KR960702527A - 살모넬라 측정방법(method for the determination of salmonella) - Google Patents
살모넬라 측정방법(method for the determination of salmonella)Info
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Abstract
본 발명은 가공원 식품 및 날 식품 사료, 주변 환경, 체액 및 부검체 등을 원료로 하는 샘플 중 살모넬라를 신속히 측정/검출하는 방법을 제공한다. 이 방법은 농축 단계와 측정 단계로 이루어진다. 농축 단계는 선택적조건을 이용하는데, 특히 선택 물질인 테트라티오네이트 및/또는 노보바이오신을 사용하고 배양 온도를 39-43q℃로 상승시켜, 살모넬라를 조기에 검출할 수 있다. 선택적 조건은 농축 단계에서 가능한 한 빨리 마련됨으로써, 높은 특이성과 높은 감도로 측정을 조기에 수행할 수 있게 한다. 축정 단계는 전통적인 한천 평판 기술과는 전혀 다른 여러가지 분석법으로 된다. 또한 가공된 제품, 즉, 열-처리되거나, 건조되거나, 경화 또는 산성화, 및 그 밖의 다른 처리된 제품에 대한 살모넬라의 특수한 농축 공정도 제공된다. 일반적으로 살모넬라의 측정/검출은 농축 수럽시로부티 24시간 이내에 수행될 수 있다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
Claims (49)
1)pH 5.6 내지 9.3으로 완충시킨 살모넬라용 수성 성장 배지로 샘플을 이동시키고, 상기 이동 전 또는 이동과 동시, 또는 이동 후에 테트라티오네이트 및/또는 기타 셀레나이트와 다른 선택 물질을 배지에 첨가하거나 배지 중에 생산시켜, 얻어진 혼합물을 38℃ 이하의 온도에서 샘플 이동 후의 기간 동안 유지시킨 다음(예비-농축 기간), 혼합물의 온도를 39-43℃로 상승시켜 온도 상승 후의 기간 동안 이 혼합물을 상승된 온도인 39-43℃에서 유지시키거나(농축 기간), 또는 2) pH 5.6 내지 9.3으로 완충시킨 살모넬라용 수성 성장 배지로 샘플을 이동시키고, 이 성장 배지를 샘플과 함께 39-42.5℃에서 유지시킨 다음, 상기 이동 전 또는 이동과 동시, 또는 이동 후 8시간 이내에 데트라티오네이트 및/또는 기타 셀레나이트와 다른 선택 물질을 배지에 첨가하거나 배지 중에 생산시켜, 상기 이동 후의 기간동안 얻어진 혼합물을 39-42.5℃의 온도에서 유지시키는(농축 기간)것 중 어느 하나로 이루어진 농축 공정, 및 이어서, 표적 분자의 동정 및/또는 정량화 또는 표적 분자와 관련된 분자 상호작용에 기초하며 본문에 기재된 전통적인 한천 평판 기술과는 다른 분석 단계로 이루어지는, 증식 후 농축 배지 중에 존재하는 살모넬라를 동정 및/또는 정량화하기 위한 측정을 수행하는 것으로 되는, 샘플 중 살모넬라 속에 속하는 박테리아의 측정 방법으로서, 여기서, 농축 공정의 조건은 선택적 농축 배지에살모넬라 균주를 출발 농도 약 15세포/㎖로 접종하고 10%의 무작위적으로 선택된 잘게 다진 날고기를 농축기간개시 무렵 농축 배지에 첨가하여 결과적인 혼합물을 농축 기간의 온도로 유지시키는, 농축 공정 및 측정으로 이루어지는 테스트(테스트 1)에 의해, 무작위적으로 선택된 살모넬라 현청형의 페닐을 테스트할 경우, 모든경우의 90% 이상에서 양성 결과가 나오도록 하고, 선택적 농축 배지에 농축 단계 개시 무렵 다음 비-살모넬라종, 즉, 시트로박터 프로인디이(Citrobacter freundii), 에스케리치아 콜라이 (Escherichia coli), 및 엔데로박터 클로아카에(Enterobacter cloacae) 중의 어느 한 가지 균주를 출발 농도 약 100세포/㎖의 농도로 접종하고, 상기 접종된 비-살모넬라 균주 의의 다른 미생물들은 상기 선택적 농축 배지 중에 존재하지 않도록 하여, 결과적인 혼합물을 농축기간의 온도에서 유지시키는, 농축 공정 및 측정으로 된 테스트(테스트 2)에 의해 비-살모넬라 종으로부터 무작위적으로 선택된 20개 균주의 패닐을 데스트할 매 거짓 양성 액분율이 각 종의 15%이내가 되도록, 측정단계에 적응시키는 것으로 되는, 샘플 중 살모넬라 속에 속하는 박테리아의 측정방법.
