KR20230111187A - Prame 특이적 t-세포 수용체 및 그의 용도 - Google Patents

Prame 특이적 t-세포 수용체 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230111187A
KR20230111187A KR1020237013603A KR20237013603A KR20230111187A KR 20230111187 A KR20230111187 A KR 20230111187A KR 1020237013603 A KR1020237013603 A KR 1020237013603A KR 20237013603 A KR20237013603 A KR 20237013603A KR 20230111187 A KR20230111187 A KR 20230111187A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
tcr
acid sequence
amino acid
seq
similar
Prior art date
Application number
KR1020237013603A
Other languages
English (en)
Inventor
카리나 베너
기울리아 롱기노티
Original Assignee
메디진 이뮤노테라피스 게엠바하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 메디진 이뮤노테라피스 게엠바하 filed Critical 메디진 이뮤노테라피스 게엠바하
Publication of KR20230111187A publication Critical patent/KR20230111187A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001184—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/001189—PRAME
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4615—Dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
    • A61K39/4622—Antigen presenting cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/464489—PRAME
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 아미노산 서열 LYVDSLFFL을 포함하는 폴리펩티드, 또는 그의 부분, 또는 그의 HLA-A 결합된 형태에 결합할 수 있는 T 세포 수용체 (TCR)에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 TCR을 코딩하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터뿐만 아니라 상기 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 TCR을 수득하는 방법 및 상기 TCR, 상기 핵산 분자, 벡터, 및/또는 숙주 세포를 포함하는 제약 및 진단 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 암을 진단하고/거나, 검출하고/거나, 예방하고/거나, 치료하는 데 사용하기 위한 이러한 제약 및 진단 조성물에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 변형된 림프구를 생성하기 위한, 상기 TCR, 핵산 분자, 또는 상기 벡터의 용도에 관한 것이다.

Description

PRAME 특이적 T-세포 수용체 및 그의 용도
본 발명은 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호(SEQ ID NO): 2)을 포함하는 폴리펩티드, 또는 그의 부분, 또는 그의 HLA-A 결합된 형태에 결합할 수 있는 T 세포 수용체 (TCR)에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 TCR을 코딩하는 핵산 분자, 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터뿐만 아니라 상기 핵산 분자 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 상기 TCR을 수득하는 방법 및 상기 TCR, 상기 핵산 분자, 벡터, 및/또는 숙주 세포를 포함하는 제약 및 진단 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 암을 진단하고/거나, 검출하고/거나, 예방하고/거나, 치료하는 데 사용하기 위한 이러한 제약 및 진단 조성물에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은 변형된 림프구를 생성하기 위한, 상기 TCR, 핵산 분자, 또는 상기 벡터의 용도에 관한 것이다.
세포 매개된 면역계의 일부를 형성하는 T 림프구 (또는 T 세포)는 병원체의 박멸에 주요 역할을 한다. T 세포는 흉선에서 발생하고 이들의 표면 상에 유핵 세포 상에 발현되는 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자 상에 제시된 펩티드 (항원 제시)의 인식을 허용하는 T 세포 수용체 분자를 발현한다. 병원체의 항원, 즉 MHC 분자에 의해 제시된 외래 항원은 강한 T 세포 반응을 끌어낼 것인 반면에 자기-항원은 통상적으로 이러한 T 세포의 발생 동안 흉선에서 자기-항원 특이적 T 세포의 음성 선택으로 인해 T 세포 반응을 야기하지 않는다. 따라서, 면역계는 외래- 또는 자기-항원을 제시하는 유핵 세포 사이를 구별하고 T 세포의 강력한 시토카인 방출 및 세포성 세포독성 메커니즘을 통해 감염된 세포를 특이적으로 표적화하고 박멸할 수 있다.
면역계의 힘은 미래의 암 요법을 위한 유망한 도구로서 인식되어 왔다. 지난 10년 동안, 연구는 입양 세포 전달 (ACT)을 사용함으로써 T 세포의 고유한 특성을 이용하는 것을 시작하였으며, 이는 생체외 확장된 공여자-유래된 림프구의 투여를 수반한다. ACT는 그가 환자의 면역-능력을 필요로 하지 않기 때문에 암의 치료에 대해 매력적인 개념이고, 전달된 림프구의 특이성은 전형적으로 자가 T 세포 반응을 효과적으로 유발하는 데 실패한 비-돌연변이된 및 따라서 면역원성이 낮은 종양 항원에 대해 표적화될 수 있다. 비록 ACT는 다양한 유형의 암에 대해 유망한 치료인 것으로 제시되었지만, 임상 치료로서의 그의 광범위한 적용은 각각의 환자로부터 종양-특이적 T 세포의 맞춤 단리 및 특징규명 - 어렵고 시간이 걸릴 수 있을 뿐만 아니라 종종 높은-결합력 T 세포를 생성하는 데 실패하는 공정 - 에 대한 필요에 의해 방해되었다 (Xue et al., Clin Exp Immunol. 2005 February; 139(2): 167-172; Schmitt et al., Hum Gene Ther. 2009 November; 20(11): 1240-1248).
1차 T 세포로의 종양 항원-특이적 T 세포 수용체 (TCR)의 유전자 전달은 그가 심지어 면역손상된 환자에서도 정의된 항원 특이성을 갖는 종양-반응성 T 림프구의 신속한 생성을 허용하기 때문에 ACT의 현재 한계 중 일부를 극복할 수 있다. 그러나, 종양 항원을 특이적으로 인식하고 목적하는 항-종양 효과를 생체내 나타내는 TCR을 보유하는 적합한 T 세포 클론의 확인은 여전히 진행 중인 연구의 주제이다. 2012년에 약 1,410만 개의 새로운 케이스의 암이 전 세계적으로 발생하였고 암이 현재 전 세계적으로 모든 인간 사망의 약 14.6 %의 원인인 것을 고려하면, 신규하고 효율적인 치료 옵션이 시급히 요구된다. 상기 제시된 필요를 따르는 것이 본 발명의 목적이다.
PRAME은 다양한 종양, 바람직하게는 흑색종에서 발현된 종양-연관된 항원이다. 추가로, PRAME은 전이, 예컨대 포도막 흑색종에 대한 독립적인 바이오마커로서 (Fiedl et al., Clin Cancer Res 2016 March; 22(5): 1234-1242) 및 DLBCL에 대한 예후 마커로서 (Mitsuhashi et al., Hematology 2014, 1/2014) 기재되었다. 이는 고환을 제외하고, 정상 조직에서 발현되지 않는다. 이 발현 패턴은 다른 암 고환 (CT) 항원, 예컨대 MAGE, BAGE 및 GAGE의 것과 유사하다. 그러나, 이들 다른 CT 항원과 달리, 이 유전자는 또한 급성 백혈병에서 발현된다. 코딩된 단백질은 레틴산 수용체의 억제자로서 작용하고, 이 기능을 통해 암 세포에 대한 성장 이점을 부여할 가능성이 있다. 대안적인 스플라이싱은 다수의 전사 변이체를 초래한다. 삼중 음성 유방암에서의 PRAME 과다발현은 또한 상피에서-중간엽으로의 전이의 유도를 통해 암 세포 운동성을 촉진하는 것으로 발견되었다 (Al-Khadairi et al., Journal of Translational Medicine 2019; 17: 9). PRAME의 결실이 만성 림프구성 백혈병에서 보고되었으나, 이는 유전자가 B 세포에서 발현되지 않고, 결실은 생리학적 이뮤노글로불린 경쇄 재배열의 결과이기 때문에 기능적으로 관련이 있지 않다.
2012년에 약 1,410만 개의 새로운 케이스의 암이 전 세계적으로 발생하였고 암이 현재 전 세계적으로 모든 인간 사망의 약 14.6%의 원인인 것을 고려하면, 신규하고 효율적인 치료 옵션이 시급히 요구된다.
따라서, 본 발명의 기초가 되는 기술적 문제는 상기 제시된 목적을 따르는 것이었다. 기술적 문제는 본원에 기재되고, 실시예에 예시되고 청구항에 정의된 바와 같은 수단 및 방법에 의해 해결되었다.
본 발명은
아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드이며, 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드, 또는
상기 폴리펩티드의 부분, 또는
상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태
에 결합할 수 있는 T 세포 수용체 (TCR)에 관한 것이며,
여기서 TCR은 하기를 포함한다:
(A) 하기의 CDR3
(Aa) 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한), 또는 바람직하게는 100% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄, 및/또는
(Ab) 서열식별번호: 14에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한, 또는 바람직하게는 100% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄,
또는
(B) 하기의 CDR3
(Ba) 서열식별번호: 40에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한), 또는 바람직하게는 100% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄, 및/또는
(Bb) 서열식별번호: 42에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한, 또는 바람직하게는 100% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄.
놀랍게도 본 발명의 맥락에서 발견된 바와 같이, PRAME 펩티드의 부분, 즉 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2; PRAME301-309)에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드이며, 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드는 인간 백혈구 항원 부류 A (HLA-A)를 통해 세포에 의해 제시되고 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR에 의해 효과적으로 인식된다. 상기 폴리펩티드에 대한 본 발명의 TCR을 포함하는 세포의 결합은 본 발명의 TCR로 형질도입된 T-세포에 의한 유의한 IFN-감마 (IFN-γ) 분비 및 이러한 폴리펩티드-적재된 세포의 효과적인 살해를 야기한다. 본원에 추가로 기재되고 명시된 바와 같은, 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2; PRAME301-309)에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드이며, 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드는 또한 본원에서 "PRAMEL-L-펩티드"로서 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "T 세포 수용체" 또는 "TCR"은 모든 문법적 형태로 본래의 TCR뿐만 아니라 TCR 변이체, 단편 및 구축물을 포함한다. 따라서 용어는 TCR 알파 및 베타 쇄를 포함하는 이종이량체뿐만 아니라 다량체 및 단일 쇄 구축물을 포함하며; 임의로 추가 도메인 및/또는 모이어티를 포함한다.
본 발명에 따라, 그의 본래의 형태로, TCR은 T 세포의 표면 상에 여러 단백질의 복합체로서 존재한다. T 세포 수용체는 독립적인 T 세포 수용체 알파 및 베타 (TCR α 및 TCR β) 유전자로부터 생산되고 알파 (α-) 및 베타 (β-) 쇄로 불리는 2개의 (별개의) 단백질 쇄로 구성된다. TCR의 각각의 쇄는 1개의 N-말단 이뮤노글로불린-유사 (Ig)-가변 (V) 도메인/영역, 1개의 Ig-불변-유사 (C) 도메인/영역, 원형질막에 쇄를 고정시키는 막관통/세포막-걸친 영역, 및 C-말단 단부에서의 짧은 세포질 테일을 보유한다.
본 발명에 따라, 항원 특이성은 알파 및 베타 쇄의 가변 영역에 의해 부여된다. TCR 알파 쇄 및 베타 쇄의 두 가변 도메인은 프레임워크 (FR) 영역에 의해 둘러싸인 3개의 초가변 또는 상보성 결정 영역 (CDR1알파/베타, CDR2알파/베타 및 CDR3알파/베타)를 포함한다. CDR3은 항원 인식 및 특이성 (즉 특이적 항원을 인식하고 이와 상호작용하는 능력)의 주요 결정인자인 반면에, CDR1 및 CDR2는 주로 항원 펩티드를 제시하는 MHC 분자와 상호작용한다.
본래의 TCR은 항원 제시 세포의 표면에서 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 분자에 결합된 ("상에 제시된/디스플레이된") 항원 펩티드를 인식한다. MHC 분자 상에 제시된 항원 펩티드는 또한 본원에서 "펩티드:MHC 복합체" 또는 "펩티드:HLA(-A) 복합체"로서 지칭된다. 2개의 상이한 부류의 MHC 분자: MHC I 및 MHC II가 있으며, 이는 상이한 세포 구획으로부터의 펩티드를 제시한다. MHC 부류 I 분자는 인체 전체에 걸친 모든 유핵 세포의 표면 상에 발현되고 세포내 구획으로부터의 펩티드 또는 단백질 단편을 세포독성 T 세포에 디스플레이한다. 인간에서, MHC는 또한 인간 백혈구 항원 (HLA)으로 불린다. 3개의 주요 유형의 MHC 부류 I: HLA-A, HLA-B 및 HLA-C가 있다. TCR이 그의 특이적 펩티드:MHC (예를 들어, 펩티드:HLA-A) 복합체에 결합하면, T 세포가 활성화되고 생물학적 이펙터 기능을 발휘한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본 발명에 따라 기재되고 제공된 TCR은 이들의 항원 표적, 즉 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드이며, 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드 (PRAMEL-L-펩티드), 또는 상기 폴리펩티드의 부분, 또는 상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태에 특이적으로 결합한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "특이적(으로) 결합하는"은 일반적으로 TCR이 그의 항원 결합 부위를 통해 무작위의, 관련이 없는 비-표적 항원보다 더 용이하게 그의 의도된 항원 표적에 결합하는 것을 나타낸다. 항원-상호작용-부위와 그의 특이적 항원의 특이적 상호작용은 또한 항원에 대한 상기 부위의 단순 결합을 초래할 수 있다. 게다가, 항원-상호작용-부위와 그의 특이적 항원의 특이적 상호작용은 대안적으로, 예를 들어 항원의 형태의 변화, 항원의 올리고머화 등의 유도로 인해 신호의 개시를 초래할 수 있다. 전형적으로, 본 맥락에서 및 본 발명에 따라, 본원에 사용된 바와 같은 "특이적 결합"은 10-5M 또는 10-6M보다 더 높은 반수-최대 IFN-γ 분비 (EC50)에 의해 결정된 바와 같은 기능적 친화도를 의미한다. 바람직하게는, 본 발명의 맥락에서, 결합은 결합 친화도가 약 10-11 내지 10-8 M (EC50), 바람직하게는 약 10-11 내지 10-9 M일 때 특이적인 것으로 간주된다.
본원에 제시된 바와 같은, 본 발명의 맥락에서 기재되고 제공된 TCR은 특히 HLA-A 분자를 통해 세포 상에 제시될 때 (즉 그의 각각의 HLA-A 결합된 형태임), 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분을 인식한다. 항원 펩티드는 그가 HLA-A 분자 (항원 제시 세포, 예컨대 수지상 세포 또는 종양 세포의 표면 상에 존재할 수 있거나, 또는 예를 들어 비드 또는 플레이트에 코팅함으로써 고정될 수 있음)와 복합체를 형성할 때 그의 "HLA-A 결합된 형태"로 존재하는 것으로 언급된다. 본 발명의 맥락에서, 이러한 HLA-A 분자는 임의의 (하위-)대립유전자 유형의 것이고 특히 대립유전자 HLA-A*24 또는 HLA-A*02에 의해 코딩된 HLA-A 분자를 포함할 수 있다. 이와 같이, 본원에 기재되고 제공된 TCR은 특히 본원에 기재되고 명시된 바와 같이 HLA-A*24 또는 HLA-A*02 분자를 통해 세포 상에 제시될 때, 즉 그의 각각의 HLA-A*24 또는 HLA-A*02 결합된 형태로 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분에 결합한다. 구체적인 실시양태에서, HLA-A*24는 HLA-A*24:02 코딩된 분자이고/거나, HLA-A*02는 HLA-A*02:17 코딩된 분자이다. 이와 같이, 본원에 기재되고 제공된 TCR은 특히 본원에 기재되고 명시된 바와 같이 HLA-A*24:02 또는 HLA-A*02:17 분자를 통해 세포 상에 제시될 때, 즉 그의 각각의 HLA-A*24:02 또는 HLA-A*02:17 결합된 형태로 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분에 결합한다. 바람직한 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재되고 제공된 TCR은 특히 본원에 기재되고 명시된 바와 같이 HLA-A*24:02 분자를 통해 세포 상에 제시될 때, 즉 그의 각각의 HLA-A*24:02 결합된 형태로 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분에 결합한다.
본 발명에 따라, 아미노산 서열의 맥락에서 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "유사한"은 제공된 아미노산 서열이 각각의 서열식별번호의 아미노산 서열과 비교하여 동일한 아미노산 또는 오직 보존적 또는 고도로 보존적 치환만을 포함하는 것을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은, "보존적" 치환은 하기 표 I에서의 "예시적인 치환"과 같이 열거된 바와 같은 치환을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 "고도로 보존적" 치환은 하기 표 I에서의 제목 "바람직한 치환" 하에 제시된 바와 같은 치환을 의미한다.
표 I 아미노산 치환
Figure pct00001
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아미노산" 또는 "아미노산 잔기"는 전형적으로 관련 기술분야에서 인식된 정의를 갖는 아미노산, 예컨대 알라닌 (Ala 또는 A); 아르기닌 (Arg 또는 R); 아스파라긴 (Asn 또는 N); 아스파르트산 (Asp 또는 D); 시스테인 (Cys 또는 C); 글루타민 (Gln 또는 Q); 글루탐산 (Glu 또는 E); 글리신 (Gly 또는 G); 히스티딘 (His 또는 H); 이소류신 (Ile 또는 I): 류신 (Leu 또는 L); 리신 (Lys 또는 K); 메티오닌 (Met 또는 M); 페닐알라닌 (Phe 또는 F); 프롤린 (Pro 또는 P); 세린 (Ser 또는 S); 트레오닌 (Thr 또는 T); 트립토판 (Trp 또는 W); 티로신 (Tyr 또는 Y); 및 발린 (Val 또는 V)으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 지칭하지만, 변형된, 합성, 또는 드문 아미노산이 목적하는 바와 같이 사용될 수 있다. 일반적으로, 아미노산은 비극성 측쇄 (예를 들어, Ala, Cys, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Val); 음으로 하전된 측쇄 (예를 들어, Asp, Glu): 양으로 하전된 측쇄 (예를 들어, Arg, His, Lys); 또는 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, Asn, Cys, Gln, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr)를 갖는 것으로 분류될 수 있다.
본 발명에 따라 사용될 때 용어 "위치"는 본원에 도시된 아미노산 서열 내의 아미노산의 위치를 의미한다. 본 맥락에서 용어 "상응하는"은 또한 위치가 오직 선행 뉴클레오티드/아미노산의 수에 의해서만 결정되지 않는 것을 포함한다.
2개 이상의 서열 (예를 들어, 핵산 서열 또는 아미노산 서열) 사이의 동일성의 수준은 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해, 예를 들어, BLAST 분석에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 맥락에서, 예를 들어, 서열 비교에 의해 비교될 2개의 서열 (예를 들어, 폴리뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열)이 동일성이 상이한 경우에, 용어 "동일성"은 보다 짧은 서열 및 상기 보다 짧은 서열과 매치하는 보다 긴 서열의 해당 부분을 지칭할 수 있다. 따라서, 비교되는 서열이 동일한 길이를 갖지 않을 때, 동일성의 정도는 바람직하게는 보다 긴 서열에서의 뉴클레오티드 잔기와 동일한 보다 짧은 서열에서의 뉴클레오티드 잔기의 백분율 또는 보다 짧은 서열에서의 뉴클레오티드 서열과 동일한 보다 긴 서열에서의 뉴클레오티드의 백분율을 지칭할 수 있다. 본 맥락에서, 통상의 기술자는 위치에서 보다 짧은 서열과 매치하는 보다 긴 서열의 해당 부분을 용이하게 결정한다. 더욱이, 본원에 사용된 바와 같은, 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 동일성 수준은 각각의 서열의 전체 길이를 지칭할 수 있고 바람직하게는 쌍별 평가되며, 여기서 각각의 갭은 1개의 미스매치로서 계수되어야 한다. 서열 비교 (예를 들어, "동일성" 값의 확립)에 대한 이들 정의는 본원에 기재되고 개시된 모든 서열에 대해 적용되어야 한다.
게다가, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "동일성"은 상응하는 서열 사이에 기능적 및/또는 구조적 동등성이 있다는 것을 의미한다. 본원에-기재된 특정 핵산/아미노산 서열에 대해 제공된 동일성 수준을 갖는 핵산/아미노산 서열은, 바람직하게는, 동일한 생물학적 기능을 갖는 이들 서열의 유도체/변이체를 나타낼 수 있다. 이들은 천연 발생 변이, 예를 들어 다른 품종, 종 등으로부터의 서열, 또는 돌연변이일 수 있고, 상기 돌연변이는 천연 형성되었을 수 있거나 또는 의도적인 돌연변이유발에 의해 생산되었을 수 있다. 더욱이, 변이는 합성적으로 생산된 서열일 수 있다. 변이체는 천연 발생 변이체 또는 합성적으로 생산된 변이체 또는 재조합체 DNA 기술에 의해 생산된 변이체일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 서열 (예를 들어, 아미노산 또는 핵산 서열)로부터의 편차는, 예를 들어, 결실, 치환, 부가, 삽입 및/또는 재조합을 포함할 수 있다. 용어 "부가"는 핵산 잔기/아미노산을 제공된 서열의 단부 또는 시작에 부가하는 것을 지칭하는 반면에, "삽입"은 핵산 잔기/아미노산을 제공된 서열 내에 삽입하는 것을 지칭한다. 용어 "결실"은 제공된 서열에서의 핵산 잔기 또는 아미노산 잔기의 결실 또는 제거를 지칭한다. 용어 "치환"은 제공된 서열에서의 핵산 잔기/아미노산 잔기의 대체를 지칭한다. 다시, 본원에 사용된 바와 같은 이들 정의는 달리 명시되지 않는 한, 준용하여, 본원에 제공되고 기재된 모든 서열에 대해 적용된다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 폴리펩티드이며, 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환되고 본 발명의 TCR이 (특이적으로) 결합하는 것인 폴리펩티드에서, 위치 2Y 및 8F는 치환되지 않는다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, 위치 6L은 오직 보존적 또는 바람직하게는 고도로 보존적 치환만을 갖거나, 또는 더욱 더 바람직하게는, 치환되지 않는다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 상기 폴리펩티드 (PRAMEL-L-펩티드)는 위치 2Y, 6L 및 8F (서열식별번호: 2에 대함)에서 치환을 갖지 않는다. 본 발명의 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 폴리펩티드 (PRAMEL-L-펩티드)는 위치 2Y, 5S, 6L, 7F 및 8F (서열식별번호: 2에 대함)에서 치환을 갖지 않는다.
