KR20230033060A - 노니주스를 함유한 요구르트 및 이의 제조방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 노니주스를 함유한 요구르트 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 노니주스를 함유한 요구르트 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
현대인들의 서구화된 식습관의 변화로 인해 장 관련 질병 발생률이 높아지고 있어, 요구르트와 같은 장 기능 개선을 위한 식품에 대한 관심이 많아지고 있다. 요구르트 속에 함유되어 있는 프로바이오틱스는 단백질 가수분해물과 생리활성 펩티드를 가지고 있어 항산화 활성에 긍정적인 영향을 미칠 수 있고, 염증성 사이토카인을 감소시키고 항염증성 사이토카인을 조절하여 장염증을 예방하고 면역력 향상에 효과적이다.
최근에는 소비자들의 기호도 증진을 위해 요구르트에 천연물질을 첨가하여 영양 및 다양한 생리활성을 규명하는 연구가 활발하게 진행되고 있다. 예를 들면 요구르트에 녹차 추출물 첨가는 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical 소거능과 같은 항산화 활성을 향상시키고 유산균의 성장 증가 및 항염증 효과를 보였고, 모링가를 첨가시 유산균의 성장을 촉진하여 발효속도를 높였다고 보고되었다(Zhang 등, 2019).
한편, 노니(Noni, Morinda citrifolia L.)는 태국, 인도네시아, 하와이, 괌에서 재배되고 있는 열대과일로서 폴리네시아인(Polynesian)의 진통제, 항염증제, 면역자극제와 같은 다양한 질병에 대한 전통의약품으로 오래전부터 식용으로 사용되었다. 노니는 복막 대식세포에서 산화질소(Nitric oxide) 생성을 증가시키고(Almeida-Souza 등, 2016), 염증성 사이토카인(Pro inflammatory cytokine)의 발현을 감소시켜 대장의 염증을 억제한다고 알려져 있다(Coutinho de Sousa 등, 2017).
노니는 전 세계적으로 새로운 기능성 식품으로 주목받고 있으며, 과일, 잎, 꽃, 껍질, 뿌리 등 다양하게 식용으로 사용되지만 대부분은 주스 형태로 소비되고 있다. 하지만, 노니주스를 첨가한 요구르트는 제품 개발, 상업화되어 판매하고 있는 제품은 없는 실정이다.
이에, 본 발명의 발명자는 노니주스의 함량 및 제조 조건을 최적화하여 관능성이 좋으면서도 항산화, 항염증 및 대장염 치료 효능을 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 노니주스 함유 요구르트 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적의 달성을 위해, 본 발명은 유원료와 5 내지 7 부피%의 노니주스를 혼합한 후 균질화시키는 단계; 상기 균질물을 80~95℃에서 멸균한 후 40℃로 냉각시키고 유산균주를 첨가하는 단계; 및 pH가 4.5에 도달할 때까지 40 내지 45℃에서 5 내지 8시간 동안 발효시키는 단계;를 포함하는, 노니주스 함유 요구르트의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 제조방법에 의해 제조된 노니주스 함유 요구르트를 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 노니주스 함유 요구르트를 포함하는 동물용 간식 조성물을 제공한다.
본 발명의 특이한 냄새와 쓴맛이 강한 노니주스의 첨가량을 최적화하여 관능성을 높이면서도 높은 항산화, 항염증, 대장염 치료 효과를 나타내고 있어, 동물 및 인간에게 효과적인 건강기능성 식품을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 동물 실험 스케줄을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서 노니주스 함량에 따른 요구르트의 (A) 총 폴리페놀 및 (B) 총 플라보노이드 함량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 pH 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 적정 산도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 유산균수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서 노니주스 함량에 따른 요구르트의 (A) DPPH radical 소거활성 및 (B) ABTS radical 소거활성을 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 있어서 다양한 함량의 노니주스가 첨가된 요구르트에 의한 인간 대장암 세포 HT-29의 (A-G) 항산화 소거능의 형광 현미경 이미지 및 (H) 형광 강도를 나타낸 그래프이다
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서 DSS-유도 마우스의 (A) 대장 길이를 나타낸 그래프 및 (B) 대장의 사진이다
도 9는 본 발명의 일 실시예에 있어서 DSS-유도 마우스의 (A) 비장 및 (B) 간의 무게를 나타낸 그래프이다. C: Basal diet; DSS: Basal diet + 25% (w/v) DSS in drinking water; CY: basal diet containing control yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water; NY: basal diet containing noni juice yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 있어서 (A) 대조, (B) DSS, (C) CY+DSS 및 (D) NY+DSS 군의 대장조직의 조직병리학적 염색 이미지이다. C: Basal diet; DSS: Basal diet + 25% (w/v) DSS in drinking water; CY: basal diet containing control yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water; NY: basal diet containing noni juice yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water
도 11은 본 발명의 일 실시예에 있어서 (A) 술잔세포의 손실, (B) 점막 밑층의 염증세포, (C) 점막의 염증세포 및 (D) 점막비후를 점수화하여 나타낸 그래프이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 있어서 C, DSS, DSS+CY 및 DSS+NY 군 마우스의 비장에서 사이토카인의 mRNA 발현을 나타낸 그래프이다. (A) mRNA expression levels of TNF-α, (B) IL-1β, (C) IFN-γ, (D) IL-6 및 (E) IL-10.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서 노니주스 함량에 따른 요구르트의 (A) 총 폴리페놀 및 (B) 총 플라보노이드 함량을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 pH 변화를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 적정 산도의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서 21일 동안 노니주스 함량에 따른 요구르트의 유산균수의 변화를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 있어서 노니주스 함량에 따른 요구르트의 (A) DPPH radical 소거활성 및 (B) ABTS radical 소거활성을 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 있어서 다양한 함량의 노니주스가 첨가된 요구르트에 의한 인간 대장암 세포 HT-29의 (A-G) 항산화 소거능의 형광 현미경 이미지 및 (H) 형광 강도를 나타낸 그래프이다
도 8은 본 발명의 일 실시예에 있어서 DSS-유도 마우스의 (A) 대장 길이를 나타낸 그래프 및 (B) 대장의 사진이다
도 9는 본 발명의 일 실시예에 있어서 DSS-유도 마우스의 (A) 비장 및 (B) 간의 무게를 나타낸 그래프이다. C: Basal diet; DSS: Basal diet + 25% (w/v) DSS in drinking water; CY: basal diet containing control yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water; NY: basal diet containing noni juice yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 있어서 (A) 대조, (B) DSS, (C) CY+DSS 및 (D) NY+DSS 군의 대장조직의 조직병리학적 염색 이미지이다. C: Basal diet; DSS: Basal diet + 25% (w/v) DSS in drinking water; CY: basal diet containing control yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water; NY: basal diet containing noni juice yogurt (2%, w/w) + 25% (w/v) DSS in drinking water
도 11은 본 발명의 일 실시예에 있어서 (A) 술잔세포의 손실, (B) 점막 밑층의 염증세포, (C) 점막의 염증세포 및 (D) 점막비후를 점수화하여 나타낸 그래프이다.
