KR20230131237A - 피리돈 다중 융합 고리계 유도체 및 이의 용도 - Google Patents

피리돈 다중 융합 고리계 유도체 및 이의 용도 Download PDF

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KR20230131237A
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케빈 엑스 첸
지앤 시옹
징징 왕
구오핑 후
진신 리우
유 한
지앤 리
슈후이 첸
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파에노 테라퓨틱스 씨오., 엘티디.
메드샤인 디스커버리 아이엔씨.
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Abstract

피리돈 다중 융합 고리계 유도체 및 이의 용도를 제공하며, 구체적으로 식(VI)으로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.

Description

피리돈 다중 융합 고리계 유도체 및 이의 용도
본 발명은 하기의 우선권을 주장한다.
CN 202110024885.9, 출원일: 2021년 01월 08일;
CN 202110264686.5, 출원일: 2021년 03월 11일;
CN 202110513447.9, 출원일: 2021년 05월 11일.
본 발명은 피리돈 다중 융합 고리계 유도체 및 이의 용도에 관한 것이며, 구체적으로 식(VI)으로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.
유행성 감기 바이러스, 즉 인플루엔자 바이러스(influenza virus, IFV)는 사람과 동물에서 인플루엔자를 유발할 수 있는 분절된 단일 가닥 안티센스 RNA 바이러스이다. 인플루엔자 바이러스는 매우 높은 이환율과 사망률을 유발할 수 있으며, 특히 A형 인플루엔자 바이러스는 1918년 내지 1920년의 “스페인 인플루엔자”(H1N1 아형), 1957년 내지 1958년의 “아시아 인플루엔자”(H2N2 아형), 1968년 내지 1969년의 “아시아 인플루엔자”(H3N2 아형), 1977년 내지 1978년의 “홍콩 인플루엔자”(H1N1 아형) 및 2009년 3월에 멕시코에서 처음 발생한 A형 H1N1 인플루엔자와 같은 세계적인 유행병을 일으킬 수 있다. 인플루엔자의 대규모 발병으로 수천 명의 사망자가 발생하여, 엄청난 사회적 공황을 일으키고 사회적 불안을 증폭시켰다.
A형 인플루엔자 바이러스는 단일 음성 가닥 RNA 바이러스이며 게놈은 8개의 단백질을 암호화하는 8개의 단편으로 나뉜다. 인플루엔자 바이러스 게놈 단편의 5' 말단과 3' 말단은 고도로 보존되어 있으며, 상기 2개 말단의 서열은 상보적으로 스템-루프 구조를 형성하며, 상기 구조는 바이러스 RNA 복제를 개시할 때 중요한 역할을 발휘한다. 바이러스의 각 유전자 단편이 암호화하는 단백질의 크기가 다르고, 인플루엔자 바이러스의 수명 주기에서 상이한 역할을 하며, 먼저 다음과 같이 몇 가지 주요 단백질의 기본 기능을 소개한다. 인플루엔자 바이러스의 HA는 인플루엔자 바이러스가 숙주 수용체를 인식하는 리간드로서, 세포 표면의 바이러스의 특이성 수용체와 결합하고 바이러스 외막과 세포내 체막의 융합을 매개하여 바이러스 뉴클레오캡시드를 방출하여 세포질로 진입한다. 인플루엔자 바이러스의 수용체는 특이성을 가지며, A형 인플루엔자 바이러스의 수용체는 시알로당단백질이다. 인플루엔자 바이러스의 NA 단백질은 바이러스 입자가 숙주 세포 표면에서 계속 응집할 수 없도록 복제 과정에서 바이러스 입자 표면의 시알산을 제거할 수 있어 비리온의 방출에 유리하고 더 많은 숙주 세포를 추가로 감염시킨다.
인플루엔자 바이러스의 M2 단백질의 역할: 인플루엔자 바이러스의 HA 단백질이 시알산에 결합되어 인플루엔자 바이러스가 숙주 세포에 의해 엔도사이토시스된다. 포식 소포의 산도 및 알칼리도는 바이러스의 탈피에 매우 중요한 역할을 하며, 바이러스 막에 있는 M2 단백질의 이온 채널은 포식 소포의 pH 값을 점차적으로 감소시킬 수 있어, pH 값이 5.0 내지 6.0으로 떨어질 때, HA2 단백질의 구조 변화를 유발하고, HA2 단백질의 아미노기 말단에 위치한 융합 펩타이드를 이동시켜 융합 과정을 활성화시킴으로써, 바이러스의 이중지질막과 세포막을 융합시키고 바이러스 입자 내부의 RNPs를 숙주 세포질로 방출시킨다. M2 단백질은 A형 인플루엔자 바이러스에서만 발견되는 막관통 이온 채널로, 이의 일부가 바이러스 외막 표면까지 확장되어 있다.
인플루엔자 바이러스 단백질의 합성도 숙주 세포의 번역 기전을 사용하며, 심지어 바이러스는 숙주 단백질의 번역을 중단하여 자체 단백질의 합성을 빠르게 할 수 있다. 특이적 아데닐라아제에 의해 완성되는 숙주 세포 mRNA의 폴리아데닐화와는 달리, 바이러스 mRNA의 아데닐산 테일은 음성 가닥의 vRNA에서 연속적인 5 내지 7개의 우라실의 전사에 의해 형성된다. 바이러스의 각 메신저 RNA(mRNA)의 캡핑은 유사한 방식으로 완성된다. PA 및 PB2 단백질은 숙주 pre-mRNA 전사체의 5' 캡 프라이머를 포획하여 바이러스 mRNA의 합성을 시작하고, 이 과정을 “캡 스내칭(cap snatching)”이라고 하며, 주로 바이러스의 RNA 의존성 RNA 폴리머라제(RdRp)에 의해 완성되며, 이의 PA 서브 유닛은 RNA 엔도뉴클레아제 활성을 가지고 있어 숙주 mRNA를 절단하는 역할을 한다. 폴리아데닐화 과정과 캡핑 과정을 완료하면 바이러스의 mRNA가 핵에서 나와 세포질로 진입하고 숙주 세포의 mRNA처럼 번역되며, 바이러스 vRNA 단편의 핵 수출은 바이러스의 M1 단백질과 NS2 단백질에 의해 매개되며, M1 단백질은 vRNA 및 NP 단백질과 상호 작용할 수 있을 때, 핵 수출 단백질 NS2와도 동시에 상호 작용할 수 있으며; 이로부터 핵 수출 단백질 NS2는 M1-RNP가 핵 단백질 형태로 핵에서 나와 숙주 세포의 세포질로 진입하도록 매개한다.
인플루엔자는 생산성 및 관련 의료 자원 손실로 인한 직접적 비용 및 예방 조치에 대한 간접적 비용이 생성된다. 미국에서, 인플루엔자로 인해 누적 연간 약 100억 달러의 손실을 초래하고 있으며, 향후 인플루엔자 대유행은 수천억 달러의 직접적 및 간접적 비용을 초래할 것으로 추정된다. 예방 비용도 매우 높으며, 전 세계의 각국 정부는 H5N1 조류 인플루엔자의 대유행 가능성에 대한 준비 및 계획, 약물과 백신의 관련된 비용 및 구입, 재난 훈련의 개발 및 국경 통제를 개선하기 위한 관련 전략을 위해 이미 수십억 달러를 지출하였다.
현재 인플루엔자의 치료 옵션에는 백신의 접종 및 항 바이러스 약물로 화학 요법 및 화학 예방을 수행하는 것이 포함된다. 예를 들어 어린이와 노인, 또는 천식, 당뇨병 또는 심장병이 있는 사람 등 고위험군에게 항인플루엔자의 백신의 접종을 권장하는 경우가 많지만 백신의 접종을 받는다고 하여 독감에 걸리는 것을 완전히 피할 수는 없다. 계절마다 일부 특정 인플루엔자 균주에 대한 백신이 다시 제조되고 있지만 해당 계절 동안 전 세계에서 자발적으로 감염되는 사람의 모든 종류의 바이러스 변종을 포괄하는 것은 불가능하다. 또한 인플루엔자 바이러스는 어느 정도의 항원 드리프트가 발생하기 때문에, 하나 이상의 바이러스가 단일 세포를 감염시키면, 게놈에 있는 8개의 개별 vRNA 단편이 혼합되거나 재편성되며, 유도된 바이러스 유전학에서의 급격한 변화는 항원의 전환을 일으키고 바이러스가 새로운 숙주 종을 감염시키고 보호 면역을 빠르게 극복할 수 있도록 한다.
항바이러스 약물은 또한 인플루엔자의 치료에 사용될 수 있으며, 여기서 오셀타미비르(타미플루)와 같은 뉴라미니다제 억제제는 A형 인플루엔자 바이러스에 대한 효과가 유의하지만 임상 관찰을 통해 이러한 유형의 뉴라미니다제 억제제에 대해 약물 내성이 있는 바이러스 균주가 나타난 것을 발견하였다. 항인플루엔자 바이러스 분야에서 임상적으로 A형 인플루엔자 치료에 단일 약물을 사용하는 것을 지원할 수 있거나 이미 시판되고 있는 다른 작용 기전을 가진 항인플루엔자 바이러스 약물과 병용하여 A형 인플루엔자의 예방 및 치료에 사용할 수 있는 새로운 작용 기전을 가진 항인플루엔자 바이러스 약물이 시급히 필요하다. 여기서 WO2016175224는 S-033447 및 이의 전구약물인 S-033188과 같은 RNA 중합효소 PA 서브 유닛 억제제를 보고하였다.
