KR20230139032A

KR20230139032A - 느릅나무속 식물 유래 카테킨 배당체 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물

Info

Publication number: KR20230139032A
Application number: KR1020220037112A
Authority: KR
Inventors: 최선은
Original assignee: 주식회사 닥터오레고닌
Priority date: 2022-03-25
Filing date: 2022-03-25
Publication date: 2023-10-05

Abstract

느릅나무속(Ulmus) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 약학 조성물이 제공된다.

Description

느릅나무속 식물 유래 카테킨 배당체 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물{Anti-obesity composition comprising Ulmus-derived catechin glycoside extract as an active ingredient}

느릅나무속 식물 유래 카테킨 배당체 고함량 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물에 관한 것이다.

지질대사는 우리 몸 에너지의 저장 및 분배, 당대사 조절, 에너지 항상성을 유지하는데 필요하며, 지질대사에 이상이 생기면 비만, 당뇨, 고지혈증 등의 증상이 나타나는 원인이 될 수 있다. 이러한 지질대사는 주로 간과 지방조직에서 일어나며, 지방조직에서는 조직을 구성하는 지방세포에 의해 조절 된다. 지방세포는 체내 대사에 있어 중요한 기관의 하나로, 단순한 에너지 저장 기관이 아니라 여러 가지 호르몬을 분비하는 내분비기관이기도 하며, 대사과정에서 능동적인 작용을 하는 장기이다.

지방세포는 지방세포내의 중성지방(triglyceride) 양이 증가하거나 지방세포의 수가 늘어나 비만을 유도하게 된다. 따라서 비만을 예방 및 치료함에 있어서 지방 축적을 감소시키고 지방세포의 수를 줄이는 방안을 찾아내야 한다. 또한 지방세포는 지방전구세포 (preadipocyte)가 분화되어 만들어지므로 지방세포 형성(adipogenesis)의 기전 연구 또한 지방조직의 역할을 이해하는 데 매우 중요하다. 최근 지방조직을 구성하는 지방세포의 분화와 조절기관에 대한 분자생물학적 연구가 광범위하게 진행되고 있다. 그러나 단일화합물 수준에서의 명확한 효능을 밝혀내는 연구가 미흡한 실정이다.

1. 대한민국 특허공개 10-2019-0070487 2. 대한민국 등록특허 10-1213519

따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 우수한 항비만 효과를 가지는 우수한 지질분해능을 갖는 추출물과, 단일화합물을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 느릅나무속(Ulmus) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 느릅나무속 식물 추출물은, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물이며, 상기 느릅나무속 식물 추출물은 느릅나무 가지 또는 뿌리의 주정 추출물이다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은, (a) 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계; 및 (b) 상기 얻어진 느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 추출물은 에탄올 용매로 추출된 것이다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드를 포함한다.

본 발명은 또한 느릅나무속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 건강기능식품을 제공하며, 상기 느릅나무속 식물 추출물은, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물이다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 느릅나무속 식물 추출물은 느릅나무 가지 또는 뿌리의 주정 추출물이며, 상기 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은, (a) 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계; 및 (b) 상기 얻어진 느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조된다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 추출물은 에탄올 용매로 추출된 것이며, 상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드(카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드)를 포함한다.

본 발명은 또한 느릅나무속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 시료를 제공하며, 상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드를 포함한다.

본 발명에 따른 항비만 조성물은 느릅나무속 식물의 추출물로부터 얻어지며, 그 추출물이 함유하는 카테킨 배당체를 포함한다. 특히 느릅나무속 식물의 지표 물질이자 유효물질로 밝혀낸 “카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드” 화합물은 농도의존적으로 지방세포 분화 억제능이 통계적으로 유의성 있게 확인하였으며, 실험 최고 농도인 20ug/ml의 농도에서는 지방분화 억제능이 40% 이상 억제되는 효과를 확인 하였다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 향후 항비만 치료제 혹은 기능성식품의 핵심 원료로 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 추출단계에 대한 단계도이다.
도 2 및 3은 느릅나무 가지 및 뿌리 주정추출물(UR, U60E)에 대한 추출공정을 설명하는 단계도이다.
도 4는 상술한 방법에 의하여 제조된 느릅타무 추출물인 UBRFⅠ과 UBRFⅡ에 대한 TLC 분석 결과이다.
도 5는 느릅나무 뿌리 및 가지 추출물에 대한 TLC 분석결과이다.
도 6은 U60E, UBC, UBRFⅠ, UBRFⅢ에 대한 카테킨 배당체에 대한 분석결과이다.
도 7은 지방세포의 염색 정도를 확인한 결과이다.
도 8 및 9는 실험예 3에 따른 항산화 활성 분석 결과이다.
도 10 및 11은 실험예 4의 라디컬 소거능 활성 분석 결과이다.
도 12 내지 16은 각 시료에 대한 세포 생존율과 이를 정리한 결과이다.
도 17 내지 21은 H₂O₂로 손상된 근세포에 대한 각 시료의 영향을 분석한 결과이다.
도 22 내지 26은 Dexamethasone으로 손상된 근세포에 대한 각 시료의 영향을 분석한 결과이다.

