KR20230162788A - 항-세라마이드 항체를 이용한 상처 치유 증진 - Google Patents

항-세라마이드 항체를 이용한 상처 치유 증진 Download PDF

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KR20230162788A
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Abstract

본 개시내용은 상처 치유를 개선시키거나 가속화시키는 조성물 및 방법을 제공한다. 다양한 실시형태에서, 방법은 항-세라마이드 항체 및 항체 단편의 사용을 포함한다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.

Description

항-세라마이드 항체를 이용한 상처 치유 증진
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 3월 16일자로 출원된 미국 가출원 제63/161,758호의 계속 출원이며, 이의 내용은 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
서열 목록에 관한 진술
본 출원과 연관된 서열 목록은 종이 사본 대신 텍스트 형식으로 제공되며, 이에 의해 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 서열 목록의 컴퓨터로 판독 가능한 형식 사본: 파일명: CERA_020_00US_SeqList_ST25.txt, 기록 날짜: 2021년 3월 16일, 파일 크기 약 31.7 킬로바이트.
기술분야
본 개시내용은 상처를 치료 또는 예방하거나, 상처 치유, 예를 들어 당뇨병성 상처 치유를 증진시키기 위한 항-세라마이드 조성물 및 이의 사용 방법에 관한 것이다.
당뇨병은 미국의 2,910만명의 개인을 포함하여 전 세계적으로 3억 4천만명의 사람에게 영향을 미친다. 당뇨병 환자의 합병증은 상처가 치유되지 않는다는 것이며, 이는 2010년 미국에서 73,000명의 하지 절단을 초래하였다.
당뇨병 환자에서, 고혈당은 장기간의 만성 염증, 원활하지 못한 혈액 순환, 및 신경병증을 촉발한다. 이러한 요인의 조합은 상처 치유 과정을 느리게 하거나 심지어 정지시킨다. 이 분야에서 광범위한 연구에도 불구하고, 당뇨병성 상처의 치유 장애의 기본 메커니즘은 다인성이며 제대로 이해가 되지 않은 상태로 남아 있다.
당뇨병성 상처에 대한 표준 치료는 상처의 변연절제술, 항생제를 이용한 감염의 치료, 및 하지의 체중 압박 감소 또는 제거를 포함한다. 그러나, 특히 당뇨병성 상처의 경우, 가속화된 상처 치유를 위해 안전하고 효과적인 치료법에 대한 충족되지 않은 요구가 남아 있다.
도 1a 내지 도 1b는 시간 경과에 따른 상처 치유의 대표적인 사진을 나타낸다. 각각의 행은 표시된 실험 그룹에서 특정 병변 부위의 이미지를 나타낸다.
도 2는 시간 경과에 따른 각각의 실험 그룹에서 평균 상처 치유율을 나타낸다. Y축은 상처 크기를 나타내며, 각각의 상처의 출발 크기는 1로 정규화하였다. X축은 일수를 나타낸다. "D+A2A"는 당뇨병 + 2A2 그룹이고, "C+A2A"는 대조군 + 2A2 그룹이다.
도 3a 내지 도 3b는 처리 간의 차이를 예시하는 막대 도표를 나타낸다. 도 3a는 10일 후 상처 크기를 나타내는 막대 도표이며, 상처 크기는 초기 상처 크기의 정규화된 %로 표시되어 있다. 도 3b는 각각의 실험 그룹에서 마우스가 95% 치유를 달성하는 데 걸린 평균 일수를 나타내는 막대 도포이다.
도 4는 시간 경과에 따른 각각의 실험 그룹에서 평균 상처 치유율을 나타낸다. Y축은 상처 크기를 나타내며, 각각의 상처의 출발 크기는 1로 정규화하였다. X축은 일수를 나타낸다.
도 5a 내지 도 5d는 각각의 실험 그룹에서 마우스가 25%, 50%, 75%, 및 90% 치유를 각각 달성하는 데 걸린 평균 일수를 나타내는 막대 도포이다.
개요
일 양태에서, 본 개시내용은 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 상처를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 상처 치유를 증진시키는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처 또는 당뇨병성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
일부 실시형태에서, 투여 경로는 국소 투여, 병변내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 및 비경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 투여 경로는 국소 투여이다. 일부 실시형태에서, 투여 경로는 정맥내 투여이다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2회 이상의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 연속 용량의 투여는 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 또는 적어도 1주일만큼 분리된다. 일부 실시형태에서, 투여 기간은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 또는 적어도 4주이다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 염증 단계 동안 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 증식 단계 동안 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 리모델링 단계 동안 투여된다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-사슬 가변 단편(scFv)이다.
일부 실시형태에서, 방법은 대조군 상처와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 50%, 또는 적어도 70%만큼 상처 치유를 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일, 20일 또는 30일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일째에 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 50%, 70%, 90%, 95% 또는 100% 감소를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 95% 감소로 측정된다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작되기 전에 투여된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작된 후에 투여된다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 scFv이다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 NYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 LYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고, VL은 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 scFv이다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 1 및 43으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44 내지 47로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR3을 포함하고, VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 6B5(h6B5) 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 h6B5 scFv이다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항체이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 scFv이다.
상세한 설명
개괄
본 개시내용은 상처 치유를 증진시키기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편(예를 들어, scFv)의 조성물 및 상처의 치료 또는 예방에 사용하는 방법이 제공된다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다. 이러한 조성물 및 방법은 이전에 당뇨병성 상처에 대한 다른 치료에 실패한 환자에서 당뇨병성 상처의 치료에 사용될 수 있다.
정의
명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 내용이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "및/또는"은 달리 표시되지 않는 한 "및" 또는 "또는"을 의미하는 것으로 본 개시내용에서 사용된다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥이 달리 요구하지 않는 한, 단어 "포함하다" 또는 "포함한다" 또는 "포함하는"과 같은 변형어는 언급된 요소 또는 정수 또는 요소 또는 정수의 그룹을 포함하는 것을 의미하지만 임의의 다른 요소 또는 정수 또는 요소 또는 정수의 그룹을 제외하는 것을 의미하지 않는 것으로 이해될 것이다.
본 출원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 및 "대략"은 동등한 것으로 사용된다. 약/대략과 함께 또는 없이 본 출원에 사용되는 임의의 숫자는 관련 기술 분야의 당업자에 의해 이해되는 임의의 정상적인 변동을 포괄하는 것을 의미한다. 특정 실시형태에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 언급되어 있거나 달리 문맥으로부터 명백하지 않는 한(이러한 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하거나 가능한 값의 0% 미만인 경우는 제외함) 언급된 참조 값의 (더 크거나 더 작은) 어느 방향으로 10%, 또는 그 이하 내에 속하는 값의 범위를 지칭한다.
용어 "샘플"은 분석 및/또는 변형의 대상이 되는 생물학적 조성물(예를 들어, 세포 또는 조직의 일부)을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 샘플은 대상체로부터 직접 수득되는 "1차 샘플"이고; 일부 실시형태에서, "샘플"은 특정 성분을 제공하고/하거나 관심이 있는 특정 성분을 단리하거나 정제하기 위한 1차 샘플의 처리 결과이다.
용어 "대상체"는, 예를 들어 포유동물과 같은 동물을 포함한다. 일부 실시형태에서, 포유동물은 영장류이다. 일부 실시형태에서, 포유동물은 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 가축, 예컨대, 소, 양, 염소, 젖소, 돼지 등; 또는 길들인 동물, 예컨대, 개 및 고양이이다. 일부 실시형태에서 (예를 들어, 특히 연구 맥락에서) 대상체는 설치류(예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터), 토끼, 영장류, 또는 근친교배시킨 돼지와 같은 돼지 등이다. 용어 "대상체" 및 "환자"는 본 명세서에서 호환 가능하게 사용된다. 일부 실시형태에서, 대상체는 신생아, 청소년, 또는 성인일 수 있다. 특히 관심이 있는 것은 포유동물 대상체이다. 본 방법으로 치료될 수 있는 포유동물 종은 개 및 고양이; 말; 소; 양; 등 및 영장류, 특히 인간을 포함한다. 동물 모델, 특히 작인 포유동물(예를 들어, 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터, 토끼 등)이 실험 조사에 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료", "치료하는", 또는 "호전시키는"은 치료적 처치 또는 예방적/방지적 처치를 지칭한다. 치료를 받는 개인의 질환의 적어도 하나의 증상이 개선되거나 치료가 개인의 진행성 질환의 악화를 지연시킬 수 있거나 추가적인 연관 질환의 발병을 예방할 수 있는 경우 처치는 치료적이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "유효량"은 특정 생리학적 효과를 초래하는 데 필요한 작용제 또는 조성물의 양을 지칭한다. 특정 작용제의 유효량은 작용제의 성질, 예컨대, 질량/부피, 세포 수/부피, 입자/부피, (작용제의 질량)/(대상체의 질량), 세포 수/(대상체의 질량), 또는 입자/(대상체의 질량)에 기반하여 다양한 방식으로 표시될 수 있다. 특정 작용제의 유효량은 또한 최대 유효 농도의 절반(EC50)으로 표현될 수 있으며, 이는 기준 수준과 최대 반응 수준 사이의 중간인 특정 생리학적 반응의 크기를 초래하는 작용제의 농도를 지칭한다.
용어 "항체"는 면역글로불린(Ig) 분자의 가변 영역에 위치하는 적어도 하나의 에피토프 인식 부위를 통해 특정 표적, 예컨대, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드, 지질, 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 Ig 분자를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어는 온전한 다클론성 또는 단클론성 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 예를 들어, 천연 면역글로불린 분자는 2개의 중쇄 폴리펩타이드 및 2개의 경쇄 폴리펩타이드로 구성된다. 각각의 중쇄 폴리펩타이드는 중쇄와 경쇄 폴리펩타이드 사이의 사슬간 이황화 결합에 의해 경쇄 폴리펩타이드와 회합하여 2개의 이종이량체 단백질 또는 폴리펩타이드(2개의 이종 폴리펩타이드 사슬로 구성된 단백질)를 형성한다. 그 다음 2개의 이종이량체 단백질은 중쇄 폴리펩타이드 사이의 추가적인 사슬간 이황화 결합에 의해 회합하여 면역글로불린 단백질 또는 폴리펩타이드를 형성한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "항원-결합 단편"은 관심이 있는 항원의 적어도 하나의 에피토프에 결합하는 면역글로불린 중쇄 및/또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR)을 함유하는 폴리펩타이드 단편을 지칭한다. 이와 관련하여, 본 명세서에 기재된 항체의 항원-결합 단편은 특이적으로 세라마이드에 결합하는 항체 유래의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 서열의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개 전부의 CDR을 포함할 수 있다. 항원-결합 단편은 전장 항체의 일부, 일반적으로 항원 결합 또는 이의 가변 영역, 예컨대, Fab, F(ab')2, Fab', Fv 단편, 미니바디, 다이아바디, 단일 도메인 항체(dAb), 단일-사슬 가변 단편(scFv), 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체, 및 항원-결합 부위 또는 필요한 특이성의 단편을 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함하는 단백질을 포함한다. 본 개시내용의 특정 실시형태에서, 온전한 항체보다는 항원-결합 단편은 조직 침투 또는 종양 침투를 증가시키는 데 사용된다. 다른 실시형태에서, 항원-결합 단편은 혈청 반감기를 증가시키기 위해 추가로 변형된다.
"Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"은 세포 상의 Fc 수용체 및/또는 보체의 C1q 성분에 결합하여 항체의 이펙터 기능을 매개할 수 있는 항체의 부분에 해당하거나 이로부터 유래된 폴리펩타이드 서열을 지칭한다. Fc는 단백질 결정을 쉽게 형성할 항체의 단편인 "결정질 단편"을 의미한다. 원래 단백질 분해에 의해 기재된 별개의 단백질 단편은 면역글로불린 단백질의 전반적인 일반 구조를 정의할 수 있다. 원래 문헌에 정의된 바와 같이, Fc 영역은 이황화 결합에 의해 회합되는 2개의 폴리펩타이드를 포함하고, 각각의 폴리펩타이드는 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는 동종이량체 단백질이다. 그러나, 보다 최근에는 이 용어가 CH3, CH2, 및 이러한 제2 사슬과 이황화물-연결된 이량체를 형성하기에 충분한 힌지의 적어도 일부로 이루어진 단일 사슬 단량체 성분에 적용되었다. 이에 따라, 문맥에 따라, 용어 "Fc 영역" 또는 "Fc 도메인"의 사용은 본 명세서에서 이량체 형태 또는 이량체 단백질을 형성하기 위해 회합하는 개별 단량체를 지칭할 것이다. 면역글로불린 구조 및 기능에 대한 검토를 위해, 문헌[Putnam, The Plasma Proteins, Vol. V (Academic Press, Inc., 1987), pp. 49-140; 및 Padlan, Mol. Immunol. 31:169-217, 1994]을 참조한다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 Fc 도메인은 자연 발생 서열의 변이체를 포함한다.
용어 "면역글로불린 불변 영역" 또는 "불변 영역"은 면역글로불린의 하나 이상의 불변 도메인(예를 들어, CH1, CH2, CH3)의 일부 또는 전부에 상응하거나 이로부터 유래되는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 서열을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 불변 영역은 CH1 도메인을 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 불변 영역을 구성하는 불변 도메인은 인간이다.
용어 "경쇄 가변 영역"(또한 "경쇄 가변 도메인" 또는 "VL"로도 지칭됨) 및 "중쇄 가변 영역"(또한 "중쇄 가변 도메인" 또는 "VH"로도 지칭됨)은 각각 항체 경쇄 및 중쇄 유래의 가변 결합 영역을 지칭한다. 가변 결합 영역은 "상보성 결정 영역"(CDR) 및 "프레임워크 영역"(FR)으로 알려진 별개의 잘 정의된 하위 영역으로 구성된다.
용어 "면역글로불린 경쇄 불변 영역"(또한 "경쇄 불변 영역" 또는 "CL"로도 지칭됨)은 항체 경쇄 유래의 불변 영역이다.
용어 "면역글로불린 중쇄 불변 영역"(또한 "중쇄 불변 영역" 또는 "CH"로도 지칭됨)은 항체 중쇄 유래의 불변 영역을 지칭한다. CH는 항체 아이소형에 따라 CH1, CH2,및 CH3(IgA, IgD, IgG), 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인(IgE, IgM)으로 더 나눌 수 있다.
용어 "F(ab)"는 파파인 효소에 의한 IgG 분자의 단백질 분해 절단으로 인해 생기는 2개의 단백질 단편을 지칭한다. 각각의 F(ab)는 VH 사슬 및 VL 사슬의 공유 이종이량체를 포함하고 온전한 항원-결합 부위를 포함한다. 각각의 F(ab)는 1가 항원-결합 단편이다. 용어 "Fab"는 F(ab')2로부터 유래된 단편을 지칭하며 Fc의 작은 부분을 함유할 수 있다. 각각의 Fab' 단편은 1가 항원-결합 단편이다.
용어 "F(ab')2"는 펩신 효소에 의한 단백질 분해 절단으로 인해 생성된 IgG의 단백질 단편을 지칭한다. 각각의 F(ab')2 단편은 2개의 F(ab') 단편을 포함하고 따라서 2가 항원-결합 단편이다.
"Fd 단편"은 VH 및 CH1 도메인을 포함한다.
"Fv 단편"은 천연 항체 분자의 항원 인식 및 결합 능력의 상당 부분을 유지하지만 Fab 내에 함유된 CH1 및 CL 도메인이 결여된 항원-결합 부위를 포함하는 비공유 VH::VL 이종이량체를 지칭한다. Inbar et al. (1972) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 69:2659-2662; Hochman et al. (1976) Biochem 15:2706-2710; 및 Ehrlich et al. (1980) Biochem 19:4091-4096. 일부 실시형태에서, Fv 단편은 IgM의 우선적인 단백질 분해 절단에 의해 생산될 수 있고, 드물게는 IgG 또는 IgM 면역글로불린 분자의 단백질 분해 절단에 의해 생산될 수 있다. 그러나, Fv 단편은 보다 일반적으로 당업계에 알려진 재조합 기법을 사용하여 유도된다.
"dAb 단편"(Ward et al., Nature 341:544 546, 1989)은 VH 도메인을 포함한다.
"단일-사슬 항체" 또는 "scFv"는 10 내지 약 25개 아미노산의 짧은 링커 펩타이드로 연결된, 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질이다. 링커는 가요성을 위한 글리신뿐만 아니라 가용성을 위한 세린 또는 트레오닌이 풍부할 수 있으며, VH의 N-말단을 VL의 C-말단과 연결하거나, 또는 그 반대로 연결할 수 있다. scFv는 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고, 원래 면역글로불린의 특이성을 유지한다. 본 개시내용에서, 항체 또는 항체 단편 또는 이의 사용에 대한 임의의 언급은 scFv 분자 및 이의 사용을 포함하는 것으로 의도된다.
"미니바디"는 CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 융합 단백질을 지칭하며 또한 본 명세서에 포함된다(S. Hu et al., Cancer Res., 56, 3055-3061, 1996). 예를 들어, 문헌[Ward, E. S. et al., Nature 341, 544-546 (1989); Bird et al., Science, 242, 423-426, 1988; Huston et al., PNAS USA, 85, 5879-5883, 1988); PCT/US92/09965; WO94/13804; P. Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 6444-6448, 1993; Y. Reiter et al., Nature Biotech, 14, 1239-1245, 1996; S. Hu et al., Cancer Res., 56, 3055-3061, 1996]을 참조한다.
용어 "다이아바디"는 VH 및 CL 도메인이 너무 짧에서 동일한 사슬 상에서 2개 도메인 사이의 짝형성을 할 수 없는 링커를 사용하여 단일 폴리펩타이드 사슬에서 발현됨으로써 도메인을 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루게 하여 2개의 항원-결합 부위를 형성하는 이중특이적 항체이다(예를 들어, 문헌[Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48 (1993) 및 Poljak et al., Structure 2:1121-23 (1994)] 참조).
용어 "나노바디" 또는 "단일 도메인 항체"는 단일 단량체 가변 항체 도메인으로 이루어진 항원-결합 단편을 지칭한다. 나노클론(Nanoclone) 방법은 B-세포의 자동화된 고속대량 선택에 기반하여 원하는 표적에 대한 나노바디를 생성하는 방법이다. (WO 2006/079372 참조)
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻은 항체를 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 상동성인 한편, 사슬(들)의 나머지 부분은 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 상동성인 단클론성 항체뿐만 아니라, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다.
용어 "단일 사슬 가변 항체" 또는 "scFv"는 10 내지 약 25개 아미노산의 짧은 링커 펩타이드로 연결된, 면역글로불린의 중쇄(VH) 및 경쇄(VL)의 가변 영역의 융합 단백질을 지칭한다. Huston et al. (1988) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85(16):5879-5883. 링커는 VH의 N-말단을 VL의 C-말단과 연결하거나 그 반대로 연결할 수 있다. 자연적으로 응집되었지만 화학적으로 분리된 항체 V 영역 유래의 경쇄 및 중쇄 폴리펩타이드를 항원-결합 부위의 구조와 실질적으로 유사한 3차원 구조로 접힐 scFv 분자로 전환하기 위한 화학적 구조를 식별하기 위한 다수의 방법이 설명된 바 있다. 예를 들어 미국 특허 제5,091,513호 및 제5,132,405호(Huston et al.); 및 미국 특허 제4,946,778호(Ladner et al.)를 참조한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR"은 면역글로불린 (항체) 분자의 "상보성 결정 영역"을 지칭한다. CDR은 항체가 이의 특이적 항원에 결합하는 항체의 가변 도메인의 일부이다. 가변 도메인당 3개의 CDR(즉, 경쇄의 가변 도메인에 CDR1, CDR2 및 CDR3, 그리고 중쇄의 가변 도메인에 CDR1, CDR2 및 CDR3)이 있다. 가변 도메인 내에서, CDR1 및 CDR2는 폴리펩타이드 사슬의 가변(V) 영역에서 발견되고, CDR3은 경쇄 영역의 경우 VJ 그리고 중쇄 영역의 경우 VDJ의 재조합에 의해 인코딩되므로 가장 큰 가변성을 나타낸다.
"단리된 항체"는 (1) 천연 상태에서 동반되는 다른 자연-회합 항체를 포함하여 자연-회합 성분과 회합되지 않거나, (2) 동일한 종 유래의 다른 단백질이 없거나, (3) 상이한 종 유래의 세포에 의해 발현되거나, (4) 자연에서 발생하지 않는 항체이다.
