CN116327922A - 生物医药组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于治疗白细胞介素5(IL‑5)介导的疾病的组合物及相关方法。
Description
本申请是基于申请日为2016年8月22日，优先权日为2015年8月24日，申请号为201680059580.9，发明名称为：“生物医药组合物”的专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及用于治疗白细胞介素5(IL-5)介导的疾病的组合物及相关方法。
背景技术
IL-5在许多不同的疾病中起着重要作用，例如哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病(eosinophilicgranulomatosis with polyangiitis)、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎。这些严重的疾病影响着全世界数亿人。
美泊利单抗(Mepolizumab)是一种单克隆抗体，其与可溶性IL-5结合并阻断可溶性IL-5与其受体结合。IL-5的结构指示为一种分泌蛋白并且没有任何关于在任何细胞类型上的任一膜结合形式的IL-5的证据。因此，Fc效应子功能并不是美泊利单抗作用机制的一部分。基于美泊利单抗的作用机制和药代动力学特性，有两个功能域与该单克隆抗体的生物学活性有关。这些为：a)在提供作用机制的互补决定区(CDR)中与IL-5结合；和b)与决定半衰期的Fc区中的新生儿Fc受体(FcRn)受体结合。通过在整个产品开发过程中进行广泛的表征研究，已确定脱酰胺、氧化和聚集是美泊利单抗的关键质量属性。重要的是，已经发现必须保持这些变体的特定水平以确保适当的生物学功能。
因此，需要适用于维持美泊利单抗的生物学功能并用于治疗IL-5介导的疾病的组合物。本发明提供了这样的组合物和相关方法。
发明内容
本发明的一个方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处、在重链氨基酸序列的M254处、在重链氨基酸序列的M430处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.8至7.2，其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包含图1所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112所代表的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.8至7.2，其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和d)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基；和c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基的氧化形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基的氧化形式的抗体；和c)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体；和c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基1处的氨基末端焦谷氨酸残基、氨基酸残基448处的羧基末端甘氨酸氨基酸残基、299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ IDNO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基和386位脱酰胺化的天冬酰胺残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个：4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的至多约80％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明还包括以下内容：
实施方式1.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含≤80％酸性抗体变体。
实施方式2.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体和≤20％聚集的抗体变体。
实施方式3.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
实施方式4.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
实施方式5.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
实施方式6.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处、在重链氨基酸序列的M254处、在重链氨基酸序列的M430处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
实施方式7.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐或柠檬酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
实施方式8.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
实施方式9.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式10.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式11.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式12.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
d)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式13.一种组合物，其包含：
抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：35％或更低的在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和25％或更低的在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
实施方式14.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基，55％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基，50％或更低的在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基，50％或更低的在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基。
实施方式15.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：35％或更低的在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和25％或更低的在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基；和
c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基，50％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基，50％或更低的在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基，50％或更低的在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基。
实施方式16.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含重链可变区，其具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列；和轻链可变区，其具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列；和
b)25％或更低的包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
实施方式17.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基。
实施方式18.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基；和
c)25％或更低的包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
实施方式19.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和
b)25％或更低的包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
实施方式20.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基。
实施方式21.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；
b)25％或更低的包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体；和
c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：3％或更低的在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和50％或更低的在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基。
实施方式22.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链序列和具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的轻链序列；
b)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基1处的氨基末端焦谷氨酸残基、氨基酸残基448处的羧基末端甘氨酸氨基酸残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和
c)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
实施方式23.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链序列和具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的轻链序列；
b)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和
c)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
实施方式24.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链序列和具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的轻链序列；
b)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含386位脱酰胺化的天冬酰胺残基；和
c)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
实施方式25.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的重链序列和具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的轻链序列；和
b)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基。
实施方式26.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式27.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的至多约80％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
实施方式28.根据前述任一实施方式的组合物，其中所述抗体的浓度为约75mg/ml至约100mg/ml。
实施方式29.根据前述任一实施方式的组合物，其中所述组合物进一步包含以下中的一个或组合：
(a)缓冲剂，其选自磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸盐、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠和组氨酸，提供6.8至7.2的pH；和/或
(b)糖；和/或
(c)聚山梨酯80；和/或
(d)EDTA。
实施方式30.根据前述任一实施方式的组合物，其中相比于包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的参比标准组合物，所述组合物具有至少0.70的IL-5特异性抗原结合活性；和/或至少70％的FcRn结合活性。
实施方式31.在受试者中治疗疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定受试者患有选自以下的疾病：哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎；和
b)向所述受试者给药治疗有效量的根据前述任一实施方式的组合物；
从而治疗该受试者中的疾病。
实施方式32.根据实施方式31的方法，其中所述组合物以100mg的剂量每4周给药一次。
实施方式33.根据实施方式1-30中任一项的组合物，其用于治疗。
实施方式34.药物组合物，其包含实施方式1-30中任一项的组合物和药学上可接受的载体。
实施方式35.根据实施方式1-30中任一项的组合物，其用于治疗哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎。
附图简述
图1.包含美泊利单抗的参比标准(RS)组合物的代表性毛细管等电聚焦(cIEF)电泳图。
图2.包含美泊利单抗(对照)的参比标准组合物和不同批次的包含美泊利单抗的组合物的代表性cIEF电泳图，所述组合物经历三天的pH9.0强制降解。
图3.包含美泊利单抗的RS组合物的代表性全视图尺寸排阻色谱(SEC)的色谱图。
图4.包含美泊利单抗的RS组合物的SEC色谱图的代表性展开图。
图5.包含美泊利单抗的RS组合物的代表性SEC-多角度光散射(MALS)色谱图。
图6.一批包含美泊利单抗的组合物的代表性SEC-MALS色谱图。
图7.包含美泊利单抗的RS组合物的代表性SEC色谱图以及在第7天对于包含美泊利单抗的不同批次的pH 3.5应激组合物的代表性SEC色谱图。
发明详述
本发明提供了用于治疗白细胞介素5(IL-5)介导的疾病的组合物和相关主题。
本发明使用的术语“哮喘”是指以可逆性气流阻塞和支气管痉挛为特征的气道炎性疾病。常见症状包括喘息、咳嗽、胸闷和气短。
在本发明的方法中，“哮喘”可以是“严重的嗜酸性粒细胞性哮喘”。患有严重的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者可在过去的12个月内具有哮喘和具有每μL血中大于或等于300个嗜酸性粒细胞的血液嗜酸性粒细胞。患有严重的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者可满足一个或个表1所述的标准。
表1
重要的是，根据这些标准患有严重的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者在开始治疗时每μL血液中可有少于150个嗜酸性粒细胞。美泊利单抗是单克隆抗体，其包含SEQ ID NO:1所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:2所示的轻链氨基酸序列。根据本发明的方法，美泊利单抗和抗原结合蛋白，特别是包含美泊利单抗的重链CDR和轻链CDR的抗体分子，可用于治疗严重的嗜酸性粒细胞性哮喘。例如，美泊利单抗，或相关的抗原结合蛋白，可适用于附加维持治疗严重的嗜酸性粒细胞性哮喘，如在过去12个月中患者血液嗜酸性粒细胞大于或等于300个细胞/μL、和/或在治疗开始时患者血液嗜酸性粒细胞大于或等于150个细胞/μL、和/或在治疗开始时患者血液嗜酸性粒细胞小于150个细胞/μL所鉴定的。或者，美泊利单抗，或相关抗原结合蛋白，可适用于附加维持治疗严重的嗜酸性粒细胞性哮喘，如在过去12个月中患者血液嗜酸性粒细胞大于或等于300个细胞/μL、和/或在治疗开始时患者血液嗜酸性粒细胞大于或等于150个细胞/μL所鉴定的。美泊利单抗，或相关抗原结合蛋白，可适用于附加维持治疗严重的嗜酸性粒细胞性哮喘，如在过去12个月中患者血液嗜酸性粒细胞大于或等于300个细胞/μL和/或在治疗开始时患者血液嗜酸性粒细胞小于150cells/μL所鉴定的。这些患者年龄可在12岁以上。美泊利单抗治疗可以减少患者中哮喘的恶化(例如，具有恶化史的患者)。当适用于美泊利单抗治疗时，可以使用本发明的方法(即，用美泊利单抗的这种治疗可以与本发明的方法组合)。用美泊利单抗治疗可以：
a)降低恶化频率。与安慰剂相比，用美泊利单抗治疗，例如每位受试者皮下施用100mg或每位受试者静脉内施用75mg，可降低：1)临床上显著恶化的速率；2)需要住院或急诊就诊的恶化的速率；和3)需要住院的恶化的速率。这种益处可导致由哮喘引起的发病率和致死事件的减少。
b)减少每日OCS剂量：用美泊利单抗治疗，例如每位受试者施用100mg或每位受试者静脉内施用75mg，可以使受试者减少伴随的皮质类固醇的每日剂量，而不会发生对哮喘的失控。使用美泊利单抗治疗的受试者每日口服皮质类固醇(OCS)剂量的中位数百分比可以比基线降低50％，而使用安慰剂治疗的患者是0％。此外，用美泊利单抗治疗的受试者中有54％可以使OCS剂量降低至5.0mg，而用安慰剂治疗的受试者为32％(p＝0.025)。
c)产生肺功能的改善：与安慰剂相比，使用美泊利单抗治疗(例如每个受试者皮下施用100mg或每个受试者静脉内施用75mg)可以证明支气管扩张剂前后的FEV1产生临床相关变化。由于受试者群体的大多数处于包括高剂量ICS(吸入皮质类固醇)和/或OCS加控制药物治疗的最大哮喘治疗中，因此肺功能的任何改善对于该受试者群体都尤其具有临床重要性。
d)在哮喘控制方面改善：与安慰剂相比，在ACQ-5加美泊利单抗(例如每个受试者皮下施用100mg或每个受试者静脉内施用75mg)中可观察到统计学显著且临床相关的改善，表明受试者可通过向他们现有的哮喘治疗中加入美泊利单抗来实现对哮喘的控制。
e)改善生活质量：与安慰剂相比，可以表明使用美泊利单抗(例如每个受试者皮下施用100mg或每个受试者静脉内施用75mg)的SGRQ评分的统计学显著且临床相关的变化。受试者可出现哮喘症状以及进行日常活动能力的明显改善。
f)产生持久的效力和药效学效应：在32周和/或52周的治疗期间，可观察到哮喘恶化和血液嗜酸性粒细胞的持续减少，以及肺功能、哮喘控制和生活质量的改善并且没有发展出耐药性。
和
g)产生血液嗜酸性粒细胞的减少。用包含美泊利单抗的组合物的治疗，例如每位受试者皮下施用100mg的美泊利单抗或每位受试者静脉内施用75mg，可导致血液嗜酸性粒细胞迅速减少(初始治疗后第4周的第一次评估为约80％；例如，从250-290个细胞/μL至40-60个细胞/μL等)。
在本发明的方法中，“哮喘”可为“严重哮喘”。患有严重哮喘的受试者符合European Respiratory Society/American Thoracic Society(ERS/ATS)关于严重哮喘指南中描述的严重哮喘的定义。因此，严重哮喘是一种哮喘，其需要在此前一年用GlobalInitiative for Asthma(GINA)针对4-5级哮喘指导建议的药物(高剂量吸入皮质类固醇[ICS]加长效β2-激动剂[LABA]或白三烯调节剂/茶碱)进行治疗，或在上一年的>＝50％期间用全身性的皮质类固醇(CS)治疗以维持对受试者哮喘的控制。根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗严重哮喘。
在本发明的方法中，“哮喘”可为“不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘”。具有不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者符合表2中所述的标准。
表2.
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘。
在本发明的方法中“哮喘”可为“嗜酸性粒细胞性哮喘”。患有不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者符合表3中所述的标准。
表3.
