KR20230029774A - 인간화 항-emap ii 치료용 항체 - Google Patents

Abstract

본 개시는 내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II에 결합하는 단일클론 항체 및 이를 이용한 치료 방법을 제공한다.

Description

인간화 항-EMAP II 치료용 항체

본 발명은 35 U.S.C. § 119(e)에 따라 2020년 6월 29일에 출원된 미합중국 가특허출원 번호 제63/045,687호의 출원일에 대한 우선권을 주장하며 그 전체 내용은 본 명세서에서 참조로서 포함된다.

내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II (Endothelial monocyte activating polypeptide II, EMAPII)는 전체적으로 인간 건강에 막대한 영향을 끼치는 매우 다양한 병리와 관련된 전구세포자멸 및 단핵구 화학주성 사이토카인(proapoptotic and monocyte chemoattractant cytokine)이다. 특히, EMAPII는 담배 연기로 유발된 폐기종의 매개체인 것으로 드러났다. EMAPII를 표적으로 하는 신규한 치료에 대한 본 기술분야의 요구가 있다. 본 발명은 그러한 요구를 해결한다.

일 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인; 및 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인;을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(humanized anti-endothelial monocyte activating polypeptide II(항-EMAPII)) 항체를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 10에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 11에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 키메릭 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(chimeric anti-endothelial monocyte activating polypeptide II(항-EMAPII)) 항체를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 11 중 어느 하나에서 설명된 아미노산 서열을 인코딩(encoding)하는 핵산을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 재조합 벡터로 형질전환된 세포를 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 형질전환된 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는 항체 제조 방법을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 항체 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 폐기종(emphysema)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 기관지폐 이형성증(bronchopulmonary dysplasia)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II (EMAPII) 매개 질환의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

특정 실시예에서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가진다.

특정 실시예에서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가진다.

특정 실시예에서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가진다.

특정 실시예에서, 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가진다.

특정 실시예에서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 10에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖고, 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 11에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는다.

본 발명의 특정 실시예에 대한 다음의 상세한 설명은 첨부된 도면과 함께 읽을 때 더 잘 이해될 것이다. 본 발명을 예시하기 위한 목적으로, 도면은 특정 실시예를 나타낸다. 그러나, 본 발명은 도면에 도시된 실시예의 정확한 배열 및 수단으로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.
도 1은 인간 proEMAPII에 대한 LC1 (SEQ ID NO. 6)을 가지는 인간화 항체들의 ELISA(enzyme linked immunosorbent assays)를 도시한다.
도 2는 인간 proEMAPII에 대한 LC2 (SEQ ID NO. 7)를 가지는 인간화 항체들의 ELISA(enzyme linked immunosorbent assays)를 도시한다.
도 3은 인간 proEMAPII에 대한 LC3 (SEQ ID NO. 8)를 가지는 인간화 항체들의 ELISA(enzyme linked immunosorbent assays)를 도시한다.
도 4는 인간 proEMAPII에 대한 LC4 (SEQ ID NO. 9)를 가지는 인간화 항체들의 ELISA(enzyme linked immunosorbent assays)를 도시한다.
도 5는 인간 proEMAPII에 대한 8개의 항체들의 ELISA 스크린을 도시한다.
도 6은 인간 성숙 EMAPII에 대한 8개의 항체들의 ELISA 스크린을 도시한다.
도 7은 마우스 proEMAPII에 대한 8개의 항체들의 ELISA 스크린을 도시한다.
도 8은 마우스 성숙 EMAPII에 대한 8개의 항체들의 ELISA 스크린을 도시한다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 시험을 위한 실시에 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법이 본원에 기술된다. 본 발명을 기술하고 청구함에 있어, 다음의 용어가 사용될 것이다. 또한, 본원에 사용된 용어는 특정 실시예를 기술하기 위한 것일 뿐이며, 제한하려는 의도가 아님을 이해해야 한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 다음의 각 용어는 본 섹션에서 그와 관련된 의미를 갖는다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 일반적으로 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법과 세포 배양(cell culture), 분자 유전학, 분석 화학, 면역학, 및 핵산 화학 및 혼성화, 단일클론 항체 합성 및 생물학적 및 생물물리학적 특성화에서의 실험 과정은 해당 기술 분야에 잘 알려져 있고 일반적으로 이용되는 것들이다. 표준 기술 또는 이들의 변형이 화학 합성 및 화학 분석에 사용된다.

단수형 단어(관사 "a" 및 "an")는 본원에서 단어(관사)의 문법적 대상의 하나 또는 하나 이상(즉, 적어도 하나)를 가리키기 위해 사용된다. 예를 들어, "요소(an element)"는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(Endothelial monocyte activating polypeptide II)" 또는 "EMAPII"는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 가리킨다. EMAPII는 34 kD 전구 형태(pro-form) ("pro-EMAPII", "프로-EMAPII") 또는 프로테아제에 의한 단백질분해 절단(proteolytic cleavage) 시 18 kDa 성숙 단백질 ("mature-EMAPII", "성숙-EMAPII")로 세포에서 방출된다. 성숙 EMAPII의 인간 동족체(homolog)는 서열 SEQ ID NO: 12: SKPIDVSRLDLRIGCIITARKHPDADSLYVEEVDVGEIAPRTVVSGLVNHVPLEQMQNRMVILLCNLKPAKMRGVLSQAMVMCASSPEKIEILAPPNGSVPGDRITFDAFPGEPDKELNPKKKIWEQIQPDLHTNDECVATYKGVPFEVKGKGVCRAQTMSNSGIK를 포함한다.

용어 "EMAPII"는 달리 명시되지 않는 한 이 단백질의 프로(pro, 전구) 및 성숙(mature) 형태 모두를 가리키는 데 사용될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약(about)"은 본 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이며, 이것이 사용되는 문맥에 따라 어느 정도 달라질 것이다. 본원에서 사용된 바와 같이 양, 농도, 시간적 지속기간 등과 같이 측정가능한 값을 언급할 경우, 용어 "약"은 명시된 값으로부터 ±20% 또는 ±10%, 더 바람직하게는 ±5%, 보다 더 바람직하게는 ±1%, 그리고 훨씬 더 바람직하게는 ±0.1%의 변화(variation)를 포함하는 것을 의미하는데, 이러한 변화는 개시된 방법을 수행하는데 적합하기 때문이다.

본원에서 사용된 바와 같이, 다른 분자에 대한 분자의 "친화도(affinity)"라는 용어는 두 분자 사이의 결합(binding)의 정도(또는 견고성(tightness))를 가리킨다. 친화도가 높을수록 두 분자 사이의 결합이 더 견고함을 의미한다. 친화도는 해리 상수(dissociation constant)(또는 K_d)의 측면에서 정량화될 수 있고, 이 경우 K_d 값이 크기에서 낮을수록(0에 가까울수록) 높은 친화도를 나타낸다.

본원에서 사용된 바와 같이 "아미노산(amino acid)"은 천연 및 합성 아미노산 둘 모두, 그리고 D 및 L 아미노산 모두를 포함하는 것을 의미한다. "표준 아미노산"은 자연적으로 발생하는 펩타이드에서 일반적으로 발견되는 20개의 L-아미노산 중 임의의 것을 의미한다. "비표준 아미노산 잔기"는 이것이 합성으로 제조되었는지 또는 천연 공급원으로부터 유래된 것인지 여부와는 관계없이, 표준 아미노산 이외의 임의의 아미노산을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "합성 아미노산"은 또한 염(salt), 아미노산 유도체(derivative)(예컨대, 아마이드), 및 치환체(substitution)를 포함하나 이에 제한되지 않는, 화학적으로 변형된 아미노산을 포함한다. 펩타이드 내에 함유된 아미노산, 특히 카복시- 또는 아미노-말단에 있는 아미노산은 메틸화, 아마이드화, 아세틸화 또는 펩타이드의 활성에 악영향을 미치지 않으면서 펩타이드의 순환 반감기(circulating half-life)를 변경시킬 수 있는 다른 화학 그룹으로의 치환에 의해 변형될 수 있다. 추가적으로, 다이설파이드 결합(disulfide linkage, 이황화 결합)은 펩타이드에 존재하거나 부존재할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 항원 상의 특정 에피토프(epitope)에 특이적으로 결합할 수 있는 면역글로불린(immunoglobulin) 분자를 가리킨다. 항체는 천연 공급원으로부터 또는 재조합 공급원으로부터 유래된 완전한 면역글로불린(intact immunoglobulin)일 수 있고, 완전한 면역글로불린의 면역반응성 부분일 수 있다. 항체는 일반적으로 면역글로불린 분자의 사량체(tetramer)이다. 본 발명에서 항체는 예를 들어 다클론 항체(polyclonal antibody), 단일클론 항체(monoclonal antibody), 세포내 항체(intracellular antibody)("intrabody(인트라바디)"), Fv, Fab 및 F(ab)₂, 뿐만 아니라 단일 사슬 항체(single chain antibody, scFv), 낙타과 항체(camelid antibody) 및 인간화 항체(humanized antibody)를 포함하는 다양한 형태로 존재할 수 있다(Harlow et al., 1999, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY; Harlow et al., 1989, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York; Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; Bird et al., 1988, Science 242:423-426). 본원에서 사용된 바와 같이, "중화 항체(neutralizing antibody)"는 항원에 결합하고 생물학적 활성을 차단하는 면역글로불린 분자이다.

