KR20230172533A - Lta4h 억제제로서의 헤테로아릴 아미노프로판올 유도체 - Google Patents

Lta4h 억제제로서의 헤테로아릴 아미노프로판올 유도체 Download PDF

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안드레아스 코르디코브슈키
유강 리우
라이너 마르틴 뤼왼트
크리스티앙 마르커트
볼프강 밀츠
틸 뢴
카르스텐 슈팡카
게프하르트 토마
티안 시에
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노파르티스 아게
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Abstract

본 출원은 다양한 장애의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 류코트리엔 A4 하이드롤라제(LTA4H) 억제제에 관한 것이다.
[화학식 I]

Description

LTA4H 억제제로서의 헤테로아릴 아미노프로판올 유도체
본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 및 LTA4H를 억제하는 데 있어서의 이의 용도에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 화합물은 LTA4H와 관련된 질환 및/또는 장애의 치료에 유용할 수 있다. 이러한 질환/또는 장애는 예를 들어, 염증 및 자가면역 장애 및 폐 및 호흡관 염증을 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 I의 상기 신규한 헤테로아릴 아미노프로판올 유도체를 포함하는 제약 조성물, 상기 화합물을 다양한 질환 및 장애의 치료에 사용하기 위한 방법, 및 상기 신규한 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.
류코트리엔 A4 하이드롤라제(LTA4H)는 LTA4의 가수분해를 촉매하여 LTB4를 생산한다. LTB4는 예를 들어 백혈구 화학주성 또는 사이토카인 방출이 관련될 수 있는 다수의 전염증성 반응을 자극한다. LTA4H의 억제는 또한 만성 염증의 해소를 촉진할 수 있는 항염증성, 해소촉진 리폭신 A4의 생합성을 증가시킨다. 따라서, LTA4H 억제는 만성, 비해소 염증이 병리상태의 주요 성분일 수 있고 광범위한 자가염증성 및 자가면역 질환을 포함하는 것으로 보이는 질환에서 유익할 수 있다.
본 발명은 LTA4H 억제제인 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 이의 제약 조성물 및 이들의 조합물을 제공한다. 본 발명은 LTA4H에 의해 매개된 질환 및/또는 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공하며, 이는 이를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 LTA4H 억제제를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 다양한 실시 형태가 본원에 기술된다. 특정 양태 내에서, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 본원에 제공된다:
[화학식 I]
또는 이의 제약상 허용가능한 염,
[식에서,
고리 B는 5원의 고리 헤테로아릴이고;
R1은 H 또는 C1-4알킬이고;
X1은 N 또는 CH이고;
X2는 N 또는 CR2이고, 여기서 R2는 H 또는 C1-4알킬이고;
R3는
또는 이고;
X3는 N 또는 CH이고;
X4는 N 또는 CH이고;
Y는 O, NRa 또는 CH2이고; Ra는 H 또는 C1-4알킬이고;
R4는 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C1-5시클로알킬로부터 선택된 구성된 군으로부터 선택되고;
R5는 H 또는 할로임].
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 치료적 활성제를 포함하는 조합, 특히 제약 조합을 제공한다.
도 1a는 본원에서 형태 C로 지정된 실시예 41의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 1b는 본원에서 형태 C로 지정된 실시예 41의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 1c는 본원에서 형태 C로 지정된 실시예 41의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
도 2a는 본원에서 형태 D로 지정된 실시예 42의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 2b는 본원에서 형태 D로 지정된 실시예 42의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 2c는 본원에서 형태 D로 지정된 실시예 42의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
도 3a는 본원에서 형태 E로 지정된 실시예 43의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 3b는 본원에서 형태 E로 지정된 실시예 43의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 3c는 본원에서 형태 E로 지정된 실시예 43의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
도 4a는 본원에서 형태 B로 지정된 실시예 44의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 4b는 본원에서 형태 B로 지정된 실시예 44의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 4c는 본원에서 형태 B로 지정된 실시예 44의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
도 5a는 본원에서 형태 A로 지정된 실시예 45의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 5b는 본원에서 형태 A로 지정된 실시예 45의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 5c는 본원에서 형태 A로 지정된 실시예 45의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
도 6a는 본원에서 형태 F로 지정된 실시예 46의 화합물에 대한 예시적인 XRPD 스펙트럼을 제공한다.
도 6b는 본원에서 형태 F로 지정된 실시예 46의 화합물에 대한 예시적인 DSC를 제공한다.
도 6c는 본원에서 형태 F로 지정된 실시예 46의 화합물에 대한 예시적인 TGA를 제공한다.
형태 A 내지 F 중 임의의 하나에 대한 XRPD 피크의 보다 상세한 목록은 상대 강도(%)(I/I0 x 100)가 또한 제공되는 하기 표에 제시되어 있다. X-선 분말 회절 스펙트럼 또는 패턴에서, 예를 들어 기기 편차(기기 간의 차이 포함)의 결과로 각도 2θ(°2θ)로 측정된 값에 고유한 가변성이 있음을 이해해야 한다. 따라서, XRPD 피크 측정에서 최대 ± 0.2 °2θ의 가변성이 존재하지만, 이러한 피크 값은 여전히 본원에 기재된 결정질 물질의 특정 고상 형태를 나타내는 것으로 간주될 것임을 이해해야 한다. 또한, XRPD 실험 및 DSC/TGA 실험으로부터의 다른 측정 값, 예컨대 상대 강도 및 수분 함량은 예를 들어 샘플 준비 및/또는 저장 및/또는 환경 조건의 결과에 따라 달라질 수 있으나, 측정된 값은 여전히 본원에 기술된 결정질 물질의 특정 고상 형태를 나타내는 것으로 간주될 것임을 이해해야 한다.
따라서 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공한다
[식에서,
고리 B는 5원의 고리 헤테로아릴이고;
R1은 H 또는 C1-4알킬이고;
X1은 N 또는 CH이고;
X2는 N 또는 CR2이고, 여기서 R2는 H 또는 C1-4알킬이고;
R3는
또는 이고;
X3는 N 또는 CH이고;
X4는 N 또는 CH이고;
Y는 O, NRa 또는 CH2이고; Ra는 H 또는 C1-4알킬이고;
R4는 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C1-5시클로알킬로부터 선택된 구성된 군으로부터 선택되고;
R5는 H 또는 할로임].
달리 명시되지 않는 한, "본 발명의 화합물들" 또는 "본 발명의 화합물"이라는 용어는 화학식 I 및 이의 하위화학식(예를 들어, 화학식 IA, IB, II 내지 V)의 화합물 및 이의 예시된 화합물, 및 염뿐만 아니라, 모든 입체이성질체(부분입체 이성질체 및 거울상 이성질체를 포함함), 회전 이성질체, 호변이성질체 및 동위원소 표지 화합물(중수소 치환체를 포함함) 및 고유하게 형성된 모이어티를 지칭한다.
정의
본원에서 사용되는 용어 "C1-C4 알킬"은 최대 4개의 탄소 원자를 갖는 완전 포화 분지형 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한. 이는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 알킬의 대표적인 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "C1-C4 알콕시"는 알킬-O-를 지칭하고, 알킬은 본원의 위에서 정의된다. 알콕시의 대표적인 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 2-프로폭시, 부톡시, tert-부톡시 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 일반적으로, 알콕시기는 약 1 내지 4개의 탄소 원자, 또는 1 내지 2개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에서 사용되는 용어 "할로C1-C4 알킬"은 하나 이상의 할로겐으로 치환된 상기 정의된 바와 같은 C1-C4 알킬을 지칭한다. 예로는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 트리클로로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1-플루오로메틸-2-플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 및 1-브로모메틸-2-브로모에틸을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "할로C1-C4 알콕시"는 하나 이상의 할로겐으로 치환된 상기 정의된 바와 같은 C1-4알콕시를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "C3-C5시클로알킬"은 3 내지 5개 탄소 원자의 포화 단환 탄화수소 기를 지칭한다. 시클로알킬은 또한 탄소환 고리로 지칭될 수 있고, 그 반대의 경우도 마찬가지이며, 존재하는 탄소 원자의 수를 추가로 나타낼 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 시클로알킬은 3 내지 5개의 고리 탄소 원자 또는 3 내지 4개의 고리 탄소 원자를 갖는 환형 탄화수소 기를 지칭한다. 단환 탄화수소 기의 예로는 시클로프로필, 시클로부틸 및 시클로펜틸을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모, 및 요오도를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "5원 헤테로아릴"은 O, N 또는 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 5원 단환 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 전형적인 헤테로아릴 기는 예를 들어 2-, 4- 또는 5-이미다졸릴; 3-, 4- 또는 5-피라졸릴; 2-, 4- 또는 5-티아졸릴; 3-, 4- 또는 5-이소티아졸릴; 2-, 4- 또는 5-옥사졸릴; 또는 3-, 4- 또는 5-이속사졸릴을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "호변이성질체"는 동일한 분자식을 갖지만 연결성이 다른 2개의 분자를 지정하는 데 사용되며, 이는 빠른 평형에서 상호전환될 수 있다. 예를 들어 특정 헤테로아릴 기는 다양한 호변이성질체 형태로 존재한다. 호변이성질체의 대표적인 예는 R3이 피라졸릴 기인 화학식 I의 화합물이다:
.
호변이성질체의 다른 특정 예는 다음과 같다:
본원에서 사용되는 용어 “약” 및 “실질적으로”는 흡열, 흡열 피크, 발열, 기준선 이동 등과 같은 특징과 관련하여 이들의 값이 변할 수 있음을 나타낸다. X-선 회절 피크 위치와 관련하여, “약” 또는 “실질적으로”는 전형적인 피크 위치 및 강도 변동이 고려됨을 의미한다. 예를 들어, 당업자는 피크 위치(2θ)가 전형적으로 0.2°만큼의 약간의 장치간 변동성을 보일 것임을 인정할 것이다. 가변성은 간혹 장치 교정 차이에 따라 0.2°보다 높을 수 있다. 추가로, 당업자는 상대적 피크 강도가 장치간 가변성뿐만 아니라 결정화도, 우선 배향, 제조된 샘플 표면, 및 당업자에게 알려진 다른 인자에 기인한 가변성을 보일 것이고, 정성적 척도로만 간주되어야 함을 이해할 것이다. DSC의 경우, 관찰된 온도의 편차는 온도 변화 속도뿐만 아니라 샘플 제조 기법 및 사용된 특정 기기에 따라 달라질 것이다. 따라서, DSC/TGA 써모그램과 관련하여 본원에서 보고된 흡열/융점 값은 ± 5℃로 달라질 수 있다(그럼에도 본원에 기재된 특정 결정질 형태의 특성인 것으로 간주될 수 있다). 예를 들어, 중량 백분율(중량%), 반응 온도와 같은 다른 특징의 맥락에서 사용될 때 용어 "약"은 ± 5%의 변동을 나타낸다.
본 발명의 다양한 열거된 실시 형태가 본원에 기술된다. 각각의 실시 형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시 형태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
실시 형태 1에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물:
[화학식 I]
또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다
[식에서,
고리 B는 5원의 고리 헤테로아릴이고;
R1은 H 또는 C1-4알킬이고;
X1은 N 또는 CH이고;
X2는 N 또는 CR2이고, 여기서 R2는 H 또는 C1-4알킬이고;
R3는
또는 이고;
X3는 N 또는 CH이고;
X4는 N 또는 CH이고;
Y는 O, NRa 또는 CH2이고; Ra는 H 또는 C1-4알킬이고;
R4는 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C1-5시클로알킬로부터 선택된 구성된 군으로부터 선택되고;
R5는 H 또는 할로임].
이 실시 형태의 일 양태에서, R3는 고리 B에 대한 부착 지점으로부터 메타 또는 파라 위치에 부착된다.
실시 형태 2에서, 본 발명은 하기 화학식 IA를 갖는 화학식 I의 화합물:
[화학식 IA]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, R1, X1, X2, X3, Y, R4 및 R5는 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 3에서, 본 발명은 하기 화학식 IB를 갖는 화학식 I의 화합물:
[화학식 IB]
, 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 고리 B, R1 및 X4는 이전에 정의된 바와 같다.
이 실시 형태의 일 양태에서, X4는 N이다. 이 실시 형태의 다른 양태에서, X4는 CH이다.
실시 형태 4에서, 본 발명은 하기 화학식 IC를 갖는 화학식 I의 화합물:
[화학식 IC]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, R1, R4, R5, X3, Y는 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 5에서, 본 발명은 하기 화학식 II를 갖는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에 따른 화학식 I, IA, IB 또는 IC의 화합물:
[화학식 II]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 모든 변수는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에서 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 6에서, 본 발명은 하기 화학식 III을 갖는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에 따른 화학식 I, IA, IB의 화합물:
[화학식 III]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 모든 변수는 실시 형태 1, 2 또는 3에서 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 7에서, 본 발명은 하기 화학식 IV를 갖는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에 따른 화학식 I, IA, IB 또는 IC의 화합물:
[화학식 IV]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 모든 변수는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에서 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 8에서, 본 발명은 하기 화학식 V를 갖는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에 따른 화학식 I, IA, IB 또는 IC의 화합물:
[화학식 V]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 모든 변수는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에서 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 9에서, 본 발명은 하기 화학식 VI을 갖는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에 따른 화학식 I, IA, IB 또는 IC의 화합물:
[화학식 VI]
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 모든 변수는 실시 형태 1, 2, 3 또는 4에서 이전에 정의된 바와 같다.
실시 형태 10에서, 본 발명은 X1이 CH인, 실시 형태 1, 2 및 5 내지 9 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다. 이 실시 형태의 일 양태에서, X2는 N이다. 이 실시 형태의 다른 양태에서, X2는 CH 또는 C-C1-4알킬, 바람직하게는 CH 또는 C-CH3이다.
실시 형태 10a에서, 본 발명은 X1이 N이고 X2가 CH인, 실시 형태 1, 2 및 5 내지 9 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 11에서, 본 발명은 R1이 H인, 실시 형태 1, 2 내지 10 및 10a 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 11a에서, 본 발명은 R1이 메틸인, 실시 형태 1 내지 10 및 10a 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 12에서, 본 발명은 X3가 N이고 Y가 O인, 실시 형태 1, 2, 4 내지 11, 11a 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 12a에서, 본 발명은 X3가 CH이고 Y가 O인, 실시 형태 1, 2, 4 내지 11, 11a 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시형태 13에서, 본 발명은 R5가 H 또는 할로이고, R4가 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C3-5시클로알킬로부터 선택되는 실시 형태 1, 2, 4 내지 11, 11a, 12 및 12a 중 어느 하나에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 14에서, 본 발명은 R4가 시클로프로필, Cl, Br, -OCH3, -OCHF2, CF3, 피라졸릴, 옥사졸릴로부터 선택되고, R5가 H 또는 F인 실시 형태 13에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용 가능한 염에 관한 것이다.
실시 형태 15에서, 본 발명은 실시 형태 1에 따른 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 화합물은 다음으로부터 선택된다:
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트;
tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트;
(R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트;
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
(3S)-3-아미노-4-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)부탄-2-올;
(R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올;
(R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올; (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(4-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-시클로프로필피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
(S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)-2-아미노프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
(2S)-2-아미노-3-[5-(4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]페닐)-2H-1,2,3,4-테트라졸-2-일]프로판-1-올;
(S)-2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올;
(R)-2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올; 및
(2S)-2-아미노-3-(2-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올.
실시 형태 15a에서, 본 발명은 실시 형태 13에 따른 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 화합물은 2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올; (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 및 (R)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올; 또는 이의 호변이성질체 및/또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다.
실시 형태 15b에서, 본 발명은 실시 형태 13에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것으로, 화합물은 다음과 같이 표시되기도 하는 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올:
; 또는 이의 제약상 허용가능한 염이다. 이전에 언급한 바와 같이, 실시 형태 15b의 화합물은 또한 호변이성질체 형태로 존재한다:
((S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올).
실시 형태 15c에서, 본 발명은 실시 형태 13에 따른 화학식 I의 화합물로서, (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올, (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올, (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올, 및 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올로부터 선택되는 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 선행하는 실시 형태 중 어느 하나에 따른 화학식 I의 화합물 또는 본원에 기술된 임의의 하위화학식은 유기 음이온 운반체 OAT3의 기질이 아니다.
출발 물질 및 절차의 선택에 따라, 화합물은 비대칭 탄소 원자의 개수에 따라 가능한 입체이성질체 중 하나의 형태로, 또는 이의 혼합물로서, 예를 들어 순수한 광학 이성질체로서, 또는 입체이성질체 혼합물로서, 예를 들어 라세미체 및 부분입체 이성질체 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은 라세미 혼합물, 부분입체 이성질체 혼합물 및 광학적으로 순수한 형태를 포함하여, 이러한 가능한 입체이성질체 모두를 포함하는 것을 의미한다. 광학 활성 (R)- 및 (S)- 입체이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나, 통상적인 기술을 사용하여 분해될 수 있다. 화합물이 이중 결합을 포함하는 경우, 치환기는 E 또는 Z 배열일 수 있다. 화합물이 이치환된 시클로알킬을 함유하는 경우, 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스 배열을 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 용어 "염"은 본 발명의 화합물의 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭한다. “염”은 특히 “제약상 허용가능한 염”을 포함한다. 용어 "제약상 허용가능한 염"은 이 발명의 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하고, 전형적으로 생물학적으로나 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 지칭한다. 많은 경우, 본 발명의 화합물은 아미노 기 및/또는 카르복실 기 또는 이와 유사한 기의 존재로 인해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다. 염기성 기 및 산성 기가 동일한 분자에 존재하는 경우, 본 발명의 화합물은 또한 내부 염, 예를 들어 쯔비터이온성 분자를 형성할 수 있다.
제약상 허용가능한 산 부가염은 무기산 및 유기산에 의해 형성될 수 있다.
염이 유도될 수 있는 무기산은 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기산은 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 석신산, 푸마르산, 타타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 톨루엔설폰산, 설포살리실산 등을 포함한다.
제약상 허용가능한 염기 부가염은 무기 염기 및 유기 염기에 의해 형성될 수 있다.
염이 유도될 수 있는 무기 염기는 예를 들어 암모늄염 및 주기율표의 I 내지 XII열의 금속을 포함한다. 특정 실시 형태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연, 및 구리로부터 유도되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘, 및 마그네슘 염을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 염기는 예를 들어 1차, 2차, 및 3차 아민, 천연 발생 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 환형 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 라이신, 메글루민, 피페라진, 및 트로메타민을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로겐 포스페이트/디하이드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 지나포에이트 염 형태로 본 발명의 화합물을 제공한다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 실시 형태 1 내지 15 중 어느 하나에 따른 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하며, 이는 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로겐 포스페이트/디하이드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 지나포에이트로부터 선택되는 염 형태이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 푸마레이트, 말레에이트, 아디페이트, 타르트레이트, 글루타메이트 및 히푸레이트 염 형태의 본 발명의 화합물을 제공한다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올을 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/하이드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 카프레이트, 클로라이드/하이드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 글루타메이트, 글루타레이트, 글리콜레이트, 히푸레이트, 하이드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 뮤케이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/하이드로겐 포스페이트/디하이드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 세바케이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 술페이트, 타르트레이트, 토실레이트 트리페나테이트, 트리플루오로아세테이트 또는 지나포에이트 염 형태로 제공한다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올을 푸마레이트, 말레에이트, 아디페이트, 타르트레이트, 글루타메이트 및 히푸레이트 염 형태로 제공한다.
또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올을 히푸레이트 염 형태로 제공한다.
본원에 제공된 모든 화학식은 또한 화합물의 비표지 형태와, 동위원소 표지된 형태를 나타내고자 한다. 동위원소 표지 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는 본원에 제공된 화학식으로 표시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 포함될 수 있는 동위원소는, 예를 들어, 수소의 동위원소를 포함한다.
실무자는 최소한 식별된 개발 화합물 주위의 상대적으로 좁은 아속을 제공해야 하며 일반 구조의 적어도 하나의 위치(더욱 바람직하게는 다수의 위치)가 중수소 원자일 수 있음을 나타내야 한다. 권장되는 내용의 예는 다음과 같다:
추가로, 특정 동위원소, 특히 중수소(즉, 2H 또는 D)의 혼입은 더 큰 대사 안정성으로부터 야기되는 특정 치료적 장점, 예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건 또는 치료 지수 또는 내약성의 개선을 제공할 수 있다. 이 맥락에서 중수소는 본 개시내용의 화합물의 치환기로 간주된다고 이해된다. 중소수의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정해질 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "동위원소 농축 계수"는 특정 동위원소의 동위원소 존재비와 자연 존재비의 비를 의미한다. 본 발명의 화합물에서의 치환기가 중수소인 것으로 표시되는 경우, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500(각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5%의 중수소 혼입), 적어도 4000(60%의 중수소 혼입), 적어도 4500(67.5%의 중수소 혼입), 적어도 5000(75%의 중수소 혼입), 적어도 5500(82.5%의 중수소 혼입), 적어도 6000(90%의 중수소 혼입), 적어도 6333.3(95%의 중수소 혼입), 적어도 6466.7(97%의 중수소 혼입), 적어도 6600(99%의 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3(99.5%의 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다. 용어 "동위원소 농축 계수"는 중수소에 대하여 기술된 것과 동일한 방식으로 임의의 동위원소에 적용될 수 있음이 이해되어야 한다.
본 발명의 화합물로 포함될 수 있는 동위원소의 다른 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 및 염소의 동위원소, 예를 들어, 각각 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 123I, 124I, 125I를 포함한다. 따라서, 본 발명은, 예를 들어, 3H 및 14C와 같은 방사성 동위원소를 비롯한 임의의 전술한 동위원소 중 하나 이상을 포함하는 화합물, 또는 2H 및 13C와 같은 비방사성 동위원소가 존재하는 것들을 포함함이 이해되어야 한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 비롯하여, 대사 연구(14C 사용), 반응 동역학 연구(예를 들어, 2H 또는 3H 사용), 검출 또는 영상화 기법, 예를 들어 양전자 방출 단층촬영(positron emission tomography, PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영(single-photon emission computed tomography, SPECT)에, 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 본 발명의 동위원소 표지 화합물은 일반적으로 당업자에게 알려진 통상적인 기술에 의해, 또는 이전에 이용된 비표지 시약 대신 적절한 동위원소 표지 시약을 사용하여 첨부된 실시예 및 제조에 기재된 것과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
추가 정의
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약 조성물"은 경구 또는 비경구 투여에 적합한 형태의, 적어도 하나의 제약상 허용가능한 담체와 함께인, 본 발명의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 담체"는 제약 조성물의 제조 또는 사용에 유용한 물질을 지칭하고, 예를 들어, 적합한 희석제, 용매, 분산 매질, 계면활성제, 항산화제, 보존제, 등장화제, 완충제, 유화제, 흡수 지연제, 염, 약물 안정제, 결합제, 부형제, 붕해제, 활택제, 습윤제, 감미제, 착향제, 염료, 및 이들의 조합을 포함하는데, 이는 당업자에게 알려진 바와 같을 것이다(예를 들어, 문헌[Remington The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Ed. Pharmaceutical Press, 2013, pp. 1049-1070] 참조).
본 발명의 화합물의 "치료적 유효량"이란 용어는 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제를 유도하거나, 증상을 완화하거나, 병태를 경감시키거나, 질환의 진행을 늦추거나 지연시키거나, 질환을 예방하는 등의 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 용어 "치료적 유효량"은 대상체에게 투여될 때 (1) (i) LTA4H에 의해 매개되는, 또는 (ii) LTA4H 활성과 관련된, 또는 (iii) LTA4H의 활성(정상 또는 비정상)을 특징으로 하는 병태, 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 경감, 예방 및/또는 완화하거나; 또는 (2) LTA4H의 활성을 감소시키거나 억제하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 또 다른 실시 형태에서, 용어 "치료적 유효량"은 세포, 또는 조직, 또는 생물학적 비-세포 물질, 또는 배지에 투여될 때, LTA4H의 활성을 적어도 부분적으로 감소시키거나 억제하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 영장류(예를 들어, 인간, 남성 또는 여성), 개, 토끼, 기니피그, 돼지, 래트 및 마우스를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 병태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기준선 활성의 유의한 감소를 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애를 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는, 환자에서 인식 가능하지 않을 수 있는 것을 포함하여, 질환 또는 장애를 완화하거나 개선하거나(즉, 질환 또는 이의 임상 증상의 적어도 하나의 발생을 지연시키거나 저지하거나); 질환 또는 장애와 연관되는 적어도 하나의 신체적 파라미터 또는 생체지표를 완화하거나 개선하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애를 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"이라는 용어는 질환 또는 장애의 예방적 처치; 또는 질환 또는 장애의 발병 또는 진행의 지연을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 대상체가 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어서 이러한 치료로부터 이득을 얻을 경우, 이러한 대상체는 치료를 "필요로 한다".
본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 맥락에서(특히 청구범위의 맥락에서) 사용된 단수 형태 및 유사한 용어는 본원에서 달리 명시되지 않는 한 또는 맥락에 의해 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본원에 기술된 모든 방법은 본원에서 달리 지시되지 않는 한 또는 달리 맥락에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공되는 임의의 모든 예, 또는 예시적 언어(예를 들어, "와 같은")의 사용은 단지 본 개시 내용을 더욱 분명히 하고자 하는 것이고 달리 청구된 발명의 범위에 대한 한정을 제기하지 않는다.
본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자(예를 들어, 탄소 등)는 라세미 또는 거울상 이성질체 풍부, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-배열로 존재할 수 있다. 특정 실시 형태에서, 각각의 비대칭 원자는 (R)- 또는 (S)- 배열에서 적어도 50%의 거울상 이성질체 과잉률, 적어도 60%의 거울상 이성질체 과잉률, 적어도 70%의 거울상 이성질체 과잉률, 적어도 80%의 거울상 이성질체 과잉률, 적어도 90%의 거울상 이성질체 과잉률, 적어도 95%의 거울상 이성질체 과잉률, 또는 적어도 99%의 거울상 이성질체 과잉률을 갖는다. 불포화 이중 결합을 갖는 원자에서의 치환체는, 가능하다면, 시스-(Z)- 또는 트랜스-(E)-형태로 존재할 수 있다.
따라서, 본원에서 사용되는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 가능한 입체이성질체, 회전 이성질체, 회전장애 이성질체, 호변이성질체 또는 이의 혼합물 중 하나의 형태로, 예를 들어, 실질적으로 순수한 기하학적(시스 또는 트랜스) 입체이성질체, 부분입체 이성질체, 광학 이성질체(대장체), 라세미체 또는 이의 혼합물로서 존재할 수 있다.
입체이성질체의 임의의 생성된 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이에 근거하여, 예를 들어, 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해, 순수하거나 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 중간체의 임의의 생성된 라세미체는 공지의 방법에 의해, 예를 들어, 광학 활성 산 또는 염기를 이용하여 수득된 이의 부분입체이성질체 염의 분리에 의해, 그리고 광학 활성 산 또는 염기 화합물을 유리시키는 것에 의해 광학적 거울상체로 분할될 수 있다. 따라서, 특히 염기성 모이어티는 본 발명의 화합물을, 예를 들어, 광학적으로 활성인 산, 예를 들어, 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산에 의해 형성된 염의 분별 결정화에 의해 광학 거울상체로 분할하는 데 이용될 수 있다. 본 발명의 라세미 화합물 또는 라세미 중간체는 또한 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 흡착제를 사용하는 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 분할될 수 있다.
염, 수화물 및 용매화물을 포함하는 본 발명의 화합물은 적절한 조건 하에서 하나 이상의 결정질 형태로 단리될 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 도 1a, 1b 및 1c 및 실시예 41에서 특성화된 바와 같이 유리 염기의 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 결정질 형태 C를 제공한다. 결정질 형태 C는 다음의 특성 중 하나 이상을 특징으로 한다:
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.4 ± 0.2 °2θ, 15.2 ± 0.2 °2θ, 22.8 ± 0.2 °2θ 및 28.6 ± 0.2 °2θ에서 2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.4 ± 0.2 °2θ, 15.2 ± 0.2 °2θ, 15.9 ± 0.2 °2θ, 16.9 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 22.8 ± 0.2 °2θ, 24.6 ± 0.2 °2θ, 및 28.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.4 ± 0.2 °2θ, 15.2 ± 0.2 °2θ, 15.9 ± 0.2 °2θ, 16.9 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 22.8 ± 0.2 °2θ, 24.6 ± 0.2 °2θ, 및 28.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 1a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 1b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 45℃에서 19 J/g의 엔탈피로 탈수 흡열이 발생한 다음, 약 110℃에서 작은 용융 흡열과 즉각적인 발열 재결정화 사건이 있음;
vi) 도 1c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 건조 시 손실이 약 1.4%임.
일 실시 형태에서, 본 발명은 도 2a, 2b 및 2c 및 실시예 42에서 특성화된 바와 같이 유리 염기의 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 결정질 형태 D를 제공한다. 결정질 형태 D는 다음의 특성 중 하나 이상을 특징으로 한다:
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.3 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 24.2 ± 0.2 °2θ 및 28.6 ± 0.2 °2θ에서 2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.3 ± 0.2 °2θ, 15.2 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 19.2 ± 0.2 °2θ, 20.3 ± 0.2 °2θ, 21.6 ± 0.2 °2θ, 22.8 ± 0.2 °2θ, 24.2± 0.2 °2θ, 및 28.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 11.3 ± 0.2 °2θ, 15.2 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 19.2 ± 0.2 °2θ, 20.3 ± 0.2 °2θ, 21.6 ± 0.2 °2θ, 22.8 ± 0.2 °2θ, 24.2± 0.2 °2θ, 및 28.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 2a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 2b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 146℃에서 약 121 J/g의 엔탈피의 용융 흡열;
vi) 도 2c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 140℃에서 건조 시 손실이 약 0.15%임.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 도 5a, 5b 및 5c 및 실시예 45에서 특성화된 바와 같이 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 히푸레이트 염의 결정질 형태 A를 제공한다.
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 8.1 ± 0.2 °2θ, 16.2 ± 0.2 °2θ, 16.3 ± 0.2 °2θ, 20.4 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ 및 23.1 ± 0.2 °2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 8.1 ± 0.2 °2θ, 11.2 ± 0.2 °2θ, 12.2 ± 0.2 °2θ, 16.2 ± 0.2 °2θ, 16.3 ± 0.2 °2θ, 18.8 ± 0.2 °2θ, 19.7 ± 0.2 °2θ, 20.4 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 22.3± 0.2 °2θ, 22.6 ± 0.2 °2θ 및 23.1 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택된 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 8.1 ± 0.2 °2θ, 11.2 ± 0.2 °2θ, 12.2 ± 0.2 °2θ, 16.2 ± 0.2 °2θ, 16.3 ± 0.2 °2θ, 18.8 ± 0.2 °2θ, 19.7 ± 0.2 °2θ, 20.4 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 22.3± 0.2 °2θ, 22.6 ± 0.2 °2θ 및 23.1 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택된 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 5a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 5b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 172℃에서 약 106 J/g의 엔탈피의 용융 흡열;
vi) 도 5c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 170℃에서 건조 시 손실이 약 0.2%임.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 도 4a, 4b 및 4c 및 실시예 44에서 특성화된 바와 같이 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 히푸레이트 염의 결정질 형태 B를 제공한다. 결정질 형태 B는 다음의 특성 중 하나 이상을 특징으로 한다:
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 13.0 ± 0.2 °2θ, 17.1 ± 0.2 °2θ, 18.0 ± 0.2 °2θ, 18.8 ± 0.2 °2θ 및 23.5 ± 0.2 °2θ에서 2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 9.3 ± 0.2 °2θ, 11.1 ± 0.2 °2θ, 13.0 ± 0.2 °2θ, 17.1 ± 0.2 °2θ, 18.0 ± 0.2 °2θ, 18.8 ± 0.2 °2θ, 23.5 ± 0.2 °2θ, 및 24.2 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 9.3 ± 0.2 °2θ, 11.1 ± 0.2 °2θ, 13.0 ± 0.2 °2θ, 17.1 ± 0.2 °2θ, 18.0 ± 0.2 °2θ, 18.8 ± 0.2 °2θ, 23.5 ± 0.2 °2θ, 및 24.2 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 4a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 4b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 180℃에서 약 134 J/g의 엔탈피의 용융 흡열;
vi) 도 4c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 170℃에서 건조 시 손실이 약 0.3%임.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 도 3a, 3b 및 3c 및 실시예 43에서 특성화된 바와 같이 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 염산 염의 결정질 형태 E를 제공한다. 결정질 형태 E는 다음의 특성 중 하나 이상을 특징으로 한다:
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 15.8 ± 0.2 °2θ, 16.4 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 22.0 ± 0.2 °2θ, 22.0 ± 0.2 °2θ 및 27.6 ± 0.2 °2θ에서 2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 15.8 ± 0.2 °2θ, 16.4 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 19.3 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 22.0 ± 0.2 °2θ, 22.4 ± 0.2 °2θ, 23.8± 0.2 °2θ, 26.2 ± 0.2 °2θ, 및 27.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 15.8 ± 0.2 °2θ, 16.4 ± 0.2 °2θ, 18.3 ± 0.2 °2θ, 19.3 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 22.0 ± 0.2 °2θ, 22.4 ± 0.2 °2θ, 23.8± 0.2 °2θ, 26.2 ± 0.2 °2θ 및 27.6 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택되는 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 3a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 3b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 236℃에서 약 127 J/g의 엔탈피의 용융 흡열;
vi) 도 3c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 230℃에서 건조 시 손실이 약 0.5%임.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 도 6a, 6b 및 6c 및 실시예 46에서 특성화된 바와 같이 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 염산 염의 결정질 형태 F를 제공한다. 결정질 형태 F는 다음의 특성 중 하나 이상을 특징으로 한다:
(i) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 5.3 ± 0.2 °2θ, 15.9 ± 0.2 °2θ, 16.8 ± 0.2 °2θ, 17.7 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 21.3 ± 0.2 °2θ, 22.3 ± 0.2 °2θ 및 23.7 ± 0.2 °2θ에서 2θ에 관한 대표적인 피크를 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(ii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 5.3 ± 0.2 °2θ, 11.4 ± 0.2 °2θ, 15.9 ± 0.2 °2θ, 16.8 ± 0.2 °2θ, 17.2 ± 0.2 °2θ, 17.7 ± 0.2 °2θ, 18.0 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 21.3 ± 0.2 °2θ, 22.3± 0.2 °2θ, 23.7 ± 0.2 °2θ 및 26.8 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택된 4개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
(iii) 약 25℃의 온도 및 1.5406 Å의 x-선 파장(λ)에서 측정된, 5.3 ± 0.2 °2θ, 11.4 ± 0.2 °2θ, 15.9 ± 0.2 °2θ, 16.8 ± 0.2 °2θ, 17.2 ± 0.2 °2θ, 17.7 ± 0.2 °2θ, 18.0 ± 0.2 °2θ, 21.0 ± 0.2 °2θ, 21.3 ± 0.2 °2θ, 22.3± 0.2 °2θ, 23.7 ± 0.2 °2θ 및 26.8 ± 0.2 °2θ로 구성된 군으로부터 선택된 5개 이상의 2θ 값을 포함하는 x-선 분말 회절 패턴;
iv) 도 6a에 도시된 x-선 분말 회절 스펙트럼과 실질적으로 동일한 x-선 회절 스펙트럼;
v) 도 6b에 도시된 것과 실질적으로 동일한 시차 주사 열량측정(DSC) 열분석도; 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 분해를 수반하며 엔탈피가 있는 약 215℃에서의 용융;
vi) 도 6c에 도시된 것과 실질적으로 동일한 열 중량 분석(TGA) 다이어그램, 즉, 10 K/분의 속도로 30℃에서 300℃로 가열할 때 약 195℃에서 건조 시 손실이 약 0.4%임.
