KR20240054098A - 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents
참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 포함하는 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 하므로 부작용이 적어 인체에 안전하면서도 피부 항균, 항염증 및 항산화 효과가 우수하여 피부를 보호하고 피부질환을 개선할 수 있다.
Description
본 발명은 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 가장 외부에 존재하는 기관으로, 외부에서부터 순서대로 표피, 진피, 피하지방 조직의 3개 층으로 크게 구분된다. 피부는 체내 수분을 보호하고 외부로부터의 침입인자를 막아 인체를 보호하는 필수적인 장벽 역할을 한다. 피부에 염증이나 자극을 일으키는 인자로는 물리화학적 자극, 알레르기항원, 자외선, 산화 스트레스, 병원균 감염, 그리고 이로 인해 이차적으로 생산된 염증관련 사이토카인, 케모카인 등이 있다. 병원균 감염의 경우, 여러 종류의 피부질환은 주로 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도구균(Staphylococcus epidermidis) 등의 피부 상재균에 의해서 발생하거나, 모공에 비정상적으로 피지가 쌓여 혐기성 여드름균인 큐티박테리움 아크니스 (Cutibacterium acnes)이 증식하는 경우 발생한다. 염증은 본래 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 것이며, 통증, 부종, 발적, 발열 등을 일으켜 기능 장애가 일어나게 된다. 이러한 염증은 일반적인 상태에서는 초기 상태가 지난 후 정상으로 돌아오나, 염증을 자극하는 자극제가 없어지지 않거나, 계속 염증 반응이 생기게 되면 세포손상 등 여러 가지 부작용이 생기게 된다.
일반적인 기초 화장품은 피부가 본래 가지고 있는 기능을 정상적으로 작용할 수 있도록 도와주는 데에 의의가 있지만 대부분 그 효과는 보습에 한정적이다. 이와 같은 이유로 최근에는 일반 기초화장품 대비 추가적인 효과와 기능을 나타낼 수 있는 기능성 화장품에 대한 소비자들의 선호도가 높아지고 있다. 기능성 화장품이란 화장품에 피부 미백, 주름개선, 항균, 항염증, 항산화 등의 기능성이 부여된 것을 말한다.
항균제, 항염증제, 항산화제에는 다양한 물질이 있으나, 피부 안전성 면에서나 화장료 배합 시 안정성 면에서 부작용을 최소화하는 것이 중요하다.
따라서, 천연물질로부터 유래되어 부작용이 적어 인체에 안전하면서도 피부 항균, 항염증 및 항산화 효과가 우수하여 피부를 보호하고 피부질환을 개선할 수 있는 천연물 유래 화장료 조성물의 개발이 필요한 실정이다.
본 발명자들은 피부 보호 및 피부질환 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 피부 항균, 항염증 및 항산화 효과가 있음을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항염증, 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 피부를 보호 및 피부질환 개선 효과가 우수한 천연물 유래 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 피부 항균, 항염증 및 항산화 효과가 있음을 규명하였다.
본 명세서에서 참외(Cucumis melo ssp. agrestis var. makuwa)는 쌍떡잎식물 합판화군 박목 박과의 한해살이 덩굴식물로, 분류학적으로는 멜론(Cucumis melo, 머스크멜론)의 한 변종이다. 1차 원산지는 아프리카 사하라 남부, 2차 원산지는 인도, 이란, 터키, 중국 등이다. 주로 인도산 야생종에서 개량된 것이 많으며, 과거에서는 일본이나 중국에서도 재배되었으나 현재 실질적으로 한국에서만 재배되고 있다. 현재 재배 및 시판되는 참외는 대부분이 한국에서 자체 개발한 품종이고, 다른나라에서는 거의 재배되지 않기 때문에 해외에서는 'Oriental melon', 'Korean melon' 또는 'Chamoe(참외)'로도 알려져 있다. 참외에는 비타민 B의 일종인 엽산(Folic acid)이 풍부하다. 2014년 ‘경상북도농업기술원’이 발표한 자료에 따르면 참외의 엽산 함량은 100 g당 132.4 ㎍으로 과일류 100 g 당 가장 높았다. 엽산은 아미노산과 핵산 합성에 필수적인 물질로, 인간의 섬유아세포의 생존력을 향상시키고 증식을 촉진하며 세포 분열과 성장에 영향을 미친다. 또한 뇌의 신경전달 물질인 노르아드레날린의 분비를 돕고, UV로 인한 DNA 손상의 복구 속도를 증가시키며, DNA의 절단된 가닥의 재결합을 촉진한다. 본 발명자는 참외에는 엽산을 안정적으로 추출하기 위하여 필요한 유기산이 함유되어 있어 추가적인 공정 없이 안정적으로 엽산을 추출할 수 있음을 규명하고, 본 발명 조성물의 유효성분 중 하나인 참외 추출물을 제조하였다. 본 명세서에서 참외는 추출물의 형태이거나, 생(生) 참외, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 참외의 발효물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 참외는 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
본 명세서에서 모자반(Sargassum fulvellum)은 모자반 속에 속하는 난해성 다년생 갈조류로 한국의 연안에서 해중림을 이루는 대표적인 식용 해조류이다. 한국에서는 지충이·괭생이모자반·알쏭이모자반·꽈배기모자반·큰잎모자반·짝잎모자반·쌍발이모자반 등 약 20종이 채집되며, 일본이나 동남아시아 일대에는 50여 종이 생육하고 있다. 국내에서는 보통 모자반 속의 많은 종류의 해조류가 식용으로 사용되며, 알긴산 등의 함량이 높아 해조 공업의 원료로 이용되거나 비료로도 쓰인다. 모자반 속에는 무기질 함량이 높아 고혈압 및 골다공증에 효과가 있으며, 요오드 함량이 높아 갑상선기능장애에도 효과가 있다. 본 명세서에서 모자반은 추출물의 형태이거나, 생(生) 모자반, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 모자반의 발효물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 모자반은 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
