KR20240110819A

KR20240110819A - Dsg2 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20240110819A
Application number: KR1020247018502A
Authority: KR
Inventors: 쉬 인 푸; 리안 에드워드 타일러
Original assignee: 아르바다 테라퓨틱스 인코포레이티드
Priority date: 2021-11-02
Filing date: 2022-11-02
Publication date: 2024-07-16

Abstract

본원 개시내용은 일반적으로 본원에 기재된 조성물을 투여함으로써 질환을 치료하는 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본원에서는 DSG2 융합 폴리펩타이드 및 심근세포 기능을 치료하고 개선시키는 방법을 포함하는 관련된 방법이 제공된다.

Description

DSG2 조성물 및 방법

관련 출원에 대한 상호 참조

[0001] 본 출원은 2021년 11월 2일자로 출원된 미국 가특허 출원 제63/274,707호의 우선권을 주장하고, 상기 출원은 이의 전문이 본원에 참고로 인용된다.

서열목록

[0002] 본 출원은 WIPO 표준 ST26에 따라 XML 포맷의 서열 목록과 함께 제출된다. 10383-108749-04.xml 파일명의 서열 목록 파일을 2022년 10월 24일자로 생성하였고 크기는 48,369 바이트이다. 서열 목록의 전자 포맷의 정보는 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다.

[0003] 질환 진행을 조절하는 요인 중 면역계의 조절 장애가 중심적인 역할을 하는 것으로 사료된다. 면역계는 고도로 조절되고 복잡한 다세포 방어 시스템으로 이루어져 있고, 손상과 항원에 대한 반응에 있어 개체 간 변동성이 큰 것을 특징으로 한다. 이의 생리학적 병태에서는 자가 구성 요소와 외래 구성 요소를 구분하여 외래 구성 요소로 인지되는 모든 구조와 상호 작용하고 제거하도록 프로그래밍되어 있다. 상기 공정은 자가 조직이 공격받는 병리학적 상황으로 전환되어 자가 면역 질환을 초래할 수 있다.

[0004] 순환하는 자가 항체는 심장 질환과 매우 밀접한 관련이 있다. 이들의 유병률, 작용 방식 및 잠재적 치료학적 조절은 집중적으로 조사된다. 심근의 손상 유발이 중요한 개시 이벤트로 사료되지만, 말초 혈액에서 관찰되는 병리학적 항체 역가와 심근 구조의 염증 강도의 발달을 위해 유전학적 소인, 환경 및 후성 유전 조절자 및 기타 아직 알려지지 않은 기전이 중요하다. 전향적 연구에서 카포리오(Caforio) 등은 순환하는 항-심장 자가항체가 질환 발병에 선행할 수 있고 질환 발달의 독립적인 예측 인자임을 보여주었다(문헌참조: Caforio et al. Circulation. 2007;115:76-83; 이의 내용은 전문이 본원에 참조로 인용됨).

[0005] 현재 질환, 특히 심장 질환과 관련된 자가 항체를 치료 및/또는 관리하기 위한 치료학적 전략은 결여되어 있다. 본원 개시내용은 이에 제한되지 않지만 심장 질환 및 감염성 질환과 같은 질환을 치료하기 위한 DSG2 융합 폴리펩타이드 기반 조성물 및 방법을 제공한다.

본 발명의 개요

[0006] 본원 개시내용은 단리된 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 본원 개시내용의 폴리펩타이드는 DSG2 단백질 전체 또는 일부를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 폴리펩타이드는 데스모글레인-2 (DSG2) 융합 폴리펩타이드이다. DSG2 융합 폴리펩타이드는 (a) DSG2 단백질 전체 또는 일부; 및/또는 (b) 면역글로불린 단백질 전체 또는 일부를 포함할 수 있다. DSG2 단백질은 호모 사피엔스(Homo sapiens) DSG2 단백질, 무스 무스쿨루스(Mus musculus) DSG2 단백질, 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus) DSG2 단백질, 마카카 물라타(Macaca mulatta) DSG2 단백질, 카니스 루푸스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) DSG2 단백질 또는 다니오 레리오(Danio rerio) DSG2 단백질일 수 있다. 면역글로불린 단백질은 사람 또는 개 면역글로불린 단백질일 수 있다.

[0007] 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 호모 사피엔스(Homo sapiens) DSG2 단백질(서열번호 1)일 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 무스 무스쿨루스(Mus musculus) DSG2 단백질(서열번호 14)일 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus) DSG2 단백질(서열번호 15)일 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 마카카 물라타(Macaca mulatta) DSG2 단백질(서열번호 16)일 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 카니스 루푸스 파밀리아리스( Canis lupus familiaris) DSG2 단백질(서열번호 17)일 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 다니오 레리오(Danio rerio) DSG2 단백질(서열번호 18)일 수 있다.

[0008] 하나의 구현예에서, DSG2 폴리펩타이드는 DSG2 단백질의 일부를 포함할 수 있다. DSG2 단백질의 일부는 DSG2 단백질의 세포 외 영역을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, DSG2의 전체 세포 외 영역은 융합 폴리펩타이드에 포함될 수 있다. 하나의 구현예에서, DSG2의 전체 세포 외 영역은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 본원 개시내용의 구현예는 또한 DSG2의 세포 외 영역의 일부를 포함할 수 있다. 예를 들어, 세포 외 영역의 일부는 세포 외 카드헤린 도메인 1(EC1), 세포 외 카드헤린 도메인 2(EC2), 세포 외 카드헤린 도메인 3(EC3), 세포 외 카드헤린 도메인 4(EC4) 및/또는 세포 외 앵커 도메인(EA)일 수 있다. 일부 양상에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 세포 외 영역의 2개 도메인을 포함한다. 예를 들어, 2개의 도메인은 EC4EA, EC1EC2, EC2EC3, EC3EC4, EC1EA, EC1EC3, EC2EC4, 및/또는 EC3EA일 수 있다. 일부 양상에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 세포 외 영역의 3개 도메인을 포함한다. 예를 들어, 3개의 도메인은 EC1EC3EA, EC1EC4EA, EC1EC3EA, EC3EC4EA, EC1EC2EC3, EC2EC3EC4, 및/또는 EC2EC4EA일 수 있다. 일부 양상에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 세포 외 영역의 4개 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 3개 도메인은 EC1EC2EC4EA, EC2EC3EC4EA, EC1EC2EC3EC4EA, EC1EC2EC3EC4, 및/또는 EC1EC2EC3EA일 수 있다.

[0009] DSG2 융합 폴리펩타이드는 면역글로불린의 일부를 포함할 수 있다. 일부는 Fc 영역, Fab 영역, 중쇄 가변(VH) 도메인, 중쇄 불변 도메인, 경쇄 가변(VL) 도메인 및/또는 경쇄 불변 도메인일 수 있다. 하나의 양상에서, 면역글로불린의 일부는 Fc 영역일 수 있다. 면역글로불린은 IgG, IgM, IgA, IgD 및/또는 IgE일 수 있다. 비제한적인 예로서, 면역글로불린은 IgG일 수 있다. 조성물은 IgG, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및/또는 IgG4를 포함할 수 있다. Fc 영역은 사람 Fc 영역 또는 개 Fc 영역일 수 있다. 본원 개시내용에 유용한 면역글로불린의 일부의 비제한적인 예는 사람 IgG1 Fc 영역(서열번호 5), 사람 IgG2 Fc 영역(서열번호 7), 사람 IgG3 Fc 영역(서열번호 9), 또는 사람 IgG4 Fc 영역(서열번호 11), 개 IgG 중쇄 D Fc 영역(서열번호 20), 개 IgG 중쇄 A Fc 영역(서열번호 22), 개 IgG 중쇄 B Fc 영역(서열번호 24) 또는 개 IgG 중쇄 C Fc 영역(서열번호 26), 사람 IgG1 중쇄 불변 도메인(서열번호 4), 사람 IgG2 중쇄 불변 도메인(서열번호 6), 사람 IgG3 중쇄 불변 도메인(서열번호 8) 또는 사람 IgG4 중쇄 불변 도메인(서열번호 10), 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 D(서열 번호 19), 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 A(서열번호 21), 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 B(서열 번호 23) 또는 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 C(서열번호 25)를 포함한다.

[0010] 본원 개시내용의 폴리펩타이드는 링커 서열을 추가로 포함할 수 있다. 링커는 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산 길이일 수 있다. 하나의 구현예에서, 링커는 GGGGS (서열번호 12)일 수 있다. 또 다른 양상에서, 링커는 EAAAK (서열번호 13), GGGGS (서열번호 27) 또는 IEGRMD (서열번호 28)일 수 있다.

[0011] 하나의 구현예는 항-데스모글레인-2(DSG2) 자가 항체에 의해 유발되는 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물이다. 상기 조성물은 DSG2의 세포 외 도메인에 대한 항-DSG2 항체의 결합을 차단하는 융합 폴리펩타이드를 포함한다. 상기 융합 폴리펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 잔기 50 내지 609 또는 이의 일부와 적어도 약 85%의 서열 동일성을 갖는 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역 및 친화성 태그를 포함한다. 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역 부분은 세포 외 카드헤린 도메인 1(EC1), 세포 외 카드헤린 도메인 2(EC2), 세포 외 카드헤린 도메인 3(EC3), 세포 외 카드헤린 도메인 4(EC4) 및 세포 외 앵커 도메인(EA)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DSG2 도메인 중 하나 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 친화성 태그는 IgG1과 같은 면역글로불린의 Fc 영역 또는 이의 변이체일 수 있다. 변이체는 서열번호 31의 서열을 가질 수 있다. 친화성 태그는 IgG4의 Fc 영역 또는 이의 변이체일 수 있다. 변이체는 서열번호 32의 서열을 가질 수 있다. 대안적으로 폴리히스티딘 펩타이드와 같은 보다 작은 단백질 또는 펩타이드에 의해 친화성 태그가 제공될 수 있다. 융합 폴리펩타이드의 일부 구현예는 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역 또는 이의 일부와 친화성 태그 사이에 위치한 링커 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 서열번호 12, 13, 27 또는 28이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC), 유육종증 또는 확장성 심근병증과 같은 부정맥이다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC), 유육종증 또는 확장성 심근병증과 같은 심근병증이다. 부정맥 또는 심근병증은 SARS-CoV2, 아데노바이러스, 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 파보바이러스, 단순포진 바이러스, 에코바이러스, 엡슈타인-바르 바이러스, 루벨라(rubella), 거대세포 바이러스 또는 HIV와 같은 바이러스에 의해 유발될 수 있다.

[0012] 본원 개시내용은 심근세포에서 부정맥 표현형을 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 심근 세포를 개시내용의 조성물과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 부정맥 표현형은 항-DSG2 항체에 의해 관련되거나 유발될 수 있다. 본원 개시내용은 또한 심근 세포를 본원 개시내용의 조성물과 접촉시킴으로써 부정맥 유발 표현형을 감소 또는 보정하는 방법을 제공한다. 부정맥 유발 표현형의 감소 또는 교정은 심근세포 나트륨 스파이크(μV/m)를 사용하여 측정할 수 있다. 본원의 개시내용은 또한 본원에 기재된 조성물을 사용한 치료 방법을 제공한다.

[0013] 본원의 개시내용은 또한 혈청 DSG2 자가항체가 연관된 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 방법은 본원에 기재된 조성물 또는 본원에 기재된 조성물을 발현하는 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 병태는 부정맥일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 병태는 심근병증일 수 있다. 일부 양상에서, 병태는 자가면역 장애일 수 있다.

[0014] 본원의 개시내용은 대상체에서 부정맥 및/또는 심근병증을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 단리된 폴리펩타이드 또는 본원 개시내용의 세포와 대상체를 접촉시킨 후 심전도의 비정상적인 박동, 어지러움증, 현기증, 심계항진, 흉통, 숨가뿜, 박출률 감소, 심박출량 저하 및/또는 심부전과 같은 부정맥과 관련된 하나 이상의 증상 또는 임상 소견을 측정하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 대상체를 본원 개시내용의 단리된 폴리펩타이드 또는 세포와 접촉시킨 후 부정맥, 심계항진, 심근염, 심부전, 심박출량 저하 및/또는 박출률 감소와 같은 심근병증과 연관된 하나 이상의 증상을 측정하는 것을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 심근병증은 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC), 유육종증, 확장성 심근병증일 수 있다. 심근병증은 또한 바이러스(예를 들어, SARS-CoV2, 아데노바이러스, 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 파보바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스, 에코바이러스(echovirus), 엡슈타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스, 루벨라(rubella), 거대세포 바이러스 또는 HIV), 세균(스타필로코커스(Staphylococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus) 또는 보렐리아(Borrelia)), 기생충(트리파노소마(Trypanosoma) 또는 톡소플라스마(Toxoplasma)) 또는 진균류(캔디다(Candida), 아스퍼길러스(Aspergillus) 또는 히스토플라스마(Histoplasma))에 의해 유발될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 이들의 혈청에서 검출가능한 수준의 항-DSG2 항체를 가질 수 있다.

[0015] 본원 개시내용은 또한 본원에 기재된 DSG2 융합 폴리펩타이드를 사용하여 대상체에서 심장 이상을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 대상체는 혈청 항-DSG2 항체를 가질 수 있다. 본원 개시내용은 또한 본원에 기재된 DSG2 융합 폴리펩타이드를 사용하여 대상체에서 항-DSG2 항체를 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 항-DSG2 항체 수준은 약 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%까지 감소될 수 있다.

[0016] 본원에서는 DSG2 융합 폴리펩타이드를 포함하는 조성물이 제공된다. 또한 본원에서는 적어도 하나의 치료학적 제제를 포함하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 DSG2 융합 폴리펩타이드와 본원에 기재된 적어도 하나의 치료학적 제제의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 치료학적 제제만을 포함한다. 치료학적 제제의 비제한적인 예는 항-CD20 항체, FcRn 차단 항체, 정맥 내 면역글로불린(IVIG), 및/또는 에쿨리주맙과 같은 보체 억제제를 포함한다. 또한, 본원에서는 본원에 기재된 DSG2 융합 폴리펩타이드 및/또는 치료학적 제제를 사용하여 혈청 항 DSG2 자가항체와 관련된 병태를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 혈청 항-DSG2 자가 항체와 관련된 병태는 심장 장애 또는 감염성 질환일 수 있다. 심장 장애는 ARVC, 유육종증 또는 확장성 심근병증 또는 항-DSG2 항체와 관련된 모든 심장 질환일 수 있다.

[0017] 이전의 기재내용 및 기타 목적, 특성 및 이점은, 첨부된 도면에서 도시된 바와 같이, 본원 개시내용의 특정 구현예의 하기의 기재로부터 명백해질 것이다. 도면들은 반드시 일정한 비율로 만들 필요는 없고, 대신에 본원 개시내용의 각종 구현예의 원리를 설명할 때에 강조한다.
[0018] 도 1a는 DSG2FP#1을 사용한 항-DSG2 항체와 ARVC 혈청의 억제 %를 보여준다. 도 1b는 DSG2FP#2을 사용한 항-DSG2 항체와 ARVC 혈청의 억제 %를 보여준다. 도 1c는 DSG2FP#3을 사용한 항-DSG2 항체와 ARVC 혈청의 억제 %를 보여준다. 도 1d는 DSG2FP#4을 사용한 항-DSG2 항체와 ARVC 혈청의 억제 %를 보여준다. DSG2 융합 폴리펩타이드를 크기 배제 크로마토그래피에 적용하고 다양한 분획을 조사하였다. 분획 "C"는 예상 MW가 ~350kDa이고 추가 실험에 사용되었다. 도 1b, 도 1c, 도 1d에서는 전체 단백질 제제("전체 제제")를 "분획 C"와 비교하였다.
[0019] 도 2a는 다중 전극 배열(MEA) 검정에서 리도카인과 항-DSG2 항체가 사람 iPSC 심근세포의 나트륨 스파이크를 약화시키는 것을 보여주는 첫 번째 일련의 전압(μV) 대 시간(msec) 그래프이다. 나트륨 스파이크의 약화는 DSG2FP#1(도 2a에서와 같이 "DSG2 융합 폴리펩타이드"로 표지됨)을 추가함으로써 역전되었고, 이는 DSG2FP#1이 나트륨 스파이크에 대한 항-DSG2 항체의 효과를 완전히 차단한다는 것을 보여준다.
[0020] 도 2b는 두 번째 일련의 전압(μV) 대 시간(msec) 그래프이고, 비히클, 토끼 IgG 및 항-VCAM-1 항체의 대조군 시험이 MEA 검정에서 나트륨 스파이크에 영향을 미치지 않음을 보여준다.
[0021] 도 3은 다중 전극 배열(MEA) 검정에서 사람 iPSC 심근세포에서 항-DSG2 항체 및 항-DSG2 항체와 DSG2FP#1(도 3에서 "데코이"로서 표지됨)을 사용한 처리시 세포 지수를 보여주고 이는 DSG2FP#1이 항-DSG2 항체의 효과를 완전히 차단한다는 것을 보여준다.
[0022] 도 4a는 검출 검정에서 항-DSG2 항체 신호의 그래프이다.
[0023] 도 4b는 여러 그룹에서 신호 대 배경 비율과 억제 퍼센트의 보정된 상관관계를 보여준다. 대조군 및 ARVC 약한 임상 데이터 그룹 데이터 포인트는 Y축상에 클러스터링되어 있고, 이는 이들 2개 그룹 간 신호 비율에 차이가 거의 없음을 시사한다.
[0024] 도 5는 전기화학 면역검정에서 평가된 일련의 재조합 DSG2 융합 단백질이 ARVC 환자 혈청의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합을 차단함을 지적하는 일련의 막대 차트를 제공한다.
[0025] 도 6은 전기화학 면역검정에서 평가한 링커 유무에 따른 재조합 DSG2_(50-609)-IgG4 Fc 융합 단백질이 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합을 차단함을 지적하는 막대 차트이다.

I. 서론

[0026] 자가 항원이라고 하는 자가 단백질에 대한 자가 항체의 생성은 많은 자가 면역 질환의 특징이다. 환자 체액의 자가항체 면역 반응성은 자가면역 질환이 의심될 때 중요한 진단 정보를 제공한다. 자가 항체의 스펙트럼은 흔히 소정의 자가면역 질환에 대해 임상적으로 유용한 정보를 제공한다. 일부 자가면역 질환은 단지 하나 또는 몇 개의 표적 자가항원에 대한 자가항체를 보유하지만, 다른 병태에서는 다수의 표적에 대한 자가항체가 공존할 수 있다. 가장 흔한 70가지 자가면역 질환 중 게놈에 의해 암호화된, 추정된 20,000개의 사람 단백질 중 대략 100개가 가장 흔한 항원성 표적을 포함하는 것으로 사료된다. 그러나 희귀 장애에서 증가하는 수의 자가항체가 발견되었고 이는 자가항체와 관련된 자가면역이 나타날 수 있는 질환이 더 있을 것임을 시사한다.

[0027] 많은 자가면역 질환의 치료는 다양한 정도의 효능과 가용한 개입의 부작용으로 인해 최적이 아닌 상태로 남아 있다. 자가면역 질환 치료제의 발전을 위해서는 자가항체가 병인에 어떻게 관여하는지를 포함한 질환별 정보가 필요하다.

