KR20240087085A - 기능성 유효성분이 증대된 신품종 영지버섯 균주 - Google Patents

기능성 유효성분이 증대된 신품종 영지버섯 균주 Download PDF

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Abstract

본 발명은 기능성 유효성분이 증대된 신품종 영지버섯 균주에 관한 것이다.
본 발명의 영지버섯 Gl-20-12 균주는 모균주 대비 세포 노화를 완화하는 가노데릭산 D, 고혈압 치료 효과를 나타내는 가노데릭산 F 및 멜라닌 생성 감소 효과를 보이는 가노덜마논디올 성분 함량이 높아, 건강기능식품 또는 화장품 산업 등에 활용될 수 있다.

Description

기능성 유효성분이 증대된 신품종 영지버섯 균주 {Novel ganoderma lucidum strain with increased functional bioactive components}
본 발명은 기능성 유효성분인 가노데릭산 D, F, 가노덜마논디올의 함량이 증대된 신품종 영지버섯 Gl-20-12 (Ganoderma lucidum G1-20-12, 기탁번호: KACC 93396P) 균주에 관한 것이다.
영지버섯(Ganoderma lucidum)은 여름에 활엽수 뿌리에서 발생한다. 진시황의 불로초라고도 알려져 있고 본초강목에서는 인삼과 함께 이 버섯을 상약의 반열에 올려놓았다. 영지버섯은 강장, 진해, 소종 등의 효능이 있어 호흡기 질환, 신경쇠약, 심장병, 고혈압 등에 효과가 있고 콜레스테롤을 낮춰주며 항암 효과가 있다고도 알려져 있다.
한편, 버섯류를 의약품, 기능성 식품의 혼합 원료로서 사용하기 위해서는 자실체인 버섯을 채취하여 사용해야 하지만 버섯 자체가 자연 상태에서 번식이 잘 되지 않는다는 점과, 채취 남용으로 인해 자원 고갈 및 생태계 파괴가 야기된다는 문제점이 있다. 톱밥 등을 이용하여 자실체를 재배하는 방법이 이용되기도 하나 이러한 방법도 재배 기간만 수개월이 소요된다. 산업적으로 사용할 수 있을 정도로 원료를 공급하기 위해서도 대량의 생산 시설 및 경비가 소요된다는 난점 때문에 대량 생산의 수요를 충족시키지 못하고 있다. 이와 같이, 버섯류는 항암제나 면역 증강제로서 효과가 있음에도 그 공급이 제한적이며 대량 생산 및 속성 생산이 용이하지 않아 널리 활용되지 못하고 있다. 따라서, 버섯들에 대하여, 버섯균의 자실체와 동등한 효과를 나타내는 균사체를 생산할 수 있는 대량 배양방법 및 신품종 균주에 대한 연구가 최근 활발하게 이루어지고 있으며, 대량생산이 가능하거나, 기능성 성분 함량이 증대된 신종 버섯 균주을 탐색하는 연구들도 진행 중이다.
이러한 배경 하에 본 발명자들은 영지버섯의 보유 유전자원의 원형질재생체를 이용하여 교잡하고, 기능성 유효성분인 가노데릭산 D, F, 가노덜마논디올의 함량이 증대된 신품종 영지버섯 균주를 개발하여, 본 발명을 완성하였다.
한국 등록특허 제10-0142731호
본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 예시적 목적은 기능성 유효성분이 증대된 영지버섯 Gl-20-12 균주를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 예시적 목적은, 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 줄기세포 노화 억제용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은, 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은, 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 고혈압 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은, 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.
상기 목적을 달성하기 위한 일 양태로서, 본 발명은 증가된 수준의 가노데릭산 D, 가노데릭산 F 및 가노덜마논디올을 함유한 영지버섯 Gl-20-12 (Ganoderma lucidum G1-20-12) 균주를 제공한다.
상기 영지버섯 균주는 기탁번호 KACC 93396P로 기탁되었다.
