MX2007011911A - Funcionamiento ciclico termico de un bloque que comprende multiples muestras. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere al campo del analisis de alto rendimiento de muestras. En particular, la presente invencion se dirige a un dispositivo, un sistema y un metodo para el templado simultaneo de multiples muestras. De manera mas particular, la invencion se refiere a un funcionamiento ciclico termico simultaneo de multiples muestras que efectua PCR en un formato de placa de microanalisis.

Description

FUNCIONAMIENTO CÍCLICO TÉRMICO DE UN BLOQUE QUE COMPRENDE MÚLTIPLES MUESTRAS Campo de la Invención La presente invención se refiere al campo del análisis de alto rendimiento de muestras. En particular, la presente invención se dirige a un dispositivo, sistema y método de templado simultáneo de múltiples muestras. Antecedentes de la Invención Los dispositivos de templado de muestras o mezclas de reacción en un modo controlado son utilizados en casi todos los campos de la química o de la bioquímica, mientras la ciencia básica es afectada en el mismo modo que el desarrollo industrial o la producción f rmacéutica. Debido a que el tiempo de trabajo así como también los reactivos son costosos, el desarrollo está tendiendo a incrementar el rendimiento de la producción y el análisis, mientras que al mismo tiempo se minimizan los volúmenes necesarios de reacción. En general, los dispositivos de templado tienen un bloque térmico que se encuentra en contacto térmico con la muestra bajo investigación. El bloque térmico es templado hasta una temperatura deseada afectando la temperatura de la muestra. El bloque térmico más simple es una chapa o placa común para calderas .

REF. 185437 Con el fin de realizar un templado eficiente, el dispositivo debe tener medios para calentar y enfriar las muestras. Para este propósito, el bloque térmico puede ser conectado con dos medios separados o con un medio único capaz de realizar ambos de los procesos de calentamiento y enfriamiento. Este medio único de templado es, por ejemplo, un medio de paso de flujo, mientras que un sistema de tuberías dentro o cerca del bloque térmico es fluido o corrido con un fluido externamente templado, por ejemplo, agua o aceite, que transporta el calor hacia o desde el bloque térmico. En el caso de dos medios separados, en general es utilizado un calentamiento resistivo en combinación con un enfriamiento disipativo. Un buen resumen acerca del manejo térmico en el campo del equipo médico y de laboratorio es escrito por Robert Smythe (Medical Device & Diagnostic Industry Magazine, Enero de 1998, p. 151-157) y lo siguiente es un extracto de este artículo. Un dispositivo común de enfriamiento disipativo es un disipador de calor en combinación con un ventilador. De manera general, los disipadores de calor son elaborados a partir de aluminio debido a que la conductividad térmica del metal es relativamente alta y también a que su costo es bajo. Estos disipadores son extruidos, estampados, unidos, fundidos o maquinados para conseguir una forma que maximizará el área superficial, facilitando la absorción de calor por el aire más frío circundante. La mayoría tienen un diseño de aleta o pasador. Cuando se utilizan con ventiladores (de convección forzada) los disipadores de calor pueden dispersar grandes cantidades de calor mientras que mantienen los componentes objetivos a una temperatura de 10-15° C por encima de la temperatura ambiente. Los disipadores de calor son económicos y ofrecen una flexibilidad de instalación aunque no pueden enfriar los componentes en o por debajo de la temperatura ambiente. Asimismo, los disipadores de calor no permiten el control de la temperatura. Las instalaciones más sofisticadas utilizan dispositivos termoeléctricos (TEC) como bombas caloríficas para calentar y activar el enfriamiento de un bloque térmico. Los dispositivos termoeléctricos son bombas caloríficas de estado sólido elaboradas a partir de materiales semiconductores que comprenden una serie de empalmes o pares de semiconductores de tipo-p y de tipo-n que son intercalados entre placas de cerámica. El calor es absorbido por los electrones en el empalme frío a medida que pasan de un nivel de baja energía en el elemento de tipo-p a un nivel más alto de energía en el elemento de tipo-n. En el empalme caliente, la energía es expelida, por ejemplo, hacia un disipador de calor a medida que los electrones se mueven del elemento de alta energía de tipo-n al elemento de baja energía de tipo-p. Una alimentación de energía de corriente directa (de, por sus siglas en inglés) proporciona la energía para mover los electrones a través del sistema. Un TEC normal contendrá hasta 127 uniones o empalmes y puede bombear o transportar tanto como 120 W de calor. La cantidad de calor bombeado es proporcional con la cantidad de la corriente que fluye a través del TEC y por lo tanto, es posible un control estricto de la temperatura. Al invertir la corriente, los TECs pueden funcionar como calentadores o enfriadores, lo cual puede ser útil para controlar un objeto en entornos cambiantes de ambiente o en el funcionamiento cíclico a las temperaturas diferentes. El intervalo de tamaños de 2-62mm, y múltiples TECs pueden ser utilizados para un enfriamiento más grande. Debido a que una cantidad relativamente grande de calor está siendo bombeada o transmitida a través de un área pequeña, los TECs en general requieren un disipador de calor que disperse el calor hacia el entorno ambiental. Un tipo bien conocido de TECs son los elementos de Peltier. La disipación de calor es esencial para un enfriamiento eficiente. Si el calor no pudiera ser disipado en su origen, el calor podría ser transferido a otro lugar utilizando tuberías isotérmicas. Un tubo o tubería isotérmica es un recipiente sellado por vacío con una estructura interior de mecha que transfiere calor mediante la evaporación y la condensación de un fluido interno de trabajo. El amoniaco, agua, acetona o raetanol son normalmente utilizados, aunque son empleados fluidos especiales para aplicaciones criogénicas y de alta temperatura. A medida que el calor es absorbido en un lado de la tubería isotérmica, el fluido de trabajo es vaporizado, creando un gradiente de presión dentro de la tubería o tubo isotérmico. El vapor es forzado a fluir hacia el extremo más frío del tubo, en donde se condensa, proporcionando su calor latente a la estructura de mecha y hacia el entorno ambiental, por ejemplo, por medio de un disipador de calor. El fluido condensado de trabajo regresa al evaporador por medio de gravedad o por la acción de capilaridad dentro de la estructura interior de mecha. Debido a que los tubos isotérmicos explotan, el calor latente afecta el fluido de trabajo, éstos pueden ser diseñados para mantener un componente casi en las condiciones ambientales. Aunque son más efectivos cuando el fluido condensado está trabajando con la gravedad, los tubos isotérmicos pueden funcionar en cualquier orientación. Normalmente, los tubos isotérmicos son pequeños y altamente confiables, aunque no pueden enfriar objetos por debajo de la temperatura ambiental . Un bloque térmico puede ser templado con dos tubos de calor, mientras que un tubo isotérmico transporta calor de una fuente de calor al bloque térmico y mientras, el otro tubo isotérmico transporta calor fuera del bloque térmico. Un bloque térmico con dos tubos isotérmicos se describe en el documento WO 01/51209. Una pluralidad de tubos isotérmicos es utilizada en el documento US 4, 950,608 para realizar un recipiente de regulación de temperatura. Un tubo isotérmico con una conductancia térmica controlable se describe en el documento US 4, 387,762. Además de los tubos isotérmicos, el espacio cerrado de estado sólido evaporado con un equilibrio de líquido-vapor en la forma de un tubo, estos espacios cerrados de estado sólido también son conocidos en una forma de placa producida por la compañía Thermacore (Lancester, USA) , denominados Therma-Base™. Estos Therma-Base™ tienen una forma sustancialmente plana y son utilizados, por ejemplo, en computadoras para distribuir el calor generado en los circuitos integrados (US 6, 256,199). Un aparato que regula la temperatura de los elementos en contacto térmico con un fluido contenido en equilibrio de líquido-vapor en el interior de un espacio cerrado se describe en el documento US 5, 161,609. El documento US 5, 819,842 describe una unidad de control de temperatura que comprende una placa de expansión para el control independiente de las múltiples muestras que se encuentran en proximidad cercana. De esta manera, un objetivo de la presente invención es proporcionar un dispositivo para el templado simultáneo de muestras. En un aspecto de la presente invención, la invención se refiere al funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras para realizar PCR en un formato de placa de microanálisis. Breve Descripción de la Invención La invención se dirige a un dispositivo para el templado de una pluralidad de muestras individuales en un modo paralelo. De manera más precisa, la invención se dirige a un dispositivo adecuado para realizar una pluralidad de amplificaciones simultáneas PCR dentro de múltiples muestras. Una materia de la presente invención es un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras que comprende: a) un bloque térmico 1 que