KR20220098231A - Il-34 안티센스 제제 및 이의 사용 방법 - Google Patents

Il-34 안티센스 제제 및 이의 사용 방법 Download PDF

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KR20220098231A
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antisense oligonucleotide
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프란체스카 비티
마리 맥널티
살바토레 벨린비아
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노그라 파마 리미티드
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Abstract

IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 억제제, 및 IL-34의 상승된 활성 또는 발현과 관련된 염증성 질환, 예컨대 염증성 장 질환 및/또는 섬유증을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 또한, 염증성 질환 및/또는 섬유증을 치료하고 염증성 질환 및/또는 섬유증을 치료하는 데 사용되는 개시된 IL-34 억제제를 함유하는 약제의 제조에 유용한 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 약제학적 조성물이 개시된다.

Description

IL-34 안티센스 제제 및 이의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 11월 15일자로 출원된 미국 가특허 제62/935,819호에 대한 이익 및 우선권을 주장하며, 그 개시내용은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함된다. 2020년 11월 13일에 생성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 GIU-060WO_SL_ST25.txt이고 크기는 21,080 바이트이다.
인터루킨-34(IL-34)는 류마티스 관절염과 같은 골 퇴행성 질환에서 염증 및 파골세포형성의 매개체인 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF, 또한 MCSF1 및 MCSF-1로 알려짐)와 기능적으로 중복되는 최근에 발견된 사이토카인이다. 급성 및 만성 염증성 질환은 아직 완전히 이해되지 않은 중요한 질환 범주이다.
예를 들어, 염증성 장 질환은 미국에서 약 140만 명의 환자가 겪는 위장관의 만성 염증성 장애이다. 이는 미국에서 가장 널리 퍼진 5가지 위장 질환 부담 중 하나이며, 전체 의료비는 17억 달러가 넘는다. 매년 미국에서 염증성 장 질환은 700,000건이 넘는 의사 방문, 100,000명의 입원 및 119,000명의 환자의 장애를 차지한다. 현재 의학적 치료법은 존재하지 않으므로 질환 관리는 평생의 치료를 필요로 한다.
염증성 장 질환의 가장 흔한 두 가지 형태는 크론병과 궤양성 대장염이다. 크론병은 위장관 전체에 영향을 미칠 수 있지만 주로 회장(소장의 말단 또는 하부)과 대장에 영향을 미친다. 궤양성 대장염은 주로 결장과 직장에 영향을 미친다. 염증성 장 질환의 원인은 완전히 이해되지 않지만, 환경적 요인과 유전적 요인 모두가 질환에 역할을 하는 것으로 여겨진다. 환경적 성분은 섭취한 식품 및 약물에 대한 노출에 의해 영향을 받는 장내 미생물의 변화를 포함할 수 있다.
염증성 장 질환은 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 심한 경련, 근육 경련, 체중 감소, 영양실조, 발열 및 빈혈과 관련이 있다. 염증성 장 질환 환자는 또한 피부 병변, 관절통, 눈 염증, 및 간 질환을 앓을 수 있고, 궤양성 대장염을 앓고 있는 어린이는 성장 장애를 앓을 수 있다. 치명적이지는 않지만, 이들 증상은 환자의 삶의 질을 저하시킨다.
따라서, 염증성 장 질환과 같은 염증성 장애를 치료하는 신뢰할 수 있는 방법의 개발이 절실히 요구된다. 광범위한 환자에게 증상으로부터의 효과적이고 영구적인 완화를 제공하고 부정적인 부작용 또는 염증 및 관해의 사이클과 관련이 없는 치료 방법을 확인하는 것이 더 요구된다.
IL-34 유전자 발현을 억제하는 제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 기재된 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함하는, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다. 예를 들어, 본 발명의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 5'-CTCACCAAGACCCCACAG-3'(서열번호: 1), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 또는 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호 6), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염일 수 있다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오타이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결이다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형된다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 7)의 서열을 포함하고, 여기서 X는 5-메틸시티딘이다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 5의 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형되고; 선택적으로, 서열번호: 5의 위치 10에 있는 시티딘은 화학적으로 변형되며 뉴클레오타이드 서열은 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 8)이고, 여기서 X는 5-메틸시티딘이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 리보뉴클레오타이드 및/또는 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 리보뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 리보뉴클레오타이드 및 데옥시리보뉴클레오타이드의 혼합물을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 잠금 핵산("LNA") 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 LNA 뉴클레오타이드, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 1-5, 5-10, 5-12개, 또는 그 이상의 LNA 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 각각은 LNA 뉴클레오타이드이다.
특정 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 LNA 뉴클레오타이드를 포함하고, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 서열은:
· 5'-cttTGGGCXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 9), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-ctttGGGCXGCACCAGcttc-3'(서열번호: 10), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-cttTGGGCcgCACCAGCttc-3'(서열번호: 11), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신인 서열;
· 5'-cttTGGGCcGCACCAGCttc-3'(서열번호: 12), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘인 서열;
· 5'-ggcXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 13), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-cttTGGGCXGCACcag-3'(서열번호: 14), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, a는 LNA 아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-tgaCCXGGAAGCAgtt-3'(서열번호: 15), 여기서 a는 LNA 아데노신이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열
중 하나,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다.
추가로, 본원에 기재된 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸시티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸티미딘, 2'-O-메틸우리딘, 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 또한 5-메틸피리미딘, 예를 들어 5-메틸시토신; 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어 5-메틸구아닌을 포함하는, 하나 이상의 화학적으로 변형된 염기를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 또한 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 중 어느 것을 포함할 수 있다: 5-메틸-2'-O-메틸시티딘, 5-메틸-2'-O-메틸티미딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘, 및/또는 5-메틸-2'-데옥시시티딘. 추가로, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 2'-O-(2-메톡시에틸)("2'-MOE") 뉴클레오사이드, 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오사이드, 2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오사이드, 가교 핵산, LNA 뉴클레오타이드, 구속 에틸'(cET) 핵산, 트리사이클로-DNA(tcDNA), 2'-O,4'-C-에틸렌 연결 핵산(ENA) 및/또는 펩타이드 핵산(PNA)을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 구현예는 전술한 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 중 하나 이상을 포함하는, 서열번호: 1-15 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 1-5, 1-10, 1-14, 1-15, 1-16, 1-19, 5-10, 5-14, 5-15, 5-19, 10-14, 10-15, 또는 10-19개의 뉴클레오사이드는 뉴클레오사이드이다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 서열은:
· 5'-CxTxTxTxGxGGCXGCACCAGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 16), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-TxCxCxAxTxGACCXGGAAGCxAxGxTxTx-3'(서열번호:17), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-CxTxTxTxGxGxGCXGCACCAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 18), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-TxCxCxAxTxGxACCXGGAAGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 19), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-CxTxTxTxGxGxGxCxXGxCxAxCxCxAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 20), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
· 5'-TxCxCxAxTxGxAxCxCxXGxGxAxAxGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 21), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열,
중 하나,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다.
추가로, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 서열은:
· 5'-CyTyTyTyGyGGCXGCACCAGyCyTyTyCy-3'(서열번호: 22), 여기서 Cy는 2'-O-메틸시티딘이고, Ty는 2'-O-메틸티미딘이며, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
· 5'-TyCyCyAyTyGACCXGGAAGCyAyGyTyTy-3'(서열번호: 23), 여기서 Cy는 2'-O-메틸시티딘이고, Ty는 2'-O-메틸티미딘이며, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, Ay는 2'-O-메틸아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열
중 하나,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결이 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 및 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결, 또는 보라노포스페이트 연결인 안티센스 올리고뉴클레오타이드이다. 특정 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 1-5, 1-10, 1-14, 1-15, 1-16, 1-19, 5-10, 5-14, 5-15, 5-19, 10-14, 10-15, 또는 10-19개의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 포함된 뉴클레오타이드의 수는 다양할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 15-20, 15-25, 15-30, 15-35, 20-25, 20-30, 20-35, 25-30, 25-35, 또는 30-35개의 뉴클레오타이드 길이이다. 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 15-25개의 뉴클레오타이드 길이이다. 특정 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 20-25개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서 본원에 기재된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 최대 수의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 길이는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 또는 35개 이하의 뉴클레오타이드 길이이다.
일 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화합물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형된다. 일부 구현예에서, 화합물은 서열번호: 7의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하고, 여기서 X는 5-메틸시티딘이다.
본원에 기재된 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-15 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오사이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 시티딘은 5-메틸시티딘으로 대체된다. 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 5-메틸-2'-데옥시시티딘을 포함할 수 있다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 본 개시내용의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 데옥시시티딘 및/또는 5-메틸-2'-데옥시시티딘, 예컨대 비제한적으로 5-메틸-2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트 및 5-메틸-2'-데옥시시티딘-5'-모노포스포로티오에이트를 포함하는 뉴클레오타이드를 포함하거나 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 구현예에서, 서열번호: 1-15 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 하나 이상의 시티딘 뉴클레오사이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 각각 5-메틸시티딘으로 치환될 수 있다. 일부 특정 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 하나의 시티딘 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환된다.
또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는 치료 방법이 본원에 기재된다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 또한 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-15 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법이 본원에 기재된다.
또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호: 1-15 중 어느 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포 또는 세포들에서 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 예를 들어, 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 증가된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 증가된 IL-34 발현은 IL-34 발현의 대조군 수준, 예를 들어 건강한 대조군 환자 또는 건강한 대조군 환자의 코호트에서 측정된 IL-34의 평균 또는 중앙값 수준, 또는 증가된 IL-34 발현과 관련된 질환의 발병 또는 검출 이전의 환자에서 측정된 IL-34의 수준에 상대적일 수 있다.
또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다.
또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 집락-자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 억제하는 방법이 본원에 기재된다.
또한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소 또는 제거하는 방법이 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유성 협착은 장, 예를 들어 대장 또는 소장에 위치한다. 특정 구현예에서, 섬유성 협착은 대장에 위치한다. 일부 구현예에서, 섬유성 협착은 대장 및/또는 소장의 하나 이상의 부분, 예를 들어 맹장, 회장, 상행 결장, 횡행 결장, 하행 결장, S상 결장, 직장, 항문, 십이지장 및/또는 공장에 국한된다.
본원에 기재된 방법은 비제한적으로 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(유형 I 및 II), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 및 자가면역 질환을 포함하는 하나 이상의 염증성 질환을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD) 또는 특발성 폐 섬유증(IPF)을 치료하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 구현예에서, 염증성 장 질환은 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염(pancolitis), 회결장염, 회장염, 또는 불확정 대장염이다. 특정 구현예에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 특정 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 경구 투여된다.
일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 환자는 인간이다.
또한, 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물이 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합하다.
또한 약제로 사용하기 위한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 본원에 기재된다. 예를 들어, 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 약제로서 사용하기 위한 것일 수 있다.
염증성 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도가 또한 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환이다. 또한 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 또는 특발성 폐 섬유증(IPF)의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 구현예에서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 또는 불확정 대장염이다. 특정 구현예에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
염증성 질환의 치료에 사용하기 위한, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 또한 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환이다. 또한 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 또는 특발성 폐 섬유증(IPF)의 치료에 사용하기 위한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 구현예에서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 또는 불확정 대장염이다. 특정 구현예에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
또한, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 IL-34 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 또한, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 상기 언급된 방법의 일부 구현예에서, 세포는 장 세포, 예를 들어, 장 간질 세포, 장 상피 세포, 장 줄기 세포, 분비 세포, 장세포, 배상 세포, 장내분비 세포, 파네스 세포, 전이 증폭 세포, 마이크로폴드 세포, 컵 세포 또는 터프트 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 장 섬유협착의 일부를 형성한다. 전술한 구현예에서, 대상체는 염증성 질환 또는 섬유증, 예를 들어 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐, 예를 들어 I형 콜라겐, II형 콜라겐, III형 콜라겐, IV형 콜라겐, V형 콜라겐, VI형 콜라겐, VII형 콜라겐, VIII형 콜라겐, IX형 콜라겐, X형 콜라겐, XI형 콜라겐, XII형 콜라겐, XIII형 콜라겐, XIV형 콜라겐, XV형 콜라겐, XVI형 콜라겐, XVII형 콜라겐, XVIII형 콜라겐, XIX형 콜라겐, XX형 콜라겐, XXI형 콜라겐, XXII형 콜라겐, XXIII형 콜라겐, XXIV형 콜라겐, XXV형 콜라겐, XXVI형 콜라겐, XXVII형 콜라겐, XXVIII형 콜라겐 또는 XXIX형 콜라겐의 발현을 억제하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 구현예에서, 콜라겐은 COL1A1, COL1A2II, COL2A1, COL3A1, COL4A1, COL4A2, COL4A3, COL4A4, COL4A5, COL4A6, COL5A1, COL5A2, COL5A3, COL6A1, COL6A2, COL6A3, COL6A5, COL7A1, COL8A1, COL8A2, COL9A1, COL9A2, COL9A3, COL10A1, COL11A1, COL11A2, COL12A1, COL13A1, COL14A1, COL15A1, COL16A1, COL17A1, COL18A1, COL19A1, COL20A1, COL21A1, COL22A1, COL23A1, COL24A1, COL25A1, EMID2, COL27A1, COL28A1, 또는 COL29A1이다. 특정 구현예에서, 콜라겐은 COL1A1(콜라겐 1A), COL3A1(콜라겐 3A), 또는 이들의 혼합물이다. 특정 구현예에서, 약제학적 제제는 경구 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
다양한 구현예에서, 본 발명은 섬유증을 앓고 있는 환자에서 IL-34를 억제하는 단계를 포함하는, 섬유증, 예를 들어 장 섬유증, 폐 섬유증 또는 간 섬유증을 치료 또는 예방하거나, 콜라겐 침착을 예방하는 방법이다. 본 발명은 또한 세포, 예를 들어 장 세포에서 IL-34를 억제하는 단계를 포함하는, 섬유증을 치료 또는 예방하거나 콜라겐 침착을 예방하는 방법일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명은 IL-34의 특정 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 환자에서 섬유증을 치료 또는 예방하거나 콜라겐 침착을 예방하는 방법일 수 있다.
또한 섬유증의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 구현예에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 다른 구현예에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증이다.
또한 섬유증의 치료에서 사용하기 위한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 구현예에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 다른 구현예에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증이다.
일부 구현예에서, 섬유증, 예를 들어 장 섬유증을 앓고 있는 환자는 이전에 염증성 장 질환을 앓았거나 또는 염증성 장 질환, 또는 환자에서 장 섬유증보다 선행된 염증성 장 질환을 앓고 있다. 특정 구현예에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
일부 구현예에서, 장 섬유증을 앓고 있는 환자는 이전에 대장염을 앓았거나 또는 대장염, 또는 환자에서 장 섬유증보다 선행된 대장염을 앓고 있다. 일부 구현예에서, 대장염은 급성 대장염이다. 일부 구현예에서, 대장염은 만성 대장염이다.
본 발명의 일부 구현예에서 환자는 포유동물, 예를 들어 영장류, 예를 들어 인간이다.
본원에 기재된 발명의 방법에서 섬유증을 갖는 환자에게 투여되는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 다양한 투여 경로에 의해 투여될 수 있음이 이해될 것이다. 다양한 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 경구, 국소, 비경구, 예컨대 피하 주사에 의한 것, 흡입 스프레이에 의한 것 또는 직장을 포함하는 하나 또는 여러 경로에 의해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 용어 비경구는 피하 주사, 췌장내 투여, 및 정맥내, 근육내, 복강내 및 흉골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 바람직한 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 섬유증, 예를 들어, 장 섬유증 또는 폐 섬유증을 갖는 환자에게 경구 투여될 수 있다.
본 발명은 분해를 위해 IL-34 RNA를 표적화할 수 있거나, RNA 스플라이싱을 방해할 수 있거나, 또는 IL-34 유전자 발현 또는 단백질 번역을 방지할 수 있는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여를 포함하는 방법을 제공할 수 있다. 본 발명의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 결합을 위해 마우스 및/또는 인간 IL-34 mRNA의 다양한 영역을 표적화할 수 있다. 인간 IL-34 mRNA 서열은 NCBI 참조 서열 NM_001172771.1(서열번호: 24), NM_001172772.1(서열번호: 25), 또는 NM_152456.2(서열번호: 26)의 서열이다. 마우스 IL-34 mRNA 서열은 NCBI 참조 서열 NM_001135100.2(서열번호: 27) 또는 NM_029646.3(서열번호: 28)의 서열이다.
IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 서열은 IL-34 RNA를 표적화할 수 있는 다수의 서열들로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 포스포로티오에이트, 즉, 뉴클레오타이드간 연결의 적어도 일부가 환자의 세포로의 전달에 적합한 포스포로티오에이트 연결인 올리고뉴클레오타이드이다. 추가로, 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 변형된 염기를 함유하는 뉴클레오타이드, 예를 들어 5-메틸-2'-데옥시시티딘을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 구현예에서, 환자에서 섬유증, 예를 들어 장 섬유증을 치료하거나, 장 섬유증 또는 폐 섬유증을 예방하거나, 또는 콜라겐 침착을 예방하는 방법은 약제학적 조성물, 예를 들어 IL-34의 특정 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 비경구 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 장용 코팅, 예를 들어 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 장용 코팅을 포함한다.
본 발명의 구현예에서, 염증성 질환(예를 들어, 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병)을 치료 및/또는 예방하거나, 환자에서(예를 들어, 섬유협착성 크론병을 앓고 있는 환자에서) 섬유협착을 치료, 감소 및/또는 제거하거나, 섬유증(예컨대, 장 섬유증 또는 폐 섬유증)을 치료하거나, 또는 환자에서 콜라겐 침착을 치료, 개선 또는 예방하는 방법은 다양한 양의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어, 서열번호: 1-23 중 하나의 서열을 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 적어도 1 ㎍, 적어도 5 ㎍, 적어도 10 ㎍, 적어도 20 ㎍, 적어도 30 ㎍, 적어도 40 ㎍, 적어도 50 ㎍, 적어도 60 ㎍, 적어도 70 ㎍, 적어도 80 ㎍, 적어도 90 또는 적어도 100 ㎍의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 35 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 10 mg, 10 mg 내지 20 mg, 20 mg 내지 30 mg, 30 mg 내지 40 mg, 40 mg 내지 50 mg, 50 mg 내지 60 mg, 60 mg 내지 70 mg, 70 mg 내지 80 mg, 80 mg 내지 90 mg, 90 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 150 mg, 150 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 250 mg, 250 mg 내지 300 mg, 250 mg 내지 300 mg 내지, 400 mg 내지 450 mg, 450 mg 내지 500 mg, 500 mg 내지 600 mg, 600 mg 내지 700 mg, 700 mg 내지 800 mg, 800 mg 내지 900 mg, 900 mg 내지 1 g, 또는 1 mg 내지 50 mg, 20 mg 내지 40 mg, 또는 1 mg 내지 500 mg의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
또한 간 섬유증, 폐 섬유증 또는 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 또한, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증 및/또는 신인성 전신 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
비제한적으로 IL-34 작은 헤어핀 RNA(shRNA), IL-34 작은 간섭 RNA(siRNA), 및 IL-34 모르폴리노 올리고머, IL-34 마이크로RNA(miRNA), 및 이러한 화합물을 포함하는 조성물을 포함하는 뉴클레오타이드 기반 IL-34 억제제가 또한 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 억제제는 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 억제제는 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 예를 들어, IL-34 억제제는 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 작은 헤어핀 RNA, IL-34 작은 간섭 RNA, IL-34 마이크로RNA, 및 IL-34 모르폴리노 올리고머, 및 이러한 화합물을 포함하는 조성물, 예를 들어 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 조성물을 포함한다.
