KR20220123240A - Trpv1 에피토프 및 항체 - Google Patents

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KR20220123240A
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카롤리나 트르쿨야
맥스 데이비슨
오베 오르바르
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오블리크 세러퓨틱스 에이비
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Abstract

본 발명은 TRPV1에 결합하는 항체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 단백질 TRPV1의 특정 에피토프와 관련이 있다. 본 발명은 또한 이러한 항체를 포함하는 면역접합체 및 조성물과 관련이 있다. 본 발명은 또한 이러한 항체를 생산하는 방법을 제공한다. 본 발명은 치료 목적, 예를 들어 통증 치료를 위한 이러한 항체의 용도를 추가로 제공한다.

Description

TRPV1 에피토프 및 항체
본 발명은 전형적으로 에피토프 및 항체, 특히 단백질 TRPV1 및 TRPV1에 결합하는 항체의 에피토프 분야에 관한 것이다. 이러한 항-TRPV1 항체는 통증 치료와 같은 치료 용도가 있다. 본 발명의 항체 기반 조성물 및 방법 및 용도는 또한 접합체 및 기타 치료 조합, 키트 및 방법의 용도로 확장된다.
TRPV1(일시적 수용체 전위 바닐로이드 유형 1)은 낮은 pH, 고온(T≥42℃), 캡사이신 및 염증 매개체와 같은 유해 자극에 민감한 이온 채널이다. TRPV1은 통증 감각에 관여하기 때문에 거의 20년 동안 연구되었다. 통증 요법에 대한 새로운 작용 방식으로서 수용체의 활성을 차단하려는 여러 시도가 있었지만 이러한 시도는 성공적이지 못하였다.
캡사이신이 TRPV1의 활성화제이고 통증을 유발할 수 있다는 것은 당업계에 잘 알려져 있다. 캡사이신은 TRPV1 활성화 및 통증을 평가하기 위한 모델에서 당업계에서 일상적으로 사용된다. 캡사이신 유도된 TRPV1 활성화의 억제를 평가하는 것은 통증 치료를 위한 제제의 잠재력을 평가하기 위한 잘 알려진 모델 시스템이다. 이러한 모델 시스템은 예를 들어 문헌[Chen 등 (2011) (Chen 등, TRP Channels, ed. MX, Z., 1-14, CRC Press/Taylor & Francis, 2011)]에 기재된다.
그의 활성화 메카니즘의 복잡성으로 인해 (전술한 바와 같이, 이는 낮은 pH, 고온 (T ≥ 42℃), 캡사이신, 및 염증성 매개체를 포함한 여러 자극이 활성화될 수 있음), TRPV1을 표적화하는 대부분의 화합물은 역효과, 예컨대 이상고열 또는 열감의 손실을 발생시켰다.
예를 들어, 화합물 AMG 517은 캡사이신, TRPV1의 pH 및 온도 활성화를 억제하는 암젠(Amgen)이 개발한 강력한 TRPV1 소분자 길항제이다. 이는 몰 추출을 위해 치료된 대상체에서 현저한 이상고열을 유발하는 1상 연구 후에 종료되었다 (Gavva, N. R. 등 Pain (2008), 136 (1-2), 202-210).
Johnson & Johnson이 개발한 또 다른 소분자 TRPV1 길항제인 마바트렙(Mavatrep)은 무릎 골관절염을 갖는 대상체를 포함하는 만성 통증의 1b상 연구에서 효능을 나타내었지만, 몇몇 대상체는 열감 및 약간의 열 화상을 경험하는 일부의 부작용이 보고되었다 (Manitpisitkul P, 등 Scand. J. Pain (2018), 18(2):151-164).
TRPV1에 결합하는 항체는 이전에 생성되었지만(Klionsky 등, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics (2006), Vol. 319(1), pages 192-198), 이들 항체는 TRPV1의 캡사이신-유도된 활성을 전혀 억제하지 않거나, 또는 항체가 TRVP1의 캡사이신 유도된 활성을 억제하는 것으로 보고되는 경우, TRTV1의 열 유도 활성의 동등한 억제 정도가 또한 보고된다.
따라서 개선된 통증 치료가 필요하다. TRPV1은 임상적으로나 유전적으로 검증된 표적이다. TRPV1의 성공적인 표적화는 그의 공급원에서 통증 완화를 제공하기 위해 오랫동안 추구된 해결책을 제공할 수 있다.
특히, TRPV1의 열 유도 활성화와는 대조적으로, TRVP1의 캡사이신 활성화의 우선적 억제를 유도하는 표적화를 갖는 TRPV1 상의 에피토프를 확인하는 것이 특히 유익할 것이다. 이는 이전의 소분자 TRPV1 길항제 (예를 들어 상기 기재된 바와 같은 AMG 517 및 마바트렙)에서 관찰된 열 관련 부작용 없이, 또는 감소된 열 관련 부작용과 함께 TRPV1에 결합하고 TRPV1의 캡사이신 활성화를 감소시키는 제제, 예컨대 항체의 확인 및 생성을 안내할 것이다.
본 발명자들은 TRPV1의 열 유도 활성화와는 대조적으로, TRTV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제하기 위해, 예를 들어 항체를 사용하여 표적화하는 데 특히 유용한 TRPV1의 세포외 영역에서 특정 에피토프 (또는 영역)를 확인함으로써 이러한 필요성을 해결하였다. TRPV1의 세포외 영역은 물론, TRTV1이 세포의 표면 상에서 (또는 표면에서) 발현될 때, 세포의 세포외 측면 (또는 세포외 표면)에서 노출된 (또는 접근가능한, 예를 들어 항체에 의해 접근가능한) TRVP1의 영역 (또는 부분)이다. 본 발명자들은 그러한 에피토프에 상응하는 (또는 본질적으로 상응하는) 단리된 펩티드를 확인하고 생성하였다. 본 발명자들은 또한 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 TRPV1의 캡사이신 활성화를 우선적으로 억제하는 항체를 생성하기 위해 이러한 단리된 펩티드를 사용하였다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:3 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:4 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:5 (OTV6) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:6 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:7 (OTV8) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:8 (OTV9) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:9 (OTV10) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:10 (OTV11) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:11 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:12 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:13 (OTV14) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 및 서열번호:14 (OTV15) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 이러한 단리된 펩티드는 TRPV1 활성화를 억제하는 항체를 생성하기 위한 항원성 펩티드로서 사용될 수 있다. 전형적으로 이러한 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 전형적으로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다.
문맥에서 달리 명백하지 않는 한, 본 발명의 "단리된 펩티드" 또는 "펩티드"에 대한 언급은 대안적으로 "단리된 에피토프" 또는 "단리된 항원성 에피토프"에 대한 언급으로 간주될 수 있다.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:3 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:4 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:6 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:8 (OTV9), 서열번호:11 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 및 서열번호:12 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:3 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:4 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:11 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:3 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:4 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3), 서열번호:3 (OTV4), 서열번호:4 (OTV5), 서열번호:5 (OTV6), 서열번호:6 (OTV7), 서열번호:7 (OTV8), 서열번호:8 (OTV9), 서열번호:9 (OTV10), 서열번호:10 (OTV11), 서열번호:11 (OTV12), 서열번호:12 (OTV13), 서열번호:13 (OTV14) 및 서열번호:14 (OTV15).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:3 (OTV4), 서열번호:4 (OTV5), 서열번호:6 (OTV7), 서열번호:8 (OTV9), 서열번호:11 (OTV12), 및 서열번호:12 (OTV13).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:3 (OTV4), 서열번호:4 (OTV5) 및 서열번호:11 (OTV12).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3), 서열번호:3 (OTV4) 및 서열번호:4 (OTV5).
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:3 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:4 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:5 (OTV6) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:6 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:7 (OTV8) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:8 (OTV9) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:9 (OTV10) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:10 (OTV11) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:11 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:12 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:13 (OTV14) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:14 (OTV15) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열. 바람직한 단리된 펩티드 (및 단리된 펩티드의 그룹)는 본원의 다른 곳에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:2 (OTV3), 서열번호:3 (OTV4), 서열번호:4 (OTV5), 서열번호:5 (OTV6), 서열번호:6 (OTV7), 서열번호:7 (OTV8), 서열번호:8 (OTV9), 서열번호:9 (OTV10), 서열번호:10 (OTV11), 서열번호:11 (OTV12), 서열번호:12 (OTV13), 서열번호:13 (OTV14) 및 서열번호:14 (OTV15). 바람직한 단리된 펩티드 (및 단리된 펩티드의 그룹)는 본원의 다른 곳에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 N- 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 N-말단에 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 C-말단에 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 N-말단 및 C-말단에서 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 N- 및/또는 C-말단에 시스테인(C) 잔기 (또는 N- 및/또는 C-말단에 추가의 시스테인(C) 잔기)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 N-말단에 시스테인(C) 잔기를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 C-말단에 시스테인(C) 잔기를 포함할 수 있다. 일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 N- 및 C-말단에 시스테인(C) 잔기를 포함할 수 있다. 단리된 펩티드의 말단에 시스테인 잔기의 제공은 펩티드 담체, 예를 들어 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같은 것에 편리한 부착을 허용할 수 있다. N- 및 C-말단 모두에서 시스테인 잔기의 제공은 원하는 경우 펩티드의 고리화를 위한 편리한 수단을 제공한다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 N- 및/또는 C-말단에서 하나 이상의 추가 변형을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서 단리된 펩티드는 C-말단 아미드화될 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 펩티드를 펩티드 담체에 부착 (또는 링크(link) 또는 연결)하는 데 사용될 수 있는 변형(화학 기 또는 링커)을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드를 펩티드 담체에 부착 (또는 링크 또는 연결)하기 위해 사용될 수 있는 변형(화학 기 또는 링커)은 프로파르길(Pra) 기이다. 펩티드 담체에 펩티드를 부착 (또는 링크 또는 연결)하기 위해 사용될 수 있는 변형(화학 기 또는 링커)은 N- 및/또는 C-말단에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드를 펩티드 담체에 부착 (또는 링크 또는 연결)하기 위해 사용될 수 있는 변형(화학 기 또는 링커, 예컨대 프로파르길 기)은 단리된 펩티드의 N-말단에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 (또는 상기 아미노산 서열을 포함하는) 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:17 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:18 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:19 (OTV6) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:20 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:21 (OTV8) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:22 (OTV9) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:23 (OTV10) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:24 (OTV11) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:25 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:26 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:27 (OTV14) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:28 (OTV15) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:17 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:18 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 서열번호:20 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:22 (OTV9) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:25 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:26 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:17 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:18 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:25 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:17 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:18 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:18 (OTV5), 서열번호:19 (OTV6), 서열번호:20 (OTV7), 서열번호:21 (OTV8), 서열번호:22 (OTV9), 서열번호:23 (OTV10), 서열번호:24 (OTV11), 서열번호:25 (OTV12), 서열번호:26 (OTV13), 서열번호:27 (OTV14), 및 서열번호:28 (OTV15).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:18 (OTV5), 서열번호:20 (OTV7), 서열번호:22 (OTV9), 서열번호:25 (OTV12), 및 서열번호:26 (OTV13).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:18 (OTV5), 및 서열번호:25 (OTV12).
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 (또는 포함하는) 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4), 및 서열번호:18 (OTV5).
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:17 (OTV4) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:18 (OTV5) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:19 (OTV6) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:20 (OTV7) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:21 (OTV8) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:22 (OTV9) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:23 (OTV10) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:24 (OTV11) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:25 (OTV12) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:26 (OTV13) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 서열번호:27 (OTV14) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열, 및 서열번호:28 (OTV15) 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열. 바람직한 단리된 펩티드 (및 단리된 펩티드의 그룹)는 본원의 다른 곳에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:18 (OTV5), 서열번호:19 (OTV6), 서열번호:20 (OTV7), 서열번호:21 (OTV8), 서열번호:22 (OTV9), 서열번호:23 (OTV10), 서열번호:24 (OTV11), 서열번호:25 (OTV12), 서열번호:26 (OTV13), 서열번호:27 (OTV14), 및 서열번호:28 (OTV15). 바람직한 단리된 펩티드 (및 단리된 펩티드의 그룹)는 본원의 다른 곳에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다: 서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4) 및 서열번호:18 (OTV5).
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (OTV5 서열)의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 (또는 이들로 구성되는) 단리된 펩티드가 바람직하다.
일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (OTV3 서열)의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 (또는 이들로 구성되는) 단리된 펩티드가 바람직하다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (OTV4 서열)의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 (또는 이들로 구성되는) 단리된 펩티드가 바람직하다.
본 발명의 단리된 펩티드 서열의 맥락에서, 주어진 아미노산 서열에 "실질적으로 상동성인" 서열은 주어진 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개(바람직하게는 1, 2 또는 3개) 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 함유하는 서열, 또는 주어진 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 서열, 또는 주어진 아미노산 서열의 적어도 6개 연속적인 아미노산을 갖는 서열일 수 있다. "실질적으로 상동성" 서열의 다른 예는 단리된 펩티드에 "실질적으로 상동성"인 아미노산 서열과 관련하여 본원의 다른 곳에서 기재되며, "실질적으로 상동성" 서열의 이러한 예는 또한 전술한 특정 펩티드 서열에 적용가능하다.
일부 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드와 "실질적으로 상동성"인 아미노산 서열은 주어진 단리된 펩티드의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 또는 3개 (바람직하게는 1 또는 2, 더 바람직하게는 1개)의 아미노산 치환 또는 첨가 또는 결실을 갖고 있는 서열, 또는 포함하는 서열, 그를 갖는 서열이다.
단리된 펩티드와 "실질적으로 상동성"인 아미노산 서열은 단리된 펩티드의 적어도 5개 또는 적어도 6개의 연속 아미노산을 포함하는 (또는 이들로 구성된) 서열 (또는 단리된 펩티드의 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 15, 적어도 20, 적어도 25 또는 적어도 30개의 연속 아미노산을 포함하거나 이들로 구성된 서열)을 포함한다. 6개의 아미노산은 항체에 의해 인식되거나 결합되는 펩티드/단백질 서열의 전형적인 길이이다.
단리된 펩티드와 "실질적으로 상동성"인 아미노산 서열은 주어진 단리된 펩티드 서열에 대해 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖거나, 포함하거나 (또는 이들로 구성된) 서열을 포함한다. 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 98%의 서열 동일성이 바람직하다.
아미노산 서열의 변경은 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 구성될 수 있다. 바람직하게는 상기 변경은 보존적 아미노산 치환이다.
본원에 사용된 "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 다른 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 계열은 염기성 측쇄 (예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어, 아스파르트산 산, 글루탐산 산), 비하전된 극성 측쇄 (예를 들어, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 무극성 측쇄 (예를 들어, 글리신, 시스테인, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 포함하여 당해 분야에 정의되었다.
용어 "실질적으로 상동성"은 또한 실질적으로 동일한 방식으로 본 발명의 단백질과 실질적으로 동일한 기능을 수행하는 본 발명의 아미노산 서열의 변형 또는 화학적 등가물을 포함한다. 예를 들어, 실질적으로 상동인 단리된 펩티드는 전형적으로 TRPV1에 결합하는 항체가 생성 (또는 발생)될 수 있는 (또는 반대) 펩티드 또는 에피토프로 작용하는 능력을 보유해야 한다.
아미노산의 상기 기재된 조작을 수행하는 방법(예를 들어, "실질적으로 상동성인" 서열을 생성하기 위해)은 당업자에게 잘 알려져 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 따라서, 일부 구현예에서, 주어진 아미노산 서열에 "실질적으로 상동성"인 서열은 치환 또는 추가 아미노산으로서 시스테인(C) 잔기를 갖지 않는다.
상동성(예를 들어, 서열 동일성)은 편리한 방법으로 평가할 수 있다. 그러나, 서열 간의 상동성(예를 들어, 동일성)의 정도를 결정하기 위해, 서열의 다중 정렬을 만드는 컴퓨터 프로그램, 예를 들어 Clustal W(Thompson, Higgins, Gibson, Nucleic Acids Res., 22:4673-4680, 1994)가 유용하다. 원하는 경우 Clustal W 알고리즘은 BLOSUM 62 스코어링 매트릭스 (Henikoff and Henikoff, Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 89:10915-10919, 1992) 및 10의 갭 개방 패널티 및 0.1의 갭 연장 패널티와 함께 사용될 수 있어서, 서열 중 하나의 총 길이의 적어도 50%가 정렬에 관여하는 2개의 서열 사이에서 최고 순서 매치가 수득된다. 서열을 정렬하는데 사용될 수 있는 다른 방법은 Smith and Waterman (Smith and Waterman, Adv . Appl . Math., 2:482, 1981)에 의해 수정된 Needleman and Wunsch (Needleman and Wunsch, J. Mol . Biol ., 48:443, 1970)의 정렬 방법이고, 두 서열 사이에서 가장 높은 차수의 일치가 얻어지고 두 서열 사이에서 동일한 아미노산의 수가 결정되도록 한다. 2개의 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성을 계산하는 다른 방법은 일반적으로 당업계에 인지되고 있으며, 예를 들어 문헌[Carillo 및 Lipton (Carillo 및 Lipton, SIAM J. Applied Math., 48:1073, 1988)]에 기재된 것들 및 문헌[Computational Molecular Biology, Lesk, e.d. Oxford University Press, New York, 1988, Biocomputing: Informatics and Genomics Projects]에 기재된 것들을 포함한다.
전형적으로 이러한 계산에는 컴퓨터 프로그램이 사용된다. ALIGN과 같은 서열 쌍을 비교하고 정렬하는 프로그램(Pearson and Lipman, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 85:2444-2448, 1988; Pearson, Methods in Enzymology, 183:63-98, 1990) 및 갭핑된 BLAST (Altschul 등, Nucleic Acids Res., 25:3389-3402, 1997), BLASTP, BLASTN, 또는 GCG (Devereux, Haeberli, Smithies, Nucleic Acids Res., 12:387, 1984)은 또한 이러한 목적에 유용하다. 또한, European Bioinformatics Institute의 Dali 서버는 단백질 서열의 구조 기반 정렬을 제공한다 (Holm, Trends in Biochemical Sciences, 20:478-480, 1995; Holm, J. Mol . Biol., 233:123-38, 1993; Holm, Nucleic Acid Res., 26:316-9, 1998).
기준점을 제공함으로써, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성을 갖는 본 발명에 따른 서열, 서열 동일성 등은 디폴트 파라미터로 ALIGN 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다(예를 들어, 인터넷 상에서 GENESTREAM 네트워크 서버, IGH, Montpellier, France).
일부 구현예에서, 본 발명은 본원에 개시된 단리된 펩티드 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)의 연장된, 말단절단된 또는 사이클릭 버전을 포함하는 (또는 이들로 구성되는) 단리된 펩티드를 제공한다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 연장되고 사이클릭일 수 있다(즉, 고리화될 수 있다). 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 말단절단되고 사이클릭일 수 있다(즉, 고리화될 수 있다). 펩티드의 연장된, 말단절단된 및 사이클릭 버전은 본원의 다른 곳에서 논의된다.
본 발명의 단리된 펩티드는 본원에 개시된 단리된 펩티드 서열의 연장된 버전, 또는 본원에 개시된 단리된 펩티드 서열과 실질적으로 상동성인 아미노산 서열의 연장된 버전을 포함할 수 있다 (또는 이로 구성될 수 있다). 예를 들어, 하나 이상의 추가의 아미노산 (예를 들어, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8 또는 적어도 9, 적어도 10, 적어도 15 또는 적어도 20 아미노산, 또는 1 내지 5 또는 1 내지 10 또는 1 내지 20개의 아미노산)은 단리된 펩티드 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)의 한쪽 말단 또는 양쪽 말단에 존재할 수 있다.
본 발명의 단리된 펩티드는 본원에 개시된 단리된 펩티드 서열의 말단절단된 버전, 또는 본원에 개시된 단리된 펩티드 서열의 말단절단된 버전을 포함할 수 있다 (또는 이로 구성될 수 있다). 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 (예를 들어, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8 또는 적어도 9, 적어도 10개의 아미노산, 또는 1 내지 5 또는 1 내지 10개의 아미노산)은 단리된 펩티드 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)의 한쪽 말단 또는 양쪽 말단에 없을 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9 또는 적어도 10 개의 아미노산 길이, 예를 들어 6 내지 10, 6 내지 12, 6 내지 15, 6 내지 20, 6 내지 25, 6 내지 30, 6 내지 40, 6 내지 50, 6 내지 60, 또는 6 내지 75 개의 아미노산 길이일 수 있다. 단리된 펩티드는 예를 들어, 5 내지 7, 5 내지 8, 5 내지 9, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 5 내지 30, 5 내지 40, 5 내지 50, 5 내지 60, 5 내지 70, 5 내지 75 개의 아미노산 길이일 수 있다. 단리된 펩티드는 예를 들어, 8 내지 10, 8 내지 15, 8 내지 20, 8 내지 25, 8 내지 30, 8 내지 40, 8 내지 50, 8 내지 60, 8 내지 70, 8 내지 75 개의 아미노산 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 ≤50 개의 아미노산 길이, 예를 들어 ≤45, ≤40, ≤35, ≤30, ≤25, ≤20, ≤15 또는 ≤10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 5-35, 5-40, 5-45, 5-50, 6-10, 6-15, 6-20, 6-25, 6-30, 6-35, 6-40, 6-45, 6-50, 8-10, 8-15, 8-20, 8-25, 8-30, 8-35, 8-40, 8-45, 8-50, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 10-35, 10-40, 10-45, 10-50, 15-20, 15-25, 15-30, 15-35, 15-40, 15-45, 15-50, 20-25, 20-30, 20-35, 25-30, 25-35 또는 25-40, 25-45, 25-50, 30-35, 30-40, 30-45, 30-50, 35-40, 35-45, 35-50, 40-45, 40-50 또는 45-50 개의 아미노산 길이)일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 <39 개의 아미노산 길이, 예를 들어 ≤38, ≤35, ≤30, ≤25, ≤20, ≤15, ≤10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 5-35, 5-38, 6-10, 6-15, 6-20, 6-25, 6-30, 6-35, 6-38, 8-10, 8-15, 8-20, 8-25, 8-30, 8-32, 8-35, 8-38, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 10-32, 10-35, 10-38, 15-20, 15-25, 15-30, 15-32, 15-35, 15-38, 20-25, 20-30, 20-35, 25-30, 25-35 또는 25-38 개의 아미노산 길이)일 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 또는 38 개의 아미노산 길이일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이, 예를 들어 ≤23, ≤20, ≤15, ≤10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-15, 5-20, 5-23, 6-10, 6-15, 6-20, 6-23, 8-10, 8-15, 8-20, 8-23, 10-15, 10-20, 10-23, 15-20, 15-23 또는 20-23 개의 아미노산 길이)일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 선형 펩티드 (또는 선형 에피토프)일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 형태적 펩티드 (또는 형태적 에피토프)일 수 있다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 사이클릭 (또는 고리화된) 펩티드 (또는 사이클릭 또는 고리화된 에피토프)일 수 있다.
일부 바람직한 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
일부 바람직한 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반하거나, 또는 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 사이클릭 펩티드이다.
펩티드 합성 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 선형 펩티드(예를 들어, 면역화 및 항체 생성에 사용)를 준비하는 데 사용되는 일반적인 기술은 Fmoc SPPS(고상 펩티드 합성)이다. SPPS에서 작은 다공성 비드는 세척-커플링-세척의 반복 주기를 사용하여 펩티드 사슬을 구축할 수 있는 기능적 링커로 처리된다. 합성된 펩티드는 화학적 절단을 사용하여 비드에서 방출된다. 사이클릭 펩티드 합성을 위해, 통상의 방법은 디설파이드 브릿지의 형성에 의한 고리화 (여기서 브릿지는 펩티드의 2개의 시스테인, 예를 들어 N-말단에 1개 및 C-말단에서 1개에 의한 브릿지 형성), 또는 브릿지가 전형적인 펩티드 결합으로 이루어진 "헤드-투-테일" 브릿지의 형성에 의한 고리를 이용한다. 사이클릭 펩티드는 고체 지지체에 형성될 수 있다.
펩티드 합성을 위한 다른 방법은 다른 화학적 합성 절차, 시험관내 번역을 사용하거나 적절한 발현 벡터를 세포에 도입하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 EDGKNNSLPMESTPHKCRGSACKP(서열번호: 30)를 포함하지 않는다 (또는 이로 구성되지 않는다).
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 TLIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPDSSYNSLYSTC(서열번호: 31)를 포함하지 않는다 (또는 이로 구성되지 않는다).
일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 아미노산 서열 SLPSESTSH(서열번호:32)를 포함하지 않는다 (또는 이로 구성되지 않는다).
물론 본 발명에 따른 단리된 펩티드는 TRPV 상과에 있는 전장 TRPV1 단백질 (즉 야생형 TRPV1 단백질), 또는 임의의 다른 전장 (야생형) 단백질, 또는 임의의 다른 전장 (야생형) 단백질을 포함하지 않는다. 따라서, 본 발명에 따른 단리된 펩티드는 전장 서열번호:1을 포함하지 않는다.
본 발명의 단리된 펩티드는, 전장 TRPV1 단백질 (예를 들어 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같음)의 영역 (또는 에피토프)에 상응하지만 (또는 이에 본질적으로 상응하지만), 그 자체가 자연에서 발생하지 않는다 (즉, 이들은 자연 발생 대응물을 갖지 않거나 자연에서 단리에서 발생하지 않음). 따라서, 본 발명의 단리된 펩티드는 인공 펩티드, 합성 펩티드, 인조 펩티드, 또는 비천연 펩티드로 간주될 수 있다.
본 발명의 추가 양태는 접합체를 제공한다. 전형적으로 접합체는 항체 생산에 사용되도록 구성된다. 접합체는 펩티드 담체에 커플링(즉, 링크 또는 연결 또는 결합)되거나 혼합된 상기 정의된 하나 이상의 단리된 펩티드를 포함할 수 있다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 접합체는 전형적으로 본 발명의 단리된 펩티드 및 펩티드 담체를 포함하며, 상기 단리된 펩티드는 상기 펩티드 담체에 커플링되거나 혼합된다. 펩티드 담체는 전형적으로 면역원성을 향상시킨다. 이것은 일부 경우에 항원성 에피토프를 제공하는 (또는 나타내거나 상응하는) 짧은 펩티드가 그 자체로 면역 반응을 유도하기에는 너무 작기 때문에 유용할 수 있다.
펩티드 담체는 전형적으로 단백질, 다당류 또는 폴리머성 아미노산과 같은 큰 거대 분자이다. 일부 구현예에서, 펩티드 담체는 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH), 난백알부민(OVA), 혈청 알부민(예를 들어, 소 혈청 알부민, BSA), 폴리라이신 등으로 구성된 군으로부터 선택된다. KLH가 전형적으로 바람직하다.
펩티드 담체에 대한 본 발명의 단리된 펩티드의 커플링은 예를 들어 공유 커플링 또는 디설파이드 브릿지일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 (예를 들어, 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이) 그의 N- 또는 C-말단에 (추가) 시스테인 잔기가 제공될 수 있다. 이러한 시스테인 잔기는 전형적으로 단리된 펩티드와 펩티드 담체(예를 들어, KLH)와의 커플링을 용이하게 한다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 펩티드 담체에 대한 단리된 펩티드의 커플링을 허용하는 변형(예를 들어, 프로파르길기와 같은 화학적 기)을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 펩티드는 표준 가교제(예를 들어, 글루타르알데히드)를 통해 펩티드 담체에 커플링된다. 단리된 펩티드를 펩티드 담체에 연결하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:2(OTV3)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:2(OTV3)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:2(OTV3)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:2(OTV3)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:16(OTV3)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:16(OTV3)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:16(OTV3)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:16(OTV3)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 적어도 25 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 30 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 32 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 25-35, 25-38, 25-45, 25-55, 25-65 또는 25 내지 75 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 20-38 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 29-35 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:2 또는 서열번호:16과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:2 또는 서열번호:16 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:2 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:2 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:16 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:16의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:16으로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:3 (OTV4)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:3 (OTV4)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:3(OTV4)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:3(OTV4)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:17 (OTV4)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:17 (OTV4)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:17(OTV4)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:17(OTV4)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 적어도 25 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 30 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 32 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 25-35, 25-38, 25-45, 25-55, 25-65 또는 25 내지 75 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 20-38 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 29-35 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:3의 위치 23 또는 서열번호:17의 위치 24에 있는 시스테인은 상이한 아미노산 잔기로 치환된다. 다른 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 (예를 들어, 서열번호: 3의 위치 23 또는 서열번호:17의 위치 24에서) 적어도 하나의 (예를 들어, 1개의) 내부 시스테인 잔기를 함유한다. 일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:3 또는 서열번호:17 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:3 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:3 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:17 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:17의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:17로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:4 (OTV5)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:4 (OTV5)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:4(OTV5)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:4(OTV5)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:18 (OTV5)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:18 (OTV5)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:18(OTV5)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:18(OTV5)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 적어도 25 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 30 개의 아미노산 길이, 또는 적어도 32 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 25-35, 25-45, 25-55, 25-65 또는 25 내지 75 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 20-25 또는 20-30 또는 20-31 또는 25-30 또는 25-32 또는 20-38 또는 25-38 또는 30-38개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 29-35 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 및/또는 C-말단 잔기를 갖는다. 일부 구현예에서, 추가 변형은 N- 및/또는 C-말단에 존재할 수 있다(예를 들어, N-말단의 프로파르길 기 및/또는 C-말단 아미드 기).
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:4 또는 서열번호:18 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:4 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 사이클릭 펩티드이다. 바람직하게는 이러한 펩티드는 N- 및 C-말단 시스테인 잔기 사이의 디설파이드 결합을 통해 고리화된다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:4 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:18 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 (바람직하게는 서열번호:18의 프로파르길 기를 통해) 펩티드 담체 KLH에 커플링된 서열번호:18로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:5 (OTV6)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:5 (OTV6)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:5(OTV6)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:5(OTV6)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:19 (OTV6)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:19 (OTV6)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:19(OTV6)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:19(OTV6)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-12, 5-15, 5-20, 5-23 또는 8-23 또는 10-23 또는 15-23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 10-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25 또는 5-30 또는 5-32 또는 5-38 또는 8-10, 8-15, 8-20, 8-25 또는 8-30 또는 8-32 또는 8-38 또는 10-38 또는 15-38 또는 20-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 5-11 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:5 또는 서열번호:19과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:5 또는 서열번호:19 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:5 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:5 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:19 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:19의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:19로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:6 (OTV7)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:6 (OTV7)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:6(OTV7)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:6(OTV7)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:20 (OTV7)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:20 (OTV7)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:20(OTV7)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:20(OTV7)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10-23 또는 15-23 또는 16-23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 10-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 16-20 또는 10-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 12-20 또는 12-25 또는 12-30 또는 12-32 또는 12-38 또는 16-20 또는 16-25 또는 16-30 또는 16-32 또는 16-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 13-19 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:6 또는 서열번호:20 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:6 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:6 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:20 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:20의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:20로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:7 (OTV8)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:7 (OTV8)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:7(OTV8)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:7(OTV8)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:21 (OTV8)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:21 (OTV8)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:21(OTV8)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:21(OTV8)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 20-38 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 또는 24-30 또는 24-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 21-27 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:7 또는 서열번호:21과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:7 또는 서열번호:21 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:7 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:7 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:21 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:21의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:21로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:8 (OTV9)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:8 (OTV9)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:8(OTV9)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:8(OTV9)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:22 (OTV9)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:22(OTV9)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:22(OTV9)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:22(OTV9)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 20-38 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 또는 24-30 또는 24-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 21-27 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:8 또는 서열번호:22 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:8 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:8 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:22 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:22의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:22로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:9(OTV10)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:9(OTV10)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:9(OTV10)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:9(OTV10)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:9(OTV10)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:23(OTV10)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:23(OTV10)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:23(OTV10)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10 내지 23 또는 15 내지 23 또는 16-23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 10-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 또는 16-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 12-20 또는 12-25 또는 12-30 또는 12-32 또는 12-38 또는 16-20 또는 16-25 또는 16-30 또는 16-32 또는 16-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 20-38 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 또는 16-30 또는 16-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 13-19 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:9 또는 서열번호:23과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:9 또는 서열번호:23 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:9 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:9 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:23 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:23의 C-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:23로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:10(OTV11)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:10(OTV11)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:10(OTV11)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:10(OTV11)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:24(OTV11)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:24(OTV11)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:24(OTV11)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:24(OTV11)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10 내지 23 또는 15 내지 23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 10-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25 또는 5-30 또는 5-32 또는 5-30 또는 8-10, 8-15, 8-20, 8-25 또는 8-30 또는 8-32 또는 8-38 또는 10-38 또는 15-38 또는 20-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 5-11 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:10 또는 서열번호:24과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:10 또는 서열번호:24 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:10 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:10 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:24 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:24의 C-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:24로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:11(OTV12)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:11(OTV12)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:11(OTV12)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:11(OTV12)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:25(OTV12)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:25(OTV12)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:25(OTV12)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:25(OTV12)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10-23 또는 15-23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-13 또는 8-13 또는 10-13 또는 5-15 또는 8-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 또는 13-15 또는 13-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10 또는 5-15 또는 5-25 또는 5-30 또는 5-32 또는 5-30 또는 5-38 또는 8-32 또는 8-38 또는 10-38 또는 13-15 또는 13-20 또는 13-25 또는 13-30 또는 13-32 또는 13-38 또는 15-38 또는 20-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 10-16 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:11 또는 서열번호:25 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:11 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:11 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:25 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:25의 C-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:25로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:12(OTV13)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:12(OTV13)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:12(OTV13)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:12(OTV13)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:26(OTV13)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:26(OTV13)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:26(OTV13)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:26(OTV13)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10-23 또는 15-23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 10-15 또는 5-13 또는 8-13 또는 10-13 또는 5-15 또는 8-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 또는 13-15 또는 13-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-10 또는 5-15 또는 5-25 또는 5-30 또는 5-32 또는 5-30 또는 5-38 또는 8-32 또는 8-38 또는 10-38 13-15 또는 13-20 또는 13-25 또는 13-30 또는 13-32 또는 13-38 또는 15-38 또는 20-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 10-16 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26과 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:12 또는 서열번호:26 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:12 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 선형 펩티드이다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:12 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:26 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 펩티드 담체 KLH(바람직하게는 서열번호:26의 N-말단 시스테인 잔기를 통해)에 커플링된 서열번호:26으로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:13(OTV14)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:13(OTV14)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:13(OTV14)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:13(OTV14)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:27(OTV14)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:27(OTV14)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:27(OTV14)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:27(OTV14)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
바람직하게는, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 아미노 서열 (또는 모티프) IED 및/또는 (바람직하게는 "및") NYD를 포함한다. 아미노산 서열 IED는 서열번호:13의 위치 11-13 및 서열번호:27의 위치 12-14에서 발견된다. 아미노산 서열 NYD는 서열번호:13의 위치 4-6 및 서열번호:27의 위치 5-7에서 발견된다.
바람직하게는, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 기반으로 하는 단리된 펩티드에서 IED 모티프 내에 1개 이하(바람직하게는 없음)의 아미노산 치환 또는 결실 및/또는 NYD 모티프 내에 1개 이하(바람직하게는 없음)의 아미노산 치환 또는 결실이 있다.
OTV14 펩티드(서열번호: 13 및 27로 표시됨)는 형태적 에피토프이다. 이들 서열 내의 IED 모티프는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 위치 599-601에 상응하고, 이들 서열의 NYD 모티프는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 위치 653-655에 상응한다. 이론에 구속되기를 바라지 않고, 다른 잔기(즉, IED 및 NYD 모티프 이외의 잔기)는 스페이서로 작용하여 IED 및 NYD 모티프의 측쇄를 완전한 TRPV1 서열의 구조적 모델에서 실제 형태를 모방하는 특정 형태로 강제하는 것으로 여겨진다.
일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 또는 <15 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10 내지 23 또는 15 내지 23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 5-11 또는 8-11 또는 10-15 또는 11-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 또는 11-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-15 또는 10-15 또는 10-20 또는 10-30 또는 10-35 또는 10-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 12-18 개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기 및 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다. 일부 구현예에서, 추가 변형은 N- 및/또는 C-말단에 존재할 수 있다(예를 들어, N-말단의 프로파르길 기 및/또는 C-말단 아미드 기).
일부 구현예에서, 서열번호:13 또는 서열번호:27에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:13 또는 서열번호:27 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:13 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 사이클릭 펩티드이다. 바람직하게는 이러한 펩티드는 N- 및 C-말단 시스테인 잔기 사이의 디설파이드 결합을 통해 고리화된다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:13 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:27 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 (바람직하게는 서열번호:28의 프로파르길 기를 통해) 펩티드 담체 KLH에 커플링된 서열번호:27로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
한 양태에서, 본 발명은 아미노산 서열 (또는 모티프) NYD 및 아미노산 서열 (또는 모티프) IED를 포함하는 단리된 펩티드를 제공하며, 여기서 아미노산 서열 NYD는 아미노산 서열 IED에 대해 N-말단에 위치하고, 바람직하게는 NYD 및 IED 서열은 하나 이상의 아미노산 잔기에 의해 분리된다(예를 들어, 3, 4 또는 5개 아미노산 잔기에 의해, 바람직하게는 4개 아미노산 잔기에 의해 분리되고, 예를 들어 아미노산 서열 PDGS(서열번호: 38)에 의해 분리된다). 이러한 단리된 펩티드는 NYD 서열에 대해 N-말단에 위치한 1개 이상 (예를 들어, 1, 2 또는 3개)의 아미노산 잔기 및/또는 IED 서열에 대해 C-말단에서 위치한 (바람직하게는 "및") 1개 이상의 (예를 들면, 1개, 2개 또는 3개의) 아미노산 잔기를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 단리된 펩티드의 바람직한 특징 및 특성(예를 들어, 바람직한 길이 및 변형)과 관련하여 본 명세서의 다른 곳에서 논의된 사항은 준용하여 본 발명의 이러한 양태에 적용될 수 있다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 (i) 아미노산 서열 (또는 모티프) NYD 및 아미노산 서열 (또는 모티프) IED를 포함하는 단리된 펩티드로서, 아미노산 서열 NYD는 아미노산 서열 IED에 대해N-말단에 위치하는, 단리된 펩티드 및 (ii) 펩티드 담체를 포함하는 접합체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 단리된 펩티드는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:14(OTV15)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:14(OTV15)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:14(OTV15)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:14(OTV15)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:28(OTV15)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:28(OTV15)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드를 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:28(OTV15)의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:28(OTV15)의 아미노산 서열로 구성된 단리된 펩티드를 제공한다.
일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 아미노 서열 ESTSH를 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 <24 개의 아미노산 길이 또는 <20 개의 아미노산 길이 <15 개의 아미노산 길이 <10 개의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-23 또는 8-23 또는 10 내지 23 또는 15 내지 23 또는 20-23 또는 5-10 또는 8-10 또는 5-11 또는 8-11 또는 10-15 또는 11-15 또는 5-15 또는 8-15 또는 5-20 또는 8-20 또는 10-20 또는 11-20 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 39개 미만의 아미노산 길이, 38개 미만의 아미노산 길이, 또는 37개 미만의 아미노산 길이, 또는 36개 미만의 아미노산 길이, 또는 35개 미만의 아미노산 길이, 또는 34개 미만의 아미노산 길이, 또는 33개 미만의 아미노산 길이 (예를 들어, 5-15 또는 10-15 또는 10-20 또는 10-30 또는 10-35 또는 10-38 또는 20-25 또는 20-30 또는 20-32 또는 25-30 또는 25-32 또는 25-38 또는 30-38 개의 아미노산 길이)이다. 일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 8-14 개의 아미노산 길이이. 일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 임의의 내부 시스테인 잔기를 함유하지 않는다. "내부" 잔기란 N-말단 및/또는 C-말단 잔기 이외의 위치에 있는 잔기를 의미한다. 일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 단리된 펩티드는 N-말단 시스테인 잔기 및 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다. 일부 구현예에서, 추가 변형은 N- 및/또는 C-말단에 존재할 수 있다(예를 들어, N-말단의 프로파르길 기 및/또는 C-말단 아미드 기).