본 명세서에서 작약뿌리(Paeonia lactiflora root 또는 Paeoniae Radix)는 작약(Paeonia lactiflora)의 뿌리로서, 방추형이며 굵다. 작약뿌리는 예로부터 진통·복통·월경통·무월경·토혈·빈혈·타박상 등의 약재로 쓰여왔다. 약리실험에서 작약뿌리의 페오니플로린(Paeoniflorin) 성분은 진정작용, 진통작용, 진경작용, 해열작용, 소염작용, 항궤양작용, 강압작용, 및 관상혈관확장작용을 나타내고, 작약뿌리의 페오놀(Paeonol) 성분은 진정작용, 해열작용, 진통작용, 진경작용, 소염작용, 지혈작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 본 명세서에서 작약뿌리는 추출물의 형태이거나, 생(生) 작약뿌리, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 작약뿌리의 발효물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 작약뿌리는 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
본 명세서에서 청각(Codium fragile)은 청각목 청각과의 해조류로 한국의 전 연안에 분포한다. 수심 1 m 내지 20 m의 깊은 곳 중에서도 파도의 영향을 적게 받는 곳에서 자라며, 온·난대 및 아열대 해역에 흔하다. 식이섬유가 많아 배변을 용이하게 하고, 칼슘, 철, 비타민 A, 비타민 C, 나이아신 등 다량의 미네랄이 함유되어 있어 성장을 촉진한다. 본 명세서에서 청각은 추출물의 형태이거나, 생(生) 청각, 생약 자체의 분쇄물, 생약의 건조물, 생약의 건조 분쇄물, 청각의 발효물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 본 명세서에서 사용되는 청각은 그 입수 방법에 제한이 없으며, 재배하여 사용하거나 시판되는 것을 구입하여 사용할 수도 있다.
본 발명에서 이용되는 조성물은 참외, 모자반, 작약뿌리 및 청각의 개별 추출물을 서로 혼합하여 제조한 것을 포함할 수 있고, 또는 참외, 모자반, 작약뿌리 및 청각의 혼합물에 추출용매를 처리하여 제조할 수도 있다.
본 발명에서 이용되는 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각 추출물은 각각 구입하거나 또는 직접 추출하여 얻을 수 있다. 본 발명의 조성물에서 이용되는 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각 추출물을 참외, 모자반, 작약뿌리 및 청각에 추출용매를 처리하여 얻는 경우에는, 극성 용매 또는 비극성 용매와 같은 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide), (v) DMSO(dimethylsulfoxide) 또는 이들의 혼합 용매를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소, THF(Tetrahydrofuran) 또는 이들의 혼합 용매를 포함한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명에서 이용되는 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각 추출물은 각각 유기용매, 물, 또는 이들의 혼합용매로 추출이 가능하다. 상기 유기용매에는 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤 등이 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 상기 유기용매는 에틸알코올, 물, 또는 이의 혼합용매이다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤 등 유기용매의 농도는 1 내지 100%(v/v), 구체적으로는 10 내지 100%(w/w), 20 내지 100%(w/w), 30 내지 100%(w/w), 40 내지 100%(w/w), 50 내지 100%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 70 내지 100%(w/w), 80 내지 100%(w/w)일 수 있고, 보다 구체적으로는 10 내지 100%(w/w), 10 내지 90 %(w/w), 10 내지 80%(w/w), 10 내지 70%(w/w), 10 내지 60%(w/w), 10 내지 50%(w/w), 20 내지 100%(w/w), 20 내지 90 %(w/w), 20 내지 80%(w/w), 20 내지 70%(w/w), 20 내지 60%(w/w), 20 내지 50%(w/w), 30 내지 100%(w/w), 30 내지 90 %(w/w), 30 내지 80%(w/w), 30 내지 70%(w/w), 30 내지 60%(w/w), 30 내지 50%(w/w), 40 내지 100%(w/w), 40 내지 90 %(w/w), 40 내지 80%(w/w), 40 내지 70%(w/w), 40 내지 60%(w/w), 40 내지 50%(w/w), 50 내지 100%(w/w), 50 내지 90 %(w/w), 50 내지 80%(w/w), 50 내지 70%(w/w), 50 내지 60%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 60 내지 90 %(w/w), 60 내지 80%(w/w), 60 내지 70%(w/w), 70 내지 100%(w/w), 70 내지 90 %(w/w), 70 내지 80%(w/w), 80 내지 100%(w/w), 80 내지 90 %(w/w), 또는 90 내지 100 %(w/w)일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 모자반 추출물의 경우에, 상기 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤 등 유기용매의 농도는 1 내지 100%(v/v), 보다 구체적으로는 50 내지 100%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 70 내지 100%(w/w), 또는 80 내지 100%(w/w)일 수 있고, 가장 구체적으로는 95%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 작약뿌리 추출물의 경우에, 상기 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤 등 유기용매의 농도는 1 내지 100%(v/v), 보다 구체적으로는 40 내지 100%(w/w), 50 내지 100%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 또는 70 내지 100%(w/w) 일 수 있고, 가장 구체적으로는 70%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 