본원에 기재된 특정 구현예에서, IL-34 억제제는 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다. 예를 들어, 본 발명의 IL-34 siRNA는 서열 5'-CTCACCAAGACCCCACAG-3'(서열번호: 1); 5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2); 5'-CTTTGGCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3); 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4); 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5); 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호: 6); 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 7), 여기서 X는 5-메틸시티딘인 서열; 또는 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 8), 여기서 X는 5-메틸시티딘인 서열을 포함하는 siRNA, 또는 서열번호: 1-8 중 하나의 IL-34 siRNA의 약제학적으로 허용가능한 염일 수 있다.
또한, 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열의 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물이 본원에 기재된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 억제제는 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결이 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 및 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결, 또는 보라노포스페이트 연결인 IL-34 siRNA이다. 특정 구현예에서, IL-34 억제제 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 억제제 서열의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 1-5, 1-10, 1-14, 1-15, 1-16, 1-19, 5-10, 5-14, 5-15, 5-19, 10-14, 10-15, 또는 10-19개의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 결합이다. 일부 구현예에서, IL-34 억제제 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
본원에 기재된 IL-34 억제제에 포함된 뉴클레오타이드의 수는 다양할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 siRNA는 20-25, 20-30, 또는 25-30개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서, IL-34 siRNA는 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 최대 수의 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 siRNA는 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개 이하의 뉴클레오타이드 길이이다.
본원에 기재된 구현예에서, IL-34 억제제, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열의 IL-34 siRNA의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 siRNA의 하나 이상의 시티딘은 5-메틸시티딘으로 대체된다. 일부 구현예에서, IL-34 siRNA는 하나 이상의 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 5-메틸-2'-데옥시시티딘을 포함할 수 있다. 예를 들어, 다양한 구현예에서, 본 개시내용의 IL-34 siRNA는 데옥시시티딘 및/또는 5-메틸-2'-데옥시시티딘, 예컨대 비제한적으로 5-메틸-2'-데옥시시티딘 5'-모노포스페이트 및 5-메틸-2'-데옥시시티딘-5'-모노포스포로티오에이트를 포함하는 뉴클레오타이드를 포함하거나 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 siRNA 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 하나 이상의 시티딘 뉴클레오사이드는 각각 5-메틸시티딘으로 치환될 수 있다.
추가로, 본원에 기재된 구현예에서, IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸("2'-OMe") 리보뉴클레오사이드, 예를 들어, 2'-O-메틸시티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸티미딘, 2'-O-메틸우리딘, 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 억제제는 또한 5-메틸피리미딘, 예를 들어 5-메틸시토신 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어 5-메틸구아닌을 포함하는 하나 이상의 화학적으로 변형된 염기를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 억제제는 또한 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 중 어느 것을 포함할 수 있다: 5-메틸-2'-O-메틸시티딘, 5-메틸-2'-O-메틸티미딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘, 및/또는 5-메틸-2'-데옥시시티딘. 추가로, 본원에 기재된 IL-34 억제제는 하나 이상의 2'-O-(2-메톡시에틸)("2'-MOE") 뉴클레오사이드, 2'-데옥시-2'-플루오로 뉴클레오사이드, 2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오사이드, 가교 핵산, LNA 뉴클레오타이드, 구속된 에틸'(cET) 핵산, 트리사이클로-DNA(tcDNA), 2'-O,4'-C-에틸렌 연결 핵산(ENA) 및/또는 펩타이드 핵산(PNA)을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 구현예는 전술한 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 중 하나 이상을 포함하는 서열번호: 1-23 중 어느 것의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 특정 구현예에서, IL-34 siRNA 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 전술한 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 중 어느 것의 하나 이상을 포함하도록 변형된 서열번호: 1-23 중 어느 것의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 염증성 질환을 치료하는 방법, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 하나 이상의 세포에서 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하는 방법, 이를 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 하나 이상의 세포에서 IL-34 매개 M-CSFR-1 신호전달을 억제하는 방법, 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법, 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법, 및/또는 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소 또는 제거하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기재된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA를 투여하는 단계를 포함한다. 전술한 방법은 IL-34 억제제(예를 들어, 서열번호: 1-23, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 작은 헤어핀 RNA, IL-34 작은 간섭 RNA, IL-34 마이크로RNA, 또는 IL-34 모르폴리노 올리고머, 또는 이러한 IL-34 억제제를 포함하는 조성물), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 전술한 방법은 서열번호: 1-23 중 어느 것, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 것의 IL-34 siRNA, 또는 이러한 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 예를 들어 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
또한 대상체의 세포에서 IL-34 발현을 억제하거나 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 방법이 본원에 개시되며, 상기 방법은 IL-34 억제제, 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 siRNA 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 전술한 방법은 IL-34 억제제(예를 들어, 서열번호: 1-23, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 작은 헤어핀 RNA, IL-34 작은 간섭 RNA, IL-34 마이크로RNA, 또는 IL-34 모르폴리노 올리고머, 또는 이러한 IL-34 억제제를 포함하는 조성물), 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 전술한 방법은 서열번호: 1-23 중 어느 것, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA를 포함하는 약제학적 제제, 또는 이러한 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 전술한 방법의 일부 구현예에서, 대상체는 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병의 치료를 필요로 한다.
또한 IL-34 siRNA가 이를 필요로 하는 환자에게 투여되는 치료 방법이 본원에 기재된다. 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 또한, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법이 본원에 기재된다.
또한, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포 또는 세포들에서 IL-34 매개 염증성 질환을 감소 또는 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 또한, IL-34 siRNA의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다. 예를 들어, 이를 필요로 하는 환자에서 증가된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재되며, 상기 방법은 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 증가된 IL-34 발현은 IL-34 발현의 대조군 수준, 예를 들어 건강한 대조군 환자 또는 건강한 대조군 환자의 코호트에서 측정된 IL-34의 평균 또는 중앙값 수준, 또는 증가된 IL-34 발현과 관련된 질환의 발병 또는 검출 이전의 환자에서 측정된 IL-34의 수준에 상대적일 수 있다.
또한 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 기재된다.
또한 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 M-CSFR-1 신호전달을 억제하는 방법이 본원에 기재된다.
또한 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소 또는 제거하는 방법이 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유성 협착은 장, 예를 들어 대장 또는 소장에 위치한다. 특정 구현예에서, 섬유성 협착은 대장에 위치한다. 일부 구현예에서, 섬유성 협착은 대장 및/또는 소장의 하나 이상의 부분, 예를 들어 맹장, 회장, 상행 결장, 횡행 결장, 하행 결장, S상 결장, 직장, 항문, 십이지장 및/또는 공장에 국한된다.
일부 구현예에서, IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA는 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여된다. 특정 구현예에서, IL-siRNA 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 경구 투여된다.
또한, 본원에 기재된 IL-34 억제제, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물이 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합하다.
또한 약제로서 사용하기 위한 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA가 본원에 기재된다. 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA는 약제로서 사용하기 위한 것일 수 있다.
염증성 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 억제제, 예를 들어 서열번호: 1 내지 8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA의 용도가 또한 본원에 기재된다. 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한 IL-34 억제제, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA가 또한 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(유형 I 및 II), 조직 또는 기관 거부반응, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환이다. 또한 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 또는 특발성 폐 섬유증(IPF)의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 염증성 질환은 염증성 장 질환이다. 일부 구현예에서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 또는 불확정 대장염이다. 특정 구현예에서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병이다.
또한, IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA를 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 IL-34 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 또한, IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 예를 들어, 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA를 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 방법이 본원에 기재된다. 상기 언급된 방법의 일부 구현예에서, 세포는 장 세포, 예를 들어, 장 간질 세포, 장 상피 세포, 장 줄기 세포, 분비 세포, 장세포, 배상 세포, 장내분비 세포, 파네스 세포, 전이 증폭 세포, 마이크로폴드 세포, 컵 세포 또는 터프트 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 장 섬유협착의 일부를 형성한다. 전술한 구현예에서, 대상체는 염증성 질환 또는 섬유증, 예를 들어 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병의 치료를 필요로 하는 대상체일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 약제학적 제제는 경구 투여될 수 있다. 특정 구현예에서, 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 환자에서 섬유증을 치료 또는 예방하거나 콜라겐 침착을 예방하는 방법일 수 있으며, 상기 방법은 IL-34의 특정 억제제, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
또한 섬유증의 치료를 위한 약제의 제조에서의 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA의 용도가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 구현예에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 다른 구현예에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증이다.
또한 섬유증의 치료에 사용하기 위한 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA가 본원에 기재된다. 일부 구현예에서, 섬유증은 장 섬유증이다. 일부 구현예에서, 섬유증은 폐 섬유증이다. 다른 구현예에서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증이다.
다양한 구현예에서, IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA는 경구, 국소, 비경구, 예컨대 피하 주사에 의한 것, 흡입 스프레이에 의한 것 또는 직장을 포함하는 하나 또는 여러 경로에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 구현예에서, IL-34 억제제는 섬유증, 예를 들어, 장 섬유증 또는 폐 섬유증을 갖는 환자에게 경구 투여될 수 있다.
본 발명은 분해를 위해 IL-34 RNA를 표적화할 수 있거나, RNA 스플라이싱을 방해할 수 있거나, 또는 IL-34 유전자 발현 또는 단백질 번역을 방지할 수 있는 IL-34 억제제의 투여를 포함하는 방법을 제공할 수 있다. 본 발명의 IL-34 siRNA를 포함하는 본 발명의 IL-34 억제제는 결합을 위해 마우스 및/또는 인간 IL-34 mRNA의 다양한 영역을 표적화할 수 있다.
본 발명의 일부 구현예에서, 환자에서 섬유증, 예를 들어 장 섬유증을 치료하거나, 장 섬유증 또는 폐 섬유증을 예방하거나, 또는 콜라겐 침착을 예방하는 방법은 약제학적 조성물, 예를 들어 IL-34의 특정 억제제, 예를 들어 IL-34 siRNA, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 비경구 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 장용 코팅, 예를 들어 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 장용 코팅을 포함한다.
본 발명의 구현예에서, 염증성 질환(예를 들어, 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병)을 치료 및/또는 예방하거나, 환자에서(예를 들어, 섬유협착성 크론병을 앓고 있는 환자에서) 섬유성 협착을 치료, 감소 및/또는 제거하거나, 섬유증(예를 들어, 장 섬유증 또는 폐 섬유증)을 치료하거나, 섬유증(예를 들어, 장 섬유증 또는 폐 섬유증)을 예방하거나, 또는 환자에서 콜라겐 침착을 치료, 개선 또는 예방하는 방법은 다양한 양의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 IL-34 억제제, 예를 들어 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 IL-34 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 적어도 1 ㎍, 적어도 5 ㎍, 적어도 10 ㎍, 적어도 20 ㎍, 적어도 30 ㎍, 적어도 40 ㎍, 적어도 50 ㎍, 적어도 60 ㎍, 적어도 70 ㎍, 적어도 80 ㎍, 적어도 90 ㎍ 또는 적어도 100 ㎍의 IL-34 억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 35 mg 내지 500 mg, 1 mg 내지 10 mg, 10 mg 내지 20 mg, 20 mg 내지 30 mg, 30 mg 내지 40 mg, 40 mg 내지 50 mg, 50 mg에서 60 mg, 60 mg 내지 70 mg, 70 mg 내지 80 mg, 80 mg 내지 90 mg, 90 mg 내지 100 mg, 100 mg 내지 150 mg, 150 mg 내지 200 mg, 200 mg 내지 250 mg, 250 mg 내지 300 mg, 300 mg 내지 350 mg, 350 mg 내지 400 mg, 400 mg 내지 450 mg, 450 mg 내지 500 mg, 500 mg 내지 600 mg, 600 mg 내지 700 mg, 700 mg 내지 800 mg, 800 mg 내지 900 mg, 900 mg 내지 1 g, 1 mg 내지 50 mg, 20 mg 내지 40 mg, 또는 1 mg 내지 500 mg의 IL-34 억제제 또는 IL-34 억제제를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
간 섬유증, 폐 섬유증 또는 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 IL-34 억제제, 예를 들어, 본원에 개시된 IL-34 siRNA를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 또한, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증 및/또는 신인성 전신 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 개시된 IL-34 siRNA와 같은 IL-34 억제제를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
도 1은 DLD-1, HT-29, HCT-116 및 NCM-460 세포에서 정규화된 IL-34 mRNA 발현 수준을 나타내는 그래프이다.
도 2a는 스크램블된 음성 대조군 올리고뉴클레오타이드(Src AS) 또는 서열번호: 1, 2, 3 또는 4의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(AS34New1, AS34New2, AS34New3, AS34New4)로 24시간 동안 형질감염된 HT-29 세포에서 정규화된 IL-34 mRNA 발현을 나타내는 그래프이다.
도 2b는 SrcAS 대조군 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 AS34New1 또는 AS34New3으로 형질감염된 HT-29 세포로부터의 웨스턴 블롯 세포 추출물을 보여준다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 2c는 SrcAS 대조군 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 AS34New1, AS34New3, 또는 AS34New4로 형질감염된 RAW 264.7 세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 3a는 SrcAS 대조군 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 AS34New1 또는 AS34New3으로 형질감염된 배양된 섬유협착성 크론병(FS CD) 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-엑틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 3b는 SrcAS 대조군 또는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 AS34New3으로 형질감염된 암 관련 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 4a는 2개의 대조군 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 하나(ControlASNew-1-PS 또는 ControlASNew-3-PS) 또는 서열번호: 1, 3, 또는 7의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(각각 New1-PS, New-3-PS 및 New-3-PS-MEC)로 형질감염된 HT-29 세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 4b는 2개의 대조군 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 하나(ControlASNew-1-PS 또는 ControlASNew-3-PS) 또는 서열번호: 1, 3, 또는 7의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(각각 New1-PS, New-3-PS 및 New-3-PS-MEC)로 형질감염된 RAW 264.7 세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 4c는 2개의 대조군 스크램블된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 하나(ControlASNew-1-PS 또는 ControlASNew-3-PS) 또는 서열번호: 1, 3, 또는 7의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(각각 New1-PS, New-3-PS 및 New-3-PS-MEC)로 형질감염된 MC-38 세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 IL-34(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 5a는 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이, CD 환자로부터의 결장암(Ileal CTR) 및 회장 염증성 CD(I CD) 및 섬유협착성 크론병(FS CD) 표본에 대한 수술을 받는 환자의 회장의 비환부로부터의 회장 대조군 표본에서 정규화된 M-CSFR-1 mRNA 발현을 나타내는 그래프이다.
도 5b는 회장 CTR, I CD 및 FS CD 조직 샘플로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 M-CSFR-1(상단) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 5c는 회장 CTR, I CD 및 FS CD 조직 샘플로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 상대적인 M-CSFR-1 신호의 정량적 분석을 나타낸다. M-CSFR-1 신호는 β-액틴 신호에 대해 정규화되었다.
도 5d는 결장암(회장 CTR)에 대한 수술을 받는 환자로부터의 회장 절편에서 M-CSFR-1의 면역조직화학적 검출을 나타낸다.
도 5d는 CD 환자(FS CD)의 회장 절편으로부터의 섬유협착성 크론병 표본에서 M-CSFR-1의 면역조직화학적 검출을 나타낸다.
도 5f는 이소형 대조군(이소형)을 사용한 회장 절편의 M-CSFR-1 항체 염색을 나타낸다.
도 5g는 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이, 회장 대조군 표본(Ileal CTR) 및 섬유협착성 크론병(FS CD)에서 정규화된 M-CSFR-1 mRNA 발현을 나타내는 그래프이다.
도 6a는 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이, 자극되지 않은 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포에서 정규화된 콜라겐 I형 알파 1 사슬(COL1A1) mRNA 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 6b는 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이, 자극되지 않은 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포에서 정규화된 콜라겐 III형 알파 1 사슬(COL3A1) mRNA 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 6c는 비자극 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 웨스턴 블롯은 COL1A1(상단 패널), COL3A1(중간 패널) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 6d는 웨스턴 블롯팅에 의해 평가된 바와 같이, 비자극 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포에서 정규화된 COL1A1 단백질 발현의 그래프를 나타낸다.
도 6e는 웨스턴 블롯팅에 의해 평가된 바와 같이, 비자극 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포에서 정규화된 COL3A1 단백질 발현의 그래프를 나타낸다.
도 6f는 자극되지 않은 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 배양된 장 섬유아세포로부터의 상층액 내의 총 콜라겐 함량을 나타낸다.
도 7a는 자극되지 않은 상태로 두거나(Unst) 또는 재조합 인간 IL-34, TNF-α 또는 IL-6으로 자극된 혈청 결핍된 장 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 블롯은 총(p38) 및 인산화된 p38(p-p38) 미토겐 활성화 단백질(MAP) 키나제에 대해 탐침되었다.
도 7b는 디메틸설폭사이드 대조군(DMSO) 또는 p38 억제제 SB202190(SB202190)으로 사전 처리되고 자극되지 않은 상태로 두거나, DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리한 후 재조합 인간 IL-34(IL-34)로 자극된 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 블롯은 COL1A1(상단 패널), COL3A1(중간 패널) 또는 β-액틴(하단)에 대해 탐침되었다.
도 7c는 DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리되고 자극되지 않은 상태로 두거나, DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리한 후 재조합 인간 IL-34로 자극된 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 COL1A1 신호의 정량화를 나타낸다. COL1A1 신호는 β-액틴 신호에 대해 정규화되었다.
도 7d는 DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리되고 자극되지 않은 상태로 두거나, DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리한 후 재조합 인간 IL-34로 자극된 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 COL3A1 신호의 정량화를 나타낸다. COL3A1 신호는 β-액틴 신호에 대해 정규화되었다.
도 7e는 DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리되고 자극되지 않은 상태로 두거나 DMSO 또는 SB202190으로 사전 처리된 후 재조합 인간 IL-34로 자극된 섬유아세포로부터의 상층액 내의 총 콜라겐 함량을 보여준다.
도 8a는 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이, 회장 대조군 표본(Ileal CTR), 또는 염증성(I CD) 또는 섬유협착성 크론병(FS CD) 장 조직 샘플로부터 채취한 장 표본에서 정규화된 IL-34 발현을 보여주는 막대 그래프이다.
도 8b는 회장 대조군(회장 CTR) 또는 염증성(I CD) 또는 섬유협착성 크론병(FS CD) 환자로부터의 쌍을 이루는 장 점막 샘플로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 블롯은 IL-34(상단 패널) 또는 β-액틴(하단 패널)에 대해 탐침되었다.
도 8c는 회장 CTR, I CD 및 FS CD 샘플로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 IL-34 신호의 정량화를 나타낸다.
도 8d는 회장 대조군 조직(회장 CTR)에서 IL-34의 면역조직화학적 염색을 나타낸다.
도 8e는 섬유협착성 크론병 장 조직(FS CD)에서 IL-34의 면역조직화학적 염색을 나타낸다.
도 8f는 이소형 대조군(이소형)을 이용한 장 조직의 염색을 나타낸다.
도 8g는 대조군의 회장 샘플(IlealCTR) 및 섬유협착성 크론병 환자(FS CD) 조직으로부터 단리된 섬유아세포에서 상대적인 IL-34 mRNA 발현을 보여주는 그래프이다.
도 8h는 대조군 환자의 회장 샘플(회장 CTR) 및 섬유협착성 크론병 환자(FS CD)로부터 단리되고 IL-34(상부) 및 β-액틴(하부) 신호에 대해 탐침된 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다.
도 9a는 서열번호: 3의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(IL-34AS) 또는 상보적인 센스 올리고뉴클레오타이드(NCAS)로 형질감염된 섬유협착성 크론병 환자(FS CD)로부터 배양된 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯을 나타낸다. 블롯은 IL-34, COL1A1, COL3A1 및 β-액틴 신호에 대해 탐침되었다.
도 9b는 배양되고 형질감염된 FS CD 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 IL-34 신호의 정량화를 나타낸다.
