KR20240009973A - Il-34 안티센스 작용제 및 이의 사용 방법 - Google Patents

Il-34 안티센스 작용제 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20240009973A
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Abstract

본원은 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 IL-34 siRNA를 포함하는, IL-34에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 및 IL-34의 상승된 활성 또는 발현과 관련된 염증성 질환, 예컨대, 염증성 장 질환 및/또는 섬유증을 치료하는 방법을 개시한다. 염증성 질환 및/또는 섬유증의 치료에 유용하고 염증성 질환 및/또는 섬유증의 치료에 사용될 개시된 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 의약의 제조에 유용한, IL-34에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 IL-34 siRNA를 함유하는 약학 조성물도 개시한다.

Description

IL-34 안티센스 작용제 및 이의 사용 방법
관련 출원의 상호 참조
본원은 2021년 5월 17일에 출원된 미국 가출원 제63/201,887호의 이익 및 우선권을 주장하고, 이 출원의 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.
인터류킨-34(IL-34)는 류마티스 관절염과 같은 뼈 퇴행성 질환에서 염증 및 파골세포생성의 매개자인 대식세포 콜로니 자극 인자(MCSF1 및 MCSF-1로서도 알려져 있는 M-CSF)와 기능적으로 중첩되는 최근 발견된 사이토카인이다. 급성 염증성 질환 및 만성 염증성 질환은 아직 완전히 이해되지 않은 중요한 질환 범주이다.
예를 들어, 류마티스 관절염(RA)은 미국에서 대략 130만 명의 환자들이 앓고 있는 관절 및 뼈의 만성 자가면역 및 염증성 장애이다. RA로 고통 받고 있는 환자들 중에서 RA와 관련된 업무 장애의 유병률은 미국에서 대략 35%였으며, 총 의료 비용은 193억 달러 이상이었다. 골관절염(OA)은 관절에서 뼈를 덮고 있는 매끄러운 연골 관절 표면의 기계적 마모와 파괴를 수반하는, 관절의 만성 염증성 질환이다. OA는 관절염의 가장 흔한 형태이고 미국에서 3,250만 명의 성인들에게 영향을 미치며, 총 의료 비용은 1,360억 달러 이상이다. RA 또는 OA에 대한 의학적 치료법은 현재 존재하지 않는다.
염증성 장 질환은 미국에서 대략 140만 명의 환자들이 앓고 있는 위장관의 만성 염증성 장애이다. 이 질환은 미국에서 가장 널리 퍼진 5가지 위장 질환 부담 중 하나이고, 총 의료 비용은 17억 달러 이상이다. 미국에서는 매년 염증성 장 질환으로 인해, 의사 방문이 700,000건 이상이고, 입원이 100,000건 이상이며, 119,000명의 환자들이 장애를 겪고 있다. 의학적 치료법이 현재 존재하지 않으므로, 질환 관리는 평생 관리를 필요로 한다.
염증성 장 질환의 2가지 가장 흔한 형태는 크론병과 궤양성 결장염이다. 크론병은 전체 위장관에 영향을 미칠 수 있지만, 주로 회장(소장의 원위 또는 하부 부분)과 대장에 영향을 미친다. 궤양성 결장염은 주로 결장과 직장에 영향을 미친다. 염증성 장 질환의 병인은 완전히 이해되지 않았지만, 환경적 요인 및 유전적 요인 둘 다가 이 질환에서 역할을 하는 것으로 여겨진다. 환경적 요인은 섭취된 음식 및 의약에의 노출에 의해 영향을 받는 장내 세균총의 변경을 포함할 수 있다.
염증성 장 질환은 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 심한 경련, 근육 연축, 체중 감소, 영양실조, 발열 및 빈혈과 관련되어 있다. 염증성 장 질환을 가진 환자는 피부 병변, 관절통, 눈 염증 및 간 장애를 앓을 수도 있고, 궤양성 결장염을 앓고 있는 어린이는 성장 결함을 앓을 수 있다. 치명적인 경우는 드물지만, 이 증상들은 환자의 삶의 질을 저하시킨다.
따라서, 염증성 장애, 예컨대, 류마티스 관절염, 골관절염 또는 염증성 장 질환을 치료하는 신뢰할 수 있는 방법을 개발할 절실한 필요성이 있다. 광범위한 환자들에 걸쳐 증상으로부터의 효과적 및 영구적 완화를 제공하고 부정적인 부작용, 또는 염증과 관해의 주기와 관련되지 않는 치료 방법을 확인할 필요성도 있다.
본원은 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 조성물, 및 이 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본원은 (a) 5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3) 또는 (b) 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5)에 따른 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 개시하는 것으로, 이때 상기 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 사이티딘은 화학적으로 변형되고, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)(2'-MOE) 뉴클레오사이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드의 10개 이하의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 6개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 8개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 하기 (a) 내지 (d)로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다: (a) 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임; (b) 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임; (c) 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및 (d) 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 IL-34에 상보적이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 siRNA이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합 및 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 길이가 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개 또는 30개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 길이가 20개 뉴클레오타이드이거나, 길이가 20개 내지 25개, 20개 내지 30개, 20개 내지 35개, 25개 내지 30개, 25개 내지 35개, 또는 30개 내지 35개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 길이가 20개, 25개 또는 30개 이하의 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 길이가 20개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 길이가 20개 뉴클레오타이드이다.
특정 실시양태에서, 본원은 (a) 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 (b) 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 개시한다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합하다.
특정 실시양태에서, 본원은 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 염증성 질환을 치료하는 방법으로서, 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 변경된 IL-34 발현과 관련되어 있다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생성을 억제한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자의 세포에서 IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제한다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 감소시키거나 억제한다. 일부 실시양태에서, 세포는 장 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 장 간질 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 장 섬유협착(fibrostricture)의 일부를 형성한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 변경된 IL-34 발현과 관련된 암의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 암을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 암은 상승된 IL-34 발현을 가진다. 일부 실시양태에서, 암은 결장암이다.
특정 실시양태에서, 본원은 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소시키거나 제거하는 방법으로서, 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 섬유성 협착은 장에 위치한다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 섬유협착 크론병이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 치료 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 활막 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 및 신원성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 환자는 크론병도 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 장 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 약학 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 환자는 크론병도 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 폐 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 약학 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 환자는 크론병도 앓고 있다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 활막 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 약학 유효량의 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 본원에 개시된 약학 조성물을, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 환자는 인간이다.
특정 실시양태에서, 본원은 염증성 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 개시한다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 또는 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 류마티스 관절염 또는 골관절염이다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 섬유협착 크론병이다.
특정 실시양태에서, 본원은 의약으로서 사용하기 위한, 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 개시한다.
특정 실시양태에서, 본원은 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한, 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 개시한다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 또는 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병이다. 일부 실시양태에서, 염증성 장 질환은 섬유협착 크론병이다.
특정 실시양태에서, 본원은 섬유증의 치료에 사용하기 위한, 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 개시한다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 활막 섬유증이다. 일부 실시양태에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 및 신원성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
도 1은 배양된 HT-29 세포에서 IL-34 발현의 조절에 대한 IL-34 ASO의 결과를 보여준다. IL-34 RNA 전사체를 실시간 PCR로 평가하였다. 수준은 β-액틴으로 정규화된다. (CTR=스크램블된 ASO, 1=서열번호 17, 2=서열번호 19, 3=서열번호 42, 4=서열번호 43). 값은 4회 실험의 평균 ± SEM이다. 일원 분산 분석에 이어 던넷(Dunnett)의 사후 검정을 이용하여 군들 사이의 차이를 비교하였다. IL-34 ASO 대 CTR, *** P<0.001.
도 2는 배양된 AGS 세포에서 IL-34 발현의 조절에 대한 IL-34 ASO의 결과를 보여준다. IL-34 RNA 전사체를 실시간 PCR로 평가하였다. 수준은 β-액틴으로 정규화된다. (CTR=스크램블된 ASO, 1=서열번호 17, 2=서열번호 19, 3=서열번호 42, 4=서열번호 43). 값은 4회 실험의 평균 ± SEM이다. 일원 분산 분석에 이어 던넷의 사후 검정을 이용하여 군들 사이의 차이를 비교하였다. IL-34 ASO 대 CTR, *** P<0.001.
도 3은 UC 환자 유래 LPMC에서 IL-34 발현의 조절에 대한 IL-34 ASO의 결과를 보여준다. IL-34 RNA 전사체를 실시간 PCR로 평가하였다. 수준은 β-액틴으로 정규화된다. (CTR=스크램블된 ASO, 1=서열번호 17, 2=서열번호 19, 3=서열번호 42, 4=서열번호 43). 값은 3회 실험의 평균 ± SEM이다. 일원 분산 분석에 이어 던넷의 사후 검정을 이용하여 군들 사이의 차이를 비교하였다. IL-34 ASO 대 CTR, ** P<0.01, *** P<0.001.
본원은 특히, IL-34 핵산 또는 이의 일부에 상보적이고(예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드) 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 상기 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 조성물, 및 자가면역 또는 염증성 질환(예를 들어, 류마티스 관절염(RA), 골관절염(OA), 크론병 또는 궤양성 결장염) 또는 섬유증과 같은 질환 또는 장애를 치료하거나, 감소시키거나 억제하기 위해 상기 조성물을 사용하는 방법을 개시한다.
정의
본원에서 사용된 바와 같이, "올리고뉴클레오타이드" 또는 "폴리뉴클레오타이드"는 교환 가능하게 사용되며 짧은 DNA 또는 RNA 분자를 의미한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드는 포스페이트 골격 또는 2' 당 위치에서 변형될 수 있는 2'-데옥시리보뉴클레오타이드(올리고데옥시리보뉴클레오타이드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 포스포로티오에이트(PS) 골격 변형을 갖고, 이때 포스페이트 골격 내의 비-가교 산소 원자들 중 하나 이상이 황 원자로 교체된다. 일부 실시양태에서, "포스포로티오에이트 올리고뉴클레오타이드" 또는 "PS 올리고뉴클레오타이드"는 O,O-결합된 포스포로티오에이트 결합(즉, 포스포로티오에이트 결합)인 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합을 가진다. 일부 실시양태에서, PS 올리고뉴클레오타이드는 O,O-결합된 포스포로티오에이트 결합(즉, 포스포로티오에이트 결합)인 모든 뉴클레오사이드간 결합을 가진다.
본원에서 사용된 바와 같이, "안티센스 치료제"는 유전자 발현을 억제하는 데 사용될 수 있는 한 부류의 핵산 기반 화합물이다. 안티센스 치료제는 단일 또는 이중 가닥 데옥시리보핵산(DNA) 기반 화합물, 리보핵산(RNA) 기반 화합물, 혼합 DNA 및 RNA 기반 화합물, 또는 DNA/RNA 화학적 유사체 화합물일 수 있다. 일부 실시양태에서, 안티센스 치료제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 일반적으로, 안티센스 치료제는 안티센스 치료제와 전구-mRNA 또는 mRNA 사이의 결합을 촉진하기 위해 주어진 유전자로부터 전사된 mRNA 또는 전구-mRNA 서열에 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하도록 설계된다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 대부분의 경우 안티센스 치료제는 mRNA 또는 전구-mRNA에 결합하여, 단백질 번역을 억제하고/하거나, 성숙 mRNA로의 전구-mRNA 스플라이싱을 변경시키고/시키거나, mRNA의 파괴를 야기함으로써 작용하는 것으로 여겨진다. 대부분의 경우, 안티센스 치료 뉴클레오타이드 서열은 표적화된 유전자 또는 mRNA의 센스 서열의 일부에 상보적이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "IL-34 안티센스 치료제"는 IL-34 유전자 센스, IL-34 전구-mRNA 센스 및/또는 IL-34 mRNA 센스 서열, 또는 이의 일부에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 기반 화합물이다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 치료제는 IL-34 유전자 센스, IL-34 전구-mRNA 센스 및/또는 IL-34 mRNA 센스 서열, 또는 이의 일부에 결합할 수 있는 뉴클레오타이드 화학적 유사체 기반 화합물일 수도 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 치료제는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, IL-34 shRNA, IL-34 siRNA, IL-34 PNA, IL-34 LNA, miRNA 및 IL-34 모르폴리노 올리고머를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "안티센스 올리고뉴클레오타이드"(ASO)는 표적 단백질(예를 들어, IL-34)을 코딩하는 mRNA와 같은 표적 RNA 서열에 상보적인 서열을 포함하는 짧은 합성 올리고뉴클레오타이드 기반 서열이다. 특정 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열은 mRNA 분자의 상보적 영역에 하이브리드화함으로써 이중 가닥 하이브리드를 생성할 수 있고, 이 이중 가닥 하이브리드는 DNA/RNA 하이브리드 가닥을 분해하여 단백질 번역을 방해하는 편재성 촉매 효소, 예컨대, RNase H의 활성화를 유발할 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, 본원에서 제공된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 RNA 또는 DNA로서 그의 표적 서열에 하이브리드화할 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, DNA 서열이 표적으로서 제공되는 경우, 상응하는 RNA 서열(타이민 대신에 우라실을 포함함)은 본원에 기재된 ASO에 포함된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 ASO는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다.
본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 포함된 뉴클레오타이드의 수는 다양할 수 있다. ASO는 길이가 전형적으로 8개 내지 50개 뉴클레오타이드, 예를 들어, 20개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개 내지 20개, 15개 내지 25개, 15개 내지 30개, 15개 내지 35개, 20개 내지 25개, 20개 내지 30개, 20개 내지 35개, 25개 내지 30개, 25개 내지 35개, 또는 30개 내지 35개 뉴클레오타이드이다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 20개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개 또는 35개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 최대 수의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 30개 또는 35개 이하의 뉴클레오타이드이다.
본원에서 사용된 바와 같이, "화학적으로 변형된 뉴클레오사이드"는 아데노신, 사이티딘, 타이미딘, 구아노신 또는 우리딘 이외의 임의의 뉴클레오사이드를 의미한다. 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 개시된 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 잠긴 핵산(LNA), 예를 들어, LNA 사이티딘, LNA 타이미딘, LNA 아데노신 또는 LNA 구아노신일 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸타이미딘, 2'-O-메틸우리딘 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함한다. 다른 실시양태에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 5-메틸피리미딘, 예를 들어, 5-메틸사이토신; 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어, 5-메틸구아닌을 포함한다. 일부 실시양태에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드들 중 임의의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다: 5-메틸-2'-O-메틸사이티딘, 5-메틸-2'-O-메틸타이미딘, 5-메틸사이티딘, 5-메틸우리딘 및/또는 5-메틸-2'-데옥시사이티딘. 본원에 개시된 일부 실시양태에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 안정화된 말단 5'-포스페이트, 또는 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체, 예를 들어, 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트 및 5'-C-메틸 유사체; 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸타이미딘 및 2'-O-메틸아데노신; 5-메틸피리미딘, 예를 들어, 5-메틸사이토신; 5-메틸퓨린, 예를 들어, 5-메틸구아닌; 5-메틸-2'-O-메틸사이티딘; 5-메틸-2'-O-메틸타이미딘; 5-메틸사이티딘; 5-메틸우리딘; 또는 5-메틸 2'-데옥시사이티딘을 포함할 수 있다.
추가로, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)("2'-MOE") 뉴클레오사이드, 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오사이드, 2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오사이드, 가교된 뉴클레오사이드, LNA 뉴클레오사이드, 구속된(constrained) 에틸(cET) 뉴클레오사이드, 트리사이클로-DNA(tcDNA) 뉴클레오사이드, 2'-O,4'-C-에틸렌 결합된 핵산(ENA) 뉴클레오사이드, 및/또는 펩티드 핵산(PNA)을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오사이드간 결합"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 인접 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 연결을 의미한다. "변형된 뉴클레오사이드간 결합"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 인접 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 비천연 연결을 의미한다. 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합; 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합, 또는 보라노포스페이트 결합을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
펩티드 핵산(PNA)은 DNA 또는 RNA와 유사한 구조를 가진 짧은 인공 합성 중합체이다. PNA는 펩티드 결합에 의해 연결된 반복적인 N-(2-아미노에틸)-글리신 유닛으로 구성된 골격을 포함한다.
잠긴 핵산(LNA)은 리보스 모이어티가 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 추가 가교에 의해 변형되어 있는 하나 이상의 변형된 RNA 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열이다. LNA는 유사한 올리고뉴클레오타이드 서열보다 더 높은 Tm을 가진 것으로 여겨진다.
모르폴리노 올리고머는 포스포로디아미데이트 기를 통해 연결된 메틸렌모르폴린 고리의 골격에 부착된 DNA 염기를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 화합물이다. 본 발명의 모르폴리노 올리고머는 관심 있는 특정 RNA 서열(예를 들어, 관심 있는 IL-34 mRNA 또는 IL-34 전구-mRNA 서열)에 결합함으로써, 유전자 발현을 방해하도록 설계될 수 있다.
작은 헤어핀 RNA(shRNA)는 일반적으로 유전자 발현을 침묵시키는 데 사용될 수 있는 헤어핀 유사 구조를 가진 RNA 분자이다. shRNA는 일반적으로 shRNA 서열을 코딩하는 플라스미드로부터 발현되며, 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 아데노 관련 바이러스 발현을 허용하도록 바이러스 벡터로부터 발현될 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, shRNA는 RNA 간섭(RNAi) 과정을 이용하여 유전자 발현을 억제하는 것으로 여겨진다. 간단히 말해서, shRNA 전사체는 드로샤(Drosha)와 다이서(Dicer)에 의해 처리된 다음, RNA 유도 침묵 복합체(RISC)에 로딩되어, 특정 mRNA의 표적화, 및 mRNA 분해 또는 단백질 번역의 억제를 허용한다.
작은 간섭 RNA(siRNA)는 RNAi 기구(예를 들어, 드로샤 및 RISC)를 이용하여 분해할 mRNA에 결합하고 이를 표적화하는, 길이가 대략 20개 내지 25개 염기쌍(그러나, 예를 들어, 길이가 18개 내지 30개 염기쌍일 수도 있음)인 이중 가닥 RNA 분자이다. siRNA는 발현을 위해 플라스미드 또는 벡터에 의존하지 않으며, 일반적으로, 예를 들어, 형질감염에 의해 표적 세포에 직접 전달될 수 있다.
MicroRNA(miRNA)는 RNA 침묵 및 유전자 발현의 전사 후 조절에서 작용하는 약 22개의 뉴클레오타이드를 함유하는 작은 비코딩 RNA 분자이다. miRNA는 mRNA 서열의 일부에 상보적인 서열을 포함한다. miRNA는 매우 특이적인 줄기-루프 구조를 나타내는 긴 단일 가닥 RNA 분자로부터 생성된다. 인공 miRNA는 천연 생성 miRNA 서열의 성숙 21개 뉴클레오타이드 서열을 표적, 예를 들어, IL-34 mRNA 표적의 21개 뉴클레오타이드 서열로 교체함으로써 설계된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "IL-34 억제제"는 IL-34의 뉴클레오타이드 기반 억제제(예를 들어, IL-34 작은 헤어핀 RNA(shRNA), IL-34 마이크로RNA(miRNA), IL-34 작은 간섭 RNA(siRNA), 및 LNA 뉴클레오타이드, 펩티드 핵산(PNA) 및 모르폴리노 올리고머를 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드), 및 이러한 화합물을 포함하는 조성물을 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, IL-34 수준(예를 들어, IL-34 mRNA 또는 단백질 수준) 및/또는 활성(예를 들어, 생물학적 활성, 예를 들어, IL-34 수용체 자극)은 IL-34 억제제를 사용함으로써 감소될 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 억제제는 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드" 또는 "IL-34 ASO"는 IL-34 유전자로부터 전사된 mRNA 분자의 핵산 서열 또는 이의 일부에 상보적인 핵산 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드를 지칭하는 것으로 이해된다. 보다 구체적으로, 이러한 올리고뉴클레오타이드는 이러한 mRNA의 코딩 영역의 핵산 서열 또는 이의 일부에 상보적일 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 IL-34 유전자, 이의 RNA 또는 단백질 생성물, 또는 배타적으로 또는 고도의 특이성으로 IL-34 또는 이의 생성물의 활성 또는 발현에 영향을 미치는 활성 또는 발현을 가진 또 다른 분자 독립체를 표적화하는 고유의 기능적 성질을 가진다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 세포(예를 들어, PBMC, 수지상 세포 또는 B 세포와 같은 면역 세포)에 도입될 때 IL-34의 발현을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 유전자로부터 전사된 mRNA의 발현을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 유전자에 의해 코딩된 단백질의 발현을 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 유전자에 의해 코딩된 단백질의 분비를 감소시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 40 내지 43의 서열 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 명세서의 설명 및 청구범위 전반에 걸쳐, 용어 "포함한다" 및 다른 형태의 이 용어, 예컨대, "포함하는" 및 "포함하고"는 예를 들어, 다른 첨가제, 구성요소, 정수 또는 단계를 포함하나 이들로 제한되지 않음을 의미하고 이들을 배제하고자 하는 것이 아니다.