comprende múltiples muestras , b) al menos una bomba calorífica 2, c) una base térmica 4, d) un disipador de calor 5 y e) una unidad de control 3 que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, en donde la base térmica 4 se encuentra en contacto térmico con el disipador de calor 5 y al menos con una bomba calorífica 2, al menos la bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1. Otra materia de la presente invención es un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, que comprende a) un bloque térmico 1 que comprende múltiples muestras, b) al menos una bomba calorífica 2, c) una primera base térmica 4 y una segunda base térmica 6, d) un disipador de calor 5 y e) una unidad de control 3 que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras . A través de toda la presente invención, el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras comprende todos los tipos de templado de una pluralidad de muestras. El funcionamiento cíclico térmico simultáneo resume una variación cíclica de la temperatura de las múltiples muestras, mientras que la temperatura en el comienzo de un ciclo es la misma que la temperatura en la finalización del ciclo. Un ciclo de temperatura comprende fases de calentamiento, enfriamiento y fases de temperatura constante. La variación de temperatura con el tiempo es resumida a través del protocolo de funcionamiento térmico cíclico. La frase múltiples muestras comprende cualquier número de muestras, mientras que las múltiples muestras pueden ser situadas en varios modos. Un modo común para situar las múltiples muestras es la utilización de placas de microanálisis. En forma alterna, múltiples recipientes de reacción podrían ser situados en un medio de retención. Dentro del alcance de la presente invención, las múltiples muestras son muestras de fluido. Cada una de las múltiples muestras comprende un solvente y uno o más objetivos disueltos que serán analizados. Un bloque térmico 1 es un dispositivo de estado sólido situado de manera que tenga una buena conductancia térmica. Existe una pluralidad de materiales conocidos por algunas personas expertas en la técnica que tienen una buena conductancia térmica y sin que se encuentren unidos con la teoría, la mayoría de materiales que tienen una buena conductancia eléctrica también son buenos conductores térmicos. Por lo tanto, los materiales como el cobre, aluminio, plata o grafito son adecuados para el bloque térmico. Por otro lado, también los plásticos y las cerámicas podrían tener una conductancia térmica suficiente para que sean utilizados como el material para el bloque térmico. Una bomba calorífica 2 es un dispositivo activo que tiene la capacidad de transportar calor. En general, las bombas caloríficas son los así llamados dispositivos termoeléctricos (TEC) elaborados a partir de materiales semiconductores que necesitan electricidad para funcionar. Una alimentación de energía de corriente directa (de) proporciona la energía para los procesos de calentamiento y enfriamiento, mientras que el inverso de la corriente no invierte la dirección del calor que está siendo bombeado. Un tipo bien conocido de TECs son los elementos de Peltier. Una base térmica 4 es un dispositivo de cámara de vapor que transporta y distribuye calor. A través de toda la presente invención, una base térmica es un tubo especial isotérmico, mientras que la base térmica tiene regiones de forma sustancialmente plana. El término tubo isotérmico es un nombre establecido para un recipiente sellado por vacío con una estructura interior de mecha que transfiere calor mediante la evaporación y condensación de un fluido interno de trabajo. A medida que el calor es absorbido en un lado del tubo isotérmico, el fluido de trabajo es vaporizado, creando un gradiente de presión dentro del tubo isotérmico. El vapor es forzado a fluir hacia el extremo más frío del tubo isotérmico, en donde se condensa, proporcionando su calor latente al entorno ambiental. Después, el fluido condensado de trabajo regresa al evaporador por medio de gravedad o por la acción capilar dentro de la estructura interior de mecha. En general, una base térmica es un dispositivo pasivo, aunque podría ser diseñado como un dispositivo activo, si la base térmica fuera equipada con medios de control . Los medios de control modifican la conductividad térmica de la base térmica ajustando ya sea la velocidad de flujo dentro del espacio cerrado o el volumen del espacio cerrado que afecta el vacío dentro del recipiente. Un disipador de calor 5 es un dispositivo que dispersa el calor. En general, un disipador de calor está constituido de un material térmicamente conductivo análogo al bloque térmico delineado con anterioridad. Por lo tanto, los disipadores de calor están principalmente constituidos de metal, de preferencia, de aluminio o cobre. Otro material adecuado para los disipadores de calor es el grafito. En forma alterna, los disipadores de calor podrían ser formados de plásticos y cerámicas, si solo fuera realizada una buena conductancia térmica. Con el fin de realizar una disipación máxima de calor, los disipadores de calor son situados a fin de proporcionar una relación de gran superficie-con-volumen. Esto es realizado a través de un montaje de aletas situadas sobre una placa de base. La relación de gran superficie-convolumen disminuye la resistencia de la transferencia de calor entre el disipador térmico y el aire circundante. Una unidad de control 3 es un dispositivo que regula el funcionamiento térmico cíclico simultáneo de múltiples muestras. Dentro de la presente invención, la unidad de control ajusta la alimentación de energía eléctrica de las bombas caloríficas, modificando la cantidad de calor transportado hacia o transportado desde el bloque térmico. Además, la unidad de control podría operar medios opcionales de control de las bases térmicas.

Todavía otro aspecto de esta invención es un método para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, el cual comprende las etapas de: a) proporcionar un bloque térmico 1 con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica 2, una primera base térmica 4, de manera opcional, una segunda base térmica 6, un disipador de calor 5 y una unidad de control 3, b) situar el bloque térmico 1 con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica 2, la primera base térmica 4, de manera opcional, la segunda base térmica 6 y el disipador de calor 5, en donde - el disipador de calor 5 se encuentra en contacto térmico con la primera base térmica 4, - la primera base térmica 4 se encuentra en contacto térmico al menos con una bomba calorífica 2 y - al menos una bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1 o de manera opcional, se encuentra en contacto térmico con la segunda base térmica 6, la segunda base térmica 6 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1, c) colocar las múltiples muestras dentro de los rebajos del bloque térmico 1 y d) realizar un protocolo de funcionamiento cíclico térmico con la unidad de control 3. Todavía otro aspecto de esta invención es un sistema para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras con el fin de realizar múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico, el cual comprende : a) un dispositivo de acuerdo con la presente invención y b) los reactivos necesarios para efectuar las múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico. La materia de la presente invención es un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras que comprende: a) un bloque térmico 1 que comprende múltiples muestras, b) al menos una bomba calorífica 2, c) una base térmica 4, d) un disipador de calor 5 y e) una unidad de control 3 que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, en donde la base térmica 4 se encuentra en contacto térmico con el disipador de calor 5 y al menos con una bomba calorífica 2, al menos una bomba calorífica 2 se encuentre en contacto térmico con el bloque térmico 1. Existe una gran cantidad de dispositivos conocidos por una persona experta en la técnica que son capaces de templar una muestra en un modo cíclico. La frase funcionamiento cíclico térmico resume una variación cíclica de la temperatura de una muestra, mientras que la temperatura en el comienzo de un ciclo es la misma que la temperatura en la finalización del mismo. Un ciclo de temperatura comprende fases de calentamiento, enfriamiento (rampas de temperatura) y fases de temperatura constante. La variación de temperatura con el tiempo es resumida por la frase "protocolo de funcionamiento cíclico térmico" . Si el dispositivo tuviera la capacidad para templar, de manera simultánea, un montaje de múltiples muestras, por ejemplo, las cavidades de una placa de microanálisis, y los resultados de los experimentos dentro de las múltiples muestras tuvieran que ser comparados, tiene que garantizarse que el funcionamiento térmico cíclico de las muestras en el centro del montaje y en el límite del mismo se prefiere que sea idéntico. Además, es deseable realizar las rampas de temperatura del protocolo de funcionamiento cíclico térmico tan rápido como sea posible, sin exceder las temperaturas de las múltiples muestras cuando se alcancen las fases de temperatura constante. En una modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el bloque térmico 1 está constituido de un material térmicamente conductivo.