전구약물:
본 발명은 식(VI)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
,
상기 식에서,
R7은 H 및 에서 선택되고;
R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
R9는 H에서 선택되고, E1은 Se에서 선택되고, X1은 CR10R11에서 선택되고, R10 및 R11은 이에 공동으로 연결된 원자와 함께 C3-5사이클로알킬을 형성하며;
또는, X1 및 R9는 이에 연결된 원자와 함께 를 형성하고, p는 0 및 1에서 선택되고, E1 및 E2 중 하나는 Se에서 선택되고, 다른 하나는 S 및 O에서 선택되며;
R12는 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, -COOH, C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노에서 선택되고, 상기 C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노는 각각 독립적으로 1, 2 또는 3개의 Rb에 의해 임의로 치환되고;
T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 CH 및 N에서 선택되고;
q는 0 및 1에서 선택되고;
t는 0, 1, 2, 3 및 4에서 선택되고;
각 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, 및 E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, 각 R12가 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되는 것이다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 각 R12는 각각 독립적으로 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R8은 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2 및 에서 선택되고, 상기 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되며, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R8은 CH3, CH2CH3, CH(CH3)2 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R8은 CH3 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R7은 H, , , 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R7은 H, 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R7은 H 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 E1은 Se에서 선택되고, E2는 O에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 에서 선택되고, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, -COOH, C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노에서 선택되고, 상기 C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노는 각각 독립적으로 1, 2 또는 3개의 Rb에 의해 임의로 치환되며, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 , , 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R5는 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R6은 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 , , 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 , , 및 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 구조단위 는 에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
상기 식에서,
R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R7은 H 및 에서 선택되고;
R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
R9는 H에서 선택되고, E1은 Se에서 선택되고, X1은 CR10R11에서 선택되고, R10 및 R11은 이에 공동으로 연결된 원자와 함께 C3-5사이클로알킬을 형성하며;
또는, X1 및 R9는 이에 연결된 원자와 함께 를 형성하고,
E1 및 E2 중 하나는 Se에서 선택되고, 다른 하나는 S 및 O에서 선택되고;
T1은 CH 및 N에서 선택되고;
p 및 q는 각각 독립적으로 0 및 1에서 선택되고;
각 Ra는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, 및 E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, R5 및 R6은 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
p, q, E1, E2, T1, R5, R6 및 R7은 본 발명에 정의된 바와 같으며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
p, q, E1, E2, R5, R6 및 R7은 본 발명에 정의된 바와 같으며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
p, q, E1, E2, R5, R6 및 R7은 본 발명에 정의된 바와 같으며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
m은 0 및 1에서 선택되고;
q, R5, R6, R7 및 R8은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R1 및 R2는 각각 독립적으로 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R5 및 R6은 각각 독립적으로 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서, R1, R2, R5, R6, R7 및 R8은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
R1, R2, R3 및 R4는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
n 및 m은 각각 독립적으로 0 및 1에서 선택되고;
조건은, 식(I-1) 및 식(I-2)에서, m이 1에서 선택되는 경우, R1 및 R2가 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되며;
q, R5, R6 및 R8은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R1 및 R2는 각각 독립적으로 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R3 및 R4는 각각 독립적으로 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
및 ,
상기 식에서,
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 및 R8은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명은 식(V)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며,
상기 식에서,
R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R7은 H 및 에서 선택되고;
R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
R9는 H에서 선택되고;
X1은 CR10R11에서 선택되고, R10 및 R11은 이에 공동으로 연결된 원자와 함께 C3-5사이클로알킬을 형성하고;
또는, X1 및 R9가 연결되어 함께 를 형성하고;
E1은 S 및 Se에서 선택되고;
E2는 O 및 Se에서 선택되고, 및 E1 및 E2 중 적어도 하나는 Se에서 선택되며;
T1은 CH 및 N에서 선택되고;
p 및 q는 각각 독립적으로 0 및 1에서 선택되고;
각 Ra는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, 및 E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, R5 및 R6이 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명은 식(IV)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
상기 식에서,
T1은 CH 및 N에서 선택되고;
E1은 S 및 Se에서 선택되고;
E2는 O 및 Se에서 선택되고, 및 E1 및 E2 중 적어도 하나는 Se에서 선택되며;
R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R7은 H 및 에서 선택되고;
R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
p 및 q는 각각 독립적으로 0 및 1에서 선택되고;
각 Ra는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, R5 및 R6이 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 하기 식에서 선택되고,
상기 식에서,
p, q, E1, E2, R5, R6 및 R7은 본 발명에 정의된 바와 같으며;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명은 식(III)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
상기 식에서,
T1은 CH 및 N에서 선택되고;
R1은 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R2는 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
m은 0 및 1에서 선택되고;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명은 식(II)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
상기 식에서,
R3은 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R4는 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
n은 0 및 1에서 선택되고;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명은 식(I)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
상기 식에서, R1, R2 및 m은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명은 식(I)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하고,
상기 식에서,
R1은 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
R2는 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
m은 0 및 1에서 선택되고;
"*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R1은 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R2는 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R3은 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일부 양태에 있어서, 상기 R4는 F에서 선택되고, 다른 변량은 본 발명에 정의된 바와 같다.
본 발명의 또 다른 일부 양태는 상기 변량을 임의로 조합하여 얻는다.
본 발명은 하기 식으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
및 .
본 발명은 인플루엔자 바이러스 관련 질환을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 더 제공한다.
발명의 효과
본 발명의 화합물은 RNA 중합효소 억제제로서, 세포 수준에서 인플루엔자 바이러스의 복제를 억제하는 시험에서 긍정적인 효과를 나타내고, 동물 체내 약효 모델에서 우수한 체중 보호를 나타내고, 회복 시간이 빠르며, 혈장 단백질 결합률 시험 결과는 본 발명의 화합물이 혈장에서 중간 정도의 혈장 단백질 결합률을 가짐을 나타내며, PK 결과는 우수한 약동학적 특성을 가지고 우수한 약물 제조 특성을 가짐을 나타낸다.
도 1은 S-033447과 단백질(PDB ID: 6FS6)의 3D 결합 모드이다.
도 2는 S-033447과 아미노산 및 금속 이온의 상호 작용을 나타낸다.
도 3은 S-033447 저에너지 형태의 이면각이다.
도 4는 회전하는 과정에서 S-033447의 2개 이면각의 에너지의 변화이다.
도 5는 화합물 A(어두운 색)와 S-033447(밝은 색)의 저에너지 형태의 비교이다.
도 6은 회전하는 과정에서 화합물 A의 2개 이면각의 에너지의 변화이다.
도 7은 화합물 B(어두운 색)와 S-033447(밝은 색)의 저에너지 형태의 비교이다.
도 8은 회전하는 과정에서 화합물 B의 2개 이면각의 에너지의 변화이다.
관련 정의
달리 명시되지 않는 한, 본문에서 사용된 하기 용어와 문구는 다음과 같은 의미를 가진다. 하나의 특정된 용어 또는 문구는 특별히 정의되지 않는 상황에서 확정되지 않거나 명확하지 않은 것으로 간주되어서는 아니되며, 통상적인 의미로 이해되어야 한다. 본문에서 상품 명칭이 나타나면 이는 대응되는 상품 또는 이의 활성 성분을 나타낸다.
여기에서 사용되는 용어 “약학적으로 허용 가능한”은 신뢰 가능한 의학 판단 범위 내에서 그러한 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형은 인간과 동물의 조직과 접촉에 사용하기에 적합하되, 과도한 독성, 자극성, 과민성 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없으며 합리적인 이익/위험 비율을 의미한다.
용어 “약학적으로 허용 가능한 염”은 본 발명 화합물의 염으로, 본 발명에서 발견된 특정 치환기를 지닌 화합물과 상대적으로 무독의 산 또는 염기로 제조된다. 본 발명의 화합물에 상대적으로 산성인 관능기가 함유될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 염기와 이러한 화합물을 접촉시키는 방식으로 염기 부가염을 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염기 부가염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘염 또는 유사한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물에 상대적인 염기성 관능기가 함유될 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매에서 충족한 양의 산과 이러한 화합물을 접촉시키는 방식으로 산 부가염을 얻을 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 산 부가염의 예로 무기산염을 포함하고, 상기 무기산은 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 탄산수소기, 인산, 인산일수소기, 인산이수소기, 황산, 황산수소기, 요오드화수소산, 아인산염 등을 포함하고; 및 유기산염을 포함하며, 상기 유기산은 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말레산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베린산, 푸마르산, 락트산, 만델린산, 프탈산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 구연산, 타르타르산 및 메탄술폰산과 같은 유사한 산을 포함하고; 또한 아미노산(예를 들어 아르기닌 등)의 염, 및 글루쿠론산과 같은 유기산의 염을 더 포함한다. 본 발명의 일부 특정 화합물은 염기성 및 산성 관능기를 포함하여 임의의 염기 또는 산 부가염으로 전환될 수 있다.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 염은 산기 또는 염기를 함유한 모체 화합물로 통상적인 화학적 방법으로 합성할 수 있다. 일반적인 경우, 이러한 염의 제조 방법은, 물 또는 유기 용매 또는 양자의 혼합물에서 유리산 또는 염기 형식의 이러한 화합물을 화학적으로 칭량된 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조하는 것이다.
본 발명의 화합물은 특정된 기하적 또는 입체 이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에서 예상한 이러한 화합물은 거울상 이성질체 또는 부분입체 이성질체가 풍부하게 함유된 혼합물과 같은 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미체 혼합물과 다른 혼합물을 포함하고, 모든 이러한 혼합물은 전부 본 발명의 범위에 속한다. 알킬기 등 치환기에는 다른 비대칭 탄소 원자가 존재할 수 있다. 이들 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
본 발명의 화합물은 상기 화합물을 구성하는 하나 또는 다수의 원자 상에 비천연적 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 트리튬 (3H), 요오드-125(125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 화합물을 표지할 수 있다. 다른 예로, 중수소로 수소를 대체하여 중수소화 약물을 형성할 수 있으며, 중수소와 탄소로 구성된 결합은 일반적인 수소와 탄소로 구성된 결합보다 강하고, 중수소화 되지 않은 약물과 비교하여 중수소화 약물은 부작용을 줄이고 약물 안정성을 증가시키며 약물의 효능을 높이고 약물의 생물학적 반감기를 연장하는 등 우세를 가지고 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소로 조성된 변환은 방사성이든 아니든 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.
용어 “임의로” 또는 “선택적으로”는 후술되는 상기 서술에는 상기 사건 또는 상황이 발생된 경우 및 상기 사건 또는 상황이 발생되지 않는 경우를 포함하는 사건 또는 상황이 나타날 수 있지만 무조건 나타나는 것은 아닌 것을 지칭한다.
용어 “치환된”은 특정 원자의 임의의 하나 또는 복수개의 수소 원자가 치환기에 의해 치환되는 것을 지칭하고, 치환기는 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환 후의 화합물이 안정적인 중수소 및 수소의 변이체를 포함할 수 있다. 치환기가 케톤기(즉 =O)일 경우, 두 개의 수소 원자가 치환되는 것을 의미한다. 케톤기 치환은 방향기에서 발생하지 않는다. 용어 “임의로 치환된”은 치환되거나 치환되지 않을 수 있음을 의미하며, 달리 명시되지 않는 한, 치환기의 유형 및 수는 화학적으로 실현 가능한 기준에서 임의적일 수 있다.
