MX2007006050A

MX2007006050A - Agentes de contraste.

Info

Publication number: MX2007006050A
Application number: MX2007006050A
Authority: MX
Inventors: Dagfinn Lovhaug; Morten Eriksen; Hege B Fjerdingstad; Andrew Healey
Original assignee: Ge Healthcare As
Priority date: 2004-11-22
Filing date: 2005-11-21
Publication date: 2007-11-14
Also published as: EP1814598A2; DE602005025911D1; ATE494913T1; CN101107016A; ES2358745T3; CN101107016B; US8182790B2; NO20073039L; EP1814598B1; JP2012207027A; IL182898A0; JP5116480B2; WO2006054904A3; EP2243496A2; RU2007118385A; KR20070091609A; WO2006054904A2; AU2005307195A1; US20090208412A1; EP2243496A3

Abstract

Un agente de contraste de la formula general (I): Z1-L-V-Z2 (I) en donde se encuentra al menos uno de Z1 y Z2 y son porciones reporteras iguales o diferentes detectables en generacion de imagenes in vivo del cuerpo humano o de un animal, V es una porcion de direccion con afinidad de enlace para areas de formacion de colageno, L es un enlace covalente, un biomodificador o una porcion enlazadora.

Description

AGENTES DE CONTRASTE Campo de la Invención La presente invención se refiere a gentes de contraste nuevos y a su uso en técnicas de generación de imagen de diagnóstico. En forma más especifica, la presente invención se refiere a agentes de contraste que comprenden vectores de dirección que enlazan a áreas de formación de colágeno y matrices extracelulares, ECM. Dichos agentes de contraste pueden ser utilizados para la dirección de la fibrosis activa (depósitos de colágeno) y el diagnóstico de un número de condiciones de enfermedad, por ejemplo, falla cardiaca, fibrosis hepática y en pulmón, fibrosis retroperitonial, ateroesclerosis, artritis, cáncer y padecimientos de la piel. Además dicho agente de contraste, puede utilizarse, para mostrar condiciones inflamatorias de cicatrización crónica, tejido de cicatriz y adherencias, investigación de tamaño de infarto, mostrar infartos tempranos y diagnosticar falla cardiaca congestiva. Antecedentes de la Invención Los colágenos son las proteínas más abundantes en el reino animal. Se conocen actualmente veinticinco tipos diferentes. La unidad estructural básica es una hélice triple; el en colágeno 1, la hélice consiste en tres polipéptidos, conteniendo cada uno 1050 aminoácidos. Las fibrilas de colágeno se forman mediante interacciones laterales entre las hélices triples. Algunos colágenos, en especial colágeno IV, forman hojas bidimensionales. La secuencia de aminoácido de las moléculas de colágeno son altamente repetitivas, y esta regularidad se refleja en la estructura de las fibrilas de colágeno. La secuencia de aminoácido del colágeno 1, contiene aproximadamente 20 copias de un motivo de 18 aminoácidos, en donde cada tercer aminoácido es una glicina. Los diversos colágenos son producidos mediante fibroblastos y algunas células epiteliales. La transcripción original es un polipéptido de pro-colágeno que contiene secuencias de señal para exportar desde la célula y también un pro-péptido que evita la asociación para formar hélices triples. Aproximadamente el 50% de los residuos de prolina y del 15 al 20% de las lisinas en las cadenas de pro-colágeno están sujetas a procesamiento intracelular para formar hidroxipolina e hidroxilisina. Estas modificaciones son esenciales para las propiedades mecánicas del colágeno. Fuera de la célula, los pro-péptido son disociados, comenzando con el proceso de auto-ensamble. Los colágenos son componentes esenciales de estructuras tales como huesos y tendones y también de matriz extracelular. Por ejemplo, el colágeno 4 forma la red básica de las membranas de base a las cuales de adhieren las células epiteliales y endoteliales. Parte de la diversidad de los colágenos es explicada a través de diferentes tipos de colágenos, aunque también existe una variedad de moléculas asociadas con colágeno. Las fibras de colágeno normalmente están asociadas con proteoglicanos. Estas proteínas consisten en un polipéptido núcleo y una ó más cadenas laterales de glucosaminoglical, también son una clase muy diversa. En las membranas de base, la laminina y la entactina (nitrógeno) son componentes importantes. Las fibulinas son una clase se proteínas con sitios de enlace para diversas proteínas de membrana de base. El undulina es una proteína que forma fibras que encuentren asociación con colágeno en bajas cantidades en el hígado normal, y en altas cantidades en el hígado fibrótico. El colágeno y otras proteínas en tejido colectivo, contiene la secuencia de aminoácido Arg-Gly-Asp, la contiene confiere enlace en la clase de integrina de las moléculas de adición de celular. Otras secuencias de aminoácido también pueden constituir el motivo de enlace central, y otras parte de ligando contribuyen a la afinidad, así como a la especificidad. Las integrinas ß1, son importantes en el enlace de colágeno. Otras proteínas de enlace de colágenos incluyen los recetores de dominio de discoidina, que responden a colágeno activando una cinasa de tirosina. Las fibras de colágeno son lateralmente flexibles, aunque no son elásticas ni comprimibles. Las propiedades elásticas del tejido colectivo son ayudadas por la elastina de proteína y sus proteínas asociadas cono oxitalan y elaunina. Las fibrilinas 1 y 2, son otras proteínas que forman fibras elásticas en asociación con elastina y otro componente estructural, glucoproteina asociada con microfibrila. Las fibras elásticas anormales se encuentran en áreas de fibrosis hepática. La deposición de colágeno es un proceso común en la sanación de una lesión, conducciones formaciones del "tejido de cicatriz" familiar. La deposición de colágeno es un proceso que disminuye la funcionalidad del tejido. Este es obvio donde la elasticidad del tejido es importante. Un ejemplo importante es el tejido con cicatriz que se forma durante la sanación de un infarto al miocardio. En el hígado los efectos de fibras rígidas son menos obvios. Parte del proceso de fibrosis hepática es la posición de material de matriz extracelular en el espacio entre los hepatocitos y el endotelio fenestrado de sinusoides hepáticas, que coincide con la transformación de sinusoides en capilaridades que contienen una membrana de base ordinaria. Esta transformación disminuye la funcionalidad del hígado, impidiendo la transferencia de soluciones de ligamento entre la sangre y los hepatocitos. La fibrosis hepática comienza con una lesión que origina daño o muerte de células hepáticas. La lesión inicia una respuesta inflamatoria. La liberación de citocinas, factores quimiotácticos y fragmentos de proteínas de matriz ECM (colágeno y fibronectina) originan la activación de células en el hígado y el reclutamiento de células inflamatorias, tales como granulositos. La inflamación, que incluye tensión oxidativa, es el factor común de la mayor parte de las causas de fibrosis hepática. Un evento importante es la activación de células estrellado (células de almacenamiento de grasa aka ó células Ito). La función mejor conocida de estas células, en el hígado normal, es el almacenamiento de vitamina A. En la activación, ellas pierden la vitamina A y se diferencian en miofibroblastos. Estas células son las células que producen colágeno. Los agentes que originan la fíbrosis hepática son numerosos: alcohol, virus de hepatitis, colagenitis, hemocromatosis, enfermedad de Wilson y esquisotomiasis. En animales de experimento (normalmente ratas), la fibrosis puede ser inducida mediante tetracloruro de carbono o tioacetamina. La mayoría de estos agentes producen agentes de producción patrones distintos de lesión hepática incluyendo posición de colágeno. El papel de la respuesta inflamatoria es variable; en algunas condiciones, por ejemplo, emocromatosis, es importante la tensión oxidativa. Si la lesión se limita en grado y en tiempo, la fibrosis resultante es reversible. En el hígado la presión prolongado puede reducir la cirrosis caracterizado por el daño general, formación de nodulos de regeneración de fibrosis que distorsiona la arquitectura del hígado. En ratas, el colágeno Tipo 1 tiene una vida media de 30 días y el Tipo lll tiene una vida media de 15 días. Cuando se induce cirrosis mediante tetracloruro de carbono, las vidas medias de ambos colágenos se reducen en un 50%. Las cantidades de colágeno alcanzan niveles de 5 a 10 veces más que los niveles normales (aunque nunca arriba de 30 -35 mg/g). El punto de diagnóstico y tratamiento de fibrosis hepática es la conservación de daño al hígado irreversible y la consecuente función reducida. La cantidad incrementada y patrones alterados de reposición de colágeno, indican fibrosis hepática. Una biopsia positiva se considera la respuesta definitiva. Las biopsias son procedimientos invasivos con una frecuencia de complicaciones significativas de 1 al 5%. Las biopsias no guiadas simples, fallarán en el diagnóstico de cirrosis en del 10 al 30% de los casos. El diagnóstico correcto puede incrementar hasta el 100% si se revisan tres especimenes. Ya que la incidencia de complicaciones incrementa con el número de biopsias tomadas, parece que las biopsias tripes pueden incrementar las incidencias de complicaciones en un orden del 10%. Además, la evaluación de biopsias está muy lejos de ser un avance. Dentro de cualquier etapa de enfermedad hepática, existe hasta una variación de cuatro veces en el área de fibrosis, además existe un transe substancial en le área de fibrosis entre diferentes etapas. En consecuencia, la cantidad de colágeno, tal como se calcula mediante análisis de imagen auxiliado por computadora, tiene poco valor en la decisión de la etapa de la fibrosis. Los observadores experimentados que utilizan esquemas de calificación estandarizados, proporcionan una información confiable con respecto a que etapa se encuentra. De hecho estos trabajan bien ya que existe poco incentivo para ver además de colágeno marcadores citológícos adicionales. Sin embargo, la tonacina de proteína de matriz ECM se deposita en lesiones tempranas y con frecuencia esta ausente del tejido con cicatriz madura, en tanto que la vitronectina es un marcador de tejido de fibrosis madura. Los marcadores suerológicos de fibrosis hepáticas que se utilizan en la actualidad pueden dividirse en dos grupos: Marcadores de alteración en función hepática (conteo de plaquetas, tras-aminasas hepáticas) y marcadores de rendimientos ECM. Estos ultimas pueden incluir marcadores de depósito de colágeno (por ejemplo, circulación de pro-péptidos de colágeno) y/o degradación de colágeno (por ejemplo, circulación de fragmentos de colágeno IV). Una combinación de marcadores seleccionados en forma cuidadosa pueden producir resultados mucho más precisos que los marcadores, aunque no existe un acuerdo universal en este aspecto. Existe claramente la necesitad de una prueba confiable que pueda diagnosticar fibrosis en etapas tempanas, antes de que ocurra un daño irreversible, una característica muy deseable de pruebas futuras es la capacidad de cuantificar cambios en la ECM. Tal como se explicó anteriormente, la deposición excesiva de colágeno reduce la elasticidad del tejido. Esto también incluye el tejido con cicatriz que se forma durante la sanación de un infarto al miocardio. Después de la lesión al corazón ó incremento persistente de tensión en la pared cardiaca, el corazón intenta compensarse mediante remodelación. Este proceso implica alteraciones progresivas en el tamaño y forma de las cámaras ventriculares, acoplados con cambios en la composición del miocardio, las respuestas típicas incluyen alargamiento de miocitos sobrevivientes y cambios en los tipos, reticulación y concentración de colágeno. Parece que inicialmente, la matriz extracelular se degrada parcialmente concurrente con hipertrofia y miocitos cardiacos. Posteriormente existe una fase de compensación crónica conforme la concentración de colágeno regresa a ser normal. Pero si el corazón no tiene la capacidad de compensarse, se remodelan los resultados en la dilatación ventricular molecular marcada a pesar de la fibrosis prominente. La etapa final de falla cardiaca está caracterizada por remodelación extra de la matriz extracelular en forma concurrente con la desorganización de miofibrilas y pérdida de emiositos. El colágeno continúa acumulándose, aunque las fibrilas de colágeno caen en una forma irregular. La fibrosis es un componente de más de 200 enfermedades en el pulmón. La lesión repetida ó tensión sostenida, por ejemplo inflamación y/o partículas inhaladas, son componentes comunes de la etiología, junto con factores genéticos que cambian el equilibrio en la dirección de depósito de tejido colectivo. Un ejemplo es la deficiencia del inhibidor de proteínasa C . una proteína cuya actividad también puede ser reducida con una consecuencia del hábito de fumar. Su función principal es inhibir la elastasa de neutrófilo. Como en la fibrosis de otros órganos, el equilibrio entre la síntesis y la degradación, puede iniciar procesos de reparación que realmente lesionen la función. Como en fibrosis de hígado o corazón, los miofibroblastos figuran de manera prominente en la patología. Originalmente son recluidos como fibroblastos que posteriormente se diferencian. Parece que el "proceso de reparación" puede continuar en la ausencia de inflamación perceptible obteniendo como resultado perdida de función progresiva. Descripción de la Técnica Relevante La publicación WO 89/10758 describe componentes que enlazan a la membrana de superficie de bioparticulas. Estos compuestos comprenden una sustancia de bio-afectación y al menos un substituyente de hidrocarburo son seleccionados de modo que el compuesto lo suficientemente no polar para impartir capacidad de enlace de lípidos al compuesto, en donde la sustancia de bio-afectación debe ser una tinta de cianina. La publicación WO 93/11120 describe compuestos que enlazan a partículas bio-compatibles en lípidos, tales como celular y virus. Estos compuestos son seleccionados de modo que los compuestos sean lo suficientemente no polares para impartir capacidad de enlace a lípidos al compuesto. Breve Descripción de la Invención La presente invención proporciona agentes de contraste nuevos útiles para el diagnóstico y monitoreo de enfermedades relacionada con la formación de colágeno excesiva. Las enfermedades e indicaciones asociadas con deposición de colágeno excesivo, son por ejemplo, falla cardiaca, fibrosis de pulmón e hígado, astereoclerosis, artritis y padecimientos de la piel. Por lo tanto, la presente invención proporciona agentes de contraste útiles en el diagnóstico de falla cardiaca y otra enfermedades que implica depósito de colágeno excesivo, tales como las mencionadas anteriormente, que comprende, una porción de dirección que incorpora una ó más porciones con generación de imagen. La porción/porciones que pueden generar imágenes, pueden ser cualquier porción de generación de imagen que cuando se administra a un sujeto, puede generar una imagen de al menos una parte al sujeto al cual se a distribuido el agente de contraste, por ejemplo, mediante radiogeneración de imagen. Tomografía Computarizada de Emisión de Fotones Simple (SPECT), Tomografía de Emisión de Positrones (PET), Generación de Imagen de Resonancia Magnética (MRl), Rayos-X, generación de imágenes ópticas (Ol), generación de Ultrasonido (US), impedancia Eléctrica o modalidades de generación de imágenes magnetométricas. La presente ¡nvención proporcionas además métodos para generación de imágenes de dichas enfermedades y también métodos para monitorear el progreso del tratamiento de dichas enfermedades. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas y percusores novedosos para la preparación de agentes de contraste de diagnóstico. Se proporcionan equipos de agentes de contraste, en particular equipos para la preparación de agentes de contraste de radio farmacéuticos. Los agentes de contraste de la presente invención, se describen en la fórmula general (I): Z.-L-V-Z2 (I) La cual se describirá de manera adicional más adelante. Descripción Detallada de la Invención Visto desde el aspecto de la presente invención, se proporcionan agentes de contraste de la fórmula (I) tal como se define en las reivindicaciones. En el agente de contraste de la fórmula general (I): al menos uno de Z-i y Z2 se encuentran y son porciones reporteras iguales ó diferentes detectables en generación de imagen in vivo del cuerpo humano ó de un animal, V es la porción de dirección de enlace de afinidad en áreas de formación de colágeno, L es un enlace covalente, un biomodificador ó una porción enlazadora. Z es utilizado en lo sucesivo para denotar ya sea uno de ó ambos de Z y Z2. Z puede ser cualquier porción que pueda generar imágenes.