"임의적" 또는 "임의로"는 후속 기재된 사건 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생하지 않을 수 있고 설명이 상기 사건 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우를 포함한다는 것을 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은, 정량적 값과 관련하여 사용될 때, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 언급된 정량적 값 그 자체를 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약" 또는 "대략"은, 문맥으로부터 달리 표시되거나 추론되지 않는 한, 언급된 정량적 값으로부터의 ±10% 편차를 의미한다.
본원에서 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이고, 본 개시내용의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다. 본 개시내용 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, 문맥이 달리 명시하지 않는 한, 단수형은 복수형을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "조성물"의 언급은 단일 조성물뿐만 아니라 다수의 이러한 조성물도 포함하고, "치료제"의 언급은 하나 이상의 치료제 및/또는 약제, 및 당업자에게 알려진 이의 등가물 등의 언급이다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 퍼센트 및 비는 중량 기준이다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 분야에서 통상의 기술을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다. 모순되는 경우, 본 명세서가 우선할 것이다. 본원에 기재된 방법 및 재료와 유사하거나 동등한 방법 및 재료가 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료는 아래에 기재되어 있다.
IL-34에 상보적인 폴리뉴클레오타이드
본원은 특히, IL-34에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를 개시한다. 일부 실시양태에서, 이 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 서열: 5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3), 또는 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5); 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호 7); 또는 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호 8), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하고, 이때 X는 5-메틸사이티딘이고, 상기 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 사이티딘은 화학적으로 변형되고, 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-O-(2)-메톡시에틸)(2'-MOE) 뉴클레오사이드이다. 일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 하기 뉴클레오타이드 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
a. 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
b. 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
c. 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
d. 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)이다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 siRNA이다. 일부 실시양태에서, siRNA는 서열번호 3, 5, 7 또는 8, 또는 서열번호 40 내지 43 중 어느 한 서열번호의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 siRNA이다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 siRNA 복합체의 일부이다. 일부 실시양태에서, siRNA는 siRNA 이중체이다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 억제제이다. 일부 실시양태에서, IL-34 억제제는 IL-34 ASO, 또는 이러한 IL-34 ASO를 포함하는 조성물이다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 IL-34 전사체(예를 들어, IL-34 mRNA 전사체) 또는 이의 일부에 상보적인 짧은 합성 올리고뉴클레오타이드 서열이다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 IL-34 mRNA 서열, 예를 들어, 마우스 또는 인간 IL-34 mRNA 서열의 일부에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 IL-34 유전자 서열, 예를 들어, 마우스 또는 인간 IL-34 유전자 서열의 일부에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 IL-34 mRNA 전사체 변이체의 일부 또는 이의 일부, 예를 들어, NCBI 참조 서열 NM_001172771.1(서열번호 24), NM_001172772.1(서열번호 25), NM_152456.2(서열번호 26), NM_152456.3(서열번호 44), NM_001172771.2(서열번호 45), NM_001393493.1(서열번호 46), NM_001393495.1(서열번호 47), NM_001172772.2(서열번호 48), NM_001393494.1(서열번호 49), NM_001393496.1(서열번호 50), NM_001393497.1(서열번호 51) 또는 NM_001393498.1(서열번호 52)의 인간 IL-34 mRNA 서열; 또는 NCBI 참조 서열 NM_001135100.2(서열번호 27) 또는 NM_029646.3(서열번호 28)의 마우스 IL-34 mRNA 서열에 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 하나 이상의 종의 IL-34 유전자로부터 생성된 IL-34 mRNA, 예를 들어, 마우스 및 인간 IL-34 mRNA 전사체를 표적화할 수 있다. 예를 들어, IL-34 ASO는 포유동물 IL-34 유전자, 예를 들어, 인간(즉, 호모 사피엔스(Homo sapiens)) IL-34 유전자 또는 마우스(즉, 무스 무스쿨루스(mus musculus)) IL-34 유전자의 IL-34 mRNA를 표적화할 수 있다. 특정 실시양태에서, IL-34 ASO는 인간 IL-34 mRNA를 표적화한다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 IL-34 유전자 또는 IL-34 mRNA의 뉴클레오타이드 서열, 또는 이의 일부에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 뉴클레오타이드 서열: 5'-CTCACCAAGACCCACAG-3'(서열번호 1); 5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호 2); 5'-CTTTGGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3); 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호 4); 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5); 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호 6); 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호 7); 또는 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호 8)을 포함하는 IL-34 ASO를 포함하나 이들로 제한되지 않고, 이때 X는 5-메틸사이티딘이다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 뉴클레오타이드 서열 5'-CTTTGGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3)을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 뉴클레오타이드 서열 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5)을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 잠긴 핵산(LNA) 뉴클레오사이드, 예를 들어, LNA 사이티딘, LNA 타이미딘, LNA 아데노신 또는 LNA 구아노신; 안정화된 말단 5'-포스페이트, 또는 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 가진 뉴클레오사이드, 예를 들어, 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5 '-E-VP), 5'-포스포로티오에이트, 및 5'-C-메틸 유사체; 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸타이미딘 및 2'-O-메틸아데노신; 5-메틸피리미딘, 예를 들어, 5-메틸사이토신; 5-메틸퓨린, 예를 들어, 5-메틸구아닌; 5-메틸-2'-O-메틸사이티딘; 5-메틸-2'-O-메틸타이미딘; 5-메틸사이티딘; 5-메틸우리딘; 또는 5-메틸 2'-데옥시사이티딘을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸타이미딘 및 2'-O-메틸아데노신을 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 뉴클레오타이드 서열 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호 7)을 포함하고, 이때 X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 뉴클레오타이드 서열 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호 8)을 포함하고, 이때 X는 5-메틸사이티딘이다.
일부 실시양태에서, ASO는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다.
일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40)과 적어도 90% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40)과 적어도 95% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40)에 따른 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다.
일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41)과 적어도 90% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41)과 적어도 95% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41)에 따른 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘이다.
일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42)와 적어도 90% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42)와 적어도 95% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42)에 따른 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다.
일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43)과 적어도 90% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43)과 적어도 95% 동일한 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, ASO는 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43)에 따른 서열을 갖고, 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 고려되는 조성물은 약학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 갭머(gapmer) 화합물이다. 갭머 화합물은 변형된 뉴클레오타이드의 5' 및 3' 플랭킹 기(영역 A' 및 C'로서 지칭됨)을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열이다. 변형된 뉴클레오타이드의 이러한 플랭킹 기는 뉴클레아제 분해로부터 뉴클레오타이드의 내부 기(영역 B'로서 지칭됨)를 보호하는 것으로 생각된다. 5' 및 3' 플랭킹 기와 내부 기는 함께 (5'에서 3'으로) A'-B'-C' 구조를 형성한다. 뉴클레오타이드의 내부 기는 길이가 통상적으로 6개 내지 10개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오타이드의 내부 기는 길이가 10개 내지 14개 분자이다. 플랭킹 뉴클레오타이드의 각각의 5' 또는 3' 기는 길이가 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 뉴클레오타이드일 수 있다. 갭머 화합물에서 플랭킹 뉴클레오타이드의 5' 및 3' 기는 길이가 동일한 수의 뉴클레오타이드일 수 있다. 변형된 뉴클레오타이드의 플랭킹 기는 예를 들어, 2'-MOE, 2'-OMe 및 LNA 뉴클레오타이드를 포함한다. 갭머 화합물 서열은 변형된 뉴클레오사이드간 결합(예를 들어, 포스포로티오에이트 결합), 2'-MOE, 2'-OMe, LNA 뉴클레오사이드, PNA, 5-메틸사이티딘 및 본원에 기재된 다른 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형을 포함할 수도 있다.
일부 실시양태에서, 갭머는 길이가 15개 내지 20개, 15개 내지 25개, 15개 내지 30개, 15개 내지 35개, 20개 내지 25개, 20개 내지 30개, 20개 내지 35개, 25개 내지 30개, 25개 내지 35개, 또는 30개 내지 35개 뉴클레오타이드이다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 특정 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 20개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개, 34개 또는 35개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, 갭머는 길이가 20개 뉴클레오타이드이다.
일부 실시양태에서, 영역 A'는 3개 또는 4개의 뉴클레오타이드 유사체, 예컨대, 2'-MOE로 구성되고, 영역 B'는 12개 또는 14개의 DNA 염기로 구성되며, 영역 C'는 3개 또는 4개의 뉴클레오타이드 유사체, 예컨대, 2'-MOE로 구성된다. 이러한 갭머 설계는 (A'-B'-C') 3-12-3, 3-14-3, 4-12-4 및 4-14-4를 포함한다.
일부 실시양태에서, 영역 A'는 5개 또는 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예컨대, 2'-MOE로 구성되고, 영역 B'는 8개 또는 10개의 DNA 염기로 구성되고, 영역 C'는 5개 또는 6개의 뉴클레오타이드 유사체, 예컨대, 2'-MOE로 구성된다. 이러한 갭머 설계는 (A'-B'-C') 5-10-5 및 6-8-6을 포함한다.
일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNNNNNNNNNNNNNNNNNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고 Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNNNNNNNNNNNNNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNxNNNNNNNNNNNxNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNxNxNNNNNNNNNxNxNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNxNxNxNNNNNNNxNxNxNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다.
일부 실시양태에서 ASO는 구조 5'-NxNxNxNNNNNXNNNNNNNNNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, X는 5-메틸사이티딘을 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNNNNXNNNNNNNNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, X는 5-메틸사이티딘을 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNNNNNNXNNNNNNNNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, X는 5-메틸사이티딘을 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, ASO는 구조 5'-NxNxNxNxNNNNNXNNNNNNNxNxNxNx-3'의 갭머를 포함하고, 이때 N은 임의의 뉴클레오타이드 또는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드를 포함하고, X는 5-메틸사이티딘을 포함하고, Nx는 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드를 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO 갭머는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하고 IL-34 ASO의 서열은 하기 서열들 중 하나 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다:
Figure pct00001
5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00002
5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00003
5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
Figure pct00004
5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 40의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 41의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 1번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 2번째 및 3번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 42의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 1번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 2번째 및 3번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 43의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 5번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 16의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 5번째, 6번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 15번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 18의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 8번째, 11번째, 13번째, 14번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 모든 타이미딘은 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 모든 구아노신은 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 모든 아데노신은 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
다른 실시양태에서, 서열번호 16, 18, 20, 40 또는 41 중 어느 하나에서 치환된 뉴클레오사이드 이외의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)가 서열번호 3에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 서열번호 3은 서열번호 16, 18, 20, 40 또는 41 중 어느 하나에서 치환된 위치 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 17의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 6번째, 15번째 및 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 19의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 2번째, 3번째, 8번째, 9번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 모든 타이미딘은 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 모든 구아노신은 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 모든 아데노신은 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 21의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
다른 실시양태에서, 서열번호 17, 19, 21, 42 또는 43 중 어느 하나에서 치환된 뉴클레오사이드 이외의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)가 서열번호 5에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 서열번호 5는 서열번호 17, 19, 21, 42 또는 43 중 어느 하나에서 치환된 위치 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 ASO는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "뉴클레오사이드간 결합"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 인접 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 연결을 의미한다. "변형된 뉴클레오사이드간 결합"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 인접 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 비천연 연결을 의미한다. 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합; 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합, 또는 보라노포스페이트 결합을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 ASO는 적어도 하나의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 ASO는 적어도 하나의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 또는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함한다.
본원에 기재된 IL-34 ASO는 변형된 리보뉴클레오사이드 및 변형된 데옥시리보뉴클레오사이드를 비롯한 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸) 변형, 예를 들어, 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신, 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신, 2'-O-(2-메톡시에틸)사이토신, 2'-O-(2-메톡시에틸)우리딘 및 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘을 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 또한 잠긴 핵산(LNA), 2'-O-메틸, 2'-플루오로 및 2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오타이드(FANA) 변형을 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 본원에 기재된 IL-34 ASO에 포함될 수 있는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 각각의 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌[Johannes and Lucchino, (2018) "Current Challenges in Delivery and Cytosolic Translocation of Therapeutic RNAs" Nucleic Acid Ther. 28(3): 178-93]; 문헌[Rettig and Behlke, (2012) "Progress toward in vivo use of siRNAs-II" Mol Ther 20:483-512]; 및 문헌[Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용은 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 혼합된 양식, 예를 들어, IL-34 펩티드 핵산(PNA)과 IL-34 잠긴 핵산(LNA)의 조합을 제공한다.
본원에 기재된 IL-34 ASO는 올리고뉴클레오타이드의 말단 5'-포스페이트의 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드 말단 5'-포스페이트 안정화를 촉진하거나 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체인 화학적 변형은 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트 및 5'-C-메틸 유사체를 포함하나 이들로 제한되지 않는다. ASO 말단 5'-포스페이트 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형은 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌[Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있다.
본원에 기재된 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 ASO는 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸타이미딘 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 비롯한 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 ASO는 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있고, 이때 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 5-메틸피리미딘, 예를 들어, 5-메틸사이토신 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어, 5-메틸구아닌을 비롯한 염기를 포함한다. 본원에 기재된 IL-34 ASO는 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드들 중 임의의 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다: 5-메틸-2'-O-메틸사이티딘, 5-메틸-2'-O-메틸타이미딘, 5-메틸사이티딘, 5-메틸우리딘 및/또는 5-메틸 2'-데옥시사이티딘.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 ASO은 하기 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 IL-34 ASO를 포함한다: 5'-CTCACCAAGACCCACAG-3'(서열번호 1), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임; 5'-GGCTTTGGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호 2), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임; 5'-CTTTGGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임; 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호 4), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임; 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임; 또는 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호 6), 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나, 적어도 하나의 결합은 변형된 뉴클레오사이드간 결합임.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 3번째 사이티딘은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 3번째 사이티딘은 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 7의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다. 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 3번째 사이티딘 이외의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호 7 이외의 뉴클레오타이드 서열을 가진 IL-34 ASO를 생성한다. 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 3번째 사이티딘은 5-메틸사이티딘이 아닌 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호 7 이외의 뉴클레오타이드 서열을 가진 IL-34 ASO를 생성한다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 5의 (5' 말단으로부터) 5번째 사이티딘은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열번호 5의 (5' 말단으로부터) 5번째 사이티딘은 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 8의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다. 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 5번째 사이티딘 이외의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호 8 이외의 뉴클레오타이드 서열을 가진 IL-34 ASO를 생성한다. 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 (5' 말단으로부터) 5번째 사이티딘은 5-메틸사이티딘이 아닌 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호 8 이외의 뉴클레오타이드 서열을 가진 IL-34 ASO를 생성한다.
본원에 기재된 IL-34 ASO는 하나 이상의 LNA 뉴클레오타이드를 포함하는 IL-34 ASO도 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 ASO 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 하기 뉴클레오타이드 서열들 중 임의의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 포함한다:
Figure pct00005
5'-cttTGGGCXGCACCAGCttc-3'(서열번호 9), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00006
5'-ctttGGGCXGCACCAGcttc-3'(서열번호 10), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘이며, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00007
5'-cttTGGGCcgCACCAGCttc-3'(서열번호 11), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘이고, g는 LNA 구아노신임;
Figure pct00008
5'-cttTGGGCcGCACCAGCttc-3'(서열번호 12), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘임;
Figure pct00009
5'-ggcXGCACCAGCttc-3'(서열번호 13), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘이고, g는 LNA 구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00010
5'-cttTGGGCXGCACcag-3'(서열번호 14), 이때 c는 LNA 사이티딘이고, t는 LNA 타이미딘이고, g는 LNA 구아노신이고, a는 LNA 아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
Figure pct00011
5'-tgaCCXGGAAGCAgtt-3'(서열번호 15), 이때 a는 LNA 아데노신이고, t는 LNA 타이미딘이고, g는 LNA 구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 LNA이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 LNA 사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 LNA 타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 9의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
또 다른 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 LNA 사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 LNA 타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 10의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
또 다른 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 9번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 LNA 사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 LNA 타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 10번째 뉴클레오사이드는 LNA 구아노신으로 치환되어, 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
또 다른 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 9번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 LNA 사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 LNA 타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되어, 서열번호 12의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
다른 실시양태에서, 서열번호 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에서 치환된 뉴클레오사이드 이외의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)가 서열번호 3에서 LNA 뉴클레오타이드로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 서열번호 3은 서열번호 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에서 치환된 위치 이외의 하나 이상의 위치에서 LNA 뉴클레오타이드로 치환될 수 있다.
특정 실시양태에서, IL-34 ASO는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하고 IL-34 ASO의 서열은 하기 서열들 중 하나 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다:
Figure pct00012
5'-CxTxTxTxGxGGCXGCACCAGxCxTxTxCx-3'(서열번호 16), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00013
5'-TxCxCxAxTxGACCXGGAAGCxAxGxTxTx-3'(서열번호 17), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00014
5'-CxTxTxTxGxGxGCXGCACCAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호 18), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00015
5'-TxCxCxAxTxGxACCXGGAAGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호 19), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00016
5'-CxTxTxTxGxGxGxCxXGxCxAxCxCxCxAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호 20), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
Figure pct00017
5'-TxCxCxAxTxGxAxCxCxXGxGxAxAxAxGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호 21), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
추가로, 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함하고 IL-34 ASO의 서열은 하기 서열들 중 하나 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로부터 선택된다:
Figure pct00018
5'-CyTyTyGyGGCXGCACCAGyCyTyTyCy-3'(서열번호 22), 이때 Cy는 2'-O-메틸사이티딘이고, Ty는 2'-O-메틸타이미딘이고, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
Figure pct00019
5'-TyCyCyAyTyGACCXGGAAGCyAyGyTyTy-3'(서열번호 23), 이때 Cy는 2'-O-메틸사이티딘이고, Ty는 2'-O-메틸타이미딘이고, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, Ay는 2'-O-메틸아데노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
예를 들어, 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 5번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸구아노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 22의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
다른 실시양태에서, 서열번호 22에서 치환된 뉴클레오사이드 이외의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)가 서열번호 3에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 서열번호 3은 서열번호 22에서 치환된 위치 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 서열번호 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 이때 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, (5' 말단을 기준으로) 서열번호 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸타이미딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸사이티딘으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸아데노신으로 각각 독립적으로 치환되고; 서열번호 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸구아노신으로 치환되고; 서열번호 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸사이티딘으로 치환되어, 서열번호 23의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 ASO를 생성한다.
다른 실시양태에서, 서열번호 23에서 치환된 뉴클레오사이드 이외의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)가 서열번호 5에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 다른 실시양태에서, 서열번호 5는 서열번호 23에서 치환된 위치 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
본원에 기재된 IL-34 ASO는 하나 이상의 올리고뉴클레오사이드 결합이 변형된 뉴클레오사이드간 결합인 포스페이트 골격을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 ASO는 적어도 하나의 포스페이트 결합을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 ASO는 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 ASO의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 ASO의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 1개, 2개, 3개 이상의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 본원에 기재된 IL-34 ASO의 바람직한 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 IL-34 ASO의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 IL-34 ASO의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 또 다른 예에서, 일부 실시양태에서, 서열번호 7의 IL-34 ASO의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 IL-34 ASO의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 IL-34 ASO의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다. 또 다른 예에서, 일부 실시양태에서, 서열번호 7의 IL-34 ASO의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다.
일부 실시양태에서, 개시된 IL-34 ASO 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 임의로, 예를 들어, 5' 또는 3' 말단 중 오로지 하나 또는 5' 및 3' 말단 둘 다에 위치하거나 올리고뉴클레오타이드 서열을 따라 위치하는 적어도 하나의 변형된 핵염기, 예를 들어, 5-메틸사이토신 및/또는 적어도 하나의 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드를 가질 수 있음이 예상된다.