청각 추출물의 경우에, 상기 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤 등 유기용매의 농도는 1 내지 100%(v/v), 보다 구체적으로는 40 내지 100%(w/w), 50 내지 100%(w/w), 60 내지 100%(w/w), 70 내지 100%(w/w), 또는 80 내지 100%(w/w)일 수 있고, 가장 구체적으로는 80%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 추출용매의 양은 추출하는 참외, 모자반, 작약뿌리 또는 청각의 양에 따라 달라질 수 있으며, 바람직하게는 참외, 모자반, 작약뿌리 또는 청각 중량의 1배 내지 30배의 부피, 더욱 구체적으로는 2배 내지 30배, 2배 내지 25배, 2배 내지 20배, 5배 내지 30배, 5배 내지 25배, 또는 5배 내지 20배 부피일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 추출물의 추출온도는 특별히 제한되지 아니하며, 예컨대 0℃ 내지 120℃일 수 있으며, 구체적으로는 20℃ 내지 100 ℃일 수 있다. 보다 구체적으로는 20℃ 내지 100℃, 20℃ 내지 90℃, 20℃ 내지 70℃, 20℃ 내지 50℃, 30℃ 내지 100℃, 30℃ 내지 90℃, 30℃ 내지 70℃, 30℃ 내지 50℃, 40℃ 내지 100℃, 40℃ 내지 90℃, 40℃ 내지 70℃, 40℃ 내지 60℃, 40℃ 내지 50℃, 50℃ 내지 100℃, 50℃ 내지 90℃, 50℃ 내지 70℃, 50℃ 내지 60℃, 60℃ 내지 100℃, 60℃ 내지 90℃, 60℃ 내지 70℃, 70℃ 내지 100℃, 70℃ 내지 90℃, 70℃ 내지 80℃, 또는 90℃ 내지 100℃일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 추출물의 추출시간은 특별히 제한되지 아니하며, 예컨대 1 시간 내지 30 시간일 수 있으며, 구체적으로는 1 시간 내지 25 시간일 수 있고, 더욱 구체적으로는 2 시간 내지 20 시간일 수 있다.
본 발명의 추출물은 공지의 천연물 추출법으로 추출될 수 있다. 예를 들어 냉침추출, 열수추출, 초음파추출, 환류냉각추출, 가열추출법으로 추출할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 참외 추출물은 다음 단계를 포함하는 제조방법으로 제조된다:
(a) 참외를 건조하는 단계; 및
(b) 상기 (a) 단계에서 건조된 참외를 추출용매에 투입하여 참외 추출액을 수득하는 단계.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (a) 단계의 참외는 식용으로 사용 가능한 종의 참외를 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 상기 (a) 단계의 참외는 건조 전에 세척하거나 건조하기 적절한 크기로 절단한 후 건조할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (a) 단계의 건조 방법으로는 업계에 알려진 건조 방법, 예컨대 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 방법 등을 제한 없이 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로 열풍건조 방법을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (a) 단계의 건조 시간은 30 분 내지 10 시간일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 (a) 단계의 건조 시간은 30 분 내지 10 시간, 30 분 내지 9 시간, 30 분 내지 8 시간, 2 시간 내지 10 시간, 2 시간 내지 9 시간, 2 시간 내지 8 시간, 4 시간 내지 10 시간, 4 시간 내지 9 시간, 4 시간 내지 8 시간, 6 시간 내지 10 시간, 6 시간 내지 9 시간, 6 시간 내지 8 시간, 7시간 내지 10 시간, 7 시간 내지 9 시간, 7 시간 내지 8시간, 8 시간 내지 10 시간, 또는 8 시간 내지 9 시간, 더욱 구체적으로 8 시간일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (a) 단계의 건조 온도는 40℃ 내지 90℃일 수 있다. 40℃ 미만에서 건조할 경우에는 참외 내 수분 함량이 높아 유효성분의 추출 수율이 낮으며, 90℃를 초과하는 경우에는 열에 의해 유효성분이 손실될 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 (a) 단계의 건조 온도는 40℃ 내지 90℃, 40℃ 내지 80℃, 40℃ 내지 70℃, 40℃ 내지 60℃, 50℃ 내지 90℃, 50℃ 내지 80℃, 50℃ 내지 70℃, 50℃ 내지 60℃, 60℃ 내지 90℃, 60℃ 내지 80℃, 60℃ 내지 70℃, 70℃ 내지 90℃, 70℃ 내지 80℃, 또는 80℃ 내지 90℃일 수 있으며, 더욱 구체적으로는 60℃일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (a) 단계 이후 참외의 추출 효율을 높이기 위해 가로, 세로, 높이를 각각 0.5 내지 1 cm의 크기로 세절하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 참외 추출물의 추출용매는 상기 유기용매는 에틸알코올, 물, 또는 이의 혼합용매일 수 있고, 더욱 구체적으로는 물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출용매의 양은 참외 중량의 5배 내지 20배의 부피, 더욱 구체적으로는 5배 내지 20배, 5배 내지 15배, 5배 내지 10배, 10배 내지 20배, 10배 내지 15배, 또는 15배 내지 20배 부피일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출용매의 양이 5배 미만일 경우에는 용매가 부족하여 충분히 추출될 수 없고, 20배를 초과할 경우에는 유효성분이 용매에 희석되어 오히려 추출액 내 유효성분의 농도가 낮다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출방법으로는 업계에 알려진 추출방법, 예컨대 냉침추출, 열수추출, 초음파추출, 환류냉각추출, 가열추출법 등을 제한 없이 사용할 수 있으며, 보다 구체적으로 열수추출 방법을 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출온도는 특별히 제한되지 