도 9c는 배양되고 형질감염된 FS CD 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 COL1A1 신호의 정량화를 나타낸다.
도 9d는 배양되고 형질감염된 FS CD 섬유아세포로부터의 추출물의 웨스턴 블롯에서 COL3A1 신호의 정량화를 나타낸다.
도 9e는 서열번호: 3의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(IL-34AS) 또는 상보적인 센스 올리고뉴클레오타이드(NCAS)로 형질감염된 FS CD 섬유아세포의 배양물로부터의 상층액 내의 총 콜라겐 함량을 나타낸다.
도 9f는 서열번호: 3의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(IL-34AS) 또는 상보적인 센스 올리고뉴클레오타이드(NCAS)로 형질감염된 배양된 FS CD 섬유아세포에서 세포 사멸의 백분율을 나타내는 그래프이다.
도 9g는 NCAS로 형질감염된 배양된 FS CD 섬유아세포의 형광 활성화 세포 분류(FACS) 플롯을 나타낸다. 세포는 아넥신 V 및 플루오레세인 이소티오시아네이트(Annexin V FITC-A, y축) 및 프로피디움 아이오다이드(Propidium Iodide-A, x축)에 대해 염색되었다.
도 9h는 IL-34AS로 형질감염된 배양된 FS CD 섬유아세포의 형광 활성화 세포 분류(FACS) 플롯을 나타낸다. 세포는 아넥신 V 및 플루오레세인 이소티오시아네이트(Annexin V FITC-A, y축) 및 프로피디움 아이오다이드(Propidium Iodide-A, x축)에 대해 염색되었다.
IL-34 억제제
IL-34 수준(예컨대, IL-34 mRNA 또는 단백질 수준) 및/또는 활성(예컨대, 생물학적 활성, 예를 들어, IL-34 수용체 자극)은 IL-34 유전자 또는 IL-34 유전자 산물(예를 들어, IL-34 mRNA)을 표적화하는 화합물 또는 조성물을 사용하여 감소될 수 있다.
IL-34 억제제는 비제한적으로 IL-34의 뉴클레오타이드 기반 억제제(예를 들어, IL-34 작은 헤어핀 RNA(shRNA), IL-34 마이크로RNA(miRNA), IL-34 작은 간섭 RNA(siRNA), 및 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 LNA 뉴클레오타이드, 펩타이드 핵산(PNA) 및 모르폴리노 올리고머를 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드), 및 이러한 화합물을 포함하는 조성물일 수 있다.
IL-34 안티센스 치료제
안티센스 치료제는 유전자 발현을 억제하는 데 사용할 수 있는 핵산 기반 화합물의 한 부류이다. 안티센스 치료제는 단일 또는 이중 가닥 데옥시리보핵산(DNA) 기반, 리보핵산(RNA) 기반, 혼합된 DNA 및 RNA 기반, 또는 DNA/RNA 화학적 유사체 화합물일 수 있다. 일반적으로, 안티센스 치료제는 안티센스 치료제 및 프리-mRNA 또는 mRNA 사이의 결합을 촉진하기 위해 주어진 유전자로부터 전사된 mRNA 또는 프리-mRNA 서열에 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하도록 설계된다. 이론에 얽매이지 않고, 대부분의 경우 안티센스 치료제는 mRNA 또는 프리-mRNA에 결합하여 단백질 번역을 억제하고, 프리-mRNA 스플라이싱을 성숙한 mRNA로 변경하고/하거나 mRNA의 파괴를 유발함으로써 작용하는 것으로 여겨진다. 대부분의 경우, 안티센스 치료 뉴클레오타이드 서열은 표적화된 유전자 또는 mRNA의 센스 서열의 일부에 상보적이다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 치료제는 IL-34 유전자 센스, IL-34 프리-mRNA 센스, 및/또는 IL-34 mRNA 센스 서열, 또는 이의 일부에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 기반 화합물이다. 본원에 기재된 IL-34 안티센스 치료제는 또한 IL-34 유전자 센스, IL-34 프리-mRNA 센스 및/또는 IL-34 mRNA 센스 서열, 또는 이의 일부에 결합할 수 있는 뉴클레오타이드 화학적 유사체 기반 화합물일 수 있다. IL-34 안티센스 치료제는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, IL-34 shRNA, IL-34 siRNA, IL-34 PNA, IL-34 LNA 및 IL-34 모르폴리노 올리고머를 포함한다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드(AON)는 표적 RNA 서열에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함하는 짧은 올리고뉴클레오타이드 기반 서열이다. AON은 전형적으로 8 내지 50개의 뉴클레오타이드 길이, 예를 들어 20개의 뉴클레오타이드 길이이다.
본원에 기재된 AON은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "화학적으로 변형된 뉴클레오사이드"는 아데노신, 시티딘, 티미딘, 구아노신, 또는 우리딘 이외의 임의의 뉴클레오사이드를 의미한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 비제한적으로 잠금 핵산(LNA), 예컨대, LNA 시티딘, LNA 티미딘, LNA 아데노신, 또는 LNA 구아노신; 안정화된 말단 5'-포스페이트 또는 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 갖는 뉴클레오사이드, 예컨대 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트, 및 5'-C-메틸 유사체; 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예컨대 2'-O-메틸시티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸티미딘, 및 2'-O-메틸아데노신; 5-메틸피리미딘, 예컨대 5-메틸시토신; 5-메틸퓨린, 예컨대 5-메틸구아닌; 5-메틸-2'-O-메틸시티딘; 5-메틸-2'-O-메틸티미딘; 5-메틸시티딘; 5-메틸우리딘; 또는 5-메틸 2'-데옥시시티딘을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 AON은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "뉴클레오사이드간 연결"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 인접한 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 연결을 의미한다. "변형된 뉴클레오사이드간 연결"은 뉴클레오사이드의 3' 위치와 비천연인 인접한 뉴클레오사이드의 5' 위치 사이의 연결을 지칭한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오사이드간 연결은 비제한적으로 포스포로티오에이트 연결; 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결 또는 보라노포스페이트 연결을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 AON은 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 및 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 AON은 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 또는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 IL-34 RNA 서열에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
펩타이드 핵산(PNA)은 DNA 또는 RNA를 모방하는 구조를 가진 짧은 인공 합성 중합체이다. PNA는 펩타이드 결합에 의해 연결된 반복되는 N-(2-아미노에틸)-글리신 단위로 구성된 골격을 포함한다. 본원에 기재된 IL-34 PNA는 IL-34 RNA 서열에 높은 특이성으로 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다.
잠금 핵산(LNA)은 리보스 모이어티가 2' 산소와 4' 탄소를 연결하는 추가 다리로 변형된 하나 이상의 변형된 RNA 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열이다. LNA는 유사한 올리고뉴클레오타이드 서열보다 더 높은 Tm을 갖는 것으로 여겨진다. 본원에 기재된 IL-34 LNA는 IL-34 RNA 서열에 높은 특이성으로 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다.
모르폴리노 올리고머는 포스포로디아미데이트 기를 통해 연결된 메틸렌모르폴린 고리의 골격에 부착된 DNA 염기를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 화합물이다. 본 발명의 모르폴리노 올리고머는 관심있는 특정한 IL-34 RNA 서열(예를 들어, 관심있는 IL-34 mRNA 또는 IL-34 프리-mRNA 서열)에 결합하여 유전자 발현을 방지하도록 설계될 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 모르폴리노 올리고머는 IL-34 mRNA 서열에 높은 특이성으로 결합하고 IL-34 유전자 발현을 억제하는 안티센스 치료제로서 사용될 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 모르폴리노 올리고머는 또한 IL-34 프리-mRNA 서열에 결합하여, IL-34 프리-mRNA 스플라이싱 및 IL-34 유전자 발현을 변경하는 데 사용될 수 있다.
작은 헤어핀 RNA(shRNA)는 일반적으로 유전자 발현을 침묵시키는 데 사용될 수 있는 헤어핀 유사 구조를 갖는 RNA 분자이다. shRNA는 일반적으로 shRNA 서열을 인코딩하는 플라스미드로부터 발현되고, 이는 렌티바이러스, 아데노바이러스 또는 아데노 관련 바이러스 발현을 허용하기 위해 바이러스 벡터로부터 발현될 수 있다. 이론에 얽매이지 않고, shRNA는 RNA 간섭(RNAi) 과정을 이용함으로써 유전자 발현을 억제하는 것으로 믿어진다. 간단히 말해서, shRNA 전사체는 Drosha와 Dicer에 의해 처리된 다음, RISC(RNA-induced silencing complex)에 로딩되어, 특정 mRNA의 표적화, 및 mRNA 분해 또는 단백질 번역 억제를 허용한다. 본원에 기재된 IL-34 shRNA는 IL-34의 유전자 발현을 억제할 수 있다.
작은 간섭 RNA(siRNA)는 분해를 위해 mRNA에 결합하고 표적화하는 RNAi 기계(예컨대, Drosha 및 RISC)를 이용하는 대략 20-25개의 염기쌍 길이(또한, 예를 들어 18-30개의 염기쌍 길이일 수 있음)의 이중가닥 RNA이다. siRNA는 발현을 위해 플라스미드 또는 벡터에 의존하지 않으며 일반적으로 예를 들어 형질감염에 의해 표적 세포에 직접 전달될 수 있다. IL-34 siRNA는 IL-34 mRNA 서열에 상보적인 RNA 서열을 포함하고 IL-34 단백질 번역을 방지하는 이중 가닥 RNA 서열이다. 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 서열번호: 1-8 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 siRNA, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
마이크로RNA(miRNA)는 RNA 침묵 및 유전자 발현의 전사 후 조절 기능을 하는 약 22개의 뉴클레오타이드를 함유하는 작은 비코딩 RNA 분자이다. miRNA는 mRNA 서열의 일부에 상보적인 서열을 포함한다. miRNA는 매우 특이적인 줄기 루프 구조를 나타내는 긴 단일 가닥 RNA 분자로부터 생산된다. 인공 miRNA는 자연 발생 miRNA 서열의 성숙한 21개 뉴클레오타이드 서열을 표적, 예를 들어 IL-34 mRNA 표적으로부터의 21개의 뉴클레오타이드 서열로 대체함으로써 설계된다.
본원에 기재된 IL-34 억제제는 올리고뉴클레오타이드의 말단 5'-포스페이트 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체의 안정화를 촉진하는 화학적 변형을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드 말단 5'-포스페이트 안정화를 촉진하거나 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체인 화학적 변형은 비제한적으로 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트 및 5'-C-메틸 유사체를 포함한다. AON 말단 5'-포스페이트 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형은 문헌[Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있으며, 이의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 억제제는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸시티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸티미딘, 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 억제제는 5-메틸피리미딘, 예를 들어 5-메틸시토신 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어 5-메틸구아닌을 포함하는 하나 이상의 화학적으로 변형된 염기를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 억제제는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 5-메틸-2'-O-메틸시티딘, 5-메틸-2'-O-메틸티미딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘, 및/또는 5-메틸 2'-데옥시시티딘 중 어느 것을 포함할 수 있다.
2'-OMe 뉴클레오타이드는 tRNA 및 다른 작은 RNA에서 자연적으로 발견된다. 올리고뉴클레오타이드 서열에 2'-OMe 뉴클레오타이드를 혼입시키는 것은 뉴클레아제 분해를 방지하고 가수분해에 대한 안정성을 증가시킨다. 올리고뉴클레오타이드에 2'-OMe 변형을 혼입시키는 것은 일반적으로 RNA-RNA 이합체의 Tm을 추가당 1-4℃만큼 증가시킨다.
2'-MOE 기의 도입은 일반적으로 생성된 올리고뉴클레오타이드의 Tm을 약 1.1℃만큼 증가시키고 뉴클레아제에 의한 분해에 대한 내성을 개선한다. 또한, 2'-MOE 올리고는 표적 mRNA 가닥의 RNase H 매개 분해를 보존하기 위해 갭머 화합물에 자주 사용된다.
본원에 기재된 IL-34 억제제는 하나 이상의 올리고뉴클레오사이드 연결이 포스페이트 연결인 포스페이트 골격을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 억제제는 변형된 올리고뉴클레오타이드 골격을 포함할 수 있으며, 여기서 뉴클레오타이드 서열의 뉴클레오사이드 연결 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결, 및 보라노포스페이트 연결로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본원에 기재된 IL-34 억제제의 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 억제제의 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 1, 2, 3개 이상의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 본원에 기재된 IL-34 억제제의 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 따라서, 일부 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 것의 IL-34 억제제의 모든 뉴클레오타이드 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 일부 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 것의 IL-34 억제제의 뉴클레오타이드 연결 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 siRNA는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19개 이상의 포스포로티오에이트 결합을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 서열번호: 1-8 중 어느 것의 IL-34 siRNA의 모든 뉴클레오타이드 연결은 포스포로티오에이트 연결이다.
IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드
본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(AON)는 IL-34 전사체(예를 들어, IL-34 mRNA 전사체)에 상보적인 짧은 합성 올리고뉴클레오타이드 서열이다.
IL-34 AON은 IL-34 mRNA 서열에 완전히 또는 거의 완전히 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, IL-34 AON은 비이합체화된 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, IL-34 AON은 2개의 올리고뉴클레오타이드의 이합체를 포함할 수 있으며, 여기서 제1 올리고뉴클레오타이드는 IL-34 mRNA 서열에 완전히 또는 거의 완전히 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하고 제2 올리고뉴클레오타이드는 제1 올리고뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. AON 결합 특이성은 해리 상수, 용융 온도(Tm)와 같은 파라미터 또는 단백질 또는 RNA 발현 수준의 변화와 같은 다른 기준의 측정 또는 IL-34 활성 또는 발현을 측정하는 다른 분석을 통해 평가될 수 있다.
본원에 개시된 바와 같은 IL-34 AON은, 예를 들어 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 뉴클레오타이드 길이, 또는 15-20, 15-25, 15-30, 15-35, 20-25, 20-30, 20-35, 25-30, 25-35, 또는 30-35개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 AON이 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35개 이하의 뉴클레오타이드 길이이도록 크기 상한에 의해 제한된다.
IL-34 AON은 IL-34 mRNA 서열 또는 IL-34 유전자 서열의 일부에 상보적인 올리고뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 마우스 또는 인간 IL-34 mRNA 또는 유전자 서열일 수 있다.
본 개시내용의 일부 구현예에서, IL-34 AON은 IL-34 mRNA 전사체 변이체의 일부 또는 그의 일부, 예를 들어 NCBI 참조 서열 NM_001172771.1(서열번호: 24), NM_001172772.1(서열번호: 25), 또는 NM_152456.2(서열번호: 26)의 인간 IL-34 mRNA 서열; 또는 NCBI 참조 서열 NM_001135100.2(서열번호: 27) 또는 NM_029646.3(서열번호: 28)의 마우스 IL-34 mRNA 서열에 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본원에 기재된 본 발명의 구현예에서, IL-34 AON은 하나 이상의 종의 IL-34 유전자로부터 생산된 IL-34 mRNA, 예를 들어 마우스 및 인간 IL-34 mRNA 전사체를 표적화할 수 있다. 예를 들어, IL-34 AON은 포유동물 IL-34 유전자, 예를 들어 인간(즉, Homo sapiens) IL-34 유전자 또는 마우스(즉, mus musculus) IL-34 유전자의 IL-34 mRNA를 표적화할 수 있다. 특정 구현예에서, IL-34 AON은 인간 IL-34 mRNA를 표적화한다. 일부 구현예에서, IL-34 AON은 IL-34 유전자 또는 IL-34 mRNA의 뉴클레오타이드에 상보적인 뉴클레오타이드 서열, 또는 이의 일부를 포함한다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 뉴클레오타이드 서열 5'-CTCACCAAGACCCCACAG-3'(서열번호: 1); 5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2); 5'-CTTTGGCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3); 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4); 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5); 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호: 6); 5'-CTTTGGCCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 7); 또는 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호 8), 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 IL-34 AON을 포함하며, 여기서 X는 5-메틸시티딘이다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 변형된 리보뉴클레오사이드 및 변형된 데옥시리보뉴클레오사이드를 포함하는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 비제한적으로 2'-O-(2-메톡시에틸) 변형, 예를 들어 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신, 2'-O(2-메톡시에틸)아데노신, 2'-O-(2-메톡시에틸)시토신, 2'-O-(2-메톡시에틸)우리딘, 및 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 개시내용은 IL-34 억제제의 혼합 양식, 예컨대 IL-34 펩타이드 핵산(PNA) 및 IL-34 잠금 핵산(LNA)의 조합을 제공한다. 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 또한 비제한적으로 잠금 핵산(LNA), 2'-O-메틸, 2'-플루오로 및 2'-플루오로-β-D-아라비노뉴클레오타이드(FANA) 변형을 포함한다. 본원에 기재된 IL-34 AON에 포함될 수 있는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 문헌[Johannes and Lucchino, (2018) "Current Challenges in Delivery and Cytosolic Translocation of Therapeutic RNAs" Nucleic Acid Ther. 28(3): 178-93; Rettig and Behlke, (2012) "Progress toward in vivo use of siRNAs-II" Mol Ther 20:483-512; and Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있으며, 이들 각각의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 올리고뉴클레오타이드의 말단 5'-포스페이트의 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형을 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드 말단 5'-포스페이트 안정화를 촉진하거나 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체인 화학적 변형은 비제한적으로 5'-메틸 포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트, 5'-메틸렌포스포네이트 유사체, 5'-E-비닐 포스포네이트(5'-E-VP), 5'-포스포로티오에이트 및 5'-C-메틸 유사체를 포함한다. AON 말단 5'-포스페이트 안정화 및 5'-포스페이트의 포스파타제 내성 유사체를 촉진하는 화학적 변형은 문헌[Khvorova and Watts, (2017) "The chemical evolution of oligonucleotide therapies of clinical utility" Nat Biotechnol., 35(3):238-48]에 기재되어 있으며, 이의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재된 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 AON은 2'-O-메틸 리보뉴클레오사이드, 예를 들어 2'-O-메틸시티딘, 2'-O-메틸구아노신, 2'-O-메틸우리딘, 2'-O-메틸티미딘, 및/또는 2'-O-메틸아데노신을 포함하는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 AON은 하나 이상의 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함할 수 있으며, 여기서 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드는 5-메틸피리미딘, 예를 들어 5-메틸시토신 및/또는 5-메틸퓨린, 예를 들어 5-메틸구아닌을 포함하는 염기를 포함한다. 본원에 기재된 IL-34 AON은 하기 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드 5-메틸-2'-O-메틸시티딘, 5-메틸-2'-O-메틸티미딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘, 및/또는 5-메틸 2'-데옥시시티딘 중 어느 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 AON은 뉴클레오타이드 서열 5'-CTCACCAAGACCCCACAG-3'(서열번호: 1), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 또는 5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호 6), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열을 포함하는 IL-34 AON, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 3번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 3번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 7의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 3번째 시티딘(5' 말단으로부터) 이외의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호: 7 이외의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 IL-34 AON을 생성한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 3번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 5-메틸시티딘이 아닌 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호: 7 이외의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 IL-34 AON을 생성한다.
