KR20230119387A

KR20230119387A - 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 부종 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20230119387A
Application number: KR1020220015465A
Authority: KR
Inventors: 김봉이
Original assignee: 경희대학교 산학협력단
Priority date: 2022-02-07
Filing date: 2022-02-07
Publication date: 2023-08-16
Also published as: WO2023149785A1

Abstract

본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 관절염에 의한 염증성 부종 예방 및 치료용 조성물을 제공으로써, 본 발명의 금전초 추출물은 동물모델에 LPS를 투여하여 염증반응을 일으킨 후, 본 발명의 금전초를 투여하여, 염증 매개 물질 및 염증 반응에서 발현되는 IL-1 beta mRNA, IL-6 mRNA, TNF-alpha, IL-4를 억제시킴을 확인하였다. 또한, 염증 초기반응에 관여하는 IL-10 mRNA 증가 및 후천면역 반응에 관여하는 IL-18 mRNA 억제시고, 동물모델의 발바닥의 부종도 육안상 감소시켰으며, 발바닥 조직을 확인한 결과 침윤세포도 감소를 확인하는바, 염증성 부종 개선 및 치료에 효과적임을 확인하여, 이와 관련된 유용한 사업에 사용될 수 있다.

Description

금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 부종 예방 및 치료용 조성물{Composition for the prevention and treatment of inflammatory edema comprising Lysimachia christinae Hance extract as an active ingredient}

본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 염증성 부종 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

부종(Ederma)은 체내조직세포 사이에 조직액이 괸 상태를 가리키는 말로서, 간단히는 몸이 붓는 증상이다. 이는 심장병이나 신장병 또는 몸의 어느 한 부분의 혈액 순환 장애로 생길 수 있다. 다리의 경우는 특히 심장에서 거리가 멀고 중력에 의한 영향이 크기 때문에 신장으로 가는 혈류가 줄어들어 부종이 생긴다. 또, 여자의 경우 정상적인 임신 또는 임신중독증일때 부종이 발생하며, 수분이나 소금의 섭취를 많이 한 경우나 피로하거나 숙면을 취하지 못했을 때 일시적으로 부종이 나타날 수 있으나 저절로 가라앉는다. 모세혈관의 투과성이 증가하는 경우, 예를 들면 화상·외상·국소적 염증·알레르기 반응 등의 경우에도 국소부종이 발생한다.

특히 다리부종의 경우 발, 발목의 부종을 동반하므로 신발이 꽉 끼는 느낌으로 쉽게 자각할 수 있으며, 부종의 느낌과 함께 다리가 무거운 느낌을 동반하므로 몸전체의 피로를 다리부종으로 자각하게 되기도 한다. 전신적인 부종은 심장 성·신장성·간성·내분비성·영양장애성 부종으로 나눌 수 있고, 국소성 부종은 혈관·림프관의 폐색으로 인한 것과 혈관운동성 부종 등이 있다. 부종이 생기게 되면, 몸이 붓고, 체중이 증가하며, 자고 일어나면 눈이 붓고, 손가락의 반지가 꼭 끼고, 신발이 작아진 것 같다. 종아리 경골부위에 손가락으로 누르면 움푹 들어간 채우묵부종(함요부종)이 나타내기도 한다. 부종은 피부속의 국소적인 과다 수분으로 인한 혈액순환 장애 및 피부 노화를 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 피부 문제는 임파계의 부적절한 기능과 과부하가 있는 임파 부종을 갖는 사람들의 상태를 더욱 악화시키는 것으로 알려져 있다.

또한, 염증　초기의 중요한 현상가운데 하나로　혈관투과성의 항진이 있다. 이 혈관투과성에는 일과성의 즉시반응과 지연반응의 2양상이 있다. 즉시반응은 히스타민 등의　아민류에 의해서　촉진되고　세정맥역의 투과성을 항진한다. 지연반응은 염증조직에서 유리하는　펩티드에서 투과성 항진에 장기작용하기때문에　혈장중의 액성성분이 혈관밖으로 누출해 염증부위에 저류한다. 이와같은　부종을 염증성 부종이라고 한다. 이 부종액은 단백성분이 풍부해　비중이 무겁고　백혈구　등의　세포성분을 많이 함유한다.

