KR20230165907A - 올리고뉴클레오티드 - Google Patents

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KR20230165907A
KR20230165907A KR1020237033884A KR20237033884A KR20230165907A KR 20230165907 A KR20230165907 A KR 20230165907A KR 1020237033884 A KR1020237033884 A KR 1020237033884A KR 20237033884 A KR20237033884 A KR 20237033884A KR 20230165907 A KR20230165907 A KR 20230165907A
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KR1020237033884A
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마이클 폴 마리에 간티에
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허드슨 인스티튜트 오브 메디컬 리서치
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Abstract

본 개시내용은 올리고뉴클레오티드가 사이클릭 GMP-AMP 신타제(cGAS), 톨-유사 수용체 3(TLR3), 톨-유사 수용체 7(TLR7), 톨-유사 수용체 8(TLR8) 및/또는 5 톨-유사 수용체 9(TLR9)를 저해하거나, 톨-유사 수용체 8(TLR8)을 강화시키도록, 올리고뉴클레오티드를 선택하거나, 설계하거나, 변형시키는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 개시내용은 올리고뉴클레오티드가 감소된 cGAS 저해 활성을 나타내도록, 올리고뉴클레오티드를 선택하거나, 설계하거나, 변형시키는 방법에 속하는 것이다.

Description

올리고뉴클레오티드
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 4월 8일에 출원된 오스트레일리아 가출원 제2021901027호 및 2021년 10월 27일에 출원된 제2021903431호로부터 우선권을 주장하며, 각각의 전체 내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은 올리고뉴클레오티드가 사이클릭 GMP-AMP 신타제(cGAS), 톨-유사 수용체 3(TLR3), 톨-유사 수용체 9(TLR9), 톨-유사 수용체 8(TLR8) 및/또는 톨-유사 수용체 7(TLR7)을 저해하거나, TLR8을 강화시키도록 올리고뉴클레오티드를 선택하거나, 설계하거나, 변형시키는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 올리고뉴클레오티드가 감소된 cGAS 저해 활성을 나타내도록 올리고뉴클레오티드를 선택하거나, 설계하거나, 변형시키는 방법에 속하는 것이다.
미국 및 유럽 연합에서의 다수의 규제 승인(문헌[Yin and Rogge, 2019]), 및 대형 제약사에 의해 최근 수십억 건의 라이센스 거래(문헌[Byrne et al., 2020])가 이루어지면서, 합성 올리고뉴클레오티드에 기반한 RNA-표적화 치료제가 많은 관심을 받고 있다. 유전자 표적화 활성과 관련된 이들의 필수 기능을 보장하기 위하여, 올리고뉴클레오티드-기반의 치료제는 변형된 뉴클레오티드(예를 들어, 2'-O-메틸[2'OMe], 2'-메톡시에틸[2'MOE], 2'-플루오로[2'F] 또는 잠금(locked) 핵산[LNA]을 가짐) 및 변형된 뉴클레오티드간 연결기(linkage)(예를 들어, 포스포로티오에이트[PS])의 혼입을 통한, 이들의 표적에 대한 증가된 친화성 및 뉴클레아제 활성에 대한 안정화 둘 모두를 필요로 한다.
합성 올리고뉴클레오티드와 병원체의 조기 검출에 관여하는 선천성 면역계의 핵산 센서 사이의 복잡한 관계가 지난 20년 동안 알려져 왔다. 예를 들어, PS-변형된 비메틸화 "CG"(CpG) 함유 DNA 올리고뉴클레오티드는 DNA 센서 톨-유사 수용체(TLR) 9를 활성화시킬 잠재성을 가질 뿐 아니라(문헌[Krieg et al., 1995]; 문헌[Hemmi et al., 2000]), 서열 및 길이 의존적 방식으로 이를 차단할 수 있다(문헌[Krieg et al., 1998]; 문헌[Gursel et al., 2003]; 문헌[Barrat et al., 2005]; 문헌[Trieu et al., 2006]). 유사하게, 2'OMe 변형된 RNA는 TLR7 및 TLR8(문헌[Robbins et al., 2007]; 문헌[Sioud et al., 2007]), 및 레티노산 유도성 유전자-I(Retinoic Acid Inducible Gene-I; RIG-I)(문헌[Devarkar et al., 2016])에 의한 RNA 감지를 차단한다. 이 지식은 환자에서 강력한 표적외 염증-유발 면역 반응을 야기하였을 선천적 면역 센서의 활성화를 회피할 수 있는 올리고뉴클레오티드 치료제의 설계에서 중요하다(문헌[Krieg et al., 1995]; 문헌[Judge et al., 2005]; 문헌[Judge et al., 2006]). 이 관점에서, 화학적 변형은 올리고뉴클레오티드의 표적화 효능을 증가시키면서, 이들의 면역자극 효과를 감소시키는 이중의 이익을 가질 수 있다.
그럼에도 불구하고, 선택된 PS-변형된 DNA 올리고뉴클레오티드(ODN)가 광범위한 면역억제 효과를 갖는 것도 한동안 분명해졌다(문헌[Bayik et al., 2016]). 이는 TLR9(문헌[Gursel et al., 2003]), TLR7(문헌[Beignon et al., 2005]), AIM2(Absent In Melanoma 2)(문헌[Kaminski et al., 2013]) 및 사이클릭-GMP-AMP 신타제(cGAS)(문헌[Steinhagen et al., 2018])의 저해에 관여하는 "TTAGGG" 함유 PS-ODN A151로 가장 잘 예시된다. 이들 효과는 서열-의존적이며, 일부 PS-DNA ODN은 개별 면역 센서에서 제한된 면역억제 활성을 나타낸다(문헌[Barrat et al., 2005]; 문헌[Bayik et al., 2016]). 유사하게, 2'OMe 올리고뉴클레오티드는 TLR7/8 감지에 서열-의존적 저해 효과를 나타낼 수 있다(문헌[Sarvestani et al., 2015]). 이들 관찰은 화학적으로 변형된 올리고뉴클레오티드에 의한 복잡한 면역억제 상황을 시사하며, 여기서, 서열은 핵산 센서에서의 이들의 활성을 좌우한다. 현재까지 소수의 ODN만이 상이한 수용체 전반에 걸쳐 연구되었기 때문에(문헌[Bayik et al., 2016]; 문헌[Steinhagen et al., 2018]), ODN의 면역억제 서열 결정인자에 관한 상세한 이해는 현재 부족하다. 또한, 승인되고 개발 중에 있는 대부분의 올리고뉴클레오티드 치료제에서 알 수 있는 바와 같이, 염기 및/또는 백본 변형을 조합한 올리고뉴클레오티드의 면역억제 효과에 관한 우리의 이해는 존재하지 않는다. 치료적 올리고뉴클레오티드의 면역억제 효과를 특징규명하는 것은 항염증성 ODN을 생성하는 데 잠재적으로 유용한 한편(문헌[McWhirter and Jefferies, 2020]), ODN 요법을 제공받기 시작한 큰 환자 집단에서 감염에 대한 감수성 증가의 회피를 돕는 데 중요해지고 있다(문헌[Byrne et al., 2020]).
cGAS는 최근 병원체 및 손상된 내인성 핵산으로부터 유래되는 시토졸 DNA의 필수 센서로서 부각되었다(문헌[McWhirter and Jefferies, 2020]). DNA에 의한 활성화 시에, cGAS는 인터페론 유전자 자극제(STING)에 결합하고 CXCL10(IP-10) 및 IFNB1을 포함하는 IRF3 반응성 유전자의 전사 유도를 촉진하는 사이클릭 GMP-AMP(cGAMP)의 형성을 유도한다. 이는 광범위한 질병과 관련된 해로운 면역 반응을 유발하기 때문에, cGAS를 치료적으로 표적화하기 위한 다양한 접근법이 현재 조사 중이다(문헌[An et al., 2018]; 문헌[Lama et al., 2019]; 문헌[Padilla-Salinas et al., 2020]; 문헌[Vincent et al., 2017]; 문헌[Zhao et al., 2020]). 이를 위해, 대부분의 약물 설계 전략은 특정 조직보다는 전신적으로 cGAS를 표적화하는 경향을 갖는, cGAS 효소 활성을 저해하는 소분자의 개발에 집중하였다(문헌[An et al., 2018]; 문헌[Lama et al., 2019]; 문헌[Padilla-Salinas et al., 2020]; 문헌[Vincent et al., 2017]; 문헌[Zhao et al., 2020]; 문헌[Dai et al., 2019]; 문헌[Hall et al., 2017]; 문헌[Wang et al., 2018]). cGAS와 유사하게, TLR9는 자가면역 질병에서 중요한 인자이며, 다시 말하자면 자가면역 염증을 조절하는 데 도움이 되는 합성 TLR9 길항제의 개발에 많은 관심이 있다.
따라서, cGAS 및/또는 TLR9 활성의 면역자극 효과의 대안적인 저해제가 필요하다.
또한, 톨-유사 수용체 3(TLR3), 톨-유사 수용체 9(TLR9), 톨-유사 수용체 8(TLR8) 및/또는 톨-유사 수용체 7(TLR7) 활성의 새로운 또는 개선된 저해제 또는 TLR8 활성을 강화시키는 새로운 또는 개선된 분자가 필요하다.
올리고뉴클레오티드를 설계하고 시험하는 동안, 본 발명자들은 cGAS, TLR3, TLR7, TLR8 및/또는 TLR9 활성을 저해하는 것을 보조하는 구조적 특징 또는 모티프를 관찰하였다. 본 발명자들은 cGAS 활성을 유지하는 것을 보조하는 이들 올리고뉴클레오티드의 구조적 특징 또는 모티프를 추가로 관찰하였다. 본 발명자들은 TLR8 활성을 강화시키는 것을 보조하는 구조적 특징 또는 모티프를 추가로 관찰하였다.
따라서, 일 양태에서, 본 발명은 cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법을 제공하며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 3);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUUUC-3'(SEQ ID NO: 7);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 19);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3'(SEQ ID NO: 34);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 49);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3'(SEQ ID NO: 50);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3'(SEQ ID NO: 53);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-TGTCTG-3'(SEQ ID NO: 61);
5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62);
5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63);
5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64);
5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A](SEQ ID NO: 65);
5'-AAAGGTTA-3'(SEQ ID NO: 66);
5'-GAAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 67);
5'-GCAGGCTC-3'(SEQ ID NO: 68);
5'-A[G/A]GGTT-3'(SEQ ID NO: 69);
5'-AGGGTT-3'(SEQ ID NO: 70);
5'-AAGGTT-3'(SEQ ID NO: 71);
5'-GGTT-3'(SEQ ID NO: 72);
5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3'(SEQ ID NO: 73);
5'-AGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 74);
5'-AGCTTCGA-3'(SEQ ID NO: 75);
5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76);
5'-TGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 77);
5'-AGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 78);
5'-G[G/C]TT-3'(SEQ ID NO: 79);
5'-GCTT-3'(SEQ ID NO: 80);
5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 81);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3'(SEQ ID NO: 82);
5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3'(SEQ ID NO: 83);
5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3'(SEQ ID NO: 84);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3'(SEQ ID NO: 87);
5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3'(SEQ ID NO: 88);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3'(SEQ ID NO: 90);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 92);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 96);
5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3'(SEQ ID NO: 97);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-GCACACTTCGTACCCA-3'(SEQ ID NO: 99);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-CGTATTATAGCCGATT-3'(SEQ ID NO: 101);
5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3'(SEQ ID NO: 102);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3'(SEQ ID NO: 107);
5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3'(SEQ ID NO: 108);
5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 109);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3'(SEQ ID NO: 110);
5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 111);
5'-CCACTTGGCAGACCAT-3'(SEQ ID NO: 112);
5'-CCATCCATGAGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 113);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3'(SEQ ID NO: 115);
5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3'(SEQ ID NO: 116);
5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3'(SEQ ID NO: 117);
5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'(SEQ ID NO: 118); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
일 구현예에서, 단계 i)는 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1), 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2) 또는 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 3)의 서열을 갖는 모티프에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다. 적합하게는, 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1), 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2) 또는 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 3)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
또 다른 구현예에서, 단계 i)는 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4)의 서열을 갖는 모티프 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 변이체에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다. 적합하게는, 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
추가의 구현예에서, 단계 i)는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3(SEQ ID NO: 57)', 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 서열을 갖는 모티프 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 변이체에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다. 적합하게는, 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
관련된 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 증가시키는 방법을 제공하며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 모티프:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 3);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUUUC-3'(SEQ ID NO: 7);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 19);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3'(SEQ ID NO: 34);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35)
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 49);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3'(SEQ ID NO: 50);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3'(SEQ ID NO: 53);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-TGTCTG-3'(SEQ ID NO: 61);
5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62);
5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63);
5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64);
5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A](SEQ ID NO: 65);
5'-AAAGGTTA-3'(SEQ ID NO: 66);
5'-GAAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 67);
5'-GCAGGCTC-3'(SEQ ID NO: 68);
5'-A[G/A]GGTT-3'(SEQ ID NO: 69);
5'-AGGGTT-3'(SEQ ID NO: 70);
5'-AAGGTT-3'(SEQ ID NO: 71);
5'-GGTT-3'(SEQ ID NO: 72);
5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3'(SEQ ID NO: 73);
5'-AGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 74);
5'-AGCTTCGA-3'(SEQ ID NO: 75);
5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76);
5'-TGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 77);
5'-AGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 78);
5'-G[G/C]TT-3'(SEQ ID NO: 79);
5'-GCTT-3'(SEQ ID NO: 80);
5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 81);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3'(SEQ ID NO: 82);
5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3'(SEQ ID NO: 83);
5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3'(SEQ ID NO: 84);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3'(SEQ ID NO: 87);
5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3'(SEQ ID NO: 88);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3'(SEQ ID NO: 90);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 92);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 96);
5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3'(SEQ ID NO: 97);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-GCACACTTCGTACCCA-3'(SEQ ID NO: 99);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-CGTATTATAGCCGATT-3'(SEQ ID NO: 101);
5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3'(SEQ ID NO: 102);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3'(SEQ ID NO: 107);
5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3'(SEQ ID NO: 108);
5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 109);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3'(SEQ ID NO: 110);
5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 111);
5'-CCACTTGGCAGACCAT-3'(SEQ ID NO: 112);
5'-CCATCCATGAGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 113);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3'(SEQ ID NO: 115);
5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3'(SEQ ID NO: 116);
5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3'(SEQ ID NO: 117);
5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'(SEQ ID NO: 118); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
하나의 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열, 예컨대 5'-GGUATC-3'(SEQ ID NO: 119), 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120) 또는 이의 단편 또는 부분을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 모티프 또는 이의 단편 또는 부분을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, 여기서, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 적합하게는 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60) 또는 이의 단편 또는 부분을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, 여기서, U는 T일 수 있다.
일 구현예에서, 본 양태의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 cGAS 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
상기 양태의 또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS를 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 표적 전사물에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
상기 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재한다.
상기 양태의 추가의 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재한다.
상기 양태의 추가의 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다. 예로서, 모티프가 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)이고, U가 T일 수 있는 구현예에서, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 양태의 모티프의 예는 서열 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120), 5'-AGUCUC-3'(SEQ ID NO: 121), 5'-GGUCCC-3'(SEQ ID NO: 122), 5'-GGUCUC-3'(SEQ ID NO: 123), 5'-AAGCUC-3'(SEQ ID NO: 124), 5'-AGUCCC-3'(SEQ ID NO: 125), 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5), 5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6), 5'-CGUUUC-3'(SEQ ID NO: 7), 5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-TGTCTG-3'(SEQ ID NO: 61), 5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62), 5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63), 5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64), 5'-AAAGGTTA-3'(SEQ ID NO: 66), 5'-GAAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 67), 5'-GCAGGCTC-3'(SEQ ID NO: 68), 5'-AGGGTT-3'(SEQ ID NO: 70), 5'-AAGGTT-3'(SEQ ID NO: 71), 5'-GGTT-3'(SEQ ID NO: 72), 5'-AGCTTCCT-3' SEQ ID NO: 74), 5'-AGCTTCGA-3'(SEQ ID NO: 75), 5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76), 5'-TGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 77), 5'-AGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 78) 또는 5'-GCTT-3'(SEQ ID NO: 80)을 갖는 것들을 포함하지만, 이에 한정되지 않으며, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 양태의 모티프는 적합하게는 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120), 5'-GGUATC-3'(SEQ ID NO: 119), 5'-AGUCTC-3'(SEQ ID NO: 126), 5'-AGTCTC-3'(SEQ ID NO: 127), 5'-GGUCCC-3'(SEQ ID NO: 122), 5'-GGUCTC-3'(SEQ ID NO: 128), 5'-AAGCUC-3'(SEQ ID NO: 124), 5'-AGTCCC-3'(SEQ ID NO: 129), 5'-GGUATA-3'(SEQ ID NO: 130), 5'-UGUTTC-3'(SEQ ID NO: 131), 5'-UGUGTC-3'(SEQ ID NO: 132), 5'-CGUTTC-3'(SEQ ID NO: 133), 5'-CGUGTC-3'(SEQ ID NO: 134), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUAT-3'(SEQ ID NO: 135), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GUAT-3'(SEQ ID NO: 136), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-TGTCTG-3'(SEQ ID NO: 61), 5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62), 5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63), 5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64), 5'-AAAGGTTA-3'(SEQ ID NO: 66), 5'-GAAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 67), 5'-GCAGGCTC-3'(SEQ ID NO: 68), 5'-AGGGTT-3'(SEQ ID NO: 70), 5'-AAGGTT-3'(SEQ ID NO: 71), 5'-GGTT-3'(SEQ ID NO: 72), 5'-AGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 74), 5'-AGCTTCGA-3'(SEQ ID NO: 75), 5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76), 5'-TGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 77), 5'-AGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 78) 또는 5'-GCTT-3'(SEQ ID NO: 80)의 서열을 갖는다.
하나의 특정 구현예에서, 상기 양태의 모티프는 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120), 5'-GGUATC-3'(SEQ ID NO: 119), 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUAUCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 137), 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 양태의 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나, 변형된 백본을 갖는다.
특정 구현예에서, 상기 양태의 모티프는 5'-mGmGmUATC-3', 5'-mGmGmUAUC-3', 5'-mAmGmUCTC-3', 5'-mAmGTCTC-3', 5'-mGmGmUmCmCC-3', 5'-mGmGmUmCTC-3', 5'-AAGCmUmC-3', 5'-AGTCCC-3'(SEQ ID NO: 129), 5'-mGmGmUATA-3', 5'-mUmGmUTTC-3', 5'-mUmGmUGTC-3', 5'-mCmGmUTTC-3', 5'-mCmGmUGTC-3', 5'-mGmGmUAU-3', 5'-mGmGmUAT-3', 5'-mGmGmUmAU-3', 5'-mGmGmUmAT-3', 5'-mGmGmUmAmU-3', 5'-mGmGmUA-3', 5'-mGmGmUmA-3', 5'-mGmGmU-3', 5'-mTmGTCTG-3', 5'-TGTCTmG-3', mTmGTCTG-3', 5'-mGTCT-3', 5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62), 5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63), 5'-TCTCCmG-3', 5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64), 5'-mAmAAGGTTA-3', 5'-GAAGCTmTmC-3', 5'-mGmCmAGGCTC-3', 5'-mAAGGTT-3', 5'-AGmGmGmTmT-3', 5'-AGCTmTmCmCmT-3', 5'-AGCTTmCmCmT-3', 5'-mAmGmCTTCGA-3', 5'-GGCTTmCmGmT-3', 5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76), 5'-TGCTTCmCmT-3' 또는 5'-AGCmTmCmTmCmT-3'의 서열을 가지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
하나의 특정 구현예에서, 상기 양태의 모티프는 하기 서열:
5'-mGmGmUATC-3';
5'-mGmGmUAUC-3';
5'-mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUAUCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmGmUmAmUmC-3';
5'-mGmCmGmGmUmAmUmCmCmAmUmGmUmCmCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmGmUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
5'-mGmGmUAU-3';
5'-mGmGmUAT-3';
5'-mGmGmUmAU-3';
5'-mGmGmUmAT-3';
5'-mGmGmUmAmU-3';
5'-mGmGmUA-3';
5'-mGmGmUmA-3';
5'-mGmUmAmU-3';
5'-mGmGmU-3';
5'-mGmUmA-3';
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 2개의 양태의 일 구현예에서, 모티프는 하기 서열: 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105); 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103); 5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3'(SEQ ID NO: 102); 또는 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106)을 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2개의 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 하기 서열:
5'-mCmGmCTTTTCTGTCTmGmGmT-3';
5'-mGmAmAAGGTTATGCAmAmGmG-3';
5'-mGmCmAGGCTCAGTGAmTmGmT-3'; 또는
5'-mGmTmGTCTGGAAGCTmTmCmC-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나, 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-LNA 변형된 염기이다.
상기 2개의 양태의 또 다른 구현예에서, 모티프는 하기 서열:
5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 81);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3'(SEQ ID NO: 82);
5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3'(SEQ ID NO: 83);
5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3'(SEQ ID NO: 84);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-TCCGGCCTCGGAAGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 138);
5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3'(SEQ ID NO: 87);
5'-GGTCTTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 139); 또는
5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3'(SEQ ID NO: 88)을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2개의 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 하기 서열:
5'-mCmGmGmAmGGTCTTGGCTTmCmGmTmGmG-3';
5'-mGmGmAmGmCTTCGAGGCCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mAmGmGmTmCTTGGCTTCGTmGmGmAmGmC-3';
5'-mGmGmGmAmAAGGTTATGCAmAmGmGmTmC-3';
5'-mCmTmGmTmGATCTTGACATmGmCmTmGmC-3';
5'-mAmCmTmGmACTGTCTTGAGmGmGmTmTmC-3';
5'-mGmCmGmTmGTCTGGAAGCTmTmCmCmTmT-3';
5'-mTmCmCmGmGCCTCGGAAGCmTmCmTmCmT-3';
5'-mGmAmGmTmCTCTGGAGCTTmCmCmTmCmT-3';
5'-mGmGmTmCmTTGGCTTCGTGmGmAmGmCmA-3'; 또는
5'-mAmGmTmCmGTAGTTGCTTCmCmTmAmAmC-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-MOE 변형된 염기이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 cGAS 활성을 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법을 제공하며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-[C/U]CUUCU-3'(SEQ ID NO: 140);
5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 141);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 143);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 147);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) cGAS 활성을 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
관련 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 감소시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 갖는 모티프:
5'-[C/U]CUUCU-3'(SEQ ID NO: 140);
5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 141);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 143);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 147);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 cGAS 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 낮은 수준으로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
2가지 상기 언급된 양태를 참조하여, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 13개 염기 내에 존재한다. 더욱 구체적으로, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 9개 염기 내에 존재한다. 보다 더욱 구체적으로, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-CCUUCU-3'(SEQ ID NO: 149) 또는 5'-UCUUCU-3'(SEQ ID NO: 150)을 가지며, U는 T일 수 있다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-mCmCUUCU-3', 5'-mCmCmUmUmCU-3', 5'-CmCmUmUmCmU-3', 5'-CCUUCU-3'(SEQ ID NO: 149), 5'-CCmUmUmCmU-3', 5'-UCmUmUmCmU-3', 5'-UCUUCU-3'(SEQ ID NO: 150), 5'-UmCmUmUmCmU-3' 또는 5'-CmCmUmUmCmU-3'을 가지며, U는 T일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3, TLR7 및/또는 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR3, TLR7 및/또는 TLR9 활성을 저해하거나 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 및 TLR7 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30), 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38), 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31), 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36), 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28), 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46), 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43), 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44), 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45), 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47), 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151), 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54), 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 및 TLR7 활성을 저해하지만, TLR9 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30), 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38), 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31), 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36), 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28), 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46), 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43), 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44), 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45), 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47), 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151) 및 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54)이 포함된다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 및 TLR9 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27), 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 및 TLR9 활성을 저해하지만, TLR7 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27)이 포함된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS, TLR7 및 TLR9 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
대안적인 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS를 저해하지만, TLR7 및/또는 TLR9를 실질적으로 저해하지 않는다.
대안적인 구현예에서, cGAS를 저해하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
대안적인 구현예에서, cGAS를 저해하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7, TLR8 및/또는 TLR9 활성을 저해하거나, 실질적으로 이를 저해하지 않는다.
상기 2가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 강화시키는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR8 활성을 강화시키거나 이를 실질적으로 강화시키지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 활성을 저해하고, TLR8 활성을 강화시킨다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 cGAS 활성을 저해하고, TLR8 활성을 실질적으로 강화시키지 않는다.
임의의 구현예에서, cGAS 활성을 저해하는 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 뉴클레오티드 길이이다. 임의의 구현예에서, cGAS 활성을 저해하는 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 15개, 그러나 20개 이하의 뉴클레오티드 길이이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있는 단계:
5'-G[G/C]CCT[C/G]-3'(SEQ ID NO: 152);
5'-CUU-3'(SEQ ID NO: 153)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3'(SEQ ID NO: 154);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3'(SEQ ID NO: 157);
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3'(SEQ ID NO: 158);
5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 163);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3'(SEQ ID NO: 164);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 170);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3'(SEQ ID NO: 171);
5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3'(SEQ ID NO: 172);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3'(SEQ ID NO: 173);
5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3'(SEQ ID NO: 174);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3'(SEQ ID NO: 176);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 177);
5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3'(SEQ ID NO: 178);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3'(SEQ ID NO: 179);
5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3'(SEQ ID NO: 180);
5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3'(SEQ ID NO: 181);
5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3'(SEQ ID NO: 182);
5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3'(SEQ ID NO: 183);
5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3'(SEQ ID NO: 184);
5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3'(SEQ ID NO: 185);
5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3'(SEQ ID NO: 186);
5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 187);
5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3'(SEQ ID NO: 188);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3(SEQ ID NO: 110)';
5'-TGCACACTTCGTACCC-3'(SEQ ID NO: 189);
5'-CCACATCCTGTGGCTC-3'(SEQ ID NO: 190);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3'(SEQ ID NO: 192);
5'-CCCACTTGGCAGACCA-3'(SEQ ID NO: 193);
5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3'(SEQ ID NO: 194);
5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3'(SEQ ID NO: 195);
5'-GGTCATTACAATAGCT-3'(SEQ ID NO: 196);
5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3'(SEQ ID NO: 197);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3'(SEQ ID NO: 198);
5'-GCATCCACCACGTCGT-3'(SEQ ID NO: 199);
5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 200);
5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3'(SEQ ID NO: 201);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCGGUATCC-3';
5'-GCUGUTTCC-3';
5'-GCUGUGTCC-3';
5'-GCCGUTTCC-3';
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC;
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-ACG-3';
5'-ACC-3';
5'-CGC-3';
5'-GAU-3';
5'-GGG-3';
5'-AGC-3';
5'-UUC-3';
5'-UUG-3';
5'-CAC-3'; 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
관련 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 TLR9 저해 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다:
5'-G[G/C]CCT[C/G]-3'(SEQ ID NO: 152);
5'-CUU-3'(SEQ ID NO: 153)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3'(SEQ ID NO: 154);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3'(SEQ ID NO: 157);
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3'(SEQ ID NO: 158);
5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 163);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3'(SEQ ID NO: 164);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 170);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3'(SEQ ID NO: 171);
5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3'(SEQ ID NO: 172);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3'(SEQ ID NO: 173);
5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3'(SEQ ID NO: 174);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3'(SEQ ID NO: 176);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 177);
5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3'(SEQ ID NO: 178);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3'(SEQ ID NO: 179);
5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3'(SEQ ID NO: 180);
5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3'(SEQ ID NO: 181);
5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3'(SEQ ID NO: 182);
5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3'(SEQ ID NO: 183);
5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3'(SEQ ID NO: 184);
5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3'(SEQ ID NO: 185);
5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3'(SEQ ID NO: 186);
5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 187);
5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3'(SEQ ID NO: 188);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3(SEQ ID NO: 110)';
5'-TGCACACTTCGTACCC-3'(SEQ ID NO: 189);
5'-CCACATCCTGTGGCTC-3'(SEQ ID NO: 190);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3'(SEQ ID NO: 192);
5'-CCCACTTGGCAGACCA-3'(SEQ ID NO: 193);
5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3'(SEQ ID NO: 194);
5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3'(SEQ ID NO: 195);
5'-GGTCATTACAATAGCT-3'(SEQ ID NO: 196);
5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3'(SEQ ID NO: 197);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3'(SEQ ID NO: 198);
5'-GCATCCACCACGTCGT-3'(SEQ ID NO: 199);
5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 200);
5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3'(SEQ ID NO: 201);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCGGUATCC-3';
5'-GCUGUTTCC-3';
5'-GCUGUGTCC-3';
5'-GCCGUTTCC-3';
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC;
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-ACG-3';
5'-ACC-3';
5'-CGC-3';
5'-GAU-3';
5'-GGG-3';
5'-AGC-3';
5'-UUC-3';
5'-UUG-3';
5'-CAC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
일 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및 TLR9 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프 5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168), 5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169), 5'-UCG-3', 5'-ACG-3', 5'-ACC-3', 5'-CGC-3', 5'-GAU-3', 5'-GGG-3', 5'-AGC-3', 5'-UUC-3', 5'-UUG-3' 또는 5'-CAC-3'을 포함하도록 하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168), 5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169), 5'-UCG-3', 5'-ACG-3', 5'-ACC-3', 5'-CGC-3', 5'-GAU-3', 5'-GGG-3', 5'-AGC-3', 5'-UUC-3', 5'-UUG-3' 또는 5'-CAC-3', 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프 5'-GCGGUATCC-3', 5'-GCUGUTTCC-3', 5'-GCUGUGTCC-3', 5'-GCCGUTTCC-3', 또는 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3' 또는 5'-CUUCGTGGG-3'을 포함하도록 하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-GCGGUATCC-3', 5'-GCUGUTTCC-3', 5'-GCUGUGTCC-3', 5'-GCCGUTTCC-3', 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3', 5'-CUUCGTGGG-3'; 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하는 것을 포함한다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
2가지 상기 언급된 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
2가지 상기 언급된 양태에 있어서, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재한다. 더욱 구체적으로, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 5개 염기 내에 존재한다. 보다 더욱 구체적으로, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다. 보다 더욱 구체적으로, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 모티프의 예에는 서열 5'-CUU-3'(SEQ ID NO: 153), 5'-CUT-3'(SEQ ID NO: 202), 5'-CTT-3'(SEQ ID NO: 203), 5'-UCG-3', 5'-ACG-3', 5'-ACC-3', 5'-CGC-3', 5'-GAU-3', 5'-GGG-3', 5'-AGC-3', 5'-UUC-3', 5'-UUG-3' 또는 5'-CAC-3'을 갖는 것들이 포함되지만 이에 한정되지 않는다.
상기 2가지 양태의 모티프의 추가의 예에는 서열 5'-GGCCTC-3'(SEQ ID NO: 204), 5'-GGCCTG-3'(SEQ ID NO: 205) 또는 5'-GCCCTC-3'(SEQ ID NO: 206)을 갖는 것들이 포함되지만 이에 한정되지 않으며, T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 모티프의 추가의 예에는 서열 5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168) 또는 5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169)을 갖는 것들이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.
구체적인 일 구현예에서, 상기 양태의 모티프는 5'-GGCCTC-3'(SEQ ID NO: 204), 5'-GGCCUC-3'(SEQ ID NO: 207), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-mCmUmU-3', 5'-mCmUT-3', 5'-mUmCmG-3', 5'-mAmCmG-3', 5'-mAmCmC-3', 5'-mCmGmC-3', 5'-mGmAmU-3', 5'-mGmGmG-3', 5'-mAmGmC-3', 5'-mUmUmC-3', 5'-mUmUmG-3' 또는 5'-mCmAmC-3'을 가지며; m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 구현예에 있어서, m은 적합하게는 2'-OMe 변형된 염기이다.
2가지 상기 언급된 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-mGmGCCTC-3', 5'-GGCCTmC-3', 5'-mGmGmCCTG-3' 또는 5'-GCCCTmC-3'을 가지며, T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 구현예에 있어서, m은 적합하게는 2'-OMe 변형된 염기이다.
2가지 상기 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-mAmCmA-3' 또는 5'-mCmAmC-3'을 가지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-LNA, 2'-MOE 및/또는 2'-OMe 변형된 염기이다.
구체적인 일 구현예에서, 상기 양태의 모티프는 5'-mGmGCCTC-3', 5'-mGmGCCUC-3', 5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAAGCmUmCmUmCmU-3'의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 200);
5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 187);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3'(SEQ ID NO: 110);
5'-TGCACACTTCGTACCC-3'(SEQ ID NO: 189);
5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3'(SEQ ID NO: 188);
5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3'(SEQ ID NO: 185);
5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3'(SEQ ID NO: 186); 또는
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191)을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 구체적인 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mCmTmTCGTGGGGTCCmTmTmT-3';
5'-mCmAmCTTCGTGGGGTmCmCmT-3';
5'-mAmCmACTTCGTGGGGmTmCmC-3';
5'-mTmGmCACACTTCGTAmCmCmC-3';
5'-mCmGmGCCTCGGAAGCmTmCmT-3';
5'-mAmGmCTTCGAGGCCCmCmAmG-3';
5'-mGmCmCATGTTTCTTCmTmTmG-3'; 또는
5'-mCmTmGCAGCTTCCTTmGmTmC-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-LNA 변형된 염기이다.
상기 2가지 양태의 또 다른 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 170);
5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 177);
5'-CAACACTTCGTGGGGTCCTT-3'(SEQ ID NO: 208);
5'-CCAACACTTCGTGGGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 209);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3'(SEQ ID NO: 173);
5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3'(SEQ ID NO: 174);
5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3'(SEQ ID NO: 179);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3'(SEQ ID NO: 171);
5'-TCCGGCCTCGGAAGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 138);
5'-GGTGGTCCACAACCCCTTTC-3'(SEQ ID NO: 210);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3'(SEQ ID NO: 181); 또는
5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3'(SEQ ID NO: 176)을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mAmCmAmCmTTCGTGGGGTCmCmTmTmTmT-3';
5'-mAmAmCmAmCTTCGTGGGGTmCmCmTmTmT-3';
5'-mCmAmAmCmACTTCGTGGGGmTmCmCmTmT-3';
5'-mCmCmAmAmCACTTCGTGGGmGmTmCmCmT-3';
5'-mGmCmGmTmGTCTGGAAGCTmTmCmCmTmT-3';
5'-mGmCmCmCmATCCATGAGGTmCmCmTmGmG-3';
5'-mGmGmGmTmATCGAAAGAGTmCmTmGmGmA-3';
5'-mTmGmGmGmCTGGAATCCGAmGmTmTmAmT-3';
5'-mGmGmTmTmTTGGCTGGGATmCmAmAmGmT-3';
5'-mTmCmAmAmAGGACTGAGGAmAmAmGmGmG-3';
5'-mTmCmCmGmGCCTCGGAAGCmTmCmTmCmT-3';
5'-mGmGmTmGmGTCCACAACCCmCmTmTmTmC-3';
5'-mAmCmTmGmACTGTCTTGAGmGmGmTmTmC-3';
5'-mGmCmGmTmATTATAGCCGAmTmTmAmAmC-3'; 또는
5'-mGmCmGmAmCTATACGCGCAmAmTmAmTmG-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-MOE 변형된 염기이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAAGCmUmCmUmCmU-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAGTCmUmCmCmAmU-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGCAGAmUmAmUmCmG-3';
5'mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUGTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmCmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUATCC-3';
5'-mGmCmUmGmUTTCC-3';
5'-mGmCmUmGmUGTCC-3';
5'-mGmCmCmGmUTTCC-3';
5'-mCmUmUmCmGTGGGGTCCTTmUmUmCmAmC; 및
5'-mCmUmUmCmGTGGG-3'을 가지며;
T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 바람직하게는, 각각의 염기는 변형된 백본을 가지며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mG*mC*mG*mG*mU*A*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'- mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*A*A*G*C*mU*mC*mU*mC*mU-3';
5'- mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*A*G*T*C*mU*mC*mC*mA*mU-3';
5'-mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*C*A*G*A*mU*mA*mU*mC*mG-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*T*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'- mG*mC*mU*mG*mU*G*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'-mG*mC*mC*mG*mU*T*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'-mG*mC*mG*mG*mU*A*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*T*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*G*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mC*mG*mU*T*T*C*C*-3';
5'-mC*mU*mU*mC*mG*T*G*G*G*G*T*C*C*T*T*mU*mU*mC*mA*mC-3'; 및
5'-mC*mU*mU* mC*mG*T*G*G*G*-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 'm'은 2'OMe 염기를 나타내고, *는 포스포로티오에이트 백본을 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법을 제공하며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 적어도 약 50% 아데닌 염기를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계;
ii) 5' 영역, 3' 영역 및 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역을 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계로서, 5' 영역 및 3' 영역 중 하나 또는 둘 모두가, 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하며, 중간 영역의 염기의 적어도 약 50%가 아데닌 염기인 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-[T/G][A/T][G/A/T]AA[A/C][A/G][G/C/A]A[T/G][T/G/C]A[A/T]-3'(SEQ ID NO: 211)의 서열을 갖는 모티프를 포함하며, T는 U일 수 있다.
적합하게는, 5' 영역 및/또는 3' 영역은 약 5개 염기 길이이며, 중간 영역은 약 10개 염기 길이이고, 중간 영역은 적어도 5개의 아데닌 염기를 포함한다. 일 구현예에서, 적어도 5개의 아데닌 염기 중 2개, 3개 및/또는 4개는 연속 서열에 존재한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 TLR9의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 3가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3, TLR7 및/또는 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR3, TLR7 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 및 TLR7 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165), 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167) 및 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160)이 포함된다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 및 TLR7 활성을 저해하지만, cGAS 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165) 및 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167)이 포함된다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 및 cGAS 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27), 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 및 cGAS 활성을 저해하지만, TLR7 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27)이 포함된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9, TLR7 및 cGAS 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
대안적인 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9를 저해하지만, TLR7 및/또는 cGAS를 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159)이 포함된다.
대안적인 구현예에서, TLR9를 저해하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
대안적인 구현예에서, TLR9를 저해하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR8, TLR7 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
상기 2가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 강화시키는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR8 활성을 강화시키거나 이를 실질적으로 강화시키지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 활성을 저해하고 TLR8 활성을 강화시킨다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR9 활성을 저해하고 TLR8 활성을 실질적으로 강화시키지 않는다.
임의의 구현예에서, TLR9 활성을 저해하는 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40 또는 50개 뉴클레오티드 길이이다. 일 구현예에서, TLR9 활성을 저해하는 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 적어도 3개, 그러나 20개 이하의 뉴클레오티드 길이, 선택적으로 적어도 9개, 그러나 20개 이하의 뉴클레오티드 길이이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법을 제공하며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 212);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213);
5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214);
5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215);
5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216);
5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3'(SEQ ID NO: 218);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3'(SEQ ID NO: 219);
5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3'(SEQ ID NO: 220);
5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3'(SEQ ID NO: 221);
5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 222);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3'(SEQ ID NO: 223);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 224);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35);
5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3'(SEQ ID NO: 225);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3'(SEQ ID NO: 226);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3'(SEQ ID NO: 227);
5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3'(SEQ ID NO: 228);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3'(SEQ ID NO: 229);
5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3'(SEQ ID NO: 230);
5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3'(SEQ ID NO: 231);
5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3'(SEQ ID NO: 232);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148);
5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3'(SEQ ID NO: 233);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3'(SEQ ID NO: 234);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3(SEQ ID NO: 235)';
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3'(SEQ ID NO: 236);
5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3'(SEQ ID NO: 237);
5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3'(SEQ ID NO: 238);
5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3'(SEQ ID NO: 239);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3'(SEQ ID NO: 240);
5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3'(SEQ ID NO: 241);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3'(SEQ ID NO: 242);
5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3'(SEQ ID NO: 243);
5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3'(SEQ ID NO: 244);
5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3'(SEQ ID NO: 245);
5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3'(SEQ ID NO: 246);
5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3'(SEQ ID NO: 247);
5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3'(SEQ ID NO: 248);
5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3'(SEQ ID NO: 249);
5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3'(SEQ ID NO: 250);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3'(SEQ ID NO: 251);
5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3'(SEQ ID NO: 252);
5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3'(SEQ ID NO: 253);
5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3'(SEQ ID NO: 254);
5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3'(SEQ ID NO: 255);
5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3'(SEQ ID NO: 256);
5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3'(SEQ ID NO: 257);
5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3'(SEQ ID NO: 258);
5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3'(SEQ ID NO: 259);
5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3'(SEQ ID NO: 260);
5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3'(SEQ ID NO: 261);
5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 262);
5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 263);
5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3'(SEQ ID NO: 264);
5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3'(SEQ ID NO: 265);
5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3'(SEQ ID NO: 266);
5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3'(SEQ ID NO: 267);
5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3'(SEQ ID NO: 268);
5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3'(SEQ ID NO: 269);
5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3'(SEQ ID NO: 270);
5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3'(SEQ ID NO: 271);
5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3'(SEQ ID NO: 272);
5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3'(SEQ ID NO: 273);
5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3'(SEQ ID NO: 274);
5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3'(SEQ ID NO: 275);
5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 276);
5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3'(SEQ ID NO: 277);
5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3'(SEQ ID NO: 278);
5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3'(SEQ ID NO: 279);
5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3'(SEQ ID NO: 280);
5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3'(SEQ ID NO: 281);
5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3'(SEQ ID NO: 282);
5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3'(SEQ ID NO: 283);
5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3'(SEQ ID NO: 284);
5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3'(SEQ ID NO: 285);
5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3'(SEQ ID NO: 286);
5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3'(SEQ ID NO: 287);
5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3'(SEQ ID NO: 288);
5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3'(SEQ ID NO: 289);
5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3'(SEQ ID NO: 290);
5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3'(SEQ ID NO: 291);
5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3'(SEQ ID NO: 292);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 293);
5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 294);
5'-GGCTTC-3'(SEQ ID NO: 295);
5'-GGCATC-3'(SEQ ID NO: 296);
5'-AGCTTC-3'(SEQ ID NO: 297);
5'-GGAATC-3'(SEQ ID NO: 298);
5'-CACATC-3'(SEQ ID NO: 299);
5'-GGCCTC-3'(SEQ ID NO: 204);
5'-CACTTC-3'(SEQ ID NO: 300);
5'-AAGATC-3'(SEQ ID NO: 301);
5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3'(SEQ ID NO: 302);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3'(SEQ ID NO: 303);
5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 304);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3'(SEQ ID NO: 305);
5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3'(SEQ ID NO: 306);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-GACTATACGCGCAATA-3'(SEQ ID NO: 307);
5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3'(SEQ ID NO: 308);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3'(SEQ ID NO: 309);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3'(SEQ ID NO: 310);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-AGGACTCCAGATGTTT-3'(SEQ ID NO: 311);
5'-GTGATCTTGACATGCT-3'(SEQ ID NO: 312);
5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3'(SEQ ID NO: 313);
5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3'(SEQ ID NO: 314);
5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3'(SEQ ID NO: 315);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 316);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3'(SEQ ID NO: 317);
5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 318);
5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 319);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-GUC-3';
5'-GUG-3';
5'-GUU-3';
5'-GGC-3';
5'-AUC-3';
5'-GAA-3';
5'-GAG-3';
5'-GGA-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-AUG-3';
5'-GCG-3';
5'-UUC-3';
5'-GCC-3';
5'-GGG-3';
5'-AUU-3';
5'-GCA-3';
5'-AGC-3';
5'-AAC-3';
5'-CCA-3';
5'-UGC-3';
5'-CAA-3';
5'-CGG-3';
5'-ACC-3';
5'-AGA-3';
5'-TTT-3';
5'-TCT-3' 및
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR7 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
일 구현예에서, 단계 i)는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56)의 서열을 갖는 모티프, 또는 이의 부분 또는 단편, 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 변이체에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다. 적합하게는, 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
일부 구현예에서, 단계 i)는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-GUC-3'; 5'-GUG-3'; 5'-GUU-3'; 5'-GGC-3'; 5'-AUC-3'; 5'-GAA-3'; 5'-GAG-3'; 5'-GGA-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-AUG-3'; 5'-GCG-3'; 5'-UUC-3'; 5'-GCC-3'; 5'-GGG-3'; 5'-AUU-3'; 5'-GCA-3'; 5'-AGC-3'; 5'-AAC-3'; 5'-CCA-3'; 5'-UGC-3'; 5'-CAA-3'; 5'-CGG-3'; 5'-ACC-3'; 5'-AGA-3'; 5'-TTT-3'; 또는 5'-TCT-3'의 서열을 갖는 모티프 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 변이체에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다. 적합하게는, 이러한 구현예의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 TLR7 저해 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 212);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213);
5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214);
5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215);
5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216);
5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3'(SEQ ID NO: 218);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3'(SEQ ID NO: 219);
5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3'(SEQ ID NO: 220);
5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3'(SEQ ID NO: 221);
5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 222);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3'(SEQ ID NO: 223);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 224);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35);
5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3'(SEQ ID NO: 225);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3'(SEQ ID NO: 226);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3'(SEQ ID NO: 227);
5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3'(SEQ ID NO: 228);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3'(SEQ ID NO: 229);
5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3'(SEQ ID NO: 230);
5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3'(SEQ ID NO: 231);
5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3'(SEQ ID NO: 232);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148);
5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3'(SEQ ID NO: 233);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3'(SEQ ID NO: 234);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3(SEQ ID NO: 235)';
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3'(SEQ ID NO: 236);
5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3'(SEQ ID NO: 237);
5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3'(SEQ ID NO: 238);
5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3'(SEQ ID NO: 239);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3'(SEQ ID NO: 240);
5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3'(SEQ ID NO: 241);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3'(SEQ ID NO: 242);
5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3'(SEQ ID NO: 243);
5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3'(SEQ ID NO: 244);
5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3'(SEQ ID NO: 245);
5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3'(SEQ ID NO: 246);
5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3'(SEQ ID NO: 247);
5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3'(SEQ ID NO: 248);
5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3'(SEQ ID NO: 249);
5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3'(SEQ ID NO: 250);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3'(SEQ ID NO: 251);
5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3'(SEQ ID NO: 252);
5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3'(SEQ ID NO: 253);
5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3'(SEQ ID NO: 254);
5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3'(SEQ ID NO: 255);
5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3'(SEQ ID NO: 256);
5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3'(SEQ ID NO: 257);
5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3'(SEQ ID NO: 258);
5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3'(SEQ ID NO: 259);
5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3'(SEQ ID NO: 260);
5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3'(SEQ ID NO: 261);
5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 262);
5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 263);
5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3'(SEQ ID NO: 264);
5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3'(SEQ ID NO: 265);
5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3'(SEQ ID NO: 266);
5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3'(SEQ ID NO: 267);
5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3'(SEQ ID NO: 268);
5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3'(SEQ ID NO: 269);
5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3'(SEQ ID NO: 270);
5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3'(SEQ ID NO: 271);
5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3'(SEQ ID NO: 272);
5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3'(SEQ ID NO: 273);
5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3'(SEQ ID NO: 274);
5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3'(SEQ ID NO: 275);
5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 276);
5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3'(SEQ ID NO: 277);
5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3'(SEQ ID NO: 278);
5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3'(SEQ ID NO: 279);
5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3'(SEQ ID NO: 280);
5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3'(SEQ ID NO: 281);
5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3'(SEQ ID NO: 282);
5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3'(SEQ ID NO: 283);
5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3'(SEQ ID NO: 284);
5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3'(SEQ ID NO: 285);
5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3'(SEQ ID NO: 286);
5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3'(SEQ ID NO: 287);
5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3'(SEQ ID NO: 288);
5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3'(SEQ ID NO: 289);
5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3'(SEQ ID NO: 290);
5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3'(SEQ ID NO: 291);
5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3'(SEQ ID NO: 292);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 293);
5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 294);
5'-GGCTTC-3'(SEQ ID NO: 295);
5'-GGCATC-3'(SEQ ID NO: 296);
5'-AGCTTC-3'(SEQ ID NO: 297);
5'-GGAATC-3'(SEQ ID NO: 298);
5'-CACATC-3'(SEQ ID NO: 299);
5'-GGCCTC-3'(SEQ ID NO: 204);
5'-CACTTC-3'(SEQ ID NO: 300);
5'-AAGATC-3'(SEQ ID NO: 301);
5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3'(SEQ ID NO: 302);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3'(SEQ ID NO: 303);
5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 304);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3'(SEQ ID NO: 305);
5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3'(SEQ ID NO: 306);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-GACTATACGCGCAATA-3'(SEQ ID NO: 307);
5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3'(SEQ ID NO: 308);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3'(SEQ ID NO: 309);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3'(SEQ ID NO: 310);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-AGGACTCCAGATGTTT-3'(SEQ ID NO: 311);
5'-GTGATCTTGACATGCT-3'(SEQ ID NO: 312);
5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3'(SEQ ID NO: 313);
5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3'(SEQ ID NO: 314);
5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3'(SEQ ID NO: 315);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 316);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3'(SEQ ID NO: 317);
5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 318);
5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 319);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-GUC-3';
5'-GUG-3';
5'-GUU-3';
5'-GGC-3';
5'-AUC-3';
5'-GAA-3';
5'-GAG-3';
5'-GGA-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-AUG-3';
5'-GCG-3';
5'-UUC-3';
5'-GCC-3';
5'-GGG-3';
5'-AUU-3';
5'-GCA-3';
5'-AGC-3';
5'-AAC-3';
5'-CCA-3';
5'-UGC-3';
5'-CAA-3';
5'-CGG-3';
5'-ACC-3';
5'-AGA-3';
5'-TTT-3';
5'-TCT-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 및 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-GUC-3', 5'-GUG-3', 5'-GUU-3', 5'-GGC-3', 5'-AUC-3', 5'-GAA-3', 5'-GAG-3', 5'-GGA-3', 5'-GAC-3', 5'-GAU-3', 5'-AUG-3', 5'-GCG-3', 5'-UUC-3', 5'-GCC-3', 5'-GGG-3', 5'-AUU-3', 5'-GCA-3', 5'-AGC-3', 5'-AAC-3', 5'-CCA-3', 5'-UGC-3', 5'-CAA-3', 5'-CGG-3', 5'-ACC-3', 5'-AGA-3', 5'-TTT-3' 또는 5'-TCT-3'으로부터 선택되는 모티프, 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, 여기서, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 적합하게는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-GUC-3', 5'-GUG-3', 5'-GUU-3', 5'-GUA-3', 5'-GGC-3', 5'-AUC-3', 5'-GAA-3', 5'-GAG-3', 5'-GGA-3', 5'-GAC-3', 5'-GAU-3', 5'-AUG-3', 5'-GCG-3', 5'-UUC-3', 5'-GCC-3', 5'-GGG-3', 5'-AUU-3', 5'-GCA-3', 5'-AGC-3', 5'-AAC-3', 5'-CCA-3', 5'-UGC-3', 5'-CAA-3', 5'-CGG-3', 5'-ACC-3', 5'-AGA-3', 5'-TTT-3' 또는 5'-TCT-3'으로부터 선택되는 모티프를 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, 여기서, U는 T일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR7 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 TLR7 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7을 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7을 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7을 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1); 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2); 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 212); 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4); 5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5); 5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6); 5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8); 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30); 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38); 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31); 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36); 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28); 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46); 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42); 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43); 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44); 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45); 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47); 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151); 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54); 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145); 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213); 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214); 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215); 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216); 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217); 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29); 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37); 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55); 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40); 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10); 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52); 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48); 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165); 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167); 또는 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160)을 가지며, 여기서, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열: 5'-GGCATCCACCACGTCGTCCA-3'(SEQ ID NO: 320); 5'-GTCCTTGCACGTGGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 321); 5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3'(SEQ ID NO: 302); 5'-GGAGATTTCAGAGCAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 322); 5'-TTCTGCAGCTTCCTTGTCCT-3'(SEQ ID NO: 323); 5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3'(SEQ ID NO: 179); 5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3'(SEQ ID NO: 303); 5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 304); 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94); 또는 5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA(SEQ ID NO: 178)를 가지며, 여기서, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mGmGmCmAmTCCACCACGTCmGmTmCmCmA-3';
5'-mGmTmCmCmTTGCACGTGGCmTmTmCmGmT-3';
5'-mTmGmTmCmCTTGCACGTGGmCmTmTmCmG-3';
5'-mGmGmAmGmATTTCAGAGCAmGmCmTmTmC-3';
5'-mTmTmCmTmGCAGCTTCCTTmGmTmCmCmT-3';
5'-mTmGmGmGmCTGGAATCCGAmGmTmTmAmT-3';
5'-mGmTmCmCmACATCCTGTGGmCmTmCmGmT-3';
5'-mTmGmTmGmATGGCCTCCCAmTmCmTmCmC-3';
5'-mTmTmTmGmCACACTTCGTAmCmCmCmAmA-3'; 또는
5'-mGmTmCmCmAAGATCAGCAGmTmCmTmCmA-3'을 가지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 이러한 예에 있어서, m은 적합하게는 2'-MOE 변형된 염기이다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120), 5'-AGUCUC-3'(SEQ ID NO: 121), 5'-GGUCCC-3'(SEQ ID NO: 122), 5'-GGUCUC-3'(SEQ ID NO: 123), 5'-AAGCUC-3'(SEQ ID NO: 124), 5'-AGUCCC-3'(SEQ ID NO: 125), 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5), 5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6), 5'-CGUUUC-3'(SEQ ID NO: 7), 5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)을 가지며, U는 T일 수 있다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 5'-GGUAUC-3'(SEQ ID NO: 120), 5'-GGUATC-3'(SEQ ID NO: 119), 5'-AGUCTC-3'(SEQ ID NO: 126), 5'-AGTCTC-3'(SEQ ID NO: 127), 5'-GGUCCC-3'(SEQ ID NO: 122), 5'-GGUCTC-3'(SEQ ID NO: 128), 5'-AAGCUC-3'(SEQ ID NO: 124), 5'-AGTCCC-3'(SEQ ID NO: 129), 5'-GGUATA-3'(SEQ ID NO: 130), 5'-UGUTTC-3'(SEQ ID NO: 131), 5'-UGUGTC-3'(SEQ ID NO: 132), 5'-CGUTTC-3'(SEQ ID NO: 133), 5'-CGUGTC-3'(SEQ ID NO: 134), 5'-GGUAT-3'(SEQ ID NO: 135), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GUAT-3'(SEQ ID NO: 136), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60), 5'-GUC-3', 5'-GUG-3', 5'-GUU-3', 5'-GGC-3', 5'-AUC-3', 5'-GAA-3', 5'-GAG-3', 5'-GGA-3', 5'-GAC-3', 5'-GAU-3', 5'-AUG-3', 5'-GCG-3', 5'-UUC-3', 5'-GCC-3', 5'-GGG-3', 5'-AUU-3', 5'-GCA-3', 5'-AGC-3', 5'-AAC-3', 5'-CCA-3', 5'-UGC-3', 5'-CAA-3', 5'-CGG-3', 5'-ACC-3', 5'-AGA-3', 5'-TTT-3' 또는 5'-TCT-3'의 서열을 갖는다.
