KR20230137293A - 인플루엔자 뉴라미니다제에 대한 광범위 중화 항체 - Google Patents
인플루엔자 뉴라미니다제에 대한 광범위 중화 항체 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있고 인플루엔자 감염을 중화시킬 수 있는 항체 및 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 또한 항체을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 항체를 발현할 수 있는 숙주 세포, 관련 조성물, 및 예를 들어, 인플루엔자 감염을 치료 또는 예방하기 위한 본원에 개시된 조성물의 사용 방법이 제공된다.
Description
서열 목록에 관한 진술
본 출원과 관련된 서열 목록은 종이 사본 대신 텍스트 형식으로 제공되며, 명세서에 참조로 포함된다. 서열 목록을 포함하는 텍스트 파일명은 930585_414WO_SEQUENCE_LISTING.txt이다. 텍스트 파일은 137KB로서 2021년 11월 16일에 생성되었으며 EFS-Web을 통해 전자적으로 제출되었다.
인플루엔자는 매년 발생하여 전 세계적으로 퍼지는 전염병으로, 매년 약 300만~500만 건의 심각한 질병이 발생하고 약 290,000~650,000명이 호흡기로 사망한다(WHO, Influenza (Seasonal) Fact sheet, November 6, 2018). 가장 흔한 증상은 다음과 같다: 갑작스러운 발열, 기침(보통 마른 기침), 두통, 근육통 및 관절통, 심한 권태감(몸이 좋지 않은 느낌), 인후염 및 콧물. 잠복기는 1일에서 4일 사이로 다양하지만 보통은 바이러스에 노출되고 약 2일 후에 증상이 시작된다. 인플루엔자의 합병증에는 폐렴, 부비동 감염, 천식이나 심부전, 패혈증 또는 만성 기저 질환의 악화와 같은 이전 건강 문제의 악화가 포함될 수 있다.
인플루엔자는 네거티브 센스, 단일 가닥, 분절 RNA 게놈을 포함하는 Orthomyxoviridae 과의 항원적 및 유전적으로 다양한 바이러스 그룹인 인플루엔자 바이러스에 의해 발생한다. 4가지 유형의 인플루엔자 바이러스(A, B, C 및 D) 중 3가지 유형(A, B 및 C)이 사람에게 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 인플루엔자 바이러스는 존재하는 주요 표면 단백질의 여러 아형인 헤마글루티닌(HA) 및 뉴라미니다아제(NA)에 준해 분류할 수 있다. 헤마글루티닌("HA") 단백질에 의해 정의되는 적어도 18개의 인플루엔자 A 아형이 있다. HA는 두 그룹으로 분류할 수 있다. 그룹 1에는 H1, H2, H5, H6, H8, H9, H11, H12, H13, H16 및 H17 아형이 포함되고 그룹 2에는 H3, H4, H7, H10, H14 및 H15 아형이 포함된다. 적어도 11개의 상이한 뉴라미니다제 아형이 있다(각각 N1에서 N11까지(cdc.gov/flu/about/viruses/types.htm)). 뉴라미니다제는 감염된 숙주 세포로부터 방출되기 전에 비리온 상의 시알산 잔기 및 표적 세포 표면 당단백질의 가수분해를 촉매함으로써 바이러스 이동성 및 퍼짐에 작용한다. 뉴라미니다제(NAI)를 억제하도록 고안된 약물이 개발되었지만(예를 들어, 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르, 라니나미비르), IAV 아형의 자연적으로 획득된 돌연변이가 현재 NAI에 대한 감수성을 감소시키고 있다(Hussain et al., Infection and Drug Resistance 10 :121- 134 (2017).
인플루엔자 바이러스 감염을 치료하기 위한 새로운 방식이 필요하다.
도 1은 항-"NA"(뉴라미니다제) 모노클로날 항체 발견을 위한 워크플로우를 나타낸다. 공여자는 뉴라미니다제 아형 N1 및 N2 항원에 대한 반응성에 대해 편도 공여자 샘플(n=50)로부터의 혈청 및 뉴라미니다제 아형 N4, N3 및 N9에 대한 반응성에 대해 PBMC(말초 혈액 단핵 세포) 공여자 샘플(n=124)로부터의 혈청을 스크리닝하여 선택하였다. 스크리닝을 위한 뉴라미니다제 항원을 포유동물 세포에서 발현시키고 결합을 유세포 측정법으로 평가하였다. 5명의 공여자로부터 얻은 B 기억 세포를 발견 워크플로우우에 입력하기 위해 유세포 측정법으로 분류하였다. 단일 분류된 B 세포(n=39,350)를 항체 분비를 자극하기 위해 50 μl 배양물에서 중간엽 간질 세포(MSC)와 공동 배양하였다. 분비된 항체를 결합 및 NA 억제 분석에 의해 평가하였다. N1 시알리다제 활성의 억제를 ELLA(enzyme-linked lectin assay: 효소 결합 렉틴 분석)를 사용하여 평가하고, N1, N2 및 N9 시알리다제 활성의 억제를 2'-(4-메틸움벨리페릴)-α-D-N-아세틸뉴라민산(MUNANA)의 절단을 측정하는 형광 기반 분석법을 사용하여 측정하였다. "NI 활성"은 뉴라미니다제 억제 활성을 지칭한다. 그룹 1 IAV N1 A/Vietnam/1203/2004 및 그룹 2 IAV N2 A/Tanzania/205/2010 및 N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA에 대한 결합을 ELISA로 평가하여 폭을 결정하였다. 선택된 B 세포로부터의 항체 서열을 cDNA로 클로닝하고 시퀀싱하였다.
도 2A는 인간 공여자 PBMC로부터 단리된 인플루엔자 A 바이러스("IAV")에 대한 모노클로날 항체("FNI"를 접두사로 가짐)의 VH 도메인 서열 정렬을 나타낸다. 도 2B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"(VH: 서열 번호 228; VL: 서열 번호 230)와 함께 "FNI3"(VH: 서열 번호 26; VL: 서열 번호 32) 및 "FNI9"(VH: 서열 번호 86; VL: 서열 번호 92)의 VH 도메인 서열을 나타낸다.
도 3A-3C는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 측정된 N1(도 3A), N2(도 3B) 및 N9(도 3C) NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 나타내며, OD 대 농도(ng/ml)로 보고되었다. 비교 항체인 1G01-LS와 비관련 항원인 "K-"에 대한 음성 대조군 항체에 의한 결합도 측정하였다.
도 4A-4C는 BLI(Bio-Layer Interferometry)로 측정된, M428L/N434S Fc 돌연변이를 지닌 FNI3(도면에서 "FNI3-LS") 및 M428L/N434S Fc 돌연변이를 지닌 FNI9(도면에서 "FNI9-LS")의 N1(도 4A), N2(도 4B) 및 N9(도 4C) NA에 대한 결합 동역학을 나타낸다. 해리는 kdis(1/s)로 보고되고, 결합은 kon(1/Ms)으로 보고되고, KD는 kdis/kon의 비율로부터 계산되었다. 비교 항체인 1G01-LS에 의한 결합도 측정하였다.
도 5는 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대한 비교 항체 1G01뿐만 아니라 FNI3 및 FNI9에 의한 결합을 시험한 유세포 측정 분석의 결과를 요약한 것이다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다. 오른쪽 스케일의 값은 계산된 EC50의 범위를 보여준다. 결합이 관찰된 최저 농도를 기준으로 값을 선택하였다.
도 6은 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 및 IBV의 NA의 계통 발생 관련성을 나타낸다.
도 7A-7C는 관련 글리코실화 부위를 갖는 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 활성에 관한 것이다. 도 7A는 A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013의 위치 245(245Gly+) 및 247(247Gly+)에 있는 그룹 2 IAV N2 아형 NA의 글리코실화 부위를 나타낸다. 도 7B는 A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013 생 바이러스 스톡에서 시알리다제 활성(NAI)의 억제를 요약한 것으로, EC50(μg/ml)으로 보고되었다. 도 7C는 유세포 측정법에 의해 측정된 A/South Australia/34/2019(245Gly+)로 감염된 포유동물 세포에서 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 나타낸다. 모의 염색은 음성 대조군으로 표시된다.
도 8은 H1N1 돼지 유라시아 조류 유사(EA) 균주, A/Swine/Jiangsu/J004/2018로 감염된 포유동물 세포 상에서 발현된 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 유세포 측정법에 의해 측정한 것을 나타낸다. 모의 염색은 음성 대조군으로 표시된다.
도 9는 인간 상피 2형(HEP-2) 세포를 사용한 FNI3 및 FNI9 결합의 다중반응성의 결여를 보여준다. 항-HA 항체 FI6v3을 양성 대조군으로 사용하였고, 항-파라믹소바이러스 항체 MPE8을 음성 대조군으로 포함시켰다.
도 10은 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성("NAI")의 억제를 요약한 것으로 MUNANA 검정에 의해 측정되었다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다.
도 11은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨).
도 12A-12B는 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도 12A는 동일한 플롯 내의 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에 대한 억제 활성을 도시하고, 도 12B는 별도의 플롯에서 이들 IAV에 대한 도시이다.
도 13A는 시알리다제 활성 검정의 시험관 내 억제에서 시험된 IAV 및 IBV 균주의 패널을 나타낸다.
도 13B는 FNI3, FNI9, FNI14(VH: 서열 번호 134; VL: 서열 번호 140), FNI17(VH: 서열 번호 146; VL: 서열 번호 152), 및 FNI19(VH: 서열 번호 158; VL: 서열 번호 164)에 대한 검정 결과를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도면 키의 별표는 245번 위치에 글리코실화 부위가 있음을 나타낸다.
도 14A-14D는 H1N1 A/California/07/2009(도 14A), H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 14B), B/Malaysia/2506/2004(도 14C), 및 B/Jiangsu/10/2003(도 14D) NA에 대한 항체 FNI1 (VH: 서열 번호 2; VL: 서열 번호 8), FNI3, FNI9, FNI14, FNI17, 및 FNI19의 중화를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨)).
도 15A 및 15B는 FcγRIIIa(도 15A; F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(도 15B; H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 비교 항체 FM08(도면에서 "FM08_LS"; VH: 서열 번호 194; VL: 서열 번호 195) 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3 및 FNI9를 시험하였다.
도 16A 및 16B는 (도 16A) N1(H1N1, 돼지 H1N1, 및 조류 H5N1) 및 (도 16B) N2(H3N2, H2N2) 아형에서 NA 항바이러스-내성 돌연변이의 연도별 빈도를 나타낸다.
도 17A 내지 17E는 항-플루 항체 또는 오셀타미비르에 의한 오셀타미비르(OSE)-내성 돌연변이(H275Y, E119D 및 H275Y 또는 S247N 및 H275Y)를 보유하도록 역유전학으로 조작된 H1N1 A/California/07/2009 바이러스의 중화를 나타낸다. 비교 항체 FM08(도 17D) 및 1G01(도 17E)과 함께 FNI3(도 17A), FNI9(도 17B) 및 오셀타미비르(도 17C)의 중화 활성을 측정하였다.
도 18A 및 18B는 항-NA 항체에 의한 OSE-내성 돌연변이(H275Y, E119D/H275Y, H275Y/S247N, I222V 또는 N294S)를 보유하도록 역유전학으로 조작된 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, IBV 바이러스, 및 IAV 및 IBV 바이러스의 중화를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도 18A의 별표(x-축)는 OSE 내성 돌연변이를 지닌 바이러스를 나타낸다. FNI3, FNI9 및 비교 항체 1G01의 중화 활성을 측정하였다. 도 18A는 개별 바이러스 균주의 중화를 도시하고, 도 18B는 중화 항-NA 항체에 의해 그룹화된 바이러스 균주의 중화를 도시한다.
도 19는 FNI3 항체의 항원 결합 단편(Fab) 도메인과 NA의 도킹을 보여주는 결정 구조 연구로부터의 데이터를 나타낸다.
도 20A 및 20B는 N2 NA에 결합되지 않거나(도 20A) 결합된(도 20B) 경우 FNI3 중쇄의 중쇄 상보성 결정 영역 3(H-CDR3)의 결정 구조 연구로부터 구축된 다이어그램을 보여준다. 결합되지 않은 FNI3 H-CDR3 결정 구조(도 20A)는 베타 시트 형태 및 잔기 E111 (CO) - D102 (NH), E111 (NH) - D102 (CO), G109 (CO) - F104 (NH), G109 (NH) - N105 (CO), 및 L108 (NH) - N105 (CO)의 카복실산기(CO)와 아미노기(NH) 사이의 온전한 주쇄 수소 결합을 나타낸다. FNI3-N2 결정 구조(도 20B)는 H-CDR3 베타 시트 형태의 붕괴 및 G109(CO) - F104(NH) 사이의 온전한 주쇄 수소 결합 하나를 보여준다.
도 21A 및 21B는 NA 아형과 복합체를 이룬 FNI3 및 비교 항체 1G01, 1G04 및 1E01의 항원 결합 단편(Fab) 도메인의 도킹 각도를 나타내는 결정 구조 연구로부터 생성된 다이어그램을 보여준다. 선은 모든 패널에서 도킹 각도를 나타내고 PDB(Protein Data Bank) 식별 코드가 비교 항체 1G01, 1G04 및 1E01에 대해 표시된다. 도 21A는 N1 NA와 복합체를 이룬 1G01(상부 패널) 및 N9 NA와 복합체를 이룬 1G04(하부 패널)를 나타낸다. 도 21B는 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3(상부 패널) 및 N2 NA와 복합체를 이룬 1E01(하부 패널)을 나타낸다.
도 22는 FNI3 CDR: H-CDR3, H-CDR2 및 L-CDR의 형태 및 상호작용을 보여준다. 이들 데이터를 생성하기 위해 MOE(Molecular Operating Environment)를 사용하여 단백질을 "신속 준비(quick prepped)"하였다.
도 23은 경쇄 CDR(L-1, L-2, L-3) 및 중쇄 CDR(H-1, H-2, H-3)의 잔기를 포함하여 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3의 결정 구조를 나타낸다. H-CDR3과 N2 NA의 상호 작용은 오른쪽 패널에 향상된 해상도로 표시된다. 음수는 상호 작용 에너지(kcal/mol)이다. MOE(Molecular Operating Environment) 소프트웨어를 사용하여 단백질을 "신속 준비"하였다.
도 24는 오셀타미비르-결합된 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3의 결정 구조 표현을 보여준다. 오셀타미비르는 N2 NA의 R292, R371 및 R118과 상호 작용하는 것으로 나타났다.
도 25는 오셀타미비르-결합된 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3을 보여주는 결정 구조의 대안적 관점을 나타낸다.
도 26A 및 26B는 2000년과 2020년 사이에 단리된 H3N2(n=60,597)로부터의 N2 NA 서열에서 FNI3 에피토프 보존의 분석을 나타낸다. 도 26A의 표는 분석된 N2 NA 서열 내 특정 위치에서 아미노산의 빈도를 보여준다. 원으로 표시된 값은 Glu221(E221, 17.41%), Ser245(S245, 33.69%), 및 Ser247(S247, 36.16%)의 가장 낮은 세 빈도에서 나타나는 아미노산을 나타낸다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 26B는 N2 NA의 E221, S245 및 S247과 FNI3로부터의 VH Y60 및 Y94의 상호작용을 나타낸다.
도 27은 2000년과 2020년 사이에 단리된 H1N1(n=57,597)로부터의 N1 NA 서열에서 FNI3 에피토프 보존(하단)과 N2 NA FNI3 에피토프 보존(상단; 도 26A 및 26B에 도시된 바와 같음)의 비교를 나타낸다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 28A 및 28B는 IAV A/Puerto Rico/8/34 또는 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 FNI3(도 28A에서 "mAb-03") 및 FNI9(도 28A에서 "mAb-09")의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 보여준다. 도 28A는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 도 28B는 연구의 타임라인과 종점을 보여준다.
도 29A-29D는 FNI3로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 29A), 2 mg/kg(도 29B), 0.6 mg/kg(도 29C) 또는 0.2 mg/kg(도 29D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 30A-30D는 FNI9로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 30A), 2 mg/kg(도 30B), 0.6 mg/kg(도 30C) 또는 0.2 mg/kg(도 30D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 31A-31D는 FNI3로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 31A), 2 mg/kg(도 31B), 0.6 mg/kg(도 31C) 또는 0.2 mg/kg(도 31D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 32A-32D는 FNI9로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 32A), 2 mg/kg(도 32B), 0.6 mg/kg(도 32C) 또는 0.2 mg/kg(도 32D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 받은 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면에서 왼쪽 그래프).
도 33A 및 33B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 33A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 33B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 생존율을 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 34A 및 34B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 34A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 34B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 감염 후 4일에서 14일까지의 체중 감소를 나타낸다(곡선 아래 면적으로 보고됨). 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 35A 및 35B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 35A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 35B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터 혈청 내 IgG와 비교한 음의 곡선 아래 면적 피크 값을 나타낸다.
도 36은 tg32 마우스에서 FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS") 및 비교 항체 FM08 및 1G01("1G01-LS")(모두 M428L/N434S 돌연변이를 보유함)의 생체 내 약동학을 나타낸다. 계산된 반감기는 사각형으로 강조 표시된다.
도 37은 포유류 세포에서 일시적으로 발현된 그룹 I IAV-, 그룹 II IAV- 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대해 지시된 농도(μg/mL)에서 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 결합을 시험한 유세포 측정 검정의 결과를 요약한 것이다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다. 오른쪽 스케일의 값은 계산된 EC50의 범위를 보여준다. 결합이 관찰된 최저 농도를 기준으로 값을 선택하였다.
도 38은 인간에서 순환하는 IAV로부터의 그룹 I(H1N1) 및 그룹 II(H3N2) NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 직사각형은 위치 245에서 글리코실화를 가지는 그룹 II(H3N2) NA 및 상응하는 시알리다제 억제 값(μg/ml의 IC50으로 보고됨)을 나타낸다.
도 39는 인간 조상, Victoria 계통 및 Yamagata 계통 IBV NA의 패널에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨).
도 40은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 비교 항-HA 항체 "FM08_LS" 및 "FHF11v9"의 중화 활성도 측정하였다.
도 41은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17, FNI19 및 오셀타미비르(OSE)에 의한 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 1 nM = 150 μl.
도 42A 및 42B는 MUNANA 검정에 의해 측정된, OSE-내성 인플루엔자 바이러스로부터의 NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). OSE 내성 IAV는 OSE(오셀타미비르) 내성 돌연변이를 수용하기 위해 역유전학으로 조작되었다. 도 42A는 Cal/09 N1 및 Cal/09 N1 OSE 내성(H1N1)에 대한 시알리다제 활성의 억제를 나타낸다. 도 42B는 Aichi/68 N2 및 Aichi/68 N2 OSE-내성 NA(H3N2)에 대한 시알리다제 활성의 억제를 나타낸다.
도 43은 FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 활성화는 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 A549 세포와 함께 인큐베이션한 후 평가되었다. M428L/N434S 돌연변이 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)를 보유하는 비교 항체 "FM08_MLNS"와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 44A 및 44B는 IAV(도 44A) 및 IBV(도 44B) NA와 함께 인큐베이션 후 FcγRIIIa(V158 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV 및 IBV NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 45A 및 45B는 IAV(도 45A) 및 IBV(도 45B) NA와 함께 인큐베이션 후 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV 및 IBV NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 46은 FNI3, FNI9 또는 FM08_LS로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(H1N1) 또는 A/Hong Kong/8/68(H3N2)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터의 혈청 내 IgG와 비교한 음의 곡선 아래 면적 피크 값(μg/ml의 EC50으로 보고됨)을 나타낸다. 피팅 목적을 위해 비히클 그룹의 음성 피크 면적을 10-1 μg /ml의 IgG 농도에서 계산하였다.
도 47A 및 47B는 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)로 감염된 DBA/2J 마우스에서 FNI3_MLNS(도 47A에서 "mAb-03") 및 FNI9_MLNS(도 47A에서 "mAb-09")의 예방적 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 도 47A는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 도 47B는 연구의 타임라인 및 종점을 보여준다.
도 48A-48D는 FNI3 또는 FNI9로 전처리 후 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata)으로 감염된 DBA/2 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 IBV B/Victoria/504/2000 (Yamagata)의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 48A), 2 mg/kg(도 48B), 0.6 mg/kg(도 48C) 또는 0.2 mg/kg(도 48D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 49A-49D는 FNI3 또는 FNI9로 전처리 후 IBV B/Brisbane/60/2008(Victoria)로 감염된 DBA/2 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 IBV B/Brisbane/60/2008(Victoria)의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 49A), 2 mg/kg(도 49B), 0.6 mg/kg(도 49C) 또는 0.2 mg/kg(도 49D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 50A 및 50B는 FNI3 또는 FNI9로 전처리한 후 B/Victoria/504/2000(Yamagata)(도 50A) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)(도 50B)로 감염된 DBA/2 마우스에서 감염 후 4일에서 14일까지의 체중 감소를 나타낸다(곡선 아래 면적 체중의 변화로 보고됨). 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 51A 및 51B는 B/Victoria/504/2000(Yamagata)(도 51A) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)(도 51B)로 감염된 DBA/2 마우스에서 FNI3 또는 FNI9 처리 후 15일 동안의 생존율을 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 52A 및 52B는 IAV 및 IBV NA에서 FNI3 에피토프 보존을 나타낸다. 도 52A는 H1N2, H2N2, H3N2 및 H5N2 IAV(n=65,5262)(상단)로부터의 N2 NA 서열 대 H1N1 및 H5N1(N=58,954)(하단)로부터의 N1 NA 서열의 분석을 나타낸다. 모든 서열은 2000년과 2020년 사이에 단리되었다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 52A에서 사각형으로 둘러싸인 잔기는 도 52B의 하단 패널에 제시된 특정 아미노산을 나타낸다. 도 52B의 표는 N2 NA 내의 중요한 FNI3-상호작용 잔기 및 대응 FNI3 CDRH3 잔기를 나타낸다.
도 53은 IBV NA에서 FNI3 에피토프 보존을 나타낸다. B/Brisbane/60/2008의 IBV NA 서열(도면에서 "FluB Victoria"; N= 7,814; 상단) 대 B/Victoria/504/2000의 IBV NA 서열(도면에서 "FluB Yamagata"; N=13,243); 하단)이 분석되었다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 사각형으로 둘러싸인 잔기는 IAV N1/N2 및 IBV 사이에서 100% 보존된 FNI3 HCDR3과 상호작용하는 1차 NA 잔기를 나타낸다.
도 54A 및 54B는 SCID tg32 마우스에서 투여 후 30일에 걸친, MLNS Fc 돌연변이(FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS"), FNI17("FNI17-LS"), FNI19("FNI19-LS")를 보유하는 FNI 항체 및 비교 항체 FM08_MLNS의 생체 내 약동학을 나타낸다. 시간 경과에 따른 농도(μg/ml로 보고됨)가 도 54A에 제시되어 있다. 도 54B의 표는 반감기(일 단위로 보고됨), AUC(일*μg/ml로 보고됨), 클리어런스(μg/ml로 보고됨) 및 부피(ml로 보고됨)를 나타낸다.
도 55는 인간 상피 2형(HEP-2) 세포에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 결합의 다중반응성의 결여를 보여준다.
도 56A-56C는 FNI 항체 및 FNI 항체의 항원 결합 단편(Fab) 도메인과 NA의 도킹을 보여주는 결정 구조 연구에 관한 것이다. 도 56A는 N2 NA에 대한 FNI3 도킹을 나타낸다. 도 56B는 NA와 도킹하는 FNI3, FNI17 및 FNI19 항체의 오버레이를 나타낸다. 도 56C는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"와 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 VH 아미노산 서열 정렬을 나타낸다. NA와 상호 작용하는 CDRH3는 직사각형으로 강조 표시된다.
도 57A는 경쇄 CDR(L-1, L-2, L-3) 및 중쇄 CDR(H-1, H-2, H-3)의 잔기를 포함하여 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI17의 결정 구조를 나타낸다. H-CDR3과 N2 NA의 상호 작용은 오른쪽 패널에 향상된 해상도로 표시된다. 백분율은 계산된 결합 에너지에 대한 각 잔기의 기여도를 나타낸다. 도 57B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"를 갖는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 VH 아미노산 서열 정렬을 보여준다. NA와 상호 작용하는 VH 잔기 D107 및 R106은 직사각형으로 강조 표시된다.
도 58은 2009년부터 2019년까지 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에서 FNI NA 에피토프 내의 상위 5개 상호작용 잔기의 보존을 나타낸다.
도 59는 FNI9, 오셀타미비르(OSE) 및 비교 항체 "FM08"에 의한 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 H3N2 A/Hong Kong/8/68 바이러스에 대한 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 계산된 IC50(nM), IC80(nM) 및 최대 억제(백분율로 보고됨)가 그래프 아래에 표시된다.
도 60은 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17 변이체 FNI17-v19 (VH: 서열 번호 199; VL: 서열 번호 201) 및 FNI19 변이체 FNI19-v3 (VH: 서열 번호 203; VL: 서열 번호 205)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다. 직사각형은 245번 위치에 글리코실화를 갖는 NA를 나타낸다. 비교 항체인 FM08_LS에 의한 중화도 측정하였다. 중화는 IC50(μg/ml 단위)으로 보고된다.
도 61은 "GAALIE" Fc 변이체 항체(Fc에서 G236A/A330L/I332E 돌연변이 포함)에 의한 FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 활성화는 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 A549 세포와 인큐베이션 후 평가되었다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 GAALIE 돌연변이 보유 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 항체(접미사 "-GAALIE")와 함께 시험하였다. 비교 항체 "FM08_LS" 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)도 시험하였다.
도 62는 IAV A/Puerto Rico/8/34 또는 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 FM08_LS의 예방 활성을 FNI3_LS 및 FNI9_LS와 비교하기 위한 실험 간 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 표는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 연구의 타임라인 및 종점은 도 28B에 표시된 것과 동일하다. 실험 A("Exp-A")로부터의 체중 데이터가 도 29A-29D(FNI3-LS, A/Puerto Rico/8/34), 도 30A-30D(FNI9-LS, A/Puerto Rico/8/34), 도 31A-31D(FNI3-LS, A/Hong Kong/8/68), 및 도 32A-32D(FNI9-LS, A/Hong Kong/8/68)에 제시되어 있다. 실험 B("Exp-B")로부터의 체중 데이터는 도 63A-63D(FM08_LS, A/Puerto Rico/8/34) 및 도 64A-64D(FM08_LS, A/Hong Kong/8/68)에 제시되어 있다.
도 63A-63D는 FM08_LS로 전처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg (도 63A), 2 mg/kg (도 63B), 0.6 mg/kg (도 63C), 또는 0.2 mg/kg (도 63D)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 64A-64D는 FM08_LS로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg (도 64A), 2 mg/kg (도 64B), 0.6 mg/kg (도 64C), 또는 0.2 mg/kg (도 64D)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 받은 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면에서 왼쪽 그래프).
도 65는 IAV A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 FNI17-LS 및 FM08_LS의 예방 활성을 비교하기 위한 생체 내 연구의 설계에 사용된 투여량을 나타낸다.
도 66A-66D는 FNI17-LS 또는 FM08_LS로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 12일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 1 mg/kg (도 66A), 0.5 mg/kg (도 66B), 0.25 mg/kg (도 66C), 또는 0.125 mg/kg (도 66D)으로 투여하였다.
도 67은 FNI17-LS 또는 FM08_LS로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 12일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 68은 IAV A/Puerto Rico/8/34로 감염된 암컷 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르(OSE)의 생물학적 효능을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 타임라인은 감염 시간, OSE 투약 및 연구 종점을 나타낸다. OSE를 A/Puerto Rico/8/34의 10배 LD50(50% 치사량)으로 감염시키기 2시간 전에 시작하여 0일에 경구 위관 영양법에 의해 10 mg/kg으로 투여하였다. OSE를 감염 후 6시간에 동일한 용량으로 투여한 다음 감염 후 6일까지 하루에 두 번 투여하였다.
도 69는 오셀타미비르(OSE)로 전처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 14일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 비히클 대조군(H2O)으로 전처리된 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 70은 오셀타미비르(OSE)로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 14일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군(H2O)으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 71은 OSE로 처리되고 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 감염 후 2일 및 4일에 폐 조직을 수집하였다. 역가는 조직 그램당 50% 조직 배양 감염 용량(TCID50/g)으로 보고된다.
도 72A-72B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"에 정렬된 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 VH(도 72A) 및 VK(도 72B)의 산 서열을 보여준다.
도 73A-73E는 그룹 I(H1N1) IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 11개의 FNI3 변이체(FNI3-v8 내지 FNI3-v18; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 1 및 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 73A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 73B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 73C)에 대한 FNI3 및 FNI3 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 73D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 73E)에 대한 FNI3 및 FNI3 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 74A-74E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI9 및 5개의 FNI9 변이체(FNI9-v5 내지 FNI9-v9; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 1 및 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 74A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 74B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 74C)에 대한 FNI9 및 FNI9 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 74D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 74E)에 대한 FNI9 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 75A-75E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI17 및 11개의 FNI17 변이체(FNI17-v6 내지 FNI17-v16; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 75A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 75B) 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 75C)에 대한 FNI17 및 FNI17 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 75D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 75E)에 대한 FNI17 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 76A-76E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI19 및 5개의 FNI19 변이체(FNI19-v6 내지 FNI19-v5; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1 (도 76A), H3N2 A/Tanzania/205/2010으로부터의 NA2(도 76B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 76C)에 대한 FNI19 및 FNI19 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 76D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 76E)에 대한 FNI19 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 77A-77D는 유세포 측정법에 의해 측정된 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 변이체의 결합을 나타낸다. 도 77A는 A/Stockholm/18/2007로부터의 N1, A/California/07/2009로부터의 N1 및 A/California/07/2009 I23R/H275Y로부터의 N1에 대한 결합을 나타낸다. 도 77B는 A/South Australia/34/2019로부터의 N2, A/Leningrad/134/17/57로부터의 N2 및 A/Washington/01/2007로부터의 N2에 대한 결합을 나타낸다. 도 77C는 A/Canada/rv504/2004로부터의 N3, A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 N6 및 A/Netherlands/078/03로부터의 N7에 대한 결합을 나타낸다. 도 77D는 B/Yamanashi/166/1998(Yamagata), B/Malaysia/2506/2004(Victoria) 및 B/Lee/10/1940(Ancestral)에 대한 결합을 나타낸다.
도 78A-78E는 특정 FNI 항체의 추가 특징을 나타낸다. 도 78A는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 VH 아미노산 서열과 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"의 것과의 정렬을 나타내며, 여기서 직사각형은 UCA 서열에서 양전하를 띤 Lys13 및 Lys19 잔기 및 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 동일한 위치에서 상응하는 잔기를 나타낸다. PyMOL을 사용하여 생성된 전체 표면 전하 지도가 pK 값 및 해상도(Å로 보고됨)와 함께 FNI3(도 78B), FNI9(도 78C), FNI17(도 78D) 및 FNI19(도 78E)에 대해 제시된다.
도 79A-79B는 tg32 마우스에서 FNI17-LS, FNI19-LS, FNI17-v19-LS, 및 FNI19-v3-LS에 대한 pK 데이터를 나타낸다. 마우스에 5 mg/kg 항체를 정맥 주사하였다. 도 79A의 표는 FNI17-LS 및 FNI19-LS(실험 1 "PK1") 및 FNI17-v19-LS 및 FNI19-v3-LS(실험 2 "PK2")에 대한 반감기, AUC(곡선 아래 면적), 정상 상태 클리어런스(CLss) 및 총 분석 부피(부피)에 대한 실험간 값을 나타낸다. 도 79B는 FNI17-LS, FNI19-LS, FNI17-v19-LS 및 FNI19-v3-LS에 대한 평균 반감기(일 단위로 보고됨) + 표준 오차를 나타낸다.
도 80은 IAV 또는 IBV로 감염된 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르(OSE)와 비교하여 FNI17-v19-rIgG1-LS의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. LD90(90% 치사량)으로 감염 24시간 전에 FNI17-v19-rIgG1-LS(9, 3, 0.9 또는 0.3 MPK)를 마우스에 사전 투여하였다. OSE를 감염 2시간 전부터 챌린지 후 3 내지 4일까지 매일 10 mg/kg을 경구 투여하였다. 마우스에 IAV(H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68) 또는 IBV(B/Victoria/504/2000 (Yamagata) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria))을 투여하였다. FcγR 및 보체(FNI17-v19-rIgG1-GRLR)에 의한 결합을 폐지하는 Fc 돌연변이를 포함하는 FNI17-v19 버전을 또한 IAV 바이러스(H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68)를 받은 그룹에서 시험하였다. 감염 3일 후 안락사시킨 마우스에서 폐 플라크 형성 단위(PFU)를 평가하였다.
도 81A-81D는 도 80에 기재된 생체 내 연구로부터 감염 3일 후 안락사시킨 BALB/c 마우스에서의 폐 바이러스 역가를 보여준다. H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 81A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 81B) 및 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata; 도 81C) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria; 도 81D)로 감염 후 폐 바이러스 역가가 제시된다.
도 82는 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 인간화 FcγR 마우스에서 FNI17-v19의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 5LD50(50% 치사량의 5배)으로 감염 24시간 전에 마우스에 항체를 사전 투여하였다.
도 83A-83C는 FNI17-v19로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 인간화 FcgR 마우스에서 14일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. A/Puerto Rico/8/34의 5LD50으로 감염시키기 하루 전에 항체를 0.9 mg/kg(도 83A), 0.3 mg/kg(도 83B) 또는 0.09 mg/kg(도 83C)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 84는 도 82에 기재된 연구로부터의 FNI17-v19로 전처리된 인간화 FcγR 마우스로부터의 혈청 중 인간 IgG의 감염전 농도를 나타낸다. 5LD50 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염시키기 2시간 전에 마우스로부터 혈청을 수집하였다.
도 85는 시알산과의 상호작용에 관여하는 NA 상의 고도로 보존된 잔기를 갖는 FNI 항체 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 사이의 결합 에너지를 나타낸다.
도 86은 H1N1 돼지 유라시아 조류 유사(EA) 균주, A/Swine/Jiangsu/J004/2018로 감염된 포유동물 세포 상에서 발현된 NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 결합을 유세포 측정법에 의해 측정한 것을 나타낸다. 모의 항체 염색이 음성 대조군으로 제시된다.
도 87A-87D는 그룹 II H7N3 A/chicken/Jalisco/PAVX17170/2017 IAV(도 87A), 그룹 II H5N6 A/chicken/Suzhou/j6/2019 IAV(도 87B), 그룹 II H7N7 A/chicken/Netherlands/621572/03 IAV(도 87C), 및 그룹 I H5N8 A/chicken/Russia/3-29/2020 IAV(도 87D) NA에 대한 FNI17-v19 또는 OSE에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(nM 단위의 IC50으로 보고됨).
도 88은 BLI(Bio-Layer Interferometry)에 의해 측정된 N9 NA에 대한 FNI3, FNI9 및 FNI17의 결합 동역학을 나타낸다. KD는 kdis/kon의 비율로부터 계산되었으며, 여기서 kdis는 (1/s)로 계산된 해리이고 kon은 (1/Ms)로 계산된 결합이다.
도 89는 그룹 II H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17, FNI17-v19, FNI19 및 FNI19-v3에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(ng/ml로 보고됨).
도 90은 그룹 II H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV와의 인큐베이션 후 FcγRIIIa(V158 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. A/Anhui/1/2013 IAV의 N9를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 음성 대조군 항체 (FY1-GRLR)와 함께 시험하였다.
도 91A-91B는 2007년부터 2019년까지 그룹 I H1N1 IAV(도 91A) 및 그룹 II H3N2 IAV(도 91B)에서 FNI NA 결합 부위 내의 OSE-내성 돌연변이의 유병률을 나타낸다.
도 92A-92B는 선택적으로 하나 이상의 OSE-내성 돌연변이를 가지는 그룹 I H1N1 IAV 균주(도 92A) 및 그룹 II H3N2 IAV 균주(도 92B)에 대한 FNI17, FNI19 및 오셀타미비르(OSE)에 의한 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 도 92A는 A/Puerto Rico/8/34(도면에서 "PR8") 및 A/California/07/2009(도면에서 "Cal/09")뿐만 아니라 OSE 내성 돌연변이 H275Y, E119D 또는 S247N 및 H275Y 모두를 포함하도록 역유전학으로 조작된 A/California/07/2009에 대한 활성을 나타낸다. 도 92B는 A/Hong Kong/8/68(도면에서 "HK/68") 및 OSE 내성 돌연변이 I222V 또는 N294S를 보유하도록 역유전학으로 조작된 A/Hong Kong/8/68에 대한 활성을 나타낸다.
도 93은 유세포 분석법으로 측정하고 평균 형광 강도(MFI)로 나타낸, N1_Vic_2019, N2_HK_2019, B/Phuket/3073/2013(Yamagata)(도면에서 "B/Phuket_2013(Yam)"), B/Malaysia/2506/2004(Victoria)(도면에서 "B/Malaysia_2004(Vic)"), 및 B/Washington/02/2019(Victoria)(도면에서 "B/Wash_2019(Vic)")로부터의 NA에 대한 FNI17-v19의 결합을 나타낸다. 세포를 음성 대조군으로서 모의 염색하였다.
도 94A-94B는 다양한 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리되고 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 94A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 94B)로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 폐 조직을 감염 후 4일(도 94A) 또는 3일(도 94B)에 수집하였다. 역가는 도 94A에서 조직 그램당 log 50% 조직 배양 감염 용량(Log TCID50/g)으로 보고된다. 역가는 도 94B에서 조직 그램당 로그 플라크 형성 단위(Log pfu/g)로 보고된다. 도 94A 및 94B에서 그래프의 점 플롯의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터이다.
도 95A-95B는 제시된 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 95A) 또는 H3N2A/Hong Kong/8/68(도 95B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 곡선 아래 면적 분석으로부터의 감염 후 0일부터 14일까지 체중 감소(음의 곡선 아래 면적 피크 값으로 보고됨)를 나타낸다. 도 95A 및 95B에서 그래프의 점 플롯 및 막대의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터(및 관련 막대)이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터(및 관련 막대)이다.
도 96A-96B는 FNI17 또는 OSE 처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 96A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 96B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터 혈청 내 IgG와 비교하여 음의 곡선 아래 면적 피크 값을 나타낸다. IC50, IC70 및 IC90이 μg/ml로 보고된다.
도 97A-97B는 FNI17 또는 OSE처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 97A) 또는 H3N2A/Hong Kong/8/68(도 97B)로 감염된 BALB/c 마우스에 대한 맥박 산소 측정법에 의해 측정된 혈액 내 산소 포화도를 나타낸다(말초 모세혈관 산소 포화도(SpO2)로 보고됨). 도 97A 및 97B에서, 그래프에서 5개 막대(및 관련 점 플롯 클러스터)의 각 그룹의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 각 막대 세트에서 가장 왼쪽에 있는 막대이고 OSE는 각 막대 세트에서 가장 오른쪽에 있는 막대이다.
도 98A-98B는 FNI17 처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 98A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 98B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 산소 포화도(감염 후 8일째)와 바이러스 폐 역가(감염 후 4일째) 간의 상관관계를 나타낸다(도 98A). Pearson 계수가 상관 관계를 정량화하기 위해 계산되었다.
도 99A-99C는 3마리의 개별 마우스("1501" - "1503"; "2501" - "2503")에 대한 FNI17-v19 및 FNI19-v3의 생체 내 약동학을 나타낸다. 1500시간에 걸친 개별 마우스에 대한 데이터가 FNI17-v19(도 99A) 및 FNI19v3(도 99B) 처리 그룹에 대해 제시되고, 64일에 걸친 것이 도 99C에 조합된다.
도 100은 마우스에서 평가된 FNI17-v19 및 FNI19-v3의 생체 내 약동학적 특성을 요약한 것이다. FM08_LS가 비교 항체로 표시된다.
도 101A-101B는 6,000개의 인간 막 단백질 어레이를 사용하여 측정된 FNI17-v19(도 101A) 및 FNI19-v3(도 101B)에 의한 표적외 결합의 결여를 나타낸다.
도 102는 Non-GLP-TCR(non-Good Laboratory Practice Tissue Cross Reactivity Testing)을 사용하여 측정된, 인간 조직에서 FNI17-v19 및 FNI19-v3에 의한 특이적 양성 염색의 결여를 나타낸다. 배경 염색을 평가하기 위해 IgG를 시험하였다.
도 103A-103C는 "GAALIE" Fc 변이체 항체(Fc에 G236A/A330L/I332E 돌연변이 포함)에 의한 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV(도 103A에서 H1N1 A/California/07/2009; 도 103B에서 H3N2 A/Hong Kong/8/68) 및 IBV(도 103C에서 B/Malaysia/2506/2004) NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 인큐베이션 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 GAALIE 돌연변이를 보유하는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 항체(도면에서 접미사 "-GAALIE")와 함께 시험하였다. 비교 항체 "FM08_LS" 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)도 시험하였다. FM08_LS 및 FY1-GRLR은 도 103A-103C에서 가장 낮은 측정값을 가졌다.
도 104는 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV, 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17-v19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다.
도 105는 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV, 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17-v19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다. B/Brisbane/2008은 직사각형으로 강조 표시된다.
도 106A-106B는 다양한 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리되고 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 106A) 또는 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 106B)로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 폐 조직을 감염 후 3일(도 106A) 또는 4일(도 106B)에 수집하였다. 역가는 도 106A에서 조직 그램당 로그 플라크 형성 단위(Log pfu/g)로 보고된다. 역가는 도 106B에서 조직 그램당 log 50% 조직 배양 감염 용량 (Log TCID50/g)으로 보고된다. 타원은 OSE와 동일한 바이러스성 폐 감소를 일으킬 수 있는 FNI17 용량(mg/kg)을 강조 표시한다. 도 106A 및 106B에서 그래프의 점 플롯 클러스터의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터이다.
도 107은 인플루엔자로 감염되고 FNI17 또는 OSE로 처리된 BALB/c 마우스의 혈청에서 IgG와 비교한 "% 보호"를 보여준다. IC50, IC70 및 IC90이 μg/ml로 보고된다.
도 108은 FNI17 또는 FM08_LS로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/3으로 감염된 마우스에서 감염 후 0일부터 14일까지의 체중 감소(음의 곡선 아래 면적 피크 값으로 보고됨)를 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 체중 감소도 측정하였다. 1 mg/kg 용량(막대 3개의 가장 왼쪽 세트)에서 막대의 왼쪽에서 오른쪽 순서는 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다(즉, 비히클은 1 mg/kg 사분면의 가장 왼쪽 막대이고, FM08_LS는 맨 오른쪽 막대임). 다른 용량에서 왼쪽 막대는 FNI17을 나타내고 오른쪽 막대는 FM08_LS를 나타낸다.
도 109는 FNI17 또는 FM08_LS로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 13일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율(최단 생존 곡선율)도 측정되었다.
도 110은 야생형과 비교하여 변이체에 대한 이득/손실을 포함한 특정 FNI3, FNI9, FNI17 또는 FNI19 mAbs의 항체 역가를 나타낸다.
도 111은 FNI3 및 11개의 FNI3 변이체(FNI3-v8 내지 FNI3-v18)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI3에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 112는 FNI9 및 5개의 FNI9 변이체(FNI9-v5 내지 FNI9-v9)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI9에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 113은 FNI17 및 11개의 FNI17 변이체(FNI17-v6 내지 FNI17-v16)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI17에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 114는 FNI19 및 5개의 FNI19 변이체(FNI19-v1 내지 FNI19-v5)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI19에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 115A-115D는 BLI(Bio-Layer Interferometry)에 의해 측정된, GAALIE 돌연변이(도면에서 접미사 "-GAALIE")를 갖는 FNI3-LS, FNI9-LS, FNI17-LS, 및 FNI19-LS 항체와 함께 FNI3-LS, FNI9-LS, FNI17-LS, 및 FNI19-LS의 상이한 FcγR에 대한 결합 동역학을 나타낸다. 화살표는 FNI17-LS 및 FNI17-LS-GAALIE에 대한 곡선을 나타낸다. 도 115A는 FcγRIIA(H)에 대한 결합을 나타내고, 도 115B는 FcγRIIA(R)에 대한 결합을 나타내고, 도 115C는 FcγRIIIA(F)에 대한 결합을 나타내고, 도 115D는 FcγRIIIA(V)에 대한 결합을 나타낸다.
도 2A는 인간 공여자 PBMC로부터 단리된 인플루엔자 A 바이러스("IAV")에 대한 모노클로날 항체("FNI"를 접두사로 가짐)의 VH 도메인 서열 정렬을 나타낸다. 도 2B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"(VH: 서열 번호 228; VL: 서열 번호 230)와 함께 "FNI3"(VH: 서열 번호 26; VL: 서열 번호 32) 및 "FNI9"(VH: 서열 번호 86; VL: 서열 번호 92)의 VH 도메인 서열을 나타낸다.
도 3A-3C는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 측정된 N1(도 3A), N2(도 3B) 및 N9(도 3C) NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 나타내며, OD 대 농도(ng/ml)로 보고되었다. 비교 항체인 1G01-LS와 비관련 항원인 "K-"에 대한 음성 대조군 항체에 의한 결합도 측정하였다.
도 4A-4C는 BLI(Bio-Layer Interferometry)로 측정된, M428L/N434S Fc 돌연변이를 지닌 FNI3(도면에서 "FNI3-LS") 및 M428L/N434S Fc 돌연변이를 지닌 FNI9(도면에서 "FNI9-LS")의 N1(도 4A), N2(도 4B) 및 N9(도 4C) NA에 대한 결합 동역학을 나타낸다. 해리는 kdis(1/s)로 보고되고, 결합은 kon(1/Ms)으로 보고되고, KD는 kdis/kon의 비율로부터 계산되었다. 비교 항체인 1G01-LS에 의한 결합도 측정하였다.
도 5는 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대한 비교 항체 1G01뿐만 아니라 FNI3 및 FNI9에 의한 결합을 시험한 유세포 측정 분석의 결과를 요약한 것이다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다. 오른쪽 스케일의 값은 계산된 EC50의 범위를 보여준다. 결합이 관찰된 최저 농도를 기준으로 값을 선택하였다.
도 6은 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 및 IBV의 NA의 계통 발생 관련성을 나타낸다.
도 7A-7C는 관련 글리코실화 부위를 갖는 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 활성에 관한 것이다. 도 7A는 A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013의 위치 245(245Gly+) 및 247(247Gly+)에 있는 그룹 2 IAV N2 아형 NA의 글리코실화 부위를 나타낸다. 도 7B는 A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013 생 바이러스 스톡에서 시알리다제 활성(NAI)의 억제를 요약한 것으로, EC50(μg/ml)으로 보고되었다. 도 7C는 유세포 측정법에 의해 측정된 A/South Australia/34/2019(245Gly+)로 감염된 포유동물 세포에서 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 나타낸다. 모의 염색은 음성 대조군으로 표시된다.
도 8은 H1N1 돼지 유라시아 조류 유사(EA) 균주, A/Swine/Jiangsu/J004/2018로 감염된 포유동물 세포 상에서 발현된 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 유세포 측정법에 의해 측정한 것을 나타낸다. 모의 염색은 음성 대조군으로 표시된다.
도 9는 인간 상피 2형(HEP-2) 세포를 사용한 FNI3 및 FNI9 결합의 다중반응성의 결여를 보여준다. 항-HA 항체 FI6v3을 양성 대조군으로 사용하였고, 항-파라믹소바이러스 항체 MPE8을 음성 대조군으로 포함시켰다.