금전초(Lysimachia christinae Hance)는 앵초과의 과로황의 전초를 사용해 만든 약재로, 한국에서는 긴병꽃풀이라고 부른다. 우리나라 어디에나 있으며, 대게 물기가 많고 햇볕이 잘 드는 양지 쪽에 흔하게 자생한다. 금전초의 동맥경화에 대한 효능(한국등록특허 제10-0535269호)이 보고된 바 있으나, 염증성 부종에 치료 효과에 대해 밝혀진 바 없다.

이에, 본 발명자들은 염증성 부종의 예방 또는 치료 효과를 가지며 부작용이 없는 천연 추출물을 포함하는 조성물을 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 금전초 추출물이 염증 및 부종을 억제하는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

1."IFN-γ Reduces Epidermal Barrier Function by Affecting Fatty Acid Composition of Ceramide in a Mouse Atopic Dermatitis Model"_Hiroyuki Kanoh, Asako Ishitsuka, Etsuko Fujine, Shuhei Matsuhaba, Mitsuhiro Nakamura, Hiroyasu Ito, Naoki Inagaki, Yoshiko Banno, Mariko Seishima_ J Immunol Res. 2019; 2019: 3030268.Published online 2019 Jan 29. doi: 10.1155/2019/3030268 2."TNF-alpha production in the skin"_M M Bashir, M R Sharma, V P Werth_2009 Jan;301(1):87-91. doi: 10.1007/s00403-008-0893-7. 3."Getting Leukocytes to the Site of Inflammation"_W. A. Muller_Getting Leukocytes to the Site of Inflammation. Veterinary Pathology, 50(1), 7-22. https://doi.org/10.1177/0300985812469883 4."IL-4 regulates skin homeostasis and the predisposition towards allergic skin inflammation"_Sarita Sehra, Yongxue Yao, Michael D. Howell, Evelyn T. Nguyen, Geoffrey S. Kansas, Donald Y. M. Leung, Jeffrey B. Travers, Mark H. Kaplan_J Immunol. 2010 Mar 15; 184(6): 3186?3190. 5."Interleukin-10 is a central regulator of the response to LPS in murinemodels of endotoxic shock and the Shwartzman reaction but not endotoxin tolerance."_Berg DJ, et al. (1995)_J Clin Invest 96:2339-2347. 6."IL-10 control of dendritic cells in the skin"_Bjorn E. Clausen, Mathilde J.H. Girard-Madoux_Oncoimmunology. 2013 Mar 1; 2(3): e23186. Published online 2013 Mar 1. doi: 10.4161/onci.23186. 7."Predictive factors for psychological distress in ambulatory lung cancer patients"_Tatsuo Akechi, Akira Kugaya, Hitoshi Okamura, Yutaka Nishiwaki, Shigeto Yamawaki & Y. Uchitomi_Supportive Care in Cancer volume 6, pages281-286 (1998). 8."Synaptic activity induces dramatic changes in the geometry of the cell nucleus: Interplay between nuclear structure, histone H3 phosphorylation, and nuclear calcium signaling."_Wittmann M, et al. (2009) J Neurosci 29:14687-14700.

본 발명의 목적은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공 하는것이다.

본 발명의 목적은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공 하는것이다.

본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공 한다.

