KR20220170316A - 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품 - Google Patents
퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 천초 추출물을 포함하는 뇌세포 보호 및 기억력 증진용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 각종 스트레스, 음주, 흡연 등 환경적 요인으로 인하여 뇌손상을 받고 있는 현대인들의 뇌세포 보호효과를 유발하여 퇴행성 질환의 예방 및 치료와 기억력 증진 효과를 유발하는 약제 및 건강보조식품에 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품에 관한 것이다.
본 발명은 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강 보조 식품에 관한 것으로, 뇌세포의 손상에 관여하는 중요한 인자중의 하나는 아미노산인 글루타메이트이다. 글루타메이트는 주로 4가지의 수용체 즉, NMDA (N-메틸-D-아스파테이트) 수용체, AMPA (L-α-아미노-3-히드록시-5-메틸-4-이속사졸프로피 오네이트) 수용체, 카이네이트(Kainate) 수용체 및 1S,3R-ACPD 수용체에 결합하여 작용을 나타낸다[Craig CR, Sti tzel RE, Modern Pharmacology with Clinical Applications, p293-302, 1997]. 뇌허혈과 같은 자극이 있을 경우 뇌세포에 산소공급이 줄어들게 되고, 결과적으로 혐기성 해당작용이 증가하며, 조직내의 에너지원인 ATP가 줄어 들어 이온펌프의 작용이 감소하게 되고, 세포외의 포타슘 이온의 양이 증가하여 신경세포막의 탈분극이 유도된다. 이렇게 되면 흥분성 신경전달물질이 분비되어 NMDA, AMPA, 카이네이트 수용체의 활성화로 인하여 뇌손상이 일어나게 된다.
흥분성 신경 전달물질에 의한 흥분성 독성(excito-toxicity)은 세포 스트레스를 유발하여, 알츠하이머병, 파킨슨병, 뇌졸증 및 근위축성 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis) 등의 퇴행성 신경질환(neurodegenerative disorde rs)과 같은 병리학적 상태를 유발하는데 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다 [Haloween, B., Reactive oxygen species and the central nervous system. J. Neurochem. 59, p1609-1623, 1992 Coyle, J. T. 및 Puttfarcken, P., Oxidative stress, glutamate, and neurodegenerative disorders. Science 262, p689-695, 1993 Olanow, C.W., A radical hypothesis for neurodegeneration. Trends Neurosci . 16, p439-444, 1993]. 중추신경계의 퇴행성 신경질환(neurodegenerative disorders)은 때로 기억과 인지기능의 저하를 수반한다. 특히, 치매는 현대와 같은 고령화 사회의 중대한 문제로서 그 원인으로 유전, 노화, 뇌손상, 흡연 및 음주와 같은 환경적 요인 및 기타 복합인자 들을 들 수 있다. 주로 해마(hippocampus)가 많이 손상되며, 이는 일반적으로 뇌의 아세틸콜린 함량의 감소와 밀접한 관련성이 있다. 현재, 뇌의 아세틸콜린 양을 증가시키기 위하여 아세틸콜린 에스테라제 억제제(acetylcholine estera se inhibitor)들이 알츠하이머성 치매의 치료에 널리 사용되고 있는 실정이다. 이외에도, 이러한 뇌손상을 억제하기 위한 많은 연구가 이루어지고 있으며[Gagliardi RJ, Neuroprotection, excitotoxicity and NMDA antagonists, Arq. Neuro-Psiquiatr. p58, 2000], 예를 들어, NMDA 길항제, AMPA 길항제, GABA 효능제, 세포내 칼슘감소제, 산화 질소(nitric oxide) 억제제, 유리 라디칼 제거제(free radical scavenger), 나트륨 채널 억제제, 글루타메이트 유리 억제제, 성장인자, 산성화(acidosis), 저체온법(hypothermia), 칼륨 채널 활성제(potassium channel activators)등의 개발이 시도되고 있다.
각종 스트레스, 음주, 흡연 등 환경적 요인으로 인하여 뇌 손상을 받고 있는 현대인들의 뇌세포 보호효과 및 기억력 증진효과를 유발하는 물질에 대한 오랜 연구 결과, 천초 추출물이 뇌세포 보호작용과 더불어 기억력 증진에 우수한 효과를 나타내는 것을 발견하고 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘, 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히 드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품은, 천초 추출물의 뇌세포 보호기능으로 인해 뇌세포 손상으로 발생되는 퇴행성 뇌질 환의 예방 및 치료 효과 뿐 아니라, 기억력 향상 유발 효과를 나타내며, 각종 환경적 스트레스로 인한 뇌 손상의 위험을 안고 있는 현대인의 뇌세포 보호 기능 및 치매환자를 포함하는 기억력이 저하된 사람에게 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 천초 추출물(분획 1)의 AMPA에 의한 신경세포 탈분극 억제효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표준편차(n= 5)이며, 대조군에 대한 유의성은 **: P<0.05 이다.