예상된 IL-34 ASO는 임의로 적어도 하나의 변형된 당을 포함할 수 있다. 예를 들어, 올리고뉴클레오타이드를 구성하는 적어도 하나의 뉴클레오타이드의 당 모이어티는 2'-OH 기가 OR, R, R'OR, SH, SR, NH2, NR2, N3, CN, F, Cl, Br 및 I(이때 R은 알킬 또는 아릴이고 R'은 알킬렌임)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 한 기로 교체될 수 있는 리보스이다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 포함된 뉴클레오타이드 서열의 표적화 부분이 IL-34 mRNA 서열 또는 이의 일부; 또는 IL-34 상호작용 파트너의 mRNA 서열 또는 이의 일부에 완전히 또는 거의 완전히 상보적이도록 설계될 수 있다. 이러한 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열의 포함은 주어진 표적에 대해 고도의 특이성을 가진 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 조작할 수 있게 한다. 특이성은 파라미터, 예컨대, 해리 상수, 또는 다른 기준, 예컨대, 단백질 또는 RNA 발현 수준의 변화의 측정, 또는 IL-34 활성 또는 발현을 측정하는 다른 어세이를 통해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IL-34 ASO는 IL-34 억제제이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 작은 간섭 RNA(siRNA)를 포함하는 IL-34 억제제이다.
작은 간섭 RNA(siRNA)는 RNAi 기구(예를 들어, 드로샤 및 RISC)를 이용하여 분해될 mRNA에 결합하고 이를 표적화하는, 길이가 대략 20개 내지 25개 염기쌍(그러나, 길이가 예를 들어, 18개 내지 30개 염기쌍일 수도 있음)의 이중 가닥 RNA 분자이다. siRNA는 발현을 위해 플라스미드 또는 벡터에 의존하지 않으며, 일반적으로 예를 들어, 형질감염에 의해 표적 세포에 직접 전달될 수 있다. IL-34 siRNA는 IL-34 mRNA 서열에 상보적인 RNA 서열을 포함하고 IL-34 단백질 번역을 방해하는 이중 가닥 RNA 서열이다.
일부 실시양태에서, IL-34 siRNA는 길이가 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 20개 내지 25개, 20개 내지 30개, 또는 25개 내지 30개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, IL-34 siRNA는 길이가 20개 내지 25개 뉴클레오타이드이다. 일부 실시양태에서, IL-34 siRNA는 길이가 20개, 25개 또는 30개 이하의 뉴클레오타이드이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 어느 한 서열번호의 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어, 서열번호 1 내지 8 중 어느 한 서열번호의 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 siRNA를 포함한다.
일부 실시양태에서, IL-34는 변형된 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 사이티딘은 5-메틸사이티딘으로 교체된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 올리고뉴클레오사이드 결합 중 하나 이상이 변형된 뉴클레오사이드간 결합인 포스페이트 골격을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 적어도 하나의 포스페이트 결합을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 결합을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 siRNA의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 siRNA의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 1개, 2개, 3개 이상의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 본원에 기재된 IL-34 siRNA의 바람직한 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 IL-34 siRNA의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 IL-34 siRNA의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 또 다른 예에서, 일부 실시양태에서, 서열번호 7의 IL-34 siRNA의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 IL-34 siRNA의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 서열번호 3의 IL-34 siRNA의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다. 또 다른 예에서, 일부 실시양태에서, 서열번호 7의 IL-34 siRNA의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다.
펩티드 핵산(PNA)은 DNA 또는 RNA와 유사한 구조를 가진 짧은 인공 합성 중합체이다. PNA는 펩티드 결합에 의해 연결된 반복적인 N-(2-아미노에틸)-글리신 유닛으로 구성된 골격을 포함한다. 본원에 기재된 IL-34 PNA는 높은 특이성으로 IL-34 RNA 서열에 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다.
잠긴 핵산(LNA)은 리보스 모이어티가 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 추가 가교에 의해 변형되어 있는 하나 이상의 변형된 RNA 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열이다. LNA는 유사한 올리고뉴클레오타이드 서열보다 더 높은 Tm을 가진 것으로 여겨진다. 본원에 기재된 IL-34 LNA는 높은 특이성으로 IL-34 RNA 서열에 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다.
모르폴리노 올리고머는 포스포로디아미데이트 기를 통해 연결된 메틸렌모르폴린 고리의 골격에 부착된 DNA 염기를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 화합물이다. 본 발명의 모르폴리노 올리고머는 관심 있는 특정 IL-34 RNA 서열(예를 들어, 관심 있는 IL-34 mRNA 또는 IL-34 전구-mRNA 서열)에 결합하여 유전자 발현을 방해하도록 설계될 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 모르폴리노 올리고머는 높은 특이성으로 IL-34 mRNA 서열에 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 모르폴리노 올리고머는 또한 IL-34 전구-mRNA 서열에 결합하여 IL-34 전구-mRNA 스플라이싱 및 IL-34 유전자 발현을 변경시키는 데 사용될 수 있다.
작은 헤어핀 RNA(shRNA)는 일반적으로 유전자 발현을 침묵시키는 데 사용될 수 있는 헤어핀 유사 구조를 가진 RNA 분자이다. shRNA는 일반적으로 shRNA 서열을 코딩하는 플라스미드로부터 발현되며, 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 아데노 관련 바이러스 발현을 허용하도록 바이러스 벡터로부터 발현될 수 있다. 이론에 의해 구속받고자 하지는 않지만, shRNA는 RNA 간섭(RNAi) 과정을 이용하여 유전자 발현을 억제하는 것으로 여겨진다. 간단히 말해서, shRNA 전사체는 드로샤와 다이서에 의해 처리된 다음, RNA 유도 침묵 복합체(RISC)에 로딩되어, 특정 mRNA의 표적화, 및 mRNA 분해 또는 단백질 번역 억제를 허용한다. 본원에 기재된 IL-34 shRNA는 IL-34의 유전자 발현을 억제할 수 있다.
마이크로RNA(miRNA)는 RNA 침묵 및 유전자 발현의 전사 후 조절에서 작용하는 약 22개의 뉴클레오타이드를 함유하는 작은 비코딩 RNA 분자이다. miRNA는 mRNA 서열의 일부에 상보적인 서열을 포함한다. miRNA는 매우 특이적인 줄기-루프 구조를 나타내는 긴 단일 가닥 RNA 분자로부터 생성된다. 인공 miRNA는 천연 생성 miRNA 서열의 성숙 21개 뉴클레오타이드 서열을 표적, 예를 들어, IL-34 mRNA 표적의 21개 뉴클레오타이드 서열로 교체함으로써 설계된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오타이드의 말단 5'-포스페이트의 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드 말단 5'-포스페이트 안정화를 촉진하거나 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체인 화학적 변형은 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트 및 5'-C-메틸 유사체를 포함하나 이들로 제한되지 않는다. ASO 말단 5'-포스페이트 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형은 내용이 본원에 참고로 포함되는 문헌[Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있다.
본원에 기재된 일부 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸사이티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸타이미딘 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 5-메틸피리미딘, 예를 들어, 5-메틸사이토신, 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어, 5-메틸구아닌을 포함하는 하나 이상의 화학적으로 변형된 염기를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드들 중 임의의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다: 5-메틸-2'-O-메틸사이티딘, 5-메틸-2'-O-메틸타이미딘, 5-메틸사이티딘, 5-메틸우리딘, 및/또는 5-메틸 2'-데옥시사이티딘.
2'-OMe 뉴클레오타이드는 tRNA 및 다른 작은 RNA에서 천연적으로 발견된다. 올리고뉴클레오타이드 서열 내로의 2'-OMe 뉴클레오타이드의 혼입은 뉴클레아제 분해를 방해하고 가수분해에 대한 안정성을 증가시킨다. 올리고뉴클레오타이드 내로의 2'-OMe 변형의 혼입은 일반적으로 RNA-RNA 이중체의 Tm을 추가당 1℃ 내지 4℃ 증가시킨다.
2'-MOE 기의 도입은 일반적으로 생성된 올리고뉴클레오타이드의 Tm을 약 1.1℃ 증가시키고 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 내성을 개선한다. 추가로, 2'-MOE 올리고는 표적 mRNA 가닥의 RNase H 매개 분해를 보존하기 위해 갭머 화합물에 자주 사용된다.
본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 올리고뉴클레오사이드 결합 중 하나 이상이 포스페이트 결합인 포스페이트 골격을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드는 변형된 올리고뉴클레오타이드 골격을 포함할 수 있으며, 이때 뉴클레오타이드 서열의 뉴클레오사이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 일부 실시양태에서, 뉴클레오타이드 서열의 1개, 2개, 3개 이상의 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드에서, 뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 따라서, 일부 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 폴리뉴클레오타이드의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 임의의 서열번호의 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 결합 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 결합이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개 이상의 포스포로티오에이트 결합을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 서열번호 1 내지 8 중 임의의 서열번호의 IL-34 siRNA의 모든 뉴클레오타이드 결합은 포스포로티오에이트 결합이다.
자가면역 및 염증성 질환
일부 실시양태에서, 본원은 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하는 방법으로서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, 서열번호 40 내지 43을 포함하는 ASO, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염)를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 일부 실시양태에서, 염증성 질환을 치료하기 위해, 예를 들어, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생성을 억제하고/하거나, IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제하기 위해 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 유효량으로, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원은 IL-34 활성과 관련된 염증성 장애의 치료를 필요로 하는 환자에서 이러한 염증성 장애를 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 안티센스 화합물을 상기 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "염증성 질환"은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증(예를 들어, 치주염), 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암(예를 들어, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암), 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환을 포함하나 이들로 제한되지 않는 다수의 급성 염증성 장애 및 만성 염증성 장애를 의미한다.
류마티스 관절염(RA)은 관절 주변에서 염증, 부종 및 통증을 야기하는, 다수의 관절에 영향을 미치는 만성 활막 염증을 특징으로 한다. 치료하지 않고 놔두면 RA는 관절에서 연골에 대한 손상을 유발할 수 있고 손상된 연골 주변에서 뼈 침식을 유발할 수 있으며, 관절외 병변을 유발한다. RA는 신체 전체에서 다른 조직에 영향을 미칠 수도 있고 피부, 입, 폐, 심장 및 눈과 같은 장기에서 문제를 야기할 수도 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 수준은 활성 RA를 가진 환자 및 염증성 관절염의 실험 모델에서 상승된다.
본원은 류마티스 관절염의 치료, 발생 위험의 감소 또는 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에서 류마티스 관절염을 치료하거나, 발생 위험을 감소시키거나 발병을 지연시키는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
골관절염(OA)은 퇴행성 관절 질환이고 활막 섬유증 및 염증을 수반하는, 관절의 일부 또는 전체의 질환을 특징으로 한다. OA는 임상 증상인 통증, 통각과민 및 강직과 관련되어 있다. 활막의 병리학적 변화는 OA의 진행을 가속화할 수 있다.
본원은 골관절염 또는 활막 섬유증의 치료, 발생 위험의 감소 또는 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에서 골관절염 또는 활막 섬유증을 치료하거나, 발생 위험을 감소시키거나 발병을 지연시키는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 루푸스와 관련된 피부 병변의 치료를 필요로 하는 환자에서 이러한 피부 병변을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 루푸스와 관련된 피부 병변의 치료는 피부 병변 수의 감소, 피부 병변의 형성 속도의 감소 및 피부 병변의 중증도의 감소로부터 선택된 적어도 하나의 효과를 포함한다. 루푸스 및/또는 루푸스 신염을 앓고 있는 환자에서 루푸스 및/또는 루푸스 신염을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 루푸스와 관련된 신장 질병의 진행을 늦추는 방법을 제공한다.
본원은 CNS 염증성 질환의 치료, 발생 위험의 감소 또는 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에서 CNS 염증성 질환을 치료하거나, 발생 위험을 감소시키거나 발병을 지연시키는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 이러한 방식으로 치료할 수 있는 CNS 염증성 질환은 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌척수염, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS) 및 파킨슨병을 포함한다.
또한, 본원은 자가면역 질환의 치료, 발생 위험의 감소 또는 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환을 치료하거나, 발생 위험을 감소시키거나 발병을 지연시키는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 이 방법은 자가면역 질환을 앓고 있거나 발생시킬 위험이 있는 대상체를 치료하는 단계를 포함한다. 이 방식으로 치료할 수 있는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 골관절염, 낭염, 제1형 당뇨병, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD) 및 특발성 폐 섬유증을 포함한다.
염증성 장 질환
일부 실시양태에서, 본원은 염증성 장 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 염증성 장 질환을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 서열번호 40 내지 43, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원은 개시된 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "염증성 장 질환"은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염을 포함하는 다수의 만성 염증성 질환을 의미한다. 크론병 및 궤양성 결장염은 염증성 장 질환의 가장 흔한 두 가지 형태이다. 염증성 장 질환은 소화기계의 자가면역 질환이다. 크론병은 말단 회장을 포함하는, 위장관의 임의의 부분에 국한될 수 있으며, 위장관의 모든 세포 유형에 영향을 미칠 수 있다. 궤양성 결장염은 결장 및 직장에 국한되며, 점막의 세포에만 영향을 미친다.
염증성 크론병은 과도한 위장 염증을 야기하는 비정상적인 면역 반응을 특징으로 한다. 염증성 크론병은 소장 및/또는 대장의 일부, 예를 들어, 회장 및 결장을 포함하는 장벽에 가장 흔히 영향을 미친다. 염증성 크론병은 또한 궤양뿐만 아니라 두껍고 부은 조직의 발생과도 연관되어 있다. 면역 시스템에서 역할을 하는 유전자(예를 들어, NOD2, ATG16L1, IL23R 및 IRGM)의 돌연변이는 적절한 자가포식과 관련된 유전자와 마찬가지로 크론병과 관련되어 있다.
섬유협착 크론병은 위장관의 섬유협착 병변/섬유성 협착의 발생을 포함하는 크론병의 한 형태이다. 섬유성 협착은 결장과는 반대로 회장의 크론병과 더 자주 연관되어 있다. 염증은 일반적으로 발달 협착보다 더 앞선다. 협착은 다음 증상들 중 임의의 증상과 관련되어 있다: 복부 경련, 복통, 복부 팽만감 및 더부룩함, 식욕 상실, 피로, 메스꺼움, 구토 및 변비. 크론병을 앓고 있는 환자의 50% 이상이 섬유협착증을 경험한다.
섬유성 협착은 세포 표면 IL-17A 수용체 발현, 및 콜라겐 아형 I, III 및 V를 비롯한 콜라겐의 증가된 생성과 관련되어 있다. 섬유성 협착은 누공의 동시 발생과도 관련되어 있다. 협착은 과도한 세포외 매트릭스(ECM) 침착과 함께 염증성 세포와 중간엽 세포의 혼합물의 존재를 조직학적 특징으로 한다. 장의 활성화된 중간엽 세포는 피브로넥틴 및 콜라겐(예를 들어, 콜라겐 III형 및 IV형)을 포함하는 ECM 성분을 축적한다. 무질서한 평활근 증식 및 과도한 ECM 침착은 협착성 장 조직의 기계적 성질을 변형시켜, 섬유성 협착과 관련된 장관의 강직성 증가 및 좁아짐을 야기하는 것으로 여겨진다. 섬유성 협착의 존재는 장벽의 점막층, 점막하층 및 근육층 모두에서 장 조직 이상을 초래한다.
일부 실시양태에서, 세포는 장 세포, 예를 들어, 장 간질 세포, 장 상피 세포, 장 줄기 세포, 분비 세포, 장세포, 고블릿(Goblet) 세포, 장내분비 세포, 파네스(Paneth) 세포, 변환 증폭 세포, 마이크로폴드(microfold) 세포, 컵(cup) 세포 또는 터프트(tuft) 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 장 섬유협착의 일부를 형성한다. 상기 언급된 실시양태에서, 대상체는 염증성 질환 또는 섬유증, 예를 들어, 염증성 크론병 또는 섬유협착 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐, 예를 들어, I형 콜라겐, II형 콜라겐, III형 콜라겐, IV형 콜라겐, V형 콜라겐, VI형 콜라겐, VII형 콜라겐, VIII형 콜라겐, IX형 콜라겐, X형 콜라겐, XI형 콜라겐, XII형 콜라겐, XIII형 콜라겐, XIV형 콜라겐, XV형 콜라겐, XVI형 콜라겐, XVII형 콜라겐, XVIII형 콜라겐, XIX형 콜라겐, XX형 콜라겐, XXI형 콜라겐, XXII형 콜라겐, XXIII형 콜라겐, XXIV형 콜라겐, XXV형 콜라겐, XXVI형 콜라겐, XXVII형 콜라겐, XXVIII형 콜라겐 또는 XXIX형 콜라겐의 발현을 억제하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 실시양태에서, 콜라겐은 COL1A1, COL1A2II, COL2A1, COL3A1, COL4A1, COL4A2, COL4A3, COL4A4, COL4A5, COL4A6, COL5A1, COL5A2, COL5A3, COL6A1, COL6A2, COL6A3, COL6A5, COL7A1, COL8A1, COL8A2, COL9A1, COL9A2, COL9A3, COL10A1, COL11A1, COL11A2, COL12A1, COL13A1, COL14A1, COL15A1, COL16A1, COL17A1, COL18A1, COL19A1, COL20A1, COL21A1, COL22A1, COL23A1, COL24A1, COL25A1, EMID2, COL27A1, COL28A1 또는 COL29A1이다. 특정 실시양태에서, 콜라겐은 COL1A1(콜라겐 1A), COL3A1(콜라겐 3A) 또는 이들의 혼합물이다.
환경적 요인과 유전적 요인 둘 다가 염증성 장 질환에서 역할을 하는 것으로 여겨지지만, 이러한 요인의 정체는 잘 정의되어 있지 않다. 예를 들어, 습관적인 흡연은 크론병 발생의 위험을 두 배로 증가시킨다. 환경적 요인은 섭취된 음식과 의약에의 노출에 의해 영향을 받는 장내 세균총의 변경을 포함할 수 있다.
염증성 장 질환은 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 심한 경련, 근육 연축, 체중 감소, 영양실조, 발열, 빈혈, 피부 병변, 관절통, 눈 염증, 간 장애, 관절염, 괴저성 농피증, 원발성 경화성 담관염 및 비갑상선 질병 증후군을 포함하는 증상과 관련되어 있고, 개시된 안티센스 화합물을 사용한 이들 증상의 치료, 예를 들어, 성장 결함도 앓을 수 있는, 궤양성 결장염을 앓고 있는 어린이의 치료도 한 실시양태에서 고려된다.
장 섬유증
일부 실시양태에서, 본원은 장 섬유증의 치료를 필요로 하는 환자에서 장 섬유증을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 서열번호 40 내지 43, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 장 섬유증은 통상적으로 염증성 장 질환(IBD)에 의해 야기된 만성 염증과 같은 염증에 대한 장 조직의 반응으로부터 비롯된다. IBD에서, 증가된 수준의 SMAD7은 TGF-β 경로 활성화 및 Smad2/3 인산화를 통해 매개된 소염성 유전자 발현을 차단한다. 증가된 TGF-β 신호전달에 노출된 근섬유모세포는 증가된 양의 콜라겐을 생성한다. 크론병과 관련하여, 지속적인 만성 염증은 섬유화 과정을 촉진하여, 소장 및 결장 협착을 포함하는 협착의 형성을 초래한다.
장 섬유증은 조영 증강 초음파촬영과 같은 다수의 영상화 기법들 중 임의의 영상화 기법에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Quaia et al. The value of small bowel wall contrast enhancement after sulfur hexafluoride-filled microbubble injection to differentiate inflammatory from fibrotic strictures in patients with Crohn's disease. Ultrasound Med. Biol. 38, 1324-1332 (2012)]; 문헌[Nylund et al. Quantitative contrast-enhanced ultrasound comparison between inflammatory and fibrotic lesions in patients with Crohn's disease. Ultrasound Med. Biol. 39, 1197-1206 (2013)]; 문헌[Stidham et al. Ultrasound elasticity imaging for detecting intestinal fibrosis and inflammation in rats and humans with Crohn's disease. Gastroenterology 141, 819-826 (2011)]을 참조한다. 자기화 전달 MRI와 같은 MRI 기법도 이용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Maccioni et al. Value of T2-weighted magnetic resonance imaging in the assessment of wall inflammation and fibrosis in Crohn's disease. Abdom. Imaging 37, 944-957 (2012)]; 문헌[Adler et al. Magnetization transfer helps detect intestinal fibrosis in an animal model of Crohn disease. Radiology 259, 127-135 (2011)]; 문헌[Pazahr et al. Magnetization transfer for the assessment of bowel fibrosis in patients with Crohn's disease: initial experience. Magn. Reson. Mat. Phys. Biol. Med. 26, 291-301 (2013)]을 참조한다.
섬유증
일부 실시양태에서, 본원은 섬유증의 치료를 필요로 하는 환자에서 섬유증을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 서열번호 40 내지 43, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원은 섬유증, 예컨대, 간 섬유증, 폐 섬유증, 활막 섬유증 및/또는 장 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 본 개시내용의 일부를 형성하는 방법을 개시한다. 예를 들어, 간 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 대안적으로, 장 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 대안적으로, 폐 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 대안적으로, 활막 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.
