JP2000000088A - グルタミナ―ゼ活性が増強された微生物培養物及びその利用 - Google Patents
グルタミナ―ゼ活性が増強された微生物培養物及びその利用Info
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 グルタミナーゼ活性が増強された微生物培養
物とその調製方法を提供すると共に、該微生物培養物を
用いた蛋白質加水分解物の製造方法と該方法により得ら
れる蛋白質加水分解物を提供すること。 【解決手段】 グルタミナーゼ産生能を有する微生物の
培養中のカタボライトリプレッションを解除すること並
びに必要により培養中期に窒素源を供給することを特徴
とするグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の
調製方法；該方法で調製される微生物培養物；該微生物
培養物を、蛋白質分解酵素の存在下、無塩もしくは食塩
濃度３％（重量／容量）以下の条件下で蛋白質に作用さ
せることを特徴とする蛋白質加水分解物の製造方法並び
に該方法により製造される蛋白質加水分解物。
物とその調製方法を提供すると共に、該微生物培養物を
用いた蛋白質加水分解物の製造方法と該方法により得ら
れる蛋白質加水分解物を提供すること。 【解決手段】 グルタミナーゼ産生能を有する微生物の
培養中のカタボライトリプレッションを解除すること並
びに必要により培養中期に窒素源を供給することを特徴
とするグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の
調製方法；該方法で調製される微生物培養物；該微生物
培養物を、蛋白質分解酵素の存在下、無塩もしくは食塩
濃度３％（重量／容量）以下の条件下で蛋白質に作用さ
せることを特徴とする蛋白質加水分解物の製造方法並び
に該方法により製造される蛋白質加水分解物。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、グルタミナーゼ活
性が増強された微生物培養物の調製方法に関し、詳しく
はグルタミナーゼ産生能を有する微生物の培養中のカタ
ボライトリプレッションを解除すること並びに必要によ
り培養中期に窒素源を補給することによって、グルタミ
ナーゼ活性が増強された微生物培養物を調製する方法に
関する。また、本発明は、グルタミナーゼ活性が増強さ
れた微生物培養物、該微生物培養物を用いた蛋白質加水
分解物の製造方法及び該製造方法により得られる蛋白質
加水分解物に関する。この蛋白質加水分解物は、グルタ
ミン酸含有量が高いために呈味力が強く、調味料として
の利用価値が高い。
性が増強された微生物培養物の調製方法に関し、詳しく
はグルタミナーゼ産生能を有する微生物の培養中のカタ
ボライトリプレッションを解除すること並びに必要によ
り培養中期に窒素源を補給することによって、グルタミ
ナーゼ活性が増強された微生物培養物を調製する方法に
関する。また、本発明は、グルタミナーゼ活性が増強さ
れた微生物培養物、該微生物培養物を用いた蛋白質加水
分解物の製造方法及び該製造方法により得られる蛋白質
加水分解物に関する。この蛋白質加水分解物は、グルタ
ミン酸含有量が高いために呈味力が強く、調味料として
の利用価値が高い。
【０００２】
【従来の技術】グルタミナーゼは、生物界に広範に分布
する酵素であり、Ｌ−グルタミンに作用し、アミド基を
加水分解してＬ−グルタミン酸とアンモニアに分解する
酵素である。Ｌ−グルタミン酸を水酸化ナトリウムまた
は炭酸ナトリウムで中和することによって得られるＬ−
グルタミン酸ナトリウムは、あらゆるうま味の基本物質
である。この物質の最大の用途は調味料で、家庭用のみ
ならず加工食品の製造になくてはならない添加物であ
る。
する酵素であり、Ｌ−グルタミンに作用し、アミド基を
加水分解してＬ−グルタミン酸とアンモニアに分解する
酵素である。Ｌ−グルタミン酸を水酸化ナトリウムまた
は炭酸ナトリウムで中和することによって得られるＬ−
グルタミン酸ナトリウムは、あらゆるうま味の基本物質
である。この物質の最大の用途は調味料で、家庭用のみ
ならず加工食品の製造になくてはならない添加物であ
る。
【０００３】また、これまでに知られている天然調味料
の製造は、蛋白質の分解を経て行われるものが主流であ
った。天然調味料と称されるもののうち、分解型天然調
味料には酸分解型と酵素分解型がある。酸分解型調味料
には、大豆、小麦などの植物性蛋白質を原料として得ら
れるHydrolyzed Vegetable Proteinとゼラチン、乳カゼ
インなどの動物性蛋白質を原料として得られるHydrolyz
ed Animal Protein があり、その主成分であるアミノ酸
組成は原料により大きく異なり、呈味、甘味などに影響
を及ぼす。例えば、脱脂大豆の塩酸分解法で得られる分
解液は、分解率（フォルモール態窒素／総窒素）が７０
％以上、グルタミン酸遊離率（グルタミン酸／総窒素）
が１．２と高く、うま味の点においては極めて優れてい
る。
の製造は、蛋白質の分解を経て行われるものが主流であ
った。天然調味料と称されるもののうち、分解型天然調
味料には酸分解型と酵素分解型がある。酸分解型調味料
には、大豆、小麦などの植物性蛋白質を原料として得ら
れるHydrolyzed Vegetable Proteinとゼラチン、乳カゼ
インなどの動物性蛋白質を原料として得られるHydrolyz
ed Animal Protein があり、その主成分であるアミノ酸
組成は原料により大きく異なり、呈味、甘味などに影響
を及ぼす。例えば、脱脂大豆の塩酸分解法で得られる分
解液は、分解率（フォルモール態窒素／総窒素）が７０
％以上、グルタミン酸遊離率（グルタミン酸／総窒素）
が１．２と高く、うま味の点においては極めて優れてい
る。
【０００４】しかしながら、一般に塩酸分解法により蛋
白質加水分解物を得る場合、１００℃で１〜２日間とい
う反応条件を要するが、このような高温で長時間の反応
は、エネルギー消費量が大きい。さらに、酸による蛋白
質の加水分解は簡便であるけれども、異臭の発生やアミ
ノ酸の過剰分解、中和のために高塩分となる等の欠点が
ある。その上、近年、酸分解法では人体に有害なモノク
ロロプロパノールやジクロロプロパノール等のクロロヒ
ドリンが生成することが指摘されており、食品素材とし
て問題になりつつある。
白質加水分解物を得る場合、１００℃で１〜２日間とい
う反応条件を要するが、このような高温で長時間の反応
は、エネルギー消費量が大きい。さらに、酸による蛋白
質の加水分解は簡便であるけれども、異臭の発生やアミ
ノ酸の過剰分解、中和のために高塩分となる等の欠点が
ある。その上、近年、酸分解法では人体に有害なモノク
ロロプロパノールやジクロロプロパノール等のクロロヒ
ドリンが生成することが指摘されており、食品素材とし
て問題になりつつある。
【０００５】一方、酵素的にアミノ酸液を製造する方法
は、古くから多々試みられており、複雑な基質をアミノ
酸にまで分解するために複合酵素系を必要とし、通常そ
の目的を達成するためにはアスペルギルス・オリーゼ
(Aspergillus oryzae）を中心とする麹菌を用いてい
る。この方法で製造されるアミノ酸液の代表的なものと
しては醤油が挙げられる。醤油は、蛋白質原料を加熱処
理し、これに麹菌を繁殖させた後、食塩水中にて発酵、
熟成させることにより製造される。しかしながら、この
方法も多大の労力と時間を要するにも関わらず、アミノ
酸遊離率が低く、特に大豆蛋白質中に最も多量含有さ
れ、かつ呈味性に重要なグルタミン酸の遊離率が低いと
いう欠点がある。
は、古くから多々試みられており、複雑な基質をアミノ
酸にまで分解するために複合酵素系を必要とし、通常そ
の目的を達成するためにはアスペルギルス・オリーゼ
(Aspergillus oryzae）を中心とする麹菌を用いてい
る。この方法で製造されるアミノ酸液の代表的なものと
しては醤油が挙げられる。醤油は、蛋白質原料を加熱処
理し、これに麹菌を繁殖させた後、食塩水中にて発酵、
熟成させることにより製造される。しかしながら、この
方法も多大の労力と時間を要するにも関わらず、アミノ
酸遊離率が低く、特に大豆蛋白質中に最も多量含有さ
れ、かつ呈味性に重要なグルタミン酸の遊離率が低いと
いう欠点がある。
【０００６】このように蛋白質の酵素分解により製造さ
れる調味料は、近年欧州を中心にその需要が増加しつつ
あるものの、モノクロロヒドロキシプロパノール類及び
ジクロロプロパノール類を含まず、塩酸分解に匹敵する
旨味の強い調味料は存在しなかった。醤油製造において
グルタミン酸が不足する原因として、麹菌のグルタミナ
ーゼ活性の不足が挙げられる。そこで、固体培養におい
てプロテアーゼ高活性株とグルタミナーゼ高活性株との
細胞融合による高活性菌株の造成も行われている（S.Us
hijima, T.Nakadai: Agric. Biol. Chem., 51,(4),1051
(1987); S.Ushijima,T.Nakadai, K.Uchida: Agric. Bi
ol. Chem., 51(10),2781 (1987); S.Ushijima, T.Nakad
ai, K.Uchida: 醤研,17,(3),89 (1991),特公平 3-7327
1号公報、特公平 3-68672号公報）。
れる調味料は、近年欧州を中心にその需要が増加しつつ
あるものの、モノクロロヒドロキシプロパノール類及び
ジクロロプロパノール類を含まず、塩酸分解に匹敵する
旨味の強い調味料は存在しなかった。醤油製造において
グルタミン酸が不足する原因として、麹菌のグルタミナ
ーゼ活性の不足が挙げられる。そこで、固体培養におい
てプロテアーゼ高活性株とグルタミナーゼ高活性株との
細胞融合による高活性菌株の造成も行われている（S.Us
hijima, T.Nakadai: Agric. Biol. Chem., 51,(4),1051
(1987); S.Ushijima,T.Nakadai, K.Uchida: Agric. Bi
ol. Chem., 51(10),2781 (1987); S.Ushijima, T.Nakad
ai, K.Uchida: 醤研,17,(3),89 (1991),特公平 3-7327
1号公報、特公平 3-68672号公報）。
【０００７】また、多くの酵素系が、消費速度の速い炭