아니하며, 예컨대 40℃ 내지 120℃일 수 있으며, 보다 구체적으로, 40℃ 내지 120℃, 40℃ 내지 100℃, 40℃ 내지 90℃, 40℃ 내지 80℃, 40℃ 내지 70℃, 55℃ 내지 120℃, 55℃ 내지 100℃, 55℃ 내지 90℃, 55℃ 내지 80℃, 55℃ 내지 70℃, 70℃ 내지 120℃, 70℃ 내지 100℃, 70℃ 내지 90℃, 또는 70℃ 내지 80℃일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출시간은 특별히 제한되지 아니하며, 예컨대 1 시간 내지 30 시간일 수 있고, 더욱 구체적으로 1 시간 내지 30 시간, 1 시간 내지 20 시간, 1 시간 내지 15 시간, 1 시간 내지 10 시간, 4 시간 내지 30 시간, 4 시간 내지 20 시간, 4 시간 내지 15 시간, 4 시간 내지 10 시간, 7 시간 내지 30 시간, 7 시간 내지 20 시간, 7 시간 내지 15 시간, 7 시간 내지 10 시간, 10 시간 내지 30 시간, 10 시간 내지 20 시간, 10 시간 내지 15 시간, 15 시간 내지 30 시간, 15 시간 내지 20 시간, 또는 20 시간 내지 30 시간일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출액에서 고형분을 제거하기 위하여 여과를 진행할 수 있다. 고형분을 제거하여 추출액의 오염 및 추출액 내 물질의 변형을 방지할 수 있다. 여과 방법으로는 업계에 알려진 다양한 여과 방법, 예컨대 여과지를 이용한 여과, 필터프레스를 이용한 여과, 원심분리기를 이용한 여과를 제한없이 사용할 수 있다. 여과 가정은 1회 이상 반복 수행할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 참외 추출물, 상기 모자반 추출물, 상기 작약뿌리 추출물 및 상기 청각 추출물의 혼합중량비는 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 참외 추출물, 상기 모자반 추출물, 상기 작약뿌리 추출물 및 상기 청각 추출물의 혼합중량비는 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10, 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 5 : 1 내지 5, 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 3 : 1 내지 3, 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 2 : 1 내지 2, 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 : 1, 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 내지 7, 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 내지 5 : 1 내지 5, 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 내지 3 : 1 내지 3, 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 내지 2 : 1 내지 2, 1 내지 7 : 1 내지 7 : 1 : 1, 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4, 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 3 : 1 내지 3, 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 2 : 1 내지 2, 또는 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 : 1, 더욱 구체적으로는 4 : 4 : 1 : 1일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각의 추출물은 용매에 의해 추출된 조추출물(crude extract)의 형태를 이용할 수 있으며, 고순도로 정제하여 사용할 수도 있다.
본 명세서에서, 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 참외, 모자반, 작약뿌리 또는 청각의 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명에서 이용되는 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 또는 청각 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 유효성분인 상기 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
상기 담체로서, 정제수, 일가 알코올류(에탄올 또는 프로필 알코올), 다가 알코올류(글리세롤, 1,3-부티렌글리콜 또는 프로필렌글리콜), 고급 지방산류(팔미틸산 또는 리놀렌산), 유지류(소맥 배아유, 동백기름, 호호바유, 올리브유, 스쿠알렌, 해바라기유, 마카데미아땅콩유, 아보가드유, 대두 수첨가 레시틴 또는 지방산 글리세라이드) 등을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다. 또한 필요에 따라 계면활성제, 살균제, 산화방지제, 자외선 흡수제, 소염제 및 청량제를 첨가할 수 있다.
계면활성제로는 폴리옥시에틸렌, 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌, 올레일에테르, 모노올레인산폴리옥시에틸렌, 폴리옥시에틸렌, 글리세릴모노스테아레이트, 모노스테아린산소르비탄, 모노올레인산폴리옥시에틸렌, 소르비탄, 자당지방산에스테르, 모노라우린산헥사글리세린, 폴리옥시에틸렌 환원라놀린, POE, 글리세릴피로글루타민산, 이소스테아린산, 디에스테르, N-아세틸글루타민 및 이소스테아릴에스테르 등을 사용할 수 있다.
살균제로는 히녹티올, 트리크로산, 크롤헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아즐렌 (azulene), 살리실산 및 징크피리타온 등을 사용할 수 있다.
산화방지제로는 부틸히드록시아니솔, 몰식자산, 몰식자산프로필 및 에리소르빈산 중에서 어떠한 것도 사용이 가능하다.
자외선 흡수제로는 디히드록시벤조페논 등의 벤조페논류, 멜라닌, 파라아미노벤조산에틸, 파라디메틸아미노벤조산 2-에틸헥실에스테르, 시녹사이트, 파라메톡시계피산 2-에틸헥실에스테르, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐) 벤조트리아졸, 우로카닌산 및 금속산화물 미립자 등을 사용할 수 있다.