Para agentes de contraste útiles y generalmente en diagnósticos in vivo, las porciones Z comprenden la proporción o porciones que pueden generar imágenes. Cuando la porción que puede generar imágenes por si misma no puede ser enlazada directamente a V ó L (cuando se encuentre) por ejemplo, cuando la porción de generación de imagen es una partícula de metal ó un Ion de metal en lo sucesivo denotado como M, entonces Z comprende una porción YiM en donde Yi es una porción con la capacidad de enlazar a V ó L (cuando se encuentra), y al mismo tiempo transportar M. Por el termino "transportar" se entiende cualquier tipo de asociación entre la porción Y-\ y M, tal como un enlace químico, por ejemplo, un enlace covalente o enlaces electrovalentes ó iónicos ó mediante absorción ó cualquier otro tipo de asociación. Cuando M es una partícula de metal o Ion de metal, entonces Yi representa un agente que quelación. La naturaleza de Z y/o YiM dependerán de la modalidad de generación de imagen utilizada en el diagnóstico. Z y/o YTM deben tener la capacidad de detectar y hacer directa ó indirectamente en una proceso de generación de imagen in vivo, por ejemplo, porciones que emiten o pueden ser originadas para detectar radiación, por ejemplo, mediante decaimiento radioactiva, excitación de fluorescencia, excitación de resonancia tejidos) que afectan los campos electromagnéticos (por ejemplo, especies paramagnética, superparamagnéticas, ferrimagnéticas ó ferromagnéticas) porciones que absorben ó exploran la energía de radiación (por ejemplo, cromóforos, partículas (incluyendo vesículas que contienen gas ó liquido), elementos pesados y compuestos de los mismos, etc.) y porciones que generan una substancia detectable (por ejemplo generadores de micro burbujas de gas). Los agentes de quelacion de la fórmula (I) y (II) en lo sucesivo serán los particularmente preferidos. Se conoce un amplio rango de porciones de generación de imágenes adecuadas, por ejemplo, a partir de la publicación WO 98/18496, cuyo contenido está incorporado en la presente invención, referencia. Las modalidades de generación de imagen y porciones que puedan generar imágenes Z y M se describen con mayor detalle más adelante: En una primera modalidad, la porción Z en el compuesto de la fórmula (I) comprende una porción Y1( que lleva una ó más porciones que puede generar imágenes M útiles en la modalidad de generación de imágenes Radio y SPECT. Preferentemente M es un emisor gama con baja o nada de emisión alfa y beta y con una vida media de más de una hora. Los grupos M preferidos son los radionúclidos 67Ga 111ln, 123l, 131l, 81mKr, "Mo, 99mTc, 201TI y 133Xe. El más preferido es 99mTc. M puede ser representado en forma adicional a través de los siguientes isótopos o pares de isótopos para utilizarse tanto en generación de imágenes y terapias sin tener que cambiar la metodología de radioetiquetación o quelador: 7Sc2?; 141Ce58; 188 ?e 5, 177? U 1, 199 A ? IUI79, 47QC21, 131 i ?53., 67 <^u29, 131 , ?53 y 123? ?53., 188R ?oe75 x y/ 99mT iV c43, 90Y t39 \ y/ 87V t39 •, 47 o«5<c-2? y 44«?c21, 90V t39 \ y? 123l ?53, 6Sm62 y 153Sm62; y 90Y39 y 111ln49. Cuando M denota un radionúclido metálico entonces Yt denota un agente de quelacion adecuado para formar un quelado estable con M. Dichos agentes de quelacion son bien conocidos en el estado del arte y los ejemplos típicos de dichos agentes de quelación se describen en la Tabla I de la publicación WO 01/77145. Particularmente preferidos son agentes de quelacion Yt de la fórmula (II): (II) en donde R1, R2, R3 y R4 independientemente H, C?.?0alquilo, C3.10alquilarilo, C2.?oalkoxialquilo, Ct-iohidroxialquilo, C?.10 alquilamino, C?.10fluoroalquilo, ó dos o más grupos, junto con los átomos a los cuales están adheridos forman un anillo carbocíclico, heterocíclico saturado o insaturado.

Más particularmente preferidos son los agentes Y,, de la fórmula (II) donde R1, R2 y R3 son hidrógeno o grupos metilo y R4 es alquilamina, más específicamente un compuesto de la fórmula (lll), en lo sucesivo denotado cPN216.

Fórmula (lll) El más preferido para Z es el quelado de cPN216 con 99mTc.

La síntesis de agente de quelacion de la fórmula (II) y (lll) se describe en la publicación numero WO 03/006070. Los grupos Z de radionúclidos de no metal, tales como 123l, 125l y 131l pueden ser enlazados en forma covalente en porciones V y L (cuando se encuentran) a través de una sustitución o reacción de adición bien conocida en el estado del arte. En una segunda modalidad el compuesto de la fórmula (I) comprende un porción Z sutil en la modalidad de generación de imagen PET. Z denota posteriormente un radio emisor con propiedades de emisión de positrones. Los grupos preferidos Z son los radionúclidos 1 C, 18F, 68Ga, 13N, 1 ° y 82Rb. 18F es específicamente preferido. Los radioemisores metálicos 82Rb y 68Ga quelados con un agente de quelacion YT también son preferidos. La química de acoplamiento de tiol, 18F-sintons y péptidos etiquetados preparados utilizando la química de acoplamiento de tiol, se describen en la Publicación Número WO 03/080544, cuyo contenido está incorporado en la presente invención como referencia. La descripción de péptidos etiquetados a través del uso de química de comportamiento de tioles puede encontrarse en la Publicación Número WO 2005/01235, cuyo contenido está incorporado a la presente invención como referencia. En otra modalidad preferida Yi denota el agente de quelación DOTA y M es 58Ga el cual puede ser fácilmente introducido en el agente de quelacion utilizando química de microondas. Los grupos Z de los radionúclidos de no metales tales como 18F pueden ser enlazados en forma covalente a las porciones V y L (cuando se encuentran), a través de una sustitución o reacciones de adición que son bien conocidas en el estado de la técnica y que también se describen por ejemplo en la Publicación WO 03/080544, la cual está incorporada en la presente invención como referencia. En una tercera modalidad, la porción Z del compuesto de la fórmula (I) comprende una porción Y que lleva una ó más generación de imagen M útiles en la modalidad de imágenes MR (Resonancia Magnética). M denota aquí un Ion de metal paramagnético, tal como los que se mencionan en la Patente Norteamericana Número 4,647,447. Los iones de metal paramagnético Gd3 + , Dy3 + , Fe3+ y Mn2+ son particularmente preferidos. Y-i denota un agente de quelacion, en particular un agente de quelacion tal como poliaminocarboxilatos acíclicos ó cíclicos (por ejemplo DTPA, DTPA-BMA, DOTA y DO3A) tal como se describe, por ejemplo, en la Patente Norteamericana Número 4,647,447 y en la Publicación Número WO 86/02841. En generación de imágenes MR, M también puede denotar óxidos de metal tales como especies súper superparamagnéticas, ferrimagnéticas ó ferromagnéticas, las cuales son absorbidas por Z, por ejemplo, de modo que Z funcione como un recubrimiento para el oxido de metal. Los óxidos de metal para utilizarse como agentes de contraste MR se describen por ejemplo en la Patente Norteamericana Número 6,230,777 la cual está incorporada a la presente invención como referencia. En una cuarta modalidad, la porción Z del compuesto de la fórmula (I) comprende una porción Yi que lleva una ó más porciones de generación de imagen M, útiles en la generación de imagen Rayos-X. Aquí M denota un metal pesado tal como W, Au y Bi en forma de óxidos que pueden ser absorbidos para Z ó en la forma de sus entidades metálicas (estado de oxidación 0). Z también puede representar derivados de arilo yodinados particularmente bien conocidos como agentes de Rayos-X yodinados, por ejemplo, aquellos conocidos bajo sus nombres comerciales lopamidol™ y Omnipaque™. Estos agentes pueden ser enlazados a través de sus funciones de amida ó amina para las porciones V ó L (cuando se encuentran) de la fórmula (I). En una modalidad adicional el compuesto de la fórmula (I) comprende porciones Z en la forma de microvesículas llenas de gas. Dichos agentes de generación de imagen de ultrasonido, pueden utilizarse en la generación de imágenes de receptores, por ejemplo, cuando son funcionalizados para enlazar a un péptido, tal y como se describe en el estado del arte, por ejemplo en la Publicación Número WO98/18500. En una sexta modalidad de la presente invención, la porción Z de la fórmula (I), puede ser cualquier porción con la capacidad de detección ya sea directa ó indirectamente en un procedimiento de generación de imagen óptica. La porción detectable puede ser un explorador de luz (por ejemplo, una partícula con color ó sin color), un absorsor de luz ó un emisor de luz. Más preferentemente Z es representado por una tinta tal como un cromóforo ó compuesto fluorescente. La porción Z puede ser cualquier tinta que interactúe con luz en el espectro electromagnético, con longitudes de onda que parten desde la luz ultravioleta hasta la luz casi infrarroja. En una versión preferida, Z tiene propiedades fluorescentes. Las porciones de tintas orgánicas preferidas incluyen grupos que tienen un sistema de electrones deslocalizados extensos, por ejemplo cianinas, merocianinas, indiocianinas, ftalocianinas, naftolocianinas, trifenilmetinas, porfirinas, tintas de pirilio, tintas de tiopirilio, tintas de escuarilio, tintas de croconio, tintas de azulenio, indoanilinas, tintas de benzofenoxazinio, tintas de benzotiafenotiazinio, antraquinonas, maftoquinonas, indatrenos, ftloilacridonas, trisfenoquinonas, tintas azo, tintas de transferencia de carga intramolecular e intermolecular y complejos de tintas, troponas, tetracinas, complejos bis(ditiolenos), complejos bis(benceno-ditiolato), tintas de yodoanilina, complejos bis(S,O-ditioleno). Las proteínas fluorescentes, tales como proteína fluorescente verde (GFP) y modificaciones de GFP que tienen diferentes propiedades de absorción/emisión, también son útiles. Los complejos de ciertos metales de tierra rara (por ejemplo europio, samario, terbio ó disprosio) se utilizan en ciertos contextos, ya que son nanocristales fluorescentes (puntos quantum). Los ejemplos preferidos de porciones de generación de imagen, son la tinta de cianina (CyDye™). La tinta de cianina son compuestos definidos por un agente de polieno que contiene un número non de átomos de carbono enlazados alterando enlaces simples ó múltiples, preferentemente enlaces dobles carbono-carbono terminados en cualquier extremo, a través de un grupo amino, uno de los cuales es cuaternizado. La cianina y cromoforos de arilo-enlazados-arilos análogos, llevan opcionalmente andamios ó sustituyentes de arilos fusionados. La descripción general de las tintas de cianina y síntesis de las mismas, se describen en las Patentes Norteamericanas Números 6,048,982, 5,268,486 y en la Patente Europea Número 1,037,947 las cuales están incorporadas en la presente invención como referencia. Las tintas de cianina son particularmente útiles debido a un amplio rango de propiedades de espectro y variaciones estructurales disponibles. Un rango de tintas de cianina son bien conocidas y probadas, tienen baja toxicidad, y están comercialmente disponibles para (GE Healtcare, de Amersham Biosciences). Las tintas de cianina son una familia simple de tintas altamente intensas con buena solubilidad acuosa. Son de pH intenso entre un pH 3-10, exhiben bajo un enlace no específico, y son más fotoestables que la fluorescencia. Las tintas de cianina son seleccionas preferentemente de los grupos que consisten en carbacianinas, oxacianinas, tiacianinas y azacianinas, que se muestran a continuación a través de las fórmulas generales.