용어 "인간 항체"는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 및 불변 영역을 갖는 모든 항체를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 모든 가변 및 불변 도메인은 인간 면역글로불린 서열(완전한 인간 항체)로부터 유래된다. 이러한 항체는 하기 기재된 바와 같이, 다양한 방식으로 제조될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "인간화"는 원래 비-인간 항체의 항원-결합 특성을 유지하는 비-인간 종으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 항체의 결합 단편(예를 들어, 경쇄 및 중쇄 가변 영역, Fab, scFv)은 인간화된다. 비-인간 항원-결합 단편은 CDR 그래프팅(Jones et al., Nature 321:522 (1986))으로 알려진 기법 및 이의 변형("재형성(reshaping)"(Verhoeyen, et al., 1988 Science 239:1534-1536; Riechmann, et al., 1988 Nature 332:323-337; Tempest, et al., Bio/Technol 1991 9:266-271), "과다키메라화(hyperchimerization)"(Queen, et al., 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86:10029-10033; Co, et al., 1991 Proc Natl Acad Sci USA 88:2869-2873; Co, et al., 1992 J Immunol 148:1149-1154), 및 "베니어링(veneering)"(Mark, et al., "Derivation of therapeutically active humanized and veneered anti-CD18 antibodies." In: Metcalf BW, Dalton BJ, eds. Cellular adhesion: molecular definition to therapeutic potential. New York: Plenum Press, 1994: 291-312)을 포함함)을 사용하여 인간화될 수 있다. 비-인간 공급원으로부터 유래된 경우, 항체의 다른 영역, 예컨대, 힌지 영역 및 불변 영역 도메인도 또한 인간화될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용 가능한"은 당업계에 잘 알려진 경로를 사용하여 투여될 때 일반적으로 알레르기 또는 다른 심각한 유해 반응을 일으키기 않는 분자 실체 및 조성물을 지칭한다. 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 동물에서, 보다 특히 인간에서 사용하기 위한 일반적으로 인정되는 다른 약전에 열거된 분자 실체 및 조성물은 "약제학적으로 허용 가능한" 것으로 간주된다.
용어 "예방하다", "예방", 및 "예방적으로"는 질환의 발병 전에(예를 들어, 질환의 특정 증상이 시작되기 전에) 화합물, 예를 들어 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 지칭한다. 질환을 예방하는 것은 질환이 발생할 가능성을 감소시키는 것, 질환의 발병을 지연시키는 것, 장기 증상을 호전시키는 것, 또는 질환의 최종 진행을 지연시키는 것을 포함할 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "특이적으로 결합한다"는 혼합물에 존재하는 다른 성분 또는 항원에 현저하게 결합하지 않으면서 적어도 105 M-1의 결합 친화도(Ka)로 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 표적 항원에 결합하는 능력을 지칭한다. 본 명세서에서 항-세라마이드 항체에 대한 언급은 세라마이드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "서열 동일성"은 2개 이상의 폴리뉴클레오타이드 서열 간 또는 2개 이상의 폴리펩타이드 서열 간의 관계를 지칭한다. 하나의 서열에서의 위치가 비교 서열의 상응하는 위치에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기에 의해 점유되는 경우, 서열은 해당 위치에서 "동일"하다고 말한다. 서열 동일성 백분율은 두 서열 모두에서 동일한 핵산 염기 또는 아미노산 잔기가 발생하는 위치의 수를 결정하여 동일한 위치의 수를 산출함으로써 계산된다. 그 다음 동일한 위치의 수를 비교 창의 총 위치 수로 나누고 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출한다. 서열 동일성의 백분율은 비교 창에 걸쳐 최적으로 정렬된 2개의 서열을 비교함으로써 결정된다. 폴리뉴클레오타이드 서열에 대한 비교 창은, 예를 들어 길이가 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000개 이상의 핵산일 수 있다. 폴리펩타이드 서열에 대한 비교 창은, 예를 들어 길이가 적어도 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300개 이상의 아미노산일 수 있다. 비교를 위해 서열을 최적으로 정렬하기 위해, 비교 창의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열의 일부는 참조 서열이 일정하게 유지되는 동안 갭이라고 불리는 추가 또는 삭제를 포함할 수 있다. 최적의 정렬은 갭이 있더라도 참조 서열과 비교 서열 사이에 최대한 가능한 수의 "동일한" 위치를 생성하는 정렬이다. 2개 서열 사이의 "서열 동일성" 백분율은 2004년 9월 1일 현재 미국 국가생물공학센터(National Center for Biotechnology Information)로부터 이용 가능한 "BLAST 2 Sequences" 프로그램 버전을 사용하여 결정될 수 있으며, 이 프로그램은 BLASTN(뉴클레오타이드 서열 비교용) 및 BLASTP(폴리펩타이드 서열 비교용) 프로그램을 포함하고, 이 프로그램은 문헌[Karlin and Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(12):5873-5877, 1993]의 알고리즘을 기반으로 한다. "BLAST 2 Sequences"를 이용하는 경우, 2004년 9월 1일 현재 디폴트 매개변수였던 매개변수가 단어 크기(3), 오픈 갭 페널티(11), 확장 갭 페널티(1), 갭 드롭오프(50), 기대 값(10) 및 매트릭스 옵션을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 다른 필요한 매개변수에 사용될 수 있다. 2개의 서열이 서로 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 경우, 2개의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열은 "실질적으로 유사한 서열 동일성" 또는 "실질적인 서열 동일성"을 갖는 것으로 간주된다.
"혈관신생"은 새로운 혈관의 형성을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "상처"는 급성, 아급성, 지연되거나 치유하기 어려운 상처, 및 만성 상처를 포함하지만 이에 제한되지 않는 조직에 대한 상해를 지칭한다. 상해는 외상, 폴력, 사고, 수술, 질환으로 인한 것일 수 있다. 상처는 막(예컨대, 피부)의 열상 또는 파열 및 보통 기저 조직에 대한 손상으로 인해 발생할 수 있다. 상처는 장기간의 침상 안정으로 인한 욕창(pressure sore)으로 인해 유발될 수 있다. 만성 상처는 당뇨병; 간, 신장, 또는 폐의 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는 내부 장기 질환; 암; 또는 치유 과정을 늦추는 임의의 다른 병태를 포함하지만 이에 제한되지 않는 질환에 의해 유발될 수 있다. 일부 실시형태에서, 상처는 본 단락에 기재된 요인들의 조합으로 인해 유발될 수 있다. 상처는 국소 위치 또는 내부에 발생할 수 있다. 상처는 개방 상처이거나 폐쇄성 상처일 수 있다. 상처는, 예를 들어 당뇨병성 상처 또는 궤양, 화상, 절개, 적출, 열상, 찰과성, 자창 또는 관통창, 수술 상처, 타박상, 혈종, 압궤 손상, 및 궤양을 포함한다.
용어 "당뇨병성 상처"는 당뇨병 상태, 예를 들어 I형 또는 II형 당뇨병으로 인해 적어도 부분적으로 당뇨병 대상체에서 발생하는 상처를 지칭한다. 당뇨병성 상처는 종종 하지(예를 들어, 당뇨병성 족부 상처)에서 발생한다.
용어 "상처 치유 증진" 또는 "상처 치유 가속화"는 호환 가능하게 사용되며, 대조군과 비교하여 치료 그룹에서 상처 치유 과정의 개선을 지칭한다.
항-세라마이드 항체, 항체 단편, 및 유도체
본 개시내용은 상처 치유를 증진시키거나, 상처를 치료 또는 예방하기 위한 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
세라마이드는 왁스성의 지질 분자 패밀리이다. 세라마이드는 스핑고신 및 지방산으로 구성된다. 세라마이드는 지질 이중층의 주요 지질 중 하나인 스핑고미엘린을 구성하는 구성 지질이므로, 진핵 세포의 세포막 내에서 고농도로 발견된다. 세라마이드는 세포의 분화, 증식, 및 세포예정사(programmed cell death; PCD)를 조절하는 것을 포함하여, 다양한 세포 신호 전달에 참여한다. 생리활성 지질로서, 세라마이드는 아폽토시스, 세포 성장 정지, 분화, 세포 노화, 세포 이동 및 부착을 포함하여 다양한 생리학적 기능에 연루되어 있다. 세라마이드 및 이의 하류 대사산물의 역할은 또한 암, 신경퇴화, 당뇨병, 미생물 발병, 비만, 및 염증을 포함하여 다수의 병리학적 상태에서도 제안되었다.
예시적인 상-세라마이드 항체의 서열 및 특성은 또한 미국 특허 공개 제2010/0239572호 및 제2017/0335014호에 개시되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 예시적인 항-세라마이드 항체의 서열은 표 1에 제공되어 있다. 그러나, 임의의 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 개시된 방법 및 용도에 따라 이용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 6B5(h6B5)이다. 일부 실시형태에서, h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시형태에서, h6B5 항체의 서열은 2020년 3월 18일자로 출원된 미국 가출원 제62/991,232호에 제공되어 있으며, 이의 내용은 모든 목적을 위해 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 각각의 CDR에 대한 서열은 본 명세서 전반에 걸쳐 개시되어 있으며, 하기 표 2에 요약되어 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체는 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 재조합 항체, 또는 합성 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항원-결합 항체 단편은 전술한 것 중 임의의 하나의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항원-결합 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, Fd 단편, dAb 단편, 다이아바디, scFv 등이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 재조합 DNA 기술을 사용하여 생산된다. 재조합 단백질의 발현 및 정제를 위한 절차는 당업계에 잘 확립되어 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-사슬 가변 단편(scFv)이다. 일부 실시형태에서, scFv는 2A2, h2A2, 6C8, 7B10, 9H10, h6B5, 또는 6B5 항체의 CDR 서열 및/또는 가변 사슬 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허 공개 제2010/0239572호에 기재된 바와 같은 2A2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 미국 특허 공개 제2017/0335014호에 기재된 바와 같은 6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본 개시내용의 h6B5 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 scFv이다. 일부 실시형태에서, scFv는 표 1에 개시된 임의의 항체의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 2A2의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 6B5의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 h6B5의 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 h2A2의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 6B5의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 h6B5의 가변 중쇄 및 경쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 임의의 면역글로불린 아이소형을 갖는다. 면역글로불린은 IgA, 분비형 IgA, IgG 및 IgM을 포함하지만 이에 제한되지 않는 일반적으로 알려진 임의의 아이소형 유래일 수 있다. IgG 아이소형은 특정 종의 하위 부류로 나뉜다: 인간의 경우 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, 그리고 마우스의 경우 IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 영역에 하나 이상의 변형을 포함한다. 특정 변형은 원하는 이펙터 기능 또는 혈청 반감기를 제공할 수 있다. 일부 실시형태에서, 적절한 Fc 영역을 이용하여, 세포 표면에 결합된 네이키드 항체는, 예를 들어 항체-의존성 세포 독성(ADCC)을 통해 또는 보체 의존성 세포독성(CDC)에서 보체를 모집함으로써, 또는 표적 세포에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 항체 의존성 세포-매개 식세포작용(ADCP) 또는 다른 일부 메커니즘에서 표적 세포의 식세포작용을 유발하는 하나 이상의 이펙터 리간드를 발현하는 비특이적 세포독성 세포를 모집함으로써 세포독성을 유도할 수 있다. 부작용 또는 치료상의 합병증을 최소화하기 위해 이펙터 기능을 제거하거나 감소시키는 것이 바람직한 경우, 다른 특정 Fc 영역이 사용될 수 있다. 항체의 Fc 영역은 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키고 따라서 혈청 반감기를 증가시키기 위해 변형될 수 있다. 대안적으로, Fc 영역은 혈정 반감기를 증가시키기 위해 PEG 또는 알부민에 접합되거나 원하는 효과를 초래하는 일부 다른 접합일 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 표지 또는 태그를 포함한다. 예시적인 검출 가능한 표지는 형광 태그, 친화성 태그, 방사성 동위원소, 발광 마커, 미립자 표지, 발색단, 인광 마커, 및 효소 표지를 포함한다. 예시적인 형광 표지는 GFP, RFP, 및 YFP를 포함한다. 예시적인 효소 표지는 호스래디쉬 퍼옥시다제 및 알칼리 포스파타제를 포함한다. 예시적인 펩타이드 태그는 His-태그, MBP, 및 스트렙트아비딘을 포함한다.