이하, 도면을 참조하여 본 발명의 구체적인 실시형태를 설명하기로 한다. 그러나 이는 예시에 불과하며 본 발명은 이에 제한되지 않는다.

본 발명을 설명함에 있어서, 본 발명과 관련된 공지기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략하기로 한다. 그리고, 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 정의된 용어들로서 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 그러므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.

본 발명의 기술적 사상은 청구범위에 의해 결정되며, 이하의 실시예는 본 발명의 기술적 사상을 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 효율적으로 설명하기 위한 일 수단일 뿐이다. 본 발명은 느릅나무 속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실싱예에 따른 항비만 조성물은 "카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드” 화합물을 포함하며, 농도의존적으로 지방세포 분화 억제능을 갖는다.

또한 본 발명의 일 실시예에 따른 추출물은, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물이며, (a) 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계; 및 (b) 상기 얻어진 느릅나무속 식물 초임계 추출박에 대해 추출물을 얻는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

단계 (a): 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계

본 발명에서, 느릅나무속 식물의 초임계 추출박(supercritical extract residue)은 느릅나무속 식물을 초임계 추출방법에 의해 추출하고 남은 잔여물(residue)을 의미한다.

본 발명의 초임계 추출박 제조에 사용되는 느릅나무속(Ulmus) 식물은 장미목 느릅나무과의 식물을 포함하며, 예를 들어 당느릅나무(Ulmus davidiana), 느릅나무(Ulmus davidiana var. japonica), 혹느릅나무(Ulmus davidiana var. japonica for. Suberosa), 참느릅나무(Ulmus parvifolia), 비술나무(Ulmus pumila), 난티나무(Ulmus laciniata) 및 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa) 등을 포함한다. 바람직하게는 느릅나무(Ulmus davidiana var. japonica), 왕느릅나무(Ulmus macrocarpa) 및 당느릅나무(Ulmus davidiana)를 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 느릅나무속 식물은 느릅나무속 식물의 전체; 또는 가지, 줄기, 뿌리, 잎, 꽃, 열매 및 씨앗으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 느릅나무속 식물의 일부를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 느릅나무속 식물의 가지, 줄기 또는 뿌리를 사용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에서, 초임계 추출 공정 전에 느릅나무속 식물의 전체 또는 일부를 건조 및/또는 분쇄하여 사용할 수 있다.

본 발명에서, 초임계 추출(supercritical extraction) 방법은 초임계 상태의 유체를 사용하여 천연물에 함유된 향, 색소, 유지류 또는 기능성 물질을 변성 없이 추출하는 방법을 의미한다.

상기 초임계 상태의 유체는 임계점(supercritical point)의 일정한 고온 고압의 한계점을 넘어 기체와 액체의 구별이 되지 않는 상태의 유체를 의미한다. 상기 초임계 유체는 초임계 이산화탄소(supercritical carbon dioxide)를 예로 들 수 있다. 상기 초임계 이산화탄소는 임계온도(31℃) 및 임계압력(7.5MPa)을 초과한 상태의 이산화탄소로서 기체와 액체의 성질을 동시에 가진 유체이다.

본 발명에서의 초임계 추출법은 예를 들어 초임계 유체와 용질의 혼합물을 추출온도와 같은 온도에서 감압하여 팽창시켜 초임계 유체의 용해력이 감소되면서 용질이 분리되는 압력변화법 방식; 또는 초임계 유체의 온도를 높여서 용해력을 감소시킴으로서 초임계 유체와 용질을 분리하는 온도 변화법 방식으로 행해질 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명에서 상기 초임계 유체와 함께 보조용매를 사용할 수 있으며, 보조용매는 이 기술분야에서 통상적으로 이용되는 극성 용매를 포함하며, 바람직하게는 알코올, 물, 에틸렌 글라이콜, 폴리에틸렌글라이콜, 프로필렌카보네이트, 포름산, 아세트산, 아세토니트릴, 클로로디플루오로메탄 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명에서 초임계 추출용 용기는 온도와 압력이 조절될 수 있으며, 추출원료와 초임계 유체가 접촉하도록 구성된 용기이면 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에서 초임계 추출에서의 압력은 100-600 bar 범위일 수 있고, 초임계 추출에서의 온도는 10-100℃ 범위일 수 있으며, 초임계 추출에서의 초임계 유체 및 보조용매의 유속은 10-100g/분일 수 있다. 당업계의 통상의 기술자는 초임계 추출에서 압력, 온도, 유체 및 보조용매의 유속을 상기 범위 내에서 적절하게 조절하여 사용할 수 있다.

상기와 같이 느릅나무속 식물을 초임계 추출한 뒤 발생하는 진여물인 초임계 추출박을 수집하고, 수집된 초임계 추출박을 다음의 용매 추출의 원료로 사용한다.