본 발명의 화합물, 즉, 수소 결합을 위한 공여자 및/또는 수여자로 작용할 수 있는 기를 함유하는 화학식 I의 화합물은 적합한 공결정 형성제를 사용하여 공결정을 형성할 수 있다. 이러한 공결정은 공지된 공결정 형성 절차에 의해 화학식 I, IA, IB 또는 IC 및 화학식 II 내지 VI 중 임의의 화학식의 화합물로부터 제조될 수 있다. 그러한 절차는 결정화 조건 하에서 공결정 형성제와 함께 화학식 I의 화합물을 용액 중에서 분쇄, 가열, 공승화, 공용융, 또는 접촉시키고 그에 의해 형성된 공결정을 단리하는 것을 포함한다. 적합한 공결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것들을 포함한다. 따라서 본 발명은 화학식 I, IA, IB, IC 및 화학식 II 내지 VI 중 임의의 하나의 화합물을 포함하는 공결정을 추가로 제공한다.
게다가, 본 발명의 화합물(그의 염을 포함함)은 또한 그의 수화물의 형태로 수득될 수 있거나, 그의 결정화에 사용되는 다른 용매를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 의도적으로 제약상 허용가능한 용매(물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있으므로, 본 발명은 용매화된 형태와 용매화되지 않은 형태 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물(이의 제약상 허용가능한 염을 포함함)과 하나 이상의 용매 분자와의 분자 복합체를 지칭한다. 그러한 용매 분자는, 수용자에게 무해한 것으로 알려진, 제약 분야에서 보통 사용되는 것들, 예를 들어, 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
합성 반응식
화학식 II의 화합물은 일반 반응식 A 또는 B에 따라 제조될 수 있다:
반응식 A
적합한 빌딩 블록 A.1의 시아노 기를 유기 주석 산화물의 존재 하에 아지드로 처리하여 테트라졸 A.2를 생성할 수 있으며, 이는 보호된 세린 유도체 A.3과 반응하여 중간체 A.4를 생성할 수 있다. 순차적 또는 동시적 탈보호는 화학식 II의 화합물을 제공할 수 있다.
반응식 B
대안적으로, 테트라졸 A.2를 염기의 존재 하에 보호된 4-(하이드록시메틸)-1,2,3-옥사티아졸리딘 2,2-디옥사이드 B.1과 반응시켜 중간체 B.2를 생성할 수 있으며, 이를 탈보호시켜 화학식 II의 화합물을 제공할 수 있다.
화학식 III의 화합물은 일반 반응식 C에 따라 제조될 수 있다:
반응식 C
적합한 빌딩 블록 C.1을 촉매의 존재 하에 붕소 시약 C.2와 반응시킬 수 있으며, 이는 보호되거나 보호되지 않아 중간체 C.3을 생성할 수 있다. 대안적으로, 상응하는 보론산 에스테르를 산 대신 사용할 수 있다. 보호된 빌딩 블록 B.1로 처리한 후 보호기를 제거하여 화학식 III의 화합물을 제공할 수 있다.
화학식 IV의 화합물은 일반 반응식 D에 따라 제조될 수 있다:
반응식 D
염기의 존재 하에 니트릴 A.1을 하이드록실아민으로 처리하여 중간체 D.2를 생성할 수 있으며, 이는 보호된 활성 에스테르 D.3과 반응하여 중간체 D.4를 생성할 수 있다. 보로하이드라이드 시약을 사용한 환원은 알코올 D.5를 생성할 수 있다. 탈보호는 화학식 IV의 화합물을 제공할 수 있다.
화학식 V의 화합물은 반응식 E에 따라 제조될 수 있다:
반응식 E
에스테르 E.4는 비누화되어 산 염화물 E.2로 전환될 수 있다. DMAP 및 염기의 존재 하에 하이드록시아세트이미드아미드 E.3으로 처리하면 중간체 E.4가 형성될 수 있다. 불활성 용매에서 E.4를 가열하여 옥사디아졸 E.5를 제공할 수 있다. E.6을 유기 리튬 시약으로 저온에서 처리한 후 E.5를 첨가하여 중간체 E.7을 생성할 수 있고, 이는 산의 존재 하에 중간체 E.8로 전환될 수 있다. 산을 환원시키면 화학식 V의 화합물을 얻을 수 있다.
화학식 VI의 화합물은 일반 반응식 F에 따라 제조될 수 있다:
반응식 F
디옥사보롤란 F.1을 NaIO4로 처리하여 보론산 F.2를 얻을 수 있다. Cu 촉매, O2 및 염기의 존재 하에 테트라졸 F.3과의 반응으로 중간체 F.6을 얻을 수 있다. 테트라졸 F.3은 아지드와의 반응을 통해 보호된 니트릴 F.5로부터 제조될 수 있다. 보로하이드라이드 시약을 사용한 환원은 알코올 F.6를 생성할 수 있다. 탈보호는 화학식 VI의 화합물을 제공할 수 있다.
반응식 A 및 D에서 중간체 A.1의 합성을 위한 추가 반응식 G~I.
반응식 G
염기의 존재 하에 G.1과 방향족 할로겐화물 G.2의 반응으로 중간체 A.1(G)를 얻을 수 있다.
반응식 H
염기의 존재 하에 화합물 H.1과 브롬화물 H.2의 반응으로 화합물 H.3을 얻을 수 있다. Rh 촉매를 이용한 환원은 H.4를 제공할 수 있다. 키랄 리간드의 존재 하에 거울상 이성질체적으로 순수한 H.4를 얻을 수 있다. 승온에서 Cu 촉매로 처리하면 화합물 A.1(H)를 얻을 수 있다.
반응식 I
염기의 존재 하에 할로겐화물 I.1과 페놀 I.2의 반응으로 중간체 A.1(I)를 얻을 수 있다.
반응식 C에서 중간체 C.1의 합성을 위한 추가 반응식 J~L:
반응식 J
염기의 존재 하에 할로겐화물 J.1과 페놀 J.2의 반응으로 중간체 C.1(J)를 얻을 수 있다.
반응식 K
염기의 존재 하에 화합물 K.1과 브롬화물 K.2의 반응으로 화합물 K.3을 얻을 수 있다. Rh 촉매를 이용한 환원은 K.4를 제공할 수 있다. 키랄 리간드의 존재 하에 거울상 이성질체적으로 순수한 K.4를 얻을 수 있다. 승온에서 Cu 촉매로 처리하면 화합물 C.1(K)를 얻을 수 있다.
반응식 L
염기의 존재 하에 할로겐화물 L.1과 페놀 L.2의 반응으로 중간체 C.1(L)을 얻을 수 있다.
반응식 E에 대한 중간체 E.1의 합성을 위한 추가 반응식 M~O
반응식 M
염기의 존재 하에 할로겐화물 M.1과 페놀 M.2의 반응으로 중간체 E.1(M)을 얻을 수 있다.
반응식 N
염기의 존재 하에 화합물 N.1과 브롬화물 N.2의 반응으로 화합물 N.3을 얻을 수 있다. Rh 촉매를 이용한 환원은 N.4를 제공할 수 있다. 키랄 리간드의 존재 하에 거울상 이성질체적으로 순수한 N.4를 얻을 수 있다. 승온에서 Cu 촉매로 처리하면 화합물 E.1(N)을 얻을 수 있다.
반응식 O
염기의 존재 하에 할로겐화물 O.1과 페놀 O.2의 반응으로 중간체 E.1(O)를 얻을 수 있다.
반응식 F에서 중간체 F.1의 합성을 위한 추가 반응식 P~R
반응식 P
염기의 존재 하에 할로겐화물 P.1과 페놀 P.2의 반응으로 중간체 F.1(P)를 얻을 수 있다.
반응식 Q
염기의 존재 하에 화합물 Q.1과 브롬화물 Q.2의 반응으로 화합물 Q.3을 얻을 수 있다. Rh 촉매를 이용한 환원은 Q.4를 제공할 수 있다. 키랄 리간드의 존재 하에 거울상 이성질체적으로 순수한 Q.4를 얻을 수 있다. 승온에서 Cu 촉매로 처리하면 화합물 F.1(Q)를 얻을 수 있다.
반응식 R
염기의 존재 하에 할로겐화물 R.1과 페놀 R.2의 반응으로 중간체 F.1(R)을 얻을 수 있다.
본 발명은 추가로 본 발명의 공정의 임의의 변형을 포함하는데, 이의 임의의 단계에서 얻을 수 있는 중간체는 출발 물질로서 사용되고 나머지 단계가 실시되거나, 출발 물질이 반응 조건 하에서 원 위치에서 형성되거나, 반응 성분이 이들의 염 또는 광학적으로 순수한 물질의 형태로 사용된다. 본 발명의 화합물 및 중간체는 또한 당업자에게 일반적으로 알려진 방법에 따라 서로 전환될 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 추가 실시 형태에서, 본 조성물은 본원에 기술된 것과 같은 적어도 2가지의 제약상 허용가능한 담체를 포함한다. 제약 조성물은 특정 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여(예를 들어, 주사, 주입, 경피 또는 국소 투여에 의해), 및 직장 투여를 위한 것으로 제형화될 수 있다. 국소 투여는 또한 흡입 또는 비강내 적용과 관련될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태(캡슐, 정제, 환제, 과립, 산제 또는 좌약을 포함하지만, 이에 한정되지 않음) 또는 액체 형태(용액, 현탁액 또는 에멀젼을 포함하지만, 이에 한정되지 않음)로 제조될 수 있다. 정제는 본 기술 분야에 공지된 방법에 따라 필름 코팅되거나 장용 코팅될 수 있다. 전형적으로, 제약 조성물은 다음 중 1가지 이상과 함께 활성 성분을 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다:
a) 희석제, 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로오스 및/또는 글리신;
b) 윤활제, 예를 들어, 실리카, 활석, 스테아르산, 이의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우도 마찬가지
c) 결합제, 예를 들어, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로오스, 소듐 카르복시메틸셀룰로오스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우
d) 붕해제, 예를 들어, 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및
e) 흡착제, 착색제, 향미제 및 감미제.
유리 형태 또는 제약상 허용가능한 염 형태의 본 발명의 화합물은, 예를 들어 다음 섹션에 제공되는 시험관내 및 생체내 시험에서 나타내는 바와 같이, 가치 있는 약리학적 특성, 예를 들어, LTA4H 조절 특성을 나타내고, 따라서, 치료용 또는 연구 화학물질로서, 예를 들어, 도구 화합물로서의 용도를 보여준다.
본 발명의 화합물은 다음으로부터 선택되는 적응증의 치료에 유용할 수 있다: 다음으로부터 선택된다: 급성 또는 만성 염증, 과민증 반응, 알레르기 반응, 아토피 피부염, 건선, 급성 호흡곤란 증후군, 면역 복합체-매개 폐 손상 및 만성 폐쇄성 폐질환, 염증성 장질환(궤양성 대장염, 크론병 및 수술후 외상을 포함), 위장 궤양, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 호중구성 피부증(괴저성 농피증, 스위트 증후군, 여드름 및 호중구성 두드러기를 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 면역-복합체-매개 사구체신염, 화농성 한선염, 자가면역질환(인슐린-의존성 진성 당뇨병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 골관절염 및 전신 홍반 루푸스를 포함), 혈관염(피부혈관염, 베체트병 및 헤노흐 쇤라인 자색반을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 심장혈관 장애(고혈압, 죽상동맥경화증, 동맥류, 중증 하지 허혈, 말초 동맥 폐색증, 폐동맥 고혈압 및 레이노 증후군을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 패혈증, 관절통을 포함하는 염증성 및 신경성 동통, 치은염을 포함하는 치주질환, 중이염, 편두통, 전립선 비대증, 쉐그렌-라손 증후군 및 암(백혈병 및 림프종, 전립선암, 유방암, 폐암, 악성 흑색종, 신세포 암종, 두경부 종양 및 결장직장암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음).
따라서, 추가 양태로서, 본 발명은 치료법에서의 화학식 I 내지 V 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도, 또는 실시예 1 내지 46 중 어느 하나의 화합물의 용도를 제공한다. 추가 실시 형태에서, 치료법은 LTA4H 활성의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 또 다른 실시 형태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
추가 양태로서, 본 발명은 치료법에 사용하기 위한, 2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올; (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 및 (R)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올로부터 선택된 화학식 I의 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 본 실시 형태의 추가 양태에서, 치료법은 LTA4H의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 본 실시 형태의 또 다른 양태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
따라서, 추가 양태로서, 본 발명은 치료법에 사용하기 위한, (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올인 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 본 실시 형태의 추가 양태에서, 치료법은 LTA4H의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 본 실시 형태의 또 다른 양태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
추가 양태로서, 본 발명은 치료법에 사용하기 위한, (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올, (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올, (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올, 및 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올로부터 선택되는 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 본 실시 형태의 추가 양태에서, 치료법은 LTA4H의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 본 실시 형태의 또 다른 양태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 발명은 LTA4H의 억제에 의해 치료되는 질환을 치료하는 방법으로서, 본 발명의 화합물(예를 들어, 화학식 I 내지 V 중 임의의 화합물 또는 실시예 1 내지 46의 특정 화합물 중 임의의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염)의 치료적으로 허용가능한 양을 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다. 추가 실시 형태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
따라서, 추가 양태로서, 본 발명은 의약 제조를 위한 본 발명의 화합물(예를 들어, 화학식 I 내지 V 중 임의의 화합물 또는 실시예 1 내지 46의 특정 화합물 중 임의의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염)의 용도를 제공한다. 추가의 실시 형태에서, 의약은 LTA4H의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환의 치료를 위한 것이다. 또 다른 실시 형태에서, 질환은 전술한 목록으로부터, 적합하게는 궤양성 대장염, 여드름, 화농성 한선염, 천식, 예를 들어 호중구성 천식, 건선 및 호중구성 염증성 병태, 예컨대 비알코올성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알코올성 지방간염(NASH)으로부터 선택된다.
본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 예를 들어, 약 50 내지 70 kg의 대상체에 대해 약 1 내지 1000 mg의 활성 성분(들)의 단위 투여량일 수 있다.
조합물:
"조합"은 하나의 단위 투여 형태의 고정 조합물, 또는 본 발명의 화합물과 조합 파트너(예를 들어 "치료제" 또는 "공동-제제"로도 지칭되는, 아래에 설명된 바와 같은 또 다른 약물)가 동시에 독립적으로 또는 시간 간격 내에서 개별적으로(특히 이들 시간 간격이 조합 파트너로 하여금 협동 효과, 예를 들어 상승 효과를 나타낼 수 있도록 하는 경우) 투여될 수 있는 조합 투여를 나타낸다. 단일 성분들은 키트로 또는 개별적으로 패키징될 수 있다. 성분들(예를 들어 분말 또는 액체) 중 하나 또는 둘 다는 투여 전에 요망되는 용량으로 재구성되거나 희석될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "공동투여" 또는 "병용투여" 등은 선택된 조합 파트너를 이를 필요로 하는 단일 대상체(예를 들어, 환자)에게 투여하는 것을 포함하는 것을 의미하며, 제제가 반드시 동일한 투여 경로로 또는 동시에 투여될 필요는 없는 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에서 사용되는 용어 "제약 조합물"은 둘 이상의 치료제의 혼합 또는 조합으로부터 생성된 제품을 의미하며, 치료제의 고정 조합물 및 비고정 조합물을 모두 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 치료제, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 조합 파트너가 둘 다 단일 개체 또는 투약의 형태로 동시에 환자에게 투여됨을 의미한다. 용어 "비고정 조합물"은 치료제, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 조합 파트너가 둘 다 동시에, 병행적으로, 또는 특정 시간 제한 없이 순차적으로 개별 개체로서 환자에게 투여되고, 이러한 투여가 환자의 신체에서 두 화합물의 치료적 유효 수준을 제공함을 의미한다. 후자는 칵테일 요법, 예를 들어 3개 이상의 치료제의 투여에도 적용된다.
"조합"은 하나의 투여 단위 형태의 고정 조합물, 또는 본 발명의 화합물과 조합 파트너가 독립적으로 동시에 또는 개별적으로 특히 조합 파트너가 협동적, 예를 들어 상승적 효과를 보여줄 수 있게 하는 시간 간격 내에 투여될 수 있는 조합 투여를 의미한다. 단일 성분들은 함께 키트로 또는 개별적으로 패키징될 수 있다. 성분들(예를 들어 분말 또는 액체) 중 하나 또는 둘 다는 투여 전에 요망되는 용량으로 재구성되거나 희석될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "제약 조합물"은 하나의 투여량 단위 형태의 고정 조합 또는 비고정 조합 또는 조합 투여를 위한 부품 키트를 나타내며, 여기서 2개 이상의 치료제가 동시에 또는 시간 간격 내에서 개별적으로 독립적으로 투여될 수 있고, 특히 이러한 시간 간격은 조합 파트너가 협동, 예컨대 상승 효과를 나타낼 수 있게 한다.
용어 "병용 요법"은 본원에 기술된 치료적 병태 또는 장애를 치료하기 위해 둘 이상의 치료제를 투여하는 것을 지칭한다. 이러한 투여는 이들 치료제를 실질적으로 동시적인 방식으로, 예컨대 고정된 비의 활성 성분을 갖는 단일 캡슐로 공동 투여하는 것을 포함한다. 대안적으로, 이러한 투여는 각각의 활성 성분을 위한 다수의 또는 개별적인 용기(예를 들어, 정제, 캡슐, 분말, 및 액체)에서의 공동-투여를 포괄한다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 원하는 용량으로 재구성될 수 있거나 희석될 수 있다. 추가적으로, 이러한 투여는 또한 대략 동일한 시점에 또는 상이한 시점에 각 유형의 치료제를 순차적인 방식으로 사용하는 것을 포괄한다. 어느 경우든, 치료 요법은 본원에서 기술되는 병태 또는 장애를 치료하는 데 있어서 약물 조합의 유익한 효과를 제공할 것이다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 다른 치료제와 동시에, 또는 그 전에 또는 그 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로 투여되거나, 다른 제제와 동일한 제약 조성물로 함께 투여될 수 있다. 치료제는, 예를 들어, 치료적으로 활성이거나 본 발명의 화합물과 함께 환자에 투여 시에 치료 활성을 향상시키는 화학적 화합물, 펩티드, 항체, 항체 단편 또는 핵산이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 치료법에서의 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 다른 치료제를 포함하는 생성물을 제공한다. 일 실시 형태에서, 치료법은 [LTA4H에 의해 매개되는 질환 또는 병태의 치료이다. 조합 제제로서 제공되는 생성물은, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제(들)를 동일한 제약 조성물에 함께 포함하는 조성물, 또는 본 발명의 화합물 및 다른 치료제(들)를 별개의 형태, 예를 들어 키트의 형태로 포함하는 조성물을 포함한다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 다른 치료제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 선택적으로, 제약 조성물은 전술된 바와 같은 제약상 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 둘 이상의 별개의 제약 조성물을 포함하는 키트를 제공하며, 이들 중 적어도 하나는 본 발명의 화합물을 함유한다. 일 실시 형태에서, 키트는 상기 조성물을 개별적으로 보유하는 수단, 예컨대 용기, 분할된 병, 또는 분할된 포일 패킷을 포함한다. 그러한 키트의 예로는 정제, 캡슐 등의 패키징에 전형적으로 사용되는 블리스터 팩이 있다.
본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어, 경구 및 비경구 투여 형태를 투여하기 위해, 별개의 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하기 위해, 또는 별개의 조성물을 서로에 대해 적정하기 위해 사용될 수 있다. 순응성을 돕기 위해, 본 발명의 키트는 전형적으로 투여 지침을 포함한다.
본 발명의 병용 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 상이한 제조업체에 의해 제조 및/또는 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 (i) 의사에게 조합 제품을 배포하기 이전에(예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우에); (ii) 투여 직전에 의사 자신에 의해(또는 의사의 지도 하에); (iii) 환자 자신에 의해, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 순차적으로 투여하는 동안, 병용 요법으로 합해질 수 있다.
따라서, 본 발명은 LTA4H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공하며, 상기 의약은 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 LTA4H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 다른 치료제의 용도를 제공하며, 상기 의약은 본 발명의 화합물과 함께 투여된다.
본 발명은 또한 LTA4H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공하며, 본 발명의 화합물은 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 LTA4H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 다른 치료제를 제공하며, 다른 치료제는 본 발명의 화합물과 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 LT14H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공하며, 본 발명의 화합물은 다른 치료제와 함께 투여된다. 본 발명은 또한 LT14H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 다른 치료제를 제공하며, 다른 치료제는 본 발명의 화합물과 함께 투여된다.
본 발명은 또한 LT14H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공하며, 환자는 이전(예를 들어, 24시간 이내)에 다른 치료제로 치료받은 적이 있다. 본 발명은 또한 LT14H에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 다른 치료제의 용도를 제공하며, 환자는 이전(예를 들어, 24시간 이내)에 본 발명의 화합물로 치료받은 적이 있다.
일 실시 형태에서, 다른 치료제는 다음으로부터 선택된다: COX 억제제, 시스테인일-류코트리엔 수용체 길항제(몬테루카스트, 프란루카스트, 자필루카스트를 포함), 류코트리엔 C4 신타제(LTC4S) 억제제, NLRP3 억제제, 스타틴, 설파살라진, 메살라민, 칼시뉴린 억제제, 예를 들어, 시클로스포린 A 또는 FK 506; mTOR 억제제, 예를 들어, 라파마이신, 40-O-(2-하이드록시에틸)-라파마이신, 바이올리무스-7 또는 바이올리무스-9; 면역억제 특성을 갖는 아스코마이신, 예를 들어, ABT-281, ASM981; 코르티코스테로이드; 시클로포스파미드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 레플루노미드; 미조리빈; 마이코페놀산 또는 염; 마이코페놀레이트 모페틸; IL-1베타 억제제.
특정 치료 이점을 제공할 수 있는 특정 개별 조합에는 NLRP3 억제제 또는 LTC4S 억제제가 포함된다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I 내지 V 중 임의의 하나에 따른 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염과 NLRP3 억제제의 조합물에 관한 것이다.
상기 조합에 사용하기 위한 NLRP3 억제제의 예는 다음의 PCT 특허 출원에 기술된 것들이다: WO/2020/234715, WO/2020/021447, WO/2017/184624, WO/2017/184623, WO/2017/184604, WO/2019/023147, WO/2019/023145, WO/2020/010140, WO/2019/079119, WO/2020/010143, WO/2020/102096, WO/2020/010118, WO/2020/086732, WO/2020/086728, WO/2020/102576, WO/2020/102574, WO/2020/102100, WO/2020/102098, WO/2020/154321 및 WO/2020/154499.
보다 구체적으로 상기 조합에 사용하기 위한 NLRP3 억제제는 다음으로 구성된 군:
또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택되고, 바람직하게는 다음으로 구성된 군:
또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다.
보다 구체적으로 상기 조합에 사용하기 위한 NLRP3 억제제는
, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이다.
다른 실시 형태에서, 상기 조합에 사용하기 위한 NLRP3 억제제는 WO2020/234715에 구체적으로 개시된 화합물로부터 선택된다. 이 실시 형태의 일 양태에서 NLRP3 억제제는 3-메틸-2-(5-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, (S)-3-메틸-2-(5-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, 및 (R)-3-메틸-2-(5-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 바람직하게는 (R)-3-메틸-2-(5-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다. 이 실시 형태의 다른 양태에서, WO2020/234715에 개시된 NLRP3 억제제는 2-(4-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, (S)-2-(4-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, 및 (R)-2-(4-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 바람직하게는 (R)-2-(4-메틸-6-((1-메틸피페리딘-3-일)아미노)피리다진-3-일)-5-(트리플루오로메틸)페놀 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다. 이 실시 형태의 또 다른 양태에서, WO2020/234715에 개시된 NLRP3 억제제는 2-(6-((3-하이드록시시클로헥실)아미노)피리다진-3-일)-3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페놀, 2-(6-(((1S,3R)-3-하이드록시시클로헥실)아미노)피리다진-3-일)-3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페놀, 2-(6-(((1R,3R)-3-하이드록시시클로헥실)아미노)피리다진-3-일)-3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페놀, 2-(6-(((1S,3S)-3-하이드록시시클로헥실)아미노)피리다진-3-일)-3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페놀 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택되고, 바람직하게는 화합물은 2-(6-(((1R,3S)-3-하이드록시시클로헥실)아미노)피리다진-3-일)-3-메틸-5-(트리플루오로메틸)페놀 또는 이의 제약상 허용가능한 염이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 HS 또는 NASH의 치료에 사용하기 위한 화학식 I 내지 V 중 임의의 하나에 따른 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염과 전술한 바와 같은 NLRP3 억제제의 조합물에 관한 것이다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I 내지 V의 화합물 중 임의의 하나 또는 이의 제약상 허용가능한 염과 LTC4S 억제제의 조합물에 관한 것이다.
상기 조합에 사용하기 위한 LTC4S 억제제의 예는 본원에 참조로 포함되는 PCT 특허 출원 WO2022/034529에 기술된 실시예 1 내지 120 중 하나이다.
보다 구체적으로 상기 조합에 사용하기 위한 LTC4S 억제제는 다음으로 구성된 군: 1-(3,4-디플루오로페닐)-9-(6-(2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온; 9-(2-아미노-6-(4-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일)피리미딘-4-일)-1-(3,4-디플루오로페닐)-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온; (R)-9-(2-아미노-6-((1,1,1-트리플루오로프로판-2-일)옥시)피리미딘-4-일)-1-(3,4-디플루오로페닐)-3-옥사-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온; (S)-9-(2-아미노-6-((1,1,1-트리플루오로프로판-2-일)옥시)피리미딘-4-일)-1-(3,4-디플루오로페닐)-3-옥사-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온; 9-(2-아미노-6-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일)-1-(3,4-디플루오로페닐)-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온 및 9-(2-아미노-6-(1,1-디플루오로에틸)피리미딘-4-일)-1-(3,4-디플루오로페닐)-1,9-디아자스피로[5.5]운데칸-2-온; 또는 이의 제약상 허용가능한 염으로부터 선택된다.
일 실시 형태에서, 본 발명은 천식 또는 아토피 피부염의 치료에 사용하기 위한 화학식 I 내지 V의 화합물 중 임의의 하나 또는 이의 제약상 허용가능한 염과 LTC4S 억제제의 조합물에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시 형태에서, 치료법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올, 또는 이의 제약상 허용가능한 염 및 상기 정의된 바와 같은 NLRP3 억제제를 포함하는 생성물이 제공된다.
본 발명의 다른 실시 형태에서, 치료법에서 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올, 또는 이의 제약상 허용가능한 염 및 상기 정의된 바와 같은 LTC4S 억제제의 생성물이 제공된다.
본 발명의 일 실시 형태에서, (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 상기 정의된 바와 같은 NLRP3 억제제 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
본 발명의 추가 실시 형태에서, (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, LTC4S 억제제 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
생물학적 분석 및 데이터
화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 가치 있는 약리학적 특성, 예를 들어, LTA4H에 민감한 특성(예를 들어, 다음 섹션에 제공되는 바와 같은 테스트에서 나타낸 바와 같음)을 나타내며, 따라서 LTA4H와 관련된 치료법을 위한 것으로 표시된다.
a) 인간 LTA4H 효소 분석:
류코트리엔 A4 하이드롤라제(LTA4H)는 에폭사이드인 류코트리엔 A4(LTA4)의 전염증성 매개체 LTB4로의 비닐 위치 가수분해를 촉매한다. LTA4H는 또한 아미노산의 발색성 7-아미노-4-메틸쿠마린(AMC) 유도체뿐만 아니라 디펩티드 및 트리펩티드 기질의 가수분해를 촉매할 수 있다. 아르기닌의 AMC 유도체(Arg-AMC)는 LTA4H의 대리 기질로 사용될 수 있으며 AMC 방출 시 형광 강도를 모니터링하여 효소 활성 및 화합물 IC50 값을 측정할 수 있다.
화합물 테스트를 위해, 화합물을 매트릭스 튜브에서 90% DMSO(10% 물) 중 10 mM 스톡 용액으로 전달한다. 이로부터, 시작 농도가 10 mM에서 0.64 μM까지 내려가는 1:5 희석 시리즈를 제조한다. 효소 분석을 위해, 0.5 μL의 화합물 용액을 각 웰로 옮기고 24.5 μL의 분석 완충액(50 mM Tris 완충액, pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl2)을 웰에 첨가한 다음 25 μL의 효소 용액(분석 완충액 중 36 nM 인간 LTA4H)을 첨가한다. 효소 화합물 혼합물을 실온에서 15분 동안 인큐베이션한 후 기질 용액 50 μL를 첨가한다. 9 nM의 최종 효소 농도에서 Arg-AMC의 KM 값 근처인 600 μM의 최종 기질 농도를 선택한다. 기질 첨가 시, 플레이트를 즉시 형광 판독기에 위치시키고 필터 설정 λ 여기 = 380 nm 및 λ 방출 = 460 nm를 사용하여 60분 동안 10분마다 형광을 측정한다. 분석 완충액에 포함된 다양한 농도(0.00128~100 μM)의 AMC를 표준 곡선으로 사용한다. 원시 데이터를 AMC 표준에서 계산된 AMC 보정 곡선을 사용하여 속도(분당 몰)로 변환한다. 데이터를 LTA4H 억제제의 IC50 값을 결정하기 위해 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism(GraphPad software Inc.)에서 분석한다.
분석 셋업으로 인해 화합물의 최대 검출가능 효력은 약 2~3 nM에서의 것이다. 따라서 이론적으로 2 nM보다 낮은 IC50 값을 초래할 수 있는 효능을 가진 화합물은 2 nM(= 분석의 더 낮은 컷오프)로 제공된다. 테스트된 화합물의 효능은 표 1에 제시되어 있다(적어도 3회 측정의 평균값이 제공됨).
b) 인간 전혈 분석:
화합물을 인간 세포 시스템에서 LTB4 생합성을 억제하는 능력을 테스트하기 위해 인간 전혈 분석(hWB)에서 테스트한다. 이를 위해 지원자의 정맥 천자를 통해 헤파린 처리된 진공채혈기에 신선한 혈액을 수집한다. 혈액을 RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 배지로 1:3으로 희석하고 200 μL의 분취량을 96웰 둥근 바닥 세포 배양 플레이트로 옮긴다. 화합물 테스트를 위해, 화합물을 매트릭스 튜브에서 90% DMSO 중 10 mM 스톡 용액으로 전달한다. 이로부터, 시작 농도가 250 μM에서 2.45 μM까지 내려가는 4배 연속 희석액을 제조한다. 4 μL의 화합물 희석액 또는 비히클을 200 μL의 혈액에 첨가하고 가습 인큐베이터에서 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션한다. 그런 다음 혈액을 10 μg/ml 칼슘 이온 운반체 A23187(Sigma) 또는 동일한 부피의 DMSO(대조군)로 자극하고 가습 인큐베이터에서 37℃에서 추가로 15분 동안 인큐베이션한다. 22℃에서 10분간 300 g로 원심분리하여 인큐베이션을 종료한다. 혈장 상청액을 채취하여 분석 완충액에서 1:20으로 희석한 후 제조업체의 프로토콜에 따라 ELISA(분석 설계)에 의한 에이코사노이드 결정을 위해 96웰 플레이트로 옮긴다. 데이터를 LTA4H 억제제의 IC50 값을 결정하기 위해 비선형 회귀를 사용하여 GraphPad Prism(GraphPad software Inc.)에서 분석한다. 테스트한 화합물의 효능을 표 1에 제시하였다.
