KR840004451A - 재조합체 dna 클론화벡터의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 : 플라스미드 SCP2 및 SCP2*의 제한 부위도.
제2도 : 플라스미드 pJL120 및 pJL121의 제한 부위도.
Claims (23)
- 플라스미드 SCP2 또는 SCP2*의 복제기능원-함유제한 프래그먼트와 a) 이. 콜라이복제원을 포함하는 제한 프래그먼트, b) 이. 콜라이세포(이는 그에 대한 내성이 부여되는 항생제에 대해 감수성을 나타낸다)로 전환될 때 한가지 이상의 항생제에 대한 내성을 부여하는 한가지 이상의 DNA분절, 및 c) 스트렙토마이세스 세포(이는 그에 대한 내성이 부여되는 항생제에 대해 감수성을 나타낸다)로 전환될 때 독립적으로 스트렙토마이세스 tra 기능 및, 한가지 이상의 항생제에 대한 내성중 어느 하나 또는 두가지를 모두 부여하는 한가지 이상의 DNA분절을 포함한 한가지 이상의 DNA을 결찰시킴을 특징으로 하는 재조합체 DNA 클론화벡터의 제조방법.
- 제1항에 있어서, 플라스미드 SCP2 또는 SCP2*의 제한 프래그먼트가 ∼5.4kb EcoRⅠ-SalⅠ 프래그먼트, ∼6.0kb SalⅠ 프래그먼트, ∼19kb EcoRⅠ-HindⅢ 프래그먼트, 또는 ∼31kb EcoRⅠ 프래그먼트인 방법.
- 제1 또는 2항에 있어서, 이. 콜라이복제원이 pBR322복제원, pBR324복제원, pBR325복제원, pBR327복제원 또는 pBR328복제원인 방법.
- 제1,2 또는 3항에 있어서, 이. 콜라이에 내성을 부여하는 한가지 이상의 DNA분절이 암피실린, 클로람페니콜 또는 테트라사이클린에 대한 내성을 부여하는 DNA분절인 방법.
- 제1 내지 4항의 어느 하나에 있어, 스트렙토마이세스에 내성을 부여하는 한가지 이상의 DNA분절이 네오마이신 또는 티오스트렙톤에 대한 내성을 부여하는 DNA분절인 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어, 항생제에 대한 내성을 부여하는 DNA분절이 플라스미드 pJL192의 ∼7.7kb EcoRⅠ-HindⅢ 제한 프래그먼트, 플라스미드 pJL4의 ∼7.7kb EcoRⅠ-HindⅢ 제한 프래그먼트, 플라스미드 pJL4의 ∼7.5kb EcoRⅠ-부분적 SalⅠ 제한 프래그먼트, 플라스미드 dJL2의 ∼1.35kb BamHⅠ 제한 프래그먼트, 또는 플라스미드 pJL193의 ∼1kb BclⅠ 제한 프래그먼트인 방법.
- 제1 내지 6항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 pJL180, pJL181, pJL125, pJL190, pJL192, pJL195, pJL199, pJL122, pJL123, pJL124, pJL126, pJL176, pJL1200, pJL1201, pJL1020, pJL1203, pJL1204, pJL1205, pJL1206, pJL1706, pJL1800, pJL1801, pJL1900, pJL1902, pJL1905, pJL193, pJL196, pJL197, pJL198, pHJL212, pHJL213, 또는 pJL1907를 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 SCP* 및 pJL325의 EcoR 분해물을 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL120 및 pJL121을 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느하나에 있어서, 플라스미드 SCP*의 ∼6.0kb SalⅠ 분해물을 pJL325의 SalⅠ 분해물에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL180 및 pJL181을 제조하는 방법.
- 제8항에 있어서, 플라스미드 pJL121의 부분적 SalⅠ 분해물을 자체-결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL125를 제조하는 방법.
- 제8항에 있어서, 플라스미드 pJL121의 ∼19.0kb EcoRⅠ-HndⅢ 분해물을 플라스미드 pJL4의 ∼7.7kb EcoRⅠ-HindⅢ 프래그먼트에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL190을 제조하는 방법.
- 제11항에 있어서, 스트렙토마이세스 세포, 바람직하게는 그리세오푸스커스종, 세포에서, 네오마이신에 대한 고도의 내성에 관해 플라스미드 pJL190에 의해 전환된 세포를 선택하여 시험하고, 내성세포로부터 플라스미드 pJL192를 분리해냄을 특징으로 하여 플라스미드 pJL192를 분리하는 방법.
- 제10항에 있어서, 플라스미드 pJL125의 5.4kb EcoRⅠ-SalⅠ 프래그먼트를 플라스미드 pJL4의 ∼7.5kb EcoRⅠ-부분적 SalⅠ 프래그먼트에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL195를 제조하는 방법.
- 제13항에 있어서 스트렙토마이세스, 바람직하게는 그리세오푸스 커스종세포에서, 네오마이신에 대한 고도의 내성에 관해 플라스미드 pJL195에 의해 전환된 세포를 선택하여 시험하여, 내성 세포로부터 플라스미드 pJL199를 분리함을 특징으로 하여 플라스미드 pJL199를 분리하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 SCP2의 부분적 BamHⅠ 분해물을 플라스미드 pJL322의 ∼4.4kb BamHⅠ 프래그먼트에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL114를 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 pBR328의 BamHⅠ 분해물을 플라스미드 pLR2의 ∼1.35kb 제한 프래그먼트에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL193을 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 pJL192의 ∼7.5kb EcoRⅠ-부분적 SalⅠ 분해물을 플라스미드 pJL125의 ∼5.4kb EcoRⅠ-SalⅠ 제한 프래그먼트에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL196을 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 pJL193의 ∼1kb BclⅠ 제한 프래그먼트를 플라스미드 pJL196의 부분적 BamHⅠ 분해물에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pJL197 및 pJL198을 제조하는 방법.
- 제1 내지 5항의 어느 하나에 있어서, 플라스미드 pJL193의 ∼1kb BclⅠ 제한 프래그먼트를 플라스미드 pJL195의 부분적 BamHⅠ 분해물에 결찰시킴을 특징으로 하여 플라스미드 pHJL212 및 pHJL213을 제조하는 방법.
- 1) 전환조건하에서, a) 플라스미드 SCP2 또는 SCP2*의 복제원 및 P유전자-함유제한 프래그먼트 및 b) P유전자의 EcoRⅠ 제한 부위내로 2클론화되는 비-치사 DNA 서열로 이루어지는 재조합체 DNA클론화벡터와 스트렙토마이세스 세포를 혼합하고,2) 이를 스트렙토마이세스 지시 균주상에서 배양시키고 M 두진 표현형을 보이는 콜로니를 선택함을 특징으로 하여 전환체를 검출하는 방법.
- 제20항에 있어서, 복제원 및 P 유전자를 포함한 제한 프래그먼트가 플라스미드 SCP2*의 프래그먼트인 방법.
- 제20 또는 21항에 있어서 스트렙토마이세스 세포 및 지시균주가 바람직하게는 리비단스, 그리세오푸스커스, 프라디아 또는 앰보파시엔스종인 방법.
- 제20,21 또는 22항에 있어서, 재조합체 DNA 클론화벡터가 플라스미드 pJL120, pJL121, pJL125, pJL190, pJL192, pJL195, pJL197, pJL198, pHJL212 또는 pHJL213인 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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