본 발명의 금전초 추출물은 동물모델에 LPS를 투여하여 염증반응을 일으킨 후, 본 발명의 금전초를 투여하여, 염증 매개 물질 및 염증 반응에서 발현되는 IL-1 beta mRNA, IL-6 mRNA, TNF-alpha, IL-4를 억제시킴을 확인하였다. 또한, 염증 초기반응에 관여하는 IL-10 mRNA 증가 및 후천면역 반응에 관여하는 IL-18 mRNA 억제시고, 동물모델의 발바닥의 부종도 육안상 감소시켰으며, 발바닥 조직을 확인한 결과 침윤세포도 감소를 확인하는바, 염증성 부종 개선 및 치료에 효과적임을 확인하여, 이와 관련된 유용한 사업에 사용될 수 있다.

도 1은 IL-6, IL-1 beta, TNF-alpha, IL-4, IL-10 및 IL-18의 mRNA 서열번호를 나타낸 도이다.
도 2는 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여, 마우스 모델의 발 크기(높이와 가로 합산)를 나타낸 도이다.
도 3은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IFN-gamma 농도를 감소시키는 것을 나타낸 도이다.
도 4는 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IL-1 beta의 mRNA 발현을 억제를 나타낸 도이다.
도 5는 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IL-6의 mRNA 발현 억제를 나타낸 도이다.
도 6은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 TNF-alpha의 mRNA 발현 상승 억제를 나타낸 도이다.
도 7은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IL-4 mRNA 발현량 차단을 나타낸 도이다.
도 8은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IL-10 mRNA의 발현량이 유의적으로 증가를 나타낸 도이다.
도 9는 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 IL-18 mRNA의 발현 상승 차단을 나타낸 도이다.
도 10은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 마우스 모델 발바닥의 부종 억제를 외관상 나타낸 도이다.
도 11은 LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 금전초 추출물을 투여하여 마우스 모델 발바닥 조직의 침윤세포 감소 효과를 나타낸 도이다.
도 12는 금전초 추출물 투여 전 (Day 0), 투여 후 1, 3, 7 및 14 일째에 측정한 체중을 나타낸 도이다.
도 13은 금전초 추출물 투여시 실험동물 생사를 나타낸 도이다.
도 14는 금전초 추출물 투여시 실험동물 상태를 나타낸 도이다.
도 15는 금전초 추출물 투여시 실험동물 생식기 상태를 나타낸 도이다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다, 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.

또한, 본 명세서에서 사용되는 용어 (terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 사료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.

본 발명은 금전초(Lysimachia christinae Hance) 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 식품 조성물은 유효성분을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨,소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 상기 약학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.

또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명의 기능성 식품 조성물은, 정제,캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공될 수 있다. 본 발명에서 '건강기능성 식품 조성물'이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다. 상기 '식품 첨가물 공전'에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료 제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다. 예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다. 캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 본 발명의 유효성분을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다. 환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다. 과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분의 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

프레타놀A는 주정을 원료로 만든 식물성 에탄올로서, 보통 의료 및 식품회사의 살균세척에 많이 사용되며, 천연디퓨저 및 모기퇴치제에 많이 사용된다.

프레타놀A 75%는 식품을 부패시키고 신선도를 저해시키는 각조 세균을 억제하므로 식품 가공시 보존성을 향상시키는 용도로 사용하고, 프레타놀A 95%는 비누나 화장품등 무수 알코올 사용하는 용도로 사용된다.

상기 부종은 염증성 부종, 특발성 부종, 심부전으로 인한 부종, 신장질환으로 인한 부종, 림프, 정맥 등의 혈관계 이상으로 인한 부종 및 외과 및 성형수술로 인한 염증성 부종으로 이루어진 군에서 1종 이상인 것이나, 바람직하게는 외과 및 성형수술로 인한 염증성 부종인 것이다.

상기 금전초 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매로 추출된 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 프레타놀A인 것이다.

상기 조성물은 IFN-gamma를 감소시키는 것이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 조성물은 IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha, IL-4 및 IL-18 발현을 억제시키는 것이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 조성물은 IL-10 발현을 증가 시키는 것이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 조성물은 염증세포의 침윤을 감소 시키는 것이나, 이에 제한되지 않는다.

