MX2007006175A - Sal de tartrato de isofagomina y metodos de uso. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a una nueva sal de ácido tartárico de Isofagomina (tartrato de isofagomina) que se puede usar para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher. La invención también proporciona una forma cristalina de tartrato de isofagomina, método para preparar la sal, una composición farmacéutica que contiene la sal, y un método de tratamiento de la enfermedad de Gaucher.

Description

SAL DE TARTRATO DE ISOFAGOMINA Y METODOS DE USO ANTECEDENTES DE LA INVENCION La enfermedad de Gaucher es un trastorno del almacenamiento lisosomal que está asociado con la acumulación de glicoesfingolípidos (GSL) en células, particularmente raonocitos y macrófagos, de individuos afligidos. Este desarrollo aberrante de GSL resulta de una deficiencia genética (mutación) en el gen que codifica la enzima lisosomal ß-glucosidasa ácida (glucocerebrosidasa , GCasa) , la hidrolasa lisosomal que degrada los GSL glucosilceramida (GluCer) . La mayoría de las mutaciones del gen glucocerebrosidasa (Gba) causan que la proteína GCasa sea mal doblada en el retículo endoplásmico (ER, por sus siglas en inglés) . La GCasa mal doblada se reconoce por el sistema de control de calidad de ER y posteriormente se degrada en lugar de ser procesada y trasladada al lisosoma. La enfermedad de Gaucher es pan-étnica, con una frecuencia de enfermedad total de aproximadamente 1 en 50,000-100,000 nacimientos. Ciertas poblaciones tienen una frecuencia mayor. En la población de Judíos Ashkenazi, por e emplo, aproximadamente 1 de 15 personas son portadores de una mutación de Gba. De acuerdo con la Fundación Gaucher Nacional, aproximadamente 2,500 Americanos sufren de la enfermedad de Gaucher. Ref. 182791 La enfermedad de Gaucher es un trastorno recesivo autosomal y es la enfermedad de almacenamiento lisosomal más común. La enfermedad se ha clasificado en tres tipos clínicos, dependiendo de la complicación neurológica y severidad de la enfermedad. La tipo 1 es la más común y se caracteriza por una ausencia de complicación neurológica. Los pacientes exhiben un amplio espectro de severidad; algunos pueden permanecer asintomáticos durante toda la vida. La mayoría de los pacientes con tipo 1 exhiben alargamiento del bazo e hígado, anormalidades esqueléticas y lesiones óseas, y reacciones inflamatorias sostenidas. Los niveles glucocerebrósido hepático se elevan desde 23 veces a 389 veces los niveles normales anteriores en los pacientes con Gaucher Tipo 1. La enfermedad de Gaucher Tipo 2 es la forma más rara y más severa. Está asociada con el comienzo temprano de enfermedad neurológica aguda. El aspecto característico de la enfermedad de Gaucher neuronopática es una anormalidad de la mirada horizontal. Los pacientes afligidos desarrollan encefalopatía progresiva y síntomas extrapiramidales tales como rigidez y movimiento tipo Parkinson (parquinsonismo) . La mayoría de los pacientes con Gaucher Tipo 2 mueren muy niños de apnea o aspiración debido al deterioro neurologico. La enfermedad de Gaucher Tipo 3 también tiene complicación neurológica, aunque a un grado menor que la Tipo 2. Estos pacientes también tienen los defectos esqueléticos y hepatosplenomegalia característicos de la Tipo 1, así como síntomas del sistema nervioso central que incluyen pobre coordinación de movimientos (ataxia), ataques, parálisis de los músculos oculares, epilepsia, y demencia. Los pacientes con enfermedad de Gaucher Tipo 3 pueden vivir en edad adulta, pero pueden tener una duración de vida acortada. Se han reportado sub-clasificaciones de la Tipo 3: Tipo 3a, la cual está asociada con hepatosplenomegalia prominente y enfermedad de médula ósea; Tipo 3b, la cual está asociada con síntomas sistémicos limitados; y Tipo 3c, la cual está asociada con hepatosplenomegalia, opacidades corneales, ataxia progresiva y demencia, y calcificación de raíz aórtica y válvula cardiaca . Los procedimientos para el tratamiento de enfermedad de Gaucher incluyen terapia de reemplazo de enzimas (ERT, por sus siglas en inglés) , transplantes de médula ósea (BMT, por sus siglas en inglés) , terapia de reducción de sustrato (SRT, por sus siglas en inglés) , terapia de genes, y tratamiento con chaperona farmacológica. La isofagomina es un potente inhibidor de la ß-glucosidasa (GCasa) ácida humana recombinante . Los métodos con chaperona farmacológica para mejorar las actividades de enzima mutante en trastornos de almacenamiento lisosomal usando inhibidores de enzima tal como isofagomina se describen en las patentes de los Estados Unidos comúnmente apropiadas 6,916,829; 6,599,919; 6,589,964; 6,583,158, y 7,141,582 cada una de las cuales se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. Por ejemplo, la adición de un inhibidor de GCasa a un medio de cultivo de fibroblasto se ha mostrado que conduce a un incremento en el traslado y actividad lisosomal de GCasa, indicando que tal inhibidor puede ser de interés terapéutico en el tratamiento de la enfermedad de Gaucher. Recientemente se ha descubierto que existe un enlace entre las mutaciones en el gen Gba y la enfermedad de Parkinson. En un estudio, se encontró en un grupo de 17 pacientes con parquinsonismo resistente al tratamiento de comienzo temprano, raro que tienen al menos un alelo con una mutación con cambio de sentido de Gba, que incluyen individuos homocigoto y heterocigoto para N370S, una mutación típicamente asociada con la enfermedad no neuronopática tipo 1 (Tayebi et al., Mol. Genet . Metab. 2003; 79; 104-109). En otro estudio, se evaluó una población de 99 Judíos Ashkenazi con enfermedad de Parkinson idiopática para seis mutaciones de Gba (N370S, L444P, 84GG, V394L, y R496H) . Treinta y un pacientes con Parkinson tuvieron uno o dos alelos de Gba mutante; 23 fueron heterocigoto para N370S; 3 fuero homocigoto para N370S; 4 fueron heterocigoto para 84GG; y 1 fue heterocigoto para R496H (Aharon-Peretz et al., New Eng . J. Med. 2004; 351: 1972-77). La frecuencia de un alelo de N370S mutante fue 5 veces entre los 1572 sujetos normales, y de 84GG fue 21 veces que de los sujetos normales. Entre los pacientes con enfermedad de Parkinson, los pacientes que portan una mutación de Gba también estuvieron más jóvenes que aquellos quiénes no fueron portadores. Este estudio sugiere que la heterocigosidad para una mutación de Gba puede predisponer a los Judíos Ashkenazi a la enfermedad de Parkinson. Puesto que se ha mostrado que la isofagomina cruza la barrera sangre-cerebro en animales, e incrementa la actividad de GCasa tipo silvestre mutante, se puede usar para tratar pacientes con Parkinson quiénes tienen una mutación heterocigota en GCasa, o quiénes están en riesgo de desarrollar enfermedad de Parkinson debido a otros factores, pero quiénes pueden beneficiarse de los niveles incrementados de GCasa tipo silvestre. Aunque el compuesto de isofagomina es un inhibidor potente y selectivo de ß-glucosidasa (GCasa) ácida humana recombinante, su uso en productos farmacéuticos presenta desafíos. Por ejemplo, la sal de clorhidrato de isofagomina ( isofagomina-HCl ) se describe en la Patente de los Estados Unidos 5,844,102. Sin embargo, el isofagomina-HCl así como la base libre de isofagomina no son fácilmente purificados en una gran escala y tienen pobres propiedades en estado sólido para el uso en unos procesos de manufactura de escala industrial y formulaciones farmacéuticas..

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En una modalidad, la presente invención proporciona un compuesto de una sal de ácido tartárico de isofagomina o tartrato de isofagomina, representado por la siguiente estructura química: en donde n es 1 ó 2. La invención también proporciona tartrato de isofagomina con una alta pureza y en una forma cristalina . En otra modalidad, la invención proporciona una composición que contiene tartrato de isofagomina, preferiblemente al menos al menos 50%, preferiblemente 90%, y aún más preferiblemente 99%. La invención también proporciona una composición que contiene al menos 90% o más de tartrato de isofagomina donde 90% del tartrato de isofagomina tiene un tamaño de partícula de 1200 µp?. En otra modalidad, la invención proporciona una composición farmacéutica que contiene tartrato de isofagomina y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En otra modalidad, la invención proporciona un método para la preparación de un tartrato de isofagomina. Un método para preparar un tartrato de isofagomina altamente purificado también se proporciona.

Todavía, en otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar la enfermedad de Gaucher en un mamífero mejorando la actividad de GCasa en el mamífero administrando una cantidad farmacéuticamente efectiva de tartrato de isofagomina o sus composiciones farmacéuticas. En otra modalidad, la invención proporciona sal de ácido L- (+) -tartárico de isofagomina. La invención también proporciona un complejo de un ácido tartárico e isofagomina. En otra modalidad, la invención proporciona una forma cristalina de tartrato de isofagomina. Preferiblemente, la forma cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que incluye cinco o más picos de los siguientes picos: (2 theta) 9.29 ± 0.009, 14.17 ± 0.009, 16.34 ± 0.009, 18.07 ± 0.009, 18.72 ± 0.009, 19.44 ± 0.009, 20.56 ± 0.009, 22.13 ± 0.009, 23.01 ± 0.009, 24.54 ± 0.009, y 27.12 + 0.009. Más preferiblemente, la configuración de rayos x incluye los siguientes picos: (2 theta) 9.29, 14.17, 16.34, 18.07, 18.72, 19.44, 20.56, 22.13, 23.01, 24.54, y 27.12. Aún más preferiblemente, la forma cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que es sustancialmente la misma como la configuración mostrada en la figura 5.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra un espectro de masa usando positiva para tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 2 muestra una XH RM en D20 de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 3 muestra una 13C RMN en D20 de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 4 muestra una 13C RMN de eco de espín en D20 de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 5 muestra una configuración de difracción en polvo de rayos X de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 6 muestra un análisis termogravimétrico (TGA, por sus siglas en inglés) de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención . La figura 7 muestra un espectro infrarrojo de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 8A muestra una XH RMN (D20) de sal de L-(+) -tartrato de isofagomina (2:1) preparada de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 8B muestra una 1H RMN (D20) de sal de D-(- ) -tartrato de isofagomina (2:1) preparada de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 8C muestra una 1H RMN (D20) de sal de D- (-) -tartrato de isofagomina (1:1) preparada de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La figura 9 muestra los resultados del tartrato de IFG sobre la actividad de GCasa de individuos saludables. La figura 10 muestra un resultado de análisis de distribución de tamaño de partícula de isofagomina preparada de acuerdo con una modalidad de la presente invención.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Los términos usados en esta especificación generalmente tienen sus significados ordinarios en la técnica, dentro del contexto de esta invención y en el contexto específico donde cada término se usa. Ciertos términos se discuten posteriormente o en cualquier parte en la especificación, para proporcionar guía adicional al profesional en la descripción de las composiciones y métodos de la invención así como también cómo hacerlos y usarlos. El término "enfermedad de Gaucher" incluye Tipo 1, Tipo 2 y Tipo 3 (incluyendo 3a, 3b y 3c) , e intermediarios y subgrupos de los mismos basado en las manifestaciones fenotípicas . Los términos "cantidad efectiva" y "efectiva cantidad" se refieren a la cantidad que es suficiente para resultar en una respuesta terapéutica. Una respuesta terapéutica puede ser cualquier respuesta que un usuario (por ejemplo, un médico clínico) reconocerá como una respuesta efectiva a la terapia, incluyendo mejoramientos en los síntomas anteriores y marcadores clínicos sustitutos. Por consiguiente, una respuesta terapéutica generalmente será un alivio de uno o más síntomas de la enfermedad de Gaucher, por ejemplo, alivio de neurodegeneracion progresiva en pacientes con Gaucher Tipos 2 y 3. La "cantidad terapéuticamente efectiva" variará dependiendo de la formulación usada, el tipo de enfermedad de Gaucher y su severidad, y la edad, peso, condición física, y sensibilidad del mamífero a ser tratado. Una respuesta terapéutica también será un alivio de uno o más síntomas de la enfermedad de Parkinson, u otras a-sinucleinopatías tal como Demencia por Cuerpo de Lewy, para la cual el tartrato de isofagomina se contempla para tratamiento . La frase "farmacéuticamente aceptable" se refiere a entidades moleculares y composiciones que son fisiológicamente tolerables y típicamente no producen reacciones desfavorables a un nivel inaceptable cuando se administran a un humano. Preferiblemente, como se usa en la presente, el término "farmacéuticamente aceptable" significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno Federal o estatal o listada en la Farmacopea de los Estados Unidos u otra farmacopea generalmente reconocida para el uso en animales, y más particularmente en humanos. El término "portador" aplicado a composiciones farmacéuticos de la invención se refiere a un diluyente, excipiente, o vehículo con el cual el tartrato de isofagomina se administra. La elección del portador se puede seleccionar con respecto a la ruta de administración propuesta y práctica farmacéutica estándar. Las condiciones farmacéuticas pueden comprender como - o además de, el portador cualquiera de los aglutinantes, lubricantes, agentes de suspensión, agentes de revestimiento, agentes de solubilización adecuados. Tales portadores farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua, soluciones salinas, soluciones de dextrosa acuosa, soluciones de glicerol acuoso, y aceites, incluyendo aquellos de origen de petróleo, animal, vegetal, o sintético, tal como aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, y aceite se sésamo. Los portadores farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E.W. Martin, 18a Edición. En una modalidad particularmente preferida de la presente invención, el portador es adecuado para la liberación inmediata, por ejemplo, liberación de la mayoría o todo el ingrediente activo durante un período de tiempo corto, tal como 60 minutos o menos, y hacer la absorción rápida del fármaco posible.