도 10은 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성("NAI")의 억제를 요약한 것으로 MUNANA 검정에 의해 측정되었다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다.
도 11은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨).
도 12A-12B는 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도 12A는 동일한 플롯 내의 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에 대한 억제 활성을 도시하고, 도 12B는 별도의 플롯에서 이들 IAV에 대한 도시이다.
도 13A는 시알리다제 활성 검정의 시험관 내 억제에서 시험된 IAV 및 IBV 균주의 패널을 나타낸다.
도 13B는 FNI3, FNI9, FNI14(VH: 서열 번호 134; VL: 서열 번호 140), FNI17(VH: 서열 번호 146; VL: 서열 번호 152), 및 FNI19(VH: 서열 번호 158; VL: 서열 번호 164)에 대한 검정 결과를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도면 키의 별표는 245번 위치에 글리코실화 부위가 있음을 나타낸다.
도 14A-14D는 H1N1 A/California/07/2009(도 14A), H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 14B), B/Malaysia/2506/2004(도 14C), 및 B/Jiangsu/10/2003(도 14D) NA에 대한 항체 FNI1 (VH: 서열 번호 2; VL: 서열 번호 8), FNI3, FNI9, FNI14, FNI17, 및 FNI19의 중화를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨)).
도 15A 및 15B는 FcγRIIIa(도 15A; F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(도 15B; H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 비교 항체 FM08(도면에서 "FM08_LS"; VH: 서열 번호 194; VL: 서열 번호 195) 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3 및 FNI9를 시험하였다.
도 16A 및 16B는 (도 16A) N1(H1N1, 돼지 H1N1, 및 조류 H5N1) 및 (도 16B) N2(H3N2, H2N2) 아형에서 NA 항바이러스-내성 돌연변이의 연도별 빈도를 나타낸다.
도 17A 내지 17E는 항-플루 항체 또는 오셀타미비르에 의한 오셀타미비르(OSE)-내성 돌연변이(H275Y, E119D 및 H275Y 또는 S247N 및 H275Y)를 보유하도록 역유전학으로 조작된 H1N1 A/California/07/2009 바이러스의 중화를 나타낸다. 비교 항체 FM08(도 17D) 및 1G01(도 17E)과 함께 FNI3(도 17A), FNI9(도 17B) 및 오셀타미비르(도 17C)의 중화 활성을 측정하였다.
도 18A 및 18B는 항-NA 항체에 의한 OSE-내성 돌연변이(H275Y, E119D/H275Y, H275Y/S247N, I222V 또는 N294S)를 보유하도록 역유전학으로 조작된 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, IBV 바이러스, 및 IAV 및 IBV 바이러스의 중화를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도 18A의 별표(x-축)는 OSE 내성 돌연변이를 지닌 바이러스를 나타낸다. FNI3, FNI9 및 비교 항체 1G01의 중화 활성을 측정하였다. 도 18A는 개별 바이러스 균주의 중화를 도시하고, 도 18B는 중화 항-NA 항체에 의해 그룹화된 바이러스 균주의 중화를 도시한다.
도 19는 FNI3 항체의 항원 결합 단편(Fab) 도메인과 NA의 도킹을 보여주는 결정 구조 연구로부터의 데이터를 나타낸다.
도 20A 및 20B는 N2 NA에 결합되지 않거나(도 20A) 결합된(도 20B) 경우 FNI3 중쇄의 중쇄 상보성 결정 영역 3(H-CDR3)의 결정 구조 연구로부터 구축된 다이어그램을 보여준다. 결합되지 않은 FNI3 H-CDR3 결정 구조(도 20A)는 베타 시트 형태 및 잔기 E111 (CO) - D102 (NH), E111 (NH) - D102 (CO), G109 (CO) - F104 (NH), G109 (NH) - N105 (CO), 및 L108 (NH) - N105 (CO)의 카복실산기(CO)와 아미노기(NH) 사이의 온전한 주쇄 수소 결합을 나타낸다. FNI3-N2 결정 구조(도 20B)는 H-CDR3 베타 시트 형태의 붕괴 및 G109(CO) - F104(NH) 사이의 온전한 주쇄 수소 결합 하나를 보여준다.
도 21A 및 21B는 NA 아형과 복합체를 이룬 FNI3 및 비교 항체 1G01, 1G04 및 1E01의 항원 결합 단편(Fab) 도메인의 도킹 각도를 나타내는 결정 구조 연구로부터 생성된 다이어그램을 보여준다. 선은 모든 패널에서 도킹 각도를 나타내고 PDB(Protein Data Bank) 식별 코드가 비교 항체 1G01, 1G04 및 1E01에 대해 표시된다. 도 21A는 N1 NA와 복합체를 이룬 1G01(상부 패널) 및 N9 NA와 복합체를 이룬 1G04(하부 패널)를 나타낸다. 도 21B는 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3(상부 패널) 및 N2 NA와 복합체를 이룬 1E01(하부 패널)을 나타낸다.
도 22는 FNI3 CDR: H-CDR3, H-CDR2 및 L-CDR의 형태 및 상호작용을 보여준다. 이들 데이터를 생성하기 위해 MOE(Molecular Operating Environment)를 사용하여 단백질을 "신속 준비(quick prepped)"하였다.
도 23은 경쇄 CDR(L-1, L-2, L-3) 및 중쇄 CDR(H-1, H-2, H-3)의 잔기를 포함하여 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3의 결정 구조를 나타낸다. H-CDR3과 N2 NA의 상호 작용은 오른쪽 패널에 향상된 해상도로 표시된다. 음수는 상호 작용 에너지(kcal/mol)이다. MOE(Molecular Operating Environment) 소프트웨어를 사용하여 단백질을 "신속 준비"하였다.
도 24는 오셀타미비르-결합된 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3의 결정 구조 표현을 보여준다. 오셀타미비르는 N2 NA의 R292, R371 및 R118과 상호 작용하는 것으로 나타났다.
도 25는 오셀타미비르-결합된 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI3을 보여주는 결정 구조의 대안적 관점을 나타낸다.
도 26A 및 26B는 2000년과 2020년 사이에 단리된 H3N2(n=60,597)로부터의 N2 NA 서열에서 FNI3 에피토프 보존의 분석을 나타낸다. 도 26A의 표는 분석된 N2 NA 서열 내 특정 위치에서 아미노산의 빈도를 보여준다. 원으로 표시된 값은 Glu221(E221, 17.41%), Ser245(S245, 33.69%), 및 Ser247(S247, 36.16%)의 가장 낮은 세 빈도에서 나타나는 아미노산을 나타낸다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 26B는 N2 NA의 E221, S245 및 S247과 FNI3로부터의 VH Y60 및 Y94의 상호작용을 나타낸다.
도 27은 2000년과 2020년 사이에 단리된 H1N1(n=57,597)로부터의 N1 NA 서열에서 FNI3 에피토프 보존(하단)과 N2 NA FNI3 에피토프 보존(상단; 도 26A 및 26B에 도시된 바와 같음)의 비교를 나타낸다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 28A 및 28B는 IAV A/Puerto Rico/8/34 또는 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 FNI3(도 28A에서 "mAb-03") 및 FNI9(도 28A에서 "mAb-09")의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 보여준다. 도 28A는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 도 28B는 연구의 타임라인과 종점을 보여준다.
도 29A-29D는 FNI3로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 29A), 2 mg/kg(도 29B), 0.6 mg/kg(도 29C) 또는 0.2 mg/kg(도 29D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 30A-30D는 FNI9로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 30A), 2 mg/kg(도 30B), 0.6 mg/kg(도 30C) 또는 0.2 mg/kg(도 30D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 31A-31D는 FNI3로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 31A), 2 mg/kg(도 31B), 0.6 mg/kg(도 31C) 또는 0.2 mg/kg(도 31D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 32A-32D는 FNI9로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 32A), 2 mg/kg(도 32B), 0.6 mg/kg(도 32C) 또는 0.2 mg/kg(도 32D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 받은 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면에서 왼쪽 그래프).
도 33A 및 33B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 33A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 33B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 생존율을 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 34A 및 34B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 34A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 34B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 감염 후 4일에서 14일까지의 체중 감소를 나타낸다(곡선 아래 면적으로 보고됨). 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 35A 및 35B는 FNI3 또는 FNI9로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 35A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 35B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터 혈청 내 IgG와 비교한 음의 곡선 아래 면적 피크 값을 나타낸다.
도 36은 tg32 마우스에서 FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS") 및 비교 항체 FM08 및 1G01("1G01-LS")(모두 M428L/N434S 돌연변이를 보유함)의 생체 내 약동학을 나타낸다. 계산된 반감기는 사각형으로 강조 표시된다.
도 37은 포유류 세포에서 일시적으로 발현된 그룹 I IAV-, 그룹 II IAV- 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV) NA의 패널에 대해 지시된 농도(μg/mL)에서 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 결합을 시험한 유세포 측정 검정의 결과를 요약한 것이다. 굵은 글꼴은 인간에게서 단리된 인플루엔자 바이러스로부터의 NA를 나타낸다. 오른쪽 스케일의 값은 계산된 EC50의 범위를 보여준다. 결합이 관찰된 최저 농도를 기준으로 값을 선택하였다.
도 38은 인간에서 순환하는 IAV로부터의 그룹 I(H1N1) 및 그룹 II(H3N2) NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 직사각형은 위치 245에서 글리코실화를 가지는 그룹 II(H3N2) NA 및 상응하는 시알리다제 억제 값(μg/ml의 IC50으로 보고됨)을 나타낸다.
도 39는 인간 조상, Victoria 계통 및 Yamagata 계통 IBV NA의 패널에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨).
도 40은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 비교 항-HA 항체 "FM08_LS" 및 "FHF11v9"의 중화 활성도 측정하였다.
도 41은 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17, FNI19 및 오셀타미비르(OSE)에 의한 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 1 nM = 150 μl.
도 42A 및 42B는 MUNANA 검정에 의해 측정된, OSE-내성 인플루엔자 바이러스로부터의 NA에 대한 FNI3 및 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). OSE 내성 IAV는 OSE(오셀타미비르) 내성 돌연변이를 수용하기 위해 역유전학으로 조작되었다. 도 42A는 Cal/09 N1 및 Cal/09 N1 OSE 내성(H1N1)에 대한 시알리다제 활성의 억제를 나타낸다. 도 42B는 Aichi/68 N2 및 Aichi/68 N2 OSE-내성 NA(H3N2)에 대한 시알리다제 활성의 억제를 나타낸다.
도 43은 FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 활성화는 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 A549 세포와 함께 인큐베이션한 후 평가되었다. M428L/N434S 돌연변이 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)를 보유하는 비교 항체 "FM08_MLNS"와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 44A 및 44B는 IAV(도 44A) 및 IBV(도 44B) NA와 함께 인큐베이션 후 FcγRIIIa(V158 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV 및 IBV NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 45A 및 45B는 IAV(도 45A) 및 IBV(도 45B) NA와 함께 인큐베이션 후 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV 및 IBV NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 시험하였다.
도 46은 FNI3, FNI9 또는 FM08_LS로 처리 후 A/Puerto Rico/8/34(H1N1) 또는 A/Hong Kong/8/68(H3N2)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터의 혈청 내 IgG와 비교한 음의 곡선 아래 면적 피크 값(μg/ml의 EC50으로 보고됨)을 나타낸다. 피팅 목적을 위해 비히클 그룹의 음성 피크 면적을 10-1 μg /ml의 IgG 농도에서 계산하였다.
도 47A 및 47B는 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)로 감염된 DBA/2J 마우스에서 FNI3_MLNS(도 47A에서 "mAb-03") 및 FNI9_MLNS(도 47A에서 "mAb-09")의 예방적 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 도 47A는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 도 47B는 연구의 타임라인 및 종점을 보여준다.
도 48A-48D는 FNI3 또는 FNI9로 전처리 후 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata)으로 감염된 DBA/2 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 IBV B/Victoria/504/2000 (Yamagata)의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 48A), 2 mg/kg(도 48B), 0.6 mg/kg(도 48C) 또는 0.2 mg/kg(도 48D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 49A-49D는 FNI3 또는 FNI9로 전처리 후 IBV B/Brisbane/60/2008(Victoria)로 감염된 DBA/2 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체는 IBV B/Brisbane/60/2008(Victoria)의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg(도 49A), 2 mg/kg(도 49B), 0.6 mg/kg(도 49C) 또는 0.2 mg/kg(도 49D)으로 투여되었다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 50A 및 50B는 FNI3 또는 FNI9로 전처리한 후 B/Victoria/504/2000(Yamagata)(도 50A) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)(도 50B)로 감염된 DBA/2 마우스에서 감염 후 4일에서 14일까지의 체중 감소를 나타낸다(곡선 아래 면적 체중의 변화로 보고됨). 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 51A 및 51B는 B/Victoria/504/2000(Yamagata)(도 51A) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)(도 51B)로 감염된 DBA/2 마우스에서 FNI3 또는 FNI9 처리 후 15일 동안의 생존율을 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리한 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 52A 및 52B는 IAV 및 IBV NA에서 FNI3 에피토프 보존을 나타낸다. 도 52A는 H1N2, H2N2, H3N2 및 H5N2 IAV(n=65,5262)(상단)로부터의 N2 NA 서열 대 H1N1 및 H5N1(N=58,954)(하단)로부터의 N1 NA 서열의 분석을 나타낸다. 모든 서열은 2000년과 2020년 사이에 단리되었다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 도 52A에서 사각형으로 둘러싸인 잔기는 도 52B의 하단 패널에 제시된 특정 아미노산을 나타낸다. 도 52B의 표는 N2 NA 내의 중요한 FNI3-상호작용 잔기 및 대응 FNI3 CDRH3 잔기를 나타낸다.
도 53은 IBV NA에서 FNI3 에피토프 보존을 나타낸다. B/Brisbane/60/2008의 IBV NA 서열(도면에서 "FluB Victoria"; N= 7,814; 상단) 대 B/Victoria/504/2000의 IBV NA 서열(도면에서 "FluB Yamagata"; N=13,243); 하단)이 분석되었다. 산성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파르트산, 글루탐산; 염기성 아미노산은 다음을 포함한다: 아르기닌, 히스티딘, 리신; 소수성 아미노산은 다음을 포함한다: 이소류신, 류신, 트립토판, 발린, 알라닌, 프롤린; 중성 아미노산은 다음을 포함한다: 아스파라긴, 글루타민; 극성 아미노산은 다음을 포함한다: 세린, 트레오닌, 글리신, 티로신. 사각형으로 둘러싸인 잔기는 IAV N1/N2 및 IBV 사이에서 100% 보존된 FNI3 HCDR3과 상호작용하는 1차 NA 잔기를 나타낸다.
도 54A 및 54B는 SCID tg32 마우스에서 투여 후 30일에 걸친, MLNS Fc 돌연변이(FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS"), FNI17("FNI17-LS"), FNI19("FNI19-LS")를 보유하는 FNI 항체 및 비교 항체 FM08_MLNS의 생체 내 약동학을 나타낸다. 시간 경과에 따른 농도(μg/ml로 보고됨)가 도 54A에 제시되어 있다. 도 54B의 표는 반감기(일 단위로 보고됨), AUC(일*μg/ml로 보고됨), 클리어런스(μg/ml로 보고됨) 및 부피(ml로 보고됨)를 나타낸다.
도 55는 인간 상피 2형(HEP-2) 세포에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 결합의 다중반응성의 결여를 보여준다.
도 56A-56C는 FNI 항체 및 FNI 항체의 항원 결합 단편(Fab) 도메인과 NA의 도킹을 보여주는 결정 구조 연구에 관한 것이다. 도 56A는 N2 NA에 대한 FNI3 도킹을 나타낸다. 도 56B는 NA와 도킹하는 FNI3, FNI17 및 FNI19 항체의 오버레이를 나타낸다. 도 56C는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"와 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 VH 아미노산 서열 정렬을 나타낸다. NA와 상호 작용하는 CDRH3는 직사각형으로 강조 표시된다.
도 57A는 경쇄 CDR(L-1, L-2, L-3) 및 중쇄 CDR(H-1, H-2, H-3)의 잔기를 포함하여 N2 NA와 복합체를 이룬 FNI17의 결정 구조를 나타낸다. H-CDR3과 N2 NA의 상호 작용은 오른쪽 패널에 향상된 해상도로 표시된다. 백분율은 계산된 결합 에너지에 대한 각 잔기의 기여도를 나타낸다. 도 57B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"를 갖는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 VH 아미노산 서열 정렬을 보여준다. NA와 상호 작용하는 VH 잔기 D107 및 R106은 직사각형으로 강조 표시된다.
도 58은 2009년부터 2019년까지 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에서 FNI NA 에피토프 내의 상위 5개 상호작용 잔기의 보존을 나타낸다.
도 59는 FNI9, 오셀타미비르(OSE) 및 비교 항체 "FM08"에 의한 핵단백질(NP) 염색에 의해 측정된 H3N2 A/Hong Kong/8/68 바이러스에 대한 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 계산된 IC50(nM), IC80(nM) 및 최대 억제(백분율로 보고됨)가 그래프 아래에 표시된다.
도 60은 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17 변이체 FNI17-v19 (VH: 서열 번호 199; VL: 서열 번호 201) 및 FNI19 변이체 FNI19-v3 (VH: 서열 번호 203; VL: 서열 번호 205)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다. 직사각형은 245번 위치에 글리코실화를 갖는 NA를 나타낸다. 비교 항체인 FM08_LS에 의한 중화도 측정하였다. 중화는 IC50(μg/ml 단위)으로 보고된다.
도 61은 "GAALIE" Fc 변이체 항체(Fc에서 G236A/A330L/I332E 돌연변이 포함)에 의한 FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. 활성화는 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 A549 세포와 인큐베이션 후 평가되었다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 GAALIE 돌연변이 보유 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 항체(접미사 "-GAALIE")와 함께 시험하였다. 비교 항체 "FM08_LS" 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)도 시험하였다.
도 62는 IAV A/Puerto Rico/8/34 또는 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 FM08_LS의 예방 활성을 FNI3_LS 및 FNI9_LS와 비교하기 위한 실험 간 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 표는 연구에 사용된 투여량 및 바이러스 균주를 보여준다. 연구의 타임라인 및 종점은 도 28B에 표시된 것과 동일하다. 실험 A("Exp-A")로부터의 체중 데이터가 도 29A-29D(FNI3-LS, A/Puerto Rico/8/34), 도 30A-30D(FNI9-LS, A/Puerto Rico/8/34), 도 31A-31D(FNI3-LS, A/Hong Kong/8/68), 및 도 32A-32D(FNI9-LS, A/Hong Kong/8/68)에 제시되어 있다. 실험 B("Exp-B")로부터의 체중 데이터는 도 63A-63D(FM08_LS, A/Puerto Rico/8/34) 및 도 64A-64D(FM08_LS, A/Hong Kong/8/68)에 제시되어 있다.
도 63A-63D는 FM08_LS로 전처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg (도 63A), 2 mg/kg (도 63B), 0.6 mg/kg (도 63C), 또는 0.2 mg/kg (도 63D)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 64A-64D는 FM08_LS로 전처리 후 H3N2 A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 15일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg (도 64A), 2 mg/kg (도 64B), 0.6 mg/kg (도 64C), 또는 0.2 mg/kg (도 64D)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 받은 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면에서 왼쪽 그래프).
도 65는 IAV A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 FNI17-LS 및 FM08_LS의 예방 활성을 비교하기 위한 생체 내 연구의 설계에 사용된 투여량을 나타낸다.
도 66A-66D는 FNI17-LS 또는 FM08_LS로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 12일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 항체를 A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 1 mg/kg (도 66A), 0.5 mg/kg (도 66B), 0.25 mg/kg (도 66C), 또는 0.125 mg/kg (도 66D)으로 투여하였다.
도 67은 FNI17-LS 또는 FM08_LS로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 12일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 68은 IAV A/Puerto Rico/8/34로 감염된 암컷 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르(OSE)의 생물학적 효능을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 타임라인은 감염 시간, OSE 투약 및 연구 종점을 나타낸다. OSE를 A/Puerto Rico/8/34의 10배 LD50(50% 치사량)으로 감염시키기 2시간 전에 시작하여 0일에 경구 위관 영양법에 의해 10 mg/kg으로 투여하였다. OSE를 감염 후 6시간에 동일한 용량으로 투여한 다음 감염 후 6일까지 하루에 두 번 투여하였다.
도 69는 오셀타미비르(OSE)로 전처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 14일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. 비히클 대조군(H2O)으로 전처리된 마우스의 체중 감소도 측정하였다.
도 70은 오셀타미비르(OSE)로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 14일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군(H2O)으로 전처리된 마우스의 생존율도 측정하였다.
도 71은 OSE로 처리되고 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 감염 후 2일 및 4일에 폐 조직을 수집하였다. 역가는 조직 그램당 50% 조직 배양 감염 용량(TCID50/g)으로 보고된다.
도 72A-72B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"에 정렬된 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 VH(도 72A) 및 VK(도 72B)의 산 서열을 보여준다.
도 73A-73E는 그룹 I(H1N1) IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI3 및 11개의 FNI3 변이체(FNI3-v8 내지 FNI3-v18; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 1 및 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 73A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 73B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 73C)에 대한 FNI3 및 FNI3 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 73D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 73E)에 대한 FNI3 및 FNI3 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 74A-74E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI9 및 5개의 FNI9 변이체(FNI9-v5 내지 FNI9-v9; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 1 및 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 74A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 74B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 74C)에 대한 FNI9 및 FNI9 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 74D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 74E)에 대한 FNI9 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 75A-75E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI17 및 11개의 FNI17 변이체(FNI17-v6 내지 FNI17-v16; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1(도 75A), H3N2 A/Tanzania/205/2010로부터의 NA2(도 75B) 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 75C)에 대한 FNI17 및 FNI17 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 75D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 75E)에 대한 FNI17 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 76A-76E는 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI19 및 5개의 FNI19 변이체(FNI19-v6 내지 FNI19-v5; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조)에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 그룹 I(H1N1) IAV NA1 (도 76A), H3N2 A/Tanzania/205/2010으로부터의 NA2(도 76B), 및 H7N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA9(도 76C)에 대한 FNI19 및 FNI19 변이체의 중화 활성이 제시된다. B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA2(도 76D) 및 B/Perth/211/2011로부터의 BNA7(도 76E)에 대한 FNI19 및 변이체의 중화 활성이 제시된다.
도 77A-77D는 유세포 측정법에 의해 측정된 IAV NA 및 IBV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 변이체의 결합을 나타낸다. 도 77A는 A/Stockholm/18/2007로부터의 N1, A/California/07/2009로부터의 N1 및 A/California/07/2009 I23R/H275Y로부터의 N1에 대한 결합을 나타낸다. 도 77B는 A/South Australia/34/2019로부터의 N2, A/Leningrad/134/17/57로부터의 N2 및 A/Washington/01/2007로부터의 N2에 대한 결합을 나타낸다. 도 77C는 A/Canada/rv504/2004로부터의 N3, A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 N6 및 A/Netherlands/078/03로부터의 N7에 대한 결합을 나타낸다. 도 77D는 B/Yamanashi/166/1998(Yamagata), B/Malaysia/2506/2004(Victoria) 및 B/Lee/10/1940(Ancestral)에 대한 결합을 나타낸다.
도 78A-78E는 특정 FNI 항체의 추가 특징을 나타낸다. 도 78A는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 VH 아미노산 서열과 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"의 것과의 정렬을 나타내며, 여기서 직사각형은 UCA 서열에서 양전하를 띤 Lys13 및 Lys19 잔기 및 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 동일한 위치에서 상응하는 잔기를 나타낸다. PyMOL을 사용하여 생성된 전체 표면 전하 지도가 pK 값 및 해상도(Å로 보고됨)와 함께 FNI3(도 78B), FNI9(도 78C), FNI17(도 78D) 및 FNI19(도 78E)에 대해 제시된다.
도 79A-79B는 tg32 마우스에서 FNI17-LS, FNI19-LS, FNI17-v19-LS, 및 FNI19-v3-LS에 대한 pK 데이터를 나타낸다. 마우스에 5 mg/kg 항체를 정맥 주사하였다. 도 79A의 표는 FNI17-LS 및 FNI19-LS(실험 1 "PK1") 및 FNI17-v19-LS 및 FNI19-v3-LS(실험 2 "PK2")에 대한 반감기, AUC(곡선 아래 면적), 정상 상태 클리어런스(CLss) 및 총 분석 부피(부피)에 대한 실험간 값을 나타낸다. 도 79B는 FNI17-LS, FNI19-LS, FNI17-v19-LS 및 FNI19-v3-LS에 대한 평균 반감기(일 단위로 보고됨) + 표준 오차를 나타낸다.
도 80은 IAV 또는 IBV로 감염된 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르(OSE)와 비교하여 FNI17-v19-rIgG1-LS의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. LD90(90% 치사량)으로 감염 24시간 전에 FNI17-v19-rIgG1-LS(9, 3, 0.9 또는 0.3 MPK)를 마우스에 사전 투여하였다. OSE를 감염 2시간 전부터 챌린지 후 3 내지 4일까지 매일 10 mg/kg을 경구 투여하였다. 마우스에 IAV(H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68) 또는 IBV(B/Victoria/504/2000 (Yamagata) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria))을 투여하였다. FcγR 및 보체(FNI17-v19-rIgG1-GRLR)에 의한 결합을 폐지하는 Fc 돌연변이를 포함하는 FNI17-v19 버전을 또한 IAV 바이러스(H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68)를 받은 그룹에서 시험하였다. 감염 3일 후 안락사시킨 마우스에서 폐 플라크 형성 단위(PFU)를 평가하였다.
도 81A-81D는 도 80에 기재된 생체 내 연구로부터 감염 3일 후 안락사시킨 BALB/c 마우스에서의 폐 바이러스 역가를 보여준다. H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 81A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 81B) 및 IBV B/Victoria/504/2000(Yamagata; 도 81C) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria; 도 81D)로 감염 후 폐 바이러스 역가가 제시된다.
도 82는 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 인간화 FcγR 마우스에서 FNI17-v19의 예방 활성을 평가하기 위한 생체 내 연구의 설계를 나타낸다. 5LD50(50% 치사량의 5배)으로 감염 24시간 전에 마우스에 항체를 사전 투여하였다.
도 83A-83C는 FNI17-v19로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 인간화 FcgR 마우스에서 14일에 걸친 체중 측정치를 나타낸다. A/Puerto Rico/8/34의 5LD50으로 감염시키기 하루 전에 항체를 0.9 mg/kg(도 83A), 0.3 mg/kg(도 83B) 또는 0.09 mg/kg(도 83C)으로 투여하였다. 비히클 대조군을 투여한 마우스의 체중도 측정하였다(각 도면의 왼쪽 그래프).
도 84는 도 82에 기재된 연구로부터의 FNI17-v19로 전처리된 인간화 FcγR 마우스로부터의 혈청 중 인간 IgG의 감염전 농도를 나타낸다. 5LD50 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염시키기 2시간 전에 마우스로부터 혈청을 수집하였다.
도 85는 시알산과의 상호작용에 관여하는 NA 상의 고도로 보존된 잔기를 갖는 FNI 항체 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 사이의 결합 에너지를 나타낸다.
도 86은 H1N1 돼지 유라시아 조류 유사(EA) 균주, A/Swine/Jiangsu/J004/2018로 감염된 포유동물 세포 상에서 발현된 NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 결합을 유세포 측정법에 의해 측정한 것을 나타낸다. 모의 항체 염색이 음성 대조군으로 제시된다.
도 87A-87D는 그룹 II H7N3 A/chicken/Jalisco/PAVX17170/2017 IAV(도 87A), 그룹 II H5N6 A/chicken/Suzhou/j6/2019 IAV(도 87B), 그룹 II H7N7 A/chicken/Netherlands/621572/03 IAV(도 87C), 및 그룹 I H5N8 A/chicken/Russia/3-29/2020 IAV(도 87D) NA에 대한 FNI17-v19 또는 OSE에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(nM 단위의 IC50으로 보고됨).
도 88은 BLI(Bio-Layer Interferometry)에 의해 측정된 N9 NA에 대한 FNI3, FNI9 및 FNI17의 결합 동역학을 나타낸다. KD는 kdis/kon의 비율로부터 계산되었으며, 여기서 kdis는 (1/s)로 계산된 해리이고 kon은 (1/Ms)로 계산된 결합이다.
도 89는 그룹 II H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV NA에 대한 FNI3, FNI9, FNI17, FNI17-v19, FNI19 및 FNI19-v3에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(ng/ml로 보고됨).
도 90은 그룹 II H7N9 A/Anhui/1/2013 IAV와의 인큐베이션 후 FcγRIIIa(V158 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. A/Anhui/1/2013 IAV의 N9를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 함께 인큐베이션한 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT 매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 음성 대조군 항체 (FY1-GRLR)와 함께 시험하였다.
도 91A-91B는 2007년부터 2019년까지 그룹 I H1N1 IAV(도 91A) 및 그룹 II H3N2 IAV(도 91B)에서 FNI NA 결합 부위 내의 OSE-내성 돌연변이의 유병률을 나타낸다.
도 92A-92B는 선택적으로 하나 이상의 OSE-내성 돌연변이를 가지는 그룹 I H1N1 IAV 균주(도 92A) 및 그룹 II H3N2 IAV 균주(도 92B)에 대한 FNI17, FNI19 및 오셀타미비르(OSE)에 의한 시험관 내 중화 활성을 나타낸다. 도 92A는 A/Puerto Rico/8/34(도면에서 "PR8") 및 A/California/07/2009(도면에서 "Cal/09")뿐만 아니라 OSE 내성 돌연변이 H275Y, E119D 또는 S247N 및 H275Y 모두를 포함하도록 역유전학으로 조작된 A/California/07/2009에 대한 활성을 나타낸다. 도 92B는 A/Hong Kong/8/68(도면에서 "HK/68") 및 OSE 내성 돌연변이 I222V 또는 N294S를 보유하도록 역유전학으로 조작된 A/Hong Kong/8/68에 대한 활성을 나타낸다.
도 93은 유세포 분석법으로 측정하고 평균 형광 강도(MFI)로 나타낸, N1_Vic_2019, N2_HK_2019, B/Phuket/3073/2013(Yamagata)(도면에서 "B/Phuket_2013(Yam)"), B/Malaysia/2506/2004(Victoria)(도면에서 "B/Malaysia_2004(Vic)"), 및 B/Washington/02/2019(Victoria)(도면에서 "B/Wash_2019(Vic)")로부터의 NA에 대한 FNI17-v19의 결합을 나타낸다. 세포를 음성 대조군으로서 모의 염색하였다.
도 94A-94B는 다양한 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리되고 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 94A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 94B)로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 폐 조직을 감염 후 4일(도 94A) 또는 3일(도 94B)에 수집하였다. 역가는 도 94A에서 조직 그램당 log 50% 조직 배양 감염 용량(Log TCID50/g)으로 보고된다. 역가는 도 94B에서 조직 그램당 로그 플라크 형성 단위(Log pfu/g)로 보고된다. 도 94A 및 94B에서 그래프의 점 플롯의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터이다.
도 95A-95B는 제시된 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 95A) 또는 H3N2A/Hong Kong/8/68(도 95B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 곡선 아래 면적 분석으로부터의 감염 후 0일부터 14일까지 체중 감소(음의 곡선 아래 면적 피크 값으로 보고됨)를 나타낸다. 도 95A 및 95B에서 그래프의 점 플롯 및 막대의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터(및 관련 막대)이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터(및 관련 막대)이다.
도 96A-96B는 FNI17 또는 OSE 처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 96A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 96B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터 혈청 내 IgG와 비교하여 음의 곡선 아래 면적 피크 값을 나타낸다. IC50, IC70 및 IC90이 μg/ml로 보고된다.
도 97A-97B는 FNI17 또는 OSE처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 97A) 또는 H3N2A/Hong Kong/8/68(도 97B)로 감염된 BALB/c 마우스에 대한 맥박 산소 측정법에 의해 측정된 혈액 내 산소 포화도를 나타낸다(말초 모세혈관 산소 포화도(SpO2)로 보고됨). 도 97A 및 97B에서, 그래프에서 5개 막대(및 관련 점 플롯 클러스터)의 각 그룹의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 각 막대 세트에서 가장 왼쪽에 있는 막대이고 OSE는 각 막대 세트에서 가장 오른쪽에 있는 막대이다.
도 98A-98B는 FNI17 처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 98A) 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 98B)로 감염된 BALB/c 마우스에서 산소 포화도(감염 후 8일째)와 바이러스 폐 역가(감염 후 4일째) 간의 상관관계를 나타낸다(도 98A). Pearson 계수가 상관 관계를 정량화하기 위해 계산되었다.
도 99A-99C는 3마리의 개별 마우스("1501" - "1503"; "2501" - "2503")에 대한 FNI17-v19 및 FNI19-v3의 생체 내 약동학을 나타낸다. 1500시간에 걸친 개별 마우스에 대한 데이터가 FNI17-v19(도 99A) 및 FNI19v3(도 99B) 처리 그룹에 대해 제시되고, 64일에 걸친 것이 도 99C에 조합된다.
도 100은 마우스에서 평가된 FNI17-v19 및 FNI19-v3의 생체 내 약동학적 특성을 요약한 것이다. FM08_LS가 비교 항체로 표시된다.
도 101A-101B는 6,000개의 인간 막 단백질 어레이를 사용하여 측정된 FNI17-v19(도 101A) 및 FNI19-v3(도 101B)에 의한 표적외 결합의 결여를 나타낸다.
도 102는 Non-GLP-TCR(non-Good Laboratory Practice Tissue Cross Reactivity Testing)을 사용하여 측정된, 인간 조직에서 FNI17-v19 및 FNI19-v3에 의한 특이적 양성 염색의 결여를 나타낸다. 배경 염색을 평가하기 위해 IgG를 시험하였다.
도 103A-103C는 "GAALIE" Fc 변이체 항체(Fc에 G236A/A330L/I332E 돌연변이 포함)에 의한 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 항체 활성화를 나타낸다. 상이한 IAV(도 103A에서 H1N1 A/California/07/2009; 도 103B에서 H3N2 A/Hong Kong/8/68) 및 IBV(도 103C에서 B/Malaysia/2506/2004) NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염된 Expi-CHO 세포와 인큐베이션 후 조작된 Jurkat 세포에서 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 활성화를 측정하였다. FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19를 GAALIE 돌연변이를 보유하는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 항체(도면에서 접미사 "-GAALIE")와 함께 시험하였다. 비교 항체 "FM08_LS" 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)도 시험하였다. FM08_LS 및 FY1-GRLR은 도 103A-103C에서 가장 낮은 측정값을 가졌다.
도 104는 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV, 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17-v19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다.
도 105는 ViroSpot 미세 중화 분석에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria 계통 IBV, 및 Yamagata 계통 IBV NA의 FNI17-v19에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다. B/Brisbane/2008은 직사각형으로 강조 표시된다.
도 106A-106B는 다양한 용량의 FNI17 또는 OSE로 처리되고 H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 106A) 또는 H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 106B)로 감염된 BALB/c 마우스의 폐 균질물에서의 바이러스 역가를 나타낸다. 폐 조직을 감염 후 3일(도 106A) 또는 4일(도 106B)에 수집하였다. 역가는 도 106A에서 조직 그램당 로그 플라크 형성 단위(Log pfu/g)로 보고된다. 역가는 도 106B에서 조직 그램당 log 50% 조직 배양 감염 용량 (Log TCID50/g)으로 보고된다. 타원은 OSE와 동일한 바이러스성 폐 감소를 일으킬 수 있는 FNI17 용량(mg/kg)을 강조 표시한다. 도 106A 및 106B에서 그래프의 점 플롯 클러스터의 왼쪽에서 오른쪽 배열은 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다. 예를 들어 비히클은 그래프에서 가장 왼쪽에 있는 점의 클러스터이고 OSE는 그래프에서 가장 오른쪽에 있는 점의 클러스터이다.
도 107은 인플루엔자로 감염되고 FNI17 또는 OSE로 처리된 BALB/c 마우스의 혈청에서 IgG와 비교한 "% 보호"를 보여준다. IC50, IC70 및 IC90이 μg/ml로 보고된다.
도 108은 FNI17 또는 FM08_LS로 전처리 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/3으로 감염된 마우스에서 감염 후 0일부터 14일까지의 체중 감소(음의 곡선 아래 면적 피크 값으로 보고됨)를 나타낸다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 체중 감소도 측정하였다. 1 mg/kg 용량(막대 3개의 가장 왼쪽 세트)에서 막대의 왼쪽에서 오른쪽 순서는 도면 키의 위에서 아래 방향에 해당한다(즉, 비히클은 1 mg/kg 사분면의 가장 왼쪽 막대이고, FM08_LS는 맨 오른쪽 막대임). 다른 용량에서 왼쪽 막대는 FNI17을 나타내고 오른쪽 막대는 FM08_LS를 나타낸다.
도 109는 FNI17 또는 FM08_LS로 처리한 후 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 13일에 걸친 생존을 보여준다. 비히클 대조군으로 전처리된 마우스의 생존율(최단 생존 곡선율)도 측정되었다.
도 110은 야생형과 비교하여 변이체에 대한 이득/손실을 포함한 특정 FNI3, FNI9, FNI17 또는 FNI19 mAbs의 항체 역가를 나타낸다.
도 111은 FNI3 및 11개의 FNI3 변이체(FNI3-v8 내지 FNI3-v18)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI3에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 112는 FNI9 및 5개의 FNI9 변이체(FNI9-v5 내지 FNI9-v9)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI9에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 113은 FNI17 및 11개의 FNI17 변이체(FNI17-v6 내지 FNI17-v16)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI17에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 114는 FNI19 및 5개의 FNI19 변이체(FNI19-v1 내지 FNI19-v5)에 대해 유세포 측정법(MFI로 보고됨)에 의해 측정된, 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV NA에 대한 결합을 나타낸다. 변이체에 대한 MFI 값이 야생형 FNI19에 대한 MFI 값으로 정규화되었다.
도 115A-115D는 BLI(Bio-Layer Interferometry)에 의해 측정된, GAALIE 돌연변이(도면에서 접미사 "-GAALIE")를 갖는 FNI3-LS, FNI9-LS, FNI17-LS, 및 FNI19-LS 항체와 함께 FNI3-LS, FNI9-LS, FNI17-LS, 및 FNI19-LS의 상이한 FcγR에 대한 결합 동역학을 나타낸다. 화살표는 FNI17-LS 및 FNI17-LS-GAALIE에 대한 곡선을 나타낸다. 도 115A는 FcγRIIA(H)에 대한 결합을 나타내고, 도 115B는 FcγRIIA(R)에 대한 결합을 나타내고, 도 115C는 FcγRIIIA(F)에 대한 결합을 나타내고, 도 115D는 FcγRIIIA(V)에 대한 결합을 나타낸다.
상세한 설명
인플루엔자 A 바이러스(IAV) 및 인플루엔자 B 바이러스(IBV)와 같은 다양한 인플루엔자 바이러스에에 결합하여 감염을 강력하게 중화시킬 수 있는 항체 및 항원 결합 단편이 본원에서 제공된다. 또한 항체 및 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 및 관련 조성물뿐만 아니라 대상체에서 인플루엔자 바이러스 감염을 치료(예를 들어, 감소, 지연, 제거 또는 예방)하고/거나 대상체에서 인플루엔자 바이러스 감염 치료용 약제의 제조를 위한 항체, 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 관련 조성물의 사용 방법이 제공된다.
본 실시예에서 교시된 바와 같이, 광범위한 IAV 및 IBV NA에 결합하고 IAV 및 IBV 바이러스에 대해 중화/억제 기능을 갖는 다수의 클론 관련 항체가 확인되었다. 항체의 서열 변이체를 생성하고 특성화하였다. 개시된 특정 실시양태는 이러한 항체, 이의 항원 결합 단편, 및 관련 조성물 및 용도에 관한 것이다.
본 개시내용을 보다 상세하게 설명하기 전에, 본원에서 사용되는 특정 용어의 정의를 제공하는 것이 이를 이해하는 데 도움이 될 수 있다. 추가적인 정의가 본 개시내용 전반에 걸쳐 제시된다.
본 설명에서, 임의의 농도 범위, 백분율 범위, 비율 범위, 또는 정수 범위는 달리 표시되지 않는 한 기재된 범위 내의 임의의 정수값 및 적절한 경우 이의 분수(예컨대, 정수의 10분의 1 및 100분의 1)를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 물리적 특성, 예컨대 중합체 서브유닛, 크기 또는 두께와 관련하여 본원에 기재된 임의의 수치 범위는, 달리 표시되지 않는 한, 기재된 범위 내의 임의의 정수를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서 사용되는 "약"은 달리 표시되지 않는 한, 지정된 범위, 값 또는 구조의 ±20%를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "하나"는 열거된 성분의 "하나 이상"을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 대안(예를 들어, "또는")의 사용은 대안 중 어느 하나, 모두 또는 이의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 본원에 사용된 용어 "포함한다", "갖는다" 및 "포함하다"는 동의적으로 사용되고, 이의 용어 및 변형체는 비제한적인 것으로 해석되도록 의도된다.
"선택적" 또는 "선택적으로"는 이후에 설명되는 요소, 구성 요소, 이벤트 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않을 수 있으며, 설명은 요소, 구성 요소, 이벤트 또는 상황이 발생하는 경우와 발생하지 않는 경우를 포함함을 의미한다.
또한, 본원에 기술된 구조 및 서브유닛의 다양한 조합으로부터 유래된 개별 작제물 또는 작제물 그룹은 각각의 작제물 또는 작제물 그룹이 개별적으로 기재된 것과 동일한 정도로 본 출원에 개시되어 있는 것으로 이해하여야 한다. 따라서, 특정 구조 또는 특정 서브유닛의 선택은 본 발명의 범위 내에 있다.
용어 "본질적으로 이루어지는"은 "포함하는"과 동등하지 않고, 청구항의 명시된 물질 또는 단계, 또는 청구 대상의 기본 특성에 실질적으로 영향을 주지 않는 것을 지칭한다. 예를 들어, 단백질 도메인, 영역 또는 모듈(예를 들어, 결합 도메인) 또는 단백질은 도메인, 영역, 모듈 또는 단백질의 아미노산 서열이 조합해서 도메인, 영역, 모듈 또는 단백질 길이의 최대 20%(예를 들어, 최대 15%, 10%, 8%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%)에 기여하고 도메인(들), 영역(들), 모듈(들) 또는 단백질의 활성도(예를 들어, 결합 단백질의 표적 결합 친화성)에 실질적으로 영향을 미치지 않는(즉, 50%를 초과하여 활성도를 감소하지 않는, 예컨대 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 이하) 연장, 결실, 돌연변이, 또는 이들의 조합(예를 들어, 아미노- 또는 카복시-말단 또는 도메인 사이의 아미노산)을 포함할 경우 특정한 아미노산 서열로 "본질적으로 이루어진다".
본원에 사용된 "아미노산"은 자연 발생 및 합성 아미노산뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전자 코드에 의해 암호화되는 아미노산뿐만 아니라 나중에 변형된 아미노산, 예를 들어 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본적 화학 구조, 즉 수소, 카복실기, 아미노기 및 R기와 결합한 α-탄소를 가지는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭시드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 백본을 가지지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 보유한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 다른 구조를 가지지만 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 화학적 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 "돌연변이"는 각각 참조 또는 야생형 핵산 분자 또는 폴리펩티드 분자와 비교하여 핵산 분자 또는 폴리펩티드 분자의 서열에서의 변화를 지칭한다. 돌연변이는 뉴클레오티드(들) 또는 아미노산(들)의 치환, 삽입 또는 결실을 포함하여 몇 가지 상이한 유형의 서열 변화를 야기할 수 있다.
"보존적 치환"은 특정 단백질의 결합 특성에 유의적으로 영향을 주지 않거나 변경시키지 않는 아미노산 치환을 의미한다. 일반적으로, 보존적 치환은 치환된 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 보존적 치환은 다음 그룹 중 하나에서 발견되는 치환을 포함한다: 그룹 1: 알라닌(Ala 또는 A), 글리신(Gly 또는 G), 세린(Ser 또는 S), 트레오닌(Thr 또는 T); 그룹 2: 아스파르트산(Asp 또는 D), 글루탐산(Glu 또는 Z); 그룹 3: 아스파라긴(Asn 또는 N), 글루타민(Gln 또는 Q); 그룹 4: 아르기닌(Arg 또는 R), 리신(Lys 또는 K), 히스티딘(His 또는 H); 그룹 5: 이소류신(Ile 또는 I), 류신(Leu 또는 L), 메티오닌(Met 또는 M), 발린(Val 또는 V); 및 그룹 6: 페닐알라닌(Phe 또는 F), 티로신(Tyr 또는 Y), 트립토판(Trp 또는 W). 부가적으로 또는 대안적으로, 아미노산은 유사한 기능, 화학적 구조 또는 조성(예를 들어, 산성, 염기성, 지방족, 방향족 또는 황 함유)에 의해 보존적 치환기 그룹들로 그룹화될 수 있다. 예를 들어, 지방족 그룹은 치환을 위해 Gly, Ala, Val, Leu 및 Ile을 포함할 수 있다. 다른 보존적 치환 그룹은 다음을 포함한다: 황 함유: Met 및 시스테인(Cys 또는 C); 산성: Asp, Glu, Asn 및 Gln; 작은 지방족, 비극성 또는 약간 극성인 잔기: Ala, Ser, Thr, Pro 및 Gly; 음으로 하전된 극성 잔기 및 이의 아미드: Asp, Asn, Glu 및 Gln; 양으로 하전된 극성 잔기: His, Arg 및 Lys; 큰 지방족, 비극성 잔기: Met, Leu, Ile, Val 및 Cys; 및 큰 방향족 잔기: Phe, Tyr 및 Trp. 추가 정보는 [Creighton (1984) Proteins, W.H. Freeman and Company]에서 찾을 수 있다.
본원에서 사용된 "단백질" 또는 "폴리펩티드는 아미노산 잔기의 중합체를 지칭한다. 단백질은 자연 발생 아미노산 중합체뿐만 아니라 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 자연 발생 아미노산의 인공 화학 모방체인 아미노산 중합체 및 자연 발생 아미노산 중합체에 적용된다. 본 개시내용의 단백질, 펩티드 및 폴리펩티드의 변이체가 또한 고려된다. 특정 실시양태에서, 변이체 단백질, 펩티드 및 폴리펩티드는 본원에 기재된 바와 같은 정의 또는 참조 아미노산 서열의 아미노산 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99.9% 동일하다.