용어 "폴리펩티드"는 달리 구체적으로 지시되지 않는 한 용어 "단백질" 또는 "펩티드"와 동등하게 본원에 사용된다. 단백질 (통상적으로 30개 미만의 아미노산을 갖는 그의 단편, 바람직하게는 생물학적으로 활성 단편, 및 펩티드를 포함함)은 공유 펩티드 결합을 통해 서로 커플링된 1개 이상의 아미노산을 포함한다 (아미노산의 쇄를 생성함). 본원에 사용된 바와 같은 용어 "폴리펩티드"는 전형적으로 15개 초과의 아미노산을 포함하는 분자의 그룹을 기재한다. 폴리펩티드는 다량체, 예컨대 이량체, 삼량체 및 보다 고차 올리고머 (즉 1개 초과의 폴리펩티드 분자로 이루어짐)를 추가로 형성할 수 있다. 이러한 이량체, 삼량체 등을 형성하는 폴리펩티드 분자는 동일하거나 또는 동일하지 않을 수 있다. 이러한 다량체의 상응하는 보다 고차 구조는, 결과적으로, 동종- 또는 이종이량체, 동종- 또는 이종삼량체 등으로 불린다. 이종다량체에 대한 예는 그의 천연 발생 형태에서, 2개의 동일한 경쇄 폴리펩티드 및 2개의 동일한 중쇄 폴리펩티드로 이루어진 항체 분자이다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 또한 천연 변형된 폴리펩티드/단백질을 지칭하며, 여기서 변형은 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 인산화 등과 같은 번역-후 변형에 의해 초래된다. 이러한 변형은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 폴리펩티드의 맥락에서, (제공된 폴리펩티드의) 용어 "부분"은 이러한 폴리펩티드의 연속하는 부분을 의미하며, 여기서 이러한 폴리펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단 부분은 결실될 수 있다. 바람직하게는, 본원에 사용된 바와 같은, "부분"은 상기 폴리펩티드의 적어도 5개, 보다 바람직하게는 6 또는 7개, 및 가장 바람직하게는 적어도 8개의 연속하는 아미노산을 포함한다. 본 발명에 따라, 이러한 "부분"은 바람직하게는 "기능적 부분"이고, 즉 이는 (특이적) 결합을 통해 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR에 의해 여전히 인식되고 바람직하게는 상기 TCR을 포함하는 세포에 의한 IFN-γ 분비를 유도한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본원에 기재되고 추가로 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분, 또는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 그의 HLA-A 결합된 형태에 대한 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR의 결합은 상기 TCR을 포함하는 세포에 의한 IFN-γ 분비를 유도한다. 하나의 실시양태에서, 본 맥락에서 및 본 발명에 따라, 본 발명의 TCR을 포함하는 이러한 세포의 IFN-γ 분비의 수준은 상기 TCR을 포함하지 않는 대조군 세포와 비교하여, 또는 관련이 없는 펩티드 (즉 본원에 기재되고 추가로 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분이 아닌 펩티드)에 결합하는 상기 TCR을 포함하는 세포와 비교하여 본원에 기재되고 추가로 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드 (또는 그의 부분, 또는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 그의 HLA-A 결합된 형태)에 결합 시 적어도 3-배, 바람직하게는 적어도 5-배, 10-배 또는 20-배 더 높다. 본 발명의 맥락에서, 및 또한 본원에 기재되고 예시된 바와 같은, IFN-감마의 측정은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어, ELISA에 의해 수행될 수 있다. 예로서, 이러한 검정 (예를 들어, ELISA)에 대해, PRAMEL-L-펩티드 (및 대조군으로서의 관련이 없는 펩티드)의 농도는 약 10-5M일 수 있고, TCR-포함 세포 대 표적 (단독 또는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 그의 HLA-A 결합된 형태의 PRAMEL-L-펩티드 또는 그의 부분)의 비율은 약 1:2일 수 있다. 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR을 포함하는 세포는 천연적으로, 또는 바람직하게는 형질도입, 형질감염, 또는 안정하게 핵산 분자를 세포 내로 삽입하는 임의의 다른 적합한 방법을 통해 이러한 TCR을 코딩하는 핵산 분자(들)를 받았을 수 있다. 상기 TCR을 포함하는 적합한 세포는 관련 기술분야에 공지되어 있고 또한 "숙주 세포(들)"로서 본원에 추가로 기재되고 제공된다. 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분을 제시하는 적합한 표적 세포는 바람직하게는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 상기 PRAMEL-L-펩티드, 또는 그의 부분을 HLA-A 분자를 통해 그의 HLA-A 결합된 형태로 제시할 수 있는 HLA-A 분자를 코딩하는 것이다. 본 맥락에서 및 본 발명에 따라, 본원에 기재된 바와 같은, HLA-A에 대한 구체적인 예는 HLA-A*24 (예를 들어, HLA-A*24:02) 및 HLA-A*02 (예를 들어, HLA-A*02:17)를 포함한다.
본 발명에 따라, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR (예를 들어, 본래의 TCR)은 바람직하게는 그의 항원 표적 (즉 PRAMEL-L-펩티드 또는 그의 부분, 또는, 바람직하게는, 예를 들어, 항원 제시 세포에 의해 HLA-A*24 (예를 들어, HLA-A*24:02) 또는 HLA-A*02 (예를 들어, HLA-A*02:17)-코딩된 분자 상에 제시된 바와 같은, 바람직하게는 항원 제시 세포에 의해 HLA-A*24:02-코딩된 분자 상에 제시된 바와 같은 그의 HLA-A 결합된 형태)에 높은 기능적 결합력으로 결합하는 것이다. 용어 "기능적 결합력"은 제공된 농도의 리간드에 시험관내 반응하는 TCR 발현 세포 (특히 본원에 기재된 바와 같은 본래의 TCR을 발현하는 T 세포)의 능력을 지칭하고, TCR 발현 세포의 생체내 이펙터 능력과 상관관계가 있는 것으로 여겨진다. 정의에 따르면, 높은 기능적 결합력을 갖는 TCR 발현 세포는 시험관내 시험에서 매우 낮은 항원 용량에 반응하지만, 보다 낮은 기능적 결합력의 이러한 세포는 이들이 높은-결합력 TCR 발현 세포의 것과 유사한 면역 반응을 시작하기 전에 보다 많은 양의 항원을 필요로 한다. 기능적 결합력은 따라서 TCR 발현 세포의 활성화 역치의 정량적 결정인자로서 간주될 수 있다. 이는 이러한 세포를 상이한 양의 동족 항원에 시험관내 노출시킴으로써 결정된다. 높은 기능적 결합력을 갖는 TCR 발현 세포는 낮은 항원 용량에 반응한다.
예를 들어, TCR 발현 세포는 전형적으로 그가 서열식별번호: 2에 따른 아미노산 서열을 갖는 PRAME 펩티드의 분자량을 갖는, 약 10-5 내지 약 10-11 M (즉 약 0.05 ng/mL 내지 약 5 ng/mL, 0.05 ng/mL, 0.1 ng/mL, 0.5 ng/mL, 1 ng/mL, 또는 5 ng/mL) 범위의 낮은 농도의 PRAME 펩티드로 적재된 항원-음성 HLA-A (예를 들어, HLA-A*24 (예를 들어, HLA-A*24:02) 또는 HLA-A*02 (예를 들어, HLA-A*02:17) 발현 표적 세포와 공동-배양 시 약 200 pg/mL 이상 (예를 들어 200 pg/mL 이상, 300 pg/mL 이상, 400 pg/mL 이상, 500 pg/mL 이상, 600 pg/mL 이상, 700 pg/mL 이상, 1000 pg/mL 이상, 5000 pg/mL 이상, 7000 pg/mL 이상, 10000 pg/mL 이상, 또는 20000 pg/mL 이상)의 인터페론 감마 (IFN-감마)를 분비하는 경우에 그의 항원 표적에 "높은" 기능적 결합력으로 결합하는 것으로 간주될 것이다. 그러므로, 본 발명의 TCR은 IFN-감마 면역검정에 의해 측정된 바와 같이, 10-5 M 미만의 반수-최대 상대 IFN-γ 분비 (EC50 값)를 초래하는 높은 기능적 결합력을 갖는 TCR이다. 바람직하게는, 초래된 반수-최대 상대 IFN-감마 분비 (EC50 값)는 IFN-감마 면역검정에 의해 측정된 바와 같이 10-6 M 미만이다 (도 4 및 실시예 4 참조).
시토카인 방출, 예컨대 IFN-감마 분비는 관련 기술분야에 공지되고 또한 본원에 달리 예시된 임의의 수단에 의해, 또는, 예를 들어, HLA-A*24:02 또는 HLA-A*02:17 공여자로부터 유래된 LCL이 ivtRNA로 형질감염되거나 또는, 예를 들어, 각각 서열식별번호: 2 또는 관련이 없는 펩티드의 아미노산 서열을 발현하도록 형질도입되고, 조사될 TCR을 발현하는 CD8+ 풍부한 및/또는 비-CD8+-풍부한 PBMC와 함께 인큐베이션되는 시험관내 검정 또는 서열식별번호: 2에 따른 PRAME 펩티드 또는 관련이 없는 펩티드로 외부 적재되고 후속적으로 조사될 TCR을 발현하는 CD8+ 풍부한 및/또는 비-CD8+-풍부한 PBMC와 함께 공동-인큐베이션된 T2 세포를 사용하는 시험관내 검정을 사용하여 측정될 수 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, (A)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 상응하는 CDR1 및/또는 CDR2 하위영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, (A)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 하기를 추가로 포함한다:
(Aa1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄의 CDR2, 및/또는
(Ab1) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄의 CDR2.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, (B)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 상응하는 CDR1 및/또는 CDR2 하위영역을 추가로 포함한다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, (B)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 하기를 추가로 포함한다:
(Ba1) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄의 CDR2, 및/또는
(Bb1) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄의 CDR2.
본 발명의 하나의 실시양태에서, (A)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 하기를 포함한다:
(Aa2) 서열식별번호: 16에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 16의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 16의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 16의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄 가변 영역,
및/또는
(Ab2) 서열식별번호: 18에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 18의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 18의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 18의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄 가변 영역.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, (B)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 TCR은 하기를 포함한다:
(Ba2) 서열식별번호: 44에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 44의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 44의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 44의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄 가변 영역,
및/또는
(Bb2) 서열식별번호: 46에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 46의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 46의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 46의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄 가변 영역.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 (i) TCR 알파 쇄 불변 영역, 및/또는 (ii) TCR 베타 쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 하나의 실시양태에서, TCR 알파 불변 영역 및/또는 TCR 베타 쇄 불변 영역은 뮤린 (murC), 예를 들어 각각 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 26, 최소 뮤린화 (mmC), 예를 들어 각각 서열식별번호: 29 및 서열식별번호: 30, 또는 인간 (huC), 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이, 예컨대 각각 서열식별번호: 28 및 서열식별번호: 29일 수 있다. 하나의 실시양태에서, TCR 알파 불변 영역 및/또는 TCR 베타 쇄 불변 영역은 예를 들어 문헌 [Boulter (2003), Protein Engineering 16, 9: 707-711], 특히 708 페이지 표 I에 기재된 바와 같이, TCR 알파 불변 영역이 TCR 베타 쇄 불변 영역과 1개 이상의 시스테인 다리를 만들거나, 또는 그 반대일 수 있도록, 예를 들어 세린 또는 트레오닌 잔기를 대체하는 1개 이상의 시스테인 잔기를 함유할 수 있다. 하나의 실시양태에서, 본 발명에 따라, TCR 알파 쇄 불변 영역은 서열식별번호: 27에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있다. 하나의 실시양태에서, 본 발명에 따라, TCR 베타 쇄 불변 영역은 서열식별번호: 28에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어질 수 있다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, (A)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 하기를 포함한다:
(Aa3) 서열식별번호: 20에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 20의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 20의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 20의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄,
및/또는
(Ab3) 서열식별번호: 22에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 22의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 22의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 22의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, (B)에 따른 CDR3을 포함하는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 하기를 포함한다:
(Ba3) 서열식별번호: 48에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 48의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 48의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 48의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 알파 쇄,
및/또는
(Bb3) 서열식별번호: 50에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 50의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 50의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고,
서열식별번호: 50의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 유사하거나 또는 동일한 (바람직하게는 동일한) 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 TCR 베타 쇄.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 하기를 포함한다:
(A) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는, (Aa) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 알파 쇄, (Aa1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 알파 쇄, (Aa2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 알파 쇄 또는 (Aa3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 알파 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및 (Ab) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 베타 쇄, (Ab1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 베타 쇄, (Ab2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 베타 쇄 또는 (Ab3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 베타 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역, 또는
(B) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는, (Ba) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 알파 쇄, (Ba1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 알파 쇄, (Ba2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 알파 쇄 또는 (Ba3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 알파 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및 (Bb) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 베타 쇄, (Bb1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 베타 쇄, (Bb2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 베타 쇄 또는 (Bb3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 베타 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역.
본 발명에 따라, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 임의의 종류의 TCR일 수 있다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, TCR은 본래의 TCR, TCR 변이체, TCR 단편, 및 TCR 구축물로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, TCR은 수용성이다.
본 발명에 따라, 모든 TCR 변이체는 바람직하게는 본 발명의 TCR의 기능적 변이체이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "기능적 변이체"는 모 TCR, 그의 가변 영역 또는 그의 항원-결합 영역과 실질적인 또는 유의한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 TCR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 지칭하고 그의 생물학적 활성, 즉 본 발명의 모 TCR이 본원에 개시되고 첨부된 실시예에서 평가된 TCR과 유사하거나, 동일하거나 또는 더욱 더 높은 정도로 항원 특이성을 갖는 항원 표적에 특이적으로 결합하는 그의 능력을 공유한다. 또한 TCR 서열 변이체가 본 발명에 의해 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "TCR 변이체"는 본원에 개시된 TCR의 "서열 변이체", 즉 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 TCR (또한 "모" TCR로서 지칭됨)의 아미노산 서열을 실질적으로 포함하나 "모" TCR 아미노산 서열과 비교하여 적어도 1개의 아미노산 변형 (즉 치환, 결실, 또는 삽입)을 함유하는 변이체를 포함하며, 단, 변이체는 바람직하게는 본 발명의 "모" TCR의 항원 특이성을 보유한다. 본 발명의 TCR 서열 변이체는 전형적으로 적절한 뉴클레오티드 변화를 "모" TCR을 코딩하는 핵산으로 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조된다. 일반적으로, 상기 언급된 아미노산 변형은 TCR의 가변 영역 또는 불변 영역으로 도입되거나, 또는 이에 존재할 수 있고 결합 강도 및 특이성, 번역-후 프로세싱 (예를 들어 글리코실화), 열역학적 안정성, 용해도, 표면 발현 또는 TCR 조립과 같은 특성을 조정하는 역할을 할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "TCR"은 TCR 구축물을 추가로 포함한다. 용어 "구축물"은 본 발명의 TCR의 적어도 1개의 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 포함하나, 반드시 본래의 TCR의 기본 구조 (즉 TCR 알파 쇄 및 TCR 베타 쇄에 혼입되어 이종이량체를 형성하는 가변 도메인)를 공유하지 않는다. TCR 구축물 및 단편은 전형적으로 일상적인 유전자 조작 방법에 의해 수득되고 종종 추가적인 기능적 단백질 또는 폴리펩티드 도메인을 포함하도록 인공적으로 구축된다. 상기에 따라, 본 발명의 TCR 구축물 및 단편은 본원에서 다른 곳에 개시된 바와 같은 적어도 1개의 CDR3 알파 및/또는 적어도 1개의 CDR3 베타를 포함하는 것으로 예상된다. 적어도 1개의 CDR1 알파, CDR2 알파, CDR1 베타, CDR2 베타, 알파 쇄 가변 영역, 베타 쇄 가변 영역, 알파 쇄 및/또는 베타 쇄, 또는 이들의 조합을, 임의로 본원에 예시된 바와 같은 추가 단백질 도메인 또는 모이어티와 조합되어 포함하는 구축물 및 단편이 본원에 추가로 예상된다. 본원에 제공된 TCR 구축물 및 단편은 상기 기재되고 첨부된 실시예에 평가된 본 발명의 TCR과 동일한 항원 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 것으로 예상된다.
본 발명의 TCR은 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 가변 영역 또는 TCR 알파 쇄 및 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 가변 영역이 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는 이종이량체 및 다량체를 포함한다. 본 발명에 사용된 바와 같은 "다량체"는 다양한 서브유닛 또는 기능적 개체의 분자를 기재하지만 이종이량체는 오직 2개의 기능적 개체만을 포함한다. 그의 가장 단순한 형태에서 본 발명에 따른 다가 TCR 구축물은 바람직하게는 링커 분자를 통해 서로 연관된 (예를 들어 공유 또는 달리 연결된) 2개 또는 3개 또는 4개 이상의 TCR의 다량체를 포함한다. 본 맥락에서 "공유 연결된"은 원자 결합 사이의 안정한 균형을 기재하는 전자 쌍을 공유하는, 2개 분자 사이의 화학 결합을 의미한다.
본 발명에 따라, 적합한 링커는 구면체, 바람직하게는 균일한 비드, 보다 바람직하게는 폴리스티렌 비드, 가장 바람직하게는 생체적합성 폴리스티렌 비드를 가질 수 있다. 이러한 TCR 구축물은 또한 본 발명의 TCR 및 비드로 혼입된 미리-정의된 형광 염료를 갖는 비드에 의해 포함될 수 있다. 적합한 링커 분자는 다가 부착 분자, 예컨대 아비딘, 스트렙타비딘, 뉴트라비딘 및 엑스트라비딘을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 이들 각각은 비오틴에 대해 4개의 결합 부위를 갖는다. 따라서, 비오티닐화 TCR은 복수의 TCR 결합 부위를 갖는 다량체로 형성될 수 있다. 다량체에서의 TCR의 수는 다량체를 만드는 데 사용된 링커 분자의 양에 대한 TCR의 양, 및 또한 임의의 다른 비오티닐화 분자의 존재 또는 부재에 의존할 것이다. 예시적인 다량체는 이량체성, 삼량체성, 사량체성 또는 오량체성이거나 또는 보다 고차 다량체 TCR 구축물이다. 본 발명의 다량체는 또한 추가 기능적 개체, 예컨대 표지 또는 약물 또는 (고체) 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라, TCR 이종이량체 또는 다량체는 또한 적어도 1개의 TCR 알파 쇄, TCR 알파 쇄 가변 영역 또는 CDR3 알파 및/또는 적어도 1개의 TCR 베타 쇄, TCR 베타 쇄 가변 영역 또는 CDR3 베타; 및 추가로 1개 이상의 융합 구성 요소(들)를 포함하는 융합 단백질 또는 폴리펩티드에 관한 것이다. 이는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 및/또는 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 및/또는 림프구의 표면 상 항원 또는 에피토프에 대해 지시되는 항체 또는 단일 쇄 항체 단편 (scFv)일 수 있고, 또한 TCR 알파 쇄(들) 및 TCR 베타 쇄(들)는 서로 연결되고, 임의로 링커를 통해, 상기 항체 또는 scFv에 융합된다. 유용한 구성 요소는 Fc 수용체; Fc 도메인 (IgA, IgD, IgG, IgE, 및 IgM으로부터 유래됨); 시토카인 (예컨대 IL-2 또는 IL-15); 독소; 항체 또는 그의 항원-결합 단편 (예컨대 항-CD3, 항-CD28, 항-CD5, 항-CD16 또는 항- CD56 항체 또는 그의 항원-결합 단편); CD247 (CD3-제타), CD28, CD137, CD134 도메인; 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
본 발명에 따른 융합 구성 요소로서 사용될 수 있는 예시적인 항체 단편은 전장 항체의 단편, 예컨대 (s)dAb, Fv, Fd, Fab, Fab', F(ab')2 또는 "r IgG" ("절반 항체"); 변형된 항체 단편, 예컨대 scFv, 디-scFv 또는 비(s)-scFv, scFv-Fc, scFv-지퍼, scFab, Fab2, Fab3, 디아바디, 단일 쇄 디아바디, 탠덤 디아바디 (Tandab's), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv, 미니바디, 멀티바디, 예컨대 트리아바디 또는 테트라바디, 및 단일 도메인 항체, 예컨대 나노바디 또는 VHH, VH 또는 VL일 수 있는, 오직 1개의 가변 도메인만을 포함하는 단일 가변 도메인 항체를 포함한다.
본 발명의 TCR 구축물은 1개 이상의 항체 또는 항체 단편에 융합될 수 있으며, 이는 1가, 2가 및 다가/다가 구축물 및 따라서 오직 1개의 표적 항원에만 특이적으로 결합하는 단일특이적 구축물뿐만 아니라 별개의 항원 결합 부위를 통해 1개 초과, 예를 들어 2개, 3개 이상의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 이중특이적 및 다중특이적/다중특이적 구축물을 생성한다.
임의로, 링커는 본 발명의 TCR 구축물의 1개 이상의 도메인 또는 영역 사이, 즉 TCR 알파 쇄 CDR3, TCR 알파 쇄 가변 영역, 및/또는 TCR 알파 쇄, TCR 베타 쇄 CDR3, TCR 베타 쇄 가변 영역, 및/또는 TCR 베타 쇄, 및/또는 본원에 기재된 1개 이상의 융합 구성 요소(들) 사이에 도입될 수 있다. 링커는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 그 중에서도, 문헌 [Chen et al., Adv Drug Deliv Rev. 2013 Oct. 15; 65(10): 1357-1369]에 의해 검토되었다. 일반적으로, 링커는 가요성, 절단가능한 및 강성 링커를 포함하고 구축물의 유형 및 의도된 용도/적용에 따라 선택될 것이다. 예를 들어, 치료적 적용의 경우, 비-면역원성, 가요성 링커는 종종 유해 면역원성 반응의 위험을 감소시키면서 도메인 사이의 어느 정도의 유연성 또는 상호작용을 보장하기 위해 바람직하다. 이러한 링커는 일반적으로 작은, 비-극성 (예를 들어 Gly) 또는 극성 (예를 들어 Ser 또는 Thr) 아미노산으로 구성되고 Gly 및 Ser 잔기의 스트레치로 이루어진 "GS" 링커를 포함한다.
