KR20110069541A - 락톤계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 또는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)은 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 가지며 세포독성이 거의 없으므로 피부 미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

[화학식 1]

여기서, R은 수소, 아세틸기 또는 C₁-C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.

락톤, 멜라닌 합성 저해, 미백.

Description

락톤계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물{Skin―whitening composition containing lactone as an active ingredien}

본 발명은 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색은 크게 멜라닌, 헤모글로빈, 카로틴 등에 의해 결정되는데 이 중에서 가장 중요한 인자는 멜라닌이다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정할 뿐만 아니라 자외선에 대한 피부 보호 및 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger)로서의 역할도 수행한다.

그러나 자외선에의 과다 노출 또는 대기 오염, 스트레스 등 외부의 환경 변화에 의해 멜라닌이 과다하게 생성된다. 멜라닌의 과잉생산은 인체에 기미, 주근깨 등을 형성하고 피부 노화를 촉진하거나 피부암의 유발에 관여하는 것으로 보고되었다. 또한 오존층의 파괴로 자외선에 노출이 심해져 생기는 과잉의 멜라닌 합성은 인체의 피부 노화에 치명적인 해를 가져오고 있다.

멜라닌의 생합성 대사는 피부암과 관련하여 최근 집중적으로 연구되고 있고 이로부터 다양한 멜라닌 생성 저해제 등이 개발되어 의약품 산업에서 피부 질환 치료제, 화장품 산업에서 기미, 주근깨 등을 예방 및 치료하는 피부 미백제 또는 식품산업에서 갈변 방지제 등으로 적용되고 있다. 또한 최근에는 환경문제와 관련하여 그 수요가 급격히 증가되고 있다.

멜라닌의 합성 과정을 살펴 보면, 먼저 세포 내의 티로신을 기질로 하여 티로시나아제라는 효소가 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논(DOPAquinone)을 생성시키고, 도파퀴논으로부터 자동 산화 반응과 효소 반응으로 도파크롬(DOPAchrome)을 거쳐 공중합체인 멜라닌이 생성된다. 이렇게 생성된 멜라닌은 멜라노좀이라는 소포체를 통해 케라티노사이트로 옮겨진 후 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나와 각질과 함께 소실된다. 그러나 이 과정에서 멜라닌 생성을 촉진하는 요인에 의해 멜라닌이 과량 생성되고 각화에 의해 멜라닌이 완전히 없어지지 않으면 색소 침착 현상이 일어나게 된다. 따라서 이러한 색소 침착 현상을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성 과정에서의 일부분을 조절하여 멜라닌의 생성을 감소시켜야 한다.

멜라닌의 합성을 저해하는 기작은 여러 가지가 있다. 먼저 대표적인 방법은 멜라닌 합성의 중요한 효소인 티로시나아제의 활성을 저해하는 것으로서, 가장 많이 알려진 것으로는 효소 활성을 위해 필요한 구리 이온을 킬레이트화하여 티로시나아제의 활성을 억제하는 코직산과 같은 킬레이터가 있다. 또한, 티로시나아제 활성을 저해하는 식물 추출물로는 상백피 추출물, 감초 추출물 등이 알려져 있다. 한편, 티로시나아제의 기질인 티로신의 경쟁적 저해제인 기질 유사 물질을 사용하 여 멜라닌 합성을 감소시키는 방법이 있는데, 이러한 기질 유사 물질로는 알부틴, 감마-피론, 히노키톨 등이 알려져 있다.

그러나, 이런 미백 원료들은 안정성이 낮아 효과가 오래 지속되지 못하며 피부에 대한 자극성이 높기 때문에 그 사용이 제한되고 있으며, 식물 추출물의 경우는 고농도에서만 비교적 높은 효과를 나타내는 단점을 가지고 있어 제품의 적용 범위가 매우 제한된다.

