JP2024518602A - Ｉｌ－３４アンチセンス剤およびそれを使用する方法 - Google Patents

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Abstract

ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを含む、ＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチド、ならびにＩＬ－３４の活性または発現の上昇に関連する炎症性疾患、例えば炎症性腸疾患、および／または線維症を処置するための方法が本明細書で開示されている。炎症性疾患および／または線維症の処置に有用な、ＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡを含有する医薬組成物、ならびに炎症性疾患および／または線維症を処置する際に使用される、開示されたポリヌクレオチドを含有する医薬の製造も開示されている。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その開示が参照によりその全体がすべての目的で本明細書に組み込まれる、２０２１年５月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／２０１，８８７号の利益および優先権を主張する。
インターロイキン－３４（ＩＬ－３４）は、関節リウマチなどの骨変性疾患における炎症および破骨細胞形成のメディエーターであるマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ、ＭＣＳＦ１およびＭＣＳＦ－１としても知られる）と機能的に重複する、最近発見されたサイトカインである。急性および慢性両方の炎症性疾患は、まだ完全には理解されていない重要な疾患カテゴリーである。
例えば、関節リウマチ（ＲＡ）は、関節および骨の慢性的な自己免疫性および炎症性の疾患であり、米国ではおよそ１３０万人の患者が苦しんでいる。ＲＡに罹患した患者のうち、ＲＡに関連した労働障害の有病率は、米国では約３５％であり、全体の医療費は１９３億ドルを超える。骨関節炎（ＯＡ）は関節の慢性炎症性疾患であり、関節の骨を覆っている滑らかな軟骨関節表面の機械的摩耗および破壊を伴う。ＯＡは関節炎の最も一般的な形態であり、米国では３，２５０万人の成人が罹患しており、全体の医療費は１，３６０億ドルを超えている。現在のところ、ＲＡまたはＯＡに対する医学的治療法は存在しない。
炎症性腸疾患は、米国でおよそ１４０万人の患者が苦しんでいる消化管の慢性炎症性疾患である。炎症性腸疾患は、米国で最も蔓延している５大消化管疾患負荷のうちの１つであり、全体の医療費は１７億ドルを超えている。米国では毎年、炎症性腸疾患では、７０万人を超える患者が医師の診察、１０万人を超える患者が入院、１１万９千人の患者が身体障害を占める。現在のところ医学的な治療法は存在しないため、疾患管理には生涯にわたるケアが必要である。
炎症性腸疾患の最も一般的な２つの形態は、クローン病および潰瘍性大腸炎である。クローン病は消化管全体に悪影響を及ぼす可能性があるが、主に回腸（小腸の遠位または下部）および大腸に悪影響を及ぼす。潰瘍性大腸炎は主に結腸および直腸に悪影響を及ぼす。炎症性腸疾患の病因は完全には理解されていないが、環境因子と遺伝因子の両方がこの疾患に関与していると考えられている。環境的な構成成分としては、摂取した食物および薬品への曝露によって影響を受ける腸内細菌叢の変化が含まれる。
炎症性腸疾患は、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、重度の痙攣、筋痙攣、体重減少、栄養不良、発熱、および貧血を伴う。炎症性腸疾患を有する患者は、皮膚病変、関節痛、眼炎症、および肝障害にも悩まされる場合があり、潰瘍性大腸炎を患っている小児は成長欠陥に苦しむ場合がある。致命的になることは稀であるが、これらの症状は患者の生活の質を低下させる。
よって、関節リウマチ、骨関節炎、または炎症性腸疾患などの炎症性疾患を処置する信頼性の高い方法を開発することが急務である。さらに、広範な患者に対して効果的かつ永続的な症状の緩和をもたらし、負の副作用または炎症と寛解のサイクルを伴わない処置する方法を特定する必要がある。
本出願は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの組成物、およびその組成物を使用する方法を提供する。
ある特定の実施形態では、（ａ）５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）または（ｂ）５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）［ここで、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのシチジンが化学的に修飾され、少なくとも１つのヌクレオシドが２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（２’－ＭＯＥ）ヌクレオシドである］によるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドのうちの１０個以下のヌクレオシドは、化学的に修飾されている。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、６個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、８個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、（ａ）５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、（ｂ）５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、（ｃ）５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および（ｄ）５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４に対して相補的である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドである。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、およびアミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート（ｔｈｉｏｎｏａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドのすべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２０ヌクレオチド長、または２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、もしくは３０～３５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２０、２５、または３０ヌクレオチド長以下である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２０～２５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２０ヌクレオチド長である。
ある特定の実施形態では、（ａ）本明細書で開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、医薬組成物は、局所投与、非経口投与、経口投与、肺内投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している。
ある特定の実施形態では、処置を必要とする患者において炎症性疾患を処置する方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の有効量を、処置を必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、炎症性疾患は、ＩＬ－３４発現の変更に関連する。一部の実施形態では、本方法は、患者の細胞において炎症性サイトカインの産生を阻害する。一部の実施形態では、本方法は、患者の細胞においてＩＬ－３４に媒介される炎症応答を低下させるかまたは阻害する。一部の実施形態では、本方法は、患者の細胞におけるＩＬ－３４に媒介されるマクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）のシグナル伝達を低下させるかまたは阻害する。一部の実施形態では、細胞は腸細胞である。一部の実施形態では、細胞は腸間質細胞である。一部の実施形態では、細胞は、腸線維狭窄の一部を形成する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、がんの防止または処置を必要とする患者において、ＩＬ－３４発現の変更に関連するがんを防止または処置する方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の有効量を、がんの防止または処置を必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、がんは、上昇したＩＬ－３４発現を有する。一部の実施形態では、がんは結腸がんである。
ある特定の実施形態では、炎症性疾患に罹患している患者において線維性狭窄を低減または排除する方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の有効量を投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、線維性狭窄は腸に位置する。一部の実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯肉炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、結腸炎に関連する結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維性クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は炎症性クローン病である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は線維性クローン病である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口的に投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、線維症を防止または処置するための方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、線維症は腸線維症である。一部の実施形態では、線維症は肺線維症である。一部の実施形態では、線維症は滑膜線維症である。一部の実施形態では、線維症は、腎線維症、心筋線維症、心内膜心筋線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎性全身性線維症からなる群から選択される。一部の実施形態では、患者はクローン病にも罹患している。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口的に投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、腸線維症を防止または処置するための方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、患者はクローン病にも罹患している。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口的に投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、肺線維症を防止または処置するための方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、患者はクローン病にも罹患している。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口的に投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、滑膜線維症を防止または処置するための方法であって、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書で開示される医薬組成物の薬学的有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻、経皮、または十二指腸内に投与される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、経口的に投与される。一部の実施形態では、患者はヒトである。
ある特定の実施形態では、炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩の使用が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、結腸炎関連結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、またはシェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性疾患は、関節リウマチまたは骨関節炎である。一部の実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、炎症性クローン病、線維性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は炎症性クローン病である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は線維性クローン病である。
ある特定の実施形態では、医薬として使用するための、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩が本明細書で開示されている。
ある特定の実施形態では、炎症性疾患の処置において使用するための、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、炎症性疾患は、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織もしくは臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、結腸炎関連結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、またはシェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性疾患は炎症性腸疾患である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病、炎症性クローン病、線維性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空回腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は炎症性クローン病である。一部の実施形態では、炎症性腸疾患は線維性クローン病である。
ある特定の実施形態では、線維症の処置において使用するための、本明細書で開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩が本明細書で開示されている。一部の実施形態では、線維症は腸線維症である。一部の実施形態では、線維症は肺線維症である。一部の実施形態では、線維症は滑膜線維症である。一部の実施形態では、線維症は、腎線維症、心筋線維症、心内膜線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎性全身性線維症からなる群から選択される。
培養ＨＴ－２９細胞におけるＩＬ－３４発現のモジュレーションに関するＩＬ－３４ ＡＳＯの結果を示すグラフである。ＩＬ－３４ ＲＮＡ転写物をリアルタイムＰＣＲで評価した。レベルはβ－アクチンに対して正規化されている。（ＣＴＲ＝スクランブルＡＳＯ、１＝配列番号１７、２＝配列番号１９、３＝配列番号４２、４＝配列番号４３）。値は４回の実験の平均値±ＳＥＭである。群間の差は、一元配置分散分析とそれに続くＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を使用して比較した。ＩＬ－３４ ＡＳＯ対ＣＴＲ、＊＊＊Ｐ＜０．００１。 培養ＡＧＳ細胞におけるＩＬ－３４発現のモジュレーションに関するＩＬ－３４ ＡＳＯの結果を示すグラフである。ＩＬ－３４ ＲＮＡ転写物をリアルタイムＰＣＲで評価した。レベルはβ－アクチンに対して正規化されている。（ＣＴＲ＝スクランブルＡＳＯ、１＝配列番号１７、２＝配列番号１９、３＝配列番号４２、４＝配列番号４３）。値は４回の実験の平均値±ＳＥＭである。群間の差は、一元配置分散分析とそれに続くＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を使用して比較した。ＩＬ－３４ ＡＳＯ対ＣＴＲ、＊＊＊Ｐ＜０．００１。 ＵＣ患者由来のＬＰＭＣにおけるＩＬ－３４発現のモジュレーションに関するＩＬ－３４ ＡＳＯの結果を示すグラフである。ＩＬ－３４ ＲＮＡ転写物をリアルタイムＰＣＲで評価した。レベルはβ－アクチンに対して正規化されている。（ＣＴＲ＝スクランブルＡＳＯ、１＝配列番号１７、２＝配列番号１９、３＝配列番号４２、４＝配列番号４３）。値は３回の実験の平均値±ＳＥＭである。群間の差は、一元配置分散分析とそれに続くＤｕｎｎｅｔｔの事後検定を使用して比較した。ＩＬ－３４ ＡＳＯ対ＣＴＲ、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
とりわけ、ＩＬ－３４核酸またはその一部に対して相補的であり（例えば、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド）、１つまたは複数の化学的に修飾されたヌクレオシドを含むポリヌクレオチド、前記オリゴヌクレオチドを含む組成物、および自己免疫疾患または炎症性疾患（例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、骨関節炎（ＯＡ）、クローン病または潰瘍性大腸炎）または線維症などの疾患または障害を処置、低減または阻害するための組成物を使用する方法が本明細書で開示されている。
定義
本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」または「ポリヌクレオチド」は互換的に使用され、短いＤＮＡまたはＲＮＡ分子を指す。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、リン酸骨格または２’糖位置で修飾され得る２’－デオキシリボヌクレオチド（オリゴデオキシリボヌクレオチド）を含む。一部の実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のホスホロチオエート（ＰＳ）骨格修飾を有し、リン酸骨格中の非架橋酸素原子のうちの１つまたは複数が硫黄原子で置き換えられている。一部の実施形態では、「ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド」または「ＰＳオリゴヌクレオチド」は、Ｏ，Ｏ連結ホスホロチオエート連結（すなわち、ホスホロチオエート連結）である少なくとも１つのヌクレオシド間連結を有する。一部の実施形態では、ＰＳオリゴヌクレオチドは、すべてが、Ｏ，Ｏ－連結ホスホロチオエート連結（すなわち、ホスホロチオエート連結）であるヌクレオシド間連結を有する。
本明細書で使用される場合、「アンチセンス治療薬」は、遺伝子発現を阻害するために使用することができる核酸ベースの化合物のクラスである。アンチセンス治療薬は、一本鎖または二本鎖のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ベース、リボ核酸（ＲＮＡ）ベース、ＤＮＡとＲＮＡの混合ベース、またはＤＮＡ／ＲＮＡ化学類似体化合物であってもよい。一部の実施形態では、アンチセンス治療薬は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。一般に、アンチセンス治療薬は、アンチセンス治療薬とプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡとの間の結合を促進するために、所定の遺伝子から転写されるｍＲＮＡまたはプレｍＲＮＡ配列に対して相補的またはほぼ相補的なヌクレオチド配列を含むように設計される。理論に拘束されることなく、ほとんどの場合、アンチセンス治療薬はｍＲＮＡまたはプレｍＲＮＡに結合することによって作用し、それによってタンパク質の翻訳を阻害し、プレｍＲＮＡの成熟ｍＲＮＡへのスプライシングを変化させる、および／またはｍＲＮＡの破壊を引き起こすと考えられている。ほとんどの事例では、アンチセンス治療薬のヌクレオチド配列は、標的遺伝子のまたはｍＲＮＡのセンス配列の一部に対して相補的である。
本明細書で使用される場合、「ＩＬ－３４アンチセンス治療薬」は、ＩＬ－３４遺伝子センス、ＩＬ－３４プレｍＲＮＡセンス、および／もしくはＩＬ－３４ ｍＲＮＡセンス配列、またはそれらの一部に対して相補的なオリゴヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドベースの化合物である。本明細書に記載のＩＬ－３４アンチセンス治療薬はまた、ＩＬ－３４遺伝子センス、ＩＬ－３４プレｍＲＮＡセンス、および／もしくはＩＬ－３４ ｍＲＮＡセンス配列、またはその一部に結合することが可能なヌクレオチド化学類似体ベースの化合物であってもよい。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンス治療薬は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＩＬ－３４ ｓｈＲＮＡ、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ、ＩＬ－３４ ＰＮＡ、ＩＬ－３４ ＬＮＡ、ｍｉＲＮＡ、およびＩＬ－３４モルホリノオリゴマーを含み得る。
本明細書で使用される場合、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（ＡＳＯ）は、標的タンパク質（例えば、ＩＬ－３４）をコードするｍＲＮＡなどの標的ＲＮＡ配列に対して相補的な配列を含む短い合成オリゴヌクレオチドベースの配列である。特定の理論に拘束されることなく、アンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、ｍＲＮＡ分子の相補的領域にハイブリダイズし、それによって二本鎖ハイブリッドを生成することができ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド鎖を分解するＲＮａｓｅ Ｈなどの遍在する触媒酵素が活性化され、それによってタンパク質の翻訳が妨げられ得る。理論に拘束されることなく、本明細書において提供されるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡのようなその標的配列にハイブリダイズし得る。したがって、一部の実施形態では、ＤＮＡ配列が標的として提供される場合、対応するＲＮＡ配列（チミンの代わりにウラシルを含む）が、本明細書に記載されているＡＳＯに含まれる。一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＯは、化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。
本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドに含まれるヌクレオチドの数は変化し得る。ＡＳＯは、典型的には、８～５０ヌクレオチド長の間、例えば２０ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～２０、１５～２５、１５～３０、１５～３５、２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、または３０～３５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～２５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０～２５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、最大数のヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、または３５ヌクレオチド長以下である。
本明細書で使用される場合、「化学的に修飾されたヌクレオシド」とは、アデノシン、シチジン、チミジン、グアノシン、またはウリジン以外の任意のヌクレオシドを意味する。化学的に修飾されたヌクレオシドは、修飾された糖部分および／または修飾された核酸塩基を含み得る。一部の実施形態では、開示された化学的に修飾されたヌクレオシドは、ロックド核酸（ＬＮＡ）、例えば、ＬＮＡシチジン、ＬＮＡチミジン、ＬＮＡアデノシン、またはＬＮＡグアノシンであり得る。一部の実施形態では、化学的に修飾されたヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルチミジン、２’－Ｏ－メチルウリジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含む。他の実施形態では、化学的に修飾されたヌクレオシドは、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンを含む。一部の実施形態では、化学的に修飾されたヌクレオシドは、以下：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル－２’－デオキシシチジンの化学的に修飾されたヌクレオシドのいずれかを含み得る。本明細書で開示される一部の実施形態では、化学修飾ヌクレオシドは、安定化末端５’－ホスフェートまたは５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体、例えば５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネート類似体、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチル類似体、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および２’－Ｏ－メチルアデノシン、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、または５－メチル２’－デオキシシチジンを含み得る。
さらに、一部の実施形態では、本明細書に記載の化学的に修飾されたヌクレオシドには、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（「２’－ＭＯＥ」）ヌクレオシド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオシド、２’－フルオロ－β－Ｄ－アラビノヌクレオシド、架橋ヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド、拘束エチル（ｃＥＴ）ヌクレオシド、トリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）ヌクレオシド、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン連結核酸（ＥＮＡ）ヌクレオシド、および／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）が含まれる。
本明細書中で使用される場合、「ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との間の接続を意味する。「修飾ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との間の、天然ではない接続をいう。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結としては、以下に限定されないが、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、アミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、またはボラノホスフェート連結が挙げられる。
ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＤＮＡまたはＲＮＡを模倣した構造を有する人工的に合成された短いポリマーである。ＰＮＡには、ペプチド結合によって連結されたＮ－（２－アミノエチル）－グリシン単位の繰り返しからなる骨格が含まれる。
ロックド核酸（ＬＮＡ）は、リボース部分が２’酸素と４’炭素とを接続する余分な架橋で修飾された、１つまたは複数の修飾ＲＮＡヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列である。ＬＮＡは、類似のオリゴヌクレオチド配列よりも高いＴｍを有すると考えられている。
モルホリノオリゴマーは、ホスホロジアミデート基を介して連結されたメチレンモルホリン環の骨格に結合したＤＮＡ塩基を含むオリゴヌクレオチド化合物である。本発明のモルホリノオリゴマーは、目的の特定のＲＮＡ配列（例えば、目的のＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたはＩＬ－３４ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列）に結合するように設計することができ、それによって遺伝子発現を防止する。
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は一般に、ヘアピン様構造を有するＲＮＡ分子であり、遺伝子発現をサイレンシングするために使用され得る。ｓｈＲＮＡは一般に、ｓｈＲＮＡ配列をコードするプラスミドから発現され、レンチウイルス、アデノウイルス、またはアデノ随伴ウイルスの発現を可能にするウイルスベクターから発現され得る。理論に拘束されることなく、ｓｈＲＮＡはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）プロセスを利用することによって、遺伝子発現を阻害すると考えられている。簡単に説明すると、ｓｈＲＮＡ転写物はＤｒｏｓｈａとＤｉｃｅｒとによってプロセシングされ、次いで、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）にロードされ、特定のｍＲＮＡの標的化、およびｍＲＮＡ分解またはタンパク質翻訳の抑制のいずれかを可能にする。
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、およそ２０～２５塩基対の長さの二本鎖ＲＮＡ分子であり（しかしながら、これは例えば、１８～３０塩基対の長さであってもよい）、ＲＮＡｉ機構（例えば、ＤｒｏｓｈａおよびＲＩＳＣ）を利用して、ｍＲＮＡに結合し、それを標的として分解する。ｓｉＲＮＡは、発現のためにプラスミドまたはベクターに依存せず、一般に、例えばトランスフェクションによって、標的細胞に直接送達され得る。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ＲＮＡサイレンシングおよび遺伝子発現の転写後調節において機能する、約２２ヌクレオチドを含有する小さなノンコーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ配列の一部に対して相補的な配列を含む。ｍｉＲＮＡは、非常に特異的なステムループ構造を示す長い一本鎖ＲＮＡ分子から生成される。人工ｍｉＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の成熟した２１ヌクレオチド配列を、標的、例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡ標的由来の２１ヌクレオチド配列と置き換えることによって設計される。
本明細書中で使用される場合、「ＩＬ－３４阻害剤」は、以下に限定されないが、ＩＬ－３４のヌクレオチドベースの阻害剤（例えば、ＩＬ－３４低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ＩＬ－３４マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ＩＬ－３４低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ならびにＬＮＡヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、およびモルホリノオリゴマーを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド）、およびこのような化合物を含む組成物を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－３４レベル（例えば、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたはタンパク質レベル）および／または活性（例えば生物学的活性、例えばＩＬ－３４受容体刺激）は、ＩＬ－３４阻害剤を使用して低下させることができる。一部の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、１つまたは複数の化学的に修飾されたヌクレオシドを含むＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。
本明細書中で使用される場合、「ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド」または「ＩＬ－３４ ＡＳＯ」は、ＩＬ－３４遺伝子またはその一部から転写されたｍＲＮＡ分子の核酸配列に対して相補的な核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを指すと理解される。より詳細には、このようなオリゴヌクレオチドは、このようなｍＲＮＡまたはその一部のコード領域中の核酸配列に対して相補的であり得る。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＬ－３４遺伝子、そのＲＮＡもしくはタンパク質産物、またはその活性もしくは発現がＩＬ－３４もしくはその産物の活性もしくは発現に影響を及ぼす別の分子実体を、排他的に、または高度の特異度で標的化するという固有の機能的特性を有する。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞（例えば、ＰＢＭＣ、樹状細胞、またはＢ細胞などの免疫細胞）に導入された場合に、ＩＬ－３４の発現を低減させ得る。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、遺伝子から転写されたｍＲＮＡの発現を低減させ得る。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を低減させ得る。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドが導入された細胞由来の遺伝子によってコードされるタンパク質の分泌を低減させ得る。一部の実施形態では、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号４０～４３の配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
本明細書の記載および特許請求の範囲を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語、および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの他の語形は、以下を含むがこれらに限定されないことを意味し、例えば、他の添加剤、成分、整数、またはステップを除外することを意図するものではない。
「場合により」または「場合によって」は、その後に記述される事象または状況が生じる可能性があるかまたは生じない可能性があることを意味し、この記載は、事象または状況が生じる例と生じない例を含む。
本明細書で使用される場合、「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、定量値に関して使用される場合、特に別段の記載がない限り、記載された定量値そのものを含む。本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、文脈から別段に指示または推論されない限り、記載された定量値から±１０％の変動を指す。
本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本開示の範囲を限定することを意図しない。本開示全体を通して使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別段に明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。よって、例えば、「組成物」に対する言及は、単一の組成物と同様に、複数のこのような組成物を含み、「治療剤」に対する言及は、当業者に公知の１つまたは複数の治療剤および／または医薬剤ならびにその等価物などに対する言及である。本明細書で使用されるすべてのパーセンテージおよび比率は、別段に示されていない限り、重量によるものである。
別段に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合には、本明細書が優先する。本明細書に記載されたものと類似するかまたは同等の方法および材料は、本開示の実践または試験において使用され得るが、好適な方法および材料が以下に記載される。
ＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチド
とりわけ、ＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチドが本明細書で開示されている。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド配列：５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、または５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）、または５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）［Ｘは５－メチルシチジンであり、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのシチジンは、化学的に修飾されており、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（２’－ＭＯＥ）ヌクレオシドである］、またはその薬学的に許容される塩を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、
ａ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
ｂ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
ｃ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
ｄ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）［ここでＣｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］
からなる群から選択されるヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容される塩を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、配列番号３、５、７、もしくは８または配列番号４０～４３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡである。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ複合体の一部である。一部の実施形態では、ｓｉＲＮＡはｓｉＲＮＡ二重鎖である。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４阻害剤である。一部の実施形態では、ＩＬ－３４阻害剤は、ＩＬ－３４ ＡＳＯまたはこのようなＩＬ－３４ ＡＳＯを含む組成物である。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４転写物（例えば、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写物）またはその一部に対して相補的な短い合成オリゴヌクレオチド配列である。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列の一部、例えば、マウスまたはヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４遺伝子配列の一部、例えばマウスまたはヒトＩＬ－３４遺伝子配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写バリアントの一部、またはその一部、例えば、ＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１７２７７１．１（配列番号２４）、ＮＭ＿００１１７２７７２．１（配列番号２５）、ＮＭ＿１５２４５６．２（配列番号２６）、ＮＭ＿１５２４５６．３（配列番号４４）、ＮＭ＿００１１７２７７１．２（配列番号４５）、ＮＭ＿００１３９３４９３．１（配列番号４６）、ＮＭ＿００１３９３４９５．１（配列番号４７）、ＮＭ＿００１１７２７７２．２（配列番号４８）、ＮＭ＿００１３９３４９４．１（配列番号４９）、ＮＭ＿００１３９３４９６．１（配列番号５０）、ＮＭ＿００１３９３４９７．１（配列番号５１）、もしくはＮＭ＿００１３９３４９８．１（配列番号５２）のヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列、またはＮＣＢＩ参照配列ＮＭ＿００１１３５１００．２（配列番号２７）もしくはＮＭ＿０２９６４６．３（配列番号２８）のマウスＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に対して相補的であるか、またはほぼ相補的であるヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、１つまたは複数の種のＩＬ－３４遺伝子から産生されるＩＬ－３４ ｍＲＮＡ、例えば、マウスおよびヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写物を標的とし得る。例えば、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、哺乳動物ＩＬ－３４遺伝子、例えば、ヒト（すなわち、ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ））ＩＬ－３４遺伝子またはマウス（すなわち、ハツカネズミ（ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ））ＩＬ－３４遺伝子のＩＬ－３４ ｍＲＮＡを標的とし得る。特定の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ヒトＩＬ－３４ ｍＲＮＡを標的とする。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４遺伝子もしくはＩＬ－３４ ｍＲＮＡのヌクレオチド配列、またはその一部に対して相補的なヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、以下に限定されないが、ヌクレオチド配列：５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）、５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）、または５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）、（ここで、Ｘは５－メチルシチジン）を含むＩＬ－３４ ＡＳＯを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ヌクレオチド配列５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ヌクレオチド配列５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、化学的に修飾されたヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、本明細書で開示される化学的に修飾されたヌクレオシドは、以下に限定されないが、ロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオシド、例えばＬＮＡシチジン、ＬＮＡチミジン、ＬＮＡアデノシン、またはＬＮＡグアノシン、安定化された末端５’－ホスフェートまたは５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体を有するヌクレオシド、例えば５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネート類似体、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチル類似体を有するヌクレオシド、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および２’－Ｏ－メチルアデノシン、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、または５－メチル２’－デオキシシチジンを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および２’－Ｏ－メチルアデノシンを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ヌクレオチド配列５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号７）を含み、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ヌクレオチド配列５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号８）を含み、Ｘは５－メチルシチジンである。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）と少なくとも９０％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）と少なくとも９０％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）に記載の配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）と少なくとも９０％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）と少なくとも９５％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）に記載の配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）と少なくとも９０％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）と少なくとも９５％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、ＡＸは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）に記載の配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）と少なくとも９０％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）と少なくとも９５％同一な配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、ＡＳＯは、５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）に記載の配列を有し、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、ＴＸは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである。一部の実施形態では、本明細書で開示される企図される組成物は、薬学的に許容される塩を含んでもよい。
本明細書に記載の一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯはギャップマー化合物である。ギャップマー化合物は、修飾ヌクレオチドの５’および３’隣接基（領域Ａ’およびＣ’と称される）を含むオリゴヌクレオチド配列である。修飾ヌクレオチドのこれらの隣接群は、ヌクレアーゼ分解からヌクレオチドの内部基（領域Ｂ’と呼ばれる）を保護すると考えられている。５’および３’の隣接する基と内部基が一緒になって（５’から３’に）Ａ’－Ｂ’－Ｃ’構造を形成する。ヌクレオチドの内部基は、通常６～１０ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチドの内部基は１０～１４分子の長さである。各５’または３’基の隣接するヌクレオチドは、３、４、５、６、またはそれより多いヌクレオチド長であり得る。ギャップマー化合物中の隣接するヌクレオチドの５’および３’基は、同じ数のヌクレオチド長であり得る。修飾ヌクレオチドの隣接する基としては、例えば、２’－ＭＯＥ、２’－ＯＭｅ、およびＬＮＡヌクレオチドが挙げられる。ギャップマー化合物配列はまた、修飾ヌクレオシド間連結（例えば、ホスホロチオエート連結）、２’－ＭＯＥ、２’－ＯＭｅ、ＬＮＡヌクレオシド、ＰＮＡ、５－メチルシチジン、および本明細書に記載の他の化学的に修飾されたヌクレオシドを含む修飾を組み込むことができる。
一部の実施形態では、ギャップマーは、１５～２０、１５～２５、１５～３０、１５～３５、２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、または３０～３５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５～２５ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、２０～２５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ギャップマーは２０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態では、領域Ａ’は、２’－ＭＯＥなどの３または４個のヌクレオチド類似体からなり、領域Ｂ’は、１２または１４個のＤＮＡ塩基からなり、領域Ｃ’は、２’－ＭＯＥなどの３または４個のヌクレオチド類似体からなる。このようなギャップマー設計には、（Ａ’－Ｂ’－Ｃ’）３－１２－３、３－１４－３、４－１２－４、および４－１４－４が含まれる。
一部の実施形態では、領域Ａ’は、２’－ＭＯＥなどの５または６個のヌクレオチド類似体からなり、領域Ｂ’は、８または１０個のＤＮＡ塩基からなり、領域Ｃ’は、２’－ＭＯＥなどの５または６個のヌクレオチド類似体からなる。このようなギャップマー設計には、（Ａ’－Ｂ’－Ｃ’）５－１０－５および６－８－６が含まれる。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘ－３のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。
一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＸＮＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｘは５－メチルシチジンを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＸＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｘは５－メチルシチジンを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＮＸＮＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｘは５－メチルシチジンを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＡＳＯは、構造５’－ＮｘＮｘＮｘＮｘＮＮＮＮＮＸＮＮＮＮＮＮＮｘＮｘＮｘＮｘ－３’のギャップマーを含み、Ｎは任意のヌクレオチドまたは化学的に修飾されたヌクレオチドを含み、Ｘは５－メチルシチジンを含み、Ｎｘは２’－Ｏ－メチル（「２’－ＯＭｅ」）リボヌクレオシドを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯギャップマーは、２’－ＭＯＥヌクレオシドを含み、ＩＬ－３４ ＡＳＯの配列は、以下：
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）、［Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
またはその薬学的に許容される塩
のうちの１つから選択される。
一部の実施形態では、配列番号３の１番目、１７番目および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、４番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号４０のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、配列番号３の１番目および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号４１のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号５の１番目、１９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号５の２番目、および３番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号５の４番目および１７番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号５の１８番目のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号４２のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号５の１番目、１９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号５の２番目、および３番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号５の１８番目のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号４３のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
