KR20240022003A - 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents
인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물 및 그 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물에 대한 것이다.
Description
본 발명은 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물 및 그 제조방법에 대한 것이다.
여성의 건강을 위협하는 질의 오염 (곰팡이균등 각종 세균에 의한)은 각종 여성 질환 및 불임의 원인이 될 수 있다. 여성의 75%가 일생에 한 번 이상 경험하며 45%의 여성이 1년에 2회 이상 경험하게 되는 흔한 병으로서 매우 심각한 수준이다. 시중에 여성 질 세정용 의료 제품들이 시판중에 있으나, 이 경우 질 내부에 사용되는 물질은 대부분이 요오드 등을 함유하는 화학적 조성물의 제품이다. 포비돈-요오드는 칸디다성 질염 또는 트리코모나스 질염 및 기타 질 감염증의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 요오드 등의 과민 증상이나 점막 손상에 의해 작열감, 궤양, 접촉성 피부염을 유발할 우려가 있고 혈중 총 요오드 수치가 상승하여 갑상성 기능 저하증을 유발할 수도 있다.
다만 천연 물질-유래의 항균제라 하더라도 농약의 잔류, 경제적인 측면, 항균 활성 등을 고려하였을 때 이들을 만족시키는 항진균제의 개발이 여전히 요구되고 있다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명의 목적은 인진쑥으로부터 추출된 추출물을 포함하는 여성 생식기 세정, 질염증, 여성 생식기 소양증 및 악취제거에 우수한 효과를 갖는 여성 청결제 조성물, 그것의 사용방법 및 제조 방법을 제공하는데 있다.
상기한 과제 해결을 위하여 본 발명은 하기와 같은 과제의 해결 수단을 제공한다.
본 발명의 일측면은 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 발효물은 인진쑥 추출물을 유산균 균주로 접종하여 발효시킨 것인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 추출물은 인진쑥의 50% 내지 90% 에탄올 수용액 추출물이며, 상기 유산균은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 발효물은 페놀릭 산(Phenolic acid)을 포함하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 가시여지 잎 조다당 분획물을 더 포함하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
일 구현예에 있어서, 상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎의 열수 추출물로부터 분리된 조다당을 포함하는 것인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 항염효과가 있으며, DPPH radical 소거능이 있으며, VEGF 단백질의 발현을 증대시키는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 질내 유해균인 가드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis) 균 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 중 어느 하나 이상을 억제하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서,상기 조성물은 식품 조성물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은 상기 본 발명의 일측면에 따른 여성 청경제 조성물의 제조방법에 있어서, 인진쑥 추출물을 제조 하는 단계; 및 인진쑥 추출물을 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유산균으로 발효하여 인진쑥 발효물을 제조하는 단계;를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 인진쑥 추출물은 인진쑥을 50% 내지 90%의 에탄올 수용액으로 추출하여 제조하는 것을 포함하며, 상기 인진쑥 발효물을 제조하는 단계는 유산균을 인진쑥 추출물에에 접종 후 20 내지 60 시간 동안 발효 하는 것을 포함하는, 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 있어서,상기 방법은 가시여지 잎 조다당 분획물을 제조하는 단계; 및 제조된 가시여지 잎 조다당 분획물과 인진쑥 발효물을 혼합하는 단계;를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 여성 청결제 조성물은 식용 원료에서 추출한 물질만을 유효 성분으로 사용하므로 화학약품의 접촉우려가 없어 인체 내에 무해하다. 또한 여성의 질 내부의 곰팡이균등을 포함한 각종 유해균들을 효과적으로 제거하여 여성 생식기 청결에 도움을 줄 수 있다. 특히 냉, 대하, 여성 생식기 악취 및 여성 생식기 소양증의 유발균을 효과적으로 억제할 수 있으므로 여성 생식기의 냉, 대하, 소양증을 억제하거나 악취를 제거하는데 유용하다.
도 1은 본원발명 실시예 1의 인진쑥 추출물 및 인진쑥 발효물의 제조 공정 개략도이다.