도 12는 본 발명의 일 실시예에 있어서 C, DSS, DSS+CY 및 DSS+NY 군 마우스의 비장에서 사이토카인의 mRNA 발현을 나타낸 그래프이다. (A) mRNA expression levels of TNF-α, (B) IL-1β, (C) IFN-γ, (D) IL-6 및 (E) IL-10.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명한다. 이하의 설명에 있어, 당업자에게 주지 저명한 기술에 대해서는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.
따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명은 유원료와 5 내지 7 부피%의 노니주스를 혼합한 후 20~30℃에서 5~15분 동안 균질화시키는 단계; 상기 균질물을 80~95℃에서 20~40분 동안 멸균한 후 40℃로 냉각시키고 유산균주를 첨가하는 단계; 및 pH가 4.5에 도달할 때까지 40 내지 45℃에서 5 내지 8시간 동안 발효시키는 단계; 를 포함하는, 노니주스 함유 요구르트의 제조방법 및 상기 제조방법에 의해 제조된 노니주스 함유 요구르트에 관한 것이다.
상기 유산균주는 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis, 스트렙토코서스 더모필러스(Streptococcus thermophilus) 및 락토바실러스 델브루키 에스에스피. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)의 혼합균주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 유원료는 본 분야에서 사용되는 것이라면 제한없이 사용할 수 있으며, 예를 들어 멸균유일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 균질화 단계에서 설탕 또는 올리고당, 펙틴 및 탈지분유를 추가 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 제조방법은 예를 들어, 2~8 부피%의 설탕, 0.1~0.4 부피%의 펙틴, 2~6 부피%의 탈지분유, 80~90 부피%의 멸균유와 5~7 부피%의 노니주스를 혼합한 후 균질화시키는 단계; 상기 균질물을 80~95℃에서 멸균한 후 40℃로 냉각시키고 유산균주를 첨가하는 단계; 및 pH가 4.5에 도달할 때까지 40 내지 45℃에서 5 내지 8시간 동안 발효시키는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 멸균 온도를 85℃일 수 있으며, 상기 발효 온도는 43℃일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 노니주스 함유 요구르트는 인간 및 동물 모두 섭취가능할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 동물은 가축 또는 반려동물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 노니주스 함유 요구르트를 포함하는 동물용 간식 조성물에 관한 것이다.
상기 동물은 가축 또는 반려동물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 조성물은 항산화 및 항염증 활성을 나타낼 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<제조예 1> 노니주스를 첨가한 호상 요구르트의 제조
노니주스는 태국산으로 100% 원액을 구입한 후 실험을 위해 filter paper(Whatman No.1)를 사용해 걸러내고 -70℃에 보관한 후 사용하였다.
요구르트 발효에 사용된 유산균은 SACCO S.R.L. (Via Manzoni 29/A 22071 Cadorago, Italy)로 Lactobacillus acidophilus, Bifidobacterium lactis, Streptococcus thermophilus와 Lacobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus로 구성되어 있는 시판 혼합균주를 사용하였다.
5 부피%의 설탕, 0.2 부피%의 펙틴, 4 부피%의 탈지분유, 83.8~91.8 부피%의 멸균유, 0~7 부피%의 노니주스를 넣고 10분간 균질화시킨 후 (Homogenizer T25, Janke and Kunkel type, Ika, Staufen, Germany), Water bath를 사용하여 85℃에서 30분간 멸균시킨 뒤 신속하게 40℃로 냉각시켰다. 복합 유산균주를 넣고 배양기에서 pH가 4.5에 도달할 때까지 43℃에서 5~8시간 발효시킨 뒤 냉장보관하였다.
<실시예 1>
노니주스를 첨가한 호상 요구르트의 pH 및 적정산도 측정
요구르트의 pH는 pH meter(ISTEC 735P, Korea)로 측정하였고, 측정하기 전에 표준용액 pH 4.00, 7.00, 10.00을 사용하여 전극을 보정하고, 적정산도를 측정하기 위하여 요구르트 3g에 증류수 27ml을 넣어 균질화하여 사용하였다. pH가 8.3이 되도록 0.1N NaOH 용액을 넣어 중화 적정한 뒤 다음 식에 대입하였다.
노니주스를 첨가한 호상 요구르트의 유산균수 측정
유산균 수 측정을 위해 ST 평판배지를 사용하였다. 노니주스 요구르트 (0, 1.0, 3.0, 5.0, 7.0%) 1g 에 멸균한 0.85% NaCl 9mL을 혼합하여 10배 단계 희석법으로 희석하였다. 희석한 시료 100㎕를 취하여 평판배지에 도말 후 37℃ 배양기(Biofree, Seoul, Korea)에서 24시간 동안 배양하였다. 배지 위에 생성된 colony의 수를 CFU/ml로 산출하여 로그 값으로 표시하였다.