본원에서 사용된 바와 같이, "항체 중쇄(antibody heavy chain)"는 모든 항체 분자에서 이들의 자연적으로 발생하는 형태에서 존재하는 두 가지 유형의 폴리펩타이드 사슬 중의 더 큰 것을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이, "항체 경쇄(antibody light chain)"는 모든 항체 분자에서 이들의 자연적으로 발생하는 형태에서 존재하는 두 가지 유형의 폴리펩타이드 사슬 중의 더 작은 것을 가리킨다. α 및 β 경쇄는 두 가지의 주요 항체 경쇄 아이소타입(isotype)을 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "항원(antigen)" 또는 "Ag"는 면역 반응을 유발하는 분자로 정의된다. 이 면역 반응은 항체 생성 또는 특이적 면역-적격 세포(immunologically-competent cell)의 활성화 각각, 또는 둘 모두를 수반할 수 있다. 통상의 기술자는 사실상 모든 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 임의의 거대분자(macromolecule, 마크로분자)가 항원으로 작용할 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 항원은 재조합 또는 게놈 DNA(genomic DNA)로부터 유래될 수 있다. 통상의 기술자는 면역 반응을 유도하는 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열 또는 부분 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 임의의 DNA가, 따라서 그 용어가 본원에서 사용되는 바와 같이 "항원"을 인코딩한다는 것을 이해할 것이다. 더욱이, 본 기술 분야의 통상의 기술자는 항원이 유전자의 전장 뉴클레오타이드 서열에 의해서만 인코딩될 필요는 없다는 것을 이해할 것이다. 본 발명이 하나 이상의 유전자의 부분적인 뉴클레오타이드 서열의 사용을 포함하나 이에 제한되지 않는다는 것과 이러한 뉴클레오타이드 서열이 원하는 면역 반응을 유도하도록 다양한 조합으로 배열된다는 것은 쉽게 알 수 있다. 또한, 통상의 기술자는 항원이 "유전자"에 의해 인코딩될 필요가 전혀 없다는 것을 이해할 것이다. 항원은 발생되거나 합성될 수 있거나 또는 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있다는 것을 쉽게 알 수 있다. 이러한 생물학적 샘플은 조직 샘플, 종양 샘플, 세포 또는 생물학적 유체를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

유전자의 "코딩 영역(coding region, 암호화 영역)"은 유전자의 전사(transcription)에 의해 생성된 mRNA 분자의 코딩 영역과 각각 상동이거나 또는 이에 대해 상보적인 유전자의 코딩 가닥의 뉴클레오타이드 잔기 및 유전자의 논코딩(non-coding, 비암호화) 가닥의 뉴클레오타이드로 구성된다.

mRNA 분자의 "코딩 영역"은 또한, mRNA 분자의 번역(translation) 동안 운반 RNA(transfer RNA) 분자의 안티 코돈(anti-codon) 영역과 매칭되거나 또는 정지 코돈(stop codon)을 인코딩하는 mRNA 분자의 뉴클레오타이드 잔기로 구성된다. 따라서 코딩 영역은 mRNA 분자에 의해 인코딩된 성숙 단백질에 존재하지 않는 아미노산 잔기에 대응하는 뉴클레오타이드 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, 단백질 배출 신호 서열(protein export signal sequence)에서 아미노산 잔기).

핵산을 지칭하기 위해 본원에서 사용된 "상보적(complementary)"은 두 개의 핵산 가닥의 영역 사이 또는 동일한 핵산 가닥의 두 영역 사이의 서열 상보성의 넓은 개념을 가리킨다. 제1 핵산 영역의 아데닌(adenine) 잔기는, 잔기가 티민(thymine) 또는 우라실(uracil)인 경우 상기 제1 영역에 대해 역평행(antiparallel)인 제2 핵산 영역의 잔기와 특이적인 수소 결합("염기쌍(base pairing)")을 형성할 수 있는 것으로 알려져 있다. 유사하게, 제1 핵산 가닥의 사이토신(cytosine) 잔기는, 잔기가 구아닌(guanine)인 경우 상기 제1 가닥에 대해 역평행인 제2 핵산 가닥의 잔기와 염기쌍을 형성할 수 있는 것으로 알려져 있다. 두 영역이 역평행 방식으로 배열되었을 때, 제1 영역의 적어도 하나의 뉴클레오타이드 잔기가 제2 영역의 잔기와 염기쌍을 형성할 수 있다면, 핵산의 제1 영역은 동일하거나 상이한 핵산의 제2 영역에 상보적이다. 바람직하게는, 상기 제1 영역은 제1 부분을 포함하고 상기 제2 영역은 제2 부분을 포함하여서 상기 제1 및 제2 부분이 역평행 방식으로 배열될 때, 상기 제1 부분의 뉴클레오타이드 잔기의 적어도 약 50%, 그리고 바람직하게는 적어도 약 75%, 적어도 약 90%, 또는 적어도 약 95%가 상기 제2 부분의 뉴클레오타이드 잔기와 염기쌍을 형성할 수 있다. 더 바람직하게는, 상기 제1 부분의 모든 뉴클레오타이드 잔기가 상기 제2 부분의 뉴클레오타이드 잔기와 염기쌍을 형성할 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 본원에 사용된 용어 "보존적 변이(conservative variation)" 또는 "보존적 치환(conservative substitution)"은 생물학적으로 유사한 또 다른 잔기에 의한 아미노산 잔기의 대체(replacement)를 가리킨다. 보존적 변이 또는 치환은 펩타이드 사슬의 모양을 변경시키지는 않을 것이다. 보존적 변이 또는 치환의 예에는, 아이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌과 같은 하나의 소수성 잔기를 또 다른 것으로 대체, 또는 아르기닌을 라이신으로, 글루탐산을 아스파트산으로, 또는 글루타민을 아스파라긴으로의 치환 등과 같이, 하나의 극성 잔기를 또 다른 것으로 치환하는 것을 포함한다.

용어 "전달 비히클(delivery vehicle)"은 비경구적(parenteral) 전달 비히클을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 대상에게 화합물을 전달할 수 있는 임의의 전달 비히클에 대한 포괄적인 언급으로서 본원에서 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같은 용어 "DNA"는 데옥시리보핵산(deoxyribonucleic acid)으로 정의된다.

"유효량(effective amount)" 또는 "치료학적 유효량(therapeutically effective amount)"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 본원에 기술된 바와 같이 특정한 생물학적 결과를 달성하는데 효과적인 화합물, 제제, 물질 또는 조성물의 양을 가리킨다. 그러한 결과는, 해당 기술 분야에 적합한 임의의 수단에 의해 결정되는 질환 또는 상태의 치료를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

"인코딩(encoding, 암호화)"은 정의된 뉴클레오타이드의 서열 (즉, rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 정의된 아미노산의 서열 및 이로부터 생성된 생물학적 특성을 가지는 생물학적 과정(biological process)에서 다른 중합체 및 거대 분자의 합성을 위한 주형으로서 역할을 하는, 유전자, cDNA, 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오타이드에서 뉴클레오타이드의 특정 서열의 고유한(inherent) 특성을 가리킨다. 따라서, 유전자는 그 유전자에 대응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생산한다면 단백질을 인코딩 한다. 이의 뉴클레오타이드 서열이 mRNA 서열과 동일하고 일반적으로 서열 목록에 제공되는 코딩 가닥 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로 사용되는 논코딩 가닥 둘 모두는, 그 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물을 인코딩하는 것으로 지칭될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "EMAPII 매개 질환(EMAPII mediated disease)"은 과도한 수준의 EMAPII가 대상에서 EMAPII의 수준을 감소시킴으로써 치료가 영향을 받는 역할을 하는 경우에 대상에서의 임의의 질환을 의미한다.

비인간(예를 들어, 뮤린(murine, 쥣과)) 항체의 "인간화(humanized)" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열(minimal sequence)을 포함하는 키메릭 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열(subsequence))이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용체의 상보성 결정 영역(complementary-determining region, CDR)의 잔기가 원하는 특이성(specificity), 친화도(affinity), 및 능력(capacity)을 갖는 마우스, 랫트, 또는 토끼와 같은 비인간 종(공여체 항체(donor antibody))의 CDR의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용체 항체(recipient antibody))이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(framework region, FR) 잔기는 대응하는 비인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용체 항체에서도, 유입된(imported) CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선하고 최적화하기 위해 이루어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 CDR 영역의 전부 또는 실질적 전부가 비인간 면역글로불린의 것에 대응하고 FR 영역의 전부 또는 실질적 전부가 인간 면역글로불린 서열의 것인, 적어도 하나 그리고 일반적으로 두 개의 가변 도메인의 실질적 전부를 포함할 것이다. 인간화 항체는 또한 최적으로, 일반적으로 인간 면역글로불린의 것인 면역글로불린 불변 영역(immunoglobulin constant region, Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 더 자세한 사항은 Jones et al., Nature, 321: 522-525, 1986; Reichmann et al., Nature, 332: 323-329, 1988; Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596, 1992 참조.

본원에 사용된 "동일성(identity)"은 두 개의 중합체 분자 사이, 특히 두 개의 아미노산 분자 사이, 예컨대 두 개의 폴리펩타이드 분자 사이의 서브유닛(subunit) 서열 동일성을 가리킨다. 두 개의 아미노산 서열이 동일한 위치에 동일한 잔기를 가질 때, 예를 들어, 두 개의 폴리펩타이드 분자의 각각에서의 위치가 아르기닌으로 점유된다면, 이들은 그 위치에서 동일하다. 두 개의 아미노산 서열이 정렬(alignment)에서 동일한 위치에서 동일한 잔기를 갖는 동일성 또는 정도는 종종 백분율로 표현된다. 두 개의 아미노산 서열 사이의 동일성은 매칭되거나 동일한 위치의 수의 직접적인 함수(direct function)이다; 예를 들어 두 서열에서 위치의 절반(예: 길이가 10개의 아미노산인 중합체에서 5개의 위치)이 동일한 경우, 두 서열은 50% 동일하다; 위치의 90%(예: 10개 중 9개)가 매칭되거나 동일한 경우, 두 아미노산 서열은 90% 동일하다.

