una concentración de 1, 3-diaminopropan-2-ol a 0.2 M. La mezcla combinada se incubó durante 4 horas a 37 °C. La temperatura se disminuyó a la temperatura ambiente y se agregó N-etilmaleimida a una concentración final de 1 mM. Después de 1 hora adicional, la mezcla se diluyó con 10 volúmenes de amortiguador de tris (50 mM, pH 8.5). El análisis de CE de la mezcla resultante muestra dos picos mayores que corresponden a hGH y Nfc141- (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH (II.) y dos picos menores que corresponden a Ne40- ( 2-hidroxi-3-aminopropil ) -hGH ( I I . ) y Ne40 , NBl 41-bis ( 2-hidroxi-3-aminopropilo) -hGH. Los últimos dos componentes se retiran durante la siguiente purificación, pero podrían haber sido recuperados. (b) cromatografía de intercambio iónico de Nel41-(2- hidroxi-3-aminopropil-hGH (II.) La solución resultante de (a) se aplicó en una columna MonoQ 10/100 GLMR (No. de catálogo 17-5167-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador A (tris 50 mM, pH 8.5). Luego se eluyó a un flujo de 2.5 ml/minuto con un gradiente de 0% a 100% del amortiguador B (tris 50 mM, NaCl 0.2 M, pH 8.5) en el amortiguador A durante 63 minutos. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm y el análisis Maldi-TofMR se realizó sobre las fracciones seleccionadas. Las fracciones que correspondían al pico más grande que proporcionaba el peso molecular esperado de acuerdo con la espectrometría de masas Maldi-TofMR se acumularon. Esta acumulación contiene hGH (I.) y Ncl 1-(2-hidroxi-3-amino-propilo) -hGH (II.) en una relación 60:40 encontrada por la CE (método A) . Los experimentos de cartografía de péptidos descritos en la solicitud Internacional WO2005DK000028 han demostrado previamente que los procedimientos combinados de (a) y (b) dan por resultado una derivatización selectiva de Gln-141. (c) Síntesis de N- (4- (terc-butiloxicarbonilaminoxi) - butil) ftalimida 282.14 133.15 334.37 A una mezcla agitada de N- (4-bromobutil) ftalimida (18.9 g, 67.0 mmol), MeCN (14 mi) y N-Boc-hidroxilamina (12.7 g, 95.4 mmol) se agregó DBU (15.0 mi, 101 mmol) en porciones.
La mezcla resultante se agitó a 50°C durante 24 horas. Se agregó agua (300 mi) y HCl 12 M (10 mi) y el producto se extrajo tres veces con AcOEt . Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (MgS04) y se concentraron bajo presión reducida. El aceite resultante (28 g) se purificó por medio de la cromatografía (140 g de Si02, elución de gradiente con heptano/AcOEt ) . 17.9 g (80%) del compuesto del título se obtuvieron como un aceite. RMN-1H (DMSO-d6) d 1 .36 (s, 9H) , 1 .50 (m, 2H) , 1.67 (m, 2H) , 3.58 (t, J = 7 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 7 Hz, 2H) , 7.85 (m, 4H) , 9.90 (s, 1 H) . (d) Síntesis de 4 - ( terc-buti loxicarbonilaminoxi ) - butilamina 204.27 334.37 A una solución de la N- ( 4 - ( terc-butiloxicarbonilaminoxi ) butil ) ftalimida obtenida a partir de (a) (8.35 g, 25.0 mmol) en EtOH (10 mi) se agregó hidrato de hidrazina (20 mi) y la mezcla se agitó a 80°C durante 38 horas. La mezcla se concentró y el residuo de coevaporó con EtOH y PhMe. Al residuo se agregó EtOH (50 mi) y la ftalhidrazida precipitada se filtró y se lavó con EtOH (50 mi) . La concentración de los productos filtrados combinados generó 5.08 g de un aceite. Este aceite se mezcló con una solución de K2C03 (10 g) en agua (20 mi) y el producto se extrajo con CH2C12. El secado (MgS04) y la concentración produjeron 2.28 g (45%) del compuesto del título como un aceite, el cual se utilizó sin purificación adicional. RMN-1H (DMSO-ds) d 1.38 (m, 2H) , 1.39 (s, 9H) , 1.51 (m, 2H) , 2.51 (t, J = 7 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 7 Hz, 2H) . (e) Síntesis de N-Boc-O- (4- (4- ( 1, 3-bis (mPEG (20000) - aminocarboniloxi) -2-propiloxi ) butirilamino) butil) - hidroxil-amina El (mPeg ( 20000 ) -NH-CO-0-CH2 ) 2CH-0- (CH2 ) 3-CO-OSu (Nektar, 2Z3Y0T01, 2.0 g, 50 µmol) se mezcló con una solución de 4- (Boc-aminoxi) butilamina (187 mg, 915 µmol) en DCM (12 mi) . Después de la agitación a temperatura ambiente durante 43 horas, la mezcla se agregó gota a gota a Et20 agitado (200 mi) . Filtración, lavando con Et20. El producto disolvió de nuevo en DCM (10 mi) y se precipitó una vez más de Et20 (200 mi). Esta precipitación se repitió tres veces. El producto entonces se disolvió en DCM (100 mi) y se trató con Amberlyst 15MR (11 g; lavado con DCM) durante 5 minutos. Después de la filtración y la concentración, el producto se precipitó de Et20 como antes. La filtración y el secado bajo presión reducida produjeron 1.98 g del compuesto del título como un sólido, (f) Síntesis de O- ( 4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20000) amino- carbóniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) - hidroxilamina El producto de la reacción previa (1.0 g) se disolvió en DCM y se agregó Amberlyst 15MR (8.0 g; lavado con DCM) . Después de la agitación durante 10 minutos, la mezcla se filtró y el producto filtrado se concentró. Al residuo se agregó DCM (25 mi) y TFA (25 mi) . Después del reposo a temperatura ambiente durante 0.5 horas, la mezcla se concentró, el residuo se coevaporó dos veces con una mezcla de DCM y tolueno y se secó bajo presión reducida durante toda la noche. El residuo se disolvió en agua (15 mi) y se lavó dos veces con agua utilizando un dispositivo de ultrafiltración A icon Ultra-15MR (Millipore) . La solución entonces se neutralizó por medio de la adición de 2-metilpiridina a pH 6. Esta solución se utilizó directamente para la oximación. (g) Oxidación de Nel41- (2-hidroxi-3-aminopropilo) -hGH (II.) para proporcionar Nel41- (2-oxoetilo) -hGH (III.) El amortiguador de las fracciones acumuladas de (b) 2 que contenían 53.8 mg de (I.) y (II.) se intercambió cuatro veces por un amortiguador de trietanolamina 15 mM/3- (Metiltio) -1-propanol 137 mM pH 8.5 (ajustado con ácido clorhídrico 1 N) utilizando un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-15MR (Millipore) . Luego, la solución se concentró a 5.4 mi. A esto se agregó 0.54 mi de peryodato de sodio 25 mM en solución acuosa y la mezcla se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. La solución entonces se lavó tres veces con amortiguador de trietanolamina 15 mM pH 8.5 utilizando un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-15MR (Millipore) . Luego se enfrió sobre hielo y se agregó 1.62 mi de N,N-dimetilformamida helada. (h) Oximación de Nel41- (2-oxoetilo) -hGH (III.) con 0-(4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20000) oxi) -2-propiloxi) - butirilamino) butil) hidroxilamina para proporcionar Nel41-[2-(0-(4-(4-(l, 3-bis (mPEG (20000) oxi) -2- propiloxi) butirilamino) butil) oxiimino) etilo] -hGH La mezcla resultante de (g) se agregó lentamente a la solución de PEG de (f) bajo mezclado suave y la reacción se dejó proceder a temperatura ambiente durante 72 horas, (i) Cromatografía de intercambio iónico de Nel4~-[2-(0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG(20000)oxi)-2-propiloxi)butiril- amino) butil) oxiimino) etilo] -hGH (III.) La solución resultante de (h) se aplicó a una columna MonoQ 10/100 GLMR (No. de catálogo 17-5167-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador A (tris 10 mM, pH 8.0). Luego se eluyó a un flujo de 2.0 ml/minuto o con un gradiente de 0% a 100% del amortiguador B (tris 10 mM, NaCl 0.2 M, pH 8.0) en el amortiguador A durante 79 minutos. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm. Se acumularon las fracciones que correspondían al pico esperado y se concentraron a 10 mi en un dispositivo de ul rafiltración Amicon Ultra-15MP (Millipore) . (j) Cromatografía de exclusión de tamaño de Nel41-[2-(0- (4- (4- (1, 3-bis (mFEG (20000) oxi) -2-propiloxi) - butirilamino) butil) oxiimino) etilo] -hGH La solución concentrada resultante de (i) se aplicó a una columna HiLoad 26/60 Superdex 200MR (No. de catálogo 17-1071-01 de Amersham) equilibrada previamente con el amortiguador C (carbonato ácido de amcnio 50 mM, pH 8.0) . Luego se eluyó a un flujo de 0.5 ml/minuto del amortiguador C durante 956 minutos. Las fi acciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm y se acumularon de acuerdo con las primeras pruebas. La SDS page mostró una banda individual con un peso molecular aparente mayor que 120 kDa.