Los materiales térmicamente conductivos son materiales que tienen una buena conductividad térmica y una baja capacidad de calor. En el análisis de la transferencia de calor, la relación de la conductividad térmica y la capacidad de calor, también es definida como difusividad térmica a = k/ (pcp) en donde k es la conductividad térmica, medida en W/ (m K) , pcp es la capacidad volumétrica de calor, medida en J/ (m3 K) . La unidad SI de la difusividad térmica es medida en m/s. Las sustancias con altas difusividades térmicas ajustan con rapidez sus temperaturas a las temperaturas circundantes, debido a que conducen calor con rapidez en comparación con su volumen térmico. Los materiales térmicamente difusivos son materiales que tienen una buena conductividad térmica, y sin estar unidos con la teoría, la mayoría de materiales que tienen una buena conductancia eléctrica también poseen una buena difusividad térmica. Por otro lado, aunque tengan difusividades térmicas mucho más pequeñas, también existen algunos materiales plásticos, cerámicos y polímeros que tienen suficientes propiedades térmicas para la presente invención. Los plásticos tienen difusividades térmicas hasta de = 0.2xl0"6 m2/s, las cerámicas hasta de a = 0.4xl0"6 m2/s. Los materiales poliméricos pueden tener, por ejemplo, conductividades térmicas hasta de k = 10 Wm"1 K"1. En una modalidad más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el bloque térmico 1 está constituido de metal, de preferencia, de aluminio o plata. Existe una pluralidad de materiales metálicos que son conocidos por algunas personas expertas en la técnica que tienen una buena conductancia térmica y que son adecuados para el bloque térmico, por ejemplo, cobre, aluminio o plata. El cobré por ejemplo, tiene una difusividad térmica aproximadamente de a = 107xl0~6 m2/s, la plata aproximadamente de a 166xl0"6 m2/s, mientras que en el aluminio es aproximadamente de a = 93xl0~6 m2/s (todos a 300 K) . Sin embargo, el aluminio es el material preferido, debido a su proceso económico y sencillo. Se observa que en la mayoría de casos los materiales metálicos no son puros sino que son aleaciones, mientras que la conductancia térmica del material estará en función de la composición de la aleación. En general, el bloque térmico 1 de la presente invención tiene una forma de cuboide con un área en corte transversal A de vista superior, una longitud 1, un ancho w y una altura h, que tiene las dimensiones preferidas de 1 = 5-200 mm, w = 5-200 mm y h = 3-100 mm. En otra modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el bloque térmico 1 comprende los rebajos 7 situados para recibir las múltiples muestras . En esta modalidad del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el bloque térmico 1 es proporcionado con múltiples rebajos 7, mientras que los rebajos 7 son situados en el lado superior que alcanza el interior del bloque térmico 1. Se prefiere que todos los rebajos tengan el mismo tamaño. Los rebajos 7 podrían ser obtenidos al perforar un bloque térmico homogéneo 1. En forma alterna, la perforación en un bloque térmico homogéneo 1 podría ser realizada de tal modo que los rebajos 7 formen agujeros que cruzan la totalidad de la altura del bloque térmico 1. Además del método de perforación en un bloque térmico homogéneo 1, podrían utilizarse otros métodos como el moldeo, la electroformación, la extracción profunda o maquinando de descarga eléctrica a fin de manufacturar el bloque térmico con rebajos. En una modalidad adicional preferida del dispositivo de acuerdo con la invención, las múltiples muestras son directamente colocadas en los rebajos 7 del bloque térmico 1 o por medio de recipientes de reacción, cada uno de los cuales comprende una de las múltiples muestras . Los rebajos 7 son situados para recibir las múltiples muestras, mientras que varias posibilidades pueden ser aplicadas dentro del alcance de la presente invención. En una modalidad, las múltiples muestras son situadas en los rebajos 7 en forma directa, por ejemplo, por medio de una etapa de medición con pipeta. Si fuera necesario, los rebajos 7 podrían ser revestidos con un material que es inerte para las muestras y que puede ser limpiado para reciclar el bloque térmico 1 para uso adicional. En otra modalidad, las múltiples muestras son situadas en los rebajos 7 por medio de recipientes de reacción, los recipientes de reacción son justificados en los rebajos 7. Es de importancia que los recipientes de reacción y los rebajos 7 sean justificados, debido a que de otro modo el aire entre ambos componentes puede actuar como un aislante térmico que impide el contacto térmico . También en una modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, los recipientes de reacción son acoplados para formar uno o más grupos, de preferencia, los recipientes de reacción son acoplados para formar una placa de múltiples cavidades. Cada uno de los múltiples rebajos 7 puede recibir un recipiente separado de reacción o uno o más grupos de recipientes acoplados de reacción pueden ser situados en los múltiples rebajos 7. Un recipiente único de reacción que es bien conocido y adecuado para la presente invención es por ejemplo, una copa Eppendorf, mientras que un grupo adecuado de recipientes acoplados de reacción es por ejemplo, una tira de copas Eppendorf o una placa de microanálisis que tiene por ejemplo, 96, 384 ó 1536 cavidades individuales. Todavía en otra modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 es un dispositivo termo eléctrico, de preferencia, un dispositivo semiconductor, de manera más preferible, un elemento de Peltier. Una bomba calorífica 2 es un elemento activo que necesita electricidad para generar y/o transportar calor y que también es denominado o conocido como dispositivo termoeléctrico (TEC) en la literatura. El general, las bombas caloríficas 2 TEC son bombas caloríficas de estado sólido elaboradas a partir de materiales semiconductores que comprenden una serie de pares o empalmes de semiconductores de tipo-p y de tipo-n que son intercalados entre las placas cerámicas. Una alimentación de energía eléctrica de proporciona la energía para mover los electrones a través del sistema, con lo cual, se transporta el calor. Un TEC común contendrá hasta 127 empalmes y puede bombear tanto como 120 W de calor, mientras que la cantidad de calor bombeado es proporcional a la cantidad de corriente que fluye a través del TEC. Por lo tanto, los TECs ofrecen un control estricto de temperatura. Al invertir la corriente, los TECs pueden funcionar como calentadores o enfriadores, lo cual puede ser útil para controlar un objeto en entornos ambientales cambiantes o durante el funcionamiento cíclico a diferentes temperaturas. Un tipo bien conocido de TECs son los elementos de Peltier. Estos elementos de Peltier se encuentran comercialmente disponibles en varias versiones distintas con respecto al funcionamiento, forma y materiales. Los TECs son de forma rectangular o redonda, éstos podrían tener agujeros centrados de paso para su fijación y existen en diferentes alturas. Los TECs especiales son optimizados para soportar el intercambio extensivo entre los modos de trabajo y son aplicables hasta una temperatura de 150° C. En general, el dispositivo semiconductor es intercalado entre las placas de cerámica. Estas placas de cerámica podrían ser proporcionadas con hendiduras para reducir el esfuerzo térmico. Con el fin de tomar en cuenta el efecto bimetálico, las placas de cerámica podrían ser parcialmente cubiertas con un material metálico (por ejemplo, cobre) . En otra variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la base térmica 4 es un dispositivo de conducción de calor que comprende un equilibrio de líquido-vapor dentro de un espacio cerrado de estado sólido. Como se mencionó con anterioridad, una base térmica 4 dentro del alcance de la presente invención es básicamente análoga a los tubos isotérmicos que son conocidos por algunas personas expertas en la técnica, con la diferencia que la base térmica 4 tiene al menos parcialmente una estructura de forma de placa en comparación con la estructura de forma de tubo de los tubos isotérmicos. En general, los tubos isotérmicos así como también las bases térmicas son espacios cerrados de estado sólido dentro de una estructura interior de mecha que transfiere el calor mediante la evaporación y la condensación del fluido interno de trabajo. En otras palabras, dentro del recipiente sellado, persiste un equilibrio del líquido-vapor del fluido interno de trabajo, mientras que el equilibrio local esta en función de la temperatura local. En mayor detalle, si el calor fuera absorbido en un lado del tubo isotérmico, el fluido de trabajo sería vaporizado, creando un gradiente de presión dentro del tubo isotérmico. El vapor es forzado a fluir hacia el extremo más frío del tubo, en donde se condensa proporcionando su calor latente al entorno ambiental . El fluido condensado de trabajo regresa al evaporador por medio de la gravedad o la acción capilar dentro de la estructura interior de mecha. El amoniaco, agua, acetona o metanol son normalmente utilizados como fluidos de trabajo, aunque son utilizados fluidos especiales para aplicaciones criogénicas y de alta temperatura. La base térmica tiene una conductividad térmica casi muy alta hasta de 2xl05 Wm"1 K"1 y por lo tanto, la dispersión de calor a través de la totalidad del área en sección transversal de la base térmica es muy eficiente. Por un lado, esto incrementa la homogeneidad durante el proceso de calentamiento y por otro lado, disminuye el tiempo requerido para el proceso de enfriamiento, debido a que la resistencia de transferencia de calor del disipador de calor será adicionalmente reducida. Una variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención comprende una base térmica 4 que es sustancialmente plana. En una modalidad más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la base térmica 4 se encuentra libre de rebajos. Dentro del alcance de la presente invención, se prefiere que la base térmica 4 sea sustancialmente plana, mientras que el término sustancialmente plana resume bases térmicas de forma de cuboide 4 con un área en sección transversal A de vista superior, una longitud 1, un ancho