KR800001409B1 - 발효에 의한 키산탄형 다당류의 제조방법 - Google Patents

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Description

발효에 의한 키산탄형 다당류의 제조방법

첨부도면은 실시예 5를 설명한 것으로서, 발효 시간에 대한 잔류 당 함량과 점도를 도시한 그라프이다.

본 발명은 발효에 의한 키산탄형 다당류 검으로 된 생중합체(生重合體)의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 방법에 사용된 키산토모나스 박테리아류의 신규한 균주는 물론 이러한 균주의 분리 및 상술한 발효방법에 의해 얻어지는 생성물에 관한 것을 내포하고 있다.

수년동안 외기의 물리적 조건에 매우 민감하지 않은 유동성질을 가진 점성 조성물, 예컨대 몇몇종의 다당류를 기재로한 점성조성물에 많은 관심을 보여왔다. 이러한 조성물은 석유공업, 식품공업을 위시한 각종공업(의약, 섬유, 화약분야)에서 점조제로 이용되고 있다.

특히, 관심의 대상이 되는 다당류는 키산토모나스 종류의 박테리아에 의하여 생성되는 다당류이다. 비교시험과 연구결과에 의하면 만노스, 글루코스, 글루코린산염, 아세틸기 및 피루빈 기를 함유하는 이들 물질은 덱스트란류 및 이와 관련된 다당류보다 점조력이 훨씬 우세한 것은 물론 pH와 온도조건에 대해 매우 둔감한 유동 성질을 나타냄이 판명되었다.

이. 에이. 쿠퍼(E. A. Cooper)와 제이. 에프. 프레스톤(J. F. Preston)이 1935년 그의 논문(Enzymeformation and polysaccnaride synthesis by bacteria; Biochem. J. 29, 2267-2277)에서 식물에 기생하는 박테리아가 다당류를 생성할 수 있다는 것을 입증한 이래 다당류의 생화학적 생성에 관한 많은 논문이 보고되었다. 사용되는 미생물은 일반적으로 키산토모나스 종류, 특히 키산토모나스 캄페스트리스 종(가장 많이 사용되는 종의 하나임), 키산토모나스 베고니애 종, 인카내 종, 베시카토리아 종, 파세올리 종에 속하는 것이지만, 아트로박터 균주 또한 이미 제시된 바 있다. 제시된 발효배지는 최소한 하나의 질소원과 하나의 탄소원, 인산염 이온 및 미량원소를 함유하며, pH와 온도는 발효중에 약 6-8.5 및 25-35℃이다.

사용되는 발효 방법은 일반적으로 15-30g/ℓ의 당(sugar)(가장 일반적으로 사용되는 탄소원임)함량을 가진 수성 배지로부터 얻은 발효제를 통기 및 교반 또는 진탕함으로서 수행된다. 질소원은 건류 찌꺼기, 펩톤류, 효모 추출물, 옥수수 끓인액(corn steep)과 같은 복합질소를 함유하는 물질중에서 선택된다.

또한 어떤 발효 방법에서는 탄소원과 질소원이 둘다 함유된 물질(예컨대 옥수수가루)을 사용한다. 이러한 모든 발효 방법에 있어서, 가장 광범위하게 사용되는 박테리아 균주는 키산토모나스 캄페스트리스, 특히 키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459이다.

본 발명은 신규의 키산토모나스 균주에 의한 적당한 기질의 발효에 의해 키산탄형의 다당류를 제조하는 신규 방법을 제공하는 것으로서, 상술한 신규방법은 키산토모나스와 통상의 복합유기 질소원을 사용하는 공지방법에 비해 다당류의 수율을 향상시키며 발효 종료시 배지의 점성이 증가하는 개량된 다당류의 제조를 가능하게 한다.

본 발명에 따른 제조방법은, 약 5,5-9의 pH와 약 25℃-35℃의 온도에서 키산토모나스 종류의 미생물을 접종한 탄소와 질소원을 기본으로 하는 배지를 발효하는 것으로 구성되며, 제1계열의 아미노산중의 하나, 즉 글루타민산, 글루타민, 아르기닌, 티로신, 트레오닌, 아스파라긴산, 아스파라긴, 프롤린, 로이신 및 트립토판중의 하나를 함유하는 배지상에서 만족한 성장을 나타내는 키산토모나스 균주를 사용하고 또 발효배지로서 5-55g/ℓ 이상의 탄수화물과 상기 아미노산중 최소한 하나의 아미노산 및 동일조건과 동일한 총 질소함량하에서 옥수수 끓인 액에 의해 생성되는 다당류의 최소한 50%에 해당하는 다당류를 생성할 수 있는 그외의 아미노산으로 구성된 배자를 사용함을 특징으로 하는바, 질소원은 총 질소의 0.1-5g/ℓ, 바람직하기로는 0.2-2g/ℓ에 해당한다.