노니주스를 첨가한 호상 요구르트 분석용 시료 준비
요구르트의 항산화 활성, 폴리페놀, 플라보노이드를 측정하기 위해 분석용 시료를 준비하였다. 요구르트 샘플 10g과 증류수 2.5ml을 섞은 뒤 pH 4.0으로 맞추었다. Water bath를 사용하여 45℃에서 10분간 살균한 후 7,000 rpm에서 10분간 원심분리 (Mega 17R, Hani l Science Industrial Co., Ltd)를 하였다. 상등액을 취하여 pH 7.0으로 조절한 후 분석을 위해 -70℃ deep freezer에 저장하였다.
총 폴리 페놀 및 플라보노이드 함량 측정
총 폴리페놀 함량을 측정하기 위해 Wei 등(2011)의 실험 방법으로 진행하였다. 우선, 샘플 100㎕과 1N Folin-Ciocal teu 용액 100㎕를 넣고 실온에서 3분간 방치한 다음 1N Na2CO3 200㎕을 넣고 암실에서 90분 반응시킨다. 표준물질은 gallic acid를 사용하였고 ELISA reader (Synergy 2, BioTek Instruments Inc.)를 사용하여 725nm에서 흡광도를 측정하였다.
총 플라보노이드 함량을 측정하기 위하여 Abeysinghe 등(2007)의 실험 방법으로 진행하였다. 샘플 100㎕, Diethylene glycol 500㎕ 및 1N NaOH 50㎕를 넣고 실온에서 60분 동안 반응시켰다. 표준물질은 quercetin을 사용하였고 흡광도는 420nm에서 측정하였다.
요구르트의 저장성 평가
요구르트의 저장성을 평가하기 위해 시료를 4℃에서 보관하여 사용하였고 7일 간격으로 21일 동안 생균수, pH, 적정 산도, 점도 및 색도를 측정하였다.
점도 측정
점도계(Brookfield, LV D-E, USA)는 Sipndle No. 63을 사용하여 50 rpm에서 5분 경과 후 1분 간격으로 3번 측정하여 평균값으로 나타내었다.
Hunter Lab color meter (Minolta chrometer CR-210, Japan)를 사용하여 L값 (lightness), a값 (redness), b값 (yellowness)을 측정하였다. 표준 백색판의 값은 L=97.83, a=-0.45, b=2.00이다.
<실시예 2> 관능검사
건국대학교에 재학 중인 대학원생 15명을 대상으로 관능평가를 실시하였고, 평가항목은 flavor (향미), smell (냄새), sweetness (단맛), texture (질감), color (색깔), appearance (외관), overall acceptability (전반적인 기호도)로 매우 나쁨 1점, 나쁨 2점, 보통 3점, 좋음 4점, 매우 좋음 5점을 표시하도록 하였다.
노니주스 첨가량(0, 1, 3, 5, 7%)이 다른 요구르트를 제조하여 기호성과 관능평가를 실시한 결과는 표 1과 같다. 맛(Flavor)에서는 1%, 3% 노니주스에서 각각 367±0.82, 360±1.06으로 유의적으로 높은 점수를 받았으며 색(Color)에서는 대조구와 1%에서 373±0.96, 373±0.70으로 유의적으로 높았다(p<0.05). 맛과 색을 제외한 모든 평가항목에는 유의성이 나타나지 않았다. 즉, 1% 노니주스가 기호도에서 유의적인 결과를 나타내었다.
Deshpande 등 (2019)의 연구결과, 노니주스(0, 3, 6, 9%)를 요구르트에 첨가시 모든 평가 항목(외관, 맛, 색깔, 향, 질감)에서 노니주스가 증가할수록 낮은 점수를 받았다. Sung과 Choi (2014)의 연구에 따르면 오디 분말(0.5, 1, 3%)을 첨가한 요구르트에서 1% 첨가한 요구르트가 관능평가에서 가장 높은 점수를 받았는데, 본 연구에서 노니주스를 1% 첨가하였을 때 높은 점수를 받은 결과와 유사하였다. 노니는 특이한 냄새와 쓴맛이 강한 과일이다(Mathivanan 등, 2005). 전반적인 선호도에서는 유의적 차이가 나타나지 않았지만 노니주스를 첨가하였을 때 맛과 향을 포함한 전반적인 기호도에는 부정적인 영향을 미치지 않은 것으로 판단된다. 따라서 본 연구에 사용된 노니주스를 첨가한 요구르트를 제조하였을 때 기능성뿐만 아니라 기호도 평가에서도 긍정적인 영향을 미칠 것으로 사료된다.
<실시예 3> 항산화 활성 측정
DPPH 및 ABTS 측정
2,2-diphenyl-1-picrydrazyl (DPPH) radical 소거능은 Kang(2018)의 실험 방법으로 진행하였다. 시료 32 ㎕, 증류수 128㎕, 0.15 mM DPPH 용액(Sigma, Co. USA) 640㎕를 넣고 15분간 암실에서 반응시켰다. 흡광도는 515nm에서 측정하였다.
2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid, ABTS) radical 소거능은 Kang (2018)의 실험 방법으로 진행하였다. 7.4mM ABTS (Sigma, Co. USA)와 2.5mM potassium persulfate (Sigma Co. USA) 를 1:1 비율로 혼합한 뒤 16시간 반응시켰고 이 용액은 흡광도 734nm에 측정하여 0.700±0.05가 되도록 증류수로 희석하여 사용되었다. ABTS 용액 180㎕, 샘플 20㎕를 넣고 15분간 암실에서 반응시킨 후 흡광도 734nm에서 측정하였다.
세포 배양
인간 대장암세포인 HT-29 세포를 10% FBS (Fetal Bovine Serum)와 1% penicillin-streptomycin에 혼합하여 RPMI-1640 media에서 5% CO2, 37℃ 가습배양기를 사용하여 배양하였다.
