KR20180037275A - 생물제약 조성물 - Google Patents

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마이어나 에이. 몽크
나렌드라 비. 밤
제니퍼 댈리
미셸 스파타라
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글락소스미스클라인 인털렉츄얼 프로퍼티 (넘버 2) 리미티드
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Abstract

본 개시내용은 인터류킨 5 (IL-5) 매개 질환을 치료하기 위한 조성물 및 관련 방법에 관한 것이다.

Description

생물제약 조성물
본 개시내용은 인터류킨 5 (IL-5) 매개 질환을 치료하기 위한 조성물 및 관련 방법에 관한 것이다.
IL-5는 수많은 상이한 질환, 예컨대 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염에서 역할을 한다. 이들 심각한 질환은 전세계 수억명의 사람들에게 영향을 미친다.
메폴리주맙은 가용성 IL-5에 결합하여 가용성 IL-5가 그의 수용체에 결합하는 것을 차단하는 모노클로날 항체이다. IL-5의 구조는 분비된 단백질을 나타내며, 어떤 세포 유형 상에서도 IL-5의 임의의 막-결합된 형태의 증거가 존재하지 않는다. 따라서, Fc 이펙터 기능은 메폴리주맙 작용 메카니즘의 부분이 아니다. 메폴리주맙의 작용 메카니즘 및 약동학적 특성에 기초하여, 이 모노클로날 항체의 생물학적 활성에 수반되는 2종의 기능적 도메인이 존재한다. 이들은 a) 작용 메카니즘을 제공하는 상보성 결정 영역 (CDR)에서의 IL-5에 대한 결합; 및 b) 반감기를 결정하는 Fc 영역에서의 신생아 Fc 수용체 (FcRn) 수용체에 대한 결합이다. 제품의 개발 전반에 걸쳐 수행된 광범위한 특징화 연구를 통해, 탈아미드화, 산화 및 응집이 메폴리주맙의 중요한 품질 속성인 것으로 결정되었다. 중요하게는, 이들 변이체의 특정 수준이 적절한 생물학적 기능을 보장하도록 유지되어야 하는 것으로 밝혀졌다.
따라서, 메폴리주맙의 생물학적 기능을 유지하고 IL-5 매개된 질환을 치료하는데 적합한 조성물에 대한 필요가 존재한다. 이러한 조성물 및 관련 방법은 본 개시내용에 의해 제공된다.
개시내용의 한 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의 중쇄 아미노산 서열의 M64에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의, 중쇄 아미노산 서열의 M64, 중쇄 아미노산 서열의 M254, 중쇄 아미노산 서열의 M430에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고, 여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트, 시트르산, 시트레이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고, 여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태; 및 d) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및 c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 산화된 형태; 및 c) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및 c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기, 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기, 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기 및 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 80% 이하를 차지하는 항체의 산성 형태를 포함하는 조성물이다.
도 1. 메폴리주맙을 포함하는 참조 표준 (RS) 조성물의 대표적인 모세관 등전 포커싱 (cIEF) 전기영동도.
도 2. 메폴리주맙을 포함하는 참조 표준 조성물 (대조군) 및 3일의 pH 9.0 강제 분해에 적용된 메폴리주맙을 포함하는 조성물의 상이한 배치의 대표적인 cIEF 전기영동도.
도 3. 메폴리주맙을 포함하는 RS 조성물의 대표적인 전체 뷰 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 크로마토그램.
도 4. 메폴리주맙을 포함하는 RS 조성물의 대표적인 확대 뷰 SEC 크로마토그램.
도 5. 메폴리주맙을 포함하는 RS 조성물의 대표적인 SEC-다중-각도 광 산란 (MALS) 크로마토그램.
도 6. 메폴리주맙을 포함하는 조성물의 배치의 대표적인 SEC-MALS 크로마토그램.
도 7. 메폴리주맙을 포함하는 RS 조성물 및 제7일에서의 pH 3.5 스트레스 적용된 메폴리주맙을 포함하는 조성물의 상이한 배치의 대표적인 SEC 크로마토그램.
본 개시내용은 인터류킨 5 (IL-5) 매개 질환을 치료하기 위한 조성물 및 관련 대상을 제공한다.
본원에 사용된 용어 "천식"은 가역적 기류 폐쇄 및 기관지연축을 특징으로 하는 기도의 염증성 질환을 의미한다. 공통 증상은 천명, 기침, 흉부 압박 및 숨가쁨을 포함한다.
개시내용의 방법에서 "천식"은 "중증 호산구성 천식"일 수 있다. 중증 호산구성 천식을 갖는 대상체는 지난 12개월간 혈액 μL당 300개 이상의 호산구를 갖는 혈액 호산구 및 천식을 가질 수 있다. 중증 호산구성 천식을 갖는 대상체는 표 1에 기재된 기준 중 1개 이상을 충족할 수 있다.
표 1
Figure pct00001
중요하게는, 이들 기준에 따른 중증 호산구성 천식을 갖는 대상체는 치료의 개시에서 혈액 μL당 150개 미만의 호산구를 가질 수 있다. 메폴리주맙은 서열식별번호: 1에 제시된 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 모노클로날 항체이다. 메폴리주맙, 및 메폴리주맙의 중쇄 CDR 및 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 단백질, 특히 항체 분자는 개시내용의 방법에 따라 중증 호산구성 천식을 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 메폴리주맙 또는 관련 항원 결합 단백질은 환자에서 지난 12개월간 300개 이상의 세포/μL 혈액 호산구 및/또는 치료의 개시에서 150개 이상의 세포/μL 혈액 호산구 및/또는 치료의 개시에서 150개 미만의 세포/μL 혈액 호산구에 의해 확인된 바와 같이, 중증 호산구성 천식의 부가적 유지 치료를 위해 지시될 수 있다. 대안적으로, 메폴리주맙 또는 관련 항원 결합 단백질은 환자에서 지난 12개월간 300개 이상의 세포/μL 혈액 호산구 및/또는 치료의 개시에서 150개 이상의 세포/μL 혈액 호산구에 의해 확인된 바와 같이, 중증 호산구성 천식의 부가적 유지 치료를 위해 지시될 수 있다. 메폴리주맙 또는 관련 항원 결합 단백질은 환자에서 지난 12개월간 300개 이상의 세포/μL 혈액 호산구 및/또는 치료의 개시에서 150개 미만의 세포/μL 혈액 호산구에 의해 확인된 바와 같이, 중증 호산구성 천식의 부가적 유지 치료를 위해 지시될 수 있다. 이러한 환자는 12세 이상일 수 있다. 메폴리주맙 치료는 환자 (예를 들어, 악화 병력을 갖는 환자)에서 천식의 악화를 감소시킬 수 있다. 개시내용의 방법은 메폴리주맙 치료가 지시되는 경우에 사용될 수 있다 (즉, 메폴리주맙을 사용한 이러한 치료가 개시내용의 방법과 조합될 수 있다). 메폴리주맙을 사용한 치료는 다음일 수 있다:
a) 악화 빈도의 감소를 가져온다. 위약과 비교하여 메폴리주맙을 사용한 치료, 예컨대 대상체당 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여는 1) 임상적으로 유의한 악화, 2) 입원 또는 ED 방문이 요구되는 악화, 및 3) 입원이 요구되는 악화의 비율을 감소시킬 수 있다. 이 이익은 잠재적으로 천식으로 인한 이환율 및 치명적 사건의 감소로 이어질 수 있다.
b) 1일 OCS 용량의 감소를 가져온다: 메폴리주맙을 사용한 치료, 예컨대 대상체당 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여는 대상체가 천식 제어의 상실을 경험하지 않으면서 병용 코르티코스테로이드의 그의 1일 용량을 감소시키도록 할 수 있다. 메폴리주맙으로 치료된 대상체는 위약으로 치료된 자들의 경우 0%에 비해 1일 경구 코르티코스테로이드 (OCS) 용량의 기준선으로부터의 50%의 중앙 백분율 감소를 달성할 수 있다. 추가로, 메폴리주맙으로 치료된 대상체의 54%는 위약으로 치료된 대상체의 32%와 비교하여 5.0 mg으로의 OCS 용량의 감소를 달성할 수 있다 (p=0.025).
c) 폐 기능의 개선을 가져온다: 위약과 비교하여 기관지확장제전 및 후 FEV1의 임상적으로 관련된 변화가 메폴리주맙 치료, 예컨대 대상체당 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여로 입증될 수 있다. 대부분이 고용량 ICS (흡입용 코르티코스테로이드) 및/또는 OCS 플러스 제어제 의약을 포함한 최대 천식 요법을 받고 있기 때문 폐 기능의 임의의 개선은 이 대상체 집단에서 특히 임상적으로 중요하다.
d) 천식 제어의 개선을 가져온다: 위약과 비교하여 통계적으로 유의하고 임상적으로 관련된 개선이 메폴리주맙, 예컨대 대상체당 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여를 사용한 ACQ-5에서 관찰될 수 있으며, 이는 대상체가 그의 기존 천식 치료에 메폴리주맙의 부가로 천식 제어를 달성할 수 있다는 것을 나타낸다.
e) 삶의 질의 개선을 가져온다: 위약과 비교하여 SGRQ 점수의 통계적으로 유의하고 임상적으로 관련된 변화가 메폴리주맙, 예컨대 대상체당 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여로 입증될 수 있다. 대상체는 천식 증상 및 일상 활동 수행 능력의 현저한 개선을 경험할 수 있다.
f) 효능 및 약역학적 효과의 지속성을 가져온다: 32- 및/또는 52-주 치료 지속기간에 걸쳐, 내성의 발생 없이 천식 악화 및 혈액 호산구의 지속적 감소, 및 폐 기능, 천식 제어 및 삶의 질의 개선이 관찰될 수 있다.
및
g) 혈액 호산구의 감소를 가져온다. 메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료, 예컨대 대상체당 메폴리주맙 100 mg 피하 투여 또는 대상체당 75 mg 정맥내 투여는 혈액 호산구의 급속한 감소를 유발할 수 있다 (초기 치료 후 제4주에서의 제1 평가 시에 대략 80%; 예를 들어, 250-290개 세포/μL에서 40-60개 세포/μL로 등).
개시내용의 방법에서 "천식"은 "중증 천식"일 수 있다. 중증 천식을 갖는 대상체는 중증 천식에 대한 유럽 호흡기 학회/ 미국 흉부 학회 (ERS/ATS) 가이드라인에 기재된 중증 천식의 정의를 충족한다. 따라서, 중증 천식은 이전 년도에 대해 세계 천식 기구 (GINA) 단계 4-5 천식 (고용량 흡입용 코르티코스테로이드 [ICS] 플러스 장기 작용 베타2-효능제 [LABA] 또는 류코트리엔 조절제/테오필린)에 대한 가이드라인 제안된 의약을 사용한 치료가 요구되거나, 또는 대상체의 천식의 제어를 유지하기 위해 이전 년도의 >=50%에 대해 전신 코르티코스테로이드 (CS)가 요구되는 천식이다. 메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 중증 천식을 치료하는데 사용될 수 있다.
개시내용의 방법에서 "천식"은 "비제어된 호산구성 천식"일 수 있다. 비제어된 호산구성 천식을 갖는 대상체는 표 2에 기재된 기준을 충족한다.
표 2.
Figure pct00002
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 비제어된 호산구성 천식을 치료하는데 사용될 수 있다.
개시내용의 방법에서 "천식"은 "호산구성 천식"일 수 있다. 비제어된 호산구성 천식을 갖는 대상체는 표 3에 기재된 기준을 충족한다.
표 3.
Figure pct00003
개시내용의 방법에서 "천식"은 "준-호산구성 천식"일 수 있다. 비제어된 호산구성 천식을 갖는 대상체는 표 4에 기재된 기준을 충족한다.
표 4
Figure pct00004
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 준-호산구성 천식을 치료하는데 사용될 수 있고, 또한 개시내용의 방법에 따라 준-호산구성 천식을 치료하는데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "수포성 유천포창" (BP)은 피부 층 표피와 진피 사이의 공간에, 보다 적절하게는 물집으로 알려져 있는 수포의 형성을 수반하는, 급성 또는 만성 자가면역 피부 질환을 의미한다. BP는 가장 흔한 자가면역 수포성 피부 질환이다. 그것은 특징적으로는 고령자 (>70세)에게 백만명당 5 내지 35명의 연간 발생률로 이환된다. BP의 발생률은 연간 평균 17%로 극적으로 증가하고 있다. BP는 종종 소포 및 수포가 발생하기 전에 습진 또는 두드러기와 유사한 극도 소양성 피부 병변으로 시작한다. 환자의 10-30%에서, BP는 또한 구강 점막을 침범한다. 질환 중증도는 침범된 영역뿐만 아니라 질환 활성을 평가하는 자가면역 수포성 피부 장애 강도 점수 (ABSIS)에 의해 결정될 수 있다. 질환은 표피하 수포 형성을 동반한 피부-표피 접합부의 손상으로 이어지는 접합부 부착 복합체의 구조적 성분에 대한 자가면역 반응으로 인한 것이다. 구체적으로, 헤미데스모솜 항원 BP180 및 BP230에 대한 자가반응성 B 및 T 세포 반응이 확인되었다. BP180에 대한 자가항체의 혈청 수준은 질환 중증도 및 활성을 반영한다. T 세포는 Th1 및 Th2 시토카인 둘 다, 대부분 IL-4, IL-5 및 IL-13을 생산하는 기억 CD4+ 세포이다. IL-5 뿐만 아니라 에오탁신은 수포 유체에서 풍부하게 발견된다. IL-5의 생산은 사실상 BP 환자의 피부에서 혈액 호산구증가증 및 유의한 호산구 침윤과 연관되어 있다. 호산구는 독성 과립 단백질 (ESP, MBP) 및 단백질분해 효소를 방출함으로써 수포 형성에 중대하게 연루되어 있는 것으로 생각된다.
본원에 사용된 용어 "호산구성 식도염" (EoE)은 호산구를 수반하는 식도의 알레르기성 염증성 상태를 의미한다. 증상은 삼킴 곤란, 음식 박힘 및 가슴쓰림이다. EoE는 식도의 상피 내층으로의 호산구 유형의 백혈구에 의한 고밀도 침윤을 특징으로 한다. EoE는 알레르기 반응에서 호산구가 하는 중요한 역할에 기초하여 섭취된 음식물에 대한 알레르기 반응인 것으로 여겨진다. EoE 진단 패널이 EoE를 진단하는데 사용될 수 있다. EoE는 또한 위식도 역류가 1일 2회 고용량 양성자-펌프 억제제 (PPI)의 6주 시험에 반응하지 않는 경우에 또는 음성 보행 pH 연구가 위식도 역류 질환 (GERD)을 배제한 경우에 진단될 수 있다. 내시경으로, 능선, 주름 또는 고리가 식도 벽에서 보일 수 있다. 때때로, 다중 고리가 식도에서 발생할 수 있으며, 용어 "물결형 식도" 또는 고양이 식도에 대한 고리의 유사성으로 인해 "고양이 식도"로 불릴 수 있다. 식도 내 백색 분비물의 존재가 또한 진단을 시사한다. 내시경검사 시에 취해진 생검 상에서, 수많은 호산구가 전형적으로 표재성 상피에서 보일 수 있다. 고배율 시야당 최소 15개의 호산구가 진단을 내리는데 요구된다. 호산구성 염증은 식도 단독에 제한되지 않으며, 전체 위장관으로 확장된다. 미세농양 및 기저 층의 확장이 존재할 수 있음에 따라, 심하게 탈과립화된 호산구가 또한 존재할 수 있다. 방사선학적으로, 용어 "환상 식도"는 때때로 식도 환류와 함께 보이는 일시적 가로 주름의 외관과 대조를 이루는 바륨 삼킴 연구 상에서의 호산구성 식도염의 외관에 대해 사용되었다 ("고양이 식도"로 불림).
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 COPD를 치료하는데 사용될 수 있다.
"만성 폐쇄성 폐 질환" (COPD)을 갖는 대상체는 1개 이상의 하기 기준을 충족할 수 있다: a) 이전 COPD 진단: 미국 흉부 학회/유럽 호흡기 학회에 의한 정의에 따라 적어도 1년 동안 COPD의 임상적으로 기록된 병력을 갖는 대상체; b) COPD의 중증도: 대상체는 하기가 존재할 수 있다: COPD의 진단을 확인하기 위한 1초간 측정된 살부타몰전 및 후 강제 호기량/ 강제 폐활량 (FEV1/FVC) 비 <0.70; 측정된 살부타몰후 FEV1>20 퍼센트 및 국민 건강 및 영양 검사 조사 (NHANES) III 참조 방정식을 사용하여 계산된 예측 정상치의 <=80 퍼센트; c) 악화의 병력: 12개월간 적어도 2회의 중등도 COPD 악화의 잘 기록된 병력 (의료 기록 검증과 유사). 중등도 전신 코르티코스테로이드의 사용 (IM, 정맥내 또는 경구) 및/또는 항생제를 사용한 치료, 또는 적어도 1회의 중증 COPD 악화로 정의된다. 중증은 입원이 요구되는 것으로 정의된다. 주: 적어도 1회의 악화는 대상체가 흡입용 코르티코스테로이드 (ICS) 플러스 장기 작용 베타2-효능제 (LABA) 플러스 장기 작용 무스카린성 길항제 (LAMA)를 취하는 동안 발생하였어야 한다. 주: 이전 항생제 단독의 사용은 그 사용이 구체적으로 COPD의 악화 증상의 치료를 위한 것이 아닌 한 중등도 악화로서 간주되지 않는다; 및 d) 병용 COPD 요법: 이전 12개월 동안 ICS 플러스 2종의 추가의 COPD 의약 (즉, 3중 요법)을 포함하며 하기 기준을 충족하는 최적화된 표준 관리 (SoC) 배경 요법에 대한 잘 기록된 요건: 건강관리 제공자에게의 방문 직전에, 흡입용 코르티코스테로이드 (용량 >=500 마이크로그램 (mcg)/일 플루티카손 프로피오네이트 용량 플러스 등가물); 또는 LABA 및 LAMA의 최소 3개월의 사용.
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 COPD를 치료하는데 사용될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증" (EGPA)은 기도 알레르기성 과민성 (아토피)의 병력을 갖는 사람에서 작은 및 중간-크기의 혈관의 염증 (혈관염)을 일으키는 자가면역 상태를 의미한다. EGPA는 또한 처그-스트라우스 증후군 (CSS) 또는 알레르기성 육아종증으로서 지칭될 수 있다. EGPA는 통상적으로 3 단계로 나타난다. 초기 (전구) 단계는 기도 염증에 의해 표시되며; 거의 모든 환자가 천식 및/또는 알레르기성 비염을 경험한다. 제2 단계는 호산구의 비정상적으로 높은 수 (과다호산구증가증)를 특징으로 하며, 이는 가장 흔하게는 폐 및 소화관에 대한 조직 손상을 일으킨다. 제3 단계는 혈관염으로 이루어지며, 이는 결국 세포 사멸로 이어질 수 있고 생명을 위협할 수 있다.
EGPA를 갖는 대상체는 1개 이상의 하기 기준을 충족할 수 있다: a) 천식; b) 감별 백혈구 계수의 10% 초과의 혈액 호산구 수준; c) 단일신경병증 또는 다발신경병증의 존재; d) 비고정 폐 침윤물; e) 부비동 이상의 존재; 및 e) 혈관외 호산구의 조직학적 증거. 분류 목적을 위해, 환자는 선행 6개의 기준 중 적어도 4개가 양성인 경우에 EGPA를 갖는다고 언급될 것이다.
