MX2007008300A - Uso de colorantes de cianina para el diagnostico de enfermedades proliferativas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere al uso del colorante de cianina SF64 para el diagnostico de enfermedades proliferativas con una administracion que comprende menos que 5 mg/kg de peso corporal.

Description

USO DE COLORANTES DE CIANINA PARA EL DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES PROLI- FERATIVAS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención está dirigida al uso de la cianina SF64, 5-29, 5-36 y/o 5-41 para el diagnóstico de enfermedades proliferativas, en particular enfermedades con tumores, con la administración de menos de 0,1 mg/kg de peso corporal.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El cáncer es la segunda causa principal de muerte entre los estadounidenses y también es responsable de uno cada cuatro muertes en los EE.UU. En 2004 morirán más de 560.000 estadounidenses o más de 1.500 personas por día de cáncer. Se han diagnosticado más de 18 millones de casos nuevos de cáncer desde 1990 y solamente en 2004 recibirán el mismo diagnóstico alrededor de 1 ,4 millones de casos nuevos. Esta estimación no incluye el cáncer preinvasivo o más del millón de casos de cáncer de piel no melanómico que se espera será diagnosticado este año. Los costos financieros del cáncer son abrumadores. De acuerdo con el Instituto Nacional de Salud [National Institute of Health] los distintos tipos de cáncer tuvieron un costo en los EE.UU. que superó los $ 189 mil millones en el 2003. Esta cantidad incluye más de $ 64 mil millones correspondientes a costos médicos directos y más de $ 125 mil millones en pérdidas de productividad. La cantidad de nuevos decesos debidos al cáncer podría reducirse sustancialmente mediante un diagnóstico temprano. Por ello, la detección de cáncer.en particular las pruebas de detección para el cáncer de mama, cervical y colorrectal, podrían reducir significativamente la cantidad de decesos debidos a estas enfermedades si se pudieran determinar en una etapa temprana cuando son más tratables. Las pruebas de detección para el cáncer de mama, cervical y colorrectal pueden real-mente impedir el desarrollo de estas enfermedades mediante la detección de condiciones precan-cerosas tratables. Idealmente, los métodos de detección son sensibles y específicos, pueden realizarse rápi- damente, no son invasivos, son económicos y están asociados con unos pocos, o ningún efecto adverso. Para la detección, por ejemplo, de tumores mamarios, las normas estándar de detección actualmente establecidas comprenden imágenes con rayos X del tejido de la mama, un procedimiento que también se conoce como mamografía. Otros métodos comprenden el diagnóstico por imágenes con resonancia magnética nuclear, ultrasonografía y termografía. El método de detección más ampliamente utilizado es con mucho la mamografía por rayos X, que tiene una gran especificidad (80% aproximadamente), no obstante la sensibilidad depende en gran medida de la interpretación de los datos de la imagen por parte del radiólogo. La resolución espacial de la mamo-grafía es baja y los tumores detectados tienen habitualmente un tamaño de 1 cm o más. Sin em-bargo, la mamografía se ha asociado con un riesgo de exposición a radiación significativo y acumulativo, en particular en mujeres en la premenopausia, que poseen un tejido mamario más denso y requieren de dosificaciones de radiación más altas que las mujeres de edad para lograr una sensibilidad suficiente. La mamografía también ha sido criticada por la manipulación fisica de la mama durante el procedimiento, que podría facilitar la diseminación de las células tumorales. En el pasa-do se han ido utilizando cada vez más las imágenes de resonancia magnética (MRI), en particular después de haber identificado un tumor mediante un método diferente. Debido a la gran resolución espacial de las imágenes MRI, tiene una sensibilidad ampliamente superior en comparación con las técnicas de diagnóstico basadas en rayos X como la mamografía; sin embargo, este método es menos específico (con una especificidad en el rango entre 37% y 97% y el valor predictivo para mujeres que no han sido diagnosticadas previamente con cáncer de mama es menor que un 2%), es mucho más costoso y requiere mucho tiempo y, por lo tanto, es menos adecuado para una detección masiva de pacientes. Recientemente, ha surgido otro método denominado tomografia óptica difusa (DOT) en el infrarrojo cercano (NIR) como un nuevo método de exploración con un gran potencial en diversas aplicaciones de diagnóstico por imágenes en la medicina. Esta técnica tiene la capacidad de producir imágenes cuantitativas de absorción y dispersión intrínseca y extrínseca (Arridge, S.R. (1995) Appl. Opt., 34: 7395-7409 y Gonatas, C.P.et al. (1995) Phys.Rev.E., 52: 4361-4365). Ntzíachristos, V. et al. (2000) Proc.Nat.Aca. Sci. EE.UU., 97: 2767-2772) describen el uso de indocianina verde (ICG) para mejorar el contraste durante el diagnóstico por imágenes ópticas de la mama humana in vivo. El diagnóstico por imágenes ópticas de grandes órganos, tal como la mama, a menudo es factible debido a la baja absorción de los tejidos en la región del espectro comprendida entre 700 y 850 nm. De hecho, se ha investigado la luz desde fines de la década de 1920 como una herramienta de diagnóstico para el cáncer de mama por transiluminación. Sin embargo, la transiluminación tiene una baja resolución espacial y ofrece poco en cuanto a cuantificación espectral de las lesiones detectadas. Por ende, la transiluminación no permitía suficiente sensibilidad y especificidad como para utilizarla clínicamente. Las grandes mejoras logradas en cuanto a la obtención de modelos matemáticos de la propagación de la luz en los tejidos combinado con los avances tecnológicos ha permitido ahora aplicar los principios de la tomografía en el diagnóstico por imágenes con luz difusa. La tomografía óptica difusa ha mejorado dramáticamente la capacidad de localizar y cuantificar las estructuras tisulares utilizando luz. Aún más, el método emplea radiación no ionizan-te y utiliza instrumentos cuyo costo es relativamente bajo, lo cual lo vuelve adecuado para la detección masiva de la mama o de otros tipos de cáncer a los cuales se puede acceder con luz. Se han utilizado fluorócromos como, p.ej., la indocianina (ICG, que es un absorbente y fluoróforo en NIR) como agentes de contraste. Se ha informado que empleando DOT con FCG como agente de contraste fue posible detectar carcinomas de ductos de mama con un tamaño de 1 cm y mayores a una concentración de 0,25 mg/kg de peso corporal. Otros agentes de contraste fluorescentes, que se pueden usar en el diagnóstico por imágenes con contraste fluorescente en el infrarrojo cercano se describen, p.ej., en EP 1 113 822 Al y en Kai Licha et al. ((2000) Photochemistry and Photobio-logy 72: 392-398). Para cualquiera de los métodos de diagnóstico por imágenes aplicados en detecciones re-petidas resulta deseable que posean tan pocos efectos secundarios como sea posible. Si la técnica de diagnóstico por imágenes requiere de la administración de sustancias como agentes de contras- te resulta deseable administrar tan solo pequeñas cantidades de dichas sustancias para evitar potenciales efectos secundarios nocivos y acumulación de la droga que podría tener lugar con la administración repetida. Por lo tanto, persiste la necesidad en la técnica anterior de identificar agentes de contraste que se puedan administrar en pequeñas cantidades y que aún proporcionen las pro-piedades deseadas de especificidad y sensibilidad para aplicaciones de exploración de rutina de DOT. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Fíg. 1 : Mamografía óptica después de inyección i.v. de SF64 en una paciente con cáncer de mama invasivo en la mama derecha. La mancha clara es causada por una señal de fluorescen-cia marcada de SF64, que luego de la inyección i.v. se acumuló en este cáncer de mama invasivo. Fig. 2: Ejemplo de imágenes tomadas ex vivo de metástasis de endometrio experimentales 6 h después de administrar la sustancia. En el panel de la izquierda se muestra la estructura del colorante fluorescente y en el panel de la derecha se muestra la imagen de la preparación de tejido del endometrio. La imagen incluye una regla indicadora del tamaño a escala en cm. Fig. 3: Ejemplo de imágenes tomadas in vivo de mícrolesiones espontáneas de la piel 6 h después de administrar la sustancia. En el panel A se muestra la imagen original y en el panel B se muestra la imagen invertida. La imagen incluye una regla indicadora del tamaño a escala en cm.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Antes de describir la presente invención con detalle, se debe tener en cuenta que esta invención no se limita a la metodología, los protocolos, líneas celulares, vectores y reactivos particulares descritos en la presente ya que pueden existir variaciones con las mismas.También se debe tener en cuenta que la terminología usada en la presente solamente sirve para describir las realizaciones particulares, y no pretende limitar el alcance de la presente invención que solamente es limitada por las reivindicaciones adjuntas. A menos que se defina de otra manera, todos los términos técnicos y científicos usados en la presente tienen el mismo significado que el comúnmente comprendido por el especialista en la técnica. Preferentemente, los términos usados en la presente se definen como se describe en "A multilingual glossary of biotechnological terms: (lUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. y KM, H. eds. (1995), Helvética Chimica Acta, CH-4010 Basel, Suiza). En toda esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto indique lo contrario, la palabra "comprenden", y variaciones tales como "comprende" y "que comprende", implica la inclusión un número entero o paso o grupo de números enteros o pasos definidos pero no la exclusión de cualquier otro número entero o paso o grupo de números enteros o pasos. En todo el texto de esta memoria descriptiva se citan diversos documentos. Cada uno de los documentos citados en la presente (incluyendo todas las patentes; solicitudes de patente, publicaciones científicas, especificaciones de proveedores, instrucciones, etc.), ya sea supra o infra, se incorporan por completo en este documento a modo de referencia. Ninguna mención en la presente debe considerarse como un reconocimiento que la invención no puede anteponer dicha des-cripción en virtud de una invención anterior. Se debe tener en cuenta que, tal como se usa en la presente y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una" y "el", "la" incluyen las referencias al plural a menos que el contexto claramente indique lo contrario. Por lo tanto, p.ej., la referencia a "un reactivo" incluye uno o más de dichos reactivos diferentes, y la referencia a "el método" incluye la referencia a pasos y métodos equivalentes conocidos por los especialistas en la técnica que podrían ser modificados, o sustituidos, por los métodos descritos en la presente. Dada la necesidad mencionada en la técnica anterior ahora los inventores han encontrado sorpresivamente que el compuesto conocido previamente de acuerdo con la fórmula (I) donde L1 a L7 son iguales o diferentes y cada uno es metano sustituido o no sustituido o L3 y L5 forman juntos un anillo de cinco o seis miembros y L4 es metano sustituido con un alquilo que tiene entre 1 y 4, p.ej. 1 , 2, 3 ó 4, átomos de carbono, R1 y R2 son un alquilo inferior que tiene entre 1 y 5, p.ej. 1 , 2, 3, 4 ó 5, átomos de carbono y están sustituidos con un grupo de ácido sulfóníco, o arilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, R3 a R10 son iguales o diferentes y cada uno es un átomo de hidrógeno, un grupo de ácido sulfónico, un grupo carboxilo, un grupo hidroxilo, un grupo al-quil(sulfoalquil)amíno, un grupo bi(sulfoalquil)amino, un grupo sulfoalcoxi, un grupo (sulfoal-quil)sulfonilo o un grupo a (sulfoalquil)aminosulfonilo y X e Y son iguales o diferentes y cada uno es un grupo de la fórmula (II) R11 R1 2 (II) donde R11 y R12 son alquilo inferior no sustituido que tiene entre 1 y 5, por ejemplo 1 , 2, 3, 4 ó 5 átomos de carbono y sales aceptables para uso farmacéutico de los mismos, p.ej. de Na, K, Ca, Mg2+ etc. Estos compuestos proveen una señal con una especificidad y sensibilidad suficientes para una detección de rutina de enfermedades proliferativas administrados en cantidades por kg de peso corporal, que son significativamente menores que las cantidades por kg de peso corporal que se utilizaban en la técnica anterior para obtener suficiente especificidad y sensibilidad. Los compuestos particularmente preferidos que se pueden usar en el contexto de la pre-senté invención comprenden uno más compuestos con una estructura de acuerdo con las fórmulas (lll) a (VI) también conocidos con los nombres de SF64, 5-29, 5-36 y 5-41, y que proveen una señal con una especificidad y sensibilidad suficientes para su uso en las exploraciones de rutina para enfermedades proliferativas en cantidades por kg de peso corporal que son significativamente inferiores a las cantidades por kg de peso corporal que se han utilizado en la técnica anterior para obtener una especificidad y sensibilidad suficiente. Por lo tanto, los compuestos utilizables de acuerdo con la pre-senté invención y, en particular, SF64, 5-29, 5-36 y 5-41 , sorpresivamente se pueden administrar en cantidades muy pequeñas y en consecuencia con un bajo potencial de efectos secundarios tóxicos. Además, los tumores detectables a esta baja concentración son tan pequeños como 3 mm de diámetro y por ende significativamente menores que los tumores detectados previamente usando otros colorantes de tipo cianina, por ejemplo ICG, para los cuales el límite de detección com-prende tumores de 1 cm de tamaño, es decir, comparables a la mamografía por rayos X. La capacidad para detectar tumores tan pequeños como de 3 mm representa un avance significativo con respecto a la capacidad para detectar tumores hasta un tamaño de 10 mm y presenta implicaciones increíbles para la sobrevida a largo plazo del paciente diagnosticado. Los tumores con un diámetro de 1 cm o más ya han atraído células endoteliales para formar nuevos capilares, es decir se han neovascularizado, y a menudo han liberado ya células tumorales hacia el torrente sanguíneo o linfático. Sin embargo, los tumores con un diámetro de 3 mm o menos a menudo no están vascularizado y han detenido su crecimiento debido a la falta de nutrientes. Dado que la vascularización del tumor es un prerrequisito para el crecimiento ulterior estos tumores solamente avanzarán si desarrollan capacidad para atraer células endotelíales. En consecuencia, las posibilidades de im-pedir que el cáncer pueda desarrollarse en una enfermedad de riesgo de vida son mucho mayores, si el tumor puede ser detectado cuando todavía tiene un tamaño donde sea mucho menos probable que se haya dispersado a través del cuerpo y/o que haya atraído células endoteliales para formar nuevos capilares. Por consiguiente, un primer aspecto de la invención comprende el uso de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) donde L a L7 son iguales o diferentes y cada uno es metano sustituido o no sustituida y L4 es metano sustituido con alquilo que tiene entre 1 y 4, p ej 1 , 2, 3 ó 4, át omos de carbono, R1 y R2 son alquilo inferior que tiene entre 1 y 5, p ej. 1 , 2, 3, 4 ó 5, átomos de carbono y están sustituidos con un grupo de ácido sulfónico, R3 a R10 son iguales o diferentes y cada uno es un átomc de hidrógeno, un grupo de ácido sulfónico, un grupo carboxilo, un grupo hidroxilo, un grupo alqu?l(sulfoalqu?l)am?no, un grupo b?