단계 (b): 상기 얻어진 느릅나무속 식물의 초임계 추출박의 추출물을 얻는 단계

상기 단계 (b)는 상기 수집된 느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 용매 추출 방법을 통해 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물을 얻는 단계이다.

본 명세서에서 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물을 언급하면서 사용되는 용어 “추출물”은 느릅나무속 식물 초임계 추출박에 추출 용매를 처리하여 얻은 추출 결과물뿐만 아니라, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물 자체를 개체(subject)에 투여할 수 있도록 제형화(예컨대, 분말화)된 추출물의 가공물도 포함하는 의미를 갖는다.

본 발명의 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은 천연물로부터 추출물을 추출하는 이 기술분야에 공지된 통상적인 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도, 압력의 조건하에서 통상적인 용매를 사용하여 분리할 수 있다.

느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 추출용매를 처리하여 추출물을 얻는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 구체적으로는, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ⅱ) 알코올 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (ⅲ) 아세트산, (ⅳ) DMF (dimethylformamide) 및 (v) DMSO (dimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF (tetrahydrofuran)를 포함한다.

보다 구체적으로, 본 발명에서 이용되는 추출용매는 (a) 물, (b) 알코올, (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 부틸아세테이트, (h) 1,3-부틸렌글리콜, (i) 헥산 및 (j) 디에틸에테르를 포함한다.

일 구현예에 따르면, 상기 알코올은 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올 등)일 수 있으며, 바람직하게는 에탄올일 수 있다.

다른 구현예에 따르면, 상기 에탄올은 구체적으로 10~90% 에탄올일 수 있고, 바람직하게는 20~80%, 더욱 바람직하게는 30~80%, 40~70%, 50~70%, 55~65%일 수 있으며, 가장 바람직하게는 60% 에탄올일 수 있다.

또 다른 구현예에 따르면, 본 발명의 추출물은 상기 용매 추출물에 대해 다시 용매를 사용하여 추가 분획하여 얻은 분획물도 포함할 수 있다.

바람직하게는 상기 용매 추출은 느릅나무속 식물의 초임계 추출박을 추출용매와 접촉시키는 공정을 통해 수행된다. 구체적으로 추출용매를 이용해 추출물을 추출하는 방법은 상온 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 추출, 마이크로웨이브 추출 및 초음파 추출로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 방법을 당업자가 적절히 선택하여 이용할 수 있다.

본 발명에서 용매추출 공정은 추출물 제조 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 통해 추출 용매를 부분적으로 또는 완전히 제거할 수 있다. 부분적 제거는 상당한 양의 유기용매가 없는 수성 농축물이 얻어질 때까지 농축하는 것을 의미하며, 완전한 제거에 의해서는 건조 잔류물을 얻을 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이것으로 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어 “추출물”은 상술한 바와 같이 이 기술분야에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 상기 조추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함하는 의미이다. 상기 용매에 의한 분획은 상기 용매를 사용한 추가적인 추출 공정을 통해 수행될 수 있다.

본 발명에서 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은 하기 화학식 1로 표시되는 카테킨 배당체, 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드(카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드)를 포함한다.

[화학식 1]

본 발명에서 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드를 10 - 200㎍/㎖의 함량으로 포함할 수 있으며, 보다 구체적으로 40 - 200㎍/㎖, 50 - 190㎍/㎖, 60 - 190㎍/㎖, 60 - 180㎍/㎖, 70 - 180㎍/㎖, 80 - 180㎍/㎖, 80 - 170㎍/㎖, 90 - 170㎍/㎖, 90 - 160㎍/㎖, 100 - 160㎍/㎖, 100 - 150㎍/㎖, 또는 100 - 140㎍/㎖의 함량으로 포함할 수 있다. 또는, 단일 화합물로서 상기 화학식 1의 화합물을 항비만 약학조성물의 유효성분으로 사용할 수 있으며, 이는 모두 본 발명의 범위에 속한다.

본 명세서에서 용어 “유효성분으로 포함하는”이란, 본 발명의 추출물이 항비만 효능을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미하는 것으로, 충분한 수준의 지방세포 분화 억제능을 통하여 이를 확인할 수 있다.

본 발명의 항비만 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육내 주입, 복강내 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.

본 발명의 항비만 약학적 조성물은 유효성분으로 느릅나무속 식물 추출물 외에 다른 약학적 활성 성분을 함께 포함하거나, 또는 다른 유효성분을 포함하는 약학적 조성물과 혼합되어 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물을 유효성분으로 포함하는 근육 손실 예방 또는 강화를 위한 조성물을 제공한다.

