KR20220151613A

KR20220151613A - 코로나바이러스 감염의 치료

Info

Publication number: KR20220151613A
Application number: KR1020227029182A
Authority: KR
Inventors: 드로어 벤-애셔; 레자 파티
Original assignee: 레드힐 바이오파마 엘티디
Priority date: 2020-03-10
Filing date: 2021-03-08
Publication date: 2022-11-15
Also published as: MX2022011173A; US20210322390A1; AU2021235304A1; JP2023517920A; US11364227B2; US11045453B1; US11052073B1; WO2021181157A1; BR112022017923A2; US20210299108A1; EP4117630A4; IL295658A; CA3174438A1; US11918560B2; US20220031682A1; CN117695284A; CN115515560B; EP4117630A1; CN115515560A

Abstract

본 발명은 대체적으로 바이러스학, 감염성 질병, 및 의약품의 분야에 관한 것이며, CoV-매개 질병, 예를 들어 SARS-CoV-2, SAR8, 또는 MERS에 의해 야기되는 것을 치료하기 위한 화합물, 조성물, 방법 및 키트를 기재한다. 더 구체적으로는, 본 발명은 2019 신규 코로나바이러스를 포함한 코로나바이러스를 치료할 수 있는 코로나바이러스의 효과적인 억제제에 관한 것이다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 코로나바이러스의 효과적인 억제제로서의 WX-671의 새로운 용도 및 인간에서 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 이의 응용을 제공한다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 코로나바이러스의 효과적인 억제제로서의 ABC294640의 새로운 용도 및 인간에서 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서의 이의 응용을 제공한다.

Description

코로나바이러스 감염의 치료

코로나바이러스는 세포질에서 복제되는 지질 외피보유 양성-가닥 RNA 바이러스(+ss RNA)이다. 2002년 이전에, 코로나바이러스는 유의한 인간 병원체인 것으로 간주되지 않았다. 다른 인간 코로나바이러스, 예컨대 HCoV-229E 및 HCoV-OC43은 건강한 성인에서 단지 경미한 호흡기 감염만을 초래하였다. 그러나 2002년에, 중국 광둥성에서 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)가 출현하였다. SARS-CoV는 중국, 홍콩, 대만, 싱가포르, 및 베트남 전체에 걸쳐 상당히 대유행하면서 동남아시아에 주로 영향을 미쳤지만, 이 지역 외부에서 이 바이러스에 감염되었다.

2012년에, 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV)가 사우디 아라비아에서 중증 호흡기 질병을 갖는 환자에서 검출되었다. 인간에서의 MERS-CoV 감염의 임상 특징은 무증상적 폐렴부터 매우 증증인 폐렴까지의 범위에 이르며, 이때 급성 호흡 곤란 증후군, 패혈성 쇼크, 및 사망을 초래하는 다기관 부전의 잠재적인 발생을 동반한다. MERS-CoV 감염의 최초의 사례가 보고되고 이 바이러스가 단리된 이래로, 이 바이러스의 역학적, 생태학적, 및 생물학적 특성을 이해하는 데 상당한 진전이 이루어져 왔다. 실시간 역전사(RT)-PCR에 의한 MERS-CoV로 인한 급성 감염의 검출을 위한 몇몇 검정이 개발되어 왔으며 광범위하게 사용되고 있다.

2019년에, 신규 코로나바이러스(nCoV)가 전세계적으로 출현하였으며, 이제 코로나바이러스 질병 2019(COVID-19)를 야기하는 것으로 알려져 있다. COVID-19는 SARS 바이러스와 계통발생학적으로 근연인 바이러스인 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS 코로나바이러스-2 또는 SARS-CoV-2)에 의해 야기되는 감염성 질병이다. 세계보건기구(WHO)는 2019-2020 코로나바이러스 대유행을 국제적 공중보건 비상사태(Public Health Emergency of International Concern, PHEIC)로 선언하였다. 대부분의 환자의 경우, COVID-19는 폐에서 시작하고 종료되는데, 그 이유는, 코로나바이러스는 호흡기 질병을 주로 야기하기 때문이다.

본 발명은 대체적으로 바이러스학, 감염성 질병 및 의학 분야에 관한 것이다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 의약품의 제조에 있어서의, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 새로운 용도를 제공한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 사람에게 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다:

. 일 실시 형태에서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 약제학적으로 허용되는 담체 물질과 배합된 상태이다. 일 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 생리학적 완충 식염수이다. 일 실시 형태에서, 생리학적 완충 식염수 중에 현탁된 ABC294640 하이드로클로라이드를 포함하는 현탁액이 형성되고, 투여하는 단계는 튜브를 사용하여 상기 현탁액을 위에 직접 전달하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, ABC294640 및 선택적으로 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태(unit dosage form)이다. 일 실시 형태에서, 투여 형태는 고체 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 야생형이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체이다. 일 실시 형태에서, 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 250 mg의 ABC294640 하이드로클로라이드를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 ABC294640 하이드로클로라이드의 1000 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 2회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, ABC294640의 유효량의 투여는 적어도 10%만큼의 바이러스 부하(viral load)의 감소를 가져온다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 유효량을 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 갖는 인간에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 개시된다:

. 일 실시 형태에서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 약제학적으로 허용되는 담체 물질과 배합된 상태이다. 일 실시 형태에서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 생리학적 완충 식염수이다. 일 실시 형태에서, 생리학적 완충 식염수 중에 현탁된 ABC294640 하이드로클로라이드를 포함하는 현탁액이 형성되고, 투여하는 단계는 튜브를 사용하여 상기 현탁액을 위에 직접 전달하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, ABC294640 및 선택적으로 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 투여 형태는 고체 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 야생형이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체이다. 일 실시 형태에서, 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 250 mg의 ABC294640 하이드로클로라이드를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 ABC294640 하이드로클로라이드의 1000 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 2회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하는 데 사용하기 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하는 데 사용하기 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하는 데 사용하기 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하는 데 사용하기 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)의 용도가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 화합물 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)의 용도가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640을 포함한다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640을 포함한다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640을 포함하는 항-코로나바이러스 감염제가 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드)를 포함하는 항-코로나바이러스 감염제가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 인간 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 ABC294640(3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 ABC294640을 투여하기 전에 대상체가 인간 코로나바이러스로 감염되어 있음을 진단적으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염은 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, COVID-19(SARS-CoV-2) 코로나바이러스 감염을 치료하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 ABC294640(3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 1회 이상의 치료적 유효 용량을 적어도 10일 동안 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 화합물을 투여하기 전에 대상체가 SARS-CoV-2로 감염되어 있음을 진단적으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, ABC294640의 하루당 총 용량은 각각의 경우에 대해 독립적으로 약 250 mg 내지 약 1500 mg으로부터 선택된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, COVID-19(SARS-CoV-2) 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에게 ABC294640(3-(4-클로로-페닐)-아다만탄-1-카르복실산(피리딘-4-일메틸)-아미드) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 약제학적 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 이때 ABC294640은 세포 내부에서의 바이러스 복제 및 하류 염증성/면역 반응 둘 모두에 관여하는 숙주 세포 인자인 스핑고신 키나제-2(SK2)에 작용하는 능력을 갖는다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스로 감염된 숙주 세포에서 상기 코로나바이러스의 복제를 조절하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 상기 바이러스의 복제를 조절하기에 유효한 양으로, 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640을 상기 숙주 세포에 투여하는 단계를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 용도가 개시된다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스는 2019 신규 코로나바이러스 COVID-19이다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염은 코로나바이러스 폐렴이다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, ABC294640은 세포 내부에서의 바이러스 복제 및 하류 염증성/면역 반응 둘 모두에 관여하는 숙주 세포 인자인 스핑고신 키나제-2(SK2)에 대해 활성이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 본 발명은 패키징된 약제학적 제품을 특징으로 한다. 패키징된 약제학적 제품은 용기, 상기 용기 내의 경구 투여에 적합한 복수의 ABC294640 단위 투여 형태, 및 용기와 관련되고 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 ABC294640의 투여를 지시하는 범례(예를 들어, 라벨 또는 삽입물(insert))를 포함한다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 의약품의 제조에 있어서의, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 새로운 용도를 제공한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다:

. 일 실시 형태에서, WX-671은 하이드로겐 설페이트 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, WX-671은 약제학적으로 허용되는 담체 물질과 배합된 상태이다. 일 실시 형태에서, WX-671 및 선택적으로 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 투여 형태는 고체 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 야생형이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체이다. 일 실시 형태에서, 200 mg의 WX-671이 이를 필요로 하는 인간에게, 200 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 단일 캡슐로 투여된다. 일 실시 형태에서, 400 mg의 WX-671이 이를 필요로 하는 인간에게, 400 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 2개의 캡슐로 투여된다. 일 실시 형태에서, 약 231 mg의 WX-671.1(우파모스타트)이 이를 필요로 하는 인간에게, 200 mg의 유리 형태와 등가인 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 단일 캡슐로 투여된다. 일 실시 형태에서, 약 463 mg의 WX-671.1(우파모스타트)이 이를 필요로 하는 인간에게, 400 mg의 유리 형태와 등가인 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 2개의 캡슐로 투여된다. 일 실시 형태에서, WX-671의 유효량의 투여는 적어도 10%만큼의 바이러스 부하의 감소를 가져온다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 유효량을 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 갖는 인간에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 개시된다:

. 일 실시 형태에서, WX-671은 하이드로겐 설페이트 염으로서 존재한다. 일 실시 형태에서, WX-671은 약제학적으로 허용되는 담체 물질과 배합된 상태이다. 일 실시 형태에서, WX-671 및 선택적으로 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 투여 형태는 고체 투여 형태이다. 일 실시 형태에서, 고체 투여 형태는 캡슐이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 야생형이다. 일 실시 형태에서, SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체이다. 일 실시 형태에서, WX-671.1(우파모스타트)은 200 mg의 유리 염기를 포함하는 단일 캡슐로서 투여되며, 여기서는 단일 캡슐이 이를 필요로 하는 인간에게, 200 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 투여된다. 일 실시 형태에서, WX-671.1(우파모스타트)은 각각의 캡슐이 200 mg을 포함하는 2개의 캡슐로서 투여되며, 여기서는 2개의 캡슐이 이를 필요로 하는 인간에게, 400 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 1회 투여된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하는 데 사용하기 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하는 데 사용하기 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671이 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하는 데 사용하기 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하는 데 사용하기 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 용도가 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 용도가 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)의 용도가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)의 용도가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671을 포함한다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671을 포함한다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제학적 조성물이 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)를 포함한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671을 포함하는 항-코로나바이러스 감염제가 개시된다:

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본 명세서에 예시된 태양에 따르면, (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)를 포함하는 항-코로나바이러스 감염제가 개시된다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 인간 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 N-α(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시-카르보닐피페라지드-하이드로클로라이드 또는 이의 전구약물 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드 중 하나로부터 선택되는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 선택되는 화합물은 이의 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서 존재할 수 있다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 화합물을 투여하기 전에 대상체가 인간 코로나바이러스로 감염되어 있음을 진단적으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염은 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드이며, 경구 투여가능 형태이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시-카르보닐피페라지드-하이드로클로라이드이며, 정맥내 또는 근육내 전달되는 주사가능 형태이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 설페이트 또는 하이드로겐 설페이트 염으로서 존재하는 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드이다.

일 실시 형태에서, 화합물은 L-입체이성질체 형태로 존재하는 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-(L)-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지늄 하이드로겐 설페이트이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드이고, 하루당 200 mg의 용량으로 투여될 것이다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드이고, 하루당 400 mg의 용량으로 투여될 것이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, COVID-19(SARS-CoV-2) 코로나바이러스 감염을 치료하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 N-α(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시-카르보닐피페라지드-하이드로클로라이드 또는 이의 전구약물 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드 중 하나로부터 선택되는 화합물의 1회 이상의 치료적 유효 용량을 적어도 14일 동안 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 선택되는 화합물은 이의 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서 존재할 수 있다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 화합물을 투여하기 전에 대상체가 SARS-CoV-2로 감염되어 있음을 진단적으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 화합물 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드의 하루당 총 용량은 각각의 경우에 대해 독립적으로 약 200 mg 내지 약 400 mg으로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-(L)-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지늄 하이드로겐 설페이트이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, COVID-19(SARS-CoV-2) 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 방법이 개시되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 인간 대상체에게 N-α(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시-카르보닐피페라지드-하이드로클로라이드 또는 이의 전구약물 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드 중 하나로부터 선택되는 화합물의 치료적으로 허용되는 양을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 선택되는 화합물은 이의 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서 존재할 수 있으며, 상기 화합물은 혈구응집소(HA)-활성화 II형 막관통 세린 프로테아제(TTSP)에 결합함으로써, 코로나바이러스에 대한 노출 후에 인간 대상체에서 코로나바이러스 복제를 증가시키는 능력을 갖는다. 일 실시 형태에서, TTSP는 막관통 프로테아제 세린 SI 구성원 2(TMPRSS2)이다. 일 실시 형태에서, TTSP는 막관통 프로테아제 세린 11A(TMPRSS11(A))이다. 일 실시 형태에서, 상기 방법은 화합물을 투여하기 전에 대상체가 SARS-CoV-2로 감염되어 있음을 진단적으로 확인하는 단계를 추가로 포함한다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-(L)-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지늄 하이드로겐 설페이트이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스로 감염된 숙주 세포에서 상기 코로나바이러스의 복제를 조절하는 방법이 개시되며, 상기 방법은 상기 바이러스의 복제를 조절하기에 유효한 양으로, N-α(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시-카르보닐피페라지드-하이드로클로라이드 또는 이의 전구약물 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드 중 하나로부터 선택되는 화합물을 상기 숙주 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 선택되는 화합물은 이의 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서 존재할 수 있다. 일 실시 형태에서, 화합물은 N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-(L)-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지늄 하이드로겐 설페이트이다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의 WX-671의 용도가 개시된다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스는 2019 신규 코로나바이러스 COVID-19이다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염은 코로나바이러스 폐렴이다. 일 실시 형태에서, WX-671은 숙주 세린 프로테아제에 대해 활성인 억제제이고, 숙주 세포 내로의 스파이크 단백질-유도 침입을 차단한다.

본 명세서에 예시된 태양에 따르면, 본 발명은 패키징된 약제학적 제품을 특징으로 한다. 패키징된 약제학적 제품은 용기, 상기 용기 내의 경구 투여에 적합한 복수의 WX-671 단위 투여 형태, 및 용기와 관련되고 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 WX-671의 투여를 지시하는 범례(예를 들어, 라벨 또는 삽입물)를 포함한다.