소염제로는 글리틸리틴산디칼륨 또는 알란토인 등을 사용할 수 있고, 청량제로는 고추틴크 또는 1-멘톨 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 있어서, 본 발명의 화장료 조성물은 용액, 외용 연고, 겔, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 앰플, 헤어앰플, 두피트리트먼트, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 헤어로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 린스겸용 샴푸, 모발 영양화장수, 헤어젤, 헤어왁스, 헤어 스프레이, 염색제, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면 활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패취 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 용어 ‘항균’이란 세균 및 진균류 등의 미생물의 살균 또는 손상, 성장 저해, 또는 증식 방지를 의미한다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도구균(Staphylococcus epidermidis), 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes), 화농성 연쇄상구균(Sreptococcus pyogenes), 고초균(Bacillus subtilis), 대장균(Escherichiacoli), 및 클로스트리듐 퍼프리젠스(Clostridium perfringens)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 균주에 대해 항균 활성을 갖는 것일 수 있다. 상기 '황색포도구균(Staphylococcus aureus)'은 그람 양성의 통성혐기성 세균으로 건강한 사람이나 가축의 피부와 비강표면에 일반적으로 존재하는 병원균이며, 내열성인 외독소를 생산하여 식중독을 일으키고, 식세포를 죽이는 독소(류코시딘), 용혈소, 응고효소 등을 분비하여 감염숙주세포의 저항성에서 벗어나 화농성 감염증을 일으키는 것을 알려져 있다. 또한, 황색포도상구균은 50% 이상의 건강한 사람, 동물의 피부, 비강 등에서 흔히 발견되며 여드름, 농가진 같은 경증의 피부감염증부터 폐렴, 수막염, 패혈증과 같은 생명을 위협하는 질환들에 이르기까지 다양한 질병을 초래할 수 있다. 상기 '큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)'는 혐기성 세균으로 피부 모낭 내에서 상주하는 여드름 유발균으로 지방분해 효소를 분비하여 이 효소가 피지 중의 중성지방을 분해하여 유리 지방산을 형성하고 모낭을 자극하며, 면역반응을 일으켜 여드름의 염증 반응에 기여하는 것으로 알려져 있으며, '프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)'로도 알려져 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하기 실시예에 나타난 바와 같이 항균 효과를 나타낼 수 있어, 세균 감염에 의한 피부질환을 예방 또는 개선할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 세균 감염에 의한 피부질환은 종창, 심농가진, 홍색음선, 모낭염, 종기, 농가진, 림프절염, 피부농양, 연조직염, 단독, 림프관염, 괴사성 피부 감염, 상처 감염, 포도구균성열상피부증후군, 또는 성홍열일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서, 용어 '예방'이란 상기 세균 감염에 의한 피부질환의 발병을 억제 또는 저해하는 것을 의미하고, 용어 '개선'이란 이미 발병한 상기 세균 감염에 의한 피부질환의 발병을 완화하는 것을 의미한다.
본 명세서에서, 용어 '항염증'이란 염증을 억제하거나 감소시키는 작용을 의미하며, 면역 반응이 완화되어 NO 생성이 억제되는 모든 작용을 의미할 수 있다. 상기 용어'염증'은 생체 조직이 손상을 입었을 때에 체내에서 일어나는 방어적 반응을 의미하는 것으로, 염증성 질환을 유발하는 원인이 될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하기 실시예에 나타난 바와 같이 항염증 효과를 나타낼 수 있어, 염증성 피부질환을 예방 또는 개선할 수 있다. 상기 '염증성 피부질환'이란 피부 상피 내에 일련의 염증 반응을 일으키는 다양한 자극 요인들로 인해 가려움, 부종, 홍반, 벗겨짐 등과 같은 일련의 임상적 징후와 증상이 유발되는 질환을 말한다. 상기 염증성 피부질환은 급· 만성 습진, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 지루성 피부염, 만성단순태선, 간찰진, 박탈 피부염, 구진상 두드러기, 건선, 일광 피부염, 또는 여드름일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하기 실시예에 나타난 바와 같이 항염증 효과를 나타낼 수 있어, 피부자극을 완화할 수 있다.
본 명세서에서, 용어 '예방'이란 상기 염증성 피부질환의 발병을 억제 또는 저해하는 것을 의미하고, 용어 '개선'이란 이미 발병한 상기 염증성 피부질환의 발병을 완화하는 것을 의미한다.
본 명세서에서, 용어 '항산화'란 활성산소의 생성을 억제하고, 자유 라디칼 또는 활성 산소종을 제거함으로써 이로 인한 세포의 손상이 감소시키는 등의 효과를 의미한다. 상기 활성산소는 산소가 자유 라디칼(free radical)을 가져 안정되지 못한 상태를 의미하며, 그로 인해 강한 활성을 갖는다는 특징이 있다. 활성산소는, 체내 효소계, 환원 대사, 화학약품, 공해물질 및 광화학 반응 등의 각종 물리적, 화학적 및 환경적 요인 등에 의하여 생성될 수 있다. 활성산소는 세포 구성 성분인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등에 대하여 비 선택적, 비가역적인 파괴 작용을 함으로써, 생체에 대하여 독성, 즉 산화적 손상(oxidative stress)을 가져오며, 세포 노화, 또는 암을 비롯한 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하기 실시예에 나타난 바와 같이 항산화 효과를 나타낼 수 있어, 피부 조직의 산화적 스트레스로 인한 손상을 방지하여 피부 상태를 개선할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 조성물은 하기 실시예에 나타난 바와 같이 항산화 효과를 나타낼 수 있어, 피부의 노화를 예방 또는 개선할 수 있다.