일부 구현예에서, 서열번호:14 또는 서열번호:28에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드는 서열번호:14 또는 서열번호:28 자체와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환, 결실 또는 부가를 갖는다.
바람직하게는, 서열번호:14 또는 서열번호:28에 기반한 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)는 사이클릭 펩티드이다. 바람직하게는 이러한 펩티드는 N- 및 C-말단 시스테인 잔기 사이의 디설파이드 결합을 통해 고리화된다.
한 양태에서, 본 발명은 서열번호:14 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열) 를 포함하거나 (또는 그로 구성되거나) 또는 서열번호:28 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하거나 (또는 그로 구성된) 그리고 펩티드 담체에 (예를 들어, 커플링된) 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다. 펩티드 담체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직한 구현예에서 펩티드 담체는 KLH이다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 (바람직하게는 서열번호:28의 프로파르길 기를 통해) 펩티드 담체 KLH에 커플링된 서열번호:28로 구성된 단리된 펩티드를 포함하는 접합체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 단리된 펩티드 (또는 접합체)는 용액 또는 현탁액에 존재할 수 있다. 따라서, 한 양태에서 본 발명은 본 발명의 단리된 펩티드, 및 선택적으로 허용가능한 (예를 들어, 약제학적으로 허용되는) 희석제, 완충액, 보존제 및/또는 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 단리된 펩티드 (또는 접합체)는 고체 지지체(예를 들어, 비드 또는 마이크로비드 또는 플레이트 또는 마이크로적정 플레이트) 상에 존재할 수 있다(즉, 이에 부착되거나 결합될 수 있다). 따라서, 한 양태에서 본 발명은 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체에 부착된 (직접적으로 또는 간접적으로 부착된) 고체 지지체를 제공한다.
본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 전형적으로 TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1)에 결합하는 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 본 발명의 단리된 펩티드는 전형적으로 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)을 위한 항원성 에피토프로 사용하기에 적합하다. 본 발명의 단리된 펩티드를 사용하는 항체의 확인 (또는 생성 또는 생성)은 임의의 적합한 수단에 의해 수행될 수 있고 당업자는 적합한 기술(예를 들어, 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같음)에 익숙하다. 예를 들어, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 전형적으로 TRPV1에 결합하는 다클론성 항체 (예를 들어, 본 발명의 단리된 펩티드 (또는 접합체)로 면역화된 동물, 예컨대 토끼에서 생성된 다클론성 항체)의 확인 (또는 생성 또는 발생), 또는 표준 하이브리도마 기술 또는 파아지 디스플레이를 사용한 단클론성 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 적합하다. 다른 방식으로, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 전형적으로 항-TRPV1 항체로 표적화하기 위한 TRPV1의 유용한 에피토프를 나타내거나 (또는 상응하거나 본질적으로 상응한다).
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1)에 결합하고 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제하는 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 적합하다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1)에 결합하고 TRPV1의 열 유도 활성화를 유의하게 억제하지 않는 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 적합하다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 TRPV1 (바람직하게는 인간 TRPV1)에 결합하고 TRPVl의 열 유도 활성화와는 대조적으로 TRVP1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제하는 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 적합하다. 일부 이러한 구현예에서, 단리된 펩티드 OTV4, OTV5 및 OTV12가 바람직하다. 일부 이러한 구현예에서, 단리된 펩티드 OTV3, OTV4 및 OTV5가 바람직하다. 일부 구현예에서, OTV5가 바람직하다. 일부 구현예에서, OTV4가 바람직하다. 일부 구현예에서, OTV3이 바람직하다.
본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 아미노산 잔기 599 내지 아미노산 잔기 656의 TRPV1 (바람직하게는 인간 TRPVl, 서열 1)의 영역에 위치하는 TRPV1 (바람직하게는 인간 TRPV1, 서열번호:1)의 에피토프 (또는 영역 또는 부분)에 상응한다 (또는 이에 본질적으로 상응한다).
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 인간 TRPV1(서열번호:1)의 C621에 상응하는 위치에 시스테인(C)(바람직하게는 세린(S)) 이외의 아미노산 잔기를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 아미노산 서열 IEDGKN(서열번호:33) 또는 서열번호: 33과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 포함하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 아미노산 서열 LPSEST(서열번호:34) 또는 서열번호: 34과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 포함하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 아미노산 서열 PPDSSYNS(서열번호: 35) 또는 서열번호:35과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 포함하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 아미노산 서열 RWRGPA(서열번호:36) 또는 서열번호: 36과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 포함하는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드는 아미노산 서열 RGPASR(서열번호:37) 또는 서열번호: 37과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환 또는 결실 또는 부가를 포함하는 서열을 포함한다.
본원에 정의된 본 발명의 단리된 펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 (또는 그로 구성된) 핵산 분자, 또는 이에 실질적으로 상동성인 핵산 분자는 본 발명의 또 다른 양태를 형성한다.
핵산 서열과 관련하여 본원에 사용된 용어 "실질적으로 상동성"은 시작 핵산 서열에 대해 적어도 65%, 70% 또는 75%, 바람직하게는 적어도 80%, 및 더욱 더 바람직하게는 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%, 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "핵산 서열" 또는 "핵산 분자"는 천연 발생 염기, 당 및 당간(백본) 연결로 구성된 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 단량체의 서열을 지칭한다. 이 용어는 또한 비-자열 발생 단량체 또는 이의 부분을 포함하는 변형되거나 치환된 서열을 포함한다. 본 발명의 핵산 서열은 디옥시리보핵산 서열(DNA) 또는 리보핵산 서열(RNA)일 수 있으며, 아데닌, 구아닌, 시토신, 티미딘 및 우라실을 포함하는 자열 발생 염기를 포함할 수 있다. 서열은 또한 변형된 염기를 포함할 수 있다. 이러한 변형된 염기의 예는 아자 및 데아자 아데닌, 구아닌, 시토신, 티미딘 및 우라실; 및 크산틴 및 하이포크산틴을 포함한다. 핵산 분자는 이중 가닥 또는 단일 가닥일 수 있다. 핵산 분자는 전체적으로 또는 부분적으로 합성 또는 재조합일 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 펩티드 (또는 접합체)를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 적합한 희석제, 담체, 부형제 및/또는 보존제 (예를 들어, 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체, 부형제 및/또는 보존제)를 추가로 포함할 수 있다(예를 들어, 이들과 혼합되어 있을 수 있음).
상기에서 명시된 바와 같이, 본 발명의 단리된 펩티드 (및 접합체)는 TRPV1 (바람직하게는 인간 TRPV1)에 결합하고 TRPVl의 열 유도 활성화와는 대조적으로 TRVP1의 캡사이신 유도된 활성화를 우선적으로 억제하는 항체의 확인 (또는 생성 또는 상승)에 사용하기에 전형적으로 적합하다.
따라서, 한 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하는 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합하는) 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다.
바람직한 구현예에서, TRPV1(일시적 수용체 전위 바닐로이드 유형 1)은 인간 TRPV1(hTRPV1)이다. 인간 TRPV1의 아미노산 서열은 본원에서 서열번호:1로 제시된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1 단백질의 세포외 영역에 위치한 TRPV1의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-656에 의해 정의되는 TRPV1의 영역에서 TRPV1의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 결합된 전체 에피토프는 TRPV1의 이 영역 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 결합된 에피토프의 적어도 하나의 아미노산은 TRPV1의 이 영역 내에 존재한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체는 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체에 결합한다 (또는 결합할 수 있다). 바람직한 단리된 펩티드 및 접합체 및 단리된 펩티드 및 접합체의 바람직한 그룹은 본원의 다른 곳에서 정의된다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체는 본원의 다른 곳에서 기재된 바와 같은 바람직한 단리된 펩티드 또는 접합체에 결합한다. 단리된 펩티드에 결합하는 항체의 능력은 임의의 적절한 수단에 의해 평가될 수 있고, 통상의 기술자는 적합한 방법 (예를 들어 주어진 단리된 펩티드가 항체 결합에 대해 전장 TRPV1과 경쟁할 수 있는지의 여부를 평가하기 위한 ELISA 검정)에 친숙하다.
본 발명의 바람직한 항체는 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체에 결합 (또는 결합할 수 있음)하지만, 물론 이들은 또한 전형적으로 전장 (또는 야생형 또는 천연) TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1)에도 결합한다.
일부 구현예에서, 전장 (또는 야생형 또는 천연) TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1)은 세포, 바람직하게는 포유동물 세포(예를 들어, 부착성 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포) 상에서 발현되는 TRPV1이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 세포(예를 들어, CHO 세포) 상에서 이종성으로 발현되는 TRPV1에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 세포 상에서 발현되는 TRPV1에 결합할 수 있으며, 여기서 TRPV1은 유도성 발현 시스템(예를 들어, 본원의 실시예 섹션에 기재된 바와 같은 테트라사이클린 조절 발현 시스템)으로부터 발현된다. TRPV1은 전형적으로 세포 표면에서 (또는 표면에서) 발현된다. TRPV1에 대한 본 발명의 항체의 결합은 임의의 적합한 수단에 의해 평가될 수 있고, 당업자는 적합한 방법(예를 들어, 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 유동 세포측정 (예컨대 FACS) 또는 면역세포화학 또는 기능적 검정을 사용)에 익숙할 것이다.
본 발명의 단리된 펩티드는 전장 TRPV1(바람직하게는 인간 TRPV1, 서열번호:1)의 특정 영역 또는 에피토프에 상응하거나 본질적으로 상응한다.
보다 구체적으로, 서열번호:2 및 서열번호:16의 단리된 펩티드(OTV3 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-630에 상응한다.
단리된 펩티드 서열번호:3(OTV4 펩티드)은 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-630에 상응한다. 단리된 펩티드 서열번호:17(OTV4 펩티드)은 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-630에 상응한다.
서열번호:4 및 서열번호:18의 단리된 펩티드(OTV5 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-630에 상응한다.
서열번호:5의 단리된 펩티드(OTV6 펩티드)는 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-606에 상응한다. 서열번호:19의 단리된 펩티드(OTV6 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-606에 상응한다.
단리된 펩티드 서열번호:6(OTV7 펩티드)은 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-614에 상응한다. 단리된 펩티드 서열번호:20(OTV7 펩티드)은 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-614에 상응한다.
서열번호:7 및 서열번호:21의 단리된 펩티드(OTV8 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-622에 상응한다.
서열번호:8 및 서열번호:22의 단리된 펩티드(OTV9 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 607-630에 상응한다.
서열번호:9 및 서열번호:23의 단리된 펩티드(OTV10 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 615-630에 상응한다.
서열번호:10의 단리된 펩티드(OTV11 펩티드)는 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 623-630에 상응한다. 서열번호:24의 단리된 펩티드(OTV11 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 623-630에 상응한다.
서열번호:11 및 서열번호:25의 단리된 펩티드(OTV12 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 631-643에 상응한다.
서열번호:12의 단리된 펩티드(OTV13 펩티드)는 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 644-656에 상응한다. 서열번호:26의 단리된 펩티드(OTV13 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 644-656에 상응한다.
서열번호:13 및 27의 단리된 펩티드(OTV14 펩티드)는 TRPV1(서열번호:1)의 잔기에 상응하는 아미노산 서열 (또는 모티프), IED 및 NYD를 포함한다. 보다 구체적으로, 서열번호:13 및 27 내의 IED 서열은 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 599-601에 상응하고, 서열번호:13 및 27 내의 NYD 서열은 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 653-655에 상응한다.
서열번호:14의 단리된 펩티드(OTV15 펩티드)는 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 610-620에 상응한다. 서열번호:28의 단리된 펩티드(OTV15 펩티드)는 본질적으로 인간 TRPV1(서열번호:1)의 잔기 610-620에 상응한다.
"에 상응한다"는 단리된 펩티드의 아미노 서열(서열번호:)이 인간 TRPV1(서열번호:1)의 언급된 영역 또는 에피토프의 아미노산 서열과 일치함을 의미한다. "에 본질적으로 상응하는"이란 단리된 펩티드(서열번호:)의 아미노산 서열이 인간 TRPV1(서열번호:1)의 언급된 영역 또는 에피토프의 서열을 기반으로 하는 (또는 그로부터 유래되거나 변형된 형태인) 것으로 식별될 수 있음을 의미한다. 예를 들어, 인간 TRPV1(서열번호:1)의 언급된 영역 또는 에피토프에 "본질적으로 상응하는" 서열을 갖는 단리된 펩티드는 전형적으로 인간 TRVP1(서열번호:1)의 명시된 영역 또는 에피토프의 서열에 상응하는 (즉, 정확히 상응하는) 단리된 펩티드와 비교하여 1개 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5개, 바람직하게는 1,2 또는 3개)의 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 갖는다. 따라서, 인간 TRPV1(서열번호:1)의 언급된 영역 또는 에피토프에 "본질적으로 상응하는" 서열을 갖는 단리된 펩티드는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같이 "실질적으로 상동성인" 단리된 펩티드 서열인 것으로 간주될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1 (서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630, 아미노산 잔기 599-606, 아미노산 잔기 599-614, 아미노산 잔기 599-622, 아미노산 잔기 607-630, 아미노산 잔기 615-630, 아미노산 잔기 623-630, 아미노산 잔기 631-643, 아미노산 잔기 644-656, 또는 아미노산 잔기 610-620에 의해 정의된 영역에 있는 에피토프에서 TRPV1에 결합하거나, 또는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-601 및 잔기 653-655에 의해 정의된 영역에서 에피토프에서 TRPV1에 결합한다. 일부 구현예에서, 결합된 전체 에피토프는 TRPV1의 이러한 영역 중 하나 내에 놓여 있다. 일부 구현예에서, 결합된 에피토프의 적어도 하나의 아미노산은 TRPV1의 이들 영역 중 하나 내에 놓여 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1 (서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630, 아미노산 잔기 599-614, 아미노산 잔기 607-630, 아미노산 잔기 631-643, 또는 아미노산 잔기 644-656에 의해 정의된 영역 내에 있는 TRPV1의 에피토프에서 TRPV1에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 본 발명의 항체는 TRPV1 (서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630, 또는 631-643에 의해 정의된 영역 내에 있는 TRPV1의 에피토프에서 TRPV1에 결합한다.
일부 구현예에서, TRPV1 (서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630에 의해 정의된 영역 내에 있는 TRPV1의 에피토프에서 TRPV1에 결합하는 본 발명의 항체가 바람직하다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41 또는 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42 또는 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43 또는 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:91 또는 바람직하게는 서열번호:92의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1,
(e) 서열번호:45 또는 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46 또는 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41 또는 서열번호:77의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42 또는 서열번호:78의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43 또는 서열번호:79의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:91 또는 바람직하게는 서열번호:92의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45 또는 서열번호:81의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46 또는 서열번호:82의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
본 발명의 일부 구현예에서, VL CDR1은 서열번호:91 (K S S Q S L L X8 S X10 X11 X12 X13 X14 X15 X16 X17)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이들 구현예에서, X8, X10, X11, X12, X13, X14, X15 및 X16은 임의의 아미노산일 수 있고, X17은 임의의 아미노산일 수 있거나 아미노산이 아닐 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X8은 D 또는 Y이고; X10는 A 또는 S이고; X11은 G 또는 N이고; X12은 K 또는 Q이고; X13은 T 또는 K이고; X14은 Y 또는 N이고; X15은 L 또는 C이고, X16은 N 또는 L이고; X17는 A이거나 아미노산이 아니다. 따라서, 바람직한 VL CDR1은 서열번호:92의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구현예의 바람직한 VL CDR1 서열은 서열번호:44, 62 또는 80의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다.
CDR 서열 중 하나 이상이 XX 잔기를 함유하는 본 발명의 구현예에서, 주어진 CDR 서열와 비교된 1, 2 또는 3, 바람직하게는 1 또는 2 (더 바람직하게는 1개의) 변경된 아미노산 또는 아미노산 치환을 함유하는 서열과 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 CDR은 또한 본 발명에 포함된다. 일부 이러한 구현예에서 아미노산 잔기 내의 상기 변경 또는 치환은 XX 잔기 중 하나 이상을 포함할 수 있거나 XX 잔기 이외의 잔기에 있을 수 있다. 다른 이러한 구현예에서 상기 변경은 XX 잔기와 비-XX 잔기의 혼합물에 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:91 또는 바람직하게는 서열번호:92의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:91 또는 바람직하게는 서열번호:92의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:440 또는 바람직하게는 서열번호:441의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:442 또는 바람직하게는 서열번호:443의 아미노산 서열, 또는 이와 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:444 또는 바람직하게는 서열번호:445의 아미노산 서열, 또는 이와 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:446 또는 바람직하게는 서열번호:447의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:107, 서열번호:127, 서열번호:147, 서열번호:167, 서열번호:187, 서열번호:207, 서열번호:227, 서열번호:247 또는 서열번호:267의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:108, 서열번호:128, 서열번호:148, 서열번호:168, 서열번호:188, 서열번호:208, 서열번호:228, 서열번호:248 또는 서열번호:268의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 일부 구현예에서, VH CDR1은 서열번호:440 (S D X3 A W N)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이러한 구현예에서 X3은 임의의 아미노산일 수 있다. 바람직하게는 X3 잔기는 F 또는 Y이다. 따라서, 바람직한 VH CDR1은 서열번호:441의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구체예의 바람직한 VH CDR1 서열은 서열번호: 103, 123, 143, 163, 183, 203, 223, 243 또는 263을 갖거나 그를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, VH CDR2는 서열번호:442 (X1 I T Y S X6 X7 T N X10 N P S L X15 S)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이들 구현예에서, X1, X6, X7, X10 및 X15는 임의의 아미노산일 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X1은 Y 또는 F이고; X6은 G 또는 D이고; X7은 Y 또는 H 또는 N이고; X10은 Y 또는 F이고; X15는 K 또는 I 또는 R이다. 따라서, 바람직한 VH CDR2는 서열번호:443의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구현예의 바람직한 VH CDR2 서열은 서열번호: 104, 124, 144, 164, 184, 204, 224, 244 또는 264를 갖거나 그를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, VH CDR3은 서열번호:444 (S X2 X3 X4 F D Y)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이러한 구현예에서 X2, X3 및 X4는 임의의 아미노산일 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X2는 T 또는 G이고; X3은 T 또는 A 또는 N이고; X4는 Y 또는 F이다. 따라서, 바람직한 VH CDR3은 서열번호:445의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구체예의 바람직한 VH CDR3 서열은 서열번호: 105, 125, 145, 165, 185, 205, 225, 245 또는 265를 갖거나 그를 포함한다.
본 발명의 일부 구현예에서, VL CDR1은 서열번호:446 (R S S Q X5 X6 X7 H S D G N T Y L E)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이러한 구현예에서 X5, X6 및 X7은 임의의 아미노산일 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X5는 S 또는 T이고; X6은 I 또는 V이고; X7은 L 또는 V 또는 I이다. 따라서, 바람직한 VL CDR1은 서열번호:447의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구현예의 바람직한 VL CDR1 서열은 서열번호:106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246 또는 266의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 W에서 1-45로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00001
Figure pct00002
표 W에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:440으로 제시된 공통 서열은 서열번호:441로 제시된 서열이다. 표 W에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:442로 제시된 공통 서열은 서열번호:443으로 제시된 서열이다. 표 W에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:444로 제시된 공통 서열은 서열번호:445로 제시된 서열이다. 표 W에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:446으로 제시된 공통 서열은 서열번호:447로 제시된 서열이다. 표 W에 제시된 본 발명의 일부 구현예에서, 37-45행에 제시된 CDR 서열의 조합이 바람직하다. 일부 구현예에서, 표 W에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:440 또는 바람직하게는 서열번호:441의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1, 서열번호:442 또는 바람직하게는 서열번호:443의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:444 또는 바람직하게는 서열번호:445의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하고/거나, (바람직하게는 "하고"), 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:446 또는 바람직하게는 서열번호:447의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 서열번호:107의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:108의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:127의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:128의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:147의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:167의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:168의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:187의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:188의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:207의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:208의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:227의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:228의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:247의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:248의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하거나, 또는 경쇄 가변 영역은 서열번호:267의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:268의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 이 단락에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:103, 서열번호:123, 서열번호:143, 서열번호:163, 서열번호:183, 서열번호:203, 서열번호:223, 서열번호:243, 서열번호:263, 서열번호:283, 서열번호:303, 서열번호:323, 서열번호:363, 서열번호:383, 서열번호:403, 서열번호:41, 서열번호:59 또는 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호: 104, 서열번호:124, 서열번호:144, 서열번호:164, 서열번호:184, 서열번호:204, 서열번호:224, 서열번호:244, 서열번호:264, 서열번호:284, 서열번호:304, 서열번호:324, 서열번호:364, 서열번호:384, 서열번호:404, 서열번호:42, 서열번호:60 또는 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호: 105, 서열번호:125, 서열번호:145, 서열번호:165, 서열번호:185, 서열번호:205, 서열번호:225, 서열번호:245, 서열번호:265, 서열번호:285, 서열번호:305, 서열번호:325, 서열번호:365, 서열번호:385, 서열번호:405, 서열번호:43, 서열번호:61 또는 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:448 또는 바람직하게는 서열번호:449의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:107, 서열번호:127, 서열번호:147, 서열번호:167, 서열번호:187, 서열번호:207, 서열번호:227, 서열번호:247, 서열번호:267, 서열번호:287, 서열번호:307, 서열번호:327, 서열번호:367, 서열번호:387, 서열번호:407, 서열번호:45, 서열번호:63 또는 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:108, 서열번호:128, 서열번호:148, 서열번호:168, 서열번호:188, 서열번호:208, 서열번호:228, 서열번호:248 또는 서열번호:268, 서열번호:288, 308, 서열번호:328, 서열번호:368, 서열번호:388, 서열번호:408, 서열번호:46, 서열번호:64 또는 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 일부 구현예에서, VL CDR1은 서열번호:448 (X1 S S Q X5 X6 X7 X8 S X10 X11 X12 X13 X14 X15 L X17)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이들 구현예에서 X1, X5, X6, X7, X8, X10, X11, X13, X14, X15 및 X17은 임의의 아미노산일 수 있고, X12는 임의의 아미노산일 수 있거나 아미노산이 아닐 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X1은 R 또는 K이고; X5는 S 또는 T이고; X6은 L 또는 V 또는 I이고; X7은 L 또는 V 또는 I이고; X8은 H 또는 D 또는 Y이고; X10은 S 또는 A 또는 D이고; X11은 G 또는 N이고; X13은 K 또는 N이고; X14는 T 또는 N이고; X15는 Y 또는 C이고; X17은 A 또는 N 또는 E이고; X12는 Q이거나 아미노산이 아니다. 따라서, 바람직한 VL CDR1은 서열번호:449의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구현예의 바람직한 VL CDR1 서열은 서열번호:106, 126, 146, 166, 186, 206, 226, 246, 266, 286, 306, 326, 366, 386, 406, 44, 62 또는 80의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 Y에서 1-18로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00003
표 Y에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:448로 제시된 공통 서열은 서열번호:449로 제시된 서열이다. 일부 구현예에서, 표 Y에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:448 또는 바람직하게는 서열번호:449의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 Y의 행 번호 1-18에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함한다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:448 또는 바람직하게는 서열번호:449의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR1을 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR2와 VL CDR3의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 Y의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41, 서열번호:59, 서열번호:103, 서열번호:123, 서열번호:143, 서열번호:163, 서열번호:183, 서열번호:203, 서열번호:223, 서열번호:243, 서열번호:263, 서열번호:283, 서열번호:303, 또는 서열번호:403의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42, 서열번호:60, 서열번호: 104, 서열번호:124, 서열번호:144, 서열번호:164, 서열번호:184, 서열번호:204, 서열번호:224, 서열번호:244, 서열번호:264, 서열번호:284, 서열번호:304, 또는 서열번호:404의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43, 서열번호:61, 서열번호: 105, 서열번호:125, 서열번호:145, 서열번호:165, 서열번호:185, 서열번호:205, 서열번호:225, 서열번호:245, 서열번호:265, 서열번호:285, 서열번호:305, 또는 서열번호:405의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44, 서열번호:62, 서열번호:106, 서열번호:126, 서열번호:146, 서열번호:166, 서열번호:186, 서열번호:206, 서열번호:226, 서열번호:246, 서열번호:266, 서열번호:286, 서열번호:306, 또는 서열번호:406의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR1,
(e) 서열번호:45, 서열번호:63, 서열번호:107, 서열번호:127, 서열번호:147, 서열번호:167, 서열번호:187, 서열번호:207, 서열번호:227, 서열번호:247, 서열번호:267, 서열번호:287, 서열번호:307, 또는 서열번호:407의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:450 또는 바람직하게는 서열번호: 451의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 일부 구현예에서, VL CDR3은 서열번호:450 (X1 Q G X4 H X6 P X8 T)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이들 구현예에서, X1, X4 및 X6은 임의의 아미노산일 수 있고, X8은 임의의 아미노산일 수 있거나 아미노산이 아닐 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X1은 W 또는 F 또는 S이고; X4는 T 또는 S이고; X6은 F 또는 V이고; X8은 P 또는 Y이거나 아미노산이 아니다. 따라서, 바람직한 VL CDR3은 서열번호:451의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구체예의 바람직한 VL CDR3 서열은 서열번호: 서열번호:46, 서열번호:64, 서열번호:108, 서열번호:128, 서열번호:148, 서열번호:168, 서열번호:188, 서열번호:208, 서열번호:228, 서열번호:248, 서열번호:268, 서열번호:288, 서열번호:308, 또는 서열번호:408을 갖거나 그를 포함한다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 AA에서 1-14로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00004
표 AA에 제시된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:450로 제시된 공통 서열은 서열번호:451로 제시된 서열이다. 일부 구현예에서, 표 AA에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:450 또는 바람직하게는 서열번호:451의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1 및 VL CDR2를 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 AA의 행 번호 1-14에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이와 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:450 또는 바람직하게는 서열번호:451의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR3을 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1와 VL CDR2의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR1, VL CDR2, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 AA의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77, 서열번호:363, 또는 서열번호:383의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42, 서열번호:78, 서열번호:364, 또는 서열번호:384의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79, 서열번호:365, 또는 385의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80, 서열번호:366, 서열번호:386의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR1,
(e) 서열번호:81, 서열번호:367, 서열번호:387의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:452 또는 바람직하게는 서열번호: 439의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 일부 구현예에서, VL CDR3은 서열번호:452 (Q Q Y Y X5 Y P X8 X9)의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 이들 실시형태에서, X5 및 X8은 임의의 아미노산일 수 있고, X9는 임의의 아미노산일 수 있거나 아미노산이 아닐 수 있다. 바람직하게는 이들 X 잔기 중 하나 이상, 가장 바람직하게는 모두는 하기 군으로부터 선택된다: X5는 Y 또는 S이고; X8은 P 또는 T이고; X9는 T이거나 아미노산이 아니다. 따라서, 바람직한 VL CDR3은 서열번호:439의 아미노산 서열을 갖거나 그를 포함한다. 예를 들어, 이 구체예의 바람직한 VL CDR3 서열은 서열번호: 82, 서열번호:368, 또는 서열번호:388을 갖거나 그를 포함한다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 CC에서 1-3로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00005
표 CC에 기재된 본 발명의 구현예에서, 바람직하게는 서열번호:452로 제시된 공통 서열은 서열번호:439로 제시된 서열이다. 일부 구현예에서, 표 CC에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:452 또는 바람직하게는 서열번호:439의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1 및 VL CDR2를 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 CC의 행 번호 1-3에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이와 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:452 또는 바람직하게는 서열번호:439의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR3을 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1와 VL CDR2의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR1, VL CDR2, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 CC의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:103, 서열번호:123, 서열번호:143, 서열번호:163, 서열번호:183, 서열번호:203, 서열번호:223, 서열번호:243, 서열번호:263, 또는 서열번호:303의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호: 104, 서열번호:124, 서열번호:144, 서열번호:164, 서열번호:184, 서열번호:204, 서열번호:224, 서열번호:244, 서열번호:264, 서열번호:304의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호: 105, 서열번호:125, 서열번호:145, 서열번호:165, 서열번호:185, 서열번호:205, 서열번호:225, 서열번호:245, 서열번호:265, 또는 서열번호:305의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:106, 서열번호:126, 서열번호:146, 서열번호:166, 서열번호:186, 서열번호:206, 서열번호:226, 서열번호:246, 서열번호:266, 서열번호:306의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR1,
(e) 서열번호:107의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:108, 서열번호:128, 서열번호:148, 서열번호:168, 서열번호:188, 서열번호:208, 서열번호:228, 서열번호:248, 서열번호:268, 서열번호:308의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 DD에서 1-10으로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00006
일부 구현예에서, 표 DD에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:107의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1 및 VL CDR3을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 DD의 행 번호 1-10에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이와 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:107의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1과 VL CDR3의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR1, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 DD의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77, 서열번호:323, 서열번호:363, 또는 서열번호:383의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호: 78, 서열번호:324, 서열번호:364, 또는 서열번호:384의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호: 79, 서열번호:325, 서열번호:365, 또는 서열번호:385의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80, 서열번호:326, 서열번호:366, 또는 서열번호:386의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82, 서열번호:328, 서열번호:368, 또는 서열번호:388의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 EE에서 1-4으로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00007
일부 구현예에서, 표 EE에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:81의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1 및 VL CDR3을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 EE의 행 번호 1-4에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이와 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:81의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1과 VL CDR3의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR1, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 EE의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41, 서열번호:59, 서열번호:283, 또는 서열번호:403의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호: 42, 서열번호:60, 서열번호:284, 또는 서열번호:404의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호: 43, 서열번호:61, 서열번호:285, 또는 서열번호:405의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44, 서열번호:62, 서열번호:286, 또는 서열번호:406의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46, 서열번호:64, 서열번호:288, 또는 서열번호:408의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
VH CDR 서열 및 VL CDR 서열의 특정한 바람직한 조합은 하기 표 FF에서 1-4으로 번호가 매겨진 각각의 행에 제시되어 있다:
Figure pct00008
일부 구현예에서, 표 FF에 인용된 특정 서열과 실질적으로 상동성인 서열이 특정 서열 자체 대신에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:45의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1 및 VL CDR3을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하며, 상기 CDR은 위의 표 FF의 행 번호 1-4에서 선택된 주어진 행에 제시된 아미노산 서열 (또는 이와 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는다. 다른 방식으로, 일부 이러한 구현예에서, 서열번호:45의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 갖는 것 외에, 바람직하게는 경쇄 가변 영역은 VL CDR1과 VL CDR3의 조합을 포함하고 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3의 조합을 포함하고, 상기 VL CDR1, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3는 상기 표 FF의 열로 조합하여 (즉, 함께) 기재된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:91 (또는 바람직하게는 서열번호:92)의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:440 (또는 바람직하게는 서열번호:441)의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1을 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR2 및 VH CDR3 (예를 들어, 이들의 조합)는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:442 (또는 바람직하게는 서열번호:443)의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1 및 VH CDR3 (예를 들어, 이들의 조합)는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:444 (또는 바람직하게는 서열번호:445)의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3를 포함한다. 이러한 일부 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1 및 VH CDR2 (예를 들어, 이들의 조합)는 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:446 (또는 바람직하게는 서열번호:447)의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:448 (또는 바람직하게는 서열번호:449)의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:450 (또는 바람직하게는 서열번호:451)의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR2, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:452 (또는 바람직하게는 서열번호:439)의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR2, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:107 또는 서열번호:81 또는 서열번호: 45의 아미노산 서열 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 일부 이러한 구현예에서, 바람직하게는 VL CDR1, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3(예를 들어, 이들의 조합)은 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:103의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:104의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:105의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:106의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:107의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:108의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:103의 VH CDR1, 서열번호:104의 VH CDR2, 및 서열번호:105의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:106의 VL CDR1, 서열번호:107의 VL CDR2, 및 서열번호:108의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:123의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:124의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:125의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:126의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:127의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:128의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:123의 VH CDR1, 서열번호:124의 VH CDR2, 및 서열번호:125의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:126의 VL CDR1, 서열번호:127의 VL CDR2, 및 서열번호:128의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:143의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:144의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:145의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:146의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:147의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:148의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:143의 VH CDR1, 서열번호:144의 VH CDR2, 및 서열번호:145의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:146의 VL CDR1, 서열번호:147의 VL CDR2, 및 서열번호:148의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:183의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:184의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:185의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:186의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:187의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:188의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:183의 VH CDR1, 서열번호:184의 VH CDR2, 및 서열번호:185의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:186의 VL CDR1, 서열번호:187의 VL CDR2, 및 서열번호:188의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:203의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:204의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:205의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:206의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:207의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:208의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:203의 VH CDR1, 서열번호:204의 VH CDR2, 및 서열번호:205의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:206의 VL CDR1, 서열번호:207의 VL CDR2, 및 서열번호:208의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:223의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:224의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:225의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:226의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:227의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:228의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:223의 VH CDR1, 서열번호:224의 VH CDR2, 및 서열번호:225의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:226의 VL CDR1, 서열번호:227의 VL CDR2, 및 서열번호:228의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:283의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:284의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:285의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:286의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:287의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호 288의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:283의 VH CDR1, 서열번호:284의 VH CDR2, 및 서열번호:285의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:286의 VL CDR1, 서열번호:287의 VL CDR2, 및 서열번호:288의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:303의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:304의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:305의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:306의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:307의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:308의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:303의 VH CDR1, 서열번호:304의 VH CDR2, 및 서열번호:305의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:306의 VL CDR1, 서열번호:307의 VL CDR2, 및 서열번호:308의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:323의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:324의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:325의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:326의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:327의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:328의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:323의 VH CDR1, 서열번호:324의 VH CDR2, 및 서열번호:325의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:326의 VL CDR1, 서열번호:327의 VL CDR2, 및 서열번호:328의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:343의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:344의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:345의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:346의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:347의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:348의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:343의 VH CDR1, 서열번호:344의 VH CDR2, 및 서열번호:345의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:346의 VL CDR1, 서열번호:347의 VL CDR2, 및 서열번호:348의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:363의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:364의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:365의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:366의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:367의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:368의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:363의 VH CDR1, 서열번호:364의 VH CDR2, 및 서열번호:365의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:366의 VL CDR1, 서열번호:367의 VL CDR2, 및 서열번호:368의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:423의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:424의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:425의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:426의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:427의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:428의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3. 실질적으로 상동성인 서열은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 바람직하게는, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열번호:423의 VH CDR1, 서열번호:424의 VH CDR2, 및 서열번호:425의 VH CDR3을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:426의 VL CDR1, 서열번호:427의 VL CDR2, 및 서열번호:428의 VL CDR3을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 특정 바람직한 구현예는 서열번호:39 또는 57 또는 75의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열번호: 40 또는 58 또는 76의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
추가의 바람직한 구현예는 서열번호:39 또는 57 또는 75의 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인 및 3개의 경쇄 CDR을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직하게는 상기 경쇄 CDR은 서열번호:44, 45 및 46; 또는 80, 81 및 82를 갖는다.
추가의 바람직한 구현예는 서열번호: 40 또는 58 또는 76의 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인 및 3개의 중쇄 CDR을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직하게는 상기 중쇄 CDR은 서열번호: 41, 42 및 43; 또는 77, 78 또는 79를 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:39의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열번호: 40의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:40의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:39의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:40의 아미노산 서열을 갖고/있거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:39의 아미노산 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:40의 아미노산 서열을 갖고 중쇄 가변 영역은 서열번호:39의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:57의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열번호:58의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:58의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:57의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:58의 아미노산 서열을 갖고/있거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:57의 아미노산 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:58의 아미노산 서열을 갖고 중쇄 가변 영역은 서열번호:57의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:75의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 서열번호:76의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:76의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:75의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% (예를 들어, 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98%) 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:76의 아미노산 서열을 갖고/있거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:75의 아미노산 서열을 갖는다.
바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:76의 아미노산 서열을 갖고 중쇄 가변 영역은 서열번호:75의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호: 101의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:102의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:102의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:101의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:121의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:122의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:122의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:121의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:141의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:142의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:142의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:141의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:161의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:162의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:162의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:161의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:181의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:182의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:182의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:181의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:201의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:202의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:202의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:201의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:221의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:222의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:222의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:221의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:241의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:242의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:242의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:241의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:261의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:262의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:262의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:261의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:281의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:282의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:282의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:281의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:301의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:302의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:302의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:301의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:321의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:322의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:322의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:321의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:341의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:342의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:342의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:341의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:361의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:362의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:362의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:361의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:381의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:382의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:382의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:381의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:401의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:402의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:402의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:401의 아미노산 서열을 갖는다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:421의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:422의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열 (예를 들어, 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성, 예를 들어 이에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 98% 서열 동일성을 갖는 서열)을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 항체를 제공하며, 경쇄 가변 영역은 서열번호:422의 아미노산 서열을 갖고/거나(바람직하게는 "갖고") 중쇄 가변 영역은 서열번호:421의 아미노산 서열을 갖는다.
다른 바람직한 구현예는 본원에 기재된 항체의 Ig(예를 들어, IgG) 형태, 예를 들어 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체 (또는 이에 기반한 항체)의 IgG 형태, 바람직하게는 전장 IgG 형태이다. 다른 바람직한 구체예는 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 및 R4P1-C1 항체 (또는 이에 기반한 항체)의 Ig (예를 들어, IgG) 형태, 바람직하게는 전장 IgG 형태이다. 일부 구현예에서, IgG는 IgG1 또는 IgG2(예를 들어, IgG2b)이다. 따라서, 일부 구현예에서 항체는 본원에 기재된 바와 같은 CDR 서열 및/또는 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 Ig 항체이다. 물론 전체 IgG 항체는 전형적으로 2개의 실질적으로 동일한 중쇄 및 2개의 실질적으로 동일한 경쇄를 포함할 것이라는 것이 이해된다.
일부 구현예에서, 본원의 표 A, B 및 C에 제시된 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체 서열에 기반한 항체가 바람직하다. 일부 구현예에서, 표 C에 제시된 OT-Ab1 항체 서열에 기반한 항체가 바람직하다.
일부 구현예에서, 본원의 표 A-C 및 E-U에 제시된 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 및 R4P1-C1 항체 서열에 기반한 항체가 바람직하다.
본 발명의 항체의 일부 예는 단클론성 항체 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1이며, 이들의 서열은 본원의 표 A, B 및 C에 제시되어 있다. 단클론성 항체 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1은 면역원으로서 OTV5 펩티드(서열번호:18)와 함께 하이브리도마 기술을 사용하여 확인되었다. CDR 도메인, VH 및 VL 도메인은 본원의 표 A, B 및 C에 제시되어 있다. 이들 CDR 도메인 또는 VH 및 VL 도메인 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 항체는 본 발명의 바람직한 양태이다.
본 발명의 항체의 다른 예는 단클론성 항체 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1 및 46D9-1이고, 이의 서열은 본원의 표 E 내지 M에 제시되어 있다. 단클론성 항체 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1 및 46D9-1은 면역원으로서 OTV3 펩티드(서열번호:16)와 함께 하이브리도마 기술을 사용하여 확인되었다. CDR 도메인, VH 및 VL 도메인은 본원의 표 E 내지 M에 제시되어 있다. 이들 CDR 도메인 또는 VH 및 VL 도메인 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 항체는 본 발명의 바람직한 양태이다.
본 발명의 항체의 다른 예는 단클론성 항체 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1이며, 이들의 서열은 본원의 표 N 내지 T에 제시되어 있다. 단클론성 항체 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1은 면역원으로서 OTV4 펩티드(서열번호:17)를 사용하여 하이브리도마 기술을 사용하여 확인되었다. CDR 도메인, VH 및 VL 도메인은 본원의 표 N 내지 T에 제시되어 있다. 이들 CDR 도메인 또는 VH 및 VL 도메인 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 항체는 본 발명의 바람직한 양태이다.