선복화(旋覆花)(Inula britannica var. linariifolia (Turcz.) Regel)는 다년초 여러해살이풀로서 한국이 원산지이고, 일본, 만주, 중국 또는 아무르 등에 분포한다. 이는 습기가 있는 도랑 부근에서 자란다. 높이는 60cm 정도로 줄기는 곧게 자라며 전체에 털이 있다. 밑부분의 잎은 바소꼴로 가운뎃잎보다 길고 잎자루가 없으며 꽃이 필 때쯤에 시든다. 가운뎃잎은 줄 모양 바소꼴 또는 줄 모양이고 끝이 뾰족하며 밑부분이 좁아져 잎자루처럼 보인다. 앞쪽 잎에는 털이 없으나 뒤쪽에는 선점(腺點)과 털이 있으며 가장자리가 뒤로 말린다. 6 ~ 8월에 15 ~ 20mm의 노란 꽃이 가지 끝과 원줄기 끝에 1개씩 달리고 포(苞)가 없다. 총포는 반구형이며 포의 비늘은 4줄로 배열되고 선점이 있다. 열매는 수과(瘦果)로서 길이 1mm 정도이며 담황색으로 3mm 정도의 센털 모양 관모(冠毛)가 있다. 겹꽃이 피는 변종은 원예용으로 재배한다(배기환,한국의 약용식물, 교학사, 776p, 2000; 홍원식,약초의 성분과 이용, 일월서각, 739p, 1999).

선복화의 구성성분으로 플라보노이드, 0.01 ~ 0.1%의 정유, 카로틴, 타닌질, 세스쿠이테르펜락톤, 이눌린, 디아세틸이눌린 등이 함유되어 있음이 알려져 있으며, 한아름 등(한국생약학회 Natural Product Sciences, pp. 28-30, 2003)이 금불초(Inula britannica var. chinensis)의 꽃으로부터 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone)를 분리하였음이 보고된 바 있다.

지금까지 선복화의 추출물 또는 분획물은 숙취해소 효과(대한민국 공개특허 2003-0004606), 뇌기능 및 인지기능 개선 효과(대한민국 등록특허 10-0569089), 혈관신생억제 효과(대한민국 등록특허 10-0500298), 탈모방지 및 발모 촉진 효과(대한민국 공개특허 10-2009-0086670), 항염증 효과(지옥표, 성균관대학교 연구보고서, 2001; 대한민국 공개특허 10-2009-0002678), 및 항암 효과 등이 보고(차미란 등, 생약학회지 제37권 제3호 통권 146호, 2006)된 바 있다. 또한, 일본 공개특허 제 1996-283143호에서는 Inula japonica (Thunb.)의 용매 추출물이 멜라닌 생성을 억제하여 미백 효과가 있음을 보고한 바 있다. 그러나 상기 Inula japonica (Thunb.)는 본원발명에서 사용된 Inula britannica var. linariifolia (Turcz.) Regel와는 종이 다른 것이며, 상기 추출물내 어느 화합물이 미백활성을 나타내는지에 대한 기재는 없다.

한편, 지금까지 락톤(lactone)계 화합물의 약리활성으로는 세스퀴테르펜 락톤계 화합물이 심혈관 질환 또는 암 치료에 이용된다는 보고(대한민국 공개특허 10-2004-0071336), 란시폴라이드 유도체가 암 치료에 이용된다는 보고(대한민국 등록특허 공개특허 10-2005-0076853), 부칠로락톤계 화합물이 지질과산화 억제활성 또는 활성산소 소거활성을 갖는다는 보고(대한민국 등록특허 10-0462843), 이소란시폴라이드, 란시폴라이드 및 액티놀라이드 B 등의 락톤 화합물이 천식 치료에 이용된다는 보고(대한민국 등록특허 10-0520496) 등이 있으나, 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 및 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)의 미백 활성에 관한 보고는 없다.

이에, 본 발명자들은 천연 추출물의 생리활성에 대한 연구에 노력하던 중, 선복화로부터 분리한 락톤계 화합물이 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내었으며, 특히 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 및 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)은 현저하게 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내며, 세포독성역시 거의 없음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다:

[화학식 1]

여기서, R은 수소, 아세틸기, 또는 C₁-C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.