도 2는 천초 추출물(분획 2, 3, 4, 5)의 AMPA에 의한 신경세포 탈분극 억제효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표 준편차(n=5)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05, **: P<0.01 이다.
도 3은 천초 추출물(분획 1)의 AMPA에 의한 C6 아교세포 손상에 대한 억제효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표 준편차(n=5)이며, 대조군에 대한 유의성은 ***: P<0.001 이다.
도 4는 천초 추출물(분획 1)의 기억력 증진 효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표준편차(n=8)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05 이다.
도 5는 천초 추출물(분획 1, 2, 3, 4 및 5)의 기억력 증진효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표준편차(n=6)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05, **: P<0.01 이다.
도 2는 천초 추출물(분획 2, 3, 4, 5)의 AMPA에 의한 신경세포 탈분극 억제효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표 준편차(n=5)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05, **: P<0.01 이다.
도 3은 천초 추출물(분획 1)의 AMPA에 의한 C6 아교세포 손상에 대한 억제효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표 준편차(n=5)이며, 대조군에 대한 유의성은 ***: P<0.001 이다.
도 4는 천초 추출물(분획 1)의 기억력 증진 효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표준편차(n=8)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05 이다.
도 5는 천초 추출물(분획 1, 2, 3, 4 및 5)의 기억력 증진효과를 나타낸다. 나타낸 값은 평균±표준편차(n=6)이며, 대조군에 대한 유의성은 *: P<0.05, **: P<0.01 이다.
본 발명의 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품의 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 천초 추출물을 0.5~ 50 중량%로 포함한다.
본 발명의 천초 추출물은, 하기와 같은 제조공정으로 제조될 수 있다.
제1단계: 천초를 메탄올, 에탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 아세톤, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트 등의 유기용매, 바람직하기로는 메탄올 또는 메탄올과 물의 1:0.2~ 1.5의 범위의 혼합용매에서 , 5 내지 80℃의 온도, 바람직하게는 30 내지 55℃에서 15분 내지 48시간의 반응시간, 바람직하게는 30분 내지 12시간 동안 추출하여 테르페노이드(terpenoids) 및 페놀성(phenolic) 물질들이 다량 함유되는 저급알콜 가용분획을 얻는다.
제2단계: 상기로부터 얻어진 저급알콜 가용분획을 저급알콜 및 물의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올과 물의 1:0.5 내지 1.5 범위의 혼합용매에 녹인 후, 산으로 pH 2~4로 조절하고, 동량의 클로로포름으로 더 추출함으로써 클로로포름 가용분획을 얻는다.
제3단계: 상기의 클로로포름 용매에 용해되지 않는 분획부를 수산화암모늄으로 pH 9~12로 조절하여 동량의 클로로 포름:메탄올 혼합용매로 추출 및 분획하여 클로로포름:메탄올 용매 가용분획을 얻는 단계로서, 이때 클로로포름 메탄올 혼합용매의 혼합비는 1:0.1~1의 범위로 하는 것이 바람직하다. 상기 클로로포름에 용해되지 않은 분획부 중 클로 로포름 메탄올 혼합용매로 추출시 용해된 분획부에는 대부분의 알칼로이드(alkaloids)들이 함유되어 있으며, 클로로포름 메탄올 혼합용매에 용해되지 않는 분획부 중 메탄올에 용해되는 분획부에는 4급 알칼로이드(quaternary alkalo ids) 및 N-옥시드들이 함유되어 있다.
제4단계: 상기 클로로포름:메탄올 혼합용매에 용해되지 않는 분획부를 메탄올로 추가로 추출 및 분획하여 메탄올 가용분획 및 메탄올에 용해되지 않은 물분획 을 얻는다.
본 발명은 상기 각 단계로부터 얻어지는 저급알콜 가용분획, 클로로포름 가용분획, 클로로포름-메탄올 가용분획, 메탄올 가용분획 및 물가용분획을 포함하는 뇌세포 보호 및 기억력 증진용 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 천초 추출물은 통상의 분획방법으로 추가의 분획공정을 수행할 수도 있다(Harborne J.B. Phytoche mical methods: A guide to modern techniques of plant analysis. 3rd Ed. pp 6-7, 1998).
