KR940000581A - 이중 프로모터-유전자 시스템을 갖는 발현 벡터(pYD 21)를 이용한 사람 프로인슐린 융합 단백질의 생산 - Google Patents

이중 프로모터-유전자 시스템을 갖는 발현 벡터(pYD 21)를 이용한 사람 프로인슐린 융합 단백질의 생산 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유전자 조작을 이용하여 대장균 내에서 사람의 프로인슐린 융합단백질을 생산하는데 있어서 한 플라스미드 내에 프로인슐린 융합단백질 유전자 뿐 아니라, 유전자의 조절기구인 프로모우터, lac리보소음 결합부위, 종류유전자 등을 한 단위로 하여 두개 이상 조합하여, 프로인슐린 융합단백질의 발현율을 획기적으로 증가시키는 방법에 관한 것이다.
사람 프로인슐린 융합단백질의 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)8를 코딩하는 유전를 포함한 융합단백질 유전자 및 종료유전자와 함께 파지람다 PR프로모우터를 함유한 대장균 발현 백터에 삽입하여 제조한 발현벡터 pYK10-9로 부터 형질반현기구인 PR프로모우터와 인슐린 구조유전자, Lac 리보소음 결합 부위 유전자, (Thr)8를 코딩하는 유전를 포함한 융합단백질 유전자 및 전사종료 터미네이터를 한 단위로 분리한 후, 이를 다시 pYK10-9에 삽입하여 각각의 독립적인 형질발현기구로 부터 프로인슐린 융합단백질의 발현이 증가하도록 제조한 발현벡터 pYD21를 대장균에 형질전환 시킨 후, 그 형질전환된 대장균을 배양하여 사람 프로인슐린 융합단백질을 대장균에서 발현시켜 대량 생산 및 회수하는 방법에 관한 것이다.

Description

이중 프로모터-유전자 시스템을 갖는 발현 벡터(pYD 21)를 이용한 사람 프로인슐린 융합 단백질의 생산
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 사람 프로인슐린 발현 벡터인 pUC(8-(Thr)6-PI와 pYK10-9)제작 개요도이다.
제2도는 사람 프로인슐린 발현 벡터인 pYD21의 제작 개요도이다.
제3도는 사람 프로인슐린 유전자가 도입된 재조합 대장균으로부터 생성된 단백질의 SDS-pAGE 사진이다.
제4도는 pYD21 발현 벡터로 형질전환된 대장균 pop2136의 유가배양 발효그래프이다.
제5도는 pYD21을 함유한 대장균 pop2136을 열유도 후 시간경과에 따른 융합단백질 생성사진이다.

Claims (4)

  1. 사람 프로인슐린 융합단백질 유전자를 대장균에서 발현시켜 사람 프로인슐린 융합단백질을 대량 생산함에 있어서, 사람 프로인슐린 융합단백질의 유전자를 Lac 리보솜 결합부위 유전자, (Thr)6를 코딩하는 유전자를 포함한 융합단백질 유전자 및 종료유전자와 함께 파지람다 PR프로모우터를 함유하는 대장균 발현 벡터에 삽입하여 제조한 발현 벡터 pYK10-9로부터 형질발현기구인 PR프로모우터와 인슐린 구조유전자, Lac 리보소옴 결합부위 유전자, (Thr)6를 코딩하는 유전자를 포함한 융합단백질 유전자 및 전사종료 터미네이터를 한 단위로 분리한 후, 이를 다시 pYK10-9에 삽입하여 각각의 독립적인 형질발현기구로부터 프로인슐린 융합단백질의 발현이 증가하도록 제조한 발현 벡터 pYD21를 대장균에 형질전환시킨 후, 그 형질전환된 대장균을 배양하여 사람 프로인슐린 융합단백질을 대장균내에서 발현시켜 생산 및 회수함을 특징으로 하는 사람 프로인슐린 융합단백질의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 형질전환되는 대장균은 pop2136임을 특징으로 하는 사람 프로인슐린 융합단백질의 제조방법.
  3. PR프로모우터, Lac 리보소옴 결합부위, (Thr)6를 코딩하는 유전자를 포함하는 전구체 유전자를 가지는 인슐린 유전자 및 전사종료부위인 터미네이터를 한 단위로 두개 이상 단위를 포함하고 있는 대장균 발현 벡터.
  4. 제3항에 있어서, PR프로모우터, Lac 리보소옴 결합부위, (Thr)6를 코딩하는 유전자를 포함하는 전구체 유전자를 가지는 인슐린 유전자 및 전사종료부위인 터미네이터로 이루어진 단위 유전자를 두 단위 포함하고 있는 대장균 발현 벡터 pYD21.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019920011138A 1992-04-01 1992-06-25 이중 프로모터-유전자 시스템을 갖는 발현 벡터(pYD 21)를 이용한 사람 프로인슐린 융합 단백질의 생산 KR950009843B1 (ko)

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