CN104519905A - 用于治疗iii型戈谢病的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了用于治疗戈谢病的方法和组合物。

Description

用于治疗III型戈谢病的组合物和方法
相关申请案的交叉引用
本申请要求2012年3月2日提交的美国申请系列号61/606,089的优先权。先前申请的公开内容被认为是本申请的公开内容的部分(并且通过引用并入本文)。
背景
III型戈谢病(Gaucher disease)为以溶酶体酶、葡糖脑苷脂酶(GCB)缺乏为特征的常染色体隐性溶酶体贮积病。GCB使在白细胞和红细胞的膜中的鞘糖脂降解之后形成的糖脂葡糖脑苷脂水解。该酶的缺乏导致葡糖脑苷脂在位于III型戈谢病患者的肝、脾和骨髓中的巨噬细胞的溶酶体中大量积聚。这些分子的积聚引起多种临床表现，包括脾肿大、肝肿大、骨骼病症、血小板减少和贫血。(Beutler等，Gaucher disease；在The Metabolic and Molecular Bases of InheritedDisease(McGraw-Hill,Inc,New York,1995)第2625-2639页中)。
对于患该病的患者的治疗包括施用缓减骨痛的镇痛药、输注血液和血小板和在一些情形下实施脾切除术。对于经受骨侵蚀的患者有时需要关节置换术。
已经将用GCB的酶替代疗法用作对III型戈谢病的治疗。对患有III型戈谢病的患者的当前治疗包括施用来源于用GCB表达构建体转染的人类胎盘或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的碳水化合物重塑GCB且所述碳水化合物重塑GCB分别称为阿糖脑苷酶或伊米苷酶(imiglucerase)。
概述
本发明部分地基于在施用给受试者(例如，患有III型戈谢病的受试者)时与伊米苷酶相比维拉苷酶(velaglucerase)引起较少免疫响应(例如，产生较少抗体，例如，产生较少中和抗体)的发现。本发明特别涉及用于为患有III型戈谢病的受试者选择治疗、为维拉苷酶治疗(例如，单独或与另一疗法组合)选择受试者的组合物和方法、用于减少在经受对III型戈谢病的治疗的受试者中的注射部位反应的方法及治疗III型戈谢病的方法。本发明也特别涉及在对III型戈谢病进行治疗的受试者中测定抗体产生，例如中和抗体产生的方法。本公开内容至少部分地基于以下前提：葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)能够穿过血脑屏障，从而可用于治疗或预防或阻止神经学参数或神经学症状(例如与III型戈谢病相关的神经学参数或神经学症状)的进展。
在一些方面，本发明的特点在于一种治疗患有III型戈谢病的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：
通过静脉内输注经小于2小时，例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟的时间对所述受试者施用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)，由此治疗所述受试者。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶、uplyso)施用不止一次且各额外剂量的葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)通过经小于2小时，例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟的时间静脉内施用给所述受试者来施用。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶、uplyso)以15-60U/kg(例如，30U/kg-60U/kg，例如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量、以等于或小于22.5U/kg的剂量、以在22.5U/kg和37.5U/kg之间的剂量、以在37.5U/kg和52.5U/kg之间的剂量或以等于或大于52.5U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶、uplyso)以2.5U/kg-60U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶、uplyso)每隔一周施用。在其他实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶、uplyso)每周施用。在一些实施方案中，所述维拉苷酶通过静脉内输注例如以2.5U/kg的剂量每周施用3次。
在一些实施方案中，一种或多种剂量(例如，本文所述的剂量)的输注经60分钟发生。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法为维拉苷酶且所述方法包括以下步骤：
用诸如灭菌注射水的药学上可接受的载体重构冻干的维拉苷酶(例如，用2.2mL灭菌注射水重构200单位小瓶或用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶)，由此形成溶液，例如，其中在加入所述灭菌注射水之后不振荡所述小瓶；任选地检查所述小瓶中的溶液(且，例如任选地测定所述溶液是否变色或是否存在微粒物质，且如果所述溶液变色或存在微粒物质，则任选决定不使用所述溶液)；
移出一定量的溶液以提供预选剂量(例如，本文所述的剂量，诸如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)；
例如在100mL适合于静脉内施用的0.9％氯化钠溶液中稀释所述量的溶液，由此形成稀溶液；任选轻轻摇动所述稀溶液，但不振荡所述稀溶液；和
通过静脉内输注向所述受试者施用所述稀溶液，例如，其中经1小时或以1U/kg/min的速率施用所述稀溶液。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法以2U/kg/min、1.5U/kg/min、1U/kg/min或0.5U/kg/min的输注速率施用。
在一些实施方案中，所述施用包括家庭疗法(例如，在受试者的家、工作场所或其他非临床(例如，非医院)环境中)。在一些实施方案中，所述施用(例如，经输注)由保健专业人员(例如，护士或医师助理)进行。例如，如果受试者例如在施用(例如，经输注)所述葡糖脑苷脂酶替代疗法一次、两次或三次之后，没有经历不良事件(AE)(例如，药物有关的严重AE或输注有关的AE，例如本文所述的事件)，则所述受试者适宜接受家庭疗法以便进行后续施用。
在另一方面，本发明提供一种鉴定适合于(例如，有希望)用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)治疗的受试者的方法。所述方法包括评估(例如，例如通过本文所述的诸如ELISA或放射免疫沉淀测定(RIP)的方法测量)例如来自所述受试者的样品中是否存在葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，当前正对所述受试者施用的疗法)(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且将所述疗法的抗体的测量值与标准(例如，阴性对照)进行比较。例如，如果所述受试者具有大于阴性对照(例如，在ELISA中的阴性对照)测量值的抗体测量值，则所述受试者被鉴定为具有所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体。例如，如果所述测量值比所述标准的值大例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％以上，则所述受试者任选被鉴定为适合于用备选的III型戈谢病治疗(例如，用维拉苷酶治疗)进行治疗。
在一些实施方案中，所述样品为血液或血清样品。在一些实施方案中，所述样品已被改良。例如，抗体测量值通过使样品与分析试剂、例如经标记的试剂(例如，经标记的葡糖脑苷脂酶)和/或底物或细胞、例如与葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体结合的底物或细胞接触来获得。在一些实施方案中，所述抗体测量值从已经富含抗体的样品、例如血液或血清样品的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
在一些实施方案中，所述方法包括例如通过本文所述的方法测量所述抗体测量值。
在另一方面，本发明提供一种选择患有III型戈谢病的受试者以便用葡糖脑苷脂酶替代疗法进行治疗的方法。任选地，所述方法包括根据受试者是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗的抗体(例如，中和抗体)经测试为阳性来选择所述治疗的受试者。所述方法包括评估(例如，例如通过本文所述的诸如ELISA或放射免疫沉淀测定(RIP)的方法测量)在例如来自所述受试者的样品中是否存在葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，当前正对受试者施用的疗法)(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体或获得所述评估且将所述疗法的抗体的测量值与标准(例如，阴性对照)比较。例如，如果所述受试者具有大于阴性对照(例如，在ELISA中的阴性对照)测量值的抗体测量值，则所述受试者被鉴定为具有所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体。所述方法任选地包括：例如，如果所述测量值比所述标准(例如，阴性对照)的值大例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％以上，则为所述受试者选择备选的III型戈谢病治疗(例如，用维拉苷酶治疗)。
在一些实施方案中，所述样品为血液或血清样品。在一些实施方案中，所述样品已被改良。例如，抗体测量值通过使样品与分析试剂、例如经标记的试剂(例如，经标记的葡糖脑苷脂酶)和/或底物或细胞、例如与葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体结合的底物或细胞接触来获得。在一些实施方案中，所述抗体测量值从已经富含抗体的样品、例如血液或血清样品的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
在一些实施方案中，所述方法包括例如通过本文所述的方法测量所述抗体值。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgE抗体经测试为阳性。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgM抗体经测试为阳性。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgG和/或IgA抗体经测试为阳性。
在另一方面，本发明提供一种治疗患有III型戈谢病的受试者的方法。所述方法包括例如通过本文所述的方法、根据受试者是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗的IgG和/或IgA抗体经测试为阳性或根据受试者处于产生III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)的危险中而选择受试者，和对所述受试者施用维拉苷酶。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgE抗体经测试为阳性。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgM抗体经测试为阳性。
在一些实施方案中，受试者关于是否产生其当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的IgG和/或IgA抗体经测试为阳性。
在一些实施方案中，维拉苷酶以15-60U/kg(例如，30U/kg-60U/kg，例如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量、以等于或小于22.5U/kg的剂量、以在22.5U/kg和37.5U/kg之间的剂量、以在37.5U/kg和52.5U/kg之间的剂量或以等于或大于52.5U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶以2.5-60U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶每隔一周通过静脉内输注施用。在其他实施方案中，维拉苷酶每周通过静脉内输注施用。在一些实施方案中，维拉苷酶通过静脉内输注例如以2.5U/kg的剂量每周施用3次。
在一些实施方案中，所述剂量(例如，本文所述的剂量)的输注经小于2小时、例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟发生。在优选的实施方案中，所述剂量的输注经60分钟发生。
在一些实施方案中，所述方法包括以下步骤：
用诸如灭菌注射水的药学上可接受的载体诸如药学上可接受的载体重构冻干的维拉苷酶(例如，用2.2mL灭菌注射水重构200单位小瓶或用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶)，由此形成溶液，例如，其中在加入所述灭菌注射水之后不振荡所述小瓶；任选地，检查所述小瓶中的溶液(且，例如任选地测定所述溶液是否变色或是否存在微粒物质，且如果所述溶液变色或存在微粒物质，则任选地决定不使用所述溶液)；
移出一定量的溶液以提供预选剂量(例如，本文所述的剂量，诸如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)；
例如在100mL适合静脉内施用的0.9％氯化钠溶液中稀释所述量的溶液，由此形成稀溶液；任选地轻轻摇动所述稀溶液，但不振荡所述稀溶液；和
通过静脉内输注对所述受试者施用所述稀溶液。
在一些实施方案中，维拉苷酶以2U/kg/min、1.5U/kg/min、1U/kg/min或0.5U/kg/min的速率施用。
在一些实施方案中，所述施用包括家庭疗法(例如，在受试者的家、工作场所或其他非临床(例如，非医院)环境中)。在一些实施方案中，所述施用(例如，经输注)由保健专业人员(例如，护士或医师助理)进行。例如，如果受试者例如在施用(例如，经输注)维拉苷酶一次、两次或三次之后，没有经历不良事件(AE)(例如，药物有关的严重AE或输注有关的AE，例如本文所述的事件)，则所述受试者适宜接受家庭疗法以便进行连续施用。
在另一方面，本发明提供一种鉴定适合于(例如，有希望)用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)治疗的受试者的方法。所述方法包括(例如)评估(例如，测量)所述受试者(例如，在输注葡糖脑苷脂酶替代疗法12小时期间或12小时之内)(例如，在当前正施用给受试者的疗法中，例如伊米苷酶或uplyso))是否存在输注部位反应(即，输注有关的不良事件)且将所述部位反应的测量水平与标准(例如，阴性对照)比较。例如，如果所述受试者在受试者当前接受的III型戈谢病治疗中的部位反应的测量值大于阴性对照(例如，在受试者体内输注安慰剂之后观察到的部位反应)的测量值，例如，如果在受试者当前接受的III型戈谢病治疗中的部位反应的测量值比所述标准值大例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％以上，则将所述受试者鉴定为适合用备选的III型戈谢病治疗(例如，用维拉苷酶的治疗)进行治疗。
在一些实施方案中，所述方法包括例如通过本文所述的方法测定输注部位值。
在另一方面，本发明提供一种选择患有III型戈谢病的受试者以便用葡糖脑苷脂酶替代疗法进行治疗的方法。任选地，所述方法包括根据受试者需要降低输注部位反应(例如，与受试者当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)相关或由其引起的反应相比降低)来选择所述治疗的受试者。所述方法包括(例如)评估(例如，测量)所述受试者(例如，在输注葡糖脑苷脂酶替代疗法12小时期间或12小时之内)(例如，在当前施用给受试者的疗法中，例如伊米苷酶或uplyso))是否存在输注部位反应(即，输注有关的不良事件)或获得所述评估且将所述部位反应的测量水平与标准(例如，阴性对照)比较。例如，如果所述受试者在受试者当前接受的III型戈谢病治疗中的部位反应的测量值大于阴性对照(例如，在受试者体内输注安慰剂之后观察到的部位反应)的测量值(例如，大5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％以上)，例如，如果在受试者当前接受的III型戈谢病治疗中的部位反应的测量值比所述标准(例如，阴性对照)值大例如5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％以上，则选择所述受试者进行备选的III型戈谢病治疗(例如，用维拉苷酶治疗)。
在一些实施方案中，所述方法包括例如通过本文所述的方法测量抗体值。
在另一方面，本发明提供一种治疗患有III型戈谢病的受试者的方法。所述方法包括例如通过本文所述的方法、根据受试者需要降低输注部位反应(例如，与受试者当前接受的III型戈谢病治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)相关或由其引起的反应相比降低)来选择所述治疗的受试者，和对所述受试者施用维拉苷酶。
在一些实施方案中，维拉苷酶以15-60U/kg(例如，30U/kg-60U/kg，例如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量、以等于或小于22.5U/kg的剂量、以在22.5U/kg和37.5U/kg之间的剂量、以在37.5U/kg和52.5U/kg之间的剂量或以等于或大于52.5U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶以2.5-60U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶每隔一周通过静脉内输注施用。在其他实施方案中，维拉苷酶每周通过静脉内输注施用。在一些实施方案中，维拉苷酶通过静脉内输注例如以2.5U/kg的剂量每周施用3次。
在一些实施方案中，所述剂量(例如，本文所述的剂量)的输注经小于2小时、例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟发生。
在一些实施方案中，所述方法包括以下步骤：
用例如灭菌注射水的药学上可接受的载体重构冻干的维拉苷酶(例如，用2.2mL灭菌注射水重构200单位小瓶或用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶)，由此形成溶液，例如，其中在加入所述灭菌注射水之后不振荡所述小瓶；任选地检查所述小瓶中的溶液(且，例如任选地测定所述溶液是否变色或是否存在微粒物质，且如果所述溶液变色或存在微粒物质，则任选地决定不使用所述溶液)；
移出一定量的溶液以提供预选剂量(例如，本文所述的剂量，诸如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)；
例如在100mL适合静脉内施用的0.9％氯化钠溶液中稀释所述量的溶液，由此形成稀溶液；任选地轻轻摇动所述稀溶液，但不振荡所述稀溶液；和
通过静脉内输注对所述受试者施用所述稀溶液。
在一些实施方案中，维拉苷酶以2.0U/kg/min、1.5U/kg/min、1.0U/kg/min或0.5U/kg/min的速率施用。
在一些实施方案中，所述施用包括家庭疗法(例如，在受试者的家、工作场所或其他非临床(例如，非医院)环境中)。在一些实施方案中，所述施用(例如，经输注)由保健专业人员(例如，护士或医师助理)进行。例如，如果受试者例如在施用(例如，经输注)维拉苷酶一次、两次或三次之后，没有经历不良事件(AE)(例如，药物有关的严重AE或输注有关的AE，例如本文所述的事件)，则所述受试者适宜接受家庭疗法以便进行后续施用。
在一些方面，本发明的特点在于一种选择患有III型戈谢病的受试者以便用维拉苷酶治疗的方法，所述方法包括以下步骤：
鉴定已接受葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)且具有小于标准的血小板计数的患有III型戈谢病的受试者；和
根据受试者具有小于标准的血小板计数来选择受试者以便用维拉苷酶治疗。
在一些实施方案中，所述方法包括评估(例如，测量)来自所述受试者的样品的血小板计数或获得所述血小板计数的估值并将所述血小板计数的测量值与标准(例如，阴性对照)比较。
在一些实施方案中，所述样品为血液或血清样品。在一些实施方案中，所述样品已被改良。在一些实施方案中，所述抗体测量值从已经富含血小板的样品、例如血样的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
在一些实施方案中，所述方法包括例如通过本文所述的方法测量血小板计数。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括例如以本文所述的剂量和/或给药方案对所述受试者施用维拉苷酶。
在一些实施方案中，维拉苷酶通过静脉内输注经小于2小时、例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟的时程施用。在一些实施方案中，所述输注以2U/kg/min、1.5U/kg/min、1U/kg/min或0.5U/kg/min的速率发生。
在一些实施方案中，所述标准为低于或等于80×103个血小板/立方毫米的血小板计数。在一些实施方案中，所述标准根据用葡糖脑苷脂酶替代疗法治疗6、9或12个月之后平均血小板计数的增加百分数。例如，与开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg的剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％的受试者被鉴定为适合用维拉苷酶治疗。作为另一实例，与开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg的剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％的受试者被鉴定为适合用维拉苷酶治疗。
在一些方面，本发明的特点在于一种治疗患有III型戈谢病的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：
选择已经接受葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)且具有小于标准的血小板计数的患有III型戈谢病的受试者，例如通过本文所述的方法鉴定出的受试者；和
对所述受试者施用维拉苷酶。
在一些实施方案中，维拉苷酶以15-60U/kg(例如，30U/kg-60U/kg，例如，15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量、以等于或小于22.5U/kg的剂量、以在22.5U/kg和37.5U/kg之间的剂量、以在37.5U/kg和52.5U/kg之间的剂量或以等于或大于52.5U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶以2.5-60U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶每隔一周通过静脉内输注施用。在其他实施方案中，维拉苷酶每周通过静脉内输注施用。在一些实施方案中，维拉苷酶通过静脉内输注例如以2.5U/kg的剂量每周施用3次。
在一些实施方案中，所述剂量(例如，本文所述的剂量)的输注经小于2小时、例如90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟发生。
在一些实施方案中，所述方法包括以下步骤：
用诸如灭菌注射水的药学上可接受的载体重构冻干的维拉苷酶(例如，用2.2mL灭菌注射水重构200单位小瓶或用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶)，由此形成溶液，例如，其中在加入所述灭菌注射水之后不振荡所述小瓶；任选地检查所述小瓶中的溶液(且，例如任选地测定所述溶液是否变色或是否存在微粒物质，且如果所述溶液变色或存在微粒物质，则任选地决定不使用所述溶液)；
移出一定量的溶液以提供预选剂量(例如，本文所述的剂量，诸如15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)；
例如在100mL适合静脉内施用的0.9％氯化钠溶液中稀释所述量的溶液，由此形成稀溶液；任选地轻轻摇动所述稀溶液，但不振荡所述稀溶液；和
通过静脉内输注对所述受试者施用所述稀溶液。
在一些实施方案中，维拉苷酶以2U/kg/min、1.5U/kg/min、1U/kg/min或0.5U/kg/min的速率施用。
在一些实施方案中，所述施用包括家庭疗法(例如，在受试者的家、工作场所或其他非临床(例如，非医院)环境中)。在一些实施方案中，所述施用(例如，经输注)由保健专业人员(例如，护士或医师助理)进行。例如，如果受试者例如在施用(例如，经输注)维拉苷酶一次、两次或三次之后，没有经历不良事件(AE)(例如，药物有关的严重AE或输注有关的AE，例如本文所述的事件)，则所述受试者适宜接受家庭疗法以便进行连续施用。
在另一方面，本发明提供一种评估受试者、例如当前正被施用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的受试者的方法。所述方法包括评估(例如，测量)所述受试者的以下参数中的一项或多项(例如，1、2、3、4、5、6或7项)或获得其估值；
血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积(例如，以占总体重的百分数形式)、脾体积(例如，以占总体重的百分数形式)、输注部位反应、骨骼参数、神经学参数或是否存在葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)(例如，这些参数中一项或多项(例如，1、2、3、4、5、6、7或8项)的平均值)。
骨骼参数可以为例如骨矿密度(BMD)(例如，如通过Z-分值的改变(例如，改进)所测量)。BMD可以例如通过双能量X线吸收测定法(DEXA)评估。可以评估的其他骨骼参数包括例如T-分值(例如，测定正常骨骼、骨量减少和骨质疏松的WHO分类)、受试者(例如，儿科受试者)的生长；受试者(例如，儿科受试者)的骨骼年龄；和骨髓负担(BMB)(例如，在成年受试者中)。
神经学参数可以是例如眼运动参数(例如，异常眼运动、异常垂直扫视、异常水平扫视、缓慢水平扫视和核上性凝高麻痹)。评价眼运动参数的方法可包括但不限于例如一般眼科评估和扫视眼球运行评估(例如，巩膜搜索线圈技术、视频技术和红外技术)。神经学参数可以是听力参数(例如，听力丧失)。评估听力参数的方法可包括但不限于一般听觉评估。神经学参数可以是异常脑干听觉诱发电位、颅神经麻痹、咬粘、进行性肌阵挛性癫痫、颤抖、EEG异常、痴呆、认知缺损、共济失调、肌协调的丧失和较差的移动性(poor mobility)。评估神经学参数的方法可包括但不限于例如EEG、脑干听觉诱发响应(BAER)、听觉诱发电位的测量(例如，电极帽)、体感觉诱发电位的测量(例如，正中神经刺激和拉伸诱发法)、精神状态评估(例如，神经心理学精神状态检查)、脑神经检查、运动技能评估(例如，机动能力的Bruininks-Oseretsky测试、学校功能评估测试、视觉-动作整合作用的Beery-Buktenica发展测试、运动和姿势技巧的临床观察(COMPS))、咬粘评估(例如，神经影像(例如，CT、MRI、弥散加权成像)、EEG、患者病史、体格检查)、手灵巧度和手眼协调测试，(例如，普渡钉板测试)、标准化IQ测试(例如，韦氏智力量表)、口头表演全量表智商测试、雷伊听觉言语学习测试、注意力的测量(例如，注意力的D2测试)、连续性能测试、接龙测试、本顿视觉体质测验、记忆力的测量(例如，修订的韦氏记忆量表、刺激呈现后被召回(presentation of stimuli to later be recalled)、加利福尼亚言语学习测试、雷伊听觉言语学习测试、选择性提醒测试、修订的本顿视觉保持测试、记忆作图测试、Rey-O复杂图形)，认知功能的评估(例如，韦氏相似性分测试、威斯康辛卡片分类测验、范畴测试、斯特鲁测试、神经系统试验电池(neurological test batteries)(例如，柔性电池、霍耳斯特德—赖坦神经心理学成套测验(Halstead-Reitanneuropsychological battery)、鲁利亚-内布拉斯加神经心理学成套测验(Luria-Nebraska Neuropsychological Battery))和心理计量测试。所述评估可以在治疗过程中例如约每周、约每两周、约每三周、约每四周、约每两个月、约每三个月、约每四个月、约每五个月、约每六个月、约每七个月、约每八个月、约每九个月、约每十个月、约每十一个月或约每十二个月进行一次。所述评估也可以在开始治疗之前进行(例如，用以确立基准值)。所述评估可以包括将来自受试者的参数的值与标准(例如，本文所述的标准，例如，阴性对照)比较和任选地测定来自受试者的参数的值与来自标准的值之间是否存在差异。所述标准可以为例如在针对III型戈谢病用不同疗法(例如，本文所述的治疗)治疗的患有III型戈谢病的受试者中测量的参数的值，或一群这样的受试者(例如，在相同时间长度的治疗之后)的平均值，或在开始疗法之前(例如，在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或维拉苷酶)之前)受试者的基准值(或一群患有III型戈谢病的受试者的平均基准值)。例如，可以评估骨骼参数(例如，骨矿密度)在例如葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)1、2、3、4或更多年之后的长期改变。
所述评估可以包括测定是否存在以下一项或多项：
在血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积、脾体积、神经学参数或骨骼参数中一项或多项之间的差异，与标准(对于给定参数)之间的差异大于5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％。或者或另外，所述评估可以包括测定是否存在输注部位反应(例如，在输注后12小时期间或12小时内)和/或是否存在葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)。
在一些实施方案中，所述评估可以为以下一项或多项：血红蛋白浓度、血小板计数和测定葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)是否存在。在一些实施方案中，这些参数中一项或多项的评估是对于来自受试者的样品，例如血液或血清样品进行的。在一些实施方案中，所述样品已被改良。例如，所述值通过使样品与分析试剂和/或底物或细胞，例如与葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体结合的底物或细胞接触来获得。在一些实施方案中，所述值从已经富含例如血红蛋白、血小板和/或抗体的样品，例如血液或血清样品的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
根据所述测定，可以对受试者作出治疗决策。例如，如果接III型戈谢病治疗如葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)的受试者的一项或多项参数的值与标准(例如，接受不同疗法(维拉苷酶)的患有III型戈谢病的受试者)的值不同，则可以作出决策将当前接受葡糖脑苷脂酶替代治疗(例如，伊米苷酶治疗)的受试者转变为不同的葡糖脑苷脂酶替代治疗(例如，维拉苷酶治疗)。例如，如果在接受伊米苷酶治疗的受试者中检测到伊米苷酶的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则可以将受试者转变为用维拉苷酶治疗。作为另一实例，如果在对接受伊米苷酶治疗的受试者施用伊米苷酶的12小时期间或12小时内检测到输注部位反应，则可以将受试者转变为用维拉苷酶治疗。作为另一实例，如果与以相同剂量和相同治疗施用频率用维拉苷酶治疗相同持续时间的一群患有III型戈谢病的受试者获得的平均血小板计数值相比，在接受伊米苷酶治疗的受试者中的平均血小板计数较低(例如，低5％、10％、％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％)，则可以将受试者转变为维拉苷酶治疗。
在另一方面，本发明提供一种选择疗法以施用给患有III型戈谢病的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：
根据以下标准来选择治疗：治疗可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)。任选地，所述方法可以包括对受试者提供治疗，例如，其中提供包括施用或转变受试者所接受的治疗。在一些实施方案中，所述治疗可以本文所述的剂量和/或给药方案施用。
所述方法可以包括例如通过本文所述的方法评估(例如，测量)这些参数中的一项或多项或获得其估值。
一方面，本发明提供一种选择疗法以施用给需要增加血红蛋白浓度、增加血小板水平、减小肝体积、减小脾体积、减小注射部位反应的可能性、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生治疗的抗体的可能性的患者，所述方法包括以下步骤：
根据以下标准来选择治疗：治疗可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗的一群受试者的可能性)。任选地，所述方法可以包括对受试者提供治疗，例如，其中提供包括施用或转变受试者所接受的治疗。在一些实施方案中，所述治疗可以本文所述的剂量和/或给药方案施用。
所述方法可以包括例如通过本文所述的方法评估(例如，测量)这些参数中的一项或多项或获得其估值。