(sulfoalqu?l)am?no, un grupo sulfoalcoxi, un grupo (sulfoalqu?l)sulfon?lo o un grupo (sulfoalqu?l)am?nosulfon?lo y X e Y son iguales o diferentes y cada uno es un grupo de la fórmula (II) R1 1 R12 (ll) donde R11 y R12 son alquilo inferior no sustituido que tiene entre 1 y 5, p ej 1, 2, 3, 4 o 5 átomos de carbono o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para preparar una composición de diagnóstico para la detección de una enfermedad prohferativa, donde dicha composición de diagnóstico comprende una cantidad de compuesto menor que 0,5 y mayor que 0,001 mg/kg de peso corporal por aplicación de diagnóstico Los compuestos particularmente preferidos para su uso en el contexto de la presente invención comprenden uno o más de los compuestos cuya estructura sea acorde con las fórmulas (lll) a (VI) o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, para la preparación de una composición de diagnóstico para detectar una enfermedad proliferativa, donde dicha composición de diagnóstico comprende al compuesto en una cantidad menor que 0,5 y mayor que 0,001 mg/kg de peso corporal por aplicación de diagnóstico. La capacidad de los compuestos hidrofílicos utilizables de acuerdo con la presente invención y, en particular, de los colorantes de cianina SF64, 5-29, 5-36 y 5-41 de actuar como agentes de contraste está determinada en parte por las concentraciones de oxi- y dioxí-hemoglobina, la saturación oxidante de la sangre, la captación del agente de contraste por los tejidos y la concentración orgánica, sin embargo, es posible incrementar la especificidad y/o sensibilidad de los compues-tos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular SF46, 5-29, 5-36 y 5-41 por acoplamiento con un compuesto de direccionamiento que se una específicamente a estructuras preferencial o exclusivamente presentes sobre células y tejidos proliferativos o en la proximidad de células y tejidos en proliferación.Algunas de estas estructuras están asociadas directamente con la célula proliferativa o están asociadas con las células próximas al tejido proliferativo. Las primeras son estructuras alteradas o sobreexpresadas en la célula proliferativa como, p.ej..receptores de factores de crecimiento.tal como el receptor de somatostatina o el receptor del factor de crecimiento epidérmico (FGFR). Actualmente se ha identificado una amplia variedad de tales estructuras y comprenden, a modo de ejemplo, receptores de factores de crecimiento, receptores acoplados a la proteína G, proteínas de los poros, canales ¡ónicos, bombas de eflujo de drogas, sitios de unión ac-cesónos para los factores de crecimiento, sulfato de heparano, proteasas unidas a membrana, moléculas de adhesión, receptores de células T y selectínas, en particular EGF, TGF, CEA, Lewis Y, CD 20, CD 33 o CD38. Otras estructuras, que se pueden emplear como blancos, son los antígenos asociados a cáncer definidos por células T que pertenecen a productos genéticos únicos de genes celulares mutados o recombinados.en particular quinasa 4 dependiente de ciclína (CDK4), p15lnk4b, p53, AFP, ß-catenína, caspasa 8, p53, mutaciones p21Ras, producto de fusión Bcr-abl, MUM-1 MUM-2, MUM-3, ELF2M, HSP70-2M, HST-2, KIAA0205, RAGE, miosína/m, 707-AP, CDC27/m, ETV6/AML, TEL/Aml1 , Dekcain, LDLR/FUT, Pml-RARa, TEL/AMLI; antígenos del cáncer de testículo (CT) , en particular NY-ESO-1 , miembros de la familia MAGE (MAGE-A1 , MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6 MAGE-10, MAGE-12), BAGE, DAM-6, DAM-10, miembros de la familia GAGE (GAGE-1 , GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7B, GAGE-8), NA-88A, CAG-3, antígeno 6250 asociados a RCC; antígenos de virus tumorales, en particular las oncoproteínas E6 o E7 derivadas del virus de papiloma humano (HPV), EBNA2-6 del virus de Epstein Barr, LMP-1 , LMP-2; antígenos de diferenciación sobreexpresados o específicos de tejidos, en particular gp77, gp100, MART-1 /Melan-A, p53, tirosinasa, proteínas relacionadas con tirosinasa (TRP-1 y TPR-2), PSA, PSM, MC1R; antígenos ampliamente expresados, en particular ART4, CAMEL, CEA, CypB, HER2/neu, hTERT, hTRT, ICE, Mucl, Muc2, PRAME RU1 , RU2, SART-1 , SART-2, SART-3 y WTI.

Se sabe que las células proliferativas, en particular las células tumorales, producen factores difusibles, que atraen a las células endoteliales y estimulan su crecimiento. Por ello, los tumores constituyen una de las pocas áreas del cuerpo donde se observa una nueva vascularización. En consecuencia, se ha utilizado el endotelio de tumores proliferativos y las estructuras asociadas con el mismo para dirigir específicamente drogas hacia el sitio del tumor. Las estructuras moleculares asociadas con las angiogénesis se revisan, p.ej., en WO 96/01653, Alessi P. et al. (2004) y Nanda, H. y Saint-Croix (2004). Las células que constituyen los tejidos proliferativos expresan factores tan-to angiogénicos como anti-angiogénicos, que en tanto los inhibidores de la angiogénesis contrarrestan el efecto de los factores angiogénicos conduce a la supresión de angiogénesis. Cuando prevalece el efecto de los factores angiogénicos, conducen al inicio de la angiogénesis. Por lo tanto, ambas estructuras, es decir activadores e inhibidores de la angiogénesis, que están relacionadas con la regulación de la angiogénesis pueden unirse al compuesto de díreccionamiento de la presente invención. Los activadores de la angiogénesis incluyen, en un sentido no limitativo, estructuras moleculares tipo, por ejemplo fibronectina ED-B (ED-BF), endoglina (CD105) (Burrows, F.J.et al. (1997) Clin. Cáncer Res. 1 : 1623-1634), miembros de la familia VEGF, factor de crecimiento del endotelío vascular (VEGFR), NRP-1 , Ang1 , Thie2, PDGF-bb y receptores, TGF-ß1 , receptores de TGF-ß, FGF, HGF, MCP-1 , integrantes (avß3, avßs.asß!), caderina VE, PICAM (CD31), efrinas, activadores de plasminógeno, las MMP PAI-1, NOS, COX-2, A733, quimioquinas o Id1/ld3. Los inhibidores de la angíogénesis incluyen, en un sentido no limitativo.estructuras moleculares tipo, p.ej. VGFR-1 , Ang2, TSP-1 , -2, angiostatina y kringles relacionados con plasminógeno, endosta-tina (colágeno (fragmento XVII), vasostatina, factor plaquetario IV, TIMP, inhibidores de MMP; PEX, METH-1, METH-2, IFN-a, -ß, -?, IP-10, IL-4, IL-12, IL-18, prolactina, VEGI, fragmento de SPARC, fragmento de osteopontina o maspína (Carmeliet, P. y Jain, R.K. (2000) Nature 407: 249-257; Yan-copoulos, G.D.et al. (2000) Nature 407: 242-248; Bergers, G. y Benjamín, L.E.(2002) Nature Reviews Cáncer 3: 401-410; Hendriks, M.J.C. et al. (2002) Nature Reviews Cáncer 3: 411-421). En una realización preferida, los compuestos de díreccionamiento se unen a los factores específicos de la angicgénesis ED-BF, VEGFR o endoglina. Entre dichos factores, ED-BF es una estructura blanco particularmente preferida. El factor ED-BF es una variante de procesamiento de la fibronectina, también conocida como fibronectina oncofetal, que se forma específicamente en las estructuras microvasculares recién formadas durante la angiogénesis. El componente que se une a estas estructuras es preferentemente un péptido (cadena de aminoácidos que posee entre 2 y 50 residuos de aminoácidos), una proteína (cadenas de aminoácidos de más de 50 residuos de aminoácidos), un ácido nucleico, una pequeña molécula o un azú-car. En lo que resta de esta memoria descriptiva.también se hace referencia a péptidos y proteínas como polipéptidos. Los polipéptidos preferidos son ligandos de estructuras que se expresan preferencial o exclusivamente en células proliferativas o en la proximidad de dichas células proliferativas tal como en las estructuras vascularizadas o en vascularización, en particular el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), somatostatina, análogos de somatostatina, bombesina, análogos de bombesina, péptido intestinal vasoactivo (VIP) y análogos, neurotensina y análogos de neurotensi- na, neuropéptido Y y análogos y anticuerpos, incluyendo anticuerpos humanos, humanizados y quiméricos; el dominio de unión al anticuerpo que comprende fragmentos, por ejemplo Fv, Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, Facb; anticuerpos de una sola cadena, por ejemplo Fvs de cadena simple (scFvs); y diabodies [fragmentos divalentes de anticuerpos]. En la literatura se describe una amplia variedad de dichos anticuerpos e incluyen para ED- BF: L19 y E8 (véase Vití F. et al. (1999) Cáncer Res. 59:347-352), el anticuerpo monoclonal BC-1 descrito en EP 0 344 134 B1 , que se puede obtener del hibridoma depositado en la European Collection of Animal Cell Cultures, Portón Down, Salisbury, Reino Unido, con el número 88042101 o una versión quimérica o humanizada del mismo, los anticuerpos contra ED-BF con las secuencias específicas VL y VH descritas en WO 97/45544 Al, los anticuerpos contra ED-BF con las secuencias específicas VL y VH descritas en WO 99/5857 A2, los anticuerpos contra ED-BF con las secuencias específicas VL y VH descritas en WO 01/62800 A1 y AP38 y AP39 (Many C, et al. (2001 ) Proteín Expr. Purif. 