素源によって、その酵素の生合成が阻害されるカタボラ
イトリプレッションを受けることが知られている（Auns
trp,K et al: “Microbial Technology" Vol.1(2nd edi
tion), Academic Press, NewYork,282(1979)）。アスペ
ルギルス・ニジュランス（Aspergillus nidulans）では
プロリン代謝系酵素やアルコール利用系酵素での研究
が、アスペルギルス・オリーゼではタカアミラーゼ遺伝
子発現制御の研究が進んでおり、creA遺伝子産物である
creA蛋白質が、様々な酵素の合成の負の調整を行ってい
ることが知られている（塚越規弘：化学と生物,32(1),4
8 (1994)）。
素源によって、その酵素の生合成が阻害されるカタボラ
イトリプレッションを受けることが知られている（Auns
trp,K et al: “Microbial Technology" Vol.1(2nd edi
tion), Academic Press, NewYork,282(1979)）。アスペ
ルギルス・ニジュランス（Aspergillus nidulans）では
プロリン代謝系酵素やアルコール利用系酵素での研究
が、アスペルギルス・オリーゼではタカアミラーゼ遺伝
子発現制御の研究が進んでおり、creA遺伝子産物である
creA蛋白質が、様々な酵素の合成の負の調整を行ってい
ることが知られている（塚越規弘：化学と生物,32(1),4
8 (1994)）。
【０００８】しかしながら、アスペルギルス・ニジュラ
ンスにおいて、培養時の窒素源がアンモニウムの場合、
グルタミナーゼの生産が抑制されるという報告のみで、
麹菌や酵母のグルタミナーゼがカタボライトリプレッシ
ョンを受けるという報告は無い。さらに、各菌株の液体
培養におけるグルタミナーゼに関しては以下のような報
告があるのみである。アスペルギルス・オリーゼ及びア
スペルギルス・ソーヤの液体培養におけるリン酸１カリ
ウム添加による菌体内グルタミナーゼ生産量の向上（山
崎達雄、稲森和夫、内田一生：醤研,22,(1),13 (199
6))、バチルス・リケニホルミス（Bacillus lichenifo
rmis)におけるグルタミンによるグルタミナーゼの誘
導、グルコースによる阻害（Cook.William R, Hoffman.
Joshua H, Bernlohr.Robert W ： J.Bacteriol.,148
(1),365 (1981)）、シュードモナス・ボレオポリス（Ps
eudomonas boreopolis) におけるグルタミンによるグル
タミナーゼの誘導（Berezov.T.T,Khisamov.G.Z, Evsee
v.L.P, Zanin.V.A： Byull. Eksp. Biol. Med.,76(10),
54(1973)）、エシェリチア・コリ（Escherichia coli）
におけるグルタミンによるグルタミナーゼ生産阻害（Va
rricchio, Frederick: Arch. Mikrobiol.,81(3),234 (1
972)) 、シュードモナス・フルオレッセンス (Pseudomo
nas fluorescens)におけるクエン酸、コハク酸、α−ケ
トグルタル酸添加によるグルタミナーゼ生産の減少（Ni
kolaev.A.Ya, Sokolov.N.N, Mardashev.S.R: Biokhimiy
a,36(3),643(1971)）などである。
ンスにおいて、培養時の窒素源がアンモニウムの場合、
グルタミナーゼの生産が抑制されるという報告のみで、
麹菌や酵母のグルタミナーゼがカタボライトリプレッシ
ョンを受けるという報告は無い。さらに、各菌株の液体
培養におけるグルタミナーゼに関しては以下のような報
告があるのみである。アスペルギルス・オリーゼ及びア
スペルギルス・ソーヤの液体培養におけるリン酸１カリ
ウム添加による菌体内グルタミナーゼ生産量の向上（山
崎達雄、稲森和夫、内田一生：醤研,22,(1),13 (199
6))、バチルス・リケニホルミス（Bacillus lichenifo
rmis)におけるグルタミンによるグルタミナーゼの誘
導、グルコースによる阻害（Cook.William R, Hoffman.
Joshua H, Bernlohr.Robert W ： J.Bacteriol.,148
(1),365 (1981)）、シュードモナス・ボレオポリス（Ps
eudomonas boreopolis) におけるグルタミンによるグル
タミナーゼの誘導（Berezov.T.T,Khisamov.G.Z, Evsee
v.L.P, Zanin.V.A： Byull. Eksp. Biol. Med.,76(10),
54(1973)）、エシェリチア・コリ（Escherichia coli）
におけるグルタミンによるグルタミナーゼ生産阻害（Va
rricchio, Frederick: Arch. Mikrobiol.,81(3),234 (1
972)) 、シュードモナス・フルオレッセンス (Pseudomo
nas fluorescens)におけるクエン酸、コハク酸、α−ケ
トグルタル酸添加によるグルタミナーゼ生産の減少（Ni
kolaev.A.Ya, Sokolov.N.N, Mardashev.S.R: Biokhimiy
a,36(3),643(1971)）などである。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】以上に説明したよう
に、アスペルギルス属に属する微生物や酵母を含めた真
菌類のグルタミナーゼ生産の向上法に関しては殆ど報告
がない。従って、本発明の目的は、第１にグルタミナー
ゼ活性が増強された微生物培養物の調製方法を提供する
ことであり、さらに該グルタミナーゼ活性が増強された
微生物培養物、該微生物培養物を用いた蛋白質加水分解
物の製造方法、該方法により得られる蛋白質加水分解物
を提供することである。
に、アスペルギルス属に属する微生物や酵母を含めた真
菌類のグルタミナーゼ生産の向上法に関しては殆ど報告
がない。従って、本発明の目的は、第１にグルタミナー
ゼ活性が増強された微生物培養物の調製方法を提供する
ことであり、さらに該グルタミナーゼ活性が増強された
微生物培養物、該微生物培養物を用いた蛋白質加水分解
物の製造方法、該方法により得られる蛋白質加水分解物
を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、微生物の培養中の
カタボライトリプレッションを解除し、かつ必要により
培養中期に窒素源を供給することによりグルタミナーゼ
生産が飛躍的に向上することを見出し、本発明を完成す
るに至った。
を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、微生物の培養中の
カタボライトリプレッションを解除し、かつ必要により
培養中期に窒素源を供給することによりグルタミナーゼ
生産が飛躍的に向上することを見出し、本発明を完成す
るに至った。
【００１１】請求項１記載の本発明は、グルタミナーゼ
産生能を有する微生物の培養中のカタボライトリプレッ
ションを解除すること並びに必要により培養中期に窒素
源を供給することを特徴とするグルタミナーゼ活性が増
強された微生物培養物の調製方法である。請求項２記載
の本発明は、カタボライトリプレッションの解除を、培
養中に炭素源を連続的又は間欠的に供給することにより
行う請求項１記載の方法である。請求項３記載の本発明
は、グルタミナーゼ産生能を有する微生物が、麹菌又は
酵母である請求項１記載の方法である。
産生能を有する微生物の培養中のカタボライトリプレッ
ションを解除すること並びに必要により培養中期に窒素
源を供給することを特徴とするグルタミナーゼ活性が増
強された微生物培養物の調製方法である。請求項２記載
の本発明は、カタボライトリプレッションの解除を、培
養中に炭素源を連続的又は間欠的に供給することにより
行う請求項１記載の方法である。請求項３記載の本発明
は、グルタミナーゼ産生能を有する微生物が、麹菌又は
酵母である請求項１記載の方法である。
【００１２】請求項４記載の本発明は、請求項１記載の
方法により調製されるグルタミナーゼ活性が増強された
微生物培養物である。請求項５記載の本発明は、請求項
４記載のグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物
を、無塩もしくは食塩濃度３％（重量／容量％）以下の
条件で蛋白質に作用させることを特徴とする蛋白質加水
分解物の製造方法である。請求項６記載の本発明は、微
生物培養物を蛋白質に作用させる際に、当初通気及び攪
拌を行いながら１５〜３９℃の温度範囲で反応を行い、
次いで通気を停止して４０〜６０℃の温度範囲で反応を
行うことを特徴とする請求項５記載の蛋白質加水分解物
の製造方法である。
方法により調製されるグルタミナーゼ活性が増強された
微生物培養物である。請求項５記載の本発明は、請求項
４記載のグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物
を、無塩もしくは食塩濃度３％（重量／容量％）以下の
条件で蛋白質に作用させることを特徴とする蛋白質加水
分解物の製造方法である。請求項６記載の本発明は、微
生物培養物を蛋白質に作用させる際に、当初通気及び攪
拌を行いながら１５〜３９℃の温度範囲で反応を行い、
次いで通気を停止して４０〜６０℃の温度範囲で反応を
行うことを特徴とする請求項５記載の蛋白質加水分解物
の製造方法である。
【００１３】請求項７記載の本発明は、請求項５又は６
記載の方法により製造される蛋白質加水分解物である。
請求項８記載の本発明は、下記の特徴を有する蛋白質加
水分解物である。 （ａ）小麦グルテンを原料とする。 （ｂ）全固形分中のグルタミン酸含有量がグルタミン酸
ナトリウムとして１６〜３６（重量／重量）％である。 （ｃ）全固形分中の全窒素含有量が８〜１３％（重量／
重量）である。 （ｄ）全固形分中の総アミノ酸含有量が４０〜７２％
（重量／重量）である。 （ｅ）全固形分中の食塩含有量が１４％（重量／重量）
以下である。 （ｆ）全固形分中の還元糖含有量が５％（重量／重量）
以下である。 （ｇ）モノクロロヒドロキシプロパノール類及びジクロ
ロプロパノール類を含まない。
