KR20230145517A - PI3Kδ 관련 장애의 치료를 위한 피라졸로피리미딘 유도체의 용도 - Google Patents

PI3Kδ 관련 장애의 치료를 위한 피라졸로피리미딘 유도체의 용도 Download PDF

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Abstract

본 출원은 식 I의 화합물:

또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 사용하여 PI3Kδ 관련 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

Description

PI3Kδ 관련 장애의 치료를 위한 피라졸로피리미딘 유도체의 용도{USE OF PYRAZOLOPYRIMIDINE DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF PI3Kδ RELATED DISORDERS}
본 출원은 2013년 3월 1일에 출원된 미국 가특허출원 61/771,480에 대해 우선권의 이익을 주장하고, 이는 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.
본 출원은 피라졸로피리미딘 유도체를 사용하는 PI3Kδ 관련 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
포스포이노시티드 3-키나제 (PI3Ks)는 이노시톨 링의 D3 위치에서 포스포릴화하는 지질 신호전달 키나제 포스포이노시티드의 큰 패밀리에 속한다 (Cantley, Science, 2002, 296(5573):1655-7). PI3Ks은 그의 구조, 조절 및 기질 특이성에 따라 세 개의 부류 (부류 I, II, 및 III)로 나누어진다. 부류 I PI3Ks는, PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ, 및 PI3Kδ을 포함하고, 포스파티딜이니시토-4,5-비스포스페이트 (PIP2)의 인산화를 촉매화하는 이중 특이성 지질 및 단백질 키나제의 패밀리이고 포스파티딜이니시토-3,4,5-트리스포스페이트 (PIP3)를 생성한다. PIP3는 성장, 생존, 부착 및 이동을 포함하는 많은 세포 공정을 제어하는 제 2 메신저로서 기능한다. 모든 네 개의 부류 I PI3K 이소폼은 촉매적 서브단위 (p110) 및 그의 발현, 활성화, 및 세포이하 국소화를 제어하는 밀접하게 연결된 조절 서브단위으로 구성된 헤테로이량체로서 존재한다. PI3Kα, PI3Kβ 및 PI3Kδ는 p85로서 공지된 조절 서브단위과 결합하고 티로신 키나제-의존성 메카니즘을 통해 성장 인자 및 시토킨에 의해 활성화되고 (Jimenez, et al., J Biol Chem., 2002, 277(44):41556-62) 반면 PI3Kγ은 두 개의 조절 서브단위 (p101 및 p84)와 결합하고 그의 활성화는 G-단백질-커플링된 수용체의 활성화에 의해 구동된다 (Brock, et al., J Cell Biol., 2003, 160(1):89-99). PI3Kα 및 PI3Kβ는 편재하여 발현된다. 반면, PI3Kγ 및 PI3Kδ는 우선적으로 백혈구 내에서 발현된다 (Vanhaesebroeck, et al., Trends Biochem Sci., 2005, 30(4):194-204).
PI3K 이소폼의 상이한 조직 분포는 그의 분명한 생물학적 기능에서 고려한다. PI3Kα 또는 PI3Kβ의 유전적 제거는 배아 치사율을 유발하고, PI3Kα 및 PI3Kβ 는, 적어도 발달 동안 필수 및 비-중복적 기능을 가짐을 나타낸다 (Vanhaesebroeck, et al., 2005). 반면, PI3Kγ및 PI3Kδ가 없는 마우스는 비록 변형된 면역 시스템을 나타내지만 생존가능하고, 생식가능하고 정상 수명을 가진다. PI3Kγ결핍은 염증 부위로의 마크로파지 및 호중구 모집 손상, 더불어 손상된 T 세포 활성화를 유도한다 (Sasaki, et al., Science, 2000, 287(5455):1040-6). PI3Kδ-돌이변이 마우스는 항원 자극 후 손상된 B 세포 발달 및 감소된 항체 반응을 유발하는 B 세포 신호전달에서 특정 결함을 가진다 (Clayton, et al., J Exp Med. 2002, 196(6):753-63; Jou, et al., Mol Cell Biol. 2002, 22(24):8580-91; Okkenhaug, et al., Science, 2002, 297(5583):1031-4).
PI3Kγ 및 PI3Kδ-돌이변이 마우스의 표현형은 이들 효소가 염증 및 다른 면역-기초 질환에서 역할을 한 수 있음을 시사하고 이는 임상전 모델에서 입증된다. PI3Kγ-돌이변이 마우스는 주로 류마티스성 관절염 (RA) 및 천식의 마우스 모델에서 질환으로부터 보호된다 (Camps, et al., Nat Med. 2005, 11(9):936-43; Thomas, et al., Eur J Immunol. 2005, 35(4):1283-91). 또한, PI3Kγ의 선택적 저해제를 사용한 야생형 마우스의 치료는 사구체신염을 감소시키고 MRL-lpr의 모델 전신 홍반성 신장염 (SLE)의 생존을 연장시키고 RA의 모델에서 관절 염증 및 손상을 억제한다고 나타났다 (Barber, et al., Nat Med. 2005, 11(9):933-5; Camps, et al., 2005). 유사하게, PI3Kδ의 선택적 저해제로 처리된 PI3Kδ-돌이변이 마우스 및 야생형 마우스 둘 다는 천식의 마우스 모델에서 약화된 알레르기성 기도 염증 및 과민성을 가지고 (Ali, et al., Nature. 2004, 431(7011):1007-11; Lee, et al., FASEB J. 2006, 20(3):455-65) 및 RA의 모델에서 약화된 질환을 가지는 것으로 나타났다 (Randis, et al., Eur. J. Immunol., 2008, 38(5):1215-24).
B 세포 증식은 염증성 자가면역 질환의 발병에서 중요한 역할을 한다고 나타났다 (Puri, Frontiers in Immunology (2012), 3(256), 1-16; Walsh, Kidney International (2007) 72, 676-682). 예를 들면, B 세포는, 염증성 자가면역 질환의 중요한 성분인 T-세포 자가반응성을 지지한다. 일단 활성화 및 성숙되면, B 세포는 염증 부위로 이동하고 염증성 세포를 모집하고 또는 형질아세포로 분화할 수 있다. 따라서, B-세포의 활성은 B-세포 자극성 시토킨, B-세포 표면 수용체를 표적화, 또는 B-세포 고갈을 통해 영향을 받을 수 있다. 리툭시맙- B-세포 표면 수용체 CD20를 공격하는 IgG1 κ마우스/인간 키메라 모노클로날 항체 -는 CD20+ B 세포를 고갈시키는 것으로 나타났다. 리툭시맙의 사용은 특발성 혈소판감소 자색반증, 자가면역 용혈성 빈혈, 또는 맥관염을 치료함에 있어서 효능을 가지는 것으로 나타났다. 예를 들면, 리툭시맙을 사용한 치료는 입증된 말초 B-세포 고갈을 갖는 항호중성 세포질 항체 관련 (ANCA) 전신 맥관염 (AASV)을 격는 환자에서의 질환의 차도를 유발하였다 (Walsh, 2007; Lovric, Nephrol Dial Transplant (2009) 24: 179-185). 유사하게, 다른 치료에 저항성 또는 비내성인 심각한 형태의 맥관염을 나타내는 환자를 포함하는, 리툭시맙을 사용한 치료 후, 혼합 한성글로불린혈 맥관염을 가지는 환자의 1/3 내지 1/3에서 완전 반응이 보고되었다 (Cacoub, Ann Rheum Dis 2008;67:283-287). 유사하게, 리툭시맙은 특발성 혈소판감소 자색반증 (또는 면역 혈소판감소성자반) (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169; Godeau, Blood (2008), 112(4), 999-1004; Medeo, European Journal of Haematology, (2008) 81, 165-169) 및 자가면역 용혈성 빈혈 (Garvey, British Journal of Haematology, (2008) 141, 149-169)에 걸린 환자를 치료함에 있어서 효능을 가지는 것으로 나타났다.
PI3Kδ 신호전달은 B 세포 생존, 이동, 및 활성화에 관련되어 있다 (Puri, Frontiers in Immunology, 2012, 3(256), 1-16, 페이지 1-5; 및 Clayton, J Exp Med, 2002, 196(6):753-63). 예를 들면, PI3Kδ은 B 세포 수용체에 의해 구동된 항원-의존성 B-세포 활성화에 필요하다. B-세포 부착, 생존, 활성화, 및 증식을 차단함에 의해, PI3Kδ 저해는 T 세포를 활성화시키는 B 세포의 능력을 손상시킬 수 있고, 그의 활성화를 방지하고 자기항체 및 프로-염증성 시토킨의 분비를 감소시킨다. 따라서, B 세포 활성화를 저해하는 그의 능력에 의해, PI3Kδ 저해제는 유사한 방법 가령 리툭시맙에 의한 B 세포 고갈에 치료가능했던 B 세포 매개 질환을 치료할 것으로 기대된다. 사실, PI3Kδ 저해제는 리툭시맙에 의해 또한 치료가능한 다양한 자가면역 질환 가령 관절염의 마우스 모델에서 유용한 것으로 나타났다 (Puri (2012)). 추가로, 자기면역과 연결되는 선천적-형 B 세포는 PI3Kδ 활성에 민감한데, MZ 및 B-1 세포가 p110δ 유전자가 없는 마우스에서 거의 부재이기 때문이다 (Puri (2012). PI3Kδ저해제는 자가면역 질환에서 암시되는 MZ 및 B-1 세포의 교환 및 활성화을 감소시킬 수 있다.
염증성 질환에서 그의 잠재적 역할 이외에, 모든 네 개의 부류 I PI3K 이소폼은 암에서 역할을 할 수 있다. p110α를 코드화하는 유전자는 유방, 전립선, 대장 및 자궁내막을 포함하는 흔한 암에서 자주 돌연변이화된다 (Samuels, et al., Science, 2004, 304(5670):554; Samuels, et al., Curr Opin Oncol. 2006, 18(1):77-82). 이들 돌연변이의 80 퍼센트는 효소의 나선 또는 키나제 도메인에서 세 개의 아미노 산 치환 중 하나에 의해 나타내어지고 및 키나제 활성의 상당한 상향조절을 유발하고 세포 배양 및 동물 모델에서 종양 형질전환을 유발한다 (Kang, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2005, 102(3):802-7; Bader, et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2006, 103(5):1475-9). 그러한 돌연변이는 비록 악성의 발달 및 진행에 기여할 수 있는 증거가 있지만 다른 PI3K 이소폼에서 확인되지 않았다. PI3Kδ의 일관된 과발현이 급성 골수아구성 백혈병에서 관찰되고 (Sujobert, et al., Blood, 2005, 106(3):1063-6) 및 PI3Kδ의 저해제 백혈병 세포의 성장을 방지할 수 있다 (Billottet, et al., Oncogene. 2006, 25(50):6648-59). PI3Kγ의 증가된 발현이 만성 골수성 백혈병에서 보인다 (Hickey, et al., J Biol Chem. 2006, 281(5):2441-50). PI3Kβ, PI3Kγ 및 PI3Kδ의 발현 변경이 뇌, 대장 및 방광의 암에서 또한 관찰되었다 (Benistant, et al., Oncogene, 2000, 19(44):5083-90; Mizoguchi, et al., Brain Pathol. 2004, 14(4):372-7; Knobbe, et al., Neuropathol Appl Neurobiol. 2005, 31(5):486-90). 추가로, 이들 이소폼은 모두 세포 배양에서 종양성인 것으로 나타났다 (Kang, et al., 2006).
이들 이유로, 염증성 장애, 자가면역 질환 및 암에서 사용될 수 있는 새로운 PI3K 저해제를 필요가 있다. 본 발명은 이러한 필요 등에 관한 것이다.
요약
본 발명은 환자에게 치료적으로 효과적인 양의 식 I의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 여기서 R2, R3, R4, R5, 및 Cy은 아래에 정의됨,을 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 특발성 혈소판감소 자색반증, 자가면역 용혈성 빈혈, 맥관염, 전신 홍반성 루프스, 홍반성 신장염, 수포창, 막성신증, 만성림프성 백혈병 (CLL), 비호지킨림프종, 모양세포성백혈병, 외투세포림프종, 소림프구 림프종, 여포성 림프종, 림포플라스마사이틱 림프종, 외부 결절성 가장자리 림프종, 호지킨성 림프종, 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증, 전림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 골수 섬유증, 점막-관련 림프조직 (MALT) 림프종, 종격(흉선) 큰 B 세포 림프종, 림프종양육아종증, 비성의 주변영역 림프종, 원발성 삼출액 림프종, 혈관내큰 B 세포 림프종, 형질세포 백혈병, 골수외 형질세포종, 무증상 골수종 (aka 무증상 골수종), 의미불명 단클론감마병증 (monoclonal gammopathy of undetermined significance, MGUS), 활성화 B-세포형 (ABC) 확산 큰 B 세포 림프종, 또는 배중심 B 세포 (GCB) 확산 큰 B 세포 림프종의 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 명세서에서 기술된 방법 중 어느 하나에서의 사용을 위한 본 명세서에서 기술된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
본 발명은 추가로 본 명세서에서 기술된 방법 중 어느 하나에서의 사용을 위한 약제의 제조를 위한 본 명세서에서 기술된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
도 1는 실시예 269의 화합물의 결정 구조를 나타낸다.
도 2는 확산 큰 B 세포 림프종의 파이퍼 인간 종양 이종인식 모델에서 14 일 동안 0.3, 1, 3, 또는 10 mg/kg에서 실시예 347의 2회 일일 투여량의 종양 저해 효과를 나타낸다 (y-축은 종양 부피 (mm3 ± SEM); x-축은 이식후 일수).
본 발명은 치료적으로 효과적인 양의 식 I의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 특발성 혈소판감소 자색반증, 자가면역 용혈성 빈혈, 맥관염, 전신 홍반성 루프스, 홍반성 신장염, 수포창, 막성신증, 만성림프성 백혈병 (CLL), 비호지킨림프종, 모양세포성백혈병, 외투세포림프종, 소림프구 림프종, 여포성 림프종, 림포플라스마사이틱 림프종, 외부 결절성 가장자리 림프종, 호지킨성 림프종, 왈덴스트룀 마크로글로불린혈증, 전림프구성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 골수 섬유증, 점막-관련 림프조직 (MALT) 림프종, 종격(흉선) 큰 B 세포 림프종, 림프종양육아종증, 비성의 주변영역 림프종, 원발성 삼출액 림프종, 혈관내큰 B 세포 림프종, 형질세포 백혈병, 골수외 형질세포종, 무증상 골수종 (aka 무증상 골수종), 의미불명 단클론감마병증, 활성화 B-세포형 (ABC) 확산 큰 B 세포 림프종 (ABC-DLBCL, 또는 배중심 B 세포 (GCB) 확산 큰 B 세포 림프종 (GCB-DLBCL)을 치료하는 방법을 제공하고,
, 여기서:
R2는 C1-6 알킬 또는 C1-6 할로알킬;
R4는 할로, OH, CN, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, C1-4 알콕시, 또는 C1-4 할로알콕시;
R5는 할로, OH, CN, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, C1-4 알콕시, 또는 C1-4 할로알콕시;
Cy는 C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환되고;
각각의 R3는 Cy1, -(C1-3 알킬렌)-Cy1, 할로, CN, NO2, C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C1-6 할로알킬, ORa1, SRa1, C(=O)Rb1, C(=O)NRc1Rd1, C(=O)ORa1, OC(=O)Rb1, OC(=O)NRc1Rd1, NRc1Rd1, NRc1C(=O)Rb1, NRc1C(=O)ORb1, NRc1C(=O)NRc1Rd1, C(=NRe)Rb1, C(=NRe)NRc1Rd1, NRc1C(=NRe)NRc1Rd1, NRc1S(=O)Rb1, NRc1S(=O)2NRc1Rd1, S(=O)Rb1, S(=O)2Rb1, 및 S(=O)2NRc1Rd1로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 상기 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐은 각각 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각 Cy1는 독립적으로 C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra1, Rc1, 및 Rd1는 H, C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 상기 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐 및 5-6 원 헤테로아릴은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Rb1는 C1-6 알킬, C1-6 할로알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 상기 C1-6 알킬, C2-6 알케닐, C2-6 알키닐, C3-7 시클로알킬, 4-7 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴은 각각 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
또는 Rc1 및 Rd1은 이들이 부착된 N 원자와 함께 4-, 5-, 6-, 또는 7 원 헤테로시클로알킬 기를 형성하고, 이는 -OH 또는 C1-3 알킬로 임의로 치환되고;
각각의 Re는 H, CN, OH, C1-4 알킬, 및 C1-4 알콕시로부터 독립적으로 선택되고; 및
각각의 R11는 OH, NO2, CN, 할로, C1-3 알킬, C2-3 알케닐, C2-3 알키닐, C1-3 할로알킬, 시아노-C1-3 알킬, HO-C1-3 알킬, C1-3 알콕시-C1-3 알킬, C3-7 시클로알킬, C1-3 알콕시, C1-3 할로알콕시, 아미노, C1-3 알킬아미노, 디(C1-3 알킬)아미노, 티오, C1-3 알킬티오, C1-3 알킬설피닐, C1-3 알킬설포닐, 카바밀, C1-3 알킬카바밀, 디(C1-3 알킬)카바밀, 카복시, C1-3 알킬카보닐, C1-4 알콕시카보닐, C1-3 알킬카보닐아미노, C1-3 알킬설포닐아미노, 아미노설포닐, C1-3 알킬아미노설포닐, 디(C1-3 알킬)아미노설포닐, 아미노설포닐아미노, C1-3 알킬아미노설포닐아미노, 디(C1-3 알킬)아미노설포닐아미노, 아미노카보닐아미노, C1-3 알킬아미노카보닐아미노, 및 디(C1-3 알킬)아미노카보닐아미노로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구체예에서, R2는 C1-3 알킬 또는 C1-3 플루오로알킬이다. 일부 구체예에서, R2는 메틸, 에틸, 또는 2,2-디플루오로메틸이다. 일부 구체예에서, R2는 메틸이다. 일부 구체예에서, R2는 에틸이다.
일부 구체예에서, R4는 할로, CN, 또는 C1-3 알킬이다. 일부 구체예에서, R4는 F, Cl, CN, 또는 메틸이다. 일부 구체예에서, R4는 F이다. 일부 구체예에서, R4는 Cl이다. 일부 구체예에서, R4는 CN이다. 일부 구체예에서, R4는 메틸이다.
일부 구체예에서, R5는 할로, CN, 또는 C1-3 알킬이다. 일부 구체예에서, R5는 Cl, CN, 또는 메틸이다. 일부 구체예에서, R5는 Cl이다. 일부 구체예에서, R5는 CN이다. 일부 구체예에서, R5는 메틸이다.
일부 구체예에서, Cy는 C3-6 시클로알킬, 4-6 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환된다. 일부 구체예에서, Cy는 4-6 원 헤테로시클로알킬이고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환된다. 일부 구체예에서, Cy는 시클로프로필 링, 페닐 링, 아제티딘 링, 피롤리딘 링, 피페리딘 링, 3-옥소-모르폴린-6-일, 2-옥소-피롤리딘 -4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-5-일, 피라졸 링, 피리딘 링, 및 피리미딘 링으로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환된다.
일부 구체예에서:
각각의 R3는 Cy1, -(C1-3 알킬렌)-Cy1, 할로, CN, C1-6 알킬, ORa1, NRc1Rd1, C(=O)Rb1, C(=O)ORa1, C(=O)NRc1Rd1, 및 S(=O)2Rb1로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각 Cy1는 독립적으로 C3-7 시클로알킬이고, 이는 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra1, Rc1, 및 Rd1는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Rb1는 독립적으로 C1-6 알킬이고, 이는 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고; 및
각각의 R11는 독립적으로 OH, CN, 할로, 시아노-C1-3 알킬, C1-3 할로알콕시, 아미노, C1-3 알킬아미노, 디(C1-3 알킬)아미노, C1-3 알킬카보닐, C1-3 알콕시카보닐, 카바밀, C1-3 알킬카바밀, 또는 디(C1-3 알킬)카바밀이다.
일부 구체예에서:
R2는 C1-3 알킬 또는 C1-3 플루오로알킬;
R4는 할로, CN, 또는 C1-3 알킬;
R5는 할로, CN, 또는 C1-3 알킬;
Cy는 C3-6 시클로알킬, 4-6 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환되고;
각각의 R3는 Cy1, -(C1-3 알킬렌)-Cy1, 할로, CN, C1-6 알킬, ORa1, NRc1Rd1, C(=O)Rb1, C(=O)ORa1, C(=O)NRc1Rd1, 및 S(=O)2Rb1로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각 Cy1는 독립적으로 C3-7 시클로알킬이고, 이는 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra1, Rc1, 및 Rd1는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Rb1는 독립적으로 C1-6 알킬이고, 이는 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고; 및
각각의 R11는 독립적으로 OH, CN, 할로, 시아노-C1-3 알킬, C1-3 할로알콕시, 아미노, C1-3 알킬아미노, 디(C1-3 알킬)아미노, C1-3 알킬카보닐, C1-3 알콕시카보닐, 카바밀, C1-3 알킬카바밀, 또는 디(C1-3 알킬)카바밀이다.
일부 구체예에서:
R2는 메틸, 에틸, 또는 2,2-디플루오로메틸;
R4는 F, Cl, CN, 또는 메틸;
R5는 Cl, CN, 또는 메틸;
Cy는 C3-6 시클로알킬, 4-6 원 헤테로시클로알킬, 페닐, 및 5-6 원 헤테로아릴로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환되고;
각각의 R3는 Cy1, -(C1-3 알킬렌)-Cy1, 할로, CN, C1-6 알킬, ORa1, NRc1Rd1, C(=O)Rb1, C(=O)ORa1, C(=O)NRc1Rd1, 및 S(=O)2Rb1로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각 Cy1는 독립적으로 C3-7 시클로알킬이고, 이는 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra1, Rc1, 및 Rd1는 H 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Rb1는 독립적으로 C1-6 알킬이고, 이는 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고; 및
각각의 R11는 독립적으로 OH, CN, 할로, 시아노-C1-3 알킬, C1-3 할로알콕시, 아미노, C1-3 알킬아미노, 디(C1-3 알킬)아미노, C1-3 알킬카보닐, C1-3 알콕시카보닐, 카바밀, C1-3 알킬카바밀, 또는 디(C1-3 알킬)카바밀이다.
일부 구체예에서:
R2는 메틸, 에틸, 또는 2,2-디플루오로메틸;
R4는 F, Cl, CN, 또는 메틸;
R5는 Cl, CN, 또는 메틸;
Cy는 시클로프로필 링, 페닐 링, 아제티딘 링, 피롤리딘 링, 피페리딘 링, 3-옥소-모르폴린-6-일, 2-옥소-피롤리딘 -4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-5-일, 피라졸 링, 피리딘 링, 및 피리미딘 링으로부터 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R3 기로 임의로 치환된다.
각각의 R3는 Cy1, -(C1-3 알킬렌)-Cy1, 할로, C1-6 알킬, ORa1, NRc1Rd1, C(=O)Rb1, C(=O)ORa1, C(=O)NRc1Rd1, 및 S(=O)2Rb1로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 C1-6 알킬은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각 Cy1는 시클로프로필 및 시클로부틸로부터 독립적으로 선택되고, 이들 각각은 1, 2, 3, 또는 4 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Ra1, Rc1, 및 Rd1는 H 및 C1-4 알킬로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 상기 C1-4 알킬은 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 Rb1는 독립적으로 C1-4 알킬이고, 이는 1, 2, 또는 3 독립적으로 선택된 R11 기로 임의로 치환되고;
각각의 R11는 독립적으로 OH, CN, 할로, 시아노-C1-3 알킬, C1-3 알콕시-C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C1-3 할로알콕시, 아미노, C1-3 알킬아미노, 디(C1-3 알킬)아미노, C1-3 알킬카보닐, C1-4 알콕시카보닐, 카바밀, C1-3 알킬카바밀, 또는 디(C1-3 알킬)카바밀이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 II의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 III의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 IV의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염; 여기서:
G는 NH, n는 1, 및 V는 O; 또는
G는 NH, n는 0, 및 V는 O 또는 CH2; 또는
G는 O, n는 0 및 V는 NH이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 IVa의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 IVb의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 IVc의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 식 IVd의 화합물:
또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염이다.
일부 구체예에서, 식 I에서 별 표시된 탄소:
는 카이랄 탄소이고 상기 화합물 또는 상기 염은 (S)-거울상이성질체이다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 2012년 8월 31일에 출원된 미국 특허 출원 번호 13/601,349 (미국 특허 공개 번호 2013/0059835)에 기술된 것들이고, 이는 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 특발성 혈소판감소 자색반증 (또는 특발성 면역 혈소판감소성자반) (ITP)을 치료하는 방법이다. 일부 구체예에서, ITP는 재발된 ITP이다. 일부 구체예에서, ITP는 난치성 ITP이다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA)을 치료하는 방법이다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 맥관염을 치료하는 방법이다. 일부 구체예에서, 맥관염은 베체트증후군, 코간증후군, 거대 세포 관절염, 류마티스성 다발근육통 (PMR), 타까야수동맥염, 버거병 (폐색성혈전혈관염), 중추 신경계 맥관염, 가와사키병, 결절성다발성동맥염, 처그-스트라우스증후군, 혼합 한성글로불린혈 맥관염 (필수 또는 간염 C 바이러스 (HCV)-유도), 헤노흐-쇤라인자반병 (HSP), 과민증 맥관염, 현미경 다발성 맥관염, 베게너육아종증, 또는 항호중성 세포질 항체 관련 (ANCA) 전신 맥관염 (AASV)이다. 일부 구체예에서, 상기 방법은 신염을 치료하는 방법이다.
일부 구체예에서, 비호지킨림프종 (NHL)을 치료하는 방법은 재발된 또는 난치성 NHL 또는 재발성 여포성 NHL이다.
일부 구체예에서, 본 출원은 치료적인 양의 본 명세서에서 기술된 화합물 중 어느 하나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 공격적림프종 (예를 들면, 배중심 B 세포-형 (GCB) 또는 활성화 B 세포-형 (ABC))을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본 출원은 치료적인 양의 본 명세서에서 기술된 화합물 중 어느 하나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 급성 골수성 백혈병을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구체예에서, 본 출원은 치료적인 양의 본 명세서에서 기술된 화합물 중 어느 하나, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자에서의 버키트 림프종을 치료하는 방법을 제공한다. 명료하게 하기 위해, 별도의 구체예의 문맥에서 기술된 본 발명의 특정 특징은, 단일 구체예에서 조합하여 또한 제공될 수 있음이 이해된다. 반대로, 간결하게 하기 위해, 단일 구체예의 문맥에서 기술된, 본 발명의 다양한 특징은, 별도로 또는 어느 적절한 하위조합으로 또한 제공될 수 있다.
본 명세서의 다양한 곳에서, 2가 연결 치환체가 기술되어 있다. 2가 연결 치환기 각각은 연결 치환기의 전진 및 후진 형태 둘 다를 포함한다고 특히 의도된다. 예를 들면, -NR(CR'R")n-는 -NR(CR'R")n- 및 -(CR'R")nNR- 둘 다를 포함한다. 구조가 명백히 연결 기를 필요로 하는 경우, 그 기에 대해 나열된 Markush 변수가 연결 기인 것으로 이해된다.
n이 정수인 용어 “n-원”은 대표적으로 링-형성 원자의 수는 n인 모이어티 내 링-형성 원자의 수를 기술한다. 예를 들면, 피페리디닐은 6-원 헤테로시클로알킬 링의 예시이고, 피라졸릴은 5-원 헤테로아릴 링의 예시이고, 피리딜은 6-원 헤테로아릴 링의 예시이고, 및 1,2,3,4-테트라하이드로-나프탈렌은 10-원 시클로알킬 기의 예시이다.
본 명세서에서 사용된, 구절 “임의로 치환된”은 비치환된 또는 치환된을 의미한다. 본 명세서에서 사용된, 용어 “치환된”은 수소 원자가 제거되고 및 치환기에 의해 대체되는 것을 의미한다. 주어진 원자에서의 치환은 원자가에 의해 제한됨 이 이해되어야만 한다.
정의 전체를 통해, 용어 “Cn-m”는 종결점을 포함하는 범위를 나타내고, 여기서 n 및 m은 정수이고 및는 탄소의 수를 나타낸다. 예시는 C1-4, C1-6, 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된 용어 “Cn-m 알킬”은 n 내지 m 탄소를 가지는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는 포화 탄화수소 기를 지칭한다,. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6 탄소 원자, 1 내지 4 탄소 원자, 1 내지 3 탄소 원자, 또는 1 내지 2 탄소 원자를 함유한다. 알킬 모이어티의 예시는 화학적 기 가령 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, tert-부틸, 이소부틸, sec-부틸; 고급 동족체 가령 2-메틸-1-부틸, n-펜틸, 3-펜틸, n-헥실, 1,2,2-트리메틸프로필, 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된, “Cn-m 알케닐”은 하나 이상의 이중 탄소-탄소 결합을 가지고 n 내지 m 탄소를 가지는 알킬 기를 지칭한다. 일부 구체예에서, 상기 알케닐 모이어티는 2 내지 6, 2 내지 4, 또는 2 내지 3 탄소 원자를 함유한다. 알케닐 기의 예시는 에테닐, n-프로페닐, 이소프로페닐, n-부테닐, sec-부테닐, 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된, “Cn-m 알키닐”은 하나 이상의 삼중 탄소-탄소 결합를 가지고 n 내지 m 탄소를 가지는 알킬 기를 지칭한다. 알키닐 기의 예시는 에티닐, 프로핀-1-일, 프로핀-2-일, 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 일부 구체예에서, 상기 알키닐 모이어티는 2 내지 6, 2 내지 4, 또는 2 내지 3 탄소 원자를 함유한다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된, 용어 “알킬렌”은 2가 알킬 연결 기를 지칭한다. 알킬렌 기의 예시는 에탄-1,2-디일, 프로판-1,3-디일, 프로판-1,2-디일, 부탄-1,4-디일, 부탄-1,3-디일, 부탄-1,2-디일, 2-메틸-프로판-1,3-디일, 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된, 용어 “Cn-m 알콕시”은 식 -O-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소를 가진다. 알콕시 기의 실시예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (예를 들면, n-프로폭시 및 이소프로폭시), t-부톡시, 등을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬아미노”는 식 -NH(알킬)의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알콕시카보닐”은 식 -C(O)O-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬카보닐”은 식 -C(O)-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬카보닐아미노”는 식 -NHC(O)-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬설포닐아미노”는 식 -NHS(O)2-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “아미노설포닐”은 식 -S(O)2NH2의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬아미노설포닐”은 식 -S(O)2NH(알킬)의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “디(Cn-m 알킬)아미노설포닐”은 식 -S(O)2N(알킬)2의 기를 지칭하고, 여기서 각각 알킬 기는 독립적으로 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 각각 알킬 기는 독립적으로, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “아미노설포닐아미노”는 식 -NHS(O)2NH2의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬아미노설포닐아미노”는 식 -NHS(O)2NH(알킬)의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “디(Cn-m 알킬)아미노설포닐아미노”는 식 -NHS(O)2N(알킬)2의 기를 지칭하고, 여기서 각각 알킬 기는 독립적으로 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 각각 알킬 기는 독립적으로, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된, 용어 “아미노카보닐아미노”는 식 -NHC(O)NH2의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬아미노카보닐아미노”는 식 -NHC(O)NH(알킬)의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “디(Cn-m 알킬)아미노카보닐아미노”는 식 -NHC(O)N(알킬)2의 기를 지칭하고, 여기서 각각 알킬 기는 독립적으로 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 각각 알킬 기는 독립적으로, 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬카바밀”은 식 -C(O)-NH(알킬)의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “티오”는 식 -SH의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬티오”는 식 -S-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬설피닐”은 식 -S(O)-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “Cn-m 알킬설포닐”은 식 -S(O)2-알킬의 기를 지칭하고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “아미노”는 식 -NH2의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “카바밀”은 식 -C(O)NH2의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된, 용어 “카보닐”은 -C(O)- 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “시아노-C1-3 알킬”은 식 -(C1-3 알킬렌)-CN의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “HO-C1-3 알킬”은 식 -(C1-3 알킬렌)-OH의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “C1-3 알콕시-C1-3 알킬”은 식 -(C1-3 알킬렌)-O(C1-3 알킬)의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “카복시”은 식 -C(O)OH의 기를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “디(Cn-m-알킬)아미노”는 식 -N(알킬)2의 기를 지칭하고, 여기서 상기 두 개의 알킬 기는 각각, 독립적으로, n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 각각 알킬 기는 독립적으로 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “디(Cn-m-알킬)카바밀”은 식 -C(O)N(알킬)2의 기를 지칭하고, 여기서 상기 두 개의 알킬 기는 각각, 독립적으로, n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 각각 알킬 기는 독립적으로 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, “할로”은 F, Cl, Br, 또는 I을 지칭한다. 일부 구체예에서, 할로 기는 F 또는 Cl이다.
본 명세서에서 사용된, “Cn-m 할로알콕시”은 n 내지 m 탄소 원자를 가지는 식 -O-할로알킬의 기를 지칭한다. 할로알콕시 기의 예시는 OCF3이다. 일부 구체예에서, 할로알콕시 기는 단지 불소화된다. 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, 단독 또는 다른 용어와 조합하여 사용된, 용어 “Cn-m 할로알킬”은 동일 또는 상이할 수 있는 하나의 할로겐 원자 내지 2s+1 할로겐 원자를 가지는 알킬 기를 지칭하고, 여기서 “s”는 상기 알킬 기 내 탄소 원자의 수이고, 여기서 상기 알킬 기는 n 내지 m 탄소 원자를 가진다. 일부 구체예에서, 할로알킬 기는 단지 불소화된다 (예를 들면, “플루오로알킬” 기). 일부 구체예에서, 상기 알킬 기는 1 내지 6, 1 내지 4, 또는 1 내지 3 탄소 원자를 가진다.
본 명세서에서 사용된, “시클로알킬”은 시클릭화된 알킬 및/또는 알케닐 기를 포함하는 비-방향족 시클릭 탄화수소를 지칭한다. 시클로알킬 기는 3, 4, 5, 6, 또는 7 링-형성 탄소 (C3-7)를 가질 수 있다. 시클로알킬 기의 링-형성 탄소 원자는 임의로 옥소 또는 설피도에 의해 치환될 수 있다. 시클로알킬 기는 또한 시클로알킬리덴을 포함한다. 시클로알킬 기의 예시는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵타트리에닐, 등을 포함한다. 일부 구체예에서, 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 또는 시클로헥실이다. 또한 시클로알킬의 정의에 포함되는 것은 시클로알킬 링에 융합된 하나 이상의 방향족 링 (즉,를 가지는 공통의 결합), 예를 들면, 벤조 또는 티에닐의 유도체 시클로펜탄, 시클로헥산, 등을 가지는 모이어티이다.
본 명세서에서 사용된, “헤테로아릴”은 황, 산소, 및 질소로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자 링 구성원을 가지는 모노시클릭 방향족 헤테로사이클을 지칭한다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로아릴 링은 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택되는 1, 2, 3, 또는 4 헤테로원자 링 구성원을 가진다. 일부 구체예에서, 헤테로아릴 모이어티 내 어느 링-형성 N은 N-옥사이드일 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로아릴은 5-6 링 원자 및 질소, 황 및 산소로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 헤테로원자 링 구성원을 가진다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로아릴은 5-원 또는 6-원 헤테로아릴 링이다.
5-원 헤테로아릴 링은 5 링 원자를 가지는 링을 가지는 헤테로아릴이고 여기서 하나 이상의 (예를 들면, 1, 2, 또는 3) 링 원자는 N, O, 및 S로부터 독립적으로 선택된다. 예시적 5-원 링 헤테로아릴은 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 피라졸릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 테트라졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,3,4-트리아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 및 1,3,4-옥사디아졸릴이다.
6-원 헤테로아릴 링은 6 링 원자를 가지는 링을 갖는 헤테로아릴이고 여기서 하나 이상의 (예를 들면, 1, 2, 또는 3) 링 원자는 N, O, 및 S로부터 독립적으로 선택된다. 예시적 6-원 링 헤테로아릴은 피리딜, 피라지닐, 피리미디닐, 트리아지닐 및 피리다지닐이다. 본 명세서에서 사용된, “헤테로시클로알킬”은 O, N, 또는 S로부터 선택되는 하나 이상의 링-형성 헤테로원자를 가지는 비-방향족 모노시클릭 헤테로사이클을 지칭한다. 헤테로시클로알킬 내에 포함되는 것은 모노시클릭 4-, 5-, 6-, 및 7-원 헤테로시클로알킬 기이다. 헤테로시클로알킬 기의 예시는 피롤리딘-2-온, 1,3-이속사졸리딘-2-온, 피라닐, 테트라하이드로푸란, 옥세타닐, 아제티디닐, 모르폴리노, 티오모르폴리노, 피페라지닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로-티에닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 이속사졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 피라졸리디닐, 옥사졸리디닐, 티아졸리디닐, 이미다졸리디닐, 아제파닐, 3-옥소-모르폴린-6-일, 2-옥소-피롤리딘 -4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-4-일, 2-옥소-옥사졸리딘-5-일, 등을 포함한다. 헤테로시클로알킬 기의 링-형성 탄소 원자 및 헤테로원자는 임의로 옥소 또는 설피도 (예를 들면, C(O), S(O), C(S), 또는 S(O)2, 등)에 의해 치환될 수 있다. 헤테로시클로알킬 기는 링-형성 탄소 원자 또는 링-형성 헤테로원자를 통해 부착될 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로시클로알킬 기는 0 내지 3 이중 결합을 함유한다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로시클로알킬 기는 0 내지 2 이중 결합을 함유한다. 일부 구체예에서, 상기 헤테로시클로알킬는 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택되는 1 또는 2 헤테로원자와 함께 4-7 또는 4-6 링 원자를 가지고 하나 이상의 산화된 링 구성원를 가진다.
특정 위치에서, 정의 또는 구체예는 특정 링 (예를 들면, 아제티딘 링, 피리딘 링, 등)을 지칭한다. 다르게 나타내지 않는다면, 이들 링은 원자의 원자가가 초과하지 않는다면 어느 링 구성원에 부착될 수 있다. 예를 들면, 아제티딘 링은 링의 어느 위치에서 부착될 수 있고, 반면 아제티딘-3-일 링은 3-위치에 부착된다.
본 명세서에서 기술된 화합물은 비대칭적 (예를 들면, 하나 이상의 입체중심을 가지는)일 수 있다. 다르게 나타내지 않는다면 모든 입체이성질체, 가령 거울상이성질체 및 부분입체이성질체가 의도된다. 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하는 본 발명의 화합물은 광학적으로 활성인 또는 라세미 형태로 분리될 수 있다. 광학적으로 불활성인 출발 물질로부터 광학적으로 활성인 형태를 제조하는 방법은 본 업계에서 공지되어 있고, 가령 라세미 혼합물의 분해 또는 입체선택적 합성에 의한다. 올레핀의 많은 기하 이성질체, C=N 이중 결합, 등이 또한 본 명세서에서 기술된 화합물 내에 존재할 수 있고, 및 모든 그러한 안정한 이성질체가 본 발명에서 고려된다. 본 발명의 화합물의Cis 및 trans 기하 이성질체가 기술되고 이성질체의 혼합물 또는 분리된 이성질체 형태로서 분리될 수 있다.
일부 구체예에서, 상기 화합물은 (R)-배열을 가진다. 일부 구체예에서, 상기 화합물은 (S)-배열을 가진다.
화합물의 라세미 혼합물의 분해는 본 업계에서 공지되어 있는 수많은 방법 중 어느 하나에 의해 수행될 수 있다. 예시적 방법은 광학적으로 활성인, 염-형성 유기 산인 카이랄 분해 산을 사용하는 분획 재결정화를 포함한다. 분획 재결정화 방법을 위한 적합한 분해제는, 예를 들면, 광학적으로 활성인 산, 가령 D 및 L 형태의 타르타르산, 디아세틸타르타르산, 디벤조일타르타르산, 만델산, 말산, 젖산 또는 다양한 광학적으로 활성인 캄포설폰산 가령 β-캄포설폰산이다. 분획 결정화 방법을 위해 적절한 다른 분해제는 입체이성질체적으로 순수한 형태의 α-메틸-벤질-아민 (예를 들면, S 및 R 형태, 또는 거울상이성질체적으로 순수한 형태), 2-페닐글리시놀, 노르에페드린, 에페드린, N-메틸에페드린, 시클로헥실에틸아민, 1,2-디아미노시클로헥산, 등을 포함한다.
