KR20230100163A - 분지쇄 아미노산 함량이 증대된 스피룰리나 추출물의 제조 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 분지쇄 아미노산 함량이 증대된 스피룰리나 추출물의 제조 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 스피룰리나를 단백질 분해 효소로 처리한 후, 발효시키는 단계를 포함하는 스피룰리나 추출물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 방법으로 제조된 스피롤리나 추출물은 분지쇄 아미노산의 함량이 증가하고 최적의 혼합비로 류신, 이소류신 및 발린을 포함한다.

Description

분지쇄 아미노산 함량이 증대된 스피룰리나 추출물의 제조 방법{METHOD FOR PREPARING SPIRULINA EXTRACT WITH INCREASED BRANCHED CHAIN AMINO ACID CONTENT}
본 발명은 분지쇄 아미노산 함량이 증대된 스피룰리나 추출물의 제조 방법에 관한 것으로서, 구체적으로는 스피룰리나를 단백질 분해 효소로 처리한 후, 발효시키는 단계를 포함하는 스피룰리나 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
스피룰리나(Arthrospira platensis)는 미세조류 중 남조류 중 하나로써 전 세계의 바닷물, 담수 등 알칼리성의 온난한 지역에서 발견된다. 스피룰리나는 광합성 능력을 가져 영양원을 타 생물에게 의존하지 않고 스스로 합성하는 다세포 생물로써 특유의 청록색 빛깔을 지녔으며 나선형의 형태를 지니고 있다. 스피룰리나는 5대 영양소 중에서도 단백질이 55~65% 이상으로 이루어져 있으며 비타민, 미네랄 등이 풍부하며 소화흡수율이 높아 이상적인 영양원이자 고부가가치 식품으로써 언급되고 있다.
한편, 분지쇄 아미노산(branched amino acid)은 필수아미노산(Essential Amino Acid) 중에서 구조 내에 수화탄소(Hydrocarbon) 곁가지를 갖는 류신(Leucine), 이소류신(iso-Leucine) 및 발린(Valine)을 가리킨다. 분지쇄는 가지사슬(Branched Chain)의 한자어로써 시중에서 분지쇄 아미노산은 영문명인 Branched Chain Amino Acid의 앞글자를 따 BCAA라고 부르기도 한다. 분지쇄 아미노산은 대부분의 아미노산이 간에서 이용되는 것과 달리 골격근에서 대사되는 특성이 있다. 특히 류신, 이소류신, 발린을 2:1:1(중량비)로 투여할 경우 체내 단백질 합성이 높다는 결과가 있어 근성장 운동을 할 때 중요하다고 여겨지며 운동 선수 및 운동을 즐기는 일반인들도 찾는 운동 보충제로써 활용되고 있다.
BCAA가 운동을 할 때 중요하다고 여겨지는 이유는 첫째로 운동 중 단백질 분해에 의해 증가된 아미노산은 혈중 포도당 농도를 유지하여 저혈당을 억제시키고, 둘째로 운동 중 ATP(Adenosine Phosphate) 생성에 관여하며, 셋째로 근육의 피로를 예방하고 회복시키는 효과가 있기 때문이다. 그 외에도 인슐린 신호 전달이나 지질대사 등에 중요한 조절인자로써 생체 내에서 좋은 작용을 한다고 알려져 있다.
그럼에도 불구하고, 류신의 경우 무맛 또는 약한 쓴맛이 나고, 이소류신의 경우 쓴맛, 발린은 D형의 경우 단맛이 나지만 L형의 경우 쓴맛이 나 식품에 적용하기 어려워 식품에 적용하는 데에 한계가 있다.
한국공개특허 제2015-0099689호는 스피룰리나 등의 해조류에 막 분해효소 및 단백질 분해효소를 처리하여 해조류 추출물을 제조하는 방법을 개시하고 있다.