본 개시된 실시 형태는 첨부된 도면을 참조하여 추가로 설명될 것이다. 도시된 도면들은 반드시 축척대로 작성된 것은 아니며, 대신에 일반적으로, 본 개시된 실시 형태의 원리를 예시하는 데 중점을 둔다.
도 1은, 본 명세서에서 인간 기관지 상피 세포(HBEC)로 지칭되는 인간 EpiAirway™ 세포 배양 모델의 도면이다.
도 2는, 3일간 인큐베이션 후에, 오파가닙-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 약리학적으로 관련된 농도에서 관찰되었음을 보여주는 그래프이다.
도 3은, 3일간 인큐베이션 후에, 오파가닙-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 강력한 항-바이러스 효과가 관찰되는 용량 범위에 걸쳐 제한된 세포독성을 보여주는 그래프이다.
도 4a는, 3일간 인큐베이션 후에, WX-UK1-처리된 및 우파모스타트-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 약리학적으로 관련된 농도에서 관찰되었음을 보여주는 그래프이다. 바이러스를 정단측 세척(apical wash)에서 TCID50 검정을 통해 적정하였다. 각각의 기호는 시험된 3개의 반복시험물로부터 평균된 역가를 나타낸다.
도 4b는, 3일간 인큐베이션 후에, 우파모스타트-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 약리학적으로 관련된 농도에서 관찰되었음을 보여주는 그래프이다. 바이러스를 정단측 세척에서 플라크 감소를 통해 적정하였다. 각각의 기호는 시험된 3개의 반복시험물로부터 평균된 역가를 나타낸다.
도 5는, 3일간 인큐베이션 후에, WX-UK1-처리된 및 우파모스타트-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 강력한 항-바이러스 효과가 관찰되는 용량 범위에 걸쳐 제한된 세포독성을 보여주는 그래프이다.
도 6은 곡선 적합화 방정식(curve fitting equation) 1로서, y-축 상에는 분율 속도가, 그리고 x-축 상에는 WX-UK1 농도가 나타나 있다. 이 그래프는 WX-UK1이 TMPRSS2의 활성을 어떻게 억제하는지를 보여준다.
도 7은 곡선 적합화 방정식 1로서, y-축 상에는 분율 속도가, 그리고 x-축 상에는 WX-UK1 농도가 나타나 있다. 이 그래프는 WX-UK1이 TMPRSS11A의 활성을 어떻게 억제하는지를 보여준다.
도 8a 및 도 8b는 Calu-3 세포 및 Vero-E6 세포에서 SARS-2-S-유도 침입의 우파모스타트 및 WX-UK1에 의한 억제를 보여주는 그래프이다. Calu-3 세포(도 8a) 또는 Vero-E6 세포(도 8b)를 지시된 농도의 우파모스타트, WX-UK1, 카모스타트 메실레이트, 또는 클로로퀸과 함께 사전-인큐베이션하고, 후속으로 VSV-SARS-2 S 단백질을 보유하는 유사입자를 접종하였다. 세포 용해물에서 루시퍼라제 활성을 결정함으로써 위형 침입을 분석하였다. 4개의 반복시험 샘플로 수행된 단일 실험의 결과가 나타나 있다. 오차 막대는 표준 편차(SD)를 나타낸다.
도 9는 Calu-3 세포에서 VSV-g 유도 침입의 우파모스타트 및 WX-UK1에 의한 억제를 보여주는 그래프이다. Calu-3 세포를 지시된 농도의 우파모스타트, WX-UK1, 카모스타트 메실레이트, 또는 클로로퀸과 함께 사전-인큐베이션하고, 후속으로 VSV-g 단백질을 보유하는 유사입자를 접종하였다. 세포 용해물에서 루시퍼라제 활성을 결정함으로써 위형 침입을 분석하였다. 4개의 반복시험 샘플로 수행된 단일 실험의 결과가 나타나 있다. 오차 막대는 표준 편차(SD)를 나타낸다.
도 10은 실시예 7에 기재된 COVID-19 폐렴에서의 오파가닙의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2a 상 연구로부터 통계학적 분석 후에 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 제공받지 않게 되기까기의 시간(mITT 민감도)의 카플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선을 나타낸다.
도 11은 실시예 7에 기재된 COVID-19 폐렴에서의 오파가닙의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2a 상 연구로부터 통계학적 분석 후에 L/분으로의 산소 유량을 기준으로 한 보충적 산소에 있어서의 기저선으로부터 50% 감소에 이르기까지의 시간(mITT 민감도)에 대한 시간 누적 발병률의 카플란-마이어 곡선을 나타낸다.
도 12는 실시예 7에 기재된 COVID-19 폐렴에서의 오파가닙의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2a 상 연구로부터 통계학적 분석 후에 14일(일수 1 내지 일수 14) 동안 일일 산소 유량(L/분) 측정치를 사용하여 기저선으로부터의 % 변화에 대한 총 보충적 산소 요구량(곡선 아래 면적)의 점 도표를 나타낸다.
정의
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "작용제(agent)"는 약리학적 활성 - 개체에 대한 작용제의 효과 - 을 갖는 약물 물질을 지칭한다. 용어 "작용제", "활성 성분", "약물 물질", 및 "화합물"은 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 ABC294640은 유리 염기 또는 염으로서의 형태의, 또는 입체이성질체 또는 비-입체이성질체 형태의 [3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산 (피리딘-4-일메틸)아미드]를 지칭한다. 고체인 화합물, 염, 전구약물 또는 용매화물의 경우에, 본 발명의 화합물, 염, 및 용매화물은 상이한 결정 형태들로 존재할 수 있으며, 이들 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도됨이 당업자에 의해 이해된다. ABC294640 하이드로클로라이드로도 알려진 오파가닙은 ABC294640의 특정 염 형태이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 WX-671은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 (N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)를 지칭한다. 고체인 화합물, 염, 전구약물 또는 용매화물의 경우에, 본 발명의 화합물, 염, 및 용매화물은 상이한 결정 형태들로 존재할 수 있으며, 이들 모두는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도됨이 당업자에 의해 이해된다. WX-671.1(우파모스타트)은 WX-671의 특정 결정질 염 형태이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "코로나바이러스"는 천연 발생(예를 들어, 야생형) 코로나바이러스; 천연 발생 코로나바이러스 변이체; 및 실험실에서 생성된 코로나바이러스 변이체 - 선택에 의해 생성된 변이체, 화학적 변형에 의해 생성된 변이체, 및 유전자 변형된 변이체(예를 들어, 재조합 DNA 방법에 의해 실험실에서 변형된 코로나바이러스)를 포함함 - 를 포함한다. 일 실시 형태에서, 대상체는 비강 분비물(비강 또는 비인두(NP) 면봉검체), 목(구인두) 면봉검체, 혈액, 또는 다른 체액 샘플을 수집하고, 예를 들어 항원-포획 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)을 사용하거나, (대상체가 IgM 항체를 갖는지의 여부를 결정하기 위하여) IgM ELISA를 사용하거나, (대상체가 IgG 항체를 갖는지의 여부를 결정하기 위하여) IgG ELISA를 사용하거나, 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)을 사용하거나, 또는 바이러스 단리에 의해, 혈액 및 다른 체액 중의 바이러스성 항원 또는 RNA의 검출에 대해 샘플을 검사함으로써, 증상이 시작된 후, 또는 본 발명에 따른 치료 후에 수일 이내에 바이러스 감염에 대해 검사될 수 있다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스는 중동 호흡기 증후군(MERS), 중증 급성 호흡기 증후군(SARS) 및 SARS-CoV-2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "포함하다(포함한다)", "구비하다(구비한다)", "갖는", "갖는다", "할 수 있다", "함유하다(함유한다)" 및 이들의 변형 형태는 추가의 동작 또는 구조의 가능성을 배제하지 않는 개방형 이행구, 용어, 또는 단어인 것으로 의도된다. 단수형("a," "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 지시 대상을 포함한다. 본 발명은 또한 명시적으로 기재하는지 아닌지의 여부에 관계없이, 본 명세서에 제시된 실시 형태 또는 요소를 "포함하는", "이로 이루어진" 및 "이로 본질적으로 이루어진" 다른 실시 형태를 고려한다.
용어 "공동투여하다", "공동투여", 또는 "병용하여"는 적어도 하나의 다른 항바이러스 활성제와 병용되는 본 발명의 화합물의 투여를 기재하는 데 사용된다. 공동투여의 시기는 환자를 치료하는 의료 전문가에 의해 가장 잘 결정된다. 때때로 작용제들은 동시에 투여되는 것이 바람직하다. 대안적으로, 병용 요법을 위해 선택되는 약물들은 상이한 시점에서 환자에게 투여될 수 있다. 물론, 하나 초과의 바이러스 또는 다른 감염 또는 다른 질환이 존재하는 경우, 본 화합물은 필요에 따라 그러한 다른 감염 또는 질환을 치료하기 위해 다른 작용제와 병용될 수 있다.
본 발명과 관련하여, 용어 "치료", "치료하는" 등은 본 명세서에 기재된 방법에서 화합물의 예방적 투여 전에 수행되거나, 바이러스 감염 전에 수행되거나, 또는 감염이 발생한 후에 바이러스 활성을 억제하는 것으로 정의된다. 일 실시 형태에서, 용어 "치료하는"은 시험관내 또는 생체내에서 바이러스의 복제를 측정가능할 정도로 억제하기 위하여, 시험관내 또는 생체내에서 세포에서의 바이러스의 부하를 측정가능할 정도로 감소시키기 위하여, 또는 환자에서 CoV-매개 질병을 가진 것과 관련된 적어도 하나의 증상을 감소시키기 위하여 본 발명의 하나 이상의 화합물을 투여하는 것으로 의미된다. 바람직하게는, 복제 억제 또는 바이러스 부하의 감소는, 적합한 검정을 사용하여 결정될 때, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99%이다. 바이러스의 복제를 모니터링하는 검정은 세포변성 바이러스 검정, 리포터-바이러스 및 리포터-세포 검정, 바이러스 레플리콘 검정, 및 유전자-표적화된 바이러스 검정을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 혈장 샘플에 대한 핵산 증폭 기반 시험(nucleic acid amplification based test, NAT 또는 NAAT) 및 비핵산-기반 시험을 사용하여 바이러스 부하 시험을 수행하여, 혈장 및 조직 중의 바이러스 RNA 수준 및 총 바이러스 RNA를 포함한, 주어진 부피의 바이러스의 양을 결정할 수 있다. 대안적으로, 소정 실시 형태에서, 수련을 받은 의사에 의해, CoV-매개 질병을 갖는 환자에서 적절한 또는 상당한 증상 완화로서 치료가 관찰된다. 전형적으로, RNA 중합, RNA 번역, 단백질 처리 또는 변형의 속도를 감소시킴으로써, 또는 바이러스 복제의 임의의 단계에 관여하는 분자(예를 들어, 바이러스 복제에 중요한 숙주 또는 바이러스의 게놈에 의해 코딩되는 단백질)의 활성을 감소시킴으로써 바이러스 복제의 감소가 달성된다. 일 실시 형태에서, 용어 "치료하다"는 바이러스, 예컨대 RNA 바이러스의 복제를 억제하거나 저해하는 본 발명의 화합물 또는 화합물들의 능력을 지칭한다. 일 실시 형태에서, 용어 "치료하다"는 RNA 바이러스 감염 동안 세포변성 효과를 억제하는 본 발명의 화합물 또는 화합물들의 능력을 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물의 "유효량"또는 "면역 자극량"은, 대상체에게 투여될 때, 검출가능한 면역 반응을 유발시키기에 충분한 양이다. 다른 실시 형태에서, 면역원성 조성물의 "보호 유효량"은, 대상체에게 투여될 때, 대상체에 대해 보호 면역을 부여하기에 충분한 양이다. 다른 실시 형태에서, 화합물의 "치료적 유효량"은, 대상체에게 투여될 때, 바이러스 감염을 치료하기에, 예컨대 바이러스 제거(viral clearance)를 증가시키기에 충분한 양이다.
본 발명의 작용제 및 방법은 이를 필요로 하는 대상체를 치료하는 데 이용될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 대상체는 포유동물, 예컨대 인간, 또는 비인간 포유동물이다. 동물, 예컨대 인간에게 투여될 때, 작용제는 바람직하게는 약제학적 조성물로서 투여되며, 약제학적 조성물은, 예를 들어 적어도 하나의 본 발명의 작용제를, 적어도 하나의 작용제와 배합될 수 있는 물질 또는 물질들의 집합물과 함께 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체 물질"은 예상된 노출 조건 하에서 포유동물에서의 치료적 치료의 목적으로 포유동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 작용제와 배합될 수 있는 물질 또는 물질들의 집합물을 의미한다. 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 불활성 고체, 반고체 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 물질을 포함한다. 물론, 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 치료되는 인간 또는 하등 동물에 대한 투여에 적합하게 하기에 충분히 높은 순도 및 충분히 낮은 독성을 가져야 한다. 약제학적 조성물은 정제, 캡슐(스프링클 캡슐 및 젤라틴 캡슐을 포함함), 과립, 분말, 시럽, 좌제, 주사 등과 같은 단위 투여 형태일 수 있다.
용어 "면역 반응"은 항원과 같은 자극에 대한 면역 시스템의 세포, 예컨대 B-세포, T-세포, 대식세포 또는 다형핵세포의 반응을 지칭한다. 면역 반응은, 예를 들어 인터페론 또는 사이토카인을 분비하는 상피 세포를 포함한, 숙주 방어 반응에 관여하는 신체의 임의의 세포를 포함할 수 있다. 면역 반응은 선천성 면역 반응 또는 염증을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 보호 면역 반응은 감염으로부터 대상체를 보호하는(감염을 예방하거나 감염과 관련된 질병의 발생을 예방하는) 면역 반응을 지칭한다.
"더 효과적인"이란, 치료가, 그와 비교되는 다른 치료보다 더 큰 효능을 나타내거나, 덜 독성이거나, 더 안전하거나, 더 편리하거나, 덜 비용이 든다는 것을 의미한다. 효능은 주어진 지시에 적절한 임의의 표준 방법을 사용하여 숙련된 실무자에 의해 측정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "적합한 기간"은 환자가 본 발명의 방법을 사용하여 코로나바이러스 감염의 진단을 위해 치료를 시작할 때 출발하여, 치료 전체에 걸쳐, 그리고 코로나바이러스 감염과 관련된 증상의 감소로 인해 또는 바이러스성 감염이 제어 하에 있다는 것을 지시하는 실험실 진단으로 인해 환자가 치료를 정지할 때까지를 지칭한다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 1주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 1주 내지 2주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 2주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 2주 내지 3주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 3주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 3주 내지 4주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 4주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 4주 내지 5주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 5주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 5주 내지 6주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 6주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 6주 내지 7주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 7주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 7주 내지 8주이다. 일 실시 형태에서, 적합한 기간은 8주이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "세포변성 효과"는 바이러스성 감염으로 인한 세포 형태의 변화를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "세포발병기전(cytopathogenesis)" 또는 "발병기전"은 숙주 세포 유전자 발현의 억제를 포함하고, 현미경적 수준에서 가시적인 변화에 더하여 바이러스성 발병기전에 기여하는 다른 세포 변화를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "억제제"는 효소의 활성에 영향을 주는 분자를 지칭한다. 본 발명의 억제제는 가역적인데, 이는 억제제가 그의 표적 효소와 약한 상호작용을 형성하고 용이하게 제거됨을 의미한다. 가역적 억제제는 효소와 일시적인 상호작용을 형성한다. 효소와 가역적 억제제 사이의 결합의 강도는 해리 상수(K_d)에 의해 정의된다. K_d의 값이 작을수록 효소와 억제제 사이의 상호작용이 더 강하고 억제 효과가 더 크다. 효소에 대해 언급할 때 억제 K_d는 K_i로 지칭된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "시험관내"는, 예를 들어, 제한 없이, 시험관 또는 세포 배양 시스템과 같은 인공 환경에서 수행되는 절차를 지칭한다. 당업자는, 예를 들어, 단리된 SK 효소가 시험관내 환경에서 조절제와 접촉될 수 있음을 이해할 것이다. 대안적으로, 단리된 세포는 시험관내 환경에서 조절제와 접촉될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "생체내"는 제한 없이, 인간, 원숭이, 마우스, 쥐, 토끼, 소, 말, 돼지, 개, 고양이 또는 영장류와 같은 살아있는 유기체 내에서 수행되는 절차를 지칭한다.

본 발명은 대체적으로 바이러스학, 감염성 질병, 및 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 CoV-매개 질병, 예를 들어 SARS-CoV-2, SARS, 또는 MERS에 의해 야기되는 것을 치료하기 위한 화합물, 조성물, 방법 및 키트를 특징으로 한다. 더 구체적으로는, 본 발명은 2019 신규 코로나바이러스를 포함한 코로나바이러스를 치료할 수 있는 코로나바이러스의 효과적인 억제제에 관한 것이다. 본 발명은 2019 신규 코로나바이러스를 포함한 코로나바이러스의 효과적인 억제제로서의 화합물의 새로운 용도, 및 인간에서 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의 이의 적용을 제공한다.

ABC294640[3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산 (피리딘-4-일메틸)아미드]는 경구-투여되는, 스핑고신 키나제 2("SphK2" 또는 "SK2") 억제제이다. ABC294640은 하기 구조식으로 나타내며:

, 유리 염기로서, 이의 염 형태로, 그리고 결정질 변형체로서 제조될 수 있다. 미국 특허 제7,338,961호, 제8,063,248호, 제8,324,237호 및 제8,557,800호 - 이들은 본 명세서에 참고로 포함됨 - 는 이들 화합물, 용도, 및 이들의 제조 방법을 교시한다.

하이드로클로라이드 염으로서 ABC294640에는 오파가닙이라는 국제 일반명(INN)이 주어져 있으며, 하기 구조식으로 나타낸다:

오파가닙의 분자식은 C₂₃H₂₅ClN₂O·HCl이며, 이의 분자량은 417.4 g/mol이다. 오파가닙은 물 및 에틸 아세테이트 중에 실질적으로 불용성인 비흡습성의 백색 내지 황백색(off-white) 고체이다. 일 실시 형태에서, 하기 부형제들 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 경질 젤라틴 사이즈 1 캡슐 내에 오파가닙을 충전함으로써 의약품이 제조된다: 미세결정질 셀룰로스; 콜로이드성 이산화규소; 식물성 마그네슘 스테아레이트; 이산화티타늄. 일 실시 형태에서, 오파가닙 캡슐은 하이드로클로라이드 염으로서의 ABC294640을 250 mg 함유하거나, 유리 염기로서의 ABC294640을 228.16 mg 함유한다. 일 실시 형태에서, 오파가닙 캡슐은 하이드로클로라이드 염으로서의 ABC294640을 375 mg 함유하거나, 유리 염기로서의 ABC294640을 342.24 mg 함유한다.

일 실시 형태에서, 오파가닙 250 mg 캡슐은 불투명한 백색 바디 및 캡, Coni-Snap 젤라틴 캡슐, 사이즈 1 내에 캡슐화되는 부형제와 함께, 하이드로클로라이드 염으로서의 ABC294640 작용제를 함유한다. 일 실시 형태에서, 오파가닙 375 mg 캡슐은 불투명한 백색 바디 및 캡, Coni-Snap 젤라틴 캡슐, 사이즈 1 내에 캡슐화되는 부형제와 함께, 하이드로클로라이드 염으로서의 ABC294640 작용제를 함유한다.

코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 오파가닙은 일반적으로 하루당 약 250 mg 내지 약 1500 범위의 양으로 투여된다. 일 실시 형태에서, 오파가닙 250 mg은 1000 mg의 총 일일 용량을 위하여, 하루당 2회 2개의 캡슐로서 투여된다. 일 실시 형태에서, 오파가닙 250 mg은 2개의 캡슐(500 mg, Q12hr)로서 투여된다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염으로 확인된 환자에게 총 최대 연속 2주 동안, 또는 총 최대 연속 14일 동안 매 12시간마다 (2개의 250 mg 캡슐로서) 단회 500 mg 용량(따라서, 하루당 1000 mg)의 오파카닙을 섭취하라는 지시가 제공된다.

본 발명자들은 수많은 연구 후에 오파가닙의 새로운 용도를 알아내었다. 오파가닙은 항바이러스, 항염증, 및 항혈전 활성을 입증하였다 - COVID-19의 원인 및 결과 둘 모두에 작용함. 오파가닙은 바이러스 복제에 관여하는 인간 세포 성분인 스핑고신 키나제-2를 표적화하며, 바이러스 그 자체는 표적화하지 않는다. 전세계적으로 출현하는 새로운 SARS-CoV-2 돌연변이에 대한 점점 늘어나는 증거는 이러한 특유의 기전의 중요성을 강조하는데, 이는 요법에 대한 바이러스 저항성의 위험을 잠재적으로 최소화한다.

약제학적 키트로도 알려진 패키징된 약제학적 제품이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 제품은 용기, 상기 용기 내의 경구 투여에 적합한 복수의 오파가닙 투여 형태, 및 용기와 관련되고 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 오파가닙의 투여를 지시하는 범례(예를 들어, 라벨 또는 삽입물)를 포함한다. 일 실시 형태에서, 범례는 전술된 방법 및/또는 키트를 사용하는 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함한다. 키트 내에 포함된 설명서는 라벨로서 패키징 재료에 부착될 수 있거나 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다. 설명서는 전형적으로 서면 자료 또는 인쇄 자료이지만, 이들은 그러한 것으로 제한되지 않는다. 설명서를 저장하고 이것을 최종 사용자에게 전달할 수 있는 임의의 매체가 본 발명에 의해 고려된다. 그러한 매체는 전자 저장 매체(예를 들어, 자기 디스크, 테이프, 카트리지), 광학 매체(예를 들어, CD ROM) 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "설명서"는 설명서를 제공하는 인터넷 사이트의 주소를 포함할 수 있다.

WX-671(N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)은 강력한 세린 프로테아제 억제제 WX-UK1(N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-아미디노-페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드)의 경구 활성 전구약물이다. WX-671은 하기 구조식으로 나타내며:

, 이의 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서 제조될 수 있다.

WX-671은 전구약물이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 전구약물은, 생체내에서 대사되어 약물의 활성 형태를 생성하는 생물학적으로 불활성인 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 지칭한다. WX-671은 생체내에서 전환되어 WX-UK1을 제공할 수 있는 화합물이다. WX-UK1은 단지 정맥내 주입에 의해서만 투여될 수 있다. WX-UK1은 본 명세서에 기재된 많은 실험적인 시험관내 실시예에서 사용된다. 본 발명은 약제로서 경구 WX-671 화합물을 기재하지만, 정맥내 주입 화합물 WX-UK1을 사용하여 약제가 제조될 수 있으며, 이는 본 발명의 범주 및 사상 내에 있음이 이해되어야 한다. 미국 특허 제6,861,435호, 제7,247,724호, 제7,659,396호, 및 제9,089,532호 - 이들은 본 명세서에 참고로 포함됨 - 는 WX-UK1 및 이의 제조 방법을 개시한다.

WX-671.1, N-α-(2,4,6-트라이아이소프로필페닐설포닐)-3-하이드록시아미디노-(L)페닐알라닌-4-에톡시카르보닐피페라지드 하이드로겐 설페이트 - 이는 에틸 4-{3-[(E)-아미노(하이드록시이미노)메틸]-N-[(2,4,6-트라이아이소프로필페닐)설포닐]-L-페닐알라닐}피페라진-1-카르복실레이트 하이드로겐 설페이트로도 지칭됨 - 는 분자식 C₃₂H₄₇N₅O₆S x H₂SO₄를 가지며, 분자량이 727.91 g/mol(유리 염기: 629.83 g/mol)이다. 미국 특허 제6,624,169호, 제7,211,670호, 제7,247,724호, 제7,342,018호, 제7,608,623호, 제7,659,396호, 제7,713,980호, 제7,745,441호, 제7,807,681호, 제7,884,206호, 제7,951,943호, 제8,492,385호, 제8,692,761호 및 RE46424호 - 이들은 본 명세서에 참고로 포함됨 - 는 이들 화합물, 용도, 및 이의 제조 방법을 개시한다. 물질 WX-671.1에는 우파모스타트라는 국제 일반명(INN)이 주어져 있다.

WX-671.1(우파모스타트)의 구조식은 다음과 같다:

우파모스타트는 비흡습성의 백색 내지 황색을 띤 분말이며, 이는 다이메틸 설폭사이드 중에 자유롭게 가용성이고, 에탄올 중에 가용성이다. 이 약물 물질은 물 또는 0.1 M HCl 중에 매우 약간 가용성이다. 경구 투여용 고체 제제가 정제, 알약, 분말, 과립, 캡슐 등으로서 제조될 수 있다. 이들 고체 제제는 적어도 하나의 부형제, 예컨대 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토스, 또는 젤라틴을 하나 이상의 본 발명의 화합물에 첨가함으로써 제조된다. 게다가, 전형적인 부형제에 더하여, 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 및 활석이 사용될 수 있다.

일 실시 형태에서, 하기 부형제들 중 적어도 하나를 추가로 포함하는 경질 젤라틴 캡슐 내에 우파모스타트를 충전함으로써 의약품이 제조된다: 미세결정질 셀룰로스; 하이프로멜로스; 에틸 알코올 무수물; 정제수 및 식물성 마그네슘 스테아레이트. 일 실시 형태에서, 우파모스타트 캡슐은 우파모스타트 하이드로겐 설페이트 231.26 mg(200 mg의 유리 염기와 등가임)을 함유한다. 경구 투여 후, 우파모스타트는 활성 WX-UK1로 전환되며, 이는 몇몇 세린 프로테아제를 억제한다. 우파모스타트는 경구 제형으로 제공될 수 있기 때문에, 코로나바이러스 감염을 치료하는 데 유용할 수 있는 다른 약물의 정맥내 투여와 관련된 불리한 점을 제거할 수 있다.

코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 우파모스타트는 일반적으로 하루당 약 200 mg 내지 약 1000 범위의 양으로 투여된다. 일 실시 형태에서, 우파모스타트는 (200 mg의 유리 염기와 등가인) 약 231.26 mg의 총 일일 용량을 위하여, 하루당 1회 하나의 캡슐로서 투여된다. 일 실시 형태에서, 우파모스타트는 (400 mg의 유리 염기와 등가인) 약 462.52 mg의 총 일일 용량을 위하여, 하루당 1회 2개의 캡슐로서 투여된다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염으로 확인된 환자에게 총 연속 2주 동안, 또는 연속 14일 동안 (200 mg의 우파모스타트 유리 염기와 등가인) 우파모스타트의 하나의 캡슐을 매일 섭취하라는 지시가 제공된다. 일 실시 형태에서, 코로나바이러스 감염으로 확인된 환자에게 총 연속 2주 동안, 또는 연속 14일 동안 (400 mg의 우파모스타트 유리 염기와 등가인) 우파모스타트의 2개의 캡슐을 매일 섭취하라는 지시가 제공된다.

본 발명자들은 수많은 연구 후에 우파모스타트의 새로운 용도를 알아내었다. 이론에 의해 구애되지 않고서, 우파모스타트의 활성 약물인 세린 프로테아제 억제제 WX-UK1은, 일단 우파모스타트가 체내에서 분해되면, 바이러스 스파이크(S) 단백질 프라이밍을 담당하는 것으로 나타나는 세린 프로테아제들 중 적어도 하나에 대해 활성이다. 따라서, 프로테아제 억제제, 예컨대 WX-UK1(또는 이의 전구약물 WX-671)의 사용은 CoV 활성화 및 확산을 감소시키는 데 효과적일 수 있으며, 그 결과 효과적인 예방적 및 치료적 치료를 가져올 수 있다. 따라서, WX-UK1은 세포 내로의 SARS-2-S-유도 침입을 차단할 수 있으며, 이에 따라 결과적으로, 코로나바이러스 복제를 억제할 것이다. 일 실시 형태에서, 감염은 바이러스와 숙주 세포 수용체의 상호작용을 촉진시켜, 감염성 및 확산을 향상시키는 단백질 분해적 활성화를 필요로 하기 때문에, 본 발명의 우파모스타트는, 치료적 유효량으로 그리고 적합한 기간 동안 투여될 때, 코로나바이러스에 의한 감염에 대해 방어할 것이다.

약제학적 키트로도 알려진 패키징된 약제학적 제품이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 제품은 용기, 상기 용기 내의 경구 투여에 적합한 복수의 우파모스타트 투여 형태, 및 용기와 관련되고 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 우파모스타트의 투여를 지시하는 범례(예를 들어, 라벨 또는 삽입물)를 포함한다. 일 실시 형태에서, 범례는 전술된 방법 및/또는 키트를 사용하는 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함한다. 키트 내에 포함된 설명서는 라벨로서 패키징 재료에 부착될 수 있거나 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다. 설명서는 전형적으로 서면 자료 또는 인쇄 자료이지만, 이들은 그러한 것으로 제한되지 않는다. 설명서를 저장하고 이것을 최종 사용자에게 전달할 수 있는 임의의 매체가 본 발명에 의해 고려된다. 그러한 매체는 전자 저장 매체(예를 들어, 자기 디스크, 테이프, 카트리지), 광학 매체(예를 들어, CD ROM) 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "설명서"는 설명서를 제공하는 인터넷 사이트의 주소를 포함할 수 있다.