'영지버섯(Ganoderma lucidum)'은 민주름 버섯목 불로초과 불로초속에 속하는 균주로서, 북아메리카, 아시아, 유럽에 널리 분포하고있으며 활엽수 고사목에 발생하는 백색 목재 부후균이며 30℃ 이상의 고온 다습조건에서 잘 자라는 것으로 알려져 있다. 또한, 영지버섯의 포자 속에 함유된 활성물질인 트리테르페노이드는 항종양, 항산화, 항염 등의 다양한 생리적 활성을 나타내는 것으로 알려져 있어, 영지버섯은 이용가치가 높은 약용버섯 중 하나이다.
본 발명의 영지버섯 Gl-20-12 균주는 KMCC02840 균주 또는 KMCC03012 균주 대비 가노데릭산 D, 가노데릭산 F 및 가노덜마논디올으로 이루어진 군에서 적어도 하나 이상의 성분 함량이 증가된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 영지버섯 Gl-20-12 균주는 가노데릭산 D를 45 이상, 가노데릭산 F를 13 이상, 가노덜마논디올을 5 이상 함유하거나, 구체적으로는 가노데릭산 D를 45 내지 75, 가노데릭산 F를 13 내지 45, 가노덜마논디올을 5 내지 9로 함유하는 것일 수 있고, 보다 구체적으로는 가노데릭산 D를 45 내지 71, 가노데릭산 F를 13 내지 40, 가노덜마논디올을 5 내지 7로 함유하는 것일 수 있다.
상기 가노데릭산(Ganoderic acid)은 영지버섯에 함유된 트리테르페노이드 계열 물질의 하나로서, 일부 가노데릭산은 간 보호, 항종양 효과, 5-알파 환원효소 억제를 포함한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 알려져 있으며, 특히 가노데릭산 D는 산화 스트레스에 의한 세포 노화를 완화효과를 나타내는 것으로 보고된 바 있으며, 가노데릭산 F는 고혈압 예방 또는 치료 효과를 나타내는 것으로 보고된 바 있다.
가노덜마논디올(Ganodermanondiol)은 영지버섯에 함유된 트리테르페노이드 계열 물질 중 하나로서, 티로시나아제(tyrosinase) 활성 및 멜라닌 합성 경로와 관련된 인자들의 활성을 억제하는 것으로 알려져 있고, 이에 따라 멜라닌 생합성을 억제하여 피부 미백 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일 실시예에서 확인한 바와 같이, 영지버섯 Gl-20-12 균주는 모균주 1(KMCC02840)보다 가노데릭산 D는 1.68배, 가노데릭산 F는 8.13배, 가노덜마논디올은 7.48배 함량이 증대되어 있는 것을 확인하였으며, 모균주 2(KMCC03012)보다는 가노데릭산 D는 1.60배, 가노데릭산 F는 3.18배, 가노덜마논디올은 1.53배 함량이 증대되어 있는 것을 확인하였다.
본 발명의 영지버섯 Gl-20-12 균주는 모균주인 KMCC02840 균주 및 KMCC03012 균주에서 분리된 원형질체를 교잡하여 얻는 것일 수 있다.
상기 교잡방법은 가노데릭산 D, 가노데릭산 F 또는 가노덜마논디올 성분 함량이 증대된 영지버섯 균주를 얻을 수 있는 교잡방법이라면 그 종류에 제한되지 않으며, 당해 기술 분야에 공지된 교잡방법에 따라 수행되는 것일 수 있다. 구체적으로는 디-모노(di-mono) 교잡육종법 또는 모노-모노(mono-mono) 교잡육종법일 수 있고, 더 바람직하게는 모노-모노(mono-mono) 교잡육종법일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 모노-모노(mono-mono) 교잡육종법은 새로운 품종 개발시 많이 이용되는 교잡법으로, 일핵 균사와 일핵 균사 간의 교배방법을 의미하며, 디-모노(di-mono) 교잡육종법은 이핵 균사와 1핵 균사 간의 교배방법을 의미한다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 줄기세포 노화 억제용 조성물을 제공한다.