라세미 혼합물의 분해는 또한 광학적으로 활성인 분해제 (예를 들면, 디니트로벤조일페닐글리신)로 충전된 칼럼 상에서의 용출에 의해 수행될 수 있다. 적합한 용출 용매 조성물은 본 업계에서의 숙련가에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에서 기술된 화합물은 또한 호변이성질체 형태를 포함한다. 호변이성질체 형태는 프로톤의 동시 이동과 함께 인접한 이중 결합을 사용한 단일 결합의 스워핑으로 부터 생긴다. 호변이성질체 형태는 동일 실험식 및 총전하를 가지는 이성질체 프로톤화 상태인 양성자성 호변이성질체를 포함한다. 양성자성 호변이성질체의 예시는 케톤 - 에놀 쌍, 아미드 - 이미드 산 쌍, 락탐 - 락팀 쌍, 에나민 - 이민 쌍, 및 프로톤이 헤테로시클릭 시스템, 예를 들면, 1H- 및 3H-이미다졸, 1H-, 2H- 및 4H- 1,2,4-트리아졸, 1H- 및 2H- 이소인돌, 및 1H- 및 2H-피라졸의 두 개의 이상의 위치를 차지할 수 있는 고리 형태를 포함한다. 호변이성질체 형태는 평형 또는 적절한 치환에 의해 하나의 형태로 입체적으로 봉쇄될 수 있다.
본 명세서에서 기술된 화합물은 중간체 또는 최종 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 또한 포함할 수 있다. 동위원소는 동일 원자수를 가지지만 상이한 질량 수를 가지는 원자를 포함한다. 예를 들면, 수소의 동위원소는 트리튬 및 듀테륨을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 용어, “화합물”은 도시된 구조의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체, 호변이성질체, 및 동위원소를 포함한다고 의도된다. 하나의 특정 호변이성질체 형태로서 명칭 또는 구조에 의해 확인된 화합물은 다르게 언급되지 않는다면 다른 호변이성질체 형태를 포함한다고 의도된다.
모든 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염은 다른 물질 가령 물 및 용매 (예를 들면 하이드레이트 및 용매화물)와 함께 발견될 수 있거나 또는 분리될 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물, 또는그의 염은 실질적으로 분리된다. “실질적으로 분리된”은 상기 화합물이 자신이 형성된 또는 검출된 환경으로부터 적어도 부분적으로 또는 실질적으로 분리된 것을 의미한다. 부분 분리는, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 화합물 내에서 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적인 분리는 본 명세서에서 기술된 화합물, 또는그의 염의 중량으로 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 97%, 또는 적어도 약 99%을 함유하는 조성물을 포함할 수 있다. 화합물 및 그의 염을 분리하는 방법은 본 업계에서 일상적이다.
구절 “약제학적으로 허용가능한”은 여기서 적절한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기성 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에서의 사용을 위해 적절한, 합리적인 이익/위험 비에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭하도록 사용된다.
본 명세서에서 사용된 “주변 온도” 및 “실온” 또는 “rt” 라는 표현은, 일반적으로 온도, 예를 들면 반응 온도, 즉 약 반응이 수행되는 방의 온도, 예를 들면, 약 20 ℃ 내지 약 30 ℃의 온도를 지칭한다고 본 업계에서 이해된다.
본 발명은 또한 본 명세서에서 기술된 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 본 명세서에서 사용된, “약제학적으로 허용가능한 염”은 부모 화합물이 기존의 산 또는 염기 모이어티를 그의 염 형태로 전환시켜 변형된 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 약제학적으로 허용가능한 염의 예시는 염기성 잔기의 미네랄 또는 유기 산 염 가령 아민; 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 가령 카복시산; 등을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염은 예를 들면, 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성된 부모 화합물의 종래의 비-독성 염을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 염은 종래의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 부모 화합물로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 그러한 염은 유리 산 또는 염기 형태의 이들 화합물을 물 내 또는 유기 용매 내, 또는 상기 두 개의 혼합물 내 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산와 반응시킴에 의해 제조할 수 있다; 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 알콜 (예를 들면, 메탄올, 에탄올, 이소-프로판올, 또는 부탄올) 또는 아세토니트릴 (ACN)와 같은 비-수성 매체가 바람직하다. 적절한 염의 리스트는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 및 Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)에서 발견되고, 이들은 각각 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.
방법
본 명세서에서 기술된 화합물은 예를 들면, 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3Ks)을 포함하는 하나 이상의 다양한 키나제의 활성을 조절할 수 있다. 용어 “조절하는”은 PI3K 패밀리의 하나 이상의 구성원의 활성을 증가 또는 감소시키는 능력을 지칭한다고 의도된다. 따라서, 본 명세서에서 기술된 화합물은 PI3K를 본 명세서에서 기술된 화합물 또는 조성물의 어느 하나 이상과 접촉시킴에 의해 PI3K을 조절하는 방법에서 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 PI3Ks의 저해제로서 작용할 수 있다. 추가의 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물은 본 명세서에서 기술된 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 조절하는 양을 투여하는 것에 의해 수용체 조절을 필요로 하는 개체에서 PI3K의 활성을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 조절은 저해이다.
암 세포 성장 및 생존이 다수 신호전달 경로에 의해 영향을 받는다면, 본 발명은 약물 저항성 키나제 돌이변이를 특징으로 하는 질환 상태을 치료 하기 위해 유용하다. 또한, 그 활성을 조절하는 키나제 내 상이한 선호도를 나타내는 상이한 키나제 저해제가 조합하여 사용될 수 있다. 이 접근은 다수 신호전달 경로를 표적화함에 의해 질환 상태를 치료함에 있어서 매우 효율적이고, 세포 내에서 발생하는 약물-내성의 가능성을 감소시키고, 및 질환의 치료의 독성을 감소시킬 수 있다.
본 화합물이 결합 및/또는 조절하는 (예를 들면, 저해하는) 키나제는 PI3K 패밀리의 어느 구성원을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 PI3K는 PI3Ka, PI3Kb, PI3Kg, 또는 PI3Kd이다. 일부 구체예에서, 상기 PI3K는 PI3Kg 또는 PI3Kd이다. 일부 구체예에서, 상기 PI3K는 PI3Kg이다. 일부 구체예에서, 상기 PI3K는 PI3Kd이다. 일부 구체예에서, 상기 PI3K는 돌연변이를 포함한다. 돌연변이는 하나의 아미노 산을 또다른 아미노 산으로 대체, 또는 하나 이상의 아미노 산의 제거일 수 있다. 그러한 구체예에서, 돌연변이는 상기 PI3K의 키나제 도메인 내에 존재할 수 있다.
일부 구체예에서, 하나 초과의 본 명세서에서 기술된 화합물은 하나의 키나제 (예를 들면, PI3Kg 또는 PI3Kd)의 활성을 저해하기 위해 사용된다.
일부 구체예에서, 하나 초과의 본 명세서에서 기술된 화합물은 하나 초과의 키나제, 가령 적어도 두 개의 키나제 (예를 들면, PI3Kg 및 PI3Kd)을 저해하기 위해 사용된다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 상기 화합물은 하나의 키나제 (예를 들면, PI3Kg 또는 PI3Kd)의 활성을 저해하기 위해 또다른 키나제 저해제와 조합하여 사용된다.
일부 구체예에서, 하나 이상의 상기 화합물은 하나 초과의 키나제 (예를 들면, PI3Kg 또는 PI3Kd), 가령 적어도 두 개의 키나제의 활성을 저해하기 위해 또다른 키나제 저해제와 조합하여 사용된다.
본 명세서에서 기술된 화합물은 선택적일 수 있다. “선택적”은 상기 화합물이 적어도 하나의 다른 키나제와 비교하여 각각 더 큰 친화도 또는 강도로 키나제에 결합 또는 저해함을 의미한다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물은 PI3Ka 및/또는 PI3Kb에 비해 PI3Kg 또는 PI3Kd의 선택적 저해제이다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물은 PI3Kd (예를 들면, PI3Ka, PI3Kb 및 PI3Kg에 비해)의 선택적 저해제이다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물은 PI3Kg (예를 들면, PI3Ka, PI3Kb 및 PI3Kd에 비해)의 선택적 저해제이다. 일부 구체예에서, 선택성은 적어도 약 2-배, 5-배, 10-배, 적어도 약 20-배, 적어도 약 50-배, 적어도 약 100-배, 적어도 약 200-배, 적어도 약 500-배 또는 적어도 약 1000-배일 수 있다. 선택성은 본 업계에서 일상적 방법에 의해 측정할 수 있다. 일부 구체예에서, 선택성은 각각 효소의 Km ATP 농도에서 시험할 수 있다. 일부 구체예에서, 본 명세서에서 기술된 화합물의 선택성은 특정 PI3K 키나제 활성과 관련된 세포 어세이에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “접촉시킴”은 시험관 내에서 시스템 또는 생체 내 시스템에서 나타낸 모이어티와 함께 가져감을 지칭한다. 예를 들면, PI3K를 본 명세서에서 기술된 화합물과 “접촉시킴”은 본 발명의 화합물을 PI3K를 가지는 개체 또는 환자, 가령 인간에게 투여함, 더불어, 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 화합물을 상기 PI3K을 함유하는 세포 또는 정제 제제를 함유하는 샘플 내로 도입함을 포함한다.
본 명세서에서 사용된, 상호교환가능하게 사용된 용어 “개체” 또는 “환자”는 포유동물을 포함하는 어느 동물, 바람직하게는 마우스, 래트, 다른 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 또는 유인원, 및 가장 바람직하게는 인간을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된, 구절 “치료적으로 효과적인 양”은 연구자, 수의사, 의학적 의사 또는 다른 임상의에 의해 조직, 시스템, 동물, 개체 또는 인간에서 추구되는 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 활성 화합물 또는 약제학적 물질의 양을 지칭한다. 일부 구체예에서, 환자 또는 개체에게 투여된 상기 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염의 투여량은 약 1 mg 내지 약 2 g, 약 1 mg 내지 약 1000 mg, 약 1 mg 내지 약 500 mg, 약 1 mg 내지 약 100 mg, 약 1 mg to 50 mg, 또는 약 50 mg 내지 약 500 mg이다.
본 명세서에서 사용된, 용어 “치료하는” 또는 “치료”는 다음 중 하나 이상을 지칭한다: (1) 질환을 방지하는 것; 예를 들면, 질환의 병인 또는 증상을 경험 또는 아직 나타내지는 않지만 질환, 병태 또는 장애에 걸리기 쉬운 개체에서의 질환, 병태 또는 장애를 방지하는 것; (2) 질환을 저해하는 것; 예를 들면, 질환의 병인 또는 증상을 경험 또는 나타내는 개체에서의 질환, 병태 또는 장애를 저해하는 것 (즉, 병인 및/또는 증상의 추가 발달을 저지); 및 (3) 질환을 완화시키는 것; 예를 들면, 질환, 상태 또는 장애의 병인 또는 증상을 경험 또는 나타내는 개체에서의 질환, 병태 또는 장애를 완화시키는 것 (즉, 병인 및/또는 증상을 반전) 가령 질환의 경중도를 감소시키는 것.
조합 요법
하나 이상의 부가적 약제학적 물질 가령, 예를 들면, 화학요법제, 항-염증제, 스테로이드, 면역억제제, 더불어 Bcr-Abl, Flt-3, EGFR, HER2, JAK (예를 들면, JAK1 또는 JAK2), c-MET, VEGFR, PDGFR, c키트, IGF-1R, RAF, FAK,Akt mTOR, PIM, 및 AKT (예를 들면, AKT1, AKT2, 또는 AKT3) 키나제 저해제 가령, 예를 들면, WO 2006/056399에 기술된 것들, 또는 다른 약제 가령, 치료적인 항체는 PI3K-관련 질환, 장애 또는 조건의 치료를 위한 본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있다. 하나 이상의 부가적 약제학적 물질은 동시에 또는 순차적으로 환자에게 투여될 수 있다.
조합 요법에서의 사용을 위한 예시 항체는 트라스투주마브 (예를 들면 항-HER2), 라니비주마브 (예를 들면 항-VEGF-A), 베바시주마브 (상품명 Avastin, 예를 들면 항-VEGF, 파니투무마브 (예를 들면 항-EGFR), 세툭시마브 (예를 들면 항-EGFR), 리툭산 (항-CD20) 및 항체에 관한 c-MET을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
하나 이상의 다음 약제가 본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있고 비제한적 리스트로서 제시된다: 세포정지제, 시스플라틴, 독소루비신, 탁소테레, 탁솔, 에토포시드, 이리노테칸, 캄프토스타, 토포테칸, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에포틸론, 타목시펜, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 테모졸로미드, 시클로포스프아미드, SCH 66336, R115777, L778,123, BMS 214662, Iressa, Tarceva, EGFR에 대한 항체, Gleevec™, 인트론, ara-C, 아드리마이신, 사이톡산, 젬시타빈, 우라실 무스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 멜팔란, 클로람부실, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포르아민, 부설판, 칼무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 다카바진, 플록수리딘, 시타라빈, 6-머캅토푸린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 옥사리플라틴, 루코비린, 엘록사틴™, 펜토스타틴, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 블레오마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신,이다루비신, 미트라마이신, 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L-아스파라기나제, 테니포시드 17.alpha.-데티닐에스트라디올, 디에틸스틸베스트롤, 테스테스테론, 프레드니손, 플루옥시메스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메제스트롤아세테이트, 메틸프레드니솔론, 메틸테스테스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트라아니센, 하이드록시프로제스테론, 아미노글루테스이미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로제스테론아세테이트, 루프롤리드, 플루타미드, 토레미펜, 고세렐린, 시스플라틴, 카보플라틴, 하이드록시우레아, 암사크린, 프로카바진, 미토탄, 미톡산트론, 레바미솔, 나벨벤, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 렐록사핀, 드롤록사핀, 헥사메틸멜라민, 아바스틴, 헤르셉틴, 벡사, 벨케이드, 제발린, 트리세녹스, 젤로다, 비노렐빈, 포르피머, 에르비툭스, 피보소말, 티오테파, 알트레트아민, 멜팔란, 트라스투주마브, 레로졸, 플루베스트란트, 엑세메스탄, 풀베스트란트, 이포스포미드, 리툭시맙, C225, 캄파트, 크로파라빈, 클라드리빈, 아피디콜론, 리툭산, 수니티니브, 다사티니브, 테자시타빈, Sml1, 플루다라빈, 펜토스타틴, 트리아핀, 디독스, 트리미독스, 아미독스, 3-AP, MDL-101,731, 벤다무스틴 (Treanda), 오파투무마브, 또는 GS-1101 (또한 CAL-101로서 공지된).
예시 화학요법제는 프로테오좀 저해제 (예를 들면, 보르테조미브), 탈리도미드, 레블리미드, 및 DNA-손상제 가령 멜팔란, 독소루비신, 시클로포스프아미드, 빈크리스틴, 에토포시드, 칼무스틴, 등을 포함한다.
예시 스테로이드는 코르티코스테로이드 가령 덱사메타손 또는 프레드니손을 포함한다.
예시 Bcr-Abl 저해제는 상기 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염, 미국 특허 번호 5,521,184, WO 04/005281, 및 미국 일련 번호 60/578,491에 개시된 속 및 종을 포함한다.
예시 적절한 Flt-3 저해제는 WO 03/037347, WO 03/099771, 및 WO 04/046120에서 개시된 바와 같은 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
예시 적절한 RAF 저해제는, WO 00/09495 및 WO 05/028444에서 개시된 바와 같은 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
예시 적절한 FAK 저해제는, WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, 및 WO 01/014402에서 개시된 바와 같은 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
예시 적절한 mTOR 저해제는, WO 2011/025889에서 개시된 바와 같은 화합물, 및 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 특히 이마티니브 또는 다른 키나제 저해제에 내성인 환자를 치료하는 위한 이마티니브를 포함하는 하나 이상의 다른 키나제 저해제와 조합하여 사용될 수 있다.
일부 구체예에서, 본 발명의 화합물은 암, 가령 다발성 골수증의 치료에서 화학요법제와 조합하여 사용될 수 있고, 그의 독성 효과 악화 없이 화학요법제 단독 반응과 비교하여 치료 반응을 향상시킬 수 있다. 다발성 골수증의 치료에서 사용된 부가적 약제학적 물질의 예시는, 예를 들면, 제한 없이, 멜팔란, 멜팔란 플러스 프레드니손 [MP], 독소루비신, 덱사메타손, 및 벨케이드 (보르테조미브)을 포함할 수 있다. 다발성 골수증의 치료에서 사용된 추가 부가적 약제는 Bcr-Abl, Flt-3, RAF 및 FAK 키나제 저해제를 포함한다. 부가적인 또는 상승적 효과는 본 발명의 PI3K 저해제와 부가적 약제와 조합의 바람직한 결과이다. 또한, 약제 가령 덱사메타손에 대한 다발성 골수증 세포의 내성은 본 발명의 PI3K 저해제를 사용한 치료에 대해 가역적일 수 있다. 이 약제는 단일 또는 계속적 투여 형태로 본 화합물과 조합시킬 수 있거나, 또는 약제는 별도의 투여 형태로서 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 코르티코스테로이드 가령 덱사메타손은 본 발명의 화합물과 조합하여 환자에게 투여되고 덱사메타손은 계속적과 반대로 간헐적으로 투여된다.
일부 추가 구체예에서, 다른 치료제와 본 발명의 화합물의 조합은 골수 이식 또는 줄기 세포 이식 전에, 동안, 및/또는 후 환자에게 투여될 수 있다.
약제학적 제제 및 투여 형태
약제로서 사용된 때, 본 명세서에서 기술된 화합물은 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 이들 조성물은 약제학적 기술에서 널리 공지된 방법으로 제조할 수 있고, 및 국소 또는 전신 치료가 바람직한지 여부 및 치료될 영역에 따라 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여는 외용 (경피, 상피, 눈을 포함하는 및 경비, 질내 및 직장내 송달을 포함하는 점막), 폐 (예를 들면, 분말 또는 에어로졸에 의한 흡입 또는 흡입에 의해, 분무기에 의함을 포함하는; 기관지내 또는 경비), 경구 또는 비경구일 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 근육내 또는 주사액 또는 수액; 또는 두개강내, 예를 들면, 척추강내 또는 심실내, 투여를 포함한다. 비경구 투여는 단일 볼루스 투여량 형태일 수 있고, 또는 예를 들면 계속적 관류 펌프에 의한 것일 수 있다. 외용 투여를 위한 약제학적 조성물 및 제제는 경피 패치, 연고, 로션, 크림, 젤, 점안제, 좌제, 분무제, 액체 및 분말을 포함한다. 종래 약제학적 담체, 수성, 분말 또는 오일성 염기층, 점증제 등이 필요 또는 바람직할 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체 (부형제)와 조합하여 활성 성분으로서, 본 명세서에서 기술된 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염을 함유하는 약제학적 조성물을 포함한다. 일부 구체예에서, 이 조성물은 외용 투여를 위해 적절하다. 본 발명의 조성물을 제조함에 있어서, 활성 성분은 대표적으로 부형제와 혼합하고, 부형제로 희석 또는 예를 들면, 캡슐, 사세, 종이, 또는 다른 용기 형태 내 그러한 담체 내에 봉입된다. 부형제가 희석제로서 작용할 때, 이는 고체, 반-고체, 또는 액체 물질일 수 있고, 활성 성분에 대한 비히클, 담체 또는 매체로서 작용한다. 따라서, 조성물은 예를 들면, 중량으로 최고 10%의 활성 화합물, 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌제, 살균 주사가능 용액, 및 살균 포장 분말을 함유하는 정제, 환제, 분말, 로렌지, 사세, 카세, 엘릭시르제, 현탁액, 에멀전, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체로서 또는 액체 매체 내), 연고 형태일 수 있다.
제제를 제조함에 있어서, 활성 화합물은 다른 성분과 조합 전에 적절한 입자 크기를 제공하도록 분쇄될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 불용성이면, 200 메쉬의 크기 미만 입자로 분쇄될 수 있다. 활성 화합물이 실질적으로 물 가용성이면, 입자 크기는 제제 내 실질적으로 균일한 분포, 예를 들면 약 40 메쉬를 제공하도록 분쇄에 의해 조정할 수 있다.
본 명세서에서 기술된 화합물은 정제 형성 및 다른 제제 타입을 위해 적절한 입자 크기를 얻기 위해 공지된 분쇄 절차 가령 습식 분쇄를 사용하여 분쇄될 수 있다. 본 명세서에서 기술된 화합물의 미세하게 분할된 (나노입자) 제제는 본 업계에서 공지되어 있는 공정에 의해 제조할 수 있고, 예를 들면, 국제출원번호 WO 2002/000196 참조.
적절한 부형제의 일부 예시는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 고무 아카시아, 칼슘 포스페이트, 알기네이트, 트라가칸트, 젤라틴, 칼슘 실리케이트, 마이크로결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 및 메틸 셀룰로스를 포함한다. 제제는 부가적으로 다음을 포함할 수 있다: 윤활제 가령 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 및 미네랄 오일; 습윤제; 유화 및 현탁 약제; 보존제 가령 메틸- 및 프로필하이드록시-벤조에이트; 감미제; 및 풍미제. 본 발명의 조성물은 본 업계에서 공지되어 있는 절차를 사용하여 환자에게 투여 후 활성 성분의 신속, 지속적 또는 지연 방출을 제공하도록 제제화할 수 있다.
조성물은 단위 투여 형태로 제제화할 수 있고, 각각의 투여량은 약 5 내지 약 1000 mg (1 g), 더욱 통상적으로 약 100 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유한다. 용어 "단위 투여 형태"는 인간 개체 및 다른 포유동물에 대해 단위 투여로 적절한 물리적으로 개별적인 단위를 지칭하고, 각각의 단위는 적절한 약제학적 부형제와 함께 소정의 치료적인 효과를 생성하도록 계산된 미리결정된 양의 활성 물질을 함유한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 약 5 내지 약 50 mg의 활성 성분을 함유한다. 이는 약 5 내지 약 10, 약 10 내지 약 15, 약 15 내지 약 20, 약 20 내지 약 25, 약 25 내지 약 30, 약 30 내지 약 35, 약 35 내지 약 40, 약 40 내지 약 45, 또는 약 45 내지 약 50 mg의 활성 성분을 함유하는 조성물을 구체화하는 것을 본 업계에서 통상의 지식을 가진 자는 이해한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 약 50 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유한다. 이는 약 50 내지 약 100, 약 100 내지 약 150, 약 150 내지 약 200, 약 200 내지 약 250, 약 250 내지 약 300, 약 350 내지 약 400, 또는 약 450 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유하는 조성물 구체화하는 것을 본 업계에서 통상의 지식을 가진 자는 이해한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 조성물은 약 500 내지 약 1000 mg의 활성 성분을 함유한다. 이는 약 500 내지 약 550, 약 550 내지 약 600, 약 600 내지 약 650, 약 650 내지 약 700, 약 700 내지 약 750, 약 750 내지 약 800, 약 800 내지 약 850, 약 850 내지 약 900, 약 900 내지 약 950, 또는 약 950 내지 약 1000 mg의 활성 성분을 함유하는 조성물 구체화하는 것을 본 업계에서 통상의 지식을 가진 자는 이해한다.
상기 본 발명의 방법 및 사용에서 본 명세서에서 기술된 화합물의 유사한 투여량이 사용될 수 있다.
활성 화합물은 넓은 투여 범위에 걸쳐 효과적일 수 있고 약제학적으로 효과적인 양으로 일반적으로 투여된다. 그러나 실제 투여되는 상기 화합물의 양은 치료되는 병태, 선택된 투여 경로, 실제 투여된 화합물, 연령, 중량, 및 개별 환자의 반응, 환자 증상의 경중도, 등을 포함하는 관련 상황에 따라, 의사에 의해 통상 결정됨이 이해된다.
고체 조성물 가령 정제를 제조하기 위해, 주요 활성 성분은 약제학적 부형제와 함께 혼합되어 본 발명의 화합물의 균질 혼합물을 함유하는 고체 예비제제 조성물을 형성한다. 이들 예비제제 조성물을 균질이라고 언급할 때, 활성 성분은 대표적으로 조성물 전체를 통해 균질하게 분산되어 조성물은 동등하게 효과적인 단위 투여 형태 가령 정제, 환제 및 캡슐로 쉽게 하위분할될 수 있다. 이 고체 예비제제는 이후, 예를 들면, 약 0.1 내지 약 1000 mg의 본 발명의 활성 성분을 함유하는 위에서 기술된 타입의 단위 투여 형태로 하위분할된다.
본 발명의 정제 또는 환제는 코팅 또는 조제되어 연장된 작용의 장점을 얻는 투여 형태를 제공할 수 있다. 예를 들면, 정제 또는 환제는 내부 투여량 및 외부 투여량 성분을 함유할 수 있고, 후자는 전자 위의 봉투 형태이다. 상기 두 개의 성분은 위 내에서 붕해에 저항하는 역할을 하는 장용층에 의해 분리되어 내부 성분이 십이지장으로 손상없이 통과하거나 또는 방출이 지연되는 것을 허용할 수 있다. 다양한 물질은 그러한 장용 층 또는 코팅에 사용될 수 있고, 그러한 물질은 많은 중합체산 및 셀락, 세틸 알콜, 및 셀룰로스 아세테이트로서의 그러한 물질과 중합체산의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 화합물 및 조성물이 경구로 또는 주사액에 의한 투여를 위해 포함되는 액체 형태는 수성 용액, 적절하게 가미된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 식용 오일 가령 면실유, 참기름, 코코넛 오일, 또는 땅콩 오일로 가미된 에멀전, 더불어 엘릭시르제 및 유사한 약제학적 비히클을 포함한다.
흡입 또는 흡입을 위한 조성물은 약제학적으로 허용가능한, 수성 또는 유기 용매, 또는 그의 혼합물 내 용액 및 현탁액, 및 분말을 포함한다. 액체 또는 고체 조성물은 위에서 기술된 바와 같은 적절한 약제학적으로 허용가능한 부형제를 함유할 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 조성물은 국소 또는 전신 효과를 위해 경구 또는 비강 호흡기 경로에 의해 투여된다. 조성물은 불활성 가스의 사용에 의해 분무될 수 있다. 분무된 용액은 분무 장치로부터 직접 호흡할 수 있고, 분무 장치는 페이스 마스크, 텐트, 또는 간헐적 양성 압력 호흡 장치에 부착될 수 있다. 용액, 현탁액, 또는 분말 조성물은 제제를 적절한 방법으로 송달하는 장치로부터 경구로 또는 비강으로 투여될 수 있다.
외용 제제는 하나 이상의 종래의 담체를 함유할 수 있다. 일부 구체예에서, 연고는 물 및, 예를 들면, 액체 파라핀, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 프로필렌 글리콜, 백색 바셀린, 등으로부터 선택된 하나 이상의 소수성 담체를 함유할 수 있다. 크림의 담체 조성물은 글리세롤 및 하나 이상의 다른 성분, 예를 들면 글리세린모노스테아레이트, PEG-글리세린모노스테아레이트 및 세틸스테아릴 알콜과 조합하여 물에 기초할 수 있다. 젤은, 다른 성분 가령, 예를 들면, 글리세롤, 하이드록시에틸 셀룰로스, 등과 적절하게 조합하여 이소프로필 알콜 및 물을 사용하여 제제화할 수 있다. 일부 구체예에서, 외용 제제는 적어도 약 0.1, 적어도 약 0.25, 적어도 약 0.5, 적어도 약 1, 적어도 약 2, 또는 적어도 약 5 wt %의 본 명세서에서 기술된 화합물을 함유한다. 외용 제제는 선택 적응증, 예를 들면, 건선 또는 다른 피부 상태의 치료를 위한 지시서와 임의로 함께 예를 들면, 100 g의 튜브 내에 적절하게 포장될 수 있다.
환자에게 투여된 화합물 또는 조성물의 양은 투여되는 것, 투여 목적 가령 예방 또는 요법, 환자 상태, 투여 방법, 등에 따라 달라진다. 치료적인 용도에서, 조성물은 치료 또는 적어도 부분적으로 질환의 증상 및 그의 합병증을 저지하기 충분한 양으로 질환을 이미 격는 환자에게 투여될 수 있다. 효과적인 투여량은 치료될 질환 상태, 더불어 인자 가령 질환의 경중도, 연령, 중량 및 환자의 일반 상태, 등에 따라 담당 임상의의 판단에 따라 다르다.
환자에게 투여된 상기 조성물은 위에서 기술된 약제학적 조성물 형태일 수 있다. 이들 조성물은 종래의 살균 기술에 의해 살균될 수 있고, 또는 살균 여과될 수 있다. 수용액은 그대로 또는 동결건조되어 사용을 위해 포장될 수 있고, 동결건조된 제제는 투여 전에 살균 수성 담체와 조합시켰다. 상기 화합물 제제의 pH는 대표적으로 3 및 11 사이, 더욱 바람직하게는 5 내지 9 및 가장 바람직하게는 7 내지 8이다. 상기 부형제, 담체, 또는 안정화제의 특정의 사용은 약제학적 염의 형성을 유발함이 이해된다.
본 발명의 화합물의 치료적인 투여는 치료가 행하지는 특정 용도, 화합물의 투여 방식, 환자의 건강 및 상태, 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 수 있다. 약제학적 조성물 내 본 명세서에서 기술된 화합물의 비율 또는 농도는 투여, 화학적 특성 (예를 들면, 소수성), 및 투여 경로를 포함하는 많은 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 본 명세서에서 기술된 화합물은 비경구 투여를 위한 약 0.1 내지 약 10% w/v의 상기 화합물을 함유하는 수성 생리학적 완충제 용액 내에 제공될 수 있다. 일부 대표적인 투여량 범위는 일일당 체중의 약 1 μg/kg 내지 약 1 g/kg이다. 일부 구체예에서, 투여량 범위는 일일당 체중의 약 0.01 mg/kg 내지 약 100 mg/kg이다. 투여는 변수 가령 질환 또는 장애의 진행의 타입 및 정도, 특정 환자의 전체적 건강 상태, 선택된 화합물의 상대적인 생물학적 효능, 부형제의 제형, 및 그의 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 효과적인 투여량은 시험관 내에서 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터의 투여량-반응 커브로부터 외삽할 수 있다.
본 발명의 조성물은 하나 이상의 부가적 약제학적 물질 가령 화학요법제, 스테로이드, 항-염증성 화합물, 또는 면역억제제를 추가로 포함할 수 있고, 그 예시가 여기에 나열되어 있다.
키트
본 발명은 치료적으로 효과적인 양의 본 명세서에서 기술된 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 함유하는 하나 이상의 용기를 포함하는, 예를 들면, PI3K-관련 질환 또는 장애, 가령 암의 치료 또는 예방에서 유용한 약제학적 키트를 또한 포함한다. 그러한 키트는 본 업계에서의 숙련가에게 쉽게 명백한 바와 같이, 필요시, 하나 이상의 다양한 종래의 약제학적 키트 성분, 가령, 예를 들면, 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 용기 가지는, 부가적 용기, 등을 추가로 포함할 수 있다. 투여되는 성분의 양을 나타내는 삽입물 또는 라벨로서의 설명서, 투여에 대한 가이드라인, 및/또는 성분 혼합에 대한 가이드라인도 또한 키트 내에 포함될 수 있다.
합성
그의 염을 포함하는 본 명세서에서 기술된 화합물은 공지된 유기 합성 기술을 사용하여 제조할 수 있고 수많은 가능한 합성 경로 중 어느 하나에 따라 합성할 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 화합물은 2012년 8월 31일에 출원된 미국 특허 출원 번호 13/601,349에서 기술된 바와 같이 제조할 수 있고, 이는 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에서 기술된 화합물을 제조하기 위한 반응은 유기 합성 업계에서의 숙련가에 의해 쉽게 선택될 수 있는 적절한 용매 내에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응이 수행되는 온도 예를 들면, 용매의 동결 온도 내지 용매의 끓는 온도의 범위일 수 있는 온도에서 출발 물질 (반응물질), 중간체, 또는 생성물과 실질적으로 비-반응성일 수 있다. 주어진 반응은 하나의 용매 또는 하나 초과의 용매의 혼합물 내에서 수행될 수 있다. 특정 반응 단계에 따라, 특정 반응 단계에 대한 적절한 용매가 숙련된 기술자에 의해 선택될 수 있다.
본 명세서에서 기술된 화합물의 제제는 다양한 화학적 기의 보호 및 탈보호를 수반할 수 있다. 보호 및 탈보호에 대한 필요, 및 적절한 보호 기의 선택은 본 업계에서의 숙련가에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 보호 기의 화학은, 예를 들면, T. W. Greene 및 P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999)에서 발견될 수 있고, 이는 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.
반응은 본 업계에서 공지되어 있는 어느 적절한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 예를 들면, 생성물 형성은 분광법 수단, 가령 핵 자기 공명 분광학 (예를 들면, 1H 또는 13C), 적외선 분광학, 분광법 (예를 들면, UV-가시광선), 질량 분광법에 의해, 또는 크로마토그래피 방법 가령 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 액체 크로마토그래피-질량 분광학 (LCMS), 또는 박층 크로마토그래피 (TLC)에 의해 모니터링할 수 있다. 화합물은, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) (“Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization” Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem. 2004, 6(6), 874-883, 이는 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다) 및 정상 상 실리카 크로마토그래피를 포함하는 다양한 방법에 의해 본 업계에서의 숙련가에 의해 정제할 수 있다.
예를 들면, 식 I의 화합물은 반응식 I에 나타낸 바와 같이 형성될 수 있다. 상기 화합물 (i)은 N-클로로숙신아미드, N-브로모숙신아미드 또는 N-아이오도숙신아미드로 할로겐화할 수 있어서 화합물 (ii) 여기서 X1 = Cl, Br, 또는 I을 얻는다. (ii)의 할로 기는, 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 또는 표준 Negishi 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서, Cy-M와 커플링될 수 있어서, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, Cy-M는 Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, 또는 Zn-Cy), 식 (iii)의 유도체를 얻는다. 택일적으로, Cy-M은 염기 내 또는 Buchwald 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 알콕사이드 염기)의 존재 하에서) 가열에 의해 수행되는 화합물 (ii)에 대한 커플링으로 시클릭 아민일 수 있어서 (여기서 M는 H 이고 아민 질소에 부착된다) 케톤 (iii)을 얻는다. 적절한 시약, 가령 소듐 테트라하이드로보레이트를 사용한 케톤 (iii)의 환원은 알콜 (iv)을 공급할 수 있고 이는 이탈 기를 보유하는 유도체 (v)로 전환될 수 있고, (예를 들면, Lg는 시아누릭 클로라이드와의 반응을 통해 클로라이드 또는 메탄설폰무수물과의 반응을 통해 메실레이트). 최종적으로, 화합물 (v)은 염기성 조건 하에서 (예를 들면, NaH 또는 CsCO3 또는 K2CO3) 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 ((vi))와 반응시킬 수 있어서 식 I의 화합물 (vii)을 얻는다.
반응식 I
택일적으로, 식 I의 화합물은 반응식 II에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. 케톤 화합물 (i)은 N-클로로숙신아미드, N-브로모숙신아미드 또는 N-아이오도숙신아미드로 할로겐화할 수 있어서 화합물 (ii) 여기서 X1 = Cl, Br, 또는 I을 얻는다. 케톤 (ii)은 적절한 시약, 가령 소듐 테트라하이드로보레이트로 환원될 수 있어서, 알콜 (iii)을 얻고 이는 이탈 기를 보유하는 유도체, (예를 들면, Lg는 시아누릭 클로라이드와의 반응을 통해 클로라이드 또는 메탄설폰무수물과의 반응을 통해 메실레이트)로 전환될 수 있고 이후 헤테로사이클과 반응시켜 헤테로시클릭 유도체 (iv)을 얻는다. 화합물 (iv)의 거울상이성질체는 카이랄 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있어서 헤테로시클릭 화합물 (v)의 단일 거울상이성질체를 얻는다. 최종적으로, (v)의 할로 기는 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 또는 표준 Negishi 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서 Cy-M와 커플링될 수 있고, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, Cy-M는 Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, 또는 Zn-Cy), 식 I (vi)의 유도체를 얻는다.
반응식 II
식 I의 화합물은 반응식 III에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. 페놀 (i)은 Mitsunobu 조건 (예를 들면, R'OH, DEAD, Ph3P) 또는 표준 알킬화 조건 (R'-Lg, Lg = 이탈 기)을 사용하여 알킬화될 수 있어서 각각 에테르 유도체 (ii)를 얻는다. (ii)의 할로 기는 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 또는 표준 Negishi 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서, Cy-M와 커플링될 수 있고, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, Cy-M는 Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, 또는 Zn-Cy), 식 (iii)의 유도체를 얻는다. 택일적으로, Cy-M은 염기 내 또는 Buchwald 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 알콕사이드 염기))의 존재 하에서 가열에 의해 수행되는 화합물 (ii)에 대한 커플링으로 시클릭 아민일 수 있어서 (여기서 M는 H 이고 아민 질소에 부착된다) 식 (iii)의 화합물을 얻는다. 케톤 (iii)은 반응식 I 및 II에 나타낸 바와 같은 유사한 방법을 사용하여 변환될 수 있어서 식 I(iv)의 화합물을 얻는다. 택일적으로, 할로-케톤 (ii)은 반응식 I 및 II에 나타낸 바와 같은 유사한 방법을 사용하여 변환될 수 있어서 할로 중간체 (v)를 얻는다. 반응식 I 및 II에서 기술된유사한 방법에 의해 할로 중간체 (v)와 Cy-M의 Suzuki, Stille, Negishi 또는 Buchwald 커플링에 의해 식 I (vi)의 화합물을 또한 얻을 수 있다.
반응식 III
반응식 I, II 및 III의 공정에서 사용될 수 있는 케톤은 아래에 반응식 IV에 나타낸 바와 같이 형성될 수 있다. 카복시산 (i)은 커플링제 (예를 들면 HBTU 또는 HATU)로 활성화 및 이후 N,O-디메틸하이드록실아민과 반응시켜 N-메톡시-N-메틸카복사미드를 얻을 수 있다. 페놀은 Mitsunobu 조건 (예를 들면, R2OH, DEAD, Ph3P) 또는 표준 알킬화 조건 (R2-Lg, Lg = 이탈 기)을 사용하여 알킬화될 수 있어서 각각 에테르 유도체 (ii)를 얻는다. (ii)의 할로 기 (X1는 할로)은 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 또는 표준 Negishi 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서, Cy-M와 커플링될 수 있고, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, Cy-M는 Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, 또는 Zn-Cy), 식 (iii)의 유도체를 얻는다. 택일적으로, 염기 내 또는 Buchwald 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 알콕사이드 염기)의 존재 하에서) 가열에 의해 수행되는 화합물 (ii)에 대한 커플링으로 Cy-M은 시클릭 아민일 수 있어서 (여기서 M는 H 이고 아민 질소에 부착된다) 아미드 (iii)를 얻는다. 식 Me-MgX2 (X2 = 할로)의 Grignard 시약과 화합물 (iii)의 반응은 케톤 (iv)을 생성할 수 있다. 케톤 (iv)은 반응식 I, II 및 III에 나타낸 바와 같은 유사한 방법을 사용하여 변환될 수 있어서 식 I의 화합물을 얻는다.
반응식 IV
반응식 I, II 및 III의 공정에서 사용될 수 있는 케톤은 아래에 반응식 V에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. (i)의 할로 기 (예를 들면, X1 = I)은 표준 Knochel/Negishi 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 트리-(2-푸릴)포스핀 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) 및 1,2-디브로모에탄 및 클로로트리메틸실란의 존재 하에서)아연 시약 Cy-Zn와 커플링될 수 있고 (예를 들면, Zn 분말과 함께 가령 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트) 식 (ii)의 유도체를 얻는다. 아제티딘 (ii)은 탈보호되고 (예를 들면, Pg = Boc, TFA을 사용) 및 이후 알킬화, 아실화 또는 환원적 아민화 (예를 들면, R3X 가령 R3-Br, R3COCl, R3-SO2Cl, R3N=C=O 또는 R3CHO 및 환원제) 조건 하에서 반응시켜 케톤 유도체 (iii)를 얻고 이는 반응식 I, II, 및 III에 나타낸 유사한 방법에 의해 식 I(v)의 화합물로 전환될 수 있다). 택일적으로, 케톤 (ii)은 적절한 시약 (우선적으로 알콜의 하나의 이성질체를 얻는 NaBH4 또는 Corey의 카이랄 CBS 촉매)으로 환원될 수 있고, 결과로서 얻어진 알콜은 이탈 기 (예를 들면, Lg는 시아누릭 클로라이드와의 반응을 통해 클로라이드 또는 메탄설폰무수물과의 반응을 통해 메실레이트)로 전환될 수 있고 및 이후 클로라이드 또는 메실레이트는 적절한 헤테로사이클과 반응시켜 (예를 들면, 반응식 I, II 및 III에 나타낸 방법과 유사한) 식 (iv)의 유도체를 얻는다. 아민 상 보호 기는 제거되고 표준 조건 하에서 및 이후 알킬화, 아실화 또는 환원적 아민화 조건 하에서 반응시켜 (예를 들면, R3X 가령 R3-Br, R3COCl, R3-SO2Cl, R3N=C=O 또는 R3CHO 및 환원제) 식 I(v)의 화합물을 얻을 수 있다.
