MX2007013765A

MX2007013765A - Mutacion de genes oas1.

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Publication number: MX2007013765A
Application number: MX2007013765A
Authority: MX
Inventors: Shawn P Iadonato; Charles L Magness; Christina A Scherer; P Campion Fellin; Tory Hagen; Amy Olson
Original assignee: Illumigen Biosciences Inc
Priority date: 2005-05-04
Filing date: 2006-05-03
Publication date: 2008-01-29
Also published as: US20090291074A1; HK1209454A1; JP2009504135A; JP5303728B2; SG10201502945PA; NO20076126L; EP2314675B1; NZ563785A; PH12014500829A1; US20130142773A1; CA2607575A1; US20060275802A1; AU2006242152B2; RU2012132651A; EP2314675A3; ZA200710521B; KR20130084323A; KR20080011423A; IL187079A0; RU2007144986A

Abstract

Se proporcionan secuencias de aminoacidos modificados de proteinas OAS1 en primates no humanos, y genes relacionados con los mismos.

Description

MUTACIÓN DE GENES OAS1 Campo de la Invención La presente invención se refiere a un método para detectar una mutación en un gen de sintetasa de oligoadenilato de primate humano o no humano, y a proteínas OAS1 que tienen al menos una modificación de aminoácido. Antecedentes de la Invención Se han identificado un número de enfermedades hasta la fecha en donde la resistencia natural a infecciones existe en la población humana. Alter y Moyer, J. Acquir. Immune Defic. Syndr. Hum Retrovirol. 18 Suppl. 1: S6-10 (1998), reportan rangos de infección viral de hepatitis C (HCV) tan altos como del 90% en grupos de alto riesgo, tales como personas que se inyectan drogas. Sin embargo, se ha identificado en la literatura el mecanismo a través del cual el restante 10% es aparentemente resistente a infecciones. Las proteínas que juegan un papel importante en la infección HCV incluyen sintetasas de oligoadenilato 2-prime, 5-prime. Las proteínas OASs son proteínas inducidas por interferón caracterizadas por su capacidad de catalizar la síntesis de oligómeros 2-prime, 5-prime de adenosina (2-5As). Hovanessian y Asociados, EMBO 6:1273-1280 (1987) descubrió que las células humanas tratadas con interferón que contienen varias proteínas OASs, corresponden a proteínas de 40 (OAS1), 46 (OAS1), 69, y 100 kD. Marie y Asociados, Biochem. Biophys. Res. Commun. 160:580-587 (1989) generó anticuerpos policlonales altamente específicos contra p69, la 69-kD OAS. Al clasificar una biblioteca de expresión celular humana, tratada con interferón con los anticuerpos anti-p69, Marie y Hovanessian, J. Biol. Chem. 267:9933-9939 (1992) aisló un cADN OAS2 parcial. Clasificaron bibliotecas adicionales con cADN parcial y recuperaron cADNs que codifican dos isoformas. Las isoformas más pequeñas son codificadas por dos mARNs que difieren en la longitud de la región no traducida 3-prime. El análisis de manchado Northern reveló que la proteína OAS2 expresa como cuatro mARNs inducidos por interferón en células humanas. Las proteínas OAS2 anticipadas tienen una secuencia de 683-aminoácidos comunes y diferentes términos 3-prime. De acuerdo con SDS-PAGE de productos de transcripción/traducción in vitro, dos isoformas tienen masas moleculares de 69 y 71 kD. Ambas isoformas exhibieron actividad OAS in vitro. El análisis de secuencia indicó que la proteína OAS2 contiene dos dominios homólogos-OAS1 separados por una región enlazadora putativa con alto contenido de prolina. Los dominios N- y C-terminal son del 41% y del 53% idénticos con OAS1, respectivamente. Mediante fluorescencia en hibridación in situ y mediante la inclusión dentro de clones mapeados, Hovanian y Asociados, Genomics 52:267-277 (1998) determinó que los genes OAS1, OAS2, y OAS3 están agrupados con la región de 130-kb en 12q24.2. 2-5As enlaza a, y activa RNase I, la cual degrada las ARNs viral y celular, conduciendo a la inhibición de síntesis de proteína celular y desajuste de la réplica viral. Un cuarto gen OAS humano, referido como OASL, difiere de OAS1, OAS2, y OAS3 en que OASL carece de actividad enzimática. El gen OASL codifica una proteína de dos dominios compuesta de una unidad OAS que genera a un dominio C-terminal de 164 aminoácidos que es homólogo a una repetición tándem de ubiquitina. ((Eskildsen y Asociados, Nuc. Acids Res. 31:3166-3173, 2003; Kakuta y Asociados, J. Interferon & Cytokine Res. 22:981-993, 2002). Debido a su papel en la inhibición de réplica viral e infección viral, existe la necesidad en la técnica de métodos y composiciones que suprimen la réplica viral relacionada con la actividad OAS1, incluyendo una profunda necesidad de terapias a base de inhibidor que suprimen la réplica HCV. Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a la detección de mutaciones relacionadas con resistencia a hepatitis C que pueden estar caracterizadas como mutaciones en el gen de sintetasa de oligoadenilato 1. En una modalidad, se contempla un método de clasificación genética. El método comprende ensayar una muestra de ácido nucleico aislada de un primate humano o no humano para la presencia de una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato que causa una modificación de aminoácidos en una o más de las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315, y 335 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 (OAS1) (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:1). En una modalidad adicional, se contempla un método de clasificación genética. El método comprende ensayar una muestra de ácido nucleico aislada de un primate humano o no humano para la presencia de una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato 1 que causa una modificación de aminoácidos en la posición 363 para las tres formas de sintetasa de oligoadenilato 1, que son homologas de carboxil-término con el Acceso Genbank NP_002525.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:3). Aún en una modalidad adicional, se contempla un método de clasificación genética. El método comprende ensayar una mezcla de ácido nucleico aislada de un primate humano o no humano para la presencia de una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato 1 que origina una modificación de ácido nucleico en una o más de las posiciones de aminoácido 347, 350, 352, 353, 354, 356, 357, 361, 363, 364, 365, 369, 371, 373, 374, 375, 378, 379, 382, 388, 389, ó 394 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 que son homologas carboxil-término con el Acceso Genbank NP_058132.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:2). Aún en otra modalidad adicional, se contempla un método de clasificación genética. El método comprende ensayar una muestra de ácido nucleico aislada de un primate humano o no humano para la presencia de una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato 1 que origina una modificación de aminoácido en una o más de las posiciones de aminoácido 347, 361, 364, 372, 384, 385, ó 399 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 que son homologas en el carboxil-término con el Acceso Genbank NP_001027581.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:4). En una modalidad adicional, la presente invención proporciona una proteína que tiene al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315, y 335 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 (OAS1) (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:1), y el uso de la proteína para preparar un diagnóstico para la resistencia a infección viral, preferentemente infección flaviviral, más preferentemente infección de hepatitis C. En modalidades específicas, el diagnóstico es un anticuerpo. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona una proteína OAS1 que tiene una modificación de aminoácido en la posición 363 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 que son homologas en el carboxil-término con el Acceso Genbank NP_002525.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:3), y el uso de la proteína para preparar un diagnóstico para resistencia a infección viral, preferentemente infección flaviviral, más preferentemente infección de hepatitis C. En modalidades específicas, el diagnóstico es un anticuerpo. En una modalidad adicional, la presente invención proporciona una proteína OAS1 que tiene al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 347, 350, 352, 353, 354, 356, 357, 361, 363, 364, 365, 369, 371, 373, 374, 375, 378, 379, 382, 388, 389, y 394 para todas las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 que son homologas en el carboxil-término con el Acceso Genbank NP_058132.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:2), y el uso de la proteína para preparar un diagnóstico para la resistencia a infección viral, preferentemente infección flaviviral, y más preferentemente infección de hepatitis C. En modalidades específicas, el diagnóstico es un anticuerpo. En una modalidad aún adicional, la presente invención proporciona una proteína OAS1 que tiene al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 347, 361, 364, 372, 384, 385, ó 399 para todos las formas de sintetasa de oligoadenilato 1 que son homologas en el carboxil-término con el Acceso Genbank NP_001027581.1 (incluyendo sin limitación SEQ ID NO:4), y el uso de la proteína para preparar un diagnóstico para resistencia de infección viral, preferentemente infección flaviviral, más preferentemente infección de hepatitis C. En modalidades específicas, el diagnóstico es un anticuerpo. Aún en una modalidad adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o inhibir infección a través de un virus, preferentemente un flavivirus, más preferentemente virus de hepatitis C, en donde el compuesto terapéutico es una proteína que tiene al menos una modificación de aminoácido de acuerdo con la presente invención. En otras modalidades, el compuesto terapéutico es un polinucleótido, tal como ADN ó ARN, que codifica la proteína. En una modalidad aún adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o inhibir infección a través de un virus, preferentemente un flavivirus, y más preferentemente un virus de hepatitis C, en donde el compuesto terapéutico es una proteína codificada por OAS1 de la presente invención que tiene una o más de las modificaciones de aminoácido descritas. Aún en una modalidad adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o inhibir infección a través de un virus, preferentemente un flavivirus, más preferentemente virus de hepatitis C, en donde el compuesto terapéutico mimetiza los efectos benéficos de al menos una mutación de la presente invención. El compuesto terapéutico puede ser una molécula pequeña, proteína, péptido, ADN, o molécula de ADN, o anticuerpo. En una modalidad aún adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o tratar cáncer, preferentemente cáncer de próstata, en donde el compuesto terapéutico es una proteína codificada por el gen OAS1, que tiene al menos una mutación de la presente invención. En otras modalidades, el compuesto terapéutico es un polinucleótido, tal como ADN ó ARN, que codifica la proteína. Aún en una modalidad adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o tratar cáncer, preferentemente cáncer de próstata, en donde el compuesto terapéutico es una proteína OAS1, que tiene al menos una modificación de aminoácido de la presente invención. En una modalidad aún adicional, la presente invención proporciona un compuesto terapéutico para prevenir o tratar cáncer, preferentemente cáncer de próstata, en donde el compuesto terapéutico mimetiza los efectos benéficos de al menos una mutación de la presente invención. El compuesto terapéutico puede ser una molécula pequeña, proteína, péptido, molécula de ADN ó ARN, o anticuerpo. En modalidades adicionales, el compuesto terapéutico tiene la capacidad de inhibir la actividad de OAS1 o al menos una sub-región o sub-función de toda la proteína, y estos compuestos son representados por moléculas anti-sentido, ribozimas, y moléculas ARNi con la capacidad de enlazar en forma específica a polinucleótidos OAS1, y mediante anticuerpos y fragmentos de los mismos con la capacidad de enlazar en forma específica a proteínas OAS1 y polipéptidos. La presente invención proporciona, en otra modalidad, inhibidores de OAS1. Los inhibidores de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, moléculas anti-sentido, ribozimas, ARNi, anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, proteínas o polipéptidos así como moléculas pequeñas. Las moléculas anti-sentido de ejemplo comprenden al menos 10, 15, ó 20 nucleótidos consecutivos de, o que hibrida bajo condiciones descritas al polinucleótido que codifica OAS1 que tiene al menos una modificación de aminoácido de la presente invención. Aún en otra modalidad adicional, los inhibidores de OAS1 son considerados que enlazan en forma específica la región de la proteína definida por un polipéptido OAS1 que tiene una modificación de aminoácido de la presente invención. Los inhibidores de la presente invención incluyen pero no se limitan a, anticuerpos, fragmentos de anticuerpos, moléculas pequeñas, proteínas o polipéptidos. En una modalidad aún adicional, los inhibidores de OAS1 se considera que están comprendidos de moléculas anti-sentido o ARNi que enlazan en forma específica o hibridan un polinucleótido que codifica una proteína OAS1 que tiene al menos una modificación de aminoácido de la presente invención. En modalidades adicionales, las composiciones se proporcionan de modo que comprendan uno o más inhibidores OAS1 en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las modalidades adicionales proporcionan métodos para disminuir la expresión de gen OAS1 o actividad biológica. Las modalidades adicionales proporcionan métodos para incrementar o disminuir en forma específica la expresión de ciertas formas del gen OAS1 que tiene al menos una mutación, tal como se describe en la presente invención. La presente invención proporciona un oligonucleótido anti-sentido que comprende al menos una ligadura de internucleósido modificada. La presente ¡nvención proporciona además un oligonucleótido anti-sentido que tiene una ligadura de fosforotioato. La presente invención proporciona además un oligonucleótido anti-sentido que comprende al menos una porción de azúcar modificada. La presente invención también proporciona un oligonucleótido anti-sentido que comprende al menos una porción de azúcar modificada la cual es una porción de azúcar 2'-O-metilo. la presente invención proporciona además un oligonucleótido anti-sentido que comprende al menos una nucleobase modificada. La presente invención proporciona además un oligonucleótido anti-sentido que tiene una nucleobase modificada en donde la nucleobase modificada es 5-metilcitosina. La presente invención también proporciona un compuesto anti-sentido en donde el compuesto anti-sentido es un oligonucleótido. La presente invención proporciona un método para inhibir la expresión de OAS1 humano en células o tejidos humanos que comprenden, en donde el método comprende contactar las células objetivo in vivo con un compuesto anti-sentido o una ribozima de 8 a 35 nucleótidos de longitud dirigida a una molécula de ácido nucleico que codifica OAS1 humana, de modo que se inhibe a la expresión de OAS1 humano. La presente invención proporciona además un método para disminuir o incrementar la expresión de formas específicas de OAS1 in vivo, estando definidas dichas formas por tener al menos una mutación en una posición de acuerdo con la presente invención, utilizando compuestos anti-sentido o ARNi o ribozimas. La presente invención proporciona además un método para modular el crecimiento de células de cáncer, en donde el método comprende contactar las células de cáncer in vivo con un compuesto anti-sentido o ribozima de 8 a 35 nucleótidos de longitud, dirigido a una molécula de ácido nucleico que codifica OAS1 humano, de modo que se inhiba la expresión de OAS1 humano. La presente invención proporciona además la identificación de regiones objetivo de polinucleótidos OAS1. La presente invención también proporciona sondas etiquetadas para identificar polinucleótidos OAS1 a través de hibridación in situ. La presente invención proporciona el uso de un inhibidor OAS1 de acuerdo con la presente invención para proporcionar un medicamento para prevenir o inhibir infección HCV. La presente invención proporciona además la dirección de un inhibidor OAS1 a regiones específicas de la proteína OAS1 o en funciones específicas de la proteína. La presente invención también proporciona una composición farmacéutica para inhibir la expresión de OAS1, en donde el método comprende un oligonucleótido anti-sentido de acuerdo con la presente invención en una mezcla con un vehículo o diluyente fisiológicamente aceptable. La presente invención proporciona además una ribozima con la capacidad de disociar en forma específica el ARN OAS1, y una composición farmacéutica que comprende la ribozima. La presente invención también proporciona inhibidores de molécula de OAS1, en donde los inhibidores tienen la capacidad de reducir la actividad de OAS1 o de reducir o prevenir la expresión de mARN OAS1. La presente invención proporciona además inhibidores de OAS1 que modifican funciones específicas de la proteína además de la síntesis de 2',5'-oligoadenilatos, incluyendo dichas funciones la interacción con otras proteínas tales como proteína NS5A de virus de hepatitis C. La presente invención proporciona compuestos que alteran las modificaciones post-traducción de OAS1, incluyendo pero sin limitarse glicosilación y fosforilación. La presente invención proporciona además un método de clasificación genética humano para identificar una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato que comprende: (a) tratar, bajo condiciones de amplificación, una muestra de ADN genómico procedente de un humano con un par de cebadores de reacción de cadena de polimerasa (PCR) para amplificar una reacción del ADN genómico humano que contiene al menos una mutación de un gen OAS1 de acuerdo con la presente invención, produciendo el tratamiento un producto de amplificación que contiene la región; (b) detectar en el producto de amplificación del paso (a), la presencia de una mutación de nucleótidos en una posición de nucleótido de la presente invención, identificando de esta forma la mutación. La presente invención también se refiere a un método para detectar en un humano un alelo de resistencia a infección de hepatitis C que contiene una mutación que comprende la substitución de nucleótido tipo no natural por un nucleótido tipo natural en una posición de nucleótidos que corresponde a una modificación de aminoácido de la presente invención en la proteína OAS1 codificada por el gen de sintetasa de oligoadenilato (OAS1), en donde el método comprende: (a) formar una mezcla en adiciones de reacción de cadena de polimerasa (PCR), combinando, en un regulador PCR, una muestra de ADN genómico del humano y un par de cebadores PCR específicos de gen de sintetasa de oligoadenilato; (b) someter la mezcla en adición PCR a una pluralidad de termociclos PCR para producir un producto de amplificación de gen de sintetasa de oligoadenilato; y (c) tratar, bajo condiciones de hibridación productos producidos en el paso (b), con una sonda con la capacidad de detectar la mutación. También se proporciona un inhibidor OAS1 aislado seleccionado de un grupo que consiste en un oligonucleótido anti-sentido, una ribozima, un ARN inhibidor pequeño (ARNi), una proteína, un polipéptido, un anticuerpo, y una molécula pequeña. El inhibidor aislado puede ser una molécula antisentido o el complemento de la misma que comprende al menos 15 ácidos nucleicos consecutivos de una secuencia de polinucleótido que corresponde a una mutación de gen OAS1 asociada con una sustitución de aminoácido de la presente ¡nvención. El inhibidor OAS1 aislado puede ser seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo y fragmento de anticuerpo. También se proporciona una composición que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un inhibidor OAS1 en un vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención también se refiere a un método para inhibir la expresión de OAS1 en una célula de mamífero, en donde el método comprende administrar a la célula un inhibidor OAS1 seleccionado del grupo que consiste en un oligonucleótido anti-sentido, una ribozima, una proteína, un ARNi, un polipéptido, un anticuerpo, y una molécula pequeña. La presente invención se refiere además a un método para inhibir la expresión del gen OAS1 en un sujeto, en donde el método comprende administrar al sujeto, en un vehículo farmacéuticamente efectivo, una cantidad de un oligonucleótido anti-sentido el cual es efectivo para hibridar en forma específica a todo o parte de las secuencias de ácido nucleico objetivo seleccionada derivada del gen OAS1.