在另一方面，本发明提供一种评估受试者、例如被选定以接受用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)治疗的受试者的方法。所述方法包括评估(例如，测量)所述受试者的以下参数中的一项或多项(例如，1、2、3、4、5、6、7或8项)；
血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积(例如，以占总体重的百分数形式)、脾体积(例如，以占总体重的百分数形式)、输注部位反应、骨骼参数、神经学参数或葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的存在(例如，这些参数中一项或多项(例如，1、2、3、4、5、6、7或8项)的平均值)。
骨骼参数可以为例如骨矿密度(BMD)(例如，如通过Z-分值的改变(例如，改进)测量)。BMD可以例如通过双能量X线吸收测定法(DEXA)评估。可以评估的其他骨骼参数包括例如T-分值(例如，测定正常骨骼、骨量减少和骨质疏松的WHO分类)、受试者(例如，儿科受试者)的生长；受试者(例如，儿科受试者)的骨骼年龄；和骨髓负担(BMB)(例如，在成年受试者中)。
神经学参数可以是例如眼运动参数(例如，异常眼运动、异常垂直扫视、异常水平扫视、缓慢水平扫视和核上性凝高麻痹)。评价眼运动参数的方法可包括但不限于例如一般眼科评估和扫视眼球运行评估(例如，巩膜搜索线圈技术、视频技术和红外技术)。神经学参数可以是听力参数(例如，听力丧失)。评估听力参数的方法可包括但不限于一般听觉评估。神经学参数可以是异常脑干听觉诱发电位、颅神经麻痹、咬粘、进行性肌阵挛性癫痫、颤抖、EEG异常、痴呆、认知缺损、共济失调、肌协调的丧失和较差的移动性。评估神经学参数的方法可包括但不限于例如EEG、脑干听觉诱发响应(BAER)、听觉诱发电位的测量(例如，电极帽)、体感觉诱发电位的测量(例如，正中神经刺激和拉伸诱发法)、精神状态评估(例如，神经心理学精神状态检查)、脑神经检查、运动技能评估(例如，机动能力的Bruininks-Oseretsky测试、学校功能评估测试、视觉-动作整合作用的Beery-Buktenica发展测试、运动和姿势的技巧的临床观察(COMPS))、咬粘评估(例如，神经影像(例如，CT、MRI、弥散加权成像)、EEG、患者病史、体格检查)、手灵巧度和手眼协调测试，(例如，普渡钉板测试)、标准化IQ测试(例如，韦氏智力量表)、口头表演全量表智商测试、雷伊听觉言语学习测试、注意力的测量(例如，注意力的D2测试)、连续性能测试、接龙测试、本顿视觉体质测验、记忆力的测量(例如，修订的韦氏记忆量表、刺激呈现后被召回、加利福尼亚言语学习测试、雷伊听觉言语学习测试、选择性提醒测试、修订的本顿视觉保持测试、记忆作图测试、Rey-O复杂图形)，认知功能的评估(例如，韦氏相似性分测试、威斯康辛卡片分类测验、范畴测试、斯特鲁测试、神经系统试验电池(例如，柔性电池、霍耳斯特德—赖坦神经心理学成套测验、鲁利亚-内布拉斯加神经心理学成套测验)和心理计量测试。所述评估可以包括将来自受试者的参数的值与标准(例如，本文所述的标准，例如，阴性对照)进行比较和任选地测定在来自所述受试者的参数的值与来自标准的值之间是否存在差异。所述标准可以为例如在用III型戈谢病的不同疗法(例如，本文所述的治疗)治疗的患有III型戈谢病的受试者中测量的参数的值，或一群这样的受试者(例如，在相同时间长度的治疗之后)的平均值，或在开始疗法之前(例如，在开始疗法之前受试者的基准值(或一群患有III型戈谢病的受试者的平均基准值)。
所述评估可以包括测定：
在血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积、脾体积、神经学参数或骨骼参数(例如，测量为骨矿密度(BMD))中的一项或多项与标准(对于给定参数)之间的差异是否大于5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％或90％。
在一些实施方案中，所述评估可以为以下一项或多项：血红蛋白浓度、血小板计数和测定葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)是否存在。在一些实施方案中，这些参数中一项或多项的评估是对于来自受试者的样品，例如血液或血清样品进行的。在一些实施方案中，所述样品已被改良。例如，所述值通过使样品与分析试剂和/或底物或细胞，例如与葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体结合的底物或细胞接触来获得。在一些实施方案中，所述值从已经富含例如血红蛋白、血小板和/或抗体的样品、例如血液或血清样品的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
在另一方面，本发明提供一种医嘱葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的方法，所述方法包括以下步骤：
接受所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
接受所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；
例如根据受试者需要以下一项或多项来选择需要所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的受试者：增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；和
将所述葡糖脑苷脂酶替代疗法医嘱、分配或施用给受试者。
在一些实施方案中，所述受试者需要以下一项或多项：增加血红蛋白浓度、增加血小板计数和减小产生葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或uplyso)的抗体(例如，中和抗体)或神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)的可能性。在一些实施方案中，受试者需要这些改变中的一项或多项的测定是根据对来自受试者的样品，例如血液或血清样品进行的这些参数中一项或多项的评估。在一些实施方案中，所述样品已被改良。例如，所述值通过使样品与分析试剂和/或底物或细胞，例如与葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体结合的底物或细胞接触来获得。在一些实施方案中，所述值从已经富含例如血红蛋白、血小板和/或抗体的样品，例如血样的浓缩部分获得。在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
在另一方面，本发明提供一种向接受者提供关于使用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或维拉苷酶)的信息或使用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或维拉苷酶)的准则的方法，所述方法包括以下步骤：
向所述接受者传递所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
向所述接受者传递所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准关，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；
接收来自所述接受者的购买所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的请求；和
将所述葡糖脑苷脂酶替代疗法出售、运送或传输到所述接受者。
在另一方面，本发明提供一种向接受者提供关于使用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或维拉苷酶)的信息或使用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶或维拉苷酶)的准则的方法，所述方法包括以下步骤：
提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或降低产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶)的一群受试者的可能性)；
例如在数据库中记录所述名标和所述信息；和
将所述记录(例如，记录的名标和信息)传输给所述接受者。
在另一方面，本发明提供一种向接受者提供关于葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的信息或使用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的准则的方法，所述方法包括以下步骤：
提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；
例如在数据库中或通过物理关联使所述名标与所述信息关联；和
将关联的名标和信息传输给所述接受者。
在另一方面，本发明提供一种包含或经程序设计以包含以下项目的数据库、媒体或计算机：
葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；和
例如在数据库中或通过物理关联使所述名标与所述信息关联的关联功能。
在另一方面，本发明提供一种使得葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)可由受试者获得的方法，所述方法包括以下步骤：
向所述受试者提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
向所述受试者提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；和
将可以施用给受试者、提供给受试者或由受试者购买的一定剂量的葡糖脑苷脂酶替代疗法投入市场。
在另一方面，本发明提供一种促使受试者要求葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的方法，所述方法包括以下步骤：
向所述受试者提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的名标，例如所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的化学结构、化学名称、商品名称或通用名称；
向所述受试者提供所述葡糖脑苷脂酶替代疗法具有以下性质中的一种或多种的信息：可以增加血红蛋白浓度、增加血小板计数、减小肝体积、减小脾体积、减小输注部位反应的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)、改变骨骼参数(例如，增加骨矿密度)、神经学参数的变化(例如，神经学参数的改善)和/或减小产生所述治疗的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的可能性(例如，相对于标准、例如本文所述的标准，例如接受III型戈谢病的不同治疗(例如，伊米苷酶或uplyso)的一群受试者的可能性)；和
将可以施用给受试者、提供给受试者或由受试者购买的一定剂量的葡糖脑苷脂酶替代疗法投入市场。
在另一方面，本发明的特点在于一种为患有III型戈谢病的患者的葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的治疗过程选择支付种类的方法。所述方法包括提供(例如，接受)受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的评估；和进行以下至少一项(1)如果受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则选择第一支付种类，和(2)如果受试者没有经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或没有产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则选择第二支付种类。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第一种类且所述指派使治疗过程(例如，维拉苷酶)的支付得到授权。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第二种类且所述指派使治疗过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的支付得到授权。
在一些实施方案中，所述评估为受试者是否产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且所述评估通过本文所述的方法获得。
在另一方面，本发明的特点在于一种为患有III型戈谢病的患者的葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的治疗过程选择支付种类的方法。所述方法包括提供(例如，接受)以下评估：与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数是否已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数是否已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％；和进行以下至少一者：(1)如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％或者如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后如果受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％，则选择第一支付种类，和(2)如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加80％、75％、70％、65％、60％或55％或者如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加40％、35％、30％或25％，则选择第二支付种类。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第一种类且所述指派使治疗过程(例如，维拉苷酶)的支付得到授权。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第二种类且所述指派使治疗过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的支付得到授权。
在一些实施方案中，所述评估通过本文所述的方法获得。
一方面，本发明的特点在于一种提供关于对患有III型戈谢病的受试者作出决策的信息或作出这一决策的方法。所述方法包括提供(例如，通过接受)受试者的评估，其中所述评估通过本文所述的方法、例如通过任选地对所述受试者施用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)来进行；提供受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的施用后测定，由此提供施用后测定；提供所述施用后测定与标准(例如，本文所述的标准)的比较，由此提供对受试者作出决策的信息或作出这一决策。
在一些实施方案中，所述方法包括作出所述决策。
在一些实施方案中，所述方法也包括将所述信息传递给另一方(例如，通过计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件)。
在一些实施方案中，所述决策包括：选择进行支付的受试者，或如果受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则为第一行动步骤(例如，用维拉苷酶治疗))进行支付或授权支付，并且如果受试者没有经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或没有产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则为第二行动步骤(例如，用伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso治疗))进行支付或授权支付。
在一些实施方案中，所述受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且行动步骤为对疗法过程(例如，用维拉苷酶治疗)进行授权。
在一些实施方案中，所述受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且行动步骤为将受试者指派为第一种类。在一些实施方案中，指派为第一种类将使得能够为提供给受试者的治疗(例如，维拉苷酶)进行支付。在一些实施方案中，支付由第一方给第二方。在一些实施方案中，第一方不是受试者。在一些实施方案中，第一方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为保险公司且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为政府机构且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构。
在一些实施方案中，所述受试者没有经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或没有产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且行动步骤为对疗法过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)进行授权。
在一些实施方案中，所述受试者没有经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或没有产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)且行动步骤为将受试者指派为第二种类。在一些实施方案中，指派为第二种类将使得能够为提供给受试者的治疗(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)进行支付。在一些实施方案中，支付由第一方给第二方。在一些实施方案中，第一方不是受试者。在一些实施方案中，第一方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为保险公司且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为政府机构且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构。
一方面，本发明的特点在于一种提供关于对患有III型戈谢病的受试者作出决策的信息或作出这一决策的方法。所述方法包括提供(例如，通过接受)受试者的评估，其中所述评估通过本文所述的方法、例如通过任选对所述受试者施用葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)来进行；提供施用后测定，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数是否已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数是否已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％，由此提供施用后测定；提供所述施用后测定与标准(例如，本文所述的标准)的比较，由此提供对受试者作出决策的信息或作出这一决策。
在一些实施方案中，所述方法包括作出所述决策。
在一些实施方案中，所述方法也包括将所述信息传递给另一方(例如，通过计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件)。
在一些实施方案中，所述决策包括选择进行支付的受试者，如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％或者如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％，则对第一行动步骤(例如，用维拉苷酶治疗)作出支付或授权支付，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加80％、75％、70％、65％、60％或55％或者如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加40％、35％、30％或25％，则对第二行动步骤(例如，用伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso治疗)作出支付或授权支付。
在一些实施方案中，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％，且行动步骤为对疗法过程(例如，用维拉苷酶治疗)进行授权。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第一种类且所述指派使治疗过程(例如，维拉苷酶)的支付得到授权。
在一些实施方案中，指派所述受试者为第二种类且所述指派使治疗过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)的支付得到授权。
在一些实施方案中，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％，且行动步骤为指派所述受试者为第一种类。在一些实施方案中，指派为第一种类将使得能够为提供给受试者的治疗(例如，维拉苷酶)进行支付。在一些实施方案中，支付由第一方给第二方。在一些实施方案中，第一方不是受试者。在一些实施方案中，第一方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为保险公司且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为政府机构且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构。
在一些实施方案中，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，如果在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或如果受试者的平均血小板计数增加40％、35％、30％或25％，且行动步骤为对疗法过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)进行授权。
在一些实施方案中，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，如果在治疗6个月之后受试者的神经学参数已改变(例如，神经学参数已改善)和/或受试者的平均血小板计数增加40％、35％、30％或25％，且行动步骤为指派所述受试者为第二种类。在一些实施方案中，指派为第二种类将使得能够为提供给受试者的治疗(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)进行支付。在一些实施方案中，支付由第一方给第二方。在一些实施方案中，第一方不是受试者。在一些实施方案中，第一方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为保险公司且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为政府机构且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构。
在另一方面，本发明的特点在于一种为患有III型戈谢病的患者的葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)治疗过程选择支付种类的方法。所述方法包括例如通过本文所述的方法测定在输注疗法之后的12小时期间或12小时之内在受试者中存在输注部位反应或在受试者中存在所述疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，和批准、作出、授权、接受、传送或以其他方式允许对选定的治疗过程(例如，维拉苷酶)进行支付。
在另一方面，本发明的特点在于一种为患有III型戈谢病的患者的葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)治疗过程选择支付种类的方法。所述方法包括例如通过本文所述的方法测定在输注疗法之后的12小时期间或12小时之内在受试者中不存在输注部位反应或在受试者中不存在所述疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，和批准、作出、授权、接受、传送或以其它方式允许对选定的治疗过程(例如，伊米苷酶、维拉苷酶或uplyso)进行支付。
一方面，本发明的特点在于一种作出数据记录的方法。所述方法包括将本文所述的方法的结果输入记录，例如计算机可读记录中。在一些实施方案中，所述记录可在全球信息网上得到。在一些实施方案中，所述记录由第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构或者保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应药物的机构评估，或在其他方面以本文所述的方法来利用。
另一方面，本发明的特点在于一种数据记录(例如，计算机可读记录)，其中所述记录包括来自本文所述的方法的结果。在一些实施方案中，所述记录可在全球信息网上得到。在一些实施方案中，所述记录由第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构或者保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应药物的机构评估和/或传送给第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构或者保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应药物的机构。
一方面，本发明的特点在于一种提供数据的方法。所述方法包括提供本文所述的数据(例如，通过本文所述的方法产生的数据)以提供记录(例如，本文所述的记录)，从而测定是否将提供支付。在一些实施方案中，所述数据由计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件提供。在一些实施方案中，所述数据由第一方提供给第二方。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第二方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构且第二方为政府机构。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构且第二方为保险公司。
一方面，本发明的特点在于一种传送本文所述的记录的方法。所述方法包括第一方例如通过计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件传送所述记录给第二方。在一些实施方案中，第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为保险公司或政府机构且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、政府机构或销售或供应治疗的机构。在一些实施方案中，第一方为政府机构或保险公司且第二方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应治疗的机构。
在一种方法中，将例如关于患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化、关于患有III型戈谢病的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的信息(例如，其中所述信息如本文所述获得)提供(例如，传递，例如通过电子手段传递)给第三方，例如医院、诊所、政府机构、偿付方或保险公司(例如人寿保险公司)。例如，医学程序的选择、医学程序的支付、偿付方的支付或服务或保险的成本可以根据所述信息。例如，第三方接受信息，至少部分根据所述信息进行测定和任选地传递所述信息或根据所述信息进行程序、支付、支付水平、承保范围等的选择。
在一种方法中，将例如与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或患有III型戈谢病的受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％的信息(例如，其中所述信息如本文所述获得)提供(例如，传递，例如通过电子手段传递)给第三方，例如医院、诊所、政府机构、偿付方或保险公司(例如，人寿保险公司)。例如，医学程序的选择、医学程序的支付、偿付方的支付或服务或保险的成本可以根据所述信息。例如，第三方接受信息，至少部分根据所述信息作出测定和任选地传递所述信息或根据所述信息进行程序、支付、支付水平、承保范围等的选择。
在一个实施方案中，保险费(例如，人寿或医疗)根据关于患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或患有III型的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的信息而评估。例如，如果受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)，则可以增加保险费(例如，增加某一百分数)。
在一个实施方案中，保险费(例如，人寿或医疗)根据关于与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或患有III型戈谢病的受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％的信息(例如，其中所述信息如本文所述获得)而评估。例如，如果与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％，则可以增加保险费(例如，增加某一百分数)。
例如，在人寿保险的核保过程中，可以使用关于患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或患有III型戈谢病的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的信息。所述信息可以并入关于受试者的概况中。在所述概况中的其他信息可以包括例如出生日期、性别、婚姻状况、银行信息、信用信息、子女等。保险单可以根据关于患III型戈谢病的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的信息而推荐。保险费和危险评价也可以根据患III型戈谢病的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)而评估。
例如，在人寿保险的核保过程中，可以使用关于与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％的信息。所述信息可以并入关于受试者的概况中。在所述概况中的其他信息可以包括例如出生日期、性别、婚姻状况、银行信息、信用信息、子女等。保险单可以根据关于与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％的信息而推荐。保险费和危险评价也可以根据与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或受试者的平均血小板计数增加是否是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％而评估。
在一个实施方案中，分析关于患有患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或患有III型戈谢病的受试者是否经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)的信息用以测定是否授权资金转拔以支付提供给受试者的服务或治疗(或作出本文中提到的另一决策)。例如，结果(例如，受试者经历葡糖脑苷脂酶替代疗法的输注部位反应或产生葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体(例如，中和抗体)(例如，IgE、IgM、IgG和/或IgA抗体)可以指示受试者适合于治疗(例如，维拉苷酶)，提示需要治疗过程(例如，用维拉苷酶)，由此触发指示或引起对提供给受试者的服务或治疗(例如，维拉苷酶)的支付进行授权的结果。例如，机构(例如，医院、护理给予者、政府机构或保险公司或支付或偿付医药费的其他机构)可以使用本文所述的方法的结果以测定一方(例如，除了受试患者以外的一方)是否将对提供给患者的服务(例如，特定疗法)或治疗进行支付。例如，第一机构(例如，保险公司)可以使用本文所述的方法的结果来测定是否提供财政支付给患者或为了患者的利益例如是否偿付第三方(例如，商品或服务的供应商、医院、医师或其他护理给予者)提供给患者的服务或治疗(例如，维拉苷酶)。例如，第一机构(例如，保险公司)可以使用本文所述方法的结果以测定在保险计划或程序(例如，健康保险或人寿保险计划或程序)中是否继续、中断、登记个体。
