KR890002397A - 하이브리드 인터페론 및 그의 제조방법 - Google Patents

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하우프트만 루돌프
스웨틀리 피터
마인들 피터
아돌프 귄테르
팔크너 에드가
보도 게르하르트
마우레르-포기 인그리트
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베링거 인겔하임 인테르 나티오날 게엠베하
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내용 없음

Description

하이브리드 인터페론 및 그의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는parpATER 33의 구성 개요도
제2도는PRHW 14의 구성 개요도
제3도는 맥시셀(maxicells:이.콜라이 CSR 603)로부터 35s 표시된 단백질의 자동방사능 사진에 관한 도

Claims (63)

  1. α-인터페론 일부 및 오메가-인터페론 일부로 이루어진 하이브리드 인터페론, 그의 N-말단 Met 또는 N-포르밀-Met 유도체 및, 하이브리드 인터페론의 펩타이드 서열이 글라이코실화 부위를 함유할 경우에는 그의 N-글라이코실화된 유도체.
  2. 제1항에 있어서, 일반식(Ⅰ)의 Bg1Ⅱ하이브리드 인터페론, 그의 n-말단 Met 또는 N-포르밀-Met 유도체 및 하이브리드인터페론의 펩타이드 서열이 글라이코실화 부위를 함유할 경우에는 그의 N-글라이코 실화된 유도체.
    R1-GlnIle Phe-R2(Ⅰ)
    CAG ATCTTC
    BglⅡ
    상기 식에서, Bg1Ⅱ는 α1-, α2- 및 오메가-인터페론의 공통적인 Bg1Ⅱ 제한부위를 가리키고, R1은 Bg1Ⅱ절단부위 앞에 위치하는 α1-또는 α2-인터페론의 DNA 서열에 의해 암호화된 α1-또는 α2-인터페론의 펩타이드 서열이며, R2가 Bg1Ⅱ절단부위 다음에 위치하는, 오메가 인터페론의 DNA 서열에 의해 암호화된 오메가 인터페론의 펩타이드 서열이거나, 또는 R1은 Bg1Ⅱ절단부위 앞에 위치하는, 오메가 인터페론의 DNA서열에 의해 암호화된 오메가 인터페론의 펩타이드 서열이고, R2가 Bg1Ⅱ 절단부위 다음에 위치하는, α1- 또는 α2-인터페론의 DNA 서열에 의해 암호화된 α1- 또는 α2-인터페론의 펩타이드 서열이다.
  3. 제2항에 있어서, IFN-α2(Arg)를 α-인터페론으로 사용하고 오메가 1(Glu) 또는 오메가 1(Gly)인터페론을 오메가 인터페론으로 사용함을 특징으로 하는 Bg1Ⅱ하이브리드 인터페론, 그의 N-말단 Met 또는 N-포르밀-Met 유도체 및 그의 N-글라이코실화된 유도체.
  4. 제3항에 있어서, 하기 서열의 IFN-α2/오메가 1(Bg1Ⅱ)하이브리드 인터페론, 그의 N-말단 Met 또는 N-포르밀-Met 유도체 및 그의 N-글라이코실화된 유도체.
    상기 서열에서, X는 Gly 또는 Glu를 나타낸다.
  5. 제3항에 있어서, 하기 서열의 IFN-α2/오메가 1(Bg1Ⅱ) 및 그의 N-말단 Met 또는 N-포르밀-Met 유도체.
  6. 제1,2,3 또는 5항에서 청구한 하이브리드 인터페론을 함유하는 약제학적 조성물.
  7. 제3 또는 5하에서 청구한 하이브리드 인터페론을 함유하는 약제학적 조성물.
  8. 바이러스성 질환 치료용 약제학적 조성물을 제조하기 위한 제1,2,3, 또는 5항에서 청구한 하이브리드 인터페론의 용도.
  9. 제1,2,3 또는 5하에서 청구한 하이브리드 인터페론을 통상적인 담체와 결합시킴을 특징으로하여, 바이러스성 질환 치료에 적합한 약제학적 조성물을 제조하는 방법.
  10. 시험 동물을 면역화하고 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론, α- 및 오메가-인터페론에 대한 모노클로날 항체를 제조하기 위한 제1 내지 5항 중 어느 한항에서 청구한 하이브리드 인터페론의 용도.
  11. 제1항 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 신규의 하이브리드 인터페론을 암호화하는 서열을 함유하는 재조합 DNA분자.