例えば、一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号３の１番目、１７番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、４番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号３の５番目および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号１６のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、配列番号３の１番目、１７番目および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、４番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号３の５番目、６番目および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号３の１５番目のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号１８のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、配列番号３の１番目、８番目、１１番目、１３番目、１４番目、１７番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号３のすべてのチミジンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号３のすべてのグアノシンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号３のすべてのアデノシンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号２０のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
他の実施形態では、配列番号３の１つまたは複数のヌクレオシドは、配列番号１６、１８、２０、４０、または４１のいずれか１つにおいて置換されたヌクレオシド以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されていてもよい。さらに他の実施形態では、配列番号３は、配列番号１６、１８、２０、４０、または４１のいずれか１つにおいて置換された位置以外の１つまたは複数の位置において、２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されていてもよい。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号５の１番目、５番目、１９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号５の２番目、３番目、および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号５の４番目および１７番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号５の１８番目のヌクレオシドは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号１７のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、配列番号５の１番目、５番目、１９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号５の２番目、３番目、および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号５の４番目および１７番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号５の６番目、１５番目、および１８番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号１９のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、配列番号５の２、３番目、８番目、９番目、１６番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンで置換されており、配列番号５のすべてのチミジンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンで置換されており、配列番号５のすべてのグアノシンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンで置換されており、配列番号５のすべてのアデノシンは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号２１のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
他の実施形態では、配列番号５の１つまたは複数のヌクレオシドは、配列番号１７、１９、２１、４２、または４３のいずれか１つにおいて置換されたヌクレオシド以外の２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されていてもよい。さらに他の実施形態では、配列番号５は、配列番号１７、１９、２１、４２、または４３のいずれか１つにおいて置換された位置以外の１つまたは複数の位置において、２’－ＭＯＥヌクレオシドで置換されていてもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＯは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む。本明細書中で使用される場合、「ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との間の接続を意味する。「修飾ヌクレオシド間連結」は、ヌクレオシドの３’位と隣接するヌクレオシドの５’位との間の、天然ではない接続を指す。一部の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結としては、以下に限定されないが、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、アミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、またはボランホスフェート連結が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＯは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドおよび少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のＡＳＯは、少なくとも１つの化学的に修飾されたヌクレオシドまたは少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結を含む。
本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、修飾リボヌクレオシドおよび修飾デオキシリボヌクレオシドを含む、化学的に修飾されたヌクレオシドを含み得る。化学的に修飾されたヌクレオシドとしては、以下に限定されないが、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）修飾、例えば、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シトシン、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）ウリジン、および２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンが挙げられる。化学的に修飾されたヌクレオシドとしては、以下に限定されないが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、２’－Ｏ－メチル、２’－フルオロ、および２’－フルオロ－β－Ｄ－アラビノヌクレオチド（ＦＡＮＡ）修飾体も挙げられる。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯに含まれ得る化学的に修飾されたヌクレオシドは、その各内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＪｏｈａｎｎｅｓおよびＬｕｃｃｈｉｎｏ、（２０１８）「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｎｄ Ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＲＮＡｓ」 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．２８（３）：１７８～９３；ＲｅｔｔｉｇおよびＢｅｈｌｋｅ、（２０１２）「Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｔｏｗａｒｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｕｓｅ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ－ＩＩ」 Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２０：４８３～５１２、ならびにＫｈｖｏｒｏｖａおよび Ｗａｔｔｓ（２０１７）「Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ」Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３５（３）：２３８～４８に記載されている。ある特定の実施形態では、本開示は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの混合モダリティ、例えば、ＩＬ－３４ペプチド核酸（ＰＮＡ）とＩＬ－３４ロック核酸（ＬＮＡ）との組合せを提供する。
本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、オリゴヌクレオチドの５’末端のホスフェートおよび５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体の安定化を促進する化学修飾を含み得る。オリゴヌクレオチドの５’末端のホスフェートの安定化を促進するか、または５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体である化学修飾としては、以下に限定されないが、５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネート類似体、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチル類似体が挙げられる。ＡＳＯの５’末端のホスフェートの安定化を促進する化学修飾および５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体は、ＫｈｖｏｒｏｖａおよびＷａｔｔｓ、（２０１７）「Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ」Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３５（３）：２３８～４８に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載の一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、化学的に修飾されたヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、１つまたは複数の化学的に修飾されたヌクレオシドを含んでもよく、化学的に修飾されたヌクレオシドは、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、および／または５－メチルプリン、例えば、５－メチルグアニンを含む塩基を含む。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、以下：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル２’－デオキシシチジンの化学的に修飾されたヌクレオシドのいずれかを含み得る。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、５’－ＣＴＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号１）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］、５’－ＧＧＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴ－３’（配列番号２）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］、５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］、５’－ＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号４）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］、５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］、もしくは、５’－ＴＧＴＴＴＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＡＧ－３’（配列番号６）［ここで、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドであるおよび／または少なくとも１つの連結は、修飾ヌクレオシド間連結である］のヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容される塩を含むＩＬ－３４ ＡＳＯを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号３の第３のシチジン（５’末端から）は、化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されてもよい。一部の実施形態では、配列番号３の３番目のシチジン（５’末端から）は、５－メチルシチジンに置換されており、その結果、配列番号７のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。一部の実施形態では、配列番号３の３番目のシチジン（５’末端から）以外のヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されており、その結果、配列番号７以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。一部の実施形態では、配列番号３の３番目のシチジン（５’末端から）は、５－メチルシチジンではない化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されており、その結果、配列番号７以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号５の５番目のシチジン（５’末端から）は、化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されていてもよい。一部の実施形態では、配列番号５の５番目のシチジン（５’末端から）は、５－メチルシチジンに置換されており、その結果、配列番号８のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。一部の実施形態では、配列番号３の５番目のシチジン（５’末端から）以外のヌクレオシドは、化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されており、その結果、配列番号８以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。一部の実施形態では、配列番号３の５番目のシチジン（５’末端から）は、５－メチルシチジンではない化学的に修飾されたヌクレオシドで置換されており、その結果、配列番号８以外のヌクレオチド配列を有するＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯには、１つまたは複数のＬＮＡヌクレオチドを含むＩＬ－３４ ＡＳＯも含まれる。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、以下：
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号９）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ｃｔｔｔＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｃｔｔｃ－３’（配列番号１０）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃｇＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１１）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンである］、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣｃＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１２）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンである］、
・５’－ｇｇｃＸＧＣＡＣＣＡＧＣｔｔｃ－３’（配列番号１３）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ｃｔｔＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣｃａｇ－３’（配列番号１４）［ここで、ｃはＬＮＡシチジンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、ａはＬＮＡアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
・５’－ｔｇａＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｇｔｔ－３’（配列番号１５）［ここで、ａはＬＮＡアデノシンであり、ｔはＬＮＡチミジンであり、ｇはＬＮＡグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］
のいずれかのヌクレオチド配列、
またはその薬学的に許容される塩、を含むＩＬ－３４ ＡＳＯを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドはＬＮＡである。例えば、一部の実施形態では、配列番号３の１番目および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、ＬＮＡシチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、ＬＮＡチミジンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号９のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
別の実施形態では、配列番号３の１番目、１７番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、ＬＮＡシチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、４番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、ＬＮＡチミジンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号１０のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
別の実施形態では、配列番号３の１番目、９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、ＬＮＡシチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立してＬＮＡチミジンで置換されており、配列番号３の１０番目のヌクレオシドは、ＬＮＡグアノシンで置換されており、その結果、配列番号１１のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
また別の実施形態では、配列番号３の１番目、９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、ＬＮＡシチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、ＬＮＡチミジンで置換されており、その結果、配列番号１２のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
他の実施形態では、配列番号３の１つまたは複数のヌクレオシドは、配列番号９、１０、１１、または１２のうちのいずれか１つにおいて置換されたヌクレオシド以外のＬＮＡヌクレオチドで置換されていてもよい。他の実施形態では、配列番号３は、配列番号９、１０、１１、または１２のうちのいずれか１つにおいて置換された位置以外の１つまたは複数の位置において、ＬＮＡヌクレオチドで置換されていてもよい。
特定の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、２’－ＭＯＥヌクレオシドを含み、ＩＬ－３４ ＡＳＯの配列は、以下：
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１６）、［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１７）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧＣＸＧＣＡＣＣＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号１８）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡＣＣＸＧＧＡＡＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号１９）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧｘＧｘＧｘＣｘＸＧｘＣｘＡｘＣｘＣｘＡｘＧｘＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号２０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴｘＧｘＡｘＣｘＣｘＸＧｘＧｘＡｘＡｘＧｘＣｘＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号２１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
またはその薬学的に許容される塩
のうちの１つから選択される。
さらに、一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、２’－ＯＭｅヌクレオシドを含み、ＩＬ－３４ ＡＳＯの配列は、以下：
・５’－ＣｙＴｙＴｙＴｙＧｙＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧｙＣｙＴｙＴｙＣｙ－３’（配列番号２２）［ここで、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
・５’－ＴｙＣｙＣｙＡｙＴｙＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣｙＡｙＧｙＴｙＴｙ－３’（配列番号２３）［ここで、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンであり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンであり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンであり、Ａｙは２’－Ｏ－メチルアデノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
またはその薬学的に許容される塩
のうちの１つから選択される。
例えば、一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＯＭｅヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号３の１番目、１７番目および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルシチジンで置換されており、配列番号３の２番目、３番目、４番目、１８番目、および１９番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルチミジンで置換されており、配列番号３の５番目および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルグアノシンで置換されており、配列番号３の９番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号２２のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
他の実施形態では、配列番号３の１つまたは複数のヌクレオシドは、配列番号２２で置換されたヌクレオシド以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されていてもよい。さらに他の実施形態では、配列番号３は、配列番号２２で置換された位置以外の１つまたは複数の位置で２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されていてもよい。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、配列番号５のヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つのヌクレオシドは、２’－ＯＭｅヌクレオシドである。例えば、一部の実施形態では、配列番号５の１番目、５番目、１９番目、および２０番目のヌクレオシド（５’末端に対して）は、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルチミジンで置換されており、配列番号５の２番目、３番目、および１６番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルシチジンで置換されており、配列番号５の４番目および１７番目のヌクレオシドは、それぞれ独立して、２’－Ｏ－メチルアデノシンで置換されており、配列番号５の１８番目のヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチルグアノシンで置換されており、配列番号５の１０番目のヌクレオシドは、５－メチルシチジンで置換されており、その結果、配列番号２３のヌクレオチド配列を含むＩＬ－３４ ＡＳＯが得られる。
他の実施形態では、配列番号５の１つまたは複数のヌクレオシドは、配列番号２３で置換されたヌクレオシド以外の２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されていてもよい。さらに他の実施形態では、配列番号５は、配列番号２３で置換された位置以外の１つまたは複数の位置で２’－ＯＭｅヌクレオシドで置換されていてもよい。