La presente invención se refiere además a un método para prevenir infección mediante flavivirus en un sujeto humano susceptible a la infección, en donde el método comprende administrar al sujeto humano un inhibidor OAS1 seleccionado del grupo que consiste en un oligonucleótido anti-sentido, una ribozima, un ARNi, una proteína, un polipéptido, un anticuerpo, y una molécula pequeña, en donde el inhibidor OAS1 previene la infección mediante los flavivirus. Breve Descripción de las Figuras La figura 1, es una secuencia de aminoácido de una forma terapéutico de proteína OAS1 (SEQ ID NO:1). La figura 2, es una tabla que describe las sustituciones de aminoácido útiles en todas las formas terapéuticas de OAS1. La figura 3, es una tabla que describe modificaciones de aminoácido OAS1 de primate útiles en formas terapéuticas de OAS1. Las posiciones indicadas con * se refieren a formas de OAS1 que son homologas en el carboxil-término con el Acceso Genbank NP_002525.1. Las posiciones indicadas con + se refiere a formas de OAS1 que son homologas en el carboxil-término al Acceso Genbank NP_0581321. Las posiciones indicadas con ? se refiere a formas de OAS1 que son homologas en el carboxil-término al Acceso Genbank NP_001027581.1. La figura 4, es una gráfica que indica las posiciones de las mutaciones de genes OAS1 de primate y modificaciones de aminoácido correspondientes.

La figura 5, es un listado de isoformas OAS1 adicionales de la presente invención, incluyendo formas de primate humano y no humano. También se proporcionan mutaciones de las isoformas de primate. Estas isoformas, ya sea solas o juntas con cualquier mutación identificada en la presente invención, son útiles para propósitos de diagnóstico, terapéutico, así como otros aquí descritos. Descripción Detallada de la Invención La presente invención se refiere a mutaciones novedosas en el gen de sintetasa de oligonucleótido 1, el uso de estas mutaciones para diagnóstico de susceptibilidad de resistencia a infección viral, proteínas codificadas por un gen que tiene una mutación de acuerdo con la presente invención, y la prevención o inhibición de infección viral utilizando proteínas, anticuerpos, y ácidos nucleicos relacionados. Estas mutaciones se correlacionan con la resistencia de vehículo a infección con flavivirus, particularmente virus de hepatitis C. Mucha de la investigación médica normal está enfocada a identificar mutaciones y efectos que originan o contribuyen a la enfermedad. Dicha investigación está diseñada para conducir a los compuestos y métodos de tratamiento en el estado de enfermedad. Se ha puesto menor atención en el estudio de las influencias genéticas que permiten a las personas permanecer saludables a pesar de la exposición a agentes infecciosos y otros factores de riesgo. La presente invención representa una aplicación exitosa de un proceso desarrollado por los inventores de la misma, mediante la cual poblaciones específicas de sujetos humanos son evaluados y analizados con el objeto de descubrir variaciones o mutaciones genéticas que confieren a la resistencia de la enfermedad. La identificación de un segmento de sub-población que tiene una resistencia natural a una enfermedad en particular o condición biológica permite en forma adicional la identificación de genes y proteínas que son objetivos adecuados para intervención farmacéutica, evaluación de diagnóstico, o prevención, tal como vacunación profiláctica.

Un segmento de sub-población se identificó previamente y se describe en la solicitud también pendiente Serie No. /972,135, y estuvo comprendida en individuos quienes, a pesar de exposición repetida a virus de hepatitis C (HCV), han permanecido sin embargo sero-negativos, en tanto que sus cohortes se han infectado (sero-positivos). Las poblaciones estudiadas incluyen pacientes hemofílicos sujetos a transfusiones de sangre repetidas, y usuarios de fármacos intravenosos quienes han quedado expuestos a través de agujas compartidas y a otros factores de riesgo. La presente invención proporciona mutaciones identificadas en los genes OAS1 de primates no humanos, tal como se describe en el ejemplo 1. La Solicitud Serie No. 10/972,135, proporciona descripción relacionada con infección HCV; definiciones; modos de práctica de la presente invención; análisis de polinucleótido; preparación de cebadores de polinucleótido; reacción de cadena de polimerasa; análisis de secuencia de ácido nucleico; detección de secuencias objetivo inmovilizadas en membrana; exploración de técnicas para detección de sustituciones base; agentes terapéuticos para restaurar y/o mejorar la función OAS1; agentes terapéuticos para inhibición de función OAS1; ribozimas; ARNi; proteínas y polipéptidos; moléculas pequeñas; métodos para evaluar la eficacia de inhibidores OAS1; y composiciones farmacéuticas. La Solicitud Serie No. 10/972,135 está incorporada en su totalidad a la presente invención como referencia. Los polipéptidos de la presente invención tienen la capacidad, como parte de su función nativa, de transducir a través de una membrana celular y transmitir sus efectos antivirales en la ausencia de un vector de administración o vehículo de expresión. Las propiedades de transducción de célula de proteínas básicas, cargadas en forma positiva ha sido descrita previamente y es bien conocida por los expertos en la técnica (Ryser y Hancock, Science. 22 de octubre de 1965; 150(695):501-3). En el caso en donde los polipéptidos se preparan como formulaciones líquidas y se administran mediante inyección, preferentemente la solución es una solución de sal isotónica que contiene 140 milimolares de cloruro de sodio y 10 milimolares de calcio en un pH de 7.4. La inyección puede ser administrada, por ejemplo, en una cantidad terapéuticamente efectiva, preferentemente en una dosis de aproximadamente 1 µg/kg de peso corporal hasta aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal al día, tomando en cuenta las rutas de administración, salud del paciente, etc. El polipéptido(s) de la presente invención puede emplearse en combinación con un vehículo farmacéutico adecuado. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de la proteína, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicho vehículo incluye pero no se limita a, solución salina, solución salina regulada, dextrosa, agua, glicerol, etanol, y combinaciones de los mismos. La formulación debe ser adecuada para el modo de administración. El polipéptido(s) de la presente invención se puede modificar mediante ligadura química del polipéptido a una o porciones o conjugados para aumentar la actividad, distribución celular, o captación celular del polipéptido(s). Dichas porciones o conjugados incluyen lípidos tales como colesterol, ácido cólico, tioéter, cadenas alifáticas, fosfolípidos y sus derivados, poliaminas, polietilenglicol (PEG), porciones de palmitilo, y otros descritos, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,514,758, 5,565,552, 5,567,810, 5,574,142, 5,585,481, 5,587,371, 5,597,696 y 5,958,773.

Los polipéptidos de la presente invención también pueden ser modificados para tipos de células específicos objetivos para una indicación de enfermedad en particular, incluyendo pero sin limitarse a, células de hígado en el caso de infección de hepatitis C. Tal como lo pueden apreciar los expertos en la técnica, se han descrito métodos adecuados que logran las metas objetivo descritas e incluyen, sin limitación, dirección liposomal, endocitosis transmitida por receptor y enlace de anticuerpo-antígeno. En una modalidad, el receptor de asiaglicoproteína puede utilizarse para administrar células de hígado a través de la adición de una porción de galactosa al polipéptido(s). En otra modalidad, se pueden conjugar porciones de mañosa para el polipéptido(s), con el objeto de dirigir el receptor de mañosa encontrado en macrófagos y células de hígado. Tal como lo podrá reconocer un experto en la técnica, se pueden combinar múltiples métodos de suministro y dirección. Por ejemplo, el polipéptido(s) de la presente invención puede ser dirigido a células de hígado mediante encapsulación dentro de liposomas, siendo conjugadas dichas liposomas para galactosa para dirigirse al receptor de asialoglicoproteína. La presente invención también proporciona un paquete o equipo farmacéutico que comprende uno o más contenedores llenos con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas de la presente invención. Asociadas con dichos contenedores se puede encontrar un aviso en la forma prescrita por una agencia gubernamental que regula la fabricación de, uso y venta de productos farmacéuticos o biológicos, en donde el aviso refleja la aprobación por parte de la agencia de fabricación, uso o venta para administración a humanos. Además, el polipéptido de la presente invención puede ser empleado junto con otros compuestos terapéuticos. Cuando el polipéptido(s) de la presente invención se utiliza como un farmacéutico, puede proporcionarse a mamíferos, en un vehículo adecuado. Cuando los polipéptidos de la presente invención se utilizan como un farmacéutico como el descrito anteriormente, se proporcionan, por ejemplo, en dosis terapéuticamente efectivas de aproximadamente 10 µg/kg de peso corporal a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal diariamente, tomando en cuenta las rutas de administración, salud del paciente, etc. La cantidad determinada es preferentemente adecuada para lograr la prevención o inhibición de infección a través de un virus, preferentemente flavivirus, preferentemente RSV y HCV, la prevención o el tratamiento de cáncer, inflamación, diabetes, u otras enfermedades. Las proteínas, sus fragmentos u otros derivados o análogos de las mismas, o células que los expresan se pueden utilizar como inmunogeno para producir anticuerpos para el mismo. Estos anticuerpos, pueden ser por ejemplo policlonales, monoclonales, quiméricos, de cadena simple, fragmentos Fab, o el producto de una biblioteca de expresión Fab. Varios procedimientos conocidos en la técnica pueden ser utilizados para la producción de anticuerpos policlonales. Los anticuerpos generados contra el polipéptido(s) de la presente invención se pueden obtener mediante inyección directa del polipéptido en un animal o administrando el polipéptido a un animal, preferentemente no humano. El anticuerpo obtenido de esta forma posteriormente se enlazará al propio polipéptido. En esta forma, incluso se puede utilizar una secuencia que codifica únicamente un fragmento del polipéptido para generar anticuerpos que enlazan a todo el polipéptido nativo. Además, un panel de dichos anticuerpos específicos a un gran número de polipéptidos puede ser utilizado. Para preparación de anticuerpos monoclonales, se puede utilizar cualquier técnica que proporcione anticuerpos producidos por cultivos de línea celular continua. Los ejemplos incluyen la técnica de hibridoma (Kohier y Milstein, 1975, Nature, 256:495-597), la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de células-B humano (Kozbor y Asociados, 1983, Immunology Today 4:72),, y la técnica de hibridoma-EBV para producir anticuerpos monoclonales humanos (Coe y Asociados, 1985, Monoclonal Antibodies and Cáncer Therapy, Alan R. Liss, Inc. páginas 77-96).

Las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena simple (Patente Norteamericana No. 4,946,778) pueden ser adaptadas para producir anticuerpos de cadena simple para productos de polipéptido inmunogenoico de la presente invención. Los anticuerpos pueden ser utilizados en métodos que se relacionan con la localización y actividad de las secuencias de proteína de la presente invención, por ejemplo, para generar imágenes de estas proteínas, medir niveles de las mismas en muestras fisiológicas adecuadas, y similares. La presente invención proporciona polipéptidos que difieren de los polipéptidos de las figuras 1 a 5, a través de 1 a 34 aminoácidos, dichas diferencias pueden incluir substituciones, inserciones, eliminaciones, la incorporación de aminoácidos modificados o derivados de aminoácido, y la adición o eliminación de aminoácidos del C-término ó N-término del polipéptido. La presente invención proporciona usos terapéuticos y profilácticos de estos polipéptidos, incluyendo pero sin limitarse al tratamiento de infección por virus, neoplasma, cáncer, diabetes, y para promover crecimiento y diferenciación celular y degeneración de tejido. La presente invención proporciona polinucleótidos que codifican los polipéptidos de la presente invención y uso de los mismos, incluyendo pero sin limitarse a usos en fabricación de polipéptidos, como terapias genéticas, como herramientas de diagnóstico, etc. Composiciones farmacéuticas La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas de los polipéptidos como ingredientes activos para aplicación terapéutica. Estas composiciones también se pueden utilizar en el método de la presente invención. En general, la composición farmacéutica para inhibir infección de virus, cáncer, neoplasma, inflamación, u otra enfermedad en un mamífero o sujeto incluye una cantidad efectiva de cuando menos un polipéptido tal como se describe anteriormente, necesario para la práctica de la presente invención, o un fragmento del mismo que muestra tener el mismo efecto, y un vehículo o diluyente farmacéutico, y fisiológicamente aceptable. De acuerdo con la presente invención, una composición farmacéutica puede estar compuesta de dos o más de los polipéptidos de las figuras 1 a 5 en combinación. La composición farmacéutica puede estar compuesta además de un solo polipéptido que contiene uno o más de las combinaciones de la figura 1 a la 5 dentro de una molécula contigua. Las composiciones pueden administrarse en forma oral, subcutánea, o parenteral incluyendo administración intravenosa, intra-arterial, intramuscular, intraperitoneal, e intranasal, así como técnicas intratecales y de infusión según se requiera. Los vehículos farmacéuticamente aceptables, diluyentes, adyuvantes y vehículos así como vehículos de implante generalmente se refieren a rellenadores inertes, no tóxicos, sólidos o líquidos, diluyentes o material de encapsulación que no reacciona con los ingredientes activos de la presente invención. También se pueden incluir líquidos catiónicos en la composición para facilitar la captación de polipéptido. También son útiles implantes de los compuestos. En general, las composiciones farmacéuticas son estériles. La presente invención se refiere a composiciones de los polipéptidos a los cuales se adhiere la etiqueta detectable, tal como una molécula fluorescente, quimiluminiscente, o radioactiva. Otro ejemplo de una composición farmacéutica que puede ser formulado a través de técnicas conocidas utilizando materiales conocidos, ver la Publicación de Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición (1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) páginas 1435-1712, las cuales están incorporadas como referencia a la presente invención. Generalmente, la formulación dependerá de una variedad de factores tales como administración, estabilidad, aspectos de producción y otros factores. Los polipéptidos de las figuras 1 a 5 pueden administrarse mediante inyección o mediante administración pulmonar mediante inhalación. También pueden estar disponibles formas de dosificación entérica, y por consiguiente la administración oral puede ser efectiva. Los polipéptidos de la presente invención pueden ser insertados en liposomas u otros microtransportadores para suministro, y pueden formularse en geles u otras composiciones de liberación sostenida. Aunque las composiciones preferidas variarán dependiendo del uso para el cual se proyecte la composición, generalmente para los polipéptidos de la presente invención, las composiciones farmacéuticas preferidas son aquéllas preparadas para inyección subcutánea o para administración pulmonar mediante inhalación, aunque las formulaciones particulares de cada tipo de administración dependerán de las características del polipéptido específico. Las formulaciones terapéuticas de los polipéptidos o conjugados de polipéptido de la presente invención, se administran normalmente en una composición que incluye uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables. Estas composiciones farmacéuticas se pueden preparar en una forma conocida en la técnica, para obtener como resultado un farmacéutico de polipéptido que sea lo suficientemente estable en el almacenamiento y sea adecuado para administración a humanos o animales. Los polipéptidos o conjugados de polipéptido de la presente invención se pueden utilizar "como tal" y/o en forma de sal de los mismos. Las sales adecuadas incluyen, pero no se limitan a, sales con metales álcali o metales de tierra alcalina, tales como sodio, potasio, calcio, y magnesio, así como, por ejemplo, sales de zinc. Estas sales o compuestos pueden presentarse como una estructura cristalina y/o amorfa. El término "farmacéuticamente aceptable" significa un vehículo o excipiente el cual en las dosis y concentraciones empleadas no origina efectos no dirigidos en los pacientes a los cuales se administre. Dichos vehículos farmacéuticamente aceptables y excipientes son conocidos en la técnica (ver la Publicación de Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edición, A. R. Gennaro, Ed., Mack Publishing Company (1990); Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins, S. Frokjaer y L. Hovgaard, Eds., Taylor & Francis (2000); y Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3a Edición, A. Kibbe, Ed., Pharmaceutical Press (2000)). La composición de la presente invención puede administrarse sola o junto con otros agentes terapéuticos. Ribavirin e interferón alfa, por ejemplo, han mostrado ser un tratamiento efectivo para infección HCV cuando se utiliza en combinación. Su eficacia en combinación excede la eficacia de cualquier producto de fármaco cuando se utiliza solo. Las composiciones de la presente invención se pueden administrar solas o en combinación con interferón, ribavirin, y/o una variedad de moléculas pequeñas que están siendo desarrolladas contra tanto objetivos virales (proteasas virales, polimerasa viral, ensamble de complejos de réplica viral) y objetivos huésped (proteasas huésped requeridas para procesamiento viral, cinasas huésped requeridas para fosforilación de objetivos virales, tales como NS5A e inhibidores de factores huésped requeridos para utilizar en forma eficiente el IRES viral). Las citocinas pueden ser administradas en conjunto, tal como por ejemplo IL-2, IL- 12, IL-23, IL-27, ó IFN-gamma. Estos agentes pueden incorporarse como