일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 5의 5번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서 서열번호: 5의 5번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 8의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 5번째 시티딘(5' 말단으로부터) 이외의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호: 8 이외의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 IL-34 AON을 생성한다. 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 5번째 시티딘(5' 말단으로부터)은 5-메틸시티딘이 아닌 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드로 치환되어, 서열번호: 8 이외의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 IL-34 AON을 생성한다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 또한 하나 이상의 LNA 뉴클레오타이드를 포함하는 IL-34 AON을 포함한다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 AON은
· 5'-cttTGGGCXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 9), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-ctttGGGCXGCACCAGcttc-3'(서열번호: 10), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-cttTGGGCcgCACCAGCttc-3'(서열번호: 11), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신인 서열;
· 5'-cttTGGGCcGCACCAGCttc-3'(서열번호: 12), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘인 서열;
· 5'-ggcXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 13), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-cttTGGGCXGCACcag-3'(서열번호: 14), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, a는 LNA 아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-tgaCCXGGAAGCAgtt-3'(서열번호: 15), 여기서 a는 LNA 아데노신이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열
중 어느 것의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 LNA이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 LNA 시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 LNA 티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호 9의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
또 다른 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 LNA 시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 LNA 티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 10의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
또 다른 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 9번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 LNA 시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 LNA 티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 10번째 뉴클레오사이드는 LNA 구아노신으로 치환되어, 서열번호: 11의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
또 다른 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 9번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 LNA 시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 LNA 티미딘으로 치환되어, 서열번호: 12의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
다른 구현예에서, 서열번호: 3의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)는 서열번호: 9, 10, 11, 또는 12 중 어느 하나에서 치환된 것 이외의 LNA 뉴클레오타이드로 치환될 수 있다. 다른 구현예에서, 서열번호: 3은 서열번호: 9, 10, 11 또는 12 중 어느 하나에서 치환된 것 이외의 하나 이상의 위치에서 LNA 뉴클레오타이드로 치환될 수 있다.
특정 구현예에서, IL-34 AON은 2'-MOE 뉴클레오사이드를 포함하고 IL-34 AON의 서열은
· 5'-CxTxTxTxGxGGCXGCACCAGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 16), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-TxCxCxAxTxGACCXGGAAGCxAxGxTxTx-3'(서열번호:17), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-CxTxTxTxGxGxGCXGCACCAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 18), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-TxCxCxAxTxGxACCXGGAAGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 19), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
· 5'-CxTxTxTxGxGxGxCxXGxCxAxCxCxAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 20), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
· 5'-TxCxCxAxTxGxAxCxCxXGxGxAxAxGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 21), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열,
중 하나,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 5번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 16의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 5번째, 6번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호: 3의 15번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되며; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 18의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 8번째, 11번째, 13번째, 14번째, 17번째, 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 모든 티미딘은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 모든 구아노신은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호: 3의 모든 아데노신은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되며; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 20의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
다른 구현예에서, 서열번호: 3의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)는 서열번호: 16, 18, 또는 20 중 어느 하나에서 치환된 것 이외의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 서열번호: 3은 서열번호: 16, 18, 또는 20 중 어느 하나로 치환된 것 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-MOE 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되고; 서열번호: 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되며; 서열번호: 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되고; 서열번호: 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되며; 서열번호: 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 17의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되고; 서열번호: 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되며; 서열번호: 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되고; 서열번호: 5의 6번째, 15번째 및 18번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되며; 서열번호: 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 19의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
일부 구현예에서, 서열번호: 5의 2번째, 3번째, 8번째, 9번째 및 16번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘으로 치환되고; 서열번호: 5의 모든 티미딘은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘으로 치환되며; 서열번호: 5의 모든 구아노신은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신으로 치환되고; 서열번호: 5의 모든 아데노신은 각각 독립적으로 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신으로 치환되며; 서열번호: 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 21의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
다른 구현예에서, 서열번호: 5에서 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)는 서열번호: 17, 19, 또는 21 중 어느 하나에서 치환된 것 이외의 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 서열번호: 5는 서열 17, 19 또는 21 중 어느 하나에서 치환된 것 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-MOE 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
추가로, 일부 구현예에서, IL-34 AON은 2'-OMe 뉴클레오사이드를 포함하고 IL-34 AON의 서열은
· 5'-CyTyTyTyGyGGCXGCACCAGyCyTyTyCy-3'(서열번호: 22), 여기서 Cy는 2'-O-메틸시티딘이고, Ty는 2'-O-메틸티미딘이며, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
· 5'-TyCyCyAyTyGACCXGGAAGCyAyGyTyTy-3'(서열번호: 23), 여기서 Cy는 2'-O-메틸시티딘이고, Ty는 2'-O-메틸티미딘이며, Gy는 2'-O-메틸구아노신이고, Ay는 2'-O-메틸아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열
중 하나,
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된다.
예를 들어, 일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 3의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 1번째, 17번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-메틸시티딘으로 치환되고; 서열번호: 3의 2번째, 3번째, 4번째, 18번째 및 19번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-메틸티미딘으로 치환되며; 서열번호: 3의 5번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-메틸구아노신으로 치환되고; 서열번호: 3의 9번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 22의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
다른 구현예에서, 서열번호: 3의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)는 서열번호: 22에서 치환된 것 이외의 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 서열번호: 3은 서열번호: 22에서 치환된 것 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-34 AON은 서열번호: 5의 뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 2'-OMe 뉴클레오사이드이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 5의 1번째, 5번째, 19번째 및 20번째 뉴클레오사이드(5' 말단에 대해)는 각각 독립적으로 2'-O-메틸티미딘으로 치환되고; 서열번호: 5의 2번째, 3번째 및 16번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-메틸시티딘으로 치환되며; 서열번호: 5의 4번째 및 17번째 뉴클레오사이드는 각각 독립적으로 2'-O-메틸아데노신으로 치환되고; 서열번호: 5의 18번째 뉴클레오사이드는 2'-O-메틸구아노신으로 치환되며; 서열번호: 5의 10번째 뉴클레오사이드는 5-메틸시티딘으로 치환되어, 서열번호: 23의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 IL-34 AON을 생성한다.
다른 구현예에서, 서열번호: 5의 하나 이상의 뉴클레오사이드(들)는 서열번호: 23에서 치환된 것 이외의 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 서열번호: 5는 서열번호: 23에서 치환된 것 이외의 하나 이상의 위치에서 2'-OMe 뉴클레오사이드로 치환될 수 있다.
본원에 기재된 IL-34 AON은 올리고뉴클레오사이드 연결 중 하나 이상이 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 포스페이트 골격을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 IL-34 AON은 하나 이상의 포스페이트 연결을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 AON은 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결 및 보라노포스페이트 연결로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 변형된 뉴클레오사이드간 연결을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 IL-34 AON의 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 본원에 기재된 IL-34 AON의 일부 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 1, 2, 3개 또는 그 이상의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 본원에 기재된 IL-34 AON의 바람직한 구현예에서, 뉴클레오타이드 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 따라서, 일부 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 것의 IL-34 AON의 모든 뉴클레오타이드 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 IL-34 AON의 모든 뉴클레오타이드 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 서열번호: 7의 IL-34 AON의 모든 뉴클레오타이드 연결은 포스포로티오에이트 연결이다. 일부 구현예에서, 서열번호: 1-23 중 어느 것의 IL-34 AON의 뉴클레오타이드 연결 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 연결이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 서열번호: 3의 IL-34 AON의 뉴클레오타이드 연결 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 연결이다. 또 다른 예에서, 일부 구현예에서, 서열번호: 7의 IL-34 AON의 뉴클레오타이드 연결 중 하나 이상은 포스포로티오에이트 연결이다.
일부 구현예에서, 개시된 IL-34 AON 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 선택적으로 적어도 하나의 변형된 핵염기, 예컨대 5-메틸시토신, 및/또는 적어도 하나의 메틸포스포네이트 뉴클레오타이드를 가질 수 있으며, 이는 예를 들어, 5' 또는 3' 말단 중 하나에만 또는 5' 및 3' 말단 둘 모두에 또는 올리고뉴클레오타이드 서열을 따라 위치한다.
고려되는 IL-34 AON은 선택적으로 적어도 하나의 변형된 당을 포함할 수 있다. 예를 들어, 올리고뉴클레오타이드를 구성하는 적어도 하나의 뉴클레오타이드의 당 모이어티는 2'-OH 기가 OR, R, R'OR, SH, SR, NH2, NR2, N3, CN, F, Cl, Br 및 I(여기서, R은 알킬 또는 아릴이고 R'는 알킬렌임)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나에 의해 대체될 수 있는 리보스이다.
본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-34 AON은 갭머 화합물이다. 갭머 화합물은 변형된 뉴클레오타이드의 5' 및 3' 측접 그룹을 포함하는 올리고뉴클레오타이드 서열이다. 변형된 뉴클레오타이드의 이러한 측접 그룹은 뉴클레아제 분해로부터 뉴클레오타이드의 내부 그룹을 보호하는 것으로 생각된다. 뉴클레오타이드의 내부 그룹은 일반적으로 6-10개의 뉴클레오타이드 길이이다. 측접 뉴클레오타이드의 각각의 5' 또는 3' 그룹은 3, 4, 5, 6개 이상의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 갭머 화합물에서 측접 뉴클레오타이드의 5' 및 3' 그룹은 길이가 동일한 수의 뉴클레오타이드일 수 있다. 변형된 뉴클레오타이드의 측접 그룹은, 예를 들어 2'-MOE, 2'-OMe 및 LNA 뉴클레오타이드를 포함한다. 갭머 화합물 서열은 또한 변형된 뉴클레오사이드간 연결(예를 들어, 포스포로티오에이트 연결), 2'-MOE, 2'-OMe, LNA, PNA, 5-메틸시티딘, 및 본원에 기재된 다른 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드를 포함하는 변형을 포함할 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오타이드는 각 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 혼입된 뉴클레오타이드 서열의 표적화 부분이 IL-34 mRNA 서열 또는 IL-34 상호작용 파트너의 mRNA 서열에 완전히 또는 거의 완전히 상보적이도록 설계될 수 있다. 이러한 상보적이거나 거의 상보적인 뉴클레오타이드 서열의 혼입은 주어진 표적에 대해 고도의 특이성을 갖는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 조작할 수 있게 한다. 특이성은 해리 상수와 같은 매개변수, 또는 단백질 또는 RNA 발현 수준의 변화와 같은 다른 기준의 측정 또는 IL-34 활성 또는 발현을 측정하는 다른 분석을 통해 평가될 수 있다.
자가면역 및 염증성 질환
본 개시내용은 부분적으로, 개시된 안티센스 화합물을 투여하는 단계을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 IL-34 활성과 관련된 염증성 장애를 치료하는 것을 고려한다. 일부 구현예에서, 개시된 안티센스 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 염증성 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 본 개시내용의 일부 구현예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량은 염증성 질환을 치료하기 위해, 예를 들어 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생성을 억제하기 위해 및/또는 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하기 위해 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 "염증성 질환"은 비제한적으로 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증(예컨대, 치주염), 색소성 융모결정성 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 유육종증, 피부 병변, CNS 염증 질환, 또는 자가면역 질환을 포함하는 많은 급성 및 만성 염증성 장애를 지칭한다.
일부 구현예에서, 개시된 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 루푸스와 관련된 피부 병변을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 루푸스와 관련된 피부 병변을 치료하는 것은 피부 병변의 수를 감소시키는 것, 피부 병변의 형성 속도를 감소시키는 것, 및 피부 병변의 중증도를 감소시키는 것으로부터 선택되는 적어도 하나의 효과를 포함한다. 개시된 안티센스 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 루푸스 및/또는 루푸스 신염을 앓고 있는 환자에서 루푸스 및/또는 루푸스 신염을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 루푸스와 관련된 신장 병태의 진행을 늦추는 방법이 제공된다.
개시된 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 CNS 염증성 질환을 치료하거나, 발병 위험을 감소시키거나, 또는 발병을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 상기 방법은 예를 들어 CNS 염증성 질환이 발생할 위험이 있는 대상체를 치료하는 것; 예컨대, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 이러한 방식으로 치료될 수 있는 CNS 염증성 질환은 다발성 경화증, 실험적 자가면역 뇌척수염, 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 및 파킨슨병을 포함한다.
또한 개시된 화합물, 예를 들어, IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환을 치료하거나, 발병 위험을 감소시키거나, 또는 발병을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 상기 방법은 자가면역 질환이 있거나 발생할 위험이 있는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 이러한 방식으로 치료될 수 있는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, I형 당뇨병, 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 및 특발성 폐섬유증을 포함한다.
염증성 장 질환
본 개시내용은 또한 개시된 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에서 염증성 장 질환의 치료 방법을 제공한다. 본원에 사용된 "염증성 장 질환"은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 결장염, 베체트병, 현미경적 결장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 또는 불확정 대장염을 포함하는 다수의 만성 염증 질환을 지칭한다. 크론병과 궤양성 대장염은 염증성 장 질환의 가장 흔한 두 가지 형태이다. 염증성 장 질환은 소화기 계통의 자가면역 질환이다. 크론병은 말단 회장을 포함하여 위장관의 어느 부분에 국한될 수 있으며 위장관의 모든 세포 유형에 영향을 미칠 수 있다. 궤양성 대장염은 결장과 직장에 국한되며 점막 세포에만 영향을 미친다.
염증성 크론병은 과도한 위장 염증을 유발하는 비정상적인 면역 반응을 특징으로 한다. 염증성 크론병은 소장 및/또는 대장의 일부, 예를 들어 회장 및 결장을 포함하는 장벽에 가장 흔히 영향을 미친다. 염증성 크론병은 또한 궤양뿐만 아니라 두껍고 팽윤된 조직의 발달과 관련이 있다. 면역계 기능에서 역할을 하는 유전자의 돌연변이(예컨대, NOD2, ATG16L1, IL23R 및 IRGM)는 크론병과 관련이 있는데, 적절한 자가포식과 관련된 유전자이기 때문이다.
섬유협착성 크론병은 위장관의 섬유협착성 병변/섬유성 협착의 발생을 포함하는 크론병의 한 가지 형태이다. 섬유성 협착은 결장과는 달리 회장의 크론병과 더 자주 관련된다. 염증은 일반적으로 발달 협착에 선행한다.　협착은 하기 증상: 복부 경련, 복통, 복부 팽만감 및 팽창, 식욕 부진, 피로, 메스꺼움, 구토 및 변비와 관련될 수 있다. 크론병으로 앓고 있는 환자의 50% 초과가 섬유협착증을 경험한다.
섬유성 협착은 세포 표면 IL-17A 수용체 발현 및 콜라겐 아형 I, III 및 V를 포함한 콜라겐 생성 증가와 관련이 있다. 섬유성 협착은 또한 누공(fistula)의 동시 발생과 관련이 있다. 협착은 과량의 세포외 기질(ECM)의 침착을 갖는 염증성 및 중간엽 세포의 혼합물의 존재에 의해 조직학적으로 특성화된다. 장의 활성화된 중간엽 세포는 피브로넥틴 및 콜라겐(예컨대, 콜라겐 III 및 IV형)을 포함한 ECM 성분을 축적한다. 무질서한 평활근 증식과 과도한 ECM 침착은 협착성 장 조직의 기계적 특성을 변형하여, 섬유성 협착과 관련된 장관의 증가된 경직 및 협소를 초래하는 것으로 여겨진다. 섬유성 협착의 존재는 장벽의 점막, 점막하 및 근육층 모두에서 장 조직 이상을 초래한다.
환경적 요인과 유전적 요인 모두는 염증성 장 질환에서 역할을 하는 것으로 여겨지지만, 이러한 요인의 정체는 잘 정의되어 있지 않다. 예를 들어, 습관적인 흡연은 크론병 발생 위험을 2배 증가시킨다. 환경적 성분은 섭취한 식품 및 약물에 대한 노출에 의해 영향을 받는 장내 미생물의 변화를 포함할 수 있다.
염증성 장 질환은 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 심한 경련, 근육 경련, 체중 감소, 영양 실조, 발열, 빈혈, 피부 병변, 관절 통증, 눈 염증, 간 장애, 관절염, 괴저 농피증, 원발성 경화성 담관염 및 비갑상선 질환 증후군과 관련이 있으며, 개시된 안티센스 화합물을 사용하여 이러한 증상을 치료하는 것, 예를 들어 성장 결함을 앓을 수 있는 궤양성 대장염을 앓고 있는 어린이를 치료하는 것이 또한 일 구현예에서 고려된다.
장 섬유증
장 섬유증은 일반적으로 염증성 장 질환(IBD)에 의해 유발되는 만성 염증과 같은 염증에 대한 장 조직의 반응으로부터 초래된다. IBD에서, 증가된 수준의 SMAD7은 TGF-β 경로 활성화 및 Smad2/3 인산화를 통해 매개되는 항염증 유전자 발현을 차단한다. 증가된 TGF-β 신호전달에 노출된 근섬유아세포는 증가된 양의 콜라겐을 생산한다. 크론병의 맥락에서, 지속적이고 만성적인 염증은 섬유화 과정을 촉진하여, 소장 및 결장 협착을 포함한 협착을 형성한다.
장 섬유증은 조영 증강 초음파촬영과 같은 다양한 영상 기술에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Quaia et al. The value of small bowel wall contrast enhancement after sulfur hexafluoride-filled microbubble injection to differentiate inflammatory from fibrotic strictures in patients with Crohn's disease. Ultrasound Med. Biol. 38, 1324-1332 (2012); Nylund et al. Quantitative contrast-enhanced ultrasound comparison between inflammatory and fibrotic lesions in patients with Crohn's disease. Ultrasound Med. Biol. 39, 1197-1206 (2013); Stidham et al. Ultrasound elasticity imaging for detecting intestinal fibrosis and inflammation in rats and humans with Crohn's disease. Gastroenterology 141, 819-826 (2011)]을 참고한다. 자화 전달 MRI와 같은 MRI 기술도 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Maccioni et al. Value of T2-weighted magnetic resonance imaging in the assessment of wall inflammation and fibrosis in Crohn's disease. Abdom. Imaging 37, 944-957 (2012); Adler et al. Magnetization transfer helps detect intestinal fibrosis in an animal model of Crohn disease. Radiology 259, 127-135 (2011); Pazahr et al. Magnetization transfer for the assessment of bowel fibrosis in patients with Crohn's disease: initial experience. Magn. Reson. Mat. Phys. Biol. Med. 26, 291-301 (2013)]을 참고한다.
섬유증
간 섬유증, 폐 섬유증 및/또는 장 섬유증과 같은 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법은 본 개시내용의 일부를 형성한다. 이러한 방법은 IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자 또는 위험에 있는 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 간 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다. 대안적으로, IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다. 대안적으로, IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 제공된다.
상기 방법을 사용하여 치료된 환자는 감지가능한 섬유증을 가질 수 있거나 갖지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 후, 예컨대 1일, 2일, 1주, 1개월 또는 6개월 이상 후, 환자에게 존재하는 섬유증의 양의 적어도 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40% 또는 심지어 50% 이상의 감소를 갖는다. 이러한 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여는 예컨대, 적어도 매일일 수 있다. 화합물은 경구 투여될 수 있다. IL-34 억제제, 예를 들어 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 투여한 결과로서 환자에서 섬유증의 임상적 징후의 지연은 본원에 개시된 것과 같은 IL-34 억제제가 투여되지 않은 환자와 비교하여 적어도 예컨대, 6개월, 1년, 18개월 또는 심지어 2년 이상일 수 있다.
필요로 하는 환자는 간경변증으로 발전한 간 섬유증을 가질 수 있다. 간 섬유증의 위험이 있는 환자는 B형 간염, C형 간염 또는 비알코올성 지방간염(NASH)을 갖는 환자를 포함할 수 있다. NASH는 지방증(steatosis) 및 간경변을 포함한 비알코올성 지방간 질환의 범위에 포함된다. NASH는 비만, 2형 당뇨병, 이상지질혈증을 특징으로 하는 대사증후군의 한 가지 성분이며, 이는 결국 간세포 암종으로 이어질 수 있다.