"개체(individual)", "환자(patient)" 또는 "대상(subject)"은 그 용어가 본원에서 사용된 바와 같이, 조류, 인간 및 다른 영장류, 및 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 및 개와 같이 상업적으로 관련된 포유동물을 포함하는 다른 포유동물을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 동물 종의 구성원을 포함한다. 바람직하게는, 대상은 인간이다.

"교육 자료(instructional material)"는 그 용어가 본원에서 사용된 바와 같이, 키트(kit)에서 본 발명의 조성물 및/또는 화합물의 유용성을 전달하기 위하여 사용될 수 있는 간행물, 기록물, 도표, 또는 임의의 다른 표현 매체를 포함한다. 키트의 교육 자료는 예를 들어 본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 함유하는 용기에 부착될 수 있거나 또는 화합물 및/또는 조성물을 함유하는 용기와 함께 운송될 수 있다. 선택적으로, 수령인이 교육 자료와 화합물을 협조적으로 사용하게 할 의도로 교육 자료는 용기와는 별도로 운송될 수 있다. 교육 자료의 전달은, 예를 들어 간행물의 물리적 전달 또는 키트의 유용성을 전달하는 다른 표현 매체에 의해 이루어질 수 있거나, 또는 선택적으로 예를 들어 전자 메일 또는 웹사이트에서 다운로드에 의한 것과 같은 컴퓨터 수단에 의해 전자 전송으로 달성될 수 있다.

"분리된(isolated)"은 천연 상태로부터 변경 또는 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 천연적으로 존재하는 핵산 또는 펩타이드는 "분리된" 것이 아니지만, 이의 천연 상태의 공존하는 물질로부터 부분적으로 또는 완전히 떨어진(separate) 동일한 핵산 또는 펩타이드는 "분리된" 것이다. 분리된 핵산 또는 단백질은 실질적으로 정제된 형태로 존재할 수 있거나, 또는 예를 들어 숙주 세포와 같은 비천연(non-native) 환경에서 존재할 수 있다.

"분리된 핵산"은 자연 발생 상태에서 그 옆에 있는 서열로부터 떨어진 핵산 세그먼트 또는 단편, 즉 일반적으로 상기 단편에 인접한 서열, 즉 이것이 자연적으로 발생하는 게놈에서 상기 단편에 인접한 서열로부터 제거된 DNA 단편을 가리킨다. 이 용어는 또한 핵산에 자연적으로 동반되는 다른 성분, 즉, 세포에서 자연적으로 이에 동반되는 RNA 또는 DNA 또는 단백질로부터 실질적으로 정제된 핵산에도 적용된다. 따라서 상기 용어는, 예를 들어 벡터 내로, 자가 복제 플라스미드 또는 바이러스 내로, 또는 원핵생물 또는 진핵생물의 게놈 DNA 내로 통합되거나, 또는 다른 서열과 독립적인 별개의 분자로서(즉, PCR 또는 제한 효소 소화에 의해 생성된 cDNA 단편 또는 게놈 단편 또는 cDNA로서) 존재할 수 있는 재조합 DNA를 포함한다. 이는 또한 추가적인 폴리펩타이드 서열을 인코딩하는 혼성 유전자(hybrid gene)의 일부인 재조합 DNA를 포함한다.

본 발명의 맥락에서, 일반적으로 발생하는 핵산 염기에 대하여 다음의 약어가 사용된다. "A"는 아데노신(adenosine)을 가리키고, "C"는 사이토신(cytosine)을 가리키고, "G"는 구아노신(guanosine)을 가리키고, "T"는 티미딘(thymidine)을 가리키고, 그리고 "U"는 유리딘(uridine)을 가리킨다.

"핵산"은 데옥시리보뉴클레오사이드 또는 리보뉴클레오사이드로 구성되었든지, 그리고 포스포다이에스터 연결 또는 변형된 연결, 예컨대 포스포트라이에스터(phosphotriester), 포스포아미데이트(phosphoramidate), 실록산(siloxane), 카보네이트(carbonate), 카복시메틸에스터(carboxymethylester), 아세트아미데이트(acetamidate), 카바메이트(carbamate), 싸이오에터(thioether), 가교된 포스포아미데이트(bridged phosphoramidate), 가교된 메틸렌 포스포네이트(bridged methylene phosphonate), 포스포로싸이오에이트(phosphorothioate), 메틸포스포네이트(methylphosphonate), 포스포로다이싸이오에이트(phosphorodithioate), 가교된 포스포로싸이오에이트(bridged phosphorothioate) 또는 설폰 연결(sulfone linkage) 및 이러한 연결의 조합으로 구성되었든지 간에, 임의의 핵산을 의미한다. 용어 핵산은 또한 생물학적으로 발생하는 다섯 가지 염기(아데닌, 구아닌, 티민, 사이토신 및 우라실) 이외의 염기로 구성된 핵산을 특별히 포함한다.

달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열"은 서로의 축퇴 버전(degenerate version)이고 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 모든 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 단백질 또는 RNA를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열이란 어구는 또한 단백질을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열이 일부 버전에서 인트론(들)을 포함할 수 있는 정도로 인트론을 포함할 수 있다.

종래 표기법이 폴리뉴클레오타이드 서열을 기술하기 위해 본원에서 사용된다: 단일 가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 왼쪽 말단은 5'-말단이고, 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 왼쪽 방향은 5'-방향으로 지칭된다.

초기 RNA 전사체(nascent RNA transcript)에 뉴클레오타이드가 5'에서 3'으로 추가되는 방향을 전사 방향이라고 일컫는다. mRNA와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥은 "코딩 가닥(coding strand)"이라고 지칭되고, DNA 상의 기준점에 대해 5'에 위치하는 DNA 가닥 상의 서열은 "업스트림 서열(upstream sequence)"이라고 지칭되며, DNA 상의 기준점에 대해 3'에 있는 DNA 가닥 상의 서열은 "다운스트림 서열(downstream sequence)"이라고 지칭된다.

용어 "올리고뉴클레오타이드(oligonucleotide)"는 일반적으로 짧은 폴리뉴클레오타이드, 일반적으로 약 60개 이하의 뉴클레오타이드를 가리킨다. 뉴클레오타이드 서열이 DNA 서열(즉, A, T, G, C)로 표현되는 경우, 이는 또한 "U"가 "T"를 대체하는 RNA 서열(즉, A, U, G, C)을 포함하는 것으로 이해될 것이다.

용어 "작동적으로 연결된(operably linked)"은 이종 핵산 서열의 발현으로 이어지는 조절 서열과 이종 핵산 서열 사이의 기능적 연결을 가리킨다. 예를 들어, 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 놓여있을 때, 상기 제1 핵산 서열은 상기 제2 핵산 서열과 작동적으로 연결된다. 예를 들어, 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우, 상기 프로모터는 상기 코딩 서열에 작동적으로 연결된다. 일반적으로, 작동적으로 연결된 DNA 서열은 연속적이고, 두 개의 단백질 코딩 영역을 연결하는 것이 필요한 경우에는 동일한 리딩 프레임(reading frame) 내에 있다.

본원에서 사용된 용어 "프로모터(promoter)"는 폴리뉴클레오타이드 서열의 특정 전사를 개시하기 위해 요구되는 세포의 합성 기관 또는 도입된 합성 기관에 의해 인식되는 DNA 서열로 정의된다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "프로모터/조절 서열"은 프로모터/조절 서열에 작동적으로 연결된 유전자 생성물의 발현을 위해 필요한 핵산 서열을 의미한다. 일부 경우에, 이 서열은 코어 프로모터(core promoter) 서열일 수 있고, 다른 경우에, 이 서열은 또한 유전자 생성물의 발현을 위해 필요한 인핸서(enhancer) 서열 및 다른 조절 요소를 포함할 수 있다. 프로모터/조절 서열은, 예컨대, 조직 특이적 방식으로 유전자 생성물을 발현하는 것일 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물(pharmaceutical composition)"은 본 발명의 적어도 하나의 화합물과, 담체(carrier), 안정화제(stabilizer), 희석제(diluent), 분산제(dispersing agent), 현탁제(suspending agent), 증점제(thickening agent), 및/또는 부형제(excipient)와 같은 다른 화학적 성분의 혼합물을 가리킨다. 약제학적 조성물은 유기체로의 화합물의 투여를 용이하게 한다. 정맥 내, 경구, 에어로졸, 비경구, 안구, 폐 및 국소 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 화합물을 투여하는 다수의 기술이 당업계에 존재한다.

"약제학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)"은 약리학적/독성학적 관점에서 환자에게 허용가능하고, 조성물, 제제, 안정성, 환자 순응도(patient acceptance) 및 생체이용률(bioavailability)과 관련하여 물리적/화학적 관점에서 제조 약학 화학자에게 허용가능한 그의 특성 및/또는 물질을 가리킨다. "약제학적으로 허용가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)"는 유효 성분(들)의 생물학적 활성의 효과(effectiveness)를 방해하지 않고 그것이 투여되는 수용자(host)에게 독성이 없는 매체(medium)를 가리킨다.