parte de la misma composición farmacéutica o pueden administrarse por separado a partir de polipéptidos o conjugados de la presente invención, ya sea en forma concurrente o de acuerdo con otro programa de tratamiento. Además, los polipéptidos, conjugados de polipéptido, o composiciones de la presente invención se pueden utilizar como un adyuvante para otras terapias. Un "paciente" para los propósitos de la presente invención, incluye tanto humanos como otros mamíferos. Por lo tanto los métodos son aplicables tanto a terapia humana como a aplicaciones veterinarias. La composición farmacéutica que comprende el polipéptido o conjugado de la presente invención se puede formular en una variedad de formas, por ejemplo, como un gel líquido, liofilizado, o como un sólido comprimido. La forma preferida dependerá de la indicación particular que esté siendo tratada, y podrá ser apreciada por los expertos en la técnica. La administración de las formulaciones de la presente ¡nvención se puede llevar a cabo en una variedad de formas, ¡ncluyendo pero sin limitarse a, en forma oral, subcutánea, intravenosa, intracerebral, ¡ntranasal, transdérmica, ¡ntraperitoneal, intramuscular, intrapulmonar, ¡ntratecal, vaginal, rectal, intraocular, o en cualquier otra forma aceptable. Las formulaciones pueden administrarse en forma continua mediante infusión, aunque la inyección de bolo es aceptable, utilizando técnicas conocidas en el arte, tal como bombas (por ejemplo, bombas osmóticas subcutáneas) o implante. En algunos casos las formulaciones pueden ser aplicadas directamente como una solución o rocío. Un ejemplo de una composición farmacéutica es una solución diseñada para administración parenteral. Aunque en muchos casos, las formulaciones de solución farmacéutica se proporcionan en forma líquida, adecuada para uso inmediato, tal como formulaciones parenterales también pueden ser proporcionadas en forma congelada o liofilizada. En el primer caso, la composición debe ser congelada antes del uso. La última forma con frecuencia es la utilizada para aumentar la estabilidad del compuesto activo contenido en la composición bajo una amplia variedad de condiciones de almacenamiento, tal como lo reconocen los expertos en la técnica, ya que las preparaciones liofilizadas generalmente son más estables que sus contrapartes líquidas. Dichas preparaciones liofilizadas son reconstituidas antes del uso, a través de la adición de uno o más diluyentes farmacéuticamente aceptable adecuados, tales como agua estéril para inyección o solución salina fisiológica estéril. Las administraciones parenterales se pueden preparar para almacenarse como formulaciones liofilizadas o como soluciones acuosas mediante mezclado, según sea adecuado, teniendo el polipéptido el grado de pureza deseado con uno o más vehículos, excipientes, o estabilizantes farmacéuticamente aceptables, que se emplean normalmente en la técnica (todos de los cuales son denominados "excipientes") por ejemplo agentes de amortiguación, agentes de estabilización, conservadores, isotonificadores, detergentes no iónicos, antioxidantes, y/o otros aditivos misceláneos. Los agentes de regulación ayudan a mantener el pH dentro de un rango el cual se aproxima a condiciones fisiológicas. Normalmente se encuentra en una concentración que fluctúa de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 50 mM. Los agentes de regulación adecuados para utilizarse con la presente invención incluyen tanto ácidos orgánicos como inorgánicos y sales de los mismos, tales como amortiguadores de citrato (por ejemplo, mezcla de citrato monosódico-citrato disódico, mezcla de ácido cítrico-citrato trisódico, mezcla de ácido cítrico-citrato monosódico, etc., amortiguador de succinato (por ejemplo, mezcla de ácido succínico-succinato monosódico, mezcla de ácido succínico-hidróxido de sodio, mezcla de ácido succínico-succinato disódico, etc.) amortiguadores de tartrato (por ejemplo, mezcla de ácido tartárico-tartrato de sodio, mezcla de ácido tartárico-tartrato de potasio, mezcla de ácido tartárico-hidróxido de sodio, etc.), amortiguadores de fumarato (por ejemplo, mezcla de ácido fumárico-fumarato monosódico, mezcla de ácido fumárico-fumarato de sodio, mezcla de fumarato monosódico-fumarato de sodio, etc.), amortiguadores de gluconato (por ejemplo, mezcla de ácido glucónico-gluconato de sodio, mezcla de ácido glucónico-hidróxido de sodio, mezcla de ácido glucónico-gluconato de potasio, etc.), amortiguador de oxalato (por ejemplo, mezcla de ácido oxálico-oxalato de sodio, mezcla de ácido oxálico-hidróxido de sodio, mezcla de ácido oxálico-oxalato de potasio, etc.), amortiguadores de lactato (por ejemplo, mezcla de ácido láctico-lactato de sodio, mezcla de ácido láctico-hidróxido de sodio, mezcla de ácido láctico-lactato de potasio, etc.), y amortiguadores de acetato (por ejemplo, mezcla de ácido acético-acetato de sodio, mezcla de ácido acético-hidróxido de sodio, etc.). Las posibilidades adicionales son amortiguadores de fosfato, amortiguadores de histidina y sales de trimetilamina tales como Tris. Se agregan conservadores para crecimiento microbiano retardado, y normalmente se agregan en cantidades de aproximadamente 0.2%-1% (p/v). Los conservadores adecuados para utilizarse con la presente invención incluyen fenol, alcohol bencílico, meta-cresol, metil-parabeno, propil-parabeno, cloruro de amonio de octadecildimetilbencilo, haluros de benzalconio (por ejemplo, cloruro, bromuro, o yoduro de benzalconio), cloruro de hexametonio, parabenos de alquilo, tales como parabeno de metilo o propilo, catecol, resorcinol, ciciohexanol, y 3-pentanol. Se agregan isotonificantes para asegurar la isotinicidad de composiciones líquidas e incluye alcoholes de azúcar polihídricos, preferentemente alcoholes de azúcar trihídricos o superiores, tales como glicerina, eritritol, arabitol, xilitol, sorbitol, y manitol. Se pueden encontrar alcohol polihídricos en una cantidad entre 0.1% y 25% en peso, normalmente 1% y 5%, tomando en cuenta las cantidades relativas de los otros ingredientes. Los estabilizadores se refieren a una amplia categoría de excipientes que pueden fluctuar en función de un agente de generación de volumen hasta un aditivo, que solubilice el agente terapéutico o ayude a prevenir la desnaturalización o adherencia a la pared del contenedor. Los estabilizadores típicos pueden ser alcoholes de azúcar polihídricos (descritos anteriormente); aminoácidos tales como arginina, lisina, glicina, glutamina, asparagina, histidina, alanina, omitina, L-leucina, 2-fenilalanina, ácido glutámico, treonina, etc., azúcares orgánicos o alcoholes de azúcar, tales como lactosa, trehalosa, estaquiosa, manitol, sorbitol, xilitol, ribitol, mioinositol, galactitol, y similares, incluyendo ciclitoles tales como inositol; polietilenglicol; polímeros de aminoácido; agentes de reducción que contienen azúcar tales como urea, glutationa, ácido tióctico, tioglucolato de sodio, tioglicerol, alfa-monotioglicerol, y tiosulfato de sodio; polipéptidos de bajo peso molecular (por ejemplo menor a 10 residuos); proteínas tales albúmina de suero humano, albúmina de suero de bovino, gelatina, o inmunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tales como polivinilpirrolidona; monosacáridos tales como xilosa, mañosa, fructosa, y glucosa; disacáridos tales como lactosa, altosa, y sacarosa; trisacáridos tales como rafinosa, y polisacáridos tales como dextrano. Los estabilizantes normalmente se encuentran dentro del rango de OJ a 10,000 partes por peso, con base en el peso de la proteína activa. Tensoactivos o detergentes no iónicos (también conocidos como "agentes de humectación" se pueden encontrar para ayudar a solubilizar el agente terapéutico, así como proteger el polipéptido terapéutico contra agregación inducida por agitación, la cual también permite que la formulación sea expuesta a tensión de corte en la superficie sin originar la desnaturalización del polipéptido. Los tensoactivos no ¡ónicos adecuados incluyen polisorbato (20, 80, etc.), polioxámeros (184, 188, etc.), polioles Pluronic®, monoéteres de sorbitano de polioxietileno (Tween®-20, Tween®-80, etc.). Los excipientes misceláneos adicionales incluyen agentes de generación de volumen o rellenadores (por ejemplo, almidón), agentes de quelación (por ejemplo, EDTA), antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico, metionina, vitamina E), y cosolventes. El ingrediente activo también puede quedar atrapado en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o mediante polimerización interfacial, por ejemplo microcápsulas de hidroximetilcelulosa, gelatina o poli-(metil-metacrilato) en sistemas de administración de fármacos coloidal (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas), o en macroemulsiones. Dichas técnicas se describen en la publicación de Remington's Pharmaceutical Sciences, supra. En un aspecto de la presente invención, la composición es una composición líquida, tal como una composición acuosa, y comprende un derivado de ciclodextrina de éter sulfoalquílico. Las formulaciones parenterales que serán utilizadas para administración in vivo, deben ser estériles. Esto se logra fácilmente, por ejemplo, mediante filtración a través de membranas de filtración estéril. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices semipermeables de polímeros hidrofóbicos sólidos que contienen el polipéptido conjugado, teniendo las matrices una forma adecuada tal como una película o microcápsula. Los ejemplos de matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles (por ejemplo, pol i (2-hidroxietil-metacrilato) o poli(vinilalcohol), poliláctidos, copolímeros de ácido L-glutámico y etil-L-glutamato, copolímeros de etileno-acetato de vinilo no degradables, ácido láctico-ácido glucólico degradable tales como la tecnología ProLease® o Lapron Depot® (microesferas inyectables compuestas de copolímero de ácido láctico-ácido glucólico y acetato de leuprolida), y ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico. Aunque los polímeros tales como etileno-acetato de vinilo y ácido láctico-ácido glucólico permiten la liberación de moléculas durante períodos prolongados, tales como hasta o alrededor de 100 días, ciertos hidrogeles liberan proteínas durante períodos de tiempo más cortos. Cuando los polipéptidos encapsulados permanecen en el cuerpo durante un largo tiempo, pueden desnaturalizarse o agregarse como resultado de exposición a humedad a una temperatura de 37°C, dando como resultado la pérdida de actividad biológica y los posibles cambios en inmunogenicidad. Se considerar estrategias razonables para estabilización dependiendo del mecanismo implicado. Por ejemplo, si se descubre que el mecanismo de agregación será la formación de enlace S-S intermolecular a través de intercambio de tio-disulfuro, la estabilización puede lograrse modificando residuos de sulfhidrilo, liofilizando a partir de soluciones acidas, controlando el contenido de humedad, utilizando aditivos adecuados y desarrollando composiciones de matriz de polímero específicas. La administración oral de los péptidos y conjugados de péptidos es una práctica que se pretende en la presente invención. Para administración oral, la composición farmacéutica puede ser en forma sólida o líquida, por ejemplo, en la forma de una cápsula, tableta, suspensión, emulsión o solución. La composición farmacéutica está elaborada preferentemente en la forma de una unidad de dosificación que contiene una cantidad determinada del ingrediente activo. Una dosis diaria adecuada para un humano u otro mamífero puede variar ampliamente dependiendo de la condición del paciente y otros factores, puede ser determinada por los expertos en la técnica, utilizando métodos de rutina. Las formas de dosificación sólida para administración oral pueden incluir cápsulas, tabletas, supositorios, polvos y granulos. En dichas formas de dosificación sólida, el compuesto activo puede ser administrado en adiciones con al menos un diluyente, tal como sacarosa, lactosa, o almidón. Dichas formas de dosificación también pueden comprender, en la práctica normal, substancias adicionales, las formas de dosificación también pueden comprender agentes de regulación. También se pueden preparar tabletas y pildoras con recubrimientos entéricos. Los polipéptidos o conjugados se pueden mezclar en adiciones con adyuvantes tales como lactosa, sacarosa, polvo de almidón, esteres de celulosa de ácido alcanoicos, ácido esteárico, talco, estearato de magnesio, óxido de magnesio, sales de sodio y calcio de ácidos fosfóricos y sulfúricos, acacia, gelatina, alginato de sodio, polivinil-pirrolidona, y/o alcohol polivinílico y producirse en tabletas o encapsularse para administración convencional. Como alternativa, se pueden disolver en solución salina, agua, polietilenglicol, propilenglicol, etanol, aceites (tales como aceite de maíz, aceite de coco, aceite de semilla de algodón o aceite de ajonjolí) de tragacanto y/o varios amortiguadores. Otros adyuvantes y modos de administración son bien conocidos en la técnica farmacéutica. El vehículo o diluyente puede incluir material de retraso de tiempo, tal como monoestearato de glicerol o diestearato de glicerol solo o con una cera, u otros materiales conocidos en la técnica. Las composiciones farmacéuticas pueden someterse a operaciones farmacéuticas convencionales, tales como esterilización y/o pueden contener adyuvantes convencionales tales como conservadores, estabilizadores, agentes de humectación, emulsificantes, reguladores, rellenadores, etc., por ejemplo tal como se describe en cualquier parte en la presente invención. Las formas de dosificación líquidas para administración oral pueden incluir emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, y elíxires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica, tal como agua. Las composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales agentes de humectación, edulcorantes, agentes de saborización, y agentes de perfume. Las formulaciones adecuadas para administración pulmonar están proyectadas como parte de la presente invención. Las formulaciones adecuadas para utilizarse con un nebulizador, ya sea a chorro o ultrasónico, normalmente comprenderán el polipéptido o conjugado disuelto en agua en una concentración de por ejemplo de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 25mg del conjugado por ml de solución, preferentemente de aproximadamente 0.1 a 10 mg/ml. La formulación también puede incluir un amortiguador y un azúcar simple (por ejemplo, para estabilización de proteína y regulación de presión osmótica) y/o albúmina de suero humano que fluctúa en concentración de 0.1 a 10 mg/ml. Los ejemplos de amortiguadores que se pueden utilizar son acetato de sodio, citrato y glicina. Preferentemente, el amortiguador tendrá una composición y molaridad adecuada para ajustar la solución a un pH dentro del rango de 3 a 9. Generalmente, las modalidades del amortiguador de desde 1 mM hasta 50 mM, son adecuadas para este propósito. Los ejemplos de azúcares que pueden ser utilizados son lactosa, maltosa, manitol, sorbito, trehalosa, y xilosa, normalmente en cantidades que fluctúan de 1% a 10% en peso de la formulación. La formulación de nebulizador también puede contener un tensoactivo para reducir o prevenir la agregación inducida en la superficie de la proteína originada por la atomización de la solución en la formación del aerosol. Se pueden emplear varios tensoactivos convencionales, tales como esteres de ácido graso de polioxietileno y alcoholes, y esteres de ácido graso de sorbitano de polioxietileno. Las cantidades generalmente fluctuarán entre 0.001% y 4% en peso de la formulación. Un tensoactivo especialmente preferido para propósitos de la presente invención, es monooleato de sorbitano de polioxietileno. Las formulaciones y métodos específicos para generar dispersiones adecuadas de partículas líquidas de la presente invención se describen en la Publicación WO 94/20069, Patente Norteamericana No. 5,915,378, Patente Norteamericana No. 5,960,792, Patente Norteamericana No. 5,957,124, Patente Norteamericana No. 5,934,272, Patente Norteamericana No. 5,915,378, Patente Norteamericana No. 5,855,564, Patente Norteamericana No. 5,826,570 y Patente Norteamericana No. 5,522,385, las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. Las formulaciones para utilizarse con un aparato inhalador de dosis medida generalmente comprenderán un polvo dividido en forma fina. Este polvo puede ser producido liofilizando y posteriormente moliendo una formulación de conjugado líquido y también puede contener un estabilizador tal como albúmina de suero humano (HSA). Normalmente se agrega más de 0.5% (p/v) de HSA. Además, uno o más azúcares o alcoholes de azúcar se pueden agregar a la preparación si es necesario. Los ejemplos incluyen lactosa, maltosa, manitol, sorbitol, sorbitosa, trehalosa, xilitol, y xilosa. La cantidad agregada a la formulación puede fluctuar de aproximadamente 0.01 a 200% (p/p), preferentemente de aproximadamente 1 a 50% del conjugado presente. Estas formulaciones posteriormente son liofilizadas y medidas hasta un tamaño de partícula deseado. Las partículas con tamaño adecuado posteriormente son suspendidas en un propulsor con la ayuda de un tensoactivo. El propulsor puede ser cualquier material convencional empleado para este propósito, tal como clorofluorocarbono, un hidrofluorocarbono, un hidrofluorocarbono, o un hidrocarbono, incluyendo triclorofluorometano, diclorofluorometano, diclorotetrafluoroetanol, y 1 ,1 ,1 ,2-tetrafluoroetano, o combinaciones de los mismos. Los tensoactivos adecuados incluyen trioletato de sorbitano, y lecitina de soya. El ácido oleico también puede ser útil como un tensoactivo. Esta mezcla posteriormente se carga en el aparato de suministro. Un ejemplo de un inhalador de dosis medida comercialmente adecuada disponible para uso en la presente invención, es el inhalador de dosis medida Ventolín, fabricado por Glaxo Inc., Research Triangle Park, N.C., EUA. Las formulaciones de inhaladores de polvo que comprenden un polvo seco dividido finamente que contiene polipéptidos y conjugados de polipéptido, y también pueden incluir un agente de generación de volumen tal como lactosa, sorbitol, sacarosa, o manitol en cantidades que facilitan la dispersión del polvo desde el aparato, por ejemplo del 50 al 90% en peso de la formulación. Las partículas de polvo deben tener propiedades aerodinámicas en los pulmones, que corresponde a las partículas con una densidad de aproximadamente 1 g/cm2 que tiene un diámetro mediano menor a 10 micrómetros, preferentemente