상기 금전초 추출물은 50~400mg/kg인 것이나, 바람직하게는 100~300mg/kg인 것이다.

본 발명은 금전초 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학 조성물에는 유효성분 이외에 보조제(adjuvant)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 보조제는 당해 기술분야에 알려진 것이라면 어느 것이나 제한 없이 사용할 수 있으나, 예를 들어 프로인트(Freund)의 완전 보조제 또는 불완전 보조제를 더 포함하여 그 면역성을 증가시킬 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 유효성분을 약학적으로 허용된 담체에 혼입시킨 형태로 제조될 수 있다. 여기서, 약학적으로 허용된 담체는 제약 분야에서 통상 사용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용할 수 있는 약학적으로 허용된 담체는 이들로 제한되는 것은 아니지만, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

제제화할 경우에는 통상 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 그러한 고형 제제는 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 칼슘 카르보네이트, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 일반적으로 사용되는 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수용성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브유와 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식이 예상될 수 있는데, 예를 들면 경구, 정맥, 근육, 피하, 복강내 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 개체의 연령, 체중, 성별, 신체 상태 등을 고려하여 선택된다. 상기 약학 조성물 중 포함되는 유효성분의 농도는 대상에 따라 다양하게 선택할 수 있음은 자명하며, 바람직하게는 약학 조성물에 0.01 ~ 5,000 ㎍/ml의 농도로 포함되는 것이다. 그 농도가 0.01 ㎍/ml 미만일 경우에는 약학 활성이 나타나지 않을 수 있고, 5,000 ㎍/ml를 초과할 경우에는 인체에 독성을 나타낼 수 있다.

상기 약학 조성물은 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화될 수 있다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경질, 연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/ 또는 폴리에틸렌 글리콜)를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제를 함유할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.

또한, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제제이며, 주사용 제제의 용매로서 물, 링거액, 등장성 생리식염수 또는 현탁액을 들 수 있다. 상기 주사용 제제의 멸균 고정 오일은 용매 또는 현탁 매질로서 사용할 수있으며 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있다.

또한, 상기 주사용 제제는 올레산과 같은 지방산을 사용할 수 있다.

이하 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 또한 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

[준비예]

준비예 1. 부종과 관련된 염증 매개물질 및 관련인자의 mRNA분석.

NucleoZOL을 이용하여 정상 마우스 동물 모델의 발바닥 조직의 mRNA를 분리한 뒤, cDNA를 합성하고 아래에 도 1에 표시된 특정 Primer와 반응시켜 IL-6, IL-1 beta, TNF-alpha, IL-4, IL-10 및 IL-18 mRNA 서열을 조사하였다(도 1).

[실시예]

실시예 1. 금전초 추출물의 제조

본 실험에 금전초는 광명당 한약도매상에서 구입하여 실험을 진행하였다. 금전초 500g을 부직포에 넣고 10배(5 L)의 프레타놀A 25%를 채우고 환류추출기(MS-609, Korea)를 이용하여 80℃에서 3시간 2회 추출 후 대형 회전감압농축기(Eyela, CA-2600-chiller가 장착된 Eyela, NVC-2200, Japan)를 이용하였고 55℃에서 30 hPa 농축하여 10 brix 내외의 표준 추출물을 제작하였다. 추출물을 Deep freezer(Themo Scientific, TSE600D, U.S.A)를 이용하여 -70℃에서 동결하였고 동결건조기(일신, 본디로 LYOPH-PRIDE 20R)로 옮긴 후 동결 건조를 실시하였다. 124시간 후 종료된 동결건조기로부터 추출물을 56 g(11.2%) 수득하였다.

실시예 2. 금전초 추출물의 부종 억제 효과를 발 크기 외관상으로 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 부종을 개선할 수 있는지 마우스모델의 발바닥을 외관상 확인하였다.

