KR930021781A - 정제된 효소농축물과 이의 제조방법 - Google Patents

정제된 효소농축물과 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 발효액으로부터 정제된 효소를 제조하는 방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 이러한 정제된 효소를 함유하는 조성물을 제공한다.

Description

정제된 효소농축물과 이의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

Claims (25)

  1. (i)발효액에서 현탁된 고체와 세포를 효소와 분리하여 효소용액을 형성시키고, (ⅱ)이 효소용액을 농축하고, (ⅲ) 농축된 효소용액에 유기화합물을 가하고, 여기서 유기화합물을 2개 이상의 카르복실기를 갖는 카르복실산, 이들 카르복실산의 염 또는 에스테르, 아미노산, 이들 아미노산의 염 또는 에스테르와 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 선택한다.
    (ⅳ) 상기 유기화합물을 함유하는 농축된 효소용액을 배양하고, (ⅴ) 정제된 효소침전물을 수집하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는, 발효액으로부터의 정제된 효소의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 단계(ⅲ)를 약 3.5-10.5의 pH에서 행함을 특징으로 하는 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 단계(ⅲ)와 (ⅳ)를 교반을 포함한 조건하에서 행함을 특징으로 하는 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 단계(ⅲ)에서 유기화합물을 0.06M 이상의최종농도로 첨가함을 특징으로 하는 제조방법.
  5. 제1항에 있어서, 단계(ⅲ)을 약 5-50℃의 온도에서 행함을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 제1항에 있어서, 단계(ⅴ) 다음에 유기화합물을 함유하는 물로, 정제된 효소침전물을 세척하는 단계(ⅵ)으로 이루어짐을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제1항에 있어서, 유기화합물을, 자연발생 아미노산 및 산성 아미노산, 염기성 아미노산, 이들의 염, 이들의 에세트르와 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 선택한 이들 아미노산의 염 또는 에스테르에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  8. 제7항에 있어서, 유기화합물을 리신. 알기닌, 히스티딘, 아스파르트산,글루탐산, 이들의 나트륨염, 리신-HCI과 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  9. 제8항에 있어서, 유기화합물을 아스파르트산, 리신과 리신-HC1에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  10. 제1항에 있어서, 유기화합물을 2 내지 3개의 카르복실기를 갖고 3개 이상의 탄소원자를 갖는 카르복실산에서 선택한 카르복신살산과 이들 카르복실산의 염, 이들의 나트륨, 칼슘, 칼륨 또는 마그네슘염과 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  11. 제10항에 있어서, 유기화합물을 말론산, 석신산, 시트르산, 말레산, 푸마르산, 이들의 나트륨 또는 칼륨염과 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 그 이상의 혼합물에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  12. 제10항에 있어서, 유기화합물을 석신산, 시트르산과 이들산의 나트륨염에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  13. 제1항에 있어서, 효소르르 프로테아제, 리파아제, 아밀라아제, 셀루라아제, 헤미셀루라아제, 펙티나아제, 아미다아제, 카탈라아제, 이성질화 효소와 옥시다아제에서 선택함을 특징으로 하는 제조방법.
  14. 제1항에 있어서, 효소가 알카리성 프로테아제 또는 알카리성 프로티아제의 유전공학적 변이체를 함유함을 특징으로 하는 제조방법.
  15. 제14항에 있어서, 효소가 바실러스 알카로필러스에서 유도된 알카리성 프로테아제 또는 유전공학적 변이체이고 단계(ⅱ)에서 효소활성도가 약 250DAPu/ml 이상이 될때까지 효소용액을 농축된 효소용액을 농축함을 특징으로 하는 제조방법.
  16. 내용없음
  17. 제1항에 있어서, 단계(ⅲ)에서 최소한 하나의 가수분해 효소를 농축된 효소용액에 더 첨가함을 특징으로 하는 제조방법.
  18. (ⅰ) 발효액에서 세포와 현탁된 고체를 알카리성 프로테아제와 분리하여 알카리성 프로테아제를 형성시키고, (ⅱ) 이 알카리성 프로테아제 용액을 농축하고, (ⅲ) 이 농축된 알카리성 프로테아제 용액에 유기화합물을 첨가하고, 여기서 유기화합물은 2개 이상의 카르복실기를 갖는 카르복실산, 이들 카르복실산의 염 또는 에스테르, 아미노산, 이들 아미노산의 염 또는 에스테르와 이들 유기화합물의 둘 또는 그 이상의 혼합물에서 선택한다. (ⅳ)유기화합물을 함유하는 농축된 알카리성 프로테아제 용액을 배양하고, (ⅴ) 알카리성 프로테아제가 효소단백질의 g당 1.00mg 이하의 가락토실 중합체 함량을 갖는 정제된 알카리성 프로테아제 용액을 수집하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는 발효액에서 나온 바실러스 알카로필러스 또는 바실러스 리케니포르미스에서 유도된 정제된 알카리성 프로테아제의 제조방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 알카리성 프로테아제가 바실러스 알카로필러스 발효액에서 유도되고 단계(ⅴ)에서 수집한 정제된 알카리성 프로테아제가 약 1,000,000Du/ml의 활성도로 농축되었을때 470nm에서 1.3이하의 흡수도를 가짐을 특징으로 하는 제조방법.
  20. 제18항에 있어서, 상기 정제된 알카리성 프로테아제가 바실러스 리케니포르미스 발효액에서 유도되고, 단계(ⅴ)에서 수집한 정제된 알카리성 프로테아제가 440DAPu/ml의 활성도로 농축되었을때 470nm에서 0.5이하의 흡수도를 가짐을 특징으로 하는 제조방법.
  21. 세제 조성물에서 제14항 또는 제18항에 따른 방법에 의하여 제조한 정제된 알카리성 프로테아제의 용도.
  22. 콘택즈렌즈 효소 세척계에서 제14항 또는 제18에 따른 방법에 의하여 제조한 정제된 알카리성 프로테아제의 용도.
  23. 제1항에 따른 방법에 의하여 제조한 정제된 효소를 함유하는 고체조성물.
  24. 제1항에 따른 방법에 의하여 제조한 정제된 효소를 함유하는 액체조성물.
  25. 프로필렌 글리콜과 제1항에 따른 방법에 의하여 제조된 정제된 효소를 함유하는 액체조성물.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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