在本发明的方法中，“哮喘”可为“亚-嗜酸性粒细胞性哮喘”。患有不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘的受试者符合表4中所述的标准。
表4
包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗亚-嗜酸性粒细胞性哮喘，且也可根据本发明的方法，用于治疗亚-嗜酸性粒细胞性哮喘。
如本发明所用术语“大疱性类天疱疮”(BP)是指急性或慢性自身免疫性皮肤病，涉及在皮肤表皮层和真皮层之间的空间形成水疱，更适当地被称为大疱。BP是最常见的自身免疫性起疱性皮肤病。它的特征是影响老年人(>70岁)，年发病率为百万分之5至35。BP的发病率正在剧增，平均每年增加17％。BP常常起始于在囊泡(vesicle)和水疱(blister)出现之前的类似湿疹或荨麻疹的非常瘙痒的皮肤损伤。在10-30％的患者中，BP也涉及口腔粘膜。疾病的严重程度可以通过自身免疫性大疱性皮肤疾病强度评分(ABSIS)来确定，其评估所涉及的面积以及疾病活性。该疾病是由于对交界粘连复合物的结构组分的自身免疫反应从而导致真皮-表皮交界处的损伤，伴有表皮下水疱形成。具体而言，已经鉴定出针对半桥体(hemidesmosomal)抗原BP180和BP230的自体反应性B和T细胞应答。针对BP180的自身抗体的血清水平反映该疾病的严重程度和活性。T细胞是产生Th1和Th2细胞因子(主要是IL-4、IL-5和IL-13)的记忆CD4+细胞。IL-5以及嗜酸细胞活化趋化因子(eotaxin)大量存在于疱液中。IL-5的产生确实与BP患者的血液嗜酸性粒细胞和皮肤中显著的嗜酸性粒细胞浸润有关。认为嗜酸性粒细胞通过释放有毒的颗粒蛋白(ESP、MBP)和蛋白水解酶而与水疱形成高度相关。
如本发明所用的术语“嗜酸性粒细胞性食管炎”(EoE)是指涉及嗜酸性粒细胞的食道过敏性炎性病症。症状是吞咽困难、食物嵌塞和胃灼热。EoE的特征在于嗜酸性粒细胞类型的白血细胞向食道上皮层的密集浸润。基于嗜酸性粒细胞在过敏反应中发挥的重要作用，EoE被认为是对摄入食物的过敏反应。EoE诊断面板可用于诊断EoE。如果胃食管反流对长达6周一天两次的高剂量质子泵抑制剂(PPI)无反应或者如果负调节性pH研究排除胃食管反流病(GERD)，也可以诊断EoE。用内窥镜检查，在食管壁可以看到脊、沟或环。有时，食道中会出现多个环，由于环与猫食道的相似性，导致产生术语“波纹状食道”或“猫食道”。食道中白色渗出物的存在也提示该诊断。在内窥镜检查时进行活组织检查，通常可在表面上皮中看到大量嗜酸性粒细胞。每个高倍视野至少需要15个嗜酸性粒细胞才能做出该诊断。嗜酸性粒细胞炎症不仅限于只在食道，还延伸至整个胃肠道。也可存在明显脱颗粒的嗜酸性粒细胞，因为可存在微脓肿和基底层的膨胀。在放射学上，术语“环状食道”已被用于表示吞钡研究中嗜酸性粒细胞性食管炎的外观，其与食管反流时所见的短暂横向皱褶(称为“猫食道”)相对比。
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗COPD。
患有“慢性阻塞性肺病”(COPD)的受试者可符合一项或多项以下标准：a)先前COPD诊断：根据American Thoracic Society/European Respiratory Society的定义，受试者有临床记录的COPD病史至少1年；b)COPD严重程度：受试者可存在以下情况：所测量的沙丁胺醇前后的一秒钟用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)的比值<0.70，以确认COPD的诊断；测量的沙丁胺醇后FEV1>使用国家健康和营养检查调查(NHANES)III参考方程计算的预测正常值的20％且<＝80％；c)病情恶化史：在12个月内有充分记录的病史(如诊疗记录证实)：至少两次中度COPD恶化。中度被定义为使用全身性皮质类固醇(IM、静脉内或口服)和/或使用抗生素治疗，或至少一种严重的COPD恶化。严重被定义为需要住院治疗。注意：受试者吸入皮质类固醇(ICS)加长效β2-激动剂(LABA)加长效毒蕈碱拮抗剂(LAMA)时，至少发生一次恶化。注意：先前仅使用抗生素不能被认为是中度恶化，除非该药物专门用于治疗COPD的恶化症状；和d)伴随的COPD治疗：在过去的12个月内，有充分的记录需要优化标准护理(SoC)背景治疗，包括ICS和2种额外的COPD药物(即三联疗法)并符合以下标准：在访问医疗保健提供者之前，至少使用3个月的吸入皮质类固醇(剂量≥500微克(mcg)/天的丙酸氟替卡松剂量当量+)；或LABA和LAMA。
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗COPD。
本发明所用的术语“伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病”(EGPA)是指在患有气道过敏性超敏反应(特应性)病史的人中引起中小型血管炎症(血管炎)的自身免疫病症。EGPA也可称为Churg-Strauss综合征(CSS)或过敏性肉芽肿病。EGPA通常表现为三个阶段。早期(前驱)阶段以气道炎症为特征；几乎所有患者都患有哮喘和/或过敏性鼻炎。第二阶段的特征是异常高数量的嗜酸性粒细胞(嗜酸粒细胞增多症)，其导致组织损伤，最常见于肺和消化道。第三阶段由血管炎组成，其可最终导致细胞死亡并可危及生命。
EGPA受试者可符合以下一项或多项标准：a)哮喘；b)血液嗜酸性粒细胞水平大于差别白细胞计数的10％；c)单神经病变或多神经病变的存在；d)未固定的肺浸润；e)鼻旁窦畸形的存在；和e)血管外嗜酸性粒细胞的组织学证据。出于分类的目的，如果前六项标准中至少有四项是肯定的，则应说患者患有EGPA。
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗EGPA。本发明的组合物可以300mg的量每4周向EGPA患者给药一次。
本发明所用术语“嗜酸性粒细胞增多综合征”(HES)是指以血液中嗜酸性粒细胞计数持续升高(≥1500个嗜酸性粒细胞/mm3)至少六个月而没有任何可识别的原因为特征的疾病，涉及心脏、神经系统或骨髓。
患有嗜酸性粒细胞增多综合征的受试者可符合以下一项或多项标准：a)记录的嗜酸性粒细胞增多综合征病史；b)血液嗜酸性粒细胞计数大于1500个细胞，持续6个月；c)涉及器官系统的迹象和症状；和d)综合评估后没有证据表明嗜酸性粒细胞增多症的寄生虫性、变应性或其他原因。
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗嗜酸性粒细胞增多综合征。本发明的组合物可以300mg的量每4周向嗜酸性粒细胞增多综合征患者给药一次。
本发明所用的术语“鼻息肉病”是指以鼻腔息肉为特征的疾病。这种息肉可位于鼻腔上部和/或可起源于窦口鼻道复合体内。
鼻息肉病患者可符合下列一项或多项标准：a)有记载的鼻息肉病史；或b)检查(例如，内窥镜检查)时明显的鼻息肉。
根据本发明的方法，包含美泊利单抗的组合物的治疗可用于治疗鼻息肉病。本发明的组合物可以750mg的量每4周向鼻息肉病患者给药一次。
如本发明所用的术语“抗体”是指具有免疫球蛋白样结构域(例如，IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)的分子并包括单克隆、重组、多克隆、单克隆、重组、多克隆、嵌合、人和人源化的这类分子。单克隆抗体可以通过表达抗体的真核细胞克隆产生。单克隆抗体也可以通过真核细胞系产生，可以通过将编码这些该抗体的重链和轻链的核酸序列导入细胞中而使所述真核细胞系重组表达该抗体的重链和轻链。从不同的真核细胞系如中国仓鼠卵巢细胞、杂交瘤或衍生自动物(例如人)的永生化抗体细胞产生抗体的方法是众所周知的。
抗体可衍生自大鼠、小鼠、灵长类动物(例如食蟹猴、旧大陆猴或大猿猴)、人或其他来源，如使用分子生物学技术产生的编码抗体分子的核酸。
抗体可以包含恒定区，其可以是任何同种型或亚型。恒定区可以是IgG同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。抗原结合蛋白恒定区可以是IgG1。
抗原结合蛋白可以包含选自突变的恒定结构域的一种或多种修饰，使得所述抗体具有增强的效应子功能/ADCC和/或补体激活。
抗体能够结合靶抗原。这种靶抗原的实例包括含有SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的人IL-5。
包含SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的美泊利单抗是抗体的实例。美泊利单抗结合人IL-5并拮抗其活性。
美泊利单抗是重组人源化单克隆抗体(IgG1，Kappa)。美泊利单抗具有两条轻链和两条重链。
美泊利单抗重链由SEQ ID NO：13所示的核酸序列编码。美泊利单抗重链含有449个氨基酸，估计分子量约为49kDa。预测的美泊利单抗成熟重链氨基酸序列是：
在上述重链氨基酸序列中，根据Kabat定义的重链框架和CDR表示为锯齿形下划线框架1、实线下划线CDR1、锯齿形下划线框架2、实线下划线CDR2、锯齿形下划线框架3、实线下划线CDR3和锯齿形框架4，其顺序为从所提供序列的氨基近端部分至羧基端部分。在上述重链氨基酸序列中，单字母氨基酸编码字符右侧的星号表示左侧的氨基酸残基可以是N-糖基化位点。
美泊利单抗轻链由SEQ ID NO：14所示的核酸序列编码。美泊利珠单抗轻链含有220个氨基酸残基，估计分子量约为24kDa。成熟的轻链氨基酸序列是：
在以上轻链氨基酸序列中，根据Kabat定义的轻链框架和CDR表示为锯齿形下划线框架1、实线下划线CDR1、锯齿形下划线框架2、实线下划线CDR2、锯齿形下划线框架3、实线下划线CDR3和锯齿形框架4，其顺序为从所提供序列的氨基近端部分至羧基端部分。
美泊利单抗重链和轻链通过单个二硫键共价连接，并且重链通过两个二硫键彼此连接，产生典型的IgG分子。两条重链均可在天冬酰胺299处与复合双触角(biantennary)寡糖糖基化。预测的多肽分子量约为146kDa，预测的碳水化合物分子量约为3kDa，美泊利单抗的总估计分子量为149.2kDa。所编码的美泊利单抗具有1338个氨基酸残基(每个轻链220个氨基酸残基，每个重链449个氨基酸残基)。美泊利单抗的主要pI约为8.7-9.1。美泊利单抗和人IL-5的分子相互作用的平衡解离常数(KD)使用标准表面等离子体共振测定法测量为小于2.29x10-11M。
美泊利单抗可作为含有该抗体和赋形剂的冻干粉末提供，其可用腰穴上可接受的载体(如无菌水)重构。然后可以将这种重构的药物组合物皮下或静脉内施用(例如，进一步稀释)。美泊利单抗也可以作为含有抗体、赋形剂和药学上可接受的载体的液体制剂提供。然后可以将该液体药物组合物皮下或静脉内施用(例如，进一步稀释)。
如本发明中使用的术语“抗体变体”意指在至少一个重链、轻链或这些的组合上由于至少一个氨基酸修饰(例如通过具有不同的氨基酸侧链)、翻译后修饰或其他修饰而不同于亲本抗体的抗体，其导致相对于亲本抗体发生结构改变(例如，不同的氨基酸侧链、不同的翻译后修饰或其他修饰)。美泊利单抗是这种亲本抗体的一个实例。可以通过本领域众所周知的多种方法直接测定结构变化，例如LC-MS、直接测序或通过诸如等电聚焦等的方法间接测定。这些方法对于本领域的普通技术人员来说是公知的。
如本发明所用的术语“IL-5”意指包含SEQ ID NO：11中所示的氨基酸序列的人IL-5。
如本发明中与抗原结合蛋白相关使用的术语“特异性结合”是指抗原结合蛋白与靶抗原以及靶抗原内的离散结构域或离散氨基酸序列结合，而不与其他(例如，不相关的)蛋白结合或不与其显著结合。然而，该术语并不排除抗原结合蛋白也可与密切相关的分子(例如具有高度序列同一性或来自另一属或种的那些)交叉反应的事实。本发明所述的抗原结合蛋白可以比它们与密切相关的分子结合的亲和力高至少2、5、10、50、100或1000倍的亲和力与人IL-5或人IL-5受体结合。
抗原结合蛋白-靶抗原相互作用的结合亲和力(KD)可以是1mM或更小、100nM或更小、10nM或更小、2nM或更小或1nM或更小。或者，所述KD可为5至10nM；或1至2nM。所述KD可为1pM至500pM；或500pM至1nM。通过缔合常数(Ka)和解离常数(Kd)确定抗原结合蛋白的结合亲和力(KD＝Kd/Ka)。结合亲和力可以通过BIACORETM测量，例如，通过将测试抗体捕获到蛋白质-A涂覆的传感器表面上并使靶抗原在该表面上流动。或者，可以通过FORTEBIO测量结合亲和力，例如，将测试抗体受体捕获到蛋白质A涂覆的针上，并使靶抗原在该表面上流动。
Kd可以是1x10-3 Ms-1或更小、1x10-4 Ms-1或更小、或1x10-5 Ms-1或更小。Kd可为1x10-5 Ms-1至1x10-4 Ms-1；或1x10-4 Ms-1至1x10-3 Ms-1。慢Kd可导致抗原结合蛋白-靶抗原复合物的缓慢解离并改善靶抗原的中和。
如本发明所用术语“特异性抗原结合活性”是指通过表面等离子体共振(SPR)测量的抗原结合活性。可以使用BIACORETM仪器通过SPR确定IL-5特异性结合活性，例如以结合模式进行。其为结合活性除以样品中的总蛋白质(例如，美泊利单抗)含量。
如本发明所用的术语“FcRn结合活性”意指通过表面等离子体共振(SPR)测量的新生儿Fc(FcRn)受体结合活性。可以使用BIACORETM仪器来确定FcRn结合。它为与FcRn受体的结合活性除以样品的总蛋白质浓度。
用于特异性抗原结合和FcRn结合的SPR方法使用美泊利单抗的参比标准。美泊利单抗参比标准可用于测定中，以获得系统适用性和样品可比性数据，以确保方法正确执行。参比标准可以允许建立校准曲线，并从曲线获得样品浓度。
例如，参比标准是包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的组合物。在另一个实施方案中，参比标准是包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，以及98％或更多的HC C-端赖氨酸缺失变体和95％或更多的HC N-端焦谷氨酸变体的组合物。在另一个实施方案中，参比标准是包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，以及98％或更多的HC C-端赖氨酸缺失变体、95％或更多的HCN-端焦谷氨酸变体、和6％或更少的脱酰胺变体的组合物。在另一个实施方案中，参照标准是包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，以及98％或更多的HC C-末端赖氨酸缺失变体、95％或更多的HC N-末端焦谷氨酸变体、6％或更少的脱酰胺化变体、4％或更少的甲硫氨酸或半胱氨酸氧化变体和0.1％色氨酸氧化变体的组合物。在另一个实施方案中，参比标准是包含SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2、以及98％或更多的HC C-端赖氨酸缺失变体、95％或更多的HCN-端焦谷氨酸变体、6％或更少的脱酰胺化变体、4％或更少的甲硫氨酸或半胱氨酸氧化变体、0.1％或更少的色氨酸氧化变体、和0.4％或更少的聚集变体的组合物。在另一个实施方案中，参比标准物是包含由图1所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112所表示的同种型的组合物。在一个实施方案中，参比标准是包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、约62.9％主峰、约35.9％酸峰、约1.2％碱峰、约99.6％单体、约0.4％聚集体、约0％片段、约0.8％ HC脱酰胺化N317、约5.5％ HC脱酰胺化N386、约5.2％ HC脱酰胺化N31、约0.2％ HC脱酰胺化N299、约0.9％ HC氧化M64、约3.5％HC氧化M254、约0.5％ HC氧化M360、约0.5％ HC氧化M430、约0.3％ HC氧化M82和M85、约0.2％ LC氧化M4、约0.0％ LC氧化C220、约0.1％ HC氧化W52、98％或更多的HC C-末端赖氨酸缺失变体和95％或更多HC N-末端焦谷氨酸变体的组合物。
在一个实施方案中，组合物具有≥0.70的特异性IL-5结合活性；和≥70％的FcRn结合活性。例如，与设定为1.0特异性IL-5结合活性和100％FcRn结合活性的参比标准相比，特异性抗原结合在0.70至1.30的范围内；和/或FcRn结合在70％至130％的范围内。
IL-5中和ED50比率是参考抗体标准品的ED50(例如，包含SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2的氨基酸序列的美泊利单抗抗体标准品)除以抗体样品的ED50(例如，美泊利单抗变体样品或包含含有SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2的氨基酸序列的美泊利单抗抗体的制造批量组合物的样品)。
所谓“分离的”，意指将分子如抗原结合蛋白或核酸从其在自然界中可能存在的环境中移除。例如，分子可以从其在自然界中通常存在的物质中纯化出来。例如，样品中分子的质量可能是总质量的95％。
本发明所用术语“VH”和“VL”分别用于指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。
“CDR”被定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高可变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链CDR和三个轻链CDR(或CDR区)。因此，本发明所用的“CDR”是指全部三个重链CDR、全部三个轻链CDR、全部重链和轻链CDR或至少一个CDR，并且其中至少一个CDR是CDRH3。框架区紧跟在这些CDR区域中的每一个之后。本领域普通技术人员容易识别可接受的重链可变区和轻链可变区框架1、框架2和框架3区。本领域普通技术人员也容易识别可接受的重链恒定区(包括铰链区)和轻链恒定区。本领域普通技术人员同样容易识别可接受的抗体同种型。
在整个说明书中，根据Kabat编号惯例对可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基进行编号。类似地，说明书中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵循Kabat编号惯例。
对于本领域技术人员来说显而易见的是，可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基有其他编号规则。对于CDR序列也有其他的编号规则，例如根据Chothia编号惯例提出的编号规则。抗体的结构和蛋白质折叠可以指其他残基被认为是CDR序列的一部分，并且技术人员将理解为是这样。
对于技术人员可用的CDR序列的其他编号惯例包括“AbM”(巴斯大学)和“接触”(伦敦大学学院)方法。使用Kabat、Chothia、AbM和接触方法中的至少两种的最小重叠区域可被确定以提供“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的子部分。
下表5代表对每个CDR或结合单位使用每个编号惯例的一个定义。表5中使用Kabat编号方案来编号可变结构域氨基酸序列。应该注意的是，一些CDR定义可因所使用的各出版物而异。
表5
| Kabat CDR | Chothia CDR | AbM CDR | 接触CDR | 最小结合单位 | |
| H1 | 31-35/35A/35B | 26-32/33/34 | 26-35/35A/35B | 30-35/35A/35B | 31-32 |
| H2 | 50-65 | 52-56 | 50-58 | 47-58 | 52-56 |
| H3 | 95-102 | 95-102 | 95-102 | 93-101 | 95-101 |
| L1 | 24-34 | 24-34 | 24-34 | 30-36 | 30-34 |
| L2 | 50-56 | 50-56 | 50-56 | 46-55 | 50-55 |
| L3 | 89-97 | 89-97 | 89-97 | 89-96 | 89-96 |
查询核酸序列与主题核酸序列之间的“百分比同一性”是在进行成对BLASTN比对后，当主题核酸序列与查询核酸序列具有100％查询覆盖率时通过BLASTN算法计算的“同一性”值，以百分比表示。查询核酸序列和主题核酸序列之间的这种成对BLASTN比对通过使用National Center for Biotechnology Institute网站上可用的BLASTN算法的默认设置来进行，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询序列可以由本发明的一个或多个权利要求中所标识的核酸序列来描述。
可用于并包括在本发明组合物和相关方法中的核酸序列可与本发明中鉴定的核酸序列(例如，编码抗体重链或抗体轻链的核酸)具有约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％和约100％同一性。在本发明中，所描述的核酸序列之间的同一性百分比可以包括上面列举的百分比同一性范围的任何离散子范围(例如，特定范围内的整数值的任何范围或特定范围内的离散子值)。