在一个实施方案中，分析关于与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或受试者的平均血小板计数增加是否小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后患有III型戈谢病的受试者是否经历神经学参数的变化和/或所述受试者的平均血小板计数增加是否小于40％、35％、30％或25％的信息用以测定是否授权资金转拔以支付提供给受试者的服务或治疗(或作出本文中提到的另一决策)。例如，结果(例如，与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时9个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗9或12个月之后受试者的平均血小板计数增加小于80％、75％、70％、65％、60％或55％，或者与在开始葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，伊米苷酶治疗，例如以60U/kg剂量的伊米苷酶，例如每隔一周施用历时6个月)之前的基准平均血小板计数相比，在治疗6个月之后所述受试者的平均血小板计数增加小于40％、35％、30％或25％)可以指示受试者适合于治疗(例如，维拉苷酶)，提示需要治疗过程(例如，用维拉苷酶)，由此触发指示或引起对提供给受试者的服务或治疗(例如，维拉苷酶)的支付进行授权的结果。例如，机构(例如，医院、护理给予者、政府机构或保险公司或支付或偿付医药费的其他机构)可以使用本文所述方法的结果以测定一方(例如，除了受试患者以外的一方)是否将对提供给患者的服务(例如，特定疗法)或治疗进行支付。例如，第一机构(例如，保险公司)可以使用本文所述方法的结果来测定是否提供财政支付给患者或为了患者的利益例如是否偿付第三方(例如，商品或服务的供应商、医院、医师或其他护理给予者)提供给患者的服务或治疗(例如，维拉苷酶)。例如，第一机构(例如，保险公司)可以使用本文所述方法的结果以测定是否在保险计划或程序(例如，健康保险或人寿保险计划或程序)中继续、中断、登记个体。
一方面，本发明的特点在于一种提供数据的方法。所述方法包括提供本文所述的数据(例如，通过本文所述的方法产生的数据)以提供记录(例如，本文所述的记录)，从而测定是否将提供支付。在一些实施方案中，所述数据由计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件提供。在一些实施方案中，所述数据由第一方提供给第二方。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、健康维护组织(HMO)、医院、政府机构或销售或供应药物的机构。在一些实施方案中，第二方选自第三方付款人、保险公司、雇主、雇主发起的健康计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应药物的机构且第二方为政府机构。在一些实施方案中，第一方选自受试者、保健提供者、治疗医师、HMO、医院、保险公司或销售或供应药物的机构且第二方为保险公司。
在一些方面，本发明提供葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)单独或与本文所述的另一药剂(例如，异法戈明酒石酸盐(isofagomine tartrate)、美格鲁特(miglustat)或Genz112638)组合用于治疗的用途。
在一些方面，本发明提供葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)单独或与本文所述的另一药剂(例如，异法戈明酒石酸盐、美格鲁特或Genz112638)组合用于制备例如用于治疗III型戈谢病的药物的用途。
在另一方面，本发明提供一种维拉苷酶的药物组合物。所述组合物包含：维拉苷酶、冻干保护剂(例如，碳水化合物(例如，蔗糖))、缓冲盐(例如，柠檬酸盐和/或柠檬酸，例如柠檬酸钠和柠檬酸)和稳定剂(例如，聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20)。
在一些实施方案中，可以冻干所述组合物。在一些实施方案中，所述冻干组合物的湿含量为1％-6％，例如1.3％-6.2％。在一些实施方案中，所述冻干组合物的湿含量为1％-5％。在一些实施方案中，所述冻干组合物的湿含量为3％-5％。在一些实施方案中，所述湿含量大于或等于3％。在一些实施方案中，所述湿含量为3％。
在一些实施方案中，可以评估所述冻干组合物。例如，可以例如通过FT-IR评估所述冻干组合物的二级结构。
在其他实施方案中，所述组合物可以为重构的溶液。例如，所述组合物为在诸如灭菌注射水的药学上可接受的载体中的重构溶液(例如，用2.2mL灭菌注射水重构200单位小瓶或用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶)。在一些实施方案中，所述组合物可以进一步包含适于静脉内施用的氯化钠溶液(例如，适于静脉内施用的0.9％氯化钠溶液)或由所述氯化钠溶液组成。
在一些实施方案中，可以评估所述重构溶液，例如，降解。例如，可以通过SE-HPLC和/或RP-HPLC评估所述重构溶液，例如，降解产物的存在。
在一些实施方案中，可以评估所述重构溶液的氧化。例如，可以通过肽作图评估所述重构溶液。
在一些方面，本发明的特点在于一种检测在样品(例如，患者样品，例如血液或血清)中的抗葡糖脑苷脂酶抗体的测定(例如，方法)。所述方法包括以下步骤：
提供固定在表面(例如，微孔)上的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)(例如，所述表面可以用诸如链霉亲和素(strepavidin)的偶合剂涂覆且所述葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)可以与药剂(例如，生物素)结合，所述药剂与所述偶合剂缔合，例如结合，例如所述葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)经与链霉亲和素结合的生物素固定到表面上)；
使所述样品与固定的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)在允许在所述样品中的抗葡糖脑苷脂酶抗体(如果存在的话)与所述固定的葡糖脑苷脂酶结合的条件下接触，由此形成混合物；
任选地进行洗涤步骤以从所述混合物中除去在所述样品中的不与所述固定的葡糖脑苷脂酶结合的任何材料；
在允许经标记的葡糖脑苷脂酶与所述抗葡糖脑苷脂酶抗体(例如，与固定的葡糖脑苷脂酶结合)(如果存在的话)(优选，所述标记物与所述偶合剂和/或与所述偶合剂结合的药剂不同，例如，如果使用生物素来将葡糖脑苷脂酶固定到表面上，则所述标记物不是生物素)的条件下向所述混合物中加入经标记的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)，其中所述经标记的葡糖脑苷脂酶用可检测的标记物标记(例如，钌标记的葡糖脑苷脂酶)；
任选地进行洗涤步骤以从所述混合物中除去不与所述抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的经标记的葡糖脑苷脂酶；和
检测(和任选地量化)在所述混合物中的标记物，例如，其中所述标记物的检测指示在所述样品中存在抗葡糖脑苷脂酶抗体。
在一些实施方案中，将检测的标记物量化为值且与对照(例如，阴性对照)比较，其中如果检测的标记物的值大于阴性对照，则所述样品含有抗葡糖脑苷脂酶抗体。在一些实施方案中，所述阴性对照为多个阴性对照的平均阴性对照值(例如，背景)。例如，所述阴性对照可以为正常人类血清(NHS)，且所述平均阴性对照值可以为多批NHS的平均值或从多种测定中获得的阴性对照值的平均值。例如，所述阴性对照值可以为1、2、3、4、5或6ng/ml抗体的值，例如，大于所述数值的样品值指示样品中存在抗葡糖脑苷脂酶抗体。作为另一实例，所述阴性对照值可以为200、250、300(例如，306)、350或400，例如，大于所述数值的样品值指示样品中存在抗葡糖脑苷脂酶抗体。
在一些实施方案中，所述测定用于检测抗维拉苷酶抗体。在另一实施方案中，所述测定用于检测抗伊米苷酶抗体。在一些实施方案中，所述测定用于检测抗uplyso抗体。
在一些方面，本发明的特点在于一种检测样品(例如，患者样品，例如血液或血清)中的抗葡糖脑苷脂酶抗体(例如，IgG抗葡糖脑苷脂酶抗体)的测定。所述方法包括以下步骤：
使所述样品与经标记的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)(其中所述葡糖脑苷脂酶用可检测的标记物标记(例如，葡糖脑苷脂酶为125I标记的))在允许在所述样品中的抗葡糖脑苷脂酶抗体(如果存在的话)与经标记的葡糖脑苷脂酶结合的条件下接触，由此形成混合物；
在允许所述抗葡糖脑苷脂酶抗体(如果存在的话)与树脂(例如，蛋白质G、蛋白质A、蛋白质A/G或蛋白质L树脂)(例如蛋白质G纯化柱)结合的条件下将所述混合物施加到所述树脂；
任选地进行洗涤步骤以从所述混合物中除去不与所述抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的经标记的葡糖脑苷脂酶；和
检测(和任选地量化)所述混合物中(例如，在所述树脂上)的标记物，例如，其中所述标记物的检测指示在所述样品中存在抗葡糖脑苷脂酶抗体。
在一些实施方案中，所述测定用于检测抗维拉苷酶抗体。在另一实施方案中，所述测定用于检测抗伊米苷酶抗体。在一些实施方案中，所述测定用于检测抗uplyso抗体。
在一些实施方案中，将检测的标记物量化为值且与对照(例如，阴性对照)比较，其中如果检测的标记物的值大于阴性对照，则所述样品含有抗葡糖脑苷脂酶抗体。在一些实施方案中，所述阴性对照为多种阴性对照的平均阴性对照值(例如，背景)。例如，所述阴性对照可以为正常人类血清(NHS)，且所述平均阴性对照值可以为多批NHS的平均值或从多种测定中获得的阴性对照值的平均值。
在一些方面，本发明的特点在于一种检测样品(例如，患者样品，例如血液或血清)中的人类抗葡糖脑苷脂酶抗体的测定。所述方法包括以下步骤：
提供固定在表面(例如，微孔)上的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)(例如，所述表面可以用诸如链霉亲和素的偶合剂涂覆且所述葡糖脑苷脂酶可以与药剂(例如，生物素)结合，所述药剂与所述偶合剂缔合，例如结合，例如所述葡糖脑苷脂酶经与链霉亲和素结合的生物素固定到表面上)；
使所述样品与固定的葡糖脑苷脂酶在允许在所述样品中的人类抗葡糖脑苷脂酶抗体(如果存在的话)与固定的葡糖脑苷脂酶结合的条件下接触，由此形成混合物；
任选地进行洗涤步骤以从所述混合物中除去在所述样品中的不与固定的葡糖脑苷脂酶结合的任何材料；
在允许可结合人类抗葡糖脑苷脂酶抗体的经标记的抗体与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体(例如，与经固定的葡糖脑苷脂酶结合的所述抗体)(如果存在的话)结合的条件下向所述混合物中加入与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体，其中与人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体用可检测的标记物(例如，钌或生物素)标记(优选地，所述标记物与所述偶合剂和/或与所述偶合剂结合的药剂不同，例如，如果使用生物素来将葡糖脑苷脂酶固定到表面上，则所述标记物不是生物素)；
任选地进行洗涤步骤以从所述混合物中除去不与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的可结合所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体的经标记的抗体；和
检测(和任选地量化)所述混合物中的标记物，例如，其中所述标记物的检测指示在所述样品中存在所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体。
在一些实施方案中，所述测定检测抗维拉苷酶抗体。在一些实施方案中，所述测定检测抗伊米苷酶抗体。在一些实施方案中，所述测定检测抗uplyso抗体。
在一些实施方案中，将检测的标记物量化为值且与对照(例如，阴性对照)比较，其中如果检测的标记物的值大于阴性对照，则所述样品含有抗维拉苷酶抗体。在一些实施方案中，所述阴性对照为多种阴性对照的平均阴性对照值(例如，背景)。例如，所述阴性对照可以为正常人类血清(NHS)，且所述平均阴性对照值可以为多批NHS的平均值或从多种测定中获得的阴性对照值的平均值。
在一些实施方案中，与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体为同种型特异性的，其中与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的所述同种型特异性抗体与对其具有特异性的同种型的人类抗体特异性结合。
在一些实施方案中，与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体为IgA特异性抗体且与在样品中的IgA人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合。
在一些实施方案中，与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体为IgE特异性抗体且与在样品中的IgE人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合。
在一些实施方案中，与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体为IgM特异性抗体且与在样品中的IgM人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合。
在一些实施方案中，与所述人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合的抗体为IgG特异性抗体且与在样品中的IgG人类抗葡糖脑苷脂酶抗体结合。
在一些方面，本发明的特点在于一种测定抗葡糖脑苷脂酶抗体(例如，在样品中)是否中和(例如，抑制)葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)活性的方法。所述方法包括以下步骤：
提供表达人类巨噬细胞甘露糖受体(MMR)的细胞(例如，人类细胞，例如人类成纤维细胞)；
使所述抗葡糖脑苷脂酶抗体与所述细胞接触，由此形成混合物；
使经标记的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶、伊米苷酶或uplyso)与所述混合物在允许经标记的葡糖脑苷脂酶与MMR在缺乏抗葡糖脑苷脂酶抗体的情况下结合(例如，其中葡糖脑苷脂酶与MMR的结合允许葡糖脑苷脂酶的细胞吸收)的条件下接触，其中葡糖脑苷脂酶用可检测的标记物标记(例如，所述葡糖脑苷脂酶用荧光标记物，例如绿色荧光染料，诸如Alexa488或异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)标记)；
除去未结合的经标记的葡糖脑苷脂酶和与细胞表面结合的经标记的葡糖脑苷脂酶(例如，经胰蛋白酶消化)；和
测量在细胞中的经标记的葡糖脑苷脂酶的量。
在一些实施方案中，将经标记的葡糖脑苷脂酶的水平与对照，例如在缺乏抗葡糖脑苷脂酶抗体的情况下在相同条件下检测的经标记的葡糖脑苷脂酶的水平比较。
在一些实施方案中，所述细胞不表达Fc受体(例如，人类Fc受体)。
在一些实施方案中，所述方法检测是否存在中和抗维拉苷酶抗体。在一些实施方案中，所述方法检测是否存在中和抗伊米苷酶抗体。在一些实施方案中，所述方法检测是否存在中和抗uplyso抗体。
在一些实施方案中，所述方法检测抗伊米苷酶抗体是否中和伊米苷酶活性。在一些实施方案中，所述方法检测抗维拉苷酶抗体是否中和维拉苷酶活性。在一些实施方案中，所述方法检测抗uplyso抗体是否中和uplyso活性。
在一些实施方案中，所述方法检测抗伊米苷酶抗体是否中和维拉苷酶和/或uplyso活性。在一些实施方案中，所述方法检测抗伊米苷酶抗体是否中和伊米苷酶和/或uplyso活性。在一些实施方案中，所述方法检测抗uplyso抗体是否中和伊米苷酶和/或维拉苷酶活性。
在一些方面，本发明的特点在于一种测定抗维拉苷酶抗体(例如，在样品中)是否中和(例如，抑制)伊米苷酶活性的方法。所述方法包括以下步骤：
提供表达人类巨噬细胞甘露糖受体(MMR)的细胞(例如，人类细胞，例如人类成纤维细胞)；
使所述抗维拉苷酶抗体与所述细胞接触，由此形成混合物；
使经标记的伊米苷酶与所述混合物在允许经标记的伊米苷酶与MMR在缺乏抗维拉苷酶抗体的情况下结合(例如，其中伊米苷酶与MMR的结合允许伊米苷酶的细胞吸收)的条件下接触，其中所述伊米苷酶用可检测的标记物标记(例如，所述伊米苷酶用荧光标记物，例如绿色荧光染料，诸如Alexa488或异硫氰酸荧光素(FITC)标记)；
除去未结合的经标记的伊米苷酶和与细胞表面结合的经标记的伊米苷酶(例如，经胰蛋白酶消化)；和
测量在所述细胞中的经标记的伊米苷酶的量。
在一些实施方案中，将经标记的伊米苷酶的水平与对照，例如在缺乏抗维拉苷酶抗体的情况下在相同条件下检测的经标记的伊米苷酶的水平比较。
在一些实施方案中，所述细胞没有表达Fc受体(例如，人类Fc受体)。
在一些方面，本发明的特点在于一种测定抗维拉苷酶抗体(例如，在样品中)是否中和(例如，抑制)维拉苷酶活性的方法。所述方法包括以下步骤：
提供表达人类巨噬细胞甘露糖受体(MMR)的细胞(例如，人类细胞，例如人类成纤维细胞)；
使所述抗伊米苷酶抗体与所述细胞接触，由此形成混合物；
使标记的维拉苷酶与所述混合物在允许标记的维拉苷酶与MMR在缺乏抗伊米苷酶抗体的情况下结合(例如，其中维拉苷酶与MMR的结合允许维拉苷酶的细胞吸收)的条件下接触，其中所述维拉苷酶用可检测的标记物标记(例如，所述维拉苷酶用荧光标记物，例如绿色荧光染料，诸如Alexa488或异硫氰酸荧光素(FITC)标记)；除去未结合的标记的维拉苷酶和与细胞表面结合的标记的维拉苷酶(例如，经胰蛋白酶消化)；和
测量在所述细胞中标记的维拉苷酶的量。
在一些实施方案中，将标记的维拉苷酶的水平与对照，例如在缺乏抗伊米苷酶抗体的情况下在相同条件下检测的标记的维拉苷酶的水平比较。
在一些实施方案中，所述细胞没有表达Fc受体(例如，人类Fc受体)。
在一些方面，本发明的特点在于一种混合抗体，其中所述混合抗体包含非人类抗药物抗体和人免疫球蛋白(Ig)。
在一些实施方案中，所述非人类抗药物IgG抗体为绵羊抗药物IgG抗体。
在一些实施方案中，所述抗药物抗体与维拉苷酶结合。
在一些实施方案中，所述抗药物抗体与伊米苷酶结合。
在一些实施方案中，所述抗药物抗体与uplyso结合。
在一些实施方案中，所述人类Ig为IgA。
在一些实施方案中，所述人类Ig为IgE。
在一些实施方案中，所述人类Ig为IgM。
在一些实施方案中，所述人类Ig为IgG。
在一些实施方案中，所述非人类抗药物抗体为IgG抗体。
在一些实施方案中，所述非人类抗药物抗体和所述人类Ig通过化学交联剂、例如长间隔臂交联剂、例如6-[3’-2-吡啶二硫代-丙酰胺基]己酸琥珀酰亚胺酯(LC-SPDP)结合在一起。
在一些实施方案中，所述混合抗体在检测和/或测量样品中的抗药物抗体的水平和/或同种型的测定中、例如在本文所述的方法中用作阳性对照。
在一些实施方案中，所述混合抗体在用于测定葡糖脑苷脂酶抗体(例如，在样品中)是否中和(例如，抑制)葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)活性的测定中、例如在本文所述的方法中用作阳性对照。例如，所述混合抗体在测定中用作抗葡糖脑苷脂酶抗体(例如，在样品中)。
在一些方面，本发明的特点在于一种测量细胞中葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)的细胞吸收(例如，内化)的方法。所述方法包括以下步骤：
使葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)与细胞(例如，人类白血病单核淋巴瘤细胞系(例如，U937)或鼠巨噬细胞细胞系(例如，J774))接触，由此形成混合物；
孵育所述混合物(例如，1、2、3、4、5、6或7小时或过夜)，例如以允许葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)细胞吸收到所述细胞中；和
测量所述细胞中的葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)的吸收量。
在一些实施方案中，所述吸收量通过测量所述细胞中葡糖脑苷脂酶的酶活性来测量。在一些实施方案中，使用在裂解后发荧光的合成底物(例如，4-MU-glc)。
在一些实施方案中，所述吸收量通过测量细胞内葡糖脑苷脂酶蛋白质水平来测量。在一些实施方案中，使用蛋白免疫印迹分析。在一些实施方案中，使用免疫组织化学分析(例如，透性化细胞的免疫组织化学)。
在一些实施方案中，在测量步骤之前将细胞洗涤一次或多次。
在一些实施方案中，所述混合物的pH值为7.5。
在一些实施方案中，甘露糖-6-磷酸(M6P)存在于所述混合物中。
在一些实施方案中，聚甘露糖存在于所述混合物中。
在一些实施方案中，钙存在于所述混合物中。
在一些实施方案中，将所述吸收量与标准、例如在不使葡糖脑苷脂酶(例如，维拉苷酶或伊米苷酶)与细胞接触的情况下测量的吸收量比较，或比较在存在和缺乏甘露糖-6-磷酸的情况下测量的吸收量，或比较在存在和缺乏聚甘露糖的情况下测量的吸收量，或比较在存在和缺乏钙的情况下测量的吸收量。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶为维拉苷酶。
在一些实施方案中，所述葡糖脑苷脂酶为伊米苷酶。
在一些实施方案中，将维拉苷酶的吸收量与伊米苷酶的吸收量(例如，在相同条件下)相比较。
术语“受试者”是指任何哺乳动物，包括但不限于按此分类的任何动物，包括人类、非人类灵长类动物、灵长类动物、狒狒、黑猩猩、猴子、啮齿类动物(例如，小鼠、大鼠)、兔、猫、狗、马、奶牛、绵羊、山羊、猪等。术语“受试者”可以与术语“患者”互换使用。
术语“分离”是指基本脱离其自然环境的分子。例如，分离蛋白基本脱离产生其的细胞或组织源的细胞物质或其他蛋白质。该术语是指其中分离蛋白的纯度足以作为治疗组合物施用的制剂，或其纯度为至少70％-80％(w/w)，更优选至少80％-90％(w/w)，甚至更优选90-95％且最优选至少95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％或100％(w/w)。
如本文所使用的术语“约”是指高达±10％的由该术语限定的值。例如，约50mM是指50mM±5mM；约4％是指4％±0.4％。
术语“治疗有效剂量”和“治疗有效量”是指引起症状预防(例如，预防80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的症状，例如在诊断为患有III型戈谢病的受试者中的III型戈谢病的症状)、延缓症状起始或改善III型戈谢病的症状的化合物的量。治疗有效剂量将例如足以治疗、预防、降低与III型戈谢病相关的病症的一种或多种症状的严重性、延缓所述症状的起始和/或降低所述症状出现的危险性。所述有效量可以通过本领域熟知的方法且如本描述的后续部分中所述来测定。
术语“治疗”和“疗法”是指现有病症的治疗和/或预防(prophylactic)/预防(preventative)措施。需要治疗者可以包括已经患有特定医学病症的个体以及处于患上所述病症的危险中或可能最终患上所述病症的个体。对治疗的需要例如通过与病症的发展相关的一种或多种危险因子的存在、病症的存在或进展或患有病症的受试者的治疗的可能接受性来评价。治疗可以包括减慢或逆转病症的进展。
术语“治疗”是指以在统计上显著的程度上或本领域技术人员可检测的程度上有效改善或预防与病症(例如，本文所述的病症)相关的病状、症状或参数或预防所述病症的起始、进展或恶化的量、方式和/或模式施以疗法。因此，治疗可以获得治疗和/或预防益处。有效量、方式或模式可以根据受试者而变且可对于受试者定制。
如本文所使用的“输注部位反应”是指在输注葡糖脑苷脂酶替代疗法期间或之后不久(例如，在对受试者输注葡糖脑苷脂酶替代治疗的12小时内)发展的一种或多种过敏症状。症状包括例如输注部位的瘙痒、刺痛、肿胀或脓肿、变红、荨麻疹/血管性水肿、胸部不适、心动过速、紫绀、呼吸症状和感觉异常。
术语“组合”是指使用两种或更多种药剂或疗法来治疗同一患者，其中所述药剂或疗法的使用和作用在时间上重叠。所述药剂或疗法可以同时(例如，作为施用给患者的单一制剂或作为同时施用的两种单独制剂)或以任何顺序相继施用。
本文提到的所有出版物、专利申请、专利及其他参考文献都通过引用全部并入本文中。在存在冲突的情形下，则以本发明说明书(包括定义)为准。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而并非用来限制。
在附图和以下描述中阐述本发明的一个或多个实施方案的细节。
附图简述
图1(a)-(f)描绘在I/II期试验中血液学值、器官值和生物标志物的平均变化％。
图2描绘在I/II期和扩展试验中关键临床参数的平均变化％。
图3描绘在TKT025中相对于基准的TKT025EXT(N＝10)平均血液学参数变化。
图4描绘在TKT025中相对于基准的TKT025EXT(N＝10)平均正规化器官体积变化。
图5描绘腰脊柱的平均Z-分值相对于基准的TKT025和TKT025EXT时间变化。
图6描绘股骨颈的平均Z-分值相对于基准的TKT025和TKT025EXT时间变化。
图7描绘相对于基准的TKT032(N＝25)平均血红蛋白浓度变化。
图8描绘相对于基准的TKT032(N＝25)平均血小板计数变化。
图9描绘相对于基准的TKT032(N＝25)平均正规化脾体积变化。
图10描绘相对于基准的TKT032(N＝25)平均正规化肝体积变化。
图11描绘相对于基准的HGT-GCB-039(N＝34)平均血红蛋白浓度变化。
图12描绘相对于基准的HGT-GCB-039(N＝34)平均血小板计数变化。
图13描绘在无脾的患者中血小板计数相对于基准的HGT-GCB-039(N＝34)平均变化。
图14描绘相对于基准的HGT-GCB-039(N＝34)平均正规化肝体积变化。
图15描绘血红蛋白浓度相对于基准的TKT034平均变化。
图16描绘血小板计数相对于基准的TKT034平均n变化％。
图17描绘正规化肝体积相对于基准的TKT034平均变化％。
图18描绘正规化脾体积相对于基准的TKT034平均变化％。
图19描绘血浆壳三糖苷酶相对于基准的TKT034平均变化％。
图20描绘血浆CCL18相对于基准的TKT034平均变化％。
图21描绘在维拉苷酶α临床研究中患者的免疫原性评估。
图22描绘通过电致化学发光(ECL)免疫测定的抗药物抗体筛选。
图23描绘筛选测定剂量响应曲线。
图24描绘IgG ADA验证性测定。
图25描绘RIP测定剂量响应曲线。
图26描绘IgA、IgM和IgE ADA验证性测定。
发明详述
本发明部分地根据在施用给受试者(例如，患有戈谢病的受试者)时与伊米苷酶相比维拉苷酶引起较少免疫响应(例如，产生较少抗体，例如，产生较少中和抗体)的发现。人们发现，在施用给受试者(例如，患有戈谢病的受试者)后与伊米苷酶相比维拉苷酶引起较少输注部位反应，且在施用给受试者(例如，患有戈谢病的受试者)时与伊米苷酶相比维拉苷酶可引起血小板计数增加。本发明特别涉及用于为患有戈谢病的受试者选择治疗、选择受试者以便用维拉苷酶治疗(例如，单独或与另一疗法组合)的组合物和方法、用于减少经受戈谢病治疗的受试者的注射部位反应的方法。
维拉苷酶
维拉苷酶为在人类细胞系中通过基因活化产生的人类β-葡糖脑苷脂酶。基因活化是指在所选择的人类细胞系中用活化内源性β-葡糖脑苷脂酶基因的启动子的目标重组。维拉苷酶作为约63kDa的单体糖蛋白分泌且由具有与天然人类蛋白质相同的序列的497个氨基酸组成。维拉苷酶的氨基酸序列描述于Zimran等(2007)Blood Cells Mol Dis,39:115-118中。
维拉苷酶α的糖基化通过在细胞培养期间使用kifunensine甘露糖苷酶I抑制剂来改变，这导致分泌主要含有具有6-9个甘露糖单位/聚糖的高甘露糖型聚糖的蛋白质。下文提供维拉苷酶的聚糖结构的概述。
维拉苷酶具有三个非邻近的结构域，其中催化部位位于III结构域(残基76-381和416-430)(β/α)8(TIM)桶中。
维拉苷酶(VPRIVTM)自Shire Human Genetics Therapies,Inc.购得。制备维拉苷酶的方法描述于例如美国专利第7,138,262号中。
药物形式。维拉苷酶(在本文中也称作维拉苷酶α)是一次性使用小瓶中的供溶解使用的无菌、白色至灰白色的无防腐剂的冻干粉末，其在用灭菌注射水重构之后静脉内(IV)输注。
定性和定量组合物。在用灭菌注射水重构后，各小瓶含有约2.5mg/mL(40U/mL)维拉苷酶α、50mg/mL蔗糖、12.9mg/mL柠檬酸钠二水合物、1.3mg/mL柠檬酸单水化物和0.11mg/mL聚山梨醇酯20。各小瓶含有对于200U小瓶为2.0mL的可提取体积和对于400U小瓶为4.0mL的可提取体积。维拉苷酶以200U/小瓶(5mg)或400U/小瓶(10mg)的维拉苷酶α供应，一单位(U)的酶活性定义为在37℃下每分钟将1微摩尔对硝基苯基β-D-吡喃葡糖苷转化为对硝基苯酚需要的酶的量。
容器和含量。维拉苷酶为在5mL(200U/小瓶形式)或20mL(400U/小瓶形式)I型玻璃小瓶中供应的供溶解使用的无菌冻干粉末。各小瓶含有200U(5mg)或400U(10mg)的维拉苷酶α。小瓶用具有氟树脂涂层的丁基橡胶塞封闭且用具有弹开塑料盖的铝外封件密封。
使用说明书。维拉苷酶为欲用于静脉内输注的供溶解使用的冻干粉末。小瓶为一次性使用小瓶。在同一输注中维拉苷酶不与其他产品一起输注。总输注体积经60分钟的时间递送。维拉苷酶应该如下处理：
1.根据个体患者的体重和医嘱剂量测定待重构的小瓶的数量。
2.从冰箱中移出所需数量的小瓶。用2.2mL的灭菌注射水重构200单位小瓶且用4.3mL灭菌注射水重构400单位小瓶。不振荡。
3.在稀释之前，目视检查小瓶中的溶液。如果溶液变色或如果存在微粒物质，则不使用。
4.从适当数量的小瓶中取出计算体积的药物。
5.在100mL适于IV施用的0.9％氯化钠溶液中稀释所需要的总体积，轻轻摇动，但不振荡。
剂量。维拉苷酶以在(且包括)2.5U/kg和60U/kg受试者体重之间，例如15U/kg至60U/kg(例如，15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量施用。维拉苷酶可以2U/kg/min、1.5U/kg/min、1U/kg/min或0.5U/kg/min的速率施用。维拉苷酶的剂量每隔一周施用给受试者。
维拉苷酶可以15-60U/kg(例如，30U/kg-60U/kg，例如，15U/kg、30U/kg、45U/kg或60U/kg)的剂量、以等于或小于22.5U/kg的剂量、以在22.5U/kg和37.5U/kg之间的剂量、以在37.5U/kg和52.5U/kg之间的剂量或以等于或大于52.5U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶可以2.5-60U/kg的剂量施用。在一些实施方案中，维拉苷酶可每隔一周通过静脉内输注施用。在其他实施方案中，维拉苷酶可以每周通过静脉内输注施用。在一些实施方案中，维拉苷酶可以通过静脉内输注例如以2.5U/kg的剂量每周施用3次。
在一些实施方案中，所述剂量(例如，本文所述的剂量)的输注经小于2小时、例如小于90分钟、80分钟、70分钟、60分钟、50分钟或45分钟发生。
重组产生的人类葡糖脑苷脂酶。其他形式的重组产生的人类葡糖脑苷脂酶可以用于本文所述的组合物、测定和方法中。例如，伊米苷酶在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中重组产生且为市售的。另外，可使用uplyso，其为在植物细胞中表达的重组葡糖脑苷脂酶(prGCD)。植物重组葡糖脑苷脂酶可以通过例如在美国公开案第US 20090208477号和第US 20080038232号和PCT公开案第WO 2004/096978号和第WO2008/132743号中描述的方法获得。
维持剂量
在改善受试者的病状后，如果需要，则可以施用治疗的维持剂量。随后，可以根据症状将施用的剂量或频率或两者降低到保持改善的病状的水平。然而，在疾病症状任何反复后受试者可能需要以长期方式的间歇治疗。
用60U/kg维拉苷酶的剂量每隔一周治疗且在用维拉苷酶完全治疗约15-18个月之后在四种推荐治疗标准(血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积、脾体积)中的两种显示出改善后，将受试者转变到30U/kg的降低剂量每隔一周治疗。尽管有该剂量降低，但这些受试者显示这四种参数(血红蛋白浓度、血小板计数、脾体积和肝体积)和生物标志物(壳三糖苷酶和CCL18)经48个月的时程临床上有意义的变化。
在维拉苷酶和伊米苷酶之间的定性比较指示戈谢受试者的潜在额外益处在于，尽管剂量降低到伊米苷酶剂量的几乎一半，患者在该四种参数方面继续临床上改善，证明血红蛋白浓度的显著增加、在36个月之后血小板计数继续增加和肝/脾体积下降率。
备选疗法
维拉苷酶(有或没有额外药剂)的施用可用作例如先前用另一疗法(即，除了维拉苷酶以外的疗法，例如伊米苷酶、阿糖脑苷酶、uplyso、异法戈明酒石酸盐、美格鲁特或Genz112638)治疗的受试者的备选治疗。例如，例如如果受试者经历来自另一疗法的副作用或不良作用，则接受另一疗法的戈谢病治疗的受试者可转变为用维拉苷酶治疗。例如，接受伊米苷酶的戈谢病治疗的受试者可转变为用维拉苷酶治疗，例如维拉苷酶可以与施用伊米苷酶时相同的剂量和相同的频率施用。例如，受试者在施用伊米苷酶时或之后可能经历输注部位反应和/或发展出抗伊米苷酶抗体(例如，伊米苷酶的中和抗体)。
组合疗法
可对患有戈谢病的受试者施用包括适量的维拉苷酶且持续适当时间以提供总治疗作用的疗法。维拉苷酶可单独或与额外药剂组合施用。在组合疗法的情况下，施用的量和时间可为提供例如增效治疗作用或相加治疗作用的施用量和时间。
在一些实施方案中，维拉苷酶可与对戈谢病的另一疗法、例如除了酶替代疗法以外的疗法、例如异法戈明酒石酸盐、美格鲁特或Genz112638组合使用。
异法戈明酒石酸盐。异法戈明酒石酸盐(AT-2101，HGT-34100，)((3R,4R,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)哌啶L-(+)-酒石酸盐；CAS No.957230-65-8)与葡糖脑苷脂酶选择性结合且使葡糖脑苷脂酶稳定并促进所述酶恰当运输到溶酶体，即在需要破坏葡糖脑苷脂的细胞中的隔室。也参见美国专利第7,501,439号。
美格鲁特。美格鲁特((2R,3R,4R,5S)-1-丁基-2-(羟基甲基)哌啶-3,4,5-三醇；CAS No.72599-27-0)为N-烷基化亚氨基糖，即右旋葡萄糖的合成类似物且具有苦味的白色至灰白色的结晶固体。美格鲁特显示出大量分布且具有进入诸如脑、骨骼和肺的深部器官的能力。
美格鲁特抑制葡萄糖神经酰胺合酶，即用于合成大多数鞘糖脂的主要酶。美格鲁特为葡萄糖神经酰胺合酶抑制剂。其通过阻断降低在体内形成某些化学物质(基于葡萄糖神经酰胺的鞘糖脂)的酶而起作用。美格鲁特用以治疗患有轻度至中度1型戈谢病的成人。