Fórmula VI: Carbacianinas Fórmula Vil. Oxacianinas Fórmula VIII. Tiacianinas Fórmula IX. Azacianinas En estas estructuras, los grupos J1 son los mismos ó diferentes y son grupos alquilo sustituidos o no sustituidos, preferentemente alquilos C1 a C6 y pueden comprender un éter ó un grupo N-CO-N. Los grupos alquilo son sustituidos opcionalmente con carboxi, ácido sulfónico, amina, amonio y grupos éster. Los grupos J1 pueden formar puentes con cualquiera de los átomos de carbono de las cadenas de polieno, por ejemplo a través de un grupo -N-CO-N- ó un grupo éter. Los grupos J2 también son los mismos ó diferentes y son grupos alquilo sustituidos ó no sustituidos. Los grupos alquilo son opcionalmente sustituidos con grupos carboxi ó de ácido sulfónico, aunque preferentemente los grupos J2 son grupos alquilo inferior, tales como alquilos C1 a C6, y más preferentemente grupos metilo. Los grupos aromáticos opcionales son indicados mediante líneas punteadas, para cubrir ambas estructuras que comprenden anillos benzocondesados y anillos naftocondensados. Los anillos son sustituidos ó no sustituidos. Los anillos pueden ser sustituidos con grupos de ácidos sulfónicos, grupos carboxílicos, grupos hidroxilo, grupos alquil(sulfoalquilo), grupos bis(sulfoalquilo)amino, grupos sulfoalcoxi, grupos sulfoalquilsulfonilo, grupos alquilo o alquilo sustituido ó sulfoalquilamino. Los grupos alquilo son preferentemente alquilos inferiores, por ejemplo, con de 1 a 6 átomos de carbono. Y es seleccionado de un grupo de hidrógeno, un grupo haluro, un grupo amino ó un grupo sulfonilo, y es preferentemente hidrógeno. La cadena de polieno de la tinta de cianina también puede contener uno ó más grupos cíclicos que forman puentes de dos ó más átomos de carbono de la cadena de polietileno, por ejemplo, incluyendo un grupo -CO- entre dos de los átomos de carbono de la cadena, tal como en las tintas de escuarina, ó incluyendo un puente alquilo. Estos puentes deben servir para incrementar la química ó fotoestabilidad de la tinta. En las fórmulas VI a IX, I es un entero positivo 1,2,3 ó 4 que proporciona tintas de trimetinecianina que tiene un puente de carbono de tres átomos de carbono, de cianina, de pentiametina, de heptametina, ó nonametina. Preferentemente la tinta de cianina es una tinta con puentes de carbono de 3, 5 ó 7 átomos de carbono, respectivamente. J1 y J2 son sitios de enlace potenciales para el enlace de la tinta a la porción de dirección V, opcionalmente a través de un porción enlazadora L, siendo J1 la preferida. En un aspecto preferido, se enlaza una J1 a la porción de dirección V, en tanto que otro grupo R1 es un grupo alquilo C1 a C6 sustituido opcionalmente. Las descripciones adicionales de porciones adecuadas en procedimiento de generación de imagen óptica, se encuentran en la Publicación Número WO 2005/003166, cuyo contenido está incorporado a la presente invención como referencia. La porción V del compuesto de la fórmula (I) comprende la secuencia de aminoácido X3-G-D que tiene la afinidad con áreas de formación de colágeno. El compuesto comprende preferentemente aminoácidos, y porciones opcionales adicionales, en donde la secuencia X3-G-D es el asiento de enlace del vector peptídico, el cual funciona como un vector que enlaza a un área de formación de colágeno. El compuesto de la fórmula (I) de la presente invención puede estar restringido por ejemplo, por la formación de uno ó más puentes de ciclado en la parte del vector peptídico. Se puede obtener un compuesto de péptido monocíclico mediante la formación de un enlace de disulfuro o un enlace de tioeter entre los aminoácidos. Los compuestos de la fórmula (I) comprenden preferentemente dos puentes de ciclado entre diferentes aminoácidos de los compuestos. El termino "puentes de ciclado" se refiere a cualquier combinación de aminoácidos o con aminoácidos y los grupos -(CH2)n- ó los grupos -(CH2)n-C6H4 con grupos funcionales que permiten la introducción de un puente, n representa un entero positivo de 1 a 10. Los ejemplos preferidos son disulfuros, miméticos de disulfuros, tales como el puente -(CH2)4- puentes de tioacetal, puentes de (ciastatona ó lantionina) y puentes que contienen éster y esteres. Preferentemente, un puente forma un enlace disulfuro y un segundo enlace comprende un puente de tioéter (sulfuro). En una modalidad adicional el vector de la fórmula V de la fórmula (I) es representado por la fórmula (VI) Ra-C( = O)-X1-X2-X3-G-D-X4-X5-X6 (IV) y comprende dos puentes de ciclado, en donde, X-A representa un enlace covalente ó 1,2,3, 4 ó 5 residuos de aminoácidos en donde uno de los residuos de aminoácido en funcionarizado opcionalmente con una porción enlazadora L y preferentemente dichos residuos de aminoácidos poseen una cadena lateral funcional, tal como un grupo ácido ó de amina, seleccionado preferentemente de ácido aspártico ó ácido glutámico, lisína, ornitina, ácido diaminobutilico ó ácido diaminopriopónico; X2 y X4 representan independientemente residuos de aminoácidos con la capacidad de formar un puente de ciclado, tal como residuos de cisteina ú homocisteina que forman enlaces de sulfuro o tioeter, ú otros residuos de aminoácidos con la capacidad de formar un puente de ciclado, tal como ácido aspártico y lisina, preferentemente X2 y X representan residuos de cisteina ú homocisteina; X3 representa arginina, N-metilarginina ó un mimético de arginina ; X5 un aminoácido hidrófobo derivado del mismo y representa preferentemente una tirocina, una fenilalanina, 3-yodo-tirosina o un residuo de nafatalalanina, y más preferentemente un residuo de fenilalanina o 3-yodo-tirosina; X6 representa un residuo de aminoácido con la capacidad de formar un puente de ciclado, presentemente un residuo de aminoácido que contiene tiol, preferentemente un residuo de cisteina ú homocisteina; y Ra representa las porciones -(CH2)n- ó -(CH2)n-C6H con la capacidad de formar un puente ya sea para X2, X4, X6; y n representa un entero positivo de 1 a 10. En un aspecto de la presente invención la porción L de la fórmula (I) representa un porción biomodificadora homogénea basada preferentemente en un bloque de construcción PEG monodisperso que comprende de 1 a 10 unidades del bloque de construcción, teniendo el biomodificador la facultad de modificar las farmacocinéticas y rangos de despeje sanguíneo de dichos agentes. Además L puede también puede representar de 1 a 10 ejes de aminoácidos, preferentemente lisina, ácido aspártico o serina. En una modalidad preferida, L representa una unidad biomodificadora que comprende una estructura tipo PEG monodispersa, el ácido 17-amino-5-oxo-6-aza-3,9, 12, 15-tetraoxaheptadecanoica de la fórmula (V), (V) en donde m es igual a un entero de 1 a 10 y en donde la unidad de terminal-C es una porción de amida. Tal como se observó anteriormente, el biomodificador, L, modifica las farmacocinéticas y rangos de despegue en la sangre de los compuestos. Los efectos biomodificadores disminuyen la captación de los compuestos de los tejidos, es decir, en músculos, hígados, etc., proporcionando de esta forma una mejor forma de diagnóstico de imagen de resultado de menos interferencia de fondo. La secreción es principalmente a través de los riñones y esto agrega una ventaja adicional del biomodificador. L puede representar además una porción derivada preferentemente de ácido glutárico y/o ácido succínico y/o una unidad a base de polietilénglicol y/o una unidad de la fórmula (V), tal como se ilustró anteriormente. Otros elementos L representativos, incluyen, polisacáridos tipo estructural, polisacáridos tipo almacenamiento, poli aminoácidos, y esteres de metilo y etilo de los mismos, polipéptidos, oligosacáridos y oligonucleótidos, los cuales pueden o no contener sitos de disociación de encimas. Los péptidos de la presente invención, pueden ser sintetizados, utilizando métodos mediante síntesis química, pero particularmente útil, es la metodología de fase sólida de Merrifiel que emplea un sintetizador de péptido automático ( J. Am. Chem. Soc., 85:2149 (1964)). Los procedimientos estándar para la estrategia de síntesis, se describen en la publicación de E. Atherton & R.C. Sheppard, "Solid phase peptide synthesis: a practical approach, 1989, IRL Press, Oxford. Se utiliza una resina de síntesis con un grupo enlazador lábil-ácido al cual se adhiere el residuo de aminoácido de terminal-C protegido deseado, mediante la formación de amida. Por ejemplo, se puede aplicar una resina denominada AM de amida Rink con un enlazador derivado de (dimetoxifenil-aminometil)-fenox¡ (Rink, H (1987), Tetrahedron Left. 30., p.3787). La disociación ácidolíptica de este péptido de esta resina, producirá una amida de péptido. Como alternativa, se puede utilizar una resina de tritilo de O-Bis-(aminoetil)etileno glicol (K Barios, y asociados (1988), Liebings Ann. Chem, p 1079) ya que al momento de la disociación ácidoliptica se produce un péptido con manejo de amina primario. Las resinas de peptidilo se ensamblan en una dirección de terminal-C a terminal-N. El grupo de protección de amino-N del amino de terminal-C se elimina primero y el segundo aminoácido de la secuencia se acopla utilizando un reactivo de condensación adecuado. Los ciclos de desprotección y acoplamiento de amino-N se repiten posteriormente en pasos alternativos, hasta que se ensambla la secuencia deseada. Generalmente, todos los grupos reactivos presentes son protegidos durante la síntesis de péptidos. Se conoce un amplio rango de grupos de protección de aminoácidos (ver por ejemplo, Greene, T.w: & Wuts, P.G.M. (1991) Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York). Se puede utilizar una estrategia de grupo de protección ortogonal (Barany, G, y asociados (1977), J. Am. Chem. Soc, 99., p. 7363). Por ejemplo, el combinar diferentes grupos de protección de amina tal como el grupo 9-fluoronilmetoxi-carbonilo (Fmoc) lábi l-piperid ina con el grupo 4-metiltritilo (Mtt) superlabil-ácido, el grupo 2-acetildimedona (Dde) lábil-hidracina y el grupo ter-butiloxicarbonilo (Boc) labil-ácido, es posible introducir en forma selectiva diferentes porciones en sitios de amina. Además, al combinar el grupo de protección tritilo (Trt) lábi l-ácido de la cadena lateral Cys con la protección ter-butilio de otros residuos Cys (lábil bajo condiciones oxidativas acidas, por ejemplo, TFA-2% dimetilsulfoxido) se logra la formación de disulfuro selectiva.