화합물의 조성 또는 구조에서 임의의 변량(예를 들어 R)이 한번 이상 나타날 경우, 이의 각각의 경우에서의 정의는 모두 독립적이다. 따라서, 예를 들어 만약 하나의 라디칼이 0 내지 2 개의 R에 의해 치환되면, 상기 라디칼은 선택적으로 두 개 이하의 R에 의해 치환 될 수 있고, 각각의 경우에서의 R은 모두 독립적인 선택항이다. 이 외에, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성하는 경우에서만 허용된다.
-(CRR)0-와 같이 하나의 연결기의 개수가 0일 경우, 상기 연결기는 단일 결합을 나타낸다.
그중의 하나의 변량이 단일 결합에서 선택되는 경우, 상기 두 개의 라디칼이 직접 연결됨을 나타내며, 예를 들어 A-L-Z에서 L이 단일 결합인 경우 상기 구조는 실제적으로 A-Z임을 나타낸다.
나열된 연결기의 결합 방향을 명시하지 않은 경우 결합 방향은 임의적이며, 예를 들어, 에서 연결기 L은 -M-W-이고, 이때 -M-W-는 고리 A와 고리 B를 왼쪽에서 오른쪽으로 읽기 순서와 같은 방향으로 연결하여 를 형성 할 수 있고, 고리 A와 고리 B를 왼쪽에서 오른쪽으로 읽기 순서와 반대 방향으로 연결하여 를 형성할 수 있다. 상기 연결기, 치환기 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정적인 화합물을 생성할 경우에만 허용된다.
달리 명시되지 않는 한, 어느 하나의 라디칼에 하나 또는 복수개의 연결 가능한 부위가 있을 경우, 상기 라디칼의 임의의 하나 또는 복수개의 부위는 화학 결합을 통해 다른 라디칼에 연결될 수 있다. 화학 결합의 연결 형태는 무정위이고, 연결 가능한 부위에 H 원자가 존재하는 경우, 화학 결합 연결 시, 해당 부위의 H 원자의 수는 연결된 화학 결합의 수에 따라 상응하게 감소되어 상응한 원자가의 라디칼로 변한다. 상기 부위와 다른 라디칼이 연결된 화학 결합은 직선 실선 결합(), 직선 점선 결합(), 또는 물결선()으로 나타낼 수 있다. 예를 들어, -OCH3의 직선 실선결합은 상기 라디칼 중의 산소 원자를 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타내고; 의 직선 점선결합은 상기 라디칼 중의 질소 원자의 양단을 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타내며; 의 물결선은 상기 페닐기 라디칼 중의 1부위 및 2 부위의 탄소 원자를 통해 다른 라디칼에 연결되는 것을 나타낸다; 는 상기 피페리디닐기의 임의의 연결 가능한 부위가 하나의 화학 결합을 통해 다른 라디칼에 연결될 수 있음을 의미하며, 적어도 , , , 의 4개의 연결 형태가 포함되고, -N-에 H원자를 그리더라도 는 여전히 의 연결 형태의 라디칼을 포함하며, 하나의 화학 결합만 연결된 경우, 상기 부위의 H는 이에 따라 하나가 감소되어 상응하는 1가 피페리디닐기로 된다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 “C1-3알킬기”는 직쇄 또는 분지쇄의 1 내지 3개의 탄소원자로 구성된 포화 탄화수소기를 나타낸다. 상기 C1-3알킬기는 C1-2 및 C2-3알킬기 등을 포함하며; 1가(예를 들어 메틸기), 2가(예를 들어 메틸렌기) 또는 다가(예를 들어 메틴기)일 수 있다. C1-3알킬기의 예로는 메틸기(Me), 에틸기(Et), 프로필기(예를 들어, n-프로필기 및 이소프로필기를 포함)등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 “C1-3알콕시기”는 1개의 산소원자를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된 1 내지 3개의 탄소원자를 포함하는 알킬기를 나타낸다. 상기 C1-3알콕시기는 C1-2, C2-3, C3 및 C2알콕시기 등을 포함한다. C1-3알콕시기의 예로는 메톡시기, 에톡시기, 프로폭시기(n-프로폭시기 및 이소프로폭시기를 포함) 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 “C1-3알킬아미노기”는 아미노기를 통해 분자의 나머지 부분에 연결된 1 내지 3개의 탄소원자를 포함하는 알킬기를 나타낸다. 상기 C1-3알킬아미노기는 C1-2, C3 및 C2알킬아미노기 등을 포함한다. C1-3알킬아미노기의 예로는 -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CH3, -N(CH3)CH2CH3, -NHCH2CH2CH3, -NHCH2(CH3)2 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 “C3-5사이클로알킬기”는 3 내지 5개의 탄소원자로 구성된 포화 고리형 탄화수소기를 나타내며, 이는 단일 고리계이며, 상기 C3-5사이클로알킬기는 C3-4 및 C4-5사이클로알킬기 등을 포함하며; 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. C3-5사이클로알킬기의 예로는 사이클로프로필기, 사이클로부틸기, 사이클로펜틸기 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, Cn-n+m 또는 Cn-Cn+m 은 n 내지 n+m개의 탄소의 임의의 하나의 구체적인 경우를 포함하며, 예를 들어 C1-12는C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12를 포함하며, 또한 n 내지 n+m 중 임의의 하나의 범위도 포함하며, 예를 들어 C1-12는 C1-3, C1-6, C1-9, C3-6, C3-9, C3-12, C6-9, C6-12 및 C9-12 등을 포함하며; 마찬가지로 n원 내지 n+m원은 고리의 원자 수가 n 내지 n+m개임을 나타내며, 예를 들어 3 내지 12원 고리는 3원 고리, 4원 고리, 5원 고리, 6원 고리, 7원 고리, 8원 고리, 9원 고리, 10원 고리, 11원 고리 및 12원 고리를 포함하며, 또한 n 내지 n+m 중 임의의 하나의 범위를 포함하고, 예를 들어 3원 내지 12원 고리는 3원 내지 6원 고리, 3원 내지 9원 고리, 5원 내지 6원 고리, 5원 내지 7원 고리, 6원 내지 7원고리, 6원 내지 8원 고리 및 6원 내지 10원 고리 등을 포함한다.
용어 “이탈기”는 다른 관능기 또는 원자에 의해 치환 반응(예를 들어 친핵성 치환 반응)을 통해 치환된 관능기 또는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 대표적인 이탈기로 트리플루오로메탄술포네이트; 염소, 브롬, 요오드; 메탄술포네이트, 토실레이트, p-브로모벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트과 같은 술포네이트기; 아세톡시기, 트리플루오로아세톡시기와 같은 아실옥시기 등을 포함한다
용어 “보호기”는 “아미노 보호기”, “하이드록실 보호기” 또는 “메르캅토 보호기”를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 용어 “아미노 보호기”는 아미노기 질소 위치에서 부반응을 방지하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 아미노 보호기로 포르밀기; 예를 들어 알카노일기 (예를 들어 아세틸기, 트리클로로아세틸기 또는 트리플푸오로아세틸기)와 같은 아실기; tert-부톡시카르보닐기(Boc)와 같은 알콕시카르보닐기; 벤질옥시카르보닐기(Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카르보닐기(Fmoc)와 같은 아릴메톡시카르보닐기; 벤질기(Bn), 트리페닐메틸기(Tr), 1,1-비스-(4'-메톡시페닐)메틸기와 같은 아릴메틸기; 트리메틸실릴기(TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴기(TBS)와 같은 실릴기 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 용어 “하이드록실 보호기”는 하이드록실의 부반응을 방지하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 하이드록실 보호기로는 메틸기, 에틸기 및 tert-부틸기와 같은 알킬기; 알카노일기(예를 들어 아세틸기)와 같은 아실기; 벤질기(Bn), p-메톡시벤질기(PMB), 9-플루오레닐메틸기(Fm) 및 디페닐메틸기(디페닐메틸기, DPM)와 같은 아릴기메틸기; 트리메틸실릴기(TMS) 및 tert-부틸디메틸실릴기(TBS)와 같은 실릴기 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화합물은 본 기술분야의 기술자들에게 공지된 다양한 합성 방법으로 제조될 수 있고, 하기에서 예를 든 구체적인 실시 형태, 이를 기타 화학 합성 방법과 결합하여 형성한 실시 형태 및 본 기술분야의 기술자들에게 공지된 등가 교체 방식을 포함하며, 바람직한 실시 형태로 본 발명의 실시예를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화합물의 구조는 본 기술분야의 기술자에게 공지된 통상적인 방법으로 확인할 수 있으며, 본 발명이 화합물의 절대 배치에 관련된 경우, 상기 절대 배치는 본 기술분야의 통상적인 기술적 수단에 의하여 확인할 수 있다. 예를 들어, 단결정 X선 회절법(SXRD)은 배양된 단결정을 Bruker D8 venture 회절계로 수집하여 회절 강도 데이터를 수집하고, 광원은 CuKα 방사선이고, 스캐닝 모드: φ/ω스캔하고, 관련 데이터를 수집한 다음 직접법(Shelxs97)을 사용하여 결정 구조를 분석하면 절대 배치를 확인할 수 있다.
본 발명은 하기와 같은 약칭을 사용한다: DMAC는 N,N-디메틸아세트아미드를 나타내고, PG는 프로필렌 글리콜을 나타내고, HP-β-CD는 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린을 나타내며, Solutol HS-15는 폴리에틸렌 글리콜(15)-하이드록시스테아레이트를 나타낸다.
본 발명에서 사용된 모든 용매는 시판되는 것이다. 화합물은 당업계의 통상적인 명명원칙 또는 ChemDraw®소프트웨어를 사용하여 명명되며, 시판되는 화합물은 공급업체의 목록명칭을 사용한다.
아래 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명에 대한 어떠한 불리한 제한을 의미하는 것이 아니다. 본 명세서에서는 본 발명을 상세히 설명하였고, 이의 구체적인 실시예도 개시하였으나 본 기술분야의 통상의 기술자라면 본 발명의 요지와 범위를 벗어나지 않는 범위에서 본 발명의 구체적인 실시 형태를 다양하게 변화 및 개선하는 것은 명백할 것이다.