Ejemplo 2 Preparación de Ncl41- [2- (O- (4- (4- (mPEG (30000) oxi ) - butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] (a) Transaminación de hGH (I.) para proporcionar Nel41- (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH (II . ) La hGH (I.) (200 mg) se disolvió en amortiguador de fosfato (50 mM, pH 8.0, 14 mi). Esta solución se mezcló con una solución de 1,3-diaminopropan-2-ol (378 mg) dísuelto en amortiguador de fosfato (50 mM, 0.5 mi, pH 8.0, el pH se ajustó a 8.0 con ácido clorhídrico diluido después de la disolución del 1,3-diamino-propan-2-ol) . Finalmente, una solución de TGasa (18 mg ~ 40 U) disuelta en amortiguador de fosfato (50 mM, pH 8.0, 0.5 mi) se agregó y el volumen se ajustó a 20 mi por medio de la adición de amortiguador de fosfato (50 mM, pH 8.0) proporcionando una concentración de 1, 3-diamino-propan-2-ol a 0.2 M. La mezcla combinada se incubó durante 4 horas a 37°C. La temperatura se disminuyó a la temperatura ambiente y se agregó N-etil-maleimida a una concentración final de 1 mM. Después de 1 hora adicional, la mezcla se diluyó con 10 volúmenes de amortiguador de tris (50 mM, pH 8.5). El análisis de CE de la mezcla resultante muestra dos picos mayores que corresponden a hGH y Nel41- (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH (II.) y dos picos menores que corresponden a Ne40- (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH (II.) y Ne4°, Nel41-bis (2-hidroxi-3-aminopropil) -hGH. Los últimos dos componentes se retiran durante la siguiente purificación, pero se podrían haber recuperado. (b) Cromatografía de intercambio iónico de Nel41-(2- hidroxi-3-amino-propilo) -hGH (II.) La solución resultante de (a) se aplicó a una columna MonoQ 10/100 GLMR (No. de catálogo 17-5167-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador A (tris 50 mM, pH 8.5). Luego se eluyó a un flujo de 2 ml/minuto con un gradiente progresivo: Paso 1: de 0% a 60% del amortiguador B (tris 50 mM, NaCl 0.2 M, pH 8.5) en el amortiguador A durante 12 minutos. Paso 2: de 60% a 64% del amortiguador B en el amortiguador A durante 8 minutos. Paso 3: 64% del amortiguador B en el amortiguador A durante 16 minutos. Paso 4: de 64% a 67% del amortiguador B en el amortiguador A durante 16 minutos. Paso 5: 67% del amortiguador B en el amortiguador A durante 16 minutos. Paso 6: de 67% a 100% del amortiguador B en el amortiguador A durante 12 minutos. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 n y se acumularon las fracciones que correspondían al pico más grande. Esta acumulación contiene hGH (I.) y Nel41- (2-hidroxi-3-amino-propilo) -hGH (II.) en una relación de 58:42 encontrada por medio de la CE (método A) . Los experimentos de cartografía de péptidos descritos en las Solicitud Internacional WO2005DK000028 han demostrado previamente que los procedimientos combinados de (a) y (b) dan por resultado una derivatización selectiva en Gln-141. (c) Síntesis de O- (4- (4- (mPEG (30000) oxi) butirilamino) - butil) hidroxilamina A una solución de 4- (N-Boc-aminoxi) butilamina (0.43 g, 2.10 mmol) en DCM (40 mi) se agregó mPeg ( 30000) -0- (CH2) 3-CO-OSu (Nektar, 2M450R01, MW 30 kDa, 5.0 g, 0.17 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 días, se concentró bajo presión reducida y el residuo se secó in vacuo. La recristalización de iPrOH (4 x 80 mi) seguida por la coevaporación de DCM y el secado bajo presión reducida produjeron 4.14 g de la alcoxilamina protegida con Boc. El producto de la reacción previa (0.65 g) se disolvió en 20 mi de DCM y se agregó Amberlyst 15" (6.0 g; lavado con DCM) . Después de la agitación durante 10 minutos, la mezcla se filtró y el producto filtrado se concentró. Al resido se agregó DCM (20 mi) y TFA (20 mi) . Después del reposo a temperatura ambiente durante 0.5 horas, la mezcla se concentró, el residuo se coevaporó dos veces con una mezcla de DCM y tolueno y se secó bajo presión reducida durante toda la noche. El residuo se disolvió en agua (15 mi) y se lavó dos veces con agua utilizando un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-15MR (Millipore) . La solución entonces se neutralizó por medio de la adición de 2-metilpiridina a pH 6. Esta solución se utilizó directamente para la oximación. (d) Oximación de Nel41- (2-hidroxi-3-aminopropilo) -hGH (II.) para proporcionar Nel41- (2-oxoetilo) -hGH (III.) El amortiguador de las fracciones acumuladas de (b) que contenía 78.14 mg de (I.) y (II.) se intercambió cuatro veces por un amortiguador de trietanolamina 15 mM/3- (metiltio) -1-propanol 137 M pH 8.5 (ajustado con ácido clorhídrico 1 N) utilizando un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-15MR (Millipore) . Finalmente, la solución se concentró a 3.3 mi. A esto se agregó 0.33 mi de peryodato de sodio 25 mM en agua y la mezcla se incubó durante 30 minutos a temperatura ambiente en la oscuridad. La solución entonces se lavó tres veces con amortiguador de trietanolamina 15 mM pH 8.5 utilizando un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-15MR (Millipore) . Luego se enfrío sobre hielo y se agregó 1.0 mi de N,N-dimetilformamida helada. (e) Oximación de Ne141- (2-oxoetilo) -hGH (III.) con O- (4- (4- (mPEG (30000) oxi ) butirilamino) butil) hidroxi lamina para proporcionar Nel41- [2- (O- (4- (4- (mPEG ( 30000 ) - oxi) butirilamino) butil) oxiimino) etilo] -hGH (III) La mezcla resultante de (d) se agregó lentamente a la solución de PEG de (c) bajo mezclado suave y la reacción se dejó proceder a temperatura ambiente durante 144 horas. (f) Cromatografía de intercambio iónico de Nel 1-[2-(0- (4- (4- (mPEG( 30000) oxi) butirilamino) butil) oxiimino) - etilo] -hGH La solución resultante de (e) se aplicó a una columna MonoQ 10/100 GLMR (No. de catálogo 17-5167-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador A (tris 10 mM, pH 8.0). Luego se eluyó a un flujo de 1.5 ml/minuto con un gradiente de 0% a 100% del amortiguador B (tris 10 mM, NaCl 0.2 M, pH 8.0) en el amortiguador A durante 107 minutos. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm. Se acumularon las fracciones que correspondían al pico deseado y se concentraron a 10 mi en un dispositivo de ultrafiltración Amicon Ultra-ld^ (Millipore) . (g) Cromatografía de exclusión de tamaño de Nel 1-[2-(0- (4- (4- (mPEG( 30000) oxi) butirilamino) butil) oxiimino) - etilo] -hGH La solución concentrada resultante de (f) se aplicó a una columna HiLoad 26/60 Superdex 200MR (No. de catálogo 17-1071-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador C (carbonato ácido de amonio 50 mM, pH 8.0). Luego se eluyó a un flujo de 0.5 ml/minuto del amortiguador C durante 956 minutos. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm y se acumularon de acuerdo con las primeras pruebas. La SDS page mostró una banda individual con un peso molecular aparente de aproximadamente 117 kDa.