일 구현예에서, 모티프는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56)의 서열을 가지며, U는 T일 수 있으며, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
추가의 구현예에서, 모티프는 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57)의 서열을 가지며, U는 T일 수 있으며, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
관련 구현예에서, 모티프는 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58)의 서열을 가지며, U는 T일 수 있으며, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
또 다른 구현예에서, 모티프는 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59)의 서열을 가지며, U는 T일 수 있으며, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
일 구현예에서, 모티프는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 서열을 가지며, U는 T일 수 있으며, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 5'-mGmGmUATC-3', 5'-mAmGmUCTC-3', 5'-mAmGTCTC-3', 5'-mGmGmUmCmCC-3', 5'-mGmGmUmCTC-3', 5'-AAGCmUmC-3', 5'-AGTCCC-3'(SEQ ID NO: 129), 5'-mGmGmUATA-3', 5'-mUmGmUTTC-3', 5'-mUmGmUGTC-3', 5'-mCmGmUTTC-3', 5'-mCmGmUGTC-3', 5'-mGmGmUAU-3', 5'-mGmGmUAT-3', 5'-mGmGmUmAU-3', 5'-mGmGmUmAT-3', 5'-mGmGmUmAmU-3', 5'-mGmGmUA-3', 5'-mGmGmUmA-3', 5'-mGmUmAmU-3', 5'-mGmGmU-3' 또는 5'-mGmUmA-3'의 서열을 가지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 TLR7의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 3가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3, TLR8, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR3, TLR8, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 TLR9 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165), 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167) 및 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160)이 포함된다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 TLR9 활성을 저해하지만, cGAS 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165) 및 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167)이 포함된다.
특정 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 cGAS 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30), 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38), 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31), 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36), 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28), 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46), 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43), 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44), 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45), 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47), 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151), 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54), 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 및 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)이 포함된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 cGAS 활성을 저해하지만, TLR9 활성을 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30), 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38), 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31), 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36), 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28), 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46), 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43), 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44), 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45), 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47), 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151) 및 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 및 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)이 포함된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7, TLR9 및 cGAS 활성을 저해한다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29), 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37), 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55), 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52) 및 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48)이 포함된다.
대안적인 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7을 저해하지만, TLR9 및/또는 cGAS를 실질적으로 저해하지 않는다. 이러한 구현예의 모티프의 예에는 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145), 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213), 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214), 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215), 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216) 및 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217)이 포함된다.
상기 2가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 강화시키는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR8 활성을 강화시키거나 이를 실질적으로 강화시키지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 활성을 저해하고 TLR8 활성을 강화시킨다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR7 활성을 저해하고 TLR8 활성을 실질적으로 강화시키지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-CUUCG-3';
5'-CUUCGTG-3';
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-UCA-3';
5'-CGG-3';
5'-UGG-3';
5'-CGC-3';
5'-AGG-3';
5'-GGA-3';
5'-GGC-3';
5'-AGA-3';
5'-CGA-3';
5'-UAG-3';
5'-UCU-3';
5'-AGC-3';
5'-GGU-3';
5'-UGA-3';
5'-AGU-3';
5'-ACG-3';
5'-CGU-3';
5'-UCC-3';
5'-GCG-3';
5'-GGG-3';
5'-UGU-3';
5'-UCA-3';
5'-CUG-3';
5'-UUG-3';
5'-UUA-3';
5'-UGC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
또 다른 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키거나, 올리고뉴클레오티드의 강화 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다:
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
5'-CUUCG-3';
5'-CUUCGTG-3';
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-UCA-3';
5'-CGG-3';
5'-UGG-3';
5'-CGC-3';
5'-AGG-3';
5'-GGA-3';
5'-GGC-3';
5'-AGA-3';
5'-CGA-3';
5'-UAG-3';
5'-UCU-3';
5'-AGC-3';
5'-GGU-3';
5'-UGA-3';
5'-AGU-3';
5'-ACG-3';
5'-CGU-3';
5'-UCC-3';
5'-GCG-3';
5'-GGG-3';
5'-UGU-3';
5'-UCA-3';
5'-CUG-3';
5'-UUG-3';
5'-UUA-3';
5'-UGC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-CUUCG-3', 5'-CUUCGTG-3', 5'-CUUCGTGGG-3', 5'-UCG-3, 5'-CGG-3', 5'-UGG-3', 5'-CGC-3', 5'-AGG-3', 5'-GGA-3', 5'-GGC-3'; 5'-AGA-3'; 5'-CGA-3'; 5'-UAG-3'; 5'-UCU-3'; 5'-AGC-3'; 5'-GGU-3'; 5'-UGA-3'; 5'-AGU-3'; 5'-ACG-3'; 5'-CGU-3'; 5'-UCC-3'; 5'-GCG-3'; 5'-GGG-3'; 5'-UGU-3'; 5'-UCA-3'; 5'-CUG-3'; 5'-UUG-3'; 5'-UUA-3' 및 5'-UGC-3'으로부터 선택되는 모티프, 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 적합하게는 5'-CUUCG-3', 5'-CUUCGTG-3', 5'-CUUCGTGGG-3', 5'-UCG-3, 5'-CGG-3', 5'-UGG-3', 5'-CGC-3', 5'-AGG-3', 5'-GGA-3', 5'-GGC-3'; 5'-AGA-3'; 5'-CGA-3'; 5'-UAG-3'; 5'-UCU-3'; 5'-AGC-3'; 5'-GGU-3'; 5'-UGA-3'; 5'-AGU-3'; 5'-ACG-3'; 5'-CGU-3'; 5'-UCC-3'; 5'-GCG-3'; 5'-GGG-3'; 5'-UGU-3'; 5'-UCA-3'; 5'-CUG-3'; 5'-UUG-3'; 5'-UUA-3' 및 5'-UGC-3'으로부터 선택되는 모티프를 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 능력을 시험하는 단계 및 TLR8 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 증가시키거나 강화시키는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-CUUCG-3', 5'-CUUCGTG-3', 5'-CUUCGTGGG-3', 5'-UCG-3, 5'-CGG-3', 5'-UGG-3', 5'-CGC-3', 5'-AGG-3' 및 5'-GGA-3'을 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-CUUCG-3',
5'-CUUCGTG-3',
5'-CUUCGTGGG-3',
5'-UCG-3',
5'-CGG-3',
5'-UGG-3',
5'-CGC-3',
5'-AGG-3', 또는
5'-GGA-3'을 가지며,
1개, 2개 또는 그 이상의 염기는 변형된 염기이고/이거나 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는, 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mCmUmUmCmG-3',
5'-mCmUmUmCmGTG-3',
5'-mCmUmUmCmGTGGG-3',
5'-mUmCmG-3',
5'-mCmGmG-3',
5'-mUmGmG-3',
5'-mCmGmC-3',
5'-mAmGmG-3', 또는
5'-mGmGmA-3'을 가지며,
m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mC*mU*mU*C*G*T*G*G*G*G*T*C*C*T*T*mU*mU*mC* mA*mC-3';
5'-mC*mU*mU*mC*mG-3',
5'-mC*mU*mU*mC*mG*T*G-3',
5'-mC*mU*mU*mC*mG*T*G*G*G-3',
5'-mU*mC*mG*-3',
5'-mC*mG*mG*-3',
5'-mU*mG*mG*-3',
5'-mC*mG*mC*-3',
5'-mA*mG*mG*-3', 또는
5'-mG*mG*mA*-3'을 가지며,
m은 2'OMe 변형된 염기이고, T/G는 DNA 염기이고, *는 포스포로티오에이트 변형된 백본이다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 일 구현예에서, 모든 염기가 변형되는 것은 아니며, 예를 들어, 하나 이상의 염기가 비변형될 수 있으며, 하나 이상의 염기가 변형될 수 있다(예를 들어, 2'OMe로 변형될 수 있다).
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 TLR8의 활성을 증가시키거나 강화시키는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 3가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 증가시키거나 강화시키는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 증가시키거나 강화시키는 것으로 실시예에서 나타난, 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-GAG-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-GAA-3';
5'-GUC-3';
5'-GUU-3';
5'-GUA-3';
5'-GUG-3';
5'-AUA-3';
5'-AUG-3';
5'-CUU-3';
5'-AAG-3';
5'-AUC-3';
5'-CCC-3';
5'-GCU-3';
5'-CCU-3';
5'-CUA-3';
5'-CUC-3';
5'-AAC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
또 다른 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 TLR8 저해 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다:
5'-GAG-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-GAA-3';
5'-GUC-3';
5'-GUU-3';
5'-GUA-3';
5'-GUG-3';
5'-AUA-3';
5'-AUG-3';
5'-CUU-3';
5'-AAG-3';
5'-AUC-3';
5'-CCC-3';
5'-GCU-3';
5'-CCU-3';
5'-CUA-3';
5'-CUC-3';
5'-AAC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-GAG-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-GAA-3'; 5'-GUC-3'; 5'-GUU-3'; 5'-GUA-3'; 5'-GUG-3'; 5'-AUA-3'; 5'-AUG-3'; 5'-CUU-3'; 5'-AAG-3'; 5'-AUC-3'; 5'-CCC-3'; 5'-GCU-3'; 5'-CCU-3'; 5'-CUA-3' 및 5'-CUC-3'; 5'-AAC-3'으로부터 선택되는 모티프, 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 적합하게는 5'-GAG-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-GAA-3'; 5'-GUC-3'; 5'-GUU-3'; 5'-GUA-3'; 5'-GUG-3'; ; 5'-AUA-3'; 5'-AUG-3'; 5'-CUU-3'; 5'-AAG-3'; 5'-AUC-3'; 5'-CCC-3'; 5'-GCU-3'; 5'-CCU-3'; 5'-CUA-3'; 5'-CUC-3' 및 5'-AAC-3'으로부터 선택되는 모티프를 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및 TLR8 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8을 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 서열 5'-GAG-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-GAA-3'; 5'-GUC-3'; 5'-GUU-3'; 5'-GUA-3'; 5'-GUG-3', ; 5'-AUA-3'; 5'-AUG-3'; 5'-CUU-3'; 5'-AAG-3'; 5'-AUC-3'; 5'-CCC-3'; 5'-GCU-3'; 5'-CCU-3'; 5'-CUA-3'; 5'-CUC-3'; 5'-AAC-3'을 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-GAX-3' 또는 5'-GUX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임),
5'-GAG-3',
5'-GAC-3',
5'-GAU-3',
5'-GAA-3',
5'-GUC-3',
5'-GUU-3',
5'-GUA-3',
5'-GUG-3'을 가지며,
1개, 2개 또는 그 이상의 염기는 변형된 염기이고/이거나 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mGmAmX-3' 또는 5'-mGmUmX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임),
5'-mGmAmG-3',
5'-mGmAmC-3',
5'-mGmAmU-3',
5'-mGmAmA-3',
5'-mGmUmC-3',
5'-mGmUmU-3',
5'-mGmUmA-3',
5'-mGmUmG-3'을 가지며,
m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 일 구현예에서, 모든 염기가 변형되는 것은 아니며, 예를 들어, 하나 이상의 염기가 비변형될 수 있으며, 하나 이상의 염기가 변형될 수 있다(예를 들어, 2'OMe로 변형될 수 있다).
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 TLR8의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 3가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하기 위한 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 하기를 포함한다:
i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
5'-TAC-3';
5'-CGC-3';
5'-GCA-3';
5'-UGA-3';
5'-CAG-3';
5'-UGG-3';
5'-UCA-3';
5'-TGA-3';
5'-CGT-3';
5'-GAC-3';
5'-CCA-3';
5'-TAG-3';
5'-TGG-3';
5'-TCA-3';
5'-TGC-3';
5'-CAC-3';
5'-CGG-3';
5'-CCC-3';
5'-ACT-3';
5'-GTA-3';
5'-GGA-3';
5'-AAG-3';
5'-ATA-3';
5'-GUC-3';
5'-UCC-3';
5'-AUC-3';
5'-CCG-3';
5'-CAA-3';
5'-GAU-3';
5'-CGA-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR3 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
iv) TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계.
또 다른 양태에서, 본 발명은 올리고뉴클레오티드의 TLR3 저해 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다:
5'-TAC-3';
5'-CGC-3';
5'-GCA-3';
5'-UGA-3';
5'-CAG-3';
5'-UGG-3';
5'-UCA-3';
5'-TGA-3';
5'-CGT-3';
5'-GAC-3';
5'-CCA-3';
5'-TAG-3';
5'-TGG-3';
5'-TCA-3';
5'-TGC-3';
5'-CAC-3';
5'-CGG-3';
5'-CCC-3';
5'-ACT-3';
5'-GTA-3';
5'-GGA-3';
5'-AAG-3';
5'-ATA-3';
5'-GUC-3';
5'-UCC-3';
5'-AUC-3';
5'-CCG-3';
5'-CAA-3';
5'-GAU-3';
5'-CGA-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 5'-TAC-3', 5'-CGC-3', 5'-GCA-3', 5'-UGA-3', 5'-CAG-3', 5'-UGG-3', 5'-UCA-3'으로부터 선택되는 모티프, 또는 이의 부분 또는 단편을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 적합하게는 5'-TAC-3', 5'-CGC-3', 5'-GCA-3', 5'-UGA-3', 5'-CAG-3', 5'-UGG-3', 5'-UCA-3'으로부터 선택되는 모티프를 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하며, U는 T일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR3 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 TLR3 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR3을 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는다.
적합하게는, 2가지 상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드는 TLR3을 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 양태의 대안적인 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR3을 인코딩하는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계된다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프는 5'-TAC-3', 5'-CGC-3', 5'-GCA-3', 5'-UGA-3', 5'-CAG-3', 5'-UGG-3', 5'-UCA-3'을 가지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-TAC-3',
5'-CGC-3',
5'-GCA-3',
5'-UGA-3',
5'-CAG-3',
5'-UGG-3',
5'-UCA-3'을 가지며,
1개, 2개 또는 그 이상의 염기는 변형된 염기이고/이거나 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 모티프는 서열:
5'-mUmAmC-3',
5'-mCmGmC-3',
5'-mGmCmA-3',
5'-mUmGmA-3',
5'-mCmAmG-3',
5'-mUmGmG-3',
5'-mUmCmA-3'을 가지며,
m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 2가지 양태의 일 구현예에서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
상기 양태의 임의의 구현예에서, 모티프는 TLR3의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
상기 3가지 양태에 관하여, 당해 방법은 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR8, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하고, 선택적으로, TLR8, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 추가의 단계를 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 후보 올리고뉴클레오티드 또는 변형된 올리고뉴클레오티드는 TLR3의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A, 6 또는 7의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
추가의 양태에서, 본 발명은 상기 언급된 양태의 방법을 사용하여 선택되거나, 설계되거나, 변형된 올리고뉴클레오티드에 속하는 것이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 3);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUUUC-3'(SEQ ID NO: 7);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 19);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3'(SEQ ID NO: 34);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 49);
5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3'(SEQ ID NO: 50);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3'(SEQ ID NO: 53);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-TGTCTG-3'(SEQ ID NO: 61);
5'-GTCT-3'(SEQ ID NO: 62);
5'-TCTCCG-3'(SEQ ID NO: 63);
5'-CTCC-3'(SEQ ID NO: 64);
5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A](SEQ ID NO: 65);
5'-AAAGGTTA-3'(SEQ ID NO: 66);
5'-GAAGCTTC-3'(SEQ ID NO: 67);
5'-GCAGGCTC-3'(SEQ ID NO: 68);
5'-A[G/A]GGTT-3'(SEQ ID NO: 69);
5'-AGGGTT-3'(SEQ ID NO: 70);
5'-AAGGTT-3'(SEQ ID NO: 71);
5'-GGTT-3'(SEQ ID NO: 72);
5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3'(SEQ ID NO: 73);
5'-AGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 74);
5'-AGCTTCGA-3'(SEQ ID NO: 75);
5'-GGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 76);
5'-TGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 77);
5'-AGCTCTCT-3'(SEQ ID NO: 78);
5'-G[G/C]TT-3'(SEQ ID NO: 79);
5'-GCTT-3'(SEQ ID NO: 80);
5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 81);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3'(SEQ ID NO: 82);
5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3'(SEQ ID NO: 83);
5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3'(SEQ ID NO: 84);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3'(SEQ ID NO: 87);
5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3'(SEQ ID NO: 88);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3'(SEQ ID NO: 90);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 92);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 96);
5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3'(SEQ ID NO: 97);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-GCACACTTCGTACCCA-3'(SEQ ID NO: 99);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-CGTATTATAGCCGATT-3'(SEQ ID NO: 101);
5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3'(SEQ ID NO: 102);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3'(SEQ ID NO: 107);
5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3'(SEQ ID NO: 108);
5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3'(SEQ ID NO: 109);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3'(SEQ ID NO: 110);
5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 111);
5'-CCACTTGGCAGACCAT-3'(SEQ ID NO: 112);
5'-CCATCCATGAGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 113);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3'(SEQ ID NO: 115);
5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3'(SEQ ID NO: 116);
5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3'(SEQ ID NO: 117);
5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'(SEQ ID NO: 118); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지는 올리고뉴클레오티드에 관한 것이며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 cGAS 활성을 저해한다.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
모티프가 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)이고, U가 T일 수 있는 구현예에서, 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다. 특정 구현예에서, 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재하며, U는 T일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42), 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43), 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44), 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45), 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46), 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 49), 5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3'(SEQ ID NO: 50), 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51), 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3'(SEQ ID NO: 53), 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 cGAS의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7 및/또는 TLR9 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열:
5'-mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUmAmUmCmCmAmUmGmUmCmCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUATACAGGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUGTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmCmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmCmGmUGTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUATCCATAGTCmUmCmCmAmU-3';
5'-mGmCmGmGmUATCCATCAGAmUmAmUmCmG-3';
5'-mCmUmUmUmAGTCGTAGTTGmUmCmUmCmU-3';
5'-mUmCmCmGmGGTCGTAGTTGmCmUmUmCmC-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAGTCmUmCmCmAmU-3',
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGGAGAmUmCmUmCmU-3';
5'-mGmGmUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
5'-mGmGmUmAmU-3';
5'-mGmGmUmA-3';
5'-mGmUmAmU-3';
5'-mGmGmU-3';
5'-mGmUmA-3';
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3'의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-mGmCmGmGmUmAmUmCmCmAmUmGmUmCmCmCmAmGmGmC-3'의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
이 양태의 임의의 구현예에서, cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드는 적어도 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 뉴클레오티드 길이이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'[C/U]CUUCU-3'(SEQ ID NO: 140);
5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 141);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 143);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 147);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 사이클릭-GMP-AMP 신타제(cGAS) 활성을 저해하지 않거나, 이의 감소된 저해를 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-G[G/C]CCT[C/G]-3'(SEQ ID NO: 152);
5'-CUU-3'(SEQ ID NO: 153)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3'(SEQ ID NO: 154);
5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3'(SEQ ID NO: 142);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3'(SEQ ID NO: 157);
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3'(SEQ ID NO: 158);
5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3'(SEQ ID NO: 163);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 16);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3'(SEQ ID NO: 51);
5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3'(SEQ ID NO: 164);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-ACA-3'(SEQ ID NO: 168)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-CAC-3'(SEQ ID NO: 169)(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3'(SEQ ID NO: 170);
5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3'(SEQ ID NO: 86);
5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3'(SEQ ID NO: 171);
5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3'(SEQ ID NO: 172);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3'(SEQ ID NO: 173);
5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3'(SEQ ID NO: 174);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3'(SEQ ID NO: 176);
5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3'(SEQ ID NO: 85);
5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 177);
5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3'(SEQ ID NO: 178);
5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3'(SEQ ID NO: 91);
5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3'(SEQ ID NO: 179);
5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3'(SEQ ID NO: 180);
5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3'(SEQ ID NO: 181);
5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3'(SEQ ID NO: 182);
5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3'(SEQ ID NO: 183);
5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3'(SEQ ID NO: 184);
5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3'(SEQ ID NO: 185);
5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3'(SEQ ID NO: 186);
5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3'(SEQ ID NO: 187);
5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3'(SEQ ID NO: 188);
5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3(SEQ ID NO: 110)';
5'-TGCACACTTCGTACCC-3'(SEQ ID NO: 189);
5'-CCACATCCTGTGGCTC-3'(SEQ ID NO: 190);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3'(SEQ ID NO: 192);
5'-CCCACTTGGCAGACCA-3'(SEQ ID NO: 193);
5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3'(SEQ ID NO: 194);
5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3'(SEQ ID NO: 195);
5'-GGTCATTACAATAGCT-3'(SEQ ID NO: 196);
5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3'(SEQ ID NO: 197);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 104);
5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3'(SEQ ID NO: 198);
5'-GCATCCACCACGTCGT-3'(SEQ ID NO: 199);
5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3'(SEQ ID NO: 200);
5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3'(SEQ ID NO: 201);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
5'-GCGGUATCC-3';
5'-GCUGUTTCC-3';
5'-GCUGUGTCC-3';
5'-GCCGUTTCC-3';
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-ACG-3';
5'-ACC-3';
5'-CGC-3';
5'-GAU-3';
5'-GGG-3';
5'-AGC-3';
5'-UUC-3';
5'-UUG-3';
5'-CAC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지는 올리고뉴클레오티드에 관한 것이며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 TLR9 활성을 저해한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 1개, 2개 또는 그 이상의 염기는 변형된 염기이거나, 1개, 2개 또는 그 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160), 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159), 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-ACC-3', 5'-CGC-3', 5'-GAU-3', 5'-GGG-3', 5'-UCG-3' 또는 5'-ACG-3', 바람직하게는 5'-mAmCmC-3', 5'-mCmGmC-3', 5'-mGmAmU-3', 5'-mGmGmG-3', 5'-mUmCmG-3' 또는 5'mAmCmG-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9 활성을 저해하고 TLR8 활성을 강화시키며, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 5'-UCG-3' 또는 5'-CGC-3', 바람직하게는 5'-mUmCmG-3' 또는 5'-mCmGmC-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이다. 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR9 활성을 저해하고, TLR8 활성을 실질적으로 강화시키지 않거나, TLR8 활성을 저해하며, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 5'-GAU-3', 바람직하게는 5'-mGmAmU-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는, 변형된 염기는 2'OMe이다.
임의의 구현예에서, TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40 또는 50개 뉴클레오티드 길이이다. 일 구현예에서, TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드는 적어도 3개, 그러나 20개 이하의 뉴클레오티드 길이, 선택적으로 적어도 9개, 그러나 20개 이하의 뉴클레오티드 길이이다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열:
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAGTCmUmCmCmAmU-3';
5'-mGmCmGmGmUATCCATAGTCmUmCmCmAmU-3';
5'-mCmCmAmAmCACTTCGTGGGmGmUmCmCmU-3';
5'-mCmAmCmUmUCGTGGGGTCCmUmUmUmUmC-3';
5'-mUmGmAmCmAAAACAATAATmAmAmCmAmG-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAAGCmUmCmUmCmU-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAGTCmUmCmCmAmU-3';
5'-mUmCmCmGmGCCTCGGCAGAmUmAmUmCmG-3';
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열:
5'-mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmUmGmUGTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmCmGmUTTCCATGTCCmCmAmGmGmC-3';
5'-mGmCmGmGmUATCC-3';
5'-mGmCmUmGmUTTCC-3';
5'-mGmCmUmGmUGTCC-3';
5'-MGmCmCmGmUTTCC-3';
5'-mCmUmUmCmGTGGGGTCCTTmUmUmCmAmC-3'; 및
5'-mCmUmUmCmGTGGG-3';
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다. 바람직하게는, 각각의 염기는 변형된 백본을 가지며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열;
5'-mG*mC*mG*mG*mU*A*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'- mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*A*A*G*C*mU*mC*mU*mC*mU-3';
5'- mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*A*G*T*C*mU*mC*mC*mA*mU-3';
5'-mU*mC*mC*mG*mG*C*C*T*C*G*G*C*A*G*A*mU*mA*mU*mC*mG-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*T*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'- mG*mC*mU*mG*mU*G*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'-mG*mC*mC*mG*mU*T*T*C*C*A*T*G*T*C*C*mC*mA*mG*mG*mC-3';
5'-mG*mC*mG*mG*mU*A*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*T*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mU*mG*mU*G*T*C*C*-3';
5'-mG*mC*mC*mG*mU*T*T*C*C*-3';
5'-mC*mU*mU*mC*mG*T*G*G*G*G*T*C*C*T*T*mU*mU*mC*mA*mC; 및
5'-mC*mU*mU* mC*mG*T*G*G*G*-3'을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 'm'은 2'OMe 염기를 나타내며, *는 포스포로티오에이트 백본을 나타낸다.
또 다른 양태에서, 본 발명은
a) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 5' 영역,
b) 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역으로서, 중간 영역의 염기의 적어도 약 50%가 아데닌 염기인 중간 영역; 및
c) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 3' 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드에 속하는 것이며;
올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우 TLR9 활성을 저해한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3'(SEQ ID NO: 164);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3'(SEQ ID NO: 164);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166); 및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
추가의 일 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2);
5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 212);
5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4);
5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5);
5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6);
5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8);
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145);
5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213);
5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214);
5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215);
5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216);
5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165);
5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167);
5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160);
5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3'(SEQ ID NO: 21);
5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3'(SEQ ID NO: 218);
5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3'(SEQ ID NO: 161);
5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3'(SEQ ID NO: 219);
5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3'(SEQ ID NO: 220);
5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3'(SEQ ID NO: 221);
5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3'(SEQ ID NO: 222);
5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3'(SEQ ID NO: 146);
5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3'(SEQ ID NO: 223);
5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3'(SEQ ID NO: 20);
5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3'(SEQ ID NO: 224);
5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'(SEQ ID NO: 41);
5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3'(SEQ ID NO: 35);
5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3'(SEQ ID NO: 225);
5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3'(SEQ ID NO: 39);
5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3'(SEQ ID NO: 226);
5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3'(SEQ ID NO: 33);
5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3'(SEQ ID NO: 227);
5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3'(SEQ ID NO: 228);
5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3'(SEQ ID NO: 25);
5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3'(SEQ ID NO: 26);
5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3'(SEQ ID NO: 229);
5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3'(SEQ ID NO: 230);
5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3'(SEQ ID NO: 231);
5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3'(SEQ ID NO: 232);
5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3'(SEQ ID NO: 23);
5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'(SEQ ID NO: 148);
5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3'(SEQ ID NO: 233);
5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3'(SEQ ID NO: 32);
5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3'(SEQ ID NO: 234);
5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3'(SEQ ID NO: 22);
5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3(SEQ ID NO: 235)';
5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3'(SEQ ID NO: 156);
5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3'(SEQ ID NO: 236);
5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3'(SEQ ID NO: 237);
5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3'(SEQ ID NO: 238);
5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3'(SEQ ID NO: 239);
5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3'(SEQ ID NO: 162);
5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'(SEQ ID NO: 166);
5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3'(SEQ ID NO: 24);
5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3'(SEQ ID NO: 144);
5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3'(SEQ ID NO: 240);
5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3'(SEQ ID NO: 241);
5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3'(SEQ ID NO: 155);
5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3'(SEQ ID NO: 9);
5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3'(SEQ ID NO: 11);
5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3'(SEQ ID NO: 12);
5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3'(SEQ ID NO: 13);
5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 14);
5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3'(SEQ ID NO: 15);
5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3'(SEQ ID NO: 17);
5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3'(SEQ ID NO: 18);
5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3'(SEQ ID NO: 242);
5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3'(SEQ ID NO: 243);
5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3'(SEQ ID NO: 244);
5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3'(SEQ ID NO: 245);
5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3'(SEQ ID NO: 246);
5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3'(SEQ ID NO: 247);
5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3'(SEQ ID NO: 248);
5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3'(SEQ ID NO: 249);
5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3'(SEQ ID NO: 250);
5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3'(SEQ ID NO: 251);
5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3'(SEQ ID NO: 252);
5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3'(SEQ ID NO: 253);
5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3'(SEQ ID NO: 254);
5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3'(SEQ ID NO: 255);
5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3'(SEQ ID NO: 256);
5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3'(SEQ ID NO: 257);
5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3'(SEQ ID NO: 258);
5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3'(SEQ ID NO: 259);
5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3'(SEQ ID NO: 260);
5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3'(SEQ ID NO: 261);
5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 262);
5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3'(SEQ ID NO: 263);
5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3'(SEQ ID NO: 264);
5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3'(SEQ ID NO: 265);
5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3'(SEQ ID NO: 266);
5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3'(SEQ ID NO: 267);
5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3'(SEQ ID NO: 268);
5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3'(SEQ ID NO: 269);
5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3'(SEQ ID NO: 270);
5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3'(SEQ ID NO: 271);
5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3'(SEQ ID NO: 272);
5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3'(SEQ ID NO: 273);
5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3'(SEQ ID NO: 274);
5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3'(SEQ ID NO: 275);
5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 276);
5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3'(SEQ ID NO: 277);
5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3'(SEQ ID NO: 278);
5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3'(SEQ ID NO: 279);
5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3'(SEQ ID NO: 280);
5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3'(SEQ ID NO: 281);
5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3'(SEQ ID NO: 282);
5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3'(SEQ ID NO: 283);
5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3'(SEQ ID NO: 284);
5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3'(SEQ ID NO: 285);
5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3'(SEQ ID NO: 286);
5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3'(SEQ ID NO: 287);
5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3'(SEQ ID NO: 288);
5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3'(SEQ ID NO: 289);
5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3'(SEQ ID NO: 290);
5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3'(SEQ ID NO: 291);
5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3'(SEQ ID NO: 292);
5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56);
5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 293);
5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3'(SEQ ID NO: 294);
5'-GGCTTC-3'(SEQ ID NO: 295);
5'-GGCATC-3'(SEQ ID NO: 296);
5'-AGCTTC-3'(SEQ ID NO: 297);
5'-GGAATC-3'(SEQ ID NO: 298);
5'-CACATC-3'(SEQ ID NO: 299);
5'-GGCCTC-3'(SEQ ID NO: 204);
5'-CACTTC-3'(SEQ ID NO: 300);
5'-AAGATC-3'(SEQ ID NO: 301);
5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3'(SEQ ID NO: 302);
5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3'(SEQ ID NO: 94);
5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3'(SEQ ID NO: 303);
5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3'(SEQ ID NO: 304);
5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3'(SEQ ID NO: 175);
5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3'(SEQ ID NO: 93);
5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3'(SEQ ID NO: 305);
5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3'(SEQ ID NO: 306);
5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3'(SEQ ID NO: 89);
5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3'(SEQ ID NO: 95);
5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3'(SEQ ID NO: 103);
5'-GACTATACGCGCAATA-3'(SEQ ID NO: 307);
5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3'(SEQ ID NO: 308);
5'-TCCAACACTTCGTGGG-3'(SEQ ID NO: 114);
5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3'(SEQ ID NO: 106);
5'-CTTGAAGCATCGTATC-3'(SEQ ID NO: 98);
5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3'(SEQ ID NO: 309);
5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3'(SEQ ID NO: 105);
5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3'(SEQ ID NO: 310);
5'-GATAGCACCTTCAGCA-3'(SEQ ID NO: 100);
5'-AGGACTCCAGATGTTT-3'(SEQ ID NO: 311);
5'-GTGATCTTGACATGCT-3'(SEQ ID NO: 312);
5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3'(SEQ ID NO: 313);
5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3'(SEQ ID NO: 314);
5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3'(SEQ ID NO: 315);
5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3'(SEQ ID NO: 316);
5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3'(SEQ ID NO: 191);
5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3'(SEQ ID NO: 317);
5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3'(SEQ ID NO: 318);
5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3'(SEQ ID NO: 319);
5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57);
5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58);
5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59);
5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60);
5'-GUC-3';
5'-GUG-3';
5'-GUU-3';
5'-GGC-3';
5'-AUC-3';
5'-GAG-3';
5'-GGA-3';
5'-TTT-3';
5'-TCT-3';
5'-GAA-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-AUG-3';
5'-GCG-3';
5'-UUC-3';
5'-GCC-3';
5'-GGG-3';
5'-AUU-3';
5'-GCA-3';
5'-AGC-3';
5'-AAC-3';
5'-CCA-3';
5'-UGC-3';
5'-CAA-3';
5'-CGG-3';
5'-ACC-3';
5'-AGA-3';
5'-TTT-3';
5'-TCT-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 제공하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 TLR7 활성을 저해한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3'(SEQ ID NO: 1); 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3'(SEQ ID NO: 2); 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3'(SEQ ID NO: 212); 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4); 5'-UGUUUC-3'(SEQ ID NO: 5); 5'-UGUGUC-3'(SEQ ID NO: 6); 5'-CGUGUC-3'(SEQ ID NO: 8); 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30); 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38); 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31); 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36); 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28); 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46); 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42); 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43); 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44); 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45); 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47); 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151); 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54); 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145); 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213); 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214); 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215); 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216); 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217); 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29); 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37); 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55); 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40); 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10); 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52); 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48); 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165); 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167); 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUX-3' 또는 5'-GAX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-GUC-3', 5'-GUG-3', 5'-GUA-3', 5'-GUU-3', 5'-GGC-3', 5'-AUC-3', 5'-GAG-3', 5'-GGA-3', 5'-TTT-3', 5'-TCT-3', 5'-GAA-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-AUG-3'; 5'-GCG-3'; 5'-UUC-3'; 5'-GCC-3'; 5'-GGG-3'; 5'-AUU-3'; 5'-GCA-3'; 5'-AGC-3'; 5'-AAC-3'; 5'-CCA-3'; 5'-UGC-3'; 5'-CAA-3'; 5'-CGG-3'; 5'-ACC-3'; 5'-AGA-3'; 5'-TTT-3' 또는 5'-TCT-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 바람직하게는 1개 또는 2개의 염기는 변형된 염기이고, 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본, 바람직하게는 5'-mGmUmX-3' 또는 5'-mGmAmX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-mGmUmC-3', 5'-mGmUmG-3', 5'-mGmUmA-3', 5'-mGmUmU-3', 5'-mGmGmC-3', 5'-mAmUmC-3', 5'-mGmAmG-3', 5'-mGmGmA-3', 5'-mTmTmT-3' 또는 5-mTmCmT-3', 5'-mGmAmA-3'; 5'-mGmAmC-3'; 5'-mGmAmU-3'; 5'-mAmUmG-3'; 5'-mGmCmG-3'; 5'-mUmUmC-3'; 5'-mGmCmC-3'; 5'-mGmGmG-3'; 5'-mAmUmU-3'; 5'-mGmCmA-3'; 5'-mAmGmC-3'; 5'-mAmAmC-3'; 5'-mCmCmA-3'; 5'-mUmGmC-3'; 5'-mCmAmA-3'; 5'-mCmGmG-3'; 5'-mAmCmC-3'; 5'-mAmGmA-3'; 5'-mUmUmU-3', 5'mUmCmU-3', 5'mTmTm-3' 또는 5'-mTmCmT-3'이며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR7 활성을 저해하고 TLR8 활성을 저해하며, 예를 들어, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUX-3' 또는 5'-GAX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-GUC-3', 5'-GUG-3', 5'-GUA-3', 5'-GUU-3', 또는 5'-GAG-3', 5'-GAC-3', 5'-GAU-3', 5'-GAA-3', 바람직하게는 5'-mGmUmX-3' 또는 5'-mGmAmX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-mGmUmC-3', 5'-mGmUmG-3', 5'-mGmUmA-3', 5'-mGmUmU-3', 5'-mGmAmG-3', 5'-mGmAmC-3', 5'-mGmAmU-3', 5'-mGmAmA-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
상기 언급된 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드는 하기를 포함할 수 있다:
a) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 5' 영역,
b) 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역, 및
c) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 3' 영역.
일 구현예에서, 중간 영역은 약 10개 염기 길이이다.
일 구현예에서, 5' 영역 및/또는 3' 영역은 (a) 약 3개 염기 길이; 또는 (b) 약 5개 염기 길이이다. 5' 영역 및/또는 3' 영역이 약 5개 염기 길이인 구현예에서, 염기는 적합하게는 변형된 2'-OMe 및/또는 2'-MOE이다. 5' 영역 및/또는 3' 영역이 약 3개 염기 길이인 구현예에서, 염기는 적합하게는 변형된 2'-LNA이다.
모티프가 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)이고, U가 T일 수 있는 구현예에서, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다. 특정 구현예에서, 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재하며, U는 T일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다.
다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열:
5'-mGmGmUmAmU-3';
5'-mGmGmUmA-3';
5'-mGmUmAmU-3';
5'-mGmGmU-3';
5'-mGmUmA-3';
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
추가의 일 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
5'-CUUCG-3';
5'-CUUCGTG-3';
5'-CUUCGTGGG-3';
5'-UCG-3';
5'-UCA-3';
5'-CGG-3';
5'-UGG-3';
5'-CGC-3';
5'-AGG-3';
5'-GGA-3';
5'-GGC-3';
5'-AGA-3';
5'-CGA-3';
5'-UAG-3';
5'-UCU-3';
5'-AGC-3';
5'-GGU-3';
5'-UGA-3';
5'-AGU-3';
5'-ACG-3';
5'-CGU-3';
5'-UCC-3';
5'-GCG-3';
5'-GGG-3';
5'-UGU-3';
5'-UCA-3';
5'-CUG-3';
5'-UUG-3';
5'-UUA-3';
5'-UGC-3';
및
이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 TLR8 활성을 강화시킨다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-CGX-3', 5'-AGX-3', 5'GGX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-UCG-3'; 5'-UCA-3'; 5'-CGG-3'; 5'-UGG-3'; 5'-CGC-3'; 5'-AGG-3'; 5'-GGA-3'; 5'-GGC-3'; 5'-AGA-3'; 5'-CGA-3'; 5'-UAG-3'; 5'-UCU-3'; 5'-AGC-3'; 5'-GGU-3'; 5'-UGA-3'5'-AGU-3'; 5'-ACG-3'; 5'-CGU-3'; 5'-UCC-3'; 5'-GCG-3'; 5'-GGG-3'; 5'-UGU-3'; 5'-UCA-3'; 5'-CUG-3'; 5'-UUG-3'; 5'-UUA-3' 또는 5'-UGC-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며; 바람직하게는 1개 또는 2개의 염기는 변형된 염기이고/이거나 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본, 더욱 바람직하게는 5'-mUmCmG-3'; 5'-mUmCmA-3'; 5'-mCmGmG-3'; 5'-mUmGmG-3'; 5'-mCmGmC-3'; 5'-mAmGmG-3'; 5'-mGmGmA-3'; 5'-mGmGmC-3'; 5'-mAmGmA-3'; 5'-mCmGmA-3'; 5'-mUmAmG-3'; 5'-mUmCmU-3'; 5'-mAmGmC-3'; 5'-mGmGmU-3'; 5'-mUmGmA-3'5'-mAmGmU-3'; 5'-mAmCmG-3'; 5'-mCmGmU-3'; 5'-mUmCmC-3'; 5'-mGmCmG-3'; 5'-mGmGmG-3'; 5'-mUmGmU-3'; 5'-mUmCmA-3'; 5'-mCmUmG-3'; 5'-mUmUmG-3'; 5'-mUmUmA-3' 또는 5'-mUmGmC-3'이며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 mC*mU*mU*C*G*T*G*G*G*G*T*C*C*T*T*mU*mU*mC*mA*mC를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이며, 2'OMe이며, *는 변형된 백본 포스포로티오에이트이다. 올리고뉴클레오티드는 제1 CG에서 LNA를 가질 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 강화시키는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 강화시키는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
추가의 일 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-GAG-3';
5'-GAC-3';
5'-GAU-3';
5'-GAA-3';
5'-GUC-3';
5'-GUU-3';
5'-GUA-3';
5'-GUG-3';
5'-AUA-3';
5'-AUG-3';
5'-CUU-3';
5'-AAG-3';
5'-AUC-3';
5'-CCC-3';
5'-GCU-3';
5'-CCU-3';
5'-CUA-3';
5'-CUC-3';
5'-AAC-3'을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 TLR8 활성을 저해한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GAX-3' 또는 5'-GUX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-GAG-3', 5'-GAC-3', 5'-GAU-3', 5'-GAA-3', 5'-GUC-3', 5'-GUU-3', 5'-GUA-3', 5'-GUG-3', 5'-AUA-3'; 5'-AUG-3'; 5'-CUU-3'; 5'-AAG-3'; 5'-AUC-3'; 5'-CCC-3'; 5'-GCU-3'; 5'-CCU-3'; 5'-CUA-3; 5'-CUC-3 또는 5'-AAC-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며; 바람직하게는 1개 또는 2개의 염기는 변형된 염기이고/이거나 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기는 변형된 백본, 더욱 바람직하게는 5'-mGmAmX-3' 또는 5'-mGmUmX-3'(여기서 X는 임의의 뉴클레오티드임), 5'-mGmAmG-3', 5'-mGmAmC-3', 5'-mGmAmU-3', 5'-mGmAmA-3', 5'-mGmUmC-3', 5'-mGmUmU-3', 5'-mGmUmA-3', 5'-mGmUmG-3', 5'-mAmUmA-3'; 5'-mAmUmG-3'; 5'-mCmUmU-3'; 5'-mAmAmG-3'; 5'-mAmUmC-3'; 5'-mCmCmC-3'; 5'-mGmCmU-3'; 5'-mCmCmU-3'; 5'-mCmUmA-3; 5'-mCmUmC-3 또는 5'-mAmAmC-3이며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR8의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A 또는 6의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR3, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
추가의 일 양태에서, 본 발명은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
5'-TAC-3';
5'-CGC-3';
5'-GCA-3';
5'-UGA-3';
5'-CAG-3';
5'-UGG-3';
5'-UCA-3';
5'-TGA-3';
5'-CGT-3';
5'-GAC-3';
5'-CCA-3';
5'-TAG-3';
5'-TGG-3';
5'-TCA-3';
5'-TGC-3';
5'-CAC-3';
5'-CGG-3';
5'-CCC-3';
5'-ACT-3';
5'-GTA-3';
5'-GGA-3';
5'-AAG-3';
5'-ATA-3';
5'-GUC-3';
5'-UCC-3';
5'-AUC-3';
5'-CCG-3';
5'-CAA-3';
5'-GAU-3';
5'-CGA-3'을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 제공하며;
U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 또는 본원에 기재된 임의의 검정에서 TLR3 활성을 저해한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-TAC-3', 5'-CGC-3', 5'-GCA-3', 5'-UGA-3', 5'-CAG-3', 5'-UGG-3', 또는 5'-UCA-3', 바람직하게는 5'-mTmAmC-3', 5'-mCmGmC-3', 5'-mGmCmA-3', 5'-mUmGmA-3', 5'-mCmAmG-3', 5'-mUmGmG-3', 5'-mUmCmA-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 가지며, 바람직하게는 변형된 염기는 2'OMe이며, 변형된 백본은 포스포로티오에이트이다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR3의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A, 6 또는 7의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 TLR3의 활성을 저해하는 것으로 실시예에서 나타난, 정의된 특정 변형을 갖거나 이를 갖지 않는 표 1, 1A, 2, 2A, 3, 3A, 4, 4A, 5, 5A, 6 또는 7의 임의의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 올리고뉴클레오티드는 TLR8, TLR7, TLR9 및/또는 cGAS 활성을 저해하거나, 이를 실질적으로 저해하지 않는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 양태 또는 구현예의 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 조성물은 약제학적으로 또는 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 조성물은 본질적으로 상기 양태 또는 구현예의 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용 가능한 담체로 이루어진다.
일 구현예에서, 조성물은 약제학적으로 또는 생리학적으로 허용 가능한 비-독성 담체를 추가로 포함한다.
일 구현예에서, 조성물에 존재하는 유일한 활성 약제학적 성분은 상기 양태 또는 구현예의 올리고뉴클레오티드이다. 바람직하게는, 사용 전에, 즉, 대상체로의 투여 전에 또는 세포와의 접촉 전에, 조성물에 존재하는 유일한 활성 약제학적 성분은 상기 양태 또는 구현예의 올리고뉴클레오티드이다.
임의의 구현예에서, 조성물의 올리고뉴클레오티드 함량의 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100%는 상기 양태 또는 구현예 중 임의의 것의 올리고뉴클레오티드이다. 바람직하게는, 사용 전에, 즉, 대상체로의 투여 전에 또는 세포와의 접촉 전에, 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드 함량을 갖는다.
임의의 구현예에서, 조성물의 올리고뉴클레오티드 함량의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 100%는 상기 양태 또는 구현예 중 임의의 것의 올리고뉴클레오티드이다. 바람직하게는, 사용 전에, 즉, 대상체로의 투여 전에 또는 세포와의 접촉 전에, 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드 함량을 갖는다.
임의의 구현예에서, 조성물 중 활성 약제학적 성분의 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100%는 상기 양태 또는 구현예 중 임의의 것의 올리고뉴클레오티드이다.
추가의 양태에서, 본 발명은 세포에서 표적 유전자의 발현을 감소시키는 방법에 관한 것이며, 당해 방법은 세포를 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 방법에 속하는 것이며, 당해 방법은 치료적 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여함으로써, 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 단계를 포함한다.
관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에서의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물에 관한 것이다.
상기 3가지 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드 또는 조성물은 질병, 장애 또는 질환에 관여하는 표적 유전자의 발현을 감소시킨다.
적합하게는, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 cGAS 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다.
일 구현예에서, 질병, 장애 또는 질환은 헌팅턴병, 파킨슨병, 운동-신경 질병(MND), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 프리온병, 전측두엽 치매, 외상성 뇌 손상, 알츠하이머병, 급성 췌장염, 실리카-유도 섬유증(Silica-induced fibrosis), 연령 의존성 황반 변성, 아이카디-구티에레스 증후군, 심근경색, 심부전, 다발성관절염/태아 및 신생아 빈혈, 전신 홍반성 루푸스, 급성 신장 손상, 알코올-관련 간 질병, 비-알코올 지방간 질병, 실리카 유도 폐 염증(silica driven lung inflammation), 만성 폐쇄성 폐 질병, 허혈성 뇌졸중 후 뇌 손상, 패혈증, 비-알코올성 지방간염(NASH), 암, 낫적혈구병, 염증성 장 질병, 제2형 당뇨병, 과다-영양-유도 비만, COVID-19, 만성 폐쇄성 폐 장애(COPD), 조혈 장애, 연령-관련 염증, 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) 감염, B형 간염, 후안부 안구 질병, 관절염, 류마티스 관절염, 폐기종, 대장암, 피부암, 전이 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 3가지 상기 언급된 양태의 질병, 장애 또는 질환은 노쇠-관련 질병, 장애 또는 질환, 예컨대 노화 및/또는 노화-관련 질병, 장애 또는 질환이다. 이와 관련하여, 올리고뉴클레오티드는 적합하게는 대상체에게 투여되는 경우 cGAS 활성을 저해한다.
적합하게는, 3가지 상기 언급된 양태의 질병, 장애 또는 질환은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR9 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다. 일 구현예에서, 질병, 장애 또는 질환은 건선, 류마티스 관절염, 전신 탈모증, 급성 파종 뇌척수염, 에디슨병, 알레르기, 강직성 척추염, 항인지질 항체 증후군, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 수포성 유사천포창, 샤가스병, 만성 폐쇄성 폐 질병, 셀리악병, 피부 홍반성 루푸스(CLE), 피부근염, 당뇨병, 확장성 심근병증(DC), 자궁내막증, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질병, 간질성 방광염, 국소피부굳음증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 심근염, 기면증, 신경근긴장증, 천포창, 악성빈혈, 다발성근염, 원발성 담즙성 경변증, 류마티스 관절염(RA), 조현병, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 전신 경화증, 측두 동맥염, 혈관염, 백반, 외음부통, 베게너 육아종증, 외상성 통증, 신경병성 통증 및 아세트아미노펜 독성, 유방암, 자궁경부 편평 세포 암종, 위암종, 신경교종, 간세포 암종, 폐암, 흑색종, 전립선암, 재발성 교모세포종, 재발성 비-호지킨 림프종 및 대장암으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 질병, 장애 또는 질환은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR7 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다.
일 구현예에서, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR8 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다.
일 구현예에서, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR3 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다.
다른 구현예에서, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환은 대상체로의 치료적 올리고뉴클레오티드의 투여와 관련된 염증성 질병, 장애 또는 질환이다. 이와 관련하여, 염증성 질병, 장애 또는 질환은 치료적 올리고뉴클레오티드의 투여 후의 하나 이상의 핵산 센서, 예컨대 cGAS, TLR3, TLR8, TLR9 및/또는 TLR7의 활성화와 적어도 부분적으로 연관된다. 일 구현예에서, 염증성 질병, 장애 또는 질환은 간 염증을 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 cGAS를 저해하는 방법에 속하는 것이다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 cGAS를 저해하는 방법에 속하는 것이다.
상기 2가지 양태의 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60) 및 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59)으로부터 선택되는 모티프를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다. 이러한 예에서, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 세포에서 노쇠를 저해하거나 예방한다.
일 구현예에서, 세포는 면역 세포이다.
일 구현예에서, 세포는 세포 배양물 내에 존재한다. 일 구현예에서, 당해 방법은 세포를 배양하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 당해 방법은 동일하지만 올리고뉴클레오티드를 결여한 조건 하에서 배양되는 세포보다 더 많은 생 세포를 생성한다. 따라서, 당해 방법은, 더 적은 계대를 사용하여 주어진 수의 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 하기 서열:
5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30);
5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38);
5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31);
5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36);
5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28);
5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46);
5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42);
5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43);
5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44);
5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45);
5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47);
5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151);
5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54);
5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3'(SEQ ID NO: 27);
5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3'(SEQ ID NO: 29);
5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3'(SEQ ID NO: 37);
5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3'(SEQ ID NO: 55);
5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3'(SEQ ID NO: 40);
5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10);
5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52);
5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48);
또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-mGmCmGmGmUATCCATGTCCmCmAmGmGmC-3'의 서열, 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-mGmCmGmGmUmAmTmCmCmAmTmGmTmCmCmCmAmGmGmC-3'의 서열, 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
추가의 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR9를 저해하는 방법을 제공한다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR9를 저해하는 방법에 속하는 것이다.
상기 2가지 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드는 적합하게는 RNA 분자, 예컨대 외인성 RNA 분자에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR9 활성화를 저해한다.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 52), 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3'(SEQ ID NO: 48), 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3'(SEQ ID NO: 160), 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3'(SEQ ID NO: 159), 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10), 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3'(SEQ ID NO: 165), 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3'(SEQ ID NO: 167); 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10)의 서열; 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3'(SEQ ID NO: 10)의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-mUmCmCmGmGCCTCGGAAGCmUmCmUmCmU-3'의 서열 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있으며, m은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR7을 저해하는 방법에 속하는 것이다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR7을 저해하는 방법을 제공한다.
