CN115244083A - Trpv1表位和抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及与TRPV1结合的抗体。本发明还涉及蛋白质TRPV1的某些表位。本发明还涉及包含此类抗体的免疫偶联物和组合物。本发明还提供了产生此类抗体的方法。本发明进一步提供了使用此类抗体用于治疗目的，例如在治疗疼痛中使用。

Description

TRPV1表位和抗体
本发明总体上涉及表位和抗体领域，特别是蛋白质TRPV1的表位和与TRPV1结合的抗体。这种抗TRPV1抗体具有治疗用途，如治疗疼痛。本发明的基于抗体的组合物和方法以及用途还延伸至偶联物和其他治疗组合、试剂盒和方法的用途。
TRPV1(transient receptor potential vanilloid type 1，瞬时受体电位香草酸1型)是一种对有害刺激(如低pH、高温(T≥42℃)、辣椒素和炎症介质)敏感的离子通道。由于TRPV1与痛感有关，因此已经研究了近20年。已经进行了几次尝试来阻断受体的活性作为疼痛治疗的新作用方式，但这些尝试都没有成功。
本领域众所周知，辣椒素是TRPV1的激活剂并且可以引起疼痛。本领域中常规使用辣椒素用于在模型中评估TRPV1激活和疼痛。评估辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是众所周知的模型系统，用于评估药剂治疗疼痛的潜力。例如Chen等人(2011)(Chen等人,在TRPChannels[瞬时受体电位通道],编辑MX,Z.,1-14,CRC Press/Taylor&Francis[CRC出版社/泰勒-弗朗西斯],2011)描述了这种模型系统。
由于其激活机制的复杂性(如上所述，它可以被几种刺激，包括低pH、高温(T≥42℃)、辣椒素和炎症介质激活)，大多数靶向TRPV1的化合物都产生了不良反应，如体温过高或热感觉丧失。
例如，化合物AMG 517是由安进公司(Amgen)开发的一种有效的TRPV1小分子拮抗剂，其可抑制TRPV1的辣椒素、pH和温度激活。其在1期研究后终止，在该研究中它在接受磨牙拔除治疗的受试者中引起明显的体温过高(Gavva,N.R.等人Pain[疼痛](2008),136(1-2),202-210)。
强生公司(Johnson&Johnson)开发的另一种小分子TRPV1拮抗剂Mavatrep在包括膝骨关节炎受试者在内的慢性疼痛的1b期研究中显示出疗效，尽管一些受试者报告了感觉热和一些轻微热灼伤的副作用(Manitpisitkul P,等人Scand.J.Pain[斯堪的纳维亚疼痛杂志](2018),18(2):151-164)。
先前已经生成了与TRPV1结合的抗体(Klionsky等人,The Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics[药理学与实验治疗学杂志](2006),第319(1)卷,第192-198页)，但这些抗体要么完全不抑制辣椒素诱导的TRPV1的活性，或者当抗体被报道为抑制辣椒素诱导的TRPV1的活性时，还报道了对热诱导的TRPV1活性的同等程度的抑制。
因此，需要改进的疼痛治疗。TRPV1是经过临床和基因验证的靶标。TRPV1的成功靶向可以提供一个长期受欢迎的解决方案，从源头缓解疼痛。
特别是，鉴定TRPV1上的表位，其靶向将促使优先抑制TRPV1的辣椒素激活，而不是热诱导的TRPV1激活，这将是特别有益的。这将指导药剂(如抗体)的鉴定和生成，这些药剂可与TRPV1结合并减少TRPV1的辣椒素激活，而没有或减少以前用小分子TRPV1拮抗剂(例如，如上所述的AMG 517和Mavatrep)观察到的热相关的副作用。
诸位发明人已经通过鉴定TRPV1的细胞外区域中的某些表位(或区域)来满足这种需要，这些表位(或区域)对于例如用抗体靶向特别有用，以便优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活。TRPV1的细胞外区域当然是TRPV1的区域(或部分)，当TRPV1在细胞表面(或细胞表面上)表达时，该区域(或部分)暴露(或可到达，例如抗体可到达)在细胞的细胞外侧(或细胞外表面)。诸位发明人已经鉴定并生成了对应于(或大体上对应于)此类表位的分离的肽。诸位发明人还使用这种分离的肽来生成抗体，该抗体优先抑制TRPV1的辣椒素激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
因此，在一方面，本发明提供了分离的肽，该分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:2(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:3(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:4(OTV5)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:5(OTV6)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:6(OTV7)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:7(OTV8)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:8(OTV9)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:9(OTV10)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:10(OTV11)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:11(OTV12)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:12(OTV13)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:13(OTV14)或与其基本上同源的序列和SEQ ID NO:14(OTV15)或与其基本上同源的序列。
如本文别处所讨论的，此类分离的肽可用作抗原肽以生成抑制TRPV1激活的抗体。通常，此类抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，通常与热诱导的TRPV1激活相反。
除非上下文另有明确说明，否则提及本发明的“分离的肽”或“肽”可替代地视为提及“分离的表位”或“分离的抗原表位”。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:3(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:4(OTV5)或与其基本上同源的序列，SEQ ID NO:6(OTV7)或与其基本上同源的序列，SEQID NO:8(OTV9)、SEQ ID NO:11(OTV12)或与其基本上同源的序列和SEQ ID NO:12(OTV13)或与其基本上同源的序列。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:3(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:4(OTV5)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:11(OTV12)或与其基本上同源的序列。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:2(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:3(OTV4)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:4(OTV5)或与其基本上同源的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:2(OTV3)、SEQ ID NO:3(OTV4)、SEQ ID NO:4(OTV5)、SEQ ID NO:5(OTV6)、SEQ ID NO:6(OTV7)、SEQ ID NO:7(OTV8)、SEQ ID NO:8(OTV9)、SEQ ID NO:9(OTV10)、SEQ ID NO:10(OTV11)、SEQ ID NO:11(OTV12)、SEQ ID NO:12(OTV13)、SEQ ID NO:13(OTV14)和SEQ ID NO:14(OTV15)。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:3(OTV4)、SEQ ID NO:4(OTV5)、SEQ ID NO:6(OTV7)、SEQ ID NO:8(OTV9)、SEQ ID NO:11(OTV12)、和SEQ ID NO:12(OTV13)。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:3(OTV4)、SEQ ID NO:4(OTV5)和SEQ IDNO:11(OTV12)。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:2(OTV3)、SEQ ID NO:3(OTV4)和SEQ IDNO:4(OTV5)。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:2(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:3(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:4(OTV5)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:5(OTV6)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:6(OTV7)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:7(OTV8)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:8(OTV9)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:9(OTV10)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:10(OTV11)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:11(OTV12)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:12(OTV13)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:13(OTV14)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:14(OTV15)或与其基本上同源的序列。优选的分离的肽(和分离的肽组)在本文别处披露。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:2(OTV3)、SEQ ID NO:3(OTV4)、SEQ ID NO:4(OTV5)、SEQID NO:5(OTV6)、SEQ ID NO:6(OTV7)、SEQ ID NO:7(OTV8)、SEQ ID NO:8(OTV9)、SEQ IDNO:9(OTV10)、SEQ ID NO:10(OTV11)、SEQ ID NO:11(OTV12)、SEQ ID NO:12(OTV13)、SEQID NO:13(OTV14)和SEQ ID NO:14(OTV15)。优选的分离的肽(和分离的肽组)在本文别处披露。
在一些实施方案中，分离的肽可以在N-末端和/或C-末端包含一个或多个额外的氨基酸。在一些优选的实施方案中，分离的肽可以在N-末端包含一个或多个额外的氨基酸。在一些优选的实施方案中，分离的肽可以在C-末端包含一个或多个额外的氨基酸。在一些优选的实施方案中，分离的肽可以在N-末端和C-末端包含一个或多个额外的氨基酸。在一些优选的实施方案中，分离的肽可以在N-末端和/或C-末端包含半胱氨酸(C)残基(或在N-末端和/或C-末端包含额外的半胱氨酸(C)残基)。在一些实施方案中，分离的肽可以在N-末端包含半胱氨酸(C)残基。在一些实施方案中，分离的肽可以在C-末端包含半胱氨酸(C)残基。在一些优选的实施方案中，分离的肽可以在N-末端和C-末端包含半胱氨酸(C)残基。在分离的肽的末端提供半胱氨酸残基可以允许方便地附接至肽载剂，例如如本文别处所讨论的。如果需要，在N-末端和C-末端都提供半胱氨酸残基为肽的环化提供了方便的方法。
在一些实施方案中，分离的肽可以在N-末端和/或C-末端包含一个或多个额外的修饰。例如，在一些实施方案中，分离的肽可以是C-末端酰胺化的。在一些实施方案中，分离的肽可具有修饰(化学基团或接头)，其可用于将肽附接(或连接(link或connect))至肽载剂。在一些实施方案中，可用于将肽附接(或连接(link或connect))至肽载剂的修饰(化学基团或接头)是炔丙基(Pra)基团。可用于将肽附接(或连接(link或connect))至肽载剂的修饰(化学基团或接头)可以在N-末端和/或C-末端。在一些实施方案中，可用于将肽附接(或连接(link或connect))至肽载剂的修饰(化学基团或接头，如炔丙基基团)在分离的肽的N-末端。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:16(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:17(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:18(OTV5)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:19(OTV6)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:20(OTV7)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:21(OTV8)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:22(OTV9)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:23(OTV10)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:24(OTV11)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:25(OTV12)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:26(OTV13)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:27(OTV14)或与其基本上同源的序列、和SEQID NO:28(OTV15)或与其基本上同源的序列。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:17(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:18(OTV5)或与其基本上同源的序列SEQ ID NO:20(OTV7)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:22(OTV9)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:25(OTV12)或与其基本上同源的序列和SEQ ID NO:26(OTV13)或与其基本上同源的序列。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:17(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:18(OTV5)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:25(OTV12)或与其基本上同源的序列。
在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:16(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQID NO:17(OTV4)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:18(OTV5)或与其基本上同源的序列。
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在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:17(OTV4)、SEQ ID NO:18(OTV5)、SEQ IDNO:20(OTV7)、SEQ ID NO:22(OTV9)、SEQ ID NO:25(OTV12)、和SEQ ID NO:26(OTV13)。
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在一些优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或包含)：SEQ ID NO:16(OTV3)、SEQ ID NO:17(OTV4)、和SEQ IDNO:18(OTV5)。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:16(OTV3)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:17(OTV4)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:18(OTV5)或与其基本上同源的序列、SEQ IDNO:19(OTV6)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:20(OTV7)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:21(OTV8)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:22(OTV9)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:23(OTV10)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:24(OTV11)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:25(OTV12)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:26(OTV13)或与其基本上同源的序列、SEQ ID NO:27(OTV14)或与其基本上同源的序列、和SEQ ID NO:28(OTV15)或与其基本上同源的序列。优选的分离的肽(和分离的肽组)在本文别处披露。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:16(OTV3)、SEQ ID NO:17(OTV4)、SEQ ID NO:18(OTV5)、SEQ ID NO:19(OTV6)、SEQ ID NO:20(OTV7)、SEQ ID NO:21(OTV8)、SEQ ID NO:22(OTV9)、SEQ ID NO:23(OTV10)、SEQ ID NO:24(OTV11)、SEQ ID NO:25(OTV12)、SEQ ID NO:26(OTV13)、SEQ ID NO:27(OTV14)、和SEQ ID NO:28(OTV15)。优选的分离的肽(和分离的肽组)在本文别处披露。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:16(OTV3)、SEQ ID NO:17(OTV4)和SEQ ID NO:18(OTV5)。
在一些实施方案中，包含(或由其组成)SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(OTV5序列)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的分离的肽是优选的。
在一些实施方案中，包含(或由其组成)SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(OTV3序列)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的分离的肽是优选的。
在一些实施方案中，包含(或由其组成)SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(OTV4序列)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的分离的肽是优选的。
在本发明的分离的肽序列的上下文中，与给定氨基酸序列“基本上同源的”序列可以是与给定氨基酸序列相比，含有1、2、3、4、5或6个(优选地1、2或3个)氨基酸取代或缺失或添加的序列，或与给定氨基酸序列具有至少70％序列同一性的序列，或具有给定氨基酸序列的至少6个连续氨基酸的序列。在本文别处描述了“基本上同源的”序列的其他实例，这些其他地方同与分离的肽“基本上同源的”氨基酸序列有关，并且“基本上同源的”序列的这些实例也适用于上述特定肽序列。
在一些优选的实施方案中，与分离的肽“基本上同源的”氨基酸序列是与给定分离的肽的氨基酸序列相比，是具有或包含以下一种序列的序列，所述序列具有1、2或3个氨基酸取代或添加或缺失(优选地1或2个，更优选地1)。
与分离的肽“基本上同源的”氨基酸序列包括以下序列，所述序列包含(或由其组成)分离的肽的至少5个或至少6个连续氨基酸(或包含分离的肽的至少7、至少8、至少9、至少10、至少11、至少12、至少15、至少20、至少25或至少30个连续氨基酸，或由其组成)。六个氨基酸是抗体识别或结合的肽/蛋白质序列的典型长度。
与分离的肽“基本上同源的”氨基酸序列包括具有或包含以下序列的序列，所述序列与给定分离的肽序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，或至少98％序列同一性，或所述序列包含(或由其组成)与给定分离的肽序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％，或至少98％序列同一性。至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或至少98％的序列同一性是优选的。
氨基酸序列的改变可以是保守或非保守氨基酸的改变。优选地，所述改变是保守氨基酸取代。
如本文所用，“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的另一个氨基酸残基替换的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，这些侧链包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
术语“基本上同源的”还包括本发明的氨基酸序列的修饰或化学等效物，其与本发明的蛋白质以基本上相同的方式发挥基本上相同的功能。例如，任何基本上同源的分离的肽通常应保留作为肽或表位作用于(或对抗)可生成(或生产)与TRPV1结合的抗体的能力。
进行上述氨基酸操作(例如生成“基本上同源的”序列)的方法是本领域技术人员众所周知的。
在一些实施方案中，分离的肽不包含任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。因此，在一些实施方案中，与给定氨基酸序列“基本上同源的”序列不具有半胱氨酸(C)残基作为取代或额外的氨基酸。
可以通过任何方便的方法评估同源性(例如序列同一性)。然而，为了确定序列之间的同源性(例如同一性)程度，对序列进行多重比对的计算机程序是有用的，例如ClustalW(Thompson,Higgins,Gibson,Nucleic Acids Res.[核酸研究],22:4673-4680,1994)。如果需要，Clustal W算法可以与BLOSUM 62评分矩阵(Henikoff和Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],89:10915-10919,1992)以及10的空位开放罚分和0.1的空位扩展罚分一起使用，以便在两个序列之间获得最高阶匹配，其中序列之一的总长度的至少50％参与比对。可用于比对序列的其他方法是由Smith和Waterman(Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.[应用数学进展],2:482,1981)修订的Needleman和Wunsch(Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],48:443,1970)的比对方法，以便在两个序列之间获得最高阶匹配，并确定两个序列之间相同氨基酸的数量。计算两个氨基酸序列之间同一性百分比的其他方法通常是本领域公认的并且包括例如由Carillo和Lipton(Carillo和Lipton,SIAM J.Applied Math.[美国工业和应用数学学会杂志],48:1073,1988)描述的那些以及以下中描述的那些：Computational Molecular Biology[计算分子生物学],Lesk,编Oxford University Press[牛津大学出版社],纽约,1988,Biocomputing:Informatics and Genomics Projects[生物计算：信息学和基因组计划]。
通常，将使用计算机程序进行此类计算。比较和比对序列对的程序，如ALIGN(Myers和Miller,CABIOS[生物科学中的计算机应用],4:11-17,1988)、FASTA(Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],85:2444-2448,1988；Pearson,Methods in Enzymology[酶学方法],183:63-98,1990)和空隙BLAST(Altschul等人,Nucleic Acids Res.[核酸研究],25:3389-3402,1997)、BLASTP、BLASTN、或GCG(Devereux,Haeberli,Smithies,Nucleic Acids Res.[核酸研究],12:387,1984)也可用于此目的。此外，欧洲生物信息学研究所的Dali服务器提供基于结构的蛋白质序列比对(Holm,Trendsin Biochemical Sciences[生物化学科学趋势],20:478-480,1995；Holm,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],233:123-38,1993；Holm,Nucleic Acid Res.[核酸研究],26:316-9,1998)。
通过提供参考点，根据本发明的具有65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性、序列同一性等的序列可以使用带有默认参数的ALIGN程序来确定(例如在因特网上的GENESTREAM网络服务器，IGH，蒙彼利埃，法国)。
在一些实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含(或由其组成)本文披露的分离的肽序列(或与其基本上同源的序列)的延长、截短或环状形式。在一些实施方案中，分离的肽可以是延长和环状的(即环形的)。在一些实施方案中，分离的肽可以是截短和环状的(即环形的)。肽的延长、截短和环状形式在本文别处讨论。
本发明的分离的肽可以包含(或由其组成)本文披露的分离的肽序列的延长形式，或与本文披露的分离的肽序列基本上同源的氨基酸序列的延长形式。例如，在分离的肽序列(或与其基本上同源的序列)的一端或两端可以存在一种或多种额外的氨基酸(例如至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8或至少9、至少10、至少15或至少20个氨基酸，或1-5或1-10或1-20个氨基酸)。
本发明的分离的肽可以包含(或由其组成)本文披露的分离的肽序列的截短形式、或本文披露的分离的肽序列的截短形式。例如，在分离的肽序列(或与其基本上同源的序列)的一端或两端可以不存在一个或多个氨基酸(例如至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8或至少9、至少10个氨基酸，或1-5或1-10个氨基酸)。
在一些实施方案中，分离的肽的长度可以是至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个氨基酸，例如长度是6至10、6至12、6至15、6至20、6至25、6至30、6至40、6至50、6至60、或6至75个氨基酸。分离的肽的长度可以是例如5至7、5至8、5至9、5至10、5至15、5至20、5至25、5至30、5至40、5至50、5至60、5至70、5至75个氨基酸。分离的肽的长度可以是例如8至10、8至15、8至20、8至25、8至30、8至40、8至50、8至60、8至70、8至75个氨基酸。
在一些实施方案中，分离的肽的长度可以是≤50个氨基酸，例如长度是≤45、≤40、≤35、≤30、≤25、≤20、≤15或≤10个氨基酸(例如长度是5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、5-35、5-40、5-45、5-50、6-10、6-15、6-20、6-25、6-30、6-35、6-40、6-45、6-50、8-10、8-15、8-20、8-25、8-30、8-35、8-40、8-45、8-50、10-15、10-20、10-25、10-30、10-35、10-40、10-45、10-50、15-20、15-25、15-30、15-35、15-40、15-45、15-50、20-25、20-30、20-35、25-30、25-35或25-40、25-45、25-50、30-35、30-40、30-45、30-50、35-40、35-45、35-50、40-45、40-50或45-50个氨基酸)。
在一些实施方案中，分离的肽的长度可以是<39个氨基酸，例如长度是≤38、≤35、≤30、≤25、≤20、≤15、≤10个氨基酸(例如长度是5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、5-35、5-38、6-10、6-15、6-20、6-25、6-30、6-35、6-38、8-10、8-15、8-20、8-25、8-30、8-32、8-35、8-38、10-15、10-20、10-25、10-30、10-32、10-35、10-38、15-20、15-25、15-30、15-32、15-35、15-38、20-25、20-30、20-35、25-30、25-35或25-38个氨基酸)。在一些实施方案中，分离的肽的长度可以是5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38个氨基酸。
在一些实施方案中，分离的肽的长度可以是<24个氨基酸，例如长度是≤23、≤20、≤15、≤10个氨基酸(例如长度是5-10、5-15、5-20、5-23、6-10、6-15、6-20、6-23、8-10、8-15、8-20、8-23、10-15、10-20、10-23、15-20、15-23或20-23个氨基酸)。
在一些实施方案中，分离的肽可以是线性肽(或线性表位)。
在一些实施方案中，分离的肽可以是构象肽(或构象表位)。
在一些实施方案中，分离的肽可以是环状(或环形的)肽(或环状或环形的表位)。
在一些优选的实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一些优选的实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)、或基于SEQ IDNO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是环状肽。
用于合成肽的方法是本领域众所周知的。用于制备线性肽(例如用于免疫和抗体生成)的常用技术是Fmoc SPPS(固相肽合成)。在SPPS中，用功能性接头处理小的多孔珠，可以使用重复的洗涤-偶联-洗涤循环在其上构建肽链。然后使用化学切割将合成的肽从珠中释放出来。对于环状肽的合成，常用方法利用环化，通过形成二硫桥(其中桥由肽的两个半胱氨酸形成桥，例如一个在N-末端且一个在C-末端)或通过形成“头对尾”桥，其中桥由典型的肽键组成。环状肽可以在固体支持物上形成。
合成肽的其他方法包括使用其他化学合成程序、体外翻译或通过将合适的表达载体引入细胞。
在一些实施方案中，分离的肽不包含(或不由其组成)氨基酸序列EDGKNNSLPMESTPHKCRGSACKP(SEQ ID NO:30)。
在一些实施方案中，分离的肽不包含(或不由其组成)氨基酸序列TLIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNSLYSTC(SEQ ID NO:31)。
在一些实施方案中，分离的肽不包含(或不由其组成)氨基酸序列SLPSESTSH(SEQID NO:32)。
根据本发明的分离的肽当然不包括全长TRPV1蛋白质(即野生型TRPV1蛋白质)或TRPV超家族中的任何其他全长(野生型)蛋白质，或任何其他全长(野生型)蛋白质。根据本发明的分离的肽因此不包括全长SEQ ID NO:1。
本发明的分离的肽，虽然对应于(或大体上对应于)全长TRPV1蛋白质的区域(或表位)(例如如本文别处所述)，但它们本身并不天然存在(即它们不具有天然存在的对应物或在自然界中不会独立发生)。因此，本发明的分离的肽可以被认为是人工肽、或合成肽、或人造肽、或非天然肽。
本发明的另一个方面提供了偶联物。通常，所述偶联物配置为用于产生抗体。所述偶联物可包含至少一种如上定义的分离的肽，所述分离的肽与肽载剂偶联(即连接(linkedto/connected to)或结合(bonded to))或混合。
因此，在一方面，本发明提供了包含本发明的分离的肽的偶联物。偶联物通常包含本发明的分离的肽和肽载剂，其中所述分离的肽与所述肽载剂偶联或混合。肽载剂通常增强免疫原性。这可能是有用的，因为在某些情况下，提供(或代表或对应于)抗原表位的短肽本身太小而不能诱导免疫反应。
肽载剂通常是大分子，例如蛋白质、多糖或聚合氨基酸。在一些实施方案中，肽载剂选自由以下组成的组：钥孔血蓝蛋白(KLH)、卵清蛋白(OVA)、血清白蛋白(例如牛血清白蛋白，BSA)、聚赖氨酸等。KLH通常是优选的。
本发明的分离的肽与肽载剂的偶联可以例如是共价偶联或二硫桥。在一些实施方案中，本发明的分离的肽可以在其N-末端或C-末端具有(额外的)半胱氨酸残基(例如，如本文别处所述)。这种半胱氨酸残基通常促进分离的肽与肽载剂(例如KLH)的偶联。在一些实施方案中，分离的肽可以具有允许分离的肽与肽载剂偶联的修饰(例如化学基团，如炔丙基基团)。在一些实施方案中，分离的肽经由标准交联剂(例如戊二醛)与肽载剂偶联。将分离的肽与肽载剂连接的方式是本领域众所周知的。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:2(OTV3)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:2(OTV3)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:2(OTV3)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:2的氨基酸序列(OTV3)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:16(OTV3)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:16(OTV3)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:16(OTV3)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:16(OTV3)的氨基酸序列组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是至少25个氨基酸、或长度是至少30个氨基酸、或长度是至少32个氨基酸(例如，长度是25-35、25-38、25-45、25-55、25-65或25至75个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是20-25或20-30或20-32或20-38或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是29-35个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16基本上同源的分离的肽与SEQID NO:2或SEQ ID NO:16本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:2(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:16(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:16的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:16组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:3(OTV4)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:3(OTV4)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:3(OTV4)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:3的氨基酸序列(OTV4)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:17(OTV4)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:17(OTV4)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:17(OTV4)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:17的氨基酸序列(OTV4)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是至少25个氨基酸、或长度是至少30个氨基酸、或长度是至少32个氨基酸(例如，长度是25-35、25-38、25-45、25-55、25-65或25至75个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是20-25或20-30或20-32或20-38或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是29-35个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，SEQ ID NO:3的23位或SEQ ID NO:17的24位的半胱氨酸被不同的氨基酸残基取代。在其他实施方案中，基于SEQ ID NO:3或SEQID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽含有至少一个(例如1)内部半胱氨酸残基(例如，在SEQ ID NO:3的23位或在SEQ ID NO:17的24位)。在一些实施方案中，基于SEQ IDNO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17基本上同源的分离的肽与SEQID NO:3或SEQ ID NO:17本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:3(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:17(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:17的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:17组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:4(OTV5)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:4(OTV5)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:4(OTV5)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:4的氨基酸序列(OTV5)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:18(OTV5)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:18(OTV5)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:18(OTV5)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:18的氨基酸序列(OTV5)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是至少25个氨基酸、或长度是至少30个氨基酸、或长度是至少32个氨基酸(例如，长度是25-35、25-45、25-55、25-65或25至75个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽的长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是20-25或20-30或20-31或25-30或25-32或20-38或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是29-35个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基和C-末端半胱氨酸残基。在一些实施方案中，在N-末端和/或C-末端(例如，在N-末端的炔丙基基团和/或C-末端酰胺基团)可以存在另外的修饰。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18基本上同源的分离的肽与SEQID NO:4或SEQ ID NO:18本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是环状肽。优选地，此类肽经由N-末端和C-末端半胱氨酸残基之间的二硫键环化。