도 2는 실험예 1의 결과이다.
도 3은 실험예 2의 결과이다.
도 4는 실험예 3의 결과이다.
도 5는 실험예 4의 결과이다.
도 6은 실험예 5의 결과로, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 CELL에서의 단백질 발현 측정 결과이다.
도 7은 실험예 5의 결과로, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 cell에 대한 발효인진쑥의 항염증 효능을 알아보기 위한 RT-PCR 평가 결과이다.
도 8은 실험예 6에서 Human 내피세포인 Endothelial cell에서 세포활성단백질 발현 측정 결과이다.
도 9는 실험예 6에서 세포활성 단백질 발현에 관여하는 PCNA 발현량 측정 결과이다.
도 10은 실험예 7의 항균력 평가결과이다.
도 11은 실험예 8의 ROS 발현량 측정결과이다.
도 2는 실험예 1의 결과이다.
도 3은 실험예 2의 결과이다.
도 4는 실험예 3의 결과이다.
도 5는 실험예 4의 결과이다.
도 6은 실험예 5의 결과로, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 CELL에서의 단백질 발현 측정 결과이다.
도 7은 실험예 5의 결과로, 마우스 대식세포인 RAW 264.7 cell에 대한 발효인진쑥의 항염증 효능을 알아보기 위한 RT-PCR 평가 결과이다.
도 8은 실험예 6에서 Human 내피세포인 Endothelial cell에서 세포활성단백질 발현 측정 결과이다.
도 9는 실험예 6에서 세포활성 단백질 발현에 관여하는 PCNA 발현량 측정 결과이다.
도 10은 실험예 7의 항균력 평가결과이다.
도 11은 실험예 8의 ROS 발현량 측정결과이다.
달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 성분, 반응 조건, 성분의 함량을 표현하는 모든 숫자, 값 및/또는 표현은, 이러한 숫자들이 본질적으로 다른 것들 중에서 이러한 값을 얻는 데 발생하는 측정의 다양한 불확실성이 반영된 근사치들이므로, 모든 경우 "약"이라는 용어에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 기재에서 수치범위가 개시되는 경우, 이러한 범위는 연속적이며, 달리 지적되지 않는 한 이러한 범 위의 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지의 모든 값을 포함한다. 더 나아가, 이러한 범위가 정수를 지칭하는 경우, 달리 지적되지 않는 한 최소값으로부터 최대값이 포함된 상기 최대값까지를 포함하는 모든 정수가 포함된다.
본 명세서에 있어서, 범위가 변수에 대해 기재되는 경우, 상기 변수는 상기 범위의 기재된 종료점들을 포함하는 기재된 범위 내의 모든 값들을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, "5 내지 10"의 범위는 5, 6, 7, 8, 9, 및 10의 값들뿐만 아니라 6 내지 10, 7 내지 10, 6 내지 9, 7 내지 9 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 5.5, 6.5, 7.5, 5.5 내지 8.5 및 6.5 내지 9 등과 같은 기재된 범위의 범주에 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다. 또한 예를 들면, "10% 내지 30%"의 범위는 10%, 11%, 12%, 13% 등의 값들과 30%까지를 포함하는 모든 정수들뿐만 아니라 10% 내지 15%, 12% 내지 18%, 20% 내지 30% 등의 임의의 하위 범위를 포함하고, 10.5%, 15.5%, 25.5% 등과 같이 기재된 범위의 범주 내의 타당한 정수들 사이의 임의의 값도 포함하는 것으로 이해될 것이다.
이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.