상기 방법을 이용하여 치료하는 환자는 검출 가능한 섬유증을 가질 수 있거나 갖지 않을 수 있다. 일부 실시양태에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 후, 예를 들어, 1일, 2일, 1주, 1개월 또는 6개월 이상 후, 환자는 환자에 존재하는 섬유증의 양의 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40% 또는 심지어 50% 이상의 감소를 가진다. IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 이러한 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어, 적어도 매일 투여될 수 있다. 화합물은 경구 투여될 수 있다. 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 결과로서 환자에서 섬유증의 임상적 증상발현의 지연은 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 본원에 개시된 폴리뉴클레오타이드를 투여 받지 않은 환자에 비해 적어도 예를 들어, 6개월, 1년, 18개월 또는 심지어 2년 이상일 수 있다.
필요로 하는 환자는 간경변으로 진행된 간 섬유증을 가질 수 있다. 간 섬유증의 위험이 있는 환자는 B형 간염, C형 간염 또는 비알코올성 지방간염(NASH)을 가진 환자를 포함할 수 있다. NASH는 지방증 및 간경변을 포함하는 광범위한 비알코올성 지방간 질환에 포함된다. NASH는 비만, 2형 진성 당뇨병 및 이상지질혈증을 특징으로 하는 대사 증후군의 구성요소이며, 궁극적으로 간세포 암종을 유발할 수 있다.
간 섬유증과 관련된 장애를 치료하는 방법, 예컨대, 특정 저장 질환 및 선천성 대사 오류, 예컨대, 알파 1-항트립신 결핍, 구리 저장 질환(예를 들어, 윌슨병), 프럭토스혈증, 갈락토스혈증, 글리코겐 저장 질환(예를 들어, III형, IV형, VI형, IX형 및 X형), 철 과다로드 증후군(예를 들어, 혈색소증), 지질 이상(예를 들어, 고셔병), 퍼록시좀 장애(예를 들어, 젤웨거(Zellweger) 증후군) 및 티로신혈증; 세균 감염(예를 들어, 브루셀라증); 기생충 감염(예를 들어, 에키노코쿠스증); NASH; 바이러스 감염(예를 들어, 만성 B형 또는 C형 간염을 포함하는 B형 간염 또는 C형 간염); 버드-키아리(Budd-Chiari) 증후군; 심부전; 간 정맥폐쇄성 질환; 및 문맥 혈전증 중 적어도 하나의 치료도 제공한다. 선천성 간 섬유증을 치료하는 방법도 예상된다. 조성물은 경구 투여될 수 있다.
간 섬유증의 경우 약물 및/또는 알코올의 남용이 연관되어 있다. 약물 및/또는 알코올 남용의 이력을 가진 환자, 예를 들어, 알코올, 아미오다론, 클로르프로마진, 이소니아지드, 메토트렉세이트, 메틸도파, 옥시페니사틴 및 톨부타마이드 중 적어도 하나를 남용한 이력을 가진 환자에서 간 섬유증을 치료하는 방법이 본원에서 예상된다.
장 섬유증의 위험이 있는 환자는 궤양성 결장염, 염증성 장 질환 또는 크론병을 가진 환자를 포함할 수 있다. 위험이 있는 환자는 광범위한 및/또는 심각한 결장 질환인 크론병 또는 결장염의 진단 시 연령이 젊은 환자, 원발성 경화성 담관염이 존재하는 환자, 및/또는 암 가족력을 가진 환자도 포함할 수 있다.
장 섬유증과 관련된 장애를 치료하는 방법, 예컨대, 궤양성 결장염, 염증성 장 질환 또는 크론병 중 적어도 하나의 치료도 제공한다.
신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 활막 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 또는 신원성 전신 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대, 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약학 제제를, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 본원에서 예상된다.
예를 들어, IL-34 ASO를 포함하는, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 단독으로 사용될 수 있거나 서로 조합되어 사용될 수 있으므로, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 본 발명의 적어도 2개의 폴리뉴클레오타이드는 단일 조성물에서 함께 사용되거나 치료법의 일부로서 사용된다. IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 약물 및/또는 알코올 남용, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 또는 신원성 전신 섬유증, 약물 및/또는 알코올 남용을 치료하기 위해 다른 약물과 조합되어 사용될 수도 있다.
암
일부 실시양태에서, 본원은 암의 치료를 필요로 하는 환자에서 암을 치료하는 방법으로서, 개시된 폴리뉴클레오타이드(예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, 서열번호 40 내지 43, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염) 또는 이의 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 암은 원발성 암 또는 전이성 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 비정상적인 수준으로 IL-34를 발현하는 세포를 포함하는 임의의 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 변경된 IL-34 발현, 예를 들어, 상승된 IL-34 발현과 연관된 임의의 암이다.
치료 및 평가
본원에 기재된 "환자" 또는 "대상체"는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 위험이 있거나, 이러한 질환을 앓고 있거나, 이러한 질환으로 진단받은, 포유동물, 영장류 및 인간을 포함하나 이들로 제한되지 않는 임의의 동물을 의미한다. 특정 실시양태에서, 환자는 예를 들어, 고양이, 개 또는 말과 같은 비인간 포유동물일 수 있다. 환자는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 발생 위험이 높은 것으로 진단받은 개체, 염증성 및/또는 섬유성 질환을 진단받은 개체, 이전에 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓았던 개체, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 증상 또는 징후, 예를 들어, IL-34 발현 신호에 대해 평가된 개체일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "필요로 하는 환자"는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 임의의 증상 또는 증상발현을 앓고 있는 환자, 염증성 및/또는 섬유성 질환의 임의의 증상 또는 증상발현을 앓을 수 있는 환자, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 본 개시내용의 방법으로부터 이익을 얻을 임의의 환자를 의미한다. 필요로 하는 환자는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 발생 위험이 있는 것으로 진단받은 환자, 과거에 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓았던 환자, 또는 이전에 염증성 및/또는 섬유성 질환에 대해 치료받은 환자를 포함할 수 있다. IL-34 발현 또는 활성의 증가된 수준과 관련된 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓고 있는 개체가 특히 적합하다.
용어 "치료한다", "치료", "치료하는" 등은 일반적으로 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방하는 관점에서 예방적일 수 있고/있거나, 질환 및/또는 질환에 기인한 부작용을 부분적으로 또는 완전히 치유하는 관점에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환의 임의의 치료를 커버하고, (a) 질환에 걸리기 쉬운 경향이 있으나, 아직 질환을 가진 것으로서 진단받지 않은 대상체에서 질환이 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 질환의 중증도 또는 범위가 증가하는 것을 예방하는 것; (c) 질환을 완화하는 것, 즉 질환의 부분적 또는 완전한 호전을 야기하는 것; 또는 (d) 질환의 재발을 예방하는 것, 즉 질환 증상의 과거 성공적인 치료 또는 질환의 치료 후에 질환이 활성 상태로 돌아가는 것을 예방하는 것을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, "유효량" 또는 "약학적 유효량"은 환자에게 투여될 때 질병을 적어도 부분적으로 치료하기에 충분한 작용제의 양을 의미한다. 치료 유효량은 질병의 중증도, 성분의 투여 경로, 및 치료받는 환자의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다. 따라서, 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량은 작용제의 투여가 대상체에서 염증성 및/또는 섬유성 질환이 발생하는 것을 예방하거나, 염증성 및/또는 섬유성 질환 진행을 예방하거나(예를 들어, 직장 출혈, 빈혈 또는 위장 염증과 같은 염증성 장 질환의 증상의 발병 또는 중증도 증가를 예방하거나), 염증성 및/또는 섬유성 질환의 일부 또는 모든 관련된 증상을 완화하거나 완전히 호전시키도록, 예를 들어, 상기 질환의 퇴행을 야기하도록 환자에서 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 데 필요한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 양이다.
치료의 효능은 염증성 및/또는 섬유성 질환과 관련된 육안 증상의 평가, 조직 조직학의 분석, 생화학적 어세이, 영상화 방법, 예를 들어, 자기 공명 영상화 또는 다른 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 치료의 효능은 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 염증성 질환을 앓고 있는 환자에게 투여한 후에 질환의 육안 증상, 예컨대, 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 경련, 근육 경련, 체중 감소, 영양실조, 발열, 빈혈, 또는 염증성 질환과 관련된 다른 육안 병리학 측면의 변화를 분석함으로써 평가될 수 있다.
치료의 효능은 또한 예를 들어, 조직 생검(예를 들어, 위장 조직 생검)을 수득하고 육안 조직 또는 세포 형태학, 또는 염색 성질을 평가함으로써 조직 또는 세포 수준에서 평가될 수 있다. 단백질 또는 RNA 발현을 검사하는 생화학적 어세이도 치료의 효능을 평가하는 데 이용될 수 있다. 예를 들어, 면역세포화학적, 면역조직화학적, 웨스턴 블롯팅 또는 노던 블롯팅 방법, 또는 RNA 수준을 평가하는 데 유용한 방법, 예컨대, 정량적 또는 반정량적 중합효소 연쇄 반응을 통해 해리된 세포 또는 해리되지 않은 조직에서 IL-34, IL-6, IL-8, TNF-알파, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환을 표시하는 또 다른 단백질 또는 유전자 생성물의 수준, 염증성 사이토카인 생성 또는 IL-34 매개 염증성 반응을 평가할 수 있다. 또한, 질환 상태 및 치료의 효능을 평가하기 위해 배설물, 혈장 또는 혈청에서 발견되는 유용한 바이오마커의 존재 또는 발현 수준을 평가할 수도 있다.
치료의 효능을 평가할 때, 유효한 평가를 보장하기 위해 적합한 대조군을 선택할 수 있다. 예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 후 염증성 및/또는 섬유성 질환을 가진 환자에서 평가된 증상을, 치료 전 또는 치료 과정의 초기 시점에서의 동일한 환자의 증상, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단받지 않은 또 다른 환자의 증상과 비교할 수 있다. 대안적으로, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 후 위장 조직의 생화학적 또는 조직학적 분석의 결과를, 동일한 환자, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단받지 않은 개체, 또는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 투여 전 동일한 환자의 위장 조직의 생화학적 또는 조직학적 분석의 결과와 비교할 수 있다. 추가로, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 후 혈액, 혈청, 세포 또는 배설물 샘플을, 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단받지 않은 개체, 또는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 투여 전 동일한 환자의 필적할만한 샘플과 비교할 수 있다.
IL-34 억제의 검증은 IL-34 발현 수준 또는 활성의 직접적 또는 간접적 평가에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, IL-34 단백질 또는 RNA 발현을 측정하는 생화학적 어세이를 이용하여 총 IL-34 억제를 평가할 수 있다. 예를 들어, 총 IL-34 수준을 평가하기 위해 웨스턴 블롯으로 위장 조직에서 IL-34 단백질 수준을 측정할 수 있다. 노던 블롯 또는 정량적 중합효소 연쇄 반응으로 IL-34 mRNA 수준을 측정하여 총 IL-34 억제를 확인할 수도 있다. 면역세포화학적 또는 면역조직화학적 방법을 통해 해리된 세포, 해리되지 않은 조직, 혈액, 혈청 또는 배설물에서 IL-34 단백질 수준, 또는 IL-34 신호전달 활성을 표시하는 또 다른 단백질의 수준을 평가할 수도 있다.
IL-34 억제는 대식세포 또는 단핵구 생성 또는 증식과 같은 파라미터를 측정하거나, MAP 키나제 인산화, 및 IL-34 수용체, 즉 대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(MCSFR-1, M-CSFR1 및 CSF1R로서도 알려져 있는 M-CSFR-1)의 신호전달 활성화의 다른 지표를 포함하는, IL-34 활성의 변화와 상관관계를 가진 다른 파라미터의 변경을 측정함으로써 간접적으로 평가될 수도 있다. 예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료한 환자의 세포에서의 활성 MAPK1 또는 MAPK3 인산화의 수준을 이 세포에서의 IL-34 활성의 지표로서 측정할 수 있다. 혈장, 혈액, 배설물 또는 조직에서 발견되는 유용한 바이오마커의 존재 또는 발현 수준을 평가하여 IL-34 억제의 효능을 평가할 수도 있다.
본원에 개시된 치료 방법은 염증성 사이토카인 생성을 억제하는 방법을 포함한다. "염증성 사이토카인 생성"은 염증성 사이토카인 반응을 시작하고/하거나 촉진하는 사이토카인의 발현을 의미한다. "염증성 사이토카인 반응"은 과립구 동원, 림프구 동원, 전신 염증(특히 위장관, 또는 이의 일부 또는 일부들의 염증), 발열, 조직 파괴, 쇼크 및/또는 사망을 특징으로 할 수 있는 면역 반응을 의미한다. 염증성 사이토카인 반응은 개별 사이토카인과 이의 동족 세포 표면 수용체의 결합(예를 들어, IL-34와 CSF1R의 결합) 및 세포 기능과 유전자 발현을 변경시키는 후속 세포내 신호전달 캐스케이드를 특징으로 할 수 있다. 염증성 사이토카인은 IL-1, IL-6, IL-8, IL-34 및 TNF-알파를 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 염증성 사이토카인의 발현은 예를 들어, 대식세포, 단핵구, 점막고유판 단핵 세포, 또는 위장관의 다른 세포 또는 면역 시스템의 세포에서 일어날 수 있다. 염증성 사이토카인 생성을 억제하는 방법은 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 일부 또는 모든 염증성 사이토카인의 발현 수준을 감소시키는 방법을 포함한다. 염증성 사이토카인 생성을 억제하는 방법은 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 일부 또는 모든 염증성 사이토카인의 발현 수준을 감소시키는 방법도 포함한다.
염증성 사이토카인 생성을 억제하는 본 개시내용의 방법은 IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제하는 방법을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "IL-34 매개 염증성 반응"은 IL-34 발현 또는 IL-34 신호전달 활성에 의해 시작되거나, 용이해지거나 촉진되는 염증성 반응을 의미한다. IL-34 매개 염증성 반응은 IL-34, IL-6, IL-8 또는 TNF-알파를 포함하나 이들로 제한되지 않는 염증성 사이토카인의 발현, 및 염증성 사이토카인 신호전달의 활성화를 초래할 수 있다. 추가로, IL-34 매개 염증성 반응은 과립구 동원, 림프구 동원, 전신 염증(특히 위장관, 또는 이의 일부 또는 일부들의 염증), 발열, 조직 파괴, 쇼크 및/또는 사망을 특징으로 할 수 있다. IL-34 매개 염증성 반응은 IL-34 신호전달의 활성화, 예를 들어, IL-34와 CSF1R의 결합 및 다운스트림 MAP 키나제의 인산화를 특징으로 할 수도 있다. IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제하는 것은 IL-34 매개 염증성 반응과 관련된 임의의 또는 모든 세포 및 전신 변화를 완화하는 것을 의미한다. 예를 들어, 염증성 사이토카인 생성, 면역 세포 동원 또는 조직 염증의 감소는 IL-34 매개 염증성 반응의 감소 또는 억제를 표시할 것이다.
본 개시내용은 또한 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34를 억제하는 방법을 제공한다. IL-34는 위장관, 면역 시스템 및 혈액의 세포를 포함하는, IL-34 발현 또는 활성이 발생하는 임의의 세포에서 억제될 수 있다. 위장관의 세포(장벽, 위, 십이지장, 공장, 대장, 소장, 회장, 결장, 직장 및 항문관의 세포를 포함함)는 원주 상피 세포, 장 간질 세포, 점막 상피 세포, 효소 생성(zymogenic) 세포, 경부 점액 세포, 벽 세포, 가스트린 세포, 고블릿 세포, 파네스 세포, 올리고점액 세포 및 융모 흡수 세포를 포함한다. 면역 시스템의 세포는 백혈구, 식세포(예를 들어, 대식세포, 호중구 및 수지상 세포), 단핵구, 비만 세포, 호산구, 호염기구, 천연 킬러 세포, 선천성 세포, 림프구, B 세포 및 T 세포를 포함한다. 혈액 세포는 적혈 세포(적혈구)와 백혈 세포(백혈구, 단핵구 및 혈소판)를 포함한다.
약학 조성물 및 투여 경로
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및/또는 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)이다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO는 갭머 ASO이다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO 갭머는 하나 이상의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-34 ASO의 서열은 하기 서열들 중 하나로부터 선택된다:
Figure pct00020
5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이며, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00021
5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
Figure pct00022
5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
Figure pct00023
5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약학 조성물"은 예를 들어, 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하기 위해, 포유동물, 예를 들어, 인간에게 투여되는, 약학적으로 허용되는 부형제 중에 특정된 양의 치료 화합물, 예를 들어, 치료 유효량의 치료 화합물을 함유하는 혼합물을 의미한다.
일부 실시양태에서, 개시된 약학 조성물은 염증성 질환(예를 들어, 류마티스 관절염 또는 골관절염)을 치료하거나 예방하는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 개시된 약학 조성물은 섬유성 질환을 치료하거나 예방하는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 개시된 약학 조성물은 암을 치료 또는 예방하는 데 유용하다.
본원에서 사용된 바와 같이, "약학적으로 허용되는 부형제"는 활성 작용제가 대상체에게 투여되고/되거나 대상체에 의해 흡수되는 것을 돕고 환자에 대한 유의미한 독성학적 부작용을 야기하지 않으면서 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 물질을 의미한다. 약학적으로 허용되는 부형제의 비제한적 예는 물, NaCl, 일반 식염수 용액, 예컨대, 인산염 완충 식염수 용액, 에멀젼(예를 들어, 유/수 또는 수/유 에멀젼), 젖산첨가된 링거, 일반 수크로스, 일반 글루코스, 결합제, 충전제, 붕해제, 활택제, 코팅제, 감미제, 풍미제, 염 용액(예컨대, 링거 용액), 알코올, 오일, 젤라틴, 탄수화물, 예컨대, 락토스, 아밀로스 또는 전분, 지방산 에스테르, 하이드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리딘 및 색소 등을 포함한다. 이러한 제제는 멸균될 수 있고, 원하는 경우, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 본 발명의 폴리뉴클레오타이드와 유해하게 반응하지 않는 보조제, 예컨대, 활택제, 보존제, 안정화제, 습윤화제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충제, 착색제 및/또는 방향성 물질 등과 혼합될 수 있다. 부형제의 예에 대해서는 문헌[Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA (1975)]을 참조한다.
한 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내를 포함하는 하나 또는 여러 경로에 의해 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 비경구는 피하 주사, 췌장내 투여, 정맥내, 근육내, 복강내, 흉골내 주사 또는 주입 기법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 관절내 투여된다. 일부 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 직장 투여된다. 일부 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 피하 투여된다. 일부 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 경구 투여된다. 일부 실시양태에서, 개시된 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학 조성물은 비경구 투여를 통해 위장관계, 또는 위장관계의 특정 영역(예를 들어, 회장, 결장 또는 직장)에 직접 투여될 수 있다.
본원에 개시된 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 약학 조성물은 유닛 제형으로 제공될 수 있고 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 약학 조성물은 그의 의도된 투여 경로에 적합하도록 제제화되어야 한다. 유용한 제제는 약학 분야에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990)]을 참조한다.
예를 들어, 약학 제제는 멸균되어 있다. 멸균은 예를 들어, 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 필터 멸균을 수행할 수 있다.
비경구 투여
본 개시내용의 약학 조성물은 비경구 투여용으로 제제화될 수 있으며, 예를 들어, 정맥내, 근육내, 피하, 병변내 또는 복강내 경로를 통한 주사용으로 제제화될 수 있다. IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 수성 약학 조성물과 같은 수성 조성물의 제조는 본 개시내용에 비추어 볼 때 당업자에게 알려져 있을 것이다. 전형적으로, 이러한 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사제로서 제조될 수 있으며; 주사 전 액체의 첨가 시 용액 또는 현탁액을 제조하는 데 사용하기에 적합한 고체 제형도 제조될 수 있고; 제제는 유화될 수도 있다.
주사용으로 적합한 약학 제형은 멸균 수성 용액 또는 분산액; 참깨유, 땅콩유 또는 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제제; 및 멸균 주사용 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우, 제형은 멸균되어야 하며 쉽게 주사할 수 있을 정도로 유동적이어야 한다. 이것은 제조 및 저장의 조건 하에서 안정적이어야 하고, 세균 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용으로부터 보존되어야 한다.