본 발명은 단백질이 풍부한 스피룰리나를 가수분해효소와 미생물을 이용하여 처리함으로써, 분지쇄 아미노산인 류신, 이소류신 및 발린을 최적의 혼합비로 포함하는 스피룰리나 추출물의 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기한 과제는, 건조된 스피룰리나를 분쇄한 스피룰리나 분말을 스피룰리나 분말 중량 대비 8~10배의 정제수를 추가하여 스피룰리나 수용액을 준비하는 단계; 상기 스피룰리나 수용액에 스피룰리나 분말 중량 대비 5~7 중량%의 탄수화물 분해효소를 첨가하여 4~6시간 동안 60~90℃의 온도에서 가수분해하여 가수분해물을 제조하는 단계; 상기 실활된 효소가수분해물에 스피룰리나 분말 중량 대비 0.1~1.5 중량%의 미생물을 첨가하여 발효시키는 단계; 및 상기 발효물을 원심분리한 후 상등액을 여과하여 스피룰리나 추출물을 제조하는 단계를 포함하는, 스피룰리나 추출물의 제조 방법에 의해 달성된다.
바람직하게는, 상기 단백질분해효소는 알카라아제(alcalase)이고, 상기 미생물은 아스퍼질러스 카와이(Aspergillus kawachii) 또는 사카로마이에스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)일 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 가수분해물을 제조하는 단계 이후에 상기 가수분해물을 실활시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 스피룰리나 추출물은 류신, 이소류신 및 발린을 2:1:1의 중량비로 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 스피룰리나 추출물의 제조 방법은 제조된 스피룰리나 추출물은 분지쇄 아미노산의 함량이 증가하고 최적의 혼합비로 류신, 이소류신 및 발린을 포함한다.
도 1은 스피룰리나 수용액을 알카라아제(Alc), 브로멜라민(Bro), 플라보르자임(Fla), 뉴트라제(Neu), 파페인(Pap), 프로타멕스(Pro)로 각각 처리한 경우의 총 폴리페놀(a) 및 조단백질(b)의 함량을 측정한 결과를 도시한 것이다.
도 2는 스피룰리나 수용액을, 알카라아제로 처리한 경우(Alc), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 24시간 발효시킨 경우(AK24), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 36시간 발효시킨 경우(AK36), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 48시간 발효시킨 경우(AK48), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 24시간 발효시킨 경우(SC24), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 36시간 발효시킨 경우(SC36), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 48시간 발효시킨 경우(SC48)의 총 폴리페놀(도 2a), 조단백질(도 2b) 및 유리 아미노산(도 2c)의 함량을 측정한 결과를 도시한 것이다.
도 3은 스피룰리나 수용액을 알카라아제로 처리한 경우(Alc), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 24시간 발효시킨 경우(AK24), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 36시간 발효시킨 경우(AK36), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 48시간 발효시킨 경우(AK48), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 24시간 발효시킨 경우(SC24), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 36시간 발효시킨 경우(SC36), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 48시간 발효시킨 경우(SC48)의 류신(도 3a), 이소류신(도 3b) 및 발린(도 3c)의 함량을 측정한 결과를 도시한 것이다.
도 4는 스피룰리나 수용액을 알카라아제로 처리한 경우(Alc), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 24시간 발효시킨 경우(AK24), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 36시간 발효시킨 경우(AK36), 알카라아제로 처리한 후 아스퍼질러스 카와이로 48시간 발효시킨 경우(AK48), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 24시간 발효시킨 경우(SC24), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 36시간 발효시킨 경우(SC36), 알카라아제로 처리한 후 사카로마이에스 세레비시애로 48시간 발효시킨 경우(SC48)의 류신, 이소류신, 발린의 함량을 합산하여 도시한 것이다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.
용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.
본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.
본 발명은 분지쇄 아미노산 함량이 증가된 스피룰리나 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.
상기 방법은 아래의 단계들을 포함한다:
건조된 스피룰리나를 분쇄한 스피룰리나 분말을 스피룰리나 분말 중량 대비 8~10배의 정제수를 추가하여 스피룰리나 수용액을 준비하는 단계(S11); 상기 스피룰리나 수용액에 스피룰리나 분말 중량 대비 5~7 중량%의 탄수화물 분해효소를 첨가하여 4~6시간 동안 60~90℃의 온도에서 가수분해하는 효소가수분해 단계(S12); 상기 가수분해물을 실활시키는 단계(S13); 상기 효소가수분해물에 스피룰리나 분말 중량 대비 0.1~1.5 중량%의 미생물을 첨가하여 발효시키는 단계(S14); 및 상기 발효물을 원심분리한 후 상등액을 여과하여 스피룰리나 추출물을 제조하는 단계(S14).