본 명세서에서, 상기 '피부 노화'는 나이가 듦에 따른 노화(chronoaging), 또는 태양광선의 노출에 따른 노화(광노화), 극한 기후 조건, 담배 연기, 미세 먼지, 화학적 오염물질 등의 환경 요인에 노출되어 피부가 경험하는 모든 변화를 의미한다. 노화로 인한 피부의 변화는 촉감 등을 통한 외적인, 가시적인 변화 등 인식가능한 모든 변화, 또는 피부 조직의 조직학적 변화를 포함한다. 바람직하게는, 상기 피부 노화는 자외선에 의한 산화(즉, 활성산소의 축적), 콜라겐 감소에 따른 피부 주름을 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 항산화 활성을 나타내어 피부의 항노화에 도움을 줄 수 있다.
하기의 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물은 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도구균(Staphylococcus epidermidis) 및 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)에 대하여 우수한 항균 활성을 나타냈으며, NO 생성을 억제하는 항염증 효과가 우수하였고, 자유 라디칼 소거능이 뛰어나 우수한 항산화 효과를 나타냈다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 화장료 조성물은 여드름 개선 효과를 갖는다.
본 명세서에서 '여드름'은 상성 좌창으로, 모공에서 피지의 생산이 증가되고 피부상피세포가 비정상적으로 각화되어 모공의 개구부를 막으며 이곳에 여드름 원인 세균이 증식하여 염증을 발생시킴으로써 유발되는 피부질환 중 하나이다. 여드름의 발생에는 다양한 인자가 관련되어 있으며 여러 인자의 상호작용으로 인하여 증상이 나타나지만 정확한 원인은 아직 밝혀지고 있지 않다. 현재까지의 연구결과에 따르면, 여드름은 면포형성과 남성호르몬에 의해 유발된 피지 생산 및 분비의 증가, 피부 상재균들의 증식, 유전적 소질, 염증유발 및 피부장벽의 기능 이상 등의 주요 인자가 복합적으로 작용하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히, 여드름의 발병에는 모낭 내에 상주하는 상재균들 중 대표적인 여드름균인 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)가 크게 관여하는 것으로 알려져 있다.
본 명세서에서 '여드름 개선'이란 여드름 유발시킨 원인 세균의 생육을 저해 및 억제함으로써 모공의 폐쇄 및 피지의 과잉 분비를 억제하여 피부 상태를 개선시키는 것을 의미한다.
하기의 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명의 유효성분인 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물은 대표적인 여드름인 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)에 대하여 우수한 항균 활성을 나타내어, 여드름 개선 효과가 우수한 것으로 나타났다.
본 발명은 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 천연 추출물을 유효성분으로 하므로 부작용이 적어 인체에 안전하면서도 피부 항균, 항염증 및 항산화 효과가 우수하여 피부를 보호하고 피부질환을 개선할 수 있다.
도 1은 PBS만을 처리한 대조군 및 본 발명의 추출물 혼합물을 처리한 시험군의 항균 활성 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 추출물 혼합물의 항염증 활성 분석 결과를 나타낸 것으로, 일산화탄소 농도를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 추출물 혼합물의 항염증 활성 분석 결과를 나타낸 것으로, 일산화탄소 농도를 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
<제조예 1> 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물 혼합물의 제조
제조예 1-1. 참외 추출물의 제조
성주군에서 재배된 참외 저급과를 깨끗이 세척하여 이물질을 제거하고, 참외의 크기가 큰 경우 건조하기 적절한 크기로 절단하였다. 참외에 함유된 유효성분이 파괴되지 않도록 참외를 60℃에서 8 시간 동안 열풍건조하였다. 상기 건조된 참외의 추출 효율을 높이기 위해 가로, 세로, 높이 각각 0.5 cm 내지 1 cm의 크기로 세절하였다.
상기 건조된 참외를 건조된 참외 전체 중량 대비 20배 중량의 증류수를 사용하여 90℃에서 10 시간 열수추출한 후, 와트만 GF/C 110 mm 여과지로 여과하여 액상의 추출물을 수득하였다.
제조예 1-2. 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물 혼합물의 제조
상기 제조예 1-1에서 제조한 참외 추출물을 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물과 혼합하여 추출물 혼합물을 제조하였다. 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물의 혼합 중량비는 4:4:1:1이었다. 모자반 추출물 및 청각 추출물은 코씨드바이오팜의 제품을 구입하여 사용하였으며, 작약뿌리 추출물은 허브테라피의 제품을 구입하여 사용하였다. 모자반 추출물은 건조된 모자반을 95% 에탄올을 추출용매로 사용하여 추출한 것이고, 청각 추출물은 건조된 청각을 80% 에탄올 추출하고 증류수를 첨가하여 추출한 것이며, 작약 추출물은 건조된 작약뿌리를 70% 에탄올을 용매로 하여 추출한 것이다.
<실시예 1> 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물 혼합물의 항균 활성 분석
상기 제조예 1-2에 의하여 제조된 추출물 혼합물의 황색포도구균(Staphylococcus aureus) ATCC 6538, 표피포도구균(Staphylococcus epidermidis) ATCC 14990 및 여드름균인 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) ATCC 6919에 대한 항균 활성을 분석하였다.