본 발명의 항체의 또 다른 예는 단클론성 항체 R4P1-C1이며, 이의 서열은 본원의 표 U에 제시되어 있다. 이 단클론성 항체는 본 명세서의 실시예 섹션에 기술된 바와 같이 파아지 디스플레이 기술을 사용하여 확인되었다. CDR 도메인, VH 및 VL 도메인은 본원의 표 U에 제시되어 있다. 이들 CDR 도메인 또는 VH 및 VL 도메인 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 항체는 본 발명의 바람직한 양태이다.
전형적으로 단클론성 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 및/또는 R4P1-C1 (또는 이에 기반한 항체, 예를 들어 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 항체)는 TRPV1 (서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630에 의해 정의된 TRPV1의 영역에서 TRPV1의 에피토프에 결합한다 (또는 그에 결합할 수 있고, 예를 들어 그에 특이적으로 결합할 수 있다). 일부 구현예에서, 결합된 전체 에피토프는 TRPV1의 이 영역 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 결합된 에피토프의 적어도 하나의 아미노산은 TRPV1의 이 영역 내에 존재한다.
실질적으로 상동성인 서열의 특정 예는 개시된 아미노산 서열에 대해 적어도 65% 동일성을 갖는 서열이다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 서열번호:40, 58, 76, 102, 122, 142, 162, 182, 202, 222, 242, 262, 282, 302, 322, 342, 362, 382, 402, 또는 422의 아미노산 서열에 대한 적어도 약 65%, 70% 또는 75%, 더 바람직하게는 적어도 약 80%, 더 바람직하게는 적어도 약 85%, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 또는 95% 및 가장 바람직하게는 적어도 약 97%, 98% 또는 99% 아미노산 서열 동일성의 아미노산 서열 영역을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역; 및/또는 서열번호:39, 57, 75, 101, 121, 141, 161, 181, 201, 221, 241, 261, 281, 301, 321, 341, 361, 381, 401, 또는 421의 아미노산 서열에 대한 적어도 약 65%, 70% 또는 75%, 더 바람직하게는 적어도 약 80%, 더 바람직하게는 적어도 약 85%, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 또는 95% 및 가장 바람직하게는 적어도 약 97%, 98% 또는 99% 아미노산 서열 동일성의 아미노산 서열 영역을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함한다.
실질적으로 상동성인 서열의 다른 바람직한 예는 개시된 아미노산 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
실질적으로 상동성인 서열의 다른 바람직한 예는 개시된 CDR 영역 중 하나 이상에 1, 2 또는 3개, 바람직하게는 1 또는 2개(더 바람직하게는 1개)의 변경된 아미노산을 함유하는 서열이다. 이러한 변경은 보존 또는 비보존 아미노산 치환, 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
일부 이러한 구현예에서, 바람직한 변경은 보존적 아미노산 치환이다.
모든 구현예에서, 실질적으로 상동성인 서열을 함유하는 항체는 TRPV1에 결합하는 능력을 보유한다. 바람직하게는, 실질적으로 상동성인 서열을 함유하는 항체는 OT-Ab3 및/또는 OT-Ab2 및/또는 OT-Ab1 항체와 관련하여 기재된 특성 중 하나 이상(바람직하게는 모두)을 보유한다. 바람직하게는, 실질적으로 상동성인 서열을 함유하는 항체는 32C8-1 및/또는 33C9-1 및/또는 34C11-1 및/또는 40B10-1 및/또는 41B5-1 및/또는 43D6-1 및/또는 44E8-1 및/또는 46B7-1 및/또는 46D9-1 및/또는 12C9-1 및/또는 12G6-1 및/또는 15D8-1 및/또는 16F1-1 및/또는 17E11-1 및/또는 17E9-1 및/또는 18E10-1 및/또는 R4P1-C1 항체과 관련하여 기재된 특성 중 하나 이상(바람직하게는 모두)을 보유한다.
본 발명에 따른 실질적으로 상동성인 아미노산 서열의 추가 예는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
본 발명의 항체의 CDR은 바람직하게는 자연 발생 항체 및/또는 효과적인 조작된 항체에서 발견되는 것과 같은 적절한 프레임워크 영역에 의해 분리된다. 따라서, 본 발명의 VH, VL 및 개별 CDR 서열은 바람직하게는 항원 결합을 가능하게 하기 위해 적절한 프레임워크 또는 스캐폴드 내에 제공되거나 통합된다. 이러한 프레임워크 서열 또는 영역은 적절한 스캐폴드를 형성하기에 적절할 경우 자연 발생 프레임워크 영역, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 해당할 수 있거나, 예를 들어 다양한 자연 발생 프레임워크 영역을 비교하여 확인된 공통 프레임워크 영역에 해당할 수 있다. 대안적으로, 비항체 스캐폴드 또는 프레임워크, 예를 들어 T 세포 수용체 프레임워크를 사용할 수 있다.
프레임워크 영역에 사용될 수 있는 적절한 서열은 당업계에 잘 알려져 있고 문서화되어 있으며 이들 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 프레임워크 영역에 대한 바람직한 서열은 본 발명의 VH 및/또는 VL 도메인을 구성하는 프레임워크 영역 중 하나 이상, 즉 OT-Ab3, OT-Ab2, 또는 OT-Ab1 항체의프레임워크 영역 중 하나 이상, 또는 본원의 표 A 내지 C 및 E 내지 U에 개시된 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1, 또는 R4P1-C1 항체의 프레임워크 영역 중 하나 이상, 또는 이에 실질적으로 상동성인 프레임워크 영역, 및 특히 항원 특이성의 유지를 허용하는 프레임워크 영역, 예를 들어 항체의 실질적으로 동일하거나 동일한 3D 구조를 초래하는 프레임워크 영역이다.
특정 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:51, 52, 53 및 54) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:47, 48, 49 및 50) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:69, 70, 71 및 72) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:65, 66, 67 및 68) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:87, 88, 89 및 90) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:83, 84, 85 및 86) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:113, 114, 115 및 116) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:109, 110, 111 및 112) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:133, 134, 135 및 136) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:129, 130, 131 및 132) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:153, 154, 155 및 156) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:149, 150, 151 및 152) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:173, 174, 175 및 176) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:169, 170, 171 및 172) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:193, 194, 195 및 196) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:189, 190, 191 및 192) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:213, 214, 215 및 216) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:209, 210, 211 및 212) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:233, 234, 235 및 236) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:229, 230, 231 및 232) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:253, 254, 255 및 256) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:249, 250, 251 및 252) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:273, 274, 275 및 276) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:269, 270, 271 및 272) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:293, 294, 295 및 296) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:289, 290, 291 및 292) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:313, 314, 315 및 315) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:309, 310, 311 및 312) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:333, 334, 335 및 336) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:329, 330, 331 및 332) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:353, 354, 355 및 356) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:349, 350, 351 및 352) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:373, 374, 375 및 376) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:369, 370, 371 및 372) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:393, 394, 395 및 396) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:389, 390, 391 및 392) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:413, 414, 415 및 416) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:409, 410, 411 및 412) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
다른 바람직한 구현예에서, 가변 경쇄 (서열번호:433, 434, 435 및 436) 및/또는 가변 중쇄 (서열번호:429, 430, 431 및 432) 프레임워크 영역 (FR) 중 모두 4개 (적절한 경우), 또는 이에 실질적으로 상동성인 FR 영역은 본 발명의 항체에서 발견된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인은 (예를 들어, VH 또는 VL 도메인에 대해 N-말단에 바로 위치하는) 그의 N-말단에 신호 펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 그러나, 이러한 신호 펩티드는 전형적으로 절단되기 때문에 전형적으로 항체 자체에 존재하지 않는다(예를 들어, 성숙한 항체 또는 단리된 항체 생성물에는 존재하지 않음).
일부 구현예에서, 서열번호:39 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:93의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:40 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:94의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:57 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:95의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:58 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:96의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:75 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:97의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:76 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:98의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:101 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:117의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:102 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:118의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:121 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:137의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:122 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:138의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:141 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:157의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:142 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:158의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:161 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:177의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:162 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:178의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:181 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:197의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:182 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:198의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:201 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:217의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:202 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:218의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:221 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:237의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:222 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:238의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:241 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:257의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:242 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:258의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:261 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:277의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:262 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:278의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:281 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:297의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:282 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:298의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:301 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:317의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:302 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:318의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:321 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:337의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:322 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:338의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:341 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:357의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:342 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:358의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:361 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:377의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:362 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:378의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:381 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:397의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:382 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:398의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:401 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:417의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:402 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:418의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 서열번호:421 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)을 포함하는 VH 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:437의 신호 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 서열번호:422 (또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)를 포함하는 VL 도메인은 그의 N-말단에 서열번호:438의 신호 펩티드를 추가로 포함한다.
상기에서 명시된 바와 같이, 본 발명의 이러한 양태에서, 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 (예를 들어, 항체는 없는 대조군과 비교하거나 TRPV1에 결합하지 않는 항체는 있는 대조군과 비교하여) 임의의 측정가능하거나 유의한 억제, 보다 바람직하게는 통계적으로 유의한 억제이다.
일부 구현예에서, 대조군 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않거나 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않는) 대조군 항체)으로 관찰된 (또는 그에 의해 야기되거나 또는 유발된) TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제의 수준 (또는 억제의 양)은 제로 억제 수준 (또는 제로 억제 값 또는 0% 억제 수준 또는 값)을 나타내거나 (또는 그로 설정된다). 따라서, 일부 구현예에서, 본원의 다른 곳에서 논의된 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율 %는 대조군 항체 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않는 대조군 항체)로 관찰되거나 (또는 그에 의해 야기되거나 또는 유발된) 억제와 비교된다 (또는 그에 대한 것이다).
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 바람직하게는 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%의 억제율이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 최대 5%, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80%, 최대 85%, 최대 90%, 최대 95% 또는 최대 100%의 억제율이다.
따라서, 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 5% 내지 100%, 10% 내지 100%, 15% 내지 100%, 20% 내지 100%, 25% 내지 100%, 30% 내지 100%, 35% 내지 100%, 40% 내지 100%, 45% 내지 100%, 50% 내지 100%, 55% 내지 100%, 60% 내지 100%, 65% 내지 100%, 70% 내지 100%, 75% 내지 100%, 80% 내지 100%, 85% 내지 100%, 90% 내지 100% 또는 95% 내지 100%의 억제율이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 5% 내지 75%, 10% 내지 75%, 15% 내지 75%, 20% 내지 75%, 25% 내지 75%, 30% 내지 75%, 35% 내지 75%, 40% 내지 75%, 45% 내지 75%, 50% 내지 75%, 55% 내지 75%, 60% 내지 75%, 65% 내지 75% 또는 70% 내지 75%의 억제율이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 5% 내지 50%, 10% 내지 50%, 15% 내지 50%, 20% 내지 50%, 25% 내지 50%, 30% 내지 50%, 35% 내지 50%, 40% 내지 50% 또는 45% 내지 50%의 억제율이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 5% 내지 25%, 10% 내지 25%, 15% 내지 25% 또는 20% 내지 25%의 억제율이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제율은 적어도 20%, 또는 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 100%의 억제율이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 ≤5μM, ≤1μM, ≤900nM, ≤800nM, ≤700nM, ≤600nM, ≤500nM, ≤400nM, ≤300nM, ≤200nM, ≤100nM, ≤75nM, ≤50nM, ≤25nM, ≤10nM, ≤5nM, ≤2nM, ≤1nM, ≤500pM, ≤400pM, ≤300pM, ≤200pM, ≤100pM, ≤50pM, ≤25pM, ≤10pM, ≤5pM, ≤2pM 또는 ≤1pM의 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 억제와 관련된 IC50을 갖는다. 바람직하게는, IC50은 ≤1μM, 예를 들어 ≤750nM, ≤500nM, ≤400nM, ≤300nM, ≤200nM, ≤100nM, ≤75nM, ≤50nM, ≤25nM, ≤10nM 또는 ≤5nM이다. 일부 구현예에서, IC50 값은 1pM 내지 5μM, 예를 들어 1pM-1μM, 1pM-500nM, 1pM-100nM, 1pM-50nM, 500pM-10μM, 500pM-1μM, 500pM-500nM, 500pM-100nM, 500pM-50nM, 1nM 내지 10μM, 1nM 내지 1μM, 1nM 내지 500nM, 1nM 내지 100nM, 1nM 내지 50nM, 10nM 내지 10μM, 10nM 내지 1μM, 10nM 내지 500nM, 10nM 내지 100nM, 10nM 내지 50nM, 100nM 내지 10μM, 100nM 내지 1μM, 또는 100nM 내지 500nM의 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, IC50 값은 최대 5μM, 또는 최대 1μM, 또는 최대 900nM, 또는 최대 800nM, 또는 최대 700nM, 또는 최대 600nM, 또는 최대 500nM, 또는 최대 400nM, 또는 최대 300nM, 또는 최대 200nM, 또는 최대 100nM, 또는 최대 50nM 또는 최대 10nM일 수 있다. IC50 값은 연구 중인 생물학적 과정에 대한 물질의 최대 억제 농도의 절반을 나타내며, 본 발명의 맥락에서 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 억제를 위한 항체의 최대 억제 농도의 절반을 나타낸다. 본 발명의 맥락에서 IC50 값은 대안적으로 캡사이신 유도 세포 TRPV1-매개 Ca2 + 유입의 억제를 위한 항체의 최대 억제 농도의 절반으로 간주될 수 있다. IC50 값은 임의의 적절한 수단에 의해 계산될 수 있다 (그리고 임의의 적절한 테스트, 방법 또는 검정, 예를 들어 본원에 기재된 방법을 기반으로 함). 예를 들어, IC50 값은 FLIPR 방법의 결과를 기반으로 설정 (또는 계산)될 수 있다. 특히 바람직한 FLIPR 방법은 본원의 실시예 섹션에 기재되어 있다.
상기에서 명시된 바와 같이, 본 발명의 이러한 양태에서, 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체에 의한 TRPV1 (존재하는 경우)의 열 유도 활성화의 억제는 대조군 (예를 들어, TRVP1에 결합하지 않는 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않은) 대조군 항체)에 의해 관찰되는 (또는 이에 의해 유발되거나 이에 의해 유도되는) TRTV1의 열 의해 유도된 활성화 억제와 실질적으로 동일하다 (또는 이와 유의하게 상이하거나 이와 유사하거나 이에 필적하지 않는다). 일부 구현예에서, 대조군 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않거나 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않는) 대조군 항체)으로 관찰된 (또는 그에 의해 야기되거나 또는 유발된) TRPV1의 열 유도 활성화의 억제의 수준 (또는 억제의 양)은 제로 억제 수준 (또는 제로 억제 값 또는 0% 억제 수준 또는 값)을 나타내거나 (또는 그로 설정된다). 따라서, 일부 구현예에서, 본원의 다른 곳에서 논의된 TRPV1의 열 유도 활성화의 억제율 %는 대조군 항체 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않는 대조군 항체)로 관찰되거나 (또는 그에 의해 야기되거나 또는 유발된) 억제와 비교된다 (또는 그에 대한 것이다).
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화를 25% 이하까지, 또는 20% 이하까지, 또는 15% 이하까지, 바람직하게는 10% 이하까지, 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지, 또는 1% 이하까지 또는 0%까지 억제한다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화를 0% 내지 25%, 0% 내지 20%, 0% 내지 10%, 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 0%까지 억제한다.
일부 바람직한 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화의 측정가능한 억제를 유발하지 않거나(또는 유도하지 않거나), TRVP1의 열 유도 활성화를 유의하게 억제하지 않는다(바람직하게는 통계적으로 유의하게 억제하지 않는다).
일부 구현예에서, 항체가 마이크로몰 (μM), 나노몰 (nM) 또는 피코몰 (pM) 범위, 바람직하게는 나노몰 (nM) 또는 피코몰 (pM) 범위의 농도에서 사용될 때 상기 억제가 결정된 바와 같다. 따라서, 일부 구현예에서, 항체가 ≤10μM, ≤5μM, ≤1μM, ≤900nM, ≤800nM, ≤700nM, ≤600nM, ≤500nM, ≤400nM, ≤300nM, ≤200nM, ≤100nM, ≤75nM, ≤50nM, ≤25nM, ≤10nM, ≤5nM, ≤2nM, ≤1nM, ≤500pM, ≤400pM, ≤300pM, ≤200pM, ≤100pM, ≤50pM, ≤25pM, ≤10pM, ≤5pM, ≤2pM 또는 ≤1pM의 농도에서 사용될 때 상기 억제가 결정된 바와 같다. 따라서, 일부 구현예에서, 항체가 1pM 내지 ≤10μM, 예를 들어 1pM 내지 1 μM, 1pM 내지 500nM, 1pM 내지 100nM, 1pM 내지 50nM, 500pM 내지 10μM, 500pM 내지 1μM, 500pM 내지 500nM, 500pM 내지 100nM, 500pM 내지 50nM, 1nM 내지 10μM, 1nM 내지 1μM, 1nM 내지 500nM, 1nM 내지 100nM, 1nM 내지 50nM, 10nM 내지 10μM, 10nM 내지 1μM, 10nM 내지 500nM, 10nM 내지 100nM, 10nM 내지 50nM, 100nM 내지 10μM, 100nM 내지 1μM, 또는 100nM 내지 500nM의 농도에서 사용될 때 상기 억제가 결정된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항체가 최대 5μM, 또는 최대 1μM, 또는 최대 900nM, 또는 최대 800nM, 또는 최대 700nM, 또는 최대 600nM, 또는 최대 400nM, 또는 최대 300nM, 또는 최대 200nM, 또는 최대 100nM, 또는 최대 50nM 또는 최대 10nM의 농도에서 사용될 때 상기 억제가 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 항체가 다클론성 항체(예를 들어, 토끼 다클론성 항체)인 경우에 상기 억제(예를 들어, % 억제) 및 농도가 적용된다. 일부 구현예에서, 항체가 단클론성 항체(예를 들어, 마우스 단클론성 항체)인 경우 상기 억제(예를 들어, % 억제) 및 농도가 적용된다.
상기에서 명시된 바와 같이, 본 발명의 이러한 양태에서, 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다. 이는 주어진 항체가 TRPV1의 열 유도 활성화를 억제 (또는 억제할 수 있음)하는 것보다 더 큰 정도로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제 (또는 억제할 수 있음)한다는 것을 의미한다. 따라서, 주어진 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 X%까지 억제한다면, 그 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화를 <X%까지 억제할 것이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)보다 적어도 5% 더 높고, 그러나 전형적으로 적어도 10% 더 높고, 바람직하게는 적어도 20% 더 높고, 적어도 30% 더 높고, 적어도 40% 더 높고, 적어도 50% 더 높고, 적어도 60% 더 높고, 적어도 70% 더 높고, 적어도 80% 더 높고, 적어도 90% 또는 심지어 100% 더 높다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 20%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 40%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 60%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 80%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 40%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤25% 또는 ≤20% 또는 15% 또는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 60%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤25% 또는 ≤20% 또는 15% 또는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 적어도 80%이고 TRPV1의 열 유도 활성화의 % 억제 (또는 % 억제 값)는 ≤25% 또는 ≤20% 또는 15% 또는 ≤10% 또는 ≤5% 또는 0%이다.
일부 구현예에서, 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제의 수준 (또는 양)을 결정 (또는 정량화)하기 위한 테스트 (또는 검정) 및 TRPV1의 열 유도 활성화의 억제의 수준 (또는 양)을 결정하기 위한 테스트 (또는 검정)를 수행함으로써 결정된 바와 같은 TRVP1의 열 유도 활성화와는 대조적으로 TRTV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다. 적합한 검정은 본원에 다른 곳에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 항체는 항체가 상기 검정 둘 다에서 동일한 농도로 사용되는 경우 (즉, 동일한 농도의 항체가 TRPV1의 열 유도 활성화의 억제 수준을 결정하기 위한 테스트에서 사용되는 바와 같이, 동일한 항체의 농도가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제 수준을 결정하기 위한 테스트 내에서 사용됨) 결정된 바와 같은 TRPVl의 열 유도 활성화와는 대조적으로, TRVP1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다 (또는 억제할 수 있다).
일부 구현예에서, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도된 활성화의 억제 수준을 결정하기 위해 테스트에 사용되는 것보다 TRVP1 농도의 열-유도된 활성화를 억제하는 수준을 결정하기 위한 테스트에서 적어도 1.5 배, 적어도 2 배, 적어도 3 배, 적어도 4 배, 바람직하게는 적어도 5 배, (예를 들어, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 배 또는 2 내지 5, 3 내지 5, 또는 4 내지 5 배) 더 높은 농도로 사용될 때 결정되는 바와 같이 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로, 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (OTV4 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50%의 억제이다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45% 또는 최대 50%의 억제이다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 50nM 내지 1μM 또는 100nM 내지 1μM, 예를 들어 400nM 내지 500nM, 또는 약 500nM (예를 들어, 533nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%까지 억제되고, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 50nM 내지 1μM 또는 100nM 내지 10μM, 예를 들어 200nM 내지 3μM, 또는 약 300nM (예를 들어, 270nM) 또는 약 3μM (예를 들어, 2.7μM)의 농도로 사용되는 경우에 결정되는 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50%까지 억제하는 항체 농도보다 약 5배 더 높은 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 약 3μM (예를 들어, 2.7μM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 10%, 적어도 15%, 바람직하게는 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50% 억제는, 상기 항체가 약 500nM (예를 들어, 533nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:3 또는 서열번호:17의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하의 억제는, 상기 항체가 약 3μM (예를 들어, 2.7μM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 20% 억제는, 상기 항체가 약 500nM (예를 들어, 533nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (OTV5 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70% 또는 적어도 75%이다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70% 또는 최대 75%의 억제이다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 100pM 내지 100nM, 예를 들어 1nM 내지 20nM, 또는 약 10nM (예를 들어, 13.3nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 15% 이하까지, 바람직하게는 10% 이하까지, 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 15%, 바람직하게는 0% 내지 10%, 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 1nM 내지 100nM, 예를 들어 5nM 내지 75nM, 또는 약 5nM (예를 들어, 6.7nM) 또는 약 50nM (예를 들어, 67nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50%까지 억제하는 항체 농도보다 약 5배 더 높은 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 약 50nM (예를 들어, 67nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50% 억제는, 상기 항체가 약 10nM (예를 들어, 13.3nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 약 5nM (예를 들어, 6.7nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50% 억제는, 상기 항체가 약 1nM (예를 들어, 1.33nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:4 또는 서열번호:18의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하의 억제는, 상기 항체가 약 5nM (예를 들어, 6.7nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 10% 억제는, 상기 항체가 약 1nM (예를 들어, 1.33nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (OTV12 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35% 또는 적어도 40%의 억제이다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35% 또는 최대 40%의 억제이다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 10pM 내지 100nM, 예를 들어 100pM 내지 20nM, 또는 약 10nM (예를 들어, 13.3nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%까지 억제되고, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 100pM 내지 500nM, 예를 들어 500pM 내지 100nM, 또는 약 1nM (예를 들어, 0.67nM) 또는 약 50nM (예를 들어, 67nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50%까지 억제하는 항체 농도보다 약 5배 더 높은 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 바람직하게는 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 약 50nM (예를 들어, 67nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45% 또는 적어도 50% 억제는, 상기 항체가 약 10nM (예를 들어, 13.3nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:11 또는 서열번호:25의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 5% 이하의 억제는, 상기 항체가 약 50nM (예를 들어, 67nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 20% 억제는, 상기 항체가 약 10nM (예를 들어, 13.3nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 또는 적어도 80%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80% 또는 최대 90%의 억제이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는 상기 항체 (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, OT-Ab1에 기반한 항체의 경우 243nM 또는 예를 들어 OT-Ab2에 기반한 항체의 경우 166nM 또는 예를 들어 OT-Ab3에 기반한 항체의 경우 326nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 15% 이하까지, 바람직하게는 10% 이하까지, 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%이고, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들) (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 15%, 바람직하게는 0% 내지 10%, 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, OT-Ab1에 기반한 항체의 경우 243nM 또는 예를 들어 OT-Ab2에 기반한 항체의 경우 166nM 또는 예를 들어 OT-Ab3에 기반한 항체의 경우 326nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 25%, 바람직하게는 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 또는 적어도 80%까지 억제하는 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, OT-Ab1에 기반한 항체의 경우 243nM 또는 예를 들어 OT-Ab2에 기반한 항체의 경우 166nM 또는 예를 들어 OT-Ab3에 기반한 항체의 경우 326nM)의 농도로 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 25%, 바람직하게는 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 또는 적어도 80% 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, OT-Ab1에 기반한 항체의 경우 243nM 또는 예를 들어 OT-Ab2에 기반한 항체의 경우 166nM 또는 예를 들어 OT-Ab3에 기반한 항체의 경우 326nM)의 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 16F1-1, 15D8-1, 17E11-1 또는 17E9-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 또는 최대 75%의 억제이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 16F1-1, 15D8-1, 17E11-1 또는 17E9-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)가 50nM 내지 1μM 또는 100nM 내지 1μM, 예를 들어 50nM 내지 500nM 또는 100nM 내지 500nM (예를 들어, 16F1-1에 기반한 항체의 경우 253nM 또는 예를 들어 15D8-1에 기반한 항체의 경우 130nM 또는 예를 들어 17E11-1에 기반한 항체의 경우 110nM 또는 예를 들어 17E9-1에 기반한 항체의 경우 83nM)의 농도로 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 15% 이하까지, 바람직하게는 10% 이하까지, 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%이고, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들) (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 15%, 바람직하게는 0% 내지 10%, 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 200nM)의 농도로 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 25%, 바람직하게는 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75%까지 억제하는 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 바람직하게는 10% 이하 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 200nM) 의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 적어도 25%, 바람직하게는 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75% 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM 또는 100nM 내지 200nM (예를 들어, 15D8-1에 기반한 항체의 경우 130nM 또는 예를 들어 17E11-1에 기반한 항체의 경우 110nM) 의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 15% 이하까지, 바람직하게는 10% 이하까지, 5% 이하까지, 4% 이하까지, 3% 이하까지, 2% 이하까지 또는 1% 이하까지, 바람직하게는 0%이고, 바람직하게는 TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 측정 가능한 (또는 유의한) 억제가 없다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들) (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 15%, 바람직하게는 0% 내지 10%, 0% 내지 5%, 0% 내지 4%, 0% 내지 3%, 0% 내지 2%, 0% 내지 1% 또는 바람직하게는 0%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 300nM)의 농도로 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 46B7-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 25% 이하 또는 20% 이하까지이다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 46B7-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들) (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 억제는 0% 내지 25%, 0% 내지 20% 또는 0% 내지 15%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 46B7-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대한 TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 367nM)의 농도로 사용될 때 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에서 기재된 패치-클램프 방법에서 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, TRPV1의 열 유도 활성화의 전술한 억제(예를 들어, % 억제)는 본원의 다른 곳에서 기재된 바와 같이 결정된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1, 15D8-1, 46B7-1, 16F1-1 17E11-1 또는 17E9-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들) (예를 들어, 단클론성 항체 예컨대 마우스 단클론성 항체)는 ≤1μM, 바람직하게는 ≤750nM, 또는 ≤500nM의 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 억제와 관련된 IC50을 가질 수 있다. 일부 그러한 구현예에서, IC50 값은 10nM 내지 1μM, 예를 들어 50nM 내지 1μM, 또는 100nM 내지 1μM, 또는 200nM 내지 1μM, 또는 10nM 내지 750nM, 또는 50nM 내지 750nM 또는 100nM 내지 750nM, 또는 200nM 내지 750nM, 또는 10nM 내지 500nM, 또는 50nM 내지 500nM 또는 100nM 내지 500nM, 또는 200nM 내지 500nM의 범위일 수 있다. 일부 그러한 구현예에서, IC50 값은 최대 1μM, 예를 들어 최대 750nM, 또는 최대 500nM일 수 있다. IC50 값은 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 FLIPR 방법과 같은 적절한 검정 또는 테스트의 결과를 기반으로 설정 (또는 계산)할 수 있다. 특히 바람직한 FLIPR 방법은 본원의 실시예 섹션에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1, 15D8-1, 46B7-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 50%까지 억제하는 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1, 15D8-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 적어도 50%까지 억제하는 농도로 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1, 15D8-1, 46B7-1 또는 17E11-1 항체에 기반한 항체 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 이의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것들)에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 25% 이하, 20% 이하, 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 15D8-1 또는 17E11-1에 기반한 항체의 경우 200nM, 또는 예를 들어 41B5-1에 기반한 항체의 경우 300nM, 또는 예를 들어 46B7-1에 기반한 항체의 경우 367nM)의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 약 50% 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM 또는 100nM 내지 200nM (예를 들어, 41B5-1에 기반한 항체의 경우 170nM, 또는 예를 들어 15D8-1에 기반한 항체의 경우 70nM, 또는 예를 들어 46B7-1에 기반한 항체의 경우 200nM, 또는 예를 들어 17E11-1에 기반한 항체의 경우 230nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 41B5-1, 15D8-1, 17E11-1 항체에 기반한 항체에 대해, TRPV1의 열 유도 활성화의 15% 이하, 10% 이하, 5% 이하, 4% 이하, 3% 이하, 2% 이하 또는 1% 이하, 바람직하게는 0%, 바람직하게는 측정가능하지 않은 (또는 유의하지 않은) 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM (예를 들어, 15D8-1 또는 17E11-1에 기반한 항체의 경우 200nM, 또는 예를 들어 41B5-1에 기반한 항체의 경우 300nM) 의 농도에서 사용될 때 관찰되고, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 약 50% 억제는, 상기 항체가 100nM 내지 1μM, 예를 들어 100nM 내지 500nM 또는 100nM 내지 200nM (예를 들어, 41B5-1에 기반한 항체의 경우 170nM, 또는 예를 들어 15D8-1에 기반한 항체의 경우 70nM, 또는 예를 들어 17E11-1에 기반한 항체의 경우 230nM)의 농도에서 사용될 때 관찰된다.
일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20의 단리된 펩티드 (OTV7 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20% 또는 적어도 25%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 5%, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25% 또는 최대 30%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:6 또는 서열번호:20의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 1nM 내지 100nM (예를 들어, 40nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22의 단리된 펩티드 (OTV9 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20% 또는 적어도 25%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 5%, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25% 또는 최대 30%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:8 또는 서열번호:22의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 1nM 내지 100nM (예를 들어, 8nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26의 단리된 펩티드 (OTV13 펩티드) (또는 그에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 5%, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25% 또는 최대 30%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대해, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 최대 5%, 최대 10%, 최대 15%, 최대 20%, 최대 25%, 최대 30% 또는 최대 35%의 억제이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 서열번호:12 또는 서열번호:26의 단리된 펩티드 (또는 이에 실질적으로 상동성인 단리된 펩티드)에 결합하거나 또는 이러한 단리된 펩티드에 상응하는 (또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체에 대한 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 전술한 % 억제는, 상기 항체 (예를 들어, 다클론성 항체 예컨대 토끼 다클론성 항체)가 1nM 내지 100nM (예를 들어, 40nM)의 농도에서 사용될 때 결정된 바와 같다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 이러한 % 억제(예를 들어, % 억제)는 예를 들어 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같이 칼슘 영상화 방법에 의해 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화는 캡사이신이 10nM 내지 10μM, 예를 들어 100nM 내지 1μM의 농도(예를 들어, 100nM 또는 1μM의 농도)로 존재할 때 (또는 TRPV1에서 사용되거나 이와 접촉될 때) 유도된 TRPV1 활성화이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화는 캡사이신이 100nM에 존재할 때 유도된 TRPV1 활성화이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화는 캡사이신이 300nM에 존재할 때 유도된 TRPV1 활성화이다.
TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 임의의 적절한 방법에 의해 평가될 수 있으며 당업자는 적절한 방법에 익숙할 것이다.
일부 구현예에서, 패치-클램프 기술과 같은 전기생리학적 방법을 사용하여, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제를 평가할 수 있다 (또는 평가할 수 있음). 패치-클램프 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며 또한 본원에 기재되어 있다. 본 발명에 따르면 대조군 항체 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않거나 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않는) 대조군 항체)와 비교하여 본 발명의 항체에 의한 캡사이신 유도 전류의 감소 (또는 억제 또는 저하)는 전형적으로 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다는 것을 나타낸다.
일부 구현예에서, 패치-클램프 방법은 (예를 들어, 배쓰에서) TRPV1 발현 세포를 (예를 들어, 피펫을 이용하여) 클램핑하고, 전류 (또는 전류 신호)를 기록하는 단계를 포함한다. 전형적으로, 전류 (또는 전류 신호)는 캡사이신으로 자극된 (또는 인큐베이션된) 세포에서 그리고 캡사이신 및 본 발명의 항체로 자극된 세포 및 또한 바람직하게는 캡사이신 및 대조군 항체 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않거나 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않는) 대조군 항체)으로 자극된 (또는 인큐베이션된) 세포에서 (예를 들어, 병행 테스트에서) 측정된다. 캡사이신 유도 전류의 감소 (또는 억제 또는 저하)는, 예를 들어 대조군 항체와 비교하여, 전형적으로 본 발명의 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다는 것을 나타낸다.
일부 구현예에서, 패치 클램프 방법에서 전체 세포 기록은 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록을 위한 미세유체 장치를 사용하여 수행된다. 일부 구현예에서, 세포는 TRPV1을 발현하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포이다. 일부 구현예에서, 배쓰 및 피펫 용액은 각각 완충액 F 및 G(본원의 다른 곳에서 정의됨)를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포를 클램핑하고 (예를 들어, -60 mV에서), 전류 신호를 샘플링 주파수 (예컨대, 10 kHz)로 기록하고, 로우 패스 (low pass) 여과한다 (예를 들면, 2 kHz에서). 일부 구현예에서, 패치-클램프 기록은 디지털/아날로그 샘플링 및 획득 소프트웨어를 사용하여 획득된다. 바람직한 구현예에서, 전류 진폭은 세포를 본 발명의 항체 또는 대조군 항체의 존재 및 부재하에 캡사이신(예를 들어, 100nM 캡사이신)에 노출시킴으로써 측정된다. 바람직한 구현예에서, 세포는 ~20초 동안 완충액 F (또는 완충액 A) 100 nM 캡사이신, 이어서 ~60초 동안 완충액 F (또는 완충액 A), ~60초 동안 완충액 F (또는 완충액 A) 중 항체, 그 다음 ~20초 동안 완충액 F (또는 완충액 A) 중 항체와 함께 100 nM 캡사이신에 노출된다. 바람직한 구현예에서, 처리 동안 밀봉 저항이 크게 이동한 측정은 분석에서 제외되었다. 바람직한 구현예에서, 항체 + 캡사이신으로 자극하는 동안 피크의 기록된 진폭을 캡사이신으로 자극하는 동안 기록된 피크의 진폭으로 나눈다. 수득된 값에 100을 곱하여 항체 + 캡사이신 자극 동안 세포 반응을 대조군 반응(캡사이신, 즉 캡사이신 단독)의 백분율로서 수득할 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 자극 (활성화)의 % 억제는 (1-(항체+캡사이신으로 자극하는 동안 피크의 기록된 진폭을 캡사이신만을 사용한 자극 동안 피크의 기록된 진폭으로 나눈 것) x100)으로서 계산될 수 있다. 측정은 바람직하게는 적어도 2개의 상이한 세포 배양 접시로부터의 세포에 대해 수행된다. 특히 바람직한 패치-클램프 방법은 본원의 실시예 섹션에 설명되어 있다.
일부 구현예에서, 패치 클램프 방법은 캡사이신(예를 들어, 100nM 캡사이신 또는 300nM 캡사이신)을 사용하여 TRPV1 발현 세포를 4회 자극 (또는 활성화)하는 것을 포함한다. 일부 그와 같은 구현예에서, hTRPV1 발현 세포는 제3 활성화 (또는 자극) 전에 본 발명의 항체로 사전-처리되고, 항체는 제3 활성화(또는 자극)를 수행하는 동안 캡사이신과 함께 포함된다. 이러한 일부 구현예에서, 제1, 2 및 4 활성화(자극)는 캡사이신에만 해당된다. 항체의 존재 하에 제3 전류 피크의 진폭을 전류 피크 2 및 4의 진폭의 평균과 비교할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포를 캡사이신 단독으로 2회 처리하여 피크 1 및 2를 얻은 다음, 항체로 처리한 다음 캡사이신과 함께 항체로 처리하여 피크 3을 얻은 다음, 캡사이신 단독으로 처리하여 피크 4를 얻는다. 일부 구현예에서, 억제%는 (1-((피크 3)/((피크2+피크4)/2)))*100으로서 계산될 수 있다. 일부 다른 구현예에서, 세포를 먼저 캡사이신 단독으로 2회 처리하여 피크 1 및 2를 얻은 다음, 항체 또는 비히클, 그 다음 항체 또는 비히클을 캡사이신과 함께 처리하여 피크 3을 얻은 다음, 캡사이신 단독으로 처리하여 피크 4를 얻는다. 이러한 일부 구현예에서, 억제율(%)은 (1-((피크 3항체/피크 2항체)/(피크 3비히클/피크 2비히클)))*100으로 계산될 수 있다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제를 칼슘 영상화 방법을 사용하여 평가할 수 있다 (또는 평가할 수 있음). 캡사이신은 칼슘 흡수를 유도한다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제은 하기에 의해 평가될 수 있거나 (또는 평가될 수 있다): (i) TRPV1 발현 세포를 (예를 들어 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은) 칼슘 지시약으로 로딩하고, (ii) 상기 세포를 본 발명의 항체 (또는 대조군 항체 또는 비히클 단독 (즉, 항체 없음) 대조군)와 접촉 (또는 인큐베이션)시키고,
(iii) 상기 세포 (즉, (ii)에서의 본 발명의 항체 또는 대조군과 함께 인큐베이션된 세포)를 캡사이신 및 칼슘 (Ca2 +)과 접촉시키고 (또는 상기 세포를 노출시키고), 그리고 (iv) 칼슘 지표로부터의 신호 (예를 들어, 형광 신호)를 측정 (또는 결정)함으로써 (예를 들면, 대조군 항체 또는 비히클 단독 대조군과 비교하여), 캡사이신 유도 칼슘 유입 (또는 흡수)을 세포에 감소 (또는 저하 또는 억제)시키는 본 발명의 항체의 능력을 평가 (또는 측정 또는 측정)한다. 그러한 구현예의 바람직한 특징은 본 명세서의 다른 곳에서의 논의로부터 명백할 것이고, 이들은 이 단락에서 논의된 구현예에 준용하여 적용될 수 있다.
TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 억제를 평가하기 위한 일부 칼슘 영상 방법에서 칼슘 지표(예를 들어, Fluo-3 AM)가 사용된다. 일부 이러한 방법에서, hTRPV1을 발현하는 세포 (예를 들어 CHO 세포)를 칼슘 지시약과 함께 인큐베이션하여 세포를 예를 들어 37°C에서 30분 동안, 칼슘 지시 약(예를 들어, Fluo-3 AM, 예를 들어, 4.4μM)으로 "로딩"하고, 바람직하게는 이어서 세척한 다음 (칼슘 지시약은 세척 후 세포 내부에 남아 있음), 본 발명의 항체 또는 대조군 항체 (예를 들면, PBS 중에 용해됨)와 함께 또는 예를 들어 실온에서 1시간 동안 추가의 작용제 없이 인큐베이션한다. 대조군 항체는 전형적으로 TRPV1에 결합하지 않는 (또는 특이적으로 결합하지 않는) 항체이다. 전형적으로, 이어서, 세포를 캡사이신 (예를 들어, 1 μM) 및 Ca2 + (예를 들면, 150 μm)와 접촉시키고(예를 들어 캡사이신 및 칼슘을 세포를 덮는 항체 용액에 첨가함), 세포 내의 칼슘 함량을, 예를 들어 플레이트 판독기로 (칼슘 인디케이터의) 형광 강도를 측정함으로써 모니터링한다(또는 측정한다). 전형적으로, 캡사이신 및 칼슘과의 인큐베이션 후 (또는 동안) 관찰된 형광 강도 (여기서, 세포는 본 발명의 항체와 함께 사전 인큐베이션되었음)는, 캡사이신과 칼슘 (Ca2 +)과의 인큐베이션 후에 (또는 동안에) 관찰되는 형광 강도와 관련하여 정규화되고, 세포를 본 발명의 항체 또는 임의의 추가의 작용제와 사전 인큐베이션하지 않았다. 캡사이신 및 칼슘 (Ca2 +)과의 인큐베이션 전에 본 발명의 항체와의 인큐베이션이 없는 경우에 비해 (예를 들어, 캡사이신 및 칼슘 (Ca2 +)과의 인큐베이션 전에 대조군 항체와의 인큐베이션이 있을 때에 비해), 캡사이신 및 칼슘 (Ca2 +)과의 인큐베이션 전에 본 발명의 항체와의 인큐베이션에 의해 형광 강도가 감소 (또는 억제 또는 저하)되는 경우, 이는 전형적으로 본 발명의 항체가 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다는 것을 나타낸다. 특히 바람직한 칼슘 영상화 방법은 본원의 실시예 섹션에 설명되어 있다.
일부 구현예에서, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화 및 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제는 FLIPR(Fluorescence Imaging Plate Reader) 방법을 사용하여 평가될 수 있다 (또는 평가될 때와 같이).
특정 바람직한 FLIPR 방법(본원의 실시예 3에서 사용된 FLIPR 방법을 반영함)에서, TRPV1 발현 세포(예를 들어, TRPV1 발현 CHO 세포)는 흑색의 투명한 바닥 마이크로플레이트(예를 들어, 96-웰 마이크로플레이트)에서 배양된다. 그 다음 예를 들어 30 분 동안 예를 들어 실온에서 세포를 완충액, 예를 들어 HEPES 완충액 (140 nM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 1mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4) 중 칼슘 지시약 (예를 들어, 4μM Fluo-3 AM )으로 인큐베이팅함으로써 칼슘 지시약 (예를 들어, 그의 Fluo-3 AM, 예를 들어 4 μM)이 세포에 로딩된다. 그 다음 세포를 완충액(예를 들어, HEPES)으로 세척하여 세포외 칼슘 지시약(예를 들어, Fluo-3 AM)을 제거한다(칼슘 지시약은 세척 후 세포 내부에 남아 있음). 후속적으로, 완충액(예를 들어, HEPES와 같은 칼슘 함유 완충액)으로 희석된 본 발명의 항체를 웰에 첨가하고, 예를 들어 항체 함유 완충액 100㎕를 각 웰의 세포에 첨가한다(전형적으로 연속 희석액 완충액으로 희석된 항체(예를 들어, HEPES와 같은 칼슘 함유 완충액)는 웰에 추가된다, 즉 상이한 웰 내에 상이한 농도의 항체). 세포는 항체의 존재 하에 배양된다(예를 들어, 실온에서 4분 동안). 형광 측정은 전형적으로 마이크로플레이트 판독기로, 예를 들어 483nm(대역폭 14nm)에서 여기 및 530(대역폭 30nm)에서 방출로 수행된다. 기준선 형광 강도를 먼저 측정한 다음(즉, 후속적으로) HEPES와 같은 칼슘 함유 완충액(예를 들어, 완충액 100μl)에 고정된 양의 캡사이신을 각 웰에 첨가하고(연구 중인 세포 배치에 대한 캡사이신의 EC50 값을 나타내는 바와 같이, 이전에 설정된 캡사이신 농도를 제공하기 위한 것이며, 전형적으로 이러한 농도는 서브-마이크로몰 범위에 있으며, 예를 들어 이러한 농도는 더 낮은 nM 범위, 예를 들어 10nM에 있을 수 있다), 제2 형광 강도 측정은 설정된 시간(전형적으로 몇 분 이내, 예를 들어 1~5분 또는 1~10분 또는 1~20분) 후에 수행된다. (칼슘 지시약의) 형광 강도는 세포 내의 칼슘 양(따라서 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화)에 대한 보고 (또는 판독)를 제공한다. 이 FLIPR 분석은 캡사이신이 첨가될 때 완충액에 존재하는 칼슘(Ca2 +)에 의존하고(즉, 세포가 캡사이신에 노출될 때 완충액에 존재하는 칼슘에 의존) 임의의 적절한 칼슘 함유 완충액을 사용할 수 있는데(전문가 적절한 완충액에 익숙할 것이다), 예를 들어 위에서 언급한 HEPES 완충액은 충분한 칼슘을 제공한다. 본 발명의 항체는 세포(웰)에 첨가하기 위한 완충액(예를 들어, HEPES와 같은 칼슘 함유 완충액)으로 희석하기 전에(즉, 희석되기 전에) PBS(인산염 완충 식염수)에 있을 수 있다. EC50은 생물학적 과정, 이 경우 세포로의 TRPV1 매개 Ca2 + 진입 (또는 TRPV1 매개 Ca2 + 흡수)의 최대 반응의 절반을 제공하는 물질의 농도이다. 데이터는 캡사이신 첨가 후 세트 (또는 특정) 시간에서의 형광에서 캡사이신 첨가 전에 측정된 (기준) 형광을 뺀 형광으로 계산되는 형광 비율로 제시 (또는 획득 또는 결정)될 수 있다. 항체의 농도(즉, 테스트 중인 주어진 항체의 농도)가 증가함에 따라 형광 비율의 감소가 관찰 (또는 측정 또는 결정)되면(예를 들어, 항체 희석 시리즈에서 더 높은 (또는 증가된) 농도에서), 이는 전형적으로 본 발명의 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다는 것을 나타낸다. 시험된 항체에 대한 IC50 값을 계산할 수 있다(그리고 숙련된 사람은 이를 쉽게 수행할 수 있음). IC50 값은 연구 중인 생물학적 과정에 대한 물질의 최대 억제 농도의 절반이며, 이 경우 캡사이신은 세포 TRPV1 매개 Ca2 + 유입 (또는 흡수 또는 유입)을 유도한다. 특히 바람직한 FLIPR 방법은 여기의 실시예 섹션에 설명되어 있다.
상기에서 명시된 바와 같이, 특정 방법은 칼슘 지시약(예를 들어, Fluo3-AM)의 사용을 포함한다. 당업자는 그러한 지표에 익숙하다. 칼슘 지표는 특정 자극(예를 들어, 캡사이신 또는 열)에 노출되는 동안 (또는 이후에) 칼슘 이온(Ca2 +)의 세포 내 농도 (또는 양)가 증가하는지 여부 (또는 그 정도)를 시각화하는 데 편리하게 사용할 수 있다. 이러한 칼슘 지표는 (자극에 노출되기 전에) 세포에 로드될 수 있으며 Ca2 + 이온에 결합할 때(즉, Ca2 + 이온 함유 배지 또는 완충액에서 Ca2 + 이온이 세포로 유입될 때) 형광이 증가한다.
TRPV1의 열 유도 활성화는 전형적으로 ≥42℃에서 유도된 (또는 결정된 대로) TRPV1 활성화이다. 따라서, 일부 구현예에서, TRPV1의 열 유도 활성화는 42℃-45℃, 42℃-50℃, 42℃-60℃, 42℃-70℃, 42℃-80℃, 42℃-90℃ 또는 42℃-100℃에서 유도된 TRPV1 활성화이다. 바람직한 구현예에서, TRPV1의 열 유도 활성화는 42℃-45℃에서 유도된 (또는 결정된 바와 같은) TRPV1 활성화이다. 바람직한 구현예에서, TRPV1의 열 유도 활성화는 42℃에서 유도된 (또는 결정된 바와 같은) TRPV1 활성화이다. 또 다른 바람직한 구현예에서, TRPV1의 열 유도 활성화는 45℃에서 유도된 (또는 결정된 바와 같은) TRPV1 활성화이다.
TRPV1의 열 유도 활성화(및 TRPV1의 열 유도 활성화의 억제)는 임의의 적절한 방법에 의해 평가될 수 있으며 당업자는 적절한 방법에 익숙할 것이다. 열(예를 들어, ≥42℃, 바람직하게는 42℃)은 TRPV1 이온 채널의 개방을 유도하고 TRPV1 발현 세포로 칼슘 이온(Ca2 +)의 유입을 유도한다. 따라서 TRPV1의 열 유도 활성화(및 TRPV1의 열 유도 활성화의 억제)는 가열 동안 (또는 후) 세포 내 칼슘 이온(Ca2 +)의 농도 (또는 양)가 증가하는지 여부 (또는 그 정도)를 결정함으로써 평가할 수 있다. 칼슘 지시약(예를 들어, Fluo-3 또는 Fluo3-AM)은 가열 중 (또는 후에) 칼슘 이온(Ca2+)의 세포 내 농도 (또는 양) 증가 여부 (또는 정도)를 시각화하는 데 편리하게 사용할 수 있다. 그러한 칼슘 지시약은 세포에 로딩될 수 있고(열에 노출되기 전에) 이들의 형광은 Ca2 + 이온에 결합할 때(즉, Ca2 + 이온 함유 배지로부터 Ca2 + 이온이 세포로 유입될 때) 증가한다. 이것은 편리한 수단, 예를 들어 공초점 현미경으로 시각화할 수 있다. TRPV1 결합 항체가 TRPV1의 열 유도 활성화를 억제할 수 있는지 여부 (또는 그 정도)는 TRPV1 발현 세포를 상기 항체와 접촉시킴으로써(예를 들어, 미세유체 장치를 사용하여 항체를 세포에 전달함으로써, 예를 들어 본 문서의 예 섹션에 설명된 바와 같은 Bioopen) 및 TRPV1의 열 유도 활성화가 항체의 부재 하에 TRPV1의 열 유도 활성화와 비교하여 (예를 들어, TRPV1에 결합하지 않거나 (또는 그에 특이적으로 결합하지 않는) 대조군 항체의 존재 하에 관찰된 TRPV1의 열 유도 활성화와 비교하여) 억제 (또는 감소)되는지 여부 (또는 그 정도)를 결정함으로써 평가할 수 있다. 열(예를 들어, 42℃)은 적절한 수단, 예를 들어 레이저 가열 시스템 (예를 들어 본원의 실시예 섹션에 설명된 바와 같음)을 사용하여 제공될 수 있다. 항-TRPV1 항체의 존재 하에 TRPV1의 열 유도 활성화의 감소(예를 들어, 상당한 감소)는 항체가 TRPV1의 열 유도 활성화를 억제한다는 것을 나타낸다. 항-TRPV1 항체의 존재 하에 TRPV1의 열 유도 활성화의 감소의 부재 (또는 유의한 감소 없음)는 항체가 TRPV1의 열 유도 활성화를 억제하지 않음 (또는 유의하게 억제하지 않음)을 나타낸다. TRPV1의 열 유도 활성화(및 TRPV1의 열 유도 활성화 억제)를 평가하는 특히 바람직한 방법은 본원의 실시예 섹션에 설명되어 있다.
일부 구현예에서, TRPV1 발현 세포가 2개의 열 펄스를 받는 방법을 사용하여 TRPV1의 열 유도 활성화(및 그의 억제)를 평가할 수 있다 (또는 평가된 대로). 이러한 일부 구현예에서, 세포는 먼저 열로 펄스화되고, 이어서 냉각되고, 이어서 항체 및 열 펄스를 조합하여 투여 (또는 이와 접촉)한 후 냉각된다. TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 항체의 효과는 세포로의 열 유도 칼슘 이온 유입에 대한 항체의 효과를 결정함으로써 평가될 수 있다. 세포로의 칼슘 유입(피크 진폭)은 칼슘 지시약(예를 들어, Fluo-3)을 사용하여 측정할 수 있다. 제2(제2 열 펄스 또는 피크 2) 대 제1(제1 열 펄스 또는 피크 1) 피크 진폭의 비율은 항체와 비히클 모두에 대해 계산될 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 백분율은 항체에 대한 비율 대 비히클에 대한 비율을 비교함으로써 계산될 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 억제율(%)은 (1-((피크 2항체/피크 1항체)/(피크 2비히클/피크 1비히클)))*100일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 TRPV1의 NADA-유도 활성화를 억제할 수 있다 (또는 억제할 수 있다). NADA(N-아라키도노일 도파민)는 강력한 천연 TRPV1 작용제이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체에 의한 TRPV1의 NADA 유도 활성화 억제는 임의의 측정가능하거나 유의한 억제이다 (예를 들어, 항체는 없는 대조군과 비교하여 또는 TRPV1에 결합하지 않는 항체는 있는 대조군과 비교하여). 일부 구현예에서, TRPV1의 NADA 유도 활성화 억제의 양 (또는 수준)(예를 들어, % 억제)은 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제와 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, TRPV1의 NADA-유도 활성화는 NADA가 10nM 내지 10μM, 예를 들어 100nM 내지 1μM(예를 들어, 100nM 또는 1μM의 농도)의 농도로 존재할 때 (또는 TRPV1에서 사용되거나 이와 접촉될 때) 유도된 TRPV1 활성화이다. 일부 구현예에서, TRPV1의 NADA 유도 활성화는 NADA가 1μM로 존재할 때 유도된 TRPV1 활성화이다.
일부 구현예에서, TRPV1의 NADA-유도 활성화 (또는 그의 억제)는 패치-클램프 방법, 예를 들어 캡사이신 대신 NADA가 사용되는 본원의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 방법으로 결정된 바와 같다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체(바람직하게는 OT-Ab1)에 기반한 항체(예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 항체)의 경우,, TRPV1의 NADA-유도 활성화의 억제는 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40 % 또는 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75% 또는 적어도 80%이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체(바람직하게는 OT-Ab1)에 기반한 항체(예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 항체)의 경우, TRPV1의 NADA-유도 활성화의 억제는 최대 30%, 최대 35%, 최대 40%, 최대 45%, 최대 50%, 최대 55%, 최대 60%, 최대 65%, 최대 70%, 최대 75%, 최대 80% 또는 최대 90%의 억제이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체(바람직하게는 OT-Ab1)에 기반한 항체(예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 그의 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 항체)에 대한 상술한 TRPV1의 NADA-유도 활성화의 억제%는 상기 항체(예를 들어, 마우스 단클론성 항체와 같은 단클론성 항체)가 100nM 내지 1μM의 농도, 예를 들어 100nM 내지 500nM(예를 들어, OT-Ab1 기반 항체의 경우 243nM)에서 사용될 때 결정된 바와 같다.
대안적으로 볼 때, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 TRPV1의 열 유도 활성화보다 더 크게 억제할 수 있다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
대안적으로 볼 때, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 대조적으로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 선택적으로 억제한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
대안적으로 고려하면, 한 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화에 비해 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
대안적으로 고려하면, 한 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화보다 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
대안적으로 볼 때, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화를 유의하게 억제하지 않으면서 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하는 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합하는) 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화를 유의하게 억제하지 않는다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합)하는 항체, 예를 들어 단리된 항체(예를 들어, 단클론성 항체)를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 억제한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하는 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합하는) 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 본 발명의 단리된 에피토프 또는 접합체에 결합한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하는 (또는 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합하는) 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630, 아미노산 잔기 599-606, 아미노산 잔기 599-614, 아미노산 잔기 599-622, 아미노산 잔기 607-630, 아미노산 잔기 615-630, 아미노산 잔기 623-630, 아미노산 잔기 631-643, 아미노산 잔기 644-656, 또는 아미노산 잔기 610-620로 정의된 TRPV1의 영역에 있는 TRPV1의 에피토프에 결합하거나, 또는 TRPV1(서열번호: 1)의 아미노산 잔기 599-601 및 잔기 653-655에 의해 정의된 영역의 에피토프에서 TRPV1에 결합한다. 또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-656에 의해 정의된 TRPV1의 영역에 있는 TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
전체 출원에 걸쳐 사용된 바와 같이, 용어 "a" 및 "an"은 상한이 이후에 구체적으로 언급되는 경우를 제외하고 언급된 구성 요소 또는 단계의 "적어도 하나", "적어도 첫 번째", "하나 이상" 또는 "복수"를 의미한다는 의미에서 사용된다. 따라서, 본원에 사용된 "항체"는 "적어도 제1 항체"를 의미한다. 임의의 단일 제제의 양과 같이 조합의 작동 가능한 한계 및 매개변수는 본 개시내용에 비추어 당업자에게 공지될 것이다.
또한, 용어 "포함하다(comprise)", "포함하다(comprises)", "가지다(has)" 또는 "갖는(having)", 또는 기타 등가 용어가 본 명세서에서 사용되는 경우, 일부 보다 구체적인 구현예에서 이러한 용어는 용어 "~로 구성되는" 또는 "본질적으로 구성되는" 또는 기타 이에 상응하는 용어를 포함한다.
본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 항체 또는 그의 부분 또는 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자, 또는 그에 실질적으로 상동인 핵산 분자는 본 발명의 또 다른 양태를 형성한다.
바람직한 핵산 분자는 본 발명의 항체의 VH 영역을 인코딩하는 것들(예를 들어, 서열번호: 39 또는 57 또는 75, 예를 들어 각각 서열번호:15 또는 55 또는 73을 인코딩하는 것들)이다. 다른 바람직한 핵산 분자는 본 발명의 항체의 VL 영역을 인코딩하는 것들(예를 들어, 서열번호:40 또는 58 또는 76, 예컨대 각각 서열번호:29 또는 56 또는 74를 인코딩하는 것들)이다.
따라서, 바람직한 핵산 분자는 (바람직하게는 서열번호: 15 또는 55 또는 73에 의해 인코딩되는) 서열번호: 39 또는 57 또는 75의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (VH)을 인코딩하는 서열을 포함하고/거나 (바람직하게는 서열번호: 29 또는 56 또는 74에 의해 인코딩되는) 서열번호: 40 또는 58 또는 76의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (VL)을 인코딩하는 서열을 포함한다.
또한 하기 조합을 인코딩하는 핵산이 바람직하다: 서열번호: 39 및 40; 또는 서열번호: 57 및 58; 또는 서열번호 75 및 76. 하기 조합을 포함하는 핵산 분자가 또한 바람직하다: 서열번호: 15 및 29; 또는 서열번호: 55 및 56; 또는 서열번호: 73 및 74.
다른 바람직한 핵산 분자는 본 발명의 항체의 VH 영역을 인코딩하는 것들 (예를 들어, 각각 서열번호:101 또는 121 또는 141 또는 161 또는 181 또는 201 또는 221 또는 241 또는 261 또는 281 또는 301 또는 321 또는 341 또는 361 또는 381 또는 401 또는 421, 예컨대 서열번호:99 또는 119 또는 139 또는 159 또는 179 또는 199 또는 219 또는 239 또는 259 또는 279 또는 299 또는 319 또는 339 또는 359 또는 379 또는 399 또는 419을 인코딩하는 것들)이다. 다른 바람직한 핵산 분자는 본 발명의 항체의 VL 영역을 인코딩하는 것들 (예를 들어, 각각 서열번호:102 또는 122 또는 142 또는 162 또는 182 또는 202 또는 222 또는 242 또는 262 또는 282 또는 302 또는 322 또는 342 또는 362 또는 382 또는 402 또는 422, 예컨대 각각 서열번호:100 또는 120 또는 140 또는 160 또는 180 또는 200 또는 220 또는 240 또는 260 또는 280 또는 300 또는 320 또는 340 또는 360 또는 380 또는 400 또는 420를 인코딩하는 것들)이다.
따라서, 특정의 바람직한 핵산 분자는 (바람직하게는 서열번호: 99 또는 119 또는 139 또는 159 또는 179 또는 199 또는 219 또는 239 또는 259 또는 279 또는 299 또는 319 또는 339 또는 359 또는 379 또는 399 또는 419에 의해 인코딩되는) 서열번호: 101 또는 121 또는 141 또는 161 또는 181 또는 201 또는 221 또는 241 또는 261 또는 281 또는 301 또는 321 또는 341 또는 361 또는 381 또는 401 또는 421의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (VH)을 인코딩하는 서열을 포함하고/거나 (바람직하게는 서열번호: 100 또는 120 또는 140 또는 160 또는 180 또는 200 또는 220 또는 240 또는 260 또는 280 또는 300 또는 320 또는 340 또는 360 또는 380 또는 400 또는 420에 의해 인코딩되는) 서열번호: 102 또는 122 또는 142 또는 162 또는 182 또는 202 또는 222 또는 242 또는 262 또는 282 또는 302 또는 322 또는 342 또는 362 또는 382 또는 402 또는 422의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (VL)을 인코딩하는 서열을 포함한다.
하기 조합을 인코딩하는 핵산 분자가 또한 바람직하다: 서열번호: 101 및 102; 또는 서열번호: 121 및 122; 또는 서열번호 141 및 142; 또는 서열번호 161 및 162; 또는 서열번호 181 및 182; 또는 서열번호 201 및 202; 또는 서열번호 221 및 222; 또는 서열번호 241 및 242; 또는 서열번호 261 및 262; 또는 서열번호 281 및 282; 또는 서열번호 301 및 302; 또는 서열번호 321 및 322; 또는 서열번호 341 및 342; 또는 서열번호 361 및 362; 또는 서열번호 381 및 382; 또는 서열번호 401 및 402; 또는 서열번호 421 및 422;
하기 조합을 포함하는 핵산 분자가 또한 바람직하다: 서열번호: 99 및 100; 또는 서열번호: 119 및 120; 또는 서열번호 139 및 140; 또는 서열번호 159 및 160; 또는 서열번호 179 및 180; 또는 서열번호 199 및 200; 또는 서열번호 219 및 220; 또는 서열번호 239 및 240; 또는 서열번호 259 및 260; 또는 서열번호 279 및 280; 또는 서열번호 299 및 300; 또는 서열번호 319 및 320; 또는 서열번호 339 및 340; 또는 서열번호 359 및 360; 또는 서열번호 379 및 380; 또는 서열번호 399 및 400; 또는 서열번호 419 및 420.
다른 바람직한 핵산 분자는 본 발명의 항체의 IgG 형태를 인코딩하는 서열을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 각각이 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자 세트 (또는 복수)를 제공하며, 상기 핵산 분자 세트는 함께 (또는 집합적으로) 본 발명에 따른 항체를 인코딩한다. 이러한 핵산 분자 세트는 세트가 발현(즉, 함께 발현)될 때(예를 들어, 숙주 세포에서) 본 발명의 전체 항체는 발현되고 바람직하게는 조립된다는 것을 특징으로 할 수 있다.
아미노산 또는 핵산 서열과 관련하여 본원에 사용된 용어 "실질적으로 상동성"은 적어도 65%, 70% 또는 75%, 바람직하게는 적어도 80%, 보다 더 바람직하게는 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%, 개시된 아미노산 또는 핵산 서열에 대한 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 따라서, 본 발명의 실질적으로 상동성인 서열은 본 발명의 서열에 대한 단일 또는 다중 염기 또는 아미노산 변경(부가, 치환, 삽입 또는 결실)을 포함한다. 아미노산 수준에서 바람직한 실질적으로 상동성인 서열은 프레임워크 영역 중 하나 이상 및/또는 발명의 서열을 구성하는 하나 이상의 CDR에서 최대 5개, 예를 들어 단지 1, 2, 3, 4 또는 5개, 바람직하게 1, 2 또는 3개, 보다 바람직하게 1 또는 2개의 변경된 아미노산을 함유한다. 상기 변경은 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 구성될 수 있다. 바람직하게는 상기 변경은 보존적 아미노산 치환이다.
특정 구현예에서, 주어진 출발 서열이 비교적 짧은 경우(예를 들어, 4개의 아미노산 길이), 더 긴 시작 서열과 실질적으로 상동성인 서열에 임의적으로 생성될 수 있는 아미노산 치환의 수와 비교하여 그에 실질적으로 상동성인 서열에 더 적은 아미노산 치환이 존재할 수 있다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 본 발명에 따른 출발 VH CDR3 서열과 실질적으로 상동성인 서열, 예를 들어, 일부 구현예에서 길이가 4개의 아미노산 잔기일 수 있는 출발 VH CDR3 서열과 실질적으로 상동성인 서열은 바람직하게는 출발 서열과 비교하여 1 또는 2개(더 바람직하게는 1개)의 변경된 아미노산을 갖는다. 따라서, 일부 구현예에서 실질적으로 상동성인 서열(예를 들어, 실질적으로 상동성인 CDR 서열)에서 변경된 아미노산의 수는 주어진 출발 CDR 서열의 길이에 맞춰질 수 있다. 예를 들어, CDR에서 특정 % 서열 동일성, 예를 들어 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 달성하기 위해 주어진 출발 CDR 서열의 길이에 따라 상이한 수의 변경된 아미노산이 존재할 수 있다.
알라닌 스캐닝 돌연변이유발 및/또는 항원-항체 복합체의 결정 구조 분석과 같은 당업계의 일상적인 방법을 사용하여 CDR의 어떤 아미노산 잔기가 항원 결합에 기여하지 않거나 항원 결합에 크게 기여하지 않는지를 결정할 수 있으며 따라서 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 본 발명의 구현예에서 변경 또는 치환을 위한 우수한 후보이다.
용어 "실질적으로 상동성"은 또한 실질적으로 동일한 방식으로 본 발명의 단백질 또는 핵산 분자와 실질적으로 동일한 기능을 수행하는 본 발명의 아미노산 및 뉴클레오티드 서열의 변형 또는 화학적 등가물을 포함한다. 예를 들어, 임의의 실질적으로 상동성인 항체는 상기 기재된 바와 같이 TRPV1에 결합하는 능력을 보유해야 한다. 바람직하게는, 실질적으로 상동인 항체는 출발 항체의 기능적 능력 중 하나 이상 (또는 모두)을 보유해야 한다.
본 발명의 항체의 실질적으로 상동성인 서열은 또한 제한 없이, 예를 들어 항체, 예를 들어 항원의 결합에 기여하지 않는 태그 서열 또는 기타 성분이 추가된 항체의 VH, VL 또는 CDR 도메인에 영향을 미치지 않는 변경, 또는 항체 분자 또는 단편의 한 유형 또는 형식을 항체 분자 또는 단편의 다른 유형 또는 형식으로 전환하는 변경(예를 들어, Fab에서 scFv 또는 전체 항체 또는 그 반대의 전환), 또는 항체 분자의 항체 분자의 특정 부류 또는 하위부류로의 전환(예를 들어, 항체 분자의 IgG 또는 이의 하위부류, 예를 들어, IgG2 또는 IgG4로의 전환)을 포함한다.
바람직하게는, 임의의 실질적으로 상동성인 항체는 해당 항체에 의해 인식되는 것과 동일한 (또는 실질적으로 동일한) TRPV1 에피토프, 예를 들어 본 발명의 CDR 도메인 또는 본원에 기재된 본 발명의 VH 및 VL 도메인에 의해 인식되는 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 보유해야 한다. 따라서, 바람직하게는, 임의의 실질적으로 상동성인 항체는 TRPV1에 대한 결합에 대해 본 발명의 다양한 항체 중 하나 이상(예를 들어, 기재된 다클론성 항체 중 하나 이상 또는 기재된 단클론성 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1 중 하나 이상)과 경쟁하는 능력을 보유해야 한다. 동일한 에피토프/항원에 대한 결합은 당업계에 잘 알려져 있고 기술된 방법, 예를 들어 결합 분석을 사용하여, 예를 들어 경쟁 분석을 사용하여 쉽게 테스트될 수 있다. 다른 기능적 특성의 보유는 또한 당업계 또는 여기에서 잘 알려져 있고 설명된 방법에 의해 쉽게 테스트될 수 있다.
따라서, 당업자는, 예를 들어 본원의 다른 곳에서 설명된 경쟁 분석 또는 ELISA 분석과 같은 결합 분석이 "실질적으로 상동성인" 항체가 본 발명의 항체 및 항체 단편과 동일한 결합 특이성을 갖는지 여부를 테스트하는 데 사용될 수 있음을 이해할 것이다. BIAcore 분석은 또한 "실질적으로 상동적인" 항체가 TRPV1에 결합할 수 있는지 여부를 확인하는 데 쉽게 사용할 수 있다. 당업자는 다른 적절한 방법 및 변형을 알고 있을 것이다.
아래에 요약된 바와 같이, 경쟁 결합 분석을 사용하여 "실질적으로 상동적인" 항체가 본 발명의 항체(예를 들어, 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1, 또는 R4P1-C1, 또는 이들 항체에 기반한 항체)에 의해 인식되는 TRPV1의 실질적으로 동일한 에피토프 (또는 동일한 에피토프)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하거나, 또는 본 발명의 다양한 항체(예를 들어, 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7- 1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1, 또는 R4P1-C1, 또는 이들 항체에 기반한 항체) 중 하나 이상과 경쟁할 수 있는 능력을 갖는지를 테스트할 수 있다. 아래에 설명된 방법은 적합한 경쟁 분석의 한 예일 뿐이다. 당업자는 다른 적절한 방법 및 변형을 알고 있을 것이다.
예시적인 경쟁 분석은 다양한 농도의 테스트 항체(예를 들어, 실질적으로 상동성인 항체)의 존재 하에 TRPV1에 대한 본 발명의 항체의 다양한 유효 농도의 결합을 평가하는 것을 포함한다. 이어서, 테스트 항체에 의해 유도된 결합 억제의 양이 평가될 수 있다. 증가하는 농도에서 본 발명의 항체와의 증가된 경쟁을 나타내는 테스트 항체(즉, 테스트 항체의 농도 증가는 TRPV1에 결합하는 본 발명의 항체의 양의 상응하는 감소를 초래함)는 실질적으로 동일한 에피토프에 대한 결합의 증거이다. 바람직하게는, 테스트 항체는 TRPV1에 결합하는 본 발명의 항체의 양을 유의하게 감소시킨다. 바람직하게는, 테스트 항체는 TRPV1에 결합하는 본 발명의 항체의 양을 적어도 약 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%만큼 감소시킨다. ELISA 및 유세포 분석 분석은 이러한 경쟁 분석에서 결합 억제를 평가하는 데 사용될 수 있지만 다른 적절한 기술은 당업자에게 잘 알려져 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체(예를 들어, 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 1516F -1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1, 또는 이들 항체에 기반한 항체)에 의해 인식되는 TRPV1의 실질적으로 동일한 (또는 동일한) 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 "실질적으로 상동성인" 항체는 또는 본 발명의 다양한 항체(예를 들어, 항체 OT-Ab3, OT-Ab2 또는 OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1 -1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1, 또는 이들 항체에 기반한 항체) 중 하나 이상과 경쟁할 수 있는 능력이 있는 항체가 바람직하다.
본원에 사용된 용어 "경쟁 항체"는 "참조 항체"와 거의, 실질적으로 또는 본질적으로 동일하거나 심지어 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. "경쟁 항체"는 중복되는 에피토프 특이성을 갖는 항체를 포함한다. 따라서 경쟁 항체는 TRPV1에 대한 결합에 대해 참조 항체와 효과적으로 경쟁할 수 있다. 바람직하게는, 경쟁 항체는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 대안적으로 볼 때, 경쟁 항체는 바람직하게는 참조 항체와 동일한 에피토프 특이성을 갖는다.
본원에 사용된 "참조 항체"는 본 발명의 단리된 펩티드 또는 본 발명에 따른 TRPV1의 에피토프에 결합하는 항체(예를 들어, 본원에 기재된 다클론성 토끼 항체)를 포함한다. "참조 항체"는 또한 바람직하게는 본원에 정의된 VH 및 VL 도메인, 보다 바람직하게는 서열번호: 39의 VH 도메인 및 서열번호: 40의 VL 도메인, 또는 서열번호: 57의 VH 도메인 및 서열번호: 58의 VL 도메인, 서열번호: 75의 VH 도메인 및 서열번호: 76의 VL 도메인, 서열번호: 101의 VH 도메인 및 서열번호: 102의 VL 도메인, 서열번호: 121의 VH 도메인 및 서열번호: 122의 VL 도메인, 서열번호: 141의 VH 도메인 및 서열번호: 142의 VL 도메인, 서열번호: 161의 VH 도메인 및 서열번호: 162의 VL 도메인, 서열번호: 181의 VH 도메인 및 서열번호: 182의 VL 도메인, 서열번호: 201의 VH 도메인 및 서열번호: 202의 VL 도메인, 서열번호: 221의 VH 도메인 및 서열번호: 222의 VL 도메인, 서열번호: 241의 VH 도메인 및 서열번호: 242의 VL 도메인, 서열번호: 261의 VH 도메인 및 서열번호: 262의 VL 도메인, 서열번호: 281의 VH 도메인 및 서열번호: 282의 VL 도메인, 서열번호: 301의 VH 도메인 및 서열번호: 302의 VL 도메인, 서열번호: 321의 VH 도메인 및 서열번호: 322의 VL 도메인, 서열번호: 341의 VH 도메인 및 서열번호: 342의 VL 도메인, 서열번호: 361의 VH 도메인 및 서열번호: 362의 VL 도메인, 서열번호: 381의 VH 도메인 및 서열번호: 382의 VL 도메인, 서열번호: 401의 VH 도메인 및 서열번호: 402의 VL 도메인, 또는 서열번호: 421의 VH 도메인 및 서열번호: 422의 VL 도메인을 갖는 본 발명에 따른 TRPV1에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 특정 바람직한 참조 항체는 항체 OT-Ab3, OT-Ab2, OT-Ab1, 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1, 또는 이들 항체에 기반한 항체로부터 선택된다.
경쟁 항체의 식별이 참조 항체와 비교하여 결정되기 때문에, 하나 또는 둘 다의 항체가 결합하는 에피토프를 실제로 결정하는 것은 경쟁 항체를 식별하기 위해 어떠한 방식으로도 요구되지 않는다는 것을 이해할 것이다. 그러나 원하는 경우 표준 기술을 사용하여 에피토프 매핑을 수행할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물, 면역접합체, 약제, 조합, 칵테일, 키트, 제1 및 제2 의료 용도 및 모든 방법에 대한 하기 설명에서 용어 "항체" 및 "면역접합체", 또는 항원 결합 영역 또는 단편 이의 용어는 달리 구체적으로 언급되거나 과학 용어에서 명확하지 않는 한 항-TRPV1 항체의 범위 및 본 명세서의 실시예 섹션에 기재된 특정 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 다클론성 및 단클론성 항체를 포함하는 항원 결합 도메인을 포함하는 임의의 면역학적 결합제를 광범위하게 지칭한다.
일부 구현예에서, 항체는 다클론성 항체, 예를 들어, 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체(바람직하게는 접합체)로 면역화된 동물(예를 들어, 특정 무병원체(SPF) 토끼와 같은 토끼)에서 생성 (또는 그 안에서 발생 또는 단리)된 다클론성 항체이다. 바람직한 단리된 펩티드 및 접합체는 본원의 다른 곳에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 단클론성 항체가 바람직하다(예를 들어, 마우스 단클론성 또는 인간 단클론성 항체 또는 인간화 단클론성 항체 또는 토끼 단클론성 항체). 바람직한 단클론성 항체는 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및 OT-Ab1 항체에 기반한 항체(예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 것)를 포함한다. 다른 바람직한 단클론성 항체는 본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1 항체(예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열)에 기반한 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 OT-Ab1 항체에 기반한 단클론성 항체는 바람직하다.
중쇄의 불변 도메인 유형에 따라 전체 항체는 5가지 주요 부류 중 하나로 지정되고: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 본 발명의 항체는 이들 부류 중 어느 하나에 속할 수 있다. 이들 중 몇몇은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등과 같은 하위 부류 또는 이소타입으로 더 나뉜다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ으로 지칭된다. 상이한 부류의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배열은 잘 알려져 있다.
전형적으로, 항원 결합 영역보다 전체 항체가 본 발명에서 사용되는 경우, IgG(예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4) 및/또는 IgM이 생리학적 상황에서 가장 흔한 항체이고 실험실 설정에서 가장 쉽게 만들어지기 때문에 바람직하다.
포유동물 항체의 "경쇄"는 불변 도메인의 아미노산 서열과 가변 도메인의 프레임워크 영역에 있는 일부 아미노산을 기반으로 하는 두 가지 명확하게 구별되는 유형인 카파(k) 및 람다(l) 중 하나로 지정된다.
당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 용어 "항체"에 의해 포괄되는 면역학적 결합 시약은 전체 항체, 이량체, 삼량체 및 다량체 항체를 포함하는 모든 항체 및 그의 항원 결합 단편; 이중특이성 항체; 키메라 항체; 재조합 및 조작된 항체, 및 이의 단편을 포함하거나 이에 확장된다.
따라서 용어 "항체"는 항원 결합 영역을 갖는 임의의 항체-유사 분자를 지칭하는 데 사용되며, 이 용어는 Fab', Fab, F(ab')2, 단일 도메인 항체(DAB), TandAbs 이량체, Fv, scFv(단일 사슬 Fv), dsFv, ds-scFv, Fd, 선형 항체, 미니바디, 디아바디, 이중특이적 항체 단편, 바이바디, 트리바디(scFv-Fab 융합, 이중특이적 또는 삼중특이적, 각기); sc-디아바디; 카파(람다) 바디(scFv-CL 융합); BiTE(이중특이성 T-세포 인게이저, T 세포를 유인하기 위한 scFv-scFv 탠덤); DVD-Ig(이중 가변 도메인 항체, 이중특이성 형식); SIP(소형 면역단백질, 일종의 미니바디); SMIP("소형 모듈형 면역약제" scFv-Fc 이량체; DART(ds-안정화 디아바디 "이중 친화력 재타겟팅"), 하나 이상의 CDR을 포함하는 소형 항체 모방체 등과 같은 항원 결합 도메인을 포함하는 항체 단편을 포함한다.
다양한 항체 기반 작제물 및 단편을 제조하고 사용하는 기술은 당업계에 잘 알려져 있다. 특히 디아바디는 EP 404 097 및 WO 93/11161; 선형 항체는 당업계에 추가로 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 비-인간 항체(예를 들어, 토끼 또는 래트 또는 마우스 항체)이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 토끼 항체이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 마우스 항체(예를 들어, 마우스 단클론성 항체)이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 항체, 보다 바람직하게는 완전한 인간 항체이다. 이와 관련하여, 인간 항체는 전형적으로 인간 요법에 사용하기 위한 적어도 두 가지 잠재적인 이점을 갖는다. 첫째, 인간의 면역계는 항체를 외래종으로 인식해서는 안 된다. 둘째, 인간 순환계의 반감기는 자연적으로 발생하는 인간 항체와 유사하여 더 적은 빈도로 투여할 수 있다.
항체 분자 및 결합 단백질과 관련하여 본원에 사용된 용어 "인간"은 먼저 가변 영역(예를 들어, VH, VL, CDR 또는 FR 영역) 및 임의로 인간 레퍼토리 또는 인간으로부터 단리되거나 유래된 또는 인간 레퍼토리, 예를 들어 인간 생식계열 또는 체세포에서 발견되는 서열로부터 유래되거나 상응하는 불변 항체 영역을 갖는 항체 및 결합 단백질을 지칭한다.
"인간" 항체 및 결합 단백질은 인간 서열에 의해 인코딩되지 않은 아미노산 잔기, 예를 들어 시험관내 무작위 또는 부위 지정 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이, 예를 들어 시험관내 클로닝 또는 PCR에 의해 도입된 돌연변이를 추가로 포함한다. 이러한 돌연변이의 특정 예는 항체 또는 결합 단백질의 소수의 잔기, 예를 들어 항체 또는 결합 단백질의 잔기 중 최대 5, 4, 3, 2 또는 1개에서, 바람직하게는 예를 들어 항체 또는 결합 단백질의 CDR 중 하나 이상을 구성하는 잔기 중 최대 5, 4, 3, 2 또는 1에서 보존적 치환 또는 기타 돌연변이를 포함하는 돌연변이이다. 이러한 "인간" 항체의 특정 예는 잠재적인 면역원성 부위의 양을 감소시키기 위해 표준 변형 기술을 거친 항체 및 가변 영역을 포함한다.