查询氨基酸序列与主题氨基酸序列之间的“百分比同一性”是在进行成对BLASTP比对后，当主题氨基酸序列与查询氨基酸序列具有100％查询覆盖率时通过BLASTP算法计算的“同一性”值，以百分比表示。查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的这种成对BLASTP比对通过使用National Center for Biotechnology Institute网站上可用的BLASTP算法的默认设置来进行，其中关闭低复杂度区域的过滤器。重要的是，查询序列可以由本发明的一个或多个权利要求中所标识的氨基酸序列来描述。
可用于并包括在本发明组合物和相关方法中的氨基酸序列可与本发明中鉴定的氨基酸序列(例如，抗体重链或抗体轻链)具有约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％和约100％同一性。在本发明中，所描述的氨基酸序列之间的同一性百分比可以包括上面列举的百分比同一性范围的任何离散子范围(例如，特定范围内的整数值的任何范围或特定范围内的离散子值)。
术语“肽”、“多肽”、“蛋白质”和“肽链”各自是指包含两个或更多个氨基酸残基的分子。肽可以是单体的或多聚体的。
本领域公认一些氨基酸取代被认为是“保守的”。根据常见的侧链特性将氨基酸分组，并且保持抗原结合蛋白的全部或基本上全部结合亲和力的组内的取代被认为是保守取代。参见表6。本发明公开的抗原结合蛋白可包含此类“保守”氨基酸取代。
表6
| 侧链 | 成员 |
| 疏水的 | met，ala，val，leu，ile |
| 中性亲水的 | cys，ser，thr |
| 酸性的 | asp，glu |
| 碱性的 | asn，gln，his，lys，arg |
| 影响链取向的残基 | gly，pro |
| 芳香的 | trp，tyr，phe |
本发明所用术语“药物组合物”是指适合于施用于患者的组合物。
本发明所述的药物组合物可以包含如本发明所述的抗体的纯化制剂。
例如，药物制剂可以包含本发明所述的抗体的纯化制剂以及药学上可接受的载体。
典型地，这样的药物组合物包含可接受的药物实践中已知的且要求的药学上可接受的载体。此类载体的实例包括灭菌的载体，例如盐水、林格氏溶液或右旋糖溶液，任选地用合适的缓冲液缓冲至pH范围为5至8。
药物组合物可以通过注射或输注(例如静脉内、腹膜内、皮内、皮下、肌内或门静脉内)施用。这种组合物适宜地没有可见的颗粒物质。药物组合物可包含1mg至10g抗原结合蛋白，例如5mg至1g的抗原结合蛋白。或者，组合物可以包含5mg至500mg的抗原结合蛋白，例如5mg至50mg。
制备这种药物组合物的方法是本领域技术人员公知的。药物组合物可以包含1mg至10g单位剂量形式的抗原结合蛋白，任选地还有使用说明书。根据本领域技术人员公知或显而易见的方法，药物组合物可以在施用之前冻干(冷冻干燥)以用于重构。当抗体具有IgG1同种型时，可以将铜的螯合剂(例如柠檬酸盐(例如柠檬酸钠)或EDTA或组氨酸)添加到药物组合物中以降低铜介导的该同种型抗体的降解程度。药物组合物还可以包含增溶剂(例如精氨酸)、表面活性剂/抗聚集剂(例如聚山梨醇酯80)和惰性气体(例如氮气)以替代小瓶顶部空间氧气。
如本发明所用的术语“治疗有效量”是指在治疗或控制待治疗病症(例如哮喘，严重的嗜酸性粒细胞性哮喘，不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘，嗜酸性粒细胞性哮喘，亚-嗜酸性粒细胞性哮喘，慢性阻塞性肺疾病，伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病(EGPA)，嗜酸性粒细胞增多综合征和鼻息肉病)的一种或多种症状时提供治疗益处的药剂(例如抗体或药物组合物)的量。这种对哮喘(包括严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘或亚-嗜酸性粒细胞性哮喘)的一或多个症状的治疗或管理实例包括：1)降低哮喘恶化的频率；2)减少需要口服或全身性皮质类固醇激素、住院和/或急诊(ED)就诊的首次临床显著恶化的时间；3)减少需要住院治疗(包括插管和入住重症监护病房)或ED就诊的恶化频率；4)减少需要住院治疗或急诊就诊的首次恶化时间；5)临床的支气管扩张剂之前FEV1与基线相比的变化；6)临床的支气管扩张剂后FEV1与基线相比的变化；7)哮喘控制问卷(ACQ)评分与基线相比的变化；8)通过肺量测定法(例如，肺活量(VC)、用力肺活量(FVC)、0.5、1.0(FEV1)、2.0和3.0秒的时间间隔的用力呼气量(FEV)、用力呼气流量25-75％(FEF 25–75)和最大通气量(MVV)总肺容量、潮气量(idal volume)、残气量、补呼气量、补吸气量、吸气量、吸气肺活量、肺活量、功能残气量、以肺总容量的百分比表示的残气量、肺泡气容量、包括导气管容积在内的肺的实际容积、用力肺活量等)评估后改善的肺功能；和9)减少需要类固醇控制(例如口服类固醇或通过任何途径施用类固醇，如泼尼松、泼尼松龙等)的哮喘的恶化。需要类固醇控制的哮喘的恶化的这种减少可以是需要类固醇(例如口服类固醇)的恶化减少约50％。
治疗有效量和治疗方案通常根据经验确定，并且可取决于诸如患者的年龄、体重和健康状况以及待治疗的疾病或病症等因素。这些因素在主治医师的权限内。
施用于受试者的抗原结合蛋白的剂量通常为1μg/kg至150mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、0.5mg/kg至50mg/kg、1至25mg/kg之间、约0.3mg/kg至约3mg/kg或1至10mg/kg的受试者体重。例如，所述剂量可为10mg/kg、30mg/kg或60mg/kg。所述剂量也可为10mg/kg至110mg/mg、15mg/kg至25mg/kg或15mg/kg至100mg/kg。抗原结合蛋白可以例如肠胃外、皮下、静脉内或肌内施用。剂量也可以以每个受试者为基础施用，例如每个受试者约20mg至每个受试者约750mg、每个受试者约75mg至每个受试者约750mg、每个受试者约20mg至每个受试者约200mg。剂量可以是在这些剂量范围内的任何离散的子范围。例如，所述剂量(例如美泊利单抗或包含美泊利单抗的药物组合物的剂量)也可以每个受试者为基础皮下给药，例如每个受试者约100mg(例如，每四周一次)或每个受试者300mg(或其他剂量可以皮下给药，以提供与静脉内给药大致相同或相当的生物利用度-例如，每个受试者三次100mg的剂量以实现向每位受试者皮下施用300mg的总剂量)。
本发明提供的任何类型的范围包括所描述的特定范围内的所有值以及关于特定范围的端点的值。
如果需要，治疗性组合物的有效日剂量可以在一天内以适当的间隔分开施用2、3、4、5、6或更多个剂量，任选地以单位剂型施用。
剂量的施用可以通过在2至24小时，例如2至12小时、或2至6小时的时间内缓慢连续输注。这种给药可导致降低的副作用。
剂量的施用可以根据需要重复一次或多次，例如每天三次、每天一次、每两天一次、每周一次、每14天一次、每月一次、每3个月一次、每4个月一次、每6个月一次或每12个月一次。抗原结合蛋白可以通过维持治疗施用，例如每周一次持续6个月或更长的时间。抗原结合蛋白可以通过例如间歇疗法进行给药，例如在一个周期中给药3至6个月，然后不给药3至6个月，然后再次给药抗原结合蛋白3至6个月，等等。
例如，所述剂量可以在每个给药日以多次剂量的形式皮下给药，每14或28天一次。在一个实施方案中，组合物的剂量是每4周(28天)100mg。
抗原结合蛋白可以以对特定部位靶向治疗的方式施用于受试者。
本发明方法中的抗原结合蛋白可以与一种或多种其他治疗活性剂(例如抗体或小分子抑制剂)组合使用。
如本发明所用，术语“治疗”及其语法变体意指治疗疗法。关于特定病症，治疗是指：(1)改善病症的一种或多种生物学表现的状况；(2)干扰a)导致对该病症或是对该病症负责的生物级联中的一个或多个点或b)病症的一种或多种生物学表现；(3)减轻与该病症或其治疗相关的一种或多种症状、作用或副作用；(4)减缓该病症或该病症的一个或多个生物学表现的进展；或(5)预防该病症的一种或多种生物学表现的发病。因此也考虑预防性治疗。本领域技术人员将认识到“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”应被理解为是指预防性施用药物以显著降低病症或其生物学表现的可能性或严重性，或延迟该病症或其生物学表现的发作。
术语“个体”、“受试者”和“患者”在本发明中可互换使用。所述受试者通常是人。所述受试者也可以是哺乳动物，例如小鼠、大鼠或灵长类动物(例如狨猴或猴子)。所述受试者可以是非人动物。本发明的抗原结合蛋白、组合物和方法也具有兽医用途。待治疗的对象可以是农场动物，例如母牛或公牛、绵羊、猪、牛、山羊或马，或者可以是家畜，例如狗或猫。所述动物可以是任何年龄，或成熟的成年动物。
治疗可以是治疗性的、预防性的或预防的。所述受试者将是需要它的人。那些需要治疗的人可包括那些已经患有特定疾病的人，以及那些未来可能患上这种疾病的人。
因此，如果指定，此处所述的本发明方法、抗原结合蛋白和组合物可用于预防性治疗或预防治疗。在这种情况下，本发明方法、抗原结合蛋白和组合物可用于预防或延迟疾病的一个或多个方面或症状的发作。所述受试者可以是无症状的。所述受试者可具有该疾病的遗传倾向。对这样的个体施用预防有效量的抗原结合蛋白。预防有效量是防止或延迟本发明所述疾病的一个或多个方面或症状发作的量。
本发明的方法、抗原结合蛋白和组合物不需要实现完全治愈或根除疾病的每个症状或表现来构成可行的治疗性治疗。如本领域所公认的，在治疗方法中用作治疗剂的药物可以降低给定疾病状态的严重程度，但不需要消除该疾病的每一种表现，即可被认为是有用的治疗剂。类似地，预防性施用治疗不需要完全有效地预防疾病的发作以构成可行的预防剂。简单地，减少疾病的影响(例如，减少其症状的数量或严重程度，或提高另一种治疗的有效性，或产生另一种有益效果)或减少疾病发生的可能性(例如通过延迟疾病的发作)或在受试者中恶化便足够了。
本发明的一个方面是一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体。
在一个实施方案中，组合物具有：a)≥0.70IL-5特异性抗原结合；和/或b)≥70％的FcRn结合。IL-5特异性抗原结合，例如与包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的人IL-5的结合，可使用在本领域中熟知的标准测定法(例如表面等离子体共振(例如BIACORETM))来测量。可以使用本领域熟知的标准测定法(例如表面等离子体共振(例如BIACORETM))类似地测量FcRn结合。
在另一个实施方案中，a)所述特异性抗原结合的范围是0.70至1.30；和/或b)所述FcRn结合的范围是70％至130％。在一些实施方案中，所述特异性抗原结合的范围可为约0.9至1.1、0.75至约1、约0.7至约0.8、约0.7、约0.91至约0.95、约.994至约.997、或约0.7至约0.9。在一些实施方案中，所述FcRn结合的范围是约70％至约100％、约100％至约130％、约70％、约80％、约90％、约100％、约110％、约120％、约80％至约90％、约80％至约100％、约100％至约110％、约110％至约120％、约120％至约130％、约80％至约120％和约90％至约110％。
在一个实施方案中，所述组合物包含：≤80％的酸性抗体变体。例如，组合物可以包含≤75％、≤70％、≤65％、≤60％、≤55％、≤50％或≤45％的酸性抗体变体。
在另一个实施方案中，所述组合物包含：≤35％脱酰胺化抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体。例如，所述组合物可包含≤22.5％、≤20％、≤17.5％、≤15％、≤12.5％、≤10％或≤7.5％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体。例如，所述组合物可包含≤32.5％、≤30％、≤25.5％或≤20％、≤17.5％、≤15％、≤12.5％、≤10％或≤7.5％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤55％氧化的抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤55％在以下任一处或组合处氧化的抗体变体:a)重链氨基酸序列的M64处；b)在重链氨基酸序列的M254处；和/或c)在重链氨基酸序列的M430处。例如，所述组合物可包含≤50％、≤45％、≤40％、≤35％、≤30％或≤25％、≤20％、≤15％、≤10％或≤5％在重链氨基酸序列的M64、M254和/或M430处氧化的抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体。例如，所述组合物可包含≤2.5％、≤2％、≤1.5％、≤1％、≤0.5％、≤0.4％、≤0.3％、≤0.25％、≤0.2％、≤0.15％或≤0.1％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体。
在另一实施方案中，脱酰胺化的抗体变体量和/或氧化的变体量通过肽谱LC-MS/MS确定。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≤20％聚集的抗体变体。例如，所述组合物可包含≤17.5％、≤15％、≤12.5％、≤10％、≤7.5％、≤5％或≤4％聚集的变体。所述组合物可包含小于或等于3％、2％、1％或0.5％的聚集的抗体。所述组合物可包含大于或等于98％的单体抗体。
在另一实施方案中，所述聚集的抗体变体包括二聚体。这种聚集的抗体可包含两个抗体分子(例如，两个IgG1抗体分子)。
在另一实施方案中，所述聚集的抗体变体的量通过尺寸排阻色谱(SEC)确定。用于进行尺寸排阻色谱和测量蛋白分子大小的方法是本领域熟知的。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≥50％重链氨基酸序列C端赖氨酸K449缺失的抗体变体。例如，所述组合物可包含≥60％、≥70％、≥75％、≥80％、≥85％、≥90％或≥95％重链氨基酸序列C端赖氨酸K449缺失的抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含：≥50％重链氨基酸序列焦谷氨酸N末端抗体变体。例如，所述组合物可包含≥60％、≥70％、≥75％、≥80％、≥85％、≥90％或≥95％重链氨基酸序列焦谷氨酸N末端抗体变体。
在另一实施方案中，所述组合物包含宿主细胞蛋白(HCP)。所述HCP可为CHO细胞衍生的。与美泊利单抗产品相关物质(即美泊利单抗加美泊利单抗变体)相比，HCP是与过程有关的杂质。HCP的行业标准可接受限值可为至多100ppm(等于100ng/mg)。本发明所述组合物中的HCP含量可以为≤50ng/mg、≤40ng/mg、≤30ng/mg或≤20ng/mg。例如，组合物的HCP含量可以为≤10ng/mg。在一个具体的实施方案中，所述组合物的HCP含量可以为≤5ng/mg或≤2ng/mg。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含一种抗体，其具有SEQ IDNO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含一种抗体，其具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含一种抗体，其具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列W52处氧化的变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含一种抗体，其具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含一种抗体，其具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处、在重链氨基酸序列的M254处、在重链氨基酸序列的M430处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
本发明的组合物可进一步包含选自以下的缓冲剂：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠和组氨酸，提供6.8至7.2的pH或pH 6.2至pH6.6，其中6.3的pH值是优选的。本发明的组合物中的缓冲液可以约10-30mM、约10-20mM、约20mM或约15.5mM存在。例如，本发明的组合物中的缓冲液以约20mM或约15.5mM磷酸氢二钠七水合物存在。
本发明的组合物可包含磷酸氢二钠七水合物和柠檬酸缓冲剂，其提供6.2至6.6的pH值，其中6.3的pH值是优选的。磷酸氢二钠七水合物缓冲剂可以约15-16.4mM的范围存在且所述柠檬酸缓冲剂可以约3.8-4.9mM的范围存在。例如，本发明的组合物可包含约15.5mM磷酸氢二钠七水合物和约4.5mM柠檬酸一水合物。
本发明的组合物可进一步包含糖。本发明的组合物可进一步包含蔗糖。蔗糖可以约5-20容重％；约10-15容重％、约11-13容重％或约12容重％存在于本发明的组合物中。
本发明的组合物可进一步包含聚山梨酯80。聚山梨酯80可以约0.01-0.1容重％的范围存在。例如，聚山梨酯80可以约0.02容重％或约0.05容重％存在于本发明的组合物中。
本发明的组合物可进一步包含EDTA。EDTA可以约0.01-0.1mM的范围存在。例如，EDTA可以约0.05mM存在。
在一个实施方案中，本发明的组合物还包含20mM磷酸氢二钠七水合物、12容重％蔗糖和0.05容重％聚山梨酯80。
在另一实施方案中，本发明的组合物还包含15.5mM磷酸氢二钠、3.9mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本发明的组合物可包含含有16.1mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA的pH 6.2的水性液体制剂。
本发明的组合物可以包含pH 6.2的水性液体制剂，其含有15.2mM磷酸氢二钠七水合物、4.8mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本发明的组合物可包含pH 6.4的水性液体制剂，其含有15.8mM磷酸氢二钠七水合物、4.2mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本发明的组合物可含有pH 6.6的水性液体制剂，其含有16.3mM磷酸氢二钠七水合物、3.7mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本发明的组合物可以包含pH 6.3的水性液体制剂，其含有15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA。重要的是，可以调节下文实施例1的切向过滤和超滤交换步骤以产生本发明的组合物，例如本发明组合物，其包含15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80、0.05mM EDTA，pH 6.3—或其他这样的液体制剂。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.8至7.2，其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。在该组合物中，所述重链可包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少95％、96％、96.88％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在该组合物中，所述轻链可包含与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少98％，98.63％或99％同一性的氨基酸序列。
在一个实施方案中，所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸盐。
在另一实施方案中，所述缓冲剂为磷酸钠、磷酸钾或柠檬酸钠。
在另一实施方案中，所述组合物还包含糖、碳水化合物和/或盐。
在另一实施方案中，所述组合物包含蔗糖。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.8至7.2，其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