유리 염기 또는 약리학적으로 허용되는 염으로서 활성 화합물의 용액은 계면활성제, 예컨대, 하이드록시프로필셀룰로스와 적절하게 혼합된 물에서 제조될 수 있다. 분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물, 및 오일에서 제조될 수 있다. 또한, 멸균 고정유를 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수 있다. 이 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 순한 고정유를 사용할 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산을 주사제의 제조에 사용할 수 있다. 멸균 주사용 제제는 무독성 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액, 현탁액 또는 에멀젼, 예를 들어, 1,3-부탄디올 중의 용액일 수도 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액, U.S.P. 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 한 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드는 1%(w/v) 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 및 0.1%(v/v) TWEEN™ 80을 포함하는 담체 또는 부형제 유체에 현탁될 수 있다. 통상의 저장 및 사용 조건 하에서, 이 제제는 미생물의 생장을 방지하기 위해 보존제를 함유한다.
주사용 제제, 예를 들어, 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용함으로써 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분을, 기본 분산 매질 및 앞서 열거된 성분들 중 필요한 다른 성분이 함유된 멸균 비히클에 혼입함으로써 제조된다. 본 개시내용의 멸균 주사용 용액은 앞서 열거된 다양한 다른 성분들과 함께 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 필요한 양의 적절한 용매에 혼입한 후, 필요에 따라 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 멸균 주사용 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분과 임의의 추가 원하는 성분으로 이루어진 분말을 이의 미리 멸균 여과된 용액으로부터 생성하는 진공 건조 및 냉동 건조 기법이다. 주사용 제제는 예를 들어, 세균 보유 필터를 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다.
근육내 주사를 위한 더 많이 또는 고도로 농축된 용액의 제조도 예상된다. 이와 관련하여, DMSO를 용매로서 사용하는 것이 매우 빠른 침투를 야기하여, 고농도의 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 작은 영역에 전달할 것이기 때문에 바람직하다.
이러한 용액에 사용하기에 적합한 보존제는 염화벤즈알코늄, 염화벤즈에토늄, 클로로부탄올, 티메로살 등을 포함한다. 적합한 완충제는 pH를 약 pH 6 내지 pH 8, 예를 들어, 약 pH 7 내지 pH 7.5로 유지하기에 충분한 양으로 붕산, 중탄산나트륨, 중탄산칼륨, 붕산나트륨, 붕산칼륨, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 아세트산나트륨, 이인산나트륨 등을 포함한다. 용액의 염화나트륨 당량이 0.9 ± 0.2%의 범위 내에 있게 하기에 적합한 장성 작용제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 덱스트로스, 글리세린, 염화칼륨, 프로필렌 글리콜, 염화나트륨 등이다. 적합한 항산화제 및 안정화제는 중아황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 티오아황산나트륨, 티오우레아 등을 포함한다. 적합한 습윤화제 및 투명화제는 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 282 및 틸록사폴을 포함한다. 적합한 점도 증가제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 젤라틴, 글리세린, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시메틸프로필셀룰로스, 라놀린, 메틸셀룰로스, 페트롤라툼(petrolatum), 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸셀룰로스 등을 포함한다.
경구 투여
일부 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드의 경구 전달에 적합한 조성물, 예를 들어, 상기 조성물이 상기 폴리뉴클레오타이드를 예를 들어, 환자의 위장관에 전달할 수 있도록 장용 코팅, 예를 들어, 위 내성 코팅을 포함하는 정제가 본원에서 예상된다. 예를 들어, 이러한 투여는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드를 환자의 위장관의 영향받은 부분에 직접 실질적으로 국소 적용하는 국소 효과를 생성할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 투여는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 원치 않는 전신 흡수를 실질적으로 피할 수 있다.
예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 어느 한 서열번호의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 과립제를 포함하는(예를 들어, 적어도 부분적으로 과립제로부터 형성된) 경구 투여용 정제를 제공한다. 이러한 정제는 장용 코팅으로 코팅될 수 있다. 예상되는 정제는 약학적으로 허용되는 부형제, 예컨대, 충전제, 결합제, 붕해제 및/또는 활택제뿐만 아니라, 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 풍미제, 예컨대, 윈터그린, 오렌지, 자일리톨, 소르비톨, 프럭토스 및 말토덱스트린, 및 방향제, 보존제 및/또는 항산화제도 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 예상되는 약학 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호 1 내지 23 또는 서열번호 40 내지 43 중 어느 한 서열번호의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 약학적으로 허용되는 염, 및 약학적으로 허용되는 충전제를 포함하는 과립내 상을 포함한다. 예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 충전제는 임의로 다른 부형제와 함께 블렌딩되고 과립제로 형성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 과립내 상은 습식 과립화를 이용함으로써 형성될 수 있으며, 예를 들어, 액체(예를 들어, 물)를 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 블렌딩된 폴리뉴클레오타이드 및 충전제에 첨가한 후, 조합물을 건조하고/하거나, 제분하고/하거나 체질하여 과립제를 생성한다. 당업자는 과립내 상을 달성하기 위해 다른 공정을 이용할 수 있음을 이해할 것이다.
일부 실시양태에서, 예상되는 제제는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있고 과립내 상과 블렌딩되어 개시된 제제를 형성할 수 있는 과립외 상을 포함한다.
개시된 제제는 충전제를 포함하는 과립내 상을 포함할 수 있다. 예시적인 충전제는 셀룰로스, 젤라틴, 인산칼슘, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 소르비톨, 미세결정성 셀룰로스, 펙틴, 폴리아크릴레이트, 덱스트로스, 셀룰로스 아세테이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 부분 전호화 전분, 탄산칼슘, 및 이들의 조합물을 포함하는 기타를 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 개시된 제제는 일반적으로 약학 제제의 성분들을 함께 유지하는 기능을 할 수 있는 결합제를 포함하는 과립내 상 및/또는 과립외 상을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 예시적인 결합제는 전분, 당, 셀룰로스 또는 변형된 셀룰로스, 예컨대, 하이드록시프로필 셀룰로스, 락토스, 전호화 옥수수 전분, 폴리비닐 피롤리돈, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 저치환된 하이드록시프로필 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 당 알코올, 및 이들의 조합물을 포함하는 기타를 포함할 수 있으나 이들로 제한되지 않는다.
예를 들어, 과립내 상 및/또는 과립외 상을 포함하는 예상되는 제제는 전분, 셀룰로스, 가교결합된 폴리비닐 피롤리돈, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 알기네이트, 옥수수 전분, 크로스멜로스 나트륨, 가교결합된 카르복시메틸 셀룰로스, 저치환된 하이드록시프로필 셀룰로스, 아카시아, 및 이들의 조합물을 포함하는 기타와 같은, 그러나 이들로 제한되지 않는, 붕해제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 과립내 상 및/또는 과립외 상은 붕해제를 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 예상되는 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 만니톨, 미세결정성 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 및 나트륨 전분 글리콜레이트 또는 이들의 조합물로부터 선택된 부형제를 포함하는 과립내 상, 및 미세결정성 셀룰로스, 나트륨 전분 글리콜레이트 및 스테아르산마그네슘 또는 이들의 혼합물 중 하나 이상을 포함하는 과립외 상을 포함한다.
일부 실시양태에서, 예상되는 제제는 활택제를 포함할 수 있고, 예를 들어, 과립외 상은 활택제를 함유할 수 있다. 활택제는 탈크, 실리카, 지방, 스테아린, 스테아르산마그네슘, 인산칼슘, 이산화규소, 규산칼슘, 인산칼슘, 콜로이드성 이산화규소, 금속성 스테아레이트, 수소첨가된 식물성 오일, 옥수수 전분, 벤조산나트륨, 폴리에틸렌 글리콜, 아세트산나트륨, 스테아르산칼슘, 라우릴황산나트륨, 염화나트륨, 라우릴황산마그네슘, 탈크 및 스테아르산을 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 약학 제제는 장용 코팅을 포함한다. 일반적으로, 장용 코팅은 약물이 소화 경로를 따라 흡수되는 위치를 제어하는, 경구 의약을 위한 장벽을 생성한다. 장용 코팅은 pH에 따라 상이한 속도로 붕해되는 중합체를 포함할 수 있다. 장용 코팅은 예를 들어, 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 메틸 아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 셀룰로스 아세테이트 석시네이트, 하이드록실프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 메틸 메타크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 공중합체 제C형, 폴리비닐 아세테이트-프탈레이트, 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트를 포함할 수 있다.
예시적인 장용 코팅은 Opadry® AMB, Acryl-EZE®, Eudragit® 등급을 포함한다. 일부 실시양태에서, 장용 코팅은 중량 기준으로 예상되는 정제의 약 5% 내지 약 10%, 약 5% 내지 약 20%, 8% 내지 약 15%, 약 8% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 20%, 또는 약 12% 내지 약 20%, 또는 약 18%를 차지할 수 있다. 예를 들어, 장용 코팅은 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함할 수 있다.
예를 들어, 예상되는 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약 0.5 중량% 내지 약 70 중량%, 예를 들어, 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 또는 약 1 중량% 내지 약 20 중량%로 포함하거나 본질적으로 이들로 구성된 정제를 제공한다. 이러한 정제는 예를 들어, 약 0.5 중량% 내지 약 60 중량%의 만니톨, 예를 들어, 약 30 중량% 내지 약 50 중량%의 만니톨, 예를 들어, 약 40 중량%의 만니톨; 및/또는 약 20 중량% 내지 약 40 중량%의 미세결정성 셀룰로스, 또는 약 10 중량% 내지 약 30 중량%의 미세결정성 셀룰로스를 포함한다. 예를 들어, 개시된 정제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 약 30 중량% 내지 약 60 중량%, 예를 들어, 약 45 중량% 내지 약 65 중량%, 또는 대안적으로 약 5 중량% 내지 약 10 중량%로 포함하고 약 30 중량% 내지 약 50 중량% 또는 대안적으로 약 5 중량% 내지 약 15 중량%의 만니톨, 약 5 중량% 내지 약 15 중량%의 미세결정성 셀룰로스, 약 0 중량% 내지 약 4 중량%, 또는 약 1 중량% 내지 약 7 중량%의 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 및 약 0 중량% 내지 약 4 중량%, 예를 들어, 약 2 중량% 내지 약 4 중량%의 나트륨 전분 글리콜레이트를 포함하는 과립내 상을 포함할 수 있다.
또 다른 예상되는 실시양태에서, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경구 투여를 위한 약학 정제 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염(예컨대, 나트륨 염), 및 약학적으로 허용되는 충전제를 포함하는 과립내 상을 포함하고, 붕해제와 같은 약학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있는 과립외 상도 포함할 수 있다. 과립외 상은 미세결정성 셀룰로스, 스테아르산마그네슘 및 이들의 혼합물로부터 선택된 성분을 포함할 수 있다. 약학 조성물은 또한 정제의 중량을 기준으로 약 12% 내지 20%의 장용 코팅을 포함할 수 있다. 예를 들어, 경구 사용을 위한 약학적으로 허용되는 정제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약 5 중량% 내지 10 중량%로 포함할 수 있고, 약 30 중량% 내지 50 중량%의 만니톨, 약 10 중량% 내지 30 중량%의 미세결정성 셀룰로스, 및 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 장용 코팅을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 경구 사용을 위한 약학적으로 허용되는 정제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약 5 중량% 내지 약 10 중량%로 포함하고 약 40 중량%의 만니톨, 약 8 중량%의 미세결정성 셀룰로스, 약 5 중량%의 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 및 약 2 중량%의 나트륨 전분 글리콜레이트를 포함하는 과립내 상; 약 17 중량%의 미세결정성 셀룰로스, 약 2 중량%의 나트륨 전분 글리콜레이트, 약 0.4 중량%의 스테아르산마그네슘을 포함하는 과립외 상; 및 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 정제 상의 장용 코팅을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 약학 조성물은 약 13 중량% 또는 약 15 중량%, 16 중량%, 17 중량% 또는 18 중량%를 차지하는 장용 코팅, 예를 들어, AcyrlEZE®(예를 들어, 전체가 본원에 참고로 포함되는 PCT 공개 제WO2010/054826호 참조)을 함유할 수 있다.
코팅이 용해되고 활성 성분이 방출되는 시점에서의 속도는 이의 용해 속도이다. 한 실시양태에서, 예상되는 정제는 예를 들어, pH 7.2의 인산염 완충제에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 제2형 장치(패들)에서 시험될 때, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 약 50% 내지 약 100%가 약 120분 내지 약 240분 후, 예를 들어, 180분 후에 방출되는 용해 프로파일을 가질 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 예상되는 정제는 예를 들어, pH 1.0의 희석된 HCl에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 제2형 장치(패들)에서 시험될 때 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드가 120분 후에 실질적으로 전혀 방출되지 않는 용해 프로파일을 가질 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 예상되는 정제는 예를 들어, pH 6.6의 인산염 완충제에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 제2형 장치(패들)에서 시험될 때, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 약 10% 내지 약 30%, 또는 약 50% 이하가 30분 후에 방출되는 용해 프로파일을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 예상되는 제제, 예를 들어, 정제는 환자에게 경구 투여될 때 상기 환자에서 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 최소 혈장 농도를 야기할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 제제는 환자에게 경구 투여될 때 환자의 결장 또는 직장, 예를 들어, 환자의 영향을 받거나 병든 부위에 국소 전달된다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 방법은 본원에 개시된 질환 및 장애의 치료에 관한 적어도 하나의 다른 작용제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 예상되는 다른 작용제는 공투여될 수 있다(예를 들어, 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다).
예상되는 작용제는 글루코코르티코이드, 세포증식억제제, 항체, 면역필린에 작용하는 작용제, 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 마이코페놀레이트 및 작은 생물학적 작용제를 포함하는 면역억제제를 포함한다. 예를 들어, 예상되는 면역억제제는 타크롤리무스, 사이클로스포린, 피메크롤리무스, 시롤리무스, 에버롤리무스, 마이코페놀산, 핀골리모드, 덱사메타손, 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 레플루노마이드, 테리플루노마이드, 아나킨라, 항-흉선세포 글로불린, 항-림프구 글로불린, 무로모납(muromonab)-CD3, 아푸투주맙(afutuzumab), 리툭시맙(rituximab), 테플리주맙(teplizumab), 에팔리주맙(efalizumab), 다클리주맙(daclizumab), 바실릭시맙(basiliximab), 아달리무맙(adalimumab), 인플릭시맙(infliximab), 세르톨리주맙 페골(certolizumab pegol), 나탈리주맙(natalizumab) 및 에타네르셉트(etanercept)를 포함하나 이들로 제한되지 않는다. 다른 예상되는 작용제는 항생제, 지사제, 완하제, 진통제, 철분 보충제, 및 칼슘 또는 비타민 D 또는 B-12 보충제를 포함한다.
용량 및 투여 빈도
일부 실시양태에서, 본원은 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 조성물(예를 들어, 서열번호 40 내지 43을 포함하는 ASO, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염)을 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증의 치료를 필요로 하는 환자에서 섬유증, 예를 들어, 폐 섬유증, 활막 섬유증 또는 장 섬유증을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물의 예시적인 용량을 제공한다. 예시적인 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 약 35 mg 내지 약 500 mg을 포함하거나 본질적으로 이로 구성된 제형을 포함한다. 예를 들어, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 약 35 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg 또는 250 mg을 포함하는 제제가 본원에서 예상된다. 한 실시양태에서, 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 약 40 mg, 80 mg 또는 160 mg을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 적어도 100 ㎍을 포함할 수 있다. 예를 들어, 제제는 IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 개시된 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg 또는 25 mg을 포함할 수 있다. 투여되는 양은 치료될 질환 또는 적응증의 유형과 정도, 환자의 전반적인 건강 및 크기, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드의 생체내 효능, 약학 제제 및 투여 경로와 같은 변수에 의해 좌우될 것이다. 원하는 혈액 수준 또는 조직 수준을 빠르게 달성하기 위해 초기 용량을 상한 수준 이상으로 증가시킬 수 있다. 대안적으로, 초기 용량은 최적치보다 더 작을 수 있으며, 치료 과정 동안 용량을 점진적으로 증가시킬 수 있다. 인간 용량은 예를 들어, 40 mg부터 160 mg까지 실시하도록 설계된 보편적인 I 상 용량 증량 연구에서 최적화될 수 있다. 투약 빈도는 투여 경로, 용량 및 치료되는 질환과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예시적인 투약 빈도는 하루에 1회, 주당 1회 및 2주마다 1회이다. 일부 실시양태에서, 투약은 7일 동안 하루에 1회이다.
진단 방법
본 개시내용은 환자의 하나 이상의 생물학적 샘플에서 IL-34 발현 신호의 수준을 검출하는 것에 의존하는, 염증성 및/또는 섬유성 질환을 가진 환자를 진단하는 방법도 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "IL-34 발현 신호"는 IL-34 유전자 발현, 또는 유전자 또는 유전자 생성물 활성의 임의의 지표를 의미할 수 있다. IL-34 유전자 생성물은 RNA(예를 들어, mRNA), 펩티드 및 단백질을 포함한다. 평가될 수 있는 IL-34 유전자 발현의 지표는 IL-34 유전자 또는 염색질 상태, IL-34 유전자와 유전자 발현을 조절하는 세포 구성요소의 상호작용, IL-34 유전자 생성물 발현 수준(예를 들어, IL-34 RNA 발현 수준, IL-34 단백질 발현 수준), 또는 IL-34 RNA 또는 단백질과 전사, 번역 또는 번역 후 처리 기구의 상호작용을 포함하나 이들로 제한되지 않는다. IL-34 유전자 생성물 활성의 지표는 IL-34 신호전달 활성의 평가(예를 들어, CSF1R 활성화 또는 MAPK1/MAPK3 인산화의 평가) 및 IL-34 수용체 결합(예를 들어, CSF1R 결합)의 평가를 포함하나 이들로 제한되지 않는다.
IL-34 발현 신호의 검출은 생체내, 시험관내 또는 생체외 방법을 통해 달성될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 시험관내에서 수행될 수 있다. 검출 방법은 환자의 혈액, 혈청, 배설물, 조직 또는 세포에서의 검출을 포함할 수 있다. 검출은 전체 조직, 조직 외식편, 세포 배양물, 해리된 세포, 세포 추출물, 또는 혈액 또는 혈청을 비롯한 체액에서 IL-34 발현 신호를 측정함으로써 달성될 수 있다. 예상되는 검출 방법은 IL-34 유전자 생성물 발현의 수준을 측정하는 어세이, 예컨대, 웨스턴 블롯팅, FACS, ELISA, 다른 정량적 결합 어세이, 세포 또는 조직 생장 어세이, 노던 블롯, 정량적 또는 반정량적 중합효소 연쇄 반응, 의료적 영상화 방법(예를 들어, MRI) 또는 면역염색 방법(예를 들어, 면역조직화학 또는 면역세포화학)을 포함한다.
예시적인 실시양태의 목록
본 발명은 하기 비제한적인 예시적인 실시양태에 의해 더 설명된다:
실시양태 1. a. 5'-CTTTGGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3), 또는 b. 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5)에 따른 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로서,
상기 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 사이티딘이 화학적으로 변형되고, 적어도 하나의 뉴클레오사이드가 2'-O-(2-메톡시에틸)(2'-MOE) 뉴클레오사이드인 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 10개 이하의 뉴클레오사이드가 화학적으로 변형된 것인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 6개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 4. 실시양태 1 또는 2에 있어서, 8개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 하기 뉴클레오타이드 서열들로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
a. 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
b. 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임;
c. 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임; 및
d. 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43), 이때 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임.
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 한 실시양태에 있어서, IL-34에 상보적인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 한 실시양태에 있어서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 한 실시양태에 있어서, IL-34 siRNA인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 한 실시양태에 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합 및 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합, 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 10. 실시양태 9에 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 11. 실시양태 1 내지 10 중 어느 한 실시양태에 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 모든 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 12. 실시양태 1 내지 11 중 어느 한 실시양태에 있어서, 길이가 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개 또는 30개 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 13. 실시양태 1 내지 11 중 어느 한 실시양태에 있어서, 길이가 20개 뉴클레오타이드이거나, 길이가 20개 내지 25개, 20개 내지 30개, 20개 내지 35개, 25개 내지 30개, 25개 내지 35개, 또는 30개 내지 35개 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 14. 실시양태 1 내지 13 중 어느 한 실시양태에 있어서, 길이가 20개, 25개 또는 30개 이하의 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 15. 실시양태 1 내지 13 중 어느 한 실시양태에 있어서, 길이가 20개 내지 25개 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 16. 실시양태 1 내지 13 중 어느 한 실시양태에 있어서, 길이가 20개 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 17. (a) 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 (b) 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
실시양태 18. 실시양태 17에 있어서, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합한 약학 조성물.
실시양태 19. 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 염증성 질환을 치료하는 방법으로서, 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 실시양태 17 또는 18의 약학 조성물을 유효량으로, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 20. 실시양태 19에 있어서, 염증성 질환이 변경된 IL-34 발현과 관련되어 있는 것인 방법.