[0028] 데스모글레인-2는 여러 심장 카드헤린 단백질 중 하나이다. 카드헤린은 칼슘에 의존하는 부착 분자이고 이는 다수의 조직에서 세포 간에 기계적 부착을 제공한다. 전형적으로 3개의 칼슘 이온(총 12개)이 5개의 연속적인 세포 외 카드헤린(EC) 도메인 각 쌍 사이에 존재하는 결합 모티프에 포켓화되어 반대편 세포의 카드헤린 도메인을 트랜스 결합을 위해 90도 형태로 만드는 데 필요한 초승달 모양을 제공한다. 상기 90도 형태는 각 EC1 도메인 상의 트립토판 잔기가 대안적 카드헤린의 소수성 포켓에 동시에 삽입될 수 있도록 하기 때문에 결합에 매우 중요하다. 미스센스 돌연변이 또는 근위부 세포 외 DSG2 도메인에 대한 항체 결합을 통해 상기 배향을 방해하면 결합과 접착력이 감소할 수 있다. 차테리에 등(Chatterjee et al.)은 ARVC를 갖는 환자의 혈청에서 공통적인 특성으로서 심장 데스모글레인-2(DSG2) 단백질에 대한 자가항체를 동정하였다(문헌참조: Chatterjee D, et al., Eur Heart J. 2018;39(44):3932-3944; 이의 내용은 전문이 본원에 참조로 인용됨). 이들 자가항체는 ARVC에 특이적이었는데, 이는 이들이 다른 형태의 유전성 심근병증이 있는 대상체로부터의 혈청뿐만 아니라 2개의 독립적인 대조군 혈청 세트에는 필수적으로 없었기 때문이다. 항-DSG2 항체는 또한 이에 제한되지 않지만 심장과 같은 장기에서 육아종을 초래하는 전신 염증성 질환인 유육종증의 일부 경우에서도 발견될 수 있다. 항-DSG2 항체는 심장 침범이 있는 유육종 환자에서도 발견된다 (문헌참조: Suna et al. 2020, Eur. Heart Journal, Volume 41, Issue Supplement_2, November 2020, ehaa946.2127; 이의 내용은 이의 전문이 참조로 인용됨). 확장성 심근병증의 진단을 받은 환자는 ARVC와 연관된 동일한 데스모솜 단백질에 돌연변이를 가질 수 있다. 이들 관찰은 일부 확장성 심근병증 환자가 실제로 항-DSG2 자가항체에 의해 매개되는 ARVC-유사 질환을 가질 수 있지만 ARVC와 관련된 전형적인 연령 및/또는 발현에 적합하지 않기 때문에 확장성 심근병증으로 진단되었음을 시사한다. 항-DSG2 자가항체는 심근에 직접 영향을 미치는 것으로 공지된 감염 환경에서 심장 세포 손상과 활성화된 면역계의 조합이 있을 때 발생하는 것으로 간주된다. 따라서 항-DSG2 항체(예를 들어, DSG2 자가항체)를 표적화하는 전략은 COVID-19, COVID-19 후 증후군 및/또는 심장 질환, 예를 들어, ARVC를 포함하지만 이에 제한되지 않는 항-DSG2 항체의 존재로 인해 발생하는 증상 및 질환의 치료에 이로울 수 있다.

[0029] 본원 개시내용은 항-DSG2 항체를 표적화하기 위한 DSG2 융합 폴리펩타이드와 관련된 조성물 및 방법을 제공한다. 따라서 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 항-DSG2 항체와 관련된 질환 및/또는 이에 제한되지 않지만 COVID-19, COVID-19 후 심장 증후군 및 ARVC와 같은 자가면역 반응과 관련된 질환의 치료에서 실행 가능한 치료학적 전략이 될 수 있다. DSG2 융합 폴리펩타이드는 또한 심장 세포 손상과 연관된 다른 질환, 예를 들어, 이에 제한되지 않지만 부정맥 유발성 심근병증(AC), 유육종증, 항-DSG2 자가항체를 동반한 확장성 심근병증, 및 콕사키 바이러스, 아데노바이러스, 에코바이러스, 파보바이러스, 루벨라 및/또는 사이토메갈로바이러스에 의해 유발되는 것들를 포함하지만 이에 제한되지 않는 바이러스 감염의 치료에 사용될 수 있다.

II. 조성물

[0030] 일부 구현예에서, 본원 개시내용은 DSG2 융합 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 본원에 기재된 조성물은 항-DSG2 항체에 결합하거나 이와 상호작용할 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 항-DSG2 항체의 활성을 조절할 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 항-DSG2 항체의 활성을 억제할 수 있다.

[0031] 일부 구현예에서, 본원의 개시내용은 DSG2 단백질을 포함한다. 일부 양상에서 DSG2 단백질은 전체 DSG2 단백질 또는 DSG2 단백질의 일부일 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 단백질은 임의의 다른 단백질 또는 단백질의 단편에 융합될 수 있다.

[0032] 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 단백질 태그를 포함할 수 있다. 단백질 태그는 다양한 목적으로 제공되는 재조합 단백질에 포함된 단백질 또는 펩타이드 서열이고, 일반적으로 N-말단 또는 C-말단에 위치한다. 본 구현예에서, 단백질 태그는 주로 친화성 태그로서 기능하지만 증진된 발현, 용해도, 생활성 및 약동학적 성질과 같은 다른 이점을 제공할 수 있다. 친화성 태그는 이들이 단백질에 부착되어 친화성 기술을 사용하여 이들의 조(crude) 생물학적 공급원에서 정제될 수 있도록 한다. 친화성 태그의 예는 키틴 결합 단백질 (CBP), 말토스 결합 단백질 (MBP), 스트렙타바딘 및 글루타티온-S-트랜스퍼라제(GST)를 포함한다. 6xHis 또는 헥사히스티딘으로 공지된 일반적인 폴리히스티딘은 고정화된 금속 이온을 함유한 매트릭스에 결합하는 널리 사용되는 단백질 태그이다.

[0033] 가용화 태그는 특히 이. 콜리와 같은 종에서 발현되는 재조합 단백질에 대해 사용되어 단백질 내 적당한 폴딩을 도와주고 봉입체에서 이들이 응집되지 않도록 한다. 이들 태그는 티오레독신　(TRX) 및 폴리(NANP)를 포함한다. 일부 친화성 태그는 MBP 및 GST와 같은 가용화제로서의 이중 역할을 갖는다. 면역글로불린의 Fc 영역은 또한 유용하고 친화성 태그와 이량체화 및 가용화제 둘다로서 작용할 뿐만 아니라 상업적 ELISA 키트를 사용하여 단백질 발현을 검출하기 위한 수단을 제공한다. 또한 IgG-Fc 태그의 첨가는 단백질 발현 수율을 증가시키고 재조합 단백질의 생체 내 약동학에 영향을 줄 수 있다.

[0034] 이하에서 기재되는 예시적 구현예의 일부에서, 융합 단백질의 단백질 태그는 6xHis로 지칭되는 6개의 연속적인 히스티딘 잔기를 갖는 폴리히스티딘 태그이다. 다른 예에서, 단백질 태그는 IgG1 (서열번호 5) 또는 IgG₄ (서열번호 11)를 포함하는 IgG의 Fc 영역이다. 이들 융합 폴리펩타이드 구현예는 항-DSG2 항체와의 결합과 관련하여 활성을 나타낸다.

[0035] DSG2 융합 폴리펩타이드는 전체 DSG2 단백질 또는 DSG2 단백질의 일부와 면역 글로불린 단백질의 전체 또는 일부를 포함하는 친화성 태그를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 링커 펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 단백질의 전체 또는 일부는 면역글로불린이 아닌 단백질에 융합될 수 있다. DSG2 단백질은 시험관 내 또는 생체 내에서 DSG2 단백질의 발현 및 정제를 개선할 수 있는 TRX, 폴리(NANP), MBP, GST 또는 폴리히스티딘과 같은 친화성 태그와 같은 단백질 또는 단백질 단편에 융합될 수 있다.

[0036] 일부 구현예에서, 융합 폴리펩타이드의 단백질 태그는 PAS 폴리펩타이드 태그이다. PAS 서열은 친수성, 비하전 생물학적 중합체로 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 매우 유사한 생물리학적 성질을 갖고, 약물로의 이의 화학적 접합은 혈장 반감기 연장을 위해 확립된 방법이다. 반면, PAS 폴리펩타이드는 유전학적 수준에서 치료학적 단백질과 융합하여 완전히 활성화된 단백질을 생산하고 시험관 내 커플링 또는 변형 단계를 생략할 수 있다(문헌참조: Schlapschy et al., Protein Eng. Des. Sel., 2013, 26(8), 489-501, 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 융합 단백질에 PAS 폴리펩타이드를 첨가하는 공정을 "파실화(PASylation)”로서 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)은 PAS 폴리펩타이드의 혼입에 대해 비-단백질 태그의 대안으로 사용된다. PEG 모이어티를 첨가하는 공정은 “페길화”로서 공지되어 있다. 융합 단백질의 특정 구현예의 파실화 또는 페길화는 친화성 크로마토그래피 대신 크기 배제 크로마토그래피에 의해 융합 단백질을 정제할 수 있는 능력을 제공할 수 있다.

[0037] 심장 세포에서 삽입된 디스크 내 DSG2 돌연변이는 부정맥, 확장성 심근병증, 및 특히 ARVC(부정맥 유발성 우심실 심근병증)를 포함한 심장 질환과 관련이 있다. 차테리에 등(Chatterjee et al.)은 ARVC를 갖는 환자의 혈청에서 공통적인 특성으로 심장 데스모글레인 2(DSG2) 단백질에 대한 자가항체를 동정하였다(문헌참조: Chatterjee D, et al., Eur Heart J. 2018;39(44):3932-3944; 이의 내용은 전문이 본원에 참조로 인용됨). 이들 자가항체는 ARVC에 특이적이었는데, 이는 이들이 다른 형태의 유전성 심근병증이 있는 대상체로부터의 혈청뿐만 아니라 2개의 독립적인 대조군 혈청 세트에는 필수적으로 없었기 때문이다. 본원의 개시내용은 DSG2 자가항체를 표적화하기 위한 치료 전략으로서 DSG2 융합 폴리펩타이드를 제공한다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2 자가항체에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 자가항체에 대한 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드의 결합은 대상체에서 내인성 DSG2에 대한 자가항체의 결합을 배제한다. 본원 개시내용의 이러한 양상에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 데코이(decoy) 단백질 또는 리간드 트랩으로서 기능한다.

[0038] 차테리에 등은 DSG2 단백질이 심근세포 손상 또는 데스모솜 돌연변이의 결과로 세포 외 공간 및/또는 순환계에 노출되거나 이로 방출되는 에피토프를 포함할 수 있음을 제안한다. 이들 에피토프의 차폐 해제는 또한 임의의 심장 손상(예를 들어, 감염성 심근염 및/또는 심장 외상과 같으나 이에 제한되지 않음)으로부터 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 어떠한 돌연변이도 포함하지 않을 수 있다. 상기 방출된 DSG2 단백질은 항원 제공 세포와 연결되어 T 세포 반응을 자극하여 관찰된 자가항체를 생성할 수 있다. 유전자 돌연변이에 의한 잠정 에피토프의 차폐 해제는 다른 형태의 자가면역에 기여할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2에 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 에피토프를 포함할 수 있다.

[0039] DSG2 융합 폴리펩타이드는 가용성 및/또는 재조합 폴리펩타이드일 수 있다. DSG2 융합 폴리펩타이드 내의 성분의 정열은 적합한 단백질 발현 및/또는 의도된 치료학적 효과를 달성하도록 최적화될 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 본원에 기재된 포맷을 포함할 수 있다. 본원에 제공된 포맷은 성분 사이에 ";"로 표시되는 N 말단에서 C 말단까지의 성분을 포함한다. DSG2 융합 폴리펩타이드의 포맷의 비제한적인 예는 (i) DSG2 단백질의 전체 또는 일부; Fc 영역, (ii) Fc 영역; DSG2 단백질의 전체 또는 일부, (iii) DSG2 단백질의 전체 또는 일부; 링커; Fc 영역, (iv) Fc 영역; 링커; DSG2 단백질의 전체 또는 일부, (v) 친화성 태그; DSG2 단백질의 전체 또는 일부, (vi) DSG2 단백질의 전체 또는 일부; 친화성 태그, (vii) DSG2 단백질의 전체 또는 일부; 링커; 친화성 태그, (viii) 친화성 태그; 링커; DSG2 단백질의 전체 또는 일부를 포함한다.

DSG2 단백질

[0040] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 전체 DSG2 단백질을 포함할 수 있다. 데스모솜 카드헤린 데스모글레인-2(DSG2)는 심장 및 위장관과 같은 상피 및 비상피 조직에서 발현되는 막관통 세포 접착 단백질이다. DSG2는 세포 간 부착과 구조적 무결성을 지지하는 주요 구조인 데스모솜 유닛의 통합 부분이다. DSG2는 증식 및 아폽토시스를 포함하는 수많은 세포 공정을 조절하는 것으로 나타났다. 일부 구현예에서, DSG2 단백질은 1,118개의 아미노산으로 이루어지고 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 사람 DSG2 단백질(UniProt ID: Q14126; ENSEMBL 단백질 ID: ENSP00000261590.8)이다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 서열번호 2의 핵산 서열(NCBI 참조 서열: NM_001943.5; ENSMBL ID: ENST00000261590.13)에 의해 암호화될 수 있다.

[0041] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 50-1118을 포함하는 완전히 가공된 DSG2 단백질일 수 있다.

[0042] DSG2 단백질은 또한 서열번호 1의 서열과 관련하여 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 단백질 돌연변이는 질환 상태와 연관된 돌연변이일 수 있다. 하나의 구현예에서, 질환 상태는 부정맥 유발성 우심실 이형성증/심근병증일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2에 하나 이상의 돌연변이를 함유하는 에피토프를 포함할 수 있다. 비제한적 예로서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 485-531 및/또는 아미노산 586-610의 영역에서 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다.

[0043] DSG2는 통상적으로 세포 외 영역, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 영역의 3가지 별개 영역을 특징으로 하는 세포 접착 단백질의 캐드헤린 슈퍼패밀리에 속한다. 일부 구현예에서, DSG2의 세포 외 영역은 서열번호 1의 아미노산 50-609인 서열번호 3의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 단백질의 카드헤린 계열의 세포 외 영역은 카드헤린 모티프 또는 EC 도메인으로 공지된 칼슘 결합 모티프의 다양한 수의 반복체를 포함한다. DSG2는 EC1, EC2, EC3 및 EC4라고 하는 4개의 EC 도메인을 포함한다. DSG2는 또한 막에 근접한 세포 외 앵커(EA) 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 전체 세포 외 영역을 포함할 수 있다. 일부 양상에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 이에 제한되지 않지만 EC1, EC2, EC3, EC4, 및/또는 EA와 같은 적어도 하나의 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, EC1 도메인은 서열번호 1의 아미노산 50-155일 수 있다. 일부 구현예에서, EC2 도메인은 서열번호 1의 아미노산 151-268일 수 있다. 일부 구현예에서, EC3 도메인은 서열번호 1의 아미노산 264-384일 수 있다. 일부 구현예에서, EC4 도메인은 서열번호 1의 아미노산 382-495일 수 있다. 일부 구현예에서, EA 도메인은 서열번호 1의 아미노산 491-609일 수 있다. 표 1은 DSG2 단백질의 아미노산 서열 뿐만 아니라 DSG2의 세포 외 영역의 아미노산 서열을 제공한다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 단백질은 표 1에서 임의의 서열 또는 표 1에서 서열 단편과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일성을 가질 수 있다.

[0044] 일부 구현예에서, DSG2 단백질은 비-사람 DSG2 단백질이다. 일부 구현예에서, 상기 DSG2 단백질은 무스 무스쿨루스(Mus musculus) (마우스) DSG2 단백질이다. 하나의 구현예에서, DSG2 단백질은 1,122개 아미노산을 포함할 수 있고 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 DSG2 단백질은 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus) (래트) DSG2 단백질이다. 하나의 구현예에서, 래트 DSG2 단백질은 1,128개 아미노산을 포함할 수 있고 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 단백질은 비-사람 영장류(NHP) DSG2 단백질이다. 일부 양상에서, NHP DSG2 단백질은 1,115개의 아미노산을 포함할 수 있는 마카카 물라타(Macaca mulatta) DSG2 단백질이고, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 DSG2 단백질은 카니스 루푸스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) (개) DSG2 단백질이다. 일부 구현예에서, 개 DSG2 단백질은 1,119개 아미노산을 포함할 수 있고 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 DSG2 단백질은 다니오 레리오(Danio rerio) (제브라 피시) DSG2 단백질이다. 일부 구현예에서, 제브라 피시 DSG2 단백질은 1,142개 아미노산을 포함할 수 있고 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.

표 1. DSG2 단백질 및 DSG2 세포 외 도메인의 서열

[0045] 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 세포 외 영역의 하나 이상의 도메인을 포함할 수 있다. DSG2의 세포 외 영역으로부터의 도메인은 일렬로 또는 혼합된 순서로 EC 도메인 또는 EA 도메인 중 하나 이상의 반복체를 포함할 수 있다. 예를 들어, DSG2 융합 폴리펩타이드는 EC1, EC2, EC3, EC4 또는 EA 도메인의 2, 3개 이상의 반복체를 포함할 수 있다. 하나 이상의 도메인 및/또는 DSG2의 세포 외 영역의 도메인의 하나 이상의 반복체가 존재하는 경우, 도메인은 본원에 기재된 링커를 통해 작동가능하게 연결될 수 있다.

[0046] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 세포 외 영역의 2개 도메인을 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드에서 DSG2의 세포 외 영역의 도메인의 비제한적인 예는 EC1EC2, EC1EC3, EC1EC4, EC1EA, EC2EC1, EC2EC3, EC2EC4, EC2EA, EC3EC1, EC3EC2, EC3EC4, EC3EA, EC4EC1, EC4EC2, EC4EC3, EC4EA, EAEC1, EAEC2, EAEC3, 및/또는 EAEC4를 포함한다.

[0047] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 세포 외 영역의 3개의 도메인을 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드에 존재하는 DSG2의 세포 외 영역의 도메인의 비제한적인 예는 EC1EC2EC3, EC1EC2EC4, EC1EC2EA, EC1EC3EC2, EC1EC3EC4, EC1EC3EA, EC1EC4EC2, EC1EC4EC3, EC1EC4EA, EC1EAEC2, EC1EAEC3, EC1EAEC4, EC2EC1EC3, EC2EC1EC4, EC2EC1EA, EC2EC3EC1, EC2EC3EC4, EC2EC3EA, EC2EC4EC1, EC2EC4EC3, EC2EC4EA, EC2EAEC1, EC2EAEC3, EC2EAEC4, EC3EC1EC2, EC3EC1EC4, EC3EC1EA, EC3EC2EC1, EC3EC2EC4, EC3EC2EA, EC3EC4EC1, EC3EC4EC2, EC3EC4EA, EC3EAEC1, EC3EAEC2, EC3EAEC4, EC4EC1EC2, EC4EC1EC3, EC4EC1EA, EC4EC2EC1, EC4EC2EC3, EC4EC2EA, EC4EC3EC1, EC4EC3EC2, EC4EC3EA, EC4EAEC1, EC4EAEC2, EC4EAEC3, EAEC1EC2, EAEC1EC3, EAEC1EC4, EAEC2EC1, EAEC2EC3, EAEC2EC4, EAEC3EC1, EAEC3EC2, EAEC3EC4, EAEC4EC1, EAEC4EC2, 및/또는 EAEC4EC3을 포함한다.