본 발명의 천초추출물을 포함하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 천초추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘, 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히 드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 천초추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
천초추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 500 mg/㎏의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 천초 추출물 및 분획물의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 천초추출물을 포함하는 조성물은 상기와 같은 제형으로 뇌세포 보호 및 기억력 증진을 위한 약제, 식품 및음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 천초 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.
본 발명의 천초 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할수 있는 약제이다.
본 발명의 상기 천초 추출물은 뇌세포 보호 및 기억력 증진의 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 천초추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품의 조성물은 전체 식품 중량의 0.1 내지 15 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%로 가할 수 있으며, 식품 건강 음료 조성물은 100m1를 기준으로 1 ∼ 30g, 바람 직하게는 3 ∼10g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 천초추출물을 함유하는 외에는 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크 로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 크실리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우 디오시드 A, 글리시르히진등), 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화 물의 비율은 본 발명의 조성물 100m1당 일반적으로 약 1 ∼ 20g, 바람직하게는 약 5 ∼ 12g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 이들에 의해 제한되지는 않는다.
실시예 1: 천초 추출물 제조
천초 250g을 세절하여 속실렛 장치를 이용하여 70% 메탄올 (750 ㎖)로 3회 추출하였다. 추출물을 여과한 후, 회전진 공농축기(rotary evaporator: EYELA N-N 계열)를 이용하여 감압 농축하고, 동결건조하여 메탄올 조추출물 16g을 얻었다( 분획 1 ).
동결건조한 메탄올 추출물 10g을 다른 유기용매로 분획하기 위하여, 200 ㎖ 의 메탄올: 물 (4:1)에 녹인 후 2M 황산 으로 pH 3으로 조절하여 동량의 클로로포름으로 3회 연속 추출하고 이를 감압농축 및 동결건조하여 클로로포름 가용 분획 3.83g을 얻었으며( 분획 2 ), 물층은 수산화암모늄으로 pH 10으로 조절한 후, 동량의 클로로포름:메탄올 (3:1) 로 2회 추출하였다. 클로로포름:메탄올(3:1)에 녹는 층을 감압농축 및 동결건조하여 클로로포름-메탄올 가용분획 0.
26g을 얻었다( 분획 3 ), 물층은 동량의 메탄올로 3회 추출, 감압농축 및 동결건조를 수행하여 4.5g의 메탄올 가용분획 ( 분획 4 )과 0.65g의 물 가용분획 ( 분획 5 )을 각각 얻어 이를 하기의 활성실험에 시료로 사용하였다.
실험예 1: 그리스 갭 분석시험(Grease Gap assay)
1) 실험방법
백서 대뇌피질의 '웨지(Wedges)'를 제조하여 두 구획의 브레인 배스(two compartment brain bath)에 장치한 후, 시험을 시행하였다[Harrison NL, Simmonds, MA, Quantitative studies on some antagonists of N-methyl D-aspa rtate in slices of rat cerebral cortex. Br. J. Pharmacol. 84, p381-391 1985년]. 뇌를 신속히 꺼내어 뇌조직 절편기를 이용하여 앞쪽 2~3 mm를 제거하고, 나머지 부위를 수직으로 잘라 500~600 ㎛ 두께의 관상 절편(coronal s ection)을 제조하여 신속히 산화된 크랩스 배지(oxygenated Krebs medium)에 넣은 후, 정중선을 중심으로 2등분하여 대뇌피질과 뇌량(corpus callosum)을 포함하는 대뇌피질쪽이 1.5 mm이고 뇌량쪽은 1 mm인 웨지를 제조하였다.
상온에서 산화된 크랩스 배지에 2시간 방치 후, 웨지들을 두 구획의 브레인 배스(two compartment brain chamber) 에 고압 실리 콘 그리스(high vacuum silicone grease)를 바른 슬릿사이로 장치하였다. 양쪽 구획 모두 1분당 2 ㎖의 속도로 크랩스배지를 관류시켰다. 천초 추출물(분획 1, 2, 3, 4 및 5)을 대뇌피질쪽의 구획에 10㎍/㎖의 농도로 10분 전에 미리 투여하기 시작하고, 흥분성 아미노산인 AMPA(α-아미노-3-히드록시-5-메틸-4-이속사졸 프로피오닉산 ) 40μM을 2분간 투여한 후, 두 구획사이의 d.c.전위를 Ag/AgCl 전극을 통하여 측정하고, 이를 증폭기(amplifier)를 통하여 증폭한 후 맥랩 데이타 포착시스템(McLab Data Acquisition System)을 이용하여 측정하였다.