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 EGPA를 치료하는데 사용될 수 있다. 개시내용의 조성물은 4주마다 1회 300 mg의 양으로 EGPA 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "과다호산구성 증후군" (HES)은 심장, 신경계 또는 골수의 침범을 동반하는, 임의의 인식가능한 원인 없이 적어도 6개월 동안 혈액 내 지속적으로 상승된 호산구 수 (≥ 1500개 호산구/mm3)를 특징으로 하는 질환을 의미한다.
과다호산구성 증후군을 갖는 대상체는 1개 이상의 하기 기준을 충족할 수 있다: a) 과다호산구성 증후군의 기록된 병력; b) 6개월 동안 1500개 세포 초과의 혈액 호산구 수; c) 기관계 침범의 징후 및 증상; 및 d) 포괄적 평가 후 호산구증가증의 기생충성, 알레르기성 또는 다른 원인의 증거 부재.
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 과다호산구성 증후군을 치료하는데 사용될 수 있다. 개시내용의 조성물은 4주마다 1회 300 mg의 양으로 과다호산구성 증후군 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "비강 폴립증"은 비강 폴립의 존재를 특징으로 하는 질환을 의미한다. 이러한 폴립은 상부 비강에 있을 수 있고/거나 부비동개구 복합체 내부로부터 기원할 수 있다.
비강 폴립증을 갖는 대상체는 1개 이상의 하기 기준을 충족할 수 있다: a) 비강 폴립증의 기록된 병력; 또는 b) 검사 (예를 들어, 내시경 검사)에서 분명한 비강 폴립.
메폴리주맙을 포함하는 조성물을 사용한 치료는 개시내용의 방법에 따라 비강 폴립증을 치료하는데 사용될 수 있다. 개시내용의 조성물은 4주마다 1회 750 mg의 양으로 비강 폴립증 환자에게 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체"는 이뮤노글로불린-유사 도메인 (예를 들어, IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE)을 갖는 분자를 지칭하며, 이 유형의 모노클로날, 재조합, 폴리클로날, 모노클로날, 재조합, 폴리클로날, 키메라, 인간 및 인간화 분자를 포함한다. 모노클로날 항체는 항체를 발현하는 진핵 세포 클론에 의해 생산될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열을 세포 내로 도입하는 것에 의해 이들을 재조합적으로 발현할 수 있는 진핵 세포주에 의해 생산될 수 있다. 상이한 진핵 세포주, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 세포, 하이브리도마, 또는 동물 (예를 들어, 인간)로부터 유래된 불멸화 항체 세포로부터 항체를 생산하는 방법은 널리 공지되어 있다.
항체는 래트, 마우스, 영장류 (예를 들어, 시노몰구스, 구세계 원숭이 또는 대형 유인원), 인간 또는 다른 공급원, 예컨대 항체 분자를 코딩하는, 분자 생물학 기술을 사용하여 생성된 핵산으로부터 유래될 수 있다.
항체는 임의의 이소형 또는 하위부류일 수 있는 불변 영역을 포함할 수 있다. 불변 영역은 IgG 이소형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 또는 그의 변이체일 수 있다. 항원 결합 단백질 불변 영역은 IgG1일 수 있다.
항원 결합 단백질은 항체가 증진된 이펙터 기능/ADCC 및/또는 보체 활성화를 갖도록 돌연변이된 불변 도메인으로부터 선택된 1종 이상의 변형을 포함할 수 있다.
항체는 표적 항원에 결합할 수 있다. 이러한 표적 항원의 예는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 IL-5를 포함한다.
서열식별번호: 1에 제시된 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 메폴리주맙은 항체의 예이다. 메폴리주맙은 인간 IL-5에 결합하며 그의 활성을 길항한다.
메폴리주맙은 재조합 인간화 모노클로날 항체 (IgG1, 카파)이다. 메폴리주맙은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 갖는다.
메폴리주맙 중쇄는 서열식별번호: 13에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩된다. 메폴리주맙 중쇄는 449개의 아미노산을 함유하며 대략 49 kDa의 추정된 분자 질량을 갖는다. 메폴리주맙에 대한 예측된 성숙 중쇄 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00005
상기 중쇄 아미노산 서열에서, 카바트 정의에 따른 중쇄 프레임워크 및 CDR은 제시된 서열의 아미노 근위 부분에서 카르복시 말단 부분으로의 순서로 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크1, 실선 밑줄표시된 CDR1, 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크2, 실선 밑줄표시된 CDR2, 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크3, 실선 밑줄표시된 CDR3 및 지그-재그프레임워크4로서 확인된다. 상기 중쇄 아미노산 서열에서, 단일 문자 아미노산 코드에 대해 문자 우측의 별표는 좌측의 아미노산 잔기가 N-글리코실화 부위일 수 있다는 것을 나타낸다.
메폴리주맙 경쇄는 서열식별번호: 14에 제시된 핵산 서열에 의해 코딩된다. 메폴리주맙 경쇄는 220개의 아미노산 잔기를 함유하며 대략 24 kDa의 추정된 분자 질량을 갖는다. 성숙 경쇄 아미노산 서열은 다음과 같다:
Figure pct00006
상기 경쇄 아미노산 서열에서, 카바트 정의에 따른 경쇄 프레임워크 및 CDR은 제시된 서열의 아미노 근위 부분에서 카르복시 말단 부분으로의 순서로 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크1, 실선 밑줄표시된 CDR1, 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크2, 실선 밑줄표시된 CDR2, 지그-재그 밑줄표시된 프레임워크3, 실선 밑줄표시된 CDR3 및 지그-재그 프레임워크4로서 확인된다.
메폴리주맙 중쇄 및 경쇄는 단일 디술피드 결합에 의해 공유 연결되고, 중쇄는 2개의 디술피드 결합에 의해 서로에 연결되어 전형적인 IgG 분자가 된다. 2개의 중쇄는 아스파라긴 299에서 복합 이중안테나 올리고사카라이드로 글리코실화될 수 있다. 예측된 폴리펩티드 분자 질량은 약 146 kDa이고, 예측된 탄수화물 분자 질량은 대략 3 kDa이어서, 메폴리주맙에 대한 총 추정된 분자 질량은 149.2 kDa이 된다. 코딩된 메폴리주맙은 1338개의 아미노산 잔기 (경쇄당 220개의 아미노산 잔기, 중쇄당 449개의 아미노산 잔기)를 갖는다. 메폴리주맙의 주요 pI는 약 8.7 - 9.1이다. 표준 표면 플라즈몬 공명 검정을 사용하여 측정 시에 메폴리주맙 및 인간 IL-5의 분자 상호작용에 대한 평형 해리 상수 (KD)는 2.29x10-11 M 미만이다.
메폴리주맙은 제약상 허용되는 담체 (예를 들어, 멸균수)로 재구성될 수 있는, 항체 및 부형제를 함유하는 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 이 재구성된 제약 조성물은 이어서 피하로 또는 정맥내로 (예를 들어, 추가의 희석 하에) 투여될 수 있다. 메폴리주맙은 또한 항체, 부형제 및 제약상 허용되는 담체를 함유하는 액체 제제로서 제공될 수 있다. 이 액체 제약 조성물은 이어서 피하로 또는 정맥내로 (예를 들어, 추가의 희석 하에) 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "항체 변이체"는 모 항체에 비해 구조적 변화 (예를 들어, 상이한 아미노산 측쇄, 상이한 번역후 변형 또는 다른 변형)를 유발하는 적어도 1개의 중쇄, 경쇄 또는 이들의 조합에서의 적어도 1종의 아미노산 변형 (예를 들어, 상이한 아미노산 측쇄를 갖는 것에 의함), 번역후 변형 또는 다른 변형에 의해 모 항체와 상이한 항체를 의미한다. 메폴리주맙은 이러한 모 항체의 예이다. 구조적 변화는 관련 기술분야에 널리 공지된 다양한 방법, 예컨대 LC-MS, 직접 서열분석에 의해 직접적으로 결정될 수 있거나 또는 등전 포커싱 등과 같은 방법을 통해 간접적으로 결정될 수 있다. 이러한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "IL-5"는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 IL-5를 의미한다.
항원 결합 단백질에 관하여 본원에 사용된 용어 "특이적으로 결합하다"는 항원 결합 단백질이 다른 (예를 들어, 비관련) 단백질에 결합하지 않거나 비유의한 결합을 보이면서, 표적 항원뿐만 아니라 표적 항원 내의 별개의 도메인 또는 별개의 아미노산 서열에 결합하는 것을 의미한다. 이 용어는 그러나 항원 결합 단백질이 또한 밀접하게 관련된 분자 (예를 들어, 고도의 서열 동일성을 갖는 것 또는 또 다른 속 또는 종으로부터의 것)와 교차-반응성일 수 있다는 사실을 배제하지 않는다. 본원에 기재된 항원 결합 단백질은 이들이 밀접하게 관련된 분자에 결합하는 것보다 적어도 2, 5, 10, 50, 100 또는 1000배 더 큰 친화도로 인간 IL-5 또는 인간 IL-5 수용체에 결합할 수 있다.
항원 결합 단백질-표적 항원 상호작용의 결합 친화도 (KD)는 1 mM 이하, 100 nM 이하, 10 nM 이하, 2 nM 이하 또는 1 nM 이하일 수 있다. 대안적으로, KD는 5 내지 10 nM; 또는 1 내지 2 nM일 수 있다. KD는 1 pM 내지 500 pM; 또는 500 pM 내지 1 nM일 수 있다. 항원 결합 단백질의 결합 친화도는 회합 상수 (Ka) 및 해리 상수 (Kd)에 의해 결정된다 (KD = Kd/Ka). 결합 친화도는 비아코어(BIACORE)™에 의해, 예를 들어 단백질-A 코팅된 센서 표면 상으로의 시험 항체의 포획 및 이 표면 상에서의 표적 항원 유동에 의해 측정될 수 있다. 대안적으로, 결합 친화도는 포르테바이오(FORTEBIO)에 의해, 예를 들어 시험 항체 수용체가 단백질-A 코팅된 바늘 상에 포획되고 이 표면 상에서 표적 항원을 유동시켜 측정될 수 있다.
Kd는 1x10-3 Ms-1 이하, 1x10-4 Ms-1 이하, 또는 1x10-5 Ms-1 이하일 수 있다. Kd는 1x10-5 Ms-1 내지 1x10-4 Ms-1; 또는 1x10-4 Ms-1 내지 1x10-3 Ms-1일 수 있다. 느린 Kd는 항원 결합 단백질-표적 항원 복합체의 느린 해리 및 표적 항원의 개선된 중화를 유발할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "특이적 항원 결합 활성"은 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 측정된 항원 결합 활성을 의미한다. IL-5 특이적 결합 활성은, 예를 들어 결합 모드로 수행되는 비아코어™ 기기를 사용하여 SPR에 의해 결정된다. 그것은 샘플 중 총 단백질 (예를 들어, 메폴리주맙) 함량에 의해 나누어진 결합 활성이다.
본원에 사용된 용어 "FcRn 결합 활성"은 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 측정된 신생아 Fc (FcRn) 수용체 결합 활성을 의미한다. FcRn 결합은 비아코어™ 기기를 사용하여 결정될 수 있다. 그것은 샘플의 총 단백질 농도에 의해 나누어진 FcRn 수용체에 대한 결합 활성이다.
특이적 항원 결합 및 FcRn 결합에 대한 SPR 방법은 메폴리주맙의 참조 표준물을 사용한다. 메폴리주맙 참조 표준물은 방법이 적절하게 수행되고 있다는 것을 보장하기 위해, 시스템 적합성 및 샘플 비교가능성 데이터를 수득하기 위한 검정에 사용될 수 있다. 참조 표준물은 보정 곡선의 확립을 가능하게 할 수 있고, 샘플의 농도는 곡선으로부터 내삽된다.
예를 들어, 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2를 포함하는 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2 및 98% 이상의 HC C-말단 리신 결실된 변이체 및 95% 이상의 HC N-말단 피로-글루타메이트 변이체를 포함하는 조성물이다. 추가 실시양태에서, 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2 및 98% 이상의 HC C-말단 리신 결실된 변이체, 95% 이상의 HC N-말단 피로-글루타메이트 변이체 및 6% 이하의 탈아미드화된 변이체를 포함하는 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2 및 98% 이상의 HC C-말단 리신 결실된 변이체, 95% 이상의 HC N-말단 피로-글루타메이트 변이체, 6% 이하의 탈아미드화된 변이체, 4% 이하의 메티오닌 또는 시스테인 산화된 변이체 및 0.1%의 트립토판 산화된 변이체를 포함하는 조성물이다. 추가 실시양태에서, 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2 및 98% 이상의 HC C-말단 리신 결실된 변이체, 95% 이상의 HC N-말단 피로-글루타메이트 변이체, 6% 이하의 탈아미드화된 변이체, 4% 이하의 메티오닌 또는 시스테인 산화된 변이체, 0.1% 이하의 트립토판 산화된 변이체 및 0.4% 이하의 응집된 변이체를 포함하는 조성물이다. 또 다른 실시양태에서, 참조 표준물은 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하는 조성물이다. 한 실시양태에서 참조 표준물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2, 약 62.9%의 주요 피크, 약 35.9%의 산성 피크, 약 1.2%의 염기성 피크, 약 99.6%의 단량체, 약 0.4%의 응집체, 약 0%의 단편, 약 0.8%의 HC 탈아미드화된 N317, 약 5.5%의 HC 탈아미드화된 N386, 약 5.2%의 HC 탈아미드화된 N31, 약 0.2%의 HC 탈아미드화된 N299, 약 0.9%의 HC 산화된 M64, 약 3.5%의 HC 산화된 M254, 약 0.5%의 HC 산화된 M360, 약 0.5%의 HC 산화된 M430, 약 0.3%의 HC 산화된 M82 및 M85, 약 0.2%의 LC 산화된 M4, 약 0.0%의 LC 산화된 C220, 약 0.1%의 HC 산화된 W52, 98% 이상의 HC C-말단 리신 결실된 변이체 및 95% 이상의 HC N-말단 피로-글루타메이트 변이체를 포함하는 조성물이다.
한 실시양태에서 조성물은 ≥0.70의 특이적 IL-5 결합 활성; 및 ≥ 70%의 FcRn 결합 활성을 갖는다. 예를 들어, 1.0의 특이적 IL-5 결합 활성 및 100%의 FcRn 결합 활성으로 설정된 참조 표준물과 비교하여, 특이적 항원 결합은 0.70 내지 1.30의 범위이고/거나; FcRn 결합은 70% 내지 130%의 범위이다.
IL-5 중화 ED50 비는 항체 샘플 (예를 들어, 메폴리주맙 변이체 샘플 또는 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 메폴리주맙 항체를 포함하는 조성물의 제조된 배치의 샘플)의 ED50에 의해 나누어진 참조 항체 표준물 (예를 들어, 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 메폴리주맙 항체 표준물)의 ED50이다.
"단리된"은 분자, 예컨대 항원 결합 단백질 또는 핵산이 자연에서 발견될 수 있는 환경으로부터 제거된 것으로 의도된다. 예를 들어, 분자는 통상적으로 그와 함께 자연에 존재하는 물질로부터 정제될 수 있다. 예를 들어, 샘플 중 분자의 질량은 총 질량의 95%일 수 있다.
용어 "VH" 및 "VL"은 각각 항원 결합 단백질의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 지칭하는 것으로 본원에 사용된다.
"CDR"은 항원 결합 단백질의 상보성 결정 영역 아미노산 서열로 정의된다. 이들은 이뮤노글로불린 중쇄 및 경쇄의 초가변 영역이다. 3개의 중쇄 및 3개의 경쇄 CDR (또는 CDR 영역)이 이뮤노글로불린의 가변 부분에 존재한다. 따라서, 본원에 사용된 "CDR"은 모든 3개의 중쇄 CDR, 모든 3개의 경쇄 CDR, 모든 중쇄 및 경쇄 CDR, 또는 적어도 1개의 CDR (여기서 적어도 1개의 CDR은 CDRH3임)을 지칭한다. 프레임워크 영역은 각각의 이들 CDR 영역을 따른다. 허용되는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 1, 프레임워크 2 및 프레임워크 3 영역은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인식된다. 허용되는 중쇄 불변 영역 (힌지 영역을 포함함) 및 경쇄 불변 영역은 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인식된다. 허용되는 항체 이소형은 유사하게 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 인식된다.
본 명세서 전체에 걸쳐, 가변 도메인 서열 및 전장 항체 서열 내 아미노산 잔기는 카바트 넘버링 규정에 따라 넘버링된다. 유사하게, 명세서에 사용된 용어 "CDR", "CDRL1", "CDRL2", "CDRL3", "CDRH1", "CDRH2", "CDRH3"은 카바트 넘버링 규정을 따른다.
가변 도메인 서열 및 전장 항체 서열 내 아미노산 잔기에 대한 대안적 넘버링 규정이 존재한다는 것은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다. 또한 CDR 서열, 예를 들어 코티아 넘버링 규정에 따라 설정된 것에 대한 대안적 넘버링 규정이 존재한다. 항체의 구조 및 단백질 폴딩은 다른 잔기가 CDR 서열의 일부로 간주된다는 것을 의미할 수 있고, 통상의 기술자에 의해 그와 같이 이해될 것이다.
통상의 기술자에게 이용가능한 CDR 서열에 대한 다른 넘버링 규정은 "AbM" (유니버시티 오브 배스) 및 "접촉" (유니버시티 칼리지 런던) 방법을 포함한다. "최소 결합 단위"를 제공하기 위해, 카바트, 코티아, AbM 및 접촉 방법 중 적어도 2종을 사용하여 최소 중첩 영역을 결정할 수 있다. 최소 결합 단위는 CDR의 하위-부분일 수 있다.
하기 표 5는 각각의 CDR 또는 결합 단위에 대한 각각의 넘버링 규정을 사용한 하나의 정의를 나타낸다. 가변 도메인 아미노산 서열을 넘버링하기 위해 카바트 넘버링 스킴이 표 5에 사용된다. CDR 정의의 일부는 사용된 개별 간행물에 따라 달라질 수 있다는 것이 주목되어야 한다.
표 5
Figure pct00007
질의 핵산 서열과 대상 핵산 서열 사이의 "퍼센트 동일성"은 백분율로 표현되는 "동일성" 값이며, 이는 대상 핵산 서열이 쌍별 BLASTN 정렬을 수행한 후 질의 핵산 서열과 100% 질의 적용범위를 가질 때 BLASTN 알고리즘에 의해 계산된다. 질의 핵산 서열과 대상 핵산 서열 사이의 이러한 쌍별 BLASTN 정렬은 국립 생명공학 연구 센터의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTN 알고리즘의 디폴트 세팅을 사용하고 낮은 복잡성 영역에 대한 필터를 턴 오프하여 수행된다. 중요하게는, 질의 핵산 서열은 본원의 1개 이상의 청구항에서 확인된 핵산 서열에 의해 기재될 수 있다.
개시내용의 조성물 및 관련 방법에서 유용하고 그에 포함될 수 있는 핵산 서열은 개시내용에서 확인된 핵산 서열 (예를 들어, 항체 중쇄 또는 항체 경쇄를 코딩하는 핵산)에 대해 약 85% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 및 약 100% 동일성을 가질 수 있다. 개시내용에서, 기재된 핵산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 상기 인용된 퍼센트 동일성 범위의 임의의 별개의 하위범위를 포함할 수 있다 (예를 들어, 특정한 범위 내의 정수 값 또는 특정한 범위 내의 별개의 하위값의 임의의 범위).