"핵산 분자" 또는 "폴리뉴클레오티드" 또는 "폴리핵산"은 천연 서브유닛(예를 들어, 퓨린 또는 피리미딘 염기) 또는 비천연 서브유닛(예를 들어, 모르폴린 고리)로 구성될 수 있는 공유 결합된 뉴클레오티드를 포함하는 중합 화합물을 지칭한다. 퓨린 염기는 아데닌, 구아닌, 하이포잔틴 및 잔틴을 포함하고, 피리미딘 염기는 우라실, 티민 및 시토신을 포함한다. 핵산 분자는 mRNA, microRNA, siRNA, 바이러스 게놈 RNA 및 합성 RNA를 포함하는 폴리리보핵산(RNA)과 cDNA, 게놈 DNA 및 합성 DNA를 포함하는 폴리데옥시리보핵산(DNA, 데옥시리보핵산이라고도 함)을 포함하며 이들은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 단일 가닥일 경우, 핵산 분자는 암호화 가닥 또는 비-암호화 가닥(안티-센스 가닥)일 수 있다. 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 분자는 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 모든 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 뉴클레오티드 서열의 일부 버전은 또한 인트론(들)이 동시 또는 사후 전사 메카니즘을 통해 제거될 정도로 인트론(들)을 포함할 수 있다. 다른 말로 하면, 상이한 뉴클레오티드 서열은 스플라이싱(splicing)에 의해, 또는 유전 코드의 중복 또는 축퇴의 결과로 동일한 아미노산 서열을 암호화할 수 있다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오시드, cap-1 구조, cap-2 구조, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 슈도우리딘, N6-메틸아데논신, 5-메틸시티딘, 2-티오우리딘, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 슈도우리딘은 N1-메틸슈도우리딘을 포함한다. 이들 특징은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 변형된 뉴클레오시드 및 mRNA 특징이 본원에 참조로 포함되는 문헌[Zhang et al. Front. Immunol., DOI=10.3389/fimmu.2019.00594 (2019); Eyler et al. PNAS 116(46): 23068-23071; DOI: 10.1073/pnas.1821754116 (2019); Nance and Meier, ACS Cent. Sci. 2021, 7, 5, 748-756; doi.org/10.1021/acscentsci.1c00197 (2021), 및 van Hoecke and Roose, J. Translational Med 17:54 (2019); https://doi.org/10.1186/s12967-019-1804-8]에서 검토되었다.
본 개시내용의 핵산 분자의 변이체가 또한 고려된다. 변이체 핵산 분자는 약 65-68℃에서 0.015M 염화나트륨, 0.0015M 시트르산나트륨, 또는 약 42℃에서 0.015M 염화나트륨, 0.0015M 시트르산나트륨 및 50% 포름아미드의 엄격한 혼성화 조건하에서 폴리뉴클레오티드로 혼성화되거나, 본원에 기술된 정의된 또는 참조 폴리뉴클레오티드의 핵산 분자와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 및 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 99.9% 동일하다. 핵산 분자 변이체는 표적 분자에 결합하는 것과 같이, 본원에 기술된 기능성을 갖는 이의 결합 도메인을 암호화하는 능력을 보유한다.
"서열 동일성 백분율"은 서열을 비교함으로써 결정된 바와 같은 2 이상의 서열 사이의 관계를 지칭한다. 서열 동일성을 결정하기 위한 바람직한 방법은 비교되는 서열간에 최상의 일치를 제공하도록 설계된다. 예를 들어, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어, 최적 정렬을 위해 제1 및 제2 아미노산 또는 핵산 서열 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있음). 또한, 비-상동 서열은 비교 목적상 무시될 수 있다. 본원에서 언급된 서열 동일성 백분율은 달리 지시되지 않는 한 참조 서열의 길이에 걸쳐 계산된다. 서열 동일성과 유사성을 결정하는 방법은 공개적으로 사용 가능한 컴퓨터 프로그램에서 찾을 수 있다. 서열 정렬 및 동일성 백분율 계산은 BLAST 프로그램(예를 들어, BLAST 2.0, BLASTP, BLASTN 또는 BLASTX)을 사용하여 수행될 수 있다. BLAST 프로그램에서 사용되는 수학적 알고리즘은 Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997에서 찾을 수 있다. 본 개시내용의 맥락에서, 서열 분석 소프트웨어가 분석을 위해 사용되는 경우, 분석 결과는 참조된 프로그램의 "기본값(default value)"에 기초한 것으로 이해될 것이다. "기본값"은 처음 초기화될 때 소프트웨어와 함께 원래 로드되는 값 또는 매개 변수 세트를 의미한다.
용어 "단리된"은 물질이 이의 본래의 환경(예를 들어, 천연 유래라면 천연 환경)으로부터 제거된다는 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 존재하는 천연 유래 핵산 또는 폴리펩티드는 단리된 것이 아니지만, 천연 시스템에서 공동 존재하는 물질 중 일부 또는 모두로부터 분리된 동일한 핵산 또는 폴리펩티드는 단리된 것이다. 이러한 핵산은 벡터의 일부일 수 있고/있거나 이러한 핵산 또는 폴리펩티드는 조성물의 부분(예를 들어, 세포 용해물)일 수 있으며, 이러한 벡터 또는 조성물은 핵산 또는 폴리펩티드에 대한 천연 환경의 부분이 아니라는 점에서 여전히 단리된 것이다. "단리된"은 또한 일부 실시양태에서 인체 외부에 있는 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 기술할 수 있다.
용어 "유전자"는 폴리펩티드 쇄를 생성하는데 관여하는 DNA 또는 RNA의 세그먼트를 의미하고; 특정 맥락에서, 이는 개별 암호화 세그먼트(엑손) 사이의 개재 서열(인트론)뿐만 아니라 암호화 영역(예를 들면, 5' 비번역 영역(UTR) 및 3' UTR)에 선행 및 후행 영역을 포함한다.
"기능성 변이체"는 본 개시내용의 모 또는 참조 화합물과 구조적으로 유사하거나 실질적으로 구조적으로 유사한 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭하지만, 조성이 다소 상이해(예를 들어, 하나의 염기, 원자 또는 작용기가 상이하거나, 추가되거나, 제거됨), 폴리펩티드 또는 암호화된 폴리펩티드가 적어도 50% 효율, 바람직하게는 모 폴리펩티드의 활성 수준의 적어도 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100%로 모 폴리펩티드의 적어도 하나의 기능을 수행할 수 있는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 달리 말하면, 본 개시내용의 폴리펩티드 또는 암호화된 폴리펩티드의 기능성 변이체는 기능성 변이체가 선택된 분석, 예컨대 결합 친화도를 측정하기 위한 분석(예를 들어, 결합 친화 상수(Ka) 또는 해리(KD) 상수를 측정하는 Biacore® 또는 사량체 염색)를 측정하기 위한 분석법에서 모 또는 참조 폴리펩티드와 비교하여 성능의 50% 이하의 감소를 나타내는 경우 "유사한 결합", "유사한 친화성" 또는 "유사한 활성"을 갖는다.
본원에 사용된 "기능성 부분" 또는 "기능성 단편"은 모 또는 참조 화합물의 도메인, 부분 또는 단편만을 포함하는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭하고, 폴리펩티드 또는 암호화된 폴리펩티드는 모 또는 참조 화합물의 도메인, 부분 또는 단편과 관련된 적어도 50% 활성을 유지하며, 바람직하게는 적어도 55%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9%, 또는 100% 수준의 모 폴리펩티드의 활성을 나타내거나 생물학적 이점(예: 효과기 기능)을 제공한다. 본 개시내용의 폴리펩티드 또는 암호화된 폴리펩티드의 "기능성 부분" 또는 "기능성 단편"은 기능성 부분 또는 단편이 선택된 분석에서 모 또는 참조 폴리펩티드와 비교하여 성능의 50% 이하(바람직하게는 친화성에 대해 모 또는 참조 폴리펩티드와 비교하여 20% 이하 또는 10% 이하, 또는 로그 차이 이하)의 감소를 나타내는 경우 "유사한 결합" 또는 "유사한 활성"을 갖는다.
본원에서 사용된 용어 "조작된", "재조합" 또는 "비-천연"은 적어도 하나의 유전자 변경을 포함하거나 외인성 또는 이종성 핵산 분자의 도입에 의해 변형된 유기체, 미생물, 세포, 핵산 분자, 또는 벡터를 지칭하며, 여기서 변경 또는 변형은 유전 공학(즉, 인간 개입)에 의해 도입된다. 유전적 변형은 예를 들어, 기능성, RNA, 단백질, 융합 단백질 또는 효소를 암호화하는 발현가능한 핵산 분자, 또는 세포의 유전 물질의 다른 핵산 분자 첨가, 결실, 치환 또는 다른 기능성 파괴를 도입하는 변형을 포함한다. 추가의 변형은 예를 들어 변형이 폴리뉴클레오티드, 유전자 또는 오페론의 발현을 변경시키는 비-암호화 조절 영역을 포함한다.
본원에 사용된 "이종" 또는 "비내인성" 또는 "외인성"은 숙주 세포 또는 대상에 고유하지 않은 임의의 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성, 또는 변경된 숙주 세포 또는 대상에 고유한 임의의 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성을 의미한다. 이종성, 비내인성 또는 외인성은 고유 및 변경된 유전자, 단백질, 화합물, 또는 핵산 분자 간에 구조, 활성 또는 둘 다가 다르도록 돌연변이되거나 다르게 변경된 유전자, 단백질, 화합물 또는 핵산 분자를 포함한다. 특정 실시양태에서, 이종성, 비-내인성 또는 외인성 유전자, 단백질 또는 핵산 분자(예를 들어, 수용체, 리간드 등)는 숙주 세포 또는 대상에 대해 내인성이 아닐 수 있지만, 대신 이러한 유전자를 암호화하는 핵산, 단백질 또는 핵산 분자가 접합, 형질전환, 형질감염, 전기천공 등에 의해 숙주 세포에 첨가될 수 있으며, 여기서 첨가된 핵산 분자는 숙주 세포 게놈에 통합되거나 염색체 외 유전 물질로 존재할 수 있다(예를 들어, 플라스미드 또는 기타 자가 복제 벡터). 용어 "상동적" 또는 "상동성"은 숙주 세포, 종 또는 균주에서 발견되거나 유래된 유전자, 단백질, 화합물, 핵산 분자 또는 활성을 지칭한다. 예를 들어, 이종 또는 외인성 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 암호화하는 유전자는 천연 폴리뉴클레오티드 또는 유전자와 상동성일 수 있고 상동성 폴리펩티드 또는 활성을 암호화할 수 있지만, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 변경된 구조, 서열, 발현 수준 또는 이들의 조합을 가질 수 있다. 비내인성 폴리뉴클레오티드 또는 유전자뿐만 아니라 암호화된 폴리펩티드 또는 활성은 동일한 종, 상이한 종, 또는 이들의 조합으로부터 유래될 수 있다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포에 고유한 핵산 분자 또는 이의 일부는 그것이 변경되거나 돌연변이된 경우 숙주 세포에 대해 이종성인 것으로 간주될 것이며, 숙주 세포에 고유한 핵산 분자는 그것이 이종 발현 조절 서열로 변경되거나 숙주 세포 고유의 핵산 분자와 정상적으로 연관되지 않는 내인성 발현 조절 서열로 변경된 경우 이종성인 것으로 간주될 것이다. 또한, "이종"이라는 용어는 숙주 세포에 대해 상이하거나 변경되거나 내인성이 아닌 생물학적 활성을 지칭할 수 있다. 본원에 기재된 바와 같이, 복수의 이종 핵산 분자는 별개의 핵산 분자로서, 복수의 개별적으로 제어되는 유전자로서, 폴리시스트론 핵산 분자로서, 융합 단백질을 암호화하는 단일 핵산 분자 또는 이들의 임의의 조합으로서 숙주 세포에 도입될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "내인성" 또는 "천연"은 숙주 세포 또는 대상에 정상적으로 존재하는 폴리뉴클레오티드, 유전자, 단백질, 화합물, 분자 또는 활성을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "발현"은 유전자와 같은 핵산 분자의 암호화 서열에 기초하여 폴리펩티드가 생성되는 과정을 지칭한다. 이 과정은 전사, 전사 후 조절, 전사 후 변형, 번역, 번역 후 조절, 번역 후 변형, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 발현된 핵산 분자는 전형적으로 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터)에 작동 가능하게 연결된다.
용어 "작동 가능하게 연결된"은 하나의 기능이 다른 것에 의해 영향을 받도록 단일 핵산 단편상에서의 2 개 이상의 핵산 분자의 결합을 지칭한다. 예를 들어, 프로모터는 암호화 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있는 경우 암호화 서열과 작동 가능하게 연결된다(즉, 암호화 서열은 프로모터의 전사 제어하에 있음). "연결되지 않은"은 유전적 요소가 서로 밀접하게 연관되어 있지 않고 하나의 기능이 다른 하나에 영향을 미치지 않음을 의미한다.
본원에 기술된 바와 같이, 복수의 이종 핵산 분자는 분리된 핵산 분자로서, 복수의 개별적으로 제어되는 유전자로서, 다시스트론성 핵산 분자로서, 융합 단백질을 암호화하는 단일 핵산 분자(예를 들어, 항체의 중쇄)로서, 또는 이들의 임의의 조합으로서 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 2종 이상의 이종 핵산 분자가 숙주 세포 내로 도입되는 경우, 2종 이상의 이종 핵산 분자가(예를 들어, 단일 벡터 상의) 단일 핵산 분자로서 도입되거나, 분리된 벡터 상에 단일 부위 또는 다수의 부위에서 숙주 염색체 내에 통합될 수 있거나, 또는 이들의 임의의 조합인 것으로 이해된다. 언급된 이종 핵산 분자 또는 단백질 활성의 수는 숙주 세포 내에 도입된 분리된 핵산 분자의 수가 아닌, 암호화 핵산 분자의 수 또는 단백질 활성 수를 지칭한다.
"작제물"이라는 용어는 재조합 핵산 분자를 함유하는 임의의 폴리뉴클레오티드(또는 문맥이 명확하게 지시하는 경우 본 개시내용의 융합 단백질)를 지칭한다. (폴리뉴클레오티드) 작제물은 벡터(예를 들어, 박테리아 벡터, 바이러스 벡터)에 존재할 수 있거나 또는 게놈에 통합될 수 있다. "벡터"는 또 다른 핵산 분자를 수송할 수 있는 핵산 분자이다. 벡터는, 예를 들어, 염색체, 비염색체, 반합성 또는 합성 핵산 분자를 포함할 수 있는 플라스미드, 코스미드, 바이러스, RNA 벡터 또는 선형 또는 환형 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다. 본 개시내용의 벡터는 또한 트랜스포존 시스템을 포함한다(예를 들어, Sleeping Beauty, 예컨대 Geurts et al., Mol. Ther. 8:108, 2003: Mates et al., Nat. Genet. 41:753, 2009 참조). 예시적인 벡터는 자율 복제가 가능한 것(에피솜 벡터), 폴리뉴클레오티드를 세포 게놈에 전달할 수 있는 것(예를 들어, 바이러스 벡터), 연결된 핵산 분자를 발현할 수 있는 것(발현 벡터)이다.
본원에서 사용되는, "발현 벡터" 또는 "벡터"는 적합한 숙주에서 핵산 분자의 발현을 수행할 수 있는 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 핵산 분자를 함유하는 DNA 작제물을 지칭한다. 이러한 조절 서열은 전사를 수행하기 위한 프로모터, 이러한 전사를 제어하기 위한 선택적 오퍼레이터 서열, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 암호화하는 서열 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자, 바이러스 또는 단순히 잠재적 게놈 삽입물일 수 있다. 일단 적합한 숙주로 형질전환되면, 벡터는 숙주 게놈과 독립적으로 복제하고 작용할 수 있거나, 또는 일부 경우, 게놈 자체에 통합될 수 있거나, 또는 벡터에 포함된 폴리뉴클레오티드를 벡터 서열없이 게놈에 전달할 수 있다. 본 명세서에서, "플라스미드", "발현 플라스미드", "바이러스" 및 "벡터"는 종종 상호 호환 가능하게 사용된다.
핵산 분자를 세포에 삽입하는 것과 관련하여 "도입된"이라는 용어는 "형질감염", "형질전환" 또는 "형질도입"을 의미하고 진핵 또는 원핵 세포 내로의 핵산 분자의 혼입에 대한 언급을 포함하며, 여기서 핵산 분자는 세포의 게놈(예를 들어, 염색체, 플라스미드, 색소체 또는 미토콘드리아 DNA)에 통합되거나, 자율 레플리콘으로 전환되거나, 일시적으로 발현될 수 있다(예를 들어, 형질감염된 mRNA).
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드는 벡터의 특정 요소에 작동가능하게 연결될 수 있다. 예를 들어, 결찰된 암호화 서열의 발현 및 프로세싱을 수행하는 데 필요한 폴리뉴클레오티드 서열은 작동가능하게 연결될 수 있다. 발현 조절 서열은 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열; 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호와 같은 효율적인 RNA 처리 신호; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율을 향상시키는 서열(즉, Kozak 합의 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 및 가능하게는 단백질 분비를 향상시키는 서열을 포함할 수 있다. 발현 조절 서열은, 관심 유전자 및 관심 유전자를 제어하기 위해 트랜스에서 또는 일정 거리에서 작용하는 발현 조절 서열과 인접한 경우 작동 가능하게 연결될 수 있다.
특정 실시양태에서, 벡터는 플라스미드 벡터 또는 바이러스 벡터(예를 들어, 렌티바이러스 벡터 또는 γ-레트로바이러스 벡터)를 포함한다. 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 파보바이러스(예를 들어, 아데노-연관 바이러스), 코로나바이러스, 음성 가닥 RNA 바이러스, 예컨대 오르토-믹소바이러스(예를 들어, 인플루엔자 바이러스), 라브도바이러스(예를 들어, 광견병 및 수포성 구내염 바이러스), 파라믹소바이러스(예를 들어, 홍역 및 센다이(Sendai)), 양성 가닥 RNA 바이러스, 예컨대 피코나바이러스 및 알파바이러스, 및 이중-가닥 DNA 바이러스(아데노바이러스, 헤르페스(예를 들어, 단순포진 바이러스 1형 및 2형, 엡스타인-바르 바이러스, 거대세포바이러스) 및 폭스바이러스(예를 들어, 백시니아, 계두 및 카나리아두창)를 포함)를 포함한다. 다른 바이러스는, 예를 들어, 노워크 바이러스, 토가바이러스, 플라비바이러스, 레오바이러스, 파보바이러스, 헤파드나바이러스 및 간염 바이러스를 포함한다. 레트로바이러스의 예는 조류 백혈증-육종, 포유동물 C-형, B-형 바이러스, D 형 바이러스, HTLV-BLV 그룹, 렌티바이러스, 스푸마바이러스를 포함한다(Coffin, J. M., Retroviridae: The viruses and their replication, In Fundamental Virology, Third Edition, B. N. Fields et al., Eds., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996).
"레트로바이러스"는 역전사 효소를 사용하여 DNA로 역전사되고, 그 후 역전사된 DNA가 숙주 세포 게놈으로 통합되는 RNA 게놈을 갖는 바이러스이다. "감마레트로바이러스"는 레트로바이러스과(retroviridae family) 속을 지칭한다. 감마레트로바이러스의 예는 마우스 줄기 세포 바이러스, 뮤린 백혈병 바이러스, 고양이 백혈병 바이러스, 고양이 육종 바이러스 및 조류 세망내피증 바이러스를 포함한다.
본원에 사용되는 "렌티바이러스 벡터"는 통합 또는 비통합일 수 있고, 상대적으로 거대한 패키징 능력을 가지며, 다양한 상이한 세포형을 형질도입할 수 있는, 유전자 전달을 위한 HIV-기반 렌티바이러스 벡터를 의미한다. 렌티바이러스 벡터는 보통 셋(패키징, 외피 및 전달) 이상의 플라스미드의 생산자 세포 내로의 일시적 형질감염 후에 생성된다. HIV와 같이, 렌티바이러스 벡터는 세포 표면 상에서 수용체와 바이러스 표면 당단백질의 상호작용을 통해 표적 세포에 진입한다. 진입 시, 바이러스 RNA는 바이러스 역전사효소 복합체에 의해 매개되는 역전사를 겪는다. 역전사 산물은 감염 세포의 DNA 내로의 바이러스 통합을 위한 기질인, 이중 가닥 선형 바이러스 DNA이다.
특정 실시양태에서, 바이러스 벡터는 감마레트로바이러스, 예를 들어, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MLV) 유래 벡터일 수 있다. 다른 실시양태에서, 바이러스 벡터는 보다 복잡한 레트로바이러스-유래 벡터, 예를 들어, 렌티바이러스-유래 벡터일 수 있다. HIV-1 유래 벡터가 이 범주에 속한다. 다른 예는 HIV-2, FIV, 말 감염성 빈혈 바이러스, SIV 및 Maedi-Visna 바이러스(양 렌티바이러스)로부터 유래된 렌티바이러스 벡터를 포함한다. 이식유전자를 함유하는 바이러스 입자로 포유동물 숙주 세포를 형질도입하기 위해 레트로바이러스 및 렌티바이러스 바이러스 벡터 및 패키징 세포를 사용하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 제8,119,772호; Walchli et al., PLoS One 6:327930, 2011; Zhao et al., J. Immunol. 174:4415, 2005; Engels et al., Hum. Gene Ther. 14:1155, 2003; Frecha et al., Mol. Ther. 18:1748, 2010; 및 Verhoeyen et al., Methods Mol. Biol. 506:97, 2009에 기재되어 있다. 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터 작제물 및 발현 시스템 또한 상업적으로 이용 가능하다. DNA 바이러스 벡터, 예를 들어, 아데노 바이러스 기반 벡터 및 아데노 관련 바이러스(AAV) 기반 벡터; 앰플 리콘 벡터, 복제 결함 HSV 및 약독화 HSV를 포함하는 단순 포진 바이러스(HSV)로부터 유래된 벡터를 포함하는 다른 바이러스 벡터가 또한 폴리뉴클레오티드 전달을 위해 사용될 수 있다(Krisky et al., Gene Ther. 5:1517, 1998).
본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 기타 벡터는 바큘로바이러스 및 α-바이러스로부터 유래된 것(Jolly, D J. 1999. Emerging Viral Vectors. pp 209-40 in Friedmann T. ed. The Development of Human Gene Therapy. New York: Cold Spring Harbor Lab), 또는 플라스미드 벡터(예를 들어, 슬리핑 뷰티 또는 다른 트랜스포손 벡터)를 포함한다.
바이러스 벡터 게놈이 별개의 전사체로서 숙주 세포에서 발현되는 복수의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 경우, 바이러스 벡터는 또한 2개 (또는 초과)의 전사체 사이에 추가적인 서열을 포함하여, 이시스트론성 또는 다시스트론성 발현이 가능할 수 있다. 바이러스 벡터에서 사용되는 이러한 서열의 예는 내부 리보솜 진입 부위(IRES), 퍼린 절단 부위(furin cleavage site), 바이러스 2A 펩티드 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
대상체에게 직접 투여하기 위한 DNA 기반 항체 또는 항원 결합 단편-암호화 플라스미드 벡터를 포함하는 플라스미드 벡터가 본원에 추가로 기재되어 있다.
본원에 사용된 용어 "숙주"는 관심 폴리펩티드(예를 들어, 본 개시내용의 항체)를 생산하기 위해 이종 핵산 분자를 사용한 유전적 변형을 위해 표적화된 세포 또는 미생물을 지칭한다.
숙주 세포는 벡터 또는 핵산의 혼입을 수용하거나 또는 단백질을 발현할 수 있는 임의의 개별 세포 또는 세포 배양물을 포함할 수 있다. 이 용어는 또한 유전적으로 또는 표현형적으로 동일하거나 상이하든 간에 숙주 세포의 자손을 포함한다. 적합한 숙주 세포는 벡터에 의존할 수 있고 포유동물 세포, 동물 세포, 인간 세포, 원숭이 세포, 곤충 세포, 효모 세포 및 박테리아 세포를 포함할 수 있다. 이들 세포는 바이러스 벡터, 인산칼슘 침전을 통한 형질전환, DEAE-덱스트란, 전기천공, 미세주입 또는 기타 방법을 사용하여 벡터 또는 기타 물질을 통합하도록 유도될 수 있다. 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2d ed. (Cold Spring Harbor Laboratory, 1989) 참조.
인플루엔자 감염과 관련하여 "숙주"는 인플루엔자에 감염된 세포 또는 대상체를 지칭한다.
본원에 사용된 "항원" 또는 "Ag"는 면역 반응을 유발하는 면역원성 분자를 지칭한다. 이 면역 반응은 항체 생산, 특이 면역학적 적격 세포의 활성화, 보체의 활성화, 항체 의존성 세포독성 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 항원(면역원성 분자)은 예를 들어 펩티드, 당펩티드, 폴리펩티드, 당폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 다당류, 지질 등일 수 있다. 항원이 합성될 수 있거나, 재조합으로 생성될 수 있거나, 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있다는 것은 자명하다. 하나 이상의 항원을 함유할 수 있는 예시적인 생물학적 샘플에는 조직 샘플, 대변 샘플, 세포, 생물학적 유체 또는 이들의 조합이 포함된다. 항원은 항원을 발현하도록 변형되거나 유전적으로 조작된 세포에 의해 생성될 수 있다. 항원은 또한 비리온에 존재하는 것과 같이 인플루엔자 NA 항원에 존재할 수도 있고, 인플루엔자에 의해 감염된 세포의 표면에 발현되거나 제시될 수도 있다.
용어 "에피토프" 또는 "항원 에피토프"는 면역글로불린 또는 다른 결합 분자, 도메인 또는 단백질과 같은 동족 결합 분자에 의해 인식되고 특이적으로 결합되는 임의의 분자, 구조, 아미노산 서열, 또는 단백질 결정기를 포함한다. 에피토프 결정기는 일반적으로 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹을 포함하고 특정 3차원 구조적 특성과 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 항원이 펩티드 또는 단백질이거나 이를 포함하는 경우, 에피토프는 연속적인 아미노산(예를 들어, 선형 에피토프)으로 구성될 수 있거나, 단백질 접힘(예를 들어, 불연속 또는 형태적 에피토프)에 의해 근접하게 되는 단백질의 상이한 부분 또는 영역으로부터의 아미노산, 또는 단백질 접힘과 관계없이 매우 근접한 비인접 아미노산으로 구성될 수 있다.
항체, 항원 결합 단편 및 조성물
한 측면에서, 본 개시내용은 (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 다를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV) 및 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 단리된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 NA와 회합하거나 이와 연합하지만, 샘플에서 임의의 다른 분자 또는 성분과 유의하게 회합 또는 연합하지 않는다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 IAV NA에 특이적으로 결합한다. 본원에 사용된 "특이적으로 결합한다"는 항체 또는 항원 결합 단편이 샘플 내 임의의 다른 분자 또는 성분과 유의하게 회합 또는 통합되지 않고, 105 M-1(이것은 이러한 회합 반응에 대한 오프-레이트 [koff]에 대한 온-레이트 [kon]의 비와 동일함) 이상의 친화도 또는 Ka(즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호작용의 평형 결합 상수)로 항원에 회합 또는 통합하는 것을 지칭한다. 대안적으로, 친화도는 M 단위(예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M)로 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(Kd)로 정의될 수 있다. 항체는 "고친화성" 항체 또는 "저친화성" 항체로 분류될 수 있다. "고친화성" 항체는 Ka가 적어도 107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 또는 적어도 1013 M-1인 항체를 지칭한다. "저친화성" 항체는 Ka가 107 M-1 이하, 106 M-1 이하, 105 M-1 이하인 항체를 지칭한다. 대안적으로, 친화도는 M 단위(예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M)로 특정 결합 상호작용의 평형 해리 상수(Kd)로 정의될 수 있다.
결합 도메인 또는 결합 단백질 친화도를 결정하는 것뿐만 아니라 특정 표적에 결합하는 본 개시내용의 항체를 식별하기 위한 다양한 검정, 예컨대, 웨스턴 블롯, ELISA(예를 들어, 직접, 간접 또는 샌드위치), 분석 초원심분리, 분광법, 생물층 간섭계 및 표면 플라즈몬 공명(Biacore®) 분석이 공지되어 있다(예를 들어, Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993; 및 미국 특허 제5,283,173호, 5,468,614호, 또는 등가물 참조). 친화도 또는 겉보기 친화도 또는 상대 친화도를 평가하기 위한 분석도 알려져 있다.
특정 예에서, 결합은 (예를 들어, 형질감염에 의해) 숙주 세포에서 인플루엔자 NA 항원을 재조합적으로 발현시키고 항체로 (예를 들어, 고정되거나 고정되고 투과된) 숙주 세포를 면역염색하고 유세포 분석법(예를 들어, ZE5 세포 분석기(BioRad®) 및 FlowJo 소프트웨어(TreeStar) 사용)에 의해 결합을 분석함으로써 결정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 양성 결합은 인플루엔자 NA-발현 세포 대 대조군(예를 들어, 모의) 세포의 항체에 의한 차등 염색에 의해 정의될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 생물층 간섭계를 사용하여 또는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 인플루엔자 NA 단백질에 결합한다.
본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 특정 특성은 IC50 또는 EC50 값을 사용하여 기술될 수 있다. 특정 실시양태에서, IC50은 지시된 생물학적 또는 생화학적 기능, 활성 또는 반응의 최대 절반 억제를 초래하는 조성물(예를 들어, 항체)의 농도이다. 특정 실시양태에서, EC50은 검정에서 최대 반응의 절반을 제공하는 조성물의 농도이다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 인플루엔자에 의한 감염을 중화시키는 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 능력을 설명하기 위해, IC50 및 EC50이 상호교환적으로 사용된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 인플루엔자에 의한 감염을 중화할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, "중화 항체"는 숙주에서 감염을 개시 및/또는 지속시키는 병원체의 능력을 중화, 즉 예방, 억제, 감소, 방해 또는 훼방할 수 있는 항체이다. 용어 "중화 항체" 및 "중화하는 항체" 또는 "중화하는 항체들"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 시험관 내 감염 모델 및/또는 생체 내 동물 감염 모델 및/또는 인간에서 인플루엔자 감염을 예방 및/또는 중화할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간, 인간화 또는 키메라이다.
특정 실시양태에서, (i) 그룹 1 IAV NA는 N1, N4, N5, 및/또는 N8을 포함하고/거나; (ii) 그룹 2 IAV NA는 N2, N3, N6, N7 및/또는 N9를 포함한다. 일부 실시양태에서: (i) N1은 A/California/07/2009, A/California/07/2009 I223R/H275Y, A/Swine/Jiangsu/J004/2018, A/Stockholm/18/2007, A/Brisbane/02/2018, A/Michigan/45/2015, A/Mississippi/3/2001, A/Netherlands/603/2009, A/Netherlands/602/2009, A/Vietnam/1203/2004, A/G4/SW/Shangdong/1207/2016, A/G4/SW/Henan/SN13/2018, 및 A/New Jersey/8/1976의 어느 하나 이상으로부터의 N1이고; (ii) N4는 A/mallard duck/Netherlands/30/2011로부터의 것이고; (iii) N5는 A/aquatic bird/Korea/CN5/2009로부터의 것이고; (iv) N8은 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011로부터의 것이고; (v) N2는 A/Washington/01/2007, A/HongKong/68, A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, A/Switzerland/9715293/2013, A/Leningrad/134/17/57, A/Florida/4/2006, A/Netherlands/823/1992, A/Norway/466/2014, A/Switzerland/8060/2017, A/Texas/50/2012, A/Victoria/361/2011, A/HongKong/2671/2019, A/SW/Mexico/SG1444/2011, A/Tanzania/205/2010, A/Aichi/2/1968, A/Bilthoven/21793/1972, A/Netherlands/233/1982, A/Shanghai/11/1987, A/Nanchang/933/1995, A/Fukui/45/2004, 및 A/Brisbane/10/2007의 어느 하나 이상으로부터의 것이고; (vi) N3는 A/Canada/rv504/2004로부터의 것이고; (v) N6은 A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 것이고; (vi) N7은 A/Netherlands/078/03으로부터의 것이고; (vii) N9는 A/Anhui/2013 및 A/Hong Kong/56/2015의 어느 하나 이상으로부터의 것이다. 특정 실시양태에서, IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata); B/Wisconsin/1/2010(Yamagata); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); B/Brisbane/33/2008; B/Colorado/06/2017; B/Hubei-wujiang/158/2009; B/Massachusetts/02/2012; B/Netherlands/234/2011; B/Perth/211/2001; B/Phuket/3073/2013; B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/HongKong/05/1972; B/Harbin/7/1994(Victoria); 및 B/Washington/02/2019(Victoria)의 어느 하나 이상으로부터의 것이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 약 0.1 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 또는 0.4 μg/mL 이하의 범위의 EC50으로 (i) 그룹 1 IAV NA; (ii) 그룹 2 IAV NA; 및 (iii) IBV NA 각각에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL 범위의 EC50으로 그룹 1 IAV NA에; (ii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL 범위의 EC50으로 그룹 2 IAV NA에; 및/또는 (iii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있다. 추가 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N1에; (ii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N4에; (iii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL 범위의 EC50으로 N5에; (iv) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8에; (v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL의 범위, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 또는 20 μg/mL의 EC50으로 N2에; (vi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N3에; (vii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N6에; (viii) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL 범위의 EC50으로 N7에; (ix) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N9에; 및/또는 (xi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N1 A/California/07/2009, N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y, N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008, N1 A/Stockholm/18/2007, N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011, N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009, N2 A/Hong Kong/68, N2 A/Leningrad/134/17/57, N3 A/Canada/rv504/2004, N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99, N9 A/Anhui/1/2013, B/Lee/10/1940(Ancestral), B/Brisbane/60/2008(Victoria), B/Malaysia/2506/2004(Victoria), B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata), B/Wisconsin/1/2010(Yamagata), 및 B/Yamanashi/166/1998(Yamagata)의 하나 이상에; (ii) 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009에; (iii) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011에; (iv) 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Washington/01/2007에; (v) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N7 A/Netherlands/078/03에; (vi) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/South Australia/34/2019에; (vii) 약 9.5 μg/mL 내지 약 3.8 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/8060/2017에; (viii) 약 18.4 μg/mL 내지 약 2.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016에; (iv) 약 1.6 μg/mL 내지 약 1.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/9715293/2013에; 및/또는 (v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4, 약 2, 약 10, 또는 약 50 μg/mL의 EC50으로 N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, NA는 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포)의 표면 상에서 발현되고 NA에 대한 결합은 유세포 측정법에 따른다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1.0E-12 M 미만, 1.0E-11 M 미만, 1.0 E-11 M 미만, 또는 1.0E-12M 이하, 1.0E-11M 이하, 또는 1.0E-10 이하의 KD, 또는 1.0E-10 내지 1.0E-13의 KD, 또는 1.0E-11 내지 1.0E-13의 KD로 NA에 결합할 수 있으며, 여기서 선택적으로 결합은 생물층 간섭계(BLI)에 의해 평가된다.
특정 실시양태에서, NA는 N1, N2 및/또는 N9이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (1) 하기 아미노산(N1 NA 넘버링) 중 임의의 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (2) 하기 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 임의의 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118에 결합할 수 있다. 항체 및 항원 결합 단편은 또한 N1 또는 N2 아미노산 넘버링 규칙을 따르지 않을 수 있는 인플루엔자 뉴라미니다제에 결합할 수 있음을 이해할 것이다; 이들 에피토프의 아미노산은 예컨대 등가물에서 동일한 아미노산 잔기(예를 들어, 정렬, 3차원 구조, 보존 또는 이들의 조합에 의해)이지만 상이하게 번호가 매겨진, NA의 위치에 의해 본원에 표시된 N1 또는 N2 아미노산 잔기에 상응할 수 있다. 따라서, N1 또는 N2 넘버링에 대한 언급은 열거된 아미노산에 상응하는 아미노산으로 이해될 것이다.
N1 대 N2 위치 넘버링(H1N1_California.07.2009 및 H3N2_NewYork.392.2004 사용)를 보여주는 일례가 표 3에 나와 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (1) 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118(N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (2) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118(N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 NA 활성 부위에 포함되거나 이를 포함하는 에피토프에 결합할 수 있으며(본원에 기재된 바와 같이, NA 활성 부위는 촉매 코어를 형성하고 시알산과 직접 접촉하는 기능성 아미노산뿐만 아니라 활성 부위 프레임워크를 형성하는 구조적 아미노산을 포함한다), 여기서, 선택적으로 NA 활성 부위는 다음 아미노산(N2 넘버링)을 포함한다: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425. 특정 실시양태에서, R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, 및 Y406은 촉매 코어를 형성하고 시알산과 직접 접촉한다. 특정 실시양태에서, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, 및 E425는 활성 부위 프레임워크를 형성한다.
특정 실시양태에서, 에피토프는 하기 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하거나 추가로 포함한다: E344, E227, S247, 및 D198.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이(N2 넘버링)를 포함하는 NA에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, NA는 IBV NA를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 아미노산 중 어느 하나 이상을 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있다(IBV 넘버링; 예를 들어, FluB Victoria 및 FluB Yamagata의 경우): R116, D149, E226, R292, 및 R374. 일부 실시양태에서, 에피토프는 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 시험관 내 감염 모델, 생체 내 동물 감염 모델, 및/또는 인간에서 (i) 그룹 1 IAV NA, 그룹 2 IAV NA 또는 둘 모두를 포함하는 IAV NA, 및/또는 (ii) IBV NA의 시알리다제 활성을 억제할 수 있다. 추가 실시양태에서: (i) 그룹 1 IAV NA는 H1N1 및/또는 H5N1을 포함하고; (ii) 그룹 2 IAV NA는 H3N2 및/또는 H7N9를 포함하고/거나; (iii) IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/HongKong/05/1972; B/Taiwan/2/1962(Ancestral); B/Brisbane/33/2008(Victoria); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/New York/1056/2003(Victoria); B/Florida/4/2006(Yamagata); B/Jiangsu/10/2003(Yamagata); B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/Harbin/7/1994(Victoria); B/Colorado/06/2017(Victoria); B/Washington/02/2019(Victoria); B/Perth/211/2001(Yamagata); B/Hubei-wujiagang/158/2009(Yamagata); B/Wisconsin/01/2010(Yamagata); B/Massachusetts/02/2012(Yamagata); 및 B/Phuket/3073/2013(Yamagata) 중 하나 이상을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 약 0.0008 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.09 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.08 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.07 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.06 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.05 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.04 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.03 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.02 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.01 μg/mL, from 0.002 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.001 μg/mL 내지 50 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 1 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL, 약 0.2 μg/mL, 약 0.3 μg/mL, 약 0.4 μg/mL, 약 0.5 μg/mL, 약 0.6 μg/mL, 약 0.7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL, 약 0.9 μg/mL, 약 1.0 μg/mL, 약 1.5 μg/mL, 약 2.0 μg/mL, 약 2.5 μg/mL, 약 3.0 μg/mL, 약 3.5 μg/mL, 약 4.0 μg/mL, 약 4.5 μg/mL, 약 5.0 μg/mL, 약 5.5 μg/mL, 약 6.0 μg/mL, 약 6.5 μg/mL, 약 7.0 μg/mL, 약 7.5 μg/mL, 약 8.0 μg/mL, 약 8.5 μg/mL, 약 9.0 μg/mL, 약 10 μg/mL, 약 11 μg/mL, 약 12 μg/mL, 약 13 μg/mL, 약 14 μg/mL, 약 15 μg/mL, 약 16 μg/mL, 약 17 μg/mL, 약 18 μg/mL, 약 19 μg/mL, 약 20 μg/mL, 약 25 μg/mL, 및/또는 약 30 μg/mL의 IC50으로 그룹 1 IAV NA; 그룹 2 IAV NA; 및/또는 IBV NA에 의한 시알리다제 활성을 억제할 수 있다. 추가 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 약 0.00001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.001 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.0001 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약.01 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.01 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.01 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.01 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/ml의 범위, 또는 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 또는 15 μg/ml의 IC50으로 하나 이상의 그룹 1 및/또는 그룹 2 IAV 및/또는 하나 이상의 IBV의 NA 시알리다제 활성을 억제할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 FcγRIIIa를 활성화할 수 있다. 추가 실시양태에서, 활성화는 항체 또는 항원 결합 단편의 IAV에 감염된 표적 세포(예를 들어, A549 세포)와의 인큐베이션 후(예를 들어, 23시간 동안) (i) 인간 FcγRIIIa(선택적으로, F158 대립유전자); 및 (ii) 루시퍼라제 리포터와 같은 리포터를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 NFAT 발현 조절 서열을 포함하는 숙주 세포(선택적으로 Jurkat 세포)를 사용하여 결정된다. 또 다른 실시양태에서, 활성화는 H1N1 IAV로 감염된 표적 세포와 항체 또는 항원 결합 단편의 인큐베이션(선택적으로, 약 23시간 동안) 후에 결정되며, 선택적으로 여기서 H1N1 IAV는 A/PR8/34이고/거나, 선택적으로 감염은 6의 감염 다중도(MOI)를 갖는다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, IAV 및/또는 IBV는 항바이러스 내성이며, 선택적으로 항바이러스제는 오셀타미비르이다.
특정 실시양태에서, IAV는 아미노산 돌연변이(들): H275Y; E119D + H275Y; S247N + H275Y; I222V; 및/또는 N294S를 포함하고, 여기서 선택적으로 IAV는 CA09 또는 A/Aichi를 포함한다. 특정 실시양태에서, IAV는 아미노산 돌연변이(들) E119V, Q136K 및/또는 R292K를 포함하는 N2 NA를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 대상체에서 (i) IAV 감염 및/또는 (ii) IBV 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (i) H1N1 바이러스(선택적으로 H1N1 바이러스는 A/PR8/34를 포함함); 및/또는 (ii) H3N2 바이러스(선택적으로 H3N2 바이러스는 선택적으로 A/Hong Kong/68을 포함함)에 의한 감염을 치료할 수 있고/거나 약독화시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IAV 및/또는 IBV에 의해 감염된 대상체에서 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편의 투여 후 선택적으로 (i) 최대 15일, 또는 (ii) 15일 초과 동안 체중 감소를 방지할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IAV 및/또는 IBV 감염 직전 대상체의 체중에 대해 결정되어 IAV 감염 및/또는 IBV 감염된 대상체에서 10% 초과의 체중 감소를 방지할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 IAV 감염 및/또는 IBV 감염된 대상체의 생존을 연장할 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 마우스(예를 들어, tg32 마우스)에서 다음과 같은 생체 내 반감기를 갖는다: (i) 약 10일 내지 약 14일, 약 10.2일 내지 약 13.8일, 약 10.5일 내지 약 13.5일, 약 11일 내지 약 13일, 약 11.5일 내지 약 12.5일, 10일 내지 14일, 또는 10.5일 내지 13.5일, 또는 11일 내지 13일의 범위, 또는 약 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 또는 14.0일; 또는 (ii) 약 12일 내지 약 16일, 약 12.5일 내지 15.5일, 약 13일 내지 15일, 약 13.5일 내지 약 14.5일, 또는 12일 내지 16일, 또는 13일 내지 15일, 또는 13.5일 내지 14.5일의 범위, 또는 약 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 1.36, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.3, 14.4, 14.5, 14.6, 14.7, 14.8, 14.9, 15.0 15.1, 15.2, 15.3, 15.4, 15.5, 1.56, 15.7, 15.8, 15.9, 또는 16.0일.
항체 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 이해하는 용어는 본원에서 달리 명시적으로 정의되지 않는 한, 당해 기술 분야에서 획득한 의미를 각각 부여한다. 예를 들어, 용어 "항체"는 디설파이드 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 온전한 항체뿐만 아니라 scFv, Fab 또는 Fab'2 단편과 같이 온전한 항체에 의해 인식되는 항원 표적 분자에 결합하는 능력을 갖거나 유지하는 온전한 항체의 임의의 항원 결합 부분 또는 단편을 의미한다. 따라서, 본원에서 "항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며 온전한 항체 및 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 단일쇄 항체 단편, 예컨대 단일쇄 가변 단편(scFv) 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함하는 이의 기능성 (항원 결합) 항체 단편을 포함하는 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함한다. 이 용어는 면역글로불린의 유전적으로 조작된 및/또는 달리 변형된 형태, 예를 들어 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체 및 이종접합체 항체, 다중특이성, 예를 들어 이중특이성 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 탠덤 디-scFv 및 탠덤 트리-scFv를 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항체"는 이의 기능성 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위부류(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 부류 또는 하위부류의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포함한다.
용어 "VL" 또는 "VL" 및 "VH" 또는 "VH"는 각각 항체 경쇄 및 항체 중쇄로부터의 가변 결합 영역을 지칭한다. 특정 실시양태에서, VL은 카파(κ) 부류(또한 본원에서 "VK")이다. 특정 실시양태에서, VL은 람다(λ) 부류이다. 가변 결합 영역은 "상보성 결정 영역"(CDR) 및 "프레임워크 영역"(FR)으로 알려진 불연속적이고 잘 정의된 하위 영역을 포함한다. "상보성 결정 영역" 및 "CDR"이라는 용어는 "초가변 영역" 또는 "HVR"과 동의어이며 일반적으로 함께 항원 특이성 및/또는 항체의 결합 친화성을 부여하며, 여기서 연속적인 CDR(즉, CDR1 및 CDR2, CDR2 및 CDR3)은 프레임워크 영역에 의해 1차 구조에서 서로 분리된 항체 가변 영역 내의 아미노산 서열을 나타낸다. 각 가변 영역에는 3개의 CDR이 있다(HCDR1, HCDR2, HCDR3; LCDR1, LCDR2, LCDR3; 각각 CDRH 및 CDRL로도 지칭됨). 특정 실시양태에서, 항체 VH는 하기와 같이 4개의 FR 및 3개의 CDR을 포함하고: FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4; 항체 VL은 하기와 같이 4개의 FR 및 3개의 CDR을 포함한다: FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4. 일반적으로, VH 및 VL은 함께 각각의 CDR을 통해 항원 결합 부위를 형성한다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 CDR은 항원과 접촉하지 않고/거나 항원 결합에 효과적으로 기여하지 않는다.
본원에 사용된 CDR의 "변이체"는 최대 1-3개의 아미노산 치환(예를 들어, 보존적 또는 비보존적 치환), 결실, 또는 이들의 조합을 갖는 CDR 서열의 기능성 변이체를 지칭한다.
CDR 및 프레임워크 영역의 넘버링은 Kabat, Chothia, EU, IMGT, Contact, North, Martin 및 AHo 넘버링 방식과 같은 임의의 공지된 방법 또는 방식에 따를 수 있다(예를 들어, Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.; Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)); Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003; Honegger and Plueckthun, J. Mol. Bio. 309:657-670 (2001); North et al. J Mol Biol. (2011) 406:228-56; doi:10.1016/j.jmb.2010.10.030; Abhinandan and Martin, Mol Immunol. (2008) 45:3832-9. 10.1016/j.molimm.2008.05.022 참조). 이들 참고문헌의 항체 및 CDR 넘버링 시스템은 본원에 참조로 포함된다. 등가 잔기 위치에 주석을 달 수 있고 항원 수용체 넘버링 및 수용체 분류(ANARCI) 소프트웨어 도구(2016, Bioinformatics 15:298-300)를 사용하여 서로 다른 분자를 비교할 수 있다. 따라서, 하나의 넘버링 방식에 따라 본원에 제공된 예시적인 가변 도메인(VH 또는 VL) 서열의 CDR의 식별은 상이한 넘버링 방식을 사용하여 결정된 동일한 가변 도메인의 CDR을 포함하는 항체를 배제하지 않는다. 특정 실시양태에서, Kabat, Chothia, EU, IMGT, Martin(Enhanced Chothia), Contact, North 및 AHo 넘버링 방법을 포함하는 임의의 공지된 CDR 넘버링 방법에 따라, 서열 번호 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 199, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 따른 VH 서열, 및 서열 번호 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 201, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나에 따른 VL 서열의 CDR을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 특정 실시양태에서, CDR은 IMGT 넘버링 방법에 따른다. 특정 실시양태에서, CDR은 CCG(Chemical Computing Group)에 의해 개발된 항체 넘버링 방법에 따르고; 예를 들어, MOE(Molecular Operating Environment) 소프트웨어(www.chemcomp.com)를 사용한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3을 포함하고, 여기서 각각의 CDR은 표 1 및/또는 표 2에 제공된 바와 같은 NA 특이적 항체의 상응하는 CDR로부터 독립적으로 선택된다. 즉, 표 1 및/또는 표 2에 제공된 NA 특이적 항체로부터의 CDR의 모든 조합이 고려된다.