병용 요법 및 교대 요법

본 명세서에 기재된 화합물은 COVID 환자에 대한 현재의 표준 치료에 추가하여, 또는 의료 제공자가 환자에게 유익할 것으로 여기는 임의의 다른 화합물 또는 요법과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여될 수 있다. 병용 요법 및/또는 교대 요법은 치료적, 보조적(adjunctive), 또는 고식적(palliative)일 수 있다. 이러한 방법들이 하나 초과의 활성제를 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 경우, 이들 작용제는 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1일 이내에; 24, 12, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1시간 이내에; 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5 또는 1분 이내에; 또는 실질적으로 동시에 투여될 수 있다. 본 발명의 방법은 경구, 전신, 비경구, 국소, 정맥내, 흡입, 또는 근육내 투여에 의해 환자에게 하나 이상의 작용제를 투여하는 단계를 포함할 수 있다.

COVID 환자는 다양한 질병 병기를 거칠 수 있고, 표준 치료는 환자가 제시하거나 진행되는 병의 병기가 어떤 것이냐에 기초하여 상이할 수 있는 것으로 관찰되었다. COVID는 면역 시스템과 응집 시스템 사이의 "크로스-토크"의 발생에 대해 주목할 만하다. 이 질병이 진행됨에 따라, 환자는 면역 시스템에 의해 과잉반응을 일으킬 수 있으며, 이는 사이토카인 폭풍을 포함한 다수의 심각한 합병증을 초래할 수 있다. 면역 시스템과 응고 시스템 사이의 크로스-토크를 통해, 환자는 호흡 시스템, 뇌, 심장 및 다른 기관을 포함한 신체의 다양한 영역에서 혈병 형성을 시작할 수 있다. 신체 전체에 걸친 다수의 혈병이 COVID 환자에서 관찰되고 있으며, 항응고제 요법을 필요로 한다. 이들 혈병은 치료되지 않고 질병이 경감되지 않는 경우 장기간 또는 심지어 영구적인 손상을 야기할 수 있는 것으로 여겨진다.

더 구체적으로는, COVID-19는 병의 다음 3개의 일반적인 병기를 통해 진행되는 것으로 기재되어 있다: 병기 1(초기 감염), 병기 2(폐 단계), 및 병기 3(초염증(hyperinflammation) 단계/사이토카인 폭풍).

병기 1은 비특이적인, 그리고 종종 경미한, 증상을 특징으로 한다. 바이러스 복제가 일어나고 있으며, 본 명세서에 기재된 화합물에 의한, 그리고 아마도 다른 항바이러스 요법과 병용하여 또는 그것과 교대로, 즉각적인 치료를 시작하는 것이 적절하다. 인터페론-β가 또한 바이러스에 대한 선천성 면역 반응을 증강시키기 위해 투여될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 인터페론-β 및/또는 추가의 항바이러스 약물과 병용하여 또는 그것과 교대로 유효량으로 사용된다. 아연 보충제 및/또는 비타민 C가 또한 때때로 이 병기에서 또는 병이 진행됨에 따라 투여된다.

COVID-19의 병기 2는 폐 단계로서, 이 단계에서 환자는 급성 저산소혈증 호흡 부전을 경험할 수 있다. 실제로, COVID-19의 원발성 기관 부전은 저산소혈증 호흡 부전이다. 스테로이드, 예를 들어 덱사메타손을 통한 중간 정도의 면역억제는 급성 저산소혈증 호흡 부전을 갖는 환자 및/또는 기계적 환기에 있는 환자에게 유익할 수 있는 것으로 밝혀져 있다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 글루코코르티코이드일 수 있는 코르티코스테로이드와 병용하여 유효량으로 사용된다. 비제한적인 예는 부데소니드(Entocort EC), 베타메타손(Celestone), 프레드니손(Prednisone Intensol), 프레드니솔론(Orapred, Prelone), 트리암시놀론(Aristospan Intra-Articular, Aristospan Intralesional, Kenalog), 메틸프레드니솔론(Medrol, Depo-Medrol, Solu-Medrol), 하이드로코르티손, 또는 덱사메타손(Dexamethasone Intensol, DexPak 10 Day, DexPak 13 Day, DexPak 6 Day)이다.

NS5B 억제제 렘데시비르는 COVID19 환자에게 주어질 때 혼합된 결과를 제공해 왔다. 그것은 단지 병원 환경에서만 투여될 수 있고, 전형적으로 일일 3회 정맥내 주사에 의해서만 투여될 수 있는데, 이로 인해 이것은 경도 내지 중등도 COVID19 환자에 대해 부적절하다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 전체적인 항바이러스 효과를 증폭시키기 위해 렘데시비르와 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다.

이 질병의 최종 단계인 병기 3은 작은 혈병들이 혈류 전체에 걸쳐 발달되는 질환인 진행성 파종성 혈관내 응고(DIC)를 특징으로 한다. 이 병기는 또한 다기관 부전(예를 들어, 혈관확장성 쇼크, 심근염)을 포함할 수 있다. 또한, 많은 환자가 "사이토카인 폭풍"을 동반하면서 COVID-19 감염의 이러한 심각한 병기에 반응하는 것으로 관찰되었다. DIC와 사이토카인 폭풍 사이에는 양방향성 상승적 관계가 있는 것으로 보인다. DIC에 대항하기 위하여, 환자에게는 종종 항응고제가 투여되는데, 이것은, 예를 들어 간접 트롬빈 억제제 또는 직접 경구 항응고제("DOAC")일 수 있다. 비제한적인 예는 저분자량 헤파린, 와파린, 비발리루딘(Angiomax), 리바록산반(Xarelto), 다비가트란(Pradaxa), 아픽사반(Eliquis), 또는 에독사반(Lixiana)이다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 항응고제 요법과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다. COVID 환자에서 혈병형성의 일부 심각한 경우에, TPA(조직 플라스미노겐 활성화 인자)가 투여될 수 있다.

높은 수준의 사이토카인 인터류킨-6(IL-6)은 COVID-19 환자에서 호흡 부전 및 사망에 대한 전조인 것으로 관찰되었다. 사이토카인 폭풍을 구성할 수 있는 면역 반응의 이러한 급증을 치료하기 위하여, IL-6-표적화 단일클론 항체, 약제학적 억제제 또는 단백질 분해제, 예컨대, IL-6에 결합하고 또한 분해를 매개하는 단백질에 결합하는 이중특이성 화합물이 환자에게 투여될 수 있다. 항체의 예에는 토실리주맙, 사릴루맙, 실툭시맙, 올로키주맙 및 클라자키주맙이 포함된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 토실리주맙 또는 사릴루맙과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다. 과잉반응 면역 시스템을 치료하는 데 사용되는 면역억제 약물의 추가의 비제한적인 예에는 야누스(Janus) 키나제 억제제(토파시티닙(Xeljanz)); 칼시뉴린 억제제(사이클로스포린(Neoral, Sandimmune, SangCya)), 타크롤리무스(Astagraf XL, Envarsus XR, Prograf)); mTOR 억제제(시롤리무스(Rapamune), 에버롤리무스(Afinitor, Zortress)); 및, IMDH 억제제(아자티오프린(Azasan, Imuran), 레플루노미드(Arava), 마이코페놀레이트(CellCept, Myfortic))가 포함된다. 추가의 항체 및 생물학적 제제는 아바타셉트(Orencia), 아달리무맙(Humira), 아나킨라(Kineret), 세르톨리주맙(Cimzia), 에타너셉트(Enbrel), 골리무맙(Simponi), 인플릭시맙(Remicade), 익세키주맙(Taltz), 나탈리주맙(Tysabri), 리툭시맙(Rituxan), 세쿠키누맙(Cosentyx), 토실리주맙(Actemra), 우스테키누맙(Stelara), 베돌리주맙(Entyvio), 바실릭시맙(Simulect), 및 다클리주맙(Zinbryta)을 포함한다.

IL-1은 IL-6 및 다른 전염증성 사이토카인의 생성을 차단한다. COVID 환자는 또한 때때로, 초염증 반응을 감소시키기 위해 항-IL-1 요법으로 치료되며, 예를 들어 아나킨라의 정맥내 투여로 치료된다. 항-IL-1 요법은 일반적으로, 예를 들어 표적화 단일클론 항체, 약제학적 억제제 또는 단백질 분해제, 예컨대, IL-1에 결합하고 또한 분해를 매개하는 단백질에 결합하는 이중특이성 화합물일 수 있다.

COVID를 갖는 환자는 종종 바이러스성 폐렴을 발생시키며, 이는 세균성 폐렴으로 이어질 수 있다. 중증 COVID-19를 갖는 환자는 또한 패혈증 또는 "패혈성 쇼크"에 의해 영향을 받을 수 있다. COVID에 속발하는 세균성 폐렴에 대한 또는 패혈증에 대한 치료는 항생제, 예를 들어 마크로라이드 항생제의 투여를 포함하며, 마이크라이드 항생제에는 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 에리트로마이신, 또는 록시트로마이신이 포함된다. 추가의 항생제는 아목시실린, 독시사이클린, 세팔렉신, 시프로플록사신, 클린다마이신, 메트로니다졸, 설파메톡사졸, 트리메토프림, 아목시실린, 클라불라네이트, 또는 레보플록사신을 포함한다. 일 실시 형태에서, 따라서 본 발명의 화합물은 항생제, 예를 들어 아지트로마이신과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다. 이들 항생제 중 일부, 예컨대 아자이트로마이신은 독립적인 항염증 특성을 갖는다. 그러한 약물들은 COVID 환자에 대한 항염증제로서 사용될 수 있고, 속발성 세균성 감염에 대한 치료 효과를 가질 수 있다.

COVID-19로 감염된 환자를 치료하는 데 있어서의 특유의 난제는 환자가 5, 10 또는 심지어 14일에 이르기까지 또는 그 이상 지속될 수 있는 기계적 환기를 필요로 하는 경우, 비교적 장기간의 진정에 대한 필요성이다. 이러한 치료 동안 진행 중인 통증을 위하여, 진통제가 순차적으로 첨가될 수 있고, 진행 중인 불안을 위하여, 진정제가 순차적으로 첨가될 수 있다. 진통제의 비제한적인 예에는 아세트아미노펜, 케타민, 및 PRN 오피오이드(하드로모르폰, 펜타닐, 및 모르핀)가 포함된다. 진정제의 비제한적인 예에는 멜라토닌, 진정제-우세 특성을 갖는 비정형 항정신병제(올란자핀, 퀘티아핀), 프로포폴 또는 덱스메데토미딘, 할로페리돌, 및 페노바르비탈이 포함된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 통증 완화제, 예컨대 아세트아미노펜, 케타민, 하이드로모르폰, 펜타닐, 또는 모르핀과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 진정제, 예컨대 멜라토닌, 올란자핀, 퀘티아핀, 프로포폴, 덱스메데토미딘, 할로페리돌, 또는 페노바르비탈과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다.

COVID-19를 위한 시험용(investigational) 약물은 클로로퀸 및 하이드록시클로로퀸을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 클로로퀸 또는 하이드록시클로로퀸과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여된다.

HIV에 대해 이전에 승인된 프로테아제 억제제, 예컨대 로피나비르 또는 리토나비르가 또한 투여될 수 있다.

일 실시 형태에서, 오파가닙이 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하는 데 사용하기 위한 우파모스타트와 병용하여 투여된다. 일 실시 형태에서, 오파가닙은 코로나바이러스 감염을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 우파모스타트와 병용하여 투여된다. 일 실시 형태에서, 오파가닙이 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 우파모스타트와 병용하여 투여된다.

COVID 환자의 치료에 사용될 수 있는 추가의 약물은 파비피라비르, 핑고리모드(Gilenya), 메틸프레드니솔론, 베바시주맙(Avastin), Actemra(토실리주맙), 우미페노비르, 로사르탄, 및 REGN3048 및 REGN3051 또는 리바비린의 단일클론 항체 병용물을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 이들 약물 또는 백신 중 임의의 것이 본 명세서에 제공된 활성 화합물과 병용하여 또는 그것과 교대로 사용되어 그러한 것에 취약한 바이러스성 감염을 치료할 수 있다.

일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 항-코로나바이러스 백신 요법과 병용하여 유효량으로 사용되며, 이러한 백신 요법에는 mRNA-1273(Moderna, Inc.), AZD-1222(AstraZeneca 및 University of Oxford), BNT162(Pfizer 및 BioNTech), CoronaVac(Sinovac), NVX-CoV 2372(NovoVax), SCB-2019(Sanofi 및 GSK), ZyCoV-D(Zydus Cadila), 및 CoVaxin(Bharat Biotech)이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 수동 항체 요법 또는 회복기 혈장 요법과 병용하여 유효량으로 사용된다.

일 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 5-HT 수용체 길항제와 병용하여 유효량으로 사용되는데, 이러한 5-HT 수용체 길항제는 코로나바이러스로 감염된 환자에 존재할 수 있는 소정의 증상, 예컨대 설사를 완화시킬 수 있다.

SARS-CoV-2는 지속적으로 돌연변이화되며, 이는 독력(virulence) 및 전파율(transmission rate)을 증가시킬 수 있다. 항바이러스제에 의한 장기간 치료 후에 바이러스의 약물-저항성 변이체가 출현할 수 있다. 약물 저항성은 바이러스 복제에 사용되는 효소를 인코딩하는 유전자의 돌연변이에 의해 일어날 수 있다. 소정의 경우에 RNA 바이러스 감염에 대한 약물의 효능은, 화합물을, 그러한 주요 약물과 상이한 돌연변이를 유도하거나 상이한 경로를 통해 작용하는 다른 항바이러스 화합물, 및 아마도 심지어 2개 또는 3개의 다른 항바이러스 화합물과 병용하여 또는 그것과 교대로 투여함으로써 연장되거나, 증강되거나, 회복될 수 있다.

본 발명은 하기의 비제한적인 실시예에 의해 예시된 다수의 태양을 갖는다. 하기 실시예는 본 발명의 다양한 실시 형태를 예시할 목적으로 제공되며, 본 발명을 임의의 방식으로 제한하는 것으로 의미되지 않는다.

실시예

실시예 1 : 인간 기도 상피 세포에서 SARS-CoV-2에 대한 ABC294640의 항바이러스 활성의 평가

본 발명자들은 SARS-CoV-2의 감염 및 확산이 오파가닙에 의해 직접 억제될 수 있는지의 여부를 평가하기 위하여, 인간 1차 기관지 상피 세포(HBEC; EpiAirway™, MatTek)의 기관형(organotypic) 공기-액체-계면(ALI) 배양에서 시험관내 평가를 설계하였다. 정단 층으로부터 공기에 노출된 섬모 및 배상(점액 생성) 세포로 이루어진, 인간 기도와 모폴로지적으로 그리고 기능적으로 유사한 거짓중층 상피 층을 함유하기 때문에, 이러한 인간 세포 배양 모델 시스템을 선택하였다. 이들 세포는 침입 바이러스에 대한 제1 방어선으로서 작용하고, 복제 부위로서의 역할을 한다. 이용가능한 증거는 또한 인간 기관지 상피 세포가 오파가닙에 의해 표적화되는 숙주 인자(스핑고신 키나제-2)를 발현함을 시사한다.

시험 화합물:

오파가닙 - 시험 화합물

설명: 오파가닙[3-(4-클로로페닐)-아다만탄-1-카르복실산 (피리딘-4-일메틸) 아미드, 하이드로클로라이드 염]은 효소 스핑고신 키나제-2(SK2)의 경구로 이용가능한 억제제이다. 용매: DMSO

렘데시비르(GS-5734) - 양성 항바이러스 대조군

설명: 렘데시비르는 뉴클레오티드-유사체 항바이러스 전구약물이다. 이것은 세포-기반 검정에서 0.06 내지 0.14 μM 범위의 EC50 값으로 EBOV의 다수의 변이체에 대해 항바이러스 활성을 나타내고, SARS-CoV를 포함한 다른 병원성 RNA 바이러스에 대해 시험관내에서 광범위-스펙트럼의 항바이러스 활성을 나타낸다. 용매: DMSO 100 mg/mL(166.0 mM)

블레오마이신(설페이트) - 양성 세포독성 대조군

설명: 블레오마이신은 호지킨 림프종 및 배아 암종의 치료에 일반적으로 사용되는 화학요법제이다. 광범위 스펙트럼의 블레오마이신-유도 폐 독성이 그러한 요법의 합병증으로서 잘 기재되어 있으며, 이의 가장 일반적인 변형 형태는 블레오마이신-유도 폐렴(BIP)이다(문헌[Sleijfer et al., 2001]). 블레오마이신(BLM)은 유전독성의 상이한 기전을 가지면서 인간 림프구에서 최상으로 연구된 소핵(MN) 유도제로서 선택된다. 용매: DMSO 16.67 mg/mL(11.2 mM)

방법:

세포 배양 - 분화된 인간 기관지 상피 세포(HBEC)

정상 인간 기관지 상피 세포(HBEC)를 MatTek Corporation(미국 매사추세츠주 애쉬랜드 소재)에 의해 분화시키고, 각각 12웰 또는 24웰 인서트를 갖는 키트에 전달하였다. HBEC 세포를 트랜스웰 인서트 내의 6 ㎟ 메쉬 디스크 상에서 성장시켰다. 수송 3일 전에, 조직을 하이드로코르티손-무함유 배지 내로 옮겼다. 수송 동안에는, 조직을 아가로스 시트 상에서 안정화시키고, 수령 시에 이것을 제거되었다. 하나의 인서트는 대략 1.2 × 10⁶개의 세포로 이루어진 것으로 추정되었다. 세포 인서트의 키트(EpiAirway™ AIR-100)는 단일 공여자, # 9831, 23세 연령, 건강한, 비흡연, 백인 남성으로부터 기원되었다. 이들 세포는 형성층에서 특유의 특성을 갖는데, 형성층의 정단측은 공기에만 노출되고 뮤신 층을 생성한다. 도착 시에, 세포 트랜스웰 인서트를 제조자의 설명서에 따라 6웰 플레이트의 개별 웰에 즉시 전달하고, 1 mL의 MatTek의 독점적 배양 배지(AIR-100-MM)를 기저외측에 첨가한 반면, 정단측은 가습된 5% CO₂ 환경에 노출시켰다. 세포를 실험 시작 전 하루 동안 37℃에서 배양하였다. 16 내지 18시간의 평형 기간 후에, 세포의 정단측으로부터 분비된 뮤신 층을 400 μL의 미리 가온된 TEER 완충액으로 세척함으로써 제거하였다. 배양 배지를 세척 단계 후에 보충하였다. 배양 인서트 및 EpiAirway 조직의 도면이 도 1에 제공되어 있다.

시험 화합물에 의한 처리:

시험 화합물을 검정 배지(AIR-ASY-100, MatTek) 중의 (DMSO를 함유하는) 스톡 용액으로부터 연속 희석시키고, 실온에 두었다. 시험 화합물 희석물을 하기에 개략적으로 설명하였다(최종 DMSO < 0.5%). HBEC 배양물을 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하고, 렘데시비르(2 μM), 블레오마이신 설페이트(75.6 및 151 ㎍/ml), 및 검정 배지(AIR-100-ASY, MatTek) 중에 희석된 오파가닙(0.05 내지 11.25 ㎍/ml 범위의 6개의 농도)과 함께 감염 전 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 대조군 웰들의 경우, DMSO를 갖는 검정 배지(최종 DMSO < 0.5%; 대조군) 및 바이러스 단독 대조군(검정 배지 단독)을 감염 전 1시간 동안 첨가하였다. 화합물을 각각의 인서트에 대해 정단층(0.15 mL) 및 기저층(0.85 mL) 상에 3회 반복하여 첨가하였다.

바이러스성 감염 및 샘플 처리:

화합물과 함께 1시간 인큐베이션 후에, 배양물의 정단측을 세척하고, 이어서 화합물 또는 검정 대조 배지의 존재 하에서, 37℃에서 1시간 동안 MOI = 0.1 PFU/세포로 SARS-CoV-2 임상 단리물(2019-nCoV/USA-WA1/2020)로 감염시켰다. 1시간 바이러스 인큐베이션 후에, 바이러스를 정단측으로부터 제거하고, 배양물을 PBS로 1회 세척하여 결합되지 않은 어떠한 바이러스도 제거하였다. 이어서, 배양물을 신선한 화합물과 함께 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 감염 후 24시간째 및 48시간째에, 기저외측 배지를 각각의 화합물들을 함유하는 1 mL의 신선한 배지로 대체하였다.

감염 후 72시간째에, 처리를 위해 조직 및 배지를 수집하였다. 정단층을 0.4 mL의 TEER 완충액(Mg²⁺ 및 Ca²⁺를 함유하는 PBS)으로 세척하고, TCID50(50% 조직 배양 감염 용량(tissue culture infectious dose)) 검정을 통한 바이러스 역가 평가를 위해 수집하였다. 정단층 상층액 샘플 농도의 8배 연속 희석물을 Vero E6 세포(20,000개/웰)가 담긴 96웰 검정 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO₂ 및 95% 상대 습도에서 인큐베이션하였다. 3일(72 ± 4시간) 인큐베이션 후에, 플레이트를 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 세포변성 효과(CPE)를 측정하였다. 바이러스 역가를 Reed 및 Muench의 방법(문헌[Reed et al., 1938])을 사용하여 계산하였다. TCID₅₀ 값을 3회 반복시험 샘플로부터 결정하였다.