在另一实施方案中，所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸盐。
在另一实施方案中，所述组合物还包含糖。
在另一实施方案中，所述蔗糖为蔗糖。
在另一实施方案中，所述组合物包含聚山梨酯80。
在另一实施方案中，所述组合物包含选自以下的一种：20mM磷酸氢二钠七水合物、12容重％蔗糖和0.05容重％聚山梨酯80的第一制剂；和15.5mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、12容重％蔗糖、0.02容重％聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第二制剂；和26mM磷酸氢二钠七水合物、15容重％蔗糖和0.065容重％聚山梨酯80的第三制剂。所述组合物的pH可为约6.8至约7.2、约6.1至约6.5或约6至约6.6。
在另一实施方案中，对于包含SEQ ID NO：11中所示氨基酸序列的人白细胞介素-5而言，抗体具有小于或等于约3.5×10-11M的解离常数。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。主要形式的抗体还可以组成大于或等于57.9％、59.4％和60％的该组合物中的蛋白质，如使用组合物的毛细管等电聚焦所测量的。
在另一实施方案中，主要形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。抗体的酸形式也可组成大于或等于37.6％、37.8％、38.4％和39.8％的该组合物中的蛋白质，如使用组合物的毛细管等电聚焦所测量的。由cIEF确定的总酸峰可高达72％并仍保留0.74IL-5特异性结合和80％FcRn结合。
在另一实施方案中，酸性形式的抗体包括选自以下的至少一种：峰65酸性形式、峰78酸性形式、峰88酸性形式和峰92酸性形式。
在另一实施方案中，酸性形式的抗体包括至少一种选自以下的脱酰胺化氨基酸残基：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。通过肽谱LC MS/MS测量，LC N31上可接受的脱酰胺水平大于或等于17％，或大于或等于17.4％。如通过肽谱LC MS/MS测量，HC 386上可接受的脱酰胺水平大于或等于30％。可接受的上限水平可以是特定变体的水平，其允许组合物中的抗体分子保留通过SPR测量的约0.70至约1.30的抗原结合活性，以及通过SPR测量的约70％至约130％的FcRn结合活性或本发明公开的其他抗原结合活性或FcRn结合活性的数值或范围。
在另一实施方案中，酸性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。通过肽谱LC-MS/MS测量，抗体的重链残基上可接受的氧化水平对于HC M64、M254和M430可为约50％，且对于HC W52可为约3％。可接受的上限水平可以是特定变体的水平，其允许组合物中的抗体分子保留通过SPR测量的约0.70至约1.30的抗原结合活性和通过SPR测量的约70％至约130％的FcRn结合活性或本发明公开的其他抗原结合活性或FcRn结合活性的数值或范围。
在另一实施方案中，主要形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；以及酸性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。抗体的碱性形式也可组成该组合物中大于或等于2.2％和2.3％的蛋白质，如使用组合物的毛细管等电聚焦所测量的。
在另一实施方案中，抗体的碱性形式包括峰112碱性形式。
在另一实施方案中，抗体的碱性形式包含羧基末端残基为甘氨酸448的重链。
在另一实施方案中，所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基，在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基，在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基.
在另一实施方案中，主要形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；以及所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和d)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
在另一实施方案中，酸性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；以及所述碱性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基。
在另一实施方案中，主要形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；酸性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；以及其中所述碱性形式的抗体包括至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基；和c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。在该组合物中，CDRH2可包含与SEQ ID NO:6的氨基酸序列具有至少85％或87.5％同一性的氨基酸序列。在该组合物中，CDRL1可包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列具有93％、94％或94.11％同一性的氨基酸序列。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基的氧化形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ IDNO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和b)包含在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基的氧化形式的抗体；和c)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。在该组合物中，所述重链可变区可包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％、95％或95.57％同一性的氨基酸序列。在该组合物中，所述轻链可变区可包含与SEQ ID NO:3的氨基酸序列具有至少90％、98％或98.31％同一性的氨基酸序列。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ IDNO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体；和c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
在另一实施方案中，总蛋白质浓度为约75mg/mL。总蛋白质浓度还可以是约75mg/mL至约150mg/mL范围内的任何一对值或单个值，例如约75mg/mL至约100mg/mL、约67.3至约87.5mg/mL、约76g蛋白质/L至约82g蛋白质/L、约46g蛋白质/L至约66g蛋白质/L或约100mg/mL。在该组合物中，在该样品中的抗-人-IL-5抗体的纯度大于或等于97.0％、96％、95％或80％、85％。
在另一实施方案中，所述组合物还包括a)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
在另一实施方案中，所述组合物还包括a)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和b)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
在另一实施方案中，所述组合物还包括a)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和b)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
在另一实施方案中，所述组合物还包括a)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；b)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基1处的氨基末端焦谷氨酸残基、氨基酸残基448处的羧基末端甘氨酸氨基酸残基、299位的脱酰胺化天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位的氧化的半胱氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约92％以上的群体在抗体重链的氨基酸残基1处包含氨基末端焦谷氨酸残基；b)约90％以上的群体在抗体重链的氨基酸残基448处包含羧基末端甘氨酸氨基酸残基；c)6.0％以下的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；d)约1.5％以下的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；e)约4.5％以下的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；f)约0.8％以下的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；和g)约6.6％以下的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约92％至约99％的群体在抗体重链的氨基酸残基1处包含氨基末端焦谷氨酸残基；b)约95％至约99.5％的群体在抗体重链的氨基酸残基448处包含羧基末端甘氨酸氨基酸残基；c)约0.3％至约1.5％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，d)约1.5％至约4.5％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；e)约0.5％至约1.5％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；f)约0.2％至约1.5％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；g)约2.5％至约3.5％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；h)约0.4％至约0.8％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；i)约3.3％至约6.6％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和j)约0.1％至约1％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约93.7％至约98.6％的群体在抗体重链的氨基酸残基1处包含氨基末端焦谷氨酸残基；b)约97.6％至约99.2％的群体在抗体重链的氨基酸残基448处包含羧基末端甘氨酸氨基酸残基；c)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；d)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；e)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；f)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；g)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；h)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；i)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和j)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和222位氧化的半胱氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.3％至约1.5％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；b)约1.5％至约4.5％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；c)约0.5％至约1.5％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；d)约0.2％至约1.5％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；e)约2.5％至约3.5％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；f)约0.4％至约0.8％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；g)约3.3％至约6.6％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和h)约0.1％至约1％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；b)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；c)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；d)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；e)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；f)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；g)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和h)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位的脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基和386位脱酰胺化的天冬酰胺残基；和b)SEQ IDNO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.3％至约1.5％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；b)约1.5％至约4.5％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和c)约3.3％至约6.6％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，b)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和c)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有a)SEQ IDNO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸残基、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含至少一个氨基酸残基修饰，其选自4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.5％至约1.5％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；b)约0.2％至约1.5％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；c)约2.5％至约3.5％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；d)约0.4％至约0.8％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；和e)约0.1％至约1％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
在另一实施方案中，所述组合物包含：a)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基；b)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基；c)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸；d)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基；和e)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的至多约80％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
在另一实施方案中，所述组合物用于治疗选自以下的疾病：哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎。
另一实施方案是在受试者中治疗疾病的方法，其包括以下步骤：a)鉴定受试者患有选自以下的疾病：哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎；和b)向所述受试者给药治疗有效量的本发明组合物；从而治疗该受试者中的疾病。
另一实施方案是制备本发明组合物的方法，其包括以下步骤：a)在宿主细胞中表达具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体；b)在约6.75至约7.00的pH下培养细胞；c)收获细胞培养物上清液；d)将细胞培养物上清液与蛋白质A树脂或蛋白质G树脂接触以结合抗体分子；e)从树脂上洗脱该抗体分子以产生第一洗脱液；f)在约3.3至约3.7的pH下处理第一洗脱液约15至约240分钟以产生处理过的第一洗脱液；g)将处理过的第一洗脱液在约8.3至约8.7的负载pH下与阴离子交换树脂接触；h)从阴离子交换树脂中收集第二洗脱液(流穿洗脱液)并保持约96小时或更少时间；i)用胍和硫酸铵处理第二洗脱液以产生溶液；j)以约12g蛋白质/L树脂的负载比至约27g蛋白质/L树脂的负载比将所述溶液与疏水性相互作用色谱树脂床接触；k)用约9树脂床体积至约11树脂床体积的洗脱梯度体积洗脱包含来自疏水相互作用色谱树脂的抗体分子的第三洗脱液，洗脱峰值截止为约17％的最大峰高至约23％的最大峰高；和l)配制第三洗脱液；由此制造本发明组合物。在本发明的方法中，任何核酸序列适用于表达以下抗体：具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体。例如，SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的核酸序列可用于表达真核细胞中的抗体。或者，可以使用具有编码(例如由于使用替代密码子)SEQ ID NO：1所示的抗体重链氨基酸序列或SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的不同序列的其他核酸序列。在本发明的方法中，可以通过在约6.75至约7.00的pH下培养细胞来控制脱酰胺作用。在本发明的方法中，可以通过培养细胞约12至约18天使得体外细胞龄小于或等于166天来控制脱酰胺。在本发明的方法中，可以通过将处理的第一洗脱液与阴离子交换树脂在约8.3至约8.7的负载pH下接触并且从阴离子交换树脂收集第二洗脱液并将其保持约96小时或更少时间来控制脱酰胺作用。在本发明的方法中，聚集可通过以下控制：在苯基SEPHAROSETM快速流动色谱过程中，通过以约12g蛋白质/L树脂负载率与约27g蛋白质/L树脂的负载率将所述溶液与疏水相互作用色谱树脂床接触；用约9树脂床体积至约11树脂床体积的洗脱梯度体积洗脱包含来自疏水相互作用色谱树脂的抗体分子的第三洗脱液，洗脱峰值截止为约17％的最大峰高至约23％的最大峰高。在本发明药物组合物的最终过滤、填充和冷冻后，也可将聚集限制为小于或等于约6小时。重要的是，所公开的方法的任何步骤都可以省略，或者组合以产生本发明组合物。.