Un "portador farmacéuticamente aceptable" significa un portador que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que generalmente es segura, no tóxica, y ni biológicamente ni de otra forma indeseable, e incluye un excipiente que es aceptable para el uso farmacéutico. Un "portador farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente solicitud incluye tanto uno como más de un portador. El término "grupo protector hidroxilo" se refiere a cualquier grupo protector común para hidroxilo para evitar reacciones indeseadas, tales como, pero no limitados a, metoximetilo , 4 -metoxibencilo , bencilo, dimetilisopropilsililo, trimetilsililo, y alquil carbonilo. "Individuos" se refiere a mamíferos, preferiblemente humanos, animales domésticos, roedores o primates, y más preferiblemente humanos. Un "individuo en necesidad de tratamiento" es un individuo que ha desarrollado, o probablemente desarrollará, enfermedad de Gaucher o una a- sinuclienopatía tal como enfermedad de Parkinson. En una modalidad, el individuo es un miembro de la población de Judíos Ashkenazi quién se ha diagnosticado o quién se ha identificado que tiene un riesgo incrementado de desarrollar enfermedad de Gaucher debido a mutaciones heredadas en el gen Gba . Sin embargo, el término "individuo" incluye cualquier en el mundo que tiene, o genéticamente está en riesgo de desarrollar, enfermedad de Gaucher, o en riesgo de desarrollar una a-sinucleinopatía tal como enfermedad de Parkinson. Como se usa en la presente, el término "mejorar" la actividad de GCasa significa estabilizar una conformación de una proteína de GCasa mutante en el ER de modo que i) se dobla en una conformación la cual permite que salga al ER, resultando en niveles incrementados de GCasa en el ER, y/o ii) logra su ubicación natural en la célula, y/o iii) exhibe actividad catabólica hacia cerebrósida, su sustrato lípido. Este término también se refiere al incremento o prolongación de la actividad de una proteína GCasa exogenamente administrada, es decir, incrementando la estabilidad y extendiendo la vida media in vivo de GCasa, por consiguiente, prolongando su actividad. La frase " sustancialmente pura", como se usa en la presente significa que la sal de isofagomina contiene no más de aproximadamente 5% de otro compuesto. Preferiblemente, la sal de isofagomina "sustancialmente pura" contiene aproximadamente 2% o menos de cualquier otro compuesto. Aún más preferiblemente, la sal de isofagomina "sustancialmente pura" contiene aproximadamente 1% o menos de cualquier otro compuesto . Los términos "alrededor de" y "aproximadamente" generalmente deberán significar un grado aceptable de error para la cantidad medida dada la naturaleza o precisión de las mediciones. Los grados ejemplares típicos de error están dentro de 20 por ciento (%) , preferiblemente dentro de 10%, y más preferiblemente dentro de 5% de un valor o intervalos de valores dados. Alternativamente, y particularmente en sistemas biológicos, los términos "alrededor de" y "aproximadamente" pueden significar valores que están dentro de un orden de magnitud, preferiblemente dentro de 10 ó 5 veces, y más preferiblemente dentro de 2 veces de un valor dado. Las cantidades numéricas dadas en la presente son aproximadas a menos que se establezca de otra forma, significando que el término "alrededor de" o "aproximadamente" puede ser inferido cuando no se establece expresamente . Como se usa en la presente, las formas singulares "un", "uno", y "el", incluyen lo plural a menos que el contexto claramente lo indique de otra forma. Por consiguiente, por ejemplo, la referencia "un" portador incluye uno o más portadores . De conformidad con la presente invención, se proporciona una forma específica de isofagomina, tartrato de isofagomina. El tartrato de isofagomina tiene muchas características mejoradas comparadas con las formas de isofagomina previamente descritas. Por ejemplo, el tartrato de isofagomina es más fácilmente purificable, especialmente en solvente tales como agua y/o etanol, y tiene mayor estabilidad que otras formas de sal de isofagomina conocidas. El tartrato de isofagomina es particularmente adecuado para la producción a escala industrial, por ejemplo, producción mayor que 1 kg de producto . La isofagomina es (3R, 4R, 5R) -5- (hidroximetil ) -3 , 4 -piperidindiol que tiene la siguiente estructura química: Tiene una fórmula molecular de 06??3 03 y un peso molecular de 147.17 g/mol. La síntesis de este compuesto se describe en las Patentes de los Estados Unidos 5,844,102 de Sierks et al. y 5,863,903 de Lundgren et al. La patente '102 describe que los compuestos descritos en la presente se pueden combinar con sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo sales de sales de ácido carboxílico orgánico tales como ácidos acético, láctico, tartárico, málico, isotionico, lactobionico , y succínico. Sin embargo, la única sal ejemplificada en esta patente (y en la literatura subsiguiente de la cual el solicitante está conciente) es la sal de clorhidrato. Como se describe en la presente, la sal de clorhidrato no es adecuada para la producción industrial o para la formulación en formas de dosificación. El término tartrato de isofagomina usado en la presente significa una sal de ácido tartárico de isofagomina y se puede representar como sigue: en donde n es 1 ó 2. El ácido tartárico podrá tener diferentes formas estereoisoméricas ; ácido D- o L-tartárico, o ácido DL- o meso-tartárico . La presente invención, así como los ejemplos, principalmente se describe con referencia al ácido L- (+) -tartárico como una modalidad preferida y la sal de isofagomina del mismo. Sin embargo, el término, ácido tartárico se propone que cubra isómeros tanto D como L así como una mezcla DL y ácido meso-tartárico, y por consiguiente el término tartrato de isofagomina se propone que incluya mono- o di-isofagomina-L-tartrato, mono- o di - isofagomina-D-tartrato, mono- o di-isofagomina-DL-tartrato y/o mono- o di-isofagomina-meso-tartrato . El ácido L-tartárico es ácido (2R, 3R) -(+) -tartárico con enriquecimiento de enantiomero de 97% o mayor, y el ácido D-tartárico es ácido (2S,3S)-(-)-tartárico con enriquecimiento de enantiomero de 97% o mayor. El ácido DL-tartárico es una mezcla de ácido D- y L-tartárico con enriquecimiento de enantiomero de menos de 97%. El tartrato de isofagomina se puede preparar a partir de base libre de isofagomina disuelta en alcohol, preferiblemente etanol, y se trata con los ácidos carboxílieos sustituidos, incluyendo aminoácidos, ácidos di- carboxílicos , o ácido tartárico, incluyendo ácidos diacil tartárico, en alcohol, preferiblemente etanol, con agitación a temperatura ambiente. La sal de ácido se precipita de la solución de etanol . La sal ácida de tartrato de isofagomina cruda se colecta por filtración. La solución de isofagomina se puede pre-filtrar para remover cualquiera de las impurezas de partícula antes de que el ácido se agregue. Después de la adición del ácido, la suspensión resultante se puede enfriar para la precipitación completa de la sal . En otra modalidad, la sal ácida de isofagomina de la presente invención se puede preparar agregando un ácido carboxílico sustituido o ácido tartárico a una solución en donde la isofagomina se prepara in situ sin aislamiento de la isofagomina . Alternativamente, la sal ácida de isofagomina de la presente invención se puede preparar a partir de una sal de ácido mineral de isofagomina tal como clorhidrato de isofagomina. La conversión se puede realizar generando la isofagomina y posteriormente tratando la base libre con un ácido carboxílico sustituto. Por ejemplo, la base libre de isofagomina se puede formar por tratamiento con la sal de clorhidrato de una fuente básica tal como una base mineral, gas amoníaco o soluciones de hidróxido de amonio acuoso, o exponiéndola a una resina básica soportada sólida o una columna de resina básica. Cuando se usa una resina básica, la columna de resina se puede eluir con agua, hidróxido de amonio acuoso o hidróxido de amonio en un alcohol tal como metanol, etanol, IPA, y similares para proporcionar la base libre de isofagomina, la cual se puede convertir a la sal acida de isofagomina de la presente invención. Debido a que el ácido tartárico es un diácido, la conversión a la sal de ácido tartárico se puede hacer con un intervalo de relaciones ácido a base: 0.5 equivalentes molar hasta 1 equivalente molar de tartárico con relación a la base libre de isofagomina. El ácido tartárico puede ser racémico (la forma D o L) o una de las tres formas estereoisoméricas , la forma L- (+) , la forma D- (-) , y la forma meso. Las condiciones preferidas para hacer la sal de tartrato usan solución de hidróxido de amonio para generar la base libre, 9 : 1 de etanol/hidróxido de amonio para eluir la base libre en una columna de gel de sílice, evaporación de solvente e hidróxido de amonio en exceso, formación de la sal de tartrato en agua/etanol, y cristalización de agua/etanol. La isofagomina y ácido tartárico se pueden combinar sobre un intervalo de estequiometrías . Puesto que el ácido tartárico es un diácido, las relaciones molares de 2:1 a 1:1 de IFG/ácido tartárico proporcionan sales estables (véase ejemplo 3) . La relación preferida es 1:1. El intervalo de estequiometría es aplicable a todos los isómeros de ácido tartárico.

