KR830006422A - 인터페론의 제조방법 - Google Patents

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KR830006422A KR1019810002386A KR810002386A KR830006422A KR 830006422 A KR830006422 A KR 830006422A KR 1019810002386 A KR1019810002386 A KR 1019810002386A KR 810002386 A KR810002386 A KR 810002386A KR 830006422 A KR830006422 A KR 830006422A
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반 노만 괴델 데이비드
페스트카 시드니
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쿠르트 네셋보쉬, 한스 스튀클린
에프. 호프만-라 롯슈 앤드 캄파니 아크티엔-게젤샤프트
토마스 디. 킬레이
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Abstract

내용 없음

Description

인터페론의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
도면 1 : 인체의 백혈구에서 분리된 모든 인터페론에서 공통적인 것으로 균질물로 정제된 두개의 아미노산 서열을 나타낸다.
이 펩타이드 유전자 부호를 지닌 mRNA서열을 표시하고 이는 DNA서열과 상응한다.
A, T, G, C 및 U는 각기 염기 아데닌, 티민, 구아닌, 사이토신 및 우라심을 함유하는 뉴클레오타이드를 나타낸다.
N은 뉴클레오타이드 A, G, C 및 U중의 어느 하나를 나타낸다. 폴리뉴클레오타이드는 5'에서 3' 방향으로 판독하며, 이중 나선(d.s) DNA를 표시하는 경우 하단 또는 암호화되지 않은 나선에 대해서는 역으로 일치된다.
도면 2 : 전위 LeIF 플라스미드를32P-라벨된 합성데옥시올리고 뉴클레오타이드와 교잡시키는 방사선도를 나타낸다.
도면 3 : 각기 "A"내지 "H"로 명명된 백혈구 인터페론 표현시 사용된 8개의 유전자 편의 뉴클레오타이드 서열(유전자 부호 나선)을 나타낸다. 각 LeIF에 대한 ATG번역 개시 코돈과 종료의 3개의 아미노산부호에는 밑줄을 그었다. 종료 고든 또는 종료부호 뒤에는 3'비번역 부위가 따른다.
LeIF A전장 유전자에서는 1개의 코돈이 빠져있으며 이는 도면의 3세 번째선 A상에 표시되어 있다. 5' 비번역 부위는 리이더 서열앞에 위치한다. 유전자편 E에서는 리이더 전서열이 완전하지 않으나 추정되는 완전 LeIF E에 대한 유전자는 전부 함유되어 있다.
유전자편 G는 완전한 유전자 부호 서열이 이루어져 있지 않다.
도면 4 : 뉴클레오타이드 서열로 표시된 8개의 LeIF단백질 서열 비교이다. 약자는 IUPAC-IUB의 생화학 명명위원회에서 권고된 것을 사용하였다.
A 알라닌, C 시스테인, D, 아스파트산, E 글루탐산, F페닐 알라닌, G 글리신, H 히스티딘, I 이소로이신, K 라이신, L 로이신, M 메티오닌, N 아스파라긴, P 프롤린, Q 글루타민, R, 아르기닌, S 세련, T 트레오닌, V 발린, W 트립토판 및 Y 티로신이다. 숫자는 아미노산 위치이다. (S는 시그널 펩타이드타). 타 LeIF는 166아미노산 열임에 비해 LeIF A의 44위치는 생략되어 있어 아미노산 열이다.
LeIF E서열은 유전자 부호중 가외로 존재하는 뉴클레오타이드(도면 3의 187위치)를 무시하고 측정하였다. 별표는 종료 코돈을 나타낸다. 모든 LEIF의 (유전자LeIF E는 제외)에 공통되는 아미노산을 표시하였다. 밑줄친 아미노산을 또한 인체 선유 아세포 인터페론에도 존재하는 것이다.
도면 5 : 8가지 타입의 LeIF분지체 cDNA(A 부터 H)의 앤토뉴클레이즈 제한도면을 나타낸다.
혼성플라스미드는 dC : dG테일링법에 의해 제조된다(Goeddel, D.V.et al, Nature 287, 411-416[1980]). cDNA는 Pst I을 사용하여 삽입시킬 수 있다.
각 cDNA말단에서의 선은 측면호모폴리머 dC : dG 말단을 나타낸다. Pvu II, EcoR I 및 Bg1 II제한 부위의 위치를 표시하였다. 도면의 어두운 점 부분은 완전의 유전자부호 서열을 나타내고 평행사선 부부은 시그널펩타이드 유전자부호 서열을 나타내며 공백부분은 3' 및 5' 비암호화된 서열을 나타낸다.
도면 6 : 완전 LeIF A를 직접 미생물적으로 합성할 수 있는 유전자 부호를 지닌 유전자 제법을 도식으로 나타낸다. 제한 부위 및 서열을 표시하였다.
("Pst I"등). "b.p"는 "염기쌍"을 나타낸다.