특정 저장 질환 및 대사의 선천적 오류, 예컨대 알파 1-항트립신 결핍, 구리 저장 질환(예컨대, 윌슨병), 과당혈증, 갈락토스혈증, 글리코겐 저장 질환(예컨대, III, IV, VI, IX 및 X형), 철 과부하 증후군(예컨대, 혈색소 침착증), 지질 이상(예컨대, 고셔병), 퍼옥시좀 장애(예컨대, 젤위거 증후군), 및 티로신혈증; 박테리아 감염(예컨대, 브루셀라증); 기생충 감염(예컨대, 포충증(echinococcosis)); NASH; 바이러스 감염(예컨대, 만성 B형 또는 C형 간염을 포함하는 B형 또는 C형 간염); 버드-키아리(Budd-Chiari) 증후군; 심부전; 간 정맥폐쇄성 질환; 및 문맥 혈전증 중 적어도 하나의 치료와 같이 간 섬유증과 관련된 장애를 치료하는 방법이 또한 제공된다. 선천성 간 섬유증을 치료하는 방법이 또한 고려된다. 조성물은 경구 투여될 수 있다.
약물 및/또는 알코올 남용은 간 섬유증의 사례에 연루되어 왔다. 약물 및/또는 알코올 남용의 병력이 있는 환자, 예를 들어, 알코올, 아미오다론, 클로르프로마진, 이소니아지드, 메토트렉세이트, 메틸도파, 옥시페니사틴 및 톨부타미드 중 적어도 하나를 남용한 이력이 있는 환자에서 간 섬유증을 치료하는 방법이 본원에서 고려된다.
장 섬유증의 위험이 있는 환자는 궤양성 대장염, 염증성 장 질환 또는 크론병이 있는 환자를 포함할 수 있다. 위험에 있는 환자는 또한 크론병 또는 대장염, 광범위하고/하거나 심각한 결장 질환의 진단에서 이른 시기에 있는 환자, 원발성 경화성 담관염이 존재하는 환자 및/또는 암의 가족력이 있는 환자를 포함할 수도 있다.
궤양성 대장염, 염증성 장 질환, 또는 크론병 중 적어도 하나의 치료와 같은 장 섬유증과 관련된 장애를 치료하는 방법이 또한 제공된다.
IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 본원에 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약제학적 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에서 고려된다.
예를 들어, IL-34 AON을 포함하는 본 발명의 IL-34 억제제는 단독으로 또는 서로 조합하여 사용될 수 있으며, 이에 의해 본 발명의 적어도 2개의 IL-34 억제제가 단일 조성물에서 또는 치료 요법의 일부로서 함께 사용된다. 본 발명의 IL-34 억제제는 또한 약물 및/또는 알코올 남용, 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 골수 섬유증, 후복막 섬유증, 또는 신인성 전신 섬유증을 치료하기 위한 다른 약물과 조합하여 사용될 수 있다.
치료 및 평가
본원에 기재된 바와 같은 "환자" 또는 "대상체"는 비제한적으로 포유동물, 영장류 및 인간을 포함하는, 염증성 및/또는 섬유성 질환의 위험이 있거나, 이를 앓거나 또는 이에 대해 진단된 임의의 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 환자는 예를 들어 고양이, 개 또는 말과 같은 비인간 포유동물일 수 있다. 환자는 염증성 및/또는 섬유성 질환이 발생할 위험이 높은 것으로 진단된 개체, 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단받은 사람, 이전에 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓았던 사람, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 증상 또는 징후, 예를 들어 IL-34 발현 신호에 대해 평가된 개체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 "필요로 하는 환자"는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 증상 또는 징후 중 어느 것을 앓고 있는 환자, 염증성 및/또는 섬유성 질환의 증상 또는 징후 중 어느 것을 앓을 수 있는 환자, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하기 위한 본 개시내용의 방법으로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 환자를 지칭한다. 필요로 하는 환자는 염증성 및/또는 섬유성 질환이 발생할 위험이 있는 것으로 진단된 환자, 과거에 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓았던 환자, 또는 이전에 염증성 및/또는 섬유성 질환에 대해 치료받은 환자를 포함할 수 있다. IL-34 발현 또는 활성의 증가된 수준과 관련된 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓고 있는 개체가 특히 관련이 있다.
용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 등은 일반적으로 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 의미하기 위해 본원에서 사용된다. 상기 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 방지한다는 점에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 질환에 기인한 부작용을 부분적으로 또는 완전히 치유한다는 점에서 치료적일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "치료"는 포유동물, 특히 인간에서 질환의 임의의 치료를 포함하며, 이는 (a) 질환에 취약할 수 있지만 이를 갖는 것으로 아직 진단받지 않은 대상체에서 질환이 발생하는 것을 예방하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 질환의 중증도 또는 범위가 증가하는 것을 예방하는 것; (c) 질환을 경감시키는 것, 즉 질환의 부분적 또는 완전한 개선을 유발하는 것; 또는 (d) 질환의 재발을 예방하는 것, 즉 질환의 증상의 이전의 성공적인 치료 또는 질환의 치료 후에 질환이 활성 상태로 되돌아가는 것을 예방하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이 "유효량" 또는 "약제학적 유효량"은 환자에게 투여될 때 병태를 적어도 부분적으로 치료하기에 충분한 제제의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 병태의 중증도, 성분의 투여 경로, 및 치료되는 환자의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다. 따라서, 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 유효량은 제제의 투여가 염증성 및/또는 섬유성 질환이 대상체에서 발생하는 것을 예방하거나, 염증성 및/또는 섬유성 질환 진행을 예방하거나(예컨대, 직장 출혈, 빈혈 또는 위장 염증과 같은 염증성 장 질환의 증상의 시작 또는 증가된 중증도를 예방하거나), 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환의 일부 또는 전부 관련된 증상을 완화하거나 완전히 개선하는, 예컨대 질환의 퇴행을 유발하도록 환자에서 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 데 필요한 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 양이다.
치료의 효능은 염증성 및/또는 섬유성 질환과 관련된 총 증상의 평가, 조직 조직학의 분석, 생화학적 분석, 영상화 방법, 예컨대 자기 공명 영상화, 또는 기타 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 치료 효능은 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 염증성 질환을 앓고 있는 환자에게 투여한 후 복통, 구토, 설사, 직장 출혈, 경련, 근육 경련, 체중 감소, 영양실조, 발열, 빈혈 또는 염증성 질환과 관련된 총체적 병리학의 다른 측면과 같은 질환의 총체적 증상을 분석함으로써 평가될 수 있다.
치료의 효능은 또한 예를 들어 조직 생검(예컨대, 위장 조직 생검)을 수득하고 총 조직 또는 세포 형태 또는 염색 특성을 평가함으로써, 조직 또는 세포 수준에서 평가될 수 있다. 단백질 또는 RNA 발현을 검사하는 생화학적 분석은 또한 치료의 효능을 평가하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 면역세포화학적, 면역조직화학적, 웨스턴 블롯팅 또는 노던 블롯팅 방법, 또는 정량적 또는 반정량적 중합효소 연쇄 반응과 같은 RNA 수준을 평가하는 데 유용한 방법을 통해 분리된 세포 또는 비분리된 조직에서 IL-34, IL-6, IL-8, TNF-알파, 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환, 염증성 사이토카인 생산, 또는 IL-34 매개 염증성 반응을 나타내는 다른 단백질 또는 유전자 산물의 수준을 평가할 수 있다. 또한 대변, 혈장 또는 혈청에서 발견되는 유용한 바이오마커의 존재 또는 발현 수준을 평가하여 질환 상태 및 치료 효능을 평가할 수 있다.
치료의 효능을 평가할 때, 유효한 평가를 보장하기 위해 적합한 대조군이 선택될 수 있다. 예를 들어, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여 후 염증성 및/또는 섬유성 질환이 있는 환자에서 평가된 증상을 치료 전 또는 치료 과정의 더 이른 시점의 동일한 환자 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단되지 않은 다른 환자에서의 증상과 비교할 수 있다. 대안적으로, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여 후 위장 조직의 생화학적 또는 조직학적 분석의 결과를 동일한 환자 또는 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단되지 않은 개체 또는 IL-34 억제제의 투여 전의 동일한 환자로부터의 위장 조직의 결과와 비교할 수 있다. 추가로, IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 투여 후 혈액, 혈청, 세포 또는 대변 샘플을 염증성 및/또는 섬유성 질환으로 진단되지 않은 개체 또는 IL-34 안티센스 억제제의 투여 전의 동일한 환자로부터의 비교 샘플과 비교할 수 있다.
IL-34 억제의 검증은 IL-34 발현 수준 또는 활성의 직접 또는 간접 평가에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, IL-34 단백질 또는 RNA 발현을 측정하는 생화학적 분석은 전반적인 IL-34 억제를 평가하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 전체 IL-34 수준을 평가하기 위해 웨스턴 블롯에 의해 위장 조직 내의 IL-34 단백질 수준을 측정할 수 있다. 또한 전체 IL-34 억제를 결정하기 위해 노던 블롯 또는 정량적 중합효소 연쇄 반응에 의해 IL-34 mRNA 수준을 측정할 수 있다. 또한 면역세포화학적 또는 면역조직화학적 방법을 통해 분리된 세포, 비분리된 않은 조직, 혈액, 혈청 또는 대변에서 IL-34 단백질 수준 또는 IL-34 신호전달 활성을 나타내는 다른 단백질의 수준을 평가할 수 있다.
IL-34 억제는 또한 대식세포 또는 단핵구 생성 또는 증식과 같은 매개변수를 측정하거나 MAP 키나제 인산화 및 IL-34 수용체 - 대식세포 집락 자극 인자 수용체(M-CSFR-1, 또한 MCSFR-1, M-CSFR1 및 CSF1R로 알려짐)의 신호전달 활성화의 다른 지표를 포함하여 IL-34 활성의 변화와 상관관계가 있는 다른 매개변수의 변경을 측정함으로써 간접적으로 평가될 수 있다. 예를 들어, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 치료된 환자의 세포에서 활성 MAPK1 또는 MAPK3 인산화의 수준을 상기 세포에서의 IL-34 활성의 지표로서 측정할 수 있다. 또한 IL-34 억제의 효능을 평가하기 위해 혈장, 혈액, 대변 또는 조직에서 발견되는 유용한 바이오마커의 존재 또는 발현 수준을 평가할 수 있다.
본원에 개시된 치료 방법은 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법을 포함한다. "염증성 사이토카인 생산"은 염증성 사이토카인 반응을 개시 및/또는 촉진하는 사이토카인의 발현을 지칭한다. "염증성 사이토카인 반응"은 과립구 모집, 림프구 모집, 전신 염증(특히 위장관 또는 이의 부분 또는 부분들의), 발열, 조직 파괴, 쇼크 및/또는 사망을 특징으로 할 수 있는 면역 반응을 지칭한다. 염증성 사이토카인 반응은 동족 세포 표면 수용체에 대한 개별 사이토카인의 결합(예컨대, CSF1R에 대한 IL-34 결합) 및 후속적인 세포 기능 및 유전자 발현을 변경하는 세포내 신호전달의 캐스케이드를 특징으로 할 수 있다. 염증성 사이토카인은 비제한적으로 IL-1, IL-6, IL-8, IL-34 및 TNF-알파를 포함한다. 염증성 사이토카인의 발현은, 예를 들어 대식세포, 단핵구, 고유판 단핵 세포, 또는 위장관의 다른 세포 또는 면역계의 세포에서 발생할 수 있다. 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법은 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 일부 또는 모든 염증성 사이토카인의 발현 수준을 감소시키는 방법을 포함한다. 염증성 사이토카인 생성을 억제하는 방법은 또한 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 일부 또는 모든 염증성 사이토카인의 발현 수준을 감소시키는 방법을 포함한다.
염증성 사이토카인 생산을 억제하기 위한 본 개시내용의 방법은 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하는 방법을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이 "IL-34 매개 염증 반응"은 IL-34 발현 또는 IL-34 신호전달 활성에 의해 개시되거나, 용이해지거나 또는 촉진되는 염증 반응을 지칭한다. IL-34 매개 염증 반응은 비제한적으로 IL-34, IL-6, IL-8 또는 TNF-알파를 포함하는 염증성 사이토카인의 발현, 및 염증성 사이토카인 신호전달의 활성화를 초래할 수 있다. 추가로, IL-34 매개 염증 반응은 과립구 모집, 림프구 모집, 전신 염증(특히 위장관 또는 이의 부분 또는 부분들의), 발열, 조직 파괴, 쇼크 및/또는 사망을 특징으로 할 수 있다. IL-34 매개 염증 반응은 또한 IL-34 신호전달의 활성화, 예를 들어 CSF1R에 대한 IL-34의 결합 및 다운스트림 MAP 키나제의 인산화를 특징으로 할 수 있다. IL-34 매개 염증 반응의 감소 또는 억제는 IL-34 매개 염증 반응과 관련된 세포 및 전신 변화 중 일부 또는 전부를 완화하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 염증성 사이토카인 생산, 면역 세포 모집 또는 조직 염증의 감소는 IL-34 매개 염증 반응의 감소 또는 억제를 나타낼 것이다.
본 개시내용은 또한 염증성 및/또는 섬유성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34를 억제하는 방법을 제공한다. IL-34는 위장관, 면역계 및 혈액의 세포를 포함하여 IL-34 발현 또는 활성이 발생하는 임의의 세포에서 억제될 수 있다. 위장관의 세포(장벽, 위, 십이지장, 공장, 대장, 소장, 회장, 결장, 직장 및 항문관의 세포 포함)는 원주 상피 세포, 장 기질 세포, 점막 상피 세포, 자이모겐 세포, 목 점액 세포, 정수리 세포, 가스트린 세포, 배상 세포, 파네스 세포, 올리고점액 세포 및 융모 흡수 세포를 포함한다. 면역계의 세포는 백혈구, 식세포(예컨대, 대식세포, 호중구 및 수지상 세포), 단핵구, 비만 세포, 호산구, 호염기구, 자연 살해 세포, 선천 세포, 림프구, B 세포 및 T 세포를 포함한다. 혈액 세포는 적혈 세포(적혈구)와 백혈 세포(백혈구, 단핵구, 혈소판)를 포함한다.
약제학적 조성물 및 투여 경로
본 개시내용은 또한 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물의 투여를 통해 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 IL-34를 표적으로 하는 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용가능한 부형제로 구성될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은 예를 들어, 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하기 위해, 포유동물, 예컨대 인간에게 투여될 약제학적으로 허용가능한 부형제 중의 치료 화합물의 특정 양, 예컨대 치료적 유효량을 함유하는 혼합물을 의미한다. 일부 구현예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에서 고려된다. 또 다른 양태에서, 본 개시내용은 염증성 및/또는 섬유성 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용도를 제공한다. 본원에서 사용된 바와 같이 "약제"는 용어 "약제학적 조성물"과 본질적으로 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 부형제"는 대상체에게 활성제의 투여 및/또는 대상체에 의한 흡수를 돕고 대상체에게 심각한 부정적인 독성 효과를 유발하지 않으면서 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 물질을 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제의 비제한적인 예는 물, NaCl, 일반 식염수 용액, 예컨대 인산염 완충 식염수 용액, 유화액(예컨대, 유/수 또는 수/유 유화액), 락테이트 링거, 일반 수크로스, 일반 글루코스, 결합제, 충전제, 붕해제, 윤활제, 코팅제, 감미제, 향료, 염 용액(예컨대, 링거액), 알코올, 오일, 젤라틴, 탄수화물, 예컨대 락토스, 아밀로스 또는 전분, 지방산 에스테르, 하이드록시메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리딘 및 색소 등을 포함한다. 이러한 제제는 멸균될 수 있고, 원한다면 본 발명의 IL-34 억제제와 유해하게 반응하지 않는 윤활제, 보존제, 안정제, 습윤제, 유화제, 삼투압에 영향을 미치는 염, 완충제, 착색제 및/또는 방향족 물질 등과 같은 보조제와 혼합될 수 있다. 부형제의 예는 문헌[Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA (1975)]을 참고한다.
일 구현예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 그의 임의의 약제학적 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피, 또는 십이지장내를 포함하는 하나 또는 몇 가지 경로에 의해 투여될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 비경구는 피하 주사, 췌장내 투여, 정맥내, 근육내, 복강내, 흉골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 예를 들어, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 대상체에게 피하 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 대상체에게 경구 투여될 수 있다. 또 다른 예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 비경구 투여를 통해 위장관 시스템, 또는 위장관 시스템의 특정 영역(예컨대, 회장, 결장 또는 직장)에 직접 투여될 수 있다.
IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 본원에 개시된 것을 함유하는 약제학적 조성물은 투여 단위 형태로 제공될 수 있고 임의의 적합한 방법에 의해 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 의도된 투여 경로와 양립하도록 제제화되어야 한다. 유용한 제제는 약학 분야에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (Mack Publishing Company, 1990)]을 참고한다.
예를 들어, 약제학적 제형은 멸균이다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조되는 경우, 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 여과 멸균이 수행될 수 있다.
비경구 투여
본 개시내용의 약제학적 조성물은 비경구 투여용으로 제제화될 수 있으며, 예컨대 정맥내, 근육내, 피하, 병변내 또는 복강내 경로를 통한 주사용으로 제제화될 수 있다. 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 함유하는 수성 약제학적 조성물과 같은 수성 조성물의 제조는 본 개시내용에 비추어 당업자에게 공지될 것이다. 전형적으로, 이러한 조성물은 주사제로서, 액체 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있으며; 주사 전에 액체를 첨가시 용액 또는 현탁액을 제조하는 데 사용하기에 적합한 고체 형태가 또한 제조될 수 있고; 제제는 또한 유화될 수 있다.
주사용으로 적합한 약제학적 형태는 멸균 수용액 또는 분산액; 참기름, 땅콩 기름 또는 수성 프로필렌 글리콜을 포함하는 제제; 및 멸균 주사 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에, 상기 형태는 무균이어야 하며 쉽게 주사할 수 있을 정도로 유동적이어야 한다. 그것은 제조 및 보관 조건 하에 안정해야 하며 박테리아 및 곰팡이와 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다.
유리 염기 또는 약리학적으로 허용가능한 염과 같은 활성 화합물의 용액은 하이드록시프로필셀룰로스와 같은 계면활성제와 적합하게 혼합된 물에서 제조될 수 있다. 분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물 및 오일에서 제조될 수 있다. 또한, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 사용될 수 있다. 이 목적을 위해 합성 모노 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 블랜드 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용될 수 있다. 멸균 주사용 제제는 또한 무독성 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사용 용액, 현탁액 또는 유화액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있다. 사용될 수 있는 허용가능한 비히클 및 용매 중에는 물, 링거 용액, U.S.P., 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 일 구현예에서, 개시된 IL-34 억제제는 1%(w/v) 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 및 0.1%(v/v) TWEEN™ 80을 포함하는 담체 또는 부형제 유체에 현탁될 수 있다. 일반적인 보관 및 사용 조건 하에서, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하기 위한 보존제를 함유한다.
주사가능한 제제, 예를 들어 멸균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 위에 열거된 것들로부터의 필요한 기타 성분을 함유하는 멸균 비히클에 다양한 멸균 활성 성분을 혼입함으로써 제조된다. 본 개시내용의 멸균 주사 용액은 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 필요한 경우 상기 열거된 다양한 다른 성분을 갖는 필요한 양의 적절한 용매에 혼입시킨 후 여과 멸균함으로써 제조될 수 있다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 활성 성분과 사전에 멸균 여과된 그의 용액으로부터의 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결 건조 기술이다. 주사 가능한 제제는 예를 들어 박테리아 보유 필터를 통한 여과에 의해 멸균될 수 있다.
더 또는 고도로 농축된 근육내 주사용 용액의 제제가 또한 고려된다. 이와 관련하여, 용매로서 DMSO를 사용하는 것이 바람직한데, 이는 매우 빠른 침투를 초래하여, 고농도의 개시된 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 작은 영역에 전달할 것이기 때문이다.