상기 2가지 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드 또는 조성물은 적합하게는 RNA 분자, 예컨대 외인성 RNA 분자, 또는 TLR7 효능제, 예컨대 소분자에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR7 활성화를 저해한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR7 활성화를 예방하거나 저해하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드와 접촉시키는 단계를 포함한다.
추가의 관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서의 RNA 분자 또는 TLR7 효능제에 의한 TLR7 활성화를 예방하거나 저해하는 방법에 속하는 것이며, 상기 방법은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR8을 저해하는 방법을 제공한다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR8을 저해하는 방법에 속하는 것이다.
상기 2가지 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드 또는 조성물은 적합하게는 RNA 분자, 예컨대 외인성 RNA 분자 또는 TLR8 효능제, 예컨대 소분자, 예를 들어, 모톨리모드(Motolimod)에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR8 활성화를 저해한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 세포에서의 RNA 분자 또는 TLR8 효능제에 의한 TLR8 활성화를 예방하거나 저해하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
추가의 관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화의 예방, 저해 방법에 속하는 것이며, 상기 방법은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR3을 저해하는 방법을 제공한다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR3을 저해하는 방법에 속하는 것이다.
상기 2가지 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드 또는 조성물은 적합하게는 RNA 분자, 예컨대 외인성 RNA 분자 또는 TLR3 효능제, 예컨대 소분자에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR3 활성화를 저해한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 세포에서의 RNA 분자 또는 TLR3 효능제에 의한 TLR3 활성화를 예방하거나 저해하는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
추가의 관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서의 RNA 분자 또는 TLR3 효능제에 의한 TLR3 활성화의 예방, 저해 방법에 속하는 것이며, 상기 방법은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR8을 강화시키거나 이의 활성을 증가시키는 방법을 제공한다.
관련 양태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR8을 강화시키거나 이의 활성을 증가시키는 방법에 속하는 것이다.
상기 2가지 양태에 관하여, 올리고뉴클레오티드 또는 조성물은 적합하게는 RNA 분자, 예컨대 외인성 RNA 분자 또는 TLR8 효능제, 예컨대 소분자, 예를 들어, 모톨리모드에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR8 활성화를 증가시킨다. 따라서, 동시-투여된 TLR8 효능제의 존재 하에서의 본 발명의 올리고뉴클레오티드에 의한 TLR8 활성의 강화는 더 낮은 용량의 TLR8 효능제가 본 발명에서 투여되는 것을 가능하게 한다. 강화될 수 있는 다른 TLR7/8 효능제는 R848, 록소리빈(Loxoribine), 가디퀴모드(gardiquimod), 이사토리빈(Isatoribine), 이미퀴모드(Imiquimod), CL075, CL097, CL264, CL307, 852A 또는 TL8-506을 포함한다.
또 다른 관련 양태에서, 본 발명은 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화를 증가시키거나 강화시키는 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 세포를 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
추가의 관련 양태에서, 본 발명은 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화를 증가시키거나 강화시키는 방법에 속하는 것이며, 상기 방법은 유효량의 상기 양태의 올리고뉴클레오티드 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
특정 구현예에서, RNA 분자는 메신저 RNA(mRNA) 분자이다. 적합하게는, mRNA 분자는 면역원성 조성물, 예컨대 mRNA 백신 조성물의 성분이거나, 그 안에 포함된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 양태의 RNA 분자 및 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다.
적합하게는, 면역원성 조성물은 mRNA 백신 조성물이다.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 30); 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3'(SEQ ID NO: 38); 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3'(SEQ ID NO: 31); 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3'(SEQ ID NO: 36); 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3'(SEQ ID NO: 28); 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 46); 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 42); 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 43); 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 44); 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 45); 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 47); 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3'(SEQ ID NO: 151); 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3'(SEQ ID NO: 54); 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3'(SEQ ID NO: 145); 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3'(SEQ ID NO: 213); 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3'(SEQ ID NO: 214); 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3'(SEQ ID NO: 215); 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3'(SEQ ID NO: 216); 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3'(SEQ ID NO: 217)의 서열; 또는 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 변이체를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U는 T일 수 있고/있거나 T는 U일 수 있다.
상기 5가지 양태의 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 5'-GGUAUA-3'(SEQ ID NO: 4), 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60) 및 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59)으로부터 선택되는 모티프를 포함하거나, 이로 이루어지거나, 본질적으로 이로 이루어지며, U는 T일 수 있다. 이러한 예에서, 모티프는 적합하게는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재한다.
적합하게는, 상기 언급된 양태에 있어서, 모티프의 염기 중 하나 이상은 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본, 예컨대 본원에 기재된 것들을 갖는다.
본 발명에 유용한 변형된 염기의 예는 2'-O-메틸, 2'-O-메톡시에톡시, 2'-플루오로, 2'-알릴, 2'-O-[2-(메틸아미노)-2-옥소에틸], 4'-티오, 4'-CH2-O-2'-가교, 4'-(CH2)2-O-2'-가교, 2'-LNA, 2'-아미노, 플루오로아라비노뉴클레오티드, 트레오스 핵산 또는 2'-O--(N-메틀리카바메이트)를 포함하는 것들을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
상기 양태에 관하여, 변형된 백본은 적합하게는 포스포로티오에이트, 비-가교 산소 원자 치환 황 원자, 포스포네이트, 예컨대 메틸포스포네이트, 포스포디에스테르, 포스포로모르폴리데이트, 포스포로피페라지데이트, 아미드, 메틸렌(메틸아미노), 프롬아세탈, 티오포름아세탈, 펩티드 핵산 또는 포스포로아미데이트, 예컨대 모르폴리노 포스포로디아미데이트(PMO), N3'-P5' 포스포르아미다이트 또는 티오포스포로아미다이트를 포함한다.
상기 양태에 있어서, 올리고뉴클레오티드의 적어도 일부는 적합하게는 리보핵산, 데옥시리보핵산, DNA 포스포로티오에이트, RNA 포스포로티오에이트, 2'-O-메틸-올리고뉴클레오티드, 2'-O-메틸-올리고데옥시리보뉴클레오티드, 2'-O-하이드로카르빌 리보핵산, 2'-O-하이드로카르빌 DNA, 2'-O-하이드로카르빌 RNA 포스포로티오에이트, 2'-O-하이드로카르빌 DNA 포스포로티오에이트, 2'-F-포스포로티오에이트, 2'-F-포스포디에스테르, 2'-메톡시에틸 포스포로티오에이트, 2-메톡시에틸 포스포디에스테르, 데옥시 메틸렌(메틸이미노)(데옥시 MMI), 2'-O-하이드로카르비 MMI, 데옥시-메틸포스-포네이트, 2'-O-하이드로카르빌 메틸포스포네이트, 모르폴리노, 4'-티오 DNA, 4'-티오 RNA, 펩티드 핵산, 3'-아미데이트, 데옥시 3'-아미데이트, 2'-O-하이드로카르빌 3'-아미데이트, 잠금 핵산, 사이클로헥산 핵산, 트리사이클-DNA, 2'플루오로-아라비노 핵산, N3'-P5' 포스포로아미데이트, 카바메이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 나일론 백본 변형 및 이들의 임의의 조합이거나 이를 갖는다.
상기 양태의 일 구현예에서, 변형된 염기는 하기를 포함한다:
(a) 2'O-메틸 및 포스포로티오에이트 백본;
(b) 2'-LNA 및 포스포로티오에이트 백본; 또는
(c) 2'-O-메톡시에톡시 및 포스포로티오에이트 백본.
상기 양태의 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드의 염기 중 적어도 하나는 표적 폴리뉴클레오티드에 혼성화되지 않는다.
적합하게는, 상기 양태의 올리고뉴클레오티드는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 예컨대 갭머 안티센스 올리고뉴클레오티드, 또는 유전자 침묵화를 위한 이중 가닥 올리고뉴클레오티드, 예컨대 siRNA 또는 shRNA이다. 특정 구현예에서, 모티프 또는 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 염기는 생체내에서 엔도뉴클레아제에 의해 제거된다.
대안적인 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 합성 올리고뉴클레오티드이다. 이에 관하여, 올리고뉴클레오티드는 표적 폴리뉴클레오티드, 예컨대 세포 또는 천연 발생 전사물에 결합하거나 혼성화되지 않도록 설계된다.
본원의 임의의 구현예는 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 임의의 다른 구현예에 준용하여 적용되는 것으로 간주될 것이다.
본 발명은 단지 예시의 목적으로 의도된 본원에 기재된 특정 구현예에 의해 범위가 제한되어서는 안 된다. 기능적으로 등가인 제품, 조성물 및 방법은 본원에 기재된 바와 같이 명백히 본 발명의 범주 내에 있다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 달리 구체적으로 언급되지 않거나 맥락상 달리 요구되지 않는 한, 단일 단계, 물질의 조성, 단계의 군 또는 물질의 조성의 군에 대한 언급은 이들 단계, 물질의 조성, 단계의 군 또는 물질의 조성의 군 중 하나 및 복수(즉, 하나 이상)를 포함하는 것으로 간주될 것이다.
본 발명은 하기에서 첨부된 도면을 참조하여 하기 비제한적 실시예에 의해 설명된다.
도 1. ASO에 의한 cGAS 감지의 서열-의존적 저해. (a) HeLa 및 HT-29 세포를 cGAS에 표적화된 20 nM의 표기된 ASO(표 1)로 24시간 동안 트랜스펙션시킨 후에, RNA 정제 및 RT-qPCR 분석을 행하였다. cGAS 수준을 18S와 비교하여 보고하고, 모의 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 각각의 세포주에 대한 2개의 독립적인 실험의 중간값을 나타낸다. (b) 100 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 8.5시간 동안 트랜스펙션시키거나, 트랜스펙션시키지 않았으며(비-처리[NT]), 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 대한 투키(Tukey)의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원(one-way) ANOVA가 나타나 있다). NT 세포에서 ASO의 기저 효과가 존재하지 않았다(문헌[Alharbi et al., 2020]). (c) 125, 250 또는 500 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 HT-29 세포를 2.5 μg/ml의 ISD70로 24시간 동안 트랜스펙션시키거나, 트랜스펙션시키지 않았으며(비-처리[NT]), 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 대한 만-휘트니(Mann-Whitney) U 검정이 나타나 있다. (d, e) 100 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 7 내지 8시간 동안 트랜스펙션시켰으며, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. (d) 자극 및 ELISA를 2개의 독립적인 플레이트에서 수행하였으며, 결과는 각각의 축 상에 제시되어 있다(이때, 상관관계 r=0.7716, P<0.0001). 두 플레이트 모두로부터의 평균 값은 표 2에 제공되어 있다. ISD70 단독 조건은 청색으로 나타나 있다. (e) NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "ISD70 단독" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 대한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). (f) 187.5 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 HT-29 세포를 2.5 μg/ml의 ISD70으로 24시간 동안 트랜스펙션시키거나, 트랜스펙션시키지 않았으며, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "ISD70 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). (g) cGAS-/-, UNC93B1-/- 및 UNC93B1 발현이 구제된 매칭되는 대조군(UNC93B1 WT) THP-1을 100 또는 250 nM의 ASO로 6시간 동안 사전-처리하고, 2.5 μg/ml의 ISD70으로 하룻밤 트랜스펙션시켰다. GSK(100 nM) 및 ODN2006(500 nM)을 각각 인간 STING 및 TLR9 효능제로서 사용하였다. 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하고, NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 "GSK" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있다). * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001, ns: 유의미하지 않음.
도 2. 고도로 강력한 cGAS 감지 저해제의 식별. (a) 상단: cGAS 저해제의 서열 정렬, 및 화살표로 강조 표시된, MEME 분석에 의해 예측되는 중요한 염기의 식별(도 6a). 하단: MEME 모티프의 선택된 위치에 점 돌연변이를 혼입한 C2 및 ASO2 돌연변이체의 설계(돌연변이는 황색으로 강조 표시됨). (b, d) 표기된 용량의 ASO(500, 250, 125, 62.5 nM)로 하룻밤 사전-처리된 HT-29 세포를 2.5 μg/ml의 ISD70으로 24시간 동안 트랜스펙션시키거나, 트랜스펙션시키지 않았으며, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(d) 또는 3(b)개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 C2[b] 또는 ASO2[d] 조건에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있고; 250 nM과 500 nM에 대한 ASO 간의 비교는 유의미하지 않았다). (c) 마우스 LL171 세포를 표기된 양의 ASO(200, 400, 600 nM)로 6시간 동안 처리한 후에, 2.5 μg/ml의 ISD45를 사용한 하룻밤 자극을 행하였다. 세포를 용해시키고, ISRE-Luc 수준을 다음날 루시퍼라제 검정에 의해 분석하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, ISRE-루시퍼라제 수준을 "ISD45 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (e) 상단: C2-Mut1 변이체의 서열 정렬; C2-ASO2-A 및 C2-ASO2-B는 밑줄 표시된 ASO2up 및 ASO2down으로부터의 3' 말단을 갖는다. 하단: 호모폴리머 dC20의 변이체; 2'OMe 염기는 분홍색이며, cGAS 저해 모티프는 밑줄 표시되어 있다. (f) 187.5 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 HT-29 세포를 2.5 μg/ml의 ISD70으로 24시간 동안 트랜스펙션시키거나, 트랜스펙션시키지 않았으며, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. (g) 100 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 24시간 동안 트랜스펙션시키고, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. (f, g) NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "ISD70 단독" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). (h) LL171 세포를 200 nM의 ASO로 6시간 동안 처리한 후에, 2.5 μg/ml의 ISD45를 사용한 하룻밤 자극을 행하였다. 세포를 용해시키고, ISRE-Luc 수준을 다음날 루시퍼라제 검정에 의해 분석하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 ISRE-루시퍼라제 수준을 "ISD45 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). (i) THP-1 세포를 100 nM C2-Mut1 또는 100, 250, 500 nM의 C2-Mut1-PS로 6시간 동안 처리하고, 2.5 μg/ml의 ISD70으로 하룻밤 트랜스펙션시켰다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 대한 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (j) MEME에 의해 식별된 ASO103으로부터의 저해성 GGUCCC 모티프(분홍색)의 위치를 보여주는 [LINC-PINT] ASO 101 내지 116의 서열(d 및 도 6b 참조). 황색 영역은 갭머의 DNA 모이어티를 강조 표시한 것이다. (k) 100 nM의 표기된 [LINC-PINT] ASO로 하룻밤 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 7.5시간 동안 트랜스펙션시켰으며, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다). (l, m) LL171 세포를 200 nM의 ASO로 6시간 또는 20분 동안 처리한 후에, "세척"하거나, 세척하지 않거나(l), 50, 100 또는 200 nM의 ASO로 20분 동안 처리하고(m), 2.5 μg/ml의 ISD45를 사용하여 하룻밤 자극하였다. 세포를 용해시키고, ISRE-Luc 수준을 다음날 루시퍼라제 검정에 의해 분석하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, ISRE-루시퍼라제 수준을 "ISD45 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(l) 또는 3개(m)의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD45 단독" 조건에 대한 투키의 다중 비교 검정(l) 또는 "ISD45 단독" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 대한 만-휘트니 U 검정(m)을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다). (n) 250 nM의 표기된 ASO로 40분 동안 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 하룻밤 트랜스펙션시키고, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "ISD70 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정 및 Mut1-dC와 dC20을 비교하는 만-휘트니 U 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001, ns: 유의미하지 않음.
도 3. cGAS 기능의 서열-의존적 저해. (a, b) 표기된 용량(500, 250, 125, 62.5, 31.25 nM)(a) 또는 125 nM(b)의 C2-Mut1 또는 A151 올리고뉴클레오티드로 6시간 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 하룻밤 트랜스펙션시켰으며, 상청액 중 IP-10(a) 또는 IFN-β(b) 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10(a) 및 IFN-β(b) 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. (a, b) 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 A151에 비한 시닥(Sidak)의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있거나[a] 조건 "NT" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다[b]). MG-63(c) 또는 마우스 불멸화된 BMDM(d)을 500 nM로 6시간 동안 사전-처리하거나, 이로 사전-처리하지 않은 후에, 2.5 μg/ml의 ISD(MG-63에 대하여 ISD70, BMDM에 대하여 ISD45), LPS(1 μg/ml), GSK(100 nM), PAM3C(100 ng/ml), ODN1826(500 nM) 또는 DMXAA(50 μg/ml)를 사용하여 하룻밤 자극하였다. 상청액 중 IP-10(c 및 d) 및 TNF-α(d) 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. (c) NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, 데이터를 "GSK" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (d) IP-10 수준을 DMXAA 조건에 대하여 정규화시킨 한편, TNF-α를 LPS 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (e) 재조합 cGAS 단백질을 시험관내에서 증가하는 농도의 ASO(0.5, 2 및 10 μM)와 함께 또는 이것 없이(NT) 2.3 μM의 ISD70과 40분 동안 인큐베이션시켰다. 반응을 EDTA를 사용하여 중지시키고, cGAMP 수준을 ELISA에 의해 분석하였다. 데이터를 조건 A151 2 μM에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 ELISA에서 기술적 2벌 반복으로 시행된 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (f) BJ hTERT SV40T 세포를 증가하는 양의 표기된 ASO(20, 50, 100 nM) 또는 2 mM의 아스피린(ASP)으로 하룻밤 트랜스펙션시킨 후에, RNA 정제를 행하였다. 3가지 인간 IFN-유도 유전자의 패널의 발현을 RT-qPCR에 의해 분석하였다. 표기된 유전자의 발현을 18S 발현에 대하여 보고하고, "모의" 조건의 평균에 대하여 추가로 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 2벌 반복으로 수행된 3개의 독립적인 실험의 평균을 나타낸다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). (g) 3마리의 상이한 마우스로부터의 Trex1-돌연변이 일차 BMDM을 50 nM의 ASO(또는 리포펙타민 단독, "모의")로 20시간 동안 트랜스펙션시킨 후에, RNA 정제를 행하였다. 3가지 마우스 IFN-유도 유전자의 패널의 발현을 RT-qPCR에 의해 분석하였다. 표기된 유전자의 발현을 18S 발현에 대하여 보고하고, "모의" 조건의 평균에 대하여 추가로 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 2벌 반복으로 수행된 3마리의 마우스의 평균을 나타낸다(± s.e.m 및 만-휘트니 U 검정이 나타나 있다). * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001, ns: 유의미하지 않음.
도 4. 서열-의존적 TLR9 저해. (a, c) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 500 nM의 표기된 ASO로 30분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다(비-처리[NT]). NF-κB-루시퍼라제 수준을 하룻밤 인큐베이션 후에 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "ODN2006 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(a) 또는 3개(c)의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ODN2006 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정[a] 또는 만-휘트니 U 검정[c]을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다). (b) ASO2 및 ASO11 서열 돌연변이체. ASO11Mut1 및 ASO11Mut2는 각각 ASO2의 3' 및 5' 말단을 함유한다. (d) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 500 nM의 표기된 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. NF-κB-루시퍼라제 수준을 하룻밤 인큐베이션 후에 측정하였다. NF-κB-루시퍼라제 수준을 NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 "ODN2006 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 자극 및 루시퍼라제 검정을 2개의 독립적인 플레이트에서 수행하였으며, 결과는 각각의 축 상에 제시되어 있다(이때, 상관관계 r=0.7909, P<0.0001)(평균화된 데이터는 표 2에 제공되어 있다). 가장 강력한 10개의 ASO(플레이트 내의 위치 참조번호는 표 2에 따라 제공됨)는 플롯 상에 강조 표시되어 있다. 500 nM에서 TLR9 활성의 50% 이하의 감소를 갖는 ASO는 청색 음영으로 강조 표시되어 있다. (e) 하단: TLR9 저해 모티프를 구성하는 염기의 상대 빈도의 MEME 픽토그램. 상단: 도 6d에서 식별된 모티프가 풍부한 서열의 정렬(플레이트 내의 위치 참조번호는 표 2에 따라 제공된다). (f) ASO2 모티프가 풍부한 서열의 정렬(도 S6c). (g) 스크리닝된 80개의 ASO(표 2 참조)로부터의 상위 및 하위 16개의 TLR9 저해제의 중앙의 10개 DNA 염기를 염기 함량에 대하여 분석하였다. 바이올린 플롯은 두 ASO 집단 모두에 대한 각 중앙의 염기의 누적 분포 수를 보여준다. (상위 및 하위 집단 간의) 시닥의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있다. (h, j, l) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 500 nM의 표기된 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다(비-처리[NT]). NF-κB-루시퍼라제 수준을 하룻밤 인큐베이션 후에 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "ODN2006 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m). "ASO2138" 조건(h) 또는 "ASO108" 조건(j)에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. (l) 조건 "661" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. (i, k) 밀접하게 관련된 ASO의 패밀리에서 "CUU" 모티프를 보여주는 서열 정렬; 황색 영역은 갭머의 DNA 모이어티를 강조 표시한다. (m) (TLR7에 대하여 100 nM 및 TLR9에 대하여 500 nM로 사용되는) 80개의 ASO에 기초한 TLR7 및 TLR9 저해의 상관관계. 조건 (TLR7에 대한) "ASO 부재 하의 R848" 또는 (TLR9에 대한) "ASO 부재 하의 ODN2006"에 비한 NF-κB-루시퍼라제 수준의 백분율은 생물학적 2벌 반복으로부터의 평균이다(평균화된 데이터는 표 2에 제공되어 있다)(이때, 상관관계 r=0.05256, P= 0.6433). 선택된 ASO가 표기되어 있다. * P≤0.05, ** P≤0.01, **** P≤0.0001, ns: 유의미하지 않음.
도 5. 2'OMe ASO의 광범위한 면역억제 효과. (a) 80개의 ASO에 대한 (표 2 및 문헌(Alharbi et al., 2020)으로부터의 데이터에 기초한) cGAS, TLR9, TLR7 저해와 TLR8 강화 간의 관계를 보여주는 버블 그래프. TLR7 및 TLR9에 대하여, 조건 (TLR7에 대한) "ASO 부재 하의 R848" 또는 "ASO 부재 하의 ODN2006"(TLR9)에 비한 NF-κB-루시퍼라제 수준의 백분율이 나타나 있다(버블의 크기는 TLR7 신호전달 세기를 반영한다). TLR8에 있어서, 조건 "ASO 부재 하의 R848"에 비한 배수 증가가 4 색-척도를 사용하여 나타나 있다. cGAS에 있어서, 조건 "ISD70 단독"에 비한 IP-10 생성의 백분율이 나타나 있다. 선택된 ASO가 표시되어 있다(플레이트 내의 위치 참조번호는 표 2에 따라 제공된다). (b) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 500 nM의 표기된 ASO로 30 내지 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다(비-처리[NT]). 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-κB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "ODN2006 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "ODN2006 단독" 또는 다르게는 표기된 조건의 쌍에 비한 투키의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다). (c) (TLR7 및 cGAS에 대하여 100 nM로 사용된) 80개의 ASO에 기초한 TLR7 및 cGAS 저해의 상관관계. 조건 (TLR7에 대한) "ASO 부재 하의 R848"에 비한 NF-κB-루시퍼라제 수준의 백분율 또는 조건 "ISD70 단독"에 비한 IP-10 생성의 백분율이 나타나 있다(이때, 유의미한 상관관계 r=0.2780, P= 0.0125). 선택된 ASO가 표시되어 있다(플레이트 내의 위치 참조번호는 표 2에 따라 제공된다). (d) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 표기된 농도의 ASO(500, 250, 125, 62.5, 31.25 nM)로 30 내지 50분 동안 처리한 후에, 1 μg/ml의 R848을 사용한 자극을 행하였다. NF-κB-루시퍼라제 수준을 하룻밤 인큐베이션 후에 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "R848 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 A151에 비한 시닥의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있다). (e) (TLR8에 대하여 500 nM 및 cGAS에 대하여 100 nM로 사용된) 80개의 ASO에 기초한 TLR8 강화와 cGAS 저해 간의 상관관계. (TLR8에 대한) 조건 "ASO 부재 하의 R848"에 비한 NF-κB-루시퍼라제 수준의 배수 증가 또는 조건 "ISD70 단독"에 비한 IP-10 생성의 백분율이 나타나 있다(이때, 유의미한 상관관계 r=0.2879, P= 0.0096). 선택된 ASO가 표시되어 있다(플레이트 내의 위치 참조번호는 표 2에 따라 제공된다). (f) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR3 세포를 표기된 농도의 C2-Mut1(1000, 500, 250, 125, 62.5, nM) 또는 A151(753, 376.5, 188.25, 94.125 또는 47.0625 nM)로 30 내지 50분 동안 처리한 후에, 0.5 μg/ml의 pIC를 사용한 자극을 행하였다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-κB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "pIC 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m). * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001, ns: 유의미하지 않음.
도 6. ASO에서의 MEME(Multiple Em for motif Elicitation) 모티프 발견. (a) ASO2를 포함하는 80개의 ASO 스크린에서 가장 강력한 2개의 cGAS 저해제(즉, ASO2, C2 및 E10)를 EE를 사용하여 분석하였다. (b) 80개의 ASO 스크린에서 가장 강력한 10개의 cGAS 저해제를 EE를 사용하여 분석하였다(표 2 참조). 나타낸 모티프를 갖는 5개의 서열을 식별하였다(C2 및 F2가 밀접하게 관련된 서열이지만, 다른 것은 그렇지 않았음에 주목한다). (c, d) 80개의 ASO 스크린에서 가장 강력한 10개의 TLR9 저해제를 ASO2와 함께 EE를 사용하여 분석하였다(표 2 참조). ASO2와 공통인 것(c) 및 A-풍부 중앙 모티프(d)를 포함하는 2개의 모티프가 여기에 나타나 있다. (e) 80개의 ASO 스크린에서 10% 미만의 cGAS 감지 저해를 갖는 17개의 ASO의 EE 분석(표 2 참조). 8개의 ASO는 강조 표시된 모티프를 공유하였다(각각 D10/A8 및 A9/H9가, 관련된 서열임에 주목한다). (a 내지 e) 도면은 EE 웹사이트로부터의 직접적인 스크린샷이다. ASO 명칭은 플레이트 내의 이들의 위치로서 제공된다(표 2 참조).
도 7. HT-29를 500 nM의 ASO2-Cy3과 함께 인큐베이션시킨 후에, ISD70+리포펙타민 트랜스펙션을 4시간 동안 행하거나 이를 행하지 않았다. 이어서, 세포를 PBS로 세척한 후에, 도립 형광 현미경법에 의한 영상화를 행하였다. 나타낸 영상은 2개의 독립적인 실험을 대표한다. ASO2-Cy3 단독 처리 세포에서의 시토졸 형광에 의해 세포에 의한 ASO의 자발적인 흡수가 명백하게 확인되는 한편, 밝은 형광 점상(punctuate)의 발생은 리포펙타민-ISD 복합체의 트랜스펙션 동안의 표지된 ASO의 증가된 흡수를 시사한다.
도 8. THP-1 및 HT-29 세포를 각각 100 nM 또는 187.5 nM의 C2-Mut1과 함께 6시간 동안 인큐베이션시킨 후에, ISD70을 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 다음날, 1X 레자주린 용액을 각각의 웰에 첨가하고, 37℃에서 4 내지 5시간 후에 세포 생존력을 측정하였다. 블랭크(blank) 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, 데이터를 NT 조건(ASO 부재, ISD70 부재)에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m).
도 9. (a) 2명의 환자로부터의 일차 FLS 세포를 표기된 용량의 네이키드(naked) ASO의 존재 하에 15일 동안 배양한 후에, 고정하고, β-갈락토시다제 염색에 대하여 분석하였다. β-갈락토시다제 양성 세포의 수를 NT 조건에 대하여 정규화시켰다. 좌측 패널: NT 및 5 μM C2-Mut1 조건의 대표적인 이미지; NT 조건에서 40 내지 50%의 세포는 β-갈락토시다제 염색에 대하여 양성이었다. 나타낸 데이터는 각각의 독립적인 공여자에 대한 각각의 조건에 대한 3벌의 반복 검증으로부터의 평균이다(± s.e.m). (b) 2명의 상이한 환자로부터의 일차 골수-유래 MSC를 표기된 용량의 네이키드 C2-Mut1의 존재 하에서 2주 동안 배양한 후에, 고정하고, β-갈락토시다제 염색에 대하여 분석하였다. β-갈락토시다제 양성 세포의 수를 NT 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 각각의 독립적인 공여자에 대한 각각의 조건에 대한 6벌의 반복 검증으로부터의 평균이다(± s.e.m). (c) 2명의 환자로부터의 일차 FLS 세포를 2.5 μM의 네이키드 ASO의 존재 하에 7일 동안 배양한 후에, 고정하고, β-갈락토시다제 염색에 대하여 분석하였다. β-갈락토시다제 양성 세포의 수를 NT 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 각각의 독립적인 공여자에 대한 각각의 조건에 대한 적어도 5벌의 반복 검증으로부터의 평균이다(± s.e.m). 각각의 공여자의 "C2-Mut1 단독" 조건에 비한 시닥의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 이원 ANOVA가 나타나 있다.
도 10. NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR3 세포를 500 nM(a) 또는 100 nM(b)의 표기된 ASO/ODN으로 20 내지 50분 동안 처리한 후에, 폴리(I:C)(1 μg/ml[a] 또는 0.5 μg/ml[b])를 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다(비-처리[NT]). 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-κB-루시퍼라제 수준을 측정하고, NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, "pIC 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. (a, b) 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "pIC"에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다). ** P≤0.01, **** P≤0.0001. ns: 유의미하지 않음.
도 11. ASO2에 의한 TLR9 감지의 저해는 ASO2의 양의 감소와 함께 보존된다. NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 표기된 양의 ASO2(100 내지 500 nM)로 50분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다(비-처리[NT]). 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-κB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-κB-루시퍼라제 수준을 "ODN2006 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 조건 "NT"에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다). **** P≤0.0001. ns: 유의미하지 않음.
도 12. NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 500 nM의 표기된 ASO로 20분 동안 처리한 후에, 1 μg/ml의 R848을 사용한 자극을 행하였다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-κB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. 조건 "ASO 부재 하의 R848"에 비하여 나타난 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개(좌측 패널) 또는 2개(우측 패널)의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 Mut1-dC 조건[상단] 또는 NT 조건[하단]에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA).
도 13. 125 nM의 표기된 ASO로 45분 동안 사전-처리된 THP-1을 2.5 μg/ml의 ISD70으로 하룻밤 트랜스펙션시키고, 상청액 중 IP-10 수준을 ELISA에 의해 결정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, IP-10 수준을 "ISD70 단독" 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(± s.e.m 및 "ISD70 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교 검정을 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다).
도 14: a, b) NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 약 30분 동안 100 nM(a) 또는 6시간 동안 400 nM(b)의 표기된 2'OMe ASO로 사전-처리한 후에, 하룻밤 R848 자극(1 μg/ml)을 행하였다. 모든 ASO 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(b) 또는 3개(a)의 독립적인 실험의 최소치로부터의 평균이며, R848 단독 조건에 대하여 보고된다. SEM 및 "R848 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. c) 3마리의 야생형(WT) 마우스로부터의 일차 BMDM을 200 nM의 표기된 ASO로 30분 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 500 μM의 구아노신으로 처리하였다. 다음날, 상청액을 수집하고, TNFα ELISA에 의해 분석하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3마리의 독립적인 마우스로부터의 평균이다. SEM 및 "구아노신 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 15: 야생형(WT) 및 Tlr7 Y264H 돌연변이 마우스로부터의 일차 BMDM을 200 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 사전-처리한 후에, mRNA 정제 및 RT-qPCR 분석을 행하였다. 유전자 발현을 18s 수준에 대하여 정규화시키고, 각각의 마우스에 대하여 NT 조건에 대해 추가로 보고하였다(데이터는 생물학적 2벌 반복의 2마리의 야생형 및 3마리의 Tlr7 Y264H 마우스로부터의 평균이다). SEM 및 Mut1-dC 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 16: 좌측: HEK-TLR7 세포 상에서 스크린으로부터 100 nM에서 가장 강력한 TLR7 저해를 나타내는 2'MOE ASO의 서열 정렬. 유의미하게 풍부한 모티프는 컬러로 강조 표시된다. 중간: 저해 모티프를 구성하는 염기의 상대적인 빈도의 MEME 픽토그램. 하단: F5-Mut는 F5와 비교하여, 보존된 모티프(청색 음영)에 표적화된 3개의 염기 변형(적색)을 함유한다. 우측: NF-κB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 100 nM의 표기된 2'OMe ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 R848 자극(1 μg/ml)을 행하였다. 모든 ASO 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험의 최소치로부터의 평균이며, R848 단독 조건에 대하여 보고된다. SEM 및 "F5" 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 17: THP-1, MG-63 및 LL-171 세포를 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 ISD를 사용한 트랜스펙션을 행하였다. (THP-1 및 MG-63에 대한) IP10 및 ISRE-Luc 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(LL171) 또는 3개의 독립적인 실험(THP-1 및 MG-63)으로부터의 평균이다. SEM, 독립표본 t-검정(THP-1) 및 ASO847에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 통상적인 이원 ANOVA(MG-63)가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD를 사용하여 자극하였다.
도 18: SV40T hTERT 섬유모세포를 100 nM의 표기된 ASO로 하룻밤 트랜스펙션시켰다. 다음날, RNA를 정제하고, 유전자 발현을 RTqPCR에 의해 평가하였다. 수득된 데이터를 18S 발현에 대하여 정규화시키고, 모의 단독 조건(트랜스펙션 시약 단독)에 대하여 수득된 값에 대하여 추가로 보고된다. 나타낸 데이터는 생물학적 2벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "847" 조건[HPRT] 또는 C2-Mut1[IFIT2]에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 19: THP-1 세포를 (100 nM로 사용되는 C2-Mut1을 제외하고) 250 nM의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD70을 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD70 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험(THP-1)으로부터의 평균이다. SEM, 및 "ISD70" 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD를 사용하여 자극하였다.
도 20: THP-1 세포를 100 nM의 ASO로 하룻밤 사전-처리한 후에, 7시간 동안 ISD70 자극을 행하였다. 자극 및 ELISA를 2개의 독립적인 플레이트에서 수행하였으며, (ISD70 단독 대조군에 비한) 결과는 각각의 축 상에 제시되어 있다. 추가의 분석에 제시된, 선택된 웰이 강조 표시되어 있다. 두 스크린 모두에 있어서, LNA 스크린(상관관계 r = 0.7153, P < 0.0001)과 비교하여 2MOE 스크린(상관관계 r = 0.3760, P= 0.0008)에서 더 많은 분기(divergence)가 있었지만 플레이트 A/B는 유의미한 상관관계가 있었다.
도 21: THP-1 세포를 (100 nM로 사용되는 C2-Mut1을 제외하고) 300 nM의 LNA 또는 200 nM의 MOE ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD70을 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD70 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(LNA) 또는 3개(MOE)의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "ISD70" 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD70을 사용하여 자극하였다.
도 22: 마우스 LL171 세포를 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD를 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. ISRE-Luc 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 마우스로부터의 평균이다. SEM 및 ISD 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 통상적인 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD를 사용하여 자극하였다.
도 23: THP-1 및 LL-171 세포를 200(2MOE를 사용하는 LL171 및 THP-1) 또는 300(LNA를 사용하는 THP-1) nM의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD를 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. (THP-1에 대하여) IP10 및 (LL171에 대하여) ISRE-Luc 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM, 독립표본 만-휘트니(LL171) 및 ISD 단독에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 통상적인 일원 ANOVA(THP-1)가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD를 사용하여 자극하였다.
도 24: MG-63 및 LL-171 세포를 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD를 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. (MG-63에 대하여) IP10 및 (LL171에 대하여) ISRE-Luc 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다(+/- SEM).
도 25: MG-63을 (500 nM로 사용되는 B3 및 HPRT847Mut를 제외하고) 1 mM의 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD를 사용한 하룻밤 트랜스펙션, 5 mg/ml의 pIC 또는 100 nM의 GSK를 사용한 자극을 행하였다(문헌[Valentin et al., 2021]). IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 GSK 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 단일의 실험으로부터의 것이다(+/- SEM).
도 26: iBMDM을 500 nM의 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD 또는 리포펙타민 단독("모의" 조건)을 사용한 하룻밤 자극을 행하였다. IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "ISD" 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 및 모의 조건을 제외한 모든 조건을 ISD를 사용하여 자극하였다.
도 27: THP-1 세포를 표기된 농도의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD70을 사용한 하룻밤 트랜스펙션을 행하였다. IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD70 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 비-선형 회귀가 나타나 있다. 모든 조건을 ISD70을 사용하여 자극하였다.
도 28: 재조합 cGAS 단백질을 시험관내에서 40분 동안 2 μM의 ASO와 함께 또는 이것 없이(NT) 2.3 mM의 ISD70과 함께 인큐베이션시켰다. 반응을 EDTA를 사용하여 중단시키고, cGAMP 수준을 특이적인 ELISA에 의해 분석하였다. 데이터는 단일의 실험으로부터의 것이며, 점은 기술적 반복 검증으로부터의 것이다.
도 29: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 100 또는 500 nM의 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-kB-루시퍼라제 수준을 'ODN2006 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. 100 nM 및 500 nM의 ASO를 사용한 자극을 독립적인 실험에서 수행하였다(각각의 농도에 대하여 나타난 데이터는 생물학적 2벌 반복의 단일의 실험으로부터의 것이다). MOE D10(분홍색) 및 D8 LNA(녹색)는 둘 모두 MB21D1의 동일한 영역을 표적화하며, 이에 따라 최상의 TLR9 2'OMe ASO로서 이전에 연구된 ASO2와 유사하다(문헌[Valentin et al. 2021]).
도 30: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 100 nM의 표기된 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006(CpG)을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT를 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-kB-루시퍼라제 수준을 'CpG 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "CpG" 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ODN2006을 사용하여 자극하였다.
도 31: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 100 nM의 표기된 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006(CpG)을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT를 사용한 백그라운드 보정 후에, NF-kB-루시퍼라제 수준을 'CpG 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "CpG" 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ODN2006을 사용하여 자극하였다.
도 32: 야생형(WT) 마우스로부터의 일차 BMDM을 100 nM의 표기된 ASO로 1시간 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 250 nM의 B-406-AS RNA를 사용한 트랜스펙션을 행하였다. 다음날, 상청액을 수집하고, TNFa ELISA에 의해 분석하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. SEM 및 "B-406-AS + dC20" 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 33: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR8 세포를 500 nM의 ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 R848 자극을 행하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. NF-kB-루시퍼라제 값은 R848 조건에 대하여 보고된다. 모든 ASO 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. SEM 및 R848 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 34: THP-1 세포를 1 mM의 ASO로 하룻밤 사전-처리한 후에, 7시간 동안 R848 자극을 행하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. 모든 ASO 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. SEM 및 R848 단독 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 35: THP-1 세포를 표기된 농도의 ASO로 하룻밤 사전-처리한 후에, 7시간 동안 R848 자극을 행하였다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 3개의 독립적인 실험으로부터의 평균이다. 모든 ASO 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. SEM 및 660-3b 조건에 대한 투키의 다중 비교를 사용한 이원 ANOVA가 나타나 있다.
도 36: a, b, c) NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR8 세포를 1 mM(b) 또는 5 mM(a 및 c)의 올리고로 40분간 사전-처리한 후에, 모톨리모드 자극을 행하였다(400 nM[b] 또는 600 nM[a 및 c] 하룻밤). 나타낸 데이터는 3개의 생물학적 3벌 반복으로 완료된 2개(b)의 독립적인 또는 단일의 실험(a 및 c)으로부터의 평균이다. NF-kB-루시퍼라제 값은 모톨리모드 조건에 대하여 보고된다. d) THP-1 세포를 1 mM의 3-mer 올리고로 하룻밤 사전-처리한 후에, 7시간 동안 R848 자극(1 mg/ml)을 행하였다. IP-10 수준을 ELISA에 의해 측정하였다. 나타낸 데이터는 3개의 생물학적 3벌 반복으로 완료된 단일의 실험으로부터의 평균이며, R848 단독 조건에 대하여 보고된다. a 내지 e) 모든 올리고 조건은 모톨리모드 또는 R848 동시-자극을 사용한다.
도 37: a, b 및 c) NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 400 nM(a, c) 또는 표기된 용량의 2'OMe 3-mer 올리고로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, R848 자극(1 μg/ml[a, b) 또는 표기된 용량[c])을 하룻밤 행하였다. 모든 올리고 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개(a, c) 또는 4개(b)의 독립적인 실험의 최소치로부터의 평균이며, R848 단독 조건(a, b) 또는 NT(c)에 대해 보고된다. SEM 및 "R848 단독" 조건에 대한 던넷의 다중 비교를 사용하는 일원 ANOVA(a) 또는 이원 ANOVA(b, c)가 나타나 있다.
도 38: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR7 세포를 400 nM 또는 2 μM 또는 표기된 용량의 2'OMe 3-mer 올리고로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, 하룻밤 R848 자극(1 μg/ml)을 행하였다. 모든 올리고 조건은 R848 동시-자극을 사용한다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이며, NT에 대한 백그라운드 보정 후에 R848 단독 조건에 대해 보고된다.
도 39: THP-1 세포를 표기된 용량(a) 또는 250 nM(b)의 ASO로 30분 동안 사전-처리한 후에, ISD70 자극을 하룻밤 행하였다. IP10 수준을 측정하고, 백그라운드 보정 후에 ISD70 단독 조건에 대하여 정규화시켰다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균(a) 또는 대표(b)이다. SEM이 나타나 있다. NT 조건을 제외한 모든 조건을 ISD70을 사용하여 자극하였다.
도 40: 불멸화된 마우스 골수 유래 대식구를 250 nM의 2'OMe ASO로 약 30분 동안 사전-처리한 후에, ODN 자극(500 nM)을 하룻밤 행하였다. 모든 올리고 조건은 ODN 동시-자극을 사용한다. 나타낸 데이터는 생물학적 3벌 반복의 2개의 독립적인 실험으로부터의 평균이며, ODN 단독 조건에 대해 보고된다. SEM 및 "C2Mut1v1 단독"에 대한 던넷의 다중 비교를 사용한 일원 ANOVA가 나타나 있다.
도 41: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR9 세포를 2 mM의 ASO로 45분 동안 처리한 후에, 200 nM의 ODN2006을 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 'ODN2006 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. ASO2를 양성 대조군으로서 사용하였다. 나타낸 데이터는 3벌의 생물학적 반복 검증(biological replicate)을 사용한 1개의 실험으로부터의 평균이다.
도 42: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR3 세포를 2 mM의 3-mer 2'OMe로 45분 동안 처리한 후에, 500 ng/ml의 폴리I:C를 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 '폴리I:C 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. C2-Mut1을 양성 대조군으로서 사용하였다. 나타낸 데이터는 3벌의 생물학적 반복 검증을 사용한 1개의 실험으로부터의 평균이다.
도 43: NF-kB-루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK-TLR3 세포를 2 mM의 3-mer DNA PS로 45분 동안 처리한 후에, 500 ng/ml의 폴리I:C를 사용한 자극을 행하거나, 이를 행하지 않았다. 하룻밤 인큐베이션 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 측정하였다. NT 조건을 사용한 백그라운드 보정 후에 NF-kB-루시퍼라제 수준을 '폴리I:C 단독' 조건에 대하여 정규화시켰다. C2-Mut1을 양성 대조군으로서 사용하였다. 나타낸 데이터는 3벌의 생물학적 반복 검증을 사용한 1개의 실험으로부터의 평균이다.
일반적인 기법 및 정의
달리 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업계(예를 들어, 올리고뉴클레오티드 설계, 분자 유전학, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 유전자 침묵화, 유전자 발현 및 생화학)의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 간주될 것이다.
달리 나타내지 않는 한, 본 발명에서 이용되는 재조합 단백질, 세포 배양 및 면역학적 기법은 당업계의 숙련자에게 잘 알려진 표준 절차이다. 이러한 기법은 문헌[J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984)], 문헌[J. Sabrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)], 문헌[T.A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991)], 문헌[D.. Glover and B.D. Haes (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 and 1996)] 및 문헌[F.M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, 현재까지의 모든 업데이트를 포함함)], 문헌[Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory (1988)] 및 문헌[J.E. Coligan et al. (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons(현재까지의 모든 업데이트를 포함함)]과 같은 출처의 문헌 전반에 걸쳐 기재되고 설명되어 있다.
용어 "및/또는", 예를 들어 "X 및/또는 Y"는 "X 및 Y" 또는 "X 또는 Y"를 의미하는 것으로 이해될 것이며, 두 의미 모두 또는 둘 중 하나의 의미에 대한 분명한 뒷받침을 제공하는 것으로 간주될 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 약이라는 용어는 반대로 언급되지 않는 한, 지정된 값의 +/- 10%, 더욱 바람직하게는 +/-5%, 더욱 바람직하게는 +/-1%를 지칭한다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 단어 "포함하다(comprise)", 또는 "포함한다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소, 정수 또는 단계의 군의 포함을 내포하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계 또는 요소, 정수 또는 단계의 군의 배제를 내포하지는 않음이 이해될 것이다.
올리고뉴클레오티드 서열의 맥락에서, "~로 본질적으로 이루어진(consisting essentially of)"은 이의 5' 또는 3' 말단에서의 추가의 1개, 2개 또는 3개의 핵산과 함께 인용된 올리고뉴클레오티드 서열을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "cGAS 활성을 저해하는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 cGAS 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없거나, 오직 감소된 또는 부분적인 cGAS 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, cGAS 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만이다.
유사하게, 어구 "올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 증가시키는" 등은 출발(비변형된) 올리고뉴클레오티드와 비교하는 경우, 본 발명에 따라 변형된 후에, 변형된 올리고뉴클레오티드가 투여된 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 cGAS 기반의 면역 반응을 시작할 수 없거나, 오직 더 약하거나 부분적인 cGAS 기반의 면역 반응만을 시작할 수 있음을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "cGAS 활성을 저해하지 않는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 cGAS 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없음을 의미한다. 일 구현예에서, cGAS 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 100%이다.
유사하게, 어구 "올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 감소시키는" 등은 출발(비변형된) 올리고뉴클레오티드와 비교하는 경우, 본 발명에 따라 변형된 후에, 변형된 올리고뉴클레오티드가 투여된 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 더 강력한 cGAS 기반의 면역 반응을 시작할 수 있음을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR9 활성을 저해하는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR9 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없거나, 오직 감소된 또는 부분적인 TLR9 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR9 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만이다.
유사하게, 어구 "올리고뉴클레오티드의 TLR9 저해 활성을 증가시키는" 등은 출발(비변형된) 올리고뉴클레오티드와 비교하는 경우, 본 발명에 따라 변형된 후에, 변형된 올리고뉴클레오티드가 투여된 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR9 기반의 면역 반응을 시작할 수 없거나, 오직 더 약하거나 부분적인 TLR9 기반의 면역 반응만을 시작할 수 있음을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR9 활성을 저해하지 않는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR9 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR9 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 100%이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR7 활성을 저해하는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR7 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없거나, 오직 감소된 또는 부분적인 TLR7 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR7 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR7 활성을 저해하지 않는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR7 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR7 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 100%이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR8 활성을 저해하는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR8 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없거나, 오직 감소된 또는 부분적인 TLR8 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR8 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR8 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 있거나, 오직 증가된 또는 상승된 TLR8 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR8 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 초과이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR3 활성을 저해하는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR3 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없거나, 오직 감소된 또는 부분적인 TLR3 기반의 면역 반응만을 이끌어낼 수 있음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR3 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 약 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 2% 또는 1% 미만이다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "TLR3 활성을 저해하지 않는" 또는 이의 변형은 동물로의 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 투여 후에, 동물이 예컨대 병원체 또는 손상된 내인성 핵산에 대하여 TLR3 기반의 면역 반응을 이끌어낼 수 없음을 의미한다. 일 구현예에서, TLR3 기반의 면역 반응은 올리고뉴클레오티드의 부재 하의 반응의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 99% 또는 100%이다.
어구 "약제학적으로 허용 가능한"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 및/또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합당한 이익/위험 비에 상응하는 이들 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여형을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하는", "치료하다" 또는 "치료"는 질병, 장애 또는 질환의 적어도 하나의 증상을 감소시키거나 제거하기에 충분한 치료적 유효량의 본원에 기재된 화합물(들)을 투여하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "예방하는", "예방하다" 또는 "예방"은 질병, 장애 또는 질환의 적어도 하나의 증상의 발생을 중단시키거나 방해하기에 충분한 치료적 유효량의 본원에 기재된 화합물(들)을 투여하는 것을 포함한다.
용어 "치료적 유효량" 및 "유효량"은 특정 작용제, 예컨대, 당해 작용제로 치료받거나 이와 접촉한 대상체 또는 세포에서 원하는 효과를 달성하기에 충분한, 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 양을 기재한다. 예를 들어, 이는 질병, 장애 또는 질환을 감소시키고/시키거나, 경감시키고/시키거나, 예방하는 데 필요한, 본원에 기재된 하나 이상의 핵산 센서(예를 들어, cGAS, TLR3, TLR7, TLR8 또는 TLR9)의 활성을 저해하는 하나 이상의 작용제를 포함하는 조성물의 양일 수 있다. 일부 구현예에서, "치료적 유효량"은 질병, 장애 또는 질환의 증상을 감소시키거나 제거하기에 충분하다. 다른 구현예에서, "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 원하는 생물학적 효과를 달성하기에 충분한 양, 예를 들어, 노쇠-연관 질병, 장애 또는 질환을 감소시키거나 예방하거나, 세포에서 노쇠를 저해하거나 예방하기에 유효한 양이다.
이상적으로, 작용제의 치료적 유효량은 대상체에서 상당한 세포독성 효과를 야기하지 않으면서, 원하는 결과를 유도하기에 충분한 양이다. 질병, 장애 또는 질환을 감소시키고/시키거나, 경감시키고/시키거나 예방하는 데 유용한 작용제의 유효량은 치료받는 대상체, 임의의 연관된 증상의 유형 및 중증도, 및 치료적 조성물의 투여 방식에 좌우될 것이다.
올리고뉴클레오티드
본 발명의 맥락에서, 용어 "올리고뉴클레오티드"는 리보핵산(RNA) 및/또는 데옥시리보핵산(DNA)의 올리고머 또는 폴리머를 지칭하며, 뉴클레오티드 단량체의 폴리머 또는 올리고머는 핵염기(당업계 및 본원에서 간단히 "염기"로 지칭됨), 변형된 핵염기, 당, 변형된 당, 포스페이트 가교 또는 변형된 인 원자 가교(본원에서 "뉴클레오티드간 연결기"로도 지칭됨)의 임의의 조합을 함유한다.
올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 또는 이중-가닥 또는 이들의 조합일 수 있다. 단일-가닥 올리고뉴클레오티드는 이중-가닥 영역을 가질 수 있고, 이중-가닥 올리고뉴클레오티드는 단일-가닥 영역(예컨대, 마이크로RNA 또는 shRNA)을 가질 수 있다.
올리고뉴클레오티드는 일반적으로 20개 이하의 염기(또는 뉴클레오티드 단위)를 전형적으로 갖는 상대적으로 짧은 뉴클레오티드의 서열을 지칭하지만, 유의미하게 더 긴, 예컨대 최대 약 160 내지 약 200개의 뉴클레오티드일 수도 있다. 예를 들어, 본원에 제공되는 올리고뉴클레오티드는 적어도 약 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100개 뉴클레오티드 또는 그 이내의 임의의 범위의 길이이다. 더욱 구체적으로, 올리고뉴클레오티드는 적합하게는 약 3 내지 약 75개 뉴클레오티드(예를 들어, 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 또는 75개 뉴클레오티드 또는 그 이내의 임의의 범위) 길이이다. 특정 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 상기 나타낸 바와 같이, 약 3 내지 약 5개 뉴클레오티드 길이이며, 이는 (예를 들어, 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56), 5'-GGUA-3'(SEQ ID NO: 57), 5'-GUAU-3'(SEQ ID NO: 58), 5'-GGU-3'(SEQ ID NO: 59) 또는 5'-GUA-3'(SEQ ID NO: 60))을 포함하고 있지만 이에 한정되지 않는다. 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 약 15 내지 약 25개 뉴클레오티드 길이이다. 일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 약 20개 뉴클레오티드 길이이다.