2) 실험결과
AMPA에 의한 신경세포의 탈분극(depolarization) 유발은 신경세포의 손상에 의한 자극의 척도로 간주되어지고 있다 . 실험결과, 도 1A에서 나타난 바와 같이, AMPA 40μM을 두 구획의 브레인 배스(two compartment brain bath)에 투여한 경우, 0.45 mV의 탈분극이 유도되는 반면, 천초추출물(분획 1)(10㎍/㎖)을 전처리하고 AMPA를 투여한 경우, 탈분극 정도가 0.21 mV로 현저히 줄어들었음을 알 수 있다.(도 1B) 특히, 천초 추출물의 다른 분획들(분획 2, 3, 4 및 5)을 전처리한 결과, AMPA에 의한 탈분극을 각각 75%, 54%, 27%, 67% 억제함이 밝혀졌다(도 2).
따라서, 천초추출물 중의 여러 가지 성분들에 의하여 신경보호작용이 유발됨을 알 수 있다.
실험예 2: 세포 생존율 시험 (MTT assay)
1) 실험방법
MTT 실험은 미토콘드리아 탈수소효소(dehydrogenase)의 활성을 비색정량하여 측정하는 방법으로, 미토콘드리아 산화환원전위(mitochondrial redox potential)나 세포 생존율을 알아보는데 주로 이용된다(Mosmann et al. J. Immu nol. Methods , 65, p55-63, 1983).
본 실험에서는 세포의 생존율을 알아보기 위하여, 각각 다른 농도의 천초 추출물이 첨가된 배양액으로 24시간 배양된 세포에, MTT 시약(Sigma, USA) 3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드, 제품번호 M 2128)를 PBS(phosphate- buffered saline)에 녹여 여과한 후 최종 0.5 ㎎/㎖의 농도로 각 웰에 첨가하고, 37 ℃에서 3시간 배양하였다. 이때 활동하는 미토콘드리아를 가진 살아있는 세포는 테트라졸리움 고리(tetrazolium ring)를 분해하여 짙은 남색의 포르마잔(formazan)을 생성하므로, 이를 녹여내기 위하여 100 ㎕ DMSO와 10 ㎕ 소렌슨 글리신 완충액(Sorenson glycine buffer: 0.1M glycine, 0.1M NaCl, pH 10.5)를 첨가하고, 570 nm에서 흡광도를 측정하 였다.
2) 실험결과
실험결과, 도 3에서와 같이 C6 아교세포에 AMPA (40μM)을 투여할 경우 거의 32% 정도의 세포가 죽게 되는 반면, 천초추출물(분획 1) (10㎍/㎖)을 전처리할 경우 세포의 생존율을 90% 이상으로 회복시키고 있다.
실험예 3: NaNO 2 기억 시험
NaNO 2 에 의한 뇌의 산소대사 결핍과 기억 및 학습과 관련있는 콜린성 신경전도는 서로 밀접한 관련이 있다고 알려져 있다[Schindler등, Nootropic drugs: Animal models for studying effects on cognition. Drug Develop Res 4:
p567-576, 1984]. NaNO 2 에 의한 뇌의 산화적 대사(oxidative metabolism) 장애와 콜린성 신경억제로 인한 기억 장애는 서로 밀접한 관련이 있다. 따라서 약물 처리 후 NaNO 2 에 의한 사망유발 시간의 지연이 나타난다면 그것은그 약물의 기억력 증가효과를 나타내는 척도의 하나로 간주될 수 있다.
1) 실험방법
웅성생쥐(20 g)에 천초추출물(분획 1)을 10 mg/kg, P.O.로 투여하고, 60분 후에 NaNO 2 를 250 mg/kg, s.c.로 주사하고 호흡이 정지할 때까지의 시간을 측정하여, 호흡이 지속되는 시간을 대조군에 비교하여 기억향상효과를 평가 하였다.
2) 실험결과
실험결과 도 4에서 나타난 바와 같이, NaNO 2 에 의한 뇌대사 장애로 인한 사망유도 시간에 비하여, 천초추출물(분획 1) (10 mg/kg, P.O.)을 전처리한 경우 45%의 증가를 유발하므로써 천초에 의한 기억력 증가효과를 나타내었다.