La sal ácida de isofagomina se puede purificar usando la mayoría de los métodos de purificación comúnmente usados, preferiblemente recristalización. Por ejemplo, el tartrato de isofagomina crudo se puede recristalizar en agua con y sin 1 ayuda de un co-solvente prótico o aprótico, preferiblemente alcoholes tales como, por ejemplo, metano, etanol, propanoles, o butanoles . La recristalización se puede conducir efectivamente no solamente a escala pequeña sino también a escala industrial, por ejemplo cantidades de sub-kilogramo. La tabla 1 resume las purezas y rendimientos de diversos ejemplos preparados y purificados de acuerdo con la presente invención.

Tabla 1 Muestra No. Pureza (%) Rendimiento (g) 1 >98 5 2 >98 15 3 96.8 55 4 84.5 45 5 95.9 40 6 87.4 71 7 94.6 45 8 95.6 343 9 95.8 851 10 99.8 14 11 98.1 134 12 97.6 128 13 99.0 72 14 99.3 116 15 99.5 57 16 98.0 1368 En una modalidad preferida, el tartrato de isofagomina crudo se disuelve en agua, y una cantidad igual de etanol se agrega a la solución resultante para obtener la precipitación del compuesto. Luego se agrega etanol (1 volumen) adicional y se agita. Este procedimiento se repite para dos alícuotas adicionales de etanol para producir una relación de etanol/agua de aproximadamente 4:1. Aunque la mayoría del tartrato de isofagomina se cristalizará después de agregar el primer volumen de etanol, se pueden usar alícuotas adicionales para la maximización del rendimiento. Después de la recristalización, los sólidos se filtran y lavan. La purificación completa se puede hacer a temperatura ambiente. El tartrato de isofagomina se puede purificar con este método hasta la pureza de aproximadamente 99% o más. Por consiguiente, el tartrato de isofagomina de acuerdo con una modalidad de la presente invención tiene pureza de 95% o mayor, preferiblemente 98% o mayor, o aún más preferiblemente 99% o mayor. El tartrato de isofagomina también se puede purificar usando otros solventes o sistemas de solventes tal como 1:1 etanol/agua, 1:1 acetona/agua, 2:1 etanol/agua, 2:1 acetona/agua, ó 3:1 etanol/agua. El carbón activado también se puede usar para remover cualquiera de las impurezas coloreadas . Cada uno de estos solventes puede proporcionar purezas de arriba de 95%, y la mayoría tienen purezas proporcionadas mayores que 98%. La facilidad de purificación de tartrato de isofagomina se puede demostrar comparando la purificación a la purificación de la sal de HCl de isofagomina en una solución acuosa, la cual requiere liofilización . Los intentos por filtrar el isofagomina-HCl resultaron en una sustancia que tiene una coloración amarilla y la consistencia de cola. Mientras tanto, el tartrato de isofagomina de acuerdo con la presente invención tiene buenas características de polvo, por ejemplo, tamaño de cristal, densidad, y fluidez, que son adecuadas para un proceso de manufactura farmacéutica. Las tablas 2 y 3 resumen las características de polvo de una muestra de tartrato de isofagomina preparada de acuerdo con la presente invención. El tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con la presente invención no es un polvo fino sino es mayormente poblado con partícula de tamaño medio con densidad volumétrica de alrededor de 0.44 g/ml e Indice de Carr de 15%, el cual por consiguiente posee alta fluidez y propiedad de fácil manejo adecuada para un proceso de manufactura farmacéutica. El tartrato de isofagomina obtenido de acuerdo con el proceso de recristalización anterior también exhibe consistencia en su distribución de tamaño de partícula lote por lote con una extensión de línea de base que cae entre 0.7 y 1.5, evitando así partículas grandes, las cuales pueden ser perjudiciales para la medición exacta de la sal durante el proceso de formulación. La mayoría de los lotes proporcionan más de 98%, o mínimo 90%, de tartrato de isofagomina con un tamaño de partícula de aproximadamente 1200 µ?t? o menos.

Tabla 2 Tabla 3 Además, el tartrato de isofagomina no es higroscópico, y la absorción de humedad del mismo solamente fue aproximadamente 0.08% después de la exposición a 75% de HR por 8 días. Los resultados de la prueba de absorción de humedad de seis diferentes muestras de tartrato de isofagomina preparadas de acuerdo con la presente invención se resumen en las tablas 4 y 5.

Estudios de absorción de humedad con solución saturada de NaBr Tabla 5. Estudios de absorción de humedad con solución saturada de NaCl método para preparar tartrato de isofagomina la presente invenció por consiguiente es adecuado para preparar una cantidad volumétrica de tartrato de isofagomina para composiciones farmacéuticas. La cantidad volumétrica de tartrato de isofagomina preparada de acuerdo con la invención se puede preparar como una forma ligeramente cruda que tiene una pureza de aproximadamente 80% dependiendo del propósito de la preparación. Sin embargo, también se podrá preparar tan pura como 90% o más, preferiblemente al menos 99% con el tamaño de partícula de aproximadamente 1200 µp o menos por 90% del tartrato de isofagomina. La CLAR se puede usar para determinar tanto la potencia de la sal ácida de isofagomina de la presente invención, como la presencia de impurezas orgánicas. La detección UV de baja longitud de onda es adecuada para el cálculo de potencia contra un estándar de referencia. Uno de experiencia en la técnica puede determinar las condiciones apropiadas para el análisis de CLAR dependiendo de la concentración de la muestra, los tipos de la columna, solventes, etc. No obstante, las siguientes condiciones se proporcionan como un ejemplo para tartrato de isofagomina: la fase móvil puede ser carbonato de amonio 10 mM (NH4HCO3) /acetoni rilo (CAN) 30/70 en modo isocrático a una velocidad de flujo de 0.5 mL/min; la columna de CLAR puede ser una columna de Carbohidrato Alltech Prevail (4.6 x 150 mm, tamaño de partícula de 5 µp?) operada a 50°C; la detección se puede ajustar a 210 nm con un tiempo de recorrido de 15 minutos; y las muestras de la sustancia de fármaco se pueden disolver en fase móvil con un volumen de inyección de 10 µ? . Se puede usar un detector de aerosol cargado (CAD, por sus siglas en inglés) para la detección de impurezas. Las muestras también se pueden analizar usando detección de dispersión de luz evaporativa (ELSD, por sus siglas en inglés) y detección UV. El detector CAD usa tecnología evaporativa para desolvatar los analitos en la presencia de gas portador de N2. Una chispa coronal imparte una carga al gas N2, el cual transfiere la carga a los analitos. Los analitos se detectan cuando transfieren su cargador a un electrómetro y se miden como corriente. Cuando se usa el detector CAD, la fase móvil se puede ajustar a acetato de amonio 5 mM/CAN 50/50 en modo isocrático a una velocidad de flujo de 1.0 mL/min con una columna de CLAR Primesep 100 (4.6 x 150 mm, tamaño de partícula de 5 µp?) operada a 25°C. Las muestras de sustancia de fármaco se preparan en la fase móvil, y se puede usar un volumen de inyección de 10 µ? . El tiempo de recorrido para este método es aproximadamente 70 minutos. Las impurezas se determinan usando una secuencia de inyección alta/baja donde la muestra se cuantifica contra el estándar de referencia a 1% de concentración de muestra nominal . La identificación de la sal ácida de isofagomina de la presente invención se puede realizar usando FT-IR y se confirma adicionalmente por ?? RMN y 13C RMN . Las figuras 2-5 muestran espectros 1H, 13C RMN, e IR de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. Los solventes residuales se pueden monitorear por cromatografía de gas (GC, por sus siglas en inglés) por espacio de cabeza. El agua, residuo en ignición, y metales pesados se monitorean por técnicas de compendio estándar. El paladio se monitorea por espectroscopia de ICP cuando es el catalizador usado en la etapa de hidrogenación final . La figura 6 muestra una configuración de difracción en polvo de rayos X de tartrato de isofagomina preparado de acuerdo con una modalidad de la presente invención. La configuración se obtiene usando un difractómetro Bruker D8 Advance, y el análisis se realiza desde 2-45° 2 theta usando las siguientes condiciones: Aunque un difractograma en polvo de rayos X es útil para identificar una forma sólida particular de un compuesto, es decir, formas polimórficas , sus valores 2-theta así como la intensidad y d-espacios pueden variar debido a las variaciones causadas durante la preparación de la muestra u obtención de la configuración. Además, es posible algún margen de error en la asignación de 2-theta y d-espacios . Los valores de 2-theta tienen una variación de ± 0.009. Por consiguiente, un método preferido de comparación de las configuraciones de difracción en polvo de rayos X para identificar una forma cristalina particular es sobreponer la configuración de difracción en polvo de rayos X de la forma desconocida sobre la configuración de difracción de rayos X de una forma conocida y comparar sus picos característicos. No obstante, los valores de 2-theta, d-espaciado, intensidad y % de intensidad de la figura 6 se resumen en la tabla 6. En la determinación de la existencia de la forma cristalina de la presente invención en una composición, uno puede comparar cinco o más picos distintivos de aquellos identificados en la tabla 6. Los picos más distintivos incluyen 9.29, 14.17, 16.34, 18.07, 18.72, 19.44, 20.56, 22.13, 23.01, 24.54, y 27.12.