Ejemplo 3 Preparación de (3- ( (4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPe (20000) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) -etoxi) etoxi) -etoxi) etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH (VII . ) Esquema de reacción para la conjugación de hGH con mPEG utilizando la transaminación con un compuesto de di-aminoxi en el ejemplo 3.
I. n=454 Vil. ! a ) Transa inación de hGH (I.) para proporcionar Nel41- (3- (aminoxi) propoxi) -hGH (V.) Se prepararon las siguientes soluciones: 100 mg de hGH (I.) se disolvieron en amortiguador de Na-fosfato (50 mM, pH 6.0) aproximadamente 9 mi. Subsecuentemente, el pH se ajustó a 6 y el volumen se sujetó a 10 mi utilizando amortiguador de Na- fosfato (50 mM, pH 6.0). 2 ) 2.00 g de 1, 3-bisaminoxipropano .2HC1 (A. Shirayev, P. K. Thoo lin e I. K. Moiseev, Synthesis, 38-40 (1997) se disolvieron en amortiguador de Na- fosfato (50 mM, pH 6.0) aproximadamente 5 mi, seguido por el ajuste del pH y el volumen con respecto de 1. 3) 30 mg de Transglutaminasa Activa MMR (Ajinonoto, 0.3 mg de enzima) se disolvieron en amortiguador de Na-fosfato (50 mM, pH 6.0) aproximadamente 9 mi, seguido por el ajuste del pH y el volumen con respecto de 1. Las soluciones 1 + 2 + 3 se mezclaron, se filtraron a través de un filtro 0.45 µm y se dejaron reaccionar a 22°C durante un período de 2.5 horas. En este punto, la CE (método B) y la espectroscopia Maldi-tofMR mostraron aproximadamente 50% de conversión de la hGH, con aproximadamente 70% del producto siendo el derivado de hGH deseado (V. ) . A la mezcla de reacción se agregaron 30 mi de N-etilmaleimida acuosa 2 mM (NEM). El pH se ajustó a 8.0 y el amortiguador de la solución se cambió 6 veces por medio de ultrafiltración (filtros de corte Amicon Ultra 15MR (Millipore) 10000 Da, 3600 RCF, temperatura ambiente, reducir el volumen a 1/10) utilizando una mezcla 1:1 de NEM acuosa 2 mM y amortiguador de fosfato 50 mM, pH 8.0. (b) Oximación de Nel41- (3- (aminoxi) propoxi) -hGH (V.) con 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPeg (20000) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) - etoxi) etoxi) etoxi) butanal (VI.) para proporcionar Nel41-(3-( (4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPeg (20000)- ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) - etoxi) etoxi) etoxi) etoxi) butilideno) aminoxi) - propiloxi) -hGH (VII.) Después del último lavado en (a), el pH se ajustó a 6.0. Se agregaron 180 mg de mPEG2-butirALD-40K (VI., Nektar 083Y0T01) en 10 mi de amortiguador. La reacción se completó dentro de 3 horas. La CLAR-FI (sistema A) y la SDS-page mostraron aproximadamente 100% de conversión del derivado de hGH V a la hGH conjugada con PEG (VII.). El amortiguador de reacción se cambió 3 veces por el amortiguador de TRIS 10 mM pH 8.5 por medio de la ultrafiltración como se describiera anteriormente . (c) Cromatografía de intercambio iónico de Nel41- (3- ( (4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPeg (20000) ilamino- carbóniloxi) -2-propilo i) butirilamino) etoxi) etoxi ) - etoxi) etoxi) butilideno) aminoxi) propiloxi) -hGH (VII.) El producto crudo se purificó en una columna de intercambio aniónico MonoQ 10/100MR (Amersham Biosciences) utilizando TRIS 10 mM pH 8.5 (amortiguador A) y TRIS 10 mM pH 8.5 + NaCl 200 mM (amortiguador B) como amortiguadores de inicio y elución, respectivamente. La elución se realizó a 2.0 ml/minuto con un gradiente de 0 a 100% de B durante un período de 80 minutos. El producto (VII.) se eluyó en aproximadamente 24% del amortiguador B. Las fracciones que contenían el producto deseado (VII.) se recolectaron, se acumularon y el amortiguador se cambió 6 veces por amortiguador de NH4HC03 50 mM pH 8.0 y finalmente se secó por congelamiento . El producto puro (VII.) se obtuvo junto con dos subproductos: aproximadamente 20% de un isómero, hGH conjugada con PEG en la posición Gln-40 y aproximadamente 10% de un dimero, hGH conjugada con PEG en ambas posiciones Gln-40 y Gln-141. Estos productos se pudieron separar por medio de la cromatografía de intercambio aniónico. La identidad de los productos se estableció por medio de experimentos de cartografía de péptidos y SDS-page.
Ejemplo 4 Preparación de Nel41 [2- (2- (2, 3-bis (mPeq (20000) iloxi) -propiloxicarbonilamino) etiloximino) etilo] -hGH ( a ) , (b ) N 7ebl41 ' 2-oxoetilo ) -hGH La N ,£141 - ( 2 -oxoetilo ) -hGH ( 252 mg) se preparó como se describe en el Ejemplo 1. (c) Oximación de Nel41- (2-oxoetilo) -hGH (III.) con O- (2- (2,3- (mPeg (20000) iloxi) propiloxicarbonilamino) - etil)hidroxilamina (Sunbright GL2-400 CA, NOF Corp., Tokio, Japón) para proporcionar la Ne_41-[2- (2- (2, 3- (mPeg (20000) iloxi) propiloxicarbonilamino) - etiloximino) etilo] -hGH El derivado de aminoxi-PEG (452 mg Sunbright GL2-400 CA, NOF Corp.) se disolvió en 5.5 mi de amortiguador (ácido 2- (N-morfolino ) etanosulf ónico (MES), 0.3 M, pH 6.5) . Luego, la acumulación concentrada de la oxidación se diluyó con 1.25 mi de NMP helada y se agregó lentamente a la solución del reactivo de PEG. La mezcla se agitó lentamente durante 2 días. (d) Cromatografía de intercambio iónico de Nel41- [2-(2-(2, 3- (mPeg (20000) iloxi) propiloxicarbonilamino) - etiloximino) etilo] -hGH El amortiguador de la mezcla de reacción de (c) se intercambió por amortiguador de trietanolamina 20 mM pH 8.5 utilizando una columna de desalinización (HiPrep 26/10, No. de catálogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) y la proteína se aplicó a una columna intercambiadora de iones (HiLoad 26/10 Q Sepharose HP, Ammersham Biosciences) equilibrada previamente con el amortiguador A ( tpetanolamina 20 mM, pH 8.5). Luego se eluyó a un flujo de 5 ml/minuto con un gradiente de 0% a 100% del amortiguador B ( t netanolamina 20 mM, NaCl 0.2 M, pH 8.5) en el amortiguador A sobre 10 volúmenes de columna. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm. Se acumularon las fracciones correspondientes al pico deseado . (e) Cromatografía de exclusión de tamaño de Nel41- [2- (2- (2, 3- (mPeg (20000) íloxi) propiloxicarbomlammo) - etiloximino) etilo] -hGH La acumulación de (d) se concentró a 15 mi por medio de la ultraf ílt ración y el amortiguador proteico de intercambió por carbonato ácido de amonio 50 mM pH 8.0 utilizando una columna de desal íni zación (HiPrep 26/10, No. de catalogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) . La proteina entonces se aplicó a una columna de exclusión de tamaño (HiLoad 26/10 Superdex 200, No. de catálogo 17-1071-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente con carbonato ácido de amonio 50 mM, pH 8.0) . Luego se eluyó a un flujo de 1.0 ml/punuto. Las fracciones se recolectaron basándose en la absorción de luz ultravioleta a 280 nm.