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:4(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:18(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地，经由SEQ ID NO:18的炔丙基基团)由SEQ ID NO:18组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:5(OTV6)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:5(OTV6)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:5(OTV6)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:5的氨基酸序列(OTV6)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:19(OTV6)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:19(OTV6)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:19(OTV6)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:19的氨基酸序列(OTV6)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-10、5-12、5-15、5-20、5-23或8-23或10-23或15-23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-15或8-15或10-15或5-20或8-20或10-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是5-10、5-15、5-20、5-25或5-30或5-32或5-38或8-10、8-15、8-20、8-25或8-30或8-32或8-38或10-38或15-38或20-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是5-11个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19基本上同源的分离的肽与SEQID NO:5或SEQ ID NO:19本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:5(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:19(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:19的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:19组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:6(OTV7)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:6(OTV7)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:6(OTV7)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:6的氨基酸序列(OTV7)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:20(OTV7)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:20(OTV7)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:20(OTV7)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:20的氨基酸序列(OTV7)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10-23或15-23或16-23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-15或8-15或10-15或5-20或8-20或16-20或10-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是12-20或12-25或12-30或12-32或12-38或16-20或16-25或16-30或16-32或16-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是13-19个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20基本上同源的分离的肽与SEQID NO:6或SEQ ID NO:20本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:6(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:20(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:20的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:20组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:7(OTV8)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:7(OTV8)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:7(OTV8)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:7的氨基酸序列(OTV8)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:21(OTV8)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:21(OTV8)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:21(OTV8)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:21的氨基酸序列(OTV8)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是20-25或20-30或20-32或20-38或25-30或25-32或25-38或30-38或24-30或24-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是21-27个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21基本上同源的分离的肽与SEQID NO:7或SEQ ID NO:21本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:7(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:21(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:21的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:21组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:8(OTV9)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:8(OTV9)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:8(OTV9)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:8的氨基酸序列(OTV9)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:22(OTV9)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:22(OTV9)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:22(OTV9)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:22的氨基酸序列(OTV9)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是20-25或20-30或20-32或20-38或25-30或25-32或25-38或30-38或24-30或24-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是21-27个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有C-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22基本上同源的分离的肽与SEQID NO:8或SEQ ID NO:22本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:8(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:22(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:22的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:22组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:9(OTV10)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:9(OTV10)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:9(OTV10)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:9的氨基酸序列(OTV10)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:9(OTV10)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:23(OTV10)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:23(OTV10)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:23的氨基酸序列(OTV10)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10至23或15至23或16-23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-15或8-15或10-15或5-20或8-20或10-20或16-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是12-20或12-25或12-30或12-32或12-38或16-20或16-25或16-30或16-32或16-38或20-25或20-30或20-32或20-38或25-30或25-32或25-38或30-38或16-30或16-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是13-19个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有C-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23基本上同源的分离的肽与SEQID NO:9或SEQ ID NO:23本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:9(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:23(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:23的C-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:23组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:10(OTV11)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:10(OTV11)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:10(OTV11)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:10的氨基酸序列(OTV11)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:24(OTV11)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:24(OTV11)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:24(OTV11)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:24的氨基酸序列(OTV11)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10至23或15至23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-15或8-15或10-15或5-20或8-20或10-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是10-10、5-15、5-20、5-25或5-30或5-32或5-30或8-10、8-15、8-20、8-25或8-30或8-32或8-38或10-38或15-38或20-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是5-11个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有C-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24基本上同源的分离的肽与SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:10(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:24(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:24的C-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:24组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:11(OTV12)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:11(OTV12)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:11(OTV12)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:11的氨基酸序列(OTV12)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:25(OTV12)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:25(OTV12)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:25(OTV12)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:25的氨基酸序列(OTV12)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10-23或15-23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-13或8-13或10-13或5-15或8-15或5-20或8-20或10-20或13-15或13-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是5-10或5-15或5-25或5-30或5-32或5-30或5-38或8-32或8-38或10-38或13-15或13-20或13-25或13-30或13-32或13-38或15-38或20-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是10-16个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有C-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25基本上同源的分离的肽与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:11(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:25(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:25的C-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:25组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:12(OTV13)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:12(OTV13)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:12(OTV13)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:12的氨基酸序列(OTV13)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:26(OTV13)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:26(OTV13)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:26(OTV13)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:26的氨基酸序列(OTV13)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10-23或15-23或20-23或5-10或8-10或10-15或5-13或8-13或10-13或5-15或8-15或5-20或8-20或10-20或13-15或13-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是5-10或5-15或5-25或5-30或5-32或5-30或5-38或8-32或8-38或10-38 13-15或13-20或13-25或13-30或13-32或13-38或15-38或20-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是10-16个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26基本上同源的分离的肽与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是线性肽。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:12(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:26(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地经由SEQ ID NO:26的N-末端半胱氨酸残基)由SEQ ID NO:26组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:13(OTV14)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:13(OTV14)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:13(OTV14)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:13的氨基酸序列(OTV14)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:27(OTV14)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:27(OTV14)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:27(OTV14)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:27的氨基酸序列(OTV14)组成的分离的肽。
优选地，基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽包含氨基序列(或基序)IED和/或(优选地“和”)NYD。氨基酸序列IED位于SEQ ID NO:13的11-13位和SEQ ID NO:27的12-14位。氨基酸序列NYD位于SEQ ID NO:13的4-6位和SEQ IDNO:27的5-7位。
优选地，在基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽中，具有在IED基序内不超过一个(优选地无)氨基酸取代或缺失和/或在NYD基序内不超过一个(优选地无)氨基酸取代或缺失。
OTV14肽(由SEQ ID NO:13和27表示)是构象表位。这些序列中的IED基序对应于TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸位置599-601，并且这些序列中的NYD基序对应于TRPV1(SEQID NO:1)的氨基酸位置653-655。不希望受理论束缚，其他残基(即除IED和NYD基序之外的残基)充当间隔物，据信将IED和NYD基序的侧链强制为特定构象，所述构象模拟完全TRPV1序列的结构模型中的实际构象。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、或长度是<15个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10至23或15至23或20-23或5-10或8-10或5-11或8-11或10-15或11-15或5-15或8-15或5-20或8-20或10-20或11-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是5-15或10-15或10-20或10-30或10-35或10-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是12-18个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ IDNO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基和C-末端半胱氨酸残基。在一些实施方案中，在N-末端和/或C-末端(例如，在N-末端的炔丙基基团和/或C-末端酰胺基团)可以存在另外的修饰。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27基本上同源的分离的肽与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是环状肽。优选地，此类肽经由N-末端和C-末端半胱氨酸残基之间的二硫键环化。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:13(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:27(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地，经由SEQ ID NO:27的炔丙基基团)由SEQ ID NO:28组成的分离的肽。
在一方面，本发明提供了包含氨基酸序列(或基序)NYD和氨基酸序列(或基序)IED的分离的肽，其中氨基酸序列NYD相对于氨基酸序列IED位于N-末端，并且优选地NYD和IED序列被一个或多个氨基酸残基分隔(例如被3、4或5个氨基酸残基分隔，优选地被4个氨基酸残基分隔，例如被氨基酸序列PDGS(SEQ ID NO:38)分隔)。此类分离的肽可以进一步包含一个或多个(例如1、2或3个)相对于NYD序列位于N-末端的氨基酸残基和/或(优选地“和”)一个或多个(例如1、2或3个)相对于IED序列位于C-末端的氨基酸残基。本文别处关于本发明的分离的肽的优选特征和特性(例如优选的长度和修饰)的讨论可经必要修正后(mutatismutandis)应用于本发明的所述方面。在另一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含(i)分离的肽，所述分离的肽包含氨基酸序列(或基序)NYD和氨基酸序列(或基序)IED，其中氨基酸序列NYD相对于氨基酸序列IED位于N-末端，和(ii)肽载剂。在优选的实施方案中，分离的肽如本文别处所述。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:14(OTV15)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:14(OTV15)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:14(OTV15)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:14的氨基酸序列(OTV15)组成的分离的肽。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:28(OTV15)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列。基本上同源的序列在本文别处描述。
在优选的实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽包含SEQ ID NO:28(OTV15)的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了分离的肽，所述分离的肽由SEQ ID NO:28(OTV15)的氨基酸序列或与其基本上同源的序列组成。基本上同源的序列在本文别处描述。
在一个实施方案中，本发明提供了由SEQ ID NO:28的氨基酸序列(OTV15)组成的分离的肽。
在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽包含氨基序列ESTSH。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是<24个氨基酸、或长度是<20个氨基酸、长度是<15个氨基酸、长度是<10个氨基酸(例如长度是5-23或8-23或10至23或15至23或20-23或5-10或8-10或5-11或8-11或10-15或11-15或5-15或8-15或5-20或8-20或10-20或11-20个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是小于39个氨基酸、长度是小于38个氨基酸、或长度是小于37个氨基酸、或长度是小于36个氨基酸、或长度是小于35个氨基酸、或长度是小于34个氨基酸、或长度是小于33个氨基酸(例如长度是5-15或10-15或10-20或10-30或10-35或10-38或20-25或20-30或20-32或25-30或25-32或25-38或30-38个氨基酸)。在一些实施方案中，基于SEQ IDNO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽长度是8-14个氨基酸。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽不含有任何内部半胱氨酸残基。“内部”残基是指在除N-末端和/或C-末端残基之外的位置上的残基。在一些实施方案中，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽具有N-末端半胱氨酸残基和C-末端半胱氨酸残基。在一些实施方案中，在N-末端和/或C-末端(例如，在N-末端的炔丙基基团和/或C-末端酰胺基团)可以存在另外的修饰。
在一些实施方案中，与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28基本上同源的分离的肽与SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28本身相比，具有1、2或3个氨基酸取代、缺失或添加。
优选地，基于SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)的分离的肽是环状肽。优选地，此类肽经由N-末端和C-末端半胱氨酸残基之间的二硫键环化。
在一方面，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含分离的肽和(例如与其偶联)肽载剂，所述分离的肽包含(或由其组成)SEQ ID NO:14(或与其基本上同源的序列)或包含(或由其组成)SEQ ID NO:28(或与其基本上同源的序列)。肽载剂在本文别处描述。在优选的实施方案中，肽载剂是KLH。在优选的实施方案中，本发明提供了偶联物，所述偶联物包含与肽载剂KLH偶联的(优选地，经由SEQ ID NO:28的炔丙基基团)由SEQ ID NO:28组成的分离的肽。
在一些实施方案中，根据本发明的分离的肽(或偶联物)可以存在于溶液或悬浮液中。因此，在一方面，本发明提供了组合物，所述组合物包含本发明的分离的肽，以及任选地可接受的(例如药学上可接受的)稀释剂、缓冲液、防腐剂和/或赋形剂。
在一些实施方案中，分离的肽(或偶联物)可存在于(即附接或结合至)固体支持物(例如珠或微珠或板或微量滴定板)上。因此，在一方面，本发明提供了固体支持物，其附接(直接或间接附接)至本发明的分离的肽或偶联物。
本发明的分离的肽(和偶联物)通常适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1(优选地人TRPV1)结合的抗体。例如，本发明的分离的肽通常适合用作抗原表位，用于鉴定(或产生或生产)抗体。使用本发明的分离的肽鉴定(或产生或生产)抗体可以通过任何合适的方式进行，并且技术人员熟悉合适的技术(例如，如本文别处所讨论的)。例如，本发明的分离的肽(和偶联物)通常适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1结合的多克隆抗体(例如在动物如兔中产生的多克隆抗体，其已经用本发明的分离的肽(或偶联物)免疫)，或用于使用标准杂交瘤技术或噬菌体展示鉴定(或产生或生产)单克隆抗体。换言之，本发明的分离的肽(和偶联物)通常代表(或对应于或大体上对应于)TRPV1的有用表位以用抗TRPV1抗体靶向。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽(和偶联物)适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1(优选地人TRPV1)结合并抑制辣椒素诱导的TRPV1激活的抗体。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽(和偶联物)适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1(优选地人TRPV1)结合并且不显著抑制热诱导的TRPV1激活的抗体。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽(和偶联物)适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1(优选地人TRPV1)结合并优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活的抗体。在一些此类实施方案中，分离的肽OTV4、OTV5和OTV12是优选的。在一些此类实施方案中，分离的肽OTV3、OTV4和OTV5是优选的。在一些实施方案中，OTV5是优选的。在一些实施方案中，OTV4是优选的。在一些实施方案中，OTV3是优选的。
本发明的分离的肽(和偶联物)对应于(或大体上对应于)TRPV1(优选地人TRPV1，SEQ ID NO:1)的表位(或区域或部分)，其位于TRPV1(优选地人TRPV1，SEQ ID NO:1)的区域，从氨基酸残基599到氨基酸残基656。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽在对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的C621的位置具有除半胱氨酸(C)以外的氨基酸残基(优选地丝氨酸(S))。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽包含氨基酸序列IEDGKN(SEQ ID NO:33)或与SEQ ID NO:33相比含有1、2或3个氨基酸取代或缺失或添加的序列。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽包含氨基酸序列LPSEST(SEQ ID NO:34)或与SEQ ID NO:34相比含有1、2或3个氨基酸取代或缺失或添加的序列。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽包含氨基酸序列PPDSSYNS(SEQ ID NO:35)或与SEQ ID NO:35相比含有1、2或3个氨基酸取代或缺失或添加的序列。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽包含氨基酸序列RWRGPA(SEQ ID NO:36)或与SEQ ID NO:36相比含有1、2或3个氨基酸取代或缺失或添加的序列。
在一些实施方案中，本发明的分离的肽包含氨基酸序列RGPASR(SEQ ID NO:37)或与SEQ ID NO:37相比含有1、2或3个氨基酸取代或缺失或添加的序列。
包含(或由其组成)编码如本文定义的本发明的分离的肽的核苷酸序列的核酸分子、或与其基本上同源的核酸分子形成本发明的又另外的方面。
如本文所用，与核酸序列有关的术语“基本上同源的”包括与起始核酸序列具有至少65％、70％或75％，优选地至少80％，甚至更优选地至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
如本文所用，术语“核酸序列”或“核酸分子”是指由天然存在的碱基、糖和糖间(主链)键组成的核苷或核苷酸单体的序列。所述术语还包括经修饰或取代的序列，其包含非天然存在的单体或其部分。本发明的核酸序列可以是脱氧核糖核酸序列(DNA)或核糖核酸序列(RNA)，并且可以包括天然存在的碱基(包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸苷和尿嘧啶)。序列还可以含有经修饰的碱基。此类经修饰的碱基的实例包括氮杂和脱氮腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸苷和尿嘧啶；以及黄嘌呤和次黄嘌呤。核酸分子可以是双链的或单链的。核酸分子可以是全部或部分合成的或重组的。
在另一方面，本发明提供了包含本发明的分离的肽(或偶联物)的组合物。此类组合物可以进一步包含(例如与其混合)适合的稀释剂、载剂、赋形剂和/或防腐剂(例如药学上可接受的稀释剂、载剂、赋形剂和/或防腐剂)。
如上所述，本发明的分离的肽(和偶联物)通常适用于鉴定(或产生或生产)与TRPV1(优选地人TRPV1)结合并优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活的抗体。
因此，在一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
在优选的实施方案中，TRPV1(瞬时受体电位香草酸1型)是人TRPV1(hTRPV1)。人TRPV1的氨基酸序列如本文SEQ ID NO:1所示。
在一些实施方案中，本发明的抗体与位于TRPV1蛋白质的细胞外区域的TRPV1的表位结合。在一些实施方案中，抗体与由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-656定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合。在一些实施方案中，结合的整个表位位于TRPV1的此区域内。在一些实施方案中，结合的表位的至少一个氨基酸位于TRPV1的此区域内。
在优选的实施方案中，本发明的抗体与本发明的分离的肽或偶联物结合(或能够与其结合)。优选的分离的肽和偶联物和分离的肽和偶联物的优选的组在本文别处定义。在优选的实施方案中，本发明的抗体与如本文别处描述的优选的分离的肽或偶联物结合。抗体与分离的肽结合的能力可以通过任何合适的方式来评估，并且技术人员熟悉合适的方法(例如，ELISA测定来评估给定分离的肽是否可以与全长TRPV1竞争抗体结合)。
尽管本发明的优选的抗体结合(或能够结合)本发明的分离的肽或偶联物，当然它们通常也结合全长(或野生型或天然)TRPV1(优选地人TRPV1)。
在一些实施方案中，全长(或野生型或天然)TRPV1(优选地人TRPV1)是在细胞上、优选地在哺乳动物细胞(例如贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞上)表达的TRPV1。在一些实施方案中，本发明的抗体能够与在细胞(例如CHO细胞)上异源表达的TRPV1结合。在一些实施方案中，本发明的抗体能够结合在细胞上表达的TRPV1，其中TRPV1从诱导型表达系统(如四环素调节的表达系统，例如如本文实施例部分中描述的)表达。TRPV1通常在细胞表面处(上)表达。本发明的抗体与TRPV1的结合可以通过任何合适的方式来评估，并且技术人员将熟悉合适的方法(例如流式细胞术(如FACS)或免疫细胞化学或使用例如本文别处描述的功能测定)。
本发明的分离的肽对应于或大体上对应于全长TRPV1(优选地人TRPV1，SEQ IDNO:1)的某些区域或表位。
更特别地，SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:16(OTV3肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-630。
分离的肽SEQ ID NO:3(OTV4肽)对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-630。分离的肽SEQ ID NO:17(OTV4肽)大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-630。
SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:18(OTV5肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ IDNO:1)的残基599-630。
SEQ ID NO:5(OTV6肽)的分离的肽对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-606。SEQ ID NO:19(OTV6肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-606。
分离的肽SEQ ID NO:6(OTV7肽)对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-614。分离的肽SEQ ID NO:20(OTV7肽)大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-614。
SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:21(OTV8肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ IDNO:1)的残基599-622。
SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:22(OTV9肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ IDNO:1)的残基607-630。
SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:23(OTV10肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQID NO:1)的残基615-630。
SEQ ID NO:10(OTV11肽)的分离的肽对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基623-630。SEQ ID NO:24(OTV11肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基623-630。
SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:25(OTV12肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQID NO:1)的残基631-643。
SEQ ID NO:12(OTV13肽)的分离的肽对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基644-656。SEQ ID NO:26(OTV13肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基644-656。
SEQ ID NO:13和27(OTV14肽)的分离的肽包含氨基酸序列(或基序)IED和NYD，其对应于TRPV1(SEQ ID NO:1)中的残基。更特别地，SEQ ID NO:13和27内的IED序列对应于TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基599-601，并且SEQ ID NO:13和27内的NYD序列对应于TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基653-655。
SEQ ID NO:14(OTV15肽)的分离的肽对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基610-620。SEQ ID NO:28(OTV15肽)的分离的肽大体上对应于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的残基610-620。
“对应于”是指分离的肽的氨基序列(SEQ ID NO:)与人TRPV1(SEQ ID NO:1)的所述区域或表位的氨基酸序列相匹配。“大体上对应于”是指分离的肽的氨基酸序列(SEQ IDNO:)可识别为基于人TRPV1(SEQ ID NO:1)的所述区域或表位的序列(或衍生自或其经修饰的形式)。例如，具有“大体上对应于”人TRPV1(SEQ ID NO:1)的所述区域或表位的序列的分离的肽通常具有一个或多个(例如1、2、3、4或5个，优选地1、2或3个)与对应于(即精确对应)人TRPV1(SEQ ID NO:1)的所述区域或表位的序列的分离的肽相比的氨基酸取代、添加或缺失。因此，具有“大体上对应于”人TRPV1(SEQ ID NO:1)的所述区域或表位的序列的分离的肽可以被认为是本文别处定义的“基本上同源的”分离的肽序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630、氨基酸残基599-606、氨基酸残基599-614、氨基酸残基599-622、氨基酸残基607-630、氨基酸残基615-630、氨基酸残基623-630、氨基酸残基631-643、氨基酸残基644-656、或氨基酸残基610-620定义的区域中的表位上与TRPV1结合，或在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-601和残基653-655定义的区域中的表位上与TRPV1结合。在一些实施方案中，结合的整个表位位于TRPV1的这些区域之一内。在一些实施方案中，结合的表位的至少一个氨基酸位于TRPV1的这些区域之一内。
在一些实施方案中，本发明的抗体在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630、氨基酸残基599-614、氨基酸残基607-630、氨基酸残基631-643、或氨基酸残基644-656定义的区域中TRPV1的表位上与TRPV1结合。
在一些实施方案中，本发明的抗体在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630、或631-643定义的区域中的TRPV1的表位上与TRPV1结合。