여성의 건강을 위협하는 질의 오염 (곰팡이균등 각종 세균에 의한)은 각종 여성 질환 및 불임의 원인이 될 수 있다. 여성의 75%가 일생에 한 번 이상 경험하며 45%의 여성이 1년에 2회 이상 경험하게 되는 흔한 병으로서 매우 심각한 수준이다. 시중에 여성 질 세정용 의료 제품들이 시판중에 있으나, 이 경우 질 내부에 사용되는 물질은 대부분이 요오드 등을 함유하는 화학적 조성물의 제품이다. 포비돈-요오드는 칸디다성 질염 또는 트리코모나스 질염 및 기타 질 감염증의 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 요오드 등의 과민 증상이나 점막 손상에 의해 작열감, 궤양, 접촉성 피부염을 유발할 우려가 있고 혈중 총 요오드 수치가 상승하여 갑상성 기능 저하증을 유발할 수도 있다. 다만 천연 물질-유래의 항균제라 하더라도 농약의 잔류, 경제적인 측면, 항균 활성 등을 고려하였을 때 이들을 만족시키는 항진균제의 개발이 여전히 요구되고 있다.
이에, 본 발명의 발명자들은 인진쑥 발효물을 포함하는 여성 청결제 조성물을 제공하고자 한다.
또한, 일 구현예에 있어서, 상기 조성물에는 가시여지 잎의 조다당 분획물을 더 포함하는 여성 청결제 조성물을 제공하고자 한다.
상기 인진쑥(Artemisia campestris)은 약용으로 쓰이는 쑥 중에서 현재까지 그 효능과 효과가 가장 뛰어난 쑥으로서 한방에서 인진호(茵蔯蒿)로 불린다. 인진쑥은 해발 300m 이상의 고지에서만 자생하며, 나무처럼 곧게 1.8m까지 자라는 국화과의 식물로 다양한 약리작용이 있다. 동의보감을 비롯한 각종 한방문헌에 의하면, 인진쑥은 몸을 따뜻하게 하며 경락을 잘 통하게 하여 황달 등의 간질환을 비롯한 100여 가지의 효능이 있다고 되어 있으며, 냉, 대하 등의 각종 부인병을 다스리는 데 없어서는 안 될 약재로 설명하고 있다.
한편, 가지여지는 목련목 포포나무과에 속하며, 열대 및 아열대 기후에서 자라는 식물인 가시여지(Annona muricata)의 잎에는 플라보노이드, 다당체, 테르페노이드, 탄닌 등의 여러가지 생리활성 성분들이 함유되어 있어, 가시여지 추출물은 항암, 항산화 등의 다양한 생리적 효능이 있다고 알려져 있나, 이로부터 획득된 추출물 또는 분획물이 여성 청결제로서의 효과를 발휘할 수 있는지에 대한 연구는 미비한 실정이다. 이에, 본 발명자는 가시여지 잎에서 분리한 조다당 성분들이 여성 청결제로서 효과가 있는지 연구하였으며, 이를 기초로 상기 인진쑥 발효물과 혼합하여 여성청결제로 제공할 수 있는 기술을 제공한다.
상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎의 추출물로부터 조다당을 분리하여 획득한 것을 포함할 수 있으며, 그 획득 과정을 특히 제한하는 것은 아니고, 상세하게는 상기 가시여지 잎 열수 추출물로부터 분리된 조다당(Crude Polysaccharides)일 수 있다.
예를 들어, 상기 가시여지 잎의 열수 추출물은 가시여지 잎 분말을 증류수에 넣고 가열하여 획득한 것으로, 예를 들어, 50g의 가시여지 잎 분말을 100 내지 1000mL, 바람직하게는 200 내지 600mL, 예를 들어 400mL의 증류수 에 넣고 100℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 고체를 여과로 제거하여 획득된 액상의 추출물일 수 있다.
나아가, 상기 가시여지 잎의 열수 추출물로부터 조다당을 분리하기 위해 알코올을 사용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 상기 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 적어도 하나일 수 있으며, 상기 알코올로써 에탄올을 사용할 경우 약 70% 이상의 에탄올 농도를 갖는 알코올을 사용할 수 있다. 상기 알코올은 가시여지 잎의 열수 추출물 300 mL 당 600 내지 900mL를 사용할 수 있으며, 예를 들어, 50g의 가시여지 잎 분말을 1000 mL의 증류수에 넣고 100℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 고체를 여과하여 획득된 액상의 추출물을 300 mL이 될 때까지 가열한 후, 70%의 알코올을 700 mL 혼합하여 4℃에서 12시간 방치하였다. 그 후, 원심분리를 통해 획득한 액상의 분획물일 수 있다.