오파가닙, 대조 화합물, 및 바이러스 감염에 노출 후의 HBEC 세포의 건강을 평가하기 위하여, 락테이트 데하이드로게나제(LDH) 방출 검정을 수행하였다. 조직 배양 인서트의 기저외측 층으로부터의 배지를 감염 후 72시간째에 취출하고, 제조자의 설명서(Promega)에 따라 LDH 저장 완충액 중에 희석시켰다. 샘플을 LDH 완충액으로 추가로 희석시키고, 동일한 부피의 LDH 검출 시약과 함께 인큐베이션하였다. 실온에서 60분간 인큐베이션 후에 발광을 기록하였다. 배양 배지 백그라운드를 결정하기 위해 음성 대조군으로서 무세포 대조군을 포함시키고, 양성 세포독성 대조군으로서 블레오마이신을 포함시켰다. 발광을 기록하였으며, 이때 백그라운드 수준은 허용되는 발광 범위(범위 1,000 내지 10,000) 이내에서 확인되었다.

추가적으로, Trizol LS(Invitrogen)를 각각의 배양 인서트에 첨가하고 수회 위아래로 피펫팅하여 세포를 용해시키고 수집함으로써 HBEC 조직의 정단층을 수집하고, 추후의 RNA 및 단백질 발현 분석을 위하여 -80℃에서 저장하였다.

결과:

오파가닙은 HBEC 배양물 중에서 SARS-CoV-2에 대해 고도로 활성이다

이 연구에서는, 정상 인간 기관지 상피 세포(HBEC)를 각각의 배양물의 정단측 및 기저외측 양쪽 모두에서 (11.25 내지 0.05 ㎍/ml 범위의) 6개의 상이한 농도의 오파가닙을 사용하여 3회 반복하여 전처리하였다. 일단 전처리되면, HBEC를 1시간 동안 SARS-CoV-2(2019-nCoV/USA-WA1/2020)에 노출시키고, 정단층을 세척하여 결합되지 않은 바이러스를 제거하고, 이어서 배양물을 화합물과 함께 3일 동안 인큐베이션하였다. 감염 후 3일째에, 정단층을 세척하고, TCID50 검정에 의해 바이러스 부하에 대해 평가하였다. 기저외측 배지를 수집하고 락테이트 데하이드로게나제(LDH)의 존재에 대해 평가하였는데, 이때 LDH는 손상된 세포로부터 방출되어 세포사/세포 생존력의 지표로서의 역할을 한다.

오파가닙은 강력한 항바이러스 활성을 입증하였으며, 이때 바이러스 복제는 세포 생존력에 대한 유의한 손상 없이 용량-의존적 방식으로 억제되었다. 3일간 인큐베이션 후에, 오파가닙-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 관찰되었는데, 이때 오파가닙 1 ㎍/ml(약리학적으로 관련된 농도)에서 출발하여 완전한 억제를 가졌다. 이들 결과는, LDH 방출 검정에서 평가될 때 세포 생존력에 있어서, 본 연구에서 양성 대조군인 렘데시비르와 양호하게 비교된다. 인간 1차 상피 배양 시스템에서 SARS-CoV-2에 대한 오파가닙의 항바이러스 활성을 입증하기 위하여, 본 발명자들은 HBEC 배양물에서 항바이러스 검정을 수행하였는데, 이때 HBEC 배양물은 공기-액체 계면 상에서 성장되고, 인간 유도 기도의 세포 복잡성 및 생리학적 특성을 재현한다. 3일간 인큐베이션 후에, 오파가닙-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 관찰되었는데, 이때 오파가닙 1 ㎍/ml(약리학적으로 관련된 농도)에서 출발하여 완전한 억제를 가졌다(도 2). 이들 결과는 본 연구에서 양성 대조군인 렘데시비르와 양호하게 비교된다.

오파가닙은 강력한 항바이러스 효과가 관찰되는 농도 범위에 걸쳐 HBEC 배양물에서 세포독성을 야기하지 않았다(도 3). 종합하면, 이들 데이터는 오파가닙이 세포 생존력 및 약물 안전성의 척도인 세포막 완전성을 손상시키지 않고서 1차 인간 폐 배양물에서 SARS-CoV-2에 대해 강력하게 항바이러스성임을 입증하며, COVID-19를 갖는 환자를 치료하기 위한 오파가닙의 유망한 잠재성을 추가로 입증한다.

시험된 농도 범위에서는, 50% 억제 또는 50% 세포독성 어느 것에도 도달하지 않았다. 시험된 최저 농도, 0.05 ㎍/ml에서는, 감염성 바이러스 생성의 90% 초과의 억제에 도달되었다. 시험된 최고 농도, 11.25 ㎍/ml에서는, 세포가 실험 전체에 걸쳐 생존가능한 상태로 유지되었다. 이 실험으로부터 고농도 및 저농도 범위를 이용하여, 항바이러스 활성 값(AVA)을 독성 값(TOX)으로 나눔으로써 세포독성과 항바이러스 활성 사이의 창(window)을 측정하는 비(AVA/TOX)인 선택성 지수(selectivity index, SI)를 계산할 때, SI 값은 225이다. 더 넓은 범위의 농도가 시험되면 SI 값이 더 클 것으로 예상된다.

실시예 2 : 인간 기도 상피 세포에서 SARS-CoV-2에 대한 우파모스타트 및 WX-UK1의 항바이러스 활성의 평가

본 발명자들은 SARS-CoV-2의 감염 및 확산이 우파모스타트 및 WX-UK1에 의해 직접 억제될 수 있는지의 여부를 평가하기 위하여, 인간 1차 기관지 상피 세포(HBEC; EpiAirway™, MatTek)의 기관형 공기-액체-계면(ALI) 배양에서 시험관내 평가를 설계하였다. 정단 층으로부터 공기에 노출된 섬모 및 배상(점액 생성) 세포로 이루어진, 인간 기도와 모폴로지적으로 그리고 기능적으로 유사한 거짓중층 상피 층을 함유하기 때문에, 이러한 인간 세포 배양 모델 시스템을 선택하였다. 이들 세포는 침입 바이러스에 대한 제1 방어선으로서 작용하고, 복제 부위로서의 역할을 한다. 이용가능한 증거는 또한 인간 기관지 상피 세포가 우파모스타트(예를 들어, TMPRSS2)에 의해 표적화되는 숙주 인자를 발현함을 시사한다.

시험 화합물:

우파모스타트 - 시험 화합물

설명: 우파모스타트 - 에틸 4-{3-[(E)-아미노(하이드록시이미노)메틸]-N-[(2,4,6- 트라이아이소프로필페닐) 설포닐]-L-페닐알라닐}-피페라진-1-카르복실레이트 하이드로겐 설페이트.

용매: DMSO

WX-UK1 - 시험 화합물

설명: WX-UK1 - 에틸 4-[(25)-3-(3- 카르밤이미도일페닐)-2-[(2,4,6- 트라이아이소프로필페닐)설포닐아미노]프로파노일]피페라진-1-카르복실레이트.

용매: DMSO

카모스타트 메실레이트 - 시험 화합물

설명: 카모스타트 메실레이트(CM) 4-[[4-[(아미노이미노메틸)아미노]벤조일]옥시] 벤젠아세트산 2-(다이메틸아미노)-2-옥소에틸 에스테르 메탄설포네이트; FOY 305; FOY-S 980; 포이판 메실레이트. 카모스타트는 경구로 생체이용 가능한 합성 세린 프로테아제이다.

용매: DMSO

블레오마이신(설페이트) - 양성 세포독성 대조군

설명: 블레오마이신은 호지킨 림프종 및 배아 암종의 치료에 일반적으로 사용되는 화학요법제이다. 광범위 스펙트럼의 블레오마이신-유도 폐 독성이 그러한 요법의 합병증으로서 잘 기재되어 있으며, 이의 가장 일반적인 변형 형태는 블레오마이신-유도 폐렴(BIP)이다(문헌[Sleijfer et al., 2001]). 블레오마이신(BLM)은 유전독성의 상이한 기전을 가지면서 인간 림프구에서 최상으로 연구된 소핵(MN) 유도제로서 선택된다.

용매: DMSO 16.67 mg/mL(11.2 mM)

방법:

세포 배양 - 분화된 인간 기관지 상피 세포(HBEC)

시험 화합물에 의한 처리:

시험 화합물을 검정 배지(AIR-ASY-100, MatTek) 중의 (DMSO를 함유하는) 스톡 용액으로부터 연속 희석시키고, 실온에 두었다. 시험 화합물 희석물을 하기에 개략적으로 설명하였다(최종 DMSO < 0.5%). HBEC 배양물을 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하고, 블레오마이신 설페이트(75.6 및 151 ㎍/ml), 검정 배지(AIR-100-ASY, MatTek) 중에 희석된, 우파모스타트(0.12 내지 30.00 ㎍/ml 범위의 6개의 농도), WX-UK1(3.33, 10, 및 30.00 ㎍/ml) 또는 카모스타트(0.5, 5, 및 25 ㎍/ml)와 함께 감염 전 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 대조군 웰들의 경우, DMSO를 갖는 검정 배지(최종 DMSO < 0.5%; 대조군) 및 바이러스 단독 대조군(검정 배지 단독)을 감염 전 1시간 동안 첨가하였다. 화합물을 각각의 인서트에 대해 정단층(0.15 mL) 및 기저층(0.85 mL) 상에 3회 반복하여 첨가하였다.

바이러스성 감염 및 샘플 처리:

감염 후 72시간째에, 처리를 위해 조직 및 배지를 수집하였다. 정단층을 0.4 mL의 TEER 완충액(Mg²⁺ 및 Ca²⁺를 함유하는 PBS)으로 세척하고, TCID50(50% 조직 배양 감염 용량) 검정을 통한 바이러스 역가 평가를 위해 수집하였다. 정단층 상층액 샘플 농도의 8배 연속 희석물을 Vero E6 세포(20,000개/웰)가 담긴 96웰 검정 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO₂ 및 95% 상대 습도에서 인큐베이션하였다. 3일(72 ± 4시간) 인큐베이션 후에, 플레이트를 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 세포변성 효과(CPE)를 측정하였다. 바이러스 역가를 Reed 및 Muench의 방법(문헌[Reed et al., 1938])을 사용하여 계산하였다. TCID50 값을 3회 반복시험 샘플로부터 결정하였다. TCID50 검정으로부터의 결과를 확인하기 위해, 플라크 감소 검정을 수행하였다. 간략하게 말하면, 플라크 감소 검정을 위하여, 정단층 상층액 샘플 농도의 10배 연속 희석물을 Vero E6 세포(100,000개의 세포/웰)가 담긴 24웰 검정 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO₂ 및 95% 상대 습도에서 인큐베이션하였다. 3일간(72 ± 4시간) 인큐베이션 후, 플레이트를 5% 중성 완충 포르말린으로 고정시키고, 크리스탈 바이올렛으로 염색하여 플라크를 시각화하였다. 하기 식을 사용하여 PFU/mL 단위로 역가를 계산하였다: 역가(PFU/mL) = 계수된 플라크 수 × 10^^{계수된 희석} × 10(100 μL의 희석된 샘플을 첨가하였기 때문에 mL로 구하기 위해). 이 검정을 2회 수행하였으며, 이때 두 번째 검정은 추가의 샘플 희석물을 평가하기 위해 바이러스 + DMSO 및 0.2 ug/ml 우파모스타트에 대해 수행되었다.

결과:

우파모스타트 및 WX-UK1은 인간 기관지 상피 조직 배양물에서 SARS-CoV-2의 고도로 강력한 항바이러스 억제제이다.

이 연구에서는, 정상 인간 기관지 상피 세포(HBEC)를 각각의 배양물의 정단측 및 기저외측 양쪽 모두에서 (0.12 내지 30.0 ㎍/ml의 범위의) 6개의 상이한 농도의 우파모스타트 및 (3.33 내지 30.0 ㎍/ml의 범위의) 3개의 상이한 농도의 WX-UK1을 사용하여 3회 반복하여 전처리하였다. 일단 전처리되면, HBEC를 SARS-CoV-2(2019-nCoV/USA-WA1/2020)에 노출시키고, 화합물과 함께 3일 동안 인큐베이션하였다. 감염 후 3일째에, 정단층을 세척하고, TCID50 검정에 의해 바이러스 부하에 대해 평가하였다. 기저외측 배지를 수집하고 락테이트 데하이드로게나제(LDH)의 존재에 대해 평가하였는데, 이때 LDH는 손상된 세포로부터 방출되어 세포사/세포 생존력의 지표로서의 역할을 한다. 비교를 위하여, 확립된 TMPRSS2 억제제인 (0.5 내지 25.0 ㎍/ml 범위의) 3개의 농도의 카모스타트를 포함시켰다.

우파모스타트 및 WX-UK1 둘 모두는 강력한 항바이러스 활성을 입증하였으며, 이때 세포 생존력에 대한 유의한 손상 없이 용량-의존적 방식으로 복제가 억제되었다(각각의 화합물의 최고 용량은 제외됨). 우파모스타트(0.12 ㎍/ml) 및 WX-UK1(3.33 ㎍/ml)의 최저 농도에서 TCID50에 의해 바이러스 부하의 3-log 및 4-log 감소가 각각 관찰되었다. 우파모스타트 및 WX-UK1 둘 모두는 감염 후 3일째에 바이러스 역가의 유사한 감소를 보여주었다. LDH 방출 검정에서 평가된 바와 같이 세포 생존력은, 최대 농도를 제외한, 우파모스타트 및 WX-UK1에 대해 평가된 모든 농도에서 손상되지 않은 것으로 보고되었다.

인간 1차 상피 배양 시스템에서 SARS-CoV-2에 대한 우파모스타트 및 WX-UK1의 항바이러스 활성을 입증하기 위하여, 본 발명자들은 HBEC 배양물에서 항바이러스 검정을 수행하였는데, 이때 HBEC 배양물은 공기-액체 계면 상에서 성장되고, 인간 유도 기도의 세포 복잡성 및 생리학적 특성을 재현한다. 3일간 인큐베이션 후에, 우파모스타트- 및 WX-UK1-처리된, SARS-CoV-2-감염된 HBEC 배양물에서, TCID50 및 플라크 감소 검정을 통해 확인된 바와 같이, 감염성 바이러스 생성의 용량-의존적 감소가 약리학적으로 관련된 농도에서 관찰되었다(도 4a 및 도 4b). 이들 결과는 알려진 TMPRSS2 억제제인 카모스타트와 양호하게 비교된다.

본 발명자들은 플라크 감소 검정 결과를 사용하여 EC50 추정치를 계산하였다. 시험된 최고 농도에서, 바이러스 생성의 억제는 50%를 초과하였다. Graphpad를 사용하여, 이용가능한 데이터로 EC50을 추정하였다. 추정된 EC50은 0.02 ug/ml였다. 본 발명자들은 하기 식을 이용하여, 하기에 기재된 바와 같이, TCID 값을 추정된 PFU 값으로 변환시킨 후에 % 억제를 계산하였다:

% 억제 = ((값 - 평균_{바이러스 대조군}) / (평균_{세포 대조군} - 평균_{바이러스 대조군}) * 100)

이어서, % 억제 값을 이들 지시에 따라 GraphPad를 통해 분석하였다:

- X 값은 우파모스타트 농도이다.

- Y 값은 반응이다.

- "Dose vs. response curve"를 선택한다.

- Analyze, nonlinear regression을 선택하고, 식들의 용량-반응(자극) 세트를 사용하여, [Dose] vs. response를 선택한다 -- 가변 기울기. 모든 다른 디폴트를 수락하였다. 얻어진 EC50은 0.02 ug/ml인 것으로 계산되었다.

LDH 방출을 통해 측정된 (시험된 최고 농도에서의 것을 제외한) 세포 생존력에 대한 유의한 손상 없이 우파모스타트, WX-UK1, 및 카모스타트에 의해 바이러스 복제가 억제되었다. 생존 불가능 세포로부터 방출된 LDH를 측정하기 위해, 조직 배양 인서트의 기저외측 층으로부터의 배지를 감염 후 72시간째에 취출하고, 제조자의 설명서(Promega)에 따라 LDH 저장 완충액 중에 희석시켰다 샘플을 LDH 완충액으로 추가로 희석시키고, 동일한 부피의 LDH 검출 시약과 함께 인큐베이션하였다. 실온에서 60분간 인큐베이션 후에 발광을 기록하였다. 배양 배지 백그라운드를 결정하기 위해 음성 대조군으로서 무세포 대조군을 포함시켰으며, 이뿐만 아니라 양성 세포독성 대조군으로서 블레오마이신(151 ug/ml)을 포함시켰다. 발광 값 - 무세포 대조군(6936의 평균 발광 판독값)을 사용하여 데이터를 플롯팅한다. 생리학적으로 관련된 인간 호흡 조직 모델을 사용한 이 데이터는, 강력한 항바이러스 효과가 관찰된 용량 범위에 걸쳐 HBEC 배양물에서 제한된 세포독성을 가지면서(도 5), SARS-CoV-2 바이러스 복제를 강하게 억제할 우파모스타트의 잠재성을 입증하고, COVID-19를 사용하여 환자를 치료하는 데 있어서의 우파모스타트의 유망한 잠재성을 추가로 입증한다. 이용가능한 데이터를 사용하여 세포 배양물의 50%에 대한 세포독성 농도(CC50)를 생성하여, 처리된 세포의 흡광도를 대조 세포와 대비하여 50%만큼 감소시키는 데 필요한 화합물 농도를 결정하였다. MTT 검정을 통해 생성된 발광 데이터를 사용하여 계산된, 우파모스타트에 대한 CC50은 46.37 uM(또는 29.2 ug/ml)이었다. 이 CC50 농도에서, 4.6 uM (또는 2.9 ug/ml)보다 더 낮은 EC50 농도는 10 초과의 SI 값(CC50/EC50)을 가져올 것이다.

실시예 3 : ARDS 유도 혈전증에 대한 ABC294640의 생체내 효능의 평가

이 연구는 래트 정맥 울혈 모델을 사용하여 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS) 질환에서 동소내(in situ)에서 유해 혈전색전성 사건의 발병률을 감소시키기 위한 ABC294640의 효능을 평가하였다. 이 검정은 LPS-유도 폐 손상 후 혈전 위험을 측정하도록 설계된다. LPS-유도 폐 손상은 ARDS에 대해 가장 일반적으로 사용되는 설치류 모델들 중 하나이며, ARDS 환자에서 관찰되는 호중구성 염증 반응을 모방하는 것으로 기재되었다. LPS-유도 ARDS의 기전은 내피 세포 및 전신 염증 반응에 대한 손상에 기초한다.

동물에서의 정맥 울혈(웨슬러(Wessler)) 시험은 생체내 과다응고성(hypercoagulability)에 대한 실험실 척도로서 40년간에 걸쳐 광범위하게 사용되어 왔다. 그것은 다양한 혈액 제제의 혈전형성(thrombogenicity)을 평가하는 데 매우 유용한 것으로 입증되어 있다.

시험 화합물을, 250 mg/㎏의 용량으로, 점적주입 후(post-instillation) 3시간째에, 그리고 점적주입후 24, 48 및 72시간째에 경구 위관영양법에 의해 투여하였다. E. 콜라이(E.coli)(O55:B5)로부터의 LPS의 적절한 양을 식염수 중에 희석시켜 400 ㎍/mL의 최종 농도를 얻었다. 이 용액을 기관내 점적주입(0.5 mL/㎏)에 의해 제공하였다. 비히클은 PBS(pH 7.4 ± 0.1)로 구성되었다. ABC294640을 칭량하고, 비히클(PBS, 0.375%, pH 7.4) 중에 옮겨서 25 mg/mL의 최종 용액을 얻었다. ABC294640 용액을 투여 전에 실온에서 10분 동안 교반한다. 이 용액을 경구 위관영양법(250 mg/㎏, 10 mL/㎏)에 의해 제공하였다.

체중이 275 내지 400 g인 스프라그-돌리 래트(수컷)를 이 연구에 사용하였다. 동물들을 연구 지도자(Study Director)에 의해 처리군에 무작위 배정하였다. 음식 및 물은 자유식(ad libitum)으로 제공되었다. 희생될 때까지 거동 및 일반적인 건강 상태에 대한 관찰이 수행되었다. 점적주입 전에, 그리고 점적주입 후 24, 48 및 72시간째에 체중을 기록하였다.

점적주입 전에, 그리고 점적주입 후 24, 48 및 72시간째에 의식있는 마우스 상에 설치된 마우스 맥박 산소측정기 칼라 프로브(mouse pulse oximeter collar probe)(MouseOx Plus system, Starr Life Sciences)를 사용하여 동맥 산소 포화도(SpO₂) 및 심박수를 기록하였다. 래트를 또한 혈량측정 챔버 환경 내로 도입하고, SpO₂와 동일한 일정을 따랐다. 기능적 호흡 파라미터를 전신 혈량측정기(VivoFlow, SCIREQ)에 의해 평가하였다. 분석된 기능적 호흡 파라미터는 하기를 포함하였다: 호흡률, PenH(폐 울혈 지수) 및 흡기/호기 시간 측정치. 완전 혈액 카운트 및 사이토카인 수준 평가를 위하여 종료 절차 전에 혈액 샘플을 또한 채취하였다.

이 연구에서는, ARDS를 LPS의 기관내 점적주입에 의해 유도하였다. ARDS 유도 및 발생 과정 전체에 걸쳐, 동물에게 비히클 또는 ABC294640을 (점적주입 후 3시간째, 24시간째, 48시간째 및 72시간째에) 경구 위관영양법에 의해 투여하였다. 72시간의 의식있는 상태의 측정 후에, 래트를 마취시키고, (72시간 시점의 위관영양법 후 4시간째에) 하대 정맥 상에서 정맥 울혈을 수행하였다. 울혈을 30분 동안 유지하였다. 이어서, 절편을 절제하고, 그 내용물을 스코어링하였다. 후속으로, 동물을 방혈에 의해 안락사시켰다.