在一些实施方案中，在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630定义的区域中的TRPV1的表位上与TRPV1结合的本发明的抗体是优选的。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:91或优选地SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:77的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH CDR3，和/或(优选地“和”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:91或优选地SEQ ID NO:92的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL CDR3。
在本发明的一些实施方案中，VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列(KS S Q S L L X8 S X10 X11 X12 X13 X14 X15 X16 X17)。在这些实施方案中，X8、X10、X11、X12、X13、X14、X15和X16可以是任何氨基酸，并且X17可以是任何氨基酸或不是氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X8是D或Y；X10是A或S；X11是G或N；X12是K或Q；X13是T或K；X14是Y或N；X15是L或C、X16是N或L；X17是A或不是氨基酸。因此，优选的VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VL CDR1序列具有或包含SEQID NO:44、62或80。
在本发明的实施方案中，当一种或多种CDR序列含有XX残基，则具有与其基本上同源的序列的CDR(与给定CDR序列相比含有1、2或3个，优选地1或2个(更优选地1个)经改变的氨基酸或氨基酸取代)也涵盖在本发明中。在一些此类实施方案中，所述氨基酸残基的改变或取代可以包括一个或多个XX残基或可以在除XX残基之外的残基处。在其他此类实施方案中，所述改变在XX残基和非XX残基的混合物中。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:91或优选地SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:91或优选地SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:440或优选地SEQ ID NO:441的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:442或优选地SEQ ID NO:443的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:444或优选地SEQ ID NO:445的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:446或优选地SEQ ID NO:447的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:167、SEQ IDNO:187、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:247或SEQ ID NO:267的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:168、SEQ IDNO:188、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:268的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在本发明的一些实施方案中，VH CDR1具有或包含SEQ ID NO:440的氨基酸序列(SD X3 A W N)。在这些实施方案中，X3可以是任何氨基酸。优选地，X3残基是F或Y。因此，优选的VH CDR1具有或包含SEQ ID NO:441的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VH CDR1序列具有或包含SEQ ID NO:103、123、143、163、183、203、223、243或263。
在本发明的一些实施方案中，VH CDR2具有或包含SEQ ID NO:442的氨基酸序列(X1 I T Y S X6 X7 T N X10 N P S L X15 S)。在这些实施方案中，X1、X6、X7、X10和X15可以是任何氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X1是Y或F；X6是G或D；X7是Y或H或N；X10是Y或F；X15是K或I或R。因此，优选的VH CDR2具有或包含SEQ ID NO:443的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VH CDR2序列具有或包含SEQ ID NO:104、124、144、164、184、204、224、244或264。
在本发明的一些实施方案中，VH CDR3具有或包含SEQ ID NO:444的氨基酸序列(SX2 X3 X4 F D Y)。在这些实施方案中，X2、X3和X4可以是任何氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X2是T或G；X3是T或A或N；X4是Y或F。因此，优选的VHCDR3具有或包含SEQ ID NO:445的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VH CDR3序列具有或包含SEQ ID NO:105、125、145、165、185、205、225、245或265。
在本发明的一些实施方案中，VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:446的氨基酸序列(RS S Q X5 X6 X7 H S D G N T Y L E)。在这些实施方案中，X5、X6和X7可以是任何氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X5是S或T；X6是I或V；X7是L或V或I。因此，优选的VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:447的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VL CDR1序列具有或包含SEQ ID NO:106、126、146、166、186、206、226、246或266。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表W中编号1-45的每一行中：
表W
Figure BDA0003788864720000381
Figure BDA0003788864720000391
在表W所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:440所示的共有序列是如SEQ ID NO:441所示的序列。在表W所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:442所示的共有序列是如SEQ ID NO:443所示的序列。在表W所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:444所示的共有序列是如SEQ ID NO:445所示的序列。在表W所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:446所示的共有序列是如SEQ ID NO:447所示的序列。在表W所示的本发明的一些实施方案中，第37-45行中所示的CDR序列的组合是优选的。在一些实施方案中，可以使用与表W中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:440或优选地SEQ ID NO:441的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO:442或优选地SEQ ID NO:443的氨基酸序列的VH CDR2、和具有SEQ ID NO:444或优选地SEQ ID NO:445的氨基酸序列的VHCDR3，和/或(优选地“和”)其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:446或优选地SEQ IDNO:447的氨基酸序列的VL CDR1。在一些此类实施方案中，优选地轻链可变区包含具有SEQID NO:107的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:127的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:128的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQID NO:148的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:167的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:168的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ IDNO:187的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ IDNO:228的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:247的氨基酸序列的VLCDR2和具有SEQ ID NO:248的氨基酸序列的VL CDR3，或轻链可变区包含具有SEQ ID NO:267的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:268的氨基酸序列的VL CDR3。在一些实施方案中，可以使用与本段中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:163、SEQ IDNO:183、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:283、SEQ ID NO:303、SEQ ID NO:323、SEQ ID NO:363、SEQ ID NO:383、SEQ ID NO:403、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:164、SEQ IDNO:184、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:284、SEQ ID NO:304、SEQ ID NO:324、SEQ ID NO:364、SEQ ID NO:384、SEQ ID NO:404、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:165、SEQ IDNO:185、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:305、SEQ ID NO:325、SEQ ID NO:365、SEQ ID NO:385、SEQ ID NO:405、SEQ IDNO:43、SEQ ID NO:61或SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:448或优选地SEQ ID NO:449的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:147、SEQ ID NO:167、SEQ IDNO:187、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:287、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:327、SEQ ID NO:367、SEQ ID NO:387、SEQ ID NO:407、SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:168、SEQ IDNO:188、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:248或SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:288、308、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:368、SEQ ID NO:388、SEQ ID NO:408、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在本发明的一些实施方案中，VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:448的氨基酸序列(X1 S S Q X5 X6 X7 X8 S X10 X11 X12 X13 X14 X15 L X17)。在这些实施方案中，X1、X5、X6、X7、X8、X10、X11、X13、X14、X15和X17可以是任何氨基酸，并且X12可以是任何氨基酸或不是氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X1是R或K；X5是S或T；X6是L或V或I；X7是L或V或I；X8是H或D或Y；X10是S或A或D；X11是G或N；X13是K或N；X14是T或N；X15是Y或C；X17是A或N或E；X12是Q或不是氨基酸。因此，优选的VL CDR1具有或包含SEQ ID NO:449的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VL CDR1序列具有或包含SEQ ID NO:106、126、146、166、186、206、226、246、266、286、306、326、366、386、406、44、62或80。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表Y中编号1-18的每一行中：
表Y
Figure BDA0003788864720000421
在表Y所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:448所示的共有序列是如SEQ ID NO:449所示的序列。在一些实施方案中，可以使用与表Y中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:448或优选地SEQ ID NO:449的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR1。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR2和VL CDR3，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表Y的行编号1-18的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:448或优选地SEQ ID NO:449的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR1，优选地轻链可变区包含VL CDR2、VL CDR3的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3具有以上表Y的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:123、SEQ IDNO:143、SEQ ID NO:163、SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:263、SEQ ID NO:283、SEQ ID NO:303、或SEQ ID NO:403的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:124、SEQ IDNO:144、SEQ ID NO:164、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:284、SEQ ID NO:304、或SEQ ID NO:404的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:125、SEQ IDNO:145、SEQ ID NO:165、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:265、SEQ ID NO:285、SEQ ID NO:305、或SEQ ID NO:405的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:126、SEQ IDNO:146、SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:286、SEQ ID NO:306、或SEQ ID NO:406的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:107、SEQ ID NO:127、SEQ IDNO:147、SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:187、SEQ ID NO:207、SEQ ID NO:227、SEQ ID NO:247、SEQ ID NO:267、SEQ ID NO:287、SEQ ID NO:307、或SEQ ID NO:407的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:450或优选地SEQ ID NO:451的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在本发明的一些实施方案中，VL CDR3具有或包含SEQ ID NO:450的氨基酸序列(X1 Q G X4 H X6 P X8 T)。在这些实施方案中，X1、X4和X6可以是任何氨基酸，并且X8可以是任何氨基酸或不是氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X1是W或F或S；X4是T或S；X6是F或V；X8是P或Y或是非氨基酸。因此，优选的VL CDR3具有或包含SEQ ID NO:451的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VL CDR3序列具有或包含SEQ IDNO:SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:148、SEQ IDNO:168、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:288、SEQ ID NO:308、或SEQ ID NO:408。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表AA中编号1-14的每一行中：
表AA
Figure BDA0003788864720000441
Figure BDA0003788864720000451
在表AA所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:450所示的共有序列是如SEQ ID NO:451所示的序列。在一些实施方案中，可以使用与表AA中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:450或优选地SEQ ID NO:451的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR3。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR1和VL CDR2，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表AA的行编号1-14的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:450或优选地SEQ ID NO:451的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR3，优选地轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR2的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR1、VL CDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3具有以上表AA的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:363、或SEQ ID NO:383的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:364、或SEQ ID NO:384的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:365、或385的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:366、SEQ ID NO:386的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:367、SEQ ID NO:387的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:452或优选地SEQ ID NO:439的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在本发明的一些实施方案中，VL CDR3具有或包含SEQ ID NO:452的氨基酸序列(QQ Y Y X5 Y P X8 X9)。在这些实施方案中，X5和X8可以是任何氨基酸，并且X9可以是任何氨基酸或不是氨基酸。优选地，这些X残基的一个或多个，最优选地所有选自以下组：X5是Y或S；X8是P或T；X9是T或是非氨基酸。因此，优选的VL CDR3具有或包含SEQ ID NO:439的氨基酸序列。例如，本实施方案的优选的VL CDR3序列具有或包含SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:368、或SEQ ID NO:388。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表CC中编号1-3的每一行中：
表CC
Figure BDA0003788864720000461
在表CC所示的本发明的实施方案中，优选地如SEQ ID NO:452所示的共有序列是如SEQ ID NO:439所示的序列。在一些实施方案中，可以使用与表CC中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:452或优选地SEQ ID NO:439的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR3。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR1和VL CDR2，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表CC的行编号1-3的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:452或优选地SEQ ID NO:439的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR3，优选地轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR2的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR1、VL CDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3具有以上表CC的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:103、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:143、SEQ ID NO:163、SEQ IDNO:183、SEQ ID NO:203、SEQ ID NO:223、SEQ ID NO:243、SEQ ID NO:263、或SEQ ID NO:303的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:104、SEQ ID NO:124、SEQ ID NO:144、SEQ ID NO:164、SEQ IDNO:184、SEQ ID NO:204、SEQ ID NO:224、SEQ ID NO:244、SEQ ID NO:264、SEQ ID NO:304的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:105、SEQ ID NO:125、SEQ ID NO:145、SEQ ID NO:165、SEQ IDNO:185、SEQ ID NO:205、SEQ ID NO:225、SEQ ID NO:245、SEQ ID NO:265、或SEQ ID NO:305的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:146、SEQ ID NO:166、SEQ IDNO:186、SEQ ID NO:206、SEQ ID NO:226、SEQ ID NO:246、SEQ ID NO:266、SEQ ID NO:306的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:148、SEQ ID NO:168、SEQ IDNO:188、SEQ ID NO:208、SEQ ID NO:228、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:268、SEQ ID NO:308的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表DD中编号1-10的每一行中：
表DD
Figure BDA0003788864720000481
在一些实施方案中，可以使用与表DD中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR1和VL CDR3，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表DD的行编号1-10的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:107的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2，优选地轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR3的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR1、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3具有以上表DD的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:323、SEQ ID NO:363、或SEQ ID NO:383的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:324、SEQ ID NO:364、或SEQ ID NO:384的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:325、SEQ ID NO:365、或SEQ ID NO:385的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:326、SEQ ID NO:366、或SEQ ID NO:386的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:368、或SEQ ID NO:388的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表EE中编号1-4的每一行中：
表EE
Figure BDA0003788864720000491
在一些实施方案中，可以使用与表EE中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR1和VL CDR3，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表EE的行编号1-4的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:81的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2，优选地轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR3的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR1、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3具有以上表EE的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:283、或SEQ ID NO:403的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:284、或SEQ ID NO:404的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:285、或SEQ ID NO:405的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:286、或SEQ ID NO:406的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:288、或SEQ ID NO:408的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
VH CDR序列和VL CDR序列的某些优选的组合列于下表FF中编号1-4的每一行中：
表FF
Figure BDA0003788864720000501
在一些实施方案中，可以使用与表FF中列举的特定序列基本上同源的序列而不是特定序列本身。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2。在一些此类实施方案中，优选地，轻链可变区包含VL CDR1和VL CDR3，并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其中所述CDR具有如选自以上表FF的行编号1-4的给定行中列出的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)。换句话说，在一些此类实施方案中，除了具有有SEQ ID NO:45的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2，优选地轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR3的组合并且重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3的组合，其中所述VL CDR1、VL CDR3、VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3具有以上表FF的行中组合列出(即一起)的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:91(或优选地SEQ ID NO:92)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:440(或优选地SEQ ID NO:441)的氨基酸序列的VH CDR1。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:442(或优选地SEQ ID NO:443)的氨基酸序列的VH CDR2。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:444(或优选地SEQ ID NO:445)的氨基酸序列的VH CDR3。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VLCDR2、VL CDR3、VH CDR1和VH CDR2(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:446(或优选地SEQ ID NO:447)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:448(或优选地SEQ ID NO:449)的氨基酸序列的VL CDR1。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR2、VLCDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:450(或优选地SEQ ID NO:451)的氨基酸序列的VL CDR3。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VLCDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:452(或优选地SEQ ID NO:439)的氨基酸序列的VL CDR3。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VLCDR2、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:107或SEQ IDNO:81或SEQ ID NO:45的氨基酸序列(或与其基本上同源的序列)的VL CDR2。在一些此类实施方案中，优选地VL CDR1、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，其组合)具有如本文别处所定义的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH CDR3；并且/或者
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH CDR3；并且
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH CDR3；并且/或者
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH CDR3；并且
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:108的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:103的VH CDR1、SEQ ID NO:104的VH CDR2、和SEQ ID NO:105的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:106的VL CDR1、SEQ ID NO:107的VL CDR2、和SEQ ID NO:108的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:123的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:124的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:125的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:126的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:127的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:123的VH CDR1、SEQ ID NO:124的VH CDR2、和SEQ ID NO:125的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:126的VL CDR1、SEQ ID NO:127的VL CDR2、和SEQ ID NO:128的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:143的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:145的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:146的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:143的VH CDR1、SEQ ID NO:144的VH CDR2、和SEQ ID NO:145的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:146的VL CDR1、SEQ ID NO:147的VL CDR2、和SEQ ID NO:148的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:183的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:184的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:185的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:183的VH CDR1、SEQ ID NO:184的VH CDR2、和SEQ ID NO:185的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:186的VL CDR1、SEQ ID NO:187的VL CDR2、和SEQ ID NO:188的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:203的VH CDR1、SEQ ID NO:204的VH CDR2、和SEQ ID NO:205的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:206的VL CDR1、SEQ ID NO:207的VL CDR2、和SEQ ID NO:208的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:225的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:223的VH CDR1、SEQ ID NO:224的VH CDR2、和SEQ ID NO:225的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:226的VL CDR1、SEQ ID NO:227的VL CDR2、和SEQ ID NO:228的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:283的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:284的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:285的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:286的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:287的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:288的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:283的VH CDR1、SEQ ID NO:284的VH CDR2、和SEQ ID NO:285的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:286的VL CDR1、SEQ ID NO:287的VL CDR2、和SEQ ID NO:288的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:303的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:304的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:305的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:306的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:307的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:308的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:303的VH CDR1、SEQ ID NO:304的VH CDR2、和SEQ ID NO:305的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:306的VL CDR1、SEQ ID NO:307的VL CDR2、和SEQ ID NO:308的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:323的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:324的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:325的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:326的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:327的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:328的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:323的VH CDR1、SEQ ID NO:324的VH CDR2、和SEQ ID NO:325的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:326的VL CDR1、SEQ ID NO:327的VL CDR2、和SEQ ID NO:328的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:343的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:344的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:345的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:346的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:347的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:348的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:343的VH CDR1、SEQ ID NO:344的VH CDR2、和SEQ ID NO:345的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:346的VL CDR1、SEQ ID NO:347的VL CDR2、和SEQ ID NO:348的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:363的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:364的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:365的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:366的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:367的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:368的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:363的VH CDR1、SEQ ID NO:364的VH CDR2、和SEQ ID NO:365的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:366的VL CDR1、SEQ ID NO:367的VL CDR2、和SEQ ID NO:368的VL CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，其结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:423的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:424的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:425的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:426的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:427的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:428的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3。基本上同源的序列在本文别处描述。优选地，所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
