KR910009928A - 전사 가능한 헤어핀 프로브를 이용한 핵산의 증폭 방법 - Google Patents

전사 가능한 헤어핀 프로브를 이용한 핵산의 증폭 방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

전사 가능한 헤어핀 프로브를 이용한 핵산의 증폭 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 내지 3도는 헤어핀 형태 및 이들의 다이머를 함유하는 본 발명의 전사 가능한 프로브의 여러가지 상이한 형태를 예시한 도면임.

Claims (10)

  1. (a) 목적하는 핵산 서열을 액체 혼합물 중에서, (1) 혼성화 조건하에서 프로모터 기능 영역을 가지는 헤어핀 구조를 형성할 수 있는 단일 가닥으로 된 자기 상보성 서열, (2) 상기 헤어핀 형성 혼성화 조건 하에서 RNA 폴리머라제 및 필요한 리보뉴클레오시드 트리포스페이트의 존재 중에서 전사될 수 있고 상기 자기 상보성 서열의 5´ 말단으로부터 연장되는 전사 가능한 서열 및 (3)목적하는 상기 서열에 사실상 상보성인 단일 가닥으로 된 프로브서열로 이루어지는 전사 가능한 프로브와 혼성화시키는 단계, (b) 헤어핀 형성 혼성화 조건하에서, 사실상 어떤 비혼성화된 프로브도 전사시킴이 없이 목적하는 상기 서열과 혼성화된 상기 프로브를 전사시키는 단계 및 (c) 상기 혼성화된 프로브 중의 프로브 서열의 전사가 예정된 시간 동안에 일어나도록 하여 생성된 RNA 전사 생성물을 목적하는 상기 서열의 증폭화물로서 축적시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는 특정 핵산 서열의 증폭 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 프로브 서열이 상기 전사 가능한 5´ 서열 중에 함유됨을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 프로브 서열이 상기 자기 상보성 서열의 3´ 말단으로 부터 연장되는 서열 중에 함유되고 사실상 상기 5´ 전사 가능한 서열에 상보성이 아닌 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1 내지 3항중 어느 한 항에 있어서, 상기 생성되는 RNA 전사 생성물을 제2의 증폭단계에서 추가 증폭시킴을 특징으로 하는 방법.
  5. 제1 내지 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리머라제가 DNA 의존성 RNA 폴리머라제, 바람직하기로는 T7, T3 또는 SP6 박테리오파지 RNA 폴리머라제이고, 바람직하기로는 상기 프로모터 영역이 아래와 같은 헤어핀 형태를 갖는 염기 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
    (여기서 n은 2 내지 50의 정수임)
  6. (a) 목적하는 핵산 서열을 액체 혼합물 중에서, (1) 혼성화 조건하에서 프로모터 기능 영역을 가지는 헤어핀 구조를 형성할 수 있는 단일 가닥으로 된 자기 상보성 서열, (2) 상기 헤어핀 형성 혼성화 조건하에서 RNA 폴리머라제및 필요한 리보뉴클레오시드 트리포스페이트의 존재 중에서 전사될 수 있고, 상기 자기 상보성 서열의 5´ 말단으로부터 연장되는 전사 가능한 서열 및 (3) 목적하는 상기 서열에 사실상 상보성인 단일 가닥으로 된 프로브서열로 이루어지는 전사가능한 프로브와 혼성화시키는 단계, (b) 헤어핀 형성 혼성화 조건하 에서, 사실상 어떤 비혼성화된 프로브도 전사시킴이 없이 목적하는 상기 서열과 혼성화시킨 상기 프로브를 전사시키는 단계, (c) 상기 혼성화된 프로브 중의 프로브 서열의 전사가 예정된 시간동안 일어나도록 하여 생성된 RNA 전사 생성물을 목적하는 상기 서열의 증폭화물로서 축적시키는 단계 및 (d) 축적된 RAN전사 생성물을 검출하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는 시료 중의 특정 핵산 서열의 검출 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 프로브 서열이 상기 전사 가능한 5´ 서열중에 함유됨을 특징으로 하는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 프로브 서열이 상기 자기 성보성 서열의 3´ 말단으로 부터연장되는 서열 중에 함유되고 상기 5´ 전사 가능한 서열에 사실상 상보성이 아닌 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제6 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 생성된 RNA 전사 생성물을 제2의 증폭 단계에서 추가 증폭시킴을 특징으로 하는 방법.
  10. (a) (1) 혼성화 조건하에서 프로모터 기능 영역을 가지는 헤어핀 구조를 형성할 수 있는 단일 가닥으로된 자기 상보성 서열, (2) 상기 헤어핀 형성 혼성화 조건 하에서 RNA 폴리머라제 및 필요한 리보뉴클레오시드 트리포스페이트의 존재 중에서 전사될 수 있고 상기 자기 상보성 서열의 5´말단으로 부터 연장되는 전사 가능한 서열 및 (3) 목적하는 상기 서열에 사실상 상보성인 단일 가닥으로 된 프로브 서열로 이루어진 전사 가능한 헤어핀 프로브 및 (b) 상기 RNA 폴리머라제로 이루어짐을 특징으로 하는 특정 핵산 서열 증폭용 시약 키트.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019900018125A 1989-11-09 1990-11-09 전사 가능한 헤어핀 프로브를 이용한 핵산의 증폭 방법 KR910009928A (ko)

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