  12. 하기 서열의 제4항에 청구한 IFN-α2/오메가 1(Bg1Ⅱ)하이브리드 인터페론의 암호화 DNA 분자, 및 그의 축퇴성(degenerate)변형체.
    상기 서열에서, Y는 뉴클리오타이드 G 또는 A를 나타낸다.
  13. 하기 서열의 제3 또는 5항에서 청구한 IFN-오메가 1/α(Bg1Ⅱ)하이브리드 인터페론의 암호화 DNA 분자 및 그의 축퇴성 변형체.
  14. 제11,12 또는 13항에서 청구한 재조합 DNA 분자를 함유함을 특징으로 하는, 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론을 암호화하는 벡터.
  15. 제14항에 있어서, 제12 또는 13항에서 청구한 재조합 DNA 분자를 함유함을 특징으로 하는 벡터.
  16. 제14 및 15항중 어느 한 항에 있어서 발현에 필요한 리플리콘(replicon)과 제어 서열 및 임의로 par-유전자좌를 추가로 함유함을 특징으로 하는 발현 플라스미드.
  17. 제16항에 있어서, 발현에 필요한 리플리콘과 제어 서열이 플라스미드pER103으로부터 유래되고 하기 서열 또는 trp 프로모터 활성을 보유하는 그의 변형 서열을 가짐을 특징으로 하는 발현 플라스미드.
  18. 제16항에 있어서, par-유전자좌가 플라스미드pPM31로부터 유래하고 하기 서열 또는 그의 작용성 변형체를 가짐을 특징으로 하는 발현 플라스미드.
    상기 서열에서, Z는 뉴클리오타이드 G 또는 C를 나타내고, W는 뉴클리오타이드 G를 나타내거나 또는 뉴클리오타이드가 없음을 나타낸다.
  19. 제14 내지 18항중 어느 한 항에 있어서, 플라스미드pAT153에서 BamHI-PstI 단편을 플라스미드parpER33의 BamHI-PstI 단편으로 대치시킴을 특징으로 하고, 하기의 제한지도로 특징지워지는 발현 플라스키드pRH72.
  20. 제14 내지 18항중 어느 한 항에 있어서, Bg1II로 선형화한 플라스미드pRH77에 플라스미드parpATER 33의 263bp 길이의 SphI-Bg1II 단편을 이용함을 특징으로 하고, 하기의 제한지도로 특징지워지는 발현 플라스미드pRH78r.
  21. 제11 내지 13항중 어느 한 항에 따른 유전 정보를 함유하는 형질 전환된 숙주 유기체.
  22. 제21항에 있어서, 형질 전환된 숙주 유기체가 원핵생물 또는 진핵생물임을 특징으로 하는 숙주 유기체.
  23. 제21항에 있어서, 유전정보가 복제에 필요한 리플리콘 및 제어 서열을 함유하는 벡터에 함유됨을 특징으로 하는 숙주 유기체.
  24. 제21항에 있어서, 유전정보가 적절한 숙주에서 복제될 수 있는 제14 내지 20항중 어느 한 항에 따른 벡터에 함유됨을 특징으로 하는 숙주 유기체.
  25. 제24항에 있어서, 숙주가 이.콜라이 HB 101임을 특징으로 하는 숙주 육기체.
  26. 제25항에 청구한 숙주 유기체를 후처리하여 수득함을 특징으로 하는, 제 11,12 또는 13항에서 청구한 DNA 서열의 제조방법.
  27. 제59항에서 청구한 플라스미드parpATER33을 Bg1II 및 SphI으로 분해하여 수득한 큰 단편을, 제41항에서 청구한 플라스미드pRHW14를 Bg1II 및 SphI로 분해하여 수득한 작은 단편에 연결하고, 계속해서 복제를 위해 이.콜라이 HB 101을 수득된 플라스미드로 형질진환시킴을 특징으로하여 제19항에서 청구한 발현 플라스미드pRH72를 제조하는 방법.
  28. 제61항에서 청구한 플라스미드pRH77을 Bg1II로, 절단하고, 제59항에서 따른 플라스미드parpATER33을 Bg1II 및 SphI으로 분해하여 수득한 263bp 길이의 단편에 연결한 다음, 계속해서 복제를 위해 이. 콜라이 HB 101을 수득된 플라스미드로 형질 전환시킴을 특징으로하여 제20항에서 청구한 발현 플라스미드pRH78r을 제조하는 방법.