在一些实施方案中，抗体包含至少一个重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:423的VH CDR1、SEQ ID NO:424的VH CDR2、和SEQ ID NO:425的VH CDR3，和/或(优选地“和”)至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:426的VL CDR1、SEQ ID NO:427的VL CDR2、和SEQ ID NO:428的VL CDR3。
本发明的某些优选的实施方案提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:39或57或75的氨基酸序列、或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或具有SEQ ID NO:40或58或76的氨基酸序列、或与其基本上同源的序列的VL结构域。
进一步优选的实施方案提供了抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:39或57或75的氨基酸序列的VH结构域和包含3个轻链CDR的VL结构域。优选地，所述轻链CDR具有SEQ ID NO44、45和46；或80、81和82。
进一步优选的实施方案提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:40或58或76的氨基酸序列的VL结构域和包含3个重链CDR的VH结构域。优选地，所述重链CDR具有SEQ IDNO 41、42和43；或77、78或79。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列，或与其具有至少80％(例如至少85％、90％、95％或98％)序列同一性的序列，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列，或与其具有至少80％(例如至少85％、90％、95％或98％)序列同一性的序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列，并且其中重链可变区具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或具有SEQ ID NO:58氨基酸序列的或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的序列(例如至少85％、90％、95％或98％)，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的序列(例如至少85％、90％、95％或98％)。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列，并且其中重链可变区具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或具有SEQ ID NO:76氨基酸序列的或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的序列(例如至少85％、90％、95％或98％)，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的序列(例如至少85％、90％、95％或98％)。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列，和/或其中重链可变区具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列。
在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列，并且其中重链可变区具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:102的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:122的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:122的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:141的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:142的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:141的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:162的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:162的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:182的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:182的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:202的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:222的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:222的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:241的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:242的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:242的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:241的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:261的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:262的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:262的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:261的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:281的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:282的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:282的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:281的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:301的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:302的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:302的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:301的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:321的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:322的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:322的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:321的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:342的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:342的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:361的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:362的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:362的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:361的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:381的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:382的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:382的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:381的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:401的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:402的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:402的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:401的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:421的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ IDNO:422的氨基酸序列或与其基本上同源的序列(例如与其具有至少80％序列同一性，例如与其具有至少85％、90％、95％或98％序列同一性的序列)的VL结构域。在优选的实施方案中，本发明提供了抗体，其中轻链可变区具有SEQ ID NO:422的氨基酸序列，并且/或者(优选地“并且”)其中重链可变区具有SEQ ID NO:421的氨基酸序列。
其他优选的实施方案是本文所述的抗体的Ig(例如IgG)形式，例如OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(或基于其的抗体)的IgG形式，优选地全长IgG形式。其他优选的实施方案是OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1和R4P1-C1抗体(或基于其的抗体)的Ig(例如IgG)形式，优选地全长IgG形式。在一些实施方案中，IgG是IgG1或IgG2(例如IgG2b)。因此，在一些实施方案中，抗体是包含如本文所述的CDR序列和/或重链可变区和/或轻链可变区的Ig抗体。当然应当理解，完全IgG抗体通常将包含两条基本相同的重链和两条基本相同的轻链。
在一些实施方案中，基于本文表A、B和C中列出的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体序列的抗体是优选的。在一些实施方案中，基于表C中列出的OT-Ab1抗体序列的抗体是优选的。
在一些实施方案中，基于本文表A-C和E-U中列出的OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1和R4P1-C1抗体序列的抗体是优选的。
本发明的抗体的一些实例是单克隆抗体OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1，其序列显示在本文表A、B和C中。使用杂交瘤技术鉴定单克隆抗体OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1，其中OTV5肽(SEQ ID NO:18)作为免疫原。CDR结构域、VH和VL结构域显示在本文表A、B和C中。包含这些CDR结构域或VH和VL结构域(或与其基本上同源的序列)的抗体是本发明的优选的方面。
本发明的抗体的其他实例是单克隆抗体32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1和46D9-1，其序列显示在本文表E-M中。使用杂交瘤技术鉴定单克隆抗体32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1和46D9-1，其中OTV3肽(SEQ ID NO:16)作为免疫原。CDR结构域、VH和VL结构域显示在本文表E-M中。包含这些CDR结构域或VH和VL结构域(或与其基本上同源的序列)的抗体是本发明的优选的方面。
本发明的抗体的其他实例是单克隆抗体12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1，其序列显示在本文表N-T中。使用杂交瘤技术鉴定单克隆抗体12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1，其中OTV4肽(SEQ ID NO:17)作为免疫原。CDR结构域、VH和VL结构域显示在本文表N-T中。包含这些CDR结构域或VH和VL结构域(或与其基本上同源的序列)的抗体是本发明的优选的方面。
本发明的抗体的另一个实例是单克隆抗体R4P1-C1，其序列显示在本文表U中。使用如本文实例部分描述的噬菌体展示技术鉴定所述单克隆抗体。CDR结构域、VH和VL结构域显示在本文表U中。包含这些CDR结构域或VH和VL结构域(或与其基本上同源的序列)的抗体是本发明的优选的方面。
通常，单克隆抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1和/或R4P1-C1(或基于其的抗体，例如与其具有基本上同源的序列的抗体)与由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合(或能够结合，例如特异性结合)。在一些实施方案中，结合的整个表位位于TRPV1的此区域内。在一些实施方案中，结合的表位的至少一个氨基酸位于TRPV1的此区域内。
基本上同源的序列的某些实例是与披露的氨基酸序列具有至少65％同一性的序列。在某些实施方案中，本发明的抗体包含至少一个轻链可变区，所述轻链可变区包括与SEQ ID NO:40、58、76、102、122、142、162、182、202、222、242、262、282、302、322、342、362、382、402、或422的氨基酸序列具有至少约65％、70％或75％，更优选地至少约80％，更优选地至少约85％，更优选地至少约90％或95％，以及最优选地至少约97％、98％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列区域；和/或至少一个重链可变区，所述重链可变区包括与SEQ IDNO:39、57、75、101、121、141、161、181、201、221、241、261、281、301、321、341、361、381、401、或421的氨基酸序列具有至少约65％、70％或75％，更优选地至少约80％，更优选地至少约85％，更优选地至少约90％或95％，以及最优选地至少约97％、98％或99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列区域。
基本上同源的序列的其他优选的实例是含有披露的氨基酸序列的保守氨基酸取代的序列。
基本上同源的序列的其他优选的实例是一个或多个披露的CDR区域中的含有1、2或3个，优选地1或2个(更优选地1个)经改变的氨基酸的序列。此类改变可以是保守或非保守的氨基酸取代、或它们的混合物。
在一些此类实施方案中，优选的改变是保守氨基酸取代。
在所有实施方案中，含有基本上同源的序列的抗体保留与TRPV1结合的能力。优选地，含有基本上同源的序列的抗体保留了关于OT-Ab3和/或OT-Ab2和/或OT-Ab1抗体所描述的一种或多种(优选全部)特性。优选地，含有基本上同源的序列的抗体保留了关于32C8-1和/或33C9-1和/或34C11-1和/或40B10-1和/或41B5-1和/或43D6-1和/或44E8-1和/或46B7-1和/或46D9-1和/或12C9-1和/或12G6-1和/或15D8-1和/或16F1-1和/或17E11-1和/或17E9-1和/或18E10-1和/或R4P1-C1抗体所描述的一种或多种(优选全部)特性。
根据本发明的基本上同源的氨基酸序列的另外的实例在本文别处描述。
本发明的抗体的CDR优选地由合适的框架区分开，例如在天然存在的抗体和/或有效的工程化抗体中发现的那些。因此，本发明的VH、VL和单独的CDR序列优选地提供在或并入适当的框架或支架中以使抗原结合。此类框架序列或区域可以对应于天然存在的框架区FR1、FR2、FR3和/或FR4，视情况而定以形成合适的支架，或者可以对应于共有框架区，例如通过比较各种天然存在的框架区来鉴定。可替代地，可以使用非抗体支架或框架(例如T细胞受体框架)。
可用于构架区的适当序列在本领域中是众所周知的并且有文献记载，并且可以使用这些中的任何一个。框架区的优选的序列是构成本发明的VH和/或VL结构域的一个或多个框架区，即如本文表A-C和E-U中披露的OT-Ab3、OT-Ab2、或OT-Ab1抗体的一个或多个框架区，32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1、或R4P1-C1抗体的一个或多个框架区、或与其基本上同源的框架区，和特别是允许维持抗原特异性的框架区，例如导致抗体的基本相同或相同的3D结构的框架区。
在某些优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:51、52、53和54)和/或可变重链(SEQ ID NO:47、48、49和50)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:69、70、71和72)和/或可变重链(SEQ ID NO:65、66、67和68)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:87、88、89和90)和/或可变重链(SEQ ID NO:83、84、85和86)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:113、114、115和116)和/或可变重链(SEQ ID NO:109、110、111和112)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:133、134、135和136)和/或可变重链(SEQ ID NO:129、130、131和132)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:153、154、155和156)和/或可变重链(SEQ ID NO:149、150、151和152)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:173、174、175和176)和/或可变重链(SEQ ID NO:169、170、171和172)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:193、194、195和196)和/或可变重链(SEQ ID NO:189、190、191和192)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:213、214、215和216)和/或可变重链(SEQ ID NO:209、210、211和212)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:233、234、235和236)和/或可变重链(SEQ ID NO:229、230、231和232)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:253、254、255和256)和/或可变重链(SEQ ID NO:249、250、251和252)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:273、274、275和276)和/或可变重链(SEQ ID NO:269、270、271和272)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:293、294、295和296)和/或可变重链(SEQ ID NO:289、290、291和292)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:313、314、315和315)和/或可变重链(SEQ ID NO:309、310、311和312)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:333、334、335和336)和/或可变重链(SEQ ID NO:329、330、331和332)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:353、354、355和356)和/或可变重链(SEQ ID NO:349、350、351和352)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:373、374、375和376)和/或可变重链(SEQ ID NO:369、370、371和372)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:393、394、395和396)和/或可变重链(SEQ ID NO:389、390、391和392)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:413、414、415和416)和/或可变重链(SEQ ID NO:409、410、411和412)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在其他优选的实施方案中，在本发明的抗体中发现所有四个可变轻链(SEQ IDNO:433、434、435和436)和/或可变重链(SEQ ID NO:429、430、431和432)框架区(FR)，视情况而定，或与其基本上同源的FR区域。
在一些实施方案中，本发明的VH结构域和/或VL结构域可以额外地包含在其N-末端端的信号肽(例如相对于VH或VL结构域直接位于N-末端)。然而，此类信号肽通常不存在于抗体本身中(例如不存在于成熟抗体或分离的抗体产物中)，因为它们通常被切割掉。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:39(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:93的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:40(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:94的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:57(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:95的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:58(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:96的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:75(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:97的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:76(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:98的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:101(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:117的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:102(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:118的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:121(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:137的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:122(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:138的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:141(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:157的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:142(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:158的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:161(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:177的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:162(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:178的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:181(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:197的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:182(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:198的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:201(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:217的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:202(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:218的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:221(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:237的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:222(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:238的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:241(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:257的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:242(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:258的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:261(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:277的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:262(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:278的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:281(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:297的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:282(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:298的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:301(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:317的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:302(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:318的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:321(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:337的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:322(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:338的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:341(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:357的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:342(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:358的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:361(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:377的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:362(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:378的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:381(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:397的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:382(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:398的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:401(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:417的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:402(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:418的信号肽。
在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:421(或与其基本上同源的序列)的VH结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:437的信号肽。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO:422(或与其基本上同源的序列)的VL结构域在其N-末端端进一步包含SEQ ID NO:438的信号肽。
如上所述，在本发明的这个方面，抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。
在一些实施方案中，抑制辣椒素诱导的TRPV1激活是任何可测量或显著的抑制，更优选地统计学上显著的抑制(例如，与没有抗体的对照相比或与具有不与TRPV1结合的抗体的对照相比)。
在一些实施方案中，用对照(例如不与TRPV1结合(或不特异性结合))观察到(或由其引起或引发)的辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制的水平(或抑制的量)表示(或设置为)零抑制水平(或零抑制值或0％抑制水平或值)。因此，在一些实施方案中，将本文别处讨论的辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或相对于)与用对照抗体(例如，不与TRPV1结合的对照抗体)观察到(或由其引起或引发)的抑制相比较。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少5％、至少10％、至少15％，优选地至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的抑制。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是多达5％、多达10％、多达15％、多达20％、多达25％、多达30％、多达35％、多达40％、多达45％、多达50％、多达55％、多达60％、多达65％、多达70％、多达75％、多达80％、多达85％、多达90％、多达95％或多达100％的抑制。
因此，在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是5％-100％、10％-100％、15％-100％、20％-100％、25％-100％、30％-100％、35％-100％、40％-100％、45％-100％、50％-100％、55％-100％、60％-100％、65％-100％、70％-100％、75％-100％、80％-100％、85％-100％、90％-100％或95％-100％的抑制。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是5％-75％、10％-75％、15％-75％、20％-75％、25％-75％、30％-75％、35％-75％、40％-75％、45％-75％、50％-75％、55％-75％、60％-75％、65％-75％或70％-75％的抑制。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是5％-50％、10％-50％、15％-50％、20％-50％、25％-50％、30％-50％、35％-50％、40％-50％或45％-50％的抑制。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是5％-25％、10％-25％、15％-25％或20％-25％的抑制。
在一些优选的实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少20％，或至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的抑制。
在一些实施方案中，本发明的抗体在辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制方面，具有≤5μM、≤1μM、≤900nM、≤800nM、≤700nM、≤600nM、≤500nM、≤400nM、≤300nM、≤200nM、≤100nM、≤75nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2nM、≤1nM、≤500pM、≤400pM、≤300pM、≤200pM、≤100pM、≤50pM、≤25pM、≤10pM、≤5pM、≤2pM或≤1pM的IC50。优选地，IC50是≤1μM，例如≤750nM、≤500nM、≤400nM、≤300nM、≤200nM、≤100nM、≤75nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM或≤5nM。在一些实施方案中，IC50值可以在1pM-≤5μM，例如1pM-1μM、1pM-500nM、1pM-100nM、1pM-50nM、500pM-10μM、500pM-1μM、500pM-500nM、500pM-100nM、500pM-50nM、1nM-10μM、1nM-1μM、1nM-500nM、1nM-100nM、1nM-50nM、10nM-10μM、10nM-1μM、10nM-500nM、10nM-100nM、10nM-50nM、100nM-10μM、100nM-1μM、或100nM-500nM的范围内。在一些实施方案中，IC50值可以多达5μM、或多达1μM、或多达900nM、或多达800nM、或多达700nM、或多达600nM、或多达500nM、或多达400nM、或多达300nM、或多达200nM、或多达100nM、或多达50nM或多达10nM。IC50值代表所研究的生物过程中物质的半数最大抑制浓度，在本发明的上下文中，表示用于抑制辣椒素诱导的TRPV1激活的抗体的半数最大抑制浓度。本发明上下文中的IC50值可替代地被视为用于抑制辣椒素诱导的细胞TRPV1介导的Ca2+流入的抗体的半数最大抑制浓度。可以通过任何合适的方式(并且基于任何合适的测试、方法或测定，例如本文所述的方法)计算IC50值。例如，可以基于FLIPR方法的结果建立(或计算)IC50值。特别优选的FLIPR方法在本文实例部分中描述。
如上所述，在本发明的这个方面，抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活。
在一些实施方案中，本发明的抗体对热诱导的TRPV1激活(如果有的话)的抑制与对热诱导的TRPV1激活的抑制(用对照(例如不与TRPV1结合(或不特异性结合)的对照抗体)观察到(或由其引起或引发))基本上相同(或没有显著差异或类似或相当)。在一些实施方案中，用对照(例如不与TRPV1结合(或不特异性结合))观察到(或由其引起或引发)的热诱导的TRPV1激活的抑制的水平(或抑制的量)表示(或设置为)零抑制水平(或零抑制值或0％抑制水平或值)。因此，在一些实施方案中，将本文别处讨论的热诱导的TRPV1激活的％抑制(或相对于)与用对照抗体(例如，不与TRPV1结合的对照抗体)观察到(或由其引起或引发)的抑制相比较。
在一些实施方案中，本发明的抗体将热诱导的TRPV1激活抑制了不超过25％、或不超过20％、或不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％、或不超过1％或0％。
因此，在一些实施方案中，本发明的抗体将热诱导的TRPV1激活抑制了0％-25％、0％-20％、0％-10％、0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或0％。
在一些优选的实施方案中，本发明的抗体导致(或引发)热诱导的TRPV1激活无可测量的抑制或热诱导的TRPV1激活的无显著的抑制(优选地无统计学上显著的抑制)。
在一些实施方案中，当抗体以微摩尔(μM)、纳摩尔(nM)或皮摩尔(pM)范围内，优选地纳摩尔(nM)或皮摩尔(pM)范围内的浓度使用时，确定上述抑制。因此，在一些实施方案中，当抗体以≤10μM、≤5μM、≤1μM、≤900nM、≤800nM、≤700nM、≤600nM、≤500nM、≤400nM、≤300nM、≤200nM、≤100nM、≤75nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2nM、≤1nM、≤500pM、≤400pM、≤300pM、≤200pM、≤100pM、≤50pM、≤25pM、≤10pM、≤5pM、≤2pM或≤1pM的浓度使用时，确定上述抑制。因此，在一些实施方案中，当抗体以1pM-≤10μM，例如1pM-1μM、1pM-500nM、1pM-100nM、1pM-50nM、500pM-10μM、500pM-1μM、500pM-500nM、500pM-100nM、500pM-50nM、1nM-10μM、1nM-1μM、1nM-500nM、1nM-100nM、1nM-50nM、10nM-10μM、10nM-1μM、10nM-500nM、10nM-100nM、10nM-50nM、100nM-10μM、100nM-1μM、或100nM-500nM的浓度使用时，确定上述抑制。在一些实施方案中，当抗体以多达5μM、或多达1μM、或多达900nM、或多达800nM、或多达700nM、或多达600nM、或多达400nM、或多达300nM、或多达200nM、或多达100nM、或多达50nM或多达10nM的浓度使用时，确定上述抑制。
在一些实施方案中，当抗体是多克隆抗体(例如兔多克隆抗体)时，应用上述抑制(例如％抑制)和浓度。在一些实施方案中，当抗体是单克隆抗体(例如小鼠单克隆抗体)时，应用上述抑制(例如％抑制)和浓度。
如上所述，在本发明的这个方面，抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活。这意味着给定抗体抑制(或能够抑制)辣椒素诱导的TRPV1激活程度大于其抑制(或能够抑制)热诱导的TRPV1激活。因此，如果给定抗体将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了X％，则所述抗体将热诱导的TRPV1激活抑制了<X％。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)比热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)高至少5％，但通常高至少10％、优选地高至少20％、高至少30％、高至少40％、高至少50％、高至少60％、高至少70％、高至少80％、高至少90％或甚至高100％。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少20％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少40％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少60％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少80％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少40％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤25％或是≤20％或是15％或是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少60％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤25％或是≤20％或是15％或是≤10％或是≤5％或是0％。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是至少80％，并且热诱导的TRPV1激活的％抑制(或％抑制值)是≤25％或是≤20％或是15％或是≤10％或是≤5％或是0％。