21 :156-64). Los anticuerpos específicos para ED-BF fueron revisados por Ebbinghaus C, et al. (2004) Curr Pharm Des. 10:1537-49. Todos estos anticuerpos, o los fragmentos de unión al anticuerpo de los mismos, se pueden usar como componentes de unión específica para angiogénesis en un uso preferido de la presente invención. Los anticuerpos particularmente preferidos son L19, E8, AP 38 y AP 39 o fragmentos que comprenden el dominio de unión de los mismos. Los anticuerpos para VEGF-R incluyen Bevacizumab (Avastin™, rhumAb-VEGF desarrollado por Genentech y Roche), el anticuerpo mAb 6.12 anti-VEGFR-1 , los anticuerpos IMC-2C6 e IMC-1121 anti-VEGFR 2 completamente humanos, los mAb HF4-3C5 (alt Imclone Systems Inc.) y KM-2550 (Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd.) anti-VEGFR-3 completamente humanos, un anticuerpo anti-VEGFR-1 (Salgaller ML (2003) Current Opinión in Molecular Therapeutics 5(6):657-667). Los anticuerpos para endoglina incluyen: SN6h, SN6, SN6a, SN6j, P3D1 , P4A4, 4464, GRE, E-9, CLE-4, RMACB, PN-E2, MAEND3, TEC4, TEC11 , A11 , 8E11. El clon SN6h se ha utilizado ampliamente para estudiar la expresión de la endoglina en diferentes entidades tumorales mediante inmunohistoquímica (Wikstróm P. et al. (2002) The Prostate 51 :268-275; Li C. et al. (2003) Br. J. Cáncer 88 1424-1431 , Saad R S et al (2004) Modern Pathol 17 197-203) Se han descrito los anticuerpos SN6, SN6a y SN6j pertenecientes de la misma sene SN6 (She X et al (2004) Int J Cáncer 108 251-257) Se han determinado los epitopes de unión de endoghna para los clones de anticuerpo P3D1 , P4A4, 4464, GRE, E-9, CLE-4, RMAC8, PNE2, MAEND3, TEC4, TEC11 (Pichuantes S, et al (1997) Tissue antigens 50 265-276) Algunos de estos anticuerpos y el clon de anticuerpo A11 fueron investigados en la expresión diferencial de endoglina en tejidos normales y tumorales de origen humano (Duff S E et al (2003) FASEB J 17 984-992) En WO 02/02614 se describen otros anticuerpos específicos de endog na.p ej scFv C4 En una de las últimas publicaciones sobre anticuerpos contra CD105, se investigó el clon 8E11 por su capacidad de predicción de riesgo metastásico en pacientes con cáncer de mama mediante inmunohistoquímica (Dales J.P et al (2004) Br J Cáncer 90 1216-1221) Todos estos anticuerpos.o fragmentos de unión al anticuerpo de los mismos, pueden usarse como componente de unión específico de la angiogénesis en un uso preferido de la presente invención Además, en la técnica antepor se describen muchos anticuerpos, o fragmentos de unión de los mismos, que se unen específicamente ellos mismos a diversas células tumorales e incluyen, a modo de ejemplo, anticuerpos contra receptores acoplados a la proteína G, proteínas de los poros, canales iónicos, bombas de eflujo de drogas, sitios de unión accesorios para los factores de crecimiento, sulfato de heparano, proteasas unidas a membrana, moléculas de adhesión, receptores de células T y selectinas, en particular EGF, TGF, CEA, Lewis Y, CD 20, CD 33 o CD38 Aun más, se pueden utilizar anticuerpos, o fragmentos de unión de los mismos, contra antígenos asociados con cáncer definido por células T que pertenecen a los productos genéticos únicos de genes celulares mutados o recombinados, en particular quinasa 4 dependiente de ciclina (CDK4), p15lnk4b, p53, AFP, ß-catenina, caspasa 8, p53, mutaciones p21Ras, producto de fusión Bcr-abl, MUM- 1 MUM-2, MUM-3, ELF2M, HSP70-2M, HST-2, KIAA0205, RAGE, miosina/m, 707AP, CDC27/m, ETV6/AML, TEL/Aml1 , Dekcain, LDLR FUT, Pml-RARa, TEL/AMLI, antígenos del cáncer de testículo (CT), en particular NY-ESO-1 , miembros de la familia MAGE (MAGE-A1 , MAGE-A2, MAGE-A3, MAGE-A4, MAGE-A6 MAGE-10, MAGE-12), BAGE, DAM-6, DAM-10, miembros de la familia GAGE (GAGE-1 , GAGE-2, GAGE-3, GAGE-4, GAGE-5, GAGE-6, GAGE-7B, GAGE-8), NA-88A, CAG-3, antígeno 6250 asociado con RCC, antigenos de virus tumorales, en particular las oncoproteínas E6 o E7 derivadas del virus de papiloma humano (HPV), EBNA2-6 del virus de Epstein Barr, LMP-1 , LMP-2, antigenos de la diferenciación sobreexpresados o específicos de tejidos, en particular gp77, gp100, MART-1/Melan-A, p53, tirosinasa, proteínas relacionadas con tirosinasa (TRP-1 y TPR-2), PSA, PSM, MC1R, antigenos de expresión amplia, en particular ART4, CAMEL, CEA, CypB, HER2/neu, hTERT, hTRT, ICE, Mucl, Muc2, PRAME RU I, RU2, SART-1 , SART-2, SART-3 y WTI Es bien sabido en la técnica que los ácidos nucleicos pueden poseer propiedades de unión específicas, por lo cual el componente de direccionamiento también puede ser un ácido nucleico Preferentemente, dichos ácidos nucleicos incluyen ADN, ARN, aptámeros y PNA, siendo los aptá-meros particularmente preferidos Los métodos para identificar específicamente aptámeros de unión son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en WO 93/24508 Al, WO 94/08050 A1 , WO 95/07364 A1 , WO 96/27605 Al y WO 96/34875 A1 Los métodos descritos en di-chos documentos se citan específicamente como referencias y se pueden usar en la identificación de aptameros, que se unen específicamente a tejidos en proliferación o a tejidos próximos a los tejidos en proliferación, tal como el endote o recién formado y/o en proliferación Los compuestos de direccionamiento particularmente preferidos para el uso de la presente invención son los aptámeros de unión específicos de la angiogénesis Los aptámeros preferidos empleados en el uso de la presente invención reconocen específicamente ED-BF, endoglina o VEGFR Con el advenimiento de la detección de gran rendimiento de pequeñas moléculas, es decir compuestos que no son peptidilo, que no son ácidos nucleicos, de un peso molecular menor que 1 ,000 g/mol, preferentemente menor que 500 g/mol, ha sido posible identificar pequeñas moléculas con propiedades de unión particulares Dichas pequeñas moléculas se pueden emplear igualmente como un componente de direccionamiento en el uso de la presente invención Una molécula pequeña preferida es la 2,2-d?fen?let?lam?na, que se identificó por unirse específicamente al ED-BF (Scheuermann J. (2002) Isolation of binding molecules to the EDB domain of fibronectin, a marker of angiogenesis. Disertación enviada a la Swiss Federal Inst. of Technology, Zurich). Los compuestos de díreccionamíento precedentes pueden acoplarse a los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular a SF64, 5-29, 5-36 y/o 5-41 mediante un enlace directo o indirecto. En este contexto el término "enlace directo" significa un enlace covalente con un residuo del compuesto de direccionamiento, en tanto el término "enlace indirecto", tal como se utiliza en la presente, significa que uno o más residuos químicos adicionales unidos mediante un enlace covalente o no covalente está ubicado entre el colorante SF64 y el compuesto de direccionamiento. Dichos uno o más residuos químicos adicionales también se conocen como "es-paciadores". Un espaciador puede proveer, por ejemplo, una separación espacial entre el compuesto de direccíonamiento y el colorante SF64. Se conocen diversos métodos para acoplar los compuestos utílizables de acuerdo con la presente invención y en particular