방혈 후에, 기관절개를 수행하고 흉강을 개방하여 폐를 노출시켰다. 이어서, 기관을 관류 시스템의 캐뉼러에 연결하였다. 좌측 폐를 클램핑한 상태에서, 차가운 PBS 1X, 프로테아제 억제제 1X 용액을 폐의 우엽에서 기관에 의해 주사하여 기관지폐포 세척액(BALF)을 수행하고, 추가의 분석을 위해 수집하였다. 세포 감별 카운트를 갖는 총 세포 카운트 및 총 단백질 함량을 BALF 샘플에서 평가하였다. BALF 중의 케모카인/사이토카인 수준의 정량화 동안 BALF의 분취물을 유지하였다.

폐의 좌엽을 절제하였다. 신선하게 수거된 좌엽을 습윤된 상태로 칭량하여 좌측 폐 중량 및 우측 폐 지수(좌측 폐 중량/체중 x 100)를 결정하였다. 좌엽의 하부 부분을 사용하여, 폐부종의 지표인 좌측 폐 습윤/건조 비를 결정하였다. 좌측 폐의 나머지 부분을 균질화하고, 단백질 함량의 정량화를 위해 분취하였다.

LPS 폐 손상의 유도:

1. LPS 또는 식염수 점적주입 이전에, 전신 혈량측정에 의해 모든 래트의 기능적 폐 파라미터를 평가하고, 칼라 프로브 맥박 산소측정기를 사용하여 의식있는 래트에 대해 SpO₂를 평가하였다. 생리학적 평가 전에 래트를 먼저 혈량측정 챔버에 순응시켰다. 호흡률, Penh 및 흡기/호기 시간 측정치를 분석하였다.

2. 산소 중 2.5% 아이소플루란 USP(캐나다 몬트리올 소재의 Abbot Laboratories)를 사용하여 래트를 마취시켰다. 이어서, 래트를 삽관하고, 기관내 점적주입에 의해 LPS 또는 식염수를 전달하였다.

3. 래트가 마취로부터 회복되고, 그들 각각의 케이지로 복귀시켰다.

4. 점적주입 후 3시간째에, ABC294640의 최초 용량을 경구 위관영양법에 의해 투여하였다(하기 표 1 참조).

[표 1]

5. 래트들을 주기적으로 평가하여 동물 웰빙을 보장하였다(일반적인 거동 및 일일 체중).

6. 점적주입 후 24, 48 및 72시간째에 동물들에게 또한 경구 위관영양법에 의해 투여하였다.

7. 적점주입 후 24, 48 및 72시간째에 SpO₂ 및 전신 혈관측정을 또한 평가하였다.

8. 완전 혈액 카운트 및 사이토카인 수준 측정을 위하여 정맥 울체 절차 전에 경정맥으로부터 혈액 샘플을 취출하였다.

9. 마지막 투여 후 4시간째에, 산소 중 2.5% 아이소플루란 USP(캐나다 몬트리올 소재의 Abbot Laboratories)를 사용하여 래트를 마취시켰다. 체온을 제어하기 위해 항온 블랭킷 상에서 이 절차를 수행하였다.

10. 래트의 하대 정맥을 노출시키고, 2개의 느슨한 봉합사를 1 cm 떨어뜨려 배치하였다. 단리된 절편의 임의의 측부 혈관을 결찰하였다.

11. 울혈을 30분 동안 동소내에서 유지하였다.

12. 정맥 울혈 절편을 적출하고, 종방향으로 개방하고, 여과지 상에 비우고, 촬영하였다. 임의의 기존의 혈전을 제거하고, 여과지 상에서 블롯팅하였다. 혈전을 측정하고, 칭량하고, 0 내지 4의 척도로 점수를 매겼다(표 2 참조).

[표 2]

13. 정맥 울혈 후에, 동물들을 방혈에 의해 안락사시키고, 기관지폐포 세척액을 우측 폐로부터 수집하였다. 그렇게 하기 위하여, 기관절개를 수행하기 전에 기관 위의 근육을 절개하였다. 흉강을 개방하여 폐를 노출시키고, 기관을 관류 시스템의 캐뉼러에 연결하였다. 좌측 폐를 클램핑한 상태에서, 15 mL(3 x 5 mL)의 차가운 PBS 1X, 프로테아제 억제제 1X 용액을 폐의 우엽에서 기관에 의해 주사하여 기관지폐포 세척액(BALF)을 수행하였다. 추가의 분석을 위해 BALF를 수집하였다. 세포 감별 카운트를 갖는 총 세포 카운트를 BALF 샘플에서 평가하였다. BALF 중의 케모카인/사이토카인 수준의 정량화 동안 BALF의 분취물을 유지하였다.

14. 이어서, 좌측 폐를 수거하고, 좌측 폐 중량 및 좌측 폐 지수 계산을 위하여 칭량하였다. 폐 조직 부종을 습윤/건조 비 계산을 사용하여 평가하였다. 좌측 폐의 하부 부분을 단독으로 칭량하고(습윤 중량), 이를 사용하여 폐 습윤/건조 비를 결정하였다. 60℃에서 적어도 24시간 동안 건조시킨 후, 이것을 재칭량하였다(건조 중량).

각각의 파라미터(하기에 열거됨)를 각각의 군에 대해 컴파일링하고, 적절한 통계 분석을 사용하여 막대 그래프로 제시하였다.

1 - 체중 변화

2 - 포화도(SpO₂) 및 심박수(bpm)

3 - 호흡 파라미터: 흡기/호기 시간

1회 호기 호흡량

호흡률

PenH

4 - 세포 감별을 갖는 BALF 총 세포 카운트

5 - BALF 사이토카인/케모카인 수준

6 - 좌측 폐의 중량 및 지수

7 - 폐의 습윤/건조 비

8 - 폐 균질액 내의 폐의 총 단백질 함량

LPS는 염증 및 기면성 상태와 관련된 폐 중량의 유의한 증가를 유도한다. 이러한 증가는 W/D 비의 중요한 증가로 나타나는 바와 같이 중증 부종과 관련된다. 폐 중량 획득은 72시간 시점의 위관영양법 후 4시간째에서, LPS-비히클 군과 대비하여 LPS-비히클 군에서 더 컸다. 250 mg/㎏으로 투여된 ABC294640은 혈전증의 감소를 보여주었다 - 혈병 길이, 중량 및 총 혈전 점수의 감소에 의해 입증됨.

실시예 4 : WX-UK1 억제를 위한 표적으로서의 TMPRSS2 및 TMPRSS11(A)의 평가

상이한 프로테아제 패밀리에 속하는 몇몇 효소는 프라이밍을 위해 CoV S 단백질에 의해 이용될 수 있다. pH-의존적 시스테인 프로테아제 카텝신 L, TMPRSS2, TMPRSS11A뿐만 아니라 세린 프로테아제 푸린은 표적 세포 내로의 바이러스 침입 동안 S 단백질을 프라이밍할 수 있다. TTSP 중 어느 것이 우파모스타트에 의한 억제의 관련 표적인지를 결정하기 위하여, 본 발명자들은 구조 모델링/예측, 구조 분석 및 관련 문헌의 검토를 포함한 분석을 수행하였다.

TMPRSS2 및 TMPRS11A 포유류 발현 시스템을 MyBioSource로부터 구매하였다(각각 MBS1193731 및 MBS1345824). 단백질을 제조자에 따라 1 mg/ml로 재구성하고, 본 발명자들은 재구성된 단백질과 함께 겔을 전개하였다. WX-UK1의 신선한 스톡 용액을 제조하였다(100% DMSO 중 100 mM WX-UK1). 농축된 스톡을 HBS 완충액 중에 1 mM로 희석시킨 후, 검정에서 추가로 희석시켰다.

효소 억제제는 몇몇 상이한 방식으로 효소 및/또는 효소-기질 복합체와 상호작용하여 효소-촉매 반응의 속도를 감소시킬 수 있다. 각각의 억제 방식에 대해, 효소와 억제제 사이의 상호작용의 강도를 반영하는, 억제제에 대한 해리 상수, Ki를 계산할 수 있다. 억제제에 대한 Ki는 기질에 대한 Km과 유사하고; 작은 Ki 값은 효소에 대한 억제제의 긴밀한 결합을 반영하는 반면, 더 큰 Ki 값은 더 약한 결합을 반영한다. Ki를 계산하는 데 사용되는 정확한 식은 억제 방식에 좌우되는데, 이것은 억제제의 존재 하에서의 효소에 대한 V_max 및 Km의 "겉보기" 값을 임의의 억제제의 부재 하에서의 V_max 및 Km과 대비함으로써 실험적으로 결정될 수 있다(하기 식 2).

이들 연구를 위해 선택된 발색 기질은 S-2288 기질이었다. 발색 기질의 인간 세린 프로테아제 절단에 대한 WX-UK1의 효과를 측정함으로써 Ki-값을 결정하였다. Ki-값의 결정을 위하여, 일련의 농도의 WX-UK1을 표적 인간 세린 프로테아제와 함께 사전-인큐베이션한 후, 발색 기질을 첨가하여 반응을 개시하였다. 선형 회귀를 사용하여 기울기로부터 반응 속도를 결정하였고, 이들을 비억제된 반응의 반응 속도에 대해 정규화하였다. 정규화된 활성을 WX-UK 1 농도에 대해 플롯팅한 후, 식 1을 사용하여 비선형 회귀에 의해 K_i-값을 얻었다.

[식 1]

vi/v0는 억제제가 존재하는 상태와 부재하는 상태에서의 초기 속도의 비이며, 이는 억제제 농도, [I] 및 기질 농도, [S]의 함수로서 기재된다.

표준 미카엘리스-멘텐 반응속도론(standard Michaelis-Menten kinetics)에 의해 K_M-파라미터를 얻었다. 실험 Vmax 값을 산출하기에 충분히 높은 적합한 일련의 농도의 기질에 세린 프로테아제를 첨가하였다. 후속 반응 속도를 기질 농도에 대해 플롯팅한 후, 미카엘리스-멘텐 식(2)을 사용하여 KM-값을 도출하였다.

[식 2]

모든 실험은 HBS(30 mM Hepes, pH = 7.4; 150 mM NaCl; 0.5% BSA) 중에서 37℃에서 적어도 3회 반복하여 수행하였다. 반응을 405 nm에서 적어도 45분 동안 2회 판독/분으로 모니터링하였다. WX-UK1을 100% DMSO 중에 유지하였기 때문에, 프로테아제 활성에 대한 원치 않는 DMSO 영향을 배제하기 위하여 비억제된 DMSO-대조군을 모든 실험에 포함시켰다.

WX-UK1에 의한 인간 TMPRSS2의 억제

도 6은 곡선 적합화 방정식 1로서, y-축 상에는 분율 속도가, 그리고 x-축 상에는 WX-UK1 농도가 나타나 있다. 이 그래프는 WX-UK1이 TMPRSS2의 활성을 어떻게 억제하는지를 보여준다. K_i는 2.9 ± 0.04 (3) μM인 것으로 결정되었다.

WX-UK1에 의한 인간 TMPRSS11a의 억제

도 7은 곡선 적합화 방정식 1로서, y-축 상에는 분율 속도가, 그리고 x-축 상에는 WX-UK1 농도가 나타나 있다. 이 그래프는 WX-UK1이 TMPRSS11A의 활성을 어떻게 억제하는지를 보여준다. K_i는 0.39 ± 0.01 (3) μM인 것으로 결정되었다.

표 3은 프로테아제들의 패널에 대한 WX-UK1의 억제 상수, Ki 값을 열거한다:

[표 3]

실시예 5 : SARS-CoV-2 스파이크 단백질-매개 침입에 대한 우파모스타트 및 WX-UK1의 효과의 평가

SARS-CoV-2 스파이크 단백질과 위형화된(pseudotyped) 복제 결함, 단회 사이클 수포성 구내염 바이러스(VSV) 입자(VSVpp+SARS-2-S Δ18) 또는 대조군으로서의 수포성 구내염 바이러스(VSV)의 당단백질의 세포 침입에 대한 우파모스타트 및 WX-UK1 둘 모두의 억제 효과를 평가하기 위해 연구를 수행하였다. Δ18은 S 단백질의 18개의 C-말단 아미노산의 결실을 지칭하며, 이는 ACE2 또는 TMPRSS2 사용에 영향을 미치지 않으면서 위형화 효율을 증가시킨다. 위형 침입 및 이의 억제를 Calu-3 및 Vero-E6 세포에서 평가하였다. 폐-유래 인간 암 세포주인 Calu-3 세포는 TMPRSS2-의존적 방식으로 SARS-CoV-2 S-유도 침입을 가능하게 한다. 배양된 폐 세포의 SARS-CoV-2 감염을 억제하는 것으로 밝혀져 있는(문헌[Hoffmann et al., 2020]) 알려진 TMPRSS2 억제제인 카모스타트를 포함한, TMPRSS2를 억제하는 작용제는 이 모델에서 S-유도 침입을 억제할 것으로 예상된다. 녹색 원숭이 신장 세포주인 Vero 세포는 TMPRSS2-독립적, 카텝신 L-의존적 방식으로 SARS-CoV-2 스파이크-유도 침입을 가능하게 한다. 클로로퀸을 포함한 산성 세포내 엔도좀의 pH를 상승시키는 작용제는 이 모델에서 침입을 억제할 것으로 예상된다. 소포성 구내염 바이러스(VSV)의 G-단백질에 의해 유도되는 침입은 특이성 대조군으로서의 역할을 하였다(VSV-G 유도 침입은 낮은 pH에 좌우되며, 이에 따라 클로로퀸 감수성이지만 카모스타트 감수성은 아니다).

방법:

위형화를 위하여, 수포성 구내염 바이러스 위형(VSVpp)을 공개된 프로토콜(문헌[Berger Rentsch and Zimmer, 2011])에 따라 생성하였다. 간략하게 말하면, 연구 중인 바이러스 표면 당단백질을 발현하도록 형질감염된 293T에, eGFP(증강된 녹색 형광 단백질), 및 VSV-G 오픈 리딩프레임 대신 반딧불이 루시퍼라제, VSV*DG-fLuc(Gert Zimmer, Institute of Virology and Immunology, 스위스

소재에 의해 흔쾌히 제공됨)에 대한 발현 카세트를 함유하는 복제-결손성 VSV 벡터를 접종하였다. 37℃에서 1시간의 인큐베이션 기간 후에, 접종물을 제거하고, 세포를 PBS로 세척한 후, 잔류 투입 바이러스를 중화시키기 위하여 항-VSV-G 항체(I1, CRL-2700으로부터의 마우스 하이브리도마 상층액; ATCC)가 보충된 배지를 첨가하였다(VSV-G를 발현하는 세포에는 어떠한 항체도 첨가하지 않았다). 위형화된 입자를 접종 후 16시간째에 수거하고, 원심분리에 의해 세포 잔해로부터 청징화하고, 실험에 사용하였다.

형질도입을 위해, 표적 세포를 50% 내지 75% 융합도(confluency)에 도달할 때까지 96웰 플레이트 내에서 성장시킨 후, 이들에게 각각의 위형화된 입자를 접종하였다. 프로테아제 억제제를 수반하는 실험을 위하여, 표적 세포를 형질도입하기 2시간 전에 각각의 화학물질로 처리하였다. 시판 기질(Beetle-Juice, PJK) 및 Hidex Sense 플레이트 발광측정기(Hidex)를 사용하여 세포 용해물에서 반딧불이 루시퍼라제의 활성을 측정함으로써 형질도입 후 16시간째에 형질도입 효율을 정량화하였다. 이 형질도입 검정은 SARS-CoV-2 스파이크를 보유한 단회 사이클 소포성 구내염 바이러스(VSV)의 침입을 측정한다.

결과:

SARS-2-S 및 VSV-G 보유 위형의 침입을 억제하는 우파모스타트 및 WX-UK1의 능력을 Calu-3(인간 폐암 세포) 및 Vero-E6 세포에서 평가하였다. 폐-유래 인간 암 세포주인 Calu-3 세포는 TMPRSS2-의존적 방식으로 그리고 이에 따라 카모스타트-감수성 방식으로 SARS-CoV-2 스파이크-유도 침입을 가능하게 한다. 아프리카 녹색 원숭이-유래 신장 세포주인 Vero 세포는 카텝신 L-의존적 방식으로 그리고 클로로퀸-감수성 방식으로 SARS-CoV-2 스파이크-유도 침입을 가능하게 한다. 소포성 구내염 바이러스(VSV)의 G-단백질에 의해 유도되는 침입은 특이성 대조군으로서의 역할을 하였다(VSV-G 유도 침입은 낮은 pH에 좌우되며, 이에 따라 클로로퀸 감수성이지만 카모스타트 감수성은 아니다).

우파모스타트 및 WX-UK1은 인간 폐암 세포(Calu-3) 및 녹색 원숭이 신장 세포(Vero E6)에서 중간 정도의 효율로 SARS-CoV-2 S 단백질 매개 침입을 억제한다.

Calu-3 세포에서 VSVpp+SARS-2-S Δ18에 대해 시험될 때, WX-UK1 및 우파모스타트 둘 모두는 중간 정도의 억제 활성을 보여주었지만, 다른 세린 프로테아제 억제제인 카모스타트보다 더 적었다(도8a). 표면 TMPRSS2를 갖지 않는 Vero-E6 세포에서 시험될 때, 우파모스타트 및 WX-UK1에 대해서는 중간 정도의 억제 활성이 여전히 주목되었으며; 카모스타트는 이러한 상황에서 불활성인 반면, 클로로퀸의 최고의 농도는 S 단백질-유도 침입을 강력히 억제하였다(도 8b). WX-UK1 및 우파모스타트는 Calu-3 세포에서 VSV-G 침입을 중간 정도로 억제하였는데, 이는 우파모스타트에 대한 더 광범위한 활성 스펙트럼을 시사한다(도 9). 클로로퀸을 제외한 3개의 모든 화합물은 Vero76 세포에서 VSV-G에 대해 시험될 때 불활성이었다. 전체적으로, 이들 결과는 WX-UK1 및 우파모스타트가 Calu-3 및 Vero 세포 내로의 SARS-CoV-2 스파이크 유도 침입을 중간 정도의 효율로 억제함을 입증한다. 이 모델의 성질로 인해, 실제 시험관내 또는 생체내 억제 농도에 대한 특이적 외삽이 가능하지 않다.

실시예 6 : 오파가닙에 의한 폐렴을 갖는 COVID-19의 치료

폐렴이 병발되지 않았고 기계적 환기를 필요로 하지 않거나 24시간 이하 동안 기계적으로 환기되어 왔던 COVID-19 감염으로 진단된 환자를 이러한 입원 연구에서 평가하였다.

1차 목적:

1) COVID-19 감염으로 입원한 환자에서 500 mg Q12hr로 투여되는 오파가닙의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해

오파가닙 치료 중에 바이러스 배출(viral shedding)을 평가하기 위해

2차/탐구는 하기 중 하나 이상을 포함할 수 있다:

1) 오파가닙 치료 중에, COVID-19 감염으로 입원한 환자에서 바이탈 사인을 평가하기 위해

2) 오파가닙 치료 중에, COVID-19 감염으로 입원한 환자에서 임상 개선을 평가하기 위해

3) 기저선에서 기계적으로 환기되지 않은 환자의 경우, 오파가닙 치료 중에 기계적 환기에 대한 필요성을 평가하기 위해

4) SpO2/FiO2 또는 PaO2/FiO2 비 중 어느 하나를 통한 저산소증의 개선, 및 실내 공기에서의 SpO2의 개선을 평가하기 위해. 실내 공기로 또는 실내 공기에서의 특정 SpO2 산소 포화도로 되돌아간다.

치료 중(on-treatment) 바이러스 부하 변화, 및 D-이량체, 심장 트로포닌, LDH 및 페리틴 수준의 변화.

연구 설계:

이 연구는, 기계적 환기를 필요로 하지 않거나 24시간 미만 동안 기계적 환기를 제공받은 COVID-19 폐렴으로 입원한 적격한 환자에 대해, 하나의 활성 치료제 시험군(arm); 오픈-라벨 오파가닙 500 mg(Q12hr, 매일 2회)을 포함시켰다. 환자는 최대 1주의 스크리닝 기간에 진입하였다. 적격한 환자는 최대 2주 동안 치료 기간에 진입하였다. 모든 참가자는 그들의 연구 약물의 마지막 용량 후 2주 동안, 2주 치료 기간의 종료 시점에서, 또는 일단 그들이 COVID-19 바이러스에 대한 2개의 연속 매일 음성 바이러스 면봉검체를 가진 경우, 또는 일수 14 전에 조기 약물 중단 후에 추적되었다. 연구 참여의 최대 지속기간은 35일(7주)이었다. 연구 참가자는 오파가닙, 2 x 250 mg 캡슐(500 mg)(Q12hr)을 제공받고, 최대 총 14일(2주) 동안 또는 2개의 연속 매일 비인두 바이러스 면봉검체가 COVID-19에 대해 음성일 때까지, 어느 것이든 먼저 일어날 때까지 매일 투여되었다. 오파가닙은 (가벼운 내지 중간 정도의 식사 후에) 음식과 함께 투여된 후, 240 mL(8 액량 온스(fluid ounce))의 물이 제공되었다. 환자가 단지 비위관(naso-gastric tube)을 통해서만 오파가닙을 섭취할 수 있다면, 캡슐의 내용물을 20 cc 생리 식염수 중에 현탁시키고, 비위관을 통해 밀어넣고 멸균수를 사용하여 충분히 플러싱하였다. 환자에게 관-급식되고(tube-fed) 있는 중이면, 오파가닙을 관-급식 직후에(대략 15 내지 30분째에) 투여하였다.