产生抗体后，可发生翻译后修饰。这可以包括一些前导序列的切割、以各种糖基化模式添加各种糖部分、脱酰胺(例如在天冬酰胺或谷氨酰胺残基处)、氧化(例如在甲硫氨酸、色氨酸或游离半胱氨酸残基处)、二硫键扰乱、异构化(例如在天冬氨酸残基处)、C端赖氨酸剪切(例如从一条或两条重链剪切)和N-端谷氨酰胺环化(例如在重链和/或轻链中)。
所述抗体组合物可以包括(i)抗体(即，具有SEQ ID NO：1所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2所示的轻链氨基酸序列的抗体)；和(ii)包括电荷变体(例如酸性和碱性变体)、氨基酸序列变体和抗体结构变体(例如聚集和片段化变体)中的一种或多种或其组合的抗体变体。
酸性或碱性抗体变体可基于它们的总体酸性或碱性电荷来表征并与抗体进行区分。例如，可以使用毛细管等电聚焦(cIEF)或离子交换色谱来检测抗体组合物的电荷分布。酸性变体可包括脱酰胺化抗体变体、糖化抗体变体、唾液酸化抗体变体和氧化抗体变体。抗体变体中的半胱氨酸和色氨酸氧化导致pI位移(即电荷差异)并且用其他酸性抗体变体检测。抗体变体中的甲硫氨酸氧化可以通过抗原结合的变化或通过肽谱，例如通过LC-MS/MS来监测。
脱酰胺是主要以约3:1比率将天冬酰胺(N)转化为异天冬氨酸(iso-D)和天冬氨酸(D)的酶促反应。因此该脱酰胺反应与天冬氨酸(D)异构化为异天冬氨酸有关。天冬酰胺的脱酰胺和天冬氨酸的异构化均涉及中间体琥珀酰亚胺。在很小程度上，以类似的方式可以用谷氨酰胺残基进行脱酰胺作用。脱酰胺化可发生在CDR、Fab(非CDR区)或Fc区中。
脱酰胺作用引起抗体电荷的变化，使得脱酰胺化抗体变体与所述抗体相比呈酸性。所述抗体组合物可以包含≤35％的脱酰胺化抗体变体。例如，轻链的N31可以脱酰胺为Iso-D、D或琥珀酰亚胺。所述抗体组合物可以在轻链的第31位包含≤25％的脱酰胺化抗体变体。这可导致抗体轻链序列中一个氨基酸改变，例如在≤25％的抗体组合物中。
例如，重链的N386可以脱酰胺为Iso-D、D或琥珀酰亚胺。所述抗体组合物可以在重链的386位包含≤35％的脱酰胺化抗体变体。这可导致抗体重链序列中一个氨基酸改变，例如在≤35％的抗体组合物中。该组合物可以包含抗体变体的混合物。脱酰胺事件可以是累积的，因此两个或多个天冬酰胺残基被脱酰胺化。因此，所述抗体组合物可以在抗体重链序列中包含至少一个氨基酸变化和/或抗体重链序列中的至少一个氨基酸变化。例如，所述抗体组合物可包含轻链第31位的脱酰胺化的抗体变体和重链第386位的脱酰胺化的抗体变体。
在生产和储存期间(即在氧化条件的存在下)可以发生氧化，并导致蛋白质的共价修饰，其由活性氧物质直接诱导或通过与氧化应激的次级副产物反应间接诱导。氧化主要发生在甲硫氨酸残基上，但可发生在色氨酸和游离半胱氨酸残基上。氧化可以发生在CDR、Fab(非CDR)区域中或Fc区域中。
氧化可引起抗体电荷的变化，使得氧化的抗体变体与抗体相比呈酸性。一些氧化的抗体变体与所述抗体具有相同的电荷。所述抗体组合物可以包含≤55％的氧化的抗体变体。例如，重链的M64、M254和/或M430中的任何一个或其组合可以被氧化。抗体组合物可以在重链的M64、M254和/或M430中的任一个或组合处包含≤55％的氧化的抗体变体。例如，重链的W52可被氧化。所述抗体组合物可以在重链的W52处包含≤3％的氧化的抗体变体。
该组合物可以包含抗体变体的混合物。因此，所述抗体组合物可以包含抗体重链序列中的至少一个氨基酸变化和/或抗体重链序列中的至少一个氨基酸变化。例如，所述抗体组合物可以在轻链的第31位包含脱酰胺化的抗体变体；和/或重链386位的脱酰胺抗体变体；和/或在重链的M64、M254和/或M430和/或W52中的任一个或其组合处氧化。
在生产和基本储存条件下可发生二硫键扰乱。在一些情况下，二硫键可断裂或不正确地形成，导致不成对的半胱氨酸残基(-SH)。这些游离(不成对)的巯基(-SH)可以促进改组(shuffling)。
重链和/或轻链中的N-末端谷氨酰胺(Q)和谷氨酸(E)可通过环化形成焦谷氨酸(pGlu)。据认为，大多数pGlu形成发生在生产生物反应器中，但它也可以非酶促形成，这取决于加工和储存条件的pH和温度。通常在天然人抗体中观察到N-末端Q或E的环化。本发明所述的抗体组合物可以在抗体的N末端包含≥50％的pGlu。pGlu可存在于重链中。这可导致抗体的重链或轻链序列中的一个氨基酸改变，例如在≥50％的抗体组合物中。
该组合物可以包含抗体变体的混合物。序列变化可以是累积的，使得所述组合物在重链和/或轻链中包含两个或更多个序列变化。因此，抗体组合物可以包含抗体重链序列中的至少一个氨基酸变化和/或抗体重链序列中的至少一个氨基酸变化。例如，所述抗体组合物可以在轻链的第31位包含脱酰胺化的抗体变体；和/或重链386位的脱酰胺化的抗体变体；和/或在重链的M64、M254和/或M430和/或W52的任一个或其组合处氧化；和/或重链和/或轻链的N端的pGlu。
C-末端赖氨酸剪切是由羧肽酶催化的酶促反应，并且通常在重组和天然人抗体中观察到。该过程的变体包括由于来自重组宿主细胞的细胞酶而从一条或两条重链中去除赖氨酸。在向人受试者/患者给药后会导致除去任何剩余的C-末端赖氨酸。本发明所述的抗体组合物可包含≥50％在抗体的C端缺失C端赖氨酸。K449可在抗体的一条或两条重链中缺失。因此存在两种抗体变体：重链中的赖氨酸单一缺失和重链中的赖氨酸双重缺失。抗体(即，具有SEQ ID NO：1所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2所示的轻链氨基酸序列的抗体)具有完整/存在的赖氨酸。这可导致抗体重链序列中一个氨基酸改变，例如在≥50％的抗体组合物中。
该组合物可以包含抗体变体的混合物。例如，所述抗体组合物可以在轻链的第31位包含脱酰胺化的抗体变体；和/或重链386位的脱酰胺化的抗体变体；和/或在重链的M64、M254和/或M430和/或W52的任一个或其组合处氧化；和/或在重链和/或轻链N端的pGlu；和/或在C-末端缺失的C-末端赖氨酸。
聚集的或片段化的抗体变体可基于它们的大小来表征并与所述抗体进行区分。例如，可以使用尺寸排阻色谱法(SEC)检测抗体组合物的尺寸分布。
所述抗体组合物可包含≤20％聚集的抗体变体。所述聚集的抗体变体可包括二聚体。所述组合物可包含抗体变体的混合物。例如，所述抗体组合物可包括在轻链的31位脱酰胺化的抗体变体；和/或在重链386位脱酰胺化的抗体变体；和/或在重链的M64、M254和/或M430和/或W52的任一处或组合处的氧化；和/或在重链和/或轻链N端的pGlu；和/或在C-末端缺失的C-末端赖氨酸；和/或聚集的抗体变体。
所述组合物可已经受到或已经经历了一种或多种翻译后修饰。修饰可发生在CDR、可变框架区或恒定区中。修饰可导致分子电荷的改变。在上述一级氨基酸序列中的翻译后修饰和变化不会导致组合物的抗原结合亲和力、生物活性、PK/PD、聚集、免疫原性或与Fc受体的结合的显著变化。该组合物基本上不含污染物质。
包含上述抗体和抗体变体的抗体组合物保留特异性抗原结合和/或FcRn结合。例如，包含上述抗体和抗体变体的抗体组合物具有≥0.70的IL-5特异性抗原结合；和/或≥70％的FcRn结合。因此，这些水平(％)的变体可以在抗体组合物中耐受而不影响功能。
本发明所述的组合物可以通过许多常规技术来生产。例如，所述组合物可以在重组表达系统中表达和纯化。在一个实施方案中，所述组合物通过在适于表达包含SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2的多肽的条件下培养宿主细胞的方法产生，其中所述组合物被表达，并且任选地被纯化，并且任选地被配制在药物组合物中。
许多不同的表达系统和纯化方法可以用于生产该组合物。通常，用编码所述抗体的重组表达载体转染宿主细胞。可以使用多种宿主细胞，包括哺乳动物来源的真核细胞系(例如CHO、Perc6、HEK293、HeLa、NS0)。合适的宿主细胞包括哺乳动物细胞如CHO(例如CHOK1和CHO-DG44)。
宿主细胞可以是分离的宿主细胞。宿主细胞通常不是多细胞生物体(例如植物或动物)的一部分。宿主细胞可以是非人类宿主细胞。
用于真核或哺乳动物细胞宿主的合适克隆和表达载体以及克隆方法在本领域中是已知的。
细胞可以在促进抗体表达的条件下培养。例如，使用生产生物反应器培养细胞。生产生物反应器体积可以是：(i)约20,000升、约10,000升；约5,000升；约2000升；约1,000升；或约500升；或(ii)500至20,000升；500至10,000升；500至5,000升；1,000至10,000升；或者2,000至10,000升。例如，所述细胞可以在生产生物反应器中在约6.75至pH 7.00的pH下培养。或者，所述细胞可以在生产生物反应器中培养约12至约18天。或者，细胞可以在生产生物反应器中在约6.75至pH 7.00的pH下培养约12至约18天。该培养步骤可有助于控制脱酰胺抗体变体的水平，例如降低脱酰胺化的抗体变体的水平。
可以通过常规蛋白质纯化步骤回收和纯化所述组合物。例如，所述组合物可以直接从培养基中收获。所述细胞培养基的收获可以通过澄清，例如通过离心和/或深层过滤。回收组合物后进行纯化以确保足够的纯度。
一个或多个色谱步骤可用于纯化，例如一种或多种色谱树脂；和/或一个或多个过滤步骤。例如使用树脂如蛋白A、G或L的亲和色谱可用于纯化所述组合物。或者，或除此之外，可以使用离子交换树脂例如阳离子交换来纯化所述组合物。或者，或除此之外，可以使用疏水相互作用色谱树脂来纯化所述组合物。或者，所述纯化步骤包括：亲和色谱树脂步骤，随后是阳离子交换树脂步骤，接着是疏水相互作用色谱树脂步骤。
例如，将所述收获物与蛋白A树脂接触。包含所述组合物的溶液可以从蛋白质A树脂上洗脱下来，并在pH3.3至3.7处理15至240分钟。该蛋白质A树脂步骤可以帮助控制聚集的抗体变体的水平，例如降低聚集的抗体变体的水平。
然后可以通过深层过滤和/或双层过滤将包含所述组合物的溶液进一步澄清。
或者，或除此之外，可以使用阴离子交换树脂。包含所述组合物的溶液可以在8.3至8.7的负载pH下与阴离子交换树脂(例如Q-SEPHAROSETM Fast Flow阴离子交换色谱)接触。包含所述组合物的溶液可以从阴离子交换树脂洗脱并保持96小时或更少。该阴离子交换树脂步骤可以帮助控制脱酰胺化抗体变体的水平，例如降低脱酰胺化抗体变体的水平。
任选地，可以将胍和/或硫酸铵加入到包含所述组合物的溶液中，并保持15至240分钟。
或者，或除此之外，可以使用疏水性相互作用色谱树脂。包含所述组合物的溶液可以以12至27g蛋白质/L树脂的负载率与疏水相互作用色谱树脂(例如，苯基SEPHAROSETM快速流动色谱)接触。例如，可以使用约9至约11的洗脱梯度体积(床体积；BV)来洗脱包含所述组合物的溶液。可以在从疏水相互作用色谱树脂洗脱期间使用约17至约23的洗脱峰值截止(最大峰高的％)。该疏水相互作用色谱树脂步骤可以帮助控制聚集的抗体变体的水平，例如降低聚集的抗体变体的水平。
然后可过滤包含所述组合物的溶液以去除病毒。然后可以将包含所述组合物的溶液在约76g蛋白质/L至约82g蛋白质/L或约100g蛋白质/L的抗体浓度进行配制。可将包含所述组合物的溶液填充到容器中并冷冻。可以将包含所述组合物的溶液的等分试样冻干。冻干物可以通过添加水重构以产生包含75mg/L蛋白质(单克隆抗-IL-5美泊利单抗抗体)和20mM磷酸氢二钠七水合物、12容重％的蔗糖和0.05容重％的聚山梨酯80的组合物，pH在约6.8至约7.2。
在另一实施方案中，本发明组合物使用制备本发明组合物的方法来生产。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.2to 6.6，其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸一水合物、柠檬酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
本发明的另一个方面是一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，其中所述组合物的pH为6.2至6.6，其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
在本发明组合物的另一实施方案中，所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐和柠檬酸。
在本发明组合物的另一实施方案中，其包含选自以下中的一种：16.1mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第一制剂；15.2mM磷酸氢二钠七水合物、4.8mM柠檬酸、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第二制剂；15.8mM磷酸氢二钠七水合物、4.2mM柠檬酸、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第三制剂；16.3mM磷酸氢二钠七水合物、3.7mM柠檬酸、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第四制剂；和15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第五制剂。
总而言之，本发明包括：
1.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体。
2.根据1所述的组合物，其中所述组合物具有：
a)≥0.70IL-5特异性抗原结合；和/或
b)≥70％FcRn结合。
3.根据2所述的组合物，其中a)所述特异性抗原结合的范围是0.70至1.30；和/或b)所述FcRn结合的范围是70％至130％。
4.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤35％脱酰胺化抗体变体。
5.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体。
6.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体。
7.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤55％在以下任一处或组合处氧化的抗体变体：
a)在重链氨基酸序列的M64处；
b)在重链氨基酸序列的M254处；和/或
c)在重链氨基酸序列的M430处。
8.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体。
9.根据4-8中所述的组合物，其中脱酰胺化的抗体变体的量和/或氧化变体的量通过肽谱LC-MS/MS确定。
10.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≤20％聚集的抗体变体。
11.根据10所述的组合物，其中所述聚集的抗体变体包括二聚体。
12.根据10或11所述的组合物，其中所述聚集的抗体变体量通过SEC确定。
13.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≥50％重链氨基酸序列C端赖氨酸K449缺失的抗体变体。
14.根据前述任一项所述的组合物，其中所述组合物包含：≥50％重链氨基酸序列焦谷氨酸N末端抗体变体。
15.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体和≤20％聚集的抗体变体。
16.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
17.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
18.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
19.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处、在重链氨基酸序列的M254处、在重链氨基酸序列的M430处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
20.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列和
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
21.20的组合物，其中所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸盐。
22.20的组合物，其中所述缓冲剂为磷酸钠、磷酸钾或柠檬酸钠。
23.20的组合物，其中所述组合物还包含糖、碳水化合物和/或盐。
24.23的组合物，其中所述组合物包含蔗糖。
25.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列和
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
26.25的组合物，其中所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸盐。
27.26的组合物，其中所述组合物还包含糖。
28.27的组合物，其中所述糖为蔗糖。
29.28的组合物，其包含聚山梨酯80。
30.29的组合物，其包含选自以下之一：20mM磷酸氢二钠七水合物、12容重％的蔗糖和0.05容重％的聚山梨酯80的第一制剂；15.5mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第二制剂；和26mM磷酸氢二钠七水合物、15容重％的蔗糖和0.065容重％的聚山梨酯80的第三制剂。
31.29的组合物，其中所述抗体对于包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的人白细胞介素-5具有小于或等于约3.5x10-11 M的解离常数。
32.31的组合物，其中所述单克隆抗体浓度为约75mg/mL或约100mg/mL。
33.30的组合物，其中所述抗体对于包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的人白细胞介素-5具有小于或等于约3.5x10-11 M的解离常数。
34.33的组合物，其中所述单克隆抗体的浓度为约75mg/mL或约100mg/mL。