제1항에 있어서, 농축 기간 중 실질적인 기간 동안의 온도는 40 내지 42℃, 바람직하게는 40.5 내지 41.5℃범위인 방법.
제1항 또는 2항에 있어서, 테트라티오네이트 및/또는 셀레나이트와 상이한 기타 선택 물질을 샘플 이동후 4시간 이내, 예컨대 2시간 이내, 또는, 1시간 이내, 예컨대 10분 이내에 배지에 첨가하거나 배지 중에 생산시키는 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 선택항목 2)에서, 샘플 이동 전, 이동과 동시 또는 이동 후에 배지에 첨가되거나 배지 중에 생산되는 유일한 선택물질이 노보바이오신인 방법.
제4항에 있어서. 결과적인 혼합물 중 노브바이오신의 농도가 ㎖당 약 1 내지 100㎍, 예컨대 ㎖당 약 1-20및 2-13㎍ 범위인 방법.
제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 선택항목 1)에서 예비-농축 기간의 길이가 10분 내지 8시간, 예컨대 ½-7시간, 1-6½시간, 2-6시간, 및 3-5시간 바람직하게는 약 4시간인 방법.
pH 5.6 내지 9.3으로 완충시킨 살모넬라용 수정 성장 배지로 샘플을 이동시키고, 상기 이동 전 또는 이동과 동시, 또는 이동 후 3시간 이내에 테트라티오네이트를 배지에 첨가하거나 배지 중에 생산시켜, 얻어진 혼합물을 상기 샘플 이동 후의 기간동안 얻어진 혼합물을 36-39℃의 온도에서 유지시키는(농축 기간) 농축공정 및, 이어서, 표적 분자의 동정 및/또는 정량화 또는 표적 분자와 관련된 분자 상호작용에 기초하며 본문에 기재된 전통적인 한천 평판 기술과는 다른 분석 단계로 이루어지는, 중식 후 농축 배지 중에 존재하는 살모넬라를 동정 및/또는 정량화하기 위한 측정을 7시간 이하의 기간 동안 수행하는 것으로 되는, 샘플 중 살모넬라속에 속하는 박테리아의 측정 방법으로서, 여기서, 농축 공정의 조건은 제1항에서 정의된 테스트 1에 의해, 무작위적으로 선택된 살모넬라 혈청형의 페닐을 테스트할 경우, 모든 경우의 90% 이상에서 양성 결과가 나오도록 하고, 제1항에서 정의된 테스트 2에 의해, 비-살모넬라 종으로부터 무작위적으로 선택된 20개 균주 페널을 테스트할 경우, 거짓 양성 백분을이 각 종의 15% 이내가 되도록, 측정단계에 적응시키는 것으로 되는, 샘플중 살모넬라 속에 속하는 박테리아의 측정방법.
제7항에 있어서, 실질적인 농축 기간동안의 온도가 36 내지 39℃ 범위인 방법.
제7항 또는 8항에 있어서, 테트라티오네이트가 샘플 이동 후 1시간 이내, 예컨대 5분 이내에 배지에 첨가되거나 또는 배지 중에 생산되는 방법.
진술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 잘게 다진 고기 샘플 100개를 테스트할 경우 측정 결과가 (테스트3 : 여기서, 테스트 될 샘플의 중량은 25g이고, 100개의 샘플은 각각 10개의 상이한 샘플들을 전달하는 10가지 상이한 소매제품으로부터 제공되고, 샘플 중 20개에는 샘플 당 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium) 세포가 15개 접종되어 있고 샘플 중 다른 20개에는 샘플 당 살모넬라 엔테리티티스(Salmonella enterititis) 세포가 약 15개 접종되어 있음) 스탠다드 프로토콜가 비교할 때, 본문에서 정의된 바와 같은 참 양성 결과를 80% 이상 결과시키고, 본문에서 정의된 바와 같은 거짓 양성 결과를 10% 이하로 결과시키는 방식으로, 본문에 정의된 RV 대신 본문에 정의된 RVS를 사용하고, RVS를 42℃에서 인큐베이션하고, 본문에서 정의된 XLD 역시 평판 배지로서 사용하는 것을 제외한, 스탠다드 프로토콜 NMKL no.71 (Nordic Committeeof Food Analysis method no.71, 1991, 제4판, 17쇄)을 표준으로 하여 보정되는 것이 특징인 방법.