記載の方法により製造される蛋白質加水分解物である。
請求項８記載の本発明は、下記の特徴を有する蛋白質加
水分解物である。 （ａ）小麦グルテンを原料とする。 （ｂ）全固形分中のグルタミン酸含有量がグルタミン酸
ナトリウムとして１６〜３６（重量／重量）％である。 （ｃ）全固形分中の全窒素含有量が８〜１３％（重量／
重量）である。 （ｄ）全固形分中の総アミノ酸含有量が４０〜７２％
（重量／重量）である。 （ｅ）全固形分中の食塩含有量が１４％（重量／重量）
以下である。 （ｆ）全固形分中の還元糖含有量が５％（重量／重量）
以下である。 （ｇ）モノクロロヒドロキシプロパノール類及びジクロ
ロプロパノール類を含まない。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明に用いる微生物は、グルタ
ミナーゼ産生能を有する微生物であり、例えば前記した
ような、麹菌や酵母の他に、バチルス属微生物、シュー
ドモナス属微生物、エシェリチア属微生物などが挙げら
れる。これらの中では、麹菌が好適である。麹菌として
は、アスペルギルス・オリーゼ、アスペルギルス・ソー
ヤ等で代表される黄麹菌が好ましい。また、酵母として
は、ブレラ・デルキシーなどが用いられる。
ミナーゼ産生能を有する微生物であり、例えば前記した
ような、麹菌や酵母の他に、バチルス属微生物、シュー
ドモナス属微生物、エシェリチア属微生物などが挙げら
れる。これらの中では、麹菌が好適である。麹菌として
は、アスペルギルス・オリーゼ、アスペルギルス・ソー
ヤ等で代表される黄麹菌が好ましい。また、酵母として
は、ブレラ・デルキシーなどが用いられる。
【００１５】本発明において使用する培地は、上記微生
物が生育し得るものであればよく、一般的に炭素源、窒
素源、補助因子などを含むものである。培地中の炭素源
については、グルコース、マルトース、フラクトース、
シュクロース等のような微生物による資化速度の速い炭
素源の場合、これらによるカタボライトリプレッション
を解除する目的から、培養中は低濃度に保つように供給
する必要がある。具体的には、培養液中の炭素源濃度
が、炭素源の供給を連続的に行う場合には、０．５％
（重量／容量）以下、好ましくは０．２％（重量／容
量）以下、間欠的に行う場合には、１．２％（重量／容
量）以下、好ましくは０．５％（重量／容量）以下にな
るように供給すべきである。なお、グルコースはデンプ
ンの加水分解物、シュクロースはモラセスのような形態
であってもよい。一方、ラクトース、マンニトール、ソ
ルボース等の微生物による資化速度が比較的遅い炭素源
に関しては、培養初期から通常量供給してもカタボライ
トリプレッションが発生することはない。それ故、これ
らは培養初期に０．５〜３．０％（重量／容量）、好ま
しくは１．０〜２．０％（重量／容量）を培地に添加す
る。上記の炭素源は単独で用いる他、２種以上を組み合
わせて用いても良い。このようにして、微生物の培養中
のカタボライトリプレッションを解除することによりグ
ルタミナーゼ生産を向上させ、高収率でグルタミナーゼ
を製造することができる。
物が生育し得るものであればよく、一般的に炭素源、窒
素源、補助因子などを含むものである。培地中の炭素源
については、グルコース、マルトース、フラクトース、
シュクロース等のような微生物による資化速度の速い炭
素源の場合、これらによるカタボライトリプレッション
を解除する目的から、培養中は低濃度に保つように供給
する必要がある。具体的には、培養液中の炭素源濃度
が、炭素源の供給を連続的に行う場合には、０．５％
（重量／容量）以下、好ましくは０．２％（重量／容
量）以下、間欠的に行う場合には、１．２％（重量／容
量）以下、好ましくは０．５％（重量／容量）以下にな
るように供給すべきである。なお、グルコースはデンプ
ンの加水分解物、シュクロースはモラセスのような形態
であってもよい。一方、ラクトース、マンニトール、ソ
ルボース等の微生物による資化速度が比較的遅い炭素源
に関しては、培養初期から通常量供給してもカタボライ
トリプレッションが発生することはない。それ故、これ
らは培養初期に０．５〜３．０％（重量／容量）、好ま
しくは１．０〜２．０％（重量／容量）を培地に添加す
る。上記の炭素源は単独で用いる他、２種以上を組み合
わせて用いても良い。このようにして、微生物の培養中
のカタボライトリプレッションを解除することによりグ
ルタミナーゼ生産を向上させ、高収率でグルタミナーゼ
を製造することができる。
【００１６】培地中の窒素源の好適な例としては、硝酸
ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム等の無機窒素源、カザミノ酸、ポリペプ
トン、バクトペプトン、大豆蛋白質、分離大豆蛋白質、
脱脂大豆、カゼイン等の有機窒素源、Ｌ−グルタミン酸
ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、Ｌ−プロ
リン、Ｌ−アラニン、グリシン、Ｌ−グルタミン等のア
ミノ酸類が挙げられる。特に、培養中期にこのような窒
素源を供給することにより、グルタミナーゼ生産をさら
に上昇させることができる。添加する窒素源の量は、
０．１〜２．０％（重量／容量）、好ましくは０．５〜
１．０％（重量／容量）である。上記の窒素源は単独で
用いる他、２種以上を組み合わせて用いても良い。な
お、アンモニウム及びグルタミンを窒素源として使用す
る場合、グルタミナーゼの生産が抑制されることがある
が、少量ずつ添加を行うことにより生産抑制を回避する
ことができる。
ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、塩化アンモニウム、硫
酸アンモニウム等の無機窒素源、カザミノ酸、ポリペプ
トン、バクトペプトン、大豆蛋白質、分離大豆蛋白質、
脱脂大豆、カゼイン等の有機窒素源、Ｌ−グルタミン酸
ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、Ｌ−プロ
リン、Ｌ−アラニン、グリシン、Ｌ−グルタミン等のア
ミノ酸類が挙げられる。特に、培養中期にこのような窒
素源を供給することにより、グルタミナーゼ生産をさら
に上昇させることができる。添加する窒素源の量は、
０．１〜２．０％（重量／容量）、好ましくは０．５〜
１．０％（重量／容量）である。上記の窒素源は単独で
用いる他、２種以上を組み合わせて用いても良い。な
お、アンモニウム及びグルタミンを窒素源として使用す
る場合、グルタミナーゼの生産が抑制されることがある
が、少量ずつ添加を行うことにより生産抑制を回避する
ことができる。
【００１７】さらに、補助因子としては、硫酸マグネシ
ウム７水和物、リン酸水素２ナトリウム、リン酸水素１
ナトリウム、リン酸水素１カリウム、リン酸水素２カリ
ウム、肉エキス、塩化カリウム、コーンスティープリカ
ーなどがあり、これらを適宜選択して使用する。これら
の添加量について述べると、例えば硫酸マグネシウムを
約０．５％（重量／容量）、リン酸水素１カリウムを約
０．５％（重量／容量）用いることが最適である。
ウム７水和物、リン酸水素２ナトリウム、リン酸水素１
ナトリウム、リン酸水素１カリウム、リン酸水素２カリ
ウム、肉エキス、塩化カリウム、コーンスティープリカ
ーなどがあり、これらを適宜選択して使用する。これら
の添加量について述べると、例えば硫酸マグネシウムを
約０．５％（重量／容量）、リン酸水素１カリウムを約
０．５％（重量／容量）用いることが最適である。
【００１８】さらに、初発の培養条件は、通常の好気的
培養条件でよく、ｐＨ４．５〜９．０、好ましくはｐＨ
５．５〜８．５、温度１５〜４０℃、好ましくは２５〜
３５℃が適当である。また、攪拌数や通気量について
は、培養環境を好気的に保つことができる条件であれば
いかなる条件でも差し支えない。本発明の方法に従って
微生物を培養することにより、グルタミナーゼ活性は通
常の約２〜３２倍に向上し、高収率でグルタミナーゼを
製造することができる。従って、本発明において「グル
タミナーゼ活性が増強された」という表現は、該活性が
グルコースを初発濃度で１．５％（重量／容量）含有す
る培地で培養中に炭素源を供給することなく培養したと
きに得られる該活性の約２倍以上、好ましくは約５倍以
上に増強されていることを意味する。また、麹菌などを
用いて調味料を製造する場合、本発明の方法を適用する
ことによって、培養液中のグルタミナーゼ生産量が向上
し、高品質の製品を効率よく大量に製造することができ
る。
培養条件でよく、ｐＨ４．５〜９．０、好ましくはｐＨ
５．５〜８．５、温度１５〜４０℃、好ましくは２５〜
３５℃が適当である。また、攪拌数や通気量について
は、培養環境を好気的に保つことができる条件であれば
いかなる条件でも差し支えない。本発明の方法に従って
微生物を培養することにより、グルタミナーゼ活性は通
常の約２〜３２倍に向上し、高収率でグルタミナーゼを
製造することができる。従って、本発明において「グル
タミナーゼ活性が増強された」という表現は、該活性が
グルコースを初発濃度で１．５％（重量／容量）含有す
る培地で培養中に炭素源を供給することなく培養したと
きに得られる該活性の約２倍以上、好ましくは約５倍以
上に増強されていることを意味する。また、麹菌などを
用いて調味料を製造する場合、本発明の方法を適用する
ことによって、培養液中のグルタミナーゼ生産量が向上
し、高品質の製品を効率よく大量に製造することができ
る。
【００１９】このようにして得られた高グルタミナーゼ
活性を有する微生物培養物は、蛋白質分解酵素の存在
下、蛋白質に作用させることにより、旨みの強い加水分
解物を得ることができる。使用する蛋白質分解酵素とし
ては、市販の酵素製剤でよく、細胞壁分解酵素等他の酵
素を含むものであっても構わない。また、精製した酵素
も使用することができる。特に、グルタミナーゼ活性を
増強させる微生物として麹菌を使用する場合、麹菌自ら
が蛋白質分解酵素を生産するため、培養物中にグルタミ
ナーセ活性と蛋白質分解酵素活性の両方が含まれてお
り、蛋白質分解酵素を外から添加する必要は必ずしもな
い。
活性を有する微生物培養物は、蛋白質分解酵素の存在
下、蛋白質に作用させることにより、旨みの強い加水分
解物を得ることができる。使用する蛋白質分解酵素とし
ては、市販の酵素製剤でよく、細胞壁分解酵素等他の酵