"갭머"는 하나 이상의 뉴클레오시드를 갖는 외부 영역 사이에 위치한 RNase H 절단을 지원하는 복수의 뉴클레오시드를 갖는 내부 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭하며, 내부 영역을 구성하는 뉴클레오시드는 외부 영역을 구성하는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오시드들과 화학적으로 구분된다. 내부 영역은 "갭"으로 지칭될 수 있고 외부 영역은 "윙(wing)"으로 지칭될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "표적", 예컨대 "표적 유전자" 또는 "표적 폴리뉴클레오티드"는 본 발명의 올리고뉴클레오티드가 이의 효과를 직접적으로 또는 간접적으로 발휘하는 분자를 지칭한다. 통상적으로, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 이의 일부와 표적 또는 표적의 산물, 예컨대 유전자에 의해 인코딩되는 mRNA 또는 이의 부분은 생리학적 조건 하에서 혼성화할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "표적 유전자의 발현을 감소시킨다" 등의 어구는 생물학적 효과를 발휘하는 유전자의 능력을 감소시키는 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 지칭한다. 이는 유전자에 의해 인코딩되는 RNA의 양의 감소 및/또는 RNA로부터 번역되는 단백질의 양의 감소에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 달성될 수 있다.
전형적으로, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 시험관내에서 합성될 것이다. 그러나, 변형된 염기 및 백본이 필요하지 않은 일부 경우에, 이들은 적합한 시스템에서, 예컨대 재조합 바이러스 또는 세포에 의해, 시험관내 또는 생체내에서 발현될 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드의 활성, 세포 분포 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 모이어티 또는 기에 컨쥬게이트될 수 있다. 이들 모이어티 또는 기는 작용기, 예컨대 일차 또는 이차 하이드록실 기에 공유 결합될 수 있다. 예시적인 모이어티 또는 기는 인터칼레이터, 리포터 분자, 폴리아민, 폴리아미드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에테르, 올리고머의 약력학적 특성을 향상시키는 기, 및 올리고머의 약동학적 특성을 향상시키는 기를 포함한다. 통상적인 컨쥬게이트 기는 콜레스테롤, 지질, 인지질, 비오틴, 페나진, 엽산, 페난트리딘, 안트라퀴논, 아크리딘, 플루오레세인, 로다민, 쿠마린 및 염료를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, "합성 올리고뉴클레오티드 서열"은 자연적으로 발생하는 상응하는 서열이 결여된 올리고뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 예를 들어, 합성 올리고뉴클레오티드 서열은 특정 RNA 분자, 예컨대 내인성 폴리펩티드를 인코딩하는 것에 대해 상보적이지 않다. 이와 같이, 합성 올리고뉴클레오티드 서열은 적합하게는 RNA 번역과 같은 전사 후 사건에 간섭할 수 없다.
본원에 사용된 바와 같이, 올리고뉴클레오티드 "변이체"는 참조 핵산 서열과 정의 가능한 뉴클레오티드 서열 관계를 공유한다. 참조 핵산 서열은 예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 것들 중 하나일 수 있다. "변이체" 올리고뉴클레오티드는 결실되거나 상이한 핵산에 의해 치환된 참조 핵산 서열의 하나 또는 복수의 핵산을 가질 수 있다. 바람직하게는, 올리고뉴클레오티드 변이체는 참조 핵산 서열과 적어도 70% 또는 75%, 바람직하게는 적어도 80% 또는 85% 또는 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유한다.
변형된 염기
본 발명의 올피고뉴클레오티드는 핵염기("염기") 변형 또는 치환을 가질 수 있다.
예는 2' 위치에서 하기 중 하나를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S- 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬(여기서, 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환된 또는 비치환된 C1 내지 C10 알킬 또는 C2 내지 C10 알케닐 및 알키닐일 수 있음). 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 2' 위치에서 하기 중 하나를 포함한다: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nONH2, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2(여기서 n 및 m은 1 내지 약 10임).
변형된 올리고뉴클레오티드의 추가의 예는 2' 위치에서 하기 중 하나를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함한다: C1 내지 C10 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알케닐, 알키닐, 알카릴, 아랄킬, O-알카릴 또는 O-아랄킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로사이클로알킬, 헤테로사이클로알카릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단기, 리포터 기, 인터칼레이터, 올리고뉴클레오티드의 약동학적 특성을 개선하기 위한 기 또는 올리고뉴클레오티드의 약력학적 특성을 개선하기 위한 기, 및 유사한 특성을 갖는 다른 치환기.
일 구현예에서, 변형은 2'-메톡시에톡시(2'-O-CH2CH2OCH3)(2'-O-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE로도 알려짐)(문헌[Martin et al., 1995]), 즉, 알콕시알콕시 기를 포함한다. 추가의 구현예에서, 변형은 2'-디메틸아미노옥시에톡시, 즉, O(CH2)2ON(CH3)2 기(2'-DMAOE로도 알려짐), 또는 2'-디메틸아미노에톡시에톡시(2'-O-디메틸-아미노-에톡시-에틸 또는 2'-DMAEOE로도 당업계에 알려짐), 즉, 2'-O-CH2-O-CH2-N(CH3)2를 포함한다.
다른 변형은 2'-메톡시(2'-O-CH3), 2'-아미노프로폭시(2'-OCH2CH2CH2NH2), 2'-알릴(2'-CH2-CH=CH2), 2'-O-알릴(2'-O-CH2-CH=CH2) 및 2'-플루오로(2'-F)를 포함한다. 2'-변형은 아라비노(위) 위치 또는 리보(아래) 위치에 존재할 수 있다. 일 구현예에서, 2'-아라비노 변형은 2'-F이다.
올리고뉴클레오티드 상의 다른 위치, 특히 3' 말단 뉴클레오티드 상의 당의 3' 위치 또는 2'-5' 연결된 올리고뉴클레오티드 및 5' 말단 뉴클레오티드의 5' 위치에서도 유사한 변형이 이루어질 수 있다.
올리고뉴클레오티드는 또한 펜토푸라노실 당 대신에 사이클로부틸 모이어티와 같은 당 모방체를 가질 수 있다.
이러한 변형된 당 구조의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 US 4,981,957, US 5,118,800, US 5,319,080, US 5,359,044, US 5,393,878, US 5,446,137, US 5,466,786, US 5,514,785, US 5,519,134, US 5,567,811, US 5,576,427, US 5,591,722, US 5,597,909, US 5,610,300, US 5,627,053, US 5,639,873, US 5,646,265, US 5,658,873, US 5,670,633, US 5,792,747, 및 US 5,700,920을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
당의 추가의 변형은 2'-하이드록실 기가 당 고리의 3' 또는 4' 탄소 원자에 연결됨으로써 바이사이클릭 당 모이어티를 형성하는 잠금 핵산(LNA)을 포함한다. 일 구현예에서, 연결기는 2' 산소 원자와 4' 탄소 원자를 가교하는 메틸렌(-CH2-)n 기이며, 여기서 n은 1 또는 2이다. LNA 및 이의 제조는 WO 98/39352 및 WO 99/14226에 기재되어 있다.
변형된 핵염기는 다른 합성 및 천연 핵염기, 예컨대, 예를 들어 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐(-CC-CH3) 우라실 및 시토신 및 피리미딘 염기의 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌, 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌, m1A(1-메틸아데노신); m2A(2-메틸아데노신); Am(2'-O-메틸아데노신); ms2m6A(2-메틸티오-N6-메틸아데노신); i6A(N6-이소펜테닐아데노신); ms2i6A(2-메틸티오-N6이소펜테닐아데노신); io6A(N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신); ms2io6A(2-메틸티오-N6-(시스-하이드록시이소펜테닐)아데노신); g6A(N6-글리시닐카바모일아데노신); t6A(N6-트레오닐카바모일아데노신); ms2t6A(2-메틸티오-N6-트레오닐 카바모일아데노신); m6t6A(N6-메틸-N6-트레오닐카바모일아데노신); hn6A(N6-하이드록시노르발릴카바모일아데노신); ms2hn6A(2-메틸티오-N6-하이드록시노르발릴 카바모일아데노신); Ar(p)(2'-O-리보실아데노신(포스페이트)); I(이노신); m1I(1-메틸이노신); m1Im(1,2'-O-디메틸이노신); m3C(3-메틸시티딘); Cm(2'-O-메틸시티딘); s2C(2-티오시티딘); ac4C(N4-아세틸시티딘); f5C(5-포르밀시티딘); m5Cm(5,2'-O-디메틸시티딘); ac4Cm(N4-아세틸-2'-O-메틸시티딘); k2C(라이시딘); m1G(1-메틸구아노신); m2G(N2-메틸구아노신); m7G(7-메틸구아노신); Gm(2'-O-메틸구아노신); m2 2G(N2,N2-디메틸구아노신); m2Gm(N2,2'-O-디메틸구아노신); m2 2Gm(N2,N2,2'-O-트리메틸구아노신); Gr(p)(2'-O-리보실구아노신 (포스페이트)); yW(위부토신); o2yW(퍼옥시위부토신); OHyW(하이드록시위부토신); OHyW*(불충분하게 변형된(undermodified) 하이드록시위부토신); imG(위오신); mimG(메틸위오신); Q(케오신); oQ(에폭시케오신); galQ(갈락토실-케오신); manQ(만노실-케오신); preQo(7-시아노-7-데아자구아노신); preQ1(7-아미노메틸-7-데아자구아노신); G+(아케오신); D(디하이드로우리딘); m5Um(5,2'-O-디메틸우리딘); s4U(4-티오우리딘); m5s2U(5-메틸-2-티오우리딘); s2Um(2-티오-2'-O-메틸우리딘); acp3U(3-(3-아미노-3-카복시프로필)우리딘); ho5U(5-하이드록시우리딘); mo5U(5-메톡시우리딘); cmo5U(우리딘 5-옥시아세트산); mcmo5U(우리딘 5-옥시아세트산 메틸 에스테르); chm5U(5-(카복시하이드록시메틸)우리딘)); mchm5U(5-(카복시하이드록시메틸)우리딘 메틸 에스테르); mcm5U(5-메톡시카보닐메틸우리딘); mcm5Um(5-메톡시카보닐메틸-2'-O-메틸우리딘); mcm5s2U(5-메톡시카보닐메틸-2-티오우리딘); nm5s2U(5-아미노메틸-2-티오우리딘); mnm5U(5-메틸아미노메틸우리딘); mnm5s2U(5-메틸아미노메틸-2-티오우리딘); mnm5se2U(5-메틸아미노메틸-2-셀레노우리딘); ncm5U(5-카바모일메틸우리딘); ncm5Um(5-카바모일메틸-2'-O-메틸우리딘); cmnm5U(5-카복시메틸아미노메틸우리딘); cmnm5Um(5-카복시메틸아미노메틸-2'-O-메틸우리딘); cmnm5s2U(5-카복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘); m6 2A(N6,N6-디메틸아데노신); Im(2'-O-메틸이노신); m4C(N4-메틸시티딘); m4Cm(N4,2'-O-디메틸시티딘); hm5C(5-하이드록시메틸시티딘); m3U(3-메틸우리딘); cm5U(5-카복시메틸우리딘); m6Am(N6,2'-O-디메틸아데노신); m6 2Am(N6,N6,O-2'-트리메틸아데노신); m2,7G(N2,7-디메틸구아노신); m2,2,7G(N2,N2,7-트리메틸구아노신); m3Um(3,2'-O-디메틸우리딘); m5D(5-메틸디하이드로우리딘); f5Cm(5-포르밀-2'-O-메틸시티딘); m1Gm(1,2'-O-디메틸구아노신); m1Am(1,2'-O-디메틸아데노신); τm5U(5-타우리노메틸우리딘); τm5s2U(5-타우리노메틸-2-티오우리딘)); imG-14(4-데메틸위오신); imG2(이소위오신); 또는 ac6A(N6-아세틸아데노신)를 포함한다.
추가의 변형된 핵염기는 트리사이클릭 피리미딘, 예컨대 페녹사진 시티딘(1H-피리미도[5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 페노티아진 시티딘(1H-피리미도[5,4-b][1,4]벤조티아진-2(3H)-온), G-클램프, 예를 들어, 치환된 페녹사진 시티딘(예를 들어, 9-(2-아미노에톡시)-H-피리미도[5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 카바졸 시티딘(2H-피리미도[4,5-b]인돌-2-온), 피리도인돌 시티딘(H-피리도[3',2':4,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-2-온) 등을 포함한다.
변형된 핵염기는 또한 퓨린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클, 예를 들어, 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈으로 대체된 것들을 포함할 수 있다. 추가의 핵염기는 US 3,687,808에 개시된 것들, 문헌[J.I. Kroschwitz (editor), The Concise Encyclopedia of Polymer Science and Engineering, pages 858-859, John Wiley and Sons (1990)]에 개시된 것들, 문헌[Englisch et al. (1991)]에 의해 개시된 것들, 문헌[Y.S. Sanghvi, Chapter 15: Antisense Research and Applications, pages 289-302, S.T. Crooke, B. Lebleu (editors), CRC Press, 1993]에 의해 개시된 것들을 포함한다.
이들 중 특정 핵염기는 올리고뉴클레오티드의 결합 친화성을 증가시키는 데 특히 유용하다. 이들에는 5-치환된 피리미딘, 6-아자피리미딘, 및 N-2, N-6 및 O-6 치환된 퓨린, 예컨대, 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신이 포함된다. 5-메틸시토신 치환은 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6 내지 1.2 oC만큼 증가시키는 것으로 나타났다. 일 구현예에서, 이들 핵염기 치환은 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 조합된다.
상기 언급된 특정한 변형된 핵염기뿐만 아니라 다른 변형된 핵염기의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 US 3,687,808, US 4,845,205, US 5,130,302, US 5,134,066, US 5,175,273, US 5,367,066, US 5,432,272, US 5,457,187, US 5,459,255, US 5,484,908, US 5,502,177, US 5,525,711, US 5,552,540, US 5,587,469, US 5,594,121, US 5,596,091, US 5,614,617, US 5,645,985, US 5,830,653, US 5,763,588, US 6,005,096, US 5,681,941 및 US 5,750,692를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
반대로 언급되지 않는 한, A, T, G, U 또는 C에 대한 언급은 자연 발생 염기 또는 이의 변형된 버전을 의미할 수 있다.
백본
본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 변형된 백본 또는 비-천연 뉴클레오시드간 연결기를 갖는 것들을 포함한다. 변형된 백본을 갖는 올리고뉴클레오티드는 백본에 인 원자를 보유하는 것들, 및 백본에 인 원자를 갖지 않는 것들을 포함한다.
인 원자를 안에 함유하는 변형된 올리고뉴클레오티드 백본은, 예를 들어 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 3'-알킬렌 포스포네이트, 5'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 메틸 및 다른 알킬 포스포네이트, 포스피네이트, 3'-아미노 포스포르아미데이트 및 아미노알킬포스포르아미데이트를 포함하는 포스포르아미데이트, 티오노포스포르아미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 셀레노포스페이트, 및 정상적인 3'-5' 연결기를 갖는 보라노포스페이트, 이들의 2'-5' 연결된 유사체, 및 하나 이상의 뉴클레오티드간 연결기가 3'에서 3', 5'에서 5' 또는 2'에서 2' 연결기인 역위된 극성(inverted polarity)을 갖는 것들을 포함한다. 역위된 극성을 갖는 올리고뉴클레오티드는 3'-최말단 뉴클레오티드간 연결기(3'-most internucleotide linkage)에서, 단일의 3'에서 3' 연결기, 즉, 무염기(핵염기가 없거나 그 대신 하이드록실기를 가짐)일 수 있는 단일의 역위된 뉴클레오시드 잔기를 포함한다. 다양한 염, 혼합 염 및 유리산 형태도 포함된다.
상기 인-함유 연결기의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 US 3,687,808, US 4,469,863, US 4,476,301, US 5,023,243, US 5,177,196, US 5,188,897, US 5,264,423, US 5,276,019, US 5,278,302, US 5,286,717, US 5,321,131, US 5,399,676, US 5,405,939, US 5,453,496, US 5,455,233, US 5,466,677, US 5,476,925, US 5,519,126, US 5,536,821, US 5,541,306, US 5,550,111, US 5,563,253, US 5,571,799, US 5,587,361, US 5,194,599, US 5,565,555, US 5,527,899, US 5,721,218, US 5,672,697 및 US 5,625,050을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
인 원자를 안에 포함하지 않는 변형된 올리고뉴클레오티드 백본은, 예를 들어 단쇄 알킬 또는 사이클로알킬 뉴클레오시드간 연결기, 혼합 헤테로원자 및 알킬 또는 사이클로알킬 뉴클레오시드간 연결기, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로사이클릭 뉴클레오시드간 연결기에 의해 형성된 백본을 포함한다. 이들에는 모르폴리노 연결기(뉴클레오시드의 당 부분으로부터 부분적으로 형성됨)를 갖는 것들; 실록산 백본; 설피드, 설폭시드 및 설폰 백본; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 백본; 리보아세틸 백본; 알켄 함유 백본; 설파메이트 백본; 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 백본; 설포네이트 및 설폰아미드 백본; 아미드 백본; 및 혼합된 N, O, S 및 CH2 성분 부분을 갖는 다른 것들이 포함된다.
상기 올리고뉴클레오티드의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 US 5,034,506, US 5,166,315, US 5,185,444, US 5,214,134, US 5,216,141, US 5,235,033, US 5,264,562, US 5,264,564, US 5,405,938, US 5,434,257, US 5,466,677, US 5,470,967, US 5,489,677, US 5,541,307, US 5,561,225, US 5,596,086, US 5,602,240, US 5,610,289, US 5,602,240, US 5,608,046, US 5,610,289, US 5,618,704, US 5,623,070, US 5,663,312, US 5,633,360, US 5,677,437, US 5,792,608, US 5,646,269 및 US 5,677,439를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
안티센스 올리고뉴클레오티드
용어 "안티센스 올리고뉴클레오티드"는 내인성 폴리펩티드를 인코딩하고 mRNA 번역과 같은 전사-후 사건에 간섭할 수 있는 것과 같은 특정 mRNA 분자의 적어도 일부에 상보적인 올리고뉴클레오티드를 의미하는 것으로 간주될 것이다. 안티센스 방법의 사용은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[G. Hartmann and S. Endres, Manual of Antisense Methodology, Kluwer (1999)] 참조).
일 구현예에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는 생리학적 조건 하에서 혼성화하며, 즉, 안티센스 올리고뉴클레오티드(완전히 또는 부분적으로 단일 가닥)는 적어도, 세포에서 정상적인 조건 하에서 내인성 폴리펩티드를 인코딩하는 것과 같은 mRNA와 이중 가닥 폴리뉴클레오티드를 형성할 수 있다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 구조 유전자에 해당하는 서열 또는 유전자 발현 또는 스플라이싱 사건에 대한 제어를 달성하는 서열에 대한 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 안티센스 서열은 내인성 유전자의 표적화된 코딩 영역, 또는 5'-비번역 영역(UTR) 또는 3'-UTR 또는 이들의 조합에 상응할 수 있다. 이는 전사 동안 또는 전사 후에, 바람직하게는 오직 표적 유전자의 엑손 서열로 스플라이싱 아웃될 수 있는 인트론 서열에 부분적으로 상보적일 수 있다. 일반적으로 UTR의 더 큰 분기를 고려할 때, 이들 영역을 표적화하는 것은 유전자 저해의 더 큰 특이성을 제공한다.
안티센스 올리고뉴클레오티드는 유전자 전사물 전체 또는 이의 부분에 상보적일 수 있다. 표적화된 전사물과 안티센스 서열의 동일성 정도는 적어도 90%, 더욱 바람직하게는 95 내지 100%여야 한다. 안티센스 RNA 또는 DNA 분자는 본원에 기재된 것과 같은 분자를 안정화하도록 기능할 수 있는 비관련 서열을 물론 포함할 수 있다.
유전자 침묵화
올리고뉴클레오티드 분자, 특히 RNA는 유전자 발현을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "RNA 간섭", "RNAi" 또는 "유전자 침묵화"는 일반적으로 dsRNA 분자가 이중 가닥 RNA 분자와 실질적인 또는 전체 상동성을 공유하는 핵산 서열의 발현을 감소시키는 프로세스를 지칭한다. 그러나, RNA 간섭이 비-RNA 이중 가닥 분자를 사용하여 달성될 수 있음이 밝혀졌다(예를 들어, US 20070004667 참조).
이중-가닥 영역은 적어도 19개의 연속 뉴클레오티드, 예를 들어 약 19 내지 23개의 뉴클레오티드여야 하거나, 예를 들어 30 또는 50개의 뉴클레오티드, 또는 100개 이상의 뉴클레오티드로 더 길 수 있다. 유전자 전사물 전체에 상응하는 전장 서열이 사용될 수 있다. 바람직하게는, 이들은 약 19 내지 약 23개 뉴클레오티드 길이이다.
표적화된 전사물과 핵산 분자의 이중-가닥 영역의 동일성 정도는 적어도 90%, 더욱 바람직하게는 95 내지 100%여야 한다. 핵산 분자는 분자를 안정화하도록 기능할 수 있는 비관련 서열을 물론 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "짧은 간섭 RNA" 또는 "siRNA"는, 예를 들어 서열 특이적 방식으로 RNAi를 매개함으로써 유전자 발현을 저해하거나 하향 조절할 수 있는 리보뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 지칭하며, 여기서 이중 가닥 부분은 50개 미만의 뉴클레오티드 길이, 바람직하게는 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오티드 길이이다. 예를 들어, siRNA는 자가-상보적 센스 및 안티센스 영역을 포함하는 핵산 분자일 수 있으며, 여기서 안티센스 영역은 표적 핵산 분자 또는 이의 부분 내의 뉴클레오티드 서열에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 영역은 표적 핵산 서열 또는 이의 부분에 상응하는 뉴클레오티드 서열을 갖는다. siRNA는 2개의 별개의 올리고뉴클레오티드로부터 조립될 수 있으며, 여기서 한 가닥은 센스 가닥이고 다른 가닥은 안티센스 가닥이며, 여기서 안티센스 및 센스 가닥은 자가-상보적이다. 두 가닥의 길이는 상이할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, siRNA라는 용어는 서열 특이적 RNAi를 매개할 수 있는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 마이크로-RNA(miRNA), 짧은 헤어핀 RNA(shRNA), 짧은 간섭 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 핵산(siNA), 짧은 간섭 변형 올리고뉴클레오티드, 화학적으로-변형된 siRNA, 전사 후 유전자 침묵화 RNA(ptgsRNA) 등을 설명하는 데 사용되는 다른 용어와 동등한 것으로 여겨진다. 또한, 본원에 사용된 바와 같이, RNAi라는 용어는 전사 후 유전자 침묵화, 번역 저해, 또는 후생유전학과 같은 서열 특이적 RNA 간섭을 설명하기 위해 사용되는 다른 용어와 동등한 것으로 여겨진다. 예를 들어, siRNA 분자는 전사 후 수준 또는 전사 전 수준 둘 모두에서 유전자를 후성적으로 침묵화시키는 데 사용될 수 있다. 비제한적인 예에서, siRNA 분자에 의한 유전자 발현의 후성적 조절은 유전자 발현을 변경하기 위한 염색질 구조의 siRNA 매개된 변형으로부터 초래될 수 있다.
"shRNA" 또는 "짧은 헤어핀 RNA"는 약 50개 미만의 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오티드가 동일한 RNA 분자 상에 위치한 상보적인 서열과 염기 쌍을 이루는 RNA 분자를 의미하며, 여기서 상기 서열 및 상보적인 서열은 염기 상보성의 두 영역에 의해 생성된 스템 구조 위에 단일-가닥 루프를 형성하는 적어도 약 4 내지 약 15개의 뉴클레오티드의 쌍을 이루지 않은 영역에 의해 분리된다. 단일 가닥 루프 서열의 예는 5' UUCAAGAGA 3'을 포함한다.
포함되는 shRNA는 이중 또는 2-핑거 및 다중-핑거 헤어핀 dsRNA이며, 여기서 RNA 분자는 단일-가닥 스페이서 영역에 의해 분리된 이러한 스템-루프 구조 중 2개 이상을 포함한다.
후보 올리고뉴클레오티드의 설계 및 시험
당업자가 알고 있는 바와 같이, 본 발명의 설계 요소에 더하여, 올리고뉴클레오티드를 생성할 때 고려해야 할 많은 요소가 알려져 있다. 세부 사항은 올리고뉴클레오티드의 목적에 좌우되지만, mRNA 2차 구조, 열역학적 안정성, 혼성화 부위의 위치, 및/또는 기능적 모티프와 같은 올리고뉴클레오티드-표적 핵산 상호작용의 세기 및 안정성과 같은 특징을 포함한다.
본 발명의 일부 방법은 특정 특징에 대해 표적 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계를 수반한다. 이는 육안에 의해, 또는 당업계에 알려진 컴퓨터 프로그램을 사용하여 수행될 수 있다. 안티센스 올리고뉴클레오티드의 기능적 특성을 설계, 분석 및 예측하는 데 사용할 수 있는 소프트웨어 프로그램에는 Mfold, Sfold, NUPACK, Nanofolder, Hyperfold, 및/또는 RNA 디자이너(designer)가 포함된다. 유전자 침묵화를 위한 올리고뉴클레오티드의 기능적 특성을 설계, 분석 및 예측하는 데 사용할 수 있는 소프트웨어 프로그램에는 dsCheck, E-RNAi 및/또는 siRNA-Finder가 포함된다.
일 구현예에서, 이용 가능한 소프트웨어를 사용하여 잠재적으로 유용한 올리고뉴클레오티드를 선택한 다음, 이들을 본원에 기재된 바와 같은 원하는 특징에 대해 스캐닝한다. 대안적으로, 본원에 기재된 바와 같은 원하는 특징에 대해 표적 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하기 위해 소프트웨어가 용이하게 개발될 수 있다.
일단 합성되면, 후보 올리고뉴클레오티드는 당업계의 표준 절차를 사용하여 이들의 원하는 활성에 대해 시험될 수 있다. 이는 관심 유전자를 발현하는 시험관내 세포에 후보물질을 투여하는 것, 및 RNA 및/또는 단백질과 같은 유전자 산물의 양을 분석하는 것을 수반할 수 있다. 또 다른 예에서, 후보물질을 동물에게 투여하고, 이 동물을 표적 RNA 및/또는 단백질의 양에 대해, 및/또는 기능 검정을 사용하여 스크리닝한다. 또 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드를 표적 폴리뉴클레오티드(예를 들어 mRNA)와 혼성화하는 이의 능력에 대해 시험한다.
일부 예에서, 발현 및 올리고뉴클레오티드 활성은 mRNA 역전사 정량적 실시간 PCR(RT-qPCR)에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, 후보 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 세포로부터 RNA를 추출하고 정제할 수 있다. 그 다음, 단리된 RNA로부터 cDNA를 합성하고 당업계에 알려진 방법 및 시약을 사용하여 RT-qPCR을 수행할 수 있다. 일 예에서, RNA는 ISOLATE II RNA 미니 키트(바이오라인(Bioline))를 사용하여 세포로부터 정제할 수 있으며, cDNA는 제조업체의 지침에 따라 High-Capacity cDNA Archive 키트(써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))를 사용하여 단리된 RNA로부터 합성할 수 있다. RT-qPCR는 제조업체의 지침에 따라 HT7900 및 QuantStudio 6 RT-PCR 시스템(써모 피셔 사이언티픽)에서 Power SYBR Green Master Mix(써모 피셔 사이언티픽)를 사용하여 수행할 수 있다.
cGAS 활성의 저해에 대한 시험
본 발명의 일부 양태는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 cGAS 활성의 저해에 대한 시험을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포에서의 cGAS 활성은 하나 이상의 친염증성(pro-inflammatory) 사이토카인 또는 케모카인(예를 들어, 인터페론-β, IP-10)의 발현 및/또는 분비, cGAMP 수준, 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현 및/또는 인터페론-자극된 반응 요소(ISRE)의 결합 또는 활성화에 의해 측정될 수 있다.
cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드의 능력은, 예를 들어 cGAS를 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션한 다음, 상기 세포를 cGAS 효능제(예를 들어, 70-bp 인터페론 자극 DNA 또는 ISD70; 45-bp 인터페론 자극 DNA 또는 ISD45)를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전체 cGAS 반응을 분석하거나, 정의된 시간 후에 cGAS-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석할 수 있다.
이러한 예에서, cGAS 활성의 저해는 세포 집단의 cGAS 반응이 전반적으로 감소되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 저해제의 존재 하에서) cGAS 효능제로 처리되는 양성 대조군 조건과 비교하여 cGAS-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 낮은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, THP-1 또는 HT-29 세포를 ISD70으로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨다. 그 다음, cGAS 활성은 예컨대 ELISA에 의해 사이토카인(예를 들어, IP-10 및/또는 IFNβ) 발현(예를 들어, 유전자 및/또는 단백질 발현) 및/또는 분비 수준에 의해 결정될 수 있다. ISD45로 트랜스펙션된 LL171 세포를 사용하여 유사한 검정을 수행할 수 있다. 또 다른 예에서, IFN 자극된 반응 요소(ISRE)-루시퍼라제 리포터를 발현하는 LL171 세포(마우스 L929 세포)를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, ISD45를 사용하여 자극한다. cGAS 활성은 발광에 의해 활성화된 IFNβ를 측정하는 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. cGAS 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 cGAMP 수준을 측정함으로써 분석될 수 있다. 예로서, cGAS 효소 활성은 재조합 cGAS를 사용한 다음, cGAMP ELISA에 의해 이의 활성을 측정하여 시험관내에서 평가될 수 있다.
TLR9 활성의 저해에 대한 시험
본 발명의 일부 양태는 당업계에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 TLR9 활성의 저해에 대하여 시험하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포 내의 TLR9 활성은 하나 이상의 친-염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IL-6)의 발현 및/또는 분비, 및/또는 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현에 의해 측정될 수 있다.
TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드의 능력은 예를 들어, TLR9를 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 상기 세포를 TLR9 효능제(예를 들어, CpG ODN2006)를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전반적인 TLR9 반응을 분석하거나, 정의된 기간 후에 TLR9-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석될 수 있다.
이러한 예에서, TLR9 활성의 저해는 세포 집단의 TLR9 반응이 전반적으로 감소되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 저해제의 존재 하에서) TLR9 효능제로 처리되는 양성 대조군 조건과 비교하여 TLR9-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 낮은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, HEK 세포를 TLR9 및 NF-κB 리포터로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, TLR9 효능제를 사용하여 자극한다. 이어서, TLR9 활성은 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. TLR9 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 사이토카인 수준(예를 들어, IFN, IL-6, TNF 및 IL-12)을 측정함으로써 분석될 수도 있다.
TLR3 활성의 저해에 대한 시험
본 발명의 방법의 일부 구현예는 당업계에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 TLR3 활성의 저해에 대하여 시험하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포 내의 TLR3 활성은 하나 이상의 친-염증성 사이토카인(예를 들어, IFNβ)의 발현 및/또는 분비, 및/또는 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현에 의해 측정될 수 있다.
TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드의 능력은 예를 들어, TLR3을 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 상기 세포를 TLR3 효능제를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전반적인 TLR3 반응을 분석하거나, 정의된 기간 후에 TLR3-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석될 수 있다.
이러한 예에서, TLR3 활성의 저해는 세포 집단의 TLR3 반응이 전반적으로 감소되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 저해제의 존재 하에서) TLR3 효능제로 처리되는 양성 대조군 조건과 비교하여 TLR3-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 낮은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, TLR3 세포를 안정하게 발현하는 HEK293 세포를 pNF-κB-Luc4 리포터로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 이중 가닥 RNA 분자(예를 들어, 폴리l:C)를 사용하여 자극한다. TLR3 활성은 발광에 의해 활성화된 NF-κB를 측정하는 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. TLR3 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 사이토카인 수준을 측정함으로써 분석될 수도 있다.
TLR7 활성의 저해에 대한 시험
본 발명의 방법의 일부 구현예는 당업계에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 TLR7 활성의 저해에 대하여 시험하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포 내의 TLR7 활성은 하나 이상의 친-염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IP-10)의 발현 및/또는 분비, 및/또는 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현에 의해 측정될 수 있다.
TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드의 능력은 예를 들어, TLR7을 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 상기 세포를 TLR7 효능제(예를 들어, R848, 구아노신 또는 면역자극 ssRNA, 예컨대 B-406-AS)를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전반적인 TLR7 반응을 분석하거나, 정의된 기간 후에 TLR7-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석될 수 있다.
이러한 예에서, TLR7 활성의 저해는 세포 집단의 TLR7 반응이 전반적으로 감소되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 저해제의 존재 하에서) TLR7 효능제로 처리되는 양성 대조군 조건과 비교하여 TLR7-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 낮은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, 293XLhTLR7(HEK-TLR7로 지칭됨) 세포를 pNF-κB-Luc4 리포터로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, R848을 사용하여 자극한다. TLR7 활성은 발광에 의해 활성화된 NF-κB를 측정하는 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. TLR7 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 사이토카인 수준을 측정함으로써 분석될 수도 있다. 또 다른 예에서, 야생형 마우스로부터의 일차 골수 유래 대식구(BMDM)를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 구아노신을 사용하여 자극한다. 대안적으로, 이러한 세포는 구성적으로 활성인 형태의 TLR7을 발현할 수 있다(예를 들어, Tlr7 Y264H ). 이어서, TLR7 활성은 TLR7-반응성 유전자, 예컨대 Tnfα 및 Oas3의 유전자 또는 단백질 발현에 의해 평가될 수 있다.
TLR8 활성의 강화에 대한 시험
본 발명의 방법의 일부 구현예는 당업계에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 TLR8 활성의 강화에 대하여 시험하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포 내의 TLR8 활성은 하나 이상의 친-염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IP-10)의 발현 및/또는 분비, 및/또는 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현에 의해 측정될 수 있다.
TLR8 활성을 강화시키는 올리고뉴클레오티드의 능력은 예를 들어, TLR8을 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 상기 세포를 TLR8 효능제를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전반적인 TLR8 반응을 분석하거나, 정의된 기간 후에 TLR8-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석될 수 있다.
이러한 예에서, TLR8 활성의 강화는 세포 집단의 TLR8 반응이 전반적으로 증가되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 비-강화제의 존재 하에서) TLR8 효능제로 처리되는 음성 대조군 조건과 비교하여 TLR8-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 높은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, 293XLhTLR8(HEK-TLR8로 지칭됨) 세포를 pNF-κB-Luc4 리포터로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, R848을 사용하여 자극한다. TLR8 활성은 발광에 의해 활성화된 NF-κB를 측정하는 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. TLR8 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 사이토카인 수준을 측정함으로써 분석될 수도 있다.
'강화'는 대조군 조건에 비한 기능적 특성의 증가를 지칭한다. TLR8 활성의 강화는 약 100% 초과, 예를 들어, 약 2배, 약 3배, 약 4배, 약 5배, 약 6배, 약 7배, 약 8배, 약 9배, 약 10배, 약 11배, 약 12배, 약 13배, 약 14배, 약 15배, 약 20배 또는 약 50배일 수 있다. 바람직하게는, TLR8 강화의 수준은 약 2배 내지 50배, 약 2배 내지 20배 및/또는 약 5배 내지 20배 더 크다.
TLR8 활성의 저해에 대한 시험
본 발명의 방법의 일부 구현예는 당업계에 알려져 있는 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있는 TLR8 활성의 저해에 대하여 시험하는 것을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포 내의 TLR8 활성은 하나 이상의 친-염증성 사이토카인(예를 들어, TNFα, IP-10)의 발현 및/또는 분비, 및/또는 전사 인자(예를 들어, NF-κB)의 활성화 또는 발현에 의해 측정될 수 있다.
TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드의 능력은 예를 들어, TLR8을 발현하는 세포를 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, 상기 세포를 TLR8 효능제를 사용하여 자극하고, 세포 집단에서 전반적인 TLR8 반응을 분석하거나, 정의된 기간 후에 TLR8-양성 활성을 갖는 세포의 비율을 분석함으로써 분석될 수 있다.
이러한 예에서, TLR8 활성의 저해는 세포 집단의 TLR8 반응이 전반적으로 감소되는 것, 또는 세포가 올리고뉴클레오티드의 부재 하에서(또는 적절한 대조군 저해제의 존재 하에서) TLR8 효능제로 처리되는 양성 대조군 조건과 비교하여 TLR8-양성 활성을 갖는 세포의 비율이 더 낮은 것을 관찰함으로써 식별할 수 있다. 일 예에서, 293XLhTLR8(HEK-TLR8로 지칭됨) 세포를 pNF-κB-Luc4 리포터로 트랜스펙션시키고, 올리고뉴클레오티드와 함께 인큐베이션시킨 다음, R848을 사용하여 자극한다. TLR8 활성은 발광에 의해 활성화된 NF-κB를 측정하는 루시퍼라제 검정에 의해 결정될 수 있다. TLR8 활성은 또한, 예를 들어 ELISA에 의해 사이토카인 수준을 측정함으로써 분석될 수도 있다.
용도
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 동물에게 투여되도록 설계된다. 이를 위하여, 올리고뉴클레오티드는 또 다른 분자, 예컨대 추가의 핵산(예를 들어, mRNA 분자), 펩티드, 담체 작용제, 치료제 등과 컨쥬게이트될 수 있다. 일 예에서, 동물은 척추동물이다. 예를 들어, 동물은 포유동물, 조류, 척색동물, 양서류 또는 파충류일 수 있다. 예시적인 대상체는 인간, 영장류, 가축(예를 들어, 양, 소, 닭, 말, 당나귀, 돼지), 반려 동물(예를 들어, 개, 고양이), 실험실 실험 동물(예를 들어, 마우스, 토끼, 랫트, 기니피그, 햄스터), 사육 야생 동물(예를 들어, 여우, 사슴)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일 예에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 임의의 관심 유전자/폴리뉴클레오티드/기능을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 합성일 수 있으며, 임의의 천연 발생 유전자 또는 폴리뉴클레오티드를 특이적으로 표적화하지 않는다. 이와 같이, 올리고뉴클레오티드는 표적 유전자 또는 폴리뉴클레오티드의 발현에 관하여 저해 활성을 거의 나타내지 않거나, 이를 나타내지 않을 수 있다.
전형적으로, 올리고뉴클레오티드는 동물의 형질을 변형시키기 위해, 더욱 전형적으로는 질병을 치료하거나 예방하기 위해 사용된다. 바람직한 구현예에서, 질병은 특히 cGAS 반응, TLR7 반응 및/또는 TLR9 반응이 저해되는 경우 동물이 올리고뉴클레오티드의 투여 후에 cGAS, TLR3, TLR7, TLR8 및/또는 TLR9 반응을 시작할 수 없는 것에서 이익을 얻을 것이다. 대안적인 구현예에서, 질병은 올리고뉴클레오티드의 투여 후에 동물이 증가된 TLR8 반응을 시작할 수 있는 것에서 이익을 얻을 것이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드를 사용하여 치료되거나 예방될 수 있는 질병에는 암(예를 들어 유방암, 난소암, 중추신경계의 암, 위장관암, 방광암, 피부암, 폐암, 두경부암, 혈액암 및 림프암, 골암), 희귀 유전병, 신경근 및 신경계 질병(예를 들어, 척수성 근육 위축, 뒤시엔느 근이영양증, 헌팅턴병, 바텐병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증, 모세혈관확장성 실조증, 뇌성마비), 바이러스(예를 들어, 거대세포바이러스, C형 간염 바이러스, 에볼라 출혈열 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스, 코로나바이러스), 심혈관 질병(예를 들어, 가족성 고콜레스테롤혈증, 고중성지방혈증), 자가면역 및 염증성 질병(예를 들어, 관절염, 루푸스, 낭염, 건선, 천식), 및 비-알코올성 및 알코올성 지방 간 질병이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 자가면역 또는 염증 질병은 급성 또는 만성일 수 있다. 일 구현예에서, 염증은 일시적인 성질일 수 있으며, 예를 들어, 감염과 연관되거나, 이에 의해 야기될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 사용하여 치료되거나 예방될 질병은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 cGAS 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타낸다. 이러한 질병은 헌팅턴병, 파킨슨병, 운동-신경 질병(MND), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 프리온병, 전측두엽 치매, 외상성 뇌 손상, 알츠하이머병, 급성 췌장염, 실리카-유도 섬유증, 연령 의존성 황반 변성, 아이카디-구티에레스 증후군, 심근경색, 심부전, 다발성관절염/태아 및 신생아 빈혈, 전신 홍반성 루푸스, 급성 신장 손상, 알코올-관련 간 질병, 비-알코올 지방간 질병, 실리카 유도 폐 염증, 만성 폐쇄성 폐 질병, 허혈성 뇌졸중 후 뇌 손상, 패혈증, 비-알코올성 지방간염(NASH), 암, 낫적혈구병, 염증성 장 질병, 제2형 당뇨병, 과다-영양-유도 비만, COVID-19, 조혈 장애, 연령-관련 염증, 큐티박테리움 아크네스 감염, B형 간염, 후안부 안구 질병, 관절염, 류마티스 관절염, 폐기종, 대장암, 피부암, 전이 및 유방암을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.
다른 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 사용하여 치료되거나 예방될 질병은 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR9 발현, 활성 및/또는 신호전달, 예컨대 암, 자가면역 장애, 염증성 장애, 자가면역 연결 조직 질병(ACTD) 및/또는 신경변성 장애를 나타낸다. 예시적인 질병은 건선, 관절염, 전신 탈모증, 급성 파종 뇌척수염, 에디슨병, 알레르기, 강직성 척추염, 항인지질 항체 증후군, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 수포성 유사천포창, 샤가스병, 만성 폐쇄성 폐 질병, 셀리악병, 피부 홍반성 루푸스(CLE), 피부근염, 당뇨병, 확장성 심근병증(DC), 자궁내막증, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질병, 간질성 방광염, 국소피부굳음증, 다발성 경화증(S), 중증근무력증, 심근염, 기면증, 신경근긴장증, 천포창, 악성빈혈, 다발성근염, 원발성 담즙성 경변증, 류마티스 관절염(RA), 조현병, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 전신 경화증, 측두 동맥염, 혈관염, 백반, 외음부통, 베게너 육아종증, 외상성 통증, 신경병성 통증 및 아세트아미노펜 독성, 유방암, 자궁경부 편평 세포 암종, 위암종, 신경교종, 간세포 암종, 폐암, 흑색종, 전립선암, 재발성 교모세포종, 재발성 비-호지킨 림프종 및 대장암을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
세포 노쇠에서의 cGAS 신호전달에 대한 역할은 최근에 확립되었으며(예를 들어, 문헌[Yang et al., 2017] 참조), 개체에 노쇠 세포가 존재하는 것은 노화 및 노화-관련 기능이상에 기여할 수 있다(예를 들어, 문헌[Capisi, 2005] 참조). 따라서, 본 발명의 광범위한 일 양태는 노쇠-연관 질병, 장애 또는 질환, 예컨대 암, 심혈관 질병, 신경변성 질병 및 노화 및 노화-관련 질병, 장애 또는 질환의 치료, 이의 우도(likelihood)의 감소 또는 이의 발병의 지연을 필요로 하는 대상체에서 노쇠-연관 질병, 장애 또는 질환, 예컨대 암, 심혈관 질병, 신경변성 질병 및 노화 및 노화-관련 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나, 이의 우도를 감소시키거나, 이의 발병을 지연시키는 방법으로서, 치료적 유효량의 본원에 기재된 올리고뉴클레오티드를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 속하는 것이다. 적합하게는, 올리고뉴클레오티드는 대상체에게 투여되는 경우에 cGAS 활성을 저해한다.
관련 형태에서, 본 발명은 세포를 유효량의 본원에 기재된 올리고뉴클레오티드와 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 노쇠를 예방하거나 저해하는 방법을 추가로 제공한다. 적합하게는, 올리고뉴클레오티드는 세포와 접촉되는 경우 세포에서 cGAS 활성을 저해한다. 또한, 현 방법이 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다.
세포는 노쇠가 가능한 당업계에 알려져 있는 임의의 것일 수 있다. 예로서, 세포는 면역 세포, 예컨대 T 세포(예를 들어, CD4+, CD8+, NK 및 조절 T 세포), B 세포, 자연 살해 세포, 호중구, 호산구, 비만 세포, 호염기구, 단핵구, 대식구 및 수지상 세포일 수 있다. 다른 예에서, 세포는 줄기 세포, 예컨대 조혈 줄기 세포일 수 있다. 적합하게는, 세포, 예컨대 면역 세포 또는 줄기 세포는 세포 기반의 치료법에 사용하기 위한 것이다.
예로서, 면역 세포는 입양 세포 이입(adoptive cell transfer)을 위해 사용될 수 있으며, 예컨대 종양-침윤 림프구(TIL), 또는 신규한 T 세포 수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자-변형된 T 세포이다. 입양 세포 요법(ACT)은 세포, 가장 일반적으로 면역-유래 세포를 동일한 환자 내로 다시 이입하거나, 면역학적 기능 및 특징을 새로운 숙주 내로 이입할 목적으로 새로운 수여자 숙주 내로 이입하는 것을 지칭할 수 있다. 이를 위하여, 면역 세포, 예컨대 T 세포, 바람직하게는 CD8+ T 세포를 원하는 항원, 예컨대 종양 세포 항원에 대하여 특이성을 갖는 T 세포 수용체를 발현하도록 조작하거나 변형시킬 수 있다. 예를 들어, 면역 세포는 원하는 항원에 대하여 특이성을 갖는 키메라 항원 수용체(CAR), 예컨대 종양-특이적 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함할 수 있다.
또 다른 형태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 대상체로의 치료적 올리고뉴클레오티드, 예컨대 당업계에 알려져 있는 것들의 투여와 연관된 염증을 예방하거나 저해하는 방법에서 사용될 수 있다. 특히, 본원에 기재된 올리고뉴클레오티드는 치료적 올리고뉴클레오티드의 투여 동안 또는 그 후에 하나 이상의 핵산 센서(예를 들어, TLR3, TLR7, TLR8, TLR9, cGAS, RIG-I, MDA5, PKR)에 의해 매개되는 염증의 예방 또는 저해에서 사용될 수 있다. 염증이 신체의 임의의 세포, 조직 또는 기관을 수반하거나 포함할 수 있음이 예상된다. 특정 구현예에서, 염증은 간 염증이거나, 이를 포함한다. 이를 위하여, 치료적 올리고뉴클레오티드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)에 컨쥬게이트될 수 있으며, 이는 간세포 내로의 아시알로당단백질 수용체(ASGR)-매개된 흡수를 향상시킴으로써(문헌[Nair et al., 2014]), 간으로의 이들의 특이적인 표적화를 가능하게 한다.
특정 예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드, 및 더욱 구체적으로는 TLR7-저해 활성을 나타내는 본원에 기재된 것들은 시험관내 또는 생체내에서 RNA 분자의 투여와 연관된 TLR7-의존적 염증 반응을 예방하거나 저해하기 위해 이용될 수 있다. 더욱 구체적으로, RNA 분자는 RNA-기반의 치료제, 예컨대 mRNA 백신의 부분일 수 있다. 이와 관련하여, 올리고뉴클레오티드는 TLR7에 의한 이들 치료적 RNA 분자의 맞물림 또는 감지를 적어도 부분적으로 저해할 수 있다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 변형된 염기, 예컨대 슈도-우리딘, 및/또는 mRNA 백신 조성물 내에 이들을 포함시키기 위해 mRNA 분자의 면역원성을 감소시키는 다른 변형의 이용에 대한 필요를 최소화할 수 있다.
특정 예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드, 및 더욱 구체적으로는 TLR8-저해 활성을 나타내는 본원에 기재된 것들은 시험관내 또는 생체내에서 RNA 분자의 투여와 연관된 TLR8-의존적 염증 반응을 예방하거나 저해하기 위해 이용될 수 있다. 더욱 구체적으로, RNA 분자는 RNA-기반의 치료제, 예컨대 mRNA 백신의 부분일 수 있다. 이와 관련하여, 올리고뉴클레오티드는 TLR8에 의한 이들 치료적 RNA 분자의 맞물림 또는 감지를 적어도 부분적으로 저해할 수 있다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 변형된 염기, 예컨대 슈도-우리딘, 및/또는 mRNA 백신 조성물 내에 이들을 포함시키기 위해 mRNA 분자의 면역원성을 감소시키는 다른 변형의 이용에 대한 필요를 최소화할 수 있다.
이와 같이, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 성분이거나, 당업계에 공지되어 있는 바와 같은 면역원성 조성물, 예컨대 RNA 또는 mRNA 백신 조성물 내에 포함될 수 있다. 용어 "RNA 백신"은 포유동물에서 면역 반응을 유도할 수 있는 항원을 인코딩하는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 인코딩하는 RNA를 포함하는 백신을 지칭한다. mRNA 백신은 예를 들어, 그 전체가 본원에 참조로 포함되는 국제 특허 출원 PCT/US2015/027400 및 PCT/US2016/044918에 기재되어 있다.
특정 형태에서, 본 발명은 RNA 분자 및 본원에 제공되는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물, 예컨대 백신 조성물을 제공한다. 적합하게는, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 본원에 기재된 바와 같이 TLR7, TLR8 및/또는 TLR3 저해 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 TLR7 저해 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 TLR8 저해 활성을 나타낸다. 특정 구현예에서, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 TLR3 저해 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 TLR3 저해 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 면역원성 조성물의 올리고뉴클레오티드는 TLR7 및 TLR8 저해 활성을 나타낸다. 면역원성 조성물은 적합하게는, (a) 대상체에서 면역 반응을 유도하고/하거나; (b) 감염, 질병 또는 질환의 예방, 치료 또는 개선을 필요로 하는 대상체에서 감염, 질병 또는 질환을 예방하거나, 치료하거나 개선하는 방법에 사용하기 위한 것이다.
mRNA 백신이 펩티드- 또는 DNA-기반의 백신에 대한 고유한 치료적 대안을 제공한다는 것이 이해될 것이다. mRNA 백신이 세포로 전달되는 경우, mRNA는 세포내 기구에 의해 폴리펩티드 또는 펩티드로 가공될 것이며, 이는 이어서, 폴리펩티드 또는 펩티드를 면역 반응을 자극할 수 있는 면역원성 단편으로 가공할 수 있다. 이를 위하여, 올리고뉴클레오티드는 개별 또는 별개 성분으로서 포함될 수 있고/있거나 백신 조성물의 RNA 또는 mRNA 분자와 컨쥬게이트될 수 있다. 이러한 구현예와 관련하여, RNA 백신의 RNA 분자는 비변형될 수 있거나, 실질적으로 비변형될 수 있다(예를 들어, 임의의 변형된 염기를 포함하지 않는다). 대안적으로, RNA 분자는 전형적으로 안정성을 향상시키는 하나 이상의 변형, 예컨대 변형된 뉴클레오티드, 변형된 당 포스페이트 백본 및 5' 및/또는 3' 비번역 영역(UTR)을 함유할 수 있다.
또한, RNA 분자는 당업계에 알려져 있는 바와 같이, 면역원성 조성물의 전달, 이입 또는 담체 시스템 내에 포함되거나 혼입될 수 있다. 예를 들어, 면역원성 조성물의 mRNA 또는 RNA 분자는 나노입자, 더욱 구체적으로 지질 나노입자에 캡슐화되거나 복합체화될 수 있다. 다양한 구현예에 따라, 적합한 나노입자는 폴리머 기반의 담체, 예컨대 폴리에틸렌이민(PEI), 지질 나노입자 및 리포좀, 나노리포좀, 세라미드-함유 나노리포좀, 프로테오리포좀, 천연 및 합성-유래 엑소좀 둘 모두, 천연, 합성 및 반-합성 박막층체(lamellar body), 나노미립자, 칼슘 포스포르-실리케이트 나노미립자, 인산칼슘 나노미립자, 이산화규소 나노미립자, 나노결정질 미립자, 반도체 나노미립자, 폴리(D-아르기닌), 졸-겔, 나노덴드리머, 전분-기반의 전달 시스템, 미셀, 에멀전, 니오좀, 다중-도메인-블록 폴리머(비닐 폴리머, 폴리프로필 아크릴산 폴리머, 역학적 폴리 컨쥬게이트) 및 건조 분말 제형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 담체 시스템과는 개별적으로 면역원성 조성물에 포함된다. 다른 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 면역원성 조성물의 담체 시스템 내에 포함되거나 혼입되며, 예컨대 RNA 백신의 RNA 분자와 함께 지질 나노입자 내로 혼입된다.