일부 실시예에서, CDR은 IMGT 넘버링 방법에 따른다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용은 상보성 결정 영역(CDR)H1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하며, 여기서, (i) 선택적으로, CDRH1은 서열 번호 3, 15, 27, 39, 51, 63, 75, 87, 99, 111, 123, 135, 147, 159, 및 231 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (ii) 선택적으로, CDRH2는 서열 번호 4, 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 148, 160, 및 232 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (iii) CDRH3은 서열 번호 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 149, 161, 및 233 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (iv) 선택적으로, CDRL1은 서열 번호 9, 21, 33, 45, 57, 69, 81, 93, 105, 117, 129, 141, 153, 165, 및 234 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (v) 선택적으로, CDRL2는 서열 번호 10, 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 154, 166, 및 235 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고/거나; (vi) 선택적으로, CDRL3은 서열 번호 11, 23, 35, 175, 178, 181, 47, 59, 71, 83, 95, 187, 193, 107, 119, 131, 143, 155, 190, 167, 및 236 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어진다.
추가 실시양태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 서열 번호 (i) 각각 3-5 및 9-11; (ii) 각각 15-17 및 21-23; (iii) 각각 27-29 및 33-35; (iv) 각각 27, 28, 172, 및 33-35; (v) 각각 27-29, 33, 34, 및 175; (vi) 각각 27-29, 33, 34, 및 178; (vii) 각각 27-29, 33, 34, 및 181; (viii) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 175; (ix) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 178; (x) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 181; (xi) 각각 39-41 및 45-47; (xii) 각각 51-53 및 57-59; (xiii) 각각 63-65 및 69-71; (xiv) 각각 75-77 및 81-83; (xv) 각각 87-89 및 93-95; (xvi) 각각 87, 88, 184 및 93-95; (xvii) 각각 87-89, 93, 94, 및 187; (xviii) 각각 87-89, 93, 94, 및 190; (xix) 각각 87-89 93, 94, 및 193; (xx) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 187; (xxi) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 190; (xxii) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 193; (xxiii) 각각 87-89, 141, 142, 및 131; (xxiv) 각각 99-101 및 105-107; (xxv) 각각 111-113 및 117-119; (xxvi) 각각 123-125 및 129-131; (xxvii) 각각 135-137 및 141-143; (xxviii) 각각 147-149 및 153-155; (xxix) 각각 159-161 및 165-167; 또는 (xxx) 각각 231-233 및 234-236에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
용어 "CL"은 "면역글로불린 경쇄 불변 영역" 또는 "경쇄 불변 영역", 즉, 항체 경쇄로부터의 불변 영역을 지칭한다. "CH"라는 용어는 항체 이소형에 따라 CH1, CH2 및 CH3(IgA, IgD, IgG) 또는 CH1, CH2, CH3 및 CH4 도메인(IgE, IgM)으로 더 나눌 수 있는 "면역글로불린 중쇄 불변 영역" 또는 "중쇄 불변 영역"을 지칭한다. 항체 중쇄의 Fc 영역은 본원에 추가로 기재되어 있다. 본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 CL, CH1, CH2, 및 CH3 중 어느 하나 이상을 포함한다. 본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 CL, CH1, CH2 및 CH3 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, CL은 서열 번호 211의 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 975, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, CH1-CH2-CH3은 서열 번호 210 또는 서열 번호 215의 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, 포유동물 세포주에서의 생산은 항체 중쇄의 하나 이상의 C-말단 리신을 제거할 수 있음이 이해될 것이다(예를 들어, Liu et al. mAbs 6(5):1145-1154 (2014) 참조). 따라서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 C-말단 리신 잔기가 존재하거나 부재하는 중쇄, CH1-CH3, CH3, 또는 Fc 폴리펩티드를 포함할 수 있고; 다시 말해서, 중쇄, CH1-CH3, 또는 Fc 폴리펩티드의 C-말단 잔기가 리신이 아닌 실시양태, 및 리신이 C-말단 잔기인 실시양태를 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 본 개시내용의 복수의 항체 및/또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄, CH1-CH3, 또는 Fc 폴리펩티드의 C-말단에 리신 잔기를 포함하지 않으며, 여기서 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄, CH1-CH3, 또는 Fc 폴리펩티드의 C-말단에 리신 잔기를 포함한다.
"Fab"(항원 결합 단편)은 항원에 결합하는 항체의 일부이며 쇄간 디설파이드 결합을 통해 경쇄에 연결된 중쇄의 가변 영역 및 CH1을 포함한다. 각 Fab 단편은 항원 결합과 관련하여 1가이고, 즉 단일 항원 결합 부위가 있다. 항체의 펩신 처리는 2가 항원 결합 활성을 갖고 여전히 항원을 가교할 수 있는 2개의 디설파이드 결합된 Fab 단편에 대략 상응하는 큰 단일 F(ab')2 단편을 생성한다. Fab와 F(ab')2는 모두 "항원 결합 단편"의 예이다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 CH1 도메인의 카복시 말단에 추가적인 소수의 잔기를 갖는다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인이 있는 Fab' 단편의 쌍으로 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 알려져 있다.
Fab 단편은 예를 들어 펩티드 링커에 의해 연결되어 본원에서 "scFab"로도 지칭되는 단일쇄 Fab를 형성할 수 있다. 이들 실시양태에서, 천연 Fab에 존재하는 쇄간 디설파이드 결합은 존재하지 않을 수 있고, 링커는 단일 폴리펩티드 쇄에서 Fab 단편을 연결하거나 결합시키도록 전체 또는 부분적으로 작용한다. 중쇄 유래 Fab 단편(예를 들어, VH + CH1 또는 "Fd"를 포함하거나 이로 이루어지거나 본질적으로 이루어짐) 및 경쇄 유래 Fab 단편(예를 들어, VL + CL을 포함하거나 이로 이루어지거나 본질적으로 이루어짐)은 scFab을 형성하기 위해 임의의 배열로 연결될 수 있다. 예를 들어, scFab는 (중쇄 Fab 단편 - 링커 - 경쇄 Fab 단편) 또는 (경쇄 Fab 단편 - 링커 - 중쇄 Fab 단편)에 따라 N-말단에서 C-말단 방향으로 배열될 수 있다. scFab에서 사용하기 위한 펩티드 링커 및 예시적인 링커 서열은 본원에서 더욱 상세하게 논의된다.
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 항원 결합 부위를 포함하는 작은 항체 단편이다. 이 단편은 일반적으로 단단한 비공유 결합의 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 구성된다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반)도 항원을 인식하고 결합하는 능력이 있지만, 일반적으로 전체 결합 부위보다 친화도가 더 낮다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단일쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 쇄에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 유지하거나 형성할 수 있게 하는 VH 및 VL 도메인 사이에 배치되고 이를 연결하는 폴리펩티드 링커를 포함한다. 이러한 펩티드 링커는 당업계에 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 융합 폴리펩티드에 통합될 수 있다. scFv에 대한 리뷰는 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg andMoore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, infra]를 참조한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VH 도메인, VL 도메인, 및 VH 도메인을 VL 도메인에 연결하는 펩티드 링커를 포함하는 scFv를 포함한다. 특정 실시양태에서, scFv는 VH-링커-VL 배향 또는 VL-링커-VH 배향일 수 있는 펩티드 링커에 의해 VL 도메인에 연결된 VH 도메인을 포함한다. 본 개시내용의 임의의 scFv는 VL 도메인의 C-말단이 짧은 펩티드 서열에 의해 VH 도메인의 N-말단에 연결되도록 조작될 수 있거나, 또는 그 반대로 조작될 수 있다(즉, (N)VL(C)-링커-(N)VH(C) 또는 (N)VH(C)-링커-(N)VL(C). 대안적으로, 일부 실시양태에서, 링커는 VH 도메인, VL 도메인, 또는 둘 다의 N-말단 부분 또는 끝에 연결될 수 있다.
펩티드 링커 서열은 예를 들어 (1) 유연한 확장 형태를 채택하는 능력; (2) 제1 및 제2 폴리펩티드 및/또는 표적 분자 상의 기능성 에피토프와 상호작용할 수 있는 2차 구조의 채택 불능 또는 능력의 결여; 및/또는 (3) 폴리펩티드 및/또는 표적 분자와 반응할 수 있는 소수성 또는 하전된 잔기의 결여 또는 상대적 결여에 기초해 선택될 수 있다. 링커 디자인(예를 들어, 길이)에 관한 다른 고려 사항에는 VH 및 VL이 기능성 항원 결합 부위를 형성할 수 있는 형태 또는 형태의 범위가 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 펩티드 링커 서열은 예를 들어 Gly, Asn 및 Ser 잔기를 함유한다. Thr 및 Ala와 같은 다른 거의 중성의 아미노산도 링커 서열에 포함될 수 있다. 링커로서 유용하게 사용될 수 있는 다른 아미노산 서열은 Maratea et al., Gene 40:39 46 (1985); Murphy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:8258 8262 (1986); 미국 특허 제4,935,233호, 및 미국 특허 제4,751,180호에 기재된 것을 포함한다. 링커의 다른 예시적이고 비제한적인 예는 예를 들어 Glu-Gly-Lys-Ser-Ser-Gly-Ser-Gly-Ser-Glu-Ser-Lys-Val-Asp(Chaudhary et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1066-1070(1990)) 및 Lys-Glu-Ser-Gly-Ser-Val-Ser-Ser-Glu-Gln-Leu-Ala-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-Asp(Bird et al., Science 242:423-426(1988)) 및 단일 반복으로 존재하거나 1 내지 5회 또는 그 이상 반복되는 경우 펜타머 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser를 포함할 수 있다. 임의의 적합한 링커가 사용될 수 있고, 일반적으로 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 15 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100개의 아미노산 길이 또는 약 200개 미만 아미노산 길이가 사용될 수 있고, 바람직하게는 가요성 구조를 포함하고(링커에 의해 연결된 두 영역, 도메인, 모티프, 단편 또는 모듈 사이의 형태적 이동을 위한 유연성 및 공간을 제공할 수 있음), 바람직하게는 생물학적으로 불활성이고/ 또는 인간에서 면역원성의 위험이 낮을 것이다. scFv는 VH 및 VL 서열의 임의의 조합 또는 본원에 개시된 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 서열의 임의의 조합을 사용하여 작제될 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어, 제1 및 제2 폴리펩티드가 기능성 도메인을 분리하고 입체 간섭을 방지하는 데 사용할 수 있는 비필수 N-말단 아미노산 영역을 가지는 경우 링커 서열은 필요하지 않다.
항체 개발 동안, 생식계열 가변(V), 연결(J) 및 다양성(D) 유전자 좌의 DNA가 재배열될 수 있고 암호화 서열에서 뉴클레오티드의 삽입 및/또는 결실이 발생할 수 있다. 체세포 돌연변이는 생성된 서열에 의해 암호화될 수 있고, 상응하는 공지 생식계열 서열을 참조하여 식별될 수 있다. 일부 상황에서, 항체의 원하는 특성(예를 들어, 인플루엔자 NA 항원에 대한 결합)에 중요하지 않거나, 항체에 바람직하지 않은 특성을 부여하거나(예를 들어, 항체가 투여된 대상체에서 면역원성 위험 증가), 또는 둘 모두인 체세포 돌연변이는 상응하는 생식계열-암호화 아미노산 또는 상이한 아미노산으로 대체되어 항체의 바람직한 특성이 개선되거나 유지되고 항체의 바람직하지 않은 특성이 감소되거나 폐지된다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 모 항체 또는 항원 결합 단편과 비교하여 가변 영역에 적어도 하나 이상의 생식계열-암호화된 아미노산을 포함하되, 단, 모 항체 또는 항원 결합 단편은 하나 이상의 체세포 돌연변이를 포함한다. 본 개시내용의 예시적인 항-NA 항체의 가변 영역 및 CDR 아미노산 서열은 본원의 표 2에 제공된다.
일부 실시양태에서, VH는 인간 IGHV1-69*01F 또는 IGHV1-69D*01F, IGHJ4*02F, 및 IGHD1-26*01F에 의해 암호화되거나 이로부터 유래되고/거나, VL은 인간 IGKV3D-15*01 F 및 Homsap IGKJ2*02 (F)에 의해 암호화되거나 이로부터 유래된다. 이들 및 관련 인간 IG 대립유전자의 폴리뉴클레오티드 서열 및 기타 정보는 예를 들어 IMGT.org에서 이용 가능하다(예를 들어 www.imgt.org/IMGT_vquest/analysis 참조).
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 산화, 탈아미드화 및/또는 이성체화의 바람직하지 않은 위험을 제거하기 위한 아미노산 변형(예를 들어, 치환 돌연변이)을 포함한다.
또한 본 발명에 개시된 ("모") 항체와 비교하여 가변 영역(예를 들어, VH, VL, 프레임워크 또는 CDR)에 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는 변이체 항체가 본원에 제공되며, 여기서 변이체 항체는 NA 항원에 결합할 수 있다.
특정 실시양태에서, (i) VH는 서열 번호 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 199, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며; 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함하고; (ii) VL은 서열 번호 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 201, 205, 209, 217, 및 230중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며; 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, VH 및 VL은 서열 번호 (i) 각각 2 및 8; (ii) 각각 14 및 20; (iii) 각각 26 및 32; (iv) 각각 26 및 174; (v) 각각 26 및 177; (vi) 각각 26 및 180; (vii) 각각 171 및 32; (viii) 각각 171 및 174; (ix) 각각 171 및 177; (x) 각각 171 및 180; (xi) 각각 38 및 44; (xii) 각각 50 및 56; (xiii) 각각 62 및 68; (xiv) 각각 74 및 80; (xv) 각각 86 및 92; (xvi) 각각 86 및 186; (xvii) 각각 86 및 189; (xviii) 각각 86 및 192; (xix) 각각 183 및 92; (xx) 각각 183 및 186; (xxi) 각각 183 및 189; (xxii) 각각 183 및 192; (xxiii) 각각 98 및 104; (xxiv) 각각 110 및 116; (xxv) 각각 122 및 128; (xxvi) 각각 134 및 140; (xxvii) 각각 146 및 152; (xxviii) 각각 158 및 164; (xxix) 각각 199 및 201; (xxx) 각각 203 및 205; (xxxi) 각각 207 및 209; (xxxii) 각각 216 및 217; 또는 (xxxiii) 각각 228 및 230에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, VH는 표 1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 VH 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 표 1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 VL 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, VH 및 VL은 서열 번호 (i) 각각 2 및 8; (ii) 각각 14 및 20; (iii) 각각 26 및 32; (iv) 각각 26 및 174; (v) 각각 26 및 177; (vi) 각각 26 및 180; (vii) 각각 171 및 32; (viii) 각각 171 및 174; (ix) 각각 171 및 177; (x) 각각 171 및 180; (xi) 각각 38 및 44; (xii) 각각 50 및 56; (xiii) 각각 62 및 68; (xiv) 각각 74 및 80; (xv) 각각 86 및 92; (xvi) 각각 86 및 186; (xvii) 각각 86 및 189; (xviii) 각각 86 및 192; (xix) 각각 183 및 92; (xx) 각각 183 및 186; (xxi) 각각 183 및 189; (xxii) 각각 183 및 192; (xxiii) 각각 98 및 104; (xxiv) 각각 110 및 116; (xxv) 각각 122 및 128; (xxvi) 각각 134 및 140; (xxvii) 각각 146 및 152; (xxviii) 각각 158 및 164; (xxix) 각각 199 및 201; (xxx) 각각 203 및 205; (xxxi) 각각 207 및 209; (xxxii) 각각 216 및 217; 또는 (xxxiii) 각각 228 및 230에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
또한, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드가 본원에서 제공되며, 여기서 폴리펩티드는 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있다. 본 실시예에서 입증된 바와 같이, 예시된 클론 관련 항체에 따른 CDRH3은 NA의 활성 부위 공동(즉, 효소 포켓)에 결합한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 또는 이의 단편을 포함하고, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열 서열은 선택적으로 VH 또는 이의 단편에 포함된다. 추가 실시양태에서, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열은 서열 번호 149, 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 및 161 중 어느 하나를 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드 또는 VH는 (i) 서열 번호 220에 따른 아미노산 서열; 및/또는 (ii) 서열 번호 221에 따른 아미노산 서열을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 항체 경쇄 가변 도메인(VL)을 추가로 포함하며, 선택적으로 VL은 (i) 서열 번호 222에 따른 아미노산 서열; (ii 서열 번호 223에 따른 아미노산 서열; 및/또는 (iii) 서열 번호 224에 따른 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시양태에서, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, VH는 서열 번호 199의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
또한 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열 및 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있다.
또한 VH 및 VL을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 VH는 도 2A, 도 56C, 도 57B 및 72A에 나타낸 VH 아미노산 잔기의 임의의 조합을 포함하고, VL은 도 72B에 나타낸 VL 아미노산 잔기의 임의의 조합을 포함한다. 간단히 말해서, 이들 도면에 나타난 클론 관련 FNI 항체는 모두 NA를 인식한다. 특정 FNI 항체는 하나 이상의 다른 FNI 항체와 비교하여 VH 또는 VL 위치에서 상이한 아미노산을 포함한다. 따라서, 개시된 실시양태는 상기 도면에 나타낸 VH 아미노산 잔기의 모든 변이 및 조합을 포함하는 공통 VH 아미노산 서열, 및 전술한 도면에 나타낸 VL 아미노산 잔기의 모든 변이 및 조합을 포함하는 VL 아미노산 서열을 포함하는 항체 및 항원 결합 단편을 포함한다. 또한 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다: (i) 다음 아미노산 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프(N1 NA 넘버링): R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (ii) 다음 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118.
또한 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118(N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (ii) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118(N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
또한 NA 활성 부위에 포함되거나 NA 활성 부위를 포함하는 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공되며, 여기서 선택적으로 NA 활성 부위는 다음 아미노산(N2 넘버링)을 포함한다: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425. 일부 실시양태에서, 에피토프는 다음 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 추가로 포함한다: E344, E227, S247, 및 D198. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있다.
또한 다음 아미노산 중 임의의 하나 이상을 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다: R116, D149, E226, R292, 및 R374.
또한 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.
일부 실시양태에서, 인플루엔자는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 또는 둘 모두를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 단일특이성(예를 들어, 단일 에피토프에 결합)이거나 다중특이성(예를 들어, 다중 에피토프 및/또는 표적 분자에 결합)이다. 항체 및 항원 결합 단편은 다양한 형식으로 작제될 수 있다. Spiess et al., Mol. Immunol. 67(2):95 (2015), 및 Brinkmann and Kontermann, mAbs 9(2):182-212 (2017) (항체 형식 및 이의 제조 방법은 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 예시적인 항체 형식은 예를 들어 이중특이성 T 세포 인게이저(BiTE), DART, 노브-인투-홀(Knobs-Into-Holes: KIH) 어셈블리, scFv-CH3-KIH 어셈블리, KIH 공통 경쇄 항체, TandAb, 트리플바디, 트리바이(TriBi) 미니바디, Fab-scFv, scFv-CH-CL-scFv, F(ab')2-scFv2, 4가 HCab, 인트라바디, CrossMab, 이중 작용 Fab(DAF)(two-in-one 또는 four-in-one), DutaMab, DT-IgG, 전하 쌍, Fab-암 교환, 시드바디, 트리오맙, LUZ-Y 어셈블리, Fcab, κλ-바디, 직교 Fab, DVD-IgG(예를 들어, 미국 특허 제8,258,268호, 이 형식은 그 전체가 본원에 참조로 포함됨), IgG(H)-scFv, scFv-(H)IgG, IgG(L)-scFv, scFv-(L)IgG, IgG(L,H)-Fv, IgG(H)-V, V(H)-IgG, IgG(L)-V, V(L)-IgG, KIH IgG-scFab, 2scFv-IgG, IgG-2scFv, scFv4-Ig, Zy바디(Zybody) 및 DVI-IgG(four-in-one), 및 소위 FIT-Ig(예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2015/103072, 이 형식은 그 전체가 참조로 본원에 포함됨), 소위 WuxiBody 형식(예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2019/057122, 이 형식은 전체가 참조로 본원에 포함됨) 및 소위 In-Elbow-Insert Ig 형식(IEI-Ig; 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2019/024979 및 WO 2019/025391, 이 형식은 그 전체가 참고로 본원에 포함됨)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 2개 이상의 VH 도메인, 2개 이상의 VL 도메인, 또는 둘 모두(즉, 2개 이상의 VH 도메인 및 2개 이상의 VL 도메인)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항원 결합 단편은 형식(N-말단에서 C-말단 방향) VH-링커-VL-링커-VH-링커-VL을 포함하며, 여기서 2개의 VH 서열은 동일하거나 상이할 수 있고 2개의 VL 서열은 동일하거나 상이할 수 있다. 이러한 연결된 scFv는 주어진 표적에 결합하도록 배열된 VH 및 VL 도메인의 임의의 조합을 포함할 수 있고, 2개 이상의 VH 및/또는 2개 이상의 VL을 포함하는 형식에서 1개, 2개 또는 그 이상의 상이한 에피오프 또는 항원이 결합될 수 있다. 다중 항원 결합 도메인을 포함하는 형식은 임의의 조합 또는 배향으로 VH 및/또는 VL 서열을 포함할 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 항원 결합 단편은 VL-링커-VH-링커-VL-링커-VH, VH-링커-VL-링커-VL-링커-VH, 또는 VL-링커-VH-링커-VH-링커-VL 형식을 포함할 수 있다.
본 개시내용의 단일특이성 또는 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 VH 및 VL 서열의 임의의 조합 및/또는 본원에 개시된 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 서열의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이중특이성 또는 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 일부 실시양태에서 본 개시내용의 1개, 2개 또는 그 이상의 항원 결합 도메인(예를 들어, VH 및 VL)을 포함할 수 있다. 동일하거나 상이한 HA 에피토프에 결합하는 2개 이상의 결합 도메인이 존재할 수 있고, 본원에 제공된 바와 같은 이중특이성 또는 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 일부 실시양태에서 추가의 HA-특이적 결합 도메인을 포함할 수 있고/거나, 함께 상이한 항원 또는 병원체에 결합하는 결합 도메인을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다중특이성; 예를 들어, 이중특이성, 삼중특이성 등일 수 있다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. "Fc" 단편 또는 Fc 폴리펩티드는 디설파이드에 의해 함께 고정된 두 항체 H 쇄의 카복시 말단 부분(즉, IgG의 CH2 및 CH3 도메인)을 포함한다. Fc는 2개의 Fc 폴리펩티드(즉, 2개의 CH2-CH3 폴리펩티드)로 구성된 이량체를 포함할 수 있다. 항체 "효과기 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인할 수 있는 생물학적 활성을 말하며, 항체 이소형에 따라 변한다. 항체 효과기 기능의 예는 다음을 포함한다: C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식세포 작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화. 본원에서 논의된 바와 같이, Fc-함유 폴리펩티드(예를 들어, 본 개시의 항체)의 하나 이상의 기능성을 변형(예를 들어, 개선, 감소, 또는 절제)하기 위해 Fc 도메인에 변형(예를 들어, 아미노산 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 기능은 예를 들어 Fc 수용체(FcR) 결합, 항체 반감기 조절(예를 들어, FcRn에 대한 결합에 의함), ADCC 기능, 단백질 A 결합, 단백질 G 결합 및 보체 결합을 포함한다. Fc 기능을 변형(예를 들어, 개선, 감소 또는 제거)하는 아미노산 변형은 예를 들어 T250Q/M428L, M252Y/S254T/T256E, H433K/N434F, M428L/N434S, E233P/L234V/L235A/G236+A327G/A330S/P331S, E333A, S239D/A330L/I332E, P257I/Q311, K326W/E333S, S239D/I332E/G236A, N297Q, K322A, S228P, L235E+E318A/K320A/K322A, L234A/L235A(본원에서 "LALA"로도 지칭됨) 및 L234A/L235A/P329G 돌연변이를 포함하고, 이 돌연변이는 InvivoGen(2011)에 의해 공개된 "Engineered Fc Regions"에 요약되었고 주석이 달렸으며, invivogen.com/PDF/review/review-Engineered-Fc-Regions-invivogen.pdf?utm_source=review&utm_medium=pdf&utm_campaign=review&utm_content=Engineered-Fc-Regions에서 온라인으로 이용 가능한 상기 내용은 본원에 참조로 포함된다.
예를 들어, 보체 캐스케이드를 활성화하기 위해 면역글로불린 분자(들)가 항원 표적에 부착될 때 C1q 단백질 복합체는 적어도 두 분자의 IgG1 또는 한 분자의 IgM에 결합할 수 있다(아미노산 잔기 318 내지 337을 포함하는 중쇄 영역이 보체 고정에 관여한다고 기재한 Ward, E. S., and Ghetie, V., Ther. Immunol. 2 (1995) 77-94). Burton, D. R., (Mol. Immunol. 22 (1985) 161-206)). Duncan, A. R. and Winter, G.(Nature 332 (1988) 738-740)는 부위 지정 돌연변이 유발을 사용하여 Glu318, Lys320 및 Lys322가 C1q에 대한 결합 부위를 형성한다고 보고하였다. C1q의 결합에서 Glu318, Lys320 및 Lys 322 잔기의 역할은 보체 매개 용해를 억제하는 이들 잔기를 함유하는 짧은 합성 펩티드의 능력에 의해 확인되었다.
예를 들어, FcR 결합은 조혈 세포를 포함하는 세포 상의 특수화된 세포 표면 수용체인 Fc 수용체(FcR)와 (항체의) Fc 부분의 상호작용에 의해 매개될 수 있다. Fc 수용체는 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하며 면역 복합체의 식세포 작용에 의한 항체 코팅 병원체의 제거와 항체 의존성세포 매개 세포독성을 통해 적혈구 및 해당 항체로 코팅된 다양한 기타 세포 표적(예를 들어, 종양 세포)의 용해를 매개하는 것으로 나타났다(ADCC; Van de Winkel, J. G., 및 Anderson, C. L., J. Leukoc. Biol. 49 (1991) 511-524). FcR은 면역글로불린 부류에 대한 특이성으로 정의된다. IgG 항체에 대한 Fc 수용체는 FcγR, IgE는 FcεR, IgA는 FcαR 등으로 지칭되며, 신생아의 Fc 수용체는 FcRn으로 지칭된다. Fc 수용체 결합은 예를 들어 Ravetch, J. V., and Kinet, J. P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492; Capel, P. J., et al., Immunomethods 4 (1994) 25-34; de Haas, M., et al., J Lab. Clin. Med. 126 (1995) 330-341; 및 Gessner, J. E., et al., Ann. Hematol. 76 (1998) 231-248에 기재되어 있다.
천연 IgG 항체(FcγR)의 Fc 도메인에 의한 수용체의 가교화는 식세포 작용, 항체 의존적 세포 독성 및 염증 매개체의 방출뿐만 아니라 면역 복합체 제거 및 항체 생산 조절을 비롯한 다양한 효과기 기능을 촉발한다. 수용체(예를 들어, FcγR)의 가교를 제공하는 Fc 모이어티가 본원에서 고려된다. 인간에서, FcγR의 3가지 부류가 지금까지 특정되었다: (i) 단량체 IgG에 높은 친화도로 결합하고 대식세포, 단핵구, 호중구 및 호산구에서 발현되는 FcγRI(CD64); (ii) 복합 IgG에 중간 내지 낮은 친화도로 결합하고 특히 백혈구에서 널리 발현되며 항체 매개 면역의 중심 역할을 하는 것으로 여겨지며 FcγRIIA, FcγRIIB 및 FcγRIIC로 분류될 수 있고, 면역계에서 다른 기능을 수행하지만 IgG-Fc에 대해 유사한 낮은 친화도로 결합하며 이러한 수용체의 엑토도메인은 매우 상동성인 FcγRII(CD32); 및 (iii) 중간에서 낮은 친화도로 IgG에 결합하고 NK 세포, 대식세포, 호산구, 일부 단핵구 및 T 세포에서 발견되고 ADCC를 매개하는 것으로 여겨지는 FcγRIIIA; 및 호중구에서 고도로 발현되는 FcγRIIIB의 두 가지 형태로 발견되는 FcγRIII(CD16).
FcγRIIA는 사멸에 관여하는 많은 세포(예를 들어, 대식세포, 단핵구, 호중구)에서 발견되며 사멸 과정을 활성화할 수 있는 것으로 보인다. FcγRIIB는 억제 과정에서 역할을 하는 것으로 보이며 B 세포, 대식세포, 비만 세포 및 호산구에서 발견된다. 중요하게도, 모든 FcγRIIB의 75%가 간에서 발견되는 것으로 나타났다(Ganesan, L. P. et al., 2012: "FcγIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes," Journal of Immunology 189: 4981-4988). FcγRIIB는 LSEC라고 하는 간 정현파 내피에서 풍부하게 발현되며, 간의 쿠퍼 세포에서 LSEC는 작은 면역 복합체 제거의 주요 부위이다(Ganesan, L. P. et al., 2012: FcγRIIb on liver sinusoidal endothelium clears small immune complexes. Journal of Immunology 189: 4981-4988).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 이의 항원 결합 단편은 FcγRIIb, 특히 Fc 영역, 예를 들어 IgG-유형 항체에 대한 결합을 위한 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 또한, [Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered Antibody. Molecular Immunology 45, 3926-3933]에 의해 기술된 바와 같이, 돌연변이 S267E 및 L328F를 도입하여 FcγRIIB 결합을 향상시키기 위해 Fc 부분을 조작하는 것이 가능하다. 이에 따라 면역 복합체의 제거가 향상될 수 있다(Chu, S., et al., 2014: Accelerated Clearance of IgE In Chimpanzees Is Mediated By Xmab7195, An Fc-Engineered Antibody With Enhanced Affinity For Inhibitory Receptor FcγRIIB. Am J Respir Crit, American Thoracic Society International Conference Abstracts). 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 특히 [Chu, S. Y. et al., 2008: Inhibition of B cell receptor-mediated activation of primary human B cells by coengagement of CD19 and FcgammaRIIb with Fc-engineered antibodies. Molecular Immunology 45, 3926-3933]에 기술된 바와 같이, 돌연변이 S267E 및 L328F를 가지는 조작된 FC 부분을 포함한다
B 세포에서 FcγRIIB는 추가 면역글로불린 생산을 억제하고 예를 들어 IgE 부류로의 이소형 전환을 억제하는 기능을 할 수 있다. 대식세포에서 FcγRIIB는 FcγRIIA를 통해 매개되는 식균작용을 억제하는 것으로 생각된다. 호산구 및 비만 세포에서 B형은 IgE가 별도의 수용체에 결합하여 이러한 세포의 활성화를 억제하는 데 도움이 될 수 있다.
FcγRI 결합과 관련하여, E233-G236, P238, D265, N297, A327 및 P329 중 적어도 하나의 천연 IgG의 변형은 FcγRI에 대한 결합을 감소시킨다. 위치 233-236의 IgG2 잔기는 상응하는 위치 IgG1 및 IgG4로 치환되어 FcγRI에 대한 IgG1 및 IgG4의 결합을 103배 감소시키고 항체 감수성 적혈구에 대한 인간 단핵구 반응을 제거한다(Armour, K. L., et al. Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2613-2624).
FcγRII 결합과 관련하여 FcγRIIA에 대한 감소된 결합이 예를 들어 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, R292 및 K414 중 적어도 하나의 IgG 돌연변이에 대해 발견된다.
인간 FcγRIIA의 두 가지 대립형질은 더 높은 친화도로 IgG1 Fc에 결합하는 "H131" 변이체와 더 낮은 친화도로 IgG1 Fc에 결합하는 "R131" 변이체이다. 예를 들어, Bruhns et al., Blood 113:3716-3725 (2009) 참조.
FcγRIII 결합과 관련하여, FcγRIIIA에 대한 감소된 결합이 예를 들어 E233-G236, P238, D265, N297, A327, P329, D270, Q295, A327, S239, E269, E293, Y296, V303, A327, K338 및 D376의 적어도 하나의 돌연변이에 대해 발견된다. Fc 수용체에 대한 인간 IgG1의 결합 부위 매핑, 상기 언급된 돌연변이 부위, 및 FcγRI 및 FcγRIIA에 대한 결합을 측정하는 방법은 Shields, R. L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604에 기재되어 있다.
인간 FcγRIIIA의 두 가지 대립형질은 IgG1 Fc에 더 낮은 친화도로 결합하는 "F158" 변이체와 더 높은 친화도로 IgG1 Fc에 결합하는 "V158" 변이체이다. 예를 들어, Bruhns et al., Blood 113:3716-3725 (2009) 참조.
FcγRII에 대한 결합과 관련하여 천연 IgG Fc의 두 영역은 FcγRII와 IgG 사이, 즉, (i) IgG Fc의 하부 힌지 부위, 특히 아미노산 잔기 L, L, G, G(234 - 237, EU 넘버링), 및 (ii) IgG Fc의 CH2 도메인의 인접 영역, 특히 예를 들어 P331 영역에서 하부 힌지 영역에 인접한 상부 CH2 도메인의 루프 및 가닥의 상호작용에 관여하는 것으로 보인다(Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318). 또한 FcγRI는 IgG Fc의 동일한 부위에 결합하는 것으로 보이는 반면 FcRn과 단백질 A는 CH2-CH3 경계면에 있는 것으로 보이는 IgG Fc의 다른 부위에 결합한다(Wines, B.D., et al., J. Immunol. 2000; 164: 5313 - 5318).
(하나 이상의) Fcγ 수용체에 대한 본 개시내용의 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편의 결합 친화도를 증가시키는(예를 들어, 참조 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편, 또는 돌연변이(들) 포함하지 않는 것에 비해) 돌연변이가 또한 고려된다. 예를 들어, Delillo and Ravetch, Cell 161(5):1035-1045 (2015) 및 Ahmed et al., J. Struc. Biol. 194(1):78 (2016) 참조 - Fc 돌연변이 및 기술이 본원에 참고로 포함됨 -.
본원에 개시된 실시양태 중 임의의 것에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 G236A; S239D; A330L; 및 I332E로부터 선택된 돌연변이; 또는 이들 중 임의의 2개 이상을 포함하는 조합; 예를 들어, S239D/I332E; S239D/A330L/I332E; G236A/S239D/I332E; G236A/A330L/I332E(본원에서 "GAALIE"로도 지칭됨); 또는 G236A/S239D/A330L/I332E를 포함하는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 S239D를 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 위치 239에서 S를 포함한다(EU 넘버링).
특정 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 FcRn 결합에 관여하는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편의 적어도 일부를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 (예를 들어, 약 6.0의 pH에서) FcRn에 대한 결합 친화성을 개선하는(예를 들어, 그에 대한 결합을 향상시키는) 하나 이상의 아미노산 변형을 포함하고, 이에 의해 일부 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 분자의 생체 내 반감기가 (예를 들어, 참조 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편 또는 달리 동일하지만 변형(들)을 포함하지 않는 항체와 비교하여) 연장된다. 특정 실시양태에서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 IgG Fc를 포함하거나 이로부터 유래되고 반감기 연장 돌연변이는 다음 중 어느 하나 이상을 포함한다: M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I Q311I; D376V; T307A; E380A(EU 넘버링). 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 M428L/N434S(본원에서 "MLNS", "LS", "_LS", 및 "-LS"로도 지칭됨)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 M252Y/S254T/T256E를 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 T250Q/M428L을 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 P257I/Q311I를 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 P257I/N434H를 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 D376V/N434H를 포함한다. 특정 실시양태에서, 반감기 연장 돌연변이는 T307A/E380A/N434A를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 치환 돌연변이 M428L/N434S를 포함하는 Fc 부분을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 치환 돌연변이 G236A/A330L/I332E를 포함하는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 G236A 돌연변이, A330L 돌연변이, 및 I332E 돌연변이(GAALIE)를 포함하고 S239D 돌연변이를 포함하지 않는 (예를 들어, IgG) Fc 부분을 포함한다(예를 들어, 위치 239에서 천연 S를 포함한다). 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 치환 돌연변이: M428L/N434S 및 G236A/A330L/I332E를 포함하고 선택적으로 S239D를 포함하지 않는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다(예를 들어, 239에서 S를 포함). 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 치환 돌연변이: M428L/N434S 및 G236A/S239D/A330L/I332E를 포함하는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 글리코실화를 변경하는 돌연변이를 포함하고, 여기서 글리코실화를 변경하는 돌연변이는 N297A, N297Q 또는 N297G를 포함하고/하거나 항체 또는 항원 결합 단편은 부분적으로 또는 완전히 비글리코실화되고/거나 부분적으로 또는 완전히 비푸코실화된다. 숙주 세포주 및 부분적으로 또는 완전히 비글리코실화된 또는 부분적으로 또는 완전히 비푸코실화된 항체 및 항원 결합 단편을 제조하는 방법은 공지되어 있다(예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2016/181357; Suzuki et al. Clin. Cancer Res. 13(6):1875-82 (2007); Huang et al. MAbs 6:1-12 (2018)).
특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 검출가능한 수준의 항체 또는 항원 결합 단편이 대상체에서 발견될 수 없는 경우에도(즉, 항체 또는 항원 결합 단편이 투여 후 대상체로부터 제거된 경우) 대상체에서 생체 내에서 지속적인 보호를 유도할 수 있다. 이러한 보호는 본원에서 백신 효과로 지칭된다. 이론에 얽매이지 않고, 수지상 세포는 항체와 항원의 복합체를 내재화한 후 항원에 대한 내인성 면역 반응을 유도하거나 이에 기여할 수 있다고 믿어진다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 예를 들어, 항원에 대한 T 세포 면역을 유도할 수 있는 수지상 세포를 활성화할 수 있는 G236A, A330L 및 I332E를 포함하는 Fc에서의 돌연변이와 같은 하나 이상의 변형을 포함한다.
본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 CH2(또는 이의 단편, CH3(또는 이의 단편), 또는 CH2 및 CH3을 포함하는 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하고, 여기서 CH2, CH3, 또는 둘 모두는 임의의 이소형일 수 있고 각각 상응하는 야생형 CH2 또는 CH3과 비교하여 아미노산 치환 또는 다른 변형을 함유할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 Fc는 결합하여 이량체를 형성하는 2개의 CH2-CH3 폴리펩티드를 포함한다.
본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 모노클로날일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다(일부 경우에는 미량). 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 매우 특이적이다. 또한, 상이한 에피토프에 대해 지시되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원의 단일 에피토프에 대해 지시된다. 모노클로날 항체는 특이성과 더불어 다른 항체에 오염되지 않은 상태로 합성될 수 있다는 장점이 있다. 용어 "모노클로날"은 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 유용한 모노클로날 항체는 Kohler et al., Nature 256:495 (1975)에 의해 최초로 기술된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나, 또는 박테리아, 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참조). 모노클로날 항체는 또한 예를 들어, Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)에 기재된 기술을 이용하여 파리 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 모노클로날 항체는 또한 PCT 공개 번호 WO 2004/076677 A2에 개시된 방법을 사용하여 얻을 수 있다.
본 개시내용의 항체 및 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이나, 쇄(들)의 나머지 부분은 다른 종에서 유래하거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메라 항체" 뿐만 아니라 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 그러한 항체의 단편을 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; 5,530,101호 및 7,498,415호; 및 Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984) 참조). 예를 들어, 키메라 항체는 인간 및 비인간 잔기를 포함할 수 있다. 또한, 키메라 항체는 수용자 항체 또는 도너 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 수행된다. 자세한 내용은 Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)를 참조한다. 키메라 항체는 또한 영장류화 항체 및 인간화 항체를 포함한다.
"인간화 항체"는 일반적으로 인간이 아닌 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖는 인간 항체로 간주된다. 이러한 비인간 아미노산 잔기는 전형적으로 가변 도메인에서 취해진다. 인간화는 인간 항체의 상응하는 서열을 비인간 가변 서열로 치환함으로써 Winter와 동료들의 방법에 따라 수행될 수 있다(Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)). 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 온전한 인간 가변 도메인보다 실질적으로 더 적은 양이 비-인간 종의 상응하는 서열로 치환된 키메라 항체(미국 특허 제4,816,567호; 5,530,101호 및 7,498,415호)이다. 일부 예에서, "인간화" 항체는 비-인간 세포 또는 동물에 의해 생성되고 인간 서열, 예를 들어 HC 도메인을 포함하는 항체이다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생성되는 항체에 존재하는 서열(즉, 인간 항체-암호화 유전자에 의해 암호화되는 서열)만을 함유하는 항체이다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같이, 인간 항체는 본원에 기재된 변형 및 변이 서열을 포함하여, 자연 발생 인간 항체(예를 들어, 인간으로부터 단리된 항체)에서 발견되지 않는 잔기 또는 변형을 포함할 수 있다. 이들은 전형적으로 항체 성능을 추가로 개선하거나 향상시키기 위해 만들어진다. 일부 경우에는 인간 항체가 형질전환 동물에 의해 생산된다. 예를 들어, 미국 특허 제5,770,429호; 6,596,541호 및 7,049,426호 참조.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 키메라, 인간화, 또는 인간이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편을 기술하거나 특징화하기 위해 다양한 약동학("PK") 파라미터가 사용된다. PK 파라미터를 평가하기 위한 항체 혈청 농도의 수집에 관한 세부사항은 본원의 실시예와 관련하여 설명된다. 용어 "t1/2 " 또는 "반감기"는 대상체에게 투여된 약학적 조성물에 포함된 항체 또는 항원 결합 단편의 소실 반감기를 의미한다. 용어 "Clast"는 일반적으로 최종 측정 가능한 혈장 농도를 의미한다(즉, 그에 뒤이어 물질은 혈장에서 측정 가능한 농도로 존재하지 않음).
본원 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 210에 제시된 CH1-CH3 아미노산 서열 및/또는 서열 번호 215에 제시된 CH1-CH3 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본원 개시된 임의의 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호 211에 제시된 CL 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 다음 서열 번호 212에 제시된 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체가 제공된다:
QVQLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFSNNVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPTSGIANYAQKFQGRVAIIADKSTSTVYMALSSLRSEDSAVYFCARARSDYFNRDLGWEDYYFENWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK(서열 번호 212)
특정 실시양태에서, 항체는 다음 서열 번호 214에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 추가로 포함한다:
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSSLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQHYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열 번호 214)
일부 실시양태에서, 다음 서열 번호 213에 제시된 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체가 제공된다:
QVQLVQSGAEVKEPGSSVTVSCKASGGTFSNNVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPTSGIANYAQKFQGRVAIIADKSTSTVYMALSSLRSEDSAVYFCARARSDYFNRDLGWEDYYFENWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPG(서열 번호 213)
특정 실시양태에서, 항체는 다음 서열 번호 214에 제시된 경쇄 아미노산 서열을 추가로 포함한다.
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVGSSLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQHYNNWPPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열 번호 214)
일부 실시양태에서, (1) 각각 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 2개의 중쇄 및 (2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 2개의 경쇄를 포함하는 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, (1) 각각 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 2개의 중쇄 및 (2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 2개의 경쇄를 포함하는 항체가 제공된다.
폴리뉴클레오티드, 벡터 및 숙주 세포
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 이의 일부(예를 들어, CDR, VH, VL, 중쇄 또는 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄) 중 임의의 것을 암호화하거나 본원에 개시된 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보핵산(DNA) 또는 리보핵산(RNA)을 포함하고, 여기서 RNA는 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오시드, cap-1 구조, cap-2 구조, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 슈도우리딘, N6-메틸아데논신, 5-메틸시티딘, 2-티오우리딘, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 슈도우리딘은 N1-메틸슈도우리딘을 포함한다.
특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 198, 200, 1, 13, 25, 170, 37, 49, 61, 73, 85, 182, 97, 109, 121, 133, 145, 157, 6, 18, 30, 42, 54, 66, 78, 90, 102, 114, 126, 138, 150, 162, 7, 19, 31, 173, 176, 179, 43, 55, 67, 79, 91, 185, 188, 191, 103, 115, 127, 139, 151, 163, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144, 156, 168, 202, 206, 204, 208, 227, 및 229 중 어느 하나 이상에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 50%(예를 들어, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드르르 포함한다.
특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포(예를 들어, 인간 세포 또는 CHO 세포)에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 암호화 서열이 알려지거나 확인되면, 공지된 기술 및 도구, 예를 들어 GenScript® OptimiumGene™ 도구 등을 사용하여 코돈 최적화를 수행할 수 있다. 코돈 최적화된 서열은 부분적으로 코돈 최적화된 서열(즉, 하나 이상의 코돈이 숙주 세포에서의 발현을 위해 최적화됨) 및 완전히 코돈 최적화된 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 198의 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열 번호 200의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
또한, 본 개시내용의 항체 및 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 예를 들어 유전자 코드의 축퇴성, 스플라이싱 등으로 인해 동일한 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 동안 상이한 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있음이 인정될 것이다.
본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보핵산(DNA) 또는 리보핵산(RNA)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, RNA는 메신저 RNA(mRNA)를 포함한다.
벡터가 또한 제공되며, 여기서 벡터는 본원에 개시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드(예를 들어, IAV NA에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드)를 포함하거나 함유한다. 벡터는 본원에 개시된 벡터 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이의 일부를 암호화하는 DNA 플라스미드 작제물(예를 들어, 소위 "DMAb"; 예를 들어, Muthumani et al., J Infect Dis. 214(3):369-378 (2016); Muthumani et al., Hum Vaccin Immunother 9:2253-2262 (2013)); Flingai et al., Sci Rep. 5:12616 (2015); 및 Elliott et al., NPJ Vaccines 18 (2017) 참조, 항체-암호화 DNA 작제물 및 이의 투여를 포함하는 관련 사용 방법이 본원에 참고로 포함됨)을 포함하는 벡터가 제공된다. 특정 실시양태에서, DNA 플라스미드 작제물은 항체 또는 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄(또는 VH 및 VL)를 암호화하는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함하며, 여기서 중쇄를 암호화하는 서열 및 경쇄를 암호화하는 서열은 선택적으로 프로테아제 절단 부위를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 자가-절단 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 의해 분리된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치환체 성분은 단일 플라스미드에 포함된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편의 치환체 성분은 2개 이상의 플라스미드에 포함된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다(예를 들어, 제1 플라스미드는 중쇄, VH 또는 VH+CH1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 플라스미드는 동족 경쇄, VL 또는 VL+CL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다). 특정 실시양태에서, 단일 플라스미드는 본 개시내용의 2개 이상의 항체 또는 항원 결합 단편으로부터의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 예시적인 발현 벡터는 Invitrogen®으로부터 입수가능한 pVax1이다. 본 개시내용의 DNA 플라스미드는 예를 들어 전기천공(예를 들어, 근육내 전기천공)에 의해, 또는 적절한 제형(예를 들어, 히알루로니다제)으로 대상체에게 전달될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체에게 항체 중쇄, VH 또는 Fd(VH + CH1)를 암호화하는 제1 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA)를 투여하고, 대상체에게 동족 항체 경쇄, VL 또는 VL+CL을 암호화하는 제2 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA)를 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA)가 제공된다. 예를 들어 Li, JQ., Zhang, ZR., Zhang, HQ. et al. Intranasal delivery of replicating mRNA encoding neutralizing antibody against SARS-CoV-2 infection in mice. Sig Transduct Target Ther 6, 369 (2021). https://doi.org/10.1038/s41392-021-00783-1 참조 - 항체를 암호화하는 mRNA 구조, 벡터 및 관련 기술이 참조로 본원에 포함됨 -. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 알파바이러스 레플리콘 입자(VRP) 전달 시스템을 통해 대상체에게 전달된다. 일부 실시양태에서, 레플리콘은 2개의 서브게놈 프로모터를 포함하는 변형된 VEEV 레플리콘을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 또는 레플리콘은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄(또는 VH 또는 VH+1) 및 경쇄(또는 VL 또는 VL+CL)를 동시에 번역할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 폴리뉴클레오티드 또는 레플리콘을 대상체에게 전달하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 또한 본 개시내용에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하거나 본 개시내용에 따른 벡터 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 함유하는 숙주 세포를 제공한다.