素を含むものであっても構わない。また、精製した酵素
も使用することができる。特に、グルタミナーゼ活性を
増強させる微生物として麹菌を使用する場合、麹菌自ら
が蛋白質分解酵素を生産するため、培養物中にグルタミ
ナーセ活性と蛋白質分解酵素活性の両方が含まれてお
り、蛋白質分解酵素を外から添加する必要は必ずしもな
い。
【００２０】本発明の高グルタミナーゼ活性を有する微
生物培養物を作用させる蛋白質としては、例えば大豆、
小麦、小麦グルテン、コーンミール、ミルクカゼイン、
フィッシュミール等であり、更に脱脂大豆あるいは膨化
や可溶化等の加工をされた種々の蛋白質、あるいはこれ
らの種々の蛋白原料からの分離蛋白質でもよい。特に、
小麦グルテン等のグルタミンを多く含む蛋白質は、高グ
ルタミナーゼ活性を有する微生物培養物を作用させるの
に適している。また、高グルタミナーゼ活性を有する微
生物培養物を蛋白質に作用させる条件について述べる
と、例えば０．２〜５０％、好ましくは１〜２０％の濃
度の原料に高グルタミナーゼ活性を有する微生物培養物
を蛋白質分解酵素存在下で混合し、５〜６０℃、好まし
くは３０〜５０℃にて、４時間〜１０日間、好ましくは
１０時間〜５日間反応させればよい。なお、上記の蛋白
原料には、澱粉等の炭水化物が含まれることがあり、反
応中に加水分解されてグルコース等の還元糖が生成する
ことがある。製造される蛋白加水分解物に還元糖が残存
すると、褐変を起こす原因となるため、還元糖の量を反
応生成物中の全固形分に対し５％（重量／重量）以下、
好ましくは３％（重量／重量）以下、さらに好ましくは
１．５％（重量／重量）以下に調整することが望まし
い。具体的には、まず、通気及び攪拌を行いながら１５
〜３９℃、好ましくは２５〜３８℃の温度範囲で反応を
行い、還元糖を資化させた後、通気を停止して４０〜６
０℃、好ましくは４１〜５０℃の温度範囲で反応を行っ
たのち反応を終了させることにより、反応生成物中の還
元糖の量を低減することができる。反応温度を移行させ
る時点は、反応開始後、全反応時間の１０〜６０％を経
過した時点である。
生物培養物を作用させる蛋白質としては、例えば大豆、
小麦、小麦グルテン、コーンミール、ミルクカゼイン、
フィッシュミール等であり、更に脱脂大豆あるいは膨化
や可溶化等の加工をされた種々の蛋白質、あるいはこれ
らの種々の蛋白原料からの分離蛋白質でもよい。特に、
小麦グルテン等のグルタミンを多く含む蛋白質は、高グ
ルタミナーゼ活性を有する微生物培養物を作用させるの
に適している。また、高グルタミナーゼ活性を有する微
生物培養物を蛋白質に作用させる条件について述べる
と、例えば０．２〜５０％、好ましくは１〜２０％の濃
度の原料に高グルタミナーゼ活性を有する微生物培養物
を蛋白質分解酵素存在下で混合し、５〜６０℃、好まし
くは３０〜５０℃にて、４時間〜１０日間、好ましくは
１０時間〜５日間反応させればよい。なお、上記の蛋白
原料には、澱粉等の炭水化物が含まれることがあり、反
応中に加水分解されてグルコース等の還元糖が生成する
ことがある。製造される蛋白加水分解物に還元糖が残存
すると、褐変を起こす原因となるため、還元糖の量を反
応生成物中の全固形分に対し５％（重量／重量）以下、
好ましくは３％（重量／重量）以下、さらに好ましくは
１．５％（重量／重量）以下に調整することが望まし
い。具体的には、まず、通気及び攪拌を行いながら１５
〜３９℃、好ましくは２５〜３８℃の温度範囲で反応を
行い、還元糖を資化させた後、通気を停止して４０〜６
０℃、好ましくは４１〜５０℃の温度範囲で反応を行っ
たのち反応を終了させることにより、反応生成物中の還
元糖の量を低減することができる。反応温度を移行させ
る時点は、反応開始後、全反応時間の１０〜６０％を経
過した時点である。
【００２１】蛋白質の加水分解反応は、無塩もしくは食
塩濃度３％（重量／容量）以下の低塩条件下で行う。蛋
白分解酵素及びグルタミナーゼは食塩により活性が阻害
されることがあり、食塩濃度が低い方が反応速度が向上
するので好ましい。但し、反応中、防腐の目的で少量の
エタノール、食塩を添加してもよい。反応終了後、未反
応の原料蛋白質、菌体などの不溶物は遠心分離や濾過
等、従来の分離法を用いて除去すればよい。また、必要
に応じて、固液分離後の液体区分を減圧濃縮、逆浸透法
などにより濃縮してもよい。特に、pHをアルカリ性に調
整した後、減圧下で濃縮を行うことにより、反応液中に
含まれるアンモニア含量を低減することができる。本発
明者らの知見によれば、グルタミン含量の高い小麦グル
テンを原料として使用した場合、蛋白質加水分解物中の
アンモニアが他原料由来のものと比べて多くなり、これ
が最終生産物の褐変を引き起こしている。従って、蛋白
質加水分解物からアンモニア含量を低減するすることが
望ましい。アンモニア含量は、全固形分中のアンモニア
態窒素量／全窒素量が０．３５（重量／重量）以下、好
ましくは０．１５（重量／重量）以下となるようにすれ
ばよい。更に、濃縮物は凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥
等の乾燥処理により、粉末化又は顆粒化することができ
る。かくして外部からグルタミン酸ナトリウムを添加す
ることなく、グルタミン酸ナトリウム含有量が高く呈味
性の強い蛋白質加水分解物を得ることができる。
塩濃度３％（重量／容量）以下の低塩条件下で行う。蛋
白分解酵素及びグルタミナーゼは食塩により活性が阻害
されることがあり、食塩濃度が低い方が反応速度が向上
するので好ましい。但し、反応中、防腐の目的で少量の
エタノール、食塩を添加してもよい。反応終了後、未反
応の原料蛋白質、菌体などの不溶物は遠心分離や濾過
等、従来の分離法を用いて除去すればよい。また、必要
に応じて、固液分離後の液体区分を減圧濃縮、逆浸透法
などにより濃縮してもよい。特に、pHをアルカリ性に調
整した後、減圧下で濃縮を行うことにより、反応液中に
含まれるアンモニア含量を低減することができる。本発
明者らの知見によれば、グルタミン含量の高い小麦グル
テンを原料として使用した場合、蛋白質加水分解物中の
アンモニアが他原料由来のものと比べて多くなり、これ
が最終生産物の褐変を引き起こしている。従って、蛋白
質加水分解物からアンモニア含量を低減するすることが
望ましい。アンモニア含量は、全固形分中のアンモニア
態窒素量／全窒素量が０．３５（重量／重量）以下、好
ましくは０．１５（重量／重量）以下となるようにすれ
ばよい。更に、濃縮物は凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥
等の乾燥処理により、粉末化又は顆粒化することができ
る。かくして外部からグルタミン酸ナトリウムを添加す
ることなく、グルタミン酸ナトリウム含有量が高く呈味
性の強い蛋白質加水分解物を得ることができる。
【００２２】上記のようにして得られる蛋白質加水分解
物は、塩酸分解物とは異なり、モノクロロヒドロキシプ
ロパノール類及びジクロロプロパノール類を含まない。
これは、エキストレルーオカラムにより抽出し、フェニ
ルホウ酸による誘導体をガスクロマトグラフィー質量分
析法（ＧＣ−ＭＳ法）で検出する方法（牛島ら、食衛誌
36,3,360-364,1995）によって検出限界以下であること
により確認することができる。なお、モノクロロヒドロ
キシプロパノール類には、3-chloro-1,2-propandiol 、
2-chloro-1,3-propandiol 、ジクロロプロパノール類に
は、1,3-dichloro-2-propanol 、2,3-dichloro-1-propa
nol がある。上記の方法によるこれらの物質のの検出限
界は、液体試料では0.００５ｐｐｍ、粉末試料では0.０
５ｐｐｍである。
物は、塩酸分解物とは異なり、モノクロロヒドロキシプ
ロパノール類及びジクロロプロパノール類を含まない。
これは、エキストレルーオカラムにより抽出し、フェニ
ルホウ酸による誘導体をガスクロマトグラフィー質量分
析法（ＧＣ−ＭＳ法）で検出する方法（牛島ら、食衛誌
36,3,360-364,1995）によって検出限界以下であること
により確認することができる。なお、モノクロロヒドロ
キシプロパノール類には、3-chloro-1,2-propandiol 、
2-chloro-1,3-propandiol 、ジクロロプロパノール類に
は、1,3-dichloro-2-propanol 、2,3-dichloro-1-propa
nol がある。上記の方法によるこれらの物質のの検出限
界は、液体試料では0.００５ｐｐｍ、粉末試料では0.０
５ｐｐｍである。
【００２３】本発明の蛋白質加水分解物を各種食品（小
麦粉使用製品、即席食品類、農産・畜産・水産加工品、
乳製品、油脂類、冷凍食品、基礎及び複合調味料、菓子
類、嗜好飲料類、その他の食品）へ添加することによ
り、うま味の強化、甘味の強化、濃厚感・伸びの付与、
まろやかさの付与、風味の増強、塩味・酸味の緩和、異
風味のマスキング等の効果がある。特に、・醤油存在下
での甘味、まろやかさ、濃厚感の付与、・肉製品の異風
味のマスキング及び肉風味の増強、・ポーク、チキン、
ビーフ、魚介、野菜エキス併用時の風味増強、・香辛料
存在下での香辛料風味の増強及び辛味のエンハンスの効
果が強い。本発明の蛋白質加水分解物は、風味が弱く、
色が淡く、かつグルタミン酸ナトリウム含有量が高いの
で、食品のもとの風味を変えたり、色を強めることな
く、上記の効果を高めたり、うま味の強化が可能であ
る。また、核酸等の他のうま味成分や酵母エキス、蛋白
加水分解物との併用により、更にうま味・こく味の強い
食品の製造が可能となる。
麦粉使用製品、即席食品類、農産・畜産・水産加工品、
乳製品、油脂類、冷凍食品、基礎及び複合調味料、菓子
類、嗜好飲料類、その他の食品）へ添加することによ
り、うま味の強化、甘味の強化、濃厚感・伸びの付与、
まろやかさの付与、風味の増強、塩味・酸味の緩和、異
風味のマスキング等の効果がある。特に、・醤油存在下
での甘味、まろやかさ、濃厚感の付与、・肉製品の異風
味のマスキング及び肉風味の増強、・ポーク、チキン、
ビーフ、魚介、野菜エキス併用時の風味増強、・香辛料
存在下での香辛料風味の増強及び辛味のエンハンスの効
果が強い。本発明の蛋白質加水分解物は、風味が弱く、
色が淡く、かつグルタミン酸ナトリウム含有量が高いの
で、食品のもとの風味を変えたり、色を強めることな