한편, 본 발명의 가시여지 잎 조다당 분획물을 건조하기 위한 건조 단계를 추가로 수행할 수 있으며, 이때 건조 공정은 특히 제한되는 것은 아니며, 예를 들어 자연건조, 열풍 건조, 동결 건조 등에 의해 수행될 수 있다. 바람직하게는 동결 건조를 수행하며, 상기 동결건조 공정은 당해 기술분야에서 수행되는 통상적인 조건 하에서 수행될 수 있고, 이 때 동결건조 공정은 건조 효율이 우수하고 잔류 용매가 없어 바람직하다.
상기 가시여지 잎 조다당 분획물을 제조하는 방법은 하기와 같다.
상세하게, 본 발명은 가시여지 잎을 열수 추출하여 가시여지 잎 열수 추출물을 획득하는 단계; 및 상기 가시여지 잎 열수 추출물로부터 조다당을 분리하여 가시여지 잎 조다당 분획물을 획득하는 단계를 포함하는, 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
상기 가시여지 잎 추출물을 획득하는 단계는 상기 열수 추출물과 알코올을 혼합하여 혼합물을 획득하는 단계;및 상기 혼합물을 고액분리하여 조다당을 분리하는 단계를 포함할 수 있으며, 앞서 서술한 가시여지 잎 열수 추출물을 획득하는 방법을 사용하여 수행할 수 있다. 즉, 상기 가시여지 잎 조다당 분획물을 획득하는 단계는 상기 열수 추출물에 알코올을 주입하여 조다당을 분리하는 것으로, 앞서 서술한 가시여지 잎의 열수 추출물로부터 조다당을 획득하는 방법을 사용하여 수행할 수 있다.
이하, 본 발명의 다양한 측면에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명의 일측면은 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 여성 청결제 조성물의 제형은 용제, 현탁제, 유제 틴크제, 시럽제, 분무제, 엑기스제와 같은 액상 제제인 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 여성 생식기 칸디다증에 효과가 있는 것을 특징으로 하는 것인 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 여성 생식기 소양증 또는 악취의 완화에 효과가 있는 것을 특징으로 하는 것인 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 발효물은 인진쑥 추출물을 유산균 균주로 접종하여 발효시킨 것인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 추출물은 인진쑥의 50% 내지 90% 에탄올 수용액 추출물이며, 상기 유산균은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 발효물은 페놀릭 산(Phenolic acid)을 포함하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
일 구현예에 있어서, 상기 인진쑥 발효물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.01중량% 내지 80 중량%로 포함된다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 가시여지 잎 조다당 분획물을 더 포함하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
일 구현예에 있어서, 상기 가지여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎의 열수 추출물의 탄수소 1 내지 5의 알코올 또는 알코올 수용액의 분획물이다. 상기 탄소수 1 내지 5의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올 일 수 있다. 바람직하게, 상기 가지여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎 열수 추출물의 50 내지 90% 에탄올 수용액 분획물일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 조성물 전체 중량에 대하여 0.01중량% 내지 80 중량%로 포함된다.