참조예 1
합성 방법:
참조예 2
합성 방법:
SHIONOGI & CO., LTD.의 항인플루엔자 약물 S-033447을 참조 화합물로 하여, Schrdinger사의 Maestro 소프트웨어의 Macromodel 모듈을 통해 S-033447의 저에너지 형태를 계산하였다. 저에너지 형태에서 피리도헥사하이드로피리미딘(이하 모핵이라고 함)의 이면각(dehidal 1)은 -146.6°이고, 모핵과 2,5-디하이드로티오펜의 이면각(dehidal 2)은 56.8°(도 3을 참조)이다. S-033447이 이의 저에너지 형태에서 이의 단백질 결합 모드 활성 형태로 변환(모핵이 -146.6°에서 -153.7°로 회전하고，2,5-디하이드로티오펜과 모핵의 이면각이 56.8°에서 55.0°로 회전함)하려면 0.8kcal/mol의 에너지 장벽을 극복하여야 한다(도 4를 참조). S-033447과 단백질(PDB ID: 6FS6)의 3D 결합 모드는 도 1에 도시된 바와 같고, S-033447과 아미노산 및 금속 이온의 상호 작용은 도 2에 도시된 바와 같다.
실시예 1
S-033447 및 6FS6 단백질의 활성 구조적 결합 모드를 관찰함으로써, S-033447의 벤조 2,5-디하이드로티에노디플루오로벤질 단편이 자유롭게 회전하는 동시에, 피리도헥사하이드로피리미딘 모핵 사이에 형성된 가장 낮은 에너지 장벽 형태(저에너지 형태)가 S-033447 및 6FS6 단백질의 공결정에서의 단백질 결합 모드 형태(활성 형태)와 비교적 일치함을 발견하여, 이는 S-033447 및 6FS6 단백질의 높은 결합 활성을 설명하였다. 일반적으로 저분자의 가장 낮은 에너지 장벽 형태(저에너지 형태)와 해당 단백질에서 이의 결합 모드 형태(활성 형태) 사이의 에너지 장벽 차이가 작을수록 해당 저분자가 저에너지 형태에서 해당 단백질의 결합 활성 형태로 변환될 때 손실되는 에너지가 적으며, 화합물이 단백질과 결합하기 보다 용이하고, 이의 결합 활성이 높아짐을 의미한다.
S-033447의 활성 형태를 고정시키고 이의 회전 에너지 장벽을 더욱 낮추기 위해, 원자의 대체를 통해 S-033447의 테트라하이드로피란 단편 및 2,5-디하이드로티오펜 단편의 O와 S를 Se로 대체하여, 상이한 사이클로펜타셀레늄 단편 및 사이클로헥사셀레늄 단편을 수득하고, 이러한 Se 대체 분자의 가장 낮은 에너지 장벽 형태와 S-033447 및 6FS6 단백질 공결정에서의 활성 형태 사이의 에너지 장벽 차이를 탐색하였다.
(1) Macromodel 모듈로 화합물 A 및 화합물 B의 저에너지 형태 회전 이면각 및 회전 에너지 장벽을 계산하였으며 결과는 표 1에 나타낸 바와 같다. 화합물 A(어두운 색)와 S-033447(밝은 색)의 저에너지 형태 비교는 도 5에 도시된 바와 같고, 회전하는 과정에서 화합물 A의 2개 2면각의 에너지의 변화는 도 6에 도시된 바와 같고, 화합물 B(어두운 색)와 S-033447(밝은 색)의 저에너지 형태 비교는 도 7에 도시된 바와 같으며, 회전하는 과정에서 화합물 B의 2개 2면각의 에너지의 변화는 도 8에 도시된 바와 같다.
참고: 이면각 1은 피리도헥사하이드로피리미딘의 이면각이고, 이면각 2는 피리도헥사하이드로피리미딘과 2,5-디하이드로티오펜의 이면각이고, ΔE는 저에너지 형태에서 S-033447의 단백질 결합 모드 활성 형태(이면각 1은 -153.7°이고, 이면각 2는 55.0°임)로의 변환에 소모되는 필요한 에너지 장벽이다.
결론: 화합물 B의 저에너지 형태는 S-033447의 활성 형태와 우수하게 겹쳐졌다. 6FS6 단백질 구조에서 본 발명의 화합물의 결합이 가장 낮은 에너지 장벽은 해당 단백질 구조에서 참조 화합물의 활성 형태에서의 에너지 장벽과 에너지 차이가 비교적 작기 때문에 본 발명의 화합물은 해당 단백질과 더 용이하게 결합하고, 해당 단백질과의 실제 결합에서 참조 화합물과 유사하거나 보다 우수한 결합 활성을 나타낼 수 있었다.
(2) Macromodel 모듈로 화합물 B의 저에너지 형태 회전 이면각을 계산하였으며, 결과는 표 2에 나타낸 바와 같다.
참고: 이면각 1은 피리도헥사하이드로피리미딘의 이면각이고, 이면각 2는 피리도헥사하이드로피리미딘과 2,5-디하이드로셀레노티오펜의 이면각이다.
결론: 화합물 B의 저에너지 형태는 S-033447의 저에너지 형태와 기본적으로 일치하였다.
실시예 2
단계 1: 화합물 2-2의 합성
인산이수소나트륨(13.58g, 113.19mmol)을 물(20mL)에 가하고, 아세토니트릴(10mL), 디페닐디셀레니드(1.18g, 3.77mmol)를 가하고, 아연 분말(986.83mg, 15.09mmol)을 배치로 가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 화합물 2-1(2g, 7.55mmol)을 가하고, 반응 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 케이크를 에틸 아세테이트(10mL×2)로 세척하고, 분액하고, 수상을 에틸 아세테이트(10mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 건조시켰다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=1:0 내지 10:1)하여 화합물 2-2를 수득하였다. MS m/z: 343.0 [M+H]+.
단계 2: 화합물 2-3의 합성
화합물 2-2(1.5g, 4.40mmol)를 메탄올(10mL) 및 물(5mL)에 가하고, 수산화나트륨(527.53mg, 13.19mmol)을 가하고, 반응 용액을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 반응 용액을 1N의 염산으로 pH=7로 조절하고, 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(10mL×2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하고 건조시켜 화합물 2-3을 수득하고, 조질의 생성물을 다음 단계에 직접 사용하였다.
단계 3: 화합물 2-4의 합성
화합물 2-3(1.3g, 3.97mmol)을 폴리인산(13mL)에 가하고, 반응 용액을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 80℃로 냉각시키고, 교반 하에 물(50mL)에 가하고, 5분 동안 계속하여 교반하고, 디클로로메탄(20mL×2)으로 추출하고, 유기상을 합병하고, 물(20mL)로 세척하고, 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 건조시켰다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=1:0 내지 10:1)하여 화합물 2-4를 수득하였다. MS m/z: 310.9 [M+H]+.
단계 4: 화합물 2-5의 합성
화합물 2-4(300mg, 970.34μmol)를 메탄올(6mL)에 가한 다음, 수소화붕소나트륨(110.13mg, 2.91mmol)을 가하고, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1N의 염산으로 pH=7로 조절한 다음, 디클로로메탄(10mL×2)으로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(10mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 건조시켰다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=10:1 내지 2:1)하여 화합물 2-5를 수득하였다.
단계 5: 화합물 2-7의 합성
화합물 2-6(50mg, 152.75μmol)을 에틸 아세테이트(1mL)에 가하고, 화합물 2-5(47.53mg, 152.75μmol)를 가한 다음, 1-프로필인산무수물(388.82mg, 611.00μmol, 363.38μL, 50% 에틸 아세테이트 용액) 및 메탄술폰산(58.72mg, 611.00μmol, 43.50μL)을 가하고 반응 용액을 밤새 환류시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(10mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(5mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(10mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 건조시켰다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(디클로로메탄:메탄올=1:0 내지 10:1)하여 화합물 2-7을 수득하였다. MS m/z: 622.0 [M+H]+.
단계 6: 화합물 2 및 2'의 합성
화합물 2-7(10mg, 16.12μmol)을 N,N-디메틸아세트아미드(0.5mL)에 가하고, 염화리튬(3.42mg, 80.58μmol, 1.65μL)을 가하고, 반응 용액을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴(2mL)로 희석하였다. 조질의 생성물의 반응 용액을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하고 정제(컬럼: Xtimate C18 100×30mm×3μm; 이동상: [A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴]; 구배: 아세토니트릴%: 40% 내지 60%, 8분)하여 화합물 2(머무름 시간 3.205분) 및 화합물 2'(머무름 시간 3.301분)를 수득하였다.
화합물 2(머무름 시간 3.205분), 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.49 (d, J = 7.53 Hz, 1H), 7.23-7.32 (m, 2H), 7.16-7.22 (m, 1H), 7.07-7.15 (m, 1H), 6.85-6.97 (m, 2H), 5.85 (d, J = 7.28 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.39 (dd, J = 2.64, 12.67 Hz, 1H), 4.73 (dd, J = 2.89, 10.16 Hz, 1H), 4.62 (br d, J = 15.56 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 12.80 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 3.14, 11.17 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 3.01, 11.80 Hz, 1H), 3.65 (t, J = 10.54 Hz, 1H), 3.43-3.53 (m, 1H), 3.06-3.17 (m, 1H). MS m/z: 532.1 [M+H] +.
화합물 2'(머무름 시간 3.301분) 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.51 (d, J = 7.28 Hz, 1H), 7.35-7.45 (m, 2H), 7.21-7.33 (m, 2H), 6.94-7.04 (m, 1H), 6.82-6.93 (m, 1H), 6.11 (d, J = 7.53 Hz, 1H), 5.52-5.68 (m, 2H), 4.42-4.58 (m, 2H), 4.16 (d, J = 13.05 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 3.14, 10.92 Hz, 1H), 3.60-3.78 (m, 2H), 3.39-3.52 (m, 1H), 2.65-2.81 (m, 1H). MS m/z: 532.1 [M+H] +.
실시예 3
단계 1: 화합물 3-2의 합성
화합물 3-1(66g, 383.43mmol)을 디클로로메탄(460mL)에 용해시키고, N,N-디메틸포름아미드(280.27mg, 3.83mmol, 295.02μL)를 가하고, 반응 용액에 염화옥살릴(73.00g, 575.15mmol, 50.35mL)을 적가하고, 적가가 완료된 후 반응 용액을 20℃에서 30분 동안 교반한 다음, 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물에 디클로로메탄(460mL)을 가하고, 교반 하에 트리에틸아민(77.60g, 766.87mmol, 106.74mL) 및 N,O-디메틸하이드록실아민염산염(37.40g, 383.43mmol)을 가하고, 반응 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물(100mL)을 가하고, 분액하고, 수상을 디클로로메탄(50mL×2)으로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 각각 희염산(0.2M, 50mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액(50mL) 및 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하여 화합물 3-2를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 클로로포름) δ 7.02-7.05 (m, 2H), 3.81 (brs, 3H), 3.49 (s, 3H), 2.28 (s, 3H).