く、上記の効果を高めたり、うま味の強化が可能であ
る。また、核酸等の他のうま味成分や酵母エキス、蛋白
加水分解物との併用により、更にうま味・こく味の強い
食品の製造が可能となる。
【００２４】
【実施例】以下に実施例により本発明を詳細に説明す
る。しかし、これらの実施例は本発明を限定するもので
はない。なお、アスペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ
１１４９４）は、American Type Culture Collection
（12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852-
1776, U.S.A.）発行のカタログに、アスペルギルス・ソ
ーヤ（ＪＣＭ ２２５０）及びブレラ・デルキシー（Ｊ
ＣＭ ５２８０）は、理化学研究所微生物系統保存施設
（埼玉県和光市広沢２−１）発行のカタログにそれぞれ
掲載されており、請求により分譲を受けることができ
る。
る。しかし、これらの実施例は本発明を限定するもので
はない。なお、アスペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ
１１４９４）は、American Type Culture Collection
（12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852-
1776, U.S.A.）発行のカタログに、アスペルギルス・ソ
ーヤ（ＪＣＭ ２２５０）及びブレラ・デルキシー（Ｊ
ＣＭ ５２８０）は、理化学研究所微生物系統保存施設
（埼玉県和光市広沢２−１）発行のカタログにそれぞれ
掲載されており、請求により分譲を受けることができ
る。
【００２５】なお、実施例中におけるグルタミナーゼ活
性の測定法は以下の通りである。グルタミナーゼ活性
は、ヒドロキシルアミン存在下の酵素反応で生成するγ
−グルタミルヒドロキサム酸を定量するハートマンらの
変法（Hartman,S.C.: J. Biol. Chem., 243,853-863(19
68))に従い測定した。具体的には、試薬Ａ（０．４Ｍ
トリスアミノメタン、０．２Ｍ 塩酸ヒドロキシルアミ
ン（ｐＨ７．０））と試薬Ｂ（１００ｍＭ Ｌ−グルタ
ミン、２０ｍＭ 還元グルタチオン（ｐＨ７．０））と
の等量混合液１ｍｌに培養液２００μｌを加え、３７℃
で１時間インキュベートする。次に、反応停止及び発色
のために、（１）３Ｎ 塩酸、（２）１２％ トリクロ
ロ酢酸及び（３）５％ 塩化第二鉄６水和物を０．１Ｎ
塩酸溶液に溶解した溶液のそれぞれの等量混合液１ｍ
ｌを加えて攪拌し、この反応液上清の５２５ｎｍでの吸
光度を測定して酵素活性を求めた。なお、上記条件下に
おいて１分間に１μｇのγ−グルタミルヒドロキサム酸
を生成させる酵素活性を１単位（Ｕ）とした。
性の測定法は以下の通りである。グルタミナーゼ活性
は、ヒドロキシルアミン存在下の酵素反応で生成するγ
−グルタミルヒドロキサム酸を定量するハートマンらの
変法（Hartman,S.C.: J. Biol. Chem., 243,853-863(19
68))に従い測定した。具体的には、試薬Ａ（０．４Ｍ
トリスアミノメタン、０．２Ｍ 塩酸ヒドロキシルアミ
ン（ｐＨ７．０））と試薬Ｂ（１００ｍＭ Ｌ−グルタ
ミン、２０ｍＭ 還元グルタチオン（ｐＨ７．０））と
の等量混合液１ｍｌに培養液２００μｌを加え、３７℃
で１時間インキュベートする。次に、反応停止及び発色
のために、（１）３Ｎ 塩酸、（２）１２％ トリクロ
ロ酢酸及び（３）５％ 塩化第二鉄６水和物を０．１Ｎ
塩酸溶液に溶解した溶液のそれぞれの等量混合液１ｍ
ｌを加えて攪拌し、この反応液上清の５２５ｎｍでの吸
光度を測定して酵素活性を求めた。なお、上記条件下に
おいて１分間に１μｇのγ−グルタミルヒドロキサム酸
を生成させる酵素活性を１単位（Ｕ）とした。
【００２６】実施例１ アスペルギルス・オリーゼを用
いたグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製
造 ラクトース又はグルコース１．５％、ポリペプトン１．
５％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウ
ム０．２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％を含
む培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーファー
メンターに張り込み、オートクレーブ殺菌後、アスペル
ギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法通り
接種した。なお、この際に接種する麹菌の形態は任意で
あり、胞子であっても、菌糸であっても差し支えない。
その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通気量１／
２ｖｖｍにて４８時間培養を行った。培養終了後、培養
物のグルタミナーゼ活性を測定した。その結果、培養液
のグルタミナーゼ生産量は、培地の炭素源が資化速度の
速いグルコースの場合、０．０５７（ｕ／ｍｌ）であっ
たが、資化速度の遅いラクトースの場合は、０．１８５
（ｕ／ｍｌ）であり、グルコースを用いたときと比べて
３倍以上のグルタミナーゼ生産量を示した。すなわち、
資化速度の遅い炭素源であるラクトースを用いることに
より、カタボライトリプレッションが解除され、生産量
が向上したわけである。
いたグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製
造 ラクトース又はグルコース１．５％、ポリペプトン１．
５％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウ
ム０．２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％を含
む培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーファー
メンターに張り込み、オートクレーブ殺菌後、アスペル
ギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法通り
接種した。なお、この際に接種する麹菌の形態は任意で
あり、胞子であっても、菌糸であっても差し支えない。
その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通気量１／
２ｖｖｍにて４８時間培養を行った。培養終了後、培養
物のグルタミナーゼ活性を測定した。その結果、培養液
のグルタミナーゼ生産量は、培地の炭素源が資化速度の
速いグルコースの場合、０．０５７（ｕ／ｍｌ）であっ
たが、資化速度の遅いラクトースの場合は、０．１８５
（ｕ／ｍｌ）であり、グルコースを用いたときと比べて
３倍以上のグルタミナーゼ生産量を示した。すなわち、
資化速度の遅い炭素源であるラクトースを用いることに
より、カタボライトリプレッションが解除され、生産量
が向上したわけである。
【００２７】さらに、炭素源としてラクトースを使用し
た場合、培養中期にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和
物１．０％を添加して培養を継続することにより、グル
タミナーゼ生産量は０．４０１（ｕ／ｍｌ）に向上し
た。以上の結果から、ラクトースを炭素源として用い、
かつ培養中期に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナトリウ
ム１水和物１．０％を添加して培養を継続することによ
り、グルタミナーゼ生産量を約７倍に上昇させることが
できた。
た場合、培養中期にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和
物１．０％を添加して培養を継続することにより、グル
タミナーゼ生産量は０．４０１（ｕ／ｍｌ）に向上し
た。以上の結果から、ラクトースを炭素源として用い、
かつ培養中期に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナトリウ
ム１水和物１．０％を添加して培養を継続することによ
り、グルタミナーゼ生産量を約７倍に上昇させることが
できた。
【００２８】実施例２ アスペルギルス・オリーゼを用
いたグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製
造 マンニトール又はシュクロース１．５％、ポリペプトン
１．５％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カ
リウム０．２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％
を含む培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーフ
ァーメンターに張り込み、オートクレーブ殺菌後、アス
ペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法
通り接種した。なお、この際に接種する麹菌の形態は任
意であり、胞子であっても、菌糸であっても差し支えな
い。その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通気量
１／２ｖｖｍにて４８時間培養を行った。培養終了後、
培養物のグルタミナーゼ活性を測定した。その結果、培
養液のグルタミナーゼ生産量は、培地の炭素源が資化速
度の速いシュクロースの場合、０．０１１（ｕ／ｍｌ）
であったが、資化速度の遅いマンニトールの場合は、
０．１４８（ｕ／ｍｌ）であり、シュクロースを用いた
ときと比べて１３倍以上のグルタミナーゼ生産量を示し
た。すなわち、資化速度の遅い炭素源であるマンニトー
ルを用いることにより、カタボライトリプレッションが
解除され、生産量が向上したわけである。
いたグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製
造 マンニトール又はシュクロース１．５％、ポリペプトン