이러한 용액에 사용하기에 적합한 보존제는 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 클로로부탄올, 티메로살 등을 포함한다. 적합한 완충액은 pH를 약 pH 6 내지 pH 8, 및 예를 들어 약 pH 7 내지 pH 7.5로 유지하기에 충분한 양으로, 붕산, 나트륨 및 칼륨 바이카보네이트, 나트륨 및 칼륨 보레이트, 나트륨 및 칼륨 카보네이트, 나트륨 아세테이트, 나트륨 바이포스페이트 등을 포함한다. 용액의 염화나트륨 당량이 0.9 ± 0.2% 범위가 되도록 적합한 등장화제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 덱스트로스, 글리세린, 염화칼륨, 프로필렌 글리콜, 염화나트륨 등이다. 적합한 항산화제 및 안정화제는 나트륨 바이설파이트, 나트륨 메타바이설파이트, 나트륨 티오설파이트, 티오우레아 등을 포함한다. 적합한 습윤제 및 정화제는 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 20, 폴록사머 282 및 틸록사폴을 포함한다. 적합한 점도 증가제는 덱스트란 40, 덱스트란 70, 젤라틴, 글리세린, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시메틸프로필셀룰로스, 라놀린, 메틸셀룰로스, 바셀린, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시메틸셀룰로스 등을 포함한다.
경구 투여
일부 구현예에서, 조성물이 IL-34 억제제를, 예컨대 환자의 위장관에 전달할 수 있도록, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경구 전달에 적합한 조성물, 예컨대 장용 코팅, 에컨대 위 내성 코팅을 포함하는 정제가 본원에 고려된다. 예를 들어, 이러한 투여는 IL-34 억제제를 환자의 위장관의 환부에 직접 실질적으로 국소 적용하는 국소 효과를 초래할 수 있다. 이러한 투여는, 일부 구현예에서, IL-34 억제제의 원치않는 전신 흡수를 실질적으로 피할 수 있다.
예를 들어, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 과립(예컨대, 적어도 부분적으로 과립으로부터 형성됨)을 포함하는 경구 투여용 정제가 제공된다. 이러한 정제는 장용성 코팅으로 코팅될 수 있다. 고려되는 정제는 약제학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 충전제, 결합제, 붕해제 및/또는 윤활제뿐만 아니라 착색제, 이형제, 코팅제, 감미제, 향미제, 예컨대 윈터그린, 오렌지, 자일리톨, 소르비톨, 프럭토스 및 말토덱스트린, 및 방향제, 보존제 및/또는 항산화제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 고려되는 약제학적 제제는 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 예컨대 서열번호: 1-23 중 어느 하나의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 충전제를 포함하는 과립내 상을 포함한다. 예를 들어, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 충전제는 선택적으로 다른 부형제와 함께 블렌딩되고 과립으로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 과립내 상은 습식 과립화를 사용하여 형성될 수 있으며, 예컨대 액체(예컨대, 물)가 블렌딩된 IL-34 억제제 및 충전제에 첨가된 다음, 조합물이 건조, 밀링 및/또는 체질되어 과립을 생산한다. 당업자는 과립내 상을 달성하기 위해 다른 공정이 사용될 수 있음을 이해할 것이다.
일부 구현예에서, 고려되는 제형은 과립외 상을 포함하며, 이는 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있고, 이는 과립내 상과 블렌딩되어 개시된 제제를 형성할 수 있다.
개시된 제제는 충전제를 포함하는 과립내 상을 포함할 수 있다. 예시적인 충전제는, 비제한적으로 셀룰로스, 젤라틴, 인산 칼슘, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨, 소르비톨, 미세결정질 셀룰로스, 펙틴, 폴리아크릴레이트, 덱스트로스, 셀룰로스 아세테이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 부분적으로 전호화된 전분, 탄산 칼슘 및 이들의 조합을 포함하는 기타를 포함한다.
일부 구현예에서, 개시된 제제는 일반적으로 약제학적 제제의 성분들을 함께 유지시키는 기능을 할 수 있는 결합제를 포함하는 과립내 상 및/또는 과립외 상을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 예시적인 결합제는 비제한적으로 전분, 당, 셀룰로스 또는 변형된 셀룰로스, 예컨대 하이드록시프로필 셀룰로스, 락토스, 전호화된 옥수수 전분, 폴리비닐 피롤리돈, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 저치환 하이드록시프로필 셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 당 알코올 및 이들의 조합을 포함하는 기타를 포함할 수 있다.
고려되는 제제, 예컨대, 과립내 상 및/또는 과립외 상을 포함하는 고려되는 제제는 붕해제, 예컨대 비제한적으로 전분, 셀룰로스, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 나트륨 전분 글리콜레이트, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 알기네이트, 옥수수 전분, 크로스멜로스 나트륨, 가교된 카르복시메틸 셀룰로스, 저치환 하이드록시프로필 셀룰로스, 아카시아 등을 포함할 수 있고, 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예를 들어, 과립내 상 및/또는 과립외 상은 붕해제를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 고려되는 제제는 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 및 만니톨, 미세결정질 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 및 나트륨 전분 글리콜레이트 또는 이들의 조합으로부터 선택된 부형제를 포함하는 과립내 상, 및 비정질 셀룰로스, 나트륨 전분 글리콜레이트, 및 마그네슘 스테아레이트 또는 이들의 혼합물 중 하나 이상을 포함하는 과립외 상을 포함한다.
일부 구현예에서, 고려되는 제제는 윤활제를 포함할 수 있으며, 예컨대 과립외 상은 윤활제를 포함할 수 있다. 윤활제는 비제한적으로 활석, 실리카, 지방, 스테아린, 마그네슘 스테아레이트, 인산 칼슘, 이산화 규소, 규산 칼슘, 인산 칼슘, 콜로이드성 이산화 규소, 금속성 스테아레이트, 수소화된 식물성 기름, 옥수수 전분, 나트륨 벤조에이트, 폴리에틸렌 글리콜, 아세트산 나트륨, 스테아르산 칼슘, 나트륨 라우릴 설페이트, 염화 나트륨, 마그네슘 라우릴 설페이트, 활석, 스테아르산을 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 제제는 장용 코팅을 포함한다. 일반적으로, 장용 코팅은 약물이 소화관을 따라 흡수되는 위치를 제어하는 경구 약물에 대한 장벽을 생성한다. 장용 코팅은 pH에 따라 다른 속도로 분해되는 중합체를 포함할 수 있다. 장용 코팅은, 예를 들어 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트, 메틸 아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 셀룰로스 아세테이트 석시네이트, 히드록실프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 메틸 메타크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 공중합체 유형 C, 폴리비닐 아세테이트-프탈레이트, 및 셀룰로스 아세테이트 프탈레이트를 포함할 수 있다.
예시적인 장용 코팅은 Opadry® AMB, Acryl-EZE®, Eudragit® 등급을 포함한다. 일부 구현예에서, 장용 코팅은 중량 기준으로 고려되는 정제의 약 5% 내지 약 10%, 약 5% 내지 약 20%, 8 내지 약 15%, 약 8% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 20%, 또는 약 12% 내지 약 20%, 또는 약 18%를 차지할 수 있다. 예를 들어, 장용 코팅은 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함할 수 있다.
예를 들어, 고려되는 구현예에서, 약 0.5 중량% 내지 약 70 중량%, 예컨대 약 0.5 중량% 내지 약 10 중량%, 또는 약 1 중량% 내지 약 20 중량%의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하거나 본질적으로 구성된 정제가 제공된다. 이러한 정제는 예를 들어 약 0.5 중량% 내지 약 60 중량%의 만니톨, 예컨대 약 30 중량% 내지 약 50 중량% 만니톨, 예컨대 약 40 중량% 만니톨; 및/또는 약 20 중량% 내지 약 40 중량%의 미세결정질 셀룰로스, 또는 약 10 중량% 내지 약 30 중량%의 미세결정질 셀룰로스를 포함할 수 있다. 예를 들어, 개시된 정제는 약 30 중량% 내지 약 60 중량%, 예컨대 약 45 중량% 내지 약 65 중량%, 또는 대안적으로 약 5 내지 약 10 중량%의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 약 30 중량% 내지 약 50 중량%, 또는 대안적으로 약 5 중량% 내지 약 15 중량% 만니톨, 약 5 중량% 내지 약 15 중량% 미세결정질 셀룰로스, 약 0 중량% 내지 약 4 중량%, 또는 약 1 중량% 내지 약 7 중량% 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 및 약 0 중량% 내지 약 4 중량%, 예컨대 약 2 중량% 내지 약 4 중량% 나트륨 전분 글리콜레이트를 포함하는 과립내 상을 포함할 수 있다.
또 다른 고려되는 구현예에서, 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경구 투여를 위한 약제학적 정제 제제는 과립내 상을 포함하고, 여기서 과립내 상은 개시된 IL-34 억제제 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염(예컨대, 나트륨 염), 및 약제학적으로 허용가능한 충전제를 포함하며, 이는 또한 붕해제와 같은 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있는 과립외 상을 포함할 수 있다. 과립외 상은 미세결정질 셀룰로스, 마그네슘 스테아레이트, 및 이들의 혼합물로부터 선택된 성분을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 또한 정제의 약 12 중량% 내지 20 중량%의 장용 코팅을 포함할 수 있다. 예를 들어, 경구 용도를 위한 약제학적으로 허용가능한 정제는 약 0.5 중량% 내지 10 중량%의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 약 30 내지 50 중량%의 만니톨, 약 10 중량% 내지 30 중량%의 미세결정질 셀룰로스, 및 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 장용 코팅을 포함할 수 있다.
또 다른 예에서, 경구 용도를 위한 약제학적으로 허용가능한 정제는 약 5 내지 약 10 중량%의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 약 40 중량% 만니톨, 약 8 중량%의 미세결정질 셀룰로스, 약 5 중량%의 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 및 약 2 중량%의 나트륨 전분 글리콜레이트를 포함하는 과립내 상; 약 17 중량%의 미세결정질 셀룰로스, 약 2 중량%의 나트륨 전분 글리콜레이트, 약 0.4 중량%의 마그네슘 스테아레이트를 포함하는 과립외 상; 및 에틸아크릴레이트-메타크릴산 공중합체를 포함하는 정제 위의 장용 코팅을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 13 중량% 또는 약 15 중량%, 16 중량%, 17 중량% 또는 18 중량%의, 예컨대 AcyrlEZE®(예컨대 PCT 공개 제WO2010/054826호 참조, 이는 전체가 참고로 본원에 포함됨)을 포함하는 장용 코팅을 포함할 수 있다.
코팅이 용해되고 활성 성분이 방출되는 시점에서의 속도는 그의 용해 속도이다. 일 구현예에서, 고려되는 정제는, 예컨대 pH 7.2의 인산염 완충액에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 유형 2 장치(패들)에서 시험될 때 약 120분 내지 약 240분 후, 예를 들어 180분 후에 약 50% 내지 약 100%의 IL-34 억제제가 방출되는 용해 프로파일을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 고려되는 정제는 예컨대 1.0의 pH를 갖는 희석된 HCl에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 유형 2 장치(패들)에서 시험될 때 120분 후에 IL-34 억제제가 실질적으로 방출되지 않는 용해 프로파일을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 고려되는 정제는, 예컨대 6.6의 pH를 갖는 포스페이트 완충액에서 100 rpm 및 37℃에서 USP/EP 유형 2 장치(패들)에서 시험될 때, 30분 후에 약 10% 내지 약 30%, 또는 약 50% 이하의 IL-34 억제제가 방출되는 용해 프로파일을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 고려되는 제제, 예컨대 정제는 환자에게 경구 투여될 때 환자에서 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 최소 혈장 농도를 초래할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 개시된 제제는 환자에게 경구 투여될 때 환자의 결장 또는 직장, 예를 들어 환자의 이환 또는 질환 부위에 국소적으로 전달된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 본원에 개시된 질환 및 장애의 치료에 관한 적어도 하나의 다른 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 고려되는 다른 제제가 공동 투여될 수 있다(예컨대, 순차적으로 또는 동시에).
고려되는 제제는 글루코코르티코이드, 세포증식억제제, 항체, 이뮤노필린에 작용하는 제제, 인터페론, 오피오이드, TNF 결합 단백질, 미코페놀레이트 및 작은 생물학적 제제를 포함하는 면역억제제를 포함한다. 예를 들어, 고려되는 면역억제제는 비제한적으로 타크로리무스, 사이클로스포린, 피메크로리무스, 시롤리무스, 에베롤리무스, 미코페놀산, 핑골리모드, 덱사메타손, 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 메토트렉세이트, 아자티오프린, 레플루노마이드, 테리플루노마이드, 아나킨라, 항-흉선세포 글로불린, 항-림프구 글로불린, 무로모납-CD3, 아푸투주맙, 리툭시맙, 테플리주맙, 에팔리주맙, 다클리주맙, 바실릭시맙, 아달리무맙, 인플릭시맙, 세르톨리주맙 페골, 나탈리주맙 및 에타네르셉트를 포함한다. 다른 고려되는 제제는 항생제, 설사제, 완하제, 진통제, 철 보충제, 및 칼슘 또는 비타민 D 또는 B-12 보충제를 포함한다.
투여량 및 투여 빈도
예시적인 제제는 약 35 mg 내지 약 500 mg의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하거나 본질적으로 구성되는 투여 형태를 포함한다. 예를 들어, 약 35 mg, 40 mg, 50 mg, 60 mg, 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 190 mg, 200 mg, 또는 250 mg의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 제제가 본원에서 고려된다. 일 구현예에서, 제제는 약 40 mg, 80 mg, 또는 160 mg의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제제는 적어도 100 ㎍의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제제는 약 0.1 mg, 0.2 mg, 0.3 mg, 0.4 mg, 0.5 mg, 1 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 또는 25 mg의 개시된 IL-34 억제제, 예를 들어 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 투여되는 양은 치료될 질환 또는 적응증의 유형 및 정도, 환자의 전반적인 건강 및 크기, IL-34 억제제의 생체내 효능, 약제학적 제제 및 투여 경로와 같은 변수에 따라 달라질 것이다. 원하는 혈액 수준 또는 조직 수준에 빠르게 도달하기 위해 초기 용량은 상한 수준을 초과하여 증가될 수 있다. 대안적으로, 초기 투여량은 최적보다 작을 수 있고, 투여량은 치료 과정 동안 점진적으로 증가될 수 있다. 인간 투여량은, 예컨대 40 mg에서 160 mg으로 실행되도록 설계된 종래의 I상 투여량 증량 연구에서 최적화될 수 있다. 투여 빈도는 투여 경로, 투여량 및 치료되는 질환과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 예시적인 투여 빈도는 1일 1회, 1주 1회 및 2주 1회이다. 일부 구현예에서, 투여는 7일 동안 1일 1회이다.
진단 방법
본 개시내용은 또한 환자의 하나 이상의 생물학적 샘플에서 IL-34 발현 신호의 수준을 검출하는 것에 의존하는 염증성 및/또는 섬유성 질환을 갖는 환자를 진단하는 방법을 제공한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-34 발현 신호"는 IL-34 유전자 발현, 또는 유전자 또는 유전자 산물 활성의 임의의 표시를 지칭할 수 있다. IL-34 유전자 산물은 RNA(예컨대, mRNA), 펩타이드 및 단백질을 포함한다. 평가될 수 있는 IL-34 유전자 발현의 지표는, 비제한적으로 IL-34 유전자 또는 염색질 상태, 유전자 발현을 조절하는 세포 성분과의 IL-34 유전자 상호작용, IL-34 유전자 산물 발현 수준(예컨대, IL-34 RNA 발현 수준, IL-34 단백질 발현 수준), 또는 IL-34 RNA 또는 단백질과 전사, 번역 또는 번역 후 처리 기계와의 상호작용을 포함한다. IL-34 유전자 산물 활성의 지표는, 비제한적으로 IL-34 신호전달 활성의 평가(예컨대, CSF1R 활성화 또는 MAPK1/MAPK3 인산화 평가) 및 IL-34 수용체 결합(예컨대, CSF1R 결합)의 평가를 포함한다.
IL-34 발현 신호의 검출은 생체내, 시험관내 또는 생체외 방법을 통해 달성될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본 개시내용의 방법은 시험관내에서 수행될 수 있다. 검출 방법은 환자의 혈액, 혈청, 대변, 조직 또는 세포에서의 검출을 포함할 수 있다. 검출은 전체 조직, 조직 외식편, 세포 배양물, 분리된 세포, 세포 추출물, 또는 혈액 또는 혈청을 포함한 체액에서 IL-34 발현 신호를 측정함으로써 달성될 수 있다. 고려되는 검출 방법은 웨스턴 블롯팅, FACS, ELISA, 기타 정량적 결합 분석, 세포 또는 조직 성장 분석, 노던 블롯, 정량적 또는 반정량적 중합효소 연쇄 반응, 의료 영상 방법(예컨대, MRI), 또는 면역염색 방법(예컨대, 면역조직화학 또는 면역세포화학)과 같이 IL-34 유전자 산물 발현의 수준을 측정하는 분석을 포함한다.
실시예
본 개시내용은 하기 실시예에 의해 추가로 예시된다. 실시예는 예시의 목적으로만 제공되며, 어떤 식으로든 본 개시내용의 범위 또는 내용을 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.
실시예 1: HT-29 CRC 세포주는 IL-34를 높은 수준으로 발현한다
인간 CRC 세포주에서의 IL-34 발현을 평가하기 위해, IL-34 mRNA 발현을 RT-PCR에 의해 DLD-1, HT-29, HCT-116 인간 CRC 세포주와 NCM-460 정상 장 상피 세포주에서 분석하였다. IL-34 mRNA 발현 수준을 β-액틴 mRNA 수준을 참조로 사용하여 정규화하였다. 도 1에 나타된 바와 같이. IL-34 mRNA 발현은 HT-29 세포에서 풍부하였다.
실시예 2: IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 설계 및 평가
마우스 및 인간 IL-34 mRNA 서열에 상보적인 서열번호: 1-4의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 설계하고 포스포로티오에이트 골격을 사용하여 생산하였다. IL-34 발현의 넉다운을 HT-29 인간 및 RAW 264.7 마우스 세포주에서 평가하였다. HT-29 세포(ATCC Manassas, Virginia, USA)를 10% FBS, 1% P/S(모두 Lonza)가 보충된 McCoy's 5A(Lonza, Verviers, Belgium)에서 배양하고 가습 인큐베이터에서 5% CO2로 37℃에서 유지시켰다. 쥣과 RAW264.7 대식세포(ATCC Manassas, Virginia, USA)를 10% FBS, 1% P/S 및 1% 비필수 아미노산(NEA)(모두 Lonza)를 갖는 Dulbecco의 변형 이글스 배지(1 g/L의 글루코스)에서 배양하고, 가습 인큐베이터에서 5% CO2로 37℃에서 유지시켰다. 세포를 제조사의 지침에 따라 Opti-MEM 배지와 Lipofectamine 3000 시약(Life Technologies, Milan, Italy)을 사용하여 특정 IL-34 AON 또는 스크램블된 AON으로 처리되지 않은 상태로 두거나 형질감염시켰다. 총 RNA 및 단백질을 추출하였다.
넉다운을 HT-29 세포에서 실시간 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 평가하였다. RT-PCR을 하기와 같이 수행하였다: 일정한 양의 RNA(0.5 μg/샘플)를 상보적 DNA(cDNA)로 역전사하였다. 그리고 나서, 1 μl의 cDNA/샘플을 하기 프로토콜을 사용하여 증폭하였다: 95℃에서 1분 동안 변성; 60℃에서 30초 동안 어닐링 후, 72℃에서 30초 연장. 하기 프라이머 서열을 사용하였다: IL-34 정방향, 5'-ACAGGAGCCGACTTCAGTAC-3'(서열번호: 29); IL-34 역방향, 5'-ACCAAGACCCCACAGATACCG-3'(서열번호: 30); β-액틴 정방향, 5'-AAGATGACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'(서열번호: 31); 및 β-액틴 역방향, 5'-AGCCAGTCCAGACGCAGGAT-3'(서열번호: 32). mRNA 발현을 β-액틴 mRNA 발현에 대해 계산하였다.