Genz112638。Genz112638为经口给予的葡萄糖神经酰胺类似物且设计用来部分地抑制葡萄糖神经酰胺合酶，其导致葡萄糖神经酰胺的产量降低。
在一些实施方案中，当维拉苷酶与额外药剂组合施用时，该组合可导致所需要的额外药剂或维拉苷酶的剂量降低，使得副作用减少。所述组合可引起一种或两种药剂的递送和功效增强。
所述药剂或疗法可同时(例如，作为施用给患者的单一制剂或同时施用的两种单独制剂)或以任何顺序相继施用。相继施用为在不同时间给予的施用。在一种药剂的施用与另一药剂的施用之间的时间可为数分钟、数小时、数天或数周。维拉苷酶的使用也可用以降低另一疗法的剂量，例如降低与正施用的另一药剂相关的副作用，例如降低除了酶替代疗法之外的疗法的副作用。因此，组合可包括以比在缺乏维拉苷酶的情况下使用的剂量低至少10％、20％、30％或50％的剂量施用第二药剂。
组合疗法可包括施用降低其他疗法的副作用的药剂。例如，在施用对戈谢病的治疗之前可对受试者施用皮质类固醇以降低输注部位反应。作为另一实例，在维拉苷酶疗法的过程中可给予铁补充疗法。
戈谢病
戈谢病为最常见的溶酶体贮积病。其由酶葡糖脑苷脂酶(也称作酸β-葡糖苷酶)的遗传性缺乏引起。所述酶作用于脂质葡糖脑苷脂(也称作葡萄糖神经酰胺)。当所述酶缺乏时，所述物质尤其积聚在单核细胞系的细胞中。脂肪物质可集中在脾、肝、肾、肺、脑和骨髓中。症状可包括脾肿大和肝肿大、肝功能障碍和可能为痛苦的重度神经功能并发症的骨骼病症和骨病变、淋巴结和(偶尔)邻近关节肿胀、腹部膨胀、皮肤褐色着色、贫血、低血小板和眼白(巩膜)上的黄色脂肪沉积。受影响最严重的人也可能更易于感染。该疾病由染色体1上的隐性基因引起且影响男性和女性。
戈谢病具有三种常见的临床亚型：
I型(或非神经病型)为该疾病的最常见形式，在50,000个活产婴儿中出现约1个。其在德系犹太人(Ashkenazi Jewish)后裔的人中最常发生。症状可在年轻时或成年开始且包括肝肿大和大体脾肿大(通称肝脾肿大)；脾可能破裂且引起额外的并发症。骨骼衰弱和骨病可为广泛的。脾肿大和骨髓置换引起贫血、血小板减少症和白细胞减少症。脑未受影响，但可能有肺损伤和罕见的肾损伤。该组中的患者通常易于瘀伤(由于血小板水平低)且经历由红细胞数量较低引起的疲劳。根据疾病起始和严重性，1型患者可很好地活到成年。许多患者具有该疾病的轻微形式且可能不显示任何症状。在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物用以治疗I型戈谢病。
II型(或急性婴儿神经戈谢病)通常在初生6个月内开始且发生率为在100,000个活产婴儿中有约1个。症状包括肝脾肿大、广泛且渐进性脑损伤、眼球运动病症、痉挛、发作、四肢强直和吮吸吞咽能力弱。感染的儿童通常在2岁前死去。
III型(慢性神经病形式)可在儿童或甚至成年的任何时候开始且在100,000个活产婴儿中出现约1个。其特征在于，与急性或2型型式相比，其为缓进型但较轻微的神经症状。主要症状包括脾和/或肝肿大、发作、机能协调弱、骨不规则、眼球运动病症、包括贫血的血液病症和呼吸问题。患者常活到其青少年和成年。
骨矿密度
如本文所使用的骨骼密度(或骨矿密度)是指每平方厘米骨骼中物质的量。骨骼密度可在临床医学中用作骨质疏松和/或骨折危险的间接指示。BMD可通过许多程序测量：例如双能量X线吸收测定法(DXA或DEXA)、定量计算机断层摄影(QCT)、定性超声波(QUS)、单光子吸收测定法(SPA)、双光子吸收测定法(DPA)、数字X射线放射照片测量(DXR)和单能量X射线吸收测定法(SEXA)。可对例如腰脊柱、臀上部或前臂进行测量。
平均骨矿密度可定义为BMC/W[g/cm]，其中BMC＝骨矿含量＝g/cm，且W＝扫描线处的宽度
密度测定法结果可以例如测量密度(g cm-3)、z-分值和t-分值报道。负分指示骨密度较低，且正分指示骨密度较高。
Z-分值是指高于或低于患者年龄、性别和种族的平均值的标准偏差的数目。
T-分值是指高于或低于与患者相同性别和种族的健康30岁成人的平均值的标准偏差的数目。世界健康组织的标准为：
·正常为-1.0或更高的T-分值。
·骨量减少定义为小于-1.0且大于-2.5。
·骨质疏松定义为-2.5或更低，意思是骨密度比30岁妇女的平均值低2.5倍标准偏差。
施用
本文所述的葡糖脑苷脂酶替代疗法可例如通过静脉内、动脉内、皮下(subdermally)、腹腔内、肌肉内或皮下(subcutaneously)注射来施用。优选所述葡糖脑苷脂酶替代疗法以约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80U/kg的范围内的剂量静脉内每隔一周施用或根据特定化合物的要求来施用。本文的方法预期施用有效量的化合物或化合物组合物以实现期望的或规定的作用。通常，葡糖脑苷脂酶替代疗法可以连续输注、例如经60分钟、90分钟、120分钟或150分钟连续输注来施用。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将取决于所治疗的宿主和特定施用模式而改变。典型制剂将含有约5％-约95％的活性化合物(w/w)。或者，这类制剂含有约20％-约80％的活性化合物。
可能需要比上述剂量更高或更低的剂量。任何特定受试者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、疾病、病状或症状的严重性和过程、受试者受疾病、病状或症状影响的倾向和治疗医师的判断。
在改善受试者的病状时，如果需要，可以施用维持剂量的本发明的化合物、组合物或组合。随后，可以根据症状将施用的剂量或频率或二者降低到保持改善的病状的水平。然而，在疾病症状任何复发时受试者可能需要长期的间歇治疗。
本发明的化合物、组合物或组合可作为家庭疗法(例如，在受试者的家、工作场所或其他非临床(例如，非医院)环境中)施用。其可由保健专业人员(例如，护士或医师助理)施用(例如，经输注)。例如，如果受试者例如在施用(例如，经输注)所述化合物、组合物或组合一次、两次或三次之后，没有经历不良事件(AE)(例如，药物有关的严重AE或输注有关的AE，例如本文所述的事件)，则所述受试者适宜接受家庭疗法以便进行后续施用。
药物组合物
葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)可并入药物组合物中以便施用给受试者。这类组合物通常包含所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)和药学上可接受的载体。
如本文所使用的语言“药学上可接受的载体或佐剂”包括与药物施用相容的溶剂、分散介质、覆料、抗菌剂和抗真菌剂、等渗且吸收延迟剂等。补充活性化合物也可并入所述组合物中。术语“药学上可接受的载体或佐剂”是指可以与葡糖脑苷脂酶一起施用给受试者并且在以足以递送治疗量的葡糖脑苷脂酶的剂量施用时不会破坏其药理学活性且无毒的载体或佐剂。
配制药物组合物以与其预定施用路径相容。施用路径的实例包括肠胃外路径，例如静脉内、皮内和皮下路径。用于肠胃外、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，诸如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的试剂，诸如氯化钠或右旋糖。pH值可用诸如盐酸或氢氧化钠的酸或碱调节。肠胃外制剂可装入安瓿、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
对于静脉内施用，合适的载体包括灭菌注射水、生理盐水、抑菌水、CREMOPHOR EL(BASF,Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，所述组合物必须为无菌的且应为流体从而存在容易的可注射性。所述组合物应该在制造和储存条件下稳定且必须被保藏以防诸如细菌和真菌的微生物的污染作用。所述载体可为溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。恰当的流动性可例如通过使用诸如卵磷脂的覆料、在分散液的情况下通过保持所需粒度或通过使用表面活性剂来保持。防止微生物作用可通过例如对羟基苯甲酸、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等的各种抗菌剂和抗真菌剂来获得。在很多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖，诸如蔗糖；多元醇，诸如甘露醇、山梨糖醇；氯化钠。可注射组合物的延长吸收可通过在所述组合物中包含例如单硬脂酸铝和明胶的延迟吸收的试剂而达到。
所述药物组合物可包含例如灭菌注射水、蔗糖、柠檬酸钠、柠檬酸和聚山梨酯。
无菌注射溶液可通过在适当溶剂中并入所需量的葡糖脑苷脂酶以及根据需要上文列举的成分中的一种或组合，接着过滤灭菌来制备。通常，分散液通过将活性化合物并入含有基础分散介质和来自以上列举成分的所需其他成分的无菌赋形剂中来制备。在供制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分外加来自其先前无菌过滤的溶液的任何额外期望的成分的粉末。
有利的是以便于施用和可实现剂量均匀性的剂量单位形式配制肠胃外组合物。如本文所使用的剂量单位形式是指适合作为待治疗的受试者的单一剂量的实体离散单位；各单位含有在与所需药物载体缔合的情况下可产生期望的治疗作用的预定量的活性化合物。
所述药物组合物可与施用说明书一起包括在容器、包装或分配器中。
试剂盒
葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，维拉苷酶)可提供在试剂盒中。所述试剂盒包含(a)葡糖脑苷脂酶替代疗法，例如包含所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的组合物；和(b)信息材料。所述信息材料可以是涉及本文所述的方法和/或在本文所述的方法中使用的葡糖脑苷脂酶替代疗法的描述性、指导性、销售性或其他材料。例如，所述信息材料描述施用葡糖脑苷脂酶替代疗法来治疗戈谢病的方法。
在一个实施方案中，所述信息材料可以包括以合适的方式、例如以合适的施用剂量、剂型或模式(例如，本文所述的施用剂量、剂型或模式)施用葡糖脑苷脂酶替代疗法的说明。在另一实施方案中，所述信息材料可以包括用于鉴定例如人类的合适受试者的说明。所述试剂盒的信息材料在其形式方面不受限制。在很多情况下，所述信息材料(例如说明)以印刷品，例如印刷文本、图画和/或照片，例如标签或印刷纸张提供。然而，所述信息材料也可以以其他格式提供，诸如盲文、计算机可读材料、视频记录或录音。在另一实施方案中，所述试剂盒的信息材料为链接或联系信息，例如实际地址、电子邮件地址、超链接、网址或电话号码，其中所述试剂盒的使用者可以获得关于效应物和/或其在本文所述方法中的用途的实质性信息。当然，所述信息材料也可以以格式的任何组合提供。
除了所述葡糖脑苷脂酶替代疗法外，所述试剂盒的组合物可以包含其他成分，诸如溶剂或缓冲剂、稳定剂或防腐剂和/或用于治疗戈谢病的第二试剂。或者，其他成分可以包含在试剂盒中，但在与所述葡糖脑苷脂酶替代疗法不同的组合物或容器中。在这类实施方案中，所述试剂盒可以包含用于混合所述葡糖脑苷脂酶替代疗法与所述其他成分(例如，在施用之前重构冻干的疗法和/或稀释重构的疗法)或用于与其他成分一起使用所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的说明。
所述葡糖脑苷脂酶替代疗法可以以任何形式(例如液态、干燥或冻干形式)提供。优选所述葡糖脑苷脂酶替代疗法为实质上纯和/或无菌的。当所述葡糖脑苷脂酶替代疗法以液体溶液提供时，所述液体溶液优选为水溶液，优选无菌水溶液。当所述葡糖脑苷脂酶替代疗法以干燥形式提供时，通常通过加入合适的溶剂来进行重构。所述溶剂(例如，无菌水或缓冲剂)可以任选地提供于试剂盒中。
所述试剂盒可以包括含有所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的组合物的一个或多个容器。在一些实施方案中，所述试剂盒含有用于所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，在组合物中)和信息材料的单独容器、分配器或隔室。例如，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，在组合物中)可以容纳于瓶子、小瓶或注射器中，且所述信息材料可以容纳于塑料套或小袋中。在其他实施方案中，所述试剂盒的单独元件容纳于单个未分开的容器内。例如，所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，在组合物中)容纳于具有以标签形式附着到其上的信息材料的瓶子、小瓶或注射器中。在一些实施方案中，所述试剂盒包括多个(例如，一包)单独容器，其各自包含所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，在组合物中)的一个或多个单位剂型(例如，本文所述的剂型)。例如，所述试剂盒包括多个注射器、安瓿、铝箔包装或泡罩包装，其各自含有所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的单个单位剂量。所述试剂盒的容器可以是气密的和/或防水的。
所述葡糖脑苷脂酶替代疗法(例如，在组合物中)可以施用给患有戈谢病的受试者。所述方法可以包括例如如本文所述评估受试者且由此鉴定需要用所述葡糖脑苷脂酶替代疗法治疗的受试者。
以下实施例提供本发明的说明性实施方案。本领域的普通技术人员应了解可以在不改变本发明的精神或范围的情况下进行的许多改进和变化。这类改进和变化涵盖在本发明的范围内。所述实施例不以任何形式限制本发明。
实施例
酶疗法的引进显著影响1型戈谢病的自然史。遗憾的是，单一治疗选择的存在代表在患有1型戈谢病的患者的治疗中的内在脆弱性。据报道约15％的伊米苷酶治疗的患者发展出IgG抗体且据报道这些患者中大致一半具有过敏症状(Starzyk K等，Molec Genet Metab.2007；90:157-163)。在全球，近期伊米苷酶的短缺加剧了在戈谢病的治疗中对于单一产品的依赖性(Steinbrook R等，N Engl J Med.2009；361:1525-1527)。在那些接受伊米苷酶输注的患者中，未知数量的患者需要预投药来减轻潜在的免疫介导的响应。在一些事例中，患者需要氢化可的松(hydrocortisone)，其本身与包括AVN的医疗危险相关。此外，近来公布的数据提示59％的用伊米苷酶治疗的GD1患者在治疗最少4年之后未能实现至少一个治疗目标，而这与治疗剂量和持续时间无关(Weinreb N等，Am J Hematol.2008；83:890-895)。
维拉苷酶α为区别于伊米苷酶的具有独有的特征(野生型氨基酸序列和高α-甘露糖基含量)的新型酶替代疗法(ERT)。以下提供的一些实施例描述评估维拉苷酶α的安全性和功效的临床试验和扩展研究。这些是涉及ERT以实现剂量降低和家庭疗法的首次临床试验。
实施例1：TKT025和TKT025EXT研究
概述
该实施例描述所进行的用于评估维拉苷酶α的安全性和功效的维拉苷酶α的9个月I/II期开放标签单一中心试验(TKT025)和进行以评估维拉苷酶α的安全性和功效的进行中的扩展(TKT025EXT)研究。
I/II期试验的第一目的在于评价以60U/kg的剂量每隔一周静脉内施用给患有有症状的1型(非神经病变型)戈谢病(GD1)的成年患者9个月的维拉苷酶α的安全性。该试验的第二目的在于评价维拉苷酶α对关键疾病特点的临床活动(Barton NW等，N Engl J Med.1991；324:1464-1470)。类似地设计扩展研究以评估长期安全性和评价维拉苷酶α对四种疾病量度：血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积的影响(Barton NW等，N Engl J Med.1991；324:1464-1470)。
在I/II期研究中12个具有1型戈谢病和完整脾的有症状的成年患者接受维拉苷酶α(60U/kg/输注)。最初筛选出13个患者参与研究，而一个患者由于存在抗伊米苷酶抗体而被排除。对完成试验的患者提供扩展研究且实行逐步剂量降低(至30U/kg/输注)。11个患者完成I/II期，10个患者进入扩展研究；9个患者在扩展研究中达到39个月。没有观察到药物有关的严重不良事件或退出，也没有观察到抗体。在扩展研究中成功实施了家庭疗法。记录以下项目的从基准到9个月和从基准到48个月的平均变化％的统计上显著的改善(p<0.004)：血红蛋白(分别为+19.2％、+21.7％)、血小板计数(分别为+67.6％、+157.8％)、正规化肝体积(分别为-18.2％、-42.8％)和正规化脾体积(分别为-49.5％、-79.3％)。这些显著的临床变化和安全性概况导致III期试验且突出了维拉苷酶α作为1型戈谢病的备选疗法的潜力。
方法
I/II期研究和扩展研究在单一中心(Gaucher Clinic,Shaare ZedekMedical Center；Jerusalem,Israel)中进行。
患者：筛选成年有症状的酶证实的患有GD1的患者。合格标准包括年龄≥18岁、脾完整、疾病有关的贫血(血红蛋白值比对于性别的正常值下限(LLN)低至少1g/dL)、血小板减少(血小板计数低于LLN)且B和C肝炎抗原和艾滋病毒的结果为阴性。如果患者对ERT为雏期且在登记之前在12个月内没有接受伊米苷酶且伊米苷酶抗体为阴性，则这些患者符合条件。如果患者在登记之前30天以内接受过任何其他适应症的研究性疗法或如果他们出于医疗或非医疗原因不能遵循实验方案，则排除这些患者。
制备和给药：维拉苷酶α由Shire HGT以冻干产品形式来供应且在2℃至8℃下运输。所述产品用无防腐剂的灭菌注射水重构。将适当量的维拉苷酶α(基于体重计)与生理盐水缓慢混合，达到100mL的最终体积。稀释的维拉苷酶α穿过0.2μm过滤器静脉内施用60分钟的时间(最大速率：1.5mg/kg/hr；1U/kg/min)。
在I/II期研究期间，前三个患者在试验地点按每隔一周的方案接受维拉苷酶α。对于该前三个患者进行剂量增加，其中给药从15U/kg的初始剂量加倍，直至达到60U/kg的最终剂量。刚好在第一个患者和第二个患者完成7天观察期之后使第二个患者和第三个患者分别接受他们的初始15U/kg输注。第三个患者一旦接受60U/kg的单一剂量且观察7天时间，登记9个额外患者且每隔一周接受60U/kg的输注，总共20剂。经受剂量增加的患者继续每隔一周的方案，另外以60U/kg输注17次，总共20次输注。
在扩展研究期间，所有患者每隔一周继续以60U/kg/输注。在约6-9个月的扩展研究之后，将对于贫血、血小板减少、肝肿大和/或脾肿大改善的4个治疗目标中实现至少两个的患者(Pastores GM等，SeminHematol.2004；41:4-14)转换为每隔一周45U/kg/输注历时3个月，且随后转换为每隔一周30U/kg/输注。根据治疗目标的实现来减少剂量的惯例是与涉及伊米苷酶的差别对待患者中的ERT的建议相一致的(Andersson HC等，Genet Med.2005；7:105-110)。
另外，居住在以色列的7个患者在扩展期转换为家庭疗法。
安全性评价：贯穿研究通过在输注之前、输注期间和输注之后进行不良事件(包括输注有关的反应)、伴随的投药和生命体征的每隔一周评价来评估安全性。大致每12周进行额外安全性评价，且包括在试验地点的身体检查、临床试验室检验(血液学、血清化学、尿检和妊娠试验)、12-导联心电图和超声心电图。在Shire HGT以3个月间隔进行抗维拉苷酶α抗体的存在的测定。
抗体测定：使用经批准的间接ELISA对于循环抗维拉苷酶α抗体筛选所有参与者。微孔板用维拉苷酶α涂覆，洗涤且用牛血清蛋白阻断以限制非特异性抗体结合。在37℃下将它们与在含有0.05％吐温20的磷酸盐缓冲盐水中稀释100倍的患者血清样品孵育60分钟。洗涤微孔且随后用适当辣根过氧化物酶(HRP)-结合的二级抗体孵育。将它们用以下HRP-抗体、同种型特异性结合物单独探试：1)山羊抗人类IgG Fc、2)山羊抗人类IgAα-链、3)山羊抗人类IgMμ-链或4)山羊抗人类IgEε-链二级抗体。将微孔洗涤最后一次且用HRP产色性底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺孵育。反应通过加入2N硫酸而停止，且使用MolecularDevices SPECTRAmax Plus384板阅读器和SOFTMax PRO软件量化各孔在450nm下的吸光度(A450)。从接受伊米苷酶的患者获得抗体阳性血清样品。这些患者的样品与维拉苷酶α交叉反应且在抗维拉苷酶抗体的筛选测定中用作人类阳性对照。因此，这些血清为抗伊米苷酶和抗维拉苷酶α阳性。在每一测定板内包括阴性人类血清对照以及阳性人类血清对照。
由ERT雏期戈谢病患者血清样品(N＝108)的平均吸光度确立抗维拉苷酶α抗体的实用ELISA抗体阳性切割点吸光度。使用ELISA吸光度数据的参数分析来计算各抗体同种型的抗体阳性下限(平均值加1.645×标准偏差；其中1.645为正态分布的第95百分位数，因此潜在地接受5％假阳性率)(Mire-Sluis AR等，J Immunol Methods.2004；289:1-16)。对于所有抗维拉苷酶α抗体同种型测定，计算ERT雏期戈谢血清样品的ELISA A450背景为0.040。ELISA抗体阳性截止点确立为比率≥2.0且A450≥0.040，其中该比率为在任何时间点取得的患者样品的A450除以在第一ERT治疗之前在基准处取得的患者样品的A450。超过ELISA阳性截止点的任何样品通过定量放射免疫沉淀测定证实且测试中和抗体；然而，没有样品达到确立的截止标准(Mire-Sluis AR等，J Immunol Methods.2004；289:1-16)。
临床活动：以预定的每三个月间隔评估血红蛋白浓度和血小板计数的主要功效评价。在扩展研究期间使用在基准、6个月和9个月(在Hadassah-Hebrew University Medical Center)和在24个月、33个月和45个月(在MOR-MAR Imaging装置)进行的定量腹部MRI(在相同型号的设备上)测量肝体积和脾体积。在试验的结束时由不知晓患者身份和进行定量腹部MRI的顺序的放射科医师评价肝体积和脾体积。在荷兰阿姆斯特丹的Academic Medical Center；Amsterdam测量壳三糖苷酶和CCL18。
统计分析：将安全性群(其也为意向治疗群)定义为接受维拉苷酶α的至少一次输注(部分或全部)的所有登记的患者，且其用于所有临床活性。不使用归集。
对于血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积的主要临床活动参数，零假设在于在基准值与研究结束(9个月)值之间和在基准值与48个月结束值之间没有差异。(即，在成员之间的各对观察结果的差异具有中值零。)在5％显著性水平下使用双尾假设检验进行比较。在基准与期末值之间的差异使用Wilcoxon符号秩次检验分析。计算相对于基准的变化且使用描述性统计概述相对于基准的变化百分数。
对于次要临床活动参数，通过访问概述观察数据、相对于基准的变化和相对于基准的变化％，包括平均值、标准误差(SE)和中值。对这些数据集不采用形式统计检验。
来自TKT025研究(9个月，60U/kg维拉苷酶α)的结果
维拉苷酶α耐受性良好且患者没有发展出抗体。早在3至6个月就发现了在血液学参数和器官体积方面的临床和统计上显著的改善(表1)。
表1 TKT025临床结果(N＝12)
人口资料和处置：筛选出总共13个患者且全部同意参与该研究：一个患者(0004)由于伊米苷酶抗体而被排除。尽管在更远的过去，2个患者(0008和0009)各自接受3次伊米苷酶输注，1个患者(0003)暴露于美格鲁特且2个患者(0005和0007)暴露于美格鲁特和伊米苷酶两者，但是因为在登记之前12个月内，所有患者未暴露于任何戈谢特异性疗法，所以根据实验方案他们在到来时都处于治疗雏期。
意向治疗群(表2)包括12个接受至少一剂量维拉苷酶α的患者；其中，11个患者(92％)完成I/II期研究(1个患者0006在接受三次输注之后因家人突然死亡而同意退出)。
在登记I/II期试验时，7个患者(58％)为女性；平均年龄为41.7(SD±17.3；范围19至70)岁；平均体重为59.6(SD±9.1；范围50至73)kg且平均身高为169(SD±8.0；范围160至184)cm。两个患者(16.7％)在登记时具有髋关节无血管形成性坏死(AVN)且另一患者的各踝具有破坏性病变。表2提供在I/II期研究内在基准的人口统计、遗传性和临床特征以及各意向治疗患者在关键数据收集点的临床发现。
肝和脾磁共振成像(MRI)扫描的结果经隐瞒且由单个审阅者解释以使偏差最小化。在研究中的各个时间点也进行包括PFT(肺功能检验)、股骨和腰脊柱的MRI和骨密度的其他临床参数的基准数据的收集。
研究由两期：剂量增加期和继续给药期组成。在剂量增加期，登记第一个患者并静脉内(IV)施用维拉苷酶α15U/kg，随后跟踪7天以便评价安全性。在对第一个患者证实了安全之后，登记2个额外患者并IV施用维拉苷酶α15U/kg，且跟踪7天以便评价安全性。在对接受15U/kg剂量的所有3个患者证实了安全之后，以相同方式施用接下来的两种较高剂量(30U/kg和60U/kg)。一旦对所有3个患者都证实了安全，则登记额外9个患者并施用60U/kg剂量。所有患者随后每隔一周接受60U/kg剂量，总共20剂维拉苷酶α。
在TKT025中在39周中的第1周、第3周、第5周和第37周评估人类的药物动力学(PK)。在研究TKT025EXT的第65周进行额外PK研究。在各评估中维拉苷酶α以一阶消除动力学自血液迅速清除。在初始暴露于维拉苷酶α之后和在重复施用维拉苷酶α之后患者的消除半衰期值是类似的。相比之下，在重复施用维拉苷酶α之后的清除率和表观分布容积值降低。
在研究TKT025中在开始每两周给药60U/kg维拉苷酶α之后3个月观察到血红蛋白浓度和血小板计数相对于基准的统计上显著的平均增加。在TKT025中的第25周(第6月)，平均血红蛋白浓度为13.57g/dL(在正常范围内)且在该研究的剩余期内保持在正常范围内。在该研究结束时，11个患者中的10个经历血红蛋白浓度的正常化。在第13周(在第3月)观察到平均血小板计数相对于基准(57.3×103/mm3)的统计上显著的增加并且在整个研究中持续。在第37周，平均血小板计数增加到98.1×103/mm3。
另外，在开始维拉苷酶α治疗之后6个月(第25周)和9个月(第37周)观察到平均和正规化(通过体重百分数校正)肝体积和脾体积相对于基准的统计上显著的减少。第3个月观察到生物标志物值(血清壳三糖苷酶和趋化因子(C-C基元)配体18[CCL18])的显著减小。总体上，在维拉苷酶α施用过程期间所有这些参数的平均改善连续不断。此外，各患者在对戈谢病具有特异性的四种治疗参数(例如，血红蛋白浓度、血小板计数、脾体积和肝体积)中的至少两种经历改善。
总之，图1A-1F提供I/II期研究中血液学参数、器官体积和生物标志物的平均改变％。在25周和37周期间观察到(a)血红蛋白浓度和(b)血小板计数的显著增加以及(c)肝体积和(d)脾体积的显著减小。虽然(e)壳三糖苷酶和(f)CCL18的生物标志物取样不完全，但每个患者随时间而观察到两种生物标志物相对于基准的一般减少。记录到以下项目从基准到第9个月的平均变化％的统计上显著的改善(p<0.003)：血红蛋白浓度(+21.7％)、血小板计数(+67.6％)、正规化肝体积(-18.2％)和正规化脾体积(-49.5％)，其中血红蛋白浓度和血小板计数两者相对于基准的统计上显著的改善在最初的3个月内达到(图2)。在图2中，作图将血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积的平均变化％相对于时间作图且对于I/II期和扩展研究进行区分。观察到各参数从基准到第9个月的相对于基准的统计上显著的变化(p<0.003)。对于血小板计数和脾体积观察到最显著的变化。
在TKT025中，所有12个患者报道经历1件或多件AE(不良事件)，总共103件AE。在15U/kg剂量期间由1个患者报道两件AE(眩晕和多汗)，由接受60U/kg剂量的患者报道剩余101件AE。最常报道的AE为眩晕、骨痛和头痛(各有5个患者；41.7％)。关节痛、背痛、手足痛、流行性感冒、上腹痛和乏力各自出现在3个患者(25％)中。除了1件骨痛之外，所有AE都是轻微的(1级)，所述骨痛为中度(2级)严重性且与研究药物无关。103件AE中无一被视为重度或危及生命的(3级或4级)。没有患者由于不良事件而被从研究中退出。
在TKT025期间观察到的大多数AE由研究者测定为与药物施用无关(表3A)。十个(10个)患者经历被视为可能或者或许与研究药物有关的22件AE；最常为眩晕(3个患者)；背痛、骨痛、头痛、体温增加和恶心(各2个患者)。九(9)个患者经历总共17件输注有关的不良事件，其在实验方案中定义为在输注当天发生、在输注期间或之后开始的AE，且判断为可能或者或许与研究药物有关。这些AE包括眩晕、头痛、背痛、骨痛、体温增加，各自在2个患者中出现。对于接受60U/kg剂量的患者，报道了所有输注有关的不良事件。一个患者在剂量减少之后由于骨痛恶化而增加到每隔一周剂量60U/kg/输注历时24个月，但在剂量增加之后没有经历缓减。因此，不存在药物有关的严重不良事件，不管输注环境为何。不施用预投药且没有患者由于不良事件而退出。患者没有发展出维拉苷酶α的抗体。
表3A 在I/II期试验(TKT025)期间观察到的治疗突现的不良事件被测定为可能或者或许与维拉苷酶α(GA-GCB)施用有关
患者百分数基于治疗组中患者的总数计。不良事件使用MedDRA 7.0版词典编码。EOW：每隔一周。
TKT025EXT(长期，30-60U/Kg维拉苷酶α)的结果
概述：TKT025EXT为在完成研究TKT025的患有1型戈谢病的患者中的维拉苷酶α疗法的开放标签扩展研究。TKT025EXT的第一目的在于当以30或60U/kg的剂量每隔一周IV施用时历时总共4年维拉苷酶α的长期安全性。第二目的在于继续评价在这些患者中如以血液学参数和肝体积和脾体积减小所测量的维拉苷酶α对临床活动的影响。也评估血浆壳三糖苷酶和CCL18以及PFT、股骨颈和腰脊柱的MRI、骨骼调查和骨密度测定法。
选择十个患者参与该临床研究。在60个月的累积治疗(TKT025+TKT025EXT)之后，维拉苷酶α耐受性良好且患者没有发展出抗体。继续观察到血液学参数和器官体积的继续且维持的临床和统计上显著的改善(表4)。图3显示在用维拉苷酶α治疗60个月的患者中平均血红蛋白浓度和血小板计数相对于基准的增加。图4显示在用维拉苷酶α治疗60个月的患者中平均肝体积和平均脾体积相对于基准的减小。
表4 TKT025EXT临床结果(N＝10)
a-器官体积在从TKT025开始的33个月、45个月和57个月评价。
人口资料和处置：在TKT025中在完成第41周评估后，患者符合条件参与TKT025EXT。在完成研究TKT025的11个患者中，10个患者进入研究TKT025EXT。1个患者(0012)由于不方便每隔一周医院出席而没有同意进入扩展研究，且1个患者(0005)由于妊娠而从扩展研究中退出。表2提供在扩展研究内在基准的人口统计、遗传性和临床特征以及各意向治疗患者在关键数据收集点的临床发现。
最初登记的所有患者每隔一周接受维拉苷酶α60U/kg。如果在1年累积治疗之后患者血液学参数(血红蛋白浓度或血小板水平)改善和/或器官体积(肝或脾)改善，剂量滴定降至30U/kg。在TKT025EXT中最初登记的所有10个患者符合所需要的剂量减少标准且转换到30U/kg剂量。
在TKT025EXT中的所有9个患者直到第42个月具有可用的血红蛋白浓度和血小板计数数据，而3个患者直至第45个月具有可用的数据。在第42个月血红蛋白相对于预治疗基准的平均(标准误差[SE])变化为2.18(0.25)g/dL(p＝0.004)，相当于相对于预治疗基准的平均变化％为19.0％。关于血小板计数，在第42个月相对于预治疗基准的平均(SE)变化为82.1(8.4)×103/mm3(p＝0.004)，相当于相对于预治疗基准的平均变化％为149.8％。
分析直到第33个月的相对于体重％经正规化的肝体积和脾体积；对于该评价所有9个患者都具有可用的肝数据且8个患者具有可用的脾数据。在第33个月正规化肝体积和正规化脾体积相对于预治疗基准的平均(SE)变化分别为-1.5(0.22)和-2.8(0.37)。结果对应于正规化肝体积和正规化脾体积相对于预治疗基准的平均变化％：-34.0％和-73.5％(分别p＝0.004和p＝0.008)。对于血浆壳三糖苷酶和CCL18参数两者也观察到了进一步改善。
总之，图2提供相对于时间作图且对于扩展研究标定的血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积的平均变化％。对于各参数自基准到48个月观察到统计上显著的变化(p<0.004)。对于血小板计数和脾体积观察到最显著的变化。对于所有患者血红蛋白值经24个月正常化。肝体积趋近正常。在整个扩展研究中注意到这些临床参数的连续改善(图2)且在所有患者中经24个月观察到血红蛋白的正常化(表2)。血红蛋白浓度(+21.7％)、血小板计数(+157.8％)、肝体积(-42.8％)和脾体积(-79.3％)的自基准到48个月的平均变化％为统计上显著的(p<0.004)。
分析直到某一日期可用的研究TKT025EXT的安全性和临床活动数据。在该研究中登记的患者具有43.2个月的累积平均暴露时间(范围：13.2-45.0个月)。在所登记的所有10个患者中报道了总共248件不良事件。大多数AE在严重性方面为轻微到中度的。对于2个患者报道了研究者视为与研究药物无关的三件重度(3度)不良事件(在1个患者中，关节痛和无菌性骨坏死，和在1个患者中，头痛)。报道了三(3)件SAE(在1个患者中，2件无菌性骨坏死，且在1个患者中，1件癜痕)。这些SAE中的每一件被研究者视为与研究药物无关，且各自在无后发病的情况下得到解决。最常报道的治疗突现的不良事件为流行性感冒(8个患者，24件)；关节痛(8个患者，21件)；头痛(6个患者，13件)；背痛(6个患者，10件)；咽喉疼痛(5个患者，7件)；上腹痛(5个患者，7件)；和牙龈出血、发热及疲劳(各4个患者，4件)。
在TKT025EXT中报道的大多数不良事件被研究者视为与研究药物无关(表3B)。在4个患者中报道了总共7件治疗有关的不良事件，包括鼻出血(2个患者，各1件)、腹痛(1个患者，1件)、上腹痛(1个患者，1件)、疲劳(1个患者、1件)和剧烈疼痛(1个患者，1件)。两个患者各自经历1件输注有关的AE：1个患者有中度(2级)手足痛，1个患者有轻微(1级)颤振。因此，不存在药物有关的严重不良事件，不管输注环境为何。另外，没有患者发生需要中断维拉苷酶α施用的输注有关的不良事件。
患者没有发展出维拉苷酶α的抗体。在扩展研究的第一年，所有7个以色列居民成功转换到家庭疗法。
表3B 在扩展研究(TKT025 EXT)期间观察到的治疗突现的不良事件被测定为可能或者或许与维拉苷酶α(GA-GCB)施用有关