[0048] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 세포 외 영역의 4개의 도메인을 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드에 존재하는 DSG2의 세포 외 영역의 도메인의 비제한적인 예 EC1EC2EC3EC4, EC1EC2EC3EA, EC1EC2EC4EC3, EC1EC2EC4EA, EC1EC2EAEC3, EC1EC2EAEC4, EC1EC3EC2EC4, EC1EC3EC2EA, EC1EC3EC4EC2, EC1EC3EC4EA, EC1EC3EAEC2, EC1EC3EAEC4, EC1EC4EC2EC3, EC1EC4EC2EA, EC1EC4EC3EC2, EC1EC4EC3EA, EC1EC4EAEC2, EC1EC4EAEC3, EC1EAEC2EC3, EC1EAEC2EC4, EC1EAEC3EC2, EC1EAEC3EC4, EC1EAEC4EC2, EC1EAEC4EC3, EC2EC1EC3EC4, EC2EC1EC3EA, EC2EC1EC4EC3, EC2EC1EC4EA, EC2EC1EAEC3, EC2EC1EAEC4, EC2EC3EC1EC4, EC2EC3EC1EA, EC2EC3EC4EC1, EC2EC3EC4EA, EC2EC3EAEC1, EC2EC3EAEC4, EC2EC4EC1EC3, EC2EC4EC1EA, EC2EC4EC3EC1, EC2EC4EC3EA, EC2EC4EAEC1, EC2EC4EAEC3, EC2EAEC1EC3, EC2EAEC1EC4, EC2EAEC3EC1, EC2EAEC3EC4, EC2EAEC4EC1, EC2EAEC4EC3, EC3EC1EC2EC4, EC3EC1EC2EA, EC3EC1EC4EC2, EC3EC1EC4EA, EC3EC1EAEC2, EC3EC1EAEC4, EC3EC2EC1EC4, EC3EC2EC1EA, EC3EC2EC4EC1, EC3EC2EC4EA, EC3EC2EAEC1, EC3EC2EAEC4, EC3EC4EC1EC2, EC3EC4EC1EA, EC3EC4EC2EC1, EC3EC4EC2EA, EC3EC4EAEC1, EC3EC4EAEC2, EC3EAEC1EC2, EC3EAEC1EC4, EC3EAEC2EC1, EC3EAEC2EC4, EC3EAEC4EC1, EC3EAEC4EC2, EC4EC1EC2EC3, EC4EC1EC2EA, EC4EC1EC3EC2, EC4EC1EC3EA, EC4EC1EAEC2, EC4EC1EAEC3, EC4EC2EC1EC3, EC4EC2EC1EA, EC4EC2EC3EC1, EC4EC2EC3EA, EC4EC2EAEC1, EC4EC2EAEC3, EC4EC3EC1EC2, EC4EC3EC1EA, EC4EC3EC2EC1, EC4EC3EC2EA, EC4EC3EAEC1, EC4EC3EAEC2, EC4EAEC1EC2, EC4EAEC1EC3, EC4EAEC2EC1, EC4EAEC2EC3, EC4EAEC3EC1, EC4EAEC3EC2, EAEC1EC2EC3, EAEC1EC2EC4, EAEC1EC3EC2, EAEC1EC3EC4, EAEC1EC4EC2, EAEC1EC4EC3, EAEC2EC1EC3, EAEC2EC1EC4, EAEC2EC3EC1, EAEC2EC3EC4, EAEC2EC4EC1, EAEC2EC4EC3, EAEC3EC1EC2, EAEC3EC1EC4, EAEC3EC2EC1, EAEC3EC2EC4, EAEC3EC4EC1, EAEC3EC4EC2, EAEC4EC1EC2, EAEC4EC1EC3, EAEC4EC2EC1, EAEC4EC2EC3, EAEC4EC3EC1, 및/또는 EAEC4EC3EC2를 포함한다.

[0049] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 DSG2의 세포 외 영역의 5개 도메인을 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드에 존재하는 DSG2의 세포 외 영역의 도메인의 비제한적인 예는 EC1EC2EC3EC4EA, EC1EC2EC3EAEC4, EC1EC2EC4EC3EA, EC1EC2EC4EAEC3, EC1EC2EAEC3EC4, EC1EC2EAEC4EC3, EC1EC3EC2EC4EA, EC1EC3EC2EAEC4, EC1EC3EC4EC2EA, EC1EC3EC4EAEC2, EC1EC3EAEC2EC4, EC1EC3EAEC4EC2, EC1EC4EC2EC3EA, EC1EC4EC2EAEC3, EC1EC4EC3EC2EA, EC1EC4EC3EAEC2, EC1EC4EAEC2EC3, EC1EC4EAEC3EC2, EC1EAEC2EC3EC4, EC1EAEC2EC4EC3, EC1EAEC3EC2EC4, EC1EAEC3EC4EC2, EC1EAEC4EC2EC3, EC1EAEC4EC3EC2, EC2EC1EC3EC4EA, EC2EC1EC3EAEC4, EC2EC1EC4EC3EA, EC2EC1EC4EAEC3, EC2EC1EAEC3EC4, EC2EC1EAEC4EC3, EC2EC3EC1EC4EA, EC2EC3EC1EAEC4, EC2EC3EC4EC1EA, EC2EC3EC4EAEC1, EC2EC3EAEC1EC4, EC2EC3EAEC4EC1, EC2EC4EC1EC3EA, EC2EC4EC1EAEC3, EC2EC4EC3EC1EA, EC2EC4EC3EAEC1, EC2EC4EAEC1EC3, EC2EC4EAEC3EC1, EC2EAEC1EC3EC4, EC2EAEC1EC4EC3, EC2EAEC3EC1EC4, EC2EAEC3EC4EC1, EC2EAEC4EC1EC3, EC2EAEC4EC3EC1, EC3EC1EC2EC4EA, EC3EC1EC2EAEC4, EC3EC1EC4EC2EA, EC3EC1EC4EAEC2, EC3EC1EAEC2EC4, EC3EC1EAEC4EC2, EC3EC2EC1EC4EA, EC3EC2EC1EAEC4, EC3EC2EC4EC1EA, EC3EC2EC4EAEC1, EC3EC2EAEC1EC4, EC3EC2EAEC4EC1, EC3EC4EC1EC2EA, EC3EC4EC1EAEC2, EC3EC4EC2EC1EA, EC3EC4EC2EAEC1, EC3EC4EAEC1EC2, EC3EC4EAEC2EC1, EC3EAEC1EC2EC4, EC3EAEC1EC4EC2, EC3EAEC2EC1EC4, EC3EAEC2EC4EC1, EC3EAEC4EC1EC2, EC3EAEC4EC2EC1, EC4EC1EC2EC3EA, EC4EC1EC2EAEC3, EC4EC1EC3EC2EA, EC4EC1EC3EAEC2, EC4EC1EAEC2EC3, EC4EC1EAEC3EC2, EC4EC2EC1EC3EA, EC4EC2EC1EAEC3, EC4EC2EC3EC1EA, EC4EC2EC3EAEC1, EC4EC2EAEC1EC3, EC4EC2EAEC3EC1, EC4EC3EC1EC2EA, EC4EC3EC1EAEC2, EC4EC3EC2EC1EA, EC4EC3EC2EAEC1, EC4EC3EAEC1EC2, EC4EC3EAEC2EC1, EC4EAEC1EC2EC3, EC4EAEC1EC3EC2, EC4EAEC2EC1EC3, EC4EAEC2EC3EC1, EC4EAEC3EC1EC2, EC4EAEC3EC2EC1, EAEC1EC2EC3EC4, EAEC1EC2EC4EC3, EAEC1EC3EC2EC4, EAEC1EC3EC4EC2, EAEC1EC4EC2EC3, EAEC1EC4EC3EC2, EAEC2EC1EC3EC4, EAEC2EC1EC4EC3, EAEC2EC3EC1EC4, EAEC2EC3EC4EC1, EAEC2EC4EC1EC3, EAEC2EC4EC3EC1, EAEC3EC1EC2EC4, EAEC3EC1EC4EC2, EAEC3EC2EC1EC4, EAEC3EC2EC4EC1, EAEC3EC4EC1EC2, EAEC3EC4EC2EC1, EAEC4EC1EC2EC3, EAEC4EC1EC3EC2, EAEC4EC2EC1EC3, EAEC4EC2EC3EC1, EAEC4EC3EC1EC2, 및/또는 EAEC4EC3EC2EC1을 포함한다.

[0050] DSG2 융합 폴리펩타이드에 존재하는 가능한 형태 뿐만 아니라 DSG2 단백질의 일부의 비제한적인 예는 표 2에 제공된다. 표 2에 기재된 임의의 DSG2 도메인은 본원에 제공된 임의의 링커를 사용하여 융합 폴리펩타이드 내의 또 다른 도메인 또는 또 다른 DSG2 도메인에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 본원 개시내용의 조성물은 표 2에 기재된 임의의 도메인의 일부 또는 단편을 포함할 수 있다. 본원 개시내용의 폴리펩타이드에 포함되는 서열번호 1 또는 서열번호 3의 도메인 또는 도메인의 조합은 표 2에 정의된 도메인의 업스트림 또는 다운스트림에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40 또는 50개 아미노산이 연장될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 폴리펩타이드에 포함되는 서열번호 1 또는 서열번호 3의 도메인 또는 도메인의 조합은 표 2에 정의된 도메인의 N 말단 또는 C 말단에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40 또는 50개 아미노산이 절단될 수 있다. 비제한적 예로서, DSG2 단백질의 세포 외 영역은 서열번호 1의 아미노산 50-609에 걸친 아미노산으로부터 연장될 수 있다.

표 2. DSG2 세포 외 영역에 대한 DSG2 도메인 조합

면역글로불린 단백질

[0051] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 면역글로불린 단백질의 전체 또는 일부를 포함할 수 있다. 면역글로불린 단백질은 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE일 수 있다. 하나의 구현예에서, 면역글로불린 단백질은 IgG일 수 있다. IgG의 비제한적인 예는 IgG1, IgG2, IgG3 및/또는 IgG4일 수 있다. DSG2 융합 폴리펩타이드는 면역글로불린 영역 또는 일부를 포함할 수 있다. 면역글로불린 영역의 비제한적인 예는 예를 들어, Fc 영역, Fab 영역, 중쇄 가변(VH) 도메인, 중쇄 불변 도메인, 경쇄 가변(VL) 도메인 및/또는 경쇄 불변 도메인이다.

[0052] DSG2 융합 폴리펩타이드는 면역글로불린의 하나 이상의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어, CH1) 또는 이의 일부, 및 일부 경우에 힌지의 일부를 포함할 수 있다. 다른 양상에서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인을 배제한다. 따라서, Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어, CH2 및 CH3), IgE 및 IgM의 마지막 3개 불변 영역 면역글로불린 도메인, 및 이들 도메인의 N-말단에 가요성 힌지를 지칭할 수 있다. IgA 및 IgM의 경우, Fc 영역은 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc 영역은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3(Cγ2 및 Cγ3) 및 Cγ1(Cγ1)과 Cγ2(Cγ2) 사이의 하부 힌지 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 절단된 CH1 도메인, 및 면역글로불린의 CH2 및 CH3을 지칭한다. Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 사람 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 그의 카르복실-말단에 잔기 E216 또는 C226 또는 P230을 포함하도록 정의되며, 여기서 넘버링은 카밧(Kabat) 항체 넘버링 서열에서와 같이 EU 인덱스에 따른다.

[0053] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 사람 면역글로불린 단백질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 단백질은 비-사람 면역글로불린 단백질을 포함할 수 있다. 비-사람 면역글로불린 단백질은 개, 래트, 마우스 또는 영장류 면역글로불린 단백질일 수 있다. 면역글로불린의 일부 서열의 비제한적인 예는 표 3에 제공된다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 표 3에서 임의의 서열 또는 표 3에서 서열 단편과 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 면역글로불린 단백질 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.

표 3. 면역글로불린 영역의 서열

[0054] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 IgG1의 중쇄 불변 영역의 아미노산 100 내지 330을 포함할 수 있다(GenBank 승인 번호 P01857.1; 서열번호 4). 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 IgG1 중쇄 불변 영역의 Fc 영역을 나타내는, 서열번호 5로서 본원에 제공된 IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산 104-330을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 (Eu 아미노산 넘버링 명명법을 사용하여) P329G LALA로 지정된 서열번호 5의 변이체를 포함할 수 있다. 상기 변이체는 IgG1의 Fc 영역 내 L234A/L235A/P329G 돌연변이를 함유하고 서열번호 31로서 본원에 제공된다. "P329G LALA 변이체"는 면역글로불린의 FcγR 및 C1q 상호작용을 감소시켜 생체 내 DSG2 융합 폴리펩타이드의 발현에 의해 유발되는 면역 반응을 최소화하는 것으로 나타났다(문헌참조: Schlothauer, et al. Protein Eng. Des. Sel. 2016, 29(10), 457-466, 이는 전문이 본원에 참조로 인용됨). 일부 대안적 구현예에서, IgG1 단백질은 L234A, L235A 및 P329G 돌연변이를 포함하지 않는다.

[0055] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 IgG4 중쇄 불변 영역의 Fc 영역을 나타내는 본원에서 서열번호 11로서 제공되는 IgG4의 아미노산 99 내지 327(GenBank 승인 번호 P01861.1; 서열번호 10)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 (Eu 아미노산 넘버링 명명법을 사용하여) S228P, L235E 및 P329G로 지정된 이들 돌연변이를 포함하는, 서열번호 11의 변이체를 포함할 수 있다. 이들 3개의 돌연변이를 포함하는 변이체의 서열은 서열번호 32로서 본원에 제공된다.

[0056] 사람 IgG4 S228P/L235E/P329G 변이체 IgG4(이하 "SPLE P329G"로서 본원에서 언급됨)는 이전에 최소한의 FcγR 결합 활성을 입증된 바 있는 IgG4의 변이체이다(문헌참조: Newman et al. 2001, Clin. Immunol., 98, 164-174; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 일부 구현예에서, IgG4 단백질은 상기된 돌연변이를 포함하지 않는다.

신호 서열:

[0057] 신호 서열(종종 신호 펩타이드, 표적화 신호, 표적 펩타이드, 국소화 서열, 전이 펩타이드, 리더 서열 또는 리더 펩타이드로 지칭됨)은 단백질(예를 들어, 본원 개시내용의 폴리펩타이드)을 이의 지정된 세포 및/또는 세포 외 위치로 유도한다. 신호 서열은 특정 위치로 향하게 되는 대부분의 새로 합성된 단백질의 N-말단에 존재하는 짧은(약 5-50개 아미노산 길이) 펩타이드일 수 있다. 신호 서열은 신호 인지 입자(SRP)에 의해 인지될 수 있고 유형 I 및 유형 II 신호 펩타이드 펩티다제를 사용하여 절단될 수 있다. 사람 단백질로부터 유래된 신호 서열은 특정 세포 및/또는 세포 외 위치로 본원 개시내용의 폴리펩타이드를 지시하기 위해 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드로서 혼입될 수 있다. 이들 신호 서열은 실험적으로 입증될 수 있고 절단될 수 있다(문헌참조: Zhang et al., Protein Sci. 2004, 13:2819-2824).

[0058] 일부 구현예에서, 신호 서열은 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 위치할 수 있고, 필수적이지는 않지만 본원에서 논의된 바와 같이 "성숙한" 폴리펩타이드를 산출하기 위해 폴리펩타이드로부터 절단될 수 있다.

[0059] 일부 예에서, 신호 서열은 천연 분비 단백질 및 이의 변이체로부터 유래된 분비 신호 서열일 수 있다.

[0060] 일부 경우에, 표적 세포의 표면 막으로 본원 개시내용의 폴리펩타이드를 지시하는 신호 서열이 사용될 수 있다. 표적 세포의 표면 상의 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 발현은 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 비-표적 생체내 환경으로의 확산을 제한함으로써 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 안전성 프로파일을 잠재적으로 개선시키는데 유용할 수 있다. 추가로, 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 막 제공은 더 긴 반감기를 위한 폴리펩타이드의 생리학적 및 정성적 신호전달 및 안정화 및 재순환을 가능하게 할 수 있다.

[0061] 신호 서열은 바이러스, 효모 및 세균과 같은 다른 유기체로부터의 이종성 신호 서열일 수 있고, 이는 본원 개시내용의 폴리펩타이드를 핵과 같은 특정 세포 부위로 향하게 할 수 있다(예를 들어, EP 1209450). 다른 예는 효소와 같은 융합 단백질의 분비를 증가시킬 수 있는 트리코더마(Trichoderma)로부터의 아스파르틱 프로테아제 (NSP24) 서열(예를 들어, 미국 특허 제8,093,016호(서빈 및 킴(Cervin and Kim)), 세균 지단백질 신호 서열(예를 들어, PCT 공개 번호 1991/09952 (라우 및 리욱스(Lau and Rioux)), 이. 콜라이(E.coli ) 장독소 II 신호 서열(예를 들어, 미국 특허 제6,605,697호 (공 등(Kwon et al.)), 이. 콜라이 분비 신호 서열(예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2016/090404 (말레이 등(Malley et al.)), 메탄올자화 효모로부터의 리파제 신호 서열(예를 들어, 미국 특허 제8,975,041호), 및 코리네폼 박테리아(Coryneform bacteria)으로부터의 DNase에 대한 신호 펩타이드(예를 들어, 미국 특허 제4,965,197호)를 포함할 수 있고; 상기 문헌들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.

[0062] 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 IgG1 신호 펩타이드 또는 IgG2 신호 펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 신호 펩타이드는 아미노산 서열 METDTLLLWVLLLWVPGSTG (서열번호 29)를 갖는 마우스 IgGκ 카파 경쇄 신호 펩타이드일 수 있다. 상기 신호 펩타이드는 전이유전자 발현을 개선하는 데 사용되는 가장 잘 특징화된 신호 펩타이드 중 하나이다(문헌참조: Fonseca et al., Vaccine, 2018, 36(20): 2799-2808, 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 하기 본원에 기재된 융합 단백질의 예시적 구현예(DSG2FP#1을 제외하고)는 발현되는 경우 서열번호 29의 신호 펩타이드를 포함하였다. 후속적으로 신호 펩타이드는 항-DSG2 항체의 억제에 대한 시험 전에 각 융합 단백질로부터 단백질 생산 중에 절단된다.

링커

[0063] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 적어도 하나의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 본원 개시내용의 폴리펩타이드의 하나 이상의 영역 사이에 위치할 수 있다. 하나의 구현예에서, 링커는 DSG2 단백질의 전체 또는 일부와 면역글로불린 단백질의 전체 또는 일부 사이에 위치할 수 있다. 하나의 양상에서, 링커는 DSG2 단백질의 하나 이상의 도메인 사이에 위치할 수 있다.

