CN116133657A

CN116133657A - 治疗covid-19疾病的新组合物和方法

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Publication number: CN116133657A
Application number: CN202180033555.4A
Authority: CN
Inventors: P·伯杰; I·迪潘; R·普雷维尔; C·詹姆斯; P-O·吉罗代; K·比兹姆斯; R·拉滕巴赫; J·布里敦; F·托泰因; V·森西奥
Original assignee: Bordeaux Medical Center; 4 Active Biotechnology Co; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite Lille 2 Droit et Sante; Institut Pasteur de Lille; Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Universite de Bordeaux
Current assignee: Bordeaux Medical Center; 4 Active Biotechnology Co; Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite Lille 2 Droit et Sante; Institut Pasteur de Lille; Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM; Universite de Bordeaux
Priority date: 2020-05-07
Filing date: 2021-05-05
Publication date: 2023-05-16
Also published as: EP4146195A1; JP2023539542A; WO2021224356A1; AU2021269090A1; US20230157994A1; CA3177779A1; BR112022022578A2; EP3906922A1; KR20240073720A

Abstract

本发明涉及新组合物，其用于治疗COVID‑19的方法中，所述方法包括向患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。

Description

治疗COVID-19疾病的新组合物和方法

发明领域

本发明涉及用于治疗COVID-19疾病的新组合物和方法。更具体地，本发明涉及至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂用于治疗COVID-19的用途，尤其是在处于疾病中期至严重期的患者中。

发明背景

已知冠状病毒会导致动物严重的呼吸道和胃肠道疾病。人类冠状病毒毒株感染多年来一直被描述为与呼吸道感染有关，即类似普通感冒的疾病。例如，SARS-CoV(严重急性呼吸综合征-冠状病毒)是一种具有高度攻击性的人类致病物，可引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，且通常会导致致命后果。在它跨越了从蝙蝠到狸猫和人类的物种屏障后，这种病毒在2003年作为一种流行病出现，证明了冠状病毒在人类中引起高发病率和死亡率的潜力。2004年和2005年分别发现了HCoV-NL63和HCoV-HKU1毒株。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)已被确定为导致COVID-19大流行病的新兴病毒，WHO现已宣布其为“全球公共健康的威胁”。最常报告的症状包括发热、干咳和气短，并且大多数患者(80％)病情较轻。大约14％的患者病情严重，5％的患者处于危重。早期报告表明，疾病的严重程度与年龄(>60岁)和共存疾病有关。截至2020年4月29日，全世界有3152556例确诊病例，其中218491例报告死于COVID-19。

在大多数情况下，COVID-19的临床特征仍然是良性的。然而，COVID-19病况可能会严重的多，16％至20％的患者可能需要在医院吸氧。它可导致5％至10％的重症监护室(ICU)患者出现急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和有创机械通气。长时间占用ICU会导致医疗资源紧张。ARDS导致99％的ICU接收和COVID-19相关死亡。ARDS的特征在于气体交换障碍引发的呼吸恶化，继发于肺泡-毛细血管屏障水肿。这种肺损伤是由针对病毒侵袭肺上皮的巨大失调性炎性应答引起的。

自2019年以来，SARS-Cov-2已感染数亿人，这是一场全球健康紧急事件，需要开发强力的抗病毒治疗。

尽管在持续研究，但仍未开发出针对最有害和最危险的病毒感染的抗病毒药物，且现有药物通常对人体有毒或不够有效。迄今为止，仅开发出疫苗来预防这些大流行病。大多数现有或正在开发中的药物通过与某些病毒蛋白的特异性相互作用而起作用，而此类药物的活性谱有限，并促进了耐药病毒变种的快速出现。

因此，本公开的目的是提供用于治疗SARS-Cov-2引起的COVID-19的新组合物和方法，预期这些组合物和方法能特别有效地提高中度至重度病例的存活率。令人惊讶地，已经发现治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4拮抗剂或抑制剂为感染COVID-19的患者提供了关键支持和健康改善。

发明内容

本申请涉及一种在治疗由SARS-Cov-2病毒(例如尤其是COVID-19)引起的呼吸道病毒性疾病的方法中使用的组合物以及一种治疗由SARS-Cov-2病毒(例如尤其是COVID-19)引起的呼吸道病毒性疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂，所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂不同于羟基氯喹。

本发明的组合物和治疗方法在改善急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者的存活率方面特别有效，所述ARDS发生在由SARS-Cov-2病毒引起的呼吸道病毒感染的中度至重度病例中。因此，所述组合物和治疗方法可用于治疗COVID-19的中度至重度病例和/或共存疾病或多种共存疾病的病例。

附图简要说明

图1是显示在方案的最后5周内每天皮下注射1mg/kg普乐沙福(plerixafor)后，通过FEV0.05/FVC测量的鼠肺功能的图。测试小鼠表现出由香烟烟雾暴露和poly-IC滴注引起的肺损伤，并且或者注射PBS(灰色方块)或注射1mg/kg普乐沙福(黑色方块)。*：P<0.05。

图2A-B：是显示心脏重塑的图，通过Fulton指数定量，计算为RV/(LV+S)，LV：左心室，RV：右心室，S：中隔。(A)Fulton指数。对照小鼠(黑色圆圈)，香烟烟雾暴露和poly-IC滴注所诱导的肺损伤小鼠(灰色方块)。(B)Fulton指数。测试小鼠表现出由香烟烟雾暴露和poly-IC滴注引起的肺损伤，并且或者注射PBS注射(灰色方块)或注射1mg/kg普乐沙福(黑色方块)。*：P<0.05，**：P<0.01。

图3A-B是显示普乐沙福对感染SARS-CoV-2的K18-hACE2小鼠的作用的图。(A)显示了在感染SARS-CoV-2后第4天和第5天媒介物处理的小鼠和普乐沙福处理的小鼠的个体体重下降百分数。(B)显示了在感染SARS-CoV-2后媒介物处理的小鼠和普乐沙福处理的小鼠存活的百分数。

图4：是显示未感染小鼠、感染小鼠血浆中瓜氨酸化组蛋白H3水平的定量的图，其中感染小鼠接受或不接受普乐沙福(3mg/kg/天)治疗。平均值±SEM；n＝5(或未感染的媒介物组为n＝2)。

图5A-C：显示来自严重患者的10％ COVID-19血清对嗜中性粒细胞迁移的影响的图。嗜中性粒细胞从稳定的COPD患者(n＝6)中分离出，并在具有(黑色正方形符号)或不具有(黑色圆圈符号)来自严重COVID-19患者的10％血清的情况下孵育。图5A-C显示了(A)DAPI^-CD16⁺，(B)DAPI^-CD16⁺CXCR4^-和(C)DAPI^-CD16⁺CXCR4⁺细胞响应于严重COVID-19患者血清的迁移的比较。结果用显示个体受试者值的符号表示。*P<0.05，Wilcoxon配对检验。

