KR20220149475A - 후박나무 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것이다.
상기 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 Salmonella Enteritidis, Escherichia coli 및 Enterococcus facieum로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가진다.
또한, 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 Lactobacillus sakei, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Pediococcus acidilactici 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가지므로, 항균용 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.
상기 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 Salmonella Enteritidis, Escherichia coli 및 Enterococcus facieum로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가진다.
또한, 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 Lactobacillus sakei, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Pediococcus acidilactici 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가지므로, 항균용 조성물의 유효성분으로 이용이 가능하다.
Description
본 발명은 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물에 관한 것이다.
인류는 병원성 미생물의 침입을 방어하고, 식품 부패 미생물을 제어하기 위하여 다양한 항균제와 방부제를 사용하여 왔다. 세균의 감염은 인간의 질병에서 가장 흔하고 치명적인 원인 중의 하나이다. 특히 병원성 미생물에 의한 직접 혹은 간접적인 피해는 경제, 환경, 의학적으로 많은 문제를 야기시키고 있다. 많은 병 원성 세균 및 진균의 감염은 감염의 중증도에 따라 그 처치 방법이 다르지만, 경구용 항생제로 치료가 가능하다.
하지만, 이러한 항생제의 오남용으로 인해 항생제 내성 균주가 출현하여 사회 전반에서 많은 문제들을 야기시키고 있다. 이러한 항생제 내성 미생물의 존재는 인간과 동물의 건강 모두에 영향을 미칠 수 있다.
한편, LAB(Lactic acid bacteria, 유산균)는 동물과 인간의 위장관에 존재하는 가장 중요한 미생물군 중 하나이다. 상기 유산균(LAB)은 면역체계 조절과 병원균 감소에 도움을 주며, 장관의 기능을 향상시키는 것으로 알려져 있어, 인체에 유익하면서 안전하다고 인정받아 왔다.
그러나 최근 항생제 내성 LAB이 검출되어 문제가 되고 있다. 발효식품에서 분리된 균의 일부 변종이 erythromycin, tetracycline, vancomycin 등과 같은 항생제에 저항성을 가지는 유전자를 보유한다고 보고되어 동식물에 공생하는 LAB의 안전성에 의문을 제기하고 있다. 항생제 유전자는 한 미생물에서 다른 미생물로 형질도입에 의해 박테리오파지를 통하거나 또는 다른 미생물이 DNA를 방출했을 때 미생물간 변환에 의해 수평적으로 전달될 수 있다고 알려져 있다.
특히, LAB는 프로바이오틱스 또는 스타터 배양균의 형태로 식품이나 건강보조식품에 광범위하게 사용되고 있어, 이러한 항생제 내성 유산균을 복용하게 되는 경우, 내성 관련 유전자 정보를 장내 유해균과 정보를 교환하여 유해균이 항생제 내성인자를 가질 수 있게 된다. 이 경우, 감염성 질환의 발생시 항생제를 복용해도 항생제의 효능을 무력화시킬 수 있어 질환 치료가 불가능하게 된다. 유산균 이외에도 최근 항생제 내성을 가지는 균주가 지속적으로 보고 되어 있어, 이에 대한 대책이 시급한 실정이다.
이러한 항생제에 내성을 가지는 유산균이나 각종 유해 미생물에 항균 효과를 가지는 물질의 개발이 필요하다. 따라서, 본 발명에서는 자연에 존재하는 천연물 소재에서 항생제 내성 균주 또는 유해 균주에 대해 항균효과를 가지는 물질을 발굴하고자 하였다.
본 발명의 목적은 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 항균용 조성물을 제공하는 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 하나의 양태로 본 발명은 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "후박나무(Machilus thunbergii)"는 녹나무과에 속하며, 바닷가, 산기슭 등 낮은 지대에서 자라는 상록활엽교목이다.