반응식 V
식 I의 화합물은 반응식 VI에 나타낸 바와 같이 산 클로라이드 화합물 (i)로부터 합성할 수 있다. 염기, 가령 소듐 하이드라이드의 존재 하에서 말로노니트릴과 산 클로라이드 (i)의 축합은, 디시아노에놀 중간체를 생성할 수 있고, 이는 적절한 염기, 가령 소듐 바이카보네이트의 존재 하에서 적절한 시약, 가령 디메틸 설페이트로 O-메틸화되어, 에놀 에테르 (ii)을 얻을 수 있다. 적절한 염기, 가령 트리에틸아민의 존재 하에서 히드라진 디하이드로클로라이드와 에놀 에테르 (ii)의 반응은, 피라졸 화합물 (iii)을 생성할 수 있다. 피라졸 화합물 (iii)을 이후 포름아미드와 반응시켜 피라졸로피리미딘 (iv)을 얻을 수 있다. 최종적으로, 화합물 (iv)은 염기성 조건 하에서 이탈 기를 보유하는 적절한 화합물 (v)과 반응시킬 수 있어서 식 I(vi)의 화합물을 얻는다.
반응식 VI
식 I의 화합물은 반응식 VII에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. (i)의 할로 기, X1은 표준 Heck 조건 (예를 들면, 팔라듐(II) 촉매, 가령 팔라듐 아세테이트의 존재 하에서) 하에서 알켄 (예를 들면, 아크릴레이트 또는 아크릴아미드)과 커플링될 수 있어서 식 (ii)의 알켄을 얻는다. DBU의 존재 하에서 니트로메탄과 알켄 (ii)의 반응은 니트로 유도체 (iii)을 생성할 수 있고 이는 표준 조건 하에서 (예를 들면, NiCl2 / NaBH4) 환원될 수 있어서 유리 아민을 얻고 이는 환화하여 락탐 (iv)를 형성한다. 락탐은 표준 조건 하에서 (예를 들면, R3-X2, 여기서 X2 = 할로, 염기, 가령 TEA 또는 NaH의 존재 하에서) 알킬화될 수 있어서 N-알킬-락탐 (v)을 얻는다. 식 (v)의 화합물, 및 적절한 환원제, 가령 LiAlH4로 락탐 (v)의 환원으로부터 유도되는 피롤리딘은 반응식 I, II 및 III에서 기술된 조건을 사용하여 식 I의 화합물로 전환될 수 있다.
반응식 VII
식 I의 화합물은 반응식 VIII에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. (i)의 할로 기 X1은 표준 Suzuki 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서) 하에서 알켄 보론산 또는 에스테르와 커플링될 수 있고 식 (ii)의 알켄을 얻는다. mCPBA를 사용한 알켄 (ii)의 에폭시화는 에폭사이드 (iii)를 얻을 수 있고 이는 2차 또는 1차 아민 (아민 = NH2R3)와 반응시킬 수 있어서 식 (iv)의 아미노 화합물을 얻는다. 2차 또는 3차 아민 유도체 (iv)는 추가로 카보닐디아미다졸 또는 포스겐과 반응시켜 옥사졸리딘온 (v) 또는 아세틸-할라이드 (예를 들면, 염기, 가령 TEA 존재 하에서 클로로-아세틸클로라이드 의)를 형성하고 N-아실 유도체를 얻고 이는 염기 (예를 들면, NaH)를 사용한 처리에 의해 모르폴리논 유도체 (vi)로 전환될 수 있다. 식 (iv, v, 및 vi)의 화합물은 표준 조건을 사용하여 탈보호될 수 있어서 (예를 들면, THP 기로 보호된 화합물은 산, 가령 TFA 또는 HCl로 처리될 수 있다) 식 I의 화합물을 얻는다.
반응식 VIII
식 I의 화합물은 반응식 IX에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. 적절한 조건 (A 또는 B, JACS, 2001, 123(9), 1862-1871 및 J. Org. Chem, 2011, 76, 358-372에서 기술된 바와 같이) 하에서 식 (i)의 알켄의 샤프레스 아미노-하이드록시화는 아미노-하이드록시 이성질체 (ii) 또는 (iii)을 생성할 수 있다. 화합물 (ii) 및 (iii)은 카보닐디아미다졸 또는 포스겐과 반응시킬 수 있어서 옥사졸리딘온 (iv), 또는 아세틸-할라이드 (예를 들면, 염기, 가령 TEA의 존재 하에서 클로로-아세틸클로라이드)를 형성하고 N-아실 유도체를 얻고 이는 염기 (예를 들면, NaH)를 사용한 처리에 의해 모르폴리논 유도체 (v)로 전환될 수 있다. 교대 아미노-하이드록시 이성질체 (iii)는 반응식 XV에 나타낸 바와 같이 옥사졸리딘온 및 모르폴리논 유도체로 전환될 수 있다.
반응식 IX
식 I의 화합물은 반응식 X에 나타낸 바와 같이 합성될 수 있다. (i)의 할로 기 (예를 들면, X1 = Cl, Br, I)는 표준 조건 하에서 (예를 들면, 피니클 보로네이트 에스테르 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서) 보로네이트 에스테르 (ii)으로 전환될 수 있다. 보로네이트 (ii)는 Suzuki 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기, 가령 Na2CO3의 존재 하에서) 아릴할라이드 또는 헤테로아릴할라이드 (예를 들면, R3-X2)와 반응시킬 수 있어서 식 (iii)을 얻는다. 식 (iii)은 반응식 I, II 또는 III에서 기술된 반응 조건을 사용하여 식 I로 전환될 수 있다.
반응식 X
식 I의 화합물, 여기서 R4 = F 또는 CN,은 반응식 XI에 나타낸 바와 같이 형성될 수 있다. 화합물 (i)은 적절한 아실화 시약 (예를 들면, Me-COCl)으로 아실화될 수 있어서 에스테르를 형성하고 이는 Lewis 산 조건 (예를 들면, BF3/HOAc 복합체) 하에서 재배치될 수 있어서 케톤 (ii)을 얻는다. 케톤 (ii)은 N-클로로숙신아미드, N-브로모숙신아미드 또는 N-아이오도숙신아미드로 할로겐화할 수 있어서 페놀 (iii), 여기서 X1 = Cl, Br, 또는 I,을 얻는다. 화합물 (iii)은 알킬화될 수 있어서 (예를 들면 R2-X 및 염기, 가령 NaH 또는 Na2CO3; 또는 하에서 Mitsunobu 조건) 에테르 (iv)를 얻는다. (iv)의 플루오로 기는 제거될 수 있어서 (예를 들면, NaCN 또는 KCN으로) 시아노 유도체 (v)을 얻는다. (v)의 할로 기는 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 또는 표준 Negishi 조건 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에서) 하에서 Cy-M와 커플링될 수 있고, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, Cy-M는 Cy-B(OH)2, Cy-Sn(Bu)4, 또는 Zn-Cy), 식 (vi)의 유도체를 얻는다. 택일적으로, Cy-M은 시클릭 아민일 수 있고 (여기서 M는 H 이고 아민 질소에 부착된다) 염기 내 또는 Buchwald 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 알콕사이드 염기)의 존재 하에서) 가열에 의해 화합물 (v)과 커플링되어 케톤 (vi)를 얻는다. 적절한 시약, 가령 소듐 테트라하이드로보레이트 또는 Corey CBS 시약을 사용한 케톤 (vi)의 환원은 알콜을 공급할 수 있고 이는 이탈 기를 보유하는 유도체로 전환될 수 있고, (예를 들면, Lg는 시아누릭 클로라이드와의 반응을 통해 클로라이드 또는 메탄설폰무수물과의 반응을 통해 메실레이트) 및 이후 염기성 조건 하에서 (예를 들면, NaH 또는 CsCO3 또는 K2CO3) 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민과 반응시켜 식 I(viii)의 화합물을 얻는다. 택일적으로, 마지막 두 개의 단계를 반전하여 케톤 (v)은 환원될 수 있어서 알콜을 얻고 이는 이탈 기로 전환 및 일단 상기 헤테로사이클로 제거되고 및 이후 Suzuki, Stille, Negishi 또는 Buchwald 커플링을 수행하여 식 I(viii)의 화합물을 얻는다. 플루오로 유도체 (iv)는 또한 반응식 XI에서 시안화 단계를 제거함에 의해 식 I의 화합물로 전환될 수 있다.
반응식 XI
식 I의 화합물은 반응식 XII에 나타낸 바와 같이 또한 형성될 수 있다. 화합물 (i)은 적절한 아실화 시약 (예를 들면, Me-COCl)으로 아실화될 수 있어서 에스테르를 형성하고 이는 Lewis 산 조건 (예를 들면, AlCl3 또는 BF3/HOAc 복합체) 하에서 재배치될 수 있어서 케톤 (ii)를 얻는다. NX1S (예를 들면, NX1S = N-클로로숙신아미드, N-브로모숙신아미드 또는 N-아이오도숙신아미드)을 사용하는 케톤 (ii)의 할로겐화는 화합물 (iii)을 생성할 수 있고, 여기서 X1 = Cl, Br, 또는 I. 페놀은 표준 조건 (예를 들면, 무기 염기, 가령 K2CO3, 및 알킬 할라이드, 가령 Et-I)을 사용하여 에테르 (iv)로 전환될 수 있다. (iv)의 할로 기는 표준 Suzuki 조건 또는 표준 Stille 조건 하에서 (예를 들면, 팔라듐(0) 촉매, 가령 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) 및 염기 (예를 들면, 바이카보네이트 또는 카보네이트 염기)의 존재 하에서 R3-M와 커플링될 수 있고, 여기서 M는 보론산, 보론에스테르 또는 적절히 치환된 금속 (예를 들면, R3-M는 R3-B(OH)2, R3-Sn(Bu)4, 또는 Zn-R3 및 R3는 치환된 또는 비치환된 올레핀, 가령 비닐), 식 (v)의 유도체를 얻는다. 알켄은 이후 샤프레스 조건을 사용하여 디하이드록실화 될 수 있어서 디올 (vi)를 얻는다. 2차 알콜의 하나의 거울상이성질체의 증가는 표준 샤프레스 비대칭적 디하이드록시화 방법을 사용하는 달성될 수 있다. 2차 알콜은 1차 알코올의 6 단계 공정 (예를 들면 실릴 보호 (예를 들면, TBS-Cl 및 DIEA), 2차 알코올의 메실화, NaN3을 사용한 메실레이트의 제거, Ph3P을 사용한 아지드의 환원, 결과로서 얻어진 1차 아민의 Boc 보호 및 이후 TBAF을 사용한 1차 알코올 상 실릴 보호 기의 탈보호)를 통해 N-Boc 보호된 아민으로 전환될 수 있어서 아미노-알콜 (vii)를 얻는다. 아미노-알콜 (vii)은 포스겐를 사용한 처리에 의해 옥사졸리딘온으로 전환될 수 있고 연이은 적절한 시약, 가령 소듐 테트라하이드로보레이트 또는 소듐 보로하이드라이드를 사용한 케톤의 환원은 알콜 (viii)을 공급할 수 있고 이는 이탈 기를 보유하는 유도체 (ix)로 전환될 수 있다 (예를 들면, Lg는 시아누릭 클로라이드와의 반응을 통해 클로라이드 또는 메탄설폰무수물과의 반응을 통해 메실레이트). 최종적으로, 화합물 (ix)은 염기성 조건 하에서 (예를 들면, NaH 또는 Cs2CO3 또는 K2CO3) 적절한 헤테로사이클 (x) (예를 들면, 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 또는 4-아미노피리도[2,3-d]피리미딘-5(8H)-온)와 반응시킬 수 있어서 식 I(xi)의 화합물을 얻는다.
반응식 XII
본 발명은 특정 실시예에 의해 더욱 상세히 기술된다. 다음 실시예는 예시적 목적으로 제시되고 어떤 식으로도 본발명을 제한하는 의도가 아니다. 본 업계에서의 숙련가는 본질적으로 동일 결과를 발생시키는 변경 또는 변경가능한 비-임계적 파라미터의 다양성을 쉽게 이해할 것이다. 실시예의 화합물은 본 명세서에서 기술된 적어도 하나의 어세이에 따라 PI3K 저해제인 것으로 발견되었다.
실시예
하나 이상의 카이랄 중심을 함유하는 아래 예시 화합물은 다르게 언급되지 않는다면 라세미 형태 또는 이성질체 혼합물로서 얻어졌다. 아래에 생성물 중 어느 하나에 대해 나타낸 염 화학양론은 가능한 화학양론을 단지 나타내는 의미이고, 다른 화학양론인 염의 가능한 형성을 배제하는 것으로 간주되어서는 안된다. 약어 “h” 및 “min”은 시간(s) 및 분(s)을, 각각 지칭한다.
실시예 1. 1-{1-[5-클로로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(5-클로로-2-하이드록시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온
아세트산 (300 mL) 내 1-(5-클로로-2-하이드록시-4-메틸페닐)에탄온 (Oakwood로부터, 50.0 g, 271 mmol)의 교반 용액에 N-아이오도숙신이미드 (73.1 g, 325 mmol)를 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 60 ~ 80 °C 사이의 가열 맨틀 상에서 3.5 시간에 걸쳐 교반시키고 이후 실온까지 냉각시키고 밤새 교반시켰다. 물 (500 mL)를 상기 혼합물에 조금씩 부가하고, 어두운 고체 형성을 유발하였다. 10 분 동안 교반 후, 상기 고체를 여과하고, 부가적 물로 세척하였다. 밝은 내지는 어두운 갈색 고체를 진공 하에서 4 시간 동안 건조시키고 이후 주말에 걸쳐 공기 건조시켜 81.3 g (97%)의 소정의 생성물을 얻었다. C9H9ClIO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 310.9; 실험치: 311.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 13.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.63 (s, 3H) ppm.
단계 2. 1-(5-클로로-3-아이오도-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온
포타슘 카보네이트 (72.4 g, 524 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (250 mL) 내 1-(5-클로로-2-하이드록시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온 (81.3 g, 262 mmol) 및 메틸 아이오다이드 (19.6 mL, 314 mmol)의 혼합물에 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반시켰다. 물 (500 mL)를 부가하고 15 분 동안 교반시켰다. 상기 어두운 고체를 여과하고 진공에서 건조시켜 42.3 g의 소정의 생성물을 얻었다. 여액을 EtOAc로 추출하였다 (4x). 조합시킨 여액을 물 (2x) 및 식염수로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 농축시켰다. 상기 고체를 진공에서 건조시켜 부가적 37.2 g의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 추가 정제 없이 사용하였다. C10H11ClIO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 324.9; 실험치: 325.0. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.62 (s, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.62 (s, 3H) ppm.
단계 3. tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (1.71 g, 26.2 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (45.0 mL)　내에 현탁시키고 1,2-디브로모에탄 (210 μL, 2.5 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 60 oC에서 10 분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 클로로트리메틸실란 (330 μL, 2.6 mmol)를 부가하고 60 °C에서 10 분 동안 교반시키고 실온까지 냉각시켰다. N,N-디메틸포름아미드 (5.0 mL) 내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (Oakwood로부터, 6.25 g, 22.1 mmol)의 용액을 이후 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시켰다. 1-(5-클로로-3-아이오도-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (5.00 g, 15.4 mmol), 트리-(2-푸릴)포스핀 (358 mg, 1.54 mmol), 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.70 g, 0.77 mmol)를 순서대로 부가하고 상기 반응 혼합물을 70 oC까지 데우고 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고 에틸 아세테이트 (EtOAc) 및 포화 NH4Cl 용액 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고 수층을 EtOAc (2x)로 추가로 추출하였다. 조합시킨 유기층을 물 및 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 및 농축시켰다. 잔사를 헥산 내 0-30% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 상에서 정제하여, 3.0 g (55%)의 소정의 생성물을 오렌지색 고체로서 얻었다. C18H24ClNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 376.1; 실험치: 376.0. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.52 (s, 1H), 4.32, (m, 2H), 4.16 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.45 (s, 9H) ppm.
단계 4. tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트
0 oC에서 교반시킨 메탄올 (20 mL) 내 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (1.3 g, 3.7 mmol)의 용액에 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.167 g, 4.41 mmol)를 부가하였다.　상기 혼합물을 0 ~ 5 °C에서 1 시간 동안 교반시켰다. 반응을 물로 중단시키고 EtOAc(3x)로 추출하였다.　조합시킨 추출물을　MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 1.3 g (100%)의 소정의 생성물을 얻었다. C18H26ClNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 378.2; 실험치: 378.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.37 (s, 1H), 5.10 (q, 1H), 4.30 (m, 2H), 4.14 (m, 3H), 3.63 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.48 (d, 3H), 1.44 (s, 9H) ppm.
단계 5. tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트
시아누릭 클로라이드 (Aldrich로부터, 1.22 g, 6.62 mmol)를 플라스크 내로 칭량하고 N,N-디메틸포름아미드 (0.512 mL, 6.62 mmol)를 부가하였다. 몇 분 동안 교반 후 메틸렌 클로라이드 (30 mL)　내 tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (1.5 g, 4.2 mmol)의 용액을 부가하였다.　결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물을 부가하고, 이후 디클로로메탄으로 희석하였다. 층을 분리하고 유기층을 포화 NaHCO3 용액, 물, 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 및 농축시켰다. 결과로서 얻어진 잔사를 헥산 내 0-35% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 상에서 정제하여, 소정의 생성물을 얻었다 (1.36 g, 86%). C13H17ClNO에 대해 계산된 LCMS (M-Cl-Boc+H)+: m/z = 238.1; 실험치: 238.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.46 (s, 1H), 5.44, (q, 1H), 4.32 (m, 2H), 4.18 - 4.10 (m, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.79 (d, 3H), 1.44 (s, 9H) ppm.
단계 6. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트
실온에서, 소듐 하이드라이드 (0.32 g, 8.0 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (20 mL) 내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (ChemBridge로부터, 0.59 g, 4.0 mmol)의 현탁액에 부가하였다. 결과로서 얻어진　혼합물을 실온에서 25 분 동안 교반시키고 그 동안 상기 현탁액은 거의 투명한 용액이 되었다. 결과로서 얻어진 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 내 tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (1.35 g, 3.61 mmol, 실시예 1, 단계 5로부터)의 용액을 부가하였다. 상기 혼합물을 50 °C에서 밤새 교반시켰다. 냉각 후, 상기 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc (2x)로 추출하였다. 조합시킨 추출물을 물 및 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 결과로서 얻어진 잔사를 실리카겔 상에서 정제하여, 디클로로메탄 내 0-10% MeOH로 용리하여 1.03 g (59%)의 소정의 생성물을 노란색 고무로서 얻었다. 라세미 생성물을 18 mL/min의 유속, 4 mg/주사액에서 헥산 내 10% 에탄올로 용리하면서 Phenomenex Lux-Cellulose 2 칼럼 (21.1x250 mm, 5 미크론 입자 크기) 상에 적용하여, 두 개의 거울상이성질체를 제공하였다. 제 1 피크의 체류 시간은 8.34 분이고 제 2 피크에 대한 체류 시간은 10.92 분이었다. 피크 1 (463 mg), C24H32ClN6O3 (M+H)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 487.2; 실험치: 487.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.21 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.30, (q, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.23 (m, 2H), 4.17 ~ 4.00 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.76 (d, 3H), 1.37 (s, 9H) ppm.
단계 7. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
메틸렌 클로라이드 (3.2 mL) 내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (318 mg, 0.653 mmol) (상기 피크 1로부터)의 용액에 1,4-디옥산 (1.6 mL, 6.5 mmol) 내 4.0 M 수소 클로라이드를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 75 분 동안 교반시켰다. 용매를 증발시키고 잔사를 진공에서 건조시켜 0.30 g의 소정의 생성물을 비스-HCl 염으로서 얻었다. C19H24ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 387.2; 실험치: 387.1.
단계 8. 1-{1-[5-클로로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
메틸렌 클로라이드 (1.0 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (58 mg, 0.13 mmol), 아세톤 (18.5 μL, 0.252 mmol)　및 트리에틸아민 (54.5 μL, 0.391 mmol)의 혼합물에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (108 mg, 0.249 mmol)의 수지를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 3 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서)을 사용하여 정제하여 50 mg (60%)의 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. C22H30ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 429.2; 실험치:　429.1. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.47 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.29 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.52 (m, 2H), 4.21 (m, 1H), 4.15 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 4.06 (t, J = 9.7 Hz, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.39 ~ 3.27 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.11 (dd, J = 6.0, 3.8 Hz, 6H) ppm.
실시예 2. 1-{1-[3-(1-아세틸아제티딘-3-일)-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 트리플루오로아세테이트
단계 1. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
메틸렌 클로라이드 (1.5 mL)　내 라세미 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (146 mg, 0.300 mmol)　(라세미 중간체 실시예 1 단계 6으로부터)의 용액에 1,4-디옥산 (0.75 mL, 3.0 mmol) 내 4.0 M 수소 클로라이드를 부가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반 후, 용매를 증발시키고 결과로서 얻어진 잔사를 진공에서 건조시켜 138 mg의 소정의 생성물을 HCl 염으로서 얻었다. C19H24ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 387.2; 실험치: 387.1.
단계 2. 1-{1-[3-(1-아세틸아제티딘-3-일)-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 트리플루오로아세테이트
메틸렌 클로라이드 (0.20 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (20.0 mg, 0.0435 mmol, 실시예 2, 단계 1로부터) 및 트리에틸아민 (30.3 μL, 0.217 mmol)의 혼합물에 아세틸 클로라이드 (6.18 μL, 0.0870 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 용매를 증발시키고 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H26ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 429.2; 실험치:　429.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.26 (q, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.28 ~ 4.20 (m, 2H), 4.01 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.75 ~ 1.71 (m, 6H) ppm.
실시예 3. 1-{1-[5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-(1-프로피오닐아제티딘-3-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 트리플루오로아세테이트
　본 화합물을 아세틸 클로라이드 대신 프로파노일 클로라이드를 사용하여 실시예 2와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C22H28ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 443.2; 실험치: 443.2. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.25 (q, 1H), 4.49 (m, 1H), 4.27 ~ 4.18 (m, 2H), 4.02 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.54 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.05 (q, 2H), 1.72 (d, 3H), 0.93 (t, 3H) ppm.
실시예 4. 1-(1-{5-클로로-3-[1-(시클로프로필메틸)아제티딘-3-일]-2-메톡시-4-메틸페닐}에틸)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및, 아세톤 대신 시클로프로판카복스알데히드 (Aldrich로부터)로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H30ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 441.2; 실험치: 441.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.06 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.96 (q, 1H), 4.22 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.24 (s, 3H), 2.68 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.80 (s, 3H), 1.45 (d, 3H), 0.64 (m, 1H), 0.24 (m, 2H), 0.01 (m, 2H) ppm.
실시예 5. 1-{1-[5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-(1-메틸아제티딘-3-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 아세톤 대신 포름알데히드로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C20H26ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 401.2; 실험치: 401.2.
실시예 6. 1-{1-[5-클로로-3-(1-에틸아제티딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 아세톤 대신 아세트알데히드로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H28ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 415.2; 실험치: 415.1
실시예 7. 1-{1-[5-클로로-3-(1-이소부틸아제티딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 아세톤 대신 이소부티르알데히드로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H32ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 443.2; 실험치: 443.1. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.29 (s, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.37 (q, 1H), 5.37 (s, 2H), 4.01 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.05 (t, 1H), 2.86 (t, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.18 (d, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.82 (d, 3H), 1.62 (m, 1H), 0.89 (d, 6H) ppm.
실시예 8. 1-{1-[3-(1-sec-부틸아제티딘-3-일)-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 아세톤 대신 2-부탄온으로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 분리하였다. C23H32ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 443.2; 실험치: 443.1
실시예 9. 1-(1-{5-클로로-2-메톡시-3-[1-(2-메톡시에틸)아제티딘-3-일]-4-메틸페닐}에틸)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 실시예 2, 단계 1로부터의 라세미 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 아세톤 대신 메톡시아세트알데히드로 실시예 1와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C22H30ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 445.2; 실험치: 445.2.
실시예 10. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-메틸아제티딘-1-카복사미드
본 화합물을, 아세틸 클로라이드 대신 메틸 이소시아네이트로 실시예 2와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 444.2; 실험치: 444.2.
실시예 11. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온
아세트산 (100 mL) 내 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (5.00 g, 25.2 mmol, Oakwood로부터)의 교반 용액에 N-브로모숙신이미드 (4.93 g, 27.7 mmol)를 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 100 °C에서 18 시간 동안 가열하였다. 주변 온도까지 냉각 후, 상기 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 이후 포화 소듐 바이카보네이트로 중화하고, 불용성 숙신이미드를 여과로 제거하였다. 여액을 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 및 이후 감압 하에서 건조시까지 농축시켰다. 잔사를 헥산 내 0 내지 50 % EtOAc로 용리하면서 실리카겔 상에서 정제하여, 소정의 생성물을 얻었다 (2.66 g, 38%). C10H11BrClO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 277.0; 실험치: 277.0. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): δ 7.70 (1H, s), 3.77 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.50 (3H, s) ppm.
단계 2. 5-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
1,4-디옥산 (6 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (0.38 g, 1.4 mmol)　및 N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복사미드 (PepTech로부터, 0.46 g, 1.6 mmol)의 혼합물에, 물 (2 mL)　내 포타슘 카보네이트 (0.38 g, 2.7 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 N2로 발포시켰다.　테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.095 g, 0.082 mmol)를 부가하고 상기 반응물을 100 °C에서 밤새 교반시켰다. 반응을 물로 희석하고,　EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 및　실리카겔 상에서 정제하여　농축시켜 (헥산 내 0-100% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다. C18H20ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 347.1; 실험치: 347.1
단계 3. 5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
메탄올 (2 mL) 내 0 oC에서 냉각시킨 5-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (106 mg, 0.306 mmol)의 용액에　소듐 테트라하이드로보레이트 (14 mg, 0.37 mmol)를 부가하였다.　상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시키고, 이후 물로 중단시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 알콜을 얻었다. C18H22ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 349.1; 실험치: 349.1.
단계 4. 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
실온에서 시아누릭 클로라이드 (85 mg, 0.46 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.036 mL, 0.46 mmol)에 부가하였다. 백색 고체 (10 분)의 형성 후, 메틸렌 클로라이드 (2 mL), 이후　5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (115 mg, 0.330 mmol, 실시예 11, 단계 3로부터)를 부가하였다. 상기 부가 후, 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물을 부가하고, 이후 디클로로메탄으로 희석하였다. 유기 상을 포화 NaHCO3 용액, 물 및 식염수로 세척하고, 이후 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 80% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (76 mg, 63%). C18H21Cl2N2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 367.1; 실험치: 367.0.
단계 5. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
N,N-디메틸포름아미드 (0.4 mL) 내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (6.1 mg, 0.041 mmol)의 용액에 0 oC에서 소듐 하이드라이드 (60%, 2.0 mg, 0.082 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시켰다. 결과로서 얻어진 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (15.0 mg, 0.0408 mmol)의 용액을 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C24H27ClN7O2 (M+H)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 480.2; 실험치: 480.1.
실시예 13. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온
4-클로로-3-플루오로페놀 (Aldrich로부터, 20 g, 100 mmol)에 아세틸 클로라이드 (14.1 mL, 199 mmol)를 N2 교반 하에서 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물은 투명한 용액으로 실온에서 신속히 변했고 이를 60 °C에서 2 시간 동안 가열하였다. 결과로서 얻어진 혼합물에 알루미늄 트리클로라이드 (25.0 g, 187 mmol)를 조금씩 부가하고 상기 반응 혼합물을 180 °C에서 30 분 동안 가열하였다. 상기 고체를 고온에서 천천히 용해시켰다. 상기 고체가 플라스크 내에서 박층을 형성하도록 플라스크를 조심스럽게 돌리면서 상기 반응 혼합물을 이후 실온까지 냉각시키고 이후 얼음-배쓰 내에서 냉각하면서 천천히 1.0 N　HCl (300 mL)로 중단시키고 밤새 교반시켰다. 노란색 침전물을 물로 세척하고　진공 하에서 건조시키고 소정의 생성물을 노란색 고체로서 얻었다 (23.8 g), 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 2. 1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시-3-아이오도페닐)에탄온
아세트산 (100 mL) 내 1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온 (23.8 g, 126 mmol)의 용액을 N-아이오도숙신이미드 (34.1 g, 151 mmol)로 처리하고 70 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc로 희석하고 포화 NaHCO3 용액으로 거품이 중단될 때까지 중단시켰다.　유기 층을 분리하고, 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고 벗겨내어 소정의 생성물을 얻었고 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 3. 1-(5-클로로-4-플루오로-3-아이오도-2-메톡시페닐)에탄온
1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시-3-아이오도페닐)에탄온 (13 g, 41 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (41.3 mL) 내에 용해시켰다. 메틸 아이오다이드 (3.9 mL, 62 mmol), 이후 포타슘 카보네이트 (11 g, 83 mmol)를 부가하였다. 반응을 60 °C에서 1 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에테르로 희석하였다. 유기 층을 분리하고 조합시키고, 물로 세척하고,　MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 10% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (10 g, 70%). C9H8ClFIO2 (M+H)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 328.9; 실험치: 328.9.
단계 4. tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (0.682 g, 10.4 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (12 mL) 내 1,2-디브로모에탄 (0.0598 mL, 0.694 mmol)와 함께 현탁시켰다. 상기 혼합물을 70 oC에서 10 분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 클로로트리메틸실란 (0.088 mL, 0.69 mmol)를 한방울씩 부가하고 교반을 1 시간 동안 계속하였다. N,N-디메틸포름아미드 (10 mL)　내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (2.5 g, 8.7 mmol)의 용액을 이후 부가하고 상기 혼합물을 40 oC에서 1 시간 동안 가열하고 이후 N,N-디메틸포름아미드 (20 mL)　내 1-(5-클로로-4-플루오로-3-아이오도-2-메톡시페닐)에탄온 (3.0 g, 9.1 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.16 g, 0.17 mmol)　및 트리-(2-푸릴)포스핀 (0.081 g, 0.35 mmol)의 혼합물을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 70 oC까지 데우고 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 이후 실온까지 냉각시키고 에테르 및 포화 NH4Cl 용액 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 25% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.8 g). C17H21ClFNO4Na (M+Na)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 380.1; 실험치: 380.1.
단계 5. tert-부틸 3-[3-클로로-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트
0 oC에서 냉각시킨 메탄올 (3 mL)　내 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (0.17 g, 0.48 mmol)의 용액에 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.022 g, 0.57 mmol)를 부가하였다.　상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시키고, 이후 물로 중단시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 조합시키고, MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 알콜을 얻었다 (0.19 g). C17H23ClFNO4Na (M+Na)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 382.1; 실험치: 382.0.
단계 6. tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-2-플루오로-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트
시아누릭 클로라이드 (140 mg, 0.78 mmol)를 실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.059 mL, 0.77 mmol)에 부가하였다. 백색 고체 (약 10 분)의 형성 후, 메틸렌 클로라이드 (4 mL), 이후　tert-부틸 3-[3-클로로-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (197 mg, 0.547 mmol)를 부가하였다. 부가 후, 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물을 부가하고, 이후 디클로로메탄으로 희석하였다. 유기 상을　포화 NaHCO3 용액, 물 및 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 및 농축시켰다. 결과로서 얻어진 잔사를 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 30% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (110 mg, 53%).
단계 7. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
0 oC에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.6 mL)　내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (7.9 mg, 0.053 mmol)의 용액에 소듐 하이드라이드 (60%, 2.5 mg, 0.11 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL) 내 tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-2-플루오로-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (20 mg, 0.053 mmol)의 용액을 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 35 oC에서 밤새 교반시키고, 이후 물로 중단시키고, 에테르로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시키고　소정의 생성물을 얻고 이를 다음 단계에서 직접 사용하였다. C23H29ClFN6O3 (M+H)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 491.2; 실험치: 491.1.
단계 8. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
메틸렌 클로라이드 (0.2 mL) 내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (14 mg, 0.028 mmol)의 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 디옥산 (0.2 mL, 0.8 mmol) 내 4.0 M 수소 클로라이드로 처리하고 이후　용매를 제거하여 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 HCl 염을 얻었다. 아세토니트릴 (0.1 mL)/메탄올 (0.1 mL)/테트라하이드로푸란 (0.1 mL) 내 크루드 HCl 염의 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.1 mL, 0.6 mmol), 이후 아세톤 (0.050 mL, 0.68 mmol)을 부가하였다. 상기 혼합물을 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (0.030 g, 0.14 mmol)의 부가 이전에 30 분 동안 교반시켰다. 상기 반응물을 실온에서 밤새 교반시키고, 이후 중단시키고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H27ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 433.2; 실험치: 433.1.
실시예 14. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온
1-(5-클로로-2-하이드록시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온 (18.9 g, 60.9 mmol) (실시예 1, 단계 1로부터)를 N,N-디메틸포름아미드 (60.8 mL) 내에 용해시켰다. 아이오도에탄 (7.3 mL, 91 mmol) 이후 포타슘 카보네이트 (17 g, 120 mmol)를 부가하였다. 반응을 60 °C에서 1 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에테르로 희석하였다. 유기 층을 조합시키고, 물로 세척하고,　MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0-10% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (18.9 g, 91.7%). C11H13ClIO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 339.0; 실험치: 339.0.
단계 2. 5-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
1,4-디옥산 (10 mL) 내 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온 (0.69 g, 2.0 mmol)　및 N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복사미드 (0.68 g, 2.4 mmol)의 혼합물에, 물 (3 mL, 200 mmol) 내 포타슘 카보네이트 (0.56 g, 4.1 mmol)를 부가하였다. 반응을 N2로 발포시켰다.　테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.24 g, 0.20 mmol)를 부가하고 N2를 발포시켰다. 반응을 95 °C에서 밤새 교반시켰다. 반응을 물로 희석하고,　EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고　실리카겔 상에서 정제하여　(헥산 내 0 내지 90% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.6 g, 82%). C19H22ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 361.1; 실험치: 361.0.
단계 3. 5-[3-클로로-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
0 oC에서 냉각시킨 메탄올 (10 mL) 내 5-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (0.60 g, 1.7 mmol)의 용액에 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.075 g, 2.0 mmol)를 부가하였다.　상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시키고, 이후 물로 중단시키고, EtOAc로 추출하였다. 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 알콜을 얻었다 (0.6 g). C19H24ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 363.1; 실험치: 363.0.
단계 4. 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
시아누릭 클로라이드 (0.43 g, 2.3 mmol)를 실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.18 mL, 2.3 mmol)에 부가하였다. 백색 고체 (10 분)의 형성 후, 메틸렌 클로라이드 (10 mL), 이후　5-[3-클로로-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (0.6 g, 2 mmol)를 부가하였다. 부가 후, 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시키고, 이후 디클로로메탄으로 희석하고 포화 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 50% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.58, 90%). C19H23Cl2NO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 381.1; 실험치: 381.0.
단계 5. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
N,N-디메틸포름아미드 (3 mL)　내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (47 mg, 0.31 mmol)의 용액에 소듐 하이드라이드 (60%, 12.6 mg, 0.524 mmol)를 0 oC에서 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시켰다. 상기 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (100 mg, 0.3 mmol, 실시예 14, 단계 4로부터)의 용액을 부가하였다. 상기 반응물을 35 oC에서 밤새 교반시켰다. 반응을 중단시키고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에 적용하고 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H29ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 494.2; 실험치: 494.1.
실시예 16. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
단계 1. 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올
소듐 테트라하이드로보레이트 (0.31 g, 8.1 mmol)를 메탄올 (25 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (실시예 11, 단계 1로부터) (1.5 g, 5.4 mmol)의 혼합물에 0 oC에서 부가하고 결과로서 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고 결과로서 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, 이후 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 40% EtOAc로 용리하면서, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (0.30 g, 90%).
단계 2. 4-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴
1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올 (0.30 g, 1.1 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카보니트릴 (Combi-Blocks로부터, 0.27 g, 1.2 mmol), 소듐 카보네이트 (230 mg, 2.1 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (8 mL)/물 (2 mL)　내 디클로로메탄 (1:1) (100 mg, 0.13 mmol) 와의 복합체를 탈기시키고 이후 N2로 재충전시켰다. 상기 반응물을 95 °C에서 2 시간 동안 교반시키고, 이후 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 40% EtOAc로 용리하면서, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (0.249 g, 75%). C16H16ClN2O2 에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 303.1; 실험치: 303.0
단계 3. 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴
시아누릭 클로라이드 (170 mg, 0.94 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (73 μL, 0.94 mmol)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 이후 메틸렌 클로라이드 (4 mL) 내 4-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴 (190 mg, 0.628 mmol)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 직접 다음 단계에서 정제 없이 사용하였다 (121 mg, 60%). C16H15Cl2N2O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 321.0; 실험치: 321.0
단계 4. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴
소듐 하이드라이드 (20 mg, 0.50 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 내 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴 (90 mg, 0.28 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (63 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 부가하고 상기 반응을 30 oC에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 냉각시키고, 물로 처리하고 이후 여과하고 소정의 생성물을 제공하였다. C22H21ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 434.1; 실험치: 434.2
단계 5. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카복시산
물 (0.70 mL, 0.70 mmol) 내 소듐 하이드록사이드 (1.0 M)를 에탄올 (1.0 mL) 내 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴 (0.060 g, 0.14 mmol)의 혼합물에 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 95 oC에서 6 시간 동안 가열하였다. 이때, 진한 HCl를 부가하여 pH를 ~ 3로 조정하였다. 용매를 제거하고 잔사를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C22H22ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 453.1; 실험치: 453.2
단계 6. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
THF (0.14 mL, 0.28 mmol)　내 2.0 M 디메틸아민을 실온에서 N,N-디메틸포름아미드 (0.7 mL) 내 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카복시산 (9.6 mg, 0.021 mmol) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (10 mg, 0.03 mmol)의 용액에 부가하고 이후 트리에틸아민 (8.8 μL, 0.064 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 1 시간 동안 교반시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C24H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치: 480.2.
실시예 17. 4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N-메틸피콜린아미드
본 화합물을 THF 내 2.0 M 디메틸아민을 대체하여 THF 내 메틸아민의 2.0 M 용액을 사용하여 실시예 16, 단계 6와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H25ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 466.2; 실험치: 466.2.
실시예 18. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-(2-하이드록시에틸)피리딘-2-카복사미드
본 화합물을 THF 내 2.0 M 디메틸아민을 대체하여 에탄올아민을 사용하여 실시예 16, 단계 6와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C24H27ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 496.2; 실험치: 496.2.
실시예 19. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸피리딘-2-카복사미드
THF 내 2.0 M 디메틸아민을 대체하여 2-(메틸아미노)에탄올을 사용하여 본 화합물을 실시예 16, 단계 6와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H29ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 510.2; 실험치: 510.2.
실시예 20. 2-(4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-1H-피라졸-1-일)에탄올
단계 1. 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-메톡시-2-메틸벤젠
시아누릭 클로라이드 (1.7 g, 9.2 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (710 μL, 9.2 mmol)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 이후 메틸렌 클로라이드 (34 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올 (실시예 16, 단계 1로부터) (1.72 g, 6.15 mmol)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 10% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (1.01 g, 60%).
단계 2. 1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
소듐 하이드라이드 (36 mg, 0.91 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (8 mL) 내 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-메톡시-2-메틸벤젠 (150 mg, 0.503 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (110 mg, 0.76 mmol)의 혼합물에 부가하고 상기 반응을 30 oC에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 CH2Cl2 내 0 내지 70% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (103 mg, 50%). C16H18BrClN5O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 410.0; 실험치: 410. 라세미 생성물을 18 mL/min의 유속, ~ 13 mg/주사액에서 헥산 내 5% 에탄올로 용리하면서 Phenomenex Lux-Cellulose 1 칼럼 상에 적용하여 (21.1x250 mm, 5 미크론 입자 크기), 두 개의 거울상이성질체를 제공하였다.