전술한 한 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 본문에서 정의된 가공된 제품과 상이한 것이 특징인 방법.
제10항 또는 11항에 있어서, 측정이 테스트 3의 스탠다드 프로토콜과 비교하여 85% 이상 참 양성 결과, 예컨대 90% 이상, 92% 이상, 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 및 100% 이상 참 양성 결과를 결과시키는 것이 특징인 방법.
제12항에 있어서, 측정이 테스트 3에서 스탠다드 프로토콜가 비교하여 101% 이상 참 양성 결과를 결과시키는 방법.
제10항 내지 13항 중 어느 한 항에 있어서, 측정이 테스트 3에서 거짓 양성 결과를 8% 이하, 예컨대5% 이하, 3% 이하, 2% 이하, 및 1% 이하의 거짓 양성 결과를 결과시키는 방법.
제14항에 있어서, 측정에 의한 테스트 3에서의 거짓 양성 결과가 0인 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 테스트 1의 모든 경우에 있어서, 측정이 92% 이상의 참 양성 결과, 예컨대 95% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상 및 99.9% 이상의 참 양성 결과를 결과시키는 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 테스트 2의 모든 경우에 있어서, 측정이 12% 이상의 거짓 양성결과, 예컨대 10% 이하, 7% 이하, 5% 이하, 3% 이하, 2% 이하, 1% 이하 및 ½/% 이하의 거짓 양성 결과를 결과시키는 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 얻어진 혼합물 중의 테트라티오네이트의 농도가 5-40mM, 예컨대 약 7-35mM, 9-30mM, 11-28mM, 13-26mM, 14-25mM, 15-23mM, 16-22mM, 17-21mM 및 18-20mM의 범위인 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 농축 공정 기간과 측정 단계 기간의 합이 56시간 이하, 예컨대 48시간 이하, 40시간 이하, 34시간 이하, 32시간 이하, 28시간 이하, 24시간 이하, 22시간 이하, 및 20시간 이하인 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 농축 기간, 또는 선택 항목 1)의, 경우 예비 농축 기간과 농축 기간의 합이 10-48시간, 예컨대 15-30시간, 또는 17-24시간인 방법.
a) pH 5.6 내지 9.3으로 완충되고, 박테리아 성장-저해 물질을 실제로 함유하지 않는, 살모델라용 수성성장 배지로 샘플을 이동시키고, 얻어진 혼합물을 39.0℃ 이하의 온도에서 1분 이상 유지시킨 다음(예비-농축기간), 혼합물의 온도를 39.5-43℃로 상승시키고 노브바이오신 및/또는 셀레나이트와 상이한 기타 선택 물질을 임의로 첨가하여 이 혼합물을 상승된 온도인 39.5-43℃에서 온도 상승 후의 기간동안 유지시키거나(예비농축 기간), 또는 b) pH 5.6 내지 9.3으로 완충시킨 살모넬라용 수성 성장 배지로 샘플을 이동시키고, 상기 이동 진 또는 이동과 동시, 또는 이동 후에 테트라티오네이트 및/또는 기타 셀레나이트와 다른 선택 물질을 배지에 첨가하여, 얻어진 혼합물을 상기 샘플 이동 후 또는 노보바이오신이나 기타 셀레나이트와 다른 선택물질의 첨가 시점부터의 기간 중 더 오랜 기간동안 39.0℃의 온도에서 유지시킨 다음,(예비 농축 기간) 상기 혼합물의 온도를 39.5-43℃로 증가시키고 노보바이오신 또는 셀레나이트와 다른 기타 선택 물질을 임의로 첨가하여, 이 혼합물을 상승된 온도인 39.5-43℃에서 온도 상승 후의 기간동안 유지시키는(선택적 예비 농축기간)것 중 어느 하나로 이루어진 농축 공정, 및 이어서, 증식 후 농축 배지 중에 존재하는 살모넬라를 동정및/또는 정량화하기 위한 측정을 수행하는 것으로 되는, 샘플 중 살모넬라 속에 속하는 박테리아의 측정 방법.