상기 용어중 “만족한 성장”이라 함은 미생물이 동일한 조건과 동일한 총 질소 함량하에서 상술한 제1계열의 아미노산의 존재하에 키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459의 균주를 사용함에 의하여 달성되는 것 보다 최소한 20%이상 높은 점도를 가진 다당류를 생성할 수 있는 성장을 의미한다.

이러한 수율 증가는 “만족한 성장”이란 용어의 정의에 대한 표준시험으로 간주되는 하기 시험을 통해 특별히 평가할 수 있다. 생성배지로 사용된 것은 하술한 실시예 1의 시험 B중의 하나이며 그 조성은 다음과 같다.

시험방법은 한편은 키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459로, 또 한편은 본 발명에 따른 키산토모나스 균주로 접종하면서 PH, 7.5; 온도, 30℃, 기간 4일; 교반 200r. p. m의 시험 조건하에서 수행되었으며 질소원은 두 경우가 아주 동일하였으며 상술한 제1계열의 아미노산중의 하나 또는 여러개로 구성되어 있다.

또한 상술한 제1계열의 아미노산의 존재하에서 “만족한 성장”을 하는 본 발명에 따른 균주는 글리코골리진, 시스테인, 히스티딘, 이소로이신 및 세린 같은 제2계열의 아미노산중의 하나 또는 여러개의 존재하에서는 생성율이 매우 낮다는 부차적인 특징을 보여줌을 후술하는 실시예를 통해서 알았다.

본 발명의 바람직한 예에 의하면, 발효 배지의 질소원의 총질소의 70-100%는 상술한 제1계열의 아미노산의 질소에 의하여 나타난다.

제1계열의 아미노산의 일반적인 특징은 이들이 생성배지의 질소원으로만 사용될 때 동일조건과 동일한 총 질소함량하에서 유일한 질소원으로서 옥수수 끓인액을 사용하여 얻은 것보다 다당류 생성율이 높게 얻어진다는 점이다. 다당류의 수율은 브루크휠드 점도계로 점도를 측정함으로서 평가할 수가 있다. 환언하면, 제1계열의 아미노산은 옥수수 끓인 액으로 얻은 것보다 높은 점도를 제공하지만, 제2계열의 아미노산은 옥수수 끓인액으로 얻은 것보다 낮은 점도를 제공한다.

따라서 본 발명자들은 하술한 바와 같이 포함된 아미노산과 새로이 분리된 각종 균주 사이의 상호작용에 있어서 개개의 아미노산보다 많은 차이가 있다는 것을 이용하여 키산토모나스 캄페스트리스의 균주에 의해 공지의 유기 질소원을 발효시키는 공지방법에 비해 다당류의 생산량을 증가시키는 방법을 개발하는 데 성공하였다.

본 발명자들은 주어진 아미노산에서 분리된 균주가 다수의 기타아미노산에서 성장할 수 있음을 발견하였다. 그러나 모든 아미노산이 동일하지는 않다. 특히, 잠복기는 소요 아미노산에 따라 다소 연장되며, 최종 성장상태 뿐만아니라 최종 점도 역시 다소차이가 있다. 본 발명자들은 동일량의 총 질소와 다수의 아미노산 조건하에서 발효 종료시에 달성된 점성이 동일 조건하에서 옥수수 끓인 액과 같은 종래의 질소 복합원에 대하여 얻어지는 점성보다 높으며, 이러한 점성은 몇몇 경우에 있어서는 옥수수 끓인 액에서 얻은 점성의 두배에 달한다는 놀라운 사실을 발견하였다(점성은 별다른 언급이 없는한 부루크휠드 점도계, 봉 LV 4-30r.p.m으로 측정하여 샌티포이즈로 표시하였다).