따라서, "인간" 항체는 인간에서 발견되는 서열로부터 유래되고 이와 관련된 서열을 포함하지만, 이는 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있다. 또한, 인간 항체 및 결합 단백질은 인간 서열로부터 확인된 인간 공통 서열, 또는 인간 서열과 실질적으로 상동성인 서열을 포함하는 단백질을 포함한다.
또한, 인간 항체 및 결합 단백질은 인간 항체 분자에서 그 자체로 조합되어 발견되는 VH, VL, CDR 또는 FR 영역의 조합으로 제한되지 않는다. 따라서, 인간 항체 및 결합 단백질은 인간에 자연적으로 존재할 필요는 없는(예를 들어, 자연 발생 항체는 아닌) 이러한 영역의 조합을 포함하거나 이에 상응할 수 있다.
일부 구현예에서, 인간 항체는 완전한 인간 항체일 것이다. 본원에 사용된 "완전한 인간" 항체는 실질적인 비인간 항체 서열이 없거나 임의의 비인간 항체 서열이 없는 "인간" 가변 영역 도메인 및/또는 CDR을 포함하는 항체이다. 예를 들어, "실질적인 비-인간 항체 서열이 없는" 인간 가변 영역 도메인 및/또는 CDR을 포함하는 항체는 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 아미노산만이 인간 항체 서열에 의해 인코딩되지 않는 아미노산인 항체, 도메인 및/또는 CDR이다. 따라서, "완전한 인간" 항체는 실질적으로 비인간 가변 영역 도메인, 예를 들어 마우스 가변 영역 도메인을 기반으로 하는 "인간화" 항체와 구별되며, 여기서 특정 아미노산은 전형적으로 인간 항체에 존재하는 아미노산과 더 잘 일치하도록 변경되었다.
본 발명의 "완전한 인간" 항체는 단일 사슬 항체와 같은 임의의 다른 실질적인 항체 서열이 없는 인간 가변 영역 도메인 및/또는 CDR일 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 "완전한 인간" 항체는 하나 이상의 인간 항체 불변 영역과 통합되거나 작동적으로 부착된 인간 가변 영역 도메인 및/또는 CDR일 수 있다. 특정한 바람직한 완전 인간 항체는 IgG 불변 영역의 완전한 상보체를 갖는 IgG 항체이다.
다른 구현예에서, 본 발명의 "인간" 항체는 부분-인간 키메라 항체일 것이다. 본원에 사용된 "부분-인간 키메라" 항체는 래트 또는 마우스와 같은 비-인간 종의 불변 영역에 작동적으로 부착되거나 이식된 "인간" 가변 영역 도메인 및/또는 CDR을 포함하는 항체이다. 이러한 부분-인간 키메라 항체는 예를 들어 전임상 연구에서 사용될 수 있으며, 여기서 불변 영역은 바람직하게는 전임상 테스트에 사용된 동일한 종의 동물일 것이다. 이들 부분-인간 키메라 항체는 또한 예를 들어 비인간 종의 불변 영역이 항체 검출을 위한 추가 옵션을 제공할 수 있는 생체외 진단에서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간화 항체일 것이다. 실질적으로 비인간 가변 영역 도메인을 기반으로 하는 "인간화" 항체는 특정 아미노산이 인간 항체에 전형적으로 존재하는 아미노산과 더 잘 상응하도록 변경된 항체이다. 인간화 항체를 생성하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 인간화 항체는 적절한 CDR(예를 들어, 뮤린 CDR)을 인간 항체 "스캐폴드"에 삽입하여 달성할 수 있다. 일부 경우에, 하나 이상의 CDR 잔기는 인간 항체에 전형적으로 존재하는 아미노산과 더 잘 일치하도록 변경될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "중쇄 상보성 결정 영역"("중쇄 CDR")은 항체 분자의 중쇄 가변 영역(VH 도메인) 내의 초가변성 영역을 지칭한다. 중쇄 가변 영역은 아미노 말단에서 카르복시 말단까지 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2 및 중쇄 CDR3이라고 하는 3개의 CDR을 갖는다. 중쇄 가변 영역은 또한 4개의 프레임워크 영역(아미노 말단에서 카르복시 말단까지의 FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 갖는다. 이러한 프레임워크 영역은 CDR을 분리한다.
본 명세서에서 용어 "중쇄 가변영역"(VH 도메인)은 항체 분자의 중쇄 가변영역을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "경쇄 상보성 결정 영역"("경쇄 CDR")은 항체 분자의 경쇄 가변 영역(VL 도메인) 내의 초가변성 영역을 지칭한다. 경쇄 가변 영역은 아미노 말단에서 카르복시 말단까지 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 및 경쇄 CDR3으로 명명되는 3개의 CDR을 갖는다. 경쇄 가변 영역은 또한 4개의 프레임워크 영역(아미노 말단에서 카르복시 말단까지의 FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 갖는다. 이러한 프레임워크 영역은 CDR을 분리한다.
본 명세서에서 용어 "경쇄 가변영역"(VL 도메인)은 항체 분자의 경쇄 가변영역을 의미한다.
본 발명의 특정 항체의 CDR 서열은 본원의 표 A-C 및 E-U에 제시되어 있다. 일부 다른 구현예에서, 본 발명의 항체의 CDR 서열은 예를 들어 널리 공지된 Kabat의 방법(예를 들어, Kabat, 등, "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 647-669, 1991) 또는 Chothia(예를 들어, Chothia C, 등 (1989) Nature, 342:877-883, 또는 Al-Lazikani 등, (1997) JMB 273,927-948)에 따라 확인된 바와 같은 임의의 적합한 방법 (또는 도구)을 사용하여 확인된 본 발명의 항체의 VH 도메인 및 VL 도메인 내의 CDR 서열일 수 있다.
항체는 기존 기술을 사용하여 단편화될 수 있다. 예를 들어, F(ab')2 단편은 항체를 펩신으로 처리하여 생성할 수 있다. 생성된 F(ab')2 단편을 처리하여 디설파이드 브릿지를 환원시켜 Fab' 단편을 생성할 수 있다. 파파인 소화는 Fab 단편의 형성으로 이어질 수 있다. Fab, Fab' 및 F(ab')2, scFv, Fv, dsFv, Fd, dAbs, TandAbs, ds-scFv, 이량체, 미니바디, 디아바디, 이중특이적 항체 단편 및 기타 단편은 또한 재조합 기술에 의해 합성될 수 있거나 화학적 합성될 수 있다. 항체 단편을 생성하는 기술은 잘 알려져 있고 당업계에 기술되어 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항체 단편은 중쇄 불변 영역, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역의 전부 또는 일부를 포함한다. 바람직하게는, 중쇄 불변 영역은 IgG 중쇄 불변 영역, 예를 들어 IgG2 또는 IgG4 중쇄 불변 영역, 또는 이의 일부이다. 또한, 항체 또는 항체 단편은 카파 경쇄 불변 영역 또는 람다 경쇄 불변 영역의 전부 또는 일부, 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 이러한 불변 영역의 전부 또는 일부는 자연적으로 생성될 수 있거나 전체적으로 또는 부분적으로 합성될 수 있다. 이러한 불변 영역에 대한 적절한 서열은 당업계에 잘 알려져 있고 문서화되어 있다. 중쇄 및 경쇄로부터의 불변 영역의 완전한 상보체가 본 발명의 항체에 포함될 때, 이러한 항체는 전형적으로 본원에서 "전장" 항체 또는 "전체" 항체로 지칭된다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 Ig(예를 들어, IgG) 항체이다.
항체 또는 항체 단편은 자연적으로 생성될 수 있거나 전체적으로 또는 부분적으로 합성적으로 생성될 수 있다. 따라서 항체는 임의의 적절한 공급원, 예를 들어 재조합 공급원 및/또는 형질전환 동물 또는 형질전환 식물, 또는 IgY 기술을 사용하는 난(eggs)에서 생산될 수 있다. 따라서, 항체 분자는 시험관내 또는 생체내에서 생산될 수 있다.
바람직하게는, 항체 또는 항체 단편은 3개의 CDR 도메인을 포함하는 항체 경쇄 가변 영역(VL) 및 3개의 CDR 도메인을 포함하는 항체 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다. 상기 VL 및 VH는 전형적으로 항원 결합 부위를 형성한다.
"Fv" 단편은 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단한 비공유 결합에서 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체를 갖는다. 이 구성에서 각 가변 도메인의 3개의 초가변 영역(CDR)이 상호작용하여 VH-VL 이량체 표면의 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 초가변 영역(CDR)은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다.
그러나, 항체의 경쇄 가변 도메인으로부터의 3개의 CDR 및 중쇄 가변 도메인으로부터의 3개의 CDR의 존재가 항원 결합에 항상 필요한 것은 아니라는 것이 당업계에 잘 문서화되어 있다. 따라서, 상기 고전적 항체 단편보다 작은 작제물이 효과적인 것으로 알려져 있다.
예를 들어, 낙타과의 항체는 광범위한 항원 결합 레퍼토리를 가지고 있지만 경쇄가 없다. 또한, VH 도메인 단독 또는 VL 도메인 단독을 포함하는 단일 도메인 항체에 대한 결과는 이들 도메인이 허용 가능한 높은 친화도로 항원에 결합할 수 있음을 나타낸다. 따라서 3개의 CDR이 항원에 효과적으로 결합할 수 있다.
따라서, 본 발명의 바람직한 항체는 6개의 CDR 영역(경쇄로부터 3개 및 중쇄로부터 3개)을 포함할 수 있지만, 6개 미만의 CDR 영역(예를 들어, 3개 CDR 영역)을 갖는 항체도 본 발명에 포함된다. 중쇄 또는 경쇄로부터의 CDR만을 갖는 항체는 또한 고려된다.
특정 중쇄 CDR 영역과 함께 사용하기 위한 바람직한 경쇄 CDR 영역은 본원의 다른 곳에 기재되어 있다. 그러나, 본 발명의 중쇄 가변 영역과 함께 사용하기 위한 3개의 CDR을 포함하는 다른 경쇄 가변 영역도 고려된다. 본 발명의 중쇄 가변 영역과 조합하여 사용될 수 있고 본 발명에 따른 TRPV1에 결합하는 항체를 생성하는 적절한 경쇄 가변 영역은 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 TRPV1에 결합하거나 이를 특이적으로 인식하는 항체, 바람직하게는 단리된 항체를 제공하며, 이는 TRPV1에 결합에 대해 본 발명의 항체와 경쟁하는 (즉, 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는) 능력을 갖는다. 본 발명의 다른 양태의 다른 특징 및 특성은 필요한 수정을 가하여 본 발명의 이러한 양태에 적용된다.
예를 들어, TRPV1에 대한 결합에 대해 본 발명의 단리된 펩티드 (또는 접합체)에 대해 생성된 항체(예를 들어, 본 명세서의 실시예 섹션에 기재된 것과 같은 다클론성 항체)와 경쟁할 수 있는 항체는 본 발명의 추가 양태을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하거나 특이적으로 인식하고 TRPV1에 대한 결합에 대해 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 OT-Ab3, OT-Ab2 및/또는 OT-Ab1 단클론성 항체(즉, 서열번호:40의 VL 및 서열번호:39의 VH를 포함하는 항체, 또는 서열번호:57의 VL 및 서열번호:58의 VH를 포함하는 항체, 또는 서열번호:75의 VL 및 서열번호:76의 VH를 포함하는 항체)와 경쟁하는(즉, 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는) 능력을 갖는 항체, 바람직하게는 단리된 항체를 제공한다. 다른 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하거나 특이적으로 인식하고 TRPV1에 대한 결합에 대해 OT-Ab3, OT-Ab2 및/또는 OT-Ab1 항체(즉, 서열번호: 44, 45 및 46의 VL CDR 서열 및 서열번호: 41, 42 및 43의 VH CDR 서열을 포함하는 항체, 또는 서열번호: 62, 63 및 64의 VL CDR 서열 및 서열번호: 59, 60 및 61의 VH CDR 서열을 포함하는 항체, 또는 서열번호: 80, 81 및 82의 VL CDR 서열 및 서열번호: 77, 78 및 79의 VH CDR 서열을 포함하는 항체)와 동일한 CDR을 포함하는 항체와 경쟁하는 능력을 갖는 항체, 바람직하게는 단리된 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하거나 특이적으로 인식하고 TRPV1에 대한 결합에 대해 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1 또는 R4P1-C1 단클론성 항체과 경쟁하는(즉, 동일하거나 실질적으로 동일한 에피토프에 결합하는) 능력(즉, 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 이러한 단클론성 항체의 VL 및 VH 서열을 포함하는 항체와 경쟁하는 능력)을 갖는 항체, 바람직하게는 단리된 항체를 제공한다.
다른 구현예에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하거나 특이적으로 인식하고 TRPV1에 대한 결합을 위한 본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1, R4P1-C1 단클론성 항체와 동일한 CDR을 포함하는 항체와 경쟁하는 능력을 갖는 항체, 바람직하게는 단리된 항체를 제공한다 (이러한 항체의 CDR 서열은 본원의 다른 곳에서 제시됨).
동일한 에피토프/항원에 대한 결합은 당업계에 잘 알려져 있고 기술된 방법, 예를 들어 본원의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 경쟁 분석과 같은 결합 분석을 사용하여 쉽게 테스트될 수 있다.
바람직하게는, 상기 기술된 능력 및 특성은 적절한 대조군 수준과 비교할 때 측정 가능하거나 유의미한 수준에서, 보다 바람직하게는 통계적으로 유의한 수준에서 관찰된다. 적절한 유의 수준은 본원의 다른 곳에서 논의된다. 보다 바람직하게는, 전술한 능력 및 특성 중 하나 이상이 선행 기술 항체에 대해 관찰된 능력과 비교할 때 측정 가능하게 더 우수하거나 더 바람직하게는 유의하게 더 우수한 수준에서 관찰된다.
여기에 언급된 임의의 통계적 분석에서, 바람직하게는 관련 통제 또는 다른 비교 엔티티 또는 측정에 대한 통계적으로 유의한 차이는 < 0.1, 바람직하게는 < 0.05의 확률 값을 갖는다. 통계적 유의성을 결정하는 적절한 방법은 당업계에 잘 알려져 있고 문서화되어 있으며 이들 중 임의의 것이 사용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:44의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:45의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:39의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호: 40의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:57의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호: 58의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:77의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:78의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:79의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:80의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:81의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:82의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:75의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호: 76의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:41 또는 서열번호:77의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:42 또는 서열번호:78의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:43 또는 서열번호:79의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:91 또는 바람직하게는 서열번호:92의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1,
(e) 서열번호:45 또는 서열번호:81의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:46 또는 서열번호:82의 아미노산 서열, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:103의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:104의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:105의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:106의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:107의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:108의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:101의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:102의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:123의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:124의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:125의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:126의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:127의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:128의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:121의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:122의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:143의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:144의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:145의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:146의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:147의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:148의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:141의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:142의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:161의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:162의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:261의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:262의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:183의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:184의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:185의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:186의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:187의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:188의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:181의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:182의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:203의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:204의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:205의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:206의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:207의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:208의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:201의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:202의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:241의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:242의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:223의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:224의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:225의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:226의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:227의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:228의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:221의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:222의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:283의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:284의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:285의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:286의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:287의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:288의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:281의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:282의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:401의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:402의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:303의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:304의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:305의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:306의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:307의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:308의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:301의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:302의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:323의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:324의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:325의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:326의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:327의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:328의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:321의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:322의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:343의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:344의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:345의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:346의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:347의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:348의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:341의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:342의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:363의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:364의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:365의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:366의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:367의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:368의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:361의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:362의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 다른 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:381의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:382의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 하나 이상의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(a) 서열번호:423의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
(b) 서열번호:424의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR2, 및
(c) 서열번호:425의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH CDR3; 및/또는 (바람직하게는 "및")
상기 경쇄 가변 영역은 다음을 포함한다:
(d) 서열번호:426의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
(e) 서열번호:427의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR2, 및
(f) 서열번호:428의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL CDR3;
상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열이다.
본 발명의 이러한 양태의 바람직한 구현예는 본 발명의 다른 양태과 관련하여 본원의 다른 곳에 기재된 항체 서열 (예를 들어, CDR 서열 및/또는 VH 도메인 및/또는 VL 도메인 서열) 중 하나 이상을 포함하는 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 다른 양태 및 바람직한 구현예의 항체의 다양한 특징에 대한 논의는 본 발명의 이러한 양태에 준용하여 적용한다. 본 발명의 이러한 양태의 일부 바람직한 구현예에서, 본 발명은 서열번호:421의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VH 도메인, 및/또는 (바람직하게는 "및") 서열번호:422의 아미노산 서열 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1에 결합하고 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체, 예를 들어 단리된 항체를 제공하며, 상기 중쇄 가변 영역은 VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하고 이들 각각은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원의 다른 곳에 (예를 들어, 조합으로) 설정된 바와 같은 아미노산 서열을 갖고 상기 경쇄 가변 영역은 VL CDR1, VL CDR2 및 VL CDR3을 포함하고, 이들 각각은 본 발명의 다른 양태와 관련하여 본원의 다른 곳에 (예를 들어, 조합으로) 설정된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는다.
본 발명의 항체, 펩티드, 결합 단백질 및 핵산 분자는 인간 또는 동물의 신체 또는 인간 또는 동물 신체로부터 유래된 조직 샘플 내에 제자리에 존재할 수 있는 임의의 그러한 구성요소와 구별되는 한 전형적으로 "단리된" 또는 "정제된" 분자이다. 그러나, 서열은 인간 또는 동물 신체에서 발견되는 서열에 상응하거나 실질적으로 상동일 수 있다. 따라서, 핵산 분자 또는 서열 및 단백질, 펩티드 또는 폴리펩티드, 예를 들어 항체와 관련하여 본원에 사용된 용어 "단리된" 또는 "정제된"은 그의 천연 환경으로부터 단리되거나, 그로부터 정제되거나, 또는 실질적으로 없는 경우에, 예를 들어 인간 또는 동물 신체로부터 단리되거나 또는 그로부터 정제된 경우에 (실제로 이들이 천연적으로 발생하는 경우에) 이러한 분자를 지칭하거나, 또는 기술적 공정에 의해 생산되는 경우에, 즉 재조합 및 합성적으로 생산된 분자를 포함하는 이러한 분자를 지칭한다.
따라서, 단백질 또는 폴리펩티드 분자 예컨대 단리된 펩티드, 경쇄 CDR 1, 2 및 3, 중쇄 CDR 1, 2 및 3, 경쇄 가변 영역, 중쇄 가변 영역, 및 결합 단백질 또는 전장 항체를 포함하는 본 발명의 항체와 관련하여 사용되는 경우, 용어 "단리된" 또는 "정제된"은 전형적으로 그것이 유래된 공급원으로부터 세포 물질 또는 다른 단백질이 실질적으로 없는 단백질을 지칭한다. 일부 구현예에서, 특히 단백질이 인간 또는 동물에게 투여되는 경우, 이러한 단리 또는 정제된 단백질은 재조합 기술에 의해 생산될 때 배양 배지, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 기타 화학물질이 실질적으로 없다.
본원에 사용된 용어 "단편"은 생물학적 관련성의 단편, 예를 들어, 항원 결합에 기여하고, 예를 들어, 항원 결합 부위의 일부를 형성하고/하거나 TRPV1 항체의 기능적 특성에 기여하는 단편을 지칭한다. 특정의 바람직한 단편은 본 발명의 항체의 중쇄 가변 영역(VH 도메인) 및/또는 경쇄 가변 영역(VL 도메인)을 포함한다.
당업자는 본 발명의 항체, 항체 단편 및 면역접합체가 당업계에 널리 공지되고 기재된 임의의 여러 방식으로 제조될 수 있음을 이해할 것이다. 예를 들어, 다클론성 항체는 동물 (비-인간 동물, 예를 들어 토끼)을 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체로 면역화시키고, 동물에 의해 생성된 단리된 펩티드 및 접합체에 대한 항체를 단리 (및 임의로 정제)시킴으로써 제조될 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명의 항체, 항체 단편, 및 면역접합체는 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 핵산 단편은 임의의 적절한 방법, 예를 들어 복제 또는 합성에 의해 유래되거나 생산될 수 있다.
본 발명의 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 코딩하는 핵산 단편을 얻었고, 이들 단편을 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작하여, 예를 들어 가변 영역 단편을 적절한 불변 영역 도메인을 갖는 전장 항체 분자로, 또는 본원의 다른 곳에서 논의된 항체 단편, 예컨대 Fab 단편, scFv 단편 등의 특정 포맷으로 전환시킬 수 있다. 전형적으로, 또는 이러한 추가 조작 절차의 일부로서, 본 발명의 항체 분자를 인코딩하는 핵산 단편은 전형적으로 본 발명의 항체의 생산을 용이하게 하기 위해 하나 이상의 적절한 발현 벡터에 혼입된다.
가능한 발현 벡터는, 벡터가 사용된 숙주 세포와 호환되는 한 코스미드, 플라스미드, 또는 변형된 바이러스 (예를 들어, 복제 결함있는 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관된 바이러스)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 발현 벡터는 "숙주 세포의 형질전환에 적합"하며, 이는 발현 벡터가 본 발명의 핵산 분자 및 발현에 사용될 숙주 세포에 기반하여 선택된 조절 서열을 함유하고, 이는 핵산 분자에 작동가능하게 연결됨을 의미한다. 작동 가능하게 연결된 것은 핵산이 핵산의 발현을 허용하는 방식으로 조절 서열에 연결되어 있음을 의미하는 것으로 의도된다.
따라서, 본 발명은 본 발명의 핵산 분자 또는 이의 단편, 및 본 발명의 핵산 분자에 의해 인코딩된 단백질 서열의 전사 및 번역을 위한 필요한 조절 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터를 고려한다.
적합한 조절 서열은 박테리아, 진균, 바이러스, 포유동물, 또는 곤충 유전자를 포함하는 다양한 공급원으로부터 유래될 수 있고 당업계에 잘 알려져 있다. 적절한 조절 서열의 선택은 하기에 논의된 바와 같이 선택된 숙주 세포에 의존하고, 당업자에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 이러한 조절 서열의 예는 전사 프로모터 및 인핸서 또는 RNA 중합효소 결합 서열, 번역 개시 신호를 포함하는 리보솜 결합 서열을 포함한다. 추가로, 선택된 숙주 세포 및 사용된 벡터에 따라, 복제 기점, 추가 DNA 제한 부위, 인핸서 및 전사 유도성을 부여하는 서열과 같은 다른 서열이 발현 벡터에 혼입될 수 있다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 또한 본 발명의 재조합 분자로 형질전환되거나 형질감염된 숙주 세포의 선택을 용이하게 하는 선택가능한 마커 유전자를 함유할 수 있다.
재조합 발현 벡터는 또한 재조합 단백질의 증가된 발현; 재조합 단백질의 용해도 증가를 제공하는 융합 모이어티를 인코딩하고; 친화성 정제에서 리간드로 작용하여 표적 재조합 단백질의 정제를 보조하는 유전자를 함유할 수 있다 (예를 들어, 정제 및/또는 식별을 가능하게 하는 적절한 "태그", 예를 들어 His 태그 또는 myc 태그가 존재할 수 있음).
재조합 발현 벡터는 형질전환된 숙주 세포를 생산하기 위해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 용어 "~로 형질전환된", "~로 형질감염된", "형질전환" 및 "형질감염"은 당업계에 공지된 많은 가능한 기술 중 하나에 의해 세포 내로 핵산(예를 들어, 벡터)을 도입하는 것을 포함하는 것으로 의도된다. 숙주 세포를 형질전환하고 형질감염시키기에 적합한 방법은 문헌[Sambrook 등, 1989 (Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)] 및 다른 실험실 교과서에서 찾을 수 있다.
적합한 숙주 세포는 다양한 진핵 숙주 세포 및 원핵 세포를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 단백질(예를 들어, 항체)은 효모 세포 또는 포유동물 세포에서 발현될 수 있다. 또한, 본 발명의 단백질은 에스케리치아 콜라이와 같은 원핵 세포에서 발현될 수 있다.
본원에 제공된 교시를 고려해 볼 때, 프로모터, 종결자, 및 적절한 유형의 발현 벡터를 식물, 조류 및 곤충 세포에 도입하는 방법이 또한 용이하게 달성될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 단백질(예를 들어, 항체)은 또한 랫트, 토끼, 양 및 돼지와 같은 비-인간 형질전환 동물에서 발현될 수 있다.
본 발명의 단백질은 또한 고상 합성과 같은 단백질의 화학에서 잘 알려진 기술을 사용하여 화학적 합성에 의해 제조될 수 있다.
다른 분자, 예컨대 단백질에 접합된 본 발명의 항체 및 단백질 (예를 들어 단리된 펩티드)을 포함하는 N-말단 또는 C-말단 융합 단백질은 재조합 기술을 통한 융합에 의해 제조될 수 있다. 생성된 융합 단백질은 본원에 기재된 바와 같은 선택된 단백질 또는 마커 단백질, 또는 태그 단백질에 융합된 본 발명의 항체 또는 단백질을 함유한다. 본 발명의 항체 및 단백질은 또한 공지된 기술에 의해 다른 단백질에 접합될 수 있다. 예를 들어, 단백질은 WO 90/10457에 기재된 바와 같은 이종이중작용성 티올-함유 링커, N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오-프로피오네이트) 또는 N-석신이미딜-5 티오아세테이트를 사용하여 커플링될 수 있다.
또 다른 양태는 본 발명의 핵산 단편 또는 분절 또는 분자 중 하나 이상을 포함하는 발현 작제물 또는 발현 벡터를 제공한다. 바람직하게는 발현 작제물 또는 벡터는 재조합체이다. 또한 함께(집합적으로) 본 발명의 항체를 인코딩하는 발현 벡터 세트 (또는 발현 작제물 세트)가 제공된다. 발현 벡터의 이러한 세트는 세트가 발현(즉, 함께 발현)될 때(예를 들어, 숙주 세포에서) 본 발명의 항체(전체 항체)가 발현되고 바람직하게는 조립된다는 것을 특징으로 할 수 있다.
바람직하게는 상기 작제물 또는 벡터는 본 발명의 핵산 분자에 의해 인코딩되는 단백질 서열의 전사 및 번역에 필요한 조절 서열을 추가로 포함한다.
또 다른 양태는 본 발명의 하나 이상의 발현 작제물 또는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포 또는 바이러스를 제공한다. 또한, 본 발명의 핵산 분자 중 하나 이상을 포함하는 숙주 세포 또는 바이러스가 제공된다. 본 발명의 항체를 발현하는 숙주 세포(예를 들어, 포유동물 숙주 세포) 또는 바이러스는 또 다른 양태를 형성한다.
본 발명은 본 발명의 항체를 생산 (또는 제조 또는 단리 또는 확인 또는 생성)하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체를 이용하고, 대안적으로 볼 때, 본 발명은 본 발명의 항체의 확인 (또는 단리 또는 생성 또는 생산)을 위한 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체의 용도를 제공한다.
본 발명은 본 발명의 항체를 생산 (또는 제조 또는 단리 또는 확인 또는 생성)하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 동물 (비-인간 동물 예를 들어 토끼)를 본 발명의 단리된 펩티드 (또는 접합체)로 면역화하는 단계를 포함한다. 바람직한 방법은 본 발명의 단리된 펩티드 (또는 접합체)에 대해 생성된 (또는 발생된) 상기 동물 항체를 수득하는 단계, 및 선택적으로 항체 생성물의 정제 단계 및/또는 항체 또는 생성물을 적어도 하나의 추가의 구성요소, 예컨대 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물로 제형화하는 단계를 포함한다.
본 발명은 하이브리도마 기술(예를 들어, 통상적인 하이브리도마 기술)에서 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체를 이용함으로써 본 발명의 항체를 생산 (또는 제조 또는 단리 또는 확인 또는 생성)하는 방법을 제공한다. 대안적으로 볼 때, 본 발명은 하이브리도마 기술을 사용하여 본 발명의 항체의 확인 (또는 단리 또는 생성 또는 생산)을 위한 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 비-인간 동물 (예를 들어, 마우스)은 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체로 면역화되고, 비장 세포는 상기 면역화된 동물 (예를 들어, 마우스)로부터 단리되고, HGPRT 발현이 결여된 골수종 세포 (예를 들어, 마우스 골수종 세포) (이러한 골수종 세포는 HAT 함유 배지에서 성장할 수 없다)와 융합되고 하이브리드 (즉 융합된 또는 하이브리도마) 세포는 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티민 (HAT) 함유 배지를 사용하여 선택된다. 융합된 세포만 HAT 함유 배지에서 성장한다.
본 발명의 또 다른 양태는 (파지 디스플레이 항체 라이브러리와 함께) 파아지 디스플레이 기술을 이용하는 본 발명의 항체를 확인 (또는 단리 또는 생성)하는 방법을 제공한다. 대안적으로 볼 때, 본 발명은 (파아지 디스플레이 항체 라이브러리와 함께) 파아지 디스플레이 기술을 사용하여 본 발명의 항체의 확인 (또는 단리 또는 생성 또는 생산)을 위한 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체의 용도를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 단리된 펩티드 또는 접합체(전형적으로 비드 또는 마이크로비드 또는 플레이트 또는 미세역가 플레이트와 같은 고체 지지체 상에 고정됨)는 파아지 라이브러리 (박테리오파아지 라이브러리 전형적으로 섬유상 박테리오파아지 라이브러리 예컨대 fd 파아지 라이브러리의 M13)와 접촉되고, 이는 scFv 또는 Fab 단편과 같은 항체 또는 항체 단편의 라이브러리를 파아지 표면에 표시 (또는 제시 또는 발현)한다. 임의의 적합한 파아지 디스플레이 항체 라이브러리가 사용될 수 있고(예를 들어, 인간 파지-Fab 라이브러리(예를 들어, 인간 나이브 파아지-Fab 라이브러리)가 사용될 수 있음), 당업자는 이들에 익숙하다(예를 들어 상업적으로 입수가능한 파아지 디스플레이 항체 라이브러리가 있다). 그 다음, 결합된 파아지가 용출되고 파아지의 핵산 (또는 표시된 항체를 인코딩하는 핵산의 적어도 일부)을 분리하고 서열분석하여 표시된 항체의 동일성을 쉽게 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합된 파아지의 용출 후, 결합된 파아지의 표시된 항체를 확인하기 전에 접촉 및 용출의 1회 이상 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5회 또는 그 초과)의 추가 라운드가 수행된다. 이러한 추가 라운드는 전형적으로 라이브러리를 더욱 풍부하게 한다. 일부 전형적인 구현예에서, 본 발명의 펩티드 또는 접합체가 고체 지지체 상에 고정되는 경우, 고체 지지체는 전형적으로 접촉 단계 후 (및 용리 단계 전) 세척되고, 이때 파아지 디스플레이 항체 또는 항체 단편은 결합된 채로 고정된 단리된 펩티드 또는 접합체에 결합한다 (그리고 다른 것은 세척 제거됨).
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체를 생산 (또는 제조)하는 방법을 제공한다. 바람직한 방법은 (i) 재조합 발현 벡터 (또는 발현 벡터의 세트) 중 하나 이상 또는 본 발명의 핵산 서열 (또는 핵산 분자 세트) 중 하나 이상을 포함하는 숙주 세포를 인코딩된 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배앙하는 단계; 및 임의로 (ii) 숙주 세포로부터 또는 성장 배지/상청액으로부터 항체를 단리 또는 수득하는 단계를 포함한다.
구현예에서, 본 발명의 항체 또는 단백질이 하나 초과의 폴리펩티드 사슬(예를 들어, 특정 단편 예컨대 Fab 단편 또는 전체의 항체)으로 구성되는 경우, 모든 폴리펩티드는 바람직하게는 동일 또는 상이한 발현 벡터로부터 숙주 세포에서 발현되어, 완전한 단백질, 예를 들어 본 발명의 항체 단백질은 숙주 세포에서 조립될 수 있고 이로부터 단리 또는 정제될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따른 항체를 생산 (또는 제조, 단리 또는 확인 또는 생성)하는 방법은 또한 항체 또는 단백질 생성물을 정제하는 단계 및/또는 항체 또는 생성물을 적어도 하나의 추가의 구성요소, 예컨대 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물로 제형화하는 단계를 포함할 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1을 포함하는 조성물을 본 발명의 항체 또는 그의 면역접합체와 접촉시키는 것을 포함하는, TRPV1에 결합하는 방법을 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 TRPV1/항체 복합체의 형성을 허용하기에 효과적인 조건 하에 TRPV1을 함유하는 것으로 의심되는 조성물을 본 발명의 항체 또는 그의 면역접합체와 접촉시키고 형성된 복합체를 검출하는 것을 포함하는, TRPV1를 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명의 항체는 또한 TRPV1에 결합하는 추가 항체를 생산하는데 사용될 수 있다. 이러한 용도는 예를 들어 새로운 항체를 형성하기 위해 모 항체의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실, 치환 또는 삽입으로서, 상기 모 항체가 본원의 다른 곳에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체 중 하나인, 부가, 결실, 치환 또는 삽입, 및 생성된 새로운 항체를 테스트하여 본 발명에 따라 TRPV1에 결합하는 항체를 확인하는 것을 수반한다. 이러한 방법을 사용하여 TRPV1에 결합하는 능력에 대해 모두 테스트할 수 있는 여러 개의 새로운 항체를 형성할 수 있다. 바람직하게는 하나 이상의 아미노산의 상기 부가, 결실, 치환 또는 삽입은 하나 이상의 CDR 도메인에서 일어난다.
모 항체에 대한 이러한 변형 또는 돌연변이는 예를 들어 무작위 또는 지시된 돌연변이유발 방법을 수행함으로써 당업계에 널리 공지되고 문서화된 기술을 사용하여 임의의 적절한 방식으로 수행될 수 있다. 지시된 돌연변이유발이 사용되는 경우 돌연변이유발을 위한 적합한 잔기를 확인하기 위한 한 전략은 항원 결합에 관련된 주요 잔기를 확인하기 위해 결합 단백질-항원 복합체, 예를 들어 Ab-Ag 복합체의 결정 구조의 분해를 이용한다. 알라닌 스캐닝 돌연변이유발은 또한 항원 결합에 관련된 주요 잔기를 확인하는 데 사용할 수 있는 일상적인 방법이다. 그 후, 이들 잔기는 상호작용을 향상시키기 위해 돌연변이될 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 아미노산 잔기는 지시된 돌연변이유발을 위해 단순히 표적화될 수 있고 TRPV1에 대한 결합에 대한 효과가 평가될 수 있다.
무작위 돌연변이유발은 임의의 적절한 방식, 예를 들어 오류 유발 PCR, 사슬 셔플링 또는 돌연변이유발유전자 E. 콜라이 균주에 의해 수행될 수 있다.
따라서, 본 발명의 VH 도메인 중 하나 이상은 임의의 적절한 공급원으로부터의 단일 VL 도메인 또는 VL 도메인의 레퍼토리와 조합될 수 있고 생성된 신규 항체는 TRPV1에 결합하는 항체를 확인하기 위해 테스트될 수 있다. 반대로, 본 발명의 VL 도메인 중 하나 이상은 임의의 적절한 공급원으로부터의 단일 VH 도메인 또는 VH 도메인의 레퍼토리와 조합될 수 있고 생성된 신규 항체는 TRPV1에 결합하는 항체를 확인하기 위해 테스트될 수 있다.
유사하게, 본 발명의 VH 및/또는 VL 도메인의 하나 이상, 또는 바람직하게는 3개 모두의 CDR은 단일 VH 및/또는 VL 도메인 또는 적절한 경우 VH 및/또는 VL 도메인의 레퍼토리, 및 TRPV1에 결합하는 항체를 확인하기 위해 테스트된 새로운 항체 내로 이식될 수 있다.
아미노산 및 단백질 도메인의 전술한 조작을 수행하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 상기 조작은 핵산 수준에서 유전공학에 의해 편리하게 수행될 수 있으며, 여기서 적절한 결합 단백질 및 그의 도메인을 인코딩하는 핵산 분자는 생성된 발현된 단백질의 아미노산 서열이 이어서 적절한 방식으로 변형되도록 변형된다.
TRPV1에 결합하는 하나 이상의 항체의 능력을 테스트하는 것은 당업계에 잘 알려져 있고 기술된 임의의 적절한 방법에 의해 수행될 수 있다. 적절한 방법은 또한 실시예 섹션에 설명되어 있다.
본 발명은 또한 항-TRPV1 항체가 적어도 하나의 다른 치료제에 작동가능하게 부착된 접합된 항체 및 이의 단편의 범위를 제공한다. 용어 "면역접합체"는 항체와 또 다른 유효 제제(예를 들어, 치료제)와의 작동적 회합을 정의하는 데 광범위하게 사용되며, 임의의 유형의 작동적 회합만을 지칭하는 것으로 의도되지 않으며, 특히 화학적 "접합"으로 제한되지 않는다. 재조합 융합 단백질이 특히 고려된다. 전달 또는 표적화제가 표적에 결합할 수 있고 치료제 또는 진단제가 전달 시에 충분히 기능하는 한, 부착 방식이 적합할 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 "네이키드(naked)" 비접합 형태로 사용된다(예를 들어, 치료학적으로 사용된다).
적어도 본 발명의 제1 항체 또는 이의 면역접합체를 포함하는 조성물은 본 발명의 추가 양태를 구성한다. 적합한 희석제, 담체 또는 부형제와의 혼합물로 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 제형(조성물)은 본 발명의 바람직한 구현예를 구성한다. 이러한 제형은 약제학적 용도를 위한 것일 수 있고 따라서 본 발명의 조성물은 바람직하게 약제학적으로 허용된다. 적합한 희석제, 부형제 및 담체는 당업자에게 공지되어 있다.
본 발명에 따른 조성물은 예를 들어 경구, 비강, 비경구, 복강내, 정맥내, 국소 또는 직장 투여에 적합한 형태로 제시될 수 있다. 일부 구현예에서, 정맥내 투여에 적합한 형태가 바람직하다.
본원에 정의된 활성 화합물은 정제, 코팅된 정제, 비강 스프레이, 용액, 에멀젼, 리포솜, 분말, 캡슐 또는 서방성 형태와 같은 통상적인 약리학적 투여 형태로 제시될 수 있다. 통상적인 약제학적 부형제 및 통상적인 생산 방법을 이러한 형태의 제조에 사용할 수 있다.
주사 용액은 예를 들어 보존제, 예컨대 p-하이드록시벤조에이트, 또는 안정화제, 예컨대 EDTA의 첨가와 같은 통상적인 방식으로 제조될 수 있다. 그 다음 용액을 주사 바이알 또는 앰플에 채울 수 있다.
비강 스프레이는 수용액에서 유사하게 제형화되고 에어로졸 추진제와 함께 스프레이 용기에 포장되거나 수동 압축 수단이 제공될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물(제제)은 바람직하게는 비경구적으로 투여된다. 일부 구현예에서 정맥내 투여가 바람직하다. 비경구 투여는 주사기에 의한 피하, 근육내 또는 정맥내 주사에 의해 수행될 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여는 주입 펌프에 의해 수행될 수 있다. 추가 옵션은 비강 또는 폐 스프레이 형태의 항체 투여를 위한 분말 또는 액체일 수 있는 조성물이다. 또 다른 추가 옵션으로서, 본 발명의 항체는 또한 경피로, 예를 들어 패치로부터, 선택적으로 이온침투 패치, 또는 경점막으로, 예를 들어 뺨으로 투여될 수 있다.
적합한 복용량 단위는 당업자에 의해 결정될 수 있다.