제21항에 있어서, 예비-농축 기간의 길이가 ½/시간 이상, 예컨대 1-10시간, 1-8시간, 2-6시간, 3-5시간, 및 3½-4½ 시간이고 바람직하게는 약 4시간인 방법.
pH 5.6 내지 9.3으로 완충시킨 살모넬라용 수성 성장 배지로 샘플을 이동시키고, 상기 이동 전 또는 이동과 동시, 또는 이동 후에 노브바이오신을 배지에 첨가하여, 얻어진 혼합물을 상기 샘플 이동 후 또는 노보바이오신이나 기타 셀레나이트와 다른 선택 물질의 첨가 시점부터의 기간 중 더 오랜 기간동안 39.0℃의 온도에서 유지시킨 다음(농축 기간), 이어서, 중식 후 농축 배지 중에 존재하는 살모넬라를 동정 및/또는 정량화하기위한 측정을 7시간 이하 동안 수행하는 것으로 되는, 샘플 중 살모넬라 속에 속하는 박테리아의 측정 방법.
제21항 내지 23항 중 어느 한 항에 있어서, 측정이 표적 분자의 동정 및/또는 정량화 또는 표적 분자가 관여하는 분자 상호작용에 기초한 것으로서, 본문에서 정의된 한천 평판법과 상이한 분석 단계로 이루어지는 방법.
제21항 내지 24항 중 어느 한 항에 있어서, 농축 공정의 조건이 -수성 성장 배지에 열-처리된 살모넬라균주 세포를 출발 농도 약 열-처리된 세포 1000개/서로 접종하고, 농축 공정 개시 무렵 배지에 5% 비-유지방건조 밀크를 첨가하는, 농축 공정 및 측정으로 이루어지는 테스트(테스트 4)에 의해, 무작위적으로 선택된 살모넬라 현청형의 페닐을 테스트할 경우, 모든 경우의 90% 이상에서 양성 결과가 나오도륵 하고, -수성 성장배지에 농축 공정 개시 무렵 다음 비-살모넬라 종, 즉, 시트로박터 프로인디이(Citrobacter freundii), 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli), 및 엔테로박터 클로아카에(Enterobacter cloacae) 중의 어느 한가지 균주를 출발 농도 약 100세포/사의 농도로 접종하는, 농축 공정 및 측정으로 된 테스트(테스트 5)에 의해 비-살모넬라 종으로부터 무작위적으로 선택된 20개 균주의 페닐을 테스트할 때 거짓 양성 백분을이 각 종의 25% 이내가되도록, 측정단계에 적응시키는 것으로 되는 방법.
제21항 내지 25항 중 어느 한 항에 있어서, 뱃치 및 종류별로 무작위적으로 선택된 50g의 분유 샘플 총 50개를 테스트할 경우(테스트 6), 스탠다드 프로토콜에 비해 80% 이상의 잠 양성 결과가 나오도록 하고, 본문에서 정의된 바와 같은 거것-양성 결과는 10% 이하가 나오도록 하는 방식으로, 스탠다드 배양 프로트콜 NMKL no.71(Nordic Committee on Food Ana1ysis method no.7l,1991)을 기준으로 보정되는 방법으로서, 여기서, 상기 각 샘플은 25g씩의 두 부분로 나뉘며, 각 부분은 청구범위 21-25항 중 어느 한 항에 따른 방법으로, 다른 부분은 스탠다드 배양 프로토콜로 처리되고, 25g 부분의 50세트 중 25세트는 다음과 같은 방식으로 스파이크 되고; -스탠다드 배양 프로토콜로 처리된 25g의 한 부분은 프로토콜의 농축 공정 개시 무렵, 약 5CFU의 살모넬라 파나마(Salmonella panama) 또는 살모넬라타이피뮤리움(Salmonella bThimurium)을 함유하는 비-유지방 건조 밀크 0.1-lg을 프로토콜에 사용된 수성 성장 배지에 첨가함으로써 보강되고, -본 발명의 특허청구 범위 제21항 내지 25항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 처리된 259의 다른 부분은 농축 공정의개시 무렵, 약 5CFU의 살모넬라 파나마(Salmonella panama) 또는 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium)을 함유하는 비-유지방 건조 밀크 0.1-b을 수성 성장 배지에 첨가함으로써 보강되는 방법.