질의 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 "퍼센트 동일성"은 백분율로 표현되는 "동일성" 값이며, 이는 대상 아미노산 서열이 쌍별 BLASTP 정렬을 수행한 후 질의 아미노산 서열과 100% 질의 적용범위를 가질 때 BLASTP 알고리즘에 의해 계산된다. 질의 아미노산 서열과 대상 아미노산 서열 사이의 이러한 쌍별 BLASTP 정렬은 국립 생명공학 연구 센터의 웹사이트 상에서 이용가능한 BLASTP 알고리즘의 디폴트 세팅을 사용하고 낮은 복잡성 영역에 대한 필터를 턴 오프하여 수행된다. 중요하게는, 질의 아미노산 서열은 본원의 1개 이상의 청구항에서 확인된 아미노산 서열에 의해 기재될 수 있다.
개시내용의 조성물 및 관련 방법에서 유용하고 그에 포함될 수 있는 아미노산 서열은 개시내용에서 확인된 아미노산 서열 (예를 들어, 항체 중쇄 또는 항체 경쇄)에 대해 약 85% 내지 약 100%, 약 90% 내지 약 100%, 약 95% 내지 약 100%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 및 약 100% 동일성을 가질 수 있다. 개시내용에서, 기재된 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은 상기 인용된 퍼센트 동일성 범위의 임의의 별개의 하위범위를 포함할 수 있다 (예를 들어, 특정한 범위 내의 정수 값 또는 특정한 범위 내의 별개의 하위값의 임의의 범위).
용어 "펩티드", "폴리펩티드", "단백질" 및 "펩티드 쇄"는 각각 2개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 펩티드는 단량체 또는 중합체일 수 있다.
특정 아미노산 치환은 "보존적"인 것으로 간주된다는 것이 관련 기술분야에서 널리 인식되어 있다. 아미노산은 공통 측쇄 특성에 기초하여 여러 군으로 나누어지고, 모든 또는 실질적으로 모든 항원 결합 단백질의 결합 친화도를 유지하는 군 내의 치환은 보존적 치환으로 간주된다. 표 6을 참조한다. 본원에 개시된 항원 결합 단백질은 이러한 "보존적" 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
표 6
Figure pct00008
본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 환자에게의 투여에 적합한 조성물을 의미한다.
본원에 기재된 제약 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체의 정제된 제제를 포함할 수 있다.
예를 들어, 제약 제제는 본원에 기재된 바와 같은 항체의 정제된 제제를 제약상 허용되는 담체와 조합하여 포함할 수 있다.
전형적으로, 이러한 제약 조성물은 허용되는 제약 실시에 의해 공지되고 언급되는 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 이러한 담체의 예는 임의로 적합한 완충제로 pH 5 내지 8의 범위 내로 완충시킨 멸균 담체, 예컨대 염수, 링거액 또는 덱스트로스 용액을 포함한다.
제약 조성물은 주사 또는 주입에 의해 투여될 수 있다 (예를 들어, 정맥내, 복강내, 피내, 피하, 근육내 또는 문맥내). 이러한 조성물은 적합하게는 가시적 미립자 물질이 없다. 제약 조성물은 1 mg 내지 10 g의 항원 결합 단백질, 예를 들어 5 mg 내지 1 g의 항원 결합 단백질을 포함할 수 있다. 대안적으로, 조성물은 5 mg 내지 500 mg의 항원 결합 단백질, 예를 들어 5 mg 내지 50 mg을 포함할 수 있다.
이러한 제약 조성물의 제조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 제약 조성물은 1 mg 내지 10 g의 단위 투여 형태의 항원 결합 단백질을 임의로 사용에 대한 지침서와 함께 포함할 수 있다. 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되거나 분명한 방법에 따라 투여하기 전에 재구성을 위해 동결건조 (냉동 건조)될 수 있다. 항체가 IgG1 이소형을 갖는 경우에, 구리의 킬레이트화제, 예컨대 시트레이트 (예를 들어, 시트르산나트륨) 또는 EDTA 또는 히스티딘이 이러한 이소형의 항체의 구리-매개된 분해의 정도를 감소시키기 위해 제약 조성물에 첨가될 수 있다. 제약 조성물은 또한 가용화제, 예컨대 아르기닌, 계면활성제/항응집제, 예컨대 폴리소르베이트 80, 및 바이알 헤드스페이스 산소를 대체하기 위한 불활성 기체, 예컨대 질소를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 치료될 상태 (예컨대 천식, 중증 호산구성 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증 (EGPA), 과다호산구성 증후군 및 비강 폴립증)의 1종 이상의 증상의 치료 또는 관리에서 치료 이익을 제공하는 작용제 (예컨대 항체 또는 제약 조성물)의 양을 의미한다. 중증 호산구성 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식 또는 준-호산구성 천식을 포함하는 천식의 1종 이상의 증상의 이러한 치료 또는 관리의 예는 1) 천식 악화의 빈도의 감소; 2) 경구 또는 전신 코르티코스테로이드, 입원 및/또는 응급부 (ED) 방문이 요구되는 최초 임상적으로 유의한 악화까지의 시간의 감소; 3) 입원 (삽관 및 집중 치료실에의 입장을 포함함) 또는 ED 방문이 요구되는 악화의 빈도의 감소; 4) 입원 또는 ED 방문이 요구되는 최초 악화까지의 시간의 감소; 5) 임상 기관지확장제전 FEV1의 기준선으로부터의 변화; 6) 임상 기관지확장제후 FEV1의 기준선으로부터의 변화; 7) 천식 조절 설문지 (ACQ) 점수의 기준선으로부터의 변화; 8) 폐활량측정에 의해 평가 시에 개선된 폐 기능 (예를 들어, 폐활량 (VC), 강제 폐활량 (FVC), 0.5, 1.0 (FEV1), 2.0, 및 3.0초의 시간 간격의 강제 호기량 (FEV), 강제 호기 유량 25-75% (FEF 25-75) 및 최대 자발적 환기 (MVV) 총 폐 용량, 1회 호흡량, 잔류량, 호기 예비량, 흡기 예비량, 흡기 용량, 흡기 폐활량, 폐활량, 기능적 잔류 용량, 총 폐 용량의 퍼센트로서 표현되는 잔류량, 폐포 기체량, 전도성 기도 양을 포함한 폐의 실제 양, 강제 폐활량 등); 및 9) 제어를 위해 스테로이드 (예컨대 경구 스테로이드 또는 스테로이드-유사 프레드니손, 프레드니솔론 등--임의의 경로에 의해 투여됨)가 요구되는 천식 악화의 감소. 제어를 위해 스테로이드가 요구되는 천식 악화의 이러한 감소는 스테로이드 (예를 들어, 경구 스테로이드)가 요구되는 악화의 대략 50% 감소일 수 있다.
치료 유효량 및 치료 요법은 일반적으로 실험적으로 결정되며, 환자의 연령, 체중 및 건강 상태, 및 치료될 질환 또는 장애와 같은 인자에 좌우될 수 있다. 이러한 인자는 담당 의사의 권한 내에 있다.
대상체에게 투여되는 항원 결합 단백질의 투여량은 1 μg/kg 내지 150 mg/kg, 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg, 0.5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1 내지 25 mg/kg, 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg 또는 1 내지 10 mg/kg 대상체 체중이다. 예를 들어, 용량은 10 mg/kg, 30 mg/kg 또는 60 mg/kg일 수 있다. 용량은 또한 10 mg/kg 내지 110 mg/mg, 15 mg/kg 내지 25 mg/kg 또는 15 mg/kg 내지 100 mg/kg일 수 있다. 항원 결합 단백질은, 예를 들어 비경구로, 피하로, 정맥내로 또는 근육내로 투여될 수 있다. 용량은 또한 대상체당 기준으로, 예컨대 대상체당 약 20 mg 내지 대상체당 약 750 mg, 대상체당 약 75 mg 내지 대상체당 약 750 mg, 대상체당 약 20 mg 내지 대상체당 약 200 mg으로 투여될 수 있다. 용량은 이들 투여량 범위를 갖는 임의의 별개의 하위범위일 수 있다. 예를 들어, 용량 (예컨대 메폴리주맙 또는 메폴리주맙을 포함하는 제약 조성물의 용량)은 또한 대상체당 기준으로, 예컨대 대상체당 약 100 mg (예를 들어, 4주마다 1회) 또는 대상체당 300 mg으로 피하로 투여될 수 있다 (또는 투여되는 다른 용량은 정맥내 투여와 거의 동일하거나 필적할만한 생체이용률이 달성된다면 피하로 투여될 수 있다-예를 들어, 대상체당 300 mg의 피하로 투여되는 총 용량을 달성하기 위해 대상체당 100 mg의 3회 용량).
임의의 유형의 본원에 제공된 범위는 기재된 특정한 범위 내의 모든 값 및 특정한 범위에 대한 종점에 관한 값을 포함한다.
원하는 경우에, 치료 조성물의 유효 1일 용량은, 임의로 단위 투여 형태로 하루 내내 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 초과의 용량으로서 투여될 수 있다.
용량의 투여는 2 내지 24시간, 예컨대 2 내지 12시간, 또는 2 내지 6시간의 기간에 걸친 느린 연속 주입에 의한 것일 수 있다. 이러한 투여는 감소된 부작용을 유발할 수 있다.
용량의 투여는 필요한 경우 1회 이상, 예를 들어 1일 3회, 1일 1회, 2일마다 1회, 1주 1회, 14일마다 1회, 1개월 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 6개월마다 1회 또는 12개월마다 1회 반복될 수 있다. 항원 결합 단백질은, 예를 들어 6개월 이상의 기간 동안 1주 1회 유지 요법에 의해 투여될 수 있다. 항원 결합 단백질은, 예를 들어 사이클에서 3 내지 6개월의 기간 동안 간헐적 요법에 의해 투여된 다음, 3 내지 6개월 동안 투여되지 않고, 이어서 3 내지 6개월 동안 항원 결합 단백질이 투여되는 등일 수 있다.
예를 들어, 용량은 각각의 투여 일에 다중 용량 형태로 14 또는 28일마다 1회 피하로 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물의 투여량은 4주 (28일)마다 1회 100 mg이다.
항원 결합 단백질은 특정한 부위에 대한 표적 요법과 같은 방식으로 대상체에게 투여될 수 있다.
개시내용의 방법의 항원 결합 단백질은 1종 이상의 다른 치료 활성제, 예컨대 항체 또는 소분자 억제제와 조합되어 사용될 수 있다
본원에 사용된 용어 "치료하는" 및 그의 문법적 변형은 치료 요법을 의미한다. 특정한 상태와 관련하여, 치료하는은 다음을 의미한다: (1) 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상의 상태를 호전시키는 것, (2) (a) 상태를 야기하거나 그의 원인이 되는 생물학적 캐스케이드에서의 1종 이상의 지점 또는 (b) 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상을 방해하는 것, (3) 상태 또는 그의 치료와 연관된 증상, 영향 또는 부작용 중 1종 이상을 완화하는 것, (4) 상태, 또는 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상의 진행을 늦추는 것, 또는 (5) 상태의 생물학적 징후 중 1종 이상의 발병을 방지하는 것. 이에 의한 예방 요법이 또한 고려된다. 통상의 기술자는 "방지"가 절대 용어가 아니라는 것을 인지할 것이다. 의학에서, "방지"는 상태 또는 그의 생물학적 징후의 가능성 또는 중증도를 실질적으로 감소시키기 위한, 또는 이러한 상태 또는 그의 생물학적 징후의 발병을 지연시키기 위한 약물의 예방적 투여를 지칭하는 것으로 이해된다.
용어 "개체", "대상체" 및 "환자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 대상체는 전형적으로 인간이다. 대상체는 또한 포유동물, 예컨대 마우스, 래트 또는 영장류 (예를 들어 마모셋 또는 원숭이)일 수 있다. 대상체는 비-인간 동물일 수 있다. 개시내용의 항원 결합 단백질, 조성물 및 방법은 또한 수의학적 용도를 갖는다. 치료될 대상체는 농장 동물, 예를 들어 암소 또는 수소, 양, 돼지, 거세된 수소, 염소 또는 말일 수 있거나, 가축, 예컨대 개 또는 고양이일 수 있다. 동물은 임의의 나이일 수 있거나, 성숙 성체 동물일 수 있다.
치료는 치유적, 예방적 또는 방지적일 수 있다. 대상체는 치료를 필요로 하는 자일 것이다. 치료를 필요로 하는 자는 향후 질환이 발생할 수 있는 개체에 더하여, 이미 특정한 의료 질환을 앓고 있는 개체를 포함할 수 있다.
따라서, 본원에 기재된 개시내용의 방법, 항원 결합 단백질 및 조성물은 명시되는 경우에 예방적 치료 또는 방지적 치료에 사용될 수 있다. 이 경우에, 개시내용의 방법, 항원 결합 단백질 및 조성물은 질환의 1종 이상의 측면 또는 증상의 발병을 방지 또는 지연시키는데 사용될 수 있다. 대상체는 무증상일 수 있다. 대상체는 질환에 대한 유전적 소인을 가질 수 있다. 항원 결합 단백질의 예방 유효량은 이러한 개체에게 투여된다. 예방 유효량은 본원에 기재된 질환의 1종 이상의 측면 또는 증상의 발병을 방지 또는 지연시키는 양이다.
개시내용의 방법, 항원 결합 단백질 및 조성물은 실행가능한 치유적 치료를 구성하기 위해 완전한 치유에 영향을 미치거나 질환의 모든 증상 또는 징후를 근절할 필요는 없다. 관련 기술분야에서 인식되는 바와 같이, 치료 방법에서 치료제로서 사용되는 약물은 소정의 질환 상태의 중증도를 감소시킬 수 있지만, 유용한 치료제로 간주되기 위해 질환의 모든 징후를 없앨 필요는 없다. 유사하게, 예방적으로 투여되는 치료는 실행가능한 예방제를 구성하기 위해 질환의 발병을 방지하는데 있어서 완전히 효과적일 필요는 없다. 단순히 질환의 영향을 감소시키거나 (예를 들어, 질환 증상의 수 또는 중증도를 감소시킴으로써, 또는 또 다른 치료의 유효성을 증가시킴으로써, 또는 또 다른 유익한 효과를 가져옴으로써), 또는 대상체에서 질환이 발생하거나 악화될 가능성을 감소시키는 것이면 (예를 들어, 질환의 발병을 지연시킴으로써) 충분하다.
개시내용의 한 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
한 실시양태에서 조성물은 다음을 갖는다: a) ≥0.70의 IL-5 특이적 항원 결합; 및/또는 b) ≥ 70%의 FcRn 결합. IL-5 특이적 항원 결합, 예컨대 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IL-5에 대한 결합은 관련 기술분야에 널리 공지된 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (예를 들어, 비아코어™)을 사용하여 측정될 수 있다. FcRn 결합은 유사하게 관련 기술분야에 널리 공지된 표준 검정, 예컨대 표면 플라즈몬 공명 (예를 들어, 비아코어™)을 사용하여 측정될 수 있다.
또 다른 실시양태에서 a) 특이적 항원 결합은 0.70 내지 1.30의 범위이고/거나; b) FcRn 결합은 70% 내지 130%의 범위이다. 일부 실시양태에서 특이적 항원 결합은 약 0.9 내지 1.1, 0.75 내지 약 1, 약 0.7 내지 약 0.8, 약 0.7, 약 0.91 내지 약 0.95, 약 .994 내지 약 .997 또는 약 0.7 내지 약 0.9의 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서 FcRn 결합은 약 70% 내지 약 100%, 약 100% 내지 약 130%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 110%, 약 120%, 약 80% 내지 약 90%, 약 80% 내지 약 100%, 약 100% 내지 약 110%, 약 110% 내지 약 120%, 약 120% 내지 약 130%, 약 80% 내지 약 120% 및 약 90% 내지 약 110%의 범위이다.
한 실시양태에서, 조성물은 다음을 포함한다: ≤80%의 산성 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≤75%, ≤70%, ≤65%, ≤60%, ≤55%, ≤50% 또는 ≤45%의 산성 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤35%의 탈아미드화된 항체 변이체.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≤22.5%, ≤20%, ≤17.5%, ≤15%, ≤12.5, ≤10% 또는 ≤7.5%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≤32.5%, ≤30%, ≤25.5% 또는 ≤20%, ≤17.5%, ≤15%, ≤12.5%, ≤10% 또는 ≤7.5%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤55%의 산화된 항체 변이체.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤55%의, 다음 중 어느 하나 또는 조합에서 산화된 항체 변이체: a) 중쇄 아미노산 서열의 M64; b) 중쇄 아미노산 서열의 M254; 및/또는 c) 중쇄 아미노산 서열의 M430. 예를 들어, 조성물은 ≤50%, ≤45%, ≤40%, ≤35%, ≤30% 또는 ≤25%, ≤20%, ≤15%, ≤10% 또는 ≤5%의 중쇄 아미노산 서열의 M64, M254 및/또는 M430에서 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≤2.5%, ≤2%, ≤1.5%, ≤1%, ≤0.5%, ≤0.4%, ≤0.3%, ≤0.25%, ≤0.2%, ≤0.15%, 또는 ≤0.1%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 탈아미드화된 항체 변이체 양 및/또는 산화된 변이체 양은 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 결정된다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≤20%의 응집된 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≤17.5%, ≤15%, ≤12.5, ≤10%, ≤7.5%, ≤5% 또는 ≤4%의 응집된 변이체를 포함할 수 있다. 조성물은 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 이하의 응집된 항체를 포함할 수 있다. 조성물은 98% 이상의 단량체 항체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 응집된 항체 변이체는 이량체를 포함한다. 이러한 응집된 항체는 2종의 항체 분자 (예를 들어, 2종의 IgG1 항체 분자)를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 응집된 항체 변이체 양은 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해 결정된다. 크기 배제 크로마토그래피를 수행하고 단백질 분자 크기를 측정하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≥50%의 중쇄 아미노산 서열 C-말단 리신 K449 결실된 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≥60%, ≥70%, ≥75, ≥80%, ≥85%, ≥90% 또는 ≥95%의 중쇄 아미노산 서열 C-말단 리신 K449 결실된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: ≥50%의 중쇄 아미노산 서열 피로-글루타메이트 N-말단 항체 변이체. 예를 들어, 조성물은 ≥60%, ≥70%, ≥75, ≥80%, ≥85%, ≥90% 또는 ≥95%의 중쇄 아미노산 서열 피로-글루타메이트 N-말단 항체 변이체를 포함할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 숙주 세포 단백질 (HCP)을 포함한다. HCP는 CHO 세포 유래된 것일 수 있다. HCP는 메폴리주맙 제품-관련 물질 (즉, 메폴리주맙 플러스 메폴리주맙 변이체)과 달리 공정-관련 불순물이다. HCP에 대한 산업 표준 허용가능 한계는 100ppm (100ng/mg과 등가임) 이하일 수 있다. 본원에 기재된 조성물 중 HCP 함량은 ≤ 50 ng/mg, ≤ 40 ng/mg, ≤ 30 ng/mg 또는 ≤ 20 ng/mg일 수 있다. 예를 들어, 조성물의 HCP 함량은 ≤ 10 ng/mg일 수 있다. 특정한 실시양태에서, 조성물의 HCP 함량은 ≤ 5 ng/mg 또는 ≤ 2 ng/mg일 수 있다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의 중쇄 아미노산 서열의 M64에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의, 중쇄 아미노산 서열의 M64, 중쇄 아미노산 서열의 M254, 중쇄 아미노산 서열의 M430에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH 또는 pH 6.2 내지 pH 6.6의 pH, 바람직하게는 6.3의 pH 값을 제공하는, 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산, 시트레이트, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨 및 히스티딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 개시내용의 조성물 중 완충제는 약 10-30 mM, 약 10-20 mM, 약 20 mM 또는 약 15.5 mM의 범위로 존재할 수 있다. 예를 들어, 개시내용의 조성물 중 완충제는 약 20 mM 또는 약 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물로 존재한다.