이러한 세포의 예는 진핵 세포, 예를 들어, 효모 세포, 동물 세포, 곤충 세포, 식물 세포; 및 E. coli를 포함하는 원핵 세포를 포함하지만 이에만 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 세포는 인간 B 세포와 같은 포유동물 세포이다. 이러한 특정 실시양태에서, 세포는 포유동물 세포주, 예컨대 CHO 세포(예를 들어, DHFR-CHO 세포(Urlaub et al., PNAS 77:4216 (1980))), 인간 배아 신장 세포(예를 들어, HEK293T 세포), PER.C6 세포, Y0 세포, Sp2/0 세포, NS0 세포, 인간 간 세포, 예를 들어 Hepa RG 세포, 골수종 세포 또는 하이브리도마 세포이다. 포유동물 숙주 세포주의 다른 예에는 마우스 세르톨리 세포(예를 들어, TM4 세포), SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통(COS-7), 아기 햄스터 신장 세포(BHK), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76), 원숭이 신장 세포(CV1), 인간 자궁경부암 세포(HELA), 인간 폐 세포(W138), 인간 간 세포(Hep G2), 개 신장 세포(MDCK, 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A), 마우스 유선 종양(MMT 060562), TRI 세포, MRC 5 세포, 및 FS4 세포가 포함된다. 항체 생산에 적합한 포유동물 숙주 세포주는 또한 예를 들어 Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)에 기재된 것을 포함한다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 E. coli와 같은 원핵 세포이다. E. coli와 같은 원핵 세포에서 펩티드의 발현은 잘 확립되어 있다(예를 들어, Pluckthun, A. Bio/Technology 9:545-551 (1991) 참조). 예를 들어, 항체는 박테리아에서, 특히 글리코실화 시 생성될 수 있으며, Fc 효과기 기능은 필요하지 않다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어, 미국 특허 제5,648,237호, 제5,789,199호 및 제5,840,523호를 참조한다.
특정 실시양태에서, 세포는 발현 벡터를 갖는 본 설명에 따른 벡터로 형질감염될 수 있다. "형질감염"이라는 용어는 DNA 또는 RNA(예를 들어, mRNA) 분자와 같은 핵산 분자를 진핵 세포와 같은 세포로 도입하는 것을 의미한다. 본 설명의 맥락에서, 용어 "형질감염"은 핵산 분자를 포유동물 세포를 비롯한 진핵 세포와 같은 세포 내로 도입하기 위해 당업자에게 공지된 임의의 방법을 포함한다. 이러한 방법은 예를 들어 전기천공, 리포펙션, 예를 들어, 양이온성 지질 및/또는 리포솜, 인산칼슘 침전, 나노입자 기반 트랜스펙션, 바이러스 기반 트랜스펙션, 또는 DEAE-덱스트란 또는 폴리에틸렌이민과 같은 양이온성 폴리머 기반 트랜스펙션 등을 포함한다. 특정 실시양태에서, 도입은 비-바이러스성이다.
또한, 본 개시내용의 숙주 세포는 예를 들어 본 개시내용에 따른 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 발현시키기 위해 본 개시내용에 따른 벡터로 안정적으로 또는 일시적으로 형질감염될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 세포는 본원에 기재된 바와 같은 벡터로 안정적으로 형질감염될 수 있다. 대안적으로, 세포는 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하는 본 개시내용에 따른 벡터로 일시적으로 형질감염될 수 있다. 본원에 개시된 임의의 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포에 대해 이종성일 수 있다.
따라서, 본 개시내용은 또한 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편을 이종적으로 발현하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 예를 들어, 세포는 항체가 완전히 또는 부분적으로 수득된 종과 상이한 종일 수 있다(예를 들어, 인간 항체 또는 조작된 인간 항체를 발현하는 CHO 세포). 일부 실시양태에서, 숙주 세포의 세포형은 자연에서 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하지 않는다. 게다가, 숙주 세포는 항체 또는 항원 결합 단편의 천연 상태(또는 천연 항체 또는 항원 결합 단편이 조작되거나 유래된 모 항체의 천연 상태)에서 존재하지 않는 항체 또는 항원 결합 단편 상에 번역 후 변형(PTM; 예를 들어 글리코실화 또는 푸코실화) 또는 그 결여를 부여할 수 있다. 이러한 PTM 또는 그 결여는 기능성 차이(예를 들어, 면역원성 감소)를 초래할 수 있다. 따라서, 본원에 개시된 바와 같은 숙주 세포에 의해 생성된 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 이의 천연 상태에서 항체(또는 모 항체)와 상이한 하나 이상의 번역 후 변형을 포함할 수 있다(예를 들어, 숙주 세포에 의해 생성된 인간 항체는 하나 이상의 번역후 변형을 포함할 수 있거나, 인간으로부터 단리되는 경우 및/또는 천연 인간 B 세포 또는 형질 세포에 의해 생성될 때 항체와 구별되도록 더 적은 번역후 변형(들)을 포함할 수 있다).
본 개시내용의 결합 단백질을 발현하는 데 유용한 곤충 세포는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 Spodoptera frugiperda Sf9 세포, Trichoplusia ni BTI-TN5B1-4 세포, 및 Spodoptera frugipera SfSWT01 "MimicTM" 세포를 포함한다. 예를 들어, Palmberger et al., J. Biotechnol. 153(3-4):160-166 (2011) 참조. 특히 Spodoptera frugiperda 세포의 형질감염을 위해 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 수많은 바큘로바이러스 균주가 확인되었다.
사상균 또는 효모와 같은 진핵 미생물이 또한 단백질 암호화 벡터를 클로닝하거나 발현하기에 적합한 숙주이며, "인간화" 글리코실화 경로를 갖는 진균 및 효모 균주를 포함하여 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생성한다. Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004); Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)을 참조한다.
식물 세포가 또한 본 개시내용의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 발현하기 위한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, PLANTIBODIES™ 기술(예를 들어, 미국 특허 제5,959,177호; 6,040,498호; 6,420,548호; 7,125,978호; 및 6,417,429호)은 항체 생산을 위해 형질전환 식물을 사용한다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 포유동물 세포를 포함한다. 특정 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO 세포, HEK293 세포, PER.C6 세포, Y0 세포, Sp2/0 세포, NS0 세포, 인간 간 세포, 골수종 세포, 또는 하이브리도마 세포이다.
관련 측면에서, 본 개시내용은 항체, 또는 항원 결합 단편을 생성하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 방법은 항체, 또는 항원 결합 단편을 생성하기에 충분한 조건 및 시간 하에 본 개시내용의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다. 예를 들어, 재조합적으로 생산된 항체를 단리하고 정제하는 데 유용한 방법은 재조합 항체를 배양 배지로 분비하는 적절한 숙주 세포/벡터 시스템으로부터 상청액을 얻은 다음 상업적으로 이용 가능한 필터를 사용하여 배지를 농축하는 것을 포함할 수 있다. 농축 후, 농축물은 단일의 적합한 정제 매트릭스 또는 친화성 매트릭스 또는 이온 교환 수지와 같은 일련의 적합한 매트릭스에 적용될 수 있다. 재조합 폴리펩티드를 추가로 정제하기 위해 하나 이상의 역상 HPLC 단계가 사용될 수 있다. 이러한 정제 방법은 면역원을 자연 환경에서 단리할 때도 사용할 수 있다. 본원에 기재된 하나 이상의 단리/재조합 항체의 대규모 생산 방법에는 적절한 배양 조건을 유지하기 위해 모니터링 및 제어되는 회분식 세포 배양이 포함된다. 가용성 항체의 정제는 본원에 기술되고 당업계에 공지되어 있고 국내 및 해외 규제 기관의 법률 및 지침에 부합하는 방법에 따라 수행될 수 있다.
조성물
또한, 본원에서는 본원에 개시된 항체, 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 또는 숙주 세포를 단독으로 또는 임의의 조합으로 포함하고 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물뿐만 아니라 담체, 부형제 및 희석제는 본원에서 더욱 상세하게 논의된다.
특정 실시양태에서, 조성물은 제1 플라스미드를 포함하는 제1 벡터, 및 제2 플라스미드를 포함하는 제2 벡터를 포함하고, 여기서 제1 플라스미드는 중쇄, VH 또는 VH+CH1을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 플라스미드는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 동족 경쇄, VL, 또는 VL+CL을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 적합한 전달 비히클 또는 담체에 커플링된 폴리뉴클레오티드(예를 들어, mRNA)를 포함한다. 인간 대상체에 투여하기 위한 예시적인 비히클 또는 담체는 지질 또는 지질 유래 전달 비히클, 예를 들어 리포솜, 고체 지질 나노입자, 유성 현탁액, 서브마이크론 지질 에멀젼, 지질 미세기포, 역 지질 미셀, 달팽이관 리포솜, 지질 미세소관, 지질 마이크로실린더, 또는 지질 나노입자(LNP) 또는 나노규모 플랫폼을 포함한다(예를 들어, Li et al. Wilery Interdiscip Rev. Nanomed Nanobiotechnol. 11(2):e1530 (2019) 참조). 적절한 mRNA를 설계하고 mRNA-LNP를 제형화하고 이를 전달하기 위한 원리, 시약 및 기술은 예를 들어 Pardi et al. (J Control Release 217345-351 (2015)); Thess et al. (Mol Ther 23: 1456-1464 (2015)); Thran et al. (EMBO Mol Med 9(10):1434-1448 (2017); Kose et al. (Sci. Immunol. 4 eaaw6647 (2019); 및 Sabnis et al. (Mol. Ther. 26:1509-1519 (2018))에 기재되어 있으며, 캡핑, 코돈 최적화, 뉴클레오시드 변형, mRNA의 정제, 안정한 지질 나노입자로 mRNA의 도입(예를 들어, 이온화 가능한 양이온성 지질/포스파티딜콜린/콜레스테롤/PEG-지질; 이온화 가능한 지질:디스테아로일 PC:콜레스테롤:폴리에틸렌 글리콜 지질), 및 이들의 피하, 근육내, 피내, 정맥내, 복강내 및 기관내 투여를 포함한 기술은 본원에 참조로 포함된다.
특정 실시양태에서, 조성물은 본 개시내용의 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 본 개시내용의 제2 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 제1 항체 또는 항원 결합 단편과 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 상이하다.
방법 및 용도
또한(예를 들어, 인간 대상체에서, 또는 인간 대상체에서 얻은 샘플에서) 인플루엔자 감염의 진단에 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편, 핵산, 벡터, 세포, 또는 조성물을 사용하는 방법이 본원에 제공된다.
진단 방법(예를 들어, 시험관 내, 생체 외)은 항체, 항체 단편(예를 들어, 항원 결합 단편)을 샘플과 접촉시키는 것을 포함할 수 있다. 이러한 샘플은 대상체로부터 단리될 수 있으며, 예를 들어 비강, 부비동, 침샘, 폐, 간, 췌장, 신장, 귀, 눈, 태반, 소화관, 심장, 난소, 뇌하수체, 부신, 갑상선, 뇌, 피부 또는 혈액에서 채취한 단리된 조직 샘플일 수 있다. 진단 방법은 또한 특히 항체 또는 항체 단편과 샘플의 접촉 후 항원/항체 복합체의 검출을 포함할 수 있다. 이러한 검출 단계는 벤치에서, 즉 인체 또는 동물의 신체에 접촉하지 않고 수행할 수 있다. 검출 방법의 예는 당업자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어 직접, 간접 및 샌드위치 ELISA를 포함하는 ELISA(효소 결합 면역흡착 분석)를 포함한다.
본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 이를 포함하는 조성물을 사용하여 대상체를 치료하는 방법이 또한 본원에서 제공되며, 여기서 대상체는 인플루엔자에 의한 감염을 갖거나 가질 것으로 여겨지거나 가질 위험이 있다. "치료하다", "치료" 또는 "개선하다"는 대상체(예를 들어, 영장류, 말, 고양이, 개, 염소, 마우스 또는 래트와 같은 인간 또는 비인간 포유동물)의 질환, 장애 또는 상태의 의학적 관리를 의미한다. 일반적으로, 본 개시내용의 항체 또는 조성물을 포함하는 적절한 용량 또는 치료 요법은 치료적 또는 예방적 이점을 이끌어내기에 충분한 양으로 투여된다. 치료 또는 예방/방지 혜택에는 개선된 임상 결과; 질환과 관련된 증상의 감소 또는 완화; 증상 발생 감소; 삶의 질 개선; 더 긴 무병 상태; 질환의 정도 감소, 질환 상태의 안정화; 질환 진행의 지연 또는 예방; 관해; 생존; 장기 생존; 또는 이들의 임의의 조합이 포함된다. 특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적/방지적 이점은 인플루엔자 감염의 치료를 위한 입원의 감소 또는 예방(즉, 통계적으로 유의한 방식으로)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적/방지적 이점은 인플루엔자 감염의 치료를 위한 감소된 입원 기간(즉, 통계적으로 유의한 방식으로)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적/방지적 이점은 삽관 및/또는 호흡기 장치의 사용과 같은 호흡기 개입에 대한 필요성의 감소 또는 폐지를 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료적 또는 예방적/방지적 이점은 말기 질환 병리를 역전시키고/시키거나 사망률을 감소시키는 것을 포함한다.
본 개시내용의 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물의 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 통계적으로 유의미한 방식으로 개선된 임상 결과; 질환과 관련된 증상의 감소 또는 완화; 증상 발생 감소; 삶의 질 개선; 더 긴 무병 상태; 질환의 정도 감소, 질환 상태의 안정화; 질환 진행 지연; 관해; 생존; 또는 연장된 생존을 포함하는 치료 효과를 초래하기에 충분한 조성물 또는 분자의 양을 지칭한다. 단독으로 투여되는 개별 활성 성분을 언급할 때, 치료적 유효량은 그 성분 또는 성분 단독을 발현하는 세포의 효과를 지칭한다. 조합을 언급할 때, 치료적 유효량은 연속적으로, 순차적으로, 또는 동시에 투여되든 상관없이 치료 효과로 이어지는, 활성 성분을 발현하는 세포와 활성 성분 또는 조합된 보조 활성 성분의 결합된 양을 지칭한다.
따라서, 특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 감염을 치료하기 위한 방법이 제공되며, 여기서 방법은 대상체에게 본원에 개시된 바와 같은 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용에 의해 치료될 수 있는 대상체는 일반적으로 인간 및 수의학 목적을 위한 원숭이 및 유인원과 같은 기타 영장류 대상이다. 마우스 및 래트와 같은 다른 모델 유기체도 본 개시내용에 따라 치료될 수 있다. 전술한 실시양태 중 임의의 것에서, 대상체는 인간 대상체일 수 있다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있고 유아, 어린이, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함하는 임의의 적합한 연령일 수 있다.
많은 기준이 인플루엔자 감염과 관련된 심각한 증상 또는 사망의 고위험에 기여하는 것으로 믿어진다. 여기에는 연령, 직업, 일반적인 건강, 기존 건강 상태, 지역 및 생활 습관이 포함되지만 이에만 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 치료되는 대상체는 하나 이상의 위험 인자를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 치료되는 인간 대상체는 유아, 어린이, 젊은 성인, 중년의 성인, 또는 노인이다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 치료되는 인간 대상체는 1세 미만이거나, 1 내지 5세이거나, 또는 5 내지 125세(예를 들어, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 또는 125세(해당 또는 그 사이의 모든 연령 포함)이다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 치료되는 인간 대상체는 0-19세, 20-44세, 45-54세, 55-64세, 65-74세, 75-84세, 또는 85세 이상이다. 중년, 특히 노년층의 사람들이 특히 위험할 수 있다. 특정 실시양태에서, 인간 대상체는 45-54세, 55-64세, 65-74세, 75-84세, 또는 85세 이상이다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 남성이다. 일부 실시양태에서, 인간 대상체는 여성이다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 치료되는 대상체는 인플루엔자에 대한 백신을 투여받았고 백신은 예를 들어 임상 진단 또는 과학적 또는 규제 합의를 통해 백신후 대상체의 감염 또는 증상에 효과적이지 않은 것으로 결정되었다.
인플루엔자 바이러스에 의한 감염의 예방은 특히 대상체가 인플루엔자 바이러스 감염으로 진단되지 않았고/거나(진단이 수행되지 않았거나 진단 결과가 음성임), 대상체가 인플루엔자 바이러스 감염의 증상을 나타내지 않거나 경험하지 않은 예방적 설정을 지칭한다. 인플루엔자 바이러스에 의한 감염 예방은 임산부, 어린이(예컨대 59개월 미만의 어린이), 노인, 만성 의학적 장애(예컨대 만성 심장, 폐, 신장, 대사, 신경 발달, 간 또는 혈액 질환)를 가진 개체 및 면역억제 상태(예컨대 HIV/AIDS, 화학 요법 또는 스테로이드 투여, 악성 종양)를 가진 개체와 같이 감염 시 심각한 질환 또는 합병증의 위험이 더 큰 대상체에 특히 유용하다. 더욱이, 인플루엔자 바이러스에 의한 감염의 예방은 또한 예를 들어 노출 증가로 인해 인플루엔자 바이러스 감염에 걸릴 위험이 더 큰 대상, 예를 들어 공공 장소에서 일하거나 머무르는 대상, 특히 의료 종사자에게 특히 유용하다.
특정 실시양태에서, 치료는 노출 전후 또는 노출 전 예방으로서 투여된다. 특정 실시양태에서, 치료는 노출 후 예방으로서 투여된다.
대조적으로, 치료 환경에서 대상체는 전형적으로 인플루엔자 A 바이러스로 감염되고, 인플루엔자 A 바이러스 감염으로 진단되고/거나, 인플루엔자 A 바이러스 감염 증상을 보인다. 인플루엔자 A 바이러스 감염의 "치료" 및 "요법"/"치료적"이라는 용어는 인플루엔자 A 바이러스 감염 및/또는 관련 증상의 약화/감소(예를 들어, 감염 및/또는 증상의 중증도, 증상의 수, 감염 및/또는 증상의 기간, 또는 이들의 임의의 조합의 약화/감소) 뿐만 아니라 (완전한) 치유를 지칭 수 있다.
본원에서 본원에 개시된 약학적 조성물의 투여로부터 감소 결과를 갖는 증상의 감소된 수 및/또는 중증도에 대한 언급은 개시된 약학적 조성물을 받지 않은 참조 대상과의 비교를 기술하는 것이 이해될 것이다. 참조 대상은 예를 들어 (i) 이전 기간 동안의 동일한 대상(예를 들어, 이전 인플루엔자 A 바이러스 계절), (ii) 동일하거나 유사한 대상: 연령 또는 연령 그룹; 성별; 임신 상태; 만성 의학적 상태(예컨대 만성 심장, 폐, 신장, 대사, 신경 발달, 간 또는 혈액 질환) 또는 그 결여; 및/또는 면역억제 상태 또는 그 결여; 또는 (iii) 인플루엔자 A 바이러스 시즌 동안 집단(예를 들어, 동일하거나 유사한 연령 또는 연령 범위 및/또는 일반적인 건강 상태를 포함한 지역, 지방 또는 국가) 내의 전형적인 대상일 수 있다. 예를 들어, 예방은 진단된 인플루엔자 A 감염 발생 없음 및/또는 전체 인플루엔자 A 계절의 일부 또는 전체 인플루엔자 A 계절 동안 인플루엔자 A 감염과 관련된 증상 결여에 의해 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 인플루엔자 A 감염의 즉각적인 위험이 있는 대상체에게 치료 유효량의 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 인플루엔자 A 감염의 즉각적인 위험은 전형적으로 인플루엔자 A가 유행하는 동안 발생한다. 인플루엔자 A 바이러스는 순환하며 질병의 계절성 전염병을 일으키는 것으로 알려져 있다(WHO, Influenza (Seasonal) Fact sheet, 2018년 11월 6일). 온대 기후에서는 계절성 유행병이 주로 겨울에 발생하는 반면, 열대 지방에서는 인플루엔자가 연중 발생하여 보다 불규칙적으로 발생한다. 예를 들어, 북반구에서는 11월, 12월, 1월, 2월, 3월에 인플루엔자 A 유행 위험이 높고 남반구에서는 5월, 6월, 7월, 8월 및 9월에 인플루엔자 A 유행 위험이 높다.
일부 실시양태에서, 치료 및/또는 예방은 노출 후 예방을 포함한다.
일부 실시양태에서, 대상체는 항바이러스제를 받았거나, 받고 있거나 받을 것이다. 일부 실시양태에서, 항바이러스제는 뉴라미니다제 억제제, 인플루엔자 폴리머라제 억제제, 또는 둘 모두를 포함한다. 특정 실시양태에서, 항바이러스제는 오셀타미비르, 라나미비르, 페라미비르, 자나미비르, 발록사비르, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 발명에 개시된 조성물을 투여하는 전형적인 경로는 경구, 국소, 경피, 흡입, 비경구, 설하, 협측, 직장, 질 및 비강내를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 사용된 용어 "비경구"는 피하 주사, 정맥내, 근육내, 흉골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 특정 실시양태에서, 투여는 경구, 정맥내, 비경구, 위내, 흉막내, 폐내, 직장내, 피내, 복강내, 종양내, 피하, 국소, 경피, 수조내, 척수강내, 비강내 및 근육내로부터 선택되는 경로로 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 대상체에게 경구 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 특정 실시양태에 따른 약학적 조성물은 환자에게 조성물의 투여 시 그 안에 함유된 활성 성분이 생체이용가능하도록 제형화된다. 대상체 또는 환자에게 투여될 조성물은 하나 이상의 투여 단위의 형태를 취할 수 있으며, 여기서 예를 들어 정제는 단일 투여 단위일 수 있고, 본원에 기재된 용기는 에어로졸 형태의 항체 또는 항원 결합일 수 있고, 복수의 투여 단위를 보유할 수 있다. 이러한 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 자명할 것이며; 예를 들어, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition (Philadelphia College of Pharmacy and Science, 2000)이 참조된다. 투여될 조성물은 어떠한 경우에도 본원의 교시와 함께 관심 질환 또는 상태의 치료를 위한 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 유효량으로 함유할 것이다.
조성물은 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 담체(들)는 미립자이므로, 조성물은 예를 들어 정제 또는 분말 형태이다. 담체(들)는 액체일 수 있으며, 조성물은 예를 들어 흡입 투여에 유용한 경구 오일, 주사 가능한 액체 또는 에어로졸이다. 경구 투여를 위해 의도된 경우, 약학적 조성물은 바람직하게는 고체 또는 액체 형태이고, 여기서 반고체, 반액체, 현탁액 및 겔 형태는 본원에서 고체 또는 액체로 간주되는 형태 내에 포함된다.
경구 투여용 고체 조성물로서, 약학적 조성물은 산제, 과립제, 압축 정제, 환제, 캡슐제, 츄잉껌, 와퍼 등으로 제형화될 수 있다. 이러한 고체 조성물은 전형적으로 하나 이상의 불활성 희석제 또는 식용 담체를 함유할 것이다. 또한, 다음 중 하나 이상이 존재할 수 있다: 카복시메틸셀룰로스, 에틸 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분, 유당 또는 덱스트린과 같은 부형제, 알긴산, 알긴산나트륨, 프리모겔, 옥수수 전분 등과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 또는 Sterotex와 같은 윤활제; 콜로이드성 이산화규소와 같은 활택제; 자당 또는 사카린과 같은 감미제; 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향료와 같은 향미제; 및 착색제. 조성물이 캡슐, 예를 들어 젤라틴 캡슐의 형태인 경우, 상기 유형의 물질 이외에 폴리에틸렌 글리콜 또는 오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다.
조성물은 액체, 예를 들어 엘릭서, 시럽, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 액체는 두 가지 예로서 경구 투여 또는 주사에 의한 전달을 위한 것일 수 있다. 경구 투여용으로 의도된 경우, 바람직한 조성물은 본 발명의 화합물 이외에 하나 이상의 감미제, 방부제, 염료/착색제 및 향미 증진제를 함유한다. 주사제로 투여되는 조성물은 계면활성제, 방부제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 완충제, 안정화제 및 등장제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
액체 약학적 조성물은 용액, 현탁액 또는 기타 유사한 형태이든지 간에 관계없이 다음 보조제 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예컨대 주사용수, 식염수, 바람직하게는 생리 식염수, 링거액, 등장성 염화나트륨, 고정유, 예컨대 용매 또는 현탁 매질로 작용할 수 있는 합성 모노 또는 디글리세리드, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 용매; 항균제, 예컨대 벤질 알코올, 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨; 에틸렌디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트제; 완충제, 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 장성 조절제, 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. 비경구 제제는 앰풀, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱으로 만든 다중 용량 바이알에 포장될 수 있다. 생리식염수가 바람직한 보조제이다. 주사 가능한 약학적 조성물은 바람직하게는 멸균 상태이다.
비경구 또는 경구 투여를 위한 액체 조성물은 적절한 투여량이 얻어질 수 있도록 본 명세서에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 양을 함유해야 한다. 전형적으로, 이 양은 조성물 중 항체 또는 항원 결합 단편 적어도 0.01%이다. 경구 투여를 위한 경우, 이 양은 조성물 중량의 0.1 내지 약 70%로 다양할 수 있다. 특정 경구 약학적 조성물은 약 4% 내지 약 75%의 항체 또는 항원 결합 단편을 함유한다. 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물 및 제제는 비경구 투여 단위가 희석 전에 0.01 내지 10 중량%의 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하도록 제조된다.
조성물은 국소 투여용일 수 있으며, 이 경우 담체는 용액, 에멀젼, 연고 또는 겔 베이스를 적절히 포함할 수 있다. 베이스는 예를 들어 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 바셀린, 라놀린, 폴리에틸렌 글리콜, 밀랍, 광유, 희석제, 예를 들어 물 및 알코올, 및 유화제 및 안정화제. 증점제가 국소 투여용 조성물에 존재할 수 있다. 경피 투여를 목적으로 하는 경우, 조성물은 경피 패치 또는 이온삼투 장치를 포함할 수 있다. 약학적 조성물은 예를 들어 직장에서 녹아 약물을 방출하는 좌제의 형태로 직장 투여용으로 의도될 수 있다. 직장 투여용 조성물은 적합한 비자극성 부형제로서 유지성 염기를 함유할 수 있다. 이러한 염기에는 라놀린, 코코아 버터 및 폴리에틸렌 글리콜이 포함되지만 이에만 제한되지는 않는다.
조성물은 고체 또는 액체 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 물질을 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 활성 성분 주위에 코팅 쉘을 형성하는 물질을 포함할 수 있다. 코팅 쉘을 형성하는 물질은 전형적으로 불활성이며, 예를 들어 당, 셸락 및 기타 장용 코팅제로부터 선택될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 젤라틴 캡슐에 포장될 수 있다. 고체 또는 액체 형태의 조성물은 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편에 결합하여 화합물의 전달을 보조하는 제제를 포함할 수 있다. 이러한 능력으로 작용할 수 있는 적합한 제제는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체, 하나 이상의 단백질 또는 리포솜을 포함한다. 조성물은 에어로졸로서 투여될 수 있는 투여 단위로 본질적으로 이루어질 수 있다. 에어로졸이라는 용어는 콜로이드 특성에서 가압 패키지로 구성된 시스템에 이르기까지 다양한 시스템을 나타내는 데 사용된다. 전달은 액화 또는 압축 가스 또는 활성 성분을 분배하는 적절한 펌프 시스템에 의해 수행될 수 있다. 에어로졸은 활성 성분(들)을 전달하기 위해 단일상, 2상 또는 3상 시스템으로 전달될 수 있다. 에어로졸의 전달은 필요한 용기, 활성제, 밸브, 하위 용기 등을 포함하며, 이들은 함께 키트를 형성할 수 있다. 당업자는 과도한 실험 없이 바람직한 에어로졸을 결정할 수 있다.
본 개시내용의 조성물은 또한 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드용 담체 분자(예를 들어, 지질 나노입자, 나노규모 전달 플랫폼 등)를 포함하는 것이 이해될 것이다.
약학적 조성물은 제약 분야에 잘 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사에 의해 투여되도록 의도된 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체, 이의 항원 결합 단편, 또는 항체 접합체 및 선택적으로, 염, 완충제 및/또는 안정화제 중 하나 이상을 포함하는 조성물을 멸균 증류수와 조합하여 용액을 형성함으로써 제조될 수 있다. 균질 용액 또는 현탁액의 형성을 용이하게 하기 위해 계면활성제가 첨가될 수 있다. 계면활성제는 수성 전달 시스템에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용해 또는 균질 현탁액을 촉진하기 위해 펩티드 조성물과 비공유적으로 상호작용하는 화합물이다.
일반적으로, 적절한 용량 및 치료 요법은 치료 및/또는 예방적 이점(예컨대, 개선된 임상 결과(예를 들어, 설사 또는 관련 탈수 또는 염증의 빈도, 기간 또는 중증도의 감소, 또는 더 긴 무병 및/또는 전체 생존, 또는 증상 중증도 감소를 포함한 본원에 기재된 바와 같은 것)을 제공하기에 충분한 양으로 조성물(들)을 제공한다. 예방적 사용의 경우, 용량은 발병을 예방, 지연하거나, 질환 또는 장애와 관련된 질환 중증도를 감소시키기에 충분해야 한다. 본원에 기재된 방법에 따라 투여되는 조성물의 예방적 이점은 전임상(시험관 내 및 생체 내 동물 연구 포함) 및 임상 연구를 수행하고 적절한 통계, 생물학적, 임상적 방법 및 기술에 의해 그로부터 얻은 데이터를 분석함으로써 결정될 수 있으며, 이들 모두는 당업자에 의해 용이하게 실시될 수 있다.
조성물은 (예를 들어, 인플루엔자 감염을 치료하기 위한) 유효량으로 투여되며, 이는 사용된 특정 화합물의 활성; 화합물의 대사 안정성 및 작용 기간; 대상체의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식단; 투여 방식 및 시간; 배설 속도; 약물 조합; 특정 장애 또는 상태의 중증도; 및 치료를 받고 있는 대상체를 비롯한 다양한 인자에 따라 달라질 것이다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제형 및 방법에 따른 요법의 투여 후, 시험 대상체는 위약 치료 또는 기타 적절한 대조군 대상체와 비교하여 치료되는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상에서 약 10% 내지 약 99% 감소를 나타낼 것이다.
일반적으로, 항체 또는 항원 결합 단편의 치료 유효 용량은 (70 kg 포유동물의 경우) 약 0.001 mg/kg(즉, 0.07 mg) 내지 약 100 mg/kg(즉, 7.0 g)이고; 바람직하게는 치료 유효 용량은 (70 kg 포유동물의 경우) 약 0.01 mg/kg(즉, 0.7 mg) 내지 약 50 mg/kg(즉, 3.5 g)이고; 보다 바람직하게는 치료학적 유효 용량은 (70 kg 포유동물의 경우) 약 1 mg/kg(즉, 70 mg) 내지 약 25 mg/kg(즉, 1.75 g)이다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 및 관련 조성물의 경우, 치료적 유효량은 항체 또는 항원 결합 단편에 대한 것과 상이할 수 있다.
특정 실시양태에서, 방법은 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 대상체에게 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 그 이상으로 투여하는 것을 포함한다.
특정 실시양태에서, 방법은 대상체에게 항체, 항원 결합 단편 또는 조성물을 여러 번 투여하는 것을 포함하며, 여기서 제2 또는 연속 투여는 제1 또는 이전 투여 후 각각 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 24, 약 48, 약 74, 약 96시간, 또는 그 이상이다.
특정 실시양태에서, 방법은 대상체가 인플루엔자에 감염되기 전에 적어도 1회 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 또는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 개시내용의 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 포함하는 조성물은 또한 예를 들어 뉴라미니다제 억제제, 예를 들어 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르 또는 라니나미비르와 같은 하나 이상의 다른 치료제의 투여와 동시에, 투여 전 또는 후에 투여될 수 있다. 이러한 조합 요법은 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 추가 활성제를 함유하는 단일 약학적 투여 제형의 투여, 뿐만 아니라 자체 별도의 제형 중에 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편 및 이의 각각의 활성제를 포함하는 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 다른 활성제는 정제 또는 캡슐과 같은 단일 경구 투여 조성물로 함께 환자에게 투여될 수 있거나, 또는 각각의 제제는 별개의 경구 투여 제제로 투여될 수 있다. 유사하게, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 항원 결합 단편 및 다른 활성제는 식염수 또는 기타 생리학적으로 허용되는 용액과 같은 단일 비경구 투여 조성물로 함께 대상체에게 투여될 수 있거나, 각각의 제제는 개별 비경구 투여 제형으로 투여된다. 별도의 투여 제형이 사용되는 경우, 항체 또는 항원 결합 단편 및 하나 이상의 추가 활성제를 포함하는 조성물은 본질적으로 동시에, 즉, 동반하여, 또는 별도로 시차를 두고, 즉, 순차적으로 임의의 순서로 투여될 수 있으며; 조합 요법은 이러한 모든 요법을 포함하는 것으로 이해된다.
일부 실시양태에서, 항체(또는 하나 이상의 핵산, 숙주 세포, 벡터 또는 조성물)는 이전에 하나 이상의 항염증제 및/또는 하나 이상의 항바이러스제를 받은 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 항바이러스제는 예를 들어 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르 또는 라니나미비르와 같은 뉴라미다제 억제제(NAI)이다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 항염증제 및/또는 하나 이상의 항바이러스제는 이전에 항체(또는 하나 이상의 핵산, 숙주 세포, 벡터 또는 조성물)를 받은 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 항바이러스제는 예를 들어 오셀타미비르, 자나미비르, 페라미비르 또는 라니나미비르와 같은 뉴라미다제 억제제(NAI)이다.
관련 측면에서, 본원에 개시된 항체, 항원 결합 단편, 벡터, 숙주 세포 및 조성물의 용도(예를 들어, 인플루엔자 감염의 진단, 예방 및/또는 치료, 인플루엔자 감염의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에서의 용도)가 제공된다.
특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 감염을 치료하거나 예방하는 방법에 사용하기 위한 항체, 항원 결합 단편, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 또는 조성물이 제공된다.
특정 실시양태에서, 대상체에서 인플루엔자 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약제를 조제 또는 제조하는 방법에 사용하기 위한 항체, 항원 결합 단편 또는 조성물이 제공된다.
본 개시내용은 또한 다음의 비제한적 실시양태를 제공한다.
실시양태 1. (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV, 또는 둘 다를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서, 인간, 인간화 또는 키메라인 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 3. 실시양태 1 또는 2에 있어서, (i) 그룹 1 IAV NA는 N1, N4, N5, 및/또는 N8을 포함하고/거나; (ii) 그룹 2 IAV NA는 N2, N3, N6, N7, 및/또는 N9를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 4. 실시양태 3에 있어서, (i) N1은 A/California/07/2009, A/California/07/2009 I223R/H275Y, A/Swine/Jiangsu/J004/2018, A/Stockholm/18/2007, A/Brisbane/02/2018, A/Michigan/45/2015, A/Mississippi/3/2001, A/Netherlands/603/2009, A/Netherlands/602/2009, A/Vietnam/1203/2004, A/G4/SW/Shangdong/1207/2016, A/G4/SW/Henan/SN13/2018, A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018, 및 A/New Jersey/8/1976 중 어느 하나 이상으로부터의 N1이고; (ii) N4는 A/mallard duck/Netherlands/30/2011로부터의 것이고; (iii) N5는 A/aquatic bird/Korea/CN5/2009로부터의 것이고; (iv) N8은 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011로부터의 것이고; (v) N2는 A/Washington/01/2007, A/HongKong/68, A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, A/Switzerland/9715293/2013, A/Leningrad/134/17/57, A/Florida/4/2006, A/Netherlands/823/1992, A/Norway/466/2014, A/Switzerland/8060/2017, A/Texas/50/2012, A/Victoria/361/2011, A/HongKong/2671/2019, A/SW/Mexico/SG1444/2011, A/Tanzania/205/2010, A/Aichi/2/1968, A/Bilthoven/21793/1972, A/Netherlands/233/1982, A/Shanghai/11/1987, A/Nanchang/933/1995, A/Fukui/45/2004, 및 A/Brisbane/10/2007 중 어느 하나 이상으로부터의 N2이고; (vi) N3는 A/Canada/rv504/2004로부터의 것이고; (v) N6은 A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 것이고; (vi) N7은 A/Netherlands/078/03로부터의 것이고/거나; (vii) N9는 A/Anhui/2013 및 A/Hong Kong/56/2015 중 어느 하나 이상으로부터의 N9인, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata); B/Wisconsin/1/2010(Yamagata); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); B/Brisbane/33/2008; B/Colorado/06/2017; B/Hubei-wujiang/158/2009; B/Massachusetts/02/2012; B/Netherlands/234/2011; B/Perth/211/2001; B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/HongKong/05/1972; B/Phuket/3073/2013, B/Harbin/7/1994(Victoria), 및 B/Washington/02/2019(Victoria) 중 어느 하나 이상으로부터의 NA인, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 약 0.1 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 1 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 이하의 EC50으로 (i) 그룹 1 IAV NA; (ii) 그룹 2 IAV NA; 및 (iii) IBV NA 각각에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 7. 실시양태 6에 있어서, (i) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 그룹 1 IAV NA에; (ii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 그룹 2 IAV NA에; 및/또는 (iii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 8. 실시양태 7에 있어서, (i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N1에; (ii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N4에; (iii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N5에; (iv) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8에; (v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL의 범위, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 또는 20 μg/mL의 EC50으로 N2에; (vi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N3에; (vii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N6에; (viii) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N7에; (ix) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N9에; 및/또는 (xi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 9. 실시양태 7 또는 8에 있어서, (i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 다음 중 하나 이상에: N1 A/California/07/2009, N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y, N1 A/Stockholm/18/2007, N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008, N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011, N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009, N2 A/Hong Kong/68, N2 A/Leningrad/134/17/57, N3 A/Canada/rv504/2004, N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99, N9 A/Anhui/1/2013, B/Lee/10/1940(Ancestral), B/Brisbane/60/2008(Victoria), B/Malaysia/2506/2004(Victoria), B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata), B/Wisconsin/1/2010(Yamagata), 및 B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); (ii) 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009에; (iii) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011에; (iv) 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Washington/01/2007에; (v) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N7 A/Netherlands/078/03에; (vi) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/South Australia/34/2019에; (vii) 약 9.5 μg/mL 내지 약 3.8 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/8060/2017에; (viii) 약 18.4 μg/mL 내지 약 2.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016에; (iv) 약 1.6 μg/mL 내지 약 1.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/9715293/2013에; 및/또는 (v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4, 약 2, 약 10, 또는 약 50 μg/mL의 EC50으로 N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 10. 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, NA가 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포)의 표면에서 발현되고 NA에 대한 결합은 유세포 분석법에 따른, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 11. 실시양태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 1.0E-12 M 미만, 1.0E-11 M 미만, 1.0 E-11 M 미만, 또는 1.0E-12M 이하, 1.0E-11M 이하, 또는 1.0E-10 이하의 KD, 또는 1.0E-10 내지 1.0E-13의 KD, 또는 1.0E-11 내지 1.0E-13의 KD로 NA에 결합할 수 있고, 선택적으로 여기서 결합은 생물층 간섭계(BLI)에 의해 평가되는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 12. 실시양태 11에 있어서, NA는 N1, N2 및/또는 N9인, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 13. 실시양태 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편: (1) (i) 하기 아미노산(N1 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (ii) 하기 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (2) (i) 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118(N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (ii) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118(N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (3) NA 활성 부위에 포함되거나 이를 포함하는 에피토프 - 여기서 선택적으로 NA 활성 부위는 하기 아미노산(N2 넘버링)을 포함함: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425; 및/또는 (4) (i) 하기 아미노산 중 어느 하나 이상: R116, D149, E226, R292, 및 R374; 또는 (ii) 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함하는 IBV NA 에피토프.
실시양태 14. 실시양태 13에 있어서, (1) 에피토프는 다음 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 더 포함하고: E344, E227, S247, 및 D198; 및/또는 (2) 항체 또는 항원 결합 단편은 S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 15. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 16. 실시양태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 시험관 내 감염 모델, 생체 내 동물 감염 모델 및/또는 인간에서 (i) 그룹 1 IAV NA, 그룹 2 IAV NA 또는 둘 모두를 포함하는 IAV NA, 및/또는 (ii) IBV NA의 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 17. 실시양태 16에 있어서, (i) 그룹 1 IAV NA는 H1N1 및/또는 H5N1을 포함하고; (ii) 그룹 2 IAV NA는 H3N2 및/또는 H7N9를 포함하고/거나; (iii) IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral);B/HongKong/05/1972; B/Taiwan/2/1962(Ancestral); B/Brisbane/33/2008(Victoria); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/New York/1056/2003(Victoria); B/Florida/4/2006(Yamagata); B/Jiangsu/10/2003(Yamagata); B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/Harbin/7/1994(Victoria); B/Colorado/06/2017(Victoria); B/Washington/02/2019(Victoria); B/Perth/211/2001(Yamagata); B/Hubei-wujiagang/158/2009(Yamagata); B/Wisconsin/01/2010(Yamagata); B/Massachusetts/02/2012(Yamagata); 및 B/Phuket/3073/2013(Yamagata) 중 하나 이상을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 18. 실시양태 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.09 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.08 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.07 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.06 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.05 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.04 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.03 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.02 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.01 μg/mL, from 0.002 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.001 μg/mL 내지 50 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 1 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL, 약 0.2 μg/mL, 약 0.3 μg/mL, 약 0.4 μg/mL, 약 0.5 μg/mL, 약 0.6 μg/mL, 약 0.7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL, 약 0.9 μg/mL, 약 1.0 μg/mL, 약 1.5 μg/mL, 약 2.0 μg/mL, 약 2.5 μg/mL, 약 3.0 μg/mL, 약 3.5 μg/mL, 약 4.0 μg/mL, 약 4.5 μg/mL, 약 5.0 μg/mL, 약 5.5 μg/mL, 약 6.0 μg/mL, 약 6.5 μg/mL, 약 7.0 μg/mL, 약 7.5 μg/mL, 약 8.0 μg/mL, 약 8.5 μg/mL, 약 9.0 μg/mL, 약 10 μg/mL, 약 11 μg/mL, 약 12 μg/mL, 약 13 μg/mL, 약 14 μg/mL, 약 15 μg/mL, 약 16 μg/mL, 약 17 μg/mL, 약 18 μg/mL, 약 19 μg/mL, 약 20 μg/mL, 약 25 μg/mL, 및/또는 약 30 μg/mL의 IC50으로 그룹 1 IAV NA; 그룹 2 IAV NA; 및/또는 IBV NA에 의한 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 19. 실시양태 18에 있어서, 약 0.00001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.001 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.0001 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/ml의 범위, 또는 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 또는 15 μg/ml의 IC50으로 하나 이상의 그룹 1 및/또는 그룹 2 IAV, 및/또는 하나 이상의 IBV의 NA 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 20. 실시양태 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 인간 FcγRIIIa를 활성화할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 21. 실시양태 20에 있어서, 활성화는 IAV로 감염된 표적 세포(예를 들어, A549 세포)와 항체 또는 항원 결합 단편의 인큐베이션 후(예를 들어, 23시간 동안) (i) 인간 FcγRIIIa(선택적으로, F158 대립유전자); 및 (ii) 루시퍼라제 리포터와 같은 리포터를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 NFAT 발현 조절 서열을 포함하는 숙주 세포(선택적으로 Jurkat 세포)를 사용하여 결정되는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 22. 실시양태 21에 있어서, 활성화는 H1N1 IAV로 감염된 표적 세포와 항체 또는 항원 결합 단편의 인큐베이션(선택적으로, 약 23시간 동안) 후에 결정되며, 선택적으로 여기서 H1N1 IAV는 A/PR8/34이고/거나, 선택적으로 감염은 6의 감염 다중도(MOI)를 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 23. 실시양태 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화시킬 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 24. 실시양태 23에 있어서, IAV 및/또는 IBV는 항바이러스 내성이고, 선택적으로 항바이러스제는 오셀타미비르인, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 25. 실시양태 1 내지 24 중 어느 하나에 있어서, IAV는 다음 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 N1 NA를 포함하고: H275Y; E119D + H275Y; S247N + H275Y; I222V; 및/또는 N294S, 여기서 선택적으로 IAV는 CA09 또는 A/Aichi를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 26. 실시양태 1 내지 25 중 어느 하나에 있어서, IAV는 아미노산 돌연변이(들) E119V, Q136K, 및/또는 R292K를 포함하는 N2 NA를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 27. 실시양태 1 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 대상체에서 (i) IAV 감염 및/또는 (ii) IBV 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 28. 실시양태 1 내지 27 중 어느 하나에 있어서, (i) 선택적으로 A/PR8/34를 포함하는 H1N1 바이러스; 및/또는 (ii) 선택적으로 A/Hong Kong/68을 포함하는 H3N2 바이러스에 의한 감염을 치료 및/또는 약화시킬 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 29. 실시양태 1 내지 28 중 어느 하나에 있어서, 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편의 투여 후 선택적으로 (i) 최대 15일, 또는 (ii) 15일 초과 동안 IAV 및/또는 IBV에 감염된 대상체에서 체중 감소를 방지할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 30. 실시양태 1 내지 29 중 어느 하나에 있어서, IAV 및/또는 IBV 감염 직전 대상체의 체중에 대해 결정되어 IAV 감염 및/또는 IBV 감염된 대상체에서 10% 초과의 체중 감소를 방지할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 31. 실시양태 1 내지 30 중 어느 하나에 있어서, IAV 감염 및/또는 IBV 감염 대상체의 생존을 연장할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 32. 실시양태 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 마우스(예를 들어, tg32 마우스)에서 다음 생체 내 반감기를 갖는 항체 또는 항원 결합 단편: (i) 약 10일 내지 약 14일, 약 10.2일 내지 약 13.8일, 약 10.5일 내지 약 13.5일, 약 11일 내지 약 13일, 약 11.5일 내지 약 12.5일, 10일 내지 14일, 또는 10.5일 내지 13.5일, 또는 11일 내지 13일의 범위, 또는 약 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 또는 14.0일; 또는 (ii) 약 12일 내지 약 16일, 약 12.5일 내지 15.5일, 약 13일 내지 15일, 약 13.5일 내지 약 14.5일, 또는 12일 내지 16일, 또는 13일 내지 15일, 또는 13.5일 내지 14.5일의 범위, 또는 약 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 1.36, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.3, 14.4, 14.5, 14.6, 14.7, 14.8, 14.9, 15.0 15.1, 15.2, 15.3, 15.4, 15.5, 1.56, 15.7, 15.8, 15.9, 또는 16.0일.
