KR20240058151A - 비만 세포 관련 장애의 치료 - Google Patents

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KR20240058151A
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박상규
김광혁
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Abstract

비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 수반하는 방법 및 용도가 본원에 제공된다.

Description

비만 세포 관련 장애의 치료
본 개시내용은 비만 세포 관련 장애의 치료에 관한 것이다.
비만 세포는 신체 전체에 걸쳐 결합 조직에서 발견되는 면역 세포이다. 비만 세포는 다중 메카니즘을 통해 박테리아, 바이러스 및 기생충 감염에 대한 감염성 질환에서 보호 역할을 한다. 비만 세포의 보호 역할에도 불구하고, 과도한 증식 및 비정상적인 활성화는 다양한 비만 세포 질환을 유발한다. 대부분의 비만 세포 질환은 IgE-매개된 탈과립화에 의해 유발된다. 예를 들어 천식, 만성 자발성 두드러기 (CSU), 알러지성 비염 (AR), 아토피성 피부염 (AD), 음식물 알러지, 및 아나필락시스를 비롯한 알러지성 질환은 가장 흔한 비만 세포 질환이다.
비만 세포 탈과립화를 억제하는 항-IgE 모노클로날 항체 (예를 들어, 오말리주맙 및 리겔리주맙)는 알러지성 천식 및 CSU의 치료를 위해 개발되었고 식품의약국 (Food and Drug Administration)에 의해 승인되었다. 오말리주맙의 작용 메카니즘은 순환 IgE를 중화시키고 FcεRI 발현을 감소시킴으로써 탈과립화를 억제하는 것이다. 그러나, 오말리주맙은 비만 세포 질환의 근본적인 원인일 수 있는 비만 세포의 수를 감소시킬 수 없기 때문에 한계가 있다 (예를 들어, [Beck LA, et al., J Allergy Clin Immunol 114:527-30] 참조). 따라서, 오말리주맙 치료를 위해서는 2 또는 4주 간격으로 반복되는 연속 투여가 필요하다 (IgE 수준 및 체중에 따라 피하로 4주마다 150-300 mg 또는 2주마다 225-375 mg) (예를 들어, [Easthope S et al., (2001) Drugs 61:253-60] 참조). 이는 또한 오말리주맙이 비만세포증 및 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS)에서 불충분한 효능을 갖는 이유이다 (예를 들어, [Weiler CR (2019) J Allergy Clin Immunol Pract 7:2396-2397] 참조).
결과적으로, 비만 세포 관련 장애를 효과적으로 관리하거나 또는 치료하는 요법이 필요하다.
항-IgE 항체의 한계를 극복하기 위해, 본 개시내용은 비만 세포의 증식 및 탈과립화 둘 다를 억제할 수 있는 치료 항체를 개발하는 것을 목적으로 하였다. 본 개시내용은 인간 c-Kit의 특이적 도메인에 결합하는 항체가 비만 세포의 증식 및 이동, 및 줄기 세포 인자 (SCF)에 의한 시토카인 분비의 조절을 억제한다는 것을 나타낸다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 인간 c-Kit의 면역글로불린-유사 ("Ig-유사") 도메인 D2 및 D3에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체를 사용하여 비만 세포-관련 장애 및/또는 그의 하나 이상의 증상의 치료, 예방, 관리 또는 호전에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 하나 이상의 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방, 관리 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법에서 사용하기 위한, 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 의약의 제조를 위한, 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 제약 조성물에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 인간 c-Kit 에피토프는 서열식별번호(SEQ ID NO): 13의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 11 및/또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합한다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함할 수 있거나 또는 CDR의 변이체를 포함할 수 있고, CDR의 변이체는 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체는 2가 단일특이적 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체는 인간화 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체는 인간 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체는 네이키드 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 대상체는 인간일 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량은 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg일 수 있다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애는 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애는 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로는 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나일 수 있다.
본원에 기재된 약제, 방법, 제약 조성물, 사용을 위한 항체, 및/또는 항체의 용도의 비제한적인 실시양태가 하기에 제시된다:
1. 하나 이상의 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방, 관리 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법.
2. 실시양태 1에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁하는 것인 방법.
7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하거나 또는 CDR의 변이체를 포함하고, CDR의 변이체가 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함하는 것인 방법.
8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 것인 방법.
9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 방법.
10. 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 것인 방법.
11. 실시양태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있는 것인 방법.
12. 실시양태 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 2가 단일특이적 항체인 방법.
13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 인간화 항체인 방법.
14. 실시양태 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 네이키드 항체인 방법.
15. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
16. 실시양태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량이 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg인 방법.
17. 실시양태 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
18. 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
19. 실시양태 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로가 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나일 수 있는 것인 방법.
20. 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 제약 조성물.
21. 실시양태 20에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 제약 조성물.
22. 실시양태 20 또는 21에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 것인 제약 조성물.
23. 실시양태 20 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 제약 조성물.
24. 실시양태 20 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 제약 조성물.
25. 실시양태 20 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁하는 것인 제약 조성물.
26. 실시양태 20 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하거나 또는 CDR의 변이체를 포함하고, CDR의 변이체가 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함하는 것인 제약 조성물.
27. 실시양태 20 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 것인 제약 조성물.
28. 실시양태 20 내지 27 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제약 조성물.
29. 실시양태 20 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 것인 제약 조성물.
30. 실시양태 20 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있는 것인 제약 조성물.
31. 실시양태 20 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 항체가 2가 단일특이적 항체인 제약 조성물.
32. 실시양태 20 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간화 항체인 제약 조성물.
33. 실시양태 20 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 항체가 네이키드 항체인 제약 조성물.
34. 실시양태 20 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 제약 조성물.
35. 실시양태 20 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 유효량이 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg인 제약 조성물.
36. 실시양태 20 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
37. 실시양태 20 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
38. 실시양태 20 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로가 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나일 수 있는 것인 제약 조성물.
39. 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법에서 사용하기 위한, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
40. 실시양태 39에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
41. 실시양태 39 또는 40에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
42. 실시양태 39 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
43. 실시양태 39 내지 42 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
44. 실시양태 39 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
45. 실시양태 39 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하거나 또는 CDR의 변이체를 포함하고, CDR의 변이체가 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
46. 실시양태 39 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
47. 실시양태 39 내지 46 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
48. 실시양태 39 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
49. 실시양태 39 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
50. 실시양태 39 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 2가 단일특이적 항체인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
51. 실시양태 39 내지 50 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 인간화 항체인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
52. 실시양태 39 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체가 네이키드 항체인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
53. 실시양태 39 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
54. 실시양태 39 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 유효량이 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
55. 실시양태 39 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
56. 실시양태 39 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
57. 실시양태 39 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로가 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나일 수 있는 것인 사용을 위한 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
58. 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 의약의 제조를 위한, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
59. 실시양태 58에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 또는 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
60. 실시양태 58 또는 59에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
61. 실시양태 58 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
62. 실시양태 58 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
63. 실시양태 58 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
64. 실시양태 58 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하거나 또는 CDR의 변이체를 포함하고, CDR의 변이체가 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
65. 실시양태 58 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
66. 실시양태 58 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
67. 실시양태 58 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
68. 실시양태 58 내지 67 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
69. 실시양태 58 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 항체가 2가 단일특이적 항체인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
70. 실시양태 58 내지 69 중 어느 하나에 있어서, 항체가 인간화 항체인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
71. 실시양태 58 내지 70 중 어느 하나에 있어서, 항체가 네이키드 항체인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
72. 실시양태 58 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
73. 실시양태 58 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 유효량이 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
74. 실시양태 58 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
75. 실시양태 58 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
76. 실시양태 58 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로가 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나일 수 있는 것인 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
77. 실시양태 39 내지 57 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
78. 실시양태 39 내지 57 중 어느 하나의 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 실시양태 20-38 중 어느 하나의 제약 조성물을 포함하는 키트.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 c-Kit 리간드로도 공지된 줄기 세포 인자 (SCF)의 결합을 차단함으로써 c-Kit 신호전달 (예를 들어, c-Kit의 인산화 경로)을 억제할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 c-Kit 신호전달을 억제함으로써 비만 세포에서 증식, 이동 및 탈과립화를 저해할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 알러지성 증상을 악화시킬 수 있는 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자, 혈관 내피 성장 인자, C-C 모티프 케모카인 리간드 2, 뇌-유래된 신경영양 인자, 및 보체 성분 C5/C5a를 비롯하여 이로 제한되지 않는 프로-염증성 시토카인의 분비를 저해할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 비만 세포 질환을 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
도 1은 LAD2 세포에서 2G4 및 4C9 항체 결합의 유동 세포분석법 결과를 도시한다. 도 1은 2G4 및 4C9 항체가 LAD2 세포의 세포 표면 상의 c-Kit에 결합한다는 것을 입증한다.
도 2a 및 2b는 LAD2 세포에서 c-Kit의 2G4 및 4C9 항체 억제의 웨스턴 블롯 결과를 도시한다. 도 2a 및 2b는 2G4 및 4C9 항체가 LAD2 세포에서 SCF-매개된 c-Kit 활성화를 억제한다는 것을 입증한다.
도 3a 및 3b는 세포 증식 검정의 결과를 도시한다. 도 3a 및 3b는 2G4 항체가 LAD2 세포에서 세포 증식을 억제한다는 것을 입증한다. 도 3a 및 3b에서, 흑색 점선 (100%)은 7일째에 SCF 및 항체가 없는 웰에서 정규화된 세포 카운트를 나타낸다.
도 4는 이동 검정의 결과를 도시한다. 도 4는 2G4 항체가 LAD2 세포에서 세포 이동을 억제한다는 것을 입증한다. 모든 결과는 3회 독립 실험의 평균 ± SD를 나타낸다. * SCF-/항체-에 비해 및 # SCF+/항체-에 비해. * P < 0.05, 및 # P < 0.05 (스튜던트(Student) 양측 t-검정).
도 5a, 5b, 5c 및 5d는 비만 세포 탈과립화 검정의 결과를 도시한다. 도 5a, 5b 및 5c는 2G4 항체가 민감화되지 않은, IgE-민감화 및 IFN-γ-민감화 LAD 세포에서 항체-매개된 비만 세포 탈과립화를 유발하지 않지만, 4C9 항체가 탈과립화를 유발한다는 것을 입증한다. 도 5d는 2G4 항체가 SCF에 의해 증강된 IgE-매개된 탈과립화를 억제한다는 것을 입증한다. 모든 결과는 3회 독립 실험의 평균 ± SD를 나타낸다. *, **, 및 *** 비처리에 비해; #, ##, 및 ### SCF-/스트렙타비딘-에 비해; §, §§, 및 §§§ SCF+/스트렙타비딘-에 비해; †, ††, 및 ††† SCF-/스트렙타비딘+에 비해; 및 ‡, ‡‡, 및 ‡‡‡ SCF+/스트렙타비딘+에 비해. * P < 0.05, ** P < 0.01, 및 *** P < 0.001; # P < 0.05, ## P < 0.01, 및 ### P < 0.001; § P < 0.05, §§ P < 0.01, 및 §§§ P < 0.001; † P < 0.05, †† P < 0.01, 및 ††† P < 0.001; 및 ‡ P < 0.05, ‡‡ P < 0.01, 및 ‡‡‡ P < 0.001 (던넷(Dunnett) 사후-검정과 함께 일원 ANOVA).
도 6은 시토카인-방출 검정의 결과를 도시한다. 도 6은 2G4 항체가 시토카인 분비의 조절을 억제한다는 것을 입증한다. 도 6에서, 결과는 3회 독립 실험의 평균 ± SD를 나타낸다. *, **, 및 *** IgE + 비히클에 비해; #, ##, 및 ### IgE + 스트렙타비딘에 비해; §, §§, 및 §§§ IgE + 스트렙타비딘/SCF에 비해. * P < 0.05, ** P < 0.01, 및 *** P < 0.001; # P < 0.05, ## P < 0.01, 및 ### P < 0.001; 및 § P < 0.05, §§ P < 0.01, 및 §§§ P < 0.001 (스튜던트 양측 t-검정).
도 7은 시토카인-방출 검정의 결과를 도시한다. 도 7은 2G4가 시토카인 분비의 조절을 억제한다는 것을 입증한다. CCL5, M-CSF 및 IL-2를 비롯한 특정 시토카인은 SCF에 의해 감소되었고, 시토카인 방출의 감소는 2G4에 의해 억제되었다 (도 7). *, **, 및 *** IgE + 비히클에 비해; #, ##, 및 ### IgE + 스트렙타비딘에 비해; §, §§, 및 §§§ IgE + 스트렙타비딘/SCF에 비해. * P < 0.05, ** P < 0.01, 및 *** P < 0.001; # P < 0.05, ## P < 0.01, 및 ### P < 0.001; 및 § P < 0.05, §§ P < 0.01, 및 §§§ P < 0.001 (스튜던트 양측 t-검정).
본 개시내용의 다양한 실시양태 또는 실시예는 본 출원의 예시 및/또는 설명의 목적을 위한 것이며, 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 본 개시내용은 본 출원에 기재된 각각의 실시양태 또는 실시예의 다양한 변형, 등가물 및/또는 대안, 및/또는 본 출원에 기재된 각각의 실시양태 또는 실시예의 모두 또는 일부의 임의의 가능한 조합을 포함한다. 본 개시내용의 권리 범위는 하기 제시된 다양한 실시양태 또는 실시예, 또는 실시양태 또는 실시예의 구체적인 설명으로 제한되지 않는다.
본 출원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 달리 정의되지 않는다면 일반적으로 본 개시내용이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 일반적인 의미를 갖는다. 본 출원에서 사용된 모든 용어는 본 개시내용의 기재 및/또는 설명의 목적으로 선택되며, 본 개시내용에 따른 권리 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 개시내용의 조성물 및 방법을 기재하고/거나 설명하는데 있어서 추가의 지침을 제공하기 위해 특정 용어가 본 출원에서 논의된다.
I. 정의
본 개시내용에서 사용될 때마다, 단수 형태 및 단수 단어는 문맥상 달리 명시되지 않는다면 복수형을 포함하고, 청구항에 제시된 단수 형태 및 단어에도 동일하게 적용된다. 예를 들어, "화합물"은 복수개의 이러한 화합물을 포함하고, "화합물 A"는 복수개의 화합물 A를 포함한다.
용어 "및/또는"은 항목 중 임의의 하나 이상, 항목의 임의의 조합, 또는 이 용어가 연관된 모든 항목을 의미한다. 용어 "함유하는", "함유하다", "포함하는", "포함하다", "갖는", "갖다" 또는 이들의 변형은 용어 "포함하는"과 유사한 방식으로 포괄적으로 해석된다.