Reactive Oxygen Species (ROS) 측정
6 well plate에서 세포를 80%까지 배양한 후 요구르트 샘플 50㎕를 넣고 16시간 동안 전처리하였다. LPS (Sigma, USA) 1㎕/㎖ 농도를 사용하여 4시간 동안 처리한 후 세포 내 ROS를 표지하는 지표인 DCF-DA (2',7'-dichlorofiuorescein diacetate) 형광염료를 10uM 사용하여 염색하였다. 염색한 후 세포를 Cold 1X PBS로 두 번 세척하여 생성된 ROS는 fluorescent microscope (Eclipse Ti2-U, Nikon Co. Ltd, Tokyo, Japan)을 사용하여 관찰하였다. 세포의 ROS를 정량화하기 위해 Image J (National Institute of Health, Bethesda, Md.) 프로그램을 이용하여 분석하였다.
<실시예 4> 마우스에서의 항염증 효과 확인
실험동물
본 연구의 동물실험은 건국대학교 동물실험윤리 위원회 (IACUC) 규정에 따라 진행되었다 (승인번호: KU20009). 체중 19~20g, 7주령의 BALB/c mice를 두열바이오텍(Korea)에서 구입하였으며 실험 전 일주일 동안 적응기간을 주었다. 사육실 실내 온도는 22±23℃, 습도는 50±5%를 유지하고 명암 주기 12cycle에서 사육하였다. 적응기간 동안에는 모든 군에서 같은 멸균사료 (Teklad Global 18% Protein Rodent Diet)와 멸균 수돗물을 자유롭게 섭취하도록 하였다.
대장염 유발 및 시료 투여
도 1에 도시된 바와 같은 스케쥴에 따라 대장염 유발을 위해 Dextran Sodium sulfate (DSS) (MPbio, CA, USA)를 물에 2.5% 녹인 후 7일간 자유 음수로 공급하여 대장염과 설사를 유발하였다. 한 군당 10마리를 배치, in vitro 실험에서 항산화 효과가 가장 높은 7% 노니주스 요구르트를 실험에 사용하였다.
C군: 멸군 사료(Tekland Golbal 18% Pr otein Rodent Diet) + 멸균 수돗물, DSS군: 멸균 사료+ 멸균 수돗물에 2.5% (w/v) DSS 함유, CY군: 멸균 사료에 동결건조한 control yogurt (2%, w/w) 함유 + 멸균 수돗물에 2.5% (w/v) DSS 함유, NY군: 멸균 사료에 동결건조한 7% noni juice yogurt(2%, w/w) 함유+멸균 수돗물에 2.5% (w/v) DSS 함유된 총 4군으로 무작위 배치하였다.
체중, 비장과 간 무게 및 장 길이 측정
마우스의 체중은 DSS를 감염시킨 7일 동안 매일 동일한 시간에 측정되었다. 실험 종료 후 안락사를 진행하였고, 맹장을 시작으로 대장이 끝나는 지점까지 적출하여 대장 길이를 측정하였다. 비장과 간 무게는 미세저울을 이용하여 측정하였다.
대장조직의 조직병리학적 관찰
마우스의 대장 앞부분을 10% formalin 용액에 넣어서 24시간 동안 고정시켰다. Ethanol을 사용하여 탈수시킨 후 파라핀을 사용하여 조직표본을 제작 후 5㎛로 절단하여 슬라이드에 제작하였다. 술잔세포의 손실, 점막의 염증세포, 점막 밑층의 염증세포와 점막비후를 측정하였다.
RNA 분리 및 cDNA 합성
마우스의 비장조직을 PBS(Phosphate buffered saline)로 세척하고 액체 질소를 사용하여 조직을 급속 냉동시켰다. Homogenizer를 사용하여 조직을 균질화시킨 뒤 Universal RNA extraction kit (Bioneer, Korea)를 사용하여 RNA 분리하였다. RNA는 Macime RT premix (Oligo dT primer)을 사용하여 cDNA로 역전사시킨 뒤 real time PCR (RT-PCR)의 주형으로 사용하였다.
Real-time PCR
RT-PCR은 검출 시스템 Bio-Rad CFX96 real time PCR 기계를 사용하여 수행되었다. Pro-inflammatory cytokines (TNF-α, INF-γ, IL-1β, IL-6)와 anti-inflammatory cytokines (IL-10) 및 house keeping gene (β-actin)에 대한 PCR 프라이머는 마크로젠에서 구입하였다(표 2). AccuPower GreenStar RT-qPCR Master Mix (Bioneer, Korea)를 사용하여 정량적 RT-PCR을 수행하였다.
<실시예 5> 통계처리
실험사료 및 실험설계
통계는 SPSS (Statistical package for social science, IBM, version 25) 프로그램을 사용하였고 다중비교는 일원배치 분산분석 (one-way ANOVA)으로 비교검정 후 Duncan's multiple range test을 사용하였으며 p<0.05, p<0.01 수준에서 유의성을 검증하였다. 모든 실험은 3반복 이상으로 진행하였다.
<실시예 6> 노니주스 요구르트의 성분 및 생리활성 특성
노니주스 요구르트의 일반성분 분석
노니주스가 0∼7% 첨가된 요구르트의 일반성분 분석 결과는 다음 표 3과 같다. 수분함량은 노니주스 1%를 넣은 요구르트에서 유의적 차이가 가장 높았으며 대조구와 첨가구를 비교하였을 때 첨가구에서 수분함량이 증가하는 경향을 보였다(p<0.05) 마찬가지로 노니주스 1%를 넣은 요구르트에서 지방함량이 가장 높았으며 대조구보다 첨가구에서 증가하는 경향을 보였다(p<0.05).
또한 회분과 유당 함량에서는 대조구와 처리구를 비교하였을 때 노니주스를 넣은 모든 첨가구에서 유의적으로 높은 경향을 나타내었다(p<0.05). 하지만 단백질과 총 고형분에서는 유의차가 나타나지 않았다. Deshpande 등 (2019)의 보고에 따르면 노니주스 농도가 증가할수록 수분은 증가하지만, 지방, 단백질, 탄수화물, 회분 함량은 크게 영향을 받지 않았다.