Tabla 6 Angulo (2-Theta°) valor d (Á) Intensidad % de (conteo) Intensidad (%) 9.29 9.5093 131 23.3 14.17 6.24684 129 22.8 16.34 5.42037 155 27.6 18.07 4.90414 330 58.5 18.72 4.73704 563 100 Tabla 6 (continuación) La sal ácida de isofagomina de la presente invención se puede administrar en una forma adecuada para cualquier ruta de administración, incluyendo, por ejemplo, oralmente en la forma de tabletas, cápsulas, o liquido, o en solución acuosa estéril para inyección. Se puede administrar oralmente en la forma de tabletas, cápsulas, óvulos, elixires, soluciones o suspensiones, geles, jarabes, lavados bucales, o un polvo seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes del uso, opcionalmente con agentes saborizantes y colorantes para aplicaciones de liberación inmediata, retardada, modificada, sostenida, impulsada o controlada. Las composiciones sólidas tales como tabletas, cápsulas, grageas, pastillas, pildoras, bolos, polvo, pastas, gránulos, balas, o preparaciones de pre-mezcla también se pueden usar. Las composiciones sólidas y líquidas para uso oral se pueden preparar de acuerdo con los métodos bien conocidos en la técnica. Tales composiciones también pueden contener uno o más portadores y excipientes farmacéuticamente aceptables, los cuales pueden estar en forma sólida o líquida. En una modalidad específica, el tartrato de isofagomina se administra como una cápsula llenada con polvo. Cuando el compuesto se formula para administración oral, las tabletas o cápsulas se pueden preparar por medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptables tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pre-geletanizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropil metilcelulosa) ; rellenadores (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o fosfato ácido de calcio) ; lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice) ,-desintegrantes (por ejemplo, almidón de papa o glicolato de almidón de sodio); o agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio) . Las tabletas se pueden revestir por métodos bien conocidos en la técnica. Los excipientes farmacéuticamente aceptables también incluyen celulosa microcristalina, lactosa, citrato de sodio, carbonato de calcio, fosfato de calcio dibásico y glicina, desintegrantes tales como almidón (preferiblemente almidón de maíz, papa o tapioca), gicolato de almidón de sodio, croscaramelosa de sodio y ciertos silicatos complejos, y aglutinantes de granulación tales como polivinilpirrolidona, hidroxipropil etilcelulosa (HPMC) , hidroxipropil celulosa (HPC) , sucrosa, gelatina, y acacia. Adicionalmente , los agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico, behenato de glicerilo y talco se pueden incluir. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden emplear como rellenadores en cápsulas de gelatina. Los excipientes preferidos a este respecto incluyen lactosa, almidón, una celulosa, azúcar de leche, o polietilenglicoles de alto peso molecular. Para suspensiones acuosas y/o elíxires, el agente se puede combinar con varios agentes emulsionantes y/o de suspensión y con diluyentes tales como agua, etanol, propilenglicol y glicerina, y combinaciones de los mismos. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o se pueden presentar como un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado (por ejemplo, etanol o un poliol tal como glicerol, propilenglicol, y polietilenglicol , y similares, mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales) antes del uso. Tales preparaciones líquidas se pueden preparar por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, agua, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o acacia) ; vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, esteres aceitosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservadores (por ejemplo, metil o propil -p-hidroxibenzoatos o ácido ascórbico) . Las preparaciones para administración oral se pueden formular de manera adecuada para producir liberación controlada o sostenida de sal ácida de isofagomina de la presente invención . La fluidez apropiada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de un revestimiento tal como lecitina, por el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de tensioactivos . La prevención de la acción de microorganismos se puede originar por varios agentes antibacterianos y antifúngicos , por ejemplo, parabenos , clorobutanol , fenol, alcohol bencílico, ácido ascórbico, y similares. En muchos casos, será razonable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares o cloruro de sodio. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede originar mediante el uso en las composiciones de agentes que retardan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio, y gelatina. Las formulaciones farmacéuticas de tartrato de isofagomina adecuadas para uso parenteral/inyectable (por ejemplo, por inyección intravenosa de bolo o infusión o vía rutas intramuscular, subcutánea o intratecal) generalmente incluyen soluciones acuosas estériles, o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. El tartrato de isofagomina se puede presentar en formas de dosis unitarias, en ampolletas, u otros contenedores de dosis unitaria, o en contenedores de dosis múltiples, si es necesario se agrega un conservador. Las composiciones para inyección pueden estar en la forma de suspensiones, soluciones, o emulsiones, en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes formuladores tales como agentes de suspensión, estabilización, solubilización, y/o dispersión. Alternativamente, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo estéril para la reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua libre de pirógenos estéril, antes del uso. En todos los casos, la forma debe ser estéril y debe ser fluida al grado que existe fácil capacidad para inyectar. Debe ser estable bajo las condiciones de manufactura y almacenamiento y se debe conservar contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos . La preparación de formulaciones parenterales adecuadas bajo condiciones estériles es fácilmente realizada por técnicas farmacéuticas estándar bien conocidas por aquellos expertos en la técnica. Las soluciones inyectables estériles se preparan incorporando el tartrato de isofagomina en la cantidad requerida en el solvente apropiado con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente, como se requiera, seguido por filtración y esterilización terminal. Generalmente, las dispersiones se preparan incorporando los diversos ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril el cual contiene el medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de aquellos enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos preferidos de preparación son la técnica de secado en vacío y secado por congelación la cual produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de la solución previamente filtrada estéril del mismo . Los conservadores, estabilizadores, tintes, y aún agentes saborizantes se pueden proporcionar en la composición farmacéutica. Los ejemplos de conservadores incluyen benzoato de sodio, ácido ascórbico, y ésteres de ácido p-hidroxibenzoico . Los antioxidantes y agentes de suspensión también se pueden usar. Los portadores farmacéuticamente aceptables adicionales los cuales se pueden incluir en la formulación son amortiguadores tales como amortiguador de citrato, amortiguador de fosfato, amortiguador de acetato, y amortiguador de bicarbonato, aminoácidos, urea, alcoholes, ácido ascórbico, fosfolípidos , proteínas, tales como albúmina de suero, colágeno, y gelatina; sales tales como EDTA o EGTA, y cloruro de sodio; liposomas polivinilpirrolidona; azúcares tales como dextrano, manitol , sorbitol , y glicerol; propilenglicol y polietilenglicol (por ejemplo, PEG-4000, PEG-6000) ; glicerol, glicina u otros aminoácidos y lípidos. Los sistemas amortiguadores para el uso con las formulaciones incluyen amortiguadores de citrato, acetato, bicarbonato, y fosfato. El amortiguador de fosfato es una modalidad preferida. Las formulaciones también pueden contener un detergente no iónico. Los detergentes no iónicos preferidos incluyen Polisorbato 20, Polisorbato 80, Tritón X-100, Tritón X-114, Nonidet P-40, Octil a-glucósido, Octil ß-glucósido, Brij 35, Pluronic, y Tween 20. Las rutas de administración (suministro) incluyen, pero no se limitan a, una o más de: oral (por ejemplo, como una tableta, cápsula, o como una solución ingerible) , tópica, mucosal (por ejemplo, como un pulverizador nasal o aerosol para inhalación), nasal, parenteral (por ejemplo, por una forma inyectable), gastrointestinal, intraespinal , intraperitoneal , intramuscular, intravenosa, intrauterina, intraocular, intradermal, intracraneal, intratraqueal , intravaginal , intracerebroventricular , intracerebral , subcutánea, oftálmica (incluyendo intravitreal o intracameral ) , transdermal, rectal, bucal, epidural y sublingual. La administración de las formulaciones parenterales descritas anteriormente de tartrato de isofagomina puede ser por inyecciones periódicas de un bolo de la preparación, o se puede administrar por administración intravenosa o intraperitoneal de un recipiente el cual está externo (por ejemplo, una bolsa i.v.) o interno (por ejemplo, un implante bioerosionable) . Véase, por ejemplo, Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,407,957 y 5,798,113, cada una incorporada en la presente para referencia. Los métodos y aparatos de suministro intrapulmonar se describen, por ejemplo, en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,654,007, 5,780,014 y 5,814,607, cada una incorporada en la presente para referencia. Otros sistemas de suministro parenteral útiles incluyen partículas de copolímero de etileno-acetato de vinilo, bombas osmóticas, sistemas de infusión implantables , suministro de bomba, suministro de célula encapsulada, suministro liposomal, inyección suministrada por aguja, inyección sin aguja, nebulizador, aerosolizador, electroporación, y parche transdérmico . Los dispositivos inyectores sin agua se describen en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,879,327, 5,520,639, 5,846,233 y 5,704,911, las especificaciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia. Cualquiera de las formulaciones descritas anteriormente se puede administrar usando estos métodos . Además, una variedad de dispositivos diseñados para la conveniencia del paciente, tales como plumas de inyección rellenables y dispositivos de inyección sin aguja, se pueden usar con las formulaciones de la presente invención como se discute en la presente. Típicamente, un médico determinará la dosificación actual la cual será más adecuada para un sujeto y proporcionará una cantidad terapéuticamente efectiva al sujeto. El nivel de dosis y frecuencia de dosificación específicos para cualquier individuo particular se puede variar y dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto, el tipo de enfermedad de Gaucher a ser tratada, edad, peso corporal, salud general, sexo, dieta, modo y tiempo de administración, velocidad de excreción, la severidad de la enfermedad, y la terapia a la que se somete el individuo. Para administración oral y parenteral, el nivel de dosificación diario del agente puede ser en dosis únicas o divididas. Preferiblemente, la cantidad efectiva o dosis de la sal ácida de isofagomina de la presente invención es suficiente para incrementar el nivel de expresión de glucocerebrosidasa mutante, por ejemplo, a aproximadamente 3-5%, preferiblemente por aproximadamente 10%, y más preferiblemente por aproximadamente 30% del nivel encontrado en células normales, es decir, células de un individuo que no tiene enfermedad de Gaucher y/o puede aliviar o prevenir una actividad de GCasa de déficit clínicamente significativo en el sujeto.

La cantidad efectiva se puede determinar frecuentemente por la experimentación de rutina, pero se espera que sea una cantidad resultante en los niveles en suero entre 0.01 y 100 µ?, preferiblemente entre 0.01 y 10 µ , muy preferiblemente entre 0.05 y 2 µ?. La dosis efectiva de tartrato de isofagomina se espera que esté entre 0.5 y 1000 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente entre 0.5 y 100, muy preferiblemente entre 1 y 50 mg/kg de peso corporal por día. En una modalidad específica, la dosis está entre aproximadamente 1-600 mg/día, más específicamente 5-300 mg/día, más específicamente, 10-150 mg/día. La dosificación no diaria también se contempla. Otros regímenes de dosificación contemplados para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher usando tartrato de isofagomina se describen en la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos 60/914,288 presentada el 24 de Abril de 2007, la cual se incorpora en la presente para referencia en su totalidad. El monitoreo terapéutico de la presente invención también es aplicable siguiendo el tratamiento de pacientes con una combinación de tartrato de isofagomina y otra terapia tal como ERT o terapia de genes. Tal terapia de combinación se describe en los números de publicación de solicitud de patente de los Estados Unidos comúnmente apropiada 2004/0180419 y 2004/0219132, ambas se incorporan en la presente para referencia en su totalidad.