본 출원에 인용된 모든 범위는 임의의 가능한 모든 하위 범위 및 그의 하위 범위의 조합을 포함할 수 있다. 인용된 범위에는 범위 내의 각각의 구체적인 값, 정수 또는 소수가 포함된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 임의의 인용된 범위가 인용된 범위의 1/2, 1/3, 1/4, 1/5 또는 1/10을 비롯하여 이로 제한되지 않는 그의 하위 범위를 충분히 기재하고/거나 가능하게 한다는 것을 용이하게 이해할 수 있다.
용어 "초과", "적어도", "이상", "미만" 등은 인용된 숫자를 포함하며, 상기 용어는 상기 논의된 하위 범위로 나누어질 수 있는 범위를 지칭한다. 범위에 대해 인용된 구체적인 값은 단지 예시의 목적을 위한 것이고, 제한적인 것으로 의도되지 않으며, 이들은 범위 내의 다른 값을 배제하지 않는다.
달리 나타내지 않는다면, 용어 "약" 및 "대략"은 일반적으로 관련 기술분야의 기술자에게 널리 공지된 바와 같이 인용된 범위에 근접한 값 또는 허용가능한 정도의 오차 내의 값을 포함한다. 허용가능한 정도의 오차는 측정치의 성질 또는 정확도의 관점에서 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, 허용가능한 정도의 오차는 조성물 또는 방법 또는 실시양태의 기능성의 관점에서 동등성을 기반으로 하여 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용에 제시된 수치 값 또는 범위의 맥락에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 제공된 값의 ±25%, ±20%, ±15%, ±10%, ±9%, ±8%, ±7%, ±6%, ±5%, ±4%, ±3%, ±2% 또는 ±1%의 변동을 지칭할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 특히 생물학적 시스템에서, 용어 "약" 및 "대략"은 주어진 값의 9배, 8배, 7배, 6배, 5배, 4배, 3배 또는 2배 이내인 한 자릿수 내의 값을 의미할 수 있다. 본 출원에 제공된 모든 수치적 양은 달리 명시되지 않는다면 근사치이다. 추가로, 이들 양은 본질적으로 그들의 측정으로부터 필연적으로 발생하는 변동성을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체" 및 "면역글로불린" 및 "Ig"는 관련 기술분야의 용어이고, 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 항원에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 갖는 분자를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "항원"은 에피토프를 함유하는 모이어티 또는 분자이며, 따라서 또한 항체에 의해 특이적으로 결합된다. 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 항체가 결합하는 항원은 c-Kit (예를 들어, 인간 c-Kit), 또는 그의 단편, 예를 들어 c-Kit (예를 들어, 인간 c-Kit)의 세포외 도메인 또는 c-Kit (예를 들어, 인간 c-Kit)의 D2 및/또는 D3 영역이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역", "항원 결합 단편" 및 유사한 용어는 항원과 상호작용하고 항원에 대한 그의 특이성을 항체 분자에 부여하는 아미노산 잔기 (예를 들어, 상보성 결정 영역 (CDR))를 포함하는 항체 분자의 일부를 지칭한다. 항원 결합 영역은 임의의 동물 종, 예컨대 설치류 (예를 들어, 마우스, 래트 또는 햄스터) 및 인간으로부터 유래될 수 있다. 항체 분자의 CDR은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 Fc 수용체와의 상호작용을 나타내거나 또는 그에 기여하는 항체 부분, 예를 들어 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복실 말단 부분을 지칭한다. 상기 용어는 면역글로불린 가변 도메인에 비해 일반적으로 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "에피토프"는 관련 기술분야의 용어이고, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국부 영역을 지칭한다. 에피토프에 기여하는 영역 또는 폴리펩티드는 폴리펩티드의 연속된 아미노산일 수 있거나 또는 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 연속되지 않은 영역으로부터 함께 나올 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "중쇄"는 항체와 관련하여 사용될 때 불변 도메인의 아미노산 서열을 기반으로 하는 임의의 별개의 유형, 예를 들어 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ) 및 뮤 (μ)를 지칭하며, 각각 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 부류를 생성하고, IgG의 하위 부류, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 중쇄는 인간 중쇄이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "면역특이적으로 결합한다", "면역특이적으로 인식한다", "특이적으로 결합한다" 및 "특이적으로 인식한다"는 항체의 맥락에서 유사한 용어이고, 항원 (예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자를 지칭하며, 이러한 결합은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해된다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 예를 들어 면역검정, 비아코어(Biacore)™, 키넥사(KinExA) 3000 장비 (사피다인 인스트루먼츠(Sapidyne Instruments), 아이다호주 보이시) 또는 관련 기술분야에 공지된 다른 검정에 의해 결정되는 바와 같이 일반적으로 보다 낮은 친화도로 다른 펩티드 또는 폴리펩티드에 결합할 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 항원에 면역특이적으로 결합하는 분자는 분자가 또 다른 항원에 결합할 때의 Ka보다 적어도 2 로그, 2.5 로그, 3 로그, 4 로그 또는 그 초과인 Ka로 항원에 결합한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 항원에 면역특이적으로 결합하는 분자는 다른 단백질과 교차 반응하지 않는다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 항원에 면역특이적으로 결합하는 분자는 다른 비-KIT 단백질과 교차 반응하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, "단리된" 또는 "정제된" 항체에는 항체가 유래된 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포 물질 또는 다른 오염 단백질이 실질적으로 없거나, 또는 화학적으로 합성될 때의 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용될 때 임의의 별개의 유형, 예를 들어 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파 (κ) 또는 람다 (λ)를 지칭한다. 경쇄 아미노산 서열은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 구체적인 실시양태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "모노클로날 항체"는 상동성인 또는 실질적으로 상동성인 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 각각의 모노클로날 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 용어 "모노클로날"은 항체의 임의의 특정한 제조 방법으로 제한되지 않는다. 일반적으로, 모노클로날 항체의 집단은 세포, 세포 집단, 또는 세포주에 의해 생성될 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 본원에서 사용된 바와 같이, "모노클로날 항체"는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포 (예를 들어, 재조합 항체를 생성하는 숙주 세포)에 의해 생성된 항체이며, 항체는 예를 들어 ELISA 또는 관련 기술분야에서 또는 본원에 제공된 실시예에서 공지된 다른 항원-결합 또는 경쟁적 결합 검정에 의해 결정되는 바와 같이 c-Kit 에피토프 (예를 들어, 인간 c-Kit의 D2 및/또는 D3의 에피토프)에 면역특이적으로 결합한다. 본원에 기재된 모노클로날 항체는 예를 들어 [Kohler et al.; Nature, 256:495 (1975)]에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나 또는 예를 들어 본원에 기재된 기술을 이용하여 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클로날 세포주 및 그에 의해 발현된 모노클로날 항체의 다른 제조 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어, [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조). 구체적인 실시양태에서, 모노클로날 항체는 그의 항원 결합 영역이 동일한 에피토프에 대해 특이적인 단일특이적 항체이다. 더 구체적인 실시양태에서, 모노클로날 단일특이적 항체는 1가 (1개의 항원 결합 영역을 가짐) 또는 다가 (1개 초과의 항원 결합 영역을 가짐), 예를 들어 2가 (2개의 항원 결합 영역을 가짐)일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "네이키드 항체"는 또 다른 작용제 또는 분자 (예를 들어, 표지 또는 약물), 펩티드 또는 폴리펩티드에 연결되거나, 융합되거나 또는 접합되지 않은 항체를 지칭한다. 구체적인 실시양태에서, 포유동물 숙주 세포에 의해 발현된 네이키드 항체는 숙주 세포의 글리코실화 기구, 예를 들어 글리코실화 효소에 의해 글리코실화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 네이키드 항체가 그의 자체 글리코실화 기구, 예를 들어 글리코실화 효소를 갖지 않는 숙주 세포에 의해 발현될 때에는 글리코실화되지 않는다. 특정 실시양태에서, 네이키드 항체는 전체 항체이고, 다른 실시양태에서, 네이키드 항체는 전체 항체의 항원 결합 단편, 예컨대 Fab 항체이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "폴리클로날 항체"는 항원 또는 항원들 내의 동일한 및 상이한 에피토프에 대해 지정된 다양한 상이한 항체를 포함하는 항체 집단을 지칭한다. 폴리클로날 항체의 생성 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, [Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York] 참조).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 단리되거나, 제조되거나, 발현되거나 또는 생성된 인간 항체, 예컨대 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉 및/또는 트랜스염색체성인 동물 (예를 들어, 마우스, 토끼, 염소 또는 소)로부터 단리된 항체 (예를 들어, [Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295] 참조), 또는 생성을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해, 예를 들어 합성, 인간 면역글로불린 서열을 코딩하는 DNA 서열의 유전자 조작, 또는 인간 면역글로불린을 코딩하는 서열, 예를 들어 인간 면역글로불린 유전자 서열을 이러한 다른 서열로 스플라이싱을 통해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 재조합 인간 항체의 아미노산 서열은 재조합 항체의 중쇄 가변 영역 ("VH") 및/또는 경쇄 가변 영역 ("VL")의 아미노산 서열이 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 그와 관련이 있지만 생체 내에서 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열이도록 변형되었다. 비제한적인 예로서, 재조합 인간 항체는 몇몇 인간 서열 단편을 재조합 인간 항체의 복합 인간 서열로 조립함으로써 수득될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 일부, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 아미노-말단의 약 110 내지 120개 아미노산 및 성숙한 경쇄에서 약 90 내지 100개 아미노산을 지칭하며, 이는 항체들 사이에서 서열이 광범위하게 상이하고, 그의 특정한 항원에 대한 특정한 항체의 결합 및 특이성으로 사용된다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 이들 영역에 집중되어 있는 반면에, 가변 도메인에서 더욱 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불린다. 어떠한 특정한 메카니즘 또는 이론에 구애되기를 바라는 건 아니지만, 경쇄 및 중쇄의 CDR이 주로 항체와 항원의 상호작용을 담당하는 것으로 믿어진다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, 가변 영역은 영장류 (예를 들어, 비인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 실시양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류 (예를 들어, 비인간 영장류) 프레임워크 영역 (FR)을 포함한다. 비제한적인 예로서, 본원에 기재된 가변 영역은 인간 서열의 2개 이상의 단편을 복합 인간 서열로 조립함으로써 수득된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "교차 경쟁하다" 또는 "교차 경쟁"은 항원 결합 단백질이 표적 상의 동일한 에피토프 또는 결합 부위에 대해 경쟁한다는 것을 의미한다. 이러한 경쟁은 참조 항원 결합 단백질 (예를 들어, 항체 또는 그의 항원-결합 부분)은 시험 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 방지하거나 또는 억제하고, 그 반대의 경우에도 마찬가지인 검정에 의해 결정될 수 있다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정을 이용하여, 시험 분자가 결합을 위해 참조 분자와 경쟁하는지를 결정할 수 있다. 이용될 수 있는 검정의 예에는 고상 직접 또는 간접 방사선 면역검정 (RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (예를 들어, [Stahli et al. (1983) Methods in Enzymology 9:242-253] 참조), 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, [Kirkland et al. (1986) J. Immunol. 137:3614-3619] 참조), 고상 직접 표지된 검정, 고상 직접 표지된 샌드위치 검정, 루미넥스(Luminex) (Jia et al., "A novel method of Multiplexed Competitive Antibody Binning for the characterization of monoclonal antibodies" J. Immunol. Methods (2004) 288, 91-98) 및 표면 플라즈몬 공명 (SPR) (Song et al., "Epitope Mapping of Ibalizumab, a Humanized Anti-CD4 Monoclonal Antibody with Anti-HIV-1 Activity in Infected Patients" J. Virol. (2010) 84, 6935-6942)이 포함된다. 일반적으로, 경쟁 항원 결합 단백질 (또는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편)이 과도하게 존재하는 경우, 이는 공통 항원에 대한 참조 항원 결합 단백질 (또는 참조 항체)의 결합을 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75% 억제할 것이다. 일부 예에서, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 그 초과로 억제된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "참조 항체"는 동일한 에피토프, 중복 에피토프 또는 인접한 에피토프에 결합하는 경쟁 항체의 분석을 위한 비교 기준의 역할을 하는 항체를 의미하며, 에피토프에 대한 결합을 위해 상기 경쟁 항체와 교차 경쟁한다.
본 개시내용에서, 용어 "제약 조성물"은 조성물에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이게 하는 제약 제제의 형태를 지칭할 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 환자에게 투여될 수 있는 하나 이상의 활성 성분을 포함하는 조성물이며, 허용 불가능한 독성 성분을 추가로 포함하지 않는다.
본 개시내용에서, 용어 "제약상 허용가능한"은 일반적으로 안전하고 무독성이며 생물학적으로 또는 달리 바람직한 제약 조성물의 제조에 유용한 물질의 성질을 지칭할 수 있고, 인간 제약적 적용 및/또는 수의학 적용에 허용가능하다. 한 실시양태에서, 용어 "제약상 허용가능한"은 인간 및/또는 동물에서 사용하기 위해 정부 규제 기관에 의해 승인되었거나 또는 승인가능하거나, 또는 미국 약전, 유럽 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 나열된 것을 의미한다.
본 개시내용에서, 용어 "제약상 허용가능한 부형제"는 치료적으로 활성이 아니고 (비활성) 무독성인 임의의 성분을 지칭한다. 한 실시양태에서, 제약상 허용가능한 부형제에는 예를 들어 제약 제품의 제형화에 사용되도록 구성된 결합제, 충전제, 용매, 완충제, 긴장제, 안정화제, 항산화제, 계면활성제 또는 윤활제가 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
본 개시내용에서, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의 제약 조성물의 성분을 지칭하며, 상기 성분은 대상체에 대해 무독성이다. 한 실시양태에서, 약리학적으로 허용가능한 담체에는 예를 들어 완충제, 부형제, 안정화제 또는 보존제가 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
본 개시내용에서, 용어 제약 조성물의 "제약학적 유효 용량", "제약학적 유효량", "투여 용량", "투여량", "치료 유효 용량", "치료 유효량", "유효 용량" 또는 "유효량"은 치료 반응 또는 효과, 원하는 국소 또는 전신 치료 결과 또는 원하는 예방 결과를 달성하는데 충분한 (필요한 기간 동안 투여되는) 제약 조성물의 양을 지칭할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 용어는 대상체에게 투여될 때 본원에 기재된 질환, 상태 또는 장애 (예를 들어, 비만 세포 관련 장애)를 (i) 치료하거나 또는 예방하는, (ii) 그의 하나 이상의 증상을 완화시키거나, 감소시키거나, 중단시키거나, 약화시키거나, 호전시키거나 또는 제거하는, 또는 (iii) 그의 하나 이상의 증상의 개시를 예방하거나 또는 지연시키는 제약 조성물의 양을 지칭한다.