단계 3. 1-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸
THF (0.60 mL, 0.60 mmol)　내 포타슘 tert-부톡사이드 (1.0 M)를 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.1 g, 0.5 mmol) N,N-디메틸포름아미드 (1.5 mL) 내의 용액에 0 oC에서 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 5 분 동안 교반시키고, 이후 0oC까지 냉각시키고 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란 (0.2 mL, 0.8 mmol)로 처리하였다. 상기 반응물을 실온에서 밤새 교반시키고, 이후 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 생성물을 제공하고 이를 헥산 내 0 내지 30% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다. C17H34BN2O3Si에 대해 계산치 (M+H)+: m/z = 353.2; 실험치: 353.1.
단계 4. 2-(4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-1H-피라졸-1-일)에탄올
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.026 g, 0.062 mmol)　(카이랄 순수, 단계 2로부터 제 1 피크), 1-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.024 g, 0.069 mmol), 소듐 카보네이트 (13 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (0.5 mL)/물 (0.1 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (6.1 mg, 0.0075 mmol)　와의 복합체를 탈기시키고 이후 N2로 재충전시켰다. 상기 반응 혼합물을 95 °C에서 2 시간 동안 교반시키고, 이후 진한 HCl (0.1 mL)로 처리하고 이후 실온에서 1 시간 동안 교반시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H25ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.2; 실험치: 442.2.
실시예 21. 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-N,N,6'-트리메틸바이페닐-4-카복사미드 트리플루오로아세테이트
단계 1. 메틸 3'-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-6'-메틸바이페닐-4-카복실레이트
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민　(60 mg, 0.15 mmol, 카이랄 순수, 실시예 20, 단계 2로부터의 제 1 피크), [3-플루오로-4-(메톡시카보닐)페닐]보론산 (Combi-Blocks로부터, 0.041 g, 0.20 mmol), 소듐 카보네이트 (36 mg, 0.34 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (1.2 mL)/물 (0.3 mL)　내 디클로로메탄 (1:1) (6 mg, 0.007 mmol) 와의 복합체를 진공처리하고 이후 N2로 재충전시켰다. 상기 반응물을 95 °C에서 2 시간 동안 교반시켰다.　이후　용매를 제거하고　크루드 혼합물을 CH2Cl2 내 0 내지 70% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고, 소정의 생성물을 얻었다 (54 mg, 75%). C24H24ClFN5O3 에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 484.2; 실험치: 484.1
단계 2. 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-6'-메틸바이페닐-4-카복시산
리튬 하이드록사이드, 1수화물 (13 mg, 0.31 mmol)를 메탄올 (0.2 mL)/테트라하이드로푸란 (0.2 mL)/물 (0.09 mL) 내 위에서 제조된 메틸 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-6'-메틸바이페닐-4-카복실레이트 (0.030 g, 0.062 mmol)의 용액에 부가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1.5 h 동안 교반시키고, 이후 진한 HCl (60 uL)로 처리하여 pH를 2로 조정하였다. 용매를 제거하고 크루드 생성물을 제공하였고 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C23H22ClFN5O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 470.1; 실험치: 470.2
단계 3. 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-N,N,6'-트리메틸바이페닐-4-카복사미드 트리플루오로아세테이트
THF 내 2.0 M 디메틸아민 (0.1 mL, 0.2 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.7 mL) 내 위에서 제조된 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-6'-메틸바이페닐-4-카복시산 (12 mg, 0.026 mmol) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (20 mg, 0.04 mmol)의 용액에 실온에서 부가하고 이후 트리에틸아민 (11 μL, 0.077 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 1 시간 동안 교반시키고, 물로 중단시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에 적용하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H27ClFN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 497.2; 실험치:　497.2.
실시예 22. 3'-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5'-클로로-3-플루오로-2'-메톡시-N,6'-디메틸바이페닐-4-카복사미드 트리플루오로아세테이트
본 화합물을 THF 내 2.0 M 디메틸아민을 대체하여 THF 내 2.0 M 메틸아민을 사용하여 실시예 21, 단계 3와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H25ClFN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 483.2; 실험치: 483.2.
실시예 23. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N-(2-하이드록시에틸)피콜린아미드 트리플루오로아세테이트
단계 1. 5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴
1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올 (0.15 g, 0.54 mmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카보니트릴 (Frontier로부터, 0.14 g, 0.59 mmol), 소듐 카보네이트 (110 mg, 1.1 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (4 mL)/물 (1 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (52 mg, 0.064 mmol)　와의 복합체를 탈기시키고 이후 N2로 재충전시켰다. 상기 반응물을 95 °C에서 2시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, 이후 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 40% EtOAc로 용리하면서, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고, 소정의 생성물을 얻었다 (114 mg, 70%). C16H16ClN2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 303.1; 실험치: 303.0
단계 2. 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴
시아누릭 클로라이드 (170 mg, 0.94 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (73 μL, 0.94 mmol)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 이후 메틸렌 클로라이드 (4 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴 (190 mg, 0.628 mmol)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 이후 여과하고 농축시켰다. 결과로서 얻어진 크루드 생성물을 다음 단계에서 추가 정제 없이 직접 사용하였다 (110 mg, 55%). C16H15Cl2N2O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 321.0; 실험치: 321.0
단계 3. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴
소듐 하이드라이드 (20 mg, 0.50 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피리딘-2-카보니트릴 (90 mg, 0.28 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (63 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 부가하고 상기 반응을 30 oC에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 처리하고 이후 여과하고 소정의 생성물을 제공하였다. C22H21ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 434.1; 실험치: 434.2
단계 4. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카복시산
물 (0.70 mL, 0.70 mmol) 내 소듐 하이드록사이드 (1.0 M)를 에탄올 (1.0 mL) 내 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴 (0.060 g, 0.14 mmol)의 혼합물에 부가하였다. 반응을 95 oC에서 6 시간 동안 가열하고, 이후 진한 HCl를 부가하여 pH를 ~ 3로 조정하였다. 용매를 제거하고 결과로서 얻어진 잔사를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C22H22ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 453.1; 실험치: 453.2
단계 5. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N-(2-하이드록시에틸)피콜린아미드 트리플루오로아세테이트
에탄올아민 (15 μL, 0.25 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.7 mL) 내 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카복시산 (9.6 mg, 0.021 mmol)　및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (10 mg, 0.03 mmol)의 용액에 실온에서 부가하고 이후 트리에틸아민 (8.8 μL, 0.064 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 1 시간 동안 교반시키고, 및 이후 물로 중단시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에 적용하고 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C24H27ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 496.2; 실험치:　496.2.
실시예 24. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸피리딘-2-카복사미드 트리플루오로아세테이트
본 화합물을 에탄올아민을 대체하여 2-(메틸아미노)에탄올을 사용하여 실시예 23와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H29ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 510.2; 실험치:　510.2.
실시예 40. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-시아노-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸피리딘-2-카복사미드
촉매 예비형성: 무수 디메틸아세트아미드 (DMA)를 N2의 부드러운 스트림로 30 분 동안 사용 전에 퍼징하였다. H2SO4의 50 mM 용액을 10　mL 디메틸아세트아미드 및 26.8　μL의 진한 H2SO4로 제조하고 이후 N2로 10 분 동안 퍼징하였다. 자기 교반바 및 중격 캡을 구비한 8　mL 바이알에 Pd(OAc)2　(22.5　mg, 100　μmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필바이페닐 (95.3　mg, 200　μmol)을 부가하였다. 바이알을 비우고 및 N2로 3 시간 충전하고, N2의 부드러운 스트림로 10 분 동안 퍼징하였다. H2SO4　(2.0　mL, DMA 내 50　mM)를 부가하고, 촉매 혼합물을 오일 배쓰 내에 80 °C에서 30 분 동안 교반시키고 균질 커피색-갈색 용액을 얻었다.
상기 촉매 (0.05 mL)를 N,N-디메틸아세트아미드 (0.1 mL) 내 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N-(2-하이드록시에틸)-N-메틸피리딘-2-카복사미드 (실시예 19로부터) (4.0 mg, 0.0078 mmol), 아연 (0.22 mg, 0.0034 mmol) 및 아연 시아나이드 (0.92 mg, 0.0078 mmol)의 혼합물에 부가하였다.　상기 혼합물을 탈기시키고 이후 반응을 120 oC에서 1.5 시간 동안 가열하였다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC 상에 적용하고 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C26H29N8O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 501.2; 실험치:　501.2
실시예 41. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1: N-(2,4-디메톡시벤질)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-아민
1-부탄올 내 4-클로로-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (330 mg, 1.9 mmol) 및 1-(2,4-디메톡시페닐)메탄아민 (0.58 mL, 3.9 mmol)의 용액을 마이크로파 내에서 150 °C에서 40 분 동안 가열하였다. 분취용 LCMS (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서)를 통해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (240 mg, 42%). C16H19N4O2 (M+H)+에 대한 LCMS: m/z = 299.1; 실험치: 299.2.
단계 2: 5-[3-클로로-5-(1-{4-[(2,4-디메톡시벤질)아미노]-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일}에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 내 N-(2,4-디메톡시벤질)-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-아민 (110 mg, 0.37 mmol)의 용액을 소듐 하이드라이드 (30 mg, 0.75 mmol)로 처리하고 20 °C에서 30 분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (130 mg, 0.34 mmol)의 용액으로 처리하고 50 °C에서 밤새 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 물 및 에틸 아세테이트(2x)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 크루드 잔사까지 농축시켰다. 분취용 LCMS를 통해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (110 mg, 49%). C34H38ClN6O4에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 629.3; 실험치: 629.1.
단계 3: 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
메틸렌 클로라이드 (2 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-{4-[(2,4-디메톡시벤질)아미노]-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일}에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (85 mg, 0.14 mmol)의 용액을 트리플루오로아세트산 (2 mL)로 처리하고 20 °C에서 3 시간 동안 및 40 °C에서 20 분 동안 교반시켰다. 분취용 LCMS를 통해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (44 mg, 46%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H28ClN6O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 479.2; 실험치: 479.0. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 12.8 (br s, 0.5 H), 8.50 (br s, 0.5 H), 8.37 (br s, 2 H), 7.91 - 7.86 (m, 0.5 H), 7.80 - 7.75 (m, 0.5 H), 7.68 - 7.58 (m, 3 H), 7.17 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 6.19 (q, J = 6.9 Hz, 1 H), 3.04 (s, 3 H), 3.01 (s, 3 H), 2.94 (s, 3 H), 2.61 (s, 3 H), 2.05 (s, 3 H), 1.83 (d, J = 6.9 Hz, 3 H).
실시예 43. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[5-(메틸설포닐)피리딘-3-일]벤조니트릴
단계 1. 1-(3-브로모-5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온
1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온 (예를 들면, 실시예 13, 단계 1로부터) (20.0　g, 101　mmol, 1.00 eq)　및 50% 수성 황산 (120　mL)를 플라스크에 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 물 배쓰 내에서 교반하면서60 °C까지 가열하였다. N-브로모숙신이미드　(21.52　g, 120.9　mmol, 1.20 eq)를 8 분 간격으로 세 부분으로 부가하고 [7.0 g + 7.0 g + 7.52 g]. 상기 반응 혼합물을 60 °C에서 3 시간 동안 가열 후, 반응을 완결시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (160 ml) 및 디클로로메탄 (DCM) (300 ml)로 희석하고, 상기 혼합물을 0.5 시간 동안 교반시켰다. 유기 층을 분리하고 수층을 디클로로메탄 (100 ml)으로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을　1 N HCl　(100 ml x 2), 물 (100 ml), 식염수 (60 ml)로 세척하고, 감압 하에서 농축시켜　크루드 생성물을 노란색 고체로서 얻었다 (29.1 g). 크루드 생성물을 HOAc (100 ml) 내에 용해시키고 이후 교반 하에서 물 (200 ml)로 희석하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 20분 동안 실온에서 교반시키고 상기 생성물을 여과에 의해 수집하고 건조시키고 1-(3-브로모-5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온을 노란색 고체로서 얻었다 (21.8 g, 80.9%). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13.18 (s, 1 H, -OH), 7.78 (d, J = 7.78 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H).
단계 2. 4-아세틸-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴
1-(3-브로모-5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시페닐)에탄온 (2.0 g, 7.5 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (16 mL, 210 mmol) 내 포타슘 시아나이드 (0.58 g, 9.0 mmol)와 조합시키고 오일 배쓰 내에서 85 oC까지 가열하였다. 18 시간 동안 가열 후, 반응을 방치하여 실온까지 냉각시키고 아이오도에탄 (0.90 mL, 11 mmol)　및 포타슘 카보네이트 (2.1 g, 15 mmol)를 부가하였다. 반응물을 65 oC까지 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 3 시간 동안 가열 후 반응을 완결하고 방치하여 실온까지 냉각시키고, 이후 에틸 아세테이트 내에 취하고 물, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시켰다. 결과로서 얻어진 용액을 농축시켜 어두운 오일로서 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산: 에틸 아세테이트 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 4-아세틸-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (1.15 gm, 50%)을 고체 잔사로서 얻었다, C11H9BrClNO2(M+H)+에 대해 계산된 LCMS: m/z = 301.9, 303.9; 실험치: (비이온화)
단계 3. 2-브로모-6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)벤조니트릴
소듐 테트라하이드로보레이트 (38 mg, 0.99 mmol)를 메탄올 (5 mL, 100 mmol) 내 4-아세틸-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (200 mg, 0.7 mmol)의 혼합물에 0 °C에서 부가하였다. 상기 반응을 실온에서 1 시간 동안 교반시키고, 농축시키고 물 및 EtOAc 사이에서 분배시켰다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 2-브로모-6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)벤조니트릴을 투명한 오일로서 얻었다 (0.15 gm, 100%), C11H11BrClNO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 303.9, 305.9; 실험치: 304.0, 305.9.
단계 4. 2-브로모-6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시벤조니트릴
시아누릭 클로라이드 (0.11 g, 0.59 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL, 40 mmol) 내에 용해시켰다. 몇 분 동안 교반 후, 메틸렌 클로라이드 (3 mL, 50 mmol) 내 2-브로모-6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)벤조니트릴 (150 mg, 0.49 mmol)의 용액을 부가하였다.　결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 반응을 물 및 디클로로메탄 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 포화 NaHCO3 용액, 물, 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 및 농축시켰다. 크루드 생성물을 0-30% EtOAc/헥산의 구배를 용리하면서 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 2-브로모-6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시벤조니트릴 (0.12 gm, 75%)을 반고체로서 얻었다, C11H10BrCl2NO에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 323.9, 320.9; 실험치: (난이온화).
단계 5. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴
소듐 하이드라이드 (16 mg, 0.41 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL, 40 mmol) 내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (33 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 부가하고 10 분 동안 교반시켰다. N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 내 2-브로모-6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시벤조니트릴 (60 mg, 0.2 mmol)를 부가하고 상기 반응을 50 oC에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 상기 생성물을 CH2Cl2/MeOH 0-10%로 용리하면서 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여, 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (0.05 gm, 60%)을 고체로서 얻었다, C17H16BrClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 437.0, 435.0; 실험치: 436.9, 434.7.
단계 6. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[5-(메틸설포닐)피리딘-3-일]벤조니트릴
아세토니트릴 (2 mL, 40 mmol)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (20 mg, 0.04 mmol) 및 3-(메틸설포닐)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (19 mg, 0.069 mmol)의 혼합물에 물 (0.5 mL, 30 mmol) 내 소듐 카보네이트 (10 mg, 0.09 mmol)를 부가하였다. 질소를 발포시키면서 반응을 탈기시켰다. 디클로로메탄과의 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) 복합체 (1:1) (2 mg, 0.002 mmol)를 부가하고 N2로 더욱 탈기시켰다. 반응물을 100 °C에서 2 시간 동안 가열하였다. 크루드 생성물을 분취용 LC-MS 상에서 정제하여 (아세토니트릴, 물, TFA) 소정의 생성물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.004 g, 20%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H22ClN7O3S에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 512.1; 실험치: 512.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 9.20 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 9.12 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.61 (t, J = 2.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 6.36 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.54 (dt, J = 14.0, 7.0 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.36 - 3.30 (m, 1H), 2.58 (s, 3H), 1.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.92 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 44. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드
실시예 43, 단계 6와 유사한 방식으로 N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜린아미드 (Peptech, Cat# BE1622)을 사용하여 표제 화합물을 제조하여 크루드 생성물을 얻었고 이를 분취용 LC-MS 상에서 정제하여 (아세토니트릴, 물, TFA) 소정의 생성물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.005 g, 22%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H25ClN8O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 505.1; 실험치: 505.1. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.72 (dd, J = 2.1, 0.7 Hz, 1H), 8.14 - 8.12 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.71 (dd, J = 8.0, 0.7 Hz, 1H), 6.35 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.61 - 3.48 (m, 1H), 3.42 - 3.31 (m, 1H), 3.03 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.80 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.92 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 65. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸니코틴아미드
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (25 mg, 0.061 mmol)　(카이랄 순수, 실시예 20, 단계 2로부터의 제 1 피크), N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)니코틴아미드 (PepTech로부터) (25 mg, 0.091 mmol), 소듐 카보네이트 (13 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II)의 혼합물, 아세토니트릴 (0.8 mL)　/ 물 (0.3 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과하고 여액을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치: 480.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (1H, s), 8.54 (1H, br s), 8.13 (1H, s), 7.82 (1H, m), 7.53 (1H, s), 7.42 (2H, br s), 6.28 (1H, q, J = 6.5 Hz), 3.22 (3H, s), 2.95 (6H, m), 2.58 (3H, s), 2.04 (3H, s), 1.77 (3H, d, J = 6.5 Hz) ppm.
실시예 66. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 비스(트리플루오로아세테이트)
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (25 mg, 0.061 mmol)　(카이랄 순수, 실시예 20, 단계 2로부터의 제 1 피크), N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복사미드 (25 mg, 0.091 mmol), 소듐 카보네이트 (13 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]-디클로로팔라듐 (II)의 혼합물, 아세토니트릴 (0.8 mL)　/ 물 (0.3 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서　2 시간 동안 교반시켰다.　실온까지 냉각 후, 상기 혼합물을 여과하고 여액을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치:　480.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (2H, br s), 8.48 (1H, m), 8.36 (1H, s), 7.86 (1H, br s), 7.65 (1H, br s), 7.58 (1H, s), 6.33 (1H, q, J = 7.0 Hz), 3.19 (3H, s), 3.03 (3H, s), 2.97 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.81 (3H, d, J = 7.0 Hz) ppm.
실시예 67. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
단계 1. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (1.6 g, 3.2 mmol, 실시예 13, 단계 7로부터)를 실온에서 2시간 동안 메틸렌 클로라이드 (17 mL)　내 디옥산 (8.15 mL, 32.6 mmol) 내 4.0 M 수소 클로라이드로 처리하였다. 상기 혼합물을 건조시까지 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다. C18H21ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 391.1; 실험치: 391.1.
단계 2. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
메틸렌 클로라이드 (20 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (0.90 g, 1.9 mmol, 실시예 67, 단계 1), 아세톤 (1.0 mL, 14 mmol)　및 트리에틸아민 (2.5 mL, 18 mmol)의 혼합물에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 수지 (2.5 g, 5.8 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 이후 여과하고, 물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 생성물을 얻었다 (870 mg, 100%). C21H27ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 433.2; 실험치: 433.1
단계 3. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민의 단일 거울상이성질체
1-{1-[5-클로로-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (870 mg, 2.0 mmol)의 거울상이성질체를 18 mL/min의 유속, 및　~8 mg/주사액의 칼럼 로딩에서 헥산 내 10% 에탄올로 용리하면서 Phenomenex Lux Cellulose-2 칼럼 상에서 분리하고, 두 개의 거울상이성질체를 분리하였다. 제 1 피크 체류 시간 10.9 min; 제 2 피크 체류 시간 13.6 min. 제 1 피크 (110 mg, 13%)의 분획을 농축시키고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H27ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 433.2; 실험치: 433.1
실시예 68. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올
에탄올 (0.53 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (15 mg, 0.032 mmol, 실시예 67, 단계 1로부터) 및 트리에틸아민 (18 μL, 0.13 mmol)의 혼합물에 (S)-(-)-메틸옥시란 (6.8 μL, 0.097 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 90 °C에서 3 h 동안 가열하고, 이후 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다. 거울상이성질체를 18 mL/min의 유속에서, 헥산 내 20% 에탄올로 용리하면서, Phenomenex Lux Cellulose C-4 칼럼 상에서 분리하고 (5 μM, 21.2 x 250 mm), 두 개의 거울상이성질체를 얻었다. 제 1 피크 (2.7 mg, 18%) 체류 시간 8.9 min; C21H27ClFN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 449.2; 실험치: 449.1. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz) δ 8.11(1H, s), 7.42 (1H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, br s), 6.21 (1H, q, J = 7.5 Hz), 4.28 (1H, d, J = 4.0 Hz), 3.82 (3H, m), 3.62 (3H, s), 3.55 (1H, m), 3.05 (1H, m), 2.97 (1H, m), 2.55 (3H, s), 2.28 (2H, m), 1.70 (2H, d, J = 7.5 Hz), 1.00 (3H, d, J = 6.0 Hz) ppm. 제 2 피크 체류 시간 10.0 min.
실시예 71. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-플루오로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-일)에탄올
메탄올 (0.1 mL)/아세토니트릴 (0.1 mL)/테트라하이드로푸란 (0.1 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (19 mg, 0.041 mmol, 실시예 67, 단계 1로부터 라세미 중간체) 및 트리에틸아민 (28 μL, 0.20 mmol)의 혼합물에 {[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}아세트알데히드 (39 μL, 0.20 mmol), 이후 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (22 mg, 0.10 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 물 내 6.0 M 수소 클로라이드로 처리하고 (0.07 mL, 0.4 mmol) 및 이후 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (2.5 mg, 13%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C20H25ClFN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 435.2; 실험치: 435.1.
실시예 72. 1-{1-[5-클로로-4-플루오로-2-메톡시-3-(1-옥세탄-3-일아제티딘-3-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
메탄올 (0.1 mL)/아세토니트릴 (0.1 mL)/테트라하이드로푸란 (0.1 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-4-플루오로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (19 mg, 0.041 mmol 라세미 중간체 실시예 67, 단계 1로부터) 및 트리에틸아민 (28 μL, 0.20 mmol)의 혼합물에 37% 포름알데히드 (15 μL, 0.20 mmol), 이후 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (22 mg, 0.10 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (1.2 mg, 6.3%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C19H23ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 405.2; 실험치: 405.1.
실시예 94. 1-{1-[5-클로로-2-에톡시-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 벤질 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트
시아누릭 클로라이드 (200 mg, 1.1 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.083 mL, 1.1 mmol)에 실온에서 부가하였다. 백색 고체 (약 10 분)의 형성 후, 메틸렌 클로라이드 (5 mL), 이후　벤질 3-[3-클로로-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (310 mg, 0.77 mmol)를 부가하였다. 부가 후, 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 물을 부가하고, 이후 디클로로메탄으로 희석하였다. 유기 상을　포화 NaHCO3 용액, 물 및 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 상에서 정제하여 (0 내지 40% EtOAc/헥산로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (140 mg, 43%). C22H26Cl2NO3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 422.1; 실험치: 422.0.
N,N-디메틸포름아미드 (2.8 mL)　내 벤질 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (0.375 g, 0.888 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.16 g, 1.1 mmol), 세슘 카보네이트 (0.43 g, 1.3 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (15 mg, 0.089 mmol)의 혼합물을 140 oC에서 1 h 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 에테르로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고 실리카겔 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 100% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다　(0.24 g, 50%). C28H32ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 535.2; 실험치: 535.0. 거울상이성질체를 18 mL/min의 유속 및 ~4.5 mg/주사액의 칼럼 로딩에서, 헥산 내 20% 에탄올로 용리하면서, Phenomenex Lux Cellulose C-2 칼럼 (5 μM, 21.2 x 250 mm) 상에서 분리하고, 두 개의 거울상이성질체를 분리하였다. 제 1 피크 체류 시간: 21.2 min; 제 2 피크 체류 시간: 24.6 min.
단계 2. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
벤질 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (170 mg, 0.32 mmol, 라세미 중간체) 및 5% 팔라듐 (80 mg)를 메탄올 (12 mL) 내에 조합시키고,　여기에 물 내 0.25 M 수소 클로라이드 (3.2 mL, 0.79 mmol)를 부가하였다. 현탁액을 H2의 풍선 압력 하에서 실온에서　2시간 동안 수소화하였다.　현탁액을 여과하였다. 여액을 포화 NaHCO3 용액으로 중화하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 여과하고, 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (117 mg, 92%). C20H26ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 401.2; 실험치: 401.1.
단계 3. 1-{1-[5-클로로-2-에톡시-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 비스(트리플루오로아세테이트)
아세톤 (9.3 μL, 0.13 mmol)를 메탄올 (0.1 mL)/테트라하이드로푸란 (0.1 mL)/아세토니트릴 (0.1 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (10.2 mg, 0.0254 mmol)에 부가하고 상기 혼합물을 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (16 mg, 0.076 mmol)의 부가 이전에 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 4 h 동안 교반시키고 이후 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다 (2.3 mg, 22%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C23H32ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 443.2; 실험치: 443.1.
실시예 95. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)에탄올 비스(트리플루오로아세테이트)
테트라하이드로푸란 (0.09 mL)/아세토니트릴 (0.09 mL)/메탄올 (0.09 mL)　내　1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (7.9 mg, 0.020 mmol, 실시예 94, 단계 2로부터의 라세미 중간체)의 혼합물에 {[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}아세트알데히드 (19 μL, 0.098 mmol)를 부가하고　상기 혼합물을 10분 동안 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 (12 mg, 0.059 mmol)의 부가 이전에 교반시켰다. 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 4 h 동안 교반시키고, 이후 물 내 6.0 M 수소 클로라이드 (30 μL, 0.2 mmol)로 10분 동안 처리하였다. 상기 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다 (3.2 mg, 40%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C22H30ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 445.2; 실험치: 445.1.　
실시예 96. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 벤질 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트
실시예 94, 단계 1로부터의 거울상이성질체를 18 mL/min의 유속 및 ~4.5 mg/주사액의 칼럼 로딩에서, 헥산 내 20% 에탄올로 용리하면서, Phenomenex Lux Cellulose C-2 칼럼 상에서 분리하고 (5 μM, 21.2 x 250 mm), 두 개의 거울상이성질체를 분리하였다. 제 1 피크 체류 시간: 21.2 min; 제 2 피크 체류 시간: 24.6 min.
단계 2. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
벤질 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (제 1 피크 이전 단계의 카이랄 중간체로부터)를 실시예 94, 단계 2에서 기술된 바와 같이 5% 팔라듐의 존재 하에서 수소화하고 소정의 카이랄 생성물을 얻었다. C20H26ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 401.2; 실험치: 401.1.
단계 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올 비스(트리플루오로아세테이트)
이소프로필 알콜 (0.05 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (10 mg, 0.02 mmol, 카이랄 중간체 단계 2로부터) 및 트리에틸아민 (9 μL, 0.07 mmol)의 혼합물에 (S)-(-)-메틸옥시란 (4.5 μL, 0.064 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 90 °C에서 밤새 교반시키고, 냉각시키고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다 (3.4 mg, 34%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. C23H32ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 459.2; 실험치: 459.1
실시예 99. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-1-옥소프로판-2-올 트리플루오로아세테이트
N,N-디메틸포름아미드 (0.15 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (9.8 mg, 0.024 mmol, 실시예 94, 단계 2로부터의 라세미 중간체), N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (14 mg, 0.037 mmol)　및 트리에틸아민 (10 μL, 0.073 mmol)의 혼합물에 물 내 85% (2S)-2-하이드록시프로판산 (3.2 μL, 0.037 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 상에서 정제하여 소정의 생성물을 트리플루오로아세트산 (TFA) 염으로서 얻었다 (2.9 mg, 29%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H30ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 473.2; 실험치: 473.1.
실시예 102. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올
이소프로필 알콜 (0.10 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (21 mg, 0.046 mmol) (실시예 1, 단계 7, 피크 1로부터의 카이랄 중간체)　및 트리에틸아민 (20 μL, 0.1 mmol)의 혼합물에 (S)-(-)-메틸옥시란 (3.2 μL, 0.046 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 90 °C에서 교반시켰다. 90분 후, 부가적 (S)-(-)-메틸옥시란　(6.4 uL)를 부가하고 90 °C에서 밤새 교반시켰다. 냉각 후, 상기 혼합물을 메탄올로 희석하고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 6 mg (30%)의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. C22H30ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 445.2; 실험치: 445.2.
실시예 104. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)에탄올
메틸렌 클로라이드 (0.3 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (20 mg, 0.04 mmol) (실시예 1, 단계 7, 피크 1로부터의 카이랄 중간체), {[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}아세트알데히드 (8.3 mg, 0.048 mmol), 및 트리에틸아민 (19 μL, 0.14 mmol)의 혼합물에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 수지 (38 mg, 0.087 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 테트라하이드로푸란 (1 mL)　내에 용해시키고 0°C까지 냉각시켰다. THF 내 1.0 M 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 (0.44 mL, 0.44 mmol)를 부가하고 실온까지 데웠다.　3 h 후, 용매를 증발시켰다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 8.1 mg (40%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H28ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 431.2; 실험치: 431.3.
실시예 105. (3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)아세토니트릴
아세토니트릴 (0.7 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (16 mg, 0.035 mmol, 실시예 1, 단계 7의 피크 1로부터의 카이랄 중간체)　및 트리에틸아민 (14 μL, 0.10 mmol)의 혼합물에 브로모아세토니트릴 (2.7 μL, 0.038 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 2.5 h 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 아세토니트릴로 희석하고 RP-HPLC을 사용함에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서) 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 순수한 분획을 부분적으로 증발시키고 이후 1 N NaOH의 부가에 의해 염기화시켰다. 수층 혼합물을 디클로로메탄 (2x)으로 추출하였다. 추출물을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다. 상기 고체를 진공에서 건조시켜 6.9 mg (46%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H25ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 426.2; 실험치: 426.0.
실시예 108. 1-(1-{5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-[1-(2,2,2-트리플루오로에틸)아제티딘-3-일]페닐}에틸)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
메틸렌 클로라이드 (0.3 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (15 mg, 0.024 mmol, 실시예 1, 단계 7의 제 1 피크로부터의 카이랄 중간체), 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트 (6.8 mg, 0.029 mmol)　및 트리에틸아민 (12 μL, 0.085 mmol)의 혼합물을 주말에 걸쳐　실온에서 교반시켰다. 용매를 증발시키고 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 4.5 mg (39%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H25ClF3N6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 469.2; 실험치: 469.1.
실시예 110. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-N-메틸프로판아미드 트리플루오로아세테이트
아세토니트릴 (0.8 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (26 mg, 0.067 mmol, 실시예 1, 단계 7의 피크 1로부터의 카이랄 중간체), (2R)-2-브로모프로판산 (7.3 μL, 0.081 mmol)　및 트리에틸아민 (19 μL, 0.13 mmol)의 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 반응이 완결되지 않아서 50 °C까지 가열하였다.　4 h 후, 용매를 증발시켰다.　크루드 잔사에　메틸암모늄 클로라이드 (4.5 mg, 0.067 mmol), N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL), 트리에틸아민 (19 μL, 0.13 mmol), 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (45 mg, 0.10 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다.　상기 반응 혼합물을 포화 NaHCO3을 함유하는 바이알에 부가하고 EtOAc (2x)로 추출하였다. 유기층을 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 농축시켰다.　크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서)을 사용하여 정제하여 1.4 mg (3.6%)의 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. C23H31ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 472.2; 실험치: 472.2.
실시예 113. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-3,3,3-트리플루오로프로판-1-올
아세토니트릴 (0.6 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (20 mg, 0.04 mmol, 실시예 1, 단계 7의 피크 1로부터의 카이랄 중간체)　및 트리에틸아민 (19 μL, 0.13 mmol)의 혼합물에 2-브로모-3,3,3-트리플루오로프로판-1-올 (Synquest Labs로부터, 9.2 mg, 0.048 mmol)를 부가하였다. N,N-디메틸포름아미드 (0.3 mL)를 부가하고, 이는 투명한 용액을 생성하였고 이를 70 °C에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석하고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 6.6 mg (30%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 분리하였다. C22H27ClF3N6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 499.2; 실험치: 499.1.
실시예 115. (2R)-3-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-1,1,1-트리플루오로프로판-2-올
에탄올 (0.3 mL)　내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (20 mg, 0.044 mmol, 실시예 1, 단계 7의 피크 1으로부터의 카이랄 중간체), (2R)-2-(트리플루오로메틸)옥시란 (9.4 μL, 0.11 mmol), 및 트리에틸아민 (18 μL, 0.13 mmol)의 혼합물을 마이크로파 내120 °C에서 25분 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 MeOH로 희석하고 RP-HPLC에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 6.2 mg (28%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C22H27ClF3N6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 499.2; 실험치: 499.1.
실시예 118. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-1-옥소프로판-2-올
N,N-디메틸포름아미드 (0.2 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (15 mg, 0.033 mmol, 실시예 1, 단계 7, 피크 1로부터의 카이랄 중간체), (2S)-2-하이드록시프로판산 (4.3 μL, 0.049 mmol) (L-젖산, 85% aq.)의 혼합물　및 트리에틸아민 (14 μL, 0.098 mmol)의 혼합물에 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (19 mg, 0.049 mmol)를 부가하였다.　결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 MeOH로 희석하고　RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 3.0 mg (20%)의 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C22H28ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 459.2; 실험치: 459.2.
실시예 121. (2R)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-1-옥소프로판-2-올 트리플루오로아세테이트
본 화합물을 (2S)-2-하이드록시프로판산 (4.3 μL, 0.049 mmol) 대신 (R)-2-하이드록시프로판산 및 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 대신 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트를 사용하여 실시예 118와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다 (실시예 1, 단계 7, 피크 1로부터의 카이랄 물질로부터 출발). 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 30 mL/min의 유속에서, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C22H28ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 459.2; 실험치: 459.2.
실시예 139. 1-{1-[5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민의 거울상이성질체
단계 1. 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온
본 화합물을 출발 물질로서 1-(5-클로로-4-플루오로-2-하이드록시-3-아이오도페닐)에탄온 및 아이오도에탄을 사용하여 실시예 13 단계 3의 절차에 따라 제조하였다. C10H10ClFIO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 342.9; 실험치: 342.9.
단계 2. tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)아제티딘-1-카복실레이트
자기 교반바 및 고무 중격을 구비한 둥근-바닥 플라스크를 리튬 클로라이드 (3.9 g, 91 mmol)로 충전하였다. 플라스크를 140° C에서 10분 동안 고진공 하에서 가열하고 실온까지 냉각 후 다시 질소로 충전하였다. 아연 (6.0 g, 91 mmol)를 부가하고 플라스크를 140 °C에서 10분 동안 고진공 하에서 가열하고 실온까지 냉각 후 다시 질소로 충전하였다. 테트라하이드로푸란 (THF) (38 mL) 및 1,2-디브로모에탄 (233 μL, 2.70 mmol)를 시린지를 통해 부가하였다. 상기 혼합물을 60 ºC에서 10분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. THF (1 mL) 내 클로로트리메틸실란 (68 μL, 0.54 mmol) 및 요오드 (69 mg, 0.27 mmol)를 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 60 °C에서 10분 동안 교반시키고 이후 실온까지 냉각시켰다. THF (10 mL) 내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (12.17 g, 42.99 mmol)의 용액을 이후 부가하고 상기 혼합물을 40 °C에서 1 h 동안 및 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 또다른 플라스크를 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온 (13.0 g, 38.0 mmol), 팔라듐 아세테이트 (170 mg, 0.76 mmol), 2'-(디시클로헥실포스피노)-N,N,N',N'-테트라메틸바이페닐-2,6-디아민 (660 mg, 1.5 mmol), 및 톨루엔 (35 mL)로 충전하고 고진공 하에서 비우고 및 다시 질소로 충전하였다. 상기 혼합물을 0 °C까지 냉각시키고 위에서 제조된 아연 시약을 천천히 시린지를 통해 부가하였다. 부가 후, 반응을 50 °C까지 밤새 가열하였다. 상기 반응 용액을 EtOAc 및 포화 NH4Cl 용액 사이에서 분배시켰다. 층을 분리하고 수층을 EtOAc (2x)로 추가로 추출하였다. 조합시킨 유기층을 물, 식염수로 세척하고, 이후 MgSO4 상에서 건조시키고, 및 농축시켰다. 크루드 혼합물을 실리카겔 칼럼 상에서 정제하여 소정의 생성물을 오렌지색 오일로서 얻었다 (6.3 g, 45%). C18H23ClFNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 394.1; 실험치: 394.1.
단계 3. tert-부틸 3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]아제티딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)아제티딘-1-카복실레이트 및 소듐 테트라하이드로보레이트를 사용하여 실시예 13 단계 5의 절차에 따라 제조하였다. C18H25ClFNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 396.1; 실험치: 396.1.
단계 4. tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]아제티딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (라세미) 및 시아누릭 클로라이드를 사용하여 실시예 13 단계 6의 절차에 따라 제조하였다.
단계 5. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-카복실레이트
DMF (20 mL) 내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (1.10 g, 7.37 mmol), 세슘 카보네이트 (3.2 g, 10 mmol) 및 포타슘 아이오다이드 (111 mg, 0.670 mmol)의 혼합물에 tert-부틸 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (2.63 g, 6.70 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 90 ºC에서 3 h 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 칼럼 상에서 정제하여 (100% 에틸 아세테이트로 용리하면서) 소정의 생성물을 발포물로서 얻었다 (2.15 g, 63%). C24H31ClFN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 505.2; 실험치: 505.2.
단계 6. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
디클로로메탄 (2.4 mL) 내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (275 mg, 0.544 mmol)의 용액에 디옥산 (1.1 mL, 4.4 mmol) 내 4.0 M 수소 클로라이드를 부가하였다. 상기 반응 용액을 실온에서 6 h 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에서 제거하고 소정의 생성물을 백색 고체로서 얻었다 (250 mg, 96%). C19H23ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 405.2; 실험치: 405.1.
단계 7. 1-{1-[5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-(1-이소프로필아제티딘-3-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
디클로로메탄 (0.67 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (49 mg, 0.10 mmol), 아세톤 (8.28 μL, 0.113 mmol), 및 트리에틸아민 (44.3 μL, 0.318 mmol)의 혼합물에 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드 수지 (89 mg, 0.20 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과하고 농축시키고 이후 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% TFA을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 라세미 생성물을 얻었다. LCMS: 실험치 m/z =　447.2 (M+H)+. 라세미 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (칼럼 IA, 5% 에탄올/95% 헥산으로 용리하면서, 18 mL/min 유속에서) 두 개의 피크를 얻었다 (이성질체 1: 9.5 mg, 21%; 이성질체 2: 9.2 mg, 20%).
이성질체 1 (먼저 용리함, 체류 시간: 4.4 min): 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.10 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 6.21 (m, 1H), 3.70 (m, 5H), 2.91 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.17 (m, 1H), 1.66 (d, 3H), 1.31 (t, 3H), 0.81 (m, 6H) ppm; C22H29ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 447.2; 실험치: 447.2.
이성질체 2 (두번째로 용리함, 체류 시간: 19.5 min): C22H29ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 447.2; 실험치: 447.2.
실시예 140. 1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판-2-올
에탄올 (1 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (20 mg, 0.042 mmol, 실시예 139, 단계 6로부터의 라세미 중간체) 및 트리에틸아민 (18 μL, 0.12 mmol)의 혼합물에 옥시란, 2,2-디메틸- (6.98 μL, 0.0837 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 120 °C에서 마이크로파 반응기 내에서 45분 동안 가열하였다. 반응을 메탄올로 희석하고 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 백색 고체로서 얻었다 (3.4 mg, 17%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C23H31ClFN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 477.2; 실험치: 477.3.
실시예 141. 1-(1-{5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-[1-(2,2,2-트리플루오로에틸)아제티딘-3-일]페닐}에틸)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
디클로로메탄 (0.5 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (19 mg, 0.040 mmol, 실시예 139, 단계 6로부터의 라세미 중간체) 및 트리에틸아민 (20 μL, 0.14 mmol)의 혼합물에 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄설포네이트 (11 mg, 0.048 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 용매를 감압 하에서 증발시키고 크루드 혼합물을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (3.8 mg, 19%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H24ClF4N6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 487.2; 실험치: 487.1.
실시예 149. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올
단계 1. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-카복실레이트의 거울상이성질체
라세미 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (칼럼 IA, 5% 에탄올/95% 헥산으로 용리하면서, 유속 18 mL/min) 두 개의 피크를 얻었다; 이성질체 1 (먼저 용리함): 체류 시간: 16.8 min; C24H31ClFN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 505.2; 실험치: 505.2; 이성질체 2 (두번째로 용리함): 체류 시간: 19.5 min; C24H31ClFN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 505.2; 실험치: 505.2.