특정 예에서, 치료적 유효량의 치료적 올리고뉴클레오티드 및 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 임의의 특정 조합 및/또는 순서로 동시에, 동시적으로, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 개별적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드의 표적 유전자(폴리뉴클레오티드)의 예에는 PLK1ERBB2, PIK3CA, ERBB3, HDAC1, MET, EGFR, TYMS, TUBB4B, FGFR2, ESR1, FASN, CDK4, CDK6, NDUFB4, PPAT, NDUFB7, DNMT1, BCL2, ATP1A1, HDAC3, FGFR1, NDUFS2, HDAC2, NDUFS3, HMGCR, IGF1R, AKT1, BCL2L1, CDK2, MTOR, PDPK1, CSNK2A1, PIK3CB, CDK12, MCL1, ATR, PLK4, MEN1, PTK2, FZD5, KRAS, WRN, CREBBP, NRAS, MAT2A, RHOA, TPX2, PPP2CA, ALDOA, RAE1, SKP1, ATP5A1, EIF4G1, CTNNB1, TFRC, CDH1, CCNE1, CLTC, METAP2, GRB2, MDM4, SLC16A1, FERMT2, ENO1, STX4, SF3B1, RBBP4, FEN1, MRPL28, CCNA2, PTPN11, SAE1, KMT2D, APC, CAD, NAMPT, OGT, HSPA8, USP5, CSNK1A1, PGD, VRK1, SEPSECS, SUPT4H1, DNAJC9, TRIAP1, DLD, PTPN7, VDAC1, STAT3, TCEB2, ADSL, GMPS, DHPS, METAP1, TAF13, CFL1, SCD, RBM39, PGAM1, FNTB, PPP2R1A, ARF1, UBE2T, UMPS, MYC, PRMT5, EIF4G2, SKP2, STAG2, ATF4, WDR77, ILK, METTL16, SOD1, DDX6, FURIN, AARS, FNTA, PABPC1, RANBP2, CDC25B, SLC2A1, CENPE, ADAR, CDC42, RNF31, CCNC, PRIM1, SLC38A2, SNUPN, PDCD6IP, RTN4IP1, VMP1, TGFBR1, TXN, UBE2N, UAP1, RAC1, GGPS1, RAB10, RAB6A, TPI1, RPE, THG1L, UBE2D3, RHEB, PKM, GMNN, HGS, NCKAP1, NUP98, SMARCA2, RNF4, DDX39B, ACLY, XPO1, PPP1R8, YAP1, MTHFD1, LPAR1, TAF1, UROD, STXBP3, HSP90B1, VHL, EFR3A, FECH, MRPL44, AIFM1, MAGOH, MRPL17, SUZ12, RNMT, RAB1B, PNPT1, RAD1, WDR48, PITRM1, MRPL47, AP2M1, EIF4A1, UBE2C, LONP1, VPS4A, SNRNP25, TUBGCP6, DNM2, UBE2M, EXOSC9, TAF1B, CDC37, ATP6V1G1, POP1, JUP, PRPS1, GPX4, CFLAR, CHMP4B, ACTB, ACTR1A, PTPN23, SHC1, TRPM7, SLC4A7, HSPD1, XRN1, WDR1, ITGB5, UBR4, ATP5B, CPD, TUFM, MYH9, ATP5F1, ATP6V1C1, SOD2, PFAS, NFE2L2, ARF4, ITGAV, DHX36, KIF18A, DDX5, XRCC5, DNAJC11, ZBTB8OS, NCL, SDHB, ATP5C1, NDC1, SNF8, CUL3, SLC7A1, ASNA1, EDF1, TMED10, CHMP6, ARIH1, DDOST, RPL28, DIMT1, CMPK1, PPIL1, PPA2, SMAD7, CEP55, MVD, MVK, PDS5A, KNTC1, CAPZB, GMPPB, TPT1, ACIN1, SAR1A, TAF6L, PTBP1, PAK2, CRKL, NHLRC2, INO80, SLC25A3, ACTR3, DDX3X, HUWE1, TBCA, IK, SSBP1, ARPC4, SLC7A5, OSGEP, PDCD2, TRAF2, SNAP23, RPN1, EIF5A, GEMIN4, BMPR1A, AHCYL1, CHMP5, TRAPPC1, LRP8, ARID2, UBE2L3, STAMBP, KDSR, UQCRC2, PNN, USP7, TBCD, ATP6V0E1, PCYT1A, TAZ, POLRMT, CELSR2, TERF1, BUB1, YRDC, SMG6, TBX3, SLC39A10, IPO13, CDIPT, UBA5, EMC7, FERMT1, VEZT, CCND1, CCND2, FPGS, JUN, PPM1D, PGGT1B, NPM1, GTF2A1, MBTPS1, HMGCS1, LRR1, HSD17B12, LCE2A, NUP153, FOSL1, IRS2, CYB5R4, PMPCB, ARHGEF7, TRRAP, NRBP1, ARMC7, MOCS3, TIPARP, SEC61A1, PFDN5, MYB, IRF4, STX5, MYCN, FOXA1, SOX10, GATA3, ZEB2, MYBL2, MFN2, TBCB, KLF4, TRIM37, CEBPA, STAG1, POU2AF1, HYPK, FLI1, NCAPD2, MAF, NUP93, RBBP8, HJURP, SMARCB1, SOCS3, GRWD1, NKX2-1, FDXR, SPDEF, SBDS, SH3GL1, KLF5, CNOT3, ZNF407, CPSF1, RPTOR, EXT1, SMC1A, GUK1, TIMM23, FAU, ACO2, ALG1, CCNL1, SCAP, SRSF6, SPAG5, SOX9, LDB1, ASPM, LIG1, TFDP1, RPAIN, CENPA, MIS12, ILF3, HSCB, ERCC2, SOX2, ARFRP1, PMF1, POLR3E, MAD2L2, PELP1, NXT1, WDHD1, ZWINT, E2F3, FZR1, JUNB, OGDH, NOB1, SKA3, TACC3, UTP14A, XRN2, SMG5, IDH3A, CIAO1, COQ4, ZFP36L1, CDCA5, PRKRA, PFDN6, PAK1IP1, PSTK, EDC4, UTP18, TOMM22, CASC5, PTTG1, RBBP5, PPP1R12A, FARS2, FOXM1, SIN3A, BUB1B, GNB1L, SMC5, SARS2, SYNCRIP, IPPK, FANCD2, WDR46, FANCI, DCP2, RFC2, RNF20, DMAP1, MED23, MBNL1, CTPS1, TBP, MMS19, RAD51C, CDS2, NONO, USP18, PARS2, FBXW11, SUMO2, RRP12, FAM50A, URB2, MCM4, SLC25A28, IPO7, MAX, SFSWAP, SBNO1, DPAGT1, TINF2, BRCA2, NUP50, RPIA, EP400, IKBKAP, KIF14, RTTN, CCDC115, GEMIN6, WWTR1, BCS1L, GTF3A, SCYL1, NELFB, DDX39A, TRA2B, SYVN1, ISL1, CYB5B, ACSL3, DPH3, E2F1, IREB2, SREBF1, SMC6, IRF8, ID1, PDCD11, SNAPC2, TIMM17A, ANAPC10, NUP85, SEH1L, VBP1, NUDC, MTX2, RPP25L, ISY1, LEMD2, ATP5D, EXOSC2, TAF1C, PPIL4, SEPHS2, HNRNPH1, CTR9, CDC26, TIMM13, FAM96B, CEBPZ, UFL1, ZNF236, COPG1, TPR, MIOS, UBE2G2, MED12, GTF3C1, PPP2R2A, UBIAD1, WTAP, MYBBP1A, NUP88, NELFCD, WDR73, RTCB, CEP192, GTF3C5, LENG1, RINT1, MED24, COX6B1, DCTN6, SLC25A38, LYRM4, STRAP, TTF2, DDX27, GTF2F1, ZNHIT2, BCLAF1, WDR18, GTF2H2C, NDE1, TIMM9, CHMP7, IPO11, TGIF1, NOC4L, EXOSC6, WDR24, INTS6, DDX41, UBE2S, ARGLU1, SHOC2, ATP5J, CSTF2, RPP30, NHP2, GRHL2, RPL22L1, WDR74, UTP23, CCDC174, RPP21, UBE2J2, GEMIN8, ATP6V0B, KIAA1429, PNO1, MED22, ENY2, THOC7, DDX19A, SUGP1, PELO, ELAC2, CHCHD4, RNPC3, INTS3, PSMG4, UQCRC1, TAF1A, TSR1, UTP6, TRMT5, EIF1AD, GTF3C2, DCTN3, GPS1, WDR7, EXOSC8, KANSL1, SPRTN, KANSL3, EXOSC5, PRCC, TRNAU1AP, EIF3J, TAMM41, HAUS6, OIP5, HAUS5, TAF6, MRPS22, MRPS34, WBP11, COG8, DHX38, DNLZ, LAGE3, FUBP1, MED26, SLC7A6OS, MARS2, RBM28, ASCC3, PSMG3, TUBGCP5, PCF11 또는 LAS1L이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
일 구현예에서, 표적화될 유전자에는 PKN3, VEGFA, KIF11, MYC, EPHA2, KRAS (G12), ERBB3, BIRC5, HIF1A, BCL2, STAT3, AR, EPAS1, BRCA2 또는 CLU가 포함된다.
본원에 기재된 바와 같이 변형될 수 있는 상업적 올리고뉴클레오티드의 예에는 인클리시란(inclisiran), 미포메르센(mipomersen)(Kynamro), 누시네르센(nusinersen)(Spinraza), 에테플리르센(eteplirsen)(Exondys51), 미라비르센(miravirsen)(SPC3649), RG6042(IONIS-HTTRx), 이노테르센(inotersen), 볼라네소르센(volanesorsen), 골로디르센(golodirsen)(Vyondys53), 포미비르센(fomivirsen)(Vitravene), 파티시란(patisiran), 기보시란(givosiran), 단바티르센(danvatirsen) 및 IONIS-AR-2.5Rx가 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
조성물
본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 흡수, 분포 및/또는 흡착(absorption)을 보조하기 위해, 다른 분자, 분자 구조 또는 화합물의 혼합물과 혼합, 캡슐화, 컨쥬게이트(예컨대, 융합)되거나, 다르게는 회합되어, 예를 들어 리포좀, 수용체-표적화된 분자, 경구, 직장, 국소 또는 기타 제형을 초래할 수 있다. 이러한 흡수, 분포 및/또는 흡착-보조 제형의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 US 5,108,921, US 5,354,844, US 5,416,016, US 5,459,127, US 5,521,291, US 5,543,158, US 5,547,932, US 5,583,020, US 5,591,721, US 4,426,330, US 4,534,899, US 5,013,556, US 5,108,921, US 5,213,804, US 5,227,170, US 5,264,221, US 5,356,633, US 5,395,619, US 5,416,016, US 5,417,978, US 5,462,854, US 5,469,854, US 5,512,295, US 5,527,528, US 5,534,259, US 5,543,152, US 5,556,948, US 5,580,575 및 US 5,595,756을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에서 투여될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 고체 또는 액체일 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체의 유용한 예는 본 개시내용의 활성 작용제의 활성에 영향을 미치지 않는 희석제, 용매, 계면활성제, 부형제, 현탁제, 완충제, 윤활제, 보조제, 비히클, 유화제, 흡수제(absorbant), 분산 매질, 코팅제, 안정제, 보호 콜로이드, 접착제, 증점제, 요변제, 침투제, 금속이온봉쇄제, 등장제 및 흡수 지연제(absorption delaying agent)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일 구현예에서, 약제학적 담체는 주사용수(WFI)이고 약제학적 조성물은 pH 7.4, 7.2 내지 7.6으로 조정된다. 일 구현예에서, 염은 나트륨 또는 칼륨 염이다.
올리고뉴클레오티드는 키랄(비대칭) 중심을 함유할 수 있거나, 분자는 전체적으로 키랄일 수 있다. 개별 입체이성질체(거울상이성질체 및 부분입체이성질체) 및 이들의 혼합물은 본 개시내용의 범위 내에 있다.
본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 약제학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 또는 에스테르의 염, 또는 투여 시에 (직접적으로 또는 간접적으로) 생물학적 활성 대사산물을 제공할 수 있는 임의의 다른 화합물일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용 가능한 염"은 부모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 유지하고 투여 시에 바람직하지 않은 독성 효과를 부여하지 않는 올리고뉴클레오티드의 생리학적으로 및 약제학적으로 허용 가능한 염을 지칭한다. 약제학적으로 허용 가능한 염 및 이들의 용도의 예는 US 6,287,860에 추가로 기재되어 있다.
본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 전구약물 또는 전구약물의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 다른 생물학적 등가물일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "전구약물"은 내인성 효소 또는 다른 화학물질 및/또는 조건의 작용에 의해 투여 시에 활성 형태(즉, 약물)로 전환되는 비활성 형태로 제조되는 치료제를 지칭한다. 특히, 본 개시내용의 올리고뉴클레오티드의 전구약물 형태는 WO 93/24510, WO 94/26764 및 US 5,770,713에 개시된 방법에 따라 SATE[(S 아세틸-2-티오에틸)포스페이트] 유도체로서 제조된다.
전구약물은, 예를 들어 혈액 내 가수분해에 의해 의학적 효과를 갖는 활성 형태로, 예를 들어 신체 내에서 전환될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 전구약물은 문헌[T. Higuchi and V. Stella, Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A. C. S. Symposium Series (1976)]; 문헌["Design of Prodrugs" ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]; 및 문헌[Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 기재되어 있다. 유기 화학 분야의 당업자는 많은 유기 화합물이 반응하거나 침전되거나 결정화되는 용매와 복합체를 형성할 수 있음을 인식할 것이다. 이들 복합체는 "용매화물"로 알려져 있다. 예를 들어, 물과의 복합체는 "수화물"로 알려져 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드의 세포 흡수를 증가시키기 위해 착화제와 복합체화될 수 있다. 착화제의 예는 양이온성 지질을 포함한다. 양이온성 지질은 올리고뉴클레오티드를 세포로 전달하는 데 사용될 수 있다.
용어 "양이온성 지질"은 극성 및 비극성 도메인 둘 모두를 가지며 생리학적 pH에서 또는 그 부근에서 양으로 하전될 수 있고, 핵산과 같은 다중음이온에 결합하고, 핵산을 세포로 전달하는 것을 촉진하는 지질 및 합성 지질을 포함한다. 일반적으로 양이온성 지질은 아민, 아미드 또는 이의 유도체의 포화 및 불포화 알킬 및 지환족 에테르 및 에스테르를 포함한다. 양이온성 지질의 직쇄 및 분지형 알킬 및 알케닐 기는, 예를 들어 1 내지 약 25개의 탄소 원자를 함유할 수 있다. 바람직한 직쇄 또는 분지형 알킬 또는 알켄 기는 6개 이상의 탄소 원자를 갖는다. 지환족 기에는 콜레스테롤 및 기타 스테로이드 기가 포함된다. 양이온 지질은, 예를 들어 Cl-, Br-, I-, F-, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 설페이트, 니트라이트 및 니트레이트를 포함하는 다양한 반대이온(음이온)을 이용하여 제조될 수 있다.
양이온성 지질의 예는 폴리에틸렌이민, 폴리아미도아민(PAMAM), 스타버스트 덴드리머(starburst dendrimer), 리포펙틴(DOTMA와 DOPE의 조합), 리포펙타제, LIPOFECTAMINE™(예를 들어, LIPOFECTAMINE™ 2000), DOPE, 사이토펙틴Cytofectin)(미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재의 길리어드 사이언스즈(Gilead Sciences)), 및 유펙틴(Eufectin)(미국 캘리포니아주 샌 루이스 오비스포 소재의 제이비엘(JBL))을 포함한다. 예시적인 양이온성 리포좀은 N-[1-(2,3-디올레올옥시)-프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드(DOTMA), N-[1-(2,3-디올레올옥시)-프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 메틸설페이트(DOTAP), 3.베타.-[N--(N',N'-디메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(DC-Chol), 2,3,-디올레일옥시-N-[2(스페르민카복스아미도)에틸]-N,N-디메틸-1-프로판아미늄 트리플루오로아세테이트(DOSPA), 1,2-디미리스틸옥시프로필-3-디메틸-하이드록시에틸 암모늄 브로마이드; 및 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드(DDAB)로부터 제조될 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 또한, 예를 들어 폴리(L-라이신) 또는 아비딘과 복합체화될 수 있으며, 지질은, 이러한 혼합물, 예를 들어 스테릴-폴리(L-라이신)에 포함될 수 있거나, 포함되지 않을 수 있다.
양이온성 지질은 올리고뉴클레오티드(및 mRNA 백신)를 세포로 전달하기 위해 당업계에서 사용되어 왔다(예를 들어, US 5,855,910; 5,851,548; 5,830,430; 5,780,053; 5,767,099; 문헌[Lewis et al., 1996]; 문헌[Hope et al., 1998] 참조). 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 흡수를 촉진하기 위해 사용될 수 있는 다른 지질 조성물이 본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있다. 상기 열거된 것들에 더하여, 다른 지질 조성물이 또한 당업계에 알려져 있고, 예를 들어 US 4,235,871; US 4,501,728; 4,837,028; 4,737,323에 교시된 것들을 포함한다.
일 구현예에서, 지질 조성물은 올리고뉴클레오티드의 지질-매개 트랜스펙션을 향상시키기 위한 작용제, 예를 들어 바이러스 단백질을 추가로 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, N-치환된 글리신 올리고뉴클레오티드(펩토이드)는 올리고뉴클레오티드의 흡수를 최적화하기 위해 사용될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 전달하기 위한 조성물은 약 1 내지 약 4개의 염기성 잔기를 갖는 펩티드를 포함한다. 이러한 염기성 잔기는, 예를 들어, 펩티드의 아미노 말단, C-말단, 또는 내부 영역에 위치할 수 있다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신(비극성으로 간주될 수도 있음), 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 염기성 아미노산 외에도, 펩티드의 대부분 또는 모든 다른 잔기는 비-염기성 아미노산, 예를 들어 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘 이외의 아미노산으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는 긴 중성 측쇄를 갖는 중성 아미노산이 우세하게 사용된다.
일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 본원에서 "수송 펩티드"로 지칭되는, 세포 내로 올리고뉴클레오티드를 수송하는 펩티드 서열을 부착함으로써 변형된다. 일 구현예에서, 조성물은 단백질을 인코딩하는 표적 핵산 분자에 상보적인 올리고뉴클레오티드, 및 공유 부착된 수송 펩티드를 포함한다.
추가의 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc), 항체, 항체-유사 분자 또는 압타머와 같은 표적화 모이어티에 부착된다(예를 들어, 문헌[Toloue and Ford (2011)] 및 문헌[Esposito et al. (2018)] 참조).
투여
일 구현예에서, 본 개시내용의 올리고뉴클레오티드는 전신 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이 "전신 투여"는 장내 또는 비경구 투여 경로이다.
본원에 사용된 바와 같이 "장내"는 위장관의 임의의 부분을 수반하는 투여 형태를 지칭하며, 예를 들어 정제, 캡슐 또는 점적 형태의 올리고뉴클레오티드의 경구 투여; 위 영양관, 십이지장 영양관 또는 위루술; 및 예를 들어 좌제 또는 관장 형태의 올리고뉴클레오티드의 직장 투여를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이 "비경구"는 주사 또는 주입에 의한 투여를 포함한다. 예에는 정맥내(정맥으로), 동맥내(동맥으로), 근육내(근육으로), 심장내(심장으로), 피하(피부 아래로), 골내 주입(골수로), 피내(피부 자체로), 척수강내(척추관으로), 복강내(복막으로의 주입 또는 주사), 방광내(방광으로 주입), 경피(온전한 피부를 통한 확산), 경점막(점막을 통한 확산), 흡입이 포함된다.
일 구현예에서, 약제학적 조성물의 투여는 피하이다.
올리고뉴클레오티드는 단회 용량으로서 또는 기간 기준으로, 예를 들어 매일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일마다 1회, 주 1회, 주 2회, 주 3회, 2주마다, 3주마다, 매월, 2개월마다, 3개월 내지 6개월마다 또는 12개월마다 반복된 용량으로서 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 투여는 주마다 1 내지 3회, 또는 매주, 2주, 3주, 4주마다 1회, 또는 2개월마다 1회이다.
일 구현예에서, 투여는 매주 1회이다.
일 구현예에서, 적어도 3 내지 6개월 동안의 약 25 내지 50 mg/주와 같은 저용량이 3 내지 6개월 동안, 이어서 최대 12개월 그리고 만성적으로 투여된다.
예시적인 용량은 약 10 내지 5,000 mg이다. 예시적인 용량은 25, 50, 100, 150, 200, 1,000, 2,000 mg을 포함한다. 예시적인 용량은 1.5 mg/kg(약 50 내지 100 mg) 및 3 mg/kg(100 내지 200 mg), 4.5 mg/kg(150 내지 300 mg), 10 mg/kg, 20 mg/kg 또는 30 mg/kg을 포함한다. 일 구현예에서, 용량은 주마다 1회 투여된다. 따라서 일 구현예에서, 대략 10 내지 30, 또는 20 내지 40, 또는 20 내지 28 mg의 저용량이 통상적으로 체중이 약 25 내지 65 kg인 대상체에게 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 올리고뉴클레오티드는 치료 효과를 생성하기 위해 용량 당 50 mg 미만, 또는 30 mg 미만, 또는 약 25 mg의 용량으로 투여된다.
표
[표 1]
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[표 1A]
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[표 2]
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Figure pct00010
Figure pct00011
표적화된 유전자 명칭은 괄호 안에 제공되며(예를 들어, [CDKN2B-AS1]), 표적 RNA 내의 참조 위치가 뒤에 온다. ASO를 하기 변형과 함께 합성하였다: 대문자는 DNA만을 위한 것이며, 'm'은 2'OMe 염기 변형을 나타내며, *는 포스포로티오에이트 백본을 나타낸다. "위치" 열은 스크린에서 사용되는 96 웰 플레이트 내의 ASO의 위치를 나타낸다. 각각의 스크린에서 사용되는 ASO의 농도가 표기되어 있다. 각각의 스크린으로부터의 평균화된 NF-κB -루시퍼라제 또는 IP-10 수준은 ISD70(cGAS), ODN2006(TLR9), R848(TLR7/8 - 문헌[Alharbi et al., 2020]) 조건에 비하여 백분율(TLR7/9/cGAS) 또는 배수 증가(TLR8)로서 제공된다. 볼드체는 도 6b에서 모티프 발견을 위해 사용된 가장 강력한 10개의 cGAS 저해제를 나 타낸다. 이탤릭체는 도 6e에서 모티프 발견을 위해 사용되는 "ISD70 단독" 조건의 10% 미만의 저해를 갖는 17개의 ASO를 나타낸다. 밑줄은 도 6c 및 도 6d에서 모티프 발견을 위해 사용되는 가장 강력한 10개의 TLR9 저해제를 나타낸다. 기호 "#"는 가장 강력한 16개의 TLR9저해제를 나타내며, 기호 "†"는 도 4g에서 사용되는 가장 약한 16개의 TLR의 저해제이다. 기호 "§"는 TLR7/9 및 cGAS를 30% 미만으로 저해하는 4개의 ASO를 나타낸다.
[표 2a]
Figure pct00012
Figure pct00013
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[표 3]
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[표 3a]
[표 4]
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[표 4a]
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[표 5]
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[표 5a]
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[표 6]
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[표 7]
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실시예
실시예 1 - 방법
세포 단리, 배양 및 자극
2명의 건강한 성인 공여자(#1129 및 #1980)로부터의 인간 일차 골수-유래 중간엽 줄기 세포(MSC)를 론자(Lonza)로부터 구입하고(#PT-2501), 1× 항생제/항진균제(써모 피셔 사이언티픽) 및 10% 열-불활성화된 우태아혈청이 보충된 둘베코의 변형된 이글스 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium) + L-글루타민(완전한 DMEM으로 지칭됨)에서 배양하였다. 배양 배지를 주 2회 교체하고, 세포를 80% 컨플루언시(confluency)에서 계대하고, 2.5 x 103개 세포/cm2의 밀도로 씨딩하였다. 이들 세포에 병원체가 부재한 것을 확인하였고, 국제 세포 및 유전자 치료 학회(International Society of Cell and Gene Therapy)에서 정의한 MSC 기준을 충족하는 것으로 인증하였다. 본원에 사용되는 MSC를 계대수 6 내지 7에서 플레이팅하였다. 류마티스 관절염(RA) 환자는 RA의 분류에 대한 미국 류마티스 학회(ACR) 기준을 충족하였다(문헌[Arnett et al., 1987]). RA 및 대조군 일차 섬유모세포-유사 활막세포(FLS)를 활막 조직의 수술 표본으로부터 수득하고, 이전에 기재된 바와 같이 배양하였다(문헌[Leech et al., 1999]). FLS를 1x 항생제/항진균제 및 10% 열 불활성화된 우태아혈청이 보충된 RPMI 1640 + L-글루타민 배지(라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))(완전한 RPMI으로 지칭됨)에서 성장시켰다.
Trex1-돌연변이 마우스(동물 윤리 참조번호 A2018/38 하에 사용됨)는 Trex1-결핍 마우스에서 보고된 것(문헌[Gray et al., 2015])과 유사하게, Trex1에 단일-기반의 돌연변이를 가져, 조기 정지 코돈(Q169X)과 세포질 DNA의 비정상적인 축적을 야기하며, 이는 cGAS-STING 경로의 기저의 관여를 초래한다(문헌[Ellyard J.I. and Vinuesa C.G., manuscript in preparation]). 야생형, Trex1-돌연변이 또는 Tlr7 Y264H 돌연변이 마우스로부터의 일차 골수 유래 대식구(BMDM)를 추출하고, 이전에 보고된 바와 같이 L929 조정 배지가 보충된 완전 DMEM에서 6일 동안 분화시켰다(문헌[Ferrand and Gantier, 2016]). 인간 TLR7, TLR9 또는 TLR3을 안정하게 발현하는 293XL-hTLR7-HA, 293XL-hTLR9-HA 및 HEK-Blue™ hTLR3을 인비보겐(Invivogen)으로부터 구입하였으며, TLR7/9 및 TLR3 세포에 대하여 각각 10 μg/ml 및 30 μg/ml의 블라스티시딘(인비보겐)이 보충된 완전한 DMEM에서 유지하였다. HeLa 세포, 인간 대장암 HT-29(R. Firestein으로부터 호혜로 얻음), HRASG12V와 함께 SV40(대형 및 소형 T 항원)을 발현하는 인간 섬유모세포(E. Sanij(문헌[Quin et al., 2016])로부터 호혜로 얻음; 본원에서 BJ hTERT SV40T로 지칭됨), LL171 세포(IFN 자극된 반응 요소(ISRE)-루시퍼라제를 발현하는 마우스 L929 세포 - V. Hornung (문헌[Ablasser et al., 2013])로부터 호혜로 얻음) 및 불멸화된 야생형 마우스 골수 대식구(BMDM)(문헌[Ferrand et al., 2018])를 완전한 DMEM에서 성장시켰다. 인간 골육종 MG-63 세포를 ATCC(#CRL-1427)로부터 구입하고, 10% 열-불활성화된 우태아혈청(써모 피셔 사이언티픽) 및 1× 항생제/항진균제(써모 피셔 사이언티픽)가 보충된 ATCC-제형화된 이글스 최소 필수 배지에서 성장시켰다. 인간 급성 골수성 백혈병 THP-1 및 이들의 CRISPR-Cas9 유도체(cGAS-/-(문헌[Mankan et al., 2014]), UNC93B1-/- 및 UNC93B1로 재구성된 UNC93B1-/-(문헌[Pelka et al., 2014])) 세포를 완전한 RPMI에서 성장시켰다. THP-1 세포를 임의의 실험에서 PMA로 분화시키지 않았으며, 오히려 현탁액 중에서 사용하였다. 모든 세포를 5% CO2와 함께 37℃에서 배양하였다. 세포주를 주 2 내지 3회 계대하고, PCR에 의해 정기적으로 마이코플라스마 오염에 대하여 시험하였다.
cGAS 자극을 위하여, 세포를 표기된 기간 동안 ASO로 처리한 후에, ISD70(인간 세포) 또는 ISD45(마우스 세포)를 사용한 트랜스펙션을 행하였다(달리 나타내지 않는 한, ISD 트랜스펙션 전에 ASO를 세척하지 않았다). cGAS 리간드 ISD45(문헌[Stetson and Medzhitov, 2006]) 및 ISD70(VACV-70으로도 알려져 있음(문헌[Unterholzner et al., 2010]))(표 1)을 하기와 같이 재현탁화시켰다: 10 μg/μl의 센스 5 μl 및 안티센스 가닥 5 μl을 무균 조건 하에서 90 μl의 PBS에 첨가하고, 75℃에서 30분 동안 가열한 후, 실온에서 냉각되게 하고, 분취하였다(1 μg/1 μl의 원액). ISD를 2.5 μg/ml의 농도에서 Opti-MEM(써모 피셔 사이언티픽) 중 리포펙타민 2000을 사용하여 1 μg:1 μl의 비로 트랜스펙션시켰다. HEK-TLR3, HEK-TLR7 및 HEK-TLR9를 표기된 농도의 ASO로 20 내지 50분 동안 처리한 후에, 각각 폴리(I:C)(인비보겐), R848(인비보겐), 모톨리모드(메드켐익스프레스(MedChemExpress)) 및 부류 B CpG 올리고뉴클레오티드 ODN 2006(IDT에 의해 합성되고 RNase-부재 TE 완충제 중에 재현탁화됨[표 1])을 사용한 자극을 행하였다. TLR2/1 효능제 PAM3CSK4(인비보겐), TLR4 효능제 지질다당류(인비보겐), 부류 B CpG 올리고뉴클레오티드 ODN 1826(IDT에 의해 합성되고 RNase-부재 TE 완충제 중에 재현탁화됨), 마우스 Sting 효능제 DMXAA(카이만(Cayman)) 및 인간 STING 효능제(문헌[(Raanjulu et al., 2018)]으로부터의 화합물 #3, 본원에서 GSK로 지칭됨 - 오스트레일리아 소재의 캔서 테라퓨틱스 씨알씨(Cancer Therapeutics CRC)로부터 호혜로 얻음)를 표기된 농도로 사용하였다. 아스피린(시그마 - A2093)을 순수 배지 중에 10 mM로 재현탁화시키고, 여과 살균하고, 최종 2 mM로 세포에 첨가하였다. 모든 ASO를 인테그레이티드 디엔에이 테크놀로지즈(Integrated DNA Technologies; IDT)에 의해 합성하였으며, RNase-부재 TE 완충제, pH 8.0(써모 피셔 사이언티픽) 중에 재현탁화시켰다. ASO 서열 및 변형은 표 1 및 2에 제공되어 있다. 1X 신선한 레자주린 용액을 웰(3.5 ml의 PBS 중에 용해된 7 mg의 레자주린[시그마 - R7017]을 사용하여 제조되고 0.2 μM로 멸균 여과된 10X 용액)에 4시간 동안 첨가한 후, 플루오스타(Fluostar) OPTIMA(비엠지 랩테크(BMG LABTECH)) 플레이트-판독기(형광: 여기 535 nm, 발광 590)를 사용하여 판독함으로써 세포 생존력을 평가하였으며; 배지 단독 및 1X 레자주린을 갖는 웰을 블랭크로서 사용하였다.
루시퍼라제 검정
TLR3, 7 또는 9를 안정하게 발현하는 HEK293 세포를 제조업체의 프로토콜에 따라 리포펙타민 2000(써모 피셔 사이언티픽)을 사용하여, pNF-κB-Luc4 리포터(클론테크(Clontech))로 역-트랜스펙션시켰다. 요약하여, 500,000 내지 700,000개의 세포를 6-웰 플레이트의 웰당 1.2 μl의 리포펙타민 2000을 사용하여 400 ng의 리포터로 역-트랜스펙션시켰으며, 5% CO2와 함께 37℃에서 3 내지 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 트랜스펙션 후에, 세포를 6-웰로부터 수집하고, 96-웰 내로 분취한 직후에, (상기 기재된 바와 같은) ASO 및 하룻밤 TLR 자극을 행하였다. 유사하게, ISRE-Luc 리포터를 발현하는 LL171 세포를 하룻밤 처리하였다. 다음날, 세포를 실온에서 10분 동안 (96-웰 플레이트에 있어서) 40 μl의 1X 글로(Glo) 용해 완충제(프로메가(Promega)) 중에서 용해시켰다. 이어서, 15 μl의 용해물을, 40 μl의 루시퍼라제 검정 시약(프로메가)을 사용하여 반딧불이 루시퍼라제 검정을 거치게 하였다. 발광을 플루오스타 OPTIMA(비엠지 랩테크) 루미노미터를 사용하여 정량화하였다.
베타-갈락토시다제 염색
β-갈락토시다제 염색 검정을 노쇠 β-갈락토시다제 염색 키트(뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs))를 사용하여 ASO로 처리된 FLS 및 MSC에서 수행하였다. 요약하여, FLS 및 MSC를 PBS로 세척하고, 고정하고, 제조업체의 프로토콜에 따라 37℃에서 X-Gal 용액을 사용하여 24 내지 48시간에 걸쳐 염색하였다. 세포를 도립 현미경검사를 사용하여 영상화시켰다. 조건당 3 내지 6개의 영상을 취하고, 이미지(image) J를 사용하여 분석하여, 영상당 β-갈락토시다제 양성 세포(청색)의 수를 계수하였다(각각의 조건에 대하여 총 100개 초과의 세포). 필드당 청색 세포의 상대적인 비율을 각각의 영상에 대하여 계산하였다.
ASO 역-트랜스펙션
도 1a, 도 3f 및 도 3g에 있어서, ASO를 리포펙타민 2000을 사용하여 역-트랜스펙션시켰다. 요약하여, 25 μl의 Opti-MEM 중 1.125 μl의 리포펙타민 2000의 용액을 25 μL의 Opti-MEM 중 1 μl의 10 μM ASO의 용액에 혼합하였다. 실온에서 20 내지 25분 인큐베이션 후에, 생성된 50 μl 용액을 24-웰 내로 분배하고, 450 μl의 항생제-부재 배지 중 50 내지 80,000개 세포를 첨가하여, 웰당 20 nM의 최종 ASO 농도를 제공하였다. 50 및 100 nM의 ASO를 사용하는 조건에 있어서(도 3f), 리포펙타민의 양을 일정하게 유지하였다. 세포를 24시간 인큐베이션 후에 150 μl의 RNA 용해 완충제(ISOLATE II RNA Mini 키트) 중에서 용해시켰다.
RNA 역전사 정량적 실시간 PCR(RT-qPCR)
전체 RNA를 ISOLATE II RNA Mini 키트(바이오라인(Bioline))를 사용하여 세포로부터 정제하였다. 랜덤 헥사머 cDNA를 제조업체의 지침에 따라 High-Capacity cDNA Archive 키트(써모 피셔 사이언티픽)를 사용하여 단리된 RNA로부터 합성하였다. RT-qPCR을 HT7900 및 QuantStudio 6 RT-PCR 시스템(써모 피셔 사이언티픽) 상에서 Power SYBR Green Master Mix(써모 피셔 사이언티픽)를 사용하여 행하였다. 각각의 PCR을 기술적 2벌 반복으로 수행하였으며, 인간 또는 마우스 18S를 참조 유전자로서 사용하였다. 각각의 앰플리콘을 겔-정제하고, 이를 사용하여 유전자 발현의 정량화를 위한 표준 곡선을 생성하였다(각각의 시행에서 사용됨). 용융 곡선을 각각의 시행에서 사용하여, 증폭의 특이성을 확인하였다. 사용되는 프라이머는 다음과 같았다: 인간 hIFIT1: hIFIT1-FWD TCACCAGATAGGGCTTTGCT(SEQ ID NO: 324); hIFIT1-REV CACCTCAAATGTGGGCTTTT(SEQ ID NO: 325); h18S: h18S-FWD CGGCTACCACATCCAAGGAA(SEQ ID NO: 326); h18S-REV GCTGGAATTACCGCGGCT(SEQ ID NO: 327); hIFI44: hIFI44-FWD ATGGCAGTGACAACTCGTTTG(SEQ ID NO: 328); hIFI44: TCCTGGTAACTCTCTTCTGCATA(SEQ ID NO: 329); 인간 IFIT2: hIFIT2-RT-FWD TTATTGGTGGCAGAAGAGGAAG(SEQ ID NO: 330); hIFIT2-RT-REV CCTCCATCAAGTTCCAGGTG(SEQ ID NO: 331); 인간 cGAS: hcGAS-FWD CACGTATGTACCCAGAACCC(SEQ ID NO: 332); hcGAS-REV GTCCTGAGGCACTGAAGAAAG(SEQ ID NO: 333); 마우스 Rsad2: mRsad2-FWD CTGTGCGCTGGAAGGTTT(SEQ ID NO: 334); mRsad2-REV ATTCAGGCACCAAACAGGAC(SEQ ID NO: 335); 마우스 18S: mRn18s- FWD GTAACCCGTTGAACCCCATT(SEQ ID NO: 336); mRn18s-REV CCATCCAATCGGTAGTAGCG(SEQ ID NO: 337); 마우스 Ifih1: mIfih1-FWD TCTTGGACACTTGCTTCGAG(SEQ ID NO: 338); mIfih1-REV TCCTTCTGCACAATCCTTCTC(SEQ ID NO: 339); 마우스 Ifit1: mIfit1-RT-FWD GAGAGTCAAGGCAGGTTTCT(SEQ ID NO: 340); mIfit1-RT-REV TCTCACTTCCAAATCAGGTATGT(SEQ ID NO: 341). 마우스 OAS3: mOAS3-FWD GTACCACCAGGTGCAGACAC(SEQ ID NO: 342); mOAS3-REV GCCATAGTTTTCCGTCCAGA(SEQ ID NO: 343);
사이토카인의 검출
인간 IP-10 및 IFN-β 수준을 상이한 배양물로부터의 상청액을 사용하여 측정하고, 제조업체의 프로토콜에 따라, 각각 IP-10(비디 바이오사이언스즈(BD Biosciences), #550926) 또는 IFN-β(피비엘 어세이 사이언스(PBL assay science), #41415-1) ELISA 키트를 사용하여 정량화하였다. 테트라메틸벤지딘 기질(써모 피셔 사이언티픽)을 사이토카인의 정량화를 위해 플루오스타 OPTIMA(비엠지 랩테크) 플레이트-판독기 상에서 사용하였다.
cGAS 시험관내 검정 및 cGAMP ELISA
0.8 μg의 재조합 전장 인간 cGAS(카이만, #22810)를 단일의 반응마다 (200 μl 중 0.5, 2 또는 10 μM의 ODN 농도를 얻도록) TE 완충제 중에 희석된 2 μl의 C2-Mut1/A151 및 20 μg의 ISD70(PBS 중에서 1 μg/μl로 신선하게 어닐링됨)과 함께, 80 mM Tris-HCl(pH 7.5), 200 mM NaCl, 20 μM ZnCl2, 20 mM MgCl2, 0.25 mM GTP(써모피셔 #R0441) 및 0.25 mM ATP(써모피셔 #R0461)를 갖는 200 μl의 부피 중에서 사용하였다. 37℃에서 40분 후에, 2.5 mM EDTA를 각각의 튜브에 첨가하여, 효소 반응을 중단시키고, 시료를 급속 동결시키고, -80℃에 보관하거나, cGAMP ELISA를 위해 직접적으로 처리하였다. cGAMP 수준을 제조업체의 프로토콜에 따라, DetectX Direct 2',3'-사이클릭 GAMP 효소 면역검정 키트(아보르 어세이즈(Arbor Assays))를 사용하여 측정하였다. 요약하여, 50 μL의 시험관내 반응물을 웰마다 50 μL의 검정 완충제, 25 μL의 컨쥬게이트 및 25 μL의 항체를 갖는 키트 마이크로플레이트의 웰마다 첨가한 후에, 최소 2시간 인큐베이션을 행하였다. 검정 완충제 중의 단계-희석을 사용하여 표준물질을 제조하였다. cGAMP 수준의 정량화를 450 nm에서 플루오스타 OPTIMA(비엠지 랩테크) 플레이트-판독기 상에서 수행하였다.
통계적 분석
Prism 8(그래프패드 소프트웨어 인코포레이티드(GraphPad Software Inc.))을 사용하여 통계적 분석을 수행하였다. 모든 실험은 최소 2회 독립적으로 반복하였다(주요 ASO를 독립적인 실험에서 실증한 ASO 스크린 제외 - 도 1d 및 도 4d). 조건 군을 비교할 때 일원 및 이원 분산 분석(ANOVA)을 사용한 한편, 조건 쌍을 비교할 때 양측 독립표본 비모수 만-휘트니 U 검정 또는 독립표본 양측 t-검정을 사용하였다. 사용된 기호: * P≤0.05, ** P≤0.01, *** P≤0.001, **** P≤0.0001 및 "ns"는 "유의미하지 않음"임.
실시예 2: cGAS 감지에서의 2'OMe 갭머 ASO의 서열-의존적 효과
cGAS는 병원체 및 손상된 내인성 핵산으로부터 유래되는 시토졸 DNA의 필수 센서로서 최근에 부각되었다(문헌[McWhirter and Jefferies, 2020]). DNA에 의한 활성화 시에, cGAS는 사이클릭 GMP-AMP(cGAMP)의 형성을 유도하며, 이는 인터페론 유전자의 자극제(STING)에 결합하고, CXCL10(IP-10) 및 IFNB1을 포함하는 IRF3 반응성 유전자의 전사 유도를 촉진한다. 이것이 매우 광범위한 질병과 연관된 유해한 면역 반응을 조장하기 때문에, cGAS를 치료적으로 표적화하기 위한 다양한 접근법이 현재 연구 중이다(문헌[An et al., 2018]; 문헌[Laa et al., 2019]; 문헌[Padilla-Salinas et al., 2020]; 문헌[Vincent et al., 2017]; 문헌[Zhao et al., 2020]). 본 발명자들은 본래 cGAS mRNA의 하향-조절에 의존하는 전략이 많은 다른 연구에서 추구되어 왔던 cGAS의 화학적 저해제에 의해 제시되는 것들에 대해 다른 치료적 방안을 제공할 수 있었다는 가설을 세웠다(문헌[An et al., 2018]; 문헌[Laa et al., 2019]; 문헌[Padilla-Salinas et al., 2020]; 문헌[Vincent et al., 2017]; 문헌[Zhao et al., 2020]). 이 가능성을 연구하기 위하여, 본 발명자들은 인간 cGAS의 mRNA를 표적화하는 11개의 2'OMe 갭머 ASO(ASO1 내지 ASO11)의 패널을 설계하였으며, cGAS를 내인적으로 발현하는 HeLa 세포 및 HT-29 세포에서 이들의 효과를 시험하였다(도 1a 및 표 1). ASO의 트랜스펙션은 2개의 세포주 간의 가변성에도 불구하고, cGAS mRNA의 서열-의존적 감소를 야기하였으며, ASO2는 30 내지 50% 영향을 가지며, ASO3/ASO4는 cGAS 발현을 강고하게 감소시키지 못하였다(도 1a).
본 발명자들은 다음으로 네이키드 ASO의 하룻밤 흡수 시의, 비분화된 단핵구 THP-1 세포에 대한 ASO의 패널의 기능적 효과를 시험하였다(도 1b). HeLa 및 HT-29 세포에서 관찰되는 하향-조절 시그니쳐와 대조적으로, ASO2는 cGAS 리간드로서 작용하는 합성 70-bp 인터페론 자극 DNA(ISD70)의 트랜스펙션 후에 IP-10 생성을 차단하는 가장 강력한 올리고뉴클레오티드였다(문헌[Unterholzner et al., 2010]). 이 관찰은 cGAS/STING-적격한 상피 HT-29 세포(문헌[Xia et al., 2016])에서 재현되었으며, 125 nM의 ASO2와의 하룻밤 인큐베이션은 ISD70-유도된 IP-10 생성을 둔화시켰다(그러나 ASO4, ASO10 또는 ASO11은 그렇지 않았다)(도 1c). 그러나, 결정적으로, 증가된 용량의 ASO4, ASO10 및 ASO11은 또한, HT-29에서 250 또는 500 nM로 사용되는 경우 ISD70-유도된 IP-10 생성을 차단하였다(도 1c). cGAS mRNA 표적화에 대한 이들의 상이한 효과를 고려하여(도 1a), ISD70-감지에 대한 ASO4/ASO10/ASO11의 용량-의존적 저해 효과는 이것이 cGAS mRNA 표적화와 독립적이며, 오히려, ISD70의 cGAS 감지에 대한 경쟁적 효과와 관련이 있음을 강력하게 시사하며; 이는 cGAS 감지에서 PS-ODN A151에 대하여 관찰되는 효과와 일치한다(문헌[Steinhagen et al., 2018]). ASO가 cGAS 기능에 직접적인 효과를 갖는다는 가설은 또한, ASO11이 낮은 용량에서 ISD70-감지를 증가시키지만, 더 높은 용량에서도 저해성이었다는 관찰과 일치하였으며, 이는 낮은 용량에서 이의 효소적 활성을 증가시키는 cGAS의 제3 DNA 결합 도메인으로의 ASO의 결합과 관련이 있을 수 있다(문헌[Xie et al., 2019])(도 1c).
ASO2가 다른 ASO보다 더 낮은 농도에서 ISD70-감지를 저해하였기 때문에, 선택된 모티프가 cGAS의 ISD70-감지에 대한 2'OMe 갭머 ASO의 저해 효과를 증가시킬 수 있음을 사실로 가정하였다. 이를 더 분명히 나타내기 위하여, 본 발명자들은 ISD70으로 트랜스펙션된 THP-1에서 CDKN2B-AS1 및 LINC-PINT 전사물(표 2 및 문헌(Alharbi et al., 2020))을 표적화하도록 설계된 80개의 2'OMe ASO의 라이브러리를 스크리닝하였다(도 1d). 이들 ASO 중 어느 것도 cGAS mRNA를 표적화하지 않았지만, 80개 중 23개는 ISD70-유도된 IP-10 생성을 40% 넘게 감소시켰다(도 1d 및 표 2). ISD70으로 트랜스펙션된 THP-1(C2, E10 및 F2 ASO) 및 HT-29 세포(C2 및 E10 ASO)에서 실증하기 위하여 고도로 저해성인 소수의 ASO를 스크린으로부터 선택하였다(도 1e, 도 1f). C2를 이용한 하룻밤 사전-처리는 두 세포 모델 모두에서 ISD70-의존적 IP-10 생성을 강고하게 저해하는 한편, E10의 유의미한 효과는 THP-1 세포에서만 관찰되었다(HT-29 세포에서 이 서열을 사용하여 25%가 감소하였음에 주목한다). 중요한 점은, C2가 ASO2(도 1e) 및 A151(도 1e, 도 1f)보다 더 강력한 저해제였다는 것이다.
본 발명자들은 최근에 2'OMe 갭머 ASO가 비분화된 THP-1에 의하여 자발적으로 흡수되고, 엔도좀 TLR7/8 감지를 조절할 수 있음을 보여주었다(문헌[Alharbi et al., 2020]). ISD70 트랜스펙션 시의 엔도좀 TLR의 추정상의 기여를 배제하기 위하여, 본 발명자들은 다음으로 cGAS(문헌[Mankan et al., 2014]) 또는 UNC93B1(문헌[Pelka et al., 2014])을 결여한 THP-1 세포에서 C2 및 ASO11의 효과를 시험하였으며, 후자는 TLR7/8 및 9 감지가 없다. cGAS-결핍 및 UNC93B1-결핍 세포가 합성 인간 STING 효능제를 사용한 자극 시에 IP-10을 유사하게 생성하였지만(문헌[Raanjulu et al., 2018]), cGAS-결핍 THP-1 세포는 또한 ISD70 트랜스펙션에 대한 반응을 결여하였다(도 1g). 역으로, 본 발명자들은 UNC93B1-결핍 및 매칭되는 야생형 세포에서 ISD70 감지에 대한 C2의 용량-의존적 저해 효과를 관찰하였고, 이는 ASO11에서는 관찰되지 않았으므로(도 1g), ISD70 감지에 대한 C2의 효과에서 엔도좀 TLR의 기여를 배제하였다. 종합하면, 이들 결과는 트랜스펙션된 DNA의 cGAS 감지를 서열-의존적 방식으로 저해하는 2'OMe 갭머 ASO에 대한 능력을 나타낸다.
실시예 3: cGAS 저해를 제어하는 2'OMe 모티프의 식별
ASO2, C2 및 E10이 THP-1에서 ISD70 감지의 강력한 저해제였음을 보여주었으며, 본 발명자들은 다음으로, 이들 ASO 내의 선택된 모티프가 이들의 저해 활성에 관여하였는지 여부를 정의하고자 하였다. 3개의 서열에서 수행한 MEME 모티프 발견 분석(문헌[Bailey and Elkan, 1994])에 의해, 4개의 고도로 보존된 염기를 갖는 C2의 5' 절반 및 ASO2 및 E10 둘 모두의 3' 절반 내의 추정상의 풍부한 모티프를 식별하였다(도 2a 및 도 6a). 이들 4개의 염기의 중요성을 시험하기 위하여, 본 발명자들은 먼저 이들 염기 중 2개(C2-Mut1) 또는 4개(C2-Mut2)를 치환하는 C2의 2개의 변이체를 설계하였다(도 2a)(모티프 내의 것들을 대체하기 위해 사용되는 염기가 임의적으로 선택되었으며 저해 활성을 동등하게 감소시키거나 증가시킬 수 있는 것에 주목한다). 이들 특정 염기의 직접적인 기여와 일치하게, HT-29 세포에서의 ISD70-유도된 IP-10 생성에 대한 C2 돌연변이체의 용량-반응 분석은 부모 C2 ASO와 비교하여 250 및 125 nM에서 두 ASO 모두에 대해 증가된 저해 활성을 보였다(이 감소는 125 nM에서 C2-Mut1에 대하여 유의미함; 도 2b). 유사하게, C2-Mut1은 마우스 LL171 세포에서 C2 및 ASO2보다 ISD45-유도된 인터페론 자극된 반응 요소(ISRE)-루시퍼라제에 대하여 유의미하게 더 저해성이었다(도 2c). 역으로, LL171 세포에서 20-mer PS 올리고뉴클레오티드(dT20)는 심지어 600 nM에서도 ISD45 감지를 저해하지 않았다(이에 의해, 마우스 세포에서 ASO 저해의 서열-특이적 성질을 확인하였다)(도 2c). 동시에, C2가 ASO2보다 더 강력한 저해제였음이 나타났고(도 1e), 본 발명자들은 C2의 5' 영역을 보유하는 ASO2의 돌연변이체(ASO2up) 또는 4개의 보존된 염기의 돌연변이체(ASO2down - 도 2a)를 설계하였다. HT-29 세포에서는 유의미하지 않지만, ASO2up이 ASO2(125 nM에서)보다 ISD70-유도된 IP-10 생성의 더 강력한 저해제였던 경향이 있었으며; 역으로, ASO2down이 62.5 및 125 nM에서 IP-10 생성을 유의미하게 증가시켰으며, 이는 HT-29 세포에서 ASO11에서 관찰된 것과 일치한다(도 2d).
C2-Mut1에서 C2의 2개의 염기 돌연변이가 ISD70-유도된 IP-10 저해를 유의미하게 증가시켰기 때문에, 본 발명자들은 다음으로, C2-Mut1에서 관찰되는 저해가 추가로 개선될 수 있는지 여부를 정의하기 위하여 염기 순열을 갖는 일련의 4개의 C2-Mut1 돌연변이체(C2-Mut1v1 내지 C2-Mut1v4)를 설계하였다(도 2e). 본 발명자들은 또한 C2-Mut1의 5' 절반을 ASO2up(C2-ASO2-A) 또는 ASO2down(C2-ASO2-B)의 3' 절반에 융합하여 하이브리드 ASO를 설계하였다. HT-29(도 2f) 및 THP-1(도 2g)에서의 이들 서열의 분석에 의해, C2-Mut1이 강고하게 ISD70 감지의 가장 저해성인 서열이었으며, 이의 돌연변이 C2-Mut1v3보다 유의미하게 더 강력하였음이 드러났다. 흥미롭게도, 2개의 융합된 저해 모티프(5' 절반에서는 C2-Mut1의 것 및 3' 절반에서는 ASO2up/C2의 것)를 함유하는 C2-ASO2-A는 C2-Mut1의 것과 유사한 효력을 가졌으며, 이는 ASO의 3' 말단 영역 내의 저해성 모티프의 중복이 저해를 유의미하게 개선하지 않았다는 것을 나타낸다(도 2f, 도 2g). 그럼에도 불구하고, THP-1 세포에서, C2-ASO2-B는 C2-ASO2-A보다 유의미하게 덜 저해성이었으며, ASO2down은 ASO2up보다 유의미하게 덜 저해성이었으며, 이에 의해, 3' 말단 영역이 또한 ISD70 감지의 저해에 일조할 수 있다는 것이 확인된다(도 2g).