본 개시내용에서, 용어 "대상체" 또는 "환자"는 임의의 포유동물을 지칭한다. "필요로 하는" 것으로 기재된 대상체 또는 환자는 질환의 치료 (또는 예방)을 필요로 하는 것을 지칭한다. 포유동물 (즉, 포유류 동물)에는 인간, 실험실 동물 (예를 들어, 영장류, 래트, 마우스), 가축 (예를 들어, 소, 양, 염소, 돼지), 및 가정용 애완동물 (예를 들어, 개, 고양이, 설치류)이 포함된다. 대상체는 인간일 수 있다. 대상체는 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 당나귀, 염소, 낙타, 마우스, 래트, 기니 피그, 양, 라마, 원숭이, 고릴라 또는 침팬지를 비롯하여 이로 제한되지 않는 비인간 포유동물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다. 대상체는 건강할 수 있거나 또는 임의의 발달 단계에서 비만 세포 관련 장애를 앓을 수 있으며, 임의의 단계는 비만 세포의 증식 또는 축적에 의해 초래되거나 또는 비만 세포 관련 장애의 발달 위험이 있을 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 비만 세포 관련 장애를 갖는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택된 비만 세포 관련 장애를 갖는다.
본 개시내용에서, 용어 대상체에서 질환을 "치료하는" 또는 질환을 갖고 있거나 또는 가진 것으로 의심되는 대상체를 "치료하는"은 질환의 적어도 하나의 증상을 감소시키거나 또는 악화로부터 예방하도록 대상체를 제약학적 치료에 적용하는 것, 예를 들어 하나 이상의 작용제를 투여하는 것을 지칭한다. 따라서, 한 실시양태에서, "치료하는"은 특히 진행의 지연, 관해의 촉진, 관해의 유도, 관해의 증대, 회복의 가속화, 대안적인 치료제의 효능 증가 또는 그에 대한 내성 감소, 또는 이들의 조합을 지칭한다.
본 개시내용에서, "투여"는 광범위하게는 대상체에게 조성물을 투여하는 경로를 지칭한다. 투여 경로의 예에는 경구 투여, 직장 투여, 국소 투여, 흡입 (비강) 또는 주사가 포함된다. 주사에 의한 투여에는 정맥내 (IV), 근육내 (IM) 및 피하 (SC) 투여가 포함된다. 본원에 기재된 제약 조성물은 경구, 비경구, 장내, 정맥내, 복강내, 국소, 경피 (예를 들어, 임의의 표준 패치 사용), 피내, 비강(내), 국소, 비경구, 예컨대 에어로졸, 흡입, 피하, 근육내, 직장(경유), 질, 동맥내, 및 척수강내, 점막경유 (예를 들어, 요도(경유), 질 (예를 들어, 질경유 및 질주위), 이식, 방광내, 폐내, 십이지장내, 위내, 및 기관지내를 비롯하여 이로 제한되지 않는 임의의 효과적인 경로에 의해 임의의 형태로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 제약 조성물은 경구로, 직장으로, 국소로, 방광내로, 배수 림프절 내로 또는 인접하여 주사에 의해, 정맥내로, 흡입 또는 에어로졸에 의해, 또는 피하로 투여된다. 일부 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 제약 조성물은 정맥내로 투여된다.
본 개시내용에서, 용어 "c-Kit"는 줄기 세포 인자 (SCF)의 수용체로도 공지된 제III형 수용체 티로신 키나제를 지칭한다. "c-Kit"는 세포에 의해 천연적으로 발현되는 c-Kit의 임의의 변이체 또는 이소형을 포함한다. 따라서, 본원에 개시된 항-c-Kit 항체는 동일한 종의 상이한 이소형 (예를 들어, 인간 c-Kit의 상이한 이소형)과 교차 반응할 수 있거나, 또는 인간 이외의 종의 c-Kit (예를 들어, 마우스 c-Kit)와 교차 반응할 수 있다. 대안적으로, 항-c-Kit 항체는 인간 c-Kit에 대해 특이적일 수 있고, 다른 종의 c-Kit와 교차 반응하지 않을 수 있다. c-Kit, 또는 그의 임의의 변이체 및 이소형은 그들을 천연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 분리되거나 또는 재조합적으로 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 25개 신호 펩티드를 제외한 인간 c-Kit의 도메인 1 내지 3의 서열 (Q26 내지 D309)은 서열식별번호: 14일 수 있다.
II. 항-c-Kit 항체
비만 세포 관련 장애를 예방하거나, 치료하거나 또는 관리하기 위한 방법에서 사용하기 위해 인간 c-Kit (예를 들어, 인간 c-Kit 수용체의 세포외 도메인 또는 Ig-유사 도메인) 또는 그의 항원 결합 단편에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체가 본원에 제공된다. 본원에 제공된 방법에서 사용하기에 적합한 항-c-Kit 항체는 본원에 기재된 바와 같이 선택될 수 있다.
c-Kit는 세포외 구획에 5가지 면역글로불린-유사 도메인 (D1-D5) 및 세포내 구획에 2가지 키나제 도메인을 갖는다. c-Kit의 리간드인 줄기 세포 인자 (SCF)는 D1-D3에 결합한다 (예를 들어, [Liu H, et al., EMBO J 26:891-901] 참조). SCF 결합은 c-Kit의 동종이량체화를 유도하여, 인산화를 초래한다. 포스포-c-Kit는 포스파티딜이노시톨-3-키나제 (PI3K)-Akt, 미토겐-활성화 단백질 키나제 (MAPK)-ERK, SRC, 야누스(Janus) 키나제 (JAK)-신호 변환인자 및 전사 (STAT) 경로의 활성화제를 비롯한 다중 신호전달 경로를 활성화시켜, 세포 증식, 생존, 분화 및 이동을 일으킨다 (예를 들어, [Lennartsson J et al., (2012) Physiol Rev 92:1619-49] 참조). SCF/c-Kit는 비만 세포에서 성장, 생존 및 분화에 필수적이며, SCF-화학주성을 통해 특이적 조직으로 이동 및 침입을 또한 유도한다 (예를 들어, [Cruse G et al (2014), Immunol Allergy Clin North Am 34:219-37; El-Agamy DS (2012), Eur J Pharmacol 690:1-3; 및 Hundley TR et al (2004), Blood 104:2410-7] 참조). 추가로, SCF는 탈과립화 및 시토카인 생성을 상승작용적으로 증가시킴으로써 염증성 반응을 증강시킨다 (예를 들어, [Okayama Y et al (2006), Immunol Res 34:97-115; 및 Varricchi G et al (2018), Immunol Rev 282:8-34] 참조). 본 개시내용에서, c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하고 c-Kit에 대한 SCF의 결합을 억제하는 항체는 SCF/c-Kit 신호전달을 억제하여, c-Kit의 인산화 및 비만 세포의 증식, 이동 및/또는 탈과립화를 저해하거나 또는 억제하는 것으로 확인되었다. 한 실시양태에서, 본 개시내용에서 항체는 특정 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용에서 항체는 SCF와 c-Kit 사이에 비해 더 큰 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합할 수 있다. 본 개시내용에서 상기 기재된 하나 이상의 특징을 갖는 항체는 c-Kit 인산화 및 비만 세포의 증식, 이동 및/또는 탈과립화를 저해하거나 또는 억제하여, 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하고, 예방하고, 관리하고/거나, 호전시킬 수 있다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 비만 세포에서 c-Kit와 SCF 사이의 결합을 억제하여, SCF/c-Kit 신호전달을 억제하거나 또는 저해할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 c-Kit의 특정 Ig-유사 도메인(들)에 면역특이적으로 결합할 수 있다. 구체적으로, 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 하기 설명된 바와 같이 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 면역특이적으로 결합할 수 있고, 추가로 Ig-유사 도메인 D2 및 D3의 특정 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 상기 기재된 이러한 결합에 의해, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SCF/c-Kit 신호전달을 억제하고; 비만 세포에서 증식, 이동 및 탈과립화를 저해하고/거나; 비만 세포 관련 장애의 알러지성 증상을 악화시킬 수 있는 프로-염증성 시토카인의 분비를 저해할 수 있다. 한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 c-Kit의 특정 에피토프 (예를 들어, 하기에 추가로 기재되는 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3)을 표적으로 하는 항체로 정의될 수 있고, 이러한 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 임의의 항체는 비제한적으로 본 개시내용의 항-c-Kit 항체로서 사용될 수 있고, 그의 범위에 포함될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D1-D3 (서열식별번호: 14), 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및 D3 (서열식별번호: 13), 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2의 R112-R205 영역 (서열식별번호: 11) 및 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D3의 S240-H263 영역 (서열식별번호: 12), 또는 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및 D3의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261, 및 H263의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263에 특이적으로 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 서열식별번호: 14는 신호 펩티드의 25개 서열을 제외한 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D1 내지 D3의 서열 (Q26 내지 D309)이며, 상기 각각의 아미노산의 번호 (예를 들어, R122)는 신호 펩티드의 25개 서열을 포함하는 아미노산의 번호이다. 따라서, 예를 들어, R122는 서열식별번호: 14에서 97번째 아미노산 서열을 의미하고, Y125는 100번째 아미노산 서열을 의미한다. 나머지 아미노산은 동일한 방식으로 해석될 수 있다.
특정 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 c-Kit에 대해 10-11 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값을 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 c-Kit에 대해 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값을 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 인간 c-Kit에 대한 평형 해리 상수 (KD) 값은 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 비롯하여 이로 제한되지 않는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 측정될 수 있다. 구체적으로, 예를 들어 항체 제조를 위해 사용되는 인간 c-Kit인 SR7500DC (라이헤르트(Reichert), 미국)를 PEG (라이헤르트, 미국) 칩 상에 고정시킬 수 있다. 그 후에, 항-c-kit 항체를 농도별로 유동시킨 후, c-Kit에 대한 친화도인 KD 값을 예를 들어 스크러버(Scrubber)2 프로그램을 사용하여 분석할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 상기 KD로 c-Kit에 결합하여, SCF와 c-Kit 사이의 결합을 억제할 수 있거나, 또는 c-Kit 인산화를 억제하거나 또는 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하고, 예방하고, 관리하고/거나 호전시키는 것과 같은 효과를 나타낼 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 상기 KD로 c-Kit에 결합하여, SCF와 c-Kit 사이의 결합을 억제할 수 있거나, 또는 c-Kit 인산화를 억제하거나 또는 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하고, 예방하고, 관리하고/거나, 호전시키는 것과 같은 효과를 나타낼 수 있다.
동일한 에피토프 또는 중복 에피토프를 갖는 항원 결합 단백질은 종종 항원에의 결합에 대해 교차 경쟁할 것이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 인간 c-Kit에의 결합에 대해 참조 항체와 교차 경쟁할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 11 및/또는 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2, 및/또는 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 11 및/또는 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및/또는 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및/또는 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및/또는 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 CDR에 존재하는 1개 또는 2개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함할 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 서열식별번호: 8과 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 항체는 예를 들어 모노클로날 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 단일특이적 항체, 다중특이적 항체 (이중특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍, 인트라바디, 이종접합체 항체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일 쇄 항체 또는 단일 쇄 Fv (scFv), 낙타화 항체, 아피바디, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-연결 Fv (sdFv), 항-이디오타입 (항-Id) 항체 (예를 들어, 항-항-Id 항체 포함), 및 상기 중 임의의 것의 에피토프-결합 단편 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 폴리클로날 항체 집단을 지칭한다. 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 하위 부류 (예를 들어, IgG2a 또는 IgG2b)일 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항체는 IgG 항체, 또는 그의 부류 (예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 하위 부류이다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 보체-의존성 세포독성 (CDC) 및/또는 항체-의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 유발하는 이펙터 기능을 감소시키도록 추가로 변형될 수 있다. 항체 약물 투여는 과민 반응 (HSR)을 유발할 수 있다. 특히, 치료 항체는 인간 비만 세포에서 상향조절되는 Fc 감마 수용체 (FcγR)를 통해 비만 세포 탈과립화를 유도할 수 있으며, IgG에 의한 FcγR의 교차 연결은 FcεRI와 유사하게 탈과립화를 유도한다 (예를 들어, [Caslin HL et al (2018)] 등 참조). 노바티스(Novartis)에 의해 개발된 항-c-Kit 항체-약물 접합체인 LOP628은 HSR로 인해 I상 임상 실험에 실패하였다. 이는 c-Kit-LOP628로부터 형성된 면역 복합체가 인간 비만 세포의 FcγRI-매개된 탈과립화를 증가시켰기 때문이다. IgG 및 항원으로 구성된 거대 면역 복합체가 높은 결합력으로 FcγR에 결합하고, FcγR 교차 연결을 유도하여, 탈과립화를 유발할 수 있는 것으로 보고된다 (예를 들어, [Bournazos S et al (2020), Nat Rev Immunol 20:633-643] 참조). 추가로, IFN-γ가 FcγRI의 발현 및 FcγRI-매개된 탈과립화를 증강시키기 때문에, 이는 알러지 환자에서 특히 치명적일 수 있다 ([L'Italien L et al (2018)] 등). 추가로, 치료 항체의 과도한 이펙터 기능은 IgG의 갈락토실화 및 아푸코실화에 의해 유도될 수 있다. 높은 정도의 갈락토실화가 C1q 결합 및 CDC를 증강시킴으로써 보체 활성화를 증가시킬 수 있고, ADCC에 대해 적당한 효과를 가질 수 있는 것으로 공지되었다 ([D. Reusch et al, Glycobiology 25 (12) (2015) 1325-1334]). 추가로, 코어-푸코스 수준의 감소는 FcγRIIIa에 대한 IgG1의 증가된 친화도로 인해 ADCC의 유의한 증가를 일으킨다 ([X.R. Jiang et al, Nat. Rev. Drug Discov. 10 (2) (2011) 101-111]). 추가로, 푸코스의 결핍은 FcγRIIIa-양성 단핵구 및 대식세포에 의해 매개된 항체-의존성 세포 식균작용을 촉진시킨다 ([S. Herter et al, J. Immunol. 192 (5) (2014) 2252-2260]). 한편, IgG의 증가된 G0F는 FcγR과의 그의 결합 친화도를 감소시켜, ADCC를 감소시킨다 ([G.P. Subedi et al, MAbs 8 (8) (2016) 1512-1524]). 따라서, 원치않는 과민 반응을 감소시키기 위해서는 갈락토실화가 감소되어야 하고, 항체의 푸코실화가 증가되어야 한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 FcγR과의 그의 친화도를 저하시킴으로써 이펙터 기능을 갖지 않도록 또는 이펙터 기능을 감소시키도록 변형될 수 있고, 구체적으로, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체의 Fc 영역은 그의 이펙터 기능을 제거하거나 또는 감소시키도록 변형될 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 형질감염된 세포 또는 숙주 세포로서 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포를 사용함으로써 제조되거나 또는 발현될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항-c-Kit 항체는 2G4 항체일 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 2G4 항체는 완전 인간 항-c-Kit 항체이고, c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하고, SCF 결합을 차단하여, c-Kit 억제 효과를 나타낸다. 2G4의 고도로 푸코실화된 형태의 c-Kit 결합 친화도, 에피토프 맵, c-Kit-양성 세포-결합 능력, 이펙터 기능, 면역원성, 및 결정 구조는 [Kim JO, et al., (2020) Int J Biol Macromol 159:66-78]에 기재되어 있고, 하기 기재된 실시예에서 사용되었다.