이하 각 단계를 상세히 설명한다.
먼저, 건조시킨 스피룰리나를 분쇄하여 스피룰리나 분말을 제조하고, 분말 중량 대비 8~10배의 정제수를 추가하여 스피룰리나 수용액을 준비한다(S11).
이어서, 상기 스피룰리나 수용액에 탄수화물 분해효소를 첨기하여 4~6시간 동안 가수분해시킨다(S12). 상기 단백질 분해효소는 노보자임사(Novozyme)의 알카라아제(Alcalase), 브로멜라인(Bromelain), 플라보르자임(Flavourzyme), 뉴트라제(Neutrase), 파페인(Papain) 및 프로타멕스(Protamex)로 이루어진 군에서 선택된 1종일 수 있다. 바람직하게는 알카라아제일 수 있다.
다음으로, 상기 가수분해물을 가열하여 단백질 분해효소를 실활시킨다(S13). 실활 온도는 공지의 방법에 따른다.
다음으로, 실활된 가수분해물에 미생물을 첨가하여 발효시킨다(S14). 상기 미생물은
아스퍼질러스 카와이(Aspergillus kawachii) 또는 사카로마이에스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)일 수 있고, 바람직하게는 사카로마이에스 세레비시애일 수 있다.
본 발명에서는 스피룰리나는 단백질 분해 효소로 처리한 후, 사카로마이에스 세레비시애로 발효시킴으로써, 분지쇄 아미노산의 함량이 증가하고, 특히, 생체 내에서 가장 이상적으로 작용하는 혼합비로 류신, 이소류신 및 발린을 포함할 수 있다. 바람직하게는 류신, 이소류신 및 발린은 2:1:1의 중량비로 포함될 수 있다.
본 발명에서 제조된 스피룰리나 추출물은 음료, 일반 식품, 건강기능식품 등에 포함될 수 있다.
이하에서 실시예 및 실험예를 들어서 본 발명을 상세하게 설명하지만, 이들 실시예에 의해 본 발명의 권리범위가 제한되는 것은 아니다.
실험예 1: 스피룰리나 단백질 분해효소 처리 가수분해물의 성분 분석
스피룰리나의 조단백질 및 아미노산 함량 증대 추출 공법을 개발하기 위해 단일 효소를 적용하여 가수분해 추출물을 제조하고 실험을 진행하여 적합한 효소를 추적하였다.
가수분해효소의 활성을 최대화하기 위해 효소별 활성 조건에 맞춰 pH를 조절하고 적정 온도에서 반응을 진행하고 반응을 정지시켜 추출물을 개발하였다. 해당 추출물을 이용하여 실험을 진행한 후, 실험 내용을 바탕으로 가수분해 공정을 확립하였다.
1-1. 단백질 가수분해 효소
단일효소를 활용한 실험은 효소를 적용하지 않은 동일 시료 조건의 대조구(Control)와 노보자임(Novozyme)사(社)의 단백질 분해 효소 알카라아제(Alcalase), 브로멜라인(Bromelain), 플라보르자임(Flavourzyme), 뉴트라제(Neutrase), 파페인(Papain) 및 프로타멕스(Protamex)의 총 6종을 적용하여 진행하였다. 각 효소의 처리 조건은 아래 표 1과 같다.