시험대상 균주들을 각각 멸균된 TSB 배지(Tryptoic Soy Broth, 대두 카제인소화액체배지)에서 37℃, 18 시간 내지 22시간 동안 배양한 후, 각 균액 0.1 mL에 제조예 1-2의 추출물 혼합물 1 mL를 처리하고 잘 현탁한 후 실온에서 5 분간 방치하였다. 대조군은 균액에 PBS(Phosphate Buffer Saline) 완충액 1 mL를 넣고 잘 현탁한 후 실온에서 5 분간 방치하였다. 상기 방치하였던 시험군 및 대조군 각각을 배양하였다. 황색포도구균(Staphylococcus aureus) 및 표피포도구균(Staphylococcus epidermidis)은 TSA(Tryptoic Soy Agar, 대두카제인소화한천)배지에서 호기성 조건, 37℃로 1 일 간 배양하였으며, 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)는 혈액 TSA(Blood TSA) 배지에서 혐기성 조건, 37℃로 4 일 간 배양하였다.
각 군에서 형성된 집락(colony)수를 계수하고, 제조예 1-2의 추출물 혼합물 처리군의 감소율(%)을 다음과 같은 식으로 계산하였다.
식
감소율(%)=[초기균수(CFU/mL)-시간경과 후 균수(CFU/mL)]/초기균수(CFU/mL) X 100
실험 결과를 도 1 및 하기 표 1에 나타내었다.
| 시험 균주 | 초기균수(CFU/mL) | 결과값(CFU/mL) | 저해율(%) |
| 황색포도구균 (Staphylococcus aureus) |
2.11 x 104 | 15,250 | 27.6 |
| 표피포도구균 (Staphylococcus epidermidis) |
1.04 x 105 | 60,200 | 42.1 |
| 큐티박테리움 아크네스 (Cutibacterium acnes) |
2.08 x 104 | 6,350 | 69.4 |
도 1 및 표 1에 나타난 바와 같이, 제조예 1-2의 추출물 혼합물은 우수한 항균 활성이 있음을 알 수 있었다. 특히, 대표적인 여드름균인 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes)를 69.4%의 저해율로 저해하였으므로, 여드름 개선 효과가 우수함을 알 수 있었다.
<실시예 2> 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물 혼합물의 항염증 활성 분석
상기 제조예 1-2에 의하여 제조된 추출물 혼합물의 세포내 일산화질소(Nitric oxide, 이하 "NO") 생성 억제 효과를 평가하여 항염증 활성을 분석하였다. 생쥐의 대식 세포인 Raw264.7 세포주에 리포폴리사카라이드(Lipopolysaccharide, LPS)(Sigma, St. Louis, MO)를 처리하여 인위적으로 NO의 생성을 유도한 후, 추출물 혼합물을 처리하여 효과를 평가하였다. 아무것도 처리하지 않은 무처치 대조군, LPS만을 처리한 LPS 처리 대조군, LPS와 10%의 추출물 혼합물을 함께 처리한 시험군인 LPS 및 추출물 혼합물 처리군으로 구분하고 각각의 NO 농도를 확인하여 추출물 혼합물의 효과에 대하여 평가하였다. RAW 264.7 세포는 한국세포주연구재단(Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 세포는 Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)에 10% 소 태아 혈청(fetal bovine serum, FBS)，100 unit/페니실린, 100 μg/mL 스트렙토마이신을 혼합한 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2의 완전습윤 조건에서 배양하였으며, 배양에 사용된 시약은 모두 Gibco BRL Co.(Grand Island, NY, USA)의 제품을 구입하여 사용하였다. 세포 배양액은 3 일마다 교체하였고 세포의 수가 80 % 이상 성장하면 계대배양하면서，2 주 동안 세포를 안정화시킨 후 실험을 진행하였다. 세포로부터 생성되는 NO의 양은 그리스 시약(Griess reagent)(1.0% sulfanilamide, 0.1% N-[1-naphtyl]-ethylene diamine dihydrochloride, 5.0% phosphoric acid)를 이용하여 측정하였다.
RAW 264.7 세포를 24 웰 플레이트에 2.5 x 105 세포/웰로 분주하여 24 시간 동안 37℃, 5% CO2 세포 배양기(HERA Cell VIOS 160i，Thermo, GERMANY)에서 안정화시킨 후 24 웰 플레이트의 상층액을 제거하고 LPS(1.0 μg/mL)를 처리한 후 시험군에만 총 시약 대비 10%의 제조예 1-2의 추출물 혼합물을 추가 처리하고 배양하였다.
24 시간 후 세포배양 상등액에 그리스 시약을 넣고 실온에서 15 분간 반응시킨 후 Micro plate Multi-Reader(Biotek，USA)를 이용하여 540 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였으며，아질산나트륨(Sodium nitrite, NaNO2) 표준곡선을 작성하여 함량을 계산하고, 그 결과를 도 2 및 하기 표 2에 나타내었다.
| - | NO (μM) | 아질산염(nitrite)(%) |
| 무처치 대조군 | 6 | 13 |
| LPS 처리 대조군 | 50 | 100 |
| LPS 및 추출물 혼합물 처리군 | 26 | 53 |
표 2에 나타난 바와 같이, NO의 농도는 무처치 대조군에서 6 μM, LPS 처리 대조군에서 50 ± 0.02 μM, LPS 및 추출물 혼합물 처리군에서 26 ± 0.03 μM으로 확인되었다. 또한, LPS에 의해 유도된 아질산염(nitrite)의 함량을 100%로 하였을 때, 아질산염 함량이 대조군에서 13%, LPS 및 추출물 혼합물 처리군에서 53%로 나타났다. 이러한 실험 결과를 통하여, 제조예 1-2의 추출물 혼합물이 NO 생성을 억제하는 항염증 효과가 우수함을 알 수 있었다.