화합물의 제조
본 발명의 화합물은 하기 실시예에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
약어:
Boc: tert-부틸옥시카보닐
CAN: 세륨암모늄질산
DCM: 디클로로메탄
DIAD: (E)-디-tert-부틸 디아젠-1,2-디카복실레이트
DMAP: 4-(디메틸아미노)피리딘
DMF: 디메틸포름아미드
DMSO: 디메틸 술폭시드
Hal: 할로겐
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
MTBE: 메틸 tert-부틸 에테르
NMR: 핵 자기 공명
PdCl2(dtbpf): 1,1'-비스 (디-t-부틸포스피노)페로센 팔라듐 디클로라이드
rt: 실온
SFC: 초임계 유체 크로마토그래피
TBDMSCl: tert-부틸디메틸실릴 클로라이드
THF: 테트라하이드로푸란
TMEDA: 테트라메틸에틸렌디아민
TMS: 트리메틸실릴
UPLC: 초고성능 액체 크로마토그래피
분석에 대한 세부 사항
NMR 분광학
NMR 스펙트럼은 Bruker UltrashieldTM 400(400 MHz) 분광계를 사용하여 얻었다. 모든 1H NMR 스펙트럼은 δ 단위(ppm)로 기록되며 예를 들어 CDCl3, DMSO-d6 또는 CD3OD로 기록되었고, 용매 피크를 기준으로 하였다.
분석적 액체 크로마토그래피
Waters Acquity UPLC/MS 시스템(Waters, 미국 매사추세츠 주 밀포드 소재)에 2성분 용매 관리자, 샘플 관리자, 컬럼 관리자, 포토다이오드 어레이 검출기(PDA) 및 Waters ZQ2000 MS 검출기가 장착되었다. UV 흡수를 λ = 210~450 nM에서 모니터링하였다. MS 검출기는 0.3초 이내에 120~1200 Da에서 전체 스캔을 수행하는 연속 양성/음성 ESI 교대 모드로 작동되었다. 질량 스펙트럼을 획득하여 중심 모드로 저장하였다. MS 기반의 분자량 확인은 양성 모드에서 유사 분자 이온 [M + H]+의 형성을 기준으로 하였다.
방법 A: 컬럼: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 μm, 2.1 x 50 mm, 60℃, 용리액 A: H2O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM 아세트산암모늄, B: ACN + 0.04 % HCOOH, 구배: 1.4분 내에 5%에서 98%까지의 B, 0.4분 동안 98% B, 0.1분 내에 98%에서 5%까지의 B, 0.1분 동안 5% B; 유량: 1.0 mL/분.
방법 B: 컬럼: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 μm, 2.1 x 50 mm, 60℃, 용리액 A: H2O + 0.05% HCOOH + 3.75 mM 아세트산암모늄, B: ACN + 0.04 % HCOOH, 구배: 9.4분 내에 5%에서 98%까지의 B, 0.4분 동안 98% B, 0.1분 내에 98%에서 5%까지의 B, 0.1분 동안 5% B; 유량: 1.0 mL/분.
방법 C: 컬럼: Acquity CORTECS C18+, 2.7 μm, 2.1x50 mm, 80℃, 용리액 A: H2O + 0.05 % HCOOH + 4.76% iPrOH + 3.75 mM 아세트산암모늄, B: iPrOH + 0.05 % HCOOH, 구배: 초기 1% B, 1.4분 내에 1%에서 50%까지의 B, 0.3분 내에 50%에서 98%까지의 B; 0.1분 동안 98%의 B; 유량: 1.0 mL/분.
분취 방법:
플래시 크로마토그래피: Teledyne ISCO, CombiFlash Rf. 컬럼: 사전 패킹된 RediSep Rf 카트리지. 전형적으로 샘플을 ISOLUTETM 상에 흡착시켰다.
SFC: Waters 분취용 SFC-100-MS; 검출: Waters 2998 포토다이오드 어레이 검출기 및 Waters MS 단일 사중극자 검출; 개질제: 메탄올; ABPR: 120바; 컬럼 온도: 40℃; 유량: 100 g/분.
분취용 HPLC: Waters Autopurification-MS 시스템; 검출: Waters 2998 포토다이오드 어레이 검출기 및 Waters MS 단일 사중극자 검출; 컬럼 온도: RT; 용리액 A: 물; 용리액 B: 아세토니트릴, 이들 둘 다 0.1% TFA 또는 0.1% NH4OH를 함유함.
이들 실시예에 사용된 모든 시약, 출발 물질 및 중간체는 상업적 공급처로부터 입수가능하거나 당업자에게 공지된 방법에 의해 용이하게 제조되었다.
중간체의 합성:
중간체 A
단계 a) 메틸 N-(tert-부톡시카보닐)-O-(tert-부틸디메틸실릴)-D-세리네이트(A.2). CH2Cl2(75 mL) 중 A.1(5.0 g, 22.8 mmol) 및 이미다졸(2.33 g, 34.2 mmol)의 용액에 CH2Cl2(25 mL) 중 TBDMSCl(4.70 g, 29.6 mmol)의 용액을 20분 이내에 아르곤 하에서 얼음 냉각시키면서 첨가하였다. 생성된 무색 현탁액을 얼음 냉각시키면서 추가로 40분 동안 교반하였다. 여전히 차가운 반응 혼합물을 물로 희석하고, MTBE로 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 증발시켜 화합물 A.2를 황색 오일(8.44 g, 정량적)로 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. TLC: Rf=0.73 (시클로헥산/에틸 아세테이트 7:3, KMnO4-염색); 1H NMR (CDCl3): δ = 5.31 (1H, br d), 4.33 (1H, ddd), 4.02 (1H, dd) 3.80 (1H, dd), 3.72 (3H, s), 1.44 (9H, s), 0.84 (9H, s), 0.01 (3H, s), 0.00 (3H, s).
단계 b) tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(A.3). THF(70 mL) 중 A.2(7.16 g, 21.5 mmol)의 용액에 아르곤 하에 얼음 냉각시키면서 LiBH4(0.94 g, 42.9 mmol)를 첨가하였다. 첨가하는 동안 약한 발포가 관찰될 수 있었다. 25℃에서 밤새 계속 교반하였다. 그런 다음, 반응 혼합물을 절반 포화 NH4Cl 용액(250 mL)에 붓고 MTBE로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 증발 건조시켜 화합물 A.3을 무색 오일(6.30 g, 96%)로 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. TLC: Rf=0.17 (시클로헥산/에틸 아세테이트 8:2, KMnO4-염색); 1H NMR (CDCl3): δ = 5.06 (1H, br s), 3.70-3.89 (3H, m), 3.49-3.65 (2H, m)1.38 (9H, s), 0.82 (9H, s), 0.02 (3H, s), 0.00 (3H, s).
단계 c) tert-부틸 (R)-4-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-1,2,3-옥사티아졸리딘-3-카르복실레이트 2,2-디옥사이드(A). 아르곤 하에서 이미다졸(8.42 g, 124 mmol)을 CH2Cl2(100 mL)에 현탁시키고 0℃까지 냉각시켰다. 10분 이내에 CH2Cl2(25 mL) 중 SOCl2(2.70 mL, 37.1 mmol) 용액을 첨가하여 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하였다. 형성된 걸쭉한 무색 현탁액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그 후, 내부 온도를 -10℃까지 낮추고 A.3(6.30 g, 20.6 mmol)의 용액을 10분 내에 적가하였다. 냉욕을 제거하고 1.5시간 동안 계속 교반하였다. 그 다음, 물(150 mL)을 첨가하고 혼합물을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 10% 시트르산 및 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 제거하고 황색 오일(6.82 g, 94%, 부분입체 이성질체 설폭사이드-혼합물)을 아세토니트릴(150 mL)에 녹였다. 이어서, RuCl3·H2O(93 mg, 0.4 mmol, 2 mol%)를 첨가한 후, 얼음 냉각시키면서 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 물(75 mL) 중 NaIO4(6.62 g, 30.1 mmol) 용액을 적가하였다. 0℃에서 추가로 45분 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트(150 ml) 및 Hyflow(25 g)를 황갈색 현탁액에 첨가하였다. 모든 고체를 여과 제거하고 여과액의 수성 층을 에틸 아세테이트/MTBE 3:1(100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수, 5% 수성 티오황산나트륨으로 세척하고 다시 염수로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 용매를 증발시켜 고체로 오염된 황색 오일을 얻었다. 고체는 시클로헥산 트리튜레이션에 의해 제거할 수 있었다. 실리카 플래쉬 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 화합물 A를 무색 오일로 얻었고, 이는 정치에 의해 고체화되었다(3.88 g, 51%). TLC: Rf = 0.41(시클로헥산/에틸 아세테이트 85:15, KMnO4-염색); [α]D 23: -25° (c=1, CH2Cl2); 1H NMR (CDCl3): δ = 4.47-4.57 (2H, m), 4.18 (1H, m), 3.78 (1H, dd), 3.69 (1H, t), 1.47 (9H, s), 0.81 (9H, s), 0.01 (3H, s), 0.00 (3H, s).
중간체 B
A.1을 S-거울상 이성질체 B.1로 대체하는 중간체 A의 합성에 사용된 유사한 절차에 의해 중간체 B를 제조하였다. [α]D 23: +20.2° (c=1, CH2Cl2); 1H NMR (CDCl3): δ = 4.48-4.58 (2H, m), 4.18 (1H, m), 3.78 (1H, dd), 3.69 (1H, t), 1.47 (9H, s), 0.81 (9H, s), 0.00 (6H, s).
실시예의 합성:
실시예 1 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 3-(2-(2-요오도페녹시)아세틸)벤조니트릴(1.1). WO2013/134226에 따라: 자석 교반 막대가 장착된 250 mL 1구 플라스크에 2-요오도페놀(10.51 g, 46.8 mmol), 아세토니트릴(16.5 ml) 및 탄산칼륨(7.12 g, 51.5 mmol)을 첨가하였다. 분홍색의 현탁액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 아세토니트릴(33 ml)에 용해된 3-(2-브로모아세틸)벤조니트릴(12.15 g, 51.5 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 추가로 탄산칼륨(380 mg) 및 3-(2-브로모아세틸)벤조니트릴(600 mg)을 첨가하였다. 2시간 후 반응 혼합물을 15℃까지 냉각시키고, 2 M의 염산(30 mL)으로 ??칭하였다. 물(100 ml)을 첨가하고 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(200 ml)로 추출하였다. 유기 층을 물(2 x 100 ml) 및 염수(100 ml)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공에서 농축하여 (1.1)을 베이지 레이진(19.24 g, 정량적)으로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.15분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 5.71 (s, 2 H), 6.77 (t, J=7.52 Hz, 1 H), 7.00 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 7.31 (t, J=7.64 Hz, 1 H), 7.76 - 7.86 (m, 2 H), 8.17 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.27 (d, J=7.95 Hz, 1 H), 8.52 (s, 1 H). MS/ESI+ 364.3 [M + H]+.381.1 [M + NH4 +]+.
단계 b) (S)-3-(1-하이드록시-2-(2-요오도페녹시)에틸)벤조니트릴(1.2). WO2013/134226 p 79 A-8에 따라: 자기 교반 막대 및 온도계가 장착된 500 mL 3구 플라스크에 3-(2-(2-요오도페녹시)아세틸)벤조니트릴(1.1)(19.2 g, 46.5 mmol)을 첨가하고, 이어서 아세토니트릴(86 ml)을 첨가하였다. 약간 탁한 혼합물을 통해 아르곤을 5분 동안 버블링했다. N-((1R,2R)-2-아미노-1,2-디페닐에틸)-4-메틸벤젠술폰아미드(0.239 g, 0.651 mmol), Cp*RhCl2 이량체(CAS: 12354-85-7)(0.173 g, 0.279 mmol) ) 및 트리에틸아민(15.48 ml, 112 mmol)을 실온에서 첨가하고 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 포름산(6.25 ml,163 mmol)을 15℃ 미만에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 10℃에서 30분 후, 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 강하게 교반하면서 물(200 ml)로 ??칭하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공 농축하여 (1.2)를 얻었다(19.76 g 미정제). 실리카 크로마토그래피(구배: 헵탄/에틸 아세테이트)로 무색 레이진(13.86 g, 77%)으로서 (1.2)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.08분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 4.09 (dd, J=9.78, 5.50 Hz, 1 H), 4.18 (dd, J=9.66, 5.75 Hz, 1 H), 5.03 (t, J=5.20 Hz, 1 H), 5.89 (s, 1 H) 6.73 (t, J=7.46 Hz, 1 H), 7.00 (d, J=8.31 Hz, 1 H), 7.32 (t, J=7.76 Hz, 1 H), 7.52 - 7.62 (m, 1 H), 7.70 - 7.78 (m, 2 H), 7.87 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.96 (s, 1 H). MS/ESI+ 383.1 [M + NH4 +]+.
단계 c) (S)-3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)벤조니트릴(1.3) 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 500 mL 2구 플라스크에 (S)-3-(1-하이드록시-2-(2-요오도페녹시)에틸)벤조니트릴(1.2)(8.76 g, 21.59 mmol)을 첨가한 후 DMF(72 ml)를 첨가하였다. 탄산세슘(14.07 g,43.2 mmol), 요오드화 Cu(I)(0.411 g, 2.159 mmol) 및 N,N-디메틸글리신 염산염을 첨가하고 혼합물을 아르곤 하에서 4시간 동안 135℃에서 교반하였다. 차가운 반응 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기상을 포화 염화암모늄 수용액으로 2회 세척하였다. 수성상을 에틸 아세테이트로 역추출하고, 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 농축하여 (1.3)을 얻었다(6.28 g 미정제). 실리카 크로마토그래피(구배: 헵탄/에틸 아세테이트)로 우윳빛 레이진(3.55 g, 66%)으로서 (1.3)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.13분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 4.15 (dd, J=11.49, 8.07 Hz, 1 H), 4.49 (dd, J=11.49, 2.20 Hz, 1 H), 5.31 - 5.40 (m, 1 H), 6.85 - 6.97 (m, 3 H), 6.97 - 7.05 (m, 1 H), 7.62 - 7.71 (m, 1 H), 7.88 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.85 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.97 (s, 1 H). MS/ESI+ 255.2 [M + NH4+]+, MS/ESI- 236.3 [M - H]-.
단계 d) (S,E)-3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(1.4). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 2구 플라스크에 (S)-3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)벤조니트릴(1.3)(1.2 g, 5.06 mmol) 및 에탄올(17 ml)을 첨가하였다. 물 중 50% 하이드록실아민 용액(1.19 ml, 20.23 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 환류시켜 투명한 용액을 얻었다. 혼합물을 진공에서 농축하여 미정제 물질(1.4)(1.39 g, 99%)을 얻었고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. 작은 탐침(60 mg)을 디클로로메탄/펜탄으로 트리튜레이션하여 38 mg의 백색 분말을 생성하였다. UPLC 체류 시간 0.79분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 4.11 (dd, J=11.43, 8.38 Hz, 1 H), 4.45 (dd, J=11.49, 2.45 Hz, 1 H), 5.27 (dd, J=8.31, 2.20 Hz, 1 H), 5.84 (s, 2 H), 6.85 - 7.02 (m, 3 H), 7.40 - 7.52 (m, 2 H), 7.69 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.80 (s, 1 H), 9.66 (s, 1 H). MS/ESI+ 271.2 [M + H]+.
단계 e) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]-디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(1.5). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 2구 플라스크에 (S,E)-3-(2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(1.4)(505 mg, 1.87 mmol) 및 2-Me-THF(18.7 ml), 이어서 Boc-Asp(OSu)-OBzl[CAS 140171-25-1](1179 mg, 2.81 mmol, Bachem)을 채웠다. 반응 혼합물을 87℃에서 4일 동안 교반하였다. 용매를 회전증발기에서 증발시켜 미정제 생성물 2.05 g을 생성하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 (1.5)(1122 mg, 100%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.38분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ =ppm 1.27 - 1.37 (m, 9 H), 3.43 (dd, J=15.71, 8.74 Hz, 1 H), 3.55 (dd, J=15.65, 5.99 Hz, 1 H), 4.12 (dd, J=11.49, 8.31 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=11.55, 2.38 Hz, 1 H), 4.67 (d, J=6.11 Hz, 1 H), 5.16 (s, 2 H), 5.40 (dd, J=8.19, 2.08 Hz, 1 H), 6.87 - 6.97 (m, 3 H), 6.99 - 7.04 (m, 1 H), 7.27 -7.38 (m, 5 H), 7.57 - 7.67 (m, 2 H), 7.69 - 7.74 (m, 1 H), 8.00 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.11 (s, 1 H). MS/ESI+ 558.3 [M + H]+.
단계 f) tert-부틸 ((S)-1-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(1.6). 자석 교반 막대가 장착된 100 mL 1구 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]-디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(1.5)(723 mg, 1.206 mmol) 및 THF(16 ml)를 채웠다. 0℃에서 수소화붕소리튬(105 mg, 4.82 mmol)을 첨가하고 10분 후에 냉각조를 제거하였다. 30분 후에 Isolute HM-N(Biotage 9800-1000) 3스푼을 첨가하여 반응 혼합물을 ??칭하였다. 용매를 회전증발기에서 증발시키고 Isolute에 흡착된 나머지 생성물을 물/아세토니트릴 구배를 적용하는 Redisep RP-C18(86 g) 컬럼을 사용하여 정제하여 tert-부틸 ((S)-1-(3-(3- ((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(1.6)(303 mg, 54.3%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.17분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ =ppm 1.29 (s, 9 H), 2.99 (dd, J=14.79, 9.17 Hz, 1 H), 3.27 (dd, J=14.79, 4.52 Hz, 1 H), 3.33 - 3.53 (m, 2 H), 3.92 (br. s., 1 H), 4.11 (dd, J=11.49, 8.31 Hz, 1 H), 4.50 (dd, J=11.49, 2.45 Hz, 1 H), 4.92 (t, J=5.62 Hz, 1 H), 5.40 (dd, J=8.19, 2.08 Hz, 1 H), 6.81 - 7.06 (m, 5 H), 7.63 (t, J=7.64 Hz, 1 H), 7.71 (d, J=7.83 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.12 (s, 1 H). MS/ESI+ 454.3 [M + H]+.
단계 g) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 1) 자석 교반 막대가 장착된 100 mL 1구 플라스크에 tert-부틸 ((S)-1-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(1.6 )(275 mg, 0.606 mmol) 및 디클로로메탄(6 ml)을 채웠다. TFA(0.934 ml, 12.13 mmol)를 첨가하고 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 남은 오일을 에틸 아세테이트에 용해시키고 포화 중탄산나트륨 수용액, 약간의 물 및 염수로 3회 세척하였다. 미정제 생성물(245 mg)을 물/아세토니트릴 구배를 적용하는 Redisep RP-C18(43 g) 컬럼을 사용하여 정제하여 70 mg을 얻었다. 끈적끈적한 고체를 동결건조하고 최종적으로 이소프로필 에테르로 트리튜레이션하여 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 1)을 백색 분말(56 mg, 26%)로 제공하였다. UPLC 체류 시간 0.77분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ =ppm 2.09 (br. s., 3 H), 3.06 - 3.28 (m, 2 H), 3.57 - 3.68 (m, 2 H), 3.75 - 3.82 (m, 1 H), 4.07 (dd, J=11.43, 8.86 Hz, 1 H), 4.42 (dd, J=11.43, 2.38 Hz, 1 H), 5.22 (dd, J=8.86, 2.14 Hz, 1 H), 6.89 - 7.06 (m, 4 H), 7.52 - 7.65 (m, 2 H), 8.10 (d, J=7.46 Hz, 1 H), 8.16 (s, 1 H). MS/ESI+ 354.2 [M + H]+.
실시예 2 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(2.3). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 3-시아노페놀(Sigma-Aldrich)(2.2)(1.036 g, 8.70 mmol), 5-클로로-2-플루오로피리딘(Apollo Scientific Ltd.)(2.1)(1.04 g, 7.91 mmol), K2CO3(3.28 g, 23.72 mmol) 및 DMF(40.0 ml)를 첨가했다. 현탁액을 100℃에서 113시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 물/EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축에 의해 갈색 오일을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~10%)로 정제하여 3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(2.3)을 백색 고체(1.55 g, 85%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.07분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.11 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.42 - 7.36 (m, 1H), 6.96 (d, J = 8.7 Hz, 1H). MS/ESI+ 231.2 [M + H]+.
단계 b) (Z)-3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(2.4). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(2.3)(1.00 g, 4.34 mmol), 하이드록실아민 염산염(1.506 g, 21.68 mmol), NaHCO3(1.821 g, 21.68 mmol) 및 에탄올(20.0 ml)/물(10.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃까지 가열하고 65분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 남은 백색 현탁액에 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. LC-MS 및 1H NMR에 의한 분석으로 후처리 생성물 (Z)-3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(2.4)(1.1 g, 95%)의 고순도가 밝혀졌다.
UPLC 체류 시간 0.71분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=ppm 9.68 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 2H), 7.15 (dd, J = 7.8, 2.0 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H). MS/ESI+ 264.3 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(2.6). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 생성물 (Z)-3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드-아미드(2.4)(450 mg, 1.707 mmol), Boc-Asp(OSu)-OBzl[CAS 140171-25-1](2.5)(789 mg, 1.877 mmol) 및 THF(10.0 ml)를 첨가하였다. 무색의 용액을 120℃까지 가열하고, 19시간 동안 교반하였다. 황색 용액을 얻었다. THF를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~18%)로 정제하여 벤질(S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(2.6)(871 mg, 93%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.41분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.11 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.66 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.24 (m, 6H), 6.93 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.54 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.23 - 5.11 (m, 2H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 3.49 (qd, J = 16.1, 4.9 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). MS/ESI+ 551.4 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판 -2-일)카르바메이트(2.7). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(2.6)(506 mg, 0.918 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 무수 THF(부피: 10.0 mL)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(100 mg, 4.59 mmol)를 한꺼번에 첨가하고 반응 혼합물을 70분 동안 교반하였다.
MeOH(3 ml)로 반응을 ??칭하였다. 포화 NH4Cl 수용액 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~50%)로 정제하여 tert-부틸(S)-(1-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(2.7)(317 mg, 77%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.13분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.08 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.81 - 7.77 (m, 1H), 7.63 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.78 - 3.64 (m, 2H), 3.35 (s, 1H), 3.22 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H). MS/ESI+ 447.3 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 2). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(2.7)(316 mg, 0.707 mmol), 디옥산(4.0ml) 및 수성 HCl(4.0 ml, 8.00 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 5일 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 대략. 0.2 M NaOH 수용액(10 ml)을 첨가하자 백색 고체가 침전되었다. EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~8.5%)로 정제하여 밝은 백색 결정 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2 -일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 2)(202 mg, 82%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.71분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.11 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.85 - 7.80 (m, 1H), 7.66 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.50 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 1H), 6.92 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.67 (dd, J = 10.6, 4.4 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 10.6, 6.2 Hz, 1H), 3.49 - 3.41 (m, 1H), 3.11 (dd, J = 15.6, 4.7 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 15.6, 8.2 Hz, 1H), 2.07 (s br, 3H). MS/ESI+ 347.3 [M + H]+.
실시예 3 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(3.2). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 1구 배형 플라스크에 5-(디플루오로메톡시)-2-플루오로피리딘(3.1)(0.938 g, 5.75 mmol), 3-시아노페놀(Sigma-Aldrich)(2.2)(0.754 g, 6.33 mmol), 탄산칼륨(2.385 g, 17.25 mmol) 및 DMF(30.0 ml)를 첨가했다. 이어서, 현탁액을 90℃에서 7일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물/EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~16%)로 정제하여 3-((5-디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(3.2)을 무색 오일(1.02 g, 67.6%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.04분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.8, 2.9 Hz, 1H), 7.52 - 7.48 (m, 2H), 7.47 - 7.44 (m, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.01 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.50 (t, J = 72.6 Hz, 1H). MS/ESI+ 263.2 [M + H]+.
단계 b) (Z)-3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(3.3). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 50mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(3.2)(545 mg, 2.078 mmol), 하이드록실아민 염산염(722 mg, 10.39 mmol), NaHCO3(873 mg, 10.39 mmol) 및 에탄올(6.0 ml)/물(3.0 ml)을 첨가하였다. 현탁액을 85℃에서 1시간 동안 교반하였다. EtOH를 진공에서 제거하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~45%)로 정제하여 (Z)-3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈-이미다미드(3.3)(564 mg, 92%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.69분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.22 (s br, 1H), 8.04 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H), 7.48 - 7.45 (m, 1H), 7.45 - 7.39 (m, 2H), 7.19 (ddd, J = 7.7, 2.3, 1.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.47 (t, J = 72.9 Hz, 1H), 4.87 (s, 2H). MS/ESI+ 296.5 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(3.4). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 THF(10 ml) 중 (Z)-3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈-이미드아미드(3.3)(546 mg, 1.849 mmol) 및 Boc-Asp(OSu)-OBzl[CAS 140171-25-1](2.5)(855 mg, 2.034 mmol)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고 무색 용액을 100℃에서 66시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~20%)로 정제하여 무색의 끈적한 오일 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(3.4)(945 mg, 88%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.35분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 - 7.22 (m, 6H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.47 (t, J = 72.9 Hz, 1H), 5.54 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.23 - 5.10 (m, 2H), 4.86 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 3.49 (qd, J = 16.1, 4.9 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H). MS/ESI+ 583.5 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(3.5). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(3.4)(514 mg, 0.882 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 4회 다시 충전시켰다. 무수 THF(9.0 ml)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서, LiBH4(96 mg, 4.41 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. MeOH을 첨가하고 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~50%)로 정제하여 tert-부틸(S)-(1-(3-(3-((5-디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(3.5)(292 mg, 69.2%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.09분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.05 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 2H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.48 (t, J = 72.9 Hz, 1H), 5.19 (s br, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 1H), 3.85 - 3.73 (m, 2H), 3.28 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). MS/ESI+ 479.4 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 3). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(3.5)(283 mg, 0.591 mmol), 디옥산(6.0 ml) 및 수성 HCl(6.0 ml, 12.00 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 2 M NaOH 수용액(6.0 ml)을 첨가하고 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 수득한 현탁액에 EtOAc 및 약 0.1 M 수성 NaOH를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~8%)로 정제하여 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 3)을 담황색의 맑은 점성 오일(182 mg, 79%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.69분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.01 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.83 - 7.79 (m, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 2H), 7.25 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.47 (t, J = 72.9 Hz, 1H), 3.63 (dd, J = 10.7, 4.4 Hz, 1H), 3.50 (dd, J = 10.7, 6.1 Hz, 1H), 3.46 - 3.38 (m, 1H), 3.09 (dd, J = 15.6, 4.7 Hz, 1H), 2.98 - 2.92 (m, 1H), 2.34 (s br, 3H). MS/ESI+ 379.2 [M + H]+.
실시예 4 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(4.3). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘(4.1)(0.990 g, 6.00 mmol), 4-시아노페놀(4.2)(0.786 g, 6.60 mmol), K2CO3(2.486 g, 17.99 mmol) 및 DMF(30.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~7%, 분획)로 정제하여 4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(4.3)(1.51 g, 95%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.44 (s, 1H), 7.98 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.28 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.6 Hz, 1H). MS/ESI+ 265.3 [M + H]+.
단계 b) N-하이드록시-4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(4.4). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 4-((5-(트리플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(4.3)(0.794 g, 3.01 mmol), 하이드록실아민 염산염(1.044 g, 15.03 mmol), NaHCO3(1.262 g, 15.03 mmol) 및 에탄올(15.0 ml)/물(5.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~40%)로 정제하여 N-하이드록시-4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(4.4) 백색 결정(828 mg, 93%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.75분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.47 - 8.43 (m, 1H), 7.93 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 2H), 7.23 - 7.17 (m, 2H), 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.89 (s, 2H). MS/ESI+ 298.2 [M + H]+. 원하는 생성물과 일치하였다.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(4.5). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 N-하이드록시-4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(4.4)(726 mg, 2.443 mmol), Boc-Asp(OSu)-OBzl[CAS 140171-25-1](2.5)(1130 mg, 2.69 mmol) 및 THF(13.0 ml)를 첨가하였다. 무색 용액을 110℃에서 17시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~18%)로 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시-카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(4.5)(1.41 g, 99%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.42분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.46 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.31-2.27 (m, 5H), 7.26 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.24 - 5.16 (m, 2H), 4.94 - 4.86 (m, 1H), 3.52 (qd, J = 16.2, 4.9 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). MS/ESI+ 585.4 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5 -일)프로판-2-일)카르바메이트(4.6). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시-카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(4.5)(737 mg, 1.261 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 이어서 무수 THF(10 mL)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(51.9 mg, 2.383 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 75분 동안 교반하였다. 50분 후, LiBH4(27.5 mg, 1.26 mmol, 1.00당량)를 더 첨가하였다. 황색 현탁액을 MeOH로 ??칭하였다. 혼합물을 주말 동안 냉동실에 보관하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~40%)로 정제하여 점착성 무색 오일 tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(4.6)(399 mg, 65.9%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.17분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.45 (s, 1H), 8.14 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.94 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.29 - 7.26 (m, 2H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.20 (s, 1H), 3.80 (dq, J = 11.3, 5.9, 4.7 Hz, 2H), 3.30 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -61.73. MS/ESI+ 481.4 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 4) 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(4.6)(393 mg, 0.818 mmol), 디옥산(8.0 ml) 및 수성 HCl(8.0 ml, 16.00 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 40시간 동안 교반하였다. 백색 현탁액을 얻었다. 용매를 진공에서 제거하였다. 2 M NaOH 수용액(10 ml)을 첨가하였다. 그런 다음 EtOAc와 약 0.2 M NaOH 수용액을 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 담황색(거의 백색) 고체를 얻었다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~10%)로 정제하여 백색 고체 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 4)(212 mg, 68.1%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.75분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.45 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.94 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.71 (dd, J = 10.5, 4.3 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 10.5, 6.3 Hz, 1H), 3.54 - 3.46 (m, 1H), 3.15 (dd, J = 15.5, 4.7 Hz, 1H), 3.01 (dd, J = 15.5, 8.1 Hz, 1H), 1.72 (s br, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -61.73. MS/ESI+ 381.3 [M + H]+.
실시예 5 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(5.1). 자석 교반 막대가 장착된 10 mL 마이크로파 바이알에 5-(디플루오로메톡시)-2-플루오로피리딘(0.186 g, 1.140 mmol, Enamine Ltd.)(3.1), 4-시아노페놀(0.177 g, 1.483 mmol, Sigma- Aldrich)(4.2), K2CO3 0.473g, 3.42 mmol) 및 DMF(부피: 4.0 ml)를 첨가하였다. 바이알을 밀봉한 후, 백색 현탁액을 110℃까지 가열하고 5일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물/EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~25%)로 정제하여 무색 오일 4-((5-디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(5.1)(0.25 g, 84%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.04분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.06 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.71 - 7.67 (m, 2H), 7.59 (dd, J = 8.8, 2.9 Hz, 1H), 7.25 - 7.21 (m, 2H), 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.51 (t, J = 72.6 Hz, 1H). MS/ESI+ 263.2 [M + H]+.
단계 b) (Z)-4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(5.2).
자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 25 mL 1구 배형 플라스크에 NaHCO3(400 mg, 4.77 mmol), 하이드록실아민 염산염(331 mg, 4.77 mmol) 및 물(2.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액(주의: 가스 형성)을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서 EtOH(5.0 ml) 중 4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-벤조니트릴(5.1)(250 mg, 0.953 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃까지 가열하고 80분 동안 교반하였다. 약 15분 이내에 무색 용액을 얻었다. 30분 후 LC-MS에서는 출발 물질이 거의 완전히 소모된 것으로 나타났다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 물/EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~65%)로 정제하여 탁한 오일을 얻었고 이는 (Z)-4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(0.248 g, 88%)(5.2)로 천천히 결정화하였다. UPLC 체류 시간 0.65분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.02 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 2H), 7.53 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H), 7.17 - 7.11 (m, 2H), 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.48 (t, J = 72.8 Hz, 1H) (NH2 및 NOH 피크는 (DMSO-d6가 아니라) CDCl3가 용매로 사용되었기 때문에 관찰되지 않음!). MS/ESI+ 296.1 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(5.3) 자석 교반 막대가 장착된 mL 마이크로파 바이알에 (Z)-4-((5-(디플루오로-메톡시)피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(5.2)(0.239 g, 0.810 mmol), Boc-Asp(OSu)-OBzl(2.5)(0.374 g, 0.890 mmol) 및 THF(3.0 ml)를 첨가하였다. 무색의 용액을 실온에서 100분 동안 교반하였다. LC-MS에서는 90분 이내에 완전히 소모된 것으로 나타났다. 이어서, 반응 혼합물을 120℃까지 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 무색 용액에 EtOAc를 첨가하고 혼합물을 주말 동안 냉동실에 보관하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. CH2Cl2 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~25%)로 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(0.443 g, 94%)(5.3)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.34분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.08 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.57 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H), 7.29 (s, 5H), 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.50 (t, J = 72.8 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.93 - 4.85 (m, 1H), 3.51 (qd, J = 16.2, 5.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). MS/ESI+ 583.2 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(5.4). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 10 mL 2구 원뿔형 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)-피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(5.3)(0.220 g, 0.378 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 비우고, Ar로 3회 다시 충전시켰다. 건조 THF(2.0 ml)를 첨가하고 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 LiBH4(0.041 g, 1.888 mmol)를 한꺼번에 첨가하고 현탁액을 70분 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH로 ??칭하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. CH2Cl2 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~55%)로 정제하여 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(0.100 g, 55.3%)(5.4)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.07분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.13 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.10 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 8.9, 2.9 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.52 (t, J = 72.8 Hz, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.84 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 3.32 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H). MS/ESI+ 479.3 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 5). 자석 교반 막대가 장착된 10 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(5.4)(0.100 g, 0.209 mmol), 디클로로메탄(2.0 ml) 및 TFA(0.081 ml, 1.045 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 용매와 산을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중의 MeOH 0~10%)로 정제하여 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)-피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(82 mg, 99%)(실시예 5)를 백색(담황색) 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.70분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.02 - 7.89 (m, 3H), 7.54 - 7.44 (m, 1H), 7.15 - 7.07 (m, 2H), 6.92 - 6.86 (m, 1H), 6.47 (t, J = 72.8 Hz, 1H), 4.01 - 3.72 (m, 3H), 3.42 - 3.20 (m, 2H). MS/ESI+ 379.3 [M + H]+.