단계 2: 화합물 3-3의 합성
화합물 3-2(20g, 92.94mmol)를 테트라하이드로푸란(200mL)에 용해시키고, 0℃에서 메틸마그네슘브로마이드(3M, 37.18mL)를 적가하고, 적가가 완료된 후 반응 용액을 20℃로 승온시키고 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 1M의 염산으로 퀀칭시키고, pH를 7로 조절하고, 에틸 아세테이트(100mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 각각 희염산(0.2M, 50mL), 포화 탄산수소나트륨 용액(50mL), 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하여 화합물 3-3을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 클로로포름) δ 7.47-7.50 (m, 1H), 7.03-7.07 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.47 (s, 3H).
단계 3: 화합물 3-4의 합성
화합물 3-3(15g, 88.15mmol)을 피리딘(90mL)에 용해시키고, 이산화셀레늄(19.56g, 176.31mmol)을 가하고, 반응 용액을 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 감압 농축하여 건조시켰다. 조질의 생성물에 물(50mL)을 가하고, 1M의 염산으로 pH를 4로 조절하고, 에틸 아세테이트(50mL×3)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(50mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하여 화합물 3-4를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.64-7.68 (m, 1H), 7.30-7.32 (m, 1H), 2.52 (s, 3H).
단계 4: 화합물 3-5의 합성
화합물 3-4(15g, 74.95mmol)를 디클로로메탄(60mL) 및 메탄올(60mL)에 용해시키고, 온도를 0 내지 20℃로 제어하고, 트리메틸실릴디아조메탄(2M, 44.97mL)을 적가하고, 반응 용액을 20℃에서 2시간 동안 교반한 다음 아세트산(3mL)을 가하고, 5분 동안 교반하였다. 반응 용액을 건조될 때까지 감압 농축하고, 물(50mL)을 가하고, 디클로로메탄(50mL×2)으로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(30mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르, 에틸 아세테이트 비율: 0 내지 20%)하여 화합물 3-5를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 클로로포름) δ 7.51-7.55 (m, 1H), 7.12-7.16 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.54 (s, 3H).
단계 5: 화합물 3-6의 합성
화합물 3-5(5g, 23.35mmol)를 1,2-디클로로에탄(50mL)에 용해시키고, N-브로모숙신이미드(8.31g, 46.69mmol) 및 아조비스이소부티로니트릴(383.37mg, 2.33mmol)을 가하고, 반응 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 각각 포화 아황산나트륨 용액(20mL), 물(20mL) 및 포화 식염수(20mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르，에틸 아세테이트 비율: 0 내지 5%)하여 화합물 3-6을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 클로로포름) δ 7.61-7.64 (m, 1H), 7.26-7.31 (m, 1H), 4.94 (s, 2H), 3.99 (s, 3H).
단계 6: 화합물 3-7의 합성
인산이수소나트륨(11.52g, 96.05mmol)을 물(60mL)에 용해시킨 후, 아세토니트릴(30mL)을 가하고, 3-(3-피리딜디셀레닐)피리딘(3.62g, 11.53mmol)을 가하고, 아연 분말(1.88g, 28.82mmol)을 배치로 가하고, 반응 용액을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 화합물 3-6(5.63g, 19.21mmol)을 가하고, 반응 용액을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고, 여액을 에틸 아세테이트(30mL×2)로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 포화 식염수(30mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르，에틸 아세테이트 비율: 0 내지 60%)하여 화합물 3-7을 수득하였다. MS(ESI) m/z: 373.8 [M+H]+.
단계 7: 화합물 3-8의 합성
화합물 3-7(4.2g, 11.28mmol)을 디클로로메탄(80mL)에 용해시키고, 데스(Dess)-마틴(Martin) 페리오디난(7.18g, 16.93mmol)을 가하고, 반응 용액을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 아황산나트륨 용액(30mL)을 가하고, 5분 동안 교반하였다. 디클로로메탄(30mL×2)으로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(30mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르，에틸 아세테이트 비율: 0 내지 50%)하여 화합물 3-8을 수득하였다. MS(ESI) m/z: 371.9 [M+H]+.
단계 8: 화합물 3-9의 합성
화합물 3-8(2.9g, 7.83mmol)을 테트라하이드로푸란(16mL)에 용해시키고, 수산화나트륨 수용액(626.67mg, 15.67mmol，4mL)을 가하고, 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 농축하여 대부분의 테트라하이드로푸란을 제거하고, 수상을 1N의 염산으로 pH를 6으로 조절하고, 고체를 여과하고, 케이크를 감압 하에 흡입 건조시켜 화합물 3-9를 수득하였다. MS(ESI) m/z: 357.9 [M+H]+.
단계 9: 화합물 3-10의 합성
화합물 3-9(2.3g, 6.46mmol)를 디메틸설폭사이드(23mL)에 용해시키고, 각각 과황산암모늄(2.95g, 12.91mmol,), 질산은(109.69mg, 645.74μmol) 및 농황산(633.34mg, 6.46mmol)을 가하고, 반응 용액을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 각각 포화 탄산수소나트륨 수용액(20mL), 물(10mL) 및 디클로로메탄(20mL)을 가하고, 5분 동안 교반하고, 여과하고, 여액을 분액하고, 수상을 디클로로메탄(10mL)으로 추출하였다. 유기상을 합병하고, 포화 식염수(30mL×3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르, 에틸 아세테이트 비율: 0 내지 50%)하여 화합물 3-10을 수득하였다. MS(ESI) m/z: 311.8 [M+H]+.
단계 10: 화합물 3-11의 합성
화합물 3-10(390mg, 1.26mmol)을 이소프로판올(8mL)에 용해시키고, 수소화붕소나트륨(95.14mg, 2.51mmol)을 가하고, 반응 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 1N의 염산으로 pH를 7로 조절하고, 에틸 아세테이트(15mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(10mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(에틸 아세테이트/석유 에테르, 에틸 아세테이트 비율: 0 내지 50%)하여 화합물 3-11을 수득하였다. MS(ESI) m/z: 313.8 [M+H]+.
단계 11: 화합물 3-12의 합성
화합물 3-11(330mg, 1.06mmol)을 디클로로메탄(6mL)에 용해시키고, 염화티오닐(251.53mg, 2.11mmol, 153.37μL)을 가하고, 반응 용액을 20℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 건조될 때까지 감압 농축하여 화합물 3-12를 수득하고, 조질의 생성물을 다음 단계의 반응에 직접 사용하였다.
단계 12: 화합물 3-13 및 3-13'의 합성
화합물 2-6(340mg, 1.04mmol)을 아세토니트릴(6mL)에 용해시키고, 화합물 3-12(343.41mg, 1.04mmol) 및 탄산세슘(676.86mg, 2.08mmol)을 가하고, 반응 용액을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(5mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(5mL×3)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(5mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼으로 정제(메탄올/디클로로메탄, 메탄올 비율: 0 내지 5%)하여 수득된 화합물을 초임계 유체 크로마토그래피 컬럼으로 검출(분석 방법: 컬럼 유형: Chiralpak AD-3 (50mm×4.6mm, 3μm); 이동상: [A: 이산화탄소, B: 0.05% 디에틸아민/에탄올]; 구배: 이동상 B 농도가 2분 내에 5%에서 40%로 증가하고, 40%에서 1.2분 동안 유지한 다음, 5%에서 0.8분 동안 유지함)하여 혼합물로 분석되며, 카이랄 분리를 사용(컬럼 유형: DAICEL CHIRALPAK AD (250mm×30mm, 10μm); 이동상: [A: 이산화탄소, B: 0.1% 암모니아수/에탄올]; 구배: 이동상 B는 40%를 유지함)하여 분리하여 카이랄 이성질체 화합물 3-13(머무름 시간 1.831분, ee=96.1%) 및 화합물 3-13'(머무름 시간 2.031분, ee=100%)을 수득하였다.
단계 13: 화합물 3의 합성
화합물 3-13(6mg, 9.65μmol)을 N,N-디메틸아세트아미드(1mL)에 가하고, 염화리튬(2.05mg, 48.27μmol)을 가하고, 반응 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴(1mL)로 희석하였다. 조질의 생성물의 반응 용액을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하고 정제(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75×30mm×3μm; 이동상: [A: 물(0.225%포름산);B: 아세토니트릴]; 구배: 아세토니트릴%: 30% 내지 53%, 5분)하여 화합물 3을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.98-8.09 (m, 1H), 7.70 (dd, J = 1.51, 8.03 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 7.53 Hz, 1H), 7.18-7.31 (m, 2H), 7.13 (dd, J = 4.52, 8.03 Hz, 1H), 5.75-5.88 (m, 2H), 5.40-5.53 (m, 1H), 4.71 (dd, J = 3.01, 10.04 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.17 (d, J = 12.55 Hz, 1H), 4.07 (dd, J = 3.01, 11.04 Hz, 1H), 3.77 (dd, J = 3.01, 11.54 Hz, 1H), 3.66 (t, J = 10.54 Hz, 1H), 3.48 (dt, J = 2.51, 11.80 Hz, 1H), 3.04-3.18 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 533.1 [M+H]+.
단계 14: 화합물 3'의 합성
화합물 3-13'(5mg, 8.05μmol)을 N,N-디메틸아세트아미드(1mL)에 가하고, 염화리튬(1.71mg, 40.23μmol)을 가하고, 반응 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴(1mL)로 희석하였다. 조질의 생성물의 반응 용액을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피로 분리하고 정제(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75×30mm×3μm; 이동상: [A: 물(0.225% 포름산); B: 아세토니트릴]; 구배: 아세토니트릴%: 30% 내지 53%, 5분)하여 화합물 3'을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 8.39-8.49 (m, 1H), 7.83 (dd, J = 1.51, 8.03 Hz, 1H), 7.26-7.39 (m, 2H), 6.95-7.10 (m, 1H), 6.85 (br s, 1H), 5.92 (d, J = 7.53 Hz, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.64 (br d, J = 13.55 Hz, 1H), 4.50-4.58 (m, 1H), 4.36 (br d, J = 7.53 Hz, 1H), 4.16-4.24 (m, 1H), 4.05 (dd, J = 3.01, 11.04 Hz, 1H), 3.74 (dd, J = 3.51, 11.54 Hz, 1H), 3.65 (t, J = 10.54 Hz, 1H), 3.47 (dt, J = 2.51, 11.80 Hz, 1H), 2.79-2.91 (m, 1H). MS(ESI) m/z: 533.1 [M+H]+.