<실시예 3> 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물 혼합물의 항산화 활성 분석
3-1. DPPH 라디칼 소거능 분석
제조예 1-2의 추출물 혼합물의 항산화능을 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 분석 (assay)을 통해 자유라디칼 소거능을 확인함으로써 검증하였다. 양성 대조군으로는 피부 미백원료로 사용되는 화합물인 아스코르브산(L-Ascorbic acid, VitaminC)을 1000 ppm으로 사용하였고, 음성 대조군으로는 멸균수를 사용한 시료 비첨가군을 사용하여 비교평가 하였다. 10 mg/mL의 제조예 1-2의 추출물 혼합물을 0.2 mM DPPH과 1:1의 부피비로 혼합하여 30 분간 암실에서 반응시킨 후 517 nm에서 Microplate reader(Epoch, BioTek)로 흡광도를 측정하였다. 상대적인 자유라디칼 소거 활성(%)을 다음과 같은 식으로 계산하고 하기 표 3에 나타내었다.
DPPH 자유라디칼 소거능(%)=(1-Absorbancesample/Absorbancecontrol)Х100%
(Absorbancesample: 시료 첨가시의 흡광도, Absorbancecontrol: 시료 비첨가시 흡광도)
| 시료 | 항산화력 (%) (DPPH 라디칼 소거능) |
| 양성 대조군(L-Ascorbic acid) | 100.0 |
| 추출물 혼합물 | 97.2 |
표 3에 나타난 바와 같이, 제조예 1-2의 추출물 혼합물은 DPPH 라디칼 소거능이 뛰어나 우수한 항산화 효과를 가지는 것을 알 수 있었다.
3-2. ABTS 라디칼 소거능 분석
제조예 1-2의 추출물 혼합물의 항산화능을 ABTS(2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)) 분석(assay)을 통해 자유라디칼 소거능을 확인함으로써 검증하였다.
7 mM ABTS 수용액과 2.45 mM 과황산칼륨(potassium persulfate)을 1:1의 비율로 혼합하여 상온, 암실에서 15 시간 방치하여 ABTS 라디칼을 형성하였다. ABTS 라디칼 양이온을 UV/VIS 분광광도계를 이용하여 734 nm에서 흡광도가 0.700(±0.050)이 되도록 에탄올로 희석하였다. 희석한 ABTS 라디칼 양이온 용액과 10 mg/mL의 제조예 1-2의 추출물 혼합물을 19:1의 부피비로 혼합하여 30 분간 암실에서 반응시킨 후 734 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성 대조군으로는 피부 미백원료로 사용되는 화합물인 아스코르브산(L-Ascorbic acid, VitaminC)을 1000 ppm으로 사용하였고, 음성 대조군으로는 멸균수를 사용한 시료 비첨가군을 사용하여 비교평가 하였다. 상대적인 자유라디칼 소거 활성(%)을 다음과 같은 식으로 계산하고 하기 표 4에 나타내었다.
ABTS 자유라디칼 소거능(%)=(1-Absorbancesample/Absorbancecontrol)Х100%
(Absorbancesample: 시료 첨가시의 흡광도, Absorbancecontrol: 시료 비첨가시 흡광도)
| 시료 | 항산화력 (%) (ABTS 라디칼 소거능) |
| 양성 대조군(L-Ascorbic acid) | 100.0 |
| 추출물 혼합물 | 100.2 |
표 4에 나타난 바와 같이, 제조예 1-2의 추출물 혼합물은 ABTS 라디칼 소거능이 뛰어나 우수한 항산화 효과를 가지는 것을 알 수 있었다.
Claims (5)
- 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 참외 추출물, 상기 모자반 추출물, 상기 작약뿌리 추출물 및 상기 청각 추출물의 혼합중량비가 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10 : 1 내지 10인 것인, 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 참외 추출물, 상기 모자반 추출물, 상기 작약뿌리 추출물 및 상기 청각 추출물은 유기용매, 물 또는 이들의 혼합용매로 추출된 것인, 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 유기용매는 C1 내지 C6의 저급 알코올, 석유 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트, 및 아세톤으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서, 여드름 개선 효과를 갖는 것인, 항균, 항염증 또는 항산화용 화장료 조성물.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020220134426A KR20240054098A (ko) | 2022-10-18 | 2022-10-18 | 참외 추출물, 모자반 추출물, 작약뿌리 추출물 및 청각 추출물을 포함하는 화장료 조성물 |
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|---|---|
| KR20240054098A true KR20240054098A (ko) | 2024-04-25 |
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ID=90885013
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|---|---|---|---|---|
| KR101285797B1 (ko) | 2011-09-07 | 2013-07-12 | 주식회사 코리아나화장품 | 피페리틸마그놀올을 함유하는 항산화, 주름 개선, 미백, 항염 및 항균 효과를 가지는 화장료 조성물 |
-
2022
- 2022-10-18 KR KR1020220134426A patent/KR20240054098A/ko unknown
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