즉, 노니주스 1 내지 7%를 첨가한 요구르트의 경우, 수분, 회분, 지방 및 유당 함량은 대조구보다 유의적으로 높게 나타났다.
pH 및 적정산도
노니주스 첨가량(0, 1%, 3%, 5%, 7%)에 따른 요구르트 발효 시간별 pH 측정 결과는 표 4에 나타냈다. 발효시간에 따른 대조구 포함 모든 처리구의 pH는 유의적으로 낮게 나타났다(p<0.05). 발효 0시간에는 노니주스 7%를 첨가한 처리구에서 pH 6.58±0.01로 가장 낮게 나타났지만, 발효 2시간과 4시간에서는 대조군의 pH가 5.11±0.02, 4.66±0.01로 가장 낮았다(p<0.05). 발효 6시간에는 1% 노니주스 pH가 4.46±0.01로 가장 낮게 나타났고 발효 8시간에는 7% 노니주스 첨가구에서 pH 4.36±0.02로 가장 낮게 나타났다(p<0.05).
표 5에 나타낸 바와 같이 발효시간에 따라 대조구와 모든 첨가구의 적정산도(TA)는 유의적으로 증가하였다(p<0.05). 발효 0시간대에는 노니주스 7% 첨가구, 발효 2시간대에는 대조구와 노니주스 3% 첨가구에서 적정산도가 높게 나타났다(p<0.05). 발효 6시간에는 대조구와 노니주스 1% 첨가구에서 적정산도가 높게 나타났다. 발효 4, 8시간대에는 대조구와 첨가구 사이에 유의적인 차이가 존재하지 않았다.
본 연구에서 제조된 요구르트는 대조구와 모든 처리구에서 발효 시간에 따라 pH는 감소하였으며 TA는 증가하였다. 이전 연구결과에 따르면 계피와 감초를 첨가한 요구르트는 발효시간 동안 pH는 감소하였고 적정산도는 증가하였다(Behrad 등, 2009). 또한 24시간 동안 발효시킨 아로니아 주스를 첨가한 요구르트에서도 pH가 감소하였고 TA는 증가하였다(Nguyen과 Hwang, 2016).
노니주스 요구르트의 유산균수
노니주스 첨가량(0, 1, 3, 5, 7%)에 따른 요구르트 발효 시간별 유산균수 측정 결과는 표 6에 나타냈다. 발효 0시간에서 2시간까지 대조구와 모든 처리구에서 유산균수가 유의적으로 증가하였으며(p<0.05), 2시간부터 8시간까지 비슷한 양상으로 유지되었다. 특히, 발효 8시간에서 대조구는 8.77(log10CFU/ml), 첨가구는 8.88∼9.00 (log10 CFU/ml)으로 대조구와 비교하였을 때 모든 첨가구의 유산균수가 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05).
Vasiljevic와 Shah(2008)에 따르면 일반적으로 유제품에 생균제가 6∼8(log10CFU/ml) 이상 함유되어야 한다고 보고하였다. 본 실험에서는 발효 8시간에서 노니주스를 첨가한 요구르트가 대조군에 비하여 유산균수가 유의적으로 높게 나타났다.
총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량
식물과 과일에서 페놀 화합물은 가장 중요한 요소 중 하나이며, 다량의 폴리페놀이 함유되어 있다(Sullivan, 2015; Ignat 등, 2011). 폴리페놀은 생체 내에서 건강상의 이점을 제공하여 항산화, 노화방지, 암과 같은 질병을 예방하는 데 중요한 역할을 한다(Abbas 등, 2017). 플라보노이드는 일반적으로 녹색식물에 많이 분포되어있는 페놀 2차 대사산물이며 활성산소를 억제하고 항염증에 효과적이다(Samanta 등, 2011; Imran 등, 2019).
노니주스(0, 1%, 3%, 5%, 7%)를 첨가한 요구르트의 분석용 시료로 폴리페놀과 플라보노이드 함량을 측정한 결과는 도 2에 나타냈다. 총 폴리페놀 함량은 노니주스 첨가량이 증가할수록 폴리페놀 함량도 증가하여 유의적 차이가 나타났다(p<0.05). 폴리페놀 함량은 노니주스 7% 처리구에서 52.30 /mL로 가장 높게 나타났으며 대조구는 36.17 ㎍/mL로 가장 낮은 함량을 나타내었다. 플라보노이드 함량은 노니주스 7% 첨가구에서 30.80 ㎍/mL로 가장 높은 함량을 나타내었고 대조구는 23.75 ㎍/mL로 가장 낮은 함량을 나타내었다. 첨가량이 증가할수록 모든 처리구에서 플라보노이드 함량이 유의적으로 증가하였다(p<0.05).
요구르트에 노니주스 첨가량이 증가할수록 폴리페놀과 플라보노이드 함량이 증가하였다. Shamrulazhar (2011)의 연구에 따르면 노니주스(0, 1, 5, 10%) 첨가량이 증가할수록 총 폴리페놀 함량이 증가하였다. 아로니아 주스를 요구르트에 농도별로 첨가하였을 때 첨가량이 증가할수록 폴리페놀, 플라보노이드 함량이 증가하였다는 보고와 일치하였다(Sah, 2015).
<실시예 7> 노니주스 요구르트의 저장 시 생화학적 품질 변화
pH 및 적정산도
요구르트를 4℃에 저장하여 21일 동안 7일 간격으로 pH의 변화를 측정 한 결과는 도 3에 나타냈다. 저장기간 동안 pH는 대조군과 모든 처리 구에서 지속적으로 감소하였다(p<0.05). 적정산도의 변화를 측정한 결과는 도 4에 나타냈다. 저장기간 동안 적정산도는 대조군과 모든 처리구에서 비슷한 양상을 보였다(p<0.05). Shamrulazhar (2011)의 연구에 따르면 저장기간 동안 pH와 TA는 노니주스 요구르트와 대조구 사이에 유의적 차이가 나타나지 않았다고 보고하였다. 약용식물인 감초와 bilberry를 요구르트에 첨가하여 8일 정도 저장하였을 때 모든 처리구에서 pH는 감소하였고 적정산도는 증가하였다(Michael 등, 2015).