entre 0.5 y 5 micrómetros, y más preferentemente de entre 1.5 y 3.5 micrómetros. Un ejemplo de un inhalador en polvo adecuado para utilizarse de acuerdo con las enseñanzas de acuerdo con la presente invención, es el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Mass., EUA. Los polvos para estos aparatos pueden ser generados y/o suministrados a través de los métodos descritos en la Patente Norteamericana No. 5,997,848, Patente Norteamericana No. 5,993,783, Patente Norteamericana No. 5,985,248, Patente Norteamericana No. 5,976,574, Patente Norteamericana No. 5,922,354, Patente Norteamericana No. 5,785,049 y Patente Norteamericana No. 5,654,007. Los aparatos mecánicos diseñados para administración pulmonar de productos terapéuticos, incluyen pero no se limitan a, nebulizadores, inhaladores de dosis medida e inhaladores de polvo, los cuales todos son familiares para los expertos en la técnica. Los ejemplos específicos de aparatos comercialmente disponibles adecuados para la práctica de la presente invención son el nebulizador Ultravent, fabricado por Mallinckrodt, Inc., St. Louis, Mo., EUA; el nebulizador Acorn II, fabricado por Marquest Medical Products, Englewood, Coló., EUA; el inhalador de dosis medida Ventolin, fabricado por Glaxo Inc., Research Triangle Park, N.C., EUA; el inhalador de polvo Spinhaler, fabricado por Fisons Corp., Bedford, Mass., EUA el aparato "de asentamiento de nebulosidad" de Nektar Therapeutics, Inc., San Carlos, Calif, EUA; el inhalador AIR fabricado por AIkermes, Cambridge, Mass., EUA; y el sistema de suministro de fármaco pulmonar AERx Aradigm Corporation, Hayward, Calif., EUA. La presente invención también proporciona equipos que incluyen los polipéptidos, conjugados, polinucleótidos, vectores de expresión, células, métodos, composiciones, y sistemas, y aparatos de la presente invención. Los equipos de la presente invención comprenden opcionalmente al menos uno de los siguientes: (1) un aparato, sistema, componente de sistema, o componente de aparato tal como se describe en la presente invención; (2) al menos un componente de equipo que comprende un polipéptido o conjugado o polinucleótido de la presente invención; un vector de expresión de plásmido que codifica un polipéptido de la presente invención; una célula que expresa un polipéptido de la presente invención; o una composición que comprende al menos uno de cualesquiera de dichos componentes; (3) instrucciones para practicar cualquier método aquí descrito, incluyendo un método terapéutico o profiláctico, instrucciones para utilizar cualquier componente identificado en (2) o cualquier composición de cualquiera de dichos componentes; y/o instrucciones para operar cualquier aparato, sistema o componente aquí descrito; (4) un contenedor para mantener el al menos dicho componente o composición; y (5) materiales de empaque. En un aspecto adicional, la presente ¡nvención proporciona el uso de cualquier aparato, componente, composición, o equipo descrito anteriormente y en la presente invención, para la práctica de cualquier método o ensayo aquí descrito, y/o para el uso de cualquier aparato, componente, composición, o equipo para practicar cualquier ensayo o método aquí descrito. Modificaciones químicas, coniugados v fusiones Se puede encontrar cualquier polipéptido de la presente invención como parte de una secuencia de polipéptido más grande, por ejemplo, una proteína de fusión, tal como ocurre al momento de la adición de uno o más dominios o subsecuencias para estabilización o detección o purificación del polipéptido. La subsecuencia de purificación del polipéptido puede incluir, por ejemplo, una etiqueta de epítope, una etiqueta FLAG, una secuencia de polihistidina, una fusión GST, o cualquier otra subsecuencia de detección/purificación, o "etiqueta" conocida en la técnica. Estos dominios o subsecuencias adicionales tienen ya sea poco o ningún efecto en la actividad del polipéptido de la presente invención, o pueden ser eliminados mediante pasos de procesamiento de síntesis posterior, tal como mediante tratamiento con una proteasa, inclusión de una inteína o similares. La presente invención incluye proteínas de fusión que comprenden polipéptido de la presente invención, por ejemplo tal como se describe en la misma, fusionado a una molécula Ig, por ejemplo una articulación IgG Fc ("formato cristalizable", o enlace de complemento de fragmento), dominio CH2 y dominio CH3, e incluye secuencias que codifican dicha proteína de fusión. Fc es la parte del anticuerpo responsable de enlazar a receptores de anticuerpo en células y el componente de complemento Clq. Las proteínas de fusión y sus ácidos nucleicos de codificación son útiles como fármacos profilácticos y/o terapéuticos o como herramientas de diagnóstico (ver también, por ejemplo, Challita-Eid, P. y Asociados (1998) J. Immunol 160:3419-3426; Sturmhoefel, K. y Asociados (1999) Cáncer Res 59:4964-4972). La presente invención también incluye proteínas de fusión que comprenden un polipéptido de la presente invención, fusionado a una molécula de albúmina, tal como albúmina de suero humano (HSA), tal como se describe, por ejemplo, en la Patente Norteamericana No. 5,876,969, y secuencias de nucleótido que codifican la proteína de fusión. Las proteínas de fusión Ig y de albúmina pueden exhibir una vida media de suero del polipéptido incrementado y/o vivo promedio ¡n vivo funcional, antigenicidad de polipéptido reducida, estabilidad de almacenamiento de polipéptido incrementada, o incremento de biodisponibilidad, por ejemplo, AUCSC incrementado y por lo tanto pueden ser útiles como fármacos profilácticos y/o terapéuticos. Todos los polipéptidos de la presente ¡nvención tienen una capacidad inherente de transducir a través de membranas celulares y afectar la función terapéutica dentro de las células. Por consiguiente, la presente invención proporciona el uso de los polipéptidos de la presente ¡nvención para mejorar la permeabilidad celular o capacidad de transducción de cualquier otra molécula. La presente invención proporciona además el uso de cualquier fragmento o subfragmento de los polipéptidos de la presente invención para mejorar la permeabilidad celular de cualquier otra molécula, tal como fragmentos o subfragmentos que tienen aproximadamente 5 aminoácidos de longitud, o aproximadamente 10 aminoácidos de longitud, tal como 15 aminoácidos de longitud, por ejemplo de aproximadamente 20 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 25 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 30 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 35 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 35 a 50 aminoácidos de longitud, de aproximadamente 50 a 100 aminoácidos de longitud, tal como 75 aminoácidos de longitud, por ejemplo de 100 a 125 aminoácidos de longitud. Cualquier polipéptido de la presente invención también puede comprender uno o más aminoácidos modificados. El aminoácido modificado puede ser, por ejemplo, un aminoácido glucosilado, un aminoácido PEGilado, un aminoácido farnesilado, un aminoácido acetilado, un aminoácido biotinilado, un aminoácido conjugado a una porción de lípido, o un aminoácido conjugado a un agente de derivación orgánica. La presencia de aminoácidos modificados puede ser conveniente, por ejemplo, (a) incrementar la vida media del suero de polipéptido y/o vida media funcional in vivo, (b) reducir la antigenicidad del polipéptido; (c) incrementar la estabilidad de almacenamiento del polipéptido o (d) incrementar la biodisponibilidad, por ejemplo, incrementando los AUCSC- Los aminoácidos se modifican, por ejemplo, en forma co-traducción o post-traducción durante la producción recombinante (por ejemplo glucosilación enlazada-N en motivos N-X-S/T durante la expresión en células mamíferas) modificadas mediante medios sintéticos. El término "conjugado" (o de manera intercambiable "conjugado de polipéptido" o "polipéptido conjugado") pretende indicar una molécula heterogénea (en el sentido del compuesto) formada mediante adición, dentro de uno o más polipéptidos de la presente invención a una o más porciones sin polipéptido, ya sea enlazada en forma directamente covalente a otra, o además se une en forma indirectamente covalente a otra a través de una porción o porciones de intervención, tal como una porción o porciones de puente, espaciadoras o de ligadura. Preferentemente, un polipéptido conjugado soluble en concentraciones y condiciones relevantes, es decir, soluble en fluidos fisiológicos tales como sangre. Los ejemplos de polipéptidos conjugados de la presente invención incluyen polipéptidos glucosilados y/o PEGilados. El término "polipéptido no conjugado" se puede utilizar para referirse a la parte de polipéptido del polipéptido conjugado. El término "fracción sin polipéptido" pretende significar una molécula que tiene la capacidad de conjugar a un grupo de adhesión de polipéptido. Los ejemplos preferidos de porciones sin polipéptido incluyen moléculas de polímero, porciones de azúcar, compuestos lipofílicos o agentes de derivación orgánicos, en particular moléculas de polímero o porciones de azúcar. Quedará entendido que la porción sin polipéptido está enlazada al polipéptido a través de un grupo de adhesión del polipéptido. Excepto en donde el número de porciones sin polipéptido, tal como moléculas de polímero, adheridos al polipéptido se indica en forma expresa, cada referencia a "una porción sin polipéptido" adherido al polipéptido o que se utiliza de otra forma a la presente invención debe ser una referencia a una o más porciones sin polipéptido adheridas al polipéptido. El término "molécula de polímero" se define como una molécula formada mediante ligadura covalente de dos o más monómeros, en donde ninguno de los monómeros es un residuo de aminoácido. El término "polímero" puede utilizarse de manera intercambiable con el término "molécula de polímero". El término "porción de azúcar" pretende indicar una molécula de carbohidrato adherida mediante glucosilación in vivo o in vitro, tal como N- u O-glucosilación. Un "sitio N-glucosilación" tiene la secuencia N-X-S/T/C, en donde X es un residuo de aminoácido excepto prolina, N es asparagina y S/T/C es ya sea serina, treonina, o cisteína, preferentemente serina o treonina, y lo más preferentemente treonina. Un "sitio O-glucosilación" comprende el grupo-OH de un residuo de serina o treonina. "El término "grupo de adhesión" pretende indicar un grupo de residuo de aminoácidos con la capacidad de acoplarse a la porción sin polipéptido relevante, tal como molécula de polímero o porción de azúcar. Para N-glucosilación in vivo, el término "grupo de adhesión" se utiliza en una forma no convencional para indicar los residuos de aminoácido que constituyen un sitio N-glucosilación (con la secuencia N-X-S/T/C, en donde X es cualquier residuo de aminoácido excepto prolina, N es asparagina y S/T/C es ya sea serina, treonina o cisteína, preferentemente serina o treonina, y lo más preferentemente treonina). Aunque el residuo de asparagina del sitio N- glucosilación es uno al cual se adhiere la porción de azúcar durante la glucosilación, dicha adición no puede lograrse a menos que se encuentren otros residuos de aminoácido del sitio N-glucosilación. Por consiguiente, cuando la porción sin polipéptido es una porción de azúcar y la conjugación será lograda mediante N-glucosilación, el término "residuo de aminoácido que comprende un grupo de adhesión para la porción sin polipéptido" tal como se utiliza en la conexión con alteraciones de la secuencia de aminoácido del polipéptido de la presente invención, quedará entendido que uno, dos o todos los residuos de aminoácido que constituyen un sitio N-glucosilación que son/serán alterados en forma tal que se introduzca cualquier sitio N-glucosilación funcional en la secuencia de aminoácido, eliminado de la secuencia, o un sitio N-glucosilación funcional se retiene en la secuencia de aminoácido (por ejemplo, substituyendo un residuo de serina, el cual ya forma parte de un sitio N-glucosilación, con un residuo de treonina y viceversa). El término "introducir" (es decir, un residuo de aminoácido "introducido", "introducción" de un residuo de aminoácido) está proyectado principalmente para significar la substitución de un residuo de aminoácido existente por otro residuo de aminoácido, aunque también significa la inserción de un residuo de aminoácido adicional. El término "eliminar" (es decir, un residuo de aminoácido "eliminado", "eliminación" de un residuo de aminoácido) está proyectado principalmente para significar la substitución del residuo de aminoácido que será eliminado por otro residuo de aminoácido, aunque también puede significar la eliminación (sin substitución) del residuo de aminoácido que será eliminado. El término "residuo de aminoácido que comprende un grupo de adhesión de la porción sin polipéptido" pretende indicar que el residuo de aminoácido es uno al cual enlaza la porción sin polipéptido (en el caso de un residuo de aminoácido introducido) o puede haber enlazado (en el caso de un residuo de aminoácido eliminado). El término "vida media funcional in vivo" se utiliza en su significado normal, es decir, el tiempo en el cual el 50% de la actividad biológica del polipéptido aún está presente en el órgano del cuerpo/objetivo, o el tiempo en el cual la actividad del polipéptido está en el 50% del valor inicial. La vida media funcional in vivo puede determinarse en un animal experimental, tal como rata, ratón, conejo, perro, o mono. Preferentemente, la vida media funcional in vivo se determina en un primate no humano, tal como un mono. Además, la vida media funcional in vivo puede determinarse para una muestra que ha sido administrada en forma intravenosa o subcutánea. Como una alternativa para determinar la vida media funcional in vivo, la "vida media de suero" puede determinarse, por ejemplo, en el momento en el cual el 50% del polipéptido circula en el plasma o torrente sanguíneo antes de ser despejado. La determinación de la vida media de suero con frecuencia es más simple que la determinación de la vida media funcional in vivo y la magnitud de la vida media de suero normalmente es una buena indicación de la magnitud de la vida media funcional in vivo. Como alternativa a los términos vida media de suero incluyen "vida media de plasma", "vida media en circulación", "despeje de suero", "despeje de plasma" y "vida media de despeje". Polinucleótidos v métodos de mutaqénesis La presente invención incluye ácidos nucleicos y polinucleótidos que codifican los polipéptidos de la presente invención. La presente invención incluye composiciones producidas mediante digestión de uno o más de cualesquiera de los polinucleótidos de la presente invención con una endonucleasa de restricción, un ARNse, o ADNse (por ejemplo como se lleva a cabo en ciertos de los formatos de recombinación en cualquier parte de la presente especificación); y composiciones producidas fragmentando o cortando uno o más polinucleótidos de la presente invención a través de medios mecánicos (por ejemplo sonicación, vórtex y similares) lo cual también se puede utilizar para proporcionar substratos para recombinación en los métodos aquí descritos. La presente invención también proporciona composiciones producidas disociando al menos uno de los polinucleótidos de la presente invención. La disociación puede comprender disociación mecánica química o enzimática y la disociación enzimática puede comprender disociación con una endonucleasa de restricción, o un ARNse, o un ADNse. También incluidas en la presente invención están las composiciones producidas a través de un proceso que comprende incubar uno o más de los polinucleótidos fragmentados de la presente invención en la presencia de trifosfatos de ribonucleótido o desoxi-ribonucleótido y una polimerasa de ácido nucleico. La composición resultante forma una mezcla de recombinación para muchos de los formatos de recombinación descritos anteriormente. La polimerasa de ácido nucleico puede ser una polimerasa de ARN, una polimerasa de ADN, o una polimerasa de ARN dirigida por ADN (por ejemplo, una "transcriptasa inversa"); la polimerasa puede ser, por ejemplo, una polimerasa de ADN termoestable (por ejemplo, VENT, TAQ, o similares). En forma similar, las composiciones que comprenden grupos de oligonucleótidos que corresponden a más de un aminoácido de la presente invención, son útiles como substratos de recombinación y son una característica de la presente invención. Por conveniencia, estas mezclas sintetizadas de oligonucleótido fragmentadas o cortadas son referidas como grupos de ácidos nucleicos fragmentados. La presente invención también proporciona un ácido nucleico recombinante que codifica un polipéptido producido mediante mutación o recombinación de al menos un polinucleótido de la presente invención. Los polinucleótidos, oligonucleótidos y fragmentos de ácido nucleico de la presente invención, se pueden preparar a través de métodos de fase sólida estándar, de acuerdo con métodos sintéticos conocidos. Normalmente, los fragmentos de hasta 100 bases son sintetizados individualmente, posteriormente unidos (por ejemplo mediante métodos de ligadura enzimática o química, o métodos de recombinación transmitida por polimerasa) para formar esencialmente cualquier secuencia continua deseada. Por ejemplo, los polinucleótidos y oligonucleótidos de la presente invención pueden prepararse mediante síntesis química, utilizando, por ejemplo, el método de fosforamidita clásico descrito, por ejemplo, por Beaucage y Asociados (1981) Tetrahedron Letters 22:1859- 69, o el método descrito por Matthes y Asociados (1984) EMBO J 3:801-05, por ejemplo como es una práctica normal en los métodos sintéticos automáticos. De acuerdo con el método de fosforamidita, los oligonucleótidos son sintetizados, por ejemplo, en un sintetizador de ADN automático, purificados, endurecidos, ligados, y clonados en vectores adecuados. Además, esencialmente cualquier polinucleótido puede ser ordenado de manera acostumbrada en cualesquiera de una variedad de fuentes comerciales, tales como Operon Technologies Inc. (Alameda, Calif.) y muchos otros. En forma similar, los péptidos y anticuerpos pueden ser ordenados en forma acostumbrada en cualquiera de una variedad de fuentes, por ejemplo, Celtek Peptides (Nashville, Tenn.); Washington Biotechnology, Inc. (Baltimore Md.); Global Peptide Services (Ft. Collin Coló.), y muchos otros. También se pueden obtener ciertos polinucleótidos de la presente invención clasificando bibliotecas de cADN (por ejemplo, bibliotecas generadas recombinando ácido nucleico homólogos como en métodos de recombinación de secuencia de recursos típica) utilizando sondas de oligonucleótido que pueden hibridar a, o amplificar mediante PCR polinucleótidos que codifican polipéptidos OAS y fragmentos de dichos polipéptidos. Los procedimientos para clasificar y aislar clones de cADN son bien conocidos para los expertos en la técnica. Dichas descritas se describen, por ejemplo, en las publicaciones de Berger y Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymol. Vol. 152, Acad. Press, Inc., San Diego, Calif. ("Berger"); J. Sambrook y D.W. Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition. Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, ("Sambrook"); y EM. Ausubel y Asociados (1987-2005) Current Protocols in Molecular Biology. Wiley Interscience, Nueva York, NY ("Ausubel"). Algunos polinucleótidos de la presente invención pueden ser obtenidos alterando una secuencia que ocurre naturalmente, por ejemplo, mutagénesis, recombinación de secuencias de recursos (por ejemplo, revoltura), o recombinación de oligonucleótidos. En otros casos, dichos polinucleótidos pueden elaborarse en sílice o a través de métodos de recombinación de oligonucleótido tal como se describe en las referencias aquí mencionadas. Tal como se describe con mayor detalle en la presente invención, los polinucleótidos de la presente invención incluyen polinucleótidos que codifican polipéptidos de la presente invención, secuencias de polinucleótidos complementarias para estas secuencias de polinucleótido, y polinucleótidos que hibridan bajo al menos condiciones estrictas a las secuencias aquí definidas. Una secuencia de codificación se refiere a una secuencia de polinucleótido que codifica un polipéptido o dominio, región o fragmento en particular del polipéptido. Los polinucleótidos de la presente invención pueden ser en la forma de ARN, o en la forma de ARN, e incluir mARN, cARN, ARN y ADN sintéticos, y cADN. Los polinucleótidos pueden ser de hebra doble o hebra simple, y si son de hebra simple, pueden ser la hebra de codificación o la hebra de no codificación (antisentido, complementaria). Los polinucleótidos de la presente invención incluyen la secuencia de codificación de un polipéptido de la presente invención (i) en aislamiento, (¡i) en combinación con una o más secuencias de codificación adicional, para codificar, por ejemplo, una proteína de fusión, una pre-proteína, una prepro-proteína, o similares, (iii) en combinación con secuencias sin codificación, tales como intrones, elementos de control, tales como un promotor (por ejemplo, promotor que ocurre naturalmente, o recombinante o revuelto) un elemento terminador o regiones no traducidas 5' y/o 3' efectivas para la expresión de la secuencia de codificación en un huésped adecuado, y/o (iv) en un vector, célula, o ambiente huésped en el cual la secuencia de codificación es un gen heterólogo. Los polinucleótidos de la presente invención también se pueden encontrar en combinación con formulaciones de composición típicas de ácido nucleico, incluyendo en la presencia de vehículos, amortiguadores, adyuvantes, excipientes y similares, tal como es conocido para los expertos en la técnica. Los fragmentos de polinucleótido normalmente comprenden al menos aproximadamente 200 bases de nucleótidos, tales como al menos aproximadamente 250, 300, 350, 400, 450, 460, 470, o más bases. Los fragmentos de nucleótidos de los polinucleótidos de la presente invención pueden hibridar bajo condiciones altamente estrictas para una secuencia de polinucleótido descrita en la presente invención y/o codificar a secuencias de aminoácido que tienen al menos una de las propiedades de polipéptido de la presente invención. Los polinucleótidos de la presente invención tienen una variedad de usos, por ejemplo, producción recombinante (es decir, expresión) de los polipéptidos de la presente invención normalmente a través de la expresión de un vector de expresión de plásmido que comprende una secuencia que codifica el polipéptido o fragmento del mismo; como terapéuticos; como profilácticos; como herramientas de diagnóstico; como inmunogenes; como adyuvantes; como sondas de diagnóstico para la presencia de ácidos nucleicos complementarios o parcialmente complementarios (incluyendo para detección de un ácido nucleico de sintetasa de oligoadenilato tipo natural), como sustratos para reacciones adicionales, por ejemplo, reacciones de recombinación de secuencia de recursos o reacciones de mutación para producir variantes nuevas y/o mejoradas, y similares. Vectores de expresión, métodos de fabricación, terapia genética Los métodos recombinantes para producir o aislar polipéptidos de la presente invención, se describen en la misma. Además para la producción recombinante, se pueden producir polipéptidos mediante síntesis de péptido dirigida utilizando técnicas de fase sólida (por ejemplo, ver la publicación de Stewart y Asociados (1969) Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co, San Francisco; Merrifield J. (1963) J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2154). La síntesis de péptidos puede llevarse a cabo utilizando técnicas manuales o mediante automatización. La síntesis automatizadas pueden lograrse, por ejemplo, utilizando el sintetizador Applied Biosystems 431A Peptide Synthesizer (Perkin Elmer, Foster City, Calif.) de acuerdo con instrucciones proporcionadas por el fabricante. Por ejemplo, las subsecuencias pueden ser sintetizadas químicamente por separado y combinarse utilizando métodos químicos para proporcionar polipéptidos de longitud completa o fragmentos de los mismos. Como alternativa, dichas secuencias pueden ser ordenadas en cualquier número de compañías que se especializan en la producción de polipéptidos. Más comúnmente, los polipéptidos de la presente invención se pueden producir expresando la codificación de ácidos nucleicos y recuperación de polipéptidos, por ejemplo, tal como se describirá más adelante. Los métodos para producir los polipéptidos de la presente invención también se incluyen. El método comprende introducir en una población de células cualquier ácido nucleico de la presente invención, el cual está enlazado en forma operativa a una secuencia reguladora objetiva para producir el polipéptido codificado, cultivar las células en un medio de cultivo para expresar el polipéptido, y aislar el polipéptido de las células o del medio de cultivo. Se utiliza una cantidad de ácido nucleico suficiente para facilitar la captación por parte de las células (transfección) y/o expresión del polipéptido. El ácido nucleico es introducido en las células mediante cualquier método de administración conocido en la técnica, incluyendo, por ejemplo, inyección, pistola genética, captación pasiva, etc. Tal como lo reconocerá un experto en la técnica, el ácido nucleico puede ser parte de un vector, tal como un vector de expresión recombinante, incluyendo un vector de plásmido de ADN o cualquier vector conocido en la técnica. El ácido nucleico o vector que comprende un ácido nucleico de la presente invención puede prepararse y formularse mediante tecnologías estándar de ADN recombinante y métodos de aislamiento conocidos en la técnica. Dicho vector de ácido nucleico o de expresión puede introducirse en una población de células de un mamífero in vivo, o células seleccionadas del mamífero (por ejemplo, células de tumor)( pueden ser removidas del mamífero y el vector de expresión de ácido nucleico puede introducirse ex vivo en la población de dichas células en una cantidad suficiente de modo que resulte la captación y expresión del polipéptido codificada. O, se produce un ácido nucleico o vector que comprende un ácido nucleico de la presente invención utilizando células cultivadas in vitro. En un aspecto, el método para producir un polipéptido de la presente invención comprende introducir en una población de células un vector de expresión recombinante que comprende cualquier ácido nucleico de la presente invención aquí descrito en una cantidad y fórmula de modo que resulte la captación del vector y expresión del polipéptido codificado; administrar el vector de expresión en un mamífero a través de cualquier formato de introducción/suministro aquí descrito; y aislar el polipéptido del mamífero o de un subproducto del mamífero. La presente invención proporciona ácidos nucleicos aislados o recombinantes (también referidos en la presente invención como polinucleótidos), referidos colectivamente como "ácidos nucleicos (o polinucleótidos) de la presente invención", que codifican los polipéptidos de la misma. Los polinucleótidos de la presente invención son útiles en una variedad de aplicaciones. Tal como se describió anteriormente, los polinucleótidos son útiles para producir polipéptidos de la presente invención. Además, los polinucleótidos de la presente invención se pueden incorporar en vectores de expresión útiles para terapia genética, vacunación de ADN, e inmunoterapia, tal como se describe en cualquier parte en la presente solicitud. Cualesquiera de los polinucleótidos de la presente invención (los cuales incluyen los descritos anteriormente) pueden codificar una proteína de fusión que comprende al menos una secuencia de aminoácido adicional, tal como, por ejemplo, una secuencia de secreción/localización, una secuencia útil para solubilización o inmovilización (por ejemplo, para despliegue en superficie celular) del polipéptido, o una secuencia útil para detección y/o purificación del polipéptido (por ejemplo, una subsecuencia de purificación de polipéptido, tal como una etiqueta de epítope, una secuencia de polihistidina y similar). En otro aspecto, la presente invención proporciona células que comprenden uno o más de los polinucleótidos de la presente invención. Dichas células pueden expresar uno o más polipéptidos codificados por los polinucleótidos de la presente invención. La presente invención también proporciona vectores que comprenden cualesquiera de los polinucleótidos de la presente invención. Dichos vectores pueden comprender un plásmido, un cósmido, un fago, un virus, o un fragmento de un virus. Dichos vectores pueden comprender un vector de expresión, si se desea, el ácido nucleico se enlaza en forma operativa a un promotor, incluyendo los descritos en la presente ¡nvención y más adelante. Además, en otro aspecto, la presente ¡nvención proporciona composiciones que comprenden un excipiente o un vehículo y al menos uno de cualesquiera de los polinucleótidos de la presente invención, vectores, células, o huéspedes que comprenden ácidos nucleicos. Dicha composición puede ser composiciones farmacéuticas, y el excipiente o vehículo puede ser un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable. La presente invención también incluye composiciones que comprenden dos o más ácidos nucleicos de la presente invención, o fragmentos de los mismos (por ejemplo, como substratos para recombinación). La composición puede comprender una biblioteca de ácidos nucleicos recombinantes, en donde la biblioteca comprende al menos 2, al menos 3, al menos 5, al menos 10, al menos 20, al menos 50, o al menos 100 o más ácidos nucleicos descritos anteriormente. Los ácidos nucleicos son clonados opcionalmente en vectores de expresión, proporcionando bibliotecas de expresión. Los polinucleótidos de la presente invención y fragmentos de los mismos, así como los vectores que comprenden dichos polinucleótidos, pueden emplearse para usos terapéuticos o profilácticos en combinación con un vehículo adecuado, tal como un vehículo farmacéutico. Dichas composiciones comprenden una cantidad terapéutica y/o profilácticamente efectiva del compuesto, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicho vehículo o excipiente incluye, pero no se limita a, solución salina, solución salina amortiguada, dextrosa, agua, glicerol, etanol, y combinaciones de los mismos. La formulación debe adaptarse al modo de administración. Los métodos para administrar ácidos nucleicos, polipéptidos, y proteínas son bien conocidos en la técnica. Los textos generales que describen técnicas biológicas moleculares útiles en la presente invención, que incluyen el uso de vectores, promotores, y muchos otros tópicos relevantes, incluyen la publicación de Berger, supra; Sambrook (1989), supra, y Ausubel, supra. Los ejemplos de técnicas suficientes para dirigir a los expertos en la técnica en métodos de amplificación in vitro, incluyendo la reacción de cadena de polimerasa (PCR), la reacción de cadena de ligasa (LCR), la amplificación beta-replicasa Q y otras técnicas transmitidas por polimerasa de ARN (por ejemplo, NASBA), por ejemplo para la producción de ácidos nucleicos homólogos de la presente invención, se encuentran en las publicaciones de Berger, Sambrook, y Ausubel, todas supra, así como en la publicación de Mullis y Asociados (1987) Patente Norteamericana No. 4,683,202; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis y Asociados, eds.) Academic Press Inc. San Diego, Calif. (1990) ("Innis"); Arnheim & Levinson (1 de octubre de 1990) C&EN 36-47; The Journal Of NIH Research (1991) 3:81-94; (Kwoh y Asociados (1989) Proc Nati Acad Sci EUA 86:1173-1177; Guatelli y Asociados (1990) Proc Nati Acad Sci EUA 87:1874-1878; Lomeli y Asociados (1989) J Clin Chem 35:1826-1831; Landegren y Asociados (1988) Science 241:1077-1080; Van Brunt (1990) Biotechnology 8:291-294; Wu y Wallace (1989) Gene 4:560-569; Barringer y Asociados (1990) Gene 89:117-122, y Sooknanan y Malek (1995) Biotechnology 13:563-564. Los métodos mejorados para clonar ácidos nucleicos amplificados in vitro se describen en la publicación de Wallace y Asociados, Patente Norteamericana No. 5,426,039. Los métodos mejorados para amplificar ácidos nucleicos grandes mediante PCR, se resumen en la publicación de Cheng y Asociados (1994) Nature 369:684-685, y las referencias en las mismas, en las cuales se generan amplicones PCR de hasta 40 kilobases (kb). Un experto en la técnica podrá apreciar que esencialmente cualquier ADN puede ser convertido en un ARN de hebra doble adecuado para digestión por restricción, expansión PCR y secuenciación utilizando transcriptasa inversa y una polimerasa. Ver las publicaciones de Ausubel, Sambrook y Berger, todas supra. En células huésped de mamífero, se puede utilizar un número de sistemas de expresión, tal como sistemas a base de virus. En casos en donde se utiliza un adenovirus como un vector de expresión, una secuencia de codificación está opcionalmente ligada en un complejo de transcripción/traducción de adenovirus que consiste en el promotor tardío y secuencia líder tripartita. La inserción en una región E1 ó E3 no esencial del genoma viral, da como resultado un virus viable con la capacidad de expresar un polipéptido de la presente invención en células huésped infectadas (Logan y Shenk ( 1984) Proc Nati Acad Sci EUA 81:3655-3659). Además, los aumentadores de transcripción, tales como aumentador de virus de sarcoma (RSV), se utilizan para incrementar la expresión en células huésped de mamífero. Las células huésped, medios, sistemas de expresión, y métodos de producción incluyen las conocidas para expresión y clonación de diversas proteínas de mamíferos. La eficiencia de expresión puede aumentarse mediante la inclusión de aumentadores adecuados para el sistema celular en uso (ver por ejemplo, Scharf D. y Asociados (1994) Results Probl Cell Differ 20:125-62; y Bittner y Asociados (1987) Methods in Enzymol 153:516- 544). Las señales de inicio específico pueden ayudar a la traducción eficiente de una secuencia de codificación de polinucleótido de la presente invención y/o fragmentos de la misma. Estas señales pueden incluir, por ejemplo, secuencias de codón de inicio ATG y adyacentes. En casos en donde una secuencia de codificación, su codón de inicio y secuencias de codón ascendentes se insertan en el vector de expresión adecuado, pueden no necesitar señales de control de traducción adicionales. Sin embargo, en casos en donde únicamente se inserta una secuencia de codificación (por ejemplo, una secuencia de codificación de proteína madura), o parte de la misma, se deben proporcionar señales de control de transcripción de ácido nucleico exógenas, incluyendo codón de inicio ATG. Además, el codón de inicio debe estar en el cuadro de lectura correcto para asegurar la transcripción de todo el inserto. Los elementos de transcripción exógenos y codones de inicio pueden ser de varios orígenes, tanto naturales como sintéticos. La introducción de la construcción en la célula huésped puede llevarse a cabo mediante transfección de fosfato de calcio, transfección transmitida por DEAE, electroporación, pistola genética o de vacuna, inyección, u otras técnicas comunes (ver por ejemplo, la publicación de Davis, L., Dibner, M., y Battey, I. (1986) Basic Methods in Molecular Biology) para métodos in vivo, ex vivo, o in vitro. Tal como se observó anteriormente, están disponibles muchas referencias para el cultivo y producción de muchas células, incluyendo células de bacterias, plantas, animales (especialmente mamíferos), y de origen arquebacteriano. Ver por ejemplo, la publicación de Sambrook, Ausubel, y Berger (todos supra), así como de Freshney (1994) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, tercera edición, Wiley-Liss, Nueva York, y las referencias ahí mencionadas; Doyle y Griffiths (1997) Mammalian Cell Culture: Essential Techniques John Wiley and Sons, Nueva York; Humason (1979) Animal Tissue Techniques, cuarta edición W.H. Freeman and Company; y Ricciardelli y Asociados (1989) In vitro Cell Dev Biol 25:1016-1024. Para cultivo y regeneración de plantas ver, por ejemplo, las publicaciones de Payne y Asociados (1992) Plant Cell and Tissue Culture in Liquid Systems John Wiley & Sons, Inc. Nueva York, N.Y.; Gamborg y Phillips (eds.) (1995) Plant Cell, Tissue and Organ Culture; Fundamental Methods Springer Lab Manual, Springer-Verlag (Berlin Heidelberg Nueva York) y Plant Molecular Biology (1993) R. R. D. Croy (ed.) Bios Scientific Publishers, Oxford, Reino Unido, ISBN 0 12 198370 6. El medio de cultivo celular en general se establece en la publicación de Atlas y Parks (eds.) The Handbook of Microbiological Media (1993) CRC Press, Boca Ratón, Fia. Está disponible información adicional del cultivo celular en literatura comercial tal como Life Science Research Cell Culture Catalogue from Sigma-Aldrich, Ine (St Louis, Mo.) ("Sigma-LSRCCC"), y por ejemplo, el Plant Culture Catalogue y suplementos también de Sigma-Aldrich, Ine (St Louis, Mo.) ("Sigma-PCCS"). Los polinucleótidos de la presente invención pueden ser recuperados y purificados de cultivos de célula recombinante a través de cualquiera de un número de métodos conocidos en la técnica, incluyendo sulfato de amonio o precipitación de etanol, extracción de ácido, cromatografía de intercambio de aniones o cationes, cromatografía de fosfocelulosa, cromatografía de interacción hidrofóbica, cromatografía de afinidad (por ejemplo, utilizando cualquiera de los sistemas de etiquetación aquí descritos), cromatografía con hidroxilapatita y cromatografía de lecitina. Se pueden utilizar pasos de redoblado de proteína, según se desee, para terminar la configuración de la proteína madura o fragmentos de los mismos. Finalmente, se puede emplear cromatografía líquida de alto desempeño (HPLC) en los pasos de purificación final. Además de las referencias observadas, supra, existe una variedad de métodos de purificación conocidos en la técnica, incluyendo, por ejemplo, los establecidos en Sandana (1997) Bioseparation of Proteins, Academic Press, Inc.; Bollag y Asociados (1996) Protein Methods, Segunda Edición, Wiley-Liss, Nueva York; Waiker (1996) The Protein Protocols Handbook Humana Press, Nueva Jersey; Harris y Angal (1990) Protein Purification Applications: A Practical Approach IRL Press at Oxford, Oxford, Inglaterra; Harris y Angal Protein Purification Methods: A Practical Approach IRL Press at Oxford, Oxford, Inglaterra; Scopes (1993) Protein Purification: Principies and Practice Tercera Edición, Springer Verlag, Nueva York; Janson y Ryden (1998) Protein Purification: Principies, High Resolution Methods and Applications, Segunda Edición Wiley-VCH, Nueva York; y Waiker (1998) Protein Protocols on CD-ROM Humana Press, Nueva Jersey. Se conoce un número de vectores virales adecuados para transducción y expresión de organismos in vivo. Dichos vectores incluyen vectores retrovirales (ver por ejemplo, la publicación de Miller, Curr Top Microbiol Immunol (1992) 158:1-24; Salmons y Gunzburg (1993) Human Gene Therapy 4:129-141; Miller y Asociados (1994) Methods in Enzymology 217: 581-599), y vectores adeno asociados (revisados en las publicaciones de Cárter (1992) Curr Opinión Biotech 3: 533-539; Muzcyzka (1992) Curr Top Microbiol Immunol. 