Ejemplo 5 Preparación de N ,Eb1l41- [2- (0- (2- (2- (mPEG (40000) iloxi) etilamino) 2-oxoetil) oximino) etilo] -hGH (a) Transaminación La hGH (I) (100 mg) se transaminó con 1,3-diaminopropan-2-ol y el producto se purificó utilizando procedimientos similares a aquellos del ejemplo 1 (a) y (b) .
De acuerdo con la espectrofotometría de luz ultravioleta y el análisis de CE, la acumulación resultante de la purificación contenía 30 mg de proteína donde 20 mg eran Nel41- (2-hidroxi- 3-aminopropilo) -hGH (II). (b) Síntesis de O- (2- (2- (mPEG (40000k) iloxi) etilamino) - 2-oxoetil) hidroxilamina mPEG(40000) / , , ^ , Boc DIC, HO Su O ' Boc TFA mPEG(40000)- Boc ' ( ^nr°-< mPEG(40000)- O-NH, Boc A una solución del ácido Bis-Boc-aminoxiacético (0.30 mg, 0.10 mmol) en DMF (1 mi) se agregó diisopropiletilamina (0.034 mi, 0.2 mmol), N-hidroxisuccinimida (10 mg, 0.1 mmol) y diisopropilcarbodiimida (0.016 mi, 0.1 mmol). La mezcla se agitó durante 15 minutos y se agregó mPeg (40000) -O- (CH2) 2-NH2 (Producto 008-028, Chirotech Ltd. Cambridge UK, MW 40 kDa, 1.0 g, 0.025 mmol) disuelto en una cantidad mínima de DCM. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 6 horas y el producto se precipitó y se lavó con éter dietílico. El producto precipitado se disolvió de nuevo en una mezcla de 0.5 mi de DMF y 1 mi de DCM y se precipitó y se lavó con éter dietílico. Esto se repitió una vez más y después del secado se aislaron 770 mg de producto precipitado. 200 mg del producto precipitado seco se disolvieron en 5 mi de DCM y 5 mi de TFA. Después de 30 minutos, la mezcla se concentró en un evaporador giratorio y se quitó dos veces con 10 mi de etanol. El aceite residual se disolvió de nuevo en una mezcla de 0.5 mi de DMF y 2 mi de DCM y se precipitó y se lavó con éter dietílico. Esto se repitió una vez más y el derivado de PEG se secó y se disolvió en 1 mi de amortiguador (MES 0.3 M, pH 6.5) El producto transaminado obtenido en (a) se disolvió en amortiguador (trietanolamina 20 mM, pH 8.5) y se agregó 3- (metiltio) -1-propanol (1 mi de una solución 683 mM) . Luego, se agregó peryodato de sodio (5 mg, 10 eq.) y la mezcla se dejó reaccionar durante 30 minutos antes de que se lavara tres veces con una solución acuosa de metionina (168 mM) y se concentró a 4.5 mi utilizando un dispositivo de ultrafiltración (Amicon Ultra-15MR, Millipore) . Luego, se agregó 0.5 mi de N-metil-pirrolidona helada y se agregó lentamente a la solución del derivado de PEG y la mezcla se dejó reaccionar durante toda la noche. El amortiguador de la mezcla de reacción se intercambió en una columna de desalinización (HiPrep 26/10, No. de catálogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) la cual se equilibró previamente y se eluyó con amortiguador (tris 10 mM, pH 8.5) y la acumulación se aplicó a una columna de intercambio iónico (HiLoad 26/10 QSepharose, No. de catálogo 17-1066-01 de Amersham Biosciences) equilibrada previamente en Tris 10 mM pH 8.5 y se eluyó con un gradiente de NaCl 0.2 M en Tris 10 mM ph 8.5 a un flujo de 4 ml/minuto sobre 10 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían la hGH conjugada con PEG de acuerdo con la CLAR-FI se acumularon y el amortiguador se intercambió en una columna de desalinización (HiPrep 26/10, No. de catálogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) la cual se equilibró previamente y se eluyó con amortiguador (bicarbonato de amonio 50 mM, pH 8.5). La acumulación se liofilizó. El rendimiento del compuesto objetivo fue 3.25 mg.
Ejemplo 6 Preparación de N ,ebll41- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPeg (30000) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) -butilideno) aminoxi) propiloxiimino) -etilo] -hGH (VII.) La hGH (100 mg) se disolvió en amortiguador (7 mi, mono-fosfato de sodio 125 mM, pH 6.0). Se agregó 1,3-bis-aminoxipropano .2HC1 (2.0 g en 5.0 mi de mono-fosfato de sodio 125 mM, ajustado a pH 6.0) y finalmente se agregó TGasa (Activa WM, Ajinomoto, 30 mg en 2 mi de mono-fosfato de sodio 125 mM, pH 6.0) y el volumen se ajustó a 30 mi con amortiguador de mono-fosfato de sodio (125 mM, pH 6.0). Después de 4 horas a 37°C la reacción se detuvo por la adición de NEM (100 ul, NEM 100 mM) . Después de 1 hora adicional a 37°C, el bis-aminoxipropano en exceso se retiró y el amortiguador se intercambió en una columna de desalinización (HiPrep 26/10, No. de catálogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) la cual se equilibró previamente y se eluyó con amortiguador (Tris 10 mM, pH 8.5). A la acumulación que contenía proteína (32 mi que contenía 82 mg de proteína) se agregó gota a gota una solución de un aldehido de PEG de dos brazos 60 kDa (Nektar, 083Y0V01 MPEG2-BUTYRALD-60K, 800 mg en 10 mi de agua) . Después de la incubación a temperatura ambiente durante toda la noche, el amortiguador se intercambió en cuatro porciones en una columna de desalineación (HiPrep 26/10, No. de catálogo 17-5087-01 de Amersham Biosciences) por Tris 10 mM pH 8.5. La acumulación que contenía proteína combinada se aplicó en tres porciones a una columna MonoQ 10/100 GLMR equilibrada en Tris 10 mM pH 8.5 y se eluyó con un gradiente de NaCl 0.2 M en Tris 10 mM Tris ph 8.5 a un flujo de 4 ml/minuto sobre 20 volúmenes de columna. Las fracciones que contenían el compuesto objetivo se recolectaron, el amortiguador se intercambió y se sometieron a la cromatografía de nuevo como antes. Finalmente, las fracciones que contenían el compuesto objetivo se acumularon y la acumulación se aplicó a una columna de filtración en gel HiLoad 26/60 Superdex 200 PGMR (No. de catálogo 171071-01 de Amersham Biosciences) la cual se equilibró previamente y se eluyó con bicarbonato de amonio 50 mM. Las fracciones que contenían el compuesto objetivo se acumularon y se liofilizaron. El rendimiento fue 35.74 mg del producto deseado.
