KR20230157431A - 야누스 키나아제 억제제로서 헤테로사이클릭 유도체 - Google Patents

야누스 키나아제 억제제로서 헤테로사이클릭 유도체 Download PDF

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라헬라 자드라베크
딘코 지헤르
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키에시 파르마슈티시 엣스. 피. 에이.
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Abstract

본 발명은 비수용체 티로신 단백질 키나아제의 JAK 패밀리 (JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2)를 억제하는 화학식 (I)로 표시되는 화합물과, 이 화합물의 제조 방법, 이 화합물을 포함하는 약학 조성물 및 이의 치료 용도에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 JAK 패밀리 비수용체 키나아제의 조절 장애와 관련된 질병 또는 상태의 치료에서, 특히 천식, COPD 및 다른 호흡기 질병을 비롯한 다양한 염증성 질환의 치료에 유용할 수 있다.

Description

야누스 키나아제 억제제로서 헤테로사이클릭 유도체
본 발명은 천식, COPD 및 기타 호흡기 질환을 비롯한 다양한 염증성 질환의 치료에 유용한 JAK 1과 같은 JAK 억제제로서 유용한 유도체인 화학적 화합물에 관한 것이다.
JAK 패밀리는 비수용체 티로신 단백질 키나아제로 구성되며 JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2의 4가지 주요 구성원이 있다. 50종 이상의 사이토카인과 성장 인자가 다양한 JAK 키나아제 조합과 비공유적으로 결합된 I형 및 II형 수용체에 결합한다. 리간드에 의해 유발되는 신호는 JAK에 의하여 수용체의 티로신이 인산화되는 것과, 하나 이상의 STAT 단백질 모집(recruitment)으로 이루어진다. 티로신-인산화된 STAT는 이량체를 이룬 뒤, 특정 유전자를 조절하기 위해 핵막을 통해 핵으로 운반된다. JAK에는 7개의 상동성 도메인(JAK 상동성 도메인, JH)이 있다. 카르복실 말단에서 시작하여 JH1은 키나아제 도메인으로 알려진 첫 번째 JH이며 약 250개의 아미노산 잔기로 구성된다. JH1은 기질을 인산화하는 키나아제 구조 도메인을 구성하는 키나아제 단백질을 암호화하고; JH2는 키나아제 도메인의 활성을 조절하는 슈도키나아제 도메인이다. JAK3는 골수 및 림프계 뿐 아니라, 내피 세포 및 혈관 평활근 세포에서 발현되고; 다른 구성원은 거의 모든 조직에서 발현된다(Hu X et al., Signal Transduct Target Ther. 2021, 26;6(1):402). 많은 세포내 프로세스는, 하류 JAK/STAT 신호 전달: 즉, 조혈, 면역 균형, 조직 복구, 염증, 세포 사멸 및 지방 생성을 말한다. 다양한 생물학적 반응은 JAK 이소폼의 특정 페어링(pairing)에 의해 조절된다. JAK1/JAK3 조합은 림프구 세포의 성장/성숙, T 세포/NK 세포의 분화/항상성유지, B 세포 클래스 전환 및 기타 염증 프로세스와 관련이 있는 IL-2, -4, -7, -9, -15 및 -21 신호를 매개한다. JAK1/TYK2-JAK1/JAK2의 조합은, 나이브 T셀 분화로의 관여, T셀 항상성 유지, 과립구 형성(granulopoiesis) 및 다른 염증 프로세스에 관여하는 IL-6 및 I형 인터페론과 같은 선천 면역 반응과 관련된 신호를 조절한다(Howell MD et al., Front. Immunol. 2019, 10, 2342). JAK2는 IL-3, IL-5, 과립세포 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 에리스로포이에틴(EPO) 및 트롬보포이에틴(TPO)과 같은 다양한 사이토카인 및 성장 인자의 신호를 조절하며 자기 자신(JAK2/ JAK2)과 빈번하게 결합한다(Hodge et al., Clin Exp Rheumatol 2016; 34(2):318-28).
유전자 변형 마우스 모델과 인간 질병은 면역 적합성에서 JAK/STAT 경로의 중요성을 입증한다. 특히, 비정상적인 JAK/STAT 신호뿐만 아니라 일부 JAK 이소폼을 포함하는 과발현 또는 돌연변이는 조혈 및 림프 조직의 악성 종양뿐만 아니라 염증성 질환을 유발한다. 현재 여러 FDA(Food and Drug Administration) 및/또는 EU 승인 JAK 억제제가 임상에 사용되고 있다. 2종의 소분자(small molecules), 즉 룩솔리티닙(ruxolitinib) 및 페드라티닙 (fedratinib)은 골수 섬유증 및 진성적혈구증가증과 같은 혈액학적 질환에 사용되고 있고; 6종의 JAK 억제제 (일본의 토파시티닙(tofacitinib), 바리시티닙(baricitinib), 룩솔로리티닙(ruxololitinib), 필고티닙(filgotinib), 우파디시티닙(upadicitinib), 델로시티닙(delocitinib))는 류마티스성 관절염, 다관절 소아 특발성 관절염, 아토피성 피부염, 궤양성 대장염 및 급성 이식편대숙주병과 같은 면역 매개 질환에 사용되고 있다. 또한, 이러한 약물 중 일부는 현재 자가면역 질환(루푸스, 백반증 등), 염증성 장 질환에서 비호지킨 림프종 및 COVID-19에 이르는 적응증에 대하여, 임상 2상 및 3상 시험 중에 있다 (Hu X. et al., Sig Transduct Target Ther 2021, 6: 402).
JAK/STAT를 표적으로 하는 소분자는 섬유성 질환의 치료에도 매력적인 옵션을 나타낸다. 실제로 섬유화 프로세스에 관여하는 염증성 사이토카인(IL-4, IL-3, IL-6, IL-11, IL-31 등)과 성장인자(FGF, VEGF 등)가 JAK/STAT 패쓰웨이(pathway)를 활성화시킨다. 블레오마이신 유도 섬유증 마우스 모델에서 테스트한 룩솔리티닙(Ruxolitinib)은 폐의 섬유성 병변을 개선하고 섬유성 분자 마커의 수준을 감소시킨 반면 (Zhang, Y et al., Ann. Rheum. Dis. 2017, 76, 1467-1475), 토파시티닙(tofacitinib)은 실험적인 피부 및 폐 섬유증에서 예방제로 작용했다 (Wang, W et al., Scleroderma Relat. Disord. 2020, 5, 40-50). 환자에서 일부 증례 보고가 연구되었다. 단일 사례 보고서는 예후가 좋지 않은 공격적인 간질성 폐 질환의 관리에서 닌테다닙(nintedanib)과 병용한 토파시티닙(tofacitinib)의 효능 및 안전성을 확증했다 (Conca, W et al., Front. Pharmacol. 2020, 11, 5857619). 바리시티닙(Baricitinib)은 간질성 폐 질환의 서브그룹을 비롯한 RA 환자의 폐 섬유증 및 염증에 대한 바이오마커 수준을 감소시키는 안전한 면역 조절제임이 입증되었다 (D'Alessandro M et al., Int. Immunopharmacol. 2020, 86, 106748).
COVID-19에서 임상 시험 중인 일부 JAK 억제제가 있는데, 이는 토파시티닙(tofacitinib), 바리시티닙(baricitinib), 룩솔리티닙(ruxolitinib)이다. 바리시티닙(baricitinib)과 룩솔리티닙(ruxolitinib)은 사망 위험 감소와 관련이 있었다. 이들은 침습적 기계 환기의 사용을 줄였고 중환자실 입원률과 급성 호흡곤란 증후군(ARDS) 발생률에 보더라인 임팩트 (borderline impact)를 가졌다 (Wijaya, I. et al. Clin. Epidemiol. Glob. Health 2021, 11, 100755). 룩솔리티닙(ruxolitinib)은 또한 COVID-19 환자에서 테스트되어, 임상 증상 및 흉부 컴퓨터 단층 촬영 이미지를 개선했다 (Cao Y. et al., J. Allergy Clin. Immunol. 2020 146, 137-146).
천식은 병인이 JAK/STAT 신호 전달의 필수적인 역할을 특징으로 하는 수많은 면역 매개 질병에 포함될 수 있다. 천식은 면역 반응, 유전적 감수성, 그리고 과민성을 유발하고 기도의 리모델링을 통해 궁극적으로 기류 제한에 기여하게 되는 감기, 알레르겐 및 운동과 같은 비특이적 외부 자극 사이의 복잡한 상호 작용으로 인한 기도의 만성 염증성 질환을 말한다. 중증 천식은 성인 천식 인구(전 세계적으로 3억 명)의 5~15%에 영향을 미치며 사망률 증가, 입원 증가, 심각한 증상 부담, 건강 관리 비용 및 결근 및 결석과 관련된 공중 보건 문제를 나타낸다(Steve NG et al., J Allergy Clin Immunol 2021;148:953-63). 중증 천식은 치료하기 어려운 천식의 하위 집합을 나타내며, 고용량의 흡입용 코르티코스테로이드(ICS)와 장시간 작용하는 베타-아고니스트 또는 기타 조절제를 함께 사용해도 질병이 통제되지 않는 환자에게서 발생하는 것을 말한다. 현재까지 4가지 유형의 생물학적 제제, 즉 오말리주맙(omalizumab)(항-면역글로불린 E) 항체, 메폴리주맙(mepolizumab) 및 레슬리주맙(reslizumab)(항-인터루킨[IL]-5항체), 벤랄리주맙(benralizumab)(항-IL-5 수용체 알파 항체), 두필루맙(dupilumab) (항-IL-4 수용체 알파 항체)가 중증 천식에 대해 허가받았다. 이들의 효능에도 불구하고, 많은 환자들이 계속해서 악화 또는 조절되지 않는 질병을 경험하며, 이는 더 새로운 치료법이 필요함을 나타낸다(Israel E, Reddel HK. N Engl J Med 2017; 377:965-76).
최근 천식 병리생물학에 대한 더 나은 이해는 표현형 분류 체계로부터, "엔도타입(endotype)" 개념의 도입으로 전환되었다. 엔도타입 개념에 따르면, 해당 환자와 관련된 병태생리학적 메커니즘 및 임상적 바이오마커에 기초하여 분류가 이루어진다(Wenzel SE et a., Am J Respir Crit Care Med 2021;203:809-21). 천식에는 2가지 주요 엔도타입, 즉 2형과 비(non)-2형이 있다. 2형 패쓰웨이는 TH2 세포 및 그룹 2 선천 림프구 세포(ILC2)에서 유래된 사이토카인(여기에는 호산구, B 세포, 기도 상피 세포 및 기타 세포 유형을 활성화하여 기도 염증을 일으키는 IL-4, IL-5 및 IL-13이 포함된다)의 활성화로 정의된다. 2형 천식의 바이오마커에는 혈액/객담 호산구증가증 및 분획 호기 산화질소(FENO) 및 IgE 수치 상승이 포함된다. 2형-로우(low) 패쓰웨이는 2형-하이(high) 사이토카인 및 바이오마커가 없는 것이 특징이며, 기도 내 호중구 수준의 증가 또는 기도 호중구 및 호산구 수준이 정상인 포씨글래뉼로사이트(paucigranulocytic) 특징을 나타낸다. 2형-로우 천식은 현재 잘 알려져 있지 않으며 여러 개의 특징적인 엔도타입을 포함할 가능성이 있다. 조사 중인 2형- 로우 엔도타입의 잠재적 매개체 및/또는 바이오마커에는 IL-6, IL-17A/F, IL-23, I형 인터페론, CXCL10, TNF, 알라민(TSLP, IL-25, IL-33), IL-1β, IL-8, IFN-γ가 있다(Hinks TSC et al., ERJ 2021, 57 (1) 2000528).
위에서 언급한 2형 및 2형-로우 엔도타입 모두에 대해 언급한 거의 모든 매개체는 JAK/STAT 패쓰웨이를 활성화하고, 이것으로 중증 천식의 두 엔도타입 모두에서 JAK 억제제의 잠재적 사용에 대한 이론적 근거를 제시한다. JAK 억제제에 의해 여러 사이토카인을 동시에 표적으로 삼는 것은, 생물학적 제제(무반응 환자의 경우) 및 표준 요법(통제되지 않는 환자의 경우)보다, 고용량 흡입용 코르티코스테로이드(ICS) 투여를 고려할 때 이점을 제공할 수 있다.
천식에서 JAK 억제제의 강력한 근거에도 불구하고 억제제의 전신 투여로 인해 안전성 문제가 발생할 수 있거나, 어린이와 같은 특정 천식 개체에 대한 투여가 제한될 수는 있다. 천식이 폐에 한정된 질환이라는 점을 고려할 때, JAK 억제제의 흡입 투여 경로는 전신 노출 및 관련 부작용을 제한하면서 치료 효능의 이점을 제공할 수 있다. 현재까지 몇몇 회사가 천식 치료를 위해 흡입형 JAK 억제제를 개발하고 있다. 아스트라제네카(Astrazeneca) 파이프라인에는 AZD-0449(임상 1상 완료) 및 AZD-4604(임상 1상 진행 중)가 포함되어 있고; 테라반스 바이오파마 (Theravance Biopharma)는 TD-8236 흡입 JAK 억제제에 대한 새로운 전임상 프로그램을 시작하고 있으며, 키나셋/벡추라(Kinaset/Vectura)는 흡입용 화합물로 VR588(임상 1상 진행 중)을 개발하고 있다. 위에서 언급한 회사가 후원한 많은 전임상 연구에서, 천식 조절에 있어서의 JAK 억제제 효능이 입증되었다. 약물 개발의 전임상 단계에서, 경구 투여된 JAK1/3 억제제 R256(현재 AZD0449로 불림)은 기도 저항, BAL 호산구증가증, 점액 생성을 감소시키는 데 효과적인 것으로 나타났으며 민감화(sensitization) 동안 투여된 경우 TH2 사이토카인 반응도 감소했다 (Ashino S et al., J Allergy Clin Immunol 2014;133:1162-74). 건조 분말로 제공된 지넨테크 (Genentech) iJak-381은 OVA에 감염된(OVA-challenged) 마우스에서 BAL 호산구증가증, CCL11, 기도 저항 및 Muc5AC를 감소시켰다. 그리고 AAH 알레르겐에 만성적으로 노출된 마우스 모델에서 BAL 호산구 증가증, 호중구 증가증, CCL11 및 CXCL1을 감소시켰다 (Dengler HS et al., Sci Transl Med 2018;10:eaao2151). 또한, 에어로졸로 투여하기 위해 제형화된 토파시티닙(Tofacitinib)과 같은 경구용 JAK 억제제는 집 먼지 진드기 천식 마우스 모델에서 호산구 수를 감소시켰다 (Younis US et al., AAPS PharmSci-Tech 2019;20:167).
폐에 한정한 JAK 억제로 이득을 얻을 수 있는 또 다른 호흡기 질환은 폐의 염증성 질환인 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)으로, 대부분 돌이킬 수 없고 점진적인 기류 제한을 특징으로 하며, 담배 연기 노출로 가장 일반적으로 발생한다. 염증성 사이토카인이 만성 기도 염증의 원인이고 그 중 일부가 JAK/STAT 활성화(IL-6, IFN-γ, IL-2 등)를 유발함에도 불구하고 COPD 병인에서 이 패쓰웨이의 역할은 제대로 특징분석되어 있지 않다. 인산화-STAT4+ 세포(Di Stefano A et al., Eur Respir J. 2004 Jul; 24(1):78-85)는 비흡연자 건강한 대조군에 비해 COPD에서 증가하는 것으로 밝혀졌다. 또 다른 연구에서, 인산화-STAT3+ 및 인산화-STAT1+ 세포 수는 비흡연자 대조군보다 COPD 환자의 폐 생검에서 더 높았지만, 인산화-STAT4 분자에 대한 이전 데이터를 재현할 수 없었다(Yew-Booth L et al., Eur Respir J 2015;46(3):843-5). 이러한 데이터로 보면, COPD 질환에서도 JAK 억제제의 치료적 사용을 제안할 수 있다.
JAK 효소에 의해 매개되는 병리학적 반응의 수를 고려할 때, 많은 질환, 특히 호흡기 질환의 치료에 유용할 수 있는 JAK 효소의 억제제에 대한 지속적인 요구가 있다.
따라서, 천식 및 호흡기 질환의 치료를 위해 폐에 국소 투여하기에 적합한 신규하고 강력한 JAK 억제제의 발견은 여전히 중요한 니드(need)로 남아있다.
이에 따라, 본 발명의 첫번째 측면의 목적은, JAK 키나아제 억제제로 유용한 아래 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
[화학식 (I)]
(상기 식 중, W, X1, X2, X3 , X4, R1, R2, R3는 본 발명의 상세한 설명에서 정의된다)
본 발명의 다른 목적은, 이러한 화합물을 포함하는 약학 조성물, 호흡기 질환을 치료하기 위해 이러한 화합물을 사용하는 방법, 및 이러한 화합물을 제조하는 데 유용한 제조 방법 및 중간체를 제공하는 것이다.
하나의 측면에서, 본 발명은 의약으로 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 제공한다. 하나의 측면에서 본 발명은 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 발명은 JAK 효소 메커니즘과 관련된 임의의 질병의 치료용 의약의 제조를 위한 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 정의된 바와 같은 JAK 효소 메카니즘과 관련된 임의의 질병의 예방 및/또는 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
특정 측면에서 본 발명의 화합물은 단독으로 사용되거나 다른 활성 성분과 조합되어 사용되며 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 낭포성 섬유증(CF), 간질성 폐 질환 및 특발성 폐 섬유증(IPF), 급성 폐 손상 및 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)을 비롯한 폐 질환의 예방 및/또는 치료를 위해 투여될 수 있다.
정의
"약학적으로 허용 가능한 염 (Pharmaceutically acceptable salts)" 이라는 용어는 화학식 (I)의 화합물의 유도체로서, 모(母)화합물이, 존재하는 경우 유리 산성기나 염기성기로부터, 약학적으로 허용가능하게 전환시키는 임의의 염기 또는 산을 이용하여, 해당하는 산첨가염 또는 염기첨가염으로 전환시키는 것에 의해 적절히 변형된 것인 화학식 (I)의 화합물의 유도체를 말한다.
적절한 상기 염의 예로는, 아미노기와 같은 염기성 잔기의 무기 또는 유기산첨가염과, 카르복실기와 같은 산 잔기의 무기 또는 유기 염기 첨가염이 있을 수 있다.
본 발명의 염을 제조하는데 적합하게 사용될 수 있는 무기 염기의 양이온은 칼륨, 나트륨, 칼슘 또는 마그네슘과 같은 알칼리 또는 알칼리 토금속 이온을 포함한다. 염기로 기능하는 주요 화합물을 무기산 또는 유기산과 반응시켜 염을 형성함으로써 얻어지는 것들로는, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 메탄설폰산, 캄포설폰산, 아세트산, 옥살산, 말레산, 푸마르산, 숙신산 및 구연산의 염이 있다.
많은 유기 화합물은 반응하거나 침전 또는 결정화되는 용매와 복합체를 형성할 수 있다. 이들 복합체는 본 발명의 또 다른 목적인 "용매화물"로 알려져 있다. 화학식 (I)의 화합물, 또는 약학적으로 허용되는 이의 염 또는 용매화물의 다형체 및 결정형도 본 발명의 추가 대상이 된다.
"할로겐" 또는 "할로겐 원자"라는 용어는 불소, 염소, 브롬 및 요오드 원자를 포함하고; 치환기로서 플푸오로(Fluoro), 클로로(Chloro), 브로모(Bromo), 아이오도(Iodo)를 의미한다.
용어 "(C1-C6)알킬"은 탄소 원자의 수가 1 내지 6 범위인 직쇄 또는 분지형 알킬기를 의미한다. 구체적인 알킬기로는 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, t-부틸, 3-메틸부틸 등이 있다.
"(C1-C6)할로알킬"이라는 표현은 하나 이상의 수소 원자가 서로 동일하거나 상이할 수 있는 하나 이상의 할로겐 원자로 치환된, 상기 정의된 "(C1-C6)알킬"기를 의미한다. 이들의 예로는, 할로겐화 알킬기, 폴리할로겐화 알킬기 및 모든 수소 원자가 할로겐 원자로 치환된 완전 할로겐화 알킬기, 예컨대 트리플루오로메틸기 또는 디플루오로 메틸기가 있다.
유사하게, 용어 "(C1-Cx) 하이드록시알킬" 또는 "(C1-Cx) 아미노알킬"은, 위에서 정의된 "(C1-Cx) 알킬"기 중, 하나 이상의 수소 원자가 하나 또는 그 이상의 하이드록시(OH)기 또는 아미노기로 치환된 것을 말한다.
아미노알킬기의 정의는 하나 이상의 아미노 기(-NR4R5)로 치환된 알킬기(즉, "(C1-C6)알킬"기)를 포함한다. 아미노 알킬의 예는 R4R5N-(C1-C6)알킬, 또는 -(CH2)mNR4R5와 같은 모노-아미노알킬기가 있다. 여기서 R4 및 R5 및 m은 본 발명의 상세한 설명에서 정의된 바와 같다.
상기 정의된 바와 같은 치환기 R4 및 R5와 관련하여, R4 및 R5 중 어느 하나가 질소 원자와 함께 결합되어 5 내지 6원 헤테로사이클릭 라디칼을 형성하는 경우, 상기 헤테로사이클릭 라디칼에서 적어도 하나의 추가 고리 탄소 원자가 적어도 하나의 헤테로원자 또는 헤테로기(예를 들어, N, NH, S 또는 O)로 치환될 수 있거나 -옥소(=O) 치환기를 가질 수 있는 경우가 여기에서 추가로 설명된다. 상기 헤테로사이클릭 라디칼은 고리의 이용가능한 지점, 즉 탄소 원자, 또는 치환에 이용가능한 헤테로원자 또는 헤테로기 상에서 추가로 임의로 치환될 수 있다. 따라서, 상기 헤테로사이클 라디칼의 예는 1-피롤리디닐, 1-피페리디닐, 1-피페라지닐, 4-모르폴리닐, 피페라진-4일-2-온, 4-메틸피페라진-1-일이다.
"(C3-C6)사이클로알킬"과 같이 "(C3-C10)사이클로알킬"이라는 용어는 지정된 수의 고리 탄소 원자를 함유하는 포화된 사이클릭 탄화수소기를 말한다. 이의 예로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸 및 아다만탄-일과 같은, 폴리사이클릭 고리 시스템이 있다.
"아릴"이라는 표현은 6개 내지 20개, 좋기로는 6 내지 15개 고리 원자를 가지고, 적어도 하나의 고리가 방향족인 모노, 비-, 또는 트리-사이클릭 탄소 고리 시스템을 말한다. "헤테로아릴"이라는 표현은 5개 내지 20개, 좋기로는 5 내지 15개 고리 원자를 가지고, 적어도 하나의 고리가 방향족이고, 적어도 하나의 고리 원자가 헤테로원자 (예컨대, N, S 또는 O)인 모노, 비-, 또는 트리-사이클릭 고리 시스템을 말한다.
아릴 또는 헤테로아릴 모노사이클릭 고리 시스템의 예로는, 예컨대 페닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이소옥사졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 티아졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 퓨라닐 라디칼 등이 있다.
아릴 또는 헤테로아릴 비사이클릭 고리 시스템의 예로는, 나프탈레닐, 비페닐레닐, 퓨리닐, 프테르디닐, 피라졸로피리미디닐, 벤조트리아졸릴, 벤조이미다졸릴, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 인다졸릴, 벤조티오펜일, 벤조디옥시닐, 디하이드로벤조디옥시닐, 인데닐, 디하이드로-인데닐, 디하이드로벤조 [1,4]디옥시닐, 벤조티아졸-2-일, 디하이드록시벤조디옥세피닐, 벤조옥사지닐, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-6-일, 4,5,6,7-테트라하이드로티아졸[4,5-c]피리딘, 4,5,6,7-테트라하이드로벤조[d]티아졸-2-일, 5,6,7,8-테트라하이드로-1,7-나프티리딘 라디칼 등이 있다.
아릴 또는 헤테로아릴 트리사이클릭 고리 시스템의 예로는, 플루오레닐 라디칼과, 전술한 헤테로아릴 비사이클릭 고리 시스템의 벤조응축(benzocondensed) 유도체가 있다.
"(C3-C6) 헤테로사이클로알킬"과 마찬가지로 "(C3-C10)헤테로사이클로알킬" 이라는 표현은, 표시된 탄소 수의 포화 또는 부분 불포화 모노, 비- 또는 트리-사이클로 알킬기를 의미하고, 여기서 적어도 하나의 고리 탄소 원자는 적어도 하나의 헤테로원자(예: N, NH, S 또는 O)로 치환되고/되거나 -옥소(=O) 치환기(예: C(=O), S(=O)를 가질 수 있다. 상기 헤테로사이클로알킬(즉, 헤테로사이클릭 라디칼 또는 헤테로사이클릭기)는 고리 상의 이용 가능한 위치, 즉, 탄소 원자 또는 치환에 이용될 수 있는 헤테로 원자 상에서 임의로는 더 치환될 수 있다. 헤테로사이클로알킬의 예로는 대표적으로 아래의 것들이 있다: 옥세탄일, 테트라하이드로-퓨라닐, 피롤리디닐, 이미다졸리디닐, 티아졸리디닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 디하이드로- 또는 테트라하이드로-피리디닐, 테트라하이드로피라닐, 피라닐, 2H- 또는 4H-피라닐, 디하이드로- 또는 테트라하이드로퓨라닐, 디하이드로이소옥사졸릴, 피롤리딘-2-온-일, 디하이드로피롤릴, 5-옥소피롤리딘-3-일, (1R,5S,6r)-3-옥사비사이클로[3.1.0]헥산-6-일, 1,1-디옥사이도티오모르폴리노, 옥타하이드로사이클로펜타[c]피롤-5-일, 4,5,6,7-테트라하이드로피라졸로[1,5-a]피라진-2-일; 4,5,6,7-테트라하이드로티아졸[5,4-c]피리딘-2-일 라디칼 등.
용어 "아릴(C1-C6)알킬"은 구성 탄소 원자의 수가 1에서 6 사이의 범위에 있는 직쇄 또는 분지형 알킬기에 연결된 아릴 고리, 예컨대, 페닐메틸 (즉, 벤질), 페닐에틸 또는 페닐프로필을 의미한다.
마찬가지로, 용어 "헤테로아릴(C1-C6)알킬"은 구성 탄소 원자의 수가 1에서 6 사이의 범위에 있는 직쇄 또는 분지형 알킬기에 연결된 헤테로아릴 고리, 예컨대 퓨라닐메틸기를 가리킨다.
용어 "알카노일"은 HC(O)- 또는 알킬카르보닐기 (예: (C1-C6)알킬C(O)-)를 지칭하며, 여기서 "알킬"기는 위에서 정의된 의미를 갖는다. 이의 예로는 포르밀, 아세틸, 프로파노일, 부타노일이 있다.
용어 "(C1-C10) 알콕시" 또는 "(C1-C10) 알콕실"은 "(C1-C6) 알콕시" 또는 "(C1-C6) 알콕실" 등과 마찬가지로, 표시된 수의 탄소수를 가지는 직쇄형 또는 분지형 탄화수소로서, 산소 브릿지를 통해 분자의 나머지가 연결된 것을 말한다. "(C1-C6)알킬티오"는 황 브릿지를 통해 연결된 전술한 탄화수소를 의미한다. 마찬가지로, "(C1-C6)알킬티오"라는 용어는 황 브릿지를 통해 연결된 전술하여 정의한 할로알킬을 말한다. (C1-C6)알킬티오 및 (C1-C6)알킬티오의 예는 각각 메틸티오, (디플루오로메틸)티오가 있다.
비슷한 표현인 "(C1-C6)할로알콕시" 또는 "(C1-C6)할로알콕실"은 산소 브릿지를 통해 연결된, 전술하여 정의한 할로알킬을 말한다. (C1-C6)할로알콕시의 예로는 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시가 있다.