[0064] 일부 구현예에서, 링커는 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 아미노산 잔기의 조합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 약 1-50개 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

[0065] 본원 개시내용의 링커는 길이가 약 1 내지 100개 아미노산일 수 있고, 이는 이펙터 모듈(펩타이드 링커라고도 공지된)의 임의의 도메인/영역을 함께 연결한다. 링커는 1-40개의 아미노산 길이, 또는 2-30개의 아미노산 길이, 또는 20-80개의 아미노산 길이, 또는 50-100개의 아미노산 길이일 수 있다. 링커 길이는 또한 폴리펩타이드의 구성 유형에 의존하고 폴리펩타이드의 결정 구조에 따라 최적화될 수 있다. 일부 경우에 보다 짧은 링커 길이가 바람직하게 선택될 수 있다. 일부 양상에서, 펩타이드 링커는 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 아미노산, 바람직하게는 펩타이드 결합에 의해 연결된 1 내지 20개의 아미노산으로 구성될 수 있고, 여기서 아미노산은 20개의 천연에 존재하는 아미노산으로부터 선택된다: 글리신(G), 알라닌(A), 발린(V), 류신(L), 이소류신(I), 세린(S), 시스테인(C), 트레오닌(T), 메티오닌(M), 프롤린(P), 페닐알라닌(F), 티로신(Y), 트립토판(W), 히스티딘(H), 라이신(K), 아르기닌(R), 아스파르테이트(D), 글루탐산(E), 아스파라긴(N) 및 글루타민(Q). 이들 아미노산 중 하나 이상은 당업계에 의해 이해되는 바와 같이 글리코실화될 수 있다. 일부 양상에서, 펩타이드 링커의 아미노산은 알라닌(A), 글리신(G), 프롤린(P), 아스파라긴(R), 세린(S), 글루타민(Q) 및 라이신(K)으로부터 선택될 수 있다.

[0066] 일부 구현예에서, 링커는 가요성 링커 또는 강성 링커일 수 있다. 가요성 링커는 작은 비극성(예를 들어, Gly) 또는 극성(예를 들어, Ser 또는 Thr) 아미노산으로 구성될 수 있다. 이들 아미노산의 작은 크기는 가요성을 제공하고 연결 기능 도메인의 이동성을 허용한다. 가장 통상적으로 사용되는 가요성 링커는 주로 Gly 및 Ser 잔기("GS" 링커)의 스트레치로 이루어진 서열을 갖고 있다. 가장 널리 사용되는 가요성 링커의 예는 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n의 서열을 갖는다. 카피 수 "n"을 조정함으로써 상기 GS 링커의 길이를 최적화하여 기능적 도메인의 적절한 분리를 달성하거나 필요한 도메인 간 상호 작용을 유지할 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 가요성을 유지하기 위한 Thr 및 Ala와 같은 추가 아미노산 및 용해도를 개선시키기 위한 Lys 및 Glu와 같은 극성 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 순전히 글리신 잔기로 이루어진 (Gly)8과 같은 가요성 링커를 포함할 수 있다. 링커 서열은 수용액에서 우수한 용해도를 유지하기 위해 큰 소수성 잔기를 회피하였다.

[0067] 일부 구현예에서, 링커는 강성 링커일 수 있다. 강성 링커의 비제한적인 예는 (EAAAK)n (n = 1-5)의 서열을 갖는 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 강성 링커는 프롤린 풍부 서열, (XP)n을 가질 수 있고, X는 임의의 아미노산, 바람직하게 Ala, Lys, 또는 Glu를 지정한다.

[0068] 일부 구현예에서, 링커는 GGGGGS (서열번호 12) 또는 EAAAK (서열번호 13)일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 GGGGS (서열번호 27)일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 IEGRMD (서열번호 28)일 수 있다.

DSG2 융합 폴리펩타이드

[0069] 융합 폴리펩타이드의 특정 구현예는 하기에 기재된 실시예에서 조사되었다. 하기의 기재에서, 구성 요소를 세미콜론으로 구분하는 N 말단에서 C 말단의 포맷으로 표현한다. 조사된 DSG2 융합 폴리펩타이드 중 하나는 R&D Systems(rndsystems.com)에서 "재조합 사람 데스모글레인-2 Fc 키메라 단백질, CF"로 호칭되는 것을 입수하였다. 상기 융합 폴리펩타이드는 섬유아세포를 플레이트 웰에 접착시키기 위해 개발된 연구 도구이고, 치료 목적으로 항-DSG2 항체를 억제하는 것과 관련해서는 이전에 조사된 적이 없다. 본원에서 "도구 데코이" 및 "DSG2FP#1"로 상호 교환적으로 지칭되는 상기 융합 폴리펩타이드의 구조는 DSG2의 세포 외 도메인의 전체 서열을 나타내는 GenBank 승인 번호 CAA81226의 잔기 Ala49 내지 Gly608(본원에 서열번호 30으로 포함됨); 서열 IEGRMD(서열번호 28)를 갖는 링커; 및 사람 IgG1의 잔기 Pro100 내지 Lys330(서열번호 4)와 함께 N-말단을 포함한다. 표 4의 일부 예시적 구현예에서, DSG2 세포 외 도메인은 사람 DSG2 서열의 아미노산 50 - 609(서열번호 1)를 포함한다. 표 4의 일부 예시 구현예에서, 면역글로불린의 Fc 영역은 IgG1Fc 도메인 또는 IgG4Fc 도메인이다. 표 4의 일부 예시 구현예에서, IgG1 서열은 서열번호 4의 아미노산 100-330 또는 104-330을 포함한다. 표 4의 일부 예시 구현예에서, IgG4 서열은 서열번호 10의 아미노산 99-327을 포함한다. 표 4의 일부 예시 구현예에서, IgG1 서열은 서열번호 31이고, 이하에서는 "P329G LALA 변이체"로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 단백질은 IgG4의 사람 IgG4 S228P/L235E/P3229G 변이체(서열번호 32)일 수 있다. 명확성을 높이기 위해, 상기된 변이체의 돌연변이 지정은 본 단락에서 동정된 서열 내 위치가 아닌 Eu 항체 넘버링 명명법을 참조한 것이다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 디설파이드 연결된 이량체로서 합성될 수 있다.

[0070] 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 적어도 하나의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 융합 단백질의 임의의 2개 구성 요소 사이에 존재할 수 있다.

[0071] 표 4는 DSG2 융합 폴리펩타이드의 예를 제공한다.

표 4. DSG2 융합 폴리펩타이드

치료학적 제제

[0072] 일부 구현예에서, 본원 개시내용은 혈청 항-DSG2 항체와 관련된 병태, 질환, 장애 또는 증상을 표적화하기 위한 치료학적 제제를 제공한다. 일부 구현예에서, 치료학적 제제는 면역글로불린 단백질을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료학적 제제는 이에 제한되지 않지만 리툭시맙과 같은 항-CD20 항체일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료학적 제제는 Fab 또는 Fc 단편을 표적화함에 의해 자가항체 기능의 차단을 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료학적 제제는 정맥내로 투여되는 면역 글로불린(IVIG)일 수 있다. 과량의 IgG를 투여하면 FcRn이 포화되어 모든 IgG 분자(자가항체 포함)가 보다 신속하게 제거될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료학적 제제는 FcRn 차단 모노클로날 항체일 수 있다. 하나의 구현예에서, FcRn-차단 모노클로날 항체는 SYNT001일 수 있다(문헌참조: Blumberg LJ, et al. Sci Adv. 2019 Dec 18;5(12):eaax9586. doi: 10.1126/sciadv.aax9586; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 일부 구현예에서, 치료학적 제제는 에쿨리주맙과 같은 항-C5 항체일 수 있다. 자가면역 질환에서 보체 시스템의 활성화는 면역 세포와 이들의 면역 복합체의 결합을 초래할 수 있고, 후속적 세포 내 신호 전달 이벤트는 발병기전에 중요하다.

[0073] 본원 개시내용의 치료학적 제제는 단독으로 또는 본원에 기재된 DSG2 융합 폴리펩타이드와 조합하여 사용할 수 있다. DSG2 융합 폴리펩타이드와 함께 사용하는 경우, 치료학적 제제는 대상체에게 DSG2 융합 폴리펩타이드를 제공하기 전, 동시에 또는 이후에 투여할 수 있다. 하나의 구현예에서, 치료학적 제제는 ARVC가 아닌 항-DSG2 항체와 관련된 병태의 치료를 위한 CAAR이다.

[0074] 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 CAAR 및 DSG2 융합 폴리펩타이드와 같은 치료학적 제제의 조합을 포함할 수 있고, 이에 제한되지 않지만 ARVC, COVID-19, COVID-19 후 증후군, 유육종증, 확장성 심근병증 또는 항-DSG2 항체와 관련된 임의의 질환과 같은 질환의 치료를 위해 사용될 수 있다.

폴리뉴클레오타이드

[0075] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 폴리펩타이드는 본원에 기재된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 변이체에 의해 암호화된다. 예시적인 핵산 또는 폴리뉴클레오타이드는 리보핵산 (RNA), 데옥시리보핵산(DNA), 트레오스 핵산(TNA), 글리콜 핵산(GNA), 펩타이드 핵산(PNA), 잠긴 핵산(β-D-리보 배위를 갖는 LNA, α-L-리보 배위를 갖는 α-LNA(LNA의 부분입체이성질체), 2'-아미노 기능화를 갖는 2'-아미노-LNA, 및 2'-아미노 기능화를 갖는 2’-아미노-α- LNA를 포함하는 LNA), 에틸렌 핵산(ENA), 사이클로헥세닐 핵산(CeNA) 또는 하이브리드 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0076] 이와 같이, 참조 서열, 특히 폴리펩타이드 서열에 대한 치환, 삽입 및/또는 추가, 결실 및 공유 변형을 함유하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본원에 기재된다. 예를 들어, 서열 태그 또는 아미노산, 예를 들어, 하나 이상의 라이신은 본원에 기재된 펩타이드 서열에 (예를 들어, N-말단 또는 C-말단에서) 첨가될 수 있다. 서열 태그는 펩타이드 정제 또는 국소화를 위해 사용될 수 있다. 라이신은 펩타이드 용해도를 증가시키거나 비오티닐화를 허용하는 데 사용될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열의 카복시 및 아미노 말단 영역에 위치한 아미노산 잔기가 임의로 제거되어 절단된 서열을 제공할 수 있다. 특정 아미노산(예를 들어, C-말단 또는 N-말단 잔기)은 대안적으로 예를 들어, 용해성 또는 고체 지지체에 연결된 보다 큰 서열의 일부로서 서열의 발현과 같이 서열의 용도에 따라 제거될 수 있다.

[0077] 임의의 특성이 본원에 기재된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 폴리펩타이드의 목적하는 성분으로서 동정되거나 한정되면, 이들 특성의 임의의 여러 조작 및/또는 변형은 이동, 스와핑, 역위, 결실, 무작위화 또는 복제에 의해 수행될 수 있다. 또한, 특성의 조작은 본원에 기재된 분자에 대한 변형과 동일한 결과를 초래할 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 도메인을 결실시키는 것과 관련된 조작은 전장 분자보다 적게 암호화하는 핵산의 변형과 마찬가지로 분자 길이의 변경을 초래한다.

III. 약제학적 조성물 및 전달

[0078] 본원에 기재된 융합 폴리펩타이드는 치료학적 제제로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용은 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 담체 및 융합 폴리펩타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

[0079] 일부 구현예에서, 조성물은 사람, 사람 환자 또는 대상체에게 투여된다. 비록 본원에 제공된 약제학적 조성물의 기재가 원칙적으로 사람에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물에 관한 것이지만, 이러한 조성물이 일반적으로 임의의 다른 동물, 예를 들면, 비-사람 동물, 예를 들면, 비-사람 포유동물에게 투여하기에 적합하다는 것은 통상의 기술자라면 이해할 것이다. 조성물이 다양한 동물에게 투여하기에 적합하게 하기 위해 사람에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물의 변형은 널리 이해되고 있고, 통상적으로 숙련된 수의 약리학자는 통상적인 실험만으로 그러한 변형을 디자인하고/하거나 수행할 수 있다. 약제학적 조성물의 투여가 고려되는 대상체는 사람 및/또는 다른 영장류; 개, 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 마우스 및/또는 래트와 같은 상업적 관련 포유류를 포함한 포유류; 및/또는 가금류, 닭, 오리, 거위 및/또는 칠면조와 같은 상업 관련 조류를 포함한 조류를 포함하지만, 이들에 제한되는 것은 아니다. 비제한적 예로서, 본원 개시내용의 조성물은 ARVC를 치료하기 위해 개에게 투여될 수 있다.

[0080] 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 사용될 수 있는 융합 폴리펩타이드 및 이의 약제학적 조성물이 본원에 제공된다.

[0081] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드 및 약제학적 조성물은 피하 경로를 통해 또는 정맥내 경로를 통해 전달될 수 있다.

[0082] 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 목적하는 특정 투여 형태에 적합한, 임의의 모든 용매, 분산 매질, 희석제 또는 기타 액체 비히클, 분산 또는 현탁 보조제, 표면 활성제, 등장화제, 증점제 또는 유화제, 보존제, 고체 결합제, 윤활제, 향미제, 안정화제, 항산화제, 삼투압 조정제, pH 조정제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 약제학적 조성물을 제형화하기 위한 각종 부형제 및 조성물을 제조하기 위한 기술은 당해 분야에 공지되어 있다[문헌참조: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; 이의 전문은 본원에 참조로 인용됨]. 통상적인 부형제 매질의 사용은 본원 개시내용의 범위 내에서 고려될 수 있지만, 임의의 통상적인 부형제 매질이, 예를 들면, 임의의 바람직하지 못한 생물학적 효과를 생성하거나 약제학적 조성물의 임의의 다른 성분(들)과 유해한 방식으로 상호작용함으로써 물질 또는 이의 유도체와 양립불가능한 한 제외되고, 이의 사용은 본원 개시내용의 범위 내에 있는 것으로 고려된다.

[0083] 일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 순수할 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 사람용 및 수의학용으로 승인된다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 식품의약국에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 약제학적 등급일 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전 및/또는 국제 약전의 표준을 충족할 수 있다.

[0804] 약제학적 조성물의 제조에 사용되는 약제학적으로 허용되는 부형제는 불활성 희석제, 분산제 및/또는 과립화제, 표면 활성제 및/또는 유화제, 붕해제, 결합제, 보존제, 완충제, 윤활제, 및/또는 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 부형제는 임의로 약제학적 조성물에 포함될 수 있다. 조성물은 또한 코코아 버터 및 좌약 왁스와 같은 부형제, 착색제, 코팅제, 감미료, 풍미제 및/또는 향료를 포함할 수 있다.

[0085] 예시적인 희석제는 탄산칼슘, 탄산나트륨, 인산칼슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 인산수소칼슘, 인산나트륨 락토스, 슈크로스, 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 염화나트륨, 건조 전분, 옥수수 전분, 분말 슈가 등 및/또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0086] 예시적인 과립화 및/또는 분산제는 감자 전분, 옥수수 전분, 타피오카 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트, 점토, 알긴산, 구아 검, 감귤 펄프, 한천, 벤토나이트, 셀룰로스 및 목재 제품, 천연 스폰지, 양이온 교환 수지, 탄산칼슘, 규산염, 탄산나트륨, 가교 결합된 폴리비닐피롤리돈(크로스포비돈), 나트륨 카복시메틸 전분 (나트륨 전분 글리콜레이트), 카복시메틸 셀룰로스, 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스(크로스카멜로스), 메틸셀룰로스, 사전 젤라틴화된 전분(전분 1500) ), 미정질 전분, 수불용성 전분, 칼슘 카복시메틸 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트(VEEGUM®), 나트륨 라우릴 설페이트, 4급 암모늄 화합물 등, 및/또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0087] 예시적인 표면 활성제 및/또는 유화제는 천연 유화제(예를 들어, 아카시아, 한천, 알긴산, 나트륨 알기네이트, 트라가칸트, 콘-드럭스, 콜레스테롤, 크산탄, 펙틴, 겔라틴, 달걀 노른자, 카세인, 울 지방, 콜레스테롤, 왁스 및 렉시틴), 콜로이드 점토(예를들어, 벤토나이트(알루미늄 실리케이트) 및 VEEGUM®(마그네슘 알루미늄 실리케이트), 장쇄 아미노산 유도체, 고분자량 알코올(예를들어, 스테아릴 알코올, 세틸 알코올, 올레일 알코올, 트리아세틴 모노스테아레이트, 에틸렌 글리콜 디스테아레이트, 글리세릴 모노스테아레이트 및 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리비닐 알코올), 카보머(예를 들어, 카복시 폴리메틸렌, 폴리아크릴산, 아크릴산 중합체 및 카복시비닐 중합체), 카라기난, 셀룰로스 유도체(예를 들어, 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 분말 셀룰로스, 하이드록시메틸 셀룰로스 , 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스), 소르비탄 지방산 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(TWEEN®20), 폴리옥시에틸렌 소르비탄(TWEEN®60), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(TWEEN®80), 소르비탄 모노팔미테이트(SPAN®40), 소르비탄 모노스테아레이트(SPAN®60), 소르비탄 트리스테아레이트(SPAN®65), 글리세릴 모노올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트(SPAN®80), 폴리옥시에틸렌 에스테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 모노스테아레이트(MYRJ®45), 폴리옥시에틸렌 수소화된 피마자유, 폴리에톡실화된 피마자유, 폴리옥시메틸렌 스테아레이트 및 SOLUTOL®), 슈크로스 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르(예를 들어, CREMOPHOR®), 폴리옥시에틸렌 에테르(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르( BRIJ®30), 폴리(비닐-피롤리돈), 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 나트륨 올레에이트, 칼륨 올레에이트, 에틸 올레에이트, 올레산, 에틸 라우레이트, 나트륨 라우릴 설페이트, PLUORINC®F 68, POLOXAMER® 188, 세트리모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드, 벤즈알코늄 클로라이드, 도쿠세이트 나트륨 등 및/또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0088] 예시적인 결합제는 전분(예를 들어, 옥수수 전분 및 전분 페이스트); 겔라틴; 슈가(예를 들어, 슈크로스, 글루코스, 덱스트로스, 덱스트린, 당밀, 락토스, 락티톨, 만니톨); 아미노산(예를 들어, 글리신); 천연 및 합성 검(예를 들어, 아카시아, 나트륨 알기네이트, 아일랜드 이끼 추출물, 판와르 검, 가티 검, 이사폴 껍질 점액, 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 셀룰로스 아세테이트, 폴리(비닐) -피롤리돈), 마그네슘 알루미늄 실리케이트(VEEGUM®), 및 낙엽송 아라보갈락탄); 알기네이트; 폴리에틸렌 옥사이드; 폴리에틸렌 글리콜; 무기 칼슘염; 규산; 폴리메타크릴레이트; 왁스; 물; 알코올; 등 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0089] 예시적인 보존제는 항산화제, 킬레이팅제, 항미생물 보존제, 항진균 보존제, 알코올 보존제, 산성 보존제 및/또는 다른 보존제를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 산화는 mRNA, 특히 액체 mRNA 제제의 잠재적인 분해 경로이다. 산화를 방지하기 위해 제제에 항산화제를 첨가할 수 있다. 예시적인 항산화제는 알파 토코페롤, 아스코르브산, 아코르빌 팔미테이트, 벤질 알코올, 부틸화 하이드록시아니솔, EDTA, m-크레졸, 메티오닌, 부틸화 하이드록시톨루엔, 모노티오글리세롤, 칼륨 메타바이설피트, 프로피온산, 프로필 갈레이트, 나트륨 아스코르베이트, 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 티오글리세롤 및/또는 아황산나트륨을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 킬레이팅제는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 시트르산 일수화물, 이나트륨 에데테이트, 이칼륨 에데테이트, 에데트산, 푸마르산, 말산, 인산, 나트륨 에데테이트, 타르타르산, 및/또는 삼나트륨 에데테이트를 포함한다. 예시적인 항미생물 보존제는 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드, 벤질 알코올, 브로노폴, 센트리미드, 세틸피리디늄 클로라이드, 클로르헥시딘, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로록실레놀, 크레졸, 에틸 알코올, 글리세린, 헥세티딘, 이미드우레아, 페놀, 페녹시에탄올, 페닐에틸 알코올, 페닐머큐릭 니트레이트, 프로필렌 글리콜 또는 티머로살을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 항진균 보존제는 부틸 파라벤, 메틸 파라벤, 에틸 파라벤, 프로필 파라벤, 벤조산, 하이드록시벤조산, 칼륨 벤조에이트, 칼륨 소르베이트, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 프로피오네이트 및/또는 소르브산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 알코올 보존제는 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 페놀, 페놀류 화합물, 비스페놀, 클로로부탄올, 하이드록시벤조에이트 및/또는 페닐 에틸 알코올을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 산성 보존제는 비타민 A, 비타민 C, 비타민 E, 베타-카로틴, 시트르산, 아세트산, 데히드로아세트산, 아스코르브산, 소르브산 및/또는 피트산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다른 보존제는 토코페롤, 토코페롤 아세테이트, 데테록심 메실레이트, 세트리미드, 부틸화 하이드록시아니솔(BHA), 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 에틸렌디아민, 나트륨 라우릴 설페이트(SLS), 나트륨 라우릴 에테르 설페이트(SLES), 아황산수소나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산칼륨, 메타중아황산칼륨, GLYDANT PLUS®, PHENONIP®, 메틸파라벤, GERMALL®115, GERMABEN®, NEOLONE™, KATHON™ 및/또는 EUXYL®을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0090] 일부 구현예에서, 약제학적 용액의 pH는 안정성을 개선하기 위해 pH 5 내지 pH 8로 유지된다. pH를 제어하기 위한 예시적인 완충제는 인산나트륨, 나트륨 시트레이트, 나트륨 숙시네이트, 히스티딘(또는 히스티딘-HCl), 탄산나트륨 및/또는 나트륨 말레이트를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 또 다른 구현예에서, 상기 열거된 예시적인 완충제는 추가의 1가 반대이온(칼륨을 포함하지만 이에 제한되지 않음)과 함께 사용될 수 있다. 2가 양이온은 또한 완충 반대 이온으로 사용될 수 있지만; 그러나 이들은 복합체 형성 및/또는 mRNA 분해로 인해 바람직하지 않다.