단계 2 1-[1- (3- 아제티딘- 3- 일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
본 화합물을 실시예 139 단계 6와 유사한 절차를 사용하여 출발 물질로서 tert-부틸 3-{3-[(1S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (카이랄 분리로부터의 제 1 피크)를 사용하여 제조하였다. C19H23ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 405.2; 실험치: 405.1.
단계 3. (2S)-1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}아제티딘-1-일)프로판-2-올
이소프로필 알콜 (0.3 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (46 mg, 0.11 mmol) (로부터 이성질체 1) 및 트리에틸아민 (50 μL, 0.4 mmol)의 혼합물에 (S)-(-)-메틸옥시란 (16 μL, 0.23 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 90 °C에서 3 h 동안 교반시켰다. 냉각 후, 상기 혼합물을 아세토니트릴로 희석하고 RP-HPLC에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (12 mg, 23%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.05 (s, 1H), 7.38 (d, 1H), 6.15 (m, 1H), 4.26 (d, 1H), 3.76-3.60 (m, 6H), 2.99 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.22 (m, 2H), 1.62 (d, 3H), 1.25 (t, 3H), 0.93 (d, 3H) ppm; C22H29ClFN6O2 에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 463.2; 실험치: 463.2.
실시예 156. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판-1-올
단계 1. 메틸 (2S)-2-브로모프로파노에이트
DMF (28 μL, 0.36 mmol)를 디클로로메탄 (4.6 mL) 내 (2S)-2-브로모프로판산 (0.552 g, 3.61 mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (0.61 mL, 7.2 mmol)의 혼합물에 0 ºC에서 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 디클로로메탄 내 용해시키고 메탄올 (1.5 mL, 36 mmol) 및 피리딘 (0.44 mL, 5.4 mmol)으로 처리하였다. 상기 반응 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 용액을 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 중단시키고 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (0.51 g, 85%).
단계 2. 메틸 (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로파노에이트
아세토니트릴 (1 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (20.1 mg, 0.0475 mmol, 실시예 1, 단계 7로부터의 카이랄 중간체)의 용액에 트리에틸아민 (23 μL, 0.17 mmol) 및 메틸 (2S)-2-브로모프로파노에이트 (9.5 mg, 0.057 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 용액을 실온에서 4 h 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고 소정의 생성물을 얻었다 (6.2 mg, 28%). C23H30ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =473.2; 실험치:473.3
단계 3. (2R)-2-(3-{3-[(1S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판-1-올
디클로로메탄 (0.5 mL) 내 메틸 (2R)-2-(3-{3-[(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로파노에이트 (6.2 mg, 0.013 mmol)의 용액을 0 °C에서 3 h 동안 톨루엔 (0.1 mL, 0.1 mmol) 내 1.0 M 디이소부틸알루미늄 하이드라이드로 처리하였다. 반응을 메탄올로 중단시키고 분취용 RP-HPLC로 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.8 mg, 14%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. C22H30ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =445.2; 실험치:445.1
실시예 158. 1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판-2-올
본 화합물을 실시예 140와 유사한 절차를 사용하여 출발 물질로서 1-[1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 하이드로클로라이드 (실시예 1, 단계 7로부터의 카이랄 중간체) 및 옥시란, 2,2-디메틸-를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C23H32ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =459.2; 실험치:459.1 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.04 (s, 1H), 7.23 (bs, 2H), 7.16 (s, 1 H), 6.14 (m, 1H), 3.96 (s, 1H), 3.85(m, 3H), 3.45 (s, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.14 (s, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.63 (d, 3H), 0.98 (s, 6H) ppm.
실시예 159. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-N,N-디메틸프로판아미드
단계 1. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판산
아세토니트릴 (0.6 mL) 및 물 (0.2 mL) 내 메틸 (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로파노에이트 (실시예 156 단계 2로부터의 카이랄 중간체) (13 mg, 0.027 mmol)의 용액에 리튬 하이드록사이드 (2.4 mg, 0.10 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트 및 1 M HCl 용액으로 희석하였다. 유기 층을 분리하고 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (10.2 mg, 83%). C22H28ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 459.2; 실험치: 459.1.
단계 2. (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)-N,N-디메틸프로판아미드
실온에서 DMF (0.3 mL) 내 (2R)-2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)프로판산 (4 mg, 0.009 mmol) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (4 mg, 0.009 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (4 μL, 0.03 mmol) 및 디메틸아민 하이드로클로라이드 (0.9 mg, 0.01 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 1 h 동안 교반시키고, 이후 메탄올로 희석하고 분취용 RP-HPLC에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (2.7 mg, 63%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. C24H33ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 486.2; 실험치: 486.1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.09 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.18 (m, 1H), 3.78 (m, 3H), 3.50 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 3.0-2.9 (m, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.67 (d, 3H), 0.98 (d, 3H) ppm.
실시예 161. [1-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}아제티딘-1-일)시클로부틸]아세토니트릴
아세토니트릴 (0.1 mL) 내 1-[(1-(3-아제티딘-3-일-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (10 mg, 0.022 mmol, 실시예 1, 단계 7로부터의 카이랄 중간체)의 용액에 시클로부틸리덴아세토니트릴 (4.1 mg, 0.044 mmol), 이후 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (13 μL, 0.087 mmol)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 아세토니트릴로 희석하고 분취용 RP-HPLC에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (4.3 mg, 41%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H31ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치: 480.0.
실시예 163. 1-{1-[5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-(1-메틸피페리딘-4-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
단계 1. tert-부틸 4-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)피페리딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 1-(5-클로로-3-아이오도-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 및 tert-부틸 4-아이오도피페리딘-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 139 단계 21와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. C20H28ClNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 404.1; 실험치: 404.1.
단계 2. tert-부틸 4-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피페리딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 4-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)피페리딘-1-카복실레이트 및 소듐 테트라하이드로보레이트를 사용하여 실시예 13 단계 5의 절차에 따라 제조하였다. C20H30ClNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 406.1; 실험치: 406.1.
단계 3. tert-부틸 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피페리딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 4-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피페리딘-1-카복실레이트 (라세미) 및 시아누릭 클로라이드를 사용하여 실시예 13 단계 6의 절차에 따라 제조하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.44 (s, 1H), 5.46 (m, 1H), 4.23 (bs, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.29 (bs, 1H), 2.78 (bs, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.27-2.09 (m, 2H), 1.78 (d, 3H), 1.63 (m, 2H), 1.43 (s, 9H) ppm.
단계 4. tert-부틸 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피페리딘-1-카복실레이트
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]피페리딘-1-카복실레이트 및 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민을 사용하여 실시예 139 단계 5의 절차에 따라 제조하였다. C26H36ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 515.3; 실험치: 515.2.
단계 5. 1-[1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-피페리딘-4-일페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드
본 화합물을 출발 물질로서 tert-부틸 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피페리딘-1-카복실레이트를 사용하여 실시예 139 단계 6의 절차에 따라 제조하였다. C21H28ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 415.2; 실험치: 415.2.
단계 6. 1-{1-[5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-(1-메틸피페리딘-4-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
본 화합물을 출발 물질로서 1-[1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-피페리딘-4-일페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 및 포름알데히드를 사용하여 실시예 139 단계 7의 절차에 따라 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C22H30ClN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 429.2; 실험치: 429.1.
실시예 164. 1-(4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피페리딘-1-일)-2-메틸프로판-2-올
본 화합물을 출발 물질로서 1-[1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-피페리딘-4-일페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 디하이드로클로라이드 (실시예 163, 단계 5로부터의 라세미 중간체) 및 옥시란, 2,2-디메틸-을 사용하여 실시예 140와 유사한 절차를 사용하여 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H36ClN6O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =487.3; 실험치: 487.3. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 8.05 (s, 1H), 7.24 (bs, 2H), 7.22 (s, 1H), 6.16 (m, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.97 (m, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15-2.04 (m, 6H), 1.63 (d, 3H), 1.40 (m, 2H), 1.03 (s, 6H) ppm.
실시예 166. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}시클로부탄올 트리플루오로아세테이트
단계 1. 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-비닐페닐)에탄온
1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 내 1-(5-클로로-3-아이오도-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (1.0 g, 3.2 mmol, 실시예 1, 단계 2로부터), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (0.66 mL, 3.9 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (0.26 g, 0.32 mmol)와의 복합체 및 포타슘 카보네이트 (1.3 g, 9.4 mmol)의 혼합물을 N2로 탈기시키고 80 ºC에서 밤새 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 반응 혼합물을 물 및 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고 실리카겔 칼럼 상에서 정제하여 (헥산 내 0 내지 10% EtOAc로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.60 g, 82%). C12H14ClO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =225.1; 실험치:225.1
단계 2. 3-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)시클로부탄온
에테르 (10 mL) 내 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-비닐페닐)에탄온 (530 mg, 2.4 mmol)의 용액에 아연-구리 커플 (1.8 g, 14 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 40 °C에서 가열하고 1,2-디메톡시에탄 (3 mL) 내 트리클로로아세틸 클로라이드 (1.4 mL, 13 mmol) 및 포스포릴 클로라이드 (1.2 mL, 13 mmol)의 용액을 천천히 2 h에 걸쳐 부가하였다. 부가 후, 상기 반응 혼합물을 환류 하에서 밤새 교반시켰다. 반응을 포화 NaHCO3 용액으로 중단시키고 에테르로 희석하였다. 유기 층을 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 잔사 및 아세트산 (10 mL) 내 아연 (0.31 g, 4.7 mmol)을 실온에서 2시간 동안 교반시키고 이후 밤새 환류시켰다. 또다른 부분의 아연을 부가하고 다시 4 h 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석하고 에테르로 추출하였다. 유기 상을 포화 NaHCO3 용액, 물 및 식염수로 순차적으로 세척하고, 이후 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 크루드 물질을 플래시 크로마토그래피로 정제하여 (헥산 내 0 내지 30% 에틸 아세테이트로 용리하면서) 소정의 생성물을 얻었다 (0.17 g, 27%). C14H16ClO3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z =267.1; 실험치:267.0
단계 3. 3-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]시클로부탄올
본 화합물을 출발 물질로서 3-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)시클로부탄온 및 소듐 테트라하이드로보레이트를 사용하여 실시예 13 단계 5의 절차에 따라 제조하였다. C14H19ClO3Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 293.1; 실험치: 293.1.
단계 4. 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]시클로부탄올
디메틸 설폭사이드 (1 mL) 내 3-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]시클로부탄올 (170 mg, 0.628 mmol)의 용액에 시아누릭 클로라이드 (64 mg, 0.34 mmol)를 부가하였다. 밤새 교반 후, 상기 반응 혼합물을 에테르 및 물로 희석하였다. 수층을 에틸 아세테이트로 한번 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드를 실리카겔 칼럼으로 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (39.6 mg, 22%). C14H18ClO2에 대해 계산된 LCMS (M-Cl)+: m/z = 253.1; 실험치: 253.2.
단계 5. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}시클로부탄올 트리플루오로아세테이트
본 화합물을 출발 물질로서 3-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]시클로부탄올 및 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민을 사용하여 실시예 139 단계 5의 절차에 따라 제조하였다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C20H25ClN5O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 402.2; 실험치: 402.2.
실시예 167. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온
아세트산 (100 mL) 내 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (5.00 g, 25.2 mmol, Oakwood로부터)의 교반 용액에 N-브로모숙신이미드 (4.93 g, 27.7 mmol)를 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 100 °C에서 18 시간 동안 가열하였다. 주변 온도까지 냉각 후, 상기 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 이후 포화 소듐 바이카보네이트로 중화하고, 불용성 숙신이미드를 여과로 제거하였다. 여액을 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 및 이후 감압 하에서 건조시까지 농축시켰다. 잔사를 헥산 내 0 내지 50 % EtOAc로 용리하면서 실리카겔 상에서 정제하여, 소정의 생성물을 얻었다 (2.66 g, 38%). C10H11BrClO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 277.0; 실험치: 277.0. 1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz): d 7.70 (1H, s), 3.77 (3H, s), 2.57 (3H, s), 2.50 (3H, s) ppm.
단계 2. 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올
소듐 테트라하이드로보레이트 (0.31 g, 8.1 mmol)를 메탄올 (25 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (1.5 g, 5.4 mmol)의 혼합물에 0 oC에서 부가하고 결과로서 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고 결과로서 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, 이후 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 40% EtOAc로 용리하면서, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고, 소정의 생성물을 얻었다 (0.30 g, 90%).
단계 3. 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-메톡시-2-메틸벤젠
시아누릭 클로라이드 (1.7 g, 9.2 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (710 μL, 9.2 mmol)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 이후 메틸렌 클로라이드 (34 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄올 (실시예 16, 단계 1로부터) (1.72 g, 6.15 mmol)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 10% EtOAc로 용리하면서, 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하여, 소정의 생성물을 얻었다 (1.01 g, 60%).
단계 4. 1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 내 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-메톡시-2-메틸벤젠 (150 mg, 0.503 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (110 mg, 0.76 mmol, ACES Pharma 생성물 리스트, 항목 # 47024), 포타슘 아이오다이드 (9.0 mg, 0.05 mmol) 및 세슘 카보네이트 (330 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 140 oC에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 CH2Cl2 내 0 내지 70% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하고, 소정의 생성물을 얻었다 (103 mg, 50%). C16H18BrClN5O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 410.0; 실험치: 410.2. 라세미 생성물을 18 mL/min의 유속, ~ 13 mg/주사액에서 헥산 내 5% 에탄올로 용리하면서, Phenomenex Lux-Cellulose 1 칼럼 상에 적용하여 (21.1 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기), 두 개의 거울상이성질체를 제공하였다. 피크 1, 체류 시간: 12.35 min; 피크 2, 체류 시간: 14.98 min.
단계 5. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (25 mg, 0.061 mmol)　(이전 단계 카이랄 분리로부터의 제 1 피크), N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복사미드 (25 mg, 0.091 mmol, Encyclopedia of Amino Acid Analogs and Boronic Acids, 항목 #BE1622-1), 소듐 카보네이트 (13 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐 (II)의 혼합물, 아세토니트릴 (0.8 mL)　/ 물 (0.3 mL)　내 디클로로메탄 (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다.　실온까지 냉각 후, 상기 혼합물을 여과하고 여액을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다 (2.9 mg, 6.7%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치:　480.2. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (2H, br s), 8.48 (1H, m), 8.36 (1H, s), 7.86 (1H, br s), 7.65 (1H, br s), 7.58 (1H, s), 6.33 (1H, q, J = 7.0 Hz), 3.19 (3H, s), 3.03 (3H, s), 2.97 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.06 (3H, s), 1.81 (3H, d, J = 7.0 Hz) ppm.
실시예 183. 1-[1-(5-클로로-3-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]-1H-피라졸-4-일}-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
단계 1. 1-(2-클로로에틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸
아세토니트릴 (6 mL) 내 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.39 g, 2.0 mmol), 1-브로모-2-클로로에탄 (0.3 mL, 3 mmol) 및 세슘 카보네이트 (1.3 g, 4.0 mmol)의 혼합물을 75 oC에서 5 h 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시키고 상기 생성물 (0.45g, 88%)를 헥산/EtOAc (최대 EtOAc 30%)로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하였다. C11H19BClN2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 257.1; 실험치: 257.0
단계 2. N,N-디메틸-2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]에탄아민
N,N-디메틸포름아미드 (0.5 mL) 내 1-(2-클로로에틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.10 g, 0.39 mmol), 소듐 아이오다이드 (58 mg, 0.39 mmol) 및 THF 내 2.0 M 디메틸아민 (1.0 mL, 2.0 mmol)의 혼합물을 80 oC에서 밤새 교반시켰다.　용매를 제거하고 소정의 생성물을 제공하였고 이를 다음 단계에서 사용하였다. C13H25BN3O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 266.2; 실험치: 266.3
단계 3.　1-[1-(5-클로로-3-{1-[2-(디메틸아미노)에틸]-1H-피라졸-4-일}-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
아세토니트릴 (0.5 mL)　/물 (0.1 mL)　내 1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (실시예 167, 단계 4로부터의 피크 1, 10 mg, 0.024 mmol), N,N-디메틸-2-[4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]-에탄아민 (8.6 mg, 0.036 mmol), 소듐 카보네이트 (5.2 mg, 0.049 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 디클로로메탄 (1:1) (4.0 mg, 0.0049 mmol) 와의 복합체를 진공처리하고 N2로 재충전시키고 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (3.1 mg, 28%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C23H30ClN8O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 469.2; 실험치: 469.2.
실시예 184. 2-[(5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-일)아미노]에탄올
단계 1. 1-{1-[5-클로로-3-(6-플루오로피리딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민　(실시예 167, 단계 4로부터의 피크 1, 25.0 mg, 0.06 mmol), 2-플루오로-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (20. mg, 0.088 mmol), 소듐 카보네이트 (12 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (1 mL)　/물 (0.3 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (9.5 mg, 0.012 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 상기 생성물을 CH2Cl2/MeOH로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (최대　MeOH 5%). C21H21ClFN6O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 427; 실험치: 427.2.
단계 2. 2-[(5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-일)아미노]에탄올
1-부탄올 (1 mL) 내 1-{1-[5-클로로-3-(6-플루오로피리딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (10 mg, 0.023 mmol) 및 에탄올아민 (0.10 mL)의 혼합물을 130 oC에서 5 h 동안 교반시켰다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (1.6 mg, 15%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C23H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 468.2; 실험치: 468.2.
실시예 188. 2-(5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)피리딘-2-일옥시)에탄올
소듐 하이드라이드 (20 mg, 0.5 mmol)를 1,2-에탄디올 (0.5 mL, 9 mmol)에 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 이때 1-{1-[5-클로로-3-(6-플루오로피리딘-3-일)-2-메톡시-4-메틸페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (10 mg, 0.023 mmol)를 부가하고 이후 상기 반응을 110 oC에서 밤새 교반시켰다.　크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (1.8 mg, 17%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. LCMS에 대해 계산된 C23H26ClN6O3 (M+H)+: m/z = 469.2; 실험치: 469.1.
실시예 189. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-(2,2-디플루오로에톡시)-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
단계 1. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-하이드록시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드
CH2Cl2 (250 μL, 0.25 mmol) 내 1.0 M 보론 트리브로마이드를 메틸렌 클로라이드 (1.2 mL) 내 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (실시예 167, 단계 5, (제 1 피크) 60 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 -78 oC에서 부가하고 이후 반응을 실온까지 데웠다. 이때 진한 HCl (0.1 mL)를 부가하고 상기 혼합물을 4 h 동안 교반시켰다. 반응을 포화 NaHCO3의 부가에 의해 중단시켰다. 상기 혼합물을 이후 메틸렌 클로라이드로 추출하였다. 조합시킨 추출물을 식염수로 세척하고, 건조시키고 농축시켜 소정의 크루드 생성물을 얻었고 (40 mg, 68%) 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C23H25ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 466.2; 실험치: 466.2.
단계 2. 5-[3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-(2,2-디플루오로에톡시)-6-메틸페닐]-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드
디이소프로필 아조디카복실레이트 (13 μL, 0.064 mmol)를 테트라하이드로푸란 (0.5 mL)　내 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-하이드록시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸피리딘-2-카복사미드 (15.0 mg, 0.0322 mmol), 2,2-디플루오로에탄올 (7.9 mg, 0.096 mmol, Alfa Aesar로부터, 항목 # B22201)　및 트리페닐포스핀 (17 mg, 0.064 mmol)의 혼합물에 0 oC에서 부가하고 이후 상기 반응을 실온에서 24 h 동안 교반시켰다. 크루드를 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다 (1.6 mg, 6.6%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H27ClF2N7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 530.2; 실험치: 530.2
실시예 192. 1-[1-(5-클로로-3-시클로프로필-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
마이크로파 바이알에 1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (15 mg, 0.037 mmol, 실시예 167, 단계 4로부터의 피크 1로부터), 포타슘 시클로프로필트리플루오로보레이트 (8 mg, 0.06 mmol, Frontier Scientific로부터, 항목 # C10298), 포타슘 포스페이트 (23 mg, 0.11 mmol), 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (4.2 mg, 0.0036 mmol), 및 이후 톨루엔 (0.3 mL)/물 (0.1 mL)를 부가하였다. 상기 바이알을 밀봉하고N2로 3 시간 탈기시켰다. 반응을 110 °C에서 20 h 동안 가열하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (1.1 mg, 8%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C19H23ClN5O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 372.2; 실험치: 372.2.
실시예 195. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에탄온
둥근 바닥 플라스크 내로 무수 DMF (22.8 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-하이드록시-4-메틸페닐)에탄온 (6.0 g, 23 mmol)를 배치하였다. 포타슘 카보네이트 (6.3 g, 46 mmol)을 이후 부가하고 이후 아이오도에탄 (2.73 mL, 34.2 mmol)을 부가하였다. 결과로서 얻어진 현탁액을 60 °C에서 2시간 동안 교반시켰다.　상기 혼합물을 100 mL 물 내로 붓고 200 mL의 에틸 에테르로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 조합시키고 물 및 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 무수 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 6.0 g의 갈색 오일까지 농축시켰다. C11H13BrClO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 293.0; 실험치: 293.0
단계 2. 1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에탄올
소듐 테트라하이드로보레이트 (0.31 g, 8.1 mmol)를 메탄올 (25 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에탄온 (1.5 g, 5.4 mmol)의 혼합물에 0 oC에서 부가하고 결과로서 얻어진 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고 결과로서 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, 이후 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 30% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (0.30 g, 90%).
단계 3. 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-에톡시-2-메틸벤젠
시아누릭 클로라이드 (1.7 g, 9.2 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (710 μL, 9.2 mmol)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 이후 메틸렌 클로라이드 (34 mL) 내 1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에탄올 (1.72 g, 6.15 mmol)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 헥산 내 0 내지 10% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (1.01 g, 60%).
단계 4. 1-(1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸)-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 내 3-브로모-1-클로로-5-(1-클로로에틸)-4-에톡시-2-메틸벤젠 (150 mg, 0.50 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (110 mg, 0.76 mmol), 포타슘 아이오다이드 (9 mg, 0.05 mmol) 및 세슘 카보네이트 (330 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 140 oC에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 크루드 생성물을 CH2Cl2 내 0 내지 70% EtOAc로 용리하면서 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제하였다 (103 mg, 50%). C17H20BrClN5O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 423.1; 실험치: 423.0. 라세미 생성물을18 mL/min의 유속, ~ 13 mg/주사액에서 헥산 내 4% 에탄올로 용리하면서, Phenomenex Lux-Cellulose 1 칼럼 상에 적용하여 (21.1 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기), 두 개의 거울상이성질체를 제공하였다. 피크 1, 체류 시간: 8.64 min; 피크 2, 체류 시간: 10.64 min.
단계 5. 5-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
아세토니트릴 (0.8 mL)　/ 물 (0.3 mL)　내 1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (25 mg, 0.061 mmol)　(이전 단계 카이랄 분리로부터의 제 1 피크), N,N-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카복사미드 (25 mg, 0.09 mmol), 소듐 카보네이트 (13 mg, 0.12 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)-페로센]디클로로팔라듐 (II)의 혼합물, 디클로로메탄 (1:1) (9.9 mg, 0.012 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서　2 시간 동안 교반시켰다.　실온까지 냉각 후, 상기 혼합물을 여과하고 여액을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다 (2.3 mg, 5%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H29ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 494.2; 실험치:　494.2.
실시예 200. 4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
단계 1. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민　(실시예 167, 단계 4로부터의 피크 1, 322 mg, 0.76 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-카보니트릴 (210 mg, 0.91 mmol, Combi-Blocks Catalog로부터, 항목 # PN-0143), 소듐 카보네이트 (130 mg, 1.2 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]-디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (5 mL)　/물 (2 mL) 내 디클로로메탄 (1:1) (99 mg, 0.12 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 상기 반응을 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 상기 생성물 (0.28 g, 85%)를 CH2Cl2/MeOH (최대　MeOH 6%)로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하여. C22H21ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 434.1; 실험치: 434.1
단계 2. 4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)피콜린산 디하이드로클로라이드
1.0 M 소듐 하이드록사이드 (2.9 mL, 2.9 mmol)를 에탄올 (4.0 mL) 내 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카보니트릴 (0.250 g, 0.576 mmol)의 혼합물에 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 95 oC에서 6 h 동안 가열하였다. 이때, 진한 HCl를 부가하여 pH를 ~ 3로 조정하였다. 용매를 제거하고 잔사를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C22H22ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 453.1; 실험치: 453.2.
단계 3. 4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-N,N-디메틸피콜린아미드 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
THF 내 2.0 M 디메틸아민 (2.0 mL, 4.0 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 mL) 내 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}피리딘-2-카복시산 (250 mg, 0.552 mmol) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (370 mg, 0.83 mmol)의 용액에 0 oC에서 부가하고　이후 트리에틸아민 (0.23 mL, 1.6 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 1 h 동안 교반시켰다. 크루드 혼합물을 RP-HPLC 상에서 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 비스-TFA 염으로서 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 480.2; 실험치: 480.2. 1H NMR (DMSO-d6, 500 MHz)　δ 8.67 (br s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 6.32 (q, 2 H), 3.20 (s, 3 H), 3.00 (s, 3 H), 2.94 (s, 3 H), 2.62 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 1.80 (d, 3 H) ppm.
실시예 203. 2-(4-(3-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐)-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
단계 1. tert-부틸 [4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]아세테이트
THF 내　1.0 M 포타슘 tert-부톡사이드 (2.4 mL, 2.4 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (6.0 mL) 내 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.39 g, 2.0 mmol)의 용액에 0 oC에서 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반시켰다.　0 oC까지 냉각시킨 후,　상기 혼합물에 t-부틸 브로모아세테이트 (0.5 mL, 3 mmol)을 부가하였다. 상기 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 이후 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 상기 생성물 (0.5 g, 81%)를 헥산/EtOAc (최대 EtOAc 30%)로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하였다. C15H26BN2O4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 309.2; 실험치: 309.1
단계 2. tert-부틸 (4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-1H-피라졸-1-일)아세테이트
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (70 mg, 0.16 mmol)　(실시예 195, 단계 4로부터의 제 1 피크), tert-부틸 [4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸-1-일]아세테이트 (65 mg, 0.21 mmol), 소듐 카보네이트 (30. mg, 0.28 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (3 mL)　/물 (0.7 mL)　내 디클로로메탄 (1:1) (23 mg, 0.028 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 NaHCO3, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 상기 생성물 (65 mg, 78%)를 CH2Cl2/MeOH (최대　MeOH 5%)로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하여. C26H33ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 526.2; 실험치: 526.3.
단계 3. (4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-1H-피라졸-1-일)아세트산 비스 트리플루오로아세테이트
트리플루오로아세트산 (0.5 mL)를 메틸렌 클로라이드 (0.5 mL) 내 tert-부틸 (4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-1H-피라졸-1-일)아세테이트 (0.065 g, 0.12 mmol)의 용액에 부가하였다. 상기 반응물을 실온에서 4 h 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고 크루드 생성물을 제공하였고 이를 다음 단계에서 사용하였다. C22H25ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 470.2; 실험치: 470.1
단계 4. 2-(4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-1H-피라졸-1-일)아세트아미드
암모늄 카보네이트 (20 mg, 0.21 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.7 mL) 내 (4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-1H-피라졸-1-일)아세트산 비스 트리플루오로아세테이트 (10 mg, 0.021 mmol) 및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (10 mg, 0.03 mmol)의 용액에 실온에서 부가하고 이후 트리에틸아민 (8.8 μL, 0.064 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 1 h 동안 교반시켰다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (2.5 mg, 25%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C22H26ClN8O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 469.2; 실험치: 469.2.
실시예 208. 6-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸니코틴아미드 비스(트리플루오로아세테이트)
단계 1. 1-{1-[5-클로로-2-에톡시-4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
1-[1-(3-브로모-5-클로로-2-에톡시-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.050 g, 0.12 mmol, 실시예 195, 단계 4로부터의 피크 1)를 디메틸 설폭사이드 (0.44 mL) 내 포타슘 아세테이트 (0.035 g, 0.35 mmol)　및 4,4,5,5,4',4',5',5'-옥타메틸-[2,2']비[[1,3,2]디옥사보롤란일] (0.060 g, 0.24 mmol)을 갖는 마이크로파 바이알 내에 실온에서 조합시켰다. 이것을 질소로 탈기시키고 이후 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]-디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (0.01 g, 0.01 mmol)과의 복합체를 부가하였다. 반응을 오일 배쓰 내에서 105 oC까지 밤새 가열하였다. 이것을 방치하여 냉각하고, 이후 에틸 아세테이트 내에 취하고 물, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켰다. 상기 생성물 (15 mg, 20%)를 CH2Cl2/MeOH (최대　MeOH 10%)로 용리하면서 크로마토그래피에 의해 정제하였다. C23H32BClN5O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 472.2; 실험치: 472.3.
단계 2. 6-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-N,N-디메틸니코틴아미드 비스(트리플루오로아세테이트)
1-{1-[5-클로로-2-에톡시-4-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (15 mg, 0.032 mmol),　6-클로로-N,N-디메틸니코틴아미드 (12 mg, 0.064 mmol), 소듐 카보네이트 (9.0 mg, 0.085 mmol)　및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]-디클로로팔라듐(II)의 혼합물, 아세토니트릴 (0.9 mL)　/물 (0.2 mL)　내 디클로로메탄 (1:1) (6.9 mg, 0.0085 mmol) 와의 복합체를 N2로 탈기시키고 이후 95 °C에서　밤새 교반시켰다. 크루드를 RP-HPLC을 사용하여 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.05% 트리플루오로아세트산을 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 TFA 염으로서 얻었다 (2 mg, 9%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H29ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 494.2; 실험치: 494.2.
실시예 209. 5-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-4-메톡시-2-메틸-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)벤조니트릴
예비-형성된 촉매 (0.05 mL, 실시예 40로부터)를 N,N-디메틸아세트아미드 (0.3 mL) 내 1-{1-[5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (7.7 mg, 0.019 mmol), 아연 (0.54 mg, 0.0082 mmol) 및 아연 시아나이드 (2.2 mg, 0.019 mmol) 혼합물에 부가하였다.　상기 혼합물을 질소로 3 시간 탈기시켰다. 반응을 120 oC에서 1.5 h 동안 가열하였다. 크루드를 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하여 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (2.1 mg, 27%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C21H23N8O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 403.2; 실험치: 403.2.
하기 화합물에 대한 실험 절차 및 LCMS 질량 스텍트럼 데이터 (MS)를 표 1 내에 요약한다.
실시예 212. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴
단계 1. 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온
출발 물질로서 아이오도메탄 대신 아이오도에탄을 사용하여 90% 수율로 라세미 중간체를 형성하는 소정의 화합물을 실시예 13, 단계 3의 절차에 따라 제조하였다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.94 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C10H10ClFIO2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 342.9, 344.9; 실험치: 342.9, 344.8.
단계 2. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴
N,N-디메틸포름아미드 (80 mL)　내 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온 (7.3 g, 21 mmol)의 용액을 포타슘 시아나이드 (2.1 g, 32 mmol)로 처리하고 40 °C에서 5 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 포화 소듐 바이카보네이트 용액/물 (1:1) 내로 부었다. 유기 층을 분리하고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 크루드 갈색 오일을 얻었다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트 (0% - 30%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 노란색 고체로서 얻었다 (6.1 g, 81%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.57 (s, 1H), 3.93 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C11H10ClINO2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 349.9; 실험치: 349.9.
단계 3. tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (4.60 g, 70.3 mmol)　및 오븐 건조된 셀라이트 (870 mg)를 플라스크에 부가하고 플라스크를 고-진공 하에서 가열 총으로 5분 동안 가열하고 이후 다시 -질소로 충전하였다. N,N-디메틸아세트아미드 (57 mL), 이후　1,2-디브로모에탄 (430 μL, 5.0 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 70 oC에서 10분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 클로로트리메틸실란 (630 μL, 5.0 mmol) 로 한방울씩 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 N,N-디메틸아세트아미드 (28 mL) 내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (18 g, 62 mmol)의 용액으로 한방울씩 처리하고 (내부 온도를 물 배쓰로 40 oC 미만으로 유지) 및 40 oC에서 2시간 동안 가열하였다. 아연-아이오도 시약 (캐눌라를 통해 이동시킨)를 질소로 플러싱된 깨끗한, 건조 플라스크 내로 직접　플라스틱 필터 (적절히 밀봉된 대기 노출을 피하기 위해)을 통해 여과하였다. 상기 반응 혼합물을 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (720 mg, 0.79 mmol)　및 트리-(2-푸릴)포스핀 (370 mg, 1.6 mmol)로 처리하고 질소로 몇 분 동안 탈기시켰다. 상기 반응 혼합물을 N,N-디메틸아세트아미드 (130 mL)　내 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴 (14 g, 41 mmol)의 용액으로 처리하고 (질소로 탈기시키고) 신속히 및 70 oC에서 2시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 용액 내로 붓고 에틸 아세테이트(3 x 300 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 물 (4 x 500 mL) 및 식염수 (1 x 500 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 어두운 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 (5% - 45%) 내 에틸 아세테이트를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (14 g, 88%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.46 (s, 1H), 4.42 - 4.20 (m, 5H), 3.80 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.59 (s, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C15H16ClN2O4 에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 323.1; 실험치: 323.0.
단계 4. tert-부틸 3-[3-클로로-2-시아노-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)페닐]아제티딘-1-카복실레이트
테트라하이드로푸란 (100 mL)　내 (3aS)-1-메틸-3,3-디페닐테트라하이드로-3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤 (9.7 g, 35 mmol)의 용액을 테트라하이드로푸란 (42 mL, 42 mmol) 내 1.0 M 보란-THF 복합체로 처리하고 20 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 -30 °C까지 냉각시키고 테트라하이드로푸란 (110 mL) 내 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (13 g, 35 mmol)의 용액으로 천천히 처리하였다. 출발 물질 케톤을 함유하는 플라스크를 부가적 테트라하이드로푸란 (20 mL)로 헹구고 상기 반응 혼합물에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 30분의 기간에 걸쳐 0 °C까지 데우고 0 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 0 °C에서 물로 중단시키고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액 내로 붓고, 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수층을 분리하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 어두운 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 에틸 아세테이트 헥산 (0% - 70%) 내 플래시 칼럼 크로마토그래피를 사용함에 의해 정제하여 소정의 생성물을 거울상이성질체의 98:2 혼합물로서 노란색 발포물로서 얻었다 (10.4 g, 78%) (체류 시간 = 7.73 min 및 9.41 min; ChiralPak AD-H 칼럼, 4.6 x 150 mm, 5 미크론 입자 크기, 1 ml/min에서 헥산 내 5% 에탄올로 용리하면서). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.56 (s, 1H), 5.15 - 5.07 (m, 1H), 4.41 - 4.17 (m, 5H), 3.74 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.12 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 1.49 - 1.37 (m, 15H). C15H18ClN2O4에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 325.1; 실험치: 325.1.
단계 5. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
0°C에서 메틸렌 클로라이드 (260 mL) 내 tert-부틸 3-[3-클로로-2-시아노-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (단계 4로부터의 거울상이성질체의 98:2 혼합물) (10 g, 27 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (11 mL, 82 mmol)　이후 메탄설폰산 무수물 (7.1 g, 41 mmol)로 처리하고 0 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 크루드 메실레이트를 얻었고 이를 추가 정제 없이 사용하였다. N,N-디메틸포름아미드 (140 mL)　내 크루드 메실레이트 중간체의 용액을 세슘 카보네이트 (13 g, 41 mmol)　및 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (4.7 g, 31 mmol)로 처리하고 60 °C에서 1 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트 (3 x 250 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (100% 디클로로메탄 내지 3% 메탄올/30% 디클로로메탄을 함유하는70% 아세토니트릴) 거울상이성질체의 95:5 혼합물로서 노란색 발포물로서 소정의 생성물을 얻었다 (2 단계에 대해 8.7 g, 62%) (RT = 4.29 min 및 6.00 min; Phenomenex Lux Cellulose C-1 칼럼, 4.6 x 150 mm, 5 미크론 입자 크기, 1 ml/min에서 헥산 내 1 5% 에탄올로 용리하면서). 이 물질을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (Phenomenex Lux Cellulose C-1 칼럼, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 10 ml/min에서 헥산 내 15% 에탄올로 용리하면서) 7.0 g의 소정의 피크 1 물질을 얻었다 (8.20 min의 체류 시간). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 6.32 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 5.48 (br s, 2H), 4.40 - 4.18 (m, 5H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.81 - 3.65 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 1.81 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.48 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H). C25H31ClN7O3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 512.2; 실험치: 512.3.
단계 6. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴
메틸렌 클로라이드 (11 mL) 내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트의 용액 (단계 5피크 1로부터 거울상이성질체) (2.2 g, 4.2 mmol)를 트리플루오로아세트산 (11 mL)로 한방울씩 처리하고 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 오일까지 농축시키고 이를 에탄올로부터 재농축시켜 (2x)　잔사를 얻었다. 이 물질을 최소 양의 메탄올 내에 용해시키고, 한방울씩 얼음 냉각된　포화 소듐 바이카보네이트 용액 (100 ml)에 부가하고,및 2:1 디클로로메탄/이소프로판올로 몇 시간 추출하고 소정의 생성물을 얻었고 (1.8 g, 정량적) 이를 추가 정제 없이 사용하였다. 작은 양의 소정의 생성물을 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 3.91 - 3.61 (m, 6H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C20H23ClN7O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 412.2; 실험치: 412.1.
실시예 213. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(1-메틸아제티딘-3-일)벤조니트릴
메탄올 (7.3 mL)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (실시예 212, 단계 6 내 카이랄 중간체) (0.30 g, 0.73 mmol)의 용액을 포름알데히드 (물 내 37%) (0.54 mL, 7.3 mmol)로 처리하고 이를 실온에서 5분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 소듐 시아노보로하이드라이드 (0.092 g, 1.5 mmol)로 처리하고 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(0.16 g, 50%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.27 - 6.18 (m, 1H), 4.10 - 3.98 (m, 1H), 3.96 - 3.86 (m, 2H), 3.83 - 3.74 (m, 1H), 3.72 - 3.64 (m, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.71 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 6.7 Hz, 3H). C21H25ClN7O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 426.2; 실험치: 426.2.
실시예 219. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시에틸)아제티딘-3-일]벤조니트릴
테트라하이드로푸란　(14　mL)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (300　mg, 0.74　mmol, 실시예 212로부터의 카이랄 중간체)의 용액을 트리에틸아민　(260　μL, 1.8　mmol) 이후 2-브로모에탄올　(63　μL, 0.89　mmol)로 한방울씩 처리하고 60 °C에서 6 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 부가적 2-브로모에탄올　(26　μL, 0.37　mmol)로 처리하고 60 °C에서 다시 6 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액 내로 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(0.15 g, 44%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 6.36 - 6.25 (m, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.19 - 4.07 (m, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.20 - 3.08 (m, 2H), 2.62 (s, 2H), 2.57 (s, 3H), 1.79 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.6 Hz, 3H). C22H27ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.1.
실시예 220. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-{1-[(2S)-2-하이드록시프로필]아제티딘-3-일}벤조니트릴
에탄올 (1.7 mL)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (50 mg, 0.12 mmol, 실시예 212로부터의 카이랄 중간체)의 용액을 (S)-(-)-메틸옥시란 (21 μL, 0.30 mmol)로 처리하고 마이크로파 내에서 125 °C에서 15분 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(27 mg, 47%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 6.23 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.13 - 3.99 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 2H), 3.85 - 3.63 (m, 2H), 3.61 - 3.51 (m, 1H), 3.15 - 2.99 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.71 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.32 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H). C23H29ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 470.2; 실험치: 470.2.
실시예 236. tert-부틸 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로파노에이트
N,N-디메틸포름아미드 (4. 6 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (0.38 g, 0.92 mmol, 실시예 212로부터의 카이랄 중간체)의 용액을 포타슘 카보네이트 (0.51 g, 3.7 mmol)　이후 tert-부틸 2-브로모-2-메틸프로파노에이트 (0.86 mL, 4.6 mmol)로 처리하고 60 °C에서 3 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물 내로 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 디클로로메탄 (0% - 10%) 내 메탄올을 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (0.43 g, 83%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.22 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.12 - 3.97 (m, 1H), 3.88 - 3.70 (m, 4H), 3.62 - 3.48 (m, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.70 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.17 (s, 9H), 1.05 (s, 6H). C28H37ClN7O3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 554.3; 실험치: 554.3.