비슷한 표현인 "(C3-C6)헤테로사이클로알킬-(C1-C6)알킬" 및 "(C3-C6)사이클로알킬-(C1-C6)알킬"은 표시된 탄소수의 알킬기를 통해, 분자의 나머지가 연결된 전술하여 정의한 헤테로사이클로알킬 및 사이클로알킬기를 말하고, 예컨대, 피페리딘-4-일-메틸, 사이클로헥실에틸이 있다.
비슷한 표현인 "(C1-C6)알콕시 (C1-C6)알킬"은 표시된 탄소수의 알킬기를 통해, 분자의 나머지가 연결된 전술하여 정의한 알콕시기를 말하고, 예컨대, 메톡시메틸이 있다.
비슷한 표현인 "(C1-C6)할로알콕시(C1-C6)알킬"은 표시된 탄소수의 알킬기를 통해, 분자의 나머지가 연결된 전술하여 정의한 "(C1-C6)할로알콕시"기를 말하고, 예컨대, 디플루오로메톡시프로필이 있다.
마찬가지로, "(C1-C6)알콕시카르보닐"은 카르보닐기를 통해, 분자의 나머지가 연결된, 전술하여 정의한 알콕시기를 말한다.
"(C1-C6)알콕시카르보닐-(C1-C6)알킬"은 표시된 수의 탄소로 된 알킬기로 추가로 연결된 카르보닐기를 통해 분자의 나머지가 연결된, 전술하여 정의한 알콕시기를 말하고, 예를 들면, 메톡시카르보닐메틸이 있다.
"(C1-C6)알콕시카르보닐-(C1-C6)알킬티오"는 메톡시카르보닐메틸티오와 같은 연결된 기를 말한다.
옥소 잔기는 다른 일반적인 표현, 예컨대 (=O)에 대한 대안으로 (O)로 표시된다. 따라서, 일반식의 관점에서, 카르보닐기는 바람직하게는, -CO-, -(CO)- 또는 -C(=O)-와 같은 다른 일반적인 표시에 대한 대안으로서 -C(O)-로 표시된다. 괄호가 유용하다고 판단되어 사용되는 경우, 일반적으로 괄호 속의 기는 사슬에 포함되지 않은 측면기이며, 선형 화학식을 명확하게 하기 위해 사용된다. 예를 들어 설포닐기 -SO2-는 예를 들어, 설피닉기 -S(O)O-에 비해 명확하게 하기 위해 -S(O)2- 로도 표시될 수 있다.
수치적 지수일 때 (어떤 값) "p는 영" 또는 "p는 0"이라는 말은, 지수 p(예: (R)p)를 포함하는 치환기 또는 기가 없음, 즉 H 이외의 치환기가 없음을 의미한다. 마찬가지로 지수가 가교 2가 그룹(예: (CH2)n)에 부착될 때 "각 위치에서 n은 영" 또는 "n은 0"이라는 말은, 브릿지기가 없이 결합(bond)만 있는 것을 말한다.
화학식 (I)의 화합물에 염기성 아미노기 또는 4급 암모늄기가 존재할 때마다, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 트리플루오로아세테이트, 포르메이트, 설페이트, 포스페이트, 메탄설포네이트, 니트레이트, 말레에이트, 아세테이트, 시트레이트, 푸마레이트, 타르트레이트, 옥살레이트, 숙시네이트, 벤조에이트, p-톨루엔설포네이트, 파모에이트 및 나프탈렌 디설포네이트 중에서 선택되는 생리학적으로 허용되는 음이온이 존재할 수 있다. 마찬가지로, COOH기와 같은 산성기의 존재 하에, 예를 들어 알칼리 또는 알칼리 토금속 이온을 포함하는 상응하는 생리학적 양이온 염도 존재할 수 있다.
화학식 (I)의 화합물은 하나 이상의 입체 중심을 함유하는 경우 광학 입체이성질체로서 존재할 수 있다.
본 발명의 화합물이 적어도 하나의 입체 중심을 갖는 경우, 이들은 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물이 2개 이상의 입체 중심을 갖는 경우, 추가로 부분입체이성질체로 존재할 수 있다. 이러한 모든 단일 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 이들의 임의의 비율의 혼합물은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다. 입체 중심을 포함하는 탄소의 절대 배치(R) 또는 (S)는 기의 우선 순위에 따라 Cahn-Ingold-Prelog 명명법 규칙에 따라 지정된다.
"단일 입체이성질체", "단일 부분입체이성질체" 또는 "단일 거울상이성질체"는 화합물의 화학명 근처에 보고될 때 이성질체가 단일 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체(예: 키랄 크로마토그래피를 통해)로 분리되었지만 관련 입체 중심에서의 절대 배치가 결정/지정되지 않은 것을 나타낸다.
아트로프이성질체(Atropisomers)는 회전에 대한 입체적 변형 장벽이 컨포머(conformers)의 분리를 가능하게 하기에 충분히 높은, 단일 결합에 대한 회전 방해로 인해 발생한다(Bringmann G et al, Angew. Chemie Int. Ed. 44 (34), 5384-5427, 2005). doi:10.1002/anie.200462661).
Oki는 주어진 온도에서 1000초 이상의 반감기로 상호 전환하는 컨포머(conformer)로서 아트로프이성질체를 정의한 바 있다(Oki M, Topics in Stereochemistry 14, 1-82, 1983).
아트로프이성질체는 많은 경우에 열적으로 평형화될 수 있는 반면 다른 형태의 키랄성 이성질체화는 일반적으로 화학적으로만 가능하다는 점에서 다른 키랄 화합물과 다르다.
아트로프이성질체의 분리는 선택적 결정화와 같은 키랄 분해법에 의해 가능하다. 아트로프이성질체 선택적(atropo-enantioselective 또는 atroposelective) 합성에서 하나의 아트로프이성질체는 다른 하나를 희생하여 형성된다. 아트로프이성질체 선택적 합성은 코리 바시키 시바타 (Corey Bakshi Shibata(CBS)) 촉매, 프롤린에서 파생된 비대칭 촉매와 같은 키랄 보조제를 사용하거나, 이성질체화 반응이 다른 것보다 한 아트로프이성질체를 선호할 때 열역학적 평형에 기반한 접근법에 의해 수행될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물의 라세미 형태 뿐만 아니라 개별 아트로프이성질체(해당 거울상이성질체가 실질적으로 없음) 및 입체이성질체가 풍부한 아트로프이성질체 혼합물도 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명은 또한 화학식 (I)의 화합물의 상응하는 중수소화 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 맥락에서, 중수소화 유도체란, 수소 원자에 의해 점유된 적어도 하나의 위치가 중수소의 천연 존재비를 초과하는 양으로 중수소에 의해 점유됨을 의미한다. 바람직하게는, 그 위치에서 중수소의 백분율은 적어도 90%, 더 바람직하게는 적어도 95%, 더욱 더 바람직하게는 99%이다.
화학식 (I)의 화합물에 대해 상기 및 하기 기재된 모든 바람직한 기 또는 실시 상태는 서로 조합될 수 있고 필요한 부분을 약간 수정하여 적용될 수도 있다.
위에서 언급한 바와 같이, 본 발명은 JAK 억제제로서 작용하는 화학식 (I)의 화합물, 이의 제조 방법과, 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체와 혼합된 이들을 단독으로 또는 하나 이상의 활성 성분과 함께 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
첫번째 측면에서, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 유도체의 클래스와, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물에 관한 것이다.
[화학식 (I)]
상기 화학식 (I)에서,
X 1 및 X 2 는 교대로(alternatively) N 또는 CH이고,
X 3 및 X 4 는 교대로(alternatively) N 또는 CH이며, 두 개의 점선은 이에 따라 교대로(alternatively) X3=N 사이에 또는 N=X4 사이에 이중 결합이 있음을 나타내고,
W는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일 및 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노로부터 선택되는 헤테로아릴이고,
R 1 은 할로겐, 좋기로는, Cl 및 F,
-OH,
-CN,
-NO2
-(CH2)mNR4R5, 좋기로는 -NH2
(C1-C6)알킬,
(C1-C6)하이드록시알킬,
(C1-C6)알콕시, 좋기로는 메톡시,
(C1-C6)알킬티오-,
(C1-C6)할로알킬,
(C1-C6)할로알콕시, 좋기로는 디플루오로메톡시,
(C1-C6)할로알킬티오- 로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 기, 좋기로는 2개 또는 3개의 기로 임의로는 치환된 피리디닐, 피페리디닐, 페닐 또는 벤질기로부터 선택되고,
(R 1 은 페닐인 경우, 화학식 K의 하나 이상의 기로, 분자 중 남은 부위에 R 1 이 부착되는 위치에 대하여, -파라 또는 -메타 위치에서, 좋기로는 메타 위치에서, 추가로 임의 치환된다.
[화학식 K]
상기 화학식 K에서,
L은 부재하거나, 또는 O, S, S(O)2, (CO), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O), NHCONH, N(R6)S(O)2, S(O)2N(R6)로부터 선택되는 2가 기이고,
Z는 H, -OH, -CN, -NO2, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되며 (여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, (C1-C6)알콕시, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, 옥소, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)
R 2 및 R 3 은 존재하는 경우 H, (C1-C6)알킬, 바람직하게는 메틸 및 화학식 J의 기로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고,
{[화학식 J]
상기 화학식 J에서,
V는 부재하거나 O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로부터 선택되는 2가 기이고,
Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, 하이드록시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)}
n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1, 2, 3, 4로부터 선택되는 정수이고,
R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
-H,
(C1-C6)알킬,
(C1-C6)할로알킬,
(C1-C6)하이드록시알킬,
알카노일,
(C1-C6)알콕시카르보닐, 및
(C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, 및 알카노일로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, -NR4R5 로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
좋기로는, 본 발명에 따른 화합물은 1H-피라졸로[4,3-c]피리딘, 1H-피라졸로[4,3-b]피리딘 또는 1H-피라졸로[3,4-b]피리딘 유도체이다.
특히 바람직한 것은, 화학식 (I)의 1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 유도체 [여기서, X1 는 CR3 (R3으로 치환된 CH를 의미)이고, X2는 N, X3는 CR2 (R2로 치환된 CH를 의미), X4는 N임], 즉 화학식 (Io)로 표시되는 1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 스캐폴드를 가지는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 이의 용매화물이다.
[화학식 (Io)]
상기 식 중,
W는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일 및 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노로부터 선택되는 헤테로아릴이고,
나머지 변수는 전술한 바와 같다.
바람직한 실시 상태에 있어, 본 발명에서는 화학식 (Io)의 화합물을 제공하는데, 상기 화학식 (Io)에서
R1 은
할로겐, 좋기로는 Cl 및 F,
OH,
(C1-C6)알콕시, 좋기로는 메톡시,
(C1-C6)알킬티오-, 좋기로는 메틸티오
(C1-C6)할로알콕시, 좋기로는 디플루오로메톡시
로부터 독립적으로 선택된 2개 또는 3개의 기로 치환된 페닐이고,
나머지 변수는 전술하여 정의한 바와 같다.
전술한 바람직한 화합물은, 흡입 투여를 위해 유리하게 밸런싱된 특징을 나타낸다.
또다른 바람직한 실시 상태에 있어, 본 발명은 화학식 (Ib)로 표시되는, 즉 화학식 (Io)의 화합물에서, 추가로 R2기(여기서, R2기는 J기임)와, R1기 (여기서, R1기는 치환된 페닐임)를 가지는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물을 제공한다.
[화학식 (Ib)]
상기 식에서, R 8 은
(C1-C6)알콕시,
(C1-C6)할로알콕시;로 이루어지는 군에서 선택되고,
L은 O, S, S(O)2, C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O)로 이루어지는 2가 기로부터 선택되며,
Z는 H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고(여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 치환된다)
R 3 은 -H 또는 (C1-C6)알킬이며,
V는 부재하거나, O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로 이루어지는 2가기로부터 선택되고,
Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 치환된다)
n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1 내지 4로부터 선택되는 정수이고,
R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
-H,
(C1-C6)알킬,
(C1-C6)할로알킬,
(C1-C6)하이드록시알킬,
알카노일,
(C1-C6)알콕시카르보닐, 및
(C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.
바람직한 실시 상태에 있어서, 본 발명은 화학식 (Ib1)으로 표시되는, 즉 화학식 (Io)의 화합물이 추가로 W, 즉 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노)를 더 가지는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물을 제공한다.
[화학식 (Ib1)]
상기 식 중, R 8 은
(C1-C6)알콕시,
(C1-C6)할로알콕시;로 이루어지는 군에서 선택되고,
L은 O, S, S(O)2, C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O)로 이루어지는 2가 기로부터 선택되며,
Z는 H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고(여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 치환된다)
R 3 은 -H 또는 (C1-C6)알킬이며,
V는 부재하거나, O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로 이루어지는 2가 기로부터 선택되고,
Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 치환된다)
n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1 내지 4로부터 선택되는 정수이고,
R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
-H,
(C1-C6)알킬,
(C1-C6)할로알킬,
(C1-C6)하이드록시알킬,
알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, 및
(C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다. 따라서, 특히 바람직한 화합물 군은 아래 나열하는 바와 같다.
전술한 바람직한 화합물들은, 좋기로는 JAK1-2-3에 대해 50 nM보다 낮은 억제 농도로, 흡입 투여를 위해 적합한 특징을 나타내었다.
또다른 바람직한 실시 상태는, 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물에 관한 것이다.
상기 식 중, X1 및 X2는 교대로(alternatively) N 또는 CH이고,
X 3 및 X 4 는 교대로(alternatively) N 또는 CH이며, 두 개의 점선은 이에 따라 교대로(alternatively) X3=N 사이에 또는 N=X4 사이에 이중 결합이 있음을 나타내고,
W는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일부터 선택되는 헤테로아릴이고,
R 1 은 시아노메틸카르보닐, 디플루오로메톡시, Cl 및 F로부터 선택되는 1개 이상의 기로 임의로는 치환된, 피페리디닐, 페닐 또는 벤질기로부터 선택되고,
R 2 는 메틸이거나, 하이드록시카르보닐메틸, 메톡시카르보닐메틸, 디메틸아미노카르보닐메틸, 하이드록시메틸로부터 선택된다.
특정 실시 상태에 따르면, 본 발명은 실시예 1a-10a의 화합물(전술한 가장 뒤의 바람직한 실시상태에 따른 것)과, 추가로 아래 표에 기재한 바와 같은 실시예 1 내지 99의 화합물, 그리고 이의 약학적으로 허용 가능한 염과 용매화물을 제공한다.
상기에 열거된 모든 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물은 하기 실험예 부분에 기재된 바와 같은 일반적인 방법 및 절차를 사용하거나 이 기술 분야의 숙련자가 쉽게 이용할 수 있는 약간 변형된 공정을 사용하여 쉽게 입수할 수 있는 출발 물질로부터 제조할 수 있다. 본 발명의 특정 실시 상태를 본원에 제시하거나 서술할 수 있지만, 이 기술 분야의 숙련자라면 본 발명의 모든 실시 상태 또는 측면이 본원에 서술된 방법을 사용하거나 다른 공지된 방법, 시약 및 출발 물질을 사용하여 제조될 수도 있음을 인지할 것이다. 전형적이거나 바람직한 공정 조건(즉, 반응 온도, 시간, 반응물의 몰비, 용매, 압력 등)이 주어진 경우, 달리 명시되지 않는 한 다른 공정 조건도 사용될 수 있다. 최적의 반응 조건은 사용된 특정 시약 또는 용매에 따라 달라질 수 있지만, 이러한 조건은 일상적인 최적화 절차에 의해 이 기술 분야 숙련자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 일반적인 반응식 및 세부 절차는 아래의 중간체 및 실시예 제조 섹션에 설명되어 있다.
본원에 상세히 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 특히, JAK 의존성 질환의 치료를 위한 JAK 키나아제 활성을 억제하는 키나아제 활성의 억제제이다.
본 발명의 첫번째 측면에서, 본 발명은 바람직하게는 호흡기 및 특히 폐 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 의약으로서 사용하기 위한 본 발명에 따른 화합물, 즉 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학 조성물을 제공한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 JAK 메커니즘과 관련된 질환의 치료, 특히 호흡기 질환 및 폐 질환과 같은 질환 치료를 위한 의약의 제조에서의 화합물 (I) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
특히 본 발명은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 COPD, 특발성 폐 섬유증(IPF), 급성 폐 손상 및 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폐 질환의 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물을 제공한다.
또한, 본 발명은 치료가 필요한 환자에게 치료 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, JAK 메카니즘과 관련된 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
특히, 본 발명은 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 특발성 폐 섬유증(IPF), 급성 폐 손상 및 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)으로부터 선택된 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
바람직한 것은 전술한 질환의 예방을 위한 본 발명의 화합물의 용도이다.
마찬가지로 바람직한 것은 상기 질환의 치료를 위한 본 발명의 화합물의 용도이다.
일반적으로 말하자면, JAK 억제제인 화합물은 JAK 효소 메커니즘과 관련된 많은 질환의 치료에 유용할 수 있다.
하나의 실시 상태에서, 본 발명의 화합물에 의해 치료될 수 있는 질환은 천식, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 및 특발성 폐 섬유증(IPF), 급성 폐 손상 및 급성 호흡곤란 증후군(ARDS)과 같은 간질성 폐 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 실시 상태에서, 상기 질환은 천식 및 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)으로부터 선택된다.
본 발명의 치료 방법은 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 다른 약학적 활성 제제와 관련하여 "유효량"은 환자의 증상을 치료하기에 충분하지만 심각한 부작용을 피하기에 충분히 낮은 화합물의 양을 의미하고, 그럼에도 불구하고 숙련된 기술자에 의해 일상적으로 결정될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 단회 투여되거나, 또는 다회의 투여량이 주어진 기간 동안 다양한 시간 간격으로 투여되는 방식의 투여 요법에 따라 투여될 수 있다. 전형적인 일일 투여량은 선택된 특정 투여 경로에 따라 달라질 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제, 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed., Mack Pub., N.Y., U.S.A.]에 기재된 것 하나 이상과 혼합된, 화학식 (I)의 화합물의 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 다양한 투여 경로를 위한 본 발명의 화합물 및 이의 약학 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 화합물 및 그의 약학 조성물의 투여는 환자의 필요에 따라, 예를 들어 경구, 비강, 비경구 (피하, 정맥내, 근육내, 흉골내 및 주입에 의해), 흡입, 직장, 질, 국소, 국부, 또는 안내, 경피 및 안구 투여될 수 있다.
정제, 겔캡, 캡슐, 당의정, 과립, 로젠지 및 벌크 분말과 같은 고체 형태를 비롯한 다양한 고체 경구 투여 형태가 본 발명의 화합물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 단독으로 또는 다양한 약학적으로 허용되는 담체, 희석제(예: 수크로즈, 만니톨, 락토즈, 전분) 및 현탁화제, 가용화제, 완충제, 결합제, 붕해제, 방부제, 착색제, 풍미제, 윤활제 등을 포함하는 공지된 부형제와 함께 투여될 수 있다. 서방형 캡슐, 정제 및 젤도 유리하다.
수성 및 비수성 용액, 에멀젼, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함하는 다양한 액체 경구 투여 형태도 또한 본 발명의 화합물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 투여 형태는 또한 물과 같은 적합한 공지된 불활성 희석제 및 방부제, 습윤제, 감미제, 풍미제와 같은 적합한 공지된 부형제 뿐만 아니라 본 발명의 화합물을 유화 및/또는 현탁시키기 위한 제제를 함유할 수 있다. 본 발명의 화합물은 예를 들어 등장성 멸균 용액의 형태로 정맥내 주사되는 주사가능한 조성물로 제제화될 수 있다. 다른 제제 형태도 가능하다.
본 발명의 화합물의 직장 투여용 좌제는 화합물을 코코아 버터, 살리실레이트 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 부형제와 혼합하여 제조할 수 있다.
질 투여를 위한 제제는 활성 성분 이외에 적합한 담체를 함유하는 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제의 형태일 수 있으며, 또한 공지되어 있다.
국소 투여를 위한 약학 조성물은 피부, 눈, 귀 또는 코에 투여하기에 적합한 크림, 연고, 도포제, 로션, 에멀젼, 현탁액, 겔, 용액, 페이스트, 분말, 스프레이 및 점적제의 형태일 수 있다. 국소 투여는 또한 경피 패치와 같은 수단을 통한 경피 투여를 수반할 수 있다.
호흡기 질환의 치료를 위해, 상기 언급된 바와 같이 본 발명에 따른 화합물은 흡입에 의해 투여될 수 있다.
흡입 가능한 제제는 흡입 가능한 분말, 추진제 함유 계량 에어로졸 또는 추진제가 없는 흡입 가능한 제제를 포함하고 건조 분말 흡입기, 가압 계량 투여 흡입기 또는 분무기에서 각각 선택될 수 있는 적절한 흡입 장치를 통해 투여될 수 있다.
건조 분말로 투여하기 위해, 종래 기술로부터 공지된 단일 또는 다중 용량 흡입기가 사용될 수 있다. 이 경우 분말은 젤라틴, 플라스틱 또는 기타 캡슐, 카트리지 또는 블리스터 팩 또는 리저버(reservoir)에 채워질 수 있다.
희석제 또는 담체, 예컨대, 락토스 또는 호흡가능 분획을 향상시키기에 적합한 임의의 다른 첨가제를 본 발명의 분말화 화합물에 첨가할 수 있다.
하이드로플루오로알칸과 같은 추진제 가스를 함유하는 흡입 에어로졸은 용액 또는 분산 형태로 본 발명의 화합물을 함유할 수 있다. 추진제 구동 제제는 공용매, 안정제 및 선택적으로 다른 부형제와 같은 다른 성분을 함유할 수도 있다.
본 발명의 화합물을 포함하는 추진제-무함유 흡입 제형은 수성, 알코올성 또는 하이드로알코올성 매질 중의 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있고 이 업계에 알려져 있는 제트 또는 초음파 분무기 또는 연무 분무기(soft-mist nebulizer), 예컨대 Respimatⓒ (베링거 잉겔하임 파마슈티컬(Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals)의 등록상표 (Wachtel, H., Kattenbeck, S., Dunne, S. et al. Pulm Ther (2017) 3: 19.))에 의해 전달될 수 있다.
본 발명의 화합물은 투여 경로와 관계 없이, 단독 활성 제제로서 또는 다른 약학적 활성 제제와 조합하여(즉, 고정 용량 조합으로 투여되는 공동 치료제 또는 별도로 제형화된 활성 성분의 병용 요법으로) 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 단독 활성 제제로서, 또는 호흡 질환의 치료에 현재 사용되고 있고 이 기술 분야 숙련자에게 공지된 것들을 포함하는 다른 약학적 활성 성분, 예컨대 베타2-작용제, 항무스카린제, 코르티코스테로이드 미토겐-활성화 키나아제(P38 MAP 키나아제) 억제제, 핵 인자 카파-B 키나아제 소단위 베타 억제제(IKK2), 인간 호중구 엘라스타아제(HNE) 억제제, 포스포디에스테라아제 4(PDE4) 억제제, 류코트리엔 조절제, 비스테로이드성 항염증제(NSAIDs) 및 점액 조절제와 조합하여 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 약학 조성물을 단독으로 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제와 함께 또는 이와 혼합하여 포함하는 키트 및 장치에 관한 것이고, 이는 단회 또는 다회 투여용 건조 분말 흡입기, 계량 흡입기 또는 분무기일 수 있다.
본 발명의 화합물의 투여량은 치료할 구체적인 질병, 증상의 중증도, 투여 경로, 투여 간격의 빈도, 이용되는 구체적인 화합물, 효능, 독성 프로필, 및 화합물의 약동학 프로파일을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라진다.
흡입에 의해 투여하기에 적합한 본 발명의 화합물을 포함하는 약학 조성물은 다양한 호흡 가능한 형태, 예를 들어 흡입용 분말(DPI), 추진제-함유 계량 에어로졸(PMDI) 또는 추진제가 없는 흡입 가능한 제제(예: UDV)이다.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 화합물을 포함하는 약학 조성물을 포함하는 장치에 관한 것이며, 단회 또는 다회 투여 용량의 분말 흡입기, 계량형 흡입기 및 분무기, 특히 연무 분무기일 수 있다.
하기 실시예는 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명의 특징은 본 발명을 설명하기 위해 제공되고 본 발명을 제한하려는 의도가 아닌 예시적인 실시 상태의 다음 설명 과정에서 명백해질 것이다.
중간체 및 실시예 1a-10a 화합물의 제조
표 1에 기재된 다음 실시예 1a-10a의 화합물을 아래와 같이 제조하고 특징분석하였다.
표 1
실시예 1a의 화합물을 다음 순서에 따라 제조하였다.
1 단계
중간체 1A: (6-브로모-1-[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]-3-메틸-피라졸로[4,3-b]피리딘)
둥근 바닥 플라스크에, 디메틸포름아미드 (16　mL) 중의 1-(5-브로모-3-플루오로-2-피리딜)에탄온 (2.00 g, 9.2 mmol),　[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]히드라진 하이드로클로라이드 (2.47 g, 10 mmol) 및 탄산 칼륨 (3.80 g, 28 mmol)을 채우고, 반응 혼합물을 85℃에서 1.5시간 동안, 이어서 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (80 mL)로 희석시키고, NaCl 포화 수용액으로 세척하고 (3x30 mL), Na2SO4 상에서 유기층을 건조시켰다. 용매를 감압하에 일부 제거하고 실온에 두었더니, 조생성물로부터 고체가 생성되었다. 고체를 여과하고, 석유 에테르(petrol ether)로 세척하고, 건조시켰더니, 표제 생성물이 생성되었다(1.797 g). ES+ m/z 388.0/390.0/392.0 [MH]+
2 단계
중간체 2A: (6-브로모-3-(브로모메틸)-1-[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]피라졸로[4,3-b]피리딘)
질소 하에서, 둥근 바닥 플라스크에 중간체 1A (200 mg, 0.51 mmol)와 1,2-디클로로에탄 (4.0 mL)을 채우고, 이어서 N-브로모숙신이미드 (110 mg, 0.62 mmol)와 AIBN (2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴)(17 mg, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 가열하였고, 이어 실온으로 냉각시킨 뒤 물 (10 mL)로 급랭시켰다. 생성된 혼합물을 디클로로메탄 (3x5 mL)으로 추출하고, 합쳐진 유기물을 NaCl　(10 mL) 농축 수용액으로 세척한 뒤, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 감압 하에 증발시킨 뒤, 조생성물을 실리카겔 위에서 SPE(고체상 추출)로 정제하였더니, 표제 화합물이 생성되었다 (134 mg). ES+ m/z 465.9/467.9/469.9/491.9 [MH]+
3 단계
중간체 3A: ([6-브로모-1-[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일]메틸 아세테이트)
중간체 2A (140 mg, 0.30 mmol), 디메틸포름아미드 (1.5 mL) 및 아세트산칼륨 (103 mg, 1.0 mmol)으로 채운 바이얼을 60℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (10mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x5 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기물을 NaCl　농축 수용액 (2x5 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 건조될 때가지 증발시켰다. 조생성물을 추가로 정제하지 않고 다음 합성 단계에 사용하였다. ES+ m/z 446.0/448.0/450.0 [MH]+.
4 단계
중간체 4A: ([1-[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]-6-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일]메틸 아세테이트)
THF (1 mL) 중의 중간체 3A (83 mg, 0.16 mmol) 및 물 중의 삼인산칼륨용액 (0.50 M, 0.65 mL, 0.33 mmol)을 10분 동안 질소로 탈기시키고, 이어 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (44 mg, 0.18 mmol)과 XPhos-Pd-G3 ((2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트) (6.9 mg, 0.0082 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃에서 1.5시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄 (10 mL) 및 물 (10mL)로 희석시켰다. 수성층을 디클로로메탄 (4x5 mL)으로 추출하고, 이어 합쳐진 유기물을 물 (10mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 조 잔류물을 실리카겔 상의 SPE(고체상 추출)로 정제하여, 표제 화합물을 얻었다 (66 mg). ES+ m/z 485.1.1/487.1 [MH]+.
5 단계
실시예 1a: ([1-[5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐]-6-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일]메탄올)
둥근 바닥 플라스크에, 중간체 4A (95 %, 48 mg, 0.094 mmol) 및 메탄올 (5 mL)을 채우고, 이어 K2CO3 (0.039 g, 0.28 mmol)를 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 이어 조생성물 잔사를 실리카겔 상의 SPE(고체상 추출)로 정제하여, 표제 화합물을 얻었다 (30 mg). ES+ m/z 443.1/445.1 [MH]+.