los colorantes de cía-nina SF64, 5-29, 5-36 y/o 5-41 a un compuesto de direccionamiento, definido precedentemente, en la técnica y habítualmente comprenden introducir funcionalidades reactivas en el colorante, sinteti-zar al colorante como un derivado con funcionalidades reactivas y/o en el compuesto de direccionamiento, que puede formar enlaces covalentes. Dichos grupos incluyen, por ejemplo, grupos tio, hidroxi, amino o carboxi. Para los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular para SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 , el acoplamiento se puede efectuar por cualquiera de los grupos indol y/o de los grupos metilo en la posición 3 del heterociclo indol o en el grupo metilo ubi-cado en el medio del heptatrieno o se puede efectuar por cualquiera de los residuos de carbono del heptatrieno. Además, el acoplamiento entre el compuesto de direccionamiento y los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 se puede efectuar por las cadenas de alquilo ligadas al nitrógeno del ¡ndol. Preferentemente, el compuesto de direccíonamiento se acopla a uno de los grupos metilo en la posición 3 del indol o al grupo 4-metilo del heptatrieno. El término "ligando de receptores" se refiere a polipéptidos que se unen específicamente a receptores sobre la superficie celular, es decir que son compañeros de unión naturales del receptor La interacción entre el receptor y su ligando puede tener diferentes consecuencias, por un lado es posible que el ligando y el receptor simplemente actúen como un enlace entre, por ejemplo, dos células o que la unión pueda conducir a un cambio funcional o en la conformación del receptor, lo que a su vez puede dar como resultado, por ejemplo, la activación de una función enzimática del receptor o la asociación del receptor con otros componentes nuevos y/o diferentes dentro de la membrana celular, en el sitio extracelular o en el sitio citoplasmático de la membrana celular En este contexto, los ligandos pueden tener un efecto agonista o antagonista sobre la función del receptor Los gandos de receptores, según el significado en la invención, también comprenden li-gandos modificados, que podrían contener aminoácidos N- o C-terminales adicionales o en los cuales se han sustituido aminoácidos sin una disminución significativa de la actividad de unión al receptor En este contexto, una disminución en más de un 90% se considera significativa Preferentemente, los ligandos modificados muestran un incremento en la unión específica Los ejemplos de dichos ligandos de receptores son VEGF, somatostatina y análogos de la misma, bombesma o y análogos de bombesina, el péptido intestinal vasoactivo (VIP) y análogos, neurotensma y análogos de neurotensina, el neuropéptido Y y análogos del mismo Preferentemente, el compuesto de acuerdo con la formula (I) y/o (lll) a (VI) anteriores se usa en la forma de la sal de sodio, no obstante, también es posible usar otras sales aceptables para uso farmacéutico además de o en lugar de la sal de sodio, es decir se puede sustituir uno o más iones de sodio en la molécula por uno o más cationes orgánicos o inorgánicos adicionales aceptables para uso farmacéutico incluyendo otros iones de metales alcalinos, como potasio, metales al-calino-térreos, tal como magnesio, calcio y semejantes, cationes orgánicos.tal como tpetilamonio, tpbutilamonio, pindinio y semejantes, sales de aminoácidos, tal como sma, arginina y semejantes Una sal de sodio particularmente preferida del compuesto que se puede emplear de acuerdo con la presente invención se ilustra en la formula (Vil) Las enfermedades proliferativas que pueden ser diagnosticadas usando la cantidad indicada del compuesto que se puede emplear de acuerdo con la presente invención se seleccionan preferentemente del grupo formado por un tumor, una precancerosis, una displasia, una metaplasia, psoriasis, artritis psoriática, artritis reumatoide, endometríosis y/o una enfermedad oftalmológica. Las enfermedades proliferativas preferidas, que se pueden diagnosticar, comprenden tumores. Los tumores se pueden diferenciar además en tumores primarios o metástasis de los mismos. A menudo la célula en metástasis crece más rápidamente, presenta menos dependencia del anclaje, tiene una ploidía cromosómica más alta y ha alcanzado la capacidad para extravasarse de la circulación debido a la expresión de metaloproteinasas de la matriz de tipo proteasas, p.ej. colagenasas, y semejantes. Por lo tanto, el tumor es diagnosticado preferentemente antes de entrar en metástasis. Aunque el riesgo de entrar en metástasis de los tumores primarios en general incrementa con el tamaño, algunos tumores como, p.ej., los melanomas a menudo forman metástasis cuando su tamaño es de tan solo uno o unos pocos milímetros en tanto otros tumores son mucho menos propensos a una diseminación temprana de células tumorales por todo el cuerpo como, p.ej., el cáncer de próstata. Una ventaja significativa del uso de la presente invención es la capacidad para detectar lesiones proliferativas de tamaño pequeño, en particular tumores primarios. Preferentemente, la lesión proliferativa detectada es menor que 10 mm, preferentemente menor que 9 mm, preferentemente menor que 8 mm, preferentemente menor que 7 mm, preferentemente menor que 6 mm, preferentemente menor que 5 mm y más preferentemente menor que 4 mm. Preferentemente, el tumor diagnosticado de acuerdo con el uso de la presente invención es un malignoma del tracto gastrointestinal o colorrectal, hígado, páncreas, riñon, vejiga, tiroides, próstata, endometrio, ovario, testículo, melanoma, mucosa oral displásica, cáncer oral invasiva, carcinoma de pulmón de células pequeñas o de células no pequeñas; un tumor mamario, incluyendo cáncer de mama dependiente de hormonas, cáncer de mama no dependiente de hormonas; cáncer de células de transición y escamosas; formas malignas neurológicas ¡ncluyendo neuroblas-toma, gliomas, astrocítomas, osteosarcoma, meningioma; sarcoma de tejidos blandos; heman-gioama y tumores endocrinológicos, incluyendo adenoma pituitario, feocromocitoma, paraganglio-ma, una forma maligna hematológica incluyendo linfoma y leucemia o las metástasis originarias de uno de los tumores mencionados precedentemente. Los tumores particularmente preferidos son los tumores de mama, cérvíx, próstata, testículo, donde el órgano/tejido a partir se desarrolla el tumor es fácilmente asequibles desde el exterior o por medios endoscópicos. La precancerosis, que es detectable de acuerdo con el uso de la presente invención, se selecciona preferentemente del grupo formado por precancerosís de la piel, en particular queratosis actínica, cuerno cutáneo, queilitis actínica, queratosis por alquitrán, queratosis por arsénico, queratosis por rayos X, enfermedad de Bowen, papulosis bowenoide, lentigo maligno, liquen escleroso y liquen rojo de la mucosa; precancerosis del tracto digestivo, en particular eritroplaquia, leucopla-quia, esófago de Barrett, síndrome de Plummer-Vinson, úlcera crural, gastropatía hipertrófica gigante, carcinoma borderline, pólipo intestinal neoplásico, pólipo rectal, vesícula en porcelana; precancerosis ginecológica, en particular carcinoma ductal in situ (CDIS), neoplasia intraepitelial cervical (CIN), leucoplaquía, hiperplasia del endometrío (grado lll), distrofia vulvar, neoplasia intraepite-lial vulvar (VIN), mole hidatidiforme; precancerosis urológica, en particular papilomatosis de vejiga, eritroplasia de Queyrat, neoplasia intraepitelial testicular (TIN), leukoplaquia; carcinoma in situ (CIS); precancerosis causada por inflamación crónica, en particular pioderma, osteomielitis, acné conglobata, lupus vulgar y fístula. La displasia es con frecuencia un precursor del cáncer, y se observa principalmente en los epitelios; es la forma más desordenada de crecimiento de células no neoplásícas, que comprende una pérdida de la uniformidad celular individual y de la orientación arquitectónica de las células.