'영지버섯 Gl-20-12 균주'는 상기 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어 '배양물'은 상기 영지버섯 G1-20-12 균주를 배양하여 얻어지는 물질로, 배지, 배양되는 균주 및 이러한 균주로부터 분비되는 물질 모두를 포함하는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 균체를 배양하기 위해 필요한 영양 공급원, 일 예로, 탄소원, 질소원, 무기염 성분, 아미노산 등 일반적으로 배양 배지에 포함될 수 있는 성분들이 포함될 수 있으며, 이러한 배양물은 상기 배양액의 형태일 수 있다.
본 발명의 용어 '추출물'은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이를 분쇄하여 얻어지는 분말, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명의 상기 추출물을 제조하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 열수 추출법, 냉침 추출법, 용매 추출법, 수증기 증류법, 용출법, 압착법, 초음파 추출법, 여과법, 환류 추출법 등이 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.
본 발명의 상기 추출물은 적절한 용매를 이용하여 영지버섯 Gl-20-12 균주로부터 추출한 것이며, 예를 들어 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성 용매 가용 추출물을 모두 포함할 수 있다. 상기 추출물을 제조하기 위해 사용되는 추출 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 추출 용매의 비제한적인 예로는 물; 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올, 프로필알콜, 부틸알콜 등의 탄소수 1 내지 4 저급 알콜; 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 등의 다가 알코올; 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매;　또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 추출 용매는 에탄올일 수 있다. 또한, 상기 용매를 사용하여 1회 이상 추출하여 용매 추출물을 제조할 수 있다.
상기 '줄기세포 노화 억제용도'는 영지버섯 Gl-20-12 균주에 포함된 가노데릭산 D에 의해 얻어질 수 있는 효과로서, 구체적으로는, 가노데릭산 D는 산화-스트레스로 인한 노화를 완화, 지연 또는 억제하는 효과를 가지고 있어(Huan Yuan et al. Aging Cell. 2022;21:e13686), 이를 함유하는 영지버섯 G1-20-12 균주 또한 줄기세포 노화 억제 효능을 가질 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 식품 조성물을 제공한다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 고혈압 예방 또는 개선용 식품 조성물, 일 예로, 건강기능식품을 제공한다.
'영지버섯 Gl-20-12 균주', '추출물'은 상기 전술한 바와 같다.
상기 '고혈압 예방 또는 개선용도'는 영지버섯 Gl-20-12 균주에 포함된 가노데릭산 F에 의해 얻어질 수 있는 효과로서, 구체적으로는, 가노데릭산 F는 고혈압 환자의 혈압을 낮추는 효과를 가지고 있어(F.Ahmad. Biomedicine & Pharmacotherapy 107 (2018) 507-519), 이를 함유하는 영지버섯 G1-20-12 균주 또한 혈압 강하 효능을 가질 수 있다
본 발명의 식품 조성물은 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food), 식품 첨가제(food additives), 건강기능식품 및 사료 등의 모든 형태를 포함하며, 인간 또는 가축을 비롯한 동물을 취식대상으로 한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다.
상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 일반 식품으로는 이에 한정되지 않지만 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(과일통조림, 병조림, 잼, 마아말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(햄, 소시지 콘비이프 등), 빵류 및 면류(우동, 메밀국수, 라면, 스파게이트, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(버터, 치즈 등), 식용식물 유지, 마가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(된장, 간장, 소스 등) 등에 상기 유효성분을 첨가하여 제조할 수 있다.
또한, 영양보조제로는 캡슐, 정제, 환 등에 상기 유효성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 건강기능식품으로는 이에 한정되지 않지만 예를 들면, 차, 주스 및 드링크의 형태로 제조하여 건강음료로 음용할 수 있도록 액상화, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 고혈압 예방 또는 개선에 효과가 있다고 알려진 1종 이상의 공지의 활성 성분과 함께 혼합하여 조성물의 형태로 제조할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 다른 양태로서, 본 발명은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 또는 식품 조성물을 제공한다.
'영지버섯 Gl-20-12 균주', '추출물', '식품 조성물'은 상기 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어, "피부 미백"은 멜라닌 등의 색소의 과다로 인하여 명도가 감소된 피부의 명도를 증가시키거나 또는 피부의 명도를 일정 수준으로 유지하는 방법, 상기 방법으로 형성된 명도가 증가된 피부 등을 포괄하여 의미한다.