실시예 2a-10a의 화합물들을 실시예 1a와 유사한 방식으로, 동일한 합성 순서에 따라 제조하였는데, 단 사용된 반응 시약 또는 용매의 변형은 통상의 최적화 절차에 따라 이 분야의 숙련자가 쉽게 결정할 수 있다.
본 발명 화합물 (1a-10a)의 약리학적 활성
JAK1 생화학적 활성 (표 1에 pIC50으로 나타낸 데이터)
이 연구의 목적은 생화학적 시간차 형광 공명 에너지 전이 분석법(biochemical time-resolved fluorescence resonance energy transfer (TR-FRET) LANCE assay)으로 신규 JAK 억제제의, JAK1 키나아제 활성을 억제하는 화합물의 활성을 분석하기 위한 것이었다. JAK1 키나아제 및 ATP (Km에 대응)의 존재하에, LANCE 울트라 키나아제 분석법 (LANCE Ultra kinase assay)으로, ULight 펩타이드 기질 (LANCE Ulight-JAK-1 (Tyr1023) Peptide, Perkin Elmer, TRF0121)을 인산화시켰다. 그 다음, 항체 (Eu-anti-phospho-substrate antibody (LANCE Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine (PT66), Perkin Elmer, AD0069)로 이를 포획하면, Eu-킬레이트 도너와 ULight 억셉터 염료(dye)가 근접하게 된다. 320 nm에서 여기시켰을 때, Eu-킬레이트는 이의 에너지를 ULight 염료로 전달하고, 이를 통해 665 nm에서 형광 발광이 일어난다. 30 μM부터 시작하여 5배씩 희석한 11개의 샘플 (30 μM - 3 pM)에 대하여 2회씩 억제제들을 시험하였다. IC50 데이터, 커브 및 QC 어낼리시스를 Excel 툴 및 GrahphPadPrism 소프트웨어를 이용하여 계산하였다. QC 크라이테리아 파라미터(criteria parameters): Z' ≥0.5, Hill Slope 범위 0.5 내지 5, S:B > 2.
효소 활성외에도, 세포내 어세이에서 JAK1/JAK3 활성에 대한 억제제 효능을 사람 말초세포 단핵구 (PBMCs)에서 STAT5 수준의 IL-2 유도 인산화에 대하여 특징분석하였다.
세포 기반 어세이 PBMC (IL-2 자극 pSTAT5) (표에서 pIC50으로 표시된 데이터)
건강한 사람 지원자로부터 PBMC를 분리하였다. 세포들을 웰에 시딩하고, 시험화합물 및 rh IL-2로 처리하였다. 30분 후, 배양셀을 분해하고, 엘라이자 (PathScan phospho-stat5 (Tyr694) ELISA (Cell signaling))로 pSTAT5 측정하였다. 30 μM부터 시작하여 5배씩 희석한 11개의 샘플 (30 μM - 3 pM)에 대하여 2회씩 억제제들을 시험하였다. IC50 데이터, 커브 및 QC 어낼리시스를 Excel 툴 및 GrahphPadPrism 소프트웨어를 이용하여 계산하였다. QC 크라이테리아 파라미터(criteria parameters): Z' ≥ 0.35, Hill Slope 범위 0.5 내지 5, S:B > 2.
NMR 스펙트럼
NMR 스펙트럼은, 표준 Bruker 펄스 시퀀스를 사용하는 Bruker Avance III 600 (5 mm RT inverse probehead), Bruker DRX 500, Bruker Avance AV 400 (5 mm RT direct probehead) 및 Bruker DPX 300 스펙트로미터로 기록했다. DMSO-d6 또는 CDCl3를 용매로 사용하고, 용매 잔여 피크가 사용되는 케이스가 아닌 한, TMS를 내부 표준으로 사용했다. 모든 시험들은 별도로 언급하지 않는 한 25℃에서 기록했다.
LC-MS 스펙트럼은, SQD 매스 스펙트로미터와 결합된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer)로 기록했다. 크로마토그래피 컬럼: Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm packing diameter), 또는 Acquity UPLC BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm packing diameter), 컬럼 온도 40℃.이동상: A = 0.1% v/v 물 중의 포름산 용액, B = 0.1% v/v 아세토니트릴 중의 포름산 용액 또는 A = 10 mM NH4HCO3 수용액(암모니아로 pH 10으로 조절) 및 B = 아세토니트릴. 분석 샘플을 물: 아세토니트릴 (1:1) 혼합물에 용해시켰다. 필요한 경우 약 10% DMSO를 용해도를 개선시키기 위하여 사용하였다.
중간체 및 실시예 1-99 제조
아래에 서술하고 다음 반응식에 기재된 제조 방법들은 본 발명의 화합물 제조에 사용가능한 합성법의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
당해 기술 분야의 숙련자라면, 본 발명의 모든 실시 상태 및 측면 (실시예 1a 내지 10a 포함)은 본원에 기재된 방법을 사용하여, 또는 다른 알려진 방법, 시약, 출발 물질을 사용하여 쉽게 변경 가능한 방법으로 제조할 수 있다는 점을 잘 인지할 것이다.
일부 케이스에서, 민감성 혹은 반응성 잔기를 보호 또는 가리기 위하여 필요한 단계, 즉 일반 화학의 원리에 따라, 일반적으로 보호기(protective groups: PG)로 알려져 있는 단계가 도입될 수 있다 (Protective group in organic syntheses, 3rd ed. T. W. Greene, P. G. M. Wuts).
화학식 (Io)의 화합물은, 보다 명확히 하기 위하여 말하면 상기 리스트에 포함된 것들을 모두 포함하는 것이고, 이는 아래의 반응식에 기재된 절차에 따라 통상 제조될 수 있다. 일반적인 반응식과 상이한 단계나 상세 내용은 구체적인 실시예 및/또는 추가의 반응식으로 설명한다.
[화학식 (Io)]
화학식 (Io)의 화합물은 반응식 1에 따라 제조될 수 있다. 화합물 IV는, 보호기 탈보호 또는 1개 이상의 단계를 수반할 수 있는 기능기 전환 등과 같이, 이 분야의 숙련자에게 잘 알려져 있는 절차에 따라, 일반기인 r1, r2 , r3 및 w가 R1, R2 R3 및 W로 각각 전환될 수 있는 중간체이다. 중간체 IV를 화학식 Io의 화합물로 전환하기 위하여 1개 이상의 기 (r1, r2, r3 및 w)에 동일한 절차가 사용될 수 있고, 각 구체적인 예에 대한 실시예 섹션에 상세히 기재된다. 이러한 전환이 불필요한 케이스 (즉, r1, r2 , r3 및 w가 각각 R1, R2 R3 및 W 에 대응)에서는 중간체 IV의 제조에 대하여 아래에 서술하는 일반적인 접근법이 화학식 Io의 화합물을 제공하게 될 것임은 명백하다.
화학식 Io(또는 중간체 IV)의 화합물은 중간체 II를 중간체 III와 반응시킴으로써, 스즈키 커플링(Suzuki coupling), 스틸 커플링(Stille coupling), 부흐발트-하트위그(Buchwald-Hartwig) 또는 유사법(Strategic application of named reactions in organic synthesis, L. Kurti, B. Czako, Ed. 2005) 등의, 금속/팔라듐 촉매 크로스 커플링 반응을 통해, W의 직접 도입에 의하여 얻어진다.
[반응식 1]
예를 들어, 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일이라면, W를 도입하기 위해 적당한 팔라듐 촉매 크로스 커플링은 스즈키 커플링이다. 스즈키 커플링은, 1,4-디옥산, THF, 1,2-디메톡시에탄, 2-프로판올 또는 DMF 등의 유기 용매 중에서, 물의 존재 혹은 부존재하에, 알칼라인 카보네이트(예컨대 Cs2CO3 또는 K2CO3) 또는 무기 포스페이트 (예컨대 K3PO4) 등의 무기 염기의 존재하에, 몇시간 (보통 1 내지 3시간) 동안 가열하면서 (보통 50-100℃ 범위), 테트라키스트리페닐포스핀팔라듐(0), PdCl2(dppf)2 등의 팔라듐 촉매하에, 또는 XPhos-Pd-G3 [(2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트] 등의 리간드-팔라다사이클 전촉매하에, 중간체 II를 대응하는 보론산이나 보론 피나콜레이트 (중간체 III, 여기서 w는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일이고, A는 디하이드록시보릴 또는 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란일이다)로 반응시킴으로써 수행한다. 보론산이나 보론 피나콜레이트 에스테르는 일반적으로 시중에서 구입하거나, 시판 시약으로부터 이 분야의 숙련자라면 쉽게 제조할 수도 있다. 합성 편의를 위해, 스즈키 커플링의 중간체에 존재할 수 있는 1차/2차 아민과 페놀은 적당한 보호기로 보호되어야 할 필요가 있다. 페놀 OH를 보호하기에 적절한 보호기로는 PMB기(파라-메톡시벤질)와 같은 벤질타입 보호기 또는 MOM(모노메톡시메틸)과 같은 에테르타입이 있을 수 있다. PMB기는 해당 PMB로 보호된 중간체 IV를 산성 조건에서 유기 또는 무기 강산으로 처리하면 쉽게 탈보호할 수 있다. 예컨대, PMB는 중간체를 트리플루오로아세트산 니트(neat) 또는 DCM, THF 또는 유사한 것 등의 유기 용매와의 혼합물 중의 트리플루오로아세트산과, 보통 실온에서 몇시간 (보통 1시간) 처리하면 보호기를 제거할 수 있다. 종국에 r2/r3 기에 존재하는 1차 및 2차 아민을 보호하기에 적절한 보호기는 Boc(tert-부톡시카르보닐) 등의 카르바베이트 타입 보호기일 수 있다. Boc기는 산성 조건에서 유기 또는 무기 강산으로 Boc로 보호된 중간체 IV를 처리하면 쉽게 탈보호할 수 있다. 예를 들어, Boc기는 중간체를 트리플루오로아세트산 니트 또는 DCM, DCE, THF 또는 유사한 것 등의 유기 용매와의 혼합물 중의 트리플루오로아세트산과, 보통 실온에서 몇시간 (보통 1 내지 3시간) 처리하면 보호기를 탈보호할 수 있다.
이미다조[1,2-b]피리다진-3-일인 경우 W를 도입하기 위한 적당한 팔라듐 촉매 크로스 커플링은 스틸 커플링법인데, 이는 극성 유기 용매 (예컨대, 첨가제(염기나 리튬염)가 있거나 없는 DMF나 1,4-디옥산) 중에서, 적절한 팔라듐 촉매 (예컨대 Pd(PPh3)2Cl2) 존재하에, 중간체 II를 해당하는 스태난 (중간체 III, w는 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일이고, A는 트리부틸스태닐 또는 트리메틸스태닐)으로 반응시키면 수행할 수 있다. 스태난은 일반적으로 시중에서 구할 수 있거나, 또는 시판되는 시약으로부터 출발하여, 이 분야의 숙련자라면 쉽게 제조할 수 있다.
또다른 접근법으로, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일인 경우, W는, 유기용매 (예컨대, DMF, 1,4-디옥산 또는 톨루엔) 중에서, 염기 (예컨대 Cs2CO3 또는 K2CO3)와 함께, 카르복실산 첨가제(예컨대, 피발산)과 함께 또는 없이, 약 110℃의 온도로 가열하면서, 적당한 팔라듐 촉매 (예컨대, Pd(Oac)2) 및 적당한 포스핀 (예컨대, PCy3 HBF4 또는 CyJohnPhos) 존재 하에서, 중간체 II를 상응하는 헤테로사이클 (중간체 III, 여기서 w는 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일 이고, A는 H)과 반응시킴으로써 직접 CH 아릴화함으로써 도입할 수 있다.
(3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노인 경우 W를 도입하기 위한 적당한 팔라듐 촉매 크로스 커플링법은, 부흐발트-하트위그 커플링법이다. 합성 편의를 위해, (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노의 카르보닐기는 알콕시기 (예컨대, 메톡시기)로 가리고, 합성 막바지에 중간체 IV로부터 제거될 필요가 있다. RuPhos-Pd-G3(2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트) 등의 적당한 리간드 팔라다사이클 시스템의 존재하에, 또는 일반적으로 적당한 Pd 급원 (예컨대, Pd2(dba)3 또는 Pd(OAc)2)의 존재하에, 적당한 비페닐포스핀 리간드타입(RuPhos, X-Phos, 또는 유사한 것)과, 소듐 tert-부톡사이드 등의 유기강산의 존재하에, 또는 Cs2CO3 등의 무기 염기 존재하에, 1,4-디옥산, THF 또는 톨루엔 등의 유기 용매 중에, 고온(보통 80-120℃)으로 몇시간 (보통 1 내지 5시간) 가열하면서, 중간체 II 및 중간체 III (w는 3-메톡시피라진-2-아미닐이고, A는 H)를 반응시키면 중간체 IV(여기서, w는 3-메톡시피라진-2-아미닐)를 생성할 수 있다. 중간체 IV의 메톡시기를 아세토니트릴 중의 TMS-Cl (트리메틸실릴 클로라이드) 및 요오드화나트륨과 1 내지 5시간 동안 0 내지 100℃에서 처리함으로써 탈메틸화하면, 화학식 Io의 화합물(여기서, W는 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노임)이 생성된다. 전술한 프로세스는 실시예 1 내지 60, 실시예 76, 실시예 85 및 87 내지 98의 합성 루트 중 하나 이상을 제공할 수 있고 이에 한정되지 않으며, 중간체 IV(r1, r2, r3 및/또는 w는 독립적으로 R1, R2, R3 및/또는 W의 전구체임)의 제조를 위한 합성 루트를 제공할 수 있으며 이에 한정되지 않는다.
또 다른 접근법으로, 화학식 Io (또는 중간체 IV)의 화합물은 중간체 VI를 중간체 VII로 고리화함으로써 제조할 수 있다. 고리화 반응은 N-메틸 피롤리돈(NMP), 디메틸아세트아미드 (DMA) 또는 1,2-디메톡시에탄 (DME) 등의 극성 유기 용매 중에서 필요한 시약을 몇시간 (보통 1 내지 5시간) 이상 가열(보통 60-70℃)함으로써 수행할 수 있다. 중간체 VI는, 중간체 II와 중간체 III의 전술한 반응과 유사한 조건을 사용하여 팔라듐 촉매 크로스 커플링함으로써 중간체 V와 중간체 III으로부터 제조할 수 있다. 이러한 접근법은, 실시예 62, 63 및 화학식 IV의 중간체의 제조를 위한 합성 루트 중 하나 이상을 제공하고, 이에 한정되는 것은 아니다.
다른 방법으로, 화학식 Io (또는 중간체 VI)의 화합물은 중간체 VIII를 중간체 IX로 N-아릴화(여기서, r1/R1은 피리디닐 또는 페닐임) 또는 N-알킬화 (여기서, r1/R1은 피페리디닐 또는 벤질임)함으로써 제조할 수 있다. N-아릴화는 구리 촉매 울만(Ullmann) 타입 반응을 사용하여 수행할 수 있다. NH 헤테로아릴과 아릴/헤테로아릴 할라이드 (클로라이드, 브로마이드, 또는 아이오다이드) 간의 울만 반응은, 적당한 구리 (I) 촉매/프로모터, 예컨대, CuI, Cu2O 또는 CuTC (코퍼 티오펜 카르복실레이트)의 존재하에, 리간드 없이, 또는 N,N-디메틸글리신, 프롤린 또는 디메틸사이클로헥산-1,2-디아민 (DMCHA) 등의 적절한 리간드와 함께, K2CO3 또는 Cs2CO3 등의 무기 염의 존재하에, DMSO, DMF 또는 DMA 등의 극성 유기 용매 중에서 몇시간 이상 (보통 3 내지 12시간) 가열 (보통 90-150℃)하면서 수행할 수 있다. 중간체 VIII는, 중간체 VI와 중간체 VII의 반응에 대하여 전술한 것과 유사한 조건을 사용하여 중간체 V를 히드라진 (또는 보호된 유도체)으로 고리화함으로써 제조할 수 있다. 이러한 대안적인 프로세스는 실시예 61과, 화학식 IV의 중간체의 제조를 위한 하나 이상의 합성 루트를 제공하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
다른 접근법으로, 화학식 Io의 화합물은, 표 1에 기재된 작용기 전환을 사용하여 중간체 IV (반응식 1에 따라 제조된 것)의 r1, r2, r3에 존재하는 특정 작용기를 추가로 엘라보레이션(elaboration)함으로써 얻을 수 있으며, 이에 따라 표에 기재된 실시예의 제조를 위한 하나 이상의 합성 루트를 제공하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
중간체 II 의 제조는 아래 반응식 2에서 서술한다.
[반응식 2]
중간체 II는 중간체 VI를 중간체 VII로 고리화하는 것에 대하여 반응식 1에 기재한 것과 유사한 조건을 사용하여, 중간체 V를 중간체 VII로 고리화함으로써 얻어진다.
또다른 접근법으로, 중간체 II는 중간체 II와 중간체 III의 N-아릴화반응/N-알킬화반응에 대하여 서술한 것과 유사하게, 중간체 X와 중간체 IX로부터 얻을 수도 있다. 중간체 X는 반응식 1에서 중간체 VI를 중간체 VII로 고리화하는 것과 유사한 방식으로, 히드라진(또는 이의 보호된 유도체)으로 중간체 V를 고리화함으로써 얻을 수 있다.
또 다른 접근법으로, 중간체 II는 일반 화학법에 따라, 일반적으로 수용되는 방법에 의해 r1 및/또는 r2 및/또는 r3기를 추가로 엘라보레이션함으로써 얻을 수도 있다. 다음 화학식에서, 특정한 중간체 II를 수득하기 위하여 사용될 수 있는 가장 흔한 전환법이 설명된다. 명확히 하기 위하여 추가로 약자들을 사용하여 표시하였다.
화학식 IIa의 중간체 (여기서, r1은 페닐이고 K는 -S(O)2NR4R5임)는 반응식 3에 기재된 바와 같이, 화학식 IIa' 또는 화학식 IIa''의 중간체를 추가로 엘라보레이션함으로써 얻을 수 있다.
[반응식 3]
중간체 IIa'는 클로로설폰산과 SO2Cl2를 보통 0 내지 5℃의 온도에서 몇시간 (보통 1시간 내지 3시간)동안 처리하여 중간체 설포닐 클로라이드를 생성하는 설포닐화 반응에 들어갈 수 있다. 설포닐 클로라이드는, DCM 또는 THF와 같은 유기 용매 중에서, 트리에틸아민 (TEA) 또는 피리딘과 같은 염기의 존재하에, 보통 실온에서 몇시간 (보통 1 내지 3시간) 동안, 대응하는 아민 H2N-(CH2)n-Z과 반응시킬 수 있다. 또는 달리, 중간체 IIa''는 보통 0 내지 5℃ 온도에서, DMF와 같은 유기 용매 중에서, SO2Cl2로 처리하고, 이에 이어 대응하는 아민 H2N-(CH2)n-Z 과량 (보통 10 내지 30 eq.)으로 처리함으로써 중간체 설포닐클로라이드를 생성하도록 활성화되면, 중간체 IIa를 생성할 수 있다.
반응식 4에 게시된 또 다른 접근법에서, 화학식 IIb의 중간체 (여기서, r2 은 H이고, r3은 -NH(CH2)nQ 또는 -O(CH2)nQ)임)는 중간체 IIb'를 각각의 아민 (H2N-(CH2)n-Q) 또는 알콜 중간체 (HO-(CH2)n-Q)로 친핵 치환함으로써, 염소를 전치(displacement)함으로써 얻을 수 있다. 상기 반응은 약 150℃의 온도에서 가열함으로써 고온으로 끓는 NMP 또는 DMA 등의 유기용매 중에서 시약을 처리하여 수행할 수 있다. r3이 -NH(CH2)nQ인 경우 중간체 IIb는, 1,4-디옥산 등의 유기 용매 중에서, Pd2(dba)3/Xantphos와 같은 적당한 촉매 시스템 또는 대안적인 적당한 Pd 급원/부흐발트 타입 포스핀 및 Cs2CO3 등의 염기의 존재하에, 최대 24시간 동안 약 100℃의 온도로 가열함으로써, 중간체 IIb' 및 H2N-(CH2)n-Q로부터 출발하여 Pd 촉매 N-아릴화함으로써 제조할 수도 있다. 일부 경우, 중간체 IIb의 r3기는 일반적으로 받아들여지는 방법, 예컨대, 산에서 에스테르 잔기를 수화시킨 다음에 아미드 커플링으로 아미드로 만드는 방법에 의하여 추가로 엘라보레이션할 수 있다.
[반응식 4]
반응식 5에 게시된 다른 접근법에서, 화학식 IIc 의 중간체 (r2는 -CH2CN임), 중간체 IId (r2는 -CH2OH임) 및 중간체 IIe (r2는 -CH2NR4R5임)를 중간체 IIc'로부터 2단계 프로세스로 제조할 수 있다. 첫번째 단계에서, 중간체 IIc'의 메틸기를 AIBN (아조비스이소부티로니트릴)과 같은 라디칼 개시제의 존재하에, 테트라클로로메탄과 같은 불활성 유기 용매의 존재하에, NBS (N-브로모숙신이미드)와 반응시켜 선택적으로 브롬화하여, 중간체 IIc''를 생성시킬 수 있다. 두번째 단계에서, 중간체 IIc''의 브롬을 해당하는 친핵체: 즉 시안화나트륨, 아세트산칼륨/물 및 아민 HNR6(CH2)n-Q과 반응시키는 브롬의 친핵 치환 반응을 통해, 중간체 IIc, IId 및 IIe를 생성할 수 있다.
[반응식 5]
반응식 6에 게시된 또다른 접근법에서, 화학식 IIg의 중간체 (r2는 -C(O)NR6-(CH2)n-Q임)는, 중간체 IIf를 대응하는 아민 HNR6-(CH2)n-Q으로 아미드 커플링하여 얻을 수도 있다. 아미드 커플링은 TEA, DIEA 또는 피리딘과 같은 유기 염기의 존재하에, HATU((1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥사이드 헥사플루오로포스페이트), HBTU (O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸 우로늄 헥사플루오로포스페이트) 또는 COMU ((1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄)과 같은 커플링제의 존재하에, DMF, DCM, 또는 THF 등의 유기 용매 중에서 아민과 산을 반응시킴으로써 수행할 수 있다.
[반응식 6]
중간체 IIf는 중간체 IIc'''로부터 2단계 프로세스로 얻을 수 있다. 첫번째 단계에서, 중간체 IIc'''는 약 100℃에서 가열함으로써 DMSO나 DMF와 같은 유기 수혼화성 용매와 물의 혼합물 중에서 가수분해되어 대응하는 알데하이드를 생성할 수 있다. 두 번째 단계에서, 이 알데하이드는 소듐 디하이드로젠포스페이트와 같은 무기 포스페이트염의 존재하에, THF와 같은 유기 용매와 물의 혼합물 중의 2-메틸-2-부텐과 같은 첨가제와 함께, 소듐 클로라이트와 같은 산화제를 사용하여, 대응하는 산으로 산화시킨다. 다른 방법으로, 중간체 IIf는, DMP (Dess-Martin periodinane)로 처리하여 알콜을 알데하이드로 산화시키는 것에 이은, 전술한 바와 같이 알데하이드를 산 IIf으로 산화시키는 것을 수반하는 2단계 산화 반응을 통해 얻을 수도 있다.
중간체 IIc'''도 동일한 방법으로 얻을 수 있고, 반응식 5에 제시된 중간체 IIc''의 합성이 수반된다.
[반응식 7]
반응식 7에 게시된 대안적인 접근법에서, 화학식 IIi의 중간체(r1은 페닐이고 K는 -S(CH2)n-Z임) 및 중간체 IIm (r은 페닐이고 K는 -S(O)2(CH2)n-Z임)은 중간체 IIh로부터 얻을 수도 있다. 중간체 IIi은 아래에 서술하는 3단계 프로세스를 통해 중간체 IIh로부터 얻을 수도 있다. 첫번째 단계에서, 중간체 IIh의 브롬은 C-S 팔라듐 촉매 커플링을 통해, 하이드로겐 설파이드의 적절한 보호된 급원 (HS-PG), 예컨대 HS-TIPS (트리이소프로필실란티올)을 도입함으로써 S-PG로 치환된다. C-S 커플링은, Pd2(dba)3 / Xantphose와 같은 적절한 촉매 시스템, 또는 다른 적절한 팔라듐 급원/포스핀 급원의 존재하에, 톨루엔 또는 DMA 등의 유기 용매 중에서, 소듐 하이드라이드 또는 소듐 tert부톡사이드와 같은 강염기 존재하에, 최대 100℃ 온도에서 아릴 브로마이드 IIh와 HS-PG를 반응시킴으로써 수행할 수 있다. TIPS기는 팔라듐 촉매 C-S 커플링 동안 부분적으로 탈보호되고/탈보호되거나 염산과 같은 산과의 혼합물을 처리함으로써 완전히 탈보호되어, 중간체 IIh의 해당 티오페놀 유도체가 생성된다. 세번째 단계에서, 중간체 IIh의 티오페놀은, 아세토니트릴 또는 아세톤 등의 유기 용매 중에서, 환류 온도로 가열하면서, K2CO3이나 Cs2CO3 등의 염기 및 첨가제로서 요오드화나트륨의 존재하에, 이들 중간체를 반응시킴으로써 Lg-(CH2)n-Z (Lg는 이탈기인데, 예컨대 Cl, Br 또는 토실기임)로 알킬화될 수 있다. n이 0이고 Z는 아릴 또는 헤테로아릴인 다른 세팅에서, 중간체 IIi는 프리하거나 또는 TIPS-보호된 해당 티오페놀을 전술한 팔라듐 촉매 C-S 커플링법으로, 아릴/헤테로아릴 할라이드와 반응시킴으로써 얻을 수도 있다. 일부 케이스에서, 중간체 IIi은, HS-(CH2)n-Z를 이용한 팔라듐 촉매 C-S 커플링법으로, 중간체 IIh로부터 바로 얻을 수도 있다.
중간체 IIm은, DCM과 같은 유기 용매 중에서 약 0℃ 온도에서 m-CPBA (메타 클로로퍼벤조산)이나 다른 적절한 퍼옥사이드와 같은 산화제를 사용하여 티오에테르 잔기를 설폰으로 산화시킴으로써, 해당 중간체 IIi로부터 얻을 수도 있다.
[반응식 8]
반응식 8에 서술한 또 다른 접근법에서, 중간체 IIo는, 중간체 IIf를 중간체 IIg로 전환하는 반응식 6에 기재된 것과 동일한 방식으로, 아민과 산을 반응시킴으로써, 아미드 커플링 방법으로 중간체 IIn으로부터 얻을 수도 있다. 중간체 IIn은 반응식 2에 게시된 것과 같이 얻을 수 있다. 대안적인 방법에서, 중간체 IIn (R6이 H임)은 tert-부탄올 등의 유기 용매 중에서 가열(100-120℃)함으로써, TEA나 DIPEA 등의 염기와 DPPA (디페닐 포스포릴 아미드)와 반응시킴으로써, N-Boc 보호 중간체 IIn (R6은 H임)를 생성하게 되는, 해당하는 카르복실산 중간체 IIf의 커티어스 재배열 (Curtious rearrangements)을 통해 얻을 수도 있다. N-Boc 보호 중간체 IIn (R6은 H임)은 절단되어 유리 아민을 생성하거나 또는 R6를 도입하는데 사용되고 절단되어 중간체 IIn을 생성할 수 있다.
다른 접근법에서, 중간체 X는 일반적으로 받아들여지는 방법으로 r2 및/또는 r3기를 추가로 엘라보레이션함으로써 얻어질 수 있다. 다음 반응식 (반응식 9와 10)에서, 중간체 Xa 및 Xb기를 얻는 데 사용될 수 있는 가장 흔한 전환법을 상세히 설명한다.