또한, 본 발명은 상기 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 락톤계 화합물인 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl- 4R,6S-britannilactone) 및 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)은 기존의 선복화 추출물 및 이의 분획물들에 비해 현저하게 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 가지며, 세포독성 역시 거의 없으므로 피부 미백용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다:

여기서, R은 수소, 아세틸기 또는 C₁-C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.

상기 화학식 1로 표시되는 락톤계 화합물은 하기 화학식 2로 표시되는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 또는 하기 화학식 3으로 표시되는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)인 것이 바람직하다.

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상기 락톤계 화합물들은 선복화(Inula britannica)로부터 분리한 것을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 화학적으로 합성한 것을 사용할 수 있다.

상기 화학식 1로 표시되는 락톤계 화합물은 하기와 같은 방법으로 분리되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

1) 선복화를 메탄올로 추출하는 단계;

2) 상기 단계 1)의 추출물을 추가로 헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트를 차례로 가하여 계통분획하는 단계;

3) 상기 단계 2)의 클로로포름 분획물을 컬럼 크로마토그래피하여 활성 분획물을 수득하는 단계; 및

4) 상기 단계 3)의 활성 분획물로부터 활성 화합물을 분리 및 정제하는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 선복화는 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 메탄올은 100%를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 선복화의 양에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 2 내지 5배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한, 추출온도는 30 ~ 100인 것이 바람직하고 40 ~ 60인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 5 ~ 24시간이 바람직하며, 10 ~ 20시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출횟수는 1 ~ 5회 반복 추출하는 것이 바람직하고, 2 ~ 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출 방법은 열수 추출, 중탕 추출, 초음파 추출법, Soxhlet 추출법 및 환류냉각 추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법은 모두 사용될 수 있다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔, 세파덱스, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(Toyopearl) 및 XAD 수지로 이루어진 그룹으로부터 선택된 충진제를 이용한 컬럼을 이용한 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 활성화합물을 분리 및 정제할 수 있다. 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있으며, 용매로 헥산-에틸아세테이트, 클로로포름-메탄올, 에틸아세테이트-메탄올 또는 디클로로메탄-메탄올을 이용할 수 있으나 이에 한정하지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 4)의 화합물의 분리 및 정제는 역상 컬럼크로마토 그래피(reverse phase column), 세파덱스 LH-20(Sephadex LH-20) 컬럼 크로마토그래피 또는 분취용 HPLC(preparative HPLC)를 이용할 수 있으나 이에 한정하지 않는다.

본 발명의 한가지 실시태양에서는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 또는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)의 멜라닌 합성 저해 활성을 선복화 추출물과 비교한 결과, 선복화 메탄올 추출물의 IC₅₀ 값이 약 250 ppm 이었으며 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 또는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)의 IC₅₀ 값은 약 6 내지 12 ppm으로 선복화 메탄올 추출물에 비해 200배 이상의 강한 활성을 나타내므로 소량의 양으로 현저한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내는 것을 확인하였다(표 1 및 도2 참조).

본 발명의 또다른 한가지 실시태양에서는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone) 또는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)의 세포독성을 측정한 결과, 250 ppm의 농도까지 세포독성이 거의 나타나지 않았다(도 3 참조).