이러한 결과는 저장기간 동안 유산균의 대사 활동이 여전히 진행되어 pH가 감소되고 산도가 증가한 것으로 사료된다.
유산균수
요구르트를 4℃에 저장하여 21일 동안 7일 간격으로 유산균수를 측정한 결과는 도 5에 나타냈다. 대조구와 모든 처리구의 유산균수는 저장 후 7일까지는 유의적인 차이가 나타나지 않았지만, 저장 후 14일에는 대조구와 처리구에서 유의적 차이가 나타나 5% 노니주스 처리구에서 가장 높은 유산균수를 나타냈다(p<0.05). 저장 21일차에는 5% 이외에 3% 첨가구에서도 높은 유산균수가 측정되었다(p<0.05). 결과적으로 노니주스가 첨가된 처리구에서는 대조구에 비하여 유산균수가 높게 나타났다. Shamrulazhar (2011)의 연구 결과, 21일 저장기간 동안 대조구보다 노니주스를 요구르트에 첨가한 처리구에서 유산균수가 더 높았다.
Michael (2015) 연구에 따르면, 요구르트에 sodium acetate가 함유된 식물추출물 첨가시 유산균의 수가 유의적으로 증가한다고 보고하였고, 본 연구에서도 노니주스를 첨가한 요구르트에서 유산균의 수가 유의적으로 높아졌다. 따라서 노니주스 추출물이 저장기간 동안 유산균수의 증대에 영향을 미치는 것으로 판단된다.
점도
노니주스를 첨가하여 제조된 요구르트를 21일 동안 7일 간격으로 점도 변화를 측정한 결과는 표 7에 나타냈다. 저장 0일차와 21일차를 비교하였을 때 3%, 5% 노니주스의 처리구에서 점도가 유의적으로 증가하였다. 대조구를 포함한 1%, 7% 노니주스의 처리구에서는 점도가 유의적으로 감소하였다(p<0.05). 즉 노니주스가 3%, 5% 함유된 요구르트의 점도가 가장 유의적으로 높았다(p<0.05).
요구르트의 품질평가에서 중요한 요소는 질감, 점도, 색상이 있으며 이것은 소비자의 선호도와 수용도를 결정하는 데 중요한 역할을 한다(Mousavi 등, 2019). 점도는 요구르트의 총 고형분 함량, 단백질 가수분해 정도, 산 생성력에 영향을 미친다 (Tamime와 Robinson, 1999). Basiri 등 (2018)의 연구에 따르면 Carboxy methyl cellulose와 아마씨 점액을 요구르트에 첨가하여 28일 동안 5일 간격으로 점도를 측정하였을 때 모든 처리구에서 점도가 점차적으로 감소하였다. 반면에 21일 저장기간에 따라 모링가 추출물이 함유된 요구르트는 대조군 요구르트와 비교하였을 때 점도가 유의적으로 높았고 본 연구와 비슷한 결과가 나타났다(Zhang 등, 2019). 저장기간 중 유산균수가 가장 높았던 3%, 5% 요구르트의 영향을 받아 산 생성력이 높아지면서 점도가 높아진 것으로 판단된다.
색도
노니주스를 첨가하여 제조된 요구르트를 21일 동안 7일 간격으로 저장하여 색도 변화를 측정한 결과는 표 8에 나타냈다. 색의 밝기를 나타내는 명도인 L값은 노니주스의 첨가량이 증가할수록 대조군에 비하여 낮아지는 것을 알 수 있었다(p<0.05). 적색을 나타내는 a값은 농도가 높을수록 증가하였으며 5% 노니주스를 첨가하였을 때 유의적 차이가 가장 높았다(p<0.05). 황색을 타내는 b값은 노니주스의 첨가량이 높을수록 증가하였으며 저장기간 동안 같은 양상으로 유지되었다. 21일 저장기간 동안 7% 노니주스가 첨가된 요구르트에서 가장 높았다(p<0.05).
노니주스의 첨가량이 증가할수록 명도 L값은 낮아지고 적색을 나타내는 a값과 황색을 나타내는 b값은 노니주스의 농도에 따라 유의적으로 증가하였다. 노니주스의 색깔이 갈색에 가깝기 때문에 밝기가 낮아지고 적색과 황색이 높게 측정된 것으로 판단된다.
<실시예 8> 노니주스 요구르트의 항 화 활성
DPPH 및 ABTS 활성
자유라디칼 소거능은 천연물질 및 식물의 항산화 능력을 분석하는 데 사용된다. 세포가 산소를 이용하여 에너지를 생성할 때 미토콘드리아의 전자전달계를 통해 자유라디칼이 생성된다(Pham-Huy 등, 2008). 자유라디칼은 산화과정을 통해 과도한 ROS를 생성하여 생체 내에 단백질, 지질 및 DNA를 손상시켜 암, 심혈관 질환을 일으키는 주요 요인으로 작용한다(Eghbaliferiz와 Iranshahi 2016).
노니주스(0%, 1%, 3%, 5%, 7%)를 첨가한 요구르트의 분석용 시료로 자유라디칼 소거능을 측정한 결과는 도 6에 나타냈다. DPPH radical 소거활성의 실험결과는 노니주스 5%, 7%에서 가장 높은 유의적 차이가 나타났으며 첨가량이 증가할수록 높아지는 경향을 보였다(p<0.05). ABTS radical 소거활성의 결과는 첨가구와 대조구와 비교했을 때 유의적 차이가 나타났고 노니주스의 첨가량이 증가할수록 높아지는 경향을 보였다(p<0.05). Shamrulazhar (2011)의 연구 결과, DPPH radical 소거능으로 측정하였을 때 노니주스(0, 1, 5, 10%) 첨가량이 증가할수록 높은 활성을 보였다.