[반응식 9]
반응식 9에 게시된 바와 같이, 중간체 Xa는 중간체 XIa로부터 3단계 프로세스로 생성한다. 첫번째로, 합성 편의를 위해, 헤테로사이클릭 NH는 C-N 아릴화 전에 적절한 보호기로 보호할 필요가 있다. THP (테트라하이드로피라닐)이 적절한 보호기를 대표할 수 있고, 메탄설폰산 또는 p-톨루엔설폰산으로서 설폰산의 존재하에, DCM 또는 THF의 유기 용매 중에서, 환류 온도 또는 그보다 낮은 온도에서 디하이드로피란과 반응시킴으로써, 중간체 XIa 상에 도입할 수 있다. 두번째 단계에서, THP로 보호된 XIa의 C-N 아릴화 반응은, 구리 촉매 울만 반응이나 팔라듐 촉매 C-N 아릴화반응을 사용하여 수행할 수 있다. 구리 촉매 울만 타입 반응은, 중간체 VIII 및 중간체 IX의 반응에 대하여 반응식 1에 설명한 바와 같이 수행할 수 있다. 팔라듐 촉매 C-N 아릴화반응은 반응식 4에서 중간체 IIb'의 중간체 IIb로의 전환에 대하여 설명한 것과 유사하게 수행할 수 있다. 마지막 단계로, THP기의 탈보호화는 해당 중간체를, 트리에틸실란과 같은 스캐빈저(scavenger)와 함께, 또는 없이, 이소프로판올, 1,4-디옥산, DCM 또는 THF와 같은 유기 용매 중에서, 트리플루오로아세트산 또는 염산 등의 산으로 처리함으로써 수행할 수 있다.
[반응식 10]
중간체 Xb는 중간체 XIb'의 브롬을 화학식 HNR6(CH2)n-Q의 아민으로 친핵치환하는 단계와, 이어 PG를 탈보호화시키는 단계를 포함하는 2단계 프로세스로, 중간체 XIb'로부터 얻을 수 있다. 중간체 XIb'는 반응식 5에 서술하는 것과 유사하게, PG 삽입 및 브롬화를 포함하는 2단계 프로세스로, 중간체 XIb로부터 얻을 수 있다. 전술한 전환 도중 중간체 XIb의 NH를 보호하기 위하여 사용될 수 있는 적절한 보호기는 트리틸기이다. 트리틸기는, THF 또는 디옥산과 같은 유기 용매 중에서 소듐 하이드라이드와 같은 하이드라이드 존재하에, 트리틸 클로라이드와 기질을 반응시킴으로써 삽입할 수 있다. 트리틸기 제거는, 트리에틸실란 등의 스캐빈저와 함께, 또는 없이, DCM 또는 THF 등의 용매 중에서, 트리플루오로아세트산 등의 산으로 해당 기질을 처리함으로써 수행할 수 있다.
전술한 모든 반응식에 게시된 출발 중간체는 본 명세서 및/또는 해당하는 실시예 섹션에 이들의 제조 방법이 기재되어 있지 않으면, 시중에서 구입할 수 있거나, 또는 흔히 받아들여지는 방법을 사용하여 이 분야의 숙련자가 시판되는 시약으로부터 출발하여 쉽게 제조할 수 있는 것들이다.
일반적인 실시예 설명
화합물의 화학식명은 다음 소프트웨어 (Structure To Name Enterprise 10.0 Cambridge Software) 또는 이의 최신판을 참고하여 명명한다.
'크로마토그래피' 또는 '플래시 크로마토그래피'에 의한 정제라 함은, Biotage SP1, 또는 Interchim puriFlash 정제 시스템, 또는 정지상 (카트리지) 함유 프리팩드(pre-packed) 폴리프로필렌 컬럼을 사용하는 동등한 MPLC 시스템을 사용하는 정제를 말한다. 생성물이 Si 카트리지를 사용하여 정제되는 경우, 이는 평균 사이즈 15 μm의 구형 입자로 된 미결합 활성화 실리카를 함유하는 Interchim 프리팩드 폴리프로필렌 컬럼 (또는 이의 등가물)이나, 평균 사이즈 50 μm의 불규칙적인 입자로 된 비결합 활성화 실리카를 함유하는 Isolute® 프리팩드 폴리프로필렌 컬럼(또는 등가물)을 말한다. 'NH-실리카' 및 'C18-실리카'라는 말이 사용되는 경우, 이들은 각각 아미노프로필 체인 결합 실리카 및 옥타데실 카본 체인 (C18)-결합 실리카를 의미한다. 필요한 생성물을 함유하는 분획 (TLC 및/또는 LCMS 분석으로 동정)을 한 데 모으고 진공 농축하였다. SCX 카트리지가 사용된 곳에서, 'SCX 카트리지'라 함은, 말단이 캐핑되지 않은 프로필설폰산 작용화된 실리카 강양이온 교환 흡착제를 함유하는 Bond Elut® 프리팩드 폴리프로필렌 컬럼 (또는 등가물)을 말한다.
프리퍼레이티브 HPLC (preparative HPLC)-MDAP를 희망하는 생성물을 함유하는 분획 정제에 사용하는 경우 (MDAP-매스 디렉티드 자동 정제), 생성물 함유 분획을 모으고, 용매를 증발시켜 제거하거나 또는 동결건조시켜 제거하였다. MDAP를 사용하는 경우, 해당 방법은 실시예 기재를 참고하라.
NMR 방법
NMR 스펙트럼은 표준 Bruker 펄스 시퀸스를 이용하는 Bruker Avance III 600 (5 mm RT inverse probe head), Bruker DRX 500, Bruker Avance AV 400 (5 mm RT direct probehead) 또는 Bruker DPX 300 스펙트로미터에서 수득했다. 용매로 DMSO-d6 또는 CDCl3을 사용했고, 나중에 용매 잔여 피크가 사용되는 경우가 아니면, 내부 표준으로 테트라메틸실란을 사용했다. 모든 실험은 별도로 언급하지 않는 한, 298K에서 기록했다. 케미칼 쉬프트를 테트라메틸실란 대비 ppm 단위로 δ 값으로 기록한다. 커플링 상수 (J값)은 헤르츠 (Hz) 단위이고, 다음 약자를 사용하여 횟수를 기록한다: s=singlet(1회), d=doublet(2회), t=triplet(3회), q=quartet(4회), m=multiplet(다회), br=broad(광폭), nd=not determined(측정되지 않음).
LCMS 방법
방법 1
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 수중 포름산, 이동상 B: 0.1% (v/v) 아세토니트릴중 포름산;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU.
방법 2
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 10 mM 암모늄 비카보네이트 수용액 (암모니아로 pH 10까지 조절), 이동상 B: 아세토니트릴;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU.
방법 3
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 수중 포름산, 이동상 B: 0.1% (v/v) 아세토니트릴 중의 포름산.
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1500 AMU.
방법 4
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 10 mM 암모늄 비카보네이트 수용액 (암모니아로 pH 10까지 조절), 이동상 B: 아세토니트릴;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1500 AMU.
방법 5
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 물 중의 포름산, 이동상 B: 0.1% (v/v) 아세토니트릴 중의 포름산;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1500 AMU.
방법 6
SQD 매스 스펙트로미터와 커플링된 애쿼티 UPLC(Acquity UPLC coupled with SQD mass spectrometer); 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (50mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 10 mM 암모늄 비카보네이트 수용액 (암모니아로 pH 10까지 조절), 이동상 B: 아세토니트릴;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1500 AMU.
방법 7
AGILENT LC 1260 Infinity with SFC 및 Agilent 6540 UHD Accurate-Mass Q-TOF LC/MS; 컬럼: 애쿼티 BEH C18 (100mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 수중 포름산, 이동상 B: 0.1% (v/v) 아세토니트릴중 포름산;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1500 AMU.
방법 8
AGILENT LC 1260 Infinity with SFC 및 Agilent 6540 UHD Accurate-Mass Q-TOF LC/MS; 컬럼: 애쿼티 UPLC BEH C18 (100mm x 2.1mm i.d., 1.7μm), 이동상 A: 0.05 % (v/v) 암모니아 수용액, 이동상 B: 아세토니트릴;
컬럼 온도: 40℃; UV 검출: 210 nm 내지 350 nm; MS 컨디션: 이온화 모드: Positive and Negative Electrospray (ES+/ES-) 교대 스캔, 스캔 범위: 100 내지 1000 AMU.
방법 Prep 1
Agilent 1290 Infinity II 정제 시스템; 컬럼: Waters XBridge® (C18, 100 mm x 19 mm i.d., 5 μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 수중 암모니아, 이동상 B: 아세토니트릴;
방법 prep 2
Agilent 1290 Infinity II 정제 시스템; 컬럼: Waters XBridge® (C18, 100 mm x 19 mm i.d., 5 μm), 이동상 A: 0.1% (v/v) 수중 암모니아, 이동상 B: 아세토니트릴;
아래에 설명하는 절차에서, 출발 물질 일부는 단계의 이름위에 표시할 때 "중간체" 또는 "실시예" 번호로 확인한다. 이는 숙련된 화학자에게 도움이 되고자 제공하는 것이다. 어떤 절차와 "유사하다 또는 "동등하다"라는 용어가 사용될 때, 이 분야의 숙련자에게 이해되는 바와 같이, 이러한 절차가 예를 들어 반응 온도, 시약/용매 양, 반응 시간, 작업 또는 크로마토그래피 정제 조건 등에서 소소한 변화를 수반할 수 있음을 의미한다.
실시예에서 화합물의 입체이성질체를 설명하는 경우, 출발 물질의 입체 중심에서 분해된 절대 배열이 임의의 후속 반응 조건에 걸쳐 전체적으로 유지된다는 가정하에 지정되었다.
달리 명시되지 않는 한, 절대 배열 (R) 또는 (S)가 화합물 이름에 붙는 경우 ee%는 90% 이상으로 간주되어야 한다.
모든 용매 및 상업용 시약은 받은 그대로 사용했다. 출발 물질의 제조가 기술되어 있지 않은 경우, 이들은 상업적으로 입수가능하거나, 문헌에 공지되어 있거나, 표준 절차를 사용하여 숙련자에 의해 용이하게 수득 가능한 것들이다.
약자
AIBN = 아조비스이소부티로니트릴; Boc2O = 디-tert-부틸 디카보네이트; tBuXPhos = 2-디-tert-부틸포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐; aq. = 수용성(수용액); DABAL-Me3 = 비스(트리메틸알루미늄)-1,4-디아자비사이클로[2.2.2]옥탄 부가생성물(adduct); DAST = 디에틸아미노설퍼 트리플루오로라이드; DBU = 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]언덱-7-엔; DCC = 디사이클로헥실카르보디이민; DCE = 1,2-디클로로에탄; DCM = 디클로로메탄; DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민; DMAP = 4-디메틸아미노피리딘; DMCHDA = 트랜스-N,N'-디메틸사이클로헥산-1,2-디아민; DMF = N,N-디메틸포름아미드; DMP = 데스-마틴 페리오디난(Dess-Martin Periodinane); DMSO = 디메틸설폭사이드; DPPA = 디페닐 포스포릴 아자이드; EEDQ = 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디하이드로퀴놀린; EtOAc = 에틸 아세테이트; HATU=(1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트), HBTU=(2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; LCMS = 액체 크로마토그래피-매스 스펙트로미터; LiHMDS = 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드; mCPBA = 3-클로로퍼벤조산; MW = 마이크로웨이브; NBS = N-브로모숙신이미드; PE = 석유 에테르 ; 1H-NMR = 양성자 핵자기 공명; RM = 반응혼합물; Rt(Retention time) = 머무름 시간; RT = 실온; RuPhos Pd-G3 = (2-디사이클로헥실포스피노-2',6'-디-이소프로폭시-1,1'-비페닐)(2'-아미노-1,1'-비페닐-2-일)팔라듐(II) 메탄설포네이트; sat. = 포화; TEA = 트리에틸아민; TFA - 트리플루오로아세트산; THF = 테트라하이드로퓨란; Xphos-Pd-G3 = (2-디사이클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II) 메탄설포네이트
중간체 제조
중간체 1
2-브로모-4-(디플루오로메틸)-1-메톡시벤젠 (중간체 1)
무수 DCM (10 mL)중의 3-브로모-4-메톡시-벤즈알데하이드 (1.0 g, 4.7 mmol) 용액에 DAST (1.2 mL, 9.3 mmol)를 0℃에서 점적하고, 반응 혼합물을 실온으로 데운 다음 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액을 천천히 첨가하여 0℃로 급랭하였고, DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 상 분리기에 통과시키고 용매를 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-20% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 화합물을 얻었다 (797 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.14 min
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 7.77 (s, 1H), 7.57 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.96 (t, J=56.4 H7, 1H), 3.89 (s, 3H)
중간체 2
(2-브로모-4-클로로페닐)(디플루오로메틸)설판 (중간체 2)
2-브로모-4-클로로-벤젠티올 (100 mg, 0.447 mmol), 소듐 클로로디플루오로아세테이트 (157 mg, 1.03 mmol) 및 Cs2CO3 (204 mg, 0.626 mmol)를 DMF (1 mL)에 현탁시키고, 100℃에서 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 생성물을 EtOAc (2x15 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액(3x5mL), 물 (5 mL) 그리고 NaCl 포화 수용액(5 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고 감압하에 증발시켜, 희망하는 생성물 (160 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.37 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.69 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.58 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.32 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.85 (t, J=56.3 Hz, 1H)
중간체 3
2-브로모-4-클로로-1-사이클로프로폭시벤젠 (중간체 3)
N-브로모숙신이미드 (52.8 mg, 0.3 mmol)를 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로판-2-올 (2.0 mL) 중의 1-클로로-4-(사이클로프로폭시)벤젠 (40.0 ㎕, 0.3 mmol)에 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액으로 급랭시키고, EtOAc(4회)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 상분리기에 통과시키고, 진공 농축시켰다. 조생성물을 Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-20% EtOAc로 용리)로 정제하였더니, 표제 생성물 (52 mg)이 생성되었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.38 min.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 7.67 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.45 (dd, J=8.7, 2.3. Hz, 1H), 7.39 (dd, J=8.8 Hz, 1H), 3.94-3.97 (m, 1H), 0-80-08.7 (m, 2H), 0.68-0.71 (m, 2H).
중간체 4
1 단 계
4,6-디클로로- N -메톡시- N -메틸니코틴아미드 (중간체 4-1)
5℃로 냉각된 무수 DCM (225 mL) 중의 4,6-디클로로피리딘-3-카르복실산 (15.0 g, 78 mmol) 현탁액에, DMF (4.5 mL, 59 mmol)를 첨가한 다음, 옥살릴 클로라이드 (6.6 mL, 78 mmol)를 점적했다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 교반한 다음, 용매를 감압하에 제거하고 잔사를 톨루엔 (20 mL)으로 공비시켰다(azeotroped). 잔사를 DCM (40 mL) 중에서 취하고, DCM (100 mL) 중의 N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (11 g, 117 mmol)와 TEA (10.8 mL, 78 mmol) 혼합물에 5℃에서 점적하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, NaHCO3 포화 수용액(70 mL)으로 급랭시키고, 유기층을 물 (3x25 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 용매를 제거하여, 표제 화합물 (16.1 g)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 합성 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.82 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.34 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.36 (s, 3H)
2 단계
1-(4,6-디클로로피리딘-3-일)에탄-1-온 (중간체 4)
0-5℃에서 중간체 4-1 (25 g, 105 mmol) 및 THF (150 mL)의 혼합물에, MeMgBr (디에틸 에테르 중의 3.0 M, 79 mL, 238 mmol)을 1시간에 걸쳐 점적하고, 반응 혼합물을 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 NH4Cl 포화 수용액 (100 mL)으로 급랭시키고, 10분간 교반하였다. 수성층을 EtOAc (100 mL)로 추출하고, 물 (100 mL), NaCl 포화 수용액 (100 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 벌브-투-벌브 증류 (bulb-to-bulb distillation (91℃/2x10-1 mbar))로 정제하여, 희망하는 생성물을 얻었다(15.8 g).
LCMS (방법 2): Rt = 0.89 min
1H-NMR (600 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.59 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 2.66 (s, 3H)
중간체 5
1-(4-클로로-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)피리딘-3-일)에탄-1-온(중간체 5)
아르곤 하에서 중간체 4 (5.00 g, 26.3 mmol)를 1,2-디메톡시에탄 (35 mL)에 용해시키고, Pd(PPh3)4 (608 mg, 0.526 mmol)를 첨가하였다. 10분 후, 2-프로판올 (35 mL) 중의 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (6.45 mg, 26.3 mmol)과 2M K2CO3 수용액 (23.7 mL, 47.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 95℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (120 mL)로 희석시켰고, 생성된 침전물을 여과시켜 모으고, 아세토니트릴 (2x50 mL)로 세척하고, 45℃에서 1시간 동안 건조시켰더니, 표제 화합물 (5g)이 얻어졌고, 이를 추가로 정제 하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.89 min, ES+ m/z 272.9/274.9 [M+H]+
중간체 6
3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 6)
NMP (10 mL) 중의 중간체 5 (500 mg, 1.83 mmol)와 히드라진 모노하이드로클로라이드 (126 mg, 1.83 mmol)를 100℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액으로 급랭시키고, EtOAc (4x15 mL)로 추출하였다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액 (5x20 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 조생성물을 DCM으로 분쇄(triturated)하여, 희망하는 생성물(167 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.64 min, ES+ m/z 251.0 [M+H]+
중간체 7a
1 단계
4-브로모-1-(디플루오로메톡시)-2-니트로벤젠 (중간체 7a-1)
4-브로모-2-니트로-페놀 (22 g, 14 mmol), 클로로디플루오로아세트산 소듐 염 (35 g, 232 mmol) 및 Cs2CO3 (46 g, 141 mmol)을 DMF/물 (250/25 mL)에 현탁시키고, 100℃에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공 농축시키고, 물 (200 mL)로 희석시키고, EtOAc (2x200 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액(3dx150 mL), NaCl 포화 수용액(150 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 증발시켜 표제 생성물 (25.9 g)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.14 min
1H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.04 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.71(dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.28 (dt, J=8.8, 1.0 Hz, 1H), 6.58 (t, J=73 Hz, 1H)
2 단계
5-브로모-2-(디플루오로메톡시)아닐린 (중간체 7a)
중간체 7a-1 (25.9 g, 96.6 mmol)를 아세트산 (200 mL)에 용해시킨 다음, 철(8.10 g, 145 mmol)을 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 DCM (700 mL)으로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액(2x800 mL)으로 세척했다. 유기층을 규조토 층으로 여과하고, NaCl 포화 수용액 (400 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 조생성물을 DCM (400 mL)에 용해시키고, 10 % w/w Na2CO3 수용액(3x200 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 증류 (60℃ / 5.9x10-2 mbar)시켜 정제하였더니, 표제 생성물이 생성되었다 (15.5 g).
LCMS (방법 2): Rt = 1.05 min
1H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 6.92-6.85 (m, 2H), 6.79 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 6.41 (t, J=73.0 Hz, 1H), 3.97 (br s, 2H)
중간체 7b
1 단계
(4-(디플루오로메톡시)-3-니트로페닐)(메틸)설판 (중간체 7b-1)
드라이 톨루엔 (45 mL) 중의 중간체 7a-1 (2.81 g, 11.0 mmol)에, 소듐 티오메톡사이드 (2.06 g, 29 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 탈기시킨 뒤, Xantphos Pd-G3 (498 mg, 0.53 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 85℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, NaCl 포화 수용액 (2x100 mL) 및 물(3x100 mL)로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압하에 용매를 제거하고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (PE 중의 0-10% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물을 얻었다 (471 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.15 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.70 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.42 (dd, J=8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.29 (dt, J=8.7, 1.0 Hz, 1H), 6.56 (t, J=73.1 Hz, 1H), 2.52 (s, 1H)
2 단계
2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)아닐린 (중간체 7b)
중간체 7b는 중간체 7b-1으로부터 출발하여 중간체 7a (2 단계)와 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.00 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 6.93 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.66 (d, J=2.3 Hz, 1H), 6.58 (dd, J=8.6, 2.3 Hz, 1H), 6.40 (t, J=74.1 Hz, 1H), 3.84 (bs, 2H), 2.42 (s, 1H)
중간체 8a
(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)히드라진 하이드로클로라이드 (중간체 8a)
0℃에서 진한 HCl (37% w/w 수용액, 45 mL) 용액에, 5-클로로-2-(디플루오로메톡시)아닐린 (12.8 g, 66.1 mmol)을 격렬하게 교반하며 점적하고 (온도 <5℃ 유지), 이어 물 (45 mL) 중의 NaNO2 (5.93 g, 86.0 mmol) 용액을 점적하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 90분간 교반한 다음, 온도 <5℃ 유지하며, 진한 HCl (37% w/w 수용액, 45 mL) 중의 틴 (II) 클로라이드 (37.6 g, 198 mmol) 용액을 점적하였다. 반응 혼합물을 밤새 4℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 NaCl 포화 수용액(100 mL)으로 희석하고, 20% w/w NaOH 수용액을 사용하여 pH 10으로 조절하고, 규조토 패드로 여과시킨 다음, 물 (2x100 mL)과 DCM (6x100 mL)으로 세척하였다. 유기층을 분리하고, 물(200 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 용매를 제거하였더니, 조생성물 첫번째 수확물이 얻어졌다. 조생성물의 두번째 수확물은 DCM으로 규조토 패드를 추가로 세척함으로써 얻어졌다. 합쳐진 수확물들을 1,4-디옥산 (100 mL)에 용해시키고, 실온에서 1,4-디옥산 (9.64 mL, 38.53 mmol) 중의 4N HCl로 30분간 처리하였더니, 침전물이 형성되었는데 이를 여과하고, 1,4-디옥산으로 세척하고 건조시켰더니, 표제 화합물 (13 g)이 생성되었고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.95 min, ES- m/z 207.0/209.0 [M-H]-
중간체 8b 내지 8e의 제조
다음 중간체들은 표시된 출발 물질로부터, 중간체 8a와 유사한 방식으로 제조하였다.
중간체 9
1 단계
3-브로모-4-메톡시벤젠설폰산(중간체 9-1)
1,4-디옥산 (6 mL) 중의 3-브로모-4-메톡시-벤젠설포닐 클로라이드(3 g, 10.5 mmol) 혼합물에, 물 (6 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 증발시켜, 표제 생성물 (2.8g)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.52 min, ES- m/z 264.7/266.7[M-H]-
2 단계
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-메톡시벤젠설폰산(중간체 9)
아르곤 하에서, DMSO (15 mL) 중의 염화구리(I) (1.13 g, 6.0 mmol), N,N-디메틸글리신 (1.23 g, 12 mmol), K2CO3 (1.65 g, 12 mmol), 중간체 9-1 (2.8 g, 10 mmol) 및 6-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (1 g, 6 mmol)을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 1M HCl 수용액(15 mL)으로 희석하고, 용해되지 않은 고체를 제거했다. 수성 추출물을 DCM (3x15 mL)으로 세척하고, 동결건조시켰다. 동결건조된 잔사를 C18 실리카 상의 플래시 크로마토그래피(물 중의 5-99% 아세토니트릴 그래디언트 용리, +0.1% v/v HCOOH)로 정제하여, 목적하는 생성물 (480 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.63 min, ES+ m/z 353.9/355.8 [M+H]+
중간체 10
1 단계
6-클로로-1-(2-메톡시페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 10-1)
아르곤 하에서, DMSO (20 mL) 중의 염화구리(I) (511 mg, 2.69 mmol), N,N-디메틸글리신 (554 mg, 5.37 mmol), K2CO3 (1.48 mg, 10.7 mmol), 1-브로모-2-메톡시-벤젠 (2 mL, 16.1 mmol) 및 6-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (900 mg, 5.37 mmol)을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 15% w/w 암모니아 수용액 (3x100 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (5x50 mL)으로 세척했다. 합쳐진 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-15% EtOAc로 용리)로 정제하여, 희망 화합물 (950 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.09 min, ES+ m/z 273.9/275.7[M+H]+
2 단계
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-메톡시벤젠설포닐 클로라이드(중간체 10)
중간체 10-1 (500 mg, 1.8 mmol)을 얼음수조에서 냉각시키고, 이어 ClSO3H (2.8 mL, 42 mmol)를 서서히 아르곤 하에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0-5℃에서 1시간 동안 교반하고, SOCl2 (0.56 mL, 7.6 mmol)를 첨가한 뒤 1시간 더 교반하였다. 반응 혼합물을 물/얼음 혼합물에서 급랭시킨 뒤, 생성된 침전물을 여과시켜 모으고, 이를 얼음 냉수로 세척한 뒤, 건조시켜, 표제 화합물 (620 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.18 min, ES+ m/z 371.4/373.6/375.5 [M+H]+.
중간체 11a
3-((3-브로모-4-메톡시페닐)설포닐)디하이드로퓨란-2(3 H )-온 (중간체 11a)
물 (3.75 mL) 중의 3-브로모-4-메톡시-벤젠설포닐 클로라이드(500 mg, 1.75 mmol), Na2SO3 (441 mg, 3.50 mmol) 및 NaHCO3 (294 mg, 3.50 mmol)를 실온에서 1.5시간 교반하였다. 테트라부틸암모늄 브로마이드 (35.0 mg, 0.109 mmol) 및 3-브로모테트라하이드로퓨란-2-온 (321 ㎕, 3.50 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음, DCM과 물 사이에 분배하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔사를 실리카 상의 크로마토그래피 (EtOAc/헥산 (1:1)로 용리)하였더니, 표제 화합물 (160 mg)이 얻어졌다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.91 min, ES- m/z=333.1/335.1 [M-H]-
중간체 11b
2-브로모-1-메톡시-4-(프로필설포닐)벤젠 (중간체 11b)
3-브로모-4-메톡시-벤젠설포닐 클로라이드 및 1-아이오도프로판으로부터 출발하여, 중간체 11a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.03 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.05 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.81 (dd, J=8.5, 2.3 Hz, 1H), 6.99 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.00-3.05 (m, 2H), 1.66-1.79 (m, 2H), 0.98 (t, J=7.1 Hz, 3H)
중간체 11c
2-브로모-1-메톡시-4-(메틸설포닐)벤젠 (중간체 11c)
3-브로모-4-메톡시-벤젠설포닐 클로라이드 및 아이오도메탄으로부터 출발하여, 중간체 11a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.86 min
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 8.07 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.90 (dd, J=8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.33 (d, J=8.7 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.21 (s, 3H)
중간체 12
4-브로모-1-(디플루오로메톡시)-2-아이오도벤젠 (중간체 12)
DMF (25 mL) 중의 4-브로모-2-아이오도-페놀 (5.00 g, 16.7 mmol), 소듐 클로로디플루오로아세테이트 (5.87 g, 38.5 mmol) 및 Cs2CO3 (7.63 mg, 23.4 mmol)를 100℃에서 2시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(250 mL)에 붓고 여과했다. 여과물을 EtOAc (2x50 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액 (3x40mL), 물 (40 mL), NaCl 포화 수용액 (40 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 용매를 증발시켰더니, 희망하는 생성물 (4.5g)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.31 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.96 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.44 (dd, J=8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J=8.7 Hz, 1H), 6.48 (t, J=73.0 Hz, 1H)
중간체 13a
1 단계
4-브로모-2-플루오로-5-메톡시페놀 (중간체 13a-1)
헥사플루오로-이소프로판올 (11.3 mL) 중의 2-플루오로-5-메톡시-페놀 (400 mg, 2.81 mmol) 혼합물에, NBS (501 mg, 2.81 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액으로 급랭시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 NaHCO3 포화 수용액 (3x15 mL), NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰더니, 표제 화합물 (28 mg)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 합성 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.92 min, ES- 219.0/221.1 [M-H]-
2 단계
1-브로모-5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)벤젠 (중간체 13a))
0℃에서 DMF (6.3 mL) 중의 중간체 13a-1 (724 mg, 3.28 mmol) 혼합물에, PMB-Cl (577 ㎕, 4.26 mmol) 및 무수 K2CO3 (1.36 g, 9.83 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 교반하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (25 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액(3x15 mL)과 NaCl 포화 수용액(15 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-10% EtoAc로 용리)로 정제하였더니, 표제 생성물이 생성되었다 (567 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.35 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.32 (m, 2H), 7.25 (d, J=10.2 Hz, 1H), 6.89 (m, 2H), 6.56 (d, J=7.1 Hz, 1H), 5.06 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.78 (s, 3H)
중간체 13b-c
다음 중간체들은, 표시된 출발 물질로부터, 중간체 13a와 유사한 방식으로 제조하였다.