w y una altura h, que tiene las dimensiones preferidas de 1 = 10-500 mm, w = 10-500 mm y h = 3-15 mm. A través de la presente invención, la frase "libre de rebajos" se utiliza para enfatizar que en ciertas modalidades preferidas de la presente invención, la base térmica tiene un área continua en sección transversal A de vista superior que es ininterrumpida por los trabajos. En otras palabras, una base térmica que es libre de rebajos tiene una superficie plana al menos en el área de contacto térmico con las partes circundantes del dispositivo. Dentro del alcance de la presente invención, la frase "contacto térmico" entre dos componentes, es utilizada para enfatizar que el contacto físico entre dos componentes tiene que ser optimizado hacia una alta conductancia térmica. En otras palabras, a través de la presente invención, un "contacto térmico" es un "contacto físico" optimizado para mejorar la conductancia térmica entre dos componentes. Debido a que el aire es un conductor térmico deficiente, se tiene que garantizar que la cantidad de aire entre los dos componentes en contacto térmico sea tan pequeña como sea posible. Existen varias posibilidades para minimizar el aire en la zona de contacto de dos materiales de estado sólido, mientras que estas posibilidades pueden ser clasificadas en dos grupos, a saber, un contacto directo térmico y un contacto indirecto térmico. Una variante del contacto indirecto térmico utiliza una pasta que tiene una alta conductancia térmica como un enlace entre los dos componentes, por ejemplo, grasa térmica. En otra variante del contacto indirecto térmico, de preferencia una hoja delgada suave térmicamente conductiva, por ejemplo, una hoja de grafito es utilizada como un material de interconexión entre los dos componentes. Esta hoja delgada de grafito incluso puede tener una cierta rugosidad de los componentes y reduce el esfuerzo mecánico debido a la expansión térmica. Por otro lado, se prefiere aplicar una fuerza mecánica, de manera que un contacto directo térmico sea suficiente y que no sean necesarios materiales adicionales de interconexión entre los dos componentes. También se prefiere que ambas áreas de contacto sean tan planas como sea posible a fin de minimizar la separación de aire entre los dos componentes. Se observa que esta es una ventaja de aplicación de una fuerza mecánica para presionar juntos los dos componentes incluso para las modalidades con contacto indirecto térmico, debido a que esto puede mejorar adicionalmente la conductancia térmica. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la base térmica 4 se encuentra en contacto térmico con el disipador de calor 5 y por medio de una hoja delgada de grafito al menos con una bomba calorífica 2, mientras que al menos una bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1 por medio de una hoja delgada de grafito. Si se deseara, la grasa térmica podría ser utilizada como un material adicional de interconexión entre la base térmica 4 y el disipador de calor 5. Todavía en otra variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 es utilizada para generar calor y para transportar el calor al bloque térmico 1. En una modalidad más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 es adicionalmente utilizada para el transporte activo de calor del bloque térmico 1 a la base térmica 4. Al invertir la corriente, los TECs pueden funcionar ya sea como calentadores o como enfriadores . En un modo de operación, el TEC genera calor y el calor es transportado hacia una de las dos placas de cerámica del dispositivo. En el otro modo de operación, el TEC transporta calor de una de las placas de cerámica a la otra placa de cerámica del dispositivo y por lo tanto, enfría de manera activa una de las placas de cerámica. En otras palabras, mientras que uno de los lados del TEC será enfriado, el otro de los lados del TEC será calentado. También en una modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el área en sección transversal de la base térmica 4 es al menos 20% más grande o más pequeña que el área en sección transversal del disipador de calor 5 y el área en sección transversal de la base térmica 4 es más grande que el área en sección transversal del bloque térmico 1, las áreas de sección transversal se encuentran en paralelo a las respectivas áreas de contacto. Durante el enfriamiento del bloque térmico, una gran cantidad de calor tiene que ser disipada en un tiempo corto. Si la cantidad de calor que necesita ser disipada se volviera aún más grande, a primera vista, esto puede ser enfrentado al utilizar simplemente un disipador de calor más grande 5 que proporcione en consecuencia un área superficial más grande de disipación. Esta suposición sólo es correcta hasta algún alcance, debido a que al utilizar un disipador de calor común de metal 5 con su conductividad térmica restringida, sólo una cierta fracción del área superficial cerca de la fuente de calor participará en el proceso disipativo. Por lo tanto, el alargamiento del área de sección transversal de un disipador de metal común de calor 5 sólo no es un modo adecuado para manejar la disipación de grandes cantidades de calor. Dentro de la presente invención, el área de sección transversal siempre es el área de sección transversal de los componentes de dispositivo en la vista superior. Se observa que las figuras esquemáticas de varias modalidades del dispositivo en las Figuras la-lf representan vistas laterales de la composición. La utilización de una base térmica 4 en combinación con un disipador de calor 5 de acuerdo con la presente invención, mejora la disipación de calor, debido a que la enorme conductancia térmica de la base térmica 4 asegura que incluso un disipador de calor 5 que es mucho más grande que la fuente de calor participará de manera efectiva en el proceso disipativo. La optimización del proceso disipativo ayuda a reducir el tiempo requerido para las etapas de enfriamiento dentro del protocolo de funcionamiento cíclico térmico. En otra variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el área de sección transversal de la base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1 al menos por un factor de 1.5, de preferencia, al menos por un factor de 4 y la base térmica 4 tiene la misma área de sección transversal que el disipador de calor 2, las área de sección transversal se encuentran en paralelo con la respectivas áreas de contacto . La relación máxima razonable del área de sección transversal de la base térmica 4 y el área de sección transversal del bloque térmico 1 esta en función de la conductancia térmica de la base térmica 4. Lo mismo es cierto para la relación de área de sección transversal del disipador de calor 5 y la base térmica 4. El suministro de un disipador de calor 5 con un área de sección transversal mucho más grande que el área de sección transversal de la base térmica 4 no mejora adicionalmente la disipación de calor. En otra variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la base térmica es proporcionada con medios de control 9 que varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica 4. Se prefiere proporcionar la base térmica con un medio de control 9, debido a que si pudieran ser variadas las propiedades de conducción de calor de la base térmica, la influencia de las bases térmicas podría ser "encendida" y "apagada" según se desee mediante los distintos procedimientos del protocolo de funcionamiento cíclico térmico. Por ejemplo, es deseable minimizar las propiedades de conducción de calor de la base térmica 4 para el procedimiento de calentamiento del protocolo del funcionamiento cíclico térmico. Si la base térmica 4 no pudiera ser "apagada" durante el procedimiento de calentamiento, una porción más grande del calor generado al menos en una bomba calorífica 2 será dispersada de manera inmediata en el disipador de calor 5. Existen varios modos para controlar las propiedades de conducción de calor de una base térmica (véase por ejemplo, el documento US 5, 417,686). En general, las propiedades de conducción de calor de la base térmica están en función del equilibrio de líquido-vapor del fluido interno de trabajo afectado por el vacío del recipiente, así como también, en base a la transportación del gas y del líquido dentro del recipiente sellado. Una modalidad más preferida de acuerdo con la presente invención es un dispositivo, en donde los medios de control 9 varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica cambiando el volumen dentro de la base térmica. Otra modalidad más preferida de acuerdo con la presente invención, es un dispositivo, en donde los medios de control 9 varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica cambiando la velocidad de flujo dentro de la base térmica. El equilibrio del líquido-vapor del fluido interno de trabajo dentro de la base térmica puede ser modificado cambiando el volumen de la base térmica. Esto puede ser realizado al proporcionar un recipiente adicional conectado con la base térmica por medio de un orificio, mientras que el volumen del recipiente adicional puede ser ajustado. El recipiente adicional puede ser, por ejemplo, una jeringa o unos tubos flexibles. En forma alterna, el vacío dentro de la base térmica puede ser directamente ajustado utilizando una bomba de vacío conectada con un orificio del recipiente. Además, las propiedades de conducción de calor de la base térmica pueden ser modificadas afectando la velocidad de flujo dentro del recipiente. Aquí, es adecuada una válvula de estrangulación, la cual podría ser operada desde el exterior sin afectar el vacío dentro del recipiente que divide la base térmica en compartimientos. En una variante preferida del dispositivo de acuerdo con la invención, el disipador de calor 5 está constituido de un material térmicamente conductivo. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el disipador de calor 5 está constituido de metal, de preferencia, de aluminio, cobre, plata o grafito. Con relación al material térmicamente conductivo del disipador de calor 5, los mismos señalamientos son válidos como los dirigidos con anterioridad con respecto al bloque térmico 1. Todavía en otra variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el disipador de calor 5 es situado para proporcionar una relación maximizada de superficie-a-volumen. Sin que se encuentre unido con la teoría, la cantidad de calor que puede ser dispersada por el disipador de calor 5 es directamente proporcional a su área superficial. Por lo tanto, es deseable proporcionar un disipador de calor con una relación optimizada de superficie-a-volumen, debido a la cantidad limitada de espacio dentro del dispositivo de la presente invención. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, una relación de gran superficie-a-volumen es proporcionada mediante el montaje de aletas situadas sobre una placa de base. También se prefiere un dispositivo de acuerdo con la invención, en donde el disipador de calor 5 sea enfriado por un flujo de aire o de agua. Un montaje intersticial de aletas proporciona una gran área superficial, mientras que la placa de base sólida representa el área de contacto térmico con la base térmica 4. El disipador de calor 5 dispersa el calor hacia el entorno. Debido a que este proceso disipativo es más efectivo para grandes diferencias de temperatura entre la atmósfera circundante y el disipador de calor 5, es deseable enfriar de manera activa el entorno. Esto puede ser realizado ya sea mediante un flujo de aire producido por un ventilador o por un flujo de líquido producido por ejemplo, por una bomba peristáltica. Todavía en otra variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la unidad de control 3 regula las propiedades al menos de una bomba calorífica 2. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la unidad de control 3 además regula los medios de control 9 que varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica 4. El dispositivo de acuerdo con la presente invención es proporcionado con una unidad de control 3. La unidad de control 3 es un dispositivo eléctrico, por ejemplo, una computadora que regula la alimentación de energía eléctrica al menos de una bomba calorífica 2 y por lo tanto, ajusta sus propiedades de calentamiento o enfriamiento. Además, la unidad de control 3 puede operar los medios de control 9 de la base térmica. Otra modalidad preferida de acuerdo con la presente invención es un dispositivo, en donde el funcionamiento cíclico térmico es efectuado para realizar amplificaciones de ácido nucleico dentro de múltiples muestras. Una modalidad más preferida de acuerdo con la presente invención es un dispositivo que además comprende un medio que monitorea las amplificaciones de ácido nucleico en tiempo real. Dentro del alcance de la presente invención, todas las amplificaciones de ácido nucleico que son conocidas por algunas personas expertas en la técnica pueden ser aplicadas, por ejemplo, la Reacción de Cadena Polimerasa (PCR) , la Reacción de Cadena Ligasa (LCR) , la Reacción de Cadena Polimerasa Ligasa, Separación-LCR, la Reacción de Cadena de Reparación, 3SR, la amplificación de desplazamiento de filamento (SDA) , la amplificación mediata de transcripción (TMA) o la amplificación Qß . En general, las amplificaciones de ácido nucleico son monitoreadas en tiempo real utilizando colorantes fluorescentes conocidos por algunas personas expertas en la técnica. Para medir las señales fluorescentes, todos los tipos de medios ópticos son adecuados dentro del alcance de la presente invención. Se prefieren las cámaras CCD o fotomedidores que podrían ser utilizados con y dentro de componentes ópticos adicionales como lentes, filtros ópticos o espejos de plegamiento. Si una cierta aplicación requiriera que el medio óptico tuviera que ser orientado por debajo del bloque térmico 1, por ejemplo, para monitorear la intensidad de fluorescencia de las múltiples muestras a través de los agujeros inferiores en el bloque térmico 1, sería posible situar la composición fuera de un disipador de calor 5, una primera base térmica 4, las bombas caloríficas 2 y de manera opcional, una segunda base térmica 6 en los lados del bloque térmico 1. Para ganar un funcionamiento cíclico térmico homogéneo del bloque térmico 1, es posible situar una de las composiciones en cada uno de los cuatro lados del bloque térmico 1. En forma alterna, una composición única podría ser situada rodeando el bloque térmico 1. Otro aspecto de la presente invención es un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras que comprende: a) un bloque térmico 1 que incluye múltiples muestras, b) al menos una bomba calorífica 2, c) una primera base térmica 4 y una segunda base térmica 6, d) un disipador de calor 5 y e) una unidad de control 3 que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras . En esta modalidad de la presente invención, se utilizan dos bases térmicas separadas 4, 6. La primera base térmica 4 mejora el procedimiento de enfriamiento dentro de los protocolos de funcionamiento cíclico térmico al distribuir el calor que será disipado de manera homogénea a través de la totalidad del disipador de calor 5. La segunda base térmica 6 mejora el procedimiento de calentamiento dentro de los protocolos del funcionamiento cíclico térmico al distribuir el calor generado al menos en una bomba calorífica 2 de manera homogénea a través de la totalidad del bloque térmico 1. Todavía en otra variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la primera base térmica 4 es sustancialmente plana. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la primera base térmica 4 es sustancialmente plana al estar en contacto térmico con el disipador de calor 5. Como se mencionó con anterioridad, el término sustancialmente plano resume las bases térmicas de forma de cuboide con un área en sección transversal A de vista superior, una longitud 1, un ancho w y una altura h, y la primera base térmica 4 tiene las dimensiones preferidas de 1 = 10-500 mm, w = 10-500 mm y h = 3-15 mm. Con respecto al contacto térmico todas las posibilidades mencionadas con anterioridad también pueden ser aplicadas para esta variante preferida . También en una variante preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 se encuentra entre las dos bases térmicas 4, 6 y al menos una bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico con ambas de las bases térmicas 4, 6. Al menos con una bomba calorífica 2 entre las dos bases térmicas 4, 6, las bombas caloríficas 2 son capaces de transferir calor a las segundas bases térmicas 6 durante el procedimiento de calentamiento, así como también, pueden transferir calor de las segundas bases térmicas 6 a las primeras bases térmicas 4 durante el procedimiento de enfriamiento. En una modalidad preferida de la invención, al menos una bomba calorífica 2 son los TECs. Se prefiere que exista un material adicional de interconexión entre las bombas caloríficas 2 y las primeras bases térmicas 4, así como también con las segundas bases térmicas 6. En ambos casos, un material preferido de interconexión es una hoja delgada de grafito como se delineó con anterioridad.

En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor 5, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1, la segunda base térmica 6 es sustancialmente plana y la segunda base térmica 6 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1, las áreas de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto. En otra variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es menor de un 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor 5, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1, la segunda base térmica 6 tiene una forma compleja que encierra parte del bloque térmico 1 o el bloque térmico 1 como una totalidad y la segunda base térmica 6 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1, las área de sección transversal se encuentran en paralelo con la respectivas áreas de contacto. El efecto positivo del disipador de calor 5, así como también una primera base térmica 4 que tienen ambos un área de sección transversal más grande que el bloque térmico 1, fue discutido en detalle con anterioridad. En pocas palabras, utilizando una primera base térmica 4 en combinación con un disipador de calor 5, se mejora la disipación de calor, debido que a la enorme conductancia térmica de la base térmica 4 garantiza que incluso un disipador de calor 5, que es mucho más grande que la fuente de calor, participará de manera efectiva en el proceso disipativo. De preferencia, el contacto térmico de la segunda base térmica 6 y el bloque térmico 1 comprende un material adicional de interconexión, por ejemplo, grasa térmica o una hoja delgada de grafito. Si sólo fuera requerido el calentamiento homogéneo del bloque térmico sin una disipación optimizada de calor, podría ser ventajoso el suministro de un dispositivo sólo con una segunda base térmica 6 sin la primera base térmica 4. Esta variación del dispositivo de acuerdo con la presente invención puede ser realizada para todas las modalidades con una primera base térmica 4 y segunda base térmica 6 como se describe en esta solicitud. Todavía en una variante más preferida del dispositivo de cuadro con la presente invención, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1 al menos por un factor de 1.5, de preferencia, al menos por un factor de 4 y la primera base térmica 4 tiene la misma área de sección transversal que el disipador de calor 2, las áreas de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto. Las relaciones razonables del área de sección transversal de la primera base térmica 4 y el bloque térmico 1, así como también de la primera base térmica 4 y el disipador de calor 2 están en función de la conductancia térmica de la base térmica 4. Con referencia a la relación del área de sección transversal de la segunda base térmica 6 y el bloque térmico 1, los mismos argumentos delineados con anterioridad son válidos y se prefiere que la segunda base térmica 6 y el bloque térmico 1 tengan aproximadamente la misma área de sección transversal, de preferencia, el área de sección transversal de la segunda base térmica 6 es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del bloque térmico 1. La segunda base térmica 6 tiene las dimensiones preferidas de 1 = 5-200 mm, w = 5-200mm y h = 3 -30 mm. En otra modalidad preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 es utilizada para generar calor y transportar calor a la segunda base térmica 6.