실시예 4: 최소 mGmGmUATC 모티프에 의한 cGAS 저해
다음으로, 본 발명자들은 갭머 ASO의 2'OMe 화학적 변형이 cGAS에 대한 이들의 효과에 작용하는지 여부를 알아보았다. C2-Mut1의 저해 효과는 마우스 LL171 및 인간 THP-1 세포 둘 모두에서 2'OMe 말단이 PS-백본 상의 DNA 염기에 의해 대체된(C2-Mut1-PS로 지칭됨) C2-Mut1 유사체에서 유의미하게 감소하였다(도 2h, 도 2i 및 표 1). 또한, 스크린으로부터 가장 저해성인 10개의 ASO 상의 MEME 모티프 발견(도 1d 및 표 2)에 의해, 5개의 ASO가 C2 및 C2-Mut1과 일치하는 보존된 [A/G]GUC[U/C]C(SEQ ID NO: 344) 모티프를 보유하였으며, 이는 주로 이들의 2'OMe 5' 말단과 중첩되었던 것이 드러났다(도 6b). 흥미롭게도, 이들 서열 중 하나인 '[LINC-PINT]103'(ASO103으로 지칭됨)은 단일 염기 점증(increment)을 갖는 서열의 패밀리의 부분이었다(표 2 및 도 2j). 이 시리즈 내에서, ASO103은 THP-1 세포에서 ISD70-유도된 IP-10 생성을 유의미하게 저해하는 유일한 서열이었으며, 이는 5'-말단 위치 및 2'OMe 변형이 ASO 저해 기능에 필수적일 가능성이 있음을 추가로 뒷받침한다(도 2k).
지금까지 수집된 데이터는 2'OMe 갭머와의 긴(즉, 6시간 내지 16시간) 사전-인큐베이션이 cGAS에 의한 ISD 감지의 저해를 야기하는 것을 보여주었다. ASO의 저해 활성에 대한 사전-인큐베이션의 역할을 알아내기 위해, 본 발명자들은 ISD45의 트랜스펙션 이전에 세척을 사용하거나 이를 사용하지 않고, LL171 세포에서 6시간 동안 사전-인큐베이션시킨 C2-Mut1의 효과를 비교하였다. 또한, ISD45의 트랜스펙션 이전의 짧은 시간(약 20분) 동안 첨가된 ASO의 효과를 시험하였다. 더 짧은 기간 동안의 ASO의 사전-인큐베이션은 ISD45-유도된 ISRE-Luc 발현에 대한 이들의 저해 효과에 영향을 미치지 않았지만, 세척 단계를 추가하면 저해를 유의미하게 둔화시켰다(도 2l). 이들 발견은 ASO가 ISD를 함유하는 리포좀과 어느 정도 동시-트랜스펙션되었음을 시사한다. 따라서, HT-29 세포의 ISD70 트랜스펙션 후에 ASO2-Cy3의 증가된 세포내 형광 펑츄아가 관찰되었으며(도 7), 이는 모두 ASO가 세포내에서 cGAS 감지를 위해 ISD와 경쟁했음을 시사한다.
이 더 짧은 ASO 사전-인큐베이션에 의존하여, 본 발명자들은 다음으로 C2-Mut1의 최소 2'OMe 함유 말단 5' mGmGmUATC 모티프를 부가한 PS 백본(dC20) 상의 dC(Mut1-dC로 지칭됨)의 20-mer 호모폴리머 서열로부터 시작하여, C2-Mut1에서 cGAS 저해를 조절하는 코어 모티프를 확인하고자 하였다(도 2e). Mut1-dC는 LL171 및 THP-1 세포에서 ISD 감지에 대하여 이의 전구체 dC20보다 유의미하게 더 저해성이었다(도 2m, 도 2n). 또한, Mut1v3-dC의 2 염기 돌연변이(mCmGmUTTC)는 두 세포 모델 모두에서 유의미한 저해 활성을 결여하였다(도 2m, 도 2n). 이전의 관찰과 종합하면, 이들 결과에 의해, 최소의 mGmGmUATC 모티프가 cGAS 저해를 PS-변형된 호모폴리머 서열에 부여하기에 충분하다는 것이 확립되며, 2개의 염기에 대한 주된 역할은 이전에 식별되었다.
본 발명자들은 cGAS 저해 모티프를 보유하는 Mut-1dC가 또한 dC20보다 유의미하게 더 높은 TLR7 저해를 나타낸다는 것을 추가로 발견하였다(도 12). 이에 의해, cGAS에 대해 현재 정의된 최소 모티프가 또한 올리고뉴클레오티드에 TLR7 저해를 부여할 수 있음이 확립된다.
실시예 5: C2-mut1에 의한 cGAS 활성의 서열-특이적 저해
cGAS의 가장 강력한 2'OMe ASO 저해제로서 C2-Mut1이 식별되었고, 본 발명자들은 용량-반응 분석을 수행하여 THP-1 모델에서 이의 IC50을 결정하고 이를 A151의 것과 비교하였다(문헌[Steinhagen et al., 2018]). ISD70 트랜스펙션 후의 IP-10 유도된 생성에 기초하여, C2-Mut1의 IC50은 A151에 대하여 165 nM인 것과 비교하여 56 nM인 것으로 결정되었다(도 3a). 125 nM의 C2-Mut1로 블로킹되는 한편, A151의 경우 약 50%만 감소되는 IFN-β의 생성을 관찰하여, DNA 감지에 대한 A151의 저해 활성보다 더 큰 이 C2-Mut1의 저해 활성이 확인되었다(도 3b). 또한, C2-Mut1을 사용한 세포의 처리는 THP-1 및 HT-29 세포의 검정에서 세포 생존력에 유의미하게 영향을 미치지 않았다는 점에도 주목할 만하다(도 8).
결정적으로, 고용량 C2-Mut1(500 nM)과의 6시간 사전-인큐베이션은 인간 MG-63 및 불멸화 마우스 골수 유래 대식구(BMDM)에서 지질다당류(LPS - TLR4 리간드) 또는 STING 합성 효능제에 의해 유도되는 IP-10 생성에 유의미하게 영향을 미치지 않았지만, ISD 감지에는 유의미하게 영향을 미쳤다(도 3c, 도 3d). 유사하게, C2-Mut1은 LPS, PAM3CSK4(TLR2/1 리간드) 또는 DMXAA(마우스 Sting 효능제) 처리 시에 TNF-α의 생성에 영향을 미치지 않았다(도 3d). 그럼에도 불구하고, C2-Mut1 사전-인큐베이션은 불멸화된 BMDM에서의 감소된 TNF-α 생성에 의해 드러나는 바와 같이, 마우스 Tlr9를 활성화시키는 CpG ODN 1826의 감지를 유의미하게 감소시켰다(도 3d). 이는 PS-2'OMe ASO가 식세포에서 TLR7/8과 같은 TLR에 의한 엔도좀 감지에 영향을 미칠 수 있다는 이전 보고와 일치하지만(문헌[Alharbi et al., 2020]), C2-Mut1이 비핵산 감지 경로, 예컨대 TLR1/2/4를 광범위하게 저해하지 않고, 다운스트림 신호전달 캐스케이드의 수준으로 작용하지 않는다는 것을 나타낸다.
시험관내에서, cGAS는 이전에 단일 가닥 ISD45에 결합되고 이에 의해 약하게 활성화되는 것으로 나타났으며(문헌[Kranzusch et al., 2013]), 이는 본 발명자들로 하여금 단일 가닥 PS-ASO가 이중 가닥 ISD의 "비활성" 경쟁자로 작용할 수 있음을 사실로 가정하게 하였다. 이를 직접적으로 평가하기 위해, 재조합 cGAS를 증가하는 양의 C2-Mut1 또는 A151(0.5, 2 및 10 μM)의 존재 하에 2.3 μM(0.1 μg/μl)의 ISD70과 함께 시험관내에서 인큐베이션시켰다. 결정적으로, 두 PS-ODN 모두가 0.5 μM의 ISD70에 의해 유도되는 cGAMP 생성을 유사하게 감소시켰지만, C2-Mut1의 저해 활성은 2 μM의 A151의 저해 활성보다 유의미하게 더 컸다(약 2배 이상)(도 3e). 따라서, 이들 시험관내 특정 조건 하에서, C2-Mut1은 A151보다 더 많은 ISD70 분자를 대체할 수 있었으며, 이는 A151보다 cGAS에 대한 그의 더 강력한 친화성을 시사한다. 세포 기반의 검정과 종합하면, 이들 관찰은 C2-Mut1이 cGAS에 결합하는 ISD70의 비활성 경쟁자로서 작용한다는 것을 뒷받침한다.
본 발명자들은 C2Mut1의 완전히 2'Ome 변형된 버전이 또한 ISD70에 의한 cGAS 활성화를 강력하게 둔화시켰음을 추가로 입증하였다(도 13).
실시예 6: C2-mut1은 구성적으로 활성인 cGAS 신호전달을 저해한다
이 시점까지의 실험은 외인적으로 트랜스펙션된 ISD의 cGAS 감지에 엄격하게 의존하였기 때문에, 본 발명자들은 다음으로, 구성적 cGAS 활성화를 갖는 세포 모델에서 ASO의 효과를 조사하였다. 이들은 먼저 기저 수준의 구성적 cGAS 활성화를 나타내는(문헌[Pepin et al., 2017]), SV40T 및 RASG12V를 안정적으로 발현하는 인간 BJ hTERT 섬유모세포에서 트랜스펙션된 C2-Mut1 및 C2-Mut1v3의 용량 의존적 효과를 비교하였다(문헌[Quin et al., 2016]). 트랜스펙션된 C2-Mut1은 이들 세포에서 구성적으로 발현되는 다수의 인터페론 자극된 유전자(ISG)(IFIT1, IFIT2 및 IFI44)의 발현의 저해에서 이의 2개의 뉴클레오티드 변이체 C2-Mut1v3보다 유의미하게 더 강력한 반면(문헌[Uhlen et al., 2017]), cGAS 활성을 블로킹하는 아스피린 처리와 비슷하였다(문헌[Dai et al., 2019])(도 3f). 두 번째로, C2-Mut1 및 C2-Mut1-v3의 하룻밤 트랜스펙션은 축적된 세포질 DNA 및 구성적 cGAS-STING 신호전달을 나타내는 Trex1-돌연변이 마우스(Q169X - 재료 및 방법 참조)로부터의 일차 마우스 골수 유래 대식구(BMDM)에서 2개의 ISG(Rsad2 및 Ifit1)의 기저 발현을 유의미하게 감소시켰다(도 3g)(문헌[McWhirter and Jefferies, 2020]). 역으로, 유사한 용량의 A151의 트랜스펙션은 이들 ISG를 저해하지 못하였다(도 3g).
cGAS 활성화는 최근에 세포 간의 노쇠의 주변분비 전파에서 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다(문헌[Gluck et al., 2017]; 문헌[Dou et al., 2017]). 이와 같이, 노쇠-관련 β-갈락토시다제(SAB)는 cGas-결핍 마우스로부터의 일차 마우스 섬유모세포의 증식 동안 강력하게 감소되었다(문헌[Gluck et al., 2017]). 따라서, 본 발명자들은 노쇠-전 일차 섬유모세포-유사 활막세포(FLS) 및 일차 골수-유래 중간엽 줄기 세포(MSC)에서 cGAS-STING 신호전달의 자발적 관여를 저해하는 C2-Mut1의 능력을 조사하기로 결정하였다. 이를 위하여, 이들은 1 내지 2주 동안 1 내지 5 μM의 C2-Mut1 ASO(짐노시스(gymnosis)로 세포에 의해 수동적으로 흡수됨)의 존재 하에 일차 세포를 성장시켰다. 이 기간 후에 많은 비율의 세포가 비-ASO 처리된 세포에서 노쇠되었지만(β-갈락토시다제 양성 염색에 기초함 - 세포의 최대 약 40 내지 50%에서 관찰됨), C2-Mut1-처리된 FLS 세포 및 MCS에서 노쇠가 강력하게 감소하였다(도 9a, 도 9b). 또 다른 세트의 FLS 세포에서의 추가의 실험은 C2-Mut1이 이의 PS 단독 변이체 C2-Mut1-PS 또는 이의 돌연변이체 C2-Mut1v3보다 SAB를 저해하는 데 더 강력하였음을 보여주었다. 유사하게, C2-Mut1은 A151보다 더 강력한 SAB의 저해제였으며(도 9c), 이는 이 활성이 이의 cGAS의 증가된 저해와 관련된다는 개념과 일치한다.
종합하면, 이들 결과는 C2-Mut1이 서열 의존적 방식으로 내인성 세포질 DNA의 구성적 cGAS 감지를 유의미하게 저해한다는 것을 입증한다.
실시예 7: 2'OMe 갭머 ASO에 의한 서열-의존적 TLR9 저해
2'OMe 갭머 ASO에 의한 DNA의 cGAS 감지의 서열-의존적 조절이 입증되었고, 본 발명자들은 다음으로, 인간 세포에서 DNA 감지에 대한 이들의 영향의 개괄적인 그림을 제공하는 것을 목표로 하여, TLR9에 의한 DNA 감지에 대한 이들의 효과를 살펴보았다. 이와 같이, A151(문헌[Gursel et al., 2003])을 포함하는 선택된 PS-ASO를 사용한 서열-의존적 TLR9 조절에 대한 충분한 증거가 존재하지만(문헌[Krieg et al., 1995]; 문헌[Barrat et al., 2005]), PS-갭머 ASO의 상황에서 2'OMe 모이어티의 영향은 정의되어 있지 않다. 2'OMe 갭머 ASO가 "T" 풍부 서열을 제외하고, TLR9를 빈번하게 활성화하지 않았음이 최근에 입증되었다(문헌[Alharbi et al., 2020]). C2-Mut1을 사용한 BMDM에서의 결과로 나타난 바와 같이, 2'OMe 갭머 ASO가 대신에 TLR9에 의한 DNA 감지의 저해를 야기하는지 여부를 특징규명하기 위해(도 3d), 본 발명자들은 인간 TLR9(이하, HEK-TLR9) 및 NF-κB 루시퍼라제 리포터를 발현하는 HEK 세포에서, CpG ODN2006의 TLR9 감지에 대하여 11개 cGAS ASO의 패널을 시험하였다. 이들은 TLR9를 저해하는 것으로 보고된 PS-ODN A151 및 IRS957과 함께, 이들의 각각의 대조군인 C151 및 IRS661을 포함시켰다(문헌[Gursel et al., 2003]; 문헌[Barrat et al., 2005]). ASO2, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10을 포함하는 다수의 ASO는 ODN2006의 TLR9 감지를 유의미하게 저해하였다(도 4a). 그러나, ASO2, IRS957 및 A151은 NF-κB 루시퍼라제 유도를 80% 넘게 감소시킨 유일한 올리고뉴클레오티드였다. ASO11이 HEK 세포에서 TLR9를 저해하는 능력을 결여하지만, TLR8을 강력하게 강화시켰다는 이전의 관찰에 의해(문헌[Alharbi et al., 2020]), 본원에서 관찰된 서열-특이적 효과가 ASO의 흡수와 관련이 없고, 오히려, TLR9에 의한 ODN2006 감지에 대한 특정 모티프의 경쟁 효과 때문임이 나타났다.
2'OMe 갭머 ASO에 의한 TLR9 저해의 서열 결정인자를 추가로 조사하기 위해, 본 발명자들은 처음에 ASO2 3'-말단 돌연변이체(ASO2up 및 ASO2down) 및 5' 또는 3' 2'OMe 영역이 ASO2의 것들과 교환된 ASO11 돌연변이체(ASO11Mut1 및 ASO11Mut2)의 효과를 HEK-TLR9 세포에서 평가하였다(도 4b, 도 4c). ASO2down의 3'-말단에서의 4-염기 치환은 ASO2up의 것들과 달리 TLR9 저해를 유의미하게 감소시켰으며, 이는 저해 효과가 ASO2의 3' 절반의 서열에 부분적으로 좌우되었음을 나타낸다. 결정적으로, ASO11 5'-말단 2'OMe 영역을 ASO2의 것으로 치환하면(ASO11Mut2), ASO11에 유의미한 TLR9 저해가 부여되며, 이의 3'-말단(ASO11Mut1)은 그렇지 않았고, 이는 ASO2의 5'-말단이 또한 TLR9에 대한 이의 조절 효과에 작용한다는 것을 시사한다(도 4c).
2'OMe 갭머 ASO에 의한 DNA의 TLR9 감지의 서열-의존적 저해에 대한 추가의 통찰을 얻기 위해, 본 발명자들은 다음으로 HEK-TLR9 세포에서 80개의 2'OMe ASO의 패널을 시험하였다(도 4d 및 표 2). 이들은 80개의 ASO 중 8개만이 TLR9를 50% 넘게 저해하고(표 2), ASO2가 시험된 가장 강력한 ASO로 남아 있음을 관찰하였다. 이 스크린으로부터의 상위 10개 ASO에서의 MEME 모티프 발견에 의해, ASO2에도 존재하는 "GGCCTC"(SEQ ID NO: 204) 모티프가 3개의 ASO에서 유의미하게 풍부하고, 10개의 ASO 중 5개에서 "A"-풍부 중앙 영역이 드러났다(도 4e, 도 4f 및 도 6c, 도 6d). 따라서, TLR9 스크린에서 16개의 최대 및 최소 저해성 ASO의 중앙의 DNA 영역의 비교는 더 강력한 TLR9 저해성 서열에서 유의미하게 더 높은 비율의 중앙의 "A"를 보여주었다(도 4g 및 표 2).
단일 염기 점증을 갖는 스크린으로부터의 2개의 ASO 패밀리의 보다 철저한 분석은, 또한 TLR9 저해에서 5' 2'OMe "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프에 대한 중요한 역할을 가리켰다(표 2). "CDKN2B-AS1" 시리즈(ASO2133 내지 2139)로 지칭되는 제1 패밀리의 실증에 의해, ASO2139에서 5'-말단 "CUU" 모티프의 부가가 TLR9 저해를 유의미하게 증가시켰음이 시사되었다(도 4h, 도 4i). 이 관찰과 일치하게, 5' 또는 3' "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프를 또한 보유하는 ASO(ASO8 내지 ASO116)의 "LINC-PINT" 시리즈의 분석에 의해, ASO(ASO112 내지 115)의 2'OMe 영역에 존재하는 "CUU/CUT" 모티프(CUU - SEQ ID NO: 153; CUT - SEQ ID NO: 202)가 이들의 5' 말단에 이러한 2'OMe "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프를 함유하는 ASO108 내지 110과 비교하여, TLR9 저해의 유의미한 증가와 연관이 있다는 것을 입증하였다(도 4i, 도 4j).
TLR9 감지의 조절에 대한 2'OMe "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프의 역할을 추가로 정의하기 위해, 본 발명자들은 다음으로 HPRT의 mRNA를 표적화하는 2'OMe ASO의 추가의 패널을 사용하였다(도 4k 및 문헌(Alharbi et al., 2020)). ASO[HPRT]551 및 660에서 5'-말단 "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프는 TLR9의 60% 초과의 저해와 관련이 있었던 한편, ASO661에서 "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프로의 단일의 5'-말단 염기의 부가("ACUU", SEQ ID NO: 346)는 저해를 유의미하게 제한하였다(도 4k, 도 4l). 역으로, 이의 "CACUUU"(SEQ ID NO: 347) 5'-말단 2'OMe 영역을 갖는 ASO662는 이 ASO의 시리즈 중 가장 강력한 저해를 나타내었지만, 이는 또한 이의 "UUUUC"(SEQ ID NO: 348) 3'-말단(이 시리즈에서 이 서열에 고유하게 존재함)의 기여와 관련이 있을 수 있다. 흥미로운 점은, ASO666이 또한 임의의 "CUU"(SEQ ID NO: 153) 모티프를 나타내지 않고, 불량한 저해성일 뿐이었던 ASO665와 단지 2개의 염기만이 상이한 반면, TLR9를 강력하게 저해하였다는 것이다(도 4k, 도 4l). 그럼에도 불구하고, 이들 결과는 TLR9 저해의 조절에서의 선택된 모티프에 대한 역할을 시사할 뿐이며, 결과 해석을 혼란스럽게 할 수 있는 2'OMe 영역에 대한 염기 점증의 추정상의 영향을 고려할 때 주의를 기울일 필요가 있다. 종합하면, 이들 결과에 의해, 중앙(우선적으로 "A" 풍부) 및 5'-말단 2'OMe 영역으로부터의 우선적인 기여를 포함하여 2'OMe 갭머 ASO에 의한 TLR9 저해의 복잡한 조절이 입증된다.
이들 발견과 대조적으로, 본 발명자들은 최근에 2'OMe "CUU"("CUU", SEQ ID NO: 153) 모티프가 2'OMe 갭머 ASO에 의한 TLR7 저해를 완화하는 데 도움이 될 수 있다고 보고하였으며(문헌[Alharbi et al., 2020]), 이는 이들 2개의 센서의 조절 간의 역의 관계를 시사한다. 따라서, 이들은 TLR9 및 TLR7 저해에 대한 80개의 ASO의 효과의 상관관계를 분석하였으며(문헌[Alharbi et al., 2020]), 도 4m에 제시하였다. TLR7 및 TLR9에 대한 ASO의 활성 간에는 상관관계가 없었으며, TLR7을 저해하지 않았지만, TLR9를 강력하게 저해하였던 ASO[CDKN2B-AS1]2139와 달리, TLR9 및 TLR7에 대하여 제한된 효과를 가졌던 ASO[LINC-PINT]108, ASO109, ASO116 및 A10으로 예시된다.
실시예 8: C2-Mut1은 인간 cGAS, TLR7 및 TLR3의 강력한 저해제이지만, TLR9의 강력한 저해제는 아니다
TLR7/TLR8(문헌[Alharbi et al., 2020]), TLR9 및 cGAS에 대한 80개의 2'OMe ASO의 패널에 대한 면역조절 프로필을 생성하였고, 본 발명자들은 TLR7 저해 및 TLR8 강화에 대한 데이터도 통합하면서, cGAS 및 TLR9에 의한 DNA 감지의 저해의 상관관계를 시각화하기 위해 버블 차트를 생성하였다(도 5a 및 표 2). TLR9와 cGAS 저해 간에는 유의미한 상관관계가 없었으며, 이는 스크린에서 가장 강력한 cGAS 저해제인 C2가 TLR9를 저해하지 않았다는 예에 의해 예시된다(도 5a). 이 관찰은 C2 및 이의 돌연변이체 C2-Mut1 및 C2-ASO2-A를 사용하여 HEK-TLR9 세포에서 실증되었다. C2 돌연변이체는 이들의 부모 ASO보다 유의미하게 더 나은 TLR9의 저해제였지만, TLR9 감지에 대한 이들의 저해 효과는 ASO2 또는 A151과 비교하여 제한적이었다(도 5b).
도 5a에 나타난 바와 같이, 이들 센서에 대한 면역조절 패턴은 고도로 가변적이었고, 오직 소수의 ASO만이 TLR7, TLR9 및 cGAS를 저해하였다(예를 들어, C4, C6 및 H7)(표 2). 그럼에도 불구하고, cGAS와 TLR7 저해 간에는 유의미한 상관관계가 있었으며(도 5c), cGAS의 가장 강력한 저해제는 또한 강력한 TLR7 억제를 나타냈다(예를 들어, C2, E10, F2, H7; 도 5c). 이와 일치하게, 가장 강력한 cGAS 저해제인 C2-Mut1은 또한 TLR7에 의한 R848 감지의 강력한 저해제였으며, A151에 대한 132 nM에 비하여 44 nM의 IC50을 갖는다(도 5d). 결정적으로, 스크린에서 오직 4개의 ASO(즉, 5%)만이 TLR7, TLR9 또는 cGAS 중 임의의 것을 30% 넘게 저해하지 않았으며(도 5a에서 빨간색으로, 그리고 표 2에서 노란색으로 강조 표시됨), 이는 대부분의 2'OMe ASO가 면역억제 효과를 갖는 것을 나타낸다.
TLR7에 대한 이들의 저해 효과와 달리, 본 발명자들은 선택된 2'OMe 갭머 ASO가 R848의 TLR8 감지를 강화시켜, 면역-종양학에서 잠재적인 치료 기회를 제시할 수 있음을 최근에 발견하였다(문헌[Alharbi et al., 2020]). 흥미롭게도, TLR8 강화는 또한, cGAS 저해와 역의 상관관계에 있었으며, 최상의 TLR8 강화제는 cGAS 저해를 결여한다(예를 들어, G7, A9, D9, G9)(도 5e). 따라서, C2는 TLR8의 약한 강화제였지만, ASO2의 예에서 관찰되는 바와 같이, 선택된 ASO는 TLR8 감지를 강화시키면서 cGAS를 저해할 수 있다(도 1 및 문헌(Alharbi et al., 2020)).
마지막으로, 본 발명자들은 인간 TLR3(HEK-TLR3) 및 NF-κB 루시퍼라제 리포터를 안정적으로 발현하는 HEK 293 세포에서 (IRS661, IRS957, A151 및 이의 돌연변이체 C151을 포함하는) 인간 TLR3 감지에 의한 비트랜스펙션된 이중 가닥 RNA(폴리I:C)의 감지에 대한 11개의 cGAS ASO의 패널의 효과를 시험하였다(이들 세포가 RIG-I 또는 MDA5를 통해 이들이 사용한 비트랜스펙션된 폴리I:C의 양에 반응성이 아님에 주목한다). IRS661 및 IRS957과 함께 500 nM로 사용된 모든 2'OMe 갭머 ASO가 폴리I:C 감지를 차단하였지만, A151 및 C151은 이들 세포에서 폴리I:C 의존적 TLR3 활성화를 오직 부분적으로만 감소시켰다(도 10a). TLR3의 서열-특이적 저해는 100 nM의 ASO에서 더욱 가시적이었고, 오직 ASO5만이 폴리I:C 감지의 유의미한 저해를 유지하였다(도 10b). HEK-TLR3 세포에서 TLR3 감지에 대한 C2-Mut1 및 A151의 저해 효과의 직접적인 비교에 의해, C2-Mut1의 더 강력한 저해를 확인하였으며, C2-Mut1에 대한 IC50은 62 nM이고, A151에 대한 IC50은 750 nM 초과였다(도 5f). 종합하면, 이들 결과에 의해, C2-Mut1이 인간 cGAS, TLR7 및 TLR3의 강력한 저해제이지만, TLR9의 더 약한 저해제임이 입증된다.
실시예 9: 2'O-메틸 ASO에 의한 TLR7의 모티프-특이적 저해.
이전의 실시예는 포스포로티오에이트 백본 상의 dC의 스트레치로의 mG*mG*mU*A*T 모티프의 부가가 TLR7에 의한 R848 감지의 저해를 촉진하기에 충분하였음을 보여주었으며(도 11 참조, dC20 ASO와 비교하여 Mut1-dC), 이는 2'O-메틸(2'OMe) 모티프를 이 저해 효과에 직접적으로 결부시킨다.
결정적으로, 이 모티프에서의 2개 염기의 치환이 TLR7 저해를 유의미하게 변경한 것이 이제 관찰되었으며(Mut1-dC 및 Mut1-v3-dC를 비교할 것), 이는 HEK TLR7 세포에서의 TLR7 저해에 대한 mG*mG*mU*A*T 의 모티프-특이적 효과를 보여준다(도 14a).
또한, RNA의 TLR8 감지와 유사하게(문헌[Greulich et al., 2019]), ASO가 아직 정의되지 않은 효소에 의해 선택적 위치에서 절단되어 TLR7 저해 모티프를 방출할 수 있다는 가설이 세워진다. 이를 시험하기 위해, 5-nt의 짧은 2'OMe 올리고뉴클레오티드를 Mut1 모티프 및 이의 변이체 Mut1-v3(각각 Mut1-short 및 Mut1-v3-short)을 포함하는 완전한 PS-백본을 사용하여 합성하였다. 본 발명자들은 또한 TLR7을 저해할 것으로 예상되지 않는 짧은 올리고뉴클레오티드(ASO 660에 기초함)를 포함시켰다. 따라서, Mut1-short가 HEK-TLR7 세포에서 R848 감지를 저해하기에 충분하였지만, 이의 변이체 및 비관련 서열은 그렇게 하지 못한 것이 입증되었다(도 14b). Mut1-short로 저해를 수득하기 위해 6시간의 사전-인큐베이션이 필요하였고, 약 30분의 전처리에서 저해가 관찰되지 않았다는 것은 주목할 만하다. 종합하면, 이들 관찰은 TLR7 저해가 특정 "mGmGmUmAmU" 모티프에 의해 달성될 수 있음을 명확하게 보여준다.
실시예 10: 2'O-메틸 ASO에 의한 구아노신 감지의 모티프 특이적 저해.
본 관찰을 확장하기 위해, 본 발명자들은 다음으로 2'OMe ASO가 내인성 TLR7 리간드로서 작용하는 구아노신에 의한 TLR7 활성화를 저해할 수 있었는지 여부를 시험하였다(문헌[Shibata et al., 2016]). 이를 위해, ASO의 효과를 야생형 마우스로부터의 일차 골수 유래 대식구(BMDM)에서 시험하였으며, 500 μM의 구아노신을 사용하여 하룻밤 자극하고, 200 nM의 ASO로 사전-처리하거나, 사전-처리하지 않았다. HEK TLR7 세포에서 TLR7에 의한 R848 감지의 저해에서 관찰된 것과 유사하게, ASO는 구아노신에 의해 유도된 TNFα 생성을 서열 특이적 방식으로 저해하였다(C2-Mut1 및 Mut1-dC는 TNFα 수준을 유의미하게 저해하지만, Mut1-v3-dC 또는 dC20은 그렇지 않았다)(도 14c).
이에 따라, Mut1-dC는 감소된 TNFα 및 Oas3 mRNA 수준으로 측정된 바와 같이, Tlr7 돌연변이 마우스(Tlr7 Y264H - 인쇄 중인 문헌[Brown and Vinuesa, et al. Nature, 2022])로부터의 일차 BMDM에서 구성적 TLR7 활성화를 유의미하게 감소시켰지만, 이의 돌연변이체 Mut1-v3-dC는 그렇지 않았다. 중요한 점은, ASO가 야생형 일차 BMDM에서 TNFα 및 Oas3 mRNA 수준을 감소시키지 않았기 때문에 Mut1-dC의 효과가 TLR7에 특이적이었다는 것이다(도 15).
종합하면, 이들 결과는 대부분의 2'OMe ASO가 강력한 TLR7 저해제(저해를 제한하는 "CUU" 모티프를 갖는 것들은 배제함)이지만, 선택된 모티프가 다른 것들보다 TLR7 감지의 더 강력한 저해를 부여하였다는 직접적인 증거를 제공하였다. Mut1-dC 및 Mut1-short의 mG*mG*mU*mA*mU (SEQ ID NO: 56)가 구아노신의 TLR7 감지를 저해하지만, 이의 mC*mG*mU*mU*mU (SEQ ID NO: 349) 변이체는 그렇지 않다는 관찰에 의해, 저해를 부여하는 모티프 내의 선택된 잔기의 매우 특이적인 활성이 확립된다.
ASO에 의한 TLR7에 대한 광범위한 저해 효과를 넘어서서, 본 작업에 의해, 강력한 TLR7 길항제로 작용하는 선택적인 짧은 올리고뉴클레오티드 모티프의 능력이 확립된다. 이는 TLR7 저해가 서열 의존적 효과 없이 임의의 2'OMe-U, 2'OMe-G 또는 2'OMe-A 변형된 RNA에 의해 달성될 수 있다는 이전의 보고에 이의를 제기하는 것이다(문헌[Robbins et al., 2007]). 따라서 Mut1-short과 같은 짧은 5-mer 올리고의 사용은 mRNA 자체의 우리딘 변형(예컨대, 슈도-우리딘)의 이용에 대한 대안으로서, mRNA 백신에서 사용되는 비변형된 T7-합성된 RNA와 조합되는 경우, TLR7 맞물림을 제한할 신규한 기회를 제시할 수 있었다.
실시예 11: TLR7의 모티프-특이적 저해는 2'OMe ASO에 제한되지 않는다.
이전의 예에서는, HEK TLR7 세포에서 TLR7 저해에 대하여 91개의 LNA 및 76개의 2'MOE 변형된 ASO를 스크리닝하였다(PCT 2020901606 참조). TLR7 저해를 뒷받침할 수 있는 모티프를 검색하는 동안, 본 발명자들은 이 스크린으로부터 상위 10개의 2'MOE TLR7 저해제에서 풍부한 선택적 GGCTTC(SEQ ID NO: 295) 모티프를 식별하였다(도 16). 보다 구체적으로, 이 모티프(즉, xGxxTC)의 위치 2, 5 및 6은 매우 풍부하였다. TLR7 저해에서의 이 모티프의 관여를 확인하기 위해, 본 발명자들은 이들 서열 중 하나인 F5(EGFR-1014 MOE)를 선택하고, 위치 2, 5 및 6에서 이의 예측된 모티프를 돌연변이시켰다(도 16). F5가 TLR7을 강력하게 저해하는 한편, 이의 돌연변이 F5-Mut는 유의미하게 덜 저해성이었으며, 이는 TLR7 저해에서의 이 모티프의 역할을 직접적으로 보여준다. 이들 결과는 F5 내의 2'MOE GGCTCC(SEQ ID NO: 295) 모티프가 TLR7 저해에 직접적으로 결부되는 것을 보여주며, 이에 의해, 모티프 특이적 TLR7 저해가 2'OMe ASO에 제한되지 않고, 다른 화학적 변형에서도 관찰될 수 있음이 확립된다.
실시예 12: 2'O-메틸 변형된 ASO에 의한 cGAS의 저해
이전의 예에 의해, 5' 말단 mG*mG*mU*A*T 모티프를 갖는 2'OMe ASO가 cGAS의 강력한 저해제임이 나타났다(문헌[Valentin et al., 2021]). 결정적으로, 이 모티프는 15개의 dC의 스트레치의 5' 말단에 cGAS의 저해를 부여하기에 충분하였다(모티프가 mC*mG*mU*T*T 로 돌연변이되었을 때 제거된 효과에 의해, 이들 2개의 염기가 효과에 직접적으로 결부됨). 이 접근법이 임의의 2'OMe ASO를 cGAS 저해제로 바꾸는 데 사용될 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 본 발명자들은 다음으로 HPRT의 mRNA에 표적화된 ASO[ASO 847](매우 강력한 유전자 표적 효능을 가짐 - 문헌(Alharbi et al., 2020) 참조)의 5' 말단에 염기를 부가하는 것이 이의 cGAS 저해 활성을 증가시킬 수 있었는지를 평가하였다. 결정적으로, ASO847의 5'말단은 mA*mU이며, 이는 mG*mG*mU*mA*mU 모티프를 재구성하기 위해 mG*mG*mU만이 이의 5'말단에 부가되었음을 의미한다(23 nt ASO를 제공함 - 847-Mut).
따라서, 본 발명자들은 cGAS 리간드 ISD70으로 트랜스펙션된 THP-1 및 MG-63 세포에서 ASO847 및 ASO847-Mut의 저해 효과를 시험하였다(도 17). 두 모델 모두에서, ASO847-Mut가 cGAS의 훨씬 더 나은 저해제였음이 입증되었다(이는 C2-Mut1(문헌[Valentin et al., 2021])의 저해성 모티프를 재구성하기 위하여 소수의 5' 말단 뉴클레오티드를 부가하는 것이, 불량하게 저해성이었을 서열의 cGAS 저해를 증가시키기에 충분하였다는 원리 검증을 직접적으로 보여준다). 유사하게, ASO847-Mut는 LL171 세포에서 ISD45에 의한 마우스 cGAS 활성화에 대해 더 나은 저해제였다.
이들 관찰을 발전시키기 위해, ASO847-Mut가 BJ7 세포(SV40T를 발현하는 인간 섬유모세포)에서 구성적 ISG 발현을 저해하면서, HPRT 표적화에 대하여 이의 저해 활성을 유지하는지 여부를 시험하였다(문헌[Valentin et al., 2021]). 이들 실험에 의해, ASO847-Mut가 여전히 HPRT 수준을 ASO847에서 볼 수 있는 수준으로 감소시킬 수 있다는 것을 확인하였다(도 18). 그러나 결정적으로, ASO847-Mut는 이들 연구에서 ISG IFIT2의 발현을 감소시키기 위해 C2-Mut1만큼 강력했지만, ASO847은 유의미하게 덜 강력하였다(이는 MG-63 세포에서 수행된 실험과 일치한다)(도 17).
종합하면, 이들 실험은 기존의 ASO를 5' 말단 염기 부가를 통해 변형시켜, 5' mG*mG*mU*mA/A*mU/T cGAS 저해제 모티프를 재구성하여, 증가된 cGAS 저해를 부여할 수 있다는 원리 검증을 확립하였다.
본 발명자들은 이전에 15개 염기 dC 올리고뉴클레오티드(Mut1-dC)의 5' 말단에 부가된 mG*mG*mU*A*T cGAS 저해제 모티프가 모티프 의존적 방식으로 cGAS 저해를 유의미하게 증가시켰다는 것을 보여주었다(이는 2 염기 돌연변이체 Mut1-v3-dC는 그렇지 않았기 때문이다(4)). Mut1-v3-dC는 모티프(mC*mG*mU*T*T)의 위치 1 및 4에 돌연변이를 함유하며, 이에 의해, 이들 염기 중 적어도 하나가 cGAS 저해에 필수적임이 확립된다.
mG*mG*mU*A*T cGAS 저해제 모티프가 추가로 절단될 수 있는지 여부를 정의하기 위해, 본 발명자들은 Mut1-dC-v2(mG*mG*mU*A) 및 Mut1-dC-v3(mG*mG*mU)으로 지칭되는 Mut1-dC의 2개의 더 짧은 변이체를 생성하였으며, 후자에는 모티프의 염기 #4가 결여되어 있다. cGAS 리간드 ISD70을 사용하여 자극된 THP-1 세포에서의 분석에 의해, 두 짧은 형태 모두가 cGAS 감지를 유의미하게 저해하였지만, 4-mer가 3-mer 모티프보다 더 강력하였음을 입증하였다(도 19). 이들 결과는 5' mG*mG*mU 또는 mG*mG*mU*A/ mG*mG*mU*mA 모티프를 재구성하는 ASO로의 5' 부가가 cGAS를 저해하는 이의 능력을 증가시키기에 충분함을 시사한다.
실시예 13: 2'MOE 및 LNA 변형된 ASO에 의한 cGAS의 저해
cGAS 저해가 다른 ASO 화학적 변형에 의해 촉진될 수 있는지 여부를 정의하기 위하여, 87개의 LNA 및 76개의 2'MOE 변형된 ASO를 THP-1 세포의 ISD70 트랜스펙션 시의 IP-10 생성의 감소에 대하여 스크리닝하였다. 선택된 ASO는 어느 하나의 화학을 사용하여 cGAS 감지를 억제하였지만, 전반적인 억제가 LNA ASO보다 2MOE ASO에서 더 강한 것으로 나타났다. 이와 같이, 사용된 용량에서 32/87(즉, 36.7%)개의 ASO가 LNA를 사용하여 cGAS 신호를 40% 넘게 억제한 데 비하여, 2MOE에 대해서는 59/76(즉, 77.6%)개였다(도 20).
본 발명자들은 다음으로 LNA 스크린에 대하여 상위 9개의 저해성 ASO를 선택하였다. LNA ASO의 더 낮은 저해 효과와 일치하게, ASO 중 다수는 실증 실험에서 cGAS를 유의미하게 저해하지 못하였다(도 21 - 예를 들어, A6 및 E1)(이후에 MOE ASO에 대하여 200 nM이 사용된 데 비하여, 여기서는 300 nM ASO가 사용되었음에 주목한다). 그럼에도 불구하고, 선택된 ASO는 신호전달을 강력하게 저해하였으며, A1, D2 및 F1이 가장 강력하다(도 21).
MOE 스크린에 대하여, 본 발명자들은 상위 11개의 저해성 ASO를 선택하였다. LNA ASO보다 더 나은 이들의 저해 활성과 일치하게, 이들 실증 실험에서 시험한 모든 MOE ASO는 cGAS를 유의미하게 저해하였으며, B3 및 E9가 가장 강력하다(도 21).
본 발명자들은 또한, ASO가 쥣과 cGAS를 저해할 수 있었는지 여부를 시험하고자 하였다(이는 일부 2'OMe ASO, 예컨대 C2-Mut1이 두 종 모두에서 활성일 수 있다는 것이 관찰되었기 때문이다). 따라서, 본 발명자들은 스크린으로부터 9개의 LNA ASO 및 11개의 MOE ASO를 시험하였으며, 이들을 LL171 리포터 세포에서 ISD 감지의 저해에 대하여 평가하였다. MOE ASO에 있어서, 절반의 서열이 이 시스템에서 cGAS를 유의미하게 저해하였으며, B3, F3, F10이 가장 강력하다(도 22).
역으로, 사용된 용량에서, LNA ASO에서 저해가 거의 관찰되지 않았거나 전혀 관찰되지 않았으며, 2개의 ASO가 트랜스펙션된 ISD에 반응하여 ISRE-루시퍼라제 신호를 강력하게 강화시켰다(D2 및 F1(도 22)). 놀랍게도, 본 발명자들은 선택된 ASO를 사용한 cGAS의 유의미한 강화를 이전에 관찰하였으며(문헌[Valentin et al., 2021]), 선택된 CpG 올리고뉴클레오티드가 cGAS와 직접적으로 맞물려, 이를 활성화시킬 수 있음이 최근에 보고되었다(문헌[Bode et al., 2021]). 특히, D2가 인간 세포에서 cGAS의 소수의 유의미한 저해제 중 하나인 한편, 마우스에서 cGAS 신호전달을 강화시킬 것이 주목할 만하였다(이에 의해, 종들 간의 cGAS에 대한 ASO 효과의 주요 차이가 강조된다).
실시예 14: 2'MOE 및 LNA 변형된 ASO에 의한 cGAS의 모티프-특이적 저해
이어서, 모티프 발견 분석을 인간 세포에서 확인된 최상의 cGAS 저해제에 대하여 MEME 서열 분석 툴을 사용하여 수행하였다. LNA ASO에 있어서, 본 발명자들은 먼저, 둘 모두 THP-1 세포에서 cGAS의 유의미한 저해제였던 A1과 F1 간에 보존된 G*T*C*T(SEQ ID NO: 62) 모티프에 집중하였다. 본 발명자들은 A1-Mut에서 이 제1 모티프를 C*T*C*C(SEQ ID NO: 64) 모티프로 돌연변이시켰다(도 23). 또한, 본 발명자들은 (인간 세포에서 저해하였지만, 마우스 세포에서 강화시켰던) D2의 서열-특이적 및 종-특이적 효과를 확인하는 데 관심이 있었다. THP-1 검정에서 최상의 5개의 ASO의 정렬에 의해, B1, F1 및 D2 간에 보존된 제2 모티프를 식별하였으며, 이를 D2에서 위치 3 및 4 - 가장 보존된 염기에서 돌연변이시켰다. 이는 D2-Mut를 초래하였다(도 23).
유사하게, 본 발명자들은 THP-1 세포에서 cGAS를 강력하게 저해하였던 11개의 MOE ASO에서 풍부한 모티프를 찾았다. 조사된 제1 MOE 모티프는 B3(THP-1에서 가장 강력한 ASO이고, 마우스 LL171 세포에서도 저해성임)과 E9 사이에서 매우 보존되었다. 중요한 점은, 이 G*G*T*T(SEQ ID NO: 72) 모티프가 2'OMe C2-Mut1 ASO로부터의 G*G*T*A(SEQ ID NO: 350) 모티프와 매우 유사하였다는 것이다. 이 모티프를 B3에서 돌연변이시켜, B3-Mut에서 C*G*C*T(SEQ ID NO: 351)를 수득하였다. 선택된 제2 MOE 모티프는 8/11개의 ASO에서 고도로 풍부하였다. 보존된 G*C*T*T(SEQ ID NO: 80)를 F10 내에서 C*C*C*T(SEQ ID NO: 352)로 돌연변이시켰다(F10-Mut를 초래함)(도 23).
이들 ASO 및 이들의 돌연변이체를 THP-1 세포에서 단회 용량(MOE ASO에 대하여 200 nM 및 덜 강력하였던 LNA에 대하여 300 nM 이용)으로 시험하였으며, 이들을 또한 LL171 세포에서 시험하였다.
THP-1 세포에서, B3-MOE, F10-MOE 및 D2-LNA의 돌연변이체는 모두 cGAS 신호전달을 저해하는 능력을 소실하였으며, 이에 의해, cGAS 저해에서의 이들 특정 모티프의 중요성이 확립된다. 놀랍게도, A1-LNA의 2-염기 변형은 오히려 인간 세포에서 cGAS 저해를 유의미하게 증가시켰다(이들이 C2-mut1이 부모 2'OMe C2 ASO보다 더 강력하였음을 발견했을 때 본 발명자들이 수득한 것과 유사함(문헌[Valentin et al., 2021]))(도 23). 이는 염기 치환이 오히려 이 모티프에 대하여 cGAS 저해를 개선하였음을 시사한다.
마우스 LL171 세포에서, B3-MOE 및 F10-MOE의 돌연변이는 또한, cGAS 저해를 유의미하게 변경하였다(도 23). A1-LNA의 돌연변이체는 이것이 cGAS의 더 강력한 저해제였던 인간 세포와는 반대로, 마우스 세포에서 저해 활성을 소실하고, 오히려 신호전달을 강화시켰다. 또한, D2-LNA의 돌연변이는 마우스 세포에서 이의 강화 효과를 유의미하게 방해하였다(도 23).
마우스 LL171 세포에서의 LNA ASO에 대한 이들 관찰은 용량-반응 연구에서 확인되었다(여기서, 증가하는 양의 D2-LNA가 ISD 감지의 강화를 증가시켰다)(도 24).
본 발명자들은 또한, 인간 MG-63 골육종 세포(cGAS 리간드에 대하여 반응성임(문헌[Valentin et al., 2021]))에서 이들의 ASO 및 이들의 돌연변이체의 저해 효과를 시험하여, 이들의 관찰을 인간 단핵 세포의 사례를 넘어서도록 확장시켰다. 흥미로운 점은, MG-63 세포에서, 시험된 용량에서 ASO가 cGAS의 강력한 저해제가 아니었으며, 오직 B3 및 A1-Mut만이 IP-10 수준을 유의미하게 감소시켰다는 것이다. 결정적으로, B3-Mut 및 A1은 IP-10 생성을 저해하지 않았으며, 이에 의해, 이들 세포에서 MOE 및 LNA ASO의 서열-특이적 효과가 확인된다(도 24).
다음으로, F10, A1-Mut 및 D2에 대하여 더 높은 용량의 ASO(1 mM)를 사용하여 MG-63 세포에서 저해의 특이성을 평가하였다. 하나의 예비 실험에서, 모든 ASO는 ISD에 의해 유도된 IP-10만을 감소시켰고, GSK 합성 효능제를 사용한 STING의 직접적인 자극에 의해, 또는 폴리I:C와의 TLR3 맞물림에 의해 유도된 것을 감소시키지 않았다(도 25).
마지막으로, 본 발명자들은 마우스 LL171 세포에서 이루어진 관찰이 또한 마우스 대식구에서도 반복될 수 있는지 여부를 시험하고 싶었다. 최상의 ASO 및 관련 돌연변이체를 ISD를 사용하여 자극된, 불멸화된 마우스 골수 유래 대식구(iBMDM)에서 시험하였으며, IP-10 생성을 판독물로서 관찰하였다. B3 및 F10은 ISD-유도된 IP-10을 유의미하게 감소시켰지만, 다른 ASO 중 어느 것도 이 상황에서 저해성이 아니었다. 놀랍게도, A1-Mut 및 D2는 섬유모세포 LL171 세포에서 관찰되는 것과 반대로, IP-10 생성을 유의미하게 강화시키지 않았다. cGAS 감지가 대식구와 LL171 세포 간에 차등적으로 조절될 수 있지만, 강화의 역학이 상이할 수 있으며, 하룻밤 시점을 사용하여 초기 강화를 차폐시킬 수 있는 것도 가능하다.
그럼에도 불구하고, A1-Mut는 ISD의 부재 하에 단독으로 트랜스펙션되는 경우, 낮은 수준의 IP-10을 유도하였다. 이것이 cGAS 활성화 때문인지 여부는 여전히 확인해야 하지만, 이는 ISD 감지에 대한 이 서열의 저해 활성의 결여와 일치한다(도 26).
종합하면, 이들 결과에 의해, DNA의 인간 및 마우스 cGAS 감지에 대한 2MOE 및 LNA ASO의 모티프-특이적 저해 효과가 확립된다. 결정적으로, 마우스 섬유모세포에서 cGAS 활성을 조절하는 LNA 모티프는 인간 세포에서 반대 효과를 갖는다(이는 적어도 LNA 변형된 ASO에 있어서, cGAS 활성의 이들의 조절에 관하여 고려할 결정적인 종간 차이가 존재함을 시사한다).
실시예 15: C2-Mut1과 비교한 2'MOE 및 LNA 변형된 ASO 효력의 분석
본 발명자들은 C2-Mut1의 IC50이 THP-1 세포에서 약 56 nM였음을 이전에 보고하였다. 본 발명자들은 다음으로, THP-1 세포에서 용량-반응 연구를 사용하여, LNA 및 MOE ASO, 및 이들의 서열 돌연변이체의 저해 효과를 평가하였다. 먼저, 2MOE ASO에 대하여, 본 발명자들은 B3 및 F10의 IC50이 각각 133 및 147 nM이었음을 결정하였다(도 27). B3 및 F10의 모티프 돌연변이는 이들의 저해 활성에 강력하게 영향을 미쳤으며, F10-Mut의 성능이 최악이었다.
두 번째로, 본 발명자들은 독립적으로, A1-Mut 및 D2의 IC50이 각각 75 및 212 nM이었음을 결정하였다. 모티프 돌연변이체는 또한 강한 영향을 받았다(도 27). 종합하면, 이들 분석에 의해, 2'MOE B3 및 LNA A1-Mut가 THP-1 세포에서 cGAS의 가장 강력한 저해제였음이 나타났다(MG-63 세포에서 이전에 관찰된 것과 일치함).
그러나, A1-Mut가 B3보다 더 강력한지 여부는 동일한 실험에서 일대일 비교로 여전히 확인해야 한다. 그럼에도 불구하고, 본 발명자들은 B3이 MG-63 세포에서 훨씬 더 강력한 cGAS 저해제였음에 주목하며, 이는 이것이 세포주 간에 전반적으로 A1-Mut보다 더 강고한 저해제임을 시사한다(도 27 및 도 24).
흥미로운 점은, F10 MOE ASO의 활성에 관하여 THP-1 및 MG-63 세포 간에 활성의 차이가 존재한다는 것이다(도 27 및 도 24). 이 ASO는 THP-1에서 매우 강력하지만, MG-63 세포에서는 500 nM 아래에서 cGAS를 저해하지 못했다(그렇지만, 이것은 1 mM로 사용되는 경우 저해성이었음 - 도 25).
마지막으로, 예비 실험을 수행하여, 시험관내에서 MOE 및 LNA ASO의 인간 cGAS 효소 활성을 저해하는 능력을 평가하였다. 이 시스템에서, 재조합 cGAS를 ASO의 존재 또는 부재 하에서 ISD70과 함께 인큐베이션시킨 후에, 특정 cGAMP ELISA를 사용하여 cGAMP 형성을 평가한다(문헌[Valentin et al., 2021]). 본 발명자들은 본 발명자들의 이전의 연구에 따라, ASO를 2 μM에서 시험하였다(문헌[Valentin et al., 2021]). 놀랍게도, 모든 ASO 및 이들의 각각의 돌연변이체가 이 용량에서 cGAMP 생성을 강력하게 저해하였지만, F10 및 F10-Mutant는 훨씬 더 약한 저해 활성을 가졌다(도 28). 이들 관찰에 의해, 이들 ASO가 cGAS 결합을 위하여 ISD와 직접적으로 경쟁함으로써, cGAMP 활성화를 감소시키는 것이 확인된다. 그럼에도 불구하고, 사용되는 용량에서, 돌연변이체는 이들의 부모 서열과 유의미한 차이를 나타내지 않았다(이는 상이한 ASO 용량에서 관찰될 수 있다). 결정적으로, F10 및 이의 돌연변이체가 덜 강력한 저해제였다는 관찰은, 시험관내 및 생체내에서 이들의 작용 방식이 상이하다는 것을 나타낸다. 이는 MG-63과 THP-1 간의 이 ASO의 상이한 활성과 일치하며, 시험관내에서 cGAS 활성화에 강력하게 영향을 미치는 다른 ASO와 상이한 작용 메커니즘을 지지한다.
임의의 이론에 결부되지 않고, F10이 세포 뉴클레아제에 의해 절단된 후에, cGAS와 최적으로 맞물리고, 이를 저해할 수 있는 것이 제안된다(시험관내 검정에서의 더 낮은 저해 활성이 설명됨). 대안적으로, F10은 동시-파트너 단백질, 예컨대 G3BP1과의 복합체에서 cGAS에만 결합할 수 있다(문헌[Liu et al., 2019]) - 이는 이 시험관 내 환경에서 가능하지 않다. 따라서, MG-63과 THP-1 간에 관찰되는 차이는 이러한 뉴클레아제 또는 동시-파트너 단백질의 상이한 발현에 의존할 것이다. F10이 DNA의 cGAS 감지에 어떻게 영향을 미치지는지를 조사하기 위해서는 향후 연구가 필요할 것이다.