本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、オリゴヌクレオシド連結のうちの１つまたは複数が修飾ヌクレオシド間連結であるホスフェート骨格を含み得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、少なくとも１つのホスフェート連結を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯは、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、アミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列の１つ、２つ、３つ、またはそれより多いヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＡＳＯの好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列のすべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。よって、一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。例えば、一部の実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。別の例では、一部の実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。例えば、一部の実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。別の例では、一部の実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ＡＳＯのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。
一部の実施形態では、開示されたＩＬ－３４ ＡＳＯ、またはその薬学的に許容される塩は、場合によって、少なくとも１つの修飾核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン、および／または少なくとも１つのメチルホスホネートヌクレオチドを有してもよく、これは、例えば、５’末端もしくは３’末端の一方のみに、または５’末端と３’末端の両方に、またはオリゴヌクレオチド配列に沿って配置されることが企図される。
企図されるＩＬ－３４ ＡＳＯは、場合によって、少なくとも１つの修飾糖を含んでもよい。例えば、オリゴヌクレオチドを構成する少なくとも１つのヌクレオチドの糖部分は、２’－ＯＨ基がＯＲ、Ｒ、Ｒ’ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＲ２、Ｎ３、ＣＮ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ（ここで、Ｒはアルキルまたはアリールであり、Ｒ’はアルキレンである）からなる群から選択されるいずれか１つの基で置き換えられていてもよいリボースである。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、各アンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれたヌクレオチド配列の標的化部分が、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列もしくはその一部、またはＩＬ－３４相互作用パートナーのｍＲＮＡ配列もしくはその一部に対して完全にまたはほぼ完全に相補的であるように設計され得る。このような相補的またはほぼ相補的なヌクレオチド配列の組込みは、所与の標的に対する高度な特異度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの操作を可能にする。特異度は、解離定数などのパラメーターの測定、あるいはタンパク質もしくはＲＮＡの発現レベルの変化などの他の基準またはＩＬ－３４活性もしくは発現を測定する他のアッセイによって評価され得る。一部の実施形態では、本明細書で開示されたＩＬ－３４ ＡＳＯは、ＩＬ－３４阻害剤である。
一部の実施形態では、本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含むＩＬ－３４阻害剤である。
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、およそ２０～２５塩基対の長さの二本鎖ＲＮＡ分子であり（しかしながら、これは例えば、１８～３０塩基対の長さであってもよい）、ＲＮＡｉ機構（例えば、ＤｒｏｓｈａおよびＲＩＳＣ）を利用して、ｍＲＮＡに結合し、それを標的として分解する。ｓｉＲＮＡは、発現のためにプラスミドまたはベクターに依存せず、一般に、例えばトランスフェクションによって、標的細胞に直接送達され得る。ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡはＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に対して相補的なＲＮＡ配列を含む二本鎖ＲＮＡ配列であり、ＩＬ－３４タンパク質の翻訳を妨げる。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、２０～２５、２０～３０、または２５～３０ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、２０～２５ヌクレオチド長である。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、２０、２５、または３０ヌクレオチド長以下である。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれか１つのヌクレオチド配列、例えば、配列番号１～８のいずれか１つのヌクレオチド配列、またはその薬学的に許容される塩を含むｓｉＲＮＡを含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－３４は修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のシチジンは、５－メチルシチジンで置き換えられている。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、オリゴヌクレオシド連結のうちの１つまたは複数が修飾ヌクレオシド間連結であるホスフェート骨格を含み得る。例えば、一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、少なくとも１つのホスフェート連結を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、アミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される１つまたは複数の修飾ヌクレオシド間連結を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列の１つ、２つ、３つ、またはそれより多いヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡの好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列のすべてのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。よって、一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。例えば、一部の実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。別の例では、一部の実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。例えば、一部の実施形態では、配列番号３のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。別の例では、一部の実施形態では、配列番号７のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。
ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＤＮＡまたはＲＮＡを模倣した構造を有する人工的に合成された短いポリマーである。ＰＮＡには、ペプチド結合によって連結されたＮ－（２－アミノエチル）－グリシン単位の繰り返しで構成される骨格が含まれる。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＰＮＡは、高い特異度でＩＬ－３４ ＲＮＡ配列に結合し、ＩＬ－３４遺伝子の発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用することができる。
ロックド核酸（ＬＮＡ）は、リボース部分が２’酸素と４’炭素とを接続する余分な架橋で修飾された、１つまたは複数の修飾ＲＮＡヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列である。ＬＮＡは、類似のオリゴヌクレオチド配列よりも高いＴｍを有すると考えられている。本明細書に記載のＩＬ－３４ ＬＮＡは、高い特異度でＩＬ－３４ ＲＮＡ配列に結合し、ＩＬ－３４遺伝子の発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用することができる。
モルホリノオリゴマーは、ホスホロジアミデート基を介して連結されたメチレンモルホリン環の骨格に結合したＤＮＡ塩基を含むオリゴヌクレオチド化合物である。本発明のモルホリノオリゴマーは、目的の特定のＩＬ－３４ ＲＮＡ配列（例えば、目的のＩＬ－３４ ｍＲＮＡまたはＩＬ－３４ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列）に結合するように設計され、それによって遺伝子発現を妨げることができる。本明細書に記載のＩＬ－３４モルホリノオリゴマーは、高い特異度でＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に結合し、ＩＬ－３４遺伝子の発現を阻害するアンチセンス治療薬として使用することができる。本明細書に記載のＩＬ－３４モルホリノオリゴマーはまた、ＩＬ－３４プレｍＲＮＡ配列に結合し、ＩＬ－３４プレｍＲＮＡスプライシングおよびＩＬ－３４遺伝子発現を変化させるために使用することができる。
低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は一般に、ヘアピン様構造を有するＲＮＡ分子であり、遺伝子発現をサイレンシングするために使用され得る。ｓｈＲＮＡは一般に、ｓｈＲＮＡ配列をコードするプラスミドから発現され、レンチウイルス、アデノウイルス、またはアデノ随伴ウイルスの発現を可能にするウイルスベクターから発現され得る。理論に拘束されることなく、ｓｈＲＮＡはＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）プロセスを利用することによって、遺伝子発現を阻害すると考えられている。簡単に説明すると、ｓｈＲＮＡ転写物はＤｒｏｓｈａとＤｉｃｅｒによってプロセシングされ、次いで、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）にロードされ、特定のｍＲＮＡの標的化、およびｍＲＮＡ分解またはタンパク質翻訳の抑制のいずれかを可能にする。本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｈＲＮＡは、ＩＬ－３４の遺伝子発現を阻害し得る。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ＲＮＡサイレンシングおよび遺伝子発現の転写後調節において機能する、約２２ヌクレオチドを含有する小さなノンコーディングＲＮＡ分子である。ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡ配列の一部に対して相補的な配列を含む。ｍｉＲＮＡは、非常に特異的なステムループ構造を示す長い一本鎖ＲＮＡ分子から生成される。人工ｍｉＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡ配列の成熟した２１ヌクレオチド配列を、標的、例えばＩＬ－３４ ｍＲＮＡ標的由来の２１ヌクレオチド配列と置き換えることによって設計される。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの５’末端のホスフェートの安定化を促進する化学修飾、および５’－リン酸のホスファターゼ耐性類似体を含み得る。オリゴヌクレオチドの５’末端のホスフェートの安定化を促進するか、または５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体である化学修飾としては、以下に限定されないが、５’－メチルホスホネート、５’－メチレンホスホネート、５’－メチレンホスホネート類似体、５’－Ｅ－ビニルホスホネート（５’－Ｅ－ＶＰ）、５’－ホスホロチオエート、および５’－Ｃ－メチル類似体が挙げられる。ＡＳＯの５’末端のホスフェートの安定化を促進する化学修飾および５’－ホスフェートのホスファターゼ耐性類似体は、ＫｈｖｏｒｏｖａおよびＷａｔｔｓ、（２０１７）「Ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｕｔｉｌｉｔｙ」 Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、３５（３）：２３８～４８に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載の一部の実施形態では、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、化学的に修飾されたヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルリボヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、２’－Ｏ－メチルウリジン、２’－Ｏ－メチルチミジン、および／または２’－Ｏ－メチルアデノシンを含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、５－メチルピリミジン、例えば５－メチルシトシン、および／または５－メチルプリン、例えば５－メチルグアニンを含む、１つまたは複数の化学的に修飾された塩基を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、以下：５－メチル－２’－Ｏ－メチルシチジン、５－メチル－２’－Ｏ－メチルチミジン、５－メチルシチジン、５－メチルウリジン、および／または５－メチル２’－デオキシシチジンの化学的に修飾されたヌクレオシドのいずれかを含み得る。
２’－ＯＭｅヌクレオチドは、ｔＲＮＡおよび他の低分子ＲＮＡに天然に見られる。オリゴヌクレオチド配列に２’－ＯＭｅヌクレオチドを組み込むことにより、ヌクレアーゼによる分解を妨げ、加水分解に対する安定性を高める。オリゴヌクレオチドに２’－ＯＭｅ修飾を組み込むことにより、一般に、添加するごとにＲＮＡ－ＲＮＡ二重鎖のＴｍが１～４℃上昇する。
２’－ＭＯＥ基の導入は、一般に、得られたオリゴヌクレオチドのＴｍを約１．１℃上昇させ、ヌクレアーゼによる分解に対する耐性を向上させる。さらに、２’－ＭＯＥオリゴは、標的ｍＲＮＡ鎖のＲＮａｓｅ Ｈに媒介される分解を維持するために、ギャップマー化合物において使用されることが多い。
本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、オリゴヌクレオシド連結のうちの１つまたは複数がホスフェート連結であるリン酸骨格を含み得る。本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチド骨格を含んでもよく、ヌクレオチド配列のヌクレオシド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、アミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される。本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの一部の実施形態では、ヌクレオチド配列の１つ、２つ、３つ、またはそれより多いヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、ヌクレオチド配列のすべてのヌクレオシド間連結がホスホロチオエート連結である。よって、一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。一部の実施形態では、配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれかのＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドのヌクレオチド連結のうちの１つまたは複数は、ホスホロチオエート連結である。例えば、本明細書に記載のＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、またはそれより多いホスホロチオエート連結を含み得る。一部の実施形態では、配列番号１～８のいずれかのＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡのヌクレオチド連結のすべては、ホスホロチオエート連結である。
自己免疫疾患および炎症性疾患
一部の実施形態では、自己免疫疾患または炎症性疾患を処置するための方法であって、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド（例えば、配列番号４０～４３を含むＡＳＯ、またはその薬学的に許容される塩）を投与することを含む方法が本明細書において提供される。本開示の一部の実施形態では、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの有効量は、炎症性疾患を処置するために、例えば、炎症性疾患に罹患している患者の細胞において炎症性サイトカイン産生を阻害するために、および／またはＩＬ－３４に媒介される炎症応答を低減もしくは阻害するために、それを必要とする患者に投与されてもよい。ある特定の実施形態では、処置を必要とする患者においてＩＬ－３４活性に関連する炎症性障害を処置する方法であって、本明細書で開示されるアンチセンス化合物を患者に投与することを含む方法が本明細書で開示されている。
「炎症性疾患」は、本明細書で使用される場合、以下に限定されないが、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎（例えば、歯周炎）、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん（例えば、結腸直腸がん、大腸炎に関連する結腸がん、散発性結腸直腸がん）、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、または自己免疫疾患を含むいくつかの急性および慢性の炎症性障害を指す。
関節リウマチ（ＲＡ）は、複数の関節に影響を及ぼす慢性の滑膜炎症を特徴とし、関節周囲の炎症、腫脹、および疼痛を引き起こす。ＲＡを処置せずに放置すると、関節の軟骨が損傷し、損傷した軟骨周囲の骨が侵食され、関節外病変を引き起こす可能性がある。ＲＡはまた、全身の他の組織にも影響を及ぼし、皮膚、口、肺、心臓、および目などの器官に問題を引き起こす可能性がある。一部の実施形態では、ＩＬ－３４レベルは、活動性ＲＡを有する患者および炎症性関節炎の実験モデルにおいて上昇する。
対象において、関節リウマチを処置する、その発症のリスクを低減する、またはその発病を遅延させる方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。
骨関節炎（ＯＡ）は変性関節疾患であり、滑膜の線維症と炎症を伴う関節の一部または全体の疾患によって特徴付けられる。ＯＡには、疼痛、痛覚過敏、およびこわばりの臨床症状が伴う。滑膜の病理学的変化はＯＡの進行を加速させる。
対象において骨関節炎または滑膜線維症を処置するか、それを発症するリスクを低下させるか、またはその発病を遅延させる方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。
一部の実施形態では、処置を必要とする患者においてループスに関連する皮膚病変を処置する方法であって、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物を投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ループスに関連する皮膚病変を処置することは、皮膚病変の数を低減すること、皮膚病変の形成速度を低減すること、および皮膚病変の重症度を低下させることから選択される少なくとも１つの効果を含む。ループスおよび／またはループス腎炎を処置する方法であって、ループスおよび／またはループス腎炎に罹患している患者において、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物を投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、ループスに関連する腎臓状態の進行を遅らせる方法が提供される。
対象においてＣＮＳ炎症性疾患を処置する、その発症のリスクを低減する、またはその発病を遅延させる方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。このようにして処置され得るＣＮＳ炎症性疾患としては、多発性硬化症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、およびパーキンソン病が挙げられる。
対象において自己免疫疾患を処置する、その発症のリスクを低減する、またはその発病を遅延させる方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド）またはその医薬組成物を投与することを含む方法も本明細書において提供される。本方法は、自己免疫疾患を有するかまたはそれを発症するリスクを有する対象を処置することを含む。このように処置され得る自己免疫疾患としては、関節リウマチ、骨関節炎、嚢炎、Ｉ型糖尿病、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、および特発性肺線維症が挙げられる。
炎症性腸疾患
一部の実施形態では、処置を必要とする患者において炎症性腸疾患を処置するための方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部、例えば配列番号４０～４３に対して相補的なポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、開示された化合物を投与することを含む方法が本明細書で開示されている。「炎症性腸疾患」は、本明細書で使用される場合、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定型大腸炎を含むいくつかの慢性炎症性疾患を指す。クローン病および潰瘍性大腸炎は炎症性腸疾患の最も一般的な２つの形態である。炎症性腸疾患は消化器系の自己免疫疾患である。クローン病は、回腸末端を含む消化管のどの部分にも局在し、消化管のすべての細胞型に影響を及ぼす場合がある。潰瘍性大腸炎は結腸および直腸に局在し、粘膜の細胞のみに影響を及ぼす。
炎症性クローン病は、過剰な消化管炎症を引き起こす異常な免疫反応を特徴とする。炎症性クローン病は多くの場合、小腸および／または大腸の一部、例えば回腸および結腸を含む腸壁を侵す。炎症性クローン病は、潰瘍と同様に厚く腫れた組織の発生も伴う。免疫系機能に関与する遺伝子（例えば、ＮＯＤ２、ＡＴＧ１６Ｌ１、ＩＬ２３Ｒ、およびＩＲＧＭ）の変異はクローン病と関連しており、適切なオートファジーに関連する遺伝子もクローン病と関連している。
線維狭窄型クローン病は、消化管の線維狭窄病変／線維性狭窄の発生を含むクローン病の一形態である。線維性狭窄は、結腸とは対照的に回腸のクローン病と関連することがより多い。炎症は一般に狭窄の発生に先行する。狭窄は以下：腹部痙攣、腹痛、腹部膨満感および腹部膨張感、食欲不振、疲労、吐き気、嘔吐、および便秘の症状のうちのいずれかを伴う可能性がある。クローン病患者の５０％より多くは線維狭窄を経験している。
線維性狭窄は、細胞表面のＩＬ－１７Ａ受容体発現、ならびにコラーゲンサブタイプＩ、ＩＩＩ、およびＶを含むコラーゲン産生の増加と関連している。線維性狭窄も瘻孔の併発と関連している。狭窄は、過剰な細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の沈着を伴う炎症性細胞と間葉系細胞との混在によって組織学的に特徴付けられる。腸の活性化した間葉系細胞は、フィブロネクチンおよびコラーゲン（例えば、ＩＩＩ型およびＩＶ型コラーゲン）を含むＥＣＭ成分を蓄積する。無秩序な平滑筋の増殖と過剰なＥＣＭの沈着は、狭窄した腸組織の機械的特性を改変し、線維性狭窄に伴う腸管の硬化と狭小化の増加をもたらすと考えられている。線維性狭窄が存在すると、腸壁の粘膜層、粘膜下層、および筋層のいずれにおいても腸組織異常が生じる。
一部の実施形態では、細胞は、腸細胞、例えば腸間質細胞、腸上皮細胞、腸幹細胞、分泌細胞、腸細胞、ゴブレット細胞、腸内分泌細胞、パネス細胞、通過増幅細胞、小葉細胞、カップ細胞、またはタフト細胞である。一部の実施形態では、細胞は、腸線維狭窄の一部を形成する。前述の実施形態では、対象は、炎症性疾患または線維症、例えば、炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病の処置を必要とする対象であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象の細胞における１つまたは複数のコラーゲン、例えば、Ｉ型コラーゲン、ＩＩ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、Ｖ型コラーゲン、ＶＩ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲン、ＶＩＩＩ型コラーゲン、ＩＸ型コラーゲン、Ｘ型コラーゲン、ＸＩ型コラーゲン、ＸＩＩ型コラーゲン、ＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＶ型コラーゲン、ＸＶ型コラーゲン、ＸＶＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩ型コラーゲン、ＸＶＩＩＩ型コラーゲン、ＸＩＸ型コラーゲン、ＸＸ型コラーゲン、ＸＸＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩ型コラーゲン、ＸＸＩＩＩ型コラーゲン、ＸＸＩＶ型コラーゲン、ＸＸＶ型コラーゲン、ＸＸＶＩ型コラーゲン、ＸＸＶＩＩ型コラーゲン、ＸＸＶＩＩＩ型コラーゲン、またはＸＸＩＸ型コラーゲンの発現を阻害するために使用され得る。例えば、本明細書に記載の実施形態では、コラーゲンは、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ１Ａ２ＩＩ、ＣＯＬ２Ａ１、ＣＯＬ３Ａ１、ＣＯＬ４Ａ１、ＣＯＬ４Ａ２、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ４Ａ４、ＣＯＬ４Ａ５、ＣＯＬ４Ａ６、ＣＯＬ５Ａ１、ＣＯＬ５Ａ２、ＣＯＬ５Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＯＬ６Ａ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＣＯＬ６Ａ５、ＣＯＬ７Ａ１、ＣＯＬ８Ａ１、ＣＯＬ８Ａ２、ＣＯＬ９Ａ１、ＣＯＬ９Ａ２、ＣＯＬ９Ａ３、ＣＯＬ１０Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ１、ＣＯＬ１１Ａ２、ＣＯＬ１２Ａ１、ＣＯＬ１３Ａ１、ＣＯＬ１４Ａ１、ＣＯＬ１５Ａ１、ＣＯＬ１６Ａ１、ＣＯＬ１７Ａ１、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬ１９Ａ１、ＣＯＬ２０Ａ１、ＣＯＬ２１Ａ１、ＣＯＬ２２Ａ１、ＣＯＬ２３Ａ１、ＣＯＬ２４Ａ１、ＣＯＬ２５Ａ１、ＥＭＩＤ２、ＣＯＬ２７Ａ１、ＣＯＬ２８Ａ１、またはＣＯＬ２９Ａ１である。特定の実施形態では、コラーゲンは、ＣＯＬ１Ａ１（コラーゲン１Ａ）、ＣＯＬ３Ａ１（コラーゲン３Ａ）、またはそれらの混合物である。
炎症性腸疾患では、環境因子と遺伝因子の両方が関与していると考えられているが、このような因子のアイデンティティは十分には定義されていない。例えば、習慣的な喫煙はクローン病の発症リスクを２倍にする環境的な構成要素としては、摂取した食物および薬品への曝露によって影響を受ける腸内細菌叢の変化が含まれ得る。