Claims (83)

  1. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열을 함유하며 전서열을 수반하지 않는 폴리펩타이드를 표현할 수 있는 복제성 미생물 표현 비히클로 형질전환시킨 미생물 배지를 성장시켜, 상기 폴리펩타이드를 표현시키고, 이 폴리펩타이드를 회수함을 특지응로 하는 상기 폴리펩타이트의 제조방법.
  2. 폴리펩타이드가 글리코실화되지 않은 특허청구의 범위 1에 따르는 방법.
  3. 폴리펩타이드가 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 언급된 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 아미노산 메티오닌을 함유하는 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  4. 폴리펩타이드가 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 사익 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 분해될 수 있는 접합물 또는 미생물 시그널 단백질을 함유하는 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  5. 인터페론의 아미노산 서열에 Cys-Ala-Trp-Glu-Val-Val-Arg-Ala-Glr-Ile-Met-Arg-Ser의 부분서열이 함유된 특허청구 범위 1내지 4중의 어느 한 가지에 따르는 방법.
  6. 인터페론 서열에 도면 4의 전 서열에 표시된 바와같이 위치하는 특정한 아미노산이 함유된 특허청구 범위 1내지 4중의 어느 한 가지에 따르는 방법.
  7. 폴리펩타이드가 인체 백혈구 인터페론(LeIF)A,B,C,D,E,H,I 및 J로 구성된 그룹중에서 선택되는 특허청구 범위 1내지 6중의 어느 한가지에 따르는 방법.
  8. 인체 백혈구 인터페론 A(LeIF A)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  9. 인체 백혈구 인터페론 B(LeIF B)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  10. 인체 백혈구 인터페론 C(LeIF C)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  11. 인체 백혈구 인터페론 D(LeIF D)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  12. 인체 백혈구 인터페론 F(LeIF F)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  13. 인체 백혈구 인터페론 H(LeIF H)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  14. 인체 백혈구 인터페론 I(LeIF I)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  15. 인체 백혈구 인터페론 J(LeIF J)제제에 대해 특허청구된 특허청구 범위 1에 따르는 방법.
  16. 미생물이 박테리아인 특허청구 범위 1내지 15중의 어느 하나에 따르는 방법.
  17. 박테리아가 이 콜리인 특허청구 범위 16에 따르는 방법.
  18. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산서열을 함유하며 전서열을 수반하지 않는 폴리펩타이드를 표현할 수 있는 복제성 미생물 표현 비히클로 미생물을 형질전환시키고, 이 형질 전환된 미생물을 배양시킴을 특징으로 하여 상기 폴리펩타이드를 생산할 수 있는 미생물을 제조하는 방법.
  19. 표현 비히클이 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 언급된 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 아미노산 메티오닌을 함유하는 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  20. 표현 비히클이 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 언급된 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 분해될 수 있는 접하불 또는 미생물 시그널 단백질을 함유하는 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 버무이 18에 따르는 방법.
  21. 표현 비히클이 Cys-Ala-Trp-Glu-Val-Val-Arg-Ala-Glu-Ile-Met-Arg-Ser의 부분 서열을 함유하는 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  22. 표현 비히클이 도면 4의 전서열에 표시된 바와같이 위치하는 특정한 아미노산 서열이 함유된 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  23. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론(LeLF)A,B,C,D,F,G,I 및 J로 구성되는 그룹중에서 선택되는 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  24. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 A(LeLF A)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  25. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 B(LeLF B)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  26. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 C(LeLF C)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  27. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 D(LeLF D)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  28. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 F(LeLF F)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  29. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 H(LeLF H)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  30. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 I(LeLF I)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  31. 표현 비히클이 인체 백혈구 인터페론 J(LeLF J)를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 18에 따르는 방법.
  32. 미생물이 박테리아인 특허청구 범위 18내지 31중의 어느 것이 따르는 방법.
  33. 박테리아가 이 콜리인 특허청구 범위 32에 따르는 방법.
  34. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열을 함유하며 전서열을 수반하지 않는 폴리펩타이드를 코딩시키는 첫번째 DNA서열을 제조한 후 이 첫번째 DNA서열을 상기 폴리펩타이드를 미생물에 표현시킬 수 있는 두번째 DNA서열과 결합시킴을 특징으로 하여 형질전환체 미생물에 상기 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 복제성 표현 비히클을 제조하는 방법.
  35. 두번째 서열이 박테리아 표현시킬 수 있음을 특징으로 하는 특허청구 범위 34에 따르는 복제성 세균 표현 비히클을 제조하는 방법.
  36. 박테리아가 이 콜리인 특허청구 범위 35에 따르는 방법.
  37. 폴리펩타이드가 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 상기 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 아미노산 메티오닌을 함유하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한 가지에 따르는 방법.
  38. 폴리펩타이드가 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열 및 상기 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 분해될 수 있는 접할물 또는 미생물 시그널 단백질을 함유하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  39. 폴리펩타이드가 Cys-Ala-Trp-Glu-Val-Val-Arg-Ala-Glu-Ile-Met-Arg-Ser부분 서열을 함유하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한 가지에 따르는 방법.
  40. 폴리펩타이드가 도면 4의 전서열에 표시된 바와같이 위치하는 특정의 아미노산으로 특징지워지는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  41. 폴리펩타이드가 인체 백혈구 인터페론(LeIF)A,B,C,D,F,H,I 및 J로 구성되는 그룹중에서 선택되는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한 가지에 따르는 방법.
  42. 인체 백혈구 인터페론 A(LeLF A)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  43. 인체 백혈구 인터페론 B(LeLF B)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  44. 인체 백혈구 인터페론 C(LeLF C)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  45. 인체 백혈구 인터페론 D(LeLF D)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  46. 인체 백혈구 인터페론 F(LeLF F)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  47. 인체 백혈구 인터페론 H(LeLF H)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  48. 인체 백혈구 인터페론 I(LeLF I)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  49. 인체 백혈구 인터페론 J(LeLF J)를 표현하는 특허청구 범위 34내지 36의 어느 한가지에 따르는 방법.