실시예 16: TLR9 저해에 대한 2'MOE 및 LNA 변형된 ASO 효력의 분석
이전의 실시예에 의해, 2'OMe ASO가 또한 인간 TLR9를 저해할 수 있었지만, 이 효과는 중등도였음이 나타났으며, 오직 8/80개의 ASO만이 500 nM에서 TLR9를 50% 넘게 유의미하게 저해하였다. TLR9 저해가 다른 ASO 화학적 변형에 의해 촉진될 수 있었는지 여부를 정의하기 위하여, 본 발명자들은 HEK-TLR9 세포의 ODN2006 처리 시에 NF-kB-루시퍼라제의 감소에 대하여 91개의 LNA 및 76개의 2'MOE 변형된 ASO를 스크리닝하였다.
2MOE 및 LNA ASO에서 전반적인 억제가 유사하게 나타났으며, 2'OMe ASO에서 관찰되는 것보다 유의미하게 더 컸다. 이와 같이, 57/91개(즉, 62.6%)의 LNA ASO는 500 nM에서 TLR9 신호를 50% 넘게 억제한 데 비하여, 2MOE ASO에 대해서는 46/76개(즉, 60.5%)였다(도 29).
본 발명자들은 다음으로, 각각의 스크린으로부터 상위 표적의 실증을 고려하였다. 2MOE에 있어서, 최상의 저해제 중 하나인 HPRT-663(D2)이 염기쌍 점증을 갖는 3개의 다른 서열과 밀접하게 관련이 있다는 것이 주목되며, 이들을 또한 실증에 포함시켰다. 종합하면, 여기서 시험한 모든 ASO는 100 nM에서 TLR9를 유의미하게 저해하였으며, D2 및 D10(ASO2)이 가장 강력하다(도 30). 결정적으로, HPRT-663은 664/665 및 666 ASO보다 더 강력한 저해제였으며, 이는 이의 5' 또는 3' 말단으로부터의 중요한 기여를 나타낸다.
LNA ASO에 있어서, TLR9에 대한 효과는 또한 HPRT 시리즈(660 내지 669)에서 점증적인 염기의 강력한 영향과 함께, 명백하게 서열-의존적이었다. 이와 같이, 660이 저해성이 아니었지만, 저해의 점진적인 증가가 존재하였으며, 664 및 665 LNA ASO에서 최고점에 도달하고, 666 및 시리즈 내의 추가의 ASO에서 다시 감소하였다. 이는 5' 및 3' 말단이 여기서 작용할 가능성이 있음을 시사한다. D8(ASO2)은 또한 LNA 화학에서 유의미하게 저해성이었다.
LNA 화학이 2'OMe 및 2'MOE에 있어서 5-mer 대신에 갭머에서의 3-mer 윙에 의존한다는 점에 주목해야 하며; 이에 따라, LNA와 2개의 다른 화학에 대하여 서열이 약간 상이하다. 흥미로운 점은, 2MOE에서의 ASO663이 꽤 저해성이며, LNA에서의 ASO665도 저해성이라는 것이다. 이들 서열의 5'말단을 관찰하는 경우, 본 발명자들은 ASO663 MOE가 ASO665 LNA에서도 관찰되는 5'말단 "ACA" 모티프로 구성되는 것에 주목한다. 유사하게, ASO662 2'OMe의 5'말단은 "CAC"이며, 이는 ASO664 LNA에서도 관찰되며, 이는 또한 저해성이다. 따라서, 이들 특정 5'말단 "ACA" 및 "CAC" 모티프는 사용된 화학과 독립적으로, ASO의 TLR9 저해 효과와 관련이 있을 수 있다.
ASO의 말단이 3가지 화학을 사용하여 TLR9 감지에 영향을 미치지만, ASO2로 지칭되는 168-MB21D1을 표적화하는 ASO(문헌[Valentin et al., 2021])가 지속적으로 매우 강력한 TLR9의 저해제였음이 주목된다(이에 의해, 오히려 모든 화학물질 간에 공통인 중앙의 16개 nt에 대한 주요한 역할이 시사된다). 따라서, 본 발명자들은 (문헌(Alharbi et al., 2020)에서의 도 1g에 따른) 2'OMe, LNA 및 MOE 화학에서의 ASO2와 비교하여, 하기를 포함하는 2'OMe ASO2 변이체의 패널을 시험하였다: 2'OMe 모이어티(PS)가 결여되거나 3'-말단 Cy3 모이어티를 함유하는 포스포디에스테르 백본(PO) 상의 ASO2. PS ASO2는 TLR9에 대한 이의 저해 활성이 완전히 결여되었기 때문에, 이들 실험에 의해, TLR9 저해를 위한 5' 및 3'-말단 변형의 필요성을 확인하였다. 흥미로운 점은, PO 변이체가 오히려 TLR9 감지를 유의미하게 강화시켰다는 것이다(이는 ASO2의 서열이 TLR9와의 상호작용을 직접적으로 촉진할 가능성이 있음을 나타낸다)(도 31). PO ASO2를 사용한 이 유도는 또한, 저해 활성의 이의 결여가 HEK에 의한 이의 흡수의 결여와 관련이 없었음을 나타냈다. 그럼에도 불구하고, 이들의 독립적인 실험으로부터 시사되는 바와 같이, ASO2는 비슷한 효능으로, 2'OMe, LNA 및 MOE 백본을 사용하여 설계되었을 때 TLR9를 유의미하게 저해하였다(도 31).
실시예 17: TLR7에 의한 RNA 감지의 저해
C2-Mut1 및 Mut1-dC가 구아노신과의 TLR7 맞물림을 저해하였음이 나타났으며, 본 발명자들은 또한 면역자극성인 짧은 단일 가닥 RNA에 대하여 이의 효과를 시험하였다. 이 실험을 위하여, 본 발명자들이 이전에 TLR7을 활성화시키는 것으로 관찰하였던(문헌[Gantier et al., 2010]) 합성 ssRNA(즉, B-406-AS ssRNA(UAAUUGGCGUCUGGCCUUCUU, SEQ ID NO: 345))를 이용하였다. 이 ssRNA를 250 nM의 최종 농도로, 이전에 기재된 바와 같이, 생물학적 3벌 반복으로, DOTAP(로슈(Roche)) 및 순수 DMEM과 함께 트랜스펙션시켰다. DOTAP 대 RNA(80 uM)의 비는 3.52 ug/ul의 ssRNA였다.
도 32에 나타낸 바와 같이, C2-Mut1 및 Mut1-dC를 이용한 일차 BMDM의 사전-처리는 dC20 대조군 동시-처리와 비교하여 ssRNA 감지에 의해 유도되는 TNFa 생성을 유의미하게 감소시켰지만, Mut1-v3-dC는 그렇지 않았으며, 이에 의해, RNA에 의해 유도되는 TLR7 신호전달의 본원에 기재된 올리고뉴클레오티드(및 특히 5'-GGUAU-3'(SEQ ID NO: 56) 모티프)에 의한 서열 특이적 저해가 추가로 확인된다.
실시예 18: 2'O-메틸 ASO에 의한 TLR8 강화는 3-염기 모티프에 좌우된다
이전의 작업에 의해, ASO2(2'OMe)의 예를 사용하여 TLR8의 서열 특이적 강화가 나타났지만, 말단 5'mUmC 모티프를 결여한 이의 LNA 변이체 ASO2-LNA는 그렇지 않았다(하기 참조). 이 5'mUmC 모티프를 ASO2-LNA에 다시 부가하는 경우(ASO2-LNA-Mut1 제공), TLR8 강화에 영향이 없었으며, 이에 의해, +C+G(여기서 "+"는 LNA 염기를 나타냄) 염기가 (ASO11-Mut2에서 관찰되는 바와 같음, 하기 참조) 다르게는 TLR8을 직접적으로 강화시키는 것으로 관찰된 5' UCCGG 모티프의 효과를 다소 길항시켰음이 시사된다.
Figure pct00043
2'Ome ASO660은 또한, TLR8 감지의 강력한 강화제이다. 이러한 강화는 5' mCmUmU[mCmG] 모티프에 직접적으로 좌우되었지만, ASO2-LNA Mut2(상기 참조)에서 5' mCmUmU[+C+G]의 상황에서 관찰되지 않았으며, 여기서, "m"은 2'O메틸 염기를 나타낸다. 이는 ASO2-LNA Mut2 내의 +C+G 모티프가 CUU(SEQ ID NO: 153) 모티프의 효과를 다소 길항시킨다는 것을 다시 시사하였다[PCT2021/050469].
이들 결과를 확장하기 위하여, 본 발명자들은 여기서 5' mCmUmU[mCmG] 모티프를 5' mCmUmU[+C+G] 모티프로 변경하였지만, 그 외에는 서열 전체를 변경하지 않고 유지하면서, ASO 660-Mut2를 합성하였다(도 33). 이들 실험에 의해, 이들 2개의 염기의 변경이 660-Mut2에 대하여 R848 감지의 TLR8 강화를 강력하게 감소시켰음을 입증하였다(도 33).
종합하면, 이들 결과는 TLR8 강화에서의 660 및 ASO2의 "mCmG" 잔기에 대한 주요한 역할을 직접적으로 뒷받침하였다(이는 이들 염기가 LNA 염기로 대체되는 경우 강력하게 감소되었다).
5' 최종 산물을 방출하기 위해 이들 2개의 염기가 엔도/엑소뉴클레아제에 의한 ASO 660의 가공을 조정할 것임을 추측하여, 본 발명자들은 다음으로, ASO 660의 5' 말단을 재현하는 상이한 길이의 일련의 짧은 2'OMe ASO를 합성하였다(Short-660 올리고로 지칭됨). R848 자극 이전의 이들 짧은 올리고뉴클레오티드의 하룻밤 인큐베이션에 의해, THP-1 세포에 의한 IP-10 생성의 길이-의존적 유도를 입증하였으며, 이는 마지막 5개의 5'말단 염기에서 가장 강력하였다(말단 CUU만으로는 TLR8을 강화시키지 못하였음에 주목한다 - 도 34).
5개의 염기를 사용하여 TLR8을 강화시키는 능력은, 본 발명자들이 TLR8 상의 이펙터 모티프가 TLR7과 유사하게, 실제로 더 짧을 것임을 추측하게 하였다. mCmUmU(660-3)가 작용하지 않았기 때문에, 본 발명자들은 또한, ASO 660의 중요한 "mCmG" 염기를 포함하는 또 다른 3 염기-길이의 올리고가 TLR8 기능을 조절할 수 있는지 여부도 시험하였다(mUmCmG, 660-3b로 지칭됨). 놀랍게도, 660-3b는 660-3 및 R848 단독과 비교하여 TLR8 감지를 유의미하게 강화시켰으며, 활성은 R848의 수준이 증가함에 따라 증가하였다(도 35).
이들 이전의 발견에 기초하여, 본 발명자들은 다음으로, HEK-TLR8 세포에서 R848 감지에 대한 3개 염기의 64가지 가능한 조합의 스크린을 수행하였다. 본 발명자들은 5 μM의 네이키드 올리고(즉, 트랜스펙션되지 않음) 및 600 ng/ml의 TLR8 선택적 효능제 모톨리모드를 사용하여 포스포로티오에이트(PS) 백본 상의 2'OMe 염기로 구성된 3-mer를 생물학적으로 3벌 반복으로 시험하였다.
도 36에 도시된 바와 같이, 오직 소수의 3-mer만이 R848의 감지를 강화시켰으며, "CGG"(SEQ ID NO: 383)가 가장 강력한 서열이고, 효력 감소의 순서에 따라, 그 다음은 "UCG"(즉, 660-3b), "UGG" 및 "CGC"(SEQ ID NO 451, 455, 375)였다(이 스크린에서 "AGG" 및 "GGA"(SEQ ID NO: 381 및 370)의 강화 효과에도 주목한다). 3개의 제1 강화제("CGG", "UCG", "UGG"; SEQ ID No: 383, 451, 455)를 반복 실험에서 독립적으로 실증하여, CGC 및 UCG가 모톨리모드의 TLR8 감지를 유의미하게 강화시켰음을 확인하였다. 결정적으로, 상기 열거된 4개의 서열은 또한, R848을 사용하여 자극된 THP-1 세포에서 본 발명자들의 64개의 3-mer의 반복 스크린에서의 IP-10 생성의 상위 강화제에 속해 있는 것으로 관찰되었다(이에 의해, 상이한 TLR8 세포 모델에서 그 관찰이 강고하게 드러난다는 것이 확인된다)(도 36).
본원에서 관찰된 R848/모톨리모드 감지에 대한 "CGG"(SEQ ID NO 383)의 매우 강력한 효과는 ASO2의 5'말단에서의 이의 존재와 직접적으로 일치하며, LNA 염기를 사용하여 +C+G로 돌연변이될 때 많은 활성을 소실하였던 mCmG 모티프와 중첩된다.
중요한 점은, 다수의 3-mer 2'OMe 올리고가 모톨리모드 및 R848 감지를 저해하는 것으로 나타났다는 점이다(THP-1에서 R848 없이 수득되는 것들과 유사한 IP-10 수준 및 HEK-TLR8에서 약 50% 감소된 NF-κB 루시퍼라제 활성을 나타냄). 이 저해 범주에서, "GAX"(SEQ ID NO: 591) 분자(즉, "GAG", "GAC", "GAU" 및 "GAA")는 HEK-TLR8 및 THP-1 스크린 둘 모두에서 강고하게 가장 강력하였다. "GUX"(SEQ ID NO: 592) 분자(즉, "GUC", "GUU", "GUA" 및 "GUG")도 GAX 분자만큼 강력하지는 않지만, 두 모델 모두에서 강고하게 저해성이었다. 이들 경향은 HEK-TLR8 세포에서의 반복 실험에서 독립적으로 확인되었으며, 이는 종합하면, 소수의 3-mer가 TLR8 감지를 저해할 수 있음을 보여준다(도 36).
실시예 19: 2'O-메틸 ASO에 의한 TLR7의 저해
이전의 실시예에 의해, Short Mut1 "mGmGmUmAmU" 5-mer가 TLR7에 의한 R848 감지를 저해하기에 충분하였음이 나타났다(도 14). 그러나, 이 저해는 올리고의 6시간 인큐베이션에 의지하였으며, 이는 이것이 더 짧은 단편으로 추가로 가공될 수 있음을 시사하였다. 이 가능성을 다루기 위하여, 본 발명자들은 다음으로, R848 자극 이전에 올리고의 인큐베이션 시간을 6시간에서 30분으로 감소시켜, TLR7 감지에 대한 "mGmGmU"(shortMut1-3) 및 "mGmUmA"(shortMut1-3b)의 효과를 조사하였다. 본 발명자들은 또한, 대조군으로서 2개의 다른 3-mer 서열, 660-3 및 660-3b를 포함시켰다. 이들 실험에 의해, Mut1 5-mer에서의 이펙터 모티프가 사실상 TLR7 감지를 선택적으로 저해하였던 "GAU"(SEQ ID NO: 440) 3-mer에 기초하였음을 확인하였다(도 37). 용량-반응 분석에 의해, 이 3-mer 올리고를 사용하여 300 nM의 IC50을 입증하였으며, 증가하는 양의 R848을 사용하여 저해가 강고하게 관찰되었다(도 37).
이들 결과에 기초하여, 본 발명자들은 TLR7에 의한 R848 감지에 대한 3개의 2'OMe 염기의 64개의 가능한 조합의 스크린을 수행하였다. 본 발명자들은 생물학적 3벌 반복으로, 400 nm 및 2 uM에서, 2개의 독립적인 스크린을 수행하였다(도 38).
이들 스크린에 의해, TLR7을 저해하는 가장 강력한 3-mer가 "GUC"였으며, 그 다음은 "GUG", "GUA" 및 "GUU"에 이어서, "GGC", "AUC", "GAG" 및 "GGA"(SEQ ID No: 442, 443, 60, 444, 377, 431, 384, 370)였음을 입증하였다. "GUX"(SEQ ID NO:"592)의 명백한 과한 표현(over-representation)은, 부위 2로의 TLR7 결합에 대한 이들 염기의 특이적인 활성을 시사하였다. 중요한 점은, GUX 모티프가 또한 TLR8을 저해하였으며, 이는 "GAG"(SEQ ID NO: 384)에 대해서도 마찬가지였다는 것이다. TLR7과 TLR8 간의 구조의 근접성을 고려해 볼 때, 이들 결과는 이들 수용체의 부위 2로의 이들 특이적인 모티프의 우선적인 결합을 강력하게 뒷받침하며, 이는 R848에 의한 TLR7/8 활성화 둘 모두의 차단을 야기한다.
이들 ASO가 10개의 내부 DNA 염기를 함유하기 때문에, 본 발명자들은 3-mer DNA 단편이 또한 TLR7 감지에 영향을 미칠 수 있음을 사실로 가정하였으며, 생물학적 3벌 반복으로, 2 μM에서, PS 백본 상의 64개의 가능한 3-mer DNA 염기의 스크린을 수행하였다. 이들 분석에 의해, 가장 강력한 3-mer DNA가 TLR7을 약 50% 저해하였음을 입증하였다. 결정적으로, 본 발명자들은 TLR7을 저해하는 2개의 가장 강력한 DNA 3-mer가 "TTT" 및 "TCT"(SEQ ID NO: 425 및 424)였음을 관찰하였다.
종합하면, 이들 분석은, 사용되는 20-mer 갭머 ASO가 엔도리소좀에서 R848의 TLR7/8 감지에 영향을 미칠 수 있기 이전에 신속하게 분해되는 작용 모델을 뒷받침한다. 본 발명자들은 3-mer만큼 적은 PS 2'OMe 올리고를 사용하여 일부 저해/강화 활성을 명확하게 반복할 수 있기 때문에, 이들은 이들 분해 산물이 TLR7/8에 대한 더 긴 2'OMe ASO의 활성의 이펙터인 것으로 여긴다.
20-mer 및 3-mer가 HEK 세포에서 TLR7/8에서 작용하기 위하여 연장된 사전-처리를 필요로 하지 않지만, 5-mer Mut1 서열은 6시간 인큐베이션 없이도 저해하지 않았기 때문에, 본 발명자들은 긴 20-mer 갭머의 엔도뉴클레아제 절단이 아마도 이들의 중간의 DNA 영역을 통해 2'OMe 단편을 방출하며, 이는 엑소뉴클레아제 활성을 통해 3-mer로 추가로 트리밍되는 것을 제안한다. 엔도 및 엑소뉴클레아제는 아마도 함께 커플링될 것이며, 이는 5-mer가 덜 효율적으로 가공되는 이유를 설명한다(3-mer가 명백하게 효율적으로 흡수되기 때문에, 길이 의존적 흡수는 여기서 문제가 될 것 같지 않다).
실시예 20: 2'O-메틸 변형된 ASO에 의한 cGAS의 길이 의존적 저해
이전의 실시예에 의해, 적은 수인 3개의 2'OMe 염기와 함께 17개의 dC의 스트레치(Mut-1-dC-3)를 함유하는 20-mer 길이 올리고뉴클레오티드가 cGAS 감지를 저해할 수 있다는 것이 나타났다. 5-mer 올리고가 TLR7을 저해하고 TLR8을 강화시킬 수 있다는 것이 나타났으며, 본 발명자들은 Mut-1 모티프(mG*mG*mU*mA*mU)를 갖는 5-mer 2'OMe 올리고가 cGAS 감지를 저해할 수 있었는지 여부를 조사하였다. 사용되는 용량(125, 250 또는 500 nM)과 독립적으로, 시험된 5-mer 중 어느 것도 THP-1 세포에서 트랜스펙션된 ISD70의 cGAS 감지를 유의미하게 저해하지 않았다(도 39). cGAS를 저해하는 데 필요한 올리고의 최소 길이를 추가로 결정하기 위하여, 본 발명자들은 이들의 3'말단에 10 및 5개의 dC 스트레치를 갖는 C2-Mut1-dC의 2개의 변이체를 생성하였다(C2-Mut1-dC-15 및 Mut1-dC-10 제공). 이들 더 짧은 ASO는 C2-Mut1-dC의 5' 말단 mG*mG*mU*A*T 모티프를 나타낼지라도, cGAS를 저해하지 않았다(도 39). 종합하면, 이들 결과는 TLR7/8의 것과 달리, 2'OMe ASO에 의한 cGAS 감지의 저해가, 사용되는 올리고의 길이에 의해 제한된다는 것을 시사한다. 이에 따라, 오직 16개 염기인 LNA ASO는 2'OMe 및 2'MOE 20-mer ASO와 비교하여 전반적으로 덜 강력한 cGAS 감지 저해제였다(도 20).
이들 결과는 TLR7/8의 것과 달리, cGAS 감지의 저해가 20-mer ASO, 예컨대 C2-Mut1의 분해 산물에 의해 매개되지 않으며, 오히려 15-mer 초과의 최소 길이에 의해 조정되는 것을 나타낸다.
실시예 21: TLR9 저해
이전의 실시예는 2'OMe, 2'MOE 및 2'LNA PS ASO가 서열-특이적 방식으로 인간 TLR9를 저해할 수 있다는 것을 나타내었다. 흥미로운 점은, 본 발명자들이 또한, C2-Mut1이 마우스 TLR9의 매우 강력한 저해제였음을 관찰하였다는 것이다(인간 TLR9에 대해서는 훨씬 덜 강력함). TLR9 저해를 이 단계에 나타나지 않은 특정 모티프로 좁힐 수 있는지 여부를 정의하기 위하여, 본 발명자들은 마우스 TLR9 저해에 대해 이들의 C2-Mut1 변이체의 패널을 시험하였다(도 40). 이들 분석에 의해, 오직 1개의 염기만이 상이한 C2-Mut1v1 및 C2-Mut1v3(UGUTT(SEQ ID NO: 596)로부터 CGUTT(SEQ ID NO 597))의 예를 사용하여, C2-Mut1 내의 단일 염기 치환이 마우스 TLR9 감지의 저해에 대하여 현저한 효과를 가졌으며, 저해를 강력하게 손상시킴을 입증하였다. 결정적으로, 본 발명자들은 또한, 인간 및 마우스 TLR9를 저해하였던 ASO 660v1이 이의 5' 말단으로부터 9개 염기로 절단되는 경우 저해 활성을 보유하는 것을 관찰하였다(도 40).
인간 및 마우스 TLR9 감지 간에 명백한 차이가 존재할지라도, 이들 발견에 의해, 마우스 TLR9 저해가 또한 선택적 2'OMe 모티프에 직접적으로 좌우되었으며((ASO2의 본 발명자들의 이전의 분석에 기초하여) 이는 인간 TLR9에 대해서도 동일하였음을 시사함) 20-mer보다 짧은 분자는 저해성일 수 있다는 것을 입증하였다.
이전의 연구에 의해, 선택된 CpG ASO 모티프의 TLR9 감지가 DNase II에 의한 더 긴 ASO의 절단에 좌우되었음이 나타났다. 3-mer 2'OMe 올리고뉴클레오티드가 TLR7/8을 조절할 수 있다는 것이 나타났고, 본 발명자들은 더 긴 ASO로부터의 3-mer 분해 산물이 또한 TLR9 감지를 제어할 수 있다는 가설을 세웠으며, 인간 TLR9 감지에 대하여 64개의 3-mer의 이들의 2'OMe 패널을 시험하였다.
2'OMe 패널에 의해, TLR9 감지가 선택된 2'OMe 3-mer: "ACC", "CGC", "GAU", "GGG"에 의해 미미하게(50% 미만) 저해되었으며, "UCG" 및 "ACG"가 가장 강력하였음이 드러났다(SEQ ID No: 403, 375, 440, 385, 451, 411)(도 41). 그럼에도 불구하고, 이들 소수의 서열의 저해 효과는 이 고용량의 3-mer에서 TLR7에 대하여 관찰되는 것과 비교하여 온건하였지만, 이는 효능제를 사용한 TLR9 감지의 포화 때문일 수 있었다. 흥미롭게도, 이들 저해제 중 소수는 또한, GAU(SEQ ID NO: 440)(TLR8 저해) 및 UCG/CGC(SEQ ID NO: 451/375)(TLR8 강화)를 사용하여 TLR8의 기능을 조절하였다.
종합하면, 이들 발견은 TLR9가 적어도 9개 염기의 2'OMe PS 올리고에 의해 저해될 수 있으며, 선택된 2'OMe 3-mer 올리고가 또한 감지에 대하여 효과를 가질 수 있음을 시사한다.
실시예 22: TLR3 저해
3-mer PS 올리고뉴클레오티드가 TLR7/8 및 9 감지를 제어할 수 있다는 것이 나타났으며, 본 발명자들은 선택된 모티프가 또한 TLR3 감지를 조절할 수 있음을 추측하였다(이 개념은 TLR3/7/8/9에 의한 엔도좀 감지가 더 긴 PS 올리고뉴클레오티드의 짧은 분해 산물에 의해 광범위하게 영향을 받을 수 있다는 것이다).
따라서, 본 발명자들은 인간 TLR3 감지에 대하여 이들의 2'OMe 및 64개의 3-mer의 DNA 패널을 시험하였다(도 42 및 도 43). 두 패널 모두에 있어서, 저해 효과는 약 25 내지 30%였으며, DNA 3-mer "TAC"(SEQ ID NO: 378)가 가장 강하고, 2'OMe 3-mer "CGC"(SEQ ID NO: 375)가 가장 강하였다. 본 발명자들은 "GCA", "UGA", "CAG", "UGG", "CGC" 및 "UCA"(여기서 U는 T일 수 있음)(SEQ ID No: 399, 453, 382, 455, 375, 449)가 DNA 및 2'OMe 둘 모두에서 20% 넘게 저해성이었음을 추가로 관찰하였다.
이들 실험은, 종합하면, 고용량(2 μM)으로 사용되는 경우, 3-mer만이 TLR3에 의한 RNA 감지에서 저해 효과를 가짐을 입증한다.
광범위하게 기재된 본 발명의 목적 또는 범위를 벗어나지 않고 특정 구현예에 나타낸 바와 같이 본 발명에 대하여 수많은 변형 및/또는 수정이 이루어질 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 본 구현예는 모든 측면에서 예시적인 것으로 간주되어야 하며 제한적이지 않다.
본원에서 논의되고/되거나 참조된 모든 간행물은 그 전체가 본원에 포함된다.
본 명세서에 포함된 문서, 행위, 재료, 장치, 물품 등의 임의의 논의는 전적으로 본 발명의 맥락을 제공하기 위한 것이다. 이들 대상 중 임의의 것 또는 전부가, 본 출원의 각각의 청구범위의 우선일 이전에 존재하였기 때문에 선행 기술 기반의 일부이거나 본 발명과 관련된 분야에서 통상적인 일반 지식임을 인정하는 것으로 간주되어서는 안 된다.
참고문헌
Figure pct00044
Figure pct00045
SEQUENCE LISTING <110> Hudson Institute of Medical Research <120> Oligonucleotides <130> 53156819 <150> 2021901027 <151> 2021-04-08 <150> 2021903431 <151> 2021-11-27 <160> 599 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 1 rgumyc 6 <210> 2 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 2 arkcyc 6 <210> 3 <211> 9 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 3 arkcycymu 9 <210> 4 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 4 gguaua 6 <210> 5 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 5 uguuuc 6 <210> 6 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 6 uguguc 6 <210> 7 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 7 cguuuc 6 <210> 8 <211> 6 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct 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<400> 524 acccacttgg cagaccatca 20 <210> 525 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EGFR-1225 MOE <400> 525 caaggccctt cgcacttctt 20 <210> 526 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-1635 MOE <400> 526 gaaccacgtc tgctctaaca 20 <210> 527 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-4915 MOE <400> 527 ttgcacactt cgtacccaaa 20 <210> 528 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MB21D1-689 MOE <400> 528 acaacccctt tcaccatccc 20 <210> 529 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-732 MOE <400> 529 tagtcaaggg catatcctac 20 <210> 530 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MB21D1-523 MOE <400> 530 gaggtcttgg cttcgtggag 20 <210> 531 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-808 MOE <400> 531 cgtgtctgga agcttccttt 20 <210> 532 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EGFR-1015 MOE <400> 532 gtgtccttgc acgtggcttc 20 <210> 533 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-1739 MOE <400> 533 cttactttcc gaggtgtcca 20 <210> 534 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-1027 MOE <400> 534 aatccgccca aagggaactg 20 <210> 535 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-1294 MOE <400> 535 cagatagcac cttcagcact 20 <210> 536 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EGFR-2874 MOE <400> 536 atgccatcca cttgataggc 20 <210> 537 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-1642 MOE <400> 537 tggcaggctc agtgatgtct 20 <210> 538 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-2584 MOE <400> 538 ttgccatgct ggctcggact 20 <210> 539 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-3648 MOE <400> 539 ctcttgaagc atcgtatcac 20 <210> 540 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-2516 MOE <400> 540 agatctggca gcccatcaac 20 <210> 541 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-2709 MOE <400> 541 gcttcaggcg ctgccttgcc 20 <210> 542 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-333 MOE <400> 542 atgtgatggc ctcccatctc 20 <210> 543 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-335 MOE <400> 543 caatgtgatg gcctcccatc 20 <210> 544 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-2112 MOE <400> 544 tgtcttcatc ggccctgcct 20 <210> 545 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-667 MOE <400> 545 tccaacactt cgtggggtcc 20 <210> 546 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-2479 MOE <400> 546 ggtggtggcc acccatctca 20 <210> 547 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EGFR-727 MOE <400> 547 atgtcccgcc actggatgct 20 <210> 548 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-329 MOE <400> 548 gatggcctcc catctccttc 20 <210> 549 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CTNN2B-1576 MOE <400> 549 cacccacttg gcagaccatc 20 <210> 550 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> EGFR-2859 MOE <400> 550 taggcacttt gcctccttct 20 <210> 551 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CAMSAP1-1850 MOE <400> 551 gatgctcctc ggtctccctt 20 <210> 552 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ASO2 <400> 552 tccggcctcg gaagctctc 19 <210> 553 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C4 <400> 553 ccatgtccca ggcctccagt 20 <210> 554 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C11 <400> 554 ttggcctgtg gatgcttt 18 <210> 555 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> A11 <400> 555 aaatgtcctg gccctcactg 20 <210> 556 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ASO-2 <400> 556 ccggcctcgg aagcucucu 19 <210> 557 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 196861965-C2 <400> 557 gcagucucca ugtcccaggc 20 <210> 558 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 195513083-E3 <400> 558 gauggttcca gucccucuuc 20 <210> 559 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F2 <400> 559 agcagucucc atgtcccag 19 <210> 560 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C2 <400> 560 gcagucucca tgtcccag 18 <210> 561 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-E8 <400> 561 gggucucctc cacaccc 17 <210> 562 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-E10 <400> 562 gauggttcca gucccucuuu c 21 <210> 563 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F9 <400> 563 ggucccatcc cttctg 16 <210> 564 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A6 <400> 564 gattaaacag attaataca 19 <210> 565 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C6 <400> 565 ggattaaaac agattaatac 20 <210> 566 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-E6 <400> 566 cttgtgaaaa gattatcttc 20 <210> 567 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C5 <400> 567 cctagaaaga agcaaagatt 20 <210> 568 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-D6 <400> 568 aatttaaagc atgaatatta 20 <210> 569 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-D10 <400> 569 cacccuucuc tctgguccc 19 <210> 570 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A8 <400> 570 ccuucuctct ggtccc 16 <210> 571 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A9 <400> 571 uggtcccatc ccuucu 16 <210> 572 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A3 <400> 572 ctgctgccac cuucu 15 <210> 573 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-H9 <400> 573 gucccatccc uucugcugcc 20 <210> 574 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-H8 <400> 574 ucctccacac ccuucuc 17 <210> 575 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-H2 <400> 575 gcctccagtg ucuucuc 17 <210> 576 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-G7 <400> 576 ucccaacucu ucuaacugu 19 <210> 577 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> G5 <400> 577 ggcatccacc acgtcg 16 <210> 578 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E6 <400> 578 ccttgcacgt ggcttcgt 18 <210> 579 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F5 <400> 579 ccttgcacgt ggcttcg 17 <210> 580 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E5 <400> 580 atttcagagc agcttc 16 <210> 581 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> G8 <400> 581 gtccacatcc tgtggctcg 19 <210> 582 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C2Mut1-dC-2 <400> 582 gguacccccc cccccccccc 20 <210> 583 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C2Mut1-dC-3 <400> 583 gguccccccc cccccccccc 20 <210> 584 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> E9 <400> 584 gactgtcttg agggttc 17 <210> 585 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> F3 <400> 585 cgtgtctgga agcttcctt 19 <210> 586 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> D10 <400> 586 cggcctcgga agctctct 18 <210> 587 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HPRT-664 MOE <400> 587 aacattcgtg gggtccttt 19 <210> 588 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 588 uccggcctcg gaagctct 18 <210> 589 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 589 cuucggcctc ggaagctctu uc 22 <210> 590 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 590 gaacgtgggg tccttuucac 20 <210> 591 <211> 3 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, t or u <400> 591 gan 3 <210> 592 <211> 3 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, t or u <400> 592 gun 3 <210> 593 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 593 ggctcc 6 <210> 594 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 594 gguatccccc ccccc 15 <210> 595 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 595 gguatcccc 9 <210> 596 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 596 ugutt 5 <210> 597 <211> 5 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 597 cgutt 5 <210> 598 <211> 3 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, t or u <400> 598 ttn 3 <210> 599 <211> 3 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> n is a, c, g, t or u <400> 599 uun 3

Claims (135)

  1. cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUUUC-3';
    (8) 5'-CGUGUC-3';
    (9) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (10) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (11) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (12) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (13) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (14) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (16) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (17) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (18) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (19) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (20) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (21) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (22) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (23) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (24) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (25) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (26) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (27) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (28) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (29) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (30) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (31) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (32) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (33) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (34) 5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3';
    (35) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (36) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (37) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (38) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (39) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (40) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (41) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (42) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (43) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (44) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (45) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (46) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (47) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (48) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (49) 5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3';
    (50) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3';
    (51) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (52) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (53) 5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3';
    (54) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (55) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (56) 5'-GGUAU-3';
    (57) 5'-GGUA-3';
    (58) 5'-GUAU-3';
    (59) 5'-GGU-3';
    (60) 5'-GUA-3';
    (61) 5'-TGTCTG-3';
    (62) 5'-GTCT-3';
    (63) 5'-TCTCCG-3';
    (64) 5'-CTCC-3';
    (65) 5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A];
    (66) 5'-AAAGGTTA-3';
    (67) 5'-GAAGCTTC-3';
    (68) 5'-GCAGGCTC-3';
    (69) 5'-A[G/A]GGTT-3';
    (70) 5'-AGGGTT-3';
    (71) 5'-AAGGTT-3';
    (72) 5'-GGTT-3';
    (73) 5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3';
    (74) 5'-AGCTTCCT-3';
    (75) 5'-AGCTTCGA-3';
    (76) 5'-GGCTTCGT-3';
    (77) 5'-TGCTTCCT-3';
    (78) 5'-AGCTCTCT-3';
    (79) 5'-G[G/C]TT-3';
    (80) 5'-GCTT-3';
    (81) 5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (82) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3';
    (83) 5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3';
    (84) 5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3';
    (85) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (86) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (87) 5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3';
    (88) 5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3';
    (89) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (90) 5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3';
    (91) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (92) 5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3';
    (93) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (94) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (95) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (96) 5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (97) 5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3';
    (98) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (99) 5'-GCACACTTCGTACCCA-3';
    (100) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (101) 5'-CGTATTATAGCCGATT-3';
    (102) 5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3';
    (103) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (104) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (105) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (106) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (107) 5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3';
    (108) 5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3';
    (109) 5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3';
    (110) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (111) 5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (112) 5'-CCACTTGGCAGACCAT-3';
    (113) 5'-CCATCCATGAGGTCCT-3';
    (114) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (115) 5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3';
    (116) 5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3';
    (117) 5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3';
    (118) 5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'; 및
    (119) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (118)의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  2. 올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUUUC-3';
    (8) 5'-CGUGUC-3';
    (9) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (10) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (11) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (12) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (13) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (14) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (16) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (17) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (18) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (19) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (20) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (21) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (22) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (23) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (24) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (25) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (26) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (27) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (28) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (29) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (30) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (31) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (32) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (33) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (34) 5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3';
    (35) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (36) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (37) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (38) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (39) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (40) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (41) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (42) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (43) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (44) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (45) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (46) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (47) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (48) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (49) 5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3';
    (50) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3';
    (51) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (52) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (53) 5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3';
    (54) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (55) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (56) 5'-GGUAU-3';
    (57) 5'-GGUA-3';
    (58) 5'-GUAU-3';
    (59) 5'-GGU-3';
    (60) 5'-GUA-3';
    (61) 5'-TGTCTG-3';
    (62) 5'-GTCT-3';
    (63) 5'-TCTCCG-3';
    (64) 5'-CTCC-3';
    (65) 5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A];
    (66) 5'-AAAGGTTA-3';
    (67) 5'-GAAGCTTC-3';
    (68) 5'-GCAGGCTC-3';
    (69) 5'-A[G/A]GGTT-3';
    (70) 5'-AGGGTT-3';
    (71) 5'-AAGGTT-3';
    (72) 5'-GGTT-3';
    (73) 5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3';
    (74) 5'-AGCTTCCT-3';
    (75) 5'-AGCTTCGA-3';
    (76) 5'-GGCTTCGT-3';
    (77) 5'-TGCTTCCT-3';
    (78) 5'-AGCTCTCT-3';
    (79) 5'-G[G/C]TT-3';
    (80) 5'-GCTT-3';
    (81) 5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (82) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3';
    (83) 5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3';
    (84) 5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3';
    (85) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (86) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (87) 5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3';
    (88) 5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3';
    (89) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (90) 5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3';
    (91) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (92) 5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3';
    (93) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (94) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (95) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (96) 5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (97) 5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3';
    (98) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (99) 5'-GCACACTTCGTACCCA-3';
    (100) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (101) 5'-CGTATTATAGCCGATT-3';
    (102) 5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3';
    (103) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (104) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (105) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (106) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (107) 5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3';
    (108) 5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3';
    (109) 5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3';
    (110) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (111) 5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (112) 5'-CCACTTGGCAGACCAT-3';
    (113) 5'-CCATCCATGAGGTCCT-3';
    (114) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (115) 5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3';
    (116) 5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3';
    (117) 5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3';
    (118) 5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'; 및
    (119) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (118)의 모티프 또는 서열의 변이체.
  3. 제2항에 있어서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계는 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하는 방법.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 cGAS를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 cGAS를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계되는 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에 존재하는 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에 존재하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재하는 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-GGUAUC-3', 5'-AGUCUC-3', 5'-GGUCCC-3', 5'-GGUCUC-3', 5'-AAGCUC-3', 5'-AGUCCC-3', 5'-GGUAUA-3', 5'-UGUUUC-3', 5'-UGUGUC-3', 5'-CGUUUC-3', 5'-CGUGUC-3', 5'-GGUAU-3', 5'-GGUA-3', 5'-GGU-3', 5'-TGTCTG-3', 5'-GTCT-3', 5'-CTCC-3', 5'-AAAGGTTA-3', 5'-GAAGCTTC-3', 5'-GCAGGCTC-3', 5'-AGGGTT-3', 5'-AAGGTT-3', 5'-GGTT-3', 5'-AGCTTCCT-3', 5'-AGCTTCGA-3', 5'-GGCTTCGT-3', 5'-TGCTTCCT-3', 5'-AGCTCTCT-3' 또는 5'-GCTT-3'을 가지며, U가 T일 수 있는 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 5'-GGUAUC-3', 5'-GGUATC-3', 5'-AGUCTC-3', 5'-AGTCTC-3', 5'-GGUCCC-3', 5'-GGUCTC-3', 5'-AAGCUC-3', 5'-AGTCCC-3', 5'-GGUATA-3', 5'-UGUTTC-3', 5'-UGUGTC-3', 5'-CGUTTC-3', 5'-CGUGTC-3', 5'-GGUAU-3', 5'-GGUAT-3', 5'-GGUA-3', 5'-GGU-3', 5'-TGTCTG-3', 5'-GTCT-3', 5'-TCTCCG-3', 5'-CTCC-3', 5'-AAAGGTTA-3', 5'-GAAGCTTC-3', 5'-GCAGGCTC-3', 5'-AGGGTT-3', 5'-AAGGTT-3', 5'-GGTT-3', 5'-AGCTTCCT-3', 5'-AGCTTCGA-3', 5'-GGCTTCGT-3', 5'-TGCTTCCT-3', 5'-AGCTCTCT-3' 또는 5'-GCTT-3'의 서열을 갖는 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프의 염기 중 하나 이상이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 5'-mGmGmUATC-3', 5'-mAmGmUCTC-3', 5'-mAmGTCTC-3', 5'-mGmGmUmCmCC-3', 5'-mGmGmUmCTC-3', 5'-AAGCmUmC-3', 5'-AGTCCC-3', 5'-mGmGmUATA-3', 5'-mUmGmUTTC-3', 5'-mUmGmUGTC-3', 5'-mCmGmUTTC-3', 5'-mCmGmUGTC-3', 5'-mGmGmUAU-3', 5'-mGmGmUAT-3', 5'-mGmGmUmAU-3', 5'-mGmGmUmAT-3', 5'-mGmGmUmAmU-3', 5'-mGmGmUA-3', 5'-mGmGmUmA-3', 5'-mGmGmU-3', 5'-mTmGTCTG-3', 5'-TGTCTmG-3', 5'-mGTCT-3', 5'-GTCT-3', 5'-TCTCCG-3', 5'-CTCC-3', 5'-mAmAAGGTTA-3', 5'-GAAGCTmTmC-3', 5'-mGmCmAGGCTC-3', 5'-mAAGGTT-3', 5'-AGmGmGmTmT-3', 5'-AGCTmTmCmCmT-3', 5'-AGCTTmCmCmT-3', 5'-mAmGmCTTCGA-3', 5'-GGCTTmCmGmT-3', 5'-GGCTTCGT-3', 5'-TGCTTCmCmT-3' 또는 5'-AGCmTmCmTmCmT-3'의 서열을 가지며, m이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  14. cGAS 활성을 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    (1) 5'-[C/U]CUUCU-3';
    (2) 5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3';
    (3) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (4) 5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3';
    (5) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (6) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (7) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (8) 5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3';
    (9) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'; 및
    (10) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (9)의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) cGAS 활성을 저해하지 않는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  15. 올리고뉴클레오티드의 cGAS 저해 활성을 감소시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    (1) 5'-[C/U]CUUCU-3';
    (2) 5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3';
    (3) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (4) 5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3';
    (5) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (6) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (7) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (8) 5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3';
    (9) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'; 및
    (10) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (9)의 모티프 또는 서열의 변이체.
  16. 제15항에 있어서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계가 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하는 방법.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 cGAS 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 cGAS 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 낮은 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 13개 염기 내에 존재하는 방법.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 9개 염기 내에 존재하는 방법.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재하는 방법.
  21. 제14항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-CCUUCU-3' 또는 5'-UCUUCU-3'을 가지며, U가 T일 수 있는 방법.
  22. 제14항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프의 염기 중 하나 이상이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  23. 제14항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-mCmCUUCU-3', 5'-mCmCmUmUmCU-3', 5'-CmCmUmUmCmU-3', 5'-CCUUCU-3', 5'-CCmUmUmCmU-3', 5'-UCmUmUmCmU-3' 또는 5'-UCUUCU-3'을 가지며, U가 T일 수 있으며, m이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  24. TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    (1) 5'-G[G/C]CCT[C/G]-3';
    (2) 5'-CUU-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
    (3) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (4) 5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3';
    (5) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (6) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (7) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (8) 5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3';
    (9) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
    (10) 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3';
    (11) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (12) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (13) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (14) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (15) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (16) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (17) 5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3';
    (18) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (19) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (20) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (21) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (22) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (23) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (24) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (25) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (26) 5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3';
    (27) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (28) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (29) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (30) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3'
    (31) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (32) 5'-ACA-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (33) 5'-CAC-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (34) 5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (35) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (36) 5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3';
    (37) 5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3';
    (38) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3';
    (39) 5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3';
    (40) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (41) 5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3';
    (42) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (43) 5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (44) 5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3';
    (45) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (46) 5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3';
    (47) 5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3';
    (48) 5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3';
    (49) 5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3';
    (50) 5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3';
    (51) 5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3';
    (52) 5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3';
    (53) 5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3';
    (54) 5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3';
    (55) 5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3';
    (56) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (57) 5'-TGCACACTTCGTACCC-3';
    (58) 5'-CCACATCCTGTGGCTC-3';
    (59) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (60) 5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3';
    (61) 5'-CCCACTTGGCAGACCA-3';
    (62) 5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3';
    (63) 5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3';
    (64) 5'-GGTCATTACAATAGCT-3';
    (65) 5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3';
    (66) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (67) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (68) 5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3';
    (69) 5'-GCATCCACCACGTCGT-3';
    (70) 5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (71) 5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3';
    (72) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (73) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (74) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
    (75) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (76) 5'-GCGGUATCC-3';
    (77) 5'-GCUGUTTCC-3';
    (78) 5'-GCUGUGTCC-3';
    (79) 5'-GCCGUTTCC-3';
    (80) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC;
    (81) 5'-CUUCGTGGG-3';
    (82) 5'-UCG-3';
    (83) 5'-ACG-3';
    (84) 5'-ACC-3';
    (85) 5'-CGC-3';
    (86) 5'-GAU-3';
    (87) 5'-GGG-3';
    (88) 5'-AGC-3';
    (89) 5'-UUC-3';
    (90) 5'-UUG-3';
    (91) 5'-CAC-3';
    및
    및
    (92) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (91)의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  25. 올리고뉴클레오티드의 TLR9 저해 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    (1) 5'-G[G/C]CCT[C/G]-3';
    (2) 5'-CUU-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
    (3) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (4) 5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3';
    (5) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (6) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (7) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (8) 5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3';
    (9) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
    (10) 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3';
    (11) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (12) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (13) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (14) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (15) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (16) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (17) 5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3';
    (18) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (19) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (20) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (21) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (22) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (23) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (24) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (25) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (26) 5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3';
    (27) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (28) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (29) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (30) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (31) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (32) 5'-ACA-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (33) 5'-CAC-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (34) 5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (35) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (36) 5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3';
    (37) 5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3';
    (38) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3';
    (39) 5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3';
    (40) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (41) 5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3';
    (42) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (43) 5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (44) 5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3';
    (45) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (46) 5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3';
    (47) 5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3';
    (48) 5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3';
    (49) 5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3';
    (50) 5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3';
    (51) 5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3';
    (52) 5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3';
    (53) 5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3';
    (54) 5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3';
    (55) 5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3';
    (56) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (57) 5'-TGCACACTTCGTACCC-3';
    (58) 5'-CCACATCCTGTGGCTC-3';
    (59) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (60) 5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3';
    (61) 5'-CCCACTTGGCAGACCA-3';
    (62) 5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3';
    (63) 5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3';
    (64) 5'-GGTCATTACAATAGCT-3';
    (65) 5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3';
    (66) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (67) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (68) 5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3';
    (69) 5'-GCATCCACCACGTCGT-3';
    (70) 5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (71) 5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3';
    (72) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (73) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (74) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
    (75) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (76) 5'-GCGGUATCC-3';
    (77) 5'-GCUGUTTCC-3';
    (78) 5'-GCUGUGTCC-3';
    (79) 5'-GCCGUTTCC-3';
    (80) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC;
    (81) 5'-CUUCGTGGG-3';
    (82) 5'-UCG-3';
    (83) 5'-ACG-3';
    (84) 5'-ACC-3';
    (85) 5'-CGC-3';
    (86) 5'-GAU-3';
    (87) 5'-GGG-3';
    (88) 5'-AGC-3';
    (89) 5'-UUC-3';
    (90) 5'-UUG-3';
    (91) 5'-CAC-3';
    및
    및
    (92) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (91)의 모티프 또는 서열의 변이체.
  26. 제25항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 TLR9 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계가 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하는 방법.
  28. 제24항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR9를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는 방법.
  29. 제24항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR9를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계되는 방법.
  30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재하는 방법.
  31. 제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 5개 염기 내에 존재하는 방법.
  32. 제24항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재하는 방법.
  33. 제24항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재하는 방법.
  34. 제24항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-CUU-3', 5'-CUT-3' 또는 5'-CTT-3'을 갖는 방법.
  35. 제24항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-GGCCTC-3', 5'-GGCCTG-3' 또는 5'-GCCCTC-3'을 가지며, T가 U일 수 있는 방법.
  36. 제24항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프의 염기 중 하나 이상이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  37. 제24항 내지 제34항 또는 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-mCmUmU-3' 또는 5'-mCmUT-3'을 가지며, m이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  38. 제24항 내지 제33항, 제35항 또는 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-mGmGCCTC-3', 5'-GGCCTmC-3', 5'-mGmGmCCTG-3' 또는 5'-GCCCTmC-3'을 가지며, T가 U일 수 있으며, m이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가
    a) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 5' 영역,
    b) 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역, 및
    c) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 3' 영역을 포함하는 방법.
  40. 제39항에 있어서, 중간 영역이 약 10개 염기 길이인 방법.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 5' 영역 및/또는 3' 영역이 (a) 약 3개 염기 길이; 또는 (b) 약 5개 염기 길이인 방법.
  42. TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 적어도 약 50% 아데닌 염기를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계;
    ii) 5' 영역, 3' 영역, 및 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역을 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계로서, 5' 영역 및 3' 영역 중 하나 또는 둘 모두가, 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하며, 중간 영역의 염기의 적어도 약 50%가 아데닌 염기인 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR9 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 5'-[T/G][A/T][G/A/T]AA[A/C][A/G][G/C/A]A[T/G][T/G/C]A[A/T]-3'의 서열을 갖는 모티프를 포함하며, T가 U일 수 있는 방법.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, 5' 영역 및/또는 3' 영역이 약 5개 염기 길이이며, 중간 영역이 약 10개 염기 길이이며, 중간 영역이 적어도 5개의 아데닌 염기를 포함하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 적어도 5개의 아데닌 염기 중 2개, 3개 및/또는 4개가 연속 서열에 존재하는 방법.
  46. 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR9를 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는 방법.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR9를 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계되는 방법.