개시내용의 조성물은 6.2 내지 6.6의 pH, 바람직하게는 6.3의 pH 값을 제공하는, 이염기성 인산나트륨 7수화물 및 시트르산 완충제를 포함할 수 있다. 이염기성 인산나트륨 7수화물 완충제는 약 15-16.4 mM의 범위로 존재할 수 있고, 시트르산 완충제는 약 3.8-4.9 mM의 범위로 존재할 수 있다. 예를 들어, 개시내용의 조성물은 약 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물 및 약 4.5 mM 시트르산 1수화물을 포함할 수 있다.
개시내용의 조성물은 당을 추가로 포함할 수 있다. 개시내용의 조성물은 수크로스를 추가로 포함할 수 있다. 수크로스는 개시내용의 조성물 중에 부피 기준으로 약 5-20 중량%; 약 10-15 중량%, 약 11-13 중량% 또는 약 12 중량%의 범위로 존재할 수 있다.
개시내용의 조성물은 폴리소르베이트 80을 추가로 포함할 수 있다. 폴리소르베이트 80은 부피 기준으로 약 0.01-0.1 중량%의 범위로 존재할 수 있다. 예를 들어, 폴리소르베이트 80은 개시내용의 조성물 중에 부피 기준으로 약 0.02 중량%, 또는 부피 기준으로 약 0.05 중량%로 존재할 수 있다.
개시내용의 조성물은 EDTA를 추가로 포함할 수 있다. EDTA는 약 0.01-0.1 mM의 범위로 존재할 수 있다. 예를 들어, EDTA는 약 0.05 mM로 존재할 수 있다.
한 실시양태에서, 개시내용의 조성물은 20 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.05 중량%의 폴리소르베이트 80을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 개시내용의 조성물은 15.5 mM 이염기성 인산나트륨, 3.9 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 추가로 포함한다.
개시내용의 조성물은 16.1 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.9 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 함유하는 pH 6.2에서의 수성 액체 제제를 포함할 수 있다.
개시내용의 조성물은 15.2 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.8 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 포함하는 pH 6.2에서의 수성 액체 제제를 포함할 수 있다.
개시내용의 조성물은 15.8 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.2 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 함유하는 pH 6.4에서의 수성 액체 제제를 포함할 수 있다.
개시내용의 조성물은 16.3 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.7 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 함유하는 pH 6.6에서의 수성 액체 제제를 포함할 수 있다.
개시내용의 조성물은 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.5 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA를 함유하는 pH 6.3에서의 수성 액체 제제를 포함할 수 있다. 중요하게는, 하기 실시예 1의 접선 여과 및 한외여과 교환 단계는 개시내용의 조성물, 예컨대 pH 6.3에서의 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.5 mM 시트르산 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80, 0.05 mM EDTA를 포함하는 개시내용의 조성물-또는 다른 이러한 액체 제제를 생산하도록 조정될 수 있다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고, 여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트, 시트르산, 시트레이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다. 조성물에서 중쇄는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 96.88%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 조성물에서 경쇄는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 98%, 98.63 또는 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서 완충제는 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산 및 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종이다.
또 다른 실시양태에서 완충제는 인산나트륨, 인산칼륨 또는 시트르산나트륨이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 당, 탄수화물 및/또는 염을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 수크로스를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고, 여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 완충제는 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산 및 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 당을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서 당은 수크로스이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 폴리소르베이트 80을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 20 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.05 중량%의 폴리소르베이트 80의 제1 제제; 및 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.9 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제2 제제; 및 26 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 15 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.065 중량%의 폴리소르베이트 80의 제3 제제로부터 선택된 1종을 포함한다. 조성물은 약 6.8 내지 약 7.2, 약 6.1 내지 약 6.5 또는 약 6 내지 약 6.6의 pH일 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체는 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터류킨-5에 대해 약 3.5x10-11 M 이하의 해리 상수를 갖는다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태를 포함하는 조성물이다. 항체의 주요 형태는 또한 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 57.9%, 59.4% 및 60% 이상을 차지할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체의 주요 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태를 포함하는 조성물이다. 항체의 산 형태는 또한 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 37.6%, 37.8%, 38.4% 및 39.8% 이상을 차지할 수 있다. cIEF에 의해 결정된 총 산성 피크 면적은 높게는 72%일 수 있으며, 여전히 0.74의 IL-5 특이적 결합 및 80%의 FcRn 결합을 유지할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체의 산성 형태는 피크 65 산성 형태, 피크 78 산성 형태, 피크 88 산성 형태 및 피크 92 산성 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항체의 산성 형태는 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 탈아미드화된 아미노산 잔기를 포함한다. LC N31 상의 탈아미드화의 허용되는 수준은 펩티드 맵핑 LC MS/MS에 의해 측정 시에 17% 이상 또는 17.4% 이상이다. HC 386 상의 탈아미드화의 허용되는 수준은 펩티드 맵핑 LC MS/MS에 의해 측정 시에 30% 이상이다. 허용되는 상위 수준은 조성물 중 항체 분자가 SPR에 의해 측정 시에 약 0.70 내지 약 1.30의 항원 결합 활성 및 SPR에 의해 측정 시에 약 70% 내지 약 130%의 FcRn 결합 활성 또는 본원에 개시된 다른 항원 결합 활성 또는 FcRn 결합 활성 값 또는 범위를 유지하도록 하는 특정한 변이체의 수준일 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체의 산성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다. 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 측정 시에 항체의 중쇄 잔기 상의 산화의 허용되는 수준은 HC M64, M254 및 M430에 대해 약 50% 및 HC W52에 대해 약 3%일 수 있다. 허용되는 상위 수준은 조성물 중 항체 분자가 SPR에 의해 측정 시에 약 0.70 내지 약 1.30의 항원 결합 활성 및 SPR에 의해 측정 시에 약 70% 내지 약 130%의 FcRn 결합 활성 또는 본원에 개시된 또는 다른 항원 결합 활성 또는 FcRn 결합 활성 값 또는 범위를 유지하도록 하는 특정한 변이체의 수준일 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체의 주요 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고; 항체의 산성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 포함하는 조성물이다. 항체의 염기성 형태는 또한 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 2.2% 및 2.3% 이상을 차지할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 항체의 염기성 형태는 피크 112 염기성 형태를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항체의 염기성 형태는 글리신 448인 카르복시 말단 잔기를 갖는 중쇄를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항체의 염기성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항체의 주요 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고; 항체의 염기성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태; 및 d) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 항체의 산성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고; 항체의 염기성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 항체의 주요 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고; 항체의 산성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고; 항체의 염기성 형태는 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및 c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다. 조성물에서 CDRH2는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 85% 또는 87.5% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 조성물에서 CDRL1은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 93%, 94% 또는 94.11% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 산화된 형태; 및 c) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태를 포함하는 조성물이다. 조성물에서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 95% 또는 95.57% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 조성물에서 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 98% 또는 98.31% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및 b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및 c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태를 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 총 단백질 농도는 약 75 mg/mL이다. 총 단백질 농도는 또한 약 75 mg/mL 내지 약 150 mg/mL, 예컨대 약 75 mg/mL 내지 약 100 mg/mL, 약 67.3 내지 약 87.5 mg/mL, 약 76 g 단백질/L 내지 약 82 g 단백질/L, 약 46 g 단백질/L 내지 약 66 g 단백질/L 또는 약 100 mg/mL의 범위에서의 대략 값의 임의의 쌍 또는 단일 값일 수 있다. 조성물에서 샘플 중 항-인간-IL-5 항체의 순도는 97.0%, 96%, 95% 또는 80%, 85% 이상이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 a) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 a) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 a) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 a) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태를 추가로 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기, 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기, 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 92% 이상이 항체 중쇄의 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기를 포함하고; b) 집단의 약 90% 이상이 항체 중쇄의 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기를 포함하고; c) 집단의 6.0% 이하가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; d) 집단의 약 1.5% 이하가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, e) 집단의 약 4.5% 이하가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, f) 집단의 약 0.8% 이하가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, g) 집단의 약 6.6% 이하가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 92% 내지 약 99%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기를 포함하고; b) 집단의 약 95% 내지 약 99.5%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기를 포함하고; c) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; d) 집단의 약 1.5% 내지 약 4.5%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; e) 집단의 약 0.5% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고; f) 집단의 약 0.2% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고; g) 집단의 약 2.5% 내지 약 3.5%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고; h) 집단의 약 0.4% 내지 약 0.8%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고; i) 집단의 약 3.3% 내지 약 6.6%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; j) 집단의 약 0.1% 내지 약 1%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 93.7% 내지 약 98.6%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 97.6% 내지 약 99.2%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기를 포함하고, c) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, d) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; e) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, f) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, g) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, h) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, i) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, j) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 222에서 산화된 시스테인 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 1.5% 내지 약 4.5%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; c) 집단의 약 0.5% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, d) 집단의 약 0.2% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, e) 집단의 약 2.5% 내지 약 3.5%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, f) 집단의 약 0.4% 내지 약 0.8%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, g) 집단의 약 3.3% 내지 약 6.6%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, h) 집단의 약 0.1% 내지 약 1%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; c) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, d) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, e) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, f) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, g) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, h) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기 및 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 1.5% 내지 약 4.5%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; c) 집단의 약 3.3% 내지 약 6.6%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고; c) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및 b) 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.5% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 0.2% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, c) 집단의 약 2.5% 내지 약 3.5%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, d) 집단의 약 0.4% 내지 약 0.8%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, e) 집단의 약 0.1% 내지 약 1%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 다음을 포함한다: a) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, b) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, c) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고, d) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고, e) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함한다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태를 포함하는 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며; b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및 c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 80% 이하를 차지하는 항체의 산성 형태를 포함하는 조성물이다.
또 다른 실시양태에서 조성물은 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환의 치료를 위한 것이다.
또 다른 실시양태는 a) 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및 b) 대상체에게 치료 유효량의 개시내용에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하며; 이에 의해 대상체에서의 질환이 치료되는 것인, 대상체에서 질환을 치료하는 방법이다.
또 다른 실시양태는 a) 숙주 세포에서 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 발현하는 단계; b) 약 6.75 내지 약 7.00의 pH에서 세포를 성장시키는 단계; c) 세포 배양 상청액을 수거하는 단계; d) 세포 배양 상청액을 항체 분자에 결합하는 단백질 A 수지 또는 단백질 G 수지와 접촉하도록 배치하는 단계; e) 수지로부터 항체 분자를 용리시켜 제1 용리액을 생성하는 단계; f) 약 15 내지 약 240분 동안 약 3.3 내지 약 3.7의 pH에서 제1 용리액을 처리하여 처리된 제1 용리액을 생성하는 단계; g) 처리된 제1 용리액을 약 8.3 내지 약 8.7의 로드 pH에서 음이온 교환 수지와 접촉하도록 배치하는 단계; h) 음이온 교환 수지로부터 제2 용리액 (관통 용리액)을 수집하고 약 96시간 이하 동안 이것을 유지하는 단계; i) 제2 용리액을 구아니딘 및 황산암모늄으로 처리하여 용액을 생성하는 단계; j) 용액을 약 12 g 단백질/L 수지의 로드 비 내지 약 27 g 단백질/L 수지의 로드 비로 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지층과 접촉하도록 배치하는 단계; k) 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지로부터 약 9 수지층 부피 내지 약 11 수지층 부피의 용리 구배 부피 및 최대 피크 높이의 약 17% 내지 최대 피크 높이의 약 23%의 용리 피크 컷 스톱으로 항체 분자를 포함하는 제3 용리액을 용리시키는 단계; 및 l) 제3 용리액을 제제화하는 단계를 포함하며; 이에 의해 개시내용의 조성물이 생산되는 것인, 개시내용의 조성물을 생산하는 방법이다. 개시내용의 방법에서 임의의 핵산 서열은 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체의 발현에 적합하다. 예를 들어, 서열식별번호: 13 또는 서열식별번호: 14의 핵산 서열은 진핵 세포에서 항체를 발현하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 항체 중쇄 아미노산 서열 또는 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 항체 경쇄 아미노산 서열을 코딩하는 상이한 서열 (예를 들어, 대안적 코돈의 사용으로 인함)을 갖는 다른 핵산 서열이 사용될 수 있다. 개시내용의 방법에서 탈아미드화는 약 6.75 내지 약 7.00의 pH에서 세포를 성장시킴으로써 제어될 수 있다. 개시내용의 방법에서 탈아미드화는 166일 이하의 시험관내 세포 연령을 위해 약 12 내지 약 18일 동안 세포를 성장시킴으로써 제어될 수 있다. 개시내용의 방법에서 탈아미드화는 처리된 제1 용리액을 약 8.3 내지 약 8.7의 로드 pH에서 음이온 교환 수지와 접촉하도록 배치하고 음이온 교환 수지로부터 제2 용리액을 수집하고 약 96시간 이하 동안 이것을 유지함으로써 제어될 수 있다. 개시내용의 방법에서 응집은 페닐 세파로스(SEPHAROSE)™ 패스트 플로우 크로마토그래피 동안 용액을 약 12 g 단백질/L 수지의 로드 비 내지 약 27 g 단백질/L 수지의 로드 비로 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지층과 접촉하도록 배치하고; 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지로부터 약 9 수지층 부피 내지 약 11 수지층 부피의 용리 구배 부피 및 최대 피크 높이의 약 17% 내지 최대 피크 높이의 약 23%의 용리 피크 컷 스톱으로 항체 분자를 포함하는 제3 용리액을 용리시킴으로써 제어될 수 있다. 응집은 또한 개시내용의 제약 조성물의 최종 여과, 충전 및 동결 후에 약 6시간 이하로 제한될 수 있다. 중요하게는, 개시된 방법의 단계 중 어느 것은 개시내용의 조성물을 생산하기 위해 생략 또는 조합될 수 있다.
항체의 생산 시에, 번역후 변형이 일어날 수 있다. 이것은 특정 리더 서열의 절단, 다양한 당 모이어티의 다양한 글리코실화 패턴으로의 부가, 탈아미드화 (예를 들어 아스파라긴 또는 글루타민 잔기에서), 산화 (예를 들어 메티오닌, 트립토판 또는 유리 시스테인 잔기에서), 디술피드 결합 스크램블링, 이성질체화 (예를 들어 아스파르트산 잔기에서), C-말단 리신 클리핑 (예를 들어 1개 또는 2개의 중쇄로부터) 및 N-말단 글루타민 고리화 (예를 들어 중쇄 및/또는 경쇄에서)를 포함할 수 있다.
항체 조성물은 (i) 항체 (즉, 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체); 및 (ii) 다음 중 하나 이상 또는 그의 조합을 포함하는 항체 변이체: 전하 변이체 (예를 들어, 산성 및 염기성 변이체), 아미노산 서열 변이체 및 항체 구조적 변이체 (예를 들어, 응집 및 단편화된 변이체)를 포함할 수 있다.
산성 또는 염기성 항체 변이체는 그의 전체 산성 또는 염기성 전하에 기초하여 특징화되고 항체와 구별될 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물의 전하 분포는 모세관 등전 포커싱 (cIEF) 또는 이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 검출될 수 있다. 산성 변이체는 탈아미드화된 항체 변이체, 당화 항체 변이체, 시알릴화 항체 변이체 및 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 항체 변이체에서의 시스테인 및 트립토판 산화는 pI 이동 (즉, 전하 차이)을 유발하고, 다른 산성 항체 변이체로 검출된다. 항체 변이체에서의 메티오닌 산화는 항원 결합 내의 변화에 의해, 또는 예를 들어 LC-MS/MS에 의한 펩티드 맵핑에 의해 모니터링될 수 있다.
탈아미드화는 주로 아스파라긴 (N)을 대략 3:1 비의 이소-아스파르트산 (이소-아스파르테이트) (이소-D) 및 아스파르트산 (아스파르테이트) (D)으로 전환시키는 효소적 반응이다. 따라서 이 탈아미드화 반응은 아스파르테이트 (D)에서 이소-아스파르테이트로의 이성질화와 관련된다. 아스파라긴의 탈아미드화 및 아스파르테이트의 이성질체화는 둘 다 중간체 숙신이미드를 수반한다. 훨씬 더 적은 정도로, 탈아미드화는 글루타민 잔기에서 유사한 방식으로 일어날 수 있다. 탈아미드화는 CDR, Fab (비-CDR 영역), 또는 Fc 영역에서 일어날 수 있다.
탈아미드화는 항체의 전하에서의 변화를 일으켜, 탈아미드화된 항체 변이체는 항체와 비교하여 산성이다. 항체 조성물은 ≤35%의 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 경쇄의 N31은 이소-D, D 또는 숙신이미드로 탈아미드화될 수 있다. 항체 조성물은 ≤25%의 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 이것은, 예를 들어 항체 조성물의 ≤25%에서 항체의 경쇄의 서열에서 1종의 아미노산 변화를 유발할 수 있다.
예를 들어, 중쇄의 N386은 이소-D, D 또는 숙신이미드로 탈아미드화될 수 있다. 항체 조성물은 ≤35%의 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 이것은, 예를 들어 항체 조성물의 ≤35%에서 항체의 중쇄의 서열에 1종의 아미노산 변화를 유발할 수 있다. 조성물은 항체 변이체의 혼합물을 포함할 수 있다. 탈아미드화 사건은 누적될 수 있어서, 2개 이상의 아스파라긴 잔기가 탈아미드화된다. 따라서, 항체 조성물은 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화 및/또는 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물은 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체 및 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
산화는 생산 및 저장 동안 일어날 수 있고 (즉, 산화 조건의 존재 하에), 반응성 산소 종에 의해 직접적으로 또는 산화성 스트레스의 2차 부산물과의 반응에 의해 간접적으로 유도되는 단백질의 공유 변형을 유발한다. 산화는 주로 메티오닌 잔기에서 일어나지만, 트립토판 및 유리 시스테인 잔기에서 일어날 수도 있다. 산화는 CDR, Fab (비-CDR) 영역, 또는 Fc 영역에서 일어날 수 있다.
산화는 항체의 전하에서의 변화를 일으킬 수 있어서, 산화된 항체 변이체는 항체와 비교하여 산성이다. 일부 산화된 항체 변이체는 항체와 동일한 전하를 갖는다. 항체 조성물은 ≤55%의 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합이 산화될 수 있다. 항체 조성물은 ≤55%의, 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합에서 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 예를 들어, 중쇄의 W52가 산화될 수 있다. 항체 조성물은 ≤3%의 중쇄의 W52에서 산화된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
조성물은 항체 변이체의 혼합물을 포함할 수 있다. 따라서, 항체 조성물은 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화 및/또는 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물은 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합 및/또는 W52에서의 산화를 포함할 수 있다.
디술피드 결합 스크램블링은 생산 및 염기성 저장 조건 동안 일어날 수 있다. 특정 상황 하에, 디술피드 결합은 파괴되거나 부정확하게 형성되어 쌍형성되지 않은 시스테인 잔기 (-SH)를 유발할 수 있다. 이들 유리 (쌍형성되지 않은) 술프히드릴 (-SH)은 셔플링을 촉진할 수 있다.
중쇄 및/또는 경쇄에서 N-말단 글루타민 (Q) 및 글루타메이트 (글루탐산) (E)는 고리화를 통해 피로글루타메이트 (pGlu)를 형성할 가능성이 있다. 대부분의 pGlu 형성은 생산 생물반응기에서 일어나지만, 또한 가공 및 저장 조건의 pH 및 온도에 따라, 비-효소적으로 형성될 수 있는 것으로 생각된다. N-말단 Q 또는 E의 고리화는 천연 인간 항체에서 통상적으로 관찰된다. 본원에 기재된 항체 조성물은 항체의 N-말단에 ≥50% pGlu를 포함할 수 있다. pGlu는 중쇄에 존재할 수 있다. 이것은, 예를 들어 항체 조성물의 ≥50%에서 항체의 중쇄 또는 경쇄의 서열에 1종의 아미노산 변화를 유발할 수 있다.
