MD1071Z - Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică - Google Patents
Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică Download PDFInfo
- Publication number
- MD1071Z MD1071Z MDS20150150A MDS20150150A MD1071Z MD 1071 Z MD1071 Z MD 1071Z MD S20150150 A MDS20150150 A MD S20150150A MD S20150150 A MDS20150150 A MD S20150150A MD 1071 Z MD1071 Z MD 1071Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- bacillus cereus
- strain
- antifungal activity
- cereus var
- fluorescens
- Prior art date
Links
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 title claims abstract description 18
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 11
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 9
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 7
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 7
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 7
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 7
- 241000427940 Fusarium solani Species 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 244000038559 crop plants Species 0.000 description 1
- 239000012225 czapek media Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică.Procedeul, conform invenţiei, prevede cultivarea tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de 10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.Rezultatul constă în majorarea activităţii antifungice a tulpinii după păstrare.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică, şi anume asupra diferitor tulpini de fungi fitopatogeni ca: Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger ce provoacă diferite boli la plantele de cultură. Datorită capacităţii de sporire a activităţii antifungice, procedeul poate fi utilizat la conservarea microorganismelor pe un termen îndelungat şi utilizarea acestora ca agenţi de protejare a plantelor de cultură de infectarea cu fitopatogeni.
Afectarea plantelor de cultură de către fitopatogeni duce la scăderea productivităţii lor, la micşorarea recoltei, precum şi la diminuarea calităţii produsului obţinut. Utilizarea microorganismelor în calitate de agenţi cu proprietăţi antimicrobiene pronunţate asupra fitopatogenilor permite atât majorarea productivităţii plantelor, cât şi îmbunătăţirea calităţii produsului.
În prezent este cunoscut un procedeu de stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 asupra fungilor fitopatogeni în urma liofilizării, utilizând ca mediu protector succinat de Na + 12% zaharoză, în rezultatul căruia, după 6 ani de păstrare, zonele de inhibiţie a patogenilor au atins valori de 15,0…25,0 mm, în dependenţă de test-cultura studiată [1].
Dezavantajul acestui procedeu constă în aceea că proprietăţile antifungice sunt slabe şi mai puţin pronunţate după păstrarea îndelungată.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui procedeu de stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07, în urma liofilizării, cu utilizarea unui mediu protector ce asigură stimularea proprietăţilor antifungice asupra fitopatogenilor, după 6 ani de păstrare.
Procedeul revendicat constă în conservarea tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 cu capacitate antifungică prin liofilizarea acesteia, utilizând mediul de protecţie lapte degresat + 12% zaharoză. Zonele de inhibiţie a creşterii fitopatogenilor, după 6 ani de la conservare, ating valori de 31,0 mm pentru Fusarium oxysporum, 33,7 - Fusarium solani, 30,7 - Alternaria alternata, 28,7 - Botrytis cinerea şi 24,3 mm - Aspergillus niger.
Procedeul de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică prevede cultivarea tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de 10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.
Rezultatul constă în majorarea activităţii antifungice a tulpinii după păstrare, şi anume stimularea evidentă a proprietăţilor antifungice asupra fitopatogenilor Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger după 6 ani de păstrare, acestea fiind mai înalte faţă de soluţia cea mai apropiată. Zonele de inhibiţie a creşterii fitopatogenilor obţinute în rezultatul liofilizării, cu utilizarea mediului protector succinat de Na + 12% zaharoză (soluţia cea mai apropiată), variază de la 15,0…25,0 mm pentru tulpinile F. oxysporum, F. solani, A. alternata B. cinerea şi A. niger, iar zona de inhibiţie determinată cu utilizarea procedeului propus în invenţie variază între 24,3…33,7 mm, ceea ce depăşeşte de până la 1,62 ori caracteristicile analoage obţinute conform celei mai apropiate soluţii.
Rezultatul tehnic al invenţiei este condiţionat de faptul că, în calitate de mediu protector pentru liofilizarea tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 se utilizează lapte degresat + 12% zaharoză. Proprietăţile antifungice evidente sunt asigurate datorită resuspendării tulpinii în mediul dat, care asigură un efect protector faţă de şocurile osmotice şi termice şi nu permite acestora de a influenţa negativ sinteza metaboliţilor cu activitate antifungică.
Exemplu de realizare a invenţiei
Se prepară mediul nutritiv agarizat King B cu următorul conţinut al ingredientelor: peptonă - 20,0 g; glicerină - 15,0 mL; K2HPO4 - 1,5 g; MgSO4·7H2O - 1,5 g; agar - 15,0 g; apă distilată până la 1,0 litru; pH-ul = 7,0 - 7,2. Pe mediul preparat, în tuburi înclinate, se reînsămânţează tulpina Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07, după 48 ore de incubare la +28…30°C, cultura se resuspendă în mediul protector lapte degresat + 12% zaharoză până la titrul de 10-8…10-9, se repartizează câte 1,0…2,0 mL de suspensie în flacoane şi se congelează rapid la -20°C, după care probele se liofilizează. Probele liofilizate sunt sigilate şi plasate în frigider la temperatura de +4°C. După 6 ani de conservare în stare liofilizată tulpina se reînsămânţează pentru a determina activitatea antifungică.