본 발명에서 상기 항균 조성물은 후박나무를 건조하거나 또는 건조 및 파쇄하여 분말화한 것을 추출에 적용할 수 있고, 후박나무의 잎, 줄기, 가지, 뿌리, 꽃 또는 이들 모두를 포함할 수 있으며, 후박나무의 잎 또는 가지를 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어, "가지"는 식물의 원줄기에서 파생하여 자라는 부분으로 식물의 줄기에서 갈라져 뻗은 줄기를 의미한다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에서 추출물의 건조는 채취한 식물로부터 유용한 성분들이 파괴되지 않는 범위에서 공지의 방법으로 진행될 수 있고, 예를 들어 음지에서 자연건조의 방법으로 진행될 수 있다. 또한, 파쇄 또는 분쇄는 이후 추출과정에서 식물의 유용한 성분들이 충분하게 추출될 수 있을 정도로 파쇄 또는 분쇄하여 분말화 할 수 있다. 상기 건조와 파쇄 또는 분쇄 공정은 필요에 따라서 순서를 뒤바꿔서 진행하거나 반복하여 실시할 수 있다.
본 발명의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.
본 발명에서 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득 될 수 있으며, 구체적으로 후박나무 잎 또는 가지를 물, C1-C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것일 수 있다. 또한, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올 일 수 있으며, 상기 후박나무 추출물은 후박나무 잎 또는 가지를 물, 메탄올, 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것일 수 있다. 상기 메탄올은 50~70% 메탄올일 수 있다. 상기 후박나무의 물 추출물은 90~110℃에서 2~10시간 동안 열수 추출할 수 있으며, 상기 후박나무의 메탄올 추출물은 50~70℃에서 15~25 시간 동안 추출하여 얻을 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "분획물"은 여러 다양한 구성 성분들을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 성분 그룹을 분리하기 위하여 분획을 수행하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 데에 사용되는 용매의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다. 상기 분획 용매의 비제한적인 예로는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 디클로로메탄(Dichloromethane) 또는 이들의 혼합용매를 들 수 있다.
구체적으로 상기 분획물은 후박나무의 추출물을 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 부탄올(butanol), 물 또는 이들의 혼합용매로 분획하여 제조한 것일 수 있다.
또한 본 발명에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
상기 조성물은 항생제 내성 균주에 대한 항균 활성을 가질 수 있으므로, 항생제 내성 균주에 대한 항균용 조성물로 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어 "항균"은 세균의 성장을 억제하거나 죽이는 것을 의미한다.
본 발명에서 용어 "항생제"는 세균을 죽이거나 세균의 성장을 억제하는 물질을 의미한다. 본 발명에서 상기 항생제는 암피실린(Ampicillin) 또는 카나마이신(Kanamycin) 일 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
상기 항생제 내성 균주는 Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Lactobacillus acidophilus 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 Lactobacillus 속, Lactococcus 속, Leuconostoc 속, Weissella 속, Pediococcus 속, Dermacoccus 속 및 Pseudomonas 속으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가질 수 있으며, 보다 구체적으로, Lactobacillus sakei, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Pediococcus acidilactici 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균활성을 가질 수 있다.
또한, 상기 후박나무 추출물을 포함하는 조성물은 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis), 대장균(Escherichia coli) 및 엔테로코커스 패시움(Enterococcus facieum)로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가질 수 있다.
상기 항균용 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 사료 첨가제 조성물, 사료 조성물, 화장료 조성물, 방부제 조성물, 및 의약외품 조성물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상으로 적용(사용)될 수 있다.
상기 항균용 조성물은 약학 조성물로 적용될 수 있다. 상기 조성물이 약학적 조성물로 적용되는 경우, 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 추출물 또는 이의 분획물은 유효성분으로 1일 0.001 내지 500 mg/kg으로, 구체적으로 0.1 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물 또는 분획물을 0.001 내지 50% 중량 백분율로 포함할 수 있다.
상기 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물은 항균 효과가 있으므로, 본 발명의 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 항균용 약학 조성물에 매우 유용하게 이용될 수 있다.
상기 항균용 조성물은 식품 조성물로 적용될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다.
상기 식품 조성물에는 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용되는 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 유효성분은 원료 조성물 중 0.01 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 항균용 조성물은 식품 첨가제 조성물로 적용될 수 있다. 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적에 따라 적절하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물은 전체 중량에 대하여 약 0.01 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 0.1 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다.