１．５％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カ
リウム０．２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％
を含む培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーフ
ァーメンターに張り込み、オートクレーブ殺菌後、アス
ペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法
通り接種した。なお、この際に接種する麹菌の形態は任
意であり、胞子であっても、菌糸であっても差し支えな
い。その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通気量
１／２ｖｖｍにて４８時間培養を行った。培養終了後、
培養物のグルタミナーゼ活性を測定した。その結果、培
養液のグルタミナーゼ生産量は、培地の炭素源が資化速
度の速いシュクロースの場合、０．０１１（ｕ／ｍｌ）
であったが、資化速度の遅いマンニトールの場合は、
０．１４８（ｕ／ｍｌ）であり、シュクロースを用いた
ときと比べて１３倍以上のグルタミナーゼ生産量を示し
た。すなわち、資化速度の遅い炭素源であるマンニトー
ルを用いることにより、カタボライトリプレッションが
解除され、生産量が向上したわけである。
【００２９】さらに、炭素源としてマンニトールを使用
した場合、培養中期にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水
和物１．０％を添加して培養を継続することにより、グ
ルタミナーゼ生産量は０．３３１（ｕ／ｍｌ）に向上し
た。以上の結果から、マンニトールを炭素源として用
い、かつ培養中期に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナト
リウム１水和物１．０％を添加して培養を継続すること
により、グルタミナーゼ生産量を約３０倍に上昇させる
ことができた。
した場合、培養中期にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水
和物１．０％を添加して培養を継続することにより、グ
ルタミナーゼ生産量は０．３３１（ｕ／ｍｌ）に向上し
た。以上の結果から、マンニトールを炭素源として用
い、かつ培養中期に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナト
リウム１水和物１．０％を添加して培養を継続すること
により、グルタミナーゼ生産量を約３０倍に上昇させる
ことができた。
【００３０】実施例３ アスペルギルス・ソーヤを用い
たグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製造 培地Ａ（グルコース１．５％、ポリペプトン１．５％、
硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウム０．
２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％（ｐＨ無調
整））又は培地Ｂ（ポリペプトン１．５％、硫酸マグネ
シウム７水和物０．５％、塩化カリウム０．２５％、リ
ン酸水素１ナトリウム０．２５％（ｐＨ無調整））２Ｌ
を総容量５Ｌのジャーファーメンターに張り込み、オー
トクレーブ殺菌後、アスペルギルス・ソーヤ（ＪＣＭ
２２５０）を常法通り接種した。なお、この際に接種す
る麹菌の形態は胞子であっても、菌糸であっても差し支
えない。その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通
気量１／２ｖｖｍにて３４時間培養を行った。培地Ｂで
発酵を開始するジャーファーメンターについては、グル
コースを０．２％以下に保つべく連続添加するものと、
同じくグルコースを０．２％以下に保つべく連続添加す
ると共に、培養中期である培養開始１７時間目に窒素源
であるＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和物１．０％を
添加するものの合計２基のジャーファーメンターを用意
した。
たグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の製造 培地Ａ（グルコース１．５％、ポリペプトン１．５％、
硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウム０．
２５％、リン酸水素１ナトリウム０．２５％（ｐＨ無調
整））又は培地Ｂ（ポリペプトン１．５％、硫酸マグネ
シウム７水和物０．５％、塩化カリウム０．２５％、リ
ン酸水素１ナトリウム０．２５％（ｐＨ無調整））２Ｌ
を総容量５Ｌのジャーファーメンターに張り込み、オー
トクレーブ殺菌後、アスペルギルス・ソーヤ（ＪＣＭ
２２５０）を常法通り接種した。なお、この際に接種す
る麹菌の形態は胞子であっても、菌糸であっても差し支
えない。その後、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通
気量１／２ｖｖｍにて３４時間培養を行った。培地Ｂで
発酵を開始するジャーファーメンターについては、グル
コースを０．２％以下に保つべく連続添加するものと、
同じくグルコースを０．２％以下に保つべく連続添加す
ると共に、培養中期である培養開始１７時間目に窒素源
であるＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和物１．０％を
添加するものの合計２基のジャーファーメンターを用意
した。
【００３１】培養終了後、培養物のグルタミナーゼ活性
を測定した。その結果、培地Ａで培養した培養液のグル
タミナーゼ生産量は０．００２（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂで
グルコースを０．２％以下に保つべく連続添加した培養
液のグルタミナーゼ生産量は０．０２２（ｕ／ｍｌ）、
培地Ｂでグルコースを０．２％以下に保つべく連続添加
し、培養１７時間目にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水
和物１．０％を添加して培養した培養液のグルタミナー
ゼ生産量は０．０６４（ｕ／ｍｌ）を示した。以上の結
果から、資化速度の速いグルコースを培養開始時から高
濃度に添加して培養を行った場合のグルタミナーゼ生産
量に比べ、グルコースを低濃度で連続添加し、カタボラ
イトリプレッションを解除したものは、グルタミナーゼ
生産量が約１１倍向上した。さらに培養中期にＬ−グル
タミン酸ナトリウム１水和物を添加して培養することに
より、麹菌のグルタミナーゼ生産量は３２倍に向上する
ことがわかった。
を測定した。その結果、培地Ａで培養した培養液のグル
タミナーゼ生産量は０．００２（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂで
グルコースを０．２％以下に保つべく連続添加した培養
液のグルタミナーゼ生産量は０．０２２（ｕ／ｍｌ）、
培地Ｂでグルコースを０．２％以下に保つべく連続添加
し、培養１７時間目にＬ−グルタミン酸ナトリウム１水
和物１．０％を添加して培養した培養液のグルタミナー
ゼ生産量は０．０６４（ｕ／ｍｌ）を示した。以上の結
果から、資化速度の速いグルコースを培養開始時から高
濃度に添加して培養を行った場合のグルタミナーゼ生産
量に比べ、グルコースを低濃度で連続添加し、カタボラ
イトリプレッションを解除したものは、グルタミナーゼ
生産量が約１１倍向上した。さらに培養中期にＬ−グル
タミン酸ナトリウム１水和物を添加して培養することに
より、麹菌のグルタミナーゼ生産量は３２倍に向上する
ことがわかった。
【００３２】実施例４ 酵母を用いたグルタミナーゼ活
性が増強された微生物培養物の製造法 培地Ａ（グルコース１．５％、バクトペプトン０．５
％、麦芽エキス０．３％、酵母エキス０．３％（ｐＨ無
調整））又は培地Ｂ（バクトペプトン０．５％、麦芽エ
キス０．３％、酵母エキス０．３％（ｐＨ無調整））２
Ｌを総容量５Ｌのジャーファーメンターに張り込み、オ
ートクレーブ殺菌後、ブレラ・デルキシー（ＪＣＭ ５
２８０）を常法通り接種した。その後、温度２５℃、攪
拌数８００ｒｐｍ、通気量１／２ｖｖｍにて５５時間培
養を行った。培地Ｂにて発酵を開始するジャーファーメ
ンターは、グルコースを０．０５％以下に保つべく連続
添加するものと、同じくグルコースを０．０５％以下に
保つべく連続添加すると共に、培養中期の培養２４時間
目に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和物
１．０％を添加するジャーファーメンターの２基を用意
した。
性が増強された微生物培養物の製造法 培地Ａ（グルコース１．５％、バクトペプトン０．５
％、麦芽エキス０．３％、酵母エキス０．３％（ｐＨ無
調整））又は培地Ｂ（バクトペプトン０．５％、麦芽エ
キス０．３％、酵母エキス０．３％（ｐＨ無調整））２
Ｌを総容量５Ｌのジャーファーメンターに張り込み、オ
ートクレーブ殺菌後、ブレラ・デルキシー（ＪＣＭ ５
２８０）を常法通り接種した。その後、温度２５℃、攪
拌数８００ｒｐｍ、通気量１／２ｖｖｍにて５５時間培
養を行った。培地Ｂにて発酵を開始するジャーファーメ
ンターは、グルコースを０．０５％以下に保つべく連続
添加するものと、同じくグルコースを０．０５％以下に
保つべく連続添加すると共に、培養中期の培養２４時間
目に窒素源であるＬ−グルタミン酸ナトリウム１水和物
１．０％を添加するジャーファーメンターの２基を用意
した。
【００３３】培養終了後、培養物のグルタミナーゼ活性
を測定した。その結果、培地Ａで培養した培養液のグル
タミナーゼ生産量は０．１２１（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂで
グルコースを連続添加した培養液のグルタミナーゼ生産
量は０．２５２（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂでグルコースを連
続添加し、培養２４時間目にＬ−グルタミン酸ナトリウ