在一些实施方案中，抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活，如通过进行测试(或测定)以确定(或定量)抑制辣椒素诱导的TRPV1激活的水平(或量)并进行测试(或测定)以确定抑制热诱导的TRPV1激活的水平(或量)所确定的。合适的测定在本文别处描述。
在一些实施方案中，抗体优先抑制(或能够抑制)辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活，如当抗体以相同的浓度用于两种此类测定确定(即相同浓度的抗体用于测试以确定辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制水平，如用于测试以确定热诱导的TRPV1激活的抑制水平)。
在一些实施方案中，抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活，如当抗体以比确定辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制水平的测试中使用的浓度高至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍，优选地至少5倍(例如1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍或2-5、3-5、或4-5倍)的浓度使用时确定用于热诱导的TRPV1激活的测试中的抑制水平。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17(OTV4肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％的抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的是多达10％、多达15％、多达20％、多达25％、多达30％、多达35％、多达40％、多达45％或多达50％的抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以50nM至1μM或100nM至1μM，例如400nM至500nM、或约500nM(例如533nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％，优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以50nM至1μM或100nM至10μM，例如200nM至3μM、或约300nM(例如270nM)或约3μM(例如2.7μM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当抗体以比将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％的浓度高约5倍的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％，优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约3μM(例如2.7μM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以约500nM(例如533nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少10％、至少15％，优选地至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:17的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约3μM(例如2.7μM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％抑制，并且当所述抗体以约500nM(例如533nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少20％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18(OTV5肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是多达20％、多达25％、多达30％、多达35％、多达40％、多达45％、多达50％、多达55％、多达60％、多达65％、多达70％或多达75％的抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以100pM至100nM，例如1nM至20nM、或约10nM(例如13.3nM)的浓度使用时确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％，优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-15％、优选地0％-10％、0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以1nM至100nM，例如5nM至75nM、或约5nM(例如6.7nM)或约50nM(例如67nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当抗体以比将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％的浓度高约5倍的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约50nM(例如67nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％，优选地不超过10％，不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以约10nM(例如13.3nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约5nM(例如6.7nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以约1nM(例如1.33nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:18的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约5nM(例如6.7nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％抑制，当所述抗体以约1nM(例如1.33nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少10％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25(OTV12肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％的抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的是多达10％、多达15％、多达20％、多达25％、多达30％、多达35％或多达40％的抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以10pM至100nM，例如100pM至20nM、或约10nM(例如13.3nM)的浓度使用时确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制不超过5％、不超过4％、不超过11％、不超过2％或不超过1％，优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以100pM至500nM，例如500pM至100nM、或约1nM(例如0.67nM)或约50nM(例如67nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当抗体以比将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％的浓度高约5倍的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体使用以约50nM(例如67nM)的浓度时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％、不超过4％、不超过3％、优选地不超过2％或不超过1％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体使用以约10nM(例如13.3nM)的浓度时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％或至少50％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:25的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，当所述抗体以约50nM(例如67nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过5％抑制，并且当所述抗体以约10nM(例如13.3nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少20％抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是多达30％、多达35％、多达40％、多达45％、多达50％、多达55％、多达60％、多达65％、多达70％、多达75％、多达80％或多达90％的抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体的辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于OT-Ab1的抗体243nM、或例如对于基于OT-Ab2的抗体166nM、或例如对于基于OT-Ab3的抗体326nM)的浓度使用时所确定。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-15％、优选地0％-10％、0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于OT-Ab1的抗体243nM、或例如对于基于OT-Ab2的抗体166nM、或例如对于基于OT-Ab3的抗体326nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当抗体以将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了至少25％，优选地至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于OT-Ab1的抗体243nM、或例如对于基于OT-Ab2的抗体166nM、或例如对于基于OT-Ab3的抗体326nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)的抑制，并且当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于OT-Ab1的抗体243nM、或例如对于基于OT-Ab2的抗体166nM、或例如对于基于OT-Ab3的抗体326nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的至少25％，优选地至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的16F1-1、15D8-1、17E11-1或17E9-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是多达10％、多达15％、多达20％、多达25％、多达30％、多达35％、多达40％、多达45％、多达50％、多达55％、多达60％、多达65％、多达70％、或多达75％的抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的16F1-1、15D8-1、17E11-1或17E9-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)以50nM至1μM或100nM至1μM，例如50nM至500nM或100nM至500nM(例如对于基于16F1-1的抗体253nM、或例如对于基于15D8-1的抗体130nM、或例如对于基于17E11-1的抗体110nM、或例如对于基于17E9-1的抗体83nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于基于本发明的15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于基于本发明的15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-15％、优选地0％-10％、0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如200nM)的浓度使用时所确定的。
在一些实施方案中，对于基于本发明的15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当抗体以将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了至少25％，优选地至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如200nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM或100nM至200nM(例如对于基于15D8-1的抗体130nM、或例如对于基于17E11-1的抗体110nM)的浓度使用，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活至少25％，优选地至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％，或至少75％抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是不超过15％，优选地不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％，优选地没有热诱导的TRPV1激活的可测量的(或没有显著的)抑制。
因此，在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-15％、优选地0％-10％、0％-5％、0％-4％、0％-3％、0％-2％、0％-1％或优选地0％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如300nM)的浓度时使用所确定的。
在一些实施方案中，对于基于本发明的46B7-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是不超过25％或不超过20％。
因此，在一些实施方案中，对于基于本发明的46B7-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)的抗体，热诱导的TRPV1激活的抑制是0％-25％、0％-20％或0％-15％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的46B7-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，热诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如367nM)的浓度时使用所确定的。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述抑制(例如％抑制)是如在膜片钳法(例如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，热诱导的TRPV1激活的上述抑制(例如％抑制)是如本文别处所述所确定的。
在一些实施方案中，基于本发明的41B5-1、15D8-1、46B7-1、16F1-1 17E11-1或17E9-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)，关于辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制≤1μM、优选地≤750nM、或≤500nM可以具有IC50。在一些此类实施方案中，IC50值可以在10nM至1μM，例如50nM至1μM、或100nM至1μM、或200nM至1μM、或10nM至750nM、或50nM至750nM或100nM至750nM、或200nM至750nM、或10nM至500nM、或50nM至500nM或100nM至500nM、或200nM至500nM的范围内。在一些此类实施方案中，IC50值可以多达1μM，例如多达750nM、或多达500nM。IC50值可以基于例如如本文所述的任何合适的测定或测试(例如FLIPR方法)的结果建立(或计算)。特别优选的FLIPR方法在本文实例部分中描述。
在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1、15D8-1、46B7-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当抗体以将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了约50％的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1、15D8-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当抗体以将辣椒素诱导的TRPV1激活抑制了约50％的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的41B5-1、15D8-1、46B7-1或17E11-1抗体(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于15D8-1或17E11-1的抗体200nM、或例如对于基于41B5-1的抗体300nM、或例如对于基于46B7-1的抗体367nM)的浓度使用，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM或100nM至200nM(例如对于基于41B5-1的抗体170nM、或例如对于基于15D8-1的抗体70nM、或例如对于基于46B7-1的抗体200nM、或例如对于基于17E11-1的抗体230nM)的浓度使用时，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的约50％抑制。
在一些实施方案中，对于基于的抗体41B5-1、15D8-1、17E11-1本发明的抗体，当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于15D8-1或17E11-1的抗体200nM、或例如对于基于41B5-1的抗体300nM)的浓度使用时，观察到热诱导的TRPV1激活的不超过15％、不超过10％、不超过5％、不超过4％、不超过3％、不超过2％或不超过1％、优选地0％、优选地无可测量的(或没有显著的)抑制，并且当所述抗体以100nM至1μM，例如100nM至500nM或100nM至200nM(例如对于基于41B5-1的抗体170nM、或例如对于基于15D8-1的抗体70nM、或例如对于基于17E11-1的抗体230nM)的浓度使用，观察到辣椒素诱导的TRPV1激活的约50％抑制。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20(OTV7肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的是多达5％、多达10％、多达15％、多达20％、多达25％或多达30％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:20的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以1nM至100nM(例如40nM)的浓度使用时确定的。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22(OTV9肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少5％、至少10％、至少15％、至少20％或至少25％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的是多达5％、多达10％、多达15％、多达20％、多达25％或多达30％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:22的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以1nM至100nM(例如8nM)的浓度使用时确定的。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26(OTV13肽)的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制是至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％或至少30％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的是多达5％、多达10％、多达15％、多达20％、多达25％、多达30％或多达35％的抑制。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，对于与SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:26的分离的肽(或与其基本上同源的分离的肽)结合的抗体或与对应于(或大体上对应于)这种分离的肽的TRPV1的表位结合的抗体，辣椒素诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如多克隆抗体，如兔多克隆抗体)以1nM至100nM(例如40nM)的浓度使用时确定的。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活的这些％抑制(例如％抑制)是如通过钙成像方法(例如如本文别处所述)所确定的。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活是当辣椒素以10nM至10μM，例如100nM至1μM(例如100nM或1μM的浓度)的浓度存在(或使用或与TRPV1接触)时，诱导的TRPV1激活。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活是当辣椒素以100nM存在时诱导的TRPV1激活。在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活是当辣椒素以300nM存在时诱导的TRPV1激活。
辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制可以通过任何合适的方法进行评估，并且技术人员将熟悉合适的方法。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制可以使用电生理学方法(如膜片钳技术)来评估(或被评估)。膜片钳法在本领域中是众所周知的并且也在本文中描述。根据本发明，与对照抗体(例如不与TRPV1结合(或不特异性结合)的对照抗体)相比，本发明的抗体减少(或抑制或降低)辣椒素诱导的电流通常表明所述抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。
在一些实施方案中，膜片钳法包含钳位(例如用移液管)表达的TRPV1细胞(例如在浴中)并且记录电流(或电流信号)的步骤。通常，在用辣椒素刺激(或孵育)的细胞中和在用辣椒素和本发明的抗体刺激的细胞中以及还优选在用辣椒素和对照抗体(例如不与TRPV1结合(或不特异性结合)的对照抗体)刺激(或孵育)的细胞中测量(例如平行测试)电流(或电流信号)。例如与对照抗体相比，辣椒素诱导的电流的减少(或抑制或降低)通常表明本发明的抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。
在一些实施方案中，在膜片钳法中，使用用于膜片钳记录的微流体装置与膜片钳放大器一起进行整个细胞记录。在一些实施方案中，细胞是表达TRPV1的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在一些实施方案中，浴和移液管溶液分别含有缓冲液F和G(如本文别处所定义)。在一些实施方案中，细胞被钳位(例如在-60mV)并且电流信号以采样频率(例如10kHz)和低通滤波(例如2kHz)记录。在一些实施方案中，使用数字/模拟采样和采集软件来采集膜片钳记录在优选的实施方案中，电流幅度通过将细胞暴露于辣椒素(例如100nM辣椒素)，有和没有本发明的抗体或对照抗体来测量。在优选的实施方案中，将细胞暴露于缓冲液F(或缓冲液A)中的100nM辣椒素约20s，随后是缓冲液F(或缓冲液A)约60s，缓冲液F(或缓冲液A)中的抗体约60s，然后缓冲液F(或缓冲液A)中100nM辣椒素和抗体一起约20s。在优选的实施方案中，从分析中排除其中封接电阻在治疗期间发生很大变化的测量。在优选的实施方案中，用抗体+辣椒素刺激期间记录的峰幅度除以用辣椒素刺激期间记录的峰幅度。获得的值可以乘以100以获得抗体+辣椒素刺激期间的细胞响应，作为对照响应(辣椒素，即仅辣椒素)的百分比。因此，在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1刺激(激活)的％抑制可以计算为(1-(用抗体+辣椒素刺激期间记录的峰幅度除以仅用辣椒素刺激期间记录的峰幅度)x100)。优选地在来自至少两个不同细胞培养皿的细胞上进行测量。特别优选的膜片钳法在本文实例部分中描述。
在一些实施方案中，膜片钳法包含使用辣椒素(例如100nM辣椒素或300nM辣椒素)刺激(或激活)表达TRPV1的细胞四次。在一些此类实施方案中，在第三次激活(或刺激)前将表达hTRPV1的细胞用本发明的抗体预处理，并且在第三次激活(或刺激)期间将抗体与辣椒素一起孵育。在一些此类实施方案中，第一次、第二次和第四次激活(刺激)仅用辣椒素。可以将抗体存在时的第三个电流峰的幅度与电流峰二和四的幅度的平均值进行比较。在一些实施方案中，细胞用单独的辣椒素处理两次以获得峰1和2，然后用抗体处理，然后用抗体与辣椒素一起处理以获得峰3，随后单独用辣椒素处理以获得峰4。在一些实施方案中，％抑制可以计算为(1-((峰3)/((峰2+峰4)/2)))*100。在一些其他实施方案中，细胞首先用单独的辣椒素处理两次以获得峰1和2，然后用抗体或媒介物处理，然后用抗体或媒介物与辣椒素一起处理以获得峰3，随后单独用辣椒素处理以获得峰4。在一些此类实施方案中，％抑制可以计算为(1-((峰3Ab/峰2Ab)/(峰3veh/峰2veh)))*100。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制可以使用钙成像方法来评估(或被评估)。辣椒素引起钙摄取。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制可以通过以下来评估(或被评估)：(i)用钙指示剂(例如如本文别处所述)加载表达TRPV1的细胞，(ii)使所述细胞与本发明的抗体(或对照抗体或仅媒介物(即无抗体)对照)接触(或孵育)，和(iii)使所述细胞(即细胞已经用本发明的抗体或(ii)中的对照孵育)与辣椒素和钙(Ca2+)接触(或将所述细胞暴露于其)，和(iv)通过测量(或确定)来自钙指示剂(例如与对照抗体或仅媒介物对照相比)的信号(例如荧光信号)，评估(或确定或测量)本发明的抗体减少(或降低或抑制)辣椒素诱导的钙流入(或摄取)细胞的能力。此类实施方案的优选特征将从本文别处的讨论中显而易见，并且这些可经必要修正后应用于本段中讨论的实施方案。
在一些用于评估辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制的钙成像方法中，使用钙指示剂(例如Fluo-3 AM)。在一些此类方法中，将表达hTRPV1的细胞(例如CHO细胞)与钙指示剂一起孵育，以在例如37℃用钙指示剂(例如Fluo-3AM，例如其4.4μM)“加载”细胞例如30min，并且优选地然后洗涤(洗涤后钙指示剂保留在细胞内)，然后与本发明的抗体或与对照抗体(例如溶解在PBS中)或不与额外的药剂一起在例如室温孵育例如1h。对照抗体通常是不与TRPV1结合(或不特异性结合)的抗体。通常，细胞然后与辣椒素(例如1μM)和Ca2+(例如150μM)接触(例如将辣椒素和钙添加到覆盖细胞的抗体溶液中)，并通过测量荧光强度(钙指示剂的)，例如用读板器监测(或测量)细胞内的钙含量。通常，在与辣椒素和钙孵育之后(或期间)观察到的荧光强度(其中细胞预先与本发明的抗体一起孵育)相对于在与辣椒素和钙(Ca2+)孵育之后(或期间)观察到的荧光强度(其中细胞未预先与本发明的抗体或任何额外的药剂一起孵育)进行归一化。与当与辣椒素和钙(Ca2+)孵育之前没有与本发明的抗体孵育时相比(例如，与用辣椒素和钙(Ca2+)孵育之前与对照抗体孵育时相比)，如果在与辣椒素和钙(Ca2+)孵育之前与本发明的抗体孵育荧光强度减少(或抑制或降低)，那么这通常表明本发明的抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。特别优选的钙成像方法在本文实例部分中描述。
在一些实施方案中，辣椒素诱导的TRPV1激活和辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制可以使用荧光成像读板器(FLIPR)方法来评估(或被评估)。
在某些优选的FLIPR方法(其反映本文实例3中使用的FLIPR方法)中，在黑色透明底微孔板(例如96孔微孔板)中培养表达TRPV1的细胞(例如表达TRPV1的CHO细胞)。然后通过在缓冲液，例如HEPES缓冲液(140nM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4)中，与钙指示剂(例如4μM Fluo-3 AM)在例如室温下持续例如30分钟孵育，将细胞用钙指示剂(例如Fluo-3 AM，例如其4μM)加载。然后用缓冲液(例如HEPES)洗涤细胞以去除细胞外钙指示剂(例如Fluo-3 AM)(洗涤后钙指示剂保留在细胞内)。随后，将稀释到缓冲液(例如含钙缓冲液，如HEPES)中的本发明的抗体添加到孔中，例如将100μl含抗体的缓冲液添加到每个孔中的细胞中(通常将稀释到缓冲液(例如含钙缓冲液，例如HEPES)中的连续稀释的抗体添加到孔中，即不同孔中不同浓度的抗体)。在抗体的存在下孵育细胞(例如持续4分钟，在例如室温)。通常由微读板器进行荧光测量，例如其中激发波长为483nm(带宽14nm)并且发射波长为530(带宽30nm)。首先测量基线荧光强度，然后(即随后)将在含钙缓冲液(例如在100μl缓冲液中)如HEPES中的固定量的辣椒素添加到每个孔中(给出先前已确定的辣椒素浓度，所述浓度代表所研究细胞批次的辣椒素EC50值，通常这种浓度在亚微摩尔范围内，例如，这种浓度可能在较低的nM范围内，例如10nM)，并且第二次荧光强度测量是在设定的时间后进行的(通常在几分钟内，例如1到5或1到10或1到20分钟)。荧光强度(钙指示剂的)提供了细胞内钙量的报告(或读数)(以及辣椒素诱导的TRPV1激活)。这种FLIPR测定依赖于添加辣椒素时缓冲液中存在钙(Ca2+)(即，当细胞暴露于辣椒素时依赖于缓冲液中存在钙)，并且可以使用任何合适的含钙缓冲液(技术人员将熟悉合适的缓冲液)，例如上述HEPES缓冲液提供足够的钙)。本发明的抗体可以在稀释到缓冲液(例如含钙缓冲液，如HEPES)之前(即，在被稀释之前)在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中，用于添加到细胞(孔)中。EC50是物质的浓度，它给出了生物过程的半最大响应，在这种情况下，TRPV1介导的Ca2+进入(或TRPV1介导的Ca2+摄取)细胞。数据可以呈现(或获得或确定)为荧光率，其计算为添加辣椒素后设定(或特定)时间的荧光减去添加辣椒素前测量的荧光(基线)。如果随着抗体(即被测试的给定抗体)浓度的增加(例如在抗体稀释系列中更高(或增加)的浓度)观察到(或测量或确定)荧光率的降低，则通常表明本发明的抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。可以计算测试的抗体的IC50值(并且本领域技术人员可以容易地进行这个)。IC50值是所研究的生物过程中物质的半数最大抑制浓度，在这种情况下是辣椒素诱导的细胞TRPV1介导的Ca2+流入(或摄取或进入)。特别优选的FLIPR方法在本文实例部分中描述。
如上所述，某些方法包含使用钙指示剂(例如Fluo3-AM)。本领域技术人员熟悉此类指示剂。钙指示剂可方便地用于可视化在暴露于特定刺激(例如辣椒素或热)期间(或之后)，钙离子(Ca2+)的细胞内浓度(或量)是否增加(或增加的程度)。此类钙指示剂可以加载到细胞中(在暴露于刺激之前)，并且它们的荧光在与Ca2+离子结合后增加(即在Ca2+离子流入细胞后，例如从含有Ca2+离子的培养基或缓冲液)。
热诱导的TRPV1激活通常是在≥42℃诱导的(或如确定的)TRPV1激活。因此，在一些实施方案中，热诱导的TRPV1激活是在42℃-45℃、42℃-50℃、42℃-60℃、42℃-70℃、42℃-80℃、42℃-90℃或42℃-100℃诱导的TRPV1激活。在优选的实施方案中，热诱导的TRPV1激活是在42℃-45℃诱导的(或如确定的)TRPV1激活。在优选的实施方案中，热诱导的TRPV1激活是在42℃诱导的(或如确定的)TRPV1激活。在另一个优选的实施方案中，热诱导的TRPV1激活是在45℃诱导的(或如确定的)TRPV1激活。
热诱导的TRPV1激活(和热诱导的TRPV1激活的抑制)可以通过任何合适的方法进行评估，并且技术人员将熟悉合适的方法。热(例如≥42℃，优选地42℃)诱导TRPV1离子通道的打开并导致钙离子(Ca2+)流入表达的TRPV1细胞。因此，可以通过确定细胞内钙离子(Ca2+)的浓度(或量)是否为在加热期间(或之后)增加(或增加的程度)来评估热诱导的TRPV1激活(和热诱导的TRPV1激活的抑制)。钙指示剂(例如Fluo-3或Fluo3-AM)可方便地用于可视化在加热期间(或之后)钙离子(Ca2+)的细胞内浓度(或量)是否增加(或增加的程度)。此类钙指示剂可以加载到细胞中(在暴露于热之前)，并且它们的荧光在与Ca2+离子结合后增加(即在Ca2+离子流入细胞后，例如从含有Ca2+离子的培养基)。这可以通过任何方便的方式来观察，例如通过共聚焦显微镜。TRPV1结合抗体是否能够抑制(或抑制的程度)热诱导的TRPV1激活可以通过将表达TRPV1的细胞与所述抗体接触(例如通过使用微流体装置(例如本文实例部分中描述的Biopen)将抗体递送至细胞)来评估，并且确定与不存在抗体时热诱导的TRPV1激活相比(例如，与在不与TRPV1结合(或不特异性结合)的对照抗体)存在时观察到的热诱导的TRPV1激活相比)，热诱导的TRPV1激活是否被抑制(或减少)(或抑制(或减少)的程度)。可以使用任何合适的方式来提供热(42℃)，例如激光加热系统，例如在本文的实例部分中描述。在抗TRPV1抗体的存在下，热诱导的TRPV1激活的减少(例如显著减少)表示所述抗体抑制热诱导的TRPV1激活。在抗TRPV1抗体的存在下，热诱导的TRPV1激活没有减少(或没有显著减少)表明所述抗体不(或不显著)抑制热诱导的TRPV1激活。评估热诱导的TRPV1激活(和热诱导的TRPV1激活的抑制)的特别优选的方法在本文实例部分中描述。
在一些实施方案中，热诱导的TRPV1激活(及其抑制)可以使用其中表达TRPV1的细胞接收两个热脉冲的方法来评估(或被评估)。在一些此类实施方案中，细胞首先用热脉冲，随后是冷却，随后是组合施用(或接触)抗体和热脉冲，随后是冷却。可以通过确定抗体对热诱导的钙离子流入细胞的影响来评估抗体对热诱导的TRPV1激活的影响。可以使用钙指示剂(例如Fluo-3)测量钙流入细胞(峰幅度)。可以针对抗体和媒介物计算第二(第二热脉冲或峰2)与第一(第一热脉冲或峰1)峰幅度的比率。在一些实施方案中，可以通过对抗体的比率和媒介物的比率进行比较，计算抑制百分比。因此，在一些实施方案中，％抑制可以是(1-((峰2Ab/峰1Ab)/(峰2veh/峰1veh)))*100。
在一些实施方案中，本发明的抗体可以抑制(或能够抑制)NADA诱导的TRPV1激活。NADA(N-花生四烯基多巴胺)是潜在的天然TRPV1激动剂。
在一些实施方案中，本发明的抗体对NADA诱导的TRPV1激活的抑制是任何可测量或显著的抑制(例如，与没有抗体的对照相比或与具有不与TRPV1结合的抗体的对照相比)。在一些实施方案中，NADA诱导的TRPV1激活的抑制的量(或水平)(例如％抑制)是如本文别处关于抑制辣椒素诱导的TRPV1激活所述。
在一些实施方案中，NADA诱导的TRPV1激活是当NADA以10nM至10μM，例如100nM至1μM(例如100nM或1μM的浓度)的浓度存在(或使用或与TRPV1接触)时，诱导的TRPV1激活。在一些实施方案中，NADA诱导的TRPV1激活时当NADA以1μM存在时诱导的TRPV1激活。
在一些实施方案中，NADA诱导的TRPV1激活(或其抑制)是如例如本文别处所述的膜片钳法中确定的，其中使用NADA代替辣椒素。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(优选地OT-Ab1)(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，NADA诱导的TRPV1激活的抑制是至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％或至少80％。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(优选地OT-Ab1)(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，NADA诱导的TRPV1激活的抑制是多达30％、多达35％、多达40％、多达45％、多达50％、多达55％、多达60％、多达65％、多达70％、多达75％、多达80％或多达90％的抑制。
在一些实施方案中，对于基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体(优选地OT-Ab1)(例如具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列、或与其基本上同源的序列的那些)的抗体，NADA诱导的TRPV1激活的上述％抑制是如当所述抗体(例如单克隆抗体，如小鼠单克隆抗体)以100nM至1μM，例如100nM至500nM(例如对于基于OT-Ab1的抗体243nM)的浓度使用时所确定的。
可替代地来看，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体能够以大于抑制热诱导的TRPV1激活的程度来抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
可替代地来看，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体选择性抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
可替代地来看，在一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中与热诱导的TRPV1激活相比，所述抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
可替代地来看，在一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体比热诱导的TRPV1激活优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
可替代地来看，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不显著抑制热诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
在另一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体不显著抑制热诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
在另一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体(例如单克隆抗体)，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后可以应用于本发明的这一方面。
在另一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体与本发明的分离的表位或偶联物结合。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
在另一方面，本发明提供了抗体，例如分离的抗体，其结合(或特异性识别或特异性结合)TRPV1，其中所述抗体与位于由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630、氨基酸残基599-606、氨基酸残基599-614、氨基酸残基599-622、氨基酸残基607-630、氨基酸残基615-630、氨基酸残基623-630、氨基酸残基631-643、氨基酸残基644-656、或氨基酸残基610-620定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合，或在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-601和残基653-655定义的区域中的表位上与TRPV1结合。在另一方面，本发明提供了抗体，所述抗体与位于由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-656定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合。对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这些方面。
如在整个申请中所使用的，术语“一个/一种(a/an)”的使用意思是它们表示所引用的组分或步骤的“至少一个/至少一种”、“至少第一个/至少第一种”、“一个或多个/一种多种”或“多个/多种”，除非在其后明确说明上限的情况。因此，如本文所用，术语“抗体”意指“至少第一抗体”。根据本披露，本领域普通技术人员将知道组合的可操作限制和参数以及任何单一药剂的量。
另外，在本文使用术语“包含(comprise/comprises)”、“具有(has/having)”或其他等效术语的情况下，在一些更特别的实施方案中，这些术语包括术语“由……组成”或“基本上由……组成”或其他等效术语。
包含编码如本文定义的本发明的抗体的核苷酸序列或其部分或片段的核酸分子、或与其基本上同源的核酸分子，形成本发明的又另外的方面。
优选的核酸分子是编码本发明的抗体的VH区域的那些(例如，分别编码SEQ IDNO:39或57或75，例如SEQ ID NO:15或55或73的那些)。其他优选的核酸分子是编码本发明的抗体的VL区域的那些(例如，分别编码SEQ ID NO:40或58或76，例如SEQ ID NO:29或56或74的那些)。
因此，优选的核酸分子包含具有SEQ ID NO:39或57或75的氨基酸序列(其优选地SEQ ID NO:15或55或73编码)的重链可变区(VH)的序列和/或包含具有SEQ ID NO:40或58或76的氨基酸序列(其优选地由SEQ ID NO:29或56或74编码)的轻链可变区(VL)的序列。
还优选的是编码以下组合的核酸：SEQ ID NO:39和40；或SEQ ID NO:57和58；或SEQ ID NO 75和76。还优选的是包含以下组合的核酸分子：SEQ ID NO:15和29；或SEQ IDNO:55和56；或SEQ ID NO:73和74。