본 발명의 식품 또는 건강기능식품 조성물은 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 이용될 수 있는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제는 포도당, 과당, 말토오스, 수크로스, 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올과 같은 천연 탄수화물, 타우마틴, 스테비아 추출물 등의 천연 향미제, 사카린, 아스파르탐산 등의 합성 향미제, 착색제, 펙트산 또는 그의 염, 알긴산 또는 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산화제 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 식품 조성물은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 캔디, 츄잉검, 젤리 및 음료로 이루어진 군으로부터 선택되는 형태일 수 있다. 상기 식품 조성물 중의 느릅나무속 식물 추출물의 함량은 식품의 형태, 풍미, 맛 등을 고려하여 적절하게 선택될 수 있으며, 예를 들어 식품 전체중량에 대하여 0.01~30중량%의 범위일 수 있다. 본 발명에 따른 식품 조성물의 형태, 조성 및 제조방법 등은 기술분야에 공지된 통상의 기술로부터 적절히 선택될 수 있음이 통상의 기술자에게 명백하다.

상기 본 발명의 항비만식품 조성물은 앞서 언급한 화학식 1로 표시되는 카테킨 배당체, 7-O-β-D-아피오푸란노사이드(카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드)를 포함한다.

이에 대한 구체적인 설명은 앞서 언급한 내용과 동일하므로 생략한다.

실시예

초임계 추출

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 추출단계에 대한 단계도이다.

도 1을 참조하여 이하 본 발명에 따른 추출방법을 보다 상세히 설명한다.

본 발명의 일 실시예에서, 느릅나무 유래 추출물을 수득하기 위하여 초임계유체 추출 연구용 장비 (ISA-SEFE-0500-0700-080, IlsinAutoclave, Daejeon, Korea)를 사용하였다. 시료의 이물질을 제거하고 세척한 후, 음건하여 실험재료로 사용하였으며. 건조된 느릅나무 껍질 시료 100g 단위별로 200 mesh의 분쇄망을 통과하도록 분쇄하고, 시료를 추출조 온도 40~60℃로 조절하여 온도를 유지시켰다.

온도가 안정화되면 시료를 넣고 CO 가스를 등압으로 유지시킨 후, 고압펌프를 이용하여 line을 통해 실험압력 조건인 400~600 bar에 도달할 때까지 Control valve를 조절하여 주입하였다. 설정 압력에 도달한 후 추출조 하부로 식용주정을 분당 5mL 또는 10mL씩 60분 또는 240분 동안 총 식용알콜인 주정을 투입하여 추출을 진행하였으며, 시료에 남아있는 잔존 에탄올을 제거하기 위해 설정된 압력과 온도로 30 min 동안 고압펌프를 이용하여 CO를 흘려보내며 추출을 완료 하였다. 본 실험에 사용된 lab-scale 초임계 유체추출장치의 개략도를 도 1에 나타나며, 본 발명의 일 실시에에 따른 Lab-scale 추출장치는 이산화탄소의 공급을 위한 추출조, 분리조, 열교환기, 고압펌프 등으로 구성되어져 있다.

용매분획

초임계 추출후 얻어진 느릅나무 초임계 추출박을 회수하여 식음용알콜(60%)에 실온에 7일 추출후, filter paper 여과를 통해서 감압농축과 동결건조를 통해서 최종 느릅나무 초임계 추출박 주정 추출물(UBRFⅠ)을 획득하였다. 획득한 1차 추출물인 UBRFⅠ을 증류수(1차 또는 3차 증류수)에 녹인후 filter paper 여과를 실시하고 분별깔때기를 사용하여 Ethyl acetate(EtOAC)층을 확보하였다. 이때 얻어진 2차 추출물은 느릅나무 유래 고함량 추출물(UBRFⅡ)이다.

가지 및 뿌리 주정추출물

본 발명의 또 다른 일 실시예에로서 느릅나무의 뿌리와 가지로 시료를 구분하여 주정 추출물을 제조하였다.

즉, 느릅나무 뿌리의 경우, 뿌리 (6.45kg)를 60% 주정으로 실온에서 추출하여 filter paper로 여과 후 그 추출액을 감압 농축하여 추출물 (UR, 392g)을 회수하였다. 박층크로마토그램 (TLC) 방법은 전개용매로 Chloroform : Methanol : Water의 비율을 70:30:4로 제조하여 사용하였고, spot으로 카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드 존재를 확인하였다. 또한 HPLC 정량분석을 통해 카테킨 배당체의 함량을 확인하였다.

느릅나무 가지의 경우, 가지 (10kg)를 60% 주정으로 실온에서 추출하여 filter paper로 여과 후 그 추출액을 감압 농축하여 추출물 (U60E, 429g)을 회수하였다. 박층크로마토그램 (TLC) 방법은 전개용매로 Chloroform : Methanol : Water의 비율을 70:30:4로 제조하여 사용하였고, spot으로 카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드 존재를 확인하였다. 또한 HPLC 정량분석을 통해 카테킨 배당체의 함량을 이하 실험예를 통하여 확인하였다.

실험예 1

화합물 분석

본 발명에 따른 느릅나무 추출물 중 지표물질 분석을 통하여 NMR 및 MS 분석을 진행하였다. 분석결과는 다음과 같으며, 이로부터 상기 화학식 1의 카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드를 확인할 수 있었다.