MÉTODOS FAM&COLOGICOS Ensayo (I) ensayo de BAF hGH-R para determinar la actividad ín vitxo de la hormona de crecimiento El ensayo de BAF hGH es un ensayo de proliferación in vi tro, donde las células BAF-3 han sido modificadas para ser dependientes de la hormona de crecimiento (GH) para el crecimiento y la supervivencia. BAF-3 es una linea celular pro-B derivada de médula ósea de murino inmortalizada. Originalmente, las células BAF-3 son dependientes de IL-3 para el crecimiento y la supervivencia. La señalización de IL-3 se inicia cuando una molécula de IL-3 se enlaza y dimeriza dos receptores de IL-3. Esto conduce a la activación de la via de señalización JAK-2/STAT y por lo cual la regulación de la transcripción de genes importantes para el crecimiento y la supervivencia. El receptor de GH (GH-R) pertenece a la misma superfamilia de receptores que IL-3R (la superfamilia de receptores de citocina/hematopoyetina) y comparte la misma vía de señalización intracelular JAK/STAT. De esta manera, después de la transfección del GH-R humano en la línea celular BAF-3, la línea celular se volvió una línea celular dependiente de GH . La línea celular muestra una estimulación de crecimiento relacionada con la dosis por la adición de concentraciones crecientes de GH humana o compuesto de prueba. El ensayo de BAF hGH-R se inicia al privar a las células de hGH (medio de cultivo sin hGH) durante 24 horas a 37°C y C02 al 5%. Las células se centrifugan, el medio se retira y las células se suspenden de nuevo en medio de inanición. 20.000 células/pocilio se siembran en placas de microtítulo (placas de micropocillos NUNC TC de 96 pocilios 96F SI con tapadera No. de catálogo 167008 de NUNCLON D) . La GH humana (en diferentes concentraciones) o el compuesto de prueba (en diferentes concentraciones) se agrega a las células y las placas se incuban durante 68 horas a 37 °C y C0 al 5%. La actividad metabólica de las células se mide por medio de un dispositivo AlamarBlueMR (No. de catálogo 1025 de BioSource Dal) . El dispositivo AlamarBlueMR es un indicador de redox, el cual es reducido por reacciones innatas para el mecanismo celular y, por lo tanto, proporciona una medida indirecta del número de células viables. El dispositivo AlamarBlueMR se agrega a cada pocilio y las células se incuban durante otras 4 horas. La absorbancia se mide en un lector de placas de fluorescencia utilizando un filtro de excitación de 544 nM y un filtro de emisión de 590 nM. La absorbancia de las muestras se coloca en un diagrama como una función de la concentración de GH/compuesto de prueba. A partir de las curvas de respuesta a la dosis se puede calcular la potencia, expresada por el valor EC50 (la cantidad de GH/compuesto de prueba que produce la mitad de la respuesta máxima) . Adicionalmente, la actividad relativa i n vitro de un compuesto de prueba se puede describir por medio del valor de relación definido como EC50 (compuesto) /EC50 (hGH) . El valor de relación superior a 1 indica que el compuesto de prueba es menos potente en comparación con la GH humana. La Tabla 1 muestra los resultados para los compuestos descritos en los ejemplos.
Tabla 1 Potencia relativa in vi tro de diferentes compuestos de hGH descritos en los ejemplos en el ensayo de BAF hGH-R. Los valores son Promedio ± SD Fármacocinetica La farmacocinét ica de los compuestos de los ejemplos se investigó en ratas macho Spraque Dawley después de la administración de dosis individuales intravenosas (i.v.) y subcutáneas (s.c.) . Los compuestos de prueba se diluyeron a una concentración final de 1 mg/ml en un amortiguador de dilución que consistía de: glicina 20 mg/ml, manitol 2 mg/ml, NaHC03 2.5 mg/ml, el pH se ajustó a 8.2. Los compuestos de prueba se estudiaron en ratas macho Spraque Dawley que pesaban 250 g. Los compuestos de prueba se administraron como una inyección individual ya sea i.v. en la vena de la cola o s.c. en el cuello con una aguja 25 G a una dosis de 1 mg/kg de peso corporal. Para cada compuesto de prueba, la toma de muestras de sangre se condujo de acuerdo con el siguiente programa presentado en la Tabla 2.
Tabla 2 Programa de toma de muestras de sangre para cada compuesto de prueba En cada tiempo de toma de muestras, se extrajeron 0.25 mi de sangre de la vena de la cola utilizando una aguja 25 G. La sangre se incorporó en un tubo de ensayo revestido con EDTA y se almacenó sobre hielo hasta la centrifugación a 1200 x G durante 10 minutos a 4°C. El plasma se transfirió a un tubo Micronic^ y se almacenó a -20°C hasta el análisis. Las concentraciones de compuesto de prueba se determinaron por medio de un ensayo ELISA de emparedado utilizando un anticuerpo policlonal anti-hGH de cobayo como receptor y proteína de enlace a hGH biotinilada (parte soluble del receptor de GH humana) como detector. El límite de detección del ensayo fue 0.2 nM. Un análisis farmacocinético sin compartimientos se realizó sobre los perfiles de concentración-tiempo promedio de cada compuesto de prueba utilizando un dispositivo WinNonlin Professional^ (Pharsight Inc., Mountain View, CA, EUA). Los cálculos de parámetros farmacocinéticos de la vida media terminal (t1 ) y tiempo de residencia promedio (MRT, por sus siglas en inglés) se presentan en la Tabla 3. Tabla 3 Vida media (t2) y tiempo de residencia promedio (MRT) de compuestos de hGH de los ejemplos en ratas Sprague Dawiey después de la administración i.v. y s.c. de dosis individuales Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (56)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :
1. Un método para unir covalentemente un PEG a un polipéptido que comprende al menos un residuo de glutamina, caracterizado porque comprende hacer reaccionar en uno o más pasos este polipéptido que comprende un residuo de glutamina representado por la fórmula [I] NH2 [I] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido, con un nucleófilo que contiene nitrógeno de la fórmula [II] H2N-D-R-X [ii] en donde D representa -O- o un enlace individual; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4- CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -C0-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; X representa -0-NH2, un aldehido, una cetona o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, un aldehido o una cetona; en presencia de transglutaminasa para formar un polipéptido transaminado de la fórmula [III] [III] opcionalmente, si X es un grupo latente, transformar el grupo latente en -0-NH2, un aldehido o una cetona, el polipéptido transaminado se hace reaccionar adicionalmente con un segundo compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] en donde Y, si X representa un aldehido, una cetona o un grupo latente, el cual con una reacción adicional se puede transformar en un aldehido o una cetona, representa -0-NH2; o si X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2, representa un aldehido o una cetona; y Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O C H, H, mPEG-O"C H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es . entonces PEG es un PEG de 10 kDa para formar un polipéptido conjugado con PEG de la fórmula [V] M en donde A representa un enlace de oxima; o cualquier sal, profármaco o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque D representa -O- .
3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque D representa un enlace individual.
4. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R representa -(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-CH2- o - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- .
5. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono.
6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono.
7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque R representa metileno o propileno.
8. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque Z representa H2 H2 mPEG-O C H„ H2 mPEG-O H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es , entonces PEG es un PEG de 10 kDa.
9. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque Y representa -0-NH2 y X representa un aldehido o un grupo latente, el cual se puede hacer reaccionar adicionalmente para formar un aldehido.
10. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque Y representa -0- NH2 y X representa una cetona o un grupo latente el cual se puede hacer reaccionar adicionalmente para formar una cetona.
11. El método de conformidad con la reivindicación 9 o la reivindicación 10, caracterizado porque el compuesto de la fórmula [IV] ?.^ [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa.
12. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque Y representa un aldehido y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2.
13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa, 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa.
14. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque Y representa una cetona y X representa -0-NH2 o un grupo latente el cual con una reacción adicional se puede transformar en -0-NH2.