검출 수단은 선택된 표지에 의해 결정된다. 표지 또는 이의 반응 생성물의 외관은, 표지가 미립자이고 적절한 수준으로 축적된 경우 육안을 사용하여, 또는 분광광도계, 루미노미터, 형광측정계와 같은 장비를 사용하거나 ELISA 또는 웨스턴 블롯에 의해 획득될 수 있다.
상처 치유
일 양태에서, 본 개시내용은 상처 치유를 증진시키기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 일 양태에서, 본 개시내용은 상처를 치료하거나 예방하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다.
자연적인 상처 치유는 명확하게 정의된 단계로 발생한다. 급성 피부 상처는 피부 및 기저 조직의 완전성과 기능을 회복하는 생물학적 과정으로 1 내지 3주 내에 치유될 수 있다. 이러한 상처는 피부에 대한 긁힘, 찰과상, 자상, 까진 상처, 절개, 열상, 또는 타박상의 결과일 수 있다.
상처는 상처의 깊이에 따라 4가지 등급 중 하나로 분류될 수 있다: i) 등급 I: 상피에 국한된 상처; ii) 등급 II: 진피로 확장된 상처; iii) 등급 III: 피하 조직으로 확장된 상처; 및 iv) 등급 IV(또는 전층 상처): 뼈가 노출된 상처(예를 들어, 뼈 압통점, 예컨대, 대전자 또는 천골). 용어 "부분 두께 상처"는 등급 I 내지 III을 포함하는 상처를 지칭하며; 부분 두께 상처의 예는 욕창, 정맥 울혈성 궤양, 및 당뇨병성 상처 또는 궤양을 포함한다. 용어 "깊은 상처"는 등급 III 및 등급 IV 상처를 둘 다 포함함을 의미한다.
자연적인 상처 치유는 주로 3가지 주요 시간 순서에 따라 발생한다. 이들 순서 각각은 특정 세포 활성을 특징으로 하며 복구 과정의 진행을 종합적으로 관리하고 지원하는 다수의 조절 신호(양성 및 음성 둘 다)에 의해 제어된다. 따라서, 다음과 같이 구별된다:
(a) 염증 단계;
(b) 증식 단계(과립화 단계 및 상피화 단계를 포함함); 및
(c) 리모델링 단계.
염증 단계인 첫 번째 단계는 혈관이 터지자마자 시작되며, 주로 피브린과 피브로넥틴으로 구성되고 임시 기질을 구성할 혈병(혈액 응고)의 형성을 촉발하는 사건이다. 이 기질은 부분적으로 병변을 채우고 손상된 영역 내에서 상처의 변형 교정을 보장하기 위해 염증 세포의 이동을 가능하게 한다. 혈소판은 또한 치유 과정에서 관여하는 세포가 모집될 수 있도록 하는 방출 인자(예를 들어, 사이토카인 및/또는 성장 인자)를 제시한다. 이 단계는 병변 부위에 수많은 염증 세포(다형핵 세포, 대식세포)의 침윤 및 활성화를 특징으로 하며, 이는 임의의 외래 미생물에 대해 유기체를 방어하고 또한 상처를 깨끗하게 하거나 정화시킨다.
두 번째 단계는 육아 조직의 발달에 해당한다. 첫째, 섬유아세포의 이동 및 증식에 의한 상해의 콜로니화가 관찰된다. 그 다음, 건강한 혈관에서 내피 세포가 이동하면 손상된 조직의 신혈관형성(neovascularization), 또는 혈관신생을 가능하게 된다. 육아 조직에서, 섬유아세포는 활성화되고 액틴 미세섬유에 의해 제공되는 상당한 수축 특성을 갖는 근섬유아세포로 분화되어, 상처 수축이 가능하게 된다. 미세섬유는 α-평활근 액틴이라는 단백질을 통해 발현된다. 이들 근섬유아세포는 병변의 치유를 야기하는 육아 조직의 형성 및 수축에서 중요한 역할을 한다. 그 다음 각질형성세포는 상처의 가장자리로부터 이동한 다음 분화하여, 표피의 재건을 야기한다. 육아 조직 발달의 이 단계는 병변의 일반적인 염증 상태의 사전 감소, 다형핵 호중구의 점진적인 소멸 및 "복구" 대식세포를 포함한 대식세포의 출현 후에 개시된다. 염증 단계에서 증식/복구 단계로의 전환은 염증의 해결 단계로 알려져 있다.
과정의 세 번째 단계는 새로 형형된 조직이 원래 조직의 초기 특성 및 특성을 갖도록 기능성 조직을 재건하는 것을 목표로 하는 리모델링 단계이다. 세포외 기질의 일부는 프로테아제(본질적으로 기질 메탈로프로테아제 및 엘라스타제)에 의해 분해되고, 세포외 기질의 재구성이 관찰된다. 육아 조직 내에서 우세한 III형 콜라겐은 진피의 주요 기질 성분인 I형 콜라겐으로 점차 대체된다. 성숙 단계의 종료 시, 섬유아세포, 근섬유아세포 및 혈관 세포는 증식 및/또는 활성 감소를 경험한다. 그 다음, 과잉 세포는 아폽토시스를 통해 사멸하며, 이와 동시에 세포외 기질의 리모델링이 일어난다.
상처가 정상적인 기간 내에 치유되지 않는 경우, 이는 "만성 상처"로 간주된다. 예를 들어, 만성 상처는 치유하는 데 2주 초과, 3주 초과, 4주 초과, 5주 추과, 6주 초과, 6주 초과, 7주 초과, 8주 초과, 9주 초과, 10주 초과, 11주 초과, 12주 초과, 3개월 초과, 4개월 초과, 5개월 초과, 또는 6개월 초과가 걸릴 수 있다. 일부 실시형태에서, 만성 상처는 상처 출현으로부터 시작하여 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10주 기간 후에 치유를 시작하지 않는다.
만성 상처의 경우, 상처는 치유 단계 중 하나에서 약화되거나 정상적인 치유 단계를 통해 진행되지 않을 수 있다. 만성 상처는, 예를 들어 적어도 부분적으로 다음 중 하나 이상을 특징으로 하는 상처를 포함할 수 있다: 1) 장기간의 염증 단계, 2) 느리게 형성되거나 결함이 있는 세포외 기질(ECM), 및 3) 정체되거나 감소된 상피화 속도. 만성 상처는 비교적 짧은 기간, 예컨대, 1개월 동안 존재할 수 있거나 수년 동안 존재할 수 있다. 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법은 만성 상처의 치유를 개시하고 증진시킬 수 있다.
만성 피부 상처는 피부 궤양, 침대앓이(bed sore), 욕창, 당뇨병성 상처(예를 들어, 당뇨병성 궤양 및 상처(sore)), 및 다른 피부 장애를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시형태에서, 만성 상처는 당뇨병성 상처, 정맥 궤양, 동맥 궤양, 압박 궤양, 및 혈관염 궤양으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 만성 상처는 당뇨병성 상처이다.
만성 피부 상처는 임의의 크기, 형상 또는 깊이일 수 있으며, 정상적인 건강한 피부 색소와 비교하여 변색된 것으로 보일 수 있다. 만성 피부 상처는 출혈이 있거나, 부종이 있거나, 화농분비물 또는 다른 유체가 배어 나올 수 있거나, 통증을 유발하거나 이환된 영역의 움직임을 어렵게 하거나 통증을 유발할 수 있다. 만성 피부 상처는 감염되어 체온 상승을 나타낼 뿐만 아니라 우유빛, 노란색, 녹색, 또는 갈색의 고름이나 분비물이 생길 수 있다. 분비물은 무취이거나 자극적인 냄새가 날 수 있다. 감염되면, 만성 피부 상처는 만지면 붉어지거나, 얼얼하거나, 열기가 있을 수 있다.
만성 피부 상처는 당뇨병, 불량한 혈액 공급, 낮은 혈중 산소, 저혈압으로 인해 혈류가 감소하는 병태, 또는 폐색되거나, 막히거나, 좁아진 혈관을 특징으로 하는 병태에 의해 유발될 수 있다. 낮은 산소 공급은 특정 혈액, 심장, 및 폐 질환에 의해, 및/또는 흡연으로 인해 유발될 수 있다. 만성 피부 상처는 또한 피부에 대한 반복적인 외상, 예컨대 조직의 부종 또는 압력 증가, 또는 상처 부위에 대한 지속적인 압력의 결과일 수 있다. 만성 피부 상처는 또한 약화되거나 손상된 면역 체계에 의해 유발될 수 있다. 약화되거나 손상된 면역 체계는 연령 증가, 방사선, 영양 부족, 및/또는 항암제 또는 스테로이드와 같은 약제에 의해 유발될 수 있다. 만성 피부 상처는 또한 박테리아, 바이러스 또는 진균 감염, 또는 외래 물질의 존재에 의해 유발될 수 있다.
당뇨병 대상체에서 상해 후 손상된 상처 치유는 주요 임상 문제를 나타내며, 이는 입원기간의 장기화 및 상당한 보건 의료비를 초래한다. 모든 비-외상성 절단 중 2/3는 당뇨병성 상처가 선행한다. 당뇨병성 상처의 손상된 치유는 다인성이며, 케모카인의 생성 감소, 혈관신생 감소, 및 비정상적인 염증 반응을 특징으로 한다.