Las resinas de peptidilo completadas, pueden ser cloro acetiladas en el termino-N y producir un puente de tíoéter entre el termino-N y el residuo Cys Los péptidos son etiquetados con 99mTc y tratan un compuesto disuelto de solución regulada destilada y libre de oxigeno (pH aproximadamente 9) y manteniendo bajo atmósfera de nitrógeno con solución Sn-MDP y Na99mTcO4 tal como se sabe en el estado de la técnica. La presente invención se ilustra en forma adicional a través de los ejemplos sin limitación del 1 al 4. Los ejemplos describen las síntesis de compuestos con dos diferentes porciones Z y/o YTM . También se describe la etiquetación de los compuestos con 99m Te. La posición de los diversos aminoácidos en los péptidos se visualiza mediante la numeración (por ejemplo Cys2) Ejemplos. Eiemplo 1 Cys2-6; c[CH2CO-Lys(N-(5-sulfo-naftalino-2-il)-Succ)-Cys-Arg- Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-GlutcPn216-NH2 (4) y su quelado 99m Te (4a) Síntesis de fase sólida de resina MBHA de amida Rink-CICh CO- Lvs-Cvs(tBu)-Arq(Pmc)-Glv-Asp(tBu)-Cvs(tBu)-Phe-Cvs(Trt)-Glv- Lvs(Boc)-1 La resina de peptidilo que corresponde a la secuencia anterior, se ensambló mediante química de péptido de fase sólida estándar (Barany, G; Kneib-Cordonier, N; Cordonier, N; Mullenm D.G. (1987) Int. J. Peptide Protein Research 30, 705-739) en una resina MBHA de amida Rink (0.73 mmol/g; de NovaBiochem) se utilizó un sintetizador de péptido modelo 433A de Applied Biosystems (Perkin Elmer). Los residuos (del termino carboxilo) fueron ensamblados en una escala de 0.25 mmol utilizando acoplamientos simples con un exceso molar de cuatro veces de aminoácidos protegidos con Na-Fmoc, (cartuchos 1 mmol) y 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio-hexafluorofosfato (HBTU)/1-hidroxi-benzotriazole (HOBt)diisopropilatil-amina(DIEA) en N-metilpirrolidina (NMP) utilizando ciclos de acoplamiento de 2.5 horas. Se logró la desprotección-Fmoc con monitoreo de conductividad utilizando 20% de piperidina con NMP. Los grupos de protección de la cadena lateral-aminoácidos utilizados fueron 4-metiltritilo (Mtt) para Lys1, fer-butilo (tBu) para Cys2, Cys6 y Asp,2,2,5,7,8-pentametilcromano-6-sulfonilo (Pmc) para Arg, tritilo (Trt) para Cys8, y fer-butiloxicarbonilo (Boc) para Lys10. La resina de peptidilo ensamblada se transfirió posteriormente a un aparato de generación de burbujas de nitrógeno manual (Wellings, D.A., Atherton, E. (1997) in Methods in Enzymology (Fields, G. ed), 289, p. 53-54, Academic Press Nueva York). El termino-N fue desprotegido-Fmoc y posteriormente cloroacetilado en dimetilformamida, (DMF) utilizando un exceso molar de 10 veces del anhídrido simétrico formado haciendo reaccionar ácido-cloro-acético (20 eq) con N.N'-diisopropilcarbodiimida (Dlc) (10eq) en diclorometano (DCM). El grupo de protección-Mtt en NE-Lys1 fue eliminado en forma selectiva tratando la resina de peptidilo con DCM que contiene 5% de triisopropilsilano (TIS) y 1% de ácido trifluoroacético (TFA) durante 5 x 2 minutos ó hasta que el filtrado se volvió incoloro. La resina de peptidilo completada, resina MBHA de Amida de Rink CICH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg(Pmc)-Gly-Asp(tBu)-Cys(tBu)-Phe-Cys(Trt)-Gly-Lys(Boc)-1 fue neutralizada con 5% DIEA en DMF y finalmente lavada con DMF y DCM y secada in vacuo. Sintesis de Cvs2-6; crCH?CO-Lvs(N-(5-sulfo-naftaleno-2-in-Succ)-Cvs-Ara-GIv-Asp-Cvs-Phe-Cvs-Phe-Cvsl-GIv-Lvs-NH? 3 Se disolvió Ácido 6-Amino-1 -naftalenosulfónico (ácido de Dahl) (1eq, 0.5 mmol,) en DMF que contiene N-metilmorfolina (NMM) (2 eq) y se agregó posteriormente anhídrido succínico (10 eq). Después de la reacción durante la noche el solvente se eliminó bajo presión reducida y el producto se purificó mediante RP-HPLC de preparación (Reversed Phase HPLC). La columna (Phenomenex Luna C18 10µ 22 x 250 mm) fue extraída con solventes en 10 ml/min con un gradiente de 5 a 15 % de acetonitrilo (ACN) en 0.1% TFA acuoso durante 40 minutos. Las fracciones pico deseadas recolectadas en seis corridas consecutivas fueron reunidas y liofilizadas produciendo 146 mg de ácido N-(-5-Sulfo-naftaleno-2-il)succinámico puro 2. RP-HPLC Analítico: tR = 16.7 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 5- % ACN en 0.1 % de TFA acuoso durante 20 minutos en un rango de 1 ml/min, =214 nm). MS de Electrorocio [M + H]+ de producto esperado en 324.0 m/z encontrado 324.0 m/z. Se agregó una solución de ácido N-(5-Sulfo-naftaleno-2-il)-succinamico 2 (5 eq) y N-oxido de hexafluorofosfato de N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetileno]-?/-metilmetanamino (HATU) (5 eq) en DMF que contiene NMM (15 eq) a la resina de peptidilo 1. La reacción se dejó en proceso durante la noche en un aparato de generación manual de burbujas de nitrógeno. La resina de péptido obtenida fue tratada posteriormente con TFA que contiene 2.5% TIS y 2.5% con agua, con el objeto de disociar de la resina el péptido protegido con Cys26fBu, eliminando al mismo tiempo y de manera simultanea todos los grupos de cadena lateral del péptido. El residuo de la resina fue filtrado y lavado con pequeñas cantidades de TFA puro. El filtrado combinado y los lavados fueron concentrados mediante evaporación giratoria y posteriormente triturados con éter dietílico para obtener el péptido crudo. El precipitado fue aislado mediante centrifugación y lavado con éter y posteriormente reutilizado a partir de 50% ACN-0.1% TFA acuoso, que produce 60 mg de producto crudo. El péptido lineal fue ciclado posteriormente, primero mediante formación de puente de tioéter efectuada agitando el péptido en un rango de 0.5 mg/ml en 50% de ACN-agua en un pH 7.5 (ajustado mediante amonio liquido) durante 60 minutos a RT. El producto ciclado fue aislado mediante liofilización. Posteriormente, el puente de disulfuro interno se formó mediante desprotección-fBu y formación simultánea de disulfuro en TFA-2% dimetilsulfoxida en un rango de 0.5 mg/ml durante 60 minutos a RT. Se eliminó TFA bajo presión reducida y el péptido fue aislado del éter y secado tal como se describe anteriormente, produciendo 62 mg de producto cíclico. El péptido crudo fue purificado mediante RP-HPLC de preparación. Se diluyó la columna (Phenomenex Luna C18 10µ, 50 x 250 mm) en 50 ml/min con un gradiente del 15 al 20% ACN en 0.1% de TFA acuoso durante 60 minutos. Las fracciones pico deseadas fueron reunidas y liofilizadas produciendo 12 mg del producto puro 3. RP-HPLC Analítico: tR = 12.9 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 15-25% ACN en TFA acuoso en 0.1% durante 20 minutos en un rango 1 ml/min, =214 nm). MS de electrorocío: [M + H]+ del producto esperado 1458.5 m/z, encontrado 1458.2 m/z. Conjugación de cPN216-glutarilo a péptido 3 Se agregó una solución de éster cPN216-glutaril-tetrafluorotiofenílico (2 eq) en DMF a una solución del péptido 3 (1 eq, 0.008 mmol) en DMF, seguido de NMM (6 eq). Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se trabajó eliminado el solvente bajo presión reducida seguido de RP-HPLC de preparación. La columna (Phenomenex Luna C18 10µ, 22 x 250 mm) fue extraída con solventes en un rango de 10 ml/min con un gradiente del 13 al 20% de ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 60 minutos. Las fracciones deseadas recolectadas pico fueron reunidas y liofilizadas produciendo 8 mg del producto puro 4. RPHPLC Analítico: tR = 18.4 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 15-25% ACN acuoso al 0.1% en TFA acuoso durante 20 minutos en un rango de 1 ml/min, =214 nm) MS de electrorocío [M + H]2+ de producto esperado en 949.4 m/z encontrado en 949.5 m/z. Etiquetación-99mTc de péptido 4 El péptido 4 (0.1 mg) fue reconstituido en solución sólida ó metanol (0.1 mg) y transferido en un equipo de excipientes Toolbox secados por congelación. El equipo Toolbox, diseñado para proporcionar condiciones de radioetiquetación genéricas para quelados a base de aminas, contenían deshidrato de fluoruro de estañoso (16 µg), ácido metileno difosfónico (25 µg), carbonato de hidrógeno de sodio (4500 µg), carbonato de sodio (600 µg), para-aminobenzoato de sodio (200 µg), equipo pH = 9.2. Posteriormente se agregó una inyección de pertecnetato de sodio (99 Tc) (2.1 GBq) en solución salina (3 ml), el equipo fue invertido unas cuantas veces para disolver los contenidos y posteriormente se dejó incubar a temperatura ambiente durante 15-20 min. Se analizó una muestra inmediatamente mediante HPLC y ITLC y se administró péptido etiquetado con 99mTc al sujeto de prueba entre 1 y 3 horas de la reconstitución del equipo.