III. 치료
한 실시양태에서, 본원에 제공된 하나 이상의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는, 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나 또는 호전시키기 위한 제약 조성물이 본원에 제공된다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 또는 그의 항원-결합 단편에서 사용하기 위한 하나 이상의 항-c-Kit 항체 (예를 들어, 인간화 항체)를 포함하는 조성물, 예컨대 제약 조성물이 본원에 제공된다. 특정한 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시험관 내, 생체 내, 또는 생체 외 사용을 위한 것일 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 항-c-Kit 항체 (예를 들어, 인간화 항체) (또는 그의 항원-결합 단편) 및 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 본원에 제공된 하나 이상의 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나 또는 호전시키는 방법이 본원에 제공된다. 필요로 하는 대상체에는 예를 들어 비만 세포 관련 장애로 진단된 적이 있는 대상체, 또는 치료받은 적이 있는 대상체, 예컨대 이전의 치료에 불응성이었던 대상체가 포함될 수 있다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방 또는 호전을 위한 본원에 제공된 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원-결합 단편의 용도가 본원에 제공된다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나 또는 호전시키는 방법에서 사용하기 위한 본원에 제공된 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 그를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체에게 제2 치료제와 병용하여 항-c-Kit 항체를 투여하는 것을 포함한다. 병용 요법에는 후속적인 작용제가 투여되었을 때 투여된 제1 작용제의 치료 효과가 완전히 사라지지 않도록 활성 화합물을 순차적으로, 동시에 및 별도로 투여하거나 또는 공동-투여하는 것이 포함된다. 특정 실시양태에서, 제2 작용제는 제1 작용제와 공동-제형화될 수 있거나 또는 별도의 제약 조성물로 제형화될 수 있다.
비만 세포 관련 장애
비만 세포 관련 장애의 주요 원인에는 비만 세포의 과도한 증식 및 비정상적인 활성화가 포함된다. 따라서, 비만 세포의 증식 또는 이동의 억제는 장기 또는 조직에서 비만 세포의 수를 감소시킴으로써 비만 세포 관련 장애를 치료할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체 또는 항원-결합 단편은 SCF-매개된 c-Kit 인산화, 비만 세포의 증식 또는 이동을 억제하거나 또는 저해하여, 비만 세포 관련 장애 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 호전시키거나 또는 관리하기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
예를 들어 천식, 만성 자발성 두드러기 (CSU), 알러지성 비염 (AR), 아토피성 피부염 (AD), 음식물 알러지, 및 아나필락시스를 비롯하여 이로 제한되지 않는 알러지성 질환은 가장 흔한 비만 세포 관련 장애이다. 예를 들어, 비만 세포의 수 및 염증성 매개자의 수준이 천식 환자의 기관지에서 증가하는 것으로 밝혀졌다. 기도에서 비만 세포 수의 증가는 증가된 염증 및 면역 리모델링을 유도한다. 면역 리모델링은 다양한 염증성 세포, 예컨대 호산구, 호염기구, 및 헬퍼 T 세포를 동원시켜, 비만 세포 관련 장애의 증상을 추가로 악화시킨다 (예를 들어, [Thomson NC et al (2012), Clin Med Insights Circ Respir Pulm Med 6:27-40] 참조). 천식은 비만 세포에 의해 촉발되는 과도한 염증성 반응으로 인해 폐 및 기도에서 발생하는 알러지성 질환이다 (예를 들어, [Brown JM et al (2008)] 참조). SCF의 수준은 천식 기도를 유의하게 증가시켜, 비만 세포 동원, 증식 및 생존을 유발한다 (예를 들어, [Al-Muhsen SZ et al (2004), Clin Exp Allergy 34:911-6] 참조). 이전의 연구에서, SCF가 기도 과민성을 증가시켰고, 이는 SCF 중화에 의해 억제되었음이 입증되었다 (예를 들어, [Campbell E et al (1999), Am J Pathol 154:1259-65] 참조). 따라서, 비만 세포에서 SCF/c-Kit 신호전달은 천식에 밀접하게 기여하고, 비만 세포에서 SCF/c-Kit 신호전달을 억제할 수 있는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 천식 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
CSU, AR, 및 AD에서, 비만 세포의 축적 및 비만 세포에 의해 방출된 염증성 매개자의 증가된 수준은 이들 질환의 주요 원인이다 (예를 들어, [Min TK et al (2019), Allergy Asthma Immunol Res 11:470-481] 참조). 따라서, 비만 세포 및 염증성 매개자 (예를 들어, 비만 세포에 의해 방출된 시토카인)의 증식 또는 이동을 억제하거나 또는 저해할 수 있는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 CSU, AR, 및 AD, 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
비만 세포 활성화 질환 (MCAD), 예컨대 비만 세포 백혈병 (MCL)에서, 비만 세포 수의 증가가 관찰되었고 (Haenisch B et al (2012), Immunology 137:197-205), MCAD 또는 MCL의 주요 원인은 비만 세포 수의 과도한 증가 또는 그의 비정상적인 활성화이다. 따라서, 비만 세포 및 염증성 매개자 (예를 들어, 비만 세포에 의해 방출된 시토카인)의 증식 또는 이동을 억제하거나 또는 저해할 수 있는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 MCAD (예를 들어, MCL) 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애에는 비만세포증 및 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS)이 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 비만세포증의 주요 원인은 피부 (피부) 또는 다른 장기 (전신성)에서 비정상적인 (신생물성) 비만 세포의 확장 및 축적이며; 이는 다양한 증상, 예컨대 가려움, 두드러기, 혈관 불안정, 두통, 간 비대, 및 아나필락시스성 쇼크를 나타낸다 (예를 들어, [Nedoszytko B et al (2021), Int J Mol Sci 22] 참조). 골수 또는 다른 조직 (일반적으로 피부) 생검에서 비만 세포의 다발성 치밀 침윤 (총계적으로 > 15개 비만 세포)이 비만세포증 진단의 주요 기준 중 하나이기 때문에, 비만 세포의 축적이 비만세포증의 주요 원인임이 명백하다 (예를 들어, [Akin C (2017), J Allergy Clin Immunol 140:349-355] 참조). 이들 비정상적인 비만 세포는 주로 c-Kit의 기능 획득 돌연변이를 보유하고, c-Kit 돌연변이는 비만세포증을 가진 환자의 약 90%에서 발견되었다 (예를 들어, [Chatterjee A et al (2015), Oncotarget 6:18250-64] 참조). MCAS의 원인 및 증상은 전신성 비만세포증의 것과 유사하지만, 비만 세포가 특정 장기에서 축적되지 않는다 (예를 들어, [Frieri M et al (2013), Curr Allergy Asthma Rep 13:27-32] 참조). MCAS는 1개 초과의 장기에서 나타나는 증상 및 주기적으로 나타나는 증상을 특징으로 할 수 있다. 따라서, 비만 세포 및 염증성 매개자 (예를 들어, 비만 세포에 의해 방출된 시토카인)의 증식 또는 이동을 억제하거나 또는 저해할 수 있는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 비만세포증 및 MCAS 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
비만 세포는 다양한 면역 세포를 동원하고 자극하는 다양한 시토카인을 분비한다. 따라서, 비만 세포에 의한 시토카인 분비의 조절은 염증성 반응을 증가시킬 수 있고, 증가된 염증성 반응은 알러지 환자에서 증상을 악화시키는 심각한 요인일 수 있다 (예를 들어, [Velez TE et al (2018), Curr Allergy Asthma Rep 18:30] 참조). 따라서, 비만 세포로부터 분비된 시토카인이 제어되거나 또는 관리될 수 있다면, 하나 이상의 연관된 염증성 반응이 저해될 수 있고, 따라서 비만 세포 관련 장애 환자 또는 알러지 환자의 하나 이상의 증상이 호전되고/거나 관리될 수 있다.
GM-CSF가 호산구의 발달, 기능 및 생존에 필수적인 것으로 공지되어 있다. 천식 및 CSU를 가진 환자의 병변에서 증가된 GM-CSF 수준은 호산구 동원 및 생존을 유도하여, 호산구의 과도한 축적을 일으킨다 (예를 들어, [Altrichter S et al (2020), J Allergy Clin Immunol 145:1510-1516] 참조). 호산구 뿐만 아니라 비만 세포는 만성 및 중증 증상학에서 중요한 역할을 하기 때문에 알러지성 질환에 대한 치료 표적으로 고려된다 (예를 들어, [O'Sullivan JA et al (2020), J Leukoc Biol 108:73-81] 참조). 호산구는 섬유 형성 인자, 예컨대 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 헤파린 결합 표피 성장 인자, IL-4, IL-13, IL-17, 신경 성장 인자, 혈소판 유래된 성장 인자, 및 형질전환 성장 인자-β (TGF-β)를 생성하고 분비하여, 중증 천식의 발달을 유발한다 (예를 들어, [Aceves SS et al (2008), Curr Mol Med 8:350-8] 참조). 따라서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체에 의한 비만 세포로부터 GM-CSF 분비의 억제는 호산구 동원 및 생존을 저해함으로써 비만 세포 관련 장애 또는 알러지성 질환에 대한 상승작용적 활성을 나타낼 수 있다. 추가로, c-Kit는 호산구에서도 발현되며, 호산구에서 SCF/c-Kit 신호전달의 활성화가 FGF-5, FGF-7, 및 TGF-β의 발현을 증강시키는 것으로 보고되었다 (예를 들어, [Dolgachev V et al (2008), Am J Pathol 172:68-76] 참조). 따라서, 비만 세포 불활성화를 통한 호산구 동원의 감소 외에도, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 호산구에서 SCF/c-Kit 신호를 억제함으로써 치료 효과를 직접적으로 나타낼 수 있다.
비만 세포에서 SCF에 의해 분비가 증가되는 다른 시토카인 또한 비만 세포 관련 장애에서 알러지성 반응을 악화시킬 수 있다. VEGF는 혈관 투과성을 증가시킴으로써 염증성 세포의 이동을 촉진시키고, CCL2는 화학주성을 통해 다양한 염증성 세포의 동원을 촉진시킨다 (예를 들어, [Ribatti D et al (2012), Biochim Biophys Acta 1822:2-8] 참조). BDNF는 천식 환자에서 기도 평활근 세포의 증식을 촉진시킴으로써 기관지 수축을 유도하고, C5/C5a는 천식의 병리학적 특징, 예컨대 점액 방출, 평활근 세포의 수축, 증가된 혈관 투과성, 및 염증성 세포의 침윤에 기여한다 (예를 들어, [Khan MA et al (2014), Respir Med 108:543-9] 참조). 한편, 항염증성 반응을 유발할 수 있는 IL-2를 비롯한 몇몇 시토카인은 SCF에 의해 감소된다. IL-2는 면역 항상성을 조절함으로써 알러지성 질환, 예컨대 알러지성 비염 (AR) 및 아토피성 피부염 (AD)을 예방하는 역할을 하는 조절성 T 세포 (Treg)의 기능 및 생존을 촉진시킨다 (예를 들어, [Noval Rivas M et al (2016), J Allergy Clin Immunol 138:639-652] 참조). SCF에 의해 유도된 IL-2 하향조절은 Treg의 활성을 감소시켜, 염증성 반응을 증가시킨다.
따라서, SCF는 비만 세포에 의한 시토카인 분비를 조절할 수 있고, 조절은 주로 다양한 프로-염증성 시토카인의 증가 및 소수의 항염증성 시토카인의 감소로 나타난다. 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 세포 관련 장애 및/또는 그의 하나 이상의 증상의 진행 및 증상을 가속화시키는 비만 세포에서 SCF-매개된 시토카인 조절을 억제함으로써 비만 세포 관련 장애를 치료하고, 예방하고, 호전시키고/거나, 관리하는 효능 또는 효과를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애에는 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애가 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 비만 세포 관련 장애는 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
조성물
본원에 제공된 하나 이상의 항-c-Kit 항체 (예를 들어, 인간화 항체)를 함유하는 치료 제형은 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를 임의적인 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 동결건조된 제형 또는 수성 용액의 형태로 보관을 위해 제조될 수 있다 ([Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.; Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed. (2006) Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.]). 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이고, 완충제, 예컨대 인산염, 시트르산염, 및 다른 유기 산; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 포함될 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에 기재된 것과 같은 제형은 또한 치료할 특정한 징후에 필요한 하나 초과의 활성 화합물 (예를 들어 분자, 예를 들어 본원에 기재된 항체 또는 항체들)을 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제형은 본원에 제공된 항-c-Kit 항체, 및 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보성 활성을 갖는 하나 이상의 활성 화합물을 포함한다. 이러한 분자는 적합하게는 의도된 목적을 위해 효과적인 양으로 조합되어 존재한다.
한 실시양태에서, 생체 내 투여를 위해 사용되는 제형은 멸균성일 수 있다. 이는 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 제약 조성물은 제약상 허용가능한 담체 중에 본원에 제공된 항-c-Kit 항체 (예를 들어, 인간화 항체) 중 하나 이상의 치료 유효량, 및 임의적으로 하나 이상의 추가의 예방제 또는 치료제를 함유한다. 이러한 제약 조성물은 비만 세포 관련 장애, 또는 그의 하나 이상의 증상의 예방, 치료, 관리 또는 호전에 유용하다.
추가로, 본원에 제공된 항-c-Kit 항체는 조성물 중 단독 제약 활성 성분으로서 제형화될 수 있거나 또는 다른 활성 성분 (예컨대 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제)과 조합될 수 있다.
조성물은 본원에 제공된 하나 이상의 항-c-Kit 항체를 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체는 비경구 투여를 위해 멸균 용액 또는 현탁액 중에서 적합한 제약 제제, 예컨대 용액, 현탁액, 분말, 또는 엘릭시르로 제형화된다. 한 실시양태에서, 항체는 경구 투여를 위해 적합한 제약 제제, 예컨대 용액, 현탁액, 정제, 분산성 정제, 환제, 캡슐, 분말, 지속된 방출 제형 또는 엘릭시르로 제형화된다.