실시양태 33. 실시양태 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상보성 결정 영역(CDR)H1, CDRH2, 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고, 여기서 (i) 선택적으로, CDRH1은 서열 번호 147, 3, 15, 27, 39, 51, 63, 75, 87, 99, 111, 123, 135, 159, 및 231 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (ii) 선택적으로, CDRH2는 서열 번호 148, 4, 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 160, 및 232 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (iii) CDRH3은 서열 번호 149, 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 161, 및 233 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (iv) 선택적으로, CDRL1은 서열 번호 153, 9, 21, 33, 45, 57, 69, 81, 93, 105, 117, 129, 141, 165, 및 234 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고; (v) 선택적으로, CDRL2는 서열 번호 154, 10, 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 166, 및 235 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고/거나; (vi) 선택적으로, CDRL3은 서열 번호 155, 11, 23, 35, 175, 178, 181, 47, 59, 71, 83, 95, 187, 193, 107, 119, 131, 143, 190, 167, 및 236 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 34. 실시양태 33에 있어서, 서열 번호 (i) 각각 147-149 및 153-155; (ii) 각각 15-17 및 21-23; (iii) 각각 27-29 및 33-35; (iv) 각각 27, 28, 172, 및 33-35; (v) 각각 27-29, 33, 34, 및 175; (vi) 각각 27-29, 33, 34, 및 178; (vii) 각각 27-29, 33, 34, 및 181; (viii) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 175; (ix) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 178; (x) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 181; (xi) 각각 39-41 및 45-47; (xii) 각각 51-53 및 57-59; (xiii) 각각 63-65 및 69-71; (xiv) 각각 75-77 및 81-83; (xv) 각각 87-89 및 93-95; (xvi) 각각 87, 88, 184 및 93-95; (xvii) 각각 87-89, 93, 94, 및 187; (xviii) 각각 87-89, 93, 94, 및 190; (xix) 87-89, 93, 94, 및 193; (xx) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 187; (xxi) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 190; (xxii) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 193; (xxiii) 각각 87-89, 141, 142, 및 131; (xxiv) 각각 99-101 및 105-107; (xxv) 각각 111-113 및 117-119; (xxvi) 각각 123-125 및 129-131; (xxvii) 각각 135-137 및 141-143; (xxviii) 각각 3-5 및 9-11; (xxix) 각각 159-161 및 165-167; 또는 (xxx) 각각 231-233 및 234-236에 제시된 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 35. 실시양태 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, (i) VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열 - 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함함 -을 포함하거나 이로 이루어지고; (ii) VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열 - 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함함 -을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 36. 실시양태 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, VH 및 VL은 서열 번호 (i) 각각 199 및 201; (ii) 각각 14 및 20; (iii) 각각 26 및 32; (iv) 각각 26 및 174; (v) 각각 26 및 177; (vi) 각각 26 및 180; (vii) 각각 171 및 32; (viii) 각각 171 및 174; (ix) 각각 171 및 177; (x) 각각 171 및 180; (xi) 각각 38 및 44; (xii) 각각 50 및 56; (xiii) 각각 62 및 68; (xiv) 각각 74 및 80; (xv) 각각 86 및 92; (xvi) 각각 86 및 186; (xvii) 각각 86 및 189; (xviii) 각각 86 및 192; (xix) 각각 183 및 92; (xx) 각각 183 및 186; (xxi) 각각 183 및 189; (xxii) 각각 183 및 192; (xxiii) 각각 98 및 104; (xxiv) 각각 110 및 116; (xxv) 각각 122 및 128; (xxvi) 각각 134 및 140; (xxvii) 각각 146 및 152; (xxviii) 각각 158 및 164; (xxix) 각각 2 및 8; (xxx) 각각 203 및 205; (xxxi) 각각 207 및 209; (xxxii) 각각 216 및 217; 또는 (xxxiii) 각각 228 및 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 37. 실시양태 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서, (i) 서열 번호 210 또는 서열 번호 215에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CH1-CH3; 및/또는 (2) 서열 번호 211에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CL을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 38. 실시양태 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, (1) 서열 번호 212 또는 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및 (2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 39. 실시양태 1 내지 38 중 어느 하나에 있어서, (1) 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및 (2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 40. 실시양태 1 내지 39 중 어느 하나에 있어서, (1) 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및 (2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 41. CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기서 (i) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 147-149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 153-155에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 15-17에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 21-23에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 27, 28, 및 29 또는 172에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 33, 34, 및 35 또는 175 또는 178 또는 181에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 39-41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 45-47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (v) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 51-53에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 57-59에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 63-65에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 69-71에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 75-77에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 81-83에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (viii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87, 88, 및 89 또는 184에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 93, 94, 및 95 또는 187 또는 190 또는 193에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ix) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87, 88, 184에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 93-95에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (x) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 99-101에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 105-107에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 111-113에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 117-119에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 123-125에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 129-131에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 135-137에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 141-143에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 3-5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 9-11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 159-161에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 165-167에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87-89에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 141, 142, 및 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 231-233에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 234-236에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고,
(i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 42. 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, (i) VH는 서열 번호 199에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ii) VH는 서열 번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iii) VH는 서열 번호 26 또는 171에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 32, 174, 177, 또는 180에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iv) VH는 서열 번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (v) VH는 서열 번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vi) VH는 서열 번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vii) VH는 서열 번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (viii) VH는 서열 번호 86 또는 183에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 92, 186, 189, 또는 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ix) VH는 서열 번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (x) VH는 서열 번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xi) VH는 서열 번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 128에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xii) VH는 서열 번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 140에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiii) VH는 서열 번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 152에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiv) VH는 서열 번호 158에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xv) VH는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvi) VH는 서열 번호 203에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 205에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvii) VH는 서열 번호 207에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 209에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; 또는 (xviii) VH는 서열 번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 43. 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, VH는 서열 번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 217에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 44. 실시양태 42 또는 43에 있어서, (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 다를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있고, 선택적으로 (1) NA 시알리다제 활성을 억제하고/하거나, (2) IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 45. 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 폴리펩티드.
실시양태 46. 실시양태 45에 있어서, 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 또는 이의 단편을 포함하고, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열은 선택적으로 VH 또는 이의 단편에 포함되는 폴리펩티드.
실시양태 47. 실시양태 45 또는 46에 있어서, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열은 서열 번호 149, 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 및 161 중 어느 하나를 포함하는 폴리펩티드.
실시양태 48. 실시양태 45 내지 47 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리펩티드 또는 VH는 서열 번호 220에 따른 아미노산 서열 서열; 및/또는 서열 번호 221에 따른 아미노산 서열을 더 포함하는, 폴리펩티드.
실시양태 49. 실시양태 45 내지 48 중 어느 하나에 있어서, 항체 경쇄 가변 도메인(VL)을 더 포함하고, 선택적으로 VL은 (i) 서열 번호 222에 따른 아미노산 서열; (ii) 서열 번호 223에 따른 아미노산 서열; 및/또는 (iii) 서열 번호 224에 따른 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
실시양태 50. 실시양태 46 내지 49 중 어느 하나에 있어서, VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 폴리펩티드.
실시양태 51. 실시양태 49 또는 50에 있어서, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 폴리펩티드.
실시양태 52. 실시양태 45 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 폴리펩티드.
실시양태 53. 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열 및 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며,
(i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제에 결합할 수 있는,
폴리펩티드.
실시양태 54. 실시양태 45 내지 52 중 어느 하나 또는 실시양태 53에 있어서, (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있고, 선택적으로 항체 또는 항원 결합 단편은 (1) NA 시알리다제 활성을 억제하고/거나, (2) IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화할 수 있는, 폴리펩티드 또는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 55. 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: (i) 하기 아미노산(N1 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (ii) 하기 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118.
실시양태 56. (i) 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118 (N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (ii) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118 (N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 57. NA 활성 부위에 포함되거나 이를 포함하는 에피토프에 결합할 수 있으며, 선택적으로 상기 NA 활성 부위는 다음 아미노산(N2 넘버링)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425.
실시양태 58. 실시양태 83 내지 85 중 어느 하나에 있어서, 에피토프는 다음 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 더 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: E344, E227, S247, 및 D198.
실시양태 59. 실시양태 55 내지 58 중 어느 하나에 있어서, S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 60. 하기 아미노산 중 어느 하나 이상을 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: R116, D149, E226, R292, 및 R374.
실시양태 61. 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
실시양태 62. 실시양태 55 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 인플루엔자는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 또는 둘 모두를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 63. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 62 중 어느 하나 및 실시양태 52에 있어서, IgG, IgA, IgM, IgE, 또는 IgD 이소형인 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 64. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 63 중 어느 하나 및 실시양태 52에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되는 IgG 이소형인 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 65. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 64 중 어느 하나 및 실시양태 52에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 항체, 모노클로날 항체, 정제된 항체, 단일쇄 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 Fv를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 66. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 65 중 어느 하나 및 실시양태 52에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 67. 실시양태 66 또는 실시양태 66에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 이중특이성 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 68. 실시양태 66 또는 67에 있어서, (i) 제1 VH 및 제1 VL; 및 (ii) 제2 VH 및 제2 VL을 포함하고, 여기서 제1 VH와 제2 VH는 상이하고 각각 독립적으로 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 제1 VL과 제2 VL은 상이하고 각각 독립적으로 서열 번호 201, 8, 20, 32, 174, 177, 180, 44, 56, 68, 80, 92, 186, 189, 192, 104, 116, 128, 140, 152, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며, 제1 VH 및 제1 VL은 함께 제1 항원-결합 부위를 형성하고, 제2 VH 및 제2 VL은 함께 제2 항원 결합 부위를 형성하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
실시양태 69. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 68 중 어느 하나 및 실시양태 52에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (예를 들어, IgG1) Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 70. 실시양태 69에 있어서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 (i) 돌연변이를 포함하지 않는 참조 Fc 폴리펩티드와 비교하여 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)(예를 들어, 제조자의 프로토콜을 사용하는 Biacore, 예를 들어 T200 기기)를 사용하여 측정됨); 및/또는 (ii) 돌연변이를 포함하지 않는 참조 Fc 폴리펩티드와 비교하여 인간 FcγR에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)(예를 들어, 제조자의 프로토콜을 사용하는 Biacore, 예를 들어 T200 기기)를 사용하여 측정됨)를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 71. 실시양태 70에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I; Q311I; D376V; T307A; E380A; 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 72. 실시양태 70 또는 71에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 (i) M428L/N434S; (ii) M252Y/S254T/T256E; (iii) T250Q/M428L; (iv) P257I/Q311I; (v) P257I/N434H; (vi) D376V/N434H; (vii) T307A/E380A/N434A; 또는 (viii) (i) 내지 (vii)의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 73. 실시양태 70 내지 72 중 어느 하나에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 M428L/N434S를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 74. 실시양태 70 내지 73 중 어느 하나에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 S239D; I332E; A330L; G236A; 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 75. 실시양태 70 내지 74 중 어느 하나에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) S239D/I332E; (ii) S239D/A330L/I332E; (iii) G236A/S239D/I332E; 또는 (iv) G236A/A330L/I332E를 포함하고, 여기서 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 선택적으로 위치 239에 Ser을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 76. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 75 중 어느 하나, 또는 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 75 중 어느 하나에 있어서, 글리코실화를 변경시키는 돌연변이를 포함하고, 여기서 글리코실화를 변경하는 돌연변이는 N297A, N297Q, 또는 N297G를 포함하고/하거나 비글리코실화 및/또는 비푸코실화된, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
실시양태 77. 다음을 포함하는 항체: (1) 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및 (2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄.
실시양태 78. (1) 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및 (2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 79. (1) 각각 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 중쇄; 및 (2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 80. (1) 각각 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 2개의 중쇄; 및 (2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 경쇄를 포함하는 항체.
실시양태 81. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하거나, 상기 항체 또는 항원 결합 단편의 VH, 중쇄, VL 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 82. 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 76 중 어느 하나의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 83. 실시양태 81 또는 82에 있어서, 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보핵산(DNA) 또는 리보핵산(RNA)을 포함하고, 여기서 RNA는 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
실시양태 84. 실시양태 81 내지 83 중 어느 하나에 있어서, 변형된 뉴클레오시드, cap-1 구조, cap-2 구조, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
실시양태 85. 실시양태 84에 있어서, 슈도우리딘, N6-메틸아데논신, 5-메틸시티딘, 2-티오우리딘, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
실시양태 86. 실시양태 84에 있어서, 슈도우리딘은 N1-메틸슈도우리딘을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
실시양태 87. 실시양태 81 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 숙주 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 폴리뉴클레오티드.
실시양태 88. 실시양태 87에 있어서, 숙주 세포는 인간 세포를 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
실시양태 89. 실시양태 81 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 198, 200, 1, 13, 25, 170, 37, 49, 61, 73, 85, 182, 97, 109, 121, 133, 145, 157, 6, 18, 30, 42, 54, 66, 78, 90, 102, 114, 126, 138, 150, 162, 7, 19, 31, 173, 176, 179, 43, 55, 67, 79, 91, 185, 188, 191, 103, 115, 127, 139, 151, 163, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144, 156, 168, 202, 206, 204, 208, 227, 및 229 중 어느 하나 이상에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 50%(예를 들어, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
실시양태 90. 실시양태 89에 있어서, 서열 번호 198의 폴리뉴클레오티드 서열 및/또는 서열 번호 200의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
실시양태 91. 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터.
실시양태 92. 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 및/또는 실시양태 91의 벡터를 포함하는 숙주 세포로서, 여기서 폴리뉴클레오티드는 선택적으로 숙주 세포에 대해 이종성이고/이거나 숙주 세포는 암호화된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 숙주 세포.
실시양태 93. 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 및/또는 실시양태 91의 벡터를 포함하는 단리된 인간 B 세포로서, 여기서 폴리뉴클레오티드는 선택적으로 인간 B 세포에 대해 이종성이고/이거나 인간 B 세포는 불멸화된, 단리된 인간 B 세포.
실시양태 94. (i) 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편; (ii) 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 76 중 어느 하나의 폴리펩티드; (iii) 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드; (iv) 실시예 91의 재조합 벡터; (v) 실시양태 92의 숙주 세포; 및/또는 (vi) 실시양태 93의 인간 B 세포, 및 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물.
실시양태 95. 실시양태 94에 있어서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 각각의 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 상이하고, 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나에 따른 것인, 조성물.
실시양태 96. 담체 분자에 캡슐화된 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 실시양태 91의 벡터를 포함하는 조성물로서, 여기서 담체 분자는 선택적으로 지질, 지질 유래 전달 비히클, 예컨대 리포솜, 고체 지질 나노입자, 유성 현탁액, 서브미크론 지질 에멀젼, 지질 미세기포, 역지질 미셀, 와우 리포솜, 지질 미세소관, 지질 미세실린더, 지질 나노입자(LNP) 또는 나노스케일 플랫폼을 포함하는, 조성물.
실시양태 97. 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 제조 방법으로서, 실시양태 92의 숙주 세포 또는 실시양태 93의 인간 B 세포를 각각 숙주 세포 또는 인간 B 세포에 대해 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하기에 충분한 시간과 및 조건 하에서 배양하는 것을 포함하는, 방법.
실시양태 98. 실시양태 97에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 더 포함하는 방법.
실시양태 99. 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 방법은 대상체에게 유효량의 (i) 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편; (ii) 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 76 중 어느 하나의 폴리펩티드; (iii) 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드; (iv) 실시예 91의 재조합 벡터; (v) 실시양태 92의 숙주 세포; (vi) 실시양태 93의 인간 B 세포; 및/또는 (vii) 실시양태 94 내지 96 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 100. 인간 대상체에서 인플루엔자 감염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 대상체에게 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 91의 재조합 벡터, 또는 실시양태 96의 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 폴리뉴클레오티드는 mRNA를 포함하는, 방법.
실시양태 101. 실시양태 100에 있어서, 인플루엔자 감염은 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 포함하는, 방법.
실시양태 102. 실시양태 99 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 단일 용량의 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 103. 실시양태 99 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 2회 이상의 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 104. 실시양태 99 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 용량을 1년에 1회, 선택적으로 인플루엔자 시즌에 앞서 또는 그 동안에 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 105. 실시양태 99 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 용량을 1년에 2회 이상, 예를 들어 6개월 마다 한 번 정도 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 106. 실시양태 99 내지 105 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 근육내, 피하 또는 정맥내로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 107. 실시양태 99 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 치료 및/또는 예방은 노출 후 예방을 포함하는 방법.
실시양태 108. 실시양태 99 내지 107 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 항바이러스제를 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정인 방법.
실시양태 109. 실시양태 108에 있어서, 항바이러스제는 뉴라미니다제 억제제, 인플루엔자 폴리머라제 억제제, 또는 둘 모두를 포함하는 방법.
실시양태 110. 실시 실시양태 108 또는 109에 있어서, 항바이러스제는 오셀타미비르, 자나미비르, 발록사비르, 페라미비르, 라니나미비르, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 방법.
실시양태 111. 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편, 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 76 중 어느 하나의 폴리펩티드, 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 91의 재조합 벡터, 실시양태 92의 숙주 세포, 실시양태 93의 인간 B 세포, 및/또는 실시양태 94 내지 96 중 어느 하나의 조성물.
실시양태 112. 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위한, 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편, 실시양태 45 내지 52 및 63 내지 76 중 어느 하나의 폴리펩티드, 실시양태 81 내지 90 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 실시양태 91의 재조합 벡터, 실시양태 92의 숙주 세포, 실시양태 93의 인간 B 세포, 및/또는 실시양태 94 내지 96 중 어느 하나의 조성물.
실시양태 113. IAV 감염 및/또는 IBV 감염의 시험관 내 진단 방법으로서, (i) 대상체로부터의 샘플을 실시양태 1 내지 44 및 53 내지 80 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (ii) 항원과 항체를 포함하거나 항원과 항원 결합 단편을 포함하는 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 방법.
실시양태 114. (i) IAV는 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV, 또는 둘 모두를 포함하고, 선택적으로 그룹 1 IAV NA는 N1, N4, N5, 및/또는 N8을 포함하고/거나; 그룹 2 IAV NA는 N2, N3, N6, N7, 및/또는 N9를 포함하고, 여기서 추가로 선택적으로 N1은 A/California/07/2009 유래, A/California/07/2009 I223R/H275Y 유래, A/Swine/Jiangsu/J004/2018 유래, A/Stockholm/18/2007 유래, A/Brisbane/02/2018 유래, A/Michigan/45/2015 유래, A/Mississippi/3/2001 유래, A/Netherlands/603/2009 유래, A/Netherlands/602/2009 유래, A/Vietnam/1203/2004 유래, A/G4/SW/Shangdong/1207/2016 유래, A/G4/SW/Henan/SN13/2018 유래, A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018 유래, 및/또는 A/New Jersey/8/1976 유래이고; N4는 A/mallard duck/Netherlands/30/2011 유래이고; N5는 A/aquatic bird/Korea/CN5/2009 유래이고; N8은 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011 유래이고; N2는 A/Washington/01/2007 유래, A/HongKong/68 유래, A/HongKong/2671/2019 유래, A/South Australia/34/2019 유래, A/Switzerland/8060/2017 유래, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 유래, A/Switzerland/9715293/2013 유래, A/Leningrad/134/17/57 유래, A/Florida/4/2006 유래, A/Netherlands/823/1992 유래, A/Norway/466/2014 유래, A/Texas/50/2012 유래, A/Victoria/361/2011 유래, A/SW/Mexico/SG1444/2011 유래, A/Aichi/2/1968 유래, A/Bilthoven/21793/1972 유래, A/Netherlands/233/1982 유래, A/Shanghai/11/1987 유래, A/Nanchang/933/1995 유래, A/Fukui/45/2004, A/Brisbane/10/2007 유래, A/Tanzania/205/2010 유래이고; N3은 A/Canada/rv504/2004 유래이고; N6은 A/swine/Ontario/01911/1/99 유래이고; N7은 A/Netherlands/078/03 유래이고/거나; N9는 A/Anhui/2013, A/Hong Kong/56/2015 유래이고/거나; (ii) IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata); B/Wisconsin/1/2010(Yamagata); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); B/Brisbane/33/2008(Victoria); B/Colorado/06/2017(Victoria); B/Hubei-wujiang/158/2009(Yamagata); B/Massachusetts/02/2012(Yamagata); B/Netherlands/234/2011; B/Perth/211/2001(Yamagata); B/Phuket/3073/2013(Yamagata); B/Texas/06/2011(Yamagata); B/HongKong/05/1972; B/Harbin/7/1994(Victoria); B/Washington/02/2019(Victoria); B/Perth/211/2011, 또는 이들의 임의의 조합의 유래인, 실시양태 99 내지 110 및 113 중 어느 하나의 방법, 또는 실시양태 111 및 112 중 어느 하나에 사용하기 위한 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포, 인간 B 세포, 및/또는 조성물.
실시예
실시예 1
항-NA 모노클로날 항체의 식별 및 테스트
N1 및 N4(G1); 및 N2, N3 및 N9(G2) 인플루엔자 슈도바이러스 대한 해당 혈청의 결합을 기준으로 익명 공여자로부터의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 선택하였다. 공여자는 뉴라미니다제 아형 N1 및 N2 항원에 대한 반응성에 대해 편도 공여자 샘플(n=50)로부터의 혈청을 선별하고, 뉴라미니다제 아형 N4, N3 및 N9에 대한 반응성에 대해 PBMC 공여자 샘플로부터의 혈청(n=124)을 스크리닝하여 선택하였다. 스크리닝을 위한 뉴라미니다제 항원을 포유동물 세포에서 발현시키고 유세포 측정법으로 결합을 평가하였다.
5명의 공여자로부터 얻은 B 기억 세포를 발견 워크플로우에 입력하기 위해 유세포 측정법으로 분류하였다(도 1). 단일 분류된 B 세포(n=39,350)를 항체 분비를 자극하기 위해 50 μl 배양물에서 중간엽 간질 세포(MSC)와 공동 배양하였다. 분비된 항체를 결합 및 NA 억제 분석에 의해 평가하였다. N1 시알리다제 활성의 억제를 ELLA(효소 결합 렉틴 검정: enzyme-linked lectin assay), NA에 의한 시알산 절단의 기질로서 큰 당단백질 기질인 페투인을 이용하는 흡광도 기반 검정을 사용하여 평가하였다(Lambre et al. J Immunol Methods. 1990). N1, N2 및 N9 시알리다제 활성의 억제를 NA 효소에 의한 2'-(4-메틸움벨리페릴)-α-D-N-아세틸뉴라민산(MUNANA)의 절단을 측정하는 형광 기반 검정을 사용하여 측정하였다(Potier et al. Anal. Biochem. 1979.).
그룹 1 IAV N1 A/Vietnam/1203/2004 및 그룹 2 IAV N2 A/Tanzania/205/2010 및 N9 A/Hong Kong/56/2015로부터의 NA에 대한 결합을 ELISA로 평가하여 폭을 결정하였다. 선택된 B 세포로부터의 항체 서열을 cDNA로 클로닝하고 시퀀싱하였다.
14개의 클론 관련 모노클로날 항체가 발견 워크플로에서 생성되었다(도 2A). 추가 평가 및 시험을 위해 FNI3(VH: 서열번호 26; VL: 서열번호 32) 및 FNI9(VH: 서열번호 86; VL: 서열번호 92)를 선택하였다. FNI3 및 FNI9 VH와 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"의 정렬을 도 2B에 나타내었다. UCA는 광범위한 IAV 및 IBV NA에 결합한다(데이터는 표시되지 않음). NA 아형에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 평가하였다. ELISA(효소 결합 면역흡착 검정: enzyme-linked immunosorbent assay)를 사용하여 N1(도 3A), N2(도 3B) 및 N9(도 3C)에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 측정하고 광학 밀도(OD) 대 농도(ng/ml)로 보고하였다. BLI를 사용하여 N1 결합(도 4A), N2(도 4B) 및 N9(도 4C)에 대한 FNI3 및 FNI9의 KD, 연관(kon) 및 해리(kdis)를 측정하였다. 비교 항체, 1G01-LS에 의한 결합(1G01은 Stadlbauer et al.에 의해 기술됨(Science 366(6464):499-504 (2019); 도 1B 참조; 항체 1G01뿐만 아니라 1E01, 및 1G04의 VH 및 VL 아미노산 서열은 본원에 참조로 포함됨-, 이들 실험에서 M428L 및 N434S Fc 돌연변이를 가짐)을 또한 ELISA 및 BLI 검정으로 측정하였다. 음성 대조군 항체 K-를 ELISA 분석에서 시험하였다.
그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV로부터의 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합이 도 5(비교자 1G01 포함)에 요약되어 있다. 결합을 NA가 포유류 세포의 표면에서 발현되는 FACS 기반 분석을 사용하여 정량화하였다. 간략하게, Expi-CHO 세포를 상이한 IAV 및 IBV NA를 암호화하는 플라스미드로 일시적으로 형질감염시켰다. 형질감염 후 48시간에 세포를 상이한 mAb의 연속 희석액과 함께 인큐베이션하였다. 60분 인큐베이션 후, 세포를 세척한 다음 항-인간 IgG-AF647 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 2회 세척하고 FACS에서 항체 결합을 평가하였다. 1G01을 비교자로 사용하였다.
그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 및 인플루엔자 B 바이러스로부터의 NA의 계통 발생 관련성을 도 6에 나타내었다.
인플루엔자 뉴라미니다제의 글리코실화는 숙주 집단에서 면역 회피 및 바이러스 적합성에 영향을 미친다. 글리코실화 부위는 위치 245(245Gly+) 및 247(247Gly+)에서 발생할 수 있다(Wan et al. Nat Microbiology. 2019). A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013에서의 예시적인 245Gly+ 및 247+ Gly 변형 부위를 도 7A에 나타내었다. 도 7B는 EC50(μg/ml)으로 보고된 A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, 및 A/Switzerland/9715293/2013 생 바이러스 스톡에 대한 시알리다제 활성(NAI) 활성의 억제를 나타낸다. A/South Australia/34/2019 (245Gly+)에 감염된 포유동물 세포에서 N2에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 유세포 측정법으로 측정하였다(도 7C). 돼지로부터 단리된 유라시아 조류 유사 인플루엔자 바이러스 균주는 유전적으로 다양하다 (Sun et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020). H1N1 돼지 유라시아 조류 유사(EA) 균주, A/Swine/Jiangsu/J004/2018로 감염된 포유동물 세포에서 NA에 대한 FNI3 및 FNI9의 결합을 도 8에 도시된 바와 같이 유세포 측정법에 의해 측정하였다.
FNI3 및 FNI9의 다중반응 가능성을 인간 상피 2형(HEP-2) 세포에서 평가하였다(도 9). 비교 항-HA 항체, FI6v3을 양성 대조군으로 사용하였고, 항-파라믹소바이러스 항체 "MPE8"(Corti et al. Nature 501(7467):439-43 (2013))을 음성 대조군으로 포함시켰다.
NA에서 시알리다제 활성의 억제를 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에 대한 MUNANA 검정을 사용하여 측정하고 결과를 도 10에 정리하였다. 다중 그룹 IAV, 그룹 II IAV 및 IBV 균주에 대한 항체의 시알리다제 억제(μg/ml의 IC50으로 보고됨)를 도 11에 정리하였다. 도 12A 및 12B는 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, 및 IBV NA에 대한 FNI3 또는 FNI9에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 나타낸다(μg/ml의 IC50으로 보고됨). 도 12A는 동일한 플롯 내의 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV를 도시하고 도 12B는 별도의 플롯에 있는 그룹을 도시한다. FNI3, FNI9, FNI14(VH: 서열 번호 134; VL: 서열 번호 140), FNI17(VH: 서열 번호 146; VL: 서열 번호 152), 및 FNI19(VH: 서열 번호 158; VL: 서열 번호 164)를 또한 패널 IAV 및 IBV 균주(도 13A)로부터의 NA의 시알리다제 활성(도 13B)을 억제하는 능력에 대해 평가하였으며, 이 중 일부는 별표로 표시된 위치 245에 글리코실화 부위를 가진다. 도 14A-14D는 FNI1(VH: 서열 번호 2; VL: 서열 번호 8), FNI3, FNI9, FNI14, FNI17, 및 FNI19에 대해 H1N1 A/California/07/2009(도 14A), H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 14B), B/Malaysia/2506/2004(도 14C), 및 B/Jiangsu/10/2003(도 14D) NA에 대한 중화 곡선을 보여준다(μg/ml로 보고됨).
FNI3 및 FNI9를 NFAT 구동 루시퍼라제 리포터 검정을 사용하여 FcγRIIIa(도 15A) 및 FcγRIIa(도 15B)의 활성화에 대해 평가하였다. Jurkat-FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 Jurkat-FcγRIIa(H131 대립유전자) 세포주의 활성화를 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 A/Puerto Rico/8/1934로 감염된 A549 세포와 23시간 인큐베이션한 후 평가하였다. 비교 항체 FY1-GRLR 및 IgG1 항체 FM08_LS(후자는 서열 번호 194의 VH 및 서열 번호 195의 VL을 갖고 M428L 및 N434S(EU 넘버링) Fc 돌연변이를 포함함)를 또한 시험하였다.
실시예 2
항-NA 항체의 구조 및 기능성 연구
오셀타미비르에 대한 인플루엔자 내성의 원인이 되는 뉴라미니다제(NA) 돌연변이는 NA 아형에 따라 달라질 수 있다(예를 들어, Hussain et al., Infection and Drug Resistance 10:121-134 (2017) 참조). 도 16A 및 16B(도 16A)는 N1(H1N1, 돼지 H1N1, 및 조류 H5N1) 및 (도 16B) N2(H3N2, H2N2)에서 NA 항바이러스-내성 돌연변이의 연도별 빈도를 나타낸다.
역유전학 접근법을 사용하여 오셀타미비르(OSE) 내성 돌연변이(H275Y, E119D 및 H275Y, S247N 및 H275Y)를 가지도록 H1N1 A/California/07/2009를 조작하였다. 비교 항체 FM08(도 17D) 및 1G01(도 17E)에 의한 중화와 함께 FNI3(도 17A), FNI9(도 17B) 및 오셀타미비르(도 17C)에 의한 역 조작된 H1N1 A/California/07/2009 바이러스의 중화를 측정하고 억제율을 nM로 보고하였다. 이들 데이터는 OSE 내성 NA 돌연변이에 대한 FNI3 및 FNI9의 감수성 부족에 대한 구조적 근거를 제시한다. 다음으로, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV 및 IBV 바이러스를 포함한 추가 바이러스를 OSE 내성 돌연변이(H275Y, E119D/H275Y, H275Y/S247N, I222V, 및 N294S)를 갖도록 역유전학으로 조작하였다. FNI3, FNI9 및 비교 항체 1G01의 중화 활성을 측정하고 IC50(μg/ml)으로 보고하였다. 도 18A는 개별 바이러스 균주의 중화를 도시하고, 도 18B는 중화 항-NA 항체에 의해 그룹화된 바이러스 균주의 중화를 도시한다.
결합 기능을 조사하기 위해 FNI3(단독 또는 NA와 복합체)의 결정 구조를 결정하였다. NA와 복합화된 FNI3 항원-결합 단편(Fab) 도메인의 상대적으로 평탄한 도킹 각도룰 도 19에 나타내었다. FNI3 중쇄의 상보성 결정 영역 3(CDR3)의 결정 구조 분석을 비결합(도 20A) 또는 N2 NA 결합 상태(도 20B)에 대해 수행하였다. 이들 연구로부터, 결합되지 않은 FNI3 결정 구조(도 20A)는 잔기 E111 (CO) - D102 (NH), E111 (NH) - D102 (CO), G109 (CO) - F104 (NH), G109 (NH) - N105 (CO), 및 L108 (NH) - N105 (CO)의 베타 시트 구조 및 카복실산기(CO)와 아미노기(NH) 사이의 온전한 주쇄 수소 결합을 나타내고; 결합된 FNI3-N2 결정 구조(도 20B)는 G109(CO) - F104(NH) 사이의 베타 시트 형태의 파괴 및 하나의 손상되지 않은 주쇄 수소 결합을 나타낸다. 이론에 구애됨이 없이, FNI3-N2 결정 구조에서 베타 시트 구조의 부재는 두 가지 가능한 시나리오로 설명될 수 있다: (1) 베타 시트의 파괴는 N2 NA에 결합하여 유도된 적합으로 인해 발생할 수 있다; (2) 베타 시트 형성은 Fab 도메인 단독에 대한 결정 접촉에 의한 유도 맞춤으로 인해 발생할 수 있다.
NA 아형과 복합화된 FNI3 항체의 Fab 도메인의 결정 구조 및 도킹 각도를 다른 항-NA 항체의 유사한 특성과 비교하여 FNI3의 도킹 특성을 추가로 특성화하였다. 도 21A는 비교 항체를 나타낸다: N1 NA와 복합화된 1G01(상부 패널); 및 N9 NA와 복합화된 1G04(하부 패널)(Stadlbauer et al., supra). 도 21B는 도킹 각도가 도 19에 도시된 것과 동일하지만 Fab 도메인이 상이한 배향에 있는 N2 NA와 복합화된 FNI3(상부 패널)을 나타낸다. 도 21B는 또한 N2 NA와 복합화된 비교 항체, 1E01(Stadlbauer et al., supra)을 나타낸다(하단 패널). 선은 도킹 각도를 나타내고 단백질 데이터 뱅크(PDB) 식별 코드가 비교 항체에 대해 표시된다. 이러한 연구에서 FNI3은 1E01과 유사한 도킹 각도를 갖지만 Fab 배향이 다르다.
MOE(Molecular Operating Environment by the Chemical Computing Group; www.chemcomp.com)를 사용하여 "신속 준비된(quick prepped)" 단백질로부터의 FNI3 상보성 결정 영역(CDR) 상호작용을 도 22에 개략적으로 나타내었다. 이 분석에서 CDRH3는 거의 90° 각도로 구부러져 NA 결합 포켓을 차지하고 CDRH2는 NA 표면에서 평평하다. 이 분석으로부터, CDRH2는 결합에 적극적으로 기여하는 것으로 보이지 않으며 CDRL은 결합 상호작용에 기여하는 것으로 보이지 않는다. 이 연구에서 CDRH3 내에서 D107 및 R106은 N2 NA 결합에 기여하는 것으로 보인다(도 23). 음수는 상호 작용 에너지(kcal/mol)이다.
FNI3의 결정 구조는 오셀타미비르가 결합된 N2 NA의 구조 위에 중첩되어(도 24, 도 25), 오셀타미비르가 R118, R292 및 R371과 상호작용한다는 것을 보여준다.
FNI3 에피토프의 보존을 2000년과 2020년 사이에 단리된 H3N2 바이러스(n=60,597)로부터의 N2 NA 서열을 사용하여 조사하였다. 에피토프 영역 공통 아미노산 서열을 분석된 N2 NA 서열 그룹의 특정 위치에서에서 아미노산 빈도를 나타내는 표와 함께 도 26A에 나타내었다. 원으로 표시된 값은 Glu221(E221, 17.41%), Ser245(S245, 33.69%) 및 Ser247(S247, 36.16%)의 가장 낮은 세 빈도에 나타나는 아미노산을 제시한다. 도 26B(하부)는 FNI3으로부터의 Y60 및 Y94와 N2 NA의 잔기 E221, S245 및 S247의 상호작용을 보여준다. 간단한 모델링을 사용하여 S245N 돌연변이는 결합을 증가시켰고 S247T 돌연변이는 결합을 감소시켰으며 E221D 돌연변이는 효과가 중립적이었다(데이터는 도시되지 않음).
2000년에서 2020년 사이에 단리된 H1N1 바이러스(n=57,597)로부터의 N1 NA 서열을 사용하여 FNI3 에피토프의 보존을 조사하였다. 도 27은 N2 NA FNI3 에피토프 보존 분석(도 26A 및 26B에 나타냄)과 H1N1로부터의 N1 NA 서열에서 FNI3 에피토프 보존 분석의 비교를 보여준다. 다음 공통 잔기 쌍이 확인되었다: R118(N2)과 R118(N1), D151(N2)과 D151(N1), E227(N2)과 E228(N1), R292(N2)와 R293(N1), 및 R371(N2)와 R368(N1). N2 NA 내의 중요한 FNI3-상호작용 잔기 및 대응 FNI3 CDRH3 잔기가 하단 패널의 표에 제시되어 있다. 잔기 R371, R292 및 R118은 FNI3 CDRH3의 D107과 상호작용하고, 잔기 D151 및 E227은 FNI3 CDRH3의 R106과 상호작용한다.
실시예 3
항-NA 모노클로날 항체의 예방 활성
FNI3 및 FNI9의 예방 활성을 IAV 감염의 뮤린 BALB/c 모델에서 평가하였다. 간략하게, H1N1 아형 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 아형 A/Hong Kong/1/68(도 28A 및 28B)로 LD90(치사량의 90%)으로 비강 감염시키기 전에 7-8주령의 BALB/c 마우스에게 FNI3(도 28A에서 "mAb-03"), FNI9(도 28A에서 "mAb-09") 또는 비히클 대조군을 투여하였다(iv). 항체를 0.2. 0.6, 2, 또는 6 mg/kg으로 투여하였다(iv). 감염 시작 시 기준선 혈청을 수집하고, 감염 후 2-14일 각각에 체중과 사망률을 모두 평가하였다(도 28B). 15일에 걸친 체중 측정치를 도 29A-29D(A/Puerto Rico/8/34 FNI3 시험 그룹), 30A-30D(A/Puerto Rico/8/34 FNI9 시험 그룹), 31A-31D(A/Hong Kong/1/68 FNI3 시험 그룹) 및 32A-32D(A/Hong Kong/1/68 FNI9 시험 그룹)에 나타내었다. 전체 사망률도 측정하였다(도 33A, A/Puerto Rico/8/34-감염 마우스; 도 33B, A/Hong Kong/1/68-감염 마우스). 도 34A 및 34B는 A/Puerto Rico/8/34(도 34A) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 34B)로 감염된 마우스에서 곡선 아래 면적으로 보고된 체중 감소를 나타낸다. A/Puerto Rico/8/34(도 35A) 또는 A/Hong으로 감염된 BALB/c 마우스의 체중 감소의 곡선 아래 면적 분석으로부터의 혈청 내 IgG와 비교하여 음의 곡선 아래 면적 피크 Kong/8/68(도 35B)도 나타내었다. tg32 마우스에서 FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS") 및 비교 항체 FM08_LS 및 1G01 ("1G01-LS")의 약동학을 도 36에 나타내었다.
실시예 4
약동학 연구
FNI3("FNI3-LS"), FNI9("FNI9-LS") 및 비교 항체 FM08_LS 및 1G01-LS의 Fc 변이체(M428L/N434S 돌연변이)의 약동학적 분석을 tg32 마우스에서 수행하였고, 반감기를 수행하였으며 그 결과를 도 36에 정리하였다. ELISA 검정을 사용하여 항체의 혈장 농도를 시험관 내에서 측정하였다. 염소 항-인간 IgG 항체(Southern Biotechnology: 2040-01)를 PBS에서 10 μg/ml로 희석하고 25 μl를 4℃에서 밤새 코팅하기 위해 96-웰 평평한 바닥 ½-면적 ELISA 플레이트의 웰에 첨가했다. 코팅 후, 자동 ELISA 세척기를 사용하여 0.05% Tween20(세척 용액)이 보충된 0.5x PBS로 플레이트를 두 번 세척하였다. 그런 다음 플레이트를 실온(RT)에서 1시간 동안 1% BSA(차단 용액)가 보충된 100 μl/웰의 PBS로 차단하고 두 번 세척하였다. 이어 샘플을 총 8회 희석에 대해 중복으로 단계적으로 1:2로 희석하였다. 시험할 각 항체에 대한 표준을 항체를 0.5 μg/ml로 희석하여 유사하게 제조하였다. 그런 다음 표준을 차단 용액에서 단계적으로 1:3으로 중복 희석하여 총 8회 희석하였다. 제조된 샘플 또는 표준 25 μl를 염소 항 인간 IgG 코팅 웰에 첨가하고 RT에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 4회 세척 후, 차단 용액에서 1:500으로 희석된 25 μl의 폴리클로날 항-IgG-알칼리성 포스파타제 접합 항체(Southern Biotechnology: 2040-04)를 검출을 위해 웰마다 첨가하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 4회 세척 후, 80 μl/웰의 기질 용액(20 ml 중탄산염 완충액 중 p-니트로페닐 포스페이트(Sigma-Aldrich: N2765-100TAB) 1정)을 첨가하여 플레이트를 전개하였다. RT에서 30분간 인큐베이션한 후 분광 광도계를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다.
마우스 혈장에서 항체의 농도를 결정하기 위해, ELISA 데이터의 OD 값을 Gen5 소프트웨어(BioTek)의 농도에 대해 플로팅하였다. 가변 기울기 모델, 4개의 파라미터 및 방정식: Y=(AD)/(1+(X/C)^B)+D)를 사용하여 비선형 곡선 맞춤을 적용하였다. 곡선 ¾의 상한, 중간 또는 하한 범위에서 품질 관리 샘플에 의한 설정 실험에서 결정된 대로 표준 곡선 ¾의 예측 가능한 분석 범위 내에 있는 샘플 희석액의 OD 값을 보간하여 샘플을 정량화하였다. 이어서 샘플의 최종 희석을 고려하여 항체의 혈장 농도를 결정하였다. 복수의 샘플 희석 값이 표준 곡선의 선형 범위 내에 있는 경우에는 이들 값의 평균이 사용되었다. 약동학(PK) 데이터를 다음 설정에 의해 WINNONLIN NONCOMPARTMENTAL ANALYSIS PROGRAM(8.1.0.3530 Core Version, Phoenix software, Certara)을 사용하여 분석하였다: 모델: 혈장 데이터, i.v. 볼루스 투여; 누락되지 않은 관측치 수: 8; 정상 상태 간격 타우: 1.00; 투여 시간: 0.00; 용량: 5.00 mg/kg; 계산 방법: 선형 보간을 사용한 선형 사다리꼴; lambda_z 계산을 위한 가중치: 균일한 가중치; Lambda_z 방법: lambda_z에 대한 최적합성 찾기, 로그 회귀. Prism 7.0 소프트웨어(GraphPad, La Jolla, CA, USA)를 사용하여 그래프 작성 및 통계 분석(선형 회귀 또는 이상값 분석)을 수행하였다.
실시예 5
FNI3 및 FNI9 변이체 항체의 생성
가변 영역에서 아미노산을 돌연변이화하여 FNI3 및 FNI9의 변이체를 생성하였다. 표 1과 2를 참조한다.
실시예 6
추가 연구
FNI 항체를 IAV NA 및 IBV NA 패널에 대한 결합 및 NAI 활성에 대해 평가하였다(도 37). FNI17 및 FNI19는 FNI3 및 FNI9보다 낮은 농도에서 인간 IAV 순환 균주로부터 NA(예: A/California/07/2009로부터의 N1 또는 A/Washington/01/2007로부터의 N2)에 결합하였다(도 37에서 직사각형으로 강조 표시된 데이터 참조). FNI3 및 FNI9는 인수 균주로부터의 NA에 대해 더 높은 교차 반응성을 나타냈다(예를 들어 A/Anhui/1/2013로부터의 N9, 도 37에서 직사각형으로 강조 표시된 데이터 참조). 모든 FNI 항체는 A/Swine/Jiangsu/J004/2018로부터의 N1에 결합했으며(도 37에서 위에서 두 번째로 직사각형으로 강조 표시된 데이터 참조), 이는 대유행 가능성이 있는 것으로 특징지어진다(Sun et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020). FNI 서열 변이체를 기능성에 대해 분석하였다. FNI 항체를 IAV 및 OSE 내성 돌연변이가 있는 바이러스에 대한 추가 중화 및 NAI 연구에서 시험하였다. FNI 항체를 IAV 및 BV NA와 함께 인큐베이션 후 FcγR의 활성화에 대해 시험하였다. 에피토프 보존 연구 및 시험관 내 저항 선택 연구를 수행하였다. IAV 및 B/Victoria/504/2000 및 B/Brisbane/60/2008에 대한 FNI3 및 FNI9의 생체 내 예방 연구를 각각 Balb/c 및 DBA/2 마우스에서 수행하였다. MLNS Fc 돌연변이를 갖는 FNI 항체의 생체 내 약동학을 SCID Tg32 마우스에서 시험하였다. 위에서 언급한 연구의 데이터를 도 37-55에 나타내었다.
FNI9, FNI7 및 FNI19를 사용하여 추가 연구(저온 EM, 내성 대 H1N1 A/California/07/2009, NHP의 PK, 효능)를 수행하였다.
실시예 7
FNI mAb를 사용한 결합 연구
항-NA 항체와 NA 사이의 결합 상호작용을 결정 구조 연구 및 도킹 분석에 의해 평가하였다. N2 NA 상의 FNI3 도킹을 도 56A에 나타내었다. NA와 도킹하는 FNI3, FNI17 및 FNI19 항체의 오버레이를 도 56B에 나타내었다. 도 56B에 표시된 코드는 FNI3, FNI17 및 FNI19의 리본 구조에 해당한다. NA와 상호작용하는 CDRH3은 도 56C에서 직사각형으로 강조 표시되며, 이는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"와 함께 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19의 VH 아미노산 서열 정렬을 보여준다. NA와 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 항체 간에 접근 각도의 주요 차이점은 관찰되지 않았다.
경쇄 CDR(L-1, L-2, L-3) 및 중쇄 CDR(H-1, H-2, H-3)의 잔기를 포함하여 N2 NA와 복합화된 FNI17의 결정 구조를 도 57A에 나타내었다. FNI17의 CDRH3 잔기 D107 및 R106은 NA 효소 포켓 내에 삽입되어 시알산 수용체를 모방한다. D107 및 R106의 서열 위치를 도 57B의 직사각형에 나타내었다.
2009년부터 2019년까지 그룹 I IAV, 그룹 II IAV 및 IBV에서 FNI NA 에피토프 내의 상위 5개 상호작용 잔기의 보존을 도 58에 나타내었다.
실시예 8
시험관 내
효능: FNI 항체와 FM08 및 오셀타미비르의 비교
FNI 항체의 시험관 내 효능을 OSE 및 FM08의 효능과 비교하여 평가하였다. H3N2 A/Hong Kong/8/68 바이러스에 대한 핵단백질(NP) 염색으로 측정한 FNI9, OSE 및 비교 항체 "FM08"의 시험관 내 중화 활성을 도 59에 나타내었다.
ViroSpot 미세중화 검정에 의해 측정된, 그룹 I(H1N1) IAV, 그룹 II(H3N2) IAV, Victoria-계통 IBV, 및 Yamagata-계통 IBV NA의 FNI17-v19(VH: 서열 번호 199; VL: 서열 번호 201), FNI19 변이체 FNI19-v3(VH: 서열 번호 203; VL: 서열 번호 205), 및 FM08-LS에 의한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 도 60에 나타내었다. ViroSpot 미세 중화 분석은 인플루엔자 바이러스의 검출 및 표현형 특성화를 위한 도구이다. 간단히 말해서, 이 기술은 면역염색된 바이러스 감염 세포의 자동 검출과 결합된 마이크로타이터 형식 바이러스 배양을 포함한다(Baalen et al., Vaccine. 35:46, 2017).
실시예 9
생체 내 효능: FNI 항체와 FM08 및 오셀타미비르의 비교
FNI 항체의 생체 내 효능을 OSE 및 FM08의 효능과 비교하여 평가하였다.
"GAALIE" 변이체 항체(G236A/A330L/I332E 변이체)에 의한 FcγRIIIa 및 FcγRIIa의 항체 활성화를 도 61에 나타낸 바와 같이 시험하였다. FcγRIIIa(F158 대립유전자) 및 FcγRIIa(H131 대립유전자)의 활성화를 조작된 Jurkat 세포의 NFAT-매개 루시퍼라제 리포터를 사용하여 측정하였다. 감염 다중도(MOI) 6에서 H1N1 인플루엔자 균주 /Puerto Rico/8/34로 감염된 A549 세포와 함께 인큐베이션한 후 활성화를 평가하였다. FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19를 GAALIE 돌연변이(접미사 "-GAALIE") 보유 FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19 GAALIE 돌연변이(접미사 "-GAALIE")와 함께 시험하였다. 비교 항체 "FM08_LS" 및 음성 대조군 항체(FY1-GRLR)도 시험하였다.