실시예 4
화합물 3(130.00mg, 244.65μmol)을 N,N-디메틸아세트아미드(2mL)에 가한 다음, 메틸 클로로메틸 카보네이트(45.70mg, 366.98μmol)， 탄산칼륨(67.63mg, 489.30μmol) 및 요오드화칼륨(40.61mg, 244.65μmol)을 가하고, 반응 용액을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(10mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(10mL×2)로 추출하고, 유기상을 포화 식염수(10mL×4)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=1:0 내지 20:1)으로 정제하여 화합물 4를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 클로로포름) δ 8.03 (dd, J=1.00, 4.52 Hz, 1H), 7.44 (dd, J=1.51, 8.03 Hz, 1H), 6.99-7.16 (m, 3H), 6.95 (dd, J=4.52, 8.03 Hz, 1H), 5.90 (d, J=6.53 Hz, 1H), 5.74-5.85 (m, 1H), 5.22-5.35 (m, 3H), 4.60 (dd, J=2.01, 13.55 Hz, 1H), 4.50 (dd, J=3.01, 10.04 Hz, 1H), 4.03 (d, J=12.55 Hz, 1H), 3.95 (dd, J=3.01, 11.04 Hz, 1H), 3.77-3.83 (m, 3H), 3.73 (dd, J=3.01, 12.05 Hz, 1H), 3.54 (t, J=10.54 Hz, 1H), 3.41 (dt, J=2.51, 11.80 Hz, 1H), 2.85-2.97 (m, 1H);MS(ESI) m/z: 621.0 [M+H]+.
화합물 4는 단결정 X선 회절법(SXRD)으로 절대 배치가 임을 확인하였다.
실시예 5
화합물 2(30.00mg, 56.56μmol)를 N,N-디메틸아세트아미드(1mL)에 가한 다음, 메틸 클로로메틸 카보네이트(14.09mg, 113.13μmol), 탄산칼륨(15.64mg, 113.13μmol) 및 요오드화칼륨(9.39mg, 56.56μmol)을 가하고, 반응 용액을 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(3mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(3mL×2)로 추출하고, 유기상을 포화 식염수(3mL×3)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 건조될 때까지 감압 농축하였다. 수득된 조질의 생성물을 분취용 박층 실리카겔 플레이트로 정제(디클로로메탄:메탄올=10:1)하여 화합물 5를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.54 (d, J=7.53 Hz, 1H), 7.13-7.28 (m, 3H), 7.07-7.13 (m, 1H), 6.99-7.05 (m, 1H), 6.90-6.97 (m, 1H), 5.92 (d, J=7.78 Hz, 1H), 5.75-5.83 (m, 2H), 5.66 (s, 1H), 5.39 (dd, J=2.64, 12.67 Hz, 1H), 4.65 (dd, J=3.01, 10.04 Hz, 1H), 4.55 (dd, J=2.13, 13.43 Hz, 1H), 4.03-4.15 (m, 2H), 3.80-3.85 (m, 3H), 3.75 (dd, J=3.26, 11.54 Hz, 1H), 3.56 (t, J=10.54 Hz, 1H), 3.42 (dt, J=2.51, 11.67 Hz, 1H), 2.98-3.08 (m, 1H);MS(ESI) m/z: 620.1 [M+H]+.
실시예 6
단계 1: 화합물 6-2의 합성
빙욕 하에, 화합물 6-1(3.35g, 13.61mmol)의 메탄올(8mL) 및 테트라하이드로푸란(32mL) 용액에 트리메틸실란디아조메탄 용액(2M, 13.61mL，27.22mmol)을 적가하고, 적가가 완료된 후 반응 용액을 20℃로 승온시키고 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 구연산 용액(100mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(100mL×3)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 탄산수소나트륨(100mL) 및 포화 식염수(100mL)로 순차적으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전 건조시켜 조질의 생성물인 화합물 6-2를 수득하고, 다음 단계의 반응에 직접 사용하였다.
단계 2: 화합물 6-3의 합성
화합물 6-2(3.98g, 15.29mmol), tert-부틸 카바제이트(2.02g, 15.29mmol) 및 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(3.84g, 15.29mmol)를 N,N-디메틸아세트아미드(80mL)에 가하고, 반응 용액을 60℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(200mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(100mL×3)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 물(200mL) 및 포화 식염수(200mL)로 각각 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 회전 건조시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=3:1 내지 1:2)로 정제하여 화합물 6-3을 수득하였다.
단계 3: 화합물 6-4의 합성
화합물 6-3(2.7g, 7.21mmol), 메틸 아크릴레이트(1.24g, 14.42mmol, 1.30mL), N,N-디이소프로필에틸아민(2.80g, 21.64mmol, 3.77mL)을 아세토니트릴(35mL)에 용해시키고, 반응 용액을 50℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 농축하고 회전 건조시키고, 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=4:1 내지 1:2, 체적비)로 정제하여 화합물 6-4를 수득하였다.
단계 4: 화합물 6-5의 합성
화합물 6-4(1.6g, 3.47mmol)의 에틸 아세테이트(20mL) 용액에 염산 에틸 아세테이트 용액(4M, 10mL)을 가하고, 반응 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하여 염산염인 조질의 생성물 6-5를 수득하고, 직접 다음 단계의 반응에 사용하였다.
단계 5: 화합물 6-6의 합성
화합물 6-5(1.18g, 염산염) 및 칼륨 tert-부톡사이드(955.32mg, 8.51mmol)를 아세토니트릴(20mL)에 가하고, 반응 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 메탄올(30mL)을 가하고, 농축하고, 회전 건조시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=3:1 내지 0:1, 체적비, 이어서 디클로로메탄:메탄올=10:1 내지 0:1)로 분리하고 정제하여 화합물 6-6을 수득하였다.
단계 6: 화합물 6-7의 합성
화합물 6-6(3g, 9.14mmol)을 디메틸설폭사이드(30mL) 및 물(3mL)에 용해시키고, 염화나트륨(1.07g, 18.27mmol)을 가하고, 반응 용액을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물(100mL)로 희석하고, 디클로로메탄(100mL×3)으로 추출하고, 유기상을 포화 식염수(100mL×2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하여 수득된 조질의 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올=1:0 내지 10:1)로 정제하여 화합물 6-7을 수득하였다.
단계 7: 화합물 6-8의 합성
화합물 6-7(0.3g, 1.11mmol) 및 디페닐(비닐)술포늄 트리플루오로메탄술포네이트(482.68mg, 1.33mmol)를 디메틸설폭사이드(3.6mL)에 용해시키고, 1,8-디아자비사이클로[5.4.0]운덱-7-엔(506.93mg, 3.33mmol)을 가하고, 반응 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 물(30mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트(30mL×3)으로 추출하고, 유기상을 포화 식염수(30mL×2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여액을 감압 농축하여, 수득된조질의 생성물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄:메탄올=1:0 내지 10:1)로 정제하여 화합물 6-8을 수득하였다. MS (ESI) m/z: 297.3 [M+H]+.
단계 8: 화합물 6-9의 합성
화합물 6-8(70mg, 236.23μmol) 및 화합물 2-5(73.51mg, 236.23μmol)를 에틸 아세테이트(2mL)에 가한 다음, 트리-n-프로필 사이클로인산 무수물(50% 에틸 아세테이트 용액, 300.66mg, 472.46μmol, 280.99μL) 및 메탄술폰산(22.70mg, 236.23μmol, 16.82μL)을 가하고, 반응 용액을 77℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 물(10mL)을 가하고, 에틸 아세테이트(5mL×2)로 추출하고, 유기상을 합병하고, 포화 식염수(5mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여액을 감압 농축하고 건조시켜 조질의 생성물을 수득하였다. 조질의 생성물을 플래시 실리카겔 컬럼(디클로로메탄:메탄올=1:0 내지 10:1)으로 정제하여 화합물 6-9를 수득하였다. MS(ESI)m/z: 591.1 [M+H]+.
단계 9: 화합물 6-9A 및 6-9B의 합성.
화합물 6-9를 초임계 유체 크로마토그래피 컬럼(분석 방법: 컬럼 유형: CHIRALCEL OD-3(100mm×4.6mm, 3μm); 이동상: [A: 이산화탄소, B: 0.05% 디에틸아민/에탄올]; 구배: B%: 4분 내에 5%에서 40%로 증가한 다음, 2.5분 동안 유지하고; 그 다음 5%에서 1.5분 동안 유지함)으로 검출하여 라세미 화합물로 분석되며, 카이랄 분리(컬럼 유형: DAICEL CHIRALCEL OD-H (25mm×30mm, 5μm); 이동상: [A: 이산화탄소, B: 0.1% 암모니아수/에탄올]; 구배: B%: 40% 내지 40%)에 의해 화합물 6-9A(머무름 시간 4.024분) 및 화합물 6-9B(머무름 시간 4.447분)를 수득하였다.
단계 10: 화합물 6의 합성
화합물 6-9A(20mg, 33.93μmol)를 N,N-디메틸아세트아미드(1mL)에 가한 후, 염화리튬(7.19mg, 169.64μmol)을 가하고, 반응 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴(2mL)로 희석하였다. 조질의 생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(컬럼 유형: Xtimate C18 100×30mm×3μm; 이동상: [물(0.225% 포름산)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 50% 내지 70%, 5분)로 분리하고 정제하여 화합물 6을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.59 (d, J=7.53 Hz, 1H), 7.19-7.31 (m, 2H), 7.03-7.19 (m, 2H), 6.90 (br s, 2H), 5.86 (d, J=7.53 Hz, 1H), 5.45-5.61 (m, 2H), 4.26 (br d, J=15.06 Hz, 1H), 4.11 (d, J=12.55 Hz, 1H), 3.07 (br d, J=15.06 Hz, 1H), 1.84-1.97 (m, 1H), 1.60-1.75 (m, 1H), 0.92-1.12 (m, 2H);MS(ESI)m/z: 501.2 [M+H]+.