상기 항균용 조성물은 사료 첨가제 조성물 또는 사료 조성물로 적용될 수 있다. 사료 조성물은 기존의 항생제를 대체하고 유해한 식품 병원성균의 생장을 억제하여 동물체의 건강상태를 양호하게 하고, 가축의 증체량과 육질을 개선시키며, 산유량 및 면역력을 증가시키는 효과가 있다. 본 발명의 사료 조성물은 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태 및 사일레지 등의 형태로 제조될 수 있다.
상기 발효사료는 본 발명의 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물 이외의 여러 가지 미생물군 또는 효소들을 첨가함으로써 유기물을 발효시켜 제조할 수 있으며, 배합사료는 여러 종류의 일반 사료와 본 발명의 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 정분획물을 혼합하여 제조할 수 있다. 펠렛 형태의 사료는 상기 배합사료 등을 펠렛기에서 열과 압력을 가하여 제조할 수 있으며, 사일레지는 청예사료를 미생물로 발효시킴으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 항균용 조성물은 화장료 조성물로 적용될 수 있으며, 항균용 화장료 조성물로 적용되는 경우, 유효성분인 후박나무 추출물 또는 이의 분획물 이외에, 항균 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 항균 효과가 있다고 알려진 화합물이나 천연 추출물을 포함할 수 있다.
한편, 본 발명의 항균 화장료 조성물에 있어서, 그 유효성분은 항균 활성을 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.99 중량 % 범위 내에서 포함될 수 있다. 여기서 "유효량"이란 항균 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 항균 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 구체적으로, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 미스트, 비누, 샴푸, 린스, 컨디셔너, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 항균 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서 "화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 항균용 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 0.01 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 0.1 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료의 제조되는 제형에 따라 또한 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
상기 항균용 조성물은 방부제 조성물로 적용될 수 있다. 상기 방부 조성물에는 식품의 방부제, 화장품 보존제 또는 의약품 보존제 등이 있다. 상기 식품의 방부제, 화장품 보존제 및 의약품 보존제는 변질, 부패, 변색 및 화학변화를 방지하기 위해 사용되는 첨가물로서 살균제, 산화방지제가 이에 포함되며 세균, 곰팡이, 효모 등 미생물의 증식을 억제하여 식품, 화장품 및 의약품에서 부패미생물의 발육저지 또는 살균작용을 하는 등의 기능성 항생제도 포함된다. 이러한 방부 조성물의 이상적인 조건으로는 독성이 없어야 하며, 미량으로도 효과가 있어야 한다.
상기 항균용 조성물은 의약외품 조성물로 적용될 수 있다. 본 발명의 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 본 발명의 후박나무 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 소독청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제비누, 핸드워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제, 패치, 또는 필터 충진제일 수 있다.
본 발명의 후박나무 추출물 또는 이의 분획물은 항균 효과를 가지므로, 항균용 조성물로 이용하다.
도 1은 실시예 2에서 얻은 후박나무 가지의 분획물 시료를 대상으로 6종 유산균에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 2는 실시예 4에서 얻은 후박나무 잎의 분획물 시료를 대상으로 6종 유산균에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 3은 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 효모에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 4는 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 피부 유해 균주에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 5는 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 유산균 3종의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
도 6은 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 Pseudomonas fluorescens의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
도 7은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis) 균주에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 대장균(Escherichia coli)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 엔테로코커스 패시움(Enterococcus facieum)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 피키아 아노말라(Pichia anomala)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 슈도모나스 에루시노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 실시예 4에서 얻은 후박나무 잎의 분획물 시료를 대상으로 6종 유산균에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 3은 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 효모에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 4는 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 피부 유해 균주에 대한 생육도를 평가한 것이다.