High Resolution TOF MS m/z: 422.17511 [M]+;1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6+D2O):6.74(H-2’,1H,d,J=2.0Hz),6.69(H-5’,1H,d,J=8.4Hz),6.59(H-6’,1H,ddJ=2.0,8.4Hz),6.09(H-8,1H,d,J=2.4Hz),5.90(H-6,1H,J=2.4Hz),5.33(H-1”,1H,d,J=4.0Hz),4.55(H-2,1H,d,J=7.2Hz),4.03(H-2”,1H,d,J=4.0Hz),4.00(H-4a”,1H,d,J=9.6Hz),3.89(H-3,1H,m),3.68(H-4b”,1H,d,J=9.6Hz),3.45(H-5”,2H,m),2.65(H-4a,1H,dd,J=4.8,16.0Hz),2.40(H-4b,1H,dd,J=8.0,16.0z);13C-NMR(100MHz,DMSO-d6+D2O):δ156.7(C-7),156.5(C-5),155.7(C-9),145.2(C-4’),145.1(C-3’),130.8(C-1’),118.8(C-6’),115.6(C-5’),114.7(C-2’),107.3(C-1”),102.1(C-10),96.0(C-8),95.3(C-6),81.4(C-2),78.9(C-3”),76.3(C-2”),74.3(C-4”),66.3(C-3),62.4(C-5”),27.8(C-4).

TLC 분석

도 4는 상술한 방법에 의하여 제조된 느릅타무 추출물인 UBRFⅠ과 UBRFⅡ에 대한 TLC 분석 결과이다. 여기에서 전개용매는 Chloroform : MeOH : Water=70;30;4이었으며, 좌측, 가운데, 우측 칼럼은 각각 카테킨 배당체인 카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드(카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드) ②UBRFⅠ ③UBRFⅡ이다.

도 4를 참조하면, 카테킨 배당체와 같이 TLC 분석을 실시했을 때, UBRFⅠ과 UBRFⅡ에서 카테킨 배당체가 있음을 확인할 수 있었다.

도 5는 느릅나무 뿌리 및 가지 추출물에 대한 TLC 분석결과이다. 여기에서 전개용매는 Chloroform : MeOH : Water=70;30;4이었으며, 좌측, 가운데, 우측 칼럼은 각각 카테킨 배당체인 카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드(카테킨-7-O-β-D-아피오푸라노사이드) ②UBRFⅠ ③UBRFⅡ이다.

도 5를 참조하면, UR과 U60E에서 카테킨 배당체가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 2

HPLC 분석

HPLC 분석을 위해 Waters 2695 Separation module, 2487 Dual Absorbance Detector 사용, 컬럼은 SkyPak C18 analytical column (5), Phenomenex KJ0-4282 guard column을 사용하였다. 이동상으로 0.9% Acetic acid (A), ACN (B) 사용하였다. (Gradient program: 5%B 0min, 10%B 0-5min, 15%B 5-7min, 25%B 7-30min, 5%B 30-31min, 5%B 31-35min)

도 6은 U60E, UBC, UBRFⅠ, UBRFⅢ에 대한 카테킨 배당체에 대한 분석결과이다.

도 6을 참조하면, 기존 느릅나무 60% 주정추출물인 UR과 비교했을 때 UBRF-I은 약 3배, UBRF-II는 10배 이상 카테킨 함량이 증가한 것을 확인할 수 있었다. 또한 느릅나무 껍질 60% 주정추출물인 UBC의 경우 UR에 비해 카테킨 배당체가 대략 2배 가량 함량이 높은 것을 알 수 있었다. 따라서, 카테킨 함량은 UBRF-II, UBRF-I, UBC 및 UR 순서이다.

실험예 3

지방세포 분화 억제능 실험

1. 세포 배양

생쥐에서 유래한 지방전구세포인 3T3-L1 세포는 한국세포주은행에서 구입하여 사용하였다. 3T3-L1 세포는 DMEM 배지 (Welgene)에 10% bovine calf serum (BCF), 100 units/mL penicillin과 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 세포 배양액 (complete DMEM 배양액)을 사용하여 37℃ 습윤한 CO₂ 배양기 (5% CO₂/95% air)에서 배양하였다. 세포가 배양접시의 80% 정도 찼을 때, phosphate buffer saline (PBS, pH 7.4)으로 세포 단층을 씻어낸 후 trypsin-2.65 mM EDTA를 첨가하여 세포를 떼어내어 계대 배양하였고, 배지는 2일마다 교환하였다.

2. 세포 생존율 (cell viability) 측정

3T3-L1 세포를 3 × 10⁴ cells/well이 되도록 24-well plate에 분주하고 24시간 세포를 배양하였다. 세포를 24시간 배양한 후시험물질이 함유된 세포 배양액으로 교환하여 세포를 72시간 배양하였다. 세포를 72시간 배양한 후 MTT assay (Denizot F and Lang R. J Immunological Method 89: 271-277, 1986)을 실시하여 살아있는 세포수를 측정하였다. MTT assay 방법은 미토콘드리아의 dehydrogenase가 MTT (Amresco)를 환원시켜 푸른색 물질인 formazan을 만드는 원리에 기초한 것으로 본 시험에서는 formazan을 isopropanol에 용해시킨 다음 570 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.