Eiemplo 2 Cys2-6; c[CH2CO-Lys(N-[5-sulfo-naftaleno-2-i])-Succ-Lys(N-5[-sulfo-naftaleno-2-il]-Succ-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly- Lys(Glut-cPn216)-NH2 (9) y su quelato 99mTc (9a) Síntesis de Cvs2-6; crCH?CO-Lvs-Cvs-Arq-Glv-Asp-Cvs-Phe-Cvs1-Glv-Lvs(Glut-cPn216)-NH, 7 La resina de peptidilo 1, que se describe en el ejemplo 1 anterior, fue protegida con NE-Lys1 mediante tratamiento con una solución de 2-acetildimedona (Dde-OH) en DMF durante dos horas utilizando un aparato de generación manual de burbujas de nitrógeno. El péptido parcialmente protegido fue disociado de la resina al momento del tratamiento con TFA, que contiene 2.5% TIS y 2.5% de agua durante 2 horas la mezcla de reacción fue trabajada y el péptido fue aislado del éter y liofilizado tal como se describe anteriormente en le Ejemplo 1, produciendo 70 mg de CICH2CO-Lys(Dde)-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-Lys-NH2 5. El péptido lineal 5, fue ciclado mediante formación de puente de tioéter tal como se describe en el ejemplo 1, y el producto crudo (78 mg) fue purificado mediante RP-HPLC de preparación. La columna (Phenomenex Luna C18 10µ, 50 x 250 mm) fue extraída con solventes en un rango de 50 ml/min con un gradiente del 20 a 45 % ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 60 minutos. Las fracciones picos deseadas fueron reunidas y liofilizadas para producir 26 mg de C[CH2CO-Lys-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-Gly-Lys-NH2 purificado 6. RP-HPLC Analítico: tR = 16.35 min (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 20-50% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 20 minutos en un rango de 1 ml/min, =214 nm). MS de electrorocío: [M + H]2+ de producto esperado en 716.8 m/z encontrado en 716.7 m/z. El éster cPN216-glutaril-tetrafluorotiofenilico de quelado (2 eq) en DMF se agregó posteriormente al péptido 6 (1 eq, 0.009 mmol) seguido de NMM (3 eq) y la mezcla se agitó durante la noche. Posteriormente el grupo en Dde en NE-Lys1 fue eliminado agregando suficiente hidracina a la mezcla de reacción para producir una solución al 2%. Después de 30 minutos, el solvente fue eliminado bajo presión reducida y el producto fue aislado mediante precipitación y la liofilización tal y como se describe anteriormente. Se llevó a cabo la desprotección íBu final y la formación de disulfuro del péptido tal como se describe en el ejemplo 1 produciendo 18 mg de péptido 7. Introducción de una porción de ácido Dah'l ramificado NE-Lys1 en la posición del péptido 7 Se agregó una solución de N-(Na E-di-Boc-lsiloxi)succinimida (3 eq) en DMF al péptido 7 (1 eq, 0.006 mmol) NMM (5 eq) por medio de NMM (5 eq). Después de 18 horas, la reacción se completó y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo de péptido se trató con TFA que contiene 2.5% TIS y 2.5% de agua durante 15 minutos, produciendo Cys2-6; c[CH2CO-Lys(N-Lys)-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-Lys(Glut-cPn216)-NH2 8, el cual se aisló mediante precipitación y se liofilizó tal y como se describe anteriormente. Se activó ácido N-(-5-Sulfo-naftaleno-2-il)succinámico (10 eq) mediante HATU (10 eq) en DMF que contiene NMM (30 eq). Después de 30 minutos, la mezcla se agregó a una solución de péptido 8 (1 eq) en DMF y la reacción se dejó proceder durante 24 horas. La mezcla se trabajó tal y como se describió anteriormente y el producto de péptido liofilizado fue purificado mediante RP-HPLC de preparación. Se diluyó la columna (Phenomenex Luna C18 10µ, 10 x 250 mm) en un rango de 5 ml/min con un gradiente de 10 a 30% ACN en FTA acuoso al 0.1% durante 40 minutos. Las fracciones pico fueron reunidas y liofilizadas 2mg del péptido puro. RP-HPLC analítico: tR = 17.4 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 5-30% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 20 minutos en un rango de 1ml/min, =214 nm). MALDI-TOF MS: [M + H]+ del producto esperado a 2330.95 m/z, encontrado en 2330.27 m/z. Etiquetacion-99mTc del péptido 9 El péptido 9 fue etiquetado con 99mTc bajo las condiciones de etiquetacion del péptido 4 en el Ejemplo 1. Eiemplo 3 Cvs2-6: crCH?CO-Lvs-(Cv5.5)-Cvs-Arq-Glv-Asp-Cvs-Phe-Cvs1-Glv-Lvs(Glut-cPn216)-NH? 10 su quelado 99mTc (10a) Acoplamiento de Cy5.5 del péptido 7 Se disolvió éster de Cy5.5-N-hidroxisuccinimida (2 eq) en NMP y la solución se agregó al péptido 7 (1 eq 0.005 mmol) seguido de NMM (5 eq). La reacción se dejó proceder durante la oscuridad durante 2 días. Posteriormente la mezcla de reacción se concentró mediante evaporación giratoria a una temperatura de 45° C y posteriormente de diluyó con TFA acuoso al 0.1% y se purificó mediante RP-HPLC de preparación. La columna (Phenomenex Luna C18 10µ, 22 x 250 mm) fue extraída con solventes en un rango de 10 ml/min en un gradiente de 15 a 30% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 60 minutos. Las fracciones pico deseadas se reunieron y liofilizaron para producir 3.2 mg del péptido 10 puro. RP-HPLC Analítico: tR = 20.9 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 15-30% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 20 minutos en un rango de 