15: 97-129). Otros vectores virales que se utilizan incluyen vectores adenovirales, vectores virales de herpes y vectores virales Sindbis, tal como se describe de manera general, por ejemplo, en las publicaciones de J ol ly (1994) Cáncer Gene Therapy 1: 51-64; Latchman (1994) Molec Biotechnol 2: 179-195; y Johanning y asociados (1995) Nucí Acids Res 23: 1495-1501. En un aspecto, se pueden utilizar vectores de virus pox. El vector viral pox se transfecta con una secuencia de polinucleótido que codifica un polipéptido de la presente invención y es útil en aplicaciones profilácticas, terapéuticas y de diagnostico cuando se desea una mejoría en la respuesta inmune, tal como por ejemplo, proliferación de célula-T incrementada o mejorada. Ver los vectores virales descritos, por ejemplo, en las publicaciones de Berencsi y asociados, J Infecí Dis (2001) 183(8): 1171-9; Rosenwirth y asociados, Vaccine 2001 February 8; 19(13-14): 1661-70; Kittlesen y asociados, J Immunol (2000) 164(8): 4204-11; Brown y asociados Gene Ther 2000 7(19): 1680-9; Kanesa-thasan y asociados, Vaccine (2000) 19(4-5): 483-91; Sten (2000) Drug 60(2): 249-71. Las composiciones que comprenden dichos vectores y un excipiente aceptable también son una característica de la presente invención. La terapia genética y vacunas genéticas proporcionan métodos para combatir enfermedades infecciosas crónicas (por ejemplo, infección VIH, hepatitis viral), así como enfermedades no infecciosas que incluyen cáncer y algunas formas de defectos congénitos tales como deficiencias enzimáticas, y dichos métodos pueden emplearse con polinucleótidos de la presente invención, incluyendo por ejemplo, vectores y células que comprenden los polinucleótidos. Se han utilizado varios métodos para introducir ácidos nucleótidos y vectores en células in vivo, ex vivo e in vitro y se pueden emplear con polinucleótidos de la presente invención, y vectores que comprenden dichos polinucleótidos. Estos métodos incluyen suministro genético a base de liposomas (Debs y Zhu (1993) WO 93/24640 y Patente Norteamericana No. 5,641,662; Mannino y Gould-Fogerite (1988) Bio Techniques 6(7): 682-691; Rose, Patente Norteamericana No. 5,279,833; Brigham (1991) WO 91/06309; y Felgner y asociados (1987) Proc Nati Acad Sci EUA 84: 7413-7414; Brigham y asociados (1989) Am J Med Sci 298: 278-281; Nabel y asociados (1990) Science 249: 1285-1288; Hazinski y asociados (1991) Am J Resp Cell Molec Biol 4: 206-209; y Wang y Huang (1987) Proc Nati Acad Sci EUA 84: 7851-7855); suministro genético transmitido por vector adenoviral, por ejemplo, para tratar cáncer (ver por ejemplo, las publicaciones de Chen y asociados (1994) Proc Nati Acad Sci EUA 91: 3054-3057; Tong y asociados (1996) Gynecol Oncol 61: 175-179; Clayman y asociados (1995) Cáncer Res. 5: 1-6; O'Malley y asociados (1995) Cáncer Res 55: 1080-1085; Hwang y asociados (1995) Am J Respir Cell Mol Biol 13: 7-16; Haddada y asociados (1995) Curr Top Microbiol Immunol. 1995 (Pt. 3): 297-306; Addison y asociados (1995) Proc Nati Acad Sci EUA 92: 8522-8526; Colak y asociados (1995) Brain Res 691: 76-82; Crystal (1995) Science 270: 404-410; Elshami y asociados (1996) Human Gene Ther 7: 141-148; Vincent y asociados (1996) J Neurosurg 85: 648-654) y muchos otros. Los vectores retrovirales con réplica defectuosa que albergan una secuencia de polinucleótidos terapéutica como parte del genoma retroviral, también han sido utilizados, particularmente con respecto a vectores MuLV simples. Ver por ejemplo, las publicaciones de Miller y asociados (1990) Mol Cell Biol 10: 4239 (1990); Kolberg (1992) J NIH Res 4: 43, y Cornetta y asociados (1991) Hum Gene Ther 2: 215). El transporte de ácido nucleico acoplado a sistemas de transporte a base de cationes, específicos de ligando (Wu y Wu (1988) J Biol Chem, 263: 14621-14624) también han sido utilizados. También se han descrito vectores de expresión de ADN descubiertos (Nabel y asociados (1990), supra); Wolff y asociados y asociados (1990) Science, 247: 1465-1468): En general, estos métodos pueden adaptarse a la presente invención incorporando ácidos nucleicos que codifican los polipéptidos de la presente invención en vectores adecuados. Los textos en general que describen protocolos de terapia genética, los cuales pueden ser adaptados a la presente invención introduciendo los ácidos nucleicos de la presente invención en pacientes, incluyen, por ejemplo, los textos de Robbins (1996) Gene Therapy Protocols, Humana Press New Jersey y Joyner (1993) Gene Targeting: A Practical Approach, IRL Press, Oxford, Inglaterra. Tratamientos Antivirales Los polinucleótidos y polipéptidos de la presente ¡nvención se pueden utilizar en forma terapéutica o profiláctica para tratar o prevenir infecciones de virus. Los víruses de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, víruses de la familia Flaviviridae, tal como, por ejemplo, Virus Hepatitis C, Virus de Fiebre Amarilla, Virus del Nilo del Oeste, Virus de Encefalitis Japonés, Virus del Dengue y Virus por Diarrea Viral de Bovino; víruses de la familia Hepadnaviridae, tal como, por ejemplo, Virus de Hepatitis B; víruses de la familia Picornaviridae, tales como, por ejemplo, Virus de Encefalomiocarditis, Rinovirus Humano y Virus de Hepatitis A; víruses de la familia Retroviridae, tal como, por ejemplo, Virus de Inmunodeficiencia Humana, Virus de Inmunodeficiencia de Simio, Virus T-Linfotrópico Humano y Virus de Sarcoma Rous; víruses de la familia Coronaviridae, tales como, por ejemplo, coronavirus SARS; víruses de la familia Rhabdoviridae, tales como, por ejemplo, Virus de Rabia y Virus de Estomatitis Vesicular, víruses de la familia Paramyxoviridae, tales como, por ejemplo, Virus Sincitial Respiratorio y Virus de Parainfluenza, víruses de la familia Papillomaviridae, tales como, por ejemplo, Papilomavirus Humano y víruses de la familia Herpesviridae, tales como, por ejemplo, Virus de Herpes Simple. Es otro objeto de la presente invención, proporcionar conjugados, tales como conjugados que comprenden una o más porciones sin péptidos enlazadas a un polipéptido de la presente ¡nvención, en donde el conjugado exhibe una propiedad antiviral, y que exhibe opcionalmente otras propiedades deseables, tales como vida media incrementada en suero y/o vida media funcional in vivo, y/o antigenicidad disminuida, en comparación con el polipéptido no conjugado. Algunos de dichos conjugados pueden exhibir eficacia mejorada en despeje de un virus de las células infectadas con el virus, en comparación con una sintetasa de oligoadenilato de referencia. Algunos de dichos conjugados pueden tener además toxicidad reducida en comparación con una sintetasa de oligoadenilato de referencia. Es otro objeto de la presente invención proporcionar un método para inhibir la réplica viral en células infectadas con virus, en donde el método comprende administrar a las células infectadas con virus o un polipéptido conjugado de la presente invención en una cantidad efectiva para inhibir la réplica viral en dichas células. La presente invención también proporciona un método para reducir un número de copias de un virus en células infectadas con virus, en donde el método comprende administrar a las células infectadas con virus un polipéptido o conjugado de la presente invención en una cantidad efectiva para reducir un número de copias del virus en dichas células. Las células pueden estar en cultivo y aislares de otra manera de un mamífero (por ejemplo, in vivo o ex vivo), o pueden estar in vivo, por ejemplo, en un sujeto, en un mamífero, en un primate o en un hombre.

Tratamientos Anti-cáncer y para Inflamación Se ha demostrado que los polipéptidos de la presente invención pueden originar que ciertos tipos de células y líneas celulares pasen por apoptosis o afecten el retardo del crecimiento de las líneas celulares o tipos celulares. Dichas líneas celulares o tipos celulares incluyen en una modalidad de ejemplo, los derivados de próstata y seno. La presente invención proporciona un método para inhibir la proliferación de una población celular, en donde el método comprende contactar la población celular con un polipéptido de la presente invención en una cantidad efectiva para disminuir la proliferación de la población celular. La población celular puede estar en un cultivo o aislarse de otra forma de un mamífero (por ejemplo, in vitro o ex vivo), o puede estar in vivo, por ejemplo, en un sujeto, en un mamífero, en un primate u hombre. La presente invención proporciona tratamiento de cánceres y enfermedades neoplásticas que utilizan los polipéptidos y polinucleótidos de la presente invención. Los cánceres de ejemplo y enfermedades neoplásticas incluyen pero no se limitan a: carcinoma adrenocortical, cánceres relacionados con SIDA, tales como por ejemplo, sarcoma de Kaposi, linfoma relacionado con SIDA, cáncer anal, astrocitoma, carcinoma de célula basal, cánceres de ducto biliar, tal como por ejemplo, los de naturaleza extrahepática, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, tales como por ejemplo, osteosarcomas e histiocitomas fibrosos malignos, glioma de tronco cerebral, tumores de cerebro, tales como por ejemplo, gliomas, astrocitomas, gliomas malignos, ependimomas, meduloblastomas y neuroblastomas, tumor neuroectodérmico primitivo suprasensorial, glioma hipotalámica y de trayectoria visual, cáncer de seno, adenoma bronquial, linfoma de Burkitt's, tumores carcinoides, linfoma del sistema nervioso central, cáncer cervical, leucemias, tales como por ejemplo, leucemia de célula peluda, leucemia linfoblástica aguada, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica y leucemia mielogenosa crónica, enfermedades mieloproliferativas crónicas, cáncer colorectal, linfoma de célula-T cutánea, cáncer endometrial, cáncer esofageal, familia de tumores de Ewing's, tumor de célula de germen extracraneal, tumor de célula de germen extragonadal, cánceres de los ojos, tales como por ejemplo, melanoma o retinoblastoma intraocular, cáncer de vejiga inflamada, cáncer de estómago, tumor trofoblástico gestacional, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin's, linfoma de no Hodgkin's, linfoma CNS primario, cáncer nasofaringeo, carcinoma de célula de isleto, cáncer de riñon (célula renal), cáncer de laringe, cáncer de labios y oral, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, tal como por ejemplo, cánceres de célula no pequeña y cánceres de célula pequeña, macroglobulinemia de Waldenstrom's, carcinoma de célula Merkel, mesotelioma, cáncer de cuello escamoso metastático, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, neoplasma de célula plasma fungoides de micosis, síndromes mielodisplásticos, enfermedades mieloproliferativas, cáncer de cavidad nasal y seno paranasal, cáncer de ovario, tal como célula germinal y epitelial, tumor ovariano potencial de baja malignidad, cáncer pancreático, cáncer paratiroides, cáncer de pene, feocromocitoma, tumor de pituitario, blastoma pleuropulmonar, cáncer de próstata, rabdomiosarcoma, cáncer de glándula salival, sarcomas, síndrome de Sezary, cáncer de piel, tal como por ejemplo, melanomas y carcinomas de célula escamosa, cáncer testicular, timoma, carcinoma tímico, cáncer de tiroides, cáncer de célula de transición, tumor trofoblástico, cáncer uretral, cáncer uterino, cáncer vaginal, cáncer vulvar y tumor de Wilms'. La presente invención proporciona además tratamiento para enfermedades autoinmune e inflamación utilizando los polipéptidos y polinucleótidos de la presente invención, en donde las enfermedades autoinmunes e inflamatorias incluyen pero no se limitan a: asma, enfermedad de Crohn's, síndrome de Guillain-Barre, esclerosis múltiple, miastenia grave, neurosis óptica psoriasis, artritis reumatoide, enfermedad de Grave's, enfermedad de Hashimoto (tiroiditis), tiroiditis de Ord's, diabetes, diabetes melitus, síndrome de Reiter's, hepatitis autoinmune, cirrosis biliar primaria, cirrosis hepática, fibrosis hepática, síndrome de anticuerpo antifosfolípido, síndrome opsoclonus myclonus, arteritis temporal, encefalomielitis diseminada aguda, síndrome de Goodpasture's, granulomatosis de Wegener's, enfermedad coeliaca, pénfigo, poliartritis, anemia hemolítica autoinmune templada, arteritis de Takayasu's, enfermedad de arteria coronaria, endometriosis, cistitis intersticial, neuromiotonia, esclerodermia, vitiligo, vulvodinia, enfermedad de Chagas', sarcoidosis, síndrome de fatiga crónica, síndrome de distensión respiratoria agudo, tendonitis, bursitis, poli mialgia reumática, enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, rinitis alérgica, enfermedad cardiovascular, colecistitis crónica, bronquiectasis, pneumconiosis, tal como por ejemplo, silicosis, osteoartritis, aterosclerosis, disatonomia, espondilitis anquilosang, uvelitis anterior aguda, lupus eritematoso sistémico, diabetes melitus dependiente de insulina, pénfigo vulgaris, encefalomielitis alérgica experimental, uveorenitis autoinmune experimental, enfermedad de tejido conectivo mezclado, síndrome de Sjorgen's, anemia hemolítica autoinmune, púrpura trombocitopénica autoinmune, fiebre reumática aguda, crioglobulinemia esencial mezclada, artritis reumatoide juvenil, enfermedad de articulaciones degenerativa, espondilitis anquilosante, artritis psoriática, neuralgia, sinoviitis, glomerulonefritis, vasculitis, inflamaciones que ocurren como secuencia de influenza, el resfriado común y otras infecciones virales, gota, dermatitis de contacto, dolor de espalda baja y cuello, dismenorrea, dolor de cabeza, dolor de dientes, torceduras, esguinces, miositis, quemaduras, lesiones y dolor e inflamación después de procedimientos quirúrgicos y dentales en un sujeto. Crecimiento Celular y Tratamientos de Regeneración de Tejido Los polipéptidos de la presente invención han mostrado estimular un programa de promoción de crecimiento celular, mitogénico en tipos de células y líneas de células específicas, tal como por ejemplo, células de hepatoma Huh7 y células de fibroblasto de pulmón fetal MRC5. Este programa mitogénico se identifica utilizando análisis de microformación de expresión y ensayos de viabilidad celular de células y líneas celulares tratadas con los polipéptidos de la presente invención. La presente invención proporciona usos de los polipéptidos de la presente invención para estimular crecimiento celular y regeneración de tejido in vitro, in vivo y ex vivo utilizando tejidos y células derivadas de sujetos o mamíferos. Derivados de los Polipéptidos de la Presente Invención La presente invención proporciona polipéptidos que difieren de cualesquiera de los polipéptidos de las figuras 1 a 5 mediante 1 a 34 aminoácidos, dichas diferencias pueden incluir substituciones, inserciones, eliminaciones, la incorporación de aminoácidos modificados o derivados de aminoácidos y la adición o eliminación de aminoácidos del C-término ó N-término de los polipéptidos. Se pueden elaborar una o más substituciones de aminoácidos para los polipéptidos de la presente invención de acuerdo, por ejemplo, con un grupo de substitución (tal como, un grupo de substitución conservadora), tal como la que se establece más adelante. Como alternativa, o en forma adicional, se pueden realizar una o más substituciones de aminoácidos en los polipéptidos lo cual introduce o elimina un residuo de aminoácidos que comprende un grupo de adición de una porción sin péptido. Los ejemplos incluyen introducción de uno o más sitios de N-glucosilación, introducción de uno o más residuos de cisteína o residuos de lisina, eliminación de uno o más sitios de N-glucosilación, y/o eliminación de una o más usinas o histidinas. Algunos polipéptidos exhiben una actividad de sintetasa de oligoadenilato. Los grupos de substitución conservadores incluyen: Grupo 1, Alanina (A) Glicina (G) Serina (S) Treonina (T), Grupo 2, Ácido aspártico (D) Ácido Glutámico (E), Grupo 3, Aspargina (N) Glutamina (Q), Grupo 4, Arginina (R) Lisina (K) Histidina (H), Grupo 5, Isoleucina (I) Leucina (L) Metionina (M) Valina (V), y Grupo 6, Fenilalanina (F) Tirosina (Y) Triptofan (W). Se pueden considerar otros grupos de aminoácidos. Por ejemplo, los aminoácidos pueden ser agrupados mediante función o estructura química o composición (por ejemplo, ácidos, básicos, alifáticos, aromáticos, o que contengan azufre). Por ejemplo, una agrupación Alifática puede comprender: Glicina (G), Alanina (A), Valina (V), Leucina (L), Isoleucina (I). Otros grupos que contienen aminoácidos que se consideran substituciones conservadoras para otros incluyen: Aromáticos: Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptofan (W); que contienen Azufre: Metionina (M), Cisteína (C); Básicos: Arginina (R), Lisina (K), Histidina (H); Ácidos: Ácido aspártico (D), Ácido Glutámico (E), Aspargina (N), Glutamina (Q). Ver también la publicación de Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman y Company, para agrupaciones adicionales de aminoácidos. Los listados de la secuencia de polipéptido de la presente invención, junto con los grupos de substitución anteriores, proporciona un listado de todas las secuencias de polipéptidos substituidas en forma consecutiva. En un aspecto, la presente invención proporciona polipéptidos aislados o recombinantes, que comprenden cada una, una secuencia que tiene al menos 90% de identidad con la secuencia (por ejemplo, al menos aproximadamente 91%, al menos aproximadamente 92%, al menos aproximadamente 93%, al menos aproximadamente 94%, al menos aproximadamente 95%, al menos aproximadamente 96%, al menos aproximadamente 97%, al menos aproximadamente 98% o al menos aproximadamente 99% de identidad de secuencia de aminoácidos) para cualesquiera de los polipéptidos de la figura 5. En algunos casos el polipéptido exhibe actividad de sintetasa de oligoadenilato. El grado al cual una secuencia (polipéptido o ácido nucleico) es similar a otra proporciona una indicación de las propiedades estructurales y funcionales similares para las dos secuencias. Por consiguiente, dentro del contexto de la presente invención, las secuencias que tienen una secuencia similar a cualquier secuencia de ejemplo determinada son una característica de la presente invención. En particular, las secuencias que tienen porcentajes de identidad de secuencia tal como se definen a continuación, son una característica de la presente invención. Se puede utilizar una variedad de métodos para determinar las relaciones de secuencia, incluyendo alineación manual o alineación y análisis de secuencia auxiliar por computadora. Esta disponible una variedad de programas de computadora para llevar a cabo alineaciones de secuencia, o se puede preparar una alineación en forma manual mediante un experto en la técnica. Tal como se observó anteriormente, las secuencias de los polipéptidos y ácidos nucleicos empleados en la presente invención no necesitan ser idénticas, pero pueden ser substancialmente idénticas a la secuencia correspondiente de un polipéptido de la presente invención o ácido nucleico de la presente invención. Por ejemplo, los polipéptidos de la presente invención pueden someterse a varios cambios, tales como una o más inserciones, eliminaciones y/o substituciones de aminoácidos, ya sea conservadoras o no conservadoras que incluyen, por ejemplo, cambios que pueden proporcionar ciertas ventajas en su uso, tal como en su uso terapéutico o profiláctico o administración o aplicación de diagnóstico. Los ácidos nucleicos de la presente invención también pueden someterse a varios cambios, tales como una o más substituciones de uno o más ácidos nucleicos en uno o más codones de modo que un codón particular codifique el mismo aminoácido o uno diferente, dando como resultado ya sea una variación silente (tal como se define en la presente invención) o variación no silente, o una o más eliminaciones de uno o más ácidos nucleicos (o codones) en la secuencia. Los ácidos nucleicos pueden ser también modificados para incluir uno o más codones que proporcionan la expresión óptima en un sistema de expresión (por ejemplo, bacteriana o de mamífero), en tanto, si se desea, el uno o más codones aún codifiquen el mismo aminoácido(s). Dichos cambios de ácido nucleico pueden proporcionar ciertas ventajas en sus usos terapéuticos o profilácticos o administración o aplicación de diagnóstico. Los ácidos nucleicos y polipéptidos pueden modificarse en una cantidad de formas siempre que comprendan una secuencia substancialmente idéntica (tal como se define más adelante), con una secuencia en un ácido nucleico respectivo o polipéptido de la presente invención. El término "idéntico" o "identidad" dentro del contexto de dos o más ácidos nucleicos o secuencias de polipéptidos, se refiere a dos o más secuencias que son las mismas o tienen un porcentaje específico de residuos de aminoácidos o nucleótidos que son los mismos, cuando se comparan y alinean para una similitud máxima, tal como se determina utilizando un algoritmo de comparación de secuencias o mediante inspección visual. La "porcentaje de identidad de secuencia" ("% identidad") de una secuencia con una secuencia de referencia (es decir, de consulta) significa que la secuencia en cuestión es idéntica (es decir, en una base de aminoácido por aminoácido con una secuencia de polipéptido, o en una base de nucleótido a nucleótido para una secuencia de polinucleótido) mediante un porcentaje específico con la secuencia de consulta en una longitud de comparación. Mutagénesis Dirigida al Sitio para Crear los Polipéptidos de la Presente Invención Los polipéptidos de la presente invención pueden construirse utilizando cualquier método estándar de mutagénesis dirigida al sitio. Las secuencias de ácido nucleico que corresponden a los polipéptidos de la presente invención se sintetizan utilizando cebadores de oligonucleótidos específicos y una polimerasa de ADN de alta fidelidad. La secuencia objetivo está contenida en un plásmido de hebra doble aislado de una cepa E. coli competente de metilación. Los oligonucleótidos complementarios que contienen la mutación deseada se sintetizan y purifican utilizando electroforesis de gel de poliacrilamida. Se utiliza un ciclador térmico para controlar la temperatura de ciclos alternantes de desnaturalización de la plantilla de plásmido de hebra doble (94°C durante 30 segundos), endurecimiento de los cebadores de oligonucleótidos (55°C durante 1 minuto), y extensión de los cebadores con una polimerasa de alta fidelidad (68°C durante 1 minuto/kb de longitud de plásmido). Después de aproximadamente 15 ciclos, la mezcla del ADN recientemente sintetizado y de entrada se trata con un sistema de restricción específica para residuos metilados (Dpn I) para digerir el plásmido de origen. El ADN resultante se introduce en las cepas bacterianas química o eléctricamente competentes para clasificación y aislamiento de plásmidos que contienen la mutación deseada. El ADN de plásmido se aisla de los transformadores y se clasifica a través de secuenciación de terminación-pigmento fluorescente para confirmar la secuencia mutante. Expresión, Fermentación v Purificación de Producto de Fármaco por Volumen Se transformó una cepa E. coli que contiene un lisógeno de ?DE3, y por consiguiente se lleva una copia cromosomal del gen de polimerasa de ARN T7 bajo el control del promotor lacUV5, con un vector de expresión bacterial que contiene un promotor inducible con IPTG que codifica una secuencia de ácido nucleico que corresponde a uno o más de los polipéptidos de la presente ¡nvención. Los cultivos se crecen en medio de caldo luria suplementado con 34 µg/mL de cloramfenicol y 15 µg/mL de canamicina a una temperatura de 37°C. Cuando OD600 alcanza >0.4, la temperatura se reduce a 18°C y las células se inducen con 0.5 mM IPTG durante 17 horas. Las células bacterianas posteriormente se suspenden nuevamente en un amortiguador que contiene 50 mM NaH2PO , pH 8, 300 mM NaCI, 20 mM imidazole, 10% glicerol, 0.1% NP40, 2 mM DTT e inhibidores de proteasa (VWR), lisados en un homogenizador Gaulin y centrifugados hasta eliminar los residuos celulares antes de la purificación de proteínas. En una modalidad, la purificación de los polipéptidos de la presente invención se puede lograr utilizando una etiqueta de polihistidina en el amino-término. Se utiliza una columna de níquel en purificaciones de afinidad de etiquetas de polihistidina, con, por ejemplo, una columna de 5 mL siendo utilizada para el lisado generado por 4 L de E. coli. El lisado se carga y posteriormente se lava con amortiguador A Buffer (50 mM NaH2PO , 300 mM NaCI, 30% glicerol, 20 mM imidazole, 2 mM DTT en pH 7.5). Posteriormente se llevó a cabo un paso de elución al 7% de Amortiguador B (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCI, 30% glicerol, 2M imidazole, 2 mM DTT en pH 6.8), para volúmenes de 3.2 columnas. Un gradiente para el 100% de Amortiguador B sobre 3 volúmenes de columna se llevó a cabo posteriormente. El polipéptido de la presente ¡nvención se puede filtrar posteriormente con gel en el Amortiguador C (50 mM NaH2PO4, 150 mM NaCI, 40% glicerol, 1 mM EDTA, 2 mM DTT en pH 6.8) y se carga en una columna de intercambio de cationes para purificación adicional. Después de que se carga la proteína, la columna se lava con Amortiguador C seguido de un paso de elución para el 75% del amortiguador D (50 mM NaH2PO4, 1 M NaCI, 40% glicerol, 1 mM EDTA, 2 mM DTT en pH 6.8), posteriormente un gradiente con volumen de 5 columnas para el 100% del Amortiguador D. Posteriormente la proteína se filtra con gel en el Amortiguador E (50 mM NaH2PO , 300 mM NaCI, 40% glicerol, 1 mM EDTA, 2 mM DTT en pH 6.8) y se almacena a una temperatura de -20°C. Las diferentes modalidades de los polipéptidos de la presente invención, incluyen pero no se limitan a: los que carecen de una etiqueta de polihistidina, los que poseen una etiqueta de poliarginina, los que tienen contenido de cisteína reducido, los que tienen variaciones de secuencia de aminoácidos diseñadas para hacer el candidato de fármaco térmicamente más estable, los que tienen modificaciones para aumentar o reducir una actividad particular del candidato de fármaco, pueden requerir estrategias de purificación alternativas. Las modalidades del candidato de fármaco del polipéptido que carecen de una etiqueta de polihistidina, por ejemplo, pueden aplicarse directamente sobre una columna de intercambio de cationes. Pasos adicionales, por ejemplo, el uso de cromatografía de interacción hidrofóbica, se pueden utilizar tomando la proteína en el Amortiguador F (50 mM NaH2PO , 300 mM NaCI, 1 M (NH4)2SO4, 30% glicerol, 1 mM EDTA, 2 mM DTT en pH 6.8) y que corren un gradiente de volumen de 10 columnas al 100% del Amortiguador E. Se pueden utilizar otras columnas de afinidad o columnas de dimensión para purificar diferentes modalidades de los candidatos de fármaco de polipéptido. También se pueden utilizar técnicas alternativas para intercambio de amortiguadores, concentración de los candidatos de fármaco y purificación de los candidatos de fármaco. Estos incluyen, pero no se limitan a, ultrafiltración, filtración de flujo tangencial y diafiltración para la concentración del candidato de fármaco y para intercambio de amortiguadores. Las técnicas tales como precipitación de los candidatos de fármaco mediante (NH )2SO , o algún otro agente químico también se pueden utilizar. La desnaturalización del candidato de fármaco en urea o algún otro desnaturalizante y el redoblado también se puede utilizar. Los polipéptidos de la presente invención se estabilizan mediante excipientes que contienen sales; soluciones estables en 300 mM NaCI pueden comenzar a precipitarse en 150 mM NaCl. Por esta razón las mezclas de excipientes favorecerán en estas concentraciones de sal estabilizante, las cuales pueden ¡ncluir pero no se limitan a, fosfato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de calcio y cloruro de magnesio.

La adición de excipientes a base de aminoácido tal como arginina, han probado estabilizar los polipéptidos de la presente invención. El 10% de la solución de sacarosa permite que los polipéptidos de la presente invención sean estables en 1 mg/mL, la adición de 2% p/v de arginina permite que algunas modalidades de los péptidos sean estables en 3 mg/mL. Por esta razón, los compuestos a base de aminoácido que incluyen pero no se limitan a histidina, glutamina, glicina y albúmina humana pueden utilizarse como excipientes. La adición de excipientes tales como glicerol es estabilizante para los polipéptidos de la presente invención. Por ejemplo, en una modalidad, un polipéptido tiene una concentración máxima con 10% de glicerol (v/v) de 1 mg/mL; en tanto que en 40% de glicerol, los candidatos de fármaco son estables hasta 12 mg/mL. Las muestras de excipientes que contienen compuestos con propiedades químicas similares se considera que incluyen pero no se limitan a polioles tales como manitol, xilitol y sorbitol. Los disacáridos tales como sacarosa han sido descubiertos por estabilizar en 10% p/v; otros disacáridos que incluyen pero no se limitan a maltosa y trehalosa también pueden ser utilizados. Los monosacáridos también pueden utilizarse en la presente invención. Polisorbatos, polietilénglicoles y compuestos similares también se pueden utilizar para practicar la presente invención. Tal como lo podrá reconocer un experto en la técnica, el uso de antioxidantes y conservadores también puede utilizarse para asegurar la estabilidad de los polipéptidos durante almacenamiento. Los antioxidantes, incluyendo pero son limitarse a citrato de sodio, pueden ser estabilizantes para almacenamiento a largo plazo de polipéptidos de la presente invención. Los conservadores, incluyendo pero sin limitarse a, alcohol bencílico pueden ser estabilizantes para los polipéptidos durante almacenamiento y pueden utilizarse en mezclas de excipientes finales. Medida de Actividad de Sintetasa de Oligoadenilato de Polipéptidos Las actividades de sintetasa de oligoadenilato de los polipéptidos de la presente invención se miden de acuerdo con métodos publicados previamente (Justesen, J., y asociados Nuc Acids Res. 8: 3073-3085, 1980). En síntesis, la proteína se activa con 200 µg/ml de ácido poliinosínico:policitidílico en amortiguador que contiene 20 mM Tris-HCl, pH 7.8, 50 mM Mg(OAc)2, 1 mM DTT, 0.2 mM EDTA, 2.5 mM ATP, a[32P]ATP, 0.5 mg/ml BSA y 10% de glicerol. La reacción procede a una temperatura de 37°C durante 30 minutos hasta 24 horas y se termina calentando a una temperatura de 90°C durante 3 minutos. Se mancha 2-4 µl de la mezcla de reacción sobre una placa de capa delgada de celulosa-PEI. Después de secarse, la placa es desarrollada con 0.4 M Tris-HCl, 30 mM MgCI2, pH 8.7. La placa se seca y visualiza mediante análisis de fósforoimagen. Como alternativa, la mezcla de reacción puede incubarse en forma adicional con 0.05 U/µl de fosfatasa intestinal de becerro para eliminar el fosfato terminal. Se logra la separación cromatográfica de capa delgada utilizando 0.76 M KH2PO4, pH 3.6, desarrollando el sistema de amortiguación. Posteriormente la placa se seca y visualiza mediante análisis de fósforoimagen. Medición de Actividad Antiviral de Polipéptidos La capacidad de los polipéptidos de la presente invención para proteger células cultivadas de víruses citotóxicos se demuestra utilizando un modelo de infección de virus de encefalomiocarditis de múrido (EMCV, cepa ATCC VR-129B). Otros modelos de infección de virus in vitro incluyen pero no se limita a flavivíruses tales como virus de diarrea de bovino, virus de Nilo del Oeste, virus GBV-C, otros víruses tales como virus sincitial respiratorio y sistema de réplica HCV (por ejemplo, Blight, K.J., y asociados 2002. J. Virology, 76: 13001-13014). Se puede utilizar en el ensayo antiviral cualquier célula cultivada en forma adecuada competente para réplica viral. Se siembran células de hepatoma humano Huh7 a una densidad de 1 x 104 células/depósito en placas de cultivo de 96 depósitos y se incuba durante la noche en un medio completo (DMEM que contiene 10% de suero bovino fetal). A la mañana siguiente, el medio se reemplaza con medio que contiene 0-10 µM de proteína o cantidades equivalentes de amortiguador de dilución de proteína. Cuando se desea, se agrega alfa-interferón en una concentración de 100 lU/ml. Las células se tratan previamente de 2-8 horas antes de la infección viral. Después del tratamiento previo, un volumen igual de medio que contiene diluciones de virus EMC en medio completo, se agrega a los depósitos. En los experimentos aquí descritos, se agrega por depósito un rango de 50-500 de unidades de formación de placa (pfu). La infección viral se deja proceder durante la noche (aproximadamente 18 horas), y la proporción de células viables se calcula utilizando cualesquiera reactivos de viabilidad o citotoxicidad celular disponibles. Los resultados aquí descritos se obtienen utilizando un ensayo de viabilidad celular que mide la conversión de un compuesto de tetrazolio [3-(4,5-dimetil-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolio, sal interna; MTS] a un compuesto de formazan con color en células viables. La conversión de MTS a formazan se detecta en un lector de placa de 96 depósitos en una absorbancia de 492 nm. Las densidades ópticas resultantes son ya sea pasadas directamente para estimular la viabilidad celular o se normalizan mediante muestras tratadas con control para calcular un porcentaje de células viables después del tratamiento. Pegilación de Polipéptido:Sulfihidrilo La conjugación del polietilénglicol (PEG) a los polipéptidos de la presente invención se logra mezclando polipéptido purificado libre de diotiotreitol (DTT) con mPEG-MAL activado (Nektar Therapeutics) en una proporción molar 0.5-10:1. La reacción procedió a temperatura ambiente durante 5 minutos a 2 horas y se extinguió mediante la adición de 2 mM DTT. La conjugación ocurrió en sitios de cisteína múltiple utilizando 20 kDa lineal y 40 kDa PEGs ramificada (figura 6A y 6B). Las formas no pegiladas y formas que contienen uno o más PEG se pueden separar de cada uno utilizando una variedad de metodologías cromatográficas conocidas para los expertos en la técnica. En modalidades de ejemplo de la presente invención, se pueden utilizar columnas de intercambio de iones, columnas de interacciones hidrofóbicas, filtración de gel y cromatografía por exclusión de tamaño, cada una sola o en combinación con otra, para el aislamiento de las diferentes formas PEG. Pegilación de Polipéptido; N-Terminal Los polipéptidos de la presente invención se pueden pegilar en la amina N-terminal. Para polipéptidos en 50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCI, 30% glicerol, 1 mM EDTA, 2 mM DTT en pH 5 que contienen 20 mM de cianoborohidruro de sodio y agitando en un baño de hielo se agregan un exceso de 5 veces de mPEG butyrALD-40K. La reacción se deja proceder hasta diez horas y posteriormente se extingue a través de la adición de un exceso de 50 veces de glicina. Los productos de reacción se analizan mediante SDS-PAGE.