조성물은 항체 변이체의 혼합물을 포함할 수 있다. 서열 변화는 누적될 수 있어서, 조성물은 중쇄 및/또는 경쇄에 2개 이상의 서열 변화를 포함한다. 따라서, 항체 조성물은 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화 및/또는 항체의 중쇄의 서열에 적어도 1종의 아미노산 변화를 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물은 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합 및/또는 W52에서의 산화; 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단에서의 pGlu를 포함할 수 있다.
C-말단 리신 클리핑은 카르복시펩티다제에 의해 촉매되는 효소적 반응이고, 재조합 및 천연 인간 항체에서 통상적으로 관찰된다. 이 과정의 변이체는 재조합 숙주 세포로부터의 세포 효소로 인해 1개 또는 2개의 중쇄로부터의 리신의 제거를 포함한다. 인간에게의 투여 시에 대상체/환자는 임의의 나머지 C-말단 리신의 제거를 유발할 가능성이 있다. 본원에 기재된 항체 조성물은 ≥50%의 C-말단에서 C-말단 리신 결실된 항체를 포함할 수 있다. K449는 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에서 결실될 수 있다. 따라서 다음 2종의 항체 변이체가 존재한다: 중쇄에서의 리신 단일 결실 및 중쇄에서의 리신 이중 결실. 항체 (즉, 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체)는 리신 무손상/존재 둘 다를 갖는다. 이것은, 예를 들어 항체 조성물의 ≥50%에서 항체의 중쇄의 서열에 1종의 아미노산 변화를 유발할 수 있다.
조성물은 항체 변이체의 혼합물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물은 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합 및/또는 W52에서의 산화; 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단에서의 pGlu; 및/또는 C-말단에서의 C-말단 리신 결실을 포함할 수 있다.
응집 또는 단편화된 항체 변이체는 그의 크기에 기초하여 특징화되고 항체와 구별될 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물의 크기 분포는 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 검출될 수 있다.
항체 조성물은 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함할 수 있다. 응집된 항체 변이체는 이량체를 포함할 수 있다. 조성물은 항체 변이체의 혼합물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 항체 조성물은 경쇄의 위치 31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및/또는 중쇄의 M64, M254 및/또는 M430 중 어느 하나 또는 조합 및/또는 W52에서의 산화; 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단에서의 pGlu; 및/또는 C-말단에서의 C-말단 리신 결실; 및/또는 응집된 항체 변이체를 포함할 수 있다.
기재된 조성물은 1종 이상의 번역후 변형에 적용되거나 그를 겪었을 수 있다. 변형은 CDR, 가변 프레임워크 영역, 또는 불변 영역에서 일어날 수 있다. 변형은 분자의 전하에서의 변화를 유발할 수 있다. 상기 기재된 1차 아미노산 서열에서의 번역후 변형 및 변화는 조성물의 항원 결합 친화도, 생물학적 활성, PK/PD, 응집, 면역원성 또는 Fc 수용체에 대한 결합에 유의한 변화를 유발하지 않는다. 조성물은 실질적으로 오염 물질이 없다.
상기 기재된 항체 및 항체 변이체를 포함하는 항체 조성물은 특이적 항원 결합 및/또는 FcRn 결합을 유지한다. 예를 들어, 상기 기재된 항체 및 항체 변이체를 포함하는 항체 조성물은 ≥0.70의 IL-5 특이적 항원 결합; 및/또는 ≥ 70%의 FcRn 결합을 갖는다. 따라서 변이체의 이들 수준 (%)은 기능에 영향을 미치지 않으면서 항체 조성물에서 허용될 수 있다.
본원에 기재된 조성물은 임의의 수의 통상적인 기술에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 재조합 발현 시스템에서 발현되고 그로부터 정제될 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2를 포함하는 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건 하에서 숙주 세포를 배양하는 방법에 의해 생산되며, 여기서 조성물은 발현되고, 임의로 정제되고, 임의로 제약 조성물 내로 제제화된다.
수많은 상이한 발현 시스템 및 정제 요법이 조성물을 생산하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 숙주 세포는 항체를 코딩하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된다. 포유동물 기원의 진핵 세포주 (예를 들어, CHO, Perc6, HEK293, HeLa, NS0)를 포함한 폭넓은 범위의 숙주 세포가 사용될 수 있다. 적합한 숙주 세포는 포유동물 세포, 예컨대 CHO (예를 들어, CHOK1 및 CHO-DG44)를 포함한다.
숙주 세포는 단리된 숙주 세포일 수 있다. 숙주 세포는 통상적으로 다세포 유기체 (예를 들어, 식물 또는 동물)의 부분이 아니다. 숙주 세포는 비-인간 숙주 세포일 수 있다.
진핵 또는 포유동물 세포 숙주와 함께 사용하는데 적절한 클로닝 및 발현 벡터 및 클로닝 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
세포는 항체의 발현을 촉진하는 조건 하에서 배양될 수 있다. 예를 들어, 생산 생물반응기가 세포를 배양하는데 사용된다. 생산 생물반응기 부피는 다음일 수 있다: (i) 약 20,000 리터, 약 10,000 리터; 약 5,000 리터; 약 2,000 리터; 약 1,000 리터; 또는 약 500 리터; 또는 (ii) 500 내지 20,000 리터; 500 내지 10,000 리터; 500 내지 5,000 리터; 1,000 내지 10,000 리터, 또는 2,000 내지 10,000 리터. 예를 들어, 세포는 생산 생물반응기 내 pH 약 6.75 내지 pH 7.00에서 배양될 수 있다. 대안적으로, 세포는 생산 생물반응기에서 약 12 내지 약 18일 동안 배양될 수 있다. 대안적으로, 세포는 생산 생물반응기 내 pH 약 6.75 내지 pH 7.00에서 약 12 내지 약 18일 동안 배양될 수 있다. 이 배양 단계는 탈아미드화된 항체 변이체의 수준을 제어하도록, 예를 들어 탈아미드화된 항체 변이체의 수준을 감소시키도록 도울 수 있다.
조성물은 통상적인 단백질 정제 절차에 의해 회수 및 정제될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 배양 배지로부터 직접적으로 수거될 수 있다. 세포 배양 배지의 수거는, 예를 들어 원심분리 및/또는 심층 여과에 의한 정제를 통해서일 수 있다. 조성물의 회수에 이어서 적절한 순도를 보장하기 위한 정제가 수행된다.
1개 이상의 크로마토그래피 단계, 예를 들어 1개 이상의 크로마토그래피 수지; 및/또는 1개 이상의 여과 단계가 정제에 사용될 수 있다. 예를 들어 단백질 A, G 또는 L과 같은 수지를 사용하는 친화성 크로마토그래피가 조성물을 정제하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 이온-교환 수지, 예컨대 양이온-교환이 조성물을 정제하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지가 조성물을 정제하는데 사용될 수 있다. 대안적으로 정제 단계는 다음을 포함한다: 친화성 크로마토그래피 수지 단계, 이어서 양이온-교환 수지 단계, 이어서 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지 단계.
예를 들어, 수거물은 단백질 A 수지와 접촉하도록 배치된다. 조성물을 포함하는 용액은 단백질 A 수지로부터 용리되고 15 내지 240분 동안 pH 3.3 내지 3.7에서 처리될 수 있다. 이 단백질 A 수지 단계는 응집된 항체 변이체의 수준을 제어하도록, 예를 들어 응집된 항체 변이체의 수준을 감소시키도록 도울 수 있다.
이어서, 조성물을 포함하는 용액은 추가로 심층 여과 및/또는 이중 층 여과에 의해 정화될 수 있다.
대안적으로, 또는 추가적으로, 음이온 교환 수지가 사용될 수 있다. 조성물을 포함하는 용액은 8.3 내지 8.7의 로드 pH에서 음이온 교환 수지 (예를 들어 Q-세파로스™ 패스트 플로우 음이온 교환 크로마토그래피)와 접촉하도록 배치될 수 있다. 조성물을 포함하는 용액은 음이온 교환 수지로부터 용리되고 96시간 이하 동안 유지될 수 있다. 이 음이온 교환 수지 단계는 탈아미드화된 항체 변이체의 수준을 제어하도록, 예를 들어 탈아미드화된 항체 변이체의 수준을 감소시키도록 도울 수 있다.
임의로, 구아니딘 및/또는 황산암모늄이 조성물을 포함하는 용액에 첨가되고 15 내지 240분 동안 유지될 수 있다.
대안적으로, 또는 추가적으로, 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지가 사용될 수 있다. 조성물을 포함하는 용액은 12 내지 27g 단백질 /L 수지의 로드 비로 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지 (예를 들어, 페닐 세파로스™ 패스트 플로우 크로마토그래피)와 접촉하도록 배치될 수 있다. 예를 들어, 조성물을 포함하는 용액은 약 9 내지 약 11의 용리 구배 부피 (층 부피; BV)를 사용하여 용리될 수 있다. 약 17 내지 약 23의 용리 피크 컷 스톱 (최대 피크 높이의 %)이 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지로부터의 용리 동안 사용될 수 있다. 이 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지 단계는 응집된 항체 변이체의 수준을 제어하도록, 예를 들어 응집된 항체 변이체의 수준을 감소시키도록 도울 수 있다.
이어서, 조성물을 포함하는 용액은 바이러스를 제거하기 위해 여과될 수 있다. 이어서, 조성물을 포함하는 용액은 약 76 g 단백질/L 내지 약 82 g 단백질/L, 또는 내지 약 100 g 단백질/L의 항체 농도로 제제화될 수 있다. 조성물을 포함하는 용액은 용기 내로 충전되고 동결될 수 있다. 조성물을 포함하는 용액의 분취물은 동결건조될 수 있다. 동결건조물은 물의 첨가에 의해 재구성되어 약 6.8 내지 약 7.2의 pH에서의 75 mg/L의 단백질인 모노클로날 항-IL-5 메폴리주맙 항체 및 20 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.05 중량%의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물을 생산할 수 있다.
또 다른 실시양태에서 개시내용의 조성물은 이러한 개시내용의 조성물을 생산하는 방법을 사용하여 생산된다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.2 내지 6.6의 pH이고, 여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트, 시트르산, 시트르산 1수화물, 시트레이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다.
개시내용의 또 다른 측면은 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며, 여기서 조성물은 6.2 내지 6.6의 pH이고, 여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고, 여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물이다.
개시내용의 조성물의 또 다른 실시양태에서 완충제는 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트 및 시트르산으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종이다.
개시내용의 조성물의 또 다른 실시양태에서 16.1 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.9 mM 시트르산, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제1 제제; 15.2 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.8 mM 시트르산, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제2 제제; 15.8 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.2 mM 시트르산, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제3 제제; 16.3 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.7 mM 시트르산, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제4 제제; 및 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.5 mM 시트르산, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제5 제제로부터 선택된 1종을 포함한다.
요약하면, 개시내용은 다음을 포함한다:
1. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체를 포함하는 조성물.
2. 1에 있어서,
a) ≥0.70의 IL-5 특이적 항원 결합; 및/또는
b) ≥ 70%의 FcRn 결합
을 갖는 조성물.
3. 2에 있어서, a) 특이적 항원 결합이 0.70 내지 1.30의 범위이고/거나; b) FcRn 결합이 70% 내지 130%의 범위인 조성물.
4. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤35%의 탈아미드화된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
5. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
6. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
7. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤55%의,
a) 중쇄 아미노산 서열의 M64;
b) 중쇄 아미노산 서열의 M254; 및/또는
c) 중쇄 아미노산 서열의 M430
중 어느 하나 또는 조합에서 산화된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
8. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
9. 4 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 탈아미드화된 항체 변이체 양 및/또는 산화된 변이체 양이 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 결정된 것인 조성물.
10. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
11. 10에 있어서, 응집된 항체 변이체가 이량체를 포함하는 것인 조성물.
12. 10 또는 11에 있어서, 응집된 항체 변이체 양이 SEC에 의해 결정된 것인 조성물.
13. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≥50%의 중쇄 아미노산 서열 C-말단 리신 K449 결실된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
14. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, ≥50%의 중쇄 아미노산 서열 피로-글루타메이트 N-말단 항체 변이체를 포함하는 조성물.
15. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
16. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
17. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의 중쇄 아미노산 서열의 M64에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
18. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
19. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의, 중쇄 아미노산 서열의 M64, 중쇄 아미노산 서열의 M254, 중쇄 아미노산 서열의 M430에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
20. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고,
여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트, 시트르산, 시트레이트 또는 그의 염이고,
여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
21. 20에 있어서, 완충제가 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산 및 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종인 조성물.
22. 20에 있어서, 완충제가 인산나트륨, 인산칼륨 또는 시트르산나트륨인 조성물.
23. 20에 있어서, 당, 탄수화물 및/또는 염을 추가로 포함하는 조성물.
24. 23에 있어서, 수크로스를 포함하는 조성물.
25. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고,
여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고,
여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
26. 25에 있어서, 완충제가 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산 및 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종인 조성물.
27. 26에 있어서, 당을 추가로 포함하는 조성물.
28. 27에 있어서, 당이 수크로스인 조성물.
29. 28에 있어서, 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물.
30. 29에 있어서, 20 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.05 중량%의 폴리소르베이트 80의 제1 제제; 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.9 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제2 제제; 및 26 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 15 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.065 중량%의 폴리소르베이트 80의 제3 제제로부터 선택된 1종을 포함하는 조성물.
31. 29에 있어서, 항체가 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터류킨-5에 대해 약 3.5x10-11 M 이하의 해리 상수를 갖는 것인 조성물.
32. 31에 있어서, 모노클로날 항체 농도가 약 75 mg/mL 또는 약 100 mg/mL인 조성물.
33. 30에 있어서, 항체가 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터류킨-5에 대해 약 3.5x10-11 M 이하의 해리 상수를 갖는 것인 조성물.
34. 33에 있어서, 모노클로날 항체 농도가 약 75 mg/mL 또는 약 100 mg/mL인 조성물.
35. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태
를 포함하는 조성물.
36. 35에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
37. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태
를 포함하는 조성물.
38. 37에 있어서, 항체의 산성 형태가 피크 65 산성 형태, 피크 78 산성 형태, 피크 88 산성 형태 및 피크 92 산성 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 것인 조성물.
39. 38에 있어서, 항체의 산성 형태가 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 탈아미드화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
40. 39에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
41. 39에 있어서, 항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
42. 39에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
43. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태
를 포함하는 조성물.
44. 43에 있어서, 항체의 염기성 형태가 피크 112 염기성 형태를 포함하는 것인 조성물.
45. 44에 있어서, 항체의 염기성 형태가 글리신 448인 카르복시 말단 잔기를 갖는 중쇄를 포함하는 것인 조성물.
46. 45에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
47. 45에 있어서, 항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
48. 45에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
49. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태;
c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태; 및
d) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태
를 포함하는 조성물.
50. 49에 있어서, 항체의 산성 형태가 피크 65 산성 형태, 피크 78 산성 형태, 피크 88 산성 형태 및 피크 92 산성 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 것인 조성물.
51. 50에 있어서, 항체의 산성 형태가 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 탈아미드화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
52. 49에 있어서, 항체의 염기성 형태가 피크 112 염기성 형태를 포함하는 것인 조성물.
53. 52에 있어서, 항체의 염기성 형태가 글리신 448인 카르복시 말단 잔기를 갖는 중쇄를 포함하는 것인 조성물.
54. 49에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
55. 49에 있어서, 항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
56. 49에 있어서, 항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
57. 49에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
58. 49에 있어서, 항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
59. 49에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
60. 49에 있어서, 항체의 주요 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 산성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 220에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하고;
항체의 염기성 형태가 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 산화된 아미노산 잔기를 포함하는 것인 조성물.
61. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
를 포함하는 조성물.
62. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
를 포함하는 조성물.
63. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
b) 아스파라긴 299에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 317에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기, 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및
c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 시스테인 222에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기 및 시스테인 220에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
를 포함하는 조성물.
64. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
를 포함하는 조성물.
65. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
를 포함하는 조성물.
66. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체;
b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태; 및
c) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
를 포함하는 조성물.
67. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
를 포함하는 조성물.
68. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
b) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
를 포함하는 조성물.
69. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
b) 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및
c) 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 82에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 메티오닌 85에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 메티오닌 4에서 산화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
를 포함하는 조성물.
70. a) 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기, 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기, 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
71. 70에 있어서,
a) 집단의 약 92% 이상이 항체 중쇄의 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 90% 이상이 항체 중쇄의 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기를 포함하고,
c) 집단의 6.0% 이하가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
d) 집단의 약 1.5% 이하가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
e) 집단의 약 4.5% 이하가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
f) 집단의 약 0.8% 이하가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
g) 집단의 약 6.6% 이하가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 것인
조성물.
72. 71에 있어서,
a) 집단의 약 93.7% 내지 약 98.6%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 97.6% 내지 약 99.2%가 항체 중쇄의 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기를 포함하고,
c) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
d) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
e) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
f) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
g) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
h) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
i) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
j) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 것인
조성물.
73. a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
74. 73에 있어서,
a) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 1.5% 내지 약 4.5%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
c) 집단의 약 0.5% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
d) 집단의 약 0.2% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
e) 집단의 약 2.5% 내지 약 3.5%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
f) 집단의 약 0.4% 내지 약 0.8%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
g) 집단의 약 3.3% 내지 약 6.6%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
h) 집단의 약 0.1% 내지 약 1%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 것인
조성물.
75. 74에 있어서,
a) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
c) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
d) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
e) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
f) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
g) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
h) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 것인
조성물.
76. a) 위치 299에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기 및 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
b) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
77. 76에 있어서,
a) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 1.5% 내지 약 4.5%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
c) 집단의 약 3.3% 내지 약 6.6%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 것인
조성물.
78. 77에 있어서,
a) 집단의 약 0.4% 내지 약 1.2%가 항체 중쇄의 위치 317에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 1.6% 내지 약 4.2%가 항체 중쇄의 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하고;
c) 집단의 약 3.4% 내지 약 6.5%가 항체 경쇄의 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 것인
조성물.
79. a) 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 222에서 산화된 시스테인, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
b) 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기 및 위치 220에서 산화된 시스테인으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
80. 79에 있어서,
c) 집단의 약 0.5% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
d) 집단의 약 0.2% 내지 약 1.5%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
e) 집단의 약 2.5% 내지 약 3.5%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
f) 집단의 약 0.4% 내지 약 0.8%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
g) 집단의 약 0.1% 내지 약 1%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 것인
조성물.
81. 80에 있어서,
a) 집단의 약 0.7% 내지 약 0.9%가 항체 중쇄의 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
b) 집단의 약 0.3% 내지 약 1.1%가 항체 중쇄의 위치 82에서 산화된 메티오닌 잔기 또는 항체 중쇄의 위치 85에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
c) 집단의 약 2.6% 내지 약 3.3%가 항체 중쇄의 위치 254에서 산화된 메티오닌을 포함하고,
d) 집단의 약 0.5% 내지 약 0.7%가 항체 중쇄의 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하고,
e) 집단의 약 0.2% 내지 약 0.8%가 항체 경쇄의 위치 4에서 산화된 메티오닌 잔기를 포함하는 것인
조성물.
82. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태
를 포함하는 조성물.
83. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 80% 이하를 차지하는 항체의 산성 형태
를 포함하는 조성물.
84. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환의 치료를 위한 조성물.