图6A-C：是显示在25μg/mL普乐沙福(黑色正方形符号)或媒介物(黑色圆圈符号)的存在下，普乐沙福对从稳定COPD患者(n＝6)分离的嗜中性粒细胞响应于从严重COVID-19患者获得的10％血清的迁移的影响的图。图6A-C显示了(A)DAPI^-CD16⁺、(B)DAPI^-CD16⁺CXCR4^-和(C)DAPI^-CD16⁺CXCR4⁺细胞响应于来自严重COVID-19患者的血清的迁移的比较。结果用显示个体受试者值的符号表示。*P<0.05，Wilcoxon配对检验。

发明详述

因此，本发明提供了使用作为趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂的某些化合物用于治疗由SARS-CoV2引起的冠状病毒感染的化合物、组合物、药物组合物和方法。本发明的趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂不同于羟基氯喹。

本发明还涉及使用作为趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂的某些化合物用于治疗COVID-19的化合物、组合物、药物组合物和方法，包括向患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。本发明特别提供了一种在治疗COVID-19的方法中使用的组合物以及一种治疗COVID-19的方法，所述治疗在有或无多种共存疾病的情况下进行，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。

本发明进一步涉及减少SARS-Cov-2感染患者的NETosis和/或减轻SARS-Cov-2感染患者的肺炎、急性呼吸衰竭和ARDS的化合物、组合物、药物组合物和方法，包括向所述患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂，条件是所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂优选不同于羟基氯喹。

如本文所用，术语“治疗”是指治愈性治疗或疾病改善性治疗，包括治疗处于感染疾病的风险中或怀疑已感染疾病的患者以及患病或被诊断患有疾病或医学病况的患者，包括抑制临床复发。治疗可施用于患有医学病症或最终可能患上该病症的受试者，以治愈疾病或复发性疾病、延迟疾病或复发性疾病的发作、减轻疾病或复发性疾病的严重程度、或改善疾病或复发性疾病的一个或多个症状，或者以延长受试者的生存期，使其超过在没有这样的治疗的情况下的预期。

急性呼吸衰竭或严重急性呼吸综合征(SARS)可影响所有年龄段的人，而第一急救者(如护士、医生等)的可能性更高。最初的症状包括发热、发冷、肌痛、咳嗽，但也包括气短和/或呼吸急促。然而，三分之二的SARS-Cov-2感染患者出现了ARDS等并发症。

根据本发明，趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂可选自基于吲哚的化合物、N-取代的吲哚化合物、双环拉胺(bicyclam)化合物、环拉胺模拟化合物、基于对苯二甲撑二胺的化合物、基于胍的拮抗剂化合物、基于四氢喹啉的化合物或1,4-亚苯基双(亚甲基)化合物。本发明的所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂不同于羟基氯喹和/或不包括羟基氯喹。

优选的趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂选自普乐沙福(AMD3100)、布利沙福(Burixafor)(TG-0054)、JM1657、AMD3329、AMD3465、AMD070、MSX-122、CTCE-9908、WZ811或BKT-140。本发明最优选的趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂是普乐沙福。

普乐沙福是公知的药物和CXCR4拮抗剂，其最初是作为抗HIV药物开发的。此外，美国食品和药物管理局于2008年批准了普乐沙福和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组合用于将造血干细胞(HSC)动员到外周血中，所述外周血用于非霍奇金淋巴瘤和多发性骨髓瘤患者的采集和随后的自体移植。普乐沙福已通过多项临床试验验证。因此，毒理学、药代动力学以及任何潜在的不良事件都是充分了解的，这使其可能通过COVID-19疾病的快速注册通道。

申请人在下面的实施例中证明，在5周内施用治疗有效量的CXCR4拮抗剂，例如普乐沙福(1mg/kg)，改善了具有肺损伤的小鼠的肺功能，小鼠的肺损伤是由香烟烟雾暴露和模拟病毒感染的poly-IC滴注诱导的，或者是注射PBS(图1和2)。

申请人还证明，普乐沙福可显著改善呼吸病况以及中期或严重期患者中COVID-19的肺部疾病演变。特别是，证明了在用有效量的CXCR4拮抗剂如普乐沙福治疗后，RNA病毒感染小鼠中的NETosis显著降低(图4)。这些显然是突破性的成果。事实上，虽然已知嗜中性粒细胞释放嗜中性粒细胞细胞外陷阱(NET)是一种对抗入侵微生物病原体的生理防御机制，但嗜中性粒细胞和NET也被确定为有助于病理性炎症和ARDS(继发于呼吸道病毒感染如COVID-19)的发展。事实上，NETosis(即肺泡间隙中NET的形成)已经是肺部的局部炎症和病毒负担(burden)，在感染患者中引起急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。对患者施用CXCR4拮抗剂预期能够显著抑制COVID-19患者中嗜中性粒细胞的迁移。

此外，申请人证明，在使用K18-hACE2转基因小鼠和致死剂量的SARS-CoV-2来模拟严重COVID-19的严重COVID-19的小鼠模型中，与媒介物处理相比，普乐沙福降低了小鼠的体重减轻动力学(图3A)，并且在44,44％的用普乐沙福治疗的小鼠中生存率提高了20％(图3B)。

这尤其令人惊讶，因为普乐沙福已经在2020年2月24日由Hosseini FS等人在preprints.org平台发表的文章中显示不合格(doi:10.20944/preprints202002.0438.v1)。在这篇文章中，作者基于分子对接模拟和病毒蛋白酶结合袋内的结合能预测，进行了虚拟筛选，以鉴定对SARS-CoV-2蛋白酶展现抑制潜力的FDA批准的小分子。作者明确拒绝了在COVID-19患者中对普乐沙福进行临床探索，因为普乐沙福已知具有骨髓副作用和强烈的免疫系统抑制，这预计会导致患者病况的恶化。

本发明的组合物和方法对于治疗处于疾病中期(moderate stage)至晚期或严重期的COVID-19患者特别有效。

中度COVID-19病例是炎症下至肺部的患者，其中咳嗽等肺部症状更为明显。肺由大气道(支气管)、小气道(细支气管)和从空气提取氧气的末端微小气囊(肺泡)组成。肺含有一种称为表面活性物质的流体，其可以保持肺部的弹性和顺应性，并帮助保持气囊的开放。中度COVID-19患者的炎症可能下移至细支气管。他们更加呼吸困难，并且往往心率加快，尤其是在走动时。

虽然大多数COVID-19患者患有良性或轻度或中度疾病，但16％至20％的患病患者发展为导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的严重COVID-19病况。严重的COVID-19患者呼吸非常困难(并且可能在轻微走动或甚至在休息时都无法以舒适的速率呼吸)，即使静坐着也比平时呼吸更快。如果没有额外的呼吸，他们就无法完成一句话。他们甚至可能避免说话。他们的氧气水平可能已经下降，所以呼吸加快的欲望强烈。医生在评估这种病况时通常会测量呼吸速率。正常成年人在不想呼吸这件事的情况下每分钟呼吸12至18次。肺炎情况下，呼吸速率上升，有时是明显上升。