ム１水和物１．０％添加して培養した培養液のグルタミ
ナーゼ生産量は０．４８６（ｕ／ｍｌ）を示した。以上
のことから、資化速度の速いグルコースを培養開始時か
ら高濃度に添加して培養を行った際のグルタミナーゼ生
産量に比べ、カタボライトリプレッションを解除すべく
グルコースを低濃度で連続添加したものはグルタミナー
ゼ生産量が２．１倍向上した。さらに培養中期にＬ−グ
ルタミン酸ナトリウム１水和物を供給することにより、
グルタミナーゼ生産量は４倍に向上することがわかっ
た。
を測定した。その結果、培地Ａで培養した培養液のグル
タミナーゼ生産量は０．１２１（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂで
グルコースを連続添加した培養液のグルタミナーゼ生産
量は０．２５２（ｕ／ｍｌ）、培地Ｂでグルコースを連
続添加し、培養２４時間目にＬ−グルタミン酸ナトリウ
ム１水和物１．０％添加して培養した培養液のグルタミ
ナーゼ生産量は０．４８６（ｕ／ｍｌ）を示した。以上
のことから、資化速度の速いグルコースを培養開始時か
ら高濃度に添加して培養を行った際のグルタミナーゼ生
産量に比べ、カタボライトリプレッションを解除すべく
グルコースを低濃度で連続添加したものはグルタミナー
ゼ生産量が２．１倍向上した。さらに培養中期にＬ−グ
ルタミン酸ナトリウム１水和物を供給することにより、
グルタミナーゼ生産量は４倍に向上することがわかっ
た。
【００３４】実施例５ 以下の操作は無菌的に行った。オートクレーブ処理した
５％小麦グルテン（商品名：アジプロンＧ２：味の素
（株）製）溶液２０ｍｌに、実施例２記載のマンニトー
ルを炭素源としたアスペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ
１１４９４）の培養物１０ｍｌを混合し、４０℃で１
０時間、２４時間、４日間、１０日間反応させた。ま
た、実施例１記載のシュークロースを炭素源としたとき
のアスペルギルス・オリーゼの培養物１０ｍｌを用いた
ものを比較対照として同様に実施した。これらの反応物
の上清について全窒素量（Ｔ−Ｎ）、遊離グルタミン酸
量の測定を行った。グルタミン酸含量は酵素法により、
また全窒素量はケルダール法により求めた。これらの分
析値及びグルタミン酸量と全窒素量から求めたグルタミ
ン酸遊離率（グルタミン酸量／全窒素量）を第１表に示
す。第１表に示した通り、マンニトールを炭素源とした
ときのアスペルギルス・オリーゼの培養物を用いた小麦
グルテン分解液のグルタミン酸遊離率は、シュークロー
スを炭素源としたときよりも明らかに高い値であった。
また、それらの分解液は強い呈味を有していた。
５％小麦グルテン（商品名：アジプロンＧ２：味の素
（株）製）溶液２０ｍｌに、実施例２記載のマンニトー
ルを炭素源としたアスペルギルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ
１１４９４）の培養物１０ｍｌを混合し、４０℃で１
０時間、２４時間、４日間、１０日間反応させた。ま
た、実施例１記載のシュークロースを炭素源としたとき
のアスペルギルス・オリーゼの培養物１０ｍｌを用いた
ものを比較対照として同様に実施した。これらの反応物
の上清について全窒素量（Ｔ−Ｎ）、遊離グルタミン酸
量の測定を行った。グルタミン酸含量は酵素法により、
また全窒素量はケルダール法により求めた。これらの分
析値及びグルタミン酸量と全窒素量から求めたグルタミ
ン酸遊離率（グルタミン酸量／全窒素量）を第１表に示
す。第１表に示した通り、マンニトールを炭素源とした
ときのアスペルギルス・オリーゼの培養物を用いた小麦
グルテン分解液のグルタミン酸遊離率は、シュークロー
スを炭素源としたときよりも明らかに高い値であった。
また、それらの分解液は強い呈味を有していた。
【００３５】
【表１】第１表 小麦グルテン分解液のグルタミン酸
遊離率比較
遊離率比較
【００３６】実施例６ 以下の培養、分解反応は無菌的に行った。分離大豆蛋白
（商品名：アジプロンＥ３、味の素（株）製）１．５
％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウム
０．２５％及びリン酸水素ナトリウム０．２５％を含む
培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーファーメ
ンターに張り込み、オートクレーブ殺菌し、アスペルギ
ルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法通り接
種した。培養は、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通
気量１／２ｖｖｍにて行った。培養中、グルコース溶液
を全添加量が１．５％（重量／容量）となるように、ま
た培養液中のグルコース濃度が０．５％を超えないよう
に間欠的に４回に分けて供給した。また、培養中期には
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム０．５％を添加して培養を
継続し、４８時間で培養を終了した。この培養物１Ｌと
５％小麦グルテン（商品名：アジプロンＧ２、味の素
（株）製）分散液２Ｌをオートクレーブ殺菌したものを
混合し、小型ジャーファーメンターで通気攪拌を行いな
がら、３５℃で８時間反応させたのち、通気を停止し、
４５℃で１６時間分解反応を行った。この分解液をヌッ
チェを用いて固液分離した後、濾液のアンモニア濃度と
等モル量の水酸化ナトリウムを添加してエバポレーター
で濃縮し、アンモニアを除去した。濃縮液に塩酸を添加
してｐＨ７．０とし、８０℃で２０分間加熱殺菌を行っ
た。冷却後、ヌッチェを用いて澱引きし、ディスク式の
スプレードライヤーを用いて噴霧乾燥し、噴霧乾燥品を
得た。噴霧乾燥品の全窒素量、アンモニア態窒素量、食
塩含量、遊離アミノ酸量及び還元糖量を測定した。食塩
含量は塩化物含量より算出し、遊離アミノ酸量はアミノ
酸分析により測定した。また、還元糖はレーマンショー
ル法によりグルコース換算値として求めた。これらの分
析値を第２表、第３表に示す。第３表に示した通り、グ
ルタミナーゼ活性の高いアスペルギルス・オリーゼの培
養物を用いて小麦グルテンを加水分解することにより、
噴霧乾燥品としてグルタミン酸（グルタミン酸ナトリウ
ムとして）を２９．９％（重量／重量）、全窒素量を
９．１％（重量／重量）、総アミノ酸量を５５．４％
（重量／重量）含む呈味力の強い蛋白質加水分解物を製
造することができた。
（商品名：アジプロンＥ３、味の素（株）製）１．５
％、硫酸マグネシウム７水和物０．５％、塩化カリウム
０．２５％及びリン酸水素ナトリウム０．２５％を含む
培地（ｐＨ無調整）２Ｌを総容量５Ｌのジャーファーメ
ンターに張り込み、オートクレーブ殺菌し、アスペルギ
ルス・オリーゼ（ＡＴＣＣ １１４９４）を常法通り接
種した。培養は、温度３０℃、攪拌数６００ｒｐｍ、通
気量１／２ｖｖｍにて行った。培養中、グルコース溶液
を全添加量が１．５％（重量／容量）となるように、ま
た培養液中のグルコース濃度が０．５％を超えないよう
に間欠的に４回に分けて供給した。また、培養中期には
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム０．５％を添加して培養を
継続し、４８時間で培養を終了した。この培養物１Ｌと
５％小麦グルテン（商品名：アジプロンＧ２、味の素
（株）製）分散液２Ｌをオートクレーブ殺菌したものを
混合し、小型ジャーファーメンターで通気攪拌を行いな
がら、３５℃で８時間反応させたのち、通気を停止し、
４５℃で１６時間分解反応を行った。この分解液をヌッ
チェを用いて固液分離した後、濾液のアンモニア濃度と
等モル量の水酸化ナトリウムを添加してエバポレーター
で濃縮し、アンモニアを除去した。濃縮液に塩酸を添加
してｐＨ７．０とし、８０℃で２０分間加熱殺菌を行っ
た。冷却後、ヌッチェを用いて澱引きし、ディスク式の
スプレードライヤーを用いて噴霧乾燥し、噴霧乾燥品を
得た。噴霧乾燥品の全窒素量、アンモニア態窒素量、食
塩含量、遊離アミノ酸量及び還元糖量を測定した。食塩
含量は塩化物含量より算出し、遊離アミノ酸量はアミノ
酸分析により測定した。また、還元糖はレーマンショー
ル法によりグルコース換算値として求めた。これらの分
析値を第２表、第３表に示す。第３表に示した通り、グ
ルタミナーゼ活性の高いアスペルギルス・オリーゼの培
養物を用いて小麦グルテンを加水分解することにより、
噴霧乾燥品としてグルタミン酸（グルタミン酸ナトリウ
ムとして）を２９．９％（重量／重量）、全窒素量を
９．１％（重量／重量）、総アミノ酸量を５５．４％
（重量／重量）含む呈味力の強い蛋白質加水分解物を製
造することができた。
【００３７】
【表２】第２表 噴霧乾燥品のアミノ酸遊離量と遊離率
【００３８】
【表３】第３表 噴霧乾燥品の分析値 *ク゛ルタミン酸ナトリウムとして
【００３９】
【発明の効果】本発明により、グルタミナーゼ活性が増
強された微生物培養物が提供される。この微生物培養物
を用いることによって、蛋白質加水分解物を効率よく製
造することができる。得られた蛋白質加水分解物は、グ
ルタミン酸含有量が高いため、呈味力が強く、調味料と
しての利用価値が高い。
強された微生物培養物が提供される。この微生物培養物
を用いることによって、蛋白質加水分解物を効率よく製
造することができる。得られた蛋白質加水分解物は、グ
ルタミン酸含有量が高いため、呈味力が強く、調味料と
しての利用価値が高い。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｎ 9/80 Ｃ１２Ｒ 1:69） (Ｃ１２Ｎ 9/80 Ｃ１２Ｒ 1:66）
Claims (8)
- 【請求項１】 グルタミナーゼ産生能を有する微生物の
培養中のカタボライトリプレッションを解除すること並
びに必要により培養中期に窒素源を供給することを特徴
とするグルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物の
調製方法。 - 【請求項２】 カタボライトリプレッションの解除を、
培養中に炭素源を連続的又は間欠的に供給することによ
り行う請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 グルタミナーゼ産生能を有する微生物