炎症性腸疾患は、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、激しい痙攣、筋肉の痙攣、体重減少、栄養不良、発熱、貧血、皮膚病変、関節痛、眼の炎症、肝障害、関節炎、壊疽性膿皮症、原発性硬化性胆管炎、および非甲状腺疾病症候群を含む症状を伴い、開示されたアンチセンス化合物を使用してこれらの症状を処置することは、実施形態では、例えば、成長障害にも罹患している可能性のある潰瘍性大腸炎に罹患している小児を処置することも企図される。
腸線維症
一部の実施形態では、処置を必要とする患者において腸線維症を処置するための方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部、例えば配列番号４０～４３に相補的なポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。腸線維症は、一般に、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）によって引き起こされる慢性炎症などの炎症に対する腸組織の反応から生じる。ＩＢＤでは、ＳＭＡＤ７レベルの増加が、ＴＧＦ－β経路の活性化およびＳｍａｄ２／３リン酸化を介して媒介される抗炎症性遺伝子発現を遮断する。ＴＧＦ－βシグナル伝達の増加に曝された筋線維芽細胞は、コラーゲン量の増加を生じる。クローン病の文脈では、持続的かつ慢性的な炎症が線維化プロセスを促進し、小腸および結腸の狭窄を含む狭窄の形成をもたらす。
腸管線維症は、造影超音波検査などのいくつかのイメージング技法のいずれによって同定することができる。例えば、Ｑｕａｉａら Ｔｈｅ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｂｏｗｅｌ ｗａｌｌ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ａｆｔｅｒ ｓｕｌｆｕｒ ｈｅｘａｆｌｕｏｒｉｄｅ－ｆｉｌｌｅｄ ｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｆｒｏｍ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｓｔｒｉｃｔｕｒｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ． ３８， １３２４～１３３２（２０１２）；Ｎｙｌｕｎｄら Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ－ｅｎｈａｎｃｅｄ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ． ３９， １１９７～１２０６（２０１３）；Ｓｔｉｄｈａｍら Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｉｍａｇｉｎｇ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １４１、８１９～８２６（２０１１）を参照されたい。磁化移動ＭＲＩなどのＭＲＩ技術を使用することもできる。例えば、Ｍａｃｃｉｏｎｉら Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｔ２－ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｗａｌｌ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｂｄｏｍ．Ｉｍａｇｉｎｇ ３７、９４４～９５７（２０１２）；ＡｄｌｅｒらＭａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｈｅｌｐｓ ｄｅｔｅｃｔ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ａｎ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｃｒｏｈｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ ２５９、１２７～１３５（２０１１）；Ｐａｚａｈｒら Ｍａｇｎｅｔｉｚａｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｂｏｗｅｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｎｉｔｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍａｔ．Ｐｈｙｓ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２６、２９１～３０１（２０１３）を参照されたい。
線維症
一部の実施形態では、処置を必要とする患者において線維症を処置するための方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部、例えば配列番号４０～４３に対して相補的なポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。ある特定の実施形態では、肝線維症、肺線維症、滑膜線維症、および／または腸線維症などの線維症を防止または処置する方法が本明細書で開示されており、本開示の一部を形成する。例えば、肝線維症を防止または処置する方法であって、本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。あるいは、腸線維症を防止または処置する方法であって、本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。あるいは、肺線維症を防止または処置する方法であって、本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。あるいは、滑膜線維症を防止または処置する方法であって、本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
上記方法を使用して処置される患者は、検出可能な線維症を有しても有さなくてもよい。一部の実施形態では、患者は、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後、例えば、１日後、２日後、１週間後、１カ月後もしくは６カ月後またはそれ以降に、患者に存在する線維症の量において、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％もしくはさらには５０％またはそれより多く低下する。ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なこのようなポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与は、例えば、少なくとも毎日であり得る。化合物は経口投与されてもよい。本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した結果として、患者における線維症の臨床症状の遅延は、本明細書で開示されるようなＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを投与されていない患者と比較して、少なくとも、例えば６カ月、１年、１８カ月もしくはさらには２年またはそれより長い場合がある。
必要とする患者は、肝硬変に進展した肝線維症を有する場合がある。肝線維症のリスクを有する患者には、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有する患者が含まれてもよい。ＮＡＳＨは、脂肪症および肝硬変を含む非アルコール性脂肪肝疾患のスペクトルに含まれる。ＮＡＳＨは、肥満、２型真性糖尿病、および脂質異常症を特徴とするメタボリックシンドロームの構成要素であり、最終的には肝細胞癌につながる可能性がある。
以下：アルファ１－アンチトリプシン欠損症、銅貯蔵病（例えば、ウィルソン病）、フルクトース血症、ガラクトース血症、糖原病（例えば、ＩＩＩ型、ＩＶ型、ＶＩ型、ＩＸ型およびＸ型）、鉄過剰症候群（例えば、ヘモクロマトーシス）、脂質異常症（例えば、ゴーシェ病）、ペルオキシソーム障害（例えば、ゼルウィガー症候群）、およびチロシン血症などの特定の貯蔵病および先天性代謝異常、細菌感染症（ブルセラ症など）、寄生虫感染症（エキノコックス症など）、ＮＡＳＨ、ウイルス感染症（例えば、慢性Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎を含むＢ型肝炎またはＣ型肝炎）、Ｂｕｄｄ－Ｃｈｉａｒｉ症候群、心不全、肝静脈閉塞性疾患、および門脈血栓症のうちの少なくとも１つの処置などの、肝線維症と関連する障害を処置する方法も提供される。先天性肝線維症を処置する方法も企図される。組成物は経口投与されてもよい。
薬物および／またはアルコールの乱用は、肝線維症の症例に関与している。薬物および／またはアルコールの乱用の既往歴のある患者において肝線維症を処置する方法も本明細書で企図される。例えば、アルコール、アミオダロン、クロルプロマジン、イソニアジド、メトトレキサート、メチルドパ、オキシフェニサチンおよびトルブタミドのうちの少なくとも１つを乱用した既往歴のある患者。
腸管線維症のリスクを有する患者には、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、またはクローン病を有する患者が含まれ得る。リスクを有する患者には、クローン病または大腸炎の診断時に幼い患者、大腸疾患が広範囲および／または重度である患者、原発性硬化性胆管炎が存在する患者、および／またはがんの家族歴を有する患者も含まれ得る。
潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、またはクローン病のうちの少なくとも１つの処置などの、腸線維症に関連する障害を処置する方法も提供される。
腎線維症、心臓線維症、心内膜線維症、特発性肺線維症、滑膜線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎性全身性線維症を防止または処置する方法であって、それを必要とする患者に、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、例えば、本明細書で開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬調製物を投与することを含む方法が企図される。
例えばＩＬ－３４ ＡＳＯを含む、本発明のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、単独で使用されても、または互いに組み合わせて使用されてもよく、それにより、本発明のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な少なくとも２つのポリヌクレオチドは、単一の組成物において、または治療レジメンの一部として一緒に使用される。本発明のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドは、薬物および／またはアルコールの乱用、腎線維症、心臓線維症、心内膜線維症、特発性肺線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、または腎性全身性線維症、薬物および／またはアルコールの乱用を処置するために、他の薬物と組み合わせて使用されてもよい。
がん
一部の実施形態では、処置を必要とする患者においてがんを処置するための方法であって、開示されたポリヌクレオチド（例えば、ＩＬ－３４またはその一部、例えば配列番号４０～４３に対して相補的なポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩）またはその医薬組成物を投与することを含む方法が本明細書において提供される。一部の実施形態では、がんは、原発性がんまたは転移性がんであり得る。一部の実施形態では、がんは、異常なレベルでＩＬ－３４を発現する細胞を含む任意のがんである。一部の実施形態では、がんは、変化したＩＬ－３４発現、例えば、上昇したＩＬ－３４発現に関連する任意のがんである。
処置および評価
本明細書に記載されている「患者」または「対象」は、炎症性疾患および／または線維性疾患のリスクを有するか、それに罹患しているかまたはそうであると診断された任意の動物、例えば以下に限定されないが、哺乳動物、霊長類、およびヒトを指す。ある特定の実施形態では、患者は、例えば、ネコ、イヌ、またはウマなどの非ヒト哺乳動物であってもよい。患者は、炎症性疾患および／または線維性疾患を発症するリスクが高いと診断された個体、炎症性疾患および／または線維性疾患と診断されたもの、炎症性疾患および／または線維性疾患に以前に罹患したもの、あるいは炎症性疾患および／または線維性疾患の症状もしくは徴候、例えばＩＬ－３４発現シグナルについて評価された個体であってもよい。
「必要とする患者」は、本明細書で使用される場合、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患の症状もしくは徴候のいずれかに罹患している患者、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患の症状もしくは徴候のいずれかに罹患する可能性のある患者、または炎症性疾患および／もしくは線維性疾患を処置するための本開示の方法から利益を得る可能性のある任意の患者を指す。必要とする患者には、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患を発症するリスクを有すると診断された患者、過去に炎症性疾患および／もしくは線維性疾患に罹患したことがある患者、または以前に炎症性疾患および／もしくは線維性疾患の処置を受けたことのある患者が含まれ得る。特に関連するのは、ＩＬ－３４の発現または活性のレベルの上昇に関連する炎症性疾患および／または線維性疾患に罹患している個体である。
本明細書で使用する「処置する」、「処置」、「処置すること」などの用語は、一般に、所望の薬理学的および／または生理学的な効果を得ることを意味する。その効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部分的に防止するという点では予防的であり得、ならびに／または疾患および／もしくは疾患に起因する有害作用を部分的にもしくは完全に治癒するという点では治療的であり得る。「処置」という用語は、本明細書で使用される場合、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の処置を網羅し、以下：（ａ）疾患の素因を有し得るが、まだ疾患であると診断されていない対象において疾患が発生するのを防止すること、（ｂ）疾患を阻害すること、すなわち疾患の重症度もしくは範囲が増大するのを防止すること、（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち疾患の部分的もしくは完全な軽快をもたらすこと、または（ｄ）疾患の再発を防止すること、すなわち疾患の症状の処置もしくは疾患の処置が以前に成功した後に疾患が活動状態に戻るのを防止することを含む。
「有効量」または「薬学的有効量」は、本明細書で使用される場合、患者に投与した場合に、ある状態を少なくとも部分的に処置するのに十分な薬剤の量を指す。治療有効量は、状態の重症度、成分の投与経路、および処置される患者の年齢、体重などに依存して変化する。したがって、開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの有効量は、薬剤の投与により、対象において炎症性疾患および／もしくは線維性疾患が生じるのが防止されるか、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患の進行が防止されるか（例えば、直腸出血、貧血、または胃腸炎などの炎症性腸疾患の症状の発病または重症度の増大が防止されるか）、または炎症性疾患および／もしくは線維性疾患の一部もしくはすべての関連症状を緩和もしくは完全に軽快させる、例えば、疾患が退縮するように、患者において炎症性疾患および／または線維性疾患を処置するのに必要なＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの量である。
処置の有効性は、炎症性疾患および／または線維性疾患に関連する肉眼的症状の評価、組織学的分析、生化学的アッセイ、例えば磁気共鳴画像法などのイメージング法、または他の公知の方法によって評価することができる。例えば、処置の有効性は、開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを炎症性疾患に罹患している患者に投与した後の、腹痛、嘔吐、下痢、直腸出血、痙攣、筋肉の痙攣、体重減少、栄養不良、発熱、貧血または炎症性疾患に関連する肉眼的病態の他の態様の変化などの、疾患の肉眼的症状を分析することによって評価されてもよい。
治療の有効性は、例えば、組織生検（例えば、消化管組織生検）を得て、肉眼的な組織または細胞の形態または染色特性を評価することによって、組織または細胞レベルで評価されてもよい。タンパク質またはＲＮＡの発現を調査する生化学的アッセイも、処置の有効性を評価するために使用されてもよい。例えば、免疫細胞化学的方法、免疫組織化学的方法、ウェスタンブロット法、もしくはノーザンブロット法、または定量的もしくは半定量的ポリメラーゼ連鎖反応などのＲＮＡレベルを評価するのに有用な方法によって、解離細胞または非解離組織におけるＩＬ－３４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＴＮＦ－アルファ、または炎症性疾患および／もしくは線維性疾患、炎症性サイトカイン産生、もしくはＩＬ－３４に媒介される炎症性応答を示す別のタンパク質もしくは遺伝子産物のレベルを評価することができる。また、糞便、血漿、または血清中に見出だされる有用なバイオマーカーの存在または発現レベルを評価して、疾患状態および処置の有効性を評価することもできる。
治療の有効性を評価する際には、有効な評価を確実にするために好適な対照が選択され得る。例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与後に炎症性疾患および／または線維性疾患を有する患者において評価された症状を、治療前の同じ患者における、または処置の経過におけるより早い時点における、または炎症性疾患および／もしくは線維性疾患と診断されていない別の患者におけるそれらの症状と比較することができる。あるいは、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後の消化管組織の生化学的または組織学的分析の結果を、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患を有すると診断されていない同じ患者もしくは個体またはＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチドもしくはその一部を投与する前の同じ患者に由来する消化管組織の結果と比較することができる。さらに、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを投与した後の血液、血清、細胞、または糞便試料を、炎症性疾患および／もしくは線維性疾患を有すると診断されていない個体、またはＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチド、もしくはその一部を投与する前の同じ患者に由来する同等の試料と比較することができる。
ＩＬ－３４阻害の検証は、ＩＬ－３４発現レベルまたは活性の直接的または間接的評価によって決定され得る。例えば、ＩＬ－３４タンパク質またはＲＮＡ発現を測定する生化学的アッセイは、全体的なＩＬ－３４阻害を評価するために使用され得る。例えば、全体的なＩＬ－３４レベルを評価するために、ウェスタンブロットによって消化管組織中のＩＬ－３４タンパク質レベルを測定してもよい。また、ノーザンブロットまたは定量的ポリメラーゼ連鎖反応によってＩＬ－３４ ｍＲＮＡレベルを測定して、全体的なＩＬ－３４阻害を決定してもよい。また、免疫細胞化学的方法または免疫組織化学的方法により、解離細胞、非解離組織、血液、血清、または糞便中のＩＬ－３４タンパク質レベルまたはＩＬ－３４シグナル伝達活性を示す別のタンパク質のレベルを評価してもよい。
ＩＬ－３４阻害はまた、マクロファージもしくは単球の生成もしくは増殖などのパラメーターを測定することによって、またはＭＡＰキナーゼリン酸化およびＩＬ－３４受容体－マクロファージコロニー刺激因子受容体（ＭＣＳＦＲ－１、Ｍ－ＣＳＦＲ－１、Ｍ－ＣＳＦＲ１、およびＣＳＦ１Ｒとしても知られている）のシグナル伝達活性化の他の指標を含む、ＩＬ－３４活性の変化と相関する他のパラメーターの変化を測定することによって、間接的に評価されてもよい。例えば、細胞におけるＩＬ－３４活性の指標として、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置された患者の細胞における活性ＭＡＰＫ１またはＭＡＰＫ３リン酸化のレベルを測定してもよい。また、ＩＬ－３４阻害の有効性を評価するために、血漿、血液、糞便または組織中に見出される有用なバイオマーカーの存在または発現レベルを評価してもよい。
本明細書で開示される治療方法には、炎症性サイトカイン産生を阻害する方法が含まれる。「炎症性サイトカイン産生」とは、炎症性サイトカイン応答を開始および／または促進するサイトカインの発現をいう。炎症性サイトカイン応答」とは、顆粒球の動員、リンパ球の動員、全身性炎症（特に、消化管またはその一部もしくは部分の）、発熱、組織破壊、ショック、および／または死によって特徴付けられ得る免疫応答をいう。炎症性サイトカイン応答は、個々のサイトカインがそれらの同族細胞表面受容体に結合すること（例えば、ＩＬ－３４がＣＳＦ１Ｒに結合すること）、およびそれに続いた、細胞機能および遺伝子発現を変化させる細胞内シグナル伝達のカスケードによって特徴付けられ得る。炎症性サイトカインとしては、以下に限定されないが、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－３４、およびＴＮＦ－アルファが挙げられる。炎症性サイトカインの発現は、例えば、マクロファージ、単球、前膜単核球、または消化管の他の細胞もしくは免疫系の細胞で起こり得る。炎症性サイトカイン産生を阻害する方法には、炎症性疾患に罹患している患者において、一部またはすべての炎症性サイトカインの発現レベルを低下させる方法が含まれる。炎症性サイトカイン産生を阻害する方法には、炎症性疾患に罹患している患者の細胞における一部またはすべての炎症性サイトカインの発現レベルを低下させる方法も含まれる。
炎症性サイトカイン産生を阻害するための本開示の方法には、ＩＬ－３４に媒介される炎症性応答を低減または阻害する方法が含まれる。「ＩＬ－３４に媒介される炎症応答」は、本明細書で使用される場合、ＩＬ－３４発現またはＩＬ－３４シグナル伝達活性によって開始されるか、容易にされるか、または促進される炎症応答をいう。ＩＬ－３４に媒介される炎症応答は、以下に限定されないが、ＩＬ－３４、ＩＬ－６、ＩＬ－８、またはＴＮＦ－アルファを含む炎症性サイトカインの発現、および炎症性サイトカインシグナル伝達の活性化をもたらし得る。さらに、ＩＬ－３４に媒介される炎症応答は、顆粒球の動員、リンパ球の動員、全身性炎症（特に、消化管またはその一部または部分）、発熱、組織破壊、ショック、および／または死によって特徴付けられ得る。ＩＬ－３４に媒介される炎症応答は、ＩＬ－３４シグナル伝達の活性化、例えばＩＬ－３４のＣＳＦ１Ｒへの結合および下流のＭＡＰキナーゼのリン酸化によっても特徴付けられ得る。ＩＬ－３４に媒介される炎症応答の低減または阻害とは、ＩＬ－３４に媒介される炎症応答に関連する細胞性および全身性の変化のいずれかまたはすべてを軽減することを指す。例えば、炎症性サイトカインの産生、免疫細胞の動員、または組織の炎症の低減は、ＩＬ－３４に媒介される炎症応答の低減または阻害を示すことになる。
本開示は、炎症性疾患および／または線維性疾患に罹患している患者の細胞においてＩＬ－３４を阻害する方法も提供する。ＩＬ－３４は、消化管、免疫系、および血液の細胞を含む、ＩＬ－３４の発現または活性が生じる任意の細胞において阻害され得る。消化管の細胞（腸壁、胃、十二指腸、空腸、大腸、小腸、回腸、結腸、直腸および肛門管の細胞を含む）には、柱状上皮細胞、腸間質細胞、粘膜上皮細胞、酵素原細胞、頸部粘液細胞、壁側細胞、ガストリン細胞、ゴブレット細胞、パネス細胞、オリゴ粘液細胞、および絨毛吸収細胞が含まれる。免疫系の細胞としては、白血球、食細胞（例えば、マクロファージ、好中球、および樹状細胞）、単球、肥満細胞、好酸球、好塩基球、ナチュラルキラー細胞、自然細胞、リンパ球、Ｂ細胞、およびＴ細胞が挙げられる。血液細胞としては、赤血球（ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ））および白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）（白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）、単球、および血小板）が挙げられる。
医薬組成物および投与経路
一部の実施形態では、本明細書で開示されたＩＬ－３４に対して相補的なポリヌクレオチド、もしくはその一部、または薬学的に許容される塩、および／または薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が本明細書において提供される。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）である。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯは、ギャップマーＡＳＯである。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯギャップマーは、１つまたは複数の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－３４ ＡＳＯの配列は、以下：
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
・５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）［ここでＣｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］
のうちの１つから選択される。
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、例えば、炎症性疾患および／または線維性疾患を処置するために、哺乳動物、例えばヒトに投与される、薬学的に許容される賦形剤中に特定量の治療用化合物、例えば治療用化合物の治療有効量を含有する混合物を意味する。
一部の実施形態では、開示された医薬組成物は、炎症性疾患（例えば、関節リウマチまたは骨関節炎）を処置または防止するのに有用である。一部の実施形態では、開示された医薬組成物は、線維性疾患を処置または防止するのに有用である。一部の実施形態では、開示された医薬組成物は、がんを処置または防止するのに有用である。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される賦形剤」は、対象への活性剤の投与および／または対象による吸収を補助し、患者に重大な有害毒性学的影響を引き起こすことなく本発明の組成物に含まれ得る物質を指す。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、水、ＮａＣｌ、リン酸緩衝生理食塩水などの通常の生理食塩水、エマルション（例えば、油／水または水／油エマルションなど）、乳酸化リンゲル、通常のスクロース、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、甘味剤、香料、塩溶液（リンゲル液など）、アルコール、油、ゼラチン、乳糖、アミロースまたはデンプンなどの炭水化物、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、および着色料などが挙げられる。このような調製物は、滅菌し、所望により、本発明のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドと劇的に反応しない補助剤、例えば滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色剤、および／または芳香族物質などと混合することができる。賦形剤の例については、Ｍａｒｔｉｎ， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５）を参照されたい。