임의의 특정 이론에 구속되고자 하지 않지만, 이러한 당뇨병성 상처의 치유 부재는 글루코스의 생체이용률 증가와 적어도 부분적으로 연관되는 것으로 고려된다. 이는 피부의 비후화, 또는 신경병증 및 동맥병증을 야기하는 상당한 산화 스트레스와 같은 수많은 생리학적 및 대사적 변경을 가져온다. 동맥병증 및 신경병증은 만성화의 2가지 주요 위험 요소이므로 따라서 당뇨병성 상처, 보다 특히 당뇨병성 족부 상처의 치유를 지연시킨다. 만성 비-당뇨병성 상처의 가장 잘 알려진 유형, 예컨대, 침대앓이 또는 정맥 궤양, 동맥 궤양 또는 혼합 궤양은 동일한 병리에서 발생하지 않는다. 예를 들어, 정맥 부전은 정맥 궤양의 형성, 만성화, 및 따라서 정맥 궤양의 치유 지연의 원인이다. 침대앓이는 부분에 대해 피부 조직에 대한 과도하고 장기간의 압력과 마찰 후 허혈 및 재관류의 주기 후에 발생하는 상처이다.
몇몇 주요 문제는 당뇨병 대상체에서 올바른 상처 치유 순서를 방해한다. 첫 번째 치유 지연은 염증 단계로부터 발생하며: 염증 단계에서 증식 단계로의 진행이 방해된다. 염증 단계는 치유에서 필수적인 단계이지만, 일시적이어야 한다. 염증의 해결은 치유의 다른 단계의 개시를 조절하는 중요한 지점이다. 이러한 동적인 사건은 염증 세포(다형핵 호중구)의 소멸 및 대식세포의 출현을 포함한다. 그 다음, 화학주성 및 혈관형성 항-염증 매개체가 생산되며 이는 특히 육아 단계의 핵심 세포인 섬유아세포의 이동 및 분화를 가능하게 한다. 앞서 언급한 대상체의 경우에서와 같이, 이러한 염증 단계가 중단되면 면역 단계가 비정상적으로 길어지게 되고 상처의 만성화를 일으키게 되어, 이후의 모든 치유 단계가 지연된다. 마지막으로, 특히 상피화 동안 상처 봉합 단계가 지연되거나 심지어 대부분의 경우 발생하지 않는다.
상처 치유에서 세라마이드 및 ASM의 역할
임의의 특정 이론에 구속되고자 하지 않지만, 세라마이드 풍부 플랫폼(CRP)의 형성은, 예를 들어 만성 상처 또는 당뇨병성 상처의 경우 상처 치유의 어려움에 기여하는 미세혈관 내피 병인의 기초가 되는 것으로 고려된다.
스핑고지질은 막 마이크로도메인의 주요 성분을 나타내며, 세라마이드-풍부 마이크로도메인은 염증 사이토카인 신호 전달에 대한 전제조건인 것으로 보인다. 산 스핑고미엘리나제(ASM) 및 중성 스핑고미엘리나제(NSM)는 스핑고지질 대사의 핵심 조절 효소이며, 전염증성 세라마이드로의 스핑고미엘린 가수분해를 촉진시킨다. ASM은 염증 사이토카인 신호 전달의 중요한 초기 반응자이다.
내피 조직 상해는 세포막의 세포외 리플릿에서 막 손상 및 산성 스핑고미엘리나제-의존성 세라마이드 형성을 야기한다. 상해 후 조직 손상이 진행되는 동안, CRP-의존성 아폽토시스는 피드-포워드(feed-forward) 과정을 나타낼 가능성이 높다. 면역-매개 조직 손상에서, 세포용해성 T 세포는 또한 효율적인 세포 사멸에 필요한 표적 세포에서 CRP를 유도한다. 이러한 과정의 중단은 면역-매개 조직 손상의 추가적인 진행을 방지하고, 강력하고 내구성 있는 조직-복구 과정의 개시를 야기한다.
항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여는 상해 후 섬유증을 유발하지 않으면서 혈관 내피 항상성을 회복시키고, 혈액과 조직 사이의 신호 전달의 조절을, 조혈 세포의 수송, 비-혈전성 혈류의 유지, 면역 및 염증 반응의 촉진, 및 항상성 복구 및 재생을 초래한다. 추가적으로, 세라마이드 풍부 플랫폼은 주로 손상된 세포에 존재하므로, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 전달은 정상적인 조직에 영향을 미치지 않으면서 손상된 조직에 국소적으로 작용할 수 있으며, 따라서 잠재적으로 광범위한 치료 지수를 제공할 수 있다.
약제학적 조성물, 투여 경로, 투약량 및 투약 일정
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 상처 치유를 증진시키거나, 상처를 치료 또는 예방하기 위한 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
투여를 위해, 본 개시내용의 항체 또는 단편(예를 들어, 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편)은 약제학적 조성물로 제형화될 수 있다. 약제학적 조성물은 (i) 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편; 및 (ii) 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함할 수 있다. 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및/또는 scFv를 포함하는 약제학적 조성물은 약제학적으로 유용한 조성물을 제조하기 위한 알려진 방법에 따라 제형화될 수 있으며, 이에 의해 치료용 분자는 약제학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합물로 조합된다. 적합한 담체, 희석제 또는 부형제는 당업자에게 잘 알려져 있다. (예를 들어, 문헌[Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 19th ed. 1995)] 참조.) 제형은 바이알 표면 상에서 단백질 손실의 방지 등을 위해 하나 이상의 부형제, 보존제, 가용화제, 완충제, 알부민을 더 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 다음 투약 형태 중 하나로 제형화될 수 있다: 경구 단위 투약 형태, 정맥내 단위 투약 형태, 비강내 단위 투약 형태, 좌제 단위 투약 형태, 피내 단위 투약 형태, 근육내 단위 투약 형태, 복강내 단위 투약 형태, 피하 단위 투약 형태, 또는 국소 투약 형태. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 국소 투약 형태로 제형화될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투약 형태로 제형화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 국소 투여용으로 제형화된다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 국소 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 조합하여 제형화될 수 있다. 국소 조성물을 위한 투약 형태의 비-제한적인 예는 분말, 스프레이, 포말, 젤리, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치, 좌제 및 리포솜 제제를 포함한다. 투약 형태는 활성 성분의 지속 방출을 위해 점막접착성 중합체를 이용하여 제형화될 수 있다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에서 약제학적으로 허용 가능한 담체, 및 필요할 수 있는 임의의 보존제, 완충제, 또는 추진제와 혼합될 수 있다.　국소 제제는 활성 성분을 국소 건식, 액체, 크림 및 에어로졸 제형에 일반적으로 사용되는 통상적인 약제학적 희석제 및 담체와 조합하여 제조될 수 있다. 연고 및 크림은, 예를 들어 적합한 증점제 및/또는 겔화제를 첨가하여 수성 기제 또는 유성 기제를 이용하여 제형화될 수 있다. 적합한 기제는 물 및/또는 오일, 예컨대, 액체 파라핀 또는 식물성 오일, 예컨대, 땅콩유 또는 피자마유를 포함할 수 있다. 기재의 성질에 따라 사용될 수 있는 증점제는 연질 파라핀, 알루미늄 스테아레이트, 세토스테아릴 알코올, 프로필렌 글라이콜, 폴리에틸렌 글라이콜, 양모지, 수소화 라놀린, 밀랍 등을 포함한다. 로션은 수성 기제 또는 유성 기제를 이용하여 제형화될 수 있으며, 일반적으로 또한 다음 중 하나 이상을 포함한다: 안정화제, 유화제, 분산제, 현탁화제, 증점제, 착색제, 향수 등. 분말은 임의의 적합한 분말 기제, 예를 들어 활석, 락토스, 전분 등의 도움으로 형성될 수 있다. 점적액은 또한 하나 이상의 분산제, 현탁화제, 가용화제 등을 포함하는 수성 기제 또는 비수성 기제를 이용하여 제형화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 연고, 페이스트, 크림 및 겔은 또한 부형제, 예컨대, 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트래거캔스, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글라이콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 이들의 혼합물을 함유할 수 있다. 분말 및 스프레이는 또한 부형제, 예컨대, 락토스, 활석, 규산, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아마이드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 관례적인 추진제, 예컨대, 클로로플루오로하이드로카본 및 휘발성 비치환 탄화수소, 예컨대, 부탄 및 프로판을 추가적으로 함유할 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 다음의 제2 약리학적 작용제 중 적어도 하나와 함께 제형화될 수 있다: 국소 마취제(예를 들어, 리도카인, 프릴로카인 등), 국소 항염증제(예를 들어, 나프록센, 프라목시캄 등), 코르티코스테로이드(예를 들어, 코르티손, 하이드로코르티손 등), 가려움증 방지제(예를 들어, 로페라마이드, 다이필레녹살레이트 등), 2가 및 3가 금속 이온(예를 들어, 망간, 칼슘, 스트론튬, 니켈, 란타넘, 세륨, 아연 등)을 포함하여 말초 감각 뉴런의 활성화를 방해하는 작용제, 진통제, 윤활제, 효모-기반 제품(예를 들어, 동결건조 효모, 효모 추출물 등), 살정제, 재상피화를 촉진하는 것으로 알려진 성장-촉진제 및/또는 상처 치유-촉진제(예를 들어, 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 인터루킨-11(IL-11) 등), 항균제(예를 들어, 네오스포린, 폴리믹신 B 설페이트, 바시트라신 징크 등), 점막접착제(예를 들어, 셀룰로스 유도체 등), 문헌[Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics]에 정의된 바와 같은 세포보호제(예를 들어, 콜로이드성 비스무트, 미소프로스톨, 수크랄페이트 등), 또는 메탄올.
본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 하나 이상의 투여 경로에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 가능한 투여 경로는, 예를 들어 근육내, 피하, 정맥내, 심방내, 관절내, 비경구, 비강내, 폐내, 경피, 척수강내, 경구, 국소, 및 병변내 경로를 포함한다. 일부 실시형태에서, 투여 경로는 국소 투여, 병변내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 및 비경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 국소 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 병변내 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 피하 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 경피 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 근육내 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 정맥내 투여를 포함하거나 이로 이루어진다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여는 비경구 투여를 포함하거나 이로 이루어진다.