1ml/min, =214 nm). MS de electrorocío : [M + H]2+ de producto esperado en 1245.97 m/z, encontrado en 1246.1 m/z Etiquetación-99 Tc del péptido 10 Se etiquetó el péptido 10 con 99mTc bajo las condiciones para etiquetación del péptido 4 en el Ejemplo 1. Ejemplo 4 Cys2-6; c[CH2CO-Lys(8-tiouril-pireno-1 ,3,6-trísulfonico ácido)-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys]-Gly-BAEG-Glut-cPn216 14 su quelado 99mTc (14a) Síntesis de Cvs2-6: crCH?CO-Lvs-Cvs-Arq-Glv-Asp-Cvs-Phe-Cvsl-Glv-BAEG-Glut-cPn216 13 La resina de peptidilo que corresponde a la secuencia anterior, se ensambló en una resina de tritilo de O-Bis-(aminoetilo)etilénglicol (BAEG) (0.44 mmol/g; de NovaBiochem) en un modo similar a la resina de peptidilo del ejemplo 1. El grupo de protección utilizado fue NE-Lys1 con etilo 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohex-1-ilidede)etilo (Dde). Posteriormente la resina de peptidilo ensamblada se transfirió a un aparato de burbujas de nitrógeno manual, el termino-N se desprotegió Fmoc y posteriormente se cloroacetiló utilizando un exceso molar de 10 veces de anhídrido simétrico en DMF, formado haciendo reaccionar ácido cloro acético (20 eq) con DIC (10 eq) en DCM. La disociación del péptido parcialmente protegido de la resina se llevó acabo tratando la resina de peptidilo con TFA que contiene 2.5% TIS 2.5% de agua durante 2 horas. La mezcla de reacción se trabajó y el péptido CICH2CO-Lys(Dde)-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys-Gly-DEG-NH2 11 se aisló del éter y se le liofilizó tal y como se describe anteriormente en el Ejemplo 1. El péptido lineal 11 (30 mg) fue ciclado mediante formación de puente de tioeter, tal y como se describe en el ejemplo 1 y el producto se purificó mediante RP-HPLC de preparación. La columna C-18 (Vydac 218TP1022, 10µ, 22 x 250 mm) se extrajo con solventes en un rango de 10 ml/min con un gradiente de 25 a 40% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 60 minutos. Las fracciones pico deseadas fueron eliminadas y fueron liofilizadas 15 mg del péptido purificado C[CH2CO-Lys(Dde)-Cys(tBu)-Arg-Gly-Asp-Cys(tBu)-Phe-Cys]-Gly-DEG-NH2 12. RP-HPLC analítico: tR = 19.2 min, (Phenomenex Luna 5µ, 4.6 x 250 mm, 25-40% ACN en TFA acuoso en 0.1% durante 20 minutos en un rango de 1ml/min, =214 nm). MS de electrorocío: [M + H]+ del producto esperado 1434 m/z., de encontrado en 1434.6 m/z Se disolvió el péptido 12 (1 eq, 15 mg) en DMF y se agregó éster cPN216-glutaril-tetrafluorotio-fenílico (2 eq) seguido de NMM (3 eq) y la mezcla se agitó durante la noche. El grupo-Dde en NE-Lys1 se eliminó posteriormente agregando suficiente hidrocína para producir una mezcla de reacción a una solución al 2%. Después de 30 minutos el solvente se eliminó bajo presión reducida y el producto se aisló mediante precipitación y liofilización tal y como se describió anteriormente. La desprotección fBu final y la formación de disulfuro del péptido se realizó tal y como se describe en el ejemplo 1. El péptido 13 ciclado completamente produjo 18 mg. Conjugación de ácido8-isotiocianatopirena-1 ,3.6-trisulfonico al péptido 13 Se disolvió el péptido 13 con (1 eq, 5 mg) en DMF y se ajustó el pH a 8 agregando NMM en pequeñas alícuotas. Posteriormente se agregó sal trisódica de ácido 8-isotiocinatopirena-1 ,3,6-trísulfónico (5 eq) y la mezcla de reacción se agitó durante toda la noche. La reacción se monitoreó durante la noche RP-HPLC y análisis MS, y el producto se purificó mediante RP-HPLC de preparación. La columna (Phenomenex Luna c18 10µ, 22 x 250 mm) fue extraída con solventes en un rango de 10 ml/min, con un gradiente de 5 a 60 % ACN en TFA acuoso de 0.1% durante 60 minutos. Las fracciones pico deseadas fueron reunidas y liofilizadas produciendo 0.8mg. RPHPLC Analítico: tR = 2.04 min, (pico amplio) (Phenomenex Luna 3µ, 4.6 x 5 mm, 10-80% ACN en TFA acuoso al 0.1% durante 10 minutos en un rango de 2 ml/min, =214 nm). MS de electrorocio: [M + H]2+ del producto esperado en 1047.8 m/z encontrado en 1048.2 m/z. Etiquetación-99mTc de péptido 14 Se etiquetó el péptido 14 con 99mTc bajo las condiciones que se describen para la etiquetación del péptido 4 en el Ejemplo 1. Listado de Secuencias <110> Amersham Healt AS <120> Agente de contraste <130> PN0466 <160> 3 <170> versión patente 3.1 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <221> THIOETH <222> (1) ... (8) <223>péptido sintetizado <220> <221> DISULFID <222> (2)..(6) <223> Puente de disulfuro entre residuo 2 y 6 <400> 1 Lys Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys Gly Lys 1 5 10 <210> 2 <211> 11 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Puente de tioeter entre residuo 1 y 9 <220> <221> THIOETH <222> (1)..(9) <223> Puente de disulfuro entre residuo 2 y 6 <220> <221> DISULFID <222> (2)..(6) <223> <400> 2 Lys Lys Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys Gly Lys 1 5 10 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <221> THIOETH <222> (1)..(8) <223> Puente de tioeter entre residuo 1 y 8 <220> <221> DISULFID <222> (2)..(6) <223> Puente de disulfuro entre residuo 2 y 6 <400> 3 Lys Cys Arg Gly Asp Cys Phe Cys Gly 1 5