본원에서 사용된 용어 "폴리뉴클레오타이드(polynucleotide)"는 뉴클레오타이드의 사슬로 정의된다. 또한, 핵산은 뉴클레오타이드의 중합체이다. 따라서, 본원에서 사용된 핵산 및 폴리뉴클레오타이드는 상호교환가능하다. 본 기술 분야의 통상의 기술자는 핵산이, 단량체의 "뉴클레오타이드"로 가수분해될 수 있는 폴리뉴클레오타이드라는 일반적인 지식을 가지고 있다. 단량체의 뉴클레오타이드는 뉴클레오사이드로 가수분해될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이 폴리뉴클레오타이드는 재조합 수단, 즉 일반적인 클로닝 기술 및 PCR™ 등을 이용하여 재조합 라이브러리 또는 세포 게놈으로부터의 핵산 서열의 클로닝, 및 합성 수단을 포함하나 이에 제한되지 않는 본 기술 분야에서 이용가능한 임의의 수단에 의해 얻어진 모든 핵산 서열을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "단백질", "펩타이드" 및 "폴리뉴클레오타이드"는 상호교환가능하게 사용되고, 펩타이드 결합에 의해 공유적으로 연결된 아미노산 잔기로 구성된 화합물을 가리킨다. 용어 "펩타이드 결합"은 하나의 아미노산의 카복실기와 제2 아미노산의 아미노기 사이에서 물 분자의 손실에 의해 형성되는 공유 아마이드 연결을 의미한다. 단백질 또는 펩타이드는 적어도 두 개의 아미노산을 포함해야 하고, 단백질 또는 펩타이드의 서열을 구성할 수 있는 아미노산의 최대 수에는 제한이 없다. 폴리펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 서로 연결(join)된 둘 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 펩타이드 또는 단백질을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어는 예를 들어 본 기술 분야에서 보통 펩타이드, 올리고펩타이드, 및 올리고머로도 지칭되는 단쇄(short chain) 및 본 기술 분야에서 일반적으로 단백질로 지칭되는 장쇄(longer chain) 모두를 의미하며, 이들에는 많은 유형이 있다. "단백질"은, 예를 들어, 특히 생물학적으로 활성인 단편(biologically active fragment), 실질적으로 상동인 단백질(substantially homologous protein), 올리고펩타이드, 동종이량체(homodimer), 이종이량체(heterodimer), 단백질의 변이체(variant), 변형된 단백질(modified protein), 유도체(derivative), 유사체(analog), 및 융합 단백질(fusion protein)을 포함한다. 단백질은 천연 단백질, 재조합 단백질, 합성 단백질, 또는 이들의 조합을 포함한다. 단백질은 수용체 또는 비수용체일 수 있다.

본원에서 사용된 용어 "재조합 DNA"는 상이한 공급원으로부터의 DNA 조각을 연결하여 생성된 DNA로 정의된다.

본원에서 사용된 용어 "재조합 폴리펩타이드"는 재조합 DNA 방법을 사용하여 생성된 폴리펩타이드로 정의된다.

본원에서 사용된 용어 "RNA"는 리보핵산(ribonucleic acid)으로 정의된다.

본원에서 사용된 용어 "치료적(therapeutic)"은 치료 및/또는 예방을 의미한다.

본원에서 사용된 용어 "치료하다(treat)"는 대상이 경험하는 증상의 빈도를 감소시키거나 대상이 경험하는 증상의 빈도 및/또는 중증도를 감소시키기 위하여 작용제(agent) 또는 화합물을 투여하는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "완화시키다(alleviate)"는 용어 "치료하다"와 상호교환가능하게 사용된다.

본원에서 사용된 바와 같이, "질환, 장애 또는 상태를 치료하는 것(treating a disease, disorder or condition)"은 대상이 경험하는 질환, 장애 또는 상태의 증상의 빈도 또는 중증도를 감소시키는 것을 의미한다. 질환, 장애 또는 상태를 치료하는 것은 증상의 완전한 근절(eradication) 또는 제거(elimination)를 포함하거나 포함하지 않을 수 있다.

"발현 벡터(expression vector)"는 발현될 뉴클레오타이드 서열에 작동적으로 연결된 발현 조절 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 가리킨다. 발현 벡터는 발현을 위한 충분한 시스-작용 요소(cis-acting element)를 포함하고, 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포에 의해서 또는 인비트로 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 발현 벡터는 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함(incorporate)하는 코스미드(cosmid), 플라스미드(plasmid) (예를 들어, 네이키드(naked) 또는 리포좀에 포함됨), 및 바이러스 (예를 들어, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노 연관 바이러스(adeno-associated virus))와 같이, 본 기술 분야에 알려진 모든 것들을 포함한다.

"벡터"는 유전자를 포함하고 유전자를 세포의 내부로 전달하는데 사용될 수 있는 물질(matter)의 구성이다. 벡터는 외래 서열을 타겟 유기체 또는 세포의 게놈내로 옮길 수 있는 유전자를 포함하는 임의의 플라스미드를 가리킨다.

본원에서 사용된 바와 같이, 핵산에 적용되는 용어 "단편(fragment)"은 전체보다 작다.

다음의 약어가 본원에서 사용된다: V_H, 중쇄 가변 영역(heavy chain variable region); V_L, 경쇄 가변 영역(light chain variable region); C_H, 중쇄 불변 영역(heavy chain constant region); C_L, 경쇄 불변 영역(light chain constant region).

범위: 본원 전반에 걸쳐서, 본 발명의 다양한 태양들이 범위 형식으로 제시될 수 있다. 범위 형식의 설명은 단지 편의와 간결성을 위한 것이며 본 발명의 범위에 대하여 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위에 대한 설명은 모든 가능한 하위 범위 뿐만 아니라 그 범위 내의 개별적인 수치값을 구체적으로 개시한 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 1 내지 6과 같은 범위의 기재는 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등과 같은 하위 범위 뿐만 아니라, 예를 들어 1, 2, 2.7, 3, 4, 5, 5.3, 및 6과 같이 그 범위 내의 개별적인 숫자를 구체적으로 기술하는 것으로 간주되어야 한다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.

설명(Description)

본 발명은 프로- 및 성숙 EMAPII를 인식하는 인간화 단일클론 항체를 제공한다. 상기 항체는 4개 중 하나의 경쇄 가변 영역과 5개 중 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 본 발명은 또한 키메릭 항-EMAPII 항체를 제공한다. 상기 항체의 전달을 위한 약제학적 조성물은 본 발명의 항체로 EMAPII를 표적화함으로써 질환을 치료하는 방법이 추가로 개시되는 것과 같이 추가로 개시된다.

항체, 벡터 및 항체를 포함하는 조성물

일 태양에서, 본 발명은 인간화 항-EMAPII 항체를 제공한다. 상기 항체는 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 도 1 내지 도 8 및 실시예 1에 나타낸 바와 같이, 본원에 개시된 항체는 프로- 및 성숙 EMAPII에 결합한다.

H4424 (인간화 HC1) SEQ ID NO: 1

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDAAMYWVRQASGKGLEWVGRIRTKPNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTSWSYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

H4425 (인간화 HC2) SEQ ID NO: 2

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGAVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDAAMYWVRQASGKGLEWVARIRTKPNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTSWSYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

H4426 (인간화 HC3) SEQ ID NO: 3

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGAVHLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDAAMYWVRQASGKGLEWVARIRTKPNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNTVYLQMNSLKTEDTAVYYCTSWSYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

H4427 (인간화 HC4) SEQ ID NO: 4

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGEVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDAAIYWVRQASGKGLEWVARIRTKPNNYATYYAASVKGRFTISRDDSNSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTSWSYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

H4428 (인간화 HC5) SEQ ID NO: 5

MDPKGSLSWRILLFLSLAFELSYGAVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDAAMYWVRQASGKGLEWVARIRTKPNNYATYYAASVKGRFTISRDDSNSTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTSWSYDFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

L4424 (인간화 LC1) SEQ ID NO: 6

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSSGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

L4425 (인간화 LC2) SEQ ID NO: 7

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSSGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

L4426 (인간화 LC3) SEQ ID NO: 8

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSSGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

L4427 (인간화 LC4) SEQ ID NO: 9

METDTLLLWVLLLWVPGSTGDIQMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSSGKTYLNWYLQKPGQSPQLLIYWMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQFLEYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

다양한 실시예에서, 인간화 항-EMAPII 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두는 각각 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5에 대하여 그리고 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9에 대하여 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 10에 대하여 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 11에 대하여 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 키메릭 항-EMAPII 항체를 제공한다.

MHC1309HC.4 SEQ ID NO: 10

AVHLVESGGGFVQPTESLKISCAASGFTFSDAAMYWVRQAPGKGLEWVARIRTKPNNYATYYADSVKGRFTISRDDSKSMVYLQMDNLKTEDTAMYYCTSWSYDFDYWGQGVMVTVSS

MHC1309LC.1 SEQ ID NO: 11

DIVMTQGALPNPVPSGESASITCQSSKSLLHSSGKTYLNWYLQRPGQSPHLLIYWMSTRASGVSDRLSGSGSGTDFTLKISSVEAEDVGVYYCQQFLEYPLTFGSGTKLEIK

다양한 실시예에서, 키메릭 항-EMAPII 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 중 하나 또는 둘 모두는 각각 SEQ ID NO: 10 및 SEQ ID NO: 11에 대하여 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

또 다른 태양에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 11 중 어느 하나에서 설명된 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. 다양한 실시예에서, 상기 벡터는 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO:5 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 중쇄를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 다양한 실시예에서, 상기 벡터는 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO:11 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 경쇄를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 다양한 실시예에서, 상기 벡터는 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO:5 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 중쇄 및 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO:9 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 경쇄를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 다양한 실시예에서, 상기 핵산은 프로모터에 작동적으로 연결된다. 다양한 실시예에서, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 형질 전환된 세포를 제공한다. 본 발명은 추가로 상기 벡터로 형질전환된 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는, SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 중쇄 및 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 설명된 인간화 항-EMAPII 항체 경쇄를 제조하는 방법을 제공한다.

간단히 요약하면, 항체를 인코딩하는 천연 또는 합성 핵산의 발현은 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 또는 이들의 일부를 프로모터에 작동적으로 연결하고 구성물을 발현 벡터 내로 통합(incorporating)함으로써 일반적으로 달성된다. 벡터는 복제(replication) 및 통합(integration) 진핵생물에 적합할 수 있다. 일반적인 클로닝 벡터는 원하는 핵산 서열의 발현의 조절에 유용한 전사 및 번역 종결자, 개시 서열, 및 프로모터를 포함한다.

핵산은 많은 유형의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 핵산은 플라스미드, 파지미드(phagemid), 파지 유도체(phage derivative), 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 특히 관심있는 벡터에는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터, 및 시퀀싱 벡터가 포함된다.

