MD1072Z - Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică - Google Patents

Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică Download PDF

Info

Publication number
MD1072Z
MD1072Z MDS20150151A MDS20150151A MD1072Z MD 1072 Z MD1072 Z MD 1072Z MD S20150151 A MDS20150151 A MD S20150151A MD S20150151 A MDS20150151 A MD S20150151A MD 1072 Z MD1072 Z MD 1072Z
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
antifungal activity
strain
pseudomonas aureofaciens
cnmn
psb
Prior art date
Application number
MDS20150151A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Людмила БАТЫР
Валерина СЛАНИНА
Тамара СЫРБУ
Original Assignee
Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы filed Critical Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы
Priority to MDS20150151A priority Critical patent/MD1072Z/ro
Publication of MD1072Y publication Critical patent/MD1072Y/ro
Publication of MD1072Z publication Critical patent/MD1072Z/ro

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică.Procedeul, conform invenţiei, prevede cultivarea tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.Rezultatul constă în majorarea activităţii antifungice a tulpinii după păstrare.

Description

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică, şi anume stimularea activităţii antifungice asupra diferitor tulpini de fungi fitopatogeni ca: Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger ce provoacă diferite boli la plantele de cultură. Datorită capacităţii de păstrare şi sporire a activităţii antifungice, procedeul dat poate fi utilizat la conservarea microorganismelor pe un termen îndelungat şi utilizarea acestora ca agenţi de prevenire şi protejare a plantelor de cultură de infectarea cu fitopatogeni.
Afectarea plantelor de cultură de către fitopatogeni duce la scăderea productivităţii lor, la micşorarea recoltei, precum şi la diminuarea calităţii produsului obţinut. Astfel, utilizarea microorganismelor în calitate de agenţi cu proprietăţi antimicrobiene pronunţate asupra fitopatogenilor ar permite atât majorarea productivităţii plantelor, cât şi îmbunătăţirea calităţii produsului.
În prezent este cunoscut un procedeu de stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 asupra fungilor fitopatogeni în urma liofilizării, utilizând ca mediu protector succinat de Na + 12% zaharoză, în rezultatul căruia, după 6 ani de păstrare, zonele de inhibiţie a patogenilor au atins valori de 21,3…28,0 mm, în dependenţă de test-cultura studiată, însă dezavantajul acestuia constă în aceea că proprietăţile antifungice sunt slabe şi mai puţin pronunţate după păstrarea îndelungată [1].
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui procedeu de stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07, în urma liofilizării, cu utilizarea unui mediu protector ce asigură stimularea proprietăţilor antifungice asupra fitopatogenilor, după 6 ani de păstrare. Procedeul revendicat constă în conservarea tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 cu capacitate antifungică prin liofilizarea acesteia, utilizând mediul de protecţie lapte degresat + 12% zaharoză. Zonele de inhibiţie a creşterii fitopatogenilor, după 6 ani de la conservare, ating valori de 28,0 mm pentru Fusarium oxysporum, 27,7 - Fusarium solani, 26,3 - Alternaria alternata, 28,0 - Botrytis cinerea şi 21,3 mm - Aspergillus niger.
Procedeul de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică prevede cultivarea tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de 10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.
Rezultatul constă în majorarea activităţii antifungice a tulpinii după păstrare.
Procedeul de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 permite stimularea evidentă a proprietăţilor antifungice asupra fitopatogenilor Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger după 6 ani de păstrare.
După 6 ani de cultivare tulpina Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 atinge titrul de 10-4…10-5 log 10 UFC ml-1, astfel după fiecare pasaj care durează 24…48 ore putem creşte titrul cu 2…3 unităţi, ceea ce ne permite de a obţine o cantitate suficientă de cultură pentru a asigura securitatea acesteia.
Creşterea proprietăţilor antifungice, pot fi influenţate de diferenţa conţinutului mediului de protecţie utilizat, astfel în componenţa laptelui care este un produs proteic intră un şir de macro- şi microelemente, fermenţi şi vitamine care ulterior joacă un rol foarte important în sporirea sintezei fermenţilor şi metaboliţilor secundari cu activitate antifungică.
Rezultatul tehnic al invenţiei este condiţionat de faptul că, pentru prima dată în calitate de mediu protector pentru liofilizarea tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 se utilizează lapte degresat + 12% zaharoză. Proprietăţile antifungice evidente sunt asigurate datorită resuspendării tulpinii în mediul dat, care asigură un efect protector faţă de şocurile osmotice şi termice şi nu permite acestora de a influenţa negativ sinteza metaboliţilor cu activitate antifungică.
Exemplu de realizare a invenţiei