본 발명에 따라 예상되는 특히 유용한 TCR 구축물은 임의로 서로 연결되고, 임의로 링커를 통해, 림프구의 표면 상 항원 또는 에피토프에 대해 지시된 적어도 1개의 항체 또는 항체 단편 (예컨대 단일 쇄 항체 단편 (scFv))에 융합된, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 알파 쇄, TCR 알파 쇄 가변 영역 또는 CDR3 알파, 본원에 정의된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 베타 쇄, TCR 베타 쇄 가변 영역 또는 CDR3 베타를 포함하는 것이다. 항체 또는 항체 단편 (예를 들어 scFv)에 의해 인식된 유용한 항원 표적은 CD3, CD28, CD5, CD16 및 CD56을 포함한다. 상기 구축물은 일반적으로 "TCR 부분" (즉 TCR 알파 및 베타 쇄 또는 그의 가변 영역 또는 CDR3)이 본원에 정의된 항원 표적을 인식하는 그의 능력을 보유하고, "항체 부분"이 목적하는 표면 항원 또는 에피토프에 결합하며, 이로써 각각의 림프구를 표적 세포에 모집하고 표적화하는 한 임의의 구조를 가질 수 있다. 이러한 구축물은 유리하게 항원 표적 (예컨대 종양 세포) 및 림프구 (예컨대 세포독성 T 세포 또는 NK 세포)를 함께 디스플레이하는 항원 제시 세포를 연결하는 "어댑터"로서 역할을 할 수 있다. 이러한 융합 단백질의 예는 약 55 킬로달톤 (kD)의 단일 펩티드 쇄 상에서, 상이한 항체의 2개의 단일-쇄 가변 단편 (scFv)으로 이루어진 이중-특이적 T 세포 인게이저 (BiTE®)의 원리에 따라 조작된 구축물이다. 따라서, 본 발명의 TCR 구축물은 목적하는 결합 특이성의 scFv (또는 다른 결합 도메인), 예를 들어 CD3 또는 CD56에 연결된 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 항원 결합 도메인 (예를 들어 서로 융합된 TCR 가변 알파 및 가변 베타 쇄)을 포함할 수 있다. scFv (또는 다른 결합 도메인)은 예컨대 CD3 수용체를 통해 T 세포에 또는 NK 세포 활성화를 위해 CD56에 결합하고, 다른 것은 종양 세포 상에 특이적으로 발현된 항원 표적을 통해 종양 세포에 결합한다. 또한 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 항원 결합 도메인, scFv (또는 다른 결합 도메인) 및 예를 들어 신체 내에서 구축물을 작용 부위에 표적화하기 위한 추가 도메인 (예를 들어 Fc 도메인)을 포함하는 트리바디가 본원에 예상된다.
본 발명의 TCR은 "단리된" 또는 "실질적으로 순수한" 형태로 제공될 수 있다. 본원에 사용될 때 "단리된" 또는 "실질적으로 순수한"은 "단리된" TCR이 그의 치료 또는 진단 용도를 방해할 수 있는 그의 생산 환경으로부터 다른 오염물 구성 요소가 없거나 또는 실질적으로 없도록, TCR이 그의 생산 환경의 구성 요소로부터 분리되고/거나 회수된 것으로 확인되었다는 것을 의미한다. 오염물 구성 요소는 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. "단리된" TCR은 따라서 상기 TCR의 발현을 초래하는 조건 하에 숙주 세포를 인큐베이션하는 단계, 및 상기 TCR을 정제하는 단계를 통해 따라서 이들 오염물 구성 요소를 제거하거나 또는 실질적으로 제거하는 적어도 하나의 정제 단계를 함유하는, TCR을 수득하는 방법에 의해 제조될 것이다. 상기 언급된 정의는 준용하여 "단리된" 폴리뉴클레오티드/핵산에 동등하게 적용가능하다.
본 발명의 TCR은 가용성 형태로 제공될 수 있다. 가용성 TCR은, 예를 들어, 가용성 TCR에 의해 인식된 항원 표적을 발현하는 암 세포에 치료제 또는 이펙터 세포를 특이적으로 표적화하는 진단 도구, 및 담체 또는 "어댑터"로서 유용하다. 가용성 TCR (sTCR)은 전형적으로 TCR 알파 및/또는 베타 쇄, 또는 그의 가변 영역 또는 CDR을 포함하고, 임의로 예를 들어 본 발명의 TCR 구축물의 맥락에서 상기 기재된 바와 같은 디술피드 결합을 통해 안정화되거나 또는 적합한 링커 분자를 통해 공유 연결된 단편 또는 구축물일 것이다. 이들은 전형적으로 예를 들어 막관통 영역을 포함하지 않을 것이다. 일부 상황에서, 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 변형은 특히 상기 언급된 특색을 제공하지 않는 재조합체 숙주에서 생산될 때, 분자의 용해도, 및/또는 알파 및 베타 쇄의 정확한 폴딩 및 쌍 형성 (목적하는 경우에)을 증진시키기 위해 도입될 수 있다. 이. 콜라이(E. coli)를 생산 숙주 세포로서 사용할 때 예를 들어 TCR 알파 및 베타 쇄의 폴딩 및 쌍 형성은 전형적으로 시험관내 달성된다. 본 발명에 따른 TCR은 따라서 예를 들어 본원에서 다른 곳에 기재된 바와 같은 추가적인 시스테인 잔기를 포함할 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, TCR은 수용성이다.
추가적인 시스테인 다리 이외에, 다른 유용한 변형은, 예를 들어, TCR 알파 및/또는 베타 쇄의 폴딩, 발현 및/또는 쌍 형성을 증가시키기 위한 류신 지퍼 및/또는 리보솜 스킵핑 서열, 예를 들어 문헌 [Walseng et al., (2015), PLoS ONE 10(4): e0119559]에 기재된 바와 같은 피코르나 바이러스로부터의 서열 2A의 부가를 포함한다.
본 발명의 TCR은 하기에 기재된 바와 같은 1개 이상의 변형을 추가로 포함할 수 있다. 하기 기재된 변형은 전형적으로 공유 변형일 것이고 관련 기술분야에 공지된 표준 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 일부 상황에서, TCR에서의 아미노산 변형은 상기 변형의 도입을 용이하게 하기 위해 요구될 수 있다.
본 발명에 따라, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 1개 이상의 융합 구성 요소(들), 예를 들어 Fc 수용체; IgA, IgD, IgG, IgE, 및 IgM을 포함하는 Fc 도메인; IL-2 또는 IL-15를 포함하는 시토카인; 독소; 항-CD3, 항-CD28, 항-CDS, 항-CD16 또는 항-CD56 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편; 및 CD247 (CD3-제타), CD28, CD137, CD134 도메인, 또는 이들의 조합으로부터 선택된 것을 추가로 포함할 수 있고; 임의로 적어도 1개의 링커를 추가로 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은
(A) 임의로 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는, (Aa) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 알파 쇄, (Aa1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 알파 쇄, (Aa2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 알파 쇄 또는 (Aa3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 알파 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및 (Ab) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 베타 쇄, (Ab1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 베타 쇄, (Ab2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 베타 쇄 또는 (Ab3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 베타 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역, 또는
(B) 임의로 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는, (Ba) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 알파 쇄, (Ba1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 알파 쇄, (Ba2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 알파 쇄 또는 (Ba3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 알파 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및 (Bb) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR3 베타 쇄, (Bb1) 하에 본원에 기재된 바와 같은 CDR1/2 베타 쇄, (Bb2) 하에 기재된 바와 같은 TCR 가변 베타 쇄 또는 (Bb3) 하에 기재된 바와 같은 TCR 베타 쇄에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역
을 포함하며,
여기서 TCR은 림프구의 표면 상 항원 (예를 들어, CD3, CD28, CD5, CD16, 또는 CD56) 또는 에피토프에 대해 지시된 항체 또는 단일 쇄 항체 단편 (scFv)을 추가로 포함하고,
여기서 TCR 알파 쇄(들) 또는 그의 하위영역 및 TCR 베타 쇄(들) 또는 그의 하위영역은 서로 연결되고, 임의로 링커를 통해, 상기 항체 또는 scFv에 융합된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프"는 인식 분자 (예를 들어, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR)가 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 바람직하게는, 에피토프는 인식 분자, 바람직하게는 TCR 또는 항체가 생산되고/거나 TCR 또는 항체가 결합할 분자 상의 부위이다. 예를 들어, 에피토프는 인식 분자, 특히 바람직하게는 에피토프를 정의하는 TCR 또는 항체에 의해 인식될 수 있다. "선형 에피토프"는 아미노산 1차 서열이 인식된 에피토프를 포함하는 에피토프이다. 선형 에피토프는 전형적으로 고유한 서열에서 적어도 3개, 및 보다 통상적으로, 적어도 5개, 예를 들어, 약 8개 내지 약 10개의 아미노산을 포함한다.
본 발명의 하나의 실시양태에서, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR은 적어도 1개의 분자 마커를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 TCR, 특히 (가용성) TCR은 적어도 1개의 분자 마커로 표지될 수 있다. 유용한 분자 마커는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 임의로 다양한 길이의 링커를 통해 일상적인 방법을 사용하여 TCR 또는 TCR 변이체에 커플링될 수 있다.
일반적으로, 상이한 마커는 이들이 검출되어야 하는 검정에 따라, 다양한 부류에 속한다 - 하기 예는 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: 방사성 또는 중동위원소일 수 있는 동위원소 마커, 예컨대 방사성동위원소 또는 방사성핵종 (예를 들어 <3>H, <14>, <15>N, <35>S, <89>Zr, <90>Y, <99>Tc, <111>In, <125>I, <131>I); 자기 마커 (예를 들어 자기 입자); 산화 환원 활성 모이어티; 광학 염료 (발색단, 인광체 및 형광단을 포함하나, 이에 제한되지는 않음), 예컨대 형광 그룹 (예를 들어 FITC, 로다민, 란타나이드 인광체), 화학발광 그룹, 및 "소분자" 형광단 또는 단백질성 형광단일 수 있는 형광단; 효소적 그룹 (예를 들어 홀스래디시 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리 포스파타제; 비오티닐화 그룹; 또는 2차 리포터에 의해 인식된 미리결정된 폴리펩티드 에피토프 (예를 들어 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등). 분자 마커로 표지하는 것은 특히 TCR, TCR 변이체 또는 특히 가용성 TCR 구축물 (예컨대 본원에 기재된 바와 같은 적어도 1개의 TCR 알파 및/또는 TCR 베타 쇄를 포함하는 것)이 진단 용도를 위해 의도될 때 예상된다.
본 발명의 TCR, 특히 가용성 TCR은, 예를 들어 면역원성을 감소시키고/거나, 유체역학 크기 (용액 중 크기) 용해도 및/또는 안정성을 증가시키고/거나 (예를 들어 단백질 가수분해 분해에 대한 증진된 보호에 의함) 혈청 반감기를 연장하기 위해 추가 기능적 모이어티를 부착시킴으로써 변형될 수 있다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 예시적인 기능적 모이어티는 인체에서 다른 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 이뮤노글로불린 Fc 영역 또는 신생아 Fc 수용체 (FcRn), 다양한 길이의 폴리펩티드 쇄 (예를 들어 XTEN 기술 또는 패실레이션(PASylation)®), 다양한 폴리올, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG화), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 비-단백질성 중합체, 또는 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜, 또는 탄수화물의 공중합체, 예컨대 히드록시에틸 전분 (예를 들어 헤실레이션(HESylation)®) 또는 폴리시알산 (예를 들어 폴리센(PolyXen)® 기술)에 결합하는 펩티드 또는 단백질 도메인을 포함한다.
다른 유용한 기능적 모이어티는 환자의 신체에서 본 발명의 TCR을 운반하는 이펙터 숙주 세포를 차단하는 데 사용될 수 있는 "자살" 또는 "안전 스위치"를 포함한다. 예는 문헌 [Gargett and Brown Front Pharmacol. 2014; 5: 235]에 의해 기재된 유도성 카스파제 9 (iCasp9) "안전 스위치"이다. 간단하게, 이펙터 숙주 세포는 그의 이량체화가 소분자 이량체화제 약물, 예컨대 AP1903/CIP에 의존하고, 변형된 이펙터 세포에서의 아폽토시스의 신속한 유도를 초래하는 카스파제 9 도메인을 발현하도록 널리-공지된 방법에 의해 변형된다. 시스템은 예를 들어 EP2173869 (A2)에 기재되어 있다. 다른 "자살" "안전 스위치"에 대한 예, 예를 들어 단순 헤르페스 바이러스 티미딘 키나제 (HSV-TK), CD20의 발현 및 항-CD20 항체 또는 myc 태그를 사용하는 후속 고갈은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (Kieback et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Jan. 15;105(2):623-8). 본 발명의 TCR은 또한 유도성 소위 "온-스위치"를 도입함으로써 (예를 들어 WO2019175209A1에 기재된 바와 같음) 변형될 수 있으며, 여기서 본 발명의 TCR의 변형된 알파 및 베타 쇄는 오직 작은 이량체화제 약물과 상호작용 시 이량체화하여 후속적으로 오직 이량체화제 약물의 존재 하에 세포 표면 상에 발현되는 기능적 TCR을 초래한다.
변경된 글리코실화 패턴을 갖는 TCR이 또한 본원에 예상된다. 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 글리코실화 패턴은 아미노산 서열 (예를 들어 하기 논의된 특정 글리코실화 아미노산 잔기의 존재 또는 부재) 및/또는 단백질이 생산되는 숙주 세포 또는 유기체에 의존할 수 있다. 폴리펩티드의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 또는 O-연결된다. N-연결은 아스파라긴 잔기의 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. 결합 분자에의 N-연결된 글리코실화 부위의 부가는 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)으로부터 선택된 1개 이상의 트리-펩티드 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 편리하게 달성된다. O-연결된 글리코실화 부위는 시작 서열에의 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 도입될 수 있다.
TCR의 글리코실화의 또 다른 수단은 단백질에의 글리코시드의 화학적 또는 효소적 커플링에 의한 것이다. 사용된 커플링 기구에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카르복실 기, (c) 유리 술프히드릴 기, 예컨대 시스테인의 것, (d) 유리 히드록실 기, 예컨대 세린, 트레오닌, 또는 히드록시프롤린의 것, (e) 방향족 잔기, 예컨대 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판의 것, 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다.
유사하게, 탈글리코실화 (즉 결합 분자 상에 존재하는 탄수화물 모이어티의 제거)는 화학적으로, 예를 들어 TCR을 트리플루오로메탄술폰산에 노출시킴으로써, 또는 효소적으로 엔도- 및 엑소-글리코시다제를 이용함으로써 달성될 수 있다.
또한 약물, 예컨대 소분자 화합물을 TCR에, 특히 본 발명의 가용성 TCR에 부가하는 것을 생각할 수 있다. 결합은 공유 결합, 또는 비-공유 상호작용을 통해 예컨대 정전기력을 통해 달성될 수 있다. 관련 기술분야에 공지된 다양한 링커는 약물 접합체를 형성하기 위해 이용될 수 있다.
본 개시내용의 TCR, 특히 가용성 TCR은 각각의 분자 (태그)의 확인, 추적, 정제 및/또는 단리를 돕는 추가적인 도메인을 도입하도록 변형될 수 있다. 이러한 태그의 비-제한적인 예는 Myc-태그, HAT-태그, HA-태그, TAP-태그, GST-태그, 키틴 결합 도메인 (CBD-태그), 말토스 결합 단백질 (MBP-태그), Flag-태그, Strep-태그 및 그의 변이체 (예를 들어 Strep II-태그), His-태그, CD20, Her2/neu 태그, myc-태그, FLAG-태그, T7-태그, HA(헤마글루티닌)-태그, 또는 GFP-태그로서 공지된 펩티드 모티프를 포함한다.
에피토프 태그는 본 개시내용의 TCR로 혼입될 수 있는 태그의 유용한 예이다. 에피토프 태그는 특이적 항체의 결합을 허용하고 따라서 환자의 신체 또는 배양된 (숙주) 세포 내에서 가용성 TCR 또는 숙주 세포의 결합 및 움직임의 확인 및 추적을 가능하게 하는 아미노산의 짧은 스트레치이다. 에피토프 태그의 검출, 및 그러므로, 태그된 TCR은 다수의 상이한 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 이러한 기술의 예는 하기를 포함한다: 면역조직화학, 면역침전, 유세포 분석, 면역형광 현미경, ELISA, 면역블롯팅 ("웨스턴"), 및 친화도 크로마토그래피. 에피토프 태그는 예를 들어 6 내지 15개의 아미노산, 특히 9 내지 11개의 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 또한 본 발명의 TCR에서 1개 초과의 에피토프 태그를 포함하는 것이 가능하다.
태그는 추가로 상기 태그에 특이적인 결합 분자 (항체)의 존재 하에 세포를 배양함으로써 본 발명의 TCR을 운반하는 숙주 세포의 자극 및 확장에 이용될 수 있다.
본 발명은 추가로 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR을 코딩하는 핵산에 관한 것이다. 본 발명의 구체적인 실시양태에서, 이러한 핵산 분자는 서열식별번호: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 또는 21 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하거나; 또는 서열식별번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 또는 49 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 핵산 서열을 포함할 수 있다.
달리 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "핵산" 또는 "핵산 분자"는 "올리고뉴클레오티드", "핵산 가닥" 등과 동의어로 사용되고, 예를 들어, 단일- 또는 이중 가닥의 1개, 2개, 또는 그 초과의 뉴클레오티드를 포함하는 중합체를 의미한다.
일반적으로, 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리뉴클레오티드", "핵산" 및 "핵산 분자"는 동의어로 해석되어야 한다. 일반적으로, 핵산 분자는 그 중에서도 DNA 분자 (예컨대 dsDNA, ssDNA, cDNA), RNA 분자 (예컨대 dsRNA, ssRNA, mRNA ivtRNA), 올리고뉴클레오티드 티오포스페이트, 치환된 리보-올리고뉴클레오티드 또는 PNA 분자를 포함할 수 있다. 더욱이, 용어 "핵산 분자"는 DNA 또는 RNA 또는 그의 혼성체 또는 관련 기술분야에 공지된 그의 임의의 변형을 지칭할 수 있다 (예를 들어, 변형의 예에 대해 US 5525711, US 471 1955, US 5792608 또는 EP 302175 참조). 폴리뉴클레오티드 서열은 단일- 또는 이중- 가닥, 선형 또는 원형, 천연 또는 합성일 수 있고, 임의의 크기 제한은 없다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드 서열은 게놈 DNA, cDNA, 미토콘드리아 DNA, mRNA, 안티센스 RNA, 리보자임 RNA 또는 이러한 RNA를 코딩하는 DNA 또는 키메로플라스트(chimeroplast) (Gamper, Nucleic Acids Research, 2000, 28, 4332 - 4339)일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드 서열은 벡터, 플라스미드 또는 바이러스 DNA 또는 RNA의 형태일 수 있다. 또한 상기 기재된 핵산 분자에 상보성인 핵산 분자 및 본원에 기재된 핵산 분자에 혼성화할 수 있는 핵산 분자가 본원에 기재된다. 본원에 기재된 핵산 분자는 또한 본 발명의 맥락에서 핵산 분자의 단편일 수 있다. 특히, 이러한 단편은 기능적 단편이다. 이러한 기능적 단편의 예는 프라이머로서 역할을 할 수 있는 핵산 분자이다.
본 발명은 추가로 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자를 포함하는 벡터에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 특히 플라스미드, 코스미드, 바이러스, 박테리오파지 및 유전자 조작에 통상적으로 사용된 다른 벡터를 지칭한다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 벡터는 본원에 기재된 바와 같은 숙주 세포, 예를 들어, 원핵 세포 (예를 들어, (진정)박테리아, 고세균), 진핵 세포 (예를 들어, 포유류 세포, 곤충 세포) 진균 세포, 효모 등의 형질전환, 형질도입 및/또는 형질감염에 적합하다. 본 발명의 맥락에서 박테리아 숙주 세포의 예는 그람 음성 및 그람 양성 세포를 포함한다. 바람직하게는, 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어, 인간 세포이다. 적합한 숙주 세포에 대한 구체적인 예는 그 중에서도 림프모구 세포주, 세포독성 T 림프구 (CTL), CD8+ T 세포 (바람직하게는 자가 CD8+ 세포), CD4+ T 세포 (바람직하게는 자가 CD4+ 세포), T 기억 줄기 세포 (TSCM), 자연 살해 (NK) 세포 (예를 들어, 또한 WO2016/116601에 기재되고 제공된 바와 같이, CD3 (CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론을 포함함)을 재조합 발현하도록 변형됨), 자연 살해 T (NKT) 세포, 및 감마/ 델타-T 세포를 포함할 수 있다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 벡터는 숙주 세포의 안정한 형질전환에 적합하다.
따라서, 본 발명의 하나의 측면에서, 제공된 바와 같은 벡터는 발현 벡터이다. 일반적으로, 발현 벡터는 문헌에 널리 기재되었다. 대체로, 이들은 선택 마커 유전자 및 선택된 숙주에서의 복제를 보장하는 복제-기점뿐만 아니라, 프로모터, 및 대부분의 경우에 전사를 위한 종결 신호를 함유할 수 있다. 프로모터와 종결 신호 사이에 바람직하게는 발현될 것을 목적하는 핵산 서열/분자의 삽입을 가능하게 하는 적어도 1개의 제한 부위 또는 폴리링커가 있다. 본원에 제공된 벡터가 본 발명의 맥락에서 이용되기에 적합한 프로모터를 이미 포함하는 선행 기술에서 공지된 발현 벡터를 이용함으로써 생성된다는 것이 이해되어야 한다. 핵산 구축물은 바람직하게는 생성된 벡터가 본 발명의 맥락에서 이용되기에 적합한 오직 1개의 프로모터만을 포함하는 방식으로 해당 벡터 내로 삽입된다. 통상의 기술자는 어떻게 이러한 삽입이 실행될 수 있는 지를 안다. 예를 들어, 프로모터는 라이게이션 전에 핵산 구축물 또는 발현 벡터로부터 절제될 수 있다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 벡터는 숙주 세포 게놈으로 통합될 수 있다. 벡터는 각각의 숙주 세포, 바람직하게는 발현 벡터에 적합한 임의의 벡터일 수 있다. 본 발명의 맥락에서, 바람직한 벡터는 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 렌티바이러스 및 레트로바이러스 벡터를 포함한다.
복제 기점, 선택 마커, 및 제한 효소 절단 부위 이외에, 발현 벡터는 전형적으로 발현될 이종성 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 1개 이상의 조절 서열을 포함한다.