85. a) 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및
b) 대상체에게 치료 유효량의 선행 항목 중 어느 하나에 따른 조성물을 투여하는 단계를 포함하며;
이에 의해 대상체에서의 질환이 치료되는 것인,
대상체에서 질환을 치료하는 방법.
86. 20 내지 83에 있어서,
a) ≥0.70의 IL-5 특이적 항원 결합; 및/또는
b) ≥ 70%의 FcRn 결합
을 갖는 조성물.
87. 20 내지 83에 있어서, a) 특이적 항원 결합이 0.70 내지 1.30의 범위이고/거나; b) FcRn 결합이 70% 내지 130%의 범위인 조성물.
88. 20 내지 83에 있어서, ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
89. 20 내지 83에 있어서, 응집된 항체 변이체가 이량체를 포함하는 것인 조성물.
90. a) 숙주 세포에서 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 발현하는 단계;
b) 166일 이하의 시험관내 세포 연령을 위해 약 12 내지 약 18일 동안 약 6.75 내지 약 7.00의 pH에서 세포를 성장시키는 단계;
c) 세포 배양 상청액을 수거하는 단계;
d) 세포 배양 상청액을 항체 분자에 결합하는 단백질 A 수지 또는 단백질 G 수지와 접촉하도록 배치하는 단계;
e) 수지로부터 항체 분자를 용리시켜 제1 용리액을 생성하는 단계;
f) 약 15 내지 약 240분 동안 약 3.3 내지 약 3.7의 pH에서 제1 용리액을 처리하여 처리된 제1 용리액을 생성하는 단계;
g) 처리된 제1 용리액을 약 8.3 내지 약 8.7의 로드 pH에서 음이온 교환 수지와 접촉하도록 배치하는 단계;
h) 음이온 교환 수지로부터 제2 용리액을 수집하고 약 96시간 이하 동안 이것을 유지하는 단계;
i) 제2 용리액을 구아니딘 및 황산암모늄으로 처리하여 용액을 생성하는 단계;
j) 용액을 약 12 g 단백질/L 수지의 로드 비 내지 약 27 g 단백질/L 수지의 로드 비로 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지층과 접촉하도록 배치하는 단계;
k) 소수성 상호작용 크로마토그래피 수지로부터 약 9 수지층 부피 내지 약 11 수지층 부피의 용리 구배 부피 및 최대 피크 높이의 약 17% 내지 최대 피크 높이의 약 23%의 용리 피크 컷 스톱으로 항체 분자를 포함하는 제3 용리액을 용리시키는 단계; 및
l) 제3 용리액을 제제화하는 단계를 포함하며;
이에 의해 1-83의 조성물이 생산되는 것인,
1 내지 83의 조성물을 생산하는 방법.
91. 1-83에 있어서, 90의 방법에 의해 생산된 조성물.
92. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
여기서 조성물은 6.2 내지 6.6의 pH이고,
여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트, 시트르산, 시트르산 1수화물, 시트레이트 또는 그의 염이고,
여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
93. 92에 있어서, 완충제가 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산 및 시트르산 1수화물로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종인 조성물.
94. 92에 있어서, 완충제가 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산, 시트르산 1수화물 또는 시트르산나트륨인 조성물.
95. 92에 있어서, 당, 탄수화물 및/또는 염을 추가로 포함하는 조성물.
96. 95에 있어서, 수크로스를 포함하는 조성물.
97. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
여기서 조성물은 6.2 내지 6.6의 pH이고,
여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고,
여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
98. 97에 있어서, 완충제가 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트르산, 시트르산 1수화물 및 시트레이트로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종인 조성물.
99. 98에 있어서, 당을 추가로 포함하는 조성물.
100. 99에 있어서, 당이 수크로스인 조성물.
101. 100에 있어서, 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물.
102. 101에 있어서, 16.1 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.9 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제1 제제; 15.2 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.8 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제2 제제; 15.8 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.2 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제3 제제; 16.3 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 3.7 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제4 제제; 및 15.5 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 4.5 mM 시트르산 1수화물, 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스, 부피 기준으로 0.02 중량%의 폴리소르베이트 80 및 0.05 mM EDTA의 제5 제제로부터 선택된 1종을 포함하는 조성물.
103. 101에 있어서, 항체가 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터류킨-5에 대해 약 3.5x10-11 M 이하의 해리 상수를 갖는 것인 조성물.
104. 101에 있어서, 모노클로날 항체 농도가 약 75 mg/mL 또는 약 100 mg/mL인 조성물.
105. 102에 있어서, 항체가 서열식별번호: 11에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 인터류킨-5에 대해 약 3.5x10-11 M 이하의 해리 상수를 갖는 것인 조성물.
106. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서, 항체가 약 75 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 농도인 조성물.
107. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서,
a) 6.8 내지 7.2의 pH를 제공하는, 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트레이트, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨 및 히스티딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제; 및/또는
b) 당; 및/또는
c) 폴리소르베이트 80; 및/또는 d) EDTA
중 하나 또는 조합을 추가로 포함하는 조성물.
108. 선행 항목 중 어느 하나에 있어서,
a) 6.2 내지 6.6의 pH를 제공하는, 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트레이트, 시트르산 1수화물, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨 및 히스티딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제; 및/또는
b) 당; 및/또는
c) 폴리소르베이트 80; 및/또는 d) EDTA
중 하나 또는 조합을 추가로 포함하는 조성물.
33. 1-108 중 어느 하나에 있어서, 요법에 사용하기 위한 조성물.
35. 1-108 중 어느 하나에 있어서, 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염을 치료하는데 사용하기 위한 조성물.
실시예
실시예 1
조성물의 제조
모노클로날 항-IL-5 항체 메폴리주맙을 포함하는 조성물의 다중 배치를 생산하였다.
서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 14에 제시된 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터 구축물로 안정하게 형질감염된 차이니즈 햄스터 난소 세포의 접종물을 액체 세포 배양 배지를 함유하는 5000 L 생물반응기에서 배양하였다. 이들 핵산에 의해 코딩되는 성숙 항체는 메폴리주맙이고, 서열식별번호: 1에 제시된 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
생물반응기를 약 34.5℃ 내지 약 35.5℃의 온도에서 작동하였다. 공기 및 산소를 배양 배지 내로 폭기하고, 약 6.75 내지 7.00의 pH를 유지하였다. 배양 지속기간은 약 12 내지 18일이었다. 시험관내 세포 연령 (마스터 세포 은행의 초기 해동에서 수거까지의 배양 일)은 166일 이하였다. 이 후에, 정화된 세포 배양 상청액을 세포 배양 배지의 원심분리 및 심층 여과에 의해 수거하였다. 이어서, 이 정화된 상청액을 단백질 A 크로마토그래피에 적용하고, 불순물을 이 크로마토그래피 칼럼으로부터 흘러나오도록 하였다. 이어서, 항체 분자를 포함한 결합된 단백질을 단백질 A 칼럼으로부터 용리시키고, 약 15 내지 240분 동안 약 3.3 내지 3.7의 pH에서 처리하였다. 이어서, 이 처리된 제제를 약 pH 4.3 내지 4.7로 조정하고, 약 20 내지 1110분 동안 유지하였다. 이어서, 이 처리된 제제를 심층 필터 및 0.5/0.2 μm 이중 층 필터의 여과 트레인을 통해 정화하였다. 이어서, 여과된 제제를 약 8.3 내지 8.7의 로드 pH에서 Q-세파로스™ 패스트 플로우 음이온 교환 크로마토그래피에 적용하고, 크로마토그래피 칼럼으로부터 용리시켰다. 이어서, 이 용리액을 약 96시간 이하 동안 유지하였다. 이어서, 구아니딘 및 황산암모늄을 첨가하였다. 구아니딘을 약 1.8 M 내지 2.2 M의 농도로 첨가하고, 약 15 내지 240분 동안 유지하였다. 이어서, 이 용액을 페닐 세파로스™ 패스트 플로우 크로마토그래피에 약 12 g 단백질/L 수지 내지 약 27 g/L 수지의 로드 비, 약 9 내지 약 11의 용리 구배 부피 (층 부피; BV) 및 약 17 내지 약 23의 용리 피크 컷 스톱 (최대 피크 높이의 %)으로 적용하였다. 이어서, 바이러스 여과를 플라노바 20N 바이러스 제거 필터를 사용하여 수행하였다. 이어서, 이 여과물을 약 46 g 단백질/L 내지 약 66 g 단백질/L의 표적 농도로 조정하고, 벌크 약물 물질 (BDS)을 약 20 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물 및 부피 기준으로 12 중량%의 수크로스를 포함하는 용액과의 접선 여과 및 한외여과 교환에 의해 제제화하였다. 이어서, 이 용액을 76 g 단백질/L 내지 약 82 g 단백질/L의 표적 농도로 조정하고, 부피 기준으로 약 0.05 중량%의 폴리소르베이트 80을 첨가하였다. 이어서, 이 용액을 0.5/0.2 μm PES 필터를 통해 여과하고, 용액의 용기를 충전 및 동결시켰다. 약물 제품을 해동 및 벌크 용기 조합에 이어서, 관련 기술분야에 널리 공지된 제조 방법에 의해 바이알 내로의 벌크의 여과, 동결건조, 마개막기 및 크림핑을 수반하는 멸균 제조 방법을 사용하여 제조하였다. 최종 약물 제품 제시는 단일 사용 바이알 내 동결건조된 약물 제품이다.
생산된 각각의 배치로부터의 동결건조물을 물의 첨가에 의해 재구성하여 약 6.8 내지 약 7.2의 pH에서의 100 mg/mL의 단백질인 모노클로날 항-IL-5 메폴리주맙 항체 및 26 mM 이염기성 인산나트륨 7수화물, 부피 기준으로 15 중량%의 수크로스 및 부피 기준으로 0.065 중량%의 폴리소르베이트 80을 포함하는 조성물을 생산하였다.
실시예 2
조성물의 특징화
상기 기재된 바와 같이 생산된 모노클로날 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물의 배치로부터의 샘플을 특징화하였다.
모세관 등전 포커싱 (cIEF)은 조성물 (예를 들어, 조성물 참조 표준물 (RS) 101245722) 중 6종의 항체 이소형의 존재를 일관되게 제시하였다. 도 1을 참조한다. 이들 이소형은 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112 이소형이다. 조성물의 샘플을 표준 방법을 사용하는 cIEF에 적용하였다. pI 7.9 및 pI 9.46 표준물을 cIEF에 의해 분석될 샘플에 포함시켰다. 도 1에 제시된 cIEF 전기영동도는 다중 배치로부터의 조성물에 대한 것을 대표한다.
전기영동도는 조성물이 항체의 주요 형태, 산성 형태 및 염기성 형태를 포함한다는 것을 제시한다. 주요 형태는 도 1에서 보일 수 있고, 또한 일부 경우에 피크 100으로서 확인된다. 항체의 산성 형태는 도 1의 피크 65, 피크 78, 피크 88 및 피크 92 형태에 상응한다. 항체의 염기성 형태는 도 1의 피크 112 형태에 상응한다.
피크의 배정에 사용된 식은 하기와 같다:
피크명=int{(pIPeak-8)/(pIMain-8)*100} 여기서: int = 정수 및 pIPeak = 명명될 피크의 pI. 표 7은 모노클로날 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물의 cIEF 전기영동도에 대한 피크 명명 규정을 제시한다. 본원에 기재된 바와 같이 결정된 피크의 명칭은 관찰된 전기영동/크로마토그래피 패턴에 기초하여 검증되어야 한다. 본원에 기재된 범위 내에 속하지 않는 피크는 상기 식에 따라 처리되어야 한다.
표 7. cIEF 피크의 확인
Figure pct00009
전기영동도 피크의 적분 분석을 수행하였다. 표 8을 참조한다.
표 8. 상이한 조성물 배치의 선택 cIEF 전기영동도의 총 피크 면적.
Figure pct00010
이것은 주요 형태가 샘플에서 총 피크 면적의 50.0% 이상을 나타냈다는 것을 제시하였다 (약 58.1% 내지 62.3%의 값이 또한 관찰됨). 이것은 또한 산성 형태가 샘플에서 총 피크 면적의 45.0% 이하를 나타냈다는 것을 제시하였다 (약 20% 내지 약 45%의 값, 예컨대 32.2% 및 40.7%가 또한 관찰됨). 염기성 형태는 샘플에서 총 피크 면적의 약 1% 내지 약 15%를 나타냈다 (약 1.2% 내지 약 4.9%의 값이 또한 관찰됨).
이어서, cIEF에 의해 생성된 주요 형태, 산성 형태 및 염기성 형태 피크 분획을 추가로 약양이온 교환 (WCX), 트립신 펩티드 맵핑 및 액체 크로마토그래피-질량 분광분석법/질량 분광분석법 (LC-MS/MS) 분석에 의해 분석하였다. 이들 분석에 표준 방법을 사용하였다.
이들 WCX, 트립신 펩티드 맵핑 및 LC-MS/MS 결과는 주요 형태 피크 분획이 2종의 IgG1 mAb 변형을 함유하였다는 것을 제시하였다. 따라서, 서열식별번호:의 항체 중쇄 아미노산 서열에서 N-말단 글루타민 (Gln, Q)의 99.6%는 피로글루탐산 (pGlu)으로 고리화되었고, 중쇄 (HC) C-말단 리신 (Lys, K) 449의 99.9%는 절단되었다. 전형적으로, 시험된 배치에서 pGlu 수준은 >95.0%였고, C-말단 K449 수준이 없는 HC의 수준은 > 98.0%였다.
이들 WCX, 트립신 펩티드 맵핑 및 LC-MS/MS 결과는 또한 산 형태 피크에 대해 탈아미드화의 특징인 1-달톤 질량 이동이 관찰되었다는 것을 제시하였다. 펩티드 맵핑 LC-MS/MS는 산성 형태 피크가 탈아미드화된 항체 종의 혼합물을 함유한다는 것을 입증하였다. 탈아미드화는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 HC N386 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열의 LC N31에서 우세하게 관찰되었다. 탈아미드화의 보다 낮은 수준은 또한 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 HC N317에서 관찰되었다.
전체로서, 이 실험 데이터는 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열의 아스파라긴 잔기 HC N317, HC N386, HC N299 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열의 LC N31이 탈아미드화에 감수성이었다는 것을 제시하였다.
이들 WCX, 트립신 펩티드 맵핑 및 LC-MS/MS는 염기성 형태 피크에 대해 이 피크에서의 항체 형태가 무손상인 적어도 1개의 중쇄의 카르복시 말단 리신 아미노산 잔기를 가졌다는 것을 제시하였다. 무손상 리신을 갖는 항체 종은, 이들이 부재하는 다른 형태에 비해, 이들 잔기로부터의 추가의 양전하로 인해 염기성 영역으로 이동할 것이다. 따라서, 염기성 형태, 예컨대 피크 112는, 1개 또는 2개의 중쇄 아미노산 서열이 무손상인 서열식별번호: 1에 제시된 카르복시 말단 리신 아미노산 서열을 갖는 항체 형태에 상응한다.
모노클로날 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물의 1차 서열분석을 또한 표준 LC-MS/MS 기술에 의해 수행하였다. 이들 분석은 조성물 중 항체 분자의 1차 구조 및 아미노산 서열을 검사하였다. 특히, 이들 분석은 어느 아미노산 잔기가 항-IL-5 항체에서 탈아미드화, 산화, 고리화 또는 부재하였는지 및 조성물에 존재하는 항-IL-5 항체의 집단 (예를 들어, 서열식별번호: 13의 핵산 서열 및 서열식별번호: 14의 핵산 서열로부터 발현됨)에서 이들의 백분율을 제시하였다. 표 9를 참조한다.
표 9. 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의한 1차 항체 서열.
Figure pct00011
항체 변이체
메폴리주맙은 가용성 IL-5에 결합하여 가용성 IL-5가 그의 수용체에 결합하는 것을 차단한다. IL-5의 구조는 분비된 단백질을 나타내며, 어떤 세포 유형 상에서도 IL-5의 임의의 막-결합된 형태의 증거가 존재하지 않는다. 따라서, Fc 이펙터 기능은 메폴리주맙 작용 메카니즘 (MOA)의 부분이 아니다. 메폴리주맙의 MOA 및 PK 특성에 기초하여, 이 항체의 생물학적 활성에 수반되는 다음 2종의 기능이 존재한다: CDR을 통한 IL-5에 대한 결합, 및 Fc 영역을 통한 FcRn 수용체에 대한 결합.
상기에서 수행되고 하기에서 착수되는 바와 같은 광범위한 특징화 연구를 통해, 적어도 탈아미드화, 산화 및 응집이 메폴리주맙의 조성물에서 항체 변이체를 유도할 수 있고, 이들 변이체가 메폴리주맙의 기능에 영향을 미칠 수 있는 것으로 결정되었다. 이들 변이체의 특정 수준은 적절한 생물학적 기능을 보장하기 위해 유지되어야 한다. 기능은 0.70-1.30의 특이적 항원 결합 활성 (IL5-결합) 및 70%-130%의 FcRn 결합의 허용되는 범위 내인 것으로 본원에 기재된다. 따라서 기능에 영향을 미치는 항체 변이체를 확인하는 단계는 다음을 포함한다: (i) 항체 변이체가 형성되는가, (ii) 변이체가 기능에 대해 영향을 미치는가, 및 (iii) 변이체의 어느 수준이 기능적 조성물을 유발할 수 있는가.
기능
IL-5 결합: 통계적 분석을 수행하여 지금까지 생성된 모든 약물 물질 (DS) 및 약물 제품 (DP) 방출 및 안정성 데이터를 사용하여 허용되는 항원 결합 기능적 활성 범위를 계산하였다. 계산된 통계적 범위를 임상 경험과 비교하고, 효력에 대한 제품 관련된 변이체의 공지된 영향에 기초하여 평가하였다. 이 분석에 기초하여, 방출 시 및 보관 수명의 종료 시에 허용되는 항원 결합 기능적 활성 범위는 0.70 - 1.30의 특이적 항원 결합이다.
IL-5 특이적 결합을 결합 모드로 수행되는 비아코어™ 기기를 사용하여 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 결정하였다. 이 SPR 검정은 효력과 연관된 메폴리주맙 변이체 및 메폴리주맙에서의 변화로부터 유발되는 항원 결합의 감소를 검출할 수 있다.
SPR은 메폴리주맙의 특이적 항원 결합 활성을 결정하는데 사용된다. 먼저, 메폴리주맙 참조 표준물을 고정화된 단백질 A를 함유하는 CM5 센서 칩의 표면 상에 주입한 다음, 고정 농도의 희석된 IL-5 단백질을 주입하여, IL-5가 포획된 메폴리주맙 샘플에 결합하는 것을 가능하게 한다. IL-5에 대한 메폴리주맙의 기능적 결합으로서 보고된, IL-5에 결합된 메폴리주맙의 농도를 상응하는 메폴리주맙 참조 표준물 보정 곡선으로부터 결정한다. SPR 결과는 IL-5에 대한 메폴리주맙의 기능적 결합 농도를 총 단백질 농도로 나눈 것으로서 보고하였다.
FcRn 결합: 메폴리주맙의 신생아 Fc (FcRn) 수용체 결합 활성을 또한 비아코어™ 기기를 사용하여 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 측정하였다. 허용되는 FcRn 결합 기능적 활성 범위는 메폴리주맙 제품 개발 동안 지금까지 생성된 결과, 공지된 검정 변수 및 유사한 mAb 제품에 대해 생성된 결과에 기초하여 70-130%인 것으로 결정되었다.