Se prepară mediul nutritiv agarizat King B cu următorul conţinut al ingredientelor: peptonă - 20,0 g; glicerină - 15,0 mL; K2HPO4 - 1,5 g; MgSO4·7H2O - 1,5 g; agar - 15,0 g; apă distilată până la 1,0 litru; pH-ul 7,0…7,2. Pe mediul preparat, în tuburi înclinate, se reînsămânţează tulpina Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07, după 48 ore de incubare la +28…30°C, cultura se resuspendă în mediul protector lapte degresat + 12% zaharoză până la titrul de 10-8…10-9, se repartizează câte 1,0…2,0 mL de suspensie în flacoane şi se congelează rapid la -20°C, după care probele se liofilizează. Probele liofilizate sunt sigilate şi plasate în frigider la temperatura de +4°C. După 6 ani de conservare în stare liofilizată tulpina se reînsămânţează pentru a determina activitatea antifungică.
Paralel se pregătesc culturile de fungi fitopatogeni care sunt inoculate pe mediul Czapek cu următoarea componenţă (g/L): zaharoză - 30,0; NaNO3 - 3,0; KH2PO4 - 1,0; MgSO4·7H2O - 0,5; KCl - 0,5; FeSO4 - 0,01; agar - 20,0; apă distilată până la 1,0 litru; pH-ul = 7,0…7,2. Suspensia de spori a fungilor fitopatogeni cu titrul 10-7…10-8 se reînsămânţează submers în plăcile Petri.
Determinarea activităţii antifungice a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 după 6 ani de la liofilizare pe mediul protector lapte degresat + 12% zaharoză a fost efectuată conform metodei de difuziune a metaboliţilor prin utilizarea discurilor de geloză. În calitate de culturi de referinţă în experimentul in vitro au fost folosite tulpinile fitopatogene de micromicete: Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger. După 4…5 zile de incubare se măsoară zonele de inhibiţie aparente în jurul discurilor de geloză.
Proprietăţile antifungice pronunţate depistate în urma elaborării procedeului de conservare şi stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 asupra fitopatogenilor prezintă interes din punct de vedere al extinderii arsenalului de microorganisme cu capacitate antifungică pronunţată, cu utilizarea acestora ca agenţi de protejare a plantelor de cultură.
Rezultatele studiului activităţii antifungice după 6 ani de conservare, în urma liofilizării tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07, utilizând ca mediu protector laptele degresat + 12% zaharoză, sunt prezentate în tabel, care relevă o activitate mai sporită faţă de soluţia cea mai apropiată. Astfel, datele experimentale obţinute demonstrează că procedeul revendicat manifestă activitate antifungică mai sporită faţă de fitopatogenii Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger, care depăşeşte de până la 2,1 ori caracteristicile analoage ale procedeului descris în cea mai apropiată soluţie.
Tabel
Activitatea antifungică a tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07, după 6 ani de conservare în stare liofilizată conform procedeului propus în invenţie şi celei mai apropiate soluţii
Metoda utilizată Zona de inhibiţie a fungilor fitopatogeni (mm) Fusarium oxysporum Fusarium solani Alternaria alternata Botrytis cinerea Aspergillus niger Conform celei mai apropiate soluţii Liofilizarea pe mediul succinat de Na + 12% zaharoză 13,3±0,7 15,0±1,1 24,7±0,7 23,0±0,7 19,0±1,1 Conform soluţiei propuse în invenţie Liofilizarea pe mediul lapte degresat + 12% zaharoză 28,0±2,3 27,7±1,3 26,3±1,3 28,0±1,1 21,3±1,7
Datele din tabel demonstrează că zonele de inhibiţie determinate conform procedeului propus în invenţie sunt mai mari şi le depăşesc de până la 2,1 ori pe cele descrise în cea mai apropiată soluţie.
Proprietăţile depistate ale tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07, liofilizată conform procedeului revendicat, prezintă interes din punct de vedere al extinderii arsenalului de preparate cu acţiune antifungică pronunţată asupra fungilor fitopatogeni - dăunători ai plantelor de cultură.
1. Batîr L., Slanina V., Sârbu T., Chiseliţa O. Activitatea antifungică a unor tulpini autohtone de microorganisme după 3 şi 6 ani de conservare în stare liofilizată. Revista de Proprietate Intelectuală Intelectus. nr.3, 2015, p. 96-104

Claims (1)

  1. Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică, care prevede cultivarea tulpinii Pseudomonas aureofaciens CNMN-PsB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de 10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.
MDS20150151A 2015-11-10 2015-11-10 Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică MD1072Z (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20150151A MD1072Z (ro) 2015-11-10 2015-11-10 Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20150151A MD1072Z (ro) 2015-11-10 2015-11-10 Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD1072Y MD1072Y (ro) 2016-09-30
MD1072Z true MD1072Z (ro) 2017-04-30

Family

ID=57014932

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDS20150151A MD1072Z (ro) 2015-11-10 2015-11-10 Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD1072Z (ro)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD1543C2 (ro) * 1997-04-25 2001-03-31 Ион АРСЕНЕ Motor eolian cu transportor