其他优选的核酸分子是编码本发明的抗体的VH区域的那些(例如，分别编码SEQID NO:101或121或141或161或181或201或221或241或261或281或301或321或341或361或381或401或421，如SEQ ID NO:99或119或139或159或179或199或219或239或259或279或299或319或339或359或379或399或419的那些)。其他优选的核酸分子是编码本发明的抗体的VL区域的那些(例如，分别编码SEQ ID NO:102或122或142或162或182或202或222或242或262或282或302或322或342或362或382或402或422，如SEQ ID NO:100或120或140或160或180或200或220或240或260或280或300或320或340或360或380或400或420的那些)。
因此，某些优选的核酸分子包含编码具有SEQ ID NO:101或121或141或161或181或201或221或241或261或281或301或321或341或361或381或401或421的氨基酸序列的重链可变区(VH)的序列(其优选地由SEQ ID NO:99或119或139或159或179或199或219或239或259或279或299或319或339或359或379或399或419编码)，和/或包含编码具有SEQ IDNO:102或122或142或162或182或202或222或242或262或282或302或322或342或362或382或402或422的氨基酸序列的轻链可变区(VL)的序列(其优选地由SEQ ID NO:100或120或140或160或180或200或220或240或260或280或300或320或340或360或380或400或420编码)。
还优选的是编码以下组合的核酸：SEQ ID NO:101和102；或SEQ ID NO:121和122；或SEQ ID NO 141和142；或SEQ ID NO 161和162；或SEQ ID NO 181和182；或SEQ ID NO201和202；或SEQ ID NO 221和222；或SEQ ID NO 241和242；或SEQ ID NO 261和262；或SEQID NO 281和282；或SEQ ID NO 301和302；或SEQ ID NO321和322；或SEQ ID NO 341和342；或SEQ ID NO 361和362；或SEQ ID NO 381和382；或SEQ ID NO 401和402；或SEQ ID NO421和422；
还优选的是包含以下组合的核酸分子：SEQ ID NO:99和100；或SEQ ID NO:119和120；或SEQ ID NO 139和140；或SEQ ID NO 159和160；或SEQ ID NO 179和180；或SEQ IDNO 199和200；或SEQ ID NO 219和220；或SEQ ID NO 239和240；或SEQ ID NO 259和260；或SEQ ID NO 279和280；或SEQ ID NO 299和300；或SEQ ID NO319和320；或SEQ ID NO 339和340；或SEQ ID NO 359和360；或SEQ ID NO 379和380；或SEQ ID NO 399和400；或SEQ IDNO 419和420。
其他优选的核酸分子包含编码本发明的抗体的IgG形式的序列。
在另一方面，本发明提供一组(或多个)核酸分子，每个核酸分子包含核苷酸序列，其中所述一组核酸分子一起(或共同)编码根据本发明的抗体。这样的一组核酸分子的特征可以在于当所述组被表达(即一起表达)(例如在宿主细胞中)时，本发明的整个抗体被表达并且优选地被组装。
如本文所用，与氨基酸或核酸序列有关的术语“基本上同源的”包括与披露的氨基酸或核酸序列具有至少65％、70％或75％，优选地至少80％，甚至更优选地至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。因此，本发明的基本上同源的序列包括对本发明序列的单个或多个碱基或氨基酸改变(添加、取代、插入或缺失)。在氨基酸水平，优选的基本上同源的序列在构成本发明的序列的一个或多个框架区和/或一个或多个CDR中，含有多达5，例如仅1、2、3、4或5个，优选地1、2或3个，更优选地1或2个经改变的氨基酸。所述改变可以是保守或非保守氨基酸的改变。优选地，所述改变是保守氨基酸取代。
在某些实施方案中，如果给定的起始序列相对较短(例如长度为四个氨基酸)，那么与可能任选地在与较长起始序列基本上同源的序列中进行的氨基酸取代的数目相比，在与其基本上同源的序列中可能存在更少的氨基酸取代。例如，在某些实施方案中，与根据本发明的起始VH CDR3序列基本上同源的序列(例如在一些实施方案中的起始VH CDR3序列)与起始序列相比可以是长度为四个氨基酸残基，优选具有1或2个(更优选地1个)经改变的氨基酸。因此，在一些实施方案中，可以根据给定起始CDR序列的长度调整基本上同源的序列中(例如在基本上同源的CDR序列中)经改变的氨基酸数量。例如，取决于给定起始CDR序列的长度，可以存在不同数量的经改变的氨基酸，如以在CDR中实现特定％序列同一性，例如至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
可以使用本领域中的常规方法(例如丙氨酸扫描诱变和/或分析抗原-抗体复合物的晶体结构)以确定CDR的哪些氨基酸残基对抗原结合没有贡献或没有显著贡献，因此在涉及基本上同源的序列的本发明的实施方案中，其是改变或取代的良好候选者。
术语“基本上同源的”还包括本发明的氨基酸和核苷酸序列的修饰或化学等效物，其与本发明的蛋白质或核酸分子以基本上相同的方式发挥基本上相同的功能。例如，任何基本上同源的抗体都应保留与上述TRPV1结合的能力。优选地，任何基本上同源的抗体应保留起始抗体的一种或多种(或全部)功能能力。
本发明的抗体的基本同源的序列还包括但不限于例如不影响抗体的VH、VL或CDR结构域的改变，例如其中添加了标签序列或其他不有助于结合抗原的组分的抗体，或将一种类型或形式的抗体分子或片段转化为另一种类型或形式的抗体分子或片段(例如从Fab转化为scFv或完整抗体，反之亦然)，或将抗体分子转化为特定的抗体分子的类别或亚类(例如将抗体分子转化为IgG或其亚类，例如IgG2或IgG4)。
优选地，任何基本上同源的抗体应保留特异性结合所讨论的抗体识别的相同(或基本上相同)TRPV1表位的能力，例如，本发明的CDR结构域识别的相同表位或如本文所述的本发明的VH和VL结构域。因此，优选地，任何基本上同源的抗体应保留与一种或多种本发明的各种抗体(例如一种或多种所述多克隆抗体或一种或多种所述单克隆抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1)结合TRPV1的能力。与相同表位/抗原的结合可以通过本领域众所周知且在其中进行描述的方法容易地测试，例如使用结合测定，例如竞争测定。其他功能特性的保留也可以通过本领域众所周知且在其中进行描述的方法容易地测试。
因此，本领域技术人员将理解结合测定可用于测试“基本上同源的”抗体是否具有与本发明的抗体和抗体片段相同的结合特异性，例如如本文别处所述的结合测定，如竞争测定或ELISA测定。BIAcore测定也可以很容易地用于确定“基本上同源的”抗体是否可以与TRPV1结合。本领域技术人员将知道其他合适的方法和变体。
如下文所述，竞争结合测定可用于测试“基本上同源的”抗体是否保留特异性结合由本发明的抗体(或相同的表位)(例如，抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1、或R4P1-C1、或基于这些抗体的抗体)识别的基本上相同的TRPV1表位的能力，或具有与本发明的各种抗体(例如，抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1、或R4P1-C1、或基于这些抗体的抗体)中的一种或多种竞争的能力。下面描述的方法只是合适的竞争测定的一个例子。本领域技术人员将知道其他合适的方法和变体。
示例性竞争测定涉及在不同浓度的测试抗体(例如，基本上同源的抗体)存在下，评估不同有效浓度的本发明的抗体与TRPV1的结合。然后可以评估由测试抗体诱导的结合抑制的量。显示在增加浓度下与本发明抗体竞争增加的测试抗体(即增加浓度的测试抗体导致与TRPV1结合的本发明抗体的量相应减少)是与基本相同表位结合的证据。优选地，测试抗体显著降低与TRPV1结合的本发明抗体的量。优选地，测试抗体将与TRPV1结合的本发明抗体的量降低了至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。ELISA和流式细胞术测定可用于评估这种竞争测定中的结合抑制，但本领域技术人员将熟知其他合适的技术。
在一些实施方案中，结合由本发明的抗体(例如，抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1、或基于这些抗体的抗体)识别的基本上相同(或相同)的TRPV1表位的能力，或具有与本发明的各种抗体(例如，抗体OT-Ab3、OT-Ab2或OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1、或基于这些抗体的抗体)中的一种或多种竞争的能力的“基本上同源的”抗体保留特异性是优选的。
如本文所用，术语“竞争抗体”是指与“参考抗体”结合大约、基本上(substantially/essentially)相同、或甚至相同的表位的抗体。“竞争抗体”包括具有重叠表位特异性的抗体。因此，竞争抗体能够有效地与参考抗体竞争与TRPV1的结合。优选地，竞争抗体可以与参考抗体结合相同的表位。可替代地来看，竞争抗体优选地具有与参考抗体相同的表位特异性。
如本文所用，“参考抗体”包括与本发明的分离的肽或与根据本发明的TRPV1的表位结合的抗体(例如，本文所述的兔多克隆抗体)。“参考抗体”还包括可以与TRPV1结合的抗体，根据本发明，其优选地具有如本文定义的VH和VL结构域，更优选地SEQ ID NO:39的VH结构域和SEQ ID NO:40的VL结构域、或SEQ ID NO:57的VH结构域和SEQ ID NO:58的VL结构域、SEQ ID NO:75的VH结构域和SEQ ID NO:76的VL结构域、SEQ ID NO:101的VH结构域和SEQ ID NO:102的VL结构域、SEQ ID NO:121的VH结构域和SEQ ID NO:122的VL结构域、SEQID NO:141的VH结构域和SEQ ID NO:142的VL结构域、SEQ ID NO:161的VH结构域和SEQ IDNO:162的VL结构域、SEQ ID NO:181的VH结构域和SEQ ID NO:182的VL结构域、SEQ ID NO:201的VH结构域和SEQ ID NO:202的VL结构域、SEQ ID NO:221的VH结构域和SEQ ID NO:222的VL结构域、SEQ ID NO:241的VH结构域和SEQ ID NO:242的VL结构域、SEQ ID NO:261的VH结构域和SEQ ID NO:262的VL结构域、SEQ ID NO:281的VH结构域和SEQ ID NO:282的VL结构域、SEQ ID NO:301的VH结构域和SEQ ID NO:302的VL结构域、SEQ ID NO:321的VH结构域和SEQ ID NO:322的VL结构域、SEQ ID NO:341的VH结构域和SEQ ID NO:342的VL结构域、SEQ ID NO:361的VH结构域和SEQ ID NO:362的VL结构域、SEQ ID NO:381的VH结构域和SEQID NO:382的VL结构域、SEQ ID NO:401的VH结构域和SEQ ID NO:402的VL结构域、或SEQ IDNO:421的VH结构域和SEQ ID NO:422的VL结构域。某些优选的参考抗体选自抗体OT-Ab3、OT-Ab2、OT-Ab1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1、或基于这些抗体的抗体。
由于竞争抗体的鉴定是与参考抗体进行比较而确定的，因此应当理解，为了鉴定竞争抗体，实际上不需要以任何方式确定一种或两种抗体结合的表位。然而，如果需要，可以使用标准技术进行表位作图。
在以下对根据本发明的组合物、免疫偶联物、药物、组合、混杂物(cocktail)、试剂盒、第一和第二医学用途以及所有方法的描述中，除非另有明确说明或从科学术语中明确，否则术语“抗体”和“免疫偶联物”或其抗原结合区或片段是指一系列抗TRPV1抗体以及本文实例部分中描述的特定抗体。
如本文所用，术语“抗体”和“免疫球蛋白”泛指包含抗原结合结构域的任何免疫结合剂，包括多克隆抗体和单克隆抗体。
在一些实施方案中，抗体是多克隆抗体，例如，在用本发明的分离的肽或偶联物(优选偶联物)免疫的动物(例如兔，如无特定病原体(SPF)兔)中生成的(或在其中生产的或从其分离的)多克隆抗体。优选的分离的肽和偶联物在本文别处描述。
在一些实施方案中，优选单克隆抗体(例如，小鼠单克隆或人单克隆抗体或人源化单克隆抗体或兔单克隆抗体)。优选的单克隆抗体包括基于本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和OT-Ab1抗体的那些(例如，具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列，或与其基本上同源的序列的那些)。其他优选的单克隆抗体包括基于本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1抗体的那些(例如，具有其CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列，或与其基本上同源的序列的那些)。在一些实施方案中，优选基于本发明的OT-Ab1抗体的单克隆抗体。
取决于重链中恒定结构域的类型，完整抗体归属于五种主要类别之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM并且本发明的抗体可以属于这些类别中的任何一种。这些中的几种进一步分为亚类或同种型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
通常，在本发明中使用完整抗体而不是抗原结合区的情况下，优选IgG(例如IgG1、IgG2或IgG4)和/或IgM，因为它们是生理情况下最常见的抗体，并且因为它们最容易在实验室环境中制备。
哺乳动物抗体的“轻链”基于其恒定结构域的氨基酸序列及其可变结构域的框架区中的一些氨基酸，归属于两种明显不同的类型之一：kappa(κ)和lambda(λ)。
如本领域技术人员将理解的，术语“抗体”所涵盖的免疫结合试剂包括或延伸至所有抗体及其抗原结合片段，包括完整抗体、二聚抗体、三聚抗体和多聚抗体；双特异性抗体；嵌合抗体；重组抗体和工程化抗体，及其片段。
因此，术语“抗体”用于指具有抗原结合区的任何抗体样分子，并且所述术语包括包含抗原结合结构域的抗体片段，如Fab'、Fab、F(ab')2、单结构域抗体(DAB)、TandAb二聚体、Fv、scFv(单链Fv)、dsFv、ds-scFv、Fd、线性抗体、微抗体、双抗体、双特异性抗体片段、二抗体、三抗体(scFv-Fab融合体，分别为双特异性的或三特异性的)；sc-双抗体；κ(λ)体(scFv-CL融合体)；BiTE(双特异性T细胞衔接器，scFv-scFv串联体以吸引T细胞)；DVD-Ig(双重可变结构域抗体，双特异性形式)；SIP(小免疫蛋白，一种微抗体)；SMIP(“小模块免疫药物”scFv-Fc二聚体)；DART(ds-稳定化的双抗体“双重亲和力再靶向分子(Dual AffinityReTargeting)”)；包含一个或多个CDR的小抗体模拟物，等等。
用于制备和使用各种基于抗体的构建体和片段的技术是本领域众所周知的。特别地，在EP 404 097和WO 93/11161中进一步描述了双抗体；而本领域中进一步描述了线性抗体。
在一些实施方案中，本发明的抗体是非人抗体(例如，兔或大鼠或小鼠抗体)。在一些实施方案中，本发明的抗体是兔抗体。在一些实施方案中，本发明的抗体是小鼠抗体(例如，小鼠单克隆抗体)。
在一些实施方案中，本发明的抗体是人抗体，更优选完全人抗体。在这方面，人抗体通常具有至少两个潜在优势用于在人疗法中使用。首先，人免疫系统不会将抗体识别为外来抗体。其次，人循环中的半衰期与天然存在的人抗体相似，从而允许给予更小和更不频繁的剂量。
如本文所用，与抗体分子和结合蛋白相关的术语“人”首先是指具有可变区(例如，VH、VL、CDR或FR区)和任选的恒定抗体区的抗体和结合蛋白，这些抗体和结合蛋白分离自或衍生自人库(repertoire)或衍生自或对应于在人或人库中(例如，在人种系或体细胞中)发现的序列。
“人”抗体和结合蛋白进一步包括不是由人序列编码的氨基酸残基，例如，通过体外随机或定点突变引入的突变，例如通过体外克隆或PCR引入的突变。此类突变的特定实例是在抗体或结合蛋白的少量残基中，例如在抗体或结合蛋白的多达5、4、3、2或1个残基中，优选例如，在构成抗体或结合蛋白的一个或多个CDR的多达5、4、3、2或1个残基中涉及保守取代的突变或其他突变。此类“人”抗体的某些实例包括已经过标准修饰技术以减少潜在免疫原性位点的量的抗体和可变区。
因此，“人”抗体包括衍生自人的序列以及与在人中发现的序列相关的序列，但其可能并非天然存在于体内人抗体种系库中。另外，人抗体和结合蛋白包括包含从人序列中鉴定的人共有序列或与人序列基本上同源的序列的蛋白质。
另外，人抗体和结合蛋白不限于本身在人抗体分子组合中发现的VH、VL、CDR或FR区的组合。因此，人抗体和结合蛋白可以包括或对应于此类区域的组合，这些区域不一定天然存在于人中(例如，不是天然存在的抗体)。
在一些实施方案中，人抗体将是完全人抗体。如本文所用，“完全人”抗体是包含“人”可变区结构域和/或CDR且没有实质性非人抗体序列或没有任何非人抗体序列的抗体。例如，包含人可变区结构域和/或CDR且“没有实质性非人抗体序列”的抗体是如下抗体、结构域和/或CDR，其中仅多达5、4、3、2或1个氨基酸是不由人抗体序列编码的氨基酸。因此，“完全人”抗体区别于“人源化”抗体，后者基本上基于非人可变区结构域，例如小鼠可变区结构域，其中某些氨基酸已被改变以更好地对应于人抗体中通常存在的氨基酸。
本发明的“完全人”抗体可以是人可变区结构域和/或CDR且没有任何其他实质性抗体序列，例如是单链抗体。可替代地，本发明的“完全人”抗体可以是与一个或多个人抗体恒定区整合或与其可操作地附接的人可变区结构域和/或CDR。某些优选的完全人抗体是具有IgG恒定区的完全互补序列的IgG抗体。
在其他实施方案中，本发明的“人”抗体将是部分人嵌合抗体。如本文所用，“部分人嵌合”抗体是包含与非人物种(如大鼠或小鼠)的恒定区可操作地附接或移植到其上的“人”可变区结构域和/或CDR的抗体。此类部分人嵌合抗体可用于例如临床前研究中，其中恒定区将优选与临床前测试中使用的动物相同的物种。这些部分人嵌合抗体也可以用于例如离体诊断中，其中非人物种的恒定区可以为抗体检测提供额外的选择。
在一些实施方案中，本发明的抗体将是人源化抗体。基本上基于非人可变区结构域的“人源化”抗体是其中某些氨基酸已被改变以更好地对应于人抗体中通常存在的氨基酸的抗体。用于生成人源化抗体的方法是本领域众所周知的。例如，人源化抗体可以通过将适当的CDR(例如，鼠CDR)插入人抗体“支架”中来实现。在一些情况下，可以改变一个或多个CDR残基以更好地对应于人抗体中通常存在的氨基酸。
如本文所用，术语“重链互补决定区”(“重链CDR”)是指抗体分子的重链可变区(VH结构域)内的高变区。重链可变区从氨基末端到羧基末端具有三个CDR，称为重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3。重链可变区还具有四个框架区(从氨基末端到羧基末端为FR1、FR2、FR3和FR4)。这些框架区将CDR分开。
如本文所用，术语“重链可变区”(VH结构域)是指抗体分子的重链可变区。
如本文所用，术语“轻链互补决定区”(“轻链CDR”)是指抗体分子的轻链可变区(VL结构域)内的高变区。轻链可变区从氨基末端到羧基末端具有三个CDR，称为轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。轻链可变区还具有四个框架区(从氨基末端到羧基末端为FR1、FR2、FR3和FR4)。这些框架区将CDR分开。
如本文所用，术语“轻链可变区”(VL结构域)是指抗体分子的轻链可变区。
本发明的某些抗体的CDR序列在本文表A-C和E-U中列出。在一些其他实施方案中，本发明抗体的CDR序列可以是本发明抗体的VH结构域和VL结构域中的CDR序列，如使用任何合适的方法(或工具)鉴定的，例如根据众所周知的Kabat(例如，Kabat等人,"Sequences ofProteins of Immunological Interest[免疫学感兴趣的蛋白质序列]",第5版.PublicHealth Service,National Institutes of Health[美国国立卫生研究院公共卫生事业部],马里兰州贝塞斯达市,647-669,1991)或Chothia(例如，Chothia C等人.(1989)Nature[自然],342:877-883，或Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948)方法鉴定的。
可以使用常规的技术将抗体片段化。例如，可以通过用胃蛋白酶处理抗体来生成F(ab')2片段。可以处理所得的F(ab')2片段以还原二硫桥，从而产生Fab′片段。木瓜蛋白酶消化可导致Fab片段的形成。Fab、Fab'和F(ab')2、scFv、Fv、dsFv、Fd、dAb、TandAb、ds-scFv、二聚体、微抗体、双抗体、双特异性抗体片段和其他片段也可以通过重组技术合成或可以化学合成。用于产生抗体片段的技术是本领域众所周知的且在其中进行描述。
在某些实施方案中，本发明的抗体或抗体片段包含全部或部分重链恒定区，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgE、IgM或IgD恒定区。优选地，重链恒定区是IgG重链恒定区，例如IgG2或IgG4重链恒定区或其一部分。此外，抗体或抗体片段可包含全部或部分κ轻链恒定区或λ轻链恒定区或其一部分。全部或部分此类恒定区可以天然产生或可以完全或部分合成。此类恒定区的适当的序列是本领域众所周知的且在其中进行记载。当本发明的抗体中包括来自重链和轻链的恒定区的完全互补序列时，此类抗体在本文中通常称为“全长”抗体或“完整”抗体。因此，在一些实施方案中，本发明的抗体是Ig(例如，IgG)抗体。
抗体或抗体片段可以天然产生或可以完全或部分合成产生。因此，抗体可以来自任何适当的来源，例如重组来源和/或在转基因动物或转基因植物中产生，或在使用IgY技术的蛋中产生。因此，抗体分子可以在体外或体内产生。
优选地，抗体或抗体片段包含含有三个CDR结构域的抗体轻链可变区(VL)和含有三个CDR结构域的抗体重链可变区(VH)。所述VL和VH通常形成抗原结合位点。
“Fv”片段是含有完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。所述区域具有呈紧密、非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体。正是在这种构型中，每个可变结构域的三个高变区(CDR)相互作用以限定VH-VL二聚体表面上的抗原结合位点。总之，六个高变区(CDR)赋予抗体抗原结合特异性。
然而，本领域充分证明，抗体轻链可变结构域的三个CDR和重链可变结构域的三个CDR的存在对于抗原结合并不总是必需的。因此，已知小于上述经典抗体片段的构建体是有效的。
例如，骆驼抗体具有广泛的抗原结合库，但没有轻链。而且，仅包含VH结构域或仅包含VL结构域的单结构域抗体的结果表明，这些结构域能以可接受的高亲和力结合抗原。因此，三个CDR可以有效地结合抗原。
因此，虽然本发明的优选抗体可能包含六个CDR区(三个来自轻链，三个来自重链)，但本发明涵盖具有少于六个CDR区(例如，3个CDR区)的抗体。还考虑了具有仅来自重链或轻链的CDR的抗体。
与指定的重链CDR区结合使用的优选轻链CDR区在本文别处描述。然而，也考虑了包含与本发明的重链可变区结合使用的三个CDR的其他轻链可变区。本领域技术人员可以容易地鉴定出适当的轻链可变区，这些轻链可变区可以与本发明的重链可变区组合使用并且产生结合根据本发明的TRPV1的抗体。
本发明的又一个方面提供了抗体、优选分离的抗体，所述抗体结合或特异性识别TRPV1并且具有与本发明的抗体竞争(即，与所述抗体结合相同或基本上相同的表位)结合TRPV1的能力。本发明的其他方面的其他特征和特性经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
例如，可以与针对本发明的分离的肽(或偶联物)生成的抗体(例如多克隆抗体，如本文实例部分中描述的那些)竞争结合TRPV1的抗体代表本发明的另一个方面。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、优选分离的抗体，所述抗体结合或特异性识别TRPV1并且具有与如本文所述的本发明的OT-Ab3、OT-Ab2和/或OT-Ab1单克隆抗体(即，包含SEQ ID NO:40的VL和SEQ ID NO:39的VH的抗体，或包含SEQ ID NO:57的VL和SEQ IDNO:58的VH的抗体，或包含SEQ ID NO:75的VL和SEQ ID NO:76的VH的抗体)竞争(即，与所述抗体结合相同或基本上相同的表位)结合TRPV1的能力。在其他实施方案中，本发明提供了抗体、优选分离的抗体，所述抗体结合或特异性识别TRPV1并且具有与包含与OT-Ab3、OT-Ab2和/或OT-Ab1抗体相同的CDR的抗体(即，分别包含SEQ ID NO:44、45和46的VL CDR序列以及SEQ ID NO:41、42和43的VH CDR序列的抗体，或分别包含SEQ ID NO:62、63和64的VLCDR序列以及SEQ ID NO:59、60和61的VH CDR序列的抗体，或分别包含SEQ ID NO:80、81和82的VL CDR序列以及SEQ ID NO:77、78和79的VH CDR序列的抗体)竞争结合TRPV1的能力。
在一些实施方案中，本发明提供了抗体、优选分离的抗体，所述抗体结合或特异性识别TRPV1并且具有与如本文所述的本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1单克隆抗体竞争(即，与所述抗体结合相同或基本上相同的表位)(即，与包含如本文别处列出的这些单克隆抗体的VL和VH序列的抗体竞争)结合TRPV1的能力。
在其他实施方案中，本发明提供了抗体、优选分离的抗体，所述抗体结合或特异性识别TRPV1并且具有与包含与本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1或R4P1-C1单克隆抗体相同的CDR(这些抗体的CDR序列在本文别处列出)的抗体竞争结合TRPV1的能力。
与相同表位/抗原的结合可以通过本领域众所周知且在其中进行描述的方法容易地测试，例如使用结合测定、如竞争测定，例如，如本文别处所述。
优选地，与适当的对照水平相比，以可测量或显著水平并且更优选以统计学显著水平观察到上述能力和特性。适当的显著水平在本文别处讨论。更优选地，与针对现有技术抗体观察到的能力相比，以可测量更好或更优选显著更好的水平观察到一种或多种上述能力和特性。
在本文提及的任何统计学分析中，优选地，相对于相关对照或其他比较实体或测量的统计学显著的差异具有<0.1、优选<0.05的概率值。确定统计学显著性的适当的方法是本领域众所周知的且在其中进行记载，并且可以使用这些中的任一种。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:77的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:78的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:79的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:91或优选地SEQ ID NO:92的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:82的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:106的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:108的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:123的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:124的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:125的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:126的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:127的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:122的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:143的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:145的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:146的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:141的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些其他优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:162的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些其他优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:261的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:262的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:183的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:184的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:185的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:182的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些其他优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:241的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:242的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:225的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:222的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:283的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:284的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:285的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:286的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:287的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:288的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:281的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:282的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些其他优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:401的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:402的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:303的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:304的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:305的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:306的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:307的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:308的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:301的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:302的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:323的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:324的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:325的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:326的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:327的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:328的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:321的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:322的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:343的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:344的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:345的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:346的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:347的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:348的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:342的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:363的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:364的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:365的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:366的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:367的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:368的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:361的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:362的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。在本发明这一方面的一些其他优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:381的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:382的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:423的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:424的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:425的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH CDR3；并且/或者(优选地“并且”)
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:426的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:427的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:428的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL CDR3；
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或其中所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
本发明这一方面的优选实施方案包括包含一个或多个抗体序列(例如，CDR序列和/或VH结构域和/或VL结构域序列)的抗体，这些抗体序列与本发明的其他方面结合在本文别处描述。因此，对本发明其他方面的抗体的各种特征和优选实施方案的讨论经必要的修正后应用于本发明的这一方面。在本发明这一方面的一些优选实施方案中，本发明提供了抗体，所述抗体包含具有SEQ ID NO:421的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VH结构域，和/或(优选地“和”)具有SEQ ID NO:422的氨基酸序列或与其基本上同源的序列的VL结构域。
在另一方面，本发明提供了抗体、例如分离的抗体，所述抗体结合TRPV1并且包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其各自具有与本发明的其他方面相关的如本文别处列出的氨基酸序列(例如，组合)，并且其中所述轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3，其各自具有与本发明的其他方面相关的如本文别处列出的氨基酸序列(例如，组合)。
本发明的抗体、肽、结合蛋白和核酸分子通常是“分离的”或“纯化的”分子，只要它们有别于可能原位存在于人体或动物体内或衍生自人体或动物体的组织样品内的任何此类组分。然而，这些序列可能对应于如在人体或动物体内发现的序列或与其基本上同源。因此，如本文所用，关于核酸分子或序列和蛋白质、肽或多肽，例如抗体的术语“分离的”或“纯化的”是指从它们的天然环境中分离、纯化或基本上摆脱它们的天然环境，例如从人体或动物体中分离或纯化的此类分子(如果它们确实是天然存在的)，或是指通过技术过程产生的此类分子，即包括重组和合成产生的分子。
因此，当与蛋白质或多肽分子如分离的肽，轻链CDR 1、2和3，重链CDR 1、2和3，轻链可变区，重链可变区和结合蛋白或本发明的抗体(包括全长抗体)结合使用时，术语“分离的”或“纯化的”通常是指基本上不含细胞材料的蛋白质、或从所述来源衍生所述“分离的”或“纯化的”蛋白质的其他蛋白质。在一些实施方案中，特别是在将蛋白质施用于人或动物的情况下，此类分离的或纯化的蛋白质在通过重组技术产生时基本上不含培养基，或在化学合成时基本上不含化学前体或其他化学物质。
如本文所用，术语“片段”是指具有生物相关性的片段，例如有助于抗原结合、例如形成抗原结合位点的一部分，和/或有助于TRPV1抗体的功能特性的片段。某些优选的片段包含本发明抗体的重链可变区(VH结构域)和/或轻链可变区(VL结构域)。
本领域技术人员将理解，本发明的抗体、抗体片段和免疫偶联物能以本领域众所周知且在其中进行描述的几种方式中的任一种来制备。例如，多克隆抗体可以通过用本发明的分离的肽或偶联物免疫动物(非人动物，例如兔)并分离(以及任选地纯化)针对已由所述动物生成的分离的肽或偶联物的抗体来制备。在其他实施方案中，本发明的抗体、抗体片段和免疫偶联物可以通过重组方法制备。
编码本发明抗体的轻链和重链可变区的核酸片段可以通过任何适当的方法、例如通过克隆或合成得到或产生。
一旦获得编码本发明抗体的轻链和重链可变区的核酸片段，就可以通过标准重组DNA技术对这些片段进行进一步操作，例如将这些可变区片段转化为具有适当的恒定区结构域的全长抗体分子，或转化为本文别处讨论的特定形式的抗体片段，例如Fab片段、scFv片段等。典型地，或作为所述进一步操作程序的一部分，编码本发明抗体分子的核酸片段通常掺入一种或多种适当的表达载体中以促进本发明抗体的产生。
可能的表达载体包括但不限于粘粒、质粒或经修饰的病毒(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，只要所述载体与所使用的宿主细胞相容即可。表达载体“适合于宿主细胞的转化”，这意味着表达载体含有本发明的核酸分子和基于待用于表达的宿主细胞选择的调节序列，这些调节序列与所述核酸分子可操作地连接。可操作地连接意指核酸以允许表达所述核酸的方式与调节序列连接。
因此，本发明考虑了重组表达载体，所述重组表达载体含有本发明的核酸分子或其片段，以及由本发明的核酸分子编码的蛋白质序列的转录和翻译所必需的调节序列。
合适的调节序列可衍生自多种来源，包括细菌、真菌、病毒、哺乳动物或昆虫基因，并且是本领域众所周知的。适当的调节序列的选择取决于如下所讨论而选择的宿主细胞，并且可以由本领域普通技术人员容易地完成。此类调节序列的实例包括：转录启动子和增强子或RNA聚合酶结合序列、核糖体结合序列包括翻译起始信号。额外地，取决于所选择的宿主细胞和所使用的载体，可以将其他序列(如复制起点、额外的DNA限制性位点、增强子和赋予转录可诱导性的序列)掺入表达载体中。
本发明的重组表达载体还可以含有选择性标记基因，所述基因有助于选择用本发明的重组分子转化或转染的宿主细胞。
重组表达载体还可以含有编码融合部分的基因，所述融合部分提供重组蛋白的增加的表达；重组蛋白的增加的溶解度；并且通过在亲和纯化中充当配体来帮助纯化靶重组蛋白(例如，可以存在能够进行纯化和/或鉴定的适当的“标签”，例如His标签或myc标签)。
可以将重组表达载体引入宿主细胞中以产生经转化的宿主细胞。术语“用……转化”、“用……转染”、“转化”和“转染”旨在涵盖通过本领域已知的许多可能技术之一将核酸(例如，载体)引入细胞中。用于转化和转染宿主细胞的合适的方法可见于Sambrook等人,1989(Sambrook,Fritsch和Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册],第2版,Cold Spring Harbor Press[冷泉港实验室出版社],纽约州冷泉港,1989)和其他实验室教科书中。
合适的宿主细胞包括多种真核宿主细胞和原核细胞。例如，本发明的蛋白质(例如，抗体)可以在酵母细胞或哺乳动物细胞中表达。另外，本发明的蛋白质可以在原核细胞如大肠杆菌中表达。
鉴于本文提供的教导，用于将适当类型的表达载体引入植物、鸟类和昆虫细胞中的启动子、终止子和方法也可以容易地实现。
可替代地，本发明的蛋白质(例如，抗体)也可以在非人转基因动物(如大鼠、兔、绵羊和猪)中表达。
本发明的蛋白质也可以使用蛋白质化学中众所周知的技术(如固相合成)通过化学合成来制备。
包含与其他分子(如蛋白质)缀合的本发明的抗体和蛋白质(例如，分离的肽)的N-末端或C-末端融合蛋白可以通过重组技术融合来制备。所得的融合蛋白含有与如本文所述的所选蛋白或标记蛋白或标签蛋白融合的本发明的抗体或蛋白质。本发明的抗体和蛋白质也可以通过已知技术与其他蛋白质缀合。例如，这些蛋白质可以使用如WO 90/10457中所述的含硫醇的异双功能接头、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代-丙酸酯)或N-琥珀酰亚胺基-5硫代乙酸酯进行偶联。
又一个方面提供了包含本发明的一个或多个核酸片段或区段或分子的表达构建体或表达载体。优选地，表达构建体或载体是重组的。还提供了一组表达载体(或一组表达构建体)，它们一起(共同地)编码本发明的抗体。这样的一组表达载体的特征可以在于当所述组被表达(即，一起表达)(例如，在宿主细胞中)时，本发明的抗体(整个抗体)被表达并且优选地被组装。