15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el compuesto de la fórmula [IV] Y-Z [IV] representa un compuesto seleccionado de en donde , a menos que se indique de otra manera , mPEG significa un mPEG con un peso molecular de 10 kDa , 20 kDa o 30 kDa y PEG significa un PEG con un peso molecular entre 2 kDa y 5 kDa.
16. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diamino-2-propanol, e Y representa -0-NH2.
17. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el compuesto de la fórmula [II] H2N-D-R-X [II] representa 1, 3-diaminooxi-propano, y Y representa un aldehido.
18. Un método para modificar las propiedades farmacológicas de una hormona de crecimiento, caracterizado porque comprende unir covalentemente un PEG a la hormona de crecimiento de acuerdo con un método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 17.
19. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18, caracterizado porque el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(-0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento.
20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representa una hormona de crecimiento humana.
21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque la hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina representa: a) una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1, b) una hGH de 20 kDa, c) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido, d) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido o e) una hGH en la cual el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 han sido suprimidos o sustituidos cada uno por otro aminoácido y en donde un residuo de glutamina está presente en otra posición en la hormona de crecimiento .
22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la hormona de crecimiento representa una hGH.
23. Un compuesto, caracterizado porque tiene la fórmula [V] PP^ N-D-R-A—Z H [V] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en el polipéptido; D representa -O- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2) -CH(NH2)-CO-NH-CH2-, - (CH2) -CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O C H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo; con la condición que si Z es , entonces PEG es un PEG de 10 kDa.
24. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque D representa -O- .
25. El compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque D representa un enlace individual.
26. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 25, caracterizado porque R representa - (CH2) 4-CH (NH2) -CO-NH-CH2- o - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO- NH-CH2-.
27. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 25, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono.
28. El compuesto de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono.
29. El compuesto de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque R representa metileno o propileno.
30. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 29, caracterizado porque Z representa H2 H2 mPEG-O C H, H. mPEG-O"C H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es entonces el PEG es un PEG de 10 kDa.
31. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 30, caracterizado porque el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en la hormona de crecimiento.
32. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1.
33. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una hGH de 20 kDa.
34. El compuesto de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de a) el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1; o b) el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otra aminoácido; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y diferente de la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 han sido suprimidos o sustituidos cada uno por otro aminoácido.
35. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque se selecciona de ?/di4i/40_2_ (o- (4- { 4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wdl 1 40-2- (O- ( 4- { 4- (mPEG(10k) iloxi) butiril} aminobutil)-oximino) etilo-hGH; wdi4i/40_2_ (Q_ ( _{3_ (mpEG(10k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; A/di4i/40_2_ (o- (4- { 4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiril } aminobutil) oximino) etilo-hGH; wdi4i/40_2_ (0_ (4_{ 5_ (mPEG (lOk) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; wdi4i/4?_3_ ( { 4_ (2_ (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) etoxi) -butiliden} aminoxi ) prop-1-iloxi-hGH; ?/di4i/40_3_ ({4_(i 3_b s (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?/di4i/4?_3_({¿}_ (mPEG (lOk) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; i^141/40-3-( {4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi ) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi ) propiloxi-hGH; ?Jdi4i/4o_3_ ( { 3_ (mPEG (io ) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; wdi4i/40_2_ (0_ (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; /di4i/40_3_ ( {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; A/di4i/40_2_ (o- (4- { 4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; wdl41 40-2- (O- (4-{3- (mPEG(20k) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Aídi4i/40_2_ (o- (4- { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; ?|di4i/40_2_ (0_ (4_{5_ (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?/di4i/40_3_ ( {4_ (2_ (2_ (2_ (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?5i4i/40_3_ ({4_(i,3_ is (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden J -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?G5I4I/40_3_( {4_ (mPEG (20k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ?di4i/40_3_ ({4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi ) propiloxi-hGH; iVdi4i/40_3_ ( {3- (mPEG(20k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; JVdl41 40-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; Ndi4i/40_3_ ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; A/dl41 0-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop- 2-iloxi) butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; iV5l41 40-2- (0-( 4- {3- (mPEG( 30 k) iloxi) propionil Jaminobutil )-oximino) etilo-hGH; wdi4i/40_2_ (o- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; wdi4i/4?_2_ (Q_ (4_{5_ (mPEG (30k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; N5i4i/40_3_ ( { 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril -amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; wdi4i/40_3_ ( {4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; A/di4i/40_3_({4_ (mPEG(30k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Wdl 1 0-3-( {4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) butiliden }-aminoxi) propiloxi-hGH; A/5i4i/40_3_ ( {3_ (mPEG ook) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH ; A/di4i/40_2_ (0_ (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; ?ldl 1 0-3- ( (4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/di4i/40_3_ ( {4-{ (2, 3-bis (mPEG (20k) il) prop-1-iloxi) PEGiloxi } -butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/di4i/40_2_ ( (4_ (4_ ( (2, 3-bis (mPEG(20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; A/dl 1-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG (lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wdl41-2- (O- (4-{4- (mPEG(lOk) iloxi) butiril Jaminobutil) oximino) -etilo-hGH; ÍV5141^- (O- (4-{3- (mPEG(lOk) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; rful-2- (0- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -butiriljaminobutil) oximino) etilo-hGH; N5l41-2- (0- (4- {5- (mPEG (lOk) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?^141-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; -Vdl41-3-({4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; 2^141-3- ({4-(mPEG(10k) iloxi) butiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; Ndl 1-3-({4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden } -aminoxi ) propiloxi-hGH; ?^1 1-3- ( { 3- (mPEG ( lOk) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; ? 141-2-(0- (2- (3- (2,3-bis(mPEG(10k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) -etilo-hGH; rf1?Í-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; ?^141-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril }-minobutil) -oximino) etilo-hGH; N5l41-2- (0- (4-{3- (mPEG(20k) iloxi) propionil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Ndl41-2- (0- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; Z^141-2- (0- (4-{5- (mPEG (20k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?^141-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; Wdl41-3-({4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butilidenj-aminoxi) -propiloxi-hGH; N5l41-3- ( { 4 - (mPEG ( 20 k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; A^141-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi ) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; iVdl41-3- ( {3- (mPEG(20k) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; -V5l41-2-(0-(2-(3-(2,3-bis (mPEG(20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; A/dl41-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG (2Ok) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi ) propiloxi-hGH; Wdl41-2- (O- (4- {4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; Ndl41-2-(0- (4-{3-(mPEG(30k) iloxi) propionil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; ATSl41-2- (O- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; ldl41-2- (O- (4-{ 5- (mPEG (30k) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; lSpli l-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi ) etoxi )-etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ?/dl41-3- ({4-(l,3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?/dl 1-3- ( {4- (mPEG(30k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?^141-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) butiliden }-aminoxi) propiloxi-hGH; ?rSl41-3- ( {3- (mPEG(30k) iloxi) propiliden} aminoxi) propiloxi-hGH; A/ddi4i_2_ ( 0_ ( 2_ ( 3_ ( 2 , 3-bis (mPEG ( 30k) iloxi ) propiloxi ) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; Wdl41-3-({4-(2,3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; A/dl 1-3-({4-{ (2, 3-bis (mPEG(20k) iloxi) prop-1-il) PEGiloxi } -butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Wdl41-2-( (4-(4-( (2, 3-bis (mPEG(20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (O- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; A^0-2- (O- (4- {4- (mPEG (lOk) iloxi) butiril } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; Nd40-2- (O- (4-{3- (mPEG(lOk) iloxi) propionil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; -Vd40-2- (O- (4- {4- (2, 3-bis (mPEG (lOk) iloxi) prop-1-iloxi) -butiril Jaminobutil) oximino) etilo-hGH; i^0-2- (O- (4-{5- (mPEG(lOk) iloxi-5-oxopentanoil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; -Vd40-3-({4-(2-(2-(2-(2-(4-(l,3-bis(mPEG(10k)ilamino-carboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; lS?"i0-3- ({4-(l,3-bis (mPEG(lOk) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; Wd40-3- ({4-(mPEG(10k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Wd40-3-({4- (2,3-bis(mPEG(10k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden J -aminoxi) propiloxi-hGH; Wd40-3- ( {3- (mPEG(lOk) iloxi) propiliden } aminoxi) propiloxi-hGH; A/540-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo-hGH; 2\/d40-3- ( {4- (2, 3-bis (mPEG(lOk) iloxi ) prop-1-iloxi ) propiliden } -aminoxi) propiloxi-hGH; rfi0-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) oximino) etilo-hGH; -V50-2-(O-(4-{3- (mPEG( 2Ok) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (0-(4-{4- (2, 3-bis (mPEG (2Ok) iloxi) prop-1-iloxi) butiril } aminobutil) oximino) etilo-hGH; Wd40-2- (0- (4-{5- (mPEG(20k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil) -oximino) etilo-hGH; ?d40-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butilidenjaminoxi) prop-1-iloxi-hGH; ??d40-3- ( { 4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; rf*°-3- ({4-(mPEG(20k) iloxi) butilidenjaminoxi ) propiloxi-hGH; Nd 0-3-({4-(2,3-bis(mPEG(20k) iloxi) prop-1-iloxi) butiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; rf*°-3- ( {3- (mPEG(20k) iloxi) propiliden }aminoxi) propiloxi-hGH; A*d40-2- (0- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo-hGH; 5i0-3- ( { 4- (2, 3-bis (mPEG (20k) iloxi) prop-1-iloxi) propiliden} -aminoxi) propiloxi-hGH; -d 0-2- (0- (4-{4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiril } -aminobutil) -oximino) etilo-hGH; iVd 0-2- (0- (4- {3- (mPEG(30k) iloxi) propionil Jaminobutil) -oximino) etilo-hGH; Wd 0-2-(O-(4-{4-(2,3-bis (mPEG(30k) iloxi) prop-1-iloxi) butiril } • aminobutil) oximino) etilo-hGH; A/d40-2- (0- (4-{5- (mPEG(30k) iloxi-5-oxopentanoil } aminobutil ) -oximino) etilo-hGH; rf*°-3- ({4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi ) prop-2-iloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden} aminoxi) prop-1-iloxi-hGH; 40-3- ({4-(l,3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butiliden} -aminoxi) -propiloxi-hGH; ?/d 0-3- ({4- (mPEG(30k) iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; A/540—3— ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) butilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?/d 0-3- ( {3- (mPEG(30k) iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; ?*d 0-2- (O- (2- (3- (2, 3-bis (mPEG (30k) iloxi) propiloxi) -propilamino) -2-oxoetil) -oximino) etilo-hGH; i^0-3- ({4- (2, 3-bis (mPEG(30k) iloxi ) prop-1-iloxi) propilidenjaminoxi) propiloxi-hGH; Wd40-3-({4-{ (2,3-bis(mPEG(20k)iloxi)prop-l-il)PEGiloxiJ-butilidenj aminoxi) propiloxi-hGH; ?/d40-2- ( (4- (4- ( (2, 3-bis (mPEG (20k) il) propil) PEGiloxi) -butirilamino) butil) oximino) etilo-hGH; í 141- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; We141-[2-(0-(4-(4- (mPEG(30k) oxi ) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; i 141- (3- ((4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiril-amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; We141-[2-(2-(2,3- (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; ?l41-[2- (O- (2-(2-(mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil)-oximino) etilo] -hGH; We141-[2-(3-(4-( (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxi) -propiloxiimino) etilo] -hGH; Af141/40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; 2^141/40- [2- (0- (4- (4- (mPEG (30k) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; Al41/40-(3-( ( 4- (2- (2- (2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; 2^141/40- [2- (2- (2, 3- (mPEG (20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; 7^141/40- [2- (O- (2- (2- (mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil)-oximino) etilo] -hGH; ^141/40- [2- (3- (4- ( (1, 3-bis (mPEG (30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) -aminoxi) propiloxiimino) etilo] -hGH; ^40- [2-0- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) aminocarboniloxi) -2-propiloxi) butirilamino) butil) -oxiimino) etilo] -hGH; iVe40-[2-(O-(4-(4- (mPEG (30k) oxi) butirilamino) -butil) oxiimino) -etilo] -hGH; -V*40- (3-( (4-(2-(2-(2- (2- (4- (1, 3-bis (mPEG(20k) ilamino-carboniloxi) -2-propiloxi) butiril-amino) etoxi) etoxi) etoxi) -etoxi) butiliden) aminoxi) propiloxi) -hGH; -Ve40-[2-(2-(2,3- (mPEG(20k) iloxi) propiloxicarbonilamino) -etiloximino) etilo] -hGH; We40-[2-(O-(2-(2- (mPEG(40k) iloxi) etilamino) -2-oxoetil) oximino) etilo] -hGH; ?40-[2- (3-(4-( (1, 3-bis (mPEG(30k) ilaminocarboniloxi) -2-propiloxi) butiliden) aminoxi) -propiloxiimino) etilo] -hGH;
36. Un compuesto, caracterizado porque tiene la fórmula [VI] [VI] en donde PP representa un radical de polipéptido obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en el polipéptido; D representa -O- o un enlace; R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono, -(CH2)4-CH(NH2) -CO-NH-CH2-, - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2- o heteroalquileno de 5 a 15 átomos de carbono; A representa un enlace de oxima; Z representa una porción seleccionada entre H2 H2 mPEG-O^C^ H„ - en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; y sales, profármacos o solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo; con la condi•ci-ó'n que si• Z, es entonces el mPEG es un mPEG de 10 kDa.
37. El compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque D representa -0-.
38. El compuesto de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque D representa un enlace individual.
39. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 38, caracterizado porque R representa - (CH2) 4-CH (NH2) -CO-NH-CH2- o - (CH2) 4-CH (NHCOCH3) -CO-NH-CH2-.
40. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 38, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 6 átomos de carbono.
41. El compuesto de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque R representa alquileno de 1 a 3 átomos de carbono.
42. El compuesto de conformidad con la reivindicación 41, caracterizado porque R representa metileno o propileno.
43. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 42, caracterizado porque Z representa H2 H2 mPEG-O C H, H n2 mPEG-O"C> H„ en donde, a menos que se indique de otra manera, mPEG indica un mPEG con un peso molecular entre 5 kDa y 40 kDa y PEG indica un PEG con un peso molecular entre 1 kDa y 10 kDa; con la condición que si Z es . entonces el PEG es un PEG de 10 kDa.
44. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 36 a 43, caracterizado porque el polipéptido es una hormona de crecimiento que comprende un residuo de glutamina y PP representa un radical de hormona de crecimiento obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hormona de crecimiento.
45. El compuesto de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en una hGH que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID No. 1.
46. El compuesto de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos residuos de glutamina que están presentes en la hGH de 20 kDa.
47. El compuesto de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 y de la cadena lateral del residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido o por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de un residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 141 en la SEC ID No. 1, en donde el residuo de glutamina en la posición que corresponde a la posición 40 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otro aminoácido y por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de otro residuo de glutamina que está presente en una posición diferente de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1; o GH representa el radical obtenido por medio de la remoción de -C(=0)-NH2 de la cadena lateral de dos glutaminas que están presentes en una hGH en posiciones diferentes de las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1, en donde cualquier residuo de glutamina que está presente en las posiciones que corresponden a las posiciones 40 y 141 en la SEC ID No. 1 ha sido suprimido o sustituido por otros aminoácidos.