주요 선정 기준:

1. 18세 이상 내지 75세 이하 연령(종점 포함)의 성인 남성 또는 여성

2. 사전동의(informed consent) 시점에서 기계적 환기를 필요로 하지 않거나, 24시간 이하 동안 기계적으로 환기된, 입증된 COVID-19 감염 및 폐렴

3. 환자, 보호자 또는 법정 대리인이 서면 IRB-승인된 사전동의서에 서명하였다.

주요 제외 기준:

1. 뉴욕 심장 협회(New York Heart Association) 부류 III 또는 IV, 심장 질병, 지난 6개월 이내에 심근 경색, 불안정한 부정맥, 또는 ECG 상에서의 허혈의 증거

2. 연구자의 판단에서 치료에 위험을 추가할 수 있는 임의의 동반이환(co-morbidity).

3. 임신(양성 혈청 검사) 또는 수유 여성

4. 이 프로토콜에서 필요한 절차를 준수하는 것을 꺼리거나 준수할 수 없음.

5. AST(SGOT) 또는 ALT(SGPT) > 2.5 x 정상 상한치(upper limit of normal, ULN)

6. 빌리루빈 > 1.5 x ULN(빌리루빈 증가가 길버트 증후군에 기인한 경우는 제외함)

7. 혈청 크레아티닌 > 2.0 X ULN

8. 절대 호중구 카운트 < 1000개의 세포/㎣

9. 혈소판 카운트 < 75,000개/㎣

10. 헤모글로빈 < 8.0 g/dL

11. 와파린, 아픽사반, 아르가트로반 또는 리바록사반을 현재 섭취하고 있음

12. 현재 약물 또는 알코올 남용

연구 평가:

하기가 매일 모니터링될 것이다(표 4 참조):

동시 투약물의 검토

유해 사건

신체 검사

바이탈 사인(체온, 혈압, 맥박수, 호흡률 및 맥박 산소측정기에 의한 산소 포화도)

임상 증상(기침, 호흡곤란, 구역, 구토, 설사)

비인두 바이러스 면봉검체

혈청 화학적 검사

감별을 갖는 CBC

흉부 X-선

소변검사

[표 4]

투여 형태 및 투여 방식:

캡슐 250 mg으로서 오파가닙을 공급하였는데, 이는 불투명한 백색 경질 젤라틴 캡슐 내에 부형제와 함께 250 mg 오파가닙을 함유한다.

오파가닙을 최대 2주 동안 매 12시간마다 2개의 캡슐(500 mg)로서 경구(또는 적절한 경우 비위관을 통해) 투여하였다. 각각의 용량은 음식과 함께 투여되거나, 적절한 경우 관-급식 후에 15 내지 30분째에 투여된다.

연구 종점:

1차 안전성 종점:

1) 유해 사건, 실험실 검사, 신체 검사 및 바이탈 사인

2) 오파가닙 처리 중에 일수 14까지 2개의 연속 매일 음성 비인두 바이러스 면봉검체를 갖는 환자의 백분율

2차/탐구 종점:

1) 바이탈 사인 개선을 보여주는 환자의 백분율(하기 중 하나 이상의 개선에 기초함: 체온, 심박수, 호흡률, 산소 포화도)

2) 임상 개선을 보여주는 환자의 백분율(하기 증상 중 하나 이상의 개선에 기초함: 기침, 호흡곤란, 구역, 구토, 설사)

2주 연구-약물-중단 추적관찰(2-week off-study-drug follow-up)의 종료 시점까지 기계적 환기를 필요로 하지 않는, 기저선에서 기계적으로 환기되지 않은 환자의 백분율

결과:

동정적 사용(compassionate use)에 대해 승인된 7명의 환자로부터 결과가 얻어졌다. 이들 환자는, 보충적 산소 상태에 있으면서, 저산소증과 함께 중등도 내지 중도 COVID-19-관련 폐렴을 가졌다. 7명의 환자 중 6명에서는 백그라운드 요법으로서 하이드록시클로로퀸(HCQ)을 포함하여, 환자들에게 오파가닙 + 표준 치료(standard-of-care)를 제공하였다.

표 5로부터 알 수 있는 바와 같이, 오파가닙과 관련되어 있을 수 있거나 없을 수 있는(이 환자에게는 또한 HCQ 및 아지트로마이신을 제공함) 설사로 인해 단지 1일의 치료만을 받은 환자 #7을 제외하고, 6명의 중등도 내지 중도 환자는 모두 유의하게 개선되었는데, 이때 5명의 환자는 실내 공기 호흡으로 되돌아가고, 3명의 환자는 퇴원하였다.

6명의 환자는 모두 C-반응성 단백질(C-Reactive Protein, CRP)의 감소를 나타내었으며, 6명의 환자는 모두, 감소된 보충적 산소공급 및 더 높은 림프구 카운트를 포함한, 측정가능한 임상 개선을 보여주었다.

모든 환자는 처음 3일 동안 250 mg 오파가닙(Q12hr)으로 시작하고, 이어서 500 mg 오파가닙(Q12hr)으로 증가시켰다.

단지 6명의 환자에도 불구하고, 이들 예비 조사결과는 오파가닙으로 치료된 처음 COVID-19 환자들에서 임상 개선을 보여주고, COVID-19 환자에서 오파가닙 사용의 내약성에 대한 예비적 지지를 제공한다.

[표 5]

5명의 환자를 이 분석에 포함시켰으며, 비교 목적을 위하여, 본 발명자들은 동일한 성별, 동일한 중증도 환자(기저선 특성)를 갖는 대조군을 사용하였다. 카테고리 변수의 경우 카이-제곱 검정을 사용하고, 적절한 경우 연속 변수의 경우 t-검정 또는 맨-휘트니 U-검정을 사용하여 군들 사이의 단변량 비교를 수행하였다. 시간 변수들을 콕스 비례 위험 회귀(Cox proportional hazard regression)를 사용하여 비교하고, 연령 및 백그라운드 병에 대해 조정하였다. 다중 비교를 위한 본페로니 교정과 함께, 반복 측정 일반 선형 모델(repeated measures general linear model)을 이용하여 CRP 및 림프구 변화를 비교하였다.

오파가닙으로 치료된 환자는 림프구 카운트에서 유의하게 더 신속한 증가를 가졌다. 모든 다른 임상 결과는 치료군에 유리하게 비통계적으로 유의한 경향을 가졌다: 고유량 비강 캐뉼러(HFNC)로부터 단계적 중단(weaning)에 이르기까지의 중위 시간은 사례 vs. 대조군에서 10일 및 15일(HR=0.3, 95% CI: 0.07 내지 1.7, p=0.2)이었으며, 주위 공기에 이르기까지의 시간은 13일 vs. 14.5일이었으며(HR=0.4, 95% CI: 0.15 내지 1.5), 대조군의 33%가 기계적 환기를 필요로 한 것과 비교하여, 이들 사례 중 어느 것도 기계적 환기를 필요로 하지 않았다. 중증 COVID-19 환자의 이 작은 코호트에서, 오파가닙은 모든 치료된 환자에서 임상 파라미터 및 실험실 파라미터 둘 모두에 있어서 개선을 가지면서 안전하고 우수한 내약성을 나타내었다. COVID-19 감염에 대한 오파가닙의 효능은 무작위 배정 플라세보-대조 시험에서 추가로 시험되어야 한다.

실시예 7: COVID-19 폐렴에서 오파가닙의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2a 상 연구

1차 목적:

14일(일수 1 내지 일수 14)에 걸쳐 일일 보충적 산소 유량(L/분)을 사용하여 총 산소 요구량(곡선 아래 면적)을 평가하기 위하여

2차 목적:

1) L/분으로의 산소 유량을 기준으로 한 보충적 산소에 있어서 기저선으로부터 50% 감소에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

2) 일수 14까지 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 필요로 하지 않는 환자의 비율을 평가하기 위하여

3) 일수 14에서 열 없는(afebrile) 환자의 비율을 평가하기 위하여

4) PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 음성 면봉검체에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

5) 일수 14에서 PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 음성 면봉검체를 갖는 환자의 비율을 평가하기 위하여

6) 일수 14까지 삽관 및 기계적 환기에 대한 필요성을 평가하기 위하여

7) 기계적 환기에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

8) 기저선에서 발열(체온 >38.0 C[100.4 F]로서 정의됨)을 갖는 것으로 적어도 1회 측정된 환자들 중에서, 일수 14에서 열 없는(체온 <37.2 C[99 F]로서 정의됨) 환자의 비율을 평가하기 위하여

9) 기저선 후 30일째에서의 사망을 평가하기 위하여

탐구 목적:

염증의 전신 마커(D-이량체, 심장 트로포닌, C-반응성 단백질[CRP], 락테이트 데하이드로게나제[LDH] 및 페리틴)의 변화를 평가하기 위하여

안전성 목적:

COVID-19 폐렴을 갖는 환자에서 최대 14일 동안 500 mg(Q12hr)으로 경구 투여된 오파가닙의 안전성 및 내약성을 평가하기 위하여

연구 모집단:

이 연구 모집단은, 흉부 X-선 상에서 방사선학적 불투명도로서 정의된 폐렴이 병발되었고 보충적 산소를 필요로 하는 COVID-19 감염으로 진단된 환자들로 이루어질 것이다. 환자는 적어도 스크리닝 동안에 그리고 기저선(일수 1)에서 입원되어야 한다.

연구 설계 및 설명:

이것은 2a 상, 개념 증명, 다시설 무작위 배정 이중-맹검, 병행 시험군, 플라세보-대조 연구(phase 2a, proof of concept, multi-center randomized double-blind, parallel arm, placebo-controlled study)였다. 사전동의를 얻은 후에, 환자는 적격성을 결정하기 위해 3일 이하 동안 스크리닝 단계에 진입하였다.42명의 적격한 환자를, 표준 치료에 추가된 오파가닙을 제공받거나, 표준 치료에 추가된 매칭되는 플라세보를 제공받도록 1:1의 무작위 배정비로 무작위 배정하였다. 치료 배정은 환자, 연구자 및 병원 직원뿐만 아니라 스폰서에 대해서도 맹검 상태로 유지되었다. COVID-19를 야기하는 SARS-CoV-2 바이러스를 특이적으로 표적화하는 확정적 치료에 대한 합의가 없었기 때문에(문헌[Wilson, 2020]), 표준 치료는 COVID-19 범유행 동안 구현된 지역적, 제도적 또는 의사 지시 요법을 참고하였다.

연구 참가자는, 표준 치료(약리학적 및/또는 지지적)에 추가하여, 매 12시간마다 오파가닙 2 x 250 mg 캡슐(500 mg)을 제공받거나, 매칭되는 플라세보를 제공받았다. 연구 약물은 14일(일수 1 내지 일수 14) 동안 매일마다 투여되어야 했는데, 단 이때, 환자는 보충적 산소를 필요로 하지 않고서 퇴원하지 않았다는 조건에서였으며, 이러한 경우에 연구 약물은 단지 일수 10까지만 투여될 것이다.

모든 참가자는 연구 약물의 그들의 마지막 용량 후 4주 동안 추적관찰되었는데, 마지막 용량은 2주 이중-맹검 치료 단계의 종료 시점에서 또는 조기 연구 약물 중단 후에 환자 또는 의사 결정에 기초하여 일어났을 수 있다. 연구 참여의 최대 지속기간은 최대 45일(최대 3일 스크리닝; 2주 DB 치료 단계 및 4주 연구-약물-중단 추적관찰을 포함함)이었다.

계층화:

다음 3개의 파라미터를 고려하는 최소화 알고리즘에 기초하여 환자들을 계층화하였다: 스크리닝 시점에서의 연령, 70세 이상의 연령, (예 또는 아니오); 스크리닝 시점에서의 HbA1c, ≥6.5, (예 또는 아니오); 기저선에서의 산소 요구량, 비침습적 양압 환기를 필요로 함(예를 들어, BIPAP, CPAP를 통함), (예 또는 아니오).

적격성 기준:

선정:

1. 18세 이상 내지 80세 이하 연령의 성인 남성 또는 여성

2. 인두 샘플(비인두 또는 구인두)의 RT-PCR 검정 및 흉부 X-선 상에서 방사선학적 불투명도로서 정의된 폐렴에 따라 입증된 COVID-19 감염

3. 환자는 기저선에서 보충적 산소를 필요로 한다

4. 환자, 보호자 또는 법정 대리인이 서면 IRB-승인된 사전동의서에 서명하였다

제외:

1. 연구자의 판단에서 치료에 위험을 추가할 수 있는 임의의 동반이환.

2. 삽관 및 기계적 환기를 필요로 함

3. 실내 공기에서 산소 포화도 > 95%

4. 입원 전에 간헐적 또는 연속적인 이동식 산소를 필요로 하는 임의의 기존의 호흡 상태

5. 환자는, 연구자의 임상 판단에서, >72시간에서 생존할 가능성이 낮다

6. 임신(무작위 배정 전 3일 이내에 양성 혈청 검사) 또는 수유 여성

7. 이 프로토콜에서 필요한 절차를 준수하는 것을 꺼리거나 준수할 수 없음.

8. 프리데리시아 식(Fridericia's formula)을 사용하여 계산된(QTcF), 심전도(ECG) 상에서의 보정된 QT(QTc) 간격이 여성의 경우 >470 ms이거나, 남성의 경우 >450 ms임

9. AST(SGOT) 또는 ALT(SGPT) > 2.5 x 정상 상한치(upper limit of normal, ULN)

10. 빌리루빈 > 1.5 x ULN(빌리루빈 증가가 길버트 증후군에 기인한 경우는 제외함)

11. 혈청 크레아티닌 > 2.0 X ULN

12. 절대 호중구 카운트 < 1000개의 세포/㎣

13. 혈소판 카운트 < 75,000개/㎣

14. 헤모글로빈 < 8.0 g/dL

15. 감수성 CYP3A4, CYP2C9 또는 CYP2C19 기질이고 좁은 치료 지수를 갖는 투약물을 현재 섭취하고 있음

16. CYP2D6 및 CYP3A4 17의 강한 유도제 또는 억제제인 투약물을 현재 섭취하고 있음. 와파린, 아픽사반, 아르가트로반 또는 리바록사반을 현재 섭취하고 있음

18. 현재 약물 또는 알코올 남용

19. 항바이러스 연구를 포함한, 약리학적 치료를 평가하는 임상 연구에 현재 참여 중임

대상체 수:

총 49명의 환자를 이 연구에서 스크리닝하였는데, 이 중 42명의 환자를 무작위 배정하였으며(23명은 오파가닙에, 19명은 플라세보에), 한편 7명은 스크리닝 실패였다. 2명의 환자를 각각의 군에 무작위 배정하였지만 치료하지는 않았다. 19명의 오파가닙 환자 및 16명의 플라세보 환자가 치료를 완료하였다(일수 14). 3명의 오파가닙 환자 및 2명의 플라세보 환자는 치료를 조기에 중단하였다. 오파가닙 시험군에서는 2명의 환자가 유해 사건을 경험하여 연구 약물을 종결시키게 된 반면, 1명의 플라세보 환자가 유해 사건으로 인해 종결되었다.

스크리닝/기저선 평가:

서명된 사전동의서

적격성 결정

완전한 의료 이력(COVID-19 증상의 개시를 포함함)

동시 투약물 평가

시스템의 기저선 검토

신체 검사

환자가 보행가능한 경우에는 체중을 측정한다

산소 요구량 (L/분)

12-리드 심전도

흉부 X-선

SARS-CoV-2 PCR 검사를 위한 비인두 또는 구인두 면봉검체

혈청 화학적 검사

CRP, D-이량체, LDH, 페리틴, 심장 트로포닌

HbA1c

감별을 갖는 CBC

소변검사

치료 전 3일 이내에 혈청 임신 검사(가임 여성의 경우)

연구 평가:

하기를 모니터링하고, 표준 치료의 일부로서 매일 문서로 기록하였다:

동시 투약물

유해 사건

중간 신체 검사

산소 요구량 (L/분)

하기를 표준 치료의 일부로서 덜 빈번하게 그리고 가능한 한 모니터링할 것이다:

동시 하이드록시클로로퀸 하에 있는 환자의 경우, 일수 1에서 최초의 연구 약물 투여 후 대략 3시간째에, 일수 2 및 일수 4에서 어느 때이든, 그리고 역시 치료의 종료 시점에서(일수 10에서, 일수 14에서, 또는 조기 연구 약물 중단 시에) 12-리드 심전도(COVID-19 하에서 병원 치료 가이드라인에 의해 허용되는 경우). 환자가 모니터(원격측정 또는 홀터 모니터를 포함함) 상에 있는 경우, 연구자는 QT 간격 데이터를 수집할 것이 권장된다

매 1 내지 3일마다 SARS-CoV-2 PCR 검사를 위한 비인두 또는 구인두 바이러스 면봉검체

주 1회 혈청 화학적 검사

주 1회 혈청 CRP, D-이량체, LDH, 페리틴, 심장 트로포닌

주 1회 감별을 갖는 CBC

의사 결정에 따라 흉부 X-선

연구 종점:

1차

14일(일수 1 내지 일수 14)에 걸쳐 일일 보충적 산소 유량(L/분)을 사용하는 총 산소 요구량(곡선 아래 면적)

2차

1) L/분으로의 산소 유량을 기준으로 한 보충적 산소에 있어서 기저선으로부터 50% 감소에 이르기까지의 시간

2) 일수 14까지 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 제공받지 않는 환자의 백분율

3) 적어도 24시간 간격을 두고서, PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 2개의 연속 음성 면봉검체에 이르기까지의 시간

4) 일수 14에서 PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 적어도 2개의 연속 음성 면봉검체 후에, 연속된 음성 면봉검체를 갖는 환자의 백분율

5) 2주 연구-약물-중단 추적관찰의 종료 시점까지 삽관 및 기계적 환기를 필요로 하는 환자의 백분율

6) 삽관 및 기계적 환기에 이르기까지의 시간

7) 기저선에서 발열(체온 >38.0 C[100.4 F]로서 정의됨)을 갖는 것으로 적어도 1회 측정된 환자들 중에서, 일수 14에서 열 없는(체온 <37.2 C[99 F]로서 정의됨) 환자의 백분율

8) 일수 30에서 어떠한 원인으로 인한 사망

탐구

1) 일수 14에서 염증의 전신 마커(D-이량체, 심장 트로포닌, C-반응성 단백질[CRP], 프로칼시토닌[PCT], 락테이트 데하이드로게나제[LDH] 및 페리틴)의 기저선으로부터 평균 변화

안전성

1) 모든 치료-응급 AE(TEAE) 및 SAE의 발병률

2) 바이탈 사인의 평가

3) 실험실 파라미터(화학적 검사 및 혈액학적 검사)의 평가

4) 심전도(ECG)의 평가

통계학적 방법:

이 연구의 1차 효능 목적은 14일(일수 1 내지 일수 14) 동안 일일 산소 유량(L/분) 측정치를 사용하여 총 보충적 산소 요구량(곡선 아래 면적)에 대한 오파가닙의 효과를 평가하기 위한 것이었다. 1차 효능 종점은, 각각의 환자에 대해, 매일마다 기저선 산소 요구량을 차감한 후에 사다리꼴 규칙을 사용하여, 일수 14까지 보충적 산소 요구량의 곡선 아래 면적을 계산하였다. 보충적 산소가 필요하지 않은 일수를 0으로 기록하였다. 소정의 날에 산소 요구량(L/분)의 몇몇 값이 기록되는 경우, 1차 분석을 위하여 이들 값 중 최고치를 취하였다. 1차 분석에서, 일수 14 전에 사망하거나, 삽관 및 기계적 환기를 필요로 하는 환자의 경우, 누락된 일일 값(daily value)을 8 L/분의 최대 보충적 산소 유량 요구량으로 배정하였다. 일수 14 전에 보충적 산소에서 퇴원한 환자의 경우, 퇴원 후 현장에 의해 값이 수집되지 않았다면, 퇴원 당일의 산소 요구량(L/분)이 이후에 일수 14까지 매일 동안 배정되어야 했다.

1차 분석은 변형된 치료 의향 모집단(modified Intent to treat population, mITT)에 기초하였는데, 이는, 무작위 배정되고 연구 약물의 적어도 1회의 용량으로 치료된 모든 환자(이 모집단은 총 40명의 대상체를 포함시켰는데, 이 중 22명은 오파가닙군에 그리고 18명은 플라세보군에 포함되었음)로 이루어진다. 기저선-조정된 AUC의 기술 통계량이, 각각의 군에 대해 그리고 군들 사이의 평균의 차이에 대해 95% 신뢰 구간과 함께 군에 의해 제시된다. 환자가 일수 14 전에 치료를 중단하였더라도 일수 14까지 이 연구를 지속하였다면 일수 14까지의 보충적 산소 요구량을 수집하였다. 또한, 일수 14까지의 바이탈 상태가 누락되어 있는 것과 같은 추적관찰의 소실은 가능성이 낮은 것으로 가정하였다. 따라서, 1차 분석은 모든 보충적 산소 값이 치료 중단 후에 누락되어 있는 경우에, 마지막 값이 - 일수 14까지, 또는 그 전에 발생된다면 사망시까지 - 이월되는 것으로 가정하였다. 상기 누락된 데이터 취급 접근법에 대한 민감도 분석을 AUC 요약 통계량 접근법을 사용하여 수행하였는데, 여기서는 군 AUC가 반복-측정 모델의 추정된 파라미터로부터 계산된다.

mITT 코호트 내에서는, 2명의 대상체가 등급 1 위장 AE로 인해 그들의 동의서를 철회하였다. 게다가, 1명의 대상체는 치료 개시 전에 기저선에서 어떠한 보충적 산소도 필요로 하지 않았으며, 통계학적 분석 계획(statistical analysis plan, SAP)에 규정된 바와 같은 몇몇 분석으로부터 제거되었다. 따라서, 사후 활성 분석 모집단("mITT 민감도")은 이들 3명의 환자를 이 분석으로부터 제외시키고, 37명의 대상체를 포함시켰는데, 이 중 19명은 오파가닙에 그리고 18명은 플라세보에 포함되었다. mITT 모집단(이는 이들 3명의 대상체를 포함시킴) 및 mITT 민감도 모집단 둘 모두에 대한 결과는 활성의 유사한 경향을 나타내었다.