一実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻的、経皮的、または十二指腸内を含む１つまたはいくつかの経路によって投与され得る。非経口的という用語は、本明細書で使用される場合、皮下注射、膵臓内投与、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内注射または注入技法を含む。一部の実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、関節内に投与される。一部の実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、直腸内に投与される。一部の実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、皮下投与される。一部の実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、経口投与される。一部の実施形態では、開示されたポリヌクレオチドまたはその医薬組成物は、非経口投与により、消化管系、または消化管系の特定の領域（例えば、回腸、結腸、または直腸）に直接投与され得る。
本明細書で開示されたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、を含む医薬組成物は、単位剤形で提示することができ、任意の好適な方法によって調製することができる。医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化されるべきである。有用な製剤は、医薬技術分野で周知の方法によって調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０）を参照されたい。
例えば、医薬製剤は無菌である。滅菌は、例えば、無菌の濾過膜を通した濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、フィルター滅菌は、凍結乾燥および復元の前または後に行うことができる。
非経口投与
本開示の医薬組成物は、非経口投与用に製剤化することができ、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、病変内、または腹腔内経路を介する注射のために製剤化される。水性組成物、例えばＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチドを含有する水性医薬組成物の調製は、本開示に照らして当業者に公知であろう。典型的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液として、注射剤として調製され得、注射前に液体を添加する際に溶液または懸濁液を調製するために使用するのに好適な固体形態もまた調製され得、および調製物はまた、乳化され得る。
注射用に好適な医薬形態としては、無菌の水溶液または分散液、ゴマ油、ラッカセイ油または水性プロピレングリコールを含む製剤、および無菌の注射用溶液または分散液を即座に調製するための無菌の粉末剤が挙げられる。いずれの場合も、その形態は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性がなければならない。製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されていなければならない。
遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と好適に混合された水中で調製することができる。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中、ならびに油中で調製することもできる。さらに、無菌の固定油を溶媒または懸濁媒体として用いてもよい。この目的のためには、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意のブランドの固定油を採用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の調製に使用することができる。無菌の注射剤調製物はまた、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射剤溶液、懸濁液、またはエマルションであってもよい。採用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および等張塩化ナトリウム溶液がある。一実施形態では、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチドは、１％（ｗ／ｖ）のカルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．１％（ｖ／ｖ）のＴＷＥＥＮ（商標）８０を含む担体または賦形剤液に懸濁されてもよい。通常の保存および使用条件下では、これらの調製物は微生物の増殖を防ぐための保存剤を含有する。
注射用調製物、例えば無菌の注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、公知技術に従って製剤化することができる。一般に、分散液は、基本分散媒および上に列挙したものから必要とされる他の成分を含有する無菌のビヒクル中に、様々な滅菌有効成分を組み込むことによって調製される。本開示の無菌の注射用溶液は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを、適切な溶媒の必要量に、必要に応じて上記に列挙された種々の他の成分とともに組み込み、次いで濾過滅菌することによって調製され得る。無菌の注射用溶液の調製のための無菌の粉末剤の場合には、好ましい調製方法は、その予め滅菌濾過した溶液から、有効成分と任意のさらなる所望の成分との粉末を生じる、真空乾燥および凍結乾燥技法である。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって滅菌することができる。
筋肉内注射のための、より多くの、または高濃度の溶液の調製も企図される。この点で、溶媒としてＤＭＳＯを使用することは、極めて迅速な浸透をもたらし、高濃度の開示されたＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを小領域に送達するので好ましい。
このような溶液に使用するのに好適な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどが挙げられる。好適な緩衝剤としては、ホウ酸、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウムおよびホウ酸カリウム、１０炭酸ナトリウムおよび１０炭酸カリウム（ｓｏｄｉｕｍ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ １０ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、酢酸ナトリウム、二リン酸ナトリウムなどが挙げられ、ｐＨを約ｐＨ６～ｐＨ８間、例えば約ｐＨ７～ｐＨ７．５の間に維持するのに十分な量である。好適な等張化剤は、デキストラン４０、デキストラン７０、デキストロース、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどであり、溶液の塩化ナトリウム当量が０．９プラスマイナス０．２％の範囲になるようにする。好適な酸化防止剤および安定剤としては、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ亜硫酸ナトリウム、チオ尿素などが挙げられる。好適な湿潤剤および清澄剤としては、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２およびタイロキサポールが挙げられる。好適な増粘剤としては、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ペトロラタム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどが挙げられる。
経口投与
一部の実施形態では、本明細書で企図されるのは、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチドの経口送達に好適な組成物、例えば腸溶性コーティング、例えば胃耐性コーティングを含む錠剤であり、組成物は、ポリヌクレオチドを、例えば、患者の消化管に送達し得る。例えば、このような投与は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドを、患者の消化管の罹患部分に直接、実質的に局所的に適用する、局所的効果をもたらし得る。このような投与は、一部の実施形態では、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの望ましくない全身吸収を実質的に回避し得る。
例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド、および薬学的に許容される賦形剤を含む顆粒（例えば、顆粒から少なくとも部分的に形成されている）を含む、経口投与のための錠剤が提供される。このような錠剤は、腸溶性コーティングでコーティングされていてもよい。企図される錠剤は、充填剤、結合剤、崩壊剤、および／または滑沢剤などの薬学的に許容される賦形剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、ウィンターグリーン、オレンジ、キシリトール、ソルビトール、フルクトース、およびマルトデキストリンなどの香料、ならびに着香剤、保存剤、および／または抗酸化剤を含み得る。
一部の実施形態では、企図される医薬製剤は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、例えば配列番号１～２３または配列番号４０～４３のいずれか１つのヌクレオチド配列を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド、および薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される充填剤を含む粒内相を含む。例えば、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、および充填剤は、場合によって他の賦形剤と一緒にブレンドされ、顆粒に形成され得る。一部の実施形態では、粒内相は、湿式造粒を使用して形成することができ、例えば、液体（例えば、水）が、ブレンドされたＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、および充填剤に添加され、次いで、その組合せが乾燥され、粉砕され、および／または篩分けされて、顆粒が生じる。当業者であれば、粒内相を達成するために他のプロセスが使用され得ることを理解するであろう。
一部の実施形態では、企図される製剤は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含み得る粒外相を含み、粒内相とブレンドされて開示された製剤を形成し得る。
開示された製剤は、充填剤を含む粒内相を含む場合がある。例示的な充填剤としては、以下に限定されないが、セルロース、ゼラチン、リン酸カルシウム、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、ソルビトール、微結晶セルロース、ペクチン、ポリアクリル酸塩、デキストロース、酢酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、部分的に予めゼラチン化されたデンプン、炭酸カルシウム、およびそれらの組合せを含む他のものが挙げられる。
一部の実施形態では、開示された製剤は、一般に医薬製剤の成分を一緒に保持するように機能し得る結合剤を含む粒内相および／または粒外相を含み得る。本開示の例示的な結合剤としては、以下に限定されないが、デンプン、糖、セルロースまたはヒドロキシプロピルセルロースなどの改変されたセルロース、ラクトース、前ゼラチン化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、糖アルコールおよびそれらの組合せを含む他のものが挙げられる。
企図される製剤、例えば、粒内相および／または粒外相を含む製剤は、デンプン、以下に限定されないが、セルロース、架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルギン酸塩、トウモロコシデンプン、クロスメロースナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、アカシア、およびそれらの組合せを含む他のものなどの崩壊剤を含み得る。例えば、粒内相および／または粒外相は、崩壊剤を含んでもよい。
一部の実施形態では、企図される製剤は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、および以下：マンニトール、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびデンプングリコール酸ナトリウムまたはそれらの組合せ、ならびに微結晶性セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムまたはそれらの混合物のうちの１つまたは複数を含む粒外相から選択される賦形剤を含む粒内相を含む。
一部の実施形態では、企図される製剤は、滑沢剤を含んでもよく、例えば、粒外相が滑沢剤を含んでもよい。滑沢剤としては、以下に限定されないが、タルク、シリカ、脂肪、ステアリン、ステアリン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、コロイド状二酸化ケイ素、金属ステアリン酸塩、水素化植物油、トウモロコシデンプン、安息香酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、酢酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、タルク、およびステアリン酸が挙げられる。
一部の実施形態では、医薬製剤は腸溶性コーティングを含む。一般に、腸溶性コーティングは、薬物が消化官に沿って吸収される位置を制御する経口薬品のバリアを作製する。腸溶性コーティングは、ｐＨに応じて異なる速度で崩壊するポリマーを含み得る。腸溶性コーティング剤としては、例えば、セルロースアセテートフタレート、メチルアクリレート－メタクリル酸コポリマー、セルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート－メタクリル酸コポリマー、エチルアクリレート－メタクリル酸コポリマー、メタクリル酸コポリマーＣ型、ポリビニルアセテートフタレート、およびセルロースアセテートフタレートなどが挙げられ得る。
例示的な腸溶性コーティングには、Ｏｐａｄｒｙ（登録商標）ＡＭＢ、Ａｃｒｙｌ－ＥＺＥ（登録商標）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）グレードが含まれる。一部の実施形態では、腸溶性コーティングは、想定される錠剤の約５重量％～約１０重量％、約５重量％～約２０重量％、８重量％～１５重量％、約８重量％～約２０重量％、約１０重量％～約２０重量％、または約１２重量％～約２０重量％、または約１８重量％を構成することができる。例えば、腸溶性コーティングは、エチルアクリレート－メタクリル酸コポリマーを含むことができる。
例えば、企図される実施形態では、約０．５重量％～約７０重量％、例えば約０．５重量％～約１０重量％、または約１重量％～約２０重量％の、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩を含むか、または本質的にそれらからなる錠剤が提供される。このような錠剤は、例えば、約０．５重量％～約６０重量％のマンニトール、例えば、約３０重量％～約５０重量％のマンニトール、例えば、約４０重量％のマンニトール、および／または約２０重量％～約４０重量％の微結晶セルロース、または約１０重量％～約３０重量％の微結晶セルロースを含み得る。例えば、開示される錠剤は、約３０％～約６０％、例えば約４５重量％～約６５重量％、または別法として約５重量％～約１０重量％のＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、約３０重量％～約５０重量％、または別法として約５重量％～約１５重量％のマンニトール、約５重量％～約１５重量％の微結晶セルロース、約０％～約４％、または約１％～約７％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、および約０％～約４％、例えば約２重量％～約４重量％のデンプングリコール酸ナトリウムを含む粒内相を含み得る。
別の企図される実施形態では、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの経口投与用の医薬錠剤製剤は、粒内相を含み、粒内相は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩（ナトリウム塩など）、および薬学的に許容される充填剤を含み、崩壊剤などの薬学的に許容される賦形剤を含み得る粒外相を含んでもよい。粒外相は、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、およびそれらの混合物から選択される成分を含み得る。医薬組成物はまた、錠剤の約１２重量％～２０重量％の腸溶性コーティングを含んでもよい。例えば、経口使用用の薬学的に許容される錠剤は、約０．５重量％～１０重量％のＩＬ－３４またはその一部に相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩、約３０重量％～５０重量％のマンニトール、約１０重量％～３０重量％の微結晶セルロース、およびエチルアクリレート－メタクリル酸コポリマーを含む腸溶性コーティングを含んでもよい。
別の例では、経口使用用の薬学的に許容される錠剤は、約５～約１０重量％のＩＬ－３４またはその一部に相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩、約４０重量％のマンニトール、約８重量％の微結晶セルロース、約５重量％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、および約２重量％のデンプングリコール酸ナトリウムを含む粒内相、約１７重量％の微結晶セルロース、約２重量％のデンプングリコール酸ナトリウム、約０．４重量％のステアリン酸マグネシウム、およびエチルアクリレート－メタクリル酸コポリマーを含む錠剤上の腸溶性コーティングを含む粒外相を含んでもよい。
一部の実施形態では、医薬組成物は、約１３重量％または約１５重量％、約１６重量％、約１７重量％または約１８重量％を占める腸溶性コーティング、例えば、ＡｃｙｒｌＥＺＥ（登録商標）（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１０／０５４８２６号を参照されたい）を含んでもよい。
コーティングが溶解し、有効成分が放出される速度が溶解速度である。一実施形態では、企図される錠剤は、例えば、ｐＨが７．２のリン酸緩衝液中、１００ｒｐｍおよび３７℃でＵＳＰ／ＥＰタイプ２装置（パドル）で試験した場合、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの約５０％～約１００％が、約１２０分～約２４０分後、例えば１８０分後に放出する溶解プロファイルを有し得る。別の実施形態では、企図される錠剤は、例えば、ｐＨが１．０の希釈ＨＣｌ中で、１００ｒｐｍおよび３７℃でＵＳＰ／ＥＰタイプ２装置（パドル）で試験した場合、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドが、１２０分後に実質的に放出されない溶解プロファイルを有し得る。企図される錠剤は、別の実施形態では、例えば、ｐＨが６．６のリン酸緩衝液中、１００ｒｐｍおよび３７℃でＵＳＰ／ＥＰタイプ２装置（パドル）で試験した場合、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドの約１０％～約３０％、または約５０％以下が、３０分後に放出する溶解プロファイルを有し得る。
企図される製剤、例えば錠剤は、一部の実施形態では、患者に経口投与された場合、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの最小血漿濃度を患者にもたらし得る。別の実施態様において、開示された製剤は、患者に経口投与された場合、患者の結腸または直腸、例えば患者の罹患部位または疾患部位に局所的に送達する。
一部の実施形態では、本明細書において提供される方法は、本明細書で開示される疾患および障害の処置を目的とする少なくとも１つの他の薬剤を投与することをさらに含んでもよい。一実施形態では、企図される他の薬剤は、同時投与されてもよい（例えば、順次または同時に）。
企図される薬剤には、グルココルチコイド、細胞賦活剤、抗体、イムノフィリンに作用する薬剤、インターフェロン、オピオイド、ＴＮＦ結合タンパク質、ミコフェノレート、および小型生物学的薬剤を含む免疫抑制剤が含まれる。例えば、企図される免疫抑制剤としては、以下に限定されないが、タクロリムス、シクロスポリン、ピメクロリムス、シロリムス、エベロリムス、ミコフェノール酸、フィンゴリモド、デキサメタゾン、フルダラビン、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、レフルノミド、テリフルノミド、アナキンラ、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン、ムロモナブ－ＣＤ３、アフツズマブ、リツキシマブ、テプリズマブ、エファリズマブ、ダクリズマブ、バシリキシマブ、アダリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブペゴル、ナタリズマブ、およびエタネルセプトが挙げられる。他の企図される薬剤としては、抗生物質、下痢止め、下剤、鎮痛剤、鉄サプリメント、およびカルシウムまたはビタミンＤもしくはＢ－１２のサプリメントが挙げられる。
投薬量と投与頻度
一部の実施形態では、処置を必要とする患者において線維症、例えば肺線維症、滑膜線維症、または腸線維症を処置する際に使用するための医薬組成物の例示的な投薬量であって、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンス組成物（例えば、配列番号４０～４３を含むＡＳＯ、またはその薬学的に許容される塩）を投与することを含む医薬組成物の例示的な投薬量が提供される。例示的な製剤には、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを約３５ｍｇ～約５００ｍｇ含むかまたは本質的にそれからなる剤形が含まれる。例えば、約３５ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１１０ｍｇ、１２０ｍｇ、１３０ｍｇ、１４０ｍｇ、１５０ｍｇ、１６０ｍｇ、１７０ｍｇ、１８０ｍｇ、１９０ｍｇ、２００ｍｇ、または２５０ｍｇのＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む製剤が、本明細書において企図される。一実施形態では、製剤は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを、約４０ｍｇ、８０ｍｇ、または１６０ｍｇ含んでもよい。一部の実施形態では、製剤は、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを少なくとも１００μｇ含んでもよい。例えば、製剤は、約０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、または２５ｍｇのＩＬ－３４またはその一部に対して相補的な開示されたポリヌクレオチド、例えばＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでもよい。投与される量は、処置される疾患または適応症のタイプおよび程度、患者の全体的な健康状態およびサイズ、ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチドのｉｎ ｖｉｖｏでの効力、医薬製剤、ならびに投与経路などの変数に依存する。初期投薬量は、所望の血中レベルまたは組織レベルを迅速に達成するために、上限レベルを超えて増加させることができる。あるいは、初期投薬量は至適投薬量より少なくすることができ、投薬量は処置の過程中で徐々に増加させてもよい。ヒトへの投薬量は、例えば、４０ｍｇ～１６０ｍｇまで実行するように設計された従来の第Ｉ相用量漸増試験において最適化することができる。投与頻度は、投与経路、投薬量および処置される疾患などの因子に依存して変化し得る。例示的な投与頻度は、１日に１回、１週間に１回および２週間に１回である。一部の実施形態では、投与は１日に１回、７日間である。
診断方法
本開示は、患者の１つまたは複数の生体試料におけるＩＬ－３４発現シグナルのレベルの検出に依存する、炎症性疾患および／または線維性疾患を有する患者を診断する方法も提供する。本明細書で使用される場合、「ＩＬ－３４発現シグナル」という用語は、ＩＬ－３４遺伝子発現、または遺伝子もしくは遺伝子産物活性の任意の指標を指し得る。ＩＬ－３４遺伝子産物には、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、ペプチドおよびタンパク質が含まれる。評価され得るＩＬ－３４遺伝子発現の指標としては、以下に限定されないが、ＩＬ－３４遺伝子またはクロマチン状態、遺伝子発現を調節する細胞成分とのＩＬ－３４遺伝子の相互作用、ＩＬ－３４遺伝子産物発現レベル（例えば、ＩＬ－３４ ＲＮＡ発現レベル、ＩＬ－３４タンパク質発現レベル）、またはＩＬ－３４ ＲＮＡもしくはタンパク質と転写、翻訳、もしくは翻訳後プロセシング機構との相互作用が挙げられる。ＩＬ－３４遺伝子産物活性の指標としては、以下に限定されないが、ＩＬ－３４シグナル伝達活性の評価（例えば、ＣＳＦ１Ｒ活性化またはＭＡＰＫ１／ＭＡＰＫ３リン酸化の評価）およびＩＬ－３４受容体結合の評価（例えば、ＣＳＦ１Ｒ結合）が挙げられる。
ＩＬ－３４発現シグナルの検出は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、またはｅｘ ｖｉｖｏの方法によって達成され得る。好ましい実施形態では、本開示の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで行われてもよい。検出する方法は、患者の血液、血清、糞便、組織、または細胞における検出を含んでもよい。検出は、全組織、組織摘出物、細胞培養物、解離細胞、細胞抽出物、または血液もしくは血清を含む体液におけるＩＬ－３４発現シグナルを測定することによって達成され得る。企図される検出方法には、ウェスタンブロット法、ＦＡＣＳ法、ＥＬＩＳＡ法、他の定量的結合アッセイ法、細胞もしくは組織増殖アッセイ法、ノーザンブロット法、定量的もしくは半定量的ポリメラーゼ連鎖反応法、医療イメージング法（例えば、ＭＲＩ）、または免疫染色法（例えば、免疫組織化学または免疫細胞化学）などのＩＬ－３４遺伝子産物発現レベルを測定するアッセイが含まれる。
例示的な実施形態のリスト
本発明は、以下の非限定的な例示的実施形態によってさらに説明される。
実施形態１．
ａ．５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、または
ｂ．５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）、
［ここで、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのシチジンは化学的に修飾されており、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（２’－ＭＯＥ）ヌクレオシドである］
によるヌクレオチド配列、
を含むポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態２．１０個以下のヌクレオシドが化学的に修飾されている、実施形態１に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態３．６個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む、実施形態１または２に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態４．８個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む、実施形態１または２に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態５．