3. 분화 유도 및 시험물질 처리

3T3-L1 세포를 1 × 10⁵ cells/well 의 농도로 24-well plate에 분주하였다. 세포가 confluence 한 상태에 도달한 후, 순차적으로 3종의 분화유도배양액 (DM)으로 세포배양액을 교환하여 세포를 배양하여 지방세포로 분화를 유도하였다. 즉, 10% FBS을 함유한 DMEM 배지에 DMI (1 μM dexamethasone, 0.5 mM 3-isobutyl-1 -methylxanthine (IBMX), 5 μg/mL insulin)를 첨가한 분화유도배양액으로 세포배양액을 교환하여 2일 동안 분화를 자극하였다. 2일 후, 10% FBS를 함유한 DMEM 배지에 5 μg/mL insulin을 첨가한 새로운 분화유도배양액으로 교환하여 다시 2일 동안 분화를 자극하였다. 총 4일 동안 분화를 자극한 후, 세포를 10% FBS를 함유한 DMEM 배지에서 2일 동안 유지하여 지방세포로의 분화를 유도하였다.

시험물질이 지방세포 분화에 미치는 영향을 조사하기 위해 분화유도배양액에 시험물질을 첨가하여 세포에 처리하였다.

4. 지방세포 분화 (지방 축척) 측정 (Oil red-O 염색)

3T3-L1 세포의 분화를 유도하며 시험물질을 처리한 후, 세포를 DPBS (Welgene)로 헹군 후 4% paraformaldehyde (PFA, Biosesang)를 넣어 1시간 동안 실온에서 세포를 고정시켰다. 세포를 고정시킨 후, oil red O (Sigma-Aldrich) 용액을 처리하여 1~2시간 동안 실온에서 염색하였다. 지방세포의 염색 정도를 눈으로 관찰한 후, 세포를 증류수로 헹구고 현미경을 통해 지방세포를 관찰하였다.

도 7은 지방세포의 염색 정도를 확인한 결과이다.

도 7을 참조하면, 느릅나무속 식물 추출물의 지표 물질이자 유효물질로 밝혀낸 화학식 1의 "카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드” 화합물을 처리하였을 때, 농도의존적으로 지방세포 분화 억제능이 통계적으로 유의성 있게 확인 되었다. 특히, 실험 최고 농도인 20ug/ml의 농도에서는 지방분화 억제능이 40% 이상 억제되는 효과를 확인할 수 있다.

이상의 결과에 따라서 “카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드”를 포함한 느릅나무속 식물속 추출물은 향후 항비만 치료제 혹은 기능성식품의 원료로 개발이 가능하다는 것을 시사한다.

실험예 4

항산화 활성 분석

DPPH 라디칼 소거능 분석을 위해 96 well plate에 샘플 20μl와 1mM DPPH 시약 180 μl를 넣어서 30분간 암실반응을 하였다. 반응 후에 ELYSA reader를 사용하여 517 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

도 8 및 9는 실험예 4에 따른 항산화 활성 분석 결과이다.

` 도 8 및 9를 참조하면, 시료 모두 농도의존적으로 라디칼 소거능이 되었고 양성대조군인 비타민C 활성과 동등한 DPPH 라디칼 소거능을 확인할 수 있으며, 특히 UBC의 경우 다른 시료들과 비교했을 때 높은 라디칼 소거능을 가진 것을 확인하였음. IC 50는 UBC가 가장 높은 것을 알 수 있다.

실험예 5

ABTS 라디컬 소거능 활성 분석

본 실험예에서는 ABTS 라디칼 소거능 분석을 위해 2.45 mM Potassium persulfate에 7.0 mM ABTS를 1:1 비율로 혼합하여 24시간 동안 암실반응으로 라디칼을 생성시켰다. 이를 PBS buffer에 희석하여 흡광도 값이 0.7~1.0 사이의 값을 나타내도록 제조하였다. 96 well plate에 시료 20 μl와 ABTS 시약 180 μl를 넣고 15분간 암실반응을 시키고, 반응 후 ELYSA reader를 이용하여 750 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.

도 10 및 11은 실험예 5의 라디컬 소거능 활성 분석 결과이다.

더 10 및 11을 참조하면, 모든 시료가 농도 의존적으로 ABTS 라디칼 소거능을 보여주었다. 또한 세 가지 시료 모두 저농도에서 높은 소거능을 보여주고 특히 250μg/ml에서는 시료 모두 비타민과 동등한 라디칼 소거능을 가진 것을 확인할 수 있었으며, IC50의 경우 UBC와 UBRF-II가 가장 우수한 것을 확인하였다.