또한, 발현 벡터는 바이러스 벡터(viral vector)의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 본 기술 분야에 잘 알려져 있고, 예를 들어 Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-3 (3^rd ed., Cold Spring Harbor Press, NY 2001) 및 다른 바이러스학 및 분자 생물학 매뉴얼에 기술되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 헤르페스 바이러스, 및 렌티바이러스를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체에서 기능하는 복제 기점(origin of replication), 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 사이트(convenient restriction endonuclease site), 및 하나 이상의 선별 마커(selectable marker)를 포함한다(예를 들어, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 제6,326,193호).

추가적인 프로모터 요소, 예를 들어, 인핸서는 전사 개시의 빈도를 조절한다. 일반적으로, 이들은 시작 사이트의 30-110 bp 업스트림 영역에 위치하지만, 최근에는 다수의 프로모터가 시작 사이트의 다운스트림에서도 기능적 요소를 포함하는 것으로 나타났다. 프로모터 요소들 사이의 간격은 종종 유연(flexible)하므로, 프로모터 기능은 요소들이 서로 반전되거나 상대적으로 이동할 때 보존된다. 티미딘 키나아제(thymidine kinase, tk) 프로모터에서, 프로모터 요소들 사이의 간격은 활성이 감소하기 시작하기 전에 50 bp 떨어지게 증가될 수 있다. 프로모터에 따라서, 개별 요소가 협력적으로 또는 독립적으로 기능하여 전사를 활성화할 수 있는 것으로 보인다.

프로모터의 예로는 EF1알파 프로모터가 있다. 추가적인 예로는 급초기 사이토메갈로바이러스(immediate early cytomegalovirus(CMV)) 프로모터 서열을 포함한다. 이 프로모터 서열은 이에 작동적으로 연결된 임의의 폴리뉴클레오타이드 서열의 높은 수준의 발현을 유도할 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 그러나, 시미안 바이러스 40(simian virus 40, SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(mouse mammary tumor virus, MMTV), 인간 면역결핍 바이러스(human immunodeficiency virus, HIV) 긴 말단 반복(long terminal repeat, LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스 급초기 프로모터, 라우스(Rous) 육종 바이러스 프로모터 뿐만 아니라, 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 헤모글로빈 프로모터, 및 크레아틴 키나아제 프로모터와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 인간 유전자 프로모터를 포함하는 다른 구성적 프로모터 서열이 또한 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명은 구성적 프로모터의 사용으로 제한되지 않아야 한다. 유도성 프로모터(inducible promoter) 또한 본 발명의 일부로서 고려된다. 유도성 프로모터의 사용은 그러한 발현이 바람직할 때에는 이것이 작동적으로 연결된 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현을 작동(turn on)시키거나 또는 발현이 바람직하지 않을 때에는 발현을 중지(turn off)시킬 수 있는 분차 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예로는 메탈로싸이오닌(metallothionine) 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린 프로모터가 포함되나 이에 제한되는 것은 아니다.

항체 폴리펩타이드 또는 이의 일부분의 발현을 평가하기 위해, 바이러스 벡터를 통해 형질주입(transfection, 트랜스펙션)되거나 또는 감염되기를 바라는 세포의 집단으로부터 발현 세포의 식별 및 선별을 용이하게 하기 위해, 세포 내로 도입되는 발현 벡터는 또한 선별 마커 유전자 또는 리포터 유전자 각각 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. 다른 태양에서, 선별 마커는 별개의 DNA 조각 상에서 운반될 수 있고, 공동-형질주입 과정에서 사용될 수 있다. 선별 마커 및 리포터 유전자 둘 모두는 숙주 세포에서 발현이 가능하도록 적절한 조절 서열 옆에 있을 수 있다. 유용한 선별 마커는, 예를 들어 네오(neo) 등과 같은 항생제 내성 유전자를 포함한다.

리포터 유전자(reporter gene)는 잠재적으로 형질주입된 세포를 식별하기 위해서 그리고 조절 서열의 기능성을 평가하기 위해서 사용된다. 일반적으로, 리포터 유전자는 수용 유기체(recipient organism) 또는 조직에 존재하지 않거나 이에 의해서 발현되지 않고, 이들의 발현이 일부 쉽게 검출가능한 특성, 예를 들어, 효소적 활성에 의해 나타나는 폴리펩타이드를 인코딩하는 유전자이다. 리포터 유전자의 발현은 DNA가 수용 세포(recipient cell) 내로 도입된 후 적절한 시기에 분석된다. 적절한 리포터 유전자는 루시퍼라아제, 베타-갈락토시다아제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제, 분비된 알칼리 포스파타아제, 또는 녹색 형광 단백질 유전자를 인코딩하는 유전자를 포함할 수 있다(예를 들어, Ui-Tei et al., 2000 FEBS Letters 479: 79-82). 적절한 발현 시스템은 잘 알려져 있고, 알려진 기술을 사용하여 제조될 수 있거나 상업적으로 얻을 수 있다. 일반적으로, 리포터 유전자의 가장 높은 수준의 발현을 나타내는 최소 5' 측부 영역(flanking region)을 갖는 구성(construct)은 프로모터로서 식별된다. 이러한 프로모터 영역은 리포터 유전자에 연결될 수 있고, 프로모터 유도 전사(promoter-driven transcription)를 조절하는 능력에 대해 작용제(agent)를 평가하는 데 사용될 수 있다.

세포 내로 유전자를 도입하고 발현시키는 방법은 본 기술 분야에 알려져 있다. 발현 벡터의 맥락에서, 벡터는 본 기술 분야의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예를 들어 포유동물, 박테리아, 효모, 또는 곤충 세포 내로 용이하게 도입될 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적, 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포 내로 전달될 수 있다.

폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 물리적 방법은 칼슘 포스페이트 침전(calcium phosphate precipitation), 리포펙션(lipofection), 입자 충돌(particle bombardment), 마이크로인젝션(microinjection), 전기천공(electroporation) 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 제조하는 방법은 본 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-3 (3^rd ed., Cold Spring Harbor Press, NY 2001) 참조.

관심있는 폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 생물학적 방법은 DNA 및 RNA 벡터의 사용을 포함한다. 바이러스 벡터, 그리고 특히 레트로바이러스 벡터는 포유 동물, 예를 들어 인간 세포 내로 유전자를 삽입하기 위하여 가장 널리 사용되는 방법이 되었다. 다른 바이러스 벡터는 렌티바이러스, 폭스바이러스(poxvirus), 헤르페스 심플렉스 바이러스 I(herpes simplex virus I), 아데노바이러스 및 아데노 연관 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,350,674호 및 제5,585,362호 참조.

폴리뉴클레오타이드를 숙주 세포 내로 도입하기 위한 화학적 수단은, 거대분자 컴플렉스(macromolecule complex), 나노캡슐(nanocapsule), 마이크로스피어(microsphere), 비드(bead), 및 수중유 에멀젼(oil-in-water emulsion), 미셀(micelle), 혼합된 미셀, 및 리포좀을 포함하는 지질 기반 시스템과 같은 콜로이드성 분산 시스템을 포함한다. 인비트로 및 인비보에서 전달 비히클로 사용하기 위한 예시적인 콜로이드성 시스템은 리포좀(예를 들어, 인공 막 소포(artificial membrane vesicle))이다.

비-바이러스성 전달 시스템이 사용되는 경우, 예시적인 전달 비히클은 리포좀이다. 지질 제형의 사용은 핵산을 숙주 세포 내로 도입하기 위하여 고려된다(인비트로(in vitro), 엑스비보(ex vivo) 또는 인비보(in vivo)). 또 다른 태양에서, 핵산은 지질과 회합(associate)될 수 있다. 지질과 회합된 핵산은 리포좀의 수성 내부에 캡슐화되거나, 리포좀의 지질 이중층 내에 산재되거나, 리포좀 및 올리고뉴클레오타이드 둘 모두와 회합된 연결 분자를 통해 리포좀에 부착되거나, 리포좀 내에 포착되거나, 리포좀과 복합체를 형성하거나, 지질을 함유하는 용액 내에 분산되거나, 지질과 혼합되거나, 지질과 결합하거나, 지질 내에 현탁액으로서 함유되거나, 미셀에 함유되거나 이와 복합체를 형성하거나, 또는 다르게 지질과 회합될 수 있다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 회합된 조성물은 용액에서 임의의 특정한 구조로 제한되지 않는다. 예를 들어, 이들은 미셀로서, 이중층 구조로, 또는 "붕괴된" 구조로 존재할 수 있다. 이들은 또한 단순히 용액에 산재되어 가능하게는 크기 또는 모양이 균일하지 않은 응집체(aggregate)를 형성할 수 있다. 지질은 자연적으로 발생하거나 또는 합성 지질일 수 있는 지방 물질(fatty substance)이다. 예를 들어, 지질은 세포질에서 자연적으로 발생하는 지방 방울(fatty droplet) 뿐만 아니라 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올 및 알데하이드와 같은 장쇄 지방족 탄화수소 및 이들의 유도체를 함유하는 화합물의 클래스를 포함한다.