상기 피부 미백 용도는 영지버섯 Gl-20-12 균주에 포함된 가노덜마논디올에 의해 얻어질 수 있는 효과로서, 구체적으로는 가노덜마논디올은 멜라닌 생합성을 저해하는 효과를 나타내는 것으로 알려져있으므로(J.W. Kim et al. Int J Mol Sci. 2016 Oct 27;17(11):1798. doi: 10.3390/ijms17111798.), 이를 함유하는 영지버섯 G1-20-12 균주 또한 피부 미백 효능을 가질 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 60 중량%로 함유될 수 있는 것으로, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 영지버섯 Gl-20-12 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물 외에도 필요에 따라 본 발명의 효과를 저하시키지 않는 범위 내에서 화장료 조성물에 일반적으로 사용하는 각종 성분, 예를 들면 수용성 성분, 분말성분, 유분, 계면활성제, 보습제, 점도조절제, 방부제, 산화방지제, 향료, 색소 등을 배합하여 구성될 수 있다.
상기 사용 가능한 계면활성제의 비제한적인 예로는, 음이온계 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양쪽성 계면활성제 등이 있다. 보다 구체적으로, 상기 음이온계 계면활성제로는 알킬벤젠설폰산염, 폴리옥시알킬렌알킬황산 에스테르염, 알킬황산 에스테르염, 올레핀설폰산염, 알킬인산염, 폴리옥시알킬렌알킬에테르인산염, 디알킬설포석신산염, 지방산염 등을 들 수 있고, 비이온성 계면활성제로서, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌지방산 에스테르, 다가 알콜지방산 부분 에스테르, 폴리옥시에틸렌 다가 알콜지방산 부분 에스테르, 폴리글리세린지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 유도체, 지방산디에탄올아미드 등을 들 수 있다. 또한, 양이온성 계면활성제로서는, 3급 지방족 아민염, 알킬트리메틸암모늄 할라이드, 디알킬디메틸암모늄할라이드 등을 들 수 있고, 양쪽성 계면활성제로서는, 아미드베타인형, 이미다졸리늄베타인형, 설포베타인형 등을 들 수 있다.
상기 보습제로서는, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 소르비톨 등을 들 수 있다. 상기 방부제로서는, 벤조산, 데하이드로아세트산, 파라옥시벤조산에스테르(파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산부틸 등), 페녹시에탄올 등을 들 수 있다. 또한, 상기 산화방지제로서는, 아스코르브산, BHA 등을 들 수 있으며, 이외에도, 자외선 흡수제, 소염제 및 청량제 등을 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 화장품 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량%로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 조성물이 제조되는 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위 (얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품 제제에 있어서 수용 가능한 담체는 화장료 조성물의 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 신품종 영지버섯 균주는 모균주 대비 세포 노화를 완화하는 가노데릭산 D, 고혈압 치료 효과를 나타내는 가노데릭산 F 및 멜라닌 생성 감소 효과를 보이는 가노덜마논디올 성분 함량이 높아, 건강기능식품 또는 화장품 산업 등에 활용될 수 있다.
도 1은 모균주(KMCC02840 및 KMCC03012)에서 분리한 원형질체이다.
도 2는 모균주(KMCC02840 및 KMCC03012) 및 모균주 교잡을 통해 선발한 신품종 균주(Gl-20-12)의 생육 모습이다.
이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 원형질재생체를 이용한 교잡주 육성
(1) 육종 모본의 원형질재생체를 이용한 교잡 균주 육성
육종 모본으로 선발한 ‘KMCC02840’과 ‘KMCC03012’에서 원형질체 분리 및 재생과정을 통해 육종 모본을 확보하고(도 1), 확보한 육종모본을 대상으로 모노-모노(mono-mono) 교잡을 수행하였다. 이렇게 얻은 교잡주를 대상으로 참나무톱밥(1kg)을 이용한 봉지재배로 30일간 25℃에서 배양하고, 온·습도 30℃, 85% 조건에서 재배하여 전체 수확량을 조사하는 수량성 조사를 수행하였다. 그 결과, 수량성 등을 기준으로, 교잡주 355점에서 29점을 선발하고, 29점에 대한 수량성 및 대사체 분석을 진행하였다.