실시예 237. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시-1,1-디메틸에틸)아제티딘-3-일]벤조니트릴
단계 1. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판산 비스(트리플루오로아세테이트)
tert-부틸 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로파노에이트 (0.36 g, 0.65 mmol, 실시예 236로부터의 카이랄 중간체)를 트리플루오로아세트산 (3.2 mL)/물 (0.065 mL)의 예비혼합 용액 내에 용해시키고 실온에서 3 h 동안 및 50 °C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고 아세토니트릴로부터 재농축시켜 (2x) 소정의 생성물을 고무로서 얻었다. 이 고무를 작은 양의 메틸-tert-부틸에테르로 처리하고 이를 고체가 형성될 때까지 돌렸다. 메틸-tert-부틸에테르를 따라내고 및 잔사를 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (0.51 g, 109%) 이를 추가 정제 없이 사용하였다. C24H29ClN7O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 498.2; 실험치: 498.3.
단계 2. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시-1,1-디메틸에틸)아제티딘-3-일]벤조니트릴
테트라하이드로푸란 (0.9 mL) 내 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판산 비스(트리플루오로아세테이트) (0.10 g, 0.16 mmol)의 용액을 -25 °C까지 냉각시키고, 4-메틸모르폴린 (0.072 mL, 0.65 mmol)　및 이소부틸 클로로포르메이트 (0.085 mL, 0.65 mmol)로 처리하고, 15 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 일회용 필터 카트리지를 통해 별도의 둥근 바닥 플라스크 내로 여과하였다. 이 용액을 이후 -20 °C까지 냉각시키고 최소 양의 물 내 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.031 g, 0.82 mmol)의 용액을 한방울씩 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 -15 °C에서 30분 동안 교반시키고, 물 내로 붓고, 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 농축시키고, 메탄올로 희석하고, 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(3.5 mg, 4%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.44 - 4.35 (m, 1H), 4.04 - 3.88 (m, 1H), 3.86 - 3.73 (m, 1H), 3.72 - 3.57 (m, 3H), 3.12 (d, J = 4.7 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.80 (s, 6H). C24H31ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 484.2; 실험치: 484.2.
실시예 239. 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판아미드
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 내 2-(3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-일)-2-메틸프로판산 비스(트리플루오로아세테이트) (0.05 g, 0.069 mmol, 실시예 237, 단계 1로부터의 카이랄 중간체)의 용액 및 에탄올 (0.17 mL, 0.34 mmol) 내 2.0 M 암모니아를 트리에틸아민 (0.048 mL, 0.35 mmol)　및 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (0.046 g, 0.10 mmol)로 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 몇 방울의 물로 중단시키고, 메탄올로 희석하고, 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(25 mg, 73%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.09 - 3.96 (m, 1H), 3.84 - 3.61 (m, 4H), 3.39 - 3.34 (m, 1H), 3.32 - 3.28 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 1.71 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.02 (s, 6H). C24H30ClN8O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 497.2; 실험치: 497.3.
실시예 247. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시-2-메틸프로파노일)아제티딘-3-일]벤조니트릴
N,N-디메틸포름아미드 (0.54 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (0.04 g, 0.097 mmol, 실시예 212로부터의 카이랄 중간체)　및 프로판산, 2-하이드록시-2-메틸- (0.012 g, 0.12 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (0.034 mL, 0.24 mmol) 이후 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.048 g, 0.13 mmol)로 처리하고 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 아세토니트릴 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 메탄올/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(7 mg, 14%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.54 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.25 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.88 - 4.77 (m, 1H), 4.73 - 4.60 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.29 - 4.09 (m, 2H), 3.85 - 3.73 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.37 (t, J = 6.3 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.22 (s, 3H). C24H29ClN7O3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 498.2; 실험치: 498.2.
실시예 261. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴
단계 1. 4-아세틸-6-클로로-2-아이오도-3-메톡시벤조니트릴
N,N-디메틸포름아미드 (200 mL)　내 1-(5-클로로-4-플루오로-3-아이오도-2-메톡시페닐)에탄온 (실시예 13, 단계 3로부터의 중간체) (18 g, 54 mmol)의 용액을 포타슘 시아나이드 (5.2 g, 81 mmol)로 처리하고 40 °C에서 6 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 포화 소듐 바이카보네이트 용액/물 (1:1) 내로 부었다. 유기 층을 분리하고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 크루드 갈색 오일을 얻었다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트 (0% - 30%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 소정의 생성물을 노란색 고체로서 얻었다 (11 g, 61%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.60 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.62 (s, 3H). C10H8ClINO2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 335.9; 실험치: 335.9.
단계 2. tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (5.0 g, 77 mmol)　및 오븐 건조된 셀라이트 (520 mg)를 플라스크에 부가하고 플라스크를 고-진공 하에서 5분 동안 가열 총으로 가열하고 및 이후 다시 질소로 충전하였다. N,N-디메틸아세트아미드 (53 mL), 이후　1,2-디브로모에탄 (400 μL, 4.6 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 70 oC에서 15분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 클로로트리메틸실란 (580 μL, 4.6 mmol)로 한방울씩 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 N,N-디메틸아세트아미드 (26 mL) 내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (16 g, 58 mmol)의 용액으로 한방울씩 처리하고 (내부 온도를 물 배쓰로 40 oC 미만으로 유지) 및 40 oC에서 2시간 동안 가열하였다. 아연-아이오도 시약 (캐눌라를 통해 이동시킨)를 플라스틱 필터 (적절히 밀봉된 대기 노출을 피하기 위해)을 통해 직접 질소로 플러싱된 깨끗한, 건조 플라스크 내로 여과하였다. 상기 반응 혼합물을 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (670 mg, 0.73 mmol)　및 트리-(2-푸릴)포스핀 (340 mg, 1.5 mmol)로 처리하고 몇 분 동안 질소로 탈기시켰다. 상기 반응 혼합물을 N,N-디메틸아세트아미드 (120 mL) 내 4-아세틸-6-클로로-2-아이오도-3-메톡시벤조니트릴 (13 g, 39 mmol)의 용액으로 신속히 처리하고 (질소로 탈기시키고) 및 70 oC에서 2시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 암모늄 클로라이드 용액 내로 붓고 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 물 (4 x 500 mL) 및 식염수 (1 x 500 mL)로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 어두운 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산(5% - 40%) 내 에틸 아세테이트를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (12 g, 85%). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.79 (s, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 1H), 4.28 - 4.11 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.38 (s, 9H).
단계 3. tert-부틸 3-[3-클로로-2-시아노-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트
테트라하이드로푸란 (46 mL)　내 (3aS)-1-메틸-3,3-디페닐테트라하이드로-3H-피롤로[1,2-c][1,3,2]옥사자보롤 (4.3 g, 16 mmol)의 용액을 테트라하이드로푸란 (19 mL, 19 mmol)　내 1.0 M 보란-THF 복합체로 처리하고 20 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 -30 °C까지 냉각시키고 테트라하이드로푸란 (49 mL)　내 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (5.7 g, 16 mmol)의 용액으로 천천히 처리하였다. 출발 물질 케톤을 함유하는 플라스크를 부가적 테트라하이드로푸란 (9 mL)로 헹구고 상기 반응 혼합물에 부가하였다. 상기 부가 완료후 반응의 온도는 -20 °C이었다. 상기 반응 혼합물을 -5 °C까지 30분의 기간에 걸쳐 데웠다. 상기 반응 혼합물을 0 °C에서 물로 중단시키고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액 내로 붓고, 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 수층을 분리하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 어두운 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트를 사용하여 (0% - 100%) 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 거울상이성질체의 97:3 혼합물로서 베이지색 발포물로서 소정의 생성물을 얻었다 (5.5 g, 97%) (체류 시간 = 12.19 min 및 13.18 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2 칼럼, 4.6 x 150 mm, 5 미크론 입자 크기, 1 ml/min에서 헥산 내 8% 에탄올로 용리하면서). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.62 (s, 1H), 5.48 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 1H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 3.66 (s, 3H), 1.38 (s, 9H), 1.29 (d, J = 6.4 Hz, 3H). C14H16ClN2O4에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 311.1; 실험치: 311.1.
단계 4. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
0 °C에서　메틸렌 클로라이드 (220 mL)　내 tert-부틸 3-[3-클로로-2-시아노-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (8.6 g, 23 mmol)　(단계 3으로부터의 거울상이성질체의 97:3 혼합물)의 용액을 트리에틸아민 (8.2 mL, 59 mmol)　이후 메탄설폰산 무수물 (6.1 g, 35 mmol)로 처리하고 0 °C에서 15분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 크루드 메실레이트를 얻었고 이를 추가 정제 없이 사용하였다. N,N-디메틸포름아미드 (82 mL) 내 크루드 메실레이트 중간체의 용액을 0 °C까지 냉각시키고, 소듐 하이드라이드 (1.2 g, 30 mmol)　(미네랄 오일 내 60%)로 처리하고, 0 °C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을　N,N-디메틸포름아미드 (170 mL) 내 tert-부틸 3-(3-클로로-2-시아노-6-메톡시-5-{1-[(메틸설포닐)옥시]에틸}페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (11 g, 24 mmol)의 용액으로 10 min의 기간에 걸쳐 한방울씩 처리하고　0 °C에서 30분 동안 교반시키고 50 °C에서 1 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 포화 소듐 바이카보네이트 용액 및 에틸 아세테이트 (3 x 200mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 물 (4 x 150 mL) 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (2% 메탄올/98% 디클로로메탄 내지 7% 메탄올/93% 디클로로메탄 [디클로로메탄은 0.5% 트리에틸아민을 함유]) 소정의 생성물을 거울상이성질체의 9:1 혼합물로서 얻었다 (9.1 g, 77% 2 단계에 대해). 이 물질을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (체류 시간 = 5.81 min 및 8.94 min; Chiracel AD-H 칼럼, 20 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 ml/min, 10 mg/inj에서 헥산 내 10% 에탄올로 용리하면서) 6.9 g의 소정의 피크 1 물질을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.27 - 4.13 (m, 4H), 3.70 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.37 (s, 9H). C20H21ClN7O3 에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1.
단계 5. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴
메틸렌 클로라이드 (30 mL)　내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (1.7 g, 3.3 mmol)의 용액을 트리플루오로아세트산 (20 mL)로 처리하고 실온에서 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시켜 잔사를 얻었고 이를 메탄올 (50 mL) 및 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (50 mL)로 희석하였다. 이 수성 용액을 식염수 (50mL)로 희석하고 디클로로메탄/이소프로판올의 5:1 혼합물 (5 x 100mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (1.4 g, 97%).　상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.40 - 4.26 (m, 1H), 3.90 - 3.68 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C19H21ClN7O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 398.1; 실험치: 398.1.
실시예 262. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-메톡시-2-(1-메틸아제티딘-3-일)벤조니트릴
메탄올 (3 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (50 mg, 0.13 mmol)의 용액을 소듐 시아노보로하이드라이드 (20 mg, 0.31 mmol)　이후 포름알데히드　(물 내 37%) (37 μL, 0.50 mmol)로 처리하고 실온에서 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 아세트산 (170 μL, 2.9 mmol)로 중단시키고, 메탄올로 희석하고, 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(30 mg, 58%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.37 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C20H23ClN7O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 412.2; 실험치: 412.1.
실시예 268. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-2-[1-(2-하이드록시에틸)아제티딘-3-일]-3-메톡시벤조니트릴
테트라하이드로푸란 (14 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (400 mg, 1.0 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (350 μL, 2.5 mmol) 및 2-브로모에탄올 (85 μL, 1.2 mmol)로 처리하고 60 °C에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, 메탄올로 희석하고, 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다　(0.14 g, 31%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.41 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.12 - 4.03 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 3.09 - 3.01 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.41 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 1.72 (d, J = 7.0 Hz, 3H). C21H25ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 442.2; 실험치: 442.2.
실시예 268 및 269의 화합물을 실시예 261 내 동일 카이랄 중간체로부터 합성하였다. 실시예 269에서의 결정 구조 결정에 따라, 에탄-1,1-디일 기의 1-위치에 있는 탄소에서의 입체화학은 S이다. 실시예 268의 화합물을 실시예 269로서의 동일 카이랄 중간체로부터 합성하였기 때문에, 본 업계에서의 통상의 지식을 가진 자는 실시예 268의 에탄-1,1-디일 기의 1-위치에 있는 탄소도 또한 S-배열일 것이라고 기대한다. 따라서, 실시예 268의 화합물은 (S)-4-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-(2-하이드록시에틸)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴이라고 생각된다.
실시예 269. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-2-{1-[(2S)-2-하이드록시프로필]아제티딘-3-일}-3-메톡시벤조니트릴
에탄올 (130 mL)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (2.5 g, 6.3 mmol)의 용액을 (S)-(-)-메틸옥시란 (1.1 mL, 16 mmol)로 처리하고 120 °C에서 25분 동안 마이크로파 내에서 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시켜 잔사를 얻었고 이를 디클로로메탄 내 메탄올 (0% - 10%; 메탄올 0.5% 트리에틸아민을 함유)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 및 분취용 LCMS에 의해 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 정제하여 소정의 생성물을 얻었다　(0.76 g, 26%). 상기 생성물을 단일 부분입체이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.35 (br s, 1H), 4.14 - 3.99 (m, 1H), 3.98 - 3.87 (m, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.60 - 3.52 (m, 1H), 3.13 - 2.99 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.75 - 1.69 (m, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H). C22H27ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.2.
실시예 269의 화합물에 대한 결정 구조 결정
C22,H26,N7,O2,CL1+H2O
결정 데이터: C22 H28 Cl F0 N7 O3, ACN/물로부터, 무색, 니들, ~0.500 x 0.070 x 0.050 mm, 모노클리닉, C2, = 25.941(7) Å, b = 4.9767(13) Å, c = 17.787(5) Å, beta = 101.967(4)°, 부피 = 2246.3(10) Å3, Z = 4, T = -100.°C, 식 중량 = 473.96, 밀도 = 1.401g/cm3, μ(Mo) = 0.21 mm-1
데이터 수집: Bruker SMART APEX-II CCD 시스템, MoKalpha 방사선, 표준 촛점 튜브, 애노드 파워 = 50kV x 42 mA, 플레이트 거리까지의 결정 = 5.0 cm, 512 x 512 픽셀/프레임, 빔 센터 = (256.13, 253.14), 총 프레임 = 704, 진동/프레임 = 0.50°, 노출/프레임 = 120.1 sec/프레임, SAINT 통합, hkl min/max = (-27, 34, -6, 6, -23, 11), shelx로 데이터 입력 = 7578, 고유 데이터 = 5186, 두 개의-세타 범위 = 3.20 내지 56.74°, 두 개의- 세타까지의 완전도 56.74 = 99.70%, R(int-xl) = 0.0331, SADABS 보정 적용하였다.
분석 및 개선: XS(Shelxtl)을 사용하여 분석되고, shelxtl 소프트웨어 패키지를 사용하여 개선된 구조, F 2에 대한 풀-매트릭스 최소 제곱에 의해 개선, Int. Tab. Vol C 표 4.2.6.8 및 6.1.1.4로부터의 산란 인자, 데이터의 수 = 5186, 제한의 수 = 2, 파라미터의 수 = 313, 데이터/파라미터 비 = 16.57, F2에 대한 피트 우수성 = 1.02, R 인덱스[I>4sigma(I)] R1 = 0.0524, wR2 = 0.1033, R 인덱스(모든 데이터) R1 = 0.0826, wR2 = 0.1162, max 차이 피크 및 홀 = 0.294 및 -0.221 e/Å3, 정제된 플랙 파라미터 = 0.05(8), NH2 및 물 수소 외의 모든 수소 원자는 라이딩 모델을 사용하여 이상화되었다.
결과: 비대칭적 단위은 50% 확률 수준으로 그린 열 타원체로 도 1에 나타낸 바와 같이 하나의 분자 및 하나의 물 분자를 함유한다. 예측된 구조가 확인된다. 절대 배열은 C21에서 공지된 S 배열에 기초하여 결정된다. C7에서의 배열은 S로 결정된다. 플랙 파라미터는 또한 올바른 배열을 확인한다. 결정 구조에 기초하여, 실시예 269의 화합물은 4-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-((S)-2-하이드록시프로필)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴이라고 생각된다. 결정 구조를 도 1에 나타낸다.
실시예 272 및 273. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-2-[1-(2-하이드록시-1-메틸에틸)아제티딘-3-일]-3-메톡시벤조니트릴의 부분입체이성질체
메탄올 (2 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (40 mg, 0.10 mmol)의 용액을 소듐 시아노보로하이드라이드 (16 mg, 0.25 mmol) 이후 아세톨 (28 μL, 0.40 mmol)로 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 아세트산 (100 μL, 1.8 mmol)로 중단시키고, 메탄올로 희석하고, 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다. 이 부분입체이성질체의 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (RT = 3.70 min 및 6.58 min; Phenomenex Lux Cellulose C-4 칼럼, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 헥산 내 20% 에탄올로 용리하면서 18 ml/min에서, 5 mg/inj) 소정의 피크 1 이성질체 (화합물 272) (19 mg, 41%) 및 피크 2 이성질체 (화합물 273) (23 mg, 50%)을 얻었다 피크 1: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 3.17 - 3.06 (m, 2H), 3.06 - 2.97 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 6.3 Hz, 3H). C22H27ClN7O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.2. 피크 2: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.43 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.06 - 3.91 (m, 2H), 3.89 - 3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.15 - 3.00 (m, 3H), 2.55 (s, 3H), 2.21 - 2.10 (m, 1H), 1.72 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.2 Hz, 3H). C22H27ClN7O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.2.
실시예 281. 2-(1-아세틸아제티딘-3-일)-4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴
0 °C에서 테트라하이드로푸란 (2 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (60 mg, 0.15 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (53 μL, 0.38 mmol) 이후 아세틸 클로라이드 (13 μL, 0.18 mmol)로 처리하고 20 °C에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (39 mg, 59%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.52 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.36 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 3H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 1H), 3.71 (d, J = 3.1 Hz, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.78 - 1.71 (m, 6H). C21H23ClN7O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 440.2; 실험치: 440.1.
실시예 285. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-메톡시-2-[1-(메틸설포닐)아제티딘-3-일]벤조니트릴
디클로로메탄 (1 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (40 mg, 0.10 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (35 μL, 0.25 mmol)로 처리하고, 0 °C까지 냉각시키고, 메탄설포닐 클로라이드 (9.3 μL, 0.12 mmol)로 처리하고 0 °C에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (20 mg, 42%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.27 - 4.12 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C20H23ClN7O3S 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 476.1; 실험치: 476.1.
실시예 289. 메틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
디클로로메탄 (1 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (20 mg, 0.05 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (20 μL, 0.14 mmol) 이후 메틸 클로로포르메이트 (4.7 μL, 0.06 mmol)로 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (12 mg, 52%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.34 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 4H), 3.71 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C21H23ClN7O3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.1.
실시예 292. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}-N-(tert-부틸)아제티딘-1-카복사미드
N,N-디메틸포름아미드 (1 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (20 mg, 0.05 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (20 μL, 0.14 mmol) 이후 2-이소시아네이토-2-메틸-프로판 (7.2 μL, 0.063 mmol)로 처리하고 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (16 mg, 64%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C24H30ClN8O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 497.2; 실험치: 497.2.
실시예 293. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복사미드
트리플루오로아세트산 (2 mL) 내 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}-N-(tert-부틸)아제티딘-1-카복사미드 (실시예 292로부터의 카이랄 중간체) (16 mg, 0.032 mmol)의 용액을 마이크로파 내에서 120 °C에서 10분 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (7 mg, 50%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.35 (br s, 2H), 6.28 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 5.70 (br s, 1H), 4.62 - 4.49 (m, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.78 - 3.49 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H). C20H22ClN8O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 441.2; 실험치: 441.1.
실시예 296. 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-메톡시페닐}N,N-디메틸아제티딘-1-카복사미드
N,N-디메틸포름아미드 (2 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 261로부터의 카이랄 중간체) (40 mg, 0.10 mmol)의 용액을 트리에틸아민 (40 μL, 0.29 mmol) 이후 p-니트로페닐 클로로포르메이트 (23 μL, 0.13 mmol)로 처리하고 실온에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었고 이를 즉시 사용하였다. 테트라하이드로푸란 (1 mL) 내 p-니트로페닐 카바메이트 중간체의 용액을 트리에틸아민 (15 μL, 0.11 mmol) 이후 테트라하이드로푸란 (150 μL, 0.15 mmol) 내 1.0 M 디메틸아민의 용액으로 처리하고 밀봉된 튜브 내에서 60 °C에서 2시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 (13 mg, 28%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.36 (br s, 2H), 6.25 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.44 - 4.23 (m, 3H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 3.69 (s, 3H), 2.76 (s, 6H), 2.55 (s, 3H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H). C22H26ClN8O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 469.2; 실험치: 469.1.
실시예 298. 1-{1-[4,5-디클로로-3-(1-에틸아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
단계 1. 1-(4,5-디클로로-2-하이드록시페닐)에탄온
아세틸 클로라이드 (19 mL, 270 mmol) 내 3,4-디클로로페놀 [AK Scientific] (30 g, 18 mmol)의 용액을 60°C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 20 °C까지 냉각시키고,　알루미늄 트리클로라이드 (37 g, 280 mmol)로 조금씩 처리하고, 및 180 °C에서 30분 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 20 °C까지 냉각시키고 용액을 쉽게 부서지지 않는 고체 블록으로 고화시켰다. 이 물질을 0 °C까지 냉각시키고 천천히 1 M HCl로 조금씩 중단시켰다. 상기 물질의 고체 블록을 충분한 HCl로 천천히 분해하고 이 이종 혼합물을 균일성을 보장하기 위해 20 °C에서 밤새 교반시켰다. 상기 고체를 여과하고, 풍부한 양의 물로 세척하고, 진공 하에서 건조시키고 소정의 생성물을 갈색 고체로서 얻었다 (38 g, 정량적).
단계 2. 1-(4,5-디클로로-2-하이드록시-3-아이오도페닐)에탄온
아세트산 (70 mL) 내 1-(4,5-디클로로-2-하이드록시페닐)에탄온 (12 g, 59 mmol)의 용액을 N-아이오도숙신이미드 (16 g,71 mmol)로 처리하고 90 °C에서 18 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 부가적 N-아이오도숙신이미드　(8 g, 36 mmol)로 처리하고 90 °C에서 4 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고,　및 거품이 중단될 때까지 포화 소듐 바이카보네이트로 중단시켰다. 유기 층을 분리하고 수층을 에틸 아세테이트로 재- 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 건조시키고 농축시켜 갈색 고체를 얻었다. 이 물질을 메탄올로부터 재결정화하여 소정의 생성물 (9.0 g, 46%)을 갈색 고체로서 얻었다. 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 13.36 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 2.65 (s, 3H). C8H6Cl2IO2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 330.9, 332.9; 실험치: 330.8, 332.9.
단계 3. 1-(4,5-디클로로-3-아이오도-2-메톡시페닐)에탄온
N,N-디메틸포름아미드 (40 mL) 내 1-(4,5-디클로로-2-하이드록시-3-아이오도페닐)에탄온 (16 g, 47 mmol) 및　포타슘 카보네이트 (17 g, 120 mmol)의 용액을 메틸 아이오다이드 (6.4 mL, 100 mmol)로 처리하고 60 °C에서 1 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 물 및 에틸 아세테이트(2x)로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 크루드 고체를 얻었다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트를 사용하여 (5% - 30%) 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 오렌지색 고체로서 얻었다 (14 g, 84%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.69 (s, 1H), 3.79 (s, 3H), 2.60 (s, 3H). C9H8Cl2IO2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 344.9, 346.9; 실험치: 344.8, 346.9.
단계 4. tert-부틸 3-(3-아세틸-5,6-디클로로-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (4.5 g, 69 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (54 mL) 내 1,2-디브로모에탄 (420 μL, 4.9 mmol)와 함께 현탁시켰다. 상기 혼합물을 70 oC에서 10분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 클로로트리메틸실란 (620 μL, 4.9 mmol)를 한방울씩 부가하고 교반을 1 h 동안 계속하였다. N,N-디메틸포름아미드 (30 mL)　내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (17 g, 61 mmol)의 용액을 이후 부가하고 상기 혼합물을 40 oC에서 1 h 동안 가열하고 이후 N,N-디메틸포름아미드 (120 mL)　내 1-(4,5-디클로로-3-아이오도-2-메톡시페닐)에탄온 (14 g, 41 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (710 mg, 0.77 mmol)　및 트리-(2-푸릴)포스핀 (360 mg, 1.6 mmol)의 혼합물을 신속히 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 이후 에틸 아세테이트 및 포화 암모늄 클로라이드 용액 사이에서 분배시켰다. 유기 층을 물로 세척하고, 마그네슘 설페이트로 건조시키고, 여과하고, 크루드 잔사까지 농축시키고 이를 헥산 내 에틸 아세테이트를 사용하여 (0% - 25%) 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (12 g, 77%). C17H21Cl2NO4Na 에 대한 LCMS (M+Na)+: m/z = 396.1; 실험치: 396.0.
단계 5. tert-부틸 3-[2,3-디클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트
0 °C에서 메탄올 (240 mL) 내 tert-부틸 3-(3-아세틸-5,6-디클로로-2-메톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (9.6 g, 26 mmol)의 용액을 소듐 테트라하이드로보레이트 (1.9 g, 51 mmol)로 5 min에 걸쳐 조금씩 처리하고 0 °C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 0 °C에서 아세트산 (7.3 mL, 130 mmol)로 중단시키고 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (~50mL)로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시켜 대부분의 메탄올을 제거하고 (~60 mL까지), 포화 소듐 바이카보네이트 용액 내로 붓고 (150 ml), 및 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 물 및 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 소정의 생성물을 얻었고 (9.6 g, 정량적) 이를 추가 정제 없이 사용하였다. C13H16Cl2NO4에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 320.0; 실험치: 320.0.
단계 6. tert-부틸 3-[2,3-디클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (0.92 mL, 12 mmol)를 실온에서 고체 시아누릭 클로라이드 (2.2 g, 12 mmol) (DMF는 상기 고체에 의해 흡수됨)에 부가하였다. 상기 혼합물을 10분 동안 방치하고, 메틸렌 클로라이드 (60 mL)로 처리하고, 상기 고체를 분해하도록 몇 분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 메틸렌 클로라이드 (30 mL) 내　tert-부틸 3-[2,3-디클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (3.0 g, 8.0 mmol)의 용액으로 처리하고 35 - 40에서 °C 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 부가적 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)로 처리하고 35 - 40 °C에서 4 h 동안 교반시켰다. 상기 반응은 완결을 위해 35 - 40 °C에서 밤새 교반하면서 다시 N,N-디메틸포름아미드 (1 mL)의 처리를 필요로하였다. 상기 반응 혼합물을 물 및 디클로로메탄으로 희석하였다. 유기 상을 분리하고 포화 소듐 바이카보네이트 용액, 물 및 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 잔사까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (2.8 g, 90%). C13H15Cl3NO3에 대한 LCMS ([M-(t-Bu)+H]+H)+: m/z = 338.0, 340.0; 실험치: 337.9, 339.9.
단계 7. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]-5,6-디클로로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
N,N-디메틸포름아미드 (23 mL)　내 tert-부틸 3-[2,3-디클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (1.0 g, 2.5 mmol)　및 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.43 g, 2.9 mmol)의 용액을 세슘 카보네이트 (1.2 g, 3.8 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (42 mg, 0.25 mmol)로 처리하고 100 oC에서 10 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 에틸 (75 mL) 및 물 (75 mL) 아세테이트로 희석하였다. 수층을 분리하고 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 재추출하였다. 조합시킨 유기 층을 물로 세척하고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액, 및 식염수, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 잔사까지 농축시켰다. 크루드 물질을 디클로로메탄 내 메탄올 (0% - 10%)을 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (0.97 g, 75%). C23H29Cl2N6O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 507.2, 509.2; 실험치: 507.0, 509.0.
단계 8. 1-[1-(3-아제티딘-3-일-4,5-디클로로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
메틸렌 클로라이드 (20 mL) 내 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]-5,6-디클로로-2-메톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (0.97 g, 1.9 mmol)의 용액을 트리플루오로아세트산 (10 mL)으로 처리하고 20 oC에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고 잔사를 메탄올로 희석하고 (~20 mL) 및 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (pH~8까지)로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시켜 메탄올을 제거하였다. 수층 내에 현탁시킨 오일을 5:1 디클로로메탄/이소프로판올의 혼합물 내로 추출하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 농축시켜 소정의 생성물을 얻었다 (0.77 g, 99%) 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다. C18H21Cl2N6O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 407.1, 409.1; 실험치: 407.0, 409.0.
단계 9. 1-{1-[4,5-디클로로-3-(1-에틸아제티딘-3-일)-2-메톡시페닐]에틸}-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
메탄올 (2.6 mL) 내 1-[1-(3-아제티딘-3-일-4,5-디클로로-2-메톡시페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (40 mg, 0.098 mmol)의 용액을 소듐 시아노보로하이드라이드 (15 mg, 0.25 mmol)　이후 아세트알데히드 (22 μL, 0.39 mmol)로 처리하고 20 oC에서 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 아세트산 (130 μL, 2.3 mmol)으로 중단시키고, 메탄올로 희석하고, 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 거울상이성질체의 혼합물로서 얻었다. 이 라세미 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 (RT = 18.6 min 및 22.0 min; Phenomenex Lux Cellulose C-4 칼럼, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 ml/min, 2.5 mg/inj에서 헥산 내 5% 에탄올로 용리하면서) 소정의 피크 1 이성질체를 얻었다 (11 mg, 26%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.33 (br s, 2H), 6.21 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 3.98 - 3.77 (m, 3H), 3.57 (s, 3H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.79 - 2.72 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 2H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.1 Hz, 3H). C20H25Cl2N6O 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 435.1; 실험치: 435.0.
실시예 307. 4-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(1-이소프로필아제티딘-3-일)벤조니트릴
단계 1. tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트
소정의 화합물을 실시예 212, 단계 5 (카이랄 중간체)의 절차에 따라, 출발 물질로서 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 대신 5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민 [ACES Pharma]을 사용하여 18% 수율로 제조하였다. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.13 (s, 1H), 6.93 (br s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.17 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.40 - 4.27 (m, 4H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.03 - 3.92 (m, 1H), 3.80 - 3.70 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.40 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C26H32ClN6O3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 511.2; 실험치: 511.2.
단계 2. 4-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴
소정의 화합물을 실시예 212, 단계 6의 절차에 따라, 출발 물질로서 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트 대신 tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐}아제티딘-1-카복실레이트를 사용하여 99% 수율로 제조하였다. C21H24ClN6O에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 411.2; 실험치: 411.1.
단계 3. 4-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(1-이소프로필아제티딘-3-일)벤조니트릴
소정의 화합물을 실시예 213의 절차에 따라, 출발 물질로서 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 대신 4-[1-(4-아미노-5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-7-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 및 포름알데히드 대신 아세톤을 사용하여 65% 수율로 제조하였다. 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. 1H NMR (300 MHz, dmso) δ 7.95 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.16 - 7.13 (m, 1H), 6.58 (s, 2H), 6.11 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.04 - 3.67 (m, 5H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.85 (dd, J = 6.1, 1.8 Hz, 6H). C24H30ClN6O에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 453.2; 실험치: 453.3.
실시예 315. 4-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-{1-[(2S)-2-하이드록시프로필]아제티딘-3-일}-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴
단계 1: 4-아세틸-5-하이드록시-2-메틸벤조니트릴
1-(4-브로모-2-하이드록시-5-메틸페닐)에탄온 (8.5 g, 37 mmol, Alfa Aesar 카탈로그# H29125)를 N,N-디메틸포름아미드 (75 mL) 내 아연 시아나이드 (8.7 g, 74 mmol)와 조합시키고 질소로 탈기시키고 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (1.0 g, 1.1 mmol)　및 (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (1.5 g, 2.6 mmol)를 부가하였다. 반응을 다시 질소로 탈기시키고 120 oC까지 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 18 h 동안 가열 후, 반응을 완결하고, 반응을 방치하여 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트 내에 취하고 물 (2X), 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 어두운 호박색 오일로서 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산:에틸 아세테이트 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 4-아세틸-5-하이드록시-2-메틸벤조니트릴을 고체로서 얻었다 (6.3 g, 98%). C10H10NO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 176.1; 실험치: 176.2.
단계 2: 4-아세틸-3-하이드록시-2-아이오도-6-메틸벤조니트릴
4-아세틸-5-하이드록시-2-메틸벤조니트릴 (6.7 g, 38 mmol)를 아세트산 (80 mL) 내에 용해시키고 N-아이오도숙신이미드 (10. g, 46 mmol)를 부가하였다. 반응을 80 oC까지 오일 배쓰 내에서 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 가열 4 h 후 동안 반응을 완결시켰다. 이것을 방치하여 냉각하고 진공에서 농축시켜 어두운 오일을 얻었다. 오일을 에틸 아세테이트 내에 취하고 물, 소듐 바이카보네이트 (3x,　약간 염기성으로 잔존할 때까지), 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 어두운 오일로서 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산:에틸 아세테이트 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 4-아세틸-3-하이드록시-2-아이오도-6-메틸벤조니트릴을 옅은 노란색 고체로서 얻었다 (7.2 g, 62 %). C10H9INO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 301.9; 실험치: 301.9.
단계 3: 4-아세틸-2-아이오도-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴
4-아세틸-3-하이드록시-2-아이오도-6-메틸벤조니트릴 (5.0 g, 17 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (50 mL)　내에 용해시키고 포타슘 카보네이트 (4.6 g, 33 mmol)　및 메틸 아이오다이드 (2.1 mL, 33 mmol)를 부가하였다. 반응을 60 oC까지 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 가열 후 2시간 동안 반응을 완결시켰다. 이것을 방치하여 냉각하고, 에틸 아세테이트로 희석하였고 (300 mL) 및 여과하고 남은 고체를 제거하였다. 유기 층을 물(3X), 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 어두운 고체로서 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산:에틸 아세테이트 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 4-아세틸-3-메톡시-2-아이오도-6-메틸벤조니트릴을 옅은 노란색 결정성 고체로서 얻었다 (5.0 g, 96%). C11H11INO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 315.9; 실험치: 316.0.
단계 4: tert-부틸 3-(3-아세틸-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐)아제티딘-1-카복실레이트
아연 (1.70 g, 26.0 mmol)　및 셀라이트 (오븐 건조된, 500 mg)를 상기 고체가 균질하게 보일 때까지 플라스크 내에서 함께 분쇄하고, 플라스크를 고진공 하에서 5 분 동안 가열 총으로 가열하고 이후 다시 -질소로 충전하였다. 상기 고체를 N,N-디메틸아세트아미드 (4.2 mL) 내에 현탁시키고 1,2-디브로모에탄 (0.13 mL, 1.5 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 70 oC에서 30분 동안 가열하고 이후 실온까지 냉각시켰다. 클로로트리메틸실란 (0.16 mL, 1.3 mmol)를 한방울씩 부가하고 교반을 2시간 동안 실온에서 계속하였다. N,N-디메틸아세트아미드 (4.35 mL)　내 tert-부틸 3-아이오도아제티딘-1-카복실레이트 (2.70 g, 9.52 mmol)의 용액을 이후 천천히 부가하고 결과로서 얻어진 혼합물을 50 oC에서 2시간 동안 가열하였다. 아연-아이오도 시약을 방치하여 실온까지 냉각시키고 시린지 내에 취하고 PTFE 필터 (니들로 적응된)을 통해 직접 여과하고　N,N-디메틸아세트아미드 (19.6 mL)　내 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.111 g, 0.121 mmol)　및 트리-(2-푸릴)포스핀 (0.056 g, 0.24 mmol)　및 4-아세틸-2-아이오도-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴 (2.0 g, 6.3 mmol)의 현탁액 내로 N2를 발포시킴에 의해 예비-탈기시켰다. 상기 반응 혼합물을 질소로 다시 탈기시키고 70 oC까지 가열하였다. 30 분 동안 가열 후 반응을 LC/MS에 의해 완결하였다. 이것을 방치하여 냉각하고, 에틸 아세테이트 내에 취하고 물, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 생성물을 오일로서 얻었다. 상기 생성물을 헥산; 에틸 아세테이트 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 tert-부틸 3-(3-아세틸-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐)아제티딘-1-카복실레이트를 투명한 오일로서 얻었다.　(1.8 g, 82%). C15H17N2O4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 289.1; 실험치: 289.1.
단계 5: tert-부틸 3-[2-시아노-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-3-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트
tert-부틸 3-(3-아세틸-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐)아제티딘-1-카복실레이트 (2.2 g, 6.4 mmol)를 메탄올 (20 mL)　내에 용해시키고 얼음 배쓰 내에서 냉각시켰다. 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.26 g, 7.0 mmol)를 조금씩 부가하고 반응을 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 1 h 동안 교반 후 반응을 완결시켰다. 이것을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 조합시킨 유기 층을 물, 포화 소듐 바이카보네이트, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 tert-부틸 3-[2-시아노-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-3-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트를 노란색 발포물로서 얻었다 (2.1 g, 99%). C15H19N2O4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 291.1; 실험치: 291.1.
단계 6: tert-부틸 3-[3-(1-클로로에틸)-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트
tert-부틸 3-[2-시아노-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-3-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (2.1 g, 6.4 mmol)를 메틸렌 클로라이드 (50.0 mL)　및 N,N-디메틸포름아미드 (0.59 mL) 내에 취하고,　얼음 배쓰 내에서 냉각시키고 티오닐 클로라이드 (0.56 mL, 7.7 mmol)를 천천히 부가하였다. 2시간 동안 교반 후 반응을 LC/MS에 의해 완결하고 에틸 아세테이트 및 물 사이에서 분배시켰다. 조합시킨 유기 층을 물, 포화 소듐 바이카보네이트, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 tert-부틸 3-[3-(1-클로로에틸)-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트를 오일로서 얻었다 (2.2 g, 100%). C15H18ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 309.1; 실험치: 309.1.
단계 7: tert-부틸 3-{3-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트
tert-부틸 3-[3-(1-클로로에틸)-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐]아제티딘-1-카복실레이트 (2.3 g, 6.3 mmol)를 세슘 카보네이트 (4.1 g, 13 mmol)　및 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (1.4 g, 9.4 mmol)와 함께 N,N-디메틸포름아미드 (68 mL)　내에 용해시키고 오일 배쓰 내에서 80 oC까지 가열하였다. 상기 반응을 18 h 동안 교반시키고 방치하여 실온까지 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 내에 취하고, 여과하고, 물, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 (헥산: 10% 에탄올 에틸 아세테이트) 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 tert-부틸 3-{3-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트를 반고체로서 얻었다 (1.5 g, 50%). C25H32N7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 478.2; 실험치: 478.2. 거울상이성질체를 Phenomenex Lux Cellulose 칼럼, 21.1 x 250 mm, 5 미크론, 헥산 내 15% 에탄올, 18 mL/min ~ 5 mg/주사액을 사용하는 카이랄 칼럼 HPLC에 의해 분리하여 다음을 얻었다: 제 1 피크 체류 시간: 2.1 분, tert-부틸 3-{3-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트; 제 2 피크 체류 시간: 3.9 분, tert-부틸 3-{3-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트.
단계 8: 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴 비스(트리플루오로아세테이트)
tert-부틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-시아노-2-메톡시-5-메틸페닐}아제티딘-1-카복실레이트 (0.35 g, 0.73 mmol)　(단계 7, 피크 1)를 메틸렌 클로라이드 (3.0 mL)　및 트리플루오로아세트산 (1.0 mL)　내에 실온에서 용해시켰다. 1 h 동안 교반 후 반응을 LC/MS에 의해 완결하였다. 반응을 진공에서 농축시켜 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴 (비스(트리플루오로아세테이트)을 점성 호박색 오일로서 얻었다 (0.50 g, 100%). C20H24N7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 378.2; 실험치: 378.2.
단계 9: 4-[-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-{1-[(2S)-2-하이드록시프로필]아제티딘-3-일}-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴
4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-메톡시-6-메틸벤조니트릴 비스(트리플루오로아세테이트) (0.074 g, 0.10 mmol)를 에탄올 (3.0 mL)　및 DIPEA (0.071 mL, 0.41 mmol) 내에 용해시키고 (S)-(-)-메틸옥시란 (0.0071 g, 0.12 mmol)를 부가하였다. 반응물을 밀봉된 튜브 내에서 90 oC까지 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 6 h 동안 가열 후 반응을 후처리 없이 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.018 g, 40%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C23H30N7O2 에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 436.2; 실험치: 436.3. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 6.22 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 4.09 - 3.83 (m, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.58 - 3.51 (m, 1H), 3.12 - 2.95 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 316. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[6-(1-하이드록시-1-메틸에틸)피리딘-3-일]벤조니트릴
단계 1. 5-브로모-N-메톡시-N-메틸피리딘-2-카복사미드
　N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 (500 mg, 5 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (10 mL) 내 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (1400 mg, 3.7 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (1000 μL, 7 mmol)　및 5-브로모피리딘-2-카복시산 (500 mg, 2 mmol, Frontier Scientific 카탈로그# B1704)의 혼합물에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반시키고 LC/MS에 의해 완결하였다. 반응을 물 및 EtOAc 사이에서 분배시켰다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산: EtOAc (0-30%) 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 5-브로모-N-메톡시-N-메틸피리딘-2-카복사미드를 투명한 오일로서 얻었다 (0.50 g, 60%). C8H10BrN2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 244.9, 246.9; 실험치: 244.9, 246.9.