Claims

R E I V I N D I C A C I O N E S 1. Un agente de contraste de la fórmula general (I) Z?-L-V-Z2 (I) en donde al menos uno de Z^ y Z2 están presentes y son porciones reporteras detectables en generación de imagen in vivo del cuerpo humano ó de un animal, V es una porción de dirección que enlaza a áreas de formación de colágeno y matriz extracelular, L es un enlace covalente, un biomodificador ó una porción enlazadora.
2. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 1, caracterizado porque V comprende la secuencia de aminoácido -X3-G-D, donde X3 representa arginina, N-metilaginina ó un mimético de arginina
3. Un agente de contraste tal y como se describe en las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque V es una porción de la fórmula (VI) Ra-C( = O)-X1-X2-X3-G-D-X4-X5-X6 (VI) que comprende dos puentes de ciclado, en donde, Xi representa un enlaza covalente ó 1, 2, 3, 4, ó 5 residuos de aminoácidos; X2 y X4 representan independientemente residuos de aminoácido con la capacidad de formar un puente de ciclado, X3 representa arginina, N-metilarginina ó un mimético de arginina; X5 un aminoácido hidrófobo ó derivado del mismo X6 un residuo de aminoácido con la capacidad de formar un puente de ciclado, Ra representa las porciones de -(CH2)n- ó -(CH2)n-C6H4-que tienen la capacidad de formar un puente para cualquiera de X2, X4 ó X6: y n representa un entero positivo de 1 a 10.
4. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 3, caracterizado porque: Xi representa 1, 2, 3, 4 ó 5 residuos de aminoácido al menos uno de los residuos de aminoácido posee un cadena lateral, tal como un grupo de ácido ó amina, seleccionado preferentemente de ácido aspártico glutámico, lisina, ornitina, ácido diaminobuíirico, ó ácido diaminopropiónico;
5. Un agente de contraste tal y como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones 3 ó 4, caracterizado porque: X2 y X4 representan independientemente residuos de cisteina ó homosisteina que forman enlaces de disulfuro ó tioeter ó residuos de aminoácidos con la capacidad de formar una puente de ciclado, tal como ácido aspártico y lisina.
6. un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 5, caracterizado porque: X2 y X4 representan independientemente residuos de cisteina u homosisteina
7. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 6, caracterizado porque: X5 representa una tirosina, una fenilalanina, una 3-yodo-tirosina o un residuo de naftilalanina.
8. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 7, caracterizado porque: X6 representa un residuo de aminoácido que contiene etilo.
9. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 8, caracterizado porque: X6 representa un residuo de cisteina ú homocisteina.
10. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque L representa un péptido que comprende de 1 a 10 residuos de aminoácidos.
11. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicación anteriores, caracterizado porque L representa residuos de glicina, licina, ácido aspártico, ó serina
12. Un agente de contraste tal como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 9, caracterizado porque L comprende una ó más unidades de ácido dicarboxílico, unidades de etilénglicol o componentes tipo PEG o combinaciones de los mismos.
13. Un agente de contraste tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de 1 a la 9 y la 12, caracterizado porque L comprende una o más unidades de d icl icol ilo , glicolilo, ó succinilo ó combinaciones de las mismas.
14. Un agente de contraste tal como se describe en cualquiera de las reivindicación 1 a la 9 y la 12 y 13, caracterizado porque L representa una unidad modificadora que comprende una estructura tipo PEG de monodispersion de ácido 17-amino-5-oxo-6-aza-3,9,12,15-tetraoxaheptadecanoico de la fórmula (V) (V) en donde m es igual a un entero de 1 a 10 y en donde la unidad Terminal-C es una unidad de amida.
15. Un agente de contraste tal y como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque Zi y Z2 representan porciones iguales ó diferentes que emiten radiación y/o afectan los campos electromagnéticos y/o absorben energía de radiación.
16. Un agente de contraste tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque Z^ y Z2 representan porciones repetidas que representan imágenes en las modalidades SPECT, PET o en la generación de imágenes ópticas
17. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 15, caracterizado porque al menos uno de Z? y Z2 comprenden un radionúclido de no metal enlazado en forma covalente a las porciones V y/o L.
18. Un agente de contraste tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizado porque al menos una de Z, y Z2 comprende 11C, 18F, 123l y/o 131l.
19. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 18, caracterizado porque al menos una de Z^ y Z2 representa porciones reporteras de la fórmula YiM, en donde M es un entidad de metal, preferentemente una entidad de Ion metálico y Y: es un agente de quelación con la capacidad de enlazar V y/o L y que transporta M.
20. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque Yi es un agente de quelacion de la fórmula (II) (II) en donde cada uno de R1, R2, R3 y R4 que representa independientemente H, C^o alquilo, C3-10 alquilarilo, C2.10 alcoxialquilo, ^0 hidroxialquilo, C1. Q alquilamina, C?-10 fluoroalquilo o dos o más grupos R, junto con los átomos a los cuales están adheridos, forman un anillo carbocíclico, heterocíclico, saturado ó ¡nsaturado.
21. Un agente de contraste tal y como se describe en la reivindicación 20, caracterizado porque un agente de quelacion de la fórmula (lll) ("
22. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 19 a la 21, caracterizado porque la porción representa readionúclidos de metal, iones de metal paramagnéticos, iones de metal fluorescentes, o iones agrupados.
23. Un agente de contraste tal y como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 19 a la 22, caracterizado porque la porción M es seleccionada del grupo que comprende 90Y, 99mTc, 11ln, 47Sc, 67Ga, 51Cr, 177mSn, 67Cu, 167Tm, 97Ru, 188Re, 177Lu, 199Au, 203Pb, 141Ce ó 18F.
24. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones de la 15 a 23, caracterizado porque una de las porciones de Z y Z2 es una tinta de cianina que comprende dos ó más porciones de ácido sulfónico y otra de las porciones Z y Z2 es una porción de la fórmula (lll) etiquetada con un radioemisor
25. Un agente de contraste tal como se describe en la reivindicación 19, caracterizado porque el agente de quelacion Y es DOTA.
26. Un agente de contraste tal como se describe en cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la porción reportera es 99mTc o un isótopo de yodo SPECT para generación de imagen o un 11C, 18F ó 68Ga o un PET o un Gd3+ para generación de imagen MR.
27. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende una cantidad efectiva de un agente de contraste o de la fórmula general (I), o una sal de la misma junto o con más adyuvantes, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables para utilizarse para mejorar la generación de imágenes in vivo.
28. El uso de un agente de contraste de la fórmula I para la fabricación de un agente de contraste para utilizarse en un método de diagnóstico de una enfermedad asociada con la formación de colágeno
29. Un método para generar imágenes mejoradas del cuerpo de un humano o un animal, al que se le administra una composición de agente de contraste tal como se definió en la fórmula (I), en donde el método comprende generar una imagen de al menos una parte de dicho cuerpo.
30. Un método para generar imágenes mejoradas del cuerpo de un humano o un animal, al cual se le ha administrado previamente una composición de un agente de contraste tal como se define en la fórmula (I), en donde el método comprende generar una imagen de al menos parte del cuerpo.
31. Un equipo para la preparación de una composición radiofarmacéutica de la fórmula I, caracterizado porque comprende un conjugado de quelado-ligado y un agente de reducción.
32. El equipo tal como se describe en la reivindicación 31 caracterizado porque el agente de reducción es una sal estañosa.
33. El equipo tal como se describe en la reivindicación 31 y 32, caracterizado porque comprende además uno ó más estabilizadores, antioxidantes, agentes de generación de volúmenes para liofilización y solubilizadores. R E S U E N Un agente de contraste de la fórmula general (I): en donde se encuentra al menos uno de Z1 y Z2 y son porciones reporteras iguales ó diferentes detectables en generación de imágenes in vivo del cuerpo humano ó de un animal, V es una porción de dirección con afinidad de enlace para áreas de formación de colágeno, L es un enlace covalente, un biomodificador o una porción enlazadora.