약제학적 조성물은 공동-투여 레지멘 또는 조합된 레지멘의 맥락에서 추가 활성 성분을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 추가 양태는 요법에 사용하기 위한, 특히 통증 요법 (또는 통증 관리)에 사용하기 위한 본 발명의 항-TRPV1 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 통증은 급성 통증이다. 일부 구현예에서, 통증은 만성 통증이다.
일부 구현예에서, 급성 통증은 급성 수술후 통증 또는 급성 외상후 통증이다.
일부 구현예에서, 만성 통증은 통각수용성 통증, 예를 들어 골관절염 연관 통증, 관절염 연관 통증, 요통 또는 목 통증이다.
일부 구현예에서, 만성 통증은 신경병증성 통증, 예를 들어 고통스러운 당뇨병성 다발성신경병증, 포진후 신경통, 외상후 신경통 또는 신경근병증이다. 일부 구현예에서, 만성 통증은 고통스러운 방광 증후군, 외음부통, 만성 췌장염 또는 내장 통증이다.
일부 구현예에서, 통증은 가려움증(급성 또는 만성 가려움증)이다.
일부 구현예에서, 통증은 염증성 통증, 특발성 통증 및 신경병증성 통증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
"요법"은 치료 및 예방이 포함하고, 즉, 치료 및 예방 용도를 모두 포함한다. 따라서 "통증 요법"에는 통증 치료와 통증 예방이 포함된다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 발명은 통증 치료에 사용하기 위한 본 발명의 항-TRPV1 항체를 제공한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명은 통증 예방에 사용하기 위한 본 발명의 항-TRPV1 항체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 치료되는(또는 예방되는) 통증은 캡사이신과 TRPV1의 활성화의 동일한(또는 유사한) 기전을 갖는 자극에 의한 TPRV1의 활성화(예를 들어, 캡사이신의 구조적 및/또는 기능적 유사체에 의한 활성화)와 관련된 (또는 이에 의해 야기되는, 또는 이에 의해 특성화된) 통증이다. 일부 구현예에서, 본 발명에 따라 치료되는(또는 예방되는) 통증은 하나 이상의 내인성 리간드 (또는 내인성 활성화제)에 의한 TPRV1의 활성화와 관련된 (또는 이에 의해 야기되는, 또는 이에 의해 특성화된) 통증이다. 이러한 내인성 리간드는 지질 화합물, 예를 들어 염증 또는 조직 손상 동안 생성된 지질 화합물(예를 들어, 아난다마이드, 리폭시게나제 및 라이소포스파티드산 (LPA)의 대사산물)일 수 있다. 일부 구현예에서, 내인성 리간드는 캡사이신의 구조적 및/또는 기능적 유사체이다.
일부 구현예에서, 본 발명에 따라 치료 (또는 예방)될 통증은 캡사이신 또는 캡사이신 유사체에 의해 유도될 수 있는 통증이다.
본 발명의 추가 양태는 TRPV1의 활성화를 억제하는데 사용하기 위한, 예를 들면, 캡사이신과 동일한 (또는 유사한) TRVP1 활성화 기전을 갖는 자극에 의한 TPRV1의 활성화 (예를 들면, 캡사이신의 구조적 및/또는 기능적 유사체에 의한 활성화)의 억제에 사용하기 위한 본 발명의 항-TRPV1 항체를 제공한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 요법에 사용하기 위한, 특히 통증 치료에 사용하기 위한 본 발명의 면역접합체를 제공한다.
본원에 기재된 바와 같은 생체내 방법 및 용도는 전형적으로 포유동물에서 수행된다. 임의의 포유동물, 예를 들어 인간 및 임의의 가축, 가정용 또는 실험용 동물이 치료될 수 있다. 구체적인 예로는 마우스, 랫트, 피그, 고양이, 개, 양, 토끼, 암소 및 원숭이가 있다. 그러나 바람직하게는 포유동물은 인간이다.
따라서, 본원에 사용된 용어 "동물" 또는 "환자"는 임의의 포유동물, 예를 들어 인간 및 임의의 가축, 가정용 또는 실험실 동물을 포함한다. 구체적인 예로는 마우스, 랫트, 피그, 고양이, 개, 양, 토끼, 암소 및 원숭이가 있다. 그러나 바람직하게는 동물 또는 환자는 인간 대상체이다. 따라서, 본 발명에 따라 치료되는 대상체 또는 환자는 바람직하게는 인간일 것이다.
일부 구현예에서, 대상체 또는 환자는 통증이 있는 사람 (또는 통증으로 고통받고 있거나 겪고 있는 사람), 또는 통증을 가질 위험이 있거나 통증이 발생할 위험이 있는 사람일 것이다.
일부 구현예에서, 치료될 대상체는 TRPV1이 상향 조절된 조직을 갖는다. 그러한 경우, 대상체는 높은 (또는 더 높은) 통증 인식을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 치료될 대상체는 TRPV1이 민감화되어 대상체가 낮은 (또는 보다 낮은) 통증 역치를 갖는 조직을 갖는다.
대안적으로 볼 때, 본 발명은 본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 통증을 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 기재된 본 발명의 치료적 용도의 구현예는 준용하여 본 발명의 이러한 양태에 적용한다.
본 발명은 또한 TPRV1의 활성화, 예를 들어 캡사이신과 동일한 (또는 유사한) TRPV1 활성화 기전을 갖는 자극에 의한 활성화 (예를 들어 캡사이신의 구조적 및/또는 기능적 유사체에 의한 활성)를 특징으로 하는 질환의 치료 방법을 제공하고, 상기 방법은 필요한 환자에게 본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 본 발명의 치료적 용도의 구현예는 준용하여 본 발명의 이러한 양태에 적용한다.
치료적 유효량은 임상 평가를 기반으로 결정되며 쉽게 모니터링할 수 있다.
추가로 대안적으로 보면, 본 발명은 요법에 사용하기 위한 약제의 제조에서의, 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 바람직한 요법은 본 명세서의 다른 곳에서 기술된 바와 같은 통증 요법이다. 본원에 기재된 본 발명의 치료적 용도의 구현예는 준용하여 본 발명의 이러한 양태에 적용한다.
추가로 대안적으로 보면, 본 발명은 TPRV1의 활성화, 예를 들어 캡사이신과 동일한 (또는 유사한) TRPV1 활성화 기전을 갖는 자극에 의한 활성화 (예를 들어 캡사이신의 구조적 및/또는 기능적 유사체에 의한 활성)를 특징으로 하는 질환의 치료를 위한 본원에서 정의된 바와 같은 본 발명의 항체의 용도를 제공한다. 선호되는 용도는 통증 치료이다. 본원에 기재된 본 발명의 치료적 용도의 구현예는 준용하여 본 발명의 이러한 양태에 적용한다.
본 발명의 항체 및 조성물, 방법 및 용도는 다른 치료제 및 진단과 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항-TRPV1 항체와 "조합하여" 사용하기 위한 생물 제제, 바람직하게는 진단제 또는 치료제와 관련하여, 용어 "조합하여"는 다양한 구현예를 포괄하도록 간결하게 사용된다. 따라서 "조합하여" 용어는 과학 용어에서 달리 구체적으로 언급되거나 명확하지 않는 한 조합된 조성물, 의약품, 칵테일, 키트, 방법 및 1차 및 2차 의료 용도의 다양한 형식에 적용된다.
따라서, 본 발명의 "조합된" 구현예는 예를 들어, 본 발명의 항-TRPV1 항체는 네이키드 항체이고 이에 작동적으로 부착되지 않은 제제 또는 치료제와 조합하여 사용되는 경우를 포함한다. 본 발명의 다른 "조합된" 구현예에서, 본 발명의 항-TRPV1 항체는 항체 자체가 제제 또는 치료제와 작동가능하게 회합되거나 조합되는 면역접합체이다. 작동적 부착은 본 명세서에 기술되고 당업계에 공지된 모든 형태의 직접 및 간접 부착을 포함한다.
"조합된" 용도는, 특히 치료제와 조합된 본 발명의 항-TRPV1 항체와 관련하여, 또한 조합된 조성물, 약제, 칵테일, 키트, 방법, 및 제1 및 제2 의료 용도를 포함하고, 치료제는 전구약물의 형태이다. 이러한 구현예에서, 전구약물을 약물의 기능적 형태로 전환할 수 있는 활성화 성분은 다시 본 발명의 항-TRPV1 항체와 작동적으로 연관될 수 있다.
따라서, 조합된 조성물, 약제, 칵테일, 키트, 방법, 및 제1 및 제2 의료 용도가 바람직하게는 진단제, 더욱 바람직하게는 치료제의 관점에서 기술되는 경우, 조합은 네이키드 항체 및 면역접합체인 항-TRPV1 항체를 포함하고, 본 발명의 생체내 구현예의 실시는 네이키드 항체 또는 면역접합체 및 생물 제제, 진단제 또는 치료제의 사전, 동시 또는 후속 투여를 수반하고; 단, 일부 접합 또는 비접합 형태에서 일부 형태의 항체 및 일부 형태의 생물 제제, 진단제 또는 치료제의 전체 제공이 달성되어야 한다.
본 발명의 효과의 상기 및 다른 설명은 작동의 조합 모드, 부착된 작용제(들)의 유형 등을 설명하기 위해 단순화를 위해 이루어진다. 이러한 설명적 접근법은 본 발명의 항-TRPV1 항체의 유익한 특성의 과소상태화 또는 과단순화로 해석되지 않아야 한다. 따라서, 이러한 항체 자체는 항-TRPV1 특성을 갖고, 이러한 항체의 면역접합체는 이들 특성을 유지하고, 이들을 부착된 작용제의 특성과 조합할 것이고; 추가로, 항체 및 임의의 부착된 작용제의 조합된 효과가 전형적으로 증진되고/거나 확대될 것임이 이해될 것이다.
따라서, 본 발명은 선택적으로 적어도 제1 조성물 또는 용기에, 생물학적 유효량의 적어도 본 발명의 제1 항-TRPV1 항체, 또는 항원-결합 단편 또는 이러한 항-TRPV1 항체의 면역접합체; 및 생물학적 유효량의 적어도 제2 생물 제제, 구성요소 또는 시스템을 포함하는 조성물, 약제학적 조성물, 치료적 키트 및 의약 칵테일을 제공한다.
"적어도 제2 생물 제제, 구성요소 또는 시스템"은 종종 치료제 또는 진단 제제, 구성요소 또는 시스템일 것이지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 예를 들어, 적어도 제2 생물 제제, 성분 또는 시스템은 항체의 변형을 위한 성분 및/또는 항체에 다른 제제를 부착하기 위한 성분을 포함할 수 있다.
치료제 또는 진단제가 적어도 제2의 생물 제제, 성분 또는 시스템으로서 포함되는 경우, 이러한 치료제 및/또는 진단제는 전형적으로 상기 정의된 장애 중 하나 이상의 치료 또는 진단과 관련하여 사용하기 위한 것일 것이다.
따라서, 특정 구현예에서 "적어도 제2 치료제"가 치료 키트 또는 칵테일에 포함될 것이다. 이 용어는 제1 치료제인 본 발명의 항-TRPV1 항체와 관련하여 선택된다.
본 발명의 특정 구현예에서, 제2 치료제는 추가의 통증 요법제 또는 통증과 연관된 (또는 이를 특징으로 하거나 유발하는) 질환을 위한 제제일 수 있다.
본 발명의 조성물, 키트 및/또는 약제과 관련하여, 치료제의 조합된 유효량은 단일 용기 또는 용기 수단 내에 포함될 수 있거나, 별개의 용기 또는 용기 수단 내에 포함될 수 있다. 칵테일은 전형적으로 함께 사용하기 위해 함께 혼합된다. 정맥내 투여용으로 제형화된 제제가 종종 선호될 것이다. 영상화 구성요소도 포함될 수 있다. 키트는 또한 적어도 제1 항체 및 포함된 하나 이상의 다른 생물 제제를 사용하기 위한 지침을 포함할 수 있다.
일반적으로 말해서, 적어도 제2 치료제는 예를 들어 단일 약제학적 조성물 또는 밀접하게 함께 투여된 2개의 약제학적 조성물로부터 본 발명의 항-TRPV1 항체와 실질적으로 동시에 동물 또는 환자에게 투여될 수 있다.
대안적으로, 적어도 제2 치료제는 본 발명의 항-TRPV1 항체의 투여에 순차적인 시간에 동물 또는 환자에게 투여될 수 있다. 본원에 사용된 "순차적으로"는 적어도 제2 치료제가 본 발명의 항-TRPV1 항체의 투여와 별개의 시간에 동물 또는 환자에게 투여되도록 "시차를 둔"을 의미한다. 전형적으로, 두 제제는 두 제제가 각각의 치료 효과를 발휘할 수 있도록 효과적으로 이격된 시간에 투여되며, 즉 "생물학적 유효 시간 간격"으로 투여된다. 적어도 제2 치료제는 본 발명의 항-TRPV1 항체 이전의 생물학적으로 유효한 시간에, 또는 그 치료제 이후의 생물학적으로 유효한 시간에 동물 또는 환자에게 투여될 수 있다.
또 다른 양태는 본 명세서에 정의된 바와 같은 본 발명의 항체 또는 다른 단백질의 적절한 양을 대상체 또는 샘플에 투여하고 대상체 또는 샘플에서 본 발명의 항체 또는 다른 단백질의 존재 및/또는 양 및/또는 위치를 검출하는 것을 포함하는 대상체 또는 샘플의 영상화 방법이다.
영상화 응용에 사용하기 위해, 본 발명의 항체는 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I와 같은 방사성 불투과성 또는 방사성 동위원소; 방사성 방출기(예를 들어, α, β, 또는 γ 방출기); 형광(형광단) 또는 화학발광(발색단) 화합물, 예를 들어 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민 또는 루시페린; 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다제 또는 양고추냉이 퍼옥시다제와 같은 효소; 영상화제; 또는 금속 이온; 또는 특정 동족 검출가능한 모이어티에 결합함으로써 검출될 수 있는 비오틴과 같은 화학적 모이어티, 예를 들어 표지화된 아비딘/스트렙타비딘과 같은 검출가능한 마커로 표지화될 수 있다. 항체 또는 항체 단편과 같은 결합 단백질에 표지를 부착하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 검출 가능한 마커는 테스트 샘플에서 결합 단백질-항원 복합체의 존재, 양 또는 위치를 검사하도록 허용한다.
본 발명은 또한 검출가능한 신호를 직접적으로 또는 간접적으로 생성하는 표지에 부착된 본 발명의 항체를 포함하는 영상화제를 포함한다. 적절한 표지는 본원의 다른 곳에 설명되어 있다.
본 발명은 본 발명의 단리된 펩티드(단리된 에피토프), 항체, 면역접합체 또는 조성물 중 하나 이상, 또는 본 발명의 항체를 인코딩하는 핵산 분자 중 하나 이상, 또는 또는 본 발명의 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 재조합 발현 벡터, 또는 본 발명의 재조합 발현 벡터 또는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 숙주 세포 또는 바이러스를 포함하는 키트를 추가로 포함한다. 바람직하게는 상기 키트는 본원에 기재된 바와 같은 방법 및 용도, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 치료제 및 방법에 사용하기 위한 것이거나 본원에 기재된 바와 같은 시험관내 검정 또는 방법에 사용하기 위한 것이다. 이러한 키트 내의 항체는 "네이키드(naked)" 항체일 수 있거나 본원의 다른 곳에서 설명된 바와 같은 항체 접합체일 수 있고, 예를 들어 면역접합체일 수 있다. 바람직하게는 상기 키트는 키트 구성요소의 사용 설명서를 포함한다. 바람직하게는 상기 키트는 본원의 다른 곳에 설명된 바와 같은 질환을 치료하기 위한 것이고, 선택적으로 이러한 질환을 치료하기 위한 키트 구성요소의 사용에 대한 설명서를 포함한다.
본원에 정의된 본 발명의 항체는 또한 시험관내 또는 생체내 적용 및 검정을 위한 분자 도구로서 사용될 수 있다. 항체는 항원 결합 부위를 가지므로, 이들은 특정 결합 쌍의 구성원으로 기능할 수 있으며 이러한 분자는 특정 결합 쌍 구성원이 필요한 임의의 검정에서 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 항체를 포함하는 시약 및 예를 들어 시험관 내 또는 생체 내 검정에서 분자 도구로서 이러한 항체의 용도를 제공한다.
본원에 개시된 뉴클레오티드(nt) 및 아미노산(a.a.) 서열 및 이들의 서열 식별자(서열 번호)의 목록 및 표
모든 뉴클레오티드 서열은 이 기술 분야의 관례에 따라 본원에서 5'에서 3'으로 인용된다.
인간 TRPV1의 아미노산 서열(서열번호:1)
Figure pct00009
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV3의 아미노산 서열(서열번호:2)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV4의 아미노산 서열(서열번호:3)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV5의 아미노산 서열(서열번호:4)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV6의 아미노산 서열(서열번호:5)
IEDGKNDS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV7의 아미노산 서열(서열번호:6)
IEDGKNDSLPSESTSH
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV8의 아미노산 서열(서열번호:7)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASR
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV9의 아미노산 서열(서열번호:8)
LPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV10의 아미노산 서열(서열번호:9)
RWRGPASRPPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV11의 아미노산 서열(서열번호:10)
PPDSSYNS
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV12의 아미노산 서열(서열번호:11)
LYSTSLELFKFTI
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV13의 아미노산 서열(서열번호:12)
GMGDLEFTENYDF
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV14의 아미노산 서열(서열번호:13)
EPMNYDPDGSIEDAG
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하지 않는 단리된 펩티드 OTV15의 아미노산 서열(서열번호:14)
ESTSHRWRGPA
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV3의 아미노산 서열(서열번호:16)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
서열번호:2와 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV4의 아미노산 서열(서열번호:17)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS
서열번호:3과 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV5의 아미노산 서열(서열번호:18)
(Pra-)CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC(CONH2)
서열번호:4와 비교하여, 이 펩티드는 N-말단 및 C-말단에 추가의 시스테인 잔기를 갖는다. 펩티드는 또한 C-말단에서 아미드화되고 N-말단에 프로파르길 기(Pra-)를 갖는다. 이 펩티드는 환형이고, 이 펩티드는 말단 시스테인 잔기를 통해 연결(고리화)된다. 프로파르길 기는 펩티드를 펩티드 담체(예를 들어, KLH)에 부착하는 수단을 제공한다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV6의 아미노산 서열(서열번호:19)
CIEDGKNDS
서열번호:5와 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV7의 아미노산 서열(서열번호:20)
CIEDGKNDSLPSESTSH
서열번호:6과 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가의 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV8의 아미노산 서열(서열번호:21)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASR
서열번호:7과 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV9의 아미노산 서열(서열번호:22)
LPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC
서열번호:8과 비교하여, 이 펩티드는 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV10의 아미노산 서열(서열번호:23)
RWRGPASRPPDSSYNSC
서열번호:9와 비교하여, 이 펩티드는 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV11의 아미노산 서열(서열번호:24)
PPDSSYNSC
서열번호:10과 비교하여, 이 펩티드는 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV12의 아미노산 서열(서열번호:25)
LYSTSLELFKFTIC
서열번호:11과 비교하여, 이 펩티드는 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV13의 아미노산 서열(서열번호:26)
CGMGDLEFTENYDF
서열번호:12와 비교하여, 이 펩티드는 N-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV14의 아미노산 서열(서열번호:27)
(Pra-)CEPMNYDPDGSIEDAGC(-CONH2)
서열번호:13과 비교하여, 이 펩티드는 N-말단 및 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다. 펩티드는 또한 C-말단에서 아미드화되고 N-말단에 프로파르길 기(Pra-)를 갖는다. 이 펩티드는 고리형이고 형태적 에피토프를 나타내며 펩티드는 말단 시스테인 잔기를 통해 연결(고리화)된다. 프로파르길 기는 펩티드를 펩티드 담체(예를 들어, KLH)에 부착하는 수단을 제공한다.
항체 생성을 위해 존재하는 추가 변형을 포함하는 단리된 펩티드 OTV15의 아미노산 서열(서열번호:28)
(Pra-)CESTSHRWRGPAC(-CONH2)
서열번호:14와 비교하여, 이 펩티드는 N-말단 및 C-말단에 추가적인 시스테인 잔기를 갖는다. 펩티드는 또한 C-말단에서 아미드화되고 N-말단에 프로파르길 기(Pra-)를 갖는다. 이 펩티드는 환형이고, 이 펩티드는 말단 시스테인 잔기를 통해 연결(고리화)된다. 프로파르길 기는 펩티드를 펩티드 담체(예를 들어, KLH)에 부착하는 수단을 제공한다.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
본 발명의 OT-Ab1, OT-Ab-2 및 OT-Ab-3 항체의 VL(즉, 경쇄) CDR1 아미노산 서열은 상기 표 D의 공통 서열 내에 속한다.
Figure pct00017
Figure pct00018
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1 및 46D9-1 항체의 VH (즉 중쇄) CDR1, CDR2 및 CDR3의 아미노산 서열 및 VL (경쇄) CDR 1 서열은 각각 상기 표 V의 공통 서열 내에 속한다.
Figure pct00052
본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1, OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3 항체의 VL (즉 경쇄) CDR1 아미노산 서열은 각각 상기 표 X의 공통 서열 내에 속한다.
Figure pct00053
본 발명의 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 18E10-1, OT-Ab2 및 OT-Ab3 항체의 VL (즉 경쇄) CDR3의 아미노산 서열은 각각 상기 표 Z의 공통 서열 내에 속한다.
Figure pct00054
본 발명의 17E11-1, 17E9-1 및 OT-Ab1 항체의 VL (즉 경쇄) CDR3의 아미노산 서열은 각각 상기 표 BB의 공통 서열 내에 속한다.
본 발명은 이제 하기 도면을 참조하여 하기 비제한적인 예에서 추가로 설명될 것이다:
도 1: OTV4 다클론성 항체(캡사이신 활성 n=6, 열 활성 n=6), OTV5 다클론성 항체(캡사이신 활성 n=6, 열 활성 n=5), OTV12 다클론성 항체(캡사이신 활성 n=7, 열 활성 n=5), AMG 517(캡사이신 활성 n=5, 열 활성 n=4), 마바트렙(Mavatrep)(캡사이신 활성 n=3, 열 활성 n=3) 또는 대조군 항체 (캡사이신 활성 n=4, 열 활성 n=7)로 처리 후 열 활성화된 또는 캡사이신 활성화된 TRPV1-활성의 억제. 상기 대조군 항체는 토끼 감마 글로불린(RRID: AB_2532177 - Thermofisher, 카탈로그 번호 31887)이었다. TRPV1의 열 활성화 및 캡사이신 활성화의 억제를 분석하기 위해, 마바트렙 및 AMG517를 동등한 농도에서 평가한 반면, 상기 항체로의 TRPV1의 열 활성화의 억제를 TRPV1의 캡사이신 활성화의 억제의 평가를 위해 사용된 항체의 농도의 5배로 평가하였다. 캡사이신 활성화의 억제를 패치-클램프 실험으로 평가하였고, 열 활성화의 억제를 열 유도 TRPV1-매개 칼슘 흡수의 형광 강도 기록으로 평가하였다.
도 2: OTV4 다클론성 항체, OTV5 다클론성 항체, OTV12 다클론성 항체, AMG 517, 마바트렙 또는 대조군 항체로의 처리 후 캡사이신 유도 TRPV1-전류의 패치 클램프 기록. 상기 대조군 항체는 토끼 감마 글로불린(RRID: AB_2532177 - Thermofisher, 카탈로그 번호 31887)이었다. 0.533 nM OTV4 (n=6), 533 nM OTV4 (n=6), 1.33 nM OTV5 (n=8), 13.3 nM OTV5 (n=6), 0.133 nM OTV12 (n=6), 13.3 nM OTV12 (n=7), 100 nM 마바트렙 (n=5), 100 nM AMG 517 (n=3) 또는 730 nM 대조군 항체 (n=4) 중 하나로 처리한 후, 캡사이신 단독의 활성화에 대한 진폭의 백분율로 계산된, 항체의 존재하에 캡사이신으로의 활성화에 대한 전류 진폭을 제시하였다. 각 데이터 포인트(n)는 단일 세포를 나타낸다. 항체 처리(OTV4, OTV5 및 OTV12)를 대조군 항체 처리와 비교하였다. 던넷 사후 검정과 병행하여 일원(one-way) 분산 분석으로 통계적 분석을 수행하였고, p < 0.05를 통계적으로 유의한 것으로 간주하였다. 별표 2개 = 0.01 미만의 p 값. 데이터는 평균 ±SEM으로 제시하였다.
도 3: OTV4 다클론성 항체, OTV5 다클론성 항체, OTV12 다클론성 항체, AMG 517, 마바트렙 또는 대조군 항체로의 처리 후, 열 유도 TRPV1-매개 칼슘 흡수의 형광 강도 기록. 상기 대조군 항체는 토끼 감마 글로불린(RRID: AB_2532177 - Thermofisher, 카탈로그 번호 31887)이었다. BiopenR을 사용하여 항체 용액을 전달하였고, 가열-프로브를 사용하여 42℃까지의 가열을 달성하였다. 열의 2개 펄스를 적용하였는데, 두 번째 것은 항체의 존재하에 이루어졌다. 270 nM OTV4 항체(n=10), 2.7 μM OTV4 항체(n=6), 6.7 nM OTV5 항체(n=5), 67 nM OTV5 항체(n=5), 0.67 nM OTV12 항체(n=6), 67 nM OTV12 항체(n=5), 100 nM 마바트렙 (n=3), 100 nM AMG-517(n=4) 또는 37 μM 대조군 항체(n=7) 중 어느 하나로 처리한 후, 열 단독의 제1 활성화에 대한 진폭의 백분율로 계산된, 항체의 존재 하에 열에 의한 제2 활성화에 대한 형광 강도를 제시하였다. 각 데이터 포인트(n)는 실험의 번호와 동일하고, 각각은 하나 이상의 세포를 함유한다. 항체 처리(OTV4, OTV5 & OTV12)를 대조군 항체로의 처리와 비교하였다. 던넷 사후 검정과 병행하여 일원 분산 분석으로 통계적 분석을 수행하였고, p < 0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주하였다. 별표 2개 = 0.01 미만의 p 값. 별표 3개 = 0.001 미만의 p 값. 데이터는 평균 ±SEM으로 제시하였다.
도 4: hTRPV1에 대한 캡사이신 유도 칼슘 흡수의 억제. hTRPV1을 발현하는 CHO 세포를 37℃에서 30분 동안 칼슘 지시약 Fluo-3 AM과 함께, 그런 다음 실온에서 1시간 동안 항체(OTV4 n=12, OTV7 n=12, OTV9 n=12, OTV12 n=11, OTV13 n=11, 또는 대조군 항체 n=12 (ThermoFischer # 31887))와 함께 배양하였다. 이어서 상기 세포를 덮은 항체 용액에 1μM 캡사이신 및 150μM Ca2 +를 적용하기 전과 후에 플레이트 판독기를 사용하여 상기 세포 내의 칼슘 함량을 모니터링하였다. 캡사이신 활성화 단독에 대한 칼슘 흡수 대비, 각 항체에 대한 전체 칼슘 흡수를 정규화하였다(즉 캡사이신 + 칼슘; 도 4에서 "Cap"). % 잔존 활성은 도 4에 "Cap"으로 표지된 1μM 캡사이신 및 150μM Ca2 + 기준치(항체 없는 대조군)와 비교할 때 남아 있는 활성의 양을 의미한다. 순전한 예로서, 30% 잔존 활성은 상기 활성이 70% 억제되었음을 의미할 것이다. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시하였다. 크루스칼-왈리스 검정과, 이어서 Dunn's 다중 비교를 사용하여 통계적 유의성을 판단하였다. 별표 1개 = 0.05 미만의 p 값. 별표 2개 = 0.01 미만의 p 값. 별표 4개 = 0.0001 미만의 p 값.
도 5: FACS 및 TRPV1-발현 CHO 세포(+TRPV1)를 사용하여 TRPV1 항체에 대한 결합 특성을 평가하였다. 후보 항체(10μg/ml) 및 후속 이차 항체 염색(형광 염료에 접합된 항-마우스 IgG)과 함께 생존 세포를 배양하고, 유동 세포측정 분석을 수행하였다. 또한 TRPV1-비발현 CHO-세포(-TRPV1)에 대한 동일한 항체를 스크리닝하여 세포에 대한 비특이적 결합을 검출하였다. 상기 이차 항체는 또한 음성 대조군으로 사용하여 비특이적 결합을 검출하였다.
도 6: 상기 패치 클램프 방법을 사용하여 TRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 캡사이신(100nM 캡사이신) 반응시 항체의 억제 활성을 측정하였다. 캡사이신 유도 전류를 완전히 억제하는 양성 대조군으로서 소분자 길항제 AMG517 및 마바트렙을 포함시켰다. hTRPV1을 100 nM 캡사이신을 사용하여 후속 4배로 활성화시켰다. hTRPV1 발현 세포를 제3 활성화 이전에 항체 또는 소분자로 전처리하고, 제3 활성화 중에 캡사이신과 함께 항체 또는 소분자를 첨가하였다. 상기 제1, 제2 및 제4 활성화는 캡사이신 단독으로 이루어졌다. 항체의 존재 하에 제3 전류 피크의 진폭을 전류 피크 2 및 4의 진폭의 평균과 비교하였다. (OT-Ab1 n=5, OT-Ab2 n=9, OT-Ab3 n=9, 마바트렙 n=5, AMG517 n=3). % 억제는 (1-((피크 3)/((피크 2+피크 4)/2)))*100이다. 데이터는 평균 ± SEM으로서 제시하였다.
도 7: 항체 OT-Ab1에 의한 TRPV1 캡사이신 유도 전류의 용량-의존적 억제를 100nM 캡사이신 및 3가지 농도의 OT-Ab1(49nM n=5, 122nM n=4, 243nM n=5)에서 평가하였다. Axopatch 200B(Molecular Devices, USA) 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여, 전체 세포 기록을 수행하였다. 상기 세포를 -60mV로 고정하고, 10 kHz의 샘플링 빈도 및 2 kHz에서 여과된 저주파 통과를 갖는 전류 신호를 기록하였다. 디지털/유사체 샘플링(Axon Digidata 1550) 및 획득 소프트웨어(Clampex 버전 10.7, Molecular Devices)를 사용하여 상기 패치-클램프 기록을 획득하였다. 100nM의 캡사이신을 사용하여 hTRPV1을 4 후속 배로 활성화하였다. 제3 활성화 이전에 항체로 hTRPV1 발현 세포를 전처리하였고, 제3 활성화 중에 캡사이신과 함께 항체를 첨가하였다. 상기 제1, 제2 및 제4 활성화는 캡사이신 단독으로 이루어졌다. 항체의 존재하에 제3 전류 피크의 진폭을 전류 피크 2 및 4의 진폭의 평균과 비교하였다. % 억제는 (1-((피크 3)/((피크 2+피크 4)/2)))*100이다. 일원 ANOVA로 통계적 평가를 수행하였다. 통계적 유의성은 아래와 같이 표현된다: *p<0.05, **p<0.01, ****p<0.0001. 데이터는 평균 ± SEM으로서 제시하였다.
도 8: 항체 OT-Ab1에 의한 TRPV1 캡사이신 유도 전류의 억제를 300nM 캡사이신 및 하나의 농도의 OT-Ab1(122 nM)에서 평가하였다. 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여 전체 세포 기록을 수행하였다. 300 nM 캡사이신을 사용하여 hTRPV1을 4 후속 배로 활성화하였다. 제3 활성화 이전에 항체 또는 비히클로 hTRPV1 발현 세포를 전처리하였고, 제3 활성화 중에 캡사이신과 함께 항체 또는 비히클을 첨가하였다. 상기 제1, 제2 및 제4 활성화는 캡사이신 단독으로 이루어졌다. 항체 또는 비히클의 존재 하에 제3 전류 피크 대 제2 전류 피크의 비율을 계산하였다. 항체 처리된 세포 및 비히클 처리된 세포에 대한 비를 비교함으로써, %억제를 계산하였다. % 억제는 (1-((피크 3항체/피크 2항체)/(피크 3비히클/피크 2비히클)))*100이다. 스튜던트 t-검정으로 통계적 평가를 수행하였다. 통계적 유의성은 아래와 같이 표시된다: **p<0.01. n =3. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시하였다.
도 9: 항체 OT-Ab1에 의한 TRPV1 NADA 유도 전류의 용량-의존적 억제를 1μM NADA 및 2가지 농도의 OT-Ab1(49 nM n=5, 243 nM n=4)에서 평가하였다. Axopatch 200B (Molecular Devices, USA) 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여, 전체 세포 기록을 수행하였다. 상기 세포를 -60 mV로 고정하였고, 10 kHz의 샘플링 빈도 및 2 kHz에서 여과된 저주파 통과를 갖는 전류 신호를 기록하였다. 디지털/유사체 샘플링(Axon Digidata 1550) 및 획득 소프트웨어(Clampex 버전 10.7, Molecular Devices)를 사용하여, 패치-클램프 기록을 획득하였다. 1 uM NADA를 사용하여, hTRPV1을 4 후속 배로 활성화하였다. 제3 활성화 이전에 항체로 hTRPV1 발현 세포를 전처리하였고, 제3 활성화 중에 NADA와 함께 항체를 첨가하였다. 상기 제1, 제2 및 제4 활성화는 NADA 단독으로 이루어졌다. 항체의 존재 하에 제3 전류 피크의 진폭을 전류 피크 2 및 4의 진폭의 평균과 비교하였다. % 억제는 (1-((피크 3)/((피크 2+피크 4)/2)))*100이다. 스튜던트 t-검정으로, 통계적 평가를 수행하였다. 통계적 유의성은 아래와 같이 표시된다: ***p<0.001. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시하였다.
도 10: Ca2 +-영상화를 사용하여 TRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 가열 반응(45℃)에 대한 항체의 억제 활성을 측정하였다. 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포로 전달하였고, 이들 세포를 도 3에 설명된 바와 같은 형광 능력을 구비한 현미경으로 관찰하였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 BiopenR을 사용하여 상기 항체를 상기 세포로 전달하였다. 열로 인해 칼슘 이온이 TRPV1 채널을 통해 세포로 유입되었고, 상기 유입은 세포 내에서 칼슘 지시약을 사용하여 측정하였다. 2가지 펄스의 열을 적용하였고, 제2 펄스는 항체(OT-Ab1, OT-Ab2, 또는 OT-Ab3) 또는 비히클의 존재 하에 적용하였다. 항체 및 비히클과 관련하여, 제2 피크 진폭 대 제1 피크 진폭의 비를 계산하였다. 항체의 상기 언급된 비율을 비히클의 비율과 비교하여 %억제를 계산하였다. %억제는 (1-((피크 2항체/피크 1항체)/(피크 2비히클/피크 1비히클)))*100이다. 소분자 길항제 AMG517 및 마바트렙는 배쓰 용액에 직접 첨가하였고, 상기 마이크로유체 디바이스를 사용하여 전달하지 않았다. 상기 소분자로 처리된 세포를 상기 항체의 경우처럼 열 펄스를 갖는 동일한 프로토콜을 사용하여 활성화하였고, 상기 항체의 경우와 동일한 방식으로 분석하였다. 항체 n=6, 소분자 n=5. 데이터는평균 ± SEM으로서 제시하였다.
도 11: 모 마우스 하이브리도마 클론의 상청액 중 단클론성 항체의 제제가 TRPV1-발현 세포(CHO TRPV1) 및 TRPV1-비발현 세포(HEK293 및 CHO S)에 결합했는지 여부에 대한 FACS 판단. 또한 비-특이적 결합에 대한 검사로서 마우스 IgG의 결합, TRPV1에 대한 이전에 확인된 결합이 있는 토끼 다클론성 양성 대조군 항체(양성 항체 대조군), 및 배경 형광을 측정하기 위한 순수한 PBS로의 검사를 나타내었다. MFI = 평균 형광 강도. 항체 1개당 N=1.
도 12: 정제된 단클론성 항체의 제제의 TRPV1-발현 세포(CHO TRPV1) 및 TRPV1-비발현 세포(CHO S)에 결합 여부에 대한 FACS 판단. 또한 비-특이적 결합에 대한 검사 및 세포 배경 형광의 척도인 미처리된 세포("염색되지 않은")를 사용한 검사로서, 항-마우스 이차 항체 IgG ("2차 항체")의 결합을 나타내었다. MFI = 평균 형광 강도. 항체 1개당 N=1.
도 13: 항체 16F1-1(253 nM), 15D8-1(130 nM), 17E11-1(110 nM) 및 17E9-1(83 nM)을 사용하여, 패치 클램프로 항체에 의한 TRPV1 캡사이신 유도 전류의 억제를 평가하였다. 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여 전체 세포 기록을 수행하였다. 항체의 유무에 관계없이 세포를 100 nM 캡사이신에 노출시킴으로써, 전류 진폭을 측정하였다. 상기 세포를 완충액 중 100 nM 캡사이신에 노출시켰고, 이어서 60초 동안 완충액에, 60초 동안 완충액 중 항체에, 그런 다음 20초 동안 완충액 중 항체와 100 nM 캡사이신에 노출시켰다. 항체+캡사이신으로 자극시킬 때의 피크의 진폭을 캡사이신 단독으로 자극시킬 때의 피크의 진폭으로 나누었다. 결과 값에 100을 곱하여 대조 반응(캡사이신 단독)의 백분율로서 항체+캡사이신 자극 중 세포 반응을 획득하였다. 데이터는 평균 ±SEM으로 제시하였다. 항체 1개당 N=3.
도 14 (도 14a 내지 14c는 전체로서 도 14를 나타낸다): 항체 15D8-1, 16F1-1, 17E9-1, 17E11-1, 41B5-1, 및 46B7-1에 의한 TRPV1-매개 캡사이신 유도 Ca2 + 흡수의 억제의 FLIPR(형광 영상화 플레이트 판독기) 판단. 상기 x-축은 항체 농도(nM)를 나타내고, y-축은 형광률([캡사이신 첨가 후 특정 시점의 형광] - [캡사이신 첨가 전 형광])을 나타낸다. 데이터 포인트당 N=1. 각 항체에 대한 계산된 IC50 값을 그래프에 나타내었다.
도 15: Ca2 +-영상화를 사용하여 TRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 가열 반응(45℃)에 대한 항체의 억제 활성을 측정하였다. 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포로 전달하였고, 이를 다른 곳에 기재된 바와 같은 형광 능력을 구비한 현미경으로 관찰하였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 Biopen을 사용하여 상기 항체를 세포에 전달하였다. 열로 인해 칼슘 이온이 TRPV1 채널을 통해 세포로 유입되었고, 상기 세포 내에서 칼슘 지시약을 사용하여 유입을 측정하였다. 2가지 열 펄스를 적용하였는데, 제2 펄스는 항체(15D8-1 또는 17E11-1) 또는 비히클의 존재 하에 적용하였다. 항체 및 비히클과 관련하여, 제2 피크 진폭 대 제1 피크 진폭의 비율을 계산하였고, 2가지 처리를 비교하였다. 일원 분산 분석(ANOVA)으로 통계적 분석을 수행하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로서 제시하였다. 15D8-1, 17E11-1 및 비히클 각각에 대해, N = 6, 6 및 10.