사용에 적합한 지질은 상업적 공급원으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어, 다이미리스틸 포스파티딜콜린("DMPC")은 Sigma, St. Louis, MO로부터 얻을 수 있고, 다이세틸 포스페이트("DCP")는 K & K Laboratories (Plainview, NY)로부터 얻을 수 있고, 콜레스테롤("Choi")은 Calbiochem-Behring로부터 얻을 수 있고, 다이미리스틸 포스파티딜글리세롤("DMPG") 및 다른 지질은 Avanti Polar Lipids, Inc. (Birmingham, AL.)로부터 얻을 수 있다. 클로로폼 또는 클로로폼/메탄올 내 지질의 스탁(stock) 용액은 약 -20℃에서 보관될 수 있다. 클로로폼은 메탄올 보다 더 쉽게 증발하기 때문에 이는 단독 용매로서 사용된다. "리포좀(liposome)"은 포접된 지질 이중층 또는 응집체의 생성에 의해 형성된 다양한 단일 및 다중라멜라(multilamellar) 지질 비히클을 포함하는 일반적 용어이다. 리포좀은 인지질 이중층 막 및 내부 수성 매질을 갖는 소포성 구조를 갖는 것으로 특징지어질 수 있다. 다중라멜라 리포좀은 수성 매질에 의해 분리된 다수의 지질층을 갖는다. 이들은 과량의 수성 용액 내에 인지질이 현탁될 때 자연적으로 형성된다. 지질 성분은 폐쇄 구조의 형성 전 자가 재배열을 거치고, 지질 이중층 사이에 물 및 용해된 용질을 포획(entrap)한다(Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505-10). 그러나, 용액에서 정상적인 소포성 구조와는 다른 구조를 갖는 조성물 또한 포함된다. 예를 들어, 지질은 미셀 구조를 추정할 수 있거나 또는 단지 지질 분자의 비균일한 응집체로서 존재할 수 있다. 리포펙타민-핵산 컴플렉스(lipofectamine-nucleic acid complex) 또한 고려된다.

다양한 실시예에서, 본 발명은 항체 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 상기 약제학적 조성물은 항체를 환자에게 전달하기에 적절한 임의의 형태일 수 있고, 상기 약제학적 조성물의 구체적인 사항은 그것이 제공되는 적응증에 기초하여 달라질 것이다. 적절한 약제학적 부형제의 예는 본원의 다른 곳에 개시된다.

질환 치료 방법

EMAPII는 일반적으로 폐 손상 뿐만 아니라 담배 연기로 유발된 폐 손상과 연관이 있다. 도 1 내지 도 8에 도시된 바와 같이, 본 발명의 항체는 프로- 및 성숙-EMAPII 둘 모두에 결합한다. 따라서, 다양한 실시예에서, 본 발명은 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD), 특히 폐기종의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에서 기술된 바와 같은 인간화 항-EMAPII 항체를 약제학적 조성물로 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

다양한 실시예에서, 본 발명은 폐기종의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에서 기술된 바와 같은 인간화 항-EMAPII 항체를 약제학적 조성물로 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

다양한 실시예에서, 본 발명은 급성 폐 손상의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에서 기술된 바와 같은 인간화 항-EMAPII 항체를 약제학적 조성물로 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

다양한 실시예에서, 본 발명은 기관지폐 이형성증(bronchopulmonary dysplasia)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에서 기술된 바와 같은 인간화 항-EMAPII 항체를 약제학적 조성물로 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

본원에 기술된 항-EMAPII 항체는 표적 세포와 상호작용할 수 있는 EMAPII에 결합하고 이의 수준을 감소시킨다. 따라서, 다양한 실시예에서, 본 발명은 EMAPII 매개 질환의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 본원에서 기술된 바와 같은 인간화 항-EMAPII 항체를 약제학적 조성물로 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

투여(Administration)/용량(Dosage)/제제(Formulations)

본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 환자, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 인간에게 투여하는 것은 의도된 질환을 치료하는데 효과적인 용량(투여량)에서 그리고 기간 동안, 알려진 절차를 사용하여 수행될 수 있다. 의도된 질환을 치료하는데 필요한 치료 화합물의 유효량은 환자에서 질환 또는 장애의 상태; 환자의 연령, 성별, 체중; 및 본 발명의 화합물을 검출하는데 사용되는 장비와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 본 기술 분야의 통상의 기술자는 관련 인자들을 연구하고 과도한 실험 없이 치료 화합물의 유효량에 관한 결정을 내릴 수 있을 것이다.

본 발명의 약제학적 조성물에서 유효 성분의 실제 용량 수준은 환자에게 독성을 나타내지 않으면서, 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대해 치료를 달성하는 데 효과적인 유효 성분(active ingredient)의 양을 얻기 위하여 달라질 수 있다.

특정 실시예에서, 본 발명의 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 부형제 또는 담체를 사용하여 제제화된다. 특정 실시예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.

담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액상 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적절한 혼합물, 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅의 사용에 의하여, 분산의 경우 필요한 입자 크기의 유지에 의하여, 그리고 계면활성제의 사용에 의하여, 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로뷰탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 경우, 등장화제(isotonic agent), 예를 들어 당, 소듐 클로라이드, 또는 만니톨 및 소르비톨과 같은 폴리알코올을 조성물에 포함하는 것이 바람직하다. 주사가능한 조성물의 장기적인 흡수(prolonged absorption)는 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴과 같이 흡수를 지연시키는 작용제를 조성물에 포함시킴으로써 유발될 수 있다.

투여를 위한 본 발명의 화합물은 약 1 ㎍ 내지 약 10,000 mg, 약 20 ㎍ 내지 약 9,500 mg, 약 40 ㎍ 내지 약 9,000 mg, 약 75 ㎍ 내지 약 8,500 mg, 약 150 ㎍ 내지 약 7,500 mg, 약 200 ㎍ 내지 약 7,000 mg, 약 3050 ㎍ 내지 약 6,000 mg, 약 500 ㎍ 내지 약 5,000 mg, 약 750 ㎍ 내지 약 4,000 mg, 약 1 mg 내지 약 3,000 mg, 약 10 mg 내지 약 2,500 mg, 약 20 mg 내지 약 2,000 mg, 약 25 mg 내지 약 1,500 mg, 약 30 mg 내지 약 1,000 mg, 약 40 mg 내지 약 900 mg, 약 50 mg 내지 약 800 mg, 약 60 mg 내지 약 750 mg, 약 70 mg 내지 약 600 mg, 약 80 mg 내지 약 500 mg의 범위 내, 그리고 그 사이의 임의의 그리고 모든 전체의 또는 부분적인 증분 내에 있을 수 있다.

특정 실시예에서, 본 발명의 화합물의 도즈(dose)는 약 1 mg 내지 약 2,500 mg이다. 특정 실시예에서, 본원에 기술된 조성물에 사용된 본 발명의 화합물의 도즈는 약 10,000 mg 미만, 또는 약 8,000 mg 미만, 또는 약 6,000 mg 미만, 또는 약 5,000 mg 미만, 또는 약 3,000 mg 미만, 또는 약 2,000 mg 미만, 또는 약 1,000 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만이다. 유사하게, 특정 실시예에서, 본원에 기술된 바와 같은 제2 화합물의 도즈는 약 1,000 mg 미만, 또는 약 800 mg 미만, 또는 약 600 mg 미만, 또는 약 500 mg 미만, 또는 약 400 mg 미만, 또는 약 300 mg 미만, 또는 약 200 mg 미만, 또는 약 100 mg 미만, 또는 약 50 mg 미만, 또는 약 40 mg 미만, 또는 약 30 mg 미만, 또는 약 25 mg 미만, 또는 약 20 mg 미만, 또는 약 15 mg 미만, 또는 약 10 mg 미만, 또는 약 5 mg 미만, 또는 약 2 mg 미만, 또는 약 1 mg 미만, 또는 약 0.5 mg 미만, 그리고 이들의 임의의 그리고 모든 전체의 또는 부분적인 증분일 수 있다.

제제(formulation)는 통상적인 부형제, 즉, 경구(oral), 비경구(parenteral), 비강(nasal), 정맥내(intravenous), 피하(subcutaneous), 장관(enteral) 또는 본 기술 분야에 알려진 임의의 다른 적절한 투여 방식에 적절한 약제학적으로 허용가능한 유기 또는 무기 담체 물질과 혼합하여 이용될 수 있다. 약제학적 조제물은 멸균될 수 있고, 바람직한 경우, 보조제, 예를 들어 윤활제, 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압 완충제에 영향을 미치는 염, 착색제, 향미제, 및/또는 방향성 물질 등과 혼합될 수 있다.

본 발명의 임의의 조성물의 투여 경로는 경구, 비강, 직장(rectal), 질내(intravaginal), 비경구, 협부(buccal), 설하(sublingual) 또는 국소(topical)를 포함한다. 본 발명에서 사용하기 위한 화합물은 경구 또는 비경구, 예를 들어 경피(transdermal), 경점막(transmucosal) (예: 설하, 설측(lingual), (경)협부((trans)buccal), (경)요도((trans)urethral), 질 (예: 경질(transvaginally) 및 질주위(perivaginally)), 비강(내)((intra)nasal) 및 (경)항문((trans)rectal)), 방광내(intravesical), 폐내(intrapulmonary), 십이지장내(intraduodenal), 위내(intragastrical), 척수강내(intrathecal), 피하, 근육내(intramuscular), 피내(intradermal), 동맥내(intra-arterial), 정맥내, 기관지내(intrabronchial), 흡입(inhalation), 및 국소 투여와 같은, 임의의 적절한 경로에 의한 투여를 위해 제제화될 수 있다.

적절한 조성물 및 제형(dosage form)은, 예를 들어 정제, 캡슐, 당의정(caplet), 알약, 젤캡(gel cap), 트로키(troche), 분산액, 현탁액, 용액, 시럽, 과립(granule), 비드(bead), 경피 패치(transdermal patch), 겔(gel), 분말(powder), 펠렛(pellet), 마그마(magma), 로젠지(lozenge), 크림, 페이스트(paste), 플라스터(plaster), 로션, 디스크(disc), 좌제(suppository), 비강 또는 경구 투여를 위한 액상 스프레이, 흡입을 위한 건조 분말 또는 에어로졸화된 제제, 방광내 투여를 위한 조성물 및 제제 등을 포함한다. 본 발명에서 유용할 수 있는 제제 및 조성물은 본원에 기술된 특정 제제 및 조성물로 제한되지 않는다는 것을 이해해야 한다.