예방 및 치료 목적을 위해, 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 단일 볼루스 전달로, 장기간에 걸친 연속 전달(예를 들어, 연속 경피 전달)을 통해, 또는 반복 투여 프로토콜로(예를 들어, 매시간, 매일, 매주, 매월 또는 매년) 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 치료적 유효 용량의 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 상기 정의된 바와 같이 치료적 유효 용량, 투약량, 또는 양은 특정 생리학적 효과, 예를 들어 상처의 하나 이상의 증상의 예방 또는 호전, 또는 상처 치유의 증진을 초래하는 데 필요한 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 지칭한다. 이러한 맥락에서 치료적 유효 투약량의 결정은 전형적으로 동물 모델 연구와 후속적으로 인간 임상 시험에 기반하며, 모델 대상체체서 상처의 발생 또는 중증도를 현저하게 감소시키거나 상처 치유를 증진히키는 유효 투약량 및 투여 프로토콜을 결정함으로써 안내된다. 본 개시내용의 조성물의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지 여부, 투여되는 다른 약제, 치료가 예방적인지 치료적인지 여부뿐만 아니라, 조성물 자체의 특정 활성 및 개인에서 원하는 반응을 이끌어내는 능력을 포함하여, 다수의 다양한 인자에 따라 다르다. 전형적으로, 투약 요법은 최적의 치료 반응을 제공하도록, 즉 안전성 및 효능을 최적화하도록 조정된다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용량은 약 0.1 μg 내지 100 mg/kg 또는 1 μg/kg 내지 약 50 mg/kg, 또는 10 μg 내지 5 mg/kg이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량은 약 1 μg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 10 μg/kg 내지 약 10 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg이다. 본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 단일 용량으로 또는 2회 이상의 용량을 고려하여, 체중의 킬로그램당 약 0.001 내지 약 10 밀리그램(mg)(mpk)의 투약량으로 투여될 수 있다. 인간 성인 환자에 대한 투여의 경우, 치료적 유효량은 용량당 0.2mg, 용량당 0.5mg, 용량당 1mg, 용량당 5mg, 용량당 10mg, 용량당 25mg, 용량당 100mg, 용량당 200mg, 및 용량당 400mg을 포함하지만 이에 제한되지 않는 용량당 0.2mg 내지 800mg 범위의 용량으로 투여될 수 있으며, 1회 이상의 용량이 치료 과정에서 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편의 총 일일 투약량은 약 1mg 내지 약 2g, 약 100mg 내지 약 1.5g, 또는 약 200mg 내지 약 1200mg의 범위일 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 용량은 약 0.1 μg/상처 표면적의 cm2 내지 100 mg/cm2 또는 1 μg/cm2 내지 약 50 mg/cm2, 또는 10 μg/cm2 내지 5 mg/cm2이다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 유효량은 약 1 μg/cm2 내지 약 20 mg/cm2, 약 10 μg/㎠ 내지 약 10 mg/cm2 또는 약 0.1 mg/cm2 내지 약 5 mg/㎠이다. 본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 또한 단일 용량으로 또는 2회 이상의 용량을 고려하여, 상처의 제곱센티미터(cm2)당 약 0.001 내지 약 10 밀리그램(mg)의 투약량으로 투여될 수 있다. 인간 성인 환자에 대한 투여의 경우, 치료적 유효량은 용량당 0.2mg, 용량당 0.5mg, 용량당 1mg, 용량당 5mg, 용량당 10mg, 용량당 25mg, 용량당 100mg, 용량당 200mg, 및 용량당 400mg을 포함하지만 이에 제한되지 않는 용량당 0.2mg 내지 800mg 범위의 용량으로 투여될 수 있으며, 1회 이상의 용량이 치료 과정에서 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편의 총 일일 투약량은 약 1mg 내지 약 2g, 약 100mg 내지 약 1.5g, 또는 약 200mg 내지 약 1200mg의 범위일 수 있다.
일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 포함하는 조성물은 약 0.1 mg/mL, 0.5 mg/mL, 1 mg/mL, 5 mg/mL, 10 mg/mL, 15 mg/mL, 20 mg/mL, 25 mg/mL, 30 mg/mL, 35 mg/mL, 40 mg/mL, 45 mg/mL, 또는 50 mg/mL의 농도로 제형화될 수 있다. 농도는 0.1 내지 1 mg/mL, 1 내지 5 mg/mL, 5 내지 10 mg/mL, 또는 10 내지 50 mg/mL일 수 있다. 일부 실시형태에서, 개시된 항체, 단편 또는 조성물은 약 0.05mg, 0.1mg, 0.2mg, 0.3mg, 0.4mg, 0.5mg, 0.6mg, 0.7mg, 0.8mg, 0.9mg 또는 1mg의 용량으로 투여될 수 있다. 용량의 부피는 약 0.005mL, 0.01mL, 0.02mL, 0.03mL, 0.04mL, 0.05mL, 0.06mL, 0.07mL, 0.08mL, 0.09mL 또는 0.1mL일 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편은 하루 중 다양한 시간에 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 용량은 저녁에 투여될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 용량은 오전에 투여될 수 있다. 투약량은, 예를 들어 여러 번 매주, 격주, 매월, 또는 매년 투여를 포함하여, 단일 또는 다중 투여로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항-세라마이드 항체 또는 항체 단편의 단일 용량은 이를 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일부 실시형태에서, 환자는 2회 이상 용량의 항-세라마이드 항체 치료를 받을 수 있다. 일부 실시형태에서, 환자는 2회 이상 용량의 항-세라마이드 항체 치료를 받을 수 있으며, 여기서 연속 용량은 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 또는 적어도 1주일만큼 분리된다. 일부 실시형태에서, 환자는 2회 이상 용량의 항-세라마이드 항체 치료를 받을 수 있으며, 여기서 연속 용량은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 또는 적어도 3개월의 기간만큼 분리된다. 일부 실시형태에서, 2회 이상의 용량은 약 1주 내지 약 2주, 약 2주 내지 약 4주, 약 1개월 내지 약 2개월, 약 2개월 내지 약 4개월, 또는 약 1개월 내지 약 6개월의 기간만큼 분리되어 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 투여 기간은 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 적어도 6일, 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 2년, 적어도 3년, 적어도 4년, 또는 적어도 5년이다. 일부 실시형태에서, 투여는 장애의 임상 증상을 모니터링함으로써 나타나는 바와 같이 불규칙적으로 이루어질 수 있다.
항-세라마이드 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물의 투약량은 담당 임상의에 의해 변경되어 표적 부위에서 원하는 농도를 유지할 수 있다. 더 높거나 더 낮은 농도가 전달 방식에 기반하여 선택될 수 있다. 항-세라마이드 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 대상체의 생애 동안 언제든지 투여될 수 있다. 투여는 상처 치유의 염증 단계, 증식 단계, 리모델링 단계, 또는 이들의 조합 동안 일어날 수 있다. 일부 실시형태에서, 투여는 상처 치유의 염증 단계 동안 일어난다. 일부 실시형태에서, 투여는 상처 치유의 증식 단계 동안 일어난다. 일부 실시형태에서, 투여는 상처 치유의 리모델링 단계 동안 일어난다.
치료 방법 및 용도
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치료적 유효량의 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 상처를 치료하거나, 예방하거나, 호전시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치료적 유효량의 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 상처 치유를 증진시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
대상체
본 명세서에 개시된 방법에 따른 치료에 대한 대상체는 상처(예를 들어, 당뇨병성 상처)가 있거나 발생할 위험이 있는 대상체를 포함한다. 상처(예를 들어, 당뇨병성 상처)가 있는 대상체는 초기 단계 또는 후기 단계 질환을 가질 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상체는 이전에 상처(예를 들어, 당뇨병성 상처)에 대한 1회 이상의 치료를 받았지만 이전 치료에 반응하지 못한 대상체이다. 이러한 실시형태에서, "반응 실패"는 이전 치료가 상처(예를 들어, 당뇨병성 상처)를 호전시키고/시키거나 개선시키지 못했음을 나타낸다. 일부 실시형태에서, 이전 치료법은 일부 결과를 나타내었을 수 있지만, 원하는 성능을 달성하지 못했을 수 있거나 일정 기간 후에 효능을 나타내는 것이 중단되었을 수 있다.
치료 판독
상처 치유는 다양한 수단에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 상처 치유는 상처 전체 표면적의 변화에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유는 상처 주축 길이(길이 및 폭)의 변화에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유는 상처 중심으로부터 상처 가장자리까지의 거리에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유는 상처 둘레의 변화에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유는 표면적-대-둘레(S/P) 비율의 변화에 의해 측정된다. 이들 매개변수의 평가는 다양한 방법, 예를 들어 컴퓨터-보조 면적측정에 의해 이루어진다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 정도는 이들 매개변수 중 임의의 하나의 초기 값과 비교하여 시간 경과에 따른 값의 백분율로 표현된다.
항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용하여 상처 치유를 증진시키는 방법이 제공된다. 이러한 치료의 효능은 여러 매개변수에 기반하여 특성화, 평가, 측정, 및/또는 모니터링될 수 있다.