실시예 6 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트
단계 a) 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(6.2). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 250 mL 1구 배형 플라스크에 5-클로로-2-플루오로피리딘(2.1)(2.31 g, 17.56 mmol), 메틸 4-하이드록시벤조에이트(6.1)(2.94 g, 19.32 mmol), K2CO3(4.85 g, 35.1 mmol) 및 DMF(100 ml)를 첨가하였다. 백색 현탁액을 100℃까지 가열하고 19시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~7%)로 정제하여 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(3.18 g, 68.7%)(6.2)를 백색 고체 결정으로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.14분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.14 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.11 - 8.05 (m, 2H), 7.69 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.20 - 7.14 (m, 2H), 6.94 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H). MS/ESI+ 264.2, 266.2.
단계 b) 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.3). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 250 mL 1구 배형 플라스크에 메틸 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조에이트(6.2)(3.09 g, 11.72 mmol), MeOH(50.0 ml)/THF(50.0 ml) 및 LiOHx1H2O(2.459 g, 58.6 mmol)를 첨가하였다. 현탁액을 45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고 주말(4일) 동안 교반하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 수득한 백색 고체에 물, 2 M 수성 HCl(40 mL, 80 mmol) 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공에서 농축하여 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(2.93 g, 100%)(6.3)을 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.92분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.10 - 7.88 (m, 3H), 7.64 - 7.53 (m, 1H), 7.09 - 6.97 (m, 2H), 6.89 - 6.78 (m, 1H). MS/ESI+ 250.1, 252.1.
단계 c) 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(6.4). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 50 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조산(6.3)(1.3 g, 5.21 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 비우고 조심스럽게 Ar로 3회 다시 충전시켰다. 무수 디클로로메탄(7.0 ml)을 첨가하고 백색 현탁액을 0℃까지 냉각시켰다. 옥살릴 클로라이드(1.0 ml, 11.42 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. DMF 2방울을 첨가한 후, 가스 형성이 관찰되었고, 반응 혼합물은 서서히 담황색으로 변하였다. 이를 0℃에서 19.5시간 동안 교반하였다. 1시간 35분 후: 옥살릴 클로라이드(0.50 mL, 5.71 mmol)를 추가로 첨가하였다. 19시간 이후: 추가 옥살릴 클로라이드(0.20 mL, 2.29 mmol) 및 4방울의 DMF를 첨가하였다. 디클로로메탄을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이를 여과하고 잔류물을 추가로 디클로로메탄으로 세척하였다. 백색 고체를 얻었고, 이를 고진공 하에 건조시켰다. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(770 mg, 55.2%)(6.4). 중간체 아실 클로라이드의 특성은 밝혀지지 않았다. 그러나 LC-MS는 MeOH의 존재 하에 메틸 에스테르(Rt = 1.15)가 형성됨을 나타내었다!
단계 d) (E)-2-클로로-N'-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일)옥시)아세트이미드아미드(6.6). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일 클로라이드(6.4)(1.25 g, 4.66 mmol), (Z)-2-클로로-N'-하이드록시아세트이미드아미드(6.5)(WO2004/14370 A2 (2004); 페이지/페이지 컬럼 44)(0.557 g, 5.13 mmol), DMAP(0.057 g, 0.466 mmol) 및 DCM(30 ml)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 30분 후 DIPEA(0.81 mL, 4.66 mmol)를 첨가하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. EtOAc 및 포화 NH4Cl 수용액을 잔류물에 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 23~38% 내지 43%)로 정제하여 (E)-2-클로로-N'-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일)옥시)아세트이미드아미드(1.05 g, 66.2%)(6.6)을 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.97분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.25 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.02 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.26 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.91 (s br, 2H), 4.17 (s, 2H). MS/ESI+ 342.1, 340.1.
단계 e) 3-(클로로메틸)-5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸(6.7). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 250 mL 1구 배형 플라스크에 (E)-2-클로로-N'-((4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조일)옥시)아세트이미드아미드(6.6)(1.05 g, 3.09 mmol) 및 톨루엔(50.0 ml)을 첨가하였다. 이어서, 용액을 130℃에서 17.5시간 동안 교반하고 진공에서 농축하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~12%)로 정제하여 3-(클로로-메틸)-5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸(463 mg, 46.6%)(6.7)을 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.23분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.22 - 8.17 (m, 2H), 8.16 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 2H), 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.67 (s, 2H). MS/ESI+ 322.1, 324.1.
단계 f) 5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-3-(((2S,5R)-3,6-디에톡시-5-이소프로필-2,5-디하이드로피라진-2-일)메틸)-1,2,4-옥사디아졸(6.9). 자석 교반 막대, 가스 주입구 및 고무 격막이 장착된 10 mL 2구 원뿔형 플라스크를 진공에서 가열하고 Ar로 3회 다시 충전시켰다. Schφllkopf 보조제[CAS: 110117-71-0](6.8)(0.50 mL, 1.369 mmol) 및 무수 THF(부피: 5.0 mL, 비율: 1.667)을 첨가하고 갈색의 투명한 용액을 -69℃까지 냉각시켰다(이소프로필 에테르/드라이아이스). 헥산 중 nBuLi(0.95 mL, 2.375 mmol)를 적가하고 진한 갈색 용액을 30분 동안 교반하였다. 진한 갈색 용액을 얻었다. 이어서, 무수 THF(3.0 mL)중 3-(클로로-메틸)-5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸(6.7)(441 mg, 1.369 mmol)을 적가하였다. 이를 16시간 동안 교반하였다; 한편, 이를 실온까지 가온하였다. 연한 갈색 용액을 얻었다. 반응물을 몇 방울의 포화 NH4Cl 수용액으로 ??칭하였다. 더 많은 포화 NH4Cl 수용액 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시키고 농축하여 황색 오일을 얻었다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~9.1%)로 정제하여 5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-3-(((2S,5R)-3,6-디에톡시-5-이소프로필-2,5-디하이드로피라진-2-일)메틸)-1,2,4-옥사디아졸(368 mg, 54%)(6.9)을 황색 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.60분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.17 - 8.12 (m, 3H), 7.70 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.48 (ddd, J = 7.4, 5.0, 3.7 Hz, 1H), 4.24 - 3.93 (m, 4H), 3.88 (t, J = 3.5 Hz, 1H), 3.37 - 3.28 (m, 1H), 3.12 (dd, J = 14.5, 7.3 Hz, 1H), 2.24 (ddt, J = 10.2, 6.8, 3.4 Hz, 1H), 1.28 - 1.24 (m, 3H), 1.23 - 1.18 (m, 3H), 1.04 (dd, J = 13.7, 6.9 Hz, 3H), 0.70 (dd, J = 15.4, 6.8 Hz, 3H). MS/ESI+ 498.3, 500.3.
단계 g) 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트(6.10). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-3-(((2S,5R)-3,6-디에톡시-5-이소프로필-2,5-디하이드로피라진-2-일)메틸)-1,2,4-옥사디아졸(6.9)(368 mg, 0.739 mmol) 및 THF(8.0 ml)를 첨가하였다. 수성 HCl(2.0 mL, 4.00 mmol)을 밝은 황색 용액에 첨가한 후, 이는 즉시 밝은 주황색으로 변했고, 시간이 지나면서 다시 황색으로 변하였다. 반응 혼합물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3 수용액으로 ??칭하였다. EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축에 의해 황색 오일을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~2.3%)로 정제하여 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트(272 mg, 95%)(6.10)를 무색 오일로 얻었고, 이는 실온에서 서서히 결정화하였다. UPLC 체류 시간 0.82분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.18 - 8.11 (m, 3H), 7.71 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 2H), 6.97 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.22 (qq, J = 7.1, 3.6 Hz, 2H), 4.01 (dd, J = 8.0, 4.7 Hz, 1H), 3.28 (dd, J = 15.1, 4.7 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 15.1, 8.0 Hz, 1H), 1.86 (s, 2H), 1.28 (t, J = 7.1 Hz, 3H). MS/ESI+ 389.2, 391.2.
단계 h) 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트(실시예 6). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 25 mL 2구 배형 플라스크에 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트(6.10)(272 mg, 0.700 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 무수 THF(5.00 ml)를 첨가하고 용액을 0℃까지 냉각시켰다. THF(2 M) 중 LiAlH4(0.350 mL, 0.700 mmol)를 첨가한 후(가스 형성이 관찰됨), 반응 혼합물을 0℃에서 65분 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH(여전히 0℃에서 냉각)에 이어 물로 ??칭하였다. 포화 NH4Cl 용액 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~10%)로 정제하여 에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트(64.6 mg, 26.4%)(실시예 6)를 연한 갈색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.70분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.13 (dd, J = 5.9, 2.9 Hz, 3H), 7.70 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.29 - 7.21 (m, 2H), 6.96 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.68 (dd, J = 10.8, 4.2 Hz, 1H), 3.52 (dd, J = 10.8, 6.5 Hz, 1H), 3.40 (dq, J = 11.2, 4.7 Hz, 1H), 2.97 (dd, J = 14.9, 4.7 Hz, 1H), 2.84 (dd, J = 14.9, 8.2 Hz, 1H), 2.57 (s br, 3H). MS/ESI+ 347.2, 349.2.
실시예 7 tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트
단계 a) 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(7.2). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 5-브로모-2,3-디플루오로피리딘(7.1)(3.0 g, 15.47 mmol), 4-시아노페놀(4.2)(2.395 g, 20.11 mmol), K2CO3(6.41 g, 46.4 mmol) 및 DMF(50.0 ml)를 첨가하였다. 현탁액을 110℃까지 가열하고, 17시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물/EtOAc를 첨가하고 황색 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축에 의해 진한 주황색 오일을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~10%, 이후 20%까지)로 정제하여 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(2.97 g, 64.9%)(7.2)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.14분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.37 (dd, J = 9.6, 2.0 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.43 (d, J = 8.7 Hz, 2H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -132.46 (d, J = 8.4 Hz). MS/ESI+ 293.0, 295.0 (약함).
단계 b) 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(7.3). 자석 교반 막대, 가스 주입구 및 고무 격막이 장착된 50 ml 2구 둥근 바닥 플라스크에 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(7.2)(0.786 g, 2.68 mmol), 1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸[CAS: 903550-26-5](1.000 g, 3.49 mmol), K3PO4(1.708 g, 8.05 mmol), [Pd(PPh3)4](0.155 g, 0.134 mmol) 및 톨루엔(15.0 ml)을 첨가하였다. 플라스크를 조심스럽게 비우고 Ar로 3회 다시 충전시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 Ar로 10분 동안 퍼징하였다. 고무 격막을 제거하고 환류 냉각기(이전에 Ar로 플러싱됨)를 장착하였다(고무 격막과 Ar 풍선이 상단에 있음). 이어서, 담황색 현탁액을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 물/EtOAc를 첨가하고 황색 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축에 의해 진한 주황색 오일을 수득하였다. 미정제 혼합물을 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 두 경우 모두 시클로헥산 중 EtOAc 0~30%)로 2회 정제하여 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(0.628 g, 64.3%)(7.3)을 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.06분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.10 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 7.76 - 7.72 (m, 2H), 7.62 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.37 - 7.32 (m, 2H), 6.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 9.9, 2.5 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 1H), 3.62 (td, J = 11.5, 2.3 Hz, 1H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 1H), 1.95 - 1.87 (m, 1H), 1.79 - 1.69 (m, 1H), 1.63 - 1.56 (m, 2H). MS/ESI+ 이온화 없음, Rf (시클로헥산/EtOAc, 3:1) = 0.26.
단계 c) 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(7.4). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 하이드록실아민 염산염(0.599 g, 8.62 mmol), NaHCO3(0.724 g, 8.62 mmol) 및 물(4.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액(주의: 가스 형성)을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 이어서 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(7.3)(0.628 g, 1.724 mmol) 및 EtOH(10 ml)를 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃까지 가열하고 110분 동안 교반하였다. 실온까지 냉각시킨 후, EtOH를 진공에서 제거하였다. 물/EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~66%)로 정제하여 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(0.570 g, 83%)(7.4)를 백색 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.80분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.08 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.77 - 7.70 (m, 3H), 7.62 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.29 - 7.25 (m, 2H), 6.38 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.15 (dd, J = 10.0, 2.4 Hz, 1H), 4.87 (s br, 2H), 4.17 - 4.05 (m, 1H), 3.62 (td, J = 11.5, 2.2 Hz, 1H), 2.66 - 2.49 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 1.90 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 1H), 1.67 - 1.53 (m, 2H). MS/ESI+ 398.3 [M + H]+. Rf (시클로헥산/EtOAc, 1:2) = 0.33.
단계 d) 벤질 (2S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(7.5). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(7.4)(0.563 g, 1.417 mmol), Boc-Asp(OSu)-Obzl(2.5)(0.655 g, 1.558 mmol) 및 THF(7.0 ml)를 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고 무색 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 120℃까지 가열하고 140분 동안 교반하였다. 용액을 실온까지 냉각시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. CH2Cl2 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~35%)로 정제하여 벤질 (2S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(270 mg, 순도는 67%에 불과함!)를 얻었다. (7.5). UPLC 체류 시간 1.40분 (방법 A). MS/ESI+ 685.4 [M + H]+. Rf (시클로헥산/EtOAc, 1:2) = 0.43.
단계 e) tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(7.6). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 10 mL 2구 원뿔형 플라스크에 벤질 (2S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(7.5)(0.134 g, 0.196 mmol)(참고: 출발 물질은 순수하지 않음, 약 67% 순수)를 첨가하였다. 바이알을 비우고, Ar로 3회 다시 충전시켰다. THF(1 ml)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(0.021 g, 0.979 mmol)를 한번에 첨가하고 현탁액을 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 ??칭하고 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수됨, 시클로헥산 중 EtOAc 0~65%)에 의한 정제. 컬럼 크로마토그래피(구배: 시클로헥산 중 EtOAc 20~55%)에 의한 2차 정제는 순도를 약간만 개선하였다. tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(48.9 mg, 43%)(7.6).
UPLC 체류 시간 1.16분 (방법 A). MS/ESI+ 581.4 [M + H]+. Rf (시클로헥산/EtOAc, 1:2) = 0.48.
단계 e) tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(실시예 7). 자석 교반 막대가 장착된 10 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(7.6). (48.9 mg, 0.084 mmol), DCM(0.800 mL) 및 TFA(33 μl, 0.428 mmol)를 첨가하였다. 무색 용액을 5일 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 출발 물질의 빠른 소모가 밝혀졌다: THP 에테르의 절단은 빨랐다. 그러나 Boc-탈보호는 예상대로 느렸다. 4일 후에 평형에 도달하였다. 용매와 산을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중의 MeOH 0-10-15%)로 정제하여 tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(10.9 mg, 24%)(실시예 7)을 탁한 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.65분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.28 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.90 (dd, J = 10.5, 1.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 3.90 (dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 3.87 - 3.78 (m, 1H), 3.73 (dd, J = 12.0, 5.7 Hz, 1H), 3.32 (dd, J = 6.7, 4.5 Hz, 2H). MS/ESI+ 397.2 [M + H]+.
실시예 8 (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(8.1). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 100 mL 1구 배형 플라스크에 4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(29.3)(2.82 g, 11.34 mmol), NaHCO3(4.76 g, 56.7 mmol), 하이드록실아민 염산염(3.94 g, 56.7 mmol), 에탄올(40 ml) 및 물(15 ml)을 첨가하였다(주의: 가스 형성). 백색 현탁액을 85℃까지 가열하고 100분 동안 교반하였다. 그런 다음 이를 실온까지 냉각시켰다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 물/EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. LC-MS 및 1H NMR 분석 결과, 수득한 백색 고체 4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(3.18 g, 97%)(8.1)의 고순도가 밝혀졌다. 따라서 더 이상의 정제가 필요하지 않았다. UPLC 체류 시간 0.73분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=ppm 9.62 (s, 1H), 8.23 (dd, J = 9.9, 1.9 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.82 (s, 2H). MS/ESI+ 282.2, 284.2.
단계 b) 벤질 (R,Z)-4-(((아미노(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)메틸렌)-아미노)옥시)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-4-옥소부타노에이트(8.3). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(8.1)(0.600 g, 2.130 mmol), Boc-D-Asp-OBzl(8.2)(1.033 g, 3.20 mmol, [CAS: 92828-64-3]), HATU(1.215 g, 3.20 mmol), THF(10.0 ml) 및 DMF(5.0 ml)를 첨가하였다. 백색 현탁액에 DIPEA(0.558 ml, 3.20 mmol)를 첨가한 후, 이는 즉시 황색으로 변하였고 입자가 서서히 용해되었다. 황색 용액을 실온에서 17.5시간 동안 교반하였다. THF를 진공에서 제거하였다. 포화 NaHCO3 수용액 및 EtOAc를 첨가하고 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 약 0.1 M 수성 HCl, 염수로 세척하고, 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 15~40%)로 정제하여 벤질 (R,Z)-4-(((아미노(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-메틸렌)-아미노)옥시)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-4-옥소부타노에이트(1.35 g, 97%)(8.3)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.25분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 7.92 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.36 (s, 5H), 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.23 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 4.82 - 4.74 (m, 1H), 3.16 (qd, J = 17.0, 4.9 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H). MS/ESI+ 587.4, 589.4. Rf (시클로헥산/EtOAc, 2:1) = 0.23.
단계 c) 벤질 (R)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(8.4). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 벤질 (R,Z)-4-(((아미노(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-메틸렌)-아미노)옥시)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-4-옥소부타노에이트(8.3)(1.34 g, 2.055 mmol) 및 THF(13.0 ml)을 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고 반응 혼합물을 100℃에서 2.5일 동안 교반하였다. 수득한 주황색 용액을 실온까지 냉각시키고 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~18%)로 정제하여 벤질 (R)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(0.806 g, 68.9%)(8.4)를 무색 점성 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.40분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.05 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 7.28 (s, 5H), 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.58 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.25 - 5.13 (m, 2H), 4.90 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.51 (qd, J = 16.2, 5.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). MS/ESI+ 569.3, 571.3. Rf (시클로헥산/EtOAc, 5:1) = 0.33.
단계 d) tert-부틸 (R)-(1-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(8.5). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (R)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(8.4)(489 mg, 0.859 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 4회 다시 충전시켰다. THF(8.0 ml)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(94 mg, 4.30 mmol)를 첨가한 후, 현탁액을 0℃에서 90분 동안 교반하였다. 1시간 이내에 출발 물질이 완전히 전환되었다. 반응물을 MeOH로 ??칭하였다. 이어서, 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~46%)로 정제하여 tert-부틸 (R)-(1-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(0.240 g, 60.1%)(8.5)를 무색 점성 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.17분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.12 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.21 (s, 1H), 4.24 - 4.16 (s, 1H), 3.81 (hept, J = 5.7, 5.1 Hz, 2H), 3.30 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). MS/ESI+ 465.3, 467.3. Rf (시클로헥산/EtOAc, 1:1) = 0.43.
단계 e) (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 8). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 (R)-(1-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(8.5)(227 mg, 0.488 mmol), 디옥산(5.0 mL) 및 수성 HCl(5.0 ml, 10.00 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 2 M NaOH 수용액(5.0 ml, 10.0 mmol, 20.48당량)을 첨가하고 디옥산을 진공에서 제거하였다. 수득한 투명한 수성상은 더 많은 2 M 수성 NaOH로 염기화하고(pH최종 > 10); 백색 고체가 침전되었다. EtOAc를 첨가하고, 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~10%)로 정제하여 (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘- -일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(131mg, 72.1%)(실시예 8)을 무색 오일로서 얻었고, 이는 냉동실에서 밤새 결정화되었다. UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.13 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 9.0, 2.2 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.71 (dd, J = 10.5, 4.3 Hz, 1H), 3.56 (dd, J = 10.6, 6.2 Hz, 1H), 3.53 - 3.45 (m, 1H), 3.14 (dd, J = 15.6, 4.7 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 15.6, 8.1 Hz, 1H). MS/ESI+ 365.3, 367.3.
실시예 9 tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트
단계 a) 3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(9.2). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 250 mL 1구 배형 플라스크에 2-플루오로-5-요오도피리딘(9.1)(1.47 g, 6.59 mmol), 3-시아노페놀(2.2)(0.864 g, 7.25 mmol), K2CO3(1.822 g, 13.18 mmol) 및 DMF(50.0 ml)를 첨가하였다. 현탁액을 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 갈색 현탁액을 얻었다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축하여 밝은 갈색 오일을 얻었고 이는 실온에서 천천히 결정화되었다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~6% 내지 7.7%)로 정제하여 3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(1.95 g, 92%)(9.2)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.15분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.98 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.43 (m, 1H), 7.38 (td, J = 4.7, 2.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J = 8.6 Hz, 1H). MS/ESI+ 323.1 [M + H]+.
단계 b) (Z)-N'-하이드록시-3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(9.3). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(9.2)(1.95 g, 6.05 mmol), 하이드록실아민 염산염(2.103 g, 30.3 mmol), NaHCO3(2.54 g, 30.3 mmol) 및 에탄올(20.0 ml)/물(10.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃까지 가열하고 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하고 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축하여 (Z)-N'-하이드록시-3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(1.87 g, 86%)(9.3)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.77분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 9.67 (s, 1H), 8.37 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43 - 7.38 (m, 2H), 7.14 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.82 (s, 2H). MS/ESI+ 356.1 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(9.4). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 (Z)-N'-하이드록시-3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(9.3)(0.852 g, 2.375 mmol), Boc-Asp(Su)-OBzl(2.5)(1.048 g, 2.494 mmol) 및 THF(13.0 ml)를 첨가하였다. 무색 용액을 100℃에서 3일 동안 교반하였다. 휘발 물질을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~15.9%)로 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(1.44 g, 93%)(9.4)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.44분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.50 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.26 (m, 6H), 6.82 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.24 - 5.12 (m, 2H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 3.50 (qd, J = 16.2, 5.0 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H). MS/ESI+ 643.3 [M + H]+.
단계 d) 벤질 (S)-3-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(9.6). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 100 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-요오도피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(9.4)(1.41 g, 2.195 mmol), 디옥산(20.0 ml)/물(10.0 ml), K3PO4(1.398 g, 6.58 mmol) 및 4-피라졸보론산 피나콜 에스테르(9.5)(0.459 g, 2.247 mmol, [CAS: 844501-71-9])를 첨가하였다. 현탁액을 Ar로 10분 동안 퍼징하였다. 이어서, Pd(dtbpf)Cl2(0.143 g, 0.219 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 25분 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과, 25분 이내에 출발 물질이 완전히 전환된 것으로 나타났으나, 생성물은 대부분 비누화되었다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. EtOAc, 물 및 2 M 수성 HCl(10 mL)을 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 이어서, 유기 층을 약 0.1 M 수성 NaOH 용액 및 염수로 세척하고, 합하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수됨, 시클로헥산 중 EtOAc 20~50%)로 정제하여 벤질 (S)-3-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(325.4 mg, 25.4%)(9.6)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.22분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.59 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.89 - 7.81 (m, 2H), 7.64 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 - 7.30 (m, 1H), 7.27 (s, 5H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.57 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.24 - 5.11 (m, 2H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 3.50 (qd, J = 16.2, 4.7 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). MS/ESI+ 583.4 [M + H]+.
단계 e) tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(9.7). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 25 mL 2구 배형 플라스크에 벤질 (S)-3-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(9.6)(229 mg, 0.393 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 무수 THF(4.0 mL)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 LiBH4(42.6 mg, 1.956 mmol)를 한번에 첨가하고 반응 혼합물을 90분 동안 교반하였다. 얼음조를 제거하고 현탁액을 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH로 ??칭하였다. rm을 밤새 냉동실에 보관하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수됨, 시클로헥산 중 EtOAc 40-70-80-85%)에 의한 정제. 불순물로 인해 생성물을 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 55-68-70%)로 다시 정제하여 tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(86.3 mg, 44.5%)(9.7)를 무색 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.92분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 7.8, 2.0 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.15 (m, 1H), 3.84 - 3.74 (m, 2H), 3.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). MS/ESI+ 479.4 [M + H]+.
단계 f) (S)-3-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올(실시예 9). 자석 교반 막대가 장착된 12 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(9.7)(86.3 mg, 0.180 mmol) 및 디옥산(2.0 ml)을 실온에서 첨가하였다. 디옥산(4 M 용액) 중 HCl(0.451 mL, 1.804 mmol)을 첨가한 후, 반응 혼합물은 즉시 백색 현탁액으로 변하였다. 이를 실온에서 17.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. EtOAc 및 2 M NaOH 수용액을 첨가했다(pH > 10까지). 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. RP C18 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 액체 주입, 물 중 MeCN 10~35%, 분획 21~27)에 의한 정제. 분획을 합하고 MeCN을 진공에서 제거하였다. 2 M NaOH 수용액(약 5mL)을 첨가하고 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축하여 (S)-3-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올(50.1 mg, 72.7%)(실시예 9)을 백색 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.60분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.59 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 8.5, 2.4 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.90 - 7.87 (m, 1H), 7.62 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.59 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.70 (dd, J = 10.6, 4.3 Hz, 1H), 3.55 (dd, J = 10.6, 6.3 Hz, 1H), 3.48 (ddd, J = 10.8, 7.2, 4.5 Hz, 1H), 3.13 (dd, J = 15.6, 4.7 Hz, 1H), 2.99 (dd, J = 15.6, 8.1 Hz, 1H). MS/ESI+ 379.3 [M + H]+.
실시예 10 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(10.1). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 250 mL 1구 배형 플라스크에 2-플루오로-5-(트리플루오로메틸)피리딘(4.1)(1.30 g, 7.87 mmol), 3-시아노페놀(2.2)(1.032 g, 8.66 mmol), K2CO3(2.177 g, 15.75 mmol) 및 DMF(30.0 ml)를 첨가하였다. 현탁액을 65℃까지 가열하고, 19시간 동안 교반하였다. 물/EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~10%)로 정제하여 3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤조-니트릴(1.97 g, 95%)(10.1)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.11분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.44 - 8.41 (m, 1H), 7.97 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.53 (m, 2H), 7.51 - 7.48 (m, 1H), 7.43 (tq, J = 5.4, 2.7 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 8.6 Hz, 1H). MS/ESI+ 265.0 [M + H]+.
단계 b) (Z)-N'-하이드록시-3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(10.2). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 100 mL 1구 배형 플라스크에 3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤조-니트릴(10.1)(1.93 g, 7.30 mmol), 하이드록실아민 염산염(2.54 g, 36.5 mmol), NaHCO3(3.07 g, 36.5 mmol) 및 에탄올(30.0 ml)/물(10.0 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃에서 80분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 주말 동안 냉동실에 보관하였다. EtOH를 진공에서 제거하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축하고 고진공 하에서 건조시켜 (Z)-N'-하이드록시-3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(2.25 g, 100%)(10.2)를 갈색의 끈적한 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.80분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ=ppm 9.69 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.24 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 2H), 7.26 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.21 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H). MS/ESI+ 298.2 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(10.3). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 (Z)-N'-하이드록시-3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(10.2)(758 mg, 2.55 mmol), Boc-Asp(Su)-OBzl(2.5)(1179 mg, 2.81 mmol) 및 THF(13.0 ml)를 첨가하였다. 연한 갈색 용액을 실온에서 10분 동안 교반한 후, 110℃에서 17.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 디클로로메탄 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~18%)로 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(1.40 g, 94%)(10.3)를 무색, 고점성 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.41분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.45 - 8.42 (m, 1H), 7.96 - 7.89 (m, 2H), 7.83 - 7.80 (m, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (ddd, J = 8.2, 2.4, 0.9 Hz, 1H), 7.29 - 7.26 (m, 5H), 7.08 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.55 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.25 - 5.11 (m, 2H), 4.92 - 4.84 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.51 (qd, J = 16.2, 5.0 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). MS/ESI+ 585.3 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(10.4). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(10.3)(550 mg, 0.941 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. THF(6.0 ml)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 LiBH4(41.0 mg, 1.882 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 80분 동안 교반하였다. 50분 후에 더 많은 LiBH4(20.5 mg, 0.941 mmol)를 첨가하였다. 황색 현탁액을 MeOH로 ??칭하였다. 이어서, 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 25~50%)로 정제하여 tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(298 mg, 65.9%)(10.4)를 얻었다. 끈적한 무색 오일. UPLC 체류 시간 1.17분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.44 - 8.41 (m, 1H), 7.96 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.88 - 7.82 (m, 1H), 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (ddd, J = 8.1, 2.3, 0.8 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.23 - 4.12 (m, 1H), 3.76 (q, J = 6.5, 5.2 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H). MS/ESI+ 481.2 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 10). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-하이드록시-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(10.4)(297 mg, 0.618 mmol), 디옥산(6.0 ml) 및 수성 HCl(6.0 ml, 12.00 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 그 동안 무색의 투명한 용액을 얻었다. 2 M NaOH 수용액(6.0 ml, 12.00 mmol)을 첨가하였다. 진공에서 디옥산을 제거하였다. EtOAc 및 약 0.2 M의 수성 NaOH를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수됨, CH2Cl2 중 MeOH 0~7.7%)로 정제하여 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(184 mg, 78%)(실시예 10)을 무색 오일로 얻었고, 이는 실온에서 결정화되어 백색 고체를 생성하였다. UPLC 체류 시간 0.78분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=ppm 8.37 (s, 1H), 7.91 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.81 (s, 1H), 7.51 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 3.70 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.59 - 3.45 (m, 2H), 3.16 - 3.09 (m, 2H). MS/ESI+ 381.2 [M + H]+.
실시예 11 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-온(11.3). 자석 교반 막대가 장착된 1000 mL 1구 플라스크에 2-클로로피리딘-3-올(10.90 g, 82 mmol), 2-브로모-1-(3-브로모페닐)에타논(23.38 g, 82 mmol), 아세톤(330 ml) 및 탄산세슘(32.2 g, 99 mmol)을 첨가하였다. 주황색 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 필터 케이크를 차가운 아세톤으로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축하여 미정제 물질 33.31 g을 얻었다. 이를 에틸 아세테이트에 용해시키고 물 및 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공 농축하여 갈색의 끈적한 덩어리 29.8 g을 얻었다. 실리카 겔(시클로헥산/에틸 아세테이트) 크로마토그래피로 1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-온(9.1 g, 23%)(11.3)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.07분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ=ppm ppm 5.34 (s, 2 H) 7.14 - 7.21 (m, 2 H), 7.41 (t, J=7.85 Hz, 1 H), 7.78 (d, J=7.73 Hz, 1 H), 7.95 (dt, J=7.82, 1.28 Hz, 1 H), 8.07 (dd, J=4.28, 1.96 Hz, 1 H), 8.16 (t, J=1.71 Hz, 1 H). MS/ESI+ 326, 328, 330.
단계 b) (R)-1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-올(11.5). 자석 교반 막대 및 온도계가 장착된 1000 mL 2구 플라스크에 1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-온(11.3)(5.22 g, 15.18 mmol)을 첨가하고, 이어서 DMF(67.3 ml)을 첨가하였다. N-((1S,2S)-2-아미노-1,2-디페닐에틸)-4-메틸벤젠술폰아미드(11.4)(0.170 g, 0.456 mmol, [CAS:167316-27-0], Strem Chemicals) 및 Cp*RhCl2 이량체(CAS: 12354-85-7)(0.094 g, 0.152 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 0℃에서 20분 동안 탈기시켰다. 포름산-트리에틸아민 복합체 5:2(4.66 ml, 11.16 mmol, CAS:115077-13-1])를 0℃에서 15분에 걸쳐 첨가하였다. 0℃에서 50분 동안 계속 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물(230 ml)에 붓고 에틸 아세테이트로 추출하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 농축하여 (R)-1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-올(5.45 g, 100%)(11.5)을 얻었다. 이 물질을 추가 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. UPLC 체류 시간 0.99분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ=ppm ppm 4.06 (dd, J=9.29, 8.31 Hz, 1 H), 4.19 (dd, J=9.41, 3.42 Hz, 1 H), 5.18 (dd, J=8.25, 3.36 Hz, 1 H), 7.17 - 7.26 (m, 2 H), 7.28 - 7.31 (m, 1 H), 7.41 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.49 (d, J=7.95 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.99 - 8.11 (m, 1 H). MS/ESI+ 328, 330, 332.