일 구현예에 있어서, 상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎의 열수 추출물로부터 분리된 조다당을 포함하는 것인, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 인진쑥 발효물과 상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 1: 0.1 내지 10 의 중량비로 포함되는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 항염효과가 있으며, DPPH radical 소거능이 있으며, VEGF 단백질의 발현을 증대시키는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 질내 유해균인 가드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis) 균 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 중 어느 하나 이상을 억제하는, 여성 청결제 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일측면에 있어서,상기 조성물은 식품 조성물인, 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 연질 또는 경질 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구 투여할 수 있으며, 하루에 체중 1 ㎏당 0.1 내지 500 ㎎, 구체적으로 1 내지 100 ㎎의 양으로 투여되도록 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 식이, 투여 시간, 투여 방법, 배설률, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 연질 또는 경질 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 드링크제, 에어로졸 등의 경구형 제형, 연고, 크림 등의 피부 외용제, 좌제, 주사제 및 멸균 주사용액 등을 비롯하여 약제학적 제제에 적합한 어떠한 형태로든 제형화하여 사용될 수 있으며, 구체적으로 주사제 또는 피부 외용제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은, 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 비경구, 경구 등의 다양한 경로로 투여될 수 있으며, 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 약학 조성물은, 통상의 기술자가 용이하게 적용할 수 있는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 특히 본 명세서에 따른 약학 조성물은 피부 외용제로서 피부 표면에 도포되는 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 분말제, 드링크제와 같은 액제, 캐러멜, 겔, 바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 식품 조성물에 있어서, 상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1 mg/kg/일 내지 5000 mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 다른 측면에 따른 식품 조성물은, 예를 들어, 츄잉껌, 캐러멜 제품, 캔디류, 빙과류, 과자류 등의 각종 식품류, 청량 음료, 미네랄 워터, 알코올 음료 등의 음료 제품, 비타민이나 미네랄 등을 포함한 식품류일 수 있다. 상기 외에 본 발명의 다른 측면에 따른 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 다른 측면에 따른 기능성 식품 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 명세서의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20중량부의 범위에서 포함되는 것이 일반적이다.
본 발명의 다른 측면은 상기 본 발명의 일측면에 따른 여성 청경제 조성물의 제조방법에 있어서, 인진쑥 추출물을 제조 하는 단계; 및 인진쑥 추출물을 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유산균으로 발효하여 인진쑥 발효물을 제조하는 단계;를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 있어서, 상기 인진쑥 추출물은 인진쑥을 50% 내지 90%의 에탄올 수용액으로 추출하여 제조하는 것을 포함하며, 상기 인진쑥 발효물을 제조하는 단계는 유산균을 인진쑥 추출물에에 접종 후 20 내지 60 시간 동안 발효 하는 것을 포함하는, 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 측면에 있어서,상기 방법은 가시여지 잎 조다당 분획물을 제조하는 단계; 및 제조된 가시여지 잎 조다당 분획물과 인진쑥 발효물을 혼합하는 단계;를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법을 제공한다.
이하, 본 발명을 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 인진쑥 발효물 제조
하기와 같은 방법으로 인진쑥 발효물을 제조하였다.
(1) 인진쑥 추출물의 제조
인진쑥은 농협파머스마켓에서 구입하였다. 상기 인진쑥을 70% 에탄올 수용액으로 60도씨의 온도에서 3번 반복 추출하여 인진쑥 추출물을 수득하였다.
(2) 인진쑥 발효물의 제조
상기 (1)에서 제조된 인진쑥 추출물에 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)의 4가지 균주를 각 1%씩 총 4%로 접종하였다.
상기 4가지 균주 모두 Alibaba에서 구매하였다.
접종된 인진쑥 추출물을 약 48시간 동안 발효를 진행하였다. 이후 여과 및 증발 공정을 거친 후 동결건조시켜 인진쑥 발효물을 수득하였다.
인진쑥 발효물의 제조 공정은 도 1과 같았다.
실험예 1. 인진쑥 추출물 및 인진쑥 발효물의 성분 분석
상기 실시예 1의 인진쑥 추출물 및 인진쑥 발효물의 성분을 하기와 같이 분석하였다.
- HPLC system :Thermo fisher scientific HPLC system
- 천연 항산화제 및 항염증제에 대한 성분 분석
- 이동상의 최적화 : column에 대해 물, methanol, acetonitrile 및 산등을 이용하고 gradient 또는 isocratic 조건을 적용하여 최적 분석조건을 확보함
- 고정상의 최적화 : 다양한 제조사로부터 확보한 길이 및 충진제가 다른 다양한 column을 적용하여 최적 분리능을 보이는 고정상을 확보함
- 검출조건의 최적화 : 활성성분이 선택적으로 높은 감도로 검출되는 검출파장을 찾아 검출 조건을 최적화함.