이러한 조성물에서, 본원에 제공된 하나 이상의 항-c-Kit 항체는 적합한 제약학적 담체와 혼합된다. 조성물에서 항체 또는 항체들의 농도는 예를 들어 투여시 비만 세포 관련 장애 및/또는 그의 하나 이상의 증상을 치료하거나, 예방하거나, 그로부터 보호하거나, 호전시키거나 또는 관리하는 양의 전달에 효과적일 수 있다.
한 실시양태에서, 조성물은 단일 용량 투여를 위해 제형화된다. 조성물을 제형화하기 위해, 선택된 담체에서 화합물의 중량 분획을 처리된 장애가 완화되거나, 예방되거나, 또는 하나 이상의 증상이 호전되도록 효과적인 농도로 용해시키거나, 현탁시키거나, 분산시키거나 또는 달리 혼합한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 항-c-Kit 항체 (예를 들어, 인간화 항체)는 처리된 환자에 대해 바람직하지 않은 부작용이 없거나 또는 최소의 또는 무시할만한 정도로 치료적으로 유용한 효과를 발휘하는데 충분한 유효량으로 제약상 허용가능한 담체 중에 포함된다.
한 실시양태에서, 치료 유효 용량은 약 0.1 ng/ml 내지 약 50-100 μg/ml의 항체의 혈청 농도를 생성한다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어 매일, 주 2회 또는 3회, 주 1회, 2주마다, 또는 3주마다 투여를 위해 체중 킬로그램당 약 0.001 mg 내지 약 2000 mg의 항체의 용량을 제공한다. 제약 투여 단위 형태는 약 0.01 mg 내지 약 2000 mg, 한 실시양태에서 투여 단위 형태당 약 10 mg 내지 약 500 mg의 항체 및/또는 다른 임의적인 필수 성분을 제공하도록 제조될 수 있다.
본원에 기재된 항-c-Kit 항체는 한 번에 투여될 수 있거나, 또는 시간 간격을 두고 투여되는 수많은 더 작은 용량으로 나뉘어질 수 있다.
항체의 혼합 또는 첨가시, 생성된 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있다. 생성된 혼합물의 형태는 선택된 담체 또는 비히클 중에서 항-c-Kit 항체의 의도된 투여 방식 및 가용성을 비롯한 수많은 인자에 따라 좌우된다.
본원에 기재된 제약 조성물은 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약상 허용가능한 유도체의 적합한 양을 함유하는 단위 투여 형태, 예컨대 멸균 비경구 (예를 들어, 정맥내) 용액 또는 현탁액으로 인간 및 동물, 예컨대 포유동물 (예를 들어, 고양이 또는 개)에게 투여하기 위해 제공된다. 제약 조성물은 또한 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약상 허용가능한 유도체의 적합한 양을 함유하는 단위 투여 형태, 예컨대 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 및 경구 용액 또는 현탁액, 및 유수 에멀젼으로 인간 및 동물, 예컨대 포유동물 (예를 들어, 고양이 또는 개)에게 투여하기 위해 제공된다. 한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체는 단위-투여 형태 또는 다중-투여 형태로 제형화되고 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같이 단위-투여 형태는 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 인간 및 동물 대상체에게 적합하고 개별적으로 포장된 물리적으로 구별된 단위를 지칭한다. 각각의 단위-용량은 필요한 제약학적 담체, 비히클 또는 희석제와 함께 원하는 치료 효과를 생성하는데 충분한 항체의 예정된 양을 함유한다. 단위-투여 형태의 예에는 앰풀 및 시린지 및 개별적으로 포장된 정제 또는 캡슐이 포함된다. 단위-투여 형태는 그의 분획으로 또는 여러 개로 투여될 수 있다. 다중-투여 형태는 분리된 단위-투여 형태로 투여되도록 단일 컨테이너에 포장된 복수개의 동일한 단위-투여 형태이다. 다중-투여 형태의 예에는 바이알, 정제 또는 캡슐의 보틀, 또는 파인트 또는 갤런의 보틀이 포함된다. 따라서, 다중 투여 형태는 포장에서 분리되지 않는 여러 개의 단위-용량이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 하나 이상의 항-c-Kit 항체는 액체 제약 제형 중에 있을 수 있다. 투여가능한 액체 제약 조성물은 예를 들어 상기 정의된 활성 화합물 및 임의적인 제약학적 아주반트를 담체, 예를 들어 물, 식염수, 수성 덱스트로스, 글리세롤, 글리콜, 에탄올 등 중에서 용해시키거나, 분산시키거나 또는 달리 혼합하여, 용액 또는 현탁액을 형성함으로써 제조될 수 있다. 필요한 경우, 투여되는 제약 조성물은 또한 소량의 무독성 보조 물질, 예컨대 습윤화제, 유화제, 가용화제, 및 pH 완충화제 등을 함유할 수 있다.
이러한 투여 형태의 실제 제조 방법은 공지되어 있거나, 또는 관련 기술분야의 기술자에게 자명할 것이며; 예를 들어 [Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.; Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed. (2006) Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.]를 참조한다.
항체를 0.005% 내지 100% 범위로 함유하고 나머지는 무독성 담체로 구성되는 투여 형태 또는 조성물이 제조될 수 있다. 이들 조성물의 제조 방법은 관련 기술분야의 기술자에게 공지되어 있다.
한 실시양태에서, 비경구 투여는 주사를 특징으로 하며, 피하, 근육내 또는 정맥내 또한 본원에서 고려된다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액으로서, 주사하기 전에 액체 중 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태로서, 또는 에멀젼으로서 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 주사제, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제에는 예를 들어 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올이 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 추가로, 필요한 경우, 투여되는 제약 조성물은 또한 소량의 무독성 보조 물질, 예컨대 습윤화제 또는 유화제, pH 완충화제, 안정화제, 가용성 증강제, 및 이러한 다른 작용제를 함유할 수 있다. 다른 투여 경로에는 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여가 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 즉시 주사가능한 멸균 용액, 사용하기 직전에 용매와 즉시 조합되는 멸균 건조 가용성 생성물 (예를 들어, 동결건조된 분말), 피하 정제, 즉시 주사가능한 멸균 현탁액, 사용하기 직전에 비히클과 즉시 조합되는 멸균 건조 불용성 생성물, 및 멸균 에멀젼이 포함된다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내로 투여되는 경우, 적합한 담체에는 생리 식염수 또는 인산염 완충된 식염수 (PBS), 및/또는 증점제 및 가용화제, 예컨대 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 임의의 혼합물을 함유하는 용액이 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
비경구 제제에서 사용되는 제약상 허용가능한 담체에는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장성 작용제, 완충제, 항산화제, 국부 마취제, 현탁화제 및 분산화제, 유화제, 격리제 또는 킬레이팅제, 및/또는 다른 제약상 허용가능한 물질이 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다.
제약학적 담체에는 또한 수혼화성 비히클을 위한 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 프로필렌 글리콜; 및 pH 조정을 위한 수산화나트륨, 염산, 시트르산, 및/또는 락트산이 포함될 수 있다.
한 실시양태에서, 활성 화합물을 함유하는 멸균 수성 용액의 정맥내 또는 동맥내 주입은 효과적인 투여 방식이다. 또 다른 실시양태에서, 활성 물질을 함유하는 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액은 원하는 약리 효과를 생성하기 위해 필요에 따라 대상체에게 주사될 수 있다.
본원에 기재된 항-c-Kit 항체는 미분화된 또는 다른 적합한 형태로 현탁될 수 있다. 생성된 혼합물의 형태는 선택된 담체 또는 비히클 중에서 항-c-Kit 항체의 의도된 투여 방식 및 가용성을 비롯한 수많은 인자에 따라 좌우된다.
다른 실시양태에서, 제약 제형은 용액, 에멀젼 및/또는 다른 혼합물로서 투여를 위해 재구성될 수 있는 동결건조된 분말이다. 이들은 또한 고체 또는 겔로서 재구성되고 제형화될 수 있다.
동결건조된 분말은 적합한 용매 중에 본원에 제공된 항-c-Kit 항체를 용해시킴으로써 제조된다. 일부 실시양태에서, 동결건조된 분말은 멸균성이다. 용매는 분말, 또는 분말로부터 제조된 재구성된 용액의 안정성 및/또는 다른 약리학적 성분을 개선시키는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제에는 덱스트로스, 소르비탈, 프럭토스, 옥수수 시럽, 크실리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 작용제가 포함되나 이로 제한되지 않는다. 용매는 또한 한 실시양태에서 대략 중성 pH의 완충제, 예컨대 시트르산염, 인산나트륨 또는 인산칼륨 또는 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 이러한 다른 완충제를 함유할 수 있다. 용액의 후속적인 멸균 여과에 이어서, 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 표준 조건하의 동결건조는 원하는 제형을 제공한다. 한 실시양태에서, 생성된 용액은 동결건조를 위해 바이알에 분배될 것이다. 각각의 바이알은 항-c-Kit 항체의 단일 용량 또는 다중 용량을 함유할 것이다. 동결건조된 분말은 적절한 조건하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 보관될 수 있다.
이 동결건조된 분말을 주사용수로 재구성하면 비경구 투여에서 사용하기 위한 제형이 제공된다. 재구성을 위해, 동결건조된 분말을 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가한다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따라 좌우된다.
본원에 기재된 항체는 국부 또는 국소 적용, 예컨대 겔, 크림 및 로션의 형태로 피부 및 점막에 국소 적용, 및 수조내 또는 척수내 적용을 위해 제형화될 수 있다. 국소 투여는 경피 전달을 위해 및 또한 점막으로 투여를 위해 또는 흡입 요법을 위해 고려된다. 단독으로 또는 다른 제약상 허용가능한 부형제와 조합하여 활성 화합물의 비강 용액 또한 투여될 수 있다.
본원에 제공된 항체 및 다른 조성물은 또한 치료할 대상체의 특정한 조직, 수용체, 또는 다른 신체 영역을 표적화하도록 제형화될 수 있다. 이러한 여러 표적화 방법은 관련 기술분야의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 이러한 모든 표적화 방법은 본 발명의 조성물에서 사용하기 위해 본원에서 고려된다. 표적화 방법의 비제한적인 예에 대해서는, 예를 들어 미국 특허 번호 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 및 5,709,874를 참조한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체는 골수, 위장관 또는 뇌로 표적화된다 (또는 달리 투여된다). 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체는 혈액-뇌 장벽을 가로지를 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체를 포함하는 조성물은 귀로 표적화될 수 있다.
용량 및 투여
본원에 기재된 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약 조성물을 그를 필요로 하는 대상체 (예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간, 개 또는 고양이)에게 투여하기 위한 용량 및 빈도는 본원에 기재된 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약 조성물의 투여가 부작용을 최소화하면서 효과적이도록 본원에 제공된 비만 세포 관련 장애의 치료 방법에 따라 결정된다. 특정한 대상체에게 투여되는 본원에 기재된 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약 조성물의 정확한 용량은 치료를 필요로 하는 대상체와 관련된 인자에 비추어 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, 고려될 수 있는 인자에는 질환 상태의 중증도, 대상체의 전반적인 건강, 대상체의 연령 및 체중, 식이, 투여 시간 및 빈도, 다른 치료제 또는 약물과의 조합(들), 반응 민감도, 및 요법에 대한 내성/반응이 포함될 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 본원에 기재된 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약 조성물의 투여 용량 및 빈도는 충분한 수준의 항-c-Kit 항체를 제공하기 위해 또는 원하는 효과를 유지하기 위해 시간에 걸쳐 조정될 수 있다.
제형에서 사용되는 정확한 용량은 또한 투여 경로 및 비만 세포 관련 장애의 중증도에 따라 좌우될 것이며, 의사의 판단 및/또는 각각의 환자의 상황에 따라 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체의 경우, 비만 세포 관련 장애를 예방하거나, 그로부터 보호하거나, 관리하거나 또는 치료하기 위해 환자에게 투여되는 용량은 전형적으로 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg 환자 체중이다. 일반적으로, 인간 항체는 외래 폴리펩티드에 대한 면역 반응으로 인해 다른 종으로부터의 항체보다 인간 신체 내에서 더 긴 반감기를 갖는다. 따라서, 인간 항체의 더 낮은 용량 및/또는 덜 빈번한 투여가 종종 가능하다. 추가로, 본원에 기재된 항체의 투여 용량 및 빈도는 변형, 예를 들어 지질화에 의해 항체의 흡수 및 조직 침투를 증강시킴으로써 감소될 수 있다.
한 실시양태에서, 대략 0.001 mg/kg (대상체 체중 kg당 항체 mg) 내지 대략 500 mg/kg의 본원에 기재된 항-c-Kit 항체가 비만 세포 관련 장애를 예방하거나, 그로부터 보호하거나, 관리하거나 또는 치료하기 위해 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체의 유효량은 약 0.01 mg 내지 약 1,000 mg이다. 따라서, 본 개시내용의 제약 조성물은 약 0.001 mg, 약 0.01 mg, 약 0.05 mg, 약 0.1 mg, 약 0.5 mg, 약 1 mg, 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 30 mg, 약 50 mg, 약 100 mg, 약 200 mg, 약 300 mg, 약 400 mg, 약 500 mg, 약 600 mg, 약 700 mg, 약 800 mg, 약 900 mg 또는 약 1,000 mg의 본원에 제공된 항-c-Kit 항체를 단일 용량으로 포함할 수 있다 (이들 숫자 사이의 임의의 값 포함). 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체의 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 하기 효과 중 적어도 1가지, 2가지, 3가지, 4가지 또는 그 초과를 달성하는데 충분한 본원에 기재된 항-c-Kit 항체의 양을 지칭한다: 비만 세포 관련 장애 및/또는 그와 연관된 하나 이상의 증상의 중증도의 감소 또는 호전; 비만 세포 관련 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 지속기간의 감소; 비만 세포 관련 장애의 하나 이상의 증상의 재발의 예방; 비만 세포 관련 장애 및/또는 그와 연관된 하나 이상의 증상의 퇴행; 대상체의 입원 감소; 입원 기간 감소; 비만 세포 관련 장애를 가진 대상체의 생존의 증가; 비만 세포 관련 장애 및/또는 그와 연관된 하나 이상의 증상의 진행의 억제 (예를 들어, 부분 억제); 비만 세포 관련 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 발달 또는 개시의 예방; 비만 세포 관련 장애를 가진 대상체의 생물학적 시편 (예를 들어, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 소변, 또는 임의의 다른 생체액)에서 하나 이상의 염증성 매개자 (예를 들어, 시토카인 또는 인터류킨)의 농도의 감소; 및 관련 기술분야에 널리 공지된 방법, 예를 들어 설문지에 의해 평가되는 삶의 질의 개선. 일부 실시양태에서, 본원에서 사용된 바와 같이 "유효량"은 또한 구체적인 결과 (예를 들어, 세포의 하나 이상의 c-Kit 생물학적 활성의 억제 또는 저해, 예컨대 비만 세포의 증식, 축적, 이동 및/또는 탈과립화의 억제 또는 저해)를 달성하기 위한 본원에 기재된 항체의 양을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체는 필요에 따라, 예를 들어 매주, 격주 (즉, 2주에 1회), 매월, 격월, 3개월마다 등으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-c-Kit 항체의 단일 용량은 비만 세포 관련 장애를 방해하고, 예방하고, 관리하고, 치료하고/거나, 호전시키기 위해 환자에게 1회 이상 투여된다.