ａ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
ｂ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
ｃ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
ｄ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）［ここでＣｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］
からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態６．ＩＬ－３４に対して相補的である、実施形態１～５のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態７．ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドである、実施形態１～６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態８．ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡである、実施形態１～７のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態９．ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、およびアミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される、実施形態１～８のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１０．ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結がホスホロチオエート連結である、実施形態９に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１１．ポリヌクレオチドのすべてのヌクレオシド間連結がホスホロチオエート連結である、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１２．２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１３．２０ヌクレオチド長、または２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５、もしくは３０～３５ヌクレオチド長である、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１４．２０、２５、または３０ヌクレオチド長以下である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１５．２０～２５ヌクレオチド長である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１６．２０ヌクレオチド長である、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態１７．（ａ）実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
実施形態１８．局所投与、非経口投与、経口投与、肺内投与、気管内投与、経鼻投与、経皮投与、または十二指腸内投与に適している、実施形態１７に記載の医薬組成物。
実施形態１９．処置を必要とする患者において炎症性疾患を処置する方法であって、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または実施形態１７～１８のいずれか１つに記載の医薬組成物の有効量を、処置を必要とする患者に投与することを含む方法。
実施形態２０．炎症性疾患がＩＬ－３４発現の変更に関連する、実施形態１９に記載の方法。
実施形態２１．炎症性疾患が、ＩＬ－３４発現の上昇に関連する、実施形態１９または２０に記載の方法。
実施形態２２．炎症性疾患が関節リウマチである、実施形態１９～２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３．炎症性疾患が骨関節炎である、実施形態１９～２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２４．患者の細胞において炎症性サイトカイン産生を阻害する、実施形態１９～２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２５．患者の細胞においてＩＬ－３４に媒介される炎症応答を低減または阻害する、実施形態１９～２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２６．患者の細胞においてＩＬ－３４に媒介されるマクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）シグナル伝達を低減または阻害する、実施形態１９～２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２７．細胞が腸細胞である、実施形態２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２８．細胞が腸間質細胞である、実施形態２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２９．細胞が腸線維狭窄の一部を形成する、実施形態２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０．炎症性疾患に罹患している患者において線維性狭窄を低減または除去する方法であって、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または実施形態１７～１８のいずれか１つに記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む方法。
実施形態３１．線維性狭窄が腸に位置する、実施形態２７に記載の方法。
実施形態３２．炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、大腸炎に関連する結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される、実施形態３０または３１に記載の方法。
実施形態３３．炎症性疾患が関節リウマチである、実施形態３２に記載の方法。
実施形態３４．炎症性疾患が骨関節炎である、実施形態３２に記載の方法。
実施形態３５．炎症性疾患が炎症性腸疾患である、実施形態３２に記載の方法。
実施形態３６．炎症性腸疾患が、クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される、実施形態３２に記載の方法。
実施形態３７．炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、実施形態３０に記載の方法。
実施態様３８．炎症性腸疾患が、線維狭窄性クローン病である、実施態様３０に記載の方法。
実施形態３９．線維症を防止または処置するための方法であって、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または実施形態１７～１８のいずれか１つに記載の医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
実施形態４０．線維症が腸線維症である、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１．線維症が肺線維症である、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４２．線維症が滑膜線維症である、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４３．線維症が、腎線維症、心筋線維症、心内膜線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎性全身性線維症からなる群から選択される、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４４．患者が関節リウマチに罹患している、実施形態３９～４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４５．患者が骨関節炎に罹患している、実施形態３９～４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６．患者がクローン病に罹患している、実施形態３９～４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４７．ポリヌクレオチドが、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻的、経皮的、または十二指腸内に投与される、実施形態１９～４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４８．ポリヌクレオチドが関節内に投与される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９．ポリヌクレオチドが直腸内に投与される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態５０．ポリヌクレオチドが経口的に投与される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態５１．炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩の使用。
実施形態５２．炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛結節性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、結腸炎関連結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、またはシェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される、実施形態５１に記載の使用。
実施形態５３．患者が関節リウマチに罹患している、実施形態５１～５２のいずれか１つに記載の使用。
実施形態５４．患者が骨関節炎に罹患している、実施形態５１～５２のいずれか１つに記載の使用。
実施形態５５．患者がクローン病に罹患している、実施形態５１～５２のいずれか１つに記載の使用。
実施形態５６．炎症性疾患が炎症性腸疾患である、実施形態５２に記載の使用。
実施形態５７．炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される、実施形態５６に記載の使用。
実施形態５８．炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、実施形態５７に記載の使用。
実施態様５９．炎症性腸疾患が、線維狭窄性クローン病である、実施態様５７に記載の使用。
実施形態６０．医薬として使用するための、実施形態１～１７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態６１．処置を必要とする患者における炎症性疾患を処置する際に使用するための、実施形態６０に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態６２．炎症性疾患が関節リウマチまたは骨関節炎である、実施形態６１に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態６３．炎症性疾患の処置において使用するための、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態６４．炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、結腸炎関連結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、またはシェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される、実施形態６３に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態６５．炎症性疾患が関節リウマチである、実施形態６４に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態６６．炎症性疾患が骨関節炎である、実施形態６４に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態６７．炎症性疾患が炎症性腸疾患である、実施形態６４に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態６８．炎症性腸疾患が、クローン病、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空腸炎、左側大腸炎、全大腸炎、回結腸炎、回腸炎、および不定性大腸炎からなる群から選択される、実施形態６７に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態６９．炎症性腸疾患が炎症性クローン病である、実施形態６８に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７０．炎症性腸疾患が線維狭窄性クローン病である、実施形態６８に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７１．線維症の処置において使用するための、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
実施形態７２．線維症が腸線維症である、実施形態７１に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７３．線維症が肺線維症である、実施形態７１に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７４．線維症が、滑膜線維症である、実施形態７１に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７５．線維症が、腎線維症、心筋線維症、心内膜線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎性全身性線維症からなる群から選択される、実施形態７１に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７６．関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻的、経皮的、または十二指腸内に投与される、実施形態６０～７５のいずれか１つに具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７７．関節内に投与される、実施形態７６に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７８．直腸投与される、実施形態７６に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態７９．経口投与される、実施形態７６に具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
実施形態８０．患者がヒトである、実施形態６０～７９のいずれか１つに具体化される使用のためのポリヌクレオチド。
本開示は、以下の実施例によってさらに例証される。実施例は、例示のみを目的として提供されるものであり、本開示の範囲または内容を何ら限定するものとして解釈されるべきではない。
３－１４－３および４－１２－４アンチセンスオリゴヌクレオチドのＩＬ－３４の設計および評価
マウスおよびヒトのＩＬ－３４ ｍＲＮＡ配列に対して相補的な配列番号４０－４３のＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドは、商業的製造業者によって設計および製造されている。
ＩＬ－３４発現のノックダウンを、ＨＴ－２９ヒト細胞株およびＲＡＷ ２６４．７マウス細胞株で評価する。ＨＴ－２９細胞（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡ）を、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ（すべてＬｏｎｚａ製）を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ ５Ａ（Ｌｏｎｚａ、Ｖｅｒｖｉｅｒｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持する。マウスＲＡＷ２６４．７マクロファージ（ＡＴＣＣ Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡ）を、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ、および１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡ）（すべてＬｏｎｚａ製）を含むダルベッコ改変イーグル培地（グルコース１ｇ／Ｌ）で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持する。マウス結腸癌細胞株ＭＣ－３８（ＡＢＭＧｏｏｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｎａｄａ）を、１０％のＦＢＳと１％のＰ／Ｓとを補充したＤＭＥＭ培地で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持する。
細胞は未処理のままか、またはＯｐｔｉ－ＭＥＭ培地およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）を使用し、製造者の使用説明書に従って、特異的ＩＬ－３４ ＡＳＯもしくはスクランブルＡＳＯをトランスフェクトされる。全ＲＮＡとタンパク質とを抽出する。
ノックダウンはＨＴ－２９細胞のリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）によって評価する。ＲＴ－ＰＣＲを以下のように実施する。一定量のＲＮＡ（０．５μｇ／試料）を相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に再転写する。次いで、１μｌのｃＤＮＡ／試料を次の以下のプロトコール：９５℃で１分間の変性、６０℃で３０秒間のアニーリング、続いて、７２℃で３０秒間の伸長を使用して増幅させる。以下のプライマー配列：ＩＬ－３４フォワード、５’－ＡＣＡＧＧＡＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＧＴＡＣ－３’（配列番号２９）、ＩＬ－３４リバース、５’－ＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＣＣＧ－３’（配列番号３０）、β－アクチンフォワード、５’－ＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣ－３’（配列番号３１）、およびβ－アクチンリバース、５’－ＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＴ－３’（配列番号３２）を使用する。ｍＲＮＡ発現は、β－アクチンｍＲＮＡ発現に対して計算する。
ＨＴ－２９細胞に、配列番号４０、４１、４２、もしくは４３のヒトＩＬ－３４ ＡＳＯ、またはスクランブル陰性対照オリゴヌクレオチド（ＳＲＣ ＡＳ；５’－ＡＡＣＡＣＧＴＣＴＡＴＡＣＧＣ－３’（配列番号３３））を２４時間トランスフェクトする。ＩＬ－３４転写物をＲＴ－ＰＣＲによって評価し、値はβ－アクチンに対して正規化する。
ノックダウンは、ＨＴ－２９細胞およびＲＡＷ ２６４．７細胞においてウェスタンブロッティングでも評価される。ウェスタンブロッティングを以下のように実施する。トランスフェクション後、細胞を、氷上で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭのＫＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、０．２ｍＭのＥＧＴＡを含有し、０．５％のＮｏｎｉｄｅｔ Ｐ４０に１ｍＭのジチオスレイトール、１０ｍｇ／ｍｌのアプロチニン、１０ｍｇ／ｍｌのロイペプチン、１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４、および１ｍＭのＮａＦを補充した緩衝液中で溶解させる。溶解物を、４℃、１２．０００ｘｇ、３０分間の遠心分離によって清澄化し、１０％のドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離する。ＩＬ－３４は、マウス抗ヒトＩＬ－３４抗体（最終希釈度１：１，０００、Ａｂｃａｍ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）をコンジュゲートさせた二次ＩｇＧモノクローナル抗体（最終希釈度１：２０，０００、Ｄａｋｏ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）と組み合わせて使用して検出する。ＨＲＰ反応は高感度強化化学発光キット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いて検出する。分析後、ブロットを剥離し、マウス抗ヒトβ－アクチン抗体（１：５，０００最終希釈、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でプローブし、続いてＨＲＰをコンジュゲートさせた二次ＩｇＧモノクローナル抗体（１：２０，０００最終希釈、Ｄａｋｏ）でプローブする。
ＩＬ－３４ ＡＳＯによるＩＬ－３４のノックダウンは、線維狭窄性クローン病およびがん関連線維芽細胞でさらに評価される。腸線維芽細胞は、腸結腸がんまたは線維狭窄性ＣＤ（ＦＳ ＣＤ）の外植片から単離する。線維芽細胞は新鮮なもの、または継代３～８の間のものを使用する。線維芽細胞は、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）を補充したＵｌｔｒａＧｌｕｔａｍｉｎｅを含むＤＭＥＭ高グルコース中で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持する。線維芽細胞はＴｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ溶液を使用して剥離し、ＩＬ－３４のノックダウンを評価する。
ＩＬ－３４ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドの設計および評価
本実施例では、ＨＴ－２９およびＡＧＳ消化管がん細胞株ならびに潰瘍性大腸炎（ＵＣ）に罹患した患者の炎症大腸組織から単離されたＬａｍｉｎａ Ｐｒｏｐｒｉａ Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ Ｃｅｌｌｓ（ＬＰＭＣ）におけるＩＬ－３４発現をノックダウンするための、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写物に対して相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の能力の評価について説明する。
ヒト、マウス、カニクイザル（および他の種）のＩＬ－３４ ｍＲＮＡ転写産物に対して相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計した。設計したＡＳＯは一本鎖のオリゴデオキシリボヌクレオチドであり、ＩＬ－３４ ｍＲＮＡの同じ配列を標的とし、完全なホスホロチオエート骨格を、５’および３’末端に２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）糖修飾を有するように修飾されている。
以下に記載するように、４つの異なるＡＳＯを評価した（配列番号１７、１９、４２および４３）。試験ＡＳＯの配列を表１に、Ｘ＝５－メチルシチジン、Ｃｘ＝２’－Ｏ－ＭＯＥシチジン、Ｔｘ：＝２’－Ｏ－ＭＯＥチミジン、Ｇｘ＝２’－Ｏ－ＭＯＥグアノシン、およびＡｘ＝２’－Ｏ－ＭＯＥアデノシンで示した。
結腸直腸がん細胞株ＨＴ－２９および胃がん細胞株ＡＧＳ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＵＳＡ）を、それぞれＭｃＣｏｙ’ｓ ５ＡおよびＲＰＭＩ １６４０培地（Ｌｏｎｚａ、Ｖｅｒｖｉｅｒｓ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）で培養し、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ（Ｌｏｎｚａ）を補充し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持した。
Ｄｉｎａｌｌｏら、Ｊ Ｃｒｏｈｎｓ Ｃｏｌｉｔｉｓ．２０１９年５月２７日；１３（６）：７７２～７８４に以前に記載されているように、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を有する患者の炎症結腸組織から採取した生検から、粘膜固有層単核細胞（ＬＰＭＣ）を単離した。ＬＰＭＣを、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓを補充したＲＰＭＩ１６４０に再懸濁させ、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ＣＯ２で維持した。ＩＬ－３４発現を下方調節するＩＬ－３４ ＡＳＯの能力を評価するために、ＨＴ－２９、ＡＧＳ、およびＵＣ患者由来のＬＰＭＣに、製造者の使用説明書に従って、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００試薬（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｉｌａｎ、Ｉｔａｌｙ）を使用して、試験ＩＬ－３４ ＡＳＯまたは関連するスクランブルアンチセンスオリゴヌクレオチドの対照（すべて２００ｎＭの濃度で使用）のいずれかを２４時間トランスフェクトした。最後に細胞を回収し、ＰｕｒｅＬｉｎｋ ｍＲＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＵＳＡ）を使用し、製造業者の使用説明書に従って全ＲＮＡを抽出した。一定量のＲＮＡを相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写し、以下のプロトコール：９５℃で１分間の変性、６０℃で３０秒間のアニーリング、続いて７２℃で３０秒間の伸長を使用してリアルタイムＰＣＲで増幅させた。プライマー配列は以下の通りであった。ＩＬ－３４：フォワード、５’－ＡＣＡＧＧＡＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＧＴＡＣ－３’（配列番号２９）、リバース、５’－ＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＣＣＧ－３’（配列番号３０）、β－アクチン：フォワード、５’－ＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣ－３’（配列番号３１）、リバース、５’－ＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＴ－３’（配列番号３２）。ＲＮＡ発現は、ΔΔＣｔアルゴリズムに基づいて、ハウスキーピングβ－アクチン遺伝子に対して計算した。