가장 주된 성분으로 Phenolic acid로 확인하였다.
실험결과는 도 2와 같았다.
생물전환을 통하여 저분자 문질로 분해된 것으로 사료되며 이러한 저분자 페놀 화합물은 인체 흡수율 등에 좋을것으로 예상된다. 따라서 발효 인진쑥이 여성청결제 및 화장품의 소재가 될 수 있음을 제시하는 결과이다.
실험예 2. 항산화 활성 확인
(1) 실험방법
상기 실시예 1의 인진쑥 추출물 및 인진쑥 발효물을 대상으로 DPPH radical 소거능 실험 및 ABTS assay 실험을 진행하였다.
(2) 실험결과
실험결과는 도 3과 같았다.
실험결과 DPPH radical 소거능이 농도 의존적으로 높아지는 것을 확인 할 수 있었다. DPPH radical 소거능이 인진쑥 추출물 보다 발효 인진쑥이 활성이 더 높은 것을 확인 할 수 있었다.
또한 ABTS assay 에서도 농도 의존적으로 소거 활성이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. ABTS assay 또한 DPPH assay와 마찬가지로 발효 인진쑥이 기존의 인진쑥 추출물에 비해 특히 저농도에서 효능이 뛰어난 것으로 확인하였다.
발효인진쑥의 환원력도 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인 할 수 있었다. 따라서 발효 인진쑥이 천연 항산화제 및 여성 청결제로 활용될 수 있음을 확인할 수 있는 결과를 확인하였다.
실험예 3. 세포 독성 평가
(1) 실험방법 : MTT assay를 이용한 세포독성 평가
마우스 유래 항염증 관련 세포주인 RAW cell, 인간 피부유래 세포인 HaCaT를 이용하여 발효인진쑥 소재의 피부독성평가 진행하였다.
(2) 실험결과
실험결과는 도 4와 같았다.
실험결과 발효 인진쑥 250ug/ml이하에서는 독성이 나타나지 않음을 확인하였다. 발효 인진쑥은 250ug/ml 부터 독성이 있으나 보다 더 낮은 농도에서 부터 항염증의 효과가 나타나므로 농도 조절에 따른 다양한 생리활성을 가질 수 있음을 확인하였다.
실험예 4. 항염증 평가
(1) 실험방법
Raw264.7 cell에 LPS 처리에 의한 염증 유발하엿고, Nitric Oxide 저해활성을 NO assay로 측정하였다.
(2) 실험결과
실험결과는 도 5와 같았다.
발효인진쑥은 Raw cell에서 100ug/ml농도로 NO를 억제하는 효능을 보였다.
실험예 5. 면연증강 효능 평가
(1) 실험방법
Raw 264.7 cell를 이용하여 면역관련 인자인 사이토카인의 발현량 측정하였다. 구체적으로 Western blot을 이용한 분자생물학적 효능 평가하였고, RT-PCR 을 이용한 항염증 인자 분석 평가를 진행하였다.
(2) 실험결과
실험결과는 도 6 및 도 7과 같았다.
도 6은 마우스 대식세포인 RAW 264.7 CELL에서의 단백질 발현 측정 결과이다.
도 7은 마우스 대식세포인 RAW 264.7 cell에 대한 발효인진쑥의 항염증 효능을 알아보기 위한 RT-PCR 평가 결과이다.
발효인진쑥은 면역관련 인자인 사이토카인의 발현량을 현저히 줄이는 것으로 나타났다.
실험예 6. 세포활성 단백질 발현 측정
(1) Endothelial cell에서 세포활성단백질 발현 측정하였다. 실험결과는 도 8과 같았다.