단계 2. 1-(5-브로모피리딘-2-일)에탄온
THF 내 메틸마그네슘 클로라이드 3.0 M (0.5 mL)를 한방울씩 테트라하이드로푸란 (10 mL)　내 5-브로모-N-메톡시-N-메틸피리딘-2-카복사미드 (200 mg, 0.8 mmol)의 혼합물에 0 °C에서 부가하였다. 1 h 동안 실온에서 교반 후, 반응을 1 N NH4Cl로 중단시키고 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 크루드 생성물 1-(5-브로모피리딘-2-일)에탄온을 얻었다 (0.15 g, 90%). C7H7BrNO에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 199.9, 201.9; 실험치: 199.9, 201.9.
단계 3. 2-(5-브로모피리딘-2-일)프로판-2-올
THF 내 메틸마그네슘 클로라이드 3.0 M (0.3 mL)를 한방울씩 테트라하이드로푸란 (10 mL) 내 1-(5-브로모피리딘-2-일)에탄온 (100 mg, 0.5 mmol)의 혼합물에 0 °C에서 부가하였다. 1 h 동안 실온에서 교반 후, 반응을 1 N NH4Cl로 중단시키고 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 크루드 2-(5-브로모피리딘-2-일)프로판-2-올을 얻었다 (0.1 g, 100%). C8H11BrNO에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 215.9, 217.9; 실험치: 215.8, 217.8.
단계 4. [6-(1-하이드록시-1-메틸에틸)피리딘-3-일]보론산
2-(5-브로모피리딘-2-일)프로판-2-올 (70 mg, 0.3 mmol), 4,4,5,5,4',4',5',5'-옥타메틸-[2,2']비[[1,3,2]디옥사보롤란일] (90. mg, 0.36 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (10 mg, 0.01 mmol) 와의 복합체, 및 1,4-디옥산 (5 mL) 내 포타슘 아세테이트 (100 mg, 1 mmol)의 혼합물을 120 °C에서 밤새 가열하였다. 반응을 LC/MS에 의해 완결하고, 진공에서 농축시켜 크루드 [6-(1-하이드록시-1-메틸에틸)피리딘-3-일]보론산을 얻었다. C8H13BNO3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 182.1; 실험치: 182.1.
단계 5. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-[6-(1-하이드록시-1-메틸에틸)피리딘-3-일]벤조니트릴 비스(2,2,2-트리플루오로아세테이트)
물 (0.5 mL) 내 소듐 카보네이트 (10 mg, 0.09 mmol)를 아세토니트릴 (1 mL) 내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-브로모-6-클로로-3-에톡시벤조니트릴 (20 mg, 0.04 mmol, 실시예 43, 단계 5로부터의 라세미 중간체) 및 [6-(1-하이드록시-1-메틸에틸)피리딘-3-일]보론산 (12 mg, 0.069 mmol, 실시예 306, 단계 4)의 혼합물에 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 N2로 탈기시키고 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (2 mg, 0.002 mmol) 와의 복합체를 부가하였다. 반응을 N2로 다시 탈기시키고 100 °C까지 1 h 동안 가열하였다. 반응을 방치하여 실온까지 냉각시키고 후처리 없이 TFA로 완충된 물; 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다. 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C25H27ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 492.1; 실험치: 492.1. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.60 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 6.36 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.52 - 3.40 (m, 1H), 3.40 - 3.30 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 1.80 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.48 (d, J = 2.3 Hz, 6H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 318. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴
단계 1. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴
4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴을 실시예 43, 단계 1 및 단계 2에서 기술된 유사한 방법에 의해 N-아이오도숙신이미드를 사용하여 제조하였다. C11H10ClINO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 349.9; 실험치: 350.0
단계 2. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴
4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴 (0.20 g, 0.57 mmol)를 세슘 카보네이트 (0.19 g, 0.57 mmol)와 함께 N,N-디메틸포름아미드 (2.0 mL) 내 피롤리딘 (0.052 mL, 0.63 mmol)와 조합시키고 120 oC까지 밀봉된 튜브 내에서 가열하였다. 18 h 동안 가열 후 반응을 방치하여 냉각하고, 에틸 아세테이트 내에 취하고, 물, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 어두운 오일로서 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 헥산: 에틸 아세테이트 구배로 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴을 오일로서 얻었다 (0.045 g, 27%). C15H18ClN2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 293.1; 실험치 293.1.
단계 3. 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴
4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴 (0.045 g, 0.15 mmol)를 메탄올 (3 mL) 내에 용해시키고 얼음 배쓰 내에서 냉각시켰다. 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.0058 g, 0.15 mmol)를 부가하고 반응을 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 1 h 동안 교반 후, 반응을 에틸 아세테이트 내에 취하고 물, 소듐 바이카보네이트, 식염수로 세척하고 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 크루드 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴을 투명한 오일로서 얻었다 (0.045 g, 100%). C15H20ClN2O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 295.1; 실험치 295.1.
단계 4. 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴
6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴 (0.045 g, 0.15 mmol)를 메틸렌 클로라이드 (3.0 mL)　및 N,N-디메틸포름아미드 (0.002 mL, 0.03 mmol)　내에 취하고 얼음 배쓰 내에서 냉각시켰다. 티오닐 클로라이드 (0.017 mL, 0.23 mmol)를 부가하고 반응을 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 2시간 동안 교반 후 반응을 완결시켰다. 상기 반응을 이후 에틸 아세테이트 내에 취하고, 소듐 바이카보네이트, 식염수로 세척하고, 마그네슘 설페이트 상에서 건조시키고 농축시켜 크루드 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴을 노란색 오일로서 얻었다 (0.048 g, 100%). C15H19Cl2N2O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 313.1; 실험치 313.1.
단계 5. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴
6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-피롤리딘-1-일벤조니트릴 (0.048 g, 0.15 mmol, 라세미 혼합물)를 N,N-디메틸포름아미드 (3.0 mL)　내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.034 g, 0.23 mmol)　및 세슘 카보네이트 (0.10 g, 0.31 mmol)와 조합시키고 오일 배쓰 내에서 85 oC까지 가열하였다. 18 h 동안 가열 후 반응을 완결시켰다. 크루드 반응물을 후처리 없이 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.012 g, 18%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H25ClN7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 426.1; 실험치 426.1. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.25 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.71 (dp, J = 15.7, 8.1, 7.2 Hz, 4H), 3.49 - 3.35 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.00 - 1.76 (m, 4H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.34 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 319. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴
단계 1. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴
1,4-디옥산 (4 mL)　내 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴 (50 mg, 0.1 mmol, 실시예 318, 단계 1), 3-메톡시아제티딘 하이드로클로라이드 (21 mg, 0.17 mmol Chem-Impex 카탈로그# 20140)　및 세슘 카보네이트 (70. mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (40 mg, 0.07 mmol)　및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (60 mg, 0.07 mmol)를 부가하였다. 상기 반응 혼합물을 N2로 탈기시켰다. 반응물을 80 °C에서 2시간 동안 가열하고 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 반응을 방치하여 실온까지 냉각시키고, 물로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 (헥산: EtOAc 0-70%) 구배를 용리하면서 실리카겔 상에서 FCC에 의해 정제하여 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴을 투명한 오일로서 얻었다 (0.030 g, 70%). C15H18ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 309.1; 실험치: 309.1.
단계 2. 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴
0 °C까지 냉각시킨 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴 (30 mg, 0.1 mmol를 메탄올 (5 mL)　내에 용해시키고 소듐 테트라하이드로보레이트 (5.5 mg, 0.14 mmol)를 부가하였다. 반응을 1 h 동안 0 °C에서 교반시켰다. 반응을 EtOAc 및 물 사이에서 분배시켰다. 조합시킨 유기 층을 물 및 포화 NaHCO3, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴을 얻었다 (0.030 g, 100%). C15H20ClN2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 311.1; 실험치: 311.1.
단계 3. 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴
6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴 (30 mg, 0.1 mmol) (라세미 혼합물)를 메틸렌 클로라이드 (5 mL)　및 N,N-디메틸포름아미드 (100 μL, 1 mmol) 내에 용해시켰다. 티오닐 클로라이드 (18 μL, 0.24 mmol)를 한방울씩 실온에서 부가하고 상기 반응을 2시간 동안 교반시켰다. 반응을 EtOAc로 희석하고, 물 및 포화 NaHCO3, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴을 얻었다 (0.030 g, 100%). C15H19Cl2N2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 329.1; 실험치: 329.1.
단계 4. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴
세슘 카보네이트 (50 mg, 0.2 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (3 mL, 40 mmol) 내　3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (16 mg, 0.10 mmol) 및 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(3-메톡시아제티딘-1-일)벤조니트릴 (30 mg, 0.09 mmol)의 혼합물에 부가하고 상기 반응을 80 oC에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물, 식염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 크루드 생성물까지 농축시켰다. 상기 생성물을 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.007 g, 20%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C21H25ClN7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.18 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.58 - 4.44 (m, 2H), 4.18 (m, 1H), 4.13 - 4.01 (m, 2H), 3.81 - 3.62 (m, 2H), 3.23 (s, 3H), 2.55 (s, 3H), 1.69 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 320. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-3-에톡시-2-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-6-메틸벤조니트릴
단계 1: 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-에톡시-6-메틸벤조니트릴 비스(트리플루오로아세테이트)
실시예 315에서 기술된 방법을 사용하지만 메틸 아이오다이드 대신 단계 3에서 에틸 아이오다이드를 사용하여, 중간체 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-에톡시-6-메틸벤조니트릴 비스(트리플루오로아세테이트)를 제조하였다. C21H26N7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 392.2; 실험치: 392.2.
단계 2. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-3-에톡시-2-(1-이소프로필아제티딘-3-일)-6-메틸벤조니트릴
메탄올 (50 mL)　내 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-에톡시-6-메틸벤조니트릴 (70 mg, 0.2 mmol)의 혼합물에 아세톤 (0.1 mL, 2 mmol)　및 소듐 시아노보로하이드라이드 (17 mg, 0.27 mmol)를 부가하였다. 상기 반응물을 실온에서 1 h 동안 교반시키고, 및 LC/MS에 의해 완결하였다. 반응을 물로 중단시키고 EtOAc로 추출하였다. 조합시킨 유기 층을 식염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 크루드 생성물을 얻었다. 상기 생성물을 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.030 g, 40%). 상기 생성물을 라세미 혼합물로서 분리하였다. C24H32N7O에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 434.2; 실험치: 434.3. 1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 8.17 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.37 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.17 - 3.98 (m, 4H), 3.90 - 3.71 (m, 3H), 2.65 (s, 3H), 2.46 (s, 4H), 1.84 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.03 (dd, J = 6.2, 1.4 Hz, 6H).
실시예 321. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시-2-메틸프로필)아제티딘-3-일]-6-메틸벤조니트릴
4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-에톡시-6-메틸벤조니트릴 (0.055 g, 0.14 mmol, 실시예 320, 단계 1로부터의 카이랄 중간체)를 테트라하이드로푸란 (22 mL),　DIPEA (0.049 mL, 0.28 mmol) 및 옥시란, 2,2-디메틸- (0.018 mL, 0.21 mmol)와 실온에서 조합시켰다. 반응을 95 oC까지 가열하고 밤새 교반하도록 방치하였다. 반응을 방치하여 실온까지 냉각시키고 후처리 없이 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.035 g, 50%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H34N7O2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 464.3; 실험치: 464.3. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.21 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.00 (m, 4H), 3.81 - 3.54 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 (bs, 2H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.04 (s, 6H).
실시예 322. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-3-에톡시-2-[1-(2-하이드록시-2-메틸프로파노일)아제티딘-3-일]-6-메틸벤조니트릴
4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-2-아제티딘-3-일-3-에톡시-6-메틸벤조니트릴 (0.075 g, 0.10 mmol, 실시예 320, 단계 1로부터의 카이랄 중간체)를 N,N-디메틸포름아미드 (3.0 mL) 및 DIPEA (0.089 mL, 0.51 mmol) 내에 용해시키고 프로판산, 2-하이드록시-2-메틸- (0.013 g, 0.12 mmol)　및 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (0.058 g, 0.15 mmol)를 부가하였다. 상기 반응을 실온에서 18 h 동안 교반시키고 LC/MS에 의해 완결하였다. 상기 생성물을 후처리 없이 pH 10으로 완충된 물: 아세토니트릴 구배를 용리하면서 C-18 칼럼 상에서 prep HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 무정형 고체로서 얻었다 (0.025 g, 51%). 상기 생성물을 단일 거울상이성질체로서 분리하였다. C25H32N7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 478.2; 실험치: 478.2. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.24 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.90 - 4.75 (m, 1H), 4.73 - 4.58 (m, 1H), 4.39 (p, J = 8.5 Hz, 1H), 4.30 - 4.05 (m, 2H), 3.75 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 2.54 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 1.72 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 6.1 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
실시예 310 및 311. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 1. 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄올
소정의 화합물을 실시예 212, 단계 4 (라세미 혼합물)의 절차에 따라, 출발 물질로서 tert-부틸 3-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)아제티딘-1-카복실레이트 대신 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄온을 사용하여 94% 수율로 96:4 거울상이성질체의 혼합물로서 제조하였다 (RT = 3.56 min 및 4.28 min; Chiral Technologies ChiralPak AD-H 칼럼, 20 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 1 ml/min에서 헥산 내 5% 에탄올로 용리하면서). C11H13ClIO에 대한 LCMS (M-(OH))+: m/z = 323.0; 실험치: 322.9.
단계 2. 1-[1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민
소정의 화합물을 실시예 212, 단계 5의 절차에 따라, 출발 물질로서 tert-부틸 3-[3-클로로-2-시아노-6-에톡시-5-(1-하이드록시에틸)페닐]아제티딘-1-카복실레이트 대신 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄올 (단계 1로부터의 96:4 혼합물)을 사용하여 32% 수율로 단일 거울상이성질체로서 제조하였다 (소정의 피크 1, 체류 시간 = 3.39 min; ChiralPak IA 칼럼, 20 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 ml/min에서 헥산 내 3% 에탄올로 용리하면서). C17H20ClIN5O에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 472.0; 실험치: 472.0.
단계 3. 메틸 (2E)-3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아크릴레이트
밀봉된 튜브 내에서 아세토니트릴 (7.4 mL) 내 1-[1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에틸]-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (피크 1 단일 이성질체 단계 2로부터) (0.61 g, 1.3 mmol)의 현탁액을 질소로 탈기시키고 트리페닐포스핀 (0.048 g, 0.18 mmol), 메틸 아크릴레이트 (0.41 mL, 4.5 mmol),　및 팔라듐 아세테이트 (0.029 g, 0.13 mmol)　이후 트리에틸아민 (0.54 mL, 3.9 mmol)로 처리하고 100 °C에서 16 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과하고, 및 상기 고체를 아세토니트릴로 세척하였다. 여액을 잔사까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 (0% - 100%) 내 에틸 아세테이트 (3% 메탄올을 함유하는)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (0.40 g, 72%). C21H25ClN5O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 430.2; 실험치: 430.2.
단계 4. 메틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-4-니트로부타노에이트의 부분입체이성질체
니트로메탄 (6.3 mL) 내 메틸 (2E)-3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}아크릴레이트 (0.40 g, 0.93 mmol)의 용액을 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (0.14 mL, 0.93 mmol)로 처리하고 90 °C에서 22 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, 메탄올로 희석하고, 분취용 LCMS에 의해 정제하였다 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 트리플루오로아세트산와 함께 물 내 아세토니트릴의 구배로 용리, 60 mL/min의 유속에서). LCMS 분획을 농축하여 아세토니트릴을 제거하였고, 고체 소듐 바이카보네이트로 처리하고, 및 에틸 아세테이트 내로 추출하였다. 에틸 아세테이트를 농축시켜 부분입체이성질체의 혼합물로서 소정의 생성물을 얻었다　(0.22 g, 48%). C22H28ClN6O5에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 491.2; 실험치: 491.2.
단계 5. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
메탄올 (1.3 mL) 내 메틸 3-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-메틸페닐}-4-니트로부타노에이트 (0.089 g, 0.18 mmol)의 용액을 니켈 클로라이드 헥사하이드레이트 (0.087 g, 0.36 mmol)로 처리하고 및 5 min 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 0 °C까지 냉각시키고, 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.073 g, 1.9 mmol)로 네 개의 부분으로 처리하고, 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 60 °C에서 1.5 h 동안 가열하고, 실온까지 냉각시키고, 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (10 mL) 및 디클로로메탄 (25 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 셀라이트를 디클로로메탄으로 세척하고 여액을 분리 퍼넬로 이동시켰다. 유기 층을 분리하고, 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　잔사까지 농축시켰다. 크루드 잔사를 메탄올로 희석하고 및 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 피크 1 부분입체이성질체 (16 mg, 21%) 및 피크 2 부분입체이성질체 (19 mg, 24%)을 얻었다. 피크 1 (화합물 310): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.10 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.21 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.79 - 3.67 (m, 1H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.28 - 3.20 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.29 (dd, J = 17.5, 8.3 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.70 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C21H26ClN6O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 429.2; 실험치: 429.2. 피크 2 (화합물 311): 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.20 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 1H), 3.90 - 3.68 (m, 2H), 3.65 - 3.56 (m, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.32 (dd, J = 17.3, 8.5 Hz, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.69 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C21H26ClN6O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 429.2; 실험치: 429.2.
실시예 323. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴
단계 1. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-비닐벤조니트릴
4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-아이오도벤조니트릴 (1.3 g, 3.6 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (740 μL, 4.3 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (100 mg, 0.20 mmol) 와의 복합체 및1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (10 mL) 내 포타슘 카보네이트 (1.5 g, 11 mmol)의 혼합물을 80 °C에서 밤새 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-20%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다, 780 mg, 87%. C13H13ClNO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 250.1; 실험치: 250.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.78 (s, 1 H), 6.83 (m, 1 H), 6.10 (m, 1 H), 5.83 (m, 1 H), 3.84 (m, 2 H), 2.58 (s, 3 H), 1.22 (m, 3 H).
단계 2. tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트
물 내 0.2 M 오스뮴 테트라옥사이드 (0.5 mL)를 아세토니트릴 (10 mL) 내 tert-부틸 [(4-클로로벤조일)옥시]카바메이트 (Ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372). (0.91 g, 3.3 mmol)의 용액에 부가하고 10 분 동안 교반시켰다. 아세토니트릴 (10 mL) 내　용액으로서 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-비닐벤조니트릴 (0.56 g, 2.2 mmol)를 카바메이트 용액에 부가하고 이후 물 (2 mL)를 부가하고　상기 반응을 3 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 반응을 물 (12 mL) 내 포화 10 M 디포타슘 디설파이트로 중단시키고 5 분 동안 교반시켰다. 물을 부가하고 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 식염수 및 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-100%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 라세미 혼합물로서 얻었다, 610 mg, 72%. C18H24ClN2O5에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 383.1; 실험치: 383.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.62 (s, 1 H), 7.03 (br s, 1 H), 5.68 (br s, 1 H), 3.96 (m, 1 H), 3.69 (m, 1 H), 3.31 (m, 1 H), 3.19 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 1.30 (m, 12 H).
단계 3. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴
tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-6-시아노-2-에톡시페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트 (290 mg, 0.76 mmol)　(단계 2로부터 라세미 혼합물) 를 1,4-디옥산 (6.1 mL)　내 4.0 M 수소 클로라이드로 15 분 동안 처리하고 상기 혼합물을 증발시켰다. 잔사를 테트라하이드로푸란 (2.3 mL) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.66 mL, 3.8 mmol) 내에 용해시켰다. N,N-카보닐디이미다졸 (250 mg, 1.5 mmol)를 부가하고 상기 반응 혼합물을 70 °C에서 밤새 환류시켰다. 상기 반응 혼합물을 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-100%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 라세미 혼합물로서 얻었다, 110 mg, 47%. C14H14ClN2O4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 309.1; 실험치: 309.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.00 (br s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 5.99 (m, 1 H), 3.89 (m, 1 H), 3.81 (m, 2 H), 3.52 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.23 (m, 3 H).
단계 4. 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴
소듐 테트라하이드로보레이트 (19 mg, 0.50 mmol)를 메탄올 (1.6 mL, 38 mmol) 내 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴 (100 mg, 0.34 mmol) (단계 3으로부터의 라세미 혼합물)의 혼합물에 0 °C에서 부가하고 상기 반응 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시키고 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 1 N HCl, 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 화합물을 네 개의 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다, 58 mg, 55%. C14H16ClN2O4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 311.1; 실험치: 311.1.
단계 5. 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴
6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴 (58 mg, 0.19 mmol) (단계 4로부터의 네 개의 부분입체이성질체의 혼합물)의 혼합물에,　메틸렌 클로라이드 (1 mL) 내　N,N-디메틸포름아미드 (36 μL), 티오닐 클로라이드 (40. μL, 0.56 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반시키고 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 소듐 바이카보네이트, 물, 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 화합물을 네 개의 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다, 55 mg, 91%. C14H15Cl2N2O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 329.0; 실험치: 329.1.
단계 6. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴
세슘 카보네이트 (0.11 g, 0.34 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (0.91 mL) 내 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (30 mg, 0.20 mmol) (단계 5로부터의 네 개의 부분입체이성질체의 혼합물)의 혼합물에 부가하고 10 분 동안 교반시켰다.　상기 혼합물에 N,N-디메틸포름아미드 (1.0 mL) 내 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(2-옥소-1,3-옥사졸리딘-5-일)벤조니트릴 (56 mg, 0.17 mmol)을 부가하고 상기 반응을 90 °C에서 1 시간 동안 교반시켰다. RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하는 분취용 LCMS에 의한 정제에 의해 (pH 10) 소정의 화합물을 피크 1로서 얻었다 (두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물) C20H21ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.17 (s, 1 H), 8.00 (br s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 6.25 (m, 1 H), 5.92 (m, 1 H), 3.90 (m, 3 H), 3.57 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H); 피크 2 (두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물):
C20H21ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 8.00 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).
헥산 내 20% 에탄올을 사용하여 18 mL/min에서 Phenomenex Lux Cellulose-1, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기 상에서의 피크 2 (두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물)의 카이랄 정제에 의해 피크 3 및 피크 4을 얻었다. 피크 3, 체류 시간 = 12.22 분 (단일 거울상이성질체): C20H21ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 7.98 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H). 피크 4, 체류 시간 = 16.25 분 (단일 거울상이성질체). C20H21ClN7O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 442.1; 실험치: 442.1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.12 (s, 1 H), 7.98 (br s, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.96 (m, 1 H), 3.85 (m, 3 H), 3.58 (m, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 1.75 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).
실시예 324. 6-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}모르폴린-3-온
단계 1. 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-비닐페닐)에탄온
1-(3-브로모-5-클로로-2-메톡시-4-메틸페닐)에탄온 (2.6 g, 9.5 mmol), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (1.9 mL, 11 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (400 mg, 0.5 mmol) 와의 복합체 및 1,4-디옥산 (60 mL), 및 물 (30 mL) 내 포타슘 카보네이트 (4.0 g, 29 mmol)의 혼합물. 결과로서 얻어진 혼합물을 80 °C에서 3 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-20%)을 사용하는 실리카겔 상에서의 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다, 2.0 g, 94%. C12H14ClO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 225.1; 실험치: 225.1.
단계 2. tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트
물 (1 mL) 내 0.2 M 오스뮴 테트라옥사이드를 아세토니트릴 (22 mL)　내 tert-부틸 [(4-클로로벤조일)옥시]카바메이트 (2.0 g, 7.2 mmol) (Ref. Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372)의 용액에 부가하고 10 분 동안 교반시켰다. 아세토니트릴 (22 mL) 내 용액으로서 1-(5-클로로-2-메톡시-4-메틸-3-비닐페닐)에탄온 (1.1 g, 4.8 mmol)를 카바메이트 용액에 부가하고 이후 물 (5 mL)를 부가하였다. 상기 반응을 3 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 반응을 물 (25 mL)　내 포화 10 M 디포타슘 디설파이트로 중단시키고 5 분 동안 교반시켰다. 물을 상기 반응에 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 식염수, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고 감압 하에서 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-100%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 라세미 혼합물로서 얻었다, 1.2 g, 69%. C17H24ClNO5Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 380.1; 실험치: 380.1. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 7.48 (s, 1 H), 6.80 (m, 1 H), 5.50 (br s, 1 H), 5.20 (br s, 1 H), 3.83 (s, 3 H), 3.32 (m, 1 H), 3.22 (m, 1 H), 2.59 (s, 3 H), 2.55 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H).
헥산 내 8% 에탄올을 사용하는 18 mL/min의 유속에서 ChiralPak AD-H, 20 x 250 mm (Chiral Technologies), 5 미크론 입자 크기 상에서의 카이랄 정제에 의해, 피크 1 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 9.86 분) 및 피크 2 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 11.47 분)을 얻었다.
단계 3. N-[2-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-2-하이드록시에틸]-2-클로로아세트아미드
tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트 (170 mg, 0.47 mmol)　(피크 1 단계 2로부터)를 1,4-디옥산 (12 mL)　내 4.0 M 수소 클로라이드로 15 분 동안 처리하였다. 용매를 증발시키고,　메틸렌 클로라이드 (6 mL) 및 트리에틸아민 (200 μL, 1.4 mmol)를 부가하고 상기 혼합물을 0 °C까지 냉각시켰다. 클로로아세틸 클로라이드 (45 μL, 0.56 mmol)를 천천히 부가하고 10 분 동안 0 °C에서 교반시켰다.　용매를 건조시까지 증발시켰다. 물을 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합시킨 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 및 농축시켜 단일 거울상이성질체로서 크루드 잔사를 얻었다. C14H17Cl2NO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 356.1; 실험치: 356.1.
단계 4. 6-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)모르폴린-3-온
0 °C에서 냉각시킨　테트라하이드로푸란 (4 mL)　내 N-[2-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-2-하이드록시에틸]-2-클로로아세트아미드 (170 mg, 0.50 mmol)　(단계 3으로부터의 단일 거울상이성질체)의 용액에, 소듐 하이드라이드 (미네랄 오일 내 60% 분산액; 39 mg, 1.0 mmol)의 혼합물을 부가하고 1 시간 동안 교반시켰다. 반응을 물로 중단시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 조합시킨 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 및 농축시켜 단일 거울상이성질체로서 크루드 잔사를 얻었다, 61 mg, 41%. C14H17ClNO4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 298.1; 실험치: 298.1.
단계 5. 6-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]모르폴린-3-온
메탄올 (2 mL) 내 6-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)모르폴린-3-온 (27 mg, 0.090 mmol)　(단일 단계 4로부터의 거울상이성질체)의 용액에 소듐 테트라하이드로보레이트 (6.8 mg, 0.18 mmol)를 0 °C에서 부가하고 1 시간동안 교반시켰다. 분취용 LCMS에 의한 정제에 의해 (pH 10) 소정의 화합물을 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 얻었다, 20 mg, 76%. C14H17ClNO3에 대해 계산된 LCMS (M-OH)+: m/z = 282.1; 실험치: 282.1.
단계 6. 6-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]모르폴린-3-온
티오닐 클로라이드 (15 μL, 0.21 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (10.0 μL)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시켰다. 메틸렌 클로라이드 (1.0 mL) 내 6-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]모르폴린-3-온 (19.0 mg, 0.0634 mmol)　(단계 5로부터의 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물)의 용액을 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 소듐 바이카보네이트, 물, 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 화합물을 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 얻었다, 19 mg, 94%. C14H17ClNO3에 대해 계산된 LCMS (M-Cl)+: m/z = 282.1; 실험치: 282.1.
단계 7. 6-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}모르폴린-3-온
N,N-디메틸포름아미드 (0.19 mL) 내 6-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]모르폴린-3-온 (19.0 mg, 0.0597 mmol)　(단계 6으로부터의 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물) 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (11 mg, 0.072 mmol), 세슘 카보네이트 (29 mg, 0.090 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (0.99 mg, 0.006 mmol)의 혼합물을 140 °C에서 1 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 에테르로 희석하고, 물로 세척하고, 농축시키고 RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하는 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (pH 10) 2.5 mg, 피크 1의 10%을 얻었다 (단일 거울상이성질체, 체류 시간 10.15 min): C20H24ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 431.2; 실험치: 431.1, 및 2.7 mg, 10%의 피크 2 (단일 거울상이성질체, 체류 시간 10.76 min): C20H24ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 431.2; 실험치: 431.1.
실시예 325. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온
단계 1. 5-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-1,3-옥사졸리딘-2-온
테트라하이드로푸란 (2.5 mL) 내 tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트 (140 mg, 0.40 mmol) (실시예 324 단계 2피크 1로부터, 단일 거울상이성질체)의 용액에,　N,N-디이소프로필에틸아민 (0.35 mL, 2.0 mmol)　및 N,N-카보닐디이미다졸 (130 mg, 0.80 mmol). 반응을 70 °C에서 10 분 동안 환류시켰다. 반응을 건조시까지 증발시켰다. 헥산 내 (0-50%) 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 단일 거울상이성질체로서 얻었다, 78 mg, 69%. C13H15ClNO4 에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 284.1; 실험치: 284.1.
단계 2. 5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온
메탄올 (1 mL) 내 5-(3-아세틸-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐)-1,3-옥사졸리딘-2-온 (21 mg, 0.072 mmol)　(단계 1로부터의 단일 거울상이성질체)의 용액에 소듐 테트라하이드로보레이트 (5.5 mg, 0.14 mmol)를 0 °C에서 부가하였다. 상기 혼합물을 0 °C에서　1 시간 동안 교반시켰다. 이를 메탄올로 희석하고 pH 10 완충제를 사용하는 분취용 LCMS 상에서 정제하여 소정의 화합물을 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 얻었다, 17 mg, 83%. C13H15ClNO3에 대해 계산된 LCMS (M-OH)+: m/z = 268.1; 실험치: 268.1.
단계 3. 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온
시아누릭 클로라이드 (16 mg, 0.084 mmol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (15 μL)의 혼합물을 실온에서 10 분 동안 교반시켰다. 메틸렌 클로라이드 (0.3 mL)　내 5-[3-클로로-5-(1-하이드록시에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (16 mg, 0.056 mmol)　(두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물 단계 2로부터)의 용액을 부가하고 상기 반응을 실온에서 밤새 교반시켰다. 티오닐 클로라이드 (12 μL, 0.17 mmol)를 부가하고 10 min 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 포화 소듐 바이카보네이트, 물, 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켜 소정의 화합물을 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 얻었다, 17 mg, 100%. C13H16Cl2NO3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 304.0; 실험치: 304.1.
단계 4. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-메톡시-6-메틸페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온
N,N-디메틸포름아미드 (0.18 mL) 내 5-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-메톡시-2-메틸페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (17 mg, 0.056 mmol)　(단계 3으로부터의 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물) 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (10 mg, 0.067 mmol), 세슘 카보네이트 (27 mg, 0.084 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (0.93 mg, 0.0056 mmol)의 혼합물을 140 °C에서 1 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 에테르로 희석하고, 물로 세척하고, 농축시키고 분취용 LCMS에 의해 정제하여　(pH 10) 소정의 화합물을 두 개의 부분입체이성질체의 라세미 혼합물로서 얻었다, 2.2 mg, 9%; C19H22ClN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 417.1; 실험치: 417.1.
실시예 345-348. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 1. 1-(5-클로로-2-에톡시-3-아이오도-4-메틸페닐)에탄올
톨루엔 (190 mL)　내 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온 (20.0 g, 58.4 mmol; 실시예 212, 단계 1)　및 1,2-에탄디올 (6.5 mL, 120 mmol)의 용액을 p-톨루엔설폰산 1수화물 (1.1 g, 5.8 mmol)로 처리하였다. 플라스크를 Dean-Stark 트랩으로 피팅하고 이를 체로 충전하고, 3 h 동안 환류시켰다. 상기 반응 혼합물을 냉각시키고 얼음 냉각된 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (250 mL)에 부가하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 식염수로 세척하고,　소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 오렌지색 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트를 사용하여 (0% - 20%) 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 얻었다 (22 g, 99%). C12H14ClFIO3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 387.0; 실험치: 386.9.
단계 2. 에틸 (2E)-3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]아크릴레이트
1,4-디옥산 (230 mL) 및 물 (110 mL)　내 2-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)-2-메틸-1,3-디옥솔란 (22 g, 58 mmol) (단계 1로부터), 에틸 (2E)-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)아크릴레이트 (16 mL, 70 mmol), 및 포타슘 카보네이트 (24 g, 170 mmol)의 혼합물을 10분 동안 질소로 탈기시켰다. 상기 반응 혼합물을 [1,1'-비스 (디페닐포스피노\)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (2.4 g, 2.9 mmol) 와의 복합체로 처리하고, 다시 10분 동안 질소로 탈기시키고, 및 80 °C에서 2시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을
셀라이트를 통해 여과하고 에틸 아세테이트 (300 mL)로 세척하였다. 여액을 물 (400 mL) 내로 부었다. 수층을 분리하고 부가적 에틸 아세테이트 (300 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 갈색 고체까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트 (0% - 30%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 소정의 생성물을 얻었다 (20 g, 96%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.70 (dd, J = 16.5, 0.9 Hz, 1H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.10 - 3.99 (m, 2H), 3.91 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.87 - 3.76 (m, 2H), 1.73 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.33 (t, J = 7.1 Hz, 3H). C17H21ClFO5 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 359.1; 실험치: 359.1.
단계 3. 에틸 3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]-4-니트로부타노에이트
니트로메탄 (100 mL) 내 에틸 (2E)-3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]아크릴레이트 (10 g, 28 mmol) (단계 2로부터) 용액을 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔 (4.6 mL, 31 mmol)로 처리하고 60 °C에서 15 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (400 mL) 내로 붓고 에틸 아세테이트(2 x 300 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및 크루드 오렌지색 오일까지 농축시켰다. 크루드 물질을 헥산 내 에틸 아세테이트 (0% - 30%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 소정의 생성물을 거울상이성질체의 혼합물로서 얻었다 (10.4 g, 89%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.82 (ddd, J = 12.5, 7.6, 1.4 Hz, 1H), 4.68 (dd, J = 12.5, 7.2 Hz, 1H), 4.54 - 4.40 (m, 1H), 4.15 - 3.90 (m, 6H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 2.85 (ddd, J = 16.0, 8.6, 1.4 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 16.1, 6.2 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.47 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H). C18H24ClFNO7에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 420.1; 실험치: 420.1.
단계 4. 거울상이성질체 4-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]피롤리딘-2-온
에탄올 (16 mL) 내 에틸 3-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]-4-니트로부타노에이트 (1.0 g, 2.4 mmol)의 현탁액　(단계 3로부터)를 데워 상기 고체를 용해시켰다. 용액을 다시 주변 온도까지 냉각시키고, 질소로 탈기시키고, 및 물 (1.5 mL) 내2800 Raney Nickel의 슬러리로 처리하였다. 상기 반응 혼합물을 다시 질소로 탈기시키고 수소 풍선으로 3 h 동안 수소화하였다. 상기 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 농축시켜 중간체 아미노 에스테르를 얻었다 (0.93 g, 100%). 중간체 아미노 에스테르를 톨루엔 (12 mL)　내에 용해시키고 110 °C에서 12 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 주변 온도까지 냉각시키고, 이 온도에서 고체를 용액으로부터 침전시켰다. 이 혼합물을 0 °C까지 냉각시키고, 30 min 동안 교반시켰다, 여과하고, 차가운 톨루엔로 세척하고, 건조시키고 소정의 생성물을 거울상이성질체의 혼합물로서 얻었다 (0.61 g, 75%). C16H20ClFNO4에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 344.1; 실험치: 344.1. 거울상이성질체의 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 개별 거울상이성질체를 피크 1 및 피크 2로서 얻었다 (RT = 5.39 min 및 7.01 min, 각각; Phenomenex Lux Cellulose C-1, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 mL/min에서 헥산 내 20% 에탄올로 용리하면서).
단계 5. 4-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온의 거울상이성질체
단계 4로부터의 분리된 거울상이성질체를 각각 개별적으로 최종 화합물까지 처리하였다. 메탄올 (17 mL) 내 4-3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)페닐]피롤리딘-2-온 (1.7 g, 5.0 mmol) (단계 4로부터)의 용액을 물 내 6.0 M 수소 클로라이드로 한방울씩 처리하고 (11 mL, 69 mmol) 20 °C 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 한방울씩 얼음 냉각된 포화 소듐 바이카보네이트 용액 (75 ml)에 부가하고 에틸 아세테이트 (2 x 100 ml)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 소정의 생성물을 얻었고 [피크 1로부터 (1.5 g, 99%); 피크 2로부터 (1.5 g, 99%)] 이를 추가 정제 없이 사용하였다. 피크 1로부터: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.16 - 3.99 (m, 1H), 3.83 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.65 - 3.54 (m, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.33 (dd, J = 16.8, 8.4 Hz, 1H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C14H16ClFNO3 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 300.1; 실험치: 300.0. 피크 2로부터: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.13 - 4.00 (m, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 1H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.32 (ddd, J = 16.9, 8.4, 1.6 Hz, 1H), 1.30 (t, J = 7.0 Hz, 3H). C14H16ClFNO3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 300.1; 실험치: 300.1.
단계 6. 4-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 5로부터의 거울상이성질체를 개별적으로 최종 생성물까지 각각 처리하였다. 0 °C에서 질소 대기 하에서 무수 메탄올 (6.7 mL) 내 4-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 (0.402 g, 1.34 mmol) (단계 5로부터)의 용액을 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.10 g, 2.7 mmol)로 처리하고 0° C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물로 0 °C에서 중단시키고 교반하면서 물 (50 mL)/에틸 아세테이트 (100 mL) 내로 부었다. 상기 혼합물을 주변 온도까지 데우고 수층을 분리하고 부가적 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을　식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 백색 발포물을 얻었다. 크루드 물질을 디클로로메탄 내 아세토니트릴 (7% 메탄올을 함유하는) (0% - 100%)을 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다 [피크 1로부터 (0.40 g, 99%); 피크 2로부터 (0.40 g, 99%)]. 피크 1로부터: C14H18ClFNO3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 302.1; 실험치: 302.0. 피크 2로부터: C14H18ClFNO3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 302.1; 실험치: 302.1.
단계 7. 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 6으로부터의 부분입체이성질체의 혼합물을 개별적으로 최종 생성물까지 각각 처리하였다. 메틸렌 클로라이드 (12 mL) 내 4-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]피롤리딘-2-온 (0.41 g, 1.4 mmol)　(단계 6로부터)의 용액을 N,N-디메틸포름아미드 (0.011 mL, 0.14 mmol)　이후 티오닐 클로라이드 (0.21 mL, 2.9 mmol)로 한방울씩 처리하고 20 °C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 한방울씩 얼음 냉각된 포화 소듐 바이카보네이트 용액에 부가하고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 클로라이드 제거로부터 형성된17-18%의 스티렌과 함께 소정의 생성물을 얻었다 [피크 1로부터 (0.38 g, 87%); 피크 2로부터 (0.39 g, 89%)]. 이들 혼합물을 추가 정제 없이 사용하였다. 피크 1로부터: C14H17Cl2FNO2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 320.1; 실험치: 320.0. 피크 2로부터: C14H17Cl2FNO2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 320.1; 실험치: 320.0.