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1093698A1 (ru) * 1981-09-22 1984-05-23 Одесский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.И.И.Мечникова Субстрат дл закреплени бактерий и способ хранени неспорообразующих бактерий рода @
SU1671682A1 (ru) * 1989-06-30 1991-08-23 Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср Способ хранени микроорганизмов
SU1698285A1 (ru) * 1989-04-11 1991-12-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии Способ консервировани рекомбинантного штамма РSеUDомоNаS SpecIeS продуцента @ -2 интерферона
RU2123044C1 (ru) * 1998-03-02 1998-12-10 Открытое акционерное общество "Русский йогурт" Способ длительного хранения естественных симбиотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1093698A1 (ru) * 1981-09-22 1984-05-23 Одесский Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им.И.И.Мечникова Субстрат дл закреплени бактерий и способ хранени неспорообразующих бактерий рода @
SU1698285A1 (ru) * 1989-04-11 1991-12-15 Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии Способ консервировани рекомбинантного штамма РSеUDомоNаS SpecIeS продуцента @ -2 интерферона
SU1671682A1 (ru) * 1989-06-30 1991-08-23 Институт Биохимии И Физиологии Микроорганизмов Ан Ссср Способ хранени микроорганизмов
RU2123044C1 (ru) * 1998-03-02 1998-12-10 Открытое акционерное общество "Русский йогурт" Способ длительного хранения естественных симбиотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных.

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Batîr L., Slanina V., Sârbu T., Chiseliţa O. Activitatea antifungică a unor tulpini autohtone de microorganisme după 3 şi 6 ani de conservare în stare liofilizată. Revista de Proprietate Intelectuală Intelectus. nr.3, 2015, p. 96-104 *
Slanina V., Lupaşcu L., Tolocichina S., Burţeva S., Postolachi O., Sîrbu T., Stepanov V., Chiseliţa O. Standardizarea procedurii de conservare a tulpinilor de bacterii păstrate in colecţia naţională de microorganisme nepatogene. I. Standardizarea procedurii de conservare a tulpinilor din genul Pseudomonas păstrate în colecţia naţională de microorganisme. Buletinul AŞM. Ştiinţele vieţii. Nr. 2(317) 2012, p160-167, găsit Internet <URL: <http://bsl.asm.md/article/id/22338> *

Also Published As

Publication number Publication date
MD1072Y (ro) 2016-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhang et al. Inhibitory effect of Pichia membranaefaciens and Kloeckera apiculata against Monilinia fructicola and their biocontrol ability of brown rot in postharvest plum
Yu et al. Effect of chitin on the antagonistic activity of Cryptococcus laurentii against Penicillium expansum in pear fruit
Tian et al. The preservation effect of Metschnikowia pulcherrima yeast on anthracnose of postharvest mango fruits and the possible mechanism
JP2016534737A5 (ro)
Aytoun The effects of griseofulvin on certain phytopathogenic fungi
Sukmawati et al. Antagonistic activity of phylloplane yeasts from Moringa oleifera Lam. leaves against Aspergillus flavus UNJCC F-30 from chicken feed
Sasanuma et al. Effect of calcium on cell-wall degrading enzymes of Botrytis cinerea
Vilaplana et al. Curative activity of possible biocontrol agents in the postharvest of yellow pitahaya and organic banana
CN104195069A (zh) 一株防治稻瘟病的枯草芽孢杆菌2012syx04
CN103449914B (zh) 海藻糖在延长糙皮侧耳菌种贮藏寿命方面的应用、培养基及方法
López-Mora et al. Evaluation of antifungal activity of chitosan in Alternaria alternata and in the quality of'Tommy Atkins' mango during storage
CN104195064A (zh) 一株体外高效拮抗稻瘟病菌的水稻内生放线菌
Li et al. Development and characterization of yeast-incorporated coating films for improving the postharvest shelf-life of snap beans
Schisler et al. Agriculturally important yeasts: biological control of field and postharvest diseases using yeast antagonists, and yeasts as pathogens of plants
CN105494445A (zh) 一种防治辣椒枯萎病制剂和应用
MD1072Z (ro) Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică
Talib et al. Isolation, culture, and maintenance of Extremophilic fungi
Guo et al. Effect of antagonistic yeast Pichia membranaefaciens on black spot decay of postharvest broccoli
Nasahi et al. Yeast potential in controlling Aspergillus sp. causing fruit rot disease in dekopon oranges (Citrus reticulata ‘Shiranui’)
MD1071Z (ro) Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică
Liu et al. Biocontrol ability and possible mechanism of Metschnikowia pulcherrima against major diseases of postharvest citrus fruit and its biopreservative application
Minamor et al. Influence of the culture filtrate of three Paecilomyces species on some growth parameters, chlorophyll content, and root anatomy of two Ghanaian maize varieties (Abeleehi and Obaatanpa) and on germination capacity of tomato and pepper seeds
MD1056Z (ro) Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aurantiaca cu activitate antifungică
Zargaryan et al. Infection of grain crops with fungi of the genus Fusarium
Meng et al. Application of composite biological control agent in postharvest preservation of cherry tomatoes

Legal Events

Date Code Title Description
FG9Y Short term patent issued
MK4Y Short term patent expired