중간체 14
1-브로모-2-메톡시-4-(메톡시메톡시)벤젠 (중간체 14) (중간체 14)
0℃에서 DMF (400 ㎕) 중의 4-브로모-3-메톡시페놀 (160 mg, 0.67 mmol) 용액을 DMF (1.2 mL) 중의 NaH (60% 미네랄 오일 분산액, 48.2 mg, 1.21 mmol) 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분간 교반한 다음, 클로로(메톡시) 메탄 (91.0 ㎕, 1.14 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음, 물(10 mL)로 급랭시키고, 디에틸 에테르 (10 mL)로 추출하였다. 유기층을 NaCl 포화 수용액(2x10 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-50% EtOAc로 용리)하여, 표제 생성물을 얻었다 (202 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.14 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ: 7.38 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.60 (d, J=2.7 Hz, 1H), 6.54 (dd, J=8.7, 2.7 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.46 (s, 1H).
중간체 15
6-클로로-3-아이오도-1-(테트라하이드로-2 H -피란-2-일)-1 H -피라졸로[4,3- c 피리딘 (중간체 15)
디하이드로피란 (3.4 mL, 37.4 mmol) 및 메탄설폰산(0.16 mL, 2.5 mmol)을 DCM (33 mL) 및 THF (16.6 mL) 중의 6-클로로-3-아이오도-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (3.48 g, 11.1 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반했다. 용매를 증발시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-100% EtOAc로 용리)하여, 표제 생성물을 얻었다 (1.48 g).
LCMS (방법 2): Rt = 1.18 min, ES+ m/z 364.0/366.0 [M+H]+
중간체 16
6-클로로-3-메틸-1-트리틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 16)
드라이 THF (50.0 mL) 중의 6-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (2.50 g, 14.9 mmol)에, 소듐 하이드라이드　(60.0 % 미네랄 오일 중의 분산액, 1.00 g, 25.0 mmol)를 나누어 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 교반한 다음, 트리틸 클로라이드(5.10 g, 18.3 mmol)를 나누어 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반했다. 반응 혼합물을 0 내지 5℃에서 NH4Cl 포화 수용액으로 급랭시키고, THF를 감압 하에 제거했다. 남아 있는 혼합물을 EtOAc (3x)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 농축시키고, 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, EtOAc로 세척하고, 건조시켜 표제 생성물을 얻었다 (3.77 g).
LCMS (방법 2): Rt = 1.51, ES+ m/z 410.2/421.1 [M+H]+
중간체 17a
1 단계
N1-(6-클로로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N2,N2-디메틸에탄-1,2-디아민 (중간체 17a-1)
L-프롤린 (85.5 mg, 0.74 mmol) 및 염화구리(I) (94.3 mg, 0.5 mmol)를 DMF (8.0 mL) 중의 중간체 15 (900 mg, 2.48 mmol), N',N'-디메틸에탄-1,2-디아민 (1.23 mL, 11.3 mmol), K2CO3 (2.05 g, 14.9 mmol) 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 아르곤 분위기하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 물 (80 mL)로 희석하고, EtOAc (3x10 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액으로 세척하고, 상분리기에 통과시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100% DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5)로 용리)로 정제하였더니, 표제 화합물이 생성되었다 (630 mg).
LCMS (방법 1): Rt = 0.62 min, ES+ m/z 323.9/325.9 [M+H]+
2 단계
N 1-(6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)- N 2, N 2-디메틸에탄-1,2-디아민 (중간체 17a)
트리에틸실란 (932 ㎕, 5.84 mmol)을 DCM (9 mL) /TFA (2.29 mL, 29.9 mmol) 중의 중간체 17a-1 (630 mg, 1.95 mmol)에 점적하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반한 다음, DCM으로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액(10 mL)으로 추출했다. 수성층 (pH 9.6으로 조정)을 EtOAc (3x)로 더 추출하는데 이어, DCM/iPrOH (1:1)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 상 분리기에 통과시키고, 감압 증발시켰더니, 표제 생성물 (396 mg)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.39 min, ES+ m/z 240.0/242.0 [M+H]+
중간체 17b 내지 17d의 제조
다음 중간체들은, 1 단계에서 N',N'-디메틸에탄-1,2-디아민을 대체하는 표시된 출발 물질로부터, 중간체 17a와 유사한 방식으로 제조할 수 있다.
중간체 17e
1 단계
1-(4-(6-클로로-1-(테트라하이드로-2 H -피란-2-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 -3-일)피페라진-1-일)에탄-1-온 (중간체 17e-1)
1,4-디옥산 (2.7 mL) 중의 중간체 15 (150 mg, 0.41 mmol), 1-피페라진-1-일에탄온 (63.5 mg, 0.495 mmol), Xanthphos (23.9 mg, 0.04 mmol), Pd2(dba)3 (11.9 mg, 0.02 mmol), Cs2CO3 (269 mg, 0.83 mmol)를 질소 분위기 하에서 16시간 동안 90℃에서 가열하였다. 실온으로 냉각하고, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc (3x10 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl (10 mL) 포화 수용액으로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-50% DCM/MeOH (20:1)로 용리)로 정제하였더니, 표제 생성물이 얻어졌다 (105.3 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 0.94 min, ES+ m/z 364.2/366.2 [M+H]+
2 단계
1-(4-(6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)피페라진-1-일)에탄-1-온 (중간체 17e)
HCl (1,4-디옥산 중의 4M, 3.7 mL, 14.9 mmol)을 이소프로판올 (3.7 mL) 중의 중간체 17e-1 (140 mg, 0.331 mmol) 혼합물에 점적하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 교반한 다음, 물 (pH를 8로 조정한 것)과 DCM (30 mL) 사이에 분배하였다. 수성층을 DCM (2x15 mL)으로 추가로 추출하고, 합쳐진 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 증발시켰다. 잔사를 4 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-50% DCM/MeOH (10:1)로 용리)로 정제하였더니, 표제 화합물이 얻어졌다 (65.9 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 0.61 min, ES+ m/z 280.1/282.1 [M+H]+
중간체 17f
1 단계
(1-(6-클로로-1-(테트라하이드로-2H-피란-2-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)아제티딘-3-일)메탄올 (중간체 17f-1)
중간체 15와 아제티딘-3-일메탄올 하이드로클로라이드로부터 출발하여, 중간체 17e-1과 유사한 방식으로 표제 화합물을 수득했다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.84 min, ES+ m/z 323.1 /325.1 [M+H]+
2 단계
(1-(6-클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)아제티딘-3-일)메탄올 (중간체 17f-2)
중간체 17f-1으로부터 출발하여, 중간체 17a(2 단계)와 유사한 방식으로 표제 생성물을 수득했다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.53 min, ES+ m/z 239.1 /240.1 [M+H]+
중간체 18a
6-클로로-1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 18a)
DMSO (3 mL) 중의 염화구리(I) (170 mg, 0.89 mmol), N,N-디메틸글리신 (185 mg, 1.79 mmol), K2CO3 (495 mg, 3.58 mmol), 2-브로모-4-플루오로-1-메톡시-벤젠 (697 ㎕, 5.4 mmol) 및 6-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (300 mg, 1.8 mmol)을 아르곤 분위기 하에서 밤새 100℃로 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고 15% 암모니아 수용액 (3x15 mL) 및 NaCl (10 mL) 포화 수용액으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-40% EtOAc로 용리)로 정제하였더니, 희망하는 생성물 (380 mg)이 생성되었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.10 min, ES+ m/z 292.0/293.9 [M+H]+
중간체 18b 내지 18y의 제조
다음 중간체들은, 표시된 출발 물질로부터, 중간체 18a와 유사한 방식으로 제조하였다. 염기, 용매, 온도, 반응시간, 리간드 및/또는 구리에 대해 소소한 변형이 있는 경우, 이들은 괄호 속에 상세히 기재해 두었다.
중간체 18z
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 18z)
중간체 4 (500 mg, 2.6 mmol), 중간체 8a (680 mg, 2.8 mmol) 및 NMP (3 mL)를 60℃에서 1시간, 그리고 120℃에서 5시간 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (20 mL)에 붓고 10분간 교반했다. 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, 물로 세척한 뒤, Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-24 % EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (242 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.25 min, ES+ m/z 344.1/346.1/348.1 [M+H]+
플래시 크로마토그래피 정제로부터, 두번째 순수 생성물을 수득했다. LC-MS 결과, 중간체 18z의 des-메틸 구조로 확인되었고, 이를 중간체 18aa로 명명했다.
4-클로로-2-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페놀 (중간체 18aa)
LCMS (방법 2): Rt = 0.65 min, ES+ m/z 294.1/296.1/298.1 [M+H]+
중간체 18ab
6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 18ab)
NMP (2 mL) 중의 중간체 4 (180 mg, 0.95 mmol) 및 중간체 8d (243 mg, 0.95 mmol)를 실온에서 밤새 교반한 다음, 170℃에서 마이크로웨이브를 1시간 동안 조사 하며 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(15 mL)로 희석하고, EtOAc (2x10 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 물 (5x15 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 진공 제거했다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-8% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물을 얻었다(144 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.26 min, ES+ m/z 356.2/358.1 [M+H]+
중간체 18ac
1 단계
4-클로로-2-(4,6-디클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페놀 (중간체 18ac-1)
NMP (12 mL) 중의 2,4,6-트리클로로피리딘-3-카르브알데하이드 (2 g, 9.5 mmol) 및 중간체 8e(1.99 g, 9.0 mmol)를 실온에서 30분간 교반한 다음, 150℃에서 7.5시간 동안 마이크로웨이브 조사하며 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL)와 물 (200 mL) 사이에 분배하고, 수성층은 EtOAc (150 mL)로 추가로 더 추출했다. 합쳐진 유기층을 물 (150 mL), NaCl 포화 수용액 (150 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰더니, 표제 화합물 (2.6g)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 그대로 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.26 min, ES- m/z 312.0/314.0/316.0 [M-H]-
2 단계
4,6-디클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 18ac)
K2CO3 (2.28 g, 17 mmol) 및 아이오도메탄 (772 ㎕, 12 mmol)을 DMF (6 mL) 중의 중간체 18ac-1 (2.6 g, 8.3 mmol) 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 거의 2시간 동안 교반하고, EtOAc (20 mL)로 희석하고 NaHCO3 포화 수용액(2x20 mL)으로 세척했다. 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-50% 사이클로헥산: DCM (3:1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물을 얻었다 (167 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.38 min
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.30 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.44 (dd, J=9.3, 2.3 Hz, 1H), 7.09 (d, J=0.9 Hz. 1H), 7.02-7.06 (m, 1H), 3.81 (s, 3H).
중간체 18ad
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-메톡시- N -메틸벤젠설폰아미드 (중간체 18ad)
드라이 DMF (0.5 mL) 중의 중간체 9 (70 mg, 0.20 mmol)의 냉각시킨 혼합물 (얼음 수조)에, SOCl2 (58 ㎕, 0.79 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0 내지 5℃에서 30분간 교반한 다음, 메틸아민(THF중의 2.0 M, 2.0 mL, 4.0 mmol)을 점적하였다. 반응 혼합물을 추가로 10분 더 교반한 다음, EtOAc (15 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x10 mL) 및 NaCl 포화 수용액(10 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-40% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물을 얻었다 (40 mg).
LCMS (방법 1): Rt = 0.91 min, ES+ m/z 367.0/369.0 [M+H]+.
중간체 18ae
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)- N -(2-하이드록시에틸)-4-메톡시벤젠설폰아미드 (중간체 18ae)
중간체 9, 에탄올아민 및 TEA의 1 당량 (equivalent)으로부터 출발하여, 중간체 18ad와 유사한 방식으로 표제 생성물을 제조했다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.81 min, ES+ m/z 397.0/398.9 [M+H]+.
중간체 18af
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-메톡시- N -(3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필)벤젠설폰아미드 (중간체 18af)
중간체 10 (50 mg, 0.13 mmol) 및 TEA (56 ㎕, 0.4 mmol)를 드라이 DCM (1 mL) 중의 3-(4-메틸피페라진-1-일)프로판-1-아민 (22 ㎕, 0.13 mmol) 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고 NaHCO3 포화 수용액 (3x5 mL) 및 NaCl 포화 수용액(5 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-90 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물(45 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.86 min, ES+ m/z 493.1/495.0 [M+H]+
중간체 18ag 내지 18ai의 제조
다음의 중간체들은 표시된 출발 물질로부터, 중간체 18af와 유사한 방식으로 제조하였다. 염기, 용매, 및/또는 온도에 소소한 변화가 있는 경우, 이들은 괄호 안에 자세히 표시해 두었다.
중간체 18aj
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)- N,N -디메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-아민 (중간체 18aj)
MeOH (2.8 mL)/THF (2 mL) 중의 중간체 18r (46 mg, 0.14 mmol) 혼합물에, 포름알데하이드 수용액 (37%, 53 ㎕, 0.71 mmol), 아세트산 (4 ㎕, 0.07 mmol) 및 Na(CN)BH3 (18 mg, 0.28)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. Na(CN)BH3, 포름알데하이드 및 아세트산의 1 당량을 첨가하고, 40℃에서 6시간 더 교반을 진행했다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc로 추출했다. 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0-10% MeOH로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (42.6 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.26 min, ES+ m/z 337.1/339.1 [M+H]+
중간체 18ak
1 단계
N 1-(1-(5-브로모-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N 3, N 3-디메틸프로판-1,3-디아민 (중간체 18ak-1)
표제 화합물은, 중간체 17b 및 중간체 12로부터 출발하여, 중간체 18a와 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.34, ES+ m/z 474.1/476.1/478.1 [M+H]+
2 단계
N 1-(6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N 3, N 3-디메틸프로판-1,3-디아민 (중간체 18ak)
중간체 18ak-1 (43 mg, 0.09 mmol), 소듐 티오메톡사이드(19 mg, 0.27 mmol), Pd2(dba)3 (7.8 mg, 8.6 μmol), Xantphos (10 mg, 18 μmol) 및 탈기 톨루엔 (1 mL)을 질소 하에 80℃에서 교반하였다. 3시간 후, Pd2(dba)3 (7.8 mg) 및Xantphos (10 mg)의 두번째 당량을 첨가하고, 80℃에서 3시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 형성된 침전물을 여과시켰다. 여과된 물질을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, 포화 NaHCO3 (10 mL) 및 NaCl 포화 수용액(10 mL)으로 세척했다. 유기층을 감압하에 증발시키고, 잔사를 DCM 중의 0-100 %, DCM/MeOH/NH4OH (90:5:0.5)로 용리하는 4g Si 카트리지 상에서 정제하여, 표제 생성물을 얻었다 (27 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.38, ES+ m/z 442.2/444.2 [M+H]+
중간체 18al
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-3-(피페라진-1-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (중간체 18al)
메탄올 (1.7 mL) 중의 중간체 18s (35 mg, 0.071 mmol) 현탁액에, HCl (1,4-디옥산 중의 4.0M, 1.7 mL, 6.8 mmol)을 점적하고, 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 물과 DCM (30 mL) 간에 분배하고, 수성층 (pH를 10.5로 조정한 후)을 DCM (2x15 mL)으로 더 추출했다. 합쳐진 유기층을 MgSO4 상에서 건조하고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-80% DCM/MeOH (10:1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (6.6mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.09, ES+ m/z 378.2/380.2 [M+H]+
중간체 18am
N -(6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)아세트아미드 (중간체 18am)
중간체 18l (35.0 mg, 0.113 mmol)을 무수 아세트산(1 mL)에 용해시키고 실온에서 4시간 교반했다. 반응 혼합물을 얼음 수조 (10 mL)에 붓고, pH를 NaHCO3 포화 수용액을 사용하여 7로 조정하고, EtOAc로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액 (2x3 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(EtOAc/MeOH (9:1)로 용리)로 정제하여, 목적하는 생성물 (29 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.01, ES+ m/z 351.0/353.0 [M+H]+
중간체 19
4-(6-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-3-메톡시페놀 (중간체 19)
MeOH (0.25 mL) 중의 중간체 18x (10.0 mg, 30 μmol) 용액에, 실온에서 2M HCl 수용액(127 ㎕, 255 μmol)을 첨가하고, 이 반응물을 1시간 동안 60℃에서 교반했다. 두 개의 병렬적인 반응 혼합물을 동일한 규모로 만들어, 실온으로 냉각시키고 NH4Cl 포화 수용액 (2 mL)으로 희석하고 30분간 교반한 다음, DCM (4x5 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 상분리기에 통과시키고, 감압하에 용매를 제거하여, 표제 생성물 (10 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 합성 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.63, ES+ m/z 290.1/292.1 [M+H]+
중간체 20
3-(브로모메틸)-6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (중간체 20)
NBS (2.06 g, 12 mmol) 및 AIBN (317 mg, 1.9 mmol)을 테트라클로로메탄 (45 mL) 중의 중간체 18z (3.2 g, 9.65 mmol) 혼합물에 첨가하고, 3시간 동안 질소 하에 환류시켰다. NBS (2.06 g, 12 mmol) 및 AIBN (317 mg, 1.9 mmol) 두번째 당량을 첨가하고, 밤새 교반을 진행했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 형성된 고체를 여과해내고, 테트라클로로메탄으로 세척했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액(80 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-100% DCM으로 용리)로 정제하여, 표제 화합물을 얻었다 (550 mg).
LCMS (방법 2): Rt = 1.35, ES+ m/z 422.0/424.0/426.0 [M+H]+
플래시 크로마토그래피 정제로부터, 두번째 순수한 생성물을 수득했다. LC-MS 결과, 중간체 18z의 디브로모유도체의 구조인 것으로 확인되었고, 이를 중간체 21 로 명명했다.
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-(디브로모메틸)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘 (중간체 21)
LCMS (방법 2): Rt = 1.47, ES+ 이온 클러스터, 메이저 피크 m/z 501.8 및 503.8 [M+H]+
중간체 22
2-(6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)아세토니트릴 (중간체 22)
중간체 20 (2.0 g, 4.7 mmol) 및 에탄올 (45 mL) 혼합물에, 물(4mL) 중의 시안화나트륨 (278 mg, 5.7 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 NaCl 포화 수용액 (40 mL)으로 희석하고, EtOAc (40+20 mL)로 두 번 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액 (20 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-30% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (300 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.18, ES+ m/z 369.9/372.0 [M+H]+
중간체 23a
(6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)메탄올
DMF (4 mL) 중의 중간체 20 (780 mg) 혼합물에, 아세트산칼륨 (353 mg, 3.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (3x10 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 물(2x10 mL), NaCl 포화 수용액 (2x10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거했다. 잔사를 메탄올 (5mL)과 물(1mL) 혼합물에 용해시키고, 탄산 칼륨 (498 mg, 3.6 mmol)을 첨가한 뒤 실온에서 교반했다. 휘발성 용매를 감압 하에 제거하고, 잔사를 EtOAc (30 mL)에 용해시키고, 물 (2x15 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (15 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 용매를 제거하고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-10%, DCM/MeOH/NH4OH (90:5:0.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (184 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.04, ES+ m/z 360.1/362.1/362.1 [M+H]+
중간체 23b
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-카르브알데하이드 (중간체 23b)
DMSO (10 mL) / 물 (1.0 mL) 중의 중간체 21 (1.67 g, 3.3 mmol)을 100℃에서 5시간 가열하고, 이어 120℃에서 3시간 가열했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(50mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 물(4x15mL), NaCl 포화 수용액 (20 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압하에 제거하였더니, 표제 생성물 (1.08g)이 생성되었고, 이를 추가 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.24, ES+ m/z 358.1/360.1 [M+H]+
중간체 23c
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실산 (중간체 23c)
중간체 23b (104 mg, 0.29 mmol) 및 THF (5 mL)의 혼합물에, NaClO2 (263 mg, 2.9 mmol)와, 물(0.8 mL) 중의 NaH2PO4 (348 mg, 2.9 mmol) 용액 및 2-메틸-2-b부텐 (1.38 mL, 13 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃가 될때까지 1.5시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (10mL)로 희석하고, 1N HCl 수용액으로 pH 2.5으로 산성화시키고, DCM (2x10 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거하였더니, 희망하는 생성물 (90mg)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.59, ES+ m/z 374.1/376.1 [M+H]+
중간체 24a
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-카르복실산 (중간체 24a)
DMSO (6.75 mL) 중의 코퍼(I)티오펜-2-카르복실레이트 (434 mg, 2.28 mmol), Cs2CO3 (2.22 g, 6.83 mmol), 2-브로모-4-클로로-1-메톡시-벤젠 (970 ㎕, 6.83 mmol) 및 6-클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (450 mg, 2.28 mmol)을 100℃에서 밤새 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물로 희석하고, pH를 1M HCl 수용액으로 3으로 조정했다. 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, 건조시키고, Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-50% DCM/MeOH/포름산 (90:10:0.3)으로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (570 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.01, ES+ m/z 337.9/339.9 [M+H]+
중간체 24b
6-클로로-1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (중간체 24b)
2-브로모-4-플루오로-1-메톡시-벤젠 및 6-클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산으로부터 시작하여, 중간체 24a와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.96, ES+ m/z 321.9/323.9 [M+H]+
중간체 24c
메틸 6-클로로-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실레이트 (중간체 24c)
DMSO (9 mL) 중의 코퍼(I)티오펜-2-카르복실레이트 (501 mg, 2.63 mmol), Cs2CO3 (3.42 g, 10.5 mmol), 중간체 11c (1.39 g, 5.25 mmol), 6-클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산 (519 mg, 2.63 mmol)을 질소하에서 16시간 동안 105℃에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 아이오도메탄 (654 ㎕, 10.5 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, DCM (3x8 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-50 % EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (682 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.94, ES+ m/z 396.1/398.1 [M+H]+
중간체 24d
1 단계
메틸 1-(5-브로모-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실레이트 (중간체 24d-1)
중간체 12 및 6-클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실산으로부터 출발하여, 중간체 24c와 유사한 방식으로 표제 화합물을 제조했다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.26, ES+ m/z 432.0/434.0/436.0 [M+H]+
2 단계
6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실산 (중간체 24d)
탈기 톨루엔 (1.5 mL) 중의 중간체 24d-1 (50.0 mg, 0.12 mmol), 소듐 티오메톡사이드 (24 mg, 0.35 mmol), Pd2(dba)3 (10.0 mg, 0.01 mmol), Xantphos (13 mg, 0.02 mmol)를 80℃에서 3시간 동안 질소 하에 교반했다. 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, 톨루엔으로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물(68 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.62, ES+ m/z 386.1/388.1 [M+H]+
중간체 25
메틸 1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복실레이트 (중간체 25)
탈기한 물 (3.75 mL) / THF (7.5 mL) 중의 중간체 24c (300 mg, 0.76 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (274 mg, 1.1 mmol), K3PO4 (322 mg, 1.5 mmol), XPhos PdG3 (64 mg, 0.076 mmol)를 70℃에서 2시간 동안 질소 하에 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (10mL)로 희석하고 DCM (6x10 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 상분리기에 통과시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-40% DCM/MeOH (20:1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (262 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.84, ES+ m/z 479.1 [M+H]+
중간체 26a
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)- N -메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-카르복스아미드 (중간체 26a)
DMF (1.5 mL) 중의 중간체 23c (25 mg, 0.067 mmol) 혼합물에, DIPEA (23 ㎕, 0.13 mmol), HATU (28 mg, 0.074 mmol) 및 메틸아민 (THF 중의 2.0 M, 334 ㎕, 0.67 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (5 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (10 mL)으로 세척했다. 수성층은 EtOAc (2x5 mL)로 더 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (PE 중의 0-24% EtOAc로 용리)로 정제하였더니, 표제 생성물 (12 mg)이 생성되었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.12, ES+ m/z 387.1/389.1 [M+H]+
중간체 26b 내지 26f의 제조
후술하는 중간체들은 표시된 출발 물질로부터, 중간체 26a와 유사한 방식으로 제조했다. 용매 및/또는 온도에 소소한 변형이 있는 경우, 이들을 괄호안에 표시해 두었다.
중간체 26g
6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)- N -((1 s ,3 s )-3-(디메틸아미노)사이클로부틸)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-카르복스아미드 (중간체 26g)
드라이 DCM (6.9 ml) 중의 중간체 26c (276 mg, 0.509 mmol)의 얼음으로 차갑게 냉각시킨 용액에, TFA (1.95 ml, 25.4 mmol)를 점적하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에 이를때까지 교반하고, 이어 SCX 카트리지로 로딩한 뒤, 메탄올로 세척하고 메탄올 암모니아 (7M)로 용리시켰다. 해당 분획을 진공 농축시켰다. 잔사를 포름산 (768 ㎕, 20.4 mmol) 및 포름알데히드 수용액 (37.0%, 1.52 mL, 20.4 mmol) 혼합물에 용해시키고, 밤새 60℃로 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액(3x15 mL), NaCl 포화 수용액 (15 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 용매를 제거하여, 표제 생성물 (144 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.15 min, ES+ m/z 470.0/472.0 [M+H]+
중간체 27a
tert -부틸 (1-((6-클로로-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)메틸)아제티딘-3-일)카바메이트 (중간체 27a))
테트라하이드로퓨란 (3.5 mL) 중의 중간체 20 (60.0 mg, 0.14 mmol) 및 tert-부틸 N-(아제티딘-3-일)카바메이트 하이드로클로라이드 (32.6 mg, 0.16 mmol) 현탁액에, TEA (59.3 ㎕, 0.43 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이어 NH4Cl 포화 수용액과 EtOAc 간에 분배했다. 유기층을 물, NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켰더니 표제 생성물 (62 mg)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.27 min, ES+ m/z 514.1/516.0 [M+H]+
27b-d의 제조
후술하는 중간체들은, 표시된 출발 물질로부터, 중간체 27a와 유사한 방식으로 제조하였다. 용매, 및/또는 온도에 소소한 변형이 있는 경우, 이를 괄호 속에 자세히 표시해두었다.