[0091] 예시적인 완충제는 또한 시트레이트 완충액, 아세테이트 완충액, 포스페이트 완충액, 염화암모늄, 탄산칼슘, 염화칼슘, 칼슘 시트레이트, 칼슘 글루비오네이트, 칼슘 글루셉테이트, 칼슘 글루코네이트, D-글루콘산, 칼슘 글리세로포스페이트, 칼슘 락테이트, 프로판산, 칼슘 레불리네이트, 펜탄산, 이염기인산칼슘, 인산, 삼염기인산칼슘, 인산수산화칼슘, 칼륨 아세테이트, 염화칼륨, 칼륨 글루코네이트, 칼륨 혼합물, 이염기인산칼륨, 일염기인산칼륨, 인산칼륨 혼합물, 나트륨 아세테이트, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 나트륨 시트레이트, 나트륨 락테이트 이염기인산나트륨, 일염기인산나트륨, 인산나트륨 혼합물, 트로메타민, 수산화마그네슘, 수산화알루미늄, 알긴산, 발열원이 없는 물, 등장 식염수, 링거 용액, 에틸 알코올 등 및/또는 이들의 조합을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

[0092] 예시적인 윤활제는 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산, 실리카, 활석, 맥아, 글리세릴 베헤네이트, 수소화 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 아세테이트, 염화나트륨, 류신, 마그네슘 라우릴 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트 등, 및 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0093] 예시적인 오일은 아몬드, 행인(apricot kernel), 아보카도, 바바수, 베르가못, 블랙 커런트 종자, 보리지, 케이드, 카모마일, 카놀라, 캐러웨이, 카나우바, 피마자, 계피, 코코아 버터, 코코넛, 대구 간, 커피, 옥수수, 목화씨, 에뮤, 유칼립투스, 달맞이꽃, 생선, 아마씨, 제라니올, 박, 포도씨, 헤이즐넛, 우슬초, 이소프로필 미리스테이트, 호호바, 쿠쿠이넛, 라반딘, 라벤더, 레몬, 리트세아 큐베바, 마카데미아넛, 아욱, 망고 씨, 메도우폼 씨, 밍크, 육두구, 올리브, 오렌지, 오렌지 러피, 팜, 팜 커널, 복숭아 커널, 땅콩, 양귀비 씨, 호박 씨, 유채, 쌀겨, 로즈마리, 잇꽃, 샌달우드, 사스콰나, 세이보리, 산자나무, 참깨, 시어버터, 실리콘, 대두, 해바라기, 티 트리, 엉겅퀴, 츠바키, 베티버, 호두 및 밀 배아 오일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예시적인 오일은 부틸 스테아레이트, 카프릴산 트리글리세라이드, 카프르산 트리글리세라이드, 사이클로메티콘, 디에틸 세바케이트, 디메티콘 360, 이소프로필 미리스테이트, 미네랄 오일, 옥틸도데칸올, 올레일 알코올, 실리콘 오일 및/또는 이들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

[0094] 코코아 버터 및 좌약 왁스와 같은 부형제, 착색제, 코팅제, 감미료, 착향료 및/또는 향료는 배합자의 판단에 따라 조성물에 존재할 수 있다.

[0095] 예시적인 첨가제는 생리학적으로 생체적합성인 완충액(예를 들어, 트리메틸아민 하이드로클로라이드), 킬레이트제(예를 들어, DTPA 또는 DTPA-비스아미드) 또는 칼슘 킬레이트 복합체(예를 들어, 칼슘 DTPA, CaNaDTPA-비스아미드)의 첨가, 또는 임의로 칼슘 또는 나트륨염(예를 들어, 염화칼슘, 칼슘 아스코르베이트, 칼슘 글루코네이트 또는 칼슘 락테이트)의 첨가를 포함한다. 추가로, 항산화제 및 현탁제가 사용될 수 있다.

[0096] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 치료학적 유효 결과를 초래하는 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 이들은 장관(장으로), 위장관, 경막외(경질막으로), 구강(입으로), 경피, 경막주위, 뇌내(대뇌로), 뇌실내(대뇌로), 뇌심실내 (뇌심실로), 경피(피부에 적용), 피내,(피부 자체로), 피하(피부 아래), 비강 투여(코를 통해), 정맥내(정맥으로), 정맥내 볼러스, 정맥 점적, 동맥 내(동맥으로), 근육내(근육으로), 심장내(심장으로), 골수내주입(골수내), 경막내(척추관내), 복강내,(복막주입 또는 주사), 방광내주입, 유리체강내, (눈을 통해), 해면내 주사 (병리학적 공동으로) 강내 (음경 기저로), 질내 투여, 자궁내, 양막 외 투여, 경피 (전신 분포를 위해 온전한 피부를 통한 확산), 경점막 ( 점막을 통한 확산), 경질, 흡입(코로 흡입), 설하, 음순, 관장, 점안액(결막에), 귀안액, 귓바퀴(귀 내부 또는 경유), 협측(뺨 쪽으로 향함) , 결막, 피부, 치과(치아 또는 치아들에), 전기삼투, 자궁경관내, 부비강내, 기관내, 체외, 혈액투석, 침윤, 간질, 복강내, 양막내, 관절내, 담도내, 기관지내, 점액낭내, 연골내(연골 내에), 상환골내 (마미 신경 내), 수조내(수조 마그나 뇌척수내), 각막내(각막 내에서), 치과 고삐내, 관상 동맥 내(관상 동맥 내에서), 체내 해면체(음경의 체내 해면체의 확장 가능한 공간 내), 디스크 내(디스크 내에), 관 내(선관 내), 십이지장 내(십이지장 내에), 경막 내(경막 내 또는 아래), 표피 내(표피로), 식도 내(식도로) , 위내(위 내에), 치은 내(치은 내에), 회장 내(소장의 말단부 내), 병변 내(국소 병변 내 또는 직접 도입), 내강 내(튜브의 내강 내에), 림프 내 (림프 내에), 골수 내 (골수강 내), 수막 내 (수막 내), 안구 내 (눈 내), 난소 내 (난소 내에), 심막 내 (심낭 내에), 흉막 내 (흉막 내에), 전립선 내(전립선 내), 폐 내(폐 또는 기관지 내), 비강 내(비강 또는 안와 주위 부비동 내), 척수 내(척추 내), 윤활막 내(관절의 활액 공동 내), 건내 (힘줄 내), 고환 내 (고환 내), 경막 내 (뇌척수 축의 모든 수준에서 뇌척수액 내), 흉부 내 (흉부 내), 관내 (기관의 세관 내), 종양 내 (종양 내) ), 고막내(황중막 내), 혈관내(혈관 내), 심실 내(심실 내), 이온영동(용해성 염 이온이 신체 조직으로 이동하는 전류에 의해), 관주(열린 상처 또는 체강을 목욕 또는 세척으로), 후두(후두에 직접), 비위(코를 통해 위로), 폐쇄 드레싱 기술, 안과(외부 눈에), 구인두(입과 인두에 직접) , 비경구, 경피, 관절주위, 경막주위, 신경주위, 치주, 직장, 호흡기(국소적 또는 전신적 효과를 위해 구강 또는 비강 흡입에 의한 기도 내), 구후부(뇌교 뒤 또는 안구 뒤), 심근내(심근으로 진입) , 연조직, 지주막하, 결막하, 점막하, 경태반(태반 통과 또는 가로질러), 기관통과(기관 벽 통과), 고막통과(고막강 가로질러 또는 통과), 요관(요관으로), 요도(태반으로), 질, 꼬리 차단, 진단, 신경 차단, 담즙 관류, 심장 관류, 광분리술 또는 척수를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 조성물은 이들이 혈액-뇌 장벽, 혈관 장벽 또는 기타 상피 장벽을 가로지르도록 허용하는 방식으로 투여될 수 있다.

[0097] 치료학적 유효 용량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 것이며 질환의 중증도 및 과정, 환자의 건강 및 치료에 대한 반응, 치료하는 의사의 판단에 따라 달라질 것이다.

IV. 사용 방법

[0098] 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드 조성물의 사용 방법이 본원에 제공된다. 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 DSG2 자가항체와 관련된 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 임의의 병인학의 DSG2 항체와 관련된 심장독성을 완화시킨다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드 조성물은 대상체에서 항-DSG2 항체를 감소시키는 데 사용될 수 있다. 대상체는 항-DSG2 항체를 생성하는 것으로 공지된 증상, 질환 또는 장애를 가질 수 없다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드 조성물은 혈청 DSG2 항체 수준을 감소시키는 데 사용될 수 있다. 본원 개시내용의 융합 폴리펩타이드는 약 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%까지 DSG2 항체 수준을 감소시킬 수 있다.

[0099] 일부 구현예에서, 심근의 항-DSG2 항체의 부정맥 유발 및/또는 심근 병증 유발 효과와 관련된 임의의 질환은 본원에 기재된 바와 같은 DSG2 융합 폴리펩타이드로 치료될 수 있다. 그러한 적응증의 비제한적 예는 부정맥유발성 우심실 심근병증(ARVC), 유육종증, 확장성 심근병증, 감염후 심근병증, 손상된 심장 기능, 박출률 감소, 심부전, 부정맥 및 심근염을 포함한다.

[0100] 질환의 치료 또는 개선의 효능은 예를 들어 질환 진행, 질환 완화, 증상 중증도, 통증 감소, 삶의 질, 심장 시험 상의 비정상적 발견의 감소, 치료 효과를 유지하는 데 필요한 약물의 용량, 질환 마커의 수준 또는 예방을 위해 치료되거나 표적화된 소정의 질환에 적절한 임의의 다른 측정 가능한 파라미터를 측정함에 의해 평가될 수 있다. 이러한 파라미터 중 어느 하나 또는 파라미터의 임의의 조합을 측정함으로써 치료 또는 예방의 효능을 모니터링하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 융합 폴리펩타이드 또는 이의 약제학적 조성물의 투여와 관련하여, 질환 또는 장애"에 대해 효과적인”은 임상적으로 적절한 방식으로의 투여가 환자의 적어도 환자의 적어도 일부에 대한 이로운 효과, 예를 들어, 증상의 개선, 치유, 질환 부하의 감소, 수명 연장, 삶의 질 개선, 수혈 필요의 감소 또는 특정 유형의 질환 또는 장애의 치료에 정통한 의사가 일반적으로 양성으로 인정하는 기타 효과를 유도함을 지적한다.

[0101] 치료 또는 예방 효과는 질환 상태의 하나 이상의 파라미터에서 유의적인 개선, 흔히 통계학적으로 유의적인 개선이 있거나 그렇지 않으면 예상되는 증상이 악화되거나 발병하지 않음으로써 명백하다. 하나의 예로서, 질환의 측정 가능한 파라미터에서 적어도 10%, 및 바람직하게는 적어도 20%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상의 유리한 변화는 효과적인 치료를 나타낼 수 있다. 소정의 화합물 또는 조성물의 효능은 또한 당업계에 공지된 바와 같은 소정의 질환에 대한 실험 동물 모델을 사용하여 판단될 수 있다. 실험 동물 모델을 사용하는 경우, 치료 효능은 마커 또는 증상에서 통계학적으로 유의적인 조절이 관찰되는 경우 입증된다.

[0102] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 대상체의 심장 이상을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료될 대상체는 혈청 항-DSG2 항체를 가질 수 있다.

심근병증 및 부정맥

[0103] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 부정맥을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 부정맥은 심장의 부적절하거나 비정상적인 전기 활성 패턴을 지칭한다. 본원 개시내용의 조성물은 부정맥 유발성 우심실 심근병증, 유육종증, 코로나-19 후 급성 후유증, 확장성 심근병증, 비후성 심근병증 및/또는 제한적 심근병증과 같은 질환의 비제한적 예에서 발견된 바와 같이 하나 이상의 부정맥 유형을 치료하는 데 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 심근병증이 있는 환자는 이의 혈청에서 혈청 DSG2 자가항체를 입증할 수 있다.

[0104] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 심근병증을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 심근병증은 심실 근육벽의 구조와 기능의 손상을 지칭한다. 본원 개시내용의 조성물은 이에 제한되지 않지만 부정맥 유발성 우심실 심근병증, 유육종증, 코로나-19 후 급성 후유증(PASC), 확장성 심근병증, 비후성 심근병증 및/또는 제한적 심근병증과 같은 하나 이상의 유형의 심근병증을 치료하는 데 사용될 수 있다. 하나의 구현예에서, 심근병증이 있는 환자는 이의 혈청에서 혈청 DSG2 자가항체를 입증할 수 있다.

[0105] 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC)을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 부정맥 유발성 우심실 심근병증/이형성증(ARVC/ARVD)은 심실 부정맥, 심부전 및 돌연사와 연관된 심장 근육 장애이다. ARVC는 전격성 및 재발성 부정맥을 특징으로 하는 심장 질환으로, 심근병증이 늦게 발병할 가능성을 갖고 심근의 섬유 지방 대체가 동반된다. 심근세포 데스모솜의 구조 및 신호전달 단백질에 대한 유전학적 돌연변이에 추가로, 환자 면역계도 ARVC에서 관련되어 있다. DSG2 단백질 내 돌연변이는 ARVC와 관련되어 있고, DSG2를 표적화하는 자가항체가 질환을 갖는 환자에서 동정되었다. ARVC 환자의 대략 50%는 공지된 데스모솜 돌연변이를 갖지 않았고; 그럼에도 불구하고 이들 환자는 DSG2 자가항체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, DSG2 융합 단백질은 DSG2 단백질에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 ARVC 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 양상에서, DSG2 융합 단백질은 DSG2 단백질에 어떠한 공지된 돌연변이가 없는 ARVC 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현에에서, 본원 개시내용의 DSG2 융합 폴리펩타이드는 ARVC와 연관된 DSG2 자가항체를 표적화할 수 있다.

[0106] 부정맥 및/또는 심근병증은 콕사키바이러스 또는 코로나바이러스와 같은 감염에 의해 유발되는 급성 염증 공정과 관련된 임상적 소견일 수 있고, 이러한 심근 염증을 심근염으로 지칭된다. 일부 구현예에서, 심근염은 바이러스, 세균, 기생충 및/또는 진균류에 의해 유발될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 바이러스와 연관된 심근염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 심근염과 연관된 바이러스의 비제한적 예는 통상의 감기를 유발하는 아데노바이러스, COVID-19; B형 및 C형 간염 바이러스; 보통 어린이에게 경미한 발진을 일으키는 파보바이러스(다섯 번째 질환); 및/또는 헤르페스 심플렉스 바이러스, 위장관 감염을 유발하는 에코바이러스, 단핵구증을 유발하는 엡스타인-바 바이러스, 루벨라, 사이토메갈로바이러스 및 HIV를 포함한다.

[0107] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 세균에 의해 유발된 심근염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 심근염과 연관된 세균의 비제한적 예는 스타필로코커스(Staphylococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus) 및/또는 보렐리아(Borrelia)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 기생충에 의해 유발된 심근염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 심근염과 연관된 기생충의 비제한적 예는 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi) 및 톡소플라스마(Toxoplasma)를 포함하고, 곤충에 의해 전염되고 샤가스 질환이라는 병태를 유발할 수 있는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 진균류에 의해 유발된 심근염을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용될 수 있다. 심근염과 연관된 진균류의 비제한적인 예는 캔디다, 아스퍼질러스; 및 히스토플라스마와 연관된 다른 진균류이다.

부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC)

[0108] 부정맥 유발성 우심실 이형성증/심근병증(ARVD/C)으로도 공지된 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC)은 복잡하고 치명적인 심장 질환으로, 젊은 개체와 운동선수에게서 흔히 발견되며 임상적 특성에 따라 다양성을 나타내는 질환이다. 전형적인 ARVC 임상 증상은 심계항진, 부정맥성 실신전/실신, 심실 부정맥으로 인한 급성 심장사를 포함하고, 이는 1차 전기적 침범을 지적한다. 그러나 ARVC 환자는 또한 심실(우측 및/또는 좌측)의 기능적 결함 및/또는 섬유지방 대체뿐만 아니라 얇아짐 및 확장으로 이루어진 심근 리모델링을 포함하는, 전형적으로 질환 후기의 구조적 질환과 관련된 임상 증상을 나타낼 수도 있고, 이는 1차 구조적 관련성을 나타낸다. ARVC가 "데스모솜 질환"으로 불림에 따라 상기 질환의 구조적 특성은 더욱 강화되고, 사람 유전학적 연구에 따르면 환자의 대략 40~50%가 데스모솜 세포-세포 접합의 구성 요소를 암호화하는 유전자에 돌연변이를 갖고 있지만(예를 들어, 데스모플라킨(DSP), 플라코글로빈(JUP) 플라코필린 2(PKP2) 및 데스모글레인-2(DSG2)); 유전 연구는 비정상적인 유전학만으로는 ARVC 질병을 유발하기에 충분하지 않다는 것을 강력히 시사한다.