COVID-19患者保留的肺顺应性表明，肺上皮对SARS-CoV-2的反应不是该疾病的单一组成部分。此外，在COVID-19相关的ARDS患者中显示的高炎性状态也表明了炎症反应后持续的内皮激活。

COVID-19似乎会损害肺部的血管系统。特别是，它可能诱发毛细血管内皮细胞/微血管功能障碍，从而导致单个细胞坏死。对COVID-19严重疾病病例的组织病理学基础进行了分析，并且在所有病例中除纤维蛋白沉积外，还显示涉及巨核细胞激活的弥漫性肺泡损伤，具有血小板聚集和富含血小板的凝块形成。

通常，COVID-19患者通过一致的临床病史、流行病学接触和SARS-CoV-2阳性测试进行检测。具体地，SARS-CoV-2感染可以使用特异性PCR测试通过鼻咽分泌物中病毒RNA的阳性检测来确认。

此外，根据柏林2012ARDS诊断标准，当COVID-19患者出现以下时诊断为COVID-19ARDS：(1)急性低氧性呼吸衰竭，(2)1周内呼吸症状恶化；(3)胸部x射线、计算机断层扫描或超声检查中的双侧气腔疾病，其无法通过积液、肺叶或肺不张或者结节来完全解释；和(4)心脏衰竭不是急性低氧性呼吸衰竭的主要原因。还发现，气短(也称为呼吸急促)是COVID-19的唯一症状，其与严重病例和需要入住ICU的患者显著关联。COVID-19ARDS在数天内遵循可预测的时间进程，症状出现后插管时间的中值为8.5天。因此，随着COVID-19的进展，监测患者中ARDS的发展是重要的。呼吸速率和SpO₂是判断患者临床病况和早期识别ARDS的两个重要参数。符合以下任一条件的患者可能患有严重疾病并需要进一步评估：呼吸速率≥30次呼吸/分钟；SpO₂≤92％；PaO₂/FiO₂≤300mmHg。

根据本发明，治疗方法和在所述方法中使用的组合物可包括进一步施用抗IL6单克隆抗体或抗IL6受体单克隆抗体。作为可以与至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂的组合施用于感染患者且优选COVID-19患者的抗IL6单克隆抗体或抗IL6受体单克隆抗体，我们可以引用的有司妥昔单抗(siltuximab)(一种用于治疗Castleman病的抗IL6嵌合单克隆抗体，以商品名

销售)、奥洛组单抗(olokizumab)(R-Pharm公司正在开发的一种用于治疗类风湿性关节炎的抗IL6人源化单克隆抗体，也称为CDP6038或OKZ)、西鲁库单抗(sirukumab)(Centocor公司正在开发的一种用于治疗类风湿性关节炎的抗IL6人单克隆抗体，也称为CNTO136)、托珠单抗(tocilizumab)(由Genentech以商品名

销售的一种用于治疗类风湿性关节炎的抗IL6人单克隆抗体)、艾西莫单抗(elsilimomab)(目前正在由Immunogen开发的一种抗人IL6治疗性抗体)、克拉扎珠单抗(clazakizumab)(BMS开发的用于治疗类风湿性关节炎的一种抗IL6，以前称为BMS-945429或ALD518)、乐维利单抗(levilimab)(BCD-089)、CPSI-2364、ALX-0061。

本发明的治疗方法和在方法中使用的组合物可进一步包括施用药学上可接受的媒介物、抗病毒药物、抗细菌药物、抗生素、PPI抑制剂、喹啉化合物、锌化合物、丙种球蛋白、造血细胞、间充质细胞、抗炎药物、疫苗、小干扰RNA和microRNA、免疫调节剂或来自恢复期患者的血浆。优选地，本发明的所述方法和所使用的组合物不包括对所述COVID-19患者进一步施用任何羟基氯喹或氯喹。

抗病毒药物可选自以下药物：核苷酸类似物、核苷类似物、核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶酶抑制剂(NNRTI)、神经氨酸苷酶抑制剂、核酸内切酶抑制剂、金刚烷、蛋白酶抑制剂(PI)、整合酶抑制剂(INSTI)和融合抑制剂(FI)、趋化因子受体拮抗剂(CCR5拮抗剂)或siRNA。

作为可与上述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂组合施用于COVID-19患者的抗病毒药物的实例，我们可以引用的有阿巴卡韦(abacavir)、阿昔洛韦(acyclovir)、阿德福韦(adefovir)、金刚烷胺(amantadine)、安普利近(ampligen)、安普那韦(amprenavir，Agenerase^TM)、阿比多尔(arbidol)、阿扎那韦(atazanavir)、atripla、balavir、巴洛沙韦酯(baloxavir marboxil，Xofluza^TM)、必妥维(biktarvy)、波普瑞韦(boceprevir，Victrelis^TM)、西多福韦(cidofovir)、科比司他(cobicistat，Tybost^TM)、可比韦(combivir)、达卡他韦(daclatasvir，Daklinza^TM)、达芦那韦(darunavir)、地拉韦啶(delavirdine)、达可挥(descovy)、地丹诺辛(didanosine)、二十二醇(docosanol)、多替拉韦(dolutegravir)、多拉韦林(doravirine，Pifeltro^TM)、ecoliever、依度尿苷(edoxudine)、依法韦仑(efavirenz)、埃替拉韦(elvitegravir)、恩曲他滨(emtricitabine)、恩夫韦地(enfuvirtide)、恩替卡韦(entecavir)、依曲韦林(etravirine，Intelence^TM)、泛昔洛韦(famciclovir)、福米韦生(fomivirsen)、福沙那韦(fosamprenavir)、膦甲酸(foscarnet)、膦乙酸(fosfonet)、法匹拉韦(favipiravir)、三氮唑核苷(triazavirin)、更昔洛韦(ganciclovir，Cytovene^TM)、伊巴他滨(ibacitabine)、伊巴组单抗(ibalizumab，Trogarzo^TM)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、imunovir、茚地那韦(indinavir)、肌苷、干扰素I型、干扰素II型、干扰素III型、拉米夫定(lamivudine)、乐特莫韦(letermovir，Prevymis^TM)、洛匹那韦(lopinavir)、洛韦胺(loviride)、马拉维若(maraviroc)、甲吲噻腙(methisazone)、吗啉胍(moroxydine)、奈非那韦(nelfinavir)、奈韦拉平(nevirapine)、nexavir、硝唑尼特(nitazoxanide)、利托那韦(norvir)、奥司他韦(oseltamivir，Tamiflu^TM)、PEG干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b(peginterferonα-2b)、喷昔洛韦(penciclovir)、帕拉米韦(peramivir，Rapivab^TM)、普可那利(pleconaril)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、pyramidine、雷特格韦(raltegravir)、瑞德西韦(remdesivir)、利巴韦林(ribavirin)、利匹韦林(rilpivirine，Edurant^TM)、金刚乙胺(rimantadine)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、司美匹韦(simeprevir，Olysio^TM)、索非布韦(sofosbuvir)、司他夫定(stavudine)、特拉匹韦(telaprevir)、替比夫定(telbivudine，Tyzeka^TM)、替诺福韦艾拉酚胺(tenofovir alafenamide)、替诺福韦酯(tenofovir disoproxil)、替诺福韦(tenofovir)、替拉那韦(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、trizivir、曲金刚胺(tromantadine)、特鲁瓦达(truvada)、万乃洛韦(valaciclovir，Valtrex^TM)、缬更昔洛韦(valganciclovir)、维克韦罗(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、viramidine、扎西他滨(zalcitabine)、扎那米韦(zanamivir，Relenza^TM)、齐多夫定(zidovudine)。