가장 높은 점성을 나타내주는 아미노산이 본 발명에 따른 제조방법에 사용되는 균주의 분리를 수행하기 위하여 사용된 아미노산과 반드시 일치하지는 않음을 언급하여 둔다. 모든 아미노산이 불균등한 사실은 종래의 복합질소원으로부터 얻은 빈약한 결과로서 설명될 수 있다. 종래의 복합질소원은 아미노산을 일정 비율로 혼합한 혼합물이다. 이러한 아미노산 중 혹종의 것은 생중합체의 고도 생성을 유도하며, 그외의 아미노산은 생성 촉진력이 훨씬 뒤떨어지지만 모두 박테리아의 배양에 사용될 수 있다. 이러한 사실은 발효의 종료시에 얻은 생체고분자의 양이 본 명세서에 나타난 가장 효과적인 아미노산으로 얻은 생체고분자의 양보다 적다는 것으로 입증되고 있다.

본 발명의 특징에 의하면, 발효배지는 제이인산칼륨으로 환산하여 인산염 이온 0.10g/ℓ-20g/ℓ, 바람직하기는 0.5g/ℓ-5g/ℓ 및 마그네슘 이온을 위시하여 하나 또는 여러개의 미량원소를 함유하고 있다. 발효배지 내의 바람직한 마그네슘이온 함량범위는 마그네슘으로 환산하여 0.0025g/ℓ-1g/ℓ이며 마그네슘 원으로 적당한 것은 황산 마그네슘, 초산 마그네슘, 염화 마그네슘 또는 질산 마그네슘과 같은 가용성 마그네슘 염이다. 특히 인산염이온은 인산 또는 가용성 인산염, 예컨대 인산칼륨 또는 인산나트륨으로서 발효배지내에 존재한다.

발효배지의 탄소원은 바람직하기로는 글루코스, 전분 또는 아밀럼(amylum), 아밀럼이나 전분 가수분해물, 당류, 레블로스, 프락토스, 말토스 및 사탕무우의 당밀 또는 자당중에서 선택되는 탄수화물의 최소한 일부로 구성되어 있다.

본 발명에 의하면, 상술한 균주에 의한 발효는 적당한 통기 및 교반이나 진탕하에서 1-6일 동안 수행되는데, 이때의 pH조건은 5.5-9, 바람직하기로는 6.5-8이며, 온도조건은 약 25℃-35℃, 바람직하기로는 27℃-31℃이다.

본 발명의 바람직한 예에 의하면, 발효배지의 질소원은 상술한 제1계열의 아미노산 정출물의 모액, 예컨대 발효공정이나 화학공정을 통해 얻어지는 글루타민산 제조의 부산물인 글루타민산 정출물의 모액의 질소함유 화합물로 구성되어 있다. 이러한 모액의 글루타민산 함량은 아미노산 총량의 60%-80%에 해당하며, 이러한 함량은 질소로 환산한 것이다.

또한 발효배지의 질소원으로서 상술한 제1계열의 아미노산에 의해 주로 제공되는 가용성 질소를 가진 농산물과 식품원료의 부산물을 사용할 수도 있다.

본 발명의 제조방법에 사용되는 키산토모나스 균주는 1975년 10월 14일 ATCC 31,176호로 “아메리칸 타잎 컬쳐 콜렉션(American type culture collection)”에 기탁된 균주가 바람직하다.

본 발명의 제조방법에 사용되는 균주, 특히 상술한 균주 ATCC 31,176호는 주로 탄수화물로 구성된 탄소원, 미량원소 및 상술한 계열의 아미노산중의 최소한 하나 특히 상술한 제1계열에 속하는 아미노산 중의 하나 즉 글루타민산, 아르기닌, 티로신, 트레오닌, 아스파라긴산, 프롤린, 로이신 및 트립토판 중의 하나로 구성된 질소원을 함유하는 분리 배지를 사용하여 병든 식물로부터 분리하여 얻을 수 있다.

생성균주의 분리방법은 병든 식물의 샘플을 선택하여 질소원으로서 대부분 상술한 제1계열의 최소한 하나의 아미노산, 바람직하기로는 이러한 아미노산의 최소한 하나로 구성된 분리배지내에서 연속배양함으로서 수행하는 것이 좋다.

분리방법은 예컨대 공지의 미생물 처리법에 따라 다음과 같은 방법으로 수행할 수가 있다.