실험예 6

세포독성 분석

천연물추출물 (UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II)의 지방분해능과 함께 근감소 방지 효능을 평가하기 위해 in vitro 체계에서 H₂O₂와 dexamethasone 유도 근세포 손상에 대한 보호 효과를 확인하기 위해 수행하였다. 모든 분석 수치는 mean ± SEM으로 나타내었고 수집된 결과는 GraphPad Prism 5.0 (GraphPad software, San Diego, CA, USA) 프로그램을 이용하여 분석하였다. 대조군과 시험물질 처리군의 차이를 비교하기 위하여 Student’s t-test 및 one-way analysis variance (ANOVA)를 이용하였고 p < 0.05 이상일 때만 통계적으로 유의성 있는 것으로 판단하였다.

우선, UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II을 시료로 사용하였으며, 세포 배양은 생쥐의 골격근육에서 유래한 근원세포 (myoblast)인 C2C12 세포는 American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입하였고, C2C12 세포는 Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)에 10% fetal bovine serum (FBS), 100 units/mL penicillin과 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 세포배양액을 사용하여 37℃ 습윤한 CO₂ 배양기 (5% CO₂/95% air)에서 배양하였다. 세포가 배양접시의 80% 정도 찼을 때, phosphate buffer saline (PBS, pH 7.4)으로 세포 단층을 씻어낸 후 trypsin-2.65 mM EDTA를 첨가하여 세포를 떼어내어 계대 배양하였고, 배지는 2일마다 교환하였다.

세포 생존율 (cell viability) 분석

C2C12 세포의 세포 생존율은 MTT assay 방법 (Denizot F and Lang R. J Immunological Method 89: 271-277, 1986)으로 측정하였고, C2C12 세포를 2.5 × 10⁴cells/well로 24-well plate에 분주하여 24시간 동안 배양하였다. 세포를 24시간 배양한 후 시험물질을 다양한 농도 (0, 10, 50, 100, 150, 200 μg/mL)로 처리한 세포배양액으로 세포배양액을 교환하여 24시간 배양하였다. 시험물질을 처리하여 24시간 배양한 후 1 mg/mL MTT (Amresco) 용액으로 세포배양액을 교환하고 2시간 동안 세포를 추가 배양한 후 살아있는 세포에서 형성된 formazan을 isopropanol로 용출하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.

H2O2 유도 근세포 손상에 대한 보호 효과 분석

C2C12 세포를 2.5 × 10⁴cells/well로 24-well plate에 분주하여 24시간 동안 배양하였다. C2C12 세포를 24시간 배양한 후 근세포 손상을 유도하기 위해 100 μM H₂O₂를 처리하였고, 각 시험물질의 근세포 손상 보호효과를 조사하기 위해 100 μM H₂O₂와 함께 다양한 농도의 시험물질을 처리하여 세포를 24시간 배양하였다. 세포를 24시간 배양한 후 동일한 방법으로 MTT assay를 실시하여 세포 생존율을 측정하였다.

Dexamethasone 유도 근세포 손상에 대한 보호 효과 분석

C2C12 세포를 2.5 × 10⁴cells/well로 24-well plate에 분주하여 24시간 배양하였다. C2C12 세포를 24시간 배양한 후 근세포 손상을 유도하기 위해 500 μM dexamethasone를 처리하였고, 각 시험물질의 근세포 손상 보호효과를 조사하기 위해 500 μM dexamethasone와 함께 다양한 농도의 시험물질을 처리하여 세포를 24시간 배양하였다. 세포를 24시간 배양한 후 위와 동일한 방법으로 MTT assay를 실시하여 세포 생존율을 측정하였다.

천연물추출물 (UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II)의 세포 생존율에 대한 영향 분석

도 12 내지 16은 각 시료에 대한 세포 생존율과 이를 정리한 결과이다.

도 12 내지 16을 참조하면, C2C12 세포의 세포 생존율은 다양한 농도 (10, 50, 100, 150, 200 μg/mL)의 UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II 처리에 의해 증가하였다. UR의 세포 생존율은 농도의존적으로 증가하였으며, 특히 200 μg/mL 농도로 처리한 경우 대조군 (0 μg/mL)에 비해 21% 세포 생존율이 증가하였다. UBC를 50 μg/mL와 100 μg/mL 농도로 처리한 경우 C2C12 세포의 세포 생존율이 대조군 (0 μg/mL)에 비해 유의적으로 증가하는 것을 확인하였으며, UBRF-I (10 ~ 200 μg/mL)은 C2C12 세포에서 세포독성이 없는 것을 확인하였으며, UBRF-II는 C2C12 세포의 세포 생존율이 농도의존적으로 증가하는 것을 확인하였다.

천연물추출물 (UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II)의 H ₂ O ₂ 유도 근세포 손상 영향 분석

H₂O₂(과산화수소)는 강한 산화제로 in vitro 체계에서 oxidative stress (산화 스트레스)를 유도한다. 본 발명에 따른 UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II 이 oxidative stress에 의한 근세포 손상에 미치는 영향을 조사하기 위해 C2C12 세포의 세포배양액에 100 μM H₂O₂를 처리하여 oxidative stress를 유도하고 UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II을 처리하여 배양한 후 C2C12 세포의 세포 생존율을 측정하였다.