비경구 투여

본원에서 사용된 바와 같이, 약제학적 조성물의 "비경구 투여"는 대상의 조직의 물리적 브리칭(physical breaching) 및 조직에서 브리치(breach)를 통한 약제학적 조성물의 투여를 특징으로 하는 임의의 투여 경로를 포함한다. 따라서 비경구 투여는 조성물의 주사, 수술적 절개를 통한 조성물의 적용, 조직을 관통하는 비-수술적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 약제학적 조성물의 투여를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 특히, 비경구 투여는 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 흉골내(intrasternal) 주사 및 신장 투석 주입 기술을 포함하나 이에 제한되지 않는 것으로 고려된다.

비경구 투여에 적절한 약제학적 조성물의 제제는 멸균수, 멸균 등장성 식염수(sterile isotonic saline)와 같은 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합된 유효 성분을 포함한다. 이러한 제제는 볼루스(bolus) 투여 또는 연속 투여에 적절한 형태로 제조, 포장, 또는 판매될 수 있다. 주사가능한 제제는 보존제를 함유하는 앰플 또는 다중도즈 용기와 같은 단위 제형(unit dosage form)으로 제조, 포장, 또는 판매될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 내 에멀젼, 페이스트, 및 이식가능한 지속 방출 또는 생분해성 제제를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 제제는 현탁제, 안정화제, 또는 분산제를 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 추가 성분을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제의 특정 실시예에서, 유효 성분은 재구성된 조성물의 비경구 투여 전에 적절한 비히클 (예: 멸균 발열성 물질 제거수(sterile pyrogen free water))과 재구성하기 위한 건조 (즉, 분말 또는 과립) 형태로 제공된다.

약제학적 조성물은 무균 주사가능한 수성 또는 유성 현탁액 또는 용액의 형태로 제조, 포장, 또는 판매될 수 있다. 이러한 현탁액 또는 용액은 본 기술 분야에 따라 제제화될 수 있고, 유효 성분에 더하여 본원에 기술된 분산제, 습윤제, 또는 현탁제와 같은 추가 성분을 포함할 수 있다. 이러한 멸균 주사가능 제제는 예를 들어 물 또는 1,3-뷰탄다이올과 같은 무독성의 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매를 사용하여 제조될 수 있다. 허용가능한 다른 희석제 및 용매에는 링거(Ringer) 용액, 등장성 소듐 클로라이드 용액, 및 합성 모노- 또는 다이-글리세라이드와 같은 고정유(fixed oil)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 유용한 다른 비경구적으로 투여가능한 제제는 유효 성분을 미정질(microcrystalline) 형태로, 리포좀성 제제(liposomal preparation)로, 또는 생분해성 중합체 시스템의 성분으로서 포함하는 것들을 포함한다. 지속 방출 또는 이식을 위한 조성물은 에멀젼, 이온 교환 수지, 난용성(sparingly soluble) 중합체, 또는 난용성 염과 같은 약제학적으로 허용가능한 중합체성 또는 소수성 물질을 포함할 수 있다.

추가 투여 형태

본 발명의 추가 제형은 미국 특허 제6,340,475호; 제6,488,962호; 제6,451,808호; 제5,972,389호; 제5,582,837호; 및 제5,007,790호에 기술된 바와 같은 제형을 포함한다. 본 발명의 추가 제형은 또한 미국 특허출원 제2003/0147952호; 제2003/0104062호; 제2003/0104053호; 제2003/0044466호; 제2003/0039688호; 및 제2002/0051820호에 기술된 바와 같은 제형을 포함한다. 본 발명의 추가 제형은 또한 PCT 출원 WO 03/35041; WO 03/35040; WO 03/35029; WO 03/35177; WO 03/35039; WO 02/96404; WO 02/32416; WO 01/97783; WO 01/56544; WO 01/32217; WO 98/55107; WO 98/11879; WO 97/47285; WO 93/18755; 및 WO 90/11757에 기술된 바와 같은 제형을 포함한다.

실험적 실시예

본 발명은 이하의 실험적 실시예를 참조하여 추가로 상세하게 설명된다. 이들 실시예는 달리 명시되지 않는 한 제한하려는 의도가 아니고 단지 예시의 목적을 위해서만 제공된다. 따라서, 본 발명은 결코 이하의 실시예로 제한되는 것으로 해석되어서는 안되며, 오히려 본원에 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 그리고 모든 변형을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

추가 설명 없이, 본 기술 분야의 통상의 기술자는 전술한 설명 및 이하의 예시적인 실시예를 이용하여, 본 발명의 청구된 방법을 실시할 수 있다고 여겨진다. 따라서 이하의 발명 실시예는 본 발명의 바람직한 실시예를 구체적으로 가리키고, 임의의 방식으로 본 개시 내용의 나머지를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.

실시예 1:

랫트 하이브리도마(hybridoma) IgG 가변 및 불변 영역의 클로닝 및 시퀀싱

cDNA 말단의 급속 증폭법(Rapid amplification of cDNA ends, RACE)은 V_H 및 V_L, C_H 및 C_L 영역에 대해 DNA를 증폭시키기 위하여 수행되었다. 양성 클론은 겔 전기영동에 의해 확인되었다. 양성 DNA는 클로닝되고 시퀀싱되었다. IgG 가변 및 불변 영역에 대하여 DNA 및 아미노산 서열이 분석되었다.

모 항체(parental antibody)의 인간화 설계는 인 실리코(in silico) 분석을 사용하여 수행되었다. 인간화 과정은 상동성 모델링된 항체 3D 구조를 생성하고 구조 모델링을 기반으로 모 항체의 프로파일을 생성함으로써 시작된다. 사용하기 위한 수용체 프레임워크(acceptor framework)는 프레임워크에 걸친 전체적인 서열 동일성, 인터페이스 위치 매칭, 유사하게 분류된 CDR 표준 위치, 및 제거되어야 할 N-글리코실화 사이트의 존재를 기반으로 식별되었다. 두 개의 경쇄(LC) 및 두 개의 중쇄(HC) 프레임워크가 인간화 설계를 위해 선택되었다.

인간화 항체는 모 항체 서열의 선택 부분을 인간 프레임워크 서열과 융합시킨 다수의 하이브리드 서열을 만들어 설계되었다. 3D 모델을 사용하여, 항원 결합을 유지할 가능성이 가장 높은 서열을 분리하기 위해 이러한 인간화 서열을 눈과 컴퓨터 모델링으로 체계적으로 분석하였다. 목표는 원래의 항체 특이성을 유지하면서 최종 인간화 항체에서 인간 서열의 양을 최대화하는 것이었다.

3개의 인간화 경쇄 및 5개의 인간화 중쇄는 2개의 상이한 중쇄 및 경쇄 인간 수용체 프레임워크를 기반으로 하여 설계되었다(표 1 참조). HC1 및 LC1은 제1 개별 프레임워크를 활용하고, 최소한의 모 항체 프레임워크 서열과 가장 많은 인간 서열을 포함한다. HC2, HC3 및 LC2는 이전과 동일한 프레임워크를 사용하지만, 추가의 모 서열(parental sequence)을 포함한다. HC4, HC5, LC3 및 LC4는 제2 개별 프레임워크를 활용하고, 인간 프레임워크와 융합된 추가의 모 서열을 또한 포함한다.

표 1: 인간화 사슬(humanized chain) 정보 테이블

인간화 사슬의 인간성 점수의 계산

단일클론 항체에 대한 인간성 점수(humanness score)는 Gao, S.H., Huang, K., Tu, H., and Adler, A.S. 2013, Monoclonal antibody humanness score and its applications. BMC Biotechnology, 13:55에 따라 계산되었다. 이 점수는 항체를 인간화할 때 중요한 인자인, 인간에서 감소된 항원성의 측면에서 항체 가변 영역 서열이 얼마나 인간과 유사한지를 나타낸다. 모 항체 및 인간화 항체에 대한 인간성 점수는 아래에 나타내었다. 이 방법에 기초하여, 중쇄의 경우 79점 이상의 점수는 이의 항원성 면에서 인간과 유사한 항체를 나타내고, 카파(kappa) 경쇄의 경우 86점 이상의 점수는 이의 항원성 면에서 인간과 유사한 항체를 나타낸다.

표 2: 중쇄의 인간성 점수

표 3: 경쇄의 인간성 점수

인간화 항체의 구성(construction)

가변 영역 서열을 먼저 합성함으로써 전장 항체 유전자를 구성하였다. 상기 서열은 포유동물 세포에서 발현을 위해 최적화되었다. 그러고 나서 이러한 가변 영역 서열을 이미 인간 Fc 도메인을 함유하는 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 추가로, 비교를 위해 모 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 동일한 백본(backbone) Fc 서열을 사용하여 전장 키메릭 사슬로 구성하였다.

소규모 생산

인간화 항체는 0.03 리터 생산을 거쳤다. 키메릭 모 항체는 또한 직접 비교를 위해 스케일-업되었다. 표시된 중쇄 및 경쇄에 대한 플라스미드를 혈청의 부재 하에 화학적으로 정의된 배지를 사용하여 현탁액에서 HEK293 세포 내로 형질주입하여 항체를 제조하였다. 구체적으로, 항체 서열은 유전자 합성되고, 독자적인 발현 벡터(proprietary expression vector) pLEV123 내로 클로닝되었다. 조건 배지(conditioned media)에서 전체 항체를 MabSelect SuRe 단백질 A 배지(GE Healthcare)를 사용하여 정제하였다.