Cuando se usa la sal ácida de isofagomina de la presente invención en combinación con un segundo agente terapéutico, la dosis de cada compuesto puede diferir de aquella cuando el compuesto se usa solo. La dosis apropiada será fácilmente apreciada por aquellos expertos en la técnica. Se apreciará que la cantidad de un compuesto de la invención requerida para el uso en el tratamiento variará con la naturaleza de la condición que es tratada y la edad y la condición del paciente y finalmente estará a la discreción del médico que atiende. Cuando la administración es consecutiva, ya sea el compuesto de la invención o el segundo agente terapéutico se puede administrar primero. Cuando la administración es simultánea, la combinación se puede administrar ya sea en la misma o diferente composición farmacéutica. Cuando se combinan en la misma formulación, se apreciará que los dos compuestos deben ser estables y compatibles entre si y los otros componentes de la formulación. Cuando se formulan separadamente se pueden proporcionar en cualquier formulación conveniente, como se conoce para tales compuestos en la técnica. La isofagomina se puede sintetizar a partir de D-arabinosa a través de unos intermediarios previamente reportados en la literatura por Danishefski et al. en Tetrahedron Letters. 1990; 31(16), 2229. Sin embargo, las etapas sintéticas previamente reportadas para los intermediarios no son económicas para la síntesis a gran escala. El proceso descrito en la presente permite la producción confiable y predecible de aquellos intermediarios (y un nuevo intermediario) y el producto final a una escala industrial y con alta pureza. Esto es debido a que todos los intermediarios se aislan por cristalización, haciendo al proceso tratable para la producción a gran escala. La isofagomina también se puede sintetizar por ruta de síntesis mostrada en el esquema de reacción Esquema de reacción 1. El PG es un grupo protector; LG es un grupo saliente La D-arabinosa se puede convertir al glicósido protegido correspondiente (A) usando un alcohol apropiado con o sin solvente (reacción pura), y un agente de activación. Por ejemplo, el intervalo de alcoholes puede incluir alcohol bencílico, o alcoholes bencílicos sustituidos tales como alcohol metoxibencílico, alcohol clorobencílico, metanol, etanol, isopropanol, alcohol ciclohexilmetílico y similares en un solvente tal como cloruro de metileno, cloroformo, THF, dioxano, D F, DMA, o NMP, con un agente de activación tal como HCl , HBr, H2S04, o algún otro ácido mineral, o cloruro de acetilo, cloruro de propionilo u otro cloruro ácido de un ácido carboxílico. La reacción se puede realizar a temperaturas que varían de temperatura ambiente a aproximadamente 100°C, para tiempos que varían desde 2 a 48 horas. Para esta invención los alcoholes preferidos son alcoholes de bencilo y bencilo sustituido, y es más preferido el alcohol bencílico. Los solventes preferidos incluyen dioxano, THF o reacción pura, y es más preferida la reacción pura. Los agentes de activación preferidos incluyen cloruro de acetilo y H2S04, y es más preferido el cloruro de acetilo. El producto puro se puede aislar fácilmente por precipitación con un solvente no polar. El solvente y temperatura preferidos para este producto es metil -t-butil éter a temperatura ambiente. El glicósido obtenido de la fórmula general A se puede proteger adicionalmente como un acetónido en los grupos hidroxilo 3 y 4 por conversión de (A) a cetal (B) con una cetona o un dimetilcetal , o enoléter del mismo, en la presencia de un ácido, con o sin (pura) un co-solvente polar. Por ejemplo, las cetonas alifáticas o aromáticas tales como acetona, 2-butanona, benzofenona, ciclohexanona , o acetofenona, o sus dialquilcetales correspondientes, pueden reaccionar con un diol vecinal en la presencia de un ácido tal como H2S04, ácido p-toluensulfónico, ácido canforsulfónico, o triflato de TMS . Los co-solventes incluyen cloruro de metileno, D SO, DMF, DMA, y NMP . En algunos casos la cetona también puede ser el solvente, tal como acetona. Las temperaturas de reacción pueden variar de temperatura ambiente a 100°C. Para esta reacción, las condiciones preferidas son acetona y 2 , 2 -dimetoxipropano con ácido p-toluensulfónico a 40°C. El producto puro fácilmente se puede aislar por cristalización con un sistema de dos componentes que incluye un componente polar y uno no polar. Las condiciones preferidas para esta purificación son acetato de etilo y heptano. El acetónido (B) se puede proteger adicionalmente como un éter en el grupo 2 -hidroxilo por conversión al alcóxido correspondiente seguido por reacción subsiguiente con un agente de alquilación para proporcionar un compuesto de la fórmula C. La protección previamente reportada utiliza más bromuro de bencilo caro y óxido de plata costoso. La formación del alcóxido fácilmente se realiza con una base fuerte tal como un hidruro álcali en un solvente aprótico polar tales como dialquil éteres o THF, DMF, DMA, MP, o DMSO correspondiente a PG2. Los agentes de alquilación incluyen cloruro de bencilo o bencilo sustituido. Las temperaturas de reacción pueden variar de -20°C a 20°C. Para esta reacción las condiciones preferidas son hidruro de sodio en DMF para generar el alcóxido a de 0°C a 10°C, seguido por alquilación de cloruro de bencilo. El producto puro se puede aislar fácilmente por precipitación con agua y un lavado no polar para remover el exceso de agua. El solvente no polar preferido para esta purificación es heptano. La remoción del acetónido en el compuesto de la fórmula general C para proporcionar un diol de la fórmula general (D) se realiza con un ácido mineral diluido tal como HCl, HBr, H2S04 en un alcohol tal como metanol, etanol, isopropanol, a temperatura ambiente. Para esta reacción, las condiciones preferidas con HCl en metanol a temperatura ambiente. El producto puro (D) se puede aislar fácilmente por precipitación con agua y un lavado no polar para remover el exceso de agua. El solvente no polar preferido para esta purificación es heptano. La protección adicional del diol se requiere para la modificación a la molécula objetivo. La eterificación selectiva del 3-hidroxilo (E) se puede realizar usando un procedimiento dirigido con estaño en un solvente de azeotropía-agua a temperaturas de reflujo seguido por eterificación a temperaturas moderadas. Los éteres de estaño se pueden formar usando óxidos de dialquil o aril estaño (IV) tales como óxido de difenilo, dimetilo, dibutilo, diisobutilo, o dioctilestaño en solventes apróticos tales como benceno, tolueno o xileno. La alquilación subsiguiente se puede realizar con haluros de alquilo o alquilarilo tal como bromuro de bencilo o cloruro de bencilo. La reacción se puede acelerar a través del uso de agentes tal como CsF o cloruro de tetraetilamonio , y las temperaturas de reacción pueden variar de temperatura ambiente a 100°C. Para esta invención el método preferido usa óxido de dibutilestaño en tolueno y cloruro de bencilo en la presencia de cloruro de tetrabutilamonio . La purificación se puede realizar fácilmente por precipitación del reactivo estaño en agua. El producto final se puede obtener por cristalización de un sistema de dos solventes. Los solventes de cristalización preferidos para esta reacción son etanol y heptano . El derivado de arabinosa intermediario tri-protegido se puede convertir directamente al derivado de xilosa correspondiente (G) a través de un sistema activado (F) . Mientras que la inversión de Mitsunobu es comúnmente usada para invertir las configuraciones de alcohol, y se ha reportado para esta transformación específica, aquellas condiciones son costosas en una escala de manufactura. Una ruta alternativa involucra la activación del hidroxilo de arabinosa a un sistema activado aislable, discreto (G) seguido por el desplazamiento con inversión usando una fuente de oxígeno barata. La activación puede ser con ésteres tales como p-toluensulfonato, metansulfonato, trifluorometansulfonato, y similares, formados del anhídrido o cloruro de sulfonilo correspondiente en la presencia de una base orgánica tal como piridina, colidina, base de Hunig, trietilamina , en un solvente no polar tal como cloruro de metileno, cloroformo, o tolueno a temperaturas desde -20°C a temperatura ambiente . El desplazamiento con la inversión de la configuración se puede realizar con nucleófilos de oxígeno, preferiblemente nitrito de metal álcali o alcalinotérreo en solventes comúnmente usados para este tipo de reacción, por ejemplo, cloruro de metileno, acetona, THF, DMF, DMA, NMP, y similares a temperaturas desde 0°C a 40 °C. Las condiciones preferidas usan anhídrido trifluorometansulfónico y piridina en cloruro de metileno a -10°C seguido por aislamiento del triflato sin la necesidad de purificación. Las condiciones peferidas para el desplazamiento del triflato son nitritos de sodio o potasio e DMF a temperatura ambiente. El producto purificado se puede obtener fácilmente por cristalización de un sistema de dos solventes usando un componente polar y no polar. Los solventes de cristalización preferidos para esta reacción son isopropanol y heptano. El derivado de xilosa tri -protegida de la fórmula general (H) se puede convertir en el nitrilo (I) con inversión de configuración a través de un sistema activado. Similar al método descrito anteriormente, la ruta involucra la activación del hidroxilo de xilosa a un sistema activado aislable, discreto (H) seguido por desplazamiento por una fuente de ciano. La activación se puede hacer de nuevo con ésteres de alquil o aril sulfonatos, preferiblemente p-toluensul fonato , metansulfonato, trifluorometansulfonato, y similares, los cuales se forman del anhídrido o cloruro de sulfonilo correspondiente en la presencia de una base media orgánica, tal como piridina, colidina, base de Hunig, trietilamina , y similares en un solvente no polar tal como cloruro de metileno, cloroformo o tolueno a temperaturas de -20°C a temperatura ambiente. El desplazamiento con inversión de configuración se puede realizar preferiblemente con reactivos tales como cianuros de metal álcali o alcalinotérreos , o cianuros de tetraetilamonio en solventes polares apróticos tales como THF, DMF , DMA, NMP, DMSO, y similares a temperaturas de 0°C a 40°C. Las condiciones preferidas usan anhídrido trifluorometansulfónico y piridina en cloruro de metileno a -10C. Las condiciones preferidas para el desplazamiento del triflato son cianuro de tetraetilamonio en THF a temperatura ambiente. El producto purificado se puede obtener por extracción seguida por cristalización de un solvente alcohólico. El solvente preferido es etanol . La conversión del intermediario nitrilo a clorhidrato de isofagomina se puede realizar en una etapa dependiendo de la elección de grupos protectores. La reducción de nitrilo, triple protección, cierre de anillo, e hidrogenación de la imina cíclica se puede realizar en una etapa única bajo condiciones de hidrogenación para proporcionar la isofagomina con alto rendimiento. La hidrogenación catalítica se puede realizar con una variedad de catalizadores comunes usados para tal hidrogenación incluyendo Pd/C, Pd(OH)2/C, PtO, catalizador Degussa o una combinación de catalizadores a cargas de 1% a 20%, bajo presión de gas hidrogeno que varía desde 14 psi a 100 psi, en solventes polares próticos o apróticos, preferiblemente alcoholes tales como metanol, etanol, isopropanol, o ásteres, o ácido acético. La hidrogenación se realizó en la presencia de un ácido tal como HC1 , HBr, HC104, H3P04, H2S04, ácido acético, ácido trifluoroacético, o ácido tartárico. La hidrogenación se puede realizar por periodos de tiempo cortos o prolongados sin riesgo de descomposición del producto. Las condiciones preferidas son para realizar la reacción con una mezcla de Pd/C y Pd(0H)2/C con cargas del 5% a 20% bajo presiones de 40 psi a 100 psi en un solvente alcohólico con HCl . Las condiciones más preferidas son 10% de carga de Pd/C y 10% de carga Pd(0H)2/C bajo 80 psi de gas hidrógeno en etanol con HCl . Esta sal de clorhidrato se puede convertir a la sal ácida de isofagomina de la presente invención . Otro método de síntesis mejorada para la preparación de isofagomina y tartrato de isofagomina se ha desarrollado recientemente y por lo tanto se presentó una solicitud de patente separada. El nuevo método utiliza D-(-)-arabinosa o L-(-)-xilosa a través de un intermediario de dicetal . Para ilustrar adicionalmente la presente invención, los siguientes ejemplos se presentan posteriormente. El uso de tales ejemplos es ilustrativo solamente y no limita el alcance y significado de la invención o de cualquier término ejemplificado. Asimismo, la invención no se limita a cualesquiera modalidades particulares preferidas descritas en la presente. De hecho, cualesquiera modificaciones y variaciones de la invención serán evidentes para aquellos expertos en la técnica sobre la lectura de esta especificación .

Ejemplo Comparativo A: Purificación de base libre de isofagomina .· La base libre de isofagomina se sometió a cromatografía usando una columna de resina Amberlite CG 50 (NH4+; 2.5cm ID X 100.0 cm L, volumen 450 mi). La columna se lavó con solución 0.5N de NH4OH (3 veces, 1200 mi), luego con agua DI (5 veces, 2250 mi) . Se disolvió isofagomina cruda (1.0 g) en 4.0 mi de agua y se cargó en la columna. La columna se eluyó con 0.1N NHOH/agua (1.36:1). Las fracciones de 10 mi se colectaron. CCD se realizó en las diferentes fracciones (gel de sílice, isopropanol : agua :NH4OH (7:2:1) y la detección fue vía pulverización de ninhidrina y azúcar de imino . La prueba de fracciones positiva con las pulverizaciones de imino-azúcar se analizaron para determinar la pureza, luego se combinaron y liofilizaron por 72 horas.