図１、図２、および図３は、ＣＴＲ＝スクランブルＡＳＯ、１＝配列番号１７、２＝配列番号１９、３＝配列番号４２、４＝配列番号４３で処理した条件における、ＨＴ－２９細胞、ＡＧＳ細胞、およびＬＰＭＣにおけるＩＬ－３４転写物の分析を示す。この結果は、４つのＩＬ－３４ ＡＳＯがすべて、対照と比較して、ＨＴ－２９細胞、ＡＧＳ細胞、およびＬＰＭＣにおいてＩＬ－３４ ＲＮＡ転写物を有意に低減させたことを示す。このデータは、４つのギャップマーＩＬ－３４ ＡＳＯが、ヒトのがん細胞および免疫細胞においてＩＬ－３４の発現を効率的に下方調節することが可能であり、関連する前臨床および臨床環境において有用であり得ることを示す。
ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＩＬ－３４発現のノックダウン
ＨＴ－２９細胞（ヒト結腸腺がん細胞株）、ＴＨＰ－１細胞（ヒト白血病単球細胞株）、ＲＡＷ ２６４．７細胞（マウスマクロファージ細胞株）、およびＭＣ－３８細胞（マウス結腸腺癌細胞株）において、ＩＬ－３４ ＡＳＯのＩＬ－３４発現をノックダウンする能力を評価する。
ＨＴ－２９細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３８、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＵＳＡ）を、ＭｃＣｏｙ’ｓ ５ＡおよびＲＰＭＩ １６４０培地（１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）を補充）で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、ＣＯ２で維持する。
ＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２０２）を、１０％のＦＢＳと１％のＰ／Ｓとを補充したＲＰＭＩ １６４０培地で成長させる。マクロファージ分化を誘導するために、細胞を１００ｎｇ／ｍＬのホルボール１２－ミリスチン酸１３－アセテート（ＰＭＡ）で２４時間処理し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ ＣＯ２で維持する。
ＲＡＷ ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－７１）を、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓ、および１％の非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（Ｌｏｎｚａ）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ ＣＯ２で維持する。
ＭＣ－３８細胞（ＡＢＭＧｏｏｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｎａｄａ）は、１０％のＦＢＳと１％のＰ／Ｓとを補充したＤＭＥＭ培地で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ ＣＯ２で維持する。
細胞は未処理のままか、またはリポ多糖（ＬＰＳ）、ペプチドグリカン（ＰＧＮ）、およびポリＩ：Ｃなどの特定の炎症促進性刺激の存在下もしくは非存在下で、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培地およびＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ３０００試薬を使用して、試験用ＩＬ－３４ ＡＳＯまたは対照のスクランブルＡＳＯをトランスフェクトされる。
次いで、細胞を回収し、全ＲＮＡを抽出して、以下のようにＲＴ－ｑＰＣＲによる分析を実施する。一定量のＲＮＡを相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）にレトロ転写する。次いで、１μＬのｃＤＮＡ／試料を以下のプロトコール：９５℃で１分間の変性、６０℃で３０秒間のアニーリング、次いで７２℃で３０秒間の伸長を使用して増幅させる。以下のプライマー配列：ＩＬ－３４フォワード、５’－ＡＣＡＧＧＡＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＧＴＡＣ－３’（配列番号２９）、ＩＬ－３４リバース、５’－ＡＣＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＴＡＣＣＧ－３’（配列番号３０）、β－アクチンフォワード、５’－ＡＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＣ－３’（配列番号３１）、およびβ－アクチンリバース、５’－ＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＡＣＧＣＡＧＧＡＴ－３’（配列番号３２）を使用する。ｍＲＮＡ発現は、ΔΔＣｔアルゴリズムに基づいて、ハウスキーピング遺伝子β－アクチンｍＲＮＡ発現に対して計算される。
ＩＬ－３４タンパク質のノックダウンを、以下のように実施されるウェスタンブロッティングによって評価する。トランスフェクション後、細胞を、氷上で、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）、１０ｍＭのＫＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、０．２ｍＭのＥＧＴＡならびに０．１ｍＭのジチオスレイトール、１０ｍｇ／ｍｌのアプロチニン、１０ｍｇ／ｍｌのロイペプチン、１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド、１ｍＭのＮａ３ＶＯ４および１ｍＭのＮａＦを補充した０．５％のＮｏｎｉｄｅｔ Ｐ４０を含有する緩衝液中で溶解させる。溶解物を、４℃で、１２，０００ｘｇ、３０分間の遠心分離で清澄化し、１０％のドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離する。ＩＬ－３４を、マウス抗ヒトＩＬ－３４抗体またはウサギ抗ヒトＩＬ－３４抗体を西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）をコンジュゲートさせた二次ＩｇＧモノクローナル抗体と組み合わせて検出する。ＨＲＰ反応を高感度強化化学発光キットを用いて検出する。分析後、ブロットを剥離し、マウス抗β－アクチン抗体と、それに続くＨＲＰをコンジュゲートさせた二次ＩｇＧモノクローナル抗体でプローブする。コンピュータ支援走査型デンシトメトリーを使用し、免疫反応性バンドの強度を分析する。
ＩＬ－３４ ＡＳＯによる細胞のトランスフェクションの結果、ＩＬ－３４ ＲＮＡおよびタンパク質の発現の減少がもたらされる。
腸線維芽細胞におけるＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＩＬ－３４発現のノックダウン
ＩＬ－３４ ＡＳＯによるＩＬ－３４ノックダウンを、結腸直腸がん（ＣＲＣ）関連線維芽細胞および線維狭窄性クローン病（ＦＳ ＣＤ）由来の線維芽細胞でさらに評価する。
ヒト腸線維芽細胞は、ＣＲＣおよびＦＳ ＣＤを有する患者の罹患組織に由来する外植片から単離し、表現型は既述の通りである。すべての実験において、線維芽細胞は新鮮なもの、または継代８までのものを使用し、Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ溶液を使用して剥離する。ヒト線維芽細胞を、１０％のＦＢＳ、１％のＰ／Ｓを補充したＵｌｔｒａＧｌｕｔａｍｉｎｅを含む高グルコースＤＭＥＭ中で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ ＣＯ２で維持する。
細胞は未処理のままか、試験ＩＬ－３４ ＡＳＯまたはスクランブルアンチセンスオリゴヌクレオチドの対照をトランスフェクトされる。全ＲＮＡを、実施例３に記載されるように、ＲＴ－ｑＰＣＲを使用する分析のために抽出する。ＩＬ－３４ ＡＳＯは、対照と比較して、ＩＬ－３４ ＲＮＡ発現の減少をもたらす。
線維芽細胞におけるコラーゲン合成に対するＩＬ－３４ ＡＳＯの効果も評価する。簡単に述べると、５×１０４個の線維芽細胞を１２ウェルプレートの各ウェルにプレーティングし、２４時間接着させた後、未処理のままか、または試験用ＩＬ－３４ ＡＳＯもしくは対照のスクランブルＡＳＯを２４～４８時間トランスフェクトする。トランスフェクション効率はウェスタンブロッティングにより決定する。４８時間後、細胞を含まない上清を回収し、市販のＥＬＩＳＡキットでコラーゲン含有量について分析する。ＩＬ－３４ ＡＳＯは、対照と比較して、線維芽細胞におけるＣＯＬ１Ａ１とＣＯＬ３Ａ１のタンパク質合成を低減する。
細胞死に対するＩＬ－３４ ＡＳＯの効果も評価する。細胞死をスコア化するために、線維芽細胞をＰＢＳで洗浄し、ＦＩＴＣ－アネキシンＶ抗体で染色し、５ｍｇ／ｍＬのＰＩとともに４℃で２０分間インキュベートする。蛍光はフローサイトメーターを使用して測定する。ＡＶ－／ＰＩ－細胞は生存細胞であると考えられ、ＡＶ＋／ＰＩ－細胞はアポトーシス細胞であると考えられ、二次壊死細胞はＡＶ＋／ＰＩ＋染色で特徴付けられる。ＩＬ－３４ ＡＳＯによるＦＳ ＣＤ線維芽細胞のトランスフェクションは、細胞生存率に影響を及ぼさない。
ＩＬ－３４ ＡＳＯによる線維芽細胞のＩＬ－３４ノックダウンは、細胞生存率に有意な影響を及ぼすことなく、コラーゲン産生の低下をもたらす。
ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＩＬ－３４発現のノックダウン
この実施例は、ヒト滑膜肉腫細胞株ＳＷ９８２およびヒト線維芽細胞様滑膜細胞ＨＦＬＳ－ＲＡにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏでのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＩＬ－３４発現のノックダウンを例証する。
ＳＷ９８２細胞を、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、および１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ１５培地で成長させる。細胞培養は、９５％の空気、および５％ ＣＯ２、３７°での加湿雰囲気で維持される。それらの活性化は、１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαで２４時間前処理することにより誘導される。
ＨＦＳＬ－ＲＡ細胞は、滑膜細胞増殖培地キット（基礎培地に増殖サプリメントを加えたもの）で培養し、加湿インキュベーター内で３７℃、５％ ＣＯ２で維持する。
細胞は未処理のままか、試験ＩＬ－３４ ＡＳＯまたはスクランブルアンチセンスオリゴヌクレオチドの対照をトランスフェクトされる。全ＲＮＡを、実施例３に記載されるように、ＲＴ－ｑＰＣＲを使用する分析のために抽出する。ＩＬ－３４タンパク質のノックダウンを、実施例３に記載されるようにウェスタンブロッティングにより評価する。
ＩＬ－３４ ＡＳＯは、対照と比較してＩＬ－３４ ＲＮＡおよびタンパク質の発現の低下をもたらす。
大腸炎モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの評価
この実施例は、ＴＮＢＳに誘導される大腸炎のモデルマウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ－３４ ＡＳＯによるＩＬ－３４のノックダウンを例証する。
ＩＬ－３４ ＡＳＯをリン酸緩衝生理食塩水に溶解させる。経口投与では、ＡＳＯを重炭酸溶液ｐＨ９．５で希釈し、ｉ．ｐ．および直腸投与では、ＡＳＯをＰＢＳで希釈する。
ＴＮＢＳに誘導される大腸炎モデルでは、７～９週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを使用する。マウスに大腸炎を誘導するために、４５％エタノール中の２，４，６－トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）２ｍｇを、軽く麻酔したマウスに、直腸に挿入した３．５Ｆのカテーテルから投与する。カテーテル先端を肛門縁の４ｃｍ近位に挿入し、１５０μＬの液体を結腸にゆっくりと注入した後、マウスを３０秒間垂直姿勢に保つ。ＴＮＢＳ誘導の２４時間後、処置群のマウスは試験ＩＬ－３４ ＡＳＯまたは対照を受ける。
大腸炎の誘導および進行を評価するために体重変化を毎日記録し、組織学的研究およびタンパク質分析のために組織を回収する。マウスを５日目に安楽死させる。
組織学的研究のために、安楽死後にマウスから取り除いた組織を１０％のホルマリン溶液（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）で固定し、パラフィン包埋し、組織切片に切り出し、ヘマトキシリンエオジンで染色する。染色切片を、リンパ球浸潤の存在、陰窩の伸長および／または歪み、明らかな潰瘍形成（ｆｒａｎｋ ｕｌｃｅｒａｔｉｏｎ）および腸壁の肥厚などの異なる基準を使用して大腸炎の証拠について調査する。結腸の顕微鏡的断面図における炎症の程度は、以下のように０から４まで等級付けされる。
０：炎症の証拠なし
１：リンパ球浸潤が低レベルで、浸潤は１０％未満の高倍率視野（ｈｐｆ）で見られ、構造的変化は観察されない
２：リンパ球浸潤は中程度で、浸潤は１０～２５％未満のｈｐｆに見られ、陰窩の伸長、粘膜層を超えて伸長しない腸壁の肥厚を有する
３：リンパ球浸潤が高水準で、浸潤は２５～５０％未満のｈｐｆに見られ、粘膜層を超えて伸長する腸壁の肥厚を有する
４：顕著なリンパ球浸潤の程度で、浸潤は５０％を超えるｈｐｆで見られ、高い血管密度、歪みを伴う陰窩の伸長、潰瘍化を伴う貫壁性の腸壁肥厚を有する。
マウスはＩＬ－３４ ＡＳＯによる処置後に大腸炎が低減した。
関節炎モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドの評価
この実施例は、コラーゲン関節炎（ＣＩＡ）動物モデルにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＬ－３４ ＡＳＯによるＩＬ－３４発現のノックダウンを例証する。
ＩＬ－３４ ＡＳＯをリン酸緩衝生理食塩水に溶解させる。経口投与では、ＡＳＯを炭酸水素塩溶液ｐＨ９．５で希釈し、ｉ．ｐおよび直腸投与では、ＡＳＯをＰＢＳで希釈する。
８～１２週齢のＤＢＡ／１マウスを使用する。０日目に完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化したウシＩＩ型コラーゲンを動物に負荷し（０．１ｍｇ／０．１ｍＬ／マウス、尾の付け根に皮内投与（ＩＤ））、２１日目にＣＦＡの代わりにＩＦＡで乳化したコラーゲンをｉ．ｄ．でブースター投与する（０．１ｍｇ／０．１ｍＬ／マウス）。動物を、２９日目の後肢２本の体積に基づいて、１０匹ずつの群に層別化する。ＡＳＯおよびビヒクルを、２９日目～４２日目まで異なる投与スケジュールで関節内注射により投与する。対照物としてデキサメタゾン（０．３ｍｇ／ｋｇ）を経口投与する。関節炎は、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１および４３日目に、定性的重症度スコアシステムおよびプレシスモメーターで測定した後肢体積（ｍＬ）を使用して評価する。実施することができる追加の分析には、後肢の採取量および終了時の体重、バイオマーカー（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）、ならびに組織病理学的検査が含まれる。
あるいは、体重１８０±２０ｇの雌のＬｅｗｉｓラットを使用する。動物には、１日目に不完全フロイントアジュバントを含むブタＩＩ型コラーゲンを負荷し（０．２ｍｇ／０．２ｍＬ／ラット、尾の付け根に皮下投与（ＳＣ））、７日目にブースター投与する（０．１ｍｇ／０．１ｍＬ／ラット、ＳＣ）。動物を１６日目に後肢２本の体積に基づいて６匹ずつの群に層別化し、１７日目に投与が開始する。対照物としてデキサメタゾン（０．３ｍｇ／ｋｇ）を１日１回、１７日目から３０日目まで１４日間連続経口投与する。ＡＳＯおよびビヒクルは関節内注射で投与する。関節炎を、１、７、１０、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８および３０日目に、定性的重症度スコアシステムおよびプレシスモメーターで測定した後肢体積（ｍＬ）を使用して評価する。実施することができる追加の分析には、バイオマーカー（タンパク質および／またはｍＲＮＡ）および組織病理学的分析が含まれる。
ＩＬ－３４ ＡＳＯで処置した動物は関節炎の低減を示す。
均等物
本開示は、その本質的な特徴から逸脱することなく、他の具体的な形態で具体化することができる。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載の開示を限定するものではなく、例示的なものと考えられるべきである。本開示の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の意味および均等の範囲内のすべての変更は、そこに包含されることが意図される。
配列表
Ｘは５－メチルシチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンあり、Ａｙは２’－Ｏ－メチルアデノシンあり、Ｃｙは２’－Ｏ－メチルシチジンあり、Ｇｙは２’－Ｏ－メチルグアノシンあり、Ｔｙは２’－Ｏ－メチルチミジンである。

Claims (35)

  1. ＩＬ－３４またはその一部に対して相補的なポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩であって、
    ａ．５’－ＣＴＴＴＧＧＧＣＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、または
    ｂ．５’－ＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴ－３’（配列番号５）
    ［ここで、ヌクレオチド配列のうちの少なくとも１つのシチジンは化学的に修飾されており、少なくとも１つのヌクレオシドは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（２’－ＭＯＥ）ヌクレオシドである］
    によるヌクレオチド配列、
    を含む、ポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  2. １０個以下のヌクレオシドが化学的に修飾されている、請求項１に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  3. ６個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  4. ８個の２’－ＭＯＥヌクレオシドを含む、請求項１または２に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  5. ａ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴｘＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣｘＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４０）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
    ｂ．５’－ＣｘＴｘＴｘＴＧＧＧＣＸＧＣＡＣＣＡＧＣＴｘＴｘＣｘ－３’（配列番号４１）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、
    ｃ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡｘＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡｘＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４２）［ここで、Ｃｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ａｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）アデノシンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］、および
    ｄ．５’－ＴｘＣｘＣｘＡＴＧＡＣＣＸＧＧＡＡＧＣＡＧｘＴｘＴｘ－３’（配列番号４３）［ここでＣｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）シチジンであり、Ｔｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）チミジンであり、Ｇｘは２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）グアノシンであり、Ｘは５－メチルシチジンである］
    からなる群から選択されるヌクレオチド配列、
    を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  6. ＩＬ－３４アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  7. ＩＬ－３４ ｓｉＲＮＡ複合体の一部である、請求項１から５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  8. 前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも１つのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結、ホスホロジチオエート連結、ホスホトリエステル連結、アルキルホスホネート連結、アミノアルキルホスホトリエステル連結、アルキレンホスホネート連結、ホスフィネート連結、ホスホロアミデート連結、およびアミノアルキルホスホロアミデート連結、チオホスホロアミデート連結、チオノアルキルホスホネート連結、チオノアルキルホスホトリエステル連結、チオホスフェート連結、セレノホスフェート連結、およびボラノホスフェート連結からなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  9. 前記ポリヌクレオチドのすべてのヌクレオシド間連結がホスホロチオエート連結である、請求項１から８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  10. ａ）請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩、および（ｂ）薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  11. 処置を必要とする患者において炎症性疾患を処置する方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項１０に記載の医薬組成物の有効量を、処置を必要とする患者に投与することを含む方法。
  12. 前記炎症性疾患がＩＬ－３４発現の上昇と関連する、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記炎症性疾患が関節リウマチである、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記炎症性疾患が骨関節炎である、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. （ｉ）前記患者の細胞における炎症性サイトカイン産生を阻害する、（ｉｉ）前記患者の細胞におけるＩＬ－３４に媒介される炎症応答を低減もしくは阻害する、および／または（ｉｉｉ）前記患者の細胞におけるＩＬ－３４に媒介されるマクロファージコロニー刺激因子受容体（Ｍ－ＣＳＦＲ－１）シグナル伝達を低減もしくは阻害する、請求項１１から１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記細胞が腸細胞（例えば、腸間質細胞）であり、および／または腸線維狭窄の一部を形成する、請求項１１から１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 炎症性疾患に罹患している患者の線維性狭窄を低減または排除する方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項１０に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む方法。
  18. 前記線維性狭窄が腸に位置する、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、乾癬、骨関節炎、嚢炎、（Ｉ型およびＩＩ型）、組織または臓器の拒絶反応、多発性硬化症、歯周組織炎、歯周炎、色素性絨毛性滑膜炎、肝炎、副鼻腔炎、結腸がん、結腸直腸がん、大腸炎に関連する結腸がん、散発性結腸直腸がん、冠動脈疾患、シェーグレン症候群（ＳＳ）、肥満、慢性炎症、肺サルコイドーシス、皮膚病変、ＣＮＳ炎症性疾患、および自己免疫疾患からなる群から選択される、請求項１７または１８に記載の方法。
  20. 前記炎症性疾患が関節リウマチである、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記炎症性疾患が骨関節炎である、請求項１９に記載の方法。
  22. 前記炎症性腸疾患が、炎症性腸疾患（例えばクローン病、胃十二指腸クローン病、クローン（肉芽腫性）大腸炎、炎症性クローン病、線維狭窄性クローン病、潰瘍性大腸炎、膠原病性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、分流性大腸炎、ベーチェット病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性直腸炎、直腸Ｓ状結腸炎、空腸炎、左側大腸炎、膵炎、回結腸炎、回腸炎、不定性大腸炎）である、請求項１９に記載の方法。
  23. 前記炎症性腸疾患が炎症性クローン病または線維狭窄性クローン病である、請求項２２に記載の方法。
  24. 線維症を防止または処置するための方法であって、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、もしくはその薬学的に許容される塩、または請求項１０に記載の医薬組成物の治療有効量を、処置を必要とする患者に投与することを含む方法。
  25. 前記線維症が肺線維症、滑膜線維症、または腸線維症である、請求項２６に記載の方法。
  26. 前記線維症が、腎線維症、心筋線維症、心内膜線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、および腎性全身性線維症からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
  27. 前記患者が関節リウマチに罹患している、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記患者が骨関節炎に罹患している、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記患者がクローン病に罹患している、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記ポリヌクレオチドが、関節内、直腸内、局所的、非経口的、経口的、肺内、気管内、経鼻的、経皮的、または十二指腸内に投与される、請求項１１から２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記患者がヒトである、請求項１１から３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩の使用。
  33. 医薬として使用するための、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  34. 炎症性疾患の処置において使用するための、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
  35. 線維症の処置において使用するための、請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩。
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