용어 "조절 서열"은 특정 숙주 유기체 또는 숙주 세포에서의 (이종성) 폴리뉴클레오티드의 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 핵산 서열을 지칭하고 따라서 전사 및 번역 조절 서열을 포함한다. 전형적으로, 원핵생물에서의 이종성 폴리뉴클레오티드 서열의 발현에 요구되는 조절 서열은 프로모터(들), 임의로 작동자 서열(들), 및 리보솜 결합 부위(들)를 포함하다. 진핵생물에서, 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 인핸서 및 임의로 스플라이스 신호가 전형적으로 요구된다. 게다가, 특정 개시 및 분비 신호는 또한 배양 배지로의 관심 폴리펩티드의 분비를 허용하기 위해 벡터로 도입될 수 있다.
핵산은 그가 특히 동일한 폴리뉴클레오티드 분자 상 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동가능하게 연결된다". 예를 들어, 프로모터는 해당 코딩 서열의 발현을 초래할 수 있을 때 이종성 유전자의 코딩 서열과 작동가능하게 연결된다. 프로모터는 전형적으로 관심 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 상류에 배치되고 상기 유전자의 발현을 조절한다.
포유류 숙주 세포 발현을 위한 예시적인 조절 서열은 포유류 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 지시하는 바이러스 요소, 예컨대 시토메갈로바이러스 (CMV) (예컨대 CMV 프로모터/인핸서), 원숭이 바이러스 40 (SV40) (예컨대 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스, (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)) 및 폴리오마로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서를 포함한다. 이전에 제시된 바와 같이, 발현 벡터는 또한 복제 기점 및 선택가능한 마커를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라, 특히 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터가 유용하다. 적합한 발현 벡터에 대한 예는 바이러스 벡터, 예컨대 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터 예를 들어 MP71 벡터 또는 레트로바이러스 SIN 벡터; 및 렌티바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 SIN 벡터를 포함한다. 본 발명의 TCR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 예를 들어 림프구를 감염시킬 수 있으며, 이는 후속적으로 이종성 TCR을 발현하는 것으로 예상된다. 적합한 발현 벡터에 대한 또 다른 예는 슬리핑 뷰티(Sleeping Beauty) (SB) 트랜스포존 트랜스포사제 DNA 플라스미드 시스템, SB DNA 플라스미드이다. 본 발명의 핵 부가물 및/또는 특히 발현 구축물은 또한 일시적인 RNA 형질감염에 의해 세포로 전달될 수 있다.
본래의 TCR 발현에 현재 사용된 바이러스 벡터는 전형적으로 1개의 벡터에서의 TCR-알파 및 TCR-베타 쇄 유전자를 돼지 트세코바이러스로부터 유래된 내부 리보솜 진입 부위 (IRES) 서열 또는 2A 펩티드 서열과 연결시켜, 형질도입된 세포 내에서 바이러스 프로모터의 제어 하에 단일 메신저 RNA (mRNA) 분자 발현을 초래한다.
본 발명은 추가로 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자, 또는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 다양한 숙주 세포는 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은, 용어 "숙주 세포"는 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 또는 벡터의 수용자일 수 있거나 또는 수용자인 세포를 포함하고/거나 본 발명의 TCR을 발현 (및 임의로 분비)한다. 용어 "세포" 및 "세포 배양"은 달리 명백하게 명시되지 않는 한 TCR의 공급원을 나타내는 데 상호교환적으로 사용된다. 용어 "숙주 세포"는 또한 숙주 세포주를 포함한다. 일반적으로, 용어 "숙주 세포"는 원핵 또는 진핵 세포를 포함하고, 또한 제한 없이 박테리아, 효모 세포, 진균 세포, 식물 세포, 및 동물 세포, 예컨대 곤충 세포 및 포유류 세포, 예를 들어 뮤린, 래트, 마카크 또는 인간 세포를 포함한다. 본 발명은 따라서, 그 중에서도, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 TCR 또는 TCR 구축물을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및/또는 벡터는 관련 기술분야에 공지된 일상적인 방법을 사용하여, 예를 들어 형질감염, 형질전환 등에 의해 숙주 세포로 도입될 수 있다.
"형질감염"은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드 (포함 벡터)를 표적 세포로 의도적으로 도입하는 공정이다. 예는 RNA 형질감염, 즉 RNA (예컨대 시험관내 전사된 RNA, ivtRNA)를 숙주 세포로 도입하는 공정이다. 용어는 주로 진핵 세포에서의 비-바이러스 방법에 사용된다. 용어 "형질도입"은 종종 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드의 바이러스-매개된 전달을 기재하는 데 사용된다. 동물 세포의 형질감염은 전형적으로 물질의 흡수를 허용하기 위해, 세포막에서 일시적인 기공 또는 "구멍"을 개방하는 것을 수반한다. 형질감염은 인산칼슘을 사용하거나, 전기천공에 의해, 세포 압착에 의해 또는 양이온성 지질을 물질과 혼합하여 리포솜을 생산함으로써 수행될 수 있으며, 이는 세포막과 융합하고 이들의 카고를 내부에 침전시킨다. 진핵 숙주 세포를 형질감염시키기 위한 예시적인 기술은 지질 소포 매개된 흡수, 열 충격 매개된 흡수, 인산칼슘 매개된 형질감염 (인산칼슘/DNA 공동-침전), 미세주사 및 전기천공을 포함한다.
"형질전환"은 박테리아, 및 또한 식물 세포를 포함하는 비-동물 진핵 세포로의 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드 (포함 벡터)의 비-바이러스 전달을 기재하는 데 사용된다. 형질전환은 그러므로 그의 주변으로부터의 세포막(들)을 통한 직접 흡수 및 외인성 유전자 물질 (핵산 분자)의 후속 혼입으로 인한 박테리아 또는 비-동물 진핵 세포의 유전자 변경이다. 형질전환은 인공 수단에 의해 초래될 수 있다. 형질전환이 일어나려면, 세포 또는 박테리아는 환경 조건, 예컨대 기아 및 세포 밀도에 대한 시간-제한된 반응으로서 발생할 수 있는, 능력의 상태에 있어야 한다. 원핵 형질전환의 경우, 기술은 열 충격 매개된 흡수, 무손상 세포와의 박테리아 원형질체 융합, 미세주사 및 전기천공을 포함할 수 있다. 식물 형질전환을 위한 기술은, 예컨대 에이. 투메파시엔스(A. tumefaciens)에 의한 아그로박테리움 매개된 전달, 신속 추진 텅스텐 또는 금 미세발사체, 전기천공, 미세주사 및 폴리에틸렌 글리콜 매개된 흡수를 포함한다.
본 발명에 따라, 본 발명의 TCR의 발현을 위해, 삽입된 폴리뉴클레오티드 서열의 발현을 조정하고/거나, 목적하는 바와 같은 유전자 산물 (즉 RNA 및/또는 단백질)을 변형시키고 프로세싱하는 숙주 세포가 선택될 수 있다. 유전자 산물의 이러한 변형 (예를 들어 글리코실화) 및 프로세싱 (예를 들어 절단)은 TCR의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 유전자 산물의 번역-후 프로세싱 및 변형에 대해 특징적이고 특이적인 메커니즘을 갖는다. 적절한 세포주 또는 숙주 시스템은 산물의 정확한 변형 및 프로세싱을 보장하기 위해 선택될 수 있다. 이를 위해, 1차 전사의 적절한 프로세싱, 글리코실화, 및 유전자 산물의 인산화를 위한 세포 기구를 보유하는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다.
본 발명에 따라, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자, 또는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터를 포함하는 숙주 세포는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR을 안정하게 발현하기에 적합한 임의의 세포일 수 있다. 바람직하게는, 이러한 숙주 세포는 이러한 TCR을 그의 표면 상에 제시할 수 있으며, 이는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 PRAMEL-L-펩티드 (또는 그의 부분, 또는 본원에 기재되고 명시된 바와 같은 그의 HLA-A 결합된 형태)에 대한 상기 TCR의 (특이적) 결합을 허용한다.
본 발명에 따른 숙주 세포는 본 발명의 가용성 TCR의 발현에 사용된 "생산 숙주 세포"일 수 있고 바람직하게는 높은 양의 재조합체 단백질을 발현할 수 있다. 상기에 따라, 생각할 수 있는 발현 시스템 (즉 상기 기재된 바와 같은 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포)은 미생물, 예컨대 재조합체 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아 (예를 들어 이. 콜라이, 비. 서브틸리스(B. subtilis)); 재조합체 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모 (예를 들어 사카로미세스(Saccharomyces), 피키아(Pichia)); 재조합체 바이러스 발현 벡터 (예를 들어 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합체 바이러스 발현 벡터 (예를 들어 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 또는 재조합체 플라스미드 발현 벡터 (예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템을 포함한다. 포유류 세포의 게놈 (예를 들어 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유류 바이러스 (예를 들어 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, 시토메갈로바이러스 (CMV) 주요 극초기 프로모터 (MIEP) 프로모터)로부터 유래된 프로모터를 함유하는 재조합체 발현 구축물을 보유하는 포유류 발현 시스템이 종종 바람직하다. 적합한 포유류 숙주 세포는 공지된 세포주 (예를 들어 COS, CHO, BLK, 293, 3T3 세포)로부터 선택될 수 있으나, 또한 림프구, 예컨대 세포독성 T 림프구 (CTL), CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포, 감마/ 델타-T-세포를 사용하는 것을 생각할 수 있다.
"생산 숙주 세포"로서 사용될 수 있는 예시적인 포유류 숙주 세포는 DHFR 마이너스 CHO 세포, 예컨대 DG44 및 DUXBI 1, NSO, COS (SV40 T 항원을 갖는 CVI의 유도체), HEK293 (인간 신장), 및 SP2 (마우스 골수종) 세포를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO 세포)를 포함한다. 다른 예시적인 숙주 세포주는 HELA (인간 자궁경부 암종), CVI (원숭이 신장 계통), VERY, BHK (아기 햄스터 신장), MDCK, 293, WI38, R1610 (차이니즈 햄스터 섬유모세포) BALBC/3T3 (마우스 섬유모세포), HAK (햄스터 신장 계통), P3x63-Ag3.653 (마우스 골수종), BFA-IcIBPT (소 내피 세포), 및 RAJI (인간 림프구)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 숙주 세포주는 전형적으로 상업 서비스, 아메리칸 티슈 컬쳐 컬렉션(American Tissue Culture Collection) (ATCC) 또는 공개된 문헌으로부터 입수가능하다. 비-포유류 세포, 예컨대 박테리아, 효모, 곤충 또는 식물 세포는 또한 용이하게 입수가능하고 또한 상기 기재된 바와 같은 "생산 숙주 세포"로서 사용될 수 있다. 예시적인 박테리아 숙주 세포는 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 이러한 에스케리키아 콜리(Escherichia coli), 살모넬라(Salmonella); 바실라세아에(Bacillaceae), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis); 뉴모코쿠스(Pneumococcus); 스트렙토코쿠스(Streptococcus), 및 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenza)를 포함한다. 다른 숙주 세포는 효모 세포, 예컨대 사카로미세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 및 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)를 포함한다. 곤충 세포는, 제한 없이, 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 포함한다.
상기에 따라, 본 발명은 또한 (a) 상기 TCR의 발현을 초래하는 조건 하에 숙주 세포 (즉 생산 숙주 세포)를 인큐베이션하는 단계 및 (b) 상기 TCR을 정제하는 단계를 포함하는, 본원에 기재된 바와 같은 TCR을 생산하고 수득하는 방법을 제공한다.
발현 벡터를 보유하는 숙주 세포는 본원에 제공된 TCR, 특히 본원에서 다른 곳에 기재된 바와 같은 알파 쇄 및/또는 베타 쇄의 생산에 적절한 조건 하에 성장되고, 알파 및/또는 베타 쇄 단백질 합성에 대해 검정된다. 이중-쇄 TCR의 발현의 경우, 알파 및 베타 쇄 둘 다를 코딩하는 벡터는 전체 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동-발현될 수 있다. 본 발명의 TCR이 발현되면, 이는 관련 기술분야에 공지된 임의의 정제 방법, 예를 들어, 크로마토그래피 (예를 들어 이온 교환 크로마토그래피 (예를 들어 수산화인회석 크로마토그래피), 친화도 크로마토그래피, 특히 단백질 A, 단백질 G 또는 렉틴 친화도 크로마토그래피, 크기 칼럼 크로마토그래피), 원심분리, 차등 용해도, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 또는 단백질의 정제를 위한 임의의 다른 표준 기술에 의해 정제될 수 있다. 통상의 기술자는 회수될 TCR의 개별 특징에 기반하는 적합한 정제 방법을 용이하게 선택할 수 있을 것이다.
본 발명의 맥락에서 기재되고 제공된 숙주 세포는 또한 본 발명의 뉴클레오티드 서열, 벡터 또는 TCR을 포함하는 "이펙터 숙주 세포"일 수 있다. 상기 이펙터 숙주 세포는 일상적인 방법을 사용하여 본 발명의 TCR을 코딩하는 핵산 서열을 포함하도록 변형되고, 본원에 기재된 TCR을 특히 세포 표면 상에 발현하는 것으로 예상된다. 본 발명의 목적을 위해, "본 발명의 TCR을 발현하는 변형된 숙주 세포"는 일반적으로, 예를 들어 첨부된 실시예에 기재된 바와 같은 RNA 형질감염에 의해, 본 발명에 따른 TCR을 발현하도록 처리되거나 또는 변경된 (이펙터 또는 생산) 숙주 세포를 지칭한다. 변형 또는 형질감염 또는 형질도입의 다른 방법, 예컨대 본원에서 다른 곳에 기재된 것이 또한 예상된다. 따라서 용어 "변형된 숙주 세포"는 바람직하게는 본 발명의 TCR을 발현하는 "형질감염된", "형질도입된" 및 "유전자 조작된" 숙주 세포를 포함한다. 바람직하게는, 이러한 "(변형된) 이펙터 숙주 세포" (특히 "(변형된) 이펙터 림프구")는 그의 특이적 항원 표적에 대한 TCR의 결합 시 세포내 신호 형질도입을 통해 이펙터 기능을 매개할 수 있다. 이러한 이펙터 기능은 예를 들어 퍼포린의 방출 (표적 세포막에 구멍을 생성함), 그랜자임 (세포내 작용하여 아폽토시스를 유발하는 프로테아제임), Fas 리간드의 발현 (FAS-보유 표적 세포에서 아폽토시스를 활성화시킴) 및 시토카인, 바람직하게는 Th1/Tc1 시토카인, 예컨대 IFN-감마, IL-2 및 TNF-α의 방출을 포함한다. 따라서, 치료될 대상체에서 그의 항원 표적을 인식하고 이에 결합할 수 있는 본 발명의 TCR을 발현하도록 조작된 이펙터 숙주 세포는 상기-언급된 이펙터 기능을 수행하며, 이로써 표적 (예를 들어 암) 세포를 살해하는 것으로 예상된다. 표적 세포의 세포용해는 예를 들어 TCR-형질감염된 수용자 T 세포와의 공동-배양 동안 형광 표지된 표적 세포의 소멸을 검출하는 CTL 형광 살해 검정 (CTL, USA)으로 평가될 수 있다.
상기 관점에서, 이펙터 숙주 세포는 바람직하게는, 즉 본원에 기재된 TCR 알파 및 베타 쇄를 전형적으로 포함하는 기능적 TCR; 및 또한 신호 전달 서브유닛 CD3 감마, 델타, 엡실론 및 제타 (CD3 복합체)를 발현한다. 게다가, 공동-수용체 CD4 또는 CD8의 발현이 또한 바람직할 수 있다. 일반적으로, 항원 결합, 수용체 활성화 및 하류 신호전달 (예를 들어 Lck, FYN, CD45, 및/또는 Zap70)에 수반된 요구되는 유전자를 보유하는 림프구, T 세포는 이펙터 숙주 세포로서 특히 적합하다. 그러나, CD3 신호 전달 서브유닛 및/또는 상기 언급된 하류 신호전달 분자 없이 (즉 본원에 기재된 항원 표적을 인식할 수 있으나, CD3 및/또는 상기 언급된 하류 신호전달 분자에 의해 매개된 기능을 초래하지 않음) "결합 도메인"으로서 본 발명의 TCR을 발현하는 이펙터 숙주 세포가 또한 본원에 예상된다. 이러한 이펙터 세포는 본원에 기재된 항원 표적을 인식할 수 있고, 임의로 CD3 신호전달 및/또는 상기 언급된 하류 신호전달 분자의 신호전달과 연관되지 않은 다른 기능을 초래할 수 있는 것으로 예상된다. 실시예는 본 발명의 TCR을 발현하고 예를 들어 이들의 항원 표적의 인식 시 세포독성 과립을 방출할 수 있는 NK 또는 NKT 세포를 포함한다.
따라서, 세포독성 T 림프구 (CTL), CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포, 감마/델타-T 세포는 유용한 림프구 이펙터 숙주 세포로서 간주된다. 본 발명의 재조합체 TCR을 발현하는 이러한 림프구는 또한 본원에서 "변형된 이펙터 림프구"로서 지칭된다. 그러나 통상의 기술자는 일반적으로 목적하는 이펙터 기능을 야기하는 TCR 신호전달 경로의 임의의 구성 요소가 관련 기술분야에 공지된 재조합체 유전자 조작 방법에 의해 적합한 숙주 세포로 도입될 수 있다는 것을 용이하게 인정할 것이다. 이펙터 숙주 세포 특히 림프구 예컨대 T 세포는 치료될 대상체로부터 수득되고 본 발명의 TCR을 발현하도록 형질전환되거나 또는 형질도입되는 자가 숙주 세포일 수 있다. 전형적으로, TCR의 재조합체 발현은 첨부된 실시예에 기재된 바와 같은 바이러스 벡터를 사용함으로써 달성될 것이다. 환자로부터 세포를 수득하고 단리하는 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
이전에 언급된 바와 같이, 본원에 제공된 이펙터 숙주 세포는 특히 치료적 적용에 예상된다. 숙주 세포의 추가 유전자 변형은 치료적 효능을 증가시키기 위해 바람직할 수 있다. 예를 들어 자가 CD8+ T 세포를 "이펙터 숙주 세포"로서 사용할 때 적합한 추가적인 변형은 내인성 TCR, CTLA-4 및/또는 PD-1 발현의 하향조절; 및/또는 공동-자극 분자, 예컨대 CD28, CD134, CD137의 증폭을 포함한다. 상기 언급된 유전자 변형을 달성하기 위한 수단 및 방법은 관련 기술분야에 기재되었다.
숙주 세포의 표적화된 게놈 조작을 위한 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, siRNA를 사용한 유전자 녹다운 이외에, 그 중에서도 문헌 [Kim & Kim Nature Reviews Genetics 15, 321-334 (2014)]에서 검토된 바와 같이, 소위 "프로그래밍가능한 뉴클레아제", 예컨대 아연-핑거 뉴클레아제 (ZFN), 전사 활성인자-유사 이펙터 뉴클레아제 (TALEN) 및 박테리아 클러스터링된 규칙적 간격의 짧은 회문식 반복부 (CRISPR)-Cas (CRISPR-연관된) 시스템으로부터 유래된 RNA-가이드된 조작된 뉴클레아제 (RGEN)의 사용을 포함한다. 예를 들어, 프로그래밍가능한 뉴클레아제, 예컨대 TALEN은 "원치 않는" 단백질, 예컨대 PD-1, CTLA-4 또는 내인성 TCR을 코딩하는 DNA 영역을 커팅하는 데 이용될 수 있고, 이로써 이들의 발현을 감소시킬 수 있다. T 세포가 (이펙터) 숙주 세포로서 사용될 때, 내인성 TCR의 하향조절은 내인성 및 외인성 TCR 알파/베타 쇄의 원치 않는 "미스페어링"을 감소시키는 이익을 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 이러한 숙주 세포는, 예를 들어, 림프모구 세포주, 세포독성 T 림프구 (CTL), CD8+ T 세포 (바람직하게는 자가 CD8+ 세포), CD4+ T 세포 (바람직하게는 자가 CD4+ 세포), T 기억 줄기 세포 (TSCM), 자연 살해 (NK) 세포 (예를 들어, 또한 WO2016/116601에 기재되고 제공된 바와 같이, CD3 (CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론을 포함함)을 재조합 발현하도록 변형됨), 자연 살해 T (NKT) 세포, 및 감마/ 델타-T 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 림프구로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 추가로 상기 TCR의 발현을 초래하는 조건 하에 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포를 인큐베이션하는 단계, 및 상기 TCR을 정제하는 단계를 포함하는, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR을 수득하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 하기 중 1개 이상을 포함하는 제약 또는 진단 조성물에 관한 것이다:
(i) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR;
(ii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자;
(iii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터; 및/또는
(iv) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포, 및
임의로 제약상 부형제(들).
용어 "제약 조성물"은 특히 인간에게 투여하기에 적합한 조성물을 지칭한다. 그러나, 비-인간 동물에 대한 투여에 적합한 조성물은 일반적으로 또한 용어에 의해 포함된다.
본 발명에 의해 예상되는 제약 조성물은 바람직하게는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제 및 PD-L1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 체크포인트 억제제를 추가로 포함할 수 있다. 모든 상기-언급된 억제제는 면역 반응 하향조절할 수 있는 면역 체크포인트 억제제이다. 세포독성 림프구-연관된 단백질 4 (CTLA-4) 억제제는 조절 T 세포에서 구성적으로 발현된 단백질 수용체이나, 단지 활성화 후 종래의 T 세포에서 상향조절된다. PD-1 및 PD-L1 억제제는 프로그래밍된 사멸-리간드 1 (PD-L1)과 그의 수용체, 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1)의 회합을 억제하는 작용한다. 이들 세포 표면 단백질의 상호작용은 면역계의 억제에 수반되고 감염 후 발생하여 방관자 숙주 세포의 살해를 제한하고 자가면역 질환을 예방한다. 따라서 상기 체크포인트 억제제가 본 발명에 따른 제약 조성물에 조합되는 것이 바람직하다.