(1) 질병에 걸린 식물의 일부를 특히 성장용으로 선택된 아미노산을 함유하는 겔로스 기재와 함께 분리배지의 1차 유분속에 삽입하고,

(2) 이 유분을 27℃-31℃에서 45-50시간 동안 배양하고,

(3) 동일 배지의 제2유분에 소량의 상기 유분을 접종한 후(예컨대 다음과 같은 조작에 의하여, 즉 분리된 황색 및 점성 집락을 백금이(白金耳)를 사용하여 다시 채집한 다음 분리된 각각의 집락으로 상술한 제2유분에서 화선배양을 행하는 조작에 의하여),

(4) 다시 27℃-31℃에서 45-50시간 동안 배양한 다음,

(5) 점성을 가진 분리된 황색 집락을 취하여 경사 시험관 내의 동일한 분리배지의 제3유분에 차례로 접종하고 나서 이들 집락을 해리시킴으로서 본 발명에 따른 다수의 특수 균주를 회수한다.

예컨대 분리배지로서 하기 조성을 가진 배지(수산화칼륨을 가하여 pH를 7로 조절하였음)를 사용하고, 상술한 조작법을 이용하여 잎이 시든 황색의 하로크(시나피스 아르벤시스)의 조각(두께가 1-3mm인 단편)을 사용하여 다수의 균주를 얻을 수도 있다.

상기의 경우에 있어서, 아미노산이 글루타민산 일 경우, 얻어지는 균주를 ORS-B-243∼ORS-B-256이라 일컬으며, 이들 모두는 황색을 띄고 있으며, 동일한 현미경적 및 육안적외관을 나타낸다. 이들 균주 중 균주 ORS-B-253은 본 발명의 제조방법에 있어서 당질 생체고분자를 생성하는데 가장 효과적이라는 것이 입증되었다. 상기 균주는 ATCC에 기탁된 균주이다.

상기의 특수 균주의 분리는 다음과 같이 수행하였다. 제3배지의 배양을 30℃에서 48시간 동안 수행한 다음 시험관을 수직으로 세우고 동량의 8% NaCl 용액을 도입하여 10배 계열로 연속 희석한 다음 30℃에서 48시간 동안 배양하였다. 각종 분리된 집락을 회수하고, 경사 시험관내의 동일한 분리 배지내에서 보존하기 위하여 다시 2차 배양하였다.

균주 ORS-B-253의 특징을 키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459와 비교하여 다음표에 나타내었다. 이들 특징은 두 개의 균주 각각의 분리된 집락으로부터 공지의 미생물학적방법에 의해 동일조건하에서 얻은 것이다.

키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459와 키산토모나스 ORS-B-253의 특징 비교표

다음표는 균주 키산토모나스 캄페스트리스 NRRL-B-1459와 균주 ORS-B-253의 경우에 있어서 생성배지 내에 단일 질소원으로 사용된 아미노산의 기능으로서 다당류 생중합체의 비교생산(점도측정치에 의한 생성수율)을 나타낸 것이다.

생성배지의 조성은 다음과 같다.

하기 실시예는 본 발명에 따른 제조방법을 이용한 대표적인 각종예를 기술한 것으로서, 이들 실시예와 관련된 시험중 몇몇은 발효 배지의 유일한 질소원으로서 옥수수 끓인 액을 사용하기 때문에 본 발명의 일부를 형성하지 않는다.

[실시예 1]

시험A: 키산토모나스 ORS-B-257 균주의 경사배양으로부터 하기 배지 MY로 구성된 예비배양액 75㎖를 배양하였다.

pH가 7인 상기 배지를 115℃에서 20분간 미리 멸균한다. 배양후 예비배양액을 200 r,p.m으로 회전하는 회전식 교반기 또는 진탕기상에서 24시간 동안 30℃에서 배양하였다.

질소원만이 서로 다른 7개의 생성배지를 제조하였으며, 그 조성은 다음과 같다.

이들 생성배지의 pH는 배지를 110℃에서 30분간 멸균하기 전에 질소원의 성질에 따라 인산 또는 수산화칼륨을 가하여 7.5로 조절하였다.

생성상(生成相)은 상술한 예비 배양액(24시간 체류시킨 배양액)5ml를 500ml 바이알(vial)내에 담긴 100ml의 생성배지에 배양시킴으로서 시작된다.

30℃에서 회전식 교반기 또는 진탕기(200r.p.m으로 회전)에서 2일간 배양한 후 배양을 중지시켰다. 50배로 배지를 희석하여 분광 광도계로 650mμ에서 성장상태를 측정하였다. 생중합체의 량은 30r.p.m에서 측정봉 LV3을 가진 부르크휠드 점도계를 사용하여 측정한 점도를 통해 추정하였다.