Las células displásicas a menudo poseen núcleos anormalmente grandes, fuertemente teñidas, y exhiben pleomorfismo La displasia se produce característicamente cuando existe una irritación o inflamación crónica Los trastornos displásicos que pueden ser diagnosticados de acuerdo con la presente invención incluyen, a modo de ejemplo, displasia ectodérmica anhidrótica, displasia ante-rofacial, displasia torácica asfixiante, displasia atpodigital, displasia broncopulmonar, displasia cerebral, displasia cervical, displasia condroectodérmica, displasia cleidocraneal, displasia ectodérmí-ca congenita, displasia craneodiafisapa, displasia craneocarpotarsal, displasia craneometafisapa, displasia de dentina, displasia diafisapa, displasia ectodérmica, displasia del esmalte, displasia encéfalo-oftálmica, displasia epifisapa hemimélica, displasia epifisana múltiple, displasia epifisapa punctata, displasia epitelial, displasia faciodigitogenital, displasia fibrosa familiar de la mandíbula, displasia familiar de pliegues blancos, displasia fibromuscular, displasia fibrosa de los huesos, dis-plasia osea florida, displasia renal-retinal hereditaria, displasia ectodér ica hidrótica, displasia ec-todérmica hipohidrótica, displasia tímica linfopénica, displasia mamaria, displasia mandibulofacial, displasia metafísica, displasia de Mondini, displasia fibrosa monostótica, displasia mucoepite al, displasia epifisapa múltiple, displasia oculoaunculovertebral, displasia oculodentodigital, displasia oculovertebral, displasia odontogénica, displasia oftalmomandibulomélica, displasia cemental pe-papical, displasia fibrosa po ostotica, displasia espondiloepifisapa pseudoacondroplásica, displasia retinal, displasia septo-óptica, displasia espondiloepifisana y displasia ventnculorradial La metaplasia es una forma de crecimiento celular controlado en la cual un de célula adulta o completamente diferenciada es sustituida por otro tipo de célula adulta Los trastornos metaplási-cos, que son detectables de acuerdo con el uso de la presente invención, se seleccionan preferentemente del grupo formado por metaplasia mieloide agnogénica, metaplasia apócnna, metaplasia atípica, metaplasia autoparenquimatosa, metaplasia del tejido conectivo, metaplasia epitelial, me-taplasia intestinal, anemia metaplasica, osificación metaplásica, pólipos metaplásicos, metaplasia mieloide, metaplasia mieloide primaria, metaplasia mieloide secundaria, metaplasia escamosa, me-taplasia escamosa del amnios, metaplasia mieloide sintomática y metaplasia regenerativa La enfermedad oftalmológica, que es detectable de acuerdo con el uso de la presente invención, se selecciona preferentemente del grupo formado por tracoma, retinopatía del prematuro, retinopatía diabética, glaucoma neovascular y degeneración macular relacionada con la edad. La endometriosis es una enfermedad ginecológica definida por la proliferación de tejido del endometrio fuera de la cavidad uterina. Las células del endometrio proliferativo se pueden distribuir por todo el cuerpo y se han encontrado lesiones de endometrio en pulmón y en otros órganos y en ese sentido la distribución de las lesiones de endometrio asemejan la distribución de micrometás-tasis. En una realización preferida del uso de la presente invención, las lesiones endométricas.p.ej. agrupaciones de células del endometrio, son detectadas son agrupaciones de células hematogéni-cas, agrupaciones de células de cavidades, agrupaciones de células intraluminales, agrupaciones de células linfáticas, agrupaciones de células locales y/o agrupaciones de células regionales. El uso de la presente invención puede ser para un diagnóstico de rutina, es decir, para la detección de las enfermedades indicadas respectivamente. Sin embargo, en una realización adicional se usan los conjugados una vez que se ha diagnosticado la enfermedad con, p.ej., un pro-cedimíento estándar de rayos X, p.ej. mamografía, un escaneado [sean] de cuerpo entero o MRI. El paciente es examinado por metástasis y/o uno o más tumores primarios pequeños (adicionales). Dicho examen puede realizarse para una mejor evaluación de la severidad, p.ej. la etapa de la enfermedad, o para determinar las mejores opciones de tratamiento y/o antes, durante y/o después de un procedimiento de tratamiento (p.ej. drogas, radiación o cirugía). Si el uso de presente ¡nven-ción se aplica antes de un procedimiento de tratamiento, debido a su gran sensibilidad, permite determinar si, p.ej., ya se han formado metástasis en la proximidad del tumor primario, y, por lo tanto permite también determinar mejor el régimen de tratamiento, p. ej. si corresponde una lumpectomía o una mastectomía en el cáncer de mama. Después del tratamiento, el uso del procedimiento de diagnóstico de la presente invención permite evaluar el éxito del procedimiento de tratamiento y determinar los regímenes de tratamiento subsiguientes, p.ej. radiación o quimioterapia. Cuando se usa durante un procedimiento quirúrgi- co es posible, p.ej., detectar metástasis en los tejidos, p.ej. nodulos linfáticos, que rodean al tumor primario. En esta realización, el uso de la presente invención permite una remoción más completa de los tumores o metástasis durante un procedimiento quirúrgico. En un aspecto adicional del uso de la presente invención, la composición de diagnóstico además comprende materiales aceptables para uso farmacéutico tales como, por ejemplo, sales aceptables para uso farmacéutico para ajustar la presión osmótica.solucíones amortiguadoras, conservantes, vehículos y/o excipientes. Preferentemente, la composición de diagnóstico es suministrada en una forma libre de pirógenos aceptable para uso farmacéutico parenteral, que puede ser una solución acuosa o un liofilizado para su reconstitución antes de la administración. La prepa-ración de dicha composición farmacéutica teniendo en cuenta la isotonicidad de pH, estabilidad y semejantes es propia del conocimiento de los especialistas en la técnica. Las composiciones de diagnóstico usadas de acuerdo con la presente invención pueden incluir diluyentes aceptable para uso farmacéutico, tales como, p.ej., cloruro de sodio para inyectables y Ringer para inyectables. Para la administración a seres humanos, la composición se puede administrar en suero o plasma autólogo. En un uso preferido