Paralel se pregătesc culturile de fungi fitopatogeni care sunt inoculate pe mediul Czapek cu următoarea componenţă (g/L): zaharoză - 30,0; NaNO3 - 3,0; KH2PO4 - 1,0; MgSO4·7H2O - 0,5; KCl - 0,5; FeSO4 - 0,01; agar - 20,0; apă distilată până la 1,0 litru; pH-ul = 7,0…7,2. Suspensia de spori a fungilor fitopatogeni cu titrul 10-7…10-8 se reînsămânţează submers în plăcile Petri.
Determinarea activităţii antifungice a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 după 6 ani de la liofilizare pe mediul protector lapte degresat + 12% zaharoză a fost efectuată conform metodei de difuziune a metaboliţilor prin utilizarea discurilor de geloză. În calitate de culturi de referinţă în experimentul in vitro au fost folosite tulpinile fitopatogene de micromicete: Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger. După 4…5 zile de incubare se măsoară zonele de inhibiţie aparente în jurul discurilor de geloză.
Proprietăţile antifungice pronunţate depistate în urma elaborării procedeului de conservare şi stimulare a activităţii antifungice a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 asupra fitopatogenilor prezintă interes din punct de vedere al extinderii arsenalului de microorganisme cu capacitate antifungică pronunţată, cu utilizarea acestora ca agenţi de prevenire şi protejare a plantelor de cultură.
Rezultatele studiului activităţii antifungice după 6 ani de conservare, în urma liofilizării tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 utilizând ca mediu protector laptele degresat + 12% zaharoză, sunt prezentate în tabel, care relevă o activitate mai sporită faţă de cea mai apropiată soluţie. Astfel, datele experimentale obţinute demonstrează că procedeul revendicat manifestă activitate antifungică mai sporită faţă de fitopatogenii Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Alternaria alternata, Botrytis cinerea şi Aspergillus niger, care depăşeşte de până la 1,62 ori caracteristicile analoage ale procedeului descris în cea mai apropiată soluţie.
Tabel
Activitatea antifungică a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07, după 6 ani de conservare în stare liofilizată conform procedeului propus în invenţie şi celei mai apropiate soluţii
Metoda utilizată Zona de inhibiţie a fungilor fitopatogeni (mm) Fusarium oxysporum Fusarium solani Alternaria alternata Botrytis cinerea Aspergillus niger Conform celei mai apropiate soluţii Liofilizarea pe mediul succinat de Na + 12% zaharoză 23,0±1,1 25,0±1,1 19,3±1,3 23,7±1,7 15,0±1,1 Conform soluţiei propuse în invenţie Liofilizarea pe mediul lapte degresat + 12% zaharoză 31,0±1,1 33,7±1,7 30,7±1,3 28,7±2,4 24,3±1,7
Datele din tabel demonstrează că zonele de inhibiţie determinate conform procedeului propus în invenţie sunt mai mari şi le depăşesc de până la 1,62 ori pe cele descrise în cea mai apropiată soluţie.
Proprietăţile depistate ale tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07, liofilizată conform procedeului revendicat, prezintă interes din punct de vedere al extinderii arsenalului de preparate cu acţiune antifungică pronunţată asupra fungilor fitopatogeni - dăunători ai plantelor de cultură.