얻어진 결과를 요약하면 다음 표와 같다.

시험B: 본 시험은 글루코스 함량을 30g/ℓ로 하고 질소원의 함량을 총 질소로 환산하여 0.72g/ℓ로 한 것 이외에는 시험 A와 동일하다.

시험 A와 동일한 조건하에서 4일간 배양한 후의 결과는 다음과 같다.

[실시예 2]

생성배지의 기본조성은 다음과 같다.

pH는 7.5로 조절하고 500ml 바이알에 각각 배지 100ml씩 분배한 후 121℃에서 15분간 배지를 멸균하였다.

본 시험에 따라 질소원은 다음과 같이 분배하였다(수치는 총질소로 환산한 g/ℓ이다).

실시예 1에서 제조한 키산토모나스 ORS-B-253의 균주의 예비 배양액을 5%의 함량으로 각종 바이알의 내용물을 배양하는데 사용하였으며, 그다음 이들 각종 바이알의 내용물은 30℃에서 4일간 진탕 교반기에서 배양하였다. 4일 후의 결과는 다음과 같다.

[실시예 3]

생성배지의 기본조성은 다음과 같다.

시험 A에서는 옥수수끓인액으로, 시험 B에서는 글루타민산으로, 시험 C에서는 글루타민산 정출물의 모액으로 각각 질소원을 대치하였다. 본 시험은 상술한 실시예에서와 마찬가지로 키산토모나스 ORS-B-253 균주로 수행하였다.

배양 4일 후의 결과는 다음과 같다.

[실시예 4]

키산토모나스 ORS-B-253의 균주의 48시간 경사배양액을 실시예 1에 정의한 배지 MY75ml 내에서 24시간 예비배양하였다. 상기의 제1예비배양액을 6ℓ용량의 바이알에 담긴 동일 배지 MY 1500ml에서 제2예비 배양액을 배양하는 데 사용하였다. 상기의 제2예비 배양액을 30℃에서 24시간 동안 회전식 교반기 또는 진탕기에서 배양하였다.

14ℓ용량의 뉴부런스위크 발효기내에서 배양하기 위하여 다음과 같은 생성배지를 제조하였다.

생성배지의 pH를 탄산칼륨으로 7.2로 조절하고 115℃에서 45분간 고압솥에서 멸균하였다. 제2예비 배양액(24시간 경과) 350ml로 생성 배지를 배양함으로서 발효가 시작되었다. 발효가 진행되는 동안 pH를 자동 조절방식에 의해 가성칼리로 7.2로 유지시키면서 온도를 28℃로 유지시켰다. 발효가 시작될 때의 교반속도를 600r.p.m으로 조절하였다가 발효가 종료될 때에는 750r.p.m 까지 점차 증가시켰다. 통기율은 1vol/vol,min로 일정하게 유지시켰다.

24시간 발효후 부르크휠드 점도계(LV4-30 r.p.m.)로 측정한 점도는 600CPO이었으며, 40시간 발효후는 6,300CPO, 55시간 발효후에는 12,000CPO이었다. 67시간 후에는 발효를 중단하였다.

전체 환원당으로 환산하여 잔류 당량은 0.15g/ℓ이었으며, 점도는 12,600CPO이었다. 최종 육즙 1ℓ를 알콜로 침전시켜 건조한 후 건조된 다당류 생중합체 30g을 분리하였다.

다당류 생체 고분자의 가수분해와 그 성분의 분석을 통하여 하기물질, 즉 글루코스, 만노스, 글루크론산, 피루빈산 및 초산을 발견할 수가 있었다.

[실시예 5]

본 시험은 글루타민산을 동량의 글루타민산 정출물의 모액으로 대치한 것 이외에는 실시예 4와 동일하다. 그외의 모든 시험조건 역시 완전 동일하다.

68시간 발효 후의 점도는 10,500CPO이었다. 이들 육즙으로부터 건조상태의 다당류 생중합체 27g/ℓ를 분리할 수 있었다. 만일 68시간 이상 발효를 계속하는 경우(이와같은 기간이 경과후 생중합체를 추출하는 대신에)얻어진 결과를 발효시간(일)에 대한 잔류당 함량(글루코스 g/ℓ) 및 점도(CPO)를 각각 첨부도면에서 곡선 A 및 B로 표시할 수 있다.