특정한 실시양태에서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 제약 조성물은 본원에 제공된 비만 세포 관련 장애의 치료 방법에 따라 대상체에게 주기적으로 투여되며, 항-c-Kit 항체 또는 제약 조성물은 일정 기간 동안 투여된 후, 휴식 기간 (즉, 항-c-Kit 항체 또는 제약 조성물이 일정 기간 동안 투여되지 않음)을 갖는다.
본원에 제공된 방법은 임의의 적합한 경로에 의해 항-c-Kit 항체를 투여하는 것을 수반한다. 투여 경로의 비제한적인 예에는 비경구 투여, 예를 들어 피하, 근육내 또는 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여가 포함된다. 본원에 제공된 방법은 뇌, 척수, 또는 귀 또는 심이 조직을 표적화하는 투여 경로를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 신경계, 예를 들어 중추 신경계를 표적화하는 투여 경로를 포함한다. 본원에 기재된 투여는 본 개시내용의 제약 조성물에 적용될 수 있다.
구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 혈액-뇌 장벽을 가로지르는데 적합한 경로를 통해 항-c-Kit 항체를 투여하는 것을 수반한다.
IV. 제조 물품 및 키트
본 개시내용의 한 실시양태에서, 적합한 포장 내에 본원에 기재된 제약 조성물 (예를 들어, 항-c-Kit 항체)을 포함하는 키트 또는 제조 물품 또한 제공된다. 본원에 기재된 조성물의 적합한 포장은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 바이알 (예컨대 밀봉 바이알), 용기, 앰풀, 보틀, 단지, 가요성 포장 (예를 들어, 밀봉 마일라(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등이 포함된다. 이들 제조 물품은 추가로 멸균되고/거나 밀봉될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 조성물을 포함할 수 있고, 조성물의 사용 방법, 예컨대 본원에 기재된 용도에 대한 지침서(들)을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기재된 키트는 다른 완충제, 희석제, 여과기, 니들, 시린지, 및 본원에 기재된 임의의 방법의 수행 지침을 갖는 포장 삽입물을 비롯하여 상업적인 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기재된 항-c-Kit 항체, 투여에 적합한 제약상 허용가능한 담체, 및 다음 중 하나 이상을 포함한다: 완충제, 희석제, 여과기, 니들, 시린지, 및 투여 수행 지침을 갖는 포장 삽입물.
V. 항체 생성
c-Kit 항원 (예를 들어, c-Kit 에피토프)에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 (예를 들어, 인간 또는 인간화 항체) (또는 그의 항원-결합 단편)은 항체의 합성을 위해 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성에 의해 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 달리 나타내지 않는다면 분자 생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 관련 기술 분야 내의 관련 분야의 통상적인 기술을 이용한다. 이들 기술은 본원에 인용된 참고문헌에 기재되어 있고, 문헌에서 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, [Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]를 참조한다.
예를 들어, 인간화 항체는 CDR-이식 (유럽 특허 번호 EP 239,400; 국제 공개 번호 WO 91/09967; 및 미국 특허 번호 5,225,539, 5,530,101, 및 5,585,089), 베니어링 또는 재포장 (유럽 특허 번호 EP 592,106 및 EP 519,596; [Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814; 및 Roguska et al., 1994, PNAS 91:969-973]), 연쇄 셔플링 (미국 특허 번호 5,565,332), 및 예를 들어 미국 특허 번호 6,407,213, 5,766,886, WO 9317105, [Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002), Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000), Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000), Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997), Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996), Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995), Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995), Sandhu J S, Gene 150(2):409-10 (1994), 및 Pedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)]에 개시된 기술을 비롯하여 이로 제한되지 않는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 미국 특허 공개 번호 US 2005/0042664 A1 (Feb. 24, 2005) 또한 참조하며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
모노클로날 항체는 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기술, 또는 이들의 조합을 이용하는 것을 비롯하여 관련 기술분야에 공지된 다양한 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 관련 기술분야에 공지되고, 예를 들어 [Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)]에 교시된 것들을 비롯한 하이브리도마 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 용어 "모노클로날 항체"는 하이브리도마 기술을 통해 생성된 항체로 제한되지 않는다. 예를 들어, 모노클로날 항체는 재조합 기술, 예를 들어 숙주 세포, 예컨대 포유동물 숙주 세포에 의해 발현된 재조합 모노클로날 항체에 의해 생성될 수 있다.
하이브리도마 기술을 이용하여 특이적 항체를 생성하고 스크리닝하는 방법은 관련 기술분야에서 일상적이며 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 양, 염소, 토끼, 래트, 햄스터 또는 마카크 원숭이를 면역화시켜, 면역화를 위해 사용되는 단백질 (예를 들어, 인간 c-Kit의 세포외 도메인)에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하거나 또는 생성할 수 있는 림프구를 유도한다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 림프구를 골수종 세포와 융합시켜, 하이브리도마 세포를 형성한다 ([Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]). 추가로, RIMMS (반복 면역화 다중 부위) 기술을 이용하여 동물을 면역화시킬 수 있다 ([Kilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381-9], 이는 본원에 참조로 포함됨).
골수종 세포주의 비제한적인 예에는 뮤린 골수종 세포주, 예컨대 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center, 미국 캘리포니아주 샌디에고)로부터 입수가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것들, 및 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection, 미국 매릴랜드주 록빌)으로부터 입수가능한 SP-2 또는 P3X63-Ag8.653 (ATCC CRL-1580) 세포가 포함된다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주 또한 인간 모노클로날 항체의 제조를 위해 기재된 적이 있다 ([Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]).
본원에 기재된 항체는 특이적 c-Kit 항원을 인식하는 항체 단편을 포함하고, 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 임의의 기술에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 Fab 및 F(ab')2 단편은 효소, 예컨대 파파인 (Fab 단편을 생성하기 위해) 또는 펩신 (F(ab')2 단편을 생성하기 위해)을 사용하여 면역글로불린 분자의 단백질 분해성 절단에 의해 생성될 수 있다. Fab 단편은 항체 분자의 2개의 동일한 아암에 상응하고, 중쇄의 VH 및 CH1 도메인과 쌍을 형성한 완전한 경쇄를 함유한다. F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 디술피드 결합에 의해 연결된 항체 분자의 2개의 항원-결합 아암을 함유한다.
한 실시양태에서, 전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오티드 서열을 포함하는 PCR 프라이머, 제한 부위, 및 제한 부위를 보호하기 위한 플랭킹 서열을 이용하여 주형, 예를 들어 scFv 클론으로부터 VH 또는 VL 서열을 증폭시킬 수 있다. 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 클로닝 기술을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인은 VH 불변 영역을 발현하는 벡터로 클로닝될 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 VL 불변 영역, 예를 들어 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현하는 벡터로 클로닝될 수 있다. VH 및 VL 도메인은 또한 필요한 불변 영역을 발현하는 1개의 벡터에 클로닝될 수 있다. 이어서, 관련 기술분야의 기술자에게 공지된 기술을 이용하여, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터를 세포주에 공동 형질감염시켜, 전장 항체, 예를 들어 IgG를 발현하는 안정한 또는 일시적인 세포주를 생성한다.
단일 도메인 항체, 예를 들어 경쇄가 결여된 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. [Riechmann et al., 1999, J. Immunol. 231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302]; 미국 특허 번호 6,005,079; 및 국제 공개 번호 WO 94/04678, WO 94/25591, 및 WO 01/44301을 참조한다.
[실시예]
이 섹션에서 실시예는 제한적인 것이 아니라 설명을 위해 제공된다.
[실시예 1] 세포주 및 항-c-Kit 항체의 제조
세포주 및 배양
LAD2는 야생형 c-Kit를 갖는 SCF-의존성 인간 비만 세포주이다. 따라서, LAD2 세포는 원발성 비만 세포와 마찬가지로 SCF-의존적 방식으로 활성화되고 증식한다. 추가로, LAD2는 FcεRI, FcγRI, 히스타민 및 트립타제를 발현하고, FcεRI 또는 FcγRI의 가교에 의해 탈과립화되어, 염증성 매개자의 방출을 유발한다. 따라서, LAD2는 비만 세포 실험에 적합한 세포주이다 ([Kirshenbaum AS, et al., (2003) Leuk Res 27:677-82] 참조).
LAD2 세포는 스템프로(StemPro)-34 영양 보충제 (2.5%, 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific), 미국 매사추세츠주), L-글루타민 (2 mM, 깁코(Gibco), 미국 캘리포니아주), 페니실린/스트렙토마이신 (1%, 하이클론(Hyclone), 미국 유타주), 및 재조합 인간 SCF (100 ng/mL, 알앤디 시스템즈(R&D Systems), 미국 미네소타주)를 갖는 스템프로-34 SFM (써모 피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주)에서 배양되었다. 배지의 절반을 SCF를 함유하는 동등한 부피의 새로운 배지로 매주 교체하였다. 세포 밀도는 2 내지 5 Х 105 세포/mL로 유지되었다. 세포를 37℃에서 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다.
항-C-Kit 항체
2G4 항체를 사용하여, c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 대한 항체 결합이 비만 세포의 인산화, 증식, 이동 등을 억제하거나 또는 저해한다는 것을 입증하였다.
실험에서 사용된 2G4 항체는 파테온 바이올로직스 (엔제이) 엘엘씨(PATHEON BIOLOGICS (NJ) LLC, 미국)에서 제조되었다. 2G4 항체는 인간 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3 영역에 결합하고, c-Kit의 D2/3 영역에서 R122, Y125, R181, K203, R205, S261, 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합한다 ([Kim JO, et al., (2020) Int J Biol Macromol 159: 66-78]). 추가로, 2G4 항체는 높은 결합 친화도 (KD = 2.83 Х 10-12 M)로 c-Kit에 결합하고, 이는 SCF와 c-Kit 사이에 비해 500배 더 강하다 (KD = 1.5 Х 10-9 내지 3 Х 10-10 M; [Debra D. Dahlen et al., Leukemia Research (2001); Tal Tilayov et al., Molecule, 2020]).
4C9 항체는 WO 2021/107566에 기재된 하기 방법을 통해 실험실 규모로 제조되었으며, 최종 농도 5.31 mg/ml의 샘플을 실험에 사용하였다.
인간 c-Kit를 표적화하는 완전 인간 4C9 항체는 이전에 기재된 바와 같이 생성되었다 ([Kim JO, et al., (2020) Int J Biol Macromol 159: 66-78]). 간략히, 인간 재조합 c-Kit (Q26-T520, 이랩사이언스(Elabscience), 중국 우한)는 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포 (론자(Lonza), 스위스 바젤)로 이식된 인간화 NSG 마우스 (오리엔트 바이오(Orient Bio), 대한민국 성남)를 면역화시켰다. 에멀젼은 c-kit 단백질 (1 μg/μL)을 동등한 부피의 완전 프로인트(Freund) 아주반트 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 미국 미주리주 세인트 루이스)와 혼합함으로써 생성되었다. 부스터 주사를 5주째 동안에 투여하였다. 마우스 혈청에서 인간 항체 역가는 간접 ELISA를 이용하여 평가하였다. 맥시소르프(Maxisorp) 플레이트를 0.1 μg/웰로 c-kit 단백질로 코팅하였다. 양성 면역 반응을 갖는 마우스를 7주째에 최종 부스팅 주사에 적용하였다. ELISA에서 c-kit에 대해 양성 반응성을 갖는 하이브리도마를 표준 제한 희석 방법을 이용하여 서브클로닝하였다. 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 항체 유전자 서열은 진스크렙트(GenScript, 미국 뉴저지주 피스카타웨이)에 의해 결정되었다. 4C9 클론의 뉴클레오티드 서열은 크리세툴루스 그리세우스(Cricetulus griseus)에 대해 코돈 최적화되고, IgG1로서 합성되고, pCHO1.0 벡터 (써모 피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주 월섬)에 서브클로닝되었다. 재조합 플라스미드를 4C9 항체의 발현을 위해 엑스피조(ExpiCHO)™ 발현 시스템 키트 (써모 피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 CD CHO 무혈청 배지에서 배양된 CHO-S 세포에 일시적으로 형질감염시켰다. 상기 [Kim et al. (2020)] 문헌에 기재된 바와 같이 단백질 A 세파로스 및 SP 세파로스 컬럼 (인비트로젠(Invitrogen), 미국 캘리포니아주 칼스바드)을 사용하여 항체를 정제하였다.
2G4 항체의 CDR 서열을 표 1에 나타내었고, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 중쇄 및 경쇄의 서열을 표 2 및 표 3에 나타내었다. 4C9 항체의 CDR 서열을 표 4에 나타내었고, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 서열을 표 5에 나타내었다.
[표 1]
Figure pct00001
[표 2]
Figure pct00002
[표 3]
Figure pct00003
[표 4]
Figure pct00004
[표 5]
Figure pct00005
통계적 분석
하기 실시예 2-7에서, 그래프화 및 통계적 분석은 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 5 (그래프패드 소프트웨어, 미국 캘리포니아주)를 이용하여 수행되었다. P-값은 양측 스튜던트 t-검정 또는 던넷 사후-검정과 함께 일원 ANOVA에 의해 측정되었다. 통계적 유의성은 P < 0.05로 설정되었다.