도 5는 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 유산균 3종의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
도 6은 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 Pseudomonas fluorescens의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
도 7은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis) 균주에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 대장균(Escherichia coli)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 엔테로코커스 패시움(Enterococcus facieum)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 10은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 피키아 아노말라(Pichia anomala)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 슈도모나스 에루시노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
[실시예 제조]
실시예 1. 후박나무 가지 추출물 제조
건조된 후박나무 가지 1kg에 후박나무 가지 중량의 10배(v/w)에 해당하는 60% 메탄올 10L를 투입하고 60℃에서 17시간 동안 추출하여 후박나무 가지 추출액을 얻었다. 다음으로 상기 후박나무 가지 추출액을 10μm 여과포를 이용하여 여과하였다. 이 후, 60℃, 0.1~0.3 MPa에서 진공감압으로 농축하여 후박나무 가지의 메탄올 추출물 원액(농축액)을 얻었다.
실시예 2. 후박나무 가지 추출물의 분획물 제조
실시예 1에서 얻은 후박나무 가지의 메탄올 추출물 원액(농축액)을 3L 분액 깔대기를 이용하여 계통분획을 실시하였다.
상기 실시예 1에서 얻은 후박나무 가지의 메탄올 추출물 원액(농축액)에 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 부탄올, 물 순서로 계통분획하여 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 헥산 분획물(HF), 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF)을 얻었다.
실시예 3. 후박나무 잎 추출물 제조
건조된 후박나무 잎 1kg에 후박나무 잎 중량의 10배(v/w)에 해당하는 60% 메탄올 10L를 투입하고 60℃에서 17시간 동안 추출하여 후박나무 잎 추출액을 얻었다. 다음으로 상기 후박나무 잎 추출액을 10μm 여과포를 이용하여 여과하였다. 이 후, 60℃, 0.1~0.3 MPa에서 진공감압으로 농축하여 후박나무 잎의 메탄올 추출물 원액을 얻었다.
실시예 4. 후박나무 잎 추출물의 분획물 제조
실시예 3에서 얻은 후박나무 잎의 메탄올 추출물 원액(농축액)을 3L 분액 깔대기를 이용하여 계통분획을 하였다.
상기 실시예 3에서 얻은 후박나무 잎의 메탄올 추출물 원액(농축액)에 헥산, 에틸아세테이트, 클로로포름, 부탄올, 물 순서로 계통분획하여 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 헥산 분획물(HF), 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF)을 얻었다.
실시예 5. 후박나무 가지의 열수 추출물 제조
건조된 후박나무 가지 2kg에 10배(w/v)의 증류수를 첨가하여, 100℃에서 4시간 동안 초고속진공저온 농축 추출기(COSMOS-660, KYUNGSEO E&P, Incheon, Korea)로 열수 추출한 후 여과하였다. 다음으로 대형회전진공농축기(Buchi rotavapor R-220, Gschwader strasse, Flawil, Switzerland)를 이용하여 55℃, 36~39 mmTorr 조건에서 12 시간 감압농축하여 시료로 사용하였다. 시료는 2 g/mL의 농도의 stock으로 제조하여 -80℃의 Deep freezer에 보관하여 실험 전 사용하였다.
실시예 6. 후박나무 잎의 열수 추출물 제조
건조된 후박나무 잎 2kg에 10배(w/v)의 증류수를 첨가하여, 100℃에서 4시간 동안 초고속진공저온 농축 추출기(COSMOS-660, KYUNGSEO E&P, Incheon, Korea)로 열수 추출한 후 여과하였다. 다음으로 대형회전진공농축기(Buchi rotavapor R-220, Gschwader strasse, Flawil, Switzerland)를 이용하여 55℃, 36~39 mmTorr 조건에서 12 시간 감압농축하여 시로 사용하였다. 시료는 2 g/mL의 농도의 stock으로 제조하여 -80℃의 Deep freezer에 보관하여 실험 전 사용하였다.
[실험예]
실험예 1. 후박나무 메탄올 추출물의 분획물의 항균 효과 평가
1-1. 후박나무 시료 준비
앞서 실시예 2에서 얻은 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF)과 실시예 4에서 얻은 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF)을 시료로 사용하였다.