上述组合物和方法可通过胃肠外、经口、经鼻、经眼、透粘膜或透皮来施用。最优选的施用途径是静脉内、肌内或皮下途径。

施用于COVID-19患者的特定治疗剂量是获得治疗和/或预防效果所需的剂量。该剂量可由医生根据患者的情况、体重、年龄和性别、施用的化合物、施用途径等确定。剂量可以是单次剂量、分开的每日剂量或多个每日剂量。或者，连续给药，例如通过控制(例如，缓慢)释放剂型，可以在每日的基础上施用或一次施用超过一天。

根据上述优选实施方案，可选择普乐沙福选为趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。然后通过皮下途径以约10至40μg/kg一天两次(20至80μg/kg/天)的剂量施用，和通过连续静脉内途径以约10至120μg/kg/小时的剂量施用。根据最优选的实施方案，普乐沙福通过静脉内灌注途径以30μg/kg/天的剂量施用于COVID患者。

根据本发明，方法和组合物尤其可用于治疗患有健康状况或共存疾病(例如高血压、肥胖和/或糖尿病)的最脆弱的患者。然而，有心肌梗死病史的患者以及癌症患者被排除在外，并且因此不用本发明的组合物和方法治疗。此外，如上所述的组合物和方法预期对心脏具有保护作用，因为申请人已经表明，施用例如普乐沙福改善了通过Fulton指数定量的心脏重塑。

所述患者包括选自以下的患者：终末期肾病(ESRD)患者、慢性阻塞性肺病(COPD)患者、AIDS患者、糖尿病患者、肥胖患者、高血压患者、新生儿、移植患者、处于免疫抑制治疗的患者、免疫系统不起作用的患者、自身免疫疾病患者、扩展护理机构(extended carefacility)中的老龄患者、处于免疫抑制治疗的自身免疫疾病患者、烧伤患者和处于急性护理机构的患者。

适用于本发明的CXCR4拮抗剂可以单独施用，但在人体治疗中，通常将与根据所需施用途径和标准药物实践选择的合适的药学上可接受的媒介物、赋形剂、稀释剂或载体混合施用。这样的药学上可接受的媒介物或赋形剂可以以0.1重量％至小于100重量％的量存在。优化药物赋形剂比例是本领域普通技术人员可以实现的，例如，组合物中药物/赋形剂的所需重量比可以小于或等于药物/赋形剂在合适介质中的溶解度比。

本发明的药物组合物可以胃肠外施用，例如静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、肌内、皮下施用，或者可以通过输注或无针技术施用。

对于这样的胃肠外施用，它们最好以无菌水性溶液的形式使用，其可以含有其他物质，例如足够的盐或葡萄糖，以使溶液与血液等渗。如有必要，水性溶液应适当缓冲(优选缓冲至约pH 3至9)。在无菌条件下合适胃肠外制剂的制备很容易通过本领域技术人员熟知的标准药物技术完成。

本发明的另一个实施方案涉及一种在治疗方法中使用的组合物和一种治疗有此需要的受试者的COVID-19疾病的方法，包括：i)通过RT-PCR或其他等同技术确定从受试者获得的样品中的病毒载量；ii)将在步骤i)确定的病毒载量与预定的参考值进行比较；和iii)向受试者施用治疗有效量的如上所述的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。根据该实施方案，样品优选是血液样品或黏液样品。

在本申请中，引用了各种参考文献，并将这些出版物的公开以其全文通过引用并入本申请，以更全面地描述本发明所属的技术状态。

实施例

实施例1：CXCR4拮抗剂对肺功能的作用

由香烟烟雾暴露和poly-IC滴注引起肺损伤的小鼠在5周内每天接受皮下注射PBS或1mg/kg普乐沙福。然后通过测量FEV0.05/FVC比值来评估肺功能。图1显示，与PBS注射相比，用1mg/kg普乐沙福注射治疗后，小鼠肺功能有统计学上显著的改善。

实施例2：CXCR4拮抗剂对心脏功能的作用

与实施例1中一样，由香烟烟雾暴露和poly-IC滴注引起肺损伤的小鼠在5周内每天接受皮下注射PBS或1mg/kg普乐沙福。然后通过Fulton指数定量心脏功能和重塑，计算为RV/(LV+S)，LV：左心室，RV：右心室，S：中隔。图2显示，与PBS注射相比，用1mg/kg普乐沙福注射处理后，小鼠心脏功能在统计学有显著的改善。

实施例3：CXCR4拮抗剂对感染SARS-CoV-2的K18-hACE2小鼠的作用

为本研究分配了两组表达人ACE2受体的转基因C57BL/6小鼠(K18-hACE2小鼠)。在第0天通过鼻内(IN)施用对15只小鼠利用5x10² TCID₅₀的临床SARS-CoV-2分离株SARS-CoV-2进行感染。同一天，每天两次地处理感染小鼠直至结束，其中对6只小鼠用注射用水处理(1M组)或对9只小鼠用10mg/kg/天的普乐沙福处理(2M组)。在研究期间，进行了死亡率和发病率观察以及体重测量。当小鼠体重减轻达到20％以上时，出于伦理原因对其实施安乐死。

实施例3.1：体重减轻

每天记录小鼠体重直至结束。

如图6A所示，与媒介物小鼠相比，用普乐沙福治疗的小鼠显示出体重减轻动力学的显著降低(p<0.0011)。事实上，在第5天，用普乐沙福治疗的小鼠体重平均下降了17.6％±1.28％，而用媒介物处理的小鼠体重平均下降了20.43％±2.88％。

实施例3.2：小鼠存活

将体重减轻超过20％的小鼠安乐死，并精确记录死亡时间。

如图6B所示，在第5天早上将媒介物组的所有小鼠安乐死。在第5天(上午2只小鼠，下午2只小鼠)和第6天(上午4只小鼠)将用普乐沙福处理的小鼠安乐死。在用媒介物和普乐沙福处理的小鼠之间观察到死亡时间的显著差异(Wilcoxon检验p<0.05)。

实施例4：临床试验1“LEONARDO”

与COVID-19相关的急性呼吸窘迫综合征中的普乐沙福(IIb期)