부종 형성은 염증세포의 침윤과 염증성 물질의 축적으로 나타나게 되고, LPS는 피부 염증반응에서 피부 조직의 부종을 일으키는 것으로 알려져 있다. 따라서, LPS를 투여한 피부 부종이 유도된 마우스모델에 음성대조군(Negative control, 0.84 ± 0.04 cm), 정상대조군(Normal contorl, 0.64 ± 0.04 cm), 양성대조군(Positive control 0.64 ±0.04 cm), 금전초 추출물은 각각 100 (0.775 ± 0.03 cm), 200 (0.765 ± 0.05 cm), 및 300 (0.645 ± 0.03 cm) mg/kg을 투여 하였다.

그 결과, 모든 실험동물의 발 크기(높이와 가로 합산)는 음성대조군은 양성대조군에 비해 유의적으로 증가하였고, 본 발명의 금전초 추출물 또한 음성대조군에 비해 농도 의존적으로 부종 개선효능이 나타난 것을 확인하였다(도 2).

실시예 3. 금전초 추출물의 부종의 초기반응인 IFN-gamma의 감소 효과 확인

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IFN-gamma 감소 시킬 수 있는지 확인하였다.

IFN-gamma는 항바이러스 작용을 가지고, 염증 반응에 관여하는 주요 인자로 직접적으로 대식세포를 활성화 시키거나 세포독성 T 세포의 분화를 촉진시키며, 또한, LPS는 IFN-gamma 발현을 증가시키고 염증반응에 의한 조직의 부종 형성 초기에 관여할 뿐만 아니라 피부의 긴사슬지방산과 세라마이드를 감소시켜 피부 보호 기능을 떨어트린다.

따라서, LPS를 투여한 피부 부종이 유도된 마우스모델에 음성대조군(Negative control, 39.9 ± 5.2 mg/mL), 정상대조군(Normal control, 19.8 ± 3.7 mg/mL), 양성대조군(Positive control, 22.3 ± 1.9 mg/mL), 금전초 추출물 각각 100 mg/kg (34.6 ± 3.1). 금전초 추출물 200 mg/kg (36.4 ± 5.5), 금전초 추출물 300 mg/kg (24.6 ± 4.0)를 투여하여, 동물모델에 혈청을 분석하였다.

그 결과, 금전초 추출물의 200 mg/kg의 용량부터 IFN-gamma가 유의적으로 감소효과가 확인되었다. 따라서, 본 발명의 금전초 추출물은 부종 형성의 초기 반응에 관여할 가능성이 있는 것을 확인 하였다(도 3).

실시예 4. 금전초 추출물의 IL-1 beta 발현 억제 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IL-1 beta의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

IL-1 beta는 직접적으로 피부 세포의 염증 매개물질 분비를 유도해 염증 반응을 증가시켜 피부자극을 유발하고, 유발된 염증반응을 통해 건선과 아토피 피부염 같은 피부질환을 유발하는 인자로써 피부 염증 개선 효능 평가에 흔히 사용되는 인자이다.

따라서, LPS를 투여한 피부 부종이 유도된 마우스모델에 음성대조군(Negative control), 정상대조군(Normal control), 양성대조군(Positive control), 금전초 추출물 각각 100 mg/kg, 금전초 추출물 200 mg/kg, 금전초 추출물 300 mg/kg를 투여하였다.

그 결과, 본 발명의 금전초 추출물이 IL-1 beta의 mRNA 발현량에 억제를 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인하였다(도 4).

실시예 5. 금전초 추출물의 IL-6 발현 억제 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IL-6 beta의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

IL-6는 피부 염증과 피부 재생에 모두 관여한다고 알려져 있으며, 피부에 일어난 염증 초기 단계에서 염증인자인 IL-1과 TNF-alpha에 의해 유도되며 피부의 표피세포, 내피세표, 간질세포 및 대식세포로부터 전염증성 인자의 방출을 촉진시킨다. 또한, 과한 염증 상태에서 IL-6는 matrix metalloproteinase(MMP)의 발현을 촉진하고 피부 기질을 분해시킬 뿐만 아니라 염증 자극에 대해 반응성이 높으며, 다른 염증인자와 비교해 발현 속도가 빠르기 때문에 염증 반응에 있어 중요한 인자로 취급된다.