患者百分数基于安全群中患者的总数计。事件百分数基于安全群中的患者经历的事件总数计。不良事件使用MedDRA 9.0版词典编码。EOW：每隔一周。
在TKT025和TKT025EXT中在1型戈谢病患者中的骨矿密度的结果
在用维拉苷酶α治疗的1型戈谢病患者中评估长期骨矿密度(BMD)变化。患者证明了BMD的显著且连续的改善。
评价：在TKT025登记期间，使用骨骼概况和双能量X线吸收测定法(DEXA)来评估骨骼病理。贯穿该研究在预定时间分析腰脊柱和股骨颈的Z-分值。对于一些患者，进行DEXA扫描，但不能根据所述扫描来评价Z-分值。缺失的Z-分值包括：1个患者-在基准和第9个月时的股骨颈；1个患者-在基准时的腰脊柱；和1个患者-在第9个月时的股骨颈。在两个患者从研究中退出(在第24个月之前1个患者和在第57个月之前1个患者)之后没有评估他们的腰脊柱和股骨颈的Z-分值。
使用T-分值来将骨密度与“年轻正常”健康30岁成人的峰值骨密度比较。在基准和69个月时的临床骨骼状况根据WHO标准来对T-分值表征：≥-1为正常；>-2.5且<-1为骨量减少；≤-2.5为骨质疏松。
方法：
分析群：在意向治疗(ITT)群(N＝10)中进行第一分析，所述意向治疗群定义为签字告知同意书参与长期扩展研究且接受≥1的全部或部分剂量的维拉苷酶α的所有患者。在伴随ERT接受或不接受双磷酸盐的亚组中也评价维拉苷酶α对BMD的影响。
统计方法论：缺失的基准Z-分值替换为下一个值。对于后续缺失的Z-分值使用末次观察结转(LOCF)分析。将线性混合模型用作重复测量分析以随时间分析Z-分值。显示示出Z-分值单位的每年增加的y-截距和斜率估计值。记录并报道从骨质疏松到骨量减少或正常和从骨量减少到正常的转变。
结果：
基准特征：在TKT025EXT中登记的所有患者具有GD1有关的骨病理。腰椎脊椎(LS)骨病理的临床状况为：1个患者(10％)在正常范围内；8个患者(80％)具有骨量减少；且1个患者(10％)具有骨质疏松。股骨颈(FN)骨病理的临床状况为：1个患者(10％)处于正常范围；5个患者(50％)具有骨量减少；且4个患者(40％)患者具有骨质疏松。DXA Z-分值为(中值[范围])：LS,-1.8[-2.9至-0.4]，FN-1.5[-2.9至-0.2]。经过69个月，平均维拉苷酶α剂量为40U/kg。十个患者中的四个也用双磷酸盐治疗。
Z-分值：对于ITT群(n＝10)、接受伴随的双磷酸盐的患者和没有接受双磷酸盐的患者在基准和各种时间点的Z-分值分别在表5-7中示出。腰脊柱和股骨颈的平均Z-分值的时间变化也分别在图5和图6中示出。
表5 Z-分值；N＝10,ITT
表6 Z-分值；n＝4[用双磷酸盐]
表7 Z-分值；n＝6[无双磷酸盐]
在69个月的过程期间腰脊柱(LS)和股骨颈(FN)的Z-分值相对于基准Z-分值的变化示于表8中。
表8
相对于基准值，P≤0.05
如表8中所示，意向治疗群的BMD经24个月显著改善(LS:0.39(0.06,0.72))且经33个月显著改善(FN:0.39(0.16,0.62))。没有接受伴随的双磷酸盐的患者的BMD经24个月显著改善(LS:0.58(0.08,1.09))且经33个月显著改善(FN:0.48(0.10,0.87))。
线性混合模型评估Z-分值：Z-分值(ITT群，n＝10，95％CI)显著低于参考群(LS y-截距＝-1.56[-2.09,-1.03]；P<0.0001)和FN(y-截距＝-1.42[-2.06,-0.79]；P＝0.0007)。两参数随时间而显著改善(LS斜率/月＝+0.011[0.005,0.017],P＝0.0021(斜率+0.011Z-分值单位/月对应于+0.132/年)；FN斜率/月＝+0.007[0.004,0.009],P＝0.0005(斜率+0.007Z-分值单位/月对应于+0.084/年))。
在仅接受维拉苷酶α的患者(n＝6，95％CI)中，Z-分值LS y-截距为-1.29[-1.97,-0.62](P＝0.0045)，FN y-截距为-1.24[-2.21,-0.27](P＝0.0216)且随时间出现显著改善[LS斜率/月＝+0.013[0.002,0.024](P＝0.028)(对应于+0.158/年)、FN斜率/月＝+0.009[0.004,0.013](P＝0.0055)(对应于+0.103/年)。
在伴随接受双磷酸盐的患者(n＝4，95％CI)中，Z-分值LS y-截距为-1.97[-3.06,-0.88](P＝0.0104)，FN y-截距为-1.71[-3.02,-0.40](P＝0.0252)且随时间出现改善[LS斜率/月＝+0.009[0.001,0.017](P＝0.0351)(对应于+0.111/年)、FN斜率/月＝+0.004[-0.001,0.010](P＝0.0867)(对应于+0.048/年)。
在根据观察数据库(International Collaborative Gaucher GroupGaucher Registry)的分析的线性混合模型中，用ERT伊米苷酶治疗的GD1患者具有比在开始跟踪时的参考群显著更低的Z-分值(n＝340，Y-截距-1.17，P<0.001)(Wenstrup等，J Bone Min Res.2007；22:119-26)。然而，在Z-分值斜率/年中观察到了剂量响应改善(15U/kg[n＝113]：+0.064；30U/kg[n＝116]：+0.086；60U/kg[n＝111]：+0.132；所有P<0.001)(Wenstrup等，J Bone Min Res.2007；22:119-26)。
在基准和69个月时的BMD状况：在基准和69个月时的临床骨骼状况使用WHO标准表征(正常＝T-分值：≥-1；骨量减少＝T-分值>-2.5且<-1；骨质疏松＝T-分值≤-2.5)。在接受维拉苷酶α而没有伴随双磷酸盐的患者(n＝6)中观察到状况变化。经过69个月，两个LS和一个FN骨质减少患者正常化且一个FN骨质疏松患者变成骨质减少。双磷酸盐的所有四个患者在WHO分类方面没有变化。
重复测量分析(纵向)斜率估计值：在重复测量分析中，ITT群(N＝10)的Z-分值估计值[95％CI]为：LS截距＝-1.56[-2.09,-1.03],P<0.0001；LS斜率(/月)＝0.011[0.005,0.017],P＝0.0021；FN截距＝-1.42[-2.06,-0.79],P＝0.0007；LS斜率(/月)＝0.007[0.004,0.009],P＝0.0005。腰脊柱斜率每月增加0.011对应于每年增加0.132，且股骨颈斜率每月增加0.007对应于每年增加0.084。
没有接受双磷酸盐的患者(N＝6)的Z-分值估计值[95％CI]为：LS截距＝-1.29[-1.97,-0.62],P＝0.0045；LS斜率(/月)＝0.013[0.002,0.024],P＝0.0280；FN截距＝-1.24[-2.21,-0.27],P＝0.0216；LS斜率(/月)＝0.009[0.004,0.013],P＝0.0055。腰脊柱斜率每月增加0.013对应于每年增加0.158，且股骨颈斜率每月增加0.009对应于每年增加0.103。
接受双磷酸盐的患者(N＝4)的Z-分值估计值[95％CI]为：LS截距＝-1.97[-3.06,-0.88],P＝0.0104；LS斜率(/月)＝0.009[0.001,0.017],P＝0.0351；FN截距＝-1.71[-3.02,-0.40],P＝0.0252；LS斜率(/月)＝0.004[-0.001,0.010],P＝0.0867。腰脊柱斜率每月增加0.009对应于每年增加0.111，且股骨颈斜率每月增加0.004对应于每年增加0.048。
统计模型使用所有可用的数据且没有使用数据归集。
结论：在用维拉苷酶α治疗的具有戈谢病和基准骨量减少/骨质疏松的患者中，在腰脊柱(第24个月)和股骨颈(第36个月)两者中的BMD改善。因为维拉苷酶α剂量在第2年期间从60单位/千克/输注减少到30单位/千克/输注，所以骨病理的改善不取决于连续高剂量疗法。
长期治疗目标的实现
已经描述了用于监测接受ERT的患有1型戈谢病的患者中治疗响应的实现、维持和连续性的治疗目标(Pastores G等，(2004)Seminars inHematology,41(增刊5):4-14)。
为了将维拉苷酶α治疗的影响相对于1型戈谢病的5种关键临床参数(贫血、血小板减少、肝肿大、脾肿大和骨骼病理)的治疗目标进行比较，将在基准时处于贫血、血小板减少、肝肿大和脾肿大的目标下的患者的比例与在4年时实现这些目标中的每一个的比例相比较。对于8个患者(3个男性，5个女性)可使用在基准和4年时贫血、血小板减少、肝肿大、脾肿大和骨骼病理的完整数据。在4年时实现骨骼病理目标的比例基于从基准到4年的Z-分值改善来测定。另外，将在4年时实现所有5个目标的患者的比例与在基准时处于所有5种参数的目标下的比例比较。
在基准时，没有患者处于所有临床参数的目标下(表9)。在1年治疗之后，所有患者维持基准时存在的目标，且全都实现了≥2个目标。在15个月和18个月之间，所有8个患者开始逐步剂量降低到维拉苷酶α30U/kg EOW。经过4年治疗，所有患者满足了所有5种临床参数的目标；因此，对于5个长期治疗目标中的每一个观察到100％实现(表9)。
表9
基准 4年
贫血 4/8(50％) 8/8(100％)
血小板减少 0/8(0％) 8/8(100％)
肝肿大 4/8(50％) 8/8(100％)
脾肿大 0/8(0％) 8/8(100％)
骨骼病理 ----------- 8/8(100％)
所有5个目标 0/8(0％) 8/8(100％)
以在第4年时的骨矿密度(BMD)相对于基准的改善来测量骨骼病理。
在该维拉苷酶αI/II期和扩展研究中，尽管在1年之后剂量减少，对于各患者也观察到临床上有意义地实现了各长期治疗目标。这是接受1型戈谢病的ERT的所有患者在开始治疗的4年内实现了所有5个长期治疗目标的群组的首次报道。
TKT025和TKT025EXT的结果的概述
本文中报道的发现证明了与维拉苷酶α相关的不良事件在严重性方面通常为轻微的且大多数与疗法无关。治疗突现不良事件为轻微至中度的且大多数与药物无关。在这些研究中登记的患者没有发展出抗体，没有观察到药物有关的严重不良事件，不论输注环境和暴露事件为何，且没有患者由于不良事件而从研究中退出。在试验地点的初期观察之后，符合条件的患者成功转换到基于家庭的护士施用的维拉苷酶α。
维拉苷酶α在所研究的四种疾病参数中展示了功效，在最初的6个月治疗内和贯穿试验和扩展研究过程观察到相对于基准的具有统计上显著且临床上有意义的改善。在开始疗法的24个月内，所有患者都实现了血红蛋白水平正常化，除一个以外的所有患者都实现了大于100,000/mm3的血小板计数，所有患者都实现了肝体积的接近正常化，且除一个以外的所有患者都显示出脾体积减小大于50％。此外，在包括剂量减少期的整个研究持续期中观察到了这些改善。回到原始剂量60U/kg/每隔一周的唯一患者在15个月初始剂量减少之后，在39个月的骨痛后回到所述原始剂量。该患者在登记时在两个脚裸中具有骨破坏性病变(成像病理无法排除AVN)且具有骨髓炎的先前病史。主要研究者(AZ)将疼痛恶化归因于先前存在的破坏性病变和先前的病理，且可能与剂量减少或治疗失败无关。
包括转换到家庭治疗和尽管剂量减少但仍然观察到的临床参数的显著变化的所观察到的安全概况已进一步产生了维拉苷酶α的三种后续III期试验(其考虑了儿童)以及全球早期访问项目和FDA认可的治疗方案。
实施例2：TKT032研究(12M，45或60U/kg维拉苷酶α)
实施例2.1：概述
该实施例描述了评估维拉苷酶α在1型GD中的功效和安全性的全局多中心试验。二十五个治疗雏期的贫血1型GD患者(4至62岁)随机分组至每隔一周静脉内施用维拉苷酶α60U/kg(n＝12)或45U/kg(n＝13)历时12个月随机分组。
患者以1:1比率随机分组以接受45U/kg(N＝13)或60U/kg(N＝12)维拉苷酶α。分层因子包括年龄(2-17；≥18)和性别(男性；女性)。患者的基准特征列在表10中。在12个月观察到了血液学参数和脾体积的临床和统计上显著的改善(表11)。图7和图8示出在用45U/kg或60U/kg维拉苷酶α治疗12个月的患者中平均血红蛋白浓度和血小板计数分别相对于基准增加。图9和图10示出在用45U/kg或60U/kg维拉苷酶α治疗12个月的患者中平均正规化脾体积和平均正规化肝体积分别相对于基准减小。
表10 TKT032基准特征
表11 TKT032临床结果(N＝25)
a-在对于多个试验调节之后统计上不显著。
维拉苷酶α耐受性良好。一个患者在研究结束时(第12个月)发展出抗体。表12汇总TKT032安全试验的结果。
表12 TKT032安全性
在第12个月，平均血红蛋白浓度增加(60U/kg：+23％；+2.4g/dL[95％置信区间(CI)：1.5,3.4；P<0.001]；45U/kg:+24％；+2.4g/dL[95％CI:1.5,3.4；P<0.001])平均血小板计数增加(60U/kg:+65.9％；+51×109/L[95％CI:24,78；P＝0.002]；45U/kg:+66％；+41×109/L[95％CI:11,71；P＝0.01])。平均脾体积减小(60U/kg:-50％[95％CI:-62,-39％]，从正常的倍数14.0减小到5.8[MN][P＝0.003]；45U/kg:-40％[95％CI:-52,-28％]，从14.5减小9.5MN[P＝0.009])；平均肝体积减小(60U/kg:-17％[95％CI:-27,-7％]，从1.5减小到1.2MN[P＝0.03]；45U/kg:-6％[95％CI:-18,6％]，从1.4减小到1.2MN[P＝0.32]。没有观察到药物有关严重不良事件或退出。一个患者发展出抗体。
研究目的
该研究的第一目的在于测定如由血红蛋白浓度增加所测量的在患有1型戈谢病的患者中以60U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α的功效。
该研究的第二目的在于评估以60U/kg和45U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α的安全性；评估如由血红蛋白浓度增加所测量的以45U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α的功效；通过评价血小板计数增加、脾体积和肝体积减小和血浆壳三糖苷酶和趋化因子(C-C基元)配体18(CCL18)水平降低来评估以60U/kg和45U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α的功效；评估以60U/kg和45U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α对生命综合质量(QoL)的影响；和评估当以60U/kg和45U/kg剂量施用时每隔一周给药维拉苷酶α的单一剂量和重复剂量的药物动力学。
该研究的第三目的在于测定自基准到实现血红蛋白响应的时间，定义为在以60U/kg或45U/kg剂量每隔一周给药用维拉苷酶α之后血红蛋白浓度增加≥1g/dL；评估以60U/kg和45U/kg剂量每隔一周给药维拉苷酶α对≥18岁患者的肺功能检验(PFT)的影响；评估在2岁至17岁之间的患者中的生长速度和Tanner分期；通过放射照相左手和腕部评估在2岁至17岁之间的患者中的骨骼年龄的变化；确立基准，据以通过腰脊柱和股骨颈的磁共振成像(MRI)来评估在2岁至17岁之间的患者中的骨病；和确立基准，据以通过以下项目来评估维拉苷酶α疗法对在≥18岁的患者中戈谢有关的局部和全身性骨病的长期影响：腰脊柱和股骨颈的DXA(包括冠状面成像)；和血清碱性磷酸酶N-末端肽交联(NTx)和C-末端肽交联(CTx)。
总体研究设计
这是设计用来评估维拉苷酶α疗法对患有I型戈谢病的患者的功效和安全性的多中心III期随机分组双盲平行组2剂量研究。
该研究由以下5期组成：(1)筛选：第-21天至第-4天；基准：第-3天至第0天(在第一剂量之前)；治疗期：第1周(第1天；第一剂量)至第51周(每个患者施用总共26次输注)；研究访问结束：第53周；跟踪：在最后输注之后30天(对于在第53周评估之前中断/退出的患者，或对于完成该研究但没有选择登记在后续长期临床研究中的患者)。
在筛选时，提供书写的告知同意书以参与该研究的患者相对于研究加入标准经历复查以测定研究合格性并进行筛选评估。具体地说，患者提供血样以测量血红蛋白浓度。只有具有对于年龄和性别来说低于正常下限至少1g/dL的血红蛋白浓度的那些患者适宜继续进入基准期。出于统计分析目的，在筛选时收集额外血样以评估血红蛋白浓度。
在完成筛选评估之后符合研究参与条件的患者在第一剂量之前进行基准程序和评估(即，第-3天至第0天)。为了证实患者的血红蛋白浓度比对于年龄和性别来说的正常下限低至少1g/dL，在基准时患者提供血样。分析并报道血红蛋白浓度。只有在筛选和基准时具有对于年龄和性别来说的正常下限低至少1g/dL的血红蛋白浓度的那些患者符合随机分组条件。出于统计分析目的，在基准中收集额外血样以评估血红蛋白浓度。在施用第一剂量之前进行额外基准程序和评估。
在完成基准评估和证实合格性之后，使患者以1:1比率随机分组以经由计算机产生的随机分组方案接受维拉苷酶α60U/kg或维拉苷酶α45U/kg。
患者在临床地点每隔一周一次接受总共26次IV输注的双盲研究投药，历时总共51周。在治疗期期间以规则间隔进行安全性和功效评价。在第51周和第53周访问进行安全性和功效的最终评价。
在整个研究中通过评价不良事件(包括输注有关的不良事件)、伴随的投药和生命体征来评价安全性。在第13周、第25周、第37周和第53周进行包括12导联心电图、身体检查、临床试验室检验(血液学、血清化学、尿检)的额外安全性评价。约每6周进行抗维拉苷酶α抗体和酶中和抗体的存在的测定，直至第53周。
经血红蛋白浓度和血小板计数、肝和脾体积及血浆壳三糖苷酶和CCL18水平评价功效。额外功效评价包括生长速度和Tanner分期、QoL指标、骨骼生长及肺功能检验。
在研究期间也评估单一剂量和重复剂量维拉苷酶α药物动力学概况。分别在第1周(第1天)和第37周收集血样用于这些分析。
向完成该研究的患者提供加入后续长期临床研究的机会。对于选择加入该长期研究中的患者，将在TKT032中在第51周和第53周访问的某些评价用作基准评价；在完成对于TKT032排定的53周程序之后，在第53周访问时患者接受其第一维拉苷酶α输注以便长期临床研究。因此，希望患者将横跨该2种研究接受连续的维拉苷酶α治疗。完成该研究但没有选择加入后续长期临床研究中的患者在其最后输注维拉苷酶α之后30天将通过现场访问和通电话而得到安全性评估。
研究群的选择
在评价的30个患者中，14个不符合随机分组条件(12个不符合包括标准；2个不符合排除标准)。使25名参与者随机分组至45U/kg(n＝13)或60U/kg(n＝12)维拉苷酶α。将接受至少1次输注(或部分输注)的所有随机分组患者包括在意向治疗(ITT)患者群中。
合格的参与者为诊断有1型戈谢病(白血球中葡糖脑苷脂酶活性不足和通过基因型分析)和疾病有关的贫血(血红蛋白水平比对于年龄和性别来说正常的当地实验室下限低≥1g/dL)的≥2岁的男性和女性。参与者也具有以下一项和多项：通过触诊至少中度脾肿大(在左肋缘以下2至3cm)；疾病有关的血小板减少(血小板计数<90×103血小板/立方毫米)；和容易触知的肝肿大。参与者在进入研究之前的30个月内不能接受对戈谢病的治疗。
如果参与者具有脾切除；具有(和怀疑具有)2或3型戈谢病；为抗体阳性和经历对伊米苷酶的过敏性休克，则排除所述参与者。其他排除标准包括在进入研究之前的30天内用任何非戈谢病有关的研究药物和装置治疗；HIV或者B或C型肝炎的阳性检验；严重贫血(维生素B12、叶酸或缺铁有关的贫血)或可能影响研究数据的任何显著的共存疾病。排除怀孕和泌乳妇女且要求具有生育小孩潜力的妇女一直使用医学可接受的避孕方法。
研究治疗
治疗任务：使患者以1:1比率随机分组以接受：每隔一周维拉苷酶α60U/kg，历时51周(12个患者，26次输注)；或每隔一周维拉苷酶α45U/kg，历时51周(12个患者，26次输注)。
随机分组：在完成基准评估并证实合格性之后，使患者经计算机产生的随机分组方案以1:1的比率随机分组以接受每隔一周输注维拉苷酶α45U/kg或维拉苷酶α60U/kg历时51周。
根据初步分析的统计有效性，对预后因子的平衡的追求在小型试验中是重要的。为了在许多预后因子(例如，年龄和性别)之间实现该平衡，使用动态分派技术。对于动态随机化程序，患者的分派受所讨论的患者的分层因子的当前平衡所影响。该技术使用如由Pocock和Simon提出的方法且非常符合在ICH-9中提供的方针(Pocock等，Biometrics.1975；31:105-115)。
治疗方案：患者在第1周接受其第一次输注。所有患者每隔一周治疗历时12个月(51周)；因此，总共施用26次维拉苷酶α输注。
剂量计算：研究药物的实际剂量根据基准时患者的体重计算。如果在第13周、第25周或第37周发现相对于先前评价的体重变化≥5％，就需要重新计算研究投药的剂量。
维拉苷酶α施用：维拉苷酶α在60U/kg剂量水平和45U/kg剂量水平下以连续IV输注施用。所有输注经1小时持续时间施用。所有输注在4.3mL的无防腐剂的灭菌注射水中重构，且随后在生理盐水(0.9％氯化钠)中稀释以产生100mL总体积。研究药物输注在一周中大致相同的一天发生，但可在排定日的每14天(±3天)发生以促进患者排定。
研究程序和数据收集方法
测定基因型：在筛选时所有患者提供血样用于测定戈谢病基因型和血浆壳三糖苷酶基因型。
病史：在筛选时，记录患者的完整病史。这包括身体系统的复查、当前和预先医疗程序的记载，和当前和预先伴随投药使用的记载、和在进入研究之前的30个月内患者没有接受戈谢病治疗的记载。
生命体征：记录的生命体征参数包括脉搏、血压、呼吸率和温度。遵循以下方案以记录在输注访问时的生命体征：输注开始(在开始输注之前10分钟内)、输注期间(30分钟(±5分钟))、输注之后(在完成输注之后5分钟内、30分钟(±5分钟)和60分钟(±5分钟))。在筛选、基准时和第53周，仅在一个时间点收集生命体征。
身体检查：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周、第37周和第53周进行身体检查。身体检查包括以下项目：一般外观、内分泌、头颈部、心血管、眼睛、腹部、耳朵、泌尿生殖器、鼻、皮肤、喉咙、肌骨胳、胸部和肺及神经系统。另外，在筛选期间进行肝和脾触诊以证实患者具有中度脾肿大(在左肋缘下2至3cm)和戈谢病有关的肝肿大。
身高和体重：在基准时和在研究的第13周、第25周、第37周和第53周记录身高和体重。
12-导联心电图：在基准和研究的第13周、第25周、第37周和第53周进行12-导ECG。各12-导联ECG包括PR、QRS、QT和QTc间隔及心率的评价。
临床实验室检验：如下所述收集血样和尿样用于临床实验室检验。所有血样经静脉穿刺收集。
血液学：在筛选、基准和研究的第13周、第25周、第37周和第53周收集血样用于完整的血液学检验。评估以下血液学参数：具有差异的全血细胞计数(CBC)、活化部分凝血活酶时间(aPPT)、网织红细胞计数(通过临床地点当地实验室分析并报道)、血小板计数和前凝血酶时间(PT)。在筛选、基准时和在每次研究访问(除了在第1周访问外)时收集血样以测量血红蛋白浓度和血小板计数。
血清化学：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周、第37周和第53周收集血样用于血清化学检验。评估以下血清化学参数：钠、丙氨酸转氨酶、钾、天冬氨酸转氨酶、葡萄糖、乳酸脱氢酶、总钙、γ-谷氨酰基转移酶、总蛋白质、肌酐磷酸激酶、白蛋白、NTx*、肌酐、CTx*、尿素氮、叶酸(仅筛选)、总胆红素、维生素B12(仅筛选)、碱性磷酸酶*(*结果用于评价骨生物标志物)。
尿检：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周、第37周和第53周收集尿样用于尿检。评估以下尿检参数：pH值、宏观评估、微观评估。
血清抗伊米苷酶抗体测定：所有患者仅在筛选期间收集血样用于测定血清抗伊米苷酶抗体。从研究中排除具有阳性结果的患者。
血清抗维拉苷酶α抗体测定：在基准时和在治疗期期间约每6周(第7周、第13周、第19周、第25周、第31周、第37周、第43周和第49周)和在第53周患者提供血样以测量在血清中的抗维拉苷酶α抗体。在治疗期期间，在输注之前收集这些血样。
不良事件：对于完成研究且没有选择从第53周访问之前的研究进入长期临床研究的患者，在最后输注之后的30天内在整个研究中根据告知同意/认可来监测不良事件。对于完成该研究且选择加入长期临床研究中的患者，根据告知同意/认可在第53周访问中监测不良事件。
预先和伴随的疾病：将在基准时存在的额外疾病视为伴随疾病且记载在病史CRF的适当页面上。在研究期间首先发生或检测到的疾病或在研究期间伴随疾病的恶化被视为AE且因而记载在CRF中。
肝和脾MRI：患者在基准时和第25周和第51周进行肝和脾的MRI。肝和脾的大小使用定量腹部MRI测量。
血浆壳三糖苷酶水平：在基准、第13周、第25周、第37周和在第53周时收集血样(约2.5mL)用于评估血浆壳三糖苷酶水平。
血浆CCL18水平：在基准、第13周、第25周、第37周和在第53周时收集血样(约2.5mL)用于评估血浆CCL18水平。
生活质量检验：在基准时和在第53周，使用包括36项短格式(SF-36)第2版(对于≥18岁的患者)和儿童健康调查表(CHQ)PF50(对于5至17岁的患者)的经批准的调查表来评估患者生活质量。
生长速度和Tanner分期：对于2至17岁的患者，在基准和第13周、第25周、第37周和第53周时评价生长。使用在该研究期间在规则的时间点记录的身高和体重测量结果来计算生长速度。在该研究中患者的生长率相对于从疾病控制和预防中心的身高和体重数据获得的相当年龄的正常个体的生长率来测量。在基准和第13周、第25周、第37周和第53周时记录Tanner分期。
骨骼生长：在基准和第51周时对在2至17岁之间的患者进行左手和腕部的放射照相以评估骨骼年龄。
肺功能检验：在基准和第53周时，在试验地点登记的具有进行肺活量测定的能力的≥18岁的患者具有PFT。
根据由美国胸科学会或欧洲呼吸学会对于肺活量测定标准公布的指标进行肺活量测定(American Thoracic Society.Standardization ofSpirometry.Am J Respir Crit Care Med.1995；152:1107-1136；Quanjer等，Eur Respir J.1993；16(增刊):5-40)。用力肺活量(FVC)和用力呼气容积/秒(FEV1)两者以绝对值和正常预测值％来表示，其基于对于成人公布的参考值来计算(Hankinson等，Am J Respir.Crit CareMed.1999；159:179-187)。对于该计算使用当前的身高。
与肺活量检验同时进行肺容量和扩散能力(DLCO)测定。肺容量测量包括总肺容量(TLC)和剩余容积(RV)，其根据公布的参考值以绝对值和正常预测值％来记录。DLCO也根据公布的参考值以绝对值和正常预测值％来表示。
药物动力学评估：对于≥18岁的患者，在第1周(第1天)和第37周的以下时间收集血样：在第一剂量之前立即，在输注期间(在5分钟、10分钟、15分钟、20分钟、40分钟和60分钟(输注结束)收集样品)和在输注之后(在65分钟、70分钟、80分钟、90分钟、105分钟和120分钟收集样品)。
对于2至17岁的患者，在第1周(第1天)和第37周的以下时间收集血样：在第一剂量之前立即，在输注期间(在10分钟、20分钟、40分钟和60分钟(输注结束)收集样品)和在输注之后(在70分钟、80分钟和90分钟收集样品)。
使用葡糖脑苷脂酶抗原免疫测定评估血清样品中施用维拉苷酶α的存在。评估以下PK参数：AUC(曲线下的面积)、Cmax(最大血清浓度)、Tmax(达到最大血清浓度的时间)、CL(mL/min/kg)(血清清除率，对于体重正规化)、Vss(mL)(稳态时的表观分布容积)、Vss(％BW)(Vss对于体重正规化)、MRT(平均滞留时间)和T1/2(消除半衰期(通过适当PK模型来分析))
骨生物标志物：仅在基准时，对≥18岁的患者进行腰脊柱和股骨颈的DXA，包括冠状面成像，以测定戈谢有关的局部和全身性骨病。骨质流失和脱矿质也通过测量血清碱性磷酸酶、NTx和CTx评估。从仅在基准时收集用于临床实验室检验的血样获得这些参数的结果。
对于2至17岁的患者，在基准时(即，与对患者进行肝和脾的MRI的同时)获得股骨颈和腰脊柱的MRI。不出所料在该研究期间任何治疗作用对于这些参数都将是显然的；因此，仅在基准时收集测量结果以确立在长期临床研究期间据以监测这些生物标志物的参考点。
不良事件
不良事件定义：不良事件(AE)为如由在临床试验的任一期中出现的身体体征、症状和/或实验室变化所指示的解剖学、生理或代谢功能的任何有毒、病理学或非预期变化，而不管是否被视为与研究药物有关。这包括预先存在病状的恶化。根据告知同意/认可在最后剂量的研究投药之后30天和/或直到不良事件已经解决/稳定或达到一种结果(无论何者在先)收集不良事件。对于完成该研究且选择加入后续长期临床研究中的患者，从向患者提供告知同意书的时间到TKT032的第53周访问监测不良事件。
AE包括：在研究起始时存在的病状的恶化(性质、严重性或频率方面的改变)；并发的疾病；药物相互作用；与伴随投药有关或可能与伴随投药有关的事件；异常实验室值(这包括研究人员认为临床上重要的在正常范围内的相对于基准的显著转变)；身体检查、生命体征、体重和ECG的临床上显著的异常。
另外，AE也可以包括出乎意料的实验室值，其变得显著超出范围且由研究人员测定为临床上显著的。
输注有关的不良事件的定义：输注有关的不良事件定义为如下不良事件：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或者或许与研究投药有关。在输注之前发生的其他AE以及在输注之前进行的与实验方案限定的检验和评价(例如，实验室检验、ECG和身体检查)相关的AE并不定义为输注有关的不良事件。
严重的不良事件定义：严重的AE(SAE)为导致任何以下结果的以任何剂量发生的任何AE：死亡；为危及生命的；需要患者住院治疗；需要现有住院治疗延期；持久或显著的病废/无能和出生缺陷/先天缺陷。
当可能不导致死亡、危及生命或需要住院治疗的事件的重要医疗事件根据适当医疗判断可能危害患者且可能需要医疗或外科手术以预防以上所列结果之一时，它们可被视为SAE。
危及生命的AE定义为鉴于最初报道使患者处于随着AE发生而引起死亡的即时危险中的AE(即，其不包括如果以更重度的形式出现时可能致死的AE)。
不良事件和严重不良事件的分类：当评价AE的严重性时，参考国立癌症研究院通用毒性标准(NCI CTC)3.0版分级量表。如果AE没有描述在NCI CTC中，则根据以下量表记录严重性。所有AE/SAE的严重性在适当CRF页面上记录为分别对应于轻微、中度、重度或危及生命的严重性的1级、2级、3级或4级。1级(轻微)定义为日常活动不受限制。2级(中度)定义为日常活动受一定程度地限制；3级(重度)定义为不能实施日常活动；和4级(危及生命的)定义为即时死亡危险。
不良事件或严重不良事件与盲法研究投药的关系由研究人员根据以下定义测定。“无关”定义为与研究药物无关。“可能有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，但其也可以由同时发生的疾病或其他药物/化学解释。“或许有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，不大可能归因于同时发生的疾病或其他药物和化学且其在去激发时依循临床上合理的响应。临床事件/实验室异常的相关性也必须具有一定的生物学似真性，至少是在理论根据上。
在严重和重度之间的阐明术语“重度”常用以描述具体事件的强度(严重性)(如在轻微、中度或重度心肌梗塞中)；然而，事件本身可能具有相对较少的医疗意义(诸如重度头痛)。这不同于“严重”，其基于通常与对生命或功能造成威胁的事件相关的结果或作用标准。严重(非重度)和因果性用作限定调整报告责任的指导。
不良事件监测和观察期：对于该研究的目的，观察期从告知同意/认可延伸到该研究的患者最终评估。出于安全目的，对于完成研究且没有选择加入长期研究的患者，最终评估定义为在最后输注之后约30天进行的后研究安全评估。对于完成该研究且选择加入长期临床研究中的患者，从患者提供告知同意书的时间到TKT032的第53周访问监测不良事件。
统计方法
一般统计方法论：对于所有功效变量来说，统计分析根据ITT原理。所述ITT分析基于接受至少一次输注(全部或部分输注)的所有随机分组患者。对于治疗组的各参数相对于基准的变化和变化％提供概括统计量。按照治疗组对于各终点提供相对于基准的平均变化和平均变化％的双侧95％置信区间。
汇总在基准时和后续研究访问时收集的连续数据，且列出各变量的平均值、标准偏差、最小值、最大值和中值以促进探求可以归因于研究药物的随时间而变的趋势。分类变量按照频率和％提供。在组内，使用配对T检验检查变化。以0.05水平限定统计显著性。
人口统计和基准特征以频率和百分数来汇总，且数据使用描述性统计提供。特定地对于2至17岁之间的患者进行额外分析。
一般来讲，使用描述性统计和图表提供研究结果，包括(如果有关)示出个别患者和各治疗组随时间的发展的图表。
根据报道的AE、临床实验室数据、ECG记录、病史、生命体征和身体检查评估安全性。另外，分析血样来测定抗维拉苷酶α抗体的存在。
假设检验：所有假设检验都为双侧的且以0.05的显著性水平进行。各变量量化为相对于基准的平均变化或相对于基准的平均变化％。所检验的各变量的零假设在于，在第51周或第53周，相对于基准没有变化。备选假设在于在相对于基准的任一方向存在变化。
筛选失败：对于进入研究所筛选的所有患者的处置连同筛选失败的原因一起列出。所有随机分组患者的处置按照治疗和访问列出，且中断的原因按照治疗列出。
样本量调整：选择用于该研究的样品量以具有检测平均血红蛋白浓度自基准到12个月的临床上显著的差异的高效能。对于第一分析按治疗组总共需要12个患者。该数量基于来自I/II期研究TKT025的结果，其检查患者内相对于基准的变化结果。观察到，在第25周，相对于基准的平均血红蛋白增加为1.92g/dL，标准偏差为0.824。假设在于平均变化的标准偏差大致相同。使用0.05的双侧α水平且假设1-单位血红蛋白的变化视为临床上显著的，相对于基准的变化的标准偏差为0.824，则将需要10个患者用于试验以具有90％的效能。假设20％的退出率，则每治疗组将需要12个患者。为了采集额外的安全数据且为了防止可能的患者漏失，且为了获得目标患者群，在该研究中可以登记高达30个患者。
分析群：用于功效数据分析的主要群体为ITT患者群，定义为接受至少一次维拉苷酶α输注(或部分输注)的所有登记并治疗的患者。可以预料由于缺乏后基准数据引起的自原始随机样本的损耗应该足够小(5％或更小)以使关于由于这类患者的排除引起的偏差的忧虑最小化。