Ejemplo Comparativo B: Purificación de isofagomina-HCl La base libre de isofagomina (30 mg) se disolvió en eOH (5 mi) y HCl 4N (0.5 mi) en isopropanol y acetona (4.0 mi) . La muestra se almacenó refrigerada durante la noche y se filtró. Los cristales se observaron en la solución. Sin embargo, luego se filtraron, el producto fue una sustancia amarilla que tiene una consistencia semejante a cola. Este HCl - isofagomina cruda se purificó usando una cromatografía de intercambio de iones eluyendo con agua y amoníaco . Las fracciones de la columna de intercambio iónico se concentraron por liofilización para dar un material semisólido gomoso.

EJEMPLO 1 : Síntesis de Tartrato de IFG de D- ( - ) -Arabinosa Las reacciones se monitorearon por CCD y se visualizaron con 5% de H2S04/metanol , con solución de ácido fosfomolíbdico, o con luz UV de 254 nm. Etapa 1 : D-Arabinosa (50 kg, 330.04 moles) y alcohol bencílico (132.2 kg, 4.33 equivalentes) se agitaron y calentaron a 35°C. El cloruro de acetilo (10.9 kg, 0.42 equivalentes) , manteniendo la temperatura <45°C, luego se agitó a 50°C durante la noche. La mezcla se enfrió a 20°C y se diluyó con MTBE (600 kg) . La mezcla se agitó por 0.5 - 5 h. Los sólidos se colectaron por filtración y se lavaron con MTBE (2 x 40 kg) . El material se secó en un secador de filtro. Se obtuvo 2 -bencil -D-arabinosa como un sólido descolorido, 70.9 kg (88.6%). XH RMN (300 MHz, DMSO-d6) : d 7.32 (m, 5H) , 4.76 (s, 1H) , 4.66 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.59 (m, 3H) , 4.45 (d, J = 12 Hz, 1H) , 3.70 (m, 4H) , 3.47 (dd, J = 12.3 Hz, 1H) . Etapa 2 : Se mezcló 2 -bencil -D-arabinosa (73.5 kg, 305.92 moles) con acetona (522 kg) . 2 , 2 -Dimetoxipropano (26.6 kg, 1.9 equivalentes) se adicionó en una porción seguido por monohidrato de ácido p-toluensulfónico (39.3 g, 0.0007 equivalentes) . La mezcla se agitó a 40°C por 18 horas. Después de que la reacción se completó, se adicionó trietilamina (193 mi, 0.0046 equivalentes). Los solventes se removieron a 30°C bajo presión reducida hasta que se obtuvo un aceite espeso. El residuo se co-evaporó con acetato de etilo (2 x 20 kg) . Se adicionó acetato de etilo (19.2 kg) para formar una solución. Se adicionó heptano (145.8 kg) en una porción a la solución y se enfrió a -10°C hasta 0°C durante la noche. Los sólidos se colectaron por filtración y se lavaron con heptano (2 x 51.5 kg) . El material se secó en un secador de filtro con una purga de nitrógeno. El derivado de acetónido (3aR, 6R, 7S , 7aS) - 6- (benciloxi ) -2 , 2 -dimetiltetrahidro-3aH- [1 , 3] dioxolo [4 , 5-c] piran-7-ol se obtuvo como un sólido descolorido, 70.4 kg (82%). P.f. 58-59°C. XH RMN (400 Hz, CDCl3) : d 7.34 (m, 5H) , 4.92 (d, J = 4 Hz, 1H) , 4.79 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.54 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.20 (m, 2H) , 4.00 (dd, J = 13, 3 Hz, 1H) , 3.92 (dd, J = 13, 2 Hz, 1H) , 3.80 (m, 1H) , 2.24 (d, J = 7 Hz, 1H) , 1.52 (s, 3H) , 1.35 (s, 3H) . Etapa 3 : el derivado de acetónido (78.2 kg, 278.97 moles) se mezcló con DMF (295 kg, 3.77 kg/kg de material de partida) y se enfrió a 5°C. Hidruro de sodio (13.4 kg, 1.2 equivalentes) se adicionó al reactor en 3 a 4 porciones, manteniendo la mezcla de reacción por abajo de 10°C luego se agitó por 1.5 horas. A una temperatura de 2°C, se adicionó cloruro de bencilo (45.9 kg, 1.3 equivalentes) por un periodo de 1 hora. La reacción se agitó a 10°C hasta 15°C por 12 h. Después de que la reacción se completó, la mezcla se enfrió a 2°C y se adicionó agua (20 kg) por 1 hora. Una carga adicional de agua (570 kg) se adicionó durante 4 horas. La mezcla se agitó a esta temperatura por 10 h. El producto se colectó por filtración centrífuga y se lavó con agua (2 x 10 kg) y heptano (2 x 15 kg) se secó por giro durante la noche. El derivado de dibencilo (3aR, 6R, 7S , 7aR) - 6 , 7 -bis (benciloxi ) -2 , 2 -dimetiltetrahidro- 3aH- [1 , 3] dioxolo [4 , 5-c] pirano se obtuvo como un sólido blanco, 74.0 kg (71.6%). Etapa 4 : El derivado de dibencilo (37.6 kg, 101.50 moles) se adicionó a metanol, AR (259 kg, 8.7 kg/kg de material de partida) y los contenidos se enfriaron a 15°C. Una solución de HC1 2.5 N (76.2 kg, 1.8 equivalentes) se adicionaron durante 1 hora. Agua adicional (20 kg) se adicionó y la mezcla se agitó por 12 horas a 15°C. Se adicionó agua (1035 kg, 4 x vol metanol, AR) al reactor y se agitó por al menos 0.5 h. El producto se filtró en una centrífuga y se lavó con agua (2 x 10 kg) y heptano (2 x 15 kg) y se secó por giro durante la noche. El diol (3R,4R,5S,6R) -5, 6 -bis (benciloxi) tetrahidro-2H-piran-3 , 4 -diol se obtuvo como un sólido blanco, 31.5 kg (94%) .