일부 실시형태에서, 개선은 특정 정도의 상처 치유를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정된다. 예를 들어, 대조군에서 상처가 치유되는 데 25일이 걸리고 치료 그룹에서 상처가 치유되는 데 20일만 걸린다면, 상처 치유는 이러한 측정에 의해 20%만큼 증진/가속화된다. 일부 실시형태에서, 개선은 미리 설정된 시점에서 상처 치유의 상대적인 정도의 증가에 의해 측정된다. 예를 들어, 상처가 생긴 후 20일째에 치료 그룹이 평균 50% 정도의 상처 치유를 달성하고(예를 들어, 전체 표면적에 의해 측정됨) 그룹만이 평균 40% 정도의 상처 치유를 달성한다면, 상처 치유는 이러한 측정에 의해 25%만큼 증진/가속된다. 당업자는 적절한 대조군(예를 들어, 대조 상처)을 쉽게 인식할 것이다. 일부 실시형태에서, 대조 상처는 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 청구범위에 언급된 것)을 제외하고 동일한 치료를 받는다. 일부 실시형태에서, 대조 상처는 표준 치료의 치료법을 받는다. 모든 경우에, 대조군에 대한 언급은 언급된 특성(예를 들어, 증진된 상처 치유)이 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 사용 결과임을 나타내는 것을 의미한다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 미리 설정된 정도로 상처 치유 매개변수 중 하나에 따라 상처를 개선시키는 데 설리는 시간의 감소에 의해 측정 시, 대조군 상처와 비교하여 대상체의 상처 치유를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%(모든 범위 및 이 사이의 하위 범위를 포함함)만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 10%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 20%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 30%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 50%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 70%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 상처 치유 매개변수는 상처의 전체 표면적, 상처의 둘레, 상처의 S/P 비율, 또는 상처 중심으로부터 가장자리까지의 거리이다. 일부 실시형태에서, 상처 치유 매개변수는 상처의 전체 표면적이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 정도는 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%의 감소이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 정도는 50%이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 정도는 95%이다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 50% 감소를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 95% 감소를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처의 완전한 봉합을 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유 매개변수 중 하나에 따라 미리 설정된 시점에서 상처 치유의 상대적인 정도의 증가에 의해 측정 시, 대조군 상처와 비교하여 대상체의 상처 치유를 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 1배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 7배, 또는 적어도 10배(모든 범위 및 이 사이의 하위 범위를 포함함)만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 10%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 20%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 30%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 50%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에서 제공되는 방법은 상처 치유를 적어도 70%만큼 증진시킨다. 일부 실시형태에서, 상처 치유 매개변수는 상처의 전체 표면적, 상처의 둘레, 상처의 S/P 비율, 또는 상처 중심으로부터 가장자리까지의 거리이다. 일부 실시형태에서, 상처 치유 매개변수는 상처의 전체 표면적이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 시점은 상처가 생기고 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 후이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 시점은 상처가 생기고 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주 또는 20주의 종료 시이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 시점은 상처가 생기고 10일 후이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 시점은 상처가 생기고 20일 후이다. 일부 실시형태에서, 미리 설정된 시점은 상처가 생기고 30일 후이다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 20일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 30일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정된다. 일부 실시형태에서, 상처는 만성 상처이다. 일부 실시형태에서, 상처는 당뇨병성 상처이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 치료는 피부 상처와 같은, 표면 상처를 치료하는 데 효과적이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 치료는 외상 또는 수술로 인해 발생할 수 있는 상처와 같은, 내부 상처를 치료하는 데 효과적이다.
일부 실시형태에서, 치료는 손상(예를 들어, 상처)이 발생한 후에 투여된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 치료는, 예컨대 상처를 유발할 가능성이 있는 활동을 시작하기 전, 또는 수술 절차 전에, 예방적으로 투여된다.
실시예
실시예 1: 항-세라마이드 항체는 당뇨병이 있는 뮤린 모델에서 상처 치유를 가속화시킨다.
당뇨병성 상처 치유에 대한 항-세라마이드 항체의 효과를 연구하기 위해, 표준화된 펀치 생검-기반 뮤린 표면 상처 모델을 MSU의 핵심 시설에서 사용하였다.
이 연구에서, 마우스를 4개의 실험 그룹으로 나누었다:
(a) 1) 항-세라마이드 항체 2A2를 적용한 당뇨병 마우스(당뇨병 + 2A2)(6마리);
(b) 2) 항-세라마이드 항체 2A2가 없는 당뇨병 마우스(당뇨병)(6마리);
(c) 3) 항-세라마이드 항체 2A2를 적용한 대조군 마우스(대조군 + 2A2)(3마리);
(d) 4) 항-세라마이드 항체 2A2가 없는 대조군 마우스(대조군)(5마리).
IV 주사에 의해 1mg의 2A2 항-세라마이드 항체 또는 비히클 대조물(PBS)을 4일마다 주사한 대조군(비-당뇨병) 및 STZ-유도 당뇨병 SKH1 무모 마우스의 등 위쪽에 5 ㎜ 생검 바늘로 상처를 도입하였다. 상처가 생긴 후 0, 1, 4, 8, 10, 12, 13, 16, 20 및 25일째 상처 부위의 대표적인 사진이 도 1a 내지 도 1b에 나타나 있다.
도 2는 각각의 실험 그룹에서 평균 상처 치유율을 시간 경과에 따른 병변 크기로 표현한 것을 나타낸다. 병변 크기이 정규화를 위해, 각각의 경우에 병변의 원래 크기를 1로 설정하였다. 당뇨병 마우스와 비-당뇨병 마우스 둘 다에서, 2A2 항체의 적용은 항체 치유 과정을 가속화시켰고 이러한 효과는 당뇨병 마우스 그룹에서 더 두드러졌다.
도 3a는 10일째 원래 상처 크기의 %로서 계산된 평균 상처 봉합을 나타낸다. 대조군과 당뇨병 그룹 둘 다에서, PBS 비히클 대조물을 주사한 마우스보다 2A2를 주사한 마우스에서 10일 후에 더 큰 정도의 상처 봉합이 달성되었다.
도 3b는 각각의 실험 그룹에서 마우스가 (원래 상처 크기와 비교하여) 95% 상처 봉합을 달성하는 데 걸린 평균 일수를 나타낸다. 당뇨병 마우스 그룹에서, 2A2 항체의 적용은 95% 치유를 달성하는 데 걸린 시간의 길이를 현저하게 단축시켰다.
전반적으로, 이 연구는 항-세라마이드 항체의 적용이 상처, 특히 당뇨병성 상처의 치유를 현저하게 가속화시킨다는 것을 입증한다.
연구 프로토콜:
하기는 실시예 1에서 수행된 동물 연구의 프로토콜이다.
연구 목적: 스트렙토조토신(STZ) 유도 I형 당뇨병을 겪고 있는 수컷 SKH1 마우스에게 4일마다 1회 정맥내(IV) 투여할 때 상처 치유에 대한 항-세라마이드 항체 2A2의 효과를 조사하는 것.
체중이 20 내지 25g인 수컷 SKH1 마우스를 대략 2주 동안 적응시켰다. 동물을 대조(C) 마우스와 당뇨병 유도(D) 마우스로 나누었다. 당뇨병은 5일 연속으로 스트렙토조토신(체중 kg당 65 mg)을 복강내 주사하여 만들어졌다. 마지막 주사 2주 후, 발등 정맥에서 수집한 혈액 한 방울로부터 혈당을 측정하였고, 혈당 수치가 ㎗당 300mg 초과인 것으로 당뇨병을 확인하였다. 체중, 다뇨증, 물 및 음식 섭취를 매일 모니터링하고 동물의 임상 상태에 기반하여 NPH 인슐린 주사(0 내지 2 단위/일)를 제공하였다. 당뇨병이 확인된 후 앞서 기재한 바와 같이 상처를 도입하였다.
비히클 또는 2A2 IV 주사 치료에 대해 동물을 2개 그룹으로 무작위 배정하였다.
상처 도입 당일 치료를 시작하였다. 상처가 완전히 치유될 때까지(약 30일) 4일마다 IV 투약을 계속하였다. 대조군(C) 동물은 당뇨병 동물과 같은 날에 상처를 입었고 비히클 또는 2A2 IV 주사 치료에 대해 2개 그룹으로 무작위 배정하였다. 상처가 생긴 날에 IV 치료를 시작하였다. 상처가 완전히 치유될 때까지(약 15일) 4일마다 투약을 계속하였다. 2A2 항체의 IV 용량은 4일마다 1 mg/25g의 마우스였다.
수술 직후 및 이 후 격일로 사진으로 상처 측정을 하고 치유 시간 비율을 계산하였다. 실험 종료 시 상처를 절제하고, 고정한 다음 진피층 두께, 기질 침착, 재혈관화, 면역 세포 침윤에 대해 분석하였다.
실시예 2: 추가 실험 검증.
추가적인 마우스 대상체를 이용하여 실시예 1에서 수행된 실험을 반복하였다. 이 실험의 결과는 표 3 내지 6 및 도 3 및 도 5a 내지 도 5d에 제공되어 있다.
도 4는 시간 경과에 따른 각각의 실험 그룹에서 평균 상처 치유율을 나타낸다. Y축은 상처 크기를 나타내며, 각각의 상처의 출발 크기는 1로 정규화하였다. X축은 일수를 나타낸다.
도 5a 내지 도 5d는 각각의 실험 그룹에서 마우스가 25%, 50%, 75% 및 90% 치유를 각각 달성하는 데 걸린 평균 일수를 나타내는 막대 도포이다.
이 실험은 항-세라마이드 항체를 이용한 마우스의 치료가 상처 치유, 특히 당뇨병성 상처의 통계적으로 유의한 가속화를 초래하였음을 추가로 검증한다.
실시예 3: 국소 항체 투여
실시예 1 내지 2에 기재한 상처 치유의 항체 치료 가속화는 상처 부위에서 국소화된 세라마이드-신호 전달 효과에 기인한 것으로 여겨진다. 따라서, 현재 개시된 항-세라마이드 항체 및/또는 이의 항원-결합 단편의 국소 투여는 실시예 1 내지 2에 기재된 바와 유사한 효과를 나타낼 것으로 예상된다. 이러한 항체 및 항원-결합 단편의 효과는 마우스와 같은 동물 모델에서 테스트될 것이다. 실험은 항체가 로션, 세이브(save), 또는 당업자에게 알려진 기타 국소 제형을 통해 국소적으로 투여되는 것을 제외하고, 실시예 1 내지 2에 기재한 실험과 유사하게 수행될 것이다. 실시예 1 내지 2에 기재한 것과 유사하게 수행된 또 다른 실험에서, 상처는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 피하 주사를 통해 치료될 것이다. 이미프라민과 같은 다른 세라마이드 신호 전달 저해제의 국소 투여는 실시예 1 및 2의 방법에 따라 상처 치유에 대해 테스트될 것이다. 항체 및/또는 이의 항원-결합 단편(또는 이미프라민)으로 치료된 상처는 대조군 및/또는 당뇨병 동물에서 상처 치유를 가속화/개선시킬 것으로 예상된다.
실시예 4: 내부 상처
내부 상처를 증진/가속화시키는 현재 개시된 치료의 능력을 입증하기 위해 추가적인 확증 실험이 수행될 것이다. 실험은 대조군과 당뇨병 대상체에게 내부 상처를 가하고 비히클로 치료되거나 치료받지 않은 대상체에서, 또는 본 개시내용의 항-세라마이드 또는 이미프라민으로 치료받은 대상체에세 시간 경과에 따라 내부 상처로부터의 치유를 추적하는 동물 모델에서 수행될 것이다. 치유는 초음파진단기, MRI, CT, 또는 수술 수단을 통한 시각적 평가를 포함하여 당업자에게 알려진 임의의 기법을 통해 추적될 것이다.