중간체 28
1-(5-브로모-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 28)
NMP (35 mL) 중의 중간체 5 (2.25 g, 8.25 mmol) 및 중간체 8b (3.92 g, 13.5 mmol)를 60℃에서 1시간 교반한 다음, 120℃에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 격렬하게 교반하며 물 (250 mL)을 첨가했다. 반응 혼합물을 EtOAc (3x200mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 (2x200 mL) 포화 수용액, NaCl 포화 수용액 (200 mL)으로 세척하고, 감압 증발시켰다. 조생성물을 디이소프로필 에테르 및 DCM/MeOH (5:1)로 분쇄하고, 건조시켜, 표제 생성물 (563 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.21 min, ES+ m/z 471.0/473.1 [M+H]+
중간체 29
2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ] 피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-1-일)페닐)티오)아세트산 (중간체 29)
톨루엔 (8 mL) 중의 메틸 티오글리콜레이트 (251 mg, 2.37 mmol)를 톨루엔 (10 mL) 중의 NaH (60.0 %, 158 mg, 3.95 mmol) 혼합물에 질소 분위기 하에서 점적했다. 반응 혼합물을 실온에서 90분 교반한 다음, 중간체 28 (930 mg, 1.97 mmol), Xantphos (143 mg, 0.25 mmol) 및 Pd2(dba)3 (90.4 mg, 0.1 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 1.5시간 더 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, pH 5에서 물 (5 mL), 디이소프로필 에테르 (5 mL), 그리고 다시 물 (5mL)에서 분쇄하고 건조시켜, 표제 생성물 (0.42 g)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.57 ES+ m/z 483.3 [M+H]+
중간체 30
1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((트리이소프로필실릴)티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 30)
톨루엔 (2 mL) 중의 트리스(프로판-2-일)실란티올 (328 ㎕, 1.53 mmol) 용액을 툴루엔 (10 mL) 중의 NaH (60.0 %, 102 mg, 2.55 mmol)혼합물에 점적하고, 반응 혼합물을 질소 하에 실온에서 1.5시간 교반했다. 중간체 28 (600 mg, 1.27 mmol), Xantphos (92.1 mg, 0.16 mmol) 및 Pd2(dba)3 (58.3 mg, 0.06 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 45분간 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (20 mL)을 첨가하여 급랭시키고, 규조토 패드로 여과시키고 EtOAc (2x35 mL)로 세척했다. 유기층을 분리하고, 물 (20 mL), NaCl 포화 수용액(30 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지상의 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-100% EtOAc)로 정제하여, 표제 생성물 (153 mg)을 얻었다.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.27 (d, J=6.7 Hz, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.71 (d, J=3.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.64 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.44 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.16 (dd, J=6.9, 4.0 Hz, 1H), 7.13 (t, J=73.0 Hz, 1H), 2.66 (s, 3H), 0.98 (d, J=6.5 Hz, 18H), 0.92 (m, 3H)
중간체 31
4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)벤젠티올 (중간체 31)
EtOH (3 mL) 중의 중간체 30 (150 mg, 0.258 mmol) 혼합물에 37% w/w HCl 수용액 (75 ㎕, 2.45 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 질소 하에 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 건조시켜, 표제 생성물 (125 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.23 (dd, J=6.9,1.6 Hz, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.71 (dd, J=4.0, 1.5 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.67 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.44 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.16 (dd, J=6.9, 4.0 Hz, 1H), 7.13 (t, J=73.0 Hz, 1H), 5.94 (s, 1H), 2.66 (s, 3H)
LCMS (방법 2): RT = 0.50 min, ES+ m/z 425.2 [M+H]+
중간체 32
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-(디플루오로메톡시)벤젠티올 (중간체 32)
톨루엔 (2 mL) 중의 트리스(프로판-2-일)실란티올 (365 ㎕, 1.7 mmol)을 톨루엔 (4 mL) 중의 NaH (60%, 113 mg, 2.8 mmol) 혼합물에 점적하고, 반응 혼합물을 아르곤 하에 실온에서 1.5시간 동안 교반했다. 톨루엔 (4 mL) 중의 중간체 18k (551 mg, 1.4 mmol), Xantphos (103 mg, 0.18 mmol) 및 Pd2(dba)3 (41 mg, 0.071 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 45분간 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 NH4Cl 포화 수용액 (20 mL)으로 급랭하고 EtOAc (100 mL)로 추출했다. 유기층을 물 (10 mL), NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 감압 하에 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(사이클로헥산 중의 0-50% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (198 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): RT = 1.16 min, ES+ m/z 341.7/343.7 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.81 (s, 1H), 7.46 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=8.5, 2.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.31 (t, J=73.0 Hz, 1H), 3.59 (s, 1H), 2.66 (s, 3H)
플래시 크로마토그래피 정제로부터, 두번째 순수한 생성물을 수득했다. LC-MS 결과 이는 중간체 18z의 디브로모유도체 구조인 것으로 확인되었고, 이를 중간체 33 으로 명명했다.
3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-(디플루오로메톡시)벤젠티올 및 6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((트리이소프로필실릴)티오)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘
LCMS (방법 1): RT = 1.80 min, ES+ m/z 341.9/343.9 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, CDCl 3 ) δ: 8.82 (s, 1H), 7.64 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.58 (dd, J=8.5, 2.1 Hz, 1H), 7.26 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.39 (t, J=73.0 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 1.27 (m, 3H), 1.11 (m, 18H)
중간체 34a
6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-메톡시에틸)티오)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 34a)
아세톤 (2.6 mL) 중의 중간체 32 (60.0 mg, 0.176 mmol) 용액을 아세톤 (2.6 mL) 중의 1-브로모-2-메톡시-에탄 (19.8 ㎕, 0.21 mmol), NaI (26.3 mg, 0.18 mmol) 및 K2CO3 (48.5 mg, 0.351 mmol) 혼합물에 첨가했다. 반응 혼합물을 70℃에서 75분간 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 DCM 과 NaHCO3 포화 수용액 간에 분배시켰다. 수성층을 DCM (2x)으로 추출하고, 합쳐진 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켜, 표제 생성물 (65.0 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 1): RT = 1.22 min, ES+ m/z 400.1/402.0 [M+H]+
중간체 34b 내지 34e의 제조
다음의 중간체들은, 표시된 출발 물질로부터, 중간체 34a와 유사한 방식으로 제조하였다.
중간체 34f
6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((3-메톡시페닐)티오)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 34f)
i-PrOH (2 mL) 중의 중간체 33 (200 mg, 0.40 mmol), CsF (140 mg, 0.92 mmol), Cs2CO3 (301 mg, 0.92 mmol), Pd2(dba)3 (12 mg, 0.020 mmol) 및 i-PrOH (2 mL) 중의 1-브로모-3-메톡시-벤젠 (118 ㎕, 0.92 mmol) 탈기 용액의 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-50% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (83 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.43 min, ES+ m/z 448.0/455.0 [M+H]+
중간체 35a
6-클로로-1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-메톡시에틸)설포닐)페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (중간체 35a)
드라이 DCM (3.3 mL) 중의 중간체 34a (64.0 mg, 0.16 mmol)의 얼음 수조로 냉각시킨 혼합물에, mCPBA (55.2 mg, 0.32 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃에서 70분간 교반했다. mCPBA (20 mg, 0.12 mmol)의 두번째 당량을 첨가하고, 반응 혼합물을 40분 더 교반했다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (51.0 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 1): Rt = 1.02 min, ES+ m/z 432.1/434.0 [M+H]+
중간체 35b
3-((3-(6-클로로-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-1-일)-4-(디플루오로메톡시)페닐)설포닐)- N,N- 디메틸프로판-1-아민 (중간체 35b)
물 (0.86 mL) 중의 Oxone® (263 mg, 0.428 mmol) 용액을 MeOH (6.4 mL) 중의 중간체 34b (87.0 mg, 0.204 mmol) 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 DCM으로 2회 추출한 다음, 다시 pH 약 7-8이 될때까지 수성층의 pH를 맞추었다. 합쳐진 유기층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 진공에서 용매를 제거했다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 10 % MeOH로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (16.0 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.02 min, ES+ m/z 459.1/461.1 [M+H]+
중간체 35c 내지 35e의 제조
후술하는 중간체들은 표시된 출발 물질로부터, 중간체 35b와 유사한 방식으로 제조하였다.
중간체 36a
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)- N,N -디메틸-1H-피라졸로[4,3- c ]피리딘-4-아민 (중간체 36a)
NMP (3 mL) 중의 중간체 18ac (100 mg, 0.30 mmol), DIPEA (118 mg, 0.91 mmol) 혼합물에, 디메틸아민 (THF 중의 2.0 M, 457 ㎕, 0.91 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브를 조사하며 120℃에서 30분간 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)와 NaHCO3 포화 수용액(15 mL) 간에 분배했다. 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, 진공 농축시켰다. 잔사를 헥산 (3 mL) 중에 2회 분쇄하고, 여과하고, 건조시켜 표제 생성물 (78 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.34 min, ES+ m/z 337.1/339.1/341.1 [M+H]+
중간체 36b 내지 36c의 제조
후술하는 중간체들은 표시된 출발 물질로부터, 중간체 36a와 유사한 방식으로 제조하였다.
중간체 36d
1 단계
tert -부틸(6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-4-일)글리시네이트 (중간체 36d-1)
NMP (2 mL) 중의 중간체 18ac (200 mg, 0.61 mmol), DIPEA (318 ㎕, 1.83 mmol) 혼합물에 tert-부틸 2-아미노아세테이트 (250 ㎕, 1.83 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브를 조사하며 150℃에서 45분간 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (20 mL)로 희석하고 NaHCO3 포화 수용액 (5x10 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-10 % EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (172.6 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.41 min, ES+ m/z 423.1/425.1/427.1 [M+H]+
2 단계
(6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-4-일)글리신 트리플루오로아세테이트 (중간체 36d-2)
드라이 DCM (2 mL) 중의 중간체 36d-1 (120 mg, 0.28 mmol)의 얼음으로 냉각시킨 용액에, TFA (2 mL, 26.1 mmol)를 점적하고, 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압하에 증발시키고, 잔사를 디에틸에테르에 현탁시키고, 용매를 제거하여 (2회), 표제 생성물 (120 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.63 min, ES+ m/z 367.0/369.0/371.0 [M+H]+
3 단계
2-((6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-4-일)아미노)- N -메틸아세트아미드 (중간체 36d)
드라이 DMF (0-5 mL) 중의 중간체 36d-2 (40.0 mg, 0.08 mmol) 혼합물에, 메틸아민 하이드로클로라이드 (16.8 mg, 0.25 mmol) 및 DIPEA (72.4 ㎕, 0.42 mmol)를 첨가하는 데 이어, HATU (34.8 mg, 0.09 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, EtOAc (15 mL)로 희석하고 NaHCO3 포화 수용액 (3x10 mL)으로 세척했다. 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-5% MeOH로 용리)로 정제하여, 희망하는 생성물 (24 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.03 min, ES+ m/z 380.0/381.9/383.9 [M+H]+.
중간체 36e
N -(6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-4-일)아세트아미드 (중간체 36e)
미리 탈기시켜 둔 1,4-디옥산 (1 mL) 중의 중간체 18ac (45.0 mg, 0.14 mmol), 아세트아미드 (10.5 mg, 0.18 mmol), Pd2(dba)3 (4.5 mg, 7.8 μmol), Xantphos (3.96 mg, 6.9 μmol), Cs2CO3 (66.9 mg, 0.21 mmol) 혼합물을, 질소 분위기 하에서 100℃에서 24시간 동안 가열했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물로 희석하고, 형성된 침전물을 여과시켜 모은 뒤, Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-15 % DCM/MeOH (99:1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (28 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.11 min, ES+ m/z 351.1, 353.1, 355.1 [M+H]+.
중간체 36f
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-4-아민 (중간체 36f)
미리 탈기시켜 둔 1,4-디옥산 (4 mL) 중의 Cs2CO3 (223 mg, 0.69 mmol) (150℃에서 1시간 진공 건조), 중간체 18ac (150 mg, 0.46 mmol), tert-부틸 카바메이트 (64.2 mg, 0.55 mmol), Pd2(dba)3 (15.0 mg, 26.1 μmol), Xantphos (13.2 mg, 22.8 μmol) 혼합물을, 질소 분위기 하에서 90℃에서 24시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)와 물 (10 mL) 사이에 분배했다. 유기층을 물 (5 mL), NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100% (DCM 중의 5% MeOH)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.06 min, ES+ m/z 309.0/331.0/313.0 [M+H]+
중간체 36g
1 단계
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-4-메톡시-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘 (중간체 36g-1)
드라이 MeOH (2.4 mL) 중의 중간체 18ac (80 mg, 0.24 mmol) 현탁액에, MeOH 중의 소듐 메톡사이드 (25 %, 443 ㎕, 1.9 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (10 mL)로 급랭시켰다. 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, 건조시켜, 표제 화합물 (70 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.40 min, ES+ m/z 324.1/326.1/328.1 [M+H]+.
2 단계
6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-4-올 (중간체 36g)
MeCN (1.5 mL) 중의 중간체 36g-1 (38.0 mg, 0.12 mmol) 현탁액에, TMS-Cl (44.4 ㎕, 0.35 mmol) 및 NaI (52.7 mg, 0.352 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃에서 15분간 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(2 mL)과 EtOAc (4 mL) 간에 분배시켰다. 유기층을 5% (w/w) Na2S2O3 수용액 (10 mL), NaCl 포화 수용액 (5 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰더니, 표제 생성물 (14 mg)이 생성되었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.57 min, ES+ m/z 310.1/312.1/314.0 [M+H]+.
중간체 37
1 단계
3-(브로모메틸)-6-클로로-1-트리틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (중간체 37-1a) 및 6-클로로-3-(디브로모메틸)-1-트리틸-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘 (중간체 37-1b)의 혼합물
중간체 16 (3.72 g, 9.08 mmol) 및 벤조트리플루오라이드 (120 mL) 혼합물에, NBS (1.94 g, 10.9 mmol) 및 AIBN (298 mg, 1.82 mmol)을 추가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 3.5시간 동안 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 형성된 침전물을 여과시켜 제거하고, EtOAc로 세척했다. 여과물을 EtOAc와 NaCl 포화 수용액 사이에 분배시키고, 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켜, 4:1 모노브롬화 (중간체 37-1a) 및 디-브롬화 생성물(중간체 37-1b) 혼합물(총량 2.57g)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.55 및 1.63 ES+ 이온 클러스터, 우세한 피크 m/z 490.0, 568.0 [M+H]+
2 단계
(6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)메탄올 (중간체 37) 및 6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-카르브알데하이드 (중간체 37-2)의 혼합물
DMSO (12 mL)/ 물 (1.2 mL) 중의, 전술한 단계로부터의 중간체 37-1a 및 중간체 37-1b의 혼합물 (2.00 g)을 100℃에서 10시간 동안 격렬히 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액 (12 mL)으로 희석했다. 형성된 침전물을 여과하고, 물 (5 mL) 및 EtOAc (2x10 mL)로 세척하고, 버렸다. 모(母)액체를 EtOAc (3x20 mL)로 추출했다. 수성층 (pH를 6.8로 조절한 후)을 EtOAc (3x20 mL)로 추출하고, EtOAc (7x10 mL)로 pH를 4.8로 조정한 경우에는 추가로 더 추출했다. 합쳐진 유기층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물 (650 mg)을 중간체 37:중간체 37-2의 1:1 혼합물 형태로 수득했고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 합성 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.34 min 및 0.44 min, ES+ m/z 182.1 및 184.1 [M+H]+
3 단계
(6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ] 피리딘-3-일)메탄올 (중간체 37)
EtOH (50 mL) 중의, 전술한 단계 (2 단계)로부터 얻어진 중간체 37 및 중간체 37-2의 혼합물 (630 mg, 3.5 mmol로 추정)을 0℃로 냉각시키고, NaBH4 (66 mg, 1.7 mmol)를 첨가하였다. 15분동안 0℃에서 교반한 다음, 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 급랭시켰다. 형성된 침전물을 여과하고, 물 (2x5 mL)로 세척하고 버렸다. 합쳐진 여과물을 EtOAc (2x20 mL)로 추출했다. 수성층 (pH를 6.8로 조정)을 EtOAc (5x20 mL)로 더 추출했다. 합쳐진 유기층을 Na2SO4 상에서 건조하고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상에서 정제(DCM 중의 0-90% DCM/MeOH (20:1)로 용리)하여, 표제 생성물 (450 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.44, ES+ m/z 184.1 [M+H]+
제조 실시예
실시예 1
1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 1)
탈기한 THF/물(4.8 mL) 중의, 중간체 18a (70.0 mg, 0.240 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (82.3 mg, 0.336 mmol), K3PO4 수용액(0.500 M, 0.960 mL, 0.480 mmol), XPhos Pd G3 (10.2 mg, 0.012 mmol) 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 아르곤 하에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (5 mL)로 급랭시켰다. 침전물을 여과시켜 모으고, Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-100% EtOAc로 용리)를 수행하여, 표제 생성물 (72.6 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.37 min, ES+ m/z 375.2 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.22 (dd, J=7.1, 1.7 Hz, 1H), 9.14 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.70 (dd, J=4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.27 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.34-7.47 (m, 3H), 7.15 (dd, J=7.1, 4.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.64 (s, 3H)
실시예 2 내지 57
후술하는 실시예들은, 표시된 출발 물질로부터, 실시예 1에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조하였다. 염기, 용매, 온도, 리간드, 및/또는 팔라듐 급원에 소소한 변형이 있는 경우, 이들을 괄호 속에 기재해 두었다.
실시예 58
1 단계
1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 58-1 단계)
탈기한 THF/물 (2.7 mL) 중의, 중간체 18u (75.0 mg, 0.18 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (77.3 mg, 0.32 mmol), 및 K3PO4 용액(0.5 M, 701 ㎕, 0.35 mmol)의 혼합물에, XPhos Pd G3 (7.42 mg, 8.8 μmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 아르곤 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석시켰다. 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100% EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (63 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2), Rt = 1.22 min, ES+ m/z 511.2 [M+H]+
2 단계
2-플루오로-5-메톡시-4-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페놀 (실시예 58)
드라이 DCM (1 mL) 중의, 중간체 실시예 58-1 단계 (57.0 mg, 0.112 mmol)의 얼음으로 냉각시킨 용액을 TFA (1 mL, 13.4 mmol)로 처리하고, 실온으로 데우고, 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액으로 중화시켰더니 침전물이 형성되었는데, 이를 여과시켜 모으고 소량의 물/DCM으로 세척했다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % DCM/MeCN/NH4OH (10:10:1)로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (18 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5), Rt = 2.61 min, ES+ m/z 390.9 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 10.44 (br. s, 1H), 9.21 (dd, J=7.1, 1.7 Hz, 1H), 9.11 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.71 (dd, J=4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.17 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.36 (d, J=11.1 Hz, 1H), 7.14 (dd, J=7.1, 4.1 Hz, 1H), 6.87 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.71 (s, 3H), 2.61 (s, 3H)
실시예 59 내지 60
후술하는 실시예들은, 중간체 18u를 표시된 출발 물질로 치환함으로써 실시예 58에 기재된 것과 유사한 방식으로 제조하였다. 염기, 용매, 온도, 리간드, 및/또는 팔라듐 급원에 소소한 변형이 있는 경우, 이들을 괄호 속에 기재해 두었다.
실시예 61
1-(2-클로로-5-메톡시피리딘-4-일)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ] 피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 61)
표제 화합물은 중간체 6 및 4-브로모-2-클로로-5-메톡시-피리딘으로부터 출발하여, 중간체 18a와 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 5), Rt = 3.31 min, ES+ m/z 392.4 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ:9.08 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.78 (dd, J=7.0,1.8 Hz, 1H), 8.62 (dd, J=4.0, 1.8 Hz, 1H), 8.46-8.48 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.94 (dd, J=7.0, 4.0 Hz, 1H), 4.07 (s, 3H), 2.73 (s, 3H)
실시예 62
(4-클로로-2-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페닐)메탄올 (실시예 62)
NMP (0.8 mL) 중의 중간체 5 (60.0 mg, 0.220 mmol) 및 중간체 8c (20.0 %, 377 mg, 0.36 mmol)를 60℃에서 1시간 동안, 그리고 100℃에서 2시간 동안 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(10 mL)로 희석하고, EtOAc (2x10 mL) 및 DCM (2x10 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 물 (4x10 mL), NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 조생성물을 DCM 중에서 분쇄하여, 표제 생성물(6.3 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 6), Rt = 3.93 min, ES+ m/z 391.44 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ: 9.22-9.25 (m, 1H), 9.20 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.67-8.70 (m, 1H), 8.27 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=8.5, 2.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.13-7.18 (m, 1H), 5.27-5.32 (m, 1H), 4.33-4.40 (m, 2H), 2.66 (s, 3H)
실시예 63
1-(5-브로모-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 63)
중간체 5 (30.0 mg, 0.110 mmol)와 중간체 8b (35.0 mg, 0.121 mmol)를 NMP (0.7 mL) 중에 현탁시키고, 마이크로웨이브로 조사하며 1시간 동안 60℃로 교반한 다음, 2시간 동안 120℃로 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (6 mL)로 희석하고, EtOAc (2x8 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 물 (3x8 mL), NaCl 포화 수용액 (8 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 크로마토그래피 (DCM 중의 0-1% MeOH로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (15 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 6): Rt = 4.88 min, ES+ m/z 471.0/473.0 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ / 9.20-9.26 (m, 1H), 9.19 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.70 (dd, J=4.1, 1.8 Hz, 1H), 8.32 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.85 (dd, J=8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.24 (t, J=73.0 Hz, 1H), 7.16 (dd, J=7.1, 4.2 Hz, 1H), 2.66 (s, 3H)
실시예 64
4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)벤조니트릴 (실시예 64)
tBuXPhos (9.04 mg, 0.02 mmol)를 NMP (0.5 mL) 중의 중간체 28 (60.0 mg, 0.13 mmol) 및 징크 시아나이드 (17.9 mg, 0.15 mmol) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 마이크로웨이브 조사하며 15분간 교반하였고, 이어 알릴팔라듐 클로라이드 이량체 (9.32 mg, 0.03 mmol)를 첨가하고, 동일 조건으로 1시간 더 교반을 지속하였다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (5mL)로 희석시키고, 형성된 침전물을 여과시켜 모았다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-45% DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (21 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.19 min, ES+ m/z 418.4 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ / 9.22-9.27 (m, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.68-8.73 (m, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.26-8.30 (m, 1H), 8.15-8.19 (m, 1H), 7.74 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 7.48 (t, J=73.0 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H)
실시예 65
1-(2-(디플루오로메톡시)-5-메틸페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 65)
탈기한 1,4-디옥산/H2O (2:1, 7.2 mL) 중의 중간체 28 (50.0 mg, 0.11 mmol), 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (74.2 ㎕, 0.53 mmol), Cs2CO3 (70 mg, 0.21 mmol) 혼합물에, Pd(PPh3)4 (12.3 mg, 0.01 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고, 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % EtOAc 용리)에 투입하여, 표제 생성물 (10 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.41 min, ES+ m/z 407.0 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.22 (dd, J=6.97, 1.74 Hz, 1H), 9.16 (d, J=1.05 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.68 (dd, J=4.01, 1.74 Hz, 1H), 8.28 (d, J=1.05 Hz, 1H), 7.47-7.52 (m, 1H), 7.38-7.48 (m, 2H), 7.14 (dd, J=7.14, 4.18 Hz, 1H), 7.11 (t, J=73.36 Hz, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.40 (s, 3H).