H1N1 IAV A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 IAV A/Hong Kong/8/68로 감염된 BALB/c 마우스에서 FNI3 및 FNI9와 함께 FM08_LS의 예방 활성을 비교하기 위해 실험 간 생체내 연구를 설계하였다(도 62). 항체를 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 IAV A/Hong Kong/8/68의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 6 mg/kg, 2 mg/kg, 0.6 mg/kg, 또는 0.2 mg/kg으로 투여하였다. 타임라인, 데이터 수집 및 연구의 종점은 도 28B에 도시된 것과 동일하다. 실험 A("Exp-A")에서 BALB/c 마우스를 FNI3(도 29A-29D) 또는 FNI9(도 30A-30D)로 전처리한 후 A/Puerto Rico/8/34로 감염시켰다. 실험 A의 다른 부문에서, BALB/c 마우스를 FNI3(도 31A-31D) 또는 FNI9(도 32A-32D)로 전처리한 후 A/Hong Kong/8/68로 감염시켰다. 실험 B("Exp-B")에서 BALB/c 마우스를 FM08_LS로 전처리 후 A/Puerto Rico/8/34(도 63A-63D) 또는 A/Hong Kong/8/68(도 64A-64D)로 감염시켰다.
15일에 걸친 체중 측정치를 도 29A-29D(A/Puerto Rico/8/34 FNI3 시험 그룹), 30A-30D(A/Puerto Rico/8/34 FNI9 시험 그룹), 31A-31D(A/Hong Kong/1/68 FNI3 시험 그룹), 32A-32D(A/Hong Kong/1/68 FNI9 시험 그룹), 63A-63D(A/Puerto Rico/8/34 FM08_LS 시험 그룹), 및 64A-64D(A/Puerto Rico/8/34 FM08_LS 시험 그룹)에 나타내었다. FNI3 또는, FNI9, 또는 FM08_LS로 처리한 후 A/Puerto Rico/8/34(H1N1) 또는 A/Hong Kong/8/68(H3N2)로 감염된 BALB/c 마우스의 체중 감소에 대한 곡선 아래 면적 분석에서 혈청 내 IgG와 비교한 음의 곡선 아래 면적 피크 값을 도 46에 나타내었다.
H1N1 IAV A/Puerto Rico/8/34로 감염된 BALB/c 마우스에서 FM08_LS의 예방 활성을 FNI17과 비교하기 위한 생체 내 연구를 설계하였다(도 65). A/Puerto Rico/8/34의 LD90(90% 치사량)으로 감염시키기 하루 전에 항체를 1 mg/kg(도 66A), 0.5 mg/kg(도 66B), 0.25 mg/kg(도 66C), 또는 0.125 mg/kg(도 66D)으로 투여하였다. 12일에 걸친 체중 측정치를 도 66A-66D에 나타내었고 12일에 걸친 생존율을 도 67에 나타내었다.
IAV A/Puerto Rico/8/34(도 68)로 감염된 암컷 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르의 생물학적 효능을 평가하기 위한 생체 내 연구를 설계하였다(도 68). OSE를 A/Puerto Rico/8/34의 10배 LD50(50% 치사량)으로 감염시키기 2시간 전에 시작하여 0일에 경구 위관 영양법에 의해 10 mg/kg으로 투여하였다. OSE를 감염 후 6시간에 동일한 용량으로 투여한 다음 감염 후 6일까지 하루에 두 번 투여하였다. 14일에 걸친 체중 측정치를 도 69에 나타내었고, 14일에 걸친 생존율을 도 70에 나타내었다. OSE-처리된 마우스로부터의 폐 균질액의 바이러스 역가를 감염 후 2일 및 4일에 얻은 샘플로부터 측정하였다(도 71).
실시예 10
FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19 변이체 항체의 생성 및 특성화
FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19로부터 가변 도메인 서열 변이체를 생성하고 결합 및 중화를 특성화하였다. 총 32개의 변이체 항체가 생성되었으며, 여기서 26개의 변이체는 VH 및/또는 VL 프레임워크 아미노산(들)의 생식계열 서열로의 복귀를 포함하고, 3개의 FNI17 변이체는 VH 프레임워크 영역의 생식계열 서열로의 복귀 및 VL에서 W97A/L/Y 돌연변이를 포함하고, 3개의 FNI17 변이체는 야생형 VH 및 VL에서 W97A/L/Y 돌연변이를 포함하였다. FNI3에서 총 11개의 변이체, FNI9에서 5개의 변이체, FNI17에서 11개의 변이체, FNI19에서 5개의 변이체를 생성하였다. 도 72A-72B는 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"에 정렬된 FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19 VH(도 72A) 및 VK(도 72B)의 산 서열을 보여준다.
개발 가능성 변이체에 의한 IAV NA(H5N1 A/Vietnam/1203/2004로부터의 NA1, H3N2 A/Tanzania/205/2010으로부터의 NA2, H7N9 A/Hong Kong/56/201로부터의 NA9) 및 IBV NA(B/Malaysia/2506/2004로부터의 BNA7; B/Perth/211/2011로부터의 BNA2)에 대한 시알리다제 활성의 시험관 내 억제를 측정하였다. 억제 활성을 도 73A-73E(FNI3 및 변이체 FNI3-v8 내지 FNI3-v18; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조), 도 74A-74E(FNI9 및 변이체 FNI9-v5 내지 FNI9-v9; 참조 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조), 도 75A-75E(FNI17 및 변이체 FNI17-v6 내지 FNI17-v16; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조) 및 도 76A-76E(FNI19 및 변이체 FNI19-v1 내지 FNI19-v5; 아미노산 및 핵산 서열에 대해서는 표 2 참조)에 나타내었다.
IAV NA 및 IBV NA에 대한 모든 32개 변이체의 결합을 mAb 프레임워크 영역의 생식계열로의 복귀로 인한 폭의 잠재적 손실을 배제하기 위해 FACS에 의해 평가하였다. 결합을 A/Stockholm/18/2007, A/California/07/2009, 및 A/California/07/2009 I23R/H275Y로부터의 N1(도 77A); A/South Australia/34/2019, A/Leningrad/134/17/57, 및 A/Washington/01/2007로부터의 N2(도 77B); A/Canada/rv504/2004로부터의 N3(도 77C); A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 N6(도 77C); A/Netherlands/078/03로부터의 N7(도 77C); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata), B/Malaysia/2506/2004(Victoria), 및 B/Lee/10/1940로부터의 IBV NA(Ancestral)(도 77D)에 대해 측정하였다.
FNI3, FNI9, FNI17, 및 FNI19에 대한 표면 전하 및 약동학(pK) 값을 결정하였다. 도 78A는 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19 VH 아미노산 서열과 돌연변이되지 않은 공통 조상인 "UCA"의 정렬을 보여주며, 여기서 수직 직사각형은 UCA 서열에서 양전하를 띤 Lys12 및 Lys19 잔기 및 생식계열 복귀 FNI3, FNI9, FNI17 및 FNI19에서 동일한 위치에서의 대응 잔기를 나타낸다. FNI3(도 78B), FNI9(도 78C), FNI17(도 78D), 및 FNI19(도 78E)에 대해 PyMOL(The PyMOL Molecular Graphics System, Version 1.2r3pre, Schroedinger, LLC)을 사용하여 생성된 전체 표면 전하 지도를 pK 값 및 분해능(Å으로 보고됨)과 함께 나타내었다. 항체 표면 상의 전체 양전하 감소는 세포 표면의 음세포 작용에 의한 항체의 격리를 감소시키는 역할을 할 수 있다. FNI9는 FNI3, FNI17 및 FNI19와 비교하여 보다 음의 표면 전하 및 그에 상응하게 개선된 pK 값을 나타냈다.
다음 2개의 변이체(Fc에서 MLNS 돌연변이를 갖는 rIgG1로 발현됨)를 약동학적 평가를 위해 선택하였다: FNI17-v19-LS(VH: 서열 번호 199; VL: 서열 번호 201) 및 FNI19-v3-LS(VH: 서열 번호 203; VL: 서열 번호 205). FNI17-v19는 중쇄(R/E 및 K/T)의 프레임워크 1(FR1) 영역 내에서 체세포 돌연변이를 통합하도록 FNI17-v13을 추가로 조작하여 양전하를 줄이고 음세포 작용을 감소시켜 반감기를 증가시킴으로써 생성되었다. FNI17-LS 및 FNI19-LS("PK1"), 및 FNI19-v3-LS 및 FNI17-v19("PK2") 사이에 실험간 약동학 분석을 수행하였다. Tg32 마우스에 5 mg/kg 항체를 정맥내 주사하였다. 반감기(도 79A) 뿐만 아니라 곡선 아래 면적(AUC), 정상 상태 클리어런스(CLss) 및 분석된 총 부피(부피)(도 79B)를 측정하였다.
실시예 11
생체 내 효능: FNI17-v19 항체와 오셀타미비르 비교
FNI17-v19의 생체 내 효능을 OSE의 것과 비교하여 평가하였다. 도 80에 나타낸 바와 같이, IAV 및 IBV로 감염된 BALB/c 마우스에서 오셀타미비르(OSE)와 비교하여 FNI17-v19-rIgG1-LS의 예방 활성을 평가하기 위해 생체내 연구를 설계하였다. 처리 그룹에 LD90(90% 치사량)로 감염시키기 24시간 전에 9 mg/kg, 3 mg/kg, 0.9 mg/kg, 또는 0.3 mg/kg의 FNI17-v19-rIgG1-LS를 투여하였다. FNI17-v19-rIgG1-GRLR을 또한 IAV 바이러스(H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68)가 투여된 마우스에 대해 9 mg/kg 및 0.3 mg/kg에서 시험하였다. GRLR 돌연변이는 FcgR 및 보체에 의한 결합을 제거하여 이펙터 기능의 활성화를 제거한다. 항체 투여 24시간 후, 마우스를 IAVs, H1N1 A/Puerto Rico/8/34 또는 H3N2 A/Hong Kong/8/68, 또는 IBV, B/Victoria/504/2000(Yamagata) 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria)로 LD90(90% 치사량)으로 감염시켰다. 예방적 환경에서 인간 치료에 사용되는 투여 요법을 모방하기 위해 감염 전 2시간부터 감염 후 3일까지 OSE를 매일 10 mg/kg으로 경구 투여하였다.
폐의 바이러스 역가를 도 80에 설명된 생체 내 모델의 마우스에서 평가하였다. 감염 후 3일째에 마우스를 안락사시키고, 폐를 수집하고, H1N1 A/Puerto Rico/8/34(도 81A), H3N2 A/Hong Kong/8/68(도 81B), B/Victoria/504/2000(Yamagata; 도 81C), 또는 B/Brisbane/60/2008(Victoria; 도 81D)로 감염 후 플라크 분석을 사용하여 폐 바이러스 역가를 측정하였다. OSE의 투여는 B/Brisbane/60/2008을 제외하고 시험된 모든 바이러스가 있는 비히클과 비교하여 바이러스 역가에서 1 로그 감소를 초래하였다. 0.3 mg/kg에서 FNI17-v19-rIgG1-LS의 단일 투여는 시험된 모든 바이러스에서 오셀타미비르의 예방 활성을 능가했으며, 추가로 FNI17-v19-rIgG1-LS에 의한 바이러스 폐 역가의 감소는 용량 의존적이었다. mAb의 GRLR 버전(FNI17-v19-rIgG1-GRLR)의 투여는 모 항체와 비교하여 보호 수준이 더 낮았다. 이펙터 기능의 폐기와 관련된 예방적 활동의 감소는 일관되고 사용된 용량과 무관한 것으로 나타났다. FNI17-v19-rIgG1-LS 및 FNI17-v19-rIgG1-GRLR mAb 사이의 PFU 감소의 차이는 9 mg/kg 및 0.3 mg/kg의 용량에서 이들 mAb를 비교하였을 때 동일한 것으로 관찰되었다.
실시예 12
생체 내 효능: 인간화
FcγR 마우스에서 FNI17-V19 항체의 예방 활성
FNI17-v19의 생체 내 효능을 FcγR-인간화 마우스 모델에서 평가하였다.
H1N1A/Puerto Rico/8/34로 감염된 인간화 FcγR 마우스에서 FNI17-v19의 예방 활성을 평가하기 위한 생체내 연구의 설계를 도 82에 나타내었다. 마우스에게 H1N1 A/Puerto Rico/8/34를 5LD50(50% 치사량의 5배)으로 비강 내 감염시키기 24시간 전에 FNI17-v19 mAb를 0.9 mg/kg, 0.3 mg/kg, 또는 0.09 mg/kg으로 사전 투여하였다. 그런 다음 동물을 14일 동안 체중 감소 및 사망률에 대해 모니터링하였다. 체중이 30% 이상 감소한 마우스는 안락사시켰다.
도 84는 도 82에 요약된 연구로부터 FNI17-v19로 전처리된 인간화 FcγR 마우스로부터의 혈청 중 인간 IgG의 감염전 농도를 나타낸다. 5LD50 H1N1 A/Puerto Rico/8/34로 감염시키기 2시간 전에 마우스에서 혈청을 수집하였다. 14일에 걸친 체중을 도 83A-83C에 나타내었다.
FNI17-v19를 투여한 동물은 0.3 mg/kg까지 적당한 체중 감소(및 사망률 없음)로 제한되는 것으로 나타났다. 감염 2시간 전에 동물로부터 수집한 혈청에서 인간 IgG 정량화는 다른 용량의 mAb를 받은 마우스가 유사한 인간 IgG 농도를 가짐으로써 항체 투여와 관련된 잠재적인 문제를 배제하는 것으로 나타났다.
실시예 13
추가 연구
도 80-115D에 기술되고 도시된 바와 같이 추가 연구를 수행하였다.
전술한 다양한 실시양태는 추가 실시양태들을 제공하기 위해 조합될 수 있다. 2020년 11월 23일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/117,448; 2020년 12월 9일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/123,424; 2021년 6월 4일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 63/197,160; 및 2021년 9월 21일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 663/261,463을 포함해, 본 명세서에서 언급되거나/되고 출원 데이터 시트에 열거된 미국 특허, 미국 특허출원 공개, 미국 특허출원, 외국 특허, 외국 특허출원 및 비-특허 공개물은 전부 이의 전문이 본원에서 참조로 원용된다. 실시양태들의 측면은, 추가 실시양태를 제공하기 위해 필요한 경우 각종 특허, 출원 및 공보의 개념을 채택하도록 수정될 수 있다.
상기한 상세한 설명에 비추어 실시양태에 대한 상기 변형 및 다른 변형이 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 청구범위에서 사용된 용어들은 청구범위를 명세서 및 청구항에 기재된 특정 실시양태들로 제한하는 것으로 해석되지 않아야 하고, 청구범위가 부여한 동등한 전체 범위와 함께 모든 가능한 실시양태를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구범위는 상기 개시내용에 의해 제한되지 않는다.
SEQUENCE LISTING
<110> Vir Biotechnology
<120> BROADLY NEUTRALIZING ANTIBODIES
AGAINST INFLUENZA NEURAMINIDASE
<130> 930585.414WO
<150> US 63/117,448
<151> 2020-11-23
<150> US 63/123,424
<151> 2020-12-09
<150> US 63/197,160
<151> 2021-06-04
<150> US 63/261,463
<151> 2021-09-21
<160> 236
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<210> 1
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 VH (wt-nt)
<400> 1
caagttcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaggc ctgggtcctc ggtgaggatc 60
tcctgcaagg cctctggtga caccttcaac aactatgttc tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggggga atcatcccta tctctggtat cccacattac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcgcaatt atcgcggacg aatccgcgag cacagtctac 240
atggagttga gcagcctacg atctgaggac tcggccgtat attactgtgc gagagcggtt 300
tccgattatt ttaatcgaga cctcggctgg gatgattact actttccttt gtggggccag 360
ggcaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 VH (aa)
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Val Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Pro His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Glu Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Pro Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRH1 (aa)
<400> 3
Gly Asp Thr Phe Asn Asn Tyr Val
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRH2 (aa)
<400> 4
Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Pro
1 5
<210> 5
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRH3 (aa)
<400> 5
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Pro Leu
20
<210> 6
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 VH (co-nt)
<400> 6
caggtgcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaggc caggatccag cgtgcggatc 60
agctgcaagg cttctggcga caccttcaac aattacgtgc tgtcctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccca tcagcggcat ccctcactac 180
gcccagaagt ttcagggcag ggtggccatc atcgctgacg agtccgctag cacagtgtat 240
atggagctgt cttccctgag atctgaggat tccgccgtgt actattgtgc cagagccgtg 300
tccgactatt tcaaccgcga tctgggctgg gacgattact attttccact gtggggacag 360
ggcaccctgg tgacagtgag ctct 384
<210> 7
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 Vk (wt-nt)
<400> 7
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctcttctgca gggccagtcg gagtgttagt gacaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctttggt gcctccacca gggccactgg tgtcccagcc 180
aggttcggtg gcagtgggtc tgggacacag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcat tataatacct ggcctccgtg gaccttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 VK (aa)
<400> 8
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Phe Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Thr Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRL1(aa)
<400> 9
Arg Ser Val Ser Asp Asn
1 5
<210> 10
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRL2(aa)
<400> 10
Gly Ala Ser
1
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 CDRL3(aa)
<400> 11
Gln His Tyr Asn Thr Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 12
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI1 Vk (co-nt)
<400> 12
gagatcgtga tgacccagtc tcctgccaca ctgtccgtgt ccccaggcga gagggccaca 60
ctgttctgca gggctagcag gtccgtgtcc gacaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccagactgct gatctttgga gcttccacca gagctacagg cgtgccagct 180
aggttcggag gaagcggatc tggcacccag tttaccctga caatctccag cctgcagagc 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcac tataatacct ggcccccttg gacatttggc 300
cagggcacca aggtggagat caag 324
<210> 13
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 VH (wt-nt)
<400> 13
caggttcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaggc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cttctggagc caccttcaat aaccatgttc tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctg tctctggaaa aacaacctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcgcgata agcacggacg aatccgcgag cacagcctat 240
atggagttga gcagcctgag atctgaggac tcggccatat attactgtgc gagagcggtt 300
tccgattact ttaatcgaga cctcggctgg gaagattatt actttccgat ctggggccag 360
ggcaccctgg tcaccgtctc ttcag 385
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 VH (aa)
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ala Thr Phe Asn Asn His
20 25 30
Val Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Val Ser Gly Lys Thr Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ser Thr Asp Glu Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Pro Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRH1 (aa)
<400> 15
Gly Ala Thr Phe Asn Asn His Val
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRH2 (aa)
<400> 16
Ile Ile Pro Val Ser Gly Lys Thr
1 5
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<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRH3 (aa)
<400> 17
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Pro Ile
20
<210> 18
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 VH (co-nt)
<400> 18
caggtgcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaggc caggatccag cgtgcgggtg 60
agctgcaagg cttctggagc taccttcaac aatcacgtgc tgacatgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatccccg tgtccggcaa gaccacatac 180
gcccagaagt ttcagggcag ggtggctatc agcaccgatg agtccgccag cacagcttat 240
atggagctgt cttccctgag atctgaggac tccgccatct actattgtgc cagagccgtg 300
tccgactact tcaaccgcga tctgggctgg gaggactact attttcccat ctggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgag ctct 384
<210> 19
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 Vk (wt-nt)
<400> 19
gacgtagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcaacttgg cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tgtcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacacag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcac tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca agttggaaat caaac 325
<210> 20
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 VK (aa)
<400> 20
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRL1(aa)
<400> 21
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 22
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRL2(aa)
<400> 22
Gly Ala Ser
1
<210> 23
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 CDRL3(aa)
<400> 23
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 24
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI2 Vk (co-nt)
<400> 24
gacgtggtca tgacccagtc tcctgccaca ctgagcgtgt ctccaggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gggcttccca gagcgtgtcc agcaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccaggctgct gatctatgga gctagcacca gagctacagg cgtgccagct 180
cgcttctctg gatccggaag cggcacacag tttaccctga caatctcttc cctgcagtct 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa agctggagat caag 324
<210> 25
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 VH (wt-nt)
<400> 25
caggttcagc tggtgcagtc gggggctgag gtgaagaggc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagc caccttcagc aacaatgtta tagcctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatggggggg atccacccta tctctgctac agcaacctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcgcgatt gccgcggacg aattaacgag cacagcctac 240
atggagttga atggcctgag atctgaggac tcggccgtgt attactgtgc gagagcgggg 300
tccgattact ttaatagaga cctcggctgg gaaaattact actttgactc ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc gtcag 385
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 VH (aa)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ala Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Val Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile His Pro Ile Ser Ala Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ala Ala Asp Glu Leu Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Asn Gly Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRH1 (aa)
<400> 27
Gly Ala Thr Phe Ser Asn Asn Val
1 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRH2 (aa)
<400> 28
Ile His Pro Ile Ser Ala Thr Ala
1 5
<210> 29
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRH3 (aa)
<400> 29
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Asp Ser
20
<210> 30
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 VH (co-nt)
<400> 30
caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaggc caggatccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcgc taccttcagc aacaatgtga tcgcttgggt gagacaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggagga atccacccta tcagcgccac cgctacatac 180
gcccagaagt ttcagggcag agtggctatc gccgctgacg agctgacctc tacagcctat 240
atggagctga acggcctgcg cagcgaggat tccgccgtgt actattgtgc cagggctggc 300
tctgactact tcaaccggga tctgggctgg gagaattact attttgactc ctggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgtc ttcc 384
<210> 31
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 Vk (wt-nt)
<400> 31
gaaatattga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca ggatgttagc ggcaacttag cctggtacca gcagagacct 120
ggccaggctc ccaggctcct tatctatggt gcatccacga gggccactgg tgtcccagcc 180
aggttcactg gcgctgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaggattttg cactttatta ctgtcagcac tataataact ggcctccgtg gaccttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 32
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 Vk (aa)
<400> 32
Glu Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ala Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 33
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRL1(aa)
<400> 33
Gln Asp Val Ser Gly Asn
1 5
<210> 34
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRL2(aa)
<400> 34
Gly Ala Ser
1
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 CDRL3(aa)
<400> 35
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 36
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3 Vk (co-nt)
<400> 36
gagatcctga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagggccacc 60
ctgagctgca gggcttctca ggacgtgtcc ggcaacctgg cctggtacca gcagagacca 120
ggacaggctc caaggctgct gatctatgga gcttccacca gggctacagg cgtgccagct 180
agattcaccg gcgctggaag cggcacagag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggatttcg ctctgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
<210> 37
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 VH (wt-nt)
<400> 37
caggagcagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc cggggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cctctggaga caccttcagc agatatacta tcagctgggt tcgacaggcc 120
cccggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcatcgctc tctctcgaag agcgacatac 180
gcacagaagt tccagggcag agttaccatt accgcggacg aatccgcgac cacagcctac 240
atacaactga gcggcctgac atctgacgac acggccgtat attactgtgc gagagcacac 300
tccgattact ttaatagaga cctcggctgg gaagattact actttgacta ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 38
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 VH (aa)
<400> 38
Gln Glu Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Ala Leu Ser Arg Arg Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala His Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRH1 (aa)
<400> 39
Gly Asp Thr Phe Ser Arg Tyr Thr
1 5
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRH2 (aa)
<400> 40
Ile Ile Ala Leu Ser Arg Arg Ala
1 5
<210> 41
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRH3 (aa)
<400> 41
Ala Arg Ala His Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Asp Tyr
20
<210> 42
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 VH (co-nt)
<400> 42
caggagcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggatccag cgtgagagtg 60
agctgcaagg cttctggcga caccttctct agatacacaa tctcctgggt gcgccaggct 120
cctggacagg gactggagtg gatgggagga atcatcgctc tgagcaggcg ggccacctac 180
gctcagaagt ttcagggccg cgtgaccatc acagccgatg agtctgccac cacagcttat 240
atccagctgt ccggcctgac cagcgacgat acagccgtgt actattgtgc cagggctcac 300
agcgactact tcaaccggga tctgggctgg gaggactact attttgatta ttggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgtc ttcc 384
<210> 43
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 Vk (wt-nt)
<400> 43
gaagtagtgc tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctctagggga aagagccatc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc accaacttag cctggtacca gcagagacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctctggt gcatccacca gggccacggg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcacgctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat cagac 325
<210> 44
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 VK (aa)
<400> 44
Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ile Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg
100 105
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRL1 (aa)
<400> 45
Gln Ser Val Ser Thr Asn
1 5
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRL2 (aa)
<400> 46
Gly Ala Ser
1
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 CDRL3 (aa)
<400> 47
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 48
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI4 Vk (co-nt)
<400> 48
gaggtggtgc tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccctgggaga gagggctatc 60
ctgagctgca gggctagcca gtccgtgtcc accaacctgg cctggtacca gcagagacca 120
ggacaggctc caaggctgct gatcagcgga gcttctacca gggctacagg catcccagcc 180
agattcagcg gctctggctc cggcacagag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggacttcg ccgtgtacta ttgtcagcag tataacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat cagg 324
<210> 49
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 VH (wt-nt)
<400> 49
caggtgcagc tgatacaatc tgaggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cttctggaga caccttcagc aaatatacta tcggctgggt gcgacaggcc 120
cccggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatccctc tctctcgaac agcgacctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgac cacagtttac 240
atgcaactga gcggcctgag atctgacgac acggccgcat attactgtgc gagagcacgc 300
tcggattact ttaatagaga cctcggctgg gacgattact actttgatta ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 50
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 VH (aa)
<400> 50
Gln Val Gln Leu Ile Gln Ser Glu Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Thr Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Leu Ser Arg Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 51
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRH1 (aa)
<400> 51
Gly Asp Thr Phe Ser Lys Tyr Thr
1 5
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRH2 (aa)
<400> 52
Ile Ile Pro Leu Ser Arg Thr Ala
1 5
<210> 53
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRH3 (aa)
<400> 53
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Asp Tyr
20
<210> 54
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 VH (co-nt)
<400> 54
caggtgcagc tgatccagag cgaggccgag gtgaagaagc caggctccag cgtgagggtg 60
agctgcaagg cttctggcga cacattctct aagtacacca tcggatgggt gcggcaggct 120
ccaggacagg gcctggagtg gatgggcggc atcatccctc tgtctagaac agccacctac 180
gctcagaagt ttcagggccg cgtgacaatc accgctgacg agtccaccac aaccgtgtat 240
atgcagctgt ccggcctgag aagcgacgat acagccgctt actattgtgc cagggctcgg 300
tccgactact tcaaccgcga tctgggctgg gacgattact attttgatta ttggggccag 360
ggcacactgg tgaccgtgtc ttcc 384
<210> 55
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 Vk (wt-nt)
<400> 55
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccaac ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gactgttagc accaacttag cctggtacca gcagaagcct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctctggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcacgctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataatt ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat cagac 325
<210> 56
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 VK (aa)
<400> 56
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Asn Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Ser Thr Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Arg
100 105
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRL1(aa)
<400> 57
Gln Thr Val Ser Thr Asn
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRL2(aa)
<400> 58
Gly Ala Ser
1
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 CDRL3(aa)
<400> 59
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 60
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI5 Vk (co-nt)
<400> 60
gagatcgtga tgacccagtc ccctgctaac ctgtccgtgt ccccaggaga gagggccaca 60
ctgtcctgcc gggctagcca gaccgtgtct acaaatctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggacaggctc caaggctgct gatcagcgga gcttctacca gagctacagg catcccagct 180
cgcttcagcg gatctggatc cggcaccgag tttaccctga caatctccag cctgcagagc 240
gaggacttcg ccgtgtacta ttgtcagcag tataacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caga 324
<210> 61
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 VH (wt-nt)
<400> 61
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cctctggagg caccttcagt agtcaagtta tcagctgggt gcgagaggcc 120
ccaggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcattccta tcactggaat agcgaacaac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg gatccacggg cacagtctac 240
atggagttga gcagcctgag atctggggac acggccgtct attactgtgc gagagcgggt 300
tcggattatt ttaatagaga cctcggctgg gaaaattact actttgaata ttggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 62
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 VH (aa)
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Gln
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Thr Gly Ile Ala Asn Asn Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Gly Ser Thr Gly Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRH1 (aa)
<400> 63
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Gln Val
1 5
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRH2 (aa)
<400> 64
Ile Ile Pro Ile Thr Gly Ile Ala
1 5
<210> 65
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRH3 (aa)
<400> 65
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Glu Tyr
20
<210> 66
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 VH (co-nt)
<400> 66
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggctccag cgtgaaggtg 60
tcttgcaagg cttccggcgg caccttctct tcccaggtca tctcttgggt gagggaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccta tcacaggcat cgccaacaat 180
gctcagaagt ttcagggcag agtgaccatc acagccgacg gcagcaccgg cacagtgtac 240
atggagctga gctctctgcg ctctggcgat accgccgtgt actattgtgc cagggctggc 300
tccgactact tcaaccggga tctgggctgg gagaattact attttgagta ttggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgtc cagc 384
<210> 67
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 Vk (wt-nt)
<400> 67
gaaatcgtga tgacacagtc tccagccacc ctgtctgtat ctccagggga aagagccatc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc acccacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccagactcct cgtttttgat gcatccacca gggccactgg tgtcccagcc 180
agattcggtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattctg ctgtttatta ctgtcaacac tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca acgtggaaat cagac 325
<210> 68
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 VK (aa)
<400> 68
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ile Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr His
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Val
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Asn Val Glu Ile Arg
100 105
<210> 69
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRL1(aa)
<400> 69
Gln Ser Val Ser Thr His
1 5
<210> 70
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRL2(aa)
<400> 70
Asp Ala Ser
1
<210> 71
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 CDRL3(aa)
<400> 71
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 72
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI6 Vk (co-nt)
<400> 72
gagatcgtga tgacccagtc tcctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagggctatc 60
ctgtcctgca gggctagcca gtccgtgtcc acccacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccaggctgct ggtgttcgac gctagcacca gagctacagg cgtgccagct 180
aggttcggag gaagcggatc tggcacagag tttaccctga caatctccag cctgcagtcc 240
gaggattccg ccgtgtacta ttgtcagcat tataacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa acgtggagat caga 324
<210> 73
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 VH (wt-nt)
<400> 73
caagtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcctgtaaga cttctggagg caccttcaat aggcaagtta tcagctgggt gcgacaggcc 120
ccaggacaag gacttgagtg gatgggaggg atcctccctc ttactggtag aggggacgag 180
gcagagaggt ttcagggcag agtcaccatt accgcggacg aatctgagag tacagtctac 240
atggacttga gcagcctgag atctggggac acggccgtct attactgtgc gagagcgcgt 300
tcggattact ttaatagaga cctcggctgg gaaaattact actttgaatc ttggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 74
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 VH (aa)
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Gly Thr Phe Asn Arg Gln
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Leu Pro Leu Thr Gly Arg Gly Asp Glu Ala Glu Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Glu Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRH1 (aa)
<400> 75
Gly Gly Thr Phe Asn Arg Gln Val
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRH2 (aa)
<400> 76
Ile Leu Pro Leu Thr Gly Arg Gly
1 5
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<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRH3 (aa)
<400> 77
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Glu Ser
20
<210> 78
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 VH (co-nt)
<400> 78
caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc caggctccag cgtgaaggtg 60
tcttgcaaga cctccggcgg cacattcaac aggcaggtca tcagctgggt gcggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggagga atcctgcctc tgaccggcag gggcgacgag 180
gccgagagat ttcagggccg cgtgaccatc acagctgatg agtccgagag caccgtgtac 240
atggacctgt cttccctgag aagcggcgat acagccgtgt actattgtgc cagggctcgg 300
tctgactatt tcaaccgcga tctgggctgg gagaattact attttgagtc ttggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgag ctct 384
<210> 79
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 Vk (wt-nt)
<400> 79
gaaatcgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtat ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt accgacttag tctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc cccggctcct catttatgat gcatccacta gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcggtg gcagggggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattctg ctgtttatta ctgtcagcac tattcttact ggcctccgtg gacattcggc 300
caagggacca aagtggaaat caatc 325
<210> 80
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 VK (aa)
<400> 80
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Asp
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Arg Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Ser Tyr Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Asn
100 105
<210> 81
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRL1(aa)
<400> 81
Gln Ser Val Ser Thr Asp
1 5
<210> 82
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRL2(aa)
<400> 82
Asp Ala Ser
1
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 CDRL3(aa)
<400> 83
Gln His Tyr Ser Tyr Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 84
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI7 Vk (co-nt)
<400> 84
gagatcgtga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagagccacc 60
ctgagctgca gggctagcca gtccgtgtcc acagacctgg tgtggtacca gcagaagcca 120
ggacaggctc caaggctgct gatctatgat gcctctacca gagctacagg catcccagct 180
aggttcggag gaaggggatc cggcaccgag tttaccctga caatctccag cctgcagagc 240
gaggactccg ccgtgtacta ttgtcagcac tacagctatt ggcccccttg gaccttcggc 300
cagggcacaa aggtggagat caac 324
<210> 85
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 VH (wt-nt)
<400> 85
caggtccacc tggtgcagtc tggggctgag gtgaaggagc ctgggtcctc ggtgacggtc 60
tcctgcaagg catctggagg cagcttcaac aaccaggcta ttagctgggt gcgacaggcc 120
ccaggacaag gccttgagtg gatgggaggg atcttcccta tctctggcac accgaccagc 180
gcacagaggt tccagggcag agtcacattt accgcggacg agtccacgac cacagtctac 240
atggatctga gcagcctgag atctgacgac acggccgtct actactgtgc gagagcgggt 300
tcggattact ttaatagaga cctcggctgg gaaaactact actttgcgtc ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 86
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 VH (aa)
<400> 86
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Asn Asn Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Phe Pro Ile Ser Gly Thr Pro Thr Ser Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 CDRH1 (aa)
<400> 87
Gly Gly Ser Phe Asn Asn Gln Ala
1 5
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 CDRH2 (aa)
<400> 88
Ile Phe Pro Ile Ser Gly Thr Pro
1 5
<210> 89
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 CDRH3 (aa)
<400> 89
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Ala Ser
20
<210> 90
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 VH (co-nt)
<400> 90
caggtgcacc tggtgcagag cggagctgag gtgaaggagc caggatccag cgtgacagtg 60
tcttgcaagg cttccggcgg cagcttcaac aatcaggcta tctcctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atctttccca tctctggcac acctacctcc 180
gcccagaggt tccagggaag ggtgaccttc accgctgacg agagcaccac aaccgtgtac 240
atggatctgt cttccctgag atctgacgat accgccgtgt actattgtgc cagagctggc 300
tccgactatt tcaaccgcga tctgggctgg gagaattact attttgcttc ctggggccag 360
ggcacactgg tgaccgtgag ctct 384
<210> 91
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 Vk (wt-nt)
<400> 91
gaaatcgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctctat cttcagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtcg gagtgttagt agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catttatgat gcatccacca gggccactgg tttttcagcc 180
aggttcgctg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattctg ctatttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 92
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 VK (aa)
<400> 92
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Ser Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Phe Ser Ala Arg Phe Ala Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 93
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 93
Arg Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 CDRL2(aa)
<400> 94
Asp Ala Ser
1
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 CDRL3(aa)
<400> 95
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 96
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9 Vk (co-nt)
<400> 96
gagatcgtga tgacccagtc cccagccaca ctgagcctgt ccagcggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gggcttcccg gagcgtgtct tccaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccagactgct gatctatgac gcctctacca gagctacagg cttctccgcc 180
aggtttgctg gatctggatc cggcacagag ttcaccctga caatcagctc tctgcagagc 240
gaggattctg ctatctacta ttgtcagcag tacaacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 VH (wt-nt)
<400> 97
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaagtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttgagt agtcaagtta ttagctgggt gcgacaggcc 120
ccaggacaag gactggagtg gatcggaggg atcatcccca ccactggtac agggggcgcg 180
gcagaggggt tccagggcag agtctccatt tccgcggacg aatccaggag cacagtctac 240
atggaactga ccagcctgac ttctggggac acggccgtct attattgtgc gagagcggtt 300
tcggattact ttaatagaga cctcggctgg gaaaattact actttgaatc ttggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 98
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 VH (aa)
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Ser Gln
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Thr Gly Thr Gly Gly Ala Ala Glu Gly Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ser Ile Ser Ala Asp Glu Ser Arg Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRH1 (aa)
<400> 99
Gly Gly Thr Leu Ser Ser Gln Val
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRH2 (aa)
<400> 100
Ile Ile Pro Thr Thr Gly Thr Gly
1 5
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<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRH3 (aa)
<400> 101
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Glu Ser
20
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<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 VH (co-nt)
<400> 102
caggtgcagc tggtgcagag cggagctgag gtgaagaagc caggctccag cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ctagcggcgg caccctgtct tcccaggtca tctcttgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatcggcggc atcatcccta ccacaggcac aggcggagct 180
gctgagggat tccagggcag agtgtccatc agcgccgacg agtctcgctc caccgtgtac 240
atggagctga ccagcctgac atctggcgat acagccgtgt actattgtgc cagggccgtg 300
tccgactatt tcaaccggga tctgggctgg gagaattact attttgagtc ctggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgag ctct 384
<210> 103
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 Vk (wt-nt)
<400> 103
gaaatcgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcttgca gggccagtcg gagtgttagt atcaacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc cccggctcct catttatgat gcatctacga gggccactgg catcccagcc 180
aggttcggtg gcagggggtc tggaacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattctg ctgtttatta ctgtcagcac tataataact ggcctccgtg gacattcggc 300
caagggacca gagtggaaat caaac 325
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 VK (aa)
<400> 104
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Ile Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Arg Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 105
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRL1(aa)
<400> 105
Arg Ser Val Ser Ile Asn
1 5
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<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRL2(aa)
<400> 106
Asp Ala Ser
1
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 CDRL3(aa)
<400> 107
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 108
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI10 Vk (co-nt)
<400> 108
gagatcgtga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagagccacc 60
ctgagctgca gggctagcag gtccgtgtcc atcaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccaggctgct gatctatgac gcttctacca gggctacagg catcccagct 180
agattcggag gaaggggatc cggaacagag tttaccctga caatctccag cctgcagagc 240
gaggattccg ccgtgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ggccaccttg gaccttcggc 300
cagggaacac gcgtggagat caag 324
<210> 109
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 VH (wt-nt)
<400> 109
caggtgcacc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg cttctggaga ctccttcaac aaatatgaag tcagctgggt gcgacaggcc 120
cccggacatg gacttgagtg gatgggaggg atcatccctc tctctcctat agcgaggtac 180
gcagagaaat ttcagggcag agtcacgatt accgcggacg aattcacgag cacggtctat 240
atacaactga ccagcctgag atctgacgac acggccgtat actactgtgc gacaacacgt 300
tcggattact ttaatagaga cctcggctgg gaagattact tctttgacca ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 110
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 VH (aa)
<400> 110
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asp Ser Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Glu Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Leu Ser Pro Ile Ala Arg Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Phe Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Thr Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Thr Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Phe Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRH1 (aa)
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Gly Asp Ser Phe Asn Lys Tyr Glu
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRH2 (aa)
<400> 112
Ile Ile Pro Leu Ser Pro Ile Ala
1 5
<210> 113
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRH3 (aa)
<400> 113
Ala Thr Thr Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
1 5 10 15
Tyr Phe Phe Asp His
20
<210> 114
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 VH (co-nt)
<400> 114
caggtgcacc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggctccag cgtgagggtg 60
tcctgcaagg ctagcggcga ctctttcaac aagtacgagg tgagctgggt gagacaggct 120
ccaggacatg gactggagtg gatgggcggc atcatccccc tgtctcctat cgccagatac 180
gctgagaagt tccagggccg cgtgaccatc acagctgatg agtttacctc cacagtgtat 240
atccagctga cctccctgag gagcgacgat acagccgtgt actattgtgc taccacaagg 300
agcgactact ttaatcggga tctgggctgg gaggactatt tctttgatca ctggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgtc ttcc 384
<210> 115
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 Vk (wt-nt)
<400> 115
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtattagc accaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctctggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg gagtttatta ctgtcagcac tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 116
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 VK (aa)
<400> 116
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 117
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRL1(aa)
<400> 117
Gln Ser Ile Ser Thr Asn
1 5
<210> 118
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRL2(aa)
<400> 118
Gly Ala Ser
1
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 CDRL3(aa)
<400> 119
Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 120
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI12 Vk (co-nt)
<400> 120
gagatcgtga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagggccacc 60
ctgagctgcc gggctagcca gtctatctcc acaaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggacaggctc caaggctgct gatcagcgga gcttctacca gagctacagg catcccagct 180
cgcttcagcg gatctggatc cggaaccgag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggacttcg gcgtgtacta ttgtcagcac tataacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
<210> 121
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 VH (wt-nt)
<400> 121
caggttcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaggc ctgggtcctc ggtgagggtc 60
tcctgcaagg gttctggaga caccttcaac aactatgtta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggccaag ggcttgagtg gatggggggg atcatcccta tctttcaaac accaaactac 180
gcagagaagt tccagggcag agtcgcgatt accgcggacg aatccacgag cacggcctac 240
atggagttga gcagcctgag atctgaggac tcggccattt attactgtgc gagagcgaat 300
tccgattact ttaatagaga cctcggctgg gaaaattact actttgaaga ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
<210> 122
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 VH (aa)
<400> 122
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Gly Ser Gly Asp Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gln Thr Pro Asn Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRH1 (aa)
<400> 123
Gly Asp Thr Phe Asn Asn Tyr Val
1 5
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRH2 (aa)
<400> 124
Ile Ile Pro Ile Phe Gln Thr Pro
1 5
<210> 125
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRH3 (aa)
<400> 125
Ala Arg Ala Asn Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Glu Asp
20
<210> 126
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 VH (co-nt)
<400> 126
caggtgcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaggc caggatccag cgtgcgggtg 60
agctgcaagg gatctggcga caccttcaac aattacgtga tcagctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccca tcttccagac ccctaactac 180
gctgagaagt ttcagggcag ggtggccatc acagctgacg agtccaccag cacagcctat 240
atggagctgt cttccctgag atctgaggat tccgctatct actattgtgc cagagctaac 300
tctgactatt tcaatcgcga tctgggctgg gagaattact attttgagga ttggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgag ctct 384
<210> 127
<211> 325
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 Vk (wt-nt)
<400> 127
gaaagagtga tgacgcagtc tccagccacc ctttctgtgt ctccaggggg aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttggt agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcttctgcca gggccactgg tgtcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttctctctct ccatcaacag cctgcagtct 240
gaagattctg cagtttatta ctgtcagcac tataatatct ggccgccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggaaat caaac 325
<210> 128
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 VK (aa)
<400> 128
Glu Arg Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gly Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ala Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Ser Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Ile Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRL1(aa)
<400> 129
Gln Ser Val Gly Ser Asn
1 5
<210> 130
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRL2(aa)
<400> 130
Asp Ala Ser
1
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 CDRL3(aa)
<400> 131
Gln His Tyr Asn Ile Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 132
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI13 Vk (co-nt)
<400> 132
gagagagtga tgacccagtc tcctgctaca ctgtccgtga gcccaggagg aagggctacc 60
ctgtcctgca gggcttctca gtccgtggga agcaacctgg cttggtacca gcagaagcca 120
ggccaggccc ccagactgct gatctatgac gcttccgcta gagctaccgg cgtgccagct 180
cgcttcagcg gatctggctc cggcacagag tttagcctgt ctatcaactc cctgcagagc 240
gaggattctg ccgtgtacta ttgtcagcac tacaatatct ggccaccttg gaccttcggc 300
cagggaacaa aggtggagat caag 324
<210> 133
<211> 385
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI14 VH (wt-nt)
<400> 133
caagttcagt tggtgcagtc tggggctgag ctgaagcggc ctgggtcctc ggtgaggatc 60
tcctgcaagg cctctggtgt caccttcaac aagtatgttc tcagctgggt gcgactggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagga atcatcccta tttctggtat accacattac 180
gcagagaagt tccagggcag agtcgcgatt accgcggacg aatccacgag cacagtctac 240
atggagttga gcagcctacg atctgaggac tcggccctat attactgtgc gagagcggtc 300
tccgattatt ttaatcggga cctcggctgg gatgattact actttccttt gtggggccac 360
ggcaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
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<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI14 VH (aa)
<400> 134
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Val Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Val Leu Ser Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Pro His Tyr Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Pro Leu Trp Gly His Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Gly Val Thr Phe Asn Lys Tyr Val
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Pro
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI14 CDRH3 (aa)
<400> 137
Ala Arg Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Asp Asp
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Pro Leu
20
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccca tcagcggcat ccctcactac 180
gctgagaagt ttcagggcag ggtggccatc acagctgacg agtccaccag cacagtgtat 240
atggagctgt cttccctgag atctgaggat tccgccctgt actattgtgc cagagccgtg 300
tccgactatt tcaatcgcga tctgggctgg gacgattact attttcccct gtggggccat 360
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<212> DNA
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gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagcgccacc 60
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gaagattttg cagtttatta ctgtcagcat tataataact ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggagat caaac 325
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Ser Ala Thr Leu Phe Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI14 CDRL3(aa)
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Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
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<211> 324
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<223> FNI14 Vk (co-nt)
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gagatcgtga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagcgccacc 60
ctgttctgca gggctagcag gtccgtgtcc gacaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
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aggttcggag gaagcggatc tggcacacag tttaccctga caatctccag cctgcagtcc 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcac tataacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
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cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccca cctctggtat agcaaactac 180
gcgcagaagt tccagggcag agtcgcgatt attgcggaca aatctacgag cacagtctac 240
atggcgttga gcagcctgag atctgaggac tcggccgtgt atttctgtgc cagagcgcgg 300
tccgactact tcaatagaga cctcggctgg gaagattact actttgagaa ctggggccag 360
ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 385
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI17 VH (aa)
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
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Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Gly Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
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Tyr Tyr Phe Glu Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
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1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> FNI17 CDRH2 (aa)
<400> 148
Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
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caagggacca aggtggaaat caaac 325
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
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1
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<213> Artificial Sequence
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<223> FNI17 CDRL3(aa)
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Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
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<213> Artificial Sequence
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<400> 156
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cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<400> 157
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cctggacagg gacttgagtg gatgggagga atcatcccta tctccggtat agcaaactac 180
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ser
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Gly Gly Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
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Tyr Tyr Phe Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ala Ser
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<211> 8
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<213> Artificial Sequence
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<223> FNI19 CDRH2 (aa)
<400> 160
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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gaagattttg cagtttatta ctgtcagcat tataatattt ggcctccgtg gacgttcggc 300
caagggacca aggtggagat caaac 325
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 164
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ala Arg Ala Thr Leu Phe Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
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Arg Ser Val Ser Asp Asn
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI19 CDRL2(aa)
<400> 166
Gly Ala Ser
1
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI19 CDRL3(aa)
<400> 167
Gln His Tyr Asn Ile Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
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<400> 168
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Val Ile Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Gly Ile His Pro Ile Ser Ala Thr Ala Thr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ala Ala Asp Glu Leu Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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gaggatttcg ctctgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ttcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
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Glu Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ala Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Phe Pro Pro
85 90 95
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100 105
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<223> FNI3-VK-W94F CDRL3 (aa)
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3-VK-W97F (nt)
<400> 176
gagatcctga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagggccacc 60
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ggacaggctc caaggctgct gatctatgga gcttccacca gggctacagg cgtgccagct 180
agattcaccg gcgctggaag cggcacagag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggatttcg ctctgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ggcccccttt cacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<211> 108
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3-VK-W97F (aa)
<400> 177
Glu Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ala Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI3-VK-W94F-W97F (nt)
<400> 179
gagatcctga tgacccagtc ccctgccaca ctgtccgtgt ccccaggaga gagggccacc 60
ctgagctgca gggcttctca ggacgtgtcc ggcaacctgg cctggtacca gcagagacca 120
ggacaggctc caaggctgct gatctatgga gcttccacca gggctacagg cgtgccagct 180
agattcaccg gcgctggaag cggcacagag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggatttcg ctctgtacta ttgtcagcac tacaacaatt ttcccccttt cacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 180