实施例4.1：设计

随机分组、双盲、安慰剂对照、具有平行组的多中心试验。

实施例4.2：主要目标：

为了证明普乐沙福能够降低重症监护病房(ICU)收治的严重COVID-19患者的有创机械通气率。

实施例4.3：主要结果

从D1到D28，存活且不需要有创机械通气的患者百分比(综合主要终点包括死亡率和/或需要有创通气的时间，以先发生者为准)。

实施例4.4：次要结果：

为了评估普乐沙福与安慰剂相比在以下方面的功效：

1.死亡率[时间框：D1-D90]

2.无通气天数[时间框：D1-D28]

3.通气持续时间[时间框：D1-D90]

4.ICU停留时间[时间框：D1-D90]

5.呼吸功能，包括一秒用力呼气体积(Forced Expiratory Volume in one sec，FEV1)、用力肺活量(Forced Vital Capacity，FVC)、动脉血氧分压(Partial arterialpressure in Oxygen，PaO2)和一氧化碳转移肺容量(Transfer Lung Capacity forcarbon monoxide，TLCO)[时间框：D90]

6.临床改善[时间框：D1、D8、D14、D28、D90]

7.CRP、纤维蛋白原和D-二聚体水平[时间框：D1、D3、D8、D14、D28]

8.为了在安全性方面评估普乐沙福与安慰剂相比的安全性和耐受性(AE、心脏监测、生命体征、实验室测试)

实施例4.5：探索性结果：

为了评估普乐沙福对以下方面的作用：

1.血液CXCR4阳性嗜中性粒细胞计数、CXCR4阳性纤维细胞计数、CXCL12、IL-6、IL-8、TNFα浓度[时间框：D1、D3、D8、D28]

2.血液CD34+细胞计数[时间框：D1、D3、D8、D28]

3.血液NETosis[时间框：D1、D3、D8、D28]

4.血液CD4+细胞、CD8+细胞、调节性T细胞、NK细胞。[时间框：D1、D3、D8、D28]

实施例4.6：纳入标准

·男性或女性≥18岁，使用符合当地有关临床研究参与者的避孕方法的规定(见第10.4节)的避孕药具，

·愿意并能够提供书面知情同意书(或由法律认可的代表提供，如果他/她在场)，

·目前因COVID-19相关的呼吸衰竭而入住ICU(48小时内)。ICU或根据国家的具体情况的等同医疗机构，如急性呼吸监护室、高度依赖性监护室，如果他们能够提供：

ο连续IV输注，

ο连续心脏远程监测(cardiotelemetry)、呼吸速率、经皮氧饱和度监测

ο经鼻高流量氧

·根据研究者判断，不需要立即(24-36小时内)进行有创机械通气，

·确认的由SARS-CoV-2导致的肺炎，其具有

ο实验室确认的SARS-CoV-2感染，通过RT-PCR(鼻咽或喉样品)或其他商业或公共卫生测定在任何样本中测定，在随机分组前2周内进行，

·需要吸氧(≥5L/分钟)以实现透皮氧饱和度>94％的急性呼吸衰竭，

·通过CKD-EPI(慢性肾病-流行病学协作)方程式估算的肾小球滤过率(eGFR)>50mL/分钟/1.73m²。(计算见第10.8节)。

接种了COVID-19疫苗的患者也可以纳入研究。

实施例4.7：排除标准

·怀孕或哺乳，

·入院时要求不插管，

·预计在72小时内转移至另一家非研究地点的医院，

·在纳入时需要有创机械通气，

·SARS-Cov-2以外的细菌性肺病或活跃感染的证据(实验室确认)，

·原发性肺动脉高压，

·心-血管共存疾病：

ο血管缺血事件(心肌梗塞或卒中)或充血性心脏衰竭或外周动脉疾病的病史，

ο既往或当前严重心律失常(例如，室性心动过速)，

ο已知的经证实的症状性体位性低血压病史，

·发展性癌症病史，包括急性和慢性白血病，

·血液功能不足，定义为：

ο绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)<1.0x10⁹/L，

ο血红蛋白<9.0g/dL(90g/L)，

ο血小板<100x10⁹/L，

·钾血症<3.5mmol/L和/或钙血症<2.2mmol/L，

·肝功能不足，定义为天冬氨酸氨基转移酶(AST)和/或丙氨酸氨基转移酶(ALT)大于3倍正常上限(ULN)和/或总胆红素大于2倍ULN

·已知对普乐沙福或其赋形剂过敏的患者。

实施例4.8：剂量方案

普乐沙福30μg/kg/小时，连续静脉内输注7天

或安慰剂，类似的输注方式

实施例4.9：纳入的患者数量

样本量基于以下假设：

1.ICU中处于COVID-19危险期且需要机械通气的患者比例的当前估计(根据Bichat和Bordeaux CHU，为50％)，

2.预估普乐沙福将使严重COVID-19患者的有创机械通气比例从50％降低至27％(即，与安慰剂相比减少46％)，

3.双侧分析(two-sided analysis)，α＝0.05。

根据上述假设，普乐沙福组中的100名患者和安慰剂组中的50名患者被要求检测需要有创机械通气的患者比例的显著降低(功效为80％)。

实施例5：临床试验1“LEONARDO-1”

与COVID-19相关的急性呼吸窘迫综合征中的普乐沙福(IIb期)

实施例5.1：设计

随机分组、双盲、安慰剂对照、具有平行组的多中心试验。

实施例5.2：主要目标：

为了证明CXCR4拮抗剂普乐沙福在最佳可用治疗的基础上能够增加COVID-19相关ARDS患者的无通气天数。

实施例5.3：主要结果

28天内的无通气天数(VFD)是定量治疗和干预功效的数个无器官衰竭结果指标之一。VFD通常定义如下：

a.如果受试者在28天的机械通气内死亡，则VFD＝0。

b.如果在开始后x天成功脱离通气，则VFD＝28-x。

c.如果受试者接受机械通气＞28天，则VFD＝0。

实施例5.4：次要结果：

1. 28天死亡率[时间框：随机分组后28天]

在随机分组后28天评估死亡率

2. 90天死亡率[时间框：随机分组后90天]，在随机分组后90天评估死亡率

3. 28天内没有有创通气的患者百分比[时间框：第28天]

4. 28天内无ICU的天数[时间框：第28天]

5.第6个月CT扫描是否存在肺纤维化[时间框：第6个月]

6.第1、7、14、28天的安全性(肺栓塞、心肌梗塞、心律失常、动脉低血压、贫血、血小板减少、高白细胞血症、估算的GFR、蛋白尿)

7.第1天、第3天、第7天和第28天的CRP、铁蛋白、D-二聚体的血液水平

实施例5.5：子研究中的其他次要结果：

1.第1天、第3天和第7天的血液嗜中性粒细胞和纤维细胞计数

2.第1天、第3天和第7天的血液CXCR4阳性嗜中性粒细胞、CXCR4阳性纤维细胞、CD34⁺细胞计数

3.第1天、第3天和第7天的血液CXCL12浓度

4.第1天、第3天和第7天的血液NETosis

a.MPO和H3瓜氨酸化

b.DNase

实施例5.6：纳入标准

-男性或女性≥18岁

-愿意并能够提供书面知情同意书(或由代理人提供)