본 발명에 따라, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 제약 조성물은 체크포인트 억제제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 하나의 실시양태에서, 상기 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제 및 PD-L1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 의해 포함된 추가 체크포인트 억제제는 LAG3, ICOS, TIM3, VISTA 및 CEACAM1이다. LAG3은 항원 활성화된 T-세포 상 억제성 수용체이다. ICOS 단백질은 CD28 및 CTLA-4 세포-표면 수용체 패밀리에 속한다. 이는 동종이량체를 형성하고 세포-세포 신호전달, 면역 반응, 및 세포 증식의 조절에서 중요한 역할을 한다. TIM3 또는 A형 간염 바이러스 세포 수용체는 이뮤노글로불린 슈퍼패밀리에 속하는 단백질, 및 TIM 패밀리의 단백질을 코딩한다. CD4-양성 T 헬퍼 림프구는 이들의 시토카인 분비 패턴에 기반하여 유형 1 (Th1) 및 2 (Th2)로 나뉠 수 있다. VISTA 또는 V-Set 면역조절 수용체는 T-세포 반응을 억제하는 면역조절 수용체를 코딩한다. CEACAM1 유전자는 암배아 항원 (CEA) 유전자 패밀리의 구성원을 코딩하며, 이는 이뮤노글로불린 슈퍼패밀리에 속한다. 이들 체크포인트 억제제는 또한 제약 조성물과 조합될 수 있다.
제약 조성물 및 그의 구성 요소 (즉 활성제 및 임의로 부형제)는 바람직하게는 제약상 허용되며, 즉 수용자에서 임의의 바람직하지 않은 국부 또는 전신 효과를 초래하지 않으면서 목적하는 치료적 효과를 끌어낼 수 있다. 본 발명의 제약상 허용되는 조성물은 예를 들어 멸균일 수 있다. 구체적으로, 용어 "제약상 허용되는"은 동물, 및 보다 특히 인간에 사용하기 위해 규제 기관 또는 다른 일반적으로 인식된 약전에 의해 승인된 것을 의미할 수 있다.
상기 기재된 활성제 (예를 들어 숙주 세포 또는 TCR)는 바람직하게는 치료 유효량으로 제약 조성물에 존재한다. "치료 유효량"에 의해 목적하는 치료적 효과를 끌어내는 활성제의 양이 의미된다. 치료적 효능 및 독성은, 예를 들어 세포 배양물에서 또는 시험 동물에서, 표준 절차, 예를 들어 ED50 (집단의 50 %에 치료적으로 유효한 용량) 및 LD50 (집단의 50 %에 치명적인 용량)에 의해 결정될 수 있다. 치료적 및 독성 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, 이는 비율, ED50/LD50으로서 표현될 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 제약 조성물이 바람직하다.
TCR 폴리뉴클레오티드, 벡터 또는 숙주 세포의 정확한 투여량은 공지된 기술을 사용하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 확인할 수 있을 것이다. 적합한 투여량은 충분한 양의 본 발명의 활성제를 제공하고 바람직하게는 치료적으로 유효하며, 즉 목적하는 치료적 효과를 끌어낸다.
관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 치료의 목적을 위한 조정 (예를 들어 완화 유지 vs. 질환의 급성 발적), 경로, 투여의 시간 및 빈도, 투여 제제의 시간 및 빈도, 연령, 체중, 일반 건강, 성별, 식이, 질환 상태의 중증도, 약물 조합(들), 반응 감수성, 및 요법에 대한 내성/반응이 필요할 수 있다. 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 가용성 TCR에 대한 적합한 투여량 범위는 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터를 사용하여 결정될 수 있고 ED50을 포함할 수 있다. 전형적으로, 투여량은 투여 경로에 따라 0.1 내지 100000 마이크로그램, 최대 약 2 g의 총 용량으로 달라질 수 있다. 본 발명의 활성제의 예시적인 투여량은 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 또는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위이다. 특정 투여량 및 전달 방법에 대한 지침은 문헌에 제공된다. 치료가 본 발명의 활성제의 치료 유효 용량의 단일 투여, 또는 치료 유효 용량의 다중 투여를 필요로 할 수 있다는 것이 인식된다. 예를 들어, 일부 제약 조성물은 특정 조성물의 제제, 반감기 및 클리어런스 비율에 따라 3 내지 4일마다, 매주, 또는 2주마다 1회, 또는 1개월 내 1회 투여될 수 있다. 이전에 제시된 바와 같이, 제약 조성물은 임의로 1종 이상의 부형제 및/또는 추가적인 활성제를 포함할 수 있다.
용어 "부형제"는 충전제, 결합제, 붕해제, 코팅, 흡착제, 부착 방지제, 활택제, 보존제, 항산화제, 향료, 착색제, 감미제, 용매, 공동-용매, 완충제, 킬레이트제, 점도 부여제, 표면 활성제, 희석제, 습윤제, 담체, 희석제, 보존제, 유화제, 안정화제 및 장성 변형제를 포함한다. 본 발명의 목적하는 제약 조성물을 제조하기 위한 적합한 부형제를 선택하는 것은 통상의 기술자의 지식 내이다. 본 발명의 제약 조성물에 사용하기 위한 예시적인 담체는 염수, 완충 염수, 덱스트로스, 및 물을 포함한다. 전형적으로, 적합한 부형제의 선택은 그 중에서도 사용된 활성제, 치료될 질환, 및 제약 조성물의 목적하는 제제에 의존할 것이다.
본 발명은 추가로 1종 이상의 상기 명시된 본 발명의 활성제 (예를 들어 숙주 세포 또는 TCR 구축물), 및 치료될 질환의 치료 및/또는 예방에 적합한 1종 이상의 추가적인 활성제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 조합에 적합한 활성 성분의 바람직한 예는 공지된 항암 약물, 예컨대 시스-플라틴, 메이탄신 유도체, 라헬마이신, 칼리키아미신, 도세탁셀, 에토포시드, 젬시타빈, 이포스파미드, 이리노테칸, 멜팔란, 미톡산트론, 소르피머 소듐포토프린 II, 테모졸미드, 토포테칸, 트리메트레에이트 글루쿠로네이트, 아우리스타틴 E 빈크리스틴 및 독소루비신; 및 펩티드 세포독소, 예컨대 리신, 디프테리아 독소, 슈도모나스(pseudomonas) 박테리아 외독소 A, DNAase 및 RNAase; 방사성-핵종, 예컨대 아이오딘 131, 레늄 186, 인듐 111, 이트륨 90, 비스무트 210 및 213, 악티늄 225 및 아스타틴 213; 전구약물, 예컨대 항체 지시된 효소 전구-약물; 면역-자극제, 예컨대 IL-2, 케모카인, 예컨대 IL-8, 혈소판 인자 4, 흑색종 성장 자극 단백질 등, 항체 또는 그의 단편, 예컨대 항-CD3 항체 또는 그의 단편, 보체 활성화제, 이종 단백질 도메인, 동종이계 단백질 도메인, 바이러스/박테리아 단백질 도메인 및 바이러스/박테리아 펩티드를 포함한다.
다양한 경로가 본 발명에 따른 제약 조성물의 투여에 적용가능하다. 전형적으로, 투여는 비경구로 달성될 것이다. 비경구 전달 방법은 국소, 동맥-내, 근육내, 피하, 골수내, 척수강내, 뇌실내, 정맥내, 복강내, 자궁내, 질내, 설하 또는 비강내 투여를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물은, 그 중에서도 사용된 활성제 (예를 들어 가용성 TCR)에 따라, 다양한 형태로, 예를 들어 고체, 액체, 기체상 또는 동결건조된 형태로 제제화될 수 있고, 그 중에서도, 연고, 크림, 경피 패치, 겔, 분말, 정제, 용액, 에어로졸, 과립, 환제, 현탁액, 에멀젼, 캡슐, 시럽, 액체, 엘릭시르, 추출물, 팅크제 또는 유체 추출물의 형태 또는 목적하는 투여 방법에 특히 적합한 형태일 수 있다. 의약을 생산하기 위한 그 자체로 공지된 공정은 문헌 [22nd edition of Remington's Pharmaceutical Sciences (Ed. Maack Publishing Co, Easton, Pa., 2012)]에 표시되고, 예를 들어 종래의 혼합, 용해, 과립화, 드라제-제조, 연화, 유화, 캡슐화, 포획 또는 동결건조 공정을 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 숙주 세포 또는 가용성 TCR을 포함하는 제약 조성물은 전형적으로 액체 형태로 제공될 것이고, 바람직하게는 제약상 허용되는 완충제를 포함한다.
본 발명의 제약 조성물이 제조된 후, 이들은 적절한 용기에 배치될 수 있고 표시된 상태의 치료에 대해 표지될 수 있다. 이러한 표지는 예를 들어 투여의 양, 빈도 및 방법을 포함할 것이다. 상기의 관점에서 본 발명은 따라서 암의 검출, 진단, 예후, 예방 및/또는 치료에서 의약으로서 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 TCR, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포를 제공한다.
TCR, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포는 일반적으로 질환 또는 장애의 치료 검출, 진단, 예후, 예방 및/또는 치료에 이용될 수 있다. 그의 모든 문법적 형태의 용어 "치료"는 치료를 필요로 하는 대상체의 치료적 또는 예방적 치료를 포함한다. "치료적 또는 예방적 치료"는 임상 및/또는 병리학적 징후의 완전한 예방을 목표로 하는 예방적 치료 또는 임상 및/또는 병리학적 징후의 개선 또는 완화를 목표로 하는 치료적 치료를 포함한다. 용어 "치료"는 따라서 또한 질환의 개선 또는 예방을 포함한다.
본 발명의 제약 조성물을 사용할 때 치료될 것으로 예상되는 이러한 질환은 바람직하게는 흑색종, 방광 암종, 결장 암종, 및 유방 선암종, 육종, 전립선암, 자궁암, 포도막암, 포도막 흑색종, 편평 두경부암, 윤활막 암종, 유잉 육종, 삼중 음성 유방암, 갑상선암, 고환암, 신장암, 췌장암, 난소암, 식도암, 비-소세포 폐암, 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 흑색종, 간세포 암종, 두경부암, 위암, 자궁내막암, 결장직장암, 담관암종, 유방암, 방광암, 골수성 백혈병 및 급성 림프모구성 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된 암이며, 바람직하게는 여기서 암은 NSCLC, SCLC, 유방, 난소 또는 결장직장암, 육종 또는 골육종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
용어 "대상체" 또는 "개체" 또는 "동물" 또는 "환자"는 본원에서 요법이 목적하는 임의의 대상체, 특히 포유류 대상체를 지칭하는 데 상호교환적으로 사용된다. 포유류 대상체는 일반적으로 인간, 비-인간 영장류, 개, 고양이, 기니 피그, 토끼, 래트, 마우스, 말, 소, 암소 등을 포함한다. 그러나, 본원에 제공된 TCR, 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 제약 조성물이 특히 인간 대상체, 특히 HLA-A2-양성인 것의 치료에 대해 예상된다는 것이 용이하게 이해될 것이다.
요법을 위해, TCR - 특히 본 발명의 가용성 TCR -, 본 발명의 핵산, 벡터 (예컨대 바이러스 벡터) 또는 숙주 세포는 그를 필요로 하는 대상체에게 직접적으로 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암을 검출하고/거나, 진단하고/거나, 예측하고/거나, 예방하고/거나 치료하는 방법에 사용하기 위한 TCR, 핵산, 벡터 또는 숙주 세포를 제공한다. 상기 방법은 (a) 본 발명의 (i) TCR (ii), 핵산, (iii) 벡터, (iv) 숙주 세포, 및/또는 (v) 제약 조성물 중 1개 이상을 제공하는 단계; 및 (b) (i)-(v) 중 1개 이상을 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 임의로, 방법은 암 요법의 추가 단계, 예를 들어 방사선, 또는 1종 이상의 항암제의 투여를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 치료는 또한 (a) 대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 림프구를 포함하는 것인 단계; (b) 본 발명의 (i) TCR, (ii) 핵산, (ii) 벡터 (iv) 숙주 세포 및/또는 (v) 제약 조성물 중 1개 이상을 제공하는 단계 (c) 단계 (b)의 (i) 내지 (v) 중 1개 이상을 단계 (a)의 림프구로 도입하고, 이로써, 변형된 림프구를 수득하는 단계, (d) 단계 (c)의 변형된 림프구를 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 단계 (a)에 제공된 림프구는 특히 상기 기재된 바와 같은 "이펙터 숙주 세포"인 것으로 예상되고 유리하게는 T 세포, NK 세포 및/또는 NKT 세포, 특히 CD8+ T 세포로부터 선택되고; 관련 기술분야에 공지된 일상적인 방법에 의해 대상체의 샘플 - 특히 혈액 샘플 - 로부터 이전 단계에서 수득될 수 있다. 그러나 또한 바람직하게는 본 발명의 TCR을 발현할 수 있고 본원에 기재된 바와 같은 목적하는 생물학적 이펙터 기능을 발휘하는 다른 림프구를 사용하는 것을 생각할 수 있다. 게다가, 상기 림프구는 전형적으로 대상체의 면역계와의 적합성을 위해 선택될 것이며, 즉 이들은 바람직하게는 면역원성 반응을 끌어내지 않을 것이다. 예를 들어, "보편적인 수용자 세포", 즉 시험관내 성장되고 확장될 수 있는 목적하는 생물학적 이펙터 기능을 발휘하는 보편적으로 양립할 수 있는 림프구를 사용하는 것을 생각할 수 있다. 이러한 세포의 사용은 따라서 단계 (a)에서 대상체 자신의 림프구를 수득하고 제공할 필요를 배제할 것이다. 단계 (c)의 생체외 도입은 전기천공을 통해 본원에 기재된 핵산 또는 벡터를 림프구로 도입함으로써, 또는 림프구를 바이러스 벡터, 예컨대 이펙터 숙주 세포의 맥락에서 이전에 기재된 바와 같은 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 벡터로 감염시킴으로써 수행될 수 있다. 다른 생각할 수 있는 방법은 형질감염 시약, 예컨대 리포솜, 또는 일시적인 RNA 형질감염에 의한 사용을 포함한다. 예를 들어 (레트로-)바이러스 벡터 또는 일시적인 RNA 형질감염에 의한 (1차) T 세포로의 항원-특이적 TCR 유전자의 전달은 후속적으로 공여자로 재-도입될 수 있는 종양-연관된 항원-특이적 T 세포를 생성하기 위한 유망한 도구를 나타내며, 여기서 이들은 상기 항원을 발현하는 종양 세포를 특이적으로 표적화하고 파괴한다. 본 발명에서, 상기 종양-연관된 항원은 본원에 정의된 바와 같은 PRAME, 특히 그의 HLA-A*24 또는 HLA-A*02:17 결합된 형태이다.
본 발명에 따른 치료는 또한 (a) 대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 림프구를 포함하는 것인 단계를 포함할 수 있으나; 치료는 (b) (i) TCR; (ii) 핵산;(iii) 벡터; (iv) 숙주 세포; 및 (v) 제약 조성물 중 1개 이상을 제공하는 단계; (c) 단계 (b)의 (i) 내지 (v) 중 1개 이상을 단계의 림프구로 도입하고, 이로써, 변형된 림프구를 수득하는 단계, (d) 단계 (c)의 변형된 림프구를 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계로 이루어진다.
상기의 관점에서, 본 발명의 추가 측면은 따라서 변형된 림프구를 생성하기 위한, 본원에서 다른 곳에 기재된 바와 같은 TCR, 핵산 서열, 벡터 및/또는 숙주 세포의 용도이다. 예를 들어 핵산 및 벡터를 림프구로 도입하기 위한 수단 및 방법은 본원에서 다른 곳에 기재되었다.
본 발명은 또한 1종 이상의 진단제(들)로서, 본원에 기재된 바와 같은 TCR, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포를 포함하는 진단 조성물을 제공한다. 전형적으로, 상기 진단제는 그의 항원 표적에 대한 그의 결합을 검출하기 위한 수단, 예를 들어 본 발명의 TCR 구축물의 맥락에서 기재된 바와 같은 표지를 포함할 것이다. 숙주 세포와 관련하여, 예를 들어 항원 인식 시 (세포독성 과립 대신에) 방출되는 염료 또는 조영제를 포함하는 변형된 숙주 세포를 사용하는 것을 생각할 수 있다.
본 발명은 추가로 의약으로서 사용하기 위한 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터 및/또는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포에 관한 것이다.
본 발명은 추가로 암의 검출, 진단, 예후, 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터 및/또는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명의 맥락에서, 구체적인 실시양태에서, 암은 흑색종, 방광 암종, 결장 암종, 유방 선암종, 육종, 전립선암, 자궁암, 포도막암, 포도막 흑색종, 편평 두경부암, 윤활막 암종, 유잉 육종, 삼중 음성 유방암, 갑상선암, 고환암, 신장암, 췌장암, 난소암, 식도암, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC), 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 흑색종, 간세포 암종, 두경부암, 위암, 자궁내막암, 결장직장암, 담관암종, 유방암, 방광암, 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프구성 암, 급성 골수성 백혈병, 포상 횡문근육종, 골암, 뇌암, 유방암, 항문, 항문관, 또는 항문직장암, 안암, 간내담관암, 관절암, 경부, 담낭, 또는 흉막암, 코, 비강, 또는 중이암, 구강암, 질암, 외음부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 암, 결장암, 식도암, 자궁경부암, 위장 카르시노이드 종양, 신경교종, 호지킨 림프종, 하인두암, 신장암, 후두암, 간암, 폐암, 악성 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비인두암, 비-호지킨 림프종, 구강인두암, 난소암, 음경암, 췌장암, 복막, 장막, 및 장간막암, 인두암, 전립선암, 직장암, 신장암, 피부암, 소장암, 연조직암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 요관암, 및 방광암으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따라, 하나의 실시양태에서, 암의 예방 및/또는 치료는 하기를 포함할 수 있다:
(i) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR,
(ii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자,
(iii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터,
(iv) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포, 및
(v) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 제약 조성물
중 1개 이상을 제공하는 단계; 및
(i) 내지 (v) 중 적어도 1개를 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계.
본 발명에 따라, 또 다른 실시양태에서, 암의 예방 및/또는 치료는 하기를 포함할 수 있다:
(1) 대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 림프구를 포함하는 것인 단계;
(2) (i) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR,
(ii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자,
(iii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터,
(iv) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포, 및
(v) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 제약 조성물
중 1개 이상을 제공하는 단계;
(3) 단계 (2)의 (i) 내지 (v) 중 1개 이상을 단계 (1)의 림프구로 도입하고, 이로써, 변형된 림프구를 수득하는 단계; 및
(4) 단계 (3)의 변형된 림프구를 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
본 발명은 추가로:
대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 1개 이상의 세포를 포함하는 것인 단계;
상기 샘플을
(i) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR,
(ii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 숙주 세포, 및/또는
(iii) 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 제약 조성물
과 접촉시키며, 이로써 복합체를 형성하는 단계; 및
복합체를 검출하는 단계
를 포함하는, 대상체에서 암의 존재를 시험관내 검출하는 방법에 관한 것이며,
여기서 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타낸다.
본 발명은 추가로 변형된 림프구를 생성하기 위한, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 TCR, 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 핵산 분자, 및/또는 본원에 기재되고 제공된 바와 같은 벡터의 용도에 관한 것이다.
표 1: 서열
Figure pct00002
Figure pct00003
본 발명은 또한 하기 항목을 특징으로 할 수 있다:
1. 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이며 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드, 또는
상기 폴리펩티드의 부분, 또는
상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태
에 결합할 수 있는 T 세포 수용체 (TCR)이며,
여기서 하기를 포함하는 TCR:
(A) 하기의 CDR3
(Aa) 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄, 및/또는
(Ab) 서열식별번호: 14에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄,
또는
(B) 하기의 CDR3
(Ba) 서열식별번호: 40에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄, 및/또는
(Bb) 서열식별번호: 42에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄.
2. 항목 1에 있어서,
(A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Aa1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR2,
및/또는
(Ab1) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR2
를 추가로 포함하거나,
또는 (B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Ba1) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR2,
및/또는
(Bb1) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR2
를 추가로 포함하는 것인 TCR.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, HLA-A는 HLA-A*24, 또는 HLA-A*02 코딩된 분자인 TCR.
4. 항목 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리펩티드, 또는 그의 부분, 또는 그의 HLA-A 결합된 형태에 대한 상기 TCR의 결합은 상기 TCR을 포함하는 세포에 의한 IFN-감마 분비를 유도하는 것인 TCR.
5. 항목 4에 있어서, 상기 TCR을 포함하는 세포의 IFN-감마 분비의 상기 유도는 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이며 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 부분, 또는 상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태에 결합 시 상기 TCR을 포함하지 않는 대조군 세포와 비교하여 적어도 5-배 더 높은 것인 TCR.
6. 항목 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서,
(A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Aa2) 서열식별번호 16에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 16의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 16의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 16의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄 가변 영역,
및/또는
(Ab2) 서열식별번호 18에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 18의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 18의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 18의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄 가변 영역
을 포함하거나,
또는
(B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Ba2) 서열식별번호 44에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 44의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 44의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 44의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄 가변 영역,
및/또는
(Bb2) 서열식별번호 46에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 46의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 46의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 46의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄 가변 영역
을 포함하는 것인 TCR.
7. 항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 하기를 추가로 포함하는 TCR:
(i) TCR 알파 쇄 불변 영역, 및/또는
(ii) TCR 베타 쇄 불변 영역.
8. 항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서,
(A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Aa3) 서열식별번호 20에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 20의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 20의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 20의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄,
및/또는
(Ab3) 서열식별번호 22에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 22의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 22의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 22의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄
를 포함하거나
또는
(B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR은
(Ba3) 서열식별번호 48에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 48의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 48의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 48의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄,
및/또는
(Bb3) 서열식별번호 50에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 50의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 50의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
서열식별번호: 50의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄
를 포함하는 것인 TCR.
9. 항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 하기를 포함하는 TCR:
(A) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는,
(Aa), (Aa1), (Aa2) 또는 (Aa3)에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및
(Ab), (Ab1), (Ab2) 또는 (Ab3)에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역,
또는
(B) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는,
(Ba), (Ba1), (Ba2) 또는 (Ba3)에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및
(Bb), (Bb1), (Bb2) 또는 (Bb3)에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역.
10. 항목 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 TCR은 본래의 TCR, TCR 변이체, TCR 단편, 및 TCR 구축물로 이루어진 군으로부터 선택된 TCR.
11. 항목 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 수용성인 TCR.
12. 항목 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 적어도 1개의 분자 마커를 추가로 포함하는 TCR.
13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR을 코딩하는 핵산 분자.
14. 항목 13에 있어서, 서열식별번호: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 또는 21 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80% 동일하거나; 또는 서열식별번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 또는 49 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함하는 핵산.
15. 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
16. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR, 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자 또는 항목 15에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
17. 항목 16에 있어서 림프모구 세포주, 세포독성 T 림프구 (CTL), CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, T 기억 줄기 세포 (TSCM), 자연 살해 (NK) 세포, 자연 살해 T (NKT) 세포, 및 감마/ 델타-T 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 림프구로부터 선택된 숙주 세포.