48. Una hormona de crecimiento humana, caracterizada porque se une covalentemente a una porción que comprende PEG, y en particular mPEG, en donde la porción que comprende PEG se une a la cadena lateral del residuo de glutamina 40, a la cadena lateral de la glutamina 141 o a las cadenas laterales de la glutamina 40 y la glutamina 141 de la hormona de crecimiento humana, a condición de que no sea (4- (4- (mPEG(20k) ilbutanoil) -amino-butiloxiimino) -etilo] -hGH, ?f141- [2- (1- (hexadecanoil) piperidin-4-il) etiloxiimino) etilo] -hGH, ?/6141 (2- (4- (4- (1, 3-bis (mPEG (20k) ilaminocarboniloxi) prop-2-iloxi) butirilamino) butiloxi-imino) etilo) -hGH, ?141(2- (4- (2, 6-bis (mPEG(20k) iloxicarbonilamino) -hexanoilamino) butiloxiimino) etilo) -hGH, A141 (2- (4-(4-(mPEG(30k) iloxi) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, A141(2- (4-(4-(mPEG(20k) iloxi) butirilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH, o ?/6141 (2- (4- (3- (mPEG(30k) iloxi) propanoilamino) butiloxiimino) -etilo) -hGH.
49. Un compuesto, caracterizado porque se obtiene por medio del uso de un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.
50. Un compuesto, caracterizado porque se puede obtener por medio del uso de un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 22.
51. Un compuesto, caracterizado porque se obtiene por medio del uso de un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22.
52. Un compuesto, caracterizado porque se puede obtener por medio del uso de un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22.
53. El compuesto caracterizado porque es de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 35, cualquiera de las reivindicaciones 44 a 52, reivindicación 51 o reivindicación 52 para el uso en la terapia.
54. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 35, cualquiera de las reivindicaciones 44 a 52, reivindicación 51 o reivindicación 52.
55. Un método para el tratamiento de la deficiencia de hormona de crecimiento (GHD) ; Síndrome de Turner; síndrome de Prader-Willi (PWS) ; síndrome de Noonan; síndrome de Down; enfermedad renal crónica, artritis reumatoide juvenil; fibrosis quística, infección por VIH en niños que reciben el tratamiento HAART (niños con VIH/HALS) ; niños pequeños nacidos de baja estatura por la edad gestacional (SGA) ; baja estatura en niños nacidos con un peso muy bajo al nacer (VLB ) excepto SGA; displasia esquelética; hipocondroplasia; acondroplasia; baja estatura idiopática (ISS) ; GHD en adultos; fracturas en o de huesos largos, tales como tibia, peroné, fémur, húmero, radio, cubito, clavícula, metacarpo, metatarso y dígito; fracturas en o de huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano y la base del pie; pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo una mano, rodilla u hombro; pacientes que tienen o que atraviesan una osteogénesis por desatención; pacientes después del reemplazo de cadera o disco, reparación de meniscos, fusiones espinales o fijación de prótesis, tal como en la rodilla, cadera, hombro, codo, muñeca o mandíbula; pacientes en los cuales se ha fijado el material de osteosíntesis, tal como clavos, tornillos y placas; pacientes con falta de unión o con una unión incorrecta de fracturas; pacientes después de la osteotomía, por ejemplo de la tibia o lec dedo del pie; pacientes después del implante de injertos; degeneración de cartílago articular en rodillas causado por traumatismo o artritis; osteoporosis en pacientes con síndrome de Turner; osteoporosis en hombres; pacientes adultos en diálisis crónica (APCD) ; enfermedad cardiovascular asociada con desnutrición en APCD; regresión de caquexia en APCD; cáncer en APCD; enfermedad pulmonar obstructiva crónica en APCD; VIH en APCD; personas de edad avanzada con APCD; enfermedad hepática crónica en APCD, síndrome de fatiga en APCD; enfermedad de Crohn; función hepática deteriorada; varones con infecciones por VIH; síndrome de intestino corto; obesidad central; síndrome de lipodistrofia asociada con el VIH (HALS) ; infertilidad masculina; pacientes después de cirugía optativa mayor, desintoxicación de alcohol/drogas o traumatismo neurológico; envejecimiento; personas de edad avanzada frágiles; osteoartritis; cartílago dañado por traumatismo; disfunción eréctil; fibromialgia; trastornos de memoria; depresión; lesión traumática del cerebro; hemorragia subaracnoidea; peso muy bajo al nacer; síndrome metabólico; miopatía glucocorticoidea; baja estatura debido al tratamiento con glucucorticoides en niños; aceleración de la curación de un tejido muscular, tejido nervioso o heridas; la aceleración o mejoramiento del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la proporción de infección en el tejido dañado, caracterizado porque comprende la administración a un paciente en necesidad del mismo en una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 35, cualquiera de las reivindicaciones 44 a 52, reivindicación 51 o reivindicación 52 o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 54.
56. El uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 31 a 35, cualquiera de las reivindicaciones 44 a 52, reivindicación 51 o reivindicación 52 en la manufactura de un medicamento que se utiliza en el tratamiento de la deficiencia de hormona de crecimiento (GHD); Síndrome de Turner; síndrome de Prader-Willi (PWS); síndrome de Noonan; síndrome de Down; enfermedad renal crónica, artritis reumatoide juvenil; fibrosis quística, infección por VIH en niños que reciben el tratamiento HAART (niños con VIH/HALS) ; niños pequeños nacidos de baja estatura por la edad gestacional (SGA) ; baja estatura en niños nacidos con un peso muy bajo al nacer (VLBW) excepto SGA; displasia esquelética; hipocondroplasia; acondroplasia; baja estatura idiopática (ISS); GHD en adultos; fracturas en o de huesos largos, tales como tibia, peroné, fémur, húmero, radio, cubito, clavícula, metacarpo, metatarso y dígito; fracturas en o de huesos esponjosos, tal como el cráneo, la base de la mano y la base del pie; pacientes después de una cirugía de tendones o ligamentos en por ejemplo una mano, rodilla u hombro; pacientes que tienen o que atraviesan una osteogénesis por desatención; pacientes después del reemplazo de cadera o disco, reparación de meniscos, fusiones espinales o fijación de prótesis, tal como en la rodilla, cadera, hombro, codo, muñeca o mandíbula; pacientes en los cuales se ha fijado el material de osteosíntesis, tal como clavos, tornillos y placas; pacientes con falta de unión o con una unión incorrecta de fracturas; pacientes después de la osteotomía, por ejemplo de la tibia o 1er dedo del pie; pacientes después del implante de injertos; degeneración de cartílago articular en rodillas causado por traumatismo o artritis; osteoporosis en pacientes con síndrome de Turner; osteoporosis en hombres; pacientes adultos en diálisis crónica (APCD) ; enfermedad cardiovascular asociada con desnutrición en APCD; regresión de caquexia en APCD; cáncer en APCD; enfermedad pulmonar obstructiva crónica en APCD; VIH en APCD; personas de edad avanzada con APCD; enfermedad hepática crónica en APCD, síndrome de fatiga en APCD; enfermedad de Crohn; función hepática deteriorada; varones con infecciones por VIH; síndrome de intestino corto; obesidad central; síndrome de lipodistrofia asociada con el VIH (HALS) ; infertilidad masculina; pacientes después de cirugía optativa mayor, desintoxicación de alcohol/drogas o traumatismo neurológico; envejecimiento; personas de edad avanzada frágiles; osteoartritis; cartílago dañado por traumatismo; disfunción eréctil; fibromialgia; trastornos de memoria; depresión; lesión traumática del cerebro; hemorragia subaracnoidea; peso muy bajo al nacer; síndrome metabólico; miopatía glucocorticoidea; baja estatura debido al tratamiento con glucucorticoides en niños; aceleración de la curación de un tejido muscular, tejido nervioso o heridas; la aceleración o mejoramiento del flujo sanguíneo al tejido dañado; o la disminución de la proporción de infección en el tejido dañado.
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