도 16: Ca2 +-영상화를 사용하여 TRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 가열 반응(45℃)에 대한 항체의 억제 활성을 측정하였다. 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포에 전달하였고, 이를 다른 곳에 기재된 바와 같은 형광 능력을 구비한 현미경으로 관찰하였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 Biopen을 사용하여 상기 항체를 세포에 전달하였다. 열로 인해 칼슘 이온이 TRPV1 채널을 통해 세포로 유입되었고, 상기 세포 내에서 칼슘 지시약을 사용하여 유입을 측정하였다. 2가지 열 펄스를 적용하였는데, 제2 펄스는 항체(41B5-1 또는 46B7-1) 또는 비히클의 존재 하에 적용하였다. 항체 및 비히클과 관련하여, 제2 피크 진폭 대 제1 피크 진폭의 비율을 계산하였고, 두 가지 처리를 비교하였다. 일원 분산 분석(ANOVA)으로, 통계적 분석을 수행하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시하였다. 41B5-1, 46B7-1 및 비히클 각각에 대한 N = 9, 7 및 10.
실시예
실시예 1 - 펩티드 및 항체 생성 및 검사
물질 및 방법
화학물질
세포 배양 배지(글루타민을 함유한 DMEM/Ham's F12 및 Ham's F12), 우태 혈청, 및 아큐타제(Accutase)를 PAA에서 구입하였다. 제오신을 Invitrogen에서 구입하였다. 대조군 항체(토끼 감마 글로불린 - RRID: AB_2532177 - 카탈로그 번호 31887)는 Thermo Fisher Scientific에서 구입하였다. 마바트렙 및 AMG517은 MedChemExpress에서 구입하였다. 그 밖의 다른 모든 화학물질을 Sigma에서 구입하였다. 다음의 완충액을 사용하였다; F: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4, G: 120 mM KCl, 2 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM EGTA, pH 7.2. H: 50mM Tris, 100 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1mM EDTA, 0.01% Triton X-100 및 1mM DTT.
세포 배양물
hTRPV1(인간 TRPV1)의 테트라사이클린 조절 발현 시스템(T-REx)이 있는 부착 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포를 10% 우태 혈청(FBS), 제오신(350 μg/ml) 및 블라스티사이딘(5 μg/ml)을 보충한 배지(글루타민 함유 DMEM/F12)에서 배양하였다. 사용하기 18~24 시간 전에, hTRPV1 발현을 유도하기 위해 세포를 10% FBS 및 독시사이클린(1 μg/ml)을 보충한 배지에서 배양하였다.
항체 개발
항체 생성을 위해 사용된 각 에피토프(펩티드)의 경우, 추가의 시스테인(들) 잔기(들)을 포함하는 합성 펩티드를 합성 및 정제하였다. 이들 합성 펩티드 서열은 서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:18 (OTV5), 서열번호:19 (OTV6), 서열번호:20 (OTV7), 서열번호:21 (OTV8), 서열번호:22 (OTV9), 서열번호:23 (OTV10), 서열번호:24 (OTV11), 서열번호:25 (OTV12), 서열번호:26 (OTV13), 서열번호:27 (OTV14) 및 서열번호:28 (OTV15)로 제시된다.
선형 에피토프(펩티드) (서열번호:16 (OTV3), 서열번호:17 (OTV4), 서열번호:19 (OTV6), 서열번호:20 (OTV7), 서열번호:21 (OTV8), 서열번호:22 (OTV9), 서열번호:23 (OTV10), 서열번호:24 (OTV11), 서열번호:25 (OTV12), 서열번호:26 (OTV13))의 경우, 펩티드(에피토프)를 말단 시스테인 잔기에 의해 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH)에 연결하였다. 사이클릭 에피토프(펩티드)(서열번호: 18 (OTV5), 서열번호:27 (OTV14) 및 서열번호:28 (OTV15))의 경우, 이어서 상기 펩티드(에피토프)를 프로파르길 작용기을 통해 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH)에 연결하였다. 상기 KLH-연결 에피토프(펩티드)를 사용하여 상기 KLH 연결 펩티드의 주입 후 특이적 무병원체(SPF) 토끼의 면역화에 의해 다클론성 항체를 생산하였다.
상기 펩티드를 캡핑 단계가 포함된 고상 펩티드 합성(SPPS)으로 생산하였다. 말단 시스테인을 산화시키고, 펩티드 단부 사이에 디설파이드 브릿지를 형성함으로써 고리화를 수행하였다. 시스테인 상의 SH-작용기를 KLH 상의 NH2-작용기에 결합시킴으로써, 선형 펩티드를 KLH에 접합시켰다. 상기 사이클릭 펩티드는 상기 펩티드 상의 프로파르길 작용기 및 KLH 상의 아지드를 사용하는 클릭 화학(click chemistry)에 의해 접합시켰다. 단백질 G 칼럼을 사용하고, 이어서 펩티드에 대한 친화성 정제를 사용하여 항체를 정제하였다.
상기 항체에 친화성 정제를 수행하고 ELISA 검사를 시행하였다. ELISA 검사는, 상기 펩티드가 표면 상에 부동화되면(데이터 도시되지 않음) 상기 항체가 그것의 각각의 펩티드(즉, 관련된 항체를 생산하기 위해 토끼를 면역화하는 데 사용되는 각각의 펩티드)에 결합할 수 있음을 보여주었다.
Innovagen AB (Lund, Sweden)에서 합성 펩티드 및 다클론성 항체의 생성을 수행하였다.
전기생리학
전기생리적 패치 클램프 기록 - OTV4 , OTV5 & OTV12
Axopatch 200B (Molecular Devices, USA) 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, G
Figure pct00055
teborg, Sweden)를 사용하여 전체 세포 기록을 수행하였다. 상기에 설명된 바와 같이, 상기 세포는 부착 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포였다. 배쓰 및 피펫(보로실리케이트 유리 모세관, i.d. 0.86 mm; GC150F-7.5, Harvard Apparatus Ltd) 용액은 각각 완충액 F 및 G를 함유하였다. 상기 세포를 -60 mV로 고정하였고, 10 kHz의 샘플링 빈도 및 2 kHz에서 여과된 저주파 통과를 갖는 전류 신호를 기록하였다. 디지털/유사체 샘플링(Axon Digidata 1550) 및 획득 소프트웨어(Clampex 버전 10.7, Molecular Devices)를 사용하여 패치-클램프 기록을 획득하였다. OTV4 항체, OTV5 항체, OTV12 항체, AMG 517, 마바트렙 및 대조군 항체(ThermoFischer # 31887)를 검사하는 실험에서, 항체 또는 소분자(소분자는 AMG 517 및 마바트렙)의 유무에 관계없이 세포를 캡사이신에 노출시킴으로써 전류 진폭을 측정하였다. 상기 세포를 ~20초 동안 완충액 F 중 100 nM 캡사이신에, 이어서 60초 동안 완충액 F에, 60초 동안 완충액 F 중 항체(또는 소분자)에, 그런 다음 ~20초 동안 완충액 F 중 항체(또는 소분자)와 함께 100 nM 캡사이신에 노출시켰다.
처리 중 밀폐(seal) 저항이 크게 변화된 측정은 분석에서 배제시켰다.
전기생리학 패치 클램프 - 데이터 분석 - OTV4 , OTV5 & OTV12
모든 측정에 대해, 항체+캡사이신으로의 자극 중 기록된 피크의 진폭을 캡사이신으로의 자극 중 기록된 피크의 진폭으로 나누었다. 적어도 2개의 상이한 세포 배양 접시에서 유래된 세포 상에서 측정을 수행하였다. 각 데이터 포인트(n)는 단일 세포를 나타낸다. 각 항체를 상기 대조군 항체와 비교하는 던넷 사후 검정과 조합하여 일원 분산 분석으로 통계적 분석을 수행하였다. p < 0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주하였다. Shapiro-Wilk 검정을 사용하여, 정상여부를 평가하였다. 데이터는 평균 ±SEM으로 제시하였다.
TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제를 평가하기 위한 칼슘 영상화 방법
hTRPV1을 발현하는 CHO 세포를 37℃에서 30분 동안 칼슘 지시약 Fluo-3 AM 4.4 μM과 함께 배양하였고, 이어서 세척한 후, 실온에서 1시간 동안 PBS에 용해된 다양한 농도의 항체(OTV4 n=12, OTV7 n=12, OTV9 n=12, OTV12 n=11, OTV13 n=11, 또는 대조군 항체 n=12(ThermoFischer # 31887))와 함께 배양하였다. 그러고 나서, 상기 세포를 덮고 있는 항체 용액에 1 μM 캡사이신 및 150 μM Ca2 +을 적용하기 전과 적용한 후에 플레이트 판독기(CLARIOstar, BMG Labtech)를 사용하여 형광 강도를 측정함으로써, 상기 세포 내의 칼슘 함량을 모니터링하였다. 항체로 사전 배양된 샘플에서 캡사이신에 의해 야기된 전체 칼슘 흡수를 캡사이신 활성화(즉 캡사이신 + 칼슘) 단독(즉 사전 항체 배양 없음)으로 야기된 칼슘 흡수에 대비하여 정규화하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로 제시하였다. 크루스칼-왈리스 검정과, 이어서 Dunn's 다중 비교를 사용하여, 통계적 유의성을 판단하였다.
영상화
가열 반응의 칼슘 영상화
hTRPV1 열 반응(42℃)에 대한 항체의 효과를 측정하기 위해, 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포에 전달하였다. 상기 세포는, 상기에 설명된 바와 같이, 부착 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 Biopen Prime(Fluicell AB)을 사용하여 상기 항체를 세포에 전달하였다. 열로 인해 hTRPV1 채널의 개방 가능성이 증가함으로써, 칼슘 이온의 유입을 야기한다. 칼슘 지시약 Fluo-3을 사용하여 이와 같은 유입을 측정하였다. 상기 세포를 성장시킨 것(50mm 미코팅된, MatTek)과 동일한 유리바닥 페트리 접시에서 상기 실험을 수행하였다. Fluo-3 AM 배양을 포함하여 모든 세포 실험은 DMEM/F-12, 페놀 레드 없는 HEPES 세포 배양 배지(Gibco)를 사용하여 수행하였다. "AM" 에스테르는 초기에 Fluo-3 지표에 부착되어, 이것에 세포 투과성을 부여한다. 일단 상기 세포 배양 배지에 첨가되면, Fluo-3 AM은 상기 세포에 들어가고, "AM" 에스테르 일부는 절단되어, 상기 세포 내에 Fluo-3 지표를 남겨 놓는다. 상기 Fluo-3 지표 자체는 세포 불투과성이라서, 상기 세포 내에 잔존한다.
공초점 현미경검사
Nikon Diaphot 200 도립 현미경에 부착된 이중 Calypso 레이저(Cobolt, Solna, Sweden) 및 Nikon Plan Apo 20x 건식 대물렌즈(N.A. 0.75 Nikon, Tokyo, Japan)를 구비한 Bio-Rad MRC 1024 공초점 장치를 사용하여 세포를 이미지화하였다. 사용된 여기 파장은 491 nm(Fluo-3)였고, 방출된 빛은 522 nM 필터를 통해 수집하였다. 20x 대물렌즈의 전체 상에 대한 이미지를 획득하였다. 프레임률은 7초당 1개의 이미지였고, 화소 해상도는 1024x1024였다.
열 프로브
레이저 가열 시스템을 사용하여 선택된 세포 주변의 온도를 국소적으로 42℃로 올렸다. Fluicell AB로 상기 레이저 가열 시스템을 내장화하였다. 이와 같은 광학 국소 가열 시스템은 20 A 벤치톱 전원(ARO-4320, Arroyo Instruments)에 의해 구동되는 CW 4W 1470-nm 반도체 다이오드 레이저(4PN-106, Seminex Corporation, USA)를 기반으로 한다. 이것은 105μm 코어, 0.22 NA, 광대역 광섬유(M63L01, Thorlabs)를 통해 국소화된 빔을 상기 샘플(본원의 경우, 세포의 작용기)에 전달한다. 상기 광섬유는, 페트리 접시에서 임의의 원하는 위치에 정밀하게 배치될 수 있도록, 5mm 광섬유 캐뉼라(CFMLC21L05, 105 μm, 0.22NA, Thorlabs)에 체결하였다.
광섬유의 끝단을 빠져나가는 좁은 빔의 1470 nm 방사선으로 인해 그것의 경로 내의 물이 국소적으로 가열된다. 가열 정도는 상기 레이저의 전류 설정에 의해 조절되는 빔 강도 및 섬유 및 샘플의 끝단 사이의 거리에 의해 결정된다. 본 연구에서, 전류 및 거리는 42℃의 샘플 온도를 달성하도록 최적화하였다. 이전에 기재된 기술 (Wegrzyn, I., 등 An optofluidic temperature probe. Sensors (Switzerland) (2013), 13 (4), 4289-4302, doi:10.3390/s130404289)을 사용하여, 유체 디바이스(Biopen, Fluicell AB)를 사용하여, 형광 반응을 탐지하여, 거리, 인가 전류 및 온도 사이의 관계를 보정하였다.
바이오펨 ( Biopen )
Biopen Prime(Fluicell AB)을 사용하여 항체를 세포에 전달하였다. 상기 Biopen은 끝단이 페트리 접시에서 세포의 선택된 작용기에 인접하게 정렬될 수 있도록 현미조작기를 사용하여 용이하게 배치되어, 주위 환경의 오염 없이 국소적으로 화합물을 전달할 수 있는 자립형 마이크로유체 디바이스이다. Biopen에 의해 전달되는 상기 용액은 Biopen 상의 웰에 장입되어 화합물 소비를 최소화한다. 용액의 전환은 전용 소프트웨어로 제어하였다.
열 반응의 칼슘 영상화 - 기록
영상화 하기 30분 전에, 상기 세포 배지를 36μM Fluo-3-AM (F1242, 열-Fisher)을 함유한 배지로 바꾸었고, 실온에서 30분 동안 샘플을 배양한 후, 세척하고 Ca2 + 를 함유한 신선한 성장 배지(DMEM/F-12, 페놀 레드 없는 HEPES 세포 배양 배지(Gibco))를 제공하였다. 현미조작기를 사용하여, Biopen을 세포의 작용기 상부에 배치하였다. 상기 열-프로브를 접시 바닥에서 상부로 10μm 떨어진 위치에, 그리고 Biopen 유출구에서 약 100μm 떨어진 위치에 배치하였다. Biopen에서의 용액 전달에 어떤 세포가 노출되었는지를 정의하기 위해, 설포로다민 B의 초기 펄스를 전달하였다. 설포로다민 B 형광이 감소된 후, 상기 세포를 7초 동안(42℃) 광학적으로 가열하였고, Fluo-3에서의 형광 반응을 측정하였다(세포 반응, 피크 #1). 후속적으로, 항체 용액 (OTV4, OTV5, OTV12 항체 또는 대조군 항체(ThermoFischer # 31887)) 또는 소분자 용액(2μM 마바트렙 또는 2μM AMG-517)를 90초 동안 전달하였고, 적용 중 마지막 7초 동안 제2 열 펄스를 적용하였다(세포 반응, 피크 #2).
열 반응의 칼슘 영상화의 데이터 분석
Image J and GraphPad Prism 소프트웨어에서 데이터 분석을 수행하였다. 상기 설포로다민 B 펄스가 Biopen 용액 전달에 의해 도달된 세포를 시각화하였고, 그에 따라 상기 측정에 포함될 세포를 규정하였다. 이들 세포의 형광 강도를 측정하고 각 시점에 대해 평균값을 구하여, 일 실험에서 자극된 세포들에 대한 평균 곡선을 획득하였다. 피크 #1의 높이를 측정하여 항체의 부재 하의 열 반응을 판단하였고, 피크 #2의 높이를 측정하여 항체의 존재 하의 열 반응을 판단하였다. 피크 #2 값을 피크# 1로 나누어 이들의 비를 획득하였다. OTV4, OTV5 및 OTV12 항체에 대한 피크의 비를 대조군 항체와 비교하였다.
던넷 사후 검정과 함께 일원 분산 분석으로 통계적 분석을 수행하였다. p < 0.05를 통계적으로 유의미한 것으로 간주하였다. Shapiro-Wilk 검정을 사용하여 정상 여부를 평가하였다. 데이터는 평균 ±SEM으로 제시하였다. n은 평균적으로 5~10개 세포를 함유한 실험의 개수이다.
결과 및 논의
항체 OTV4, OTV5 및 OTV12로 명명된, TRPV1의 모듈러스 선택적 길항적 항체를 상기에 설명된 바와 같이(즉, 상기 KLH-연결 OTV4, OTV5 및 OTV12로 토끼를 면역화함으로써) 개발하였다. 이들 모듈러스 선택적 항체는, TRPV1의 열 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 활성화를 우선적으로 억제할 수 있어서, 이전의 소분자 길항제에서 관찰된 바 있는 열 관련 부작용을 축소 또는 방지할 수 있다.
TRPV1의 캡사이신 및 열 활성화의 억제 정도를 각각 비교하여, OTV4, OTV5 및 OTV12 항체의 모듈러스 선택적 효과를 결정하였다. 상기 활성 프로파일을 소분자 길항제 마바트렙(Manitpisitkul P, 등 Scand . J. Pain (2018), 18(2):151-164) 및 AMG-517(Gavva, N. R. 등 Pain (2008), 136 (1-2), 202-210)의 활성 프로파일과 비교하였다(도 1). 전체세포 패치-클램프 기록을 사용하여 캡사이신 유도 채널 활성의 억제를 평가하고, 형광이 있는 세포내 Ca2 + 흐름을 측정하여 열 유도 활성에 미치는 영향을 평가하였는데, 여기서 상기 항체 용액은 BiopenR (Fluicell AB) 시스템을 사용하여 전달하였다.
상기 패치-클램프 실험(캡사이신 유도 TRPV1 활성화를 평가함) 중에, 세포를 캡사이신에 노출시키고, 이어서 항체(또는 소분자) 및 최종적으로 항체(또는 소분자)의 존재 하에 캡사이신에 노출시켰다. 형광 실험(열 유도 TRPV1 활성화를 평가함)중에, 세포를 열(42℃)에 노출시키고, 이어서 항체(또는 소분자) 및 최종적으로 항체(또는 소분자)의 존재 하에 열(42℃)에 노출시켰다.
상기 항체에 의한 열 및 캡사이신 억제의 수준을 도 1에서 볼 수 있는데, 여기서 상기 항체는, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제의 평가를 위해 사용된 항체 농도와 비교할 때, 열 유도 활성화의 억제를 위한 평가를 위해 5 배 더 높은 농도로 사용한 반면, 마바트렙 및 AMG517은 동등한 농도에서 평가하였다.
OTV4 항체는 533 nM에서 캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 26.5% 억제를 이끌어내었고, 2.7 μM에서 온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 -4.1% 억제를 이끌어내었다(도 1).
OTV5 항체는 13.3 nM에서 캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 62.4% 억제를 이끌어내었고, 67 nM에서 온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 10.0% 억제를 이끌어내었다 (도 1).
OTV12 항체는 13.3 nM에서 캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 34.1% 억제를 이끌어내었고, 67 nM에서 온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 -12.8% 억제를 이끌어내었다(도 1).
마바트렙은 100 nM에서 캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 100% 억제를 이끌어내었고, 100 nM에서 온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 89.3% 억제를 이끌어내었다(도 1).
AMG517은 100 nM에서 캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 100% 억제의 캡사이신 억제를 이끌어내었고, 100 nM에서 온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 88.8% 억제를 이끌어내었다(도 1).
상기 대조군 항체는 TRPV1의 캡사이신- 또는 온도 유도 활성화에서 어떤 억제도 이끌어내지 않았다(도 1).
평가된 모든 항체 농도는 도 2(캡사이신 유도 TRPV1 활성화의 억제와 관련하여) 및 도 3(온도(열) 유도 TRPV1 활성화의 억제와 관련하여)에서 볼 수 있다.
요약하면, 3가지 항체 모두(OTV4, OTV5 및 OTV12 항체), 열 활성화의 평가를 5 배 더 높은 항체 농도로 수행하였음에도, 열-활성화와 비교하여 더 높은 캡사이신 활성화의 억제를 이끌어내었고, OTV5의 경우 최고 차이를 보여주었으며, 이로써 모듈러스-선택적 활성 프로파일을 입증하였다. 반면에, 마바트렙 및 AMG517는 100 nM에서 캡사이신 및 열 활성화를 거의 동등한 수준으로 억제하였다. 이것은 분명히 OTV4, OTV5 및 OTV12 항체가 단순한 TRPV1 길항제보다 많고; 이들 항체가, TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 선택적으로 억제함을 입증한다. OTV4 및 OTV12 항체, 그리고 특히 OTV5 항체는 TRPV1-표적화 통증 요법을 위한 유망한 새로운 후보이고 현재 약물 후보로 추구되고 있다. 이들은 첫 번째 치료적 항-TRPV1 항체가 될 뿐만 아니라, 이온 통로를 위해 개발된 첫 번째 치료적 항체가 될 것이다. 본 데이터는 또한 OTV4, OTV5 및 OTV12 항체를 생성하기 위해 사용되는 에피토프(펩티드) 아미노산 서열에 상응하는(또는 이에 본질적으로 상응하는) TRPV1 상의 에피토프가 본원에 기재된 바와 같이 모듈러스 선택적 항체를 식별하기 위해 표적(즉, 항체를 발생시키기, 반대)에 유용한 에피토프임을 성립시킨다.
도 4는 OTV4 및 OTV12 다클론성 항체에 대한 데이터를 함유할 뿐만 아니라, 추가로 OTV7, OTV9 및 OTV13 다클론성 항체가 TRPV1의캡사이신 유도 활성화를 상당히 억제할 수 있음을 보여준다. 도 4 실험의 경우, 패치-클램프 방법에 의한 캡사이신 유도 TRPV1 활성화를 평가하기 보다, 칼슘 영상화를 이용하였고, 도 4는 이들 OTV 항체가 캡사이신 유도 칼슘 흡수를 억제할 수 있음을 보여준다. hTRPV1 발현 세포를 30분 동안 4.4 μM의 Fluo-3 AM과 함께 배양하였다. 그 후에, 세포를 세척하고 1시간 동안 다양한 농도로 PBS에 용해된 항체와 함께 배양하였다. CLARIOstar (BMG Labtech) 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 1 μM의 캡사이신 및 150 μM의 Ca2+의 적용 전과 적용 후에 형광 강도를 측정하였다.
상기 OTV7, OTV9 및 OTV13 다클론성 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제하는 것으로 여겨진다. 상기에 설명된 바와 같이, 발명자들은 또한 다클론성 항체 OTV3, OTV6, OTV8, OTV10, OTV11, OTV13, OTV14 및 OTV15를 생성한 바 있다. 이들 항체 또한 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도된 활성화를 우선적으로 억제하는 것으로 여겨진다.
상기 내용에서 상기 발명자들이 TRPV1의 억제를 달성하기 위해 항체의 표적으로 매우 유용한 TRPV1 상의 에피토프에 상응하는(또는 이에 본질적으로 상응하는) 특정 펩티드 서열(에피토프 서열)을 확인한 바 있음이 분명하다. 특히, 발명자들은 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 우선적인 억제를 달성하기 위해 항체의 표적으로 매우 유용한 TRPV1 상의 에피토프를 확인한 바 있다. TRPV1의 열 축의 동반 억제를 방지(또는 축소)하기 때문에 TRPV1의 캡사이신 축의 억제를 위해 치료적으로 유리한 선택성을 갖는 항체가 다른 TRPV1 억제제(본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이)에서 관찰되는 역효과, 예컨대 이상고열 또는 열 감각의 손실을 방지 (또는 축소)시킬 것이다.
실시예 2 - 단클론성 항체 ( OT - Ab1 , OT - Ab2 및 OT - Ab - 3로 명명된 항체)의 생성 및 검사
물질 및 방법
하이브리도마 기술을 사용한 단클론성 항체(마우스 IgG )의 생성
열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH)(KLH 연결된 펩티드는 실시예 1에 설명된 바와 같음)에 연결된 서열번호:18의 사이클릭 펩티드(OTV5)로 마우스를 면역화하였다. ELISA로 면역 반응을 평가하였다. 면역화 공정 후, ELISA 및/또는 FACS 혈청 스크리닝을 기반으로 마우스를 선택하고, 마우스의 비장 세포를 추출하여 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마 세포를 생산하였다. ELISA 및/또는 FACS로 하이브리도마를 스크리닝하여, 양성 클론(즉, 상기 표적에 결합하는 항체를 생산하는 것)을 획득하였다. 이와 같은 스크리닝 후, 상기 선택된 하이브리도마의 하위 클로닝을 수행하고, ELISA 및/또는 FACS를 사용하여 추가의 스크리닝을 시행하였다. 이어서, 하위클로닝된 하이브리도마를 사용하여 단클론성 항체를 생산하였고, 상기 항체를 정제하였다. ELISA 및/또는 FACS를 사용하여, 정제된 항체의 결합 특성을 검사하였다. 3가지 단클론성 항체, OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3을 식별하였다.
마우스 하이브리도마 IgG의 클로닝 및 시퀀싱
마우스 하이브리도마에서, cDNA를 합성할 RNA를 준비하였다. cDNA의 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH) 영역을 증폭하여, 별도로 표준 클로닝 벡터로 클로닝하였다. 양성 클론의 식별은 콜로니 PCR과, 뒤 이어서 겔 전기영동에 의해 이루어졌다. 양성 클론에서 VL 및 VH DNA 및 아미노산 서열을 수득하였다.
항체 OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3의 서열은 본원의 표 C, B 및 A에 표시되었다.
OT-Ab1의 IgG 유형은 IgG2b/카파이고, OT-Ab2는 IgG1/카파이고, OT-Ab3은 IgG1/카파이다.
형광-활성화 세포 분류( FACS )를 사용한 TRPV1 -발현 CHO 세포에 항체의 결합 여부의 결정
단클론성 항체 제제의 경우, CHO-TRPV1 세포를 4℃에서 30분 동안 50μl의 항체 제제(혈청, 하이브리도마 상청액 또는 정제된 단클론성 항체)와 함께 배양하였고, 이어서 4℃에서 30분 동안 50 μl의 이차 항체(항-마우스 IgG, 형광 프로브에 접합됨)와 배양하였다. 음성 대조군은 이차 항체 단독(50μL의 샘플 중에 10 mg/mL의 항-마우스 IgG)이었다. 세포의 형광 신호를 측정함으로써 결합을 평가하였고, 평균 형광 강도(MFI)로 보고하였다. CHO-TRPV1 세포는 다른 곳에 기재된 바와 같이 hTRPV1(인간 TRPV1)의 테트라사이클린 조절 발현 시스템(T-REx)을 가진 부착 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포였다. 독시사이클린을 사용하여 TRPV1의 발현을 유도하였다(+TRPV1로 명명됨). 비-유도 세포는 -TRPV1로 명명한다.
패치 클램프에 의한 캡사이신 유도 전류 또는 NADA 유도 전류의 측정
Axopatch 200B(Molecular Devices, USA) 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여 전체 세포 기록을 수행하였다. 상기 세포(140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4 중)를 피펫(i.d. 0.86 mm; GC150F-7.5, Harvard Apparatus Ltd; 120 mM KCl, 2 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM EGTA으로 채움, pH 7.2, 끝단 저항 3~6 MOhm)을 사용하여 -60 mV로 고정시키고, 10 kHz의 샘플링 빈도 및 2 kHz에서 여과된 저주파 통과를 갖는 전류 신호를 기록하였다. 디지털/유사체 샘플링(Axon Digidata 1550) 및 획득 소프트웨어(Clampex 버전 10.7, Molecular Devices)를 사용하여, 패치-클램프 기록을 획득하였다. 항체의 유무에 관계없이, 세포를 100 nM 캡사이신, 300 nM 캡사이신 또는 1 μM NADA에 노출시킴으로써, 전류 진폭을 측정하였다. 100nM 캡사이신 또는 1μM NADA의 효과를 검사하는 실험을 위해, 우선 세포를 캡사이신(또는 NADA) 단독으로 2회 처리하여 피크 1 및 2를 생성하였고, 이어서 항체로 처리하고, 그런 다음 캡사이신 (또는 NADA)와 함께 항체로 처리하여 피크 3을 생성하였고, 이어서 캡사이신(또는 NADA) 단독으로 처리하여 피크 4를 생성하였다. 그러고 나서, (1-((피크 3) /((피크 2 + 피크 4)/2)))*100으로 효과를 계산하였다. 이와 같은 효과 계산 방법은 문헌(Nikolaev, M. V. 등 TRPV1 activation power can switch an action mode for its polypeptide ligands. PLoS One 12, 1-16, 2017)에 기재된 바 있다. 300nM 캡사이신의 효과를 검사하는 실험을 위해, 우선 세포를 캡사이신 단독으로 2회 처리하여 피크 1 및 2를 생성하였고, 이어서 항체 또는 비히클로 처리하고, 그런 다음 캡사이신과 함께 항체 또는 비히클로 처리하여, 피크 3을 생성하였고, 이어서 캡사이신 단독으로 처리하여 피크 4를 생성하였다. 그러고 나서, (1-((피크 3항체/피크 2항체)/(피크 3비히클/피크 2비히클)))*100로 효과를 계산하였다.
Ca 2 + -영상화를 사용한 열 유도 전류의 측정
hTRPV1 열 반응에 대한 항체의 효과를 측정하기 위해, 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포에 전달(45oC)하였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 Biopen Prime(Fluicell AB, Sweden)을 사용하여 상기 항체를 세포에 전달하였다. 열로 인해 칼슘 이온의 유입을 유발하는 hTRPV1 채널의 개방 가능성이 증가되었다. 칼슘 지시약 Fluo-3을 사용하여, 이와 같은 유입을 측정하였다. 세포를 배양할 때와 마찬가지로 동일한 유리 바닥 페트리 접시(50mm 미코팅된, MatTek)에서 상기 실험을 수행하였다. 상기 세포는 상기에 설명된 바와 같이 부착 TRPV1 발현 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포였다. Fluo-3 AM 배양을 포함하는 모든 세포 실험을 완충액 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4를 사용하여 수행하였다. Nikon Diaphot 200 도립 현미경에 부착된 이중 Calypso 레이저(Cobolt, Solna, Sweden) 및 Nikon Plan Apo 20x 건식 대물렌즈(N.A. 0.75 Nikon, Tokyo, Japan)를 구비한 Bio-Rad MRC 1024 공초점를 사용하여 세포를 이미지화하였다. 이 실시예에서, 항체의 효과는 아래와 같이 결정하였다: 우선 세포에 열 펄스를 적용하고, 이어서 세포를 냉각시키고, 그런 다음 항체 또는 소분자와, 열 펄스를 조합하여 투여하고, 이어서 냉각시켰다. 상기 항체의 경우와 동일한 프로토콜을 사용하여 배쓰 용액에 직접 소분자 마바트렙 또는 AG517을 적용하였다. 칼슘 이온의 세포로의 열 유도 유입에 대한 항체(또는 소분자 억제제 AMG517 또는 마바트렙)의 효과를 결정함으로써, TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 상기 항체(또는 소분자 억제제 AMG517 또는 마바트렙)의 효과를 평가하였다.
피크 진폭은 칼슘 지시약 Fluo-3을 사용하여 측정된 세포로의 칼슘 유입을 나타낸다.
항체 및 비히클 모두에 대한 제2 피크 진폭 대 제1 피크 진폭의 비를 계산하였다. 상기 항체의 상기 언급된 비를 상기 비히클의 비와 비교함으로써, %억제를 계산하였다. % 억제는 (1-((피크 2항체/피크 1항체)/(피크 2비히클/피크 1비히클)))*100이다.
현미경 검사의 도움 하에 생존 세포에 결합한 항체의 결정
현미경검사로 생존 세포에 대한 OT-Ab1의 결합을 입증하기 위해, 생존 TRPV1-발현 CHO-세포를 1시간 동안 OT-Ab1과 함께 배양하고, 후속적으로 포름알데하이드 용액에 고정시켜, 형광 이차 항체로 염색하고 Hoechst로 대조염색하여, 핵을 시각화하였다. 형광 능력이 구비된 공초점 현미경검사로 세포를 관찰하였다. 세포막에 위치한 형광 신호로 결합을 평가하였다.
결과 및 논의
TRPV1은 그것의 작은 세포외 영역 때문에 항체로 접근하기 매우 어려운 것으로 여겨지는 TRP-계열의 구성원인 이온 통로이다. 약물 표적으로서 그것의 반박 불가한 중요성에도 불구하고, 이온 통로는 항체 표적으로 상당히 활용되지 못하고 있다. 본 연구에서, 3가지 양식-선택적 단클론성 항체(mAbs)을 개발하였는데, 이들은 우리가 아는 바로는 TRPV1에 대항하여 개발된 첫 번째 억제 mAbs임을 차치하더라도, 이들은 이온 통로에 대항하여 개발된 가장 기능적인 복합 항체이다. 이들 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제한다.
인간 TRPV1에 대항한 마우스 단클론성 항체 3가지, 즉 OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3은 하이브리도마 기술을 사용하여 생산하였다. hTRPV1에 결합하는 특이성은 FACS를 사용하여, 그리고 유도성 hTRPV1 발현을 나타내는 CHO 세포주를 활용하여 결정하였다. OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3은 hTRPV1에 강한 특이적 결합을 보여주는 hTRPV1-비발현 세포가 아닌 hTRPV1-발현 세포에 결합된다(도 5).
OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3은 몇 개의 상이한 방식으로 hTRPV1 활성화에 대한 효과를 평가하였다. 패치 클램프 방법을 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 캡사이신 반응에 미치는 항체의 억제 활성을 측정하였다. 검사 대상이었던 일 양태는 100 nM 또는 300 nM의 캡사이신 농도에서 캡사이신 유도 전류를 억제하는 경향이었다. OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3은 캡사이신 유도 전류를 억제하였다(도 6). hTRPV1 길항제 AMG517 및 마바트렙(양성 대조군)은 캡사이신 유도 전류를 완전히 억제하였다(도 6). OT-Ab1에 의한 캡사이신 유도 전류(100 nM 캡사이신)의 억제는 용량-의존적이어서, OT-Ab1의 농도가 늘어날 경우 억제가 늘어남이 관찰되었다. 용량과 효과의 관계는 통계적으로 유의미하였다(도 7). 122 nM OT-Ab1의 캡사이신 유도 전류의 억제 또한 300 nM 캡사이신에서 확인되었다(도 8).
또한 패치 클램프 방법을 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 NADA 반응에 대한 OT-Ab1 억제 활성을 측정하였다. 항체 OT-Ab1에 의한 hTRPV1 NADA 유도 전류의 용량-의존적 억제가 1 μM NADA 및 2가지 농도의 OT-Ab1에서 관찰되어, 용량과 효과의 관계는 통계적으로 유의미하였다(도 9). NADA(N-아라키도노일 도파민)은 과학 문헌에 강력한 천연 TRPV1 효능제로 기재된 바 있다. 이것은 엔도칸나비노이드 계열에 속한다. 이로써 NADA가 중추 및 말초 신경계의 통각 및 염증에서 중요한 역할을 함이 시사된다.
Ca2 +-영상화를 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 열 반응에 대한 OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3의 억제 활성을 측정하였다. 소분자 길항제 AMG517 및 마바트렙은 이 실시예에서 열 유도 Ca2 + 흡수를 약 75% 억제한 반면, OT-Ab1, OT-Ab2 및 OT-Ab3은 열 유도 Ca2+ 흡수를 억제하지 않았다(도 10).
또한 형광 현미경검사로 생존 세포 상의 TRPV1에 OT-Ab1의 결합 능력을 평가하였고, OT-Ab1이 생존 TRPV1 발현 세포에 결합하여 세포막에 결합됨(데이터가 도시되지 않음)이 밝혀졌다.
캡사이신 또는 NADA 중 어느 하나에 의한 hTRPV1의 활성화를 억제하지만, 열에 의한 hTRPV1의 활성화를 억제하지 않는 능력은 이들 항체가 양식-선택적 약리학을 보임을 나타내는데, 이는 임상적으로 허용되고 유용한 치료제에 대해 매우 원하는 특성이다.
본 연구에서, 소분자 접근법을 사용하여 실패한 임상적으로 중요한 표적인 hTRPV1을 표적으로 삼는 양식-선택적 단클론성 항체가 개발된 바 있다. 이들 항체는 TRPV1-표적화 통증 요법을 위한 유망한 새로운 후보이고, 현재 약물 후보로 추구되고 있다.
실시예 3 - 단클론성 항체 ( 32C8 -1, 33C9 -1, 34C11 -1, 40B10 -1, 41B5 -1, 43D6 -1, 44E8-1, 46B7 -1, 46D9 -1, 12C9 -1, 12G6-1, 15D8 -1, 16F1-1, 17E11 -1, 17E9-1 및 18E10-1로 명명된 항체)의 생성 및 검사
물질 및 방법
하이브리도마 기술을 사용한 단클론성 항체(마우스 IgG )의 생산
열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌에 연결된 서열번호:16의 선형 펩티드(펩티드 OTV3)로 마우스를 면역화하거나 또는 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH)에 연결된 서열번호:17의 선형 펩티드(펩티드 OTV4)(상기 KLH 연결 펩티드는 실시예 1에 설명된 바와 같음)로 면역화하였다. ELISA로 면역 반응을 평가하였다. 면역화 공정 이후, 혈청의 ELISA 및/또는 FACS 스크리닝을 기초로 마우스를 선택하고, 마우스의 비장 세포를 추출하여 골수종 세포와 융합함으로써 하이브리도마 세포를 생산하였다. ELISA 및/또는 FACS로 하이브리도마를 스크리닝하여 양성 클론(즉, 표적에 결합하는 항체를 생산하는 것)을 수득하였다. 이와 같은 스크리닝 이후, 선택된 하이브리도마의 하위클로닝을 수행하고, ELISA 및/또는 FACS를 사용하여 추가의 스크리닝을 시행하였다. 이어서, 하위클로닝된 하이브리도마를 사용하여 단클론성 항체를 생산하고, 상기 항체를 정제하였다. ELISA 및/또는 FACS를 사용하여, 정제된 항체의 결합 특성을 검사하였다. 16개 단클론성 항체인 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1을 식별하였다. 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1 및 46D9-1 항체를 생성하기 위해 사용한 펩티드(면역원)는 서열번호:16의 펩티드(OTV3)였고, 상기에서 언급된 바와 같이, 이것은 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌에 연결되었다. 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1 항체를 생성하기 위해 사용한 펩티드(면역원)는 서열번호:17의 펩티드(OTV4)였고, 상기에서 언급된 바와 같이, 이것은 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌에 연결되었다. 항체 명칭 각각의 접미사 "-1"은 단지 이들 항체 각각이 각각의 모 하이브리도마(상기 모 하이브리도마는 "-1" 접미사 없이 동일한 명칭을 갖는데, 예를 들어 32C8은 32C8-1 항체(딸 클론)의 모 하이브리도마임)의 딸 클론임을 시사한다.
OTV4-기반 및 OTV5-기반 정제된 항체의 경우, 저장 완충액은 PBS(2.7mM KCl, 1.5mM KH2PO4, 137mM NaCl, 8mM Na2HPO4, pH 7.2)였다.
OTV3-기반 정제된 항체의 경우, 저장 완충액은 PBS-Tween(0.02% Tween 80, 2.7mM KCl, 1.5mM KH2PO4, 137mM NaCl, 8mM Na2HPO4, pH 7.2)이였다.
마우스 하이브리도마 IgG의 클로닝 및 시퀀싱
마우스 하이브리도마에서, cDNA를 합성하는 RNA를 준비하였다. cDNA의 가변 경쇄(VL) 및 가변 중쇄(VH) 영역을 증폭시켜, 별도로 표준 클로닝 벡터로 클로닝하였다. 양성 클론의 식별은 콜로니 PCR에 의해, 이어서 겔 전기영동에 의해 이루어졌다. 양성 클론에서 VL 및 VH DNA 및 아미노산 서열을 수득하였다.
항체 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1의 서열을 본원의 표 E~T에 나타내었다.
15D8-1, 17E11-1 및 12G6-1의 IgG 유형은 IgG1/카파이다. 16F1-1의 IgG 유형은 IgG2a/카파이다. 17E9-1 및 12C9-1의 IgG 유형은 유형 IgG2b/카파이다. 18E10-1의 IgG 유형은 IgG2c/카파이다.