35.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
36.35的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
37.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
38.37的组合物，其中酸性形式的抗体包括选自以下的至少一种：峰65酸性形式、峰78酸性形式、峰88酸性形式和峰92酸性形式。
39.38的组合物，其中酸性形式的抗体包含至少一种选自一下的脱酰胺化氨基酸残基：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
40.39的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
41.39的组合物，其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
42.39的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；和
其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
43.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
44.43的组合物，其中所述碱性形式的抗体包括峰112碱性形式。
45.44的组合物，其中所述碱性形式的抗体包含羧基末端残基为甘氨酸448的重链。
46.45的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
47.45的组合物，其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的重链氨基酸残基。
48.45的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的重链氨基酸残基；和
其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
49.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
d)碱性形式的抗体，其组成该组合物中的约1％至约15％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
50.49的组合物，其中酸性形式的抗体包括选自以下的至少一种：峰65酸性形式、峰78酸性形式、峰88酸性形式和峰92酸性形式。
51.50的组合物，其中酸性形式的抗体包含至少一种选自一下的脱酰胺化氨基酸残基：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
52.49的组合物，其中所述碱性形式的抗体包括峰112碱性形式。
53.52的组合物，其中所述碱性形式的抗体包含羧基末端残基为甘氨酸448的重链。
54.49的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
55.49的组合物，其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的重链氨基酸残基。
56.49的组合物，其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
57.49的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基；和
其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
58.49的组合物，其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；和
其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
59.49的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；和
其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
60.49的组合物，其中主要形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；
其中酸性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸220处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基；和
其中所述碱性形式的抗体包含至少一种选自以下的氧化的氨基酸残基：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
61.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基。
62.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
63.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)脱酰胺形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在天冬酰胺299处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺317处脱酰胺的重链氨基酸残基、在天冬酰胺386处脱酰胺的重链氨基酸残基和在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基；和
c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基、在半胱氨酸222处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸254处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸360处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸430处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基和在半胱氨酸220处氧化的轻链氨基酸残基。
64.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和
b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
65.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基。
66.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：5中所示的CDRH1氨基酸序列、SEQ ID NO：6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO：7所示的CDRH3氨基酸序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO：8所示的CDRL1氨基酸序列、SEQ ID NO：9所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO：10所示的CDRL3氨基酸序列的轻链可变区；
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基；和
c)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
67.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和
b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体。
68.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；和
b)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
69.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的重链可变区序列和具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链可变区序列；
b)包含在天冬酰胺31处脱酰胺的轻链氨基酸残基的脱酰胺形式的抗体；和
c)氧化形式的抗体，其包含选自以下的至少一种：在色氨酸52处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸64处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸82处氧化的重链氨基酸残基、在甲硫氨酸85处氧化的重链氨基酸残基和在甲硫氨酸4处氧化的轻链氨基酸残基。
70.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基1处的氨基末端焦谷氨酸残基、氨基酸残基448处的羧基末端甘氨酸氨基酸残基、299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和
b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
71.70的组合物，其中:
a)约92％以上的群体在抗体重链的氨基酸残基1处包含氨基末端焦谷氨酸残基，
b)约90％以上的群体在抗体重链的氨基酸残基448处包含羧基末端甘氨酸氨基酸残基，
c)6.0％以下的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；
d)约1.5％以下的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
e)约4.5％以下的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
f)约0.8％以下的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基，和
g)约6.6％以下的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
72.71的组合物，其中：
a)约93.7％至约98.6％的群体在抗体重链的氨基酸残基1处包含氨基末端焦谷氨酸残基，
b)约97.6％至约99.2％的群体在抗体重链的氨基酸残基448处包含羧基末端甘氨酸氨基酸残基，
c)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，
d)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；
e)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
f)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基，
g)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
h)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基，
i)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基和
j)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
73.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基、386位脱酰胺化的天冬酰胺残基、52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和
b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基、4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
74.73的组合物，其中：
a)约0.3％至约1.5％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，
b)约1.5％至约4.5％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；
c)约0.5％至约1.5％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
d)约0.2％至约1.5％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基，
e)约2.5％至约3.5％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
f)约0.4％至约0.8％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基,
g)约3.3％至约6.6％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，和
h)约0.1％至约1％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
75.74的组合物，其中：
a)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，
b)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；
c)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
d)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基，
e)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
f)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基，
g)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基和
h)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
76.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：299位脱酰胺化的天冬酰胺残基、317位脱酰胺化的天冬酰胺残基和386位脱酰胺化的天冬酰胺残基；和
b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含氨基酸残基31处的脱酰胺化的天冬酰胺残基。
77.76的组合物，其中：
a)约0.3％至约1.5％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，
b)约1.5％至约4.5％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和
c)约3.3％至约6.6％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
78.77的组合物，其中：
a)约0.4％至约1.2％的群体在抗体重链的317位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基，
b)约1.6％至约4.2％的群体在抗体重链的386位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基；和
c)约3.4％至约6.5％的群体在抗体轻链的氨基酸残基31位包含脱酰胺化的天冬酰胺残基。
79.一种组合物，其包含多种抗-IL-5抗体，其具有
a)SEQ ID NO：1中所示的抗体重链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：52位氧化的色氨酸残基、64位氧化的甲硫氨酸残基、82位氧化的甲硫氨酸残基、85位氧化的甲硫氨酸残基、222位氧化的半胱氨酸、254位氧化的甲硫氨酸、360位氧化的甲硫氨酸和430位氧化的甲硫氨酸残基；和
b)SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的修饰形式，其包含选自以下的至少一个氨基酸残基修饰：4位氧化的甲硫氨酸残基和220位氧化的半胱氨酸。
80.79的组合物，其中：
c)约0.5％至约1.5％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
d)约0.2％至约1.5％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基，
e)约2.5％至约3.5％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
f)约0.4％至约0.8％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基，和
g)约0.1％至约1％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
81.80的组合物，其中：
a)约0.7％至约0.9％的群体在抗体重链的64位包含氧化的甲硫氨酸残基，
b)约0.3％至约1.1％的群体在抗体重链的82位包含氧化的甲硫氨酸残基或在抗体重链的85位包含氧化的甲硫氨酸残基，
c)约2.6％至约3.3％的群体在抗体重链的254位包含氧化的甲硫氨酸，
d)约0.5％至约0.7％的群体在抗体重链的430位包含氧化的甲硫氨酸残基，和
e)约0.2％至约0.8％的群体在抗体轻链的4位包含氧化的甲硫氨酸残基。
82.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