단계 11: 화합물 6'의 합성
화합물 6-9B(20.00mg, 33.93μmol)를 N,N-디메틸아세트아미드(1mL)에 가한 후, 염화리튬(7.19mg, 169.64μmol, 3.47μL)을 가하고 반응 용액을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실온으로 냉각시키고, 아세토니트릴(2mL)로 희석하였다. 조질의 생성물을 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(컬럼 유형: Xtimate C18 100×30mm×3μm; 이동상: [물(0.225% 포름산)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 50% 내지 70%, 5분)로 분리하고 정제하여 화합물 6'을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 중수소화 메탄올) δ 7.59 (d, J=7.53 Hz, 1H), 7.19-7.32 (m, 2H), 7.02-7.19 (m, 2H), 6.81-6.96 (m, 2H), 5.86 (d, J=7.53 Hz, 1H), 5.44-5.63 (m, 2H), 4.26 (br d, J=15.06 Hz, 1H), 4.11 (d, J=12.55 Hz, 1H), 3.07 (br d, J=15.06 Hz, 1H), 1.81-1.98 (m, 1H), 1.57-1.73 (m, 1H), 0.90-1.14 (m, 2H). MS(ESI)m/z: 501.1[M+H]+.
생물학적 시험 데이터
실험예 1: 인플루엔자 바이러스 세포 변성(CPE) 실험
인플루엔자 바이러스(Influenza virus, IFV)에 대한 화합물의 항바이러스 활성은 화합물의 절반 유효 농도(EC50)값을 측정하여 평가하였다. 세포 변성 실험은 화합물의 항바이러스 활성을 반영하기 위해 바이러스에 감염된 세포에 대한 화합물의 보호 효과를 측정하는 데 널리 사용되고 있다.
인플루엔자 바이러스 CPE 실험
MDCK 세포를 웰당 2,000개의 세포 밀도로 검은색 384웰 세포 배양 플레이트에 접종한 다음, 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에 방치하여 밤새 배양하였다. Echo555 비접촉식 나노 업그레이드 음파 피펫팅 시스템으로 화합물을 희석하고 세포 웰(4배 배율로 희석, 8개의 시험 농도 포인트)에 가하였다. 인플루엔자 바이러스 A/PR/8/34(H1N1) 균주를 웰당 1 내지 2 90%의 조직 배양 감염 투여량(TCID90)으로 세포 배양 플레이트에 가하고, 배지에서 DMSO의 최종 농도는 0.5%이었다. 바이러스 대조군 웰(DMSO 및 바이러스를 가하고, 화합물을 가하지 않음), 세포 대조군 웰(DMSO를 가하고, 화합물 및 바이러스를 가하지 않음) 및 배지 대조군 웰(배지만 있고, 세포가 포함되지 않음)을 설정하였다. 화합물의 세포 독성의 측정 및 항바이러스 활성의 측정을 병행하여 수행하며, 바이러스를 가하지 않은 것을 제외한 다른 실험 조건은 항바이러스 활성의 실험과 일치하였다. 세포 플레이트를 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 5일 동안 배양하였다. 5일 동안 배양한 후, 세포 활성 검출 키트 CCK8을 사용하여 세포 활성을 검출하였다. 원시 데이터는 화합물의 항바이러스 활성 및 세포 독성의 계산에 사용되었다.
화합물의 항바이러스 활성 및 세포 독성은 각각 바이러스에 의한 세포 바이러스 효과에 대한 화합물의 억제율(%)로 나타내었다. 계산 공식은 하기에 나타낸 바와 같다:
GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 화합물의 억제율 및 세포 독성에 대해 비선형 피팅 분석을 수행하여 화합물의 EC50값을 수득하였다. 실험 결과는 표 3에 나타낸 바와 같다.
결론: 본 발명의 화합물은 세포 수준에서 인플루엔자 바이러스의 복제를 억제하는 실험에서 긍정적인 효과를 나타내었다.
실험예 2: 체내 약효 연구
실험 목적: A형 인플루엔자 바이러스 H1N1 마우스 감염 모델에서 화합물의 약효를 평가하고자 한다.
실험 방안: 마우스를 비강 점적에 의해 A형 인플루엔자 바이러스 A/PR/8/34(H1N1)에 감염시키고, 감염된 48시간 후에 화합물로 치료하기 시작하고, 1일 2회 연속 7일 동안 경구 투여하였다. 마우스의 체중 변화 및 생존율을 관찰하여, 해당 모델에서 화합물의 항 A형 인플루엔자 바이러스 H1N1 효과를 평가하였다.
실험은 6 내지 7주령의 암컷인 SPF 등급 BALB/c 마우스를 선택하였다. 마우스는 BSL-2 동물방에 도착한 후 적어도 3일 동안 적응시킨 후 실험을 시작하였다. 감염된 당일을 실험 0일째로 설정하엿다. 마우스에 펜토바르비탈 나트륨을 복강내 주사하여 마취(75mg/kg, 10mL/kg)시키고, 동물이 깊은 마취 상태에 들어간 후, 비강 점적을 통해 A/PR/8/34(H1N1) 바이러스에 감염시키고, 감염 체적은 50μL이었다. 2일째부터 8일째까지, 5mg/kg(투여 체적 10mL/kg)의 시험 화합물을 1일 2회로 매일 경구 투여하였다. 첫 투여 시점은 감염된 후 48시간이었다. 마우스의 상태를 매일 관찰하고, 마우스의 체중 및 생존율을 기록하였다. 14일째에 생존한 모든 동물을 안락사시켰다.
실험 결과:
동물의 생존율 및 체중 감소율을 검출하며, 체중 감소율=(0일째 체중-N일째 체중)/0일째 체중×100%이다. 결과는 표 4에 나타낸 바와 같이 화합물 5는 7일째에 동물 체중의 최대 감소율이 13.77%로 달성할 수 있도록 보호할 수 있으며, 이후 회복되기 시작하여 실험이 끝날 때까지 마우스의 생존율이 100%이며; 화합물 4는 3일째에 동물 체중의 최대 감소율이 7.03%로 보호할 수 있으며, 이후 회복되기 시작하여 실험이 끝날 때까지 마우스의 생존율이 100%이었다.
결론: 본 발명의 화합물은 동물 체내 약효 모델에서 체중 보호가 우수하며, 회복 시간이 빠른 것으로 나타내었다.
실험예 3: 발록사비르(Baloxavir) 내성 A/PR/8/34 (H1N1) I38T 인플루엔자 바이러스주에 대한 세포 변성(CPE) 실험
실험 목적: 화합물의 절반 유효 농도(EC50)값을 측정하여 발록사비르(Baloxavir) 내성 A/PR/8/34 (H1N1) I38T 인플루엔자 바이러스주에 대한 화합물의 항바이러스 활성을 평가하고자 한다.
실험 방안: MDCK 세포를 웰당 15,000개의 세포 밀도로 96웰 세포 배양 플레이트에 접종하고, 37℃, 5% CO2의 인큐베이터에서 밤새 배양하였다. 다음날 화합물 용액(3배로 연속 희석, 8개의 농도 포인트, 3중 웰) 및 발록사비르 내성 A/PR/8/34 (H1N1) 인플루엔자 바이러스주를 가하고, 세포 배양액에서 DMSO의 최종 농도는 0.5%이었다. 화합물이 없는 바이러스에 감염된 대조군 웰에서 세포 변성이 80 내지 95%로 될 때까지 세포를 5% CO2, 37℃의 인큐베이터에서 5일 동안 배양하였다. 그 다음 CCK8을 사용하여 각 웰의 세포 활성을 검출하였다. 화합물이 포함된 웰의 세포 활성이 바이러스에 감염된 대조군 웰보다 높은 경우, 즉 CPE가 약해지는 경우, 화합물이 측정된 바이러스에 대해 억제 효과가 있음을 나타내었다.
실험 결과:
화합물의 항바이러스 활성은 바이러스에 의한 세포 바이러스 효과에 대한 화합물의 억제 활성(%)으로 표시되었다. 계산 공식은 하기에 나타낸 바와 같다.
EC50은 GraphPad Prism(version 5) 소프트웨어를 사용하여 화합물의 억제 활성 및 세포 생존율에 대해 비선형 피팅 분석을 수행하고, 피팅 방법은 “log(inhibitor) vs. response -- Variable slope”이었다. 실험 결과는 표 5에 나타낸 바와 같다.
결론: 본 발명의 화합물은 세포 수준에서 발록사비르 내성 A/PR/8/34(H1N1) 인플루엔자 바이러스주의 복제를 억제하는 실험에서 긍적적인 효과를 나타내었다.
실험예 4: 체내 약효 연구
실험 목적: A형 인플루엔자 바이러스 H1N1 내성 균주의 마우스 감염 모델에서 화합물의 약효를 평가하고자 한다.
실험 방안: 마우스를 비강 점적에 의해 A형 인플루엔자 바이러스 발록사비르 내성 A/PR/8/34 (H1N1) I38T 바이러스주에 감염시키고, 감염 2시간 전부터 화합물로 치료하기 시작하며, 1일 2회 연속 7일 동안 경구 투여하였다. 마우스의 체중 변화 및 생존율을 관찰하여, 해당 모델에서 화합물의 항 A형 인플루엔자 바이러스 H1N1 효과를 평가하였다.
실험은 6 내지 7주령의 암컷인 SPF 등급 BALB/c 마우스를 선택하였다. 마우스는 BSL-2 동물방에 도착한 후 적어도 3일 동안 적응시킨 후 실험을 시작하였다. 감염된 당일을 실험 0일째로 설정하였다. 마우스에 졸레틸(Zoletil) 50/자일라진 염산염(Xylazine hydrochloride)을 복강내 주사하여 깊이 마취시킨 후, 비강 점적을 통해 발록사비르 내성 A/PR/8/34 (H1N1) I38T 바이러스주에 감염시키고, 감염 체적은 50μL이었다. 2일째부터 8일째까지, 15mg/kg 또는 50mg/kg(투여 체적 10mL/kg)의 시험 화합물을 1일 2회로 매일 경구 투여하였다. 첫 투여 시점은 감염 2시간 전이었다. 마우스의 상태를 매일 관찰하고, 마우스의 체중 및 생존율을 기록하였다. 14일째에 생존한 모든 동물을 안락사시켰다.
실험 결과:
동물의 생존율 및 체중 감소율을 검출하며, 체중 감소율=(0일째 체중-N일째 체중)/0일째 체중×100%이다. 실험 결과는 하기 표 6에 나타낸 바와 같다. 화합물 4를 50mg/kg의 투여량으로 투여할 때 마우스의 체중이 거의 감소하지 않았으며, 실험이 끝날 때까지 마우스의 생존율이 100%이었다.