1. Batîr L., Slanina V., Sârbu T., Chiseliţa O. Activitatea antifungică a unor tulpini autohtone de microorganisme după 3 şi 6 ani de conservare în stare liofilizată. Revista de Proprietate Intelectuală Intelectus, nr. 3, 2015, p. 96-104
Claims (1)
- Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică, care prevede cultivarea tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens CNMN-BB-07 pe un mediu nutritiv în decurs de 48 ore la temperatura de 28…30°C, resuspendarea într-un mediu constituit din lapte degresat şi 12% de zaharoză cu un titru de 10-8…10-9, congelarea rapidă la temperatura de -20°C, liofilizarea şi păstrarea la temperatura de + 4°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20150150A MD1071Z (ro) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20150150A MD1071Z (ro) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD1071Y MD1071Y (ro) | 2016-09-30 |
| MD1071Z true MD1071Z (ro) | 2017-04-30 |
Family
ID=57014931
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20150150A MD1071Z (ro) | 2015-11-10 | 2015-11-10 | Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD1071Z (ro) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA49390C2 (en) * | 2001-11-28 | 2002-09-16 | Inst Agroecology And Biotechno | Strain of associative bacteria for bacillus polymyxa 6-m used for production of antigungal biological preparation |
| RU2514023C1 (ru) * | 2012-12-26 | 2014-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) | Штамм bacillus thuringiensis var. darmstadiensis n 25 в качестве средства комплексного воздействия на вредных жесткокрылых насекомых и фитопатогенные грибы |
-
2015
- 2015-11-10 MD MDS20150150A patent/MD1071Z/ro not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA49390C2 (en) * | 2001-11-28 | 2002-09-16 | Inst Agroecology And Biotechno | Strain of associative bacteria for bacillus polymyxa 6-m used for production of antigungal biological preparation |
| RU2514023C1 (ru) * | 2012-12-26 | 2014-04-27 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИСХМ Россельхозакадемии) | Штамм bacillus thuringiensis var. darmstadiensis n 25 в качестве средства комплексного воздействия на вредных жесткокрылых насекомых и фитопатогенные грибы |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Batîr L., Slanina V., Sârbu T., Chiseliţa O. Activitatea antifungică a unor tulpini autohtone de microorganisme după 3 şi 6 ani de conservare în stare liofilizată. Revista de Proprietate Intelectuală Intelectus, nr. 3, 2015, p. 96-104 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD1071Y (ro) | 2016-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhao et al. | Volatile organic compounds (VOCs) from Bacillus subtilis CF-3 reduce anthracnose and elicit active defense responses in harvested litchi fruits | |
| Yu et al. | Effect of chitin on the antagonistic activity of Cryptococcus laurentii against Penicillium expansum in pear fruit | |
| Jones et al. | Biocontrol of Sclerotinia sclerotiorum infection of cabbage by Coniothyrium minitans and Trichoderma spp. | |
| Yang et al. | Antifungal activity and mechanism of tea polyphenols against Rhizopus stolonifer | |
| Çorbacı et al. | Purification, characterization and in vivo biocontrol efficiency of killer toxins from Debaryomyces hansenii strains | |
| Ma et al. | Purification and characterization of chitinase from Gliocladium catenulatum strain HL-1-1 | |
| Wachid | Inhibitory Power Test of Two Trichoderma Isolates in In Vitro Way Againts Fusarium oxysporum The Cause of Red Chilli Stem Rot | |
| Agrillo et al. | An alternative biocontrol agent of soil-borne phytopathogens: A new antifungal compound produced by a plant growth promoting bacterium isolated from North Algeria | |
| Magallon-Andalon et al. | Parasitism and substrate competitions effect of antagonistic yeasts for biocontrol of Colletotrichum gloeosporioides in papaya (Carica papaya L.) var Maradol | |
| Talib et al. | Isolation, culture, and maintenance of Extremophilic fungi | |
| Guo et al. | Effect of antagonistic yeast Pichia membranaefaciens on black spot decay of postharvest broccoli | |
| MD1071Z (ro) | Procedeu de conservare a tulpinii Bacillus cereus var. fluorescens cu activitate antifungică | |
| MD1072Z (ro) | Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aureofaciens cu activitate antifungică | |
| MD1056Z (ro) | Procedeu de conservare a tulpinii Pseudomonas aurantiaca cu activitate antifungică | |
| Zargaryan et al. | Infection of grain crops with fungi of the genus Fusarium | |
| Minamor et al. | Influence of the culture filtrate of three Paecilomyces species on some growth parameters, chlorophyll content, and root anatomy of two Ghanaian maize varieties (Abeleehi and Obaatanpa) and on germination capacity of tomato and pepper seeds | |
| KR101481897B1 (ko) | 스트렙토마이세스 에스피 bs063 및 이를 이용한 식물병 방제 | |
| Summerell et al. | Factors influencing survival of Pyrenophora tritici-repentis: water potential and temperature | |
| Jankiewicz et al. | Purification, characteristics and identification of chitinases synthesized by the bacterium Serratia plymuthica MP44 antagonistic against phytopathogenic fungi | |
| Ghewande | Biological control of groundnut (Arachis hypogaea L.) rust (Puccinia arachidis Speg.) in India | |
| Ji et al. | Biocontrol potential of Bacillus licheniformis W10 against peach shoot blight caused by Phomopsis amygdali | |
| Zhu et al. | Biocontrol efficiency and multiple mechanisms of Bacillus velezensis BV07 against postharvest green mold on citrus fruit | |
| CN103937689A (zh) | 一种抑制鲜果采后病害的类酵母真菌及其应用 | |
| Goswami et al. | Aspergillus niger, a dominant phylloplane coloniser, influences the activity of defense enzymes in Solanum lycopersicum | |
| de Almeida et al. | In vitro control of phytopathogenic fungi and damping-off of tomato by Bacillus velezensis LABIM40 (CMRP 4489) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued | ||
| MK4Y | Short term patent expired |