18. 하기를 포함하는, 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR을 수득하는 방법:
상기 TCR의 발현을 초래하는 조건 하에 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포를 인큐베이션하는 단계, 및
상기 TCR을 정제하는 단계.
19. 하기 중 1개 이상을 포함하는 제약 또는 진단 조성물:
(i) 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR;
(ii) 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자;
(iii) 항목 15에 따른 벡터; 및/또는
(iv) 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포,
및, 임의로, 제약상 부형제(들).
20. 항목 19에 있어서, 체크포인트 억제제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
21. 항목 20에 있어서, 상기 체크포인트 억제제는 CTLA-4 억제제, PD-1 억제제 및 PD-L1 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 제약 조성물.
22. 의약으로서 사용하기 위한 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR, 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자, 항목 15에 따른 벡터 및/또는 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포.
23. 암의 검출, 진단, 예후, 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR, 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자, 항목 15에 따른 벡터 및/또는 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포.
24. 항목 23에 있어서, 암은 흑색종, 방광 암종, 결장 암종, 유방 선암종, 육종, 전립선암, 자궁암, 포도막암, 포도막 흑색종, 편평 두경부암, 윤활막 암종, 유잉 육종, 삼중 음성 유방암, 갑상선암, 고환암, 신장암, 췌장암, 난소암, 식도암, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC), 비-호지킨 림프종, 다발성 골수종, 흑색종, 간세포 암종, 두경부암, 위암, 자궁내막암, 결장직장암, 담관암종, 유방암, 방광암, 골수성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 급성 림프구성 암, 급성 골수성 백혈병, 포상 횡문근육종, 골암, 뇌암, 유방암, 항문, 항문관, 또는 항문직장암, 안암, 간내담관암, 관절암, 경부, 담낭, 또는 흉막암, 코, 비강, 또는 중이암, 구강암, 질암, 외음부암, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 암, 결장암, 식도암, 자궁경부암, 위장 카르시노이드 종양, 신경교종, 호지킨 림프종, 하인두암, 신장암, 후두암, 간암, 폐암, 악성 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비인두암, 비-호지킨 림프종, 구강인두암, 난소암, 음경암, 췌장암, 복막, 장막, 및 장간막암, 인두암, 전립선암, 직장암, 신장암, 피부암, 소장암, 연조직암, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 요관암, 및 방광암으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 TCR, 핵산 분자, 벡터 또는 숙주 세포.
25. 항목 23 또는 24에 있어서, 암의 예방 및/또는 치료는 하기를 포함하는 것인 TCR, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포:
(i) 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR,
(ii) 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자,
(iii) 항목 15에 따른 벡터,
(iv) 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포, 및
(v) 항목 19 내지 21 중 어느 하나의 제약 조성물
중 1개 이상을 제공하는 단계; 및
(i) 내지 (v) 중 적어도 1개를 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계.
26. 항목 23 내지 25 중 어느 하나에 있어서, 암의 예방 및/또는 치료는 하기를 포함하는 것인 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR, 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자, 항목 15에 따른 벡터 및/또는 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포:
(1) 대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 림프구를 포함하는 것인 단계;
(2) (i) 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR,
(ii) 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자,
(iii) 항목 15에 따른 벡터,
(iv) 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포, 및
(v) 항목 19 내지 21 중 어느 하나의 제약 조성물
중 1개 이상을 제공하는 단계;
(3) 단계 (2)의 (i) 내지 (v) 중 1개 이상을 단계 (1)의 림프구로 도입하고, 이로써, 변형된 림프구를 수득하는 단계; 및
(4) 단계 (3)의 변형된 림프구를 암의 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 대상체 또는 환자에게 투여하는 단계.
27. 대상체의 샘플을 제공하는 단계이며, 상기 샘플은 1개 이상의 세포를 포함하는 것인 단계;
상기 샘플을
(i) 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR,
(ii) 항목 16 또는 17에 따른 숙주 세포, 및/또는
(iii) 항목 19 내지 21 중 어느 하나의 제약 조성물
과 접촉시키며, 이로써 복합체를 형성하는 단계; 및
복합체를 검출하는 단계
를 포함하는, 대상체에서 암의 존재를 시험관내 검출하는 방법이며,
여기서 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타내는 것인 방법.
28. 변형된 림프구를 생성하기 위한, 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 따른 TCR, 항목 13 또는 14에 따른 핵산 분자, 및/또는 항목 15에 따른 벡터의 용도.
본 발명을 특징짓는 실시양태는 본원에 기재되고, 도면에 제시되고, 실시예에 예시되고, 청구항에 반영된다.
본원에 사용된 바와 같은, 단수 형태가 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한 복수형을 포함한다는 것이 유의되어야 한다. 따라서, 예를 들어, "시약"에 대한 언급은 이러한 상이한 시약 중 하나 이상을 포함하고 "방법"에 대한 언급은 본원에 기재된 방법에 대해 변형되거나 또는 치환될 수 있는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 동등한 단계 및 방법에 대한 언급을 포함한다.
달리 지시되지 않는 한, 일련의 요소에 선행하는 용어 "적어도"는 모든 요소를 일련으로 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 단지 일상적인 실험을 사용하여, 본원에 기재된 본 발명의 구체적인 실시양태에 대한 많은 등가물을 인식할 것이거나 또는 확인할 수 있다. 이러한 등가물은 본 발명에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
용어 "및/또는"은 본원에 사용된 어디든지 "및", "또는" 및 "상기 용어에 의해 연결된 요소의 모든 또는 임의의 다른 조합"의 의미를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약" 또는 "대략"은 제공된 값 또는 범위의 20% 이내, 바람직하게는 10% 이내, 및 보다 바람직하게는 5% 또는 2% 이내를 의미한다.
본 명세서 및 이어지는 청구항 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구하지 않는 한, 단어 "포함한다", 및 변이, 예컨대 "포함한다" 및 "포함하는"은 명시된 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹의 포함을 내포하나 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹을 제외하지 않는 것으로 이해될 것이다. 본원에 사용될 때 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는" 또는 "포함하는" 또는 때때로 본원에 사용될 때 용어 "갖는"으로 치환될 수 있다.
본원에 사용될 때 "이루어진"은 청구항 요소에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분을 배제한다. 본원에 사용될 때, "본질적으로 이루어진"은 청구항의 기본 및 신규한 특징에 물질적으로 영향을 미치지 않는 물질 또는 단계를 배제하지 않는다.
본원에서 각각의 경우에 용어 "포함하는", "본질적으로 이루어진" 및 "이루어진" 중 임의의 것은 다른 2개의 용어 중 어느 하나로 대체될 수 있다.
본 발명이 본원에 기재된 특정 방법론, 프로토콜, 및 시약 등에 제한되지 않고 그 자체로 다양할 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 기재할 목적을 위한 것이고, 청구항에 의해 오직 정의되는, 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
위든지 또는 아래든지, 본 명세서의 본문 전반에 걸쳐 인용된 모든 공개문헌 및 특허 (모든 특허, 특허 출원, 과학 공개문헌, 제조업체의 사양, 지침 등을 포함함)는 이로써 그 전문이 참조로서 포함된다. 본원에 어떠한 것도 본 발명이 선행 발명에 의해 이러한 개시내용보다 선행할 자격이 부여되지 않는다는 인정으로서 해석되어서는 안 된다. 참조로서 포함된 자료가 본 명세서를 부정하거나 또는 이와 일치하지 않는 한, 본 명세서는 임의의 이러한 자료를 대체할 것이다.
도면은 하기를 제시한다:
도 1 HLA-A*24:02-코딩된 분자를 발현하는 림프모구 세포주 (LCL; EBV-형질전환된 B 세포)는 PRAME를 코딩하는 ivtRNA 또는 물로 전기천공되고 PRAME301-309 펩티드 또는 관련이 없는 펩티드로 적재되었다. 이들 세포는 TCR T402-93- 또는 TCR T116-49- 트랜스제닉 T 세포와의 공동-배양 검정에서 표적으로서 사용되었다. 형질도입되지 않은 T 세포는 음성 대조군으로서 역할을 하였다. 인큐베이션의 24시간 (h) 후, TCR 트랜스제닉 T 세포에 의한 IFN-γ 방출이 표준 ELISA에 의해 평가되었다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
도 2 TCR T402-93 또는 TCR T116-49를 발현하는 CD8+ T 세포는 HLA-A*24-양성 PRAME-양성 종양 세포주 (K562, Mel624.38, CMK, SKHEP1) 또는 HLA-A*24-양성 PRAME-음성 종양 세포주 (Colo678, MCF-7, 22RV1)와 공동-배양되었다. 형질도입되지 않은 CD8+ T 세포는 음성 대조군으로서 역할을 하였다. PRAME를 코딩하는 ivtRNA 또는 물로 전기천공되고 PRAME301-309 펩티드 또는 관련이 없는 펩티드로 적재된 HLA-A*24-양성 LCL은 내부 표적 대조군으로서 포함되었다. 트랜스제닉 TCR-발현 T 세포의 활성화는 24h 공동-배양 후 IFN-γ 방출 ([pg/ml])을 측정하는 표준 ELISA에 의해 평가되었다. 표준 편차와 함께 중복의 평균 값이 제시된다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다. 4000 pg 초과의 값은 3차 다항식을 사용하여 추정되었다.
도 3 적색-표지된 종양 세포주는 TCR T402-93- 또는 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포 및 형질도입되지 않은 T 세포와 함께 인큐베이션되었다. 세포를 105h의 기간에 걸쳐 생-세포 이미징 시스템을 사용하여 모니터링하여 TCR-트랜스제닉 T 세포에 의해 매개된 적색-표지된 종양 세포의 살해를 평가하였다. 총 통합된 강도 (RCU (적색 보정된 단위) x μm2/이미지)는 인큐사이트 줌(IncuCyte ZOOM)® 소프트웨어를 사용하여 계산되었다. 각각의 측정 지점은 3회의 기술적 복제의 평균을 나타낸다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
도 4 HLA-A*24-양성 LCL은 적정량 (10-5 M 내지 10-9 M)의 PRAME301-309 펩티드로 적재되고 TCR T402-93- 또는 TCR T116-49-발현 CD8+ T 세포와 공동-배양되었다. 표준 ELISA를 수행하여 24h 후 T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 평가하였다. 이펙터 세포 샘플당 최대 IFN-γ 방출은 100 %로 설정되었다. 이에 기반하여, 상대 IFN-γ 방출이 계산되었다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
도 5 트레오닌 스캐닝 검정이 TCR T402-93 및 TCR T116-49에 의해 인식된 9-량체 PRAME301-309 (LYVDSLFFL) 펩티드에 대해 수행되었다. PRAME301-309 펩티드에 포함된 아미노산은 트레오닌에 의해 연속적으로 대체되었다 (교환된 aa는 볼드체로 제시됨). HLA-A*24-양성 LCL은 변형된 펩티드 (10-5M)로 적재되고 인큐베이션의 24h 후 표준 ELISA에 의해 IFN-γ 분비를 평가하는 데 TCR T402-93 또는 TCR T116-49를 발현하는 T 세포 및 형질도입되지 않은 T 세포와의 공동-배양에 사용되었다. 표준 편차와 함께 중복의 평균 값이 제시된다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
도 6 야생형 9-량체 PRAME301-309 (LYVDSLFFL) 펩티드와 비교하여 최대 3개의 아미노산 차이를 갖는 펩티드가 엑스피토프(Expitope) 2.0® 도구를 사용하여 선택되었다. 미스매치된 펩티드는 HLA-A*24-양성 LCL (10-5M) 상에 적재되었고 TCR T402-93- 또는 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포에 의한 인식이 시험되었다. PRAME301-309-적재된 LCL은 내부 양성 대조군으로서 포함되었다. T 세포의 활성화는 인큐베이션의 24h 후 표준 ELISA IFN-γ를 사용하여 평가되었다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
도 7 TCR T116-49-형질도입된 T 세포는 독일 및 미국/유럽 백인 집단에서 가장 빈번한 HLA-A, -B 및 -C 대립유전자를 포함하는 52개의 LCL로 이루어진 세포 라이브러리와 공동-배양되었다. 또한, 동일한 52개의 LCL은 PRAME301-309 펩티드로 적재되고 TCR T116-49-형질도입된 T 세포와의 공동-배양에서 시험되었다. 표준 ELISA를 수행하여 인큐베이션의 24h 후 T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 평가하였다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
본 발명은 추가로 하기 실시예에 의해 예시된다. 하지만, 실시예 및 그에 기재된 구체적인 실시양태는 본 발명을 이러한 구체적인 실시양태로 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예
실시예 1: PRAME301-309-특이적 HLA-A24-제한된 TCR의 단리
시험관내 프라이밍 접근법이 임의의 목적하는 HLA 제한 및 항원 특이성의 T 세포 클론을 단리하는 데 사용되었다. 프라이밍 시스템은 항원-제시 세포로서 HLA-A*24:02-음성 건강한 공여자의 성숙 수지상 세포 (mDC) 및 반응 세포로서 자가 CD8-풍부한 T 세포를 사용하였다. 전장 인간 PRAME 아미노산 서열을 코딩하는 시험관내 전사된 RNA (ivtRNA)는 특이적 항원의 공급원으로서 역할을 하였다. 동시에, 인간 HLA-A*24:02-코딩 ivtRNA (https://www.ebi.ac.uk/ipd/imgt/hla/로부터 유래된 서열)는 제한 요소의 공급원으로서 사용되고 이 전용 HLA 대립유전자 (WO2007/017201에 기재된 바와 같음)의 측면에서 동종이계 프라이밍을 설정하기 위해 mDC로 형질감염되었다. mDC로의 전기천공 후, PRAME-코딩 ivtRNA는 전장 단백질로 번역되었으며, 이는 후속적으로 프로세싱되고 형질감염된 mDC에 의해 발현되는 트랜스제닉 HLA-A*24 분자에 의해 펩티드로서 제시되었다. T 세포와 동일한 공여자로부터의 ivtRNA-형질감염된 mDC의 시험관내 공동-배양은 상응하는 TCR의 공급원으로서 역할을 한 항원-특이적 T 세포의 새로 유도를 야기하였다.
HLA-A*24:02-코딩 ivtRNA 및 PRAME ivtRNA로 형질감염된 mDC를 사용하는 동종이계 T 세포 프라이밍 접근법은 하기 프로토콜에 따른 동종이계 HLA-A*24:02-코딩된 분자에 의한 펩티드 제시를 사용하여 달성되었다:
HLA-A*24:02/PRAME 프라이밍
단핵구는 HLA-A*24:02-음성 건강한 공여자로부터 유래되었고 상응하는 mDC는 문헌 [Jonuleit et al. protocol (Jonuleit et al., Eur. J. Immunol. 1997, 27:3135-3142)]에 따른 적합한 성숙 칵테일을 사용하여 생산되었다. mDC는 동시에 PRAME을 코딩하는 20 μg ivtRNA 및 HLA-A*24 분자를 코딩하는 20 μg ivtRNA로 전기천공되었다. 제조된 mDC는 후속적으로 자가 CD8+ T 세포와 1:10의 비율로 약 14일 동안 IL-2 (50 단위/ml)로 보충된 적합한 세포 배지에서 공동-배양되었다. 후속적으로, PRAME301-309-특이적 T 세포는 HLA-A*24:02 PRAME301-309 다량체를 사용하여 확인되고 FACS 기술을 사용하는 단일 세포 분류에 의해 분리되었다. HLA-A*24 분자 상 목적하는 PRAME301-309 에피토프를 인식한 유망한 T 세포 클론의 확인 후, 상응하는 T 세포 수용체 (TCR) 서열은 차세대 시퀀싱 (NGS)에 의해 분석되었다. 확인된 HLA-A*24-제한된 PRAME301-309 -특이적 TCR (T402-93 및 T116-49)은 수용자 T 세포로 발현되었고 기능 및 특이성에 관한 특징규명이 수행되었다.
실시예 2: 항원 특이성의 평가
HLA-A*24:02-코딩된 분자를 발현하는 LCL은 10-5 M의 농도로 특이적 PRAME301-309 펩티드 또는 관련이 없는 펩티드로 적재되었다. 추가적으로, 동일한 HLA-A*24-양성 LCL은 PRAME를 코딩하는 ivtRNA 또는 음성 대조군으로서 물로 전기천공되었다. 각각의 표적 세포주는 10000개의 T 세포 및 20000개의 표적/96-웰을 사용하여 1:2의 이펙터 대 표적 (E:T) 비율로 TCR T402-93 또는 TCR T116-49로 형질도입된 T 세포와 공동-배양되었다. 형질도입되지 않은 T 세포 (UT)는 음성 대조군으로서 포함되었다. 공동-배양의 24h 후, T 세포에 의해 방출된 IFN-γ는 표준 ELISA에 의해 측정되었다.
결과:
TCR T402-93- 및 TCR T116-49 -형질도입된 T 세포 둘 다는 특이적 PRAME301-309 펩티드뿐만 아니라 PRAME-형질감염된 LCL을 인식하였다. 유의하면, TCR T116-49를 발현하는 T 세포는 TCR T402-93-트랜스제닉 T 세포와 비교하여 양성 표적과 인큐베이션 후 더 높은 수준의 방출된 IFN-γ를 나타냈다. 관련이 없는 펩티드로 적재된 및 물-전기천공된 LCL의 인식은 관측되지 않았다 (도 1).
실시예 3: 종양 세포 인식
T 세포에 의한 IFN-γ 방출의 평가
TCR T402-93 또는 TCR T116-49로 형질도입된 이펙터 T 세포는 PRAME-양성 종양 세포주 (K562, Mel624.38, CMK, SKHEP1) 또는 PRAME-음성 종양 세포주 (Colo678, MCF-7, 22RV1)와 공동-배양되었다. 선택된 종양 세포주 중에서, CMK 및 SKHEP1 세포주는 HLA-A*24에 대해 내인성으로 양성이지만, 다른 5개의 세포주는 내인성으로 HLA-A*24-음성이다. 따라서, 이들 5개의 세포주는 HLA-A*24 (K562, Mel624.38, 22RV1)로의 형질도입 또는 HLA-A*24 분자를 코딩하는 ivtRNA (Colo678 및 MCF-7)로의 형질감염 후 시험되었다. 형질도입되지 않은 CD8+ T 세포는 음성 대조군으로서 역할을 하였다. PRAME를 코딩하는 ivtRNA 또는 물로 전기천공되고 PRAME301-309 펩티드 또는 관련이 없는 펩티드로 적재된 HLA-A*24-양성 LCL은 내부 대조군으로서 포함되었다. T 세포 및 표적 세포는 1:1의 E:T 비율 (10000개 E/10000개 T/96-웰)로 공동-배양되었다. 트랜스제닉 TCR-발현 T 세포의 활성화는 24h 공동-배양 후 IFN-γ 방출 ([pg/ml])을 측정하는 표준 ELISA에 의해 평가되었다. 4000 pg 초과의 값은 3차 다항식을 사용하여 추정되었다.
결과:
TCR T116-49-형질도입된 T 세포는 모든 시험된 PRAME-양성 종양 세포의 인식을 나타냈지만, TCR T402-93-형질도입된 T 세포는 4개의 PRAME-양성 세포 (K562 및 Mel624.38) 중 단지 2개와의 공동-배양 후 높은 수준의 IFN-γ를 방출하였다. 임의의 PRAME-음성 세포의 인식은 TCR T116-49-형질도입된 T 세포와의 공동-배양에서 관측되지 않았다. 대조적으로, PRAME-음성 세포주 (MCF-7)의 약간의 인식은 TCR 402-93을 발현하는 T 세포에 대해 관측되었다 (도 2).
T 세포에 의해 매개된 살해의 평가
TCR 트랜스제닉 T 세포에 의해 매개된 살해를 평가하기 위해, 2개의 PRAME-양성 종양 세포주 (Mel624.38, SKHEP1) 및 PRAME-음성 종양 세포주 (Colo678)가 표적 세포로서 선택되었다. 선택된 종양 세포주 중에서, SKHEP1 세포주는 HLA-A*24에 대해 내인성으로 양성이지만, 다른 3개의 세포주는 내인성으로 HLA-A*24-음성이다. 따라서, SKHEP1 세포는 오직 mCherry (적색 형광 단백질)로 형질도입되었지만, 다른 2개의 세포주는 mCherry에 연결된 HLA-A*24로 형질도입되었다. 적색-표지된 종양 세포는 공동-배양의 시작 전 2일에 96-웰 평저 플레이트에 시딩되었다 (Mel624.38 및 SKHEP1 5000개 세포/웰, Colo678 10000개 세포/웰). 내부 양성 대조군으로서, 동일한 종양 세포주는 추가적으로 PRAME301-309 펩티드로 적재되었다. 웰당 TCR T402-93- 또는 TCR T116-49를 발현하는 10000개의 T 세포를 추가한 후, 공동-배양 플레이트는 생-세포 이미징 시스템 (인큐사이트 줌® 장치)으로 전달되었다. 세포를 105h의 총 기간에 걸쳐 모니터링하여 TCR-트랜스제닉 T 세포에 의해 매개된 적색-표지된 종양 세포의 살해를 평가하였다. 총 통합된 강도 (RCU (적색 보정된 단위) x μm2/이미지)로 지정된, 이미지에서의 대상의 적색 형광 강도의 총 합계는 인큐사이트 줌® 소프트웨어를 사용하여 계산되었다.
결과:
TCR-형질도입된 샘플 둘 다는 Mel624.38 PRAME-양성 세포주의 성장에 영향을 미쳤지만, 대조적으로 오직 TCR T116-49-형질도입된 T 세포만이 SKHEP1 PRAME-양성 세포주의 효율적인 살해를 매개하였다. TCR-형질도입된 샘플 둘 다는 PRAME-음성 종양 세포의 확장에 영향을 미치지 않았다. 펩티드 적재 후 각각의 표적 세포주는 TCR-형질도입된 T 세포에 의해 효율적으로 살해되었다. 대조적으로, 표적 세포 성장이 형질도입되지 않은 T 세포가 공동-배양에서 이펙터로서 사용되었을 때 모든 종양 세포주에 대해 관측되었다 (도 3).