그 결과, 본 발명의 금전초 추출물이 IL-6 beta의 mRNA 발현량에 억제를 농도 의존적으로 IL-6 beta의 mRNA 발현 억제하는 것을 확인하였다(도 5).

실시예 6. 금전초 추출물의 TNF-alpha 발현 억제 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 TNF-alpha의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

TNF-alpha는 ultraviolet B(UVB), LPS 또는 피부 자극에 의한 피부 염증 반응에서 발현량이 증가한다. 또한, 염증 활성을 발달시켜 피부의 내피부착인자 발현량을 초래하고 림프구의 침윤과 T-림프구의 순환에 관여할 뿐만 아니라 염증 부위에 백혈구를 응집시킨다.

그 결과, 본 발명의 금전초 추출물이 TNF-alpha의 mRNA 발현량에 억제를 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인하였다(도 6).

실시예 7. 금전초 추출물의 IL-4 발현 억제 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IL-4의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

IL-4는 피부 자극에 의한 피부 염증반응에서 표피 분화 복합체(epidermal differentiation complex)에 관련된 유전자를 조절하여 피부의 회복과 보호 기능을 감소시키는 작용을 매개하는 것으로 알려져 있다.

그 결과, 본 발명의 금전초 추출물은 100 mg/kg부터 LPS에 의한 IL-4 mRNA 발현량 증가를 억제하는 것으로 나타났지만 농도의존적으로 피부조직의 IL-4 mRNA 발현량을 증가시키는 것으로 나타났다. 이는 LPS 처리 그룹 이상으로 피부 조직의 IL-4 mRNA의 발현을 상승시키지 않아 본 발명의 금전초 추출물은 피부 염증 반응에서 IL-4 mRNA 발현의 상승을 차단시켜 피부염증 매개작용 억제를 확인하였다(도 7).

실시예 8. 금전초 추출물의 IL-10 발현 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IL-10의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

IL-10은 항염증 사이토카인으로 여러 백혈구에 의해 생산되며 특히 조절 T세포는 IL-10의 분비를 통해 면역억제기능을 가지며, 피부의 내피에서 외부 항원에 대한 과도한 면역반응을 억제한다.

LPS에 의해 발현이 증가된 IL-10은 초기 염증반응에서 염증성 쇼크를 조절하거나 산화질소(nitric oxide)와 같은 염증 매개분자의 생성과 작용에 직접적으로 대항한다고 알려져 있다. 금전초 추출물은 IL-10이 유의하게 증가하였다(도 8).

실시예 9. 금전초 추출물의 IL-18 발현 억제 효과 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델에 IL-18의 mRNA 발현 억제 할 수 있는지 확인 하였다.

IL-18는 IFN-gamma의 생산을 유도하는 전염증성 사이토카인으로 염증조절복합체 활성에 관여하며, 염증반응에서 피부 각질세포의 TNF-alpha 방출을 유도하여 세포자멸사를 초래하는 것으로 알려져 있다. 또한, 활성화된 염증조절복합체는 NF-kB 신호전달 경로를 활성화 하여 염증반응을 유발한다.

그 결과, 본 발명의 금전초 추출물이 IL-18의 mRNA 발현량에 억제를 농도 의존적으로 억제하는 것을 확인하였다.

특히, 금전초 추출물 300 mg/kg를 투여하였을때, IL-18 억제효능이 가장 좋았다(도 9).

실시예 10. 금전초 추출물의 부종 형성의 억제 외관 및 조직의 침윤세포로 확인.

본 발명의 금전초 추출물을 100, 200 및 300 mg/kg의 농도로 일주일간 경구투여한 뒤, 성형수술과 시술로 인한 부종 및 염증 모델을 제작하기 위하여, 200 ng/paw LPS를 투여하여 피부 부종이 유도된 마우스모델의 발 바닥을 외관상 확인하였고, 발 바닥 세포의 침윤세포를 확인 하였다.