결과:

이 연구로부터의 초기 결과(top-line result)는 오파가닙이 안전하다는 것을 확인시켜 주었는데, 이때 오파가닙과 플라세보 치료 시험군 사이에는 실질적인 안전성 차이가 없었다. 전체적으로, 플라세보 시험군에서보다 더 적은 수의 환자가 오파가닙 치료 시험군에서 심각한 유해 사건(SAE)을 앓았다. 이러한 작은 샘플 크기에서, 삽관 또는 사망의 몇몇 사건이 있었으며, 이들은 두 시험군 사이에서 균형을 이루었다.

오파가닙-치료된 시험군은 주요 1차 및 2차 효능 결과에 걸쳐 일수 14에서의 치료의 종료 시점까지 산소 요구량을 감소시키는 데 있어서 더 큰 개선의 일관된 경향을 보여주었는데, 이는 세계보건기구(World Health Organization, WHO) 순서 척도에 의해 정의된 바와 같은 임상 개선과 상관된다:

실내 공기에 도달하고 일수 14까지 산소 지지를 더 이상 필요로 하지 않는 환자의 비율에 있어서, 대조 시험군 대비 더 큰 개선(52.6% vs. 22.2%). 도 10은 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 제공받지 않게 되기까지의 시간(mITT 민감도)의 카플란-마이어 곡선을 나타낸다.

일수 14까지 보충적 산소의 50% 감소를 갖는 환자의 비율에 있어서, 대조 시험군 대비 더 큰 개선(89.5% vs.66.7%). 도 11은 L/분으로의 산소 유량을 기준으로 한 보충적 산소에 있어서의 기저선으로부터 50% 감소에 이르기까지의 시간(mITT 민감도)에 대한 시간 누적 발병률의 카플란-마이어 곡선을 나타낸다.

일수 14까지 퇴원한 환자의, 대조 시험군 대비 더 높은 비율(73.7% vs. 55.6%).

14일에 걸쳐 중위 총 산소 요구량(AUC)의 기저선으로부터의 더 큰 감소(68.0% vs. 46.7%). 도 12는 14일(일수 1 내지 일수 14) 동안 일일 산소 유량(L/분) 측정치를 사용하여 기저선으로부터의 % 변화에 대한 총 보충적 산소 요구량(곡선 아래 면적)의 점 도표를 나타낸다.

실시예 8: 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 국제적 2/3상 연구 - COVID-19 폐렴에서 오파가닙

1차 목적:

일수 14까지 삽관 및 기계적 환기를 필요로 하는 환자의 비율을 평가하기 위하여.

2차 목적:

1) WHO 임상 개선 순서 척도 상에서의 변화를 평가하기 위하여

2) 삽관 및 기계적 환기에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

3) 예를 들어 비강 캐뉼러를 통해 높은 산소 유량으로부터, 또는 높은 산소 유량이 이용가능한 선택지가 아니라면 CPAP로부터, 비강 캐뉼러를 통해 낮은 산소 유량에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

4) 일수 14까지 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 필요로 하지 않는 환자의 비율을 평가하기 위하여

5) 14일(일수 1 내지 일수 14)에 걸쳐 일일 보충적 산소 유량(L/분)을 사용하여 총 산소 요구량(곡선 아래 면적)을 평가하기 위하여

6) PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 2개의 연속 음성 면봉검체에 이르기까지의 시간을 평가하기 위하여

7) 일수 14에서 PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 2개의 연속 음성 면봉검체를 갖는 환자의 비율을 평가하기 위하여

9) 기저선 후 30일째에서의 사망을 평가하기 위하여

탐구 목적:

14일의 치료 기간에 걸쳐 염증의 전신 마커(D-이량체, 심장 트로포닌, C-반응성 단백질[CRP], 락테이트 데하이드로게나제[LDH] 및 페리틴)의 변화를 평가하기 위하여.

안전성 목적:

중증 COVID-19 폐렴을 갖는 환자에서 최대 14일 동안 500 mg(Q12hr)으로 경구 투여된 오파가닙의 안전성 및 내약성을 평가하기 위하여

연구 모집단:

연구 모집단은 현지-특이적 진단 지침에 따른 적격성 기준에 기초하여 중도인 것으로 정의된 COVID-19 감염으로 진단된 환자로 이루어질 것이다. 구체적으로는, 환자는 SARS-CoV-2에 속발하는 폐렴, 흉부 X-선 또는 CT 스캔 상에서의 폐렴의 방사선학적 증거를 최소한으로 가질 것이며, 비강 캐뉼러를 통한 고유량 산소에 의한, 또는 높은 산소 유량이 이용가능한 선택지가 아니라면 CPAP에 의한 보충적 산소를 필요로 할 것이다. 환자는 적어도 스크리닝 동안에 그리고 기저선(일수 1)에서 입원되어야 한다.

연구 설계 및 설명:

이는, 무용(futility) 평가를 이용하게 될 적응 설계를 갖는 2/3상 다시설 무작위 배정, 이중-맹검, 병행 시험군, 플라세보-대조 연구(phase 2/3 multi-center randomized, double-blind, parallel arm, placebo- controlled study)이다. 이 연구는 이탈리아, 기타 EU 국가, 러시아, 브라질, 멕시코 및 미국에서 최대 대략 40곳의 임상 현장에서 수행될 계획이다.

사전동의를 얻은 후에, 환자는 적격성을 결정하기 위해 3일 이하 동안 스크리닝 단계에 진입할 것이다. 대략 270명의 적격한 환자를 표준 치료에 추가된 오파가닙, 또는 표준 치료에 추가된 매칭되는 플라세보 중 어느 하나에 1:1의 무작위 배정비로 무작위 배정하고 이들을 제공할 것이다. 치료 배정은 환자, 연구자 및 병원 직원뿐만 아니라 스폰서에 대해서도 맹검 상태로 유지될 것이다. 이 프로토콜에 대해, COVID-19를 치료하기 위한 승인 및/또는 지침이 진행 중이기 때문에, 현지 진단 및 가이드라인 문서, 예컨대 Temporary Methodic Recommendations: Prophylactic, Diagnostics and Treatment of New Corona Virus Infection (COVID-19); 유럽 위원회(EU Commission), EMA(European Medicines Agency), HMA(Heads of Medicines Agency) 및 FDA에 기초하여 질병의 중증도에 따라 권장되는 치료 계획에 의해, 그리고 이들 권장사항의 최신 버전으로 업데이트된 바와 같이 표준 치료가 정의될 것이다.

연구 참가자는, 임의의 주어진 시설에서 표준 치료(상기에 정의된 바와 같은 약리학적, 및/또는 지지적)에 추가하여, 매 12시간마다 오파가닙 2 x 250 mg 캡슐(500 mg)을 제공받거나, 매칭되는 플라세보를 제공받을 것이다. 연구 약물은 14일(일수 1 내지 일수 14) 동안 매일 투여될 것이다. 모든 참가자는 연구 약물의 그들의 마지막 용량 후 28일 동안 추적관찰될 것이며, 마지막 용량은 일수 14에서 또는 조기 연구 약물 중단 후에 환자 또는 의사 결정에 기초하여 일어날 수 있다.

무작위 배정 전략:

질병의 중증도에 따라 권장되는 치료 계획에서의 치료가 현지 진단 및 가이드라인 문서, 예컨대 Temporary Methodic Recommendations: Prophylactic, Diagnostics and Treatment of New Corona Virus Infection (COVID-19); 유럽 위원회, EMA(European Medicines Agency), HMA(Heads of Medicines Agency) 및 FDA에 기초하여 상이할 수 있기 때문에, 환자에게 투여되는 표준 치료는 시설에 따라 상이할 수 있다. 두 치료 시험군 모두에서의 표준 치료 계획(standard treatment regimen)의 균형을 보장하기 위하여, 개별 현장 수준에서 무작위 배정이 결정될 것이다.

무용에 대한 적응 중간 분석:

무효(no effect)의 널 가설(null hypothesis)을 거부하게 될 확률을 결정하고 이 연구를 계속하는 것이 무용이게 될 것인지를 결정하기 위하여, 대략 100명의 대상체(각각의 군으로부터의 대략 50명의 대상체)가 1차 종점에 대해 평가되었을 때 비맹검된 무용 중간 분석이 수행될 것이다. 기준은 중간 분석 전에 통계학적 분석 계획(SAP)의 최종 버전에서 전향적으로 결정되고 문서로 기록될 것이다.

데이터 안전성 모니터링 위원회:

시험 참가자의 안전성을 보장하기 위하여 이 연구의 안전성 관리를 위해 데이터 안전성 모니터링 위원회(data safety monitoring board, DSMB)가 소집될 것이다. 안전성 데이터를 검토하기 위한 DSMB 회의는 25%, 50% 및 75%의 무작위 배정된 환자가 일수 7, 그리고 이어서 일수 14에 도달한 후에, 또는 각각 대략 70, 135 및 200명의 무작위 배정된 환자가 일수 7, 그리고 이어서 일수 14에 도달하였을 때 계획될 것이다. DSMB는 또한 독립적인 비맹검된 통계 전문가에 의해 수행된 무용 분석의 결과(무용/비-무용)를 스폰서에게 이송하는 것을 담당할 것이다.

계층화:

환자는 기저선에서 COVID-19 결과에 대한 3개 이상의 고위험 임상 파라미터(예 또는 아니오)를 충족시키는 데 기초하여 계층화될 것이다. 파라미터는 다음과 같다: 1) 스크리닝 시점에서의 연령, 60세 이상의 연령, (예 또는 아니오); 2) 남성, (예 또는 아니오); 3) 스크리닝 시점에서의 HbA1c, ≥6.5 (예 또는 아니오); 4) (증가된 호흡률, 코 벌렁임(nasal flaring) 및/또는 횡격막을 포함한 호흡근의 증가된 사용으로서 정의되는) 부합되는 증가된 호흡 일량(work of breathing)을 동반하지 않는 저산소혈증[예 또는 아니오]; 5) 알려진 기저 만성 폐 질병 (예 또는 아니오); 6) 알려진 심혈관 질병 또는 고혈압 (예 또는 아니오); 7) BMI ≥ 28.0 ㎏/m² (예 또는 아니오); 8) 알려진 신장 질병 (예 또는 아니오).

치료 및 투여:

오파가닙 500 mg(Q12hr) 또는 매칭되는 플라세보. 현탁액 형태로 제조된 오파가닙 또는 플라세보가 비위관에 의해 환자의 위에 투여될 수 있다.

연구 지속기간:

연구 참여의 최대 지속기간은 최대 45일(최대 3일 스크리닝; 최대 14일의 이중-맹검 치료 및 28일의 연구-약물-중단 추적관찰을 포함함)일 것이다.

적격성 기준:

선정:

1. 18세 이상 내지 80세 이하 연령의 성인 남성 또는 여성

2. 인두 샘플(비인두 또는 구인두)의 RT-PCR 검정 및 흉부 X-선 또는 CT 스캔 3 상에서 방사선학적 불투명도로서 정의된 폐렴에 따라 입증된 COVID-19 감염. 환자는 기저선에서 고유량 보충적 산소, 또는 높은 산소 유량이 이용가능한 선택지가 아니라면 CPAP를 필요로 한다.

4. 환자는 이 연구 동안 그리고 연구 약물의 마지막 용량 후 3개월째까지 적절한 피임 방법을 사용할 것에 동의한다.

5. 환자 또는 법정 대리인은 IRB/윤리위원회(Ethics Committee)에 의해 승인된 서면 사전동의서에 서명하였다.

제외:

2. 삽관 및 기계적 환기를 필요로 함

3. 실내 공기에서 산소 포화도 > 95%

6. 임신(무작위 배정 전 3일 이내에 양성 혈청 검사 또는 소변 검사) 또는 수유 여성.

8. 프리데리시아 식을 사용하여 계산된(QTcF), 심전도(ECG) 상에서의 보정된 QT(QTc) 간격이 여성의 경우 >470 ms이거나, 남성의 경우 >450 ms임

10. 총 빌리루빈 > 1.5 x ULN(빌리루빈 증가가 길버트 증후군에 기인한 경우는 제외함)

11. 혈청 크레아티닌 > 2.0 X ULN

12. 절대 호중구 카운트 < 1000개의 세포/㎣

13. 혈소판 카운트 < 75,000개/㎣

14. 헤모글로빈 < 8.0 g/dL

16. CYP2D6 및 CYP3A4의 강한 유도제 또는 억제제인 투약물을 현재 섭취하고 있음.

17. CYP450 대사에 기초한 약물-약물 상호작용으로 인해 와파린, 아픽사반, 아르가트로반 또는 리바록사반을 현재 섭취하고 있음

18. 현재 약물 또는 알코올 남용

스크리닝/기저선 평가:

환자 또는 법정 대리인에 의한 사전동의서 서명

적격성 결정

완전한 의료 이력(COVID-19 증상의 개시를 포함함)

동시 투약물 평가

시스템의 기저선 검토

신체 검사

환자가 보행가능한 경우에는 체중을 측정한다

산소 요구량 (L/분)

FiO2 (추정치)

12-리드 심전도

흉부 X-선 또는 CT 스캔

SARS-CoV-2 PCR 검사를 위한 비인두 또는 구인두 면봉검체

혈청 화학적 검사

CRP, D-이량체, LDH, 페리틴, 심장 트로포닌

HbA1c

감별을 갖는 CBC

소변검사

치료 전 3일 이내에 혈청 또는 소변 임신 검사(가임 여성의 경우)

연구 평가:

하기를 모니터링하고, 표준 치료의 일부로서 매일 문서로 기록할 것이다:

동시 투약물

유해 사건

중간 신체 검사

산소 유량 설정 (L/분)

FiO2 (추정하거나, 환자가 환기되는 경우 알려져 있음)

동시 클로로퀸/하이드록시클로로퀸/메플로퀸 하에 있는 환자의 경우, 일수 1에서 최초의 연구 약물 투여 후 대략 3시간째에, 일수 2 및 일수 4에서 어느 때이든, 그리고 역시 치료의 종료 시점에서(일수 14에서 또는 조기 연구 약물 중단 시에) 12-리드 심전도(COVID-19 하에서 병원 치료 가이드라인에 의해 허용되는 경우). 환자가 모니터(원격측정 또는 홀터 모니터를 포함함) 상에 있는 경우, 연구자는 QT 간격 데이터를 수집할 것이 권장된다

매 3일마다 SARS-CoV-2 PCR 검사를 위한 비인두 또는 구인두 바이러스 면봉검체

주 1회 혈청 화학적 검사

주 1회 혈청 CRP, D-이량체, LDH, 페리틴, 심장 트로포닌

주 1회 감별을 갖는 CBC

의사 결정에 따라 흉부 X-선 또는 CT 스캔

연구 종점:

1차

일수 14까지 삽관 및 기계적 환기를 필요로 하는 환자의 백분율

2차

1) WHO 임상 개선 순서 척도(WHO Ordinal Scale for Clinical Improvement)에서 2 이상의 카테고리 개선을 갖는 환자의 백분율

2) 삽관 및 기계적 환기에 이르기까지의 시간

3) 예를 들어 비강 캐뉼러를 통해 높은 산소 유량으로부터, 또는 높은 산소 유량이 이용가능한 선택지가 아니라면 CPAP로부터, 비강 캐뉼러를 통해 낮은 산소 유량에 이르기까지의 시간

4) 일수 14까지 적어도 24시간 동안 보충적 산소를 더 이상 제공받지 않는 환자의 백분율

5) 14일(일수 1 내지 일수 14)에 걸쳐 일일 보충적 산소 유량(L/분)을 사용하는 총 산소 요구량(곡선 아래 면적)

6) 적어도 24시간 간격을 두고서, PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 2개의 연속 음성 면봉검체에 이르기까지의 시간

7) 일수 14에서 PCR에 의거하여 SARS-CoV-2에 대해 적어도 2개의 연속 음성 면봉검체를 갖는 환자의 백분율

8) 기저선에서 발열(체온 >38.0 C[100.4 F]로서 정의됨)을 갖는 것으로 적어도 1회 측정된 환자들 중에서, 일수 14에서 열 없는(체온 <37.2 C[99 F]로서 정의됨) 환자의 백분율

9) 기저선 후 일수 30에서의 어떠한 원인으로 인한 사망

탐구

일수 14에서 염증의 전신 마커(D-이량체, 심장 트로포닌, C-반응성 단백질[CRP], 프로칼시토닌[PCT], 락테이트 데하이드로게나제[LDH] 및 페리틴)의 기저선으로부터 평균 변화

안전성

1) 모든 치료-응급 AE(TEAE) 및 SAE의 발병률

2) 바이탈 사인의 평가

3) 실험실 파라미터(화학적 검사 및 혈액학적 검사)의 평가

4) 심전도(ECG)의 평가

이 연구 동안 금지된 투약물:

다음 투약물은 28일 추적관찰 기간을 포함하여 이 연구 동안에 금지된다:

감수성 CYP3A4, CYP2C9 또는 CYP2C19 기질이고 좁은 치료 지수를 갖는 투약물이 금지된다

CYP2D6 및 3A4의 강한 유도제 또는 억제제가 금지된다

와파린, 아픽사반, 아르가트로반 및 리바록사반이 CYP450 대사에 기초한 약물-약물 상호작용으로 인해 금지된다

정지 규칙:

이 연구 동안 언제든지, 참가자는 그들이 (개정된 NCI 유해 사건에 대한 공통 용어(Common Terminology for Adverse Events)[CTCAE v.5.0]를 사용하여) 다음 유해 사건들 중 임의의 것을 경험한 것으로 결정된다면 연구 약물을 정지할 것이다:

등급 3 중증도의 임의의 신경정신의학적 유해 사건

임의의 중증도(임의의 등급)의 환각

등급 3 중증도의 구역

등급 3 중증도의 구토

등급 2 중증도의 크레아티닌 증가

통계학적 방법:

1차 분석은 복합 실패(composite failure)(예/아니오) 변수에 기초할 것인데, 이는 대상체가 삽관 및 기계적 환기를 필요로 하였는지 또는 연구 일수 14까지 사망하였는지를 나타낸다.

알려져 있지 않은 환자 결과(추적관찰 소실 환자)의 드문 사례에서는, 그것이 또한 1차 분석에 대해 치료 실패로서 계수될 것이다. 환자가 14일 이내에 COVID-19에 대한 새로운 시험용 요법을 개시하는 경우, 이 또한 1차 분석에서 치료 실패로서 간주될 것이다.

실패 사건을 갖는 대상체의 수 및 백분율은 치료군당 표로 작성될 것이다. 95% 신뢰 구간이 각각의 비율에 대해 구성될 것이다. 코크란-맨텔-헨젤(CMH) 검정은 무작위 배정에 사용되는 연구 계층화 인자를 사용하여 2개의 군 사이의 실패의 비율을 비교할 것이며, 상응하는 위험 차이 추정치가 95% 신뢰 구간과 함께 제시될 것이다. 필요에 따라 정확한 신뢰 구간이 사용될 것이다.

이 검정에 대한 유의성 수준은 양측 5%일 것이다. 작은 수의 사건(임의의 연구 시험군에서 5개 미만의 사건)의 경우에, 피셔의 정확 검정(Fisher exact test)이 사용될 것이다.

각각의 실패 유형(삽관 및 기계적 환기)의 수 및 퍼센트는 군에 의해 기재될 것이다.

1차 분석은 변형된 치료 의향 모집단(mITT)에 기초할 것인데, 이는, 무작위 배정되고 연구 약물의 적어도 1회의 용량으로 치료된 모든 환자로 이루어진다.

DSMB 무용 검토

2021년 1월에, 독립적인 데이터 안전성 모니터링 위원회(DSMB)는 이 연구에서 치료된 처음 135명의 환자로부터의 비맹검 효능 데이터 및 처음 175명의 환자로부터의 안전성 데이터의 사전에 일정이 잡힌 무용 검토에 따라 이 연구를 계속할 것을 만장일치로 권장하였다.

실시예 9 : COVID-19 질병의 치료를 위한 오파가닙(스핑고신 키나제-2(SK2) 억제제), 또는 플라세보의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2/3상 연구

이 연구는, 연구자의 판단에서, 입원을 필요로 하지 않는 COVID-19 환자의 치료를 위한 플라세보 대비 오파가닙의 활성을 평가할 것이다.

1차 목적:

병으로부터 지속적 회복에 이르기까지의 시간에 있어서의 오파가닙과 플라세보 사이의 비교. 환자는 일단 그 또는 그녀가 하기 기준을 충족하면 회복된 것으로 간주될 것이다:

1) 해열제를 사용하지 않고서 적어도 48시간 동안 열 없는 상태(<38.0℃ 심부 체온)임;

2) 하기를 제외한 모든 증상은 소산되거나 병 이전 수준으로 되돌아옴(예를 들어, 환자가 COVID-19의 발병 전에 기저선 호흡 손상을 가졌다면):

a. 피로, 무후각증, 무미각증 또는 미각장애 - 이들은 급성 병 동안의 수준과 유사한 수준, 즉, 증상 설문에 따른 것과 동일한 수준에서 지속될 수 있음;

b. 흉통, 기침 또는 호흡곤란 - 이들은 지속적인 경우, 치료의 출발 시점에서보다 적어도 하나의 등급이 더 낮아야 하고 등급 1(경도)보다 더 나쁘지 않아야 함.

지속적 회복은, 상기 정의에 따라, 적어도 28일 동안 또는 연구의 종료 시점까지, 어느 것이든 먼저 일어나는 경우에 대해 유지되는 회복이다.