安全群由接受至少一次研究输注(或部分输注)的所有随机分组患者组成。根据占优势地接受输注而不是随机分派的治疗来分析安全群中不接受对其随机分派的研究输注的任何患者。这类患者自完成实验方案(PP)患者群排除。PP患者群定义为接受≥80％的排定输注且具有有效的基准和第51周和/或第53周评估的所有随机分组患者。
功效分析：对于进入研究所筛选的所有患者的处置连同筛选失败的原因一起列出。所有随机分组患者的处置按照治疗组和访问列出并列出中断的原因。
在随机分组到60U/kg维拉苷酶α的患者中，第一临床活动变量为血红蛋白浓度。第一目的在于通过示出在随机分组到60U/kg维拉苷酶α的患者中血红蛋白自基准到12个月的平均变化来证明功效。出于分析目的，将在筛选和基准时收集的血红蛋白值取平均值以确立用以计算变化的基准。零假设在于血红蛋白浓度自基准到12个月没有变化。自基准到12个月的平均差异使用配对T检验或Wilcoxon符号秩检验来检验。还提供了该平均差异的95％置信区间。
第二和第三临床活动变量为：血红蛋白浓度(对于45U/kg组评价自基准到12个月(第53周)的变化)；血小板计数(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第53周)的变化)；脾体积(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第51周)的变化％；除了观察值以外，脾体积按照体重正规化并且以正常的倍数提供)；肝体积(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第51周)的变化％；除了观察值以外，肝体积按照体重正规化并且以正常的倍数提供)；血浆壳三糖苷酶(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第53周)的变化；在12个月的治疗之后预期统计上显著的降低)；血浆CCL18(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第53周)的变化；在12个月的治疗之后预期统计上显著的降低)；生活质量(SF-36和CHQ)(对于两个治疗组评价自基准到12个月(第53周)的变化)；血红蛋白响应(获得血红蛋白响应的时间，定义为对于两个治疗组评价血红蛋白浓度增加≥1g/dL)；生长速度和Tanner分期(对于在2至17岁之间的患者的两个治疗组评估自基准到12个月(第53周)的变化)；骨骼年龄(对于两个治疗组评估自基准到12个月(第51周)的变化，如通过在2至17岁之间的患者的左手和腕部的放射照相测量)；和PFT(对于≥18岁的患者的两个治疗组评价自基准到12个月(第53周)的变化)。
对于用以证明在随机分组到45U/kg维拉苷酶α的患者中血红蛋白自基准到12个月(第53周)的平均变化的第二目的，零假设在于自基准到12个月(第51周或第53周)将没有变化。出于分析目的，将在筛选和基准时收集的血红蛋白值取平均值以确立用以计算变化的基准。自基准到12个月(第51周或第53周)的平均差异使用配对T检验或Wilcoxon符号秩检验来检验。还提供了平均差异的95％置信区间。
对于剩余的二次参数，零假设在于对于各治疗组自基准到12个月(第51周或第53周)将没有变化。出于分析目的，将在筛选和基准时收集的血小板值取平均值以确立用以计算两治疗组的变化的基准。自基准到12个月(第51周或第53周)的平均差异使用配对T检验或Wilcoxon符号秩检验来检验。还提供了平均差异的95％置信区间。
对于达到血红蛋白响应的时间，对于各治疗组提供Kaplan-Meier(乘积极限)生存曲线。获得中值时间和95％置信区间。在第53周审查在研究结束时(即，在第53周)没有经历事件的患者。另外，提供在该研究期间实现在正常范围内的血红蛋白水平的患者的比例。
对于检查相对于基准的变化的剩余的三次参数，零假设在于对于各治疗组自基准到12个月(第51周或第53周)将没有变化。在基准到12个月(第51周或第53周)之间的平均差异使用配对T检验或Wilcoxon符号秩检验来检验。还提供了平均差异的95％置信区间。
安全分析：评价接受至少一剂研究药物(或部分剂量)的所有患者的临床安全性和耐受性。不对安全参数进行正式统计检验。列出各患者的生命体征、12-导联ECG、临床化学、血液学和尿检安全监测且标记出异常值。对于诸如AE的分类变量，列出经历各AE的患者的数量和百分数。AE以事件严重性汇总。也显示出了经历药物有关的AE以及不被视为与研究药物有关的AE的患者的数量和百分数。
使用临床实验室评估(血液学、血清化学、尿检和抗维拉苷酶α抗体的测定)来评价维拉苷酶α的安全性。
亚组的分析：特定地对于在2至17岁之间的患者进行额外分析。并且，在分析中关于血红蛋白基准值给出对于疾病严重性的考虑因素。
药物动力学分析：维拉苷酶α的单一剂量和重复剂量的药物动力学曲线分别通过分析第1周和第37周的标准PK参数来确立。
结果
在12个月，在两组中平均血红蛋白浓度增加(60U/kg：增加23.3％，+2.4±0.3g/dL,P＝0.0001；45U/kg：增加23.8％，+2.4±0.5g/dL,P＝0.0001)，平均血小板计数增加(60U/kg：增加66％，+51±12×109/L,P＝0.0016；45U/kg：增加66％，+41±12×109/L；P＝0.0111)。在两组中平均脾体积减小(60U/kg：减小50％，-1.9±0.5体重％，P＝0.0032，从在基准时的14.0正常的倍数[MN]减小到5.6MN；45U/kg：减小40％，-1.9±0.6体重％，P＝0.0085；从14.5MN减小到9.5MN)；肝体积也减小(60U/kg：减小17％，0.8±3.体重％，P＝0.0282，从1.5MN减小到1.2MN；45U/kg：减小6％，-0.3±0.3体重％，P＝0.3149，从1.4MN减小到1.2MN)。
在两组中，在第15周四分之三患者实现血红蛋白浓度增加≥1g/dL；在60U/kg组中，所有患者在第27周实现血红蛋白浓度增加≥1g/dL，在45U/kg组中，所有患者在第37周实现血红蛋白浓度增加≥1g/dL。
如果患者具有2个壳三糖苷酶突变拷贝(患者6，45U/kg)或如果他们具有小于5700的基准壳三糖苷酶活性(患者4，60U/kg；患者15，45U/kg)，则将患者从壳三糖苷酶分析中排除。在治疗12个月之后，对于两治疗组，平均血浆壳三糖苷酶活性相对于基准减小：在60U/kg组中，减小83％(95％CI:-91.15,-74.08％；N＝11；p<0.001)和在45U/kg组中，减小60％(95％CI:-73.26,-46.63％；N＝11；p<0.001)。经过用维拉苷酶α60U/kg和45U/kg治疗1年，平均CCL18水平也分别降低66％(95％CI:-77.81,-54.22；p<0.001)和47％(95％CI:-63.37,-30.15％；p<0.001)。
维拉苷酶α通常耐受性良好，没有药物有关的严重AE且没有由于AE引起的患者退出。最常见的AE为头痛、鼻咽炎、损伤、关节痛、咳嗽和发热。单个患者发展出了抗体。
总之，在该全局多中心研究中，维拉苷酶α60U/kg和45U/kg通常耐受性良好且有效作为患有1型戈谢病的成人和儿童的一线治疗。两种剂量与血红蛋白值的迅速改善相关，大多数患者早在15周就响应。所测量的所有临床参数在12个月之后证明临床上有意义的改善，用维拉苷酶α60U/kg见到更大的响应。
实施例3：HGT-GCB-039(9M,60U/kg维拉苷酶α或伊米苷酶)
概述
该实施例描述设计用来比较酶替代疗法维拉苷酶α与伊米苷酶在患有1型戈谢病的患者的治疗中的安全性和功效的多中心III期随机分组双盲平行组研究。
该实施例的第一目的在于证明如由血红蛋白浓度自基准到第41周(9M)的变化所测量维拉苷酶α不亚于伊米苷酶。关键的第二目的在于证明在两组中到第41周血小板计数增加或肝/脾体积减小没有差异。
使患者以1:1的比率随机分组以接受60U/kg维拉苷酶α(N＝17)或伊米苷酶(N＝17)。患者的基准特征列于表13和表14中。分层因子包括年龄(2-17；≥18)和脾切除状况(Y；N)。第一目的和第二目的两者都满足。第一功效评价和第二功效评价的结果分别示于表15和表16中。图11和图12示出在用60U/kg维拉苷酶α或伊米苷酶治疗41周的患者中平均血红蛋白浓度和血小板计数分别相对于基准的可比较的增加。图13示出在用60U/kg维拉苷酶α或伊米苷酶治疗41周的无脾的患者中平均血小板计数相对于基准的可比较的增加。图14示出在用60U/kg维拉苷酶α或伊米苷酶治疗41周的患者中平均正规化肝体积相对于基准的可比较的减小。在安全性方面在维拉苷酶α和伊米苷酶之间没有显著差异。治疗突现的不良事件汇总于表17中。接受维拉苷酶α的患者没有发展出抗体(表18)。四个接受伊米苷酶的患者发展出了抗伊米苷酶抗体(表18)。
表13 ITT的HGT-GCB-039基准特征
表14 按照年龄组的HGT-GCB-039基准特征
表15 HGT-GCB-039第一功效评价-在对于非劣性的Hgb单侧CI中自基准到第41周的平均变化(维拉苷酶α-伊米苷酶)
表16 HGT-GCB-039第二功效评价-自基准到41周的平均变化的差异(维拉苷酶α-伊米苷酶)
a-根据在告知同意年龄、脾切除状况和基准值下调整的混合模型。
b-有20个脾切除患者被排除(10个患者，维拉苷酶α60U/kg；10个患者，伊米苷酶60U/kg)。
c-根据在告知同意年龄和基准值下调整的混合模型。
d-有13个缺乏壳三糖苷酶活性的患者被排除(7个患者，维拉苷酶α60U/kg；6个患者，伊米苷酶60U/kg)。
表17 治疗突现不良事件的HGT-GCB-039总概述
表18 HGT-GCB-039抗体
研究目的
该研究的第一目的在于比较维拉苷酶α和伊米苷酶对患有1型戈谢病的患者的血红蛋白浓度的影响。
该研究的第二目的为：比较维拉苷酶α和伊米苷酶对血小板计数的影响；比较维拉苷酶α和伊米苷酶对肝体积和脾体积的影响(通过MRI)；比较维拉苷酶α和伊米苷酶对戈谢病特异性生物标志物(血浆壳三糖苷酶和CCL18水平)的影响；评估维拉苷酶α和伊米苷酶在患有1型戈谢病的患者中的安全性，如对于各治疗组通过标准临床实验室评价(包括抗体形成率和酶中和抗体活性)和安全评价(包括输注有关的不良事件的比率和需要用以控制输注有关的不良事件的预投药的患者的比例)所测量；和比较维拉苷酶α和伊米苷酶对血红蛋白响应(定义为血红蛋白水平相对于基准改善≥1g/dL)的最早时间的影响。
该研究的第三目的为：评估维拉苷酶α和伊米苷酶对在2至17岁之间的患者的生长速度和Tanner分期的影响；通过左手和腕部的放射照相评估维拉苷酶α和伊米苷酶对在2至17岁之间的患者的骨骼年龄变化的影响；评估如通过≥18岁的患者的SF-36和5至17岁的患者的CHQ PF-50所测量的维拉苷酶α和伊米苷酶对总体QoL变化的影响；评估如通过选择的细胞因子评价(TNF-α、IL6、IL1b、IL8、IL13、CD14和GM-CSF)所测量的维拉苷酶α和伊米苷酶对≥18岁的患者的免疫和炎性响应的影响；确立基准，据以通过腰脊柱和股骨颈的MRI来评估在2岁至17岁之间的患者中的骨病；和确立基准，据以通过以下项目来评估维拉苷酶α疗法对在≥18岁的患者中戈谢有关的局部和全身性骨病的长期影响：腰脊柱和股骨颈的双能量X线吸收测定法(DXA)，包括冠状面成像；和血清碱性磷酸酶，N-末端肽交联(NTx)和C-末端肽交联(CTx)。
研究终点
该研究的第一终点在于测量自基准至第41周/研究结束(EOS)时在两个治疗组之间血红蛋白浓度的平均变化。
该研究的第二终点为：评估如由不良事件和输注有关的不良事件(和需要预投药以控制输注有关的不良事件的患者的比例)、临床实验室值、生命体征、12-导联心电图(ECG)、抗体形成和酶中和抗体活性所评价的维拉苷酶α和伊米苷酶的安全性；比较在治疗组之间血小板计数相对于基准的平均变化和变化％；比较在治疗组之间根据MRI的肝体积和脾体积相对于基准的平均变化和变化％；比较在治疗组之间血浆壳三糖苷酶和血浆CCL18水平相对于基准的平均变化和变化％；和比较在治疗组之间达到血红蛋白浓度响应的时间(定义为血红蛋白水平相对于基准的改善≥1g/dL)。
该研究的第三终点为：评估在各治疗组内在2至17岁之间的患者的生长速度和Tanner分期相对于基准的变化；评估在各治疗组内≥18岁的患者的SF-36参数相对于基准的变化；评估如由选择的细胞因子评价(TNF-α、IL6、IL1b、IL8、IL13、CD14和GM-CSF)测量的维拉苷酶α和伊米苷酶对≥18岁的患者的免疫和炎性响应的影响；评估在各治疗组内5至17岁的患者的CHQ(PF-50)参数相对于基准的变化；和评估在各治疗组内对于在2至17岁之间的患者如通过左手和腕部的放射照相测量的骨骼年龄相对于基准的变化。
总体研究设计
该研究由以下5期组成：筛选：第-21天至第-4天；基准：第-3天至第0天(通过患者随机分组)；治疗：第1周(第1天，即，第一剂量的那天)至第39周；研究访问结束：第41周；
跟踪接触：在最后输注之后30天(对于在第41周评估之前中断/退出的患者，或对于没有选择登记在长期临床研究中的患者)。
在筛选时，提供书写的告知同意书以参与该研究的患者相对于研究加入标准复查以测定研究合格性。患者提供血样以测量血红蛋白浓度。仅具有低于对于年龄和性别来说的正常下限的血红蛋白浓度的那些患者符合登记条件。出于统计分析目的，在筛选时收集额外血样以评估血红蛋白浓度。
在完成筛选评估之后符合研究参与条件的患者进行基准程序和评估(即，第-3天至第0天)。为了证实患者的血红蛋白浓度低于对于年龄和性别来说的正常下限，在基准时提供血样。分析并报道血红蛋白浓度。只有在筛选和基准二者时具有低于对于年龄和性别来说的正常下限的血红蛋白浓度的那些患者符合登记条件。出于统计分析目的，在基准时收集额外血样以评估血红蛋白浓度。在施用盲法研究投药的第一剂量之前进行额外基准程序和评估。
在完成筛选和基准程序并证实患者合格性后，使患者以1:1比率随机分组以接受双盲研究投药(维拉苷酶α60U/kg或伊米苷酶60U/kg)。随机分组经集中程序实现。利用计算机产生的随机分组方案来分派患者到治疗组。进行尝试以得到在诸如年龄、血红蛋白浓度的某些预后变量方面可比较的治疗组，而不管患者已进行脾切除。在研究之前制定随机分组方案。
患者在临床地点每隔一周一次接受总共20次IV输注的双盲研究投药，总共39周。在治疗期期间以规则间隔进行安全性和功效评价。在第41周访问(在最后输注之后2周)进行安全性和功效的最终评价。
贯穿研究通过评价不良事件(包括输注有关的不良事件)、伴随的投药和生命体征来评价安全性。在第13周、第25周和第41周进行包括12-导联心电图、身体检查、临床试验室检验(血液学、血清化学、尿检)的额外安全性评价。约每6周进行抗维拉苷酶α抗体或抗伊米苷酶抗体和酶中和抗体的存在的测定直至第41周。
经血红蛋白浓度和血小板计数、肝和脾体积及血浆壳三糖苷酶和CCL18水平评价功效。额外功效评价包括生长速度和Tanner分期、QoL指标、骨骼生长。测量在进入研究时≥18岁的患者中的免疫和炎性响应(如通过选择的细胞因子参数所测量)。
在该研究中治疗的持续时间为39周且在该研究中患者参与的持续时间高达11个月(从筛选到跟踪)。
提供给完成该研究的患者机会以登记在后续开放标签的长期临床研究中，其中所有患者将接受维拉苷酶α。对于选择加入后续开放标签的长期临床研究的患者来说，将来自第41周访问的某些评价用作用于临床研究的标准评价；在完成对于该研究排定的41周程序和评估之后患者将接受其第一次维拉苷酶α输注以便长期临床研究。因此，希望患者跨越该两种研究接受连续治疗。完成该研究但没有选择加入后续长期临床研究中的患者在该研究中在其最后输注之后30天将通过现场访问和通电话而得到安全性评估。
研究群的选择
登记34个患者(17个患者分配给各治疗组)。
合格的参与者为诊断有1型戈谢病(白血球中葡糖脑苷脂酶活性不足和通过基因型分析)和疾病有关的贫血(血红蛋白水平比对于年龄和性别来说正常的当地实验室下限低)的≥2岁的男性和女性。参与者也具有以下一项和多项：通过触诊至少中度脾肿大(在左肋缘以下2至3cm)；疾病有关的血小板减少(血小板计数<120×103血小板/立方毫米)；和容易触知的肝肿大。参与者在进入研究之前的12个月内不能接受对戈谢病的治疗。
如果参与者具有脾切除；患有(或怀疑患有)2或3型戈谢病；为抗体阳性或经历对伊米苷酶的过敏性休克，则排除所述参与者。其他排除标准包括在进入研究之前的30天内用任何非戈谢病有关的研究药物和装置治疗；HIV或者B或C型肝炎为阳性检验；严重贫血(维生素B12、叶酸或缺铁有关的贫血)或能够影响研究数据的任何显著的共存疾病。排除怀孕和泌乳妇女且要求具有生育小孩潜力的妇女一直使用医学可接受的避孕方法。
研究治疗
治疗任务：在施用第一剂量的以下物质之前使患者以1:1的比率随机分组：每隔一周施用维拉苷酶α60U/kg历时39周(高达16个患者，20次输注)，或每隔一周施用伊米苷酶60U/kg历时39周(高达16个患者，20次输注)。所有研究投药通过IV输注经1小时施用以保持对治疗盲目。
治疗施用
研究投药输注：在临床地点以连续1-小时IV输注施用双盲研究投药输注，以保持对治疗盲目。研究投药输注在一周中大致相同的一天发生，但每14天(±3天)发生以促进患者排定。
剂量计算：双盲研究投药的第一剂量根据基准时患者的体重计算。自基准或自最新记录的测量值(第13周或第25周)体重变化≥5％将需要重新计算研究投药的剂量。
研究投药的描述
维拉苷酶α：维拉苷酶α为在2至8℃下供应并运输到临床试验地点以便储存的冻干产品。
伊米苷酶 伊米苷酶(Cerezyme)作为无菌无热原的白色至灰白色冻干产品供应。
研究程序和数据收集方法
研究加入标准：在筛选时，复查患者对于研究加入标准的合格性。不符合研究加入标准的患者被视为筛选失败。
合格性的证实：在筛选时，患者提供血样以测量血红蛋白浓度，从而测定研究合格性。仅具有低于对于年龄和性别来说正常的当地实验室下限的血红蛋白浓度的那些患者符合登记条件。
在基准时，患者提供血样以证实其血红蛋白浓度低于对于年龄和性别来说正常的当地实验室下限。只有在筛选和基准二者时具有低于对于年龄和性别来说正常的下限的血红蛋白浓度的那些患者被证实符合该研究条件。
测定基因型：在筛选时所有患者提供血样用于测定戈谢病基因型和血浆壳三糖苷酶基因型。
病史：在筛选时，记录患者的完整病史。这包括身体系统的复查、当前和预先医疗程序的记载、和当前和预先伴随投药使用的记载、和在进入研究之前的12个月内没有对戈谢病治疗的患者的记载。
生命体征：记录的生命体征参数包括脉搏、血压、呼吸率和温度。遵循以下方案以记录在输注访问时的生命体征：输注开始(在开始输注之前10分钟内)、输注期间(30分钟(±5分钟))、输注之后(在完成输注之后5分钟内、30分钟(±5分钟)和60分钟(±5分钟))。在筛选、基准时和第41周，仅在一个时间点收集生命体征。
身体检查：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周和第41周进行身体检查。身体检查包括以下项：一般外貌、内分泌、头颈部、心血管、眼睛、腹部、耳朵、泌尿生殖器、鼻、皮肤、喉咙、肌骨胳、胸部和肺及神经学。身体发现的任何异常变化在适当CRF页面上记录为不良事件。
身高和体重：在基准时和在研究的第13周、第25周和第41周记录身高和体重。对于儿科患者(即，2至17岁)，使用身高和体重评价来测定生长速度。
12-导联心电图：在基准和研究的第13周、第25周和第41周进行12-导ECG，且所述12-导ECG包括PR、QRS、QT和QTc间隔及心率的评价。
临床实验室检验：如下所述收集血样和尿样用于临床实验室检验。
血液学：在筛选时和在基准时收集血样以测量血红蛋白水平用于统计分析。也在筛选、基准和研究的第13周、第25周和第41周收集血样用于完整的血液学检验。评估以下血液学参数：具有差异的全血细胞计数(CBC)、血小板计数、活化部分凝血活酶时间(aPPT)、网织红细胞计数(通过临床地点当地实验室分析并报道)和前凝血酶时间(PT)。在筛选时、基准时和在每次研究访问(除了在第1周访问外)时收集血样以测量血红蛋白浓度和血小板计数。
血清化学：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周和第41周收集血样用于血清化学检验。评估以下血清化学参数：钠、丙氨酸转氨酶、钾、天冬氨酸转氨酶、葡萄糖、乳酸脱氢酶、总钙、γ-谷氨酰基转移酶、总蛋白质、肌酐磷酸激酶、白蛋白、NTx*、肌酐、CTx*、尿素氮、叶酸(以测定研究合格性)、总胆红素、维生素B12(仅筛选)、碱性磷酸酶*(*结果用于评价骨生物标志物)。在筛选时具有叶酸和/或维生素B12缺乏有关的贫血且如此不符合研究进入标准的患者被视为筛选失败。
尿检：在筛选、基准时和在研究的第13周、第25周和第41周收集尿样用于尿检。评估以下尿检参数：pH、微观评估和宏观评估。
血清抗维拉苷酶α抗体：在筛选时和在治疗期期间约每6周(第7周、第13周、第19周、第25周、第31周和第37周)和在第41周患者提供血样以测量在血清中的抗维拉苷酶α抗体。在治疗期期间，在双盲研究投药的输注之前收集这些血样。
评估收集用于抗维拉苷酶α抗体测定的血样。这些样品使用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选，且所有阳性实例使用放射免疫沉淀测定(RIP)证实为阳性。阳性实例为同种型的(IgG、IgA、IgM或IgE)。另外，使用体外测定检验阳性实例的酶中和活性。
血清抗伊米苷酶抗体测定：在筛选时患者提供血样以测量抗伊米苷酶抗体。使用为抗维拉苷酶α抗体分析获得的相同样品进行抗伊米苷酶抗体分析。
评估这些血样以测定抗伊米苷酶抗体的存在。这些样品使用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选，且所有阳性实例使用放射免疫沉淀测定(RIP)证实为阳性。阳性实例为同种型的(IgG、IgA、IgM或IgE)。另外，使用体外测定检验阳性实例的酶中和活性。
在筛选时检验抗伊米苷酶抗体为阳性的患者不符合该研究的条件。
对于在该研究期间发展出抗伊米苷酶抗体的患者进行抗体交叉反应性检验(与维拉苷酶α)。
免疫和炎性响应检验：在基准时和在第13周、第25周和第41周≥18岁的患者提供血样用于免疫和炎性响应检验。在基准时获得一个样品。在第13周、第25周和第41周，在用研究药物的各输注之前、在紧接着跟踪和在用研究药物的各输注之后的1小时获得样品。
不良事件：贯穿该研究从患者提供告知同意书的时间至在最后输注之后的30天对于完成研究且没有选择加入后续开放标签长期临床研究中的患者或对于在第41周访问之前从研究中中断或退出的患者监测不良事件。对于完成该研究且选择加入后续开放标签长期临床研究中的患者，从告知同意到完成第41周访问监测不良事件。
输注有关的不良事件的管理：蛋白质的输注可能与对该输注的反应相关。输注有关的不良事件定义为如下不良事件：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或或许与研究盲法研究投药有关。
肝和脾MRI：在基准时和在第25周和第41周/EOS对患者进行肝和脾的MRI。肝和脾的大小使用定量腹部MRI测量。
血浆壳三糖苷酶水平：在基准时和在第1周、第5周、第9周、第13周、第17周、第21周、第25周、第29周、第33周、第37周和第41周收集血样以评估血浆壳三糖苷酶水平。使用酶活性测定分析壳三糖苷酶。
血浆CCL18水平：在基准时和在第1周、第5周、第9周、第13周、第17周、第21周、第25周、第29周、第33周、第37周和第41周收集血样以评估血浆CCL18水平。通过在市售试剂盒中酶联免疫吸附测定(ELISA)测量CCL18水平。
生活质量检验：在基准时和在第41周，使用包括36项短格式(SF-36)第2版(对于≥18岁的患者)和儿童健康调查表(CHQ)PF50(对于5至17岁的患者)的批准的调查表评估(Ware Arch Phys Med Rehabil Vol 84，增刊2，2003年4月：43-51；SF-36v2 Health1996,2000by QualityMetric Incorporated and Medical Outcomes Trust.版权所有；Landgraf等，Child Health Questionnaire:使用手册。第2次印刷，Health Act,Inc.,Boston MA,1999；Landgraf等，Quality ofLife Research.1998；7(5):433-445)。
生长速度和Tanner分期：对于2至17岁的患者，在基准和第13周、第25周和第41周时评价生长。使用在该研究期间在规则的时间点记录的身高和体重测量结果计算生长速度且使其与Tanner分期相关。在基准和第13周、第25周和第41周时记录Tanner分期。将在各治疗组中在2至17岁之间的各患者相对于基准的变化评估为三次功效参数。
骨骼生长：在基准和第41周时对在2至17岁之间的患者进行左手和腕部的放射照相以评估骨骼年龄。
骨生物标志物：在基准时和第41周，对≥18岁的患者进行腰脊柱和股骨颈的DXA，包括冠状面成像，以测定戈谢有关的局部和全身性骨病。在基准时和第41周，这些患者的骨质流失和脱矿质通过测量血清碱性磷酸酶、NTx和CTx评估。
对于2至17岁的患者，在基准时和第41周(与对这些患者进行肝和脾的MRI的同时)获得股骨颈和腰脊柱的MRI。
不出所料在该研究期间任何治疗作用对于这些参数都将是显然的；然而，在基准时和第41周收集的测量结果将用以确立在后续开放标签长期临床研究期间自其监测这些生物标志物的参考点。
预先和伴随的疾病：将在基准时存在的额外疾病视为伴随疾病且记载在病史CRF的适当页面上。在研究期间首先发生或检测到的疾病或在研究期间伴随疾病的恶化被视为AE且因而记载在CRF中。
患者在该研究期间的任一点或在最后输注之后的30天内没有接受用红血球生长因子或研究药物或装置的治疗。
在该研究的治疗期期间，患者可以接受作为预投药的皮质类固醇以减轻潜在的输注有关的不良事件。
不良事件
不良事件定义：不良事件(AE)为如由在临床试验的任一期中出现的身体体征、症状和/或实验室变化所指示的解剖学、生理或代谢功能的任何无毒、病理学或无意识的变化，而不管是否被视为研究药物有关。这包括预先存在病状的恶化。自患者提供告知同意的时间至在最后剂量的盲法研究投药之后的30天和/或直到不良事件已经解决/稳定或达到一种结果(无论何者在先)收集不良事件。对于在第41周访问之前被中断或退出的患者，跟踪AE直至在其最后输注之后的30天。对于完成该研究且选择加入长期临床研究中的患者，从患者提供告知同意书的时间到第41周访问监测不良事件。
AE包括：在研究起始时存在的病状的恶化(性质、严重性或频率方面的改变)；并发的疾病；药物相互作用；与伴随投药有关或可能与伴随投药有关的事件；异常实验室值(这包括自在研究人员认为临床上重要的正常范围内的基准的显著转变)；身体检查、生命体征、体重和ECG的临床上显著的异常。
另外，AE也可以包括出乎意料的实验室值，其变得显著超出范围且由研究人员测定为临床上显著的。如果存在出乎意外的溢出值，则重复实验室检验，直至其恢复到正常或可被解释且患者的安全不在保险范围内。
输注有关的不良事件的定义：输注有关的不良事件定义为如下不良事件：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或或许与盲法研究投药有关。在输注之前发生的其他AE以及在输注之前进行的与实验方案限定的检验和评价(例如，实验室检验、ECG和身体检查)相关的AE并不定义为输注有关的不良事件。
严重的不良事件定义：严重的AE(SAE)为导致任何以下结果的以任何剂量发生的任何AE：死亡，为危及生命的，需要患者住院治疗，需要现有住院治疗延期、持久或显著的病废/无能和出生缺陷/先天缺陷。
可能不导致死亡、危及生命或需要住院治疗的重要医疗事件可被视为SAE，当根据适当医疗判断，它们可能危害患者且可能需要医疗或外科手术以预防以上所列结果之一。
危及生命的AE定义为鉴于最初报道使患者处于随着AE发生而引起的死亡即时危险中的AE(即，其不包括使其以更严重的形式出现或可能致死的AE)。
不良事件和严重不良事件的分类：当评价AE的严重性时，参考国立癌症研究院通用毒性标准(NCI CTC)3.0版分级量表。如果AE没有描述在NCI CTC中，则根据以下量表记录严重性。所有AE/SAE的严重性在适当CRF页面上记录为分别对应于轻微、中度、重度或危及生命的严重性的1级、2级、3级或4级。1级(轻微)定义为日常活动不受限制。2级(中度)定义为日常活动受一定程度地限制；3级(重度)定义为不能实施日常活动；和4级(危及生命的)定义为即时死亡危险。
不良事件或严重不良事件与盲目研究投药的关系由研究人员根据以下定义测定。“无关”定义为与研究药物无关。“可能有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，但其也可以由同时发生的疾病或其他药物/化学解释。“或许有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，不大可能归因于同时发生的疾病或其他药物和化学且其接着是对再挑战的临床上合理的响应。临床事件/实验室异常的相关性也必须具有一定的生物学似真性，至少是在理论根据上。
在严重和重度之间的阐明：术语“重度”常用以描述具体事件的强度(严重性)(如在轻微、中度或重度心肌梗塞中)；然而，事件本身可能具有相对较少的医疗意义(诸如重度头痛)。这与“严重”没有不同，其根据通常与造成对生命或功能的威胁的事件通常相关的结果或作用标准。严重(非重度)和因果性用作限定调整报告责任的指导。
不良事件监测和观察期：对于该研究的目的，观察期从患者提供告知同意书的时间延伸到该研究的患者最终评估。出于安全目的，最终评估定义为对完成研究且没有选择加入长期研究的患者或对在第41周访问之前从研究中中断或退出的患者在最后输注之后约30天进行的后研究安全评估。对于完成该研究且选择加入长期临床研究中的患者，从患者提供告知同意书的时间到第41周访问监测不良事件。如果研究人员认为必须在观察期结束之后记录研究患者中的AE，他或她可联系主办者来测定应该如何记下或报道AE。
统计方法
一般统计方法论：考虑两组数据以统计分析功效：1)意向治疗(ITT)数据集和2)完成实验方案(PP)数据集。所述ITT数据集由接受至少一完整或部分剂量的研究药物的所有随机分组患者组成。所述PP数据集为ITT数据集的亚组，其包括完成41周研究、具有所收集的第一功效变量的基准测量结果和41周测量结果并接受至少80％的其排定输注剂量的患者。
对于跟踪连续分布的变量，表格汇总由n、平均值、标准偏差、最小值、最大值和中值组成。关键功效变量的图表由治疗组提供。对于分类变量，表格汇总由由治疗组在各分类中提供的频率和百分比组成。第一功效变量由治疗组提供，且包括：原始值：以最初报道的标度的变量的未转化值；该值相对于基准的绝对变化，即X-B(其中B为基准值且X为后基准值)；和该值相对于基准的变化％，即100*(X-B)/B(其中B为基准值且X为后基准值)。
假设检验：该研究比较维拉苷酶α与伊米苷酶的作用。意图在于示出维拉苷酶α在临床上以0.025的显著性水平与伊米苷酶至少一样好。
对于第一功效终点的零假设在于对于维拉苷酶α来说血红蛋白浓度自基准至第41周的平均变化比对于伊米苷酶来说血红蛋白浓度自基准至第41周的平均变化低至少1g/dL。待检验的假设可陈述为：
H0：μVela-μIMIG≤-1，相对地，HA：μVela-μIMIG>-1
或
H0：关于平均血红蛋白响应维拉苷酶α较差
HA：关于平均血红蛋白响应维拉苷酶α不差
筛选失败和患者处置：对于进入研究筛选的所有患者的处置连同筛选失败的原因一起列出。所有随机分组患者的处置通过治疗组和访问列出，且中断的原因通过治疗组列出。
样本量调整：当各治疗组中的样本量为14时，两组0.025单侧t-检验将具有80％的效能以拒绝血红蛋白的平均差值≤-1g/dL的零假设、支持平均差值大于-1的备选假设，假定预期平均差值为0且常见标准偏差为0.90。
假设15％漏失，总共32个患者(每治疗组有16个患者)登记到研究中。
功效分析
分析群：考虑两组数据用于统计分析功效(意向治疗(ITT)数据集和完成实验方案(PP)数据集)。
第一功效分析：第一功效终点为在两个治疗组之间血红蛋白浓度自基准到第41周的平均变化。第一分析使用ITT群进行。这是设计用来证明就治疗患有1型戈谢病的患者的功效而言维拉苷酶α不亚于伊米苷酶的非劣性随机分组控制的试验。
使用单侧97.5％置信区间。非劣性由单侧置信区间或假设检验证明，所述假设检验用于检验治疗差异在血红蛋白方面小于或等于等效界值(-1g/dL)的零假设相对伊米苷酶治疗差异大于所述较低等效界值的备选假设。换句话说，刚好集中在置信区间的一端且忽略置信区间的另一端产生单侧97.5％置信区间[(a,∞)]，其中a为单侧置信区间的下界，可以绘出功效结论。
第二功效分析：对于比较在治疗组之间相对于基准的变化的第二功效分析(血小板计数、肝和脾体积、壳三糖苷酶和CCL18)，如果在两个治疗组之间自基准到第41周的平均变化为统计上显著的(统计上显著的将定义为p-值小于0.05)，则评估统计检验。使用协方差分析(ANCOVA)模型对在两个治疗组之间相对于基准的平均变化的差异提供95％置信区间，其包括例如作为共向变量的基准年龄。
对于得到事件结果量度的时间(即，自基准达到第一血红蛋白响应≥1g/dL的时间)，对各治疗组提供Kaplan-Meier(乘积极限)生存曲线且使用对数秩检验比较在治疗组之间的曲线。对各治疗组提供中值时间和95％置信区间。在第41周审查到研究结束(即，到第41周)没有经历事件的患者。在第41周评估之前退出或被中断的患者和在退出或中断的时候没有达到响应的患者在对于该患者的最后已知评估的时候审查。另外，使用费雪精确检验提供并比较在治疗组之间响应的患者与未响应者的比例。
安全分析：评价接受至少一剂研究药物(或部分剂量)的所有患者的临床安全性和耐受性。对安全参数不进行正式统计检验。概述了生命体征、12-导ECG、临床化学、血液学和尿检安全监测。对于诸如AE的分类变量，列出经历各AE的患者的数量和百分数。AE以事件严重性汇总。也将显示出经历药物有关的AE和输注有关的AE以及不被视为与研究药物有关的AE的患者的数量和百分数。使用临床实验室评估(血液学、血清化学、尿检和抗维拉苷酶α抗体的测定)来评价维拉苷酶α的安全性。
实施例4：TKT034研究(在从用伊米苷酶治疗转换的患者中的多中心开放标签研究)
概述
该实施例描述检查在预先接受伊米苷酶的患有1型戈谢病的患者中维拉苷酶α的安全性和功效的全局开放标签12个月研究。≥2岁的患者接受剂量等于其预先伊米苷酶剂量的维拉苷酶α，输注每隔一周经1小时施用。
40个患者接受维拉苷酶α(18个男性，4个预先脾切除；年龄范围：9-17岁)。中值预先伊米苷酶使用为67个月(范围：22-192个月)。维拉苷酶α剂量为15-22.5U/kg(n＝14)(“15U/kg组”)、22.5-37.5U/kg(n＝12)(“30U/kg组”)、37.5-52.5U/kg(n＝7)(“45U/kg组”)和>52.5U/kg(n＝7)(“60U/kg组”)。维拉苷酶α耐受性通常良好，大多数不良事件(AE)为轻微或中度严重性。11个患者(28％)经历视为可能或或许与研究药物有关的AE，大多数AE被视为与输注有关。患者没有经历危及生命的AE。一种严重的AE被视为或许与治疗有关：1个患者在首次输注期间具有2级过敏性反应，且被选择以中断研究。在输注时和2周后检验该患者的IgE、IgM、IgG、IgA和中和抗体为阴性。患者没有发展出维拉苷酶α的IgG抗体。血红蛋白浓度、血小板计数、肝和脾体积在治疗水平下维持1年。