Sah 등 (2015) 연구에 따르면 아로니아 주스가 첨가된 요구르트를 농도별로 DPPH 및 ABTS radical 소거능을 측정하였을 때 농도가 높을수록 소거 활성이 높았다. 또한 고추 주스가 첨가된 요구르트를 농도별로 항산화 활성을 측정하였을 때 대조구 요구르트와 비교하였을 때 유의적으로 증가하는 경향을 보였고 이는 본 연구와 비슷한 양상을 보였다(Kang 등, 2018). 따라서 본 연구에서 사용된 노니주스의 첨가는 기존 요구르트의 항산화능을 개선시키는 효과가 있는 것으로 사료된다.
인간 대장암세포 HT-29에서 항산화 활성
인간 대장암세포인 HT-29에 노니주스를 첨가하여 항산화 효과를 측정한 결과는 도 7에 나타냈다. 활성산소종(Reactive oxygen species, ROS)의 과도한 생성은 세포와 조직을 손상시켜 염증성 장 질환을 유발할 수 있다(Roessner 등, 2008). 세포에 높은 ROS 생성을 유도하기 위하여 LPS (1 /mL)를 처리하였고 노니주스 요구르트를 첨가하였다. HT-29 세포에 ROS 발생 정도를 측정하기 위해 DCF-DA 염료를 사용하여 녹색으로 염색하였다.
LPS를 처리하지 않은 no treatment와 LPS만 처리한 것을 비교하였을 때 높은 유의적 차이가 나타났다(p<0.001). LPS만 처리한 것과 LPS에 요구르트를 첨가한 것을 비교하였을 때 ROS의 농도가 유의적으로 낮아졌다(p<0.001). 노니주스를 첨가하지 않는 대조구와 첨가구의 형광의 강도 차이를 보면 첨가할수록 낮아지는 경향을 보였다.
이전 연구에 따르면 노니 과일 추출물은 인간 대장 상피세포인 Caco-2에서 LPS로 유도된 ROS 생산을 억제하여 산화 및 염증에 효과가 있다고 보고하였고 본 실험과 유사하였다(Huang 등, 2015). 또한 N-butanol 추출물은 AGE로 유도된 인간 탯줄 정맥 내피세포인 HUVECs에서 ROS 생성을 감소시킬 수 있다고 보고하였다(Ishibashi 등, 2017).
본 실험결과는 노니주스의 첨가농도가 증가할수록 산화스트레스는 감소하는 것을 볼 때 (p<0.001), 노니주스가 7% 첨가된 요구르트는 우수한 항산화능을 가진 것으로 판단된다. 따라서, 노니주스를 요구르트에 첨가하면 ROS를 감소시켜 염증성 장 질환 예방 및 치료에 도움을 줄 수 있을 것으로 시사하고 있다.
<실시예 9> 노니주스 요구르트의 항염증 효과
마우스의 성장에 미치는 영향
IBD의 치료법을 연구하기 위해 수많은 동물 모델이 개발되고 있으며 그 중 DSS를 사용하여 대장염을 유발하는 방법이 널리 사용되고 있다(Chassaing 등, 2014). 체중감소는 DSS 유발로 인한 질병을 평가하는 방법 중 하나이다. DSS 유발기간 동안의 마우스 체중 변화와 1일 섭취량은 표 9에 나타냈다.
실험 시작 0일차에는 처리구와 대조구 사이에 체중 차이가 관찰되지 않았다. 1일 후 DSS군에서 체중이 감소하였고(p<0.05), 2∼6일까지 대조구와 처리구에 유의차가 나타나지 않았으나, DSS+NY군에서 1일 사료 섭취량은 증가하였다. 7일 차에 대조구의 체중이 가장 높았으며 DSS+NY군에서 DSS군과 비교하였을 때 체중이 증가하는 경향을 보였다(p<0.01). 실험기간 동안의 1일 사료섭취량은 DSS+CY군과 DSS+NY 군에서 유의적으로 높았다(p<0.05).
선행연구에 따르면 DSS 유발시킨 뒤 7일차에 Lactobacillus casei를 섭취한 DSS 유발 BALB/c 모델에서 DSS 단독 처리군과 비교하였을 때 체중이 증가하는 결과를 나타내었다(Herias 등, 2005). 또한 Jin 등 (2019)의 연구 결과에 따르면 노니 추출물을 섭취한 IBD 마우스에서 DSS군과 비교하였을 때 체중이 유의적으로 증가하는 경향을 보였다. 본 연구 결과에서도 마찬가지로 7일차에 DSS+NY군에서 DSS군과 비교하였을 때 체중이 증가하는 경향을 보여 DSS+NY군이 체중감소 이후 회복 효과가 있는 것으로 사료된다.
마우스의 장 길이, 비장 및 간의 무게에 미치는 영향
DSS에 감염되었을 때 마우스의 임상 증상으로 결장은 현저하게 단축된다(Chassaing 등, 2014). DSS 첨가에 따른 변화된 장 길이와 함께 비장, 간 무게의 결과는 도 8 및 9에 나타냈다.
대조군의 장 길이가 975 cm로 유의적으로 가장 길었던 반면, DSS군의 장 길이는 757 cm로 가장 짧았다(p<0.001). DSS+NY군의 장 길이는 850 cm로 DSS군과 비교하였을 때 길며 유의적인 차이가 나타났다( p<0.001). 비장 무게는 C군에서 0.06g으로 가장 낮은 유의적 차이를 나타내었다(p<0.05). 간의 무게는 유의적 차이가 나타나지 않았다.
선행연구에 따르면 노니 열수추출물을 섭취한 IBD 마우스는 DSS군과 비교하였을 때 결장이 현저히 증가하는 결과를 나타내었다(Jin 등, 2019). 본 연구결과에서도 DSS+NY군이 DSS군과 비교하였을 때 결장의 길이가 증가하여 NY 투여가 IBD 임상 증상에 긍정적으로 치료 효과가 있을 것으로 사료된다.