LPS는 피부 염증반응에서 피부 조직의 부종을 일으키는 것으로 알려져 있다.

그 결과, 음성대조군(Negative control)은 정상대조군과 비교하여 발의 붓기가 증가되었고, 양성대조군 처리군에서 감소되는 것으로 확인하였다(도 10). 또한, 음성대조군(Negative control)은 정상대조군과 비교하여 조직의 염증세포 침윤이 증가되었고, 양성대조군 처리군에서 감소되는 것으로 확인하였다(도 11).

이에 따라, LPS로 피부 부종이 유도된 마우스 모델에서 본 발명의 금전초 추출물이 농도 의존적으로 외관상 부종이 억제된 것을 확인하였고(도 10), 또한 농도 의존적으로 염증세포의 침윤이 감소되는 것을 확인하였다(도 11).

따라서, 본 발명의 금전초 추출물은 붓기 및 염증세포 감소하는 것을 확인 하였다.

실시예 11. 금전초 추출물을 마우스 모델에 투여시, 마우스 모델의 건강상태 확인.

본 발명의 금전초 추출물의 안정성 평가를 위해 모든 시험물질투여군의 투여 전 (Day 0), 투여 후 1, 3, 7 및 14 일째에 측정한 체중을 재었고, 생사 여부 및 일반적인 증상을 확인하였다.

상기 통계처리는 통계프로그램 (SPSS Statistics ver. 25, IBM, USA)을 사용하여 평균값과 표준편차를 구하였다. 실험군 간 평균값의 차이를 검증하기 위해 일원배치분산분석 (One-way ANOVA)을 실시한 후, Tukey-Kramer multiple comparison test를 사용하여 유의수준 p < 0.05 수준에서 통계적인 차이를 검증하였다.

검증한 결과, 모든 시험물질투여군은 대조군과 비교해 통계학적 유의성이 관찰되지 않았고(도 12), 사망한 동물들도 관찰되지 않았으며(도 13), 특이적인 일방증산 소견도 관찰되지 않았으나(도 14), 수컷 대조군의 1 례 (개체번호: 1104)에서 우측 고환(Testis) 및 부고환(Epididymis)의 위축(Atrophy) 소견이 관찰되었다(도 15). 수컷 대조군의 1 례에서 관찰된 우측 고환 및 부고환의 위축소견은 관찰된 개체가 1 례에 불과하고 시험물질이 투여되지 않아 독성학적 의미는 없으며, 우발적 또는 호르몬의 변화에 따른 영향으로 추정된다. 결론적으로 금전초 추출물에 대한 상기 시험의 결과를 봤을 때 개략의 치사량은 암컷 및 수컷모두 5,000 mg/kg 이상의 용량으로 판단되었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

금전초(Lysimachia christinae Hance) 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 개선용 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 부종은 염증성 부종, 특발성 부종, 심부전으로 인한 부종, 신장질환으로 인한 부종, 림프, 정맥 등의 혈관계 이상으로 외과 및 성형수술로 인한 염증성 부종으로 이루어진 군에서 1종 이상인 것인, 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 금전초 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 용매로 추출된 것인, 식품 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 추출 용매는 식물성 에탄올인 프레타놀A인 것인, 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 IFN-gamma를 감소시키는 것인, 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 IL-1 beta, IL-6, TNF-alpha, IL-4 및 IL-18 발현을 억제시키는 것인, 식품 조성물
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 IL-10 발현을 증가 시키는 것인, 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 염증세포의 침윤을 감소 시키는 것인, 식품 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 금전초 추출물은 50~400mg/kg인 것인, 식품 조성물.
금전초(Lysimachia christinae Hance) 추출물을 유효성분으로 포함하는 부종 예방 및 치료용 약학적 조성물.