따라서, 본 발명의 락톤(lactone)계 화합물은 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 가지며, 세포독성이 거의 없으므로 피부 미백용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 락톤계 화합물 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 락톤계 화합물은 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 가지며, 세포독성이 거의 없으므로 피부 미백용 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 락톤계 화합물을 상기 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 90 중량부의 양으로 함유되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 락톤계 화합물에 추가적으로 피부학적으로 허용된 담체를 혼합하여 사용될 수 있다. 상기 피부학적으로 허용된 담체는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알코올, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제(humectant), 증점제(thickening agent), 항산화제, 점도 안정화제(viscosity stabilizer), 킬레이팅제, 완충제, 방부제, 저급 알코올 등이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 그 종류와 농도는 다양하고, 당업자가 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 수정 및 변경할 수 있는 부분을 포함한다. 필요에 따라 미백제, 보습제, 항염증제, 항박테리아제, 항진균제, 비타민, 자외선 차단제, 항생제, 여드름 방지제, 향수, 염료가 포함될 수도 있으며, 이들은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 본 발명에 따른 화장용 조성물에 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 본 발명의 락톤계 화합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 미백 활성 성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 피부 미백 활성 성분으로는 코지산 및 이의 유도체, 알부틴, 아스코르브산 및 이의 유도체, 하이드로퀴논 및 이의 유도체, 레조르시놀, 사이클로알카논, 메틸렌디옥시페닐 알칸올, 2,7-디니트로인다졸, 덩굴귤 추출물, 쌀 추출물, 감초 추출물과 같은 식물 추출물 등이 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물로부터 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 상기 화장품은 본 발명의 락톤계 화합물 이외에도 피부학적으로 허용된 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수도 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트 또는 미용액 등이 있다. 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 또는 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이 며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 락톤(lactone)계 화합물의 제조

<1-1> 선복화 추출물의 제조

한약재 시장(hanyakjae.net)에서 선복화(Inula britannica) 1.5 kg을 구입 후 상온에서 100% 메탄올 3 L에 48시간 침지시켜 여과기를 이용하여 3회 반복 추출하였다. 수득한 추출액을 감압 농축기를 사용하여 메탄올을 증발시켜 선복화 메탄올 추출물 70 g을 제조하였다.

<1-2> 선복화 추출물로부터 유기용매 분획물의 제조

상기 실시예<1-1>에서 제조한 선복화 메탄올 추출물(70 g)을 물 2리터에 현탁하고 헥산(Hexane)(2 L)를 가한 후 분액깔대기를 사용하여 3회 추출 후 나머지 수층을 다시 클로로포름(2L)를 가하여 3회 추출하였다. 나머지 수층에 물 (500ml)을 가하여 에틸아세테이트(EtOAc)(2 L)으로 3회 추출하였다. 헥산층, 클로로포름층 및 에틸아세테이트층을 각각 농축함으로써, 헥산 분획물(25 g), 클로로포름 분획물(18 g) 및 에틸아세테이트 분획물(10 g)을 수득하였다.

<1-3> 유기용매 분획물로부터 화합물의 제조

상기 실시예<1-2>에서 제조한 클로로포름층을 농축하여 얻은 분획물(18 g)을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(실리카겔 컬럼 20 g)에서 헥산-에틸아세테이트 (100 %: 0% 0% : 100%)로 구성되는 단계 농도구배 용매시스템을 적용하여 51개(Fr.1 ~ Fr.51)의 분획물을 얻었다. 상기에서 얻은 분획물 중 Fr.25 및 Fr.51이 멜라닌 합성 저해 활성을 나타내어 선별하였다.

상기 분획물 Fr.25를 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 정제한 후 얻어진 활성분획물을 용매계를 달리하여 세파텍스 LH-20 컬럼 크로마토그래피를 재실시하였다. 얻어진 활성분획물을 아세톤을 이용하여 순순한 결정상의 화합물 IB2(280 mg)을 수득하였다. 상기 화합물 IB2를 분석한 결과, 하기 화학식 2로 표시되는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone)임을 확인하였다.

[화학식 2]

상기 분획물 Fr.51을 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 정제한 후 얻어진 활성분획물을 세파텍스 LH-20 컬럼 크로마토그래피를 재실시하였다. 얻어진 활성분획물을 아세톤을 이용하여 순순한 결정상의 화합물 IB3(70 mg)을 수득하였다. 상기 화합물 IB3를 분석한 결과, 하기 화학식 3로 표시되는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)임을 확인하였다.

[화학식 3]

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<실험예 1> 멜라닌 합성 저해 활성 분석

<1-1> B16 멜라노마 세포 배양

멜라닌을 생성하는 세포주로서 일반적으로 미백물질 스크리닝에 사용되는, B16 멜라노마 세포를 한국세포주은행에서 제공받아 배양시켰다. 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 100 U/㎖ 페니실린이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 멜라노마 세포주인 B16를 혼합하여 24 웰 플레이트에 1 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 접종하고 하루 동안 5% CO₂ 및 37의 조건에서 배양하였다. 멜라노마 세포를 배양하여 100 mm 패트리 디쉬가 90% 정도 찼을 때 계대하였다.