[0109] 현재 ARVC에 대한 효과적인 치료법은 없고, 치료 방식, 스크리닝 용법 또는 ARVC에 특화된 약물에 대한 무작위 시험도 진행되지 않았다. 결과로서, ARVC 환자에 대한 치료 전략은 주로 전기생리학적 결과의 증상 완화를 목표로 하고 임상 전문 지식, 후향적 레지스트리 기반 연구 결과 및 모델 시스템에 대한 연구를 기반으로 한다. 결과로서, ARVC 환자를 위한 기존 치료요법은 항부정맥 약물(소탈롤, 암니오다론, 베타 차단제)의 사용에 의존하고, 이는 환자가 항부정맥 치료요법에 불응하거나 불내성이 생기면 이식형 심장 제세동기 및 심장 카테터 절제술을 포함하는 보다 침습적인 치료법으로 전환된다. 그러나 현재의 치료학적 방식은 초기 진단 후 10~11년 이내에 40%에 달하는 많은 ARVC 환자가 사망하는 질환 관리에 제한된 효과를 가져 ARVC 환자를 위한 보다 효과적인 치료요법 개발의 필요성이 강조되고 있다.

COVID-19

[0110] 본원에 기재된 바와 같은 DSG2 융합 폴리펩타이드 또는 융합 폴리펩타이드를 함유하는 조성물은 COVID-19 또는 COVID-19의 장기 효과를 치료하기 위해 투여될 수 있다.

[0111] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19 및/또는 SARS-CoV-2에 감염된 개체를 치료하는데 유용할 수 있다. 감염된 사람은 증상, 전-증상, 무증상일 수 있다. 세계보건기구(WHO)에 따르면 COVID-19 전염은 SARS-CoV-2에 감염된 증상자, 전-증상자, 무증상자에게서 발생할 수 있다. 증상 전염은 사람이 증상을 경험하기 전에 발생하는 전염을 지칭할 수 있다. 전-증상 전염은 COVID-19 증상이 나타나기 전에 발생하는 전염을 지칭할 수 있다.

[0112] COVID-19는 이에 제한되지 않지만 열 또는 오한, 기침, 숨가쁨 또는 호흡 곤란, 피로, 근육통 또는 몸살, 두통, 새로운 미각 또는 후각 상실, 인후염, 코 막힘 또는 콧물, 메스꺼움 또는 구토, 설사, 호흡 곤란, 흉부의 지속적인 통증 또는 압박과 같은 하나 이상의 증상과 관련될 수 있다. 일부 구현예에서, COVID-19 감염은 무증상일 수도 있지만 여전히 항-DSG2 항체를 생성할 수 있다.

[0113] DSG2 융합 폴리펩타이드를 사용하여 COVID-19 질환의 하나 이상의 단계를 치료할 수 있다. 일반적으로 SARS-CoV-2에 감염된 성인은 다음 중증도 질병 카테고리로 분류할 수 있다. 그러나 각 카테고리에 대한 기준은 임상 지침 및 임상 시험에 따라 중복되거나 다양할 수 있고, 환자의 임상 상태는 시간 경과에 따라 변화될 수 있다(COVID-19 치료 지침 패널. 코로나바이러스 질환 2019(COVID-19) 치료 지침. 국립 보건원. www.covid19treatmentguidelines.nih.gov/. Accessed 12/11/2020에서 이용 가능. 이이 전문이 본원에 참조로 인용됨). 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 바이러스 시험(즉, 핵산 증폭 시험 또는 항원 시험)을 사용하여 SARS-CoV-2에 대해 양성으로 시험되었지만 COVID-19와 일치하는 증상을 갖지 않는 개체를 포함할 수 있는 무증상 또는 전-증상 감염을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19의 임의의 다양한 징후 및 증상(예를 들어, 열, 기침, 인후통, 불쾌감, 두통, 근육통, 메스꺼움, 구토, 설사, 미각 및 후각 상실)을 갖지만 숨가쁨, 호흡곤란 또는 비정상적인 흉부 이미지화를 갖지 않는 개체를 포함하는 경미한 질병을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 임상 평가 또는 이미지화 동안 하부 호흡기 질환의 증거를 나타내고 해수면에서 실내 공기에서 산소 포화도(SpO2) ≥ 94%를 갖는 개체를 포함할 수 있는 중등도 질병을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 해수면의 실내 공기에서 SpO2 < 94%, 흡기 산소 분율에 대한 산소의 동맥 분압의 비율(PaO2/FiO2) < 300mmHg, 분당 호흡 빈도 >30회 또는 폐 침윤 >50%를 갖는 개체를 포함하는 중증 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 호흡 부전, 패혈성 쇼크 및/또는 다발성 장기 기능 장애를 갖는 개체를 포함하는 중병을 치료하기 위한 것일 수 있다.

[0114] COVID-19와 관련된 하나 이상의 상태를 예방하는 방법도 본원에 제공된다. 하나의 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 증상의 개시 전이지만 바이러스에 대한 노출과 증상 개시 사이에 잠복기가 있기 때문에 바이러스에 노출된 후에 대상체에게 제공될 수 있다. 신종 코로나바이러스 SARS-CoV-2의 잠복기는 일반적으로 2일과 14일 사이이고 평균 5일이다(문헌참조: Lombardi et al., J. Hosp. Infect. 2020 doi: 10.1016/j.jhin.2020.03.003; 이의 내용은 본원에 전문이 참조로 인용됨).

[0115] 본원 개시내용의 조성물은 또한 COVID-19의 치료에 사용하도록 권장되는 하나 이상의 치료학적 제제와 함께 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 DSG2 융합 폴리펩타이드는 이에 제한되지 않지만 렘데시비르, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 아지트로마이신, 로피나비르, 리토나비르, 이버멕틴, 인터류킨 억제제, 인터페론, 키나제 억제제, 글루코코르티코스테로이드 및/또는 SARS CoV-2 모노클로날 항체(예를 들어, 밤라니비맙, 카시리비맙, 임데비맙)와 같은 하나 이상의 치료학적 제제와 함께 사용될 수 있다.

[0116] 2019년부터 개시하여 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)는 수백만 명의 코로나바이러스 질환(COVID-19라고 함)을 감염시키는 대유행을 유발하였고(문헌참조: Wu et al., 2020 Nature 579, 265-269), 전 세계적으로 백만 명 이상이 사망하였다. SARS-CoV-2에 감염된 환자는 무증상에서 위급한 질병에 이르기까지 다양한 임상 증상을 경험할 수 있다. 최신 연구는 일부 경우 경미한 질환 버전을 앓는 개체들도 이들의 초기 회복 후에도 오랫동안 증상을 계속 경험할 수 있음을 시사한다. 상기 병태는 COVID-19 후 증후군 또는 "장거리 COVID-19" 또는 "장기간 COVID-19" 또는 "COVID-19 후 급성 후유증(PASC)"으로 불리우고 있다. 현재 추정치에 따르면 Covid-19에 감염된 환자의 최대 28%가 급성 COVID-19 감염으로부터 회복된 후 3개월에도 심계항진이 계속되는 것으로 나타났다(문헌참조: Puntmann, et al., Nature Med. 2022, 28, 2117-2123, 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 추가로 환자는 또한 COVID-19의 급성 감염이 해소된 후에도 박출률 감소 또는 심근병증을 발병할 수 있다. COVID-9 후 심장 징후 및 증상은 다른 장기 시스템에 대한 효과와 공존할 수 있지만 단독으로 나타날 수도 있다. 장기 COVID를 갖는 환자는 부정맥만, 심근병증만 또는 둘 다 나타날 수 있다. 심근병증을 갖는 환자는 무증상 환자부터 전격성 심부전, 부정맥 및/또는 심장 돌연사를 갖는 환자까지 다양하다.

[0117] COVID-19 바이러스인 SARS-CoV-2는 여러 장기 시스템, 특히 폐와 심장에 영향을 미친다. 심장 바이오마커, 특히 고감도 트로포닌 및/또는 크레아틴 키나제 MB의 상승은 COVID-19 감염 환자에게서 흔히 관찰되었다. 바비쉬(Bavishi) 등이 수행한 임상 분석 검토는 COVID-19 감염 환자의 20%에서 심근 손상이 발생한 것으로 나타났다(문헌참조: Prog Cardiovasc Dis. 2020 September-October; 63(5): 682-689). COVID-19와 관련된 심근 손상의 가능한 기전은 1) 심근염을 유발하는 병리학적 T-세포 및 단핵구를 통해 매개되는 과염증 및 사이토킨 폭풍, 2) 심근 세포 손상을 초래하는 호흡 부전 및 저산소혈증, 3) 심근 세포에서 ACE2 발현 및 후속 보호 신호 전달 경로의 하향 조절, 4) 관상 미세혈관 혈전증의 과응고성 및 발달, 5) 미만성 내피 손상, 및/또는, 6) COVID-19 후 증후군인 심근 허혈/경색으로 이어지는 관상 동맥 플라크 파열 또는 공급-수요 불일치를 유발하는 염증 및/또는 스트레스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

[0118] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19 후 증후군을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 급성 COVID-19에서 회복된 후 지속적인 증상을 경험하는 환자에 대한 보고가 증가하고 있으며 본원에서는 "COVID-19 후 증후군"으로 지칭되고 이러한 증상을 겪는 개체는 일반적으로 "장거리 운송업자(long hauler)"라고 지칭된다. 일부 구현예에서, 환자가 최대 1개월, 최대 2개월, 최대 3개월, 최대 4개월, 최대 5개월, 최대 6개월, 최대 1년 이상 하나 이상의 증상을 앓는 경우 환자는 COVID-19 후 증후군을 갖는 것으로 간주될 수 있다.

[0119] COVID-19 후 증후군은 또한 심혈관 손상을 포함하는 다수의 장기 손상과 연관되어 있다. COVID-19에서 회복된 지 몇 달 후에 실시한 이미지화 시험에서 경미한 COVID-19 증상만 경험한 사람들의 경우에도 심장 근육에 지속적인 손상이 있는 것으로 나타났다. COVID-19 후 증후군은 부정맥 및/또는 심근염 및/또는 심근병증의 위험 증가와도 관련이 있는 것으로 보인다.

[0120] 현재 COVID-19 및 COVID-19 후 증후군을 치료하고/하거나 관리하기 위한 치료학적 전략이 부재이다. COVID-19의 심장 징후는 이들 환자에게 필요한 상당한 자원과 잠재적 집중 치료 지원으로 인해 이미 압도된 의료 시스템을 상당한 스트레스하에 있게 한다. 특히, COVID-19 및 COVID 19 후 증후군 관련 심근 손상과 연관된 발생률 및 사망률을 감소시키기 위해 염증 반응을 억제하는 치료 방식의 개발이 시급히 요구된다. 본원 개시내용은 이에 제한되지 않지만 COVID-19 및/또는 COVID-19 후 증후군과 같은 질환을 치료하기 위한 DSG2 융합 폴리펩타이드 기반 조성물 및 방법을 제공한다.

[0121] 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19 후 증후군(즉, COVID-19 후 심장 증후군)에서 심혈관계와 연관된 하나 이상의 증상을 치료하기 위해 사용될 수 있다. COVID-19에서 최근 회복된 100명의 환자를 포함한 하나의 연구에서 심장 자기 공명 영상은 78명의 환자(78%)에서 심장 침범을, 60명의 환자(60%)에서 진행 중인 심근 염증을 밝혔으며, 이는 기존 병태, 중증도 및 급성 질병의 전체 경과 및 최초 진단으로부터의 시간과는 무관하였다(문헌참조: Puntmann et al. JAMA Cardiol. 2020;5(11):1265-1273). 보다 소규모 연구에서, 운동 선수의 15%는 급성 COVID-19에서 회복된 후 심근 이상에 대한 증거를 가졌다. 하나의 구현예에서, DSG2 융합 폴리펩타이드는 COVID-19 후 증후군을 갖는 대상체에서 심근염을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

[0122] 일부 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 임의의 심장 징후와 연관되지 않은 코로나19 후 증후군을 치료하는 데 사용될 수 있다.

[0123] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19의 초기 진단 후 최대 수주, 수개월 및/또는 수년 동안 COVID-19의 증상을 보이는 대상체를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, COVID-19 후 증후군 환자는 COVID-19의 최초 진단 후 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년 또는 그 이상 동안 및/또는 그 이후에 증상을 나타낼 수 있다. COVID-19의 진단은 당업계에 공지된 방법(예를 들어, 역전사 폴리머라제 연쇄 반응 및/또는 항체 시험)을 사용하여 확립할 수 있다. 일부 구현예에서, COVID-19 후 증후군에 걸린 대상체는 본원 개시내용의 조성물로 치료될 수 있다.

[0124] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 심부전의 명백한 증상을 갖거나 갖지 않는 손상된 심장 기능, 가장 특히 감소된 박출률을 나타내는 COVID-19 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 부정맥을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

[0125] 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19 후 증후군과 연관된 하나 이상의 증상을 개선시킬 수 있다. 일부 구현예에서, COVID-19 후 증후군의 증상은 급성 COVID-19와 동일할 수 있다. 일부 양상에서, COVID-19 후 증후군과 연관된 증상은 숨가쁨, 피로, 부종, 기좌 호흡, 활동 제한, 인지 능력 손상, 심계항진, 현기증, 실신, 가벼운 현기증, 심부전 및/또는 부정맥일 수 있다.

[0126] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 COVID-19가 없는 환자에서도 기재된 집중 치료 후 증후군과 중복되는 증상을 갖는 COV1D-19 후 증후군을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

[0127] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 심혈관계(예를 들어, 심장 근육의 염증), 호흡계( 폐 기능 이상), 신장계(급성 신장 손상), 피부(발진, 탈모), 신경학적 합병증(후각 및 미각 문제, 수면 문제, 집중력 장애, 기억력 문제) 및/또는 정신과적 문제(우울증, 불안, 기분의 변화)와 연관된 하나 이상의 장기 합병증을 가질 수 있는 COVID-19 후 증후군을 갖는 대상체를 치료하기 위해 사용될 수 있다.

[0128] 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 1개, 2개 또는 그 이상의 연관된 동반이환을 가질 수 있는 COVID-19 후 증후군 대상체를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 동반이환의 비제한적 예는 고혈압, 갑상선 질환, 면역 장애, COPD(만성 폐쇄성 폐 질환), 고혈압, 비만, 정신 건강 병태 및 당뇨병을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

V. 정의

[0129] 도메인: 폴리펩타이드를 지칭할 때 본원에서 사용되는 용어 "도메인"은 하나 이상의 동정 가능한 구조적 또는 기능적 특징 또는 성질(예를 들어, 결합 능력, 단백질-단백질 상호작용을 위한 부위로서의 작용)을 갖는 폴리펩타이드의 모티프를 지칭한다.

[0130] 발현 벡터: 본원에서 사용되는 용어 "발현 벡터"는 전사될 수 있는 유전자 생성물의 적어도 일부를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 특정 숙주 유기체에서 작동 가능하게 연결된 암호화 서열의 전사 및 가능한 해독에 필요한 핵산 서열을 지칭하는 다양한 제어 서열을 함유할 수 있다. 전사 및 해독을 관장하는 제어 서열 외에도, 벡터 및 발현 벡터는 다른 기능을 또한 제공하는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 상기 용어는 또한 시험관내 또는 생체내에서 숙주 세포로 전달될 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 재조합 플라스미드 또는 바이러스를 포함한다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 일시적 세포주 또는 안정한 세포주이다. 일부 구현예에서, 이것은 CHO, HEK293 및 NSO 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

[0131] 특성: 폴리펩타이드를 지칭할 때 "특성"은 분자의 별개의 아미노산 서열 기반 성분으로 정의된다. 본원에 기재된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 폴리펩타이드의 특성은 국소 형태, 폴드, 루프, 하프-루프, 도메인, 하프-도메인, 부위, 말단, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.

[0132] 융합 단백질 본원에서 사용되는 용어 "융합 단백질" 또는 키메라 단백질은 동일한 폴리펩타이드에 천연적으로 존재하지 않는 2개 이상의 아미노산 서열 또는 이의 활성 단편을 포함하는 단백질 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 별개의 폴리펩타이드는 작동 가능하게 공유적으로 연결되고, 예를 들어 화학적으로 연결되거나 펩타이드 결합에 의해 함께 융합된다. 재조합 융합 폴리펩타이드는 재조합 DNA 기술에 의해 인공적으로 생성된다.

[0133] 하프 도메인: 폴리펩타이드를 지칭할 때 본원에서 사용되는 용어 "절반-도메인(half-domain)"은 이것이 유래된 도메인상에 있는 아미노산의 적어도 절반의 수를 갖는 동정된 도메인의 일부를 의미한다. 도메인은 항상 짝수의 아미노산 잔기를 포함한 것은 아닐 수 있는 것으로 이해된다. 따라서 도메인이 홀수의 아미노산을 포함하거나 포함하는 것으로 동정되는 경우에 있어서, 홀수 도메인의 하프 도메인은 도메인의 정수 부분 또는 다음 정수 부분(도메인의 아미노산의 수/2+/-0.5 아미노산)을 포함할 것이다. 예를 들어, 7개 아미노산 도메인으로서 동정된 도메인은 3개 아미노산 또는 4개 아미노산의 하프 도메인을 생성할 수 있다(7/2=3.5+1-0.5는 3 또는 4임). 또한 서브도메인은 도메인 또는 하프 도메인 내에서 동정될 수 있으며, 이들 서브도메인은 도메인 또는 도메인으로부터 유래된 하프 도메인에서 동정된 모든 구조적 또는 기능적 성질을 보다 적게 소유하는 것으로 이해된다. 또한, 본원의 임의의 도메인 유형을 포함하는 아미노산은 폴리펩타이드의 백본을 따라 인접할 필요가 없는 것으로 이해된다(즉, 인접하지 않은 아미노산은 도메인, 하프-도메인 또는 서브도메인을 생성하기 위해 구조적으로 폴딩될 수 있다).

[0134] 면역 반응: 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "면역 반응"은 염증, 외상, 면역 장애, 또는 감염 또는 유전학적 질환과 연관된 병태를 지칭한다. 이들 병태는 세포 및 전신 방어 시스템에 영향을 미칠 수 있는, 다양한 인자, 예를 들어, 항체, 면역 세포, 사이토킨, 케모킨 및 기타 신호전달 분자의 발현을 특징으로 할 수 있다.

[0135] 링커: 본원에 사용된 바와 같이, "링커"는 공유 결합이 2개 이상의 폴리펩타이드를 결합시키는 기능성 그룹(예를 들어, 화학 물질 또는 폴리펩타이드)을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "펩타이드 링커"는 2개의 단백질을 서로 결합시키기 위해 사용되는 2개 이상의 아미노산이다.