실험결과 발효 인진쑥은 세포혈관 생성 및 유지에 관여하는 VEGF( Vascular endothelial growth factor)의 발현을 증대시켰다. 또한, 세포자살 단백질에 관여하는 caspase-3의 발현은 효과적으로 억제하였고, B-cell Lymphma 2 ( BCL-2)의 발현 증대시켰다.
(2) Raw 264.7 cell을 이용하여 세포활성단백질 발현에 관여하는 PCNA 측정
Raw 264.7 cell를 이용하여 세포활성 단백질 발현에 관여하는 PCNA ( Proliferating cell Nuclear Antigen: 증식세포 항원) 발현 증대 측정하였다.
실험결과는 도 9와 같았다. 도 9는 세포활성 단백질 발현에 관여하는 PCNA 발현량 측정 결과이다.
실험예 7. 항균력 평가
실시예 1의 발효 인진쑥의 항균 활성을 평가하였다. 여성 질 내 유해균인 Gardnerella vaginalis와 candida albicans에 대한 발효 인진쑥의 항균 활성을 평가 하였다.
실험결과는 도 10과 같았다. 도 10에서 (a)는 가드네렐라, (b)는 칸디다 에서의 발효인진쑥의 저해환 항균력 테스트 결과이다.
실험결과 Gardnerella vaginalis의 경우, 발효 인진쑥은 각각의 농도 20mg/ml, 50mg/ml, 80mg/ml, 100mg/ml에서 모두 저해환을 보였다. candida albicans의 경우 발효인진쑥은 100mg/ml 에서 저해환을 보였다. 따라서, 본원발명의 발효 인진쑥은 질내 유해균의 생장 억제에 효과적임을 확인하였다.
실시예 2. 가시여지 잎 조다당 분획물의 제조
하기와 같은 방법을 통해 가시여지 잎의 추출물로부터 조다당을 분리하였다.
㈜토담에서 제공받은 건조된 가지여지 잎을 분쇄하여, 가지여지 잎 분말 50g에 400mL의 증류수를 가한 후 100℃ 에서 2시간 동안 열수추출 하였다.
추출물을 거름종이로 여과한 후, 여과액에 70% 에탄올을 가하여(여과액과 70% 에탄올의 비율 = 3:7), 4℃에서 12시간 동안 방치한 후, 원심분리(3,200rpm, 20분)하여 침지된 조다당을 분리하였다. 분리된 조다당을 가시여지잎 조다당 분획물이라 하였다.
실시예 3. 여성청결제 혼합물의 제조
상기 실시예 1의 인진쑥 발효물과 실시예 2의 가시여지 잎 조다당 분획물을 1:1의 중량비로 혼합하여 여성청결제 혼합물을 제조하였다.
실험예 8. ROS 발현량 측정
Raw264.7 cell에 LPS 처리에 의한 염증 유발하여 활성 산소종(Reactive oxygen species)을 측정하였다. 활성산소종은 산소분자로부터 유래된 여러 종류의 반응 분자와 자유라디칼을 말하며, 라디칼과 연관된 산소 화합물들은 산소호흡을 하는 생명체들에게 위험한 요인이 될 수 있다.
실험대상으로 실시예 1의 인진쑥 발효물과 실시예 3의 인진쑥 발효물 및 가시여지 잎 조다당 분획물의 혼합물을 Raw cell에 100ug/ml농도로 투여하여 ROS의 억제 효과를 확인하였다.
실험결과는 도 11과 같았다.
실험결과 발효인진쑥은 Raw cell에서 100ug/ml농도로 ROS를 억제하는 효능을 보였고, 발효인진쑥과 가지여지 잎 조다당 분획물의 혼합물은 발효인진쑥 단독 투여에 비하여 우수한 ROS 억제 효과를 보였다.
제형예
본 발명의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 명세서를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 연질 캡슐
실시예 3의 혼합물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 팜유 2mg, 식물성 경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 9mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 혼합하여 연질 캡슐 충진액을 제조한다. 1 캡슐당 400㎎씩 충진하여 연질 캡슐을 제조한다. 그리고, 상기와 별도로 젤라틴 66 중량부, 글리세린 24 중량부 및 솔비톨액 10 중량부의 비율로 연질 캡슐 시트를 제조하고 상기 충진액을 충진시켜 본 명세서에 따른 조성물 400mg이 함유된 연질캡슐을 제조한다.