<1-2> 선복화 추출물 및 분리한 화합물의 멜라닌 저해 측정

배양된 B16 멜라노마 세포를 이용하여 선복화 추출물, IB2 및 IB3 화합물의 멜라닌합성 억제 효과를 측정하였다. DMSO만을 처리한 음성 대조군, 메탄올 추출물, IB2 및 IB3 화합물을 2.5, 7.5, 25, 75 250 ppm 농도로 각각 처리한 실험군, 및 미백물질로 알려진 코직에씨드(Kojik acid, KA)을 2.5, 7.5, 25, 75, 250 ppm 농도로 각각 처리한 양성대조군으로 분류하였다. 즉 24-well 플레이트에 세포를 1 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 접종하고 하루 동안 배양하였다. 그 후 100nM의 a-MSH(mealanocyte stimulating hormon : 멜라닌세포 자극 호르몬)가 포함된 새 배지로 교환한 후, 시료를 2.5, 7.5, 25, 75 250 ppm 농도로 처리하여 72 시간 배양하였다. 72시간 후 배지에 존재하는 멜라닌 양을 400 nm에서 흡광도을 측정하여, 상기 분획물의 농도별 멜라닌 저해활성을 측정하여 IC₅₀ 값을 계산하였다.

그 결과, 하기 표 1 및 도 2에서 보는 바와 같이 IB2 및 IB3 화합물은 코직에씨드(Kojik acid, KA) 및 선복화 추출물에 비해 현저한 멜라닌 저해활성을 나타내었다(표 1 및 도 2) 따라서, 본 발명의 IB2 및 IB3의 락톤계 화합물은 모두 우수한 멜라닌 합성 저해 활성을 가지며, 상기 활성은 선복화 추출물에 비해 현저히 우수한 것을 알 수 있다.

	메탄올 추출물	KA	IB2	IB3
IC50 (ppm)	250	36.576	12.25	6.38

<실험예 2> 세포독성 분석

<2-1> 선복화 추출물 및 분리한 화합물의 세포독성 측정

선복화 추출물 및 분리한 화합물을 미백용 조성물로 사용될 수 있는지 알아보기 위해, 세포독성을 조사하였다. 우선, 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 100 U/㎖ 페니실린이 첨가된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 멜라노마 세포주인 B16를 혼합하여 24 웰 플레이트에 1 × 10⁵ 세포/웰의 밀도로 접종하였다. 그런 다음, 선복화 메탄올 추출물, IB2 및 IB3 화합물을 각각 2.5, 7.5, 25, 75, 250 ppm 농도로 첨가하고 24시간 동안 배양하였다. 음성대조군으로는 시료를 처리하지 않은 군을 사용하였으며 양성 대조군으로 코직에씨드(Kojic acid, KA)을 2.5, 7.5, 25, 75, 250 ppm 농도로 각각 처리한 군을 사용하였다. 24시간 후, 5 /의 MTT(3-(4,5-디메틸-2-티아졸릴)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드) 시약을 10 씩 처리하여 37에서 4시간 동안 추가배양하였다. 그 후, 배지 및 MTT 시약을 제거한 후, 1 의 디메틸설폭사이드(DMSO)를 첨가하여 발색정도를 575 에서 흡광도를 측정하였다. 이를 3회 반복한 후, 통계처리하여 평균값을 구하였다.

그 결과, 도 3에서 보는 바와 같이 메탄올 추출물, IB2 및 IB3 화합물은 250 ppm의 농도에서도 세포독성을 거의 나타내지 않았다(도 3).

따라서, 본 발명의 IB2 및 IB3 화합물은 세포에 독성을 유발하지 않아 인체에 안전하게 사용할 수 있음을 알 수 있다.