Los siguientes ejemplos se ofrecen a manera de ilustración, y no a manera de limitación. EJEMPLOS EJEMPLO I Modificaciones de Aminoácido en Proteínas OAS1 de Primate No Humano Los genes OAS1 procedentes de primates no humanos se secuenciaron y compararon con mutaciones encontradas OAS1 en el gen humano. Dichas mutaciones proporcionan la interiorización adicional en la evolución del gen y la proteína OAS1. Los aminoácidos conservados en forma de evolución sugieren sitios importantes, o críticos, para la función OAS1 o actividad enzimática. De manera inversa, los sitios de aminoácidos OAS1 que han mutado recientemente, por ejemplo, únicamente en humanos, o muestran una pluralidad de substituciones de aminoácidos en primates, indican sitios menos críticos para función o actividad enzimática. La abundancia de sitios mutados dentro de un motivo particular de la proteína OAS1 está correlacionada con las tolerancias del dominio funcional para modificación. Dichos sitios y motivos son optimizados para mejorar la función de proteína o actividad específica. Similarmente, las mutaciones de genes y proteínas con funciones de defensa inmune o viral tipo OAS1 son hipotetizadas para resultar del estímulo histórico mediante infección viral. Las mutaciones en proteínas OAS1 de primates son liofilizadas para mejorar la eficacia viral en esta base y son oportunidades de optimización de una proteína OAS1 terapéutica humana. En una modalidad de ejemplo, el aminoácido de primate ancestral de un sitio específico de OAS1 puede restaurarse a una forma terapéutica humana de la proteína OAS1 para optimizar la actividad específica de proteína o eficacia antiviral. En otras modalidades, los aminoácidos alternativos identificados en OAS1 de primate no humano, aunque no necesariamente conservados en forma ancestral, son substituidos en una forma terapéutica humana de OAS1 con el objeto de mejorar la actividad específica de proteína o eficacia anti-viral. Las secuencias de ADN o mARN que codifica tanto para las proteínas primate nativas así como para las formas híbridas humanas-primate son novedosas y tienen utilidad. Varios ejemplos de su utilidad son: agentes para detectar sus contrapartes de ADN ó mARN respectivos; en vectores de expresión utilizados en la fabricación de proteínas terapéuticas; y en la detección de compuestos novedosos que enlazan al mARN respectivo. La figura 1 proporciona una forma terapéutica de OAS1 (SEQ ID NO:1). Las modificaciones a esta forma con el objeto de proporcionar formas terapéuticas adicionales se lleva a cabo al menos utilizando una modificación de aminoácido tal como se proporciona en la figura 2. Tal como se describe en la figura 2, una modificación útil es la eliminación de la metionina inicial procedente de SEQ ID NO:1 y otras formas de OAS1. Las modificaciones adicionales se elaboran tal como se indica en la figura 3. Las modificaciones anteriores descritas en las figuras 2 y 3 también son aplicadas a otras isoformas OAS1 terapéuticas proporcionadas en la figura 5. La figura 3 también proporciona modificaciones específicas de proteínas OAS1 que son homologas de carboxil-término con el acceso Genbank NP_002525.1 (por ejemplo, SEQ ID NO:3), modificaciones específicas de proteínas OAS1 que son homologas del carboxil-término con el acceso Genbank NP_0058132.1 (por ejemplo, SEQ ID NO:2) y modificaciones específicas de proteínas OAS1 que son homologas del carboxil-término con el acceso Genbank NP_001027581.1 (por ejemplo, SEQ ID NO:4). En la figura 4 se describen mutaciones de ejemplo identificadas en primates no humanos incluyendo gorilas, chimpancés, orangutanes y monos macaques. La figura 5 describe isoformas OAS1 de primates humanos y no humanos que son útiles para propósitos de diagnóstico y terapéuticos de la presente invención, así como mutaciones de primate particulares descritas en la presente invención. EJEMPLO 2 Preparación y Secuenciación de cADN El ARN celular total se purifica de linfoblastos cultivados o fibroblastos de pacientes que tienen fenotipo de resistencia de hepatitis C. El procedimiento de purificación se lleva a cabo tal como se describe en la publicación de Chomczynki y asociados., Anal. Biochem., 162: 156-159 (1987). Las células se homogenizan en 10 mililitros (ml) de una solución de desnaturalización que contiene 4.0 M de tiocinato de guanidina, OJ M Tris-HCl en pH 7.5 y OJ M de beta-mercaptoetanol para formar un lisado celular. Posteriormente el sarcosinato de laurilo de sodio se mezcla en adiciones hasta una concentración final de 0.5% para el lisado celular después del cual la mezcla en adiciones se centrífuga en 5000 X g durante 10 minutos a temperatura ambiente. El sobrenadante resultante que contiene el ARN total se elabora en capas en un colchón de 5.7 M de cloruro de cesio y 0.01 M EDTA en un pH 7.5 y se peletiza mediante centrifugación. El pelet de ARN resultante se disuelve en una solución de 10 mM Tris-HCl en pH 7.6 y 1 mM EDTA (TE) que contiene 0.1% de sulfato docecílo de sodio (SDS). Después de la extracción de fenolcloroformo y precipitación de etanol, la concentración de ARN celular total purificada se estima midiendo la densidad óptica en 260 nm. El ARN total preparado anteriormente se utiliza como una plantilla para síntesis de cADN utilizando transcriptasa inversa para síntesis de primera hebra y PCR con cebadores de oligonucleótido diseñados para amplificar el cADN en dos fragmentos de traslape designados fragmento 5' y 3'. Los oligonucleótidos utilizados en la práctica de la presente invención son sintetizados en un Sintetizador de ADN 381A Applied Biosystems siguiendo las instrucciones del fabricante. El PCR se conduce utilizando métodos conocidos en la técnica. Se describen métodos de amplificación PCR con detalle en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,683,192, 4,683,202, 4,800,159 y 4,965,188 y al menos en varios textos incluyendo PCR Technology: Principies and Applications for ADN Amplification, H. Erlich, ed., Stockton Press, New York (1989); y PCR Protocols: A Guide to Methods and Aplications, Innis, y asociados, eds., Academic Press, San Diego, Calif. (1990) y cebadores a base de secuencias de nucleótidos que codifican las regiones modificadas por aminoácidos tal como se describe en la presente invención. Las secuencias determinadas directamente de los ADNs amplificados con PCR de los pacientes y sin infección HCV son analizados. La presencia de una corriente ascendente de mutación a partir de la región de codificación del gen OAS se pueden detectar en pacientes que son seronegativos de HCV, a pesar de exposiciones repetidas al virus. La especificación anterior, incluyendo las modalidades específicas y ejemplos, pretende ser ilustrativa de la presente invención y no tomarse como una limitación. Otras numerosas variaciones y modificaciones pueden efectuarse sin apartarse del espíritu y alcance real de la presente invención. Todas las patentes, publicaciones de patentes y publicaciones de no patentes mencionadas están incorporadas a la presente ¡nvención como referencia.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método de clasificación genética de humano para identificar una mutación de gen de sintetasa de oligoadenilato (OAS1), en donde el método comprende detectar en una muestra de ácido nucleico la presencia de una mutación OAS1, en donde la mutación da como resultado al menos una modificación de aminoácido en la proteína OAS1 codificada.
2. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO:1, excepto para al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315 y 335.
3. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de una proteína OAS1 que es homologa en el carboxil-término al acceso Genbank NP_002525.1, y la secuencia de aminoácido tiene una modificación de aminoácido en la posición 363.
4. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de una proteína OAS1 que es homologa en el carboxil-término con el acceso Genbank NP_058132.1 excepto para al menos una modificación de aminoácido en la posición 347, 350, 352, 353, 354, 356, 357, 361, 363, 364, 365, 369, 371, 373, 374, 375, 378, 379, 382, 388, 389 y 394.
5. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de una proteína OAS1 que es homologa en el carboxil-término con el acceso Genbank NP_001027581.1 excepto para al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 347, 361, 364, 372, 384, 385 y 399.
6. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO:2, excepto para al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315, 335, 347, 350, 352, 353, 354, 356, 357, 361, 363, 364, 365, 369, 371, 373, 374, 375, 378, 379, 381, 388, 389 y 394.
7. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO:3, excepto para al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315, 335 y 363.
8. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácido de la SEQ ID NO:4, excepto para al menos una modificación de aminoácido en las posiciones 1, 24, 25, 28, 31, 36, 47, 53, 54, 64, 69, 74, 104, 108, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 127, 130, 139, 142, 160, 161, 162, 166, 175, 179, 226, 242, 246, 248, 250, 254, 274, 279, 282, 284, 288, 289, 292, 295, 314, 315, 335, 247, 361, 364, 372, 384, 385 y 399.
9. Una proteína de sintetasa de oligoadenilato 1, caracterizada porque comprende un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos de una de SEQ ID NO:5-16.
10. Un polinucleótido que codifica al polipéptido tal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 2 a la 9.
11. Una composición terapéutica para tratar o prevenir infección mediante un virus en un mamífero, caracterizada porque la composición es el polipéptido de cualesquiera de las reivindicaciones de la 2 a la 9 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. Una composición terapéutica tal como se describe en la reivindicación 11, caracterizada porque el virus es un flavivirus.
13. Una composición terapéutica tal como se describe en la reivindicación 12, caracterizada porque el virus es virus de hepatitis C.
14. Una composición terapéutica para tratar cáncer en un mamífero, en donde la composición es el polipéptido tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 2 a la 9 junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
15. La composición terapéutica tal como se describe en la reivindicación 14, caracterizada porque el cáncer es cáncer de próstata.
16. Un compuesto terapéutico para tratar o prevenir infección viral en un mamífero, en donde el compuesto es un inhibidor de la actividad del polipéptido de cualesquiera de las reivindicaciones de la 2 a la 9.
17. El compuesto terapéutico tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el compuesto terapéutico es una molécula antisentido.
18. El compuesto terapéutico tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el compuesto terapéutico es una molécula ARNi.
19. El compuesto terapéutico tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el compuesto terapéutico es una ribocima.
20. El compuesto terapéutico tal como se describe en la reivindicación 16, caracterizado porque el compuesto terapéutico es un anticuerpo.
21. Un equipo de diagnóstico para determinar la resistencia de infección viral, en donde el equipo comprende al menos un polipéptido tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 2 a la 9.
22. El equipo de diagnóstico tal como se describe en la reivindicación 21, caracterizado porque comprende uno o más de: (a) instrucciones par utilizar al menos un polipéptido para clasificar, diagnosticar, pronosticar, monitorear en forma terapéutica o cualquier combinación de estas aplicaciones; y (b) una etiqueta o inserto que indica la aprobación de regulación para clasificación, diagnostico, pronostico o uso terapéutico o cualquier combinación de los mismos.
23. El equipo de diagnóstico tal como se describe en la reivindicación 21, caracterizado porque al menos un polipéptido se etiqueta en forma detectable.
24. Un método para tratar una enfermedad viral en un sujeto mamífero, caracterizado porque el método comprende proporcionar a un sujeto que necesita de dicho tratamiento, una composición terapéutica tal como se describe en la reivindicación 11.
25. El método tal como se describe en la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad viral es seleccionada del grupo que consiste en la familia Flaviviridae, la familia Picornaviridae, la familia Hepadnaviridae, la familia Coronaviridae, la familia Paramyxoviridae, la familia Retroviridae, la familia Rhabdoviridae, la familia Papillomaviridae, y la familia Herpesviridae.
26. El método tal como se describe en la reivindicación 25, caracterizado porque la enfermedad viral es seleccionada del grupo que consiste en virus de Hepatitis C, Virus de Fiebre Amarilla, Virus del Nilo del Oeste, Virus de Encefalitis Japonés, Virus del Dengue y Virus por Diarrea Viral de Bovino, Virus de Hepatitis B, Virus de Encefalomiocarditis, Rinovirus Humano, Virus de Hepatitis A, Virus de Inmunodeficiencia Humana, Virus de Inmunodeficiencia de Simio, Virus T-Linfotrópico Humano, Virus de Sarcoma Rous, coronavirus SARS, Virus de Rabia, Virus de Estomatitis Vesicular, Virus Sincitial Respiratorio, Virus de Parainfluenza, Papilomavirus Humano y Virus de Herpes Simple.
27. Un método para tratar cáncer en un sujeto mamífero, caracterizado porque el método comprende proporcionar a un sujeto que necesita de dicho tratamiento, una composición terapéutica tal como se describe en la reivindicación 14.
28. El método tal como se describe en la reivindicación 27, caracterizado porque el cáncer es seleccionado del grupo que consiste en: carcinoma adrenocortical, cánceres relacionados con SIDA, tales como por ejemplo, sarcoma de Kaposi, linfoma relacionado con SIDA, cáncer anal, astrocitoma, carcinoma de célula basal, cánceres de ducto biliar, cáncer de vejiga, cáncer de huesos, osteosarcomas, histiocitomas fibrosos malignos, glioma de tronco cerebral, tumores de cerebro, gliomas, astrocitomas, gliomas malignos, ependimomas, meduloblastomas, neuroblastomas, tumor neuroéctodérmico primitivo suprasensorial, glioma hipotalámica y de trayectoria visual, cáncer de seno, adenoma bronquial, linfoma de Burkitt's, tumores carcinoides, linfoma del sistema nervioso central, cáncer cervical, leucemias, leucemia de célula peluda, leucemia linfoblástica aguada, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica y leucemia mielogenosa crónica, enfermedades mieloproliferativas crónicas, cáncer colorectal, linfoma de célula-T cutánea, cáncer endometrial, cáncer esofageal, familia de tumores de Ewing's, tumor de célula de germen extracraneal, tumor de célula de germen extragonadal, cánceres de los ojos, melanoma o retinoblastoma intraocular, cáncer de vejiga inflamada, cáncer de estómago, tumor trofoblástico gestacional, cáncer de cabeza y cuello, carcinoma hepatocelular, linfoma de Hodgkin's, linfoma de no Hodgkin's, linfoma CNS primario, cáncer nasofaríngeo, carcinoma de célula de isleto, cáncer de riñon (célula renal), cáncer de laringe, cáncer de labios y oral, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, tal como por ejemplo, cánceres de célula no pequeña y cánceres de célula pequeña, macroglobulinemia de Waldenstrom's, carcinoma de célula Merkel, mesotelioma, cáncer de cuello escamoso metastático, neoplasia endocrina múltiple, mieloma múltiple, neoplasma de célula plasma fungoides de micosis, síndromes mielodisplásticos, enfermedades mieloproliferativas, cáncer de cavidad nasal y seno paranasal, cáncer de ovario, tal como célula germinal y epitelial, tumor ovariano potencial de baja malignidad, cáncer pancreático, cáncer paratiroides, cáncer de pene, feocromocitoma, tumor de pituitario, blastoma pleuropulmonar, cáncer de próstata, rabdomiosarcoma, cáncer de glándula salival, sarcomas, síndrome de Sezary, cáncer de piel, tal como por ejemplo, melanomas y carcinomas de célula escamosa, cáncer testicular, timoma, carcinoma tímico, cáncer de tiroides, cáncer de célula de transición, tumor trofoblástico, cáncer uretral, cáncer uterino, cáncer vaginal, cáncer vulvar y tumor de Wilms'.