(2) 교잡 균주의 수량성 분석
모균주 및 교잡 균주의 형태는, ‘KMCC02840’균주는 편각 형태를 보였고, ‘KMCC03012’균주는 편각과 녹각의 중간형태를 보였으며, 교잡 육성한 ‘Gl-20-12’은 녹각 형태를 나타내었다(도 2). 또한, 수량성을 조사한 결과, 교잡 균주는 모균주에 비해 각각 14.6%, 20% 수량이 적은 것을 확인하였다(표 1).
KMCC02840
(모균주1) 		KMCC03012
(모균주2) 		Gl-20-12
수량성 58.90±4.46a 54.60±9.85ab 46.64±14.60b
실시예 2: 교잡 균주의 유효성분 함량 분석
(1) 유효성분 분석 방법
모균주 및 교잡 균주에 포함된 유효성분을 분석하기 위하여, HPLC(SHIMADZU), Detector SPD-20A, Pump LC-20AT 장비를 사용하였다. 분석에 사용된 시약 및 표준물질은 표 2에 나타내었으며, 구체적인 분석 조건은 표 3에 표시하였다. Pump LC-20AT 장비를 사용한 펌프 프로그램으로서, 그라데이션 시스템은 표 4에 나타내었다.
항목 제조처 규격 순도
물(Water) SAMCHUN 7732-18-5 -
아세토니트릴(Acetonitrile) J.T.Baker 27-05-8 99.80%
아세트산(Acetic acid) DAEJUNG 64-18-7 99.5%
가노데릭산 D(Ganoderic acid D) Chemface CFN90292 98%
가노데릭산 F(Ganoderic acid F) Chemface CFN90292 98%
가노덜마논디올(Ganodermanondiol) Chemface CFN99085 98%
항목 조건
검출기(Detector) UV/VIS 245nm
컬럼(Column) Phenomenex Luna C-18 (4.6*250mm, 5μm 입자 크기)
주입(Injection) 20μL
유량(Flow rate) 0.8ml/분
이동상(Mobile phase) A: 물
B: 0.2% 아세트산을 포함한 아세토니트릴
시간
(분) 		0 20 30 40 50 55 60 70 80 90 110
A (%) 80 65 60 50 40 30 25 15 5 0 0
B (%) 20 35 40 50 60 70 75 85 95 100 100
시험액 조제 관련하여, 검액 조제는 영지버섯 1g에 94% 에탄올 100mL을 넣은 후 80℃에서 4시간 동안 환류 추출하고, 여과 및 감압 농축하였으며, 농축된 추출물에 3차 증류수 40mL 및 CHCl3 40mL을 첨가하여 분획하였다. 이후 CHCl3 분획물은 농축 후 HPLC 수준의 메탄올에 용해하여 HPLC 분석에 사용하였다.
표준액 조제 관련하여, 저장 용액은 표준물질 5mg을 취하여 1.5mL 튜브에 넣고 메탄올로 5mg/mL로 채운 후 이 액을 초음파 진탕기에서 5분간 진탕한 후 이 액을 메탄올로 희석하여 사용하였다. Blank는 메탄올을 시린지 필터(0.45μm)에 여과하여 조제하였고, 시험용액은 상기 저장용액을 200μg/mL 농도로 메탄올에 희석한 후, 시린지 필터(0.45μm)로 여과하여 조제하였으며, 이 액을 1.5mL 튜브에 넣고 섞은 후 시험방법에 따라 분석을 진행하였다. 플라시보(placebo) 용액은 메탄올(blank) 1.5mL 튜브에 넣고 섞은 후 시험방법에 따라 분석을 진행하였다. 표준용액은 저장용액 5종을 각 100μg/mL 농도로 메탄올에 희석하여 시린지 필터(0.45μm)로 여과하여조제하였으며, 이 액과 1.5mL 튜브에 각각 100μL 넣고 섞은 후 시험방법에 따라 분석을 진행하였다. 특이성은 Blank 에서 표준물질에 영향을 줄 수 있는 피크를 관찰하고 각각의 RT를 확인하는 방법으로 분석하였다.