が、麹菌又は酵母である請求項１記載の方法。 - 【請求項４】 請求項１記載の方法により調製されるグ
ルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物。 - 【請求項５】 請求項４記載のグルタミナーゼ活性が増
強された微生物培養物を、蛋白質分解酵素の存在下、無
塩もしくは食塩濃度３％（重量／容量）以下の条件下で
蛋白質に作用させることを特徴とする蛋白質加水分解物
の製造方法。 - 【請求項６】 微生物培養物を蛋白質に作用させる際
に、当初通気及び攪拌を行いながら１５〜３９℃の温度
範囲で反応を行い、次いで通気を停止して４０〜６０℃
の温度範囲で反応を行うことを特徴とする請求項５記載
の蛋白質加水分解物の製造方法。 - 【請求項７】 請求項５又は６記載の方法により製造さ
れる蛋白質加水分解物。 - 【請求項８】 下記の特徴を有する蛋白質加水分解物。 （ａ）小麦グルテンを原料とする。 （ｂ）全固形分中のグルタミン酸含有量がグルタミン酸
ナトリウムとして１６〜３６（重量／重量）％である。 （ｃ）全固形分中の全窒素含有量が８〜１３％（重量／
重量）である。 （ｄ）全固形分中の総アミノ酸含有量が４０〜７２％
（重量／重量）である。 （ｅ）全固形分中の食塩含有量が１４％（重量／重量）
以下である。 （ｆ）全固形分中の還元糖含有量が５％（重量／重量）
以下である。 （ｇ）モノクロロヒドロキシプロパノール類及びジクロ
ロプロパノール類を含まない。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06833899A JP3948151B2 (ja) | 1998-04-16 | 1999-03-15 | グルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物及びその利用 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12162198 | 1998-04-16 | ||
| JP10-121621 | 1998-04-16 | ||
| JP06833899A JP3948151B2 (ja) | 1998-04-16 | 1999-03-15 | グルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物及びその利用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000000088A true JP2000000088A (ja) | 2000-01-07 |
| JP3948151B2 JP3948151B2 (ja) | 2007-07-25 |
Family
ID=26409566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06833899A Expired - Lifetime JP3948151B2 (ja) | 1998-04-16 | 1999-03-15 | グルタミナーゼ活性が増強された微生物培養物及びその利用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3948151B2 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004187684A (ja) * | 2002-11-26 | 2004-07-08 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミンの製造法及びｌ−グルタミン生産菌 |
| US6803062B2 (en) | 2000-10-30 | 2004-10-12 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing hydrolyzed protein |
| JP2008259451A (ja) * | 2007-04-12 | 2008-10-30 | Mitsubishi Chemicals Corp | 有機酸生産微生物の菌体の調製法及び有機酸の製造法 |
| US7943364B2 (en) | 2002-11-26 | 2011-05-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-glutamine and L-glutamine producing bacterium |
| JP2012507265A (ja) * | 2008-12-24 | 2012-03-29 | 安▲チ▼酵母股▲フェン▼有限公司 | グルタミン酸高含有酵母エキス及びその製造方法 |
| JP2014054245A (ja) * | 2012-08-10 | 2014-03-27 | Kikkoman Corp | 液体麹および調味液 |
| EP2900084A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF NATURAL BEEF AROMA |
| EP2900085A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PREPARATION OF KOKUMI NATURAL AROMA |
| EP2900087A4 (en) * | 2013-08-07 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PREPARATION OF FERMENTED IMP BROTH OR FERMENTED GLUTAMIC ACID BROTH AS A RAW MATERIAL FOR THE PREPARATION OF A NATURAL AROMA |
| EP2900086A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR PRODUCING NATURAL NEUTRAL TASTE |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102079571B1 (ko) * | 2019-02-15 | 2020-02-20 | 대상 주식회사 | 글루탐산의 함량이 증대된 천연 발효 조미소재의 제조방법 |
-
1999
- 1999-03-15 JP JP06833899A patent/JP3948151B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6803062B2 (en) | 2000-10-30 | 2004-10-12 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing hydrolyzed protein |
| JP2004187684A (ja) * | 2002-11-26 | 2004-07-08 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミンの製造法及びｌ−グルタミン生産菌 |
| US7943364B2 (en) | 2002-11-26 | 2011-05-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing L-glutamine and L-glutamine producing bacterium |
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| JP2012507265A (ja) * | 2008-12-24 | 2012-03-29 | 安▲チ▼酵母股▲フェン▼有限公司 | グルタミン酸高含有酵母エキス及びその製造方法 |
| JP2014054245A (ja) * | 2012-08-10 | 2014-03-27 | Kikkoman Corp | 液体麹および調味液 |
| EP2900084A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF NATURAL BEEF AROMA |
| EP2900085A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PREPARATION OF KOKUMI NATURAL AROMA |
| EP2900086A4 (en) * | 2013-07-23 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR PRODUCING NATURAL NEUTRAL TASTE |
| AU2014293959B2 (en) * | 2013-07-23 | 2017-06-22 | Cj Cheiljedang Corporation | Method for preparing natural neutral flavor |
| EP3305095A1 (en) * | 2013-07-23 | 2018-04-11 | CJ Cheiljedang Corporation | Method for preparing imp fermented broth or glutamic acid fermented broth as raw material for preparation of natural flavor |
| EP2900087A4 (en) * | 2013-08-07 | 2016-06-01 | Cj Cheiljedang Corp | PROCESS FOR THE PREPARATION OF FERMENTED IMP BROTH OR FERMENTED GLUTAMIC ACID BROTH AS A RAW MATERIAL FOR THE PREPARATION OF A NATURAL AROMA |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3948151B2 (ja) | 2007-07-25 |
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