  29. 세균 숙주를 제14 내지 20항중 어느 한 항에서 청구한 플라스미드로 형질 전환시킴을 특징으로하여, 제22 내지 25항중 어느 한 항에서 청구한 형질 절환된 숙주 유기체를 제조하는 방법.
  30. 적절한 세균 숙주 유기체를 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론을 암호화하는 유전정보로 형질 전환시키고, 이 유전 정보를 발현시키며, 생성된 하이브리드 인터페론을 숙주 유기체로부터 단리시킴을 특징으로하여 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론을 제조하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 숙주 이. 콜라이 HB 101을 제14 내지 20항중 어느 한 항에서 청구한 발현 플라스미드로 형질 전환시킴을 특징으로 하는 방법.
  32. α-인터페론의 일부 및 오메가 인터페론의 일부로 이루어진, 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론에 대한 모노클로날 항체를 함유하는 항체 친화성 컬럼을 사용하여, 재조합 방법으로 제조함 오메가-인터페론을 정제함을 특징으로하여 서열의 순수한 오메가 1인터페론을 제조하는 방법.
    상기 서열에서, 위치 111의 X는 Glu 또는 나타낸다.
  33. 제32항에 있어서, 재조합 방법에 의해 제조된 오메가-인터페론을, 제39 내지 41항중 어느 한 항에서 청구한 플라스미드 또는 그의 축퇴성 변형체로 형질 전화시킨 세균 숙주에 의해 제조함을 특징으로 하는 순수한 오메가 인터페론을 제조하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 사용된 숙주가 이.콜라이 세균, 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis), 종 세라티아 마르 세슨스(Serratia marcescens) 또는 슈도모나스(Pseudomonas)의 세균과 같은 장내세균임을 특징으로 하는 방법.
  35. 제33항에 있어서, 이.콜라이 HB 101을 세균 숙주로 사용함을 특징으로 하는 방법.
  36. 제33항에 있어서, 제53항에서 청구한 항체를 담체와 공유 결합된 항체로 사용함을 특징으로 하는 방법.
  37. 제32항에 있어서, 활성화된 세파로스를 담체로서 사용함을 특징으로 하는 방법.
  38. 제32항에 있어서, Mono-s 크로마토그래피컬럼을 사용함을 특징으로 하는 방법.
  39. 플라스미드parpATER33에서 HindIII-BamHI 단편을 플라스미드pRHW 11 또는pRHW12의 HindIII-BamHI 단편으로 대치시킴을 특징으로 하고, 하기 제한지도로 특징지워지는 오메가 1-인터페론의 발현 플라스미드.
    상기 제한지도에서, IFN W1은 IFN-오메가 1(Glu)을 암호화하는 DNA 서열을 나타낸다.
  40. 제39항에 있어서, 오메가 1-인터페론을 유전자가 하기의 DNA 서열 또는 그의 축퇴성 변형 서열을 함유함을 특징으로 하는 발현 플라스미드pRHW 13 또는pRHW 14.
    상기 서열에서, Y는 뉴클리오타이드 A 또는 G를 나타낸다.
  41. 제39항 또는 40항에 있어서, Y가 뉴클리오타이드 G를 나타냄을 특징으로 하는 발현 클라스미드pRHW14.
  42. parpATER33의 약 3750bp길이의 HindIII-BamHI 단편을, 오메가 1인터페론을 암호화하는 플라스미드를 HindIII 및 BamHI으로 분해하여 수득한 약 800bp 길이의 단편에 연결시킴을 특징으로하여, 제69, 40 또는 41항에서 청구한 발현 플라스미드를 제조하는 방법.
  43. 플라스미드pRHW11로부터 단리한 오메가 1(Glu)인터페론 유전자를 유전자로서 사용함을 특징으로하여 발현 플라스미드pRHW13을 제조하는 방법.
  44. 플라스미드pRHW12로부터 단리한 오메가 1(Gly)인터페론 유전자를 유전자로서 사용함을 특징으로하여 발현 플라스미드pRHW14를 제조하는 방법.
  45. 제39,40,41,59 또는 61항에서 청구한 발현 플라스미드로 형질 전환시킨 세균 숙주.
  46. 제39,40,41,59 또는 61항에서 청구한 발현 플라스미드로 형질 전환시킨 이.콜라이 세균.