실험예 4: 수동 회피 기억 시험 (Passive Avoidance Test)
1) 실험방법
웅성생쥐(20 g)에 천초 추출물(분획 1, 분획 2, 분획 3, 분획 4, 분획 5)을 하루에 10 mg/kg, P.O.로 3일간 투여하고, 제미니 회피 시스템(Gemini Avoidance System, San Diego Instruments, USA) 을 이용하여 수동회피 기억시험을 시행하였다. 실험은 쿠마르 등의 방법을 기본으로 하여 약간의 수정을 가하여 다음과 같이 시행하였다[Kumar, V., Si ngh, P.N., Muruganandan, A. V., Bhattacharya. Effect of Indian Hypericum perforatum Linn on animal models of cognitive dysfunction. J Ethnopharmacology 72, p119-128, 2000].
첫째 날의 트레이닝 실험에는, 마우스를 밝은 박스에 넣고 300초 동안 순화 (acclimation)시킨 후, 자동으로 문이 열리게 하여 어두운 박스로 이동하도록 한다. 어두운 박스로 이동하면 0.3 mA의 전기 자극을 1초간 가한다. 24시간 후의 테스트 실험에는, 마우스를 밝은 박스에 300초 동안 순화시킨 후 문을 열어주어 어두운 박스로 이동하게 한다. 이때 어두운 박스로 이동할 때까지 걸리는 시간을 측정한다. 둘째 날에는 전기자극을 주지 않는다. 만약, 마우스가 500 초 동안 어두운 박스로 이동하지 않으면 최대 점수인 500초를 준다.
2) 실험결과
첫째날의 트레이닝 실험에서는 실험결과 도 5A에서 나타난 바와 같이각 실험군간에 유의적인 차이가 없었다. 둘째날의 테스트 실험에서는 실험결과 도 5B에서 나타난 바와 같이, 스코폴라민(scopolamine) 처치로 치매가 유발된 마우 스는 대조군에 비하여 92.7%의 기억능력이 떨어졌다. 하지만 천초 분획 1, 2, 3, 4 및 5를 3일간 투여한 마우스의 경우, 스코폴아민에 의한 기억 장애를 각각 99%, 33%, 61%, 133% 및 112% 회복시키는 우수한 기억회복력 효과를 나타내었다.
실험예 5: 천초 추출물의 경구독성시험
1) 실험방법
20 g 정도의 ICR 마우스 25마리를 온도 23 ℃, 상대습도 50%, 조도 150~ 300 룩스(Lux)의 동물실에서 1주일간 사육한 후 각 5마리씩 5군으로 나누어 실험하였다.
실시예에서 얻은 천초 추출물(분획 1, 분획 2, 분획 3, 분획 4, 분획 5)을 0.1 % 트윈(Tween) 80에 녹인 후, 5 그룹의 마우스에 각각 약효유발 용량 (10 mg/Kg, P.O.)의 100배 (1,000 mg/Kg, P.O.) - 1000배 (10,000 mg/Kg, P.O.) 를 1회 경구 투여하였다. 투여 후 7일간 일반 증상의 변화 및 사망 동물의 유무를 관찰 하였다. 그리고 투여 7일째 마우 스를 치사시켜 해부하고 육안으로 내부 장기를 검사하였다.
2) 실험결과
천초 추출물의 분획 투여로 인한 이상 소견은 관찰되지 않았으며, 천초 추출물 분획 1, 분획 2, 분획 3, 분획 4 및 분획 5의 치사량은 최소한 각각 5,000 mg/kg 이상, 10,000 mg/Kg 이상, 10,000 mg/Kg 이상, 5,000 mg/Kg 이상 및 5,0 00 mg/Kg 이상으로 나타났다.
하기에 상기 약학조성물의 제제예를 설명하나 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예 1. 정제하기의 조성에 따라, 통상의 정제 제조방법으로 각각 제제화하였다.
천초의 메탄올 추출물 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ500.0 mg
유당ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 500.0 mg
탈크ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 5.0 mg
마그네슘 스테아레이트ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 1.0 mg
제제예 2. 캡슐제
하기의 조성에 따라, 다음과 같은 방법으로 캡슐제를 제조하였다.
천초추출물을 체질하여 부형제와 혼합한 후, 젤라틴 캡슐중에 충전하여 캡슐을 제조하였다.
천초의 메탄올 추출물 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 500.0 ㎎
전분 1500 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 10.0 ㎎
스테아르산마그네슘 BP ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ100.0 ㎎
제제예 3. 시럽제
하기의 조성에 따라, 다음과 같은 방법으로 시럽제를 제조하였다.