효소 기질 pH 온도 ℃
알카라아제 단백질 6.5 ~ 8.5 55 ~ 70
브로멜라인 6.0 ~ 8.0 45 ~ 50
플라보르자임 5.0 ~ 7.0 50
뉴트라제 5.5 ~ 7.5 45 ~ 55
파페인 5.0 ~ 7.5 50 ~ 70
프로타멕스 5.5 ~ 7.5 35 ~ 60
1-2. 스피룰리나 가수분해물의 제조
본 실험에 적용한 효소들은 스피룰리나의 조단백질 및 아미노산 증대를 위해 사용되었다. 스피룰리나 분말 10 wt% 농도의 수용액을 제조한 후 18,000 ~ 25,000 RPM에서 균질화하고 100℃/30분간 살균 및 냉각 후 대조구 및 시료로 사용했다.
냉각된 시료를 단일 효소의 최적 pH로 조정한 후 효소를 1%씩 첨가했다. 이때 효소의 첨가비는 기질이 되는 스피룰리나 분말의 중량을 기준으로 첨가했다. 효소를 첨가한 시료는 각각의 최적 온도와 100~150rpm으로 설정된 진탕배양기에서 가수분해를 진행하였고, 5시간 경과 후 실활하여 시료를 취했다. 취한 시료는 2,000rpm에서 20분간 원심분리를 통해 상등액을 회수하고 5um(Thickness : 0.26mm) 여과지를 사용하여 여과한 액으로 시험 분석을 진행하였다. 가시광선 분광광도계(UV/Vis Spectrophotometer)를 활용하여 총 폴리페놀을 측정하였고, 단백질 증류 정량기(Kjeldahl Distillation System)을 활용하여 조단백질을 측정하였다.
실험 조건은 아래 표 2와 같다.
시료명 효소 효소농도 시료농도 처리시간
0 Control 효소X - 10 wt% -
1 Alc Alcalase 기질대비
1 wt%		 5시간
2 Bro AMG
3 Fla Celluclast
4 Neu Flavourzyme
5 Pap Neutrase
6 Pro Protamex
1-3. 총 폴리페놀 함량 측정
상기에서 제조된 시료액 20uL와 7.5% 탄산나트륨 용액 80uL 혼합 후, Folin-ciocalteu’s phenol 용액 100uL을 넣어 30분간 반응시킨 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 타닌(Tannin)을 표준용액으로 사용하여, 시료 중 타닌 함량으로 결과를 나타냈다. 그 결과를 도 1에 나타냈다.
1-4. 조단백질 함량 측정
시료액 1g에 분해촉진제로 황산칼륨 2g, 진한 황산 12mL을 넣고 킬달 분해장치에서 시료액이 연한 미색에서 무색이 될 때까지 탄화하였다. 탄화물을 단백질 증류 정량기기를 활용하여 증류, 중화 및 적가하여 조단백질 함량을 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나타냈다.
1-5. 결과
도 1을 보면, 총 폴리페놀은 효소가수분해 후 대조개 대비 모두 높아지는 양상을 보였고, 그 중에서 알카라아제, 브로멜라인, 뉴트라제 순서로 단백질 가수분해효소가 높은 효과를 보였다. 조단백질 함량은 알카라아제, 브로멜라인이 대조구 대비 2배 가까이 높아지는 양상을 보였다. 본 단일 효소 적용 실험을 통해 스피룰리나의 총 폴리페놀, 조단백질과 같은 유효성분 증대를 위해서는 단백질 가수분해 효소, 그 중에서도 알카라아제가 적합하다. 이에 아래 실험예 2는 알카라아제를 이용한 스피룰리나 가수분해물에 대해 실시하였다.
실험예 2: 반응표면분석법을 이용한 알카라아제 처리구의 조건 최적화
알카라아제의 최적 조건을 추적하기 위해 반응표면분석 실험을 진행하였다. 실험 조건은 중심합성계획법에 의거하여 설계했으며, 효소농도와 처리시간을 독립변수로 설정하고, 총 폴리페놀과 조단백질 결과를 종속변수로 설정하였다. 총 15개의 처리구로 실험을 진행하였으며 처리구는 통계적인 오차를 줄이기 위해 무작위적인 순서로 진행되었다. 스피룰리나 10% 농도의 수용액을 제조 후 18,000 ~ 25,000 RPM에서 균질화하고 100℃/30분간 살균 및 냉각 후 대조구 및 시료로 사용했다.