[제형예 2] 정제
실시예 3의 혼합물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 갈락토올리고당 200㎎, 유당 60㎎ 및 맥아당 140㎎을 혼합하고 유동층 건조기를 이용하여 과립한 후 당 에스테르(sugar ester) 6㎎을 첨가한다. 이들 조성물 500mg을 통상의 방법으로 타정하여 정제를 제조한다.
[제형예 3] 드링크제
실시예 3의 혼합물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 포도당 10g, 구연산 0.6g, 및 액상 올리고당 25g을 혼합한 후 정제수 300㎖를 가하여 각 병에 200㎖씩 되도록 충진한다. 병에 충진한 후 130℃에서 4 내지 5초간 살균하여 드링크제를 제조한다.
[제형예 4] 과립제
실시예 3의 혼합물 8mg, 비타민 E 9mg, 비타민 C 9mg, 무수결정 포도당 250㎎ 및 전분 550㎎을 혼합하고, 유동층 과립기를 사용하여 과립으로 성형한 후 포에 충진하여 과립제를 제조한다.
[제형예 5] 건강음료
하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 건강음료를 제조하였다.
| 배합 성분 | 함량 |
| 실시예 3의 혼합물 | 1000 mg |
| 구연산 | 1000 mg |
| 올리고당 | 100 g |
| 타우린 | 1g |
| 정제수 | 잔량 |
통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균한다.
이상, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예를 통해 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징으로 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
Claims (13)
- 인진쑥 발효물을 유효성분으로 포함하는 여성 청결제 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 인진쑥 발효물은 인진쑥 추출물을 유산균 균주로 접종하여 발효시킨 것인, 여성 청결제 조성물.
- 제 2항에 있어서,
상기 인진쑥 추출물은 인진쑥의 50% 내지 90% 에탄올 수용액 추출물이며,
상기 유산균은 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인, 여성 청결제 조성물.
- 제 1항에 있어서,
상기 인진쑥 발효물은 페놀릭 산(Phenolic acid)을 포함하는, 여성 청결제 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 가시여지 잎 조다당 분획물을 더 포함하는, 여성 청결제 조성물.
- 제 5 항에 있어서,
상기 가시여지 잎 조다당 분획물은 가시여지 잎의 열수 추출물로부터 분리된 조다당을 포함하는 것인, 여성 청결제 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 항염효과가 있으며, DPPH radical 소거능이 있으며, VEGF 단백질의 발현을 증대시키는, 여성 청결제 조성물.
- 제 1 항에 있어서,
상기 조성물은 질내 유해균인 가드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis) 균 및 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 중 어느 하나 이상을 억제하는, 여성 청결제 조성물.
- 제 1항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 따른 여성 청경제 조성물의 제조방법에 있어서,
인진쑥 추출물을 제조 하는 단계; 및
인진쑥 추출물을 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis) 균주, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus), 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii) 및 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유산균으로 발효하여 인진쑥 발효물을 제조하는 단계;
를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법.
- 제 9 항에 있어서,
상기 인진쑥 추출물은 인진쑥을 50% 내지 90%의 에탄올 수용액으로 추출하여 제조하는 것을 포함하며,
상기 인진쑥 발효물을 제조하는 단계는 유산균을 인진쑥 추출물에에 접종 후 20 내지 60 시간 동안 발효 하는 것을 포함하는, 여성 청결제 조성물의 제조 방법.
- 제 9 항에 있어서,
상기 방법은 가시여지 잎 조다당 분획물을 제조하는 단계; 및
제조된 가시여지 잎 조다당 분획물과 인진쑥 발효물을 혼합하는 단계;를 포함하는 여성 청결제 조성물의 제조 방법.
- 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 약학 조성물인, 조성물.
- 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인, 조성물.
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