-目前因实验室确认的COVID-19感染而住院

-需要少于48小时的有创机械通气

-在试验开始时FDA-EMA建议的护理标准

-根据柏林标准诊断为ARDS

实施例5.7：排除标准

-具有不复苏指令(DNR指令)的患者

-怀孕或哺乳

-已知的细菌性肺炎

-当前心肌梗塞

-已知在过去5年有癌症(实体或血液)

-原发性肺动脉高压，肺纤维化

-对普乐沙福过敏

-任何时候的嗜中性粒细胞浓度>50000/mm³

实施例5.8：剂量方案

普乐沙福皮下10至40μg/kg，一天两次(20至80μg/kg/天)，持续14天。

在HIV临床试验中，在2.5至160μg/kg/h的开放标签性剂量递增研究中，通过连续静脉内输注施用普乐沙福(AMD3100)10天。

在WHIM综合征中，通过皮下注射施用普乐沙福6个月(10至20μg/kg，一天两次，持续6个月)。

当肌酐清除率<50ml/分钟时，必须调整剂量。

实施例5.9：纳入的患者数量

根据最近提交的研究，由托珠单抗治疗的ARDS患者在第28天的VFD＝14.86+/-5.36。

假设上文所述的普乐沙福治疗和最佳可用治疗的组合会使VFD增加2天。则计划有4组患者(安慰剂、普乐沙福10μg/kg一天两次、普乐沙福20μg/kg一天两次、普乐沙福40μg/kg一天两次)。为了获得90％的功效和5％的α风险，我们必须每臂纳入132名患者。

实施例6：临床试验2“PLANET”

中度形式的COVID-19中的普乐沙福(IIb期)

实施例6.1：设计

随机分组、双盲、安慰剂对照、具有平行组的多中心试验。

实施例6.2：主要目标：

在选项1和2之间的选择将取决于从中度转至严重COVID-19形式的患者的百分比(数据即将公布，DISCOVERY/CORIMMUNO试验)

选项1：

为了证明CXCR4拮抗剂普乐沙福在最佳可用治疗的基础上可以缩短达到轻度形式的COVID-19的时间。

选项2：

为了证明CXCR4拮抗剂普乐沙福在最佳可用治疗的基础上能够降低COVID-19中度形式的患者在第14天死亡或需要通气(机械或无创)的百分比。

实施例6.3：主要结果

选项1：

达到轻度形式的COVID-19的时间，定义为无需通气支持(WHO标准)。

选项2：

第14天需要通气(机械或无创)或死亡的患者百分比

实施例6.4：次要结果：

1.第14天具有轻度形式的COVID-19的患者的百分比

2.初始CT扫描(诊断)和3个月CT扫描(随机分组后)之间的差异[时间框：第3个月]

3.初始TDI和最终TDI之间的差异[时间框：第14天]

4.第14天在环境空气中进行的6分钟步行测试距离(m)

5.在环境空气中进行6分钟步行测试中，SpO2<90％的患者百分比

6. 28天死亡率[时间框：随机分组后28天]

在随机分组后28天评估的死亡率

7. 28天内无ICU天数[时间框：第28天]

8. 28天内的最大氧气速率[时间框：第28天]

9. 28天内在医院外存活的天数[时间框：第28天]

10. 28天内接受氧气治疗的存活天数[时间框：第28天]

11.第1、7、14、28天的安全性(肺栓塞、心肌梗塞、心律失常、动脉低血压、贫血、血小板减少、高白细胞血症、估算的GFR、蛋白尿)

12.第1天、第3天、第7天和第28天的CRP、铁蛋白、D-二聚体的血液水平

实施例6.5：子研究中的其他次要结果：

13.第1天、第3天和第7天的血液嗜中性粒细胞和纤维细胞计数

14.第1天、第3天和第7天的血液CXCR4阳性嗜中性粒细胞、CXCR4阳性纤维细胞、CD34⁺细胞计数

15.第1天、第3天和第7天的血液CXCL12浓度

16.第1天、第3天和第7天的血液NETosis

c.MPO和H3瓜氨酸化

d.DNase

实施例6.6：纳入标准

-男性或女性≥18岁

-愿意并能够提供书面知情同意书(或由代理人提供)

-目前因实验室确认的COVID-19感染而住院

-患有中度形式的COVID-19，定义为需要3至5L/分钟的氧气治疗，以获得大于97％的经皮氧饱和度和<25次呼吸/分钟的呼吸速率，而无需有创通气。

-在试验开始时FDA-EMA建议的护理标准

实施例6.7：排除标准

-在ICU住院的患者

-需要有创机械通气的患者

-怀孕或哺乳

-已知的细菌性肺炎

-当前心肌梗塞

-当前肺栓塞

-已知在过去5年有癌症(实体或血液)

-原发性肺动脉高压，肺纤维化

-对普乐沙福过敏

-任何时候的嗜中性粒细胞浓度>50000/mm³

实施例6.8：剂量方案

普乐沙福皮下10至40μg/kg，一天两次(20至80μg/kg/天)，持续14天

当肌酐清除率<50ml/分钟时，必须调整剂量。

实施例7：普乐沙福抑制RNA病毒感染诱导的NETosis

本研究分配了五组C57Bl/6小鼠。通过鼻内(IN)施用含有50个斑块形成单位(PFU)的PBS，在第0天对10只小鼠进行RNA病毒感染。

2只小鼠用50μl PBS鼻内处理(1M组-未感染)。

在第1天，用注射用水(2M组和4M组)或3mg/kg/天的普乐沙福(3M组和5M组)每天两次处理感染小鼠。在研究期间，进行了死亡率和发病率观察以及体重测量。

第7天，将来自1M、2M和3M组的小鼠安乐死，并收集血液用于血浆中的NETosis分析(瓜氨酸化组蛋白H3和DNA)。

根据表1的研究设计和表2的研究时间表进行研究。

表1：研究设计

表2：研究时间表

第7天，将1M、2M和3M组的小鼠安乐死。打开胸腔后，通过心脏穿刺收集血液。

实施例7.1：血液样品制备

将血液样品在4℃下以1500g离心15分钟，用于血浆分离。收获血浆并立即转移至干净的1.5ml Eppendorf管中，并在-70℃下或干冰中储存以便运输。

实施例7.2：血浆中的NETosis分析

将血浆样品送往位于波尔多医院(Bordeaux Hospital)U1034单元的外部实验室进行NETosis分析。通过给药瓜氨酸化组蛋白H3和DNA来在血浆中评估NETosis。对于瓜氨酸化组蛋白H3给药，该技术改编自Thalin等人描述的方法(Validation of an enzyme-linked immunosorbent assay for the quantification of citrullinated histone H3as a marker for neutrophil cellular traps in human plasma.Immunol Res.2017；65:706-712)，其中部分使用了细胞死亡检测试剂盒(Roche)。