한편, 본 발명의 화합물들은 목적에 따라 여러 형태로 제형화가 가능하다. 하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

<제제예 1> 유연 화장수의 제조

정제수에 부틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유, 베타인, 구연산, 구연산나트륨 및 방부제를 첨가하여 교반한 후 용해시킨 다음, 에탄올에 향료를 넣어 용해시킨 혼합물을 첨가하였다. 여기에 본 발명의 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone)을 가하여 충분히 교반한 후, 숙성시켜 실리마린 함유 유연 화장수를 제조하였다. 하기 표 2에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤	50.0
부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	5.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화 피마자유	0.2
에탄올	5.0
베타인	2.0
구연산	0.02
구연산 나트륨	0.06
방부제	미량
향료	미량
정제수	미량

<제제예 2> 영양 화장수의 제조

본 발명의 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 방부제 및 정제수를 70 내지 75 ℃에서 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 내지 80℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 소르비탄스테아레이트, 포리소르베이트 60, 글리세릴스테아레이트 및 스테아릴글리세레티네이트 혼합물을 가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45℃정도로 냉각하면서 향료를 첨가하여 교반한 다음, 30℃까지 냉각한 후 숙성시켜 영양화장수를 제조하였다. 하기 표 3에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤	40.0
부틸렌 글리콜	8.0
글리세린	5.0
스쿠알란	10.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.0
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시레티네이트	0.2
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
방부제	미량
향료	미량
정제수	미량

<제제예 3> 에센스의 제조

시토 시테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 시토 시테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 본 발명의 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone), 디세틸포스페이트, 농글리세린 및 정제수 혼합 용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 카르복시비닐폴리머, 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시켜 에센스를 제조하였다. 하기 표 4에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤	10.0
시토 스테로	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세라마이드	0.7
세테아레스-4	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	0.5
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	미량

상기에서 보는 바와 같이, 본 발명의 락톤계 화합물들은 멜라닌 생성 억제 효능이 우수하면서 안정성도 높으므로 피부 미백용 약학적 조성물 또는 화장료 조성물 개발에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 선복화로부터 분리된 화합물을 분리하는 과정을 나타내는 개요도이다.

도 2는 선복화 추출물 및 분리한 화합물의 멜라닌 합성 저해 효과를 나타낸 그래프이다.

도 3은 선복화 추출물 및 분리한 화합물의 세포독성 정도를 나타낸 그래프이다.

Claims (8)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물:

   [화학식 1]

   

   여기서, R은 수소, 아세틸기, 또는 C₁-C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.
2. 제 1항에 있어서, 상기 락톤계 화합물은 하기 화학식 2로 표시되는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone)인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 약학적 조성물:

   [화학식 2]

   

   .
3. 제 1항에 있어서, 상기 락톤계 화합물은 하기 화학식 3으로 표시되는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 약학적 조성물:

   [화학식 3]

   

   .
4. 제 1항에 있어서, 상기 화합물은 선복화(Inula britannica var. linariifolia (Turcz.) Regel)로부터 분리된 것을 특징으로 하는 피부 미백용 약학적 조성물.
5. 하기 화학식 1로 표시되는 락톤(lactone)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물:

   [화학식 1]

   

   여기서, R은 수소, 아세틸기, 또는 C₁-C₄ 직쇄 또는 측쇄 알킬기이다.
6. 제 5항에 있어서, 상기 락톤계 화합물은 하기 화학식 2로 표시되는 1-O-아세틸-4R,6S-브리타닐락톤(1-O-acetyl-4R,6S-britannilactone)인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물:

   [화학식 2]

   

   .
7. 제 5항에 있어서, 상기 락톤계 화합물은 하기 화학식 3으로 표시되는 1-하이드록시-4R,6S-브리타닐락톤(1-hydroxy-4R,6S-britannilactone)인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물:

   [화학식 3]

   

   .
8. 제 5항에 있어서, 상기 화합물은 선복화(Inula britannica var. linariifolia (Turcz.) Regel)로부터 분리된 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.

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