실시양태 21. 실시양태 19 또는 20에 있어서, 염증성 질환이 상승된 IL-34 발현과 관련되어 있는 것인 방법.
실시양태 22. 실시양태 19 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염인 방법.
실시양태 23. 실시양태 19 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서, 염증성 질환이 골관절염인 방법.
실시양태 24. 실시양태 19 내지 23 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생성을 억제하는 방법.
실시양태 25. 실시양태 19 내지 24 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자의 세포에서 IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제하는 방법.
실시양태 26. 실시양태 19 내지 25 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 감소시키거나 억제하는 방법.
실시양태 27. 실시양태 24 내지 26 중 어느 한 실시양태에 있어서, 세포가 장 세포인 방법.
실시양태 28. 실시양태 24 내지 26 중 어느 한 실시양태에 있어서, 세포가 장 간질 세포인 방법.
실시양태 29. 실시양태 24 내지 26 중 어느 한 실시양태에 있어서, 세포가 장 섬유협착의 일부를 형성하는 것인 방법.
실시양태 30. 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소시키거나 제거하는 방법으로서, 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 실시양태 17 또는 18의 약학 조성물을 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 31. 실시양태 27에 있어서, 섬유성 협착이 장에 위치하는 것인 방법.
실시양태 32. 실시양태 30 또는 31에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
실시양태 33. 실시양태 32에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염인 방법.
실시양태 34. 실시양태 32에 있어서, 염증성 질환이 골관절염인 방법.
실시양태 35. 실시양태 32에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환인 방법.
실시양태 36. 실시양태 32에 있어서, 염증성 장 질환이 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
실시양태 37. 실시양태 30에 있어서, 염증성 장 질환이 염증성 크론병인 방법.
실시양태 38. 실시양태 30에 있어서, 염증성 장 질환이 섬유협착 크론병인 방법.
실시양태 39. 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 실시양태 1 내지 16 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 실시양태 17 또는 18의 약학 조성물을 치료 유효량으로, 이러한 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 40. 실시양태 39에 있어서, 섬유증이 장 섬유증인 방법.
실시양태 41. 실시양태 39에 있어서, 섬유증이 폐 섬유증인 방법.
실시양태 42. 실시양태 39에 있어서, 섬유증이 활막 섬유증인 방법.
실시양태 43. 실시양태 39에 있어서, 섬유증이 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 및 신원성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
실시양태 44. 실시양태 39 내지 43 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 류마티스 관절염을 앓고 있는 것인 방법.
실시양태 45. 실시양태 39 내지 43 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 골관절염을 앓고 있는 것인 방법.
실시양태 46. 실시양태 39 내지 43 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 크론병을 앓고 있는 것인 방법.
실시양태 47. 실시양태 19 내지 46 중 어느 한 실시양태에 있어서, 폴리뉴클레오타이드를 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여하는 것인 방법.
실시양태 48. 실시양태 47에 있어서, 폴리뉴클레오타이드를 관절내로 투여하는 것인 방법.
실시양태 49. 실시양태 47에 있어서, 폴리뉴클레오타이드를 직장 투여하는 것인 방법.
실시양태 50. 실시양태 47에 있어서, 폴리뉴클레오타이드를 경구 투여하는 것인 방법.
실시양태 51. 염증성 질환의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도.
실시양태 52. 실시양태 51에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환 또는 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
실시양태 53. 실시양태 51 또는 52에 있어서, 환자가 류마티스 관절염을 앓고 있는 것인 용도.
실시양태 54. 실시양태 51 또는 52에 있어서, 환자가 골관절염을 앓고 있는 것인 용도.
실시양태 55. 실시양태 51 또는 52에 있어서, 환자가 크론병을 앓고 있는 것인 용도.
실시양태 56. 실시양태 52에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환인 용도.
실시양태 57. 실시양태 56에 있어서, 염증성 장 질환이 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 용도.
실시양태 58. 실시양태 57에 있어서, 염증성 장 질환이 염증성 크론병인 용도.
실시양태 59. 실시양태 57에 있어서, 염증성 장 질환이 섬유협착 크론병인 용도.
실시양태 60. 의약으로서 사용하기 위한 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
실시양태 61. 실시양태 60에 있어서, 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 염증성 질환을 치료하는 데 사용하기 위한 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 62. 실시양태 61에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염 또는 골관절염인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 63. 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
실시양태 64. 실시양태 63에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, 당뇨병(I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환 또는 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 65. 실시양태 64에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 66. 실시양태 64에 있어서, 염증성 질환이 골관절염인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 67. 실시양태 64에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 68. 실시양태 67에 있어서, 염증성 장 질환이 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 및 불확정 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 69. 실시양태 68에 있어서, 염증성 장 질환이 염증성 크론병인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 70. 실시양태 68에 있어서, 염증성 장 질환이 섬유협착 크론병인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 71. 섬유증의 치료에 사용하기 위한 실시양태 1 내지 17 중 어느 한 실시양태의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
실시양태 72. 실시양태 71에 있어서, 섬유증이 장 섬유증인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 73. 실시양태 71에 있어서, 섬유증이 폐 섬유증인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 74. 실시양태 71에 있어서, 섬유증이 활막 섬유증인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 75. 실시양태 71에 있어서, 섬유증이 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증 및 신원성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 76. 실시양태 60 내지 75 중 어느 한 실시양태에 있어서, 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여되는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 77. 실시양태 76에 있어서, 관절내로 투여되는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 78. 실시양태 76에 있어서, 직장 투여되는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 79. 실시양태 76에 있어서, 경구 투여되는 폴리뉴클레오타이드.
실시양태 80. 실시양태 60 내지 79 중 어느 한 실시양태에 있어서, 환자가 인간인 폴리뉴클레오타이드.
실시예
본 개시내용은 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다. 실시예는 예시 목적으로만 제공되며, 어떤 방식으로든 본 개시내용의 범위 또는 내용을 제한하는 것으로서 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: 3-14-3 및 4-12-4 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 IL-34의 설계 및 평가
마우스 및 인간 IL-34 mRNA 서열에 상보적인 서열번호 40 내지 43의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 상업적인 제조사에 의해 설계되고 생성된다.
IL-34 발현의 녹다운(knockdown)을 HT-29 인간 및 RAW 264.7 마우스 세포주에서 평가한다. HT-29 세포(ATCC, 미국 버지니아주 마나사스)를 10% FBS 및 1% P/S(모두 론자(Lonza) 제품)로 보충된 맥코이(McCoy) 5A(Lonza, 벨기에 베르비에)에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다. 뮤린 RAW264.7 대식세포(ATCC, 미국 버지니아주 마나사스)를 10% FBS, 1% P/S 및 1% 비필수 아미노산(NEA)(모두 론자 제품)을 가진 둘베코(Dulbecco) 변형 이글(Eagle) 배지(1 g/ℓ의 글루코스)에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다. 뮤린 결장 암종 세포주 MC-38(ABMGood, 캐나다 리치몬드)을 10% FBS 및 1% P/S로 보충된 DMEM 배지에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
세포를 처리되지 않은 채로 두거나, 제조사의 지침에 따라 Opti-MEM 배지 및 리포펙타민(Lipofectamine) 3000 시약(Life Technologies, 이탈리아 밀란)을 사용하여 특정 IL-34 ASO 또는 스크램블된 ASO로 세포를 형질감염시킨다. 총 RNA 및 단백질을 추출한다.
HT-29 세포에서 실시간 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)으로 녹다운을 평가한다. RT-PCR을 다음과 같이 수행한다: 일정한 양의 RNA(0.5 ㎍/샘플)를 상보적 DNA(cDNA)로 역전사한다. 이어서, 다음 프로토콜을 이용하여 1 ㎕의 cDNA/샘플을 증폭한다: 95℃에서 1분 동안 변성; 60℃에서 30초 동안 어닐링에 이어 72℃에서 30초 동안 연장. 다음 프라이머 서열을 사용한다: IL-34 정방향, 5'-ACAGGAGCCGACTTCAGTAC-3'(서열번호 29); IL-34 역방향, 5'-ACCAAGACCCACAGATACCG-3'(서열번호 30); β-액틴 정방향, 5'-AAGATGACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'(서열번호 31); 및 β-액틴 역방향, 5'-AGCCAGTCCAGACGCAGGAT-3'(서열번호 32). β-액틴 mRNA 발현을 기준으로 mRNA 발현을 계산한다.
HT-29 세포를 서열번호 40, 41, 42 또는 43의 인간 IL-34 ASO, 또는 스크램블된 음성 대조군 올리고뉴클레오타이드(SRC AS; 5'-AACACGTCTATACGC-3'(서열번호 33))로 24시간 동안 형질감염시킨다. IL-34 전사체를 RT-PCR로 평가하고 값을 β-액틴으로 정규화한다.
HT-29 세포 및 RAW 264.7 세포에서 웨스턴 블롯팅으로 녹다운도 평가한다. 웨스턴 블롯팅을 다음과 같이 수행한다: 형질감염 후, 10 mM HEPES(pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.2 mM EGTA 및 0.5% Nonidet P40을 함유하고 1 mM 디티오트레이톨, 10 mg/㎖ 아프로티닌, 10 mg/㎖ 류펩틴, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 mM Na3VO4 및 1 mM NaF로 보충된 완충제 중의 얼음에서 세포를 용해시킨다. 용해물을 4℃에서 12,000xg로 30분 동안 원심분리하여 정화하고 10% 도데실황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 분리한다. 호스라디쉬 퍼옥시다제(HRP)-접합된 2차 IgG 단일클론 항체(1:20,000 최종 희석; Dako, 이탈리아 밀란)와 함께 마우스 항-인간 IL-34 항체(1:1,000 최종 희석; Abcam, 영국 캠브리지)를 사용하여 IL-34를 검출한다. 민감한 증강된 화학발광 키트(Pierce, 일리노이주 록포드)를 사용하여 HRP 반응을 검출한다. 분석 후, 블롯을 벗겨내고 마우스 항-인간 β-액틴 항체(1:5,000 최종 희석; Sigma-Aldrich)로 프로빙한 다음, HRP-접합된 2차 IgG 단일클론 항체(1:20,000 최종 희석; Dako)로 프로빙한다.
IL-34 ASO에 의한 IL-34 녹다운을 섬유협착 크론병 및 암 관련 섬유모세포에서 추가로 평가한다. 장 섬유모세포를 장 결장암 또는 섬유협착 CD(FS CD) 외식편으로부터 단리한다. 섬유모세포를 바로 사용하거나 3회 내지 8회 계대배양하여 사용한다. 섬유모세포를 10% FBS 및 1% P/S(Lonza)로 보충된 울트라글루타민(UltraGlutamine)을 가진 DMEM 고글루코스에서 배양하고, 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다. 트립신/EDTA 용액을 사용하여 섬유모세포를 탈착시키고 IL-34의 녹다운에 대해 평가한다.
실시예 2: IL-34 갭머 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계 및 평가
본 실시예는 IL-34 mRNA 전사체에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)가 HT-29 및 AGS 위장암 세포주뿐만 아니라, 궤양성 결장염(UC)에 의해 영향을 받은 환자의 염증 결장 조직으로부터 단리된 점막고유판 단핵 세포(LPMC)에서도 IL-34 발현을 녹다운시키는 능력의 평가를 설명한다.
인간, 마우스, 사이노몰구스 원숭이(및 기타 종) IL-34 mRNA 전사체에 상보적인 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 설계하였다. 설계된 ASO는 IL-34 mRNA에서 동일한 서열을 표적화하고 5' 및 3' 말단에서 완전한 포스포로티오에이트 골격 및 2'-O-메톡시에틸(2'-MOE) 당 변형을 갖도록 변형된 단일 가닥 올리고데옥시리보뉴클레오타이드이다.
4개의 상이한 ASO(서열번호 17, 19, 42 및 43)를 이하에 기재된 바와 같이 평가하였다. 시험 ASO의 서열은 표 1에 제시되어 있고, 이때 X는 5-메틸사이티딘이고; Cx는 2'-O-MOE 사이티딘이고; Tx는 2'-O-MOE 타이미딘이고; Gx는 2'-O-MOE 구아노신이고; Ax는 2'-O-MOE 아데노신이다.
결장직장암 세포주 HT-29 및 위암 세포주 AGS(ATCC, 미국 마나사스)를 10% FBS 및 1% P/S(Lonza)로 보충된 각각 맥코이 5A 및 RPMI 1640 배지(Lonza, 벨기에 베르비어)에서 배양하였고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지하였다.
문헌[Dinallo et al., J Crohns Colitis. 2019 May 27;13(6):772-784]에 이미 기재된 바와 같이 궤양성 결장염(UC)을 가진 환자의 염증 결장 조직으로부터 채취된 생검으로부터 점막고유판 단핵 세포(LPMC)를 단리하였다. LPMC를 10% FBS 및 1% P/S로 보충된 RPMI 1640에 재현탁하였고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지하였다. IL-34 발현을 하향조절하는 IL-34 ASO의 능력을 평가하기 위해, 제조사의 지침에 따라 Opti-MEM 배지 및 리포펙타민 3000 시약(Life Technologies, 이탈리아 밀란)을 사용하여 HT-29, AGS 및 UC 환자 유래 LPMC를 시험 IL-34 ASO 또는 대조군인 관련 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드(모두 200 nM의 농도로 사용됨)로 24시간 동안 형질감염시켰다. 종료 시, 세포를 모으고, 제조사의 지침에 따라 퓨어링크(PureLink) mRNA 미니 키트(Thermo Fisher Scientific, 미국 왈쌈)를 사용하여 총 RNA를 추출하였다. 일정한 양의 RNA를 상보적 DNA(cDNA)로 역전사하고 다음 프로토콜을 이용하여 실시간 PCR로 증폭하였다: 95℃에서 1분 동안 변성; 60℃에서 30초 동안 어닐링에 이어 72℃에서 30초 동안 연장. 프라이머 서열은 다음과 같았다: IL-34: 정방향, 5'-ACAGGAGCCGACTTCAGTAC-3'(서열번호 29); 역방향, 5'-ACCAAGACCCACAGATACCG-3'(서열번호 30); β-액틴: 정방향, 5'-AAGATGACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'(서열번호 31); 역방향, 5'-AGCCAGTCCAGACGCAGGAT-3'(서열번호 32). ΔΔCt 알고리즘을 기반으로 하우스킵핑 β-액틴 유전자를 기준으로 RNA 발현을 계산하였다.
도 1, 도 2 및 도 3은 CTR=스크램블된 ASO, 1=서열번호 17, 2=서열번호 19, 3=서열번호 42, 4=서열번호 43으로 처리된 조건에서 HT-29 세포, AGS 세포 및 LPMC의 IL-34 전사체의 분석을 보여준다. 결과는 4개의 IL-34 ASO 모두가 대조군에 비해 HT-29 세포, AGS 세포 및 LPMC에서 IL-34 RNA 전사체를 유의미하게 감소시켰음을 보여준다. 데이터는 4개의 갭머 IL-34 ASO가 인간 암 및 면역 세포에서 IL-34 발현을 효율적으로 하향조절할 수 있으며 관련 전임상 및 임상 환경에서 유용할 수 있음을 시사한다.
실시예 3: IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 IL-34 발현의 녹다운
IL-34 발현을 녹다운시키는 IL-34 ASO의 능력을 HT-29 세포(인간 결장 선암종 세포주), THP-1 세포(인간 백혈병 단핵구 세포주), RAW 264.7 세포(뮤린 대식세포 세포주) 및 MC-38 세포(뮤린 결장 선암종 세포주)에서 평가한다.
HT-29 세포(ATCC HTB-38, 미국 마나사스)를 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(P/S)으로 보충된 맥코이 5A 및 RPMI 1640 배지에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
THP-1 세포(ATCC TIB-202)를 10 FBS 및 1% P/S로 보충된 RPMI 1640 배지에서 생장시킨다. 대식세포 분화를 유도하기 위해, 세포를 100 ng/㎖ 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)로 24시간 동안 처리하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
RAW 264.7 세포(ATCC TIB-71)를 10% FBS, 1% P/S 및 1% 비필수 아미노산(NEAA)(Lonza)으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지(DMEM)에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
MC-38 세포(ABMGood, 캐나다 리치몬드)를 10% FBS 및 1% P/S로 보충된 DMEM 배지에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
세포를 처리되지 않은 채로 두거나, 지질다당류(LPS), 펩티도글리칸(PGN) 및 폴리 I:C와 같은 특정 염증촉진성 자극의 존재 또는 부재 하에서 Opti-MEM 배지 및 리포펙타민 3000 시약을 사용하여 시험 IL-34 ASO 또는 대조군인 스크램블된 ASO로 세포를 형질감염시킨다.
이어서, 세포를 모으고 다음과 같이 수행된 RT-qPCR로 분석하기 위해 총 RNA를 추출한다: 일정한 양의 RNA를 상보적 DNA(cDNA)로 역전사한다. 이어서, 다음 프로토콜을 이용하여 1 ㎕의 cDNA/샘플을 증폭한다: 95℃에서 1분 동안 변성; 60℃에서 30초 동안 어닐링에 이어 72℃에서 30초 동안 연장. 다음 프라이머 서열을 사용한다: IL-34 정방향, 5'-ACAGGAGCCGACTTCAGTAC-3'(서열번호 29); IL-34 역방향, 5'-ACCAAGACCCACAGATACCG-3'(서열번호 30); β-액틴 정방향, 5'-AAGATGACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'(서열번호 31); 및 β-액틴 역방향, 5'-AGCCAGTCCAGACGCAGGAT-3'(서열번호 32). ΔΔCt 알고리즘을 기반으로 하우스킵핑 유전자 β-액틴 mRNA 발현을 기준으로 mRNA 발현을 계산한다.
IL-34 단백질 녹다운을 다음과 같이 수행된 웨스턴 블롯팅으로 평가한다: 형질감염 후, 10 mM HEPES(pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.2 mM EGTA 및 0.5% Nonidet P40을 함유하고 1 mM 디티오트레이톨, 10 mg/㎖ 아프로티닌, 10 mg/㎖ 류펩틴, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 mM Na3VO4 및 1 mM NaF로 보충된 완충제 중의 얼음에서 세포를 용해시킨다. 용해물을 4℃에서 12,000xg로 30분 동안 원심분리하여 정화하고 10% 도데실황산나트륨-폴리아크릴아미드 겔 전기영동으로 분리한다. 호스라디쉬 퍼옥시다제(HRP)-접합된 2차 IgG 단일클론 항체와 함께 마우스 항-인간 IL-34 항체 또는 토끼 항-인간 IL-34 항체를 사용하여 IL-34를 검출한다. 민감한 증강된 화학발광 키트를 사용하여 HRP 반응을 검출한다. 분석 후, 블롯을 벗겨내고 마우스 항-β-액틴 항체로 프로빙한 다음, HRP-접합된 2차 IgG 단일클론 항체로 프로빙한다. 컴퓨터 보조 스캐닝 밀도측정을 이용하여 면역반응성 밴드의 강도를 분석한다.
IL-34 ASO를 사용한 세포의 형질감염의 결과는 IL-34 RNA 및 단백질 발현을 감소시킨다.
실시예 4: 장 섬유모세포에서 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 IL-34 발현의 녹다운
IL-34 ASO에 의한 IL-34 녹다운을 결장직장암(CRC) 관련 섬유모세포 및 섬유협착 크론병(FS CD) 유래 섬유모세포에서 더 평가한다.
앞서 기재된 바와 같이 표현형적으로 CRC 및 FS CD를 가진 환자의 영향받은 조직으로부터 유래한 외식편으로부터 인간 장 섬유모세포를 단리한다. 모든 실험에서, 섬유모세포를 바로 사용하거나 계대배양 8 이하에서 사용하고 트립신/EDTA 용액을 사용하여 탈착시킨다. 10% FBS 및 1% P/S로 보충된 울트라글루타민을 가진 DMEM 고글루코스에서 인간 섬유모세포를 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
세포를 처리되지 않은 채로 두거나, 시험 IL-34 ASO 또는 대조군인 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 세포를 형질감염시킨다. 실시예 3에 기재된 바와 같이 RT-qPCR을 이용하여 분석하기 위해 총 RNA를 추출한다. IL-34 ASO는 대조군에 비해 IL-34 RNA 발현을 감소시킨다.