Glu Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ala Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Phe Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<213> Artificial Sequence
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Gln His Tyr Asn Asn Phe Pro Pro Phe Thr
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
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tcttgcaagg cttccggcgg cagcttcaac aatcaggcta tctcctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atctttccca tctctggcac acctacctcc 180
gcccagaggt tccagggaag ggtgaccttc accgctgacg agagcaccac aaccgtgtac 240
atggatctgt cttccctgag atctgacgat accgccgtgt actattgtgc cagagctggc 300
tccgactatt tcaaccgcga tctgggcttc gagaattact attttgcttc ctggggccag 360
ggcacactgg tgaccgtgag ctct 384
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
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Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Asn Asn Gln
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Phe Pro Ile Ser Gly Thr Pro Thr Ser Ala Gln Arg Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Phe Glu Asn
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20
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cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<213> Artificial Sequence
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Phe Ser Ala Arg Phe Ala Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
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gagatcgtga tgacccagtc cccagccaca ctgagcctgt ccagcggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gggcttcccg gagcgtgtct tccaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccagactgct gatctatgac gcctctacca gagctacagg cttctccgcc 180
aggtttgctg gatctggatc cggcacagag ttcaccctga caatcagctc tctgcagagc 240
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cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<213> Artificial Sequence
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Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Ser Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
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Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Phe Thr
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<223> FNI9-VK-W94F-W97F (nt)
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gagatcgtga tgacccagtc cccagccaca ctgagcctgt ccagcggaga gagggccacc 60
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aggtttgctg gatctggatc cggcacagag ttcaccctga caatcagctc tctgcagagc 240
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cagggcacaa aggtggagat caag 324
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9-VK-W94F-W97F (aa)
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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50 55 60
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Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Gln Gln Tyr Asn Asn Phe Pro Pro Phe Thr
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Asn Ala Val Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Gly Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
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65 70 75 80
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FM08 VL
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Gly Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg Thr Phe Gly Gln
85 90 95
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100
<210> 196
<211> 217
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> WT hIgG1 Fc
<400> 196
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
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100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 197
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Chimeric hinge sequence
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<211> 386
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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tccgactact tcaaccgcga tctgggttgg gaggactatt actttgaaaa ctgggggcag 360
ggcacactgg tcactgtctc atcagc 386
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<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI17-v19-VH (aa)
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Ala Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 202
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 202
caggtccagc tggtgcagag tggtgccgag gtcaaaaagc cagggtcaag tgtcaaagtc 60
agttgtaaag catcagaggg aacattcaac aagtacacaa tcagctgggt gagacaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccta tctctggcat cgccaattac 180
gctcagaagt tccagggccg cgtggccatc acagctgacg agtccaccac aaccgcctat 240
atggagctgt ccagcctgag gtctgaggat tccgccgtgt actattgcgc caccgctgtg 300
agcgactact tcaaccggga tctgggctgg gaggactatt attttccatt ctggggtcag 360
gggacactgg tcaccgtctc ttcc 384
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI19-v3-VH (aa)
<400> 203
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Glu Gly Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Thr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Gly Ile Ile Pro Ile Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ala Val Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Pro Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 204
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI19-v3-VK (co-nt)
<400> 204
gagatcgtga tgacccagtc ccctgctaca ctgtccgtgt ccccaggagc tagggctacc 60
ctgttctgca gggctagcag gtccgtgtcc gacaacctgg cttggtacca gcagaagcca 120
ggccaggccc ccagactgct gatctttgga gctagcacca gagctacagg cgtgccagct 180
cgcttcagcg gatctggatc cggcacacag tttaccctga caatctccag cctgcagtct 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgtcagcac tataatatct ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
<210> 205
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI19-v3-VK (aa)
<400> 205
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ala Arg Ala Thr Leu Phe Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Ile Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 206
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9-v5-VH (co-nt)
<400> 206
caggtgcacc tggtgcagag cggagctgag gtgaaggagc caggatccag cgtgacagtg 60
tcttgcaagg cttccggcgg cagcttcaac aatcaggcta tctcctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atctttccca tctctggcac acctacctcc 180
gcccagaggt tccagggaag ggtgaccttc accgctgacg agagcaccac aaccgtgtac 240
atggatctgt cttccctgag atctgacgat accgccgtgt actattgtgc cagagctggc 300
tccgactatt tcaaccgcga tctgggctgg gagaattact attttgcttc ctggggccag 360
ggcacactgg tgaccgtgag ctct 384
<210> 207
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9-v5-VH (aa)
<400> 207
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Ser Phe Asn Asn Gln
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Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Phe Pro Ile Ser Gly Thr Pro Thr Ser Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Phe Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9-v5-VK (co-nt)
<400> 208
gagattgtga tgacccagtc ccctgctacc ctgagcgtgt cccccggaga gagagctacc 60
ctgagttgcc gcgccagccg cagtgtctct gacaacctgg cttggtacca gcagaagcca 120
ggacaggctc ctaggctgct gatctatggc gcctccacca gggctacagg catcccagct 180
cggttctctg gatccggaag cggcaccgag tttaccctga caatctccag cctgcagagc 240
gaggatttcg ccgtgtacta ttgccagcat tacaacatct ggcctccttg gacattcggt 300
cagggaacta aagtggaaat taag 324
<210> 209
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI9-v5-VK (aa)
<400> 209
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Arg Ser Val Ser Asp Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Ile Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 210
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgHG1*01, G1m3 CH1-CH3 with M428L and N434S mutations and
C-terminal lysine
<400> 210
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 211
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Kappa light chain CL
<400> 211
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 212
<211> 458
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI17-v19 heavy chain with M428L and N434S mutations in CH3 and a
C-terminal lysine
<400> 212
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Ala Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 213
<211> 457
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI17-v19 heavy chain with M428L and N434S mutations in CH3,
without C-terminal lysine
<400> 213
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Thr Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Ala Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455
<210> 214
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> FNI17-v19 light chain
<400> 214
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 215
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgHG1*01, G1m3 CH1-CH3 with M428L and N434S mutations, without
C-terminal lysine
<400> 215
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 216
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI17-v13 VH
<400> 216
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Arg Val Lys Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Asn
20 25 30
Val Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Thr Ser Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Ile Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Ala Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asp
100 105 110
Tyr Tyr Phe Glu Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 217
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI17-v13 VK
<400> 217
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 218
<211> 407
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence Codon-optimized nucleotide
sequence encoding FNI17-v19-VH with N-terminal
amino acids T-G-V-H-S and C-terminal amino acids
A-S
<400> 218
accggtgtac attctcaggt ccagctggtc cagagtgggg cagaggtcaa agagccaggg 60
tcttcagtca cagtctcatg caaagcaagc ggaggaacat tttccaacaa tgtgatcagc 120
tgggtgaggc aggctccagg acagggactg gagtggatgg gcggcatcat ccctacctct 180
ggcatcgcca actacgctca gaagttccag ggcagagtgg ccatcatcgc tgacaagtct 240
acctccacag tgtatatggc cctgtccagc ctgagaagcg aggattccgc cgtgtacttc 300
tgcgccaggg ctcggtccga ctacttcaac cgcgatctgg gttgggagga ctattacttt 360
gaaaactggg ggcagggcac actggtcact gtctcatcag cgtcgac 407
<210> 219
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRH3
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = R or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = A or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = V, G, H, R, or N
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = W or F
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = D or E
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = D or N
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Y or F
<220>
<221> VARIANT
<222> 20
<223> Xaa = P, D, E, or A
<220>
<221> VARIANT
<222> 21
<223> Xaa = L, I, S, Y, H, D, N, or F
<400> 219
Ala Xaa Xaa Xaa Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Tyr Xaa Phe Xaa Xaa
20
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRH1
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = G or E
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = D, A, G, or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = T or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = F or L
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = N or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = N, R, K, or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Y, H, Q, or N
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = V, T, A, or E
<400> 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 221
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRH2
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = I, H, L, or F
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = P or A
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = I, V, L, or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = S, T, or F
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = G, A, R, P, or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = I, K, R, or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = P, T, A, or G
<400> 221
Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 222
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRL1
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Q or R
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = T, S or D
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = V or I
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = S or G
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = S, G, I, T, or D
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = N, D, H, or S
<400> 222
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 223
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRL2
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = G or D
<400> 223
Xaa Ala Ser
1
<210> 224
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI antibody consensus CDRL3
amino acid sequence
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Q or H
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = N, T, or I
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = W or F
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = W or F;
<400> 224
Gln Xaa Tyr Asn Xaa Xaa Pro Pro Xaa Thr
1 5 10
<210> 225
<400> 225
000
<210> 226
<400> 226
000
<210> 227
<211> 384
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA-IGH
<400> 227
caggtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag gtgaagaagc caggctccag cgtgaaggtg 60
agctgcaagg cttctggcgg caccttctct tcctacgcta tctcctgggt gaggcaggct 120
ccaggacagg gactggagtg gatgggcggc atcatcccta tcttcggcac agccaactac 180
gctcagaagt ttcagggcag agtgaccatc acagccgacg agtctacctc cacagcttat 240
atggagctga gctctctgcg ctccgaggat accgccgtgt actattgtgc cagggctggc 300
agcgactact tcaaccggga tctgggctgg gagaattact attttgacta ttggggccag 360
ggcaccctgg tgacagtgtc cagc 384
<210> 228
<211> 128
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA VH
<400> 228
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
100 105 110
Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 229
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA-IGK
<400> 229
gagatcgtga tgacccagtc tcctgccaca ctgagcgtgt ctccaggaga gagggccacc 60
ctgtcctgca gggcttccca gagcgtgtcc agcaacctgg cctggtacca gcagaagcca 120
ggccaggctc ccaggctgct gatctatggc gccagcacca gagctacagg catcccagct 180
cgcttctctg gatccggaag cggcacagag tttaccctga caatctcttc cctgcagtct 240
gaggacttcg ccgtgtacta ttgtcagcag tacaacaatt ggcccccttg gacctttggc 300
cagggcacaa aggtggagat caag 324
<210> 230
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA VK
<400> 230
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 231
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRH1
<400> 231
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 232
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRH2
<400> 232
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 233
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRH3
<400> 233
Ala Arg Ala Gly Ser Asp Tyr Phe Asn Arg Asp Leu Gly Trp Glu Asn
1 5 10 15
Tyr Tyr Phe Asp Tyr
20
<210> 234
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRL1
<400> 234
Gln Ser Val Ser Ser Asn
1 5
<210> 235
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRL2
<400> 235
Gly Ala Ser
1
<210> 236
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic sequence FNI-UCA CDRL3
<400> 236
Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Trp Thr
1 5 10
Claims (114)
- (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV, 또는 둘 다를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및
(ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서, 인간, 인간화 또는 키메라인 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
(i) 그룹 1 IAV NA는 N1, N4, N5, 및/또는 N8을 포함하고/거나;
(ii) 그룹 2 IAV NA는 N2, N3, N6, N7, 및/또는 N9를 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제3항에 있어서,
(i) N1은 A/California/07/2009, A/California/07/2009 I223R/H275Y, A/Swine/Jiangsu/J004/2018, A/Stockholm/18/2007, A/Brisbane/02/2018, A/Michigan/45/2015, A/Mississippi/3/2001, A/Netherlands/603/2009, A/Netherlands/602/2009, A/Vietnam/1203/2004, A/G4/SW/Shangdong/1207/2016, A/G4/SW/Henan/SN13/2018, A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018, 및 A/New Jersey/8/1976 중 어느 하나 이상으로부터의 N1이고;
(ii) N4는 A/mallard duck/Netherlands/30/2011로부터의 것이고;
(iii) N5는 A/aquatic bird/Korea/CN5/2009로부터의 것이고;
(iv) N8은 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011로부터의 것이고;
(v) N2는 A/Washington/01/2007, A/HongKong/68, A/South Australia/34/2019, A/Switzerland/8060/2017, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016, A/Switzerland/9715293/2013, A/Leningrad/134/17/57, A/Florida/4/2006, A/Netherlands/823/1992, A/Norway/466/2014, A/Switzerland/8060/2017, A/Texas/50/2012, A/Victoria/361/2011, A/HongKong/2671/2019, A/SW/Mexico/SG1444/2011, A/Tanzania/205/2010, A/Aichi/2/1968, A/Bilthoven/21793/1972, A/Netherlands/233/1982, A/Shanghai/11/1987, A/Nanchang/933/1995, A/Fukui/45/2004, 및 A/Brisbane/10/2007 중 어느 하나 이상으로부터의 N2이고;
(vi) N3는 A/Canada/rv504/2004로부터의 것이고;
(v) N6은 A/swine/Ontario/01911/1/99로부터의 것이고;
(vi) N7은 A/Netherlands/078/03로부터의 것이고/거나;
(vii) N9는 A/Anhui/2013 및 A/Hong Kong/56/2015 중 어느 하나 이상으로부터의 N9인,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata); B/Wisconsin/1/2010(Yamagata); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); B/Brisbane/33/2008; B/Colorado/06/2017; B/Hubei-wujiang/158/2009; B/Massachusetts/02/2012; B/Netherlands/234/2011; B/Perth/211/2001; B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/HongKong/05/1972; B/Phuket/3073/2013, B/Harbin/7/1994(Victoria), 및 B/Washington/02/2019(Victoria) 중 어느 하나 이상으로부터의 NA인, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.1 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 내지 약 1 μg/mL의 범위, 또는 0.4 μg/mL 이하의 EC50으로
(i) 그룹 1 IAV NA;
(ii) 그룹 2 IAV NA; 및
(iii) IBV NA 각각에 결합할 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제6항에 있어서,
(i) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 그룹 1 IAV NA에;
(ii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 10 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 그룹 2 IAV NA에; 및/또는
(iii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제7항에 있어서,
(i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N1에;
(ii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N4에;
(iii) 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N5에;
(iv) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8에;
(v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 0.4 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL의 범위, 또는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 또는 20 μg/mL의 EC50으로 N2에;
(vi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N3에;
(vii) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N6에;
(viii) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N7에;
(ix) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 N9에; 및/또는
(xi) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 IBV NA에 결합할 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제7항 또는 제8항에 있어서,
(i) 약 0.4 μg/mL, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.9 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.5 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL 내지 약 1.0 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0 μg/mL의 EC50으로 다음 중 하나 이상에: N1 A/California/07/2009, N1 A/California/07/2009 I223R/H275Y, N1 A/Stockholm/18/2007, N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2008, N4 A/mallard duck/Netherlands/30/2011, N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009, N2 A/Hong Kong/68, N2 A/Leningrad/134/17/57, N3 A/Canada/rv504/2004, N6 A/Swine/Ontario/01911/1/99, N9 A/Anhui/1/2013, B/Lee/10/1940(Ancestral), B/Brisbane/60/2008(Victoria), B/Malaysia/2506/2004(Victoria), B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata), B/Wisconsin/1/2010(Yamagata), 및 B/Yamanashi/166/1998(Yamagata);
(ii) 약 2 μg/mL, 또는 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N5 A/aquatic bird/ Korea/CN5/2009에;
(iii) 약 50 μg/mL의 EC50으로 N8 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011에;
(iv) 약 2 μg/mL 내지 약 10 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Washington/01/2007에;
(v) 약 2 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N7 A/Netherlands/078/03에;
(vi) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/South Australia/34/2019에;
(vii) 약 9.5 μg/mL 내지 약 3.8 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/8060/2017에;
(viii) 약 18.4 μg/mL 내지 약 2.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016에;
(iv) 약 1.6 μg/mL 내지 약 1.2 μg/mL의 범위의 EC50으로 N2 A/Switzerland/9715293/2013에; 및/또는
(v) 약 0.4 μg/mL 내지 약 50 μg/mL의 범위, 또는 약 0.4, 약 2, 약 10, 또는 약 50 μg/mL의 EC50으로 N1 A/Swine/Jiangsu/J004/2018에 결합할 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, NA는 숙주 세포(예를 들어, CHO 세포)의 표면에서 발현되고 NA에 대한 결합은 유세포 분석법에 따른, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 1.0E-12 M 미만, 1.0E-11 M 미만, 1.0 E-11 M 미만, 또는 1.0E-12M 이하, 1.0E-11M 이하, 또는 1.0E-10 이하의 KD, 또는 1.0E-10 내지 1.0E-13의 KD, 또는 1.0E-11 내지 1.0E-13의 KD로 NA에 결합할 수 있고, 선택적으로 여기서 결합은 생물층 간섭계(BLI)에 의해 평가되는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제11항에 있어서, NA는 N1, N2 및/또는 N9인, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편:
(1) (i) 하기 아미노산(N1 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는 (ii) 하기 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는
(2) (i) 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118(N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는 (ii) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118(N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는
(3) NA 활성 부위에 포함되거나 이를 포함하는 에피토프 - 여기서 선택적으로 NA 활성 부위는 하기 아미노산(N2 넘버링)을 포함함: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425; 및/또는
(4) (i) 하기 아미노산 중 어느 하나 이상: R116, D149, E226, R292, 및 R374; 또는 (ii) 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함하는 IBV NA 에피토프. - 제13항에 있어서,
(1) 에피토프는 다음 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 더 포함하고: E344, E227, S247, 및 D198; 및/또는
(2) 항체 또는 항원 결합 단편은 S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 시험관 내 감염 모델, 생체 내 동물 감염 모델 및/또는 인간에서 (i) 그룹 1 IAV NA, 그룹 2 IAV NA 또는 둘 모두를 포함하는 IAV NA, 및/또는 (ii) IBV NA의 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제16항에 있어서,
(i) 그룹 1 IAV NA는 H1N1 및/또는 H5N1을 포함하고;
(ii) 그룹 2 IAV NA는 H3N2 및/또는 H7N9를 포함하고/거나;
(iii) IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral);B/HongKong/05/1972; B/Taiwan/2/1962(Ancestral); B/Brisbane/33/2008(Victoria); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/New York/1056/2003(Victoria); B/Florida/4/2006(Yamagata); B/Jiangsu/10/2003(Yamagata); B/Texas/06/2011(Yamagata); B/Perth/211/2011; B/Harbin/7/1994(Victoria); B/Colorado/06/2017(Victoria); B/Washington/02/2019(Victoria); B/Perth/211/2001(Yamagata); B/Hubei-wujiagang/158/2009(Yamagata); B/Wisconsin/01/2010(Yamagata); B/Massachusetts/02/2012(Yamagata); 및 B/Phuket/3073/2013(Yamagata) 중 하나 이상을 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.1 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.09 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.08 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.07 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.06 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.05 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.04 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.03 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.02 μg/mL, 약 0.0008 μg/mL 내지 약 0.01 μg/mL, from 0.002 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.001 μg/mL 내지 50 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 1 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.9 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.8 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.7 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.6 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.5 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.4 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.3 μg/mL, 약 0.1 μg/mL 내지 약 0.2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 30 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 20 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 10 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 9 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 8 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 6 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 5 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 4 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 3 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 2 μg/mL, 약 0.8 μg/mL 내지 약 1 μg/mL의 범위, 또는 약 0.1 μg/mL, 약 0.2 μg/mL, 약 0.3 μg/mL, 약 0.4 μg/mL, 약 0.5 μg/mL, 약 0.6 μg/mL, 약 0.7 μg/mL, 약 0.8 μg/mL, 약 0.9 μg/mL, 약 1.0 μg/mL, 약 1.5 μg/mL, 약 2.0 μg/mL, 약 2.5 μg/mL, 약 3.0 μg/mL, 약 3.5 μg/mL, 약 4.0 μg/mL, 약 4.5 μg/mL, 약 5.0 μg/mL, 약 5.5 μg/mL, 약 6.0 μg/mL, 약 6.5 μg/mL, 약 7.0 μg/mL, 약 7.5 μg/mL, 약 8.0 μg/mL, 약 8.5 μg/mL, 약 9.0 μg/mL, 약 10 μg/mL, 약 11 μg/mL, 약 12 μg/mL, 약 13 μg/mL, 약 14 μg/mL, 약 15 μg/mL, 약 16 μg/mL, 약 17 μg/mL, 약 18 μg/mL, 약 19 μg/mL, 약 20 μg/mL, 약 25 μg/mL, 및/또는 약 30 μg/mL의 IC50으로 그룹 1 IAV NA; 그룹 2 IAV NA; 및/또는 IBV NA에 의한 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제18항에 있어서, 약 0.00001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.001 μg/ml, 또는 약 0.0001 μg/mL 내지 약.0001 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.0001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약.001 μg/mL 내지 약 0.01 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 10 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 1 μg/ml, 또는 약 0.01 μg/mL 내지 약 0.1 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 25 μg/ml, 또는 약 1 μg/mL 내지 약 10 μg/ml의 범위, 또는 약 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 12.5, 13, 13.5, 14, 14.5, 또는 15 μg/ml의 IC50으로 하나 이상의 그룹 1 및/또는 그룹 2 IAV, 및/또는 하나 이상의 IBV의 NA 시알리다제 활성을 억제할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 FcγRIIIa를 활성화할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제20항에 있어서, 활성화는 IAV로 감염된 표적 세포(예를 들어, A549 세포)와 항체 또는 항원 결합 단편의 인큐베이션 후(예를 들어, 23시간 동안) (i) 인간 FcγRIIIa(선택적으로, F158 대립유전자); 및 (ii) 루시퍼라제 리포터와 같은 리포터를 암호화하는 서열에 작동가능하게 연결된 NFAT 발현 조절 서열을 포함하는 숙주 세포(선택적으로 Jurkat 세포)를 사용하여 결정되는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제21항에 있어서, 활성화는 H1N1 IAV로 감염된 표적 세포와 항체 또는 항원 결합 단편의 인큐베이션(선택적으로, 약 23시간 동안) 후에 결정되며, 선택적으로 여기서 H1N1 IAV는 A/PR8/34이고/거나, 선택적으로 감염은 6의 감염 다중도(MOI)를 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화시킬 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제23항에 있어서, IAV 및/또는 IBV는 항바이러스 내성이고, 선택적으로 항바이러스제는 오셀타미비르인, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, IAV는 다음 아미노산 돌연변이(들)를 포함하는 N1 NA를 포함하고: H275Y; E119D + H275Y; S247N + H275Y; I222V; 및/또는 N294S, 여기서 선택적으로 IAV는 CA09 또는 A/Aichi를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, IAV는 아미노산 돌연변이(들) E119V, Q136K, 및/또는 R292K를 포함하는 N2 NA를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체에서 (i) IAV 감염 및/또는 (ii) IBV 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 선택적으로 A/PR8/34를 포함하는 H1N1 바이러스; 및/또는
(ii) 선택적으로 A/Hong Kong/68을 포함하는 H3N2 바이러스에 의한 감염을 치료 및/또는 약화시킬 수 있는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 유효량의 항체 또는 항원 결합 단편의 투여 후 선택적으로 (i) 최대 15일, 또는 (ii) 15일 초과 동안 IAV 및/또는 IBV에 감염된 대상체에서 체중 감소를 방지할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, IAV 및/또는 IBV 감염 직전 대상체의 체중에 대해 결정되어 IAV 감염 및/또는 IBV 감염된 대상체에서 10% 초과의 체중 감소를 방지할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, IAV 감염 및/또는 IBV 감염 대상체의 생존을 연장할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 마우스(예를 들어, tg32 마우스)에서 다음 생체 내 반감기를 갖는 항체 또는 항원 결합 단편:
(i) 약 10일 내지 약 14일, 약 10.2일 내지 약 13.8일, 약 10.5일 내지 약 13.5일, 약 11일 내지 약 13일, 약 11.5일 내지 약 12.5일, 10일 내지 14일, 또는 10.5일 내지 13.5일, 또는 11일 내지 13일의 범위, 또는 약 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 11.0, 11.1, 11.2, 11.3, 11.4, 11.5, 11.6, 11.7, 11.8, 11.9, 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 13.6, 13.7, 13.8, 13.9, 또는 14.0일; 또는
(ii) 약 12일 내지 약 16일, 약 12.5일 내지 15.5일, 약 13일 내지 15일, 약 13.5일 내지 약 14.5일, 또는 12일 내지 16일, 또는 13일 내지 15일, 또는 13.5일 내지 14.5일의 범위, 또는 약 12.0, 12.1, 12.2, 12.3, 12.4, 12.5, 12.6, 12.7, 12.8, 12.9, 13.0, 13.1, 13.2, 13.3, 13.4, 13.5, 1.36, 13.7, 13.8, 13.9, 14.0, 14.1, 14.2, 14.3, 14.4, 14.5, 14.6, 14.7, 14.8, 14.9, 15.0 15.1, 15.2, 15.3, 15.4, 15.5, 1.56, 15.7, 15.8, 15.9, 또는 16.0일. - 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상보성 결정 영역(CDR)H1, CDRH2, 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하고, 여기서
(i) 선택적으로, CDRH1은 서열 번호 147, 3, 15, 27, 39, 51, 63, 75, 87, 99, 111, 123, 135, 159, 및 231 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고;
(ii) 선택적으로, CDRH2는 서열 번호 148, 4, 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88, 100, 112, 124, 136, 160, 및 232 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고;
(iii) CDRH3은 서열 번호 149, 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 161, 및 233 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고;
(iv) 선택적으로, CDRL1은 서열 번호 153, 9, 21, 33, 45, 57, 69, 81, 93, 105, 117, 129, 141, 165, 및 234 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고;
(v) 선택적으로, CDRL2는 서열 번호 154, 10, 22, 34, 46, 58, 70, 82, 94, 106, 118, 130, 142, 166, 및 235 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어지고/거나;
(vi) 선택적으로, CDRL3은 서열 번호 155, 11, 23, 35, 175, 178, 181, 47, 59, 71, 83, 95, 187, 193, 107, 119, 131, 143, 190, 167, 및 236 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열, 또는 1, 2 또는 3개의 산 치환을 포함하는 이의 기능성 변이체(이 치환 중 하나 이상은 선택적으로 보존적 치환이고/이거나 생식계열-암호화된 아미노산에 대한 치환임)을 포함하거나 이로 이루어진,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제33항에 있어서, 서열 번호 (i) 각각 147-149 및 153-155; (ii) 각각 15-17 및 21-23; (iii) 각각 27-29 및 33-35; (iv) 각각 27, 28, 172, 및 33-35; (v) 각각 27-29, 33, 34, 및 175; (vi) 각각 27-29, 33, 34, 및 178; (vii) 각각 27-29, 33, 34, 및 181; (viii) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 175; (ix) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 178; (x) 각각 27, 28, 172, 33, 34, 및 181; (xi) 각각 39-41 및 45-47; (xii) 각각 51-53 및 57-59; (xiii) 각각 63-65 및 69-71; (xiv) 각각 75-77 및 81-83; (xv) 각각 87-89 및 93-95; (xvi) 각각 87, 88, 184 및 93-95; (xvii) 각각 87-89, 93, 94, 및 187; (xviii) 각각 87-89, 93, 94, 및 190; (xix) 87-89, 93, 94, 및 193; (xx) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 187; (xxi) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 190; (xxii) 각각 87, 88, 184, 93, 94, 및 193; (xxiii) 각각 87-89, 141, 142, 및 131; (xxiv) 각각 99-101 및 105-107; (xxv) 각각 111-113 및 117-119; (xxvi) 각각 123-125 및 129-131; (xxvii) 각각 135-137 및 141-143; (xxviii) 각각 3-5 및 9-11; (xxix) 각각 159-161 및 165-167; 또는 (xxx) 각각 231-233 및 234-236에 제시된 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열 - 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함함 -을 포함하거나 이로 이루어지고;
(ii) VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 아미노산 서열 - 여기서 서열 변이는 선택적으로 하나 이상의 프레임워크 영역으로 제한되고/되거나 서열 변이는 생식계열 암호화 아미노산에 대한 하나 이상의 치환을 포함함 -을 포함하거나 이로 이루어진,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, VH 및 VL은 서열 번호 (i) 각각 199 및 201; (ii) 각각 14 및 20; (iii) 각각 26 및 32; (iv) 각각 26 및 174; (v) 각각 26 및 177; (vi) 각각 26 및 180; (vii) 각각 171 및 32; (viii) 각각 171 및 174; (ix) 각각 171 및 177; (x) 각각 171 및 180; (xi) 각각 38 및 44; (xii) 각각 50 및 56; (xiii) 각각 62 및 68; (xiv) 각각 74 및 80; (xv) 각각 86 및 92; (xvi) 각각 86 및 186; (xvii) 각각 86 및 189; (xviii) 각각 86 및 192; (xix) 각각 183 및 92; (xx) 각각 183 및 186; (xxi) 각각 183 및 189; (xxii) 각각 183 및 192; (xxiii) 각각 98 및 104; (xxiv) 각각 110 및 116; (xxv) 각각 122 및 128; (xxvi) 각각 134 및 140; (xxvii) 각각 146 및 152; (xxviii) 각각 158 및 164; (xxix) 각각 2 및 8; (xxx) 각각 203 및 205; (xxxi) 각각 207 및 209; (xxxii) 각각 216 및 217; 또는 (xxxiii) 각각 228 및 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
(i) 서열 번호 210 또는 서열 번호 215에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CH1-CH3; 및/또는
(2) 서열 번호 211에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 CL을 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
(1) 서열 번호 212 또는 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및
(2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
(1) 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및
(2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
(1) 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및
(2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄를 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH), 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기서
(i) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 147-149에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 153-155에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(ii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 15-17에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 21-23에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(iii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 27, 28, 및 29 또는 172에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 33, 34, 및 35 또는 175 또는 178 또는 181에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(iv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 39-41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 45-47에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(v) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 51-53에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 57-59에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(vi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 63-65에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 69-71에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(vii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 75-77에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 81-83에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(viii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87, 88, 및 89 또는 184에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 93, 94, 및 95 또는 187 또는 190 또는 193에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(ix) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87, 88, 184에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 93-95에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(x) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 99-101에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 105-107에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 111-113에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 117-119에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 123-125에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 129-131에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xiii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 135-137에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 141-143에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xiv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 3-5에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 9-11에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xv) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 159-161에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 165-167에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xvi) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 87-89에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 141, 142, 및 131에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나;
(xvii) CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열 번호 231-233에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열 번호 234-236에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고,
(i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는,
항체 또는 이의 항원 결합 단편. - 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, (i) VH는 서열 번호 199에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ii) VH는 서열 번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 20에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iii) VH는 서열 번호 26 또는 171에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 32, 174, 177, 또는 180에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (iv) VH는 서열 번호 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 44에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (v) VH는 서열 번호 50에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 56에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vi) VH는 서열 번호 62에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (vii) VH는 서열 번호 74에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 80에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (viii) VH는 서열 번호 86 또는 183에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 92, 186, 189, 또는 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (ix) VH는 서열 번호 98에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 104에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (x) VH는 서열 번호 110에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 116에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xi) VH는 서열 번호 122에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 128에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xii) VH는 서열 번호 134에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 140에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiii) VH는 서열 번호 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 152에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xiv) VH는 서열 번호 158에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 164에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xv) VH는 서열 번호 2에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvi) VH는 서열 번호 203에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 205에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; (xvii) VH는 서열 번호 207에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 209에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지거나; 또는 (xviii) VH는 서열 번호 228에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, VH는 서열 번호 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 217에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제42항 또는 제43항에 있어서, (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 다를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있고, 선택적으로 (1) NA 시알리다제 활성을 억제하고/하거나, (2) IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로서, 인플루엔자 바이러스 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있는 폴리펩티드.
- 제45항에 있어서, 항체 중쇄 가변 도메인(VH) 또는 이의 단편을 포함하고, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열은 선택적으로 VH 또는 이의 단편에 포함되는 폴리펩티드.
- 제45항 또는 제46항에 있어서, 서열 번호 219에 따른 아미노산 서열은 서열 번호 149, 5, 17, 29, 172, 41, 53, 65, 77, 89, 184, 101, 113, 125, 137, 및 161 중 어느 하나를 포함하는 폴리펩티드.
- 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드 또는 VH는
(i) 서열 번호 220에 따른 아미노산 서열 서열; 및/또는
(ii) 서열 번호 221에 따른 아미노산 서열을 더 포함하는,
폴리펩티드. - 제45항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 경쇄 가변 도메인(VL)을 더 포함하고, 선택적으로 VL은
(i) 서열 번호 222에 따른 아미노산 서열;
(ii) 서열 번호 223에 따른 아미노산 서열; 및/또는
(iii) 서열 번호 224에 따른 아미노산 서열을 포함하는,
폴리펩티드. - 제46항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 폴리펩티드.
- 제49항 또는 제50항에 있어서, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진, 폴리펩티드.
- 제45항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 폴리펩티드.
- 중쇄 가변 도메인(VH) 아미노산 서열 및 경쇄 가변 도메인(VL) 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
VH는 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171, 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지고, VL은 서열 번호 201, 8, 20, 32, 44, 56, 68, 80, 92, 104, 116, 128, 140, 152, 174, 177, 180, 186, 189, 192, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어지며,
(i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제에 결합할 수 있는,
폴리펩티드. - 제45항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV 또는 둘 모두를 포함하는 인플루엔자 A 바이러스(IAV); 및/또는 (ii) 인플루엔자 B 바이러스(IBV)로부터의 뉴라미니다제(NA)에 결합할 수 있고, 선택적으로 (1) NA 시알리다제 활성을 억제하고/거나, (2) IAV 및/또는 IBV에 의한 감염을 중화할 수 있는, 폴리펩티드 또는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
(i) 하기 아미노산(N1 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R368, R293, E228, E344, S247, D198, D151, R118; 및/또는
(ii) 하기 아미노산(N2 NA 넘버링) 중 어느 하나 이상을 포함하는 NA 에피토프: R371, R292, E227, E344, S247, D198, D151, R118. - 다음에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
(i) 아미노산 R368, R293, E228, D151, 및 R118 (N1 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프; 및/또는
(ii) 아미노산 R371, R292, E227, D151, 및 R118 (N2 NA 넘버링)을 포함하는 NA 에피토프. - NA 활성 부위에 포함되거나 이를 포함하는 에피토프에 결합할 수 있으며, 선택적으로 상기 NA 활성 부위는 다음 아미노산(N2 넘버링)을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: R118, D151, R152, R224, E276, R292, R371, Y406, E119, R156, W178, S179, D/N198, I222, E227, H274, E277, D293, E425.
- 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프는 다음 NA 아미노산(N2 넘버링) 중 어느 하나 이상을 더 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: E344, E227, S247, 및 D198.
- 제55항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, S245N 아미노산 돌연변이 및/또는 E221D 아미노산 돌연변이를 포함하는 NA에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편.
- 하기 아미노산 중 어느 하나 이상을 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편: R116, D149, E226, R292, 및 R374.
- 아미노산 R116, D149, E226, R292, 및 R374를 포함하는 IBV NA 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
- 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 인플루엔자는 인플루엔자 A 바이러스, 인플루엔자 B 바이러스, 또는 둘 모두를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제52항의 폴리펩티드로서, IgG, IgA, IgM, IgE, 또는 IgD 이소형인 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제63항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제52항의 폴리펩티드로서, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되는 IgG 이소형인 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제64항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제52항의 폴리펩티드로서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 항체, 모노클로날 항체, 정제된 항체, 단일쇄 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 Fv를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제65항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제52항의 폴리펩티드로서, 항체 또는 항원 결합 단편은 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제66항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편은 이중특이성 항체 또는 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제66항 또는 제67항에 있어서,
(i) 제1 VH 및 제1 VL; 및
(ii) 제2 VH 및 제2 VL을 포함하고,
여기서 제1 VH와 제2 VH는 상이하고 각각 독립적으로 서열 번호 199, 2, 14, 26, 171 38, 50, 62, 74, 86, 183, 98, 110, 122, 134, 146, 158, 203, 207, 216, 및 228 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고,
제1 VL과 제2 VL은 상이하고 각각 독립적으로 서열 번호 201, 8, 20, 32, 174, 177, 180, 44, 56, 68, 80, 92, 186, 189, 192, 104, 116, 128, 140, 152, 164, 205, 209, 217, 및 230 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하며,
제1 VH 및 제1 VL은 함께 제1 항원-결합 부위를 형성하고, 제2 VH 및 제2 VL은 함께 제2 항원 결합 부위를 형성하는,
항체 또는 항원 결합 단편. - 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제68항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제52항의 폴리펩티드로서, 항체 또는 항원 결합 단편은 (예를 들어, IgG1) Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제69항에 있어서, Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은
(i) 돌연변이를 포함하지 않는 참조 Fc 폴리펩티드와 비교하여 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)(예를 들어, 제조자의 프로토콜을 사용하는 Biacore, 예를 들어 T200 기기)를 사용하여 측정됨); 및/또는
(ii) 돌연변이를 포함하지 않는 참조 Fc 폴리펩티드와 비교하여 인간 FcγR에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이(예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)(예를 들어, 제조자의 프로토콜을 사용하는 Biacore, 예를 들어 T200 기기)를 사용하여 측정됨)를 포함하는,
항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드. - 제70항에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 M428L; N434S; N434H; N434A; N434S; M252Y; S254T; T256E; T250Q; P257I; Q311I; D376V; T307A; E380A; 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제70항 또는 제71항에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 (i) M428L/N434S; (ii) M252Y/S254T/T256E; (iii) T250Q/M428L; (iv) P257I/Q311I; (v) P257I/N434H; (vi) D376V/N434H; (vii) T307A/E380A/N434A; 또는 (viii) (i) 내지 (vii)의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 돌연변이는 M428L/N434S를 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 S239D; I332E; A330L; G236A; 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제70항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR에 대한 결합을 향상시키는 돌연변이는 (i) S239D/I332E; (ii) S239D/A330L/I332E; (iii) G236A/S239D/I332E; 또는 (iv) G236A/A330L/I332E를 포함하고, 여기서 Fc 폴리펩티드 또는 이의 단편은 선택적으로 위치 239에 Ser을 포함하는, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제75항 중 어느 한 항의 폴리펩티드로서, 글리코실화를 변경시키는 돌연변이를 포함하고, 여기서 글리코실화를 변경하는 돌연변이는 N297A, N297Q, 또는 N297G를 포함하고/하거나 비글리코실화 및/또는 비푸코실화된, 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 폴리펩티드.
- 다음을 포함하는 항체:
(1) 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및
(2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄. - 다음을 포함하는 항체:
(1) 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄; 및
(2) 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄. - 다음을 포함하는 항체:
(1) 각각 서열 번호 212에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 중쇄; 및
(2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 경쇄. - 다음을 포함하는 항체:
(1) 각각 서열 번호 213에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이들로 이루어진 2개의 중쇄; 및
(2) 각각 서열 번호 214에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진 2개의 경쇄. - 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 암호화하거나, 상기 항체 또는 항원 결합 단편의 VH, 중쇄, VL 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
- 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
- 제81항 또는 제82항에 있어서, 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보핵산(DNA) 또는 리보핵산(RNA)을 포함하고, 여기서 RNA는 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
- 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 뉴클레오시드, cap-1 구조, cap-2 구조, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
- 제84항에 있어서, 슈도우리딘, N6-메틸아데논신, 5-메틸시티딘, 2-티오우리딘, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
- 제84항에 있어서, 슈도우리딘은 N1-메틸슈도우리딘을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
- 제81항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 폴리뉴클레오티드.
- 제87항에 있어서, 숙주 세포는 인간 세포를 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
- 제81항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 198, 200, 1, 13, 25, 170, 37, 49, 61, 73, 85, 182, 97, 109, 121, 133, 145, 157, 6, 18, 30, 42, 54, 66, 78, 90, 102, 114, 126, 138, 150, 162, 7, 19, 31, 173, 176, 179, 43, 55, 67, 79, 91, 185, 188, 191, 103, 115, 127, 139, 151, 163, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132, 144, 156, 168, 202, 206, 204, 208, 227, 및 229 중 어느 하나 이상에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 50%(예를 들어, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 94%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상) 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드.
- 제89항에 있어서, 서열 번호 198의 폴리뉴클레오티드 서열 및/또는 서열 번호 200의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
- 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터.
- 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 및/또는 제91항의 벡터를 포함하는 숙주 세포로서, 여기서 폴리뉴클레오티드는 선택적으로 숙주 세포에 대해 이종성이고/이거나 숙주 세포는 암호화된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 숙주 세포.
- 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 및/또는 제91항의 벡터를 포함하는 단리된 인간 B 세포로서, 여기서 폴리뉴클레오티드는 선택적으로 인간 B 세포에 대해 이종성이고/이거나 인간 B 세포는 불멸화된, 단리된 인간 B 세포.
- (i) 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편;
(ii) 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항의 폴리펩티드;
(iii) 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드;
(iv) 제91항의 재조합 벡터;
(v) 제92항의 숙주 세포; 및/또는
(vi) 제93항의 인간 B 세포, 및
약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물. - 제94항에 있어서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 각각의 제1 항체 또는 항원 결합 단편 및 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 상이하고, 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항에 따른 것인, 조성물.
- 담체 분자에 캡슐화된 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제91항의 벡터를 포함하는 조성물로서, 여기서 담체 분자는 선택적으로 지질, 지질 유래 전달 비히클, 예컨대 리포솜, 고체 지질 나노입자, 유성 현탁액, 서브미크론 지질 에멀젼, 지질 미세기포, 역지질 미셀, 와우 리포솜, 지질 미세소관, 지질 미세실린더, 지질 나노입자(LNP) 또는 나노스케일 플랫폼을 포함하는, 조성물.
- 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편의 제조 방법으로서, 제92항의 숙주 세포 또는 제93항의 인간 B 세포를 각각 숙주 세포 또는 인간 B 세포에 대해 항체 또는 항원 결합 단편을 발현하기에 충분한 시간과 및 조건 하에서 배양하는 것을 포함하는, 방법.
- 제97항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편을 단리하는 단계를 더 포함하는 방법.
- 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 대상체에게 유효량의
(i) 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편;
(ii) 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항의 폴리펩티드;
(iii) 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드;
(iv) 제91항의 재조합 벡터;
(v) 제92항의 숙주 세포;
(vi) 제93항의 인간 B 세포; 및/또는
(vii) 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법. - 인간 대상체에서 인플루엔자 감염을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 대상체에게 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 제91항의 재조합 벡터 또는 제96항의 조성물을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 폴리뉴클레오티드는 mRNA를 포함하는, 방법.
- 제100항에 있어서, 인플루엔자 감염은 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 포함하는, 방법.
- 제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 용량의 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 2회 이상의 용량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 용량을 1년에 1회, 선택적으로 인플루엔자 시즌에 앞서 또는 그 동안에 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포 또는 조성물의 용량을 1년에 2회 이상, 예를 들어 6개월 마다 한 번 정도 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포, 또는 조성물을 근육내, 피하 또는 정맥내로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 및/또는 예방은 노출 후 예방을 포함하는 방법.
- 제99항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 항바이러스제를 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정인 방법.
- 제108항에 있어서, 항바이러스제는 뉴라미니다제 억제제, 인플루엔자 폴리머라제 억제제, 또는 둘 모두를 포함하는 방법.
- 제108항 또는 제109항에 있어서, 항바이러스제는 오셀타미비르, 자나미비르, 발록사비르, 페라미비르, 라니나미비르, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 방법.
- 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 제91항의 재조합 벡터, 제92항의 숙주 세포, 제93항의 인간 B 세포, 및/또는 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항의 조성물.
- 대상체에서 IAV 감염 및/또는 IBV 감염의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 사용하기 위한, 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편, 제45항 내지 제52항 및 제63항 내지 제76항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 제91항의 재조합 벡터, 제92항의 숙주 세포, 제93항의 인간 B 세포, 및/또는 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항의 조성물.
- IAV 감염 및/또는 IBV 감염의 시험관 내 진단 방법으로서,
(i) 대상체로부터의 샘플을 제1항 내지 제44항 및 제53항 내지 제80항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
(ii) 항원과 항체를 포함하거나 항원과 항원 결합 단편을 포함하는 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 방법. - 제99항 내지 제110항 및 제113항 중 어느 한 항의 방법, 제111항 또는 제112항에 사용하기 위한 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포, 인간 B 세포, 및/또는 조성물로서,
(i) IAV는 그룹 1 IAV, 그룹 2 IAV, 또는 둘 모두를 포함하고, 선택적으로 그룹 1 IAV NA는 N1, N4, N5, 및/또는 N8을 포함하고/거나; 그룹 2 IAV NA는 N2, N3, N6, N7, 및/또는 N9를 포함하고, 여기서 추가로 선택적으로 N1은 A/California/07/2009 유래, A/California/07/2009 I223R/H275Y 유래, A/Swine/Jiangsu/J004/2018 유래, A/Stockholm/18/2007 유래, A/Brisbane/02/2018 유래, A/Michigan/45/2015 유래, A/Mississippi/3/2001 유래, A/Netherlands/603/2009 유래, A/Netherlands/602/2009 유래, A/Vietnam/1203/2004 유래, A/G4/SW/Shangdong/1207/2016 유래, A/G4/SW/Henan/SN13/2018 유래, A/G4/SW/Jiangsu/J004/2018 유래, 및/또는 A/New Jersey/8/1976 유래이고; N4는 A/mallard duck/Netherlands/30/2011 유래이고; N5는 A/aquatic bird/Korea/CN5/2009 유래이고; N8은 A/harbor seal/New Hampshire/179629/2011 유래이고; N2는 A/Washington/01/2007 유래, A/HongKong/68 유래, A/HongKong/2671/2019 유래, A/South Australia/34/2019 유래, A/Switzerland/8060/2017 유래, A/Singapore/INFIMH-16-0019/2016 유래, A/Switzerland/9715293/2013 유래, A/Leningrad/134/17/57 유래, A/Florida/4/2006 유래, A/Netherlands/823/1992 유래, A/Norway/466/2014 유래, A/Texas/50/2012 유래, A/Victoria/361/2011 유래, A/SW/Mexico/SG1444/2011 유래, A/Aichi/2/1968 유래, A/Bilthoven/21793/1972 유래, A/Netherlands/233/1982 유래, A/Shanghai/11/1987 유래, A/Nanchang/933/1995 유래, A/Fukui/45/2004, A/Brisbane/10/2007 유래, A/Tanzania/205/2010 유래이고; N3은 A/Canada/rv504/2004 유래이고; N6은 A/swine/Ontario/01911/1/99 유래이고; N7은 A/Netherlands/078/03 유래이고/거나; N9는 A/Anhui/2013, A/Hong Kong/56/2015 유래이고/거나;
(ii) IBV NA는 B/Lee/10/1940(Ancestral); B/Brisbane/60/2008(Victoria); B/Malaysia/2506/2004(Victoria); B/Malaysia/3120318925/2013(Yamagata); B/Wisconsin/1/2010(Yamagata); B/Yamanashi/166/1998(Yamagata); B/Brisbane/33/2008(Victoria); B/Colorado/06/2017(Victoria); B/Hubei-wujiang/158/2009(Yamagata); B/Massachusetts/02/2012(Yamagata); B/Netherlands/234/2011; B/Perth/211/2001(Yamagata); B/Phuket/3073/2013(Yamagata); B/Texas/06/2011(Yamagata); B/HongKong/05/1972; B/Harbin/7/1994(Victoria); B/Washington/02/2019(Victoria); B/Perth/211/2011, 또는 이들의 임의의 조합의 유래인,
방법, 또는 항체 또는 항원 결합 단편, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 벡터, 숙주 세포, 인간 B 세포, 및/또는 조성물.
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