[실시예 2] c-Kit 항체는 LAD2 세포에 결합한다
LAD2 세포의 세포 표면 상의 c-Kit에 대한 항체 결합을 입증하기 위해, 유동 세포분석법 검정을 수행하였다. SCF가 c-Kit의 내재화 및 분해를 유발할 수 있기 때문에 24시간 동안 LAD2 세포에서 SCF를 고갈시켰다. 세포를 둘베코(Dulbecco) 인산염-완충된 식염수 (DPBS; 론자, 미국; 카탈로그 번호: 17-512Q)로 세정하고, 4℃에서 1시간 동안 5% 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 PBS로 차단시켰다. BSA로 차단시킨 후, 인간 BD Fc 블록(Block)TM (2.5 μg/106 세포, 비디 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 미국 캘리포니아주)을 처리하여, Fc 수용체에 대한 항체의 결합을 차단하였다. 세포 (2 Х 105 세포)를 4℃에서 1시간 동안 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1 (시노 바이올로지컬(Sino Biological), 중국 베이징)로 지정된 농도로 염색하였다. 이어서, 세포를 2% BSA를 함유하는 PBS로 3회 세정하고, 4℃에서 1시간 동안 염소 항-인간 IgG 이차 항체 (0.3 μg/mL, 인비트로젠, 미국 캘리포니아주)로 염색하였다. 세척 후, 형광 신호를 사이플로우 큐브(CyFlow Cube)6 (시스멕스 파르텍(Sysmex Partec), 독일 괴를리츠)을 사용하여 검출하고, 데이터 분석은 FCS 익스프레스 6 플로우 (데 노보(De Novo) 소프트웨어, 미국 캘리포니아주)를 사용하여 수행하였다. 유동 세포분석법 분석의 결과는 도 1에 도시된다.
도 1에 따르면, 2G4 및 4C9 항체 둘 다 용량-의존적 방식으로 LAD2 세포에 결합하였고, 형광 신호는 100 ng/mL의 농도에서 포화되었다. 그러나, 이차 항체에 의한 비특이적 신호를 제외하고는 정상 인간 IgG1의 결합 신호가 증가하지 않았다. 이들 결과는 2G4가 인간 c-Kit의 D2 및/또는 D3 영역에 결합하고, 4C9가 인간 c-Kit의 D1 및/또는 D2 영역에 결합한다는 점에서, 2G4 항체 및 4C9 항체 둘 다 LAD2 세포 상에 존재하는 c-Kit, 구체적으로 c-Kit의 세포외 도메인에 면역특이적으로 결합한다는 것을 입증한다.
[실시예 3] 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 SCF/c-Kit 신호전달을 억제한다
2G4 및 4C9 항체가 SCF-매개된 c-Kit 활성화를 억제할 수 있는지 여부를 증명하기 위해, LAD2 세포를 24시간 동안 SCF-결핍 배지에서 6-웰 배양 플레이트 (1 Х 106 세포/웰)에 시딩하였다. SCF-고갈 후, LAD2 세포를 지정된 농도에서 37℃에서 1시간 동안 2G4 또는 4C9 항체로 전처리하였다. 이어서, 세포를 추가 10분 동안 100 ng/mL SCF로 자극하였다. 그 후에, 세포를 RIPA 용해 완충제 (pH 7.6, 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM Na2EDTA, 1 mM EGTA, 1% NP-40, 1% 나트륨 데옥시콜레이트, 0.1% SDS, 10 mM β-글리세로포스페이트, 1 mM Na3OV4, 10 mM NaF, 1 μg/mL 류펩틴, 1 mM PMSF, 5 μg/mL 아프로티닌, 및 2 mM 2-머캅토에탄올)에서 용해시켰다. c-Kit 및 그의 하류 신호전달 분자 (Akt 및 Erk)의 인산화를 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. α-튜뷸린을 로딩 대조군으로 사용하였다. 본원에서 사용된 항체는 항-포스포-c-Kit (Tyr719, Tyr823, Tyr568/570, 및 Tyr703, 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology), 미국 매사추세츠주), 항-포스포 Akt (Ser473, 셀 시그널링 테크놀로지, 미국 매사추세츠주), 항-포스포-Erk1/2 (셀 시그널링 테크놀로지, 미국 매사추세츠주), 항-c-Kit (알앤디 시스템즈, 미국 미네소타주), 항-Akt (산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology), 미국 캘리포니아주), 항-Erk1/2 (산타 크루즈 바이오테크놀로지, 미국 캘리포니아주), 및 항-α-튜뷸린 (실험실 제조)이었다. 웨스턴 블롯 분석의 결과는 도 2a 및 2b에 도시되어 있다.
2G4 항체에 의한 전처리는 용량-의존적 방식으로 SCF에 의해 유도된 c-Kit 인산화를 억제하였다 (도 2a). 2G4 항체는 c-Kit의 모든 시험한 티로신 잔기 (Y719, Y823, Y568/570, 및 Y703)의 인산화를 억제하였다. 특히, 1 μg/ml 이상의 농도에서, 2G4 항체는 대부분의 인산화를 억제하였다. 추가로, c-Kit의 하류 신호인 Akt 및 Erk1/2의 인산화는 용량-의존적 방식으로 2G4 항체에 의해 감소되었다. 이들 결과는 2G4 항체가 LAD2 세포에서 SCF에 의해 유도된 c-Kit 신호전달의 활성화를 효과적으로 억제하였음을 입증한다.
그러나, 4C9 항체가 총 c-Kit 발현을 용량-의존적 방식으로 유의하게 하향조절하였지만, 이는 c-Kit 인산화의 하류 신호전달 경로와 관련이 있는 Akt 및 Erk1/2의 인산화를 억제하지 않았다 (도 2b). 이들 결과는 4C9 항체가 c-Kit 자체의 발현만을 억제하고, c-Kit 및 SCF의 결합에 의한 c-Kit 인산화는 억제하지 않음을 시사한다.
이는 또한 모든 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 인산화를 억제하는 것은 아님을 시사하고, 높은 결합 친화도로 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 인산화를 효과적으로 억제함을 입증한다.
[실시예 4] 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 비만 세포의 세포 증식을 저해한다
LAD2 세포를 100 ng/mL SCF의 존재 또는 부재하에 96-웰 배양 플레이트 (1 Х 104 세포/웰)에 시딩하였다. 세포를 최종 농도 100 μg/mL에서 연속 5배의 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1과 함께 37℃에서 7일 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 10 μM 획스트(Hoechst) 33342 (써모 피셔 사이언티픽, 미국 매사추세츠주)로 30분 동안 염색하고, 셀리고(Celigo) 영상화 세포분석기 (넥셀롬(Nexcelom), 미국 매사추세츠주)를 사용하여 카운트하였다. 세포 증식 검정의 결과는 도 3a 및 3b에 도시된다.
세포 증식 검정에서, LAD2 세포의 수를 100 ng/mL SCF에 의해 7일 동안 2.5배 초과로 증가시켰다 (도 3a에서 SCF가 부재하는 웰에서 (흑색 점선) 및 SCF가 존재하고 항체가 부재하는 웰에서의 정규화된 세포 카운트와 비교함). SCF-매개된 증식은 용량-의존적 방식으로 2G4 항체에 의해 강력하게 저해되었지만, 4C9 또는 정상 인간 IgG1에 의해서는 저해되지 않았다 (도 3a). LAD2 세포에 대한 2G4 항체의 절반 최대 억제 농도 (IC50) 값은 0.058 μg/mL이었고, 증식은 0.8 μg/mL보다 높은 농도에서 2G4 항체에 의해 완전히 억제되었다. SCF의 부재하에, LAD2 세포는 증식하지 않았고, 2G4, 4C9, 및 정상 인간 IgG1은 세포 증식에 전혀 영향을 미치지 않았다 (도 3b). 이는 2G4 항체가 LAD2에 대한 세포 사멸을 직접적으로 유도하지 않지만, SCF에 의해 매개된 증식을 억제할 수 있음을 의미한다.
실시예 3의 결과를 함께 고려하면, 이들 결과는 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하고 SCF 결합에 의한 c-Kit 인산화를 억제하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체, 예를 들어 2G4 항체가 비만 세포의 SCF-매개된 증식을 저해할 수 있음을 입증한다. 그러나, SCF 결합에 의한 c-Kit 인산화 (즉, c-Kit 신호전달 경로의 하류)를 억제하지 않는 4C9 항체는 비만 세포의 SCF-매개된 증식을 저해하지 않는다.
이는 또한 모든 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 증식을 저해하는 것은 아님을 시사하고, 높은 결합 친화도로 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 증식을 효과적으로 저해함을 입증한다.
이는 또한 모든 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 증식을 저해하는 것은 아님을 시사하고, 높은 결합 친화도로 c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 증식을 효과적으로 저해함을 입증한다.
[실시예 5] 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 비만 세포의 이동을 저해한다
24시간 동안 LAD2 세포에서 SCF를 고갈시겼다. 그 후에, 1 Х 106 세포를 저보충 배지 (0.5% 스템프로-34 영양 보충제, 2 mM L-글루타민, 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 갖는 스템프로-34 SFM)와 함께 8 μm 공극 (코스타(Costar), 미국 매사추세츠주)을 갖는 6-트랜스웰 플레이트의 상부 챔버에 시딩하였다. 다음으로, 24시간 동안, 1 μg/mL의 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1을 상부 챔버에 첨가하고, 100 ng/mL SCF를 하부 챔버에 첨가하였다. 상부 챔버를 제거한 후, 하부 챔버에서 이동된 세포를 5개의 상이한 필드에서 고전력 필드 (HPF, Х 40 배율)를 사용하여 현미경으로 카운트하였다. 세포 이동 검정의 결과는 도 4에 도시된다.
8 μm 공극 폴리카르보네이트 막을 갖는 트랜스웰 플레이트를 사용하는 이동 검정에서, 막을 통과하는 세포의 수는 100 ng/mL SCF에 의해 26배 초과로 증가하였다 (도 4). SCF에 의해 유도된 이동의 증가는 기저 수준에서 1 μg/mL의 2G4 항체에 의해 완전히 저해되었다. 그러나, LAD2 이동은 4C9 항체에 의해 부분적으로 억제되었지만, 유의한 차이는 관찰되지 않았다 (P = 0.1071). 정상 인간 IgG1의 존재하에서는 이동이 감소하지 않았다.
실시예 4의 결과와 유사하게, c-Kit의 Ig-유사 도메인 D2 및/또는 D3에 결합하고 SCF 결합에 의한 c-Kit 인산화를 억제하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체, 즉, 2G4 항체는 SCF에 의한 비만 세포의 이동을 저해할 수 있었다. 그러나, SCF 결합에 의한 c-Kit 인산화 (즉, c-Kit 신호전달 경로의 하류)를 억제하지 않는 4C9 항체는 SCF에 의한 비만 세포의 이동을 저해하지 않는다.
이는 또한 모든 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 이동을 저해하지는 않음을 시사하고, 높은 결합 친화도로 c-Kit의 특정 Ig-유사 도메인에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 이동을 효과적으로 저해함을 입증한다.
비만 세포 증식 및 이동의 억제를 지배하는 작용 메카니즘은 본 개시내용의 항-c-Kit 항체의 고유한 활성이며, 이는 항히스타민제, 코르티코스테로이드 및 항-IgE 항체를 비롯한 통상적인 치료제와 상이하다. 따라서, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 통상적인 치료제로는 충분히 치료될 수 없는 비만 세포 관련 장애 (예를 들어, 비만세포증, MCAS 등)에 대해 효과적인 치료 효과를 나타낼 수 있다. 대조적으로, 본 개시내용의 항-c-Kit 항체의 특징을 갖지 않는 4C9 항체는 LAD2 세포의 증식 및 이동을 충분히 억제하지 못하였다.
[실시예 6] 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 비만 세포 탈과립화를 유도하지 않는다
인간 비만 세포는 FcγRI (CD64) 및 FcγRII (CD32)를 비롯한 FcγR을 발현하지만, FcγRIII (CD16)은 발현하지 않는다. FcγR에 대한 IgG의 Fc 영역의 결합은 치료 항체를 제공받는 환자에서 과민 반응 (HSR)을 유발할 수 있는 탈과립화를 촉발시킬 수 있다. 더욱이, 다량체성 IgG-항원 면역 복합체는 높은-결합력 상호작용으로 FcγR에 결합할 수 있다. 따라서, β-헥소스아미니다제 검정을 수행하여, 2G4 또는 4C9 항체가 LAD2 세포에서 탈과립화를 증가시키는지 여부를 결정하였다. 민감화되지 않은, IgE-민감화 및 인터페론 (IFN)-γ-민감화 LAD2 세포를 제조하였다. 비오티닐화된 인간 IgE (200 ng/mL, NBS-C 바이오사이언스(NBS-C Bioscience), 오스트리아 비엔나) 또는 IFN-γ (150 ng/mL, 페프로텍(PeproTech), 미국 뉴저지주)를 37℃에서 24시간 동안 (SCF-결핍 배지에서) 세포에 첨가하였다. 민감화 후에, 세포를 HEPES 완충제 (10 mM HEPES, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 0.4 mM Na2HPO4, 5.6 mM 글루코스, 1.8 mM CaCl2, 1.3 mM MgSO4, 및 0.04% BSA)로 2회 세척하고, 96-웰 배양 플레이트 (10,000 세포/웰) 상에 시딩하였다. 이어서, 세포를 1 또는 10 μg/mL의 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1과 함께 37℃에서 (CO2 없이) 1시간 동안 인큐베이션하였다. 양성 대조군으로서 스트렙타비딘 (2 ng/mL, 시그마-알드리치, 미국 미주리주)을 사용하여, 비오티닐화-IgE를 가교시켰다. 450 Х g에서 5분 동안 원심분리 후에, 50 μL의 상청액을 100 μL의 p-니트로페닐 N-아세틸-β-D-글루코사미드 (PNAG) 용액 (3.5 mg/mL, 시그마-알드리치, 미국 미주리주)에 37℃에서 (CO2 없이) 1.5시간 동안 첨가하였다. 50 μL의 글리신 완충제 (0.4 M)를 첨가할 때, 황색은 β-헥소스아미니다제 활성을 나타내었다 (예를 들어, [Kuehn HS, Radinger M and Gilfillan AM (2010) Measuring mast cell mediator release. Curr Protoc Immunol Chapter 7:Unit7 38.] 참조). 405 nm 파장에서의 흡광도는 스펙트로스타(SPECTROstar) 나노 마이크로플레이트 판독기 (비엠지 랩테크(BMG Labtech), 독일 오텐베르크)를 사용하여 측정하였다. 이들 결과는 도 5a 내지 5c에 도시된다.
추가로, 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1이 SCF에 의해 상승작용적으로 증가된 탈과립화를 저해할 수 있는지 여부를 조사하기 위해, IgE-민감화 LAD2 세포를 HEPES 완충제 중에 재현탁시키고, 96-웰 배양 플레이트 (10,000 세포/웰) 상에 시딩하였다. 세포를 2G4, 4C9, 또는 정상 인간 IgG1로 37℃에서 0.5시간 동안 전처리하고, 추가 0.5시간 동안 100 ng/mL SCF로 처리하였다. 이어서, 그 후에, 스트렙타비딘을 첨가하여, 비오티닐화-IgE를 0.5시간 동안 가교시키고, β-헥소스아미니다제 방출 검정을 수행하였다. 이들 결과는 도 5d에 도시된다.