먼저 정제수에 백당을 용해시켰다. 파라옥시벤조에이트, 파라옥시프로필벤조에이트 및 천초추출물을 가하여 60℃에서 용해시킨 후 냉각하고, 정제수를 가하여 150 ㎖로 만들었다.
천초의 메탄올 추출물ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 5.0 g
백당ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ95.1 g
파라옥시벤조에이트ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ80.0 ㎎
파라옥시프로필벤조에이트 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 16.0 ㎎
정제수ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍto 150 ㎖
제제예 4. 액제
하기의 성분을 통상의 액제 제제방법으로 제제화하고, 갈색병에 충전하여 액 제를 제조하였다.
천초의 메탄올 추출물ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 500.0 mg
이성화당ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 20.0 g
산화방제제ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 5.0 mg
메틸 파라옥시벤조에이트 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 2.0 mg
정제수ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ to 100.0 ㎖
제제예 5. 산제
하기의 성분을 통상의 산제의 제조방법으로 혼합하고, 봉지에 넣어 밀봉한 후 산제를 제조하였다.
천초의 메탄올 추출물 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 50.0 mg
유당 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ100.0 mg
탈크 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 5.0 mg
제제예 6. 주사제
하기의 성분을 통상의 주사제의 제조방법으로 2.0 ㎖의 용량의 앰플에 충전하고, 멸균시켜 주사제를 제조하였다.
천초의 메탄올 추출물 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 50.0 mg
산화방제제ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 1.0 mg
트윈 80 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍ 1.0 mg
주사용 증류수 ㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍㆍto 2.0 ㎖
또한 하기와 같은 방법으로 건강식품을 제조한다.
[선식의 제조]
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 만들었다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 만들었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 건조 천초추출물을 다음의 비율로 배합하여 과립을 만들었다.
곡물류 : 현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%,
종실류 : 들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%,
천초 추출물 건조분말 : 3 중량%, 영지 0.5중량%, 지황 0.5중량%
Claims (10)
- 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품에 있어서, 천초추출물을 포함하는 뇌세포 보호 및 기억력 증진용 약학조성물.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 전체 조성물에 대하여 0.5~ 50 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 천초를 탄소수 1 내지 4의 저급알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, 에테르, 에틸아세테이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 유기용매로 추출하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 제 3항에 따른 방법으로 얻어진 천초추출물을 메탄올:물 혼합용매에 녹인 후, 산으로 pH 2~4로 조절하고 동량의 클로로포름으로 더 추출, 분획함으로써 얻어지는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 제 3항에 따른 방법으로 얻어진 천초추출물을 메탄올:물 혼합용매에 녹이고, 산으로 pH 2~4로 조절하여 동량의 클로로포름으로 추출한 후, 클로로포름에 용해되지 않는 분획부를 수산화암모늄으로 pH 9~ 12로 조절하여 동량의 클로로포름 메탄올 혼합용매로 추출, 분획함으로써 얻어지는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 제 3항에 따른 방법으로 얻어진 천초추출물을 메탄올:물 혼합용매에 녹이고, 산으로 pH 2~4로 조절하여 동량의 클로로포름으로 추출한 후, 클로로포름에 용해되지 않는 분획부를 수산화암모늄으로 pH 9~ 12로 조절하여 동량의 클로로포름 메탄올 혼합용매로 추출하고, 이 중 클로로포름 메탄올 혼합용매에 용해되지 않는 분획부를 메탄올로 더 추출, 분획함으로써 얻어지는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 천초추출물이 제 3항에 따른 방법으로 얻어진 천초추출물을 메탄올 물 혼합용매에 녹이고, 산으로 pH 2~4로 조절하여 동량의 클로로포름으로 추출한 후, 클로로포름에 용해되지 않는 분획부를 수산화암모늄으로 pH 9~ 12로 조절하여 동량의 클로로포름 메탄올 혼합용매로 추출하고, 이 중 클로로포름:메탄올 혼합용매에 용해되지 않는 분획부를 메탄올로 더 추출, 분획하여 메탄올에 용해되지 않은 분획으로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 담체, 부형제, 희석제 또는 이들의 혼합물을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 제 1항에 있어서, 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화되는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
- 뇌세포 보호 및 기억력 증진 효과를 나타내는 천초 추출물 및 식품학적으로 허용가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 질환을 예방 및 치료하고 기억력을 높이는 뇌 세포 보호 효과를 유도하는 건강보조식품.
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