总之，先前用伊米苷酶治疗≥22个月的患有1型戈谢病的成人和儿科患者成功转换到维拉苷酶α，经12个月测量到临床疾病的稳定性。
研究目标
该研究的第一目的在于评估在先前用伊米苷酶治疗的患有1型戈谢病的患者中每隔一周给予维拉苷酶α的安全性。
第二目的为：评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后血红蛋白浓度相对于基准的变化，评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后血小板计数相对于基准的变化，和通过腹部MRI评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后肝体积和脾体积相对于基准的变化。
第三/探察目的为：评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后血浆壳三糖苷酶和趋化因子(C-C基元)配体18(CCL18)水平相对于基准的变化，通过左手和腕部的放射照相评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后在2至17岁之间的患者中的骨骼年龄的变化，评估在每隔一周给予维拉苷酶α之后在2至17岁之间的患者中的生长速度和Tanner分期的变化，确立如下基准，自其监测维拉苷酶α疗法对在≥18岁的患者中戈谢有关的局部和全身性骨病的长期影响，如通过腰脊柱和股骨颈的骨密度(DXA)(包括冠状面成像)、血清碱性磷酸酶、N-末端肽交联(NTx)和C-末端肽交联(CTx)所测量和确立以下基准，自其通过腰脊柱和股骨颈的MRI评估在2岁至17岁之间的患者中的骨病。
总体研究设计
这是设计用来评估维拉苷酶α疗法对当前接受对I型戈谢病的伊米苷酶疗法的患者的安全性的多中心II/III期开放标签研究。登记41个患者以接受与其伊米苷酶剂量相同单位数的维拉苷酶α。剂量在15U/kg至60U/kg范围内。在研究登记之前在6个月期间患者接受相同剂量的伊米苷酶。对各患者的研究的总持续时间为约14个月(视情况从筛选到研究和/或跟踪结束)。
所述研究由以下5期组成：筛选(第-14天到第-4天)；基准(第-3天至第0天(在第一剂量之前)；治疗期：第1周(第1天；第一剂量)至第51周(每个患者施用总共26次输注)；研究访问结束：第53周；跟踪：在最后输注之后的30天(对于在第53周评估之前中断/退出的患者，或对于完成该研究但没有选择加入后续长期临床研究中的患者)。
在患者第一剂量之前的两周内对提供书写的告知同意书的患者(或父母/法定监护人)进行筛选评估以测定符合登记条件。为了测定研究合格性，在筛选期间自各患者收集血样以评估血红蛋白浓度和血小板计数。
出于统计分析目的，在筛选期间收集额外血样以评估血红蛋白浓度和血小板计数。
将第一剂量的研究药物的施用定义为第1周(第1天)。维拉苷酶α输注每隔一周施用历时12个月(51周)，总共26次输注。患者接受与其伊米苷酶剂量相同单位数的维拉苷酶α。剂量在15U/kg至60U/kg范围内。输注时间为60分钟(1小时)。在源文件和适当CRF中记载了增加的输注持续时间(例如，2小时)。输注的持续时间不小于1小时。
在临床地点对各患者施用前3次维拉苷酶α输注。没有经历治疗有关的严重不良事件或维拉苷酶α输注有关的不良事件的患者可以按研究人员的判断和指导在家接受由有资格和经培训的医务人员进行的其后续输注。在研究期间可以在随后的时间点重新评估经历输注有关的不良事件的患者以考虑转换到家庭输注。要求接受作为家庭疗法的维拉苷酶α的患者在第7周、第13周、第19周、第25周、第31周、第37周、第45周和第51周及第53周返回临床地点。
研究完成的访问定义为第53周。只要患者1)完成51-周治疗期和2)完成第51周和第53周的研究访问，则将患者视为完成了该研究。
提供给完成该研究的患者机会以登记在后续长期开放标签的临床研究中。对于选择加入后续长期开放标签的临床研究的患者来说，将来自该研究(TKT034)的第51周和第53周访问的某些评价用作该研究的基准评价；在患者完成对第53周访问的所有评价并提供书写的告知同意书以参与后续长期开放标签的临床研究之后，患者将在第53周访问时接受其后续长期开放标签临床研究的第一次输注。因此，希望患者将横跨该2种研究接受连续维拉苷酶α治疗。完成该研究且没有选择加入后续长期开放标签的临床研究的患者将在其最后输注之后通过现场访问或打电话30天而得到安全评价(收集不良事件和伴随的投药)。
研究群的选择
将接受至少一次输注(或部分输注)的所有登记的患者包括在ITT患者群中。
合格的参与者为诊断有1型戈谢病(白血球中葡糖脑苷脂酶活性不足或通过基因型分析)的≥2岁的男性或女性，其接受与伊米苷酶一致的治疗历时最少连续30个月；允许1个患者参与得到连续22个月的用伊米苷酶的先前治疗。
如果参与者的血红蛋白浓度≤10g/dL且血小板计数≤80×103血小板/立方毫米；在筛选之前的6个月期间具有不稳定的血红蛋白浓度(超过筛选值的±1g/dL的范围)或血小板计数(超过筛选值的±20％)；患有(或怀疑患有)2或3型戈谢病；经历对伊米苷酶的过敏性休克；在进入研究之前的6个月内具有与伊米苷酶不一致的治疗或接受美格鲁特；或在筛选的12个内具有放射证实的活性、临床上显著的脾梗塞或恶化骨坏死，则排除这些参与者。
其他排除标准包括在进入研究之前的30天内用任何研究性药物或装置治疗；HIV、B或C型肝炎为阳性检验；在筛选时有非戈谢病有关的贫血；或可能影响研究数据的任何显著的共存疾病。排除怀孕和泌乳妇女且要求具有生育小孩潜力的妇女一直使用医学可接受的避孕方法。
研究治疗
治疗任务：患者每隔一周以与其伊米苷酶剂量相同的单位数接受维拉苷酶α输注。在基准时记录患者的当前伊米苷酶剂量。维拉苷酶α剂量在15U/kg至60U/kg范围内。
治疗方案：患者在第1周(第1天)接受其第一次输注。所有患者每隔一周接受一次维拉苷酶α历时12个月(51周)，因此，施用总共26次输注。
所有剂量的维拉苷酶α作为连续IV输注以1U/kg/min的最大流速施用。输注时间为60分钟(1小时)。在源文件和适当CRF中记载了增加的输注持续时间(例如，2小时)。输注的持续时间可不小于1小时。患者在进入研究之前最多30天且在进入研究之前最少14天接受其最终伊米苷酶剂量。
剂量计算：用以计算在第13周、第25周或第37周的剂量的相对于基准或先前记录的体重的体重变化≥5％需要重新计算研究投药的剂量。
剂量调节：贯穿治疗期监测患者的临床参数(即，血红蛋白浓度、血小板计数和肝体积及脾体积)的变化。如果患者证明了这些参数的临床上显著的改变，则研究人员评估患者的剂量增加15U/kg的选择。如果经两次连续评估满足且符合以下四项标准中的两项或更多项，则考虑剂量调节：血红蛋白浓度相对于基准减小>1g/dL；血小板计数相对于基准减小>20％；如通过器官触诊指示且如通过MRI测量证实的肝体积增大>15％；和如通过器官触诊指示且如通过MRI测量证实相对于基准的脾体积增大>15％。
如果临床参数值在3个月内没有回到基准水平，则研究人员选择使剂量以15U/kg的增量增加。对接受60U/kg剂量的患者没有提供剂量增加且不允许剂量高于60U/kg。如果患者对最大剂量60U/kg未能作出响应，如果根据研究者的临床判断认为适当，则可以使患者退出。
维拉苷酶α施用
维拉苷酶α施用的总论：静脉内施用维拉苷酶α。研究药物输注在一周中大致相同的一天发生，但可在目标日的每14天(±3天)发生以有助于患者排定。如果完全可能的话，则应该避免缺失输注。如果患者在从其排定给药的17天内没有给药，则患者将在批准其在研究中继续之后尽快地接受下一次输注。可能可以接受在先前输注之后的早至7天给出下一次输注。后续输注将回到原始方案。
维拉苷酶α施用的家庭输注指南：前三次维拉苷酶α输注在临床地点施用。在前三次给药之后，没有经历治疗有关的严重不良事件或输注有关的不良事件的患者可以在家接受其后续输注。在研究期间可以在随后的时间点重新评估经历输注有关的不良事件的患者以考虑转换到家庭输注。要求接受作为家庭疗法的维拉苷酶α的患者在第7周、第13周、第19周、第25周、第31周、第37周、第45周、第51周及第53周返回临床地点。
在家庭环境中，在各次访问时收集生命体征和不良事件的记载。
输注有关的不良事件的管理：输注有关的不良事件定义为如下不良事件：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或或许与研究药物有关。
研究药物的描述：维拉苷酶α为在2℃至8℃下供应并由合格的分配器运输到临床试验地点以便储存的冻干产品。
戈谢病特异性治疗史：在筛选时，记录所有戈谢病特异性治疗，包括患者的当前伊米苷酶剂量。患者的初始维拉苷酶α剂量根据所记录的当前伊米苷酶剂量。
历史血红蛋白和血小板值：收集并复查在进入研究之前的30个月内血红蛋白浓度和血小板计数的所有评估以测定患者合格性。
测定戈谢病和壳三糖苷酶基因型：仅在筛选时，所有患者收集血样用于测定戈谢病和血浆壳三糖苷酶基因型。
生命体征：记录的生命体征参数包括脉搏、血压、呼吸率和温度。
遵循以下方案以记录在所有输注访问时的生命体征：输注开始(在开始输注之前10分钟内)、在输注期间(30分钟(±5分钟))；输注之后(在完成输注之后5分钟内、在完成输注之后30分钟(±5分钟)和在完成输注之后60分钟(±5分钟))。
身体检查：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周、第51周和第53周进行身体检查。身体检查包括以下项：一般外貌、内分泌、头颈部、心血管、眼睛、腹部、耳朵、泌尿生殖器、鼻、皮肤、喉咙、肌骨胳、胸部和肺及神经学。身体发现的任何异常变化在适当CRF页面上记录为不良事件。
身高和体重：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周和第51周记录身高和体重。使用身高和体重测量结果计算生长速度且使其与Tanner分期相关。
12-导联心电图：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周和第51周进行12-导ECG。各12-导ECG包括PR、QRS、QT和QTc间隔及心率的评价。
临床实验室检验：如下所述收集血样和尿样用于以下评估。
血液学：在筛选和基准访问时和在第7周、第13周、第19周、第25周、第31周、第37周、第45周、第51周和第53周收集血样用于血液学检验。评估以下血液学参数：具有差异的全血细胞计数(CBC)、活化部分凝血活酶时间(aPPT)、网织红细胞计数(通过就地的当地实验室进行)、血小板计数和前凝血酶时间(PT)。在筛选、基准时和在每次研究访问时(除了在第1周访问外)收集血样以测量血红蛋白浓度和血小板计数。
出于统计分析目的，在筛选期间收集额外血样以测量血红蛋白浓度和血小板计数。
血清化学：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周、第51周和第53周收集血样用于血清化学检验。
评估以下血清化学参数：钠、总胆红素、钾、碱性磷酸酶*、葡萄糖、丙氨酸转氨酶、总钙、天冬氨酸转氨酶、总蛋白质、乳酸脱氢酶、白蛋白、γ-谷氨酰基转移酶、肌酐、肌酐磷酸激酶、尿素氮、CTx、NTx*(*结果用于评价骨生物标志物)。在筛选时具有叶酸和/或维生素B12缺乏有关的贫血且如此不符合研究加入标准的患者被视为筛选失败。根据临床地点的标准惯例，可以使这些患者在研究人员的判断下对其叶酸和/或维生素B12缺乏有关的贫血治疗高达12周。在这些患者完成叶酸和/或维生素B12治疗方案之后可以针对该研究进行重新筛选。
尿检：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周、第51周和第53周收集尿样用于尿检。评估以下尿检参数：pH、微观评估和宏观评估。
血清抗伊米苷酶抗体测定：所有患者仅在基准时给出血样用于测定血清抗伊米苷酶抗体。患者符合在该研究中登记的条件，而与其抗伊米苷酶抗体状况无关。将允许抗伊米苷酶抗体为阳性的患者进入该研究。评估这些血样以测定抗伊米苷酶抗体的存在。
血清抗维拉苷酶α抗体测定：在基准访问时和在第7周、第13周、第19周、第25周、第31周、第37周、第45周和第51周收集血样用于测定抗维拉苷酶α抗体。评估收集用于抗维拉苷酶α抗体测定的血样。使用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选这些样品。
不良事件：贯穿其研究从患者提供签字的告知同意书的时间至在最后输注之后的30天对于完成研究且没有选择加入后续长期开放标签的临床研究中的患者或对于在第53周访问之前从研究中中断或退出的患者监测不良事件。对于完成该研究且选择加入后续长期开放标签的临床研究中的患者，从告知同意到该研究(TKT034)的第53周访问监测不良事件。
预先和伴随的疾病：将在基准时存在的额外疾病视为伴随疾病且记载在CRF的适当病史页面上。在研究期间首先发生或检测到的疾病或在研究期间伴随疾病的恶化被视为AE且因而记载在CRF中。
功效评估的研究程序
血红蛋白浓度：在本文所述的时间点测量血红蛋白浓度。血红蛋白浓度自基准到12个月的变化为该研究的第二终点。
血小板计数：在本文所述的时间点测量血小板计数。血小板计数自基准到12个月的变化为该研究的第二终点。
通过腹部MRI测量的肝体积和脾体积：在基准时和第25周及第51周对患者进行肝和脾的定量腹部MRI。肝体积和脾体积自基准到12个月的变化为该研究的第二终点。
血浆壳三糖苷酶和CCL19水平：在基准访问时和在第13周、第25周、第37周、第51周和第53周收集血样用于评估血浆壳三糖苷酶和CCL18水平。壳三糖苷酶体积和CCL18水平自基准到12个月的变化为该研究的第三终点。
生长速度和Tanner分期：对于2至17岁的患者，在本文中限定的时间点评价生长。使用在该研究期间在规则的时间点记录的身高和体重测量结果计算生长速度，且使其与Tanner分期相关。生长速度和Tanner分期自基准到12个月的变化为该研究的第三终点。
骨骼生长：在基准和第51周时对在2至17岁之间的患者进行左手和腕部的放射照相以评估骨骼年龄。在2至17岁的患者中的骨骼生长自基准到12个月的变化为该研究的第三终点。
额外研究程序
骨生物标志物：仅在基准时，对≥18岁的患者进行腰脊柱和股骨颈的DXA，包括冠状面成像，以测定戈谢有关的局部和全身性骨病。骨质流失和脱矿质也通过测量血清碱性磷酸酶、NTx和CTx评估。从仅在基准时收集用于临床实验室检验的血样获得这些参数的结果。
对于2至17岁的患者，在基准时(与对患者进行肝和脾的MRI的同时)获得股骨颈和腰脊柱的MRI。
不出所料在该研究期间任何治疗作用对于这些参数都将是显然的，因此，仅在基准时收集的测量结果用以确立在后续长期开放标签临床研究期间自其监测这些生物标志物的参考点。
不良事件
不良事件定义：不良事件(AE)为如由在临床试验的任一期中出现的身体体征、症状和/或实验室变化所指示的解剖学、生理或代谢功能的任何无毒、病理学或无意识的变化，而不管是否被视为研究药物有关。这包括预先存在病状的恶化。自告知同意至在最后剂量的研究药物之后30天和/或直到不良事件已经解决/稳定或达到一种结果(无论何者在先)收集不良事件。对于在第53周访问之前被中断或退出的患者，跟踪AE直至在其最后输注维拉苷酶α之后的30天。
AE包括：在研究起始时存在的病状的恶化(性质、严重性或频率方面的改变)；并发的疾病；药物相互作用；与伴随投药有关或可能与伴随投药有关的事件；异常实验室值(这包括自在研究人员认为临床上重要的正常范围内的基准的显著转变)；身体检查、生命体征、体重和ECG的临床上显著的异常。
另外，AE也可以包括出乎意料的实验室值，其变得显著超出范围且由研究人员测定为临床上显著的。如果存在出乎意外的溢出值，则将重复实验室检验，直至其恢复到正常或可被解释且患者的安全不在保险范围内。
输注有关的不良事件的定义：输注有关的不良事件定义为如下不良事件：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或或许与研究药物有关。在输注之前发生的其他AE以及在输注之前进行的与实验方案限定的检验和评价(例如，实验室检验、ECG和身体检查)相关的AE并不定义为输注有关的不良事件。如上定义管理输注有关的不良事件。
严重的不良事件定义：严重的AE(SAE)为导致任何以下结果的以任何剂量发生的任何AE：死亡，为危及生命的，需要患者住院治疗，需要现有住院治疗延期、持久或显著的病废/无能和出生缺陷/先天缺陷。
可能不导致死亡、危及生命或需要住院治疗的重要医疗事件可被视为SAE，当根据适当医疗判断，它们可能危害患者且可能需要医疗或外科手术以预防以上所列结果之一。
危及生命的AE定义为鉴于最初报道使患者处于随着AE发生而引起的死亡即时危险中的AE(即，其不包括使其以更严重的形式出现或可能致死的AE)。
不良事件和严重不良事件的分类：当评价AE的严重性时，参考国立癌症研究院通用毒性标准(NCI CTC)3.0版分级量表。如果AE没有描述在NCI CTC中，则根据以下量表记录严重性。所有AE/SAE的严重性在适当CRF页面上记录为分别对应于轻微、中度、重度或危及生命的严重性的1级、2级、3级或4级。1级(轻微)定义为日常活动不受限制。2级(中度)定义为日常活动受一定程度地限制；3级(重度)定义为不能实施日常活动；和4级(危及生命的)定义为即时死亡危险。
不良事件或严重不良事件与盲目研究投药的关系由研究人员根据以下定义测定。“无关”定义为与研究药物无关。“可能有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，但其也可以由同时发生的疾病或其他药物/化学解释。“或许有关”定义为在施用研究药物的合理时序下的临床事件/实验室异常，不大可能归因于同时发生的疾病或其他药物和化学且其接着是对再挑战的临床上合理的响应。临床事件/实验室异常的相关性也必须具有一定的生物学似真性，至少是在理论根据上。
在严重和重度之间的阐明：术语“重度”常用以描述具体事件的强度(严重性)(如在轻微、中度或重度心肌梗塞中)；然而，事件本身可能具有相对较少的医疗意义(诸如重度头痛)。这与“严重”没有不同，其根据通常与造成对生命或功能的威胁的事件通常相关的结果或作用标准。严重(非重度)和因果性用作限定调整报告责任的指导。
不良事件监测和观察期：对于该研究的目的，观察期从患者提供签字的告知同意书的时间延伸到该研究的患者最终评估。出于安全目的，最终评估定义为对完成研究且没有选择加入后续长期开放标签的临床研究中的患者或对在第53周之前从研究中中断或退出的患者在最后输注之后约30天进行的后研究安全评估。对于选择加入后续长期开放标签的临床研究中的患者，监测不良事件直至第53周；将到该研究的第53周为止还没有解决的不良事件记录在后续长期开放标签的临床研究的患者病史中。
统计方法
一般统计方法论：意向治疗(ITT)患者群定义为接受至少一次输注(全部或部分输注)的所有登记的患者。对所述ITT群进行统计数据分析。使用描述性统计(n、平均值、中值、最小值、最大值和标准偏差)概述在基准时和在后续研究访问时收集的连续数据。分类数据作为频率和百分数汇总。根据人口统计和基准特征对在ITT群中的所有患者提供描述性统计。
第二终点(即，临床参数)的分析根据如下所述的非劣性假设。
样本量调整：这是安全性试验且难以鉴定该研究的单一第一安全性结果变量。然而，根据功效参数的选择的样本量适合评估不太常见的副作用。
纳入至少26个患者提供关于安全性和耐受性的基本信息。根据TKT025研究，对于患者在6个月的平均变化没有指示不良事件(AE)相对于基准的任何恶化。一些患者将具有被解决的AE，一些患者具有恶化的AE。假设患者自然变化，则对于单一患者见到恶化的机会为11％。这11％的失效率属于1个患者。该试验中所有26个患者不具有SAE的可能性等于患者1不具有SAE的可能性乘以患者2不具有SAE的可能性乘以(...等...)患者26不具有SAE的可能性。也就是说，在26个患者中至少一个患者将显示AE相对于基准的恶化的95％可能性[1-(.89)26＝0.95]。换句话说，对于26个的样本量来说，当事件的概率为0.11时，观察到至少1件的概率将为0.95。Or,或者，在没有观察到事件时，为了获得95％置信区间上对罕见事件的概率的上界0.11，将需要26个的样本量。
零假设为对于选择的临床参数(血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积)中的每一个相对于基准(即，伊米苷酶治疗结束时)到12个月的平均变化在预指定的临床上显著的值内。对于血红蛋白来说自基准到第53周的临床上显著的变化定义为变化小于1gm/dL，且对于血小板计数来说自基准到第53周的临床上显著的变化定义为变化20％。对于正规化肝体积和正规化脾体积，自基准到第53周的变化定义为至多增加15％。26个患者的样本量评估值根据配对T检验的平均值，0.671的标准偏差，0.05的双侧α水平和80％效能。
第一分析：评价接受至少一剂全部或部分剂量的研究药物的所有患者的临床安全性和耐受性。列出收集的各患者的生命体征、临床化学和血液学用于安全监测且标记出异常值。对于诸如AE的分类变量，列出经历各AE的患者的数量和百分数。AE以事件的严重性汇总。也显示出经历药物有关的AE和不被视为与研究药物有关的AE的患者的数量和百分数。也汇总了输注有关的不良事件反应和抗维拉苷酶α抗体形成率。
第一临床变量在于评估每隔一周施用维拉苷酶α给临床上对伊米苷酶稳定的患有I型戈谢病的患者的安全性。通过在各研究访问时评价生命体征和记载的不良事件(按类型、频率和严重性)以及在需求访问时身体检查的进行和实验室评价方面的变化来评估安全性。
所有AE使用MedDRA编码词典编码。AE汇总通常根据在患者第一次输注研究药物之后发生的所有AE(治疗突现的)。
第二分析：该研究的第二终点为：血红蛋白浓度自基准到12个月的变化；血小板计数自基准到12个月的变化；根据腹部MRI的脾体积自基准到12个月的变化(评估为变化％)(脾体积通过体重正规化)；和根据腹部MRI的肝体积自基准到12个月的变化(评估为变化％)(肝体积通过体重正规化)。
对于各临床活动参数，备选假设在于相对于基准(即，伊米苷酶治疗结束时)到12个月的平均变化在对待评估参数指定的临床上显著的水平内(其中血红蛋白相对于基准的总体平均变化在1g/dL内，血小板计数在20％内且肝体积和脾体积在15％内)。这使用对于这些临床参数相对于基准的真实差值的2-侧90％置信区间评估。例如，如果血红蛋白相对于基准的变化的置信区间在-1至1g/dL的区间内，则推断出维拉苷酶α的功效。
主办者的期望在于平均血红蛋白浓度经12个月的时间基本恒定。例如，对于血红蛋白的第二功效分析，代替使用90％的置信区间，可以使用以下成对的统计假设检验，各自在0.05的α水平下。
H01:μd≤1相对H11:μd<1
H02:μd≤-1相对H21:μd>-1
通过拒绝第一零假设(H01)，支持第一备选假设(H11)，在0.05的显著水平下推断出血红蛋白相对于基准的治疗平均变化小于比基准值高的1g/dL。通过拒绝第二零假设(H02)，支持第二备选假设(H21)，在0.05的显著水平下推断出血红蛋白相对于基准的治疗平均变化大于比基准值低的1g/dL。因为H01和H02不能同时为真，所以对于以上成对的假设检验，总I型出错率为0.05。因此，通过拒绝两种零假设，支持备选假设，在0.05的显著水平下推断出治疗(维拉苷酶α)血红蛋白浓度在-1至1g/dL的区间内。
主办者认为置信区间方法将比使用假设检验的响应方法更容易解释。因此，所述置信区间方法将用于第二推理。
第三分析：该研究的第三终点为：血浆壳三糖苷酶和CCL18水平自基准到12个月的变化；在2至17岁的患者中骨骼年龄自基准到12个月的变化；及生长速度和Tanner分期自基准到12个月的变化。
在各时间点使用描述性统计概述第三终点(平均值、中值、标准偏差、最小值和最大值)。对于在该研究期间在基准时和其他时间点收集数据的终点，检查组内变化。
亚组的分析：特定地对于在2至17岁之间的患者进行额外分析。并且，在分析中关于血红蛋白基准值给出对于疾病严重性的考虑因素。
结果
将40个患者包括在意向治疗(ITT)分析中(表19)且38个患者(93％)完成该分析。1个患者在接受研究药物之前中断；在15U/kg组中的两个患者中断，其中1个患者是在其用维拉苷酶α第一次输注期间的类过敏性反应而中断，且1个患者是在第31周由于在戈谢有关的症状方面缺乏察觉的改善而中断。
患者接受与其预先伊米苷酶方案相同单位数的维拉苷酶α。中值预先伊米苷酶使用为67个月(范围：22-192个月)。维拉苷酶α剂量归合成四个范围：≤22.5U/kg(n＝14)、22.5-37.5U/kg(n＝12)、37.5-52.5U/kg(n＝7)和>52.5U/kg(n＝7)。如果患者被证明了血红蛋白或血小板计数的临床上显著的变化，则研究者选择增加维拉苷酶α剂量(到每隔一周的最大值60U/kg)。在研究期间不进行剂量调节。
表19 在基准时TKT034患者特征
*正常肝体积为体重的2.5％。
**在具有完整脾的36个患者中：在登记之前对4个患者进行脾切除。正常脾体积为体重的0.2％。MN＝正常的倍数。
临床参数在治疗水平下维持1年(表20)。
表20
维拉苷酶α耐受性通常良好，大多数不良事件(AE)为轻微或中度严重性(表21)。最常报道的AE为鼻咽炎(8/40个患者)、关节痛(9/40个患者)和头痛(12/40个患者)。总体上，40个患者中有11个(28％)经历被视为可能或或许与研究药物有关的AE，这些事件中的大多数被视为与输注有关。患者没有经历危及生命的AE。一件重度不良事件被视为或许与治疗有关且出现在具有重度过敏性反应的患者中。在输注时和两周以后，检验该患者的所有4种同种型(IgE、IgM、IgG、IgA)(包括中和抗体)为阴性。1个患者(在15U/kg组中)经历导致中断的类过敏性反应；其他患者没有由于AE而被中断。患者没有发展出维拉苷酶α的IgG抗体，包括在筛选时检验抗伊米苷酶α抗体为阳性的三个患者。
表21 TKT034安全性汇总
*治疗突现的AE定义为在第一次输注的那天或那天之后直至患者最后输注之后的30天发生的AE。
输注有关的AE定义为如下AE：1)在输注开始之后的12小时期间或12小时内开始，和2)被判断为可能或或许与研究药物有关。
各患者的前三次输注在临床地点施用，此后没有经历药物有关的严重AE或输注有关的AE的患者符合在家接受后续输注的条件。在研究期间，40个合格患者中的25个(63％)接受至少一次家庭疗法，10个患者(67％)在15U/kg组中，6个患者(50％)在30U/kg组中，5个患者(83％)在45U/kg组中且4个患者(57％)在60U/kg组中。
对于血红蛋白浓度，相对于基准的平均变化为-0.1g/dL，其中90％置信区间为-0.3至0.1g/dL，在±1g/dL的预定功效标准内。对于血小板计数，相对于基准的变化％为+7.0％，其中90％置信区间为0.5至13.5％，在±20％的预定功效标准内。对于肝体积，相对于基准的变化％为-0.0％，其中90％置信区间为-2.6至2.6％，在±15％的预定功效标准内。对于脾体积，相对于基准的变化％为-5.6％，其中90％置信区间为-10.8至-0.4％，在±15％的预定功效标准内。如通过对于临床上显著的变化的预指定的功效标准所证明，血红蛋白浓度、血小板计数和肝体积及脾体积在治疗水平下维持至维拉苷酶α治疗的1年。血红蛋白的平均变化及血小板计数和器官体积的平均变化％示于图15-图18中。对于各参数，在四个计量组中见到类似结果。
血浆壳三糖苷酶和血浆CCL18的变化％示于图19和图20中。经12个月的治疗期维持且可能降低两种生物标志物的水平。
实施例5：HGT-GCB-058研究
概述
HGT-GCB-058为用以观察维拉苷酶α在被新近诊断(治疗雏期)或从伊米苷酶转换到维拉苷酶α的患有1型戈谢病的患者中的安全性的多中心开放标签治疗研究。该研究设计用于两岁或更大的男性或女性患者。维拉苷酶通过1小时静脉内(IV)输注每隔一周(EOW)以15-60U/kg的剂量施用。患者接受与其预先伊米苷酶剂量相同单位数的维拉苷酶α(EOW接受<15U/kg伊米苷酶的患者接受15U/kg维拉苷酶α)。输注速率的最大值为1U/kg/min。
患者和方法
开始HGT-GCB-058以提供给可能另外受限或由于供应限制而无法使用伊米苷酶的患者备选的治疗选择。第一终点为观察维拉苷酶α的安全性。
对于HGT-GCB-058，在第一地点开始的3个月内，跨越美国的20个临床地点登记患者。在2009年9月1日和2010年1月31日之间，超过150个患者登记到HGT-GCB-058上且接受至少一次维拉苷酶α输注。仅3个患者为治疗雏期，所有其他患者先前用伊米苷酶治疗。
初步安全性结果
中断：<10％；同意和其他原因退出(<10％)；经历包括SAE的AE(<2％)。
治疗突现的不良事件(TE-AE)：
治疗雏期患者(n＝3)：没有严重的AE；没有重度AE；2个患者经历中度AE：头痛(中度)和背痛(中度)(输注有关-可能有关)
先前用伊米苷酶治疗(n>150)：35.8％-至少一件TE-AE；18.2％-至少一件可能/或许有关的TE-AE；13.8％-至少一件输注有关的反应；<1％-无关的严重AE(69岁的女性经历需要住院治疗的重度脑血管意外)；3.1％-至少一件重度AE：关节痛(无关)、疲劳(或许有关)、骨痛(无关)、手足痛(无关)、白细胞减少(可能有关)、脑血管意外(无关)。
实施例6：比较研究
该研究的目的在于比较维拉苷酶α、Genz-112638和在治疗1型戈谢病中的功效。在治疗6个月、9个月或12个月之后测量血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积。
剂量：酶替代疗法(ERT)：60U/kg EOW；Genz112638：50mg和100mg BID；Zavesca：100mg TID
男性与女性的比率Cerezyme(8比7)；Ceredase(3比2)；维拉苷酶I/II期TKT025研究(5比7)；维拉苷酶-TKT032研究-45U/kg剂量(8比5)；维拉苷酶-TKT032研究-60U/kg剂量(7比5)；Zavesca(1比1)；Genz-112638(3比4)
纳入标准：
Cerezyme和Ceredase：贫血和脾肿大
维拉苷酶TKT025：贫血和血小板减少
Genz-112638：贫血、血栓形成和脾肿大
Zavesca剂量：器官异常肿大和<100/nL Pl或<11.5Hb
维拉苷酶HGT-GCB-039和TKT032：贫血和1项其他参数表现
在雏期患者中的基准比较示于表22中。
表22
MN＝正常的倍数
来自用维拉苷酶α或Genz-112638治疗6个月的患者的比较结果示于表23中。
表23
1 Cerezyme和Ceredase资料如由Grabowski等，(1995)Ann.Intern.Med.122,33-39报道。
-Cerezyme和Ceredase的血小板计数平均增加(以细胞/nL计)来自Cerezyme SBA。
2 维拉苷酶αI/II期结果
3 Oppenheimer分析员报告：2008年5月8日，来自Genzyme AnalystDay 2008
4 由基准乘以变化％计算
ERT以60U/kg EOW施用，Genz112638以50mg和100mg BID施用
来自用维拉苷酶α或Genz-112638治疗9个月和12个月的患者的比较结果示于表24中。
表24
1 Cerezyme和Ceredase 9-Mo资料如由Grabowski等，(1995)Ann.Intern.Med.122,33-39报道。剂量为每隔一周(EOW)60U/kg。
-平均血小板计数增加(以细胞/nL计)由原始数据计算
2 维拉苷酶α 9-Mo数据来自TKT025(I/II期)-60U/kg剂量EOW
3 维拉苷酶α 12-Mo数据来自TKT025扩展-60U/kg剂量EOW
4 维拉苷酶α 12-Mo数据来自TKT032-60U/kg剂量剂量EOW
5 维拉苷酶afa 12 Mo数据来自TKT032-45U/kg剂量EOW
3 WORLD符合外观，2009年2月20日-以50mg和100mg BID施用
结论：该研究显示，根据在开始治疗之后6个月、9个月或12个月的血红蛋白浓度、血小板计数、肝体积和脾体积的测量结果，在治疗1型戈谢病方面维拉苷酶α至少与Genz-112638和一样有效。
实施例7：抗药物抗体(ADA)测定
概述
治疗蛋白质的抗体的发展可以影响患者安全、功效和药物动力学。发展并批准了一组抗药物抗体(ADA)和中和抗体(NAb)测定以评估并比较在三种维拉苷酶αIII期研究之一中接受维拉苷酶α或伊米苷酶的患者的抗体响应。
诸如酶替代疗法(ERT)的生物学疗法的潜在免疫原性的评价通过以下步骤进行：
1.筛选ERT的抗体
i.允许假阳性
ii.对所有同种型的广泛特异性
iii.对药物存在的耐受性
2.验证性步骤
i.排除假阳性
ii.同种型特异性
3.滴度步骤
i.相对浓度
4.对中和抗体的检验
i.体外活性
ii.体外细胞吸收
该评价可以对任何ERT进行。
该评价的实例示于图21中。
免疫测定方法
抗维拉苷酶α和抗伊米苷酶抗体使用桥免疫测定和免疫球蛋白(Ig)亚类特异性间接免疫测定同等评估，所有都根据电致化学发光平台以及RIP测定。桥电致化学发光免疫测定检测所有免疫球蛋白亚类且被视为抗体筛选测定。Ig亚类电致化学发光免疫测定为IgA、IgM和IgE抗体的验证性测定，而RIP测定验证IgG抗体的存在。抗体筛选测定和IgG测定为校准的、定量的且利用人类抗体阳性对照。IgA、IgM和IgE测定为半定量的且利用混合(人类-绵羊)阳性对照。
所有抗维拉苷酶α免疫测定和抗伊米苷酶免疫测定为相同的，包括正截止标准，不同之处在于使用维拉苷酶α或伊米苷酶来来询问样品。这些测定为高吞吐量的，提供增加的检测表面积，允许使用具有最小非特异性结合的高血清样品浓度且检测所有抗体亚类。
抗体筛选测定
如在图22中所示，抗药物抗体筛选可以使用电致化学发光(ECL)免疫测定进行。
抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体使用在抗生蛋白链菌素涂覆的微孔板上固定的生物素结合的维拉苷酶α(或伊米苷酶)检测。固定的生物素化的维拉苷酶α(或伊米苷酶)捕获在患者血清中存在的抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体且未结合的蛋白质通过洗涤除去。将钌配合物标记的维拉苷酶α(或伊米苷酶)加到各微孔中，导致与结合的抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体形成复合物。这接着是第二洗涤步骤，其中除去未结合的标记蛋白质。
在微孔表面附近结合的标记分子在通过电致化学发光反应触发的过程中发光，这通过MSD SECTOR成像器2400仪测量(http://www.mesoscale.com/CatalogSystemWeb/WebRoot/products/imager_2400.aspx)。将维拉苷酶α和伊米苷酶的具有交叉反应性的小鼠单克隆抗体用作在各测定板内的定标器且将可与维拉苷酶α交叉反应的人类抗伊米苷酶抗体用作正测定对照。在检验样品中抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体的浓度通过将未知的测量的电致化学发光信号内插在校准曲线上来评估。