  48. TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUGUC-3';
    (8) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (9) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (10) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (11) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (12) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (13) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (14) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (16) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (17) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (18) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (19) 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3';
    (20) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (21) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (22) 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3';
    (23) 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3';
    (24) 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3';
    (25) 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3';
    (26) 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3';
    (27) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (28) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (29) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (30) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (31) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (32) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (33) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (34) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (35) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (36) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (37) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (38) 5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3';
    (39) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (40) 5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3';
    (41) 5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3';
    (42) 5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3';
    (43) 5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3';
    (44) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (45) 5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3';
    (46) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (47) 5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3';
    (48) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (49) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (50) 5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3';
    (51) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (52) 5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3';
    (53) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (54) 5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3';
    (55) 5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3';
    (56) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (57) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (58) 5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3';
    (59) 5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3';
    (60) 5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3';
    (61) 5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3';
    (62) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (63) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3';
    (64) 5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3';
    (65) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (66) 5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3';
    (67) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (68) 5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3';
    (69) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (70) 5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3';
    (71) 5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3';
    (72) 5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3';
    (73) 5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3';
    (74) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (75) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (76) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (77) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (78) 5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3';
    (79) 5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3';
    (80) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (81) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (82) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (83) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (84) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (85) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (86) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (87) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (88) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (89) 5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3';
    (90) 5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3';
    (91) 5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3';
    (92) 5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3';
    (93) 5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3';
    (94) 5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3';
    (95) 5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3';
    (96) 5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3';
    (97) 5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3';
    (98) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3';
    (99) 5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3';
    (100) 5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3';
    (101) 5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3';
    (102) 5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3';
    (103) 5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3';
    (104) 5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3';
    (105) 5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3';
    (106) 5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3';
    (107) 5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3';
    (108) 5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3';
    (109) 5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3';
    (110) 5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3';
    (111) 5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3';
    (112) 5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3';
    (113) 5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3';
    (114) 5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3';
    (115) 5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3';
    (116) 5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3';
    (117) 5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3';
    (118) 5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3';
    (119) 5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3';
    (120) 5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3';
    (121) 5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3';
    (122) 5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3';
    (123) 5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3';
    (124) 5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3';
    (125) 5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3';
    (126) 5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3';
    (127) 5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3';
    (128) 5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3';
    (129) 5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3';
    (130) 5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3';
    (131) 5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3';
    (132) 5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3';
    (133) 5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3';
    (134) 5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3';
    (135) 5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3';
    (136) 5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3';
    (137) 5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3';
    (138) 5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3';
    (139) 5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3';
    (140) 5'-GGUAU-3';
    (141) 5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (142) 5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (143) 5'-GGCTTC-3';
    (144) 5'-GGCATC-3';
    (145) 5'-AGCTTC-3';
    (146) 5'-GGAATC-3';
    (147) 5'-CACATC-3';
    (148) 5'-GGCCTC-3';
    (149) 5'-CACTTC-3';
    (150) 5'-AAGATC-3';
    (151) 5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3';
    (152) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (153) 5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3';
    (154) 5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (155) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (156) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (157) 5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3';
    (158) 5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3';
    (159) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (160) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (161) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (162) 5'-GACTATACGCGCAATA-3';
    (163) 5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3';
    (164) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (165) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (166) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (167) 5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3';
    (168) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (169) 5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3';
    (170) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (171) 5'-AGGACTCCAGATGTTT-3';
    (172) 5'-GTGATCTTGACATGCT-3';
    (173) 5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3';
    (174) 5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3';
    (175) 5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3';
    (176) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (177) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (178) 5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3';
    (179) 5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3';
    (180) 5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (181) 5'-GGUA-3';
    (182) 5'-GUAU-3';
    (183) 5'-GGU-3';
    (184) 5'-GUA-3';
    (185) 5'-GUC-3';
    (186) 5'-GUG-3';
    (187) 5'-GUU-3';
    (188) 5'-GUA-3';
    (189) 5'-GGC-3';
    (190) 5'-AUC-3';
    (191) 5'-GAA-3';
    (192) 5'-GAG-3';
    (193) 5'-GGA-3';
    (194) 5'-GAC-3';
    (195) 5'-GAU-3';
    (196) 5'-AUG-3';
    (197) 5'-GCG-3';
    (198) 5'-UUC-3';
    (199) 5'-GCC-3';
    (200) 5'-GGG-3';
    (201) 5'-AUU-3';
    (202) 5'-GCA-3';
    (203) 5'-AGC-3';
    (204) 5'-AAC-3';
    (205) 5'-CCA-3';
    (206) 5'-UGC-3';
    (207) 5'-CAA-3';
    (208) 5'-CGG-3';
    (209) 5'-ACC-3';
    (210) 5'-AGA-3';
    (211) 5'-TTT-3';
    (212) 5'-TCT-3' 및
    및
    (213) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (212)의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR7 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  49. 올리고뉴클레오티드의 TLR7 저해 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUGUC-3';
    (8) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (9) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (10) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (11) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (12) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (13) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (14) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (16) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (17) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (18) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (19) 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3';
    (20) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (21) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (22) 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3';
    (23) 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3';
    (24) 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3';
    (25) 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3';
    (26) 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3';
    (27) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (28) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (29) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (30) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (31) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (32) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (33) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (34) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (35) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (36) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (37) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (38) 5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3';
    (39) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (40) 5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3';
    (41) 5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3';
    (42) 5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3';
    (43) 5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3';
    (44) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (45) 5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3';
    (46) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (47) 5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3';
    (48) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (49) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (50) 5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3';
    (51) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (52) 5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3';
    (53) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (54) 5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3';
    (55) 5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3';
    (56) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (57) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (58) 5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3';
    (59) 5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3';
    (60) 5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3';
    (61) 5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3';
    (62) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (63) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3';
    (64) 5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3';
    (65) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (66) 5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3';
    (67) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (68) 5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3';
    (69) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (70) 5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3';
    (71) 5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3';
    (72) 5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3';
    (73) 5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3';
    (74) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (75) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (76) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (77) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (78) 5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3';
    (79) 5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3';
    (80) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (81) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (82) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (83) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (84) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (85) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (86) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (87) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (88) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (89) 5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3';
    (90) 5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3';
    (91) 5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3';
    (92) 5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3';
    (93) 5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3';
    (94) 5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3';
    (95) 5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3';
    (96) 5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3';
    (97) 5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3';
    (98) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3';
    (99) 5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3';
    (100) 5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3';
    (101) 5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3';
    (102) 5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3';
    (103) 5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3';
    (104) 5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3';
    (105) 5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3';
    (106) 5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3';
    (107) 5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3';
    (108) 5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3';
    (109) 5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3';
    (110) 5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3';
    (111) 5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3';
    (112) 5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3';
    (113) 5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3';
    (114) 5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3';
    (115) 5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3';
    (116) 5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3';
    (117) 5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3';
    (118) 5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3';
    (119) 5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3';
    (120) 5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3';
    (121) 5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3';
    (122) 5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3';
    (123) 5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3';
    (124) 5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3';
    (125) 5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3';
    (126) 5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3';
    (127) 5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3';
    (128) 5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3';
    (129) 5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3';
    (130) 5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3';
    (131) 5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3';
    (132) 5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3';
    (133) 5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3';
    (134) 5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3';
    (135) 5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3';
    (136) 5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3';
    (137) 5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3';
    (138) 5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3';
    (139) 5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3';
    (140) 5'-GGUAU-3';
    (141) 5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (142) 5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (143) 5'-GGCTTC-3';
    (144) 5'-GGCATC-3';
    (145) 5'-AGCTTC-3';
    (146) 5'-GGAATC-3';
    (147) 5'-CACATC-3';
    (148) 5'-GGCCTC-3';
    (149) 5'-CACTTC-3';
    (150) 5'-AAGATC-3';
    (151) 5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3';
    (152) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (153) 5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3';
    (154) 5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (155) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (156) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (157) 5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3';
    (158) 5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3';
    (159) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (160) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (161) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (162) 5'-GACTATACGCGCAATA-3';
    (163) 5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3';
    (164) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (165) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (166) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (167) 5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3';
    (168) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (169) 5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3';
    (170) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (171) 5'-AGGACTCCAGATGTTT-3';
    (172) 5'-GTGATCTTGACATGCT-3';
    (173) 5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3';
    (174) 5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3';
    (175) 5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3';
    (176) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (177) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (178) 5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3';
    (179) 5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3';
    (180) 5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (181) 5'-GGUA-3';
    (182) 5'-GUAU-3';
    (183) 5'-GGU-3';
    (184) 5'-GUA-3';
    (185) 5'-GUC-3';
    (186) 5'-GUG-3';
    (187) 5'-GUU-3';
    (188) 5'-GUA-3';
    (189) 5'-GGC-3';
    (190) 5'-AUC-3';
    (191) 5'-GAA-3';
    (192) 5'-GAG-3';
    (193) 5'-GGA-3';
    (194) 5'-GAC-3';
    (195) 5'-GAU-3';
    (196) 5'-AUG-3';
    (197) 5'-GCG-3';
    (198) 5'-UUC-3';
    (199) 5'-GCC-3';
    (200) 5'-GGG-3';
    (201) 5'-AUU-3';
    (202) 5'-GCA-3';
    (203) 5'-AGC-3';
    (204) 5'-AAC-3';
    (205) 5'-CCA-3';
    (206) 5'-UGC-3';
    (207) 5'-CAA-3';
    (208) 5'-CGG-3';
    (209) 5'-ACC-3';
    (210) 5'-AGA-3';
    (211) 5'-TTT-3';
    (212) 5'-TCT-3' 및
    및
    (213) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (212)의 모티프 또는 서열의 변이체.
  50. 제49항에 있어서, 올리고뉴클레오티드를 변형시키는 단계가 뉴클레오티드의 서열을 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 부가하여, 변형된 올리고뉴클레오티드가 모티프를 포함하도록 하는 것을 포함하는 방법.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 변형된 올리고뉴클레오티드의 TLR7 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계 및 TLR7 활성을 비변형된 올리고뉴클레오티드보다 더 큰 정도로 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  52. 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR7을 인코딩하는 전사물 또는 이의 상보체에 결합하지 않거나, 이에 결합하도록 설계되지 않는 방법.
  53. 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 TLR7을 인코딩하지 않는 표적 전사물 또는 이의 상보체에 결합하거나, 이에 결합하도록 설계되는 방법.
  54. 제48항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 (a) 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 11개 염기 내에; (b) 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 8개 염기 내에; 및/또는 (c) 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단에 또는 이의 부근에 존재하는 방법.
  55. 제48항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가
    a) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 5' 영역,
    b) 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역, 및
    c) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 3' 영역을 포함하는 방법.
  56. 제55항에 있어서, 중간 영역이 약 10개 염기 길이이고/이거나 5' 영역 및/또는 3' 영역이 (a) 약 3개 염기 길이; 또는 (b) 약 5개 염기 길이인 방법.
  57. 제48항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 서열 5'-GGUAUC-3', 5'-AGUCUC-3', 5'-GGUCCC-3', 5'-GGUCUC-3', 5'-AAGCUC-3', 5'-AGUCCC-3', 5'-GGUAUA-3', 5'-UGUUUC-3', 5'-UGUGUC-3', 5'-CGUUUC-3', 5'-CGUGUC-3', 5'-GGUAU-3', 5'-GGUA-3', 5'-GUAU-3', 5'-GGU-3', 5'-GUA-3', (185) 5'-GUC-3'; 5'-GUG-3'; 5'-GUU-3'; 5'-GUA-3'; 5'-GGC-3'; 5'-AUC-3'; 5'-GAA-3'; 5'-GAG-3'; 5'-GGA-3'; 5'-GAC-3'; 5'-GAU-3'; 5'-AUG-3'; 5'-GCG-3'; 5'-UUC-3'; 5'-GCC-3'; 5'-GGG-3'; 5'-AUU-3'; 5'-GCA-3'; 5'-AGC-3'; 5'-AAC-3'; 5'-CCA-3'; 5'-UGC-3'; 5'-CAA-3'; 5'-CGG-3'; 5'-ACC-3'; 5'-AGA-3'을 가지며, U가 T일 수 있는 방법.
  58. 제48항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 5'-GGUAUC-3', 5'-GGUATC-3', 5'-AGUCTC-3', 5'-AGTCTC-3', 5'-GGUCCC-3', 5'-GGUCTC-3', 5'-AAGCUC-3', 5'-AGTCCC-3', 5'-GGUATA-3', 5'-UGUTTC-3', 5'-UGUGTC-3', 5'-CGUTTC-3', 5'-CGUGTC-3', 5'-GGUAU-3', 5'-GGUAT-3', 5'-GGUA-3', 5'-GUAU-3', 5'-GUAT-3', 5'-GGU-3' 또는 5'-GUA-3'의 서열을 갖는 방법.
  59. 제48항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프의 염기 중 하나 이상이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  60. 제48항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 모티프가 5'-mGmGmUATC-3', 5'-mAmGmUCTC-3', 5'-mAmGTCTC-3', 5'-mGmGmUmCmCC-3', 5'-mGmGmUmCTC-3', 5'-AAGCmUmC-3', 5'-AGTCCC-3', 5'-mGmGmUATA-3', 5'-mUmGmUTTC-3', 5'-mUmGmUGTC-3', 5'-mCmGmUTTC-3', 5'-mCmGmUGTC-3', 5'-mGmGmUAU-3', 5'-mGmGmUAT-3', 5'-mGmGmUmAU-3', 5'-mGmGmUmAT-3', 5'-mGmGmUmAmU-3', 5'-mGmGmUmA-3', 5'-mGmUmAmU-3', 5'-mGmGmU-3' 또는 5'-mGmUmA-3'의 서열을 가지며, m이 변형된 염기이고/이거나 변형된 백본을 갖는 방법.
  61. TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    5'-CUUCG-3';
    5'-CUUCGTG-3';
    5'-CUUCGTGGG-3';
    5'-UCG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CGG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-CGC-3';
    5'-AGG-3';
    5'-GGA-3';
    5'-GGC-3';
    5'-AGA-3';
    5'-CGA-3';
    5'-UAG-3';
    5'-UCU-3';
    5'-AGC-3';
    5'-GGU-3';
    5'-UGA-3';
    5'-AGU-3';
    5'-ACG-3';
    5'-CGU-3';
    5'-UCC-3';
    5'-GCG-3';
    5'-GGG-3';
    5'-UGU-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CUG-3';
    5'-UUG-3';
    5'-UUA-3';
    5'-UGC-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  62. 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 증가시키거나 강화시키거나, 올리고뉴클레오티드의 강화 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    5'-CUUCG-3';
    5'-CUUCGTG-3';
    5'-CUUCGTGGG-3';
    5'-UCG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CGG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-CGC-3';
    5'-AGG-3';
    5'-GGA-3';
    5'-GGC-3';
    5'-AGA-3';
    5'-CGA-3';
    5'-UAG-3';
    5'-UCU-3';
    5'-AGC-3';
    5'-GGU-3';
    5'-UGA-3';
    5'-AGU-3';
    5'-ACG-3';
    5'-CGU-3';
    5'-UCC-3';
    5'-GCG-3';
    5'-GGG-3';
    5'-UGU-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CUG-3';
    5'-UUG-3';
    5'-UUA-3';
    5'-UGC-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
  63. TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    5'-GAG-3';
    5'-GAC-3';
    5'-GAU-3';
    5'-GAA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-GUU-3';
    5'-GUA-3';
    5'-GUG-3';
    5'-AUA-3';
    5'-AUG-3';
    5'-CUU-3';
    5'-AAG-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCC-3';
    5-GCU-3';
    5'-CCU-3';
    5'-CUA-3'
    5'-CUC-3';
    5'-AAC-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR8 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  64. 올리고뉴클레오티드의 TLR8 저해 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    5'-GAG-3';
    5'-GAC-3';
    5'-GAU-3';
    5'-GAA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-GUU-3';
    5'-GUA-3';
    5'-GUG-3';
    5'-AUA-3';
    5'-AUG-3';
    5'-CUU-3';
    5'-AAG-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCC-3';
    5-GCU-3';
    5'-CCU-3';
    5'-CUA-3';
    5'-CUC-3';
    5'-AAC-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
  65. TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하거나 설계하는 방법으로서,
    i) 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 갖는 영역에 대하여 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보체를 스캐닝하는 단계로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 단계:
    5'-TAC-3';
    5'-CGC-3';
    5'-GCA-3';
    5'-UGA-3';
    5'-CAG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-TGA-3';
    5'-CGT-3';
    5'-GAC-3';
    5'-CCA-3';
    5'-TAG-3';
    5'-TGG-3';
    5'-TCA-3';
    5'-TGC-3';
    5'-CAC-3';
    5'-CGG-3';
    5'-CCC-3';
    5'-ACT-3';
    5'-GTA-3';
    5'-GGA-3';
    5'-AAG-3';
    5'-ATA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-UCC-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCG-3';
    5'-CAA-3';
    5'-GAU-3';
    5'-CGA-3'; 및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체;
    ii) 모티프를 포함하는 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드를 생성하는 단계;
    iii) 하나 이상의 후보 올리고뉴클레오티드의 TLR3 활성을 저해하는 능력을 시험하는 단계, 및
    iv) TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드를 선택하는 단계를 포함하는 방법.
  66. 올리고뉴클레오티드의 TLR3 저해 활성을 증가시키는 방법으로서, 올리고뉴클레오티드를 변형시켜, 변형된 올리고뉴클레오티드가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 모티프를 포함하도록 하는 단계를 포함하고,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는, 방법:
    5'-TAC-3';
    5'-CGC-3';
    5'-GCA-3';
    5'-UGA-3';
    5'-CAG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-TGA-3';
    5'-CGT-3';
    5'-GAC-3';
    5'-CCA-3';
    5'-TAG-3';
    5'-TGG-3';
    5'-TCA-3';
    5'-TGC-3';
    5'-CAC-3';
    5'-CGG-3';
    5'-CCC-3';
    5'-ACT-3';
    5'-GTA-3';
    5'-GGA-3';
    5'-AAG-3';
    5'-ATA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-UCC-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCG-3';
    5'-CAA-3';
    5'-GAU-3';
    5'-CGA-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체.
  67. 제12항, 제13항, 제22항, 제23항, 제36항 내지 제47항, 제59항 또는 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 염기가 2'-O-메틸, 2'-O-메톡시에톡시, 2'-플루오로, 2'-알릴, 2'-O-[2-(메틸아미노)-2-옥소에틸], 4'-티오, 4'-CH2-O-2'-가교, 4'-(CH2)2-O-2'-가교, 2'-LNA, 2'-아미노, 플루오로아라비노뉴클레오티드, 트레오스 핵산 또는 2'-O--(N-메틀리카바메이트)를 포함하는 방법.
  68. 제12항, 제13항, 제22항, 제23항, 제36항 내지 제47항, 제59항 또는 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 백본이 포스포로티오에이트, 비-가교 산소 원자 치환 황 원자, 포스포네이트, 예컨대 메틸포스포네이트, 포스포디에스테르, 포스포로모르폴리데이트, 포스포로피페라지데이트, 아미드, 메틸렌(메틸아미노), 프롬아세탈, 티오포름아세탈, 펩티드 핵산 또는 포스포로아미데이트, 예컨대 모르폴리노 포스포로디아미데이트(PMO), N3'-P5' 포스포르아미다이트 또는 티오포스포로아미다이트를 포함하는 방법.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드의 적어도 일부가 리보핵산, 데옥시리보핵산, DNA 포스포로티오에이트, RNA 포스포로티오에이트, 2'-O-메틸-올리고뉴클레오티드, 2'-O-메틸-올리고데옥시리보뉴클레오티드, 2'-O-하이드로카르빌 리보핵산, 2'-O-하이드로카르빌 DNA, 2'-O-하이드로카르빌 RNA 포스포로티오에이트, 2'-O-하이드로카르빌 DNA 포스포로티오에이트, 2'-F-포스포로티오에이트, 2'-F-포스포디에스테르, 2'-메톡시에틸 포스포로티오에이트, 2-메톡시에틸 포스포디에스테르, 데옥시 메틸렌(메틸이미노)(데옥시 MMI), 2'-O-하이드로카르비 MMI, 데옥시-메틸포스-포네이트, 2'-O-하이드로카르빌 메틸포스포네이트, 모르폴리노, 4'-티오 DNA, 4'-티오 RNA, 펩티드 핵산, 3'-아미데이트, 데옥시 3'-아미데이트, 2'-O-하이드로카르빌 3'-아미데이트, 잠금(locked) 핵산, 사이클로헥산 핵산, 트리사이클-DNA, 2'플루오로-아라비노 핵산, N3'-P5' 포스포로아미데이트, 카바메이트 연결, 포스포트리에스테르 연결, 나일론 백본 변형 및 이들의 임의의 조합이거나 이를 갖는 방법.
  70. 제12항, 제13항, 제22항, 제23항, 제36항 내지 제47항, 제59항 또는 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 염기가
    (a) 2'O-메틸 및 포스포로티오에이트 백본;
    (b) 2'-LNA 및 포스포로티오에이트 백본; 또는
    (c) 2'-O-메톡시에톡시 및 포스포로티오에이트 백본을 포함하는 방법.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드의 염기 중 적어도 하나가 표적 폴리뉴클레오티드에 혼성화되지 않는 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 유전자 침묵화를 위한 이중 가닥 올리고뉴클레오티드인 방법.
  73. 제72항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 갭머 안티센스 올리고뉴클레오티드인 방법.
  74. 제72항 또는 제73항에 있어서, 모티프 또는 올리고뉴클레오티드의 하나 이상의 염기가 생체내에서 엔도뉴클레아제에 의해 제거되는 방법.
  75. 제72항에 있어서, 유전자 침묵화를 위한 이중 가닥 올리고뉴클레오티드가 siRNA 또는 shRNA인 방법.
  76. 제1항, 제5항 내지 제14항, 제18항 내지 제24항, 제28항 내지 제48항 또는 제52항 내지 75항 중 어느 한 항에 따른 방법을 사용하여 선택되거나 설계되거나, 제2항 내지 제13항, 제15항 내지 제23항, 제25항 내지 제41항 또는 제49항 내지 75항 중 어느 한 항에 따른 방법을 사용하여 변형되는 올리고뉴클레오티드.
  77. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUUUC-3';
    (8) 5'-CGUGUC-3';
    (9) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (10) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (11) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (12) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (13) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (14) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (16) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (17) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (18) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (19) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (20) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (21) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (22) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (23) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (24) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (25) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (26) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (27) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (28) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (29) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (30) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (31) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (32) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (33) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (34) 5'-GGUCCCATCCCTTCTGCUGC-3';
    (35) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (36) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (37) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (38) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (39) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (40) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (41) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (42) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (43) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (44) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (45) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (46) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (47) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (48) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (49) 5'-GCGGUATCCATCAGAUAUCG-3';
    (50) 5'-CUUUAGTCGTAGTTGUCUCU-3';
    (51) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (52) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (53) 5'-UCCGGCCTCGGGAGAUCUCU-3';
    (54) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (55) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (56) 5'-GGUAU-3';
    (57) 5'-GGUA-3';
    (58) 5'-GUAU-3';
    (59) 5'-GGU-3';
    (60) 5'-GUA-3';
    (61) 5'-TGTCTG-3';
    (62) 5'-GTCT-3';
    (63) 5'-TCTCCG-3';
    (64) 5'-CTCC-3';
    (65) 5'-[G/A][A/C]AG[G/C][T/C]T[C/A];
    (66) 5'-AAAGGTTA-3';
    (67) 5'-GAAGCTTC-3';
    (68) 5'-GCAGGCTC-3';
    (69) 5'-A[G/A]GGTT-3';
    (70) 5'-AGGGTT-3';
    (71) 5'-AAGGTT-3';
    (72) 5'-GGTT-3';
    (73) 5'-[A/G]GCT[T/C][T/C][G/C][T/A]-3';
    (74) 5'-AGCTTCCT-3';
    (75) 5'-AGCTTCGA-3';
    (76) 5'-GGCTTCGT-3';
    (77) 5'-TGCTTCCT-3';
    (78) 5'-AGCTCTCT-3';
    (79) 5'-G[G/C]TT-3';
    (80) 5'-GCTT-3';
    (81) 5'-CGGAGGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (82) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTGGAGC-3';
    (83) 5'-GGGAAAGGTTATGCAAGGTC-3';
    (84) 5'-CTGTGATCTTGACATGCTGC-3';
    (85) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (86) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (87) 5'-GAGTCTCTGGAGCTTCCTCT-3';
    (88) 5'-AGTCGTAGTTGCTTCCTAAC-3';
    (89) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (90) 5'-TTGGCTCGGCTTGCCTACTT-3';
    (91) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (92) 5'-TCGCACTTCAGTCTGAGCAG-3';
    (93) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (94) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (95) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (96) 5'-GCGGAGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (97) 5'-CCAAGATCAGCAGTCT-3';
    (98) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (99) 5'-GCACACTTCGTACCCA-3';
    (100) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (101) 5'-CGTATTATAGCCGATT-3';
    (102) 5'-GCAGGCTCAGTGATGT-3';
    (103) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (104) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (105) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (106) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (107) 5'-TGGCCTCCCATCTCCT-3';
    (108) 5'-ATCTGGCAGCCCATCA-3';
    (109) 5'-GAGGTCTTGGCTTCGT-3';
    (110) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (111) 5'-TTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (112) 5'-CCACTTGGCAGACCAT-3';
    (113) 5'-CCATCCATGAGGTCCT-3';
    (114) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (115) 5'-TCTTCATCGGCCCTGC-3';
    (116) 5'-CCAGCAGGTCAGCAAA-3';
    (117) 5'-CGCTTTTCTCTCCGGT-3';
    (118) 5'-GGUAUAGGACTCCAGATGUUUCC-3'; 및
    (119) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (118)의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 cGAS 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  78. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    (1) 5'[C/U]CUUCU-3';
    (2) 5'-CACCCTTCTCTCTGGUCCCA-3';
    (3) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (4) 5'-UCUCUGGTCCCATCCCUUCU-3';
    (5) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (6) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (7) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (8) 5'-CAGGCCTCCAGTGTCUUCUC-3';
    (9) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3'; 및
    (10) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (9)의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 사이클릭-GMP-AMP 신타제(cGAS) 활성을 저해하지 않거나, 이의 감소된 저해를 나타내는 올리고뉴클레오티드.
  79. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    (1) 5'-G[G/C]CCT[C/G]-3';
    (2) 5'-CUU-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 및/또는 3' 말단의 10개 염기 내에 존재함);
    (3) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (4) 5'-CUUCUCTCTGGTCCCAUCCC-3';
    (5) 5'-CCUUCTCTCTGGTCCCAUCC-3';
    (6) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (7) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (8) 5'-CUUCCACAATCAAGACAUUC-3';
    (9) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC-3';
    (10) 5'-CACUUCGTGGGGTCCUUUUC-3';
    (11) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (12) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (13) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (14) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (15) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (16) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (17) 5'-UCCGGCCTCGGCAGAUAUCG-3';
    (18) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (19) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (20) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (21) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (22) 5'-CAUUAGGTGCAGAAAUCUUC-3';
    (23) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (24) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (25) 5'-UCCGGGTCGTAGTTGCUUCC-3';
    (26) 5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3';
    (27) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (28) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (29) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (30) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (31) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (32) 5'-ACA-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (33) 5'-CAC-3'(여기서 모티프는 올리고뉴클레오티드의 5' 말단에 또는 이의 부근에 존재함);
    (34) 5'-ACACTTCGTGGGGTCCTTTT-3';
    (35) 5'-GCGTGTCTGGAAGCTTCCTT-3';
    (36) 5'-TCAAAGGACTGAGGAAAGGG-3';
    (37) 5'-ATCCAACACTTCGTGGGGTC-3';
    (38) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCTGG-3';
    (39) 5'-GGGTATCGAAAGAGTCTGGA-3';
    (40) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (41) 5'-GCGACTATACGCGCAATATG-3';
    (42) 5'-ACTGACTGTCTTGAGGGTTC-3';
    (43) 5'-AACACTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (44) 5'-GTCCAAGATCAGCAGTCTCA-3';
    (45) 5'-ACAGTGTTGAGATACTCGGG-3';
    (46) 5'-TGGGCTGGAATCCGAGTTAT-3';
    (47) 5'-CGGCATCCACCACGTCGTCC-3';
    (48) 5'-GCGTATTATAGCCGATTAAC-3';
    (49) 5'-GGAGGTCTTGGCTTCGTGGA-3';
    (50) 5'-TGGGTTACGGCTCAGTATGG-3';
    (51) 5'-CCGCCATGTTTCTTCTTGGA-3';
    (52) 5'-AGCTTCGAGGCCCCAG-3';
    (53) 5'-GCCATGTTTCTTCTTG-3';
    (54) 5'-CACTTCGTGGGGTCCT-3';
    (55) 5'-CGGCCTCGGAAGCTCT-3';
    (56) 5'-ACACTTCGTGGGGTCC-3';
    (57) 5'-TGCACACTTCGTACCC-3';
    (58) 5'-CCACATCCTGTGGCTC-3';
    (59) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (60) 5'-ACTTCGTGGGGTCCTT-3';
    (61) 5'-CCCACTTGGCAGACCA-3';
    (62) 5'-GTCCCCTGTTGACTGG-3';
    (63) 5'-ACGTTCAGTCCTGTCC-3';
    (64) 5'-GGTCATTACAATAGCT-3';
    (65) 5'-TCGTGGGGTCCTTTTC-3';
    (66) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (67) 5'-ATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (68) 5'-TGCTCCTCGGTCTCCC-3';
    (69) 5'-GCATCCACCACGTCGT-3';
    (70) 5'-CTTCGTGGGGTCCTTT-3';
    (71) 5'-AGGCCCTTCGCACTTC-3';
    (72) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (73) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (74) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3'
    (75) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (76) 5'-GCGGUATCC-3';
    (77) 5'-GCUGUTTCC-3';
    (78) 5'-GCUGUGTCC-3';
    (79) 5'-GCCGUTTCC-3';
    (80) 5'-CUUCGTGGGGTCCTTUUCAC;
    (81) 5'-CUUCGTGGG-3';
    (82) 5'-UCG-3';
    (83) 5'-ACG-3';
    (84) 5'-ACC-3';
    (85) 5'-CGC-3';
    (86) 5'-GAU-3';
    (87) 5'-GGG-3';
    (88) 5'-AGC-3';
    (89) 5'-UUC-3';
    (90) 5'-UUG-3';
    (91) 5'-CAC-3';
    및
    (92) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (91)의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어진 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우에 TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  80. a) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 5' 영역,
    b) 리보핵산, 데옥시리보핵산 또는 이들의 조합, 변형된 백본을 선택적으로 갖는 염기를 포함하는 중간 영역으로서, 중간 영역의 염기 중 적어도 약 50%가 아데닌 염기인 중간 영역; 및
    c) 변형되고/되거나 변형된 백본을 갖는 염기를 포함하는 3' 영역을 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 TLR9 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  81. 제80항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    (1) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (2) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (3) 5'-CUUGUGAAAAGATTAUCUUC-3';
    (4) 5'-CCUAGAAAGAAGCAAAGAUU-3';
    (5) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3'; 및
    (6) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (5)의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있는 올리고뉴클레오티드.
  82. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    (1) 5'-[A/G]GU[A/C][U/C]C-3';
    (2) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C-3';
    (3) 5'-A[G/A][U/G]C[U/C]C[U/C][C/A]U-3';
    (4) 5'-GGUAUA-3';
    (5) 5'-UGUUUC-3';
    (6) 5'-UGUGUC-3';
    (7) 5'-CGUGUC-3';
    (8) 5'-GCAGUCTCCATGTCCCAGGC-3';
    (9) 5'-GAUGGTTCCAGTCCCUCUUC-3';
    (10) 5'-AGCAGTCTCCATGTCCCAGG-3';
    (11) 5'-GGGUCTCCTCCACACCCUUC-3';
    (12) 5'-GGUGGCCACAGGCAACGUCA-3';
    (13) 5'-GCCGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (14) 5'-GCGGUATCCATGTCCCAGGC-3';
    (15) 5'-GCGGUATACAGGTCCCAGGC-3';
    (16) 5'-GCUGUTTCCATGTCCCAGGC-3';
    (17) 5'-GCUGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (18) 5'-GCCGUGTCCATGTCCCAGGC-3';
    (19) 5'-GCGGUAUCCAUGUCCCAGGC-3';
    (20) 5'-GGUATCCCCCCCCCCCCCCC-3';
    (21) 5'-GUCCCATCCCTTCTGCUGCC-3';
    (22) 5'-UUCUCTCTGGTCCCAUCCCU-3';
    (23) 5'-GUUCAGTCAGATCGCUGGGA-3';
    (24) 5'-AUGACATTTCGTGGCUCCUA-3';
    (25) 5'-UCUCCATGTCCCAGGCCUCC-3';
    (26) 5'-AGUCUCCATGTCCCAGGCCU-3';
    (27) 5'-CCAUGTCCCAGGCCTCCAGU-3';
    (28) 5'-GCAAGGCAGAGAAACUCCAG-3';
    (29) 5'-GGAUUAAAACAGATTAAUAC-3';
    (30) 5'-AGCCGAACAGAAGGAGCGUC-3';
    (31) 5'-UCCGGCCTCGGAAGCUCUCU-3';
    (32) 5'-UCCGGCCTCGGAGTCUCCAU-3';
    (33) 5'-GCGGUATCCATAGTCUCCAU-3';
    (34) 5'-GAUUAAAACAGATTAAUACA-3';
    (35) 5'-UGACAAAACAATAATAACAG-3';
    (36) 5'-CCAACACTTCGTGGGGUCCU-3';
    (37) 5'-GUGUCCTTCATGCTTUGGAU-3';
    (38) 5'-GUCCCAGGCCTCCAGUGUCU-3';
    (39) 5'-UUGGCCTGTGGATGCUUUGU-3';
    (40) 5'-GUCCGTACCTCCACCCACCG-3';
    (41) 5'-GUGUUTTTAATTTTGUAGAG-3';
    (42) 5'-GUCAAACCTAGAAAGAAGCA-3';
    (43) 5'-GGUCUCCTCCACACCCUUCU-3';
    (44) 5'-GUCUCCTCCACACCCUUCUC-3';
    (45) 5'-UGAUGATGCTTGCAGGAGGC-3';
    (46) 5'-UUAAATAATCTAGTTUGAAG-3';
    (47) 5'-AAAGCAGTCTCCATGUCCCA-3';
    (48) 5'-GCGUAGTTTCTCTTCCUCCC-3';
    (49) 5'-UCUGGTCCCATCCCTUCUGC-3';
    (50) 5'-UAUUUCCACATGCCCAGUGU-3';
    (51) 5'-UGUUUCCCCGGAGAGCAAUG-3';
    (52) 5'-UUAGCTCCTTGCCTCGUUCC-3';
    (53) 5'-AUUUCCACATGCCCAGUGUU-3';
    (54) 5'-UGGCGTAGTTTCTCTUCCUC-3';
    (55) 5'-UGACATTTCGTGGCTCCUAC-3';
    (56) 5'-GAAAAGATTATCTTCUUUUA-3';
    (57) 5'-UGUGAAAAGATTATCUUCUU-3';
    (58) 5'-UUGUGAAAAGATTATCUUCU-3';
    (59) 5'-UUUGAAATTCAGAAGAUUUG-3';
    (60) 5'-AAGCAGTCTCCATGTCCCAG-3';
    (61) 5'-AGGAUTAAAACAGATUAAUA-3';
    (62) 5'-AGAUUATCTTCTTTTAAUUU-3';
    (63) 5'-UCCCAACTCTTCTAACUCGU-3';
    (64) 5'-UAAAATAAGGGGAATAGGGG-3';
    (65) 5'-AGUGGCACATACCACACCCU-3';
    (66) 5'-AAGAUTATCTTCTTTUAAUU-3';
    (67) 5'-AGAAAGAAGCAAAGAUUCAA-3';
    (68) 5'-UCCCATCCCTTCTGCUGCCA-3';
    (69) 5'-ACCCUTCTCTCTGGTCCCAU-3';
    (70) 5'-AAUAUCTGCTGCCCACCUUC-3';
    (71) 5'-UCUCUCTGGTCCCATCCCUU-3';
    (72) 5'-AGGCCTCCAGTGTCTUCUCC-3';
    (73) 5'-CAAGCCCCAGCGTTCCUCCG-3';
    (74) 5'-AAAUGTCCTGGCCCTCACUG-3';
    (75) 5'-AAUUUAAAGCATGAAUAUUA-3';
    (76) 5'-AAAAGATTATCTTCTUUUAA-3';
    (77) 5'-AUAUCTGCTGCCCACCUUCU-3';
    (78) 5'-CAGUCTCCATGTCCCAGGCC-3';
    (79) 5'-AAAGATTATCTTCTTUUAAU-3';
    (80) 5'-CCCUUCTCTCTGGTCCCAUC-3';
    (81) 5'-AUGGCCTTTCCGTGCCAAGG-3';
    (82) 5'-GCAUUCCGTGCGGAAGCCUU-3';
    (83) 5'-GGCCGAACTTTCCCGCCUUA-3';
    (84) 5'-GGUCUTGGCTTCGTGGAGCA-3';
    (85) 5'-GGAGCTTCGAGGCCCCAGGC-3';
    (86) 5'-GGUGGTCCACAACCCCUUUC-3';
    (87) 5'-UUCUGGGGACTTCCAGUUUA-3';
    (88) 5'-UGAUUCCAAAGCCAGGGUUA-3';
    (89) 5'-GGGUATCGAAAGAGTCUGGA-3';
    (90) 5'-CUUGCACGTGGCTTCGUCUC-3';
    (91) 5'-GUGUCCTTGCACGTGGCUUC-3';
    (92) 5'-GUAAAAAGCTTTTGAAGUGA-3';
    (93) 5'-AUGCCATCCACTTGAUAGGC-3';
    (94) 5'-UGAAGTAAAAATCAAUAGCG-3';
    (95) 5'-AAGGCCCTTCGCACTUCUUA-3';
    (96) 5'-GUACUCGTCGGCATCCACCA-3';
    (97) 5'-GUCCUTGCACGTGGCUUCGU-3';
    (98) 5'-GCCCATCCATGAGGTCCUGG-3';
    (99) 5'-GUAAAAGGAGAAAACUAUCU-3';
    (100) 5'-UUGAAGTGAAGTAAAAGGAG-3';
    (101) 5'-GUUACTCGTGCCTTGGCAAA-3';
    (102) 5'-GUCCAAGATCAGCAGUCUCA-3';
    (103) 5'-UUCAATGGGAGAATAAAGCA-3';
    (104) 5'-GCAAGGCCCTTCGCACUUCU-3';
    (105) 5'-GGGUCCACCACTAGCCAGUA-3';
    (106) 5'-GUAGAGAAATTATTTUAGGA-3';
    (107) 5'-AUCCACCACGTCGTCCAUGU-3';
    (108) 5'-GGCAUCCACCACGTCGUCCA-3';
    (109) 5'-UUACUTTAAAAGCAAAAGGA-3';
    (110) 5'-UUUGAAGTGAAGTAAAAGGA-3';
    (111) 5'-GAAGUGAAGTAAAAGGAGAA-3';
    (112) 5'-GGCCATCTCTGCTTCUUGGU-3';
    (113) 5'-UGGGCTGGAATCCGAGUUAU-3';
    (114) 5'-GGAGATTTCAGAGCAGCUUC-3';
    (115) 5'-UUUACGGTTTTCAGAAUAUC-3';
    (116) 5'-GCGUGTCTGGAAGCTUCCUU-3';
    (117) 5'-GCUUATTTTAAGCATAUUAA-3';
    (118) 5'-UUAUUTTAAGCATATUAAAA-3';
    (119) 5'-UUCUGCAGCTTCCTTGUCCU-3';
    (120) 5'-AUUACTTTAAAAGCAAAAGG-3';
    (121) 5'-AUUUUAAGCATATTAAAAAG-3';
    (122) 5'-UGUGGCTTGTCCTCAGACAU-3';
    (123) 5'-AAAAGGAGAAAACTAUCUUC-3';
    (124) 5'-GGGUCCATACCCAAGGCAUC-3';
    (125) 5'-ACAGUGTTGAGATACUCGGG-3';
    (126) 5'-GGAUCTGCATGCCCTCAUCU-3';
    (127) 5'-AGUAAAAAGCTTTTGAAGUG-3';
    (128) 5'-GUCGUGGCAAATAGTCCUAG-3';
    (129) 5'-GGAGATCAGATGAGAGGAGC-3';
    (130) 5'-GUGGUTAAGTACATGAGCUC-3';
    (131) 5'-GGACACTTAGCTGTTCCUCG-3';
    (132) 5'-GUCUCTACTGTTACCUCUGA-3';
    (133) 5'-GAGUUCTTCGTAGGCUUCUG-3';
    (134) 5'-AAAGUCAAAAAGAAAAACUG-3';
    (135) 5'-AAAAGTGGGAAATAAAGGUU-3';
    (136) 5'-AGUUUATAGATTTCAAGUAG-3';
    (137) 5'-AAAAAGTGGGAAATAAAGGU-3';
    (138) 5'-UUUAUATTACAAAGCUACUU-3';
    (139) 5'-UGCUATTCATATTTTUAUUU-3';
    (140) 5'-GGUAU-3';
    (141) 5'-[G/A/C][G/A][G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (142) 5'-[G/A/C]G[G/A/C][T/A/C]TC-3';
    (143) 5'-GGCTTC-3';
    (144) 5'-GGCATC-3';
    (145) 5'-AGCTTC-3';
    (146) 5'-GGAATC-3';
    (147) 5'-CACATC-3';
    (148) 5'-GGCCTC-3';
    (149) 5'-CACTTC-3';
    (150) 5'-AAGATC-3';
    (151) 5'-TGTCCTTGCACGTGGCTTCG-3';
    (152) 5'-TTTGCACACTTCGTACCCAA-3';
    (153) 5'-GTCCACATCCTGTGGCTCGT-3';
    (154) 5'-TGTGATGGCCTCCCATCTCC-3';
    (155) 5'-GGTTTTGGCTGGGATCAAGT-3';
    (156) 5'-GGTGTCCTTGCACGTGGCTT-3';
    (157) 5'-GGTCCATACCCAAGGCATCC-3';
    (158) 5'-GTGTCTTCATCGGCCCTGCC-3';
    (159) 5'-GTCTTGGCTTCGTGGAGCAG-3';
    (160) 5'-GCTGACAAAGATTCACTGGT-3';
    (161) 5'-GAAAGGTTATGCAAGG-3';
    (162) 5'-GACTATACGCGCAATA-3';
    (163) 5'-TGTGATGGCCTCCCAT-3';
    (164) 5'-TCCAACACTTCGTGGG-3';
    (165) 5'-GTGTCTGGAAGCTTCC-3';
    (166) 5'-CTTGAAGCATCGTATC-3';
    (167) 5'-TCGTAGTTGCTTCCTA-3';
    (168) 5'-CGCTTTTCTGTCTGGT-3';
    (169) 5'-GGCTGGAATCCGAGTT-3';
    (170) 5'-GATAGCACCTTCAGCA-3';
    (171) 5'-AGGACTCCAGATGTTT-3';
    (172) 5'-GTGATCTTGACATGCT-3';
    (173) 5'-AGATTTCAGAGCAGCT-3';
    (174) 5'-GGTTACGGCTCAGTAT-3';
    (175) 5'-GTTCAGTCCTGTCCAT-3';
    (176) 5'-AGGTCTTGGCTTCGTG-3';
    (177) 5'-CTGCAGCTTCCTTGTC-3';
    (178) 5'-GTCCTTGCACGTGGCT-3';
    (179) 5'-GTCTCTGGAGCTTCCT-3';
    (180) 5'-GGTCTTGGCTTCGTGG-3';
    (181) 5'-GGUA-3';
    (182) 5'-GUAU-3';
    (183) 5'-GGU-3';
    (184) 5'-GUA-3';
    (185) 5'-GUC-3';
    (186) 5'-GUG-3';
    (187) 5'-GUU-3';
    (188) 5'-GUA-3';
    (189) 5'-GGC-3';
    (190) 5'-AUC-3';
    (191) 5'-GAA-3';
    (192) 5'-GAG-3';
    (193) 5'-GGA-3';
    (194) 5'-GAC-3';
    (195) 5'-GAU-3';
    (196) 5'-AUG-3';
    (197) 5'-GCG-3';
    (198) 5'-UUC-3';
    (199) 5'-GCC-3';
    (200) 5'-GGG-3';
    (201) 5'-AUU-3';
    (202) 5'-GCA-3';
    (203) 5'-AGC-3';
    (204) 5'-AAC-3';
    (205) 5'-CCA-3';
    (206) 5'-UGC-3';
    (207) 5'-CAA-3';
    (208) 5'-CGG-3';
    (209) 5'-ACC-3';
    (210) 5'-AGA-3';
    (211) 5'-TTT-3';
    (212) 5'-TCT-3'; 및
    (213) 이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 (1) 내지 (212)의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 TLR7 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  83. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    5'-CUUCG-3';
    5'-CUUCGTG-3';
    5'-CUUCGTGGG-3';
    5'-UCG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CGG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-CGC-3';
    5'-AGG-3';
    5'-GGA-3';
    5'-GGC-3';
    5'-AGA-3';
    5'-CGA-3';
    5'-UAG-3';
    5'-UCU-3';
    5'-AGC-3';
    5'-GGU-3';
    5'-UGA-3';
    5'-AGU-3';
    5'-ACG-3';
    5'-CGU-3';
    5'-UCC-3';
    5'-GCG-3';
    5'-GGG-3';
    5'-UGU-3';
    5'-UCA-3';
    5'-CUG-3';
    5'-UUG-3';
    5'-UUA-3';
    5'-UGC-3';
    및
    이와 적어도 약 75% 서열 동일성을 갖는 이의 모티프 또는 서열의 변이체
    를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 TLR8 활성을 강화시키는 올리고뉴클레오티드.
  84. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    5'-GAG-3';
    5'-GAC-3';
    5'-GAU-3';
    5'-GAA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-GUU-3';
    5'-GUA-3';
    5'-GUG-3';
    5'-AUA-3';
    5'-AUG-3';
    5'-CUU-3';
    5'-AAG-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCC-3';
    5-GCU-3';
    5'-CCU-3';
    5'-CUA-3';
    5'-CUC-3';
    5'-AAC-3'을 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 TLR8 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  85. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 모티프 또는 서열:
    5'-TAC-3';
    5'-CGC-3';
    5'-GCA-3';
    5'-UGA-3';
    5'-CAG-3';
    5'-UGG-3';
    5'-UCA-3';
    5'-TGA-3';
    5'-CGT-3';
    5'-GAC-3';
    5'-CCA-3';
    5'-TAG-3';
    5'-TGG-3';
    5'-TCA-3';
    5'-TGC-3';
    5'-CAC-3';
    5'-CGG-3';
    5'-CCC-3';
    5'-ACT-3';
    5'-GTA-3';
    5'-GGA-3';
    5'-AAG-3';
    5'-ATA-3';
    5'-GUC-3';
    5'-UCC-3';
    5'-AUC-3';
    5'-CCG-3';
    5'-CAA-3';
    5'-GAU-3';
    5'-CGA-3'을 포함하는 올리고뉴클레오티드로서,
    U가 T일 수 있고/있거나 T가 U일 수 있으며, 올리고뉴클레오티드가 대상체에게 투여되는 경우 TLR3 활성을 저해하는 올리고뉴클레오티드.
  86. 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물.
  87. 제86항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함하는 조성물.
  88. 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용 가능한 담체로 본질적으로 이루어진 조성물.
  89. 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 올리고뉴클레오티드 함량의 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100%가 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드인 조성물.
  90. 제86항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물의 올리고뉴클레오티드 함량의 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 100%가 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드인 조성물.
  91. 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 중 활성 약제학적 성분의 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 100%가 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드인 조성물.
  92. 세포에서의 표적 유전자의 발현을 감소시키는 방법으로서, 세포를 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제92항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  93. 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제92항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여함으로써, 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 단계를 포함하는 방법.
  94. 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하기 위한 약제의 제조에서의 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제92항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 용도.
  95. 대상체에서 질병, 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제92항 중 어느 한 항에 따른 조성물.
  96. 제93항, 제94항 또는 제95항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 질병, 장애 또는 질환에 관여하는 표적 유전자의 발현을 감소시키는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  97. 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이, 증가된, 과도한 또는 비정상적인 cGAS 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타내는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  98. 제97항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이 헌팅턴병, 파킨슨병, 운동-신경 질병(MND), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 프리온병, 전측두엽 치매, 외상성 뇌 손상, 알츠하이머병, 급성 췌장염, 실리카-유도 섬유증(Silica-induced fibrosis), 연령 의존성 황반 변성, 아이카디-구티에레스 증후군, 심근경색, 심부전, 다발성관절염/태아 및 신생아 빈혈, 전신 홍반성 루푸스, 급성 신장 손상, 알코올-관련 간 질병, 비-알코올 지방간 질병, 실리카 유도 폐 염증(silica driven lung inflammation), 만성 폐쇄성 폐 질병, 허혈성 뇌졸중 후 뇌 손상, 패혈증, 비-알코올성 지방간염(NASH), 암, 낫적혈구병, 염증성 장 질병, 제2형 당뇨병, 과다-영양-유도 비만, COVID-19, 조혈 장애, 연령-관련 염증, 큐티박테리움 아크네스(Cutibacterium acnes) 감염, B형 간염, 후안부 안구 질병, 관절염, 류마티스 관절염, 폐기종, 대장암, 피부암, 전이 및 유방암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  99. 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이, 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR9 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타내는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  100. 제99항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이 건선, 류마티스 관절염, 전신 탈모증, 급성 파종 뇌척수염, 에디슨병, 알레르기, 강직성 척추염, 항인지질 항체 증후군, 동맥경화증, 죽상동맥경화증, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 수포성 유사천포창, 샤가스병, 만성 폐쇄성 폐 질병, 셀리악병, 피부 홍반성 루푸스(CLE), 피부근염, 당뇨병, 확장성 심근병증(DC), 자궁내막증, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 화농성 한선염, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질병, 간질성 방광염, 국소피부굳음증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 심근염, 기면증, 신경근긴장증, 천포창, 악성빈혈, 다발성근염, 원발성 담즙성 경변증, 류마티스 관절염(RA), 조현병, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루푸스(SLE), 전신 경화증, 측두 동맥염, 혈관염, 백반, 외음부통, 베게너 육아종증, 외상성 통증, 신경병성 통증 및 아세트아미노펜 독성, 유방암, 자궁경부 편평 세포 암종, 위암종, 신경교종, 간세포 암종, 폐암, 흑색종, 전립선암, 재발성 교모세포종, 재발성 비-호지킨 림프종 및 대장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  101. 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이, 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR7 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타내는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  102. 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환이, 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR8 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타내는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  103. 제93항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 언급된 3가지 양태의 질병, 장애 또는 질환이, 증가된, 과도한 또는 비정상적인 TLR3 발현, 활성 및/또는 신호전달을 나타내는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  104. 제93항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이 노쇠-관련 질병, 장애 또는 질환, 예컨대 노화 및/또는 노화-관련 질병, 장애 또는 질환인 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  105. 제93항 내지 제97항, 제99항, 또는 제101항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 질병, 장애 또는 질환이 대상체로의 치료적 올리고뉴클레오티드의 투여와 연관된 염증성 질병, 장애 또는 질환인 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  106. 제105항에 있어서, 염증성 질병, 장애 또는 질환이 간 염증을 포함하는 방법, 용도 또는 올리고뉴클레오티드.
  107. 유효량의 제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 cGAS를 저해하는 방법.
  108. 세포를 유효량의 제76항 내지 제78항 중 어느 한 항의 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 cGAS를 저해하는 방법.
  109. 제108항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 세포에서 노쇠를 저해하거나 예방하는 방법.
  110. 제108항 또는 제109항에 있어서, 세포가 면역 세포인 방법.
  111. 유효량의 제76항 또는 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR9를 저해하는 방법.
  112. 세포를 유효량의 제76항 또는 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR9를 저해하는 방법.
  113. 유효량의 제76항 또는 제82항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR7을 저해하는 방법.
  114. 세포를 유효량의 제76항 또는 제82항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR7을 저해하는 방법.
  115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 RNA 분자에 반응하는 세포 또는 대상체에서의 TLR7 활성화를 적어도 부분적으로 저해하는 방법.
  116. 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR7 활성화를 저해하는 방법으로서, 세포를 유효량의 제76항 또는 제82항에 따른 올리고뉴클레오티드, 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  117. 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR7 활성화를 저해하는 방법으로서, 유효량의 제76항 또는 제82항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  118. 유효량의 제76항 또는 제84항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR8을 저해하는 방법.
  119. 세포를 유효량의 제76항 또는 제84항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR8을 저해하는 방법.
  120. 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화를 예방하거나 저해하는 방법으로서, 세포를 유효량의 제76항 또는 제84항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  121. 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화의 예방, 저해 방법으로서, 유효량의 제76항 또는 제84항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  122. 유효량의 제76항 또는 제85항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR3을 저해하는 방법.
  123. 세포를 유효량의 제76항 또는 제85항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR3을 저해하는 방법.
  124. 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR3 활성화를 예방하거나 저해하는 방법으로서, 세포를 유효량의 제76항 또는 제85항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  125. 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR3 활성화의 예방, 저해 방법으로서, 유효량의 제76항 또는 제85항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  126. 유효량의 제76항 또는 제83항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 TLR8을 강화시키거나 이의 활성을 증가시키는 방법.
  127. 세포를 유효량의 제76항 또는 제83항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 TLR8을 강화시키거나 이의 활성을 증가시키는 방법.
  128. 세포에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화를 증가시키거나 강화시키는 방법으로서, 세포를 유효량의 제76항 또는 제83항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  129. 대상체에서의 RNA 분자에 의한 TLR8 활성화를 증가시키거나 강화시키는 방법으로서, 유효량의 제76항 또는 제83항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  130. 제116항, 제117항, 제120항, 제121항, 제124항, 제125항, 제128항 또는 제129항에 있어서, RNA 분자가 mRNA 분자인 방법.
  131. 제130항에 있어서, mRNA 분자가 면역원성 조성물의 성분이거나, 그 안에 포함되는 방법.
  132. RNA 분자 및 제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물.
  133. 면역원성 조성물이 mRNA 백신 조성물인 제131항의 방법 또는 제132항의 면역원성 조성물.
  134. 제107항 내지 제110항, 제113항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 5'-GGUAUA-3', 5'-GGUAU-3', 5'-GGUA-3', 5'-GUAU-3', 5'-GGU-3' 또는 5'-GUA-3'의 서열을 포함하거나, 본질적으로 이로 이루어지거나, 이로 이루어지며, U가 T일 수 있는 방법 또는 면역원성 조성물.
  135. 본원에 개시되거나 본 출원의 명세서에 개별적으로 또는 집합적으로 나타난 단계, 특징, 정수, 조성물 및/또는 화합물, 및 상기 단계 또는 특징 중 둘 이상의 임의의 및 모든 조합.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US11873486B2 (en) * 2017-03-31 2024-01-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Modulating dsRNA editing, sensing, and metabolism to increase tumor immunity and improve the efficacy of cancer immunotherapy and/or modulators of intratumoral interferon
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