de la presente invención, el compuesto diagnóstico es administrado por vía parenteral y más preferentemente por vía intravenosa. Después de la administración intravenosa de uno o más de los compuestos utiliza-bles de acuerdo con la presente invención y en particular de SF46, 5-29, 5-36 y 5-41 , se pueden obtener las imágenes in vivo en términos de unos pocos minutos. Sin embargo, la exploración de imágenes puede tener lugar, si se desea, horas o aún más después de haber inyectado uno o más de los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 en el paciente. En la mayoría de los casos, se acumulará una cantidad suficiente de la dosis administrada en el área donde se van a obtener las imágenes dentro de aproximadamente 0,1 hora. Al usar uno o más de los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 se ha encontrado sorpresivamente que el agente de contraste permitió obtener imágenes de los tumores hasta 48 h después de la inyección. Esto representa una ventaja adicional con respecto a la técnica anterior de colorantes dado que permite la administración del compuesto que se puede usar de acuerdo con la presente invención uno o aún dos días antes del uso de DOT, p.ej., por parte del especialista a cargo de1 paciente, lo que después permite obtener imágenes de forma inmediata de dicho paciente en un centro de diagnóstico especializado sin necesidad de inyectar el colorante en el centro de diagnóstico y permite la distribución del agente de contraste el día que se llevó a cabo la DOT. Por lo tanto, en una realización preferida el compuesto de diagnóstico es administrado al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47 ó 48 h antes de obtener las imágenes. Como se mencionara precedentemente, se ha encontrado sorpresivamente que se han descpto cantidades de colorantes de cianina utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular de SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 para otros colorantes de cianina tipo ICG que son suficientes para proveer la sensibilidad y especificidad necesaria para la detección de enfermedades proli-ferativas. Sin embargo, en una realización preferida del uso de acuerdo con la presente invención el compuesto de acuerdo con la fórmula (I) está incluido en la composición de diagnóstico en una cantidad que comprende aproximadamente 0,4, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,2, 0,1 , menos que 0,1 , aproximadamente 0,09, aproximadamente 0,08, aproximadamente 0,07, aproximadamente 0,06, aproximadamente 0,05, aproximadamente 0,04, aproximadamente 0,03, apro-ximadamente 0,02 y aproximadamente 0,01 mg/kg de peso corporal. En consecuencia, los rangos prefepdos de el o los compuestos utilizables de acuerdo con la presente invención y en particular de SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 que se pueden administrar comprenden entre 0,4 y 0,001 , entre 0,2 y 0,001 , entre 0,1 y 0,001 , entre menos de 0,1 y 0,001 , entre 0,09 y 0,001 , entre 0,008 y 0,001 , entre 0,06 y 0,001 , entre 0,05 y 0,001 mg por kg de peso corporal. Debido a la gran hidrofilicidad y la alta solubilidad en agua, los volúmenes inyectables de los compuestos de la presente invención y en particular de SF46, 5-29, 5-36 y/o 5-41 para los pacientes pueden ser tan bajos como 1 ml, lo que es significativamente menos que las inyecciones usadas actualmente que exceden los 10 ml. Por ello, en una realización preferida del uso de acuerdo con la presente invención, el compuesto acorde con la fórmula (I) está contenida en menos que 5 ml, preferentemente menos que 4 ml, preferentemente menos que 3 ml, preferentemente menos que 2 ml y aún más preferentemente en 1 ml aproximadamente de composición de diagnóstico. Un aspecto adicional de la presente invención es un conjunto de elementos de diagnóstico que comprende uno o más compuestos de la fórmula (I) y/o (lll) a (VI) en una cantidad que permite preparar una composición de diagnóstico para administrar entre menos que 0,5 y 0,001 mg/kg de peso corporal, preferentemente entre 0,4 y 0,001 , entre 0,2 y 0,001 , entre 0,1 y 0,001 , entre menos que 0,1 y 0,001 , entre 0,09 y 0,001 , entre 0,008 y 0,001 , entre 0,06 y 0,001, entre 0,05 y 0,001 mg/kg de peso corporal del compuesto por aplicación de diagnóstico y, opcionalmente, una sal, vehículo, excipiente y/o solución amortiguadora aceptable para uso farmacéutico definido precedentemente. Preferentemente, el conjunto de elementos comprende al compuesto y componentes opcionales adicionales en una forma liofilizada. Se considera que sin mayor elaboración, un especialista en el arte puede utilizar la presente invención en su grado más completo usando la presente descripción. Los siguientes Ejemplos deben considerarse, entonces, como meramente ilustrativos y no en un sentido limitativo de la descripción en modo alguno. Eiemplos Mamografía óptica después de inyección i.v. de SF64 en una paciente con cáncer de mama invasivo en la mama derecha. Se inyectó una dosis de SF64 a 0,1 mg/kg de peso corporal, después de diluir del liofilizado con salina normal 0,9%, por vía intravenosa a través de una cánula permanente en el antebrazo. Se obtuvieron las imágenes del paciente con un dispositivo para mamografía láser tomográfico computado óptico en una posición adecuada, con la mama colgando libremente dentro de la cámara de producción de imágenes, estando rodeado de aire. La adquisición de las imágenes comenzó 1 hora y 10 minutos después de la inyección i.v. de SF64 y se efectuó una reconstrucción de imágenes usando la modalidad de fluorescencia, con lo cual se observaba casi exclusivamente la señal de fluorescencia de SF64. El colorante de contraste se acumuló en este cáncer de mama invasivo, que está representado en la imagen por la mancha brillante. Esto condujo a la marcada señal de fluorescencia de SF64 en la imagen. Determinación del rendimiento cuántico de fluorescencia de diversos colorantes de tricar- bocianina Los compuestos 6-4, 5-36, 5-29. 5-41 , NIR96009, NIR96005 e ICG (véase la Tabla 1 ) fueron evaluados por sus rendimientos cuánticos de fluorescencia a una concentración de 2 µM ya sea en agua o plasma. Resulta evidente a partir de la Tabla 2 que una sustitución en el medio del colorante de tricarbocianina mejora el rendimiento cuántico de fluorescencia en ambos medios.