83.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于20％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的至多约80％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
84.根据前述任一项的组合物，其用于治疗选自以下的疾病：哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎。
85.治疗受试者中的疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定受试者患有选自以下的疾病：哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎；和
b)向所述受试者给药治疗有效量的前述任一组合物；
从而治疗该受试者中的疾病。
86.20至83的组合物，其中所述组合物具有：
a)≥0.70IL-5特异性抗原结合；和/或
b)≥70％ FcRn结合。
87.20至83的组合物，其中a)所述特异性抗原结合的范围是0.70至1.30；和/或b)所述FcRn结合的范围是70％至130％。
88.20至83的组合物，其中所述组合物包含：≤20％聚集的抗体变体。
89.20至83的的组合物，其中所述聚集的抗体变体包括二聚体。
90.制备1-83的组合物的方法，其包括以下步骤：
a)在宿主细胞中表达具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体；
b)对于体外细胞龄小于或等于166天的情况，使细胞在约6.75至约7.00的pH下生长约12至约18天；
c)收获细胞培养物上清液；
d)将细胞培养物上清液与蛋白A树脂或蛋白G树脂接触以结合抗体分子；
e)从树脂上洗脱该抗体分子以产生第一洗脱液；
f)在约3.3至约3.7的pH下处理第一洗脱液约15至约240分钟以产生处理过的第一洗脱液；
g)将处理过的第一洗脱液在约8.3至约8.7的负载pH下与阴离子交换树脂接触；
h)从阴离子交换树脂收集第二洗脱液并保持约96小时或更少时间；
i)用胍和硫酸铵处理第二洗脱液以产生溶液；
j)以约12g蛋白质/L树脂的负载比至约27g蛋白质/L树脂的负载比将所述溶液与疏水性相互作用色谱树脂床接触；
k)用约9树脂床体积至约11树脂床体积的洗脱梯度体积从疏水相互作用色谱树脂洗脱包含抗体分子的第三洗脱液，洗脱峰值截止约17％的最大峰高至约23％的最大峰高；和
l)配制第三洗脱液；
从而制备1-83的组合物。
91.通过90的方法制备的1-83的组合物。
92.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.2至6.6，
其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸一水合物、柠檬酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，和
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
93.92的组合物，其中所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸一水合物。
94.92的组合物，其中所述缓冲剂为磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸、柠檬酸一水合物或柠檬酸钠。
95.92的组合物，其中所述组合物还包括糖、碳水化合物和/或盐。
96.95的组合物，其中所述组合物包含蔗糖。
97.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.2至6.6，
其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包含由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，和
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
98.97的组合物，其中所述缓冲剂选自以下至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸一水合物和柠檬酸盐。
99.98的组合物，其中所述组合物还包含糖。
100.99的组合物，其中所述糖为蔗糖。
101.100的组合物，其包括聚山梨酯80。
102.101的组合物，其包含选自以下之一：16.1mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第一制剂；15.2mM磷酸氢二钠七水合物、4.8mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第二制剂；15.8mM磷酸氢二钠七水合物、4.2mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第三制剂；16.3mM磷酸氢二钠七水合物、3.7mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第四制剂；和15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸一水合物、12容重％的蔗糖、0.02容重％的聚山梨酯80和0.05mM EDTA的第五制剂。
103.101的组合物，其中所述抗体对于包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的人白细胞介素-5具有小于或等于约3.5x10-11 M的解离常数。
104.101的组合物，其中所述单克隆抗体浓度为约75mg/mL或约100mg/mL。
105.102的组合物，其中所述抗体对于包含SEQ ID NO：11所示氨基酸序列的人白细胞介素-5具有小于或等于约3.5x10-11 M的解离常数。
106.根据前述任一的组合物，其中所述抗体的浓度为约75mg/ml至约100mg/ml。
107.根据前述任一的组合物，其中所述组合物还包含以下一个或组合：
a)选自以下的缓冲剂：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸盐、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠和组氨酸，提供6.8至7.2的pH；和/或
b)糖；和/或
c)聚山梨酯80；和/或d)EDTA。
108.根据前述任一的组合物，其中所述组合物还包含以下一个或组合：
a)选自以下的缓冲剂：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸盐、柠檬酸一水合物、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠和组氨酸，提供6.2至6.6的pH；和/或
b)糖；和/或
c)聚山梨酯80；和/或d)EDTA。
109.1-108中任一个的组合物，其用于治疗。
110.1-108中任一个的组合物，其用于治疗哮喘、严重的嗜酸性粒细胞性哮喘、严重哮喘、不受控制的嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、亚-嗜酸性粒细胞性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、伴有多血管炎的嗜酸性粒细胞性肉芽肿病、嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮和嗜酸性粒细胞性食管炎。
实施例
实施例1
组合物的制备
生产了多批包含单克隆抗IL-5抗体美泊利单抗的组合物。
将用包含SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示核酸序列的表达载体构建体稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞的接种物在包含液体细胞培养基的5000L生物反应器中培养。由这些核酸编码的成熟抗体是美泊利单抗，并且包含SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列。
生物反应器在约34.5℃至约35.5℃的温度下运行。将空气和氧气喷入培养基中并保持约6.75至7.00的pH。培养时间约为12至18天。体外细胞龄(从原始细胞库初始解冻到收获的培养天数)为166天或更短。此后，通过离心和深层过滤细胞培养基而收获澄清的细胞培养上清液。然后将澄清的上清液进行蛋白质A色谱分离，并使杂质从该色谱柱流出。然后从蛋白质A柱洗脱包含抗体分子的结合蛋白，在约3.3至3.7的pH下处理约15至240分钟。然后将该处理过的制剂调节至约4.3至4.7的pH并保持约20至1110分钟。然后通过深层过滤器和0.5/0.2μm双层过滤器的过滤装置澄清该处理过的制剂。然后将经过滤的制剂在约8.3-8.7的负载pH下进行Q-SEPHAROSETM快速流动阴离子交换色谱，并从色谱柱洗脱。然后将该洗脱液保持约96小时或更短时间。然后加入胍和硫酸铵。将胍加入到约1.8M至2.2M的浓度并保持约15至240分钟。然后使该溶液经受苯基SEPHAROSETM快速流动色谱，负载率为约12g蛋白质/L树脂至约27g/L树脂，洗脱梯度体积(床体积；BV)为约9至约11，且洗脱峰截止(最大峰高的百分比)为约17-23。然后使用Planova 20N病毒去除过滤器进行病毒过滤。然后将该滤液调节至约46g蛋白质/L至约66g蛋白质/L的目标浓度，并且通过切向过滤和超滤交换将原料药(BDS)用包含约20mM磷酸氢二钠七水合物和12容重％的蔗糖的溶液进行配制。然后将该溶液调节至76g蛋白质/L至约82g蛋白质/L的目标浓度，并加入约0.05容重％的聚山梨酯80。然后将该溶液通过0.5/0.2μm PES过滤器过滤并且将该溶液的容器填充并冷冻。使用无菌生产过程来制造药物产品，所述无菌生产过程包括解冻和结合散装容器，然后将散装物过滤到小瓶中，通过本领域公知的制造过程进行冻干、塞住和压制(crimping)。最终的药物产品呈现为一次性使用小瓶中的冻干药物产品。
通过加入水重构每批生产的冻干物，以在约6.8至约7.2的pH下产生包含100mg/mL蛋白质、单克隆抗IL-5美泊利单抗抗体和26mM磷酸氢二钠七水合物、15容重％的蔗糖和0.065容重％的聚山梨酯80的组合物。
实施例2
组合物的表征
表征如上所述制备的包含单克隆抗IL-5抗体的组合物批次的样品。
毛细管等电聚焦(cIEF)一致表明组合物中存在六种抗体同种型(例如，组合物参比标准(RS)101245722)。参见图1。这些同种型是图1中显示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112同种型。使用标准方法将组合物样品进行cIEF。pI 7.9和pI 9.46标准品被包含在待由cIEF分析的样品中。图1中所示的cIEF电泳图代表来自多批次的组合物的电泳图。
电泳图显示组合物包含主要形式的抗体、酸性形式的抗体和碱性形式的抗体。所述主要形式可以在图1中看到，并且在某些情况下也被确定为峰100。酸性形式的抗体对应于图1的峰65、峰78、峰88和峰92形式。所述碱性形式的抗体对应于图1的峰112形式。
用于指定峰的公式如下：
峰名＝int{(pI峰-8)/(pI主要-8)*100}其中：int＝整数且pI峰＝待命名峰的pI。表7显示了包含单克隆抗IL-5抗体的组合物的cIEF电泳图谱的峰命名惯例。应根据观察到的电泳/色谱模式来验证如本发明所述确定的峰的名称。不符合本发明所述范围的峰应根据上述公式进行处理。
表7.cIEF峰的鉴定
对电泳图峰进行积分分析。见表8。
表8.选择不同组合物批次的cIEF电泳图中的总峰面积。
这表明所述主要形式表示大于或等于样品中总峰面积的50.0％(也观察到约58.1％至62.3％的值)。这也表明所述酸性形式代表小于或等于样品中总峰面积的45.0％(其值在约20％至约45％，例如也观察到32.2％至40.7％)。碱性形式表示为样品中总峰面积的约1％至约15％(也观察到约1.2％至约4.9％的值)。
然后通过弱阳离子交换(WCX)、胰蛋白酶肽谱和液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)分析进一步分析由cIEF产生的主要形式、酸性形式和碱性形式峰组分。标准方法用于这些分析。
这些WCX、胰蛋白酶肽谱和LC-MS/MS结果显示主要形式峰组分含有两种IgG1 mAb修饰。因此，在SEQ ID NO：的抗体重链氨基酸序列中，99.6％的N-末端谷氨酰胺(Gln，Q)环化为焦谷氨酸(pGlu)，并且99.9％的重链(HC)C-末端赖氨酸(Lys，K)449被切割。通常，测试批次中的pGlu水平>95.0％，而没有C-末端K449水平的HC水平>98.0％。
这些WCX、胰蛋白酶肽谱和LC-MS/MS结果也显示酸形式的峰，其中观察到脱酰胺的单道尔顿质量转移特征。肽谱LC-MS/MS显示，酸性形式峰包含脱酰胺化抗体种类的混合物。主要在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的HC N386处和在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的LC N31处观察到脱酰胺化。在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的HC N317处也观察到较低水平的脱酰胺化。
实验数据总体显示SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的天冬酰胺残基HC N317、HCN386、HC N299和SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的LC N31易于脱酰胺化。
这些WCX、胰蛋白酶肽谱和LC-MS/MS显示出碱性形式的峰，其中在该峰中的所述抗体形成具有至少一个其中羧基端赖氨酸氨基酸残基完整的重链。相对于缺乏该赖氨酸的其他形式，具有完整赖氨酸的抗体种类将由于来自这些残基的额外正电荷而迁移至碱性区域。因此，所述碱性形式例如峰112对应于其中一条或两条重链氨基酸序列具有完整的SEQID NO：1中所示的羧基端赖氨酸氨基酸序列的抗体形式。
包含单克隆抗IL-5抗体的组合物的初级测序也通过标准LC-MS/MS技术进行。这些分析检查了组合物中所述抗体分子的主要结构和氨基酸序列。具体而言，这些分析显示了抗IL-5抗体中哪些氨基酸残基发生了脱酰胺化、氧化、环化或缺失，以及其在所述组合物中存在的抗IL-5抗体群中的百分比(例如，从SEQ ID NO：13的核酸序列和SEQ ID NO：14的核酸序列表达)。参见表9。
表9.通过肽谱LC-MS/MS分析一级抗体序列。
抗体变体
美泊利单抗结合可溶性IL-5并阻断可溶性IL-5与其受体的结合。所述IL-5的结构表示为分泌蛋白，并且在任何细胞类型上没有任何膜结合形式的IL-5的证据。因此，Fc效应子功能不是美泊利单抗作用机制(MOA)的一部分。基于美泊利单抗的MOA和PK特性，在该抗体的生物学活性中涉及两个功能：经由CDR与IL-5结合，以及经由Fc区与FcRn受体结合。
通过以上和如下文所述进行的广泛表征研究，确定至少脱酰胺化、氧化和聚集可导致美泊利单抗组合物中的抗体变体，并且这些变体可影响美泊利单抗的功能。应该保持特定水平的这些变体以确保适当的生物学功能。本发明将功能描述为在0.70-1.30特异性抗原结合活性(IL5结合)和70％-130％FcRn结合的可接受范围内。因此，鉴定影响功能的抗体变体的步骤包括：(i)是否形成抗体变体，(ii)变体是否影响功能，以及(iii)什么水平的变体可导致功能性组合物。
功能
IL-5结合：使用迄今为止生成的所有药物物质(DS)和药物产品(DP)释放和稳定性数据进行统计分析以计算可接受的抗原结合功能活性范围。将计算的统计学范围与临床经验进行比较，并基于产品相关变体对效力的已知影响进行评估。基于这种分析，释放时和保质期结束时可接受的抗原结合功能活性范围是0.70-1.30的特异性抗原结合。
使用BIACORETM仪器，以结合模式进行，通过表面等离子体共振(SPR)确定IL-5特异性结合。该SPR测定能够检测由美泊利单抗和美泊利单抗变体与效力相关的变化而引起的抗原结合降低。
SPR用于确定美泊利单抗的特异性抗原结合活性。首先，将美泊利单抗参比标准品注射到含有固定化蛋白质A的CM5传感器芯片的表面上，然后注射固定浓度的稀释的IL-5蛋白质，使得所述IL-5结合至捕获的美泊利单抗样品。根据相应的美泊利单抗参比标准校准曲线确定与IL-5结合的美泊利单抗的浓度，其作为美泊利单抗与IL-5的功能性结合报道。所述SPR结果被报道为美泊利单抗与IL-5的功能结合浓度除以总蛋白质浓度。
FcRn结合：还使用BIACORETM仪器通过表面等离子体共振(SPR)测量美泊利单抗的新生儿Fc(FcRn)受体结合活性。基于美泊利单抗产品开发期间迄今为止产生的结果、已知测定变量以及类似的mAb产物产生的结果，确定可接受的FcRn结合功能性活性范围为70-130％。
美泊利单抗的Fc区与FcRn结合，并且这种相互作用反映了美泊利单抗的长血清半衰期(平均终末半衰期＝20天)。在SPR测定中，使用含有固定化FcRn受体的次氮基三乙酸(NTA)传感器芯片来捕获固定浓度的美泊利单抗。首先，以固定浓度注入Ni2+，并通过NTA螯合Ni2+而将Ni2+捕获在NTA传感器芯片上。其次，以固定浓度注射FcRn受体，并且FcRn受体α链的C端的6x组氨酸标签结合先前被捕获的Ni2+。然后将稀释在标准曲线浓度范围内的美泊利单抗注射到含有捕获的FcRn受体的NTA传感器芯片的表面上。从相应的美泊利单抗参比标准校准曲线推断与所述FcRn受体结合的美泊利单抗的浓度。所述SPR结果被报道为美泊利单抗与FcRn受体的功能性结合浓度除以总蛋白浓度。
用于特异性抗原结合和FcRn结合的SPR方法使用美泊利单抗的参比标准。所述美泊利单抗参比标准仅用于测定，以获得系统适用性和样品可比性数据，以确保方法正确执行。所述参比标准允许建立校准曲线，并从曲线推导样品浓度。
酸性变体
然后进行强制降解研究以确定增加水平的酸性变体(例如脱酰胺化)对抗体功能/功效(即抗原结合和FcRn结合活性)的影响。