En una modalidad más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, al menos una bomba calorífica 2 es adicionalmente utilizada para el transporte activo de calor de la segunda base térmica 6 a la primera base térmica 4. Como se mencionó con anterioridad, cuando los TECs sean utilizados como bombas caloríficas, la inversión de la corriente de estos elementos termoeléctricos proporciona ya sea un dispositivo de calentamiento o de enfriamiento. Una modalidad preferida de acuerdo con la presente invención es un dispositivo, en donde la primera base térmica 4 y la segunda base térmica 6 se encuentran ambas libres de rebajos . Otra modalidad preferida de acuerdo con la presente invención es un dispositivo, en donde la primera base térmica 4 y/o la segunda base térmica 6 son proporcionadas con medios de control 9 que varían las propiedades de conducción de calor de las bases térmicas 4, 6. Se prefiere proporcionar cada base térmica con un medio de control 9, debido a que si las propiedades de conducción de calor de las bases térmicas pudieran ser variadas de manera independiente, la influencia de las bases térmicas podría ser "encendida" y "apagada" según se desee a través de los distintos procedimientos del protocolo de funcionamiento cíclico térmico. Por ejemplo, en una modalidad con una primera base térmica 4 y una segunda base térmica 6, es deseable minimizar las propiedades de conducción de calor de la primera base térmica 4 y maximizar las propiedades de conducción de calor de la segunda base térmica 6 para el procedimiento de calentamiento del protocolo del funcionamiento cíclico térmico. Si la primera base térmica 4 no pudiera ser "apagada" durante el procedimiento de calentamiento, una porción más grande del calor generado al menos en una bomba calorífica 2 será dispersada de manera inmediata en el disipador de calor 5. Se observa que las formas para controlar las propiedades de conducción de calor de una base térmica, así como también, las modalidades del disipador de calor 5, la bomba calorífica 2, el bloque térmico 1, los medios de control 9 y la unidad de control 3 como se describió con anterioridad, también pueden ser aplicados con respecto al dispositivo con una primera base térmica 4 y una segunda base térmica 6. En una variante más preferida del dispositivo de acuerdo con la presente invención, la unidad de control 3 además regula los medios de control 9 que varían las propiedades de conducción de calor de las bases térmicas 4, 6. El dispositivo de acuerdo con la presente invención es proporcionado con una unidad de control 3. La unidad de control 3 es un dispositivo eléctrico, por ejemplo, una computadora que regula la alimentación de energía eléctrica al menos de una bomba calorífica 2 y por lo tanto, ajustar sus propiedades de calentamiento o enfriamiento. Además, la unidad de control 3 puede operar los medios de control 9 al menos de una de las bases térmicas 4, 6. Otro aspecto de esta invención es un método para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras que comprende las etapas de: a) proporcionar un bloque térmico 1 con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica 2, una primera base térmica 4, de manera opcional una segunda base térmica 6, un disipador de calor 5 y una unidad de control 3, b) situar el bloque térmico 1 con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica 2, la primera base térmica 4, de manera opcional la segunda base térmica 6 y el disipador de calor 5 , en donde - el disipador de calor 5 se encuentra en contacto térmico con la primera base térmica 4, - la primera base térmica 4 se encuentra en contacto térmico al menos con una bomba calorífica 2, y - al menos una bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico, ya sea con el bloque térmico 1 o de manera opcional en contacto térmico con la segunda base térmica 6, la segunda base térmica 6 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1, c) colocar múltiples muestras dentro de los rebajos del bloque térmico 1 y d) realizar un protocolo del funcionamiento cíclico térmico con la unidad de control 3. La frase protocolo del funcionamiento cíclico térmico resume una variación cíclica de la temperatura de una muestra, mientras la temperatura en el comienzo de un ciclo es la misma que la temperatura en la finalización del mismo. Un ciclo de temperatura comprende fases de calentamiento, enfriamiento (rampas de temperatura) y fases de temperatura constante . Como se mencionó con anterioridad, la frase "contacto térmico" entre dos componentes es utilizada a través de la presente invención para enfatizar que el contacto tiene que ser optimizado hacia una alta conductancia térmica. El contacto térmico puede ser optimizado, por ejemplo, mediante una pasta, por ejemplo, una grasa térmica, que tenga una alta conductancia térmica como enlace entre los dos componentes o mediante una hoja suave térmicamente conductiva, por ejemplo, una hoja delgada de grafito como una capa intermedia entre los dos componentes. En todos los casos, sería ventajoso si los dos componentes fueran presionados juntos a través de una fuerza mecánica. En una variante preferida del método de acuerdo con la presente invención, la primera base térmica 4 se encuentra en contacto térmico con el disipador de calor 5 y por medio de una hoja delgada de grafito al menos con una bomba calorífica 2, mientras que al menos una bomba calorífica 2 se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico 1 o con la segunda base térmica 6 por medio de una hoja delgada de grafito . En otra variante preferida del método de acuerdo con la presente invención, la primera base térmica 4 es sustancialmente plana. En una variante más preferida del método de acuerdo con la presente invención, la primera base térmica 4 se encuentra libre de rebajos. Todavía en otra variante preferida del método de acuerdo con la presente invención, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor 5 y el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1, las área de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto. En una variante más preferida del método de acuerdo con la presente invención, el área de sección transversal de la primera base térmica 4 es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico 1 al menos por un factor de 1.5, de preferencia, al menos por un factor de 4 y la primera base térmica 4 tiene la misma área de sección transversal que el disipador de calor 2, las área de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto. También se prefiere un método de acuerdo con la presente invención, en donde la segunda base térmica 6 opcional sea sustancialmente plana. Más preferido es un método de acuerdo con la presente invención, en donde la segunda base térmica 6 opcional se encuentre libre de rebajos. Además se prefiere un método de acuerdo con la presente invención, en donde la segunda base térmica 6 opcional tenga la misma área de sección transversal que el bloque térmico 1. Las razones para los arreglos preferidos indicados con anterioridad ya fueron discutidas con respecto al dispositivo de acuerdo con la presente invención. En una modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención, la segunda base térmica 6 opcional tiene una forma compleja que encierra parte del bloque térmico 1 o el bloque térmico 1 como una totalidad. En otra modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención, la segunda base térmica 6 opcional tiene una forma compleja que reemplaza el bloque térmico 1. La modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención, en donde una segunda base térmica 6 tiene una forma compleja, proporciona un templado especialmente homogéneo del bloque térmico 1, debido a que no sólo la parte inferior del bloque térmico 1 se encuentra en contacto térmico con la segunda base térmica 6, sino que también partes de las paredes laterales o incluso el bloque térmico 1 como una totalidad es revestido a través de la segunda base térmica 6. En forma alterna al revestimiento del bloque térmico 1 por la segunda base térmica 6 como una totalidad, el bloque térmico 1 podría ser reemplazado por una base térmica especial 8 que sea formada como un bloque térmico por sí mismo. Todavía en otra modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención, las múltiples muestras son colocadas dentro de los rebajos del bloque térmico 1 en forma directa o por medio de recipientes de reacción, cada uno de los cuales comprende una de las múltiples muestras . En una modalidad más preferida del método de acuerdo con la presente invención, los recipientes de reacción son acoplados para formar uno o más grupos, de preferencia, los recipientes de reacción son acoplados para formar una placa de múltiples cavidades. Las diferentes opciones para colocar las múltiples muestras en el bloque térmico 1 ya fueron discutidas con anterioridad con respecto al dispositivo de acuerdo con la presente invención. En una modalidad adicional preferida del método de acuerdo con la presente invención, el protocolo del funcionamiento cíclico térmico es adecuado para realizar las amplificaciones de ácido nucleico dentro de las múltiples muestras. Todavía más preferido es un método de acuerdo con la presente invención, en donde las amplificaciones de ácido nucleico son monitoreadas en tiempo real. Todavía otro aspecto de esta invención es un sistema para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras con el fin de realizar múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico que comprende : a) un dispositivo de acuerdo con la presente invención y b) los reactivos necesarios para realizar las múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico. Los reactivos a través de toda esta aplicación son todos los tipos de químicos que sean necesarios para efectuar uno de los métodos delineados con anterioridad con la ayuda del dispositivo inventivo de acuerdo con la presente invención. Estos reactivos podrían ser líquidos o sólidos, materiales puros o mezclas, podrían ser proporcionados "listos para uso" o como concentrados. En un sistema preferido de acuerdo con la presente invención, los reactivos comprenden soluciones de amortiguación, detergentes, enzimas, nucleótidos y primarios . Los reactivos de este sistema preferido de acuerdo con la presente invención son los reactivos necesarios para realizar las amplificaciones PCR. En mayor detalle, los reactivos son un conjunto de nucleótidos únicos, una polimerasa, un par de primarios y soluciones de amortiguación. En otro sistema preferido de acuerdo con la presente invención, las múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico son múltiples amplificaciones PCR que son monitoreadas en tiempo real. Los siguientes ejemplos, listado de secuencia y figuras son proporcionados para ayudar al entendimiento de la presente invención, el alcance verdadero de la cual es señalado en las reivindicaciones adjuntas. Se entiende que pueden ser realizadas modificaciones en los procedimientos señalados sin apartarse del espíritu de la invención.