섬유모세포에서 콜라겐 합성에 대한 IL-34 ASO의 효과도 평가한다. 간단히 말해서, 5x104개의 섬유모세포를 12웰 플레이트의 각각의 웰에 플레이팅하고 24시간 동안 부착되도록 방치한 다음, 처리되지 않은 채로 두거나 시험 IL-34 ASO 또는 대조군인 스크램블 ASO로 24시간 내지 48시간 동안 형질감염시킨다. 형질감염 효율을 웨스턴 블롯팅으로 측정한다. 48시간 후, 무세포 상청액을 모으고 시판되는 ELISA 키트로 콜라겐 함량에 대해 분석한다. IL-34 ASO는 대조군에 비해 섬유모세포에서 COL1A1 및 COL3A1 단백질 합성 둘 다를 감소시킨다.
세포 사멸에 대한 IL-34 ASO의 효과도 평가한다. 세포 사멸을 점수화하기 위해, 섬유모세포를 PBS로 세척하고 FITC-아넥신(annexin) V 항체로 염색하고 4℃에서 20분 동안 5 mg/㎖ PI와 함께 인큐베이션한다. 유세포분석기를 이용하여 형광을 측정한다. AV-/PI-세포는 생존 가능한 세포로 간주되고, AV+/PI-세포는 아폽토시스성 세포로 간주되며, 2차 괴사 세포는 AV+/PI+ 염색을 특징으로 한다. IL-34 ASO를 사용한 FS CD 섬유모세포의 형질감염은 세포 생존율에 영향을 미치지 않는다.
IL-34 ASO에 의한 섬유모세포의 IL-34 녹다운은 세포 생존율에 유의미한 영향을 미치지 않으면서 콜라겐 생성을 감소시킨다.
실시예 5: IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 IL-34 발현의 녹다운
본 실시예는 인간 활막 육종 세포주 SW982 및 인간 섬유모세포 유사 활막세포 HFLS-RA에서 시험관내 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 IL-34 발현의 녹다운을 예시한다.
SW982 세포를 100 U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 10% 태아 소 혈청(FBS)으로 보충된 레이보비츠(Leibovitz) L15 배지에서 생장시킨다. 세포 배양물을 37℃에서 95% 공기와 5% CO2의 가습된 대기에서 유지한다. 10 ng/㎖ TNFα로 24시간 동안 전처리함으로써 이들의 활성화를 유도한다.
HFSL-RA 세포를 활막세포 생장 배지 키트(생장 보충제를 가진 기본 배지)에서 배양하고 가습된 인큐베이터에서 5% CO2와 함께 37℃에서 유지한다.
세포를 처리되지 않은 채로 두거나, 시험 IL-34 ASO 또는 대조군인 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 세포를 형질감염시킨다. 실시예 3에 기재된 바와 같이 RT-qPCR을 이용하여 분석하기 위해 총 RNA를 추출한다. IL-34 단백질 녹다운을 실시예 3에 기재된 바와 같이 웨스턴 블롯팅으로 평가한다.
IL-34 ASO는 대조군에 비해 IL-34 RNA 및 단백질 발현을 감소시킨다.
실시예 6: 결장염 모델에서 생체내 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 평가
본 실시예는 TNBS 유도 결장염의 마우스 모델에서 생체내 IL-34 ASO에 의한 IL-34 녹다운을 예시한다.
IL-34 ASO를 인산염 완충 식염수에 용해시킨다. 경구 투여를 위해, ASO를 pH 9.5의 중탄산염 용액으로 희석하고; 복강내 및 직장 투여를 위해, ASO를 PBS로 희석한다.
TNBS 유도 결장염 모델을 위해 7주령 내지 9주령의 암컷 Balb/c 마우스를 사용한다. 마우스에서 결장염을 유도하기 위해, 45% 에탄올 중의 2 mg 2,4,6-트리니트로벤젠설폰산(TNBS)을, 직장에 삽입된 3.5F 카테터를 통해 약하게 마취된 마우스에게 투여한다. 카테터 팁을 항문 가장자리 4 cm 근처에서 삽입하고 150 ㎕의 유체를 결장에 천천히 주입한 후, 마우스를 수직 자세로 30초 동안 유지한다. 24시간의 TNBS 유도 후, 치료군의 마우스는 시험 IL-34 ASO 또는 대조군을 받는다.
결장염의 유도 및 진행을 평가하기 위해 체중 변화를 매일 기록하고, 조직학적 연구 및 단백질 분석을 위해 조직을 모은다. 5일째 날에 마우스를 안락사시킨다.
조직학적 연구를 위해, 안락사 후 마우스로부터 제거된 조직을 10% 포르말린 용액(Sigma Aldrich)에 고정시키고, 파라핀에 포매하고, 조직 절편으로 절단하고 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한다. 다양한 기준, 예컨대, 림프구 침윤의 존재, 선와(crypt)의 연신 및/또는 뒤틀림, 뚜렷한 궤양 및 장벽의 비후화를 이용하여 염색된 절편을 결장염의 증거에 대해 검사한다. 결장의 현미경 단면에서 염증의 정도를 다음과 같이 0부터 4까지 등급화한다:
0: 염증의 증거가 없음;
1: 침윤이 < 10% 고전력장(hpf)에서 보이는 낮은 수준의 림프구 침윤, 구조적 변화가 관찰되지 않음;
2: 침윤이 < 10% 내지 25% hpf에서 보이는 중등도의 림프구 침윤, 선와 연신, 점막층 넘어로 확장되지 않는 장벽 비후화;
3: 침윤이 < 25% 내지 50% hpf에서 보이는 높은 수준의 림프구 침윤, 점막층 너머로 확장되는 장벽의 비후화;
4: 침윤이 > 50% hpf에서 보이는 현저한 정도의 림프구 침윤, 높은 혈관 밀도, 뒤틀림이 있는 선와 연신, 궤양형성을 동반한 경벽 장벽 비후화.
마우스는 IL-34 ASO를 사용한 치료 후 감소된 결장염을 가진다.
실시예 7: 관절염 모델에서 생체내 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 평가
본 실시예는 콜라겐 유도 관절염(CIA) 동물 모델에서 생체내 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 IL-34 ASO에 의한 IL-34 발현의 녹다운을 예시한다.
IL-34 ASO를 인산염 완충 식염수에 용해시킨다. 경구 투여를 위해, ASO를 pH 9.5의 중탄산염 용액으로 희석하고; 복강내 및 직장 투여를 위해, ASO를 PBS로 희석한다.
8주령 내지 12주령의 DBA/1 마우스를 사용한다. 0일째 날에 완전 프로인트 면역보강제(Complete Freund's adjuvant)(CFA)와 함께 유화된 소 II형 콜라겐을 사용하여 동물을 챌린지하고(0.1 mg/0.1 ㎖/마우스, 꼬리의 기저부에서 피내(ID)) 21일째 날에 CFA 대신에 IFA와 함께 유화된 콜라겐을 사용하여 피내 부스팅을 수행한다(0.1 mg/0.1 ㎖/마우스). 29일째 날에 2개의 뒷발의 부피를 기준으로 동물을 각각 10마리의 군으로 분류한다. 29일째 날부터 42일째 날까지 상이한 투약 일정으로 관절내 주사를 통해 ASO 및 비히클을 투여한다. 대조군 제품 덱사메타손(0.3 mg/kg)을 경구 투여한다. 21일째 날, 23일째 날, 25일째 날, 27일째 날, 29일째 날, 31일째 날, 33일째 날, 35일째 날, 37일째 날, 39일째 날, 41일째 날 및 43일째 날에 정성적 중증도 점수 시스템, 및 체적변동유량계(plethysmometer)에 의해 측정된 뒷발 부피(㎖)를 사용하여 관절염을 평가한다. 수행될 수 있는 추가 분석은 뒷발 채취 및 종료 시 체중, 바이오마커(단백질 및/또는 mRNA), 및 조직병리학을 포함한다.
대안적으로, 체중이 180 ± 20 g인 암컷 루이스 래트를 사용한다. 1일째 날에 불완전 프로인트 면역보강제와 함께 돼지 II형 콜라겐으로 동물을 챌린지하고(0.2 mg/0.2 ㎖/래트, 꼬리의 기저부에서 피하(SC)) 7일째 날에 부스팅한다(0.1 mg/0.1 ㎖/래트, SC). 16일째 날 2개의 뒷발의 부피를 기준으로 동물을 각각 6마리의 군으로 분류한 다음, 17일째 날에 투약을 시작한다. 대조군 제품 덱사메타손(0.3 mg/kg)을 17일째 날부터 30일째 날까지 연속 14일 동안 하루에 1회 경구 투여한다. ASO 및 비히클을 관절내 주사로 투여한다. 1일째 날, 7일째 날, 10일째 날, 14일째 날, 16일째 날, 18일째 날, 20일째 날, 22일째 날, 24일째 날, 26일째 날, 28일째 날 및 30일째 날에 정성적 중증도 점수 시스템, 및 체적변동유량계에 의해 측정된 뒷발 부피(㎖)를 사용하여 관절염을 평가한다. 수행될 수 있는 추가 분석은 바이오마커(단백질 및/또는 mRNA) 및 조직병리학을 포함한다.
IL-34 ASO로 치료된 동물은 감소된 관절염을 보인다.
등가물
본 개시내용은 그의 본질적인 특징을 벗어나면서 다른 구체적인 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 상기 실시양태는 본원에 기재된 개시내용을 제한하기보다는 예시하기 위한 것으로 간주되어야 한다. 본 개시내용의 범위는 상기 설명보다는 첨부된 청구범위에 의해 표시되고, 청구범위의 균등론의 의미와 범위 내에 있는 모든 변화는 이에 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> NOGRA PHARMA LIMITED <120> IL-34 ANTISENSE AGENTS AND METHODS OF USING SAME <130> P342607WO/RAW <140> PCT/EP2022/063300 <141> 2022-05-17 <150> 63/201,887 <151> 2021-05-17 <160> 52 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 1 ctcaccaaga cccacag 17 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 2 ggctttgggc cgcaccagct 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 3 ctttgggccg caccagcttc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 4 tgggccgcac cagcttcagg 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 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cctgtggccc gcagcagtga gggcacagct gtgggttgca ggggagacag 1620 ccagcacggc gtggccattc tatgaccccc cagcctggca gactggggag ctgggggcag 1680 agggcggtgc caagtgccac atcttgccat agtggatgct cttccagttt cttttttcta 1740 ttaaacaccc cacttccttt ggaaaaaaaa aaaaaaaaa 1779 <210> 26 <211> 1796 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 26 catcagacgg gaagcctgga ctgtgggttg ggggcagcct cagcctctcc aacctggcac 60 ccactgcccg tggcccttag gcacctgctt ggggtcctgg agccccttaa ggccaccagc 120 aaatcctagg agaccgagtc ttggcacgtg aacagagcca gatttcacac tgagcagctg 180 cagtcggaga aatcagagaa agcgtcaccc agccccagat tccgaggggc ctgccaggga 240 ctctctcctc ctgctccttg gaaaggaaga ccccgaaaga cccccaagcc accggctcag 300 acctgcttct gggctgccat gggacttgcg gccaccgccc cccggctgtc ctccacgctg 360 ccgggcagat aagggcagct gctgcccttg gggcacctgc tcactcccgc agcccagcca 420 ctcctccagg gccagccctt ccctgactga gtgaccacct ctgctgcccc gaggccatgt 480 aggccgtgct taggcctctg tggacacact gctggggacg gcgcctgagc tctcaggggg 540 acgaggaaca ccaccatgcc ccggggcttc acctggctgc gctatcttgg 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1440 agggctcagc ttcctgcctt ccatagctgt catggcctca cctggagcgg aggggacctg 1500 gggacctgaa ggtggatggg gacacagctc ctggcttctc ctggtgctgc cctcactgtc 1560 cccccgccta aagggggtac tgagcctcct gtggcccgca gcagtgaggg cacagctgtg 1620 ggttgcaggg gagacagcca gcacggcgtg gccattctat gaccccccag cctggcagac 1680 tggggagctg ggggcagagg gcggtgccaa gtgccacatc ttgccatagt ggatgctctt 1740 ccagtttctt ttttctatta aacaccccac ttcctttgga aaaaaaaaaa aaaaaa 1796 <210> 27 <211> 1747 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 27 tctagaaaca aatctgagct gctgtagcgt gtgtcccccg ccctccgaga agactgtagg 60 ctgaacacac aacagcctgt cccacacagc atttactgcc acagccccca aggcacctgc 120 tccaggcctt gagctgctca aagcttccgg cgacggcgac tgtagaagcc cacatcctgg 180 caggtgagca gagctagact tcacgctgag cagctgcagc cgaagaaacc agagaaagcg 240 ccacccagcc ccagattcca agaggcctgc ctgctgggga ctcccttctc ttcttcctcc 300 tcctcctctt cctcctcctg agaccctcaa agtcactgtc tcacaccagt tcctgagctg 360 caatgggact ggcagccact gccccctggc tgtcctccgc cctgccaagc agatagggcg 420 gtagctaccc caggagtatc 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gcctcacctg gagcggaggg gacctgggga 1500 cctgaaggtg gatggggaca cagctcctgg cttctcctgg tgctgccctc actgtccccc 1560 cgcctaaagg gggtactgag cctcctgtgg cccgcagcag tgagggcaca gctgtgggtt 1620 gcaggggaga cagccagcac ggcgtggcca ttctatgacc ccccagcctg gcagactggg 1680 gagctggggg cagagggcgg tgccaagtgc cacatcttgc catagtggat gctcttccag 1740 tttctttttt ctattaaaca ccccacttcc tttgg 1775 <210> 45 <211> 1772 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 agacgggaag cctggactgt gggttggggg cagcctcagc ctctccaacc tggcacccac 60 tgcccgtggc ccttaggcac ctgcttgggg tcctggagcc ccttaaggcc accagcaaat 120 cctaggagac cgagtcttgg cacgtgaaca gagccagatt tcacactgag cagctgcagt 180 cggagaaatc agagaaagcg tcacccagcc ccagattccg aggggcctgc cagggactct 240 ctcctcctgc tccttggaaa ggaagacccc gaaagacccc caagccaccg gctcagacct 300 gcttctgggc tgccatggga cttgcggcca ccgccccccg gctgtcctcc acgctgccgg 360 gcagataagg gcagctgctg cccttggggc acctgctcac tcccgcagcc cagccactcc 420 tccagggcca gcccttccct gactgagtga ccacctctgc tgccccgagg ccatgtaggc 480 cgtgcttagg cctctgtgga cacactgctg gggacggcgc ctgagctctc agggggacga 540 ggaacaccac catgccccgg ggcttcacct ggctgcgcta tcttgggatc ttccttggcg 600 tggccttggg gaatgagcct ttggagatgt ggcccttgac gcagaatgag gagtgcactg 660 tcacgggttt tctgcgggac aagctgcagt acaggagccg acttcagtac atgaaacact 720 acttccccat caactacaag atcagtgtgc cttacgaggg ggtgttcaga atcgccaacg 780 tcaccaggct gagggcccag gtgagcgagc gggagctgcg gtatctgtgg gtcttggtga 840 gcctcagtgc cactgagtcg gtgcaggacg tgctgctcga gggccaccca tcctggaagt 900 acctgcagga ggtggagacg ctgctgctga atgtccagca gggcctcacg gatgtggagg 960 tcagccccaa ggtggaatcc gtgttgtccc tcttgaatgc cccagggcca aacctgaagc 1020 tggtgcggcc caaagccctg ctggacaact gcttccgggt catggagctg ctgtactgct 1080 cctgctgtaa acaaagctcc gtcctaaact ggcaggactg tgaggtgcca agtcctcagt 1140 cttgcagccc agagccctca ttgcagtatg cggccaccca gctgtaccct ccgcccccgt 1200 ggtcccccag ctccccgcct cactccacgg gctcggtgag gccggtcagg gcacagggcg 1260 agggcctctt gccctgagca ccctggatgg tgactgcgga taggggcagc cagaccagct 1320 cccacaggag ttcaactggg tctgagactt caaggggtgg tggtgggagc cccccttggg 1380 agaggacccc tgggaagggt gtttttcctt tgagggggat tctgtgccac agcagggctc 1440 agcttcctgc cttccatagc tgtcatggcc tcacctggag cggaggggac ctggggacct 1500 gaaggtggat ggggacacag ctcctggctt ctcctggtgc tgccctcact gtccccccgc 1560 ctaaaggggg tactgagcct cctgtggccc gcagcagtga gggcacagct gtgggttgca 1620 ggggagacag ccagcacggc gtggccattc tatgaccccc cagcctggca gactggggag 1680 ctgggggcag agggcggtgc caagtgccac atcttgccat agtggatgct cttccagttt 1740 cttttttcta ttaaacaccc cacttccttt gg 1772 <210> 46 <211> 1696 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 46 atgatcagag atgtctgcat gaggaacaga ggctgctttg tggattgggg agctccccat 60 tagcggaggc agagccagat ttcacactga gcagctgcag tcggagaaat cagagaaagc 120 gtcacccagc cccagattcc gaggggcctg ccagggactc tctcctcctg ctccttggaa 180 aggaagaccc cgaaagaccc ccaagccacc ggctcagacc tgcttctggg ctgccatggg 240 acttgcggcc accgcccccc ggctgtcctc cacgctgccg ggcagataag ggcagctgct 300 gcccttgggg cacctgctca ctcccgcagc ccagccactc ctccagggcc agcccttccc 360 tgactgagtg accacctctg ctgccccgag gccatgtagg ccgtgcttag gcctctgtgg 420 acacactgct ggggacggcg cctgagctct cagggggacg aggaacacca ccatgccccg 480 gggcttcacc tggctgcgct atcttgggat cttccttggc gtggccttgg ggaatgagcc 540 tttggagatg tggcccttga cgcagaatga ggagtgcact gtcacgggtt ttctgcggga 600 caagctgcag tacaggagcc gacttcagta catgaaacac tacttcccca tcaactacaa 660 gatcagtgtg ccttacgagg gggtgttcag aatcgccaac gtcaccaggc tgcagagggc 720 ccaggtgagc gagcgggagc tgcggtatct gtgggtcttg gtgagcctca gtgccactga 780 gtcggtgcag gacgtgctgc tcgagggcca cccatcctgg aagtacctgc aggaggtgga 840 gacgctgctg ctgaatgtcc agcagggcct cacggatgtg gaggtcagcc ccaaggtgga 900 atccgtgttg tccctcttga atgccccagg gccaaacctg aagctggtgc ggcccaaagc 960 cctgctggac aactgcttcc gggtcatgga gctgctgtac tgctcctgct gtaaacaaag 1020 ctccgtccta aactggcagg actgtgaggt gccaagtcct cagtcttgca gcccagagcc 1080 ctcattgcag tatgcggcca cccagctgta ccctccgccc ccgtggtccc ccagctcccc 1140 gcctcactcc acgggctcgg tgaggccggt cagggcacag ggcgagggcc tcttgccctg 1200 agcaccctgg atggtgactg cggatagggg cagccagacc agctcccaca ggagttcaac 1260 tgggtctgag acttcaaggg gtggtggtgg gagcccccct tgggagagga cccctgggaa 1320 gggtgttttt cctttgaggg ggattctgtg ccacagcagg gctcagcttc ctgccttcca 1380 tagctgtcat ggcctcacct ggagcggagg ggacctgggg acctgaaggt ggatggggac 1440 acagctcctg gcttctcctg gtgctgccct cactgtcccc ccgcctaaag ggggtactga 1500 gcctcctgtg gcccgcagca gtgagggcac agctgtgggt tgcaggggag acagccagca 1560 cggcgtggcc attctatgac cccccagcct ggcagactgg ggagctgggg gcagagggcg 1620 gtgccaagtg ccacatcttg ccatagtgga tgctcttcca gtttcttttt tctattaaac 1680 accccacttc ctttgg 1696 <210> 47 <211> 1693 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 atgatcagag atgtctgcat gaggaacaga ggctgctttg tggattgggg agctccccat 60 tagcggaggc agagccagat ttcacactga gcagctgcag tcggagaaat cagagaaagc 120 gtcacccagc cccagattcc gaggggcctg ccagggactc tctcctcctg ctccttggaa 180 aggaagaccc cgaaagaccc ccaagccacc ggctcagacc tgcttctggg ctgccatggg 240 acttgcggcc accgcccccc ggctgtcctc cacgctgccg ggcagataag ggcagctgct 300 gcccttgggg cacctgctca ctcccgcagc ccagccactc ctccagggcc agcccttccc 360 tgactgagtg accacctctg ctgccccgag gccatgtagg ccgtgcttag gcctctgtgg 420 acacactgct ggggacggcg cctgagctct cagggggacg aggaacacca ccatgccccg 480 gggcttcacc tggctgcgct atcttgggat cttccttggc gtggccttgg ggaatgagcc 540 tttggagatg tggcccttga cgcagaatga ggagtgcact gtcacgggtt ttctgcggga 600 caagctgcag tacaggagcc gacttcagta catgaaacac tacttcccca tcaactacaa 660 gatcagtgtg ccttacgagg gggtgttcag aatcgccaac gtcaccaggc tgagggccca 720 ggtgagcgag cgggagctgc ggtatctgtg ggtcttggtg agcctcagtg ccactgagtc 780 ggtgcaggac gtgctgctcg agggccaccc atcctggaag tacctgcagg aggtggagac 840 gctgctgctg aatgtccagc agggcctcac ggatgtggag gtcagcccca aggtggaatc 900 cgtgttgtcc ctcttgaatg ccccagggcc aaacctgaag ctggtgcggc ccaaagccct 960 gctggacaac tgcttccggg tcatggagct gctgtactgc tcctgctgta aacaaagctc 1020 cgtcctaaac tggcaggact gtgaggtgcc aagtcctcag tcttgcagcc cagagccctc 1080 attgcagtat gcggccaccc agctgtaccc tccgcccccg tggtccccca gctccccgcc 1140 tcactccacg ggctcggtga ggccggtcag ggcacagggc gagggcctct tgccctgagc 1200 accctggatg gtgactgcgg ataggggcag ccagaccagc tcccacagga gttcaactgg 1260 gtctgagact tcaaggggtg gtggtgggag ccccccttgg gagaggaccc ctgggaaggg 1320 tgtttttcct ttgaggggga ttctgtgcca cagcagggct cagcttcctg ccttccatag 1380 ctgtcatggc ctcacctgga gcggagggga cctggggacc tgaaggtgga tggggacaca 1440 gctcctggct tctcctggtg ctgccctcac tgtccccccg cctaaagggg gtactgagcc 1500 tcctgtggcc cgcagcagtg agggcacagc tgtgggttgc aggggagaca gccagcacgg 1560 cgtggccatt ctatgacccc ccagcctggc agactgggga gctgggggca gagggcggtg 1620 ccaagtgcca catcttgcca tagtggatgc tcttccagtt tcttttttct attaaacacc 1680 ccacttcctt tgg 1693 <210> 48 <211> 1762 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 48 ctcgaagctc ggcgtctgtg atggtctacg gggctttcga ggtgatcagg cagcgtcagt 60 cttcagccgc taagccgaga aggagtcagt cagagagcct tgggccagag ttccaggggc 120 tctgggagtg gctgccagag ccagatttca cactgagcag ctgcagtcgg agaaatcaga 180 