1-2. 실험균주 및 배지
생육활성평가에 사용된 그람양성 유산균으로는 Lactobacillus sakei KCTC 3598, Lactobacillus acidophilus KCTC 3140, Lactococcus lactis KCTC 3769, Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100, Weissella confusa KCTC 3499, Pediococcus acidilactici KCTC 15064로 총 6종, 효모 균주로는 Pichia anomala KCTC 7295, Pichia fermentans KCTC 17571 총 2종, 피부 유해균주로 Pseudomonas fluorescens KCTC 2344, Dermacoccus sp. KCTC 19435를 생물자원센터(Korean Collection for Type Culture, Daejeon, Korea)에서 분양 후 사용하였다.
실험 3-4일 전 동결상태의 균주들을 활성화시켜 3계대 이내의 균주를 이용하여 실험에 이용하였다. 상기 그람양성 유산균의 배양배지는 MRS agar (Difco, Detroit, MI, USA)와 MRS broth (Difco, Detroit, MI, USA)를 이용하였고, 효모 균주의 배양배지는 potato dextrose agar (PDA; Difco, Detroit, MI, USA)와 potato dextrose broth (PDB; Difco, Detroit, MI)를 이용하였다.
Pseudomonas fluorescens와 Dermacoccus sp. 균주의 배양배지로는 tryptic soy broth (TSB; Difco, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA)와 tryptic soy agar (TSA; Difco, Becton Dickinson, Sparks, MD, USA)를 이용하였다.
1-3. 유산균에 대한 생육저해 효능 평가
유산균에 대한 생육효능 평가는 96 well microtiter assay 방법을 이용하였다. 96 well에 160 μL의 배지를 분주하고, 후박나무 시료를 각각 20 μL(총10 mg)씩 분주하였다. 모든 균주의 접종은 24시간 배양액(1Х107-8)을 사용하여 1%로 접종하였으며, 96 well에 20 μL씩 분주하였다. 배지액만 주입한 것과 배지와 함께 균주액을 주입한 것을 대조군으로 설정하였다. 배지액만 주입한 것은 배양 과정에서 오염 여부를 확인하기 위한 것이다. Well당 반복수는 6으로 하였다. 모든 균주는 30-35 ℃에서 48시간 배양 후, 600 nm에서 흡광도를 측정하였다(SpectraMax i3 multimode plate reader, Molecular Devices, San Jose, CA, USA).
도 1은 실시예 2에서 얻은 후박나무 가지의 분획물 시료를 대상으로 6종 유산균에 대한 생육도를 평가한 것이다. 모든 유산균은 MRS broth로 30-35℃에서 48시간 배양하였고, 모든 후박나무 시료의 농도는 10 mg 처리하였다.
후박나무 시료 처리 없이 배지와 함께 균주액만을 주입하여 48시간 배양한 대조군의 생육도를 100%로 설정하고, 대조군 대비하여 후박나무 시료 처리에 따른 생육 저해 정도를 비교하고 %로 나타내었다.
Percentage of cell viability = (OD value of experimental samples/OD value of experimental controls )*100
그람 양성 유산균 6종에 대해 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF) 10 mg을 처리한 경우, 이들 분획물 중에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 부탄올 분획물(BAF)만이 6종의 유산균 모두에 대해 95% 이상의 생육 저해를 보여 유산균에 대해 항균 효과를 나타냈다(도 1).
도 2는 실시예 4에서 얻은 후박나무 잎의 분획물 시료를 대상으로 6종 유산균에 대한 생육도를 평가한 것이다. 모든 유산균은 MRS broth로 30-35℃에서 48시간 배양하였고, 모든 후박나무 시료의 농도는 10 mg 처리하였다.
후박나무 시료 처리 없이 배지와 함께 균주액만을 주입하여 48시간 배양한 대조군의 생육도를 100%로 설정하고, 대조군 대비하여 후박나무 시료 처리에 따른 생육 저해 정도를 비교하고 %로 나타내었다.