실시예 5: 개시된 항체 및 이의 항원-결합 단편의 추가 검증
본 개시내용은 2A2 항체의 검증 실험을 통해 항-세라마이드 항체 및/또는 이의 항원-결합 단편의 효과를 예시한다. 실시예 1 내지 2의 실험은 본 명세서에 개시된 추가적인 항체 및 항원-결합 단편, 또는 세라마이드에 결합하거나 세라마이드-풍부 플랫폼의 형성을 저해할 수 있는 다른 항체/항원-결합 단편 중 임의의 하나를 사용하여 반복될 것이다. 예를 들어, 실시예 1 내지 2에 기재한 바와 같은 상처 치유 실험은 6b5 뮤린 항체 및 이의 단편(US 제2019-0389970호, 이는 본 명세서에 참조에 의해 원용됨), 및 6b5 인간화 항체 및 이의 단편(PCT/US2021/022914 및 이의 상응하는 US 가출원 제62/991,232호, 이들 둘 다 본 명세서에 참조에 의해 원용됨)을 사용하여 반복될 것이다.
추가의 번호가 매겨진 실시형태
본 발병의 추가 실시형태는 하기 번호가 매겨진 실시형태로 제공된다:
실시형태 1. 필요로 하는 대상체에서 상처를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 2. 필요로 하는 대상체에서 상처 치유를 증진시키는 방법으로서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 3. 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 만성 상처 또는 당뇨병성 상처인, 방법.
실시형태 4. 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 만성 상처인, 방법.
실시형태 5. 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 당뇨병성 상처인, 방법.
실시형태 5.1 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 당뇨병성 외상인, 방법.
실시형태 5.2 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 당뇨병성 내상인, 방법.
실시형태 5.3 실시형태 1 또는 2에 있어서, 상기 상처는 내피 조직 상처인, 방법.
실시형태 6. 실시형태 1 내지 5.3 중 어느 하나에 있어서, 투여 경로는 국소 투여, 병변내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 및 비경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
실시형태 7. 실시형태 6에 있어서, 상기 투여 경로는 국소 투여인, 방법.
실시형태 8. 실시형태 6에 있어서, 상기 투여 경로는 정맥내 투여인, 방법.
실시형태 9. 실시형태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로 투여되는, 방법.
실시형태 10. 실시형태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법.
실시형태 11. 실시형태 10에 있어서, 연속 용량의 투여는 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 또는 적어도 1주일만큼 분리되는, 방법.
실시형태 12. 실시형태 10 또는 11에 있어서, 투여 기간은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 또는 적어도 4주인, 방법.
실시형태 13. 실시형태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 염증 단계 동안 투여되는, 방법.
실시형태 14. 실시형태 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 증식 단계 동안 투여되는, 방법.
실시형태 15. 실시형태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 리모델링 단계 동안 투여되는, 방법.
실시형태 16. 실시형태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체인, 방법.
실시형태 17. 실시형태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-사슬 가변 단편(scFv)인, 방법.
실시형태 18. 실시형태 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 대조군 상처와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 50%, 또는 적어도 70%만큼 상처 치유를 증진시키는, 방법.
실시형태 19. 실시형태 18에 있어서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일, 20일 또는 30일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정되는, 방법.
실시형태 20. 실시형태 19에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일째에 측정되는, 방법.
실시형태 21. 실시형태 18에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 50%, 70%, 90%, 95% 또는 100% 감소를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정되는, 방법.
실시형태 22. 실시형태 21에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 95% 감소로 측정되는, 방법.
실시형태 23. 실시형태 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작되기 전에 투여되는, 방법.
실시형태 24. 실시형태 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작된 후에 투여되는, 방법.
실시형태 25. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
a) 상기 VH는 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
b) 상기 VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 방법.
실시형태 26. 실시형태 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 27. 실시형태 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 항체인, 방법.
실시형태 28. 실시형태 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 scFv인, 방법.
실시형태 29. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
a) 상기 VH는 NYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 LYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
b) 상기 VL은 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 방법.
실시형태 30. 실시형태 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 31. 실시형태 1 내지 24, 29 및 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 항체인, 방법.
실시형태 32. 실시형태 1 내지 24, 29 및 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 scFv인, 방법.
실시형태 33. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
a) 상기 VH는 서열번호 1 및 43로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44 내지 47로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR3을 포함하고,
b) 상기 VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR3을 포함하는, 방법.
실시형태 34. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 35. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 36. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 37. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 38. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 39. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 40. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 41. 실시형태 33에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 42. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 43. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 44. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 45. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 46. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 47. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 48. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 49. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 50. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 51. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 52. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 53. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 54. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 55. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 56. 실시형태 33에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
실시형태 57. 실시형태 33 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 6B5(h6B5) 항체인, 방법.
실시형태 58. 실시형태 33 내지 56 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 h6B5 scFv인, 방법.
실시형태 59. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 60. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 61. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 62. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 63. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 64. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 65. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 66. 실시형태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
실시형태 67. 실시형태 59 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항체인, 방법.
실시형태 68. 실시형태 59 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 scFv인, 방법.
실시형태 69. 필요로 하는 대상체에서 상처를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 이미프라민 또는 이의 염을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 70. 필요로 하는 대상체에서 상처 치유를 증진시키는 방법으로서, 이미프라민 또는 이의 염을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시형태 71. 실시형태 70 또는 71에 있어서, 상기 상처는 만성 상처 또는 당뇨병성 상처인, 방법.
실시형태 72. 실시형태 70 또는 71에 있어서, 상기 상처는 만성 상처인, 방법.
실시형태 73. 실시형태 70 또는 712에 있어서, 상기 상처는 당뇨병성 상처인, 방법.
실시형태 74. 실시형태 70 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 투여 경로는 국소 투여, 병변내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 및 비경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
실시형태 75. 실시형태 74에 있어서, 상기 투여 경로는 국소 투여인, 방법.
실시형태 76. 실시형태 74에 있어서, 상기 투여 경로는 정맥내 투여인, 방법.
실시형태 77. 실시형태 70 내지 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로 투여되는, 방법.
실시형태 78. 실시형태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법.
실시형태 79. 실시형태 78에 있어서, 연속 용량의 투여는 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 또는 적어도 1주일만큼 분리되는, 방법.
실시형태 80. 실시형태 78 또는 79에 있어서, 투여 기간은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 또는 적어도 4주인, 방법.
실시형태 81. 실시형태 70 내지 80 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 염증 단계 동안 투여되는, 방법.
실시형태 82. 실시형태 70 내지 81 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 증식 단계 동안 투여되는, 방법.
실시형태 83. 실시형태 70 내지 82 중 어느 하나에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 리모델링 단계 동안 투여되는, 방법.
참조에 의한 원용
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SEQUENCE LISTING <110> Ceramedix Holding, LLC Memorial Sloane-Kettering Cancer Center <120> WOUND HEALING ENHANCEMENT WITH ANTI-CERAMIDE ANTIBODIES <130> CERA-020/00US 328726-2101 <160> 55 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His Thr Ile His 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Tyr Asn Tyr Pro Arg Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Phe Ile Thr Thr Val Val Pro Ser Ala Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Asp Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Val 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75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (68)

  1. 필요로 하는 대상체에서 상처를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 필요로 하는 대상체에서 상처 치유를 증진시키는 방법으로서, 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 상처는 만성 상처 또는 당뇨병성 상처인, 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 상처는 만성 상처인, 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 상처는 당뇨병성 상처인, 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 투여 경로는 국소 투여, 병변내 투여, 피하 투여, 경피 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 및 비경구 투여로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 투여 경로는 국소 투여인, 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 투여 경로는 정맥내 투여인, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 용량으로 투여되는, 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2회 이상의 용량으로 투여되는, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 연속 용량의 투여는 적어도 1일, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 4일, 적어도 5일, 또는 적어도 1주일만큼 분리되는, 방법.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 투여 기간은 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 또는 적어도 4주인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 염증 단계 동안 투여되는, 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 증식 단계 동안 투여되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처 치유의 리모델링 단계 동안 투여되는, 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체인, 방법.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일-사슬 가변 단편(scFv)인, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 대조군 상처와 비교하여 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 50%, 또는 적어도 70%만큼 상처 치유를 증진시키는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일, 20일 또는 30일째 상처 전체 표면적의 감소에 의해 측정되는, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처가 생긴 후 10일째에 측정되는, 방법.
  21. 제18항에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 50%, 70%, 90%, 95% 또는 100% 감소를 달성하는 데 걸리는 시간의 감소에 의해 측정되는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 상처 치유의 증진은 상처 전체 표면적의 95% 감소로 측정되는, 방법.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작되기 전에 투여되는, 방법.
  24. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상처의 하나 이상의 증상이 시작된 후에 투여되는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
    a) 상기 VH는 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), YNYPRDGSTKYNEKFKG(서열번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
    b) 상기 VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 7의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 항체인, 방법.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 6B5 scFv인, 방법.
  29. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
    a) 상기 VH는 NYWMH(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), AIYPGDSDTSYNQKFKG(서열번호 34)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 LYYGYD(서열번호 35)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함하고,
    b) 상기 VL은 KSSQSLIDSDGKTFLN(서열번호 36)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LVSKLDS(서열번호 37)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 WQGTHFPYT(서열번호 38)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 39의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 40의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  31. 제1항 내지 제24항, 제29항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 항체인, 방법.
  32. 제1항 내지 제24항, 제29항 및 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 2A2 scFv인, 방법.
  33. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되,
    a) 상기 VH는 서열번호 1 및 43으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 44 내지 47로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR2, 및 GFITTVVPSAY(서열번호 3)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 HCDR3을 포함하고,
    b) 상기 VL은 RASKSISKYLA(서열번호 4)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SGSTLQS(서열번호 5)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR2, 및 QQHNEYPWT(서열번호 6)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 LCDR3을 포함하는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  35. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  36. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  37. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTIH(서열번호 1)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  38. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYNEKFQG(서열번호 44)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  39. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPREGSTKYNEKFQG(서열번호 45)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  40. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDVSTKYNEKFQG(서열번호 46)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  41. 제33항에 있어서, 상기 HCDR1은 GYTFTDHTMH(서열번호 43)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 HCDR2는 YNYPRDGSTKYAEKFQG(서열번호 47)의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  42. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  43. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  44. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 48과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  45. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  46. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  47. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 49와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  48. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  49. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  50. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 50과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  51. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  52. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  53. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 51과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  54. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 53과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  55. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 54와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  56. 제33항에 있어서, 상기 VH는 서열번호 52와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, 상기 VL은 서열번호 55와 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97% 동일하거나, 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지는, 방법.
  57. 제33항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 6B5(h6B5) 항체인, 방법.
  58. 제33항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 h6B5 scFv인, 방법.
  59. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  60. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 48의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  61. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  62. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 49의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  63. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  64. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  65. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  66. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하되, 상기 VH는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL은 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  67. 제59항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항체인, 방법.
  68. 제59항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-세라마이드 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 scFv인, 방법.
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