메폴리주맙의 Fc 영역은 FcRn에 결합하고, 이 상호작용은 메폴리주맙의 긴 혈청 반감기 (평균 말단 반감기 = 20일)를 반영한다. SPR 검정에서, 고정화된 FcRn 수용체를 함유하는 니트릴로트리아세트산 (NTA) 센서 칩을 고정 농도의 메폴리주맙을 포획하는데 사용하였다. 첫번째로, Ni2+를 고정 농도로 주입하고, NTA를 통한 Ni2+의 킬레이트화에 의해 NTA 센서 칩 상에 포획하였다. 두번째로, FcRn 수용체를 고정 농도로 주입하였으며, FcRn 수용체의 알파 쇄의 C-말단에서의 6x 히스티딘 태그가 이전에 포획된 Ni2+에 결합한다. 이어서, 표준 곡선 농도 범위 내에서 희석된 메폴리주맙을 포획된 FcRn 수용체를 함유하는 NTA 센서 칩의 표면 상에 주입하였다. FcRn 수용체에 결합된 메폴리주맙의 농도를 상응하는 메폴리주맙 참조 표준물 보정 곡선으로부터 추정하였다. SPR 결과는 FcRn 수용체에 대한 메폴리주맙의 기능적 결합 농도를 총 단백질 농도로 나눈 것으로서 보고하였다.
특이적 항원 결합 및 FcRn 결합에 대한 SPR 방법은 메폴리주맙의 참조 표준물을 사용한다. 메폴리주맙 참조 표준물은 방법이 적절하게 수행되고 있다는 것을 보장하기 위해, 시스템 적합성 및 샘플 비교가능성 데이터를 수득하기 위한 검정에 단순히 사용된다. 참조 표준물은 보정 곡선의 확립을 가능하게 하고, 샘플의 농도는 곡선으로부터 내삽된다.
산성 변이체
이어서, 강제 분해 연구를 수행하여 항체 기능/효능, 즉 항원 결합 및 FcRn 결합 활성에 대한 증가된 수준의 산성 변이체, 예를 들어 탈아미드화의 영향을 결정하였다.
pH 9.0 강제 분해 연구에서 조성물을 6N 수산화나트륨을 사용하여 pH 9.0으로 조정하고, 40℃에서 30일 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 0, 3, 7, 14 및 30일에 수집하고, 대조군으로서 사용된 비스트레스 조성물과 비교하였다. 이어서, pH 9.0 스트레스 적용된 샘플을 cIEF에 의해 분석하였다. 결과는 표 10 및 도 1에 제시된다 (제0일 및 제3일). pH 9.0 스트레스 적용된 조성물은 제14일에 cIEF 검정의 능력을 넘어서 분해되었으며; 따라서, 단지 제7일 시점까지의 결과만이 표 10에 제시된다. 3일 동안 pH 9.0의 스트레스 적용된 조건에서, 총 산성 영역은 조성물의 2종의 상이한 배치에 대해 74.4% 및 71.9%인 것으로 관찰되었다.
표 10. pH 9.0 강제 분해 연구에 대한 cIEF 데이터 요약.
Figure pct00012
이어서, 상이한 배치로부터의 조성물의 pH 9.0 강제 분해 연구 샘플을 표준 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 방법을 사용하여 특이적 항원 결합 활성 (표 11) 및 FcRn 결합 활성 (표 12)에 대해 시험하였다.
표 11. 상이한 배치로부터의 조성물의 pH 9.0 강제 분해 연구 샘플에서 SPR에 의해 측정된 특이적 항원 결합 활성 (예를 들어, 인간 IL-5 결합 활성)의 데이터 요약.
Figure pct00013
표 12. 상이한 배치로부터의 조성물의 pH 9.0 강제 분해 연구 샘플에서 SPR에 의해 측정된 FcRn 결합.
Figure pct00014
제3일에서의 IL5 특이적 결합 활성 (즉, 약 72-74% 산성 변이체)은 pH 9.0 강제 분해에 적용된 조성물의 두 배치에 대해 0.74였다. FcRn 결합 활성은 pH 9.0 강제 분해에 적용된 조성물의 두 배치에 대해 각각 82% 및 80%였다. 이들 값은 각각의 검정에 대한 허용 기준 내에 있었다. 특이적 항원 결합 활성에 대한 허용 기준은 0.70-1.30이고, FcRn 결합에 대한 허용 기준은 70%-130%이다. 따라서, 산성 변이체는 메폴리주맙 조성물의 기능을 유지하기 위해 높게는 약 74%일 수 있다.
탈아미드화
강제 분해 연구는 탈아미드화에 감수성인 것처럼 보이는 어느 잔기가 실제로 탈아미드화되는지, 및 탈아미드화된 변이체가 기능에 영향을 미치는지 여부, 및 기능을 유지하기 위해 탈아미드화의 어느 수준이 조성물 내에서 허용되는지를 결정할 수 있다. 탈아미드화에 감수성인 것으로 실험적으로 결정된 아스파라긴 잔기는 HC N317, HC N386, HC N299 및 LC N31이다. 강제 분해 연구를 수행하여 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열에서의 탈아미드화 LC N31의 증가된 수준이 항원 결합 활성에 대해 미치는 영향을 결정하였다. 이들 연구에서 상이한 배치로부터의 조성물을 6N 수산화나트륨을 사용하여 pH 9.0으로 조정하고, 40℃에서 30일 동안 인큐베이션하였다. 샘플을 0, 3, 7, 14 및 30일에 수집하고, 대조군으로서 사용된 비스트레스 조성물 (예를 들어, 참조 표준물)과 비교하였다. pH 9.0 스트레스 적용된 샘플을 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 시험하였다. 결과는 표 13에 제시된다. 메폴리주맙을 3일 동안 pH 9.0에서 유지하는 경우에 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열에서의 탈아미드화된 LC N31의 수준은 조성물의 상이한 배치에 대해 17.4% 및 16.8%이다. 표 13을 참조한다. 3일 동안 pH 9.0에서 유지한 메폴리주맙에 대한 항원 및 FcRN 결합 데이터는 표 11 및 표 12에 제시된다.
표 13. 제3일에 상이한 배치로부터의 조성물의 pH 9.0 강제 분해 연구 샘플에서 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의한 백분율 탈아미드화.
Figure pct00015
따라서 제3일에, 0.74의 특이적 항원 결합 활성 (표 11) 및 84% 및 82%의 FcRn 결합 활성 (표 12)은 약 17% 이하의 N31에서의 탈아미드화 및 약 28% 이하의 N386에서의 탈아미드화 (표 13)가 0.70-1.30의 특이적 항원 결합 활성 및 70%-130%의 FcRn 결합의 허용되는 범위 내에서 기능적 조성물을 유지할 수 있다는 것을 제시한다.
산화
강제 분해 연구를 수행하여 조성물의 항체 중쇄 및 경쇄에서의 메티오닌 및 다른 아미노산 잔기의 산화에 대한 감수성을 실험적으로 검사하였다. 강제 분해 연구는 산화에 감수성인 것처럼 보이는 어느 잔기가 실제로 산화되는지, 및 산화된 변이체가 기능에 영향을 미치는지 여부, 및 기능/효능 (항원 결합 및/또는 FcRn 결합)을 유지하기 위해 산화의 어느 수준이 조성물 내에서 허용되는지를 결정할 수 있다.
조성물의 샘플을 실온 (RT)에서 48시간 동안 0.1% 과산화수소 (H2O2)와 함께 인큐베이션하여 산화를 유도하였다. 샘플을 0, 6, 12, 24 및 48시간에 수집하였다. 이들을 대조군으로서 사용된 비스트레스 조성물 (예를 들어, 참조 표준물)과 비교하였다. 이들 연구로부터 가장 산화되기 쉬운 메티오닌 (M) 잔기는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 HC M64, HC M82, HC M85, HC M254, HC M360, HC M430 및 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 LC M4를 포함하는 것으로 결정하였다. 가장 산화되기 쉬운 메티오닌 (M) 잔기는 HC CDR2에 위치하는 M64; FcRn 및 Fc 영역에서의 단백질 A 결합 포켓에 위치하는 M254 및 M430; 및 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 M360을 포함한다. 보다 적은 정도로 산화되기 쉬운 메티오닌 잔기는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 HC M4, HC M82 및 HC M85를 포함하였다. 추가로, 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 LC C220은 화학적으로 유도된 조건 하에서 산화되기 쉬운 것으로 결정되었다. 중요하게는, LC C220 및 HC C222는 중쇄 및 경쇄를 연결하는 쇄간 디술피드 결합을 형성한다.
메티오닌 산화로부터 유발되는 술폭시드 및 시스테인 산화로부터 유발되는 술폰산의 수준을 펩티드 맵핑 LC-MS/MS를 사용하여 측정하였으며, 이는 표 14에 요약된다. HC M64, M254, M360 및 M430은 0.1% 과산화수소 (H2O2)와의 인큐베이션 후 48시간에 70% 초과 산화되었다.
표 14. 48시간 동안 H2O2로 처리한 후 상이한 배치로부터의 조성물의 연구 샘플에서 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 결정된 백분율 산화.
Figure pct00016
조성물 중 항체에 의한 특이적 항원 결합을 SPR에 의해 측정하였다. 이것은 표 15에 요약된 바와 같이 상이한 H2O2 스트레스 적용된 배치에서 48시간에 특이적 항원 결합 활성의 보다 큰 감소를 입증하였다. 이러한 항원 결합의 감소는 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 관찰된 M64 산화의 비교적 보다 높은 수준과 상관관계가 있다. 조성물의 상이한 배치로부터의 시험된 샘플에서 특이적 항원 결합 활성은 각각 대략 15% 및 32% 감소하였다. 메폴리주맙이 85.6% 산화된 경우에 특이적 항원 결합 활성은 여전히 0.57에서 유지되었다. 메폴리주맙에서의 산화의 누적 수준과 특이적 항원 결합 활성 사이의 선형 관계를 사용하였으며, 최악의 경우에 HC M64가 대략 50% 산화될 수 있었고 조성물 중 항체는 여전히 0.70-1.30의 범위에서 항원 결합 활성을 유지하는 것으로 결정되었다.
표 15. 48시간 동안 H2O2로 처리된 조성물의 상이한 배치에서 SPR에 의해 측정된 특이적 항원 결합 활성.
Figure pct00017
조성물의 상이한 배치로부터의 H2O2 스트레스 적용된 샘플의 FcRn 결합 활성 프로파일은 표 16에 제시된 바와 같이 대조군 (비처리 참조 표준물)과 비교하여 48시간에 FcRn 결합 활성의 실질적 감소와 고도로 유사하였다. HC M254 및 HC M430은 Fc 영역에 위치하고, 산화되는 경우에 FcRn 결합의 감소를 유발하는 것으로 제시되었다. 강제 분해 연구 동안 생성된 펩티드 맵핑 결과에 기초하여, 조성물이 48시간 동안 H2O2로 화학적으로 산화되는 경우에, 상이한 배치에서 관찰된 산화된 HC M254 및 HC M430의 수준은 ≥ 95%이다. FcRn 결합 결과는 조성물의 상이한 배치로부터의 H2O2 스트레스 적용된 샘플에서 항원 FcRn 결합의 대략 80% 감소를 제시하였다. 메폴리주맙이 ≥90% 산화된 경우에 FcRn 결합 활성은 여전히 22%에서 유지되었다. 메폴리주맙에서의 산화의 누적 수준과 FcRn 결합 활성 사이의 선형 관계를 사용하였으며, 최악의 경우에 HC M254 및 HC M430이 50% 산화될 수 있었고 조성물 중 항체는 여전히 70%-130%의 범위에서 FcRn 결합 활성을 유지하는 것으로 결정되었다.
표 16. 48시간 동안 H2O2로 처리된 조성물의 상이한 배치에서 SPR에 의해 측정된 FcRn 결합 활성.
Figure pct00018
광 스트레스 연구를 수행하여 조성물의 상이한 배치에서 항체의 항원 결합 활성에 대한 광 유도된 트립토판 산화의 영향을 결정하였다. 이것은 항체 중쇄에서의 트립토판 W52가 산화되기 쉽다는 것을 제시하였다. 이들 연구를 위해 상이한 배치로부터의 조성물을 25℃에서 대략 60시간에 걸쳐 1.8백만 룩스-hr의 가시 광선에 노출시켜 광 스트레스를 유도하였다. 0, 3, 7, 14 및 30시간에 수집된 샘플을 대조군으로서 사용된 조성물의 비스트레스 참조 표준물과 비교하였다. 트립토판 산화로부터 유발되는 디-산화/키누레닌의 수준은 표 17에 요약된 바와 같이 광 노출 스트레스 적용된 조성물의 상이한 배치에서 고도로 유사하였다. HC W52 산화의 증가를 광 노출의 60시간 후에 검출하였다.
표 17. 60시간 동안 광 노출 스트레스 후 조성물의 상이한 배치에서 펩티드 맵핑 LC-MS/MS에 의해 측정된 백분율 산화.
Figure pct00019
광 노출 스트레스 적용된 조성물의 상이한 배치에서 항체의 특이적 항원 결합 활성 프로파일은 시간 경과에 따라 특이적 항원 결합 활성의 감소를 제시하였다. 이것은 표 18에 요약된다. 메폴리주맙이 대략 7% 산화된 경우에 특이적 항원 결합 활성은 여전히 0.53에서 유지되었다. 메폴리주맙에서의 트립토판 산화의 누적 수준과 특이적 항원 결합 활성 사이의 선형 관계를 사용하였으며, 최악의 경우에 W52가 3% 산화될 수 있었고 조성물 중 항체는 여전히 0.70-1.30의 범위에서 항원 결합 활성을 유지하는 것으로 결정되었다.
표 18. 60시간 동안 광 노출 스트레스 후 조성물의 상이한 배치에서 SPR에 의해 측정된 특이적 항원 결합 활성.
Figure pct00020
따라서, 기능 (IL-5 결합 및/또는 FcRn 결합)을 유지하기 위해, HC M64는 50% 이하로 산화될 수 있었고, HC M254 및 HC M430은 50% 이하로 산화될 수 있었고, W52는 3% 이하로 산화될 수 있었다.
응집
조성물 중 항체의 크기 분포를 표준 비-변성 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 방법을 사용하여 모니터링하였다. 도 3 및 도 4에 제시된 바와 같이 RS 조성물 SEC 프로파일에서 3개의 피크가 검출되었다. 99.4%의 상대 백분율 면적을 갖는 7.9분에서의 주요 피크를 단량체로서 확인하였고; 0.5%의 상대 백분율 면적을 갖는 대략 6.7분에서의 부차적 피크를 응집체로서 확인하였다. 주요 피크 후에 용리되는 제2 부차적 피크가 일부 배치에서 관찰되었으며, 이는 단편의 존재를 나타낸다. 전형적으로 이 피크는 0.1의 SEC 검정 QL 미만이다.
응집체 피크를 다중-각도 광 산란 (MALS) 검출 및 분석용 초원심분리 (AUC)를 동반한 SEC를 사용하여 추가로 특징화하였다. 결과는 SEC-MALS 프로파일이 RS 조성물에 대한 도 5 및 조성물의 상이한 배치에 대한 도 6에 제시된 바와 같이 초기 용리 피크 (이량체) 및 후기 용리 피크 (단량체)를 함유한다는 것을 제시한다. 각각의 피크를 횡단하는 선은 검출된 종의 몰 질량 및 이량체 피크의 위치를 나타내며, 이는 샘플에서의 이량체의 낮은 존재비로 인해 크로마토그램에서 용이하게 가시적이지는 않다.
SEC-MALS 데이터를 사용하여 항체 단량체 및 이량체의 몰 질량을 계산하였다. RS 조성물에서 및 조성물의 상이한 배치에 대해 생성된 단량체의 몰 질량은 표 19에 제시된 바와 같이 148,760 kDa의 메폴리주맙 단량체 이론적 질량과 필적하였다. 샘플에 존재하는 이량체의 낮은 수준으로 인해 이 종에 대해 관찰된 분자량에서 가변성이 검출되었다.
표 19. RS 조성물에서 및 조성물의 상이한 배치에 대한 단량체의 SEC-MALS 분석.
Figure pct00021
SEC를 포함한 분획 기반 방법의 상보적 기술로서 침강 속도 곡선하 면적 (AUC) 적분 분석을 사용하여 크로마토그래피 분리로부터의 자기 회합 평형의 교란 또는 고차 응집체의 제외가 존재하지 않음을 확인하였다. AUC 분석의 결과는 표 20에 제시된 바와 같이 c(s) 분포가 조성물의 RS 배치 및 조성물의 또 다른 배치 둘 다에 대해 2.81 S의 침강 계수를 갖는, 단량체로서 확인된 1개의 우세 종 (주요 피크); 및 조성물의 RS 배치에 대해 4.87 S 및 조성물의 또 다른 배치에 대해 5.10 S의 침강 계수를 갖는, 이량체로서 확인된 1개의 응집체 피크를 함유한다는 것을 입증하였다. PRS와 BDS 사이의 침강 계수 값의 차이는 실질적인 것으로 간주되지 않으며, 샘플 내의 이량체의 낮은 존재비에 기인한다. 검출된 단지 고분자량 종만이 이량체였으며, 이는 SEC-UV 및 SEC-MALS 결과와 일치한다.
표 20. 조성물의 상이한 배치의 AUC 분석
Figure pct00022
단량체 및 이량체에 대해 결정된 침강 계수는 IgG1 모노클로날 항체에 대해 전통적으로 관찰된 값보다 더 낮았다. 메폴리주맙의 제제는 12% (w/v) 수크로스를 함유하여, 조성물에서 이들 항체 분자에 대해 관찰된 보다 낮은 침강 계수의 원인이 되는 고도로 점성인 샘플을 유발한다. SEC-UV, SEC-MALS, 및 AUC 분석의 결과는 조성물 중 응집체 종이 항체 이량체라는 것을 제시한다.
항원 결합 활성에 대한 응집체의 영향을 조사하기 위해, 상이한 배치로부터의 조성물에 대해 낮은 pH 연구를 수행하였다. 상이한 배치로부터의 조성물 샘플을 5N 염산을 사용하여 pH 3.5로 조정하였다. 이어서, pH 3.5 조정된 샘플을 40℃에서 30일 동안 인큐베이션하여 화학적 변형을 유도하였다. 0, 3, 7, 14 및 30일에 수집된 샘플을 대조군으로서 사용된 조성물의 비스트레스 RS 샘플과 비교하였다. 이것은 조성물이 낮은 pH 3.5에서 화학적으로 스트레스 적용되는 경우에 응집이 주요 분해 경로 중 하나라는 것을 제시하였다.
조성물의 pH 3.5 스트레스 적용된 샘플의 SEC 분해 프로파일은 도 7에 제시되고 표 21에 요약된다. 낮은 pH 3.5 스트레스 조건 하에서, 조성물의 상이한 배치 사이에서 상이한 응집률이 관찰되었다. 그러나, 30일까지 조성물의 두 배치는 평형에 도달하고 유사한 수준의 응집을 나타낸다. 상이한 배치 사이에서의 이러한 응집률 차이는 배치에서 비-공유 이량체에 비해 공유 이량체의 보다 높은 수준에 기인한다. 조성물의 MDS1 배치에서 관찰된 보다 느린 응집률은 MDS2 배치의 것에 비해 비-공유 이량체의 보다 높은 비율에 기인하고; 비-공유 이량체는 평형에 도달할 때까지 회합 및 해리하며, 이는 전체 응집체 형성율을 늦출 수 있다.
표 21. 조성물의 비처리 RS 배치 및 조성물의 pH 스트레스 적용된 배치의 SEC 데이터 요약.
Figure pct00023
조성물의 pH 3.5 스트레스 적용된 배치의 샘플의 특이적 항원 결합 활성 프로파일은 표 22에 요약된 바와 같이 시간 경과에 따라 특이적 항원 결합 활성의 감소를 제시하였다.