단계 c) (R)-3-(3-브로모페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(11.6). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 500 mL 2구 플라스크에 (R)-1-(3-브로모페닐)-2-((2-요오도피리딘-3-일)옥시)에탄-1-올(11.5)(5.45 g, 15.76 mmol)을 첨가하고, 이어서 DME(197 ml)를 첨가하였다. THF(15.95 ml, 15.95 mmol,[CAS: 40949-94-8]) 중 KHMDS 1 M을 아르곤 하에서 60℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 1.5시간 동안 교반하였다. THF(3 ml) 중 추가 KHMDS 1 M을 60℃에서 첨가하고 추가로 60분 동안 계속 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 물(100 ml)로 ??칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 물과 포화 NH4Cl 수용액 및 염수로 철저히 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 (R)-3-(3-브로모페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(2.95 g, 42.2%)(11.6)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.06분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= ppm 4.16 (dd, J=11.62, 8.19 Hz, 1 H), 4.49 (dd, J=11.55, 2.51 Hz, 1 H), 5.49 (dd, J=8.01, 2.26 Hz, 1 H), 7.00 (dd, J=7.82, 4.77 Hz, 1 H), 7.37 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 7.42 (t, J=7.95 Hz, 1 H), 7.52 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.61 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.81 (dd, J=4.77, 1.34 Hz, 1 H). MS/ESI+ 292, 294 .
단계 d) (R)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴(11.7). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 100 mL 2구 플라스크에 (R)-3-(3-브로모페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(11.6)(1.158 g, 3.96 mmol)에 이어 DMF(21 ml)를 첨가하였다. 시안화 아연(1.862 g, 15.86 mmol), 1,1'-비스(디페닐-포스피노)페로센(1.758 g, 3.17 mmol, [CAS: 12150-46-8]) 및 Pd2(dba)3(0.726 g, 0.793 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 아르곤으로 탈기시켰다. 혼합물을 아르곤 하에 80℃에서 20시간 동안 교반하였다. 차가운 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(250 ml)로 희석하고 5% 중탄산나트륨 용액, 물 및 염수로 2회 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공 농축하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 (R)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴(750 mg, 79%)(11.7)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.86분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= ppm 4.19 (dd, J=11.55, 8.13 Hz, 1 H), 4.52 (dd, J=11.55, 2.51 Hz, 1 H), 5.56 (dd, J=8.07, 2.20 Hz, 1 H), 7.01 (dd, J=7.82, 4.77 Hz, 1 H), 7.38 (dd, J=7.89, 1.53 Hz, 1 H), 7.68 (t, J=7.48 Hz, 1 H), 7.81 - 7.91 (m, 3 H), 7.98 (s, 1 H). MS/ESI+ 239 [M + H]+.
단계 e) (R,Z)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(11.8). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 50 mL 2구 플라스크에 (R)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴(11.7)(380 mg, 1.59 mmol) 및 에탄올(7 ml)을 첨가하였다. 물 중 50% 하이드록실아민 용액(0.376 ml, 6.38 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 3.5시간 동안 환류시켜 투명한 용액을 얻었다. 혼합물을 디클로로메탄으로 2회 추출하고 진공에서 농축하여 미정제 (R,Z)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(477 mg, 85%)(11.8)을 얻었고, 이는 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. 작은 탐침(51 mg)을 SFC를 통해 정제하여 38 mg의 베이지색 포말을 생성하였다. UPLC 체류 시간 0.54분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ= ppm 2.30 (br s, 4 H), 4.02 (dd, J=11.68, 8.86 Hz, 1 H), 4.41 (dd, J=11.62, 2.45 Hz, 1 H), 5.09 (br s, 2 H), 5.36 (dd, J=8.80, 2.20 Hz, 1 H), 6.94 (dd, J=7.82, 4.77 Hz, 1 H), 7.26 (br s, 1 H), 7.44 - 7.57 (m, 2 H), 7.68 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.90 (dd, J=4.71, 1.53 Hz, 1 H). MS/ESI+ 272 [M + H]+.
단계 f) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(11.9). 자석 교반 막대 및 환류 냉각기가 장착된 50 mL 2구 플라스크에 (R,Z)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(11.8)(477 mg, 1.35 mmol) 및 2-Me-THF(13.5 ml)에 이어 Boc-Asp(OSu)-OBzl(2.5)[CAS 140171-25-1](655 mg, 1.55 mmol, Bachem)을 채웠다. 반응 혼합물을 2일 동안 환류시켰다. 용매를 회전증발기에서 증발시켜 1.30 g의 미정제 생성물을 생성하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)-아미노)-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1 ,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(374 mg, 45.5.%)를 얻었다. (11.9). UPLC 체류 시간 1.27분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ=ppm 1.27 (s, 2 H), 1.44 (s, 11 H), 1.60 (br s, 3 H), 3.51 (br d, J=4.89 Hz, 2 H), 4.06 (dd, J=11.68, 8.86 Hz, 1 H), 4.43 (dd, J=11.61, 2.32 Hz, 1 H), 4.90 (br s, 1 H), 5.14 - 5.27 (m, 3 H), 5.36 - 5.44 (m, 1 H,) 5.47 - 5.63 (m, 1 H), 6.95 (dd, J=7.89, 4.83 Hz, 1 H), 7.29 (br s, 3 H), 7.35 (s, 2 H), 7.55 (t, J=7.76 Hz, 1 H), 7.66 (br d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.91 (dd, J=4.77, 1.34 Hz, 1 H), 8.03 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.09 (s, 1 H). MS/ESI+ 559 [M + H]+.
단계 g) tert-부틸 ((S)-1-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(11.10). 자석 교반 막대가 장착된 100 mL 1구 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)-아미노)-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(11.9)(350 mg, 0.627 mmol) 및 THF(8.3 ml)를 채웠다. 0℃에서 수소화붕소리튬(54.6 mg, 2.506 mmol)을 첨가하고 10분 후에 냉각조를 제거하였다. 실온에서 7시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 얼음물에 붓고 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 tert-부틸 ((S)-1-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(63 mg, 22%)(11.10)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.96분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ=ppm 1.44 (s, 9 H), 3.31 (br d, J=6.11 Hz, 2 H), 3.83 (t, J=4.22 Hz, 2 H), 4.07 (dd, J=11.68, 8.86 Hz, 1 H), 4.21 (br s, 1 H), 4.45 (dd, J=11.68, 2.51 Hz, 1 H), 5.13 - 5.27 (m, 1 H), 5.42 (dd, J=8.80, 2.32 Hz, 1 H), 6.95 (dd, J=7.89, 4.83 Hz, 1 H), 7.28 - 7.30 (m, 1 H), 7.56 (t, J=7.76 Hz, 1 H), 7.66 (d, J=7.82 Hz, 1 H), 7.91 (dd, J=4.77, 1.59 Hz, 1 H), 8.10 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.17 (s, 1 H). MS/ESI+ 455 [M + H]+.
단계 h) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 11) 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 플라스크에 tert-부틸 ((S)-1-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(11.10)(46 mg, 0.101 mmol) 및 디옥산(1 ml)을 채웠다. 디옥산 2 M 중 HCl(0.506 ml, 1.012 mmol)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축하고 남은 백색 고체를 디클로로메탄으로 2회 트리튜레이션하고 증발시켰다. 미정제 백색 분말을 초음파조에서 에틸 에테르로 2회 트리튜레이션하고 따라내어 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(38 mg, 99%)(실시예 11)의 염산염을 백색 분말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.59분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= ppm 3.29 - 3.47 (m, 2 H), 3.59 - 3.79 (m, 3 H), 4.17 (dd, J=11.55, 8.25 Hz, 1 H), 4.55 (br dd, J=11.61, 2.45 Hz, 2 H), 5.62 (dd, J=8.13, 2.14 Hz, 1 H), 7.02 (dd, J=7.82, 4.77 Hz, 1 H), 7.40 (dd, J=7.82, 1.59 Hz, 1 H), 7.64 - 7.76 (m, 2 H), 7.83 (dd, J=4.77, 1.47 Hz, 1 H), 8.06 (d, J=7.70 Hz, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 8.29 (br s, 3 H). MS/ESI+ 355 [M + H]+.
실시예 12 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) (Z)-4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N'-하이드록시벤즈이미드아미드(12.1). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 100 mL 1구 플라스크에 26.3(2.82 g, 11.34 mmol), NaHCO3(4.76 g, 56.7 mmol), 하이드록실아민 염산염(3.94 g, 56.7 mmol), 에탄올(40 ml) 및 물(15 ml)(주의: 가스 형성)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃까지 가열하고 100분 동안 교반하였다. 그런 다음 25℃까지 냉각시켰다. 진공에서 에탄올을 제거하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시킨 후 용매를 제거하여 12.1을 무색 고체로 얻었다(3.18 g, 97%). UPLC 체류 시간 0.73분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ =ppm 9.62 (1H, s), 8.23 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 7.71 (2H, d), 7.20 (2H, d), 5.82 (2H, s). MS/ESI 282.2 [M + H]+.
단계 b) (S)-벤질 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(12.3). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 12.1(0.60 g, 2.066 mmol), 12.2(0.985 g, 2.343 mmol) 및 THF(13 ml)를 첨가하였다. 무색 용액을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서 이를 110℃까지 가열하고 15시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 무색 오일로서 12.3(829 mg, 71%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.41분 (방법 A). 1H NMR (CDCl3): δ =ppm 8.05 (2H, d), 7.93 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 7.28 (5H, s), 7.25 (2H, s), 5.58 (1H, d), 5.25 - 5.13 (2H, m), 4.90 (1H, d), 3.51 (2H, dq), 1.44 (9H, s). MS/ESI 569.4 [M + H]+.
단계 c) (S)-tert-부틸 (1-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(12.4). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 화합물 12.3(474 mg, 0.833 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 비우고 아르곤으로 3회 다시 충전시켰다. 건조 THF(8.0 mL)를 첨가하고 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(91 mg, 4.17 mmol)를 한번에 첨가하고 현탁액을 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올로 ??칭하였다. 용매를 제거하고 미정제 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고 실리카에 흡착시켰다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 점성 무색 오일로서 12.4(229 mg, 58%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.17분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ =ppm 8.12 (2H, d), 7.93 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 7.27 (2H, d), 5.21 (1H, s), 4.24 - 4.16 (1H, s, br), 3.81 (2H, m), 3.30 (2H, d), 1.44 (9H, s). MS/ESI 465.3 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 12). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 배형 플라스크에 12.4(225 mg, 0.484 mmol), CH2Cl2(5.0 mL) 및 TFA(0.186 mL, 2.42 mmol)를 첨가하였다. 무색 용액을 25℃에서 65시간 동안 교반하였다. 용매 및 산을 제거하고 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 수성 NaOH(0.1 M) 및 에틸 아세테이트를 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 실리카 정제(구배: CH2Cl2/MeOH)로 생성물인 실시예 12를 무색 오일로 얻었고, 이는 25℃에서 천천히 고형화되었다(64 mg, 36%). UPLC 체류 시간 0.74분 (방법 A). 1H NMR (CDCl3): δ =ppm 8.13 (2H, d), 7.93 (1H, d), 7.55 (1H, dd), 7.27 (2H, d), 3.71 (1H, dd), 3.56 (1H, dd), 3.53 - 3.45 (1H, d), 3.14 (1H, dd), 3.00 (1H, dd), OH 및 NH2는 관찰되지 않음. ES/ESI 365.2 [M + H]+.
실시예 13 (S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올
단계 a) 4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(13.3). DMF(70 mL) 중 13.1(2.5 g, 14.2 mmol), 13.2(1.86 g, 15.6 mmol) 및 K2CO3(5.9 g, 42.6 mmol)의 현탁액을 18시간 동안 110℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 25℃까지 냉각시켰다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 용매를 제거하였다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 무색 고체로서 화합물 13.3(3.30 g, 84%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (CDCl3): δ =ppm 8.23 (1H, d), 7.85 (1H, dd), 7.72-7.67 (2H, m), 7.25-7.20 (2H, m), 6.94 (1H, d). MS/ESI 275.1 [M + H]+.
단계 b) 4-((5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(13.5). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 250 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 13.3(3.23 g, 11.74 mmol), K3PO4(7.48 g, 35.2 mmol), 13.4(3.92 g, 14.1 mmol), Pd(PPh3)4(0.678 g, 0.587 mmol) 및 톨루엔(70 ml)을 첨가하였다. 현탁액을 아르곤으로 15분 동안 퍼징하였다. 가스 유입구를 환류 냉각기로 교체하고 반응 혼합물을 110℃까지 가열하고 2시간 동안 교반하였다. 현탁액을 25℃까지 냉각시킨 후 냉동실에 16시간 동안 보관하였다. 물 및 에틸 아세테이트를 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 및 에틸 아세테이트로부터의 결정화에 의해 화합물 13.5를 무색 고체로 얻었다(1.54 g, 38%). UPLC 체류 시간 1.09분 (방법 A). 1H NMR (CDCl3): δ =ppm 8.33 (1H, d), 7.94 (1H, dd), 7.75-7.69 (2H, m), 7.62 (1H, d), 7.34 - 7.28 (2H, m), 7.11 (1H, d), 6.36 (1H, d), 5.14 (1H, dd), 4.16-4.05 (1H, m), 3.59 (1H, dt), 2.58 (1H, ddt), 2.14-2.05 (1H, m), 1.95-1.85 (1H, m), 1.82-1.68 (1H, m), 1.62 - 1.51 (2H, m). MS/ESI 347.2 [M + H]+.
단계 c) (Z)-N'-하이드록시-4-((5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(13.6). 자석 교반 막대가 장착된 100 mL 1구 플라스크에 하이드록실아민 염산염(1.54 g, 22.1 mmol), NaHCO3(1.86 g, 22.1 mmol) 및 물(10 ml)을 첨가하였다. 무색 현탁액(주의: 가스 형성)을 25℃에서 5분 동안 교반하였다. 화합물 13.5(1.53 g, 4.42 mmol) 및 에탄올(25 ml)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃에서 90분 동안 교반하였다. 에탄올을 제거하고 물과 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고 Na2SO로 건조시켰다. 용매를 제거하고 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 무색 고체로서 화합물 13.6(1.62 g, 97%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.71분 (방법 A). 1H NMR (CDCl3): δ =ppm 8.33 (1H, d), 7.89 (1H, dd), 7.74-7.68 (m, 2H), 7.62 (1H, d), 7.25-7.20 (2H, m), 7.04 (1H, d), 6.35 (1H, d), 5.14 (1H, dd), 4.87 (s, 2H), 4.09 (1H, dd), 3.59 (1H, td), 2.65-2.51 (1H, m), 1.88 (1H, d), 1.82-1.68 (1H, m), 1.65-1.52 (2H, m). MS/ESI 380.4 [M + H]+.
단계 d) (2S)-벤질 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(13.8). 자석 교반 막대, 환류 냉각기 및 고무 격막이 장착된 50 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 13.6(1.31 g, 3.45 mmol), 13.7(1.60 g, 3.80 mmol) 및 THF(20 ml)을 첨가하였다. 무색 용액을 25℃에서 30분 동안 교반한 다음 7일 동안 90℃까지 가열하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 13.8을 에피머 혼합물(1.68 g, 73%)로서 얻었고 이를 다음 단계에서 사용하였다. UPLC 체류 시간 1.39분 (방법 A). MS/ESI 667.4 [M + H]+.
단계 e) tert-부틸 ((2S)-1-하이드록시-3-(3-(4-((5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-2-일)카르바메이트(13.9). 자석 교반 막대, 기체 주입구 및 고무 격막이 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 화합물 13.8(634 mg, 0.951 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 비우고 아르곤으로 3회 다시 충전시켰다. 건조 THF(5.0 mL)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 리튬 보로하이드라이드(104 mg, 4.75 mmol)를 첨가하고 현탁액을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올로 ??칭하였다. 용매를 제거하고 미정제 생성물을 디클로로메탄에 용해시키고 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 화합물 13.9(백색 고체)를 에피머 혼합물(276 mg, 52%)로서 얻었고, 이를 다음 단계에서 사용하였다. UPLC 체류 시간 1.14분 (방법 A). MS/ESI 563.4 [M + H]+.
단계 f) (S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올(실시예 13). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 13.9(276 mg, 0.491 mmol), 디옥산(5.0 mL) 및 수성 HCl(5.0 mL, 10.00 mmol, 2 M 용액)을 첨가하였다. 탁한 용액을 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 디옥산 및 물을 제거하고 잔류물을 RP C18 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 액체 주입, 물 중 MeCN 10~35%)로 정제하였다. 아세토니트릴을 제거하고 수성상을 2 M 수성 NaOH로 염기화하였다. 에틸 아세테이트를 첨가하고 수성상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하여 실시예 13을 무색 고체로 얻었다(112 mg, 60%). UPLC 체류 시간 0.59분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ =ppm 13.00 (1H, s), 8.65 (1H, s), 8.30 (1H, d), 8.07 (2H, d), 7.83 (1H, s, br), 7.35 (2H, d), 7.20 (1H, d), 6.79 (1H, s), 4.80 (1H, m), 3.38 (2H, m), 3.22 (1H, m), 3.15 (1H, dd), 2.88 (1H, dd), 1.75 (2H, m). MS/ESI 379.4 [M + H]+.
실시예 14 (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) (R)-3-(3-(2H-테트라졸-5-일)페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(14.1). 톨루엔(11.70 ml) 중 (R)-3-(2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)벤조니트릴(11.7)(500 mg, 2.099 mmol), 디부틸주석산화물(104 mg, 0.42 mmol, [CAS: 818-08-6]) 및 TMS-아지드(509 mg, 4.2 mmol, [CAS: 4648-54-8])의 현탁액을 21.5시간 동안 100℃까지 가열하였다. 차가운 반응 혼합물을 메탄올(50 ml)로 희석하고 진공에서 농축하였다. 미정제 생성물을 디에틸에테르/디클로로메탄 1:1 + 약간의 메탄올로 트리튜레이션하고 여과하였다. 고체를 디에틸에테르/디클로로메탄 1:1로 세척하고 건조시켜 (R)-3-(3-(2H-테트라졸-5-일)페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(386 mg, 65.4%)(14.1)을 베이지색 분말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.70분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= ppm 2.99 - 3.66 (m, 4 H), 4.17 (dd, J=11.62, 8.31 Hz, 1 H), 4.55 (dd, J=11.62, 2.45 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J=8.19, 2.20 Hz, 1 H), 7.02 (dd, J=7.95, 4.77 Hz, 1 H), 7.39 (dd, J=7.82, 1.47 Hz, 1 H), 7.64 - 7.76 (m, 2 H), 7.84 (dd, J=4.65, 1.47 Hz, 1 H), 8.06 (d, J=7.21 Hz, 1 H), 8.21 (s, 1 H). MS/ESI+ 282 [M + H]+.
단계 b) 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(14.3). THF(14.6 mL) 중 (R)-3-(3-(2H-테트라졸-5-일)페닐)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘(14.1)(336 mg, 0.729 mmol) 의 용액에 0℃에서 질소 하에 DIAD(419 g, 1.822 mmol), PPh3(478 mg, 1.822 mmol, 2.50) 및 Boc-L-Ser-OMe(14.2)(420 mg, 1.822 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. Isolute를 첨가하고 혼합물을 진공에서 농축하고 잔류물을 실리카 겔(에틸 아세테이트/시클로헥산) 상에서 정제하여 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(490 mg, 98%)(14.3)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.09분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ= ppm 1.44 (s, 9 H), 3.80 (s, 7 H), 3.95 (dd, J=11.43, 3.73 Hz, 4 H), 4.04 - 4.17 (m, 2 H), 4.34 - 4.49 (m, 1 H), 4.91 (br s, 1 H), 5.05 - 5.22 (m, 1 H), 5.27 - 5.50 (m, 4 H), 6.95 (dd, J=7.89, 4.83 Hz, 1 H), 7.28 - 7.32 (m, 1 H), 7.52 - 7.65 (m, 2 H), 7.91 (dd, J=4.77, 1.59 Hz, 1 H), 8.15 (d, J=7.58 Hz, 1 H), 8.24 (s, 1 H). MS/ESI+ 483 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 ((S)-1-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(14.4). 0℃에서 LiBH4(THF 중의 2몰 용액 3.54 mL, 7.09 mmol)를 THF(17.7 mL) 중 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)-아미노)-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(14.3)(950 mg, 1.772 mmol)의 용액에 적가하고, 혼합물을 0℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 물과 1 M 염산으로 ??칭하여 pH가 약 7이 되도록 하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물과 염수로 세척하고 황산나트륨으로 건조시키고 여과하고 진공에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔(에틸 아세테이트/시클로헥산) 상에서 정제하여 tert-부틸 ((S)-1-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(264 mg, 32%)(14.4)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.94분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ= ppm 1.42 (s, 10 H), 3.75 (t, J=4.95 Hz, 2 H), 4.08 (dd, J=11.61, 8.80 Hz, 1 H), 4.27 (br s, 1 H), 4.46 (dd, J=11.62, 2.45 Hz, 1 H), 4.91 (br d, J=5.87 Hz, 2 H), 5.08 - 5.20 (m, 1 H), 5.43 (dd, J=8.86, 2.26 Hz, 1 H), 6.95 (dd, J=7.82, 4.77 Hz, 1 H), 7.28 - 7.30 (m, 1 H), 7.53 - 7.63 (m, 2 H), 7.90 (dd, J=4.83, 1.53 Hz, 1 H), 8.17 (d, J=7.46 Hz, 1 H), 8.25 (s, 1 H). MS/ESI+ 455 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 14). 디옥산(5.06 mL) 중 tert-부틸((S)-1-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(14.4)(230 mg, 0.506 mmol)의 용액에 디옥산 중 염산(1.265 ml, 5.06 mmol, 4 M 용액)을 질소 하에 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 주말 동안 교반한 후 진공에서 농축하였다. 얻은 고체를 디에틸 에테르로 3회 트리튜레이션하고 물/아세토니트릴로부터 동결건조하여 (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(206 mg, 100%)(실시예 14)을 HCl 염으로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.58분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= ppm 3.60 - 3.68 (m, 1 H), 3.70 - 3.76 (m, 2 H), 4.12 - 4.23 (m, 2 H), 4.56 (br d, J=11.74 Hz, 1 H), 4.91 - 5.14 (m, 2 H), 5.63 (br d, J=7.95 Hz, 1 H), 6.96 - 7.07 (m, 1 H), 7.40 (br d, J=7.70 Hz, 1 H), 7.64 - 7.74 (m, 2 H), 7.83 (br d, J=3.55 Hz, 1 H), 8.12 (br d, J=6.97 Hz, 1 H), 8.24 (br s, 1 H), 8.34 (br s, 3 H). MS/ESI+ 355 [M + H]+.
실시예 15 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
키랄 설폰아미드를 S,S-거울상 이성질체[CAS: 167316-27-7]로 대체하여 실시예 1의 합성에 사용된 유사한 절차에 의해 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 15)을 제조하였다. 실시예 15는 유리 염기로 분리되었다. UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ=ppm ppm 1.82 (br. s., 3 H), 3.02 (dd, J=15.59, 8.01 Hz, 1 H), 3.16 (dd, J=15.53, 4.65 Hz, 1 H), 3.47 - 3.61 (m, 2 H), 3.73 (dd, J=10.45, 4.22 Hz, 1 H), 4.07 (dd, J=11.49, 8.93 Hz, 1 H), 4.42 (dd, J=11.49, 2.45 Hz, 1 H), 5.22 (dd, J=8.86, 2.26 Hz, 1 H), 6.88 - 7.06 (m, 4 H), 7.53 - 7.64 (m, 2 H), 8.07 - 8.19 (m, 2 H). MS/ESI+ 354 [M + H]+.
실시예 16 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(16.1). 자석 교반 막대 및 냉각기(있는 그대로의 공기)가 장착된 100 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 하이드록실아민 염산염(3.89 g, 55.9 mmol), NaHCO3(4.70 g, 55.9 mmol) 및 물(8 ml)을 첨가하였다. 백색 현탁액(주의: 가스 형성)을 약 10분 동안 교반하였다. 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(31.3)(2.58 g, 11.19 mmol) 및 EtOH(30 ml)를 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃까지 가열하고 90분 동안 교반하였다. LC-MS 분석 결과 70분 이내에 완전한 전환이 나타났다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고 냉동실에 2일 동안 보관하였다. EtOH를 진공에서 제거하고 물/EtOAc를 백색 고체에 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 진공에서 농축하여 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(2.91 g, 99%)(16.1)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.65분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 9.60 (s, 1H), 8.21 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.12 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.81 (s, 2H). MS/ESI+ 264.1, 266.1 [M + H]+.
단계 b) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(16.2). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(16.1)(1.45 g, 5.50 mmol), Boc-Asp(OSu)-OBzl(2.5)(2.54 g, 6.05 mmol) 및 THF(15 ml)를 첨가하였다. 바이알을 밀봉하고 무색 용액을 실온에서 7시간 동안 교반하였다. 6시간 이내에 에스테르로 완전히 전환되었다. 반응 혼합물을 밤새 냉동실에 보관하였다. 이어서, 이를 120℃까지 가열하고 5시간 동안 교반하였다. 얻은 황색 용액을 실온까지 냉각시키고, THF를 진공에서 제거하여 황색 오일을 얻었다. 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~25%)로 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(2.94 g, 97%)(16.2)를 담황색의 끈적한 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.39분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.15 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.69 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 7.30 - 7.28 (m, 5H), 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.93 - 4.86 (m, 1H), 3.51 (qd, J = 16.2, 5.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). MS/ESI+ 551.2, 553.2 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(16.3). 자석 교반 막대가 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(16.2)(0.681 g, 1.236 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고 Ar로 3회 다시 충전시켰다. 건조 THF(5.0 ml)를 첨가하고 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(0.081 g, 3.71 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고 45분 동안 교반하였다. 현탁액을 여과하고 CH2Cl2를 첨가하였다. 이를 밤새 냉동실에 보관하였다. 실리카 겔을 첨가하였다(주의: 가스 형성). 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 시클로헥산 중 EtOAc 0~50%)로 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(0.272 g, 49.2%)(16.3)를 백색 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.11분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.15 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.69 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.23 (s br, 1H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.80 (dq, J = 11.2, 5.8, 4.7 Hz, 2H), 3.29 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.01 (s br, 1H), 1.43 (s, 9H). MS/ESI+ 447.3, 449.3 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 16). - 자기 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(16.3)(0.270 g, 0.604 mmol), 디클로로메탄(8 ml) 및 TFA(0.233 ml, 3.02 mmol)를 첨가하였다. 무색 용액을 실온에서 6일 동안 교반하였다. 느린 반응: 2일 이내에 아직도 완전한 전환이 이루어지지 않았다. 또한, 부산물이 생성되었다. 실리카 겔과 디클로로메탄을 더 첨가하였다. 이어서, 용매를 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~10%)로 정제하여 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(0.147 g, 70.2%)(실시예 16)을 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.73분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ= 8.25 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 8.03 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.51 (t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.76 - 3.59 (dq, J = 31.2, 6.0 Hz, 3H), 3.44 - 3.25 (m, 2H). MS/ESI+ 347.1, 349.1 [M + H]+.
실시예 17 (S)-2-아미노-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) (R)-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤조니트릴(17.2). 자석 교반 막대가 장착된 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 (S)-1-페닐프로판-2-올(17.1)(0.999 ml, 7.26 mmol, ABCR GmbH), 4-시아노페놀(4.2)(0.865 g, 7.26 mmol), PPh3(2.476 g, 9.44 mmol) 및 THF(25.0 ml)를 첨가하였다. 모든 고체가 완전히 용해된 후 DIAD(1.836 ml, 9.44 mmol)를 첨가하였다. 황색 용액(주의: 매우 따뜻해짐)을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 이어서 이를 주말 동안 냉동실에 보관하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 디이소프로필 에테르 및 시클로헥산을 첨가하고 황색 용액을 실리카 패드 위로 여과하였다(일부 Ph3PO를 제거하기 위함). 용액을 진공에서 농축하여 진한 황색 오일을 얻었다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~5%, 분획)로 정제하여 (R)-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤조니트릴(0.954 g, 55.4%)(17.2)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.24분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.57 - 7.52 (m, 2H), 7.32 - 7.27 (m, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 3H), 6.93 - 6.88 (m, 2H), 4.65 (h, J = 6.1 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 13.8, 6.2 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 13.8, 6.3 Hz, 1H), 1.34 (d, J = 6.1 Hz, 3H). MS/ESI에서는 이온화가 관찰되지 않았음 [M + H]+. TLC Rf=0.32 (시클로헥산/에틸 아세테이트 10:1, 실리카 겔).
단계 b) (R,Z)-N'-하이드록시-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(17.3). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 50 mL 1구 둥근 바닥 플라스크에 하이드록실아민 염산염(1.397 g, 20.10 mmol), NaHCO3(1.689 g, 20.10 mmol) 및 물(5.0 ml)을 첨가하였다. 현탁액(주의: 가스 형성)을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 이어서 EtOH(15 ml) 중 (R)-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤조니트릴(17.2)(0.954 g, 4.02 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃까지 가열하였다. 이를 100분 동안 교반하였다. 이어서 백색 현탁액을 밤새 냉동실에 보관하였다. EtOH를 진공에서 제거하고 물/EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 합하고, Na2SO4로 건조시켰다. 진공 농축에 의해 담황색 오일을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~50%, 분획)로 정제하여 (R,Z)-N'-하이드록시-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(0.976 g, 90%)(17.3)를 탁한 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.81분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.59 - 7.52 (m, 2H), 7.34 - 7.21 (m, 5H), 6.93 - 6.88 (m, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.63 (h, J = 6.1 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 13.7, 5.9 Hz, 1H), 2.85 (dd, J = 13.7, 6.6 Hz, 1H), 1.33 (d, J = 6.1 Hz, 3H). MS/ESI+ 271.2 [M + H]+.
단계 c) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(17.4). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 (R,Z)-N'-하이드록시-4-((1-페닐프로판-2-일)옥시)벤즈이미드아미드(17.3)(0.487 g, 1.802 mmol), Boc-Asp(OSu)-Obzl(2.5)(0.833 g, 1.982 mmol) 및 THF(6.0 ml)를 첨가하였다. 무색 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS 분석에 따르면 105분 이내에 완전히 소모되었다. 이어서, 반응 혼합물을 120℃까지 가열하고 3시간 동안 교반하였다. 이어서, EtOAc를 담황색 용액에 첨가하고 혼합물을 주말 동안 냉동실에 보관하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 디클로로메탄 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~15%)로 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(0.814 g, 81%)(17.4)를 "회색" 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.48분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.94 - 7.88 (m, 2H), 7.34 - 7.22 (m, 10H), 6.97 - 6.92 (m, 2H), 5.60 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.25 - 5.12 (m, 2H), 4.95 - 4.83 (m, 1H), 4.68 (dt, J = 12.3, 6.1 Hz, 1H), 3.59 - 3.39 (m, 2H), 3.12 (dd, J = 13.7, 5.9 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 13.7, 6.5 Hz, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.35 (d, J = 6.1 Hz, 3H). MS/ESI+ 558.4 [M + H]+.
단계 d) 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(17.5). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 10 mL 2구 원뿔형 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(17.4)(0.443 g, 0.794 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 비우고, Ar로 3회 다시 충전시켰다. 건조 THF(3.0 ml)를 첨가하고 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서 LiBH4(0.087 g, 3.97 mmol)를 한꺼번에 첨가하고 현탁액을 45분 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH로 ??칭하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 디클로로메탄 및 실리카 겔을 첨가하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~50% 및 0~50%)로 2회 정제하여 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(0.168 g, 46.6%)(17.5)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.24분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.34 - 7.20 (m, 5H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.29 - 5.19 (m, 1H), 4.67 (h, J = 6.2 Hz, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 3.34 - 3.19 (m, 2H), 3.11 (dd, J = 13.7, 5.9 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 13.7, 6.5 Hz, 1H), 2.73 (s, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.34 (d, J = 6.1 Hz, 3H). MS/ESI+ 454.3 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(실시예 17). 자석 교반 막대가 장착된 10 mL 1구 배형 플라스크에 벤질 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로파노에이트(17.5)(0.168 g, 0.370 mmol), DCM(4.0 ml) 및 TFA(0.143 ml, 1.852 mmol)를 첨가하였다. 무색 용액을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 그 동안, 이는 주황색으로 변했다. 용매와 산을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~10%)에 의한 정제. 생성물을 동일한 조건 하에 다시 정제하여 (S)-2-아미노-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올(0.108 g, 78%)(실시예 17)을 무색 오일로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.84분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.30 - 7.19 (m, 5H), 6.89 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 4.61 (h, J = 6.1 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.90 - 3.83 (m, 1H), 3.79 (dd, J = 11.7, 6.5 Hz, 1H), 3.37 - 3.14 (m, 2H), 3.06 (dd, J = 13.7, 5.9 Hz, 1H), 2.82 (dd, J = 13.7, 6.5 Hz, 1H), 1.28 (d, J = 6.0 Hz, 3H). MS/ESI+ 354.3 [M + H]+.
실시예 18 (3S)-3-아미노-4-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)부탄-2-올
단계 a) 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(18.1). 자석 교반 막대 및 냉각기(공기)가 장착된 50 mL 1구 배형 플라스크에 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(7.2)(763 mg, 2.60 mmol), 하이드록실아민 염산염(905 mg, 13.02 mmol), NaHCO3(1093 mg, 13.02 mmol) 및 에탄올(15.0)/물(5.0 mL)을 첨가하였다. 백색 현탁액을 85℃에서 80분 동안 교반하였다. EtOH를 진공에서 제거하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 진공에서 농축하여 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(0.849 g, 98%)(18.1)를 백색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.75분 (방법 A). MS/ESI+ 326.2, 328.2 [M + H]+.