2차 목적:

활성 치료제군과 플라세보 사이의 비교:

1) 치료의 출발 시점으로부터 일수 8, 15, 29 및 57에서 PCR-음성인 환자의 비율(랜드마크 분석);

2) 기저선에 존재하는 개별 질병-관련 증상의 소산에 이르기까지의 시간;

3) 연구 중에 새로운 질병-관련 증상의 발생;

4) (임상적으로 진단된) 기저선 폐렴이 없는 환자들 중에서 연구 동안 폐렴의 발병률;

5) 질병 중증도의 실험실 마커, 즉, 산소 포화도, CRP, 림프구 카운트, 심장 트로포닌 및 D-이량체 수준에 있어서의 기저선으로부터 이들이 연구 중에 측정되는 시점까지의 변화;

6) 유해 사건;

7) 전체적으로 그리고 COVID-19-관련 적응증을 위하여, 연구 투약물의 최초 용량 후 8주 이내에 입원;

8) 연구 투약물의 최초 용량 후 30일째에 사망;

탐구

1) 일수 57까지 유증상의 PCR-확인된 COVID-19가 발생된, 가정 접촉(household contact)을 보고한 환자의 퍼센트;

2) 치료 출발 시점으로부터 57일에서 SARS-CoV-2에 대한 혈청 IgM 및 IgG 항체의 수준.

안전성:

환자는, 연구 과정 전체에 걸쳐, 임상 사건 및 실험실 사건 둘 모두를 포함한 유해 사건에 대해 추적될 것이다.

구체적으로는, 용량 감소 또는 요법의 중단을 초래하는 독성이 추적되고 표로 작성될 것이다.

모집단:

선정 기준:

1. 기도 샘플의 RT-PCR 검정에 따라, 유증상의 진단적으로 확인된 COVID-19를 갖는 환자.

2. 환자는 무작위 배정 3일 이내에, 유증상이게 되었거나 RT-PCR에 의해 양성인 것으로, 어느 것이든 더 큰 것으로, 확인되었어야 한다.

3. 18세 이상의 연령의 남성 및 여성.

4. 하기에 기재된 것을 제외하고는, 기저선에서, 하기에 열거된 실험실 파라미터는 NCI CTCAE v5.0 등급 2보다 더 나쁘지 않다:

- 정상 상한치(ULN; 단지 등급 1만)의 1.5배 이하의 빌리루빈

- AST(SGOT), ALT(SGPT) ≤ 5.0 x ULN,

- 혈청 크레아티닌 ≤ 1.5 X ULN (등급 1)

- 알부민 ≥ 2.0 g/dL

5. 허용되는 혈액학적 상태:

- 절대 호중구 카운트 ≥ 1000개 세포/㎣

- 혈소판 카운트 ≥ 50,000 plt/㎣

- 헤모글로빈 ≥ 8.0 g/dL

6. 연구자의 견해에서 임상적으로 허용되는 혈당 제어.

7. INR 및 부분 트롬보플라스틴 시간(PTT)은 각각, 환자가 다비가트란 또는 헤파린을 섭취하고 있지 않는 한, ≤ 1.5 X ULN(즉, 등급 1)이다.

8. 실내 공기에서 맥박 산소측정기에 의한 산소 포화도 ≥ 92%

9. 음성 임신 검사(가임 여성의 경우).

10. 가임 여성, 및 가임 여성 파트너를 갖는 남성은 이 연구 동안 그리고 연구 투약물의 마지막 용량 후 적어도 2개월 동안 허용되는 피임 방법의 사용에 동의해야 한다.

11. 독립적으로 매일의 일지를 작성하는 능력.

12. 환자는 사전동의서를 제공해야 한다.

제외 기준:

1. 환자는 임상의 평가에 따라 긴급 입원을 필요로 한다.

2. 임신 또는 수유 여성.

3. 이 프로토콜에서 필요한 절차를 준수하는 것을 꺼리거나 준수할 수 없음.

4. 환자는 보충적 산소를 필요로 한다

5. 환자는, COVID-19를 위한 렘데시비르, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 아지트로마이신 또는 다른 특정 항바이러스 요법, 또는 ≥ 일일 20 mg 프레드니손/일일 3 mg 덱사메타손과 등가인 전신 코르티코스테로이드를 현재 제공받고 있거나, 지난 7일 이내에 제공받았거나, 이 연구 과정 동안 제공받을 것으로 예상된다.

6. 환자는, 시험연구중인 적응증을 위해 제공되는 승인된 작용제(예를 들어, 항-사이토카인 치료제)를 포함한, 임의의 적응증을 위한 임의의 다른 시험용 작용제를 현재 제공받고 있거나 스크리닝 전 30일 이내에 제공받았다.

7. 환자는 와파린, 아픽사반(Eliquis), 또는 리바록사반(Xarelto)을 현재 섭취하고 있거나 이들의 섭취를 시작할 것으로 예상된다. 환자는 연구 중에 다비가트란(Pradaxa), 표준 또는 저분자량 헤파린을 섭취하고 있을 수 있거나 시작할 수 있다.

설계:

이는 입원환자 케어를 필요로 하지 않는 유증상 COVID-19를 갖는 환자에서 플라세보 대비 오파가닙의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조, 병행군 연구이다. 이 연구는, 초기 결과에 의해 나타나는 바와 같이, 무용 또는 샘플 크기의 증가로 인한 조기 종료에 대한 중간 분석을 포함할 것이다.

방법:

파트 B: 연구 참가자는 오파가닙 2 x 250 mg 캡슐(500 mg)(매 12시간마다), 또는 매칭되는 플라세보를 제공받을 것이다. 환자는 다음 상황의 수에 의해 계층화될 것이다(없음, 하나, 또는 하나 초과): 65세 이상의 연령, 다음의 우려되는 의학적 질환의 존재: 고혈압, 만성 폐 질병, 비만[BMI≥30], 당뇨병, 심부전, 관상 동맥 질병, 혈전성 사건(현재 또는 이력에 의해), 신장 질병. 환자는 또한 이들이 치료되는 현지에 의해 계층화될 것이다(미국 vs. 미국 이외). 이어서, 이들은 활성 약물 또는 플라세보에 1:1로 무작위 배정될 것이다. 환자는, 유해 사건을 포함한 증상; 체온 및 맥박 산소측정치를 포함한 바이탈 사인에 대한 설문을 매일 작성할 것이며, 섭취되는 투약물의 기록을 연구의 처음 4주 동안에는 매일, 그리고 이후에는 매주 3회 작성할 것이다. 바이러스 면봉검체, 및 안전성 실험실 및 약력학적 마커를 위한 혈액이 의료 직원에 의한 가정 방문에서 획득될 것이다. 치료 완료 후에, 환자는 무작위 배정으로부터 일수 57까지 추적될 것이다.

이 연구 동안 금지된 투약물:

CYP2D6 및 3A4의 강한 유도제 또는 억제제가 금지된다

실시예 10 : COVID-19 질병의 치료를 위한 우파모스타트(세린 프로테아제 억제제), 또는 플라세보의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조 2/3상 연구

이 연구는, 연구자의 판단에서, 입원을 필요로 하지 않는 COVID-19 환자의 치료를 위한 플라세보 대비 우파모스타트의 활성을 평가할 것이다.

1차 목적:

이 연구의 파트 A: 2개의 용량 수준의 안전성 및 내약성의 결정 및 파트 B를 위한 우파모스타트 용량에 관한 결정 질병 마커의 중증도의 변화가 평가되겠지만, 추구할 용량이 어떤 것인지를 결정하는 데 있어서 주요 인자는 아닐 것이다. 회복에 이르기까지의 시간이 또한 계산되겠지만, 작은 샘플 크기 및 결과의 예상된 변동성을 고려하면, 임상적으로 의미있는 차이는 관찰되지 않을 수 있다.

이 연구의 파트 B: 병으로부터 지속적 회복에 이르기까지의 시간에 있어서의 우파모스타트와 플라세보 사이의 비교. 환자는 일단 그 또는 그녀가 하기 기준을 충족하면 회복된 것으로 간주될 것이다:

c. 피로, 무후각증, 무미각증 또는 미각장애 - 이들은 급성 병 동안의 수준과 유사한 수준, 즉, 증상 설문에 따른 것과 동일한 수준에서 지속될 수 있음;

d. 흉통, 기침 또는 호흡곤란 - 이들은 지속적인 경우, 치료의 출발 시점에서보다 적어도 하나의 등급이 더 낮아야 하고 등급 1(경도)보다 더 나쁘지 않아야 함.

2차 목적:

활성 치료제군과 플라세보 사이의 비교:

3) 연구 중에 새로운 질병-관련 증상의 발생;

6) 유해 사건;

8) 연구 투약물의 최초 용량 후 30일째에 사망;

탐구

1) 일수 57까지 유증상의 PCR-확인된 COVID-19가 발생된, 가정 접촉을 보고한 환자의 퍼센트;

안전성:

모집단:

선정 기준:

3. 18세 이상의 연령의 남성 및 여성.

- 정상 상한치(ULN; 단지 등급 1만)의 1.5배 이하의 빌리루빈

- AST(SGOT), ALT(SGPT) ≤ 5.0 x ULN,

- 혈청 크레아티닌 ≤ 1.5 X ULN (등급 1)

- 알부민 ≥ 2.0 g/dL

5. 허용되는 혈액학적 상태:

- 절대 호중구 카운트 ≥ 1000개 세포/㎣

- 혈소판 카운트 ≥ 50,000 plt/㎣

- 헤모글로빈 ≥ 8.0 g/dL

6. 연구자의 견해에서 임상적으로 허용되는 혈당 제어.

9. 음성 임신 검사(가임 여성의 경우).

11. 독립적으로 매일의 일지를 작성하는 능력.

12. 환자는 사전동의서를 제공해야 한다.

제외 기준:

1. 환자는 임상의 평가에 따라 긴급 입원을 필요로 한다.

2. 임신 또는 수유 여성.

4. 환자는 보충적 산소를 필요로 한다

설계:

이는 입원환자 케어를 필요로 하지 않는 유증상 COVID-19를 갖는 환자에서 플라세보 대비 우파모스타트의 무작위 배정, 이중-맹검, 플라세보-대조, 병행군 연구이다. 이 연구는 용량 선택을 위한 2/3상 작업적 심리스 설계 방법(phase 2/3 operationally seamless design methodology)(파트 A) 및 추진적으로 독립적인 확인 3상 연구(파트 B)를 사용할 것이다. 3상 부분은, 초기 결과에 의해 나타나는 바와 같이, 무용 또는 샘플 크기의 증가로 인한 조기 종료에 대한 중간 분석을 포함할 것이다.

방법:

파트 A: 연구를 위한 적격성 확인 후에, 환자는 연령에 의해 계층화될 것이다: 65세 미만 또는 65세 이상. 이어서, 이들은 하기 치료군들 중 하나에 1:1:1로 무작위 배정될 것이다:

1. 우파모스타트 200 mg, 2개의 캡슐, qd (n=20);

2. 우파모스타트 200 mg, 1개의 캡슐; 및 매칭되는 플라세보, 1개의 캡슐, qd (n=20)

3. 플라세보, 2개의 캡슐, qd (n=20).

맹검을 유지하기 위하여, 환자에게 2개의 투약물 병이 제공되고, 매일 각각의 병으로부터의 알약을 1개씩 섭취하도록 지시될 것이다. 양쪽 알약은 동시에 섭취되어야 한다.

투약물은 물과 함께 그리고 음식과 함께 또는 음식 없이 섭취되어야 한다.

환자는 14일 동안 또는 하기 중 하나가 발생할 때까지 투약물을 섭취해야 한다:

연구자의 판단에서, 치료의 중단을 필요로 하는 연구 투약물과 관련되든 관련되지 않든 어느 것이든 간에 유해 사건;

환자 또는 연구자는 치료를 중단하는 것이 환자의 최상의 관심이라고 결정한다.

총 60명의 환자가 파트 A를 완료한 후에 데이터 안전성 모니터링 위원회(DSMB)에 의해 중간 분석이 수행될 것이다.

DSMB가 양쪽 계획의 안전성이 유사하다고 결정한다면, 파트 B에서의 증가(accrual)는 400 mg qd 용량으로 계속될 것이다.

안전성이 200 mg qd 계획을 사용하는 것이 더 유리하다면, 파트 B에서의 증가는 200 mg qd 용량으로 계속될 것이다.

파트 B: 파트 A로부터의 안전성 결과에 기초하여, 200 mg 또는 400 mg(즉, 1개 또는 2개의 200 mg 캡슐) 치료 계획 중 어느 하나가 선택될 것이다. 파트 B에 등록된 환자는 다음 상황의 수에 의해 계층화될 것이다(없음, 하나, 또는 하나 초과): 65세 이상의 연령, 다음의 우려되는 의학적 질환의 존재: 고혈압, 만성 폐 질병, 비만[BMI≥30], 당뇨병, 심부전, 관상 동맥 질병, 혈전성 사건(현재 또는 이력에 의해), 신장 질병. 환자는 또한 이들이 치료되는 현지에 의해 계층화될 것이다(미국 vs. 미국 이외). 이어서, 이들은 파트 A에 기초하여 선택된 일정대로 활성 약물 또는 플라세보에 3:2로 무작위 배정될 것이다. 총 대략 250명의 추가의 환자가 이 연구의 파트 B에 등록될 것이며, 이 중 150명은 활성 약물을 제공받을 것이고, 100명은 플라세보를 제공받을 것이다. 따라서, 이 연구의 양쪽 파트를 조합하면, 총 170명의 환자가 파트 A에서 선택된 용량으로 활성제를 제공받을 것이고, 120명은 플라세보를 제공받을 것이다. 그러나, 분석은 파트 A와 파트 B에 대해 독립적으로 수행될 것이다.

환자는, 유해 사건을 포함한 증상; 체온 및 맥박 산소측정치를 포함한 바이탈 사인에 대한 설문을 매일 작성할 것이며, 섭취되는 투약물의 기록을 연구의 처음 4주 동안에는 매일, 그리고 이후에는 매주 3회 작성할 것이다. 바이러스 면봉검체, 및 안전성 실험실 및 약력학적 마커를 위한 혈액이 의료 직원에 의한 가정 방문에서 획득될 것이다. 치료 완료 후에, 환자는 무작위 배정으로부터 일수 57까지 추적될 것이다.

통계량:

이 연구의 파트 A에서는, 활성 약물 및 플라세보의 2개의 용량 수준을 시험할 것이다. 각각의 활성제군에서의 독성의 발병률 및 중증도, DSMB에 의한 안전성의 전체적인 평가에 기초하여, 이 연구의 파트 B에 대한 계획이 선택될 것이다. 이들 2개의 활성제군 사이의 독성에 있어서의 현저한 차이의 부재 시에, 파트 B로 계속 진행되기 위한 디폴트 선택은 400 mg 일일 계획이 될 것이다.

파트 A 및 파트 B로부터의 효능 데이터는 개별적으로 분석될 것이다.

전체 샘플 크기는 중간 연구 결과에 기초하여 확대될 수 있다.

샘플 크기는, 1차 목적에 정의된 바와 같이, 1차 종점, 즉, COVID-19 병으로부터 지속적 회복에 이르기까지의 시간에 기초하여 결정되었다. 3:2 할당비로 활성제군을 플라세보군과 대비하여 위험률(hazard ratio) = 1.5를 검출하기 위해서는, 0.05의 양측 유의성 수준에서 로그-순위 검정을 사용하여 80% 검정력을 제공하기 위해 총 201건의 회복 사건이 필요한 것으로 계산되었다. 추적관찰의 종료 시점까지 80% 지속적 회복률을 가정하여(모든 등록된 환자에 대해 동일한 추적관찰이 가정됨), 파트 B에 등록된 최소 환자수는 총 250명일 것이며, 이 중 150명은 이 연구의 파트 B에 고려된 계획에서 활성제 시험군에, 그리고 100명은 플라세보 시험군에 등록될 것이다.

산업상의 이용가능성

본 발명은 유리 염기로서의 또는 염으로서의 하기로 나타낸 화합물을 활성 성분으로서 포함하는 항-코로나바이러스제:

, 상기 항-코로나바이러스제를 포함하는 항-SARS제, 및 상기 항-코로나바이러스제를 사용하여 SARS를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 코로나바이러스, 특히 SARS-관련 코로나바이러스에 의해 야기되는 질병의 치료를 가능하게 한다.

본 발명은 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 하기로 나타낸 화합물을 활성 성분으로서 포함하는 항-코로나바이러스제:

본 명세서에 언급된 모든 특허, 특허 출원, 및 간행된 참고문헌은 전체적으로 참고로 포함된다. 기재된 본 발명의 조성물 및 방법의 다양한 수정 및 변형이 본 발명의 범주 및 사상으로부터 벗어나지 않고서 당업자에게 명백할 것이다. 본 발명이 구체적인 실시 형태와 관련하여 기재되어 있지만, 본 발명은 그러한 구체적인 실시 형태로 부당하게 제한되지 않아야 함이 이해될 것이다. 실제로, 분자 생물학, 의학, 면역학, 약리학, 바이러스학 분야, 또는 관련 분야의 당업자에게 명백한, 본 발명을 수행하기 위해 기재된 방식의 다양한 수정은 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.

Claims

코로나바이러스 질병을 치료하기 위한 방법으로서,
이를 필요로 하는 대상체에게 유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법:

.
제1항에 있어서, 상기 코로나바이러스 질병은 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)인, 방법.
제1항에 있어서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재하는, 방법.
제1항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 ABC294640 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태(unit dosage form)인, 방법.
제3항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 ABC294640 하이드로클로라이드 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제4항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제5항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제6항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제7항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제3항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제3항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제5항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 250 mg의 ABC294640 하이드로클로라이드를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 ABC294640 하이드로클로라이드의 1000 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 2회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제3항에 있어서, ABC294640 하이드로클로라이드 및 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 포함하며, 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 생리학적 완충 식염수인, 방법.
제15항에 있어서, 생리학적 완충 식염수 중에 현탁된 ABC294640 하이드로클로라이드를 포함하는 현탁액이 형성되고, 투여하는 단계는 튜브를 사용하여 상기 현탁액을 위에 직접 전달하는 단계를 포함하는, 방법.
유리 염기로서의 또는 염으로서의 ABC294640의 유효량을 코로나바이러스 질병을 갖는 인간에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법:

.
제17항에 있어서, 상기 코로나바이러스 질병은 상기 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)인, 방법.
제17항에 있어서, ABC294640은 하이드로클로라이드 염으로서 존재하는, 방법.
제17항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 ABC294640 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제19항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 ABC294640 하이드로클로라이드 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제20항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제21항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제22항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제23항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제17항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제19항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제17항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제19항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제21항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 250 mg의 ABC294640 하이드로클로라이드를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 ABC294640 하이드로클로라이드의 1000 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 일일 2회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제19항에 있어서, ABC294640 하이드로클로라이드 및 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 포함하며, 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 생리학적 완충 식염수인, 방법.
제31항에 있어서, 생리학적 완충 식염수 중에 현탁된 ABC294640 하이드로클로라이드를 포함하는 현탁액이 형성되고, 상기 투여하는 단계는 튜브를 사용하여 상기 현탁액을 위에 직접 전달하는 단계를 포함하는, 방법.
코로나바이러스 질병을 치료하기 위한 방법으로서,
이를 필요로 하는 대상체에게 (L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법:

.
제33항에 있어서, 상기 코로나바이러스 질병은 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)인, 방법.
제33항에 있어서, WX-671은 하이드로겐 설페이트 염으로서 존재하는, 방법.
제33항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 WX-671 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제35항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 WX-671 하이드로겐 설페이트 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제36항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제37항에 있어서, 상기 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제38항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제39항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제33항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제33항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제35항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제35항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제40항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 200 mg의 WX-671 유리 염기를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671의 200 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 단일 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제40항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 200 mg의 WX-671 유리 염기를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671의 400 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제41항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 약 231 mg의 WX-671 하이드로겐 설페이트를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671 하이드로겐 설페이트의 약 231 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 단일 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제41항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 약 231 mg의 WX-671 하이드로겐 설페이트를 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671 하이드로겐 설페이트의 약 463 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
(L)- 또는 (D)-거울상 이성질체로서의, 그리고 E- 또는 (Z)-이성질체 또는 (E/Z)-혼합물로서의, 그리고 유리 염기로서의 또는 염으로서의 WX-671의 유효량을 코로나바이러스 질병을 갖는 인간에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법:

.
제50항에 있어서, 상기 코로나바이러스 질병은 SARS-CoV-2 바이러스에 의해 야기되는 2019 코로나바이러스 질병(COVID-19)인, 방법.
제50항에 있어서, WX-671은 하이드로겐 설페이트 염으로서 존재하는, 방법.
제50항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 WX-671 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제52항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체 물질을 추가로 포함하며, 상기 WX-671 하이드로겐 설페이트 및 상기 약제학적으로 허용되는 담체 물질은 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태인, 방법.
제53항에 있어서, 상기 단위 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제54항에 있어서, 상기 단위 투여 형태는 고체 투여 형태인, 방법.
제55항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제56항에 있어서, 상기 고체 투여 형태는 캡슐인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제52항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 야생형인, 방법.
제50항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제52항에 있어서, 상기 SARS-CoV-2 바이러스는 천연 발생 코로나바이러스 변이체인, 방법.
제57항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 200 mg의 WX-671과 등가량을 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671의 약 400 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 단일 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제57항에 있어서, 상기 경구 투여에 적합한 단위 투여 형태는 200 mg의 WX-671과 등가량을 갖는 캡슐이고, 투여하는 단계는 WX-671의 약 400 mg의 총 일일 용량을 위하여, 적어도 10일 동안 매일 1회 2개의 캡슐을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.