1. 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 항체 매개된 비만 세포 탈과립화를 유도하지 않는다
민감화되지 않은 LAD2 세포에서 2G4 항체 및 정상 인간 IgG1에 의해 매개된 탈과립화는 유의하게 증가되지 않았지만, 4C9 항체는 비처리 세포와 비교하여 용량-의존적 방식으로 탈과립화를 증가시켰다 (도 5a).
IgE-민감화 세포에서, 2G4 항체는 탈과립화를 증가시키지 않은 반면에, 4C9 항체는 탈과립화를 유의하게 증가시켰다 (도 5b). 정상 인간 IgG1은 탈과립화를 약간 증가시켰지만; 차이는 통계적으로 유의하지 않았다 (P > 0.5808). 알러젠의 모방체로서 IgE 라이게이션을 위한 스트렙타비딘을 양성 대조군으로 사용하여, 비만 세포 탈과립화의 활성을 입증하였다. 스트렙타비딘은 비처리 세포와 비교하여 탈과립화를 3배 초과로 증가시켰다.
IFN-γ가 인간 비만 세포에서 FcγRI의 발현을 강하게 증가시키고, 탈과립화가 FcγRI에 의해 증강될 수 있음이 보고되었다 [Woolhiser MR et al., Clin Immunol 110:172-80]. 따라서, 비만 세포 탈과립화 검정에서 IFN-γ의 첨가는 인간에서 활성화된 면역계의 반응을 모방할 수 있다. IFN-γ-민감화 세포에서, 2G4 항체 (P > 0.1784) 및 정상 인간 IgG1 (P > 0.6074)은 탈과립화를 약간 증가시켰지만, 차이는 통계적으로 유의하지 않았다 (도 5c). 그러나, 민감화되지 않은 또는 IgE-민감화 세포에서의 탈과립화와 비교하여 4C9 항체는 탈과립화를 유의하게 증가시켰다.
따라서, 이는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 항체 매개된 비만 세포 탈과립화를 유도하지 않고, 이로써 환자에게 투여될 때 예를 들어 HSR을 유발하지 않음으로써 안전하게 사용될 수 있음을 나타낸다.
2. 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 SCF에 의해 상승작용적으로 증가되는 비만 세포 탈과립화를 억제한다
SCF는 LAD2 세포에서 IgE-매개된 탈과립화를 증가시키는 것으로 공지되어 있다. 비만 세포 탈과립화 검정에서 (도 5d), SCF 단독은 IgE 민감화 LAD2 세포에서 β-헥소스아미니다제의 분비를 유의하게 증가시키지 않은 반면에, 비오티닐화-IgE 가교제인 스트렙타비딘 (알러젠 모방체)은 β-헥소스아미니다제의 분비를 3배 증가시켰다. SCF 및 스트렙타비딘의 처리가 스트렙타비딘 단독과 비교하여 β-헥소스아미니다제의 분비를 2배 증가시켰기 때문에, SCF 및 스트렙타비딘으로 함께 처리하여 상승작용적 효과를 나타내었다.
SCF 및 스트렙타비딘에 의한 탈과립화의 증가는 용량-의존적 방식으로 2G4 항체에 의해 억제되었고 (IC50 = 0.00636 μg/mL), 탈과립화는 0.1 μg/mL보다 높은 2G4 항체 농도에서 (스트렙타비딘+/SCF- 샘플에서의 탈과립화 수준으로) 감소되었다. 그러나, 4C9 항체 및 정상 인간 IgG1은 탈과립화를 전혀 억제하지 못하였다. 이 결과는 2G4 항체가 SCF에 의한 비만 세포 탈과립화의 과도한 증가를 억제할 수 있음을 나타내었다.
대부분의 비만 세포 관련 질환은 IgE-매개된 탈과립화에 의해 유발된다. 상기 결과에 따라, 2G4 항체는 IgE-라이게이션 및 SCF에 의한 비만 세포의 탈과립화의 증가를 억제하였다. 그러나, 4C9 항체는 비만 세포의 IgE-매개된 탈과립화를 감소시키지 못하였다.
이는 또한 모든 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 IgE-매개된 탈과립화를 억제하는 것은 아님을 시사하고, 높은 결합 친화도로 c-Kit의 특정 Ig-유사 도메인에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포의 IgE-매개된 탈과립화를 효과적으로 억제함을 입증한다.
[실시예 7] 본 개시내용의 예시적인 항-c-Kit 항체는 비만 세포에 의한 시토카인 분비의 SCF-매개된 조절을 억제한다
LAD2 세포 (1 Х 106 세포/mL)는 비오티닐화-IgE (200 ng/mL)에 의해 37℃에서 24시간 동안 민감화되었다. 이어서, 세포를 PBS로 2회 세척하고, 저보충 배지를 갖는 12-웰 배양 플레이트 (1 Х 106 세포/웰)에 시딩하였다. 그 후에, 2G4 항체 (1 μg/mL), SCF (100 ng/mL), 및 스트렙타비딘 (10 ng/mL)을 0.5시간 간격으로 세포에 첨가하였다. 24시간의 인큐베이션 후에, 세포-배양 상청액을 수확하고, LAD2 세포에 의해 방출된 시토카인을 제조자의 프로토콜에 따라 인간 XL 시토카인 어레이 키트 (알앤디 시스템즈, 미국 미네소타주)를 사용하여 블롯팅하였다. 각각의 블롯의 강도를 이미지제이(ImageJ) 소프트웨어 (미국 국립 보건원(US National Institutes of Health), 미국 매릴랜드주)를 사용하여 측정하였다. 모든 실험을 독립적으로 3회 반복하였다. 시토카인-방출 검정의 결과는 도 6 및 7에 도시된다.
다양한 시토카인의 수준은 100 ng/mL SCF에 의한 처리 후에 유의하게 증가하였다 (도 6). 이들 시토카인 수준의 증가는 1 μg/mL의 2G4 항체에 의한 처리에 의해 강력하게 억제되었다. 특히, GM-CSF는 SCF에 의해 7배 넘게 증가되지만, 상기 증가는 2G4 항체에 의해 기저 수준으로 완전히 감소된다 (도 6). 추가로, 종양원성 저해 2 (ST2), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), C-C 모티프 케모카인 리간드 2 (CCL2, MCP-1로도 공지됨), 시스타틴 C (CST3), 뇌-유래된 신경영양 인자 (BDNF), T 세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3 (TIM-3), 및 보체 성분 C5/C5a는 2배 넘게 증가하였지만, 모두 2G4 항체에 의해 효과적으로 감소하였다 (도 6).
한편, CCL5, 대식세포 콜로니-자극 인자 (M-CSF), 및 인터류킨-2 (IL-2)를 비롯한 몇몇 시토카인은 SCF에 의해 하향조절되었다 (도 7). 하향조절은 또한 2G4 항체에 의해 저해되었다.
종합적으로, SCF는 비만 세포에 의한 시토카인 분비의 조절을 유도하고, 상기 조절은 주로 비만 세포 질환을 악화시키는 프로-염증성 시토카인의 증가에 의해 나타난다. 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 시토카인의 조절을 억제하였고, 비만 세포 질환의 치료를 위한 치료제로서 사용될 수 있다.
상기 결과는 특정 위치에서 인간 c-Kit 에피토프에 결합하는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포 장애 및 그의 증상의 치료, 예방, 관리 및/또는 호전에 효과적임을 나타내었다. 특히, 실시예의 결과는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체, 예컨대 2G4 항체가 통상적인 치료제와는 상이한 메카니즘으로 비만 세포 관련 장애를 위한 치료제로서 잠재성을 가짐을 나타낸다. 본 개시내용의 항-c-Kit 항체는 높은 친화도로 c-Kit에 결합하고, c-Kit의 리간드인 SCF의 결합을 완전히 차단한다. SCF/c-Kit 신호전달의 차단은 인간 비만 세포에서 세포 증식, 이동, 탈과립화, 및 시토카인 방출을 효과적으로 억제한다. 따라서, 이들 결과는 본 개시내용의 항-c-Kit 항체가 비만 세포 질환에 대한 치료 활성 및 효과를 나타냄을 시사한다.
상기 설명으로부터, 본 개시내용이 속하는 기술분야의 기술자는 본 개시내용이 그의 기술적 사상 또는 필수적인 특징을 변경시키지 않고 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있음을 이해할 것이다. 이와 관련하여, 상기 기재된 실시예가 예시적이고, 모든 관점에서 제한하는 것이 아님을 이해해야 한다. 본 개시내용의 범위는 청구항의 의미 및 범위, 및 본 개시내용으로부터 유래된 모든 변형, 변경 또는 대안 및 그의 등가적인 개념을 포함하도록 해석된다.
(서열 목록)
2g4 항체의 L-CDR2의 아미노산 서열: LGS (서열식별번호: 5)

Claims (22)

  1. 하나 이상의 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방, 관리 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 14의 아미노산 서열 상의 R122, Y125, R181, K203, R205, S261 및 H263 중 적어도 하나에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 8 X 10-12 M, 6 X 10-12 M, 4 X 10-12 M, 3 X 10-12 M, 2 X 10-12 M, 1 X 10-12 M, 또는 10-13 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) 값으로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 SCF와 c-Kit 사이에 비해 50배 넘게 더 강한, 100배 넘게 더 강한, 150배 넘게 더 강한, 200배 넘게 더 강한, 250배 넘게 더 강한, 300배 넘게 더 강한, 350배 넘게 더 강한, 400배 넘게 더 강한, 450배 넘게 더 강한, 500배 넘게 더 강한, 550배 넘게 더 강한, 또는 600배 넘게 더 강한 결합 친화도로 c-Kit에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  6. 하나 이상의 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방, 관리 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법으로서,
    여기서 항체 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열식별번호: 11 및 12의 아미노산 서열 상의 인간 c-Kit 에피토프에의 결합에 대해 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 참조 항체와 교차 경쟁하는 것인 방법.
  7. 하나 이상의 비만 세포 관련 장애의 치료, 예방, 관리 또는 호전을 필요로 하는 대상체에게 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하거나 또는 CDR의 변이체를 포함하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법으로서,
    여기서 CDR의 변이체는 적어도 하나의 CDR에 존재하는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산(들)의 변형, 결실 또는 치환을 포함하는 것인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 VH CDR1, 서열식별번호: 2의 VH CDR2, 서열식별번호: 3의 VH CDR3, 서열식별번호: 4의 VL CDR1, 서열식별번호: 5의 VL CDR2 및 서열식별번호: 6의 VL CDR3을 포함하는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8과 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7을 포함하는 VH 및 서열식별번호: 8을 포함하는 VL을 포함하는 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열식별번호: 9를 포함하는 중쇄 및 서열식별번호: 10을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체가 2가 단일특이적 항체인 방법.
  13. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체가 인간화 항체인 방법.
  14. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체가 네이키드 항체인 방법.
  15. 제1항에 있어서, 대상체가 인간인 방법.
  16. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 치료 유효량이 약 0.01 mg/kg 내지 1,000 mg/kg인 방법.
  17. 제1항에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 비만 세포 활성화 증후군 (MCAS), 원발성 비만 세포 활성화 증후군, 모노클로날 비만 세포 활성화 증후군 (MMAS), 특발성 비만 세포 활성화 증후군, 속발성 비만 세포 활성화 증후군, 천식, 알러지성 비염, 알러지성 염증, 음식물 알러지, 류마티스성 관절염, 염증성 장 질환 (IBD), 다발성 경화증, 아나필락시스, 특발성 아나필락시스, Ig-E 매개된 아나필락시스, 비-Ig-E 매개된 아나필락시스, 신경섬유종증, 아토피성 피부염, 건선, 두드러기, 특발성 두드러기, 만성 두드러기, 만성 자발성 두드러기, 알러지성 두드러기, 특발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 열 유도성 두드러기, 피부묘기증성 두드러기, 진동성 두드러기, 콜린성 두드러기, 접촉성 두드러기, 증상성 피부묘기증, 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염, 과호산구성 증후군, 섬유증, 특발성 폐 섬유증 (IPF), 폐 섬유증, 간 섬유증, 심장 섬유증, 경피증, 골수섬유증, 염증성 상태, 폐 동맥성 고혈압 (PAH), 과민성 장 증후군 (IBS), 피부병, 비만 세포 활성화 장애 (MCAD), 비만세포증, 피부 비만세포증 (예를 들어, 색소성 두드러기), 비활동성 전신성 비만세포증 (ISM), 무증상성 전신성 비만세포증 (SSM), 연관된 혈액학적 신생물을 동반한 비만세포증 (SM-AHN), 공격성 전신성 비만세포증 (ASM), 비만 세포 백혈병 (MCL), 비만 세포 육종, 전신성 비만세포증 (SM), 진행된 SM (AdvSM), 진행되지 않은 SM (비-Adv SM), 부종 (혈관부종), 원발성 폐 고혈압 (PPH), 비만세포성 위장염, 비만세포성 결장염, 소양증, 만성 소양증, 만성 신부전 및 심장에 대해 속발성인 소양증, 비만 세포와 연관된 심장, 혈관, 장, 뇌, 신장, 간, 췌장, 근육, 골 및 피부 상태, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 알러지성 질환 (예를 들어 음식물 알러지 포함), 알러지성 부비동염, 알러지성 접촉성 피부염, 결절성 홍반, 다형 홍반, 피부 괴사성 세정맥염 및 벌레 물림 피부 염증, 기관지 천식, 염증성 질환, 당뇨병, 제I형 당뇨병, 제II형 당뇨병, 중추 신경계 (CNS) 장애, 간질성 방광염 및 혈액학적 장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  18. 제1항에 있어서, 비만 세포 관련 장애가 만성 자발성 두드러기, 한랭 유도성 두드러기, 증상성 피부묘기증 및 정상 보체혈증성 두드러기성 혈관염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  19. 제1항에 있어서, 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 투여 경로가 경구 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경막외 투여, 장내 투여, 뇌내 투여, 비강 투여, 동맥내 투여, 심장내 투여, 골내 주입, 척수강내 투여, 및 복강내 투여 중 적어도 하나인 방법.
  20. 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는, 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 제약 조성물.
  21. 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키는 방법에서 사용하기 위한, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  22. 대상체에서 하나 이상의 비만 세포 관련 장애를 치료하거나, 예방하거나, 관리하거나 또는 호전시키기 위한 의약의 제조를 위한, 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 c-Kit 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-c-Kit 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 용도.
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