실시예 4: 기능적 결합력
실험의 목표는 PRAME301-309 -특이적 TCR의 기능적 결합력을 측정하는 것이었다. 기능적 결합력은, 예컨대 트랜스제닉 TCR과 pMHC 복합체 사이의 개별 비공유 결합 상호작용의 다중 친화도의 축적된 힘을 지칭한다. TCR-트랜스제닉 T 세포 집단의 기능적 결합력은 적정량의 PRAME301-309 펩티드 (10-5 M 내지 10-9 M)로 적재된 HLA-A*24-양성 LCL과의 공동-배양에서 반수-최대 상대 IFN-γ 방출로서 측정되었다. T 세포 및 표적 세포는 1:1의 E:T 비율 (10000개 E/10000개 T/96-웰)로 공동-배양되었다. 형질도입되지 않은 CD8+ T 세포가 T 세포의 내인성 TCR에 의해 매개되고 트랜스제닉 TCR-특이적 인식과 관련되지 않은 반응성을 빼기 위해 내부 대조군으로서 사용되었다. 표준 ELISA를 수행하여 24h 후 T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 평가하였다. 이펙터 세포 샘플당 최대 IFN-γ 방출은 100 %로 설정되었다. 이에 기반하여, 상대 IFN-γ 방출이 계산되었다. 이 실험은 2개의 상이한 공여자로 수행되었다. 하나의 대표적인 실험이 제시된다.
결과:
TCR T116-49-형질도입된 T 세포는 TCR T402-93-형질도입된 T 세포와 비교하여 더 높은 기능적 결합력을 나타냈으며, 이는 표적 펩티드에 대한 더 높은 감수성을 나타낸다 (도 4).
실시예 5: TCR 인식 모티프 (트레오닌 스캔 검정)
실험의 목표는 TCR에 의한 직접적인 인식 또는 HLA-A*24:02- 코딩된 분자에 결합하는 펩티드에 필수적인 PRAME301-309 에피토프 내 중요한 잔기를 평가하는 것이었다. 아미노산 치환 스캐닝은 이들 잔기가 아미노산 트레오닌으로 교환될 때마다 TCR에 의한 인식을 제거하는 에피토프 서열에서의 중요한 아미노산을 정의하는 데 사용되었다. 이들 "고정된" 아미노산은 고유한 TCR 인식 모티프를 정의하는 데 사용될 수 있다. 트레오닌 스캐닝 검정이 TCR T402-93 및 TCR T116-49에 의해 인식된 9-량체 PRAME301-309 펩티드에 대해 수행되었다. PRAME301-309 펩티드에 포함된 아미노산은 트레오닌에 의해 연속적으로 대체되었다. HLA-A*24-양성 LCL은 변형된 펩티드 (10-5M)뿐만 아니라 야생형 PRAME301-309 펩티드로 적재되고 TCR T402-93 또는 TCR T116-49를 발현하는 T 세포와의 공동-배양에 사용되었다. 형질도입되지 않은 T 세포는 내부 대조군으로서 역할을 하였다. T 세포 및 표적 세포는 1:1의 E:T 비율 (10000개 E/10000개 T/96-웰)로 공동-배양되었다. T 세포에 의한 IFN-γ 분비를 평가하기 위해 표준 ELISA가 공동-배양의 24h 후 수행되었다.
결과:
TCR T116-49-형질도입된 T 세포는 TCR T402-93-형질도입된 T 세포와 비교하여 더 적은 고정된 위치를 갖는 상이한 TCR 인식 모티프를 나타냈다 (도 5).
실시예 6: 미스매치된 펩티드의 인식
엑스피토프 2.0® 도구 (엑스피토프® 2.0; Jaravine et al. BMC Cancer 2017)를 사용하는 인실리코 분석에 의해, 야생형 9-량체 PRAME301-309 에피토프와 비교하여 최대 3개의 미스매치를 포함하는 52개의 펩티드가 선택되었다. 미스매치된 펩티드는 HLA-A*24-양성 LCL (10-5M) 상에 적재되었고 TCR T402-93- 및 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포에 의한 인식이 시험되었다. 야생형 PRAME301-309 펩티드-적재된 LCL뿐만 아니라 적재되지 않은 LCL은 내부 대조군으로서 포함되었다. T 세포 및 표적 세포는 1:1의 E:T 비율 (10000개 E/10000개 T/96-웰)로 공동-배양되었다. T 세포의 활성화는 인큐베이션의 24h 후 표준 ELISA IFN-γ를 사용하여 평가되었다.
결과:
TCR 트랜스제닉 T 세포 샘플은 야생형 PRAME301-309 펩티드를 인식하였지만 적재되지 않은 표적은 인식하지 않았고 따라서 트랜스제닉 T 세포의 기능성을 입증하였다. TCR T402-93-형질도입된 T 세포는 또한 펩티드 #4, #33, #38 및 #42로 적재된 표적 세포에 의해 활성화되었지만, TCR T116-49-형질도입된 T 세포는 미스매치된 펩티드 #18로 적재된 LCL로 자극 시 IFN-γ를 방출한다 (도 6 및 표 2).
표 2: T402-93- 또는 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포에 의해 인식된 52개의 시험된 펩티드 중 5개의 미스매치된 펩티드의 목록
Figure pct00004
펩티드 #4 (YYSDSIFFL)는 서열식별번호: 52에 제시되고, 펩티드 #33 (LYVDTIGFL)은 서열식별번호: 53에 제시되고, 펩티드 #38 (DYVDSLYFC)은 서열식별번호: 54에 제시되고, 펩티드 #42 (LYYDHLGFL)는 서열식별번호: 55에 제시되고 펩티드 #18 (DYVGTLFFL)은 서열식별번호: 56에 제시된다.
실시예 7: LCL 라이브러리
독일 및 미국/유럽 백인 집단에서 가장 빈번한 HLA-A, -B 및 -C 대립유전자를 포함하는 52개의 LCL로 이루어진 세포 라이브러리가 확립되었다. 이들 집단 중 어느 하나의 0.5% 초과의 HLA 대립유전자 빈도는 적어도 1개의 세포주에 의해 포함되었고, 5% 초과의 빈도를 나타내는 HLA 대립유전자는 적어도 2개의 LCL로 포함된다 (HLA-A*11:01 제외). 실험의 제1 목표는 TCR 116-49에 의한 빈번한 HLA 동종이형의 잠재적인 표적 항원-독립적인 교차-인식을 조사하는 것이었다. HLA-동종 교차-인식은 동종이계 HLA 분자와 상호작용하는 TCR의 능력으로서 정의될 수 있으며 여기서 이들 상호작용은 또한 정교한 펩티드 및 HLA 특이성을 나타내기 위해 기재된다. 따라서, 52개의 LCL은 TCR T116-49를 발현하는 T 세포와 함께 인큐베이션되었다. 실험의 추가적인 목표는 PRAME301-309 에피토프를 제시할 수 있고 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포에 의해 인식될 수 있는 HLA-A*24:02 이외의 공통 HLA-A 하위-대립유전자를 결정하는 것이었다 (HLA 제한 미세-타이핑). 따라서, 52개의 LCL은 PRAME301-309 펩티드 (10-5M)로 적재되고 후속적으로 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포와의 공동-배양에서 표적으로서 사용되었다. 인큐베이션의 24h 후, 표준 ELISA를 수행하여 T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 측정하였다.
결과:
TCR 116-49-형질도입된 T 세포에 의한 IFN-γ 방출은 라이브러리에 포함된 모든 PRAME301-309 펩티드-적재된 HLA-A*24:02-양성 LCL과의 공동-배양 후 관측되었다. TCR 116-49-트랜스제닉 T 세포는 펩티드 적재가 없는 것뿐만 아니라 PRAME301-309 펩티드의 적재 후 HLA-A*02:02를 발현하는 LCL을 약간 인식하였으며, 이는 HLA-A*02:02 대립유전자에 대한 잠재적인 HLA-동종 교차 인식을 시사한다. HLA-A*02:17을 발현하는 2개의 LCL은 오직 PRAME301-309 펩티드 적재 후 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포에 의해 인식되었으며, 이는 PRAME301-309 에피토프가 또한 HLA-A*02:17-코딩된 분자 상에 제시되어 TCR T116-49-트랜스제닉 T 세포의 활성화를 야기할 수 있다는 것을 나타낸다.
서열 (상충할 경우 하기 서열이 WIPO ST.25 표준에 따른 서열 목록의 서열을 지배함):
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
SEQUENCE LISTING <110> Medigene Immunotherapies GmbH <120> Novel PRAME receptors and uses thereof <130> MED17180EP <150> EP20198096.8 <151> 2020-09-24 <160> 56 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ctctatgtgg actctttatt tttcctt 27 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu 1 5 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 aaggccctgt acagc 15 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Lys Ala Leu Tyr Ser 1 5 <210> 5 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 gagaaccatc ggtac 15 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Glu Asn His Arg Tyr 1 5 <210> 7 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 ctgctgaaag gcggcgagca g 21 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gln 1 5 <210> 9 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 agctacggcg tgaaggac 18 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> homo sapiens <400> 10 Ser Tyr Gly Val Lys Asp 1 5 <210> 11 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 tgcggcacag ccaatagcgg cggcagcaac tacaagctga ccttc 45 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Cys Gly Thr Ala Asn Ser Gly Gly Ser Asn Tyr Lys Leu Thr Phe 1 5 10 15 <210> 13 <211> 39 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 tgcgccatca gcgactacga gggcaccgag gcctttttt 39 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Cys Ala Ile Ser Asp Tyr Glu Gly Thr Glu Ala Phe Phe 1 5 10 <210> 15 <211> 402 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 atggagacac tgctgaaggt gctgtctggc acactgctgt ggcagctgac ctgggtccga 60 tctcagcagc ctgttcagtc tcctcaggcc gtgatcctga gagaaggcga ggacgccgtg 120 atcaactgca gcagctctaa ggccctgtac agcgtgcact ggtacagaca gaagcacggc 180 gaggcccctg tgttcctgat gatcctgctg aaaggcggcg agcagaaggg ccacgagaag 240 atcagcgcca gcttcaacga gaagaagcag cagtccagcc tgtacctgac agccagccag 300 ctgagctaca gcggcaccta cttttgcggc acagccaata gcggcggcag caactacaag 360 ctgaccttcg gcaagggcac cctgctgacc gtgaatccca at 402 <210> 16 <211> 134 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Glu Thr Leu Leu Lys Val Leu Ser Gly Thr Leu Leu Trp Gln Leu 1 5 10 15 Thr Trp Val Arg Ser Gln Gln Pro Val Gln Ser Pro Gln Ala Val Ile 20 25 30 Leu Arg Glu Gly Glu Asp Ala Val Ile Asn Cys Ser Ser Ser Lys Ala 35 40 45 Leu Tyr Ser Val His Trp Tyr Arg Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Val 50 55 60 Phe Leu Met Ile Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gln Lys Gly His Glu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Ala Ser Phe Asn Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ser Leu Tyr Leu 85 90 95 Thr Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gly Thr Ala 100 105 110 Asn Ser Gly Gly Ser Asn Tyr Lys Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Leu 115 120 125 Leu Thr Val Asn Pro Asn 130 <210> 17 <211> 393 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 atgggcacca gactgttctt ctacgtggcc ctgtgtctgc tgtggacagg ccatgtggat 60 gccggaatca cacagagccc cagacacaaa gtgaccgaga caggcacccc tgtgacactg 120 agatgtcacc agaccgagaa ccatcggtac atgtattggt acagacagga ccccggccac 180 ggcctgagac tgatccacta tagctacggc gtgaaggaca ccgacaaggg cgaagtgtct 240 gacggctaca gcgtgtccag aagcaagacc gaggacttcc tgctgaccct ggaaagcgcc 300 acaagcagcc agaccagcgt gtacttctgc gccatcagcg actacgaggg caccgaggcc 360 ttttttggcc aaggcacaag actgaccgtg gtg 393 <210> 18 <211> 131 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Gly Thr Arg Leu Phe Phe Tyr Val Ala Leu Cys Leu Leu Trp Thr 1 5 10 15 Gly His Val Asp Ala Gly Ile Thr Gln Ser Pro Arg His Lys Val Thr 20 25 30 Glu Thr Gly Thr Pro Val Thr Leu Arg Cys His Gln Thr Glu Asn His 35 40 45 Arg Tyr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly His Gly Leu Arg Leu 50 55 60 Ile His Tyr Ser Tyr Gly Val Lys Asp Thr Asp Lys Gly Glu Val Ser 65 70 75 80 Asp Gly Tyr Ser Val Ser Arg Ser Lys Thr Glu Asp Phe Leu Leu Thr 85 90 95 Leu Glu Ser Ala Thr Ser Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ile 100 105 110 Ser Asp Tyr Glu Gly Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Val 130 <210> 19 <211> 810 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 atggagacac tgctgaaggt gctgtctggc acactgctgt ggcagctgac ctgggtccga 60 tctcagcagc ctgttcagtc tcctcaggcc gtgatcctga gagaaggcga ggacgccgtg 120 atcaactgca gcagctctaa ggccctgtac agcgtgcact ggtacagaca gaagcacggc 180 gaggcccctg tgttcctgat gatcctgctg aaaggcggcg agcagaaggg ccacgagaag 240 atcagcgcca gcttcaacga gaagaagcag cagtccagcc tgtacctgac agccagccag 300 ctgagctaca gcggcaccta cttttgcggc acagccaata gcggcggcag caactacaag 360 ctgaccttcg gcaagggcac cctgctgacc gtgaatccca atatccagaa tccggagccc 420 gccgtatacc agctgaagga ccctagaagc caggacagca ccctgtgcct gttcaccgac 480 ttcgacagcc agatcaacgt gcccaagacc atggaaagcg gcaccttcat caccgacaag 540 acagtgctgg acatgaaggc catggacagc aagtccaacg gcgcaatcgc ctggtccaac 600 cagaccagct tcacatgcca ggacatcttc aaagagacaa acgccacata ccccagcagc 660 gacgtgccct gtgatgccac cctgacagag aagtccttcg agacagacat gaacctgaac 720 ttccagaatc tgtccgtgat gggcctgaga atcctgctgc tgaaggtggc cggcttcaat 780 ctgctgatga ccctgcggct gtggtccagc 810 <210> 20 <211> 270 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Glu Thr Leu Leu Lys Val Leu Ser Gly Thr Leu Leu Trp Gln Leu 1 5 10 15 Thr Trp Val Arg Ser Gln Gln Pro Val Gln Ser Pro Gln Ala Val Ile 20 25 30 Leu Arg Glu Gly Glu Asp Ala Val Ile Asn Cys Ser Ser Ser Lys Ala 35 40 45 Leu Tyr Ser Val His Trp Tyr Arg Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Val 50 55 60 Phe Leu Met Ile Leu Leu Lys Gly Gly Glu Gln Lys Gly His Glu Lys 65 70 75 80 Ile Ser Ala Ser Phe Asn Glu Lys Lys Gln Gln Ser Ser Leu Tyr Leu 85 90 95 Thr Ala Ser Gln Leu Ser Tyr Ser Gly Thr Tyr Phe Cys Gly Thr Ala 100 105 110 Asn Ser Gly Gly Ser Asn Tyr Lys Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Leu 115 120 125 Leu Thr Val Asn Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln 130 135 140 Leu Lys Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp 145 150 155 160 Phe Asp Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe 165 170 175 Ile Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser 180 185 190 Asn Gly Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp 195 200 205 Ile Phe Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys 210 215 220 Asp Ala Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn 225 230 235 240 Phe Gln Asn Leu Ser Val Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val 245 250 255 Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 260 265 270 <210> 21 <211> 912 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 atgggcacca gactgttctt ctacgtggcc ctgtgtctgc tgtggacagg ccatgtggat 60 gccggaatca cacagagccc cagacacaaa gtgaccgaga caggcacccc tgtgacactg 120 agatgtcacc agaccgagaa ccatcggtac atgtattggt acagacagga ccccggccac 180 ggcctgagac tgatccacta tagctacggc gtgaaggaca ccgacaaggg cgaagtgtct 240 gacggctaca gcgtgtccag aagcaagacc gaggacttcc tgctgaccct ggaaagcgcc 300 acaagcagcc agaccagcgt gtacttctgc gccatcagcg actacgaggg caccgaggcc 360 ttttttggcc aaggcacaag actgaccgtg gtggaagatc tccggaacgt gaccccccct 420 aaagtgaccc tgttcgaacc cagcaaggcc gagatcgcca acaagcagaa agccaccctc 480 gtgtgcctgg ccagaggctt cttccccgac catgtggaac tgtcttggtg ggtcaacggc 540 aaagaggtgc acagcggagt gtccaccgac cctcaggcct acaaagagag caactacagc 600 tactgcctga gcagcagact gcgggtgtcc gccaccttct ggcacaaccc ccggaaccac 660 ttcagatgcc aggtgcagtt tcacggcctg agcgaagagg acaagtggcc cgaaggctcc 720 cccaagcccg tgacccagaa tatctctgcc gaggcctggg gcagagccga ctgtggaatt 780 accagcgcca gctaccacca gggcgtgctg tctgccacca tcctgtacga gatcctgctg 840 ggcaaggcca ccctgtacgc cgtgctggtg tctggcctgg tgctgatggc catggtcaag 900 aagaagaaca gc 912 <210> 22 <211> 304 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Gly Thr Arg Leu Phe Phe Tyr Val Ala Leu Cys Leu Leu Trp Thr 1 5 10 15 Gly His Val Asp Ala Gly Ile Thr Gln Ser Pro Arg His Lys Val Thr 20 25 30 Glu Thr Gly Thr Pro Val Thr Leu Arg Cys His Gln Thr Glu Asn His 35 40 45 Arg Tyr Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly His Gly Leu Arg Leu 50 55 60 Ile His Tyr Ser Tyr Gly Val Lys Asp Thr Asp Lys Gly Glu Val Ser 65 70 75 80 Asp Gly Tyr Ser Val Ser Arg Ser Lys Thr Glu Asp Phe Leu Leu Thr 85 90 95 Leu Glu Ser Ala Thr Ser Ser Gln Thr Ser Val Tyr Phe Cys Ala Ile 100 105 110 Ser Asp Tyr Glu Gly Thr Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Val Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Thr Leu 130 135 140 Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu 145 150 155 160 Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp 165 170 175 Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln 180 185 190 Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg 195 200 205 Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln 210 215 220 Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala 245 250 255 Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser Ala 260 265 270 Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val 275 280 285 Leu Val Ser Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn Ser 290 295 300 <210> 23 <211> 408 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 atccagaatc cggagcccgc cgtataccag ctgaaggacc ctagaagcca ggacagcacc 60 ctgtgcctgt tcaccgactt cgacagccag atcaacgtgc ccaagaccat ggaaagcggc 120 accttcatca ccgacaagac agtgctggac atgaaggcca tggacagcaa gtccaacggc 180 gcaatcgcct ggtccaacca gaccagcttc acatgccagg acatcttcaa agagacaaac 240 gccacatacc ccagcagcga cgtgccctgt gatgccaccc tgacagagaa gtccttcgag 300 acagacatga acctgaactt ccagaatctg tccgtgatgg gcctgagaat cctgctgctg 360 aaggtggccg gcttcaatct gctgatgacc ctgcggctgt ggtccagc 408 <210> 24 <211> 136 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys Asp Pro Arg Ser 1 5 10 15 Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Ile Asn 20 25 30 Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr Asp Lys Thr Val 35 40 45 Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly Ala Ile Ala Trp 50 55 60 Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe Lys Glu Thr Asn 65 70 75 80 Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala Thr Leu Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val 100 105 110 Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu 115 120 125 Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 <210> 25 <211> 519 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 25 gaagatctcc ggaacgtgac cccccctaaa gtgaccctgt tcgaacccag caaggccgag 60 atcgccaaca agcagaaagc caccctcgtg tgcctggcca gaggcttctt ccccgaccat 120 gtggaactgt cttggtgggt caacggcaaa gaggtgcaca gcggagtgtc caccgaccct 180 caggcctaca aagagagcaa ctacagctac tgcctgagca gcagactgcg ggtgtccgcc 240 accttctggc acaacccccg gaaccacttc agatgccagg tgcagtttca cggcctgagc 300 gaagaggaca agtggcccga aggctccccc aagcccgtga cccagaatat ctctgccgag 360 gcctggggca gagccgactg tggaattacc agcgccagct accaccaggg cgtgctgtct 420 gccaccatcc tgtacgagat cctgctgggc aaggccaccc tgtacgccgt gctggtgtct 480 ggcctggtgc tgatggccat ggtcaagaag aagaacagc 519 <210> 26 <211> 173 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Thr Leu Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Ala Tyr Lys 50 55 60 Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala 65 70 75 80 Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe 85 90 95 His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser Pro Lys Pro 100 105 110 Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly 115 120 125 Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu 130 135 140 Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser 145 150 155 160 Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn Ser 165 170 <210> 27 <211> 140 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser 1 5 10 15 Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn 20 25 30 Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val 35 40 45 Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp 50 55 60 Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile 65 70 75 80 Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val 85 90 95 Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln 100 105 110 Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly 115 120 125 Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 28 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser 1 5 10 15 Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala 20 25 30 Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly 35 40 45 Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu 50 55 60 Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg 65 70 75 80 Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln 85 90 95 Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg 100 105 110 Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala 115 120 125 Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala 130 135 140 Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val 145 150 155 160 Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Phe 165 170 175 <210> 29 <211> 140 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 29 Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser 1 5 10 15 Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn 20 25 30 Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val 35 40 45 Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp 50 55 60 Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile 65 70 75 80 Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Val 85 90 95 Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln 100 105 110 Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly 115 120 125 Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 30 <211> 177 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro 1 5 10 15 Ser Lys Ala Glu Ile Ala His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 20 25 30 Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn 35 40 45 Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys 50 55 60 Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu 65 70 75 80 Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys 85 90 95 Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp 100 105 110 Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg 115 120 125 Ala Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser 130 135 140 Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala 145 150 155 160 Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175 Phe <210> 31 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 31 accacactga gcaac 15 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Thr Thr Leu Ser Asn 1 5 <210> 33 <211> 18 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 33 ggcaccagca atcccaac 18 <210> 34 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Gly Thr Ser Asn Pro Asn 1 5 <210> 35 <211> 21 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 35 ctggtcaagt ccggcgaagt g 21 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Leu Val Lys Ser Gly Glu Val 1 5 <210> 37 <211> 15 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 37 agcgtcggca tcggc 15 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Ser Val Gly Ile Gly 1 5 <210> 39 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 39 tgtgctggcg ccctgcctag agccggcagc tatcaactga cattc 45 <210> 40 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Cys Ala Gly Ala Leu Pro Arg Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe 1 5 10 15 <210> 41 <211> 45 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 41 tgtgcttgga gcctcggagc cggctacacc gacacacagt atttt 45 <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Cys Ala Trp Ser Leu Gly Ala Gly Tyr Thr Asp Thr Gln Tyr Phe 1 5 10 15 <210> 43 <211> 396 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 43 atgctgctga tcacctccat gctggtgctg tggatgcagc tgagccaagt gaacggccag 60 caagtgatgc