在+4℃下将孔用抗组蛋白H11-4抗体包被过夜。用洗涤缓冲液洗涤3次后，将40μl血浆+60μl孵育缓冲液在搅拌下孵育90分钟。3次洗涤后，将100μl在孵育缓冲液中1:2000稀释的针对组蛋白H3(瓜氨酸R2+R8+R17)的兔多克隆抗体施加于每个孔，于室温下摇动持续90分钟。3次洗涤后，添加100μl在孵育缓冲液中1:6000稀释的山羊抗兔HRP抗体。于室温下摇动孵育平板60分钟。3次洗涤后，添加100μl TMB持续5-10分钟，并用100μlH2SO4 0.25M终止反应。

读取450nm的吸光度(参考620nm)。

在第7天结束时收集1M、2M和3M组小鼠的血液(2M和3M组每组5只小鼠，1M组2只小鼠)。收获血浆样品，并通过给药瓜氨酸化组蛋白H3和血浆DNA浓度来评估NETosis参数。

实施例7.3：瓜氨酸化组蛋白H3水平的评估

评估血浆中瓜氨酸化组蛋白H3(嗜中性粒细胞细胞陷阱的生物标志物)的水平。表3和图3显示了个体和组平均瓜氨酸化组蛋白H3水平。

在未感染小鼠血浆中检测到低浓度的瓜氨酸化组蛋白H3水平。RNA病毒感染增加了该标志物的水平(RNA病毒感染组为2.124±0.563，而未感染组为0.113±0.008)。3mg/kg/天的普乐沙福治疗略微降低了瓜氨酸化组蛋白H3的水平(RNA病毒感染+3mg/kg/天普乐沙福组为1.428±0.799，而RNA病毒感染组为2.124±0.563)。

表3：血浆中瓜氨酸化组蛋白H3的评估(450nm处的吸光度)

实施例8：普乐沙福抑制了COVID-19患者的血清诱导的嗜中性粒细胞迁移

从COBRA群组(COPD和哮喘患者群组)的6名患者中分离出嗜中性粒细胞。将5x10⁵个嗜中性粒细胞在37℃下用普乐沙福(25μg/mL)或用HBSS媒介物预处理15分钟。接下来，将细胞接种在改良的Boyden室的上部隔室中，用于在含有0.5％ HSA培养基的0.2mL HBSS中的迁移测定。将HBSS、0.5％ HSA或HBSS、0.5％ HSA+来自严重COVID-19患者的血清(10％稀释)添加到每个孔的底部隔室。迁移测定持续3小时，之后收集下部隔室中的细胞并用DAPI、抗CD16和抗CXCR4抗体染色。通过FACS法分析细胞身份和计数。

实施例8.1：从全血中分离人嗜中性粒细胞

根据Hartl等人(Infiltrated neutrophils acquire novel chemokinereceptor expression and chemokine responsiveness in chronic inflammatory lungdiseases.J.Immunol.Baltim.Md 1950.181:8053–8067)描述的方法分离嗜中性粒细胞。通过等渗Percoll密度梯度从COPD患者的血液中新鲜分离嗜中性粒细胞。回收嗜中性粒细胞，用含有20mM HEPES和0.1％(w/v)BSA的HBSS洗涤两次，然后以0.2ml中5x10⁵的细胞浓度在HBSS、20mM HEPES和0.1％(w/v)BSA中重悬。

实施例8.2：COVID-19血清对嗜中性粒细胞迁移的影响

使用Boyden室测定法，利用transwell小室(孔径8μm)来评估嗜中性粒细胞迁移。将含0.5％ HSA的0.2mLHBSS中的总共5x10⁵个嗜中性粒细胞添加到每个孔的上部隔室。在有指示时，将嗜中性粒细胞在37℃下用CXCR4拮抗剂普乐沙福(25μg/mL)预处理15分钟。将HBSS、0.5％ HSA和来自严重COVID-19患者的血清(10％稀释)添加到每个孔的底部隔室。3小时后，用1mL洗涤底部隔室的内容物，下室的细胞内容物在FACS管中收回(每个FACS管1个下室的细胞内容物)，并进行DAPI染色过程以排除死亡细胞。

在嗜中性粒细胞从下室回收后，将FACS管在4℃下以500g离心5分钟。细胞的固定和渗透如下：添加0.3mLCytofix/Cytoperm 15分钟(保护管避光)。接下来，添加400μL渗透缓冲液，并将细胞进行4℃、400g离心5分钟。丢弃上清液，并对细胞进行抗体染色。将细胞在4℃下与抗CD16孵育40分钟，以指示所有嗜中性粒细胞，抗CXCR4用以特别指示表达CXCR4的嗜中性粒细胞。接下来，添加400μL渗透缓冲液，在4℃下以400g将细胞离心5分钟。丢弃上清液后，将细胞与合适的二抗在4℃下孵育40分钟。最后，将细胞与DAPI在4℃下孵育。DAPI孵育(以从FACS计数中排除死亡细胞)后，添加400μLPBS 1X，并在4℃下以400g将细胞离心5分钟。将细胞重悬于300μLPBS 1X中。为了获得迁移细胞的绝对值，在恒定的预定时间段(1分钟)期间获得每个条件下的流式细胞计数。

表4：研究设计

每种条件处理均一式两份进行。

评估来自患者的COVID-19血清的影响，如图4所示。

在25μg/mL普乐沙福(红圈符号)或媒介物(黑圈符号)的存在下，稳定COPD患者(n＝6)响应于来自严重COVID患者的10％血清的嗜中性粒细胞迁移。响应于来严重自COVID患者的血清的DAPI^-CD16⁺(图4A)、DAPI^-CD16⁺CXCR4^-(图4B)和DAPI^-CD16⁺CXCR4⁺(图4C)细胞迁移的比较。结果用表示个体受试者值的符号表示。*P<0.05，Wilcoxon配对检验。

FACS分析表明，在10％血清的存在下，CXCR4+嗜中性粒细胞占总DAPI-CD16+的比例为约1％(表5)。这与以下事实相符：在非炎性或非COVID条件下，不成熟的CXCR4+嗜中性粒细胞仅存在于骨髓中，但在血流中有极小的释放。

表5：DAPI-CD16+CXCR4+嗜中性粒细胞在DAPI-CD16+嗜中性粒细胞中的百分比

评估DAPI-CD16+、DAPI-CD16+、CXCR4-和DAPI-CD16+CXCR4+细胞的迁移反应。严重COVID-19血清诱导来自嗜中性粒细胞的迁移反应。事实上，在暴露于COVID-19血清后，嗜中性粒细胞迁移显著增多(P<0.05)。与0％血清条件相比，CXCR4+嗜中性粒细胞响应于COVID-19血清的迁移多2倍(Sg87)至1345倍(Sg89)(表6)。(FACS计数的原始数据和每名患者的单独原始数据提供于附件部分)。