단계 b) 벤질 (S)-3-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(18.2). 자석 교반 막대가 장착된 20 mL 마이크로파 바이알에 4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)-N-하이드록시벤즈이미드아미드(18.1)(470 mg, 1.441 mmol), Boc-Asp(OSu)-OBzl(2.5)(666 mg, 1.585 mmol) 및 THF(13.0 ml)를 첨가하였다. 용액을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 현탁액을 얻었다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 0~16%)로 정제하여 벤질 (S)-3-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(433 mg, 49%)(18.2)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.44분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.05 - 8.01 (m, 2H), 7.99 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 7H), 5.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.23 - 5.12 (m, 2H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 3.49 (qd, J = 16.3, 5.1 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ= -132.98. MS/ESI+ 613.3, 615.3 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(18.3). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 25 mL 2구 둥근 바닥 플라스크에 벤질 (S)-3-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(18.2)(433 mg, 0.706 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 무수 THF(8.0 ml)를 첨가하고 투명한 용액을 0℃까지 냉각시켰다. LiBH4(61.5 mg, 2.82 mmol)를 첨가한 후, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다. 휘발 성분을 진공에서 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~45%)로 정제하여 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(217 mg, 60.4%)(18.3)를 무색 점착성 오일로 얻었다. ). UPLC 체류 시간 1.18분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.12 (dd, J = 9.1, 2.2 Hz, 2H), 8.01 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.9 Hz, 2H), 5.22 (s br, 1H), 4.24 - 4.15 (m, 1H), 3.86 - 3.76 (m, 2H), 3.29 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ= -132.96. MS/ESI+ 509.2, 511.2 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-옥소프로판-2-일)카르바메이트(18.4). 자석 교반 막대가 장착된 12 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(18.3)(217 mg, 0.426 mmol), DCM(5.0 ml) 및 DMP(208 mg, 0.490 mmol)를 첨가하였다. 백색 현탁액을 실온에서 28분 동안 교반하였다. 몇 방울의 포화 수성 NaHCO3 및 포화 Na2S2O3 수용액을 첨가하고, 2상 시스템을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 동안 두 상 모두 투명해졌다. 물과 디클로로메탄을 첨가하였다. 수성상을 CH2Cl2로 1회, EtOAc로 1회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 20~26.5% 내지 34.3%)로 정제하여 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-옥소프로판-2-일)카르바메이트(177 mg, 82%)(18.4)를 단단한 백색 포말로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.22분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 9.75 (s, 1H), 8.12 - 8.07 (m, 2H), 8.01 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 5.67 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.69 - 4.56 (m, 1H), 3.50 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H). MS/ESI+ 507.1, 509.1 [M + H]+.
단계 e) tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시부탄-2-일)카르바메이트(18.5). 자석 교반 막대, 고무 격막 및 기체 주입구가 장착된 10 mL 2구 원뿔형 플라스크에 tert-부틸 (S)-(1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-옥소프로판-2-일)카르바메이트(18.4)(91.3 mg, 0.180 mmol)를 첨가하였다. 플라스크를 비우고, Ar로 5회 다시 충전시켰다. 무수 THF(1.00 mL)를 첨가하고 무색 용액을 0℃까지 냉각시켰다. 이어서, THF 중 MeMgBr(0.25 mL, 0.750 mmol)을 조심스럽게 첨가하고(첨가하는 동안 가스 형성), 반응 혼합물을 2.5시간 동안 교반하였다(얼음조는 2시간 후에 제거되었다). 반응을 몇 방울의 MeOH 및 포화 NH4Cl 수용액으로 ??칭하였다. 이를 밤새 냉동실에 보관하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카 겔에 흡수, 시클로헥산 중 EtOAc 15~27.5% 내지 40%)로 정제하여 tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시부탄-2-일)카르바메이트(60.2 mg, 63.9%)(18.5)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.22분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.12 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 2H), 8.01 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 5.14 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 2H), 3.38 - 3.18 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.26 (d, J = 2.3 Hz, 3H). 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ= -132.99. MS/ESI+ 523.3, 525.3 [M + H]+.
단계 f) (3S)-3-아미노-4-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)부탄-2-올(실시예 18). 자석 교반 막대가 장착된 12 mL 1구 배형 플라스크에 tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시부탄-2-일)카르바메이트(18.5). (60.2 mg, 0.115 mmol), 디옥산(1.00 ml) 및 수성 HCl(1.00 mL, 2.000 mmol)을 첨가하였다. 탁한 용액을 실온에서 4일 동안 교반하였다. 물, 2 M 수성 NaOH(5.0 mL) 및 EtOAc를 첨가하였다. 수성상을 EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고 합하고 Na2SO4로 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피(ISCO CombiFlash Rf, 실리카겔에 흡수, CH2Cl2 중 MeOH 0~5%)로 정제하여 (3S)-3-아미노-4-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)부탄-2-올(33.9 mg, 67.5%)(실시예 18)을 무색 오일 및 78:22 부분입체 이성질체 혼합물로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.79분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.16 - 8.09 (m, 2H), 8.00 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 3H), 3.71 - 3.61 (m, 1H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 3.02 - 2.92 (m, 1H), 1.28 (d, J = 6.2 Hz, 3H). MS/ESI+ 423.2, 425.2 [M + H]+.
실시예 19 (R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올
단계 a) 2-(4-(2H-테트라졸-5-일)페녹시)-5-브로모피리딘(19.1). 실온에서 Bu2SnO(0.204 g, 0.818 mmol)를 톨루엔(20 ml) 중 13.3(1.5 g, 5.45 mmol) 및 트리메틸실릴 아지드(1.447 mL, 10.91 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물(황색 용액)을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 미정제 생성물을 디에틸에테르로 트리튜레이션하고 19.1(1.28 g, 70%)을 백색 고체로서 여과 제거하였다. UPLC 체류 시간 0.86분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 16.82 (s, br, 1H), 8.33 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.24 - 8.00 (m, 3H), 7.51 - 7.29 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 1H). MS/ESI 318.1 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(2H-테트라졸-5-일)페녹시)-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘(19.3). 화합물 19.1(1.2 g, 3.77 mmol) 및 19.2(0.732 g, 3.77 mmol)를 디옥산(15 ml) 및 물(15 ml)에 용해시켰다. 이어서, K3PO4(2.402 g, 11.32 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(0.246 g, 0.377 mmol)를 아르곤 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 Isolute에 흡수시키고 RotaVap에서 건조될 때까지 건조시켰다. 반응 혼합물을 실리카(구배: 에틸 아세테이트/MeOH) 상에서 정제하여 화합물 19.3(1.41 g, 81% 순도)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.67분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 12.97 (s, br, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.25 (m, 1H), 8.05 (m, 2H), 7.78 (s, br, 1H), 7.25 (m, 2H), 7.10 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 테트라졸 H는 관찰되지 않음. MS/ESI 306.2 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (R)-(1-(5-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판-2-일)카르바메이트(19.4). 실온에서 중간체 B(166 mg, 0.452 mmol)를 DMA(4 mL) 중 19.3(115 mg, 0.377 mmol)과 Cs2CO3(368 mg, 1.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 염수 및 CH2Cl2를 첨가하고 혼합물을 CH2Cl2(3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 실리카(구배: 에틸아세테이트/MeOH) 상에서 정제하여 19.4를 백색 고체로서 얻었다(30 mg, 83% 순도). UPLC 체류 시간 0.89분 (방법 A). MS/ESI 479.4 [M + H]+.
단계 d) (R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올(실시예 19). 디옥산(0.157 mL, 0.627 mmol) 중 HCl의 4 M 용액을 디옥산(0.5 ml) 중 19.4(30 mg, 0.063 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하고 디에틸에테르로 희석하였다. 무색 고체를 여과하고 SFC로 정제하여 실시예 19를 무색 분말(10 mg, 39%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.56분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.64 (1H, d), 8.31 (1H, dd), 8.13 (3H, m), 7.86 (2H, d), 7.43 (2H, d), 7.23 (1H, d), 6.78 (1H, d), 5.50 (1H, m), 4.78 (1H, dd), 4.63 (1H, dd), 3.85 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 3.55 (1H, dd), 피라졸 NH는 관찰되지 않음. MS/ESI 379.3 [M + H]+.
실시예 20 (S)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올
실시예 20은 중간체 B를 R-거울상 이성질체 중간체 A로 대체하여 실시예 19의 합성에 사용된 유사한 절차에 의해 제조되었다. 실시예 20은 염산염으로서 분리되었다. UPLC 체류 시간 0.58분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.64 (1H, d), 8.38 (3H, m), 8.30 (1H, dd), 8.14 (2H, d), 7.80 (1H, m), 7.37 (2H, d), 7.20 (1H, d), 6.78 (1H, d), 5.05 (1H, dd), 5.00 (1H, dd), 3.84 (1H, m), 3.75 (1H, dd), 3.67 (1H, dd), OH 및 피라졸 NH는 관찰되지 않음. MS/ESI 379.2 [M + H]+.
실시예 21 (S)-2-아미노-3-(3-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) 2-((6-브로모피리딘-3-일)옥시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(21.3). DMF(1.5 mL) 중 21.1(189 mg, 1.264 mmol), 21.2(200 mg, 1.149 mmol) 및 K2CO3(318 mg, 2.299 mmol)의 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 21.3(271 mg, 73%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.41 (1H, s), 8.27 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 7.75 (2H, s). MS/ESI 303.0 [M + H]+.
단계 b) 5-클로로-3-플루오로-2-((6-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-3-일)옥시)피리딘(21.5). 디옥산(15 mL) 및 물(5 mL)의 혼합물 중 21.3(1350 mg, 4.45 mmol), 21.4(1299 mg, 4.67 mmol), K3PO4(1888 mg, 8.90 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(145 mg, 0.222 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 25℃에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 21.5(1390 mg, 73%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.16분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.65 (1H, d), 8.29 (1H, dd) 8.10 (1H, d), 7.83-7.89 (2H, m), 7.60 (1H, d), 6.81 (1H, d), 6.25 (1H, dd), 3.86 (1H, d), 3.46-3.56 (1H, m), 2.33-2.46 (1H, m), 1.88-2.06 (2H, m), 1.48-1.71 (3H, m). MS/ESI 375.1 [M + H]+.
단계 c) 2-((6-(1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)옥시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(21.6). 메탄올(12 mL) 중 21.5(1380 mg, 3.68 mmol)의 용액에 2 N HCl(11.05 mL, 22.1 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 현탁액이 형성되었다. 여과하여 무색 고체를 얻었고 이를 CH2Cl2(20 mL)에 용해시켰다. 물을 첨가하고 2 N K2CO3를 첨가하여 pH를 10까지 조정하였다. 층을 분리하고 수성 층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2CO3로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 21.6(960 mg, 89%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.89분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 13.50 및 13.05 (1 H, 2s), 8.52 (1H, s br), 8.27 (1H, dd), 7.95-8.10 (2H, m), 7.83 (1H, s br), 7.71-7.80 (1H, m), 6.83 (1H, s br), 호변이성질체의 혼합물. MS/ESI 291.1 [M + H]+.
단계 d) (S)-tert-부틸 (1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(21.7). DMF(11 mL) 중 21.6(900 mg, 3.10 mmol), 중간체 A(1366 mg, 3.72 mmol) 및 K2CO3(1284 mg, 9.29 mmol)의 혼합물을 아르곤 하에 25℃에서 70시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 염수를 첨가하고 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 21.7(518 mg, 28%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.54분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.50 (1H, d), 8.26 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 7.97 (1H, d), 7.74 (1H, dd), 7.71 (1H, d), 6.83 (1H, d br), 6.77 (1H, d), 4.30 (1H, dd), 4.13 (1H, dd br), 3.93 (1H, d br), 3.46-3.62 (2H, m), 1.32 (9H, s), 0.85-0.89 (9H, m), 0.02-0.06 (6H, m). MS/ESI 578.3 [M + H]+.
단계 e) tert-부틸 ((2S)-1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(5-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(21.8). 디옥산(2.5 mL) 및 물(1 mL)의 혼합물 중 21.7(250 mg, 0.432 mmol), 21.4(241 mg, 0.865 mmol), K3PO4(275 mg, 1.297 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(145 mg, 0.222 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 90℃에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 21.8(180 mg, 60%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.55분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.55 (1H, d), 8.10 (1H,s), 8.02-8.08 (1H, m), 8.00 (1H, d), 7.79 (1H, dd), 7.73 (1H, d), 7.61 (1H, s), 6.84 (1H, d br), 6.79 (1H, d), 6.59 (1H, d), 5.29 (1H, dd), 4.31 (1 H, dd), 4.14 (1H, dd br), 3.94 (2H, d br), 3.53-3.59 (3H, m), 2.28-2.44 (1H, m), 1.90-2.02 (1H, m), 1.77-1.88 (1H, m), 1.50-1.55 (3H, m), 1.33 (9H, s), 0.89 (9H, s), 0.05 (6 H, s). MS/ESI 694.5 [M + H]+.
단계 f) (S)-2-아미노-3-(3-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 21). 디옥산(0.612 mL, 2.45 mmol) 중 HCl의 4 M 용액을 아세톤(2.5 ml) 중 21.8(170 mg, 0.245 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 무색 고체를 여과하고 아세톤으로 세척한 후 SFC 및 실리카 크로마토그래피(구배: CH2Cl2/MeOH)로 정제하여 실시예 21을 무색 분말(12 mg, 12%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.55분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 13.07 (1H, s br), 8.52 (1H, d), 8.41 (1H, s), 8.25 (1H, d br), 7.98 (1H, d), 7.76-7.85 (2H, m), 7.74 (1H, dd), 6.81 (2H, dd), 4.71 (1H, t), 4.22 (1H, dd), 3.99 (1H, dd), 3.25-3.30 (2H, m), 3.08-3.16 (1H, m), 1.58 (2H, s br). MS/ESI 396.2 [M + H]+.
실시예 22 (S)-2-아미노-3-(5-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피콜리노니트릴(22.3). DMF(10 mL) 중 22.1(1245 mg, 8.33 mmol), 22.2(1000 mg, 8.33 mmol) 및 K2CO3(2301 mg, 16.65 mmol)의 혼합물을 아르곤 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH) 상에서 정제하여 22.3(1181 mg, 54%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.01분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.77 (1H, d), 8.34 (1H, dd), 8.18 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.03 (1H, dd). MS/ESI 250.1 [M + H]+.
단계 b) 2-((6-(2H-테트라졸-5-일)피리딘-3-일)옥시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(22.4). 아르곤 하에서 건조 톨루엔(8 mL) 중 22.3(1120 mg, 4.49 mmol), Bu2SnO(112 mg, 0.449 mmol) 및 TMSN3(1034 mg, 8.97 mmol)의 용액을 밀봉된 튜브에서 90℃에서 18시간 동안 가열 블록에서 가열하였다. 추가로 Bu2SnO 및 TMSN3를 첨가하고 3시간 동안 가열을 계속하였다. 실온까지 냉각시킨 후 MeOH(2 mL)를 첨가하고 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트, 이어서 CH2Cl2/MeOH) 상에서 정제하여 29.4를 무색 분말로 얻었다(960 mg, 73%). UPLC 체류 시간 0.85분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.79 (1H, d), 8.28-8.35 (2H, m), 8.11 (1H, d), 8.02 (1H, dd), 테트라졸 NH는 관찰되지 않음. MS/ESI 293.1 [M + H]+.
단계 c) (S)-tert-부틸 (1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(5-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-2-일)카르바메이트(22.5). DMF(17 mL) 중 22.4(950 mg, 2.60 mmol), 중간체 A(1145 mg, 3.12 mmol) 및 K2CO3(1077 mg, 7.79 mmol)의 혼합물을 아르곤 하에 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 시클로헥산/에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 22.5(773 mg, 51%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.50분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.69 (1H, d), 8.32-8.36 (2H, m), 8.11 (1H, d), 8.04 (1H, dd), 6.83 (1H, d), 5.08-5.23 (1H, m), 4.61-4.75 (1H, m), 3.90-4.01 (1H, m), 3.62-3.68 (2H, m), 1.21 (9H, s), 0.84 (9H, s), 0.02-0.06 (6H, m). MS/ESI 580.2 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 ((2S)-1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(5-(5-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-2-일)카르바메이트(22.7). 디옥산(3.5 mL) 및 물(1.17 mL)의 혼합물 중 22.5(330 mg, 0.569 mmol), 22.6(264 mg, 0.948 mmol), K3PO4(302 mg, 1.423 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(30.9 mg, 0.047 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 90℃에서 1.25시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 22.7(118 mg, 30%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.52분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.76 (1H, d), 8.23 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.09 (1H, d), 7.99 (1H, dd), 7.60-7.68 (m, 1H, m), 6.96 (1H, d br), 6.61 (1H, d), 5.30 (1H, dd), 4.91 (1H, dd), 4.70 (1H, dd br), 3.91-4.12 (2H, m), 3.53-3.70 (3H, m), 2.26-2.48 (1H, m), 1.92-2.01 (1H, m), 1.77-1.89 (1H, m), 1.50-1.68 (3H, m), 1.02-1.28 (9H, m), 0.88 (9H, s), 0.07 (6H, s). MS/ESI 696.3 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(5-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 22). 디옥산(0.284 mL, 1.15 mmol) 중 HCl의 4 M 용액을 아세톤(1 ml) 중 22.7(80 mg, 0.115 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔류물을 물에 용해시키고, CH2Cl2를 첨가하였다. 포화 NaHCO3 용액을 사용하여 pH를 9까지 조정하고 수성 층을 CH2Cl2/이소프로판올(3:1)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH) 상에서 정제하여 실시예 22(15 mg, 31%)를 무색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.52분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 13.09 (1H, s br), 8.72 (1H, s br), 8.45 (1H, s br), 8.28 (1H, d br), 8.23 (1H, d br), 7.94 (1H, d br) 7.85 (1H, s br), 6.84 (1H, s br), 4.86 (1H, s br), 4.71-4.83 (1H, m), 4.50-4.71 (1H, m), 3.39 (2H, m), 3.35 (1H, m), 1.70 (2H, s br). MS/ESI 398.1 [M + H]+.
실시예 23 (S)-2-아미노-3-(3-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) 2-((6-브로모피리딘-3-일)옥시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(23.3). 아르곤 하에서 탄산칼륨(1.33 g, 9.63 mmol)을 DMA(5 mL) 중 23.1(1.00 g, 6.42 mmol) 및 23.2(1.11 g, 6.42 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물(40 mL) 및 MTBE(20 ml)에 붓고 10분 동안 격렬하게 교반하였다. 그 후, 수성 층을 MTBE로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 H2O로 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일로 얻었다. 시클로헥산(4 mL)으로부터 결정화하여 화합물 23.3을 회백색 고체(1.57 g, 81%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.15분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.42 (1H, s), 8.29 (1H, dd), 8.08 (1H, d), 7.76 (2H, s). MS/ESI: m/z = 303.0 [M + H]+.
단계 b) 2-((6-(1H-피라졸-3-일)피리딘-3-일)옥시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(23.5). 디옥산(22.6 mL) 중 23.3(686 mg, 2.26 mmol) 및 23.4(582 mg, 5.20 mmol)의 현탁액에 2 M 수성 Na2CO3(2.26 mL, 4.52 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0)(313 mg, 0.271 mmol)을 첨가하였다. 아르곤으로 퍼징한 후, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 85℃에서 20시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 현탁액을 에틸 아세테이트(50 mL)와 물(75 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M 수성 Na2CO3 및 반포화 염수로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)를 통해 연황색 오일을 얻었다. 잔류물을 EtOH/Et2O로부터 결정화하여 순수한 화합물 23.5를 백색 고체로 얻었다(353 mg, 48%). UPLC 체류 시간 0.95분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 10.61 (br s), 8.57 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 8.08 (s), 8.07 (d), 7.86 (dd, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.89 (s, 1H). MS/ESI: m/z = 291.1 [M + H]+.
단계 c) (S)-2-아미노-3-(3-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(23.6, 실시예 23). DMA(4.5 mL) 중 23.5(117 mg, 0.40 mmol) 및 중간체 A(177 mg, 0.482 mmol)의 용액에 Cs2CO3(392 mg, 1.204 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 아르곤 하에 0℃에서 1.5시간 동안 교반하고, 실온에서 추가로 2시간 동안 교반한 후, 45℃에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)와 물(25 mL)의 혼합물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 4회 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피에 의한 분리(구배: CH2Cl2 /MeOH/NH3)로 순수한 화합물 실시예 23을 무색 오일(89 mg, 55%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.71분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.55 (1H, d), 8.29 (1H, d), 8.21 (3H, br s), 8.08 (1H, d), 8.05 (1H,dm), 7.90 (1H, d), 7.80 (1H, d), 6.87 (1H, d), 4.52-4.37 (2H, m), 3.68-3.55 (2H, m), 3.54-3.45 (1H, m). MS/ESI: m/z = 364.1 [M + H]+.
아세톤(5 mL) 용액을 MeOH(0.6 mL) 중 1.25 M HCl로 처리하여 물질을 염산염으로 전환시키고, 증발시킨 후 Et2O로 트리튜레이션하였다. 형성된 침전물을 여과하고 80℃에서 진공 건조하여 생성물을 무색 결정질 고체(81.2 mg)로 얻었다. 추가로 레지오이성질체 생성물 (S)-2-아미노-3-(5-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 23'을 분리할 수 있었다. Et2O로부터 재결정화하여 무색 결정질 고체(17.2 mg, 12%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.67분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.63 (1H, d), 8.29 (1H, dd), 8.11 (1H, d), 7.92-7.82 (2H, m), 7.54 (1H, d), 6.78 (1H, d), 4.62-4.51 (2H, m), 4.43 (1H, dd), 3.29-3.07 (3H, m), 1.50 (2H, br s). MS/ESI: m/z = 364.2 [M + H]+.
실시예 24 (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) 2-(3-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(24.3). 아르곤 하에서 탄산칼륨(3.99 g, 28.9 mmol)을 DMA(10 mL) 중 24.1(3.00 g, 19.26 mmol) 및 24.2(3.33 g, 19.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물(120 mL) 및 MTBE(60 ml)에 부었다. 수성 층을 MTBE로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 10% K2CO3, H2O 및 염수로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시켰다. 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일로 얻었다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피(시클로헥산/DCM)로 정제하여 무색 오일로서 화합물 24.3(5.06 g, 87%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.31분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.25 (1H, dd), 8.09 (1H, d), 7.52 (1H, s), 7.47 (1H, d), 7.41 (1H, "t"), 7.25 (1H, dd). MS/ESI: m/z = 302.0 [M + H]+.
단계 b) 2-(3-(1H-피라졸-3-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(24.5). DMA(15 mL) 중 24.3(1.5 g, 4.96 mmol) 및 24.4(1.11 g, 9.92 mmol)의 현탁액에 KHCO3(0.993 g, 9.91 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0)(286 mg, 0.248 mmol)을 첨가하였다. 아르곤으로 퍼징한 후, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 93℃에서 24시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 현탁액을 에틸 아세테이트(60 mL)와 물(60 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M 수성 Na2CO3 및 반포화 염수로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)를 통해 순수한 화합물 24.5를 무색 오일(547 mg, 38%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.04분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 12.96 (1H, br s), 8.24 (1H, s), 8.23 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 7.95 (1H, br s), 7.51 (1H, d), 7.47 (1H, s), 7.40 (1H, "t"), 7.00 (dd, 1H). MS/ESI: m/z = 290.1 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(3-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(24.6). DMA(12 mL) 중 24.5(523 mg, 1.805 mmol) 및 중간체 A(796 mg, 2.166 mmol)의 용액에 Cs2CO3(1.765 g, 5.42 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. RM을 에틸 아세테이트(60 mL)와 물(30 mL)의 혼합물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 4회 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피에 의한 분리(구배: CH2CL2/EtOAc)로 순수한 화합물 24.6을 무색 오일(917 mg, 88%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.63분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 8.23 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 7.68 (1H, s), 7.67 (1H, d), 7.58 (1H, br s), 7.46 (1H, "t"), 7.12 (1H, dd), 6.78 (1H, d), 6.72 (1H, d), 4.26 (1H, dd), 4.16-4.05 (1H, m), 3.94-3.82 (1H, m), 3.61-3.45 (2H, m), 1.32 (9H, s), 0.87 (s, 9H), 0.04 (s, 6H). MS/ESI: m/z = 577.3 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 24). 화합물 24.6(917 mg, 1.589 mmol)을 아세톤(10 mL)에 용해시키고, 디옥산 중 4 M HCl(3.97 mL, 15.89 mmol)을 첨가하였다. 즉시 가스 발생이 관찰되었으며 15분 이내에 걸쭉한 현탁액이 형성되었다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 증발시켜 끈적한 잔류물을 남겼다. 화합물을 플래시 크로마토그래피(구배: CH2Cl2/MeOH-32% 수성 NH3)로 정제하여 방치 시 결정화되는 무색 오일로서 실시예 24(531 mg, 92%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 8.23 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 7.76 (1H, d), 7.68 (1H, d), 7.59 (1H, "t"), 7.45 (1H, "t"), 7.11 (1H, dd), 6.73 (1H, d), 4.67 (1H, t), 4.17 (1H, dd), 3.94 (1H, dd), 3.31-3.21 (2H, m), 3.14-3.02 (1H, m), 1.48 (2H, br s). MS/ESI: m/z = 363.1 [M + H]+.
실시예 25 S)-2-아미노-3-(4-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) 2-(4-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(25.3). 아르곤 하에서 탄산칼륨(3.99 g, 28.9 mmol)을 DMA(10 mL) 중 25.1(3.00 g, 19.26 mmol) 및 25.2(3.33 g, 19.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물(120 mL) 및 MTBE(60 mL)에 부었다. 수성 층을 MTBE로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 10% K2CO3, H2O 및 염수로 세척하였다. 유기상을 Na2SO4로 건조시켰다. 증발시켜 미정제 생성물을 황색 오일로 얻었다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피(시클로헥산/DCM)로 정제하여 무색 오일로서 화합물 25.3(5.16 g, 89%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.31분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.24 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 7.62 (2H, "d"), 7.21 (2H, "d"). MS/ESI: m/z = 301.9 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(1H-피라졸-4-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(25.5). DMA(15 mL) 중 25.3(1.5 g, 4.96 mmol) 및 25.4(1.11 g, 9.92 mmol)의 현탁액에 KHCO3(0.993 g, 9.91 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0)(286 mg, 0.248 mmol)을 첨가하였다. 아르곤으로 퍼징한 후, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 90℃에서 48시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 현탁액을 에틸 아세테이트(100 mL)와 물(100 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M 수성 Na2CO3 및 반포화 염수로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)를 통해 끈적한 오일을 얻었다. 잔류물을 시클로헥산/Et2O 2:1로 결정화하여 순수한 화합물 25.5를 백색 고체로 얻었다(472 mg, 27%). UPLC 체류 시간 0.99분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 12.93 (1H, br s), 8.21 (1H, dd), 8.18 (1H, br s), 8.06 (1 H, d), 7.92 (1H, br s), 7.65 (2H, "d"), 7.19 (2H, "d"). MS/ESI: m/z = 290.1 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(4-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(25.6). DMA(5.5 mL) 중 25.5(196 mg, 0.676 mmol) 및 중간체 A(323 mg, 0.878 mmol)의 용액에 Cs2CO3(660 mg, 2.027 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 28시간 동안 교반하였다. RM을 에틸 아세테이트(60 mL)와 물(30 mL)의 혼합물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 4회 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피에 의한 분리(구배: CH2CL2/EtOAc)로 방치 시 결정화되는 순수한 화합물 25.6의 무색 오일을 얻었다(399 mg, 86%). UPLC 체류 시간 1.60분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 8.22 (1H, dd), 8.09-8.01 (2H, m), 7.89 (1H, s), 7.59 (2H, "d"), 7.20 (2H, "d"), 6.78 (1H, br d), 4.25 (1H, dd), 4.15-4.06 (1H, m), 3.98-3.86 (1H, m)), 3.60-3.46 (2H, m), 1.33 (9H, s), 0.89 (9H, s), 0.05 (6H, s). MS/ESI: m/z = 577.4 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(4-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 25). 화합물 25.6(388 mg, 0.672 mmol)을 아세톤(5 ml)에 용해시키고, 디옥산 중 4 M HCl(1.68 mL, 6.72 mmol)을 첨가하였다. 즉시 가스 발생이 관찰되었으며 15분 이내에 걸쭉한 현탁액이 형성되었다. 혼합물을 40℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 디옥산중 추가의 4 M HCl(0.84 mL, 3.36 mmol)을 첨가하고 40℃에서 4시간 동안 계속 교반하였다. 투명한 용액을 증발시켜 끈적한 잔류물을 남겼다. 화합물을 플래시 크로마토그래피(구배: CH2Cl2/MeOH-32% 수성 NH3)로 정제하여 고체를 얻었다. 이소프로판올로 트리튜레이션하여 60℃에서 진공 건조시킨 후 실시예 25를 백색 고체로 얻었다(157 mg, 64%). UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ 8.21 (1H, dd), 8.14 (1H, s), 8.06 (1H, d), 7.88 (1H, s), 7.62 (2H, "d"), 7.19 (2H, "d"), 4.68 (1H, t) 4.17 (1H, dd), 3.94 (1H, dd), 3.33-3.21 (2H, m), 3.15-3.03 (1H, m), 1.49 (2H, br s). MS/ESI: m/z = 363.1 [M + H]+.
실시예 26 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) 2-(4-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(26.3). 아르곤 하에서 탄산칼륨(1.33 g, 9.63 mmol)을 DMA(5 mL) 중 26.1(1.00 g, 6.42 mmol) 및 26.2(1.11 g, 6.42 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물(40 mL) 및 MTBE(20 ml)에 붓고 10분 동안 격렬하게 교반하였다. 그 후, 수성 층을 MTBE로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 10% 수성 K2CO3, 반포화 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 증발시켜 미정제 생성물을 무색 오일로 얻었다. 실리카 플래시 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/CH2Cl2)는 화합물 26.3을 무색 고체(1.75 g, 90%)로 제공하였다. UPLC 체류 시간 1.31분 (방법 A). TLC: Rf = 0.25 (CH2Cl2/시클로헥산 1:4), 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.24 (1H, dd), 8.06 (1H, s), 7.62 (2H, d), 7.21 (2H, d). MS/ESI: m/z = 302.0 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(1H-피라졸-3-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(26.5). 디옥산(14 mL) 중 26.3(1.00 g, 3.31 mmol) 및 26.4(1.11 g, 9.92 mmol)의 현탁액에 2 M 수성 Na2CO3(1.65 mL, 3.30 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0)(0.31 g, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 아르곤으로 퍼징한 후, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브에서 75℃에서 40시간 동안 교반하였다. 냉각 후, 현탁액을 에틸 아세테이트(50 mL)와 물(75 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 1 M 수성 Na2CO3 및 반포화 염수로 세척하였다. Na2SO4 상에서 건조시키고 증발시켜 황색 오일을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)를 통해 순수한 화합물 26.5를 무색 오일(0.27 g, 28%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.01분 (방법 A). TLC: Rf = 0.35 (에틸 아세테이트/시클로헥산 1:1), 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.24 (1H, dd), 8.08 (1H, d), 7.86 (2H, d), 7.79 (1H, d), 7.22 (2H, d), 6.72 (1H, d). MS/ESI: m/z = 290.1 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(26.6). DMA(10 mL) 중 26.5(261 mg, 0.90 mmol) 및 중간체 A(398 mg, 1.08 mmol)의 용액에 Cs2CO3(880 mg, 2.70 mmol)을 첨가하였다. 무색 현탁액을 아르곤 하에 25℃에서 2.5시간 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트(75 mL)와 물(30 mL)의 혼합물에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 4회 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 14:1의 비율로 두 가지 가능한 레지오이성질체 알킬화 생성물을 함유하는 무색 오일을 얻었다(UPLC, UV 215 nm). 플래시 크로마토그래피에 의한 분리(구배: CH2CL2/에틸 아세테이트)로 원하는 레지오이성질체 26.6을 무색 오일(370 mg, 71%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 7.63분 (방법 B). TLC: Rf = 0.64 (에틸 아세테이트/CH2Cl2 1:1), 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.23 (1H, dd), 8.08 (1H, d), 7.82 (2H, d), 7.68 (1H, d), 7.22 (2H, d), 6.80 (1H, br d), 6.69 (1H, d), 4.39 (1H, dd), 4.11 (1H, dd), 3.94 (1H, m), 3.55 (2H, m), 1.38 (9H, s), 0.89 (9H, s), 0.02 (3H, s), 0.02 (3H, s). MS/ESI: m/z = 577.4 [M + H]+. 원하지 않는 피라졸 레지오이성질체 26.6'도 무색 오일(42 mg, 8%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 7.53분 (방법 B). TLC: Rf = 0.27 (에틸 아세테이트/CH2CL2 1:1), 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.26 (1H, dd), 8.09 (1H, d), 7.54 (2H, d), 7.53 (1H, d), 7.30 (2H, d), 6.57 (1H, br d), 6.49 (1H, d), 4.29 (1H, dd), 4.10 (1H, dd), 3.94 (1H, m), 3.40 (2H, m), 1.33 (9H, s), 0.79 (9H, s), -0.04 (3H, s), -0.05 (3H, s). MS/ESI: m/z = 577.4 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 26). 화합물 26.6(362 mg, 0.627 mmol)을 디옥산(1.5 mL) 중 4 M HCl에 용해시켰다. 즉시 발포가 관찰될 수 있었고, 15분 이내에 걸쭉한 현탁액이 형성되었다. 아세톤(4.5 mL)을 첨가하고 25℃에서 추가로 1.5시간 동안 계속 교반하였다. 반응물을 증발시켜 끈적한 잔류물을 남겼다. 플래시 크로마토그래피(구배: CH2Cl2/MeOH-32% 수성 NH3) 및 에틸 에테르/n-펜탄으로부터의 재결정화로 실시예 26을 무색 분말(166 mg, 73%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). TLC: Rf = 0.19 (CH2CL2/MeOH/25% 수성 NH3 90:9:1), 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.23 (1H, dd), 8.07 (1H, d), 7.84 (2H, d), 7.76 (1H, d), 7.22 (2H, d), 6.69 (1H, d), 4.68 (1H, t, OH), 4.19 (1H, dd), 3.96 (1H, dd), 3.32-3.25 (3H, m), 3.11 (1H, m), 1.51 (2H, br s, NH2). MS/ESI: m/z = 363.2 [M + H]+.