표 3: HEK293 세포에서 일시적으로 생성된 항체

인간화 항체의 결합 ELISA

20개의 인간화 항체, 키메릭 모 항체, 및 랫트 모 항체의 용량 의존적인 결합 ELISA가 수행되었다. ELISA 플레이트를 인산염 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS) 내 인간 프로-EMAPII, 2 ㎍/mL로 4℃에서 밤새 코팅하였다. 모든 항체를 0.05% 인산염 완충 식염수 tween (phosphate buffered saline tween, PBST)으로 10 ㎍/mL에서 시작하여 7 포인트, 4배 연속 희석으로 희석하고, 마지막 포인트는 PBST 단독이었다. 항체는 1.5시간 동안 사전-차단된 ELISA 플레이트 상에서 배양(인큐베이션)하고, 이어서 0.05% PBST로 3회 세척하였다. 2차 항체(겨자무 과산화효소(horseradish peroxidase, HRP)-항-인간 IgG Fc 또는 HRP-항-랫트 IgG Fc)를 HRP 어세이 희석액으로 5000x 희석시키고, 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 그러고 나서 플레이트를 4회 세척하고, TMB 기질을 첨가하였다. 1N HCl에 의해 반응이 정지되기 전 5분 동안 실온에서 발색되었다. 결합 곡선은 도 1 내지 도 4에 도시된다.

프로- 및 성숙-EMAPII에 대한 결합

20개의 항체의 용량 의존적인 결합 ELISA가 수행되었고, 결과는 도 5 내지 도 8에 나타내었다. 항원의 코팅은 4℃에서 밤새 2 ㎍/mL였다. 실온에서 1.5시간 동안 PBS 내 2% BSA로 블로킹(blocking). 1차 배양(primary incubation)은 10 ㎍/mL, 1:4 희석으로 실온에서 1시간 동안 수행되었다. 검출 항체(detection antibody)는 인간화 및 키메릭 항체에 대해 염소-항-인간이고, 랫트 모체에 대해 염소-항-랫트였다. RT 1시간 (1:10000 희석).

열거된 실시예의 리스트

실시예 1. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인; 및

SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인;을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.

실시예 2. 실시예 1에 따른 항체에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고

상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 항체.

실시예 3. 실시예 1에 따른 항체에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고

상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 항체.

실시예 4. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.

실시예 5. 실시예 4에 따른 항체에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 항체.

실시예 6. SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.

실시예 7. 실시예 6에 따른 항체에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 항체.

실시예 8. SEQ ID NO: 10에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 11에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 키메릭 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.

실시예 9. 실시예 8에 따른 항체에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 10에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖고, 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 11에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 항체.

실시예 10. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 11 중 어느 하나에서 설명된 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 재조합 벡터.

실시예 11. 실시예 10에 따른 재조합 벡터로 형질전환된 세포.

실시예 12. 실시예 11의 형질전환된 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는 항체 제조 방법.

실시예 13. 실시예 1 내지 9 중 어느 하나에 따른 항체 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.

실시예 14. 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 실시예 13에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.

실시예 15. 폐기종의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 실시예 13에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.

실시예 16. 기관지폐 이형성증의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 실시예 13에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.

실시예 17. 내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II (EMAPII) 매개 질환의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 실시예 13에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.

다른 실시예

본원에서 변수의 임의의 정의에서 요소들의 리스트의 설명은 임의의 단일 요소 또는 리스트에 언급된 요소들의 조합 (또는 하위 조합)으로서 그 변수의 정의를 포함한다. 본원에서 실시예의 설명은 임의의 단일 실시예 또는 임의의 다른 실시예 또는 이들의 일부와의 조합인 실시예를 포함한다.

본원에 인용된 각각의 그리고 모든 특허, 특허 출원, 및 공보의 개시는 그의 전체가 참조로 본원에 포함된다. 본 발명은 특정 실시예를 참조하여 기술되었지만, 본 발명의 다른 실시예 및 변형이 본 발명의 진정한 사상 및 범위를 벗어나지 않고 해당 기술 분야의 통상의 기술자에 의해서 고안될 수 있음은 명백하다. 첨부된 청구범위는 이러한 실시예 및 동등한 변형 모두를 포함하는 것으로 해석되도록 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> Allinaire Therapeutics, LLC Hay, Doughlas W.P. Berezovsky, Suzanne E. Knight, David Huang, Kexin Wang, Jordon K. K <120> Humanized Anti-EMAP II Therapeutic Antibodies <130> 206009-7004WO1(00093) <150> US63045687 <151> 2020-06-29 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 471 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized HC1 <400> 1 Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser 1 5 10 15 Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala 35 40 45 Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala 50 55 60 Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Arg Ile Arg Thr Lys Pro Asn 65 70 75 80 Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 85 90 95 Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 100 105 110 Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ser Trp Ser Tyr Asp 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 145 150 155 160 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 210 215 220 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 355 360 365 Arg Glu Pro 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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 210 215 220 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 355 360 365 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 370 375 380 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 385 390 395 400 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 420 425 430 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 435 440 445 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 450 455 460 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 465 470 <210> 5 <211> 471 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized HC5 <400> 5 Met Asp Pro Lys Gly Ser Leu Ser Trp Arg Ile Leu Leu Phe Leu Ser 1 5 10 15 Leu Ala Phe Glu Leu Ser Tyr Gly Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly 20 25 30 Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala 35 40 45 Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala 50 55 60 Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Thr Lys Pro Asn 65 70 75 80 Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile 85 90 95 Ser Arg Asp Asp Ser Asn Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu 100 105 110 Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Ser Trp Ser Tyr Asp 115 120 125 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 145 150 155 160 Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 165 170 175 Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 180 185 190 His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 195 200 205 Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile 210 215 220 Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val 225 230 235 240 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 245 250 255 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 260 265 270 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 275 280 285 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 290 295 300 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 305 310 315 320 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 325 330 335 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 340 345 350 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 355 360 365 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 370 375 380 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 385 390 395 400 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 405 410 415 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 420 425 430 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 435 440 445 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 450 455 460 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 465 470 <210> 6 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized LC1 <400> 6 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Asn Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln Gln Phe Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 7 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized LC2 <400> 7 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln Gln Phe Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 115 120 125 Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 8 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized LC3 <400> 8 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln Gln Phe Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 115 120 125 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 9 <211> 239 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Humanized LC4 <400> 9 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro 1 5 10 15 Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser 35 40 45 Leu Leu His Ser Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala 65 70 75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Gln Gln Phe Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 115 120 125 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 10 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MHC1309HC.4 <400> 10 Ala Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Thr Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala 20 25 30 Ala Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Arg Thr Lys Pro Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Met 65 70 75 80 Val Tyr Leu Gln Met Asp Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr 85 90 95 Tyr Cys Thr Ser Trp Ser Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MHC1309LC.1 <400> 11 Asp Ile Val Met Thr Gln Gly Ala Leu Pro Asn Pro Val Pro Ser Gly 1 5 10 15 Glu Ser Ala Ser Ile Thr Cys Gln Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Ser Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro His Leu Leu Ile Tyr Trp Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser 50 55 60 Asp Arg Leu Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe 85 90 95 Leu Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 12 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Ser Lys Pro Ile Asp Val Ser Arg Leu Asp Leu Arg Ile Gly Cys Ile 1 5 10 15 Ile Thr Ala Arg Lys His Pro Asp Ala Asp Ser Leu Tyr Val Glu Glu 20 25 30 Val Asp Val Gly Glu Ile Ala Pro Arg Thr Val Val Ser Gly Leu Val 35 40 45 Asn His Val Pro Leu Glu Gln Met Gln Asn Arg Met Val Ile Leu Leu 50 55 60 Cys Asn Leu Lys Pro Ala Lys Met Arg Gly Val Leu Ser Gln Ala Met 65 70 75 80 Val Met Cys Ala Ser Ser Pro Glu Lys Ile Glu Ile Leu Ala Pro Pro 85 90 95 Asn Gly Ser Val Pro Gly Asp Arg Ile Thr Phe Asp Ala Phe Pro Gly 100 105 110 Glu Pro Asp Lys Glu Leu Asn Pro Lys Lys Lys Ile Trp Glu Gln Ile 115 120 125 Gln Pro Asp Leu His Thr Asn Asp Glu Cys Val Ala Thr Tyr Lys Gly 130 135 140 Val Pro Phe Glu Val Lys Gly Lys Gly Val Cys Arg Ala Gln Thr Met 145 150 155 160 Ser Asn Ser Gly Ile Lys 165

Claims (17)

1. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인; 및
   SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인;을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(humanized anti-endothelial monocyte activating polypeptide II(항-EMAPII)) 항체.
2. 제1항에 있어서,
   상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고
   상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 항체.
3. 제1항에 있어서,
   상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지고; 그리고
   상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 항체.
4. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 5 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.
5. 제4항에 있어서,
   상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 2 또는 SEQ ID NO: 3 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 항체.
6. SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 인간화 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(항-EMAPII) 항체.
7. 제6항에 있어서,
   상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9 중 어느 하나에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 항체.
8. SEQ ID NO: 10에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 11에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 키메릭 항-내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II(chimeric anti-endothelial monocyte activating polypeptide II(항-EMAPII)) 항체.
9. 제8항에 있어서,
   상기 중쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 10에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖고, 상기 경쇄 가변 도메인은 SEQ ID NO: 11에 대해 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 것을 특징으로 하는 항체.
10. SEQ ID NO: 1 내지 SEQ ID NO: 11 중 어느 하나에서 설명된 아미노산 서열을 인코딩(encoding)하는 핵산을 포함하는 재조합 벡터.
11. 제10항에 따른 재조합 벡터로 형질전환된 세포.
12. 제11항의 형질전환된 세포를 항체가 발현되는 조건 하에 배양하는 것을 포함하는 항체 제조 방법.
13. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 항체 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
14. 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 제13항에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
15. 폐기종(emphysema)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 제13항에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
16. 기관지폐 이형성증(bronchopulmonary dysplasia)의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 제13항에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
17. 내피 단핵구 활성화 폴리펩타이드 II (EMAPII) 매개 질환의 치료를 필요로 하는 대상에서 이를 치료하는 방법으로서, 제13항에 따른 약제학적 조성물을 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법.

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