실시예 66
1 단계
4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)벤조산 (실시예 66-1 단계)
DMF (5 mL) 중의 중간체 28 (500.0 mg, 1.06 mmol), Pd(OAc)2 (7.15 mg, 32 μmol), Xantphos (18.4 mg, 32 μmol) 및 포름산 (280 ㎕, 7.43 mmol) 혼합물에, DCC (438 mg, 2.12 mmol) 및 TEA (296 ㎕, 2.12 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (15 mL)로 희석하였더니 침전물이 형성되었고, 이를 여과시켜 모으고, 소량의 MeOH로 세척하고 건조시켰다. 조생성물을 1M NaOH 수용액 (20 mL)에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 2M HCl 수용액으로 산성화하였더니 침전물이 생겼는데, 이를 여과하여 모아 표제 생성물 (200 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.51 min, ES+ m/z 437.1 [M+H]+
2 단계
4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)- N -(티아졸-2-일)벤즈아미드 (실시예 66)
드라이 DMF (1 mL) 중의 중간체 실시예 66-1 단계 (30.0 mg, 0.07 mmol), 티아졸-2-아민 (8.26 mg, 0.08 mmol), DIPEA (24 ㎕, 0.14 mmol) 혼합물에, HATU (28.8 mg, 0.08 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물(5 mL)로 희석시켰더니 침전물이 형성되었고, 이를 여과시켜 모았다. 조생성물을 MeOH로 분쇄하여, 표제 생성물 (19.5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.24 min, ES+ m/z 519.1 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ:12.86 (br s, 1H), 9.17-9.28 (m, 2H), 8.91 (s, 1H), 8.64-8.69 (m, 1H), 8.47 (d, J=1.8 Hz, 1H), 8.37 (dd, J=8.8, 2.14 Hz, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.72 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J=3.4 Hz, 1H), 7.45 (t, J=72.4 Hz, 1H), 7.27-7.32 (m, 1H), 7.15 (dd, J=7.0, 4.0 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H)
실시예 67
2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3- c ] 피리딘-1-일)페닐)티오)-N-메틸아세트아미드 (실시예 67)
DMF (1 mL) 중의 중간체 29 (55.0 mg, 0.11 mmol) 혼합물에, HATU (52.0 mg, 0.14 mmol) 및 DIPEA (80 ㎕, 0.46 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 45분간 교반했다. 메틸아민 (THF 중의 2M, 171 ㎕, 0.342 mmol)을 첨가하고, 실온에서 1시간 더 교반을 지속했다. 반응 혼합물을 EtOAc (8 mL)와 물 (10 mL) 사이에 분배하고, 수성층은 EtOAc (8 mL)로 추가로 추출했으며, 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액 (2x10 mL), NaCl 포화 수용액(10 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH (19:1) 로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (3.57 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.57 min, ES+ m/z 496.5 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ / 9.22-9.26 (m, 1H), 9.17-9.21 (m, 1H), 8.88 (br d, J=1.7 Hz, 1H), 8.68-8.73 (m, 1H), 8.29-8.33 (m, 1H), 8.06-8.12 (m, 1H), 7.66-7.70 (m, 1H), 7.59-7.62 (m, 1H), 7.47-7.52 (m, 1H), 7.18 (t, J=73.0 Hz, 1H), 7.13-7.17 (m, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.56 (d, J=4.6 Hz, 3H)
실시예 68
2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페닐)티오)아세트아미드 (실시예 68)
표제 화합물은 중간체 29 및 암모니아 (1,4-디옥산 중의 0.5 M)로부터 출발하여, 실시예 67과 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 6): Rt = 3.44 min, ES+ m/z 482.6 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.22 (dd, J=7.0, 1.3 Hz, 1H), 9.18 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.71 (dd, J=4.0, 1.5 Hz, 1H), 8.32 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.61 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1H), 7.60 (bs, 1H), 7.50 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.18 (t, J=73 Hz, 1H), 7.18 (bs, 1H), 7.16 dd, J=7.1, 4.0 Hz, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.67 (s, 3H)
실시예 69
2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)-N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드 (실시예 69)
표제 화합물은 중간체 29 및 에탄올아민으부터 출발하여, 실시예 67과 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 6): Rt = 3.35 min, ES+ m/z 526.5 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 , 373 K) δ: 9.14 (d, J=0.8 Hz, 1H), 9.11 (dd, J=7.2, 1.3 Hz, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.66 (dd, J=3.9, 1.5 Hz, 1H), 8.29 (d, J=0.8 Hz, 1H), 7.82 (bs, 1H), 7.68 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=7.6, 2.3 Hz, 1H), 7.46 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.09 (dd, J=7.1, 4.0 Hz, 1H), 7.04 (t, J=73.0 Hz, 1H), 4.31 (bs, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.37 (q, J=5.2 Hz, 2H), 3.12 (q, J=5.4 Hz, 2H), 2.66 (s, 3H)
실시예 70
2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페닐)설포닐)아세트아미드 (실시예 70)
EtOH (1.2 mL) 중의 실시예 68 (33.0 mg, 0.07 mmol) 혼합물에, 물 (0.85 mL) 중의 Oxone® (169 mg, 0.27 mol) 현탁액을 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 물 (2 mL)과 DCM(2 mL)으로 희석시키고, 유기층을 감압 하에 실온에서 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-80 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (3.6 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 6): Rt = 3.32 min, ES+ m/z 514.2 [M+H]+
1H-NMR (DMSO-d 6 , 600 MHz) δ: 9.24 (dd, J=7.0, 1.7 Hz, 1H), 9.22 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.70 (dd, J=4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.40 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.16 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.11 (dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.52 (t, J=72.0 Hz, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.17 (dd, J=7.0, 4.0 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 2.70 (s, 3H)
실시예 71
1-(5-(사이클로프로필티오)-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (실시예 71)
DCE (0.5 mL) 중의 중간체 31 (20.0 mg, 0.05 mmol), 사이클로프로필 보론산 (5.77 mg, 0.07 mmol), 아세트산구리(II) (8.13 mg, 0.05 mmol), 2,2'-디피리딜 (6.99 mg, 0.05 mmol) 및 Cs2CO3 (14.6 mg, 0.05 mmol)를 70℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 DCM (5 mL)로 희석하고, 암모니아 수용액 (24%, 5 mL)을 첨가하고, 실온에서 10분간 교반했다. 유기층을 분리하고, 암모니아 수용액 (24%, 5 mL), 물 (5 mL), NaCl 포화 수용액 (5 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-75 % EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (4.1 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 4.12 min, ES+ m/z 465.5 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22-9.25 (m, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.68 (dd, J=4.1, 1.8 Hz, 1H), 8.35 (d, J=1.2 Hz, 1H), 7.66 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.56-7.59 (m, 1H), 7.48-7.52 (m, 1H), 7.14-7.18 (m, 1H), 7.14 (t, J=73.0 Hz, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.37 (ddd, J=7.3, 4.3, 3.1 Hz, 1H), 1.04-1.11 (m, 2H), 0.62-0.67 (m, 2H)
실시예 72
1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((테트라하이드로-2 H -피란-4-일)티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 72)
DMF (1.5 mL) 중의 중간체 31 (35.0 mg, 0.08 mmol) 혼합물에, NaI (12.4 mg, 0.08 mmol), K2CO3 (22.8 mg, 0.17 mmol) 및 4-브로모테트라하이드로피란 (10.2 ㎕, 0.09 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 60시간 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (8 mL)와 물 (8 mL) 간에 분배하였다. 유기층을 물(8 mL), NaHCO3 포화 수용액(8 mL), NaCl 포화 수용액(8 mL)으로 세척하고, 감압하에 증발시켰다. 잔사를 MDAP 프리퍼레이티브 HPLC (방법 prep 1)으로 정제하여, 표제 생성물 (2.5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.74 min, ES+ m/z 509.1 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.22-9.27 (m, 1H), 9.18 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.65-8.71 (m, 1H), 8.30-8.33 (m, 1H), 7.69-7.73 (m, 1H), 7.66 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1H), 7.49-7.53 (m, 1H), 7.22 (t, J=73.0 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=7.0, 4.3 Hz, 1H), 3.75-3.82 (m, 2H), 3.56-3.65 (m, 1H), 3.34-3.40 (m, 2H), 2.66-2.68 (m, 3H), 1.86-1.94 (m, 2H), 1.48-1.58 (m, 2H)
실시예 73
1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(옥세탄-3-일티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 73)
아세톤 (3 mL) 중의 중간체 31 (33.0 mg, 0.08 mmol) 혼합물에, 옥세탄-3-일 4-메틸벤젠설포네이트 (19.5 mg, 0.09 mmol), NaI (11.7 mg, 0.08 mmol) 및 K2CO3 (21.5 mg, 0.16 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 환류하면서 3시간 교반하고, 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)와 물 (10mL) 간에 분배했다. 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 MDAP 프리퍼레이티브 HPLC (방법 prep 2)로 정제하여, 표제 생성물 (8 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 7): Rt = 5.25 min, ES+ m/z 481.1 [M+H]+
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22 (dd, J=7.0, 1.7 Hz, 1 H), 9.17 (s, 1 H), 8.90 (s, 1 H), 8.66-8.70 (m, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 7.53-7.56 (m, 1 H), 7.50 (s, 2 H), 7.18 (t, J=73.0 Hz, 1 H), 7.13-7.17 (m, 1 H), 5.00 (t, J=7.0 Hz, 2 H), 4.67-4.78 (m, 1 H), 4.50 (t, J=6.4 Hz, 2 H), 2.65 (s, 3 H)
실시예 74
1 단계
tert -부틸 4-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)페닐)티오)피페리딘-카르복실레이트 (실시예 74-1 단계)
아세톤 (4 mL) 중의 중간체 31 (85.0 %, 60.0 mg, 0.12 mmol) 혼합물에, N-Boc-4-브로모피페리딘 (38.1 mg, 0.14 mmol), NaI (18.0 mg, 0.12 mmol) 및 K2CO3 (33.2 mg, 0.240 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2.5시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하였더니 침전물이 형성되었고, 이를 여과시켜 모아 표제 생성물 (66 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.38 min, ES+ m/z 608.4 [M+H]+
2 단계
1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(피페리딘-4-일티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘 (실시예 74)
DCM (2 mL) 중의 중간체 실시예 74-1 단계 (70.0 %, 66.0 mg, 0.08 mmol) 혼합물에, TFA (113 ㎕, 1.52 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔사를 EtOAc (10 mL)와 물 (10 mL) 사이에 분배했다. 수성층을 NaHCO3 포화 수용액 (10 mL)으로 중화하고, DCM (2x10 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고, 감압 하에 증발시켰더니, 조생성물이 생성되었고, 이를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-30 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5) 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (22 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 6): Rt = 4.51 min, ES+ m/z 508.5 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22-9.27 (m, 1 H), 9.18 (s, 1 H), 8.90 (s, 1 H), 8.67-8.71 (m, 1 H), 8.33 (s, 1 H), 7.67 (d, J=2.1 Hz, 1 H), 7.60-7.65 (m, 1 H), 7.47-7.52 (m, 1 H), 7.21 (t, J=73.0 Hz, 1 H), 7.13-7.18 (m, 1 H), 3.38-3.47 (m, 1 H), 2.83-2.91 (m, 2 H), 2.66 (s, 3 H), 2.41-2.49 (m, 2 H), 1.83-1.92 (m, 2 H), 1.34-1.45 (m, 2 H)
실시예 75
1-(4-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)피페리딘-1-일)에탄-1-온 (실시예 75)
DCM (0.4 mL) 중의 실시예 74 (14.0 mg, 0.03 mmol) 혼합물에, TEA (11.5 ㎕, 0.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 얼음 수조에서 냉각시킨 다음에, 아세트산 무수물 (3.1 ㎕, 0.03 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 건조하고, 잔사를 EtOAc (6 mL)와 0.1M HCl 수용액 사이에 분배했다. 수성층을 pH 8로 중화하고, EtOAc (2x8 mL)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaHCO3 포화 수용액 (2x5 mL), NaCl 포화 수용액 (5 mL)으로 세척하고, 감압 하에 증발시켰다. 조생성물을 EtOAc/헥산으로 분쇄하여, 희망하는 생성물 (10 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 6): Rt = 4.21 min, ES+ m/z 550.4 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.22-9.26 (m, 1H), 9.19 (d, J=1.2 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.67-8.72 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.72 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.7, 2.3 Hz, 1H), 7.50-7.54 (m, 1H), 7.23 (t, J=73.0 Hz, 1H), 7.13-7.19 (m, 1H), 4.10-4.16 (m, 1H), 3.68-3.74 (m, 1H), 3.61-3.67 (m, 1H), 3.09-3.17 (m, 1H), 2.77-2.84 (m, 1H), 2.67 (s, 3H), 1.93-2.02 (m, 4H), 1.45-1.54 (m, 1H), 1.31-1.40 (m, 1H), 1.22-1.29 (m, 1H)
실시예 76
1 단계
tert -부틸 (1-((1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메틸)아제티딘-3-일)카바메이트 (실시예 76-1 단계)
탈기한 1,4-디옥산/물 (2:1, 1.95 mL) 중의 중간체 27a (60.0 mg, 0.12 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (45.7 mg, 0.19 mmol), Cs2CO3 (76 mg, 0.23 mmol) 혼합물에, Pd(PPh3)4 (13.5mg, 0.01 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 아르곤 분위기하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x10 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-30 % DCM/MeCN/NH4OH (10:10:1)로 용리)로 정제하였다. 수득된 물질을 아세토니트릴로 분쇄하여, 표제 화합물 (36 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.19 min, ES+ m/z 597.2/599.2 [M+H]+
2 단계
1-((1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메틸)아제티딘-3-아민 (실시예 76)
드라이 DCM (2 ml) 중의 얼음으로 냉각시킨 중간체 실시예 76-1 단계 (26.0 mg, 0.0435 mmol) 용액을 TFA (100 ㎕, 1.31 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온으로 데운 뒤, 3시간 교반했다. 반응 혼합물을 SCX 카트리지에 로딩하고, 메탄올로 세척하고, 메탄올 암모니아 (7N)로 용리했다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)에 투입하였다. 수득된 물질을 n-헥산/DCM으로 분쇄하여, 희망하는 화합물 (6 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 4): Rt = 1.57 min, ES+ m/z 497.1/499.1 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ:9.16-9.35 (m, 2H), 8.83-8.97 (m, 1H), 8.71 (br s, 1H), 8.28-8.40 (m, 1H), 7.82-7.93 (m, 1H), 7.71-7.81 (m, 1H), 7.54-7.66 (m, 1H), 7.06-7.40 (m, 1H), 7.14-7.21 (m, 1H), 3.93-4.03 (m, 2H), 3.49-3.63 (m, 2H), 3.42-3.47 (m, 1H), 2.72-2.90 (m, 2H)
실시예 77
1 단계
(1 s ,3 s )-3-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미도)사이클로부틸 메탄설포네이트 (실시예 77-1 단계)
DCM (8 mL) 중의 실시예 34 (240 mg, 0.49 mmol)의 냉각시킨 혼합물(0℃)에, 메탄설포닐 클로라이드 (49.3 ㎕, 0.64 mmol) 및 TEA (205 ㎕, 0.09 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1.5시간 동안 0℃부터 실온까지 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 조생성물을 물로 분쇄하여, 표제 생성물 (285 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.06 min, ES+ m/z 568.1/570.1 [M+H]+
2 단계
N- ((1 r ,3 r )-3-아지도사이클로부틸)-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 77-2 단계)
드라이 DMF (1.5 mL) 중의 중간체 실시예 76-1 단계 (60.0 mg, 0.11 mmol) 혼합물에, NaN3 (13.7 mg, 0.21 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 85℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (25 mL)로 희석한 다음, NaHCO3 포화 수용액(3x15 mL) 및 NaCl 포화 수용액(15 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰더니 표제 생성물 (55 mg)이 생성되었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.23 min, ES+ m/z 515.2/517.1 [M+H]+.
3 단계
N -((1 r ,3 r )-3-아미노사이클로부틸)-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 77)
트리페닐포스핀 (84.0 mg, 0.32 mmol)을 THF/물 15:1 (1.6 mL) 중의 중간체 실시예 77-2 단계 (55.0 mg, 0.11 mmol) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 교반했다. 반응 혼합물을 SCX 카트리지에 로딩하고, MeOH로 세척하고, 메탄올 암모니아 (7M)로 용리했다. 생성물을 함유하는 모아진 분획을 증발시키고, Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-65 % DCM/MeOH/NH4OH (90:15:1.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (16 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt =2.82 min, ES+ m/z 489.1/491.3 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.46 (s, 1H), 9.23 (d, J=7.0 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.87 (d, J=7.5 Hz, 1H), 8.67-8.75 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.80 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.45 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H), 4.53-4.69 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.46-3.56 (m, 1H), 2.28-2.41 (m, 2H), 1.91-2.09 (m, 2H).
실시예 78
1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-((1r,3r)-3-(메틸(2-(메틸아미노)-2-옥소에틸)아미노)사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 78)
DMSO (100 ㎕) 중의 중간체 실시예 77-1 단계 (30.0 mg, 0.05 mmol), N-메틸-2-(메틸아미노)아세트아미드 (0.5 mL, 4.57 mmol) 및 DMAP (1.29 mg, 0.01 mmol)를 120℃에서 마이크로웨이브 조사하에 3시간 반응시켰다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x5 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (5 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰더니, 조생성물이 생성되었고, 이를 Si 카트리지 상의 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100% DCM/MeCN/MeOH (10:10:2)로 용리)하여, 표제 생성물 (2 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt =2.89 min, ES+ m/z 574.2/576.1 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 , 353 K) δ:9.49 (s, 1H), 9.13-9.22 (m, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.59-8.80 (m, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.73-7.80 (m, 1H), 7.65-7.71 (m, 1H), 7.49-7.64 (m, 1H), 7.46 (br d, J=8.9 Hz, 1H), 7.10-7.18 (m, 1H), 4.47-4.58 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.18-3.23 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 2H), 2.64-2.70 (m, 3H), 2.23-2.34 (m, 4H), 2.13-2.21 (m, 3H)
실시예 79
1-(5-클로로-2-메톡시페닐)- N -((1 r ,3 r )-3-모르폴리노사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 79)
표제 생성물을 중간체 실시예 77-1 단계 및 모르폴린으로부터 출발하여, 실시예 78과 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 5): Rt =2.93 min, ES+ m/z 559.2/561.1 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.46 (d, J=1.2 Hz, 1H), 9.24 (dd, J=6.9, 1.7 Hz, 1H), 8.97 (d, J=7.3 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.72 (dd, J=4.0, 1.5 Hz, 1H), 8.31 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.81 (d, J=2.7 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.46 (d, J=9.2 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H), 4.50 (sxt, J=7.2 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (br t, J=4.3 Hz, 4H), 2.77-2.87 (m, 1H), 2.18-2.34 (m, 8H)
실시예 80
1-(5-클로로-2-메톡시페닐)- N -((1 r ,3 r )-3-(디메틸아미노)사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 80)
실시예 77 (12.0 mg, 0.0245 mmol)을 포름산 (254 ㎕, 6.72 mmol) / 포름알데하이드 수용액 (37.0 %, 500 ㎕, 6.72 mmol) 혼합물에 용해시키고, 60℃에서 4시간 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x15 mL), NaCl 포화 수용액 (15 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-65% DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (10 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt =2.91 min, ES+ m/z 517.2/519.0 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ:9.46 (s, 1H), 9.23 (dd, J=6.9, 1.3 Hz, 1H), 8.95 (d, J=7.1 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.67-8.78 (m, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.81 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=6.8, 4.2 Hz, 1H), 4.38-4.53 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 2.67-2.81 (m, 1H), 2.22 (br t, J=6.4 Hz, 4H), 2.06 (s, 6H)
실시예 81
1 단계
1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실산 (실시예 81-1 단계)
디옥산/물 (2:1, 4.5 mL)의 탈기한 혼합물 중의, 중간체 23c (100 mg, 0.27 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (105 mg, 0.43 mmol) 및 Cs2CO3 (174 mg, 0.54 mmol) 혼합물에, Pd(PPh3)4 (30.9 mg, 0.03 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 아르곤하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 물로 추출했다. 수성층을 2M HCl 수용액으로 산성화하고, 형성된 침전물을 여과시켜 모았다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 DCM/MeOH/포름산 (90:5:0.3)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (15 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.57 min, ES+ m/z 456.9/458.9 [M+H]+
2 단계
N -((1 s ,3 s )-3-아미노사이클로부틸)-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 81)
드라이 DMF (1 mL) 중의 중간체 실시예 81-1 단계 (15.0 mg, 32.8 μmol), tert-부틸 N-(3-아미노사이클로부틸) 카바메이트 (7.34 mg, 39.4 μmol) 및 DIPEA (12 ㎕, 65 μmol) 혼합물에, HATU (14 mg, 36.1 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x10 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (10 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-40% DCM/MeCN/MeOH (10:10:1)로 용리)로 정제하였다. 수득된 물질을 DCM (2 mL)에 용해시키고, 얼음 수조에서 냉각시킨 뒤, TFA (122 ㎕, 50 eq)를 점적했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 넘게 방치한 다음, SCX 카트리지에 로딩하고, MeOH로 세척하고, 메탄올 암모니아 (1.5N)로 용리하여, 표제 생성물 (10 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 2.88 min, ES+ m/z 525.1/527.1 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ:9.50 (s, 1H), 9.25 (br d, J=6.7 Hz, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.76 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 8.72 (br d, J=3.1 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.04 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.84 (dd, J=9.0, 2.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J=9.1 Hz, 1H), 7.28 (t, J=72.5 Hz, 1H), 7.18 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H), 4.04-4.16 (m, 1H), 3.05 (quin, J=7.8 Hz, 1H), 2.53-2.62 (m, 2H), 1.82-1.94 (m, 2H)
실시예 82
N -(2-(디메틸아미노)에틸)-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 82)
중간체 25 (40.0 mg, 0.08 mmol), DABAL-Me3 (32.1 mg, 0.13 mmol), THF (2 mL) 및 N',N'-디메틸에탄-1,2-디아민 (13.7 ㎕, 0.13 mmol)를 질소 분위기 하에서 130℃에서 마이크로웨이브 조사하에 10분간 가열했다. DABAL-Me3 (32.1 mg, 0.125 mmol)의 두번째 당량을 첨가하고, 반응 혼합물을 10분간 동일 조건 하에 더 가열했다. 반응 혼합물을 1M HCl 수용액 (2 mL)으로 조심스럽게 급랭하고, DCM (10 mL)으로 세척했다. 유기층을 2M NaOH 수용액을 사용하여 pH 9.4로 만들고, DCM (5x5 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 상 분리기에 통과시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 조생성물을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-75 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5)로 용리)로 정제하여, 표제 화합물 (25 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 2.26 min, ES+ m/z 535.3 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.52 (d, J=1.9 Hz, 1H); 9.25 (dd, J=6.9, 1.7 Hz, 1H); 8.93 (s, 1H); 8.72 (dd, J=4.1, 1.8 Hz, 1H); 8.59 (t, J=5.7 Hz, 1H); 8.34 (d, J=0.9 Hz, 1H); 8.22 (d, J=2.3 Hz, 1H); 8.18 (dd, J=8.8, 2.3 Hz, 1H); 7.69 (d, J=8.8 Hz, 1H); 7.18 (dd, J=6.9, 4.1 Hz, 1H); 3.98 (s, 3H); 3.45 (q, 6.5 Hz, 2H); 3.31 (s, 3H); 2.45 (t, J=6.8 Hz, 2H); 2.20 (s, 6H)
실시예 83 내지 84
다음의 실시예들은 표시된 출발 물질로부터, 실시예 82와 유사한 방식으로 제조하였다.
실시예 85
1 단계
6-클로로-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실산 (실시예 85-1 단계)
THF (11.3 mL) 중의 중간체 24c (543 mg, 1.37 mmol) 혼합물에, 물 (3.75 mL)중의 LiOH (165 mg, 6.86 mmol) 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔사를 물에서 취하고, 1M HCl 수용액을 사용하여 pH를 2.5로 조정하여, 침전물이 형성되었는데, 이를 여과시켜 모으고, 물로 세척하고 건조시켜, 표제 생성물 (485 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.44, ES+ m/z 382.0/383.9 [M+H]+
2 단계
tert -부틸 (6-클로로-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)카바메이트 (실시예-85-2 단계)
중간체 실시예 85-1 단계 (330 mg, 0.86 mmol)를 t-BuOH (15 mL) 및 TEA (361 ㎕, 2.6 mmol)에 용해하고, 30분간 환류했다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 두고, DPPA (279 ㎕, 1.3 mmol)를 첨가하고, 10시간 환류했다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-100% EtOAc로 용리)로 정제하였다. 분리된 물질을 에틸 에테르로 분쇄하여, 표제 생성물 (224 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.04, ES+ m/z 453.1/455.1 [M+H]+
3 단계
tert -부틸 (1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)카바메이트 (실시예 85-3 단계)
물 (4.4 mL)/ THF (8.8 mL) 혼합물 중의, 중간체 실시예 85-2 단계 (224 mg, 0.50 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (182 mg, 0.742 mmol) 및 K3PO4 (262 mg, 1.24 mmol)의 탈기된 혼합물에, XPhos PdG3 (25 mg, 0.06 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 75℃에서 2시간 동안 아르곤 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물 (15 mL)과 NaHCO3 포화 수용액 (15 mL)으로 희석하고, DCM (4x15 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:40:1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (45 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.01, ES+ m/z 536.1 [M+H]+
4 단계
tert -부틸 (1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)(메틸)카바메이트 (실시예 85-4 단계)
드라이 DMF (1.5 mL) 중의 중간체 85-3 단계 (45.0 mg, 0.08 mmol) 혼합물에, NaH (60 % 미네랄오일 중의 분산액, 3.4 mg, 0.08 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 아이오도메탄(5.75㎕, 0.09 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 데워지게 두었다. 2시간 교반한 다음, 반응 혼합물을 물로 급랭시키고, EtOAc (3x)로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, 건조하고, 진공 농축시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (사이클로헥산 중의 0-100 % EtOAc로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (30 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.07, ES+ m/z 550.9 [M+H]+
5 단계
1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)- N -메틸-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-아민 (실시예 85)
DCM (3 mL) 중의 중간체 실시예 85-4 단계 (30.0 mg, 0.05 mmol) 혼합물에, TFA (243 ㎕, 3.28 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 건조시키고, 잔사를 MeOH 중에서 취한 후 SCX 카트리지로 로딩하고, MeOH로 세척하고, 2M 에탄올 암모니아로 용리했다. 수득된 물질을 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피(DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)에 투입하여, 표제 생성물 (15 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 7): Rt = 3.74 min, ES+ m/z 450.0 [M+H]+
1HNMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.21-9.23 (m, 1H); 9.06 (d, J=0.6 Hz, 1H); 8.86 (s, 1H); 8.71 (dd, J=4.1 Hz, J=1.7 Hz, 1H); 8.18 (d, J=0.9 Hz, 1H); 8.01 (d, J=2.4 Hz, 1H); 7.97 (dd, J=8.9 Hz, J=2.4 Hz, 1H); 7.58 (d, J=8.9 Hz, 1H); 7.16 (dd, J=7.0 Hz, J=4.1 Hz, 1H); 6.91 (q, J=4.8 Hz, 1H); 4.02 (s, 3H); 3.26 (s, 3H); 2.95 (d, J=5.2 Hz, 3H)
실시예 86
1 단계
N 1 -(1-(5-아미노-2-메톡시페닐)-6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N 2 , N 2 -디메틸에탄-1,2-디아민 (실시예 86-1 단계)
EtOH (1.8 mL) 중의 중간체 18o (77 mg, 0.12 mmol), 암모늄 포르메이트 (46 mg, 0.73 mmol) 및 Pt/C (3% 활성화 카본, 황화된 것, 50 %, 9.5 mg, 0.02 mmol)를 2시간 환류했다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 규조토 패드로 여과하고, DCM으로 세척했다. 여과물을 증발시키고, 잔사를 물과 DCM 사이에 분배했다. 수성층을 DCM (2 Х 15 mL)으로 추가로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5))로 정제하여, 표제 화합물 (18 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.83, ES+ m/z 361.1/363.1 [M+H]+
2 단계
N 1 -(1-(5-아미노-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N 2 , N 2 -디메틸에탄-1,2-디아민 (실시예 86-2 단계)
표제 화합물을 중간체 실시예 86-1단계로부터 출발하여, 실시예 85-3단계와 유사한 방식으로 제조하였다.
LCMS (방법 1): Rt = 0.76, ES+ m/z 443.9 [M+H]+
3 단계
N -(3-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-1-일)-4-메톡시페닐)메탄설폰아미드 (실시예 86)
중간체 실시예 86-2 단계 (14 mg, 0.03)의 냉각된 (0℃) 혼합물에, 피리딘 (2.8 mg, 0.03 mmol)에 이어, 메탄설포닐 클로라이드(2.2 ㎕, 0.03 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 0℃에서 15분간 교반하고, 실온에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 NaHCO3 포화 수용액으로 희석하고, DCM (4x15 mL)으로 추출했다. 합쳐진 유기층을 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거했다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 7): Rt = 3.14 min, ES+ m/z 522.2 [M+H]+
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.61 (bs, 1H), 9.21 (dd, J=7.1, 1.7 Hz, 1H), 9.09 (d, J=1.0 Hz, 1H), 8.86 (s. 1H), 8.70 (dd, J=4.0, 1.7 Hz, 1H), 8.15 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.37 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.31 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.28 (dd, J=8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=7.1, 4.1 Hz, 1H), 6.74 (t, J=5.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.42 (q, J=6.1 Hz, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.60-2.56 (m, 2H), 2.24 (s, 6H).
실시예 87
1 단계
tert -부틸 (2-((6-클로로-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)아미노)-2-옥소에틸)(메틸) (실시예 87-1 단계)
DCE (1 mL) 중의 Boc-사르코신 (42.8 mg, 0.23 mmol) 및 EEDQ (56.0 mg, 0.23 mmol) 현탁액을 실온에서 10분간 교반했다. DCE (2 mL) 중의 중간체 18l (35.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 교반했다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (2x5 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰더니 잔사가 생성되었고, 이를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0.100 % DCM/MeOH (20:1)로 용리)로 정제하였다. 수득된 물질을 디에틸 에테르 및 사이클로헥산으로 분쇄하여, 표제 생성물 (29 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.20 min, ES+ m/z 479.1/481.0
2 단계
tert-부틸 (2-((1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)아미노)-2-옥소에틸)(메틸)카바메이트 (실시예 87-2 단계)
1,4-디옥산/물 (2:1, 0.9 mL) 및 Pd(PPh3)4 (6.98 mg, 6.0 μmol)의 혼합물을 중간체 실시예 87-1 단계 (29.0 mg, 0.06 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (22.2 mg, 0.09 mmol) 및 Cs2CO3 (39.3 mg, 0.12 mmol)이 채워진 바이얼에 첨가했다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 아르곤 하에 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc (15 mL)로 희석하고, NaHCO3 포화 수용액 (3x5 mL) 및 NaCl 포화 수용액 (5 mL)으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 농축했다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (EtOAc 중의 0-10 % MeOH로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (15 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.12 min, ES+ m/z 563.3/565.2.
3 단계
N -(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)-2-(메틸아미노)아세트아미드 (실시예 87)
DCE (0.5 mL) 중의 중간체 87-2 단계 (15.0 mg, 26.6 μmol) 용액을 TFA (69.3 ㎕, 0.93 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (0-100 % DCM/MeOH/NH4OH (90:1:0.1)로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (11.5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 3): Rt = 0.97 min, ES+ m/z 462.9 [M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.41 (d, J=1.0 Hz, 1H), 9.23 (dd, J=7.1, 1.7 Hz, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.71 (dd, J=4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.22 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.56 (m, 2H), 7.45 - 7.39 (m, 1H), 7.16 (dd, J=7.0, 4.0 Hz, 1H), 6.73 (br s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.43 (s, 2H), 2.38 (s, 3H).
실시예 88
1 단계
(6-클로로-1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메탄올 (실시예 88-1 단계)
DMF (2.9 mL) 중의 중간체 37 (193 mg, 1.05 mmol), 중간체 13a (538 mg, 1.58 mmol), K2CO3 (291 mg, 2.10 mmol), 염화구리(I) (100 mg, 0.526 mmol) 및 DMCHA (166 ㎕ 1.05 mmol)를 100℃에서 10시간 동안 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 암모니아 수용액(1M)으로 여러번 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피(DCM 중의 0-50 % EtOAc로 용리)하여, 표제 생성물(108 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.02 min, ES+ m/z 444.1/446.1 [M+H]+
2 단계
6-클로로-1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르브알데하이드 (실시예 88-2 단계)
DMP (115 mg, 0.272 mmol)를 DCM (10 mL) 중의 중간체 실시예 88-1 단계 (107 mg, 0.23 mmol) 현탁액에 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반하고, 이어 Na2S2O3 포화 수용액/NaHCO3 포화 수용액 혼합물(1:1, 10 mL)로 급랭시키고, 30분 더 교반했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거하여, 표제 생성물 (102 mg)을 얻었고, 이를 더 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.33, ES+ m/z 442.1/444.1 [M+H]+
3 단계
6-클로로-1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복실산 (실시예 88-3 단계)
물 (0.61 mL) 중의 NaClO2 (207 mg, 2.3 mmol), NaH2PO4 (274 mg, 32.3 mmol) 용액을 THF (3.7 mL) 중의 중간체 실시예 88-2단계 (101 mg, 0.23 mmol) 용액에 첨가한 다음에, 2-메틸-2-부텐 (1.1 mL, 10 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 40℃에서 밤새 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 물로 희석했다. 수성 혼합물의 pH를 1N HCl 수용액을 사용하여 3으로 조정하였더니 침전물이 생겼고 이를 여과시켜 모으고, 물로 세척하고, 건조시켜 희망하는 생성물 (104 mg)을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.72, ES+ m/z 458.1/460.0 [M+H]+
4 단계
6-클로로-N-(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 88-4 단계)
드라이 DMF (0.7 mL) 중의 중간체 실시예 88-3 단계 (72.0 mg, 0.14 mmol), N',N'-디메틸프로판-1,3-디아민 (34.0 ㎕, 0.27 mmol) 및 DIPEA (70.7 ㎕, 0.41 mmol) 용액에, HATU (56.6 mg, 0.15 mmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 60℃에서 1시간 교반했다. HATU (56.6 mg, 0.15 mmol)의 두번째 당량을 첨가하고, 반응 혼합물을 50분 더 교반했다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, NH4Cl 포화 수용액, NaHCO3 포화 수용액, 물 및 NaCl 포화 수용액으로 세척했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조하고 건조될 때까지 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 5-10% MeOH로 용리)로 정제하여, 표제 생성물 (42 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.28, ES+ m/z 542.3/544.2 [M+H]+
5 단계
N -(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-2-메톡시-4-((4-메톡시벤질)옥시)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 88-5 단계)
THF (1.58 mL) 및 물 (0.55 mL)을 중간체 실시예 88-4 단계 (40.7 mg, 0.07 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (26.2 mg, 0.11 mmol) 및 K3PO4 (30.3 mg, 0.14 mmol)로 채워진 바이얼에 추가했다. XPhos Pd G3 (6.04 mg, 7.1 μmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 75분간 아르곤 대기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 DCM과 물 사이에 분배했다. 유기층을 물, NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 상의 크로마토그래피(DCM 중의 DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)하여, 표제 생성물 (24.5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.20, ES+ m/z 625.4 [M+H]+
6 단계
N -(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-4-하이드록시-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-카르복스아미드 (실시예 88)
디클로로메탄 (0.5 mL) 중의 중간체 실시예 87-5 단계 (22.3 mg, 0.04 mmol) 현탁액을 얼음 수조에서 냉각시키고, TFA (318 ㎕, 4.28 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물은 실온에서 20분간 교반했다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 증발시키고 DCM과 물 사이에 분배했다(NaHCO3 포화 수용액을 이용하여 대략 pH 8로 조정). 형성된 침전물을 여과시켜 모으고, 물로 세척하고, 건조시켜, 표제 생성물 (6.20 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 3): Rt = 0.94 min, ES+ m/z 505.3
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.48 (s, 1H), 9.23 (br d, J=7.0 Hz, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.76 (br t, J=5.5 Hz, 1H), 8.72 (br d, J=3.1 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.53 (br d, J=11.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=6.7, 4.0 Hz, 1H), 6.90 (br d, J=7.6 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.35 (m, 2H, overlap with HDO), 2.28 (br t, J=6.9 Hz, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.70 (quin, J=6.9 Hz, 2H).