  47. 제39,40,41,59 또는 61항에서 청구한 발현 플라스미드로 형질 전환시킨 이.콜라이 HB 101.
  48. 상응하는 세균 숙주를 제39,40,41,59 또는 61항에서 청구한 발현 플라스미드로 형질 전환시킴을 특징으로하여 제45,46 또는 47항에서 청구한 세균 숙주를 제조하는 방법.
  49. 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론으로 면역화한 마우스로부터의 비장세포를 골수종 세포와 세포 융합시켜 하이므리드 세포주를 수득하고, 수득한 하이브리드 세포주가 이들 하이브리드 인터페론에 대한 항체를 생산함을 특징으로 하는 시험관내 및 생체내 배양할 수 있는 하이브리드 세포주.
  50. 제49항에 있어서, 사용된 비장 세포를 BALB/C 마우스로부터 취하고 사용된 골수종 세포가 P3-X-63Ag8-653주의 것임을 특징으로 하는 하이브리드 세포주.
  51. 제49 및 50항중 어느 한 항에 있어서, 제2,3,4 또는 5항에서 청구한 하이브리드인터페론을 면역화용으로 사용함을 특징으로 하는 하이브리드 세포주.
  52. 제49,50 및 51항중 어느 한 항에 있어서, 제5항에서 청구한 하이브리드 인터페론을 면역화용으로 사용하고, 그것이 구성적으로 OMG-2.
  53. 타이프 α2, 오메가 1 및 제5항에서 청구한 하이브리드 인터페론의 사람 인터페론 활성을 전체적으로 또는 부분적으로 중화시킴을 특징으로 하는 모노클로날 항체.
  54. IgG-항체 생성 하이브리드 세포주를 세포 융합에 의해 제조하고, 아클론화시키며, 세포 성장후항-인터페론 특이성이 있는 IgG항체를 단리시킴을 특징으로하여, 제53항에서 청구한 항-사람 인터페론-α2, -오메가 1 및 항-하이브리드 인터페론 특이성이 있는, 마우스로부터의 신규한 IgG-항체를 제조하는 방법.
  55. 제54항에 있어서, 제5항에서 청구한 하이브리드 인터페론에 대해 면역화된 마우스로부터의 비장 세포 및 골수종 세포를 세포 융합에 사용함을 특징으로 하는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 세포주 P3-X-63Ag8-653을 골수증 세포로 사용함을 특징으로 하는 방법.
  57. 제55항에 있어서, 제5항에서 청구한 하이브리드 인터페론에 대해 면역화된 BALB/C 마우스로부터의 비장 세포를 사용함을 특징으로 하는 방법.
  58. 제53항에서 청구한 모노클로날 항체를 활성화된 담체와 공유적으로 결합시킴을 특징으로 하여 항체 친화성 담체를 제조하는 방법.
  59. 플라스미드PAT153에서 BamHI-PstI 단편을 플라스미드parpER33의 BamHI0ParI 단편으로 대치시키고, 하기의 제한지도로 특징지워지는 플라스미드parpATER33.
  60. 플라스미드parpER33을 BamHI 및 PsrI으로 분해하여 수득한 작은 단편을, 플라스미드PAT 153을 BamHI 및 PsrI으로 분해하여 수득한 큰 단편에 연결시켜 수득함을 특징으로 하는 제59항에서 청구한 플라스미드parpATER33의 제조방법.
  61. 플라스미드pRHW14에서 큰 SphI-Bg1II 단편을 플라스미드parpATER33의 작은 SphI-Bg1II 단편으로 대치시키고, 하기의 제한지도로 특징지워지는 발현 플라스미드pRH77.
  62. 제41항에 따른 플라스미드pRHW14를 Bg1II 및 SphI으로 분해하여 수득한 큰 단편을, 제59항에 따른 플라스미드parpATER33을 Bg1II 및 SphI으로 분해하여 수득한 것으로 IFN-α(Arg)의 C말단을 암호화하는 작은 단편에 연결시키고, 계속해서 세균 숙주를 수득된 플라스미드로 형질 전환시킴을 특징으로 하여, 제61항에서 청구한 발현 플라스미드pRH77을 제조하는 방법.
  63. 제1 내지 5항중 어느 한 항에서 청구한 하이브리드 인터페론, IFN-α2 또는 IFN-오메가 1의 정제를 위한 제53항에서 청구한 모노클로날 항체의 용도.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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