Percentage of cell viability = (OD value of experimental samples/OD value of experimental controls )*100
그람 양성 유산균 6종에 대해 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF) 10 mg을 처리한 경우, 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 모든 분획물은 Pediococcus acidilactici, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus acidophilus 유산균에 대해서는 모든 분획물에서 항균 활성이 없었다. 그러나, Weissella confusa 유산균에 대해서는 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물 중에서 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF)이 항균 활성을 나타냈다. 그리고 Lactococcus lactis 유산균과 Lactobacillus sakei 유산균에 대해서는 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물 중에서 에틸아세테이트 분획물(EAF)만이 항균활성을 나타냈다.
따라서, 후박나무의 추출 부위 그리고 분획 용매에 따라 유산균에 대한 항균 활성이 상이하다는 것을 알 수 있었다.
1-4. 효모에 대한 생육 저해 효능 평가
상기 실험예 1-3과 동일하게 실험하면서, 유산균 대신 효모 균주 Pichia anomala KCTC 7295, Pichia fermentans KCTC 17571를 사용하였다.
도 3은 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 효모에 대한 생육도를 평가한 것이다. 모든 효모는 PDB 배지로 30℃에서 48시간 배양하였고, 모든 시료의 농도는 10 mg으로 처리하였다. 후박나무 시료 처리 없이 배지와 함께 균주액만을 주입하여 48시간 배양한 대조군의 생육도를 100%로 설정하고, 대조군 대비하여 후박나무 시료 처리에 따른 생육 저해 정도를 비교하고 %로 나타내었다.
Percentage of cell viability = (OD value of experimental samples/OD value of experimental controls )*100
Pichia anomala와 Pichia fermentans는 2종 모두 효모균주로 Pichia anomala는 발효식품의 미관을 해치는 주요 산막형성 균주이며, Pichia fermentans는 발효식품의 스타터 균주로서 발효에 주로 이용된다.
실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF) 10 mg을 처리한 경우, 이들 분획물 중에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 클로로포름 분획물(CLF)만이 Pichia fermentans에 대해 생육 저해를 보이는 것을 확인하였다. 그러나, 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF) 모두 Pichia fermentans에 대해 생육 저해 효과가 없었다.
Pichia anomala에 대해서는 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF)과 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF), 부탄올 분획물(BAF) 그리고 물 분획물(WF) 모두 항균 효과가 없었다.
따라서, 후박나무의 추출 부위 그리고 분획 용매에 따라 효모에 대한 항균 활성이 상이하다는 것을 알 수 있었다.
1-5. 피부 유해 균주에 대한 생육 저해 효능 평가
상기 실험예 1-3과 동일하게 실험하면서, 유산균 대신 피부 유해 균주로 Pseudomonas fluorescens KCTC 2344, Dermacoccus sp. KCTC 19435를 사용하였다.
도 4는 실시예 2와 4에서 얻은 후박나무 분획물 시료를 대상으로 2종의 피부 유해 균주에 대한 생육도를 평가한 것이다. 상기 피부 유해 균주는 TSB 배지에서 30 ℃에서 48시간 배양하였고, 모든 시료의 농도는 10 mg으로 처리하였다.
후박나무 시료 처리 없이 배지와 함께 균주액만을 주입하여 48시간 배양한 대조군의 생육도를 100%로 설정하고, 대조군 대비하여 후박나무 시료 처리에 따른 생육 저해 정도를 비교하고 %로 나타내었다.
Percentage of cell viability = (OD value of experimental samples/OD value of experimental controls )*100
Dermacoccus 속은 주로 사람의 피부나 물에서 분리되는 균으로 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물 중에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF) 시료에서 높은 생육저해 활성을 나타냈으며, 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물 중에서도 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물(EAF), 클로로포름 분획물(CLF) 시료에서 높은 생육저해 활성을 나타냈다.
또한, Pseudomonas fluorescens는 부패를 일으키거나 병원성을 나타내는 균주이다. 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 부탄올 분획물(BAF)이 Pseudomonas fluorescens 균주에 대한 생육 저해 효과가 컸다. 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물들은 Pseudomonas fluorescens 균주에 대한 생육 저해 효과가 거의 없었다.