[0136] 조절: 본원에서 사용되는 바와 같이, "조절"이라는 용어는 당업계에서 인지되며 반응의 상향 조절(즉, 활성화 또는 자극), 하향 조절(즉, 저해 또는 억제), 또는 이 둘다의 조합 또는 별개를 지칭한다.

[0137] 폴리뉴클레오타이드: 본원에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오타이드"는 포스포디에스테르 결합에 의해 연결된 뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드는 본원에서 5'에서 3' 방향으로 제시된다. 폴리뉴클레오타이드는 데옥시리보핵산(DNA) 분자 또는 리보핵산(RNA) 분자일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드가 DNA 분자인 경우 해당 분자는 유전자 또는 cDNA 분자일 수 있다. 뉴클레오타이드 염기는 본원에서 단일 문자 코드로 표시된다: 아데닌(A), 구아닌(G), 티민(T), 시토신(C), 이노신(I) 및 우라실(U). 폴리뉴클레오타이드는 당해 분야의 통상의 기술자에게 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 제조될 수 있다.

[0138] 폴리펩타이드: 일부 구현예에서, 본원 개시내용의 조성물은 폴리펩타이드 또는 단백질 또는 이의 변이체이다. 본원 개시내용에 따르면, 임의의 아미노산 기반 분자(천연 또는 비천연)는 "폴리펩타이드"로 지칭될 수 있고, 상기 용어는 "펩타이드", "펩티도모사체" 및 "단백질"을 포함한다. 본원에 사용된 "폴리펩타이드"는 펩타이드 결합에 의해 가장 자주 함께 연결된 아미노산 잔기(천연 또는 비천연)의 중합체를 의미한다. 본원에 사용되는 상기 용어는 임의의 크기, 구조 또는 기능의 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드를 지칭한다. "펩티도모사체" 또는 "폴리펩타이드 모사체"는 분자가 천연 폴리펩타이드(즉, 단지 20개의 단백질 생성 아미노산으로 구성된 폴리펩타이드)에서 발견되지 않는 구조적 요소를 포함하는 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 펩티도모사체는 천연 펩타이드의 생물학적 작용(들)을 재현하거나 모방할 수 있다.

[0139] 폴리펩타이드 변이체: 용어 “폴리펩타이드 변이체”는 아미노산 서열이 고유 또는 참조 서열과 상이한 분자를 지칭한다. 아미노산 서열 변이체는 고유 또는 참조 서열과 비교하여 아미노산 서열 내의 특정 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 가질 수 있다. 통상적으로, 변이체는 고유 또는 참조 서열에 대해 적어도 약 50%의 동일성(상동성)을 가질 것이고, 바람직하게 이들은 고유 또는 참조 서열에 대해 적어도 약 80%, 보다 바람직하게는 적어도 약 90% 동일(상동성)하다.

[0140] 재조합체: 본원에서 사용되는 용어 "재조합체"는 자연에서 일반적으로 발견되는 것과는 구별되는 유전학적 실체를 지칭한다. 폴리뉴클레오타이드 또는 유전자에 적용되는 바와 같이, 이는 폴리뉴클레오타이드가 클로닝, 제한 및/또는 연결 단계, 및 천연에서 발견되는 폴리뉴클레오타이드와 구별되는 작제물의 생성을 초래하는 기타 절차의 다양한 조합의 생성물임을 의미한다.

[0141] 샘플: 본원에서 사용된 용어 “샘플"은 분석 또는 가공을 위해 공급원에서 채취 및/또는 제공되는 분취물 또는 일부를 의미한다. 일부 구현예에서, 샘플은 조직, 세포 또는 구성 부분(예를 들어, 혈액, 점액, 림프액, 윤활액, 뇌척수액, 타액, 양수, 양막 제대혈, 소변, 질액 및 정액)과 같은 생물학적 공급원으로부터 기원한다. 일부 구현예에서, 샘플은 전체 유기체 또는 이에 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 혈장, 혈청, 척수액, 림프액, 피부의 외부 절편, 호흡기, 장관, 및 비뇨 생식관, 눈물, 타액, 밀크, 혈액 세포, 종양, 또는 기관을 포함하지만 이에 제한되지 않는 조직, 세포 또는 구성 부분, 또는 분획 또는 이의 부분의 서브세트로부터 제조된 균질물, 용해물 또는 추출물일 수 있거나 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 단백질과 같은 세포 성분을 포함할 수 있는 영양 보로쓰 또는 겔과 같은 배지이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, “1차” 샘플은 공급원의 분취액이다. 일부 구현예에서, 1차 샘플은 분석 또는 기타 용도를 위한 샘플을 제조하기 위해 하나 이상의 처리(예를 들어, 분리, 정제 등) 단계에 적용된다.

[0142] 서열 동일성: “서열 동일성'이라는 용어는 서열 정렬로 나타내는 동일한 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 비율을 지적한다. 예를 들어, 아미노산 잔기가 각각 20개이고 2개 위치에서 차이를 제외하고 아미노산 서열이 동일한 2개 펩타이드는 18/20, 즉 90%의 서열 동일성을 갖는다.

[0143] 실질적으로: 본원에 사용된 “실질적으로”라는 용어는 관심 대상의 특징 또는 성질의 전체 또는 거의 전체에 가까운 범위 또는 정도를 나타내는 정성적 조건을 지칭한다. 생물학 분야의 당업자는 생물학적, 화학적 현상이 완결될때까지 진행되고/되거나 절대적인 결과를 얻거나 피하는 경우에도 거의 없다는 것을 이해할 것이다. 따라서 많은 생물학적 및 화학적 현상에 내재된 잠재적인 완전성 결여를 포착하기 위해 “실질적으로”라는 용어를 사용한다.

[0144] 말단: 본원에서 사용되는 용어 "말단(termini)" 또는 "말단(terminus)"은 폴리펩타이드를 지칭할 때 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 극단을 지칭한다. 이러한 극단은 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 첫 번째 또는 마지막 부위에만 제한되지 않고 말단 영역에 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 폴리펩타이드 기반 분자는 N-말단(자유 아미노 그룹(NH2)을 갖는 아미노산에 의해 종결됨) 및 C-말단(자유 카복실 그룹((COOH)을 갖는 아미노산에 의해 종결됨) 둘다를 갖는 것으로서 특징 분석될 수 있다. 본원에 기재된 단백질은 일부 경우에 디설파이드 결합 또는 비공유 힘(다량체, 올리고머)에 의해 함께 결합된 다중 폴리펩타이드 쇄로 구성된다. 이들 종류의 단백질은 다수의 N- 및 C-말단을 갖는다. 대안적으로, 폴리펩타이드의 말단은 이들이 경우에 따라 유기 접합체와 같은 비-폴리펩타이드 기반 모이어티로 개시하거나 종료되도록 변형될 수 있다.

[0145] 치료학적 유효량: 본원에 사용되는 용어 "치료학적 유효량"이란, 질환, 장애 및/또는 병태를 앓고 있거나 이들에 걸리기 쉬운 대상체에 투여될 때 질환, 장애 및/또는 병태의 증상을 치료 또는 개선하거나 이들의 발병을 진단, 예방 및/또는 지연시키기에 충분한 전달될 제제의 양을 의미한다.

[0146] 치료하는: 본원에 사용되는 용어 "치료하는"이란, 특정 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특성의 개시를 부분적으로 또는 완전히 완화, 개선, 향상, 경감 또는 지연시키거나 이들의 진행을 억제하거나, 이들의 중증도를 감소시키고/시키거나 이들의 발생률을 감소시키는 것을 지칭한다. 치료는 질환, 장애 및/또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질환, 장애 및/또는 병태의 초기 징후만 보이는 대상체에게 질환, 장애 및/또는 병태와 관련된 병리 발생 감소시키기 위한 목적으로 수행될 수 있다.

[0147] 치료: 본원에 사용된 "치료한다", "치료" 등의 용어는 병리학적 과정의 경감 또는 완화를 지칭한다. 본원 개시내용의 맥락에서, 이는 하기 본원에 인용된 임의의 다른 병태에 관한 것이고, 용어 "치료한다", "치료" 등은 이러한 병태와 연관된 적어도 하나의 증상을 경감시키거나 완화시키거나 느리게 하거나 그러한 병태의 진행 또는 예상되는 진행을 역전시키는 것을 의미한다.

[0148] 치료 용량: 본원에서 사용되는 바와 같은 "치료 용량"은 치료학적 징후를 해결하거나 완화시키는 과정에서 투여되는 치료학적 제제의 하나 이상의 용량을 지칭한다. 치료 용량은 체액 또는 생물학적 시스템에서 치료학적 제제의 목적하는 농도 또는 활성 수준을 유지하도록 조정될 수 있다.

VI. 등가물 및 범위

[0149] 본원 개시내용의 다양한 구현예는 본원 개시내용에 구체적으로 나타내고 기재되었지만, 본원 및 첨부된 특허청구범위에 제시된 구현예의 취지 및 범위를 벗어나지 않는 범위 내에서 형태 및 세부 사항에 있어서 다양한 변경이 가능함은 당업자에게 자명할 것이다.

[0150] 당업자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본원에 기재된 특정 구현예에 대한 많은 등가물을 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 본원 개시내용의 범위는 상기 상세한 설명에 한정되는 것으로 의도되지 않고 첨부된 특허청구범위에서 제시된 바와 같다.

[0151] 청구항에서 "a", "an", "the"와 같은 관사는 반대되는 의미로 표시되거나 문맥에서 달리 명백하지 않는 한 2개 이상을 의미할 수 있다. 1개 이상의 그룹 구성원을 포함하거나 이들 사이에 있는 청구항 또는 상세한 설명은 반대되는 표시가 있거나 문맥에서 달리 명백하지 않는 한 그룹 구성원 중 1개 이상 또는 모두가 특정 생성물 또는 공정에 존재하거나, 해당 공정에 사용되거나, 기타 관련성이 있는 경우 충족된 것으로 간주한다. 본원의 개시내용은 그룹의 정확히 하나의 구성원이 존재하거나 사용되거나 달리 주어진 물건 또는 방법과 관련되지 않는 구현예를 포함한다. 본원의 개시내용은 그룹의 정확히 하나 이상 또는 전체 구성원이 존재하거나 사용되거나 달리 주어진 생성물 또는 방법과 관련되지 않은 구현예를 포함한다.

[0152] 용어 "포함하는" 은 개방적인 것으로 의도되며, 추가의 요소 또는 단계를 허용하지만 요구하지 않는다. 용어 “포함하는”이 본원에 사용된 경우, 따라서 용어 “로 이루어진” 및 “또는 포함하는”은 또한 포괄되고 기재된다.

[0153] 범위가 주어지는 경우, 평가변수는 포함된다. 더욱이, 달리 명시되지 않거나 달리 문맥 및 통상의 기술자의 이해로부터 명백하지 않다면, 범위로서 표현된 수치는 본원 개시내용의 다양한 구현예에서 명시된 범위 내의 임의의 특정 수치 또는 하위 범위를 달리 문맥에 의해 명백히 지시되지 않는다면 범위의 하한의 단위의 10배까지 상정한다.

[0154] 또한, 종래 기술 내에 속하는 본원 개시내용의 임의의 특정 실시형태는 임의의 하나 이상의 특허청구범위로부터 명시적으로 배제될 수 있는 것으로 이해된다. 이러한 구현예는 통상의 기술자에게 알려져 있는 것으로 간주되기 때문에, 배제가 본원에서 명시적으로 제시되어 있지 않을 지라도, 이들은 배제될 수 있다. 본원에 기재된 조성물의 임의의 특정 구현예는 선행 기술의 존재와 관련이 있는지 여부에 상관없이 어떤 이유로든 하나 이상의 청구범위에서 제외될 수 있다.

[0155] 인용된 모든 출처, 예를 들어, 여기에 인용된 참고 문헌, 간행물, 데이터베이스, 데이터베이스 항목, 작품은 인용문에 명시적으로 언급되지 않았더라도 참조를 통해 본 출원에 인용된다. 인용된 출처의 기재와 본 출원의 기재가 상충하는 경우 본 출원의 기재가 우선한다.

[0156] 섹션 및 표의 표제는 제한적인 것으로 의도되지 않는다.

실시예

실시예 1. DSG2 융합 폴리펩타이드 및 항-DSG2 항체와의 상호작용

[0157] DSG2 융합 폴리펩타이드에 대한 후보물은 IgG Fc에 융합된 DSG2의 세포 외 도메인(ECD) 부분 또는 이의 변이체를 포함한다. 면역글로불린의 Fc 부분에 ECD를 연결하는 것은 증가된 단백질 안정성을 제공하고, PK 성질을 증진시키고 효율적인 정제를 제공할 수 있기 때문에 DSG2 융합 폴리펩타이드에 이로운 것으로 간주되었다. 표 4는 수득되거나 제조된 DSG2 융합 폴리펩타이드를 제공한다.

[0158] 1단계 친화성 정제에서 나타난 바와 같이 DSG2 융합 폴리펩타이드의 전체 제제가 매우 이종성이라는 것을 알 수 있었다. 초기 생산 평가는 높은 응집을 시사하였다. 표 5에 나타낸 바와 같이, 동적 광 산란(DLS)은 모든 후보물이 평균 중합체 분포 지수(PDI)>0.25로 나타남을 보여주어 이는 샘플이 보다 많은 응집 또는 침전으로 인해 다수 크기의 입자를 포함할 수 있음을 지적한다. 6개 후보물은 참조 샘플과 비교하였다. 6개의 후보물 모두는 크기가 약 4배 내지 8배 보다 큰 피크 1 모드 직경을 보여주었다. 융합 폴리펩타이드를 포함하는 IgG4는 융합 폴리펩타이드를 포함하는 IgG1에 비해 크기가 약 2배 보다 큰 피크 1 모드 직경을 보여주었다.

표 5. DSG2 융합 폴리펩타이드의 DLS 데이터 해석

[0159] 표 6은 후보 DSG2 융합 폴리펩타이드에 대한 용융 온도 Tm 값을 보여준다. 3개의 Tm 값이 존재한다는 것은 분석 전에 후보 DSG2 융합 폴리펩타이드에 응집체가 포함되어 있을 수 있음을 시사한다. 온도가 상승함에 따라 응집체가 이동하고, 언폴딩되며, 확산되기 시작하였다. 세 번째 Tm 값이 포함된 4개 샘플의 차등적 그래프는 융점 이후의 전이를 보여주었다. 분석 동안에 제공된 Tm 값은 모든 DSG2 융합 폴리펩타이드 간에 유사한 값을 입증하였다. 이는 작제물의 열 안정성이 유사함을 시사할 수 있다.

표 6. DSG2 융합 폴리펩타이드의 Tm

[0160] DSG2 융합 폴리펩타이드는 항-DSG2 항체 메소 스케일 발견(MSD) 검정에 의해 항-DSG2 항체를 차단하는 능력에 대해 시험되었다. 시험된 DSG2FP#2, DSG2FP#3, DSG2FP#4, DSG2FP#5, DSG2FP#6, DSG2FP#7 융합 폴리펩타이드는 항-DSG2 항체와 결합하여 이를 차단할 수 있었다. DSG2 융합 폴리펩타이드 DSG2FP#1은 ARVC 환자로부터 수득된 혈청 (본원에서 또한 ARVC 혈청으로 지칭됨) 뿐만 아니라 항-DSG2 항체와 결합하고 이를 차단할 수 있었다(도 1a 참조). DSG2 융합 폴리펩타이드를 크기 배제 크로마토그래피에 적용하고 다양한 용출 분획을 조사하였다. 분획 "C"는 ~350kDa의 예측된 MW를 보여주었고, 추가 실험에 사용되었다. 표 7 및 도 1b, 도 1c, 및 도 1d에 나타낸 바와 같이, 분획 C에 대한 집적(enriching)은 ARVC 환자 혈청을 차단하는 DSG2 융합 폴리펩타이드의 능력을 개선시켰다. 이러한 효과는 DSG2FP#4에 대해 관찰되는 것보다 DSG2FP#2 및 DSG2FP#3에서 보다 현저하다.

표 7. DSG2 융합 폴리펩타이드의 분획 C가 ARVC 혈청에 미치는 효과

실시에 2. 항-DSG2 항체와 DSG2 융합 폴리펩타이드가 심장 기능에 미치는 효과

[0161] 심근세포에서 항-DSG2 항체의 효과를 결정하기 위해, 심장 시험관내 부정맥 유발(CiPA) 검정을 수행하였다(문헌참조: Sager et al. Am Heart J 2014;167:292-300; 이의 내용은 전문이 본원에 참조로 인용됨). CiPA는 4개의 구성 요소로 이루어진 것으로 고려된다: (1) 심장 이온 채널 검정에 대한 시험 제제의 효과 평가; (2) 데이터를 심장 기능과 통합하기 위한 이온 채널 결과를 기반으로 하는 심장 활동 전위의 인실리코 모델링; (3) 모델링 결과를 확인하기 위해 사람 심실 근세포에서 시험 제제 효과의 실험적 측정; 및 (4) 결과 스코어링. 다중 전극 배열(MEA) 검정은 사람 유도 만능 줄기세포(iPSC) 유래 심근 세포를 사용하여 자발적인 ECG 유사 필드 전위를 기록함으로써 2차원 여기 전파를 평가하는 CiPA의 구성 요소이다. 하기에 정량화된 나트륨 스파이크는 심근 세포의 특정 나트륨 채널 전류를 측정한 것이고 또한 문헌(참조: Blinova K, et al. Cell Rep. 2018 Sep 25;24(13):3582-3592 (이의 내용은 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다. CiPA는 FDA와 EMA에 의해 임상적으로 검증된 심근세포 기반 분석법으로 간주된다. 검정에서 부정맥 신호는 특정 제제, 예를 들어, 항-DSG2 항체가 사람에서 부정맥을 일으킬 가능성이 있다는 증거로 간주된다. 평가되는 파라미터는 전기 신호 전파 구성 요소의 스파이크 (예를 들어, 나트륨 스파이크)와 세포 임피던스 및 세포 수의 함수인 세포 지수에서의 변화를 측정함을 포함한다. 나트륨 스파이크의 변화는 부정맥을 나타낼 수 있고, 세포 지수(CI)의 변화는 세포 연결성의 변화를 나타낼 수 있다.

[0162] 심근세포 CiPA 검정에서 시판되는 항-DSG2 항체를 시험하였다. 항-DSG2 항체는 심근세포 나트륨 스파이크를 약화시키는 것으로 밝혀졌고, 상기 효과는 시간과 용량 의존적이었다. 전압(μV)은 0시간, 1시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간의 시간 간격으로 측정된다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 나트륨 스파이크에 대한 항-DSG2 항체(0.5 μg/mL)의 효과는 10 μM 리도카인(양성 대조군)의 효과와 유사하였다. 심근세포 나트륨 스파이크에 대한 항-DSG2 항체의 효과는 1.1 μg/mL의 DSG2 융합 폴리펩타이드, DSG2FP#1에 의해 구제되었다. 예상된 바와 같이, 0.5 μg/mL의 음성 대조군, 비히클, 토끼 IgG 및 항-VCAM-1 항체는 시간 경과에도 나트륨 스파이크에 어떠한 변화를 일으키지 않았다.