실시예 89
1 단계
1-(6-클로로-1-트리틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N -메틸메탄아민 (실시예 89-1 단계)
THF (11.7 mL) 중의 중간체 37-1a/중간체 37-1b (중간체 37의 1단계 이후 수득된 혼합물) (563 mg, 1.15 mmol) 용액을 메틸아민 (THF 중의 2.0M, 5.76 mL, 11.5 mmol) 용액에 점적하고, 실온에서 45분간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 건조시키고, 잔사를 EtOAc와 NaHCO3 포화 수용액 간에 분배했다. 유기층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피(DCM 중의 DCM/MeOH (20:1)로 용리)하여, 표제 생성물을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.37, ES+ m/z 439.2/441.1 [M+H]+
2 단계
1-(6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)-N-메틸메탄아민 (실시예 89-2 단계)
TFA (5.91 mL, 79.6 mmol)를 디클로로메탄 (5.91 mL) 중의 중간체 89-1 단계 (520 mg, 1.18 mmol) 및 트리에틸실란 (568 ㎕, 3.55 mmol) 용액에 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 교반했다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔사를 실리가 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)하여, 표제 생성물을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.50, ES+ m/z 197.0/199.0 [M+H]+.
3 단계
tert-부틸 ((6-클로로-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메틸)(메틸)카바메이트 (실시예 89-3 단계)
트리에틸아민 (417 ㎕, 2.99 mmol)과 Boc2O (256 mg, 1.17 mmol)를 DCM (5 mL) 중의 중간체 실시예 89-2 단계 (210 mg, 1.07 mmol) 용액에 첨가했다. 반응 혼합물을 실온에서 100분간 교반한 다음, DCM과 NaHCO3 포화 수용액 간에 분배했다. 유기층을 물과 NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피 (DCM/MeOH (20:1)로 용리)하여, 표제 생성물(199 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 0.91, ES+ m/z 297.1/299.1 [M+H]+.
4 단계
tert-부틸 ((6-클로로-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메틸)(메틸)카바메이트 (실시예 89-4 단계)
DMF (0.8 mL) 중의 중간체 실시예 89-3 단계 (70.0 mg, 0.24 mmol), 중간체 11c (93.8 mg, 0.35 mmol), K2CO3 (65.2 mg, 0.472 mmol), 염화구리(I) (33.7 mg, 0.18 mmol) 및 DMCHA (50.3 mg, 0.35 mmol)를 100℃에서 밤새 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 EtOAc와 물 사이에 분배했다. 유기층을 물, NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거했다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피 (DCM 중의 DCM/MeOH (30:1)로 용리)하고, 실리카 겔 컬럼 상에서 두번째 정제(n-헥산 중의 EtOAc (1:2)로 용리)하여, 표제 생성물 (29.0 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.11, ES+ m/z 481.0/482.9 [M+H]+.
5 단계
tert-부틸 ((1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)메틸)(메틸)카바메이트 (실시예 89-5 단계)
THF (1.18 mL) 및 물 (0.41 mL) 중의, 중간체 실시예 89-4 단계 (27.0 mg, 0.06 mmol), 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피라졸로[1,5-a]피리미딘 (24.8 mg, 0.10 mmol), K3PO4 (23.8 mg, 0.11 mmol)를 아르곤으로 탈기시킨 다음, XPhos Pd G3 (4.75 mg, 5.6 μmol)를 첨가했다. 반응 혼합물을 아르곤 하에서 60℃에서 1시간 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 DCM과 물 사이에 분배시켰다. 유기층을 물, NaCl 포화 수용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거했다. 잔사를 실리카 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피 (30:0 내지 1 DCM 중의 MeOH로 용리)하는 데 이어, 실리카 겔 컬럼 상의 추가 정제 (DCM/EtOAc, (1:1)로 용리)하여, 표제 생성물 (26.0 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 4.28, ES+ m/z 564.3 [M+H]+.
6 단계
1-(1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5- a ]피리미딘-3-일)-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-3-일)- N -메틸메탄아민 (실시예 89)
DCM (0.5 mL) 중의 중간체 실시예 88-5 단계 (23.0 mg, 0.04 mmol) 현탁액을 실온에서 1시간 동안 TFA (106 ㎕, 1.43 mmol)로 처리했다. 반응 혼합물을 감압 하에 증발시키고, 잔사를 실리카 겔 컬럼 상에서 크로마토그래피(DCM/MeOH/NH4OH (90:9:1.5)로 용리)하여, 표제 생성물(17.5 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 3): Rt = 0.78 min, ES+ m/z 464.2 [M+H]+
1H-NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 9.32 (d, J=0.9 Hz, 1H), 9.23 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.71 (dd, J=4.0, 1.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.09 (dd, J=8.9, 2.1 Hz, 1H), 8.05 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.17 (dd, J=7.0, 4.3 Hz, 1H), 4.13 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.38 (s, 3H)
실시예 90
1 단계
1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)- N -(3-메톡시피라진-2-일)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-6-아민 (실시예 90-1 단계)
1,4-디옥산 (2.1 mL) 중의 중간체 18a (70 mg, 0.24 mmol), 2-아미노-3-메톡시피라진(39 mg, 0.31 mmol), 소듐 t-부톡사이드 (35 mg, 0.36 mmol)의 탈기한 혼합물에, RuPhos-Pd-G3 (30 mg, 0.04 mmol)를 첨가하고, 이 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 아르곤 분위기 하에서 교반했다. 실온으로 냉각시킨 뒤, 반응 혼합물을 물(5mL)로 희석하였더니 침전물이 형성되었고, 이를 여과시켜 모아, 표제 생성물 (100 mg)을 얻었으며, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
LCMS (방법 2): Rt = 1.21, ES+ m/z 381.1 [M+H]+
2 단계
3-((1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-3-메틸-1 H -피라졸로[4,3- c ]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1 H )-온 (실시예 90)
TMS-Cl (110 ㎕, 0.84 mmol) 및 NaI (126 mg, 0.84 mmol)를 아세토니트릴 (8 mL) 중의 중간체 실시예 90-1 단계 (107 mg, 0.28 mmol) 혼합물에 첨가했다. 반응 혼합물을 85℃에서 2시간 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고 감압 하에 증발시켰다. 잔사를 Si 카트리지 상의 플래시 크로마토그래피 (DCM 중의 0-40 % DCM/MeOH/NH4OH (90:9:0.5))로 정제하여, 표제 화합물 (51 mg)을 얻었다.
LCMS (방법 5): Rt = 3.26 min, ES+ m/z 367.1[M+H]+
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ = 12.19 (br s, 1H), 8.87 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.19 (d, J=1.0 Hz, 1H), 7.30-7.44 (m, 3H), 6.83-6.97 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.58 (s, 3H)
실시예 91 내지 99
다음의 실시예는 표시된 출발 물질로부터, 실시예 90과 유사한 방식으로 제조하였다. 리간드 / 팔라듐 급원에 소소한 변형이 있는 경우, 이들을 괄호 안에 표기해두었다.
본 발명의 화합물(1-99)의 약리학적 활성
JAK1, JAK2 , JAK3 및 Tyk2의 생화학적 활성
어세이 원리
본 연구의 목적은 셀-프리(cell-free) 환경에서, 모든 4가지 JAK 이소폼을 억제하는 화합물의 능력을 측정하기 위한 것이었다. JAK 1, JAK 2, JAK 3 및 TYK2에 대한 어세이를 시간차 형광 공명 에너지 전이 분석법(Time-resolved fluorescence resonance energy transfer (TR-FRET) technology)으로 수행하였다. 이 분석법은 여기된 도너로부터 억셉터 염료(dye)로의 에너지 전이와, 억셉터 염료에 의한 발광 측정에 의해 검출되는 2개의 레이블링된 바인딩 파트너의 상호작용으로 이루어진다. LANCE 울트라 키나아제 분석법 (LANCE Ultra kinase assay)을 사용하였다. JAK1, JAK2, JAK3 및 TYK2 키나아제 및 ATP (Km에 대응)의 존재하에 ULight 펩타이드 기질 (LANCE Ulight-JAK-1 (Tyr1023) Peptide, Perkin Elmer, TRF0121)을 인산화시켰다. 이어서, 항체 (Eu-anti-phospho-substrate antibody (LANCE Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine (PT66), Perkin Elmer, AD0069)로 이를 포획하면, Eu-킬레이트 도너와 ULight 억셉터 염료가 근접하게 된다. 320 nm에서 여기시켰을 때, Eu-킬레이트는 이의 에너지를 ULight 염료로 전달하고, 이를 통해 665 nm에서 형광 발광이 일어난다.
화합물 시험
순수한 DMSO 중의 화합물 연속 희석액을 10 mM DMSO 스탁 용액(stock solution)으로부터 제조했다. 화합물을 가장 높은 농도인 20 μM로부터 시작하여 11개의 연속적인 5배 희석액 (20 μM - 2 pM)에 대하여 384-웰 플레이트에서 시험하였다. Mosquito (TTP labtech)를 이용하여, 화합물 200 nL를 마더 플레이터로부터 테스트 플레이트로 전달하였다. 어세이는 20 ㎕ 시험 용적 (키나아제 반응) 및 40 ㎕ 총 용적 (중단제 및 항체 검출제)인 384-엘 퍼킨 엘머 (Perkin Elmer) 테스트 플레이트에서 수행하였다. 30/50/20/10nM 의 펩타이드 및 20/0.7/0.2/12μM의 ATP로 이루어진 기질 용액 (펩타이드+ATP) 10 ㎕에, JAK 1, JAK 2, JAK 3 및 TYK2를 각각 첨가했다. 효소 용액 10 ㎕를 농도, 즉 각각 0.15/0.083/0.025/0.144 ng/㎕의 JAK 1, JAK 2, JAK 3 및 TYK2로 키나아제 반응에 첨가했다. 흔들어주고 1.5시간 실온에서 인큐베이션한 다음, 중단 (10 ㎕ EDTA) 및 검출 혼합물 (10 ㎕ 유로퓸 항 포스포 항체, 최종: 0.5 nM) 20 ㎕를 첨가했다. 인큐베이션 1시간 후에, EnVision 2104 리더(Perkin Elmer)에서 결과값을 판독했다.
IC50 데이터, 커브 및 QC 어낼리시스를 Excel 툴 및 GrahphPadPrism 소프트웨어 v9를 이용하여 계산했다. 간단히 말해, 각각의 농도-효능 커브는 시험 화합물 (X)의 시험 농도 대 해당 억제 백분율 값 (Y)의 로그값을, 최소제곱법 (통상) 피팅을 이용하여 플롯팅함으로써 생성된다. 최적합의 IC50 값은 Log(억제제) 대 정규화된 반응 - 변수 기울기 방정식 Y=100/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))을 이용하여 계산한다. QC 크라이테리아 파라미터(criteria parameters)(Z', S:B, R2, HillSlope)를 모든 IC50 커브에 대해 체크했다. IC50 데이터, 커브 및 QC 어낼리시스를 Excel 툴 및 GrahphPadPrism 소프트웨어를 이용하여 계산했다. QC 크라이테리아 파라미터(criteria parameters): Z' ≥0.5, Hill Slope 범위 0.5 내지 5, S:B > 2.
본 발명의 화합물 (실시예 1 a-10a 및 1-99 포함)은 모든 JAK 이소폼에 대한 억제능에 대해, 6 초과의 pIC50값을 보였고, 이는 억제 농도 측면에서 < 1 μM에 해당한다. 대부분의 화합물은 JAK1에 대한 억제능에서, 좋기로는 7.3 이상의 값, 더 좋기로는 8.3 이상의 값을 보였고, 이는 억제 농도 측면에서 ≤50 nM에 해당한다.
화합물 1-99에 대한 데이터를 아래 표에 실었다.
아래 분류표에 따라 JAK1, JAK2, JAK3 및 Tyk2 이소폼에 대한 억제 활성을 기준으로 화합물들을 위 표와 같이 분류해보았다.
+ + + : pIC50 ≥ 8.3
+ + : 8.3 > pIC50 ≥7.3
+ : pIC50 < 7.3
본 명세서에서 수치 범위나 상한, 하한이 사용되는 경우, 말단 값도 포함하는 값이다. 또한, 어떤 수치 범위나 상한 또는 하한내의 모든 값과 하위 범위도, 별도로 제외된다고 언급하지 않는 한은 모두 포함한다.
본 명세서 사용된 "단수(a, an)"의 표현은 "1개 이상(one or more)"을 의미하는 것이다.
본 발명의 수치적인 변형이나 변경은 본 발명의 교시에서 가능함이 명백하다. 따라서, 첨부된 특허청구범위 내에서, 본 발명은 여기에 구체적으로 기술된 것과 달리 실시될 수 있음을 이해해야 한다.

Claims (12)

  1. 화학식 I의 화합물:
    {[화학식 I]

    상기 화학식 I에서,
    X 1 및 X 2 는 교대로(alternatively) N 또는 CH이고,
    X 3 및 X 4 는 교대로(alternatively) N 또는 CH이며, 두 개의 점선은 이에 따라 교대로 (alternatively) X3=N 사이에 또는 N=X4 사이에 이중 결합이 있음을 나타내고,
    W는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일 및 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노로부터 선택되는 헤테로아릴이고,
    R 1 은
    할로겐,
    -OH,
    -CN,
    -NO2,
    -(CH2)mNR4R5,
    (C1-C6)알킬,
    (C1-C6)하이드록시알킬,
    (C1-C6)알콕시,
    (C1-C6)알킬티오-,
    (C1-C6)할로알킬,
    (C1-C6)할로알콕시,
    (C1-C6)할로알킬티오-
    및 화학식 K의 기
    [화학식 K]

    로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상, 좋기로는 2개 또는 3개의 기로 임의로는 치환된 피리디닐, 피페리디닐, 페닐 또는 벤질기로부터 선택되고,
    [상기 화학식 K에서,
    L은 부재하거나, 또는 O, S, S(O)2, (CO), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O), NHCONH, N(R6)S(O)2, S(O)2N(R6)로부터 선택되는 2가 기이고,
    Z는 H, -OH, -CN, -NO2, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되며 (여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, (C1-C6)알콕시, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, 옥소, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)]
    R 2 및 R 3 은 존재하는 경우 H, (C1-C6)알킬 및 화학식 J의 기로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되며,
    [화학식 J]

    [상기 화학식 J에서,
    V는 부재하거나 O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로부터 선택되는 2가 기이고,
    Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, 하이드록시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)]
    n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1, 2, 3, 4로부터 선택되는 정수이고,
    R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
    -H,
    (C1-C6)알킬,
    (C1-C6)할로알킬,
    (C1-C6)하이드록시알킬,
    알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, 및
    (C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
    R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, 및 알카노일로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
    R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, -NR4R5 로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다}
    이의 단일 광학이성질체(single enantiomers), 부분입체이성질체(diastereoisomers) 및 임의 비율의 이의 혼합물(mixtures thereof in any proportion),
    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물(solvates).
  2. 제1항에 있어서,
    화학식 (Io)으로 표시되는 화합물인 것인 화합물:
    {[화학식 (Io)]

    상기 화학식 (Io)에서, W는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일, 이미다조[1,2-b]피리다진-3-일 및 (3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노로부터 선택되는 헤테로아릴이다}
    이의 단일 광학이성질체, 부분입체이성질체 및 이의 혼합물,
    또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    R1은
    할로겐, 좋기로는 Cl 및 F,
    OH,
    (C1-C6)알콕시, 좋기로는 메톡시,
    (C1-C6)알킬티오-, 좋기로는 메틸티오
    (C1-C6)할로알콕시, 좋기로는 디플루오로메톡시
    로부터 독립적으로 선택된 2개 또는 3개의 기로 치환된 페닐인 것인 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    화학식 (Ib)으로 표시되는 화합물:
    {[화학식 (Ib)]

    상기 식에서, R 8 은
    (C1-C6)알콕시,
    (C1-C6)할로알콕시;로 이루어지는 군에서 선택되고,
    L은 O, S, S(O)2, C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O)로 이루어지는 2가기 로부터 선택되며,
    Z는 H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고(여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 더 치환된다)
    R 3 은 -H 또는 (C1-C6)알킬이며,
    V는 부재하거나, O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로 이루어지는 2가기로부터 선택되고,
    Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)
    n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1 내지 4로부터 선택되는 정수이고,
    R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
    -H,
    (C1-C6)알킬,
    (C1-C6)할로알킬,
    (C1-C6)하이드록시알킬,
    알카노일,
    (C1-C6)알콕시카르보닐, 및
    (C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
    R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
    R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다}
    이의 단일 광학이성질체, 부분입체이성질체 및 이의 혼합물,
    또는 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    화학식 (Ib1)으로 표시되는 화합물:
    {[화학식 (Ib1)]

    상기 식 중, R 8 은
    (C1-C6)알콕시,
    (C1-C6)할로알콕시;로 이루어지는 군에서 선택되고,
    L은 O, S, S(O)2, C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O)로 이루어지는 2가 기로부터 선택되며,
    Z는 H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NH(R6), (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고(여기서, 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 (C1-C10)알킬, 알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, -C(O)NH(R6), (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로는 더 치환된다)
    R 3 은 -H 또는 (C1-C6)알킬이며,
    V는 부재하거나, O, S, S(O)2, C(O), C(O)O, O(O)C, C(O)N(R6), N(R6)C(O); N(R6)-(CH2)m-N(R6), -N(R6)-로 이루어지는 2가 기로부터 선택되고,
    Q는 H, -CN, -OH, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)할로알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카르보닐, -(CH2)mNR4R5, -C(O)NR4R5, -N(R6)C(O)R6, -CH(CN)NR4R5, (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고 (여기서 상기 (C3-C8)사이클로알킬, 아릴, 헤테로아릴 및 (C3-C6)헤테로사이클로알킬은 -OH, 옥소, (C1-C10)알킬, (C1-C10)알킬-S(O)2-O-, 알카노일, (C1-C6)하이드록시알킬, (C1-C6)알콕시(C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시카르보닐, (C1-C6)알콕시카르보닐-NH-, -N(R6)(CH2)mC(O)NR4R5, -NR4R5, (C3-C6)헤테로사이클로알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1개 이상의 치환체로 임의로 더 치환된다)
    n 및 m은 각 위치에서 독립적으로 0이거나, 또는 1 내지 4로부터 선택되는 정수이고,
    R 4 및 R 5 은 서로 동일하거나 상이하며,
    -H,
    (C1-C6)알킬,
    (C1-C6)할로알킬,
    (C1-C6)하이드록시알킬,
    알카노일, (C1-C6)알콕시카르보닐, 및
    (C3-C6)헤테로사이클로알킬;로 이루어지는 군으로부터 선택되며,
    R 6 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬, (C1-C6)하이드록시알킬로 이루어지는 군으로부터 선택되고,
    R 7 은 각 위치에서 독립적으로, H, (C1-C6)알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다}
    이의 단일 광학이성질체, 부분입체이성질체 및 이의 임의 비율의 혼합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물.
  6. 제1항에 있어서,
    아래 나열한 화합물로부터 선택되는 화합물:
    {(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일)메탄올;
    2-(3-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-5-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[3,4-b]피리딘-1-일)-N,N-디메틸아세트아미드;
    메틸 1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-카르복실레이트;
    2-(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일)-N,N-디메틸아세트아미드;
    2-(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-3-일)아세트산;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(4-클로로-2-플루오로벤질)-6-(이미다조[1,2-b]피리다진-3-일)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘;
    3-(3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-1-일)피페리딘-1-일)-3-옥소프로판니트릴;
    1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-(디플루오로메틸)-2-메톡시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2-메톡시-5-(트리플루오로메틸)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-(메틸티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-((디플루오로메틸)티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-사이클로프로폭시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2,5-디메톡시페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    3-((4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)설포닐)프로판-1-올;
    1-(2-메톡시-5-(프로필설포닐)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    4-클로로-2-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페놀;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    4-메톡시-N-메틸-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)벤젠설폰아미드;
    N-(2-하이드록시에틸)-4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)벤젠설폰아미드;
    4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-N-(3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필)벤젠설폰아미드;
    4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-N-((1-메틸아제티딘-3-일)메틸)벤젠설폰아미드;
    4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-N-(2-(4-메틸피페라진-1-일)에틸)벤젠설폰아미드;
    4-메톡시-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-N-(2-모르폴리노에틸)벤젠설폰아미드;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-메톡시에틸)설포닐)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    3-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)설포닐)-N,N-디메틸프로판-1-아민;
    2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)설포닐)에탄-1-올;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-(피페리딘-1-일)에틸)설포닐)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(3-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)설포닐)피롤리딘-1-일)에탄-1-온;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((3-메톡시페닐)설포닐)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸설포닐)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    3-메톡시-4-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페놀;
    2-(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)아세토니트릴;
    (1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)메탄올;
    1-(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N,N-디메틸메탄아민;
    1-(1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N-메틸메탄아민;
    (1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)메탄아민;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-N-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-((1s,3s)-3-하이드록시사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    (1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)(1,1-디옥사이도티오모르폴리노)메탄온;
    1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-N-((1s,3s)-3-(디메틸아미노)사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-N-(3-(디메틸아미노)프로필)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    N-(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-아민;
    N-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)아세트아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-아민;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N,N-디메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-아민;
    1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-N-(2-모르폴리노에틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-아민;
    N1-(1-(5-(디플루오로메틸)-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N2,N2-디메틸에탄-1,2-디아민;
    N1-(1-(2-메톡시-5-메틸페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N2,N2-디메틸에탄-1,2-디아민;
    N1-(1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸티오)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N3,N3-디메틸프로판-1,3-디아민;
    1-(4-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)피페라진-1-일)에탄-1-온;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-3-(피페라진-1-일)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    (1-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)아제티딘-3-일)메탄올;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-3-메톡시-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N,N-디메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-아민;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-아민;
    N-(2-((1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)아미노)에틸)아세트아미드;
    2-((1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)아미노)-N-메틸아세트아미드;
    N-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)아세트아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-아민;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-올;
    2-플루오로-5-메톡시-4-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페놀;
    2-클로로-5-메톡시-4-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페놀;
    5-메톡시-2-메틸-4-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페놀;
    1-(2-클로로-5-메톡시피리딘-4-일)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    (4-클로로-2-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)메탄올;
    1-(5-브로모-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)벤조니트릴;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-메틸페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-N-(티아졸-2-일)벤즈아미드;
    2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)-N-메틸아세트아미드;
    2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)아세트아미드;
    2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)-N-(2-하이드록시에틸)아세트아미드;
    2-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)설포닐)아세트아미드;
    1-(5-(사이클로프로필티오)-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(옥세탄-3-일티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(피페리딘-4-일티오)페닐)-3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘;
    1-(4-((4-(디플루오로메톡시)-3-(3-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)페닐)티오)피페리딘-1-일)에탄-1-온;
    1-((1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)메틸)아제티딘-3-아민;
    N-((1r,3r)-3-아미노사이클로부틸)-1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-((1r,3r)-3-(메틸(2-(메틸아미노)-2-옥소에틸)아미노)사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-((1r,3r)-3-모르폴리노사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-N-((1r,3r)-3-(디메틸아미노)사이클로부틸)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    N-((1s,3s)-3-아미노사이클로부틸)-1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    N-(2-(디메틸아미노)에틸)-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    N-(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-N-(3-모르폴리노프로필)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-N-메틸-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-아민;
    N-(3-(3-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)-4-메톡시페닐)메탄설폰아미드;
    N-(1-(5-클로로-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-2-(메틸아미노)아세트아미드;
    N-(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-4-하이드록시-2-메톡시페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    1-(1-(2-메톡시-5-(메틸설포닐)페닐)-6-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-일)-N-메틸메탄아민;
    3-((1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    3-((1-(5-(디플루오로메틸)-2-메톡시페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    N-(2-하이드록시에틸)-4-메톡시-3-(3-메틸-6-((3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)벤젠설폰아미드;
    3-((1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-메톡시에틸)티오)페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    3-((1-(2-(디플루오로메톡시)-5-(메틸설포닐)페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    3-((1-(2-(디플루오로메톡시)-5-((2-메톡시에틸)설포닐)페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    N-(3-(디메틸아미노)프로필)-1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-6-((3-옥소-3,4-디하이드로피라진-2-일)아미노)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-3-카르복스아미드;
    3-((3-((3-(디메틸아미노)프로필)아미노)-1-(5-플루오로-2-메톡시페닐)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    3-((1-(5-(디플루오로메틸)-2-메톡시페닐)-3-((2-(디메틸아미노)에틸)아미노)-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온;
    3-((1-(5-클로로-2-(디플루오로메톡시)페닐)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-일)아미노)피라진-2(1H)-온}
    이의 단일 광학이성질체, 부분입체이성질체 및 이의 혼합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물.
  7. 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합된, 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 정의된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    흡입형 분말, 추진제 함유 계량 에어로졸 또는 추진제 무함유 흡입 가능한 제형으로부터 선택되는, 흡입 형태로 투여되기에 적합한 약학 조성물.
  9. 단회 투여 혹은 다회 투여용 건조 분말 흡입기, 계량형 흡입기 또는 연무 분무기일 수 있는, 제8항에 기재된 약학 조성물을 포함하는 장치.
  10. 의약으로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제8항 중 어느 하나의 항에 기재된 화합물 또는 약학 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    천식, 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 특발성 폐섬유증 (IPF), 급성 폐손상 및 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 폐 질환의 예방 및/또는 치료 용도의, 화합물 또는 약학 조성물.
  12. 제1항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 정의된 화합물과,
    아래에 예시하는 바와 같이 이 분야의 숙련자에게 잘 알려진 호흡기 질환 치료에 흔히 사용되는 것들을 포함하는 다른 약학적으로 활성인 성분으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상의 활성 성분의 조합물(combination):
    베타2-아고니스트(beta2-agonists), 항무스카린제 (antimuscarinic agents), 코르티코스테로이드(corticosteroids), 미토젠 활성화 키나아제 억제제 (mitogen-activated kinases (P38 MAP kinases) inhibitors), 핵 인자 카파-B 키나아제 서브유닛 베타 억제제 (nuclear factor kappa-B kinase subunit beta inhibitors (IKK2)), 인간 호중구 엘라스타제 억제제 (human neutrophil elastase (HNE) inhibitors), 포스포디에스터라제 4 (PDE4) 억제제 (phosphodiesterase 4 (PDE4) inhibitors), 류코트리엔 모듈레이터 (leukotriene modulators), 비스테로이드 항염증제 (non-steroidal anti-inflammatory agents (NSAIDs)) 및 점액 조절제 (mucus regulators).
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