마우스 대장조직의 병리학적 분석
대장 원위 부분을 H&E로 염색하여 조직 손상도를 확인하기 위해 술잔세포의 손실(Loss of goblet cells), 점막 밑층의 염증세포(Inflammatory cells in submucosa), 점막의 염증세포(Inflammatory cells in mucosa)를 점수화하여 나타내었고 점막비후(Mucosa thickening)를 측정하여 나타낸 결과는 도 10 및 11에 나타냈다.
점수로 나타낸 3가지 항목에서 DSS군이 대조군 C군에 비하여 유의적으로 높은 점수를 보였다(p<0.05). 술잔세포 손실과 점막의 염증세포에서 DSS+NY군이 DSS와 DSS+CY에 비하여 유의적으로 낮은 점수를 나타내었다(p<0.05). 점막 밑층 염증세포에서는 DSS+NY군이 DSS군과 비교하였을 때 유의적으로 낮은 점수를 나타내었지만 DSS+CY과는 유의차가 나타나지 않았다. 점막 비후는 DSS군이 다른 군에 비해 유의적으로 두꺼운 경향을 보였다 (p<0.05).
본 연구결과는 DSS군이 다른 군들과 비교하였을 때 유의적으로 높은 점수를 받았으며 DSS+NY군이 DSS와 비교하였을 때 유의적으로 낮은 점수를 받아 대장조직에서 노니주스 요구르트 급이가 항염증 효과를 나타내어 기능성을 시사하였다.
항염증 사이토카인과 염증성 사이토카인의 발현에 미치는 영향
IFN-γ는 T세포와 NK(Natural Killer) 세포에 의해 생성되는 염증성 사이토카인이며, IFN-γ와 IL-6 생성 증가는 IBD 환자의 점막 염증 생산을 일으키는데 관련이 있다(Joseph 등, 1998; Coutinho 등, 2017). IL-10은 항상성을 유지하는데 중요한 역할을 작용하는 항염증성 사이토카인이며 대식세포 및 T 세포의 기능을 억제시킨다(Li 등, 2014). IL-10의 결핍은 장 염증을 악화시킨다(Kuhn 등, 1993; Zigmond 등 2014). Xiao 등 (2016)은 IL-6 및 TNF-α 단클론항체를 DSS 유도된 IBD 모델에 투여하였을 때 장 조직을 변화시키고 장 투과율을 현저하게 저하시켰다고 보고하였다. 따라서 전 염증성 사이토카인에 속하는 TNF-α, IFN-γ, IL-6 및 IL-1 β의 생산 증가는 장 염증의 유도와 관련이 있으며, 치료는 이것을 감소시키는데 중점을 둔다(Azuma 등, 2010).
RT-PCR을 사용하여 마우스 비장 조직의 사이토카인 mRNA 발현정도는 도 12에 나타낸 바와 같다. TNF-α와 IL-1β에서는 그룹들 간에 유의적인 차이는 없었다. IFN-γ의 mRNA 발현정도는 DSS군에서 가장 높게 발현되었고 DSS+NY군이 C군과 비교하였을 때 유의적인 차이는 없었다. DSS+NY군은 DSS+CY와 비교하였을 때 유의적으로 높게 발현되었다( p<0.01). IL-6의 mRNA 발현정도는 DSS군에서 가장 높게 발현되었으며 나머지 군에서는 유의적인 차이가 없었다. 항염증 사이토카인에 속하는 IL-10 에서는 DSS군이 가장 낮게 발현되었으며 DSS+NY군에서 C군과 비교하였을 때 보다 더 높게 발현되었다.
Coutinho 등 (2017)의 연구결과에 따르면 마우스의 조직을 ELISA를 사용하여 사이토카인을 분석한 결과 노니 과일주스를 섭취한 IBD 마우스는 염증성 사이토카인에 속하는 TNF-α 및 IFN-γ의 생산을 감소시켰다고 보고하였다. 이와는 대조적으로 Stevens 등 (1992)은 PCR을 사용하여 사이토카인은 분석하였을 때 대조군과 UC, CD 모델 사이에서 TNF-α의 mRNA 발현 정도는 차이가 없었으며 IL-6의 mRNA 발현에서는 UC, CD 모델이 대조군에 비해서 높게 나타났다고 보고하였다. 또한 타우린을 DSS 유도된 마우스에게 섭취시켰을 때 대식세포 염증성 단백질 2(MIP-2) 발현 증가를 억제시켰지만 IL-1β, TNF-α의 발현은 억제하지 않았다(Zhao 등, 2008).
본 연구에서는 DSS+NY 군과 DSS군을 비교하였을 때 TNF-α와 IL-1β의 RNA의 발현정도는 유의적 차이가 나타나지 않았고 IL-6와 IFN-γ mRNA의 발현정도는 DSS 군과 비교하였을 때 감소하였다. 이러한 결과는 노니주스를 요구르트에 첨가시 IBD 의 예방 또는 치료제로서 적용될 수 있음을 시사하였다.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.
Claims (5)
- 유원료와 5 내지 7 부피%의 노니주스를 혼합한 후 균질화시키는 단계;
상기 균질물을 80~95℃에서 멸균한 후 40℃로 냉각시키고 유산균주를 첨가하는 단계; 및
pH가 4.5에 도달할 때까지 40 내지 45℃에서 5 내지 8시간 동안 발효시키는 단계;
를 포함하는, 노니주스 함유 요구르트의 제조방법. - 제1항에 있어서, 상기 유산균주는 락토바실러스 아시도필러스(L actobacillus acidophilus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis, 스트렙토코서스 더모필러스(Streptococcus thermophilus) 및 락토바실러스 델브루키 에스에스피. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)의 혼합 균주인 것인, 노니주스 함유 요구르트의 제조방법.
- 제1항 또는 제2항의 제조방법에 의해 제조되는 노니주스 함유 요구르트.
- 제3항에 있어서, 상기 노니주스 함유 요구르트는 항산화 및 항염증 활성을 갖는 것인, 노니주스 함유 요구르트.
- 제3항의 노니주스 함유 요구르트를 포함하는 동물용 간식 조성물.
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