제26항에 있어서, 테스트 6의 스탠다드 프로토콜에 비해 측정결과, 85% 이상, 예컨대 90%, 92%, 95%, 97%, 98%, 99% 및 100%의 참 양성 결과가 얻어지는 방법.
제27항에 있어서, 테스트 6의 스탠다드 프로트콜에 비해 측정결과, 101% 이상의 참 양성 결과가 얻어지는 방법.
제26항 내지 28항 중 어느 한 항에 있어서, 테스트 6의 스탠다드 프로토콜에 비해 측정 결과, 거짓 양성결과가 8% 이하, 예컨대, 5%, 3%, 2% 및 1%로 얻어지는 방법.
제29항에 있어서, 테스트 6의 측정에 의한 거짓 양성 결과가 0인 방법.
제21항 내지 30항 중 어느 한 항에 있어서, 농축 공정과 측정단계 기간의 합이 56시간 이하, 예컨대 48시간, 40시간, 32시간, 28시간, 24시간, 22시간, 및 20시간 이하인 방법.
제21항 내지 31항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 결과가 테스트 4의 모든 경우에 있어서 92% 이상의 참 양성 결과, 예컨대 95%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 및 99.9%의 참 양성 결과가 얻어지는 방법.
제21항 내지 32항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 결과, 테스트 5에서, 거짓 양성 결과가 20% 이하, 예컨대 15%, 10%, 6%, 3%, 2%, l½%로 얻어지는 방법.
제21항 내지 33항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 본문에서 정의된 바와 같은 가공된 제품인 방법.
제21항 내지 34항 중 어느 한 항에 있어서, 선택항목 a) 또는 b)와 관련한 농축 기간의 길이 또는, 예비-농축 기간과 선택적 농축 기간의 합이 10-48시간, 예컨대 15-30시간, 및 17-24시간인 방법.
진술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 면역학적 반응을 포함하는 방법.
제36항에 있어서, 측정 단계가 면역 분석, 예컨대, 라디오 면역 분석(RIA : Radio Immune Assay(RIA), 효소 면역 분석(EIA : Enzyme Immune Assay), 효소 결합 면역 흡작 분석(ELISA : Enzyme LinkedImmune Sorbent Assay), 형광 항체 기술(FA : Fluorescence Antibody technizue), 및 검출상 중 리포좀, 미셀 또는 리포좀-유사입자를 이용하는 것으로 되는 면역 분석 ; 면역 고정화를 이용한 분석 ; 라덱스 응집과 같은 면역 응집을 이용한 분석; DNA/DNA-하이브리다이제이션 분석; RNA/RNA-하이브리다이제이션 분석 : 및 DNA/RNA-하이브리다이제이션 분석 중에서 선택되는 분석을 포함하는 방법.
제1항 내지 35중 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 폴리머레이즈 연쇄 반응(PCR : polymerasechain reaction)을 포함하는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 펩티드핵산(PNA : peptide nucleic acids)을 사용하는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 렉틴을 사용하는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 박데리오파지 Felix 01과 같은 박테리오파지를 사용하는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 살모넬라를 함유하는 배지의 전기 저항 또는 임피던스를 변화시키는 결과를 야기시키는, 살모넬라에 의한 어떤 물질의 대사적 전환으로 이루어지고 살모넬라의 검출은 이 변화를 측정하는 것에 의해 완수되는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 살모넬라가 한천 매트릭스 상 또는 한천 매트릭스를 통하여 이동하는 능력을 분석하는 것으로 되는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 소수성 그리드 막 필터법(HGMF : hydrophobic grid membrane filter method)을 이용하는 분석과 같이, 박데리아를 배지로부터 분리하여 필터 상에서 유지시키는, 여과 단계를 포함하는 분석을 포함하는 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 방사능측정법을 이용하는 분석으로 된 방법.
제1항 내지 35항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 크로마트그래피 분리를 이용하는 분석으로 된 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 측정 단계가 선택적 후-농축을 이용하는 방법.
제47항에 있어서, 선택적 후-농축 기간이 2-6시간, 예컨대 2.0-4.5시간, 2.5-3.5시간, 바람직하게는 약 3시간인 방법.
전술한 항 중 어느 한 항에 있어서, 살모넬라용 수성 성장 배지가 최대 0.5%w/v 소듐 하이드로겐 셀레나이트 용액, 바람직하게는 셀레나이트 농도가 0% w/v에 해당하는 농도로 셀레나이트를 갖는 방법.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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