(2) 가노데릭산 및 가노덜마논디올 함량 분석
모균주 및 교잡으로 얻은 29점의 교잡주 계통별로 유효성분인 가노데릭산 및 가노덜마논디올 함량을 비교한 결과(표 5), 모균주 1(KMCC02840) 및 모균주 2(KMCC03012) 대비 가노데릭산 및 가노덜마논디올 함량이 동시에 모두 높은 GI-20-12를 선별하였다.
기능성 유효성분 함량(μg/ml)
가노데릭산 D 가노데릭산 F 가노덜마논디온
모균주 1
(KMCC02840) 		42.70 4.95 0.97
모균주 2(KMCC03012) 44.90 12.63 4.76
Gl-20-1 25.83 3.22 0.50
Gl-20-2 36.08 14.76 2.60
Gl-20-3 24.49 3.06 0.81
Gl-20-4 42.00 1.53 0.38
Gl-20-5 28.35 3.92 1.92
Gl-20-6 31.11 4.37 1.62
Gl-20-7 33.70 6.03 1.96
Gl-20-8 20.37 0.75 2.67
Gl-20-9 26.81 8.00 2.96
Gl-20-10 30.54 1.60 0.69
Gl-20-11 33.90 3.64 0.81
Gl-20-12 71.71 40.22 7.26
Gl-20-13 74.81 7.00 0.84
Gl-20-14 42.06 0.04 0.10
Gl-20-15 43.47 16.28 1.45
Gl-20-16 70.08 36.60 0.38
Gl-20-17 40.75 3.38 0.28
Gl-20-18 40.19 17.87 4.61
Gl-20-19 35.37 8.40 0.29
Gl-20-20 36.00 2.68 0.31
Gl-20-21 37.94 14.14 0.32
Gl-20-22 52.45 0.03 0.57
Gl-20-23 65.98 23.09 0.24
Gl-20-24 43.40 15.88 0.25
Gl-20-25 71.71 19.63 1.83
Gl-20-26 17.07 1.01 0.17
Gl-20-27 58.19 4.21 0.83
Gl-20-28 60.92 0.06 0.77
Gl-20-29 63.81 26.89 2.20
선별된‘Gl-20-12’균주는, 모균주 1 및 2 대비 가노데릭산 D는 약 1.6배 이상 함량이 증대되었고, 가노데릭산 F를 3.18배 이상, 특히 모균주 2 대비 8.13배나 증대되었으며, 가노덜마논디올은 모균주 2 대비 1.53배 증대되었고, 모균주 1에 비해서는 7.48배나 증대되어 있음을 확인하였다.
농촌진흥청 국립농업과학원 미생물은행(KACC) KACC93396P 20221201

Claims (9)

  1. 증가된 수준의 가노데릭산 D, 가노데릭산 F 및 가노덜마논디올을 함유한 영지버섯 Gl-20-12 (Ganoderma lucidum G1-20-12) 균주.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 영지버섯 Gl-20-12는 기탁번호 KACC 93396P로 기탁된 것인, 균주.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 균주는 KMCC02840 균주 또는 KMCC03012 균주 대비, 가노데릭산 D, 가노데릭산 F 및 가노덜마논디올으로 이루어진 군에서 적어도 하나 이상의 성분 함량이 증가된 것을 특징으로 하는, 균주.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 균주는 KMCC02840 균주 및 KMCC03012 균주에서 분리된 원형질체를 교잡한 것을 특징으로 하는, 균주.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 교잡은 모노-모노(mono-mono) 교잡육종법으로 수행되는 것을 특징으로 하는, 균주.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 줄기세포 노화 억제용 조성물.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 식품 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 식품 조성물은 고혈압 예방 또는 개선용인, 식품 조성물.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 균주 또는 이의 배양물, 또는 이의 추출물을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
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