따라서, 후박나무의 추출 부위 그리고 분획 용매에 따라 피부 유해 균주에 대한 항균 활성이 상이하다는 것을 알 수 있었다.
실험예 2. 후박나무 시료의 디스크 확산 검사(Disc diffusion assay)에 의한 항생제 내성 균주에 대한 항균능 측정
2-1. 디스크 확산 검사(Disc diffusion assay)
후박나무의 항균활성을 disc diffusion assay로 측정하였다. 배양 균주는 24 시간 이상 배양된 후, 약 1 Х 106 ~ 1 Х 107 CFU/mL의 농도로 본 실험에 사용하였다. 각 균주용 고체평판배지에 100 μL씩 멸균 면봉을 사용하여 도말하였다. 멸균된 Paper disc (Diameter 6 mm, Toyo Roshi Kaisha, Ltd., Tokyo, Japan)를 균주를 도말한 고체평판배지에 올려놓은 후, 항생제인 Ampicillin과 Kanamycin를 분주하여 천천히 흡수시킨 뒤 건조하였다. 이후 평판배지는 24시간 동안 30-35℃에서 배양한 후, 생육저해환(Clear zone)의 크기를 비교하였다.
2-2. 유산균의 항생제 내성 평가
도 1과 도 2에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물과 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물이 항균 효과를 나타낸 유산균 중에서 Lactobacillus acidophilus KCTC 3140, Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100, Weissella confusa KCTC 3499 총 3종의 유산균 균주가 항생제 내생이 있는 지를 평가하였다. 이를 통해, 후박나무 시료가 항생제 내성이 있는 균주에 대해서도 항균 효과를 가지는 지를 평가하고자 하였다.
상기와 같은 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 Lactobacillus acidophilus KCTC 3140, Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100, Weissella confusa KCTC 3499 총 3종의 유산균 균주가 항생제 내성이 있는 지를 평가하였다.
도 5는 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 유산균 3종의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
그 결과, Lactobacillus acidophilus KCTC 3140, Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100, Weissella confusa KCTC 3499 균주는 암피실린과 카나마이신에 대한 내성을 가지고 있는 것을 확인하였다.
따라서, 상기 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물과 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 분획물은 항생제 내성이 있는 유산균, Lactobacillus acidophilus KCTC 3140, Leuconostoc mesenteroides KCTC 3100, Weissella confusa KCTC 3499에 대해서 항균 활성을 가지므로, 항생제 내성이 있는 균주에 대한 항균제로 이용이 가능하다는 것을 알 수 있었다.
2-3. 피부 유해 균주의 항생제 내성 평가
도 4에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물이 항균 효과를 나타낸 Pseudomonas fluorescens 균주가 항생제 내생이 있는 지를 평가하였다. 이를 통해, 후박나무 시료가 항생제 내성이 있는 피부 유해 균주에 대해서도 항균 효과를 가지는 지를 평가하고자 하였다.
상기와 같은 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 피부 유해 균주인 Pseudomonas fluorescens 균주가 항생제 내성이 있는 지를 평가하였다.
도 6은 디스크 확산 검사 방법을 이용하여 Pseudomonas fluorescens의 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 평가한 결과이다.
그 결과, 상기 Pseudomonas fluorescens 균주는 암피실린과 카나마이신에 대한 항생제 내성을 가지고 있는 것을 확인하였다.
따라서, 상기 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물이 항생제 내성이 있는 Pseudomonas fluorescens 균주에 대해서 항균 활성을 가지므로, 항생제 내성이 있는 균주에 대한 항균제로 이용이 가능하다는 것을 알 수 있었다.
실험예 3. 후박나무 잎의 열수 추출물의 항균 효과 평가
항균 활성 평가를 위해 사용된 표준 균주는 Escherichia coli (ATCC 25922), Enterococcus faecium (ATCC 27273), Salmonella enteritidis (KCCM 12021), Pichia anomala, Pseudomonas aeruginosa 5종의 균종을 사용하여 Microtiter plate assay를 시행하였다. 모든 균주는 실험 전 계대 후, 24시간 배양한 균액을 처리하였다. 96 well round bottom plate에 140 μL nutrient broth 배지를 각 well에 넣은 후, 연속 희석한 후박나무 잎의 열수 추출물(30 μL)을 농도별로 주입하였다. 마지막으로 30 μL의 균주를 각 well에 주입 후, 37 ℃의 인큐베이터에 24 시간 배양하여 600 nm에서 흡광도를 측정하였다(Spectra Max M3, Molecular device, Sunnyvale, CA, USA). 시료를 넣지 않은 배양액 대조구와 비교하여 저해능(%)을 측정하였다.