gaaagcgtca cccagcccca gattccgagg ggcctgccag ggactctctc ctcctgctcc 240 ttggaaagga agaccccgaa agacccccaa gccaccggct cagacctgct tctgggctgc 300 catgggactt gcggccaccg ccccccggct gtcctccacg ctgccgggca gataagggca 360 gctgctgccc ttggggcacc tgctcactcc cgcagcccag ccactcctcc agggccagcc 420 cttccctgac tgagtgacca cctctgctgc cccgaggcca tgtaggccgt gcttaggcct 480 ctgtggacac actgctgggg acggcgcctg agctctcagg gggacgagga acaccaccat 540 gccccggggc ttcacctggc tgcgctatct tgggatcttc cttggcgtgg ccttggggaa 600 tgagcctttg gagatgtggc ccttgacgca gaatgaggag tgcactgtca cgggttttct 660 gcgggacaag ctgcagtaca ggagccgact tcagtacatg aaacactact tccccatcaa 720 ctacaagatc agtgtgcctt acgagggggt gttcagaatc gccaacgtca ccaggctgca 780 gagggcccag gtgagcgagc gggagctgcg gtatctgtgg gtcttggtga gcctcagtgc 840 cactgagtcg gtgcaggacg tgctgctcga gggccaccca tcctggaagt acctgcagga 900 ggtggagacg ctgctgctga atgtccagca gggcctcacg gatgtggagg tcagccccaa 960 ggtggaatcc gtgttgtccc tcttgaatgc cccagggcca aacctgaagc tggtgcggcc 1020 caaagccctg ctggacaact gcttccgggt catggagctg ctgtactgct cctgctgtaa 1080 acaaagctcc gtcctaaact ggcaggactg tgaggtgcca agtcctcagt cttgcagccc 1140 agagccctca ttgcagtatg cggccaccca gctgtaccct ccgcccccgt ggtcccccag 1200 ctccccgcct cactccacgg gctcggtgag gccggtcagg gcacagggcg agggcctctt 1260 gccctgagca ccctggatgg tgactgcgga taggggcagc cagaccagct cccacaggag 1320 ttcaactggg tctgagactt caaggggtgg tggtgggagc cccccttggg agaggacccc 1380 tgggaagggt gtttttcctt tgagggggat tctgtgccac agcagggctc agcttcctgc 1440 cttccatagc tgtcatggcc tcacctggag cggaggggac ctggggacct gaaggtggat 1500 ggggacacag ctcctggctt ctcctggtgc tgccctcact gtccccccgc ctaaaggggg 1560 tactgagcct cctgtggccc gcagcagtga gggcacagct gtgggttgca ggggagacag 1620 ccagcacggc gtggccattc tatgaccccc cagcctggca gactggggag ctgggggcag 1680 agggcggtgc caagtgccac atcttgccat agtggatgct cttccagttt cttttttcta 1740 ttaaacaccc cacttccttt gg 1762 <210> 49 <211> 1613 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 49 acactgagca gctgcagtcg gagaaatcag agaaagcgtc acccagcccc agattccgag 60 gggcctgcca gggactctct cctcctgctc cttggaaagg aagaccccga aagaccccca 120 agccaccggc tcagacctgc ttctgggctg ccatgggact tgcggccacc gccccccggc 180 tgtcctccac gctgccgggc agataagggc agctgctgcc cttggggcac ctgctcactc 240 ccgcagccca gccactcctc cagggccagc ccttccctga ctgagtgacc acctctgctg 300 ccccgaggcc atgtaggccg tgcttaggcc tctgtggaca cactgctggg gacggcgcct 360 gagctctcag ggggacgagg aacaccacca tgccccgggg cttcacctgg ctgcgctatc 420 ttgggatctt ccttggcgtg gccttgggga atgagccttt ggagatgtgg cccttgacgc 480 agaatgagga gtgcactgtc acgggttttc tgcgggacaa gctgcagtac aggagccgac 540 ttcagtacat gaaacactac ttccccatca actacaagat cagtgtgcct tacgaggggg 600 tgttcagaat cgccaacgtc accaggctgc agagggccca ggtgagcgag cgggagctgc 660 ggtatctgtg ggtcttggtg agcctcagtg ccactgagtc ggtgcaggac gtgctgctcg 720 agggccaccc atcctggaag tacctgcagg aggtggagac gctgctgctg aatgtccagc 780 agggcctcac ggatgtggag gtcagcccca aggtggaatc cgtgttgtcc ctcttgaatg 840 ccccagggcc aaacctgaag ctggtgcggc ccaaagccct gctggacaac tgcttccggg 900 tcatggagct gctgtactgc tcctgctgta aacaaagctc cgtcctaaac tggcaggact 960 gtgaggtgcc aagtcctcag tcttgcagcc cagagccctc attgcagtat gcggccaccc 1020 agctgtaccc tccgcccccg tggtccccca gctccccgcc tcactccacg ggctcggtga 1080 ggccggtcag ggcacagggc gagggcctct tgccctgagc accctggatg gtgactgcgg 1140 ataggggcag ccagaccagc tcccacagga gttcaactgg gtctgagact tcaaggggtg 1200 gtggtgggag ccccccttgg gagaggaccc ctgggaaggg tgtttttcct ttgaggggga 1260 ttctgtgcca cagcagggct cagcttcctg ccttccatag ctgtcatggc ctcacctgga 1320 gcggagggga cctggggacc tgaaggtgga tggggacaca gctcctggct tctcctggtg 1380 ctgccctcac tgtccccccg cctaaagggg gtactgagcc tcctgtggcc cgcagcagtg 1440 agggcacagc tgtgggttgc aggggagaca gccagcacgg cgtggccatt ctatgacccc 1500 ccagcctggc agactgggga gctgggggca gagggcggtg ccaagtgcca catcttgcca 1560 tagtggatgc tcttccagtt tcttttttct attaaacacc ccacttcctt tgg 1613 <210> 50 <211> 1610 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 50 acactgagca gctgcagtcg gagaaatcag agaaagcgtc acccagcccc agattccgag 60 gggcctgcca gggactctct cctcctgctc cttggaaagg aagaccccga aagaccccca 120 agccaccggc tcagacctgc ttctgggctg ccatgggact tgcggccacc gccccccggc 180 tgtcctccac gctgccgggc agataagggc agctgctgcc cttggggcac ctgctcactc 240 ccgcagccca gccactcctc cagggccagc ccttccctga ctgagtgacc acctctgctg 300 ccccgaggcc atgtaggccg tgcttaggcc tctgtggaca cactgctggg gacggcgcct 360 gagctctcag ggggacgagg aacaccacca tgccccgggg cttcacctgg ctgcgctatc 420 ttgggatctt ccttggcgtg gccttgggga atgagccttt ggagatgtgg cccttgacgc 480 agaatgagga gtgcactgtc acgggttttc tgcgggacaa gctgcagtac aggagccgac 540 ttcagtacat gaaacactac ttccccatca actacaagat cagtgtgcct tacgaggggg 600 tgttcagaat cgccaacgtc accaggctga gggcccaggt gagcgagcgg gagctgcggt 660 atctgtgggt cttggtgagc ctcagtgcca ctgagtcggt gcaggacgtg ctgctcgagg 720 gccacccatc ctggaagtac ctgcaggagg tggagacgct gctgctgaat gtccagcagg 780 gcctcacgga tgtggaggtc agccccaagg tggaatccgt gttgtccctc ttgaatgccc 840 cagggccaaa cctgaagctg gtgcggccca aagccctgct ggacaactgc ttccgggtca 900 tggagctgct gtactgctcc tgctgtaaac aaagctccgt cctaaactgg caggactgtg 960 aggtgccaag tcctcagtct tgcagcccag agccctcatt gcagtatgcg gccacccagc 1020 tgtaccctcc gcccccgtgg tcccccagct ccccgcctca ctccacgggc tcggtgaggc 1080 cggtcagggc acagggcgag ggcctcttgc cctgagcacc ctggatggtg actgcggata 1140 ggggcagcca gaccagctcc cacaggagtt caactgggtc tgagacttca aggggtggtg 1200 gtgggagccc cccttgggag aggacccctg ggaagggtgt ttttcctttg agggggattc 1260 tgtgccacag cagggctcag cttcctgcct tccatagctg tcatggcctc acctggagcg 1320 gaggggacct ggggacctga aggtggatgg ggacacagct cctggcttct cctggtgctg 1380 ccctcactgt ccccccgcct aaagggggta ctgagcctcc tgtggcccgc agcagtgagg 1440 gcacagctgt gggttgcagg ggagacagcc agcacggcgt ggccattcta tgacccccca 1500 gcctggcaga ctggggagct gggggcagag ggcggtgcca agtgccacat cttgccatag 1560 tggatgctct tccagtttct tttttctatt aaacacccca cttcctttgg 1610 <210> 51 <211> 1515 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 51 ggaaggcgct acagacccgc tggcatagtt agctgggagg gacactaaga tcagatagag 60 caggaaggaa agtggtgtgg ggcgtgggtg actgaagagt cattttatca agttgaaacc 120 agaatccagg atgattcgat ctcctgaatg ccgggctgga aaacccagca acgagctttg 180 aaaacatatc acccggacac caggggcaga ggctgttctg ggcgggaggt tgtgcctgcc 240 ccacggagcg acagaagcgg ggagaccaga cgtcgaccct gaggcgtgcc tcctgggggg 300 ctccagtggc cggcatggga tcttgggatc ttccttggcg tggccttggg gaatgagcct 360 ttggagatgt ggcccttgac gcagaatgag gagtgcactg tcacgggttt tctgcgggac 420 aagctgcagt acaggagccg acttcagtac atgaaacact acttccccat caactacaag 480 atcagtgtgc cttacgaggg ggtgttcaga atcgccaacg tcaccaggct gcagagggcc 540 caggtgagcg agcgggagct gcggtatctg tgggtcttgg tgagcctcag tgccactgag 600 tcggtgcagg acgtgctgct cgagggccac ccatcctgga agtacctgca ggaggtggag 660 acgctgctgc tgaatgtcca gcagggcctc acggatgtgg aggtcagccc caaggtggaa 720 tccgtgttgt ccctcttgaa tgccccaggg ccaaacctga agctggtgcg gcccaaagcc 780 ctgctggaca actgcttccg ggtcatggag ctgctgtact gctcctgctg taaacaaagc 840 tccgtcctaa actggcagga ctgtgaggtg ccaagtcctc agtcttgcag cccagagccc 900 tcattgcagt atgcggccac ccagctgtac cctccgcccc cgtggtcccc cagctccccg 960 cctcactcca cgggctcggt gaggccggtc agggcacagg gcgagggcct cttgccctga 1020 gcaccctgga tggtgactgc ggataggggc agccagacca gctcccacag gagttcaact 1080 gggtctgaga cttcaagggg tggtggtggg agcccccctt gggagaggac ccctgggaag 1140 ggtgtttttc ctttgagggg gattctgtgc cacagcaggg ctcagcttcc tgccttccat 1200 agctgtcatg gcctcacctg gagcggaggg gacctgggga cctgaaggtg gatggggaca 1260 cagctcctgg cttctcctgg tgctgccctc actgtccccc cgcctaaagg gggtactgag 1320 cctcctgtgg cccgcagcag tgagggcaca gctgtgggtt gcaggggaga cagccagcac 1380 ggcgtggcca ttctatgacc ccccagcctg gcagactggg gagctggggg cagagggcgg 1440 tgccaagtgc cacatcttgc catagtggat gctcttccag tttctttttt ctattaaaca 1500 ccccacttcc tttgg 1515 <210> 52 <211> 1512 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 52 ggaaggcgct acagacccgc tggcatagtt agctgggagg gacactaaga tcagatagag 60 caggaaggaa agtggtgtgg ggcgtgggtg actgaagagt cattttatca agttgaaacc 120 agaatccagg atgattcgat ctcctgaatg ccgggctgga aaacccagca acgagctttg 180 aaaacatatc acccggacac caggggcaga ggctgttctg ggcgggaggt tgtgcctgcc 240 ccacggagcg acagaagcgg ggagaccaga cgtcgaccct gaggcgtgcc tcctgggggg 300 ctccagtggc cggcatggga tcttgggatc ttccttggcg tggccttggg gaatgagcct 360 ttggagatgt ggcccttgac gcagaatgag gagtgcactg tcacgggttt tctgcgggac 420 aagctgcagt acaggagccg acttcagtac atgaaacact acttccccat caactacaag 480 atcagtgtgc cttacgaggg ggtgttcaga atcgccaacg tcaccaggct gagggcccag 540 gtgagcgagc gggagctgcg gtatctgtgg gtcttggtga gcctcagtgc cactgagtcg 600 gtgcaggacg tgctgctcga gggccaccca tcctggaagt acctgcagga ggtggagacg 660 ctgctgctga atgtccagca gggcctcacg gatgtggagg tcagccccaa ggtggaatcc 720 gtgttgtccc tcttgaatgc cccagggcca aacctgaagc tggtgcggcc caaagccctg 780 ctggacaact gcttccgggt catggagctg ctgtactgct cctgctgtaa acaaagctcc 840 gtcctaaact ggcaggactg tgaggtgcca agtcctcagt cttgcagccc agagccctca 900 ttgcagtatg cggccaccca gctgtaccct ccgcccccgt ggtcccccag ctccccgcct 960 cactccacgg gctcggtgag gccggtcagg gcacagggcg agggcctctt gccctgagca 1020 ccctggatgg tgactgcgga taggggcagc cagaccagct cccacaggag ttcaactggg 1080 tctgagactt caaggggtgg tggtgggagc cccccttggg agaggacccc tgggaagggt 1140 gtttttcctt tgagggggat tctgtgccac agcagggctc agcttcctgc cttccatagc 1200 tgtcatggcc tcacctggag cggaggggac ctggggacct gaaggtggat ggggacacag 1260 ctcctggctt ctcctggtgc tgccctcact gtccccccgc ctaaaggggg tactgagcct 1320 cctgtggccc gcagcagtga gggcacagct gtgggttgca ggggagacag ccagcacggc 1380 gtggccattc tatgaccccc cagcctggca gactggggag ctgggggcag agggcggtgc 1440 caagtgccac atcttgccat agtggatgct cttccagttt cttttttcta ttaaacaccc 1500 cacttccttt gg 1512

Claims (35)

  1. a. 5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호 3), 또는
    b. 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호 5)
    에 따른 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, IL-34 또는 이의 일부에 상보적인 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염으로서,
    상기 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 사이티딘이 화학적으로 변형되고, 적어도 하나의 뉴클레오사이드가 2'-O-(2-메톡시에틸)(2'-MOE) 뉴클레오사이드인 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  2. 제1항에 있어서, 10개 이하의 뉴클레오사이드가 화학적으로 변형된 것인 폴리뉴클레오타이드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 6개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 8개의 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    a. 5'-CxTxTxTxGGGCXGCACCAGCxTxTxCx-3'(서열번호 40)(Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임);
    b. 5'-CxTxTxTGGGCXGCACCAGCTxTxCx-3'(서열번호 41)(Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, X는 5-메틸사이티딘임);
    c. 5'-TxCxCxAxTGACCXGGAAGCAxGxTxTx-3'(서열번호 42)(Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임); 및
    d. 5'-TxCxCxATGACCXGGAAGCAGxTxTx-3'(서열번호 43)(Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)사이티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)타이미딘이고, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸사이티딘임)
    로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 siRNA 복합체의 일부인 폴리뉴클레오타이드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합, 포스포로디티오에이트 결합, 포스포트리에스테르 결합, 알킬포스포네이트 결합, 아미노알킬포스포트리에스테르 결합, 알킬렌 포스포네이트 결합, 포스피네이트 결합, 포스포르아미데이트 결합, 및 아미노알킬포스포르아미데이트 결합, 티오포스포르아미데이트 결합, 티오노알킬포스포네이트 결합, 티오노알킬포스포트리에스테르 결합, 티오포스페이트 결합, 셀레노포스페이트 결합, 및 보라노포스페이트 결합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 폴리뉴클레오타이드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리뉴클레오타이드의 모든 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 폴리뉴클레오타이드.
  10. (a) 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 (b) 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 제10항의 약학 조성물의 유효량을 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 염증성 질환을 치료하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 염증성 질환이 상승된 IL-34 발현과 관련되어 있는 것인 방법.
  13. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염인 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 질환이 골관절염인 방법.
  15. 제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생성을 억제하고/하거나; (ii) 환자의 세포에서 IL-34 매개 염증성 반응을 감소시키거나 억제하고/하거나; (iii) 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 감소시키거나 억제하는 방법.
  16. 제11항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 세포가 장 세포(예를 들어, 장 간질 세포)이고/이거나 장 섬유협착(fibrostricture)의 일부를 형성하는 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 제10항의 약학 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소시키거나 제거하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 섬유성 협착이 장에 위치하는 것인 방법.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 낭염, (I형 및 II형), 조직 또는 장기 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소 융모결절성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 결장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 염증성 질환이 류마티스 관절염인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 염증성 질환이 골관절염인 방법.
  22. 제19항에 있어서, 염증성 질환이 염증성 장 질환(예를 들어, 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 결장염, 염증성 크론병, 섬유협착 크론병, 궤양성 결장염, 콜라겐성 결장염, 림프구성 결장염, 허혈성 결장염, 전환성 결장염, 베체트병, 미시적 결장염, 궤양성 직장염, 직장구불결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 범결장염, 회결장염, 회장염 또는 불확정 결장염)인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 염증성 장 질환이 염증성 크론병 또는 섬유협착 크론병인 방법.
  24. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 제10항의 약학 조성물의 치료 유효량을 섬유종의 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증을 예방하거나 치료하는 방법.
  25. 제26항에 있어서, 섬유증이 폐 섬유증, 활막 섬유증 또는 장 섬유증인 방법.
  26. 제26항에 있어서, 섬유증이 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심내막심근 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 및 신원성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  27. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 류마티스 관절염을 앓고 있는 것인 방법.
  28. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 골관절염을 앓고 있는 것인 방법.
  29. 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 크론병을 앓고 있는 것인 방법.
  30. 제11항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리뉴클레오타이드를 관절내, 직장, 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여하는 것인 방법.
  31. 제11항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 인간인 방법.
  32. 염증성 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도.
  33. 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  34. 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  35. 섬유증의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
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