[실시예 6]

본 실시예 역시 글루코스 55g/ℓ 대신 22g/ℓ로, K₂HPO, 3H₂O 1g/ℓ 대신 이 염기 인산나트륨 2.06g/ℓ를 사용하고 pH를 수산화나트륨을 가하여 7.3으로 유지시킨 것 이외에는 실시예 5와 동일하다.

얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다.

48시간의 발효후 12.5g/ℓ의 건조한 다당류 생중합체가 추출되었다.

[실시예 7]

본 실시예는 이 염기 인산나트륨 6g/ℓ를 사용하고 발효기간 중 pH를 조절하지 않은 것을 제외하고는 상술한 실시예와 같이 수행하였다.

얻어진 결과는 다음과 같다.

23시간 발효후에는 10/ℓ의 건조한 다당류 생중합체가 분리되었다.

[실시예 8]

본 실시예의 시험은 각종 탄소원의 사용에 해당한다.

생성배지의 조성은 다음과 같다.

탄소원으로 사용된 당류는 다음과 같다.

500ml 바이알에 담긴 100ml의 배지를 탄산칼륨으로 pH를 7.5로 조절한 후에 110℃에서 30분간 멸균하였다. 매 바이알에 대하여 실시예 1에서 제조한 24시간된 ORS-B-253균주의 예비 배양액 5ml를 가하여 배양을 행하였다.

28℃에서 회전식 교반기 또는 진탕기내에서 4일간 배양한 후에 얻어진 점도는 다음과 같다(부르크휠드 점도계 LV4-30r.p.m)

[실시예 9]

본 실시예의 시험은 각종의 총 질소 함량(범위는 0.205-2.05g/ℓ)을 나타낸 것이다.

생성배지의 조성은 다음과 같다.

배지를 바이알당 100ml의 비율로 500ml 바이알에 배분하였다. 총 질소 함량은 다음과 같다.

pH를 7.5로 조절하고 각종 배지를 110℃에서 30분간 멸균하였다. 각각의 배지를 실시예 1과 같이 제조한 ORS-B-253 균주의 24시간 된 예비 배양액 4ml로 배양한 후 각각의 바이알을 회전식 교반기 또는 진탕기(200r.p.m)상에서 28℃에서 배양하였다.

이들 결과는 다음과 같다(부루크휠드 점도계 LV4-30r.p.m)

[실시예 10]

본 실시예의 시험은 각종 pH값(범위는 6.60-8.70)에 대한 것이다.

생성배지의 조성은 다음과 같다.

상기 배지를 500ml 바이알에 100ml씩 배분하였다. 각각의 바이알의 내용물의 pH를 탄산칼륨이나 인산을 사용하여 서로 다르게 조절하고 110℃에서 30분간 살균하였다. 각 시험배지의 pH값은 다음과 같다.

배지를 실시예 1과 같이 제조한 키산토모나스 균주 ORS-B-253의 예비배양액(24시간 경과된 것임) 4ml로 접종하였다. 28℃에서 회전식 교반기 상에서 4일간 배양한 후의 pH값과 점도는 다음과 같다.

[실시예 11]

본 실시예의 시험은 각종 인산염이온 함량의 사용에 관한 것이다.

전체량이 1ℓ가 되게 하는 배지의 조성은 다음과 같다.

배지는 바이알당 100ml의 비율로 다음과 같이 500ml 바이알에 배분하였다.

pH를 7.5로 조절하고 배지를 100℃에서 30분간 멸균하였다. 균주 ORS-B-253의 예비 배양액(24시간 경과된 것)을 바이알 당 4ml의 비율로 사용하여 매체를 배양하였다. 28℃에서 회전식 교반기(200r.p.m)에서 2일간 배양한 후의 얻어진 점도는 다음과 같다.

Claims (1)

1. 본문에 상술한 바와 같이, 키산토모나스 균주 ORS-B-253(ATCC 31 176)을 탄소원으로서 5-55g/ℓ이상의 탄수화물과 질소원으로서 글루타민산, 글루타민, 아르기닌, 티로신, 트레오닌, 아스파라긴산, 아스파라긴, 프로린, 로이신 및 트립토판의 아미노산 중 최소한 하나의 아미노산을 0.1-5g/ℓ함유하는 수성배지에서 통기교반하에 배양시킴을 특징으로 하는 키산탄형 다당류의 제조방법.

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