优选地，所述构建体或载体进一步包含由本发明的核酸分子编码的蛋白质序列的转录和翻译所必需的调节序列。
又一个方面提供了包含本发明的一种或多种表达构建体或表达载体的宿主细胞或病毒。还提供了包含本发明的一种或多种核酸分子的宿主细胞或病毒。表达本发明抗体的宿主细胞(例如，哺乳动物宿主细胞)或病毒形成又一个方面。
本发明的又一个方面提供了产生(或制造或分离或鉴定或生成)本发明的抗体的方法，所述方法使用本发明的分离的肽或偶联物。可替代地来看，本发明提供了本发明的分离的肽或偶联物用于鉴定(或分离或生成或产生)本发明的抗体的用途。
本发明的又一个方面提供了产生(或制造或分离或鉴定或生成)本发明的抗体的方法，所述方法包括用本发明的分离的肽(或偶联物)免疫动物(非人动物，例如兔)的步骤。优选的方法包括从所述动物获得针对本发明的分离的肽(或偶联物)生成(或生产)的抗体的步骤，以及任选地纯化抗体产物和/或将抗体或产物配制成包括至少一种额外的组分(如药学上可接受的载剂或赋形剂)的组合物的步骤。
本发明的又一个方面提供了通过在杂交瘤技术(例如，常规的杂交瘤技术)中使用本发明的分离的肽或偶联物来产生(或制造或分离或鉴定或生成)本发明的抗体的方法。可替代地来看，本发明提供了本发明的分离的肽或偶联物用于使用杂交瘤技术来鉴定(或分离或生成或产生)本发明的抗体的用途。在一些实施方案中，用本发明的分离的肽或偶联物免疫非人动物(例如，小鼠)，从所述经免疫的动物(例如，小鼠)分离脾细胞并将其与缺乏HGPRT表达的骨髓瘤细胞(例如，小鼠骨髓瘤细胞)(此类骨髓瘤细胞不能在含有HAT的培养基中生长)融合，并且使用含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶(HAT)的培养基选择杂交(即，融合的或杂交瘤)细胞。仅融合的细胞在含有HAT的培养基中生长。
本发明的又一个方面提供了鉴定(或分离或生成)本发明的抗体的方法，所述方法使用噬菌体展示技术(带有噬菌体展示抗体文库)。可替代地来看，本发明提供了本发明的分离的肽或偶联物用于使用噬菌体展示技术(带有噬菌体展示抗体文库)来鉴定(或分离或生成或产生)本发明的抗体的用途。在一些实施方案中，将本发明的分离的肽或偶联物(通常固定在固体支持物如珠或微珠或板或微量滴定板上)与噬菌体文库(细菌噬菌体文库通常是丝状细菌噬菌体文库，如M13或fd噬菌体文库)接触，所述噬菌体文库在噬菌体表面上展示(或呈现或表达)抗体或抗体片段如scFv或Fab片段的文库。可以使用任何合适的噬菌体展示抗体文库(例如，可以使用人噬菌体-Fab文库(例如，人原始噬菌体-Fab文库))，并且技术人员熟悉这些(并且例如，存在可商购的噬菌体展示抗体文库)。然后洗脱结合的噬菌体，并且可以通过分离和测序噬菌体的核酸(或编码展示抗体的核酸的至少一部分)容易地确定展示抗体的身份。在一些实施方案中，在洗脱结合的噬菌体后，在鉴定结合的噬菌体的展示抗体之前，进行一轮或多轮(例如，1、2、3、4、5或更多轮)额外的接触和洗脱。此类额外的轮次通常会进一步使文库富集。在一些典型的实施方案中，在将本发明的肽或偶联物固定在固体支持物上的情况下，通常在接触步骤后(且在洗脱步骤前)洗涤固体支持物，其中那些展示与经固定的分离的肽或偶联物结合的抗体或抗体片段的噬菌体保持结合(而其他被洗掉)。
本发明的又一个方面提供了产生(或制造)本发明的抗体的方法，所述方法包括培养本发明的宿主细胞的步骤。优选的方法包括以下步骤：(i)在适合于所编码抗体表达的条件下培养包含本发明的一种或多种重组表达载体(或一组表达载体)或者一种或多种核酸序列(或一组核酸分子)的宿主细胞；以及任选地(ii)从宿主细胞或从生长培养基/上清液中分离或获得抗体。
在实施方案中，当本发明的抗体或蛋白质由多于一条多肽链(例如，某些片段如Fab片段或完整抗体)组成时，那么所有的多肽优选从相同或不同的表达载体在宿主细胞中表达，以便完整的蛋白质(例如，本发明的抗体蛋白质)可以在宿主细胞中组装并从其分离或纯化。
在一些实施方案中，产生(或制造或分离或鉴定或生成)根据本发明的抗体的方法还可以包括纯化抗体或蛋白质产物和/或将抗体或产物配制成包括至少一种额外的组分(如药学上可接受的载剂或赋形剂)的组合物的步骤。
在另一方面，本发明提供了结合TRPV1的方法，所述方法包括将包含TRPV1的组合物与本发明的抗体或其免疫偶联物接触。
在又一方面，本发明提供了检测TRPV1的方法，所述方法包括在有效允许TRPV1/抗体复合物形成的条件下将怀疑含有TRPV1的组合物与本发明的抗体或其免疫偶联物接触，并检测如此形成的复合物。
本发明的抗体还可用于产生结合TRPV1的另外的抗体。此类用途涉及例如在亲本抗体的氨基酸序列中添加、缺失、取代或插入一个或多个氨基酸以形成新抗体，其中所述亲本抗体是如本文别处定义的本发明的抗体之一，并且测试所得的新抗体以鉴定结合根据本发明的TRPV1的抗体。此类方法可用于形成多种新抗体，所有这些抗体均可测试其结合TRPV1的能力。优选地，一个或多个氨基酸的所述添加、缺失、取代或插入发生在一个或多个CDR结构域中。
对亲本抗体的这种修饰或突变可以使用本领域众所周知且在其中进行记载的技术以任何适当的方式进行，例如通过进行随机或定向诱变的方法。如果要使用定向诱变，那么一种鉴定用于诱变的适当残基的策略是利用结合蛋白-抗原复合物(例如，Ab-Ag复合物)的晶体结构的拆分来鉴定参与抗原结合的关键残基。丙氨酸扫描诱变也是一种常规方法，可用于鉴定参与抗原结合的关键残基。随后，可以对这些残基进行突变以增强相互作用。可替代地，可以简单地将一个或多个氨基酸残基作为定向诱变的目标，并评估对结合TRPV1的影响。
随机诱变能以任何适当的方式进行，例如通过易错PCR、链改组或增变大肠杆菌菌株。
因此，本发明的一个或多个VH结构域可以与来自任何适当来源的单个VL结构域或VL结构域库组合，并且测试所得的新抗体以鉴定结合TRPV1的抗体。反过来说，本发明的一个或多个VL结构域可以与来自任何适当来源的单个VH结构域或VH结构域库组合，并且测试所得的新抗体以鉴定结合TRPV1的抗体。
类似地，本发明的VH和/或VL结构域的一个或多个、或优选地所有三个CDR可以移植到单个VH和/或VL结构域或者VH和/或VL结构域库中，视情况而定，并且测试所得的新抗体以鉴定结合TRPV1的抗体。
进行上述氨基酸和蛋白质结构域操作的方法是本领域技术人员众所周知的。例如，所述操作可以通过基因工程在核酸水平上方便地进行，其中编码适当的结合蛋白及其结构域的核酸分子被修饰，使得所得的表达蛋白的氨基酸序列进而以适当的方式被修饰。
测试一种或多种抗体结合TRPV1的能力可以通过本领域众所周知且在其中进行描述的任何适当的方法进行。合适的方法也在实例部分中描述。
本发明还提供了一系列缀合抗体及其片段，其中抗TRPV1抗体与至少一种其他治疗剂可操作地附接。术语“免疫偶联物”广泛用于定义抗体与另一有效药剂(例如，治疗剂)的可操作的缔合，并不旨在仅指任何类型的可操作的缔合，并且特别不限于化学“缀合”。特别考虑了重组融合蛋白。只要递送剂或靶向剂能够结合靶标并且治疗剂或诊断剂在递送时具有足够的功能，附接模式就是合适的。
在一些实施方案中，本发明的抗体以其“裸”未缀合形式使用(例如，治疗性使用)。
包含本发明的至少第一抗体或其免疫偶联物的组合物构成本发明的另一个方面。包含本发明的一种或多种抗体与合适的稀释剂、载剂或赋形剂混合的配制品(组合物)构成本发明的优选实施方案。此类配制品可以用于药物用途，并且因此本发明的组合物优选是药学上可接受的。合适的稀释剂、赋形剂和载剂是技术人员已知的。
根据本发明的组合物能够例如以适合于口服、经鼻、肠胃外、腹膜内、静脉内、局部或直肠施用的形式呈现。在一些实施方案中，优选适合于静脉内施用的形式。
本文定义的活性化合物能够以常规的药理学施用形式呈现，如片剂、包衣片剂、喷鼻剂、溶液、乳液、脂质体、粉末、胶囊或缓释形式。可以使用常规的药物赋形剂以及通常的产生方法来制备这些形式。
注射溶液能够例如以常规的方式产生，例如通过添加防腐剂如对羟基苯甲酸酯或稳定剂如EDTA。然后可以将溶液填充到注射小瓶或安瓿中。
喷鼻剂可以类似地配制在水溶液中并装入喷雾容器中，所述喷雾容器具有气溶胶推进剂或提供有手动压缩装置。
本发明的药物组合物(配制品)优选肠胃外施用。在一些实施方案中，优选静脉内施用。肠胃外施用可以利用注射器通过皮下、肌肉内或静脉内注射进行。可替代地，肠胃外施用可以利用输液泵进行。另一种选择是组合物，所述组合物可以是粉末或液体用于以喷鼻剂或喷肺剂的形式施用抗体。作为再另一种选择，本发明的抗体也可以经皮施用，例如从贴片、任选地离子电渗贴片，或经粘膜施用，例如经颊。
合适的剂量单位可以由本领域技术人员确定。
在共同施用方案或组合方案的上下文中，药物组合物可以额外包含另外的活性成分。
本发明的另一个方面提供了本发明的抗TRPV1抗体，用于疗法、特别是用于疼痛疗法(或疼痛管理)。
在一些实施方案中，疼痛是急性疼痛。在一些实施方案中，疼痛是慢性疼痛。
在一些实施方案中，急性疼痛是急性术后疼痛或急性创伤后疼痛。
在一些实施方案中，慢性疼痛是伤害性疼痛，例如骨关节炎相关疼痛、关节炎相关疼痛、下腰疼痛或颈部疼痛。
在一些实施方案中，慢性疼痛是神经性疼痛，例如疼痛性糖尿病性多发性神经病、带状疱疹后神经痛、创伤后神经痛或神经根病变。在一些实施方案中，慢性疼痛是疼痛性膀胱综合征、外阴痛、慢性胰腺炎或内脏疼痛。
在一些实施方案中，疼痛是瘙痒(急性或慢性瘙痒)。
在一些实施方案中，疼痛选自由炎性疼痛、特发性疼痛和神经性疼痛组成的组。
“疗法”包括治疗和预防，即包括治疗和预防用途两者。“疼痛疗法”因此包括疼痛的治疗和疼痛的预防。
因此，在一些实施方案中，本发明提供了用于在治疗疼痛中使用的本发明的抗TRPV1抗体。因此，在一些实施方案中，本发明提供了用于在预防疼痛中使用的本发明的抗TRPV1抗体。
在一些实施方案中，根据本发明待治疗(或预防)的疼痛是与通过刺激激活TPRV1相关的(或由其引起或表征的)疼痛，所述刺激具有与辣椒素相同(或类似)的激活TRPV1的机制(例如，通过辣椒素的结构和/或功能类似物激活)。在一些实施方案中，根据本发明待治疗(或预防)的疼痛是与通过一种或多种内源性配体(或内源性激活剂)激活TPRV1相关的(或由其引起或表征的)疼痛。此类内源性配体可以是脂质化合物，例如在炎症或组织损伤期间产生的脂质化合物(例如，大麻素、脂氧合酶和溶血磷脂酸(LPA)的代谢物)。在一些实施方案中，内源性配体是辣椒素的结构和/或功能类似物。
在一些实施方案中，根据本发明待治疗(或预防)的疼痛是可由辣椒素或辣椒素类似物诱导的疼痛。
本发明的另一个方面提供了本发明的抗TRPV1抗体，用于在抑制TRPV1激活中使用，例如用于在抑制通过刺激激活TPRV1中使用，所述刺激具有与辣椒素相同(或类似)的激活TRPV1的机制(例如，通过辣椒素的结构和/或功能类似物激活)。
在另一方面，本发明提供了本发明的免疫偶联物，用于疗法、特别是用于在治疗疼痛中使用。
如本文所述的体内方法和用途通常在哺乳动物中进行。可以治疗任何哺乳动物，例如人和任何牲畜、家畜或实验室动物。特定实例包括小鼠、大鼠、猪、猫、狗、绵羊、兔、乳牛和猴。然而，优选地，哺乳动物是人。
因此，如本文所用，术语“动物”或“患者”包括任何哺乳动物，例如人和任何牲畜、家畜或实验室动物。特定实例包括小鼠、大鼠、猪、猫、狗、绵羊、兔、乳牛和猴。然而，优选地，动物或患者是人受试者。因此，根据本发明治疗的受试者或患者将优选是人。
在一些实施方案中，受试者或患者将是患有疼痛(或遭受或经历疼痛)的那些，或者处于患有疼痛风险或处于发展疼痛风险的那些。
在一些实施方案中，待治疗的受试者具有其中TRPV1已被上调的组织。在此类情况下，受试者可能具有高(或更高)的疼痛意识。
在一些实施方案中，待治疗的受试者具有其中TRPV1已被致敏的组织，使得受试者具有低(或更低)的疼痛阈值。
可替代地来看，本发明提供了治疗疼痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如本文定义的本发明的抗体。本文描述的本发明的治疗用途的实施方案经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
本发明还提供了治疗疾病的方法，所述疾病的特征是激活TPRV1，例如通过刺激激活，所述刺激具有与辣椒素相同(或类似)的激活TRPV1的机制(例如，通过辣椒素的结构和/或功能类似物激活)，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如本文定义的本发明的抗体。本文描述的本发明的治疗用途的实施方案经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
治疗有效量将基于临床评估确定并且可以容易地监测。
进一步可替代地来看，本发明提供了如本文定义的本发明的抗体在制造用于在疗法中使用的药物中的用途。优选的疗法是如本文别处所述的疼痛疗法。本文描述的本发明的治疗用途的实施方案经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
进一步可替代地来看，本发明提供了如本文定义的本发明的抗体用于治疗疾病的用途，所述疾病的特征是激活TPRV1，例如通过刺激激活，所述刺激具有与辣椒素相同(或类似)的激活TRPV1的机制(例如，通过辣椒素的结构和/或功能类似物激活)。优选的用途是用于治疗疼痛。本文描述的本发明的治疗用途的实施方案经必要的修正后应用于本发明的这一方面。
本发明的抗体和组合物以及方法和用途可以与其他治疗剂和诊断剂组合使用。就用于与根据本发明的抗TRPV1抗体“组合”使用的生物剂、优选诊断剂或治疗剂而言，术语“组合”简洁地用于涵盖一系列实施方案。因此，“组合”术语，除非另有明确说明或从科学术语中明确，适用于各种形式的组合组合物、药物、混杂物、试剂盒、方法以及第一和第二医学用途。
因此，本发明的“组合”实施方案包括例如，本发明的抗TRPV1抗体是裸抗体并且与不与其可操作的附接的药剂或治疗剂组合使用。在本发明的其他“组合”实施方案中，本发明的抗TRPV1抗体是免疫偶联物，其中抗体本身与药剂或治疗剂可操作地缔合或组合。可操作的附接包括如本文所述和本领域已知的所有形式的直接和间接附接。
“组合”用途，特别是就本发明的抗TRPV1抗体与治疗剂组合而言，还包括组合组合物、药物、混杂物、试剂盒、方法以及第一和第二医学用途，其中治疗剂呈前药的形式。在此类实施方案中，能够将前药转化为药物的功能形式的激活组分可以再次与本发明的抗TRPV1抗体可操作地缔合。
因此，在描述组合组合物、药物、混杂物、试剂盒、方法以及第一和第二医学用途的情况下，优选地就诊断剂、并且更优选地治疗剂而言，这些组合包括作为裸抗体的抗TRPV1抗体和免疫偶联物，并且其中本发明的体内实施方案的实施涉及先前、同时或随后施用裸抗体或免疫偶联物和生物剂、诊断剂或治疗剂；只要以某种缀合或未缀合形式实现某种形式的抗体和某种形式的生物剂、诊断剂或治疗剂的总体提供即可。
对本发明效果作出的前述和其他解释是为了简单地解释操作的组合模式、一种或多种附接剂的类型，等等。这种描述性方法不应被解释为轻描淡写或过度简化本发明的抗TRPV1抗体的有益特性。因此应当理解，此类抗体本身具有抗TRPV1特性，并且此类抗体的免疫偶联物将保持这些特性并将它们与附接剂的特性进行组合；并且进一步地，抗体和任何附接剂的组合效果通常会被增强和/或放大。
因此，本发明提供了组合物、药物组合物、治疗试剂盒和药用混杂物，这些组合物、药物组合物、治疗试剂盒和药用混杂物任选地在至少第一组合物或容器中包含生物有效量的本发明的至少第一抗TRPV1抗体、或这种抗TRPV1抗体的抗原结合片段或免疫偶联物；和生物有效量的至少第二生物剂、组分或系统。
所述所述“至少第二生物剂、组分或系统”通常是治疗剂或诊断剂、组分或系统，但并非必须如此。例如，所述至少第二生物剂、组分或系统可以包含用于修饰抗体和/或用于将其他药剂附接至抗体的组分。
在包括治疗剂或诊断剂作为至少第二生物剂、组分或系统的情况下，此类治疗剂和/或诊断剂通常是用于与上述定义的一种或多种障碍的治疗或诊断结合使用的那些。
因此，在某些实施方案中，“至少第二治疗剂”将包括在治疗试剂盒或混杂物中。参考本发明的抗TRPV1抗体作为第一治疗剂来选择所述术语。
在本发明的某些实施方案中，第二治疗剂可以是另外的疼痛疗法剂或用于治疗与疼痛相关的(或由其表征或引起的)疾病的药剂。
就本发明的组合物、试剂盒和/或药物而言，组合有效量的治疗剂可以包含在单个容器或容器装置中，或包含在不同的容器或容器装置中。混杂物通常混合在一起以组合使用。配制用于静脉内施用的药剂通常是优选的。还可以包括成像组分。试剂盒还可以包括使用至少第一抗体和所包括的一种或多种其他生物剂的说明。
一般而言，至少第二治疗剂可以与本发明的抗TRPV1抗体基本上同时施用于动物或患者；例如来自单个药物组合物或来自紧密施用的两种药物组合物。
可替代地，能够以与施用本发明的抗TRPV1抗体依序的时间向动物或患者施用至少第二治疗剂。如本文所用，“以依序的时间”意指“交错的”，使得以与施用本发明的抗TRPV1抗体不同的时间向动物或患者施用至少第二治疗剂。通常，两种药剂有时有效间隔地施用，以允许这两种药剂发挥它们各自的治疗效果，即它们以“生物有效时间间隔”施用。可以在本发明的抗TRPV1抗体之前的生物有效时间或在所述治疗剂之后的生物有效时间向动物或患者施用至少第二治疗剂。
又一个方面是对受试者或样品进行成像的方法，所述方法包括向受试者或样品施用适当量的如本文定义的本发明的抗体或其他蛋白质，并检测本发明的抗体或其他蛋白质在受试者或样品中的存在和/或量和/或位置。
为了在成像应用中使用，本发明的抗体可以用可检测标记物进行标记，如不透射线或放射性同位素，如3H、14C、32P、35S、123I、125I、131I；放射性发射体(例如，α、β或γ发射体)；荧光(荧光团)或化学发光(发色团)化合物，如异硫氰酸荧光素、罗丹明或萤光素；酶，如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶；成像剂；或金属离子；或化学部分如生物素，其可以通过与特定的同源可检测部分(例如，经标记的抗生物素蛋白/链霉抗生物素蛋白)结合来检测。将标记附接至结合蛋白(如抗体或抗体片段)的方法是本领域已知的。此类可检测标记物允许检查测试样品中结合蛋白-抗原复合物的存在、量或位置。
本发明还包括成像剂，这些成像剂包含与直接或间接产生可检测信号的标记附接的本发明的抗体。适当的标记在本文别处描述。
本发明进一步包括试剂盒，这些试剂盒包含本发明的一种或多种分离的肽(分离的表位)、抗体、免疫偶联物或组合物，或编码本发明抗体的一种或多种核酸分子，或包含本发明的核酸序列的一种或多种重组表达载体，或包含本发明的重组表达载体或核酸序列的一种或多种宿主细胞或病毒。优选地，所述试剂盒用于在如本文所述的方法和用途，例如，如本文所述的治疗方法中使用，或用于在如本文所述的体外测定或方法中使用。此类试剂盒中的抗体可以是“裸”抗体或可以是如本文别处所述的抗体偶联物，例如可以是免疫偶联物。优选地，所述试剂盒包括试剂盒组分的使用说明。优选地，所述试剂盒用于治疗如本文别处所述的疾病，并且任选地包括试剂盒组分治疗此类疾病的使用说明。
如本文定义的本发明的抗体也可用作体外或体内应用和测定的分子工具。由于抗体具有抗原结合位点，它们可以作为特异性结合对成员发挥作用，并且这些分子可以用于需要特定结合对成员的任何测定中。
因此，本发明的又另外的方面提供了包含如本文定义的本发明的抗体的试剂以及此类抗体作为分子工具的用途，例如在体外或体内测定中。
核苷酸(nt)和氨基酸(a.a.)的列表和表格本文披露的序列及其序列标识符(SEQ ID NO)
根据这一技术领域的惯例，本文列举了所有核苷酸从5'到3'的序列。
人TRPV1的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)
MKKWSSTDLGAAADPLQKDTCPDPLDGDPNSRPPPAKPQLSTAKSRTRLFGKGDSEEAFPVDCPHEEGELDSCPTITVSPVITIQRPGDGPTGARLLSQDSVAASTEKTLRLYDRRSIFEAVAQNNCQDLESLLLFLQKSKKHLTDNEFKDPETGKTCLLKAMLNLHDGQNTTIPLLLEIARQTDSLKELVNASYTDSYYKGQTALHIAIERRNMALVTLLVENGADVQAAAHGDFFKKTKGRPGFYFGELPLSLAACTNQLGIVKFLLQNSWQTADISARDSVGNTVLHALVEVADNTADNTKFVTSMYNEILMLGAKLHPTLKLEELTNKKGMTPLALAAGTGKIGVLAYILQREIQEPECRHLSRKFTEWAYGPVHSSLYDLSCIDTCEKNSVLEVIAYSSSETPNRHDMLLVEPLNRLLQDKWDRFVKRIFYFNFLVYCLYMIIFTMAAYYRPVDGLPPFKMEKTGDYFRVTGEILSVLGGVYFFFRGIQYFLQRRPSMKTLFVDSYSEMLFFLQSLFMLATVVLYFSHLKEYVASMVFSLALGWTNMLYYTRGFQQMGIYAVMIEKMILRDLCRFMFVYIVFLFGFSTAVVTLIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNSLYSTCLELFKFTIGMGDLEFTENYDFKAVFIILLLAYVILTYILLLNMLIALMGETVNKIAQESKNIWKLQRAITILDTEKSFLKCMRKAFRSGKLLQVGYTPDGKDDYRWCFRVDEVNWTTWNTNVGIINEDPGNCEGVKRTLSFSLRSSRVSGRHWKNFALVPLLREASARDRQSAQPEEVYLRQFSGSLKPEDAEVFKSPAASGEK
分离的肽OTV3的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:2)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
分离的肽OTV4的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:3)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS
分离的肽OTV5的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:4)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
分离的肽OTV6的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:5)
IEDGKNDS
分离的肽OTV7的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:6)
IEDGKNDSLPSESTSH
分离的肽OTV8的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:7)
IEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASR
分离的肽OTV9的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:8)
LPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
分离的肽OTV10的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:9)
RWRGPASRPPDSSYNS
分离的肽OTV11的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:10)
PPDSSYNS
分离的肽OTV12的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:11)
LYSTSLELFKFTI
分离的肽OTV13的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:12)
GMGDLEFTENYDF
分离的肽OTV14的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:13)
EPMNYDPDGSIEDAG
分离的肽OTV15的氨基酸序列，不包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:14)
ESTSHRWRGPA
分离的肽OTV3的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:16)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS
与SEQ ID NO:2相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV4的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:17)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS
与SEQ ID NO:3相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV5的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:18)
(Pra-)CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC(CONH2)
与SEQ ID NO:4相比，该肽在N-末端处和C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。该肽还在C-末端处酰胺化，并在N-末端处具有炔丙基基团(Pra-)。该肽是环状的，其中该肽经由末端半胱氨酸残基连接(环化)。炔丙基基团提供了用于将该肽附接到肽载剂(例如，KLH)的方式。
分离的肽OTV6的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:19)
CIEDGKNDS
与SEQ ID NO:5相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV7的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:20)
CIEDGKNDSLPSESTSH
与SEQ ID NO:6相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV8的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:21)
CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASR
与SEQ ID NO:7相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV9的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰(SEQ ID NO:22)
LPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC
与SEQ ID NO:8相比，该肽在C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV10的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:23)
RWRGPASRPPDSSYNSC
与SEQ ID NO:9相比，该肽在C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV11的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:24)
PPDSSYNSC
与SEQ ID NO:10相比，该肽在C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV12的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:25)
LYSTSLELFKFTIC
与SEQ ID NO:11相比，该肽在C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV13的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:26)
CGMGDLEFTENYDF
与SEQ ID NO:12相比，该肽在N-末端处具有额外的半胱氨酸残基。
分离的肽OTV14的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:27)
(Pra-)CEPMNYDPDGSIEDAGC(-CONH2)
与SEQ ID NO:13相比，该肽在N-末端处和C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。该肽还在C-末端处酰胺化，并在N-末端处具有炔丙基基团(Pra-)。该肽是环状的并且代表构象表位，其中该肽经由末端半胱氨酸残基连接(环化)。炔丙基基团提供了用于将该肽附接到肽载剂(例如，KLH)的方式。
分离的肽OTV15的氨基酸序列，包括出于抗体生成的目的而存在的额外的修饰 (SEQ ID NO:28)
(Pra-)CESTSHRWRGPAC(-CONH2)
与SEQ ID NO:14相比，该肽在N-末端处和C-末端处具有额外的半胱氨酸残基。该肽还在C-末端处酰胺化，并在N-末端处具有炔丙基基团(Pra-)。该肽是环状的，其中该肽经由末端半胱氨酸残基连接(环化)。炔丙基基团提供了用于将该肽附接到肽载剂(例如，KLH)的方式。
表A-抗体OT-Ab3的序列
Figure BDA0003788864720001341
Figure BDA0003788864720001351
表B-抗体OT-Ab2的序列
Figure BDA0003788864720001352
Figure BDA0003788864720001361
Figure BDA0003788864720001371
表C-抗体OT-Ab1的序列
Figure BDA0003788864720001372
Figure BDA0003788864720001381
Figure BDA0003788864720001391
表D-共有氨基酸序列
Figure BDA0003788864720001392
本发明的OT-Ab1、OT-Ab-2和OT-Ab-3抗体的VL(即，轻)CDR1氨基酸序列属于上表D的共有序列。
表E-抗体32C8-1的序列
Figure BDA0003788864720001401
Figure BDA0003788864720001411
表F-抗体33C9-1的序列
Figure BDA0003788864720001412
Figure BDA0003788864720001421
Figure BDA0003788864720001431
表G-抗体34C11-1的序列
Figure BDA0003788864720001432
Figure BDA0003788864720001441
Figure BDA0003788864720001451
表H-抗体40B10-1的序列
Figure BDA0003788864720001452
Figure BDA0003788864720001461
Figure BDA0003788864720001471
表I-抗体41B5-1的序列
Figure BDA0003788864720001481
Figure BDA0003788864720001491
表J-抗体43D6-1的序列
Figure BDA0003788864720001492
Figure BDA0003788864720001501
Figure BDA0003788864720001511
表K-抗体44E8-1的序列
Figure BDA0003788864720001512
Figure BDA0003788864720001521
Figure BDA0003788864720001531
表L-抗体46B7-1的序列
Figure BDA0003788864720001532
Figure BDA0003788864720001541
Figure BDA0003788864720001551
表M-抗体46D9-1的序列
Figure BDA0003788864720001561
Figure BDA0003788864720001571
Figure BDA0003788864720001581
表N-抗体12C9-1的序列
Figure BDA0003788864720001582
Figure BDA0003788864720001591
Figure BDA0003788864720001601
表O-抗体12G6-1的序列
Figure BDA0003788864720001602
Figure BDA0003788864720001611
Figure BDA0003788864720001621
表P-抗体15D8-1的序列
Figure BDA0003788864720001622
Figure BDA0003788864720001631
表Q-抗体16F1-1的序列
Figure BDA0003788864720001641
Figure BDA0003788864720001651
表R-抗体17E11-1的序列
Figure BDA0003788864720001661
Figure BDA0003788864720001671
表S-抗体17E9-1的序列
Figure BDA0003788864720001672
Figure BDA0003788864720001681
Figure BDA0003788864720001691
表T-抗体18E10-1的序列
Figure BDA0003788864720001701
Figure BDA0003788864720001711
表U-抗体R4P1-C1的序列
Figure BDA0003788864720001721
Figure BDA0003788864720001731
表V-共有氨基酸序列
Figure BDA0003788864720001732
Figure BDA0003788864720001741
本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1和46D9-1抗体的VH(即，重)CDR1、CDR2和CDR3氨基酸序列以及VL(轻)CDR1序列各自属于上表V的共有序列。
表X-共有氨基酸序列
Figure BDA0003788864720001742
Figure BDA0003788864720001751
本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1、OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3抗体的VL(即，轻)CDR1氨基酸序列各自属于上表X的共有序列。
表Z-共有氨基酸序列
Figure BDA0003788864720001752
本发明的32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、18E10-1、OT-Ab2和OT-Ab3抗体的VL(即，轻)CDR3氨基酸序列各自属于上表Z的共有序列。
表BB-共有氨基酸序列
Figure BDA0003788864720001753
本发明的17E11-1、17E9-1和OT-Ab1抗体的VL(即，轻)CDR3氨基酸序列各自属于上表BB的共有序列。
现在将参考以下附图在以下非限制性实例中进一步描述本发明：
图1：在用OTV4多克隆抗体(辣椒素n＝6，热n＝6)、OTV5多克隆抗体(辣椒素n＝6，热n＝5)、OTV12多克隆抗体(辣椒素n＝7，热n＝5)、AMG 517(辣椒素n＝5，热n＝4)、Mavatrep(辣椒素n＝3，热n＝3)或对照抗体(辣椒素n＝4，热n＝7)处理后热激活的或辣椒素激活的TRPV1-活性的抑制。对照抗体为兔丙种球蛋白(RRID：AB_2532177-赛默飞世尔公司(Thermofisher)，目录号31887)。对等浓度的Mavatrep和AMG517进行了评估，以分析TRPV1的热和辣椒素激活的抑制，而抗体对TRPV1的热激活的抑制在5倍用于评估TRPV1的辣椒素激活的抑制的抗体浓度下进行了评估。用膜片钳实验评估了辣椒素激活的抑制，并且用热诱导的TRPV1介导的钙摄取的荧光强度记录评估了热激活的抑制。
图2：在用OTV4多克隆抗体、OTV5多克隆抗体、OTV12多克隆抗体、AMG 517、Mavatrep或对照抗体处理后，辣椒素诱导的TRPV1电流的膜片钳记录。对照抗体为兔丙种球蛋白(RRID：AB_2532177-赛默飞世尔公司，目录号31887)。在用0.533nM OTV4(n＝6)、533nMOTV4(n＝6)、1.33nM OTV5(n＝8)、13.3nM OTV5(n＝6)、0.133nM OTV12(n＝6)、13.3nMOTV12(n＝7)、100nM Mavatrep(n＝5)、100nM AMG 517(n＝3)或730nM对照抗体(n＝4)处理后，呈现了在抗体存在下用辣椒素激活的电流幅度，计算为仅用辣椒素激活的幅度的百分比。每个数据点(n)代表单个细胞。将抗体处理(OTV4、OTV5和OTV12)与对照抗体处理进行了比较。采用单因素方差分析结合Dunnett事后检验进行了统计学分析，并且p<0.05被认为是统计学显著的。两个星号＝p值小于0.01。数据呈现为平均值±SEM。
图3：在用OTV4多克隆抗体、OTV5多克隆抗体、OTV12多克隆抗体、AMG 517、Mavatrep或对照抗体处理后，热诱导的TRPV1介导的钙摄取的荧光强度记录。对照抗体为兔丙种球蛋白(RRID：AB_2532177-赛默飞世尔公司，目录号31887)。使用BiopenR递送抗体溶液，并使用热探针将其加热至42℃。施加了两个热脉冲，第二个是在抗体存在的情况下。在用270nM OTV4抗体(n＝10)、2.7μM OTV4抗体(n＝6)、6.7nM OTV5抗体(n＝5)、67nM OTV5抗体(n＝5)、0.67nM OTV12抗体(n＝6)、67nM OTV12抗体(n＝5)、100nM Mavatrep(n＝3)、100nM AMG-517(n＝4)或37μM对照抗体(n＝7)处理后，呈现了在抗体存在下第二次用热激活的荧光强度，计算为仅第一次用热激活的幅度的百分比。每个数据点(n)等于实验数量，每个实验含有一个或多个细胞。将抗体处理(OTV4、OTV5和OTV12)与对照抗体处理进行了比较。采用单因素方差分析结合Dunnett事后检验进行了统计学分析，并且p<0.05被认为是统计学显著的。两个星号＝p值小于0.01。三个星号＝p值小于0.001。数据呈现为平均值±SEM。
图4：辣椒素诱导的hTRPV1的钙摄取的抑制。将表达hTRPV1的CHO细胞与钙指示剂Fluo-3 AM在37℃下一起孵育30min，随后与抗体(OTV4 n＝12、OTV7 n＝12、OTV9 n＝12、OTV12 n＝11、OTV13 n＝11、或对照抗体n＝12(赛默飞世尔公司#31887))在室温下一起孵育1h。然后在将1μM辣椒素和150μM Ca2+应用于覆盖细胞的抗体溶液之前和之后，使用读板器来监测细胞内的钙含量。每种抗体的总钙摄取相对于仅辣椒素激活的钙摄取(即辣椒素+钙；图4中的“Cap”)进行归一化。剩余活性％意指与图4中标记为“Cap”的1μM辣椒素和150μMCa2+参考物(不含抗体的对照)相比剩余的活性量。仅作为示例，30％的剩余活性意味着该活性被抑制了70％。数据表示为平均值±SEM。使用Kruskal-Wallis检验随后是Dunn多重比较确定了统计学显著性。一个星号＝p值小于0.05。两个星号＝p值小于0.01。四个星号＝p值小于0.0001。
图5：使用FACS和表达TRPV1的CHO细胞(+TRPV1)评估了TRPV1抗体的结合特性。将活细胞与候选抗体(10μg/ml)一起孵育，随后进行二级抗体染色(与荧光染料缀合的抗小鼠IgG)和流式细胞术分析。还针对不表达TRPV1的CHO细胞(-TRPV1)筛选了相同的抗体，以确定与细胞的非特异性结合。二级抗体也用作阴性对照以检测非特异性结合。
图6：膜片钳方法用于测量抗体对表达TRPV1的CHO细胞中hTRPV1辣椒素(100nM辣椒素)响应的抑制活性。包括小分子拮抗剂AMG517和Mavatrep作为完全抑制辣椒素诱导的电流的阳性对照。使用100nM辣椒素连续四次激活hTRPV1。在第三次激活之前用抗体或小分子预处理表达hTRPV1的细胞，并且在第三次激活期间将抗体或小分子与辣椒素一起添加。第一次、第二次和第四次激活仅是辣椒素。将抗体存在时的第三个电流峰的幅度与电流峰二和四的幅度的平均值进行了比较。(OT-Ab1 n＝5、OT-Ab2 n＝9、OT-Ab3 n＝9、Mavatrepn＝5、AMG517 n＝3)。抑制％为(1-((峰3)/((峰2+峰4)/2)))*100。数据呈现为平均值±SEM。
图7：在100nM辣椒素和三个浓度的OT-Ab1(49nM n＝5、122nM n＝4、243nM n＝5)下评估了抗体OT-Ab1对TRPV1辣椒素诱导的电流的剂量依赖性抑制。使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)与Axopatch 200B(分子装置公司(Molecular Devices)，美国)膜片钳放大器一起进行了全细胞记录。将细胞钳位在-60mV，并且以10kHz的采样频率记录电流信号并将其以2kHz进行低通滤波。使用数字/模拟采样(Axon Digidata 1550)和采集软件(Clampex 10.7版，分子装置公司)获取膜片钳记录。使用100nM辣椒素连续四次激活hTRPV1。在第三次激活之前用抗体预处理表达hTRPV1的细胞，并且在第三次激活期间将抗体与辣椒素一起添加。第一次、第二次和第四次激活仅是辣椒素。将抗体存在时的第三个电流峰的幅度与电流峰二和四的幅度的平均值进行了比较。抑制％为(1-((峰3)/((峰2+峰4)/2)))*100。采用单因素ANOVA进行了统计学评估。统计学意义表示如下：*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001。数据呈现为平均值±SEM。
图8：在300nM辣椒素和一个浓度的OT-Ab1(122nM)下评估了抗体OT-Ab1对TRPV1辣椒素诱导的电流的抑制。使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)进行了全细胞记录。使用300nM辣椒素连续四次激活hTRPV1。在第三次激活之前用抗体或媒介物预处理表达hTRPV1的细胞，并且在第三次激活期间将抗体或媒介物与辣椒素一起添加。第一次、第二次和第四次激活仅是辣椒素。计算了抗体或媒介物存在时的第三个电流峰与第二个电流峰的比率。通过对抗体处理的细胞和媒介物处理的细胞的比率进行比较，计算了抑制百分比。抑制％为(1-((峰3Ab/峰2Ab)/(峰3veh/峰2veh)))*100。采用学生t检验进行了统计学评估。统计学意义表示如下：**p<0.01，n＝3。数据呈现为平均值±SEM。
图9：在1μM NADA和两个浓度的OT-Ab1(49nM n＝5、243nM n＝4)下评估了抗体OT-Ab1对TRPV1 NADA诱导的电流的剂量依赖性抑制。使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)与Axopatch 200B(分子装置公司，美国)膜片钳放大器一起进行了全细胞记录。将细胞钳位在-60mV，并且以10kHz的采样频率记录电流信号并将其以2kHz进行低通滤波。使用数字/模拟采样(Axon Digidata1550)和采集软件(Clampex 10.7版，分子装置公司)采集膜片钳记录。使用1uM NADA连续四次激活hTRPV1。在第三次激活之前用抗体预处理表达hTRPV1的细胞，并且在第三次激活期间将抗体与NADA一起添加。第一次、第二次和第四次激活仅是NADA。将抗体存在时的第三个电流峰的幅度与电流峰二和四的幅度的平均值进行了比较。抑制％为(1-((峰3)/((峰2+峰4)/2)))*100。采用学生t检验进行了统计学评估。统计学意义表示如下：***p<0.001。数据呈现为平均值±SEM。
图10：Ca2+成像用于测量抗体对表达TRPV1的CHO细胞中hTRPV1热响应(45℃)的抑制活性。使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲，这些细胞用具有荧光能力的显微镜观察，如图3所述。使用了商业微流体装置BiopenR将抗体递送至细胞。热导致钙离子通过TRPV1通道流入细胞中，并使用细胞内的钙指示剂测量流入。施加了两个热脉冲，第二个是在抗体(OT-Ab1、OT-Ab2、或OT-Ab3)或媒介物存在的情况下。计算了抗体和媒介物两者的第二峰幅度与第一峰幅度的比率。通过对抗体的上述比率和媒介物的比率进行比较，计算了抑制百分比。抑制％为(1-((峰2Ab/峰1Ab)/(峰2veh/峰1veh)))*100。将小分子拮抗剂AMG517和Mavatrep直接添加到浴溶液中，并且不使用微流体装置进行递送。使用与抗体相同的热脉冲方案激活用小分子处理的细胞，并以与抗体相同的方式进行分析。抗体n＝6，小分子n＝5。数据呈现为平均值±SEM。
图11：来自亲本小鼠杂交瘤克隆的上清液中的单克隆抗体制剂与表达TRPV1的细胞(CHO TRPV1)和不表达TRPV1的细胞(HEK293和CHO S)的结合的FACS测定。还显示了作为非特异性结合测试的小鼠IgG、先前经确认与TRPV1结合的兔多克隆阳性对照抗体(Pos.抗体对照)、以及用纯PBS进行的测试(以测量背景荧光)的结合。MFI＝平均荧光强度。N＝1/抗体。