실시예 27 (S)-2-아미노-3-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸(26.3). 건조 톨루엔(9 mL) 중 니트릴 27.1(1.43 g, 6.23 mmol)의 용액에 디부틸스탄나논(155 mg, 0.623 mmol) 및 아지도트리메틸실란(1.7 mL, 12.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 바이알에서 17시간 동안 100℃까지 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 모든 휘발 물질을 진공에서 제거하고 미정제물을 MeOH (6 mL)로 트리튜레이션하고 다시 농축시켰다. 물질을 MeCN(6 mL)에 현탁시키고 여과하였다. 고체를 MeCN(2x3 mL)으로 세척하고 진공 건조시켜 무색 분말로서 테트라졸 27.2(1.49 g, 86%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.99분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 16.82 (s, br, 1H), 8.09-8.02 (m, 2H), 7.55-7.46 (m, 2H), 7.27-7.12 (m, 4H). MS/ESI: m/z = 273.0 [M + H]+.
단계 b) 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(27.3). THF(60 mL) 중 화합물 27.2(1.2 g, 4.40 mmol) 및 PPh33(2.89 g, 11.0 mmol)의 용액에 THF(20 mL) 중 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트(2.53 g, 11.00 mmol) 및 Boc-Ser-OMe(2.41 g, 11.0mmol)을 첨가하였다. 실온에서 19시간 동안 교반한 후, 모든 휘발 물질을 진공에서 제거하고, 미정제물을 isoluteTM에 흡착시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(80 g SiO2, 헵탄에서 EtOAc)로 정제하여 표제 화합물 27.3 및 상당량의 BocNH-NHBoc를 함유하는 무색 고체(4.1 g)를 얻었다. 물질은 추가 정제 없이 다음으로 넘겨졌다. UPLC 체류 시간 1.34분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.15-8.07 (m, 2H), 7.40-7.31 (m, 2H), 7.31 (s, 1H), 7.14-7.06 (m, 2H), 7.06-6.98 (m, 2H), 5.14 (qd, 2H), 4.90 (dt, 1H), 3.85 (s, 3H), 1.45 (s, 9H). MS/ESI: m/z = 474.0 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸(S)-(1-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(27.4). THF(10 mL) 중 화합물 27.3(414 mg, 0.874 mmol)의 용액을 0℃에서 THF 중 2N LiBH4(1.75 mL, 3.5 mmol)로 처리하였다. 30분 후, 반응 혼합물을 isoluteTM에 흡착시키고 진공 건조시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(RP18 실리카 43 g, 물 중 0.1% TFA:MeCN 19:1 내지 0:1)에 의해 알코올 27.4(173 mg, 44%)를 무색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.22분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.09-8.02 (m, 2H), 7.54-7.45 (m, 2H), 7.23-7.11 (m, 4H), 6.88 (d, 1H, -NH), 5.03 (t, 1H, -OH), 4.89 (dd, 1H), 4.61 (dd, 1H), 3.99 (s, br, 1H), 3.48 (d, br, 2H), 1.25 (s, 9H). MS (ESI+): m/z = 446.1 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 27). DCM(4 mL) 중 27.4(88 mg, 0.197 mmol)의 용액을 TFA(2 mL)로 처리하고 실온에서 1시간 동안 유지하였다. 반응 혼합물을 진공 농축하고, isoluteTM에 흡착시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(RP18 실리카 43 g, 물 중 0.1% TFA:MeCN 19:1 내지 0:1)에 이어 HCl 함유 수용액으로부터 동결건조하여 실시예 27의 염산염(71 mg, 92%)을 무색 분말로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.81분 (방법 A). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.24 (s, br, 3H, -NH 3), 8.12-8.06 (m, 2H), 7.55-7.47 (m, 2H), 7.25-7.12 (m, 4H), 5.56 (t, 1H, -OH), 5.04 (dd, 1H), 4.96 (dd, 1H), 3.81 (dq, 1H), 3.72 (dt, 1H), 3.63 (dt, 1H). MS (ESI+): m/z = 346.0 [M + H]+.
실시예 28 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-시클로프로필피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 2-(4-(2H-테트라졸-5-일)페녹시)-5-브로모피리딘(28.1). 아르곤 하에서 건조 톨루엔(10.5 mL) 중 13.3(2.95 g, 10.72 mmol), Bu2SnO(0.267 g, 1.073 mmol) 및 TMSN3(2.47 g, 21.45 mmol)의 용액을 각각 함유하는 2개의 바이알을 밀봉하고 100℃에서 8시간 동안 가열 블록에서 교반하였다. 불균일 혼합물을 합하고, MeOH로 처리하고 감압 하에 농축시켰다. 고체 잔류물을 MeOH로부터 결정화하여 28.1을 무색 고체로 얻었다(2.60 g, 42%). UPLC 체류 시간 0.86분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 16.5 (1H, s, br), 8.32 (1H, d), 8.11 (1H, dd), 8.04-8.09 (2H, m), 7.35-7.40 (2H, m), 7.14 (1H, d). MS/ESI 318.1 [M + H]+.
단계 b) (S)-메틸 3-(5-(4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노에이트(28.3). THF(60 ml) 중 28.1(2.60 g, 8.17 mmol), 트리페닐포스핀(3.22 g, 12.26 mmol), DIAD(2.82 g, 12.26 mmol) 및 28.2(2.69 g, 12.26 mmol)의 용액을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. Isolute를 첨가하고 혼합물을 진공에서 건조시켰다. 실리카 상 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)에 의해 약 10% 트리페닐포스핀 옥사이드를 함유하는 28.3(5.65g)을 무색 고체로 얻었고, 이는 다음 단계에서 사용되었다. 분석 샘플을 얻기 위해 소량을 SFC로 추가로 정제하였다. UPLC 체류 시간 1.25분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.33 (1H, d), 8.12 (1H, dd), 8.08 (2H, d), 7.49 (1H, d), 7.34 (2H, d), 5.11 (1H, dd), 5.01 (1H, dd), 4.71 (1H, m), 3.70 (3H, s), 1.32 (9H, s). MS/ESI 519.1 [M + H]+.
단계 c) (S)-tert-부틸 (1-하이드록시-3-(5-(4-하이드록시페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-2-일)카르바메이트(28.4). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2 N 용액, 10.28 mL, 20.56 mmol)를 THF(50 mL) 중 28.3(2.67 g, 5.14 mmol)의 용액에 적가하고 혼합물을 0℃에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(1 N 수용액)로 중화시키고, CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 무색 고체로 화합물 28.4(553 mg, 21%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.11분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.33 (1H, d), 8.12 (1H, dd), 8.08 (2H, d), 7.34 (2H, d), 7.24 (1H, d), 6.88 (1H, d), 5.03 (1H, t, br), 4.91 (1H, dd), 4.63 (1H, dd), 4.02 (1H, m), 3.48 (2H, m), 1.27 (9H, s). MS/ESI 491.2 [M + H]+.
단계 d) (S)-tert-부틸 (1-(5-(4-((5-시클로프로필피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(28.6). 디옥산(7.5 mL) 및 물(3.75 mL)의 혼합물 중 28.4(400 mg, 0.814 mmol), 28.5(164 mg, 0.977 mmol), K3PO4(518 mg, 2.442 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(53.1 mg, 0.081 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 85℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 28.6(80 mg, 21%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.11분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.05 (3H, m), 7.57 (1H, dd), 7.25 (2H, d), 7.02 (1H, d), 6.88 (1H, d), 5.02 (1H, t, br), 4.90 (1H, dd), 4.62 (1H, dd), 4.02 (1H, m), 3.47 (2H, m), 1.95 (1H, m), 1.25 (9H, s), 0.96 (2H, m), 0.71 (2H, m). MS/ESI 453.4 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-시클로프로필피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 28). CH2Cl2(1.7mL) 중 28.6(77 mg, 0.170 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 0.638 mL, 2.55 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 여과하여 실시예 28의 염산염을 무색 고체로 얻었다(60 mg, 89%). UPLC 체류 시간 0.72분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.42 (3H, s br), 8.12 (2H, d), 8.04 (1H, d), 7.57 (1H, dd), 7.28 (2H, d), 7.02 (1H, d), 5.56 (1H, s, br), 5.08-4.94 (2H, m), 3.81 (1H, m), 3.72 (1H, dd), 3.65 (1H, dd), 1.95 (1H, m), 0.96 (2H, m), 0.71 (2H, m). MS/ESI 353.3 [M + H]+.
실시예 29 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(29.3). DMF(40 mL) 중 29.1(23.6 g, 158 mmol), 29.2(17.9 g, 150 mmol) 및 K2CO3(24.9 g, 180 mmol)의 현탁액을 100℃까지 3시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 헵탄-에틸 아세테이트(2:1, 500 mL)와 물(250 mL) 사이에 분배시켰다. 유기 층을 Na2CO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 미정제 생성물을 얻었고, 이를 헥산/에틸 아세테이트로부터 재결정화시켰다. 순수한 생성물 29.3을 무색 고체(20.5 g, 53%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.30 (1H, dd), 8.13 (1H, dd), 7.93 (2H, d), 7.43 (2H, d). MS/ESI 249.0 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(2H-테트라졸-5-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(29.4). 아르곤 하에서 건조 톨루엔(9 mL) 중 29.3(2.24 g, 9.00 mmol), Bu2SnO(0.224 g, 0.900 mmol) 및 TMSN3(2.39 mL, 18.0 mmol)의 용액을 각각 함유하는 9개의 바이알을 밀봉하고 90℃에서 18시간 동안 가열 블록에서 교반하였다. 불균일 혼합물을 농축하고, 합한 미정제 물질을 MeOH(100 mL)로 처리하고 감압 하에 한 번 더 농축하여 연한 갈색-주황색 고체를 얻었다. 고체 잔류물을 MeOH(100 mL)에 현탁시키고, 20분 동안 교반하고 여과하였다. 고체를 헵탄으로 세척하고 건조하여 화합물 29.4를 무색 분말(18.5 g, 77%)로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.89분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 16.8 (1H, s, br), 8.28 (1H, dd), 8.08-8.13 (3H, m), 7.43 (2H, d). MS/ESI 292.1 [M + H]+.
단계 c) (S)-메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(29.6). 0℃에서 PPh3(29.5 g, 112.5 mmol), DIAD(25.9 g, 112.5 mmol) 및 29.5(24.6 g, 112.5 mmol)를 THF(150 ml) 중 29.4(13.1 g, 45.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 실리카 크로마토그래피(석유 에테르 중 15% 에틸 아세테이트)에 의해 화합물 29.6을 무색 고체로 얻었다(13.7 g, 62%). UPLC 체류 시간 1.26분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.28 (1H, dd), 8.10 (3H, m), 7.49 (1H, d), 7.41 (2H, d), 5.13 (1H, dd), 5.01 (1H, dd), 4.72 (1H, m), 3.70 (3H, s), 1.31 (9H, s). MS/ESI 493.3 [M + H]+.
단계 d) (S)-tert-부틸 (1-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(29.7). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2 N 용액, 2.94 mL, 5.88 mmol)를 THF(15 mL) 중 29.6(724 mg, 1.47 mmol)의 용액에 적가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(1 N 수용액)로 중화시키고, CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 무색 오일로 화합물 29.7(555 mg, 72%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.13분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.28 (1H, dd), 8.10 (3H, m), 7.40 (2H, d), 6.88 (1H, d), 5.03 (1H, t, br), 4.91 (1H, dd), 4.63 (1H, dd), 4.01 (1H, m), 3.48 (2H, m), 1.25 (9H, s). MS/ESI 465.3 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 29). CH2Cl2(3 mL) 중 29.7(172 mg, 0.37 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 1.4 mL, 5.6 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여과하여 실시예 29의 염산염을 무색 고체로 얻었다(93 mg, 62%). UPLC 체류 시간 0.74분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.42 (3H, s, br), 8.29 (1H, dd), 8.15 (2H, d), 8.11 (1H, d), 7.42 (2H, d), 5.56 (1H, s, br), 5.08-4.94 (2H, m), 3.81 (1H, m), 3.77-3.60 (2H, m). MS/ESI 365.2 [M + H]+.
실시예 30 (R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
29.5를 R-거울상 이성질체 30.5로 대체하여 실시예 29의 합성에 사용된 유사한 절차에 의해 (R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 30)의 염산염을 제조하였다. UPLC 체류 시간 0.74분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.37 (3H, s, br), 8.29 (1H, dd), 8.15 (2H, m), 8.11 (1H, d), 7.42 (2H, m), 5.57 (1H, t), 5.08-4.94 (2H, m), 3.82 (1H, m), 3.77-3.62 (2H, m). MS/ESI 365.2 [M + H]+.
실시예 31 (R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)벤조니트릴(31.3). 화합물 31.1(19.7 g, 150 mmol)을 DMF(부피: 30 mL) 중 31.2(16.99 g, 143 mmol) 및 분말화된 K2CO3(23.66 g, 171 mmol)의 현탁액에 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물은 현탁액으로 남아 있었고 온도 변화는 관찰되지 않았다. 혼합물을 24시간 동안 140℃까지 가열하였다. RM을 약 80℃까지 냉각시켜, 매우 걸쭉한 황색 현탁액이 생성되었다. 에틸 아세테이트(100 mL) 및 물(100 mL)을 첨가하여 2개의 투명한 층을 생성하였다. 실온까지 냉각시키자 상부 유기 층에서 생성물의 결정화가 시작되었다. 무색의 미세한 침상을 여과하여 수집하고, MeOH(3 x 30 mL)로 세척하고, 공기 흐름 중에서 건조시켜 31.3(17.5 g, 52% 수율)을 얻었다. 여과액을 추가 물(200 ml) 및 에틸 아세테이트/헵탄(1:2)(300 ml)으로 희석하였다. 상을 분리하고 유기 층을 물(2 x 100 ml), NaHCO3(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 농축하여 무색 고체를 얻었고, 이를 MeOH(약 50 mL)에 현탁시켰다. 31.3의 두 번째 배치를 여과하여 수집하고 MeOH(2x30 mL)로 세척한 다음 공기 흐름 중에서 건조시켜 (11.4 g, 34% 수율)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.06분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.27 (1H, d), 8.04 (1H, dd), 7.91 (2H, m), 7.36 (2H, m), 7.24, (1H, d). MS/ESI 230.9 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(2H-테트라졸-5-일)페녹시)-5-클로로피리딘(31.4). 건조 톨루엔(9 mL) 중 31.3(1.442 g, 6.25 mmol), Bu2SnO(0.156 g, 0.625 mmol) 및 TMS-아지드(1.659 mL, 12.50 mmol)의 5개 용액을 아르곤 하에서 제조하였다. 바이알을 밀봉하고 혼합물을 가열 블록에서 100℃에서 65시간 동안 교반하였다. 혼합물을 합하고 MeOH(50 mL)로 처리하여 RM을 현탁액으로 전환시켰다. 모든 용매를 감압 하에 제거하였다. 고체 잔류물을 MeCN(70 mL)에 현탁시키고 여과하였다. 무색 분말을 MeCN(2x25 mL) 및 펜탄으로 세척하고 건조하여 31.4(7.66 g, 88% 수율)를 무색 분말로서 얻었다. UPLC 체류 시간 2.81분 (방법 B). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 16.7 (1H, s br), 8.27 (1H, d), 8.04 (1H, dd), 7.91 (2H, m), 7.36 (2H, m), 7.24, (1H, d). MS/ESI 274.0 [M + H]+.
단계 c) (R)-메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(31.6). THF(65 ml) 중 트리페닐포스핀(2.396 g, 9.13 mmol), DIAD(2.103 g, 9.13 mmol) 및 31.4(1.00 g, 3.65 mmol) 및 31.5(2.003 g, 9.13 mmol)의 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. Isolute를 첨가하고 혼합물을 진공에서 건조시켰다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 31.6(1.57 g, 89%)을 무색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.33분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.25 (1H, d), 8.09 (2H, d), 8.01 (1H, d), 7.49 (1H, d), 7.34 (2H, d), 7.20 (1H, d), 5.11 (1H, dd), 5.01 (1H, dd), 4.72 (1H, m), 3.71 (3H, s), 1.25-1.40 (9H, m). MS/ESI 475.3 [M + H]+.
단계 d) (R)-tert-부틸 (1-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(31.7). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2 N 용액, 2.106 mL, 4.21 mmol)를 THF(10 mL) 중 31.6(500 mg, 1.053 mmol)의 용액에 적가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(1 N 수용액)로 중화시키고, CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 무색 오일로 화합물 31.7(555 mg, 72%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.27 (1H, dd), 8.09 (2H, d), 8.03, (1H, d), 7.34 (2H, d), 7.20 (1H, d), 6.88 (1H, d), 5.03 (1H, t, br), 4.91 (1H, dd), 4.63 (2H, dd), 4.00 (1H, m), 3.40-3.51 (2H, m), 1.25 (9H, s). MS/ESI 447.2 [M + H]+.
단계 d) (R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 31). CH2Cl2(6 mL) 중 31.7(275 mg, 0.615 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 2.308 mL, 9.23 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 여과하여 실시예 31의 염산염의 첫 번째 배치를 무색 고체로 얻었다(40 mg, 18%). 여과액을 농축하고 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하였다. TFA 염은 유리 염기로 전환되었으며, 이를 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH)에서 추가 정제하여 실시예 31(37 mg, 15%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.70분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.26 (1H, d), 8.10 (2H, d), 8.02 (1H, dd), 7.34 (2H, d), 7.00, (1H, d), 4.85 (1H, t, br), 4.77 (1H, dd), 4.55 (1H, dd), 3.33-3.45 (2H, m), 3.25-3.30 (1H, m), 1.60 (2H, s br). MS/ESI 347.1 [M + H]+.
실시예 32 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) (2S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(32.2). 디옥산(20 mL) 및 물(6.3 mL)의 혼합물 중 실시예 29(2000 mg, 5.48 mmol), 32.1(2050 mg, 10.97 mmol), K3PO4(2328 mg, 10.97 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)(357 mg, 0.548 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 120℃에서 1.5분 동안 교반하였다. 디옥산(5 mL) 중 추가의 32.1 및 PdCl2(dtbpf) 용액을 첨가하고 120℃에서 1시간 동안 계속 가열하였다. 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH) 상에서 정제하여 32.2(1127 mg, 42%)를 얻었다. 물질을 THF(70 mL)에 용해시키고, SiliaMetS DMT를 첨가하고, 이 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 스캐빈저를 여과 제거하고, 잔류물을 THF로 세척하고 농축하여 고체를 얻었고, 이를 다음 단계에 사용하였다. UPLC 체류 시간 0.78분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.12-8.17 (3H, m), 8.06 (1H, d), 7.62 (1H, d), 7.45 (2H, d), 6.61 (1H, d), 5.31 (1H, dd), 4.83-4.91 (1H, m), 4.77 (1H, dd), 4.56 (1H, dd), 3.95 (1H, d br), 3.53-3.62 (1H, m), 3.25-3.45 (3H, m), 2.33-2.44 (1H, m), 1.92-2.01 (1H, m), 1.85 (1H, d br), 1.49-1.72 (m, 5H). MS/ESI 481.2 [M + H]+
단계 b) (S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 32). THF(15 mL) 중 32.2(1125 mg, 2.341 mmol)의 용액에 2 N HCl(2.0 mL)을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH)에서 정제하여 실시예 32(421 mg, 41%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 0.63분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.54 (3H, s br), 8.48 (1H, d), 8.28, (1H, dd), 8.15 (2H, d), 7.83 (1H, d), 7.41 (2H, d), 6.85 (1H, d), 5.00-5.10 (2H, m), 3.75-3-85 (2H, m), 3.67-3.76 (2H, m), OH 및 피라졸 NH는 관찰되지 않음. MS/ESI 397.2 [M + H]+
실시예 33 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 33). CH2Cl2(2.8 mL) 중 28.4(139 mg, 0.283 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 1.061 mL, 4.24 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 여과하여 실시예 33의 염산염을 무색 고체로 얻었다(100 mg, 83%). UPLC 체류 시간 0.73분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.41 (2H, s br), 8.33 (1H, d), 8.10-8.17 (3H, m), 7.37 (2H, d), 7.17 (1H, d), 4.95-5.10 (2H, m), 3.82 (1H, m), 3.72 (1H, dd), 3.65 (1H, dd). MS/ESI 391.1 [M + H]+.
실시예 34 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
31.5를 S-거울상 이성질체 34.5로 대체하여 실시예 31의 합성에 사용된 유사한 절차에 의해 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 34)을 염산염으로 제조하였다. UPLC 체류 시간 0.68분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.43 (3H, s br), 8.27 (1H, d), 8.14 (2H, m), 8.03 (1H, dd), 7.36 (2H, m), 7.21 (1H, d 5.57 (1H, t), 4.95-5.10 (2H, m), 3.82 (1H, m), 3.73 (1H, dd), 3.65 (1H, dd), OH는 관찰되지 않음. MS/ESI 347.2 [M + H]+.
실시예 35 S)-2-아미노-3-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올
단계 a) 6-(4-클로로페녹시)니코티노니트릴(35.3). DMF(6 mL) 중 35.1(1.948 g, 15.16 mmol), 35.2 6-클로로니코티노니트릴(2 g, 14.43 mmol) 및 K2CO3(2.394 g, 17.32 mmol)의 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물(100 ml)에 붓고 에틸 아세테이트/헵탄(1:1)(150 ml)으로 희석하여 반응물을 ??칭하였다. 상을 분리하고 유기상을 물(100 ml) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 진공에서 약 40 mL까지 농축시켰고, 결정화가 시작되었다. 고체를 여과하여 수집하고, 헵탄(3x10 mL)으로 세척하고 공기 흐름 중에 건조시켰다. 화합물 35.3(2.15 g, 9.14 mmol, 63.3% 수율)을 무색 분말로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.10분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.65 (1H, d), 8.34 (1H, dd), 7.49-7.53 (2H, m), 7.26-7.29 (3H, m). MS/ESI 231.0 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-클로로페녹시)-5-(2H-테트라졸-5-일)피리딘(35.4). 톨루엔(8 mL) 중 35.3(1.50 g, 6.50 mmol) 및 Bu2SnO(0.162 g, 0.650 mmol)의 혼합물에 Ar 하에서 TMSN3(1.726 mL, 13.01 mmol)을 첨가하였다. RM을 16시간 동안 100℃까지 가열하였다. 실온까지 다시 냉각시킨 후, 생성된 현탁액을 MeOH(50 mL)에 용해시키고 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(30 mL)에 현탁시키고, 여과하고, 여러 부분의 MeCN(3x10 mL) 및 헵탄(3x20 mL)으로 세척하였다. 생성물을 공기 흐름 중에 건조시켜 35.4(990 mg, 3.29 mmol, 50.5% 수율)를 무색 고체로 수득하였다. UPLC 체류 시간 0.86분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 17.1 (1H, s br), 8.77 (1H, d), 8.43 (1H, dd), 7.49-7.53 (2H, m), 7.29 (1H, d), 7.24-7.28 (2H, m). MS/ESI 274.2 [M + H]+.
단계 c) (S)-메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(35.6). THF(25 ml) 중 트리페닐포스핀(575 mg, 2.192 mmol), DIAD(505 mg, 2.192 mmol) 및 35.4(400 mg, 1.462 mmol) 및 35.5(481 mg, 2.192 mmol)의 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. Isolute를 첨가하고 혼합물을 진공에서 건조시켰다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 35.6(1.57 g, 89%)을 무색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 1.25분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.79 (1H, d), 8.43 (1H, dd), 7.47-7.54 (3H, m), 7.44-7.30 (3H, m), 5.12 (1H, dd), 5.02 (1H, dd), 4.72 (1H, m), 3.71 (3H, s), 1.30 (9H, s). MS/ESI 475.1 [M + H]+.
단계 d) (S)-tert-부틸 (1-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(35.7). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2 N 용액, 1.722 mL, 3.44 mmol)를 THF(5 mL) 중 35.6(409 mg, 0.861 mmol)의 용액에 적가하고 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(1 N 수용액)로 중화시키고, CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 무색 고체로 화합물 35.7(197 mg, 51%)를 얻었다. UPLC 체류 시간 1.13분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.79 (1H, d), 8.43 (1H, dd), 7.48-7.54 (2H, m), 7.25-7.29 (3H, m), 6.88 (1H, d), 5.03 (1H, t), 4.93 (1H, dd), 4.53 (1H, dd), 4.00 (1H, m), 3.43-3.54 (2H, m), 1.25 (9H, s). MS/ESI 447.1 [M + H]+.
단계 d) (S)-2-아미노-3-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올(실시예 35). CH2Cl2(4 mL) 중 35.7(182 mg, 0.407 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 1.527 mL, 6.11 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 여과하여 실시예 35의 염산염을 무색 고체로 얻었다(151 mg, 97%). UPLC 체류 시간 0.72분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.83 (1H, d), 8.48 (1H, dd), 8.42 (3H, s br), 7.50-7.54 (2H, m), 7.25-7.30 (3H, m), 4.97-5.11 (2H, m), 3.80 (1H, m), 3.72 (1H, dd), 3.65 (1H, dd), OH 는 관찰되지않음. MS/ESI 347.1 [M + H]+.
실시예 36 (S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)-2-아미노프로판-1-올
단계 a) 2-(4-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(36.3). DMF(50 mL) 중 화합물 36.1(5.00 g, 33.4 mmol), 36.2(6.36 g, 36.8 mmol), K2CO3(6.93 g, 50.2 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석한 다음 염수(3 x 100 mL) 및 H2O(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 건조시키고 농축하여 잔류물을 얻었다. 잔류물을 실리카(구배 석유 에테르/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 화합물 36.3(8.20 g, 80%)을 백색 고체로서 얻었다. 1H NMR (CDCl3): δ = 7.81 (1H, d), 7.45 (3H, m), 6.92-7.06 (2H, m). MS/ESI 301.9 [M + H]+.
단계 b) 2-(4-(1H-피라졸-3-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘(36.5). H2O(20 mL) 및 디옥산(100 mL) 중 36.3(7.0 g, 23.1 mmol), 화합물 36.4(13.5 g, 69.4 mmol), Pd(PPh3)4(1.34 g, 1.16 mmol), Na2CO3(3.84 g, 36.2 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 75℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O(100 mL)로 희석한 다음 에틸 아세테이트(3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축하여 잔류물을 얻었고, 이를 실리카(구배 석유 에테르/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 36.5(3.0 g, 10.2 mmol, 44%)를 백색 고체로 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ = 12.90 (1H, s br), 8.24 (br d, J = 9.8 Hz, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.69-7.95 (m, 3H), 7.17-7.34 (m, 2H), 6.75-6.85 (m, 1H), 호변이성질체의 혼합물. MS/ESI 289.9 [M + H]+.
단계 c) tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(36.6). DMF(40 mL) 중 36.5(2.5 g, 8.53 mmol), 중간체 A(3.76 g, 10.2 mmol), Cs2CO3(8.34 g, 25.6 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 3회 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL) 및 물(50 mL)에 부었다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 염수로 4회 세척하고 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 잔류물을 얻었고, 이를 실리카(구배 석유 에테르/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 36.6(2.3 g, 38%)을 무색 검으로 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.23 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 7.82 (2H, d), 7.68 (1H, d), 7.16-7.28 (2H, m), 6.84 (1H, d), 6.68 (1H, d), 4.26 (1H, dd), 4.01-4.13 (m, 1H), 3.88-3.95 (1H, m), 3.50-3.63 (2H, m), 1.20-1.35 (m, 9H), 0.88 (9H, s), 0.04 (s, 6H). MS/ESI 577.2 [M + H]+.
단계 d) tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(36.8). NMP(10 mL) 및 H2O(1 mL) 중 36.6(1.01 g, 1.65 mmol), 36.7(682 mg, 2.47 mmol), PdCl2(29.2 mg, 0.165 mmol), P(c-C6H11)3(138 mg, 0.494 mmol) 및 CsF(500 mg, 3.29 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 N2로 퍼징한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하고 H2O(3 x 30 mL) 및 염수(30 mL)로 세척하였다. 유기물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 36.8(1.1 g, 미정제)을 담황색 검으로서 얻었고, 이를 추가 정제 없이 단계 e)에 사용하였다. MS/ESI 579.1 [M + H]+.
단계 e) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 36). HCl/에틸 아세테이트(20 mL, 4 M) 중 36.8(단계 d로부터의 미정제물 1.1 g)의 혼합물을 N2 분위기 하에 20℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 분취용 HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 250 x 50 mm, 10 μm; 이동상: [물(0.05% HCl)-ACN]; B%: 5ACN%-35ACN%, 35분, 80%분)로 정제하여 실시예 36의 염산염(317 mg, 44%)을 연황색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.52분 (방법 C). 1H NMR (CD3OD): δ = 8.75 (1H, s br), 8.47-8.54 (1H, m), 7.03-7.08 (1H, m), 7.99 (2H, d), 7.78 (1H, m), 7.32 (2H, d), 7.23 (1H, d), 6.98-7.02 (1H, m), 6.78 (1H, d), 4.42-4.60 (2H, m), 3.63-3.70 (2H, m), 3.55-3.61 (1H, m). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.60 (1H, d), 8.28 (3H, s br), 8.25 (1H, dd), 7.84-7.89 (3H, m), 7.77 (1H, d), 7.16-7.21 (2H, m), 7.10 (1H, d), 6.76 (1H, m), 4.35-4.46 (2H, m), 3.56-3.68 (2H, m), 3.45-3.52 (1H, m), 피라졸-NH 및 OH는 관찰되지 않음. MS/ESI 377.3 [M + H]+.
실시예 37 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올
단계 a) tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(37.2). NMP(10 mL) 및 H2O(1 mL) 중 26.6(1.01 g, 1.65 mmol), 37.1(682 mg, 2.47 mmol), PdCl2(29.2 mg, 0.165 mmol), P(c-C6H11)3(138 mg, 0.494 mmol) 및 CsF(500 mg, 3.29 mmol)의 혼합물을 탈기시키고 질소 하에 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하고 염수(3 x 30 mL) 및 H2O(30 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 37.2(1.1 g, 미정제)를 담황색 검으로서 얻었고, 이를 추가 정제 없이 단계 b)에 사용하였다. MS/ESI 579.1 [M + H]+.
단계 b) (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(실시예 37). HCl/에틸 아세테이트(20 mL, 4 M) 중 화합물 37.2(1.1 g)의 혼합물을 탈기시키고, 20℃에서 0.5시간 동안 질소 하에 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 분취용 HPLC(컬럼: Phenomenex luna C18 250 x 50 mm x 10 μm; 이동상: [물(0.05% HCl)-ACN]; B%: 5ACN%-35ACN%, 35분, 80%분)로 정제하여 실시예 37의 염산염(2단계에 걸쳐 317 mg, 44%)을 연황색 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.60분 (방법 C). 1H NMR (CD3OD): δ = 8.38 (1H, d), 8.13 (1H, dd), 7.90-7.95 (2H, m), 7.84-7.87 (1H, m), 7.74 (1H, d), 7.22-7.26 (2H, m), 6.83-6.86 (1H, m), 6.75 (1H, d), 4.43-4.56 (2H, m), 3.78-3.85 (2H, m), 3.65-3.71 (1H, m). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.42 (1H, d), 8.16-8.28 (4H, m), 7.84-7.89 (3H, m), 7.80 (1H, d), 7.22-7.26 (2H, m), 6.82 (1H, d), 6.77 (1H, d), 4.35-4.48 (2H, m), 3.56-3.68 (2H, m), 3.45-3.52 (1H, m), 피라졸-NH 및 OH는 관찰되지 않음. MS/ESI 395.4 [M + H]+.
실시예 38 (2S)-2-아미노-3-[5-(4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]페닐)-2H-1,2,3,4-테트라졸-2-일]프로판-1-올
단계 a) 4-[(5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시]벤조니트릴(38.3). DMF(80 mL) 중 38.1(8 g, 41.24 mmol), 4-하이드록시벤조니트릴(5.43 g, 45.58 mmol) 및 K2CO3(6.3 g, 45.25 mmol)의 혼합물을 아르곤 하에 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, H2O(300 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(100 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(에틸 아세테이트/석유 에테르; 12:88) 상에서 정제하여 38.3(7.00 g, 58%)을 무색 고체로 얻었다.