냉각된 시료를 알카라아제의 최적 pH로 조정한 후 기질이 되는 스피룰리나의 중량을 기준으로 독립변수로 설정된 각각의 효소 농도를 기준으로 첨가했다. 효소를 첨가한 시료는 각각의 최적 온도와 100~150rpm으로 설정된 진탕배양기에서 가수분해를 진행하였고, 독립변수로 설정된 각각의 처리시간 경과 후 실활하여 시료를 취했다. 취한 시료는 2,000rpm에서 20분간 원심분리를 통해 상등액을 회수하고 5um(Thickness : 0.26mm) 여과지를 사용하여 여과한 액으로 시험 분석을 진행하였다. 반응표면분석 조건을 아래 표 3에 나타냈다.
가시광선 분광광도계(UV/Vis Spectrophotometer)를 활용하여 총 폴리페놀을 측정하였고, 단백질 증류 정량기(Kjeldahl Distillation System)을 활용하여 조단백질을 측정하여 각각의 결과를 종속변수로 삼아 최종적으로 반응표면분석을 통해 결과를 나타냈다. 그 결과를 표 4에 나타냈다.
처리구 독립변수
(Independent variable) 		종속변수
(Dependent variable)
효소농도
(%) 		처리시간
(hr) 		총 폴리페놀 함량
(mg/L) 		조단백질 함량
(mg/g) 		유리아미노산
(mg/g)
1 4 5 494.2 1808.5 323.8
2 4 1 526.9 1468.8 110.7
3 4 3 512.7 624.6 180.0
4 6 3 351.4 1887.5 206.2
5 4 3 561.0 1070.7 178.3
6 4 3 625.6 1358.9 184.7
7 2 3 383.3 1153.0 132.4
8 6 1 489.6 1458.5 107.8
9 6 5 871.6 2766.0 513.1
10 4 3 661.1 1811.9 174.0
11 2 1 386.1 1153.0 76.7
12 4 3 590.0 1448.2 179.5
13 2 5 557.5 1129.0 257.6
14 4 3 571.4 1479.1 183.9
Figure pat00001
상기 분석결과를 토대로 하여, 스피룰리나를 알카라아제를 이용하여 효소가수분해 할 경우 총 폴리페놀과 조단백질의 증대를 위해서는 알카라아제를 6 wt% 첨가하여 5시간 반응시키는 것이 최적 조건으로 도출되었다.
실험예 3: 가수분해효소 및 발효 처리를 이용한 스피룰리나추출물 성분분석
스피룰리나 분말 10 wt% 농도의 수용액을 제조 후 18,000 ~ 25,000 RPM에서 균질화하고 100℃/30분간 살균 및 냉각 후 대조구 및 시료로 사용했다. 냉각된 시료를 알카라아제(Alcalase)의 최적 pH로 조정한 후 기질이 되는 스피룰리나의 중량을 기준으로 6 wt%의 알카라아제(Alcalase)를 첨가했으며, 이는 상기 실험예 2의 반응표면분석에서 최적화 조건으로 도출된 값이다.
효소를 첨가한 시료는 각각의 최적 온도와 100~150rpm으로 설정된 진탕배양기에서 반응표면분석에서 최적 시간으로 도출된 5시간 경과 후 실활하였다. 실활한 시료는 기질대비 1% 함량으로 아스퍼질러스 카와이(Aspergillus kawachii, 이하 AK), 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae, 이하 SC) 건조 효모를 첨가하여 각각 24시간, 36시간, 48시간 동안 배양 후 살균한 시료를 취했다.
취한 시료는 2,000rpm에서 20분간 원심분리를 통해 상등액을 회수하고 5um(Thickness : 0.26mm) 여과지를 사용하여 여과한 액으로 시험 분석을 진행하였다.
가시광선 분광광도계(UV/Vis Spectrophotometer)를 활용하여 총 폴리페놀을 측정하였고, 단백질 증류 정량기(Kjeldahl Distillation System)을 활용하여 조단백질을 측정하였으며, 아미노산 자동분석기(L-8800, Hitachi, Japan)로 유리아미노산을 측정하였다.