[0163] 다양한 용량의 항-DSG2 항체가 세포 지수에 영향을 미쳤다. 세포 지수는 전류에 대한 세포 층의 전도도와 반비례 관계에 있다. 세포 층에 걸친 증가된 전도도는 세포 층에 보다 많은 갭이 있음을 지적하고 이는 세포가 서로 잘 부착되지 않는다는 것을 의미할 수 있다. 따라서 세포 층에 걸친 증가된 전도도는 보다 낮은 세포 지수를 초래할 수 있다. 어떠한 용량 반응은 관찰되지 않았다. 항-DSG2 항체의 농도는 0.00005μg/mL에서 5μg/mL까지 다양하였다. 고용량의 리도카인(양성 대조군)으로 치료한 결과 세포 지수 및 가능한 세포사의 현저한 감소를 초래하였다. 리도카인의 농도는 3μM에서 100μM까지 다양하였다. 특히, 음성 대조군(비히클, 항-CAM-1 항체 또는 토끼 IgG)의 어떠한 것도 세포 지수에서의 감소를 보여주지 않았다. 항-DSG2 항체의 농도는 0.00005μg/mL에서 5μg/mL까지 다양하였다. 세포 지수에 대한 항-DSG2 항체의 효과는 DSG2 융합 폴리펩타이드인 DSG2FP#1을 추가함으로써 역전되었다(도 3 및 표 8 참조).

표 8. 다양한 용량의 항-DSG2 항체는 iPSC 유래 심근세포 MEA 검정에서 세포 지수에 영향을 미쳤다.

실시예 3. ARVC 환자에서 DSG2 항체 수준

[0164] ARVC 진단은 태스크 포스 기준으로 공지된 복잡한 도구를 기반으로 하고, 상기 기준은 ARVC 진단에 대한 다양한 수준의 확신을 가져올 수 있다. ARVC 질환 상태 및 중증도의 지표로서 DSG2 항체의 활용을 탐구하였다. ARVC 진단을 받은 환자로부터 대략 50cc의 혈청을 채취하였다. 분석을 위해 총 10명의 ARVC 환자와 5명의 건강한 대조군이 사용되었다. 환자 의료 기록에서 사용 가능한 데이터를 기반으로 ARVC 혈청 샘플을 보다 강력한 진단과 덜 강력한 진단으로 분리하고 항-DSG2 항체 메소 스케일 발견(MSD) 기반 검정을 사용하여 항-DSG2 항체 수준을 비교하였다. 검정 결과는 검정에서 항-DSG2 항체 신호 강도가 진단 임상 데이터의 견고성과 잘 상관관계가 있음을 보여주었다. 강력한 임상 데이터와 함께 환자에서 수득된 ARVC 혈청 샘플은 다른 2개의 그룹에 비해 보다 높은 수준의 항-DSG2 항체를 보여주었다(도 4a 및 도 4b). 강력한 임상 데이터와 함께 환자 혈청 샘플로부터의 검정 신호는 경쟁 DSG2 폴리펩타이드 DSG2-Fc(DSG2FP#1)를 첨가하여 차단될 수도 있다.

실시예 4. 상이한 친화성 태그를 갖는 DSG2 융합 폴리펩타이드에 의한 ARVC 환자 혈청에 존재하는 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합 차단

[0165] DSG2 융합 폴리펩타이드는 전기화학 면역검정에서 ARVC 환자의 혈청 내 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합을 차단하는 능력에 대해 조사하였다. 융합 폴리펩타이드를 최종 농도 5μg/mL로 첨가하고 환자 혈청을 최종 농도 10%(v/v)로 사용하였다. 결과는 도 5의 일련의 막대 차트에 나타내고, 여기서 숫자 961, 965, 978, 986 및 964는 ARVC 환자 혈청 샘플을 지적한다.

[0166] 도 5에서 좌측부터 첫 번째 데이터 시리즈는 DSG2FP#1(서열번호 30의 아미노산 49-608; 링커(IEGRMD(서열번호 28)로서 상기된); IgG1의 아미노산 100-330(서열번호 4))에 대한 것이다. 좌측으로부터 제2 데이터 시리즈는 DSG2_(50-602)-6xHis에 대한 것으로, 이는 서열번호 1(완전한 세포 외 도메인)의 DSG2 아미노산 50-602가 헥사히스티딘 펩타이드 태그에 융합된 폴리펩타이드이다. 좌측으로부터 제3 데이터 시리즈는 융합 폴리펩타이드의 조합에 대한 것으로, 이는 서열번호 1(EC1)의 DSG2 아미노산 50-155와 헥사히스티딘 펩타이드 태그의 융합체인 EC1_(50-155)-6xHis 및 서열번호 1(EC2)의 DSG2 아미노산 151-268과 헥사히스티딘 펩타이드 태그의 융합체인 EC2_(151-268)-6xHis를 포함한다. 좌측으로부터 제4 데이터 시리즈는 서열번호 1(EA)의 DSG2 아미노산 491-602와 헥사히스티딘 펩타이드 태그의 융합체인 EA_(491-602)-6xHis에 대한 것이다. 도 5의 억제 결과에서 100% 억제는 완전한 차단을 지적하고, 가장 우수한 차단 활성이 DSG2FP#1에 의해 제공됨을 보여준다. 2개의 추가 검정은 IgG1 Fc 영역 대신 헥사히스티딘 태그를 포함하는 융합 폴리펩타이드에 의한 적어도 60%의 차단 활성을 지적한다. 따라서 ARVC 환자의 혈청에서 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합 차단이 IgG의 Fc 영역 이외의 친화성 태그를 갖는 DSG2 융합 폴리펩타이드를 사용하여 성취될 수 있음이 자명하다. 다른 친화성 태그가 DSG2 폴리펩타이드의 대안적 구현예에서 유용한 것으로 결정될 수 있고, 이의 예는 CBP, MBP, 스트렙타비딘 및 GST를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가로, EA 영역을 포함한 세포 외 도메인(ECD)의 일부를 갖는 융합 폴리펩타이드는 ARVC 환자의 혈청에서 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합 차단을 입증한다. 이들 발견은 DSG2 세포 외 도메인 또는 이의 일부를 포함하는 융합 폴리펩타이드가 상이한 친화성 태그와 조합되어 항-DSG2 항체와 DSG2의 세포 외 도메인의 상호 작용을 차단하여 기능하는 다양한 심장 부정맥을 포함하여, 항-DSG2 자가 항체로 인해 발생하는 장애의 치료에 사용하기에 적합한 치료학적 제제일 것임을 예측하기 위한 근거를 제공한다.

실시예 5. IgG4 친화성 태그를 갖는 DSG2 융합 폴리펩타이드에 의한 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합 차단

[0167] 전기화학 면역검정에서 2개의 재조합 DSG2 융합 폴리펩타이드에 의한 항-DSG2 항체의 DSG2 세포 외 도메인으로의 결합 차단을 평가하였다. 융합 폴리펩타이드를 최종 농도 5mg/mL로 첨가하였다. 항-DSG2 항체는 최종 농도 500ng/mL로 사용하였다. 결과는 도 6에 제공된다. 검정에서 완전한 차단은 100% 억제이다. DSG2 재조합 단백질: 검정 막대는 서열번호 1의 아미노산 50-609에 의해 나타낸 DSG2 세포 외 도메인과 서열번호 11의 IgG4 Fc 도메인 아미노산 99-332로 대표되는 DSG2 세포 외 도메인의 융합 단백질인 DSG2-(IgG4)FC(DSG2FP#6)에 대한 것이다. 회색 막대는 서열번호 1의 아미노산 50-609에 의해 나타낸 전장의 DSG2 세포 외 도메인과 GGGGS 펩타이드 링커 (서열번호 12) 및 서열번호 11의 IgG4 Fc 도메인 아미노산 99-332의 융합 단백질인 DSG2-GGGGS-(IgG4)FC(DSG2FP#7)에 대한 것이다.

[0168] 융합 폴리펩타이드 둘다는 80% 초과의 억제로 유사한 활성을 보여준다. 이는 사람 IgG4 Fc 영역을 친화성 태그로 사용해도 융합 폴리펩타이드의 항-DSG2 항체 차단 기능이 손상되지 않으며, 이 경우 링커의 존재가 억제 활성에 큰 영향을 생성하지 않음을 지적한다. 이들 발견은 DSG2 세포 외 도메인 또는 이의 일부를 포함하는 융합 폴리펩타이드가 다른 면역글로불린으로부터의 Fc 영역을 포함하는, 상이한 친화성 태그와 조합되어 다양한 심장 부정맥을 포함하여, 항-DSG2 자가항체로 인해 발생하는 장애의 치료에 사용하기에 적당한 치료학적 제제일 것임을 예측하기 위한 근거를 제공한다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

데스모글레인 -2 (DSG2) 융합 폴리펩타이드를 포함하는 단리된 폴리펩타이드로서, 상기 DSG2 융합 폴리펩타이드가 다음을 포함하는, 단리된 폴리펩타이드:
a. DSG2 단백질이 호모 사피엔스(Homo sapiens) DSG2 단백질, 무스 무스쿨루스(Mus musculus) DSG2 단백질, 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus) DSG2 단백질, 마카카 물라타(Macaca mulatta) DSG2 단백질, 카니스 루푸스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) DSG2 단백질 또는 다니오 레리오(Danio rerio) DSG2 단백질인, DSG2 단백질의 전체 또는 일부; 및
b. 면역글로불린 단백질이 사람 또는 개의 면역글로불린 단백질인, 면역글로불린 단백질의 전체 또는 일부.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 호모 사피엔스(Homo sapiens) DSG2 단백질(서열번호 1)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 무스 무스쿨루스(Mus musculus) DSG2 단백질(서열번호 14)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus) DSG2 단백질(서열번호 15)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 마카카 물라타(Macaca mulatta) DSG2 단백질(서열번호 16)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 카니스 루푸스 파밀리아리스(Canis lupus familiaris) DSG2 단백질(서열번호 17)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 단백질이 다니오 레리오(Danio rerio) DSG2 단백질(서열번호 18)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DSG2 융합 폴리펩타이드가 DSG2 단백질의 일부를 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제8항에 있어서, 상기 DSG2 단백질의 일부가 DSG2 단백질의 세포 외 영역의 전체 또는 일부인, 단리된 폴리펩타이드.
제3항에 있어서, 상기 DSG2 단백질의 일부가 DSG2 단백질의 전체 세포 외 영역인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항에 있어서, 상기 DSG2 융합 폴리펩타이드가 면역글로불린 단백질의 일부를 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제11항에 있어서, 상기 면역글로불린 단백질이 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE로부터 선택되는, 단리된 폴리펩타이드.
제12항에 있어서, 상기 면역글로불린 단백질이 IgE인, 단리된 폴리펩타이드.
제12항에 있어서, 상기 면역글로불린이 IgG인, 단리된 폴리펩타이드.
제14항에 있어서, 상기 IgG가 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4인, 단리된 폴리펩타이드.
제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린 단백질의 일부가 Fc 영역, Fab 영역, 중쇄 가변(VH) 도메인, 중쇄 불변 도메인, 경쇄 가변(VL) 도메인 또는 경쇄 불변 도메인인, 단리된 폴리펩타이드.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역글로불린 단백질의 일부가 Fc 영역인, 단리된 폴리펩타이드.
제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역이 사람 Fc 영역이고, 상기 사람 Fc 영역이 사람 IgG1 Fc 영역(서열번호 5), 사람 IgG2 Fc 영역(서열번호 7), 사람 IgG3 Fc 영역(서열번호 9) 또는 사람 IgG4 Fc 영역(서열번호 11)인, 단리된 폴리펩타이드.
제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역이 개 Fc 영역이고, 상기 개 Fc 영역이 개 IgG 중쇄 D Fc 영역(서열번호 20), 개 IgG 중쇄 A Fc 영역(서열번호 22), 개 IgG 중쇄 B Fc 영역(서열번호 24) 또는 개 IgG 중쇄 C Fc 영역(서열번호 26)인, 단리된 폴리펩타이드.
제16항에 있어서, 상기 면역글로불린 단백질의 일부가 중쇄 불변 도메인인, 단리된 폴리펩타이드.
제20항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역이 사람 중쇄 불변 영역이고, 상기 사람 중쇄 불변 영역이 사람 IgG1 중쇄 불변 도메인(서열번호 4), 사람 IgG2 중쇄 불변 도메인(서열번호 6), 사람 IgG3 중쇄 불변 도메인(서열번호 8) 또는 사람 IgG4 중쇄 불변 도메인(서열번호 10)인, 단리된 폴리펩타이드.
제20항에 있어서, 상기 중쇄 불변 영역이 개 중쇄 불변 영역이고, 상기 개 중쇄 불변 영역이 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 D(서열번호 19), 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 A(서열번호 21), 개 IgG 중쇄 불변 도메인 쇄 B(서열번호 23) 또는 개 IgG4 중쇄 불변 도메인 쇄 C(서열번호 25)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DSG2 융합 폴리펩타이드가 링커를 추가로 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제23항에 있어서, 상기 링커가 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산 길이인, 단리된 폴리펩타이드.
제24항에 있어서, 상기 링커가 GGGGGS (서열번호 12), EAAAK (서열번호 13), GGGGS (서열번호 27) 또는 IEGRMD (서열번호 28)인, 단리된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DSG2 융합 폴리펩타이드가 친화성 태그를 추가로 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제10항에 있어서, 상기 DSG2 단백질의 전체 세포 외 영역이 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제9항에 있어서, 상기 DSG2 단백질의 일부가 DSG2 단백질의 세포 외 영역의 일부인, 단리된 폴리펩타이드.
제6항에 있어서, 상기 DSG2 단백질의 세포 외 영역의 일부가 세포 외 카드헤린 도메인 1 (EC1), 세포 외 카드헤린 도메인 2 (EC2), 세포 외 카드헤린 도메인 3 (EC3), 세포 외 카드헤린 도메인 4 (EC4) 및 세포 외 앵커 도메인 (EA)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 하나의 도메인을 포함하는, 단리된 폴리펩타이드.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드를 발현하는 세포.
심근 세포에서 부정맥 유발 표현형을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법이 심근 세포와 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 DSG2 융합 폴리펩타이드를 접촉시킴을 포함하는, 방법.
제31항에 있어서, 상기 부정맥 유발 표현형이 항-DSG2 항체와 관련되는, 방법.
심근세포의 전기적 기능을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법이:
상기 심근세포와 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 DSG2 융합 폴리펩타이드를 접촉시키는 단계, 및 심근세포 나트륨 스파이크(μV/m)를 측정하는 단계로서, DSG2 융합 폴리펩타이드와 접촉시킨 후 나트륨 스파이크에서의 증가가 개선된 심근세포 전기적 기능을 지적하는, 단계를 포함하는, 방법.
제33항에 있어서, 상기 심근세포가 항-DSG2 항체에 사전 노출되는, 방법.
혈청 항 DSG2 자가항체와 관련된 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 대상체를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 또는 제30항의 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
대상체에서 부정맥 및/또는 심근병증을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이:
상기 대상체를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 또는 제30항의 세포와 접촉시키는 단계; 및
심계항진, 현기증, 가벼운 현기증, 실신, 심부전 및 박출률 감소로 이루어진 그룹으로부터 선택된 부정맥과 관련된 하나 이상의 증상을 측정하는 단계, 및/또는
부정맥, 심계항진, 가벼운 현기증, 현기증, 실신, 심근염, 심부전, 심박출량 불량 및 박출률 감소로 이루어진 그룹으로부터 선택된 심근병증과 관련된 하나 이상의 증상을 측정하는 단계를 포함하는, 방법.
제36항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 부정맥 유발 우심실 심근병증인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 유육종증과 관련된, 방법.
제36항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 확장성 심근병증인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 혈청 항-DSG2 항체와 관련된, 방법.
대상체에서 심장 이상을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 대상체를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 또는 제30항의 세포와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 대상체의 혈청이 항-DSG2 항체를 포함하는, 방법.
대상체에서 항-DSG2 항체를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법이:
(i) 상기 대상체를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 또는 제30항의 세포와 접촉시키는 단계, 및
(ii) 상기 대상체에서 항-DSG2 항체의 수준을 측정하는 단계로서, 상기 대상체를 단리된 폴리펩타이드와 접촉시키는 단계가 항-DSG2 항체의 수준을 감소시키는, 단계를 포함하는, 방법.
제42항에 있어서, 상기 항-DSG2 항체가 약 1%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%가 감소되는, 방법.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 및 적어도 하나의 치료학적 제제를 포함하는 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 항-CD20 항체인, 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 FcRn-차단 항체인, 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 정맥내 면역글로불린 (IVIG)인, 조성물.
제44항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 에쿨리주맙인, 조성물.
혈청 항 DSG2 자가항체와 관련된 병태를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 대상체를 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항의 단리된 폴리펩타이드 또는 적어도 하나의 치료학적 제제 또는 이의 조합을 포함하는, 방법.
제49항에 있어서, 상기 대상체가 적어도 하나의 치료학적 제제와 접촉되는, 방법.
제50항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 항-CD20 항체인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 FcRn-차단 항체인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 정맥내 면역글로불린(IVIG)인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 적어도 하나의 치료학적 제제가 에쿨리주맙인, 방법.
항-데스모글레인-2(DSG2) 자가 항체에 의해 유발되는 질환 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 조성물이:
DSG2의 세포 외 도메인에 대한 항-DSG2 항체의 결합을 차단하는 융합 폴리펩타이드로서, 상기 융합 폴리펩타이드가
서열번호 1의 아미노산 잔기 50 내지 609 또는 이의 일부와 적어도 약 85%의 서열 동일성을 갖는 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역 및 친화성 태그를 포함하는 융합 폴리펩타이드를 포함하는, 약제학적 조성물.
제55항에 있어서, 상기 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역의 일부가 세포 외 카드헤린 도메인 1(EC1), 세포 외 카드헤린 도메인 2(EC2), 세포 외 카드헤린 도메인 3(EC3), 세포 외 카드헤린 도메인 4(EC4) 및 세포 외 앵커 도메인(EA)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DSG2 도메인 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 친화성 태그가 면역글로불린의 Fc 영역인, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 면역글로불린이 IgG1 또는 IgG4인, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 면역글로불린이 서열번호 31의 서열을 갖는 IgG1의 변이체인, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 면역글로불린이 서열번호 32의 서열을 갖는 IgG4의 변이체인, 약제학적 조성물.
제55항 또는 제56항에 있어서, 상기 친화성 태그가 폴리히스티딘 태그인, 약제학적 조성물.
제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 사람 DSG2 단백질의 세포 외 영역 또는 이의 일부와 친화성 태그 사이에 위치한 링커 서열을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
제62항에 있어서, 상기 링커 서열이 서열번호 12, 13, 27 또는 28인, 약제학적 조성물.
제55항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 부정맥 및/또는 심근병증인, 약제학적 조성물.
제64항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 부정맥 유발성 우심실 심근병증(ARVC), 유육종증, COVID-19 후 급성 후유증, 또는 확장성 심근병증인, 약제학적 조성물.
제64항 또는 제65항에 있어서, 상기 부정맥 및/또는 심근병증이 바이러스에 의해 근위부 또는 원위부에 유발되는, 약제학적 조성물.
제66항에 있어서, 상기 바이러스가 SARS-CoV2, 아데노바이러스, 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, 파보바이러스, 단순포진 바이러스, 에코바이러스, 엡슈타인-바르 바이러스, 루벨라(rubella), 거대세포 바이러스 또는 HIV인, 약제학적 조성물.