Etapa 5: El derivado diol (37.5 kg, 113.51 moles) se mezcló con tolueno (207.6 kg, 5.5 kg/kg de diol) y óxido de dibutilestaño (31.1 kg, 1.1 equivalentes). El reactor se equipó con aparato Dean-Stark y los contenidos del reactor se calentaron a reflujo (aproximadamente 110°C) hasta que no se colectó más agua por remoción (8 - 12 h) . Los contenidos del reactor se enfriaron a 35°C y se adicionó cloruro de tetrabutilamonio (18.3 kg, 0.5 equivalentes) en una porción. Se adicionó cloruro de bencilo (15.8 kg, 1.1 equivalentes) a una velocidad que mantuvo la temperatura <40° y se continuó la agitación a 35°C por 12 h. La adición y agitación por 12 h se repitió diariamente por 4 días hasta que se completó la reacción. Después de que la reacción se completó, la mezcla se enfrió a 25°C, se adicionó agua (150 kg) en una porción, y los contenidos se agitaron durante la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de lecho de Celite (1 kg/kg de diol) y el lecho se enjuagó con tolueno (10 kg) . El filtrado se dejó sedimentar (1 h) y las capas se separaron. La adición, agitación, filtración y separación de agua se repitieron. Las capas acuosas se combinaron y extrajeron con acetato de etilo (25 kg) , y las capas se separaron. Las capas orgánicas se combinaron y concentraron bajo vacío a 45°C a un volumen estirable mínimo. Se adicionó heptano (102.6 kg) . La mezcla se agitó por 20 minutos, se enfrió a 0°C, y se agitó por 8 - 12 h. Los sólidos se colectaron por filtración y se lavaron con heptano (10 kg) . Los sólidos crudos se disolvieron en 6:1 heptano/200 pf etanol (7 kg/kg de sólido crudo) a 35°C, se enfrió a -5°C hasta 0°C y se agitó durante la noche. Los sólidos se colectaron por filtración y se lavaron con heptano (10 kg) . La pureza del producto se monitoreó por CCD . Típicamente, 2 ó más recristalizaciones se requirieron para remover las impurezas. El derivado de tribencilo purificado se secó en un horno de vacio a 30°C. Se obtuvo (3R,4R,5R,6R) -4,5, 6 -Tris (benciloxi) tetrahidro-2H-piran-3-ol como un sólido blanco, 17.5 kg (37%) . P.f. 59-60°C. XH RM (400 MHz, CDCl3) : d 7.38 (m, 15H) , 4.89 (d, J = 4 Hz, 1H) , 4.82 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.71 (m, 3H) , 4.57 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.55 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.01 (br s, 1H) , 3.95 (dd, J = 10, 3Hz, 1H) , 3.83 (m, 2H) , 3.71 (dd, J = 12, 2 Hz, 1H) , 2.56 (br s, 1H) . Etapa 6 : El derivado de tribencilarabinosa (12.0 kg, 28.54 moles) se mezcló con cloruro de metileno (79.2 kg, 6.6 kg/kg de material de partida) y piridina (11.3 kg, 5 equivalentes) y se enfrió a -10°C. EL anhídrido trifluorometansulfónico (10.1 kg, 1.25 equivalentes) se adicionó a una velocidad que mantuvo la temperatura inferior a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a -10°C hasta 0°C hasta que el material de partida se consumó. Una vez completada, la mezcla de reacción se lavó con 7.5% de solución de HC1 (3 x 68 kg, 17 equivalentes) y agua (48 kg) . Durante los lavados, la temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo a <5°C. La mezcla se ajustó a pH>6 lavando con 7.5% de solución de NaHC03 (55.0 kg) . Se adicionó trietilamina (0.4 kg, 0.3 kg/kg de material de partida) y la fase orgánica se secó con K2C03 anhidro (1.2 kg, 0.1 equivalentes) . La mezcla se filtró y se concentró a sequedad bajo vacío a 20°C hasta 35°C para dar (3S, 4R, 5S, 6R) -4,5, 6 -Tris (benciloxi) tetrahidro-2H-piran-3 -ol . El triflato se utilizó sin purificación. RMN (300 MHz, CDC13) : d 7.31 - 7.16 (m, 15H) , 5.12 (br s, 1H) , 4.83 (d, J = 4 Hz, 1H) , 4.76 (d, J = 11 Hz, 1H) , 4.64 (m, 2H) , 4.50 (d, J = 9 Hz, 1H) , 4.46 (d, J = 8 Hz, 1H) , 3.97 (dd, J = 10, 3 Hz, 1H) , 3.86 (d, J = 14 Hz, 1H) , 3.77 - 3.72 (m, 2H) . Etapa 7 : El triflato se disolvió en DMF (36.2 kg, 3.02 kg/kg de material de partida) y se enfrió a 10°C. Se adicionó el nitrito de sodio (5.9 kg, 3.0 equivalentes) . La solución se sometió a exoterma a aproximadamente 30°C, luego la mezcla de reacción se enfrió a 15°C a 25°C y se agitó por 12 - 16 h. La mezcla se enfrió a 5°C, y se adicionó agua (152 kg, 4.2 kg/kg DMF) a una velocidad que mantuvo la temperatura <15°C. La mezcla resultante se agitó a 10°C por 2 horas. Los sólidos se filtraron y lavaron con agua (2 x 12 kg) . Los sólidos filtrados se disolvieron en acetato de etilo (216 kg, 1.8 kg/kg de material de partida) . La solución se lavó con salmuera (15.5 kg) , se secó con MgS04 (2.5 kg) , se filtró, y el filtrado se concentró a sequedad bajo vacío a 35°C. Se adicionó isopropanol (9.5 kg) y se calentó a 75 °C para disolver el producto crudo. Se adicionó heptano (24.6 kg) a la solución y la mezcla se enfrió a 15°C hasta 25°C. La mezcla se enfrió adicionalmente a 0°C y se agitó durante la noche. Los sólidos se filtraron y lavaron con heptano (2 x 8.2 kg) . El material se secó en un horno a vacío. Se obtuvo (3S, 4R, 5S, 6R) -4 , 5, 6-Tris (benciloxi) tetrahidro-2H-piran-3-ol como un sólido amarillo, 5.3 kg (44%). 1H RMN (300 MHz, CDC13) : d 7.37 (m, 15H) , 4.96 (d, J = 11 Hz, 1H) , 4.80 (m, 2H) , 4.68 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.61 (m, 2H) , 4.53 (d, J = 12 Hz, 1H) , 3.78 (m, 1H) , 3.67 (m, 3H) , 3.50 (dd, J = 9.3 Hz, 1H) , 2.42 (br s, 1H) . Etapa 8 : El derivado de tribencilxilosa (10.4 kg, 24.73 moles) se mezcló con cloruro de metileno (68.6 kg, 6.6 kg/kg de material de partida) y piridina (9.8 kg, 5 equivalentes) y se enfrió a -10°C. Se adicionó anhídrido trifluorometansulfónico (8.7 kg, 1.25 equivalentes) a una velocidad que mantuvo la temperatura inferior a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a -10°C hasta 0°C hasta que el material de partida se consumió. Una vez completada, la mezcla de reacción se lavó con 7.5% de solución de HCl .(3 x 58.9 kg, 17 equivalentes) y agua (41.6 kg) . Durante los lavados, la temperatura de la mezcla de reacción se mantuvo a <5°C. La mezcla se ajustó a pH>6 lavando con solución de NaHC03 saturada (44.6 kg) . Se adicionó trietilamina (0.4 kg, 0.3 kg/kg de material de partida) y la fase orgánica se secó con K2C03 anhidro (1.2 kg, 0.1 equivalentes). La mezcla se filtró y concentró a sequedad bajo vacío a 20°C hasta 35°C. RMN? Etapa 9 : El triflato se disolvió en THF (29 kg, 2.8 kg/kg de material de partida) y se enfrió a 0°C. Se adicionó cianuro de tetraetilamonio (4.6 kg, 1.2 equivalentes), la solución se sometió a exoterma, luego la mezcla de reacción se enfrió a 20°C y se agitó por 12 h. Se adicionó acetato de etilo (21.8 kg) y la fase orgánica se lavó con 10% de solución de NaCl (3 x 14.3 kg) . Las capas acuosas combinadas se extrajeron con acetato de etilo (21.8 kg) . Las capas orgánicas se combinaron, se secaron con MgS0 (2 kg) , se filtraron, y se concentraron a sequedad. Se adicionó etanol (200 pf, 3.23 kg/kg de material de partida) y se calentó a 70°C hasta disolver el producto crudo. La solución se enfrió a 20°C, luego se enfrió adicionalmente a 5°C y se agitó durante la noche. Los sólidos se filtraron y lavaron con heptano (2 x 10.4 kg) . La cristalización de 200 pf etanol (7 ml/g sólidos) se repitió. Los sólidos se filtraron y se lavaron con heptano (2 x 10.4 kg) . El material se secó en un horno a vacío. Se obtuvo ( 3R, 4R, 5S , 6S) -4 , 5 , 6 - Tris (benciloxi ) tetrahidro-2H-piran-3 -carbonitrilo como un café claro, 6.3 kg (59%). XH RMN (300 MHz, CDC13) : d 7.31 (m, 15H) , 4.90 (d, J = 3 Hz, 1H) , 4.81 - 4.73 (complejo, 3H) , 4.70 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.62 (d, J = 12 Hz, 1H) , 4.55 (d, J = 12 Hz, 1H) , 3.99 (dd, J = 9, 5 Hz, 1H) , 3.91 (dd, J = 12, 3 Hz, 1H) , 3.82 - 3.74 (señales superpuestas, 2H) , 3.13 m, 1H) . Etapa 10: El derivado de nitrilo (2.5 kg, 5.8 moles) se disolvió en etanol absoluto (138.1 kg) y se calentó a 35°C hasta que se obtuvo una solución clara. El paladio humedecido sobre carbono se adicionó (250 g; 10% p/p) , seguido por hidróxido de paladio, (250 g; 20% p/p) y ácido clorhídrico (0.6 L) . La solución se purgó dos veces con nitrógeno y una vez con hidrógeno. La solución se presurizó a 80 psi con hidrógeno, se agitó, y se calentó a 35°C por 72 horas, volviendo a presurizar cuando fuera necesario. La mezcla se filtró y se concentró bajo vacío a 30°C hasta 35°C. El clorhidrato de isofagomina crudo se mezcló con NH4OH acuoso (3 L) . La solución se filtró y purificó sobre una columna de gel de sílice (aproximadamente 20 kg) usando sistema de solvente 9:1 EtOH/ HOH acuoso. El producto se concentró bajo vacío a 35°C hasta 40°C. La base libre de isofagomina se disolvió en etanol absoluto (7.7 ml/g de residuo) y se filtró. Se disolvió el ácido L- (+) -tartárico (1185 g, 1 g/g de residuo) en etanol absoluto (7.7 ml/g de residuo), se filtró, y lentamente se adicionó a la solución de isofagomina en etanol. Esta solución se agitó por 45 minutos, se filtró, y se lavó con etanol (2.5 1, 1 ml/g de material de partida) .

El producto se secó a peso constante en un horno de vacío a 44 °C. Se obtuvo tartrato de isofagomina como un sólido blanco 1.2 kg (97.5% de pureza). XH RMN (300 MHz , D20) : d 4.40 (s, 2H) , 3.70 (dd, J = 12, 4 Hz, 1H) , 3.66 - 3.58 (m, 2H) , 3.38 (m, 3H) , 2.83 (t, J = 13 Hz , 1H) , 2.79 (t, J = 13 Hz, 1H) , 1.88 - 1.77 (m, 1H) .

EJEMPLO 2 : Recristalización de tartrato de isofagomina Se disolvió el tartrato de isofagomina (1.767 g) en agua (1.767 1) a temperatura ambiente. El EtOH absoluto (1.767 1) se adicionó y agitó por más de 30 minutos. Una alícuota adicional de EtOH absoluta (1.767 1) se adicionó por goteo a una corriente lenta y se agitó por 30 minutos. Este proceso se repitió dos veces (incluyendo los 30 minutos de agitación) para obtener una solución de 4:1 EtOH/agua. Los sólidos se filtraron y lavaron con EtOH/agua (4:1) y se secaron en un horno a vacío a 43 °C durante la noche a un peso constante (es decir, <1% del peso neto perdido después de volver a secar por unas 2 horas adicionales) . El rendimiento de la recristalización fue de 91%. La muestra se encontró que tiene 1.3% de impurezas basadas en CIAR. El espectro de RMN del producto recristalizado se muestra en la Figura 3 y Figura 4. p.f. 168 - 169°C.

EJEMPLO 3 : Síntesis de Sales de Tartrato de Isofagomina Sal de L (+) -tartrato de isofagomina (2:1) Una solución de ácido L- (+) -tartárico (102 mg, 0.679 mmol) en agua desionizada (1.0 mi) se adicionó en la solución de isofagomina (200 mg, 2.0 equivalentes) disuelta en agua desionizada (2.0 mi) a temperatura ambiente. La solución se agitó por 10 minutos y se liofilizó durante la noche. El residuo se secó adicionalmente bajo vacío a 45°C por tres días para producir la sal deseada (275.6 mg, 91%) . P.f. 92 - 93°C, XH R N (300 MHz , D20) : d 4.22 (s, 2H) , 3.71 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1H) , 3.67 - 3.59 (m, 2H) , 3.44 - 3.37 (m, 3H) , 2.85 (t, J = 12 Hz, 1H) , 2.75 (t, J = 12 Hz, 1H) , 1.85 (m, 1H) (FIGURA 8A) Sal de D- (-) -Tartrato de isofagomina (2:1) Una solución de ácido D- (-)- tartárico (102 mg, 0.679 mmol) en agua desionizada (1.0 mi) se adicionó en la solución de isofagomina (200 mg, 2.0 equivalentes) disuelta en agua desionizada (2.0 mi) a temperatura ambiente. La solución se agitó por 10 minutos y se liofilizó durante la noche. El residuo se secó adicionalmente bajo vacío a 45°C por tres días para producir la sal deseada (287.2 mg, 95%) . P.f. 94 - 95°C, XH RMN (300 MHz , D20) : d 4.22 (s, 2H) , 3.71 (dd, J = 12, 3.6 Hz, 1H) , 3.67 - 3.59 (m, 2H) , 3.44 - 3.36 (m, 3H) , 2.85 (t, J = 12 Hz, 1H) , 2.75 (t, J = 12 Hz, 1H) , 1.84 (m, 1H) (FIGURA 8B) .

Sal de D- (-) -Tartrato de isofagomina (1:1) Una solución de ácido D- (-) -tartárico (204 mg, 1.359 mmol) en agua desionizada (2.9 mi) se adicionó en la solución de isofagomita (200 mg, 2.0 equivalentes) disuelta en agua desionizada (2.0 mi) a temperatura ambiente. La solución se agitó por 10 min y se liofilizó durante la noche. El residuo se secó adicionalmente bajo vacio a 45°C por tres días para proporcionar la sal deseada (396.9 mg, 98%). P.f. 73 - 74 °C, XH RMN (300 MHz , D20) : d 4.41 (s, 2H) , 3.71 (dd, H = 12, 3.3 Hz, 1H) , 3.66 - 3.59 (m, 2H) , 3.44 - 3.36 (m, 3H) , 2.84 (t, J = 12 Hz, 1H) , 2.75 (t, J =12 Hz, 1H) , 1.84 (m, 1H) (Figura 8C) .