단계 8. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}피롤리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 7로부터의 부분입체이성질체의 혼합물을 개별적으로 최종 생성물까지 각각 처리하였다. N,N-디메틸포름아미드 (7.4 mL)　내 4-[3-클로로-5-(1-클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]피롤리딘-2-온 (0.36 g, 1.1 mmol) (단계 7로부터), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.19 g, 1.3 mmol),　세슘 카보네이트 (0.54 g, 1.7 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (18 mg, 0.11 mmol)의 혼합물을 100 oC에서 4.5 h 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물 (30 ml) 내로 붓고 에틸 아세테이트로 추출하고 (3 x 50 mL) 부분입체이성질체의 혼합물 ((S)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온; (R)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온; (S)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온; 및 (R)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온)을 얻었다. 부분입체이성질체의 혼합물을 분취용 LCMS에 의해 정제하여 (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 60 mL/min의 유속에서) 소정의 생성물을 얻었다 [피크 1로부터 피크 A (화합물 345) (0.13 g, 54%) 및 피크 B (화합물 346) (0.11 g, 46%)를 분리하고; 피크 2로부터 피크 A (화합물 347) (0.15 g, 63%) 및 피크 B (화합물 348) (0.14 g, 55%)를 분리]. 화합물 346: 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (br s, 1H), 6.23 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.05 - 3.90 (m, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H), 3.63 - 3.53 (m, 1H), 3.29 - 3.20 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.38 - 2.21 (m, 1H), 1.70 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.39 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C20H23ClFN6O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 433.2; 실험치: 433.1. 화합물 347: 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.26 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 1H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.84 - 3.77 (m, 1H), 3.61 - 3.53 (m, 1H), 3.27 - 3.22 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.30 (dd, J = 18.1, 8.6 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C20H23ClFN6O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 433.2; 실험치: 433.1.
실시예 349-352. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴의 부분입체이성질체
단계 1. 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴의 거울상이성질체
디메틸 설폭사이드 (1.5 mL) 내 4-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 (0.20 g, 0.67 mmol) (실시예 345, 단계 5로부터) 및 소듐 시아나이드 (0.057 g, 1.2 mmol)의 라세미 혼합물을 80 °C에서 3 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 물 (35 mL) 내로 붓고 에틸 아세테이트 (2 x　50 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 크루드 잔사를 얻었다. 크루드 물질을 헥산 내 에테르 (10% 메탄올을 함유하는) (0% - 100%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 거울상이성질체의 혼합물로서 얻었다 (0.15 g, 71%). C15H16ClN2O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 307.1; 실험치: 307.0. 거울상이성질체의 혼합물을 카이랄 HPLC에 의해 분리하여 개별 거울상이성질체를 피크 1 및 피크 2로서 얻었다 (RT = 5.00 min 및 10.4 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 mL/min에서 헥산 내 60% 에탄올로 용리하면서).
단계 2. 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴의 부분입체이성질체
단계 1로부터의 거울상이성질체를 개별적으로 최종 생성물까지 각각 처리하였다. 질소 대기 하에서 0 °C에서 무수 메탄올 (14 mL) 내 4-아세틸-6-클로로-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴 (피크 1로부터: 0.83 g, 2.7 mmol; 피크 2로부터: 0.86 g, 2.8 mmol)의 용액을 소듐 테트라하이드로보레이트 (0.20 g, 5.4 mmol)로 처리하고 0° C에서 30분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 0 °C에서 물로 중단시키고 물 (50 mL)/에틸 아세테이트 (100 mL) 내로 교반하면서 부었다. 상기 혼합물을 주변 온도까지 데우고 수층을 분리하고 부가적 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을　식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 소정의 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다 [피크 1로부터 (0.83 g, 99%); 피크 2로부터 (0.87 g, 99%)]. 피크 1로부터: C15H18ClN2O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 309.1; 실험치: 309.1. 피크 2로부터: C15H18ClN2O3에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 309.1; 실험치: 309.1.
단계 3. 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴의 부분입체이성질체
단계 2로부터 부분입체이성질체의 혼합물을 개별적으로 최종 생성물까지 각각 처리하였다. 메틸렌 클로라이드 (23 mL) 내 6-클로로-3-에톡시-4-(1-하이드록시에틸)-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴 (피크 1로부터: 0.83 g, 2.7 mmol; 피크 2로부터: 0.87 g, 2.8 mmol)의 용액을 N,N-디메틸포름아미드 (0.021 mL, 0.27 mmol) 이후 티오닐 클로라이드 (0.490 mL, 6.72 mmol)로 한방울씩 처리하고 20 °C에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 한방울씩 얼음 냉각된 포화 소듐 바이카보네이트 용액에 부가하고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 소정의 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다 [피크 1로부터 (0.85 g, 97%); 피크 2로부터 (0.90 g, 98%)]. 이들 혼합물을 추가 정제 없이 사용하였다. 피크 1로부터: C15H17Cl2N2O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 327.1; 실험치: 327.1. 피크 2로부터: C15H17Cl2N2O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 327.1; 실험치: 327.1.
단계 4. 4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴의 부분입체이성질체
단계 3으로부터의 부분입체이성질체의 혼합물을 각각 개별적으로 처리하였다. N,N-디메틸포름아미드 (17 mL, 220 mmol)　내 6-클로로-4-(1-클로로에틸)-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴 (피크 1로부터: 0.85 g, 2.6 mmol; 피크 2로부터: 0.89 g, 2.7 mmol), 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (0.46 g, 3.1 mmol),　세슘 카보네이트 (1.3 g, 3.9 mmol)　및 포타슘 아이오다이드 (43 mg, 0.26 mmol)의 혼합물을 90 oC에서 3 h 동안 가열하였다.
상기 반응 혼합물을 물 (100 mL)/에틸 아세테이트 (100 mL) 내로 붓고 셀라이트를 통해 여과하고 흑색 고체를 제거하였다. 수층을 분리하고 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 조합시킨 유기 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고, 및　농축시켜 백색 발포물을 얻었다. 크루드 물질을 디클로로메탄 내 메탄올 (0% - 20%)를 사용하여 플래시 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 소정의 생성물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 얻었다 [피크 1로부터 (0.49 g, 43%); 피크 2로부터 (0.53 g, 44%)]. 피크 1로부터 부분입체이성질체의 분석 카이랄 HPLC의 분석은 에피머화로 인해 소정의 두 개의 피크 대신 네 개의 피크의 혼합물을 밝혀냈다. 피크 2로부터 부분입체이성질체의 분석은 또한 네 개의 피크를 밝혀냈다. 두 세트의 혼합물을 모두 조합시키고 카이랄 HPLC를 통해 정제하여 네 개의 개별 피크를 얻었다 (RT = 6.41 min, 8.13 min, 9.93 min, 14.4 min; Phenomenex Lux Cellulose C-2, 21.2 x 250 mm, 5 미크론 입자 크기, 18 mL/min에서 헥산 내 60% 에탄올로 용리하면서). 피크 1 (화합물 351), 피크 2 (화합물 349), 피크 3 (화합물 352), 및 피크 4 (화합물 350)의 화합물을 이후 실시예 A3 및 B2의 어세이에서 시험하였다. 화합물 349: 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 1H), 4.00 - 3.91 (m, 1H), 3.90 - 3.81 (m, 1H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.42 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 1.74 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.43 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C21H23ClN7O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 440.2; 실험치: 440.2. 화합물 352: 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.26 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 1H), 3.97 - 3.82 (m, 2H), 3.67 - 3.59 (m, 1H), 3.49 - 3.40 (m, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 3H), 1.73 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 6.9 Hz, 3H). C21H23ClN7O2에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 440.2; 실험치: 440.2.
실시예 353 및 354. 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 1: 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-비닐페닐)에탄온
1,4-디옥산 (200 mL) 및 물 (100 mL) 내 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-아이오도페닐)에탄온 (13.3 g, 38.8 mmol) (실시예 139, 단계 1로부터), 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (7.9 mL, 46 mmol), [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II), 디클로로메탄 (1:1) (1.0 g, 1.0 mmol)와의 복합체 및 포타슘 카보네이트 (16 g, 120 mmol)의 혼합물을 80 °C에서 2 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온까지 냉각시키고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 농축시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-30%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다, 7.0 g, 74%. C12H13ClFO2에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 243.0; 실험치: 243.1.
단계 2: 1-[5-클로로-3-(1,2-디하이드록시에틸)-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온
AD-mix-alpha (5.8 g, 7.3 mmol) (Aldrich #392758)을 물 (21 mL)과 함께 15 분 동안 tert-부틸 알콜 (21 mL) 내에 교반시켰다. 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-비닐페닐)에탄온 (1.0 g, 4.1 mmol)　(단계 1로부터)를 부가하고 상기 현탁액을 16 시간 동안 교반시켰다. 소듐 설파이트 (6.2 g, 49 mmol)를 부가하고 상기 현탁액을 15 분 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-80%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 라세미 혼합물로서 얻었다, 900 mg, 80%. 헥산 내 20% 에탄올을 사용하여 18 mL/min의 유속에서 Phenomenex Lux Cellulose C-2, 21.2 x 250 mm (Chiral Technologies), 5 미크론 입자 크기 상에서의 카이랄 정제에 의해, 피크 1 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 7.88 분) 및 피크 2 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 11 분)를 얻었고; 소정의 거울상이성질체는 피크 2였다. C12H13ClFO3에 대해 계산된 LCMS (M-OH)+: m/z = 259.1; 실험치: 259.1.
단계 3: 1-[3-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-1-하이드록시에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온
1-[5-클로로-3-(1,2-디하이드록시에틸)-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온 (700 mg, 2 mmol) (단계 2로부터, 피크 2)을 N,N-디이소프로필에틸아민 (4.0 mL, 23 mmol)와 함께 1,2-디클로로에탄 (6 mL) 내에 현탁시키고 1,2-디클로로에탄 (7.6 mL) 내 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드의 1.0 M 용액을 부가하였다. 상기 혼합물을 80 °C까지 3 시간 동안 가열하고 실온까지 냉각시켰다. 증발 및 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-50%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다 800 mg, 80%. C18H28ClFO4SiNa에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 413.1; 실험치: 413.1.
단계 4: 1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸 메탄설포네이트
1-[3-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}-1-하이드록시에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온 (700 mg, 2.0 mmol) (단계 3로부터)을 트리에틸아민 (2.0 mL, 14 mmol) 및 메탄설폰무수물 (670 mg, 3.8 mmol)와 함께 1,2-디클로로에탄 (15 mL) 내에 실온에서 1.5 시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 식염수 내로 붓고 디클로로메탄으로 추출하였다. 추출물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시키고 소정의 화합물을 얻었다 830 mg, 100%. C18H27ClFO3Si에 대해 계산된 LCMS (M-OMs)+: m/z = 373.1; 실험치: 373.1.
단계 5: 1-[3-(1-아지도-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온
1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸 메탄설포네이트 (0.83 g, 1.77 mmol) (단계 4로부터)을 디메틸 설폭사이드 (10 mL) 내에 현탁시키고 소듐 아지드 (0.12 g, 1.8 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 50 °C까지 1 시간 동안 가열하고 실온까지 냉각시켰다. 상기 혼합물을 식염수 내로 붓고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시키고 소정의 화합물 736 mg, 100%을 얻었다. C18H27ClFN3O3SiNa에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 438.1; 실험치: 438.1.
단계 6: 1-[3-(1-아미노-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온
1-[3-(1-아지도-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온 (750 mg, 1.8 mmol) (단계 5로부터)을 물 (0.33 mL)과 함께 테트라하이드로푸란 (10 mL) 내에 교반시키고 트리페닐포스핀을 부가하였다. 상기 혼합물을 60 °C까지 2 시간 동안 가열하고 실온까지 냉각시켰다. 식염수를 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시키고 소정의 화합물 700 mg, 100 %을 얻었다. C18H30ClFNO3Si에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 390.2; 실험치: 390.2.
단계 7: tert-부틸 (1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)카바메이트
1-[3-(1-아미노-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-클로로-2-에톡시-4-플루오로페닐]에탄온 (700 mg, 2.0 mmol) (단계 6로부터)을 디-tert-부틸디카보네이트 (780 mg, 3.6 mmol)와 함께 테트라하이드로푸란 (30 mL) 내에 현탁시키고 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.94 mL, 5.4 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반시켰다. 식염수를 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-30%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물 550 mg, 60 %을 얻었다. C23H37ClFNO5SiNa에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 512.2; 실험치: 512.2.
단계 8: tert-부틸 [1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트
Tert-부틸 (1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)카바메이트 (500 mg, 1.0 mmol) (단계 7로부터)을 테트라하이드로푸란 (10 mL) 내에 교반시키고 테트라하이드로푸란 (1.5 mL) 내 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드의 1.0 M 용액을 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 30 분 동안 교반시키고 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-50%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다 238 mg, 60 %. C17H23ClFNO5Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 398.1; 실험치: 398.1.
단계 9: 4-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-1,3-옥사졸리딘-2-온
tert-부틸 [1-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트 (234 mg, 0.62 mmol) (단계 8로부터)를 1,2-디클로로에탄 (12 mL) 내에 용해시키고 톨루엔 (0.93 mL) 내 2.0 M 포스겐의 용액을 부가하였다. 상기 혼합물을 80 °C까지 1.5 시간 동안 가열하였다. 증발 및 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-85%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 얻었다, 175 mg, 93%. C13H14ClFNO4에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 302.1; 실험치: 302.1.
단계 10: 4-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온
4-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-1,3-옥사졸리딘-2-온 (175 mg, 0.58 mmol)을 메탄올 (10 mL) 내에 0 °C에서 교반시키고 소듐 테트라하이드로보레이트 (33 mg, 0.87 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반시키고 증발시켰다. 물을 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시키고 약 1:1 부분입체이성질체의 혼합물을 얻었다, 175 mg, 99%. C13H15ClFNO4Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 326.1; 실험치: 326.1.
단계 11: 4-[3-클로로-5-(클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온
4-[3-클로로-6-에톡시-2-플루오로-5-(1-하이드록시에틸)페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (150 mg, 0.49 mmol) (단계 10로부터)을 N,N-디메틸포름아미드 (96 μL)와 함께 디클로로메탄 (4 mL) 내에 교반시키고 티오닐 클로라이드 (110 μL, 1.5 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 증발시켰다. 물을 부가하고 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시키고 소정의 화합물을 얻었다, 159 mg, 100%.
단계 12: 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온
4-[3-클로로-5-(클로로에틸)-6-에톡시-2-플루오로페닐]-1,3-옥사졸리딘-2-온 (160 mg, 0.50 mmol) (단계 1로부터1)을 세슘 카보네이트 (324 mg, 0.99 mmol)와 함께 N,N-디메틸포름아미드 (21 mL) 내에 현탁시키고 3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-아민 (89 mg, 0.60 mmol)를 부가하였다. 상기 혼합물을 80 °C까지 1.5 시간 동안 가열하고 실온까지 냉각시켰다. 상기 혼합물을 물로 희석하고 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 식염수로 세척하고, 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. RP-HPLC (XBridge C18 칼럼, 0.1% 암모늄 하이드록사이드를 함유하는 아세토니트릴/물의 구배로 용리하면서, 30 mL/min의 유속에서)을 사용하는 분취용 LCMS에 의한 정제에 의해 (pH 10) 상기 두 개의 부분입체이성질체 (피크 1 [화합물 353] Rt = 4.9 min. 및 피크 2 [화합물 354] Rt = 5.6 min.)을 분리시켰고; 화합물 354을 소정의 단일 거울상이성질체로서 제공하고, 28 mg, 13%. 피크 2: C19H21ClFN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 435.1; 실험치: 435.1. 1H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 8.15 (s, 1 H), 7.62 (m, 1 H), 6.31 (m, 1 H), 5.39 (m, 1 H), 4.79 (m, 1 H), 4.40 (m, 1 H), 3.95 (m, 1 H), 3.80 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 1.80 (m, 3 H), 1.40 (m, 3 H).
실시예 355-358. 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온의 부분입체이성질체
단계 1: tert-부틸 [2-(3-아세틸-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)-2-하이드록시에틸]카바메이트
물 (10 mL)　내 0.2 M 오스뮴 테트라옥사이드를 아세토니트릴 (210 mL)　내 tert-부틸 [(4-클로로벤조일)옥시]카바메이트 (Lawrence Harris, J. Org.Chem, 2011, 76, 358-372). (19 g, 70 mmol)의 용액에 부가하고 10 분 동안 교반시켰다. 아세토니트릴 (210 mL)　내 용액으로서 1-(5-클로로-2-에톡시-4-플루오로-3-비닐페닐)에탄온 (11.2 g, 46 mmol)　(실시예 353, 단계 1로부터)를 카바메이트 용액에 부가하고 이후 물 (50 mL)를　부가하고　상기 반응을 3 시간 동안 실온에서 교반시켰다. 반응을 물 (240 mL) 내 포화 10 M 디포타슘 디설파이트로 중단시키고 5 분 동안 교반시켰다. 물을 부가하고 상기 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 추출물을 포화 소듐 바이카보네이트 용액으로 세척하고, 식염수 및 소듐 설페이트 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켰다. 헥산 내 에틸 아세테이트 (0-100%)을 사용하여 실리카겔 상에서 정제에 의해 소정의 화합물을 라세미 혼합물로서 얻었다, 16.6 g, 95%. C17H23ClFNO5Na에 대해 계산된 LCMS (M+Na)+: m/z = 398.1; 실험치: 398.0.
단계 2: 5-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온
소정의 단일 거울상이성질체 (피크 3) 를, 이 실시예에서 단계 1로부터의 중간체가 라세미였고 및 따라서 네 개의 부분입체이성질체의 최종 분리가 단계 12에서 발생하였다는 것을 제외하고 실시예 353 (단계 8-12)에서와 동일 절차를 사용하여 제조하였다. 헥산 내 30% 에탄올을 사용하는 18 mL/min의 유속에서 Phenomenex Lux Cellulose C-4, 21 x 250 mm (Chiral Technologies), 5 미크론 입자 크기 상에서의 카이랄 정제에 의해, 피크 1: 화합물 355 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 12.7 분), 피크 2: 화합물 356 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 14.2 분), 피크 3: 화합물 357 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 20.3 분), 및 피크 4: 화합물 358 (단일 거울상이성질체) (체류 시간 = 28.9 분);을 얻었고 가장 활성인 거울상이성질체는 피크 3이었다. C19H21ClFN6O3에 대해 계산된 LCMS (M+H)+: m/z = 435.1; 실험치: 435.1. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.15 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.71 (d, 1 H), 7.26 (bs, 1 H), 6.23 (m, 1 H), 5.84 (t, 1 H), 3.92 (m, 1 H), 3.83 (m, 1 H), 2.52 (s, 3 H), 1.75 (d, 3 H), 1.40 (m, 3 H).
실시예 361-363. 4-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-(2-하이드록시프로필)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴의 부분입체이성질체
실시예 269의 입체화학에 기초하여, 각각의 부분입체이성질체의 입체화학은 4-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-((S)-2-하이드록시프로필)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 361), 4-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-((R)-2-하이드록시프로필)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 362), 및 4-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-6-클로로-2-(1-((R)-2-하이드록시프로필)아제티딘-3-일)-3-메톡시벤조니트릴 (실시예 363) (아래에 나타낸 구조) 라고 생각된다
실시예 361의 합성:
(R)-4-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-2-(아제티딘-3-일)-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (6.00 g, 14.3 mmol)에 메탄올 (72 mL)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 현탁액에 (S)-(-)-메틸옥시란 (2.01 mL, 28.6 mmol)을 실온에서 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 19 h 동안 교반시켰다. 부가적 (S)-(-)-메틸옥시란 (0.50 mL, 7.2 mmol)를 부가하고 교반을 부가적 시간 동안 계속하였다. 상기 반응 혼합물에 물 (280 mL)을 부가하고 흐린 용액을 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드 (300 mL x 4)로 추출하였다. 유기 층을 조합시키고 식염수로 세척하고 (50 mL) 및 농축시켰다. 크루드 생성물을 메틸렌 클로라이드 내 MeOH (약 0.5% 암모늄 하이드록사이드를 함유하였다)로 용리된 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 상기 분획은 생성물을 함유하였고 수집하고 건조시까지 증발시켰다. 이 잔사를 추가로 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 표제 화합물의 샘플을 NMR 분광학 및 질량 분광법에 의해 분석하였고 및 다음 데이터를 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.32 (br s, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.08 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.38 - 2.19 (m, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm. C22H27ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.2.
실시예 362의 합성:
(S)-4-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-2-(아제티딘-3-일)-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (293.0 mg, 0.73 mmol)에 메탄올 (3.7 mL)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 현탁액에 (R)-(+)-메틸옥시란 103 μL, 1.46 mmol)을 실온에서 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 19 h 동안 교반시켰다. 부가적 (R)-(+)-메틸옥시란 (51.3 μL, 0.73 mmol)를 부가하고 교반을 부가적 2.5 시간 동안 계속하였다. 상기 반응 혼합물에 물 (14 mL)을 부가하고 흐린 용액을 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드 (4 x 16 mL)로 추출하였다. 유기 층을 조합시키고 식염수로 세척하고 (50 mL) 및 농축시켰다. 크루드 생성물을 메틸렌 클로라이드 내 MeOH (약 0.5% 암모늄 하이드록사이드를 함유하였다)로 용리된 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 상기 분획은 생성물을 함유하였고 수집하고 건조시까지 증발시켰다. 이 잔사를 추가로 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 표제 화합물의 샘플을 NMR 분광학 및 질량 분광법에 의해 분석하였고 및 다음 데이터를 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.30 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.37 (br s, 1H), 4.09 (m, 2H), 3.93 (m, 2H), 3.65 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.12 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.39 - 2.26 (m, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm. C22H27ClN7O2 에 대한 LCMS (M+H)+: m/z = 456.2; 실험치: 456.2.
실시예 363의 합성:.
(R)-4-(1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-2-(아제티딘-3-일)-6-클로로-3-메톡시벤조니트릴 (6.0 g, 14.3 mmol)에 메탄올 (72 mL)를 부가하였다. 결과로서 얻어진 현탁액에 (R)-(+)-메틸옥시란 (2.01 mL, 28.6 mmol)을 실온에서 부가하고 상기 혼합물을 실온에서 18 h 동안 교반시켰다. 상기 반응 혼합물에 물 (280 mL)을 부가하고 흐린 용액을 교반시켰다. 상기 혼합물을 메틸렌 클로라이드 (300 mL x 4)로 추출하였다. 유기 층을 조합시키고 식염수로 세척하고 (50 mL) 및 농축시켰다. 크루드 생성물을 메틸렌 클로라이드 내 MeOH (약 0.5% 암모늄 하이드록사이드를 함유하였다)로 용리된 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 상기 분획은 생성물을 함유하였고 수집하고 건조시까지 증발시켰다. 이 잔사를 추가로 분취용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. 표제 화합물의 샘플을 NMR 분광학 및 질량 분광법에 의해 분석하였고 및 다음 데이터를 얻었다. 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.11 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.29 (br s, 2H), 6.24 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 4.11 - 4.00 (m, 1H), 3.98 - 3.90 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.61 - 3.53 (m, 2H), 3.07 (m, 2H), 2.56 (s, 3H), 2.28 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 1.73 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.2 Hz, 3H) ppm.
세 개의 HPLC 방법를 전개시켜 실시예 269의 화합물로부터 입체이성질체를 분리하였다. 방법 A를 전개시켜 실시예 269로부터 실시예 361 부분입체이성질체를 분리하였다. 실시예 269로부터 실시예 361의 체류 시간은 각각 15.7 min 및 11.5 min이다. 크로마토그래피 조건은 표 B1에 기술되어 있다.
방법 B를 전개시켜 실시예 269로부터 실시예 362 부분입체이성질체를 분리하였다. 실시예 269로부터 실시예 362의 체류 시간은 각각 26.4 min 및 21.7 min이다. 크로마토그래피 조건은 표 B2에 기술되어 있다.
방법 C를 전개시켜 실시예 269로부터 세 개의 입체이성질체 실시예 361, 실시예 362 및 실시예 363를 분리하였다. 입체이성질체 실시예 361, 실시예 362 및 실시예 363는 넓은 밴드로서 체류 시간 12.9 min에서 용리하고 반면 실시예 269는 용리하고 14.3 min 체류 시간에서 용리한다. 거울상이성질체, 실시예 363의 수준 추정은 방법 A, B, 및 C로부터의 데이터의 조합에 의해 행해질 수 있다. 크로마토그래피 조건은 표 B3에 기술되어 있다.
실시예 A1: PI3K 효소 어세이
지질 키나제 기질, D-마이오-포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트 (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-디-O-옥타노일글리세릴, 3-O-포스포 연결된 (PIP2), 비오틴화 I(1,3,4,5)P4, PI(3,4,5)P3 검출자 단백질을 포함하는 PI3-키나제 발광 어세이 키트는 Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT)로부터 구입하였다. 도너 및 억셉터 비드를 포함하는 AlphaScreenTM GST 검출 키트는 PerkinElmer Life Sciences (Waltham, MA)로부터 구입하였다. PI3Kδ (p110δ /p85α)는 Millipore (Bedford, MA)로부터 구입하였다. ATP, MgCl2, DTT, EDTA, HEPES 및 CHAPS은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하였다.　
PI3Kδ에 대한 AlphaScreenTM 어세이
키나제 반응은 40 μL의 최종 부피로 Thermo Fisher Scientific로부터 384-웰 REMP 플레이트에서 수행한다. 저해제는 일단 DMSO 내에 시리즈로 희석하고 다른 반응 성분의 부가 이전에 플레이트 웰에 부가한다. 어세이에서 DMSO의 최종 농도는 2%이다. PI3K 어세이는 50 mM HEPES, pH 7.4, 5mM MgCl2, 50 mM NaCl, 5mM DTT 및 CHAPS 0.04%에서 실온에서 수행한다. 반응은 ATP의 부가에 의해 개시하고, 20 μM PIP2, 20 μM ATP, 1.2nM PI3Kδ로 구성된 최종 반응 혼합물은 20 분 동안 배양한다. 10 μL의 반응 혼합물은 이후 ??칭 완충제: 50 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Tween-20 내 5 μL 50nM 비오틴화 I(1,3,4,5)P4로 이동시키고, 이후 25nM PI(3,4,5)P3 검출자 단백질을 함유하는 ??칭 완충제 내에 현탁시킨 AlphaScreenTM 도너 및 억셉터 비드10 μL를 부가한다. 도너 및 억셉터 비드 둘 다의 최종 농도는 20 mg/ml이다. 플레이트 밀봉 후, 플레이트는 어두운 위치에서 실온에서 2 시간 동안 배양한다. 생성물의 활성은 Fusion-alpha 마이크로플레이트　판독기　(Perkin-Elmer) 상에서 결정된다. IC50 결정은 GraphPad Prism 3.0 소프트웨어를 사용하여 저해제 농도의 로그 대 퍼센트 제어 활성의 커브 피팅에 의해 수행한다.
실시예 A2: PI3K 효소 어세이
물질: 지질 키나제 기질, 포스포이노시톨-4,5-비스포스페이트 (PIP2)은 Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT)로부터 구입하였다. PI3K 이소폼 α, β, δ 및 γ은 Millipore (Bedford, MA)로부터 구입하였다. ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS 및 CHAPS은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하였다.
키나제 반응은 24 μL의 최종 부피로 Thermo Fisher Scientific로부터의 투명한-바닥 96-웰 플레이트 내에서 수행한다. 저해제는 먼저 시리즈로 DMSO 내에 희석하고 다른 반응 성분의 부가 이전에 플레이트 웰에 부가한다. 어세이에서 DMSO의 최종 농도는 0.5%이다. PI3K 어세이는 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT 및 CHAPS 0.03%에서 실온에서 수행한다. 50 μM PIP2, 키나제 및 다양한 농도의 저해제를 함유하는 반응 혼합물을 제조한다. 반응은 1000 μM의 최종 농도까지 2.2 μCi [γ-33P]ATP을 함유하는 ATP의 부가에 의해 개시한다. 어세이에서PI3K 이소폼 α, β, δ 및 γ의 최종 농도는 각각 1.3, 9.4, 2.9 및 10.8 nM였다. 반응은 180 분 동안 배양하고 100 μL의 1 M 포타슘 포스페이트 pH 8.0, 30 mM EDTA ??칭 완충제의 부가에 의해 종결한다. 100 μL 분취량의 상기 반응 용액은 이후 96-웰 Millipore MultiScreen IP 0.45 μm PVDF 필터 플레이트 (필터 플레이트는 각각 200 μL 100% 에탄올, 증류수, 및 1 M 포타슘 포스페이트 pH 8.0로 미리 적신다)로 이동시킨다. 필터 플레이트는 진공 하에서 Millipore Manifold 상에서 흡입하고 1 M 포타슘 포스페이트 pH 8.0 및 1 mM ATP을 함유하는18×200 μL 세척 완충제로 세척한다. 흡입 및 블로팅에 의해 건조후, 플레이트는 공기 배양기 3내에서 7 °C에서 밤새 건조시켰다. Packard TopCount 어뎁터 (Millipore)는 이후 각각의 웰 내 120 μL 마이크로신트 20 신틸레이션 칵테일 (Perkin Elmer)의 부가 이후 플레이트에 부착된다. 플레이트 밀봉 후, 생성물의 방사활성은 TopCount (Perkin-Elmer) 상에서의 신틸레이션 카운팅에 의해 결정하였다. IC50 결정은 GraphPad Prism 3.0 소프트웨어를 사용하여 저해제 농도의 로그 대 퍼센트 제어 활성의 커브 피팅에 의해 수행한다.
실시예 A3: PI3Kδ 신틸레이션 근접　어세이
물질
[γ-33P]ATP (10mCi/mL)를 Perkin-Elmer (Waltham, MA)로부터 구입하였다. 지질 키나제 기질, D-마이오-포스파티딜이노시톨 4,5-비스포스페이트 (PtdIns(4,5)P2)D (+)-sn-1,2-디-O-옥타노일글리세릴, 3-O-포스포 연결된 (PIP2), CAS 204858-53-7를 Echelon Biosciences (Salt Lake City, UT)로부터 구입하였다. PI3Kδ (p110δ /p85α)를 Millipore (Bedford, MA)로부터 구입하였다. ATP, MgCl2, DTT, EDTA, MOPS 및 CHAPS를 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하였다.　Wheat Germ Agglutinin (WGA) YSi SPA Scintillation Beads를 GE healthcare life sciences (Piscataway, NJ)로부터 구입하였다.
키나제 반응을 25 μL의 최종 부피로 Thermo Fisher Scientific로부터의 폴리스티렌 384-웰 매트릭스 백색 플레이트에서 수행하였다. 저해제를 먼저 시리즈로 DMSO 내에 희석하고 다른 반응 성분의 부가 이전에 플레이트 웰에 부가한다. 어세이에서 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. PI3K 어세이를 실온에서 20 mM MOPS, pH 6.7, 10 mM MgCl2, 5 mM DTT 및 CHAPS 0.03%에서 수행하였다. 반응을 ATP의 부가에 의해 개시하고, 최종 반응 혼합물은 20 μM PIP2, 20 μM ATP, 0.2 μCi [γ-33P] ATP, 4 nM PI3Kδ로 구성되었다. 반응을 210 min 동안 배양하고 ??칭 완충제: 150mM 포타슘 포스페이트 pH 8.0, 20% 글리세롤. 25 mM EDTA, 400 μM ATP 내에 현탁시킨 40 μL SPA 비드의 부가에 의해 종결하였다. SPA 비드의 최종 농도는 1.0mg/mL였다. 플레이트 밀봉 후, 플레이트를 밤새 실온에서 흔들고 및 1800 rpm에서 10 분 동안 원심분리하였고, 상기 생성물의 방사활성을 TopCount (Perkin-Elmer) 상에서의 신틸레이션 카운팅에 의해 결정하였다. IC50 결정을 GraphPad Prism 3.0 소프트웨어를 사용하여 저해제 농도의 로그 대 퍼센트 제어 활성의 커브 피팅에 의해 수행한다. 본 실시예에 대한 IC50 데이터는 어세이 A3에 의해 결정된 바와 같이 표 2에 제시된다. 실시예 361 및 363에 대한 IC50 데이터는 어세이 A2에 의해 결정되는 바와 같이 표 3에 나타낸다.
* 칼럼 기호 (표 2 및 3에 대한):
+은 ≤ 10 nM을 지칭한다
++은 >10 nM 내지 50 nM을 지칭한다
+++은 >50 nM 내지 200 nM을 지칭한다
++++은 >200 nM 내지 500 nM을 지칭한다
+++++은 >500 nM을 지칭한다
실시예 B1: B 세포 증식 어세이
B 세포를 획득하기 위해, 인간 PBMC은 Ficoll-Hypague (GE Healthcare, Piscataway, NJ) 상 표준 밀도 구배 원심분리에 의해 정상, 약물 유리 도너의 말초 혈액으로부터 분리되고 항-CD19 마이크로비드 (Miltenyi Biotech, Auburn, CA)와 함께 배양하였다. B 세포는 이후 제조자 설명서에 따라 autoMacs (Miltenyi Biotech)을 사용하여 양성 면역분류에 의해 정제한다.
정제된 B 세포 (2×105/웰/200 μL)은 상이한 양의 시험 화합물의 존재 하에서 RPMI1640, 10% FBS 및 염소 F(ab')2 항-인간 IgM (10 μg/ml) (Invitrogen, Carlsbad, CA) 내 96-웰 매우 낮은 결합 플레이트 (Corning, Corning, NY) 내에서 3일 동안 배양한다. PBS 내 [3H]-티미딘 (1 μCi/웰) (PerkinElmer, Boston, MA)는 이후 부가적 12 시간 동안 B　세포 배양물에 부가하고 이후 포함된 방사활성을 GF/B 필터 (Packard Bioscience, Meriden, CT)을 통해 물과 함께 여과에 의해 분리하고 TopCount (Packard Bioscience)로 액체 신틸레이션 카운팅에 의해 측정한다.
실시예 B2: 파이퍼 세포 증식 어세이
파이퍼 세포주 (확산 큰 B 세포 림프종)은 ATCC (Manassas, VA)로부터 구입하고 추천된 배지 (RPMI 및 10% FBS) 내에서 유지한다. 상기 화합물의 항-증식 활성을 측정하기 위해, 파이퍼 세포는 시험 화합물의 농도 범위의 존재하 또는 부재하 96-웰 매우 낮은 결합 플레이트 (Corning, Corning, NY)로 배지 (2x103 세포 /웰/ 200 μl당)로 플레이팅한다. 3-4 일 후, PBS 내 [3H]-티미딘 (1 μCi/웰) (PerkinElmer, Boston, MA)는 이후 부가적 12 시간 동안 세포 배양물에 부가하고 이후 포함된 방사활성을 GF/B 필터 (Packard Bioscience, Meriden, CT)을 통해 물과 함께 여과에 의해 분리하고 TopCount (Packard Bioscience)로 액체 신틸레이션 카운팅에 의해 측정한다. 선택화합물에 대한 IC50 데이터를 표 4에 제시한다.
* 칼럼 기호:
+은 ≤ 10 nM을 지칭한다
++은 >10 nM 내지 50 nM을 지칭한다
실시예 C: Akt 인산화 어세이
Ramos 세포 (버키트 림프종으로부터 B 림프구)은 ATCC (Manassas, VA)로부터 얻고 및 RPMI1640 및 10% FBS 내에서 유지한다. 세포 (3×107 세포 /튜브/3 mL RPMI 내)는 37 °C에서2시간 동안 상이한 양의 시험 화합물과 함께 배양하고 이후 염소 F(ab')2 항-인간 IgM (5 μg/mL) (Invitrogen)로 17 분 동안 37 °C 물 배쓰 내에서 자극하였다. 자극된 세포를 4 °C에서 원심분리로 스핀다운하고 전체 세포 추출물을 300 μL 분해 완충제 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA)을 사용하여 제조한다. 결과로서 얻어진 분해물은 초음파처리하고 상청액은 수집한다. 상청액 내 Akt의 인산화 수준은 제조자 설명서에 따라 PathScan 포스포-Akt1 (Ser473) 샌드위치 ELISA 키트 (Cell Signaling Technology)을 사용하여 분석한다.
실시예 D: 림프종의 파이퍼 모델
방법:
암컷 SCID 마우스, (5 내지 8 주의 연령, Charles River Laboratories, Wilmington, MA)를 0.2 mL 살균 식염수 내 1 × 107 종양 세포 (파이퍼, ATCC #CRL-2632, Manassas, VA) 및 매트리겔 (BD Biosciences #354234)와 함께 접종하였다. 접종을 플랭크 상 피하로 수행하였다. 종양 조직 단편 (약 3 mm × 3 mm)를 배양된 세포의 접종 3 내지 6 주 후 수집하고 세포 접종 대신 피하로 이식하였다. 조직 단편을 블런트-팁 겸자를 사용하여 고체 조각으로서 이식하였다. 종양 보유 마우스의 치료를 종양 크기에 따라 종양 접종 후15 내지 25 일에 시작하였다. 동물을 각각의 그룹 내 대략 같은 평균 종양 부피를 얻도록 분류하였다. 모든 그룹 내 최소 평균 종양 부피는 치료 첫날 150 mm3이고 그룹은 7 동물로 구성되었다. 실험 치료제, 실시예 347을 마우스에게 경구로 (PO) 투여하였다. 치료 빈도는 효능을 위해 최소 14 일에 대해 일일 두번이었다. 피하 종양의 크기를 디지털 캘리퍼스를 사용하여 두세번 측정하였다. 종양 부피를 2차원으로 종양을 측정하고 다음 등식을 이용하여 계산하였다: 부피 = [길이 × (폭2)]/2; 여기서 더 큰 숫자가 길이이고 더 짧은 숫자가 폭이다. 다수 종양이 형성된다면, 최종 부피는 동일 등식에 적용되는 개별 종양의 합계이다: 예를 들면, 2 종양; 부피 = {[L1 × (W1)2]/2} + {[L2 x (W2)2]/2}. 종양 성장에 대한 효과는 퍼센트 종양 성장 저해 (%TGI)로 보고되었다. 퍼센트 TGI는 다음 등식으로 계산하였다: (1- (Tx 부피 / 대조구 부피))*100, 여기서 대조구 부피는 주어진 날의 비히클 또는 비처리된 종양 부피이고, Tx 부피는 동일한 날 어느 치료 그룹 종양 부피이다. 치료 및 비히클 대조구 사이의 통계적 차이는 ANOVA: 단일 인자 시험을 사용하여 평가하였다.
결과:
실시예 347를 NHL의 서브타입인 확산 큰 B 세포 림프종의 파이퍼 인간 종양 이종인식 모델 내 단일 물질로서 평가하였다. 파이퍼 암 세포는 시험관 내에서 실시예 347의 항-증식 효과에 민감한 것으로 나타났다. 따라서, 종양 모델을 면역 손상 SCID 마우스 내로 종양 세포의 피하 접종에 기초하여 확립하고 종양-보유 마우스는 14 일 동안 0.3, 1, 3, 또는 10 mg/kg에서 비히클 또는 실시예 347의 일일 경구 투여량을 2회 투여받았다. 실시예 347 치료는 증가하는 투여량와 함께 종양 성장을 22%, 24%, 36%, 및 58% (퍼센트 종양 성장 저해) 저해하였다 (도 2).
본 명세서에서 기술된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형은 이전에 기술로부터 본 업계에서의 숙련가에게 명백하다. 그러한 변형은 또한 첨부된 청구범위의 범위에 속한다고 의도된다. 본 출원서에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물을 포함하는 각각의 참고문헌은 그 전체가 참고로서 본 명세서에 포함된다.

Claims (15)

  1. 하기 식 IV의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 비성의 주변영역 림프종 치료용 약제학적 조성물:

    위의 화학식 IV에서,
    G는 NH, n는 1, 및 V는 O이거나; 또는
    G는 NH, n는 0, 및 V는 CH2이거나; 또는
    G는 O, n는 0 및 V는 NH이고;
    R2는 C1-6 알킬 또는 C1-6 할로알킬이고;
    R4는 할로, OH, CN, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, C1-4 알콕시, 또는 C1-4 할로알콕시이고;
    R5는 할로, OH, CN, C1-4 알킬, C1-4 할로알킬, C1-4 알콕시, 또는 C1-4 할로알콕시이다.
  2. 제1항에 있어서, R2는 에틸인, 약제학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서, R4는 F, Cl, CN, 또는 메틸인, 약제학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서, R5는 Cl, CN, 또는 메틸인, 약제학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화합물이
    4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}피롤리딘-2-온;
    4-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-6-클로로-3-에톡시-2-(5-옥소피롤리딘-3-일)벤조니트릴; 및
    4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}-1,3-옥사졸리딘-2-온; 또는
    상기 화합물들 중 어느 한 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}피롤리딘-2-온 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 약제학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (S)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 약제학적 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (R)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 약제학적 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (S)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 약제학적 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (R)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염인, 약제학적 조성물.
  11. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 4-{3-[1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸]-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐}피롤리딘-2-온인, 약제학적 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (S)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온인, 약제학적 조성물.
  13. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (R)-4-(3-((S)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온인, 약제학적 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (S)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온인, 약제학적 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 화합물이 (R)-4-(3-((R)-1-(4-아미노-3-메틸-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일)에틸)-5-클로로-2-에톡시-6-플루오로페닐)피롤리딘-2-온인, 약제학적 조성물.
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