Breve Descripción de las Figuras Las Figuras la-lf son imágenes esquemáticas de varias modalidades del dispositivo de acuerdo con la presente invención. Las Figuras 2a- 2e son imágenes térmicas del bloque térmico durante el procedimiento de calentamiento del bloque térmico. Las Figuras 3a-3e son imágenes térmicas del bloque térmico durante un procedimiento de enfriamiento del bloque térmico. La Figura 4 es una gráfica que ilustra varias temperaturas asociadas con el bloque térmico como una función del tiempo durante el término del protocolo del funcionamiento cíclico térmico que comprende 6 ciclos. La Figura 5 es una gráfica detallada que ilustra varias temperaturas asociadas con el bloque térmico como una función del tiempo durante el término de un ciclo del funcionamiento cíclico térmico. La Figura 6 son curvas de amplificación de tiempo real del fragmento Parvorious B19. Cinco diferentes concentraciones objetivo fueron analizadas por PCR en tiempo real y cada concentración es representada por cinco distintas cavidades de la placa, (a: 106 copias; b: 105 copias; c: 104 copias; d 103 copias; e 102 copias). La Figura 7 son curvas de amplificación en tiempo real de un fragmento Parvorious B19. 96 curvas de amplificación en tiempo real registradas en 96 cavidades distintas de la placa, cada una contiene 104 copias de la secuencia objetivo. Descripción detallada de la invención Ejemplo 1 Un dispositivo de acuerdo con la presente invención para el funcionamiento cíclico térmico de 384 placas de múltiples cavidades comprende un bloque térmico hecho en casa de una aleación de aluminio de 0.5 de AlMgSi . Un bloque de aluminio con una dimensión de 109x73x9.1 mm fue utilizado para formar 384 rebajos mediante el proceso de taladrado, cada rebajo cónico tiene un diámetro superior de 3.44 mm (ángulo de 17°) y una profundidad de 6.8 mm. Por debajo del bloque térmico fueron situados 6 elementos de Peltier, mientras que el contacto térmico es mejorado a través de una hoja delgada conductiva térmica de grafito. Los elementos utilizados de Peltier son adecuados para múltiples procedimientos del funcionamiento cíclico térmico y pueden calentarse hasta 130° C. Además, cada uno de ellos tiene una capacidad de enfriamiento de 75 W. Por medio de una segunda hoja delgada conductiva térmica de grafito, los 6 elementos de Peltier son situados sobre una base térmica. La base térmica utilizada es adaptada para la producción de Thermacore™ y tiene la dimensión de 248x198x5 mm. La cavidad del recipiente está constituida de cobre y el fluido de trabajo es agua. El disipador de calor, que es utilizado se encuentra comercialmente disponible a partir de Webra (número de producto W-209) , y está constituido de una aleación de aluminio de 0.5 de AlMgSi con la dimensión de 250x200x75 mm. Entre el disipador de calor y la base térmica, se aplica una grasa comercial térmica con el fin de mejorar el contacto térmico . Todos los cuatro componentes del dispositivo son fijados juntos mediante 17 tornillos y resortes y el proceso disipativo es mejorado a través de cuatro ventiladores que circulan aire en el disipador de calor. Ejemplo 2 Las imágenes térmicas del bloque térmico de un dispositivo como se describió en el Ejemplo 1 fueron grabadas con una cámara- IR (comercialmente disponible en la compañía FLIR) durante un procedimiento de calentamiento (Figuras 2a- 2e) y un procedimiento de enfriamiento (Figuras 3a-3e) . El procedimiento de calentamiento (Figura 2) inicio a una temperatura de 55° C con una relación de calentamiento de 4° C/s hasta que fueron alcanzados los 95° C, mientras que el procedimiento de enfriamiento (Figuras 3a-3e) inicio a una temperatura de 95° C con una relación de enfriamiento de 2° C/s hasta que fueron alcanzados los 55° C. Las imágenes fueron tomadas en distintos momentos durante el procedimiento de calentamiento y el procedimiento de enfriamiento, de manera respectiva. Ejemplo 3 En la Figura 4, son graficadas distintas temperaturas características de 6 ciclos sucesivos de temperatura del siguiente protocolo de funcionamiento cíclico térmico como una función del tiempo: 7 diferentes perfiles de temperatura son incluidos en la figura, el perfil de temperaturas del protocolo del funcionamiento cíclico térmico (?Soll Temp'), la temperatura teórica del bloque térmico ( ?Soll Ist' ) , la temperatura medida del bloque térmico (?Ist Temp'), la temperatura promedio medida dentro de los 9 rebajos del bloque térmico ( ?Min' ) , la temperatura máxima medida de los 9 rebajos del bloque térmico ( ? ax' ) y la homogeneidad de las mediciones de los 9 rebajos ( ?Hom' ; homogeneidad = temperatura máxima del rebajo - temperatura mínima del rebajo) . Una placa estándar de múltiples cavidades fue situada en los rebajos del bloque térmico y 9 cavidades distribuidas a través de la sección transversal del bloque térmico fueron llenadas con aceite ((Type Applied Biosystems, Nujol Nineral Oil, No. de Parte 0186-2302) . La temperatura fue medida utilizando un termopar (Thermocouples Omega 5TC-TT-36-72) para cada rebajo. La temperatura del bloque térmico fue medida con un sensor interno de temperatura dentro del bloque térmico. En la Figura 5 es graficada una ampliación del último ciclo de la secuencia para ilustrar los diferentes perfiles en mayor detalle. Ejemplo 4 Para demostrar adicionalmente la validez de la invención, las amplificaciones PCR en tiempo real de diferentes concentraciones objetivo con una detección basada en sondas de hibridación de etiquetado de fluorescencia-colorante fueron efectuadas utilizando el aparato descrito en el Ejemplo 1. Como un sistema de prueba, fue elegida la amplificación PCR en tiempo real de 177 fragmentos bp del Parvovirus B19 (NO ID SEQ: 1) . Como la sonda fluorescente, fue utilizado el par HybridisationProbe (NO ID SEQ: 4 y NO ID SEQ: 5) de LightCycler-Parvovirus B19 Quantification Kit (Roche Applied Science, Artículo No. 3 246 809) o SybrGreen. Los resultados son mostrados en la Figura 6 (par HybridisationProbe) y en la Figura 7 (SybrGreen) . PCR Un fragmento parcial de la secuencia Parvovirus B19 fue clonado en un vector plásmido pCRTM 2.1 (Invitrogen) . Las diluciones de DNA del plásmido Parvovirus B19 fueron preparadas en 10 mM Tris-HCl, pH 8.3. Por 106 de reacción PCR en 100 copias del objetivo plásmido fueron utilizadas para la amplificación. Por amplificación PCR se utilizó el LightCycler-Parvovirus B19 Quantification Kit (Roche Applied Science, Artículo No. 3 246 809) . Un ensayo común de PCR consistió de 106 para 100 copias del plásmido Parvovirus B19, el amortiguador de reacción, el amortiguador de detección y la polimerasa 1 U de FastStar Taq DNA de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El protocolo PCR consistió de una etapa inicial de desnaturalización a 95° C durante 10 minutos, seguida por 40 ciclos de amplificación a 95° C durante 10 segundos, 60° C durante 15 segundos y 72° C durante 10 segundos. Las relaciones de rampa fueron de 4.8° C de calentamiento y 2.4° C de enfriamiento, de manera respectiva. Las reacciones PCR fueron realizadas en un volumen total de 20 µl en una placa de microensayo de 384 cavidades (el producto elaborado para el cliente de Treff, Suiza) . La emisión de fluorescencia fue detectada en cada ciclo en el final de la etapa de recocido a 60° C utilizando una cámara CCD conectada con un sistema óptico que comprende lentes telecéntricos con el fin de medir las señales de fluorescencia de todas las cavidades de la placa en forma simultánea. El sistema óptico utilizado es descrito en la Solicitud de Patente Europea EP 05000863.0 (presentada el 18 de Enero del 2005) . El par HybridisationProbe fue excitado a 480 nm, mientras que la emisión fue medida en 640 nm. El par SybrGreen fue excitado en 470 nm, mientras que la emisión fue medida en 530 nm. El tiempo de exposición fue establecido en 1000 ms . En la Figura 6, las curvas de amplificación de 5 diferentes concentraciones objetivo fueron graficadas, mientras que cada concentración objetivo es representada a través de 5 distintas cavidades (distribuidas a través de la placa de 384 cavidades) . Los grupos de curvas de amplificación basados en la misma concentración objetivo son etiquetados con (a) 106 copias (medio CP (valor del codo) 16.6; SD 0.033), (b) 105 copias (medio CP 20.1; SD 0.043), (c) 104 copias (medio CP 23.5; SD 0.029), (d) 103 copias (medio CP 26.9; SD 0.020), (e) 102 copias (medio CP 30.4; SD 0.2). La Figura 7 comprende 96 curvas de amplificación en tiempo real registradas en 96 cavidades distintas de una placa de 384 cavidades, cada una conteniendo 104 copias de la secuencia objetivo. Las 96 reacciones de amplificación tuvieron un valor promedio CP de 23.7 con una desviación estándar de 0.08.