도 17 내지 21은 H₂O₂로 손상된 근세포에 대한 각 시료의 영향을 분석한 결과이다.

도 17 내지 21을 참조하면, H₂O₂를 처리한 경우 H₂O₂를 처리하지 않은 대조군 [H₂O₂ (-)/(-)]에 비해 세포생존율이 현저하게 감소하였다. UR(10, 50, 100, 200 μg/mL)을 처리한 경우 세포생존율이 농도 의존적으로 증가함을 확인할 수 있었고, 최고농도인 200 μg/mL 에서는 H₂O₂ 만을 처리한 대조군 [H₂O₂ (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 55.9% 증가하는 것을 확인하였다.

UBC(10, 50, 100 μg/mL)를 처리한 경우 H₂O₂ 만을 처리한 대조군 [H₂O₂ (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 유의적으로 증가함을 확인하였다. UBRF-I을 처리한 경우 대조군 [H₂O₂ (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 농도 의존적으로 증가하였으며, 100 μg/mL 농도에서의 세포 생존율은 대조군에 비해 38.2% 증가하였다. 10, 50 및 100 μg/mL UBRF-II는 H₂O₂ 으로 oxidative stress를 유도한 조건에서 C2C12 세포의 세포 생존율에 유의한 영향을 미치지 않았다. 반면 200 μg/mL 농도로 UBRF-II을 처리한 경우 H₂O₂ 만을 처리한 대조군 [H₂O₂ (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 유의적으로 감소하였다.

천연물추출물 (UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II)의 dexamethasone 유도 근세포 손상 영향 분석

Dexamethasone은 대표적인 glucocorticoid 중의 하나로 임상에서 오남용 시 골격근의 분해를 초래하며, 이를 토대로 in vitro 체계에서 근세포 손상을 유도하기 위해 널리 사용되고 있다. UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II가 glucocorticoid에 의한 근세포 손상에 미치는 영향을 조사하기 위해 C2C12 세포의 세포배양액에 500 μM dexamethasone을 처리하여 근세포 손상을 유도하고 UR, UBC, UBRF-I, UBFF-II을 처리하여 배양한 후 C2C12 세포의 세포 생존율을 측정하였다.

도 22 내지 26은 Dexamethasone으로 손상된 근세포에 대한 각 시료의 영향을 분석한 결과이다.

도 22 내지 26을 참조하면, Dexamethasone를 처리한 경우 dexamethasone를 처리하지 않은 대조군 [DEX (-)/(-)]에 비해 세포 생존율이 현저하게 감소하였다.

UR은 100, 200 μg/mL 농도로 UR를 처리하였을 때 dexamethasone 만을 처리한 대조군 [DEX (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 증가하였다. UBC는 10μg/mL에서 세포 손상에 대한 보호 효과를 확인할 수 있었음. UBRF-I은 저농도인 10 및 50 μg/mL 농도로 처리하였을 때 대조군 [DEX (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

UBRF-II를 10, 50 및 100 μg/mL 농도로 처리한 경우 대조군 [DEX (+)/(-)]에 비해 세포 생존율이 유의적으로 증가하였으며, 특히, 100 μg/mL 농도로 UBRF-II를 처리하였을 때 대조군 [DEX (+)/(-)]에 비해 세포생존율이 40.7% 증가하였으며 세포손상에 대한 보호 효과를 확인하였다.

Claims

느릅나무속(Ulmus) 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 약학 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물인 것을 특징으로 하는, 항비만 약학 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은 느릅나무 가지 또는 뿌리의 주정 추출물인 것을 특징으로 하는, 항비만 약학 조성물.
제 2항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은,
(a) 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계; 및
(b) 상기 얻어진 느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는, 항비만 약학 조성물.
제 1항에서 있어서,
상기 추출물은 에탄올 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 항비만 약학 조성물.
제1항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항비만 약학 조성물.
느릅나무속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 건강기능식품.
제 7항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은, 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물인 것을 특징으로 하는, 항비만 건강기능식품.
제 7항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은 느릅나무 가지 또는 뿌리의 주정 추출물인 것을 특징으로 하는, 항비만 건강기능식품.
제 9항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 초임계 추출박의 추출물은,
(a) 느릅나무속 식물을 초임계 추출하여 초임계 추출박을 얻는 단계; 및
(b) 상기 얻어진 느릅나무속 식물의 초임계 추출박에 대해 추출물을 얻는 단계;를 포함하는 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는, 항비만 건강기능식품.
제 7항에서 있어서,
상기 추출물은 에탄올 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 항비만 건강기능식품.
제7항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드(카테킨 7-O-β-D-아피오푸라노사이드)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항비만 건강기능식품.
느릅나무속 식물 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항비만 시료.
제 13항에 있어서,
상기 느릅나무속 식물 추출물은 카테킨 7-O-β-D-아피오푸란노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항비만 시료.