단계 b) 4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]벤조니트릴(38.5). 질소 하에 CH3CN(150 mL) 중 38.3(5.00 g, 17.06 mmol), 38.4(18.33 g, 51.19 mmol) 및 Pd(PPh3)4(2.00 g, 1.73 mmol)의 혼합물을 환류 하에 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고 진공 농축시켰다. 잔류물을 실리카(에틸 아세테이트/석유 에테르; 25:75) 상에서 정제하여 38.5(4.00 g, 83%)를 무색 고체로 얻었다. MS/ESI 282.0 [M + H]+.
단계 c) 3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)-2-[4-(2H-1,2,3,4-테트라졸-5-일)페녹시]피리딘(38.6). 질소 하에 톨루엔(40 mL) 중 38.5(4.00 g, 14.22 mmol), Bu2SnO(350 mg, 1.41) 및 TMSN3(5.00 g, 43.40 mmol)의 혼합물을 환류 하에 3시간 동안 가열하였다. 혼합물을 진공 하에 농축하고 잔류물을 실리카(에틸 아세테이트/석유 에테르; 70:30) 상에서 정제하여 38.6(3.5 g, 76%)을 무색 고체로 얻었다.
단계 d) 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(옥사졸-2-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로파노에이트(38.8). THF(100 mL) 중 38.6(3.50 g, 10.7 9mmol)의 용액에 질소 하에 0℃에서 DIAD(6.20 g, 26.96 mmol), PPh3(7.10 g, 27.07 mmol, 2.50) 및 38.7(6.00 g, 27.37mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 농축하고, 잔류물을 실리카(에틸 아세테이트/석유 에테르; 45:55) 상에서 정제하여 38.8(3.20 g, 56%)을 무색 고체로 얻었다. MS/ESI 526.1 [M + H]+.
단계 e). tert-부틸 N-[(2S)-1-[5-(4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]페닐)-2H-1,2,3,4-테트라졸-2-일]-3-하이드록시프로판-2-일]카르바메이트(38.9). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2몰 용액 7.6 mL)를 THF(40 mL) 중 38.8의 용액에 적가하고 혼합물을 0~10℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 AcOH(920 mg, 15.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 H2O(150 mL)로 희석하고 에틸 아세테이트(3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 염수(50 mL)로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카(에틸 아세테이트/석유 에테르: 60/40) 상에서 정제하여 38.9(800 mg, 42%)를 무색 고체로 얻었다. MS/ESI 498.1 [M + H]+.
단계 f) (2S)-2-아미노-3-[5-(4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]페닐)-2H-1,2,3,4-테트라졸-2-일]프로판-1-올(실시예 38). CH2Cl2(50 mL) 및 MeOH(10 mL) 중 38.9(800 mg, 1.61 mmol)의 용액에 질소 하에 0℃에서 HCl(디옥산 중 4 M 8 mL)을 첨가하고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 에테르(50 mL)로 희석하고 고체를 여과하여 수집하였다. 미정제 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 실시예 38(280 mg, 44)을 무색 고체로 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.57 (1H, d), 8.38 (1H, dd), 8.30 (1H, s), 8.14 (2H, d), 7.41-7.50 (3H, m), 4.85 (1H, s br), 4.78 (1H, dd), 4.56 (1H, dd), 3.35-3.50 (3H, m), 1.75 (2H, s br). MS/ESI 398.1 [M + H]+.
실시예 39 2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올
단계 a) 5-클로로-3-플루오로-2-(4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페녹시)피리딘(39.3). DMF(45 mL) 중 39.1(6.73 g, 45.0 mmol), 39.2(9.00 g, 40.9 mmol) 및 K2CO3(11.30 g, 82.0 mmol)의 용액을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 잔존 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 실리카 상에서 정제하여 39.3(11.23 g, 76%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.47분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.24 (1H, dd), 8.08 (1H, s), 7.73 (2H, d), 7.19 (2H, d), 1.31 (12H, s). MS/ESI 350.2 [M + H]+.
단계 b) (4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)보론산(39.4). THF(90 mL) 및 물(90 mL) 중 화합물 39.3(11.20 g, 32.0 mmol)의 용액에 NaIO4(20.56 g, 96 mmol)를 첨가하고 혼합물을 25℃에서 72시간 동안 교반하였다. HCl(1 N, 22.43 mL)을 첨가하고 1시간 동안 계속 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 물로 세척하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 시클로헥산으로 트리튜레이션하고, 생성된 고체를 여과 제거하고 시클로헥산으로 세척하고 진공에서 건조시켜 39.4(7.02 g, 78%)를 고체로 얻었다. UPLC 체류 시간 0.91분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.22 (1H, dd), 8.04-8.09 (3H, m), 7.84 (2H, d), 7.14 (2H, d). MS/ESI 268.2 [M + H]+.
단계 c) (S)-메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(2H-테트라졸-5-일)프로파노에이트(39.6). DMF(9 mL) 중 39.5(900 mg, 3.94 mmol)의 용액에 NaN3(769 mg, 11.83 mmol) 및 NEt3 x HCl(1628 mg, 11.83 mmol)을 첨가하고 혼합물을 마이크로파 오븐에서 130℃에서 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 여과하고 잔류물을 에틸 아세테이트로 세척하였다. 유기 층을 수성 HCl(pH 1)로 세척하고 Na2SO4로 건조시킨 후 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 39.6(480 mg, 44%)을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6): δ = 16.13 (1H, s br), 7.39 (1H, d br), 4.46-4.54 (1H, m), 3.62 (3H, s), 3.39-3.18 (2H, m), 1.35 (9H, s). MS/ESI 272.1 [M + H]+.
단계 d) 메틸 2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로파노에이트(39.7). CH2Cl2(8 mL) 중 35.6(400 mg, 1.475 mmol)의 용액에 아르곤 하에 25℃에서 39.4(631 mg, 2.359 mmol), K2CO3(224 mg, 1.622 mmol) 및 [Cu(OH)(TMEDA)]2Cl2(82 mg, 0.177 mmol)를 첨가하였다. 청색 혼합물을 산소 분위기(풍선) 하에 25℃에서 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 하이플로(hyflo)를 통해 여과하고, 잔류물을 CH2Cl2로 세척하고 합한 용액을 농축하였다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 39.7(375 mg, 48%)을 얻었다. 물질을 SFC로 추가로 정제하였다. UPLC 체류 시간 1.28분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.29 (1H, dd), 8.08-8.14 (3H, m), 7.52 (2H, d), 7.27-7-49 (1H, m), 4.58 (1H, m), 3.67 (3H, s), 3.33-3.55 (2H, m), 1.34 (9H, s). MS/ESI 493.3 [M + H]+.
단계 e) tert-부틸 (1-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트(39.8). 0℃에서 LiBH4(THF 중 2 N 용액, 0.651 mL, 1.302 mmol)를 THF(2 mL) 중 39.7(107 mg, 0.217 mmol)의 용액에 적가하고 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 HCl(1 N 수용액)로 중화시키고, CH2Cl2를 첨가하고, 유기 층을 분리하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하였다. 실리카 크로마토그래피(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트)로 화합물 39.8(63 mg, 63%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 1.13분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.29 (1H, dd), 8.00-8.21 (3H, m), 7.37-7.61 (2H, m), 6.71 (1H, d br), 4.84 (1H, t br), 3.79-3.96 (1H, m), 3.33-3.51 (2H, m), 3.28 (1H, dd), 2.95 (1H, dd), 1.12 - 1.31 (m, 9 H). MS/ESI 465.3 [M + H]+.
단계 f) 2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올(실시예 39). CH2Cl2(1.5 mL) 중 39.8(63 mg, 0.137 mmol)의 용액에 HCl(디옥산 중 4 N 용액, 0.515 mL, 2.059 mmol)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 현탁액은 아르곤 흐름 중에서 부분적으로 농축되었다. 여과하여 실시예 39의 염산염을 무색 고체로 얻었다(50 mg, 92%). UPLC 체류 시간 0.76분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.30 (1H, dd), 8.12-8.23 (6H, m), 7.54 (2H, d), 5.47 (1H, t br), 3.65-3.78 (1H, m), 3.50-3.64 (2H, m), 3.25-3.33 (2H, m). MS/ESI 365.1 [M + H]+.
실시예 39는 실시예 39R(체류 시간: 9.98분)과 실시예 39S(체류 시간: 11.48분)의 라세미 혼합물인 것으로 확인되었다(Chiralpak IA KL034, 5 μm, 250 x 4.6 mm; 헵탄/에틸 아세테이트/MeOH/디에틸 아민 40:30:30:0.05, 1 ml/분, 254 nm). (S) 2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올(실시예 39S)은 키랄 SFC(AD, 5 μm, 250 x 50 mm; 이동상: EtOH 중 0.1% NH3 x H2O, 40%)에 의해 라세미체로부터 얻었다.
실시예 40 (2S)-2-아미노-3-(2-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올(염산염)
단계 a) (2S)-2-아미노-3-(2-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올(실시예 40). 디옥산(9.5 mL) 및 물(3.166 mL)의 혼합물 중 실시예 39S(950 mg, 2.60 mmol), 40.1(1449 mg, 5.21 mmol), K3PO4(1106 mg, 5.21 mmol) 및 PdCl2(dtbpf)136 mg, 0.208 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에서 90℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 추가로 40.1 및 PdCl2(dtbpf)를 첨가하고 1시간 동안 계속 가열하였다. 혼합물을 물로 희석하고 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔류물을 실리카(구배: 시클로헥산/에틸 아세테이트) 상에서 정제하여 40.2(518 mg, 49%)을 얻었다. 물질을 DMF(20 mL)에 용해시키고, SiliaMetS DMT를 첨가하고, 이 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 스캐빈저를 여과 제거하고, 잔류물을 CH2Cl2/MeOH로 세척하고 농축하여 고체를 얻었고, 이를 다음 단계에 사용하였다. UPLC 체류 시간 0.78분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.10-8.20 (3H, m), 8.07 (1H, dd), 7.62 (1H, d), 7.56 (2H, d), 6.61 (1H, d), 5.31 (1H, dd), 4.73 (1H, s br), 3.95 (1H, d br), 3.50-3.66 (1H, m), 3.37 (2H, m), 3.08-3.35 (2H) 2.83 (1H, dd), 2.25-2.45 (1H, m), 1.95-2.05 (1H, m), 1.83-1.93 (1H, m), 1.50-1.72 (5H, m). MS/ESI 481.3 [M + H]+.
단계 b) (S)-2-아미노-3-(2-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올(실시예 40). THF(7 mL) 중 40.2(510 mg, 1.061 mmol)의 용액에 HCl(2 mL 2 N)을 첨가하고 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고 잔류물을 실리카(구배: CH2Cl2/MeOH)에서 정제하여 실시예 40의 염산염(289 mg, 61%)을 얻었다. UPLC 체류 시간 0.65분 (방법 A). 1H NMR (DMSO-d6): δ = 8.47 (1H, d), 8.23-8.33 (4H, m), 8.07-8.23 (2H, m), 7.82 (1H, d), 7.47-7.59 (2H, m), 6.85 (1H, d), 5.82 (1H, m), 3.59-3.76 (3H, m), 3.26-3.43 (2H, m). MS/ESI 397.2 [M + H]+.
실시예 41: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 / (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 유리 염기 유형-1 형태 C
단계-1: 2-(4-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘의 합성:
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합성 절차:
깨끗한 둥근 바닥(RB) 플라스크에 DMF, 탄산칼륨(69.32 g, 0.5016몰, 1.50당량), 2,3-디플루오로-5-클로로피리딘(50 g, 0.3344몰, 1.0당량), 4-브로모페놀(57.85 g, 0.3344몰, 1.0당량)을 채우고 혼합물을 40±5℃ 온도에서 교반하였다. 반응물을 냉각시키고 정제수를 천천히 채웠다. 생성물을 여과하고 정제수로 세척한 후 물질을 건조시켜 2-(4-브로모페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 7.20 (dd, J=5.2, 3.2 Hz, 2 H), 7.62 (dd, J=5.6, 3.2 Hz, 2 H), 8.06 (d, J=2.4 Hz 1 H), 8.25 (dd, J=10, 2.4 Hz 1 H), HPLC 순도: > 98% 영역, RT: 21.73분
단계-2 및 단계-3: 2-(4-(1H-피라졸-3-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘의 합성
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A1의 실험 절차:
둥근 바닥 플라스크에 2-메틸 테트라하이드로푸란-com, 정제수, 1H-피라졸, 1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-(119.52 g, 0.4몰, 1.30당량), 제3인산칼륨(210.50 g, 1몰, 3당량), A1-2(100 g, 0.3몰, 1.0당량)을 채웠다. 반응물을 질소 하에 퍼징하였다. 퍼징 하에 트리페닐포스핀 팔라듐(0)(19.09 g, 0.016몰, 5몰%)을 채웠다. 질량 온도를 70±5℃까지 3시간 동안 가열하였다. 질량 온도를 냉각시키고 d정제수를 채웠다. 에틸아세테이트에서 생성물을 추출하였다. 다시 에틸아세테이트로 수성 층을 추출하였다. 합한 유기 층을 정제수로 세척한 후 염수 용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨-Com으로 건조시키고 약 ~5.0 w/v가 될 때까지 진공 하에서 45℃ 미만에서 유기 층을 농축시켰다. 에틸 아세테이트 반응물에 염산 4 M을 채우고， 25±5℃에서 3시간 동안 교반한다. 생성물을 여과하고 에틸아세테이트로 세척한다. RB 플라스크 에틸 아세테이트에 정제수와 습윤 물질을 채웠다. 포화 중탄산나트륨 용액을 사용하여 pH를 7~8로 조정하였다. 유기 층을 분리하고, 유기 층을 염수 용액으로 세척한 후 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기 층을 농축하고 n-헵탄으로 결정화하여 2-(4-(1H-피라졸-3-일)페녹시)-5-클로로-3-플루오로피리딘을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 6.72 (dd, J=5.2, 3.2 Hz, 1 H), 7.22 (m, 2 H), 7.79 (m, 1 H), 7.86 (m, 2 H), 8.07 (d, J=2 Hz, 1H), 8.23 (dd, J=4.8 Hz, 2.4 Hz, 1H), 13.08 (bs, 1H), HPLC 순도: > 97 & 영역, HPLC RT: 17.27분, MS/ESI+ 290.20. HPLC RT: 17.27분
단계-4: tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(A3)의 합성
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실험 절차:
깨끗한 RB 플라스크에 DMF, A1(50 g, 0.1725몰, 1.0당량) 및 탄산세슘(112.4 g, 0.345몰, 2.0당량)을 채웠다. 별도의 용기에서 DMF 중 A2(69.80 g, 0.1898몰 및 1.10당량)를 준비하였다. A1을 함유한 반응물에 A2 용액을 천천히 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 유지하였다. 반응물을 냉각시키고 정제수를 천천히 첨가하였다. 유기 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트로 재추출하였다. 합한 유기 층에 정제수를 채우고 1% 시트르산 용액을 이용하여 pH를 조정한 후, 유기 층을 포화 중탄산나트륨 용액, 정제수 및 염수 용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고 유기 층을 진공 하에서 50℃ 아래에서 농축한다. n-헵탄 중 0~40% 에틸 아세테이트를 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 미정제 생성물을 정제한다. 순수한 분획을 수집하고 진공 하에서 농축하여 tert-부틸 (S)-(1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일))옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트를 점성 시럽으로 얻는다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 0.046 (S, 6 H), 0.0850 (s, 9 H), 1.1372 (s, 9 H), 3.54 (m, 2 H), 3.943-3.909 (m, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 6.68 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J=8 Hz, 2H), 7.68 (d, J=2 Hz, 1H), 7.82 (d, J=8.8, 2H), 8.06 (d, J=2 Hz, 1H), 8.22 (dd, J=10 Hz, 2.4 Hz, 1H), 추가 시약과 용매 신호가 관찰됨, HPLC 순도: > 95% 영역
크로마토그래피 조건:
단계-5: tert-부틸 ((2S)-1-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-2-일)카르바메이트(A5)의 합성
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실험 절차:
RB 플라스크에 THF, A3(90 g, 0.1559 몰, 1.0당량), K3PO4(99.26 g, 0.4676몰, 3.0당량), XPHOS(4.45 g, 0.009몰, 0.06당량) 및 정제수를 채웠다. 반응물을 질소로 퍼징하였다. 병행하여 THF 중 A4 용액을 제조하였다. Pd(OAc)2(2.09 g, 0.009몰, 0.06당량)를 채우고 반응물을 50+5℃로 가열하였다. 50+5℃에서 A4 용액을 천천히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후, 반응물을 50+5℃에서 2~3시간 동안 유지하였다. 반응물을 냉각시키고 정제수)를 천천히 첨가한 후 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 셀라이트 베드를 통해 반응물을 여과하고 셀라이트 베드를 에틸 아세테이트로 세척한다. 층을 분리하고 수성 층을 에틸 아세테이트로 다시 추출하였다. 합한 유기 층을 10% 염수 용액으로 세척하고 황산나트륨으로 건조시킨 후 유기 층을 진공 하에 농축한다. 실리카 겔, EtOAc(10%) 및 n-헵탄(90%)을 용리액으로 사용하여 컬럼 크로마토그래피로 미정제 생성물을 정제하였다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 0.04 (s, 6 H), 0.09 (s, 9 H), 1.134 (s, 9 H), 1.53 (m, 4 H), 1.87 (m, 4H), 2.51 (m, 1H), 3.56 (m, 4H), 3.94 (m, 3H), 4.07 (m, 2H), 4.25 (m, 1H), 5.29 (m, 1H), 6.59 (d, J= 2 Hz, 1H), 6.70 (d, J=2 Hz, 1H), 6.83 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.27 (m, 2H), 7.61 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.85 (m, 2H), 8.02 (dd, J=11.2 Hz, 2.0 Hz, 1H), 8.10 (d, J=2 Hz, 1H), HPLC 순도: > 97% 영역
비고: 추가 시약 및 용매 신호가 있는 NMR 신호가 관찰되었다.
단계-6 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(A6)의 합성
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실험 절차:
깨끗한 RB 플라스크에 A5와 무수 알코올을 채웠다. 0~5℃까지 냉각시키고 EtOAc 중 4 M HCl을 천천히 첨가한다. 12시간 동안 반응물 온도를 25 ± 5℃까지 증가시켰다. 50℃ 아래의 진공 하에서 반응물을 최대 1~2부피까지 농축하였다. 무수 알코올을 채우고 반응물 온도를 50+5℃까지 증가시키고 1시간 동안 유지하였다. 반응물을 냉각시키고 반응물을 여과하였다. 무수 알코올로 세척하고, 물질을 포화 NaHCO3로 염기화하고, 생성물을 여과하고 세척하였다. 생성물을 60+5℃의 정제수에서 1시간 동안 교반한다. 물질을 냉각시키고 생성물을 여과한다. 물질을 VTD에서 진공 하에 55+5℃에서 8시간 동안 건조시켰다. 물질을 THF에 용해시키고 실리아 결합 티올로 처리하여 잔류 금속을 제거하였다. THF를 농축하고 생성물을 메탄올에 용해시키고 여과하여 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올(A6)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 1.55 (bs, 2 H), 3.10 (m, 1 H), 3.28 (m, 2 H), 3.96 (m, 1 H), 4.18 (m, 1H), 4.71 (t, 1H), 6.69 (d, J=2 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 7.22 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J=2 Hz, 2H), 7.83 (d, J=8.4 Hz, 2H), 8.22 (dd, J=11.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 8.42 (d, J=1.6 Hz, 1H) HPLC 순도: > 99% 영역, HPLC RT: 10.03분, MS/ESI+ 395.10
분리된 물질을 물리화학적 특성을 결정하기 위해 다양한 방법으로 특성화하였다. 분리된 물질은 침상 및 판 유사 입자로 구성된 고결정성 분말이었다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 분석하였다(각각 도 1a, 1b 및 1c). 물질은 순도가 높았고, 약 45℃에서 19 J/g의 엔탈피로 탈수 흡열을 보인 후 약 110℃에서 작은 용융 흡열과 즉각적인 발열 재결정화 사건을 나타냈다. 마지막으로 121 J/g의 엔탈피와 함께 약 146℃에서 용융점을 볼 수 있다. 건조 시 손실은 TGA에 의해 1.4%로 측정되었으며 이는 Karl Fischer 적정에 의해 입증되었다.
실시예 42: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 / (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 유리 염기 유형-2 형태 D
바이알에 실시예 41 300 mg을 에탄올 5 mL에 첨가하였다. 샘플을 500 rpm으로 50℃에서 교반하였다. 시간이 지남에 따라 형성된 덩어리를 파괴하기 위해 현탁액을 주기적으로 와류시켰다. 4시간 후, 현탁액을 실온에서 밤새 500 rpm으로 교반하였다. 원심분리 여과로 고체를 회수하고 50℃에서 진공 건조시켰다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 분석하였다(각각 도 2a, 2b 및 2c).
결정질 유리 염기 유형 2(형태 D)는 약 146℃에서 용융되었고, 용융된 샘플을 재가열한 후 52℃에서 유리 전이를 나타냈다.
결정질 형태 유리 염기 유형 2(형태 D)는 TGA에 의해 약 0.15%의 건조 시 손실을 제공하였다.
결정질 형태 유리 염기 유형 2(형태 D)는 DVS에 의해 흡습성이 있는 것으로 나타났으며, 70% RH 이상에서 3% 수분을 가역적으로 흡수하여 수화된 형태로 변환되었다.
실시예 43: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 / (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 염산염(형태 E)
바이알에 실시예 41 300 mg을 70 μL의 12 N 염산과 3 mL 에탄올의 혼합물에 첨가하였다. 샘플을 500 rpm으로 50℃에서 교반하였다. 추가로 2 mL의 에탄올을 첨가하여 현탁액을 희석시키고 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 그 후, 현탁액을 실온에서 밤새 300 rpm으로 교반하였다. 고체를 원심분리 여과로 분리하고 50℃에서 밤새 진공 건조시켰다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 분석하였다(각각 도 3a, 3b 및 3c).
염산염(형태 E)은 약 236℃에서 용융되었으며 상응하는 유리 전이 온도는 91℃였다.
염산염(형태 E)은 TGA에 의해 약 0.5%의 건조 시 손실을 나타냈다.
염산염(형태 E)은 95% RH에서 수증기의 0.6%만을 흡수하여 약간 흡습성이 있었다.
실시예 44: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 히푸레이트 염(형태 B)
실시예 41 300 mg, 히푸르산 150 mg 및 에탄올 3 mL를 바이알에 첨가하였다. 샘플을 500 rpm으로 50℃에서 교반하였다. 추가로 2 mL의 에탄올을 첨가하여 현탁액을 희석하였고, 혼합물을 간단히 초음파 처리하였다. 3시간 후, 현탁액을 실온에서 밤새 300 rpm으로 교반하였다. 특성화를 위해 원심분리 여과를 통해 고체를 분리하였다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 특성화하였다(각각 도 4a, 4b 및 4c). 히푸르산 염(형태 B)은 융점이 약 180℃이고 융합 엔탈피가 134 J/g인 고결정질 형태이다. 이는 170℃에서 TGA에 의해 약 0.3%의 중량 손실을 나타냈다. 변형 B는 오로지 약하게 흡습성이 있어 95% RH에서 약 0.3%의 수분을 흡수한다.
(S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올. 히푸레이트 염)(A7- 형태 B)에 대한 대안적인 합성
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실험 절차:
깨끗한 RB 플라스크에 메탄올과 A6(실시예 41)(80 g, 0.202몰, 1.0당량)을 채웠다. 반응물을 55+5℃까지 가열하여 투명한 용액을 얻었다. 미리 용해된 히푸르산을 메탄올(40 g, 0.2244몰, 1.1당량)에 천천히 첨가하였다. 55+5℃에서 0.08wt%의 A7 종자 물질을 첨가하고 6시간 동안 유지한다. 물질을 교반 가능한 부피까지 농축하고 여과한다. 생성물을 여과하고 생성물을 메탄올로 세척하여 (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올. 히푸레이트 염)(A7)을 얻었다.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 3.31 (m, 4 H), 3.84 (d, J=6 Hz, 2 H), 4.06 (m, 1 H), 4.25 (m, 1 H), 6.72 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.24 (m, 2H), 7.51 (m, 3H), 7.83 (m, 6H), 8.23 (dd, J=11.2 Hz, 1.6 Hz, 1H), 8.43 (d, J=2 Hz, 1H), 8.61 (t, 1H), HPLC 화학적 순도: > 99%, 키랄 순도: > 99% 영역.
실시예 45: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 / (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 히푸르산 염 형태 A
히푸레이트 염(형태 A)은 테트라하이드로푸란/물(95:5)에서 에틸 아세테이트로의 역의 반용매 침전법을 통해 얻었다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 특성화하였다(각각 도 5a, 5b 및 5c). 이는 약 106 J/g의 융합 엔탈피와 함께 약 172℃의 용융점을 나타냈다. 변형 A는 또한 약간만 흡습성을 나타내어 95% RH에서 약 0.5%의 수분을 흡수하였다. 히푸레이트 염(형태 A)은 각각 약 172℃에서 용융되었으며, 이에 상응하는 유리 전이는 77℃였다. 히푸레이트 염(형태 A)은 TGA에 의해 0.2%의 건조 시 손실을 나타냈다. 히푸레이트 염(형태 A)은 95% RH에서 수증기의 0.5%만을 흡수하여 약간 흡습성이 있었다.
실시예 46: (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 / (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올의 L-타르타르산 염(형태 F)(2:1 비의 타르타르산:화합물)
실시예 41 300 mg, L-타르타르산 57 mg 및 에탄올 5 mL를 바이알에 첨가하였다. 시간이 지남에 따라 형성된 덩어리를 파괴하기 위해 주기적으로 와류시키면서 혼합물을 50℃에서 500 rpm으로 4시간 동안 교반하였다. 그 후, 현탁액을 실온에서 밤새 500 rpm으로 교반하였다. 원심분리 여과로 고체를 분리하고 50℃에서 진공 건조시켰다. 분리된 물질을 XRPD, DSC 및 TGA로 특성화하였다(각각 도 6a, 6b 및 6c). (2:1) L-타르트레이트는 분해되면서 215℃에서 용융되었다.
결정질 형태 특성화에 사용된 방법 요약:
분말 X-선 회절
반사 기하학(reflection geometry)에서 Bruker D8 Advance를 이용하여 X-선 분말 회절(XRPD) 패턴을 얻었다. 제로 백그라운드 Si-웨이퍼 샘플 홀더를 이용하여 분말을 분석하였다. 방사선은 Cu Kα(l = 1.5406 Å)이었다. 3° 내지 45° 2세타에서 패턴을 측정하였다.
DSC:
TA 기기(Q2000)를 이용하여 각각의 결정질 형태에 대하여 시차 주사 열량측정법을 수행하였다. 각 분석을 위해 0.5~2 mg의 샘플을 알루미늄 팬(TI20608)에 넣었다. 가열 속도는 30 내지 300℃의 온도 범위에서 분당 10℃였다. 온도는 섭씨(℃)로 보고되고, 엔탈피는 그램당 줄(J/g)로 보고된다. 플롯은 흡열 피크를 아래 방향으로 나타낸다. 흡열 용융 피크(융점)를 외삽 개시 온도에 대해 평가하였다. 이 방법으로 측정된 샘플 온도의 정확도는 약 ±1℃ 이내이고, 융해열은 약 ±5%의 상대 오차 내에서 측정될 수 있다.
열중량 분석(TGA):
TA-기기 Q5000를 이용하여 TGA 곡선을 얻었다. 0.5~2 mg의 샘플을 개방형 알루미늄 팬에 넣었다. TGA 곡선을 30 내지 300℃에서 10℃/분으로 측정하였다. LoD(건조 시 손실)는 30℃ 내지 100℃ 또는 150℃에서 계산하였다. 중량 손실을 측정된 샘플 온도에 대해 플롯팅하였다. 온도는 섭씨(℃)로 보고하고, 중량 손실은 %로 보고한다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I의 화합물:
    [화학식 I]
    또는 이의 제약상 허용가능한 염
    [식에서,
    고리 B는 5원의 고리 헤테로아릴이고;
    R1은 H 또는 C1-4알킬이고;
    X1은 N 또는 CH이고;
    X2는 N 또는 CR2이고, 여기서 R2는 H 또는 C1-4알킬이고;
    R3는
    또는 이고;
    X3는 N 또는 CH이고;
    X4는 N 또는 CH이고;
    Y는 O, NRa 또는 CH2이고; Ra는 H 또는 C1-4알킬이고;
    R4는 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C1-5시클로알킬로부터 선택된 구성된 군으로부터 선택되고;
    R5는 H 또는 할로임].
  2. 제1항에 있어서, 화학식 IA를 갖는 화합물:
    [화학식 IA]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  3. 제1항에 있어서, 화학식 IB를 갖는 화합물:
    [화학식 IB]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  4. 제1항에 있어서, 화학식 IC를 갖는 화합물:
    [화학식 IC]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 II를 갖는 화합물:
    [화학식 II]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 III을 갖는 화합물:
    [화학식 III]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 IV를 갖는 화합물:
    [화학식 IV]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 V를 갖는 화합물:
    [화학식 V]
    또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 VI을 갖는 화합물:
    [화학식 VI]
    ; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  10. 제1항, 제2항 및 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, X1은 CH인 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  11. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 H인 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  12. 제1항, 제2항 및 제4항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, X3가 N이고 Y가 O인 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  13. 제1항, 제2항 및 제4항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R5가 H 또는 할로이고, R4가 할로, 할로C1-4알콕시, C1-4알콕시, 할로C1-4알킬, C1-4알킬, 5원 헤테로아릴 및 C3-5시클로알킬로부터 선택되는 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  14. 제13항에 있어서, R4가 시클로프로필, Cl, Br, -OCH3, -OCHF2, CF3, 피라졸릴, 옥사졸릴로부터 선택되고, R5가 H 또는 F인 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  15. 제1항에 있어서, 다음으로부터 선택되는 화합물; 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((S)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-(디플루오로메톡시)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    에틸 (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-3-일)프로파노에이트;
    tert-부틸 ((2S)-1-(3-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트;
    (R)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    tert-부틸 (S)-(1-(3-(3-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-3-하이드록시프로판-2-일)카르바메이트;
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)-2-아미노프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(3-((R)-2,3-디하이드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-3-일)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(3-((R)-2,3-디하이드로벤조[b][1,4]디옥신-2-일)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-(((R)-1-페닐프로판-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)프로판-1-올;
    (3S)-3-아미노-4-(3-(4-((5-브로모-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1,2,4-옥사디아졸-5-일)부탄-2-올;
    (R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올;
    (R)-3-(5-(4-((5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)-2-아미노프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(5-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(5-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)피리딘-2-일)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올; (S)-2-아미노-3-(3-(3-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(4-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-(4-클로로페녹시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-시클로프로필피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
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    (R)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-브로모피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(4-((5-클로로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(5-(6-(4-클로로페녹시)피리딘-3-일)-2H-테트라졸-2-일)프로판-1-올;
    (S)-3-(3-(4-((5-(1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)-2-아미노프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(3-(4-((3-플루오로-5-(1H-피라졸-3-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올;
    (2S)-2-아미노-3-[5-(4-[[3-플루오로-5-(1,3-옥사졸-2-일)피리딘-2-일]옥시]페닐)-2H-1,2,3,4-테트라졸-2-일]프로판-1-올;
    (S)-2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올;
    (R)-2-아미노-3-(2-(4-((5-클로로-3-플루오로피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올; 및
    (2S)-2-아미노-3-(2-(4-((3-플루오로-5-(1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)옥시)페닐)-2H-테트라졸-5-일)프로판-1-올.
  16. 치료적 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물.
  17. 치료적 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염 및 하나 이상의 치료적 활성 공동-제제를 포함하는 조합물.
  18. 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  19. LTA4H 억제에 의해 매개되는 질환 및/또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염.
  20. 대상체에서 LTA4H 활성에 의해 매개되는 질환 및/또는 장애의 치료 방법으로서, 상기 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 질환 및/또는 장애는 다음으로부터 선택되는, 사용하기 위한 화합물 또는 치료 방법: 급성 또는 만성 염증, 과민증 반응, 알레르기 반응, 아토피 피부염, 건선, 급성 호흡곤란 증후군, 면역 복합체-매개 폐 손상 및 만성 폐쇄성 폐질환, 염증성 장질환(궤양성 대장염, 크론병 및 수술후 외상을 포함), 위장 궤양, 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 호중구성 피부증(괴저성 농피증, 스위트 증후군, 여드름 및 호중구성 두드러기를 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 면역-복합체-매개 사구체신염, 화농성 한선염, 자가면역질환(인슐린-의존성 진성 당뇨병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 골관절염 및 전신 홍반 루푸스를 포함), 혈관염(피부혈관염, 베체트병 및 헤노흐 쇤라인 자색반을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 심장혈관 장애(고혈압, 죽상동맥경화증, 동맥류, 중증 하지 허혈, 말초 동맥 폐색증, 폐동맥 고혈압 및 레이노 증후군을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음), 패혈증, 관절통을 포함하는 염증성 및 신경성 동통, 치은염을 포함하는 치주질환, 중이염, 편두통, 전립선 비대증, 쉐그렌-라손 증후군 및 암(백혈병 및 림프종, 전립선암, 유방암, 폐암, 악성 흑색종, 신세포 암종, 두경부 종양 및 결장직장암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음).
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