표 22. 조성물의 pH 스트레스 적용된 배치의 샘플에서 SPR에 의해 측정된 특이적 항원 결합 활성의 데이터 요약.
Figure pct00024
조성물의 pH 3.5 스트레스 적용된 배치의 샘플의 FcRn 결합 활성 프로파일은 표 23에 요약된 바와 같이 시간 경과에 따라 FcRn 결합 활성의 감소를 제시하였다.
표 23. 조성물의 pH 스트레스 적용된 배치에서 SPR에 의해 측정된 FcRn 결합의 데이터 요약.
Figure pct00025
요약하면, 표 21-23은 샘플에 대략 40% 응집체가 존재하는 경우에 항원 결합 및 FcRn 결합의 대략 50% 감소가 존재한다는 것을 제시한다. 메폴리주맙이 대략 40% 응집된 경우에, 특이적 항원 결합 활성은 여전히 0.57에서 유지되었고, FcRn 결합 활성은 51%에서 유지되었다 (표 22 MDS2 제3일). 공유 대 비-공유 이량체의 상이한 비 때문에 제3일에 MDS1과 MDS2 사이의 응집체 함량에 대해 다소 상이한 분해 프로파일이 존재하였다 (표 21).
메폴리주맙에서의 응집과 특이적 항원 및 FcRn 결합 활성 사이의 선형 관계를 MDS2로부터 사용하였으며, 최악의 경우에 메폴리주맙은 20% 응집될 수 있었고 조성물 중 항체는 여전히 0.70-1.30의 범위에서 항원 결합 활성 및 70-130%의 FcRn 결합 활성을 유지하는 것으로 결정되었다.
따라서, 메폴리주맙을 포함하는 조성물에서 항체는 20% 응집되고 여전히 0.70-1.30의 범위에서 IL-5 결합 활성 및 70%-130%의 범위에서 FcRn 결합 활성을 유지하는 것이 가능하다.
HCP
메폴리주맙 조성물 중 잔류 CHO 숙주 세포 단백질 수준은 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 측정한다. 이 방법은 메폴리주맙의 생산 공정 조건을 모방하는 조건 하에서 성장시킨 CHO 세포주의 천연 항원에 대해 생산된 항체를 사용한다.
메폴리주맙 조성물에 대해, HCP 함량에 대한 허용되는 범위는 ≤ 10 ng/mg인 것으로 결정되었다. 이 범위는 지금까지 생성된 방출 데이터로부터 유래되고, 실제 분석 및 공정 가변성을 나타낸다. 약물 물질의 37종의 상이한 배치는 하기 HCP 함량을 가졌다: 1.1 ng/mg (2 배치), 1.0 ng/mg (5 배치), 0.9 ng/mg (1 배치), 0.8 ng/mg (3 배치), 0.7 ng/mg (1 배치), 0.6 (1 배치), 0.5 ng/mg (1 배치), <0.5 ng/mg (4 배치), <1 ng/mg (19 배치).
요약하면, 메폴리주맙의 생물학적 활성에 수반되는 다음 2종의 우세한 기능이 존재한다: CDR을 통한 IL-5에 대한 결합, 및 Fc 영역을 통한 FcRn 수용체에 대한 결합. 상기에서 수행된 광범위한 특징화 연구를 통해, 특정한 탈아미드화된 항체 변이체, 특정한 산화된 항체 변이체 및 응집된 항체 변이체가 메폴리주맙의 조성물의 기능에 영향을 미칠 수 있는 것으로 결정되었다. 따라서, 이들 변이체의 특정 수준은 적절한 기능/효능을 보장하기 위해 유지되어야 한다.
실시예 3
비공식 서열 목록
하기 밑줄표시는 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 부분에서 CDR의 카바트 정의에 따른 CDR 서열, 또는 이들 CDR 서열을 코딩하는 핵산 서열을 확인한다. 예를 들어, 서열식별번호: 1에서 프레임워크 및 CDR은 제시된 서열의 아미노 근위 부분에서 카르복시 말단 부분으로의 순서로 평문 프레임워크1, 밑줄표시된 CDR1, 평문 프레임워크2, 밑줄표시된 CDR2, 평문 프레임워크3, 밑줄표시된 CDR3 및 평문 프레임워크4로서 제시된다. 단일 문자 아미노산 코드에 대해 문자 우측의 별표는 좌측의 아미노산 잔기가 N-글리코실화 부위라는 것을 나타낸다. 이 스킴은, 예를 들어 서열식별번호: 1-4, 11, 12 및 19-22 등에서 사용된다. 이들 서열에 제시된 아미노 말단 메티오닌 잔기는 절단될 수 있다. 따라서, 여기서 아미노 말단 메티오닌 잔기를 보여주는 서열은 또한 이러한 아미노 말단 메티오닌 잔기가 결여되어 있는 이들 단백질의 절단된 버전을 개시하는 것으로 고려되어야 한다. 핵산 서열은 DNA 핵산 서열로서 제시되며 "t" 핵산 잔기를 포함하고, 상응하는 RNA 서열은 또한 "t" 핵산 잔기가 또한 "u" 핵산 잔기를 개시하는 것으로 간주될 수 있도록 개시된 바와 같이 고려되어야 한다. 추가적으로, 5' 근위 "atg" 개시 코돈 및 3' 근위 "taa", "tag" 및 "tga" 정지 코돈은 하기 cDNA 핵산 서열에서 생략되었다. 이것은, 예를 들어 서열식별번호: 31-34 등에서 그러하다.
메폴리주맙 전장 중쇄
서열식별번호: 1
Figure pct00026
메폴리주맙 전장 경쇄
서열식별번호: 2
Figure pct00027
메폴리주맙 VH
서열식별번호: 3
Figure pct00028
메폴리주맙 VL
서열식별번호: 4
Figure pct00029
메폴리주맙 CDRH1
서열식별번호: 5
Figure pct00030
메폴리주맙 CDRH2
서열식별번호: 6
Figure pct00031
메폴리주맙 CDRH3
서열식별번호: 7
Figure pct00032
메폴리주맙 CDRL1
서열식별번호: 8
Figure pct00033
메폴리주맙 CDRL2
서열식별번호: 9
Figure pct00034
메폴리주맙 CDRL3
서열식별번호: 10
Figure pct00035
인간 IL-5 (성숙 단백질)
서열식별번호: 11
Figure pct00036
인간 IL-5 수용체 서브유닛 알파 이소형 1 (성숙 단백질)
서열식별번호: 12
Figure pct00037
메폴리주맙 전장 중쇄를 코딩하는 DNA
서열식별번호: 13
Figure pct00038
메폴리주맙 전장 경쇄를 코딩하는 DNA
서열식별번호: 14
Figure pct00039
본 발명이 지금 완전히 기재되었지만, 첨부된 청구범위의 취지 또는 범주에 벗어나지 않으면서 많은 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline LLC Bam, Narendra Monck, Myrna Dally, Jennifer Spatara, Michelle <120> BIOPHARMACEUTICAL COMPOSITIONS <130> PU65961P3 <150> 62/249,497 <151> 2015-11-02 <150> 62/247,906 <151> 2015-10-29 <150> 62/240,131 <151> 2015-10-12 <150> 62/209,000 <151> 2015-08-24 <160> 14 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 1 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Ser Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Ala Ser Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Asn Gln Val Val Leu 65 70 75 80 Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Pro Pro Ser Ser Leu Leu Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 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Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Val His Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 3 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 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Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn 85 90 95 Val His Ser Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 5 Ser Tyr Ser Val His 1 5 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 6 Val Ile Trp Ala Ser Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser 1 5 10 15 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 7 Asp Pro Pro Ser Ser Leu Leu Arg Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 8 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 8 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 9 Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 10 Gln Asn Val His Ser Phe Pro Phe Thr 1 5 <210> 11 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 11 Ile Pro Thr Glu Ile Pro Thr Ser Ala Leu Val Lys Glu Thr Leu Ala 1 5 10 15 Leu Leu Ser Thr His Arg Thr Leu Leu Ile Ala Asn Glu Thr Leu Arg 20 25 30 Ile Pro Val Pro Val His Lys Asn His Gln Leu Cys Thr Glu Glu Ile 35 40 45 Phe Gln Gly Ile Gly Thr Leu Glu Ser Gln Thr Val Gln Gly Gly Thr 50 55 60 Val Glu Arg Leu Phe Lys Asn Leu Ser Leu Ile Lys Lys Tyr Ile Asp 65 70 75 80 Gly Gln Lys Lys Lys Cys Gly Glu Glu Arg Arg Arg Val Asn Gln Phe 85 90 95 Leu Asp Tyr Leu Gln Glu Phe Leu Gly Val Met Asn Thr Glu Trp Ile 100 105 110 Ile Glu Ser 115 <210> 12 <211> 400 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 12 Asp Leu Leu Pro Asp Glu Lys Ile Ser Leu Leu Pro Pro Val Asn Phe 1 5 10 15 Thr Ile Lys Val Thr Gly Leu Ala Gln Val Leu Leu Gln Trp Lys Pro 20 25 30 Asn Pro Asp Gln Glu Gln Arg Asn Val Asn Leu Glu Tyr Gln Val Lys 35 40 45 Ile Asn Ala Pro Lys Glu Asp Asp Tyr Glu Thr Arg Ile Thr Glu Ser 50 55 60 Lys Cys Val Thr Ile Leu His Lys Gly Phe Ser Ala Ser Val Arg Thr 65 70 75 80 Ile Leu Gln Asn Asp His Ser Leu Leu Ala Ser Ser Trp Ala Ser Ala 85 90 95 Glu Leu His Ala Pro Pro Gly Ser Pro Gly Thr Ser Ile Val Asn Leu 100 105 110 Thr Cys Thr Thr Asn Thr Thr Glu Asp Asn Tyr Ser Arg Leu Arg Ser 115 120 125 Tyr Gln Val Ser Leu His Cys Thr Trp Leu Val Gly Thr Asp Ala Pro 130 135 140 Glu Asp Thr Gln Tyr Phe Leu Tyr Tyr Arg Tyr Gly Ser Trp Thr Glu 145 150 155 160 Glu Cys Gln Glu Tyr Ser Lys Asp Thr Leu Gly Arg Asn Ile Ala Cys 165 170 175 Trp Phe Pro Arg Thr Phe Ile Leu Ser Lys Gly Arg Asp Trp Leu Ala 180 185 190 Val Leu Val Asn Gly Ser Ser Lys His Ser Ala Ile Arg Pro Phe Asp 195 200 205 Gln Leu Phe Ala Leu His Ala Ile Asp Gln Ile Asn Pro Pro Leu Asn 210 215 220 Val Thr Ala Glu Ile Glu Gly Thr Arg Leu Ser Ile Gln Trp Glu Lys 225 230 235 240 Pro Val Ser Ala Phe Pro Ile His Cys Phe Asp Tyr Glu Val Lys Ile 245 250 255 His Asn Thr Arg Asn Gly Tyr Leu Gln Ile Glu Lys Leu Met Thr Asn 260 265 270 Ala Phe Ile Ser Ile Ile Asp Asp Leu Ser Lys Tyr Asp Val Gln Val 275 280 285 Arg Ala Ala Val Ser Ser Met Cys Arg Glu Ala Gly Leu Trp Ser Glu 290 295 300 Trp Ser Gln Pro Ile Tyr Val Gly Asn Asp Glu His Lys Pro Leu Arg 305 310 315 320 Glu Trp Phe Val Ile Val Ile Met Ala Thr Ile Cys Phe Ile Leu Leu 325 330 335 Ile Leu Ser Leu Ile Cys Lys Ile Cys His Leu Trp Ile Lys Leu Phe 340 345 350 Pro Pro Ile Pro Ala Pro Lys Ser Asn Ile Lys Asp Leu Phe Val Thr 355 360 365 Thr Asn Tyr Glu Lys Ala Gly Ser Ser Glu Thr Glu Ile Glu Val Ile 370 375 380 Cys Tyr Ile Glu Lys Pro Gly Val Glu Thr Leu Glu Asp Ser Val Phe 385 390 395 400 <210> 13 <211> 1347 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 13 caggttaccc tgcgtgaatc cggtccggca ctagttaaac cgacccagac cctgacgtta 60 acctgcaccg tctccggttt ctccctgacg agctatagtg tacactgggt ccgtcagccg 120 ccgggtaaag gtctagaatg gctgggtgta atatgggcta gtggaggcac agattataat 180 tcggctctca tgtcccgtct gtcgatatcc aaagacacct cccgtaacca ggttgttctg 240 accatgacta acatggaccc ggttgacacc gctacctact actgcgctcg agatccccct 300 tcttccttac tacggcttga ctactggggt cgtggtaccc cagttaccgt gagctcagct 360 agtaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480 aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600 atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa 660 tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctatagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaag 1347 <210> 14 <211> 660 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleic acid sequence identified using molecular biology techniques. <400> 14 gatatcgtga tgacccagtc tccagactcg ctagctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60 atcaactgca agagctctca gagtctgtta aacagtggaa atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtatcagc agaaacccgg gcagcctcct aagttgctca tttacggggc gtcgactagg 180 gaatctgggg tacctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtatactact gtcagaatgt tcatagtttt 300 ccattcacgt tcggcggagg gaccaagttg gagatcaaac gtactgtggc ggcgccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660

Claims (35)

  1. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  2. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤80%의 산성 항체 변이체 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  3. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  4. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의 중쇄 아미노산 서열의 M64에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  5. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  6. 서열식별번호: 1에 제시된 바와 같은 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 바와 같은 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체, 또는 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 중쇄 아미노산 서열 및/또는 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일한 경쇄 아미노산 서열을 갖는 항체 변이체를 포함하며, ≤25%의 경쇄 아미노산 서열의 N31에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤35%의 중쇄 아미노산 서열의 N386에서 탈아미드화된 항체 변이체; ≤55%의, 중쇄 아미노산 서열의 M64, 중쇄 아미노산 서열의 M254, 중쇄 아미노산 서열의 M430에서 산화된 항체 변이체; ≤3%의 중쇄 아미노산 서열의 W52에서 산화된 항체 변이체; 및 ≤20%의 응집된 항체 변이체를 포함하는 조성물.
  7. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
    여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고,
    여기서 완충제는 히스티딘, 포스페이트 또는 시트레이트 또는 그의 염이고,
    여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
    여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
    여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
  8. 모노클로날 항체의 정제된 제제 및 완충제를 포함하는 조성물이며,
    여기서 조성물은 6.8 내지 7.2의 pH이고,
    여기서 완충제는 포스페이트 또는 그의 염이고,
    여기서 정제된 제제는 도 1에 제시된 피크 65, 피크 78, 피크 88, 피크 92, 주요 피크 및 피크 112에 의해 나타내어진 이소형을 포함하고,
    여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 아미노산 서열 및 서열식별번호: 2의 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 아미노산 서열을 포함하고,
    여기서 항체는 차이니즈 햄스터 난소 세포에 의해 생산된 것인 조성물.
  9. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태
    를 포함하는 조성물.
  10. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
    c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태
    를 포함하는 조성물.
  11. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
    c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태
    를 포함하는 조성물.
  12. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 50% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태;
    c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 20% 내지 약 45%를 차지하는 항체의 산성 형태; 및
    d) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 1% 내지 약 15%를 차지하는 항체의 염기성 형태
    를 포함하는 조성물.
  13. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 35% 이하의 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  14. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 55% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 50% 이하의 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 50% 이하의 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 및 50% 이하의 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  15. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 35% 이하의 아스파라긴 386에서 탈아미드화된 중쇄 아미노산 잔기 및 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및
    c) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 50% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 50% 이하의 메티오닌 254에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 50% 이하의 메티오닌 360에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 및 50% 이하의 메티오닌 430에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  16. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  17. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 50% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  18. a) 서열식별번호: 5에 제시된 CDRH1 아미노산 서열, 서열식별번호: 6에 제시된 CDRH2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 7에 제시된 CDRH3 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 서열식별번호: 8에 제시된 CDRL1 아미노산 서열, 서열식별번호: 9에 제시된 CDRL2 아미노산 서열, 및 서열식별번호: 10에 제시된 CDRL3 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기 및 50% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태; 및
    c) 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  19. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  20. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 및 50% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  21. a) 서열식별번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 서열 및 서열식별번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 25% 이하의 아스파라긴 31에서 탈아미드화된 경쇄 아미노산 잔기를 포함하는 항체의 탈아미드화된 형태; 및
    c) 3% 이하의 트립토판 52에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기, 및 50% 이하의 메티오닌 64에서 산화된 중쇄 아미노산 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종을 포함하는 항체의 산화된 형태
    를 포함하는 조성물.
  22. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 아미노산 잔기 1에서 아미노 말단 피로글루타메이트 잔기, 아미노산 잔기 448에서 카르복시 말단 글리신 아미노산 잔기, 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
    c) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
    를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
  23. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기, 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
    c) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
    를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
  24. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체;
    b) 위치 386에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태; 및
    c) 아미노산 잔기 31에서 탈아미드화된 아스파라긴 잔기를 포함하는 서열식별번호: 2에 제시된 항체 경쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
    를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
  25. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체; 및
    b) 위치 52에서 산화된 트립토판 잔기, 위치 64에서 산화된 메티오닌 잔기, 위치 254에서 산화된 메티오닌, 위치 360에서 산화된 메티오닌 및 위치 430에서 산화된 메티오닌 잔기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 아미노산 잔기 변형을 포함하는 서열식별번호: 1에 제시된 항체 중쇄 아미노산 서열의 변형된 형태
    를 갖는 항-IL-5 항체의 집단을 포함하는 조성물.
  26. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태
    를 포함하는 조성물.
  27. a) 서열식별번호: 1에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 중쇄 서열 및 서열식별번호: 2에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 동일성을 갖는 경쇄 서열을 포함하는 항-IL-5 항체를 포함하는 조성물이며;
    b) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 20% 이상을 차지하는 항체의 주요 형태; 및
    c) 조성물의 모세관 등전 포커싱을 사용하여 측정 시에 조성물 중 단백질의 약 80% 이하를 차지하는 항체의 산성 형태
    를 포함하는 조성물.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 약 75 mg/ml 내지 약 100 mg/ml의 농도인 조성물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 6.8 내지 7.2의 pH를 제공하는, 이염기성 인산나트륨 7수화물, 포스페이트, 시트레이트, 인산나트륨, 인산칼륨, 시트르산나트륨 및 히스티딘으로 이루어진 군으로부터 선택된 완충제; 및/또는
    (b) 당; 및/또는
    (c) 폴리소르베이트 80; 및/또는
    (d) EDTA
    중 하나 또는 조합을 추가로 포함하는 조성물.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 서열식별번호: 1 및 서열식별번호: 2를 포함하는 참조 표준 조성물과 비교하여, 적어도 0.70의 IL-5 특이적 항원 결합 활성; 및/또는 적어도 70%의 FcRn 결합 활성을 갖는 조성물.
  31. a) 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 갖는 대상체를 확인하는 단계; 및
    b) 대상체에게 치료 유효량의 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 투여하는 단계
    를 포함하며; 이에 의해 대상체에서의 질환이 치료되는 것인,
    대상체에서 질환을 치료하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 조성물이 4주마다 1회 100 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  33. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 조성물.
  34. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 따른 조성물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  35. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 천식, 중증 호산구성 천식, 중증 천식, 비제어된 호산구성 천식, 호산구성 천식, 준-호산구성 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 다발혈관염을 동반한 호산구성 육아종증, 과다호산구성 증후군, 비강 폴립증, 수포성 유천포창 및 호산구성 식도염을 치료하는데 사용하기 위한 조성물.
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