检验最少67个戈谢病患者基准以设定这些测定的抗体阳性切割点。该检验设计包括经至少14天的时间使用不同板批号检验重复样品的至少3种分析。使用至少三批不同的微孔板。对于各测定总共1269次测定随机使用两种可用MSD仪器。将抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体的测定切割点确立为如在Mire-Sluis,AR等，Journal of ImmunologicalMethods 289(2004)，第1-16页中推荐获得的电致化学发光值的平均值加1.645标准偏差。对于抗维拉苷酶α和抗伊米苷酶抗体的测定敏感性分别评估为33.4ng/mL和65.6ng/mL。
该测定的筛选特征(使用维拉苷酶作为药物)示于表25中。
各参数的规格显示高敏感性且批准可重现的ADA筛选测定来评估在接受维拉苷酶α或伊米苷酶的患者中的抗体响应。
表25
ADA＝抗药物抗体；LOD＝检测极限；LOQ＝量化极限；RSD＝相对标准偏差
维拉苷酶的筛选测定剂量响应曲线示于图23中。
在平台上单克隆ADA的亲和性和结合动力学的实例示于表26中。对于ADA测定定标器观察到了类似配体亲和性和结合动力学。
表26
配体 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
维拉苷酶α 9.2E+05 2.7E-04 3.0E-10
伊米苷酶 2.8E+06 1.0E-04 3.7E-10
生物素化维拉苷酶α 4.0E+05 2.2E-04 5.4E-10
生物素化伊米苷酶 2.0E+06 9.5E-04 4.8E-10
放射免疫沉淀测定
如果在样品中检测到抗药物抗体，则可以进行用以测定抗体的Ig同种型的验证性测定。使用放射免疫沉淀检测免疫球蛋白G(IgG)抗体。放射免疫沉淀(RIP)测定示于图24中。
在放射免疫沉淀测定中，患者血清中存在的抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)IgG抗体在溶解期结合125I-维拉苷酶α(或伊米苷酶)且形成使用蛋白质G微柱捕获的抗原/抗体复合物。洗涤所述微柱以除去游离标记物且在γ计数器中直接量化。保留在所述微柱中的放射性计数与在检验样品中的抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)IgG抗体的浓度成比例。在检验样品中抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)IgG抗体的浓度使用与以上讨论相同的单克隆抗体定标器自校准曲线评估。在该测定中使用与上述相同的人类抗体阳性对照。
使用充分表征的已知浓度的抗体，最小平方线适合根据高纯度单克隆抗体的校准曲线，提供用于计算在分析测定中的不可靠性的可靠且一致的方法。该工具允许可自试剂放射性标记衰减、放射性自分解和/或测定处理变量发生的计数的中间测定变化以及允许非特异性结合的变化和可以随时间发生的测定读出数据的变化的切割点的正规化。
检验总共59个戈谢病患者基准以设定该测定的抗体阳性切割点。抗维拉苷酶α(伊米苷酶)IgG的测定切割点如上所述确立且在Mire-Sluis等2中推荐。抗维拉苷酶αIgG和抗伊米苷酶IgG测定的测定敏感性分别评估为28.3ng/mL和64.5ng/mL。
用这样的测定使用维拉苷酶作为药物获得的结果的实例示于表27中。
批准高敏感性且可重现的IgG ADA验证性测定来评估在接受维拉苷酶α或伊米苷酶的患者中的抗体响应。
表27
ADA＝抗药物抗体；LOD＝检测极限；LOQ＝量化极限；RSD＝相对标准偏差
对于RIP测定使用维拉苷酶获得的剂量响应曲线的实例示于图25中。
间接电致化学发光免疫测定
平行于IgG抗体的筛选，进行测定以筛选IgE抗体的存在。也可以进行测定来检测IgA和IgM抗体的存在。
使用ECL测定检测IgA、IgM和IgE ADA。这种检测的实施例示于图26中。
使用间接电致化学发光免疫测定分析抗维拉苷酶α(伊米苷酶)抗体的Ig亚类。通过在抗生蛋白链菌素涂覆的微孔板上固定生物素化维拉苷酶α(伊米苷酶)检测在血清中的抗体。将稀释的血清样品加到固定的维拉苷酶α(伊米苷酶)中，其捕获在样品中存在的任何抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)抗体。在样品孵育之后，洗涤微孔以除去未结合的蛋白质。接着，单独加入相对IgA、IgM或IgE的钌配合物标记的抗人类二次抗体且将其进一步孵育导致与任何结合的抗维拉苷酶α或伊米苷酶抗体形成Ig种类特异性复合物。这接着是另一洗涤步骤，其中除去未结合的标记的二次抗体。在微孔表面附近结合的标记分子随后如上所述发光。
制备人造抗体阳性对照用于这些测定，因为不可得到抗维拉苷酶α(抗伊米苷酶)IgA、IgM或IgE抗体。人类IgA-、IgM-和IgE-抗体混合物通过化学交联纯化的非特异性人类IgA、IgM或IgE碎片到在用维拉苷酶α超免疫的绵羊中产生且可与伊米苷酶交叉反应的抗体合成。IgA-、IgM-和IgE-抗体混合体因此经绵羊抗体结构域与维拉苷酶α(或伊米苷酶)结合，且分别使用相对人类IgA、IgM或IgE结构域的钌配合物标志的抗人类二次抗体检测。
如上所述且在Mire-Sluis等2中推荐确立抗维拉苷酶α(伊米苷酶)IgA、IgM和IgE的测定切割点。抗维拉苷酶αIgE和抗伊米苷酶IgE测定的测定敏感性分别评估为10.6ng/mL和11.0ng/mL。对于抗维拉苷酶α(伊米苷酶)IgA和IgM抗体，除了时间点信号与预输注基准信号的比率大于或等于2.0以外，必须符合测定阳性切割点。
对于这些测定，可以使用混合阳性对照。例如：
-处理绵羊ADA IgG和人类IgA、IgM和IgE以产生吡啶硫醇活化的蛋白质(参见Gu M.L.、Feng S.L.和Glenn J.K.Development of ananimal-human antibody complex for use as a control in ELISA.J.Pharmaceutical and Biomedical Analysis,32(2003),523-529)
-降低并淡化活化的IgA、IgM和IgE
-将活化的IgG与降低的IgA、IgM或IgE混合
-形成的混合抗体通过尺寸排阻色谱和ECL ELISA表征
-获得IgA和IgM的人类/绵羊摩尔比为5且IgE的人类/绵羊摩尔比为2
IgA、IgM和IgE验证性测定特征的实例(当将维拉苷酶用作药物时)示于表28中。
批准高敏感性且可重现的IgA、IgM和IgE ADA同种型测定来评估在接受维拉苷酶α或伊米苷酶的患者中的抗体响应。
表28
1根据混合对照响应；2阳性切割点；至基准的时间点的比率必须≥2.0；3人类/绵羊ADA混合对照；4批准高敏感性且可重现的IgA、IgM和IgE ADA同种型测定来评估在接受维拉苷酶α或伊米苷酶的患者中的抗体响应。
ADA＝抗药物抗体；LOD＝检测极限；LOQ＝量化极限；RSD＝相对标准偏差
体外酶活性的抗体抑制
使用检测并量化抑制维拉苷酶α(伊米苷酶)活性的抗体的测定检验通过抗维拉苷酶α(伊米苷酶)抗体实现的体外酶活性的抑制。该方法根据比色活性测定，其测量维拉苷酶α(伊米苷酶)水解合成底物4-硝基苯基-β-D-果聚糖为对硝基苯酚和D-果聚糖的能力。
在37℃下将抗维拉苷酶α(伊米苷酶)抗体阳性血清样品分别用固定量的维拉苷酶α或伊米苷酶预孵育30分钟。将已知抑制维拉苷酶α和伊米苷酶体外活性的绵羊多克隆抗体用作阳性对照。随后加入4-硝基苯基-β-D-果聚糖底物溶液且在37℃下将其用血清样品/酶混合物孵育1小时。酶促反应通过加入甘氨酸/碳酸钠缓冲剂(pH 10.7)停止且在405nm的吸收波长下测量产物(对硝基苯酚)。1单位的维拉苷酶α(伊米苷酶)活性定义为在37℃下在1分钟内水解1μmol的底物4-硝基苯基-β-D-果聚糖需要的酶的量。酶活性通过比较在相同测定板中测量的在试验样品和测定对照物中的释放的对硝基苯酚量化为对硝基苯酚的校准曲线。检验样品的结果相对于在缺乏血清样品的情况下测量的维拉苷酶α(伊米苷酶)的活性表达且报道为抑制％。
测定切割点由个别健康人类供体血清(N＝52)和酶替代疗法雏期戈谢病患者(N＝35)测定。维拉苷酶α和伊米苷酶中和抗体测定的切割点定义为根据这些87个样本计抑制>20.0％。因此，如果观察到的抑制水平≤20.0％，则将患者样本的抑制抗体视为阴性，且如果观察到的抑制水平>20.0％，则将患者样本的抑制抗体视为阳性。
体外基于细胞的测定
使用体外基于细胞的测定来评价抗药物抗体，从而测定抗体是否为中和抗体。
表29示出抗药物抗体的中和水平的测定特征的规格(将维拉苷酶用作药物)。
表29
1n＝104NHS和70种ERT雏期戈谢血清
LOD＝检测极限；LOQ＝量化极限；RSD＝相对标准偏差
关于在诸如对戈谢病ERT的ERT中的中和抗体，考虑的要点包括：
●受体介导的细胞吸收对于治疗剂的体内功能是关键的
●由ADA引起的受体结合干扰可以妨碍酶运输
●细胞吸收的抑制是评估成功ERT的重要工具，因为
●其密切模仿NAb可以通过其在体内施加作用的机制，和
●NAb可以降低或消除治疗剂的生物活性
●基于细胞的测定提供评价NAb的最适当的生物模型
评估来自在戈谢病的临床试验中进行ERT的患者的样品的维拉苷酶或伊米苷酶的中和抗体。结果示于表30中。
表30
1先前接受伊米苷酶治疗且在试验开始时转换到维拉苷酶α；2不显著(小于量化极限)；3至今没有检验；对于抗维拉苷酶α抗体为阴性的时间点
体外基于细胞的测定I
主要目的：进行实验以测定人类抗体与维拉苷酶α和/或伊米苷酶反应以通过工程化以表达CD206的人类细胞系(HT1080)抑制(阻断或中和)重组酶的CD206介导的吸收的能力，和比较在这方面响应伊米苷酶产生的抗药物抗体(ADA)与响应维拉苷酶α产生的抗药物抗体(ADA)。假设为在维拉苷酶α和伊米苷酶之间存在抗原差异；关于ADA对治疗剂的细胞结合、细胞内化和/或细胞内运输的功能作用，这些表位将区别维拉苷酶α与伊米苷酶。
材料和设备：
关键材料
1.细胞系MRC1-18源自于HT1080系且用人类CD206(巨噬细胞甘露糖受体；MMR，也称作MRC1，1型甘露糖受体C)稳定转染。HT1080(saf)细胞通过电穿孔并直接涂到96-孔板中而用携带编码MMR的基因的表达载体(从人类肝cDNA文库中分离)转染。稳定的克隆使用含有0.4mg/mLG418的培养基选择。MRC1表达使用FITC抗MRC1染色和分析通过荧光位移分析。MMR在MRC1-18上的表达通过用抗-MMR Ab表面染色而证实。另外，MRC1-18通过免疫染色和流式细胞术确定Fc(γ)受体的表达为阴性。
2.Alexa488结合的维拉苷酶α和伊米苷酶：维拉苷酶α或伊米苷酶根据制造商实验方案(Molecular Probes，目录号A 10235)使用Alexa488蛋白质标记试剂盒与Alexa488结合。
3.来自临床试验TKT-032、TKT-034和HGT-GCB-039的伊米苷酶或维拉苷酶αADA-阳性患者血清(见表31，样品ID)
4.测定阳性对照(PC)：在正常人类血清中的250μg/mL纯化多克隆绵羊抗维拉苷酶α抗体(G140)(NHS；BRH127439)
5.阴性对照样品：来自正常健康供体的人类血清样品(Bioreclamation，目录号HMSM,BRH127438,BRH127439)或来自登记在临床试验TKT-032(N＝25)中的患者的基准血清样品。
6.聚甘露糖：Sigma目录号M7054
7.D-甘露糖-6-磷酸：Sigma目录号M3655
8.生长培养基：50％CD-CHO(Invitrogen目录号10743)和50％CD-293(Invitrogen目录号11913)，补充有4mM L-谷氨酰胺(Invitrogen目录号25230)和0.4mg/mL Geneticin(G418,Invitrogen目录号11811-031)
9.0.05％胰蛋白酶-EDTA：Invitrogen目录号25300
10.洗涤缓冲液：PBS/0.5％BSA
11.BD细胞计数机构和跟踪珠粒：BD Bioscience目录号641319
设备的部分目录
1.具有5％CO2的37℃孵育箱：Forma Scientific Model 3033
2.离心机：Thermo Scientific Model Sorvall Legend T+
3.细胞计数器：Mexcelom Bioscience LLC,Model CellometerAuto T 4
4.流式细胞仪：BD Bioscience,FACSCanto II
方法：通过抗体筛选和验证性测定检验抗药物抗体为阳性的患者血清利用工程化以表达人类巨噬细胞甘露糖受体(MMR)的HT1080细胞系通过体外细胞吸收测定进一步检查。简要地讲，MRC1-18细胞保持在补充有0.5mg/mL G418的CD培养基中。对于各测定，在平底96-孔板中加入在具有G418的CD培养基中的1.5×105细胞/孔，且在37℃下将其用1:20稀释的检验患者血清样品、1:20稀释的正常人类血清(NHS)或在1:20稀释的NHS中的测定阳性对照(G140抗体，5mg/mL聚甘露糖)预孵育15分钟。随后，加入5nM Alexa488标记的维拉苷酶α或伊米苷酶，且在37℃下孵育额外2小时。在各实验中通过在37℃下用在1:20稀释的NHS中的Alexa488标记的维拉苷酶α或伊米苷酶(0-10nM)孵育2小时而包括Alexa488标记的维拉苷酶α或伊米苷酶的校准曲线。
在孵育2小时之后，通过离心分离除去培养基，将细胞用胰蛋白酶-EDTA处理3分钟以除去表面结合的维拉苷酶α或伊米苷酶，随后通过加入相等体积的具有10％FBS的培养基中和。将细胞用PBS/0.5％BSA洗涤一次，使其再悬浮在PBS/0.5％BSA中并通过具有固定仪器安装的BDFACS Canto II分析。在各分析之前该Canto II仪器用BD细胞计数机构和跟踪珠粒装配。结果用FlowJo软件分析，且记录各样品的平均荧光强度(MFI)。调节的MFI通过从各样品的MFI中减去背景样品(具有0nM药物的细胞)的MFI计算。相对于正常人类血清样品(NHS)或患者自己的雏期基准样品(在可得到的情况下)测定患者样品的维拉苷酶α和伊米苷酶吸收的抑制。抑制百分数可以使用以下方程式计算：
抑制％＝1-(检验样品的调节的MFI/患者基准或NHS的调节的MFI)×100
结果：
测定发展：
以下初始结果根据该测定的发展获得(数据未示出)：
MRC118细胞系的维拉苷酶α和伊米苷酶的内化具有剂量依赖性。
MRC1-18细胞系的维拉苷酶α和伊米苷酶的内化由甘露糖受体介导，因为该内化由聚甘露糖(5mg/mL，>89％)抑制，但不由M6P(5mM)抑制。
在1:20稀释的NHS(正常人类血清)中示踪的G140抗体抑制MRC1-18细胞系的维拉苷酶α和伊米苷酶吸收。该抑制具有剂量依赖性。
以1:20稀释度检验的12批NHS没有抑制MRC1-18细胞系的维拉苷酶α吸收。
测定变量：
来自临床研究的25种个别雏期戈谢血清样品经3天检验(N＝75)以确立对MRC1-18细胞系中维拉苷酶α或伊米苷酶的吸收的基准影响。
对维拉苷酶α吸收的平均基准血清影响类似于对伊米苷酶吸收的基准血清影响。然而，与维拉苷酶α相比，伊米苷酶的计算为CV％的变量大得多(28％对15％)(数据未示出)。
ADA-阳性患者血清样品结果和测定的可重现性
检验由先前测定具有抗伊米苷酶或维拉苷酶α的抗体的患者血清样品的维拉苷酶α和伊米苷酶吸收的抑制。平行检验各血清样品阻断伊米苷酶吸收以及维拉苷酶α吸收的能力，这与酶制剂最初引起抗体产生无关。表31列出患者血清样品和接受的蛋白质治疗(仅一个抗体阳性患者、ENU、接受用维拉苷酶α治疗)。
表31：ADA-阳性患者血清样品
患者 患者原始细胞 接受的治疗
032-191-0002 ENU 维拉苷酶α
039-009-0001 RW 伊米苷酶
039-194-0001 GAJ 伊米苷酶
039-194-0002 AVL 伊米苷酶
039-167-0001 KM 伊米苷酶
034-027-0002 SB 伊米苷酶
034-154-0001 JMS 伊米苷酶
034-164-0001 MPQ 伊米苷酶
来自患者ENU、RW、GAJ、AVL和SB的样品没有显示伊米苷酶或维拉苷酶α吸收的抑制(数据未示出)。相对于正常人类血清样品或患者自己的雏期基准样品(在可得到的情况下)，经3天测定患者样品JMS、KM、MPQ和SB(作为阴性对照)的维拉苷酶α和伊米苷酶吸收的抑制的可重现性(表32)。
患者KM(039-167-0001)在基准时为雏期且随后在后续研究中用伊米苷酶治疗。相对于维拉苷酶α吸收的等效抑制(0-15％，其在该测定的变量的范围内)，来自所有三次访问的样品显示伊米苷酶吸收的显著抑制(相对于其基准抑制24-52％)。
患者SB(034-027-0002)、JMS(034-154-0001)和MPQ(034-164-0001)先前用伊米苷酶治疗。相对于正常人类血清样品，来自患者SB的血清没有显示伊米苷酶吸收的抑制(0％)或维拉苷酶α吸收的抑制(0％)。来自患者JMS的血清的伊米苷酶吸收的抑制(0-14％)与观察到的维拉苷酶α吸收的抑制(0-20％)一致。来自患者MPQ的血清的伊米苷酶吸收的抑制(32-45％)显著大于维拉苷酶α吸收的等效抑制(0-15％，其在测定变量的范围内)。
这些初步结果提出在来自患者KM和MPQ的血清中存在的中和抗体抑制细胞中伊米苷酶的吸收，而不是抑制维拉苷酶α的吸收。
表32：ADA-阳性患者样品的伊米苷酶或维拉苷酶α吸收的抑制
也经3天测定由甘露糖抑制剂聚甘露糖和多克隆绵羊抗维拉苷酶α抗体G140(阳性对照)引起的伊米苷酶或维拉苷酶α吸收的抑制(表33)。聚甘露糖抑制MRC1-18细胞中伊米苷酶和维拉苷酶α经甘露糖受体的吸收。G140抗体抑制MRC1-18细胞中相等量的伊米苷酶和维拉苷酶α的吸收。
表33：由阳性对照引起的伊米苷酶或维拉苷酶α吸收的抑制
结论：关于蛋白质序列(例如，在伊米苷酶中的R495H突变)和碳水化合物结构两者，维拉苷酶α和伊米苷酶在结构上不同。进行实验以阐明以下假设：抗原差异存在于维拉苷酶α和伊米苷酶之间，且关于抗药物抗体(ADA)阻断各治疗剂的细胞结合和/或细胞内化的能力，这些表位区别维拉苷酶α与伊米苷酶。使用新近发展的HT1080细胞系进行实验，其中治疗剂的吸收主要由MMR变得更方便，且由其他已知的细胞吸收机制最低限度地混淆。测量患者血清样品的伊米苷酶或维拉苷酶α吸收相对于彼此的抑制。该数据显示，在总共7种取自响应伊米苷酶治疗产生ADA的患者的血清样品和1种取自响应维拉苷酶α治疗产生ADA的患者的血清样品之中，2种来自响应伊米苷酶产生ADA的血清(2/7＝29％)引起伊米苷酶的细胞吸收抑制24％-52％，但维拉苷酶α的细胞吸收抑制仅0-15％，其在测定变量内。相比之下，至今已经鉴定仅一个患者响应维拉苷酶α治疗产生抗体；该血清不抑制吸收。
平行检验各血清样品阻断伊米苷酶吸收和/或维拉苷酶α吸收的能力，这与酶制剂最初引起抗体产生无关。维拉苷酶α吸收的抑制与伊米苷酶吸收的抑制的这种比较允许粗略“绘出”各治疗剂的生物学相关部分的表位(警告：在本文中检验的抗血清为多克隆的且因此各抗血清可能含有也许识别多个表位的抗原特异性的混合物)。在考虑这些预防措施的情况下，用抗伊米苷酶抗血清观察到的吸收的抑制似乎限于伊米苷酶，因为相同的抗血清不抑制平行检验的维拉苷酶α的内化。这些数据提出响应伊米苷酶产生的一些ADA经特别暴露于伊米苷酶的表位抑制细胞内化。此外，就翻译后修饰而言，在对伊米苷酶吸收相对维拉苷酶α吸收的血清影响观察到的变量差异可能归因于在维拉苷酶α制剂中的均质性比在伊米苷酶制剂中的均质性更大。
使用基于细胞的测定检验由抗维拉苷酶α(伊米苷酶)抗体引起的酶吸收的抑制，该基于细胞的测定检测并量化妨碍巨噬细胞甘露糖受体(MMR)介导的维拉苷酶α(伊米苷酶)吸收的抗体。该方法根据在限定条件下由MRC1-18细胞内化的荧光标记的维拉苷酶α(伊米苷酶)的量化。MRC1-18为在Shire HGT自用1型人类巨噬细胞甘露糖受体C稳定转染的HT1080细胞工程化的细胞系。
简要地讲，将抗维拉苷酶α(伊米苷酶)抗体阳性血清样品在37℃下在平底96-孔板中在培养基中用MRC1-18细胞预孵育15分钟。将池正常人类血清(NHS)用作阴性对照。已知绵羊多克隆抗体抑制维拉苷酶α和伊米苷酶吸收以及聚甘露糖MMR特异性配体(Sung SJ等，J.Cell Biol.1983；96:160-166)用作阻断酶吸收的阳性对照。
在预孵育之后，加入Alexa Fluor-488标记的维拉苷酶α或伊米苷酶，且将其在37℃下孵育额外2小时。在各实验中包括由用MRC1-18细胞孵育Alexa Fluor-488标记的酶组成的校准曲线。在孵育之后，通过离心分离除去培养基，将细胞用胰蛋白酶-EDTA处理3分钟以除去表面结合的酶，且最后通过加入等体积的培养基使反应pH回到中性。将细胞洗涤一次且使用含有0.5％BSA的磷酸盐缓冲盐水再悬浮。使用在各分析之前使用仪器细胞计数机构和追踪珠粒校准的Becton Dickinson FACSCanto II仪器分析细胞。
结果用仪器的FlowJo软件分析，且记录各样品的平均荧光强度(MFI)。调节的MFI通过从各未知且对照样品的MFI中减去来自不含酶的样品孔的背景MFI计算。根据以下方程相对于NHS控制评估患者血清样品引起的酶的抑制：
抑制％＝[1-[检验样品的调节的MFI/NHS的调节的MFI]]×100
测定切割点通过分析从治疗雏期戈谢病患者收集的25种个别血清来测定。在单独的四天对总共100个值检验各血清且将阳性切割点定义为抑制作用大于这些值的平均值加1.645标准偏差。
体外基于细胞的测定II
发展该测定以比较维拉苷酶α的吸收与伊米苷酶的吸收。
方法：对于实验设计(DOE)测定，全因子设计由Statease DESIGNEXPERT 软件辅助。DOE利用来源于佛波醇豆蔻酸酯乙酸酯(PMA)诱发的U937细胞的巨噬细胞，且在5mM甘露糖-6-磷酸(M6P)存在下进行。对于内化比较，源自U937的巨噬细胞用在pH 7.5下具有10mM钙的GCB孵育3小时。内化药物通过活性测定用在裂解时发荧光的合成底物(4-MU-glc)测量。
结果：在U937细胞中维拉苷酶α和伊米苷酶的内化率的比较显示维拉苷酶α比伊米苷酶更有效地内化，高达2.5倍。使用MMR-表达鼠细胞系J774也观察到在细胞内化方面的该差异。在具体测定条件下，钙的加入适度抑制伊米苷酶的细胞吸收，同时其增强维拉苷酶α的吸收。两种酶的内化可以通过向培养基中加入聚甘露糖而抑制，尽管与伊米苷酶相比，J774细胞的维拉苷酶α吸收的抑制更彻底。DOE测定揭示：i)钙与pH的相互作用大大影响吸收；和ii)生物测定样品比较需要存在钙，符合MMR的已知钙依赖性。在DOE实验中甘露糖-6-磷酸(M6P)的存在保证在U937细胞上的M6P受体不促进测量的内化。
这些数据提出维拉苷酶α比伊米苷酶更有效地内化。虽然两种酶主要经MMR内化，一小部分(与维拉苷酶α相比，伊米苷酶更多)通过备选机制内化。这些数据可以证明在区别维拉苷酶α、伊米苷酶和其他未来疗法方面有价值。
概述
根据这些研究，抗体检测方法的概述如下：
●按ICH和FDA准则批准用于维拉苷酶α和伊米苷酶ADA的等效测定。参见，例如http://www.fda.gov/downloads/RegulatoryInformation/Guidances/UCM128049.pdf和http://www.ich.org/LOB/media/MEDIA417.pdf
●筛选
●验证
●滴度
●同种型
●中和
●平行评估隐匿性患者试样的维拉苷酶αADA和伊米苷酶ADA
●对照和定标器涵盖大量抗体亲和性
●在没有发现人类阳性血清时发展同种型特异性混合对照
在III期研究中患者的免疫原性状况：
●TKT032：使患者对维拉苷酶α60U/kg或45U/kg EOW随机分组
●基准时ADA-阴性的1个患者响应维拉苷酶α发展出NAb
●TKT034：将先前对伊米苷酶稳定的患者转换到维拉苷酶α15-60U/kg
●基准时抗伊米苷酶阳性的3个患者经12个月治疗为抗维拉苷酶阴性。
●HGT-GCB-039：使患者对维拉苷酶α60U/kg或伊米苷酶60U/kg EOW随机分组
●基准时ADA-阴性的4个患者响应伊米苷酶血清转化
●其中，1个患者相对于伊米苷酶和维拉苷酶α两者发展出NAb反应性，而3个患者仅相对于伊米苷酶发展出非抑制性IgG ADA反应性
患者血清转化汇总示于表34中。在检验的99个患者中，82个患者接受维拉苷酶α且17个患者接受伊米苷酶。在试验期间，接受维拉苷酶α的82个患者中的1个患者和接受伊米苷酶的17个患者中的4个患者发展出抗体。
表34
在该实施例中论述的研究的临床含义如下：
●发展、优化并批准了高度灵敏且等效的方法以直接评价并比较患者对维拉苷酶α和伊米苷酶治疗的抗体响应
●结果显示在用维拉苷酶α治疗的1％患者和用伊米苷酶治疗的23％患者中的血清转化，提出在维拉苷酶α和伊米苷酶之间的显著抗原差异
●另外，存在由伊米苷酶的ADA而不是维拉苷酶α的ADA引起的显著细胞吸收抑制。
实施例8：湿含量对冻干维拉苷酶产品的稳定性的影响
目的：评价湿含量对冻干维拉苷酶产品的稳定性的影响。
方法：将蛋白质配制成含蔗糖的溶液且使用FTS实验室规模冻干器(Lyostar II)冻干。在初次干燥之后用取样器不时移出冻干的小瓶以产生具有不同湿含量的样品。通过FT-IR检查冻干蛋白质的二级结构。这些样品的热稳定性通过物理外观、湿含量、尺寸排阻和反相HPLC和根据肽作图方法的氧化来表征。
在用灭菌注射水重构后，维拉苷酶产品含有约2.5mg/mL(40U/mL)维拉苷酶α、50mg/mL蔗糖、12.9mg/mL柠檬酸钠二水合物、1.3mg/mL柠檬酸单水化物和0.11mg/mL聚山梨醇酯20。
结果：在冻干产品中实现1.3％至6.2％的湿含量范围。在具有高湿含量(≥5％)的药物产品中在加速的温度(40℃)下观察到饼坍陷。然而，重构溶液的化学稳定性检验结果证明，根据SE-HPLC方法和RP-HPLC方法两者，与较干燥的样品相比，具有较高湿含量(≥3％)的样品的降解程度显著较低，以及显示氧化量较低。该稳定性趋势与通过干燥产品的FT-IR在二级结构中观察到的变化相关。
结论：湿含量越高使冻干蛋白质的化学稳定性越好。该稳定性趋势通过较少地变为在具有较高湿含量的固相中的二级结构来解释。冻干制品中恰当湿含量的选择需要平衡饼的结构稳定性与蛋白质的化学稳定性。
实施例9：维拉苷酶α的治疗目标的分析
已经描述了治疗目标来监测接受ERT的患有1型戈谢病的患者中治疗响应的实现、维持和连续性(Pastores G等，(2004)Seminars inHematology,41(增刊5):4-14)。
对于维拉苷酶α治疗对关于1型戈谢病的临床参数(贫血、血小板减少、肝肿大、脾肿大和骨骼病理)的治疗目标的影响的基准，将基准时处于贫血、血小板减少、肝肿大和脾肿大的目标的患者的比例与在9个月或1年实现这些目标中的每一个的比例相比较。
不使用数据归责。仅包括在两个时间点对各目标具有数据的患者。对于血液学参数，基准为筛选值和基准值的平均值；1年治疗目标值对于TKT032和TKT034为第51周值和第53周值的平均值，且对于HGT-GCB-039为第39周值和第41周值的平均值。对于器官体积，在HGT-GCB-039中，将第41周值应用到1年治疗目标标准。
在表35-40中描述具有完整脾的TKT032、HGT-GCB-039、HGT-GCB-039患者、HGT-GCB-039的脾切除患者、TKT034和TKT025的治疗目标。
表35
表36
表37
表38
表39
表40
实施例10.维拉苷酶α在患有III型戈谢病儿童和青少年中的功效和安全性研究
戈谢病是因葡糖脑苷脂酶(GCB)的缺乏而引起的罕见溶酶体贮积症。戈谢病已基于神经学症状的存在或不存在和神经学症状的严重度而被分为3个临床亚型。患有2型戈谢病的患者呈现急性神经功能恶化，患有3型戈谢病的患者通常显示更加亚急性的神经学过程；1型戈谢病这种占据超过90％的所有病例的最常见的形式，并不牵涉中枢神经系统。
维拉苷酶α是被批准用于患1型戈谢病的儿科和成年患者的酶替代疗法(ERT)。ERT已被证明能减轻器官巨大症，改善血液学参数和积极影响健康相关生活质量。未曾显示ERT穿过血脑屏障碍，因此其显示改善与戈谢病相关的神经学(中枢神经系统；CNS)表现的能力很有限。
本研究提供了研究维拉苷酶α在患有3型戈谢病的患者中的功效和安全性的基础。此研究将是在患有3型戈谢病的儿童和青少年中进行的维拉苷酶α酶替代疗法的干预性多中心、标签公开的功效和安全性研究。主要结果测量将包括：血红蛋白浓度从基准的变化、血小板计数从基准的变化、使用磁共振成像(MRI)测量的标准化肝体积从基准的变化、使用磁共振成像(MRI)测量的标准化脾体积从基准的变化和神经学症状从基准的变化。安全性评估可包括不利事件和输注相关不利事件的评估、严重的不利事件、临床实验室值、尿分析、生命体征、12-导联心电图(ECG)记录、体格检查和抗-维拉苷酶α抗体形成。该研究的实验部分将每隔一周通过静脉内输注接受维拉苷酶α。
若要包括在研究中，则每一个患者必须满足所有下列标准：3型戈谢病的确认诊断；招募时≥2岁和<18岁；首次进行治疗或在进入研究之前12个月内未曾接受戈谢病的治疗(研究的或批准的)；患者必需具有戈谢病相关贫血，定义为低于相应年龄和性别的正常值下限的血红蛋白浓度。患者还必须满足下列标准的一项或多项：通过触诊发现的至少中度脾肿大(左肋缘下方2至3cm)；戈谢病相关血小板减少症，定义为血小板计数<120x10,000血小板/mm3；戈谢病相关的易于触知的大肝。已经历脾切除术的患者仍然可适合加入研究。具有生育可能性的女性患者必须同意在研究过程中在所有时间使用医学上可接受的避孕方法。将在招募时以及在整个研究参与过程中按需进行妊娠测试。男性患者必须同意在研究过程中在所有时间上使用医学上可接受的避孕方法并向研究人员报告伴侣的妊娠。患者的父母或患者的法律上授权的代表必须提供已被伦理委员会/独立伦理委员会(IRB/IEC)批准的书面知情同意书。
满足下列标准中的任何标准的患者将排除出本研究：患者怀疑患有2型或I型戈谢病；患者<2岁；患者已经历严重的(3级或更高级)对戈谢病的任何酶替代疗法(批准的或研究的)的输注相关的超敏反应(过敏性或过敏样反应)；患者已在进入研究之前30天内接受利用研究药物的任何非戈谢病相关治疗；患者为孕妇和/或哺乳期的女性。
已经描述了本发明的许多实施方案。尽管如此，应当理解的是可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行各种改进。因此，其他实施方案在以上权利要求书的范围内。

Claims (21)

1.一种治疗患有III型戈谢病的受试者的方法，所述方法包括以下步骤：
通过在不到2小时的时间内向所述受试者静脉内输注来施用葡糖脑苷脂酶替代疗法，由此治疗所述受试者。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述葡糖脑苷脂酶替代疗法在90分钟或更短的时间内施用。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述葡糖脑苷脂酶替代疗法在60分钟或更短的时间内施用。
4.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括通过在不到2小时的时间内向所述受试者静脉内输注来施用第二葡糖脑苷脂酶替代疗法。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述葡糖脑苷脂酶替代疗法选自由以下组成的组：维拉苷酶、伊米苷酶和uplyso。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述葡糖脑苷脂酶替代疗法以15-60U/kg的剂量施用。
7.一种鉴定适合于用葡糖脑苷脂酶替代疗法治疗的受试者的方法，其包括以下步骤：
测定葡糖脑苷脂酶替代疗法的中和抗体是否存在于来自所述受试者的样品中以获得所述疗法的抗体的测量值，其中所述受试者当前正被施用第一葡糖脑苷脂酶替代疗法或其先前已接受第一葡糖脑苷脂酶替代疗法，和
将所述疗法的所述抗体测量值与标准比较，
其中，如果所述抗体测量值大于所述标准，则将所述受试者鉴定为具有所述葡糖脑苷脂酶替代疗法的抗体且为使用维拉苷酶的葡糖脑苷脂酶替代疗法的候选者，且如果所述抗体测量值不大于所述标准，则将所述受试者鉴定为使用所述第一葡糖脑苷脂酶替代疗法或备选葡糖脑苷脂酶替代疗法的葡糖脑苷脂酶替代疗法的候选者。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述第一葡糖脑苷脂酶替代疗法为伊米苷酶或uplyso。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述样品为血液或血清样品。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述血液或血清样品已经改良。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述样品已与分析试剂或底物接触。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述样品为血液或血清样品的浓缩部分。
13.根据权利要求7所述的方法，其中所述受试者被鉴定为使用维拉苷酶的葡糖脑苷脂酶替代疗法的候选者，且所述方法进一步包括对所述受试者施用维拉苷酶。
14.一种治疗当前正接受或先前已接受葡糖脑苷脂酶替代疗法的患有III型戈谢病的受试者的方法，其包括以下步骤：
根据受试者对于其当前接受或先前接受的戈谢病疗法的抗体的产生测试为阳性来选择受试者，和
对所述受试者施用维拉苷酶。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者对于其当前接受或先前接受的戈谢病疗法的IgE抗体的产生测试为阳性。
16.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者对于其当前接受或先前接受的戈谢病疗法的IgM抗体的产生测试为阳性。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者对于其当前接受或先前接受的戈谢病疗法的IgG抗体的产生测试为阳性。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者当前接受或先前接受的戈谢病疗法为伊米苷酶。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者当前接受或先前接受的戈谢病疗法为uplyso。
20.根据权利要求14所述的方法，其中维拉苷酶以15-60U/kg的剂量施用。
21.根据权利要求14所述的方法，其中所述维拉苷酶在90分钟或更短时间内通过静脉内输注施用给所述受试者。
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