Información de Secuencia del Parvovirus B19 (las posiciones de los primarios están subrayadas) (NO ID SEQ: 1) 1 cagaggttgt gccatttaat gggaagggaa ctaaggctag cataaagttt caaactatgg 61 taaactggct gtgtgaaaac agagtgttta cagaggataa gtggaaacta gttgacttta 121 accagtacac tttactaagc agtagtcaca gtggaagttt tcaaattcaa agtgcactaa 181 aactagcaat ttataaagca actaatttag tgcctactag cgcattttta ttgcatacag 241 actttgagca ggttatgtgt attaaagaca ataaaattgt taaattgtta ctttgtcaaa 301 actatgaccc cctattggtg gggcagcatg tgttaaagtg gattgataaa aaatgtggca 361 agaaaaatac actgtggttt tatgggccgc caagtacagg aaaaacaaac ttggcaatgg 421 ccattgctaa aagtgttcca gtatatggca tggttaactg gaataatgaa aactttccat 481 ttaatgatgt agcaggaaaa agcttggtgg tctgggatga aggtattatt aagtctacaa 541 ttgtagaagc tgcaaaagct attttaggcg ggcaacccac cagggtagat taaaaaatgc 601 gtggaagtgt agctgtgcct ggagtacctg tggttataac cagcaatggt gacattactt 661 ttgttgtaag cgggaacact acaacaactg tacatgctta agccttaaaa gagcgaatgg 721 taaagttaaa ctttactgta ag Secuencias de los primarios y sondas PCR: Detección de primaro-PCR (No. ID SEC: 2) : 5' -GGG GCA TGT GTT AAA GTG G-3' Antidetección de primaro-PCR (No. ID SEC: 3): 5' -CCT GCT ACÁ TCA TTA AAT GGA AAG-3' Sonda de aceptador (No. ID SEC: 4): 5 ' -LCRed640-TTG GCG GCC CAT AAA ACC ACÁ GTG TAT-fosfatO-3' Sonda de donador (No. ID SEC: 5) : 5' -TGG CCA TTG CCA AGT TTG TTT TTC CTG T- Fluorescencia-3 ' Secuencia del fragmento amplif cado : 5'- g gggcagcatg tgttaaagtg gattgataaa aaatgtggca agaaaaatac actgtggttt tatgggccgc caagtacagg aaaaacaaac ttggcaatgg ccattgctaa aagtgttcca gtatatggca tggttaactg gaataatgaa aactttccat ttaatgatgt agcagg -3' Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (25)

1. Reivindicaciones Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, caracterizado porque comprende : a) un bloque térmico que incluye múltiples muestras, b) al menos una bomba calorífica, c) una base térmica, d) un disipador de calor y e) una unidad de control que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, en donde la base térmica se encuentra en contacto térmico al menos con el disipador de calor y al menos con la bomba calorífica, al menos la bomba calorífica se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico.
2. 2. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el bloque térmico comprende rebajos situados para recibir las múltiples muestras .
3. 3. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 1-2, caracterizado porque al menos una bomba calorífica es un dispositivo termoeléctrico, de preferencia, un dispositivo semiconductor, de manera más preferible, un elemento de Peltier.
4. 4. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 1-3, caracterizado porque la base térmica es sustancialmente plana.
5. 5. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la base térmica se encuentra libre de rebajos.
6. 6. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 4-5, caracterizado porque el área de sección transversal de la base térmica es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor, y en donde el área de sección transversal de la base térmica es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico, las área de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto.
7. 7. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 1-6, caracterizado porque la base térmica es proporcionada con medios de control que varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica.
8. 8. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 1-7, caracterizado porque la unidad de control regula las propiedades al menos de una bomba calorífica.
9. 9. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la unidad de control además regula los medios de control que varían las propiedades de conducción de calor de la base térmica.
10. 10. Un dispositivo para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, caracterizado porque comprende : a) un bloque térmico que incluye múltiples muestras, b) al menos una bomba calorífica, c) una primera base térmica y una segunda base térmica, d) un disipador de calor y e) una unidad de control que regula el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras.
11. 11. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque la base térmica es sustancialmente plana.
12. 12. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 10-11, caracterizado porque al menos una bomba calorífica se encuentra entre las dos bases térmicas, y en donde al menos una bomba calorífica se encuentra en contacto térmico con ambas de las bases térmicas .
13. 13. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 10-12, caracterizado porque el área de sección transversal de la primera base térmica es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor, en donde el área de sección transversal de la primera base térmica es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico, en donde la segunda base térmica es sustancialmente plana y en donde la segunda base térmica se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico, las áreas de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto.
14. 14. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la primera base térmica y la segunda base térmica se encuentran libres de rebajos .
15. 15. El dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 10-14, caracterizado porque la primera base térmica y/o la segunda base térmica son proporcionadas con medios de control que varían las propiedades de conducción de calor de las bases térmicas.
16. 16. El dispositivo de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la unidad de control además regula los medios de control que varían las propiedades de conducción de calor de las bases térmicas.
17. 17. Un método para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras, caracterizado porque comprende las etapas de: a) proporcionar un bloque térmico con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica, una primera base térmica, de manera opcional, una segunda base térmica, un disipador de calor y una unidad de control, b) situar el bloque térmico con múltiples rebajos, al menos una bomba calorífica, la primera base térmica, de manera opcional, la segunda base térmica y el disipador de calor, en donde - el disipador de calor se encuentra en contacto térmico con la primera base térmica, - la primera base térmica se encuentra en contacto térmico al menos con una bomba calorífica y al menos una bomba calorífica se encuentra en contacto térmico con el bloque térmico o de manera opcional, se encuentra en contacto térmico con la segunda base térmica, la segunda base térmica se encuentra en contacto con el bloque térmico, c) colocar las múltiples muestras dentro de los rebajos del bloque térmico y d) realizar un protocolo de funcionamiento cíclico térmico con la unidad de control.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque la primera base térmica es sustancialmente plana.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la primera base térmica se encuentra libre de rebajos.
20. 20. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18-19, caracterizado porque el área de sección transversal de la primera base térmica es menor del 20% más grande o más pequeña que el área de sección transversal del disipador de calor, y en donde el área de sección transversal de la primera base térmica es más grande que el área de sección transversal del bloque térmico, las áreas de sección transversal se encuentran en paralelo con las respectivas áreas de contacto.
21. 21. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18-19, caracterizado porque la segunda base térmica opcional es sustancialmente plana.
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la segunda base térmica opcional se encuentra libre de rebajos.
23. 23. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 17-22, caracterizado porque el protocolo del funcionamiento cíclico térmico es adecuado para efectuar las amplificaciones de ácido nucleico dentro de las múltiples muestras .
24. 24. Un sistema para el funcionamiento cíclico térmico simultáneo de múltiples muestras con el fin de realizar múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico, caracterizado porque comprende: a) un dispositivo de conformidad con las reivindicaciones 1-16 y b) los reactivos necesarios para efectuar las múltiples reacciones de amplificación de ácido nucleico.
25. 25. El sistema de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque los reactivos comprende soluciones de amortiguación, detergentes, enzimas, nucleótidos y primarios.