HT-29 세포를 서열번호 1, 2, 3 또는 4의 인간 IL-34 AON 또는 스크램블된 음성 대조군 올리고뉴클레오타이드(SRC AS; 5'-AACACGTCTATACGC-3'(서열번호: 33))로 24시간 동안 형질감염시켰다(도 2a, 각각 서열번호: 1-4에 해당하는 AS34New1-4). IL-34 전사체를 RT-PCR에 의해 평가하고 값을 β-액틴에 대해 정규화하였다. 서열번호: 1 및 3의 IL-34 AON을 이용한 HT-29 세포의 형질감염은 RT-PCR에 의해 평가된 바와 같이 IL-34 mRNA 발현을 유의하게 감소시켰다(도 2a; Src AS v. AS34New1, p=0.03; Src AS v. AS34New3, p=0.03; 데이터는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로 표시됨).
넉다운을 또한 HT-29 세포 및 RAW 264.7 세포에서 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다. 웨스턴 블롯팅을 다음과 같이 수행하였다: 형질감염 후, 세포를 1 mM 디티오트레이톨, 10 mg/ml 아프로티닌, 10 mg/ml 류펩틴, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 mM Na3VO4 및 1 mM NaF가 보충된 10 mM HEPES(pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.2 mM EGTA 및 0.5% Nonidet P40을 함유하는 완충액에서 얼음 위에서 용해시켰다. 용해물을 4℃, 12.000xg에서 30분 동안 원심분리에 의해 정화하고, 10% 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 상에서 분리하였다. IL-34를 호스래디쉬 퍼옥시다제(HRP)-접합 이차 IgG 단일클론 항체(1:20,000 최종 희석, Dako, Milan, Italy)와 조합된, 마우스 항 인간 IL-34 항체(1:1,000 최종 희석, Abcam Cambridge, UK)를 사용하여 검출하였다. HRP 반응을 민감성 강화 화학발광 키트(Pierce, Rockford, IL)로 검출하였다. 분석 후, 블롯을 스트리핑하고 마우스 항-인간 β-액틴 항체(1:5,000 최종 희석, Sigma-Aldrich)로 탐침한 다음, HRP-접합 이차 IgG 모노클로날 항체(1:20,000 최종 희석, Dako)로 탐침하였다.
도 2b는 IL-34 스크램블된 대조군 또는 AS34New1 또는 3개의 IL-34 AON을 이용한 HT-29 세포의 형질감염이 IL-34 단백질 발현을 감소시켰음을 보여준다. 도 2c는 IL-34 스크램블링된 대조군 또는 AS34New1 또는 3개의 IL-34 AON을 사용한 RAW 264.7 세포의 형질감염이 IL-34 단백질 발현을 감소시켰음을 보여준다.
IL-34 AON AS34New1 및 3에 의한 IL-34 넉다운을 섬유협착성 크론병 및 암 관련 섬유아세포에서 추가로 평가하였다. 장 섬유아세포를 장 결장암 또는 섬유협착성 CD(FS CD) 외식편으로부터 단리하였다. 섬유아세포를 신선하게 또는 계대 3 내지 8에서 사용하였다. 섬유아세포를 10% FBS, 1% P/S(Lonza)가 보충된 UltraGlutamine을 갖는 DMEM 고 글루코스에서 배양하고, 가습 인큐베이터에서 5% CO2로 37℃에서 유지시켰다. 트립신/EDTA 용액을 사용하여 섬유아세포를 분리하였다. AS34New1 또는 3을 사용한 FS CD 외식편의 형질감염은 Src AS로 형질감염된 FS CD 외식편과 비교하여 IL-34의 넉다운을 가시적으로 증가시켰다(도 3a). AS34New3을 이용한 암 관련 섬유아세포의 형질감염은 Src AS로 형질감염된 섬유아세포와 비교하여 IL-34의 넉다운을 가시적으로 증가시켰다(도 3b).
5-메틸시토신 변형을 포함하는 IL-34 AON(서열번호: 7의 IL-34 AON)의 넉다운 효능을 HT-29, RAW 264.7 및 MC-38 세포주에서 시험하였다. MC38은 쥣과 세포주이다. MC-38 세포(ATCC Manassas, Virginia, USA)를 10%의 FBS 및 1%의 P/S(Lonza)가 보충된 McCoy's 5A에서 배양하고 가습 인큐베이터에서 5% CO2로 37℃에서 유지시켰다. 모든 세포주를 24시간 동안 IL-34 AON으로 형질감염시킨 후, IL-34 및 β-액틴 수준을 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. 세포를 서열번호: 1, 3 또는 7의 포스포로티오에이트 골격을 갖는 IL-34 AON(각각 New1-PS, New-3-PS, New-3-PS-MEC; 도 4a, 4b, 4c) 또는 스크램블된 대조군(대조군 ASNew-1-PS, 대조군 ASNew-3-PS)으로 형질감염시켰다. 5-메틸시토신을 포함하는 서열번호: 7의 IL-34 AON을 이용한 형질감염은 시험된 다른 모든 AON을 이용한 형질감염에 비해 IL-34 넉다운을 증가시켰다(도 4a, 4b 및 4c). 이들 결과는 서열번호: 7의 IL-34 AON을 포함하는 IL-34 AON이 마우스 및 인간 세포주에서 IL-34 mRNA 및 단백질의 발현을 넉다운시킬 수 있었음을 입증한다.
실시예 3: M-CSFR-1은 크론병 섬유협착에서 과발현된다
M-CSFR-1의 발현을 RT-PCR에 의해 CD 환자로부터의 회장 염증성 CD(I CD) 및 FS-CD 표본에서 평가하였다. 의학적 치료에 대한 반응이 좋지 않은 만성 활성 질환에 대한 수술을 받는 I CD를 갖는 10명의 환자 및 수술을 받는 FS CD를 갖는 27명의 환자로부터 수술 표본을 채취하였다. 회장 대조군(CTR)은 결장암 수술을 받는 있는 27명의 환자의 거시적 및 미시적 비환부로부터 채취한 점막 표본이었다. 연구에 참여한 각 환자는 서면 동의하였고, 연구 프로토콜은 지역 윤리 위원회의 승인을 받았다.
RT-PCR을 다음과 같이 수행하였다: RNA(0.5 ㎍/샘플)를 cDNA로 역전사하였다. 1 μl의 cDNA/샘플을 하기 조건을 사용하여 증폭하였다: 95℃에서 1분 동안 변성; M-CSFR-1의 경우 58℃에서 30초, 또는 β-액틴의 경우 60℃에서 30초 동안 어닐링 후, 72℃에서 30초 동안 연장. 하기 프라이머 서열을 사용하였다: M-CSFR-1 정방향, 5'-CTGCTCAACTTTCTGCGAAG-3'(서열번호: 34); M-CSFR-1 역방향, 5'-CTCATCTCCACATAGGTGTC-3'(서열번호: 35); β-액틴 정방향, 5'-AAGATGACCCAGATCATGTTTGAGACC-3'(서열번호: 31); 및 β-액틴 역방향, 5'-AGCCAGTCCAGACGCAGGAT-3'(서열번호: 32). mRNA 발현을 β-액틴 mRNA 발현에 대해 계산하였다.
M-CSFR-1 발현을 평가하기 위한 RT-PCR을 대조군, I CD 및 FS CD 샘플에서 상기에 기재된 바와 같이 수행하였다. M-CSFR-1 mRNA 전사체는 CTR과 비교하여 I CD 환자에서 증가하였다(도 5a). 추가로, M-CSFR-1 mRNA 전사체는 I CD 및 회장 CTR 샘플과 비교하여 FS CD 샘플에서 증가하였다(도 5a; Ileal CTR v. I CD, p=0.003; I CD v. FS CD, p=0.01; 평균 ± SEM).
I CD 및 FS CD 샘플의 웨스턴 블롯팅을 수행하여 M-CSFR-1 발현을 평가하였다. 세포를 1 mM 디티오트레이톨, 10 mg/ml 아프로티닌, 10 mg/ml 류펩틴, 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드, 1 mM Na3VO4, 및 1 mM NaF가 보충된 10 mM HEPES(pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.2 mM EGTA 및 0.5% Nonidet P40을 함유하는 완충액에서 얼음 위에서 용해시켰다. 용해물을 4℃에서 30분 동안 원심분리에 의해 정화하고 겔 전기영동에 의해 10% 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 상에서 분리하였다. 단백질을 멤브레인으로 이동시킨 후, 멤브레인을 토끼 항인간 M-CSFR-1(1:500, Novus Biological Southpark Way, USA)과 함께 인큐베이션한 후, HRP 접합 이차 IgG 모노클로날 항체(최종 희석 1:20,000, Dako, Milan, Italy)와 함께 인큐베이션하였다. HRP 반응을 민감성 강화 화학발광 키트(Pierce, Rockford, IL)로 검출하였다. 분석 후, 블롯을 스트리핑하고, 마우스 항-인간 β-액틴(최종 희석 1:5,000, Sigma-Aldrich)과 함께 인큐베이션하였다. 컴퓨터 보조 스캐닝 농도계(Image-Lab 5.2.1, Bio-Rad Laboratories, Milan, Italy)를 사용하여 면역 반응성 밴드의 강도를 분석하였다.
I CD, FS CD 및 CTR 샘플에서 M-CSFR-1의 단백질 추출 및 웨스턴 블롯 검출은 I CD에서의 M-CSFR-1 발현이 CTR보다 크고 FS CD에서의 발현이 CTR 및 I CD 샘플 모두에 비해 증가된다는 것을 확인하였다(도 5b 및 5c; Ileal CTR v. I CD, p=0.03; I CD v. FS CD, p=0.01; 평균 ± SEM).
M-CSFR-1의 발현을 면역조직화학에 의해 추가로 평가하였다. 면역조직화학을 회장 CTR, I CD 환자 및 FS CD 환자의 포르말린 고정, 파라핀 포매 회장 절편 상에서 수행하였다. 절편을 탈파라핀화하고 자일렌 및 에탄올로 탈수시키고, 98℃(Dako)의 항온조에서 트리스 EDTA 시트레이트 완충액(pH 7.8)에서 30분 동안 항원 복구(antigen retrieval)를 수행하였다. 실온(RT)에서 1시간 동안 인큐베이션된 인간 M-CSFR-1(최종 농도 1:200, Novus Biological)에 대한 토끼 단일클론 항체를 사용하여 면역조직화학 염색을 수행한 후, 크로모겐으로서 3,3'디아미노벤지딘(DAB)(MACH 4 Universal HRP-Polymer Kit, Biocare Medical)을 갖는 바이오틴이 없는 HRP 중합체 검출 기술을 사용하여 검출하였다. 절편을 헤마톡실린으로 대조염색하고, 탈수시키고, 마운팅하였다. 이소형 대조군 IgG 염색된 절편을 상기 기재된 바와 같이 동일한 면역조직화학적 조건 하에서 제조하여, 1차 항체를 정제된 마우스 정상 IgG 대조군 항체(R&D Systems)로 교체하였다.
회장 대조군 및 FS CD 샘플의 면역조직화학적 분석은 대조군 절편(도 5d)과 비교하여 FS CD(도 5e)에서 M-CSFR-1의 향상된 발현을 보여주었다. M-CSFR-1 발현은 이소형 대조군에서는 관찰되지 않았다(도 5f). 면역조직화학적 분석은 또한 기질 세포가 M-CSFR-1에 대해 양성임을 입증하였다(도 5e). 이러한 결과는 RT-PCR에 의해 추가로 확인되었고, 이는 대조군 섬유아세포와 비교하여 FS CD 환자의 회장 샘플로부터 단리된 섬유아세포에서 증가된 M-CSFR-1 mRNA 발현을 나타내었다(도 5g; Ileal CTR v. FS CD, p=0.04; 평균 ± SEM)). 이러한 결과는 IL-34에 대한 수용체인 M-CSFR-1의 발현이 비-CD 환자로부터의 회장 조직에 비해 CD 환자의 조직에서 증가하였음을 입증한다. 또한, 이러한 결과는 M-CSFR-1 발현이 I CD 환자로부터의 조직에 비해 FS CD 조직에서 더 높다는 것을 입증하였다.
실시예 4: 크론병 섬유아세포에서 IL-34 유도 콜라겐 생산
IL-34 발현에 의한 장 섬유아세포에서의 콜라겐 생산의 조절을 대조군 장 섬유아세포를 IL-34로 자극함으로써 평가하였다. 섬유아세포를 계대 3 내지 8에서 사용하였다. 섬유아세포를 75 cm2 플라스틱 플라스크에서 유지시키고 Ultra Glutamine을 갖는 고 글루코스를 함유하고 10% 우태아혈청(FBS), 1% 페니실린(100 U/ml), 스트렙토마이신(100 ㎍/ml) 및 1%의 비필수 아미노산(Lonza; Verviers, Belgium)이 보충된 D-MEM에서 5% CO2로 가습된 대기에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 5x104개의 정상 섬유아세포를 12-웰 플레이트의 각 웰에 플레이팅하고, 24시간 동안 부착되도록 방치하고, 6시간 동안 고갈시키고, 마지막으로 자극되지 않은 상태로 방치하거나 재조합 인간 IL-34(50 ng/ml, R&D Systems, Minneapolis, MN)로 자극시켰다. 6-48시간 후, 세포 및 무세포 상층액을 채취하였다. 세포를 단백질 및 유전자 발현 분석에 사용하고, 무세포 상층액을 콜라겐 함량에 대해 분석하였다. 하기 프라이머를 COL1A1 및 COL3A1의 RT-PCR에 사용하였다. COL1A1 정방향, 5'-GGACACAGAGGTTTCAGTGG-3'(서열번호: 36); COL1A1 역방향, 3'-GGTGACTTTGGAGACACAGG-5(서열번호: 37); COL3A1 정방향 5'-GGAGAATGTTGTGCAGTTTGC-3'(서열번호: 38); 및 COL3A1 역방향, 3'-CGTTGACGTGTTGTAAGAGG-5'(서열번호: 39). 하기 항체를 웨스턴 블롯팅에 사용하였다: 토끼 항-인간 COL1A1(최종 희석 1:1,000; Novus Biological, Italy) 및 토끼 항-인간 COL3A1(최종 희석 1:1,000; Novus Biological).
RT-PCR 분석은 재조합 인간 IL-34를 사용한 자극이 자극되지 않은 섬유아세포와 비교하여 섬유아세포에서 COL1A1 및 COL3A1 mRNA 전사체 생산을 유의하게 향상시켰음을 입증하였다(Unst; 도 6a, Unst v. IL-34, p=0.04; 도 6b, Unst v. IL-34, p=0.03; 평균 ± SEM). 도 6c는 재조합 인간 IL-34에 의한 자극이 자극되지 않은 섬유아세포와 비교하여 섬유아세포에서 COL1A1 및 COL3A1 단백질 발현을 유의하게 향상시켰음을 보여주는 웨스턴 블롯이다. 도 6d 및 도 6e는 각각 β-액틴 대조군에 대해 정규화된 도 6c에 나타낸 웨스턴 블롯의 COL1A1 및 COL3A1 신호의 정량을 나타내는 막대 그래프이다(COL1A1, Unst v. IL-34, p=0.03; COL3A1, Unst v. IL-34, p=0.01; 평균 ± SEM).
총 콜라겐을 또한 제조업체의 지침(Biocolor Ltd, Belfast, UK)에 따라 Sircol Collagen 분석 키트를 사용하여 섬유아세포 상층액에서 측정하였다. 섬유아세포 상층액에서의 가용성 형태의 콜라겐의 정량화는 IL-34를 이용한 자극이 자극되지 않은 대조군에 비해 콜라겐 합성을 증가시켰음을 입증하였다(도 6f; Unst v. IL-34, p=0.01; 평균 ± SEM). 이러한 결과는 IL-34가 섬유아세포에서 콜라겐 생산을 자극하였음을 입증한다.
실시예 5: IL-34는 p38 MAP 키나제 의존 경로를 통해 콜라겐 생산을 자극한다
p38 MAP 키나제에 대한 콜라겐 합성에서의 IL-34의 의존성을 조사하였다. IL-34는 장 섬유아세포 기능을 제어하는 신호 전달 경로인 상피 세포에서 p38 MAP 키나제를 활성화시킨다. 대조군 혈청 고갈된 장 섬유아세포를 자극되지 않은 상태로 두거나 재조합 인간 IL-34(50 ng/mL), TNF-α(25 ng/ml, R&D Systems) 또는 IL-6(50 ng/ml, R&D Systems)으로 30분 동안 자극시킨 다음, 용해시켰다. TNF-α 및 IL-6을 양성 대조군으로 사용하였다. 총 추출물을 웨스턴 블롯팅에 의해 인산화된(p-p38) 및 총 p38 미토겐 활성화된 단백질(MAP) 키나제의 함량에 대해 분석하였다. 토끼 항-인간 p-p38(1:1,000 EMD Millipore Corporation) 및 마우스 항-인간 총 p38(최종 희석 1:500, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Texas, USA) 항체를 사용하여 웨스턴 블롯팅을 수행하였다. IL-34 자극은 자극되지 않은 세포와 비교하여 섬유아세포에서 p38 MAP 키나제의 인산화를 향상시켰다(도 7a).
IL-34 유도 콜라겐 생산에 대한 MAP 키나아제 p38의 효과를 평가하기 위해, 정상 섬유아세포를 p38의 억제제인 SB202190(10 mol/l; EMD Millipore Corporation, MA, USA) 또는 디메틸 설폭사이드(DMSO; 비히클)와 함께 1시간 동안 사전 인큐베이션한 다음, IL-34(50 ng/ml)로 24-48시간 동안 자극시키거나 자극하지 않은 상태로 두었다. 세포에서의 단백질 발현을 웨스턴 블롯팅으로 분석하였고, 무세포 상층액을 콜라겐 함량에 대해 분석하였다. 도 7b는 SB202190를 이용한 세포의 사전 인큐베이션이 IL-34 유도된 COL1A1 및 COL3A1 생산을 중단시켰음을 보여주는 웨스턴 블롯이다. 도 7c 및 도 7d는 각각 웨스턴 블롯팅에 의해 평가된 바와 같이 β-액틴 대조군에 대해 정규화된 도 7a에 나타낸 웨스턴 블롯의 COL1A1 및 COL3A1 신호의 정량(COL1A1(DMSO v. DMSO + IL-34, p=0.0009; DMSO + IL-34 v. SB202190, p=0.0003; DMSO + IL-34 v. SB202190 + IL-34, p=0.0001; DMSO v. SB202190 + IL-34, p=0.05); COL3A1 (DMSO v. DMSO + IL-34, p=0.01; DMSO + IL-34 v. SB202190, p=0.002; DMSO + IL-34 v. SB202190 + IL-34, p=0.002; DMSO v. SB202190 + IL-34, p=0.03); 평균 ± SEM) 및 Sircol 분석에 의해 평가된 섬유아세포의 총 콜라겐 생산(도 7e; DMSO v. DMSO + IL-34, p=0.001; DMSO + IL-34 v. SB202190 + IL-34, p=0.01; 평균±SEM)을 보여주는 막대 그래프이다. 이러한 결과는 IL-34 유도 콜라겐 생산이 p38 MAP 키나아제 경로에 의존함을 입증한다.