도 7 내지 9는 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다. 구체적으로, 도 7은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis) 균주에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다. 도 8은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 대장균(Escherichia coli)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다. 도 9는 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 엔테로코커스 패시움(Enterococcus facieum)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
항균 활성은 7 log(1Х107)의 균액을 접종하였고, 3종의 표준 균주 중, 식품위해 세균인 살모넬라 엔테리티디스(Salmonella Enteritidis) 균주에 대해서 후박나무 잎의 열수 추출물 0.5 g/mL의 농도에서 90% 이상으로 가장 높은 저해활성을 보였다. 대장균(Escherichia coli)는 75.42%, 엔테로코커스 패시움(Enterococcus facieum)은 50.02%의 저해활성을 나타내었다.
도 10은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 피키아 아노말라(Pichia anomala)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다. 도 11은 실시예 6의 후박나무 잎의 열수 추출물의 슈도모나스 에루시노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대한 항균 활성 효과를 나타낸 그래프이다.
그 결과, 후박나무 잎의 열수 추출물은 피키아 아노말라(Pichia anomala)와 녹농균인 슈도모나스 에루시노사(Pseudomonas aeruginosa)에 대한 항균 활성은 없었다. Pichia anomala와 Pichia fermentans는 2종 모두 효모균주로 Pichia anomala는 발효식품의 미관을 해치는 주요 산막형성 균주이며, Pichia fermentans는 발효식품의 스타터 균주로서 발효에 주로 이용된다.
앞서 도 3에서 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 분획물 중에서 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 클로로포름 분획물(CLF)만이 Pichia fermentans에 대해 생육 저해를 보이는 것을 확인하였다.
Pichia anomala에 대해서는 실시예 2의 후박나무 가지의 메탄올 추출물의 모든 분획물과 실시예 4의 후박나무 잎의 메탄올 추출물의 모든 분획물에서 항균 효과가 없었다.
따라서, 후박나무는 효모에 대한 항균 활성은 크지 않은 것을 알 수 있었다.
결론적으로 후박나무의 추출 부위 그리고 분획 용매에 따라 균주에 대한 항균 활성이 상이하였으며, 항생제 내성 균주에 대해서도 항균효과를 가지는 것을 확인하였다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.
Claims (10)
- 후박나무(Machilus thunbergii) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 항생제 내성 균주에 대한 항균 활성을 가지는 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 후박나무 추출물은 물, C1-C4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 후박나무 추출물은 후박나무 잎 또는 가지를 물, 메탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 분획물은 후박나무의 추출물을 헥산(Hexane), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 클로로포름(Chloroform), 부탄올(butanol), 물 또는 이들의 혼합용매로 분획하여 제조한 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 Salmonella Enteritidis, Escherichia coli 및 Enterococcus facieum로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가지는 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 Lactobacillus 속, Lactococcus 속, Leuconostoc 속, Weissella 속, Pediococcus 속, Dermacoccus 속 및 Pseudomonas 속으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가지는 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 Lactobacillus sakei, Lactobacillus acidophilus, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Pediococcus acidilactici 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 균주에 항균 활성을 가지는 것인, 항균용 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 항생제 내성 균주는 Leuconostoc mesenteroides, Weissella confusa, Lactobacillus acidophilus 및 Pseudomonas fluorescens로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것인, 항균용 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 항균용 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 식품 첨가제 조성물, 사료 첨가제 조성물, 사료 조성물, 화장료 조성물, 방부제 조성물, 및 의약외품 조성물로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상으로 적용되는 것인, 항균용 조성물.
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