  50. 인체 백혈구 인터페론 A,B,C,D,F,H,I 및 J로 구성되는 그룹중에서 선택되는 인터페론의 아미노산 서열을 함유하는 미생물학적으로 제조된 폴리펩타이드를 무독성 불활성의 치료학적으로 배합가능한 담체와 혼합하여 생성된 혼합물을 적절한 약제학적 용량제형으로 제조함을 특징으로 하여 상기 폴리펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물을 제조하는 방법.
  51. 인체 백혈구 인터페론 A,B,C,D,F,H,I 및 J로 구성되는 그룹에서 선택된 인터페론의 아미노산 서열 및 무독성, 불활성의 치료학적으로 배합가능한 담체물질을 함유하는 미생물학적으로 제조된 폴리펩타이드를 함유하는 약제학적 조성물.
  52. 전술된 바와같은 폴리펩타이드, 복제성 미생물 표현 비히클 및 미생물을 제조하는 방법.
  53. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 아미노산 서열을 코딩시키는 서열을 함유하고 전서열은 수발하지 않는 DNA서열
  54. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 아미노산 메티오닌을 함유하는 상기 인터페론의 아미노산 서열을 코딩시키는 서열을 함유하는 DNA서열
  55. 성숙 인체 백혈구 인터페론의 통상의 첫 아미노산의 N-말단에 부착된 분해될 수 있는 접합물 또는 미생물 시그널단백질을 함유하는 상기 인터페론의 아미노산 서열을 코딩시키는 서열을 함유하는 DNA서열.
  56. Cys-Ala-Trp-Glu-Val-Val-Arg-Ala-Glu-Ile-Met-Arg-Ser의 부분 아미노산 서열을 코딩시키는 서열을 함유하는 특허청구 범위 53내지 55중의 어느 한 가지에 따르는 DNA서열
  57. 도면 4의 전서열에 표시된 바와같이 위치하는 특정한 인터페론 아미노산을 코딩시키는 코돈을 함유하는 특허청구 범위 53내지 57중의 어느 하나에 따르는 DNA서열
  58. 인체 백혈구 인터페론 (LeLF)A,B,C,D,F,H,I 및 J로 구성되는 그룹중에서 선택된 폴리펩타이드를 코딩시키는 특허청구 범위 53내지 57중의 어느 하나에 따르는 DNA서열
  59. 인체 백혈구 인터페론 A(LeLF A)를 코딩시키는 DNA서열
  60. 인체 백혈구 인터페론 B(LeLF B)를 코딩시키는 DNA서열
  61. 인체 백혈구 인터페론 C(LeLF C)를 코딩시키는 DNA서열
  62. 인체 백혈구 인터페론 D(LeLF D)를 코딩시키는 DNA서열
  63. 인체 백혈구 인터페론 F(LeLF F)를 코딩시키는 DNA서열
  64. 인체 백혈구 인터페론 H(LeLF H)를 코딩시키는 DNA서열
  65. 인체 백혈구 인터페론 I(LeLF I)를 코딩시키는 DNA서열
  66. 인체 백혈구 인터페론 J(LeLF J)를 코딩시키는 DNA서열
  67. 도면 3의 서열 A,B,C,D,F 및 H로 구성되는 그룹중에서 선택되는 DNA서열
  68. 도면 8의 서열 A,C,H,I 및 J로 구성되는 서열중에서 선택되는 DNA서열
  69. 언급된 폴리펩타이드를 미생물학적으로 표현시킬 수 있는 DNA서열과 결합시킨 특허청구 범위 53내지 68중의 어느 하나에 따르는 DNA서열
  70. 박테리아에 언급된 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 DNA서열과 결합시킨 특허청구 버무이 53내지 68중의 어느 하나에 따르는 서열
  71. 박테리아가 이 콜리인 특허청구 범위 70에 따르는 방법.
  72. 특허청구 범위 53내지 71에 따르는 DNA서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드를 형질전환된 미생물에 표현시킬 수 있는 복제성 미생물 표현 비히클
  73. 박테리아에 폴리펩타이드를 표현시킬 수 있는 특허청구 범위 72에 따르는 표현 비히클
  74. 박테리아가 이 콜리인 특허청구 범위 73에 따르는 표현 비히클
  75. 미생물 표현 비히클이 플라스미드인 특허청구 72내지 74중 어느 하나에 따르는 미생물 표현 비히클
  76. pLeIF A trp25, pLeIF trp7 및 pLeIF F trp1으로 구성되는 그룹중에서 선택된 폴라스미드
  77. pLeIF C trp35, 및 pLeIF D trp11로 구성된 구룹중에서 선택된 플라스미드
  78. pLeIF G 및 pLeIF H로 구성된 그룹중에서 선택돈 플라스미드
  79. pLeIF trp1 및 pLeIF J trp1으로 구성되는 그룹중에서 선택된 플라스미드
  80. 특허청구 범위 72내지 79중의 어느 하나에 특허청구된 비히클로 형질전환시킨 미생물
  81. 특허청구 범위 72내지 79중의 어느 하나에 특허청구된 비히클로 형질전환시킨 박테리아.
  82. 특허청구 범위 72내지 79중의 어느 하나에 특허청구된 비히클로 형질전환시킨 이 콜리균주
  83. 특허청구 범위 72내지 79중의 어느 하나에 특허청구된 비히클로 형질전환시킨 이 콜리 K-12균주 294
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019810002386A 1980-07-01 1981-07-01 인터페론의 제조방법 KR860001558B1 (ko)

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