在pH 9.0强制降解研究中，用6N氢氧化钠将所述组合物调节至pH 9.0，并在40℃培养30天。在0、3、7、14和30天收集样品，并将其与用作对照的未应激组合物进行比较。然后通过cIEF分析pH 9.0应激样品。结果显示在表10和图1(第0天和第3天)中。在第14天，pH9.0应激组合物降解超过cIEF测定的容量；因此，直到第7天的时间点的结果如表10所示。在pH 9.0的应激条件下3天，对于两批不同批次的组合物，观察到总酸性区域分别为74.4％和71.9％。
表10.pH 9.0强迫降解研究的cIEF数据总结。
然后使用标准表面等离子体共振(SPR)方法测试来自不同批次的组合物的pH 9.0强制降解研究样品的特异性抗原结合活性(表11)和FcRn结合活性(表12)。
表11.通过SPR在对来自不同批次的组合物样品的pH9.0强迫降解研究中测量的特异性抗原结合活性(例如，人IL-5结合活性)的数据总结。
表12.通过SPR在对来自不同批次的组合物样品的pH9.0强迫降解研究中测量的FcRn结合。
对于两批经过pH 9.0强制降解的组合物，第3天的IL5特异性结合活性(即约72-74％酸性变体)为0.74。对于经过pH 9.0强制降解的两批组合物，FcRn结合活性分别为82％和80％。这些值在每个测定的验收标准范围内。特异性抗原结合活性的验收标准为0.70-1.30，FcRn结合的验收标准为70％-130％。因此，酸性变体可以高达约74％以维持美泊利单抗组合物的功能。
脱酰胺化
强制降解研究可以确定哪些似乎易脱酰胺化的残基确实脱酰胺化，以及脱酰胺化变体是否对功能有影响，以及组合物中何种水平的脱酰胺化在维持功能上是可接受的。通过实验确定易脱酰胺化的天冬酰胺残基是HC N317、HC N386、HC N299和LC N31。进行强制降解研究以确定SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列中增加水平的脱酰胺化LC N31对抗原结合活性的影响。在这些研究中，用6N氢氧化钠将来自不同批次的组合物调节至pH9.0并在40℃培养30天。在第0、3、7、14和30天收集样品，并将其与用作对照的未应激组合物(例如参比标准)进行比较。通过肽谱LC-MS/MS测试pH 9.0应激样品。结果如表13所示。当美泊利单抗在pH 9.0保持3天时，针对不同批次组合物，SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列中脱酰胺化LC N31的水平分别为17.4％和16.8％。参见表13。在表11和表12中呈现了美泊利单抗在pH 9.0保持3天的抗原和FcRN结合数据。
表13.在第3天，在来自不同批次的组合物的pH 9.0强制降解研究样品中，通过肽谱LC-MS/MS测定的脱酰胺百分比。
因此在第3天，所述特异性抗原结合活性为0.74(表11)，并且FcRn结合活性为84％和82％(表12)，表明N31处的脱酰胺化高达约17％并且N386处的脱酰胺化高达约28％(表13)，可将功能性组合物维持在0.70-1.30特异性抗原结合活性和70％-130％FcRn结合的可接受的范围内。
氧化
进行强迫降解研究以实验性地检查组合物的抗体重链和轻链中的甲硫氨酸和其他氨基酸残基对氧化的易感性。强制降解研究可以确定哪些对氧化敏感的残基实际上被氧化，以及氧化变体是否对功能具有影响，以及在组合物中何种水平的氧化对维持功能/功效(抗原结合和/或FcRn结合)是可接受的。
将组合物样品与0.1％过氧化氢(H2O2)在室温(RT)培养48小时以诱导氧化。在0、6、12、24和48小时收集样品。将这些与用作对照的无应激组合物(例如，参比标准)进行比较。从这些研究中确定，最易于氧化的甲硫氨酸(M)残基包括SEQ ID NO：1所示抗体重链氨基酸序列的HC M64、HC M82、HC M85、HC M254、HC M360、HC M430和SEQ ID NO：2中所示的抗体轻链氨基酸序列的LC M4。最易于氧化的甲硫氨酸(M)残基包括位于HC CDR2中的M64；M254和M430，其位于Fc区中的FcRn和蛋白质A结合口袋中；以及SEQ ID NO：1所示的抗体重链氨基酸序列的M360。易于氧化程度较低的甲硫氨酸残基包括SEQ ID NO：1所示的抗体重链氨基酸序列的HC M4、HC M82和HC M85。此外，在化学诱导条件下，确定SEQ ID NO：2所示的抗体轻链氨基酸序列的LC C220易于氧化。重要的是，LC C220和HC C222形成连接重链和轻链的链间二硫键。
使用肽谱LC-MS/MS测量由甲硫氨酸氧化产生的亚砜水平和由半胱氨酸氧化产生的磺酸水平，并概括于表14中。在用0.1％过氧化氢(H2O2)培养后48小时，HC M64、M254、M360和M430超过70％被氧化。
表14.在用H2O2处理48小时后，在来自不同批次的组合物的研究样品中，由肽谱LC-MS/MS测定的氧化百分比。
通过SPR测量组合物中抗体的特异性抗原结合。这表明在不同的H2O2应激批次中在48小时特异性抗原结合活性下降更大，如表15所概述。抗原结合的这种降低与通过肽谱LC-MS/MS观察到的相对较高水平的M64氧化相关。来自不同批次组合物的测试样品中的特异性抗原结合活性分别下降约15％和32％。当美泊利单抗氧化85.6％时，特异性抗原结合活性仍保持在0.57。使用美泊利单抗中的累积的氧化水平与特异性抗原结合活性之间的线性关系，并且确定在最坏的情况下HC M64可以被氧化约50％并且组合物中的抗体仍然保持0.70-1.30范围的抗原结合活性。
表15.在用H2O2处理48小时的不同批次的组合物中通过SPR测量的特异性抗原结合活性。
如表16所示，来自不同批次组合物的H2O2应激样品的FcRn结合活性曲线高度相似，其中与对照(未处理的参照标准)相比，48小时的FcRn结合活性显著降低。HC M254和HCM430位于Fc区，并且已经显示氧化时导致FcRn结合减少。基于强制降解研究期间产生的肽谱结果，当所述组合物用H2O2化学氧化48小时时，在不同批次中观察到的氧化HC M254和HCM430的水平≥95％。FcRn结合结果显示来自不同批次组合物的H2O2应激样品中抗原FcRn结合降低约80％。当美泊利单抗≥90％氧化时，FcRn结合活性仍保持在22％。使用美泊利单抗中的累积氧化水平与FcRn结合活性之间的线性关系，并且确定在最差情况下HC M254和HCM430可以被氧化50％，并且组合物中的抗体仍然保持70％-130％的FcRn结合活性。
表16.在用H2O2处理48小时的不同批次的组合物中通过SPR测量的FcRn结合活性。
进行光应激研究以确定在不同批次的组合物中光诱导的色氨酸氧化对抗体的抗原结合活性的影响。这表明抗体重链中的色氨酸W52易于氧化。对于这些研究，将来自不同批次的组合物在25℃暴露于180万勒克斯-小时的可见光约60小时以诱导光应激。将在0、3、7、14和30小时收集的样品与用作对照的未应激的参比标准组合物进行比较。由色氨酸氧化得到的二氧化/犬尿氨酸的水平在不同批次的光暴露应激组合物中高度相似，如表17中所汇总的。光照60小时后检测到HC W52氧化的增加。
表17.在光暴露应激60小时后，在不同批次的组合物中通过肽谱LC-MS/MS测量的氧化百分比。
在不同批次的光暴露应激组合物中抗体的特异性抗原结合活性曲线显示特异性抗原结合活性随时间减少。这总结在表18中。当美泊利单抗被氧化约7％时，特异性抗原结合活性仍然保持在0.53。使用美泊利单抗的色氨酸氧化累积水平与特异性抗原结合活性之间的线性关系，并且确定在最坏的情况下W52可以被氧化3％并且所述组合物中的抗体仍然保持0.70-1.30的抗原结合活性。
表18.在光暴露应激60小时后，通过SPR测量不同批次的组合物中的特异性抗原结合活性。
因此，为了维持功能(IL-5结合和/或FcRn结合)，HC M64可以被氧化至多50％，HCM254和HC M430可以被氧化至多50％，并且W52可以被氧化至多3％。
聚集
通过使用标准非变性尺寸排阻层析(SEC)方法监测组合物中抗体的尺寸分布。如图3和图4所示，在RS组合物SEC曲线中检测到三个峰。在7.9分钟，具有99.4％的相对百分比面积的主峰被鉴定为单体；约6.7分钟，具有0.5％的相对百分比面积的次要峰被鉴定为聚集体。在一些批次中观察到第二个次要峰，其在主峰之后洗脱，表明存在片段。通常该峰低于0.1的SEC测定QL。
使用SEC，用多角度光散射(MALS)检测和分析超速离心(AUC)进一步表征聚集峰。结果显示SEC-MALS谱包含早期洗脱峰(二聚体)和随后的洗脱峰(单体)，如图5针对RS组合物和图6针对不同批次的组合物所示。与每个峰交叉的线表示检测到的物质的摩尔质量和二聚体峰的位置，由于样品中二聚体的丰度低，在色谱图中不容易看到。
SEC-MALS数据用于计算抗体单体和二聚体的摩尔质量。如表19所示，RS组合物中和不同批次组合物中所得单体的摩尔质量与美泊利单抗单体的148,760kDa的理论质量相当。由于样品中存在低水平的该物质，因此在二聚体中观察到的分子量中检测到变化。
表19.RS组合物中单体和不同批次组合物的SEC-MALS分析。
使用曲线下的沉降速度面积(AUC)积分分析作为基于分数的方法(包括SEC)的补充技术，以确认不存在自缔合平衡的扰动或从色谱分离中排除更高阶的聚集体。AUC分析结果表明c(s)分布包含：一种主要物质(主要峰)，其鉴定为单体，其中对于组合物的RS批次和另一批次的组合物均具有2.81S的沉降系数；和一个聚集峰，其鉴定为二聚体，其中针对RS批次组合物的沉降系数为4.87S，针对另一批次的组合物的沉降系数为5.10S，如表20所示。PRS和BDS之间的沉降系数值差异不被认为是实质性的，并且归因于样品内二聚体的低丰度。检测到的唯一高分子量物质是二聚体，这与SEC-UV和SEC-MALS结果一致。
表20.不同批次的组合物的AUC分析
单体和二聚体测定的沉降系数低于对IgG1单克隆抗体传统观察到的值。美泊利单抗的制剂含有12％(w/v)蔗糖，产生高度粘稠的样品，导致组合物中这些抗体分子观察到的沉降系数较低。SEC-UV、SEC-MALS和AUC分析的结果显示组合物中的聚集物质是抗体二聚体。
为了研究聚集体对抗原结合活性的影响，对来自不同批次的组合物进行低pH研究。用5N盐酸将来自不同批次的组合物样品调节至pH 3.5。然后将pH 3.5调节的样品在40℃培养30天以诱导化学修饰。在0、3、7、14和30天收集的样品与用作对照的组合物的无应激RS样品进行比较。这表明，当所述组合物在低pH 3.5下发生化学应激时，聚集是主要的降解途径之一。
在图7中显示了组合物的pH 3.5应激样品的SEC降解曲线，并概括在表21中。在低pH 3.5应激条件下，在不同批次的组合物之间观察到不同的聚集速率。但是，到第30天，两批次组合物达到平衡并表现出相似水平的聚集。不同批次之间聚集率的差异归因于批次中共价二聚体比非共价二聚体的更高水平。在组合物的MDS1批次中观察到的较慢的聚集速率归因于相对于MDS2批次的更高比例的非共价二聚物；非共价二聚体结合并解离直至达到平衡，这可以减缓聚集体形成的总体速率。
表21.组合物的未处理RS批次和组合物的pH应激批次的SEC数据汇总。
如表22中概述的，组合物的pH3.5应激批次的样品的特异性抗原结合活性曲线显示特异性抗原结合活性随时间降低。
表22.在组合物的pH应激批次的样品中通过SPR测量的特异性抗原结合活性的数据总结。
如表23中概述的，组合物的pH3.5应激批次的样品的FcRn结合活性曲线显示FcRn结合活性随时间降低。
表23.在pH应激批次的组合物中通过SPR测量的FcRn结合的数据总结。
总之，表21-23显示当样品中存在约40％聚集体时，抗原结合和FcRn结合降低大约50％。当美泊利单抗聚集约40％时，特异性抗原结合活性仍保持在0.57，并且FcRn结合活性保持在51％(表22MDS2第3天)。由于共价与非共价二聚体的比例不同，在第3天，针对MDS1和MDS2之间的聚集体含量存在略有不同的降解曲线(表21)。
使用来自MDS2的美泊利单抗中的聚集与特异性抗原与FcRn结合活性之间的线性关系，并且确定在最坏的情况下美泊利单抗可以20％聚集，并且组合物中的抗体仍将保持抗原结合活性0.70-1.30，并保持FcRn结合活性70-130％。
因此，包含美泊利单抗的组合物中的抗体可以聚集20％，并仍保留0.70-1.30的IL-5结合活性和70％-130％的FcRn结合活性。
HCP
使用酶联免疫吸附测定(ELISA)测量美泊利单抗组合物中的残余CHO宿主细胞蛋白水平。该方法使用针对在模拟美泊利单抗的制备过程的条件下生长的CHO细胞系的天然抗原产生的抗体。
已经确定，对于美泊利单抗组合物，HCP含量的可接受范围是≤10ng/mg。该范围来源于迄今为止生成的发布数据，并代表真正的分析和过程可变性。37组不同批次的药物具有以下HCP含量：1.1ng/mg(2批次)、1.0ng/mg(5批次)、0.9ng/mg(1批次)、0.8ng/mg(3批次)、0.7ng/mg(1批次)、0.6(1批次)、0.5ng/mg(1批次)、<0.5ng/mg(4批次)、<1ng/mg(19批次)。
总之，存在两种与美泊利单抗的生物学活性有关的主要功能：通过CDR与IL-5结合，以及通过Fc区与FcRn受体结合。通过以上进行的广泛表征研究，确定了特定的脱酰胺化抗体变体、特定的氧化抗体变体和聚集的抗体变体可以影响美泊利单抗组合物的功能。因此，应保持特定水平的这些变体以确保适当的功能/功效。
实施例3
非正式序列表
根据Kabat定义的CDR，在抗体的可变重链和可变轻链部分或编码这些CDR序列的核酸序列中鉴定CDR序列，以下划线表示。例如，在SEQ ID NO：1中，框架和CDR按照从所示序列的氨基近端部分至羧基末端部分的顺序以纯文本框架1、加下划线的CDR1、纯文本框架2、加下划线的CDR2、纯文本框架3、加下划线的CDR3和纯文本框架4的形式呈现。单字母氨基酸编码右侧的星号表示左侧的氨基酸残基是N-糖基化位点。该方案用于例SEQ ID NO：1-4、11、12和19-22等。这些序列中显示的氨基末端甲硫氨酸残基可以被切割。因此，这里显示氨基末端甲硫氨酸残基的序列也应该被认为是公开了缺失这种氨基末端甲硫氨酸残基的这些蛋白质的切割形式。核酸序列作为DNA核酸序列呈现并且包括“t”核酸残基，相应的RNA序列也应该被认为是公开的，使得“t”核酸残基也可以被视为公开“u”核酸残基。此外，从下面的cDNA核酸序列中省略了5'近端“atg”起始密码子和3'近端“taa”、“tag”和“tga”终止密码子。例如对于SEQ ID NO：31-34等是这种情况。
美泊利单抗全长重链
美泊利单抗全长轻链
美泊利单抗VH
美泊利单抗VL
美泊利单抗CDRH1
美泊利单抗CDRH2
美泊利单抗CDRH3
美泊利单抗CDRL1
美泊利单抗CDRL2
美泊利单抗CDRL3
人IL-5(成熟蛋白质)
人IL-5受体亚单位α同种型1(成熟蛋白质)
编码美泊利单抗全长重链的DNA
DNA编码美泊利单抗全长轻链
现已充分描述本发明，对于本领域的普通技术人员显而易见的是，在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下，可以对其做出许多改变和修改。
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1.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含≤80％酸性抗体变体。
2.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤80％酸性抗体变体和≤20％聚集的抗体变体。
3.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
4.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
5.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
6.一种组合物，其包含具有SEQ ID NO：1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：2中所示的轻链氨基酸序列的抗体，或具有与所述重链氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和/或与所述轻链氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列的抗体变体，其中所述组合物包含：≤25％在轻链氨基酸序列的N31处脱酰胺化的抗体变体；≤35％在重链氨基酸序列的N386处脱酰胺化的抗体变体；≤55％在重链氨基酸序列的M64处、在重链氨基酸序列的M254处、在重链氨基酸序列的M430处氧化的抗体变体；≤3％在重链氨基酸序列的W52处氧化的抗体变体；和≤20％聚集的抗体变体。
7.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为组氨酸、磷酸盐或柠檬酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
8.一种组合物，其包含单克隆抗体的纯化制剂和缓冲剂，
其中所述组合物的pH为6.8至7.2，
其中所述缓冲剂为磷酸盐或其盐，
其中所述纯化制剂包括由图1中所示的峰65、峰78、峰88、峰92、主峰和峰112表示的同种型，
其中所述抗体包含与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链氨基酸序列和与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链氨基酸序列，且
其中所述抗体由中国仓鼠卵巢细胞产生。
9.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；和
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
10.一种组合物，其包含：
a)抗-IL-5抗体，其包含与SEQ ID NO：1中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的重链序列和与SEQ ID NO：2中所示氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链序列；
b)主要形式的抗体，其组成组合物中大于或等于50％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量；和
c)酸性形式的抗体，其组成该组合物中的约20％至约45％的蛋白质，其使用该组合物的毛细管等电聚焦所测量。
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