表6：响应于10％ COVID-19血清相比于0％血清条件下的DAPI-CD16+CXCR4+嗜中性粒细胞迁移增加的比率

实施例8.3：普乐沙福对嗜中性粒细胞迁移的作用

接下来，在三个嗜中性粒细胞群(即DAPI-CD16+、DAPI-CD16+CXCR4-和DAPI-CD16+CXCR4+)中评估普乐沙福(25μg/mL)的作用。

如图5所示，在25μg/mL普乐沙福(红圈符号)或媒介物(黑圈符号)的存在下，稳定COPD患者(n＝6)响应于来自严重COVID患者的10％血清的嗜中性粒细胞迁移。响应于来自严重COVID患者的血清的DAPI^-CD16⁺(图5A)、DAPI^-CD16⁺CXCR4^-(图5B)和DAPI^-CD16⁺CXCR4⁺(图5C)细胞迁移的比较。结果用表示个体受试者值的符号表示。*P<0.05，Wilcoxon配对检验。

CXCR4拮抗剂普乐沙福并未显著降低血清诱导的嗜中性粒细胞总群体的募集(图5A)。预料之中地，普乐沙福对CXCR4阴性嗜中性粒细胞的迁移没有显著影响(图5B)。这与DAPI-CD16+CXCR4+所占的小百分比(约1％)相符。相比之下，普乐沙福强烈地且可重复地降低了CXCR4阳性嗜中性粒细胞的迁移(图5C)。普乐沙福使CXCR4+嗜中性粒细胞减少了75.8％±5.9％(表7)。

表7：在普乐沙福的存在下，响应于COVID-19血清的DAPI-CD16+CXCR4+嗜中性粒细胞迁移减少的百分比

Claims

1.一种组合物，其用于治疗COVID-19的方法中，所述方法包括向患者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂不同于羟基氯喹。

2.根据权利要求1的用于方法中的所述组合物，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂是基于吲哚的化合物、N-取代的吲哚化合物、双环拉胺化合物、环拉胺模拟化合物、基于对苯二甲撑二胺的化合物、基于胍的拮抗剂化合物、基于四氢喹啉的化合物或1,4-亚苯基双(亚甲基)化合物。

3.根据权利要求1或2的用于方法中的所述组合物，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂选自普乐沙福(AMD3100)、布利沙福(TG-0054)、JM1657、AMD3329、AMD3465、AMD070、MSX-122、CTCE-9908、WZ811或BKT-140。

4.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂通过选自胃肠外、经口、经鼻、经眼、透粘膜或透皮的途径来施用。

5.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂通过静脉内、肌内或皮下途径施用。

6.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，其中所述趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂是普乐沙福，并且其中普乐沙福通过皮下途径以约5至80μg/kg一天两次(20至80μg/kg/天)的剂量和通过连续静脉内途径以约10至120μg/kg/小时的剂量施用。

7.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，其中所述受试者处于COVID-19感染的中期至晚期。

8.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，所述方法包括进一步治疗所述患者的一种共存疾病或多种共存疾病。

9.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，其中患有一种共存疾病或多种共存疾病的患者包括肥胖患者、患有高血压的患者、患有慢性阻塞性肺病(COPD)的患者、终末期肾病(ESRD)患者、AIDS患者、糖尿病患者、新生儿、移植患者、处于免疫抑制治疗的患者、免疫系统不起作用的患者、自身免疫疾病患者、扩展护理机构中的老龄患者、处于免疫抑制治疗的自身免疫疾病患者、烧伤患者或处于急性护理机构的患者。

10.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，所述方法进一步包括施用药学上可接受的媒介物。

11.根据前述权利要求中任一项的用于方法中的所述组合物，所述方法进一步包括向所述COVID-19患者施用抗IL6单克隆抗体或抗IL6受体单克隆抗体、抗病毒药物、抗细菌药物、抗生素、PPI抑制剂、喹啉化合物、锌化合物、丙种球蛋白、造血细胞、间充质细胞、抗炎药物、疫苗、小干扰RNA和microRNA、免疫调节剂或恢复期血浆。

12.根据权利要求11的用于方法中的所述组合物，其中所述抗IL6单克隆抗体或抗IL6受体单克隆抗体选自司妥昔单抗、奥洛组单抗、西鲁库单抗、托珠单抗、艾西莫单抗、克拉扎珠单抗、乐维利单抗、CPSI-2364或ALX-0061。

13.根据权利要求11的用于方法中的所述组合物，其中抗病毒药物选自阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿德福韦、金刚烷胺、安普利近、安普那韦(Agenerase^TM)、阿比多尔、阿扎那韦、atripla、balavir、巴洛沙韦酯(Xofluza^TM)、必妥维、波普瑞韦(Victrelis^TM)、西多福韦、科比司他(Tybost^TM)、可比韦、达卡他韦(Daklinza^TM)、达芦那韦、地拉韦啶、达可挥、地丹诺辛、二十二醇、多替拉韦、多拉韦林(Pifeltro^TM)、ecoliever、依度尿苷、依法韦仑、埃替拉韦、恩曲他滨、恩夫韦地、恩替卡韦、依曲韦林(Intelence^TM)、泛昔洛韦、福米韦生、福沙那韦、膦甲酸、膦乙酸、法匹拉韦、三氮唑核苷、更昔洛韦(Cytovene^TM)、伊巴他滨、伊巴组单抗(Trogarzo^TM)、碘苷、咪喹莫特、imunovir、茚地那韦、肌苷、干扰素I型、干扰素II型、干扰素III型、拉米夫定、乐特莫韦(Prevymis^TM)、洛匹那韦、洛韦胺、马拉维若、甲吲噻腙、吗啉胍、奈非那韦、奈韦拉平、nexavir、硝唑尼特、利托那韦、奥司他韦(Tamiflu^TM)、PEG干扰素α-2a、聚乙二醇干扰素α-2b、喷昔洛韦、帕拉米韦(Rapivab^TM)、普可那利、鬼臼毒素、pyramidine、雷特格韦、瑞德西韦、利巴韦林、利匹韦林(Edurant^TM)、金刚乙胺、利托那韦、沙奎那韦、司美匹韦(Olysio^TM)、索非布韦、司他夫定、特拉匹韦、替比夫定(Tyzeka^TM)、替诺福韦艾拉酚胺、替诺福韦酯、替诺福韦、替拉那韦、曲氟尿苷、trizivir、曲金刚胺、特鲁瓦达、万乃洛韦(Valtrex^TM)、缬更昔洛韦、维克韦罗、阿糖腺苷、viramidine、扎西他滨、扎那米韦(Relenza^TM)、齐多夫定。

14.一种组合物，其用于治疗有此需要的患者的COVID-19的方法中，所述方法包括：

i)通过RT-PCR或其他等同的技术测定从所述受试者获得的样品中的病毒载量；

ii)将在步骤i)确定的病毒载量与预定参考值进行比较；和

iii)向所述受试者施用治疗有效量的至少一种趋化因子受体CXCR4的拮抗剂或抑制剂。

15.根据权利要求14的用于方法中的所述组合物，其中所述样品是血液样品或黏液样品。