Tabla 2 Licha et al., Proceedings of the SPIE, Vol. 2927 (Bellingham, VA, EE.UU.), 1996, págs. 192-198 Obtención de imágenes de micrometástasis en ratones desnudos con tumores Capan-1 Se tripsinizaron células de tumores Capan-1 cultivadas hasta subconfluencia en cultivo, se centrifugaron y se volvieron a suspender en PBS. Después de teñirlas con azul Trypan y calcular la concentración celular, la suspensión de células se definió en una concentración de 3 x 107/ml. La suspensión de células se enfrió sobre hielo hasta el momento del uso.Se anestesiaron tres ratones desnudos hembra (NMRI-desnudo, 24-25 g de peso corporal) y se inocularon 30 µl (1 x 106 células/animal) de la suspensión de células por vía subcapsular en el páncreas en cada animal después de efectuarles una incisión abdominal. Cada animal recibió 0,05 µmol/kg de peso corporal (0,04 mg de colorante por kg de peso corporal) de una sustancia que comprende un colorante de cianina que posee la estructura representada en la Fig. 2, que había sido conjugado con el anticuerpo AP39 EB-DF (véase Marty C, et al. (2001 ) Protein Expr.Purif.21 :156-64).Esta sustancia fue administrada por vía intravenosa en el momento en que era claramente palpable el crecimiento de un tumor (aproximadamente 12 a 14 semanas después del implante de células tumorales). Los animales fueron sacrificados 6 horas después de una administración por vía intravenosa de la sustancia y se obtuvieron imágenes del mesenterio que contenía micrometástasis ex vivo para señales de fluorescencia usando una cámara CCD intensificada. La fluorescencia de la sustancia fue excitada por irradiación del mesenterio con luz infrarroja cercana con una longitud de onda de 740 nm.que era producida con un diodo láser (0,5 W de salída).Las imágenes por fluorescencia se guardaron digitalmente.A continuación, se evaluó el tamaño de las micrometástasis usando un microscopio con poco aumento (Stemi 2000-C,Fa. Cari Zeis).Se recibieron señales de fluorescencia de micrometástasís con un rango entre 0,5 y 2,0 mm de diámetro y de metástasis mesentéricas más grandes y se corresponden con la evaluación con microscopio.La eficacia de los conjugados de colorante se muestran en la Fig. 2, panel derecho. Obtención de imágenes in vivo de microlesiones espontáneas de la piel en ratones desnudos Se observaron múltiples microlesiones espontáneas en la piel en dos ratones desnudos NMR. Cada ratón recibió, por vía intravenosa, 0,05 µmol/kg de peso corporal (0,04 mg de colorante por kg de peso corporal) de un conjugado del colorante AP39 representado en la Fig. 2. La obten-ción de imágenes se efectuó en ratones anestesiados 6 horas después de administrar la sustancia. Se indujo una anestesia breve usando el anestésico para inhalación isoflurano (Isofluran Curamed, Curamed Pharma GmbH, Karlsruhe, Alemania) La fluorescencia de la sustancia se excitó con un diodo láser (longitud de onda de excitación de 742 nm, diodo láser, 0,5 W de salida) y se detectó usando una cámara CCD intensificada Las imágenes por fluorescencia se guardaron digitalmente A continuación, se evaluó el tamaño de las microlesiones usando un microscopio de poco aumento (Stemí 2000-C, Fa Cari Zeis) Se recibieron señales de fluorescencia de microlesiones que eran hasta < 1 mm La eficacia de los conjugados de colorante se muestra en la Fig 3 basado en un ejemplo representativo

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Uso de un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo en la preparación de una composición de diagnóstico para detectar una enfermedad proliferativa, donde la composición de diagnóstico comprende al compuesto en una cantidad menor que 0,5 y mayor que 0,001 mg/kg de peso corporal por aplicación de diagnóstico. 2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 , donde el compuesto está acoplado a un compuesto de direccionamiento. 3. El uso de acuerdo con la reivindicación 2, donde el compuesto de direccionamiento se selecciona del grupo formado por los compuestos de direccionamiento que consisten de un polipéptido, un ácido nucleico, una pequeña molécula o un azúcar. 4. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el polipéptido se selecciona del grupo formado por el ligando de un receptor, un anticuerpo, un anticuerpo de cadena simple o un fragmento de unión de un anticuerpo o de un anticuerpo de cadena simple. 5. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la enferme-dad proliferativa se selecciona del grupo formado por un tumor, una precancerosís, una displasia, una metaplasia, psoriasis, artritis psoriática, artritis reumatoide, endometriosis y/o una enfermedad oftalmológica. 6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde el tumor es un tumor primario o una metástasis. 7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde el tumor es un malignoma del tracto gastrointestinal o colorrectal, hígado, páncreas, riñon, vejiga, tiroides, próstata, endometrio, ovario, testículo, melanoma, mucosa oral displásica, cáncer oral invasivo, carcinoma de pulmón de células pequeñas o de células no pequeñas; un tumor mamario, incluyendo cáncer de mama dependiente de hormonas, cáncer de mama no dependiente de hormonas; cáncer de células de transición y escamosas; formas malignas neurológicas incluyendo neuroblastoma, gliomas, astrocito-mas, osteosarcoma, meningioma; sarcoma de tejidos blandos; hemangioama y tumores endocrino-lógicos, incluyendo adenoma pituitario, feocromocitoma, paraganglíoma, una forma maligna hematológica incluyendo línfoma y leucemia o las metástasis originadas en uno de tumores mencionados precedentemente. 8. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde el compuesto de diagnóstico es administrado durante la detección del tumor o antes, durante o después de una cirugía. 9. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la precancerosis se selecciona del grupo formado por precancerosis de la piel, en particular queratosis actínica, cuerno cutáneo, queilitis actínica, queratosis por alquitrán, queratosis por arsénico, queratosis por rayos X, enfermedad de Bowen, papulosis bowenoide, lentigo maligna, liquen escleroso y liquen rojo de la mucosa; precancerosis del tracto digestivo, en particular eritroplaquia, leucoplaquia, esófago de Barrett, síndrome de Plummer-Vinson, úlcera crural, gastropatía hipertrófica gigante, carcinoma borderline, pólipo intestinal neoplásíco, pólipo rectal, vesícula en porcelana; precancerosis ginecológica, en particular carcinoma ductal in situ (CDIS), neoplasia intraepitelial cervical (CIN), leucoplaquia, hiperplasia del endometrio (grado lll), distrofia vulvar, neoplasia intraepítelial vulvar (VIN), mole hidatidiforme; precancerosis urológica, en particular, papilomatosis de vejiga, eritroplasia de Quey-rat, neoplasia intraepitelial testicular (TIN), leukoplaquia; carcinoma in situ (CIS); precancerosis causada por inflamación crónica, en particular pioderma, osteomielitis, acné conglobata, lupus vul- gar y fístula 10 El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la metaplasia se selecciona del grupo formado por metaplasia mieloide angiogenica, metaplasia apocnna, metaplasia atipica, me-taplasia autoparenquimatosa, metaplasia del tejido conectivo, metaplasia epitelial, metaplasia intes-tmal, anemia metaplasica, osificación metaplasica, pólipos metaplasicos, metaplasia mieloide, me-taplasia mieloide primaria, metaplasia mieloide secundaria, metaplasia escamosa, metaplasia escamosa del amnios, metaplasia mieloide sintomática y metaplasia regenerativa 11 El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la displasia se selecciona del grupo formado por displasia ectodermica anhidrotica, displasia anterofacial, displasia torácica as-fixiante, displasia atnodigital, displasia broncopulmonar, displasia cerebral, displasia cervical, dis-plasia condroectodermica, displasia cleidocraneal,, displasia ectodermica congénita, displasia cra-neodiafisapa, displasia craneocarpotarsal, craneometafisana displasia, displasia de dentina, dis-plasia diafisapa, displasia ectodermica, displasia del esmalte, displasia encéfalo-oftálmica, displasia epifisapa hemimelica, displasia epifisana múltiple, displasia epifisapa punctata, displasia epitelial, displasia faciodigitogenital, displasia fibrosa familiar de la mandíbula, displasia familiar de pliegues blancos, displasia fibromuscular, displasia fibrosa de los huesos, displasia ósea florida, displasia renal-retinal hereditaria, displasia ectodermica hidrotica, displasia ectodermica hipohidrotica, dis-plasia ti ica linfopenica, displasia mamaria, displasia mandibulofacial, displasia metafísica, displa-sia de Mondini, displasia fibrosa monostotica, displasia mucoepitehal, displasia epifisana múltiple, displasia oculoaupculovertebral, displasia oculodentodigital, displasia oculovertebral, displasia odontogenica, displasia oftalmomandibulomelica, displasia cemental penapical, displasia fibrosa poliostotica, displasia espondiloepifisana pseudoacondroplasica, displasia retinal, displasia septo-optica, displasia espondiloepifisapa y displasia ventnculorradial 12 El uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la enfermedad oftalmológica se selecciona del grupo formado por tracoma, retinopatia del prematuro, retinopatía diabética, glaucoma neovascular y degeneración macular relacionada con la edad 13. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde la composición de diagnóstico además comprende una sal, vehículo, excipiente y/o solución amortiguadora aceptable para uso farmacéutico. 14. El uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, donde el com-puesto está incluido en la composición de diagnóstico en una cantidad que comprende 0,1 o menos mg/kg de peso corporal. 15. Un conjunto de elementos de diagnóstico que comprende el compuesto de la fórmula (1 ) acorde con la reivindicación 1 o una sal aceptable para uso farmacéutico del mismo, en una cantidad que permite preparar una composición de diagnóstico para su administración que comprende menos que 0,5 y más que 0,001 mg/kg de peso corporal del compuesto por cada aplicación de diagnóstico y, opcionalmente, una sal, vehículo, excipiente y/o solución amortiguadora aceptable para uso farmacéutico.