agatccctca gtaccagcac gtgcaagaag gcgaggactt caccacctac 120 tgcaacagca gcaccacact gagcaacatc cagtggtaca agcagcggcc tggcggacac 180 cctgtgtttc tgatccagct ggtcaagtcc ggcgaagtga agaagcagaa gcggctgacc 240 ttccagttcg gcgaggccaa gaagaacagc agcctgcaca tcaccgccac acagaccacc 300 gatgtgggca cctacttttg tgctggcgcc ctgcctagag ccggcagcta tcaactgaca 360 ttcggcaagg gcaccaagct gagcgtgatc cccaac 396 <210> 44 <211> 132 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Met Leu Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln 1 5 10 15 Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln 20 25 30 Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser 35 40 45 Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu 50 55 60 Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr 65 70 75 80 Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala 85 90 95 Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Ala Leu Pro 100 105 110 Arg Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu Ser 115 120 125 Val Ile Pro Asn 130 <210> 45 <211> 393 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 45 atgctgtgtt ctctgctggc tctgctgctg ggcacctttt ttggcgtcag aagccagacc 60 atccaccagt ggcctgctac actggtgcag cctgttggaa gccctctgag cctggaatgt 120 accgtggaag gcaccagcaa tcccaacctg tactggtaca gacaggccgc tggaagagga 180 ctgcagctgc tgttttacag cgtcggcatc ggccagatca gcagcgaggt tccacagaat 240 ctgagcgcca gcagacccca ggacagacag tttatcctga gcagcaagaa gctgctgctg 300 agcgacagcg gcttctacct gtgtgcttgg agcctcggag ccggctacac cgacacacag 360 tattttggcc ctggcaccag actgaccgtg ctg 393 <210> 46 <211> 131 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Met Leu Cys Ser Leu Leu Ala Leu Leu Leu Gly Thr Phe Phe Gly Val 1 5 10 15 Arg Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val 20 25 30 Gly Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro 35 40 45 Asn Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Gly Leu Gln Leu Leu 50 55 60 Phe Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn 65 70 75 80 Leu Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys 85 90 95 Lys Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Leu 100 105 110 Gly Ala Gly Tyr Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Leu 130 <210> 47 <211> 804 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 47 atgctgctga tcacctccat gctggtgctg tggatgcagc tgagccaagt gaacggccag 60 caagtgatgc agatccctca gtaccagcac gtgcaagaag gcgaggactt caccacctac 120 tgcaacagca gcaccacact gagcaacatc cagtggtaca agcagcggcc tggcggacac 180 cctgtgtttc tgatccagct ggtcaagtcc ggcgaagtga agaagcagaa gcggctgacc 240 ttccagttcg gcgaggccaa gaagaacagc agcctgcaca tcaccgccac acagaccacc 300 gatgtgggca cctacttttg tgctggcgcc ctgcctagag ccggcagcta tcaactgaca 360 ttcggcaagg gcaccaagct gagcgtgatc cccaacatcc agaatccgga gcccgccgta 420 taccagctga aggaccctag aagccaggac agcaccctgt gcctgttcac cgacttcgac 480 agccagatca acgtgcccaa gaccatggaa agcggcacct tcatcaccga caagacagtg 540 ctggacatga aggccatgga cagcaagtcc aacggcgcaa tcgcctggtc caaccagacc 600 agcttcacat gccaggacat cttcaaagag acaaacgcca cataccccag cagcgacgtg 660 ccctgtgatg ccaccctgac agagaagtcc ttcgagacag acatgaacct gaacttccag 720 aatctgtccg tgatgggcct gagaatcctg ctgctgaagg tggccggctt caatctgctg 780 atgaccctgc ggctgtggtc cagc 804 <210> 48 <211> 268 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Met Leu Leu Ile Thr Ser Met Leu Val Leu Trp Met Gln Leu Ser Gln 1 5 10 15 Val Asn Gly Gln Gln Val Met Gln Ile Pro Gln Tyr Gln His Val Gln 20 25 30 Glu Gly Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Cys Asn Ser Ser Thr Thr Leu Ser 35 40 45 Asn Ile Gln Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Gly His Pro Val Phe Leu 50 55 60 Ile Gln Leu Val Lys Ser Gly Glu Val Lys Lys Gln Lys Arg Leu Thr 65 70 75 80 Phe Gln Phe Gly Glu Ala Lys Lys Asn Ser Ser Leu His Ile Thr Ala 85 90 95 Thr Gln Thr Thr Asp Val Gly Thr Tyr Phe Cys Ala Gly Ala Leu Pro 100 105 110 Arg Ala Gly Ser Tyr Gln Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Lys Leu Ser 115 120 125 Val Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Glu Pro Ala Val Tyr Gln Leu Lys 130 135 140 Asp Pro Arg Ser Gln Asp Ser Thr Leu Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp 145 150 155 160 Ser Gln Ile Asn Val Pro Lys Thr Met Glu Ser Gly Thr Phe Ile Thr 165 170 175 Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Lys Ala Met Asp Ser Lys Ser Asn Gly 180 185 190 Ala Ile Ala Trp Ser Asn Gln Thr Ser Phe Thr Cys Gln Asp Ile Phe 195 200 205 Lys Glu Thr Asn Ala Thr Tyr Pro Ser Ser Asp Val Pro Cys Asp Ala 210 215 220 Thr Leu Thr Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Met Asn Leu Asn Phe Gln 225 230 235 240 Asn Leu Ser Val Met Gly Leu Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly 245 250 255 Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 260 265 <210> 49 <211> 912 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 49 atgctgtgtt ctctgctggc tctgctgctg ggcacctttt ttggcgtcag aagccagacc 60 atccaccagt ggcctgctac actggtgcag cctgttggaa gccctctgag cctggaatgt 120 accgtggaag gcaccagcaa tcccaacctg tactggtaca gacaggccgc tggaagagga 180 ctgcagctgc tgttttacag cgtcggcatc ggccagatca gcagcgaggt tccacagaat 240 ctgagcgcca gcagacccca ggacagacag tttatcctga gcagcaagaa gctgctgctg 300 agcgacagcg gcttctacct gtgtgcttgg agcctcggag ccggctacac cgacacacag 360 tattttggcc ctggcaccag actgaccgtg ctggaagatc tccggaacgt gaccccccct 420 aaagtgaccc tgttcgaacc cagcaaggcc gagatcgcca acaagcagaa agccaccctc 480 gtgtgcctgg ccagaggctt cttccccgac catgtggaac tgtcttggtg ggtcaacggc 540 aaagaggtgc acagcggagt gtccaccgac cctcaggcct acaaagagag caactacagc 600 tactgcctga gcagcagact gcgggtgtcc gccaccttct ggcacaaccc ccggaaccac 660 ttcagatgcc aggtgcagtt tcacggcctg agcgaagagg acaagtggcc cgaaggctcc 720 cccaagcccg tgacccagaa tatctctgcc gaggcctggg gcagagccga ctgtggaatt 780 accagcgcca gctaccacca gggcgtgctg tctgccacca tcctgtacga gatcctgctg 840 ggcaaggcca ccctgtacgc cgtgctggtg tctggcctgg tgctgatggc catggtcaag 900 aagaagaaca gc 912 <210> 50 <211> 304 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Met Leu Cys Ser Leu Leu Ala Leu Leu Leu Gly Thr Phe Phe Gly Val 1 5 10 15 Arg Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val 20 25 30 Gly Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro 35 40 45 Asn Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Gly Leu Gln Leu Leu 50 55 60 Phe Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn 65 70 75 80 Leu Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys 85 90 95 Lys Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Leu 100 105 110 Gly Ala Gly Tyr Thr Asp Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Thr Val Leu Glu Asp Leu Arg Asn Val Thr Pro Pro Lys Val Thr Leu 130 135 140 Phe Glu Pro Ser Lys Ala Glu Ile Ala Asn Lys Gln Lys Ala Thr Leu 145 150 155 160 Val Cys Leu Ala Arg Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp 165 170 175 Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln 180 185 190 Ala Tyr Lys Glu Ser Asn Tyr Ser Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg 195 200 205 Val Ser Ala Thr Phe Trp His Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln 210 215 220 Val Gln Phe His Gly Leu Ser Glu Glu Asp Lys Trp Pro Glu Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Pro Val Thr Gln Asn Ile Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala 245 250 255 Asp Cys Gly Ile Thr Ser Ala Ser Tyr His Gln Gly Val Leu Ser Ala 260 265 270 Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val 275 280 285 Leu Val Ser Gly Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Lys Lys Asn Ser 290 295 300 <210> 51 <211> 509 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Met Glu Arg Arg Arg Leu Trp Gly Ser Ile Gln Ser Arg Tyr Ile Ser 1 5 10 15 Met Ser Val Trp Thr Ser Pro Arg Arg Leu Val Glu Leu Ala Gly Gln 20 25 30 Ser Leu Leu Lys Asp Glu Ala Leu Ala Ile Ala Ala Leu Glu Leu Leu 35 40 45 Pro Arg Glu Leu Phe Pro Pro Leu Phe Met Ala Ala Phe Asp Gly Arg 50 55 60 His Ser Gln Thr Leu Lys Ala Met Val Gln Ala Trp Pro Phe Thr Cys 65 70 75 80 Leu Pro Leu Gly Val Leu Met Lys Gly Gln His Leu His Leu Glu Thr 85 90 95 Phe Lys Ala Val Leu Asp Gly Leu Asp Val Leu Leu Ala Gln Glu Val 100 105 110 Arg Pro Arg Arg Trp Lys Leu Gln Val Leu Asp Leu Arg Lys Asn Ser 115 120 125 His Gln Asp Phe Trp Thr Val Trp Ser Gly Asn Arg Ala Ser Leu Tyr 130 135 140 Ser Phe Pro Glu Pro Glu Ala Ala Gln Pro Met Thr Lys Lys Arg Lys 145 150 155 160 Val Asp Gly Leu Ser Thr Glu Ala Glu Gln Pro Phe Ile Pro Val Glu 165 170 175 Val Leu Val Asp Leu Phe Leu Lys Glu Gly Ala Cys Asp Glu Leu Phe 180 185 190 Ser Tyr Leu Ile Glu Lys Val Lys Arg Lys Lys Asn Val Leu Arg Leu 195 200 205 Cys Cys Lys Lys Leu Lys Ile Phe Ala Met Pro Met Gln Asp Ile Lys 210 215 220 Met Ile Leu Lys Met Val Gln Leu Asp Ser Ile Glu Asp Leu Glu Val 225 230 235 240 Thr Cys Thr Trp Lys Leu Pro Thr Leu Ala Lys Phe Ser Pro Tyr Leu 245 250 255 Gly Gln Met Ile Asn Leu Arg Arg Leu Leu Leu Ser His Ile His Ala 260 265 270 Ser Ser Tyr Ile Ser Pro Glu Lys Glu Glu Gln Tyr Ile Ala Gln Phe 275 280 285 Thr Ser Gln Phe Leu Ser Leu Gln Cys Leu Gln Ala Leu Tyr Val Asp 290 295 300 Ser Leu Phe Phe Leu Arg Gly Arg Leu Asp Gln Leu Leu Arg His Val 305 310 315 320 Met Asn Pro Leu Glu Thr Leu Ser Ile Thr Asn Cys Arg Leu Ser Glu 325 330 335 Gly Asp Val Met His Leu Ser Gln Ser Pro Ser Val Ser Gln Leu Ser 340 345 350 Val Leu Ser Leu Ser Gly Val Met Leu Thr Asp Val Ser Pro Glu Pro 355 360 365 Leu Gln Ala Leu Leu Glu Arg Ala Ser Ala Thr Leu Gln Asp Leu Val 370 375 380 Phe Asp Glu Cys Gly Ile Thr Asp Asp Gln Leu Leu Ala Leu Leu Pro 385 390 395 400 Ser Leu Ser His Cys Ser Gln Leu Thr Thr Leu Ser Phe Tyr Gly Asn 405 410 415 Ser Ile Ser Ile Ser Ala Leu Gln Ser Leu Leu Gln His Leu Ile Gly 420 425 430 Leu Ser Asn Leu Thr His Val Leu Tyr Pro Val Pro Leu Glu Ser Tyr 435 440 445 Glu Asp Ile His Gly Thr Leu His Leu Glu Arg Leu Ala Tyr Leu His 450 455 460 Ala Arg Leu Arg Glu Leu Leu Cys Glu Leu Gly Arg Pro Ser Met Val 465 470 475 480 Trp Leu Ser Ala Asn Pro Cys Pro His Cys Gly Asp Arg Thr Phe Tyr 485 490 495 Asp Pro Glu Pro Ile Leu Cys Pro Cys Phe Met Pro Asn 500 505 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> mutated peptide <400> 52 Tyr Tyr Ser Asp Ser Ile Phe Phe Leu 1 5 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> mutated peptide <400> 53 Leu Tyr Val Asp Thr Ile Gly Phe Leu 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> mutated peptide <400> 54 Asp Tyr Val Asp Ser Leu Tyr Phe Cys 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> mutated peptide <400> 55 Leu Tyr Tyr Asp His Leu Gly Phe Leu 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> mutated peptide <400> 56 Asp Tyr Val Gly Thr Leu Phe Phe Leu 1 5

Claims (15)

  1. 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호(SEQ ID NO): 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이며 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드, 또는
    상기 폴리펩티드의 부분, 또는
    상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태
    에 결합할 수 있는 T 세포 수용체 (TCR)이며,
    하기를 포함하는 TCR:
    (A) 하기의 CDR3
    (Aa) 서열식별번호: 12에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄, 및/또는
    (Ab) 서열식별번호: 14에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄,
    또는
    (B) 하기의 CDR3
    (Ba) 서열식별번호: 40에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄, 및/또는
    (Bb) 서열식별번호: 42에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄.
  2. 제1항에 있어서,
    (A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Aa1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR2,
    및/또는
    (Ab1) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 10의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR2
    를 추가로 포함하거나,
    또는 (B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Ba1) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 알파 쇄의 CDR2,
    및/또는
    (Bb1) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR1, 및/또는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하는 TCR 베타 쇄의 CDR2
    를 추가로 포함하는 것인 TCR.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HLA-A가 HLA-A*24, 또는 HLA-A*02 코딩된 분자인 TCR.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩티드, 또는 그의 부분, 또는 그의 HLA-A 결합된 형태에 대한 상기 TCR의 결합이 상기 TCR을 포함하는 세포에 의한 IFN-감마 분비를 유도하는 것인 TCR.
  5. 제4항에 있어서, 상기 TCR을 포함하는 세포의 IFN-감마 분비의 상기 유도가 아미노산 서열 LYVDSLFFL (서열식별번호: 2)에 따른 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드이며 여기서 4개 이하의 아미노산이 치환된 것인 폴리펩티드, 또는 상기 폴리펩티드의 부분, 또는 상기 폴리펩티드 또는 그의 부분의 각각의 HLA-A 결합된 형태에 결합 시 상기 TCR을 포함하지 않는 대조군 세포와 비교하여 적어도 5-배 더 높은 것인 TCR.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    (A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Aa2) 서열식별번호 16에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 16의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 16의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 16의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 알파 쇄 가변 영역,
    및/또는
    (Ab2) 서열식별번호 18에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 18의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 18의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 18의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 베타 쇄 가변 영역
    을 포함하거나,
    또는
    (B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Ba2) 서열식별번호 44에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 44의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 44의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 44의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 알파 쇄 가변 영역,
    및/또는
    (Bb2) 서열식별번호 46에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 46의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 46의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 46의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 베타 쇄 가변 영역
    을 포함하는 것인 TCR.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (A)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Aa3) 서열식별번호 20에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 20의 위치 47 내지 51에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 20의 위치 69 내지 75에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 20의 위치 109 내지 123에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 알파 쇄,
    및/또는
    (Ab3) 서열식별번호 22에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 22의 위치 46 내지 50에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 22의 위치 68 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 22의 위치 110 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 베타 쇄
    를 포함하거나,
    또는
    (B)에 따른 CDR3을 포함하는 상기 TCR이
    (Ba3) 서열식별번호 48에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 48의 위치 45 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 48의 위치 67 내지 73에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 48의 위치 107 내지 121에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 알파 쇄,
    및/또는
    (Bb3) 서열식별번호 50에 대해 적어도 80 % 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 50의 위치 44 내지 49에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 50의 위치 67 내지 71에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하고,
    서열식별번호: 50의 위치 108 내지 122에 대해 적어도 80% 유사한 아미노산 서열을 포함하는
    TCR 베타 쇄
    를 포함하는 것인 TCR.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 TCR:
    (A) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는,
    (Aa), (Aa1), (Aa2) 또는 (Aa3)에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및
    (Ab), (Ab1), (Ab2) 또는 (Ab3)에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역,
    또는
    (B) 서로 공유 연결되어 TCR 이종이량체 또는 다량체를 형성하는,
    (Ba), (Ba1), (Ba2) 또는 (Ba3)에 따른 적어도 1개의 TCR 알파 쇄 또는 그의 하위영역, 및
    (Bb), (Bb1), (Bb2) 또는 (Bb3)에 따른 적어도 1개의 TCR 베타 쇄 또는 그의 하위영역.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 TCR을 코딩하는 핵산 분자.
  10. 제9항에 있어서, 서열식별번호: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 또는 21 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80% 동일하거나; 또는 서열식별번호: 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 또는 49 중 임의의 1개의 핵산 서열에 대해 적어도 80% 동일한 핵산 서열을 포함하는 핵산.
  11. 제9항 또는 제10항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 TCR, 제9항 또는 제10항에 따른 핵산 분자 또는 제11항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  13. 하기 중 1개 이상을 포함하는 제약 또는 진단 조성물:
    (i) 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 TCR;
    (ii) 제9항 또는 제10항에 따른 핵산 분자;
    (iii) 제11항에 따른 벡터; 및/또는
    (iv) 제12항에 따른 숙주 세포,
    및, 임의로, 제약상 부형제(들).
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 TCR, 핵산 분자, 벡터 및/또는 숙주 세포.
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 검출, 진단, 예후, 예방 및/또는 치료에 사용하기 위한 TCR, 핵산 분자, 벡터 및/또는 숙주 세포.
KR1020237013603A 2020-09-24 2021-09-24 Prame 특이적 t-세포 수용체 및 그의 용도 KR20230111187A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20198096.8 2020-09-24
EP20198096 2020-09-24
PCT/EP2021/076324 WO2022063966A1 (en) 2020-09-24 2021-09-24 Prame specific t-cell receptors and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230111187A true KR20230111187A (ko) 2023-07-25

Family

ID=72658988

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237013603A KR20230111187A (ko) 2020-09-24 2021-09-24 Prame 특이적 t-세포 수용체 및 그의 용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230340065A1 (ko)
EP (1) EP4217380A1 (ko)
JP (1) JP2023542230A (ko)
KR (1) KR20230111187A (ko)
CN (1) CN116615445A (ko)
AU (1) AU2021348239A1 (ko)
BR (1) BR112023005318A2 (ko)
CA (1) CA3193353A1 (ko)
IL (1) IL301543A (ko)
MX (1) MX2023003372A (ko)
WO (1) WO2022063966A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024101994A1 (en) * 2022-11-11 2024-05-16 ACADEMISCH ZIEKENHUIS LEIDEN (h.o.d.n. LUMC) T cell receptors directed against cancer-associated antigens and uses thereof

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4711955A (en) 1981-04-17 1987-12-08 Yale University Modified nucleotides and methods of preparing and using same
CA1223831A (en) 1982-06-23 1987-07-07 Dean Engelhardt Modified nucleotides, methods of preparing and utilizing and compositions containing the same
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
PT2327763T (pt) 2005-08-05 2018-05-11 Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum Gesundheit & Umwelt Gmbh Geração de células t específicas de antigénios
EP2006376A1 (en) 2007-06-21 2008-12-24 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt GmbH Fusion protein comprising a caspase domain and a nuclear hormone receptor binding domain and methods and uses thereof
GB201501175D0 (en) 2015-01-23 2015-03-11 Univ Oslo Hf A universal T-cell for personalised medicine
CN106478809B (zh) * 2015-11-06 2018-06-01 广东香雪精准医疗技术有限公司 识别prame抗原短肽的tcr
CN108948184B (zh) * 2017-05-22 2021-04-23 香雪生命科学技术（广东）有限公司 一种识别衍生自prame抗原短肽的t细胞受体
CN109400697B (zh) * 2017-08-17 2021-04-23 香雪生命科学技术（广东）有限公司 一种识别prame抗原短肽的tcr及其相关组合物
WO2019175209A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Medigene Immunotherapies Gmbh Inducible t cell receptors and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022063966A1 (en) 2022-03-31
US20230340065A1 (en) 2023-10-26
EP4217380A1 (en) 2023-08-02
JP2023542230A (ja) 2023-10-05
MX2023003372A (es) 2023-05-04
AU2021348239A9 (en) 2023-07-13
CA3193353A1 (en) 2022-03-31
CN116615445A (zh) 2023-08-18
BR112023005318A2 (pt) 2023-04-25
AU2021348239A1 (en) 2023-05-04
IL301543A (en) 2023-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102436129B1 (ko) T 세포 수용체 및 이의 용도
KR102490850B1 (ko) Nyeso t 세포 수용체
US20220401484A1 (en) Prame TCR Receptors And Uses Thereof
KR20210019993A (ko) Τ 세포 수용체 및 이를 발현하는 조작된 세포
KR20210150440A (ko) Mage a4 t 세포 수용체
CN116322715A (zh) 经改造t细胞受体和使用方法
KR20230111187A (ko) Prame 특이적 t-세포 수용체 및 그의 용도
JP7412006B2 (ja) 誘導性ｔ細胞レセプター及びその使用
KR20230111186A (ko) Mage-a3 특이적 t 세포 수용체 및 그의 용도
EA041624B1 (ru) Prame-специфический t-клеточный рецептор и варианты его применения
JP2024519614A (ja) Ｐｒａｍｅ特異的ｔ細胞受容体とキメラ補助刺激受容体との組合せ
WO2024015743A1 (en) Peptides and engineered t cell receptors targeting vcy antigen and methods of use
CN116096740A (zh) 经改造t细胞受体和使用方法