세포 배양물
hTRPV1(인간 TRPV1)의 테트라사이클린 조절된 발현 시스템(T-REx)을 가진 부착 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포를 10% 우태 혈청(FBS), 제오신(350 μg/ml) 및 블라스티사이딘(5 μg/ml)을 보충한 배지(글루타민을 함유한 DMEM/F12)에서 배양하였다. 사용하기 18~24 시간 전에, hTRPV1 발현을 유도하기 위해, 세포를 10% FBS 및 독시사이클린(1 μg/ml)으로 보충한 배지에서 배양하였다.
표준 세포 배양 조건 하에서, HEK293 세포 및 CHO S 세포를 성장시켰다.
형광-활성화된 세포 분류( FACS )를 사용하여 TRPV1 -발현 CHO 세포에 항체의 결합 여부를 결정
FACS 분석을 위한 단클론성 항체 제제를 위해, CHO TRPV1 세포, HEK 293 세포 또는 CHO S 세포를 실온에서 40분 동안 50 μl의 항체 제제(혈청, 하이브리도마 상청액 또는 정제된 단클론성 항체 또는 대조군)와 함께 배양하였고, 이어서 실온에서 30분 동안 100 μl의 이차 항체(항-마우스 IgG, 형광 프로브에 접함됨)와 함께 배양하였다. 세포에서 형광 신호를 측정하여 결합여부를 평가하였고, 이를 평균 형광 강도(MFI)로 보고하였다. CHO TRPV1 세포는 다른 곳에 기재된 바와 같이 hTRPV1(인간 TRPV1)의 테트라사이클린 조절 발현 시스템(T-REx)이 구비된 부착 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포였다. 독시사이클린을 사용하여 TRPV1의 발현을 유도하였다. 음성 대조군 세포로서, CHO S 세포 및 HEK 293 세포를 사용하였다. CHO S 세포는 TRPV1의 기저 발현이 거의 없거나 또는 전무하며, 재조합 단백질의 높은 수준의 발현을 위한 도구로서 사용하는 고밀도 현탁액-적응 세포 유형이다. HEK 293 세포는 TRPV1의 기저 발현이 거의 없거나 또는 전무한, 세포 생물학에 널리 사용되는 인간 배아 신장 293 세포이다.
음성 대조군은 이차 항체 단독(50μL의 샘플 중 10 mg/mL의 항-마우스 IgG)이었다. 비-특이적 결합의, 또 다른 음성 대조군은 마우스 IgG였다. 또 다른 대조군은 염색되지 않은 CHO TRPV1 세포였으며, 이것은 어떤 것으로도 처리되지 않아서 배경 형광의 척도를 제공하는 세포이다.
패치 클램프에 의한 캡사이신 유도 전류의 측정
Axopatch 200B(Molecular Devices, USA) 패치 클램프 증폭기와 함께 패치 클램프 기록용 마이크로유체 디바이스(Dynaflow, Cellectricon AB, Sweden)를 사용하여 전체 세포 기록을 수행하였다. 세포(완충액 A: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4 중)를 피펫(완충액 B: 120 mM KCl, 2 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM EGTA, pH 7.2로 채워짐)을 사용하여, -60 mV로 고정시키고, 10 kHz의 샘플링 빈도 및 2 kHz에서 여과된 저주파 통과를 갖는 전류 신호를 기록하였다. 디지털/유사체 샘플링(Axon Digidata 1550) 및 획득 소프트웨어(Clampex 버전 10.7, Molecular Devices)를 사용하여 패치-클램프 기록을 획득하였다.
항체의 유무에 관계없이, 세포를 100 nM 캡사이신에 노출시켜 전류 진폭을 측정하였다. 상기 세포를 20초 동안 완충액 A 중 100 nM 캡사이신에 노출시키고, 이어서 60초 동안 완충액 A에, 그리고 60초 동안 완충액 A 중 항체에, 이어서 20초 동안 완충액 A 중 항체와 함께 100 nM 캡사이신에 노출시켰다.
데이터는 아래와 같이 분석하였다: 모든 측정에 대해, 항체+캡사이신으로의 자극 중 피크의 진폭을 캡사이신 단독으로의 자극 중 피크의 진폭으로 나누었다. 결과 값에 100을 곱하여 대조 반응(캡사이신 단독)의 백분율로서 항체+캡사이신 자극 중 세포 반응을 수득하였다.
Ca 2 + -영상화를 사용한 열 유도 전류의 측정
hTRPV1 열 반응에 대한 항체의 효과를 측정하기 위해, 광학 가열 시스템을 사용하여 열 펄스를 세포에 전달(45℃)하였다. 상업적 마이크로유체 디바이스인 Biopen Prime(Fluicell AB, Sweden)을 사용하여 상기 항체를 세포에 전달하였다. 열로 인해 칼슘 이온의 유입을 유발하는 hTRPV1 채널의 개방 가능성이 증가된다. 칼슘 지시약 Fluo-3을 사용하여, 이와 같은 유입을 측정하였다. 세포를 배양했던 동일한 유리 바닥 페트리 접시(50mm 미코팅된, MatTek)에서 실험을 수행하였다. 상기에 설명된 바와 같이, 상기 세포는 부착 TRPV1 발현 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포였다. Fluo-3 AM 배양을 포함하는 모든 세포 실험은 HEPES 완충액(140 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4)을 사용하여 수행하였다. Nikon Diaphot 200 도립 현미경에 부착된 이중 Calypso 레이저(Cobolt, Solna, Sweden) 및 Nikon Plan Apo 20x 건식 대물렌즈(N.A. 0.75 Nikon, Tokyo, Japan)를 구비한 Bio-Rad MRC 1024 공초점 장치를 사용하여 세포를 이미지화하였다. 이 실시예에서, 상기 항체의 효과는 아래와 같이 결정하였다: 세포에 먼저 열 펄스를 적용하고, 이어서 냉각시킨 후, 그러고 나서, 항체 또는 소분자에 열 펄스를 조합하여 투여하고, 이어서 냉각시켰다. TRPV1의 열 유도 활성화에 대한 항체의 효과는 칼슘 이온의 세포로의 열 유도 유입에 대한 항체의 효과를 판단함으로써 평가하였다.
피크 진폭은 칼슘 지시약 Fluo-3을 사용하여 측정된 상기 세포로의 칼슘의 유입을 나타낸다.
항체 및 비히클 모두에 대해, 제2 피크 진폭 대 제1 피크 진폭의 비를 계산하였다.
상기 항체의 상기 언급된 비를 상기 비히클의 비와 비교함으로써 % 억제를 계산하였다. % 억제는 (1-((피크 2항체/피크 1항체)/(피크 2비히클/피크 1비히클)))*100이다.
형광 영상화 플레이트 판독기( FLIPR )를 사용한 캡사이신 유도 활성의 측정
유도성 TRPV1 발현을 가진 CHO 세포를 검정 투명 바닥 96-웰 마이크로플레이트(Corning ltd.)에서 배양하고, TRPV1 발현을 유도하였다. 실온에서 30분 동안 HEPES 완충액(140 nM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 1mM MgCl2, 10 mM HEPES, 10 mM D-글루코스, pH 7.4) 중 4μM Fluo-3으로 상기 세포를 배양함으로써, 세포에 Fluo-3 AM 칼슘 지시약(Thermo Fisher, 카탈로그 번호 F1242)을 장입하였다. 세포외 Fluo-3을 제거하기 위해 HEPES 완충액으로 세포를 후속 세척한 후, 연속적으로 희석된 항체를 웰에 첨가하였다. 실온에서 4 분 동안 항체의 존재 하에 세포를 배양하였다. 483 nm(밴드 폭 14nm)에서 여기하고 530(밴드 폭 30nm)에서 방출하는 ClarioSTAR 마이크로플레이트 판독기(BMG Labtech)를 사용하여 형광 측정을 시행하였다. 우선 기준선 형광 강도를 측정하고, 이어서 고정된 양의 캡사이신(HEPES 완충액 중)을 각 웰에 첨가하고(연구 중인 세포의 배치를 위해 이전에 캡사이신의 EC50 값을 나타내는 것으로 성립된 농도의 캡사이신을 제공함, 전형적으로 이와 같은 농도는 더 낮은 nM 범위, 예를 들면 10nM에 속한다), 특정 시간(몇 분 내에) 후에 제2 형광 강도 측정을 수행하였다. EC50은 생물학적 과정의 최대 반응 중 절반을 제공하는 물질의 농도로, 이 경우의 반응은 세포로의 TRPV1-매개 Ca2 +의 진입이다. 데이터는 형광률로 제시하였는데, 이것은 캡사이신을 첨가하고 특정 시간 후의 형광에서 캡사이신 첨가 전 측정된 형광을 차감한 것으로 계산된다. 상기 검사대상 항체에 대한 IC50 값을 계산하였다. IC50 값은 연구 중인 생물학적 과정에 대한 물질의 최대 억제 농도의 절반으로, 이 경우에 캡사이신-유도 세포 TRPV1-매개 Ca2 + 유입이다.
결과 및 논의
본 실시예에 기재된 본 연구에서, 하이브리도마 기술을 사용하여 인간 TRPV1에 대한 16개의 마우스 단클론성 항체인 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1, 46D9-1, 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1, 18E10-1을 생산하였다. FACS를 사용하고 유도성 hTRPV1 발현을 갖는 CHO 세포주를 활용하여, hTRPV1에 대한 결합의 특이성을 결정하였다. 32C8-1, 33C9-1, 34C11-1, 40B10-1, 41B5-1, 43D6-1, 44E8-1, 46B7-1 및 46D9-1 항체가 유래된 모 하이브리도마에서 유래된 하이브리도마 상청액 제제가 hTRPV1-발현 세포에 결합되었으나 hTRPV1-비발현 세포에는 결합하지 않았는데, 이것은 hTRPV1에 대한 강력한 특이적 결합을 시사한다(도 11). 정제된 항체 12C9-1, 12G6-1, 15D8-1, 16F1-1, 17E11-1, 17E9-1 및 18E10-1의 제제가 hTRPV1-발현 세포에 결합되었으나 hTRPV1-비발현 세포에는 결합하지 않았는데, 이는 hTRPV1에 대한 강한 특이적 결합을 시사한다(도 12).
항체의 특정 성질의 추가 검사를 아래에 기재하였다.
15D8-1, 16F1-1, 17E9-1 및 17E11-1을 몇 개의 상이한 방식으로 hTRPV1 활성화에 대한 이들의 효과에 대해 평가하였다. 패치 클램프 방법을 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 캡사이신 반응에 대한 항체의 억제 활성을 측정하였다. 검사대상인 일 양태는 캡사이신 농도 100 nM에서 캡사이신 유도 전류를 억제하는 경향이었다. 항체 15D8-1(130 nM에서), 16F1-1(253 nM에서), 17E9-1(83 nM에서) 및 17E11-1(110 nM에서)은 100 nM 캡사이신에서 캡사이신 유도 전류를 억제하였고, 따라서 이들은 TRPV1의 캡사이신 축의 길항제이다(도 13).
본 발명자들은 FLIPR를 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 항체 15D8-1, 16F1-1, 17E9-1, 17E11-1, 41B5-1 및 46B7-1에 의한 TRPV1-매개 캡사이신 유도 Ca2 + 흡수의 억제 능력을 판단하였다. 억제 효능은 IC50 값으로 표현될 수 있고, 이것은 연구 중인 생물학적 과정을 위한, 이 경우에는 세포 TRPV1-매개 Ca2 + 유입을 위한, 물질의 최대 억제 농도의 절반이다. 이런 점에서 이들 모든 항체가 억제효능을 가진다. 상기 데이터에서 본 발명자들은 대략적인 IC50 값을 계산하였는데 15D8-1의 경우 70 nM, 41B5-1의 경우 170 nM, 46B7-1의 경우 200 nM, 16F1-1의 경우 215 nM, 17E11-1의 경우 230 nM 및 17E9-1의 경우 400 nM이었다(도 14).
또한, TRPV1의 캡사이신 축을 억제하는 항체의 능력에 대해, 항체 44E8-1, 40B10-1, 43D6-1을 검사하였고, 이들 항체 각각은 캡사이신 축에 억제 효과를 나타내었고(데이터 도시되지 않음), 즉, TRPV1의 캡사이신 유도 활성화의 억제를 보여주었다.
Ca2 +-영상화를 사용하여 hTRPV1-발현 CHO 세포에서 hTRPV1 열 반응에 대한 15D8-1, 17E11-1, 41B5-1 및 46B7-1의 억제 활성을 측정하였다(도 15 및 도 16).
비히클 대조군 15D8-1과 비교할 때, 17E11-1 및 41B5-1은 통계적으로 유의미한 방식으로 열 유도 Ca2 + 흡수를 억제하지 않았다. 다시 말해서, 항체 처리 후 TRPV1 열 유도 활성이 대략 100%(여기서 100%는 비히클의 경우) 남아 있었다(도 15 및 도 16). 따라서, 15D8-1, 17E11-1 및 41B5-1은 TRPV1의 열 축의 길항제가 아니다. 상기 데이터는 이 실시예에서 항체 15D8-1,17E11-1 및 41B5-1이 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제함을 보여준다.
이 실시예에 기재된 데이터는 또한 항체 46B7-1이 TRPV1의 열 유도 활성화가 아닌 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제함을 보여준다.
열에 의한 hTRPV1의 활성화가 아닌 캡사이신에 의한 hTRPV1의 활성화를 우선적으로 억제하는 능력은 임상적으로 허용되는 및 유용한 치료제에 대해 매우 원하는 특성인 양식-선택적 약리학을 나타낸다.
본 연구에서, 소분자 접근법을 사용했을 때 실패했던 임상적으로 중요한 표적인 hTRPV1을 표적으로 삼는 양식-선택적 단클론성 항체가 개발되었다. 이들 항체는 TRPV1-표적화 통증 요법을 위한 유망한 새로운 후보이자, 약물 후보로 현재 추구되고 있다.
실시예 4 - 단클론성 항체 ( R4P1 -C1로 명명된 항체)의 생성
물질 및 방법
파아지 디스플레이 기술을 사용한 단클론성 항체( IgG )의 생성
파아지 디스플레이를 위한 항원 혼합물은 각각 합성되고 N-말단 Cys를 통한 3개의 상이한 담체(BSA, OVA + KLH)로 접합된 3개의 상이한 펩티드(OTV3, OTV4, OTV5)로 이루어졌다. 따라서, 전체적으로 9개의 상이한 접합체가 존재하였다(즉 OTV3+BSA, OTV3+OVA, OTV3+KLH, OTV4+BSA, OTV4+OVA, OTV4+KLH, OTV5+BSA, OTV5+OVA 및 OTV5+KLH). BSA은 소 혈청 알부민의 약어이다. OVA는 난백알부민의 약어이다. KLH는 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌의 약어이다.
상기 펩티드 서열은 아래와 같았다:
OTV3: CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS (서열번호:16)
OTV4: CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS (서열번호:17)
OTV5: (Pra-)CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC(-CONH2) (서열번호:18)
사용된 OTV3 및 OTV4 펩티드는 선형 펩티드였다. 사용된 OTV5 펩티드는 사이클릭 펩티드이다.
바이오패닝 ( Biopanning )
시험관에 항원 혼합물을 도포한 후, 세척하고, 차단한 후, 다시 세척하였다. 그러고 나서, 담체(BSA, OVA + KLH)로의 노출에 의해 고갈된 파아지 라이브러리를 첨가한 후, 배양하였다. 이어서 시험관을 다시 세척하고, 파아지 결합제를 글리신 HCl로 용출한 후, 중화시켰다. 용출된 파아지를 증폭을 위해 대장균(E. Coli) 배양물에 첨가하고, 바이오패닝의 추가 시행을 위해 증폭된 파아지를 수집하였다. 최종 바이오패닝 후, ELISA로 다클론성 파아지를 검사하였다.
다클론성 파아지 ELISA
ELISA 플레이트를 담체에 접합된 항원 또는 담체 단독(대조군)으로 도포하고, 이어서 세척하고, 차단하고, 세척한 후, 상기 바이오패닝 단계에서 획득한 증폭된 용출된 파아지를 첨가하였다. 추가의 세척 후, 항-파아지-HRP 항체를 사용하여, 결합된 파아지를 검출하였다.
단클론성 파아지 ELISA
바이오패닝 단계에서 무작위로 선택된 단일 대장균(E. coli) 클론을 채취하여 배양하였다. 파아지를 함유한 상청액을 준비하여 정제하였다. ELISA 플레이트를 담체에 접합된 항원 또는 담체 단독(대조군)으로 도포하고, 이어서 세척, 차단, 세척 후, 정제된 파아지를 첨가하였다. 추가 세척 후, 항-파아지-HRP 항체를 사용하여 결합된 파아지를 검출하였다.
유전자 합성 및 하위- 클로닝
다음과 같이, 벡터 작제물(플라스미드)을 제조하였다. 파아지 디스플레이를 통해 식별된 파아지 클론 R4P1-C1에서 유래된 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 서열의 cDNA를 CHO 세포에서의 포유동물 발현의 최적화 조건으로 화학적으로 합성하고, 이어서 인간 IgG1의 중쇄(HC) 및 경쇄(LC)의 전장 서열을 획득하기 위해, 포유동물 세포 발현 벡터로 하위-클로닝하였다.
항체 R4P1-C1의 서열은 본원의 표 U에 나타내었다.
이 실시예에서 제조한 R4P1-C1 항체의 IgG 유형은 IgG1/카파이다.
단클론성 항체의 발현 및 정제
플라스미드 DNA를 일시적으로 CHO 세포로 공동 형질감염시켰다. 14일 후, 배양 배지를 수집하였고, 이어서 단백질 A/G 칼럼 상에서 재조합 항체를 PBS 완충액(pH 7.5)으로 정제시켰다. 쿠마씨 블루 염색으로 감소된 및 비감소된 SDS-PAGE에 의해 순도를 평가하였다.
결과 및 논의
본 실시예는 파아지 디스플레이에 의한 단클론성 항체의 생산을 기술한다. 이 경우에 사용된 파아지 라이브러리는 상업적으로 입수가능한 인간 미처리(naive) LiAb-Fab 라이브러리(2 x 10E10 변이체의 높은 다양성)였다. 4회에 걸친 바이오패닝 및 ELISA 검사 후, 80개 클론을 선택하여 R4P1-C1, #1, #2, #3, 및 #4로 표현된 파아지 클론의 이와 같은 그룹 내에서 5개의 상이한 서열을 식별하였다. BSA, OVA 또는 KLH 중 하나에 각각 체결된 개별 펩티드 OTV3, OTV4 및 OTV5(총 9개의 펩티드-접합체) 각각에 대한 결합에 대해, ELISA로 이들 파아지 클론 각각을 검사하였다. 이것은 파아지가 그것의 속성으로 인해 비특이적으로 결합할 수 있기 때문에 클론 특이성을 확보하는 데 중요한 확인 단계이다. ELISA 검사(단클론성 파아지 ELISA 검사)에서, 하나의 파아지 Fab 클론인 R4P1-C1이 상기 펩티드 3가지 모두(펩티드-담체 접합체 9개 모두)에 특이적으로 강하게 결합된 반면, 다른 파아지 Fab 클론들은 비-특이적 결합제인 것으로 보인다(하기 표 GG 참조, 모든 파아지는 동일한 농도로 검사하였다).
Figure pct00056
SEQUENCE LISTING <110> Oblique Therapeutics AB <120> TRPV1 Epitopes and Antibodies <130> 69.15.140192/01 <140> PCT/EP2020/085629 <141> 2020-12-10 <150> GB1918103.1 <151> 2019-12-10 <160> 452 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 839 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Lys Lys Trp Ser Ser Thr Asp Leu Gly Ala Ala Ala Asp Pro Leu 1 5 10 15 Gln Lys Asp Thr Cys Pro Asp Pro Leu Asp Gly Asp Pro Asn Ser Arg 20 25 30 Pro Pro Pro Ala Lys Pro Gln Leu Ser Thr Ala Lys Ser Arg Thr Arg 35 40 45 Leu Phe Gly Lys Gly Asp Ser Glu Glu Ala Phe Pro Val Asp Cys Pro 50 55 60 His Glu Glu Gly Glu Leu Asp Ser Cys Pro Thr Ile Thr Val Ser Pro 65 70 75 80 Val Ile Thr Ile Gln Arg Pro Gly Asp Gly Pro Thr Gly Ala Arg Leu 85 90 95 Leu Ser Gln Asp Ser Val Ala Ala Ser Thr Glu Lys Thr Leu Arg Leu 100 105 110 Tyr Asp Arg Arg Ser Ile Phe Glu Ala Val Ala Gln Asn Asn Cys Gln 115 120 125 Asp Leu Glu Ser Leu Leu Leu Phe Leu Gln Lys Ser Lys Lys His Leu 130 135 140 Thr Asp Asn Glu Phe Lys Asp Pro Glu Thr Gly Lys Thr Cys Leu Leu 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attaatccag atagtagtac gataaactat 180 acgccatctc taaaggatga attcatcatc tccagagaca acgccaaaaa tacgctgtac 240 ctgcaaatga gcaaagtgag atctgaggac acagtccttt attactgttc aagagggggg 300 gactactggg gtcaaggaac ctcagtcacc gtctcctca 339 <210> 56 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 56 gatgttgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggttc ccattggaca accagcctcc 60 atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgctg gaaagacata tttgaattgg 120 ttgttacaga ggccaggcca gtctccaaag cgcctaatct atctggtgtc taaactggac 180 tctggagtcc ctgacaagtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tttgggaatt tattattgct ggcaaggtac acattttcca 300 tacacgttcg gctcggggac aaaattggaa ataaaa 336 <210> 57 <211> 113 <212> PRT <213> Mouse <400> 57 Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Arg Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Asp Ser Ser Thr Ile Asn Tyr Thr Pro Ser Leu 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ccagttcttc 240 ctgcagttga attctgtgac tcctgaagac acagccacat attactgtgc aagatctact 300 acctattttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348 <210> 100 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 100 gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gaccatttta catagtgatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattattgct ttcaaggttc acatgttcct 300 cccacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 101 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 101 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Phe Thr Ser Asp 20 25 30 Phe Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Asp His Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Ile Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 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tacataacct acagtggtta cactaactac 180 aacccatctc tcaaaagtcg aatctctatc actcgagaca catccaagac ccagttcttc 240 ctgcagttga gttctgtgac tactgaggac acagccacat attactgtgc gagatctact 300 accttctttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348 <210> 120 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 120 gatgttttga tgacccaaac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtgatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caatcgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agtagactgg aggatgagga tctgggagtc tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300 cccacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 121 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 121 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr 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acctgcactg tcactgacta ctcattcacc agtgattttg cctggaactg gatccggcag 120 tttccaggaa acaaactgga gtggatgggc ttcataacct acagtgatca cactaactac 180 aacccatctc tcataagtcg aatctctatc actcgagaca catccaagaa ccagttcttc 240 ctgctgttga attctgtgac tcctgaagac acagccacat attactgtgc aagatctact 300 acctattttg actactgggg ccaaggcacc actctcacag tctcctca 348 <210> 140 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 140 gatgttttga tgacccaaac tcctctctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60 atctcttgta gatctagtca gagcatttta catagtgatg gaaacaccta tttagaatgg 120 tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agcagagtgg aaaccgagga tctgggagtt tattattgct ttcaaggttc acatgttcct 300 cccacgttcg gaggggggac caagttggaa ataaaa 336 <210> 141 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 141 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Phe Thr Ser Asp 20 25 30 Phe Ala Trp Asn Trp 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ttcaaggttc acatgttcct 300 cccacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 201 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 201 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Thr Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 202 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 202 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Ile His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 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cagtggcagt ggatcaggga cggatttcac actcaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tctgggattt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300 ccgacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336 <210> 221 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 221 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Phe Ile Thr Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Glu Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Ser Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 222 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 222 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys 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tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180 tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240 agtagagtgg aggctgagga tctgggagtt tattactgct ttcaaggttc acatgttcct 300 cccacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaa 336 <210> 241 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 241 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Thr Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Ala Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 242 <211> 112 <212> PRT <213> Mouse <400> 242 Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys 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tccagagaca atcccaagaa caccctgttc 240 ctgcaaatga ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacggggt 300 aatgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca 348 <210> 320 <211> 336 <212> DNA <213> Mouse <400> 320 aacattatga tgacacagtc gccatcatct ctggctgtgt ctgcaggaga aaaggtcact 60 atgagctgta agtccagtca aagtgtttta tacagttcaa atcagaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tctactgggc atccactagg 180 gaatctggtg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt tactcttacc 240 atcagcagtg tacaagctga agacctggca gtttattact gtcatcaata tttctcctcg 300 tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaa 336 <210> 321 <211> 116 <212> PRT <213> Mouse <400> 321 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro 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120 ccaggaaagg gtttggaatg ggttgctcgc ataagaagta aaagtagtaa ttatgcaaca 180 tattatgccg attcagtgaa agacagattc accatctcca gagatgattc acaaagcatg 240 gtctatctgc agatgaacaa cctgaaaact gaggacacag ccatgtatta ctgtgtgaga 300 aagggggatg gttacgacgg ctggtttgct tactggggcc aagggactct ggtcactgtc 360 tctgca 366 <210> 340 <211> 321 <212> DNA <213> Mouse <400> 340 gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 60 atcacatgtc gaccaagtgg gaatattcac aattatttag tatggtatca gcagaaacag 120 ggaaaatctc ctcaggtcct ggtctataat tcaaaaacct tagcagatgg tgtgccatca 180 cggttcagtg gcagtggatc aggaacacag tattctctca agatcaacag cctgcagcct 240 gaagattttg ggacttatta ctgtcaacat ttttggagta ctccactcac gttcggtgct 300 gggaccaaac tggagctgaa a 321 <210> 341 <211> 122 <212> PRT <213> Mouse <400> 341 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala 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tgctgcagtc tgtggcagag cttgtgaggc caggggcctc agtcaagttg 60 tcctgcacag cttctggctt caacattaaa aacaccttta tacactggct gaagcagagg 120 cctgagcagg gcctggagtg gattggaaag attgatcctg cgaatggtaa tattagatgt 180 gccccgaagt tccagggcaa ggccactata actgcagaca catcctccaa cacagcctac 240 ctgcagctca gcagcctgac atctggggac actgccatct attactgtgg tagaggtact 300 atgttagtag gtcacttcta ctggtacttc gatgtctggg gcacagggac cacggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 360 <211> 339 <212> DNA <213> Mouse <400> 360 gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaagattact 60 atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagca atcaaaagaa ctacttggcc 120 tggtaccagc agaaaccggg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180 gaatctgggg tccctgatcg cttctcaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagtg tgaagactga agacctggca attttttact gtcagcaata ttattactat 300 cctcccacgt tcggtgctgg gaccaagctg gagctgaga 339 <210> 361 <211> 123 <212> PRT <213> Mouse <400> 361 Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Val Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser 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ccggacagag ggtgaccatc 60 tcctgctccg gcagcagctc caatatcggc agcaatacag tgaactggta ccagcagctg 120 cccggcaccg cccctaagct gctgatctac aggaacaccc agagaccctc cggcgtgcct 180 gatagatttt ccggcagcaa gagcggcacc agcgccagcc tggccatctc cggactgcag 240 agcgaggacg aggccgacta ctactgtgag gcctgggatg attccatgag gggcgccgcc 300 tttggcggcg gaacccaact gacagtgctg 330 <210> 421 <211> 125 <212> PRT <213> Human <400> 421 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala 50 55 60 Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn 65 70 75 80 Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val 85 90 95 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Pro Val Gly Met Tyr Ala Phe 100 105 110 Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 422 <211> 110 <212> PRT <213> Human <400> 422 Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Arg Asn Thr Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ala Trp Asp Asp Ser Met 85 90 95 Arg Gly Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 423 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 423 Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala 1 5 10 <210> 424 <211> 9 <212> PRT <213> Human <400> 424 Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn 1 5 <210> 425 <211> 15 <212> PRT <213> Human <400> 425 Ala Arg Asp Asp Tyr Asp Pro Val Gly Met Tyr Ala Phe Asp Ile 1 5 10 15 <210> 426 <211> 8 <212> PRT <213> Human <400> 426 Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr 1 5 <210> 427 <211> 3 <212> PRT <213> Human <400> 427 Arg Asn Thr 1 <210> 428 <211> 11 <212> PRT <213> Human <400> 428 Glu Ala Trp Asp Asp Ser Met Arg Gly Ala Ala 1 5 10 <210> 429 <211> 25 <212> PRT <213> Human <400> 429 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser 20 25 <210> 430 <211> 17 <212> PRT <213> Human <400> 430 Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly 1 5 10 15 Arg <210> 431 <211> 38 <212> PRT <213> Human <400> 431 Asp Tyr Ala Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr 1 5 10 15 Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp 20 25 30 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 35 <210> 432 <211> 11 <212> PRT <213> Human <400> 432 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 433 <211> 25 <212> PRT <213> Human <400> 433 Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser 20 25 <210> 434 <211> 17 <212> PRT <213> Human <400> 434 Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile 1 5 10 15 Tyr <210> 435 <211> 36 <212> PRT <213> Human <400> 435 Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly 1 5 10 15 Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala 20 25 30 Asp Tyr Tyr Cys 35 <210> 436 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 436 Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Leu 1 5 10 <210> 437 <211> 19 <212> PRT <213> Human <400> 437 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 Val Leu Ser <210> 438 <211> 20 <212> PRT <213> Human <400> 438 Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 1 5 10 15 Gly Ala Tyr Gly 20 <210> 439 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Tyr or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Pro or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Thr or no amino acid <400> 439 Gln Gln Tyr Tyr Xaa Tyr Pro Xaa Xaa 1 5 <210> 440 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> any amino acid <400> 440 Ser Asp Xaa Ala Trp Asn 1 5 <210> 441 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Phe or Tyr <400> 441 Ser Asp Xaa Ala Trp Asn 1 5 <210> 442 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR2 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> any amino acid <400> 442 Xaa Ile Thr Tyr Ser Xaa Xaa Thr Asn Xaa Asn Pro Ser Leu Xaa Ser 1 5 10 15 <210> 443 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR2 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Tyr or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Gly or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Tyr or His or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Tyr or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Lys or Ile or Arg <400> 443 Xaa Ile Thr Tyr Ser Xaa Xaa Thr Asn Xaa Asn Pro Ser Leu Xaa Ser 1 5 10 15 <210> 444 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> any amino acid <400> 444 Ser Xaa Xaa Xaa Phe Asp Tyr 1 5 <210> 445 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Thr or Gly <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Thr or Ala or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Tyr or Phe <400> 445 Ser Xaa Xaa Xaa Phe Asp Tyr 1 5 <210> 446 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> any amino acid <400> 446 Arg Ser Ser Gln Xaa Xaa Xaa His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 447 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Ile or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Leu or Val or Ile <400> 447 Arg Ser Ser Gln Xaa Xaa Xaa His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 448 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> any amino acid or no amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> any amino acid <400> 448 Xaa Ser Ser Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 Xaa <210> 449 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR1 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Lys or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Leu or Ile or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Leu or Ile or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> His or Asp or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Ser or Ala or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Gly or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Gln or no amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Lys or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Thr or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Tyr or Cys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Ala or Asn or Glu <400> 449 Xaa Ser Ser Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 Xaa <210> 450 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> any amino acid or no amino acid <400> 450 Xaa Gln Gly Xaa His Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 451 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Trp or Phe or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Thr or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Phe or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Pro or Tyr or no amino acid <400> 451 Xaa Gln Gly Xaa His Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 452 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light CDR3 consensus sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> any amino acid or no amino acid <400> 452 Gln Gln Tyr Tyr Xaa Tyr Pro Xaa Xaa 1 5

Claims (33)

  1. TRPV1에 결합하는 항체로서, 상기 항체는 TRPV1의 세포외 영역에서 TRPV1에 결합하고, 상기 항체는 TRPV1의 열 유도 활성화와 반대로 TRPV1의 캡사이신 유도 활성화를 우선적으로 억제하는 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-656에 의해 정의되는 TRPV1의 영역에서 TRPV1의 에피토프에 결합하는, 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 TRPV1(서열번호:1)의 아미노산 잔기 599-630, 아미노산 잔기 599-606, 아미노산 잔기 519-614, 아미노산 잔기 599-622, 아미노산 잔기 607-630, 아미노산 잔기 615-630, 아미노산 잔기 623-630, 아미노산 잔기 631-643, 아미노산 잔기 644-656 또는 아미노산 잔기 610-620에 의해 정의된 영역에 있는 에피토프에서 TRPV1에 결합하거나, 또는 TRPV1의 아미노산 잔기 599-601 및 잔기 653-655에 의해 정의된 TRPV1의 영역에 있는 TRPV1의 에피토프에 결합하는, 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 아미노산 잔기 599-630에 의해 정의된 영역에 있는 에피토프에서 TRPV1에 결합하는, 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단리된 펩티드에 결합하고, 상기 단리된 펩티드는 서열번호:4, 서열번호:2, 서열번호:3, 서열번호:5, 서열번호:6, 서열번호:7, 서열번호:8, 서열번호:9, 서열번호:10, 서열번호:11, 서열번호:12, 서열번호:13 및 서열번호:14로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 상기 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환 또는 부가 또는 결실을 갖는 서열을 포함하는, 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단리된 펩티드에 결합하고, 상기 단리된 펩티드는 서열번호:18, 서열번호:16, 서열번호:17, 서열번호:19, 서열번호:20, 서열번호:21, 서열번호:22, 서열번호:23, 서열번호:24, 서열번호:25, 서열번호:26, 서열번호:27 및 서열번호:28로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 상기 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환 또는 부가 또는 결실을 갖는 서열을 포함하는, 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단리된 펩티드에 결합하고, 상기 단리된 펩티드는 서열번호:18, 서열번호:16, 서열번호:17, 서열번호:19, 서열번호:20, 서열번호:21, 서열번호:22, 서열번호:23, 서열번호:24, 서열번호:25, 서열번호:26, 서열번호:27 및 서열번호:28로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성되거나, 또는 상기 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 또는 3개의 아미노산 치환 또는 부가 또는 결실을 갖는 서열로 구성되는, 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단리된 펩티드에 결합하고, 상기 단리된 펩티드는 서열번호:18, 서열번호:16 및 서열번호:17로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 구성되는, 항체.
  9. 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단리된 펩티드는 선형 펩티드 또는 사이클릭 펩티드인, 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:448, 바람직하게는 서열번호:449의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1을 포함하는, 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서
    (i) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:77의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:78의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:79의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나, 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:80의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:81의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:82의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (ii) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:41의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:42의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:43의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:44의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1, 서열번호:45의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:46의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (iii) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:103의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:104의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:105의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:106의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1, 서열번호:107의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:108의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (iv) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:123의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:124의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:125의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:126의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:127의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:128의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (v) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:143의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:144의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:145의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:146의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:147의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (vi) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:183의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:184의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:185의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:186의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:187의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:188의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (vii) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:203의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:204의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:205의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:206의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:207의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:208의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (viii) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:223의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:224의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:225의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:226의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:227의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:228의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (ix) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:283의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:284의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:285의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:286의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:287의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:288의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (x) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:303의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:304의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:305의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:306의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:307의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:308의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나;
    (xi) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:323의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:324의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:325의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:326의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:327의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:328의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하거나; 또는
    (xii) 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:363의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:364의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:365의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:366의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄 (VL) CDR1, 서열번호:367의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:368의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고;
    상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열인, 항체.
  12. 제10항에 있어서, 상기 항체는 제11항의 파트 (i) 내지 (xii) 중 어느 하나에서 함께 정의된 바와 같은 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, VL CDR3, VH CDR1, VH CDR2 및 VH CDR3을 포함하는, 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은,
    (a) 서열번호:77의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1,
    (b) 서열번호:78의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2, 및
    (c) 서열번호:79의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함하고; 그리고
    상기 경쇄 가변 영역은,
    (d) 서열번호:80의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1,
    (e) 서열번호:81의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2, 및
    (f) 서열번호:82의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함하는, 항체.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고,
    (i) 경쇄 가변 영역은 서열번호:76의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:75의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (ii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:58의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:57의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (iii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:40의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:39의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (iv) 경쇄 가변 영역은 서열번호:102의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:101의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (v) 경쇄 가변 영역은 서열번호:122의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:121의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (vi) 경쇄 가변 영역은 서열번호:142의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:141의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (vii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:162의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:161의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (viii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:182의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:181의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (ix) 경쇄 가변 영역은 서열번호:202의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:201의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (x) 경쇄 가변 영역은 서열번호:222의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:221의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xi) 경쇄 가변 영역은 서열번호:242의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:241의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:262의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:261의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xiii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:282의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:281의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xiv) 경쇄 가변 영역은 서열번호:302의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:301의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xv) 경쇄 가변 영역은 서열번호:322의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:321의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xvi) 경쇄 가변 영역은 서열번호:362의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:361의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나;
    (xvii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:382의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:381의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지거나; 또는
    (xviii) 경쇄 가변 영역은 서열번호:402의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 가지고/거나 중쇄 가변 영역은 서열번호:401의 아미노산 서열, 또는 그에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는, 항체.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:343의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:344의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:345의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:346의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1, 서열번호:347의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:348의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열인, 항체.
  16. 제1항 내지 제9항 또는 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호:342의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖고/거나, 중쇄 가변 영역은 서열번호:341의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는, 항체.
  17. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 상기 중쇄 가변 영역은 서열번호:423의 아미노산 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) CDR1, 서열번호:424의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2 및 서열번호:425의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고/거나; 상기 경쇄 가변 영역은 서열번호:426의 아미노산 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) CDR1, 서열번호:427의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2 및 서열번호:428의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3, 또는 이에 실질적으로 상동성인 서열을 포함하고, 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 치환을 함유하는 서열이거나, 또는 상기 실질적으로 상동성인 서열은 주어진 CDR 서열의 보존적 아미노산 치환을 함유하는 서열인, 항체.
  18. 제1항 내지 제9항 또는 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역 및 3개의 CDR을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열번호:422의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖고/거나, 중쇄 가변 영역은 서열번호:421의 아미노산 서열, 또는 이에 대해 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 갖는, 항체.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다클론성 항체 또는 단클론성 항체인, 항체.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체 불변 영역을 포함하는 전체 항체인, 항체.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG 항체인, 항체.
  22. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체의 항원 결합 단편인, 항체.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 및 희석제, 담체 또는 부형제, 바람직하게는 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는 조성물.
  24. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자, 또는 뉴클레오티드 서열을 각각 포함하는 핵산 분자 세트로서, 상기 핵산 분자 세트가 함께 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는, 핵산 분자 또는 핵산 분자 세트.
  25. 하기 단계를 포함하는, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 항체의 생산 방법:
    (i) (i) 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 항체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자 또는 (ii) 뉴클레오티드 서열을 각각 포함하는 핵산 분자 세트로서, 상기 핵산 분자 세트는 함께 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 핵산 분자 세트, 또는 (iii) 상기 핵산 분자 중 하나 이상을 포함하는 하나 이상의 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를, 인코딩된 항체의 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계; 및
    (ii) 숙주 세포 또는 성장 배지/상청액으로부터 항체를 단리하거나 수득하는 단계.
  26. 요법에 사용하기 위한 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항체.
  27. 통증 요법에 사용하기 위한 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항체.
  28. 통증을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항체의 치료적 유효량을 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  29. 요법에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항체의 용도.
  30. 제29항에 있어서, 상기 요법은 통증의 치료인, 용도.
  31. 단리된 펩티드로서, 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에서 정의된 단리된 펩티드.
  32. 제5항 내지 제9항 중 어느 한 항에 정의된 단리된 펩티드 및 펩티드 담체를 포함하는 접합체.
  33. 제32항에 있어서, 상기 펩티드 담체가 열쇠구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH), 난백알부민(OVA) 또는 소 혈청 알부민(BSA)인, 접합체.
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