실시예 6: 크론병 섬유협착에서 IL-34 생산
섬유협착의 어떤 세포가 IL-34를 생산하는지 결정하기 위해 IL-34 발현을 섬유협착에서 평가하였다. IL-34에 대한 RNA 전사체를 I CD, FS CD 및 대조군으로부터 채취한 장 표본에서 평가하였다. IL-34 RNA 전사체는 대조군과 비교하여 I CD 환자에서 유의하게 증가하였다(도 8a). IL-34 RNA 발현은 대조군 및 I CD 샘플과 비교하여 FS CD 샘플에서 증가하였다(도 8a; Ileal CTR v. I CD, p=0.002; I CD v. FS CD, p=0.03; Ileal CTR v. FS CD, p=0.002; 평균 ± SEM). 도 8b는 IL-34 발현이 대조군과 비교하여 I CD 환자에서 증가되고 대조군 및 I CD 세포 모두와 비교하여 FS CD 환자에서 유의하게 증가된다는 것을 보여주는 쌍을 이루는 점막 샘플로부터 추출된 총 단백질의 웨스턴 블롯 분석이다. 도 8c는 β-액틴 대조군에 대해 정규화된 도 8b에 나타낸 웨스턴 블롯의 IL-34 신호의 정량을 나타내는 막대 그래프이다(Ileal CTR v. I CD, p=0.004; I CD v. FS CD, p=0.04; Ileal CTR v. FS CD, p=0.004; 평균 ± SEM). 면역조직화학적 분석은 또한 IL-34가 회장 대조군(도 8d) 및 이소형 대조군(도 8f)와 비교하여 FS CD 세포(도 8e)에서 고도로 발현된다는 것을 입증하였다. 면역조직화학은 또한 FS CD 섬유협착에서 기질 세포가 IL-34를 발현하였음을 입증하였다(도 8e). 향상된 IL-34 RNA(도 8g; 평균±SEM) 및 단백질 발현(도 8h)이 대조군 섬유아세포와 비교하여 FS CD 환자의 회장 샘플로부터 단리된 섬유아세포에서 관찰되었다.
실시예 7: 크론병 섬유아세포에서 IL-34 넉다운은 콜라겐 생산을 감소시킨다
FS 표본으로부터 단리된 CD 섬유아세포에서 콜라겐 합성에 대한 IL-34 억제의 효과를 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 평가하였다. 요약하면, 5x104개의 FS CD 섬유아세포를 12웰 플레이트의 각 웰에 플레이팅하고, 24시간 동안 부착되도록 둔 다음, 처리되지 않은 상태로 두거나 제조업체의 지침(Life Technologies, Milan, Italy)에 따라 Opti-MEM 배지 및 Lipofectamine 3000 시약을 사용하여 24-48시간 동안 서열번호: 3의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드(IL-34 AS) 또는 상보적 센스 올리고뉴클레오타이드(NCAS, 둘 모두 200 nM로 사용됨; Integrated DNA Technologies, Inc. Leuven, Belgium)로 형질감염시켰다. 형질감염 효율을 웨스턴 블롯팅에 의해 결정하였다. 무세포 상층액을 48시간 후 콜라겐 함량에 대해 분석하였다.
IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용한 FS CD 섬유아세포의 형질감염은 웨스턴 블롯팅에 의해 평가된 바와 같이 대조군 안티센스 서열을 사용한 형질감염과 비교하여 COL1A1 및 COL3A1 단백질 합성 모두를 유의하게 감소시켰다(도 9a).
도 9b, 9c 및 9d는 각각 β-액틴 대조군에 대해 정규화된 도 9a에 나타낸 웨스턴 블롯의 IL-34, COL1A1 및 COL3A1 신호의 정량을 나타내는 막대 그래프이다(IL-34, NCAS v. IL-34AS, p=0.01; COL1A1, NCAS v. IL-34AS, p=0.0004; COL3A1, NCAS v. IL-34AS, p=0.004; 평균 ± SEM). IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 사용한 FS CD 섬유아세포의 형질감염은 또한 섬유아세포 배양 상층액에서 콜라겐의 분비를 유의하게 감소시켰다(도 9e; NCAS v. IL-34AS, p=0.006, 평균 ± SEM).
세포 사멸에 대한 IL-34 넉다운의 효과를 또한 평가하였다. 세포 사멸의 점수를 매기기 위해, FS 섬유아세포를 PBS에서 세척하고, 제조업체의 지침에 따라 FITC-아넥신 V(AV, 1:100 최종 희석; Immunotools, Friesoyte, Germany)로 염색하고, 5 mg/ml PI(Life Technologies)와 함께 4℃에서 20분 동안 인큐베이션하였다. FACSVerse(BD Biosciences) 유세포 분석기의 FL-1 및 FL-2 채널을 사용한 유세포 분석에 의해 형광을 측정하였다. AV-/PI-세포는 생존가능한 세포로 간주되었고, AV+/PI-세포는 세포사멸로 간주되었으며, 이차 괴사 세포는 AV+/PI+ 염색을 특징으로 하였다. 도 9g 및 9h는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 NCAS로 형질감염된 FS CD 섬유아세포의 유세포분석 점 플롯이다. 도 9f는 도 9g 및 9h의 유세포 분석 데이터에 상응하는 막대 그래프(평균 ± SEM)이며, 이는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 형질감염된 FS CD 섬유아세포가 세포 사멸을 증가시키지 않았음을 보여준다. 이러한 결과는 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 FS CD 섬유아세포에서의 IL-34 넉다운이 세포 사멸에 유의한 영향을 미치지 않으면서 콜라겐 생산을 유의하게 감소시킨다는 것을 입증한다.
참조에 의한 통합
본원에 인용된 특허 문서 및 과학 기사 각각의 전체 개시내용은 모든 목적을 위해 참조로 포함된다.
균등물
본 개시내용은 그의 본질적인 특징을 벗어나는 다른 구체적인 형태로 구현될 수 있다. 따라서, 전술한 구현예는 본원에 기재된 개시내용을 제한하기보다는 예시하는 것으로 간주되어야 한다. 본 개시내용의 범위는 전술한 설명이 아닌 첨부된 청구범위에 의해 표시되며, 청구범위의 등가물의 의미 및 범위 내에 있는 모든 변화가 여기에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> NOGRA PHARMA LIMITED <120> IL-34 ANTISENSE AGENTS AND METHODS OF USING SAME <130> GIU-060WO <140> <141> <150> 62/935,819 <151> 2019-11-15 <160> 39 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 1 ctcaccaaga cccacag 17 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 2 ggctttgggc cgcaccagct 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 3 ctttgggccg caccagcttc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 4 tgggccgcac cagcttcagg 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> 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Claims (136)

  1. 5'-CTCACCAAGACCCACAG-3'(서열번호: 1), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 및
    5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호: 6), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열,
    또는
    그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  2. 제1항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 서열번호: 3이고, 여기서 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형된 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  3. 제2항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 7)이고, 여기서 X는 5-메틸시티딘인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  4. 제1항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 서열번호: 5이고, 여기서 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형되며; 선택적으로 서열번호: 5의 위치 10에 있는 시티딘은 화학적으로 변형되고, 뉴클레오타이드 서열은 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호 8)이며, 여기서 X는 5-메틸시티딘인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 잠금 핵산(LNA)을 포함하는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오타이드는 잠금 핵산(LNA)을 포함하는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  7. 5'-cttTGGGCXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 9), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-ctttGGGCXGCACCAGcttc-3'(서열번호: 10), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-cttTGGGCcgCACCAGCttc-3'(서열번호: 11), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신인 서열;
    5'-cttTGGGCcGCACCAGCttc-3'(서열번호: 12), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘인 서열;
    5'-ggcXGCACCAGCttc-3'(서열번호: 13), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-cttTGGGCXGCACcag-3'(서열번호: 14), 여기서 c는 LNA 시티딘이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, a는 LNA 아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
    5'-tgaCCXGGAAGCAgtt-3'(서열번호 15), 여기서 a는 LNA 아데노신이고, t는 LNA 티미딘이며, g는 LNA 구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는
    그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  8. 5'-CxTxTxTxGxGGCXGCACCAGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 16), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-TxCxCxAxTxGACCXGGAAGCxAxGxTxTx-3'(서열번호:17), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-CxTxTxTxGxGxGCXGCACCAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 18), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-TxCxCxAxTxGxACCXGGAAGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 19), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열;
    5'-CxTxTxTxGxGxGxCxXGxCxAxCxCxAxGxCxTxTxCx-3'(서열번호: 20), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열; 및
    5'-TxCxCxAxTxGxAxCxCxXGxGxAxAxGxCxAxGxTxTx-3'(서열번호: 21), 여기서 Cx는 2'-O-(2-메톡시에틸)시티딘이고, Tx는 2'-O-(2-메톡시에틸)티미딘이며, Gx는 2'-O-(2-메톡시에틸)구아노신이고, Ax는 2'-O-(2-메톡시에틸)아데노신이며, X는 5-메틸시티딘인 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열, 또는
    그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 리보뉴클레오타이드를 포함하는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함하는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 리보뉴클레오타이드 및 데옥시리보뉴클레오타이드의 혼합물을 포함하는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 및 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결, 및 보라노포스페이트 연결로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 시티딘은 5-메틸시티딘으로 치환된 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 20개의 뉴클레오타이드 길이 또는 20-25, 20-30, 20-35, 25-30, 25-35, 또는 30-35개의 뉴클레오타이드 길이인 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  17. 제16항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 20-25개의 뉴클레오타이드 길이인 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 20, 25, 30, 또는 35개 이하의 뉴클레오타이드 길이인 것인 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화합물.
  20. 제1항 내지 제3항 및 제5항 내지 제18항 중 어느 한 항의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 화합물로서, 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 서열번호: 3의 뉴클레오타이드 서열이고 적어도 하나의 시티딘이 화학적으로 변형된 것인 화합물.
  21. 제20항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 서열 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 7)를 포함하고, 여기서 X는 5-메틸시티딘인 것인 화합물.
  22. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 염증성 질환의 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 치료하는 방법.
  23. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법.
  24. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하는 방법.
  25. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환의 치료가 필요한 환자에서 상기 염증성 질환을 치료하는 방법.
  26. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 집락 자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 억제하는 방법.
  27. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소 또는 제거하는 방법.
  28. 제27항에 있어서, 섬유성 협착은 장에 위치하는 것인 방법.
  29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염 , 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염(pancolitis), 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 방법.
  33. 제31항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 방법.
  34. 제22항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여되는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 경구 투여되는 것인 방법.
  36. 제22항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
  37. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물.
  38. 제37항에 있어서, 약제학적 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합한 것인 약제학적 조성물.
  39. 염증성 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 용도.
  40. 제39항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  41. 제40항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 용도.
  42. 제41항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  43. 제42항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 용도.
  44. 제42항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 용도.
  45. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 IL-34 발현을 억제하는 방법.
  46. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 세포는 장 세포인 방법.
  48. 제47항에 있어서, 세포는 장 기질 세포인 방법.
  49. 제45항 또는 제46항에 있어서, 세포는 장 섬유협착의 일부를 형성하는 것인 방법.
  50. 제45항 또는 제46항에 있어서, 대상체는 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병으로부터 선택된 질환의 치료를 필요로 하는 것인 방법.
  51. 제46항에 있어서, 하나 이상의 콜라겐은 콜라겐 1A, 콜라겐 3A 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  52. 제45항 또는 제46항에 있어서, 약제학적 제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  53. 제45항 또는 제46항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  54. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물의 치료적 유효량을 섬유증의 예방 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법.
  55. 제54항에 있어서, 섬유증은 장 섬유증인 방법.
  56. 제54항에 있어서, 섬유증은 폐 섬유증인 방법.
  57. 제54항에 있어서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 및 신인성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  58. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 장 섬유증의 예방 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법.
  59. 제58항에 있어서, 약제학적 제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  60. 제58항 또는 제59항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
  61. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 또한 크론병을 앓고 있는 것인 방법.
  62. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 폐 섬유증의 예방 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 폐 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법.
  63. 제62항에 있어서, 약제학적 제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  64. 제62항 또는 제63항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
  65. 약제로서 사용하기 위한 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물.
  66. 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물.
  67. 제66항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  68. 제67항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.　
  69. 제68항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.　
  70. 제69항에 있어서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  71. 제69항에 있어서, 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  72. 섬유증의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  73. 제72항에 있어서, 섬유증은 장 섬유증인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  74. 제72항에 있어서, 섬유증은 폐 섬유증인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  75. 제72항에 있어서, 섬유증은 신장 섬유증, 심장 섬유증, 심근내막 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 및 신장성 전신 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 안티센스 올리고뉴클레오타이드.
  76. 5'-CTCACCAAGACCCCACAG-3'(서열번호: 1), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-GGCTTTGGGCCGCACCAGCT-3'(서열번호: 2), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-CTTTGGGCCGCACCAGCTTC-3'(서열번호: 3), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-TGGGCCGCACCAGCTTCAGG-3'(서열번호: 4), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열;
    5'-TCCATGACCCGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 5), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열; 및
    5'-TGTTTCATGTACTGAAG-3'(서열번호 6), 여기서 적어도 하나의 뉴클레오사이드는 화학적으로 변형된 뉴클레오사이드이고/이거나 적어도 하나의 연결은 변형된 뉴클레오사이드간 연결인 서열
    로 이루어진 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열,
    또는
    그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 IL-34 억제제.
  77. 제76항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 서열번호: 3이고, 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형된 것인 IL-34 억제제.
  78. 제77항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 5'-CTTTGGGCXGCACCAGCTTC-3'(서열번호 7)이고, 여기서 X는 5-메틸시티딘인 IL-34 억제제.
  79. 제76항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열은 서열번호: 5이고, 적어도 하나의 시티딘은 화학적으로 변형되며; 선택적으로 서열번호: 5의 위치 10에 있는 시티딘은 화학적으로 변형되고, 뉴클레오타이드 서열은 5'-TCCATGACCXGGAAGCAGTT-3'(서열번호: 8)이며, 여기서 X는 5-메틸시티딘인 IL-34 억제제.
  80. 제76항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 하나 이상의 잠금 핵산(LNA)을 포함하는 것인 IL-34 억제제.
  81. 제76항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 각각의 뉴클레오타이드는 잠금 핵산(LNA)을 포함하는 것인 IL-34 억제제.
  82. 제76항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 억제제는 IL-34 siRNA 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염인 IL-34 억제제.
  83. 제82항에 있어서, 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결, 포스포로디티오에이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 알킬포스포네이트 연결, 아미노알킬포스포트리에스테르 연결, 알킬렌 포스포네이트 연결, 포스피네이트 연결, 포스포라미데이트 연결, 및 아미노알킬포스포라미데이트 연결, 티오포스포라미데이트 연결, 티오노알킬포스포네이트 연결, 티오노알킬포스포트리에스테르 연결, 티오포스페이트 연결, 셀레노포스페이트 연결, 및 보라노포스페이트 연결로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 억제제.
  84. 제82항 또는 제83항에 있어서, 서열의 적어도 하나의 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 IL-34 억제제.
  85. 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 서열의 모든 뉴클레오사이드간 연결은 포스포로티오에이트 연결인 IL-34 억제제.
  86. 제82항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 시티딘은 5-메틸시티딘으로 치환된 것인 IL-34 억제제.
  87. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 siRNA는 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 20-25, 20-30, 또는 25-30개의 뉴클레오타이드 길이인 것인 IL-34 억제제.
  88. 제87항에 있어서, IL-34 siRNA는 20-25개의 뉴클레오타이드 길이인 것인 IL-34 억제제.
  89. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 siRNA는 20, 25, 또는 30개 이하의 뉴클레오타이드 길이인 것인 IL-34 억제제.
  90. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 염증성 질환의 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 치료하는 방법.
  91. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 염증성 사이토카인 생산을 억제하는 방법.
  92. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 염증 반응을 감소 또는 억제하는 방법.
  93. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 변경된 IL-34 발현과 관련된 염증성 질환의 치료가 필요한 환자에서 상기 염증성 질환을 치료하는 방법.
  94. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자의 세포에서 IL-34 매개 대식세포 집락 자극 인자 수용체(M-CSFR-1) 신호전달을 억제하는 방법.
  95. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 질환을 앓고 있는 환자에서 섬유성 협착을 감소 또는 제거하는 방법.
  96. 제95항에 있어서, 섬유성 협착은 장에 위치하는 것인 방법.
  97. 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  98. 제97항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 방법.
  99. 제98항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  100. 제99항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 방법.
  101. 제99항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 방법.
  102. 제90항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, IL-34 억제제는 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내로 투여되는 것인 방법.
  103. 제102항에 있어서, IL-34 억제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  104. 제90항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
  105. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적으로 허용가능한 조성물.
  106. 제105항에 있어서, 약제학적 조성물은 국소, 비경구, 경구, 폐, 기관내, 비강내, 경피 또는 십이지장내 투여에 적합한 것인 방법.
  107. 염증성 질환의 치료를 위한 약제의 제조에서의 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도.
  108. 제107항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  109. 제108항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 용도.
  110. 제109항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  111. 제110항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 용도.
  112. 제110항에 있어서, 상기 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 용도.
  113. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 IL-34 발현을 억제하는 방법.
  114. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 세포에서 하나 이상의 콜라겐의 발현을 억제하는 방법.
  115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 세포는 장 세포인 방법.
  116. 제115항에 있어서, 세포는 장 기질 세포인 방법.
  117. 제113항 또는 제114항에 있어서, 세포는 장 섬유협착의 일부를 형성하는 것인 방법.
  118. 제113항 또는 제114항에 있어서, 대상체는 염증성 크론병 또는 섬유협착성 크론병으로부터 선택된 질환의 치료를 필요로 하는 것인 방법.
  119. 제114항에 있어서, 하나 이상의 콜라겐은 콜라겐 1A, 콜라겐 3A 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  120. 제113항 또는 제114항에 있어서, 약제학적 제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  121. 제113항 또는 제114항에 있어서, 대상체는 인간인 방법.
  122. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 치료적 유효량을 섬유증의 예방 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법.
  123. 제122항에 있어서, 섬유증은 장 섬유증인 방법.
  124. 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약제학적 제제의 약제학적 유효량을 장 섬유증의 예방 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 장 섬유증을 예방 또는 치료하는 방법.
  125. 제124항에 있어서, 약제학적 제제는 경구 투여되는 것인 방법.
  126. 제124항 또는 제125항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
  127. 제124항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 또한 크론병을 앓고 있는 것인 방법.
  128. 약제로서 사용하기 위한 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  129. 염증성 질환의 치료에 사용하기 위한 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  130. 제129항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, 건선, 골관절염, 당뇨병(I 및 II형), 조직 또는 기관 거부, 다발성 경화증, 치주 염증, 치주염, 색소성 융모결절 활막염, 간염, 부비동염, 결장암, 결장직장암, 대장염 관련 결장암, 산발성 결장직장암, 관상 동맥 질환, 쇼그렌 증후군(SS), 비만, 만성 염증, 폐 사르코이드증, 피부 병변, CNS 염증성 질환 또는 자가면역 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 억제제.
  131. 제130항에 있어서, 상기 염증성 질환은 염증성 장 질환인 IL-34 억제제.　
  132. 제131항에 있어서, 염증성 장 질환은 크론병, 염증성 크론병, 섬유협착성 크론병, 위십이지장 크론병, 크론(육아종) 대장염, 궤양성 대장염, 교원성 대장염, 림프구성 대장염, 허혈성 대장염, 전환 대장염, 베체트병, 현미경적 대장염, 궤양성 직장염, 직장S상결장염, 공회장염, 좌측 결장염, 전결장염, 회결장염, 회장염, 및 불확정 대장염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 IL-34 억제제.　
  133. 제132항에 있어서, 염증성 장 질환은 염증성 크론병인 IL-34 억제제.
  134. 제132항에 있어서, 염증성 장 질환은 섬유협착성 크론병인 IL-34 억제제.
  135. 섬유증의 치료에 사용하기 위한 제76항 내지 제89항 중 어느 한 항의 IL-34 억제제 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염.
  136. 제135항에 있어서, 섬유증은 장 섬유증인 IL-34 억제제.
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