EJEMPLO 4 : Formulaciones de cápsula de tartrato de isofagomina Cápsula de 10 mg, Prototipo Cápsula de 100 mg, Prototipo 1 2 % p/p mg/cápsula g/lote % p/p mg/cápsula g/lote Tartrato de 5.50 10.00 15.00 50.00 10.00 40.00 isofagomina Avicel PH102'B 94.00 170.79 256.19 49.50 99.00 39.60 (celulosa microcristalina ) Estearato de .050 .091 1.36 0.50 1.0 .040 Magnesio Total 100.00 181.70 272.55 100.00 200.00 80.0 cubiertas de 1500 cápsulas (tamaño de 400 cápsulas (tamaño de cápsula blanco cubierta estimado = 2 ó 3) cubierta estimado = 2 ó 3) opaco, tamaño tbd Cápsula de 10 mg, Prototipo Cápsula de 100 mg, Prototipo 3 4 % p/p mg/cápsula g/lote % p/p mg/cápsula g/lote Tartrato de 4.35 10.00 15.00 40.00 100.00 40.00 isofagomina Emcompress™ 47.43 109.08 163.62 29.60 74.00 29.60 (fosfato de dicalcio dibásico) Avicel PH102* 47.43 109.08 163.62 29.60 74.00 29.60 (celulosa microcristalina) Cab-O-Sil" (dióxido .30 .69 1.04 .30 .75 .30 de silicio coloidal (humeante) Estearato de 0.50 1.15 1.73 .050 1.25 .050 Magnesio Total 100.00 230.00 345.00 100.00 250.00 100.00 cubiertas de 1500 cápsulas (tamaño de 400 cápsulas (tamaño de cápsula blanco cubierta estimado = 2 6 3) cubierta estimado = 2 6 3) opaco, tamaño tbd EJEMPLO 5 : Mejoramiento Intracelular de Actividad de GCasa en Fibroblastos de Gaucher Pacientes La actividad de mejoramiento intracelular de L-(+)-tartrato de isofagomina se investigó con fibroblastos establecidos de pacientes con Gaucher. Para evaluar los efectos de IFG en niveles de GCasa mutante, se condujo un estudio de respuesta ex vivo con macrófagos y linfoblastos transformados por EBV derivados de leucocitos periféricos de 40 pacientes. El estudio incluyó 21 hombres con enfermedad de Gaucher Tipo I, 1 hombre con enfermedad de Gaucher Tipo III, y 18 mujeres con enfermedad de Gaucher Tipo 1. Los pacientes variaron en edad desde 7 a 83 años, y 38 de 40 pacientes estuvieron en terapia de reemplazo de enzima (ERT) . Los macrófagos fueron derivados exitosamente de 34 a 40 pacientes, de los cuales 32 demostraron un incremento dependiente de la dosis en niveles de GCasa (promedio = 2.8 veces) cuando se trataron con tartrato de IFG (5 días) . Se observaron resultados similares para 5 líneas celulares de linfoblasto derivado del paciente adicionales. La IFG incrementó significativamente los niveles de GCasa en las células de los pacientes con diferentes genotipos incluyendo N370S/N370S (11), N370S/L444P (8), N370S/84insG (11), N370S/R163X, N370S/Y212H, L444P/del 136T, L444P/F216Y, L444P/L174F, G202R/R463C, y K79N/complej o B exón 9/10 (tipo III GD) . El mejoramiento máximo de GCasa en macrófagos se logró a aproximadamente 30 µ? de IFG.

Ejemplo 6: Estudios de Fase I de la Seguridad, Farmacocinéticas y Farmacodinámicas de Tartrato de Isofagomina, una Nueva Chaperona Farmacológica para el Tratamiento de Enfermedad de Gaucher El tartrato de isofagomina es una chaperona farmacológica en desarrollo para el tratamiento del trastorno de almacenamiento lisosomal, enfermedad de Gaucher. Usando móldeos animales y de base celular se muestra que la isofagomina incrementa los niveles celulares de glucocerebrosidasa (GCasa) , la enzima deficiente en la enfermedad de Gaucher. Se realizaron estudios clínicos de Fase I de doble blindaje aleatorizados en 72 voluntarios saludables, (39 hombres, 33 mujeres). El tartrato de isofagomina se administró oralmente como una solución acuosa. En un estudio de dosis ascendente única primero en humanos, las dosis de 8, 25, 75, 150 (dos grupos), y 300 mg se administraron (6 activos, 2 placebos en cada grupo) . En un estudio de dosis ascendente múltiple, las dosis de 25, 75, y 225 mg se administraron diariamente por siete días (6 activos, 2 placebos en cada grupo) . En ambos estudios, el tartrato de isofagomina generalmente fue bien tolerado a todas las dosis y los eventos adversos de tratamiento emergente en ambos estudios fueron mayormente ligeros. No ocurrieron eventos adversos serios. El tartrato de isofagomina mostró buena exposición sistémica vía la ruta oral. En el estudio de dosis única, los valores de Cmax y AUC en plasma fueron correlacionados linealmente con la dosis administrada. Los niveles en plasma promedio llegaron al máximo en 3.4 hr. (SEM: 0.6 hr.) y la vida media de eliminación de plasma fue 14 hr (SEM: 2 hr . ) . En el estudio de dosis múltiples, después de 7 días de administración oral, el comportamiento farmocinético se encontró que es lineal con la dosis, con ninguna acumulación inesperada de isofagomina. Los valores Tmax y vida media fueron similares a aquellos observados en el estudio de dosis única . En el estudio de dosis múltiples, la actividad de GCasa en glóbulos blancos aislados se midió en los días 1, 3, 5 y 7 durante la administración de tartrato de isofagomina, y en los días 9, 14 y 21 durante el período de fracasos de post-tratamiento . En todos los sujetos que recibieron tartrato de isofagomina existió un incremento marcado en niveles de GCasa durante el período de tratamiento, seguido por una disminución en la remoción del fármaco y un retorno a niveles de línea de base cercanos por el día 21 (figura 9) . El incremento en el nivel de enzima estuvo relacionado con la dosis, alcanzando aproximadamente 3.5 veces los niveles de línea de base anteriores. Estos resultados para la seguridad, farmacocinéticas y efectos farmacodinámicos prelimares en voluntarios saludables soportan la evaluación adicional de tartrato de isofagomina para el tratamiento de enfermedad de Gaucher . La presente invención no será limitada en alcance por las modalidades específicas descritas en la presente. En efecto, varias modificaciones de la invención además de aquellas descritas en la presente llegaran a ser evidente para aquellos expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y las figuras acompañantes. Tales modificaciones se proponen para caer dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Se entenderá adicionalmente que todos los valores son aproximados, y se proporcionan para descripción. Las patentes, solicitudes de patentes, publicaciones, descripciones de producto, y protocolos son citadas en toda esta solicitud, las descripciones de las cuales se incorporan en la presente para referencia en sus totalidades para todos los propósitos. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (51)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Compuesto de la sal de ácido tartárico de isofagomina (tartrato de isofagomina) con la siguiente estructura química representativa: caracterizado porque n es 1 ó 2.

2. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tartrato de isofagomina es una forma sustancialmente purificada.

3. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la pureza del tartrato de isofagomina es al menos 95%.

4. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la pureza del tartrato de isofagomina es al menos 98%.

5. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la pureza del tartrato de isofagomina es al menos 99%.

6. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n = 1.

7. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque n = 2.

8. Compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el tartrato de isofagomina es la sal de ácido L- (+) -tartárico de isofagomina y n = 1.

9. Complejo caracterizado porque es de un ácido tartárico e isofagomina.

10. Composición caracterizada porque comprende tartrato de isofagomina.

11. Composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la composición contiene el tartrato de isofagomina al menos 50% en peso.

12. Composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque la composición contiene el tartrato de isofagomina al menos 90% en peso.

13. Composición de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque 90% o más del tartrato de isofagomina tiene un tamaño de partícula de 1200 um o menor.

14. Composición de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque contiene el tartrato de isofagomina al menos 99% en peso.

15. Método para preparar tartrato de isofagomina caracterizado porque comprende: (a) hacer reaccionar la base libre de isofagomina o su forma ionizada y ácido tartárico en un solvente; y (b) aislar el tartrato de isofagomina.

16. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el ácido tartárico es ácido L- (+) -tartárico .

17. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque se forma al menos un kilogramo de tartrato de isofagomina.

18. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el solvente es alcohol acuoso.

19. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el alcohol se selecciona de metanol , etanol , propanoles, butanoles, o mezclas de los mismos.

20. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el alcohol es etanol.

21. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque la etapa de aislamiento incluye recristalización.

22. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque 90% o más del tartrato de isofagomina tiene un tamaño de partícula de 1200 µt? o menor.

23. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la recristalización se realiza en agua con ayuda de un solvente secundario.

24. Método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el solvente secundario es un solvente prótico .

25. Método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado porque el solvente prótico es un alcohol.

26. Método para preparar tartrato de isofagomina de alta pureza en una escala industrial, caracterizado porque comprende : (a) hacer reaccionar aproximadamente 1 kg o más de base libre de isofagomina o su forma ionizada y ácido tartárico en un solvente; (b) obtener un tartrato de isofagomina cruda; (c) recristalizar el tartrato de isofagomina cruda usando una solución acuosa; y (d) aislar el tartrato de isofagomina de alta pureza .

27. Método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la solución acuosa es agua.

28. Método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la solución acuosa es una mezcla de agua y un alcohol en donde el agua y el alcohol se usan al mismo tiempo o con un intervalo.

29. Método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la alta pureza es al menos 84% puro por

30. Método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la alta pureza es al menos 98% pura por peso .

31. Método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la alta pureza es al menos 99% pura por peso .

32. Método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque 90% o más del tartrato de isofagomina de alta pureza tiene un tamaño de partícula de 1200 µ?? o menor.

33. Composición farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de tartrato de isofagomina y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

34. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque la cantidad farmacéuticamente efectiva varia desde aproximadamente 5 y 300 mg por dosis .

35. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque la cantidad farmacéuticamente efectiva varía desde aproximadamente 10 y 100 mg por dosis.

36. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque el excipiente farmacéuticamente aceptable es celulosa microcristalina , estearato de magnesio, o fosfato de calcio dibásico.

37. Composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada porque el tartrato de isofagomina está en una forma cristalina.

38. Compuesto caracterizado porque es de tartrato de isofagomina cristalina.

39. Compuesto de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el tartrato de isofagomina cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que incluye cinco o más picos de los picos siguientes: (2 theta) 9.29 + 0.009, 14.17 + 0.009, 16.34 + 0.009, 18.07 + 0.009, 18.72 + 0.009, 19.44 + 0.009, 20.56 + 0.009, 22.13 + 0.009, 23.01 + 0.009, 24.54 + 0.009, y 27.12 + 0.009.

40. Compuesto de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el tartrato de isofagomina cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que incluye los siguientes picos: (2 tetha) 9.29, 14.17, 16.34, 18.07, 18.72, 19.44, 20.56, 22.13, 23.01, 24.54, y 27.12.

41. Compuesto de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porgue el tartrato de isofagomina cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que es sustancialmente la misma que la configuración mostrada en la Figura 5.

42. Método de tratamiento de enfermedad de Gaucher caracterizado porque comprende administrar a un individuo con necesidad de tratamiento una cantidad efectiva de tartrato de isofagomina .

43. Método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el tartrato de isofagomina es sustancialmente puro.

44. Método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el tratamiento además comprende administrar al individuo una enzima de glucocerebrosidasa funcional .

45. Método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque la cantidad efectiva del tartrato de isofagomina es aproximadamente 10-100 mg por dosis.

46. Método para incrementar en una célula de mamífero la actividad de glucocerebrosidasa, el método se caracterizado porque comprende poner en contacto la célula con tartrato de isofagomina en una cantidad efectiva para mejorar la actividad de glucocerebrosidasa.

47. Método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el tartrato de isofagomina es una forma cristalina .

48. Método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque la forma cristalina tiene una configuración de difracción en polvo de rayos x que incluye cinco o más picos de los siguientes picos: (2 tetha) 9.29 + 0.009, 14.17 + 0.009, 16.34 + 0.009, 18.07 + 0.009, 18.72 + 0.009, 19.44 + 0.009, 20.56 + 0.009, 22.13 + 0.009, 23.01 + 0.009, 24.54 + 0.009, y 27.12 + 0.009.

49. Método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque la célula de mamífero es una célula humana .

50. Método de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el tartrato de isofagomina se une de manera reversible a la glucocerebrosida en una cantidad efectiva para estabilizar la glucocerebrosidasa .

51. Sal farmacéuticamente aceptable de isofagomina, caracterizada porque la sal farmacéuticamente aceptable es fácilmente recristalizada en un kg o mayor escala usando una solución acuosa y es tartrato de isofagomina.