3-1. 총 폴리페놀 함량 실험
상기에서 제조된 시료액 20uL와 7.5% 탄산나트륨 용액 80uL 혼합 후, Folin-ciocalteu’s phenol 용액 100uL을 넣어 30분간 반응시킨 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 타닌(Tannin)을 표준용액으로 사용하여, 시료 중 타닌 함량으로 결과를 나타냈다.
3-2. 조단백질 실험
시료액 1g에 분해촉진제로 황산칼륨 2g, 진한 황산 12mL을 넣고 킬달 분해장치에서 시료액이 연한 미색에서 무색이 될 때까지 탄화하였다. 탄화물을 단백질 증류 정량기기를 활용하여 증류, 중화 및 적가하여 조단백질 함량을 측정하였다. 그 결과를 도 2에 나타냈다.
3-3. 유리아미노산 측정 실험
시료액 2g에 50% 에탄올 용액 45mL를 가하여 3시간 동안 진탕교반 후, 감압 농축기를 이용하여 에탄올을 제거하였다. 에탄올이 제거된 여액에 증류수를 가하여 100mL로 정용한 후, 이를 아미노산 자동분석기와 43종의 유리아미노산 표준품을 이용해 유리아미노산을 측정하였다. 측정조건은 하기 표 5와 같고, 그 결과는 도 3 및 도 4에 나타냈다.
Free Amino acid
Instrument L-8800, Hitachi, Japan
Column Ion exchange column (4.6 mm×60 mm)
Detector UV
Oven Temperature 30 - 70℃
Coil Temperature 135℃
Flow rate 0.35mL/min
3-4. 결과
도 2를 보면, 알카라아제 처리 후 미생물 발효를 실시할 경우 총 폴리페놀, 조단백질이 전반적으로 증대되는 것을 확인할 수 있었다. 유리아미노산의 경우 아스퍼질러스 카와이(AK)는 발효시간이 늘어날수록 증대하고, 사카로마이세스 세레비시애(SC)는 감소하는 경향을 보였으나 유리아미노산 43종 중 분지쇄 아미노산만 확인할 경우 사카로마이세스 세레비시애(SC)의 증대량이 보다 높았다.
도 3a를 보면, 류신의 증가량은 아스퍼질러스 카와이(AK)와 사카로마이세스 세레비시애(SC) 간 유의적인 차이를 보이지 않았다. 도 3b와 도 3c를 보면, 이소류신과 발린의 증가량이 사카로마이세스 세레비시애(SC) 처리구에서 보다 높았으며, 사카로마이세스 세레비시애(SC) 48시간 처리구가 류신, 이소류신, 발린의 함량비 2:1:1에 가까워 생체 내 작용에 가장 좋은 비율로 증대함을 확인했다.

Claims (4)

  1. 건조된 스피룰리나를 분쇄한 스피룰리나 분말을 스피룰리나 분말 중량 대비 8~10배의 정제수를 추가하여 스피룰리나 수용액을 준비하는 단계;
    상기 스피룰리나 수용액에 스피룰리나 분말 중량 대비 5~7 중량%의 탄수화물 분해효소를 첨가하여 4~6시간 동안 60~90℃의 온도에서 가수분해하여 가수분해물을 제조하는 단계;
    상기 실활된 효소가수분해물에 스피룰리나 분말 중량 대비 0.1~1.5 중량%의 미생물을 첨가하여 발효시키는 단계; 및
    상기 발효물을 원심분리한 후 상등액을 여과하여 스피룰리나 추출물을 제조하는 단계를 포함하는, 스피룰리나 추출물의 제조 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단백질분해효소는 알카라아제(alcalase)이고, 상기 미생물은 아스퍼질러스 카와이(Aspergillus kawachii) 또는 사카로마이에스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는, 스피룰리나 추출물의 제조 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 가수분해물을 제조하는 단계 이후에 상기 가수분해물을 실활시키는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 스피룰리나 추출물의 제조 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 스피룰리나 추출물은 류신, 이소류신 및 발린을 2:1:1의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 스피룰리나 추출물의 제조 방법.
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