결론: 본 발명의 화합물은 동물 체내 약효 모델에서 체중 보호가 우수하며, 회복 시간이 빠른 것으로 나타내었다.
실험예 5 화합물의 혈장 단백질 결합률 시험
실험 목적: 평형 투석 방법으로 CD-1 마우스, SD 랫트 및 인간 혈장에서 본 발명의 화합물의 단백질 결합률을 평가하고자 한다.
실험 방안: 시험 화합물을 투석 완충액으로 상기 5개 종의 혈장에 각각 희석하고, 최종 농도가 2μM인 시료로 제조한 후, 시료를 96웰 평형 투석 장치에 가하고, 37℃에서 인산염 완충액으로 4시간 동안 투석하였다. 실험은 와파린(warfarin)을 대조군 화합물로 사용하였다. 혈장 및 완충액에서 시험 화합물과 와파린의 농도는 LC-MS/MS 방법으로 측정하였다.
실험 결과: 결과는 표 7에 나타낸 바와 같다.
참고: H는 인간을 나타내고, R은 랫트를 나타내고, M은 마우스를 나타내고, D는 개를 나타내며, C는 사이노몰거스 원숭이를 나타낸다.
결론: 본 발명의 화합물은 5개 종의 혈장에서 모두 중간 정도의 혈장 단백질 결합률을 가지며, 이는 상기 5개 종의 혈장에서 시험 화합물의 유리상태 약물 농도 비율이 적당하고 우수한 약물 제조 특성을 가짐을 예시하였다.
실험예 6: 랫트 약동학적 연구 실험
실험 목적: 본 발명의 화합물의 단일 정맥 주사 및 위관 투여 후 수컷 SD 랫트 체내에서 혈장 약동학을 고찰하고자 한다.
실험 동물: 6 내지 8주령의 체중이 200 내지 300g인 수컷 SD 랫트이며;
실험 과정: 주사로 투여(i.v.)하고, 투여량은 1mpk이고, 농도는 0.50mg/mL이고, 용매는 40%DMAC+40%PG+20%(20%HP-β-CD+물)이며; 경구로 투여(po)하고, 투여량은 10mpk이고, 농도는 1mg/mL이고, 용매는 3%DMSO+10%solutol HS+87% 물이었다.
시료 수집: 실험 동물은 매 시점마다 복재 정맥 천자로부터 0.03mL의 혈액 시료를 채취하고, 실제 채혈 시간을 기록하였다. 모든 혈액 시료를 규격이 1.5mL인 상업용 EDTA-K2 항응고제 튜브에 가하였다. 혈액 시료를 채취한 후, 혈장 매트릭스에 안정제로 DDV를 가하며, 여기서, 혈장:디클로르보스(Dichlorvos) 용액=40:1이고, 디클로르보스(Dichlorvos) 용액은 40mM의 디클로르보스(Dichlorvos)의 아세토니트릴/수(1:1)용액이며, 30분 이내에, 4℃, 3000g에서 10분 동안 원심분리하여 상청 혈장을 흡인하여 빠르게 드라이아이스에 방치하고, -80℃의 냉장고에 보관하여 LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
데이터 분석: Phoenix WinNonlin 6.3 약동학 소프트웨어의 비구획 모델을 사용하여 혈장 농도를 처리하고, 선형 대수 사다리꼴 방법을 사용하여 약동학 매개변수 Cl(겉보기 제거율), T1/2(화합물의 절반을 제거하는 데 필요한 시간), Cmax(피크 농도), AUC0-last(0-마지막 샘플링 시간 내의 농도 적분 면적)를 계산하였으며, 결과는 표 8에 나타낸 바와 같다.
실험 결론: 본 발명의 화합물은 경구 혈장 노출량이 비교적 높고, 우수한 약동학 특성을 가지고 있었다.
실험예 7: 비글견의 약동학 연구 실험
실험 목적: 본 발명의 화합물의 단일 정맥 주사 및 위관 투여 후 수컷 비글견의 체내에서 혈장 약동학을 고찰하고자 한다.
실험 동물: ≥6개월의 체중이 6 내지 12kg인 수컷 비글견이며;
실험 과정: 주사로 투여(i.v.)하고 투여량은 1mpk이고, 농도는 1mg/mL이고, 용매는 10%DMAC+90%(20%HP-β-CD+물)이며; 경구로 투여(po)하고, 투여량은 10mpk이고, 농도는 2mg/mL이고, 용매는 3%DMSO+10%solutol HS+87% 물이었다.
시료 수집: 실험 동물은 매 시점마다 복재 정맥 천자로부터 0.8mL의 혈액 시료를 채취하고, 실제 채혈 시간을 기록하였다. 모든 혈액 시료를 규격이 1.5mL인 상업용 EDTA-K2 항응고제 튜브에 가하였다. 혈액 샘플을 채취한 후, 혈장 매트릭스에 안정제로 DDV를 가하며, 여기서, 혈장:디클로르보스(Dichlorvos) 용액=40:1이고, 디클로르보스(Dichlorvos) 용액은 40mM의 디클로르보스(Dichlorvos)의 아세토니트릴/수(1:1)용액이며, 30분 이내에, 4℃, 3000g에서 10분 동안 원심분리하여 상청 혈장을 흡인하여 빠르게 드라이아이스에 방치하고, -80℃의 냉장고에 보관하여 LC-MS/MS 분석에 사용하였다.
데이터 분석: Phoenix WinNonlin 6.3 약동학 소프트웨어의 비구획 모델을 사용하여 혈장 농도를 처리하고, 선형 대수 사다리꼴 방법을 사용하여 약동학 매개변수 Cl , T1/2, Cmax, AUC0-last를 계산하였으며, 결과는 표 9에 나타낸 바와 같다.
실험 결론: 본 발명의 화합물은 제거율이 낮고, 반감기의 시간이 길고, 경구 투여 혈장 노출량이 높으며, 우수한 약동학 특성을 가지고 있었다.

Claims (19)

  1. 식(VI)으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    ,
    상기 식에서,
    R7은 H 및 에서 선택되고;
    R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
    R9는 H에서 선택되고, E1은 Se에서 선택되고, X1은 CR10R11에서 선택되고, R10 및 R11은 이에 공동으로 연결된 원자와 함께 C3-5사이클로알킬을 형성하며;
    또는, X1 및 R9는 이에 연결된 원자와 함께 를 형성하고, p는 0 및 1에서 선택되고, E1 및 E2 중 하나는 Se에서 선택되고, 다른 하나는 S 및 O에서 선택되며;
    각 R12는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, -COOH, C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노에서 선택되고, 상기 C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노는 각각 독립적으로 1, 2 또는 3개의 Rb에 의해 임의로 치환되며;
    T1, T2, T3 및 T4는 각각 독립적으로 CH 및 N에서 선택되고;
    q는 0 및 1에서 선택되고;
    t는 0, 1, 2, 3 및 4에서 선택되고;
    각 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
    조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, 및 E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, 각 R12가 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되는 것이다.
  2. 제1항에 있어서,
    각 R12는 각각 독립적으로 F에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항에 있어서,
    R8은 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2 및 에서 선택되고, 상기 CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제3항에 있어서,
    R8은 CH3, CH2CH3, CH(CH3)2 및 에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항에 있어서,
    R7은 H, , , 및 에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  6. 제1항에 있어서,
    E1은 Se에서 선택되고, E2는 O에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  7. 제1항에 있어서,
    구조단위 는 에서 선택되고, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH, NH2, -COOH, C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노에서 선택되고, 상기 C1-3알킬, C1-3알콕시 및 C1-3알킬아미노는 각각 독립적으로 1, 2 또는 3개의 Rb에 의해 임의로 치환되며, T1, E1, q 및 Rb는 제1항에 정의된 바와 같은, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염
  8. 제7항에 있어서,
    구조단위 는 , , 및 에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  9. 제1항에 있어서,
    구조단위 는 , , 및 에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  10. 제9항에 있어서,
    구조단위 는 , , 및 에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    하기 식에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:

    상기 식에서,
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
    R7은 H 및 에서 선택되고;
    R8은 C1-3알킬 및 에서 선택되고, 상기 C1-3알킬 및 는 1, 2 또는 3개의 Ra에 의해 임의로 치환되고;
    R9는 H에서 선택되고, E1은 Se에서 선택되고, X1은 CR10R11에서 선택되고, R10 및 R11은 이에 공동으로 연결된 원자와 함께 C3-5사이클로알킬을 형성하며;
    또는, X1 및 R9는 이에 연결된 원자와 함께 를 형성하고,
    E1 및 E2 중 하나는 Se에서 선택되고, 다른 하나는 S 및 O에서 선택되고;
    T1은 CH 및 N에서 선택되고;
    p 및 q는 각각 독립적으로 0 및 1에서 선택되고;
    각 Ra는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 I에서 선택되고;
    조건은, T1이 CH에서 선택되고, 및 E1이 Se에서 선택되고, 및 E2가 O에서 선택되고, p가 1에서 선택되고, q가 1에서 선택되는 경우, R5 및 R6이 각각 독립적으로 OH 및 NH2에서 선택되며;
    "*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
  12. 제11항에 있어서,
    하기 식에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    및 ,
    상기 식에서,
    p, q, E1, E2, T1, R5, R6 및 R7은 제11항에 정의된 바와 같으며;
    "*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
  13. 제12항에 있어서,
    하기 식에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    및 ,
    상기 식에서,
    p, q, E1, E2, R5, R6 및 R7은 제12항에 정의된 바와 같으며;
    "*"가 있는 탄소 원자는 카이랄 탄소 원자이고, (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체 또는 1종의 거울상 이성질체가 풍부하게 함유된 형태로 존재한다.
  14. 제13항에 있어서,
    하기 식에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:

    및 ,
    상기 식에서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2에서 선택되고;
    m은 0 및 1에서 선택되고;
    q, R5, R6, R7 및 R8은 제13항에 정의된 바와 같다.
  15. 제14항에 있어서,
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 F에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  16. 제14항에 있어서,
    R5 및 R6은 각각 독립적으로 F에서 선택되는, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  17. 제14항에 있어서,
    하기 식에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:

    및 ,
    상기 식에서, R1, R2, R5, R6, R7 및 R8은 제14항에 정의된 바와 같다.
  18. 하기 식으로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    및
  19. 인플루엔자 바이러스 관련 질환을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의, 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.
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