图12：纯化的单克隆抗体制剂与表达TRPV1的细胞(CHO TRPV1)和不表达TRPV1的细胞(CHO S)的结合的FACS测定。还显示了作为非特异性结合测试的抗小鼠二级抗体IgG(“二级抗体”)和作为细胞背景荧光量度的用未处理细胞进行的测试(“未染色的”)的结合。MFI＝平均荧光强度。N＝1/抗体。
图13：通过膜片钳评估了抗体对TRPV1辣椒素诱导的电流的抑制，其中抗体是16F1-1(253nM)、15D8-1(130nM)、17E11-1(110nM)和17E9-1(83nM)。使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)进行了全细胞记录。通过将细胞暴露于100nM辣椒素，测量了电流幅度(有和没有抗体的情况下)。将细胞暴露于缓冲液中的100nM辣椒素，随后是缓冲液60s，缓冲液中的抗体60s，然后缓冲液中的100nM辣椒素和抗体一起20s。用抗体+辣椒素刺激期间的峰幅度除以仅用辣椒素刺激期间的峰幅度。获得的值乘以100以获得抗体+辣椒素刺激期间的细胞响应，作为对照响应(仅辣椒素)的百分比。数据呈现为平均值±SEM。N＝3/抗体。
图14：FLIPR(荧光成像读板器)测定抗体15D8-1、16F1-1、17E9-1、17E11-1、41B5-1和46B7-1对TRPV1介导的辣椒素诱导的Ca2+摄取的抑制。x轴显示抗体浓度(nM)，y轴显示荧光率([辣椒素添加后某一时间的荧光]-[辣椒素添加前的荧光])。N＝1/数据点。每种抗体的计算的IC50值显示在图中。
图15：Ca2+成像用于测量抗体对表达TRPV1的CHO细胞中hTRPV1热响应(45℃)的抑制活性。使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲，这些细胞用具有荧光能力的显微镜观察，如别处所述。使用了商业微流体装置Biopen将抗体递送至细胞。热导致钙离子通过TRPV1通道流入细胞中，并使用细胞内的钙指示剂测量流入。施加了两个热脉冲，第二个是在抗体(15D8-1或17E11-1)或媒介物存在的情况下。计算了抗体和媒介物两者的第二峰幅度与第一峰幅度的比率，并在处理之间进行了比较。采用单因素方差分析(ANOVA)进行了统计学分析。数据呈现为平均值±SEM。分别对于15D8-1、17E11-1和媒介物，N＝6、6和10。
图16：Ca2+成像用于测量抗体对表达TRPV1的CHO细胞中hTRPV1热响应(45℃)的抑制活性。使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲，这些细胞用具有荧光能力的显微镜观察，如别处所述。使用了商业微流体装置Biopen将抗体递送至细胞。热导致钙离子通过TRPV1通道流入细胞中，并使用细胞内的钙指示剂测量流入。施加了两个热脉冲，第二个是在抗体(41B5-1或46B7-1)或媒介物存在的情况下。计算了抗体和媒介物两者的第二峰幅度与第一峰幅度的比率，并在处理之间进行了比较。采用单因素方差分析(ANOVA)进行了统计学分析。数据呈现为平均值±SEM。分别对于41B5-1、46B7-1和媒介物，N＝9、7和10。
实施例：
实施例1-肽和抗体的生成和测试
材料与方法
化学物质
细胞培养基(DMEM/Ham's F12，含有谷氨酰胺和Ham's F12)、胎牛血清和Accutase均购自PAA公司。博莱霉素购自英杰公司(Invitrogen)。对照抗体(兔丙种球蛋白-RRID：AB_2532177-目录号31887)购自赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific)。Mavatrep和AMG517均购自MedChemExpress公司。所有其他化学物质均购自西格玛公司(Sigma)。使用了以下缓冲液：F：140mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4，G：120mM KCl、2mM MgCl2、10mM HEPES、10mM EGTA，pH 7.2。H：50mM Tris、100mMNaCl、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.01％Triton X-100和1mM DTT。
细胞培养
在补充有10％胎牛血清(FBS)、博莱霉素(350μg/ml)和杀稻瘟菌素(5μg/ml)的培养基(DMEM/F12，含有谷氨酰胺)中培养了具有四环素调节的hTRPV1(人TRPV1)表达系统(T-REx)的贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。使用前18-24小时，将细胞在补充有10％FBS和强力霉素(1μg/ml)的培养基中孵育，以诱导hTRPV1表达。
抗体开发
对于用于抗体生成的每个表位(肽)，合成并纯化了包括额外的一个或多个半胱氨酸残基的合成肽。这些合成肽序列如下所列：SEQ ID NO:16(OTV3)、SEQ ID NO:17(OTV4)、SEQ ID NO:18(OTV5)、SEQ ID NO:19(OTV6)、SEQ ID NO:20(OTV7)、SEQ ID NO:21(OTV8)、SEQ ID NO:22(OTV9)、SEQ ID NO:23(OTV10)、SEQ ID NO:24(OTV11)、SEQ ID NO:25(OTV12)、SEQ ID NO:26(OTV13)、SEQ ID NO:27(OTV14)和SEQ ID NO:28(OTV15)。
对于线性表位(肽)(SEQ ID NO:16(OTV3)、SEQ ID NO:17(OTV4)、SEQ ID NO:19(OTV6)、SEQ ID NO:20(OTV7)、SEQ ID NO:21(OTV8)、SEQ ID NO:22(OTV9)、SEQ ID NO:23(OTV10)、SEQ ID NO:24(OTV11)、SEQ ID NO:25(OTV12)、SEQ ID NO:26(OTV13))，将这些肽(表位)通过末端半胱氨酸残基与钥孔血蓝蛋白(KLH)连接。对于环状表位(肽)(SEQ ID NO:18(OTV5)、SEQ ID NO:27(OTV14)和SEQ ID NO:28(OTV15))，然后将这些肽(表位)经由炔丙基基团与钥孔血蓝蛋白(KLH)连接。KLH连接的表位(肽)用于通过免疫无特定病原体(SPF)兔随后注射KLH连接的肽来产生多克隆抗体。
通过固相肽合成(SPPS)和加帽步骤产生肽。通过氧化末端半胱氨酸进行环化，从而在肽端之间形成二硫桥。通过将半胱氨酸上的SH-基团与KLH上的NH2-基团偶联，将线性肽与KLH缀合。使用肽上的炔丙基基团和KLH上的叠氮化物通过点击化学缀合环状肽。使用蛋白质G柱纯化抗体，随后针对肽进行亲和纯化。
对抗体进行亲和纯化并进行ELISA测试。ELISA测试表明，当肽固定在表面上时，抗体能够结合它们各自的肽(即，用于免疫兔以产生相关抗体的各自的肽)(数据未示出)。
合成肽和多克隆抗体两者的生成由Innovagen AB公司(隆德，瑞典)进行。
电生理学
电生理学膜片钳记录-OTV4、OTV5和OTV12
使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，哥德堡，瑞典)与Axopatch 200B(分子装置公司，美国)膜片钳放大器一起进行了全细胞记录。如上所述，细胞是贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。浴溶液和移液管溶液(硼硅酸盐玻璃毛细管，i.d.0.86mm；GC150F-7.5，哈佛仪器有限公司(Harvard Apparatus Ltd))分别含有缓冲液F和G。将细胞钳位在-60mV，并且以10kHz的采样频率记录电流信号并将其以2kHz进行低通滤波。使用数字/模拟采样(Axon Digidata 1550)和采集软件(Clampex 10.7版，分子装置公司)获取膜片钳记录。在测试OTV4抗体、OTV5抗体、OTV12抗体、AMG 517、Mavatrep和对照抗体(赛默飞世尔公司#31887)的实验中，通过将细胞暴露于辣椒素，测量了电流幅度(有和没有抗体或小分子(小分子是AMG 517和Mavatrep)的情况下)。将细胞暴露于缓冲液F中的100nM辣椒素约20s，随后是缓冲液F 60s，缓冲液F中的抗体(或小分子)60s，然后缓冲液F中的100nM辣椒素和抗体(或小分子)一起约20s。
从分析中排除了封接电阻在处理期间发生很大变化的测量值。
电生理学膜片钳-数据分析-OTV4、OTV5和OTV12
对于所有测量值，用抗体+辣椒素刺激期间记录的峰幅度除以用辣椒素刺激期间记录的峰幅度。在来自至少两个不同细胞培养皿的细胞上进行测量。每个数据点(n)代表单个细胞。采用单因素方差分析结合Dunnett事后检验(该检验对每种抗体与对照抗体进行比较)进行了统计学分析。p<0.05被认为是统计学显著的。使用Shapiro-Wilk检验评估了正态性。数据呈现为平均值±SEM。
用于评估辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制的钙成像方法
将表达hTRPV1的CHO细胞与4.4μM的钙指示剂Fluo-3 AM在37℃下一起孵育30min，之后洗涤，然后与溶解在PBS中的各种浓度的抗体(OTV4 n＝12、OTV7 n＝12、OTV9 n＝12、OTV12 n＝11、OTV13 n＝11、或对照抗体n＝12(赛默飞世尔公司#31887))在室温下一起孵育1h。然后在将1μM辣椒素和150μM Ca2+应用于覆盖细胞的抗体溶液之前和之后，通过使用读板器(CLARIOstar，BMG实验室科技公司(BMG Labtech))测量荧光强度来监测细胞内的钙含量。由在那些先前与抗体一起孵育的样品中的辣椒素引起的总钙摄取相对于仅由辣椒素激活引起的钙摄取(即辣椒素+钙)(即，没有先前与抗体孵育)进行归一化。数据表示为平均值±SEM。使用Kruskal-Wallis检验随后是Dunn多重比较确定了统计学显著性。
成像
热响应的钙成像
为了测量抗体对hTRPV1热响应(42℃)的影响，使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲。如上所述，细胞是贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。使用了商业微流体装置BiopenPrime(Fluicell AB公司)将抗体递送至细胞。热增加导致钙离子流入的hTRPV1通道的打开概率。使用钙指示剂Fluo-3测量了该流入。实验在与细胞生长相同的玻璃底皮氏培养皿(50mm未包被，马迪克公司(MatTek))中进行。包括Fluo-3 AM孵育在内的所有细胞实验均使用DMEM/F-12(不含酚红的HEPES细胞培养基)(吉博科公司(Gibco))进行。“AM”酯最初附接到Fluo-3指示剂上，使其具有细胞渗透性。一旦添加到细胞培养基中，Fluo-3 AM就会进入细胞，并且“AM”酯部分被切割，从而将Fluo-3指示剂留在细胞内。Fluo-3指示剂本身不具有细胞渗透性，因此它保留在细胞内。
共聚焦显微镜
使用装有双重Calypso激光器(科博特公司(Cobolt)，索尔纳，瑞典)的Bio-RadMRC 1024共聚焦装置对细胞进行成像，该装置附接到Nikon Diaphot 200倒置显微镜和Nikon Plan Apo 20x干物镜(N.A.0.75，尼康公司(Nikon)，东京，日本)上。使用的激发波长为491nm(Fluo-3)，并且通过522nM滤光片收集发射光。获取20x物镜的全视图的图像。帧率为每7秒一张图像，并且像素分辨率为1024×1024。
热探针
使用激光加热系统将所选细胞周围的温度局部提高到42℃。激光加热系统由Fluicell AB公司内部制造。该光学局部加热系统基于由20A台式电源(ARO-4320，阿罗约设备公司(Arroyo Instruments))驱动的CW 4W 1470-nm半导体二极管激光器(4PN-106，Seminex公司，美国)。其通过105μm芯、0.22NA、宽带光纤(M63L01，托尔实验室公司(Thorlabs))向样品(在我们的案例中为一组细胞)递送局部光束。光纤与5mm光纤套管(CFMLC21L05，105μm，0.22NA，托尔实验室公司)耦合，因此可以精确定位在皮氏培养皿中的任何所需位置。
一束1470nm辐射的窄光束从光纤尖端射出，在其路径内引起水的局部加热。加热程度由通过激光器的电流设置调制的光束强度以及光纤尖端与样品之间的距离决定。在这项研究中，对电流和距离进行了优化，以实现42℃的样品温度。使用探测荧光响应的流体装置(Biopen，Fluicell AB公司)，使用先前描述的技术(Wegrzyn,I.等人.An optofluidictemperature probe[光流体温度探针].传感器(瑞士)(2013),13(4),4289-4302,doi:10.3390/s130404289)，校准了距离、施加电流和温度之间的关系。
Biopen
使用了Biopen Prime(Fluicell AB公司)将抗体递送至细胞。Biopen是一种独立的微流体装置，可以使用显微操作器容易地定位，使得尖端可以与皮氏培养皿中所选的一组细胞相邻对齐，从而在不污染周围环境的情况下局部递送化合物。Biopen将递送的溶液被加载到Biopen上的孔中，以最大限度地减少化合物消耗。溶液之间的切换由专用软件控制。
热响应的钙成像-记录
成像前30min，将细胞培养基更换为含有36μM Fluo-3-AM(F1242，赛默飞世尔公司)的培养基，并将样品在RT下孵育30min，然后洗涤并提供含有Ca2+的新鲜生长培养基(DMEM/F-12(不含酚红的HEPES细胞培养基)(吉博科公司))。使用显微操作器将Biopen定位在一组细胞的上方。热探针位于培养皿底部上方10μm处，并且距离Biopen出口大约100μm。为了确定哪些细胞暴露于来自Biopen的溶液递送，递送了磺基罗丹明B的初始脉冲。在磺基罗丹明B荧光下降后，将细胞光学加热7s(42℃)并测量来自Fluo-3的荧光响应(细胞响应，峰#1)。随后，将抗体溶液(OTV4、OTV5、OTV12抗体或对照抗体(赛默飞世尔公司#31887))或小分子溶液(2μM Mavatrep或2μM AMG-517)递送90s，并在施加的最后7s期间施加第二个热脉冲(细胞响应，峰#2)。
热响应的钙成像的数据分析
在Image J和GraphPad Prism软件中进行了数据分析。磺基罗丹明B脉冲使Biopen溶液递送到达的细胞可视化，由此确定将包含在测量中的细胞。测量这些细胞的荧光强度并在每个时间点取平均值，以获得在一个实验中刺激的细胞的平均曲线。测量峰#1的高度以确定不存在抗体时的热响应，并且测量峰#2的高度以确定存在抗体时的热响应。峰#2值除以峰#1以获得比率。将OTV4、OTV5和OTV12抗体的峰的比率与对照抗体进行了比较。
采用单因素方差分析结合Dunnett事后检验进行了统计学分析。p<0.05被认为是统计学显著的。使用Shapiro-Wilk检验评估了正态性。数据呈现为平均值±SEM。n等于实验数量，这些实验平均含有5-10个细胞。
结果与讨论
如上所述开发了TRPV1的模式选择性拮抗抗体，命名为抗体OTV4、OTV5和OTV12(即，通过用所述KLH连接的OTV4、OTV5和OTV12免疫兔)。这些模式选择性抗体能够优先抑制TRPV1的辣椒素激活，而不是TRPV1的热激活，从而减少或避免已用以前的小分子拮抗剂观察到的与热相关的副作用。
OTV4、OTV5和OTV12抗体的模式选择性作用分别通过对TRPV1的辣椒素激活和热激活的抑制程度进行比较来确定。将活性特征与小分子拮抗剂Mavatrep(Manitpisitkul P等人.Scand.J.Pain[斯堪的纳维亚疼痛杂志](2018),18(2):151-164)和AMG-517(Gavva,N.R.等人.Pain[疼痛](2008),136(1-2),202-210)的那些活性特征进行比较(图1)。使用全细胞膜片钳记录评估了辣椒素诱导的通道活性的抑制，并使用荧光测量细胞内Ca2+通量评估了对热诱导的活性的影响，其中使用BiopenR(Fluicell AB公司)系统递送抗体溶液。
在膜片钳实验(其评估了辣椒素诱导的TRPV1激活)期间，细胞暴露于辣椒素，随后是抗体(或小分子)，最后是在抗体(或小分子)存在下的辣椒素。在荧光实验(其评估了热诱导的TRPV1激活)期间，细胞暴露于热(42℃)，随后是抗体(或小分子)，最后是在抗体(或小分子)存在下的热(42℃)。
抗体对热和辣椒素的抑制水平可见于图1，其中与用于评估辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制的抗体浓度相比，抗体以高5倍的浓度使用，用于评估热诱导的激活的抑制，而Mavatrep和AMG517以等浓度进行评估。
OTV4抗体在533nM处引发对辣椒素诱导的TRPV1激活的26.5％的抑制，而在2.7μM处引发对温度(热)诱导的TRPV1激活的-4.1％的抑制(图1)。
OTV5抗体在13.3nM处引发对辣椒素诱导的TRPV1激活的62.4％的抑制，而在67nM处引发对温度(热)诱导的TRPV1激活的10.0％的抑制(图1)。
OTV12抗体在13.3nM处引发对辣椒素诱导的TRPV1激活的34.1％的抑制，而在67nM处引发对温度(热)诱导的TRPV1激活的-12.8％的抑制(图1)。
Mavatrep在100nM处引发对辣椒素诱导的TRPV1激活的100％的抑制，而在100nM处引发对温度(热)诱导的TRPV1激活的89.3％的抑制(图1)。
AMG517在100nM处引发对辣椒素诱导的TRPV1激活的100％的抑制，而在100nM处引发对温度(热)诱导的TRPV1激活的88.8％的抑制(图1)。
对照抗体不引发对辣椒素或温度诱导的TRPV1激活的抑制(图1)。
评估的所有抗体浓度可见于图2(与辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制相关)和图3(与温度(热)诱导的TRPV1激活的抑制相关)。
总之，所有三种抗体(OTV4、OTV5和OTV12抗体)通过如下展示出模式选择性活性特征：即使在高5倍的抗体浓度下进行热激活评估，与热激活相比，引发对辣椒素激活的更高的抑制，其中OTV5的差异最大。相比之下，Mavatrep和AMG517在100nM处均以接近相等的水平抑制辣椒素和热激活。这清楚地表明，OTV4、OTV5和OTV12抗体不仅仅是简单的TRPV1拮抗剂；它们选择性抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。OTV4和OTV12抗体、尤其是OTV5抗体，是有前景的TRPV1靶向疼痛疗法的新候选物，并且目前正在作为药物候选物进行研究。这些不仅是第一批治疗抗TRPV1抗体，它们还将是有史以来第一批为离子通道开发的治疗抗体。本发明的数据还证实，对应于(或基本上对应于)用于生成OTV4、OTV5和OTV12抗体的表位(肽)氨基酸序列的TRPV1上的表位是有用的靶向(即，生成针对其的抗体)表位，以便鉴定如本文所述的模式选择性抗体。
除了含有OTV4和OTV12多克隆抗体的数据外，图4还额外显示出OTV7、OTV9和OTV13多克隆抗体能够显著抑制辣椒素诱导的TRPV1激活。对于图4的实验，不是通过膜片钳方法评估辣椒素诱导的TRPV1激活，而是利用了钙成像，并且图4显示出这些OTV抗体能够抑制辣椒素诱导的钙摄取。将表达hTRPV1的细胞与4.4μM Fluo-3 AM一起孵育30min。之后洗涤细胞，并将其用溶解在不同浓度的PBS中的抗体孵育1h。使用CLARIOstar(BMG实验室科技公司)微读板器在应用1μM辣椒素和150μM Ca2+之前和之后测量了荧光强度。
据信，OTV7、OTV9和OTV13多克隆抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。如上所述，发明人还生成了多克隆抗体OTV3、OTV6、OTV8、OTV10、OTV11、OTV13、OTV14和OTV15。据信，这些抗体还优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
从以上可明显看出，发明人已经鉴定了对应于(或基本上对应于)TRPV1上的表位的某些肽序列(表位序列)，这些表位对于用抗体靶向非常有用，以便实现对TRPV1的抑制。特别地，发明人已经鉴定了TRPV1上的表位，这些表位对于用抗体靶向非常有用，以便实现对辣椒素诱导的TRPV1激活的优先抑制，而不是热诱导的TRPV1激活。具有这种选择性以抑制TRPV1的辣椒素轴的抗体在治疗上将是有利的，因为避免(或减少)同时抑制TRPV1的热轴将避免(或减少)副作用，例如用其他TRPV1抑制剂(如本文别处所讨论)观察到的体温过高或热感觉丧失。
实施例2-单克隆抗体(命名为OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab-3的抗体)的生成和测试
材料与方法
使用杂交瘤技术产生单克隆抗体(小鼠IgG)
用与钥孔血蓝蛋白(KLH)连接的SEQ ID NO:18(OTV5)的环状肽(KLH连接的肽如上文实施例1中所述)免疫小鼠。使用ELISA评估了免疫反应。在免疫过程之后，基于ELISA和/或FACS血清筛选来选择小鼠，并从小鼠中提取脾细胞并将其与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞。通过ELISA和/或FACS筛选杂交瘤以获得阳性克隆(即，产生与靶标结合的抗体)。在该筛选之后，对所选杂交瘤进行亚克隆，并使用ELISA和/或FACS进行另一轮筛选。然后使用亚克隆的杂交瘤产生单克隆抗体并纯化抗体。使用ELISA和/或FACS测试纯化的抗体的结合特性。鉴定了三种单克隆抗体：OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3。
小鼠杂交瘤IgG的克隆和测序
从小鼠杂交瘤中制备了RNA，从中合成了cDNA。将cDNA的可变轻(VL)和可变重(VH)区域分别扩增并克隆到标准克隆载体中。阳性克隆的鉴定通过菌落PCR，随后是凝胶电泳进行。VL和VH DNA及氨基酸序列获自阳性克隆。
抗体OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3的序列在本文表C、B和A中列出。
OT-Ab1的IgG类型是IgG2b/κ，OT-Ab2是IgG1/κ，并且OT-Ab3是IgG1/κ。
使用荧光激活细胞分选(FACS)测定抗体与表达TRPV1的CHO细胞的结合
对于单克隆抗体制剂，CHO-TRPV1细胞与50μl抗体制剂(血清、杂交瘤上清液或纯化的单克隆抗体)在4℃下一起孵育30min，随后与50μl二级抗体(抗小鼠IgG，其与荧光探针缀合)在4℃下一起孵育30min。阴性对照仅为二级抗体(50μL样品中10mg/mL的抗小鼠IgG)。通过测量来自细胞的荧光信号评估了结合，并将其报告为平均荧光强度(MFI)。CHO-TRPV1细胞是贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，具有四环素调节的hTRPV1(人TRPV1)表达系统(T-REx)，如别处所述。使用强力霉素诱导TRPV1的表达(表示为+TRPV1)。未诱导的细胞表示为-TRPV1。
通过膜片钳测量辣椒素诱导的电流或NADA诱导的电流
使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)与Axopatch 200B(分子装置公司，美国)膜片钳放大器一起进行了全细胞记录。使用移液管(i.d.0.86mm；GC150F-7.5，哈佛仪器有限公司；装有120mM KCl、2mM MgCl2、10mM HEPES、10mM EGTA、pH 7.2，尖端电阻3-6MOhm)，将细胞(在140mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mMMgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4中)钳位在-60mV，并且以10kHz的采样频率记录电流信号并将其以2kHz进行低通滤波。使用数字/模拟采样(Axon Digidata 1550)和采集软件(Clampex 10.7版，分子装置公司)获取膜片钳记录。通过将细胞暴露于100nM辣椒素、300nM辣椒素、或1μM NADA，测量了电流幅度(有和没有抗体的情况下)。对于测试100nM辣椒素或1μM NADA的效果的实验，首先用单独的辣椒素(或NADA)处理细胞两次，从而产生峰1和2，然后用抗体处理，再然后是抗体与辣椒素(或NADA)一起处理，从而产生峰3，随后是单独的辣椒素(或NADA)处理，从而产生峰4。然后将效果计算为(1-((峰3)/((峰2+峰4)/2)))*100。这种计算效果的方法已在文献中进行描述(Nikolaev,M.V.等人.TRPV1activationpower can switch an action mode for its polypeptide ligands.[TRPV1激活能力可以改变其多肽配体的作用模式]PLoS One[公共科学图书馆·综合]12,1-16,2017)。对于测试300nM辣椒素的效果的实验，首先用单独的辣椒素处理细胞两次，从而产生峰1和2，然后用抗体或媒介物处理，再然后是抗体或媒介物与辣椒素一起处理，从而产生峰3，随后是单独的辣椒素处理，从而产生峰4。然后将效果计算为(1-((峰3Ab/峰2Ab)/(峰3veh/峰2veh)))*100。
使用Ca2+成像测量热诱导的电流
为了测量抗体对hTRPV1热响应(45℃)的影响，使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲。使用了商业微流体装置Biopen Prime(Fluicell AB公司，瑞典)将抗体递送至细胞。热增加导致钙离子流入的hTRPV1通道的打开概率。使用钙指示剂Fluo-3测量了该流入。实验在与细胞培养相同的玻璃底皮氏培养皿(50mm未包被，马迪克公司)中进行。如上所述，细胞是表达TRPV1的贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。包括Fluo-3 AM孵育在内的所有细胞实验均使用缓冲液(140mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4)进行。使用装有双重Calypso激光器(科博特公司，索尔纳，瑞典)的Bio-Rad MRC1024共聚焦装置对细胞进行成像，该装置附接到Nikon Diaphot 200倒置显微镜和NikonPlan Apo 20x干物镜(N.A.0.75，尼康公司，东京，日本)上。在该实施例中，如下确定了抗体的作用：首先对细胞进行热脉冲，随后冷却，然后施用抗体或小分子和热脉冲的组合，随后冷却。使用与抗体相同的方案将小分子Mavatrep或AG517直接应用于浴溶液中。通过确定抗体(或小分子抑制剂AMG517或Mavatrep)对热诱导的钙离子流入细胞中的影响，评估了抗体(或小分子抑制剂AMG517或Mavatrep)对热诱导的TRPV1激活的影响。
峰幅度表示使用钙指示剂Fluo-3测量的钙流入细胞。
计算了抗体和媒介物两者的第二峰幅度与第一峰幅度的比率。通过对抗体的上述比率和媒介物的比率进行比较，计算了抑制百分比。抑制％为(1-((峰2Ab/峰1Ab)/(峰2veh/峰1veh)))*100。
显微镜辅助测定抗体与活细胞的结合
为了通过显微镜证明OT-Ab1与活细胞的结合，将表达TRPV1的活CHO细胞与OT-Ab1一起孵育1小时，随后固定在甲醛溶液中，用荧光二级抗体染色，并用Hoechst复染以使细胞核可视化。用配备荧光能力的共聚焦显微镜观察细胞。结合被评估为位于细胞膜的荧光信号。
结果与讨论
TRPV1是一种离子通道，它是TRP家族的成员，由于其细胞外区域小，故被认为很难用抗体接近。尽管离子通道作为药物靶标具有无可辩驳的重要性，但作为抗体靶标的离子通道还没有得到充分利用。在本发明的研究中，开发了三种模式选择性单克隆抗体(mAb)，除了是针对TRPV1开发的第一批抑制mAb之外，据我们所知，这些还是针对离子通道开发的功能最复杂的抗体。这些抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
使用杂交瘤技术产生了三个针对人TRPV1、OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3的小鼠单克隆抗体的实施例。使用FACS，采用具有诱导型hTRPV1表达的CHO细胞系，确定了与hTRPV1结合的特异性。OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3与表达hTRPV1的细胞结合，但不与不表达hTRPV1的细胞结合，表明了与hTRPV1的强特异性结合(图5)。
以几种不同的方式评估了OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3对hTRPV1激活的影响。膜片钳方法用于测量抗体对表达hTRPV1的CHO细胞中hTRPV1辣椒素响应的抑制活性。测试的一个方面是在100nM或300nM的辣椒素浓度下抑制辣椒素诱导的电流的倾向。OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3抑制了辣椒素诱导的电流(图6)。hTRPV1拮抗剂AMG517和Mavatrep(阳性对照)完全抑制了辣椒素诱导的电流(图6)。OT-Ab1对辣椒素诱导的电流(100nM辣椒素)的抑制是剂量依赖性的，其中观察到OT-Ab1浓度增加时抑制增加。剂量和效果之间的关系是统计学显著的(图7)。在300nM辣椒素下也证实了122nM OT-Ab1对辣椒素诱导的电流的抑制(图8)。
膜片钳方法还用于测量OT-Ab1对表达hTRPV1的CHO细胞中hTRPV1 NADA响应的抑制活性。在1μM NADA和两个浓度的OT-Ab1下观察到抗体OT-Ab1对hTRPV1NADA诱导的电流的剂量依赖性抑制，并且剂量和效果之间的关系是统计学显著的(图9)。NADA(N-花生四烯基多巴胺)在科学文献中被描述为一种强大的天然TRPV1激动剂。它属于内源性大麻素家族。据表明，NADA在中枢和周围神经系统的伤害感受和炎症中起重要作用。
Ca2+成像用于测量OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3对表达hTRPV1的CHO细胞中hTRPV1热响应的抑制活性。在该实施例中，小分子拮抗剂AMG517和Mavatrep抑制了热诱导的Ca2+摄取约75％，而OT-Ab1、OT-Ab2和OT-Ab3不抑制热诱导的Ca2+摄取(图10)。
还通过荧光显微镜评估了OT-Ab1与活细胞上的TRPV1结合的能力，并且发现OT-Ab1与表达TRPV1的活细胞结合，在细胞膜上结合(数据未示出)。
抑制辣椒素或NADA激活hTRPV1，而不抑制热激活hTRPV1的能力表明这些抗体显示出模式选择性药理学，这是对于临床上可接受且有用的治疗剂的高度期望的特性。
在本发明的研究中，已经开发了靶向hTRPV1的模式选择性单克隆抗体，hTRPV1是一种临床上重要的靶标，其在使用小分子的方法中遭遇失败。这些抗体是有前景的TRPV1靶向疼痛疗法的新候选物，并且目前正在作为药物候选物进行研究。
实施例3-单克隆抗体(命名为32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、 44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1的抗 体)的生成和测试
材料与方法
使用杂交瘤技术产生单克隆抗体(小鼠IgG)
用与钥孔血蓝蛋白连接的SEQ ID NO:16的线性肽(肽OTV3)免疫小鼠，或用与钥孔血蓝蛋白(KLH)连接的SEQ ID NO:17的线性肽(肽OTV4)(KLH连接的肽如上文实施例1中所述)免疫小鼠。使用ELISA评估了免疫反应。在免疫过程之后，基于ELISA和/或FACS血清筛选来选择小鼠，并从小鼠中提取脾细胞并将其与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞。通过ELISA和/或FACS筛选杂交瘤以获得阳性克隆(即，产生与靶标结合的抗体)。在该筛选之后，对所选杂交瘤进行亚克隆，并使用ELISA和/或FACS进行另一轮筛选。然后使用亚克隆的杂交瘤产生单克隆抗体并纯化抗体。使用ELISA和/或FACS测试纯化的抗体的结合特性。鉴定了16种单克隆抗体：32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1。用于生成32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1和46D9-1抗体的肽(免疫原)是SEQ ID NO:16的肽(OTV3)，并且如上所述，该肽与钥孔血蓝蛋白连接。用于生成12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1抗体的肽(免疫原)是SEQ ID NO:17的肽(OTV4)，并且如上所述，该肽与钥孔血蓝蛋白连接。每个抗体名称中的后缀“-1”仅表示这些抗体中的每一种是来自各自亲本杂交瘤的子代克隆(亲本杂交瘤具有相同的名称，没有“-1”后缀，例如32C8是32C8-1抗体(子代克隆)的亲本杂交瘤)。
对于基于OTV4和基于OTV5的纯化的抗体，储存缓冲液是PBS(2.7mM KCl、1.5mMKH2PO4、137mM NaCl、8mM Na2HPO4，pH 7.2)。
对于基于OTV3的纯化的抗体，储存缓冲液是PBS-Tween(0.02％Tween 80、2.7mMKCl、1.5mM KH2PO4、137mM NaCl、8mM Na2HPO4，pH 7.2)。
小鼠杂交瘤IgG的克隆和测序
从小鼠杂交瘤中制备了RNA，从中合成了cDNA。将cDNA的可变轻(VL)和可变重(VH)区域分别扩增并克隆到标准克隆载体中。阳性克隆的鉴定通过菌落PCR，随后是凝胶电泳进行。VL和VH DNA及氨基酸序列获自阳性克隆。
抗体32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1的序列在本文表E-T中列出。
15D8-1、17E11-1和12G6-1的IgG类型是IgG1/κ。16F1-1的IgG类型是IgG2a/κ。17E9-1和12C9-1的IgG类型是IgG2b/κ类型。18E10-1的IgG类型是IgG2c/κ。
细胞培养
在补充有10％胎牛血清(FBS)、博莱霉素(350μg/ml)和杀稻瘟菌素(5μg/ml)的培养基(DMEM/F12，含有谷氨酰胺)中培养了具有四环素调节的hTRPV1(人TRPV1)表达系统(T-REx)的贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。使用前18-24小时，将细胞在补充有10％FBS和强力霉素(1μg/ml)的培养基中孵育，以诱导hTRPV1表达。
HEK293细胞和CHO S细胞在标准细胞培养条件下生长。
使用荧光激活细胞分选(FACS)测定抗体与表达TRPV1的CHO细胞的结合
对于用于FACS分析的单克隆抗体制剂，将CHO TRPV1细胞、HEK 293细胞或CHO S细胞与50μl抗体制剂(血清、杂交瘤上清液或纯化的单克隆抗体或对照)在室温下一起孵育40min，随后与100μl二级抗体(抗小鼠IgG，其与荧光探针缀合)在室温下一起孵育30min。通过测量来自细胞的荧光信号评估了结合，并将其报告为平均荧光强度(MFI)。CHO TRPV1细胞是贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，具有四环素调节的hTRPV1(人TRPV1)表达系统(T-REx)，如别处所述。使用强力霉素诱导TRPV1的表达。CHO S细胞和HEK 293细胞用作阴性对照细胞。CHO S细胞是一种高密度、悬浮适应的细胞类型，用作高水平表达重组蛋白的工具，其中TRPV1的基础表达很少或没有。HEK 293细胞是广泛用于细胞生物学的人胚胎肾293细胞，其中TRPV1的基础表达很少或没有。
阴性对照仅为二级抗体(50μL样品中10mg/mL的抗小鼠IgG)。非特异性结合的另一阴性对照是小鼠IgG。另一对照是未染色的CHO TRPV1细胞，它们是未经任何处理的细胞，并因此提供了背景荧光量度。
通过膜片钳测量辣椒素诱导的电流
使用用于膜片钳记录的微流体装置(Dynaflow，Cellectricon AB公司，瑞典)与Axopatch 200B(分子装置公司，美国)膜片钳放大器一起进行了全细胞记录。使用移液管(装有缓冲液B：120mM KCl、2mM MgCl2、10mM HEPES、10mM EGTA，pH 7.2)，将细胞(在缓冲液A：140mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4中)钳位在-60mV，并且以10kHz的采样频率记录电流信号并将其以2kHz进行低通滤波。使用数字/模拟采样(Axon Digidata 1550)和采集软件(Clampex 10.7版，分子装置公司)获取膜片钳记录。
通过将细胞暴露于100nM辣椒素，测量了电流幅度(有和没有抗体的情况下)。将细胞暴露于缓冲液A中的100nM辣椒素20s，随后是缓冲液A 60s，缓冲液A中的抗体60s，然后缓冲液A中的100nM辣椒素和抗体一起20s。
数据分析如下：对于所有测量值，用抗体+辣椒素刺激期间的峰幅度除以仅用辣椒素刺激期间的峰幅度。获得的值乘以100以获得抗体+辣椒素刺激期间的细胞响应，作为对照响应(仅辣椒素)的百分比。
使用Ca2+成像测量热诱导的电流
为了测量抗体对hTRPV1热响应(45℃)的影响，使用了光学加热系统向细胞递送热脉冲。使用了商业微流体装置Biopen Prime(Fluicell AB公司，瑞典)将抗体递送至细胞。热增加导致钙离子流入的hTRPV1通道的打开概率。使用钙指示剂Fluo-3测量了该流入。实验在与细胞培养相同的玻璃底皮氏培养皿(50mm未包被，马迪克公司)中进行。如上所述，细胞是表达TRPV1的贴壁中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。包括Fluo-3 AM孵育在内的所有细胞实验均使用HEPES缓冲液(140mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4)进行。使用装有双重Calypso激光器(科博特公司，索尔纳，瑞典)的Bio-RadMRC 1024共聚焦装置对细胞进行成像，该装置附接到Nikon Diaphot 200倒置显微镜和Nikon Plan Apo 20x干物镜(N.A.0.75，尼康公司，东京，日本)上。在该实施例中，如下确定了抗体的作用：首先对细胞进行热脉冲，随后冷却，然后施用抗体或小分子和热脉冲的组合，随后冷却。通过确定抗体对热诱导的钙离子流入细胞中的影响，评估了抗体对热诱导的TRPV1激活的影响。
峰幅度表示使用钙指示剂Fluo-3测量的钙流入细胞。
计算了抗体和媒介物两者的第二峰幅度与第一峰幅度的比率。通过对抗体的上述比率和媒介物的比率进行比较，计算了抑制百分比。抑制％为(1-((峰2Ab/峰1Ab)/(峰2veh/峰1veh)))*100。
使用荧光成像读板器(FLIPR)测量辣椒素诱导的活性
在黑色透明底部96孔微孔板(康宁公司(Corning ltd.))中培养具有诱导型TRPV1表达的CHO细胞，并诱导TRPV1表达。通过将细胞与HEPES缓冲液(140nM NaCl、5mM KCl、1mMCaCl2、1mM MgCl2、10mM HEPES、10mM D-葡萄糖，pH 7.4)中的4μM Fluo-3在室温下一起孵育30分钟，将细胞用Fluo-3 AM钙指示剂(赛默飞世尔公司，目录号F1242)加载。随后用HEPES缓冲液洗涤细胞以去除细胞外Fluo-3之后，将连续稀释的抗体添加到孔中。在抗体的存在下，在室温下孵育细胞4分钟。使用ClarioSTAR微读板器(BMG实验室科技公司)进行了荧光测量，其中在483nm处激发(带宽14nm)，在530处发射(带宽30nm)。首先测量基线荧光强度，然后将固定量的辣椒素(在HEPES缓冲液中)添加到每个孔中(以给出先前已确定的辣椒素浓度，该浓度代表所研究的细胞批次的辣椒素的EC50值，通常这种浓度在更低的nM范围内，例如10nM)，并且在某一时间后(几分钟内)进行第二次荧光强度测量。EC50是物质的浓度，它给出了生物过程的半最大响应，在这种情况下是TRPV1介导的Ca2+进入细胞。数据呈现为荧光率，其计算为添加辣椒素后某一时间的荧光减去辣椒素添加前测量的荧光。计算了测试抗体的IC50值。IC50值是所研究的生物过程中物质的半数最大抑制浓度，在这种情况下是辣椒素诱导的细胞TRPV1介导的Ca2+流入。
结果与讨论
在本发明的实施例描述的研究中，使用杂交瘤技术产生了针对人RPV1、32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1、46D9-1、12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1、18E10-1的16种小鼠单克隆抗体。使用FACS，采用具有诱导型hTRPV1表达的CHO细胞系，确定了与hTRPV1结合的特异性。来自亲本杂交瘤(32C8-1、33C9-1、34C11-1、40B10-1、41B5-1、43D6-1、44E8-1、46B7-1和46D9-1抗体均由其衍生)的杂交瘤上清液制剂与表达hTRPV1的细胞结合，但不与不表达hTRPV1的细胞结合，表明了与hTRPV1的强特异性结合(图11)。纯化的抗体12C9-1、12G6-1、15D8-1、16F1-1、17E11-1、17E9-1和18E10-1的制剂与表达hTRPV1的细胞结合，但不与不表达hTRPV1的细胞结合，表明了与hTRPV1的强特异性结合(图12)。
下文描述了某些抗体的进一步测试。
以几种不同的方式评估了15D8-1、16F1-1、17E9-1和17E11-1对hTRPV1激活的影响。膜片钳方法用于测量抗体对表达hTRPV1的CHO细胞中hTRPV1辣椒素响应的抑制活性。测试的一个方面是在100nM的辣椒素浓度下抑制辣椒素诱导的电流的倾向。抗体15D8-1(在130nM)、16F1-1(在253nM)、17E9-1(在83nM)和17E11-1(在110nM)在100nM辣椒素下抑制了辣椒素诱导的电流，并因此是TRPV1的辣椒素轴的拮抗剂(图13)。
我们使用FLIPR来确定抗体15D8-1、16F1-1、17E9-1、17E11-1、41B5-1和46B7-1抑制在表达hTRPV1的CHO细胞中TRPV1介导的辣椒素诱导的Ca2+摄取的能力。抑制功效可以用IC50值来表示，该值是所研究的生物过程中物质的半数最大抑制浓度，在这种情况下是细胞TRPV1介导的Ca2+流入。所有这些抗体在这方面都是抑制性的。根据数据，我们计算出15D8-1的近似IC50值为70nM，41B5-1为170nM，46B7-1为200nM，16F1-1为215nM，17E11-1为230nM，以及17E9-1为400nM(图14)。
还测试了抗体44E8-1、40B10-1、43D6-1抑制TRPV1的辣椒素轴的能力，并且这些抗体中的每一种都显示出对辣椒素轴的抑制作用(数据未示出)，即显示出对辣椒素诱导的TRPV1激活的抑制。
Ca2+成像用于测量15D8-1、17E11-1、41B5-1和46B7-1对表达hTRPV1的CHO细胞中hTRPV1热响应的抑制活性(图15和图16)。
当与媒介物对照15D8-1相比时，17E11-1和41B5-1并没有以统计学显著的方式抑制热诱导的Ca2+摄取。换言之，在抗体处理后，TRPV1热诱导的活性保持在大约100％(其中100％是媒介物的活性)(图15和图16)。因此，15D8-1、17E11-1和41B5-1不是TRPV1的热轴的拮抗剂。该实施例中的数据显示出抗体15D8-1、17E11-1和41B5-1优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
该实施例中描述的数据还显示出抗体46B7-1优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活，而不是热诱导的TRPV1激活。
优先抑制辣椒素激活hTRPV1，而不是热激活hTRPV1的能力表明了一种模式选择性药理学，这是对于临床上可接受且有用的治疗剂的高度期望的特性。
在本发明的研究中，已经开发了靶向hTRPV1的模式选择性单克隆抗体，hTRPV1是一种临床上重要的靶标，其在使用小分子的方法中遭遇失败。这些抗体是有前景的TRPV1靶向疼痛疗法的新候选物，并且目前正在作为药物候选物进行研究。
实施例4-单克隆抗体(命名为R4P1-C1的抗体)的生成
材料与方法
使用噬菌体展示技术产生单克隆抗体(IgG)
用于噬菌体展示的抗原混合物由3种不同的肽(OTV3、OTV4、OTV5)组成，每种肽经合成并且经由N-末端Cys与3种不同的载剂(BSA、OVA+KLH)缀合。因此，总共有九种不同的偶联物(即，OTV3+BSA、OTV3+OVA、OTV3+KLH、OTV4+BSA、OTV4+OVA、OTV4+KLH、OTV5+BSA、OTV5+OVA和OTV5+KLH)。BSA是牛血清白蛋白的缩写。OVA是卵清蛋白的缩写。KLH是钥孔血蓝蛋白的缩写。
肽序列如下：
OTV3：CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNS(SEQ ID NO:16)
OTV4：CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPACRPPDSSYNS(SEQ ID NO:17)
OTV5：(Pra-)CIEDGKNDSLPSESTSHRWRGPASRPPDSSYNSC(-CONH2)(SEQ ID NO:18)
使用的OTV3和OTV4肽是线性肽。使用的OTV5肽是环状肽。
生物淘选
用抗原混合物包被管，然后洗涤，封闭并再次洗涤。然后添加因暴露于载剂(BSA、OVA+KLH)而耗尽的噬菌体文库，随后孵育。然后再次洗涤管，并且用甘氨酸HCl洗脱噬菌体结合物，随后中和。将洗脱的噬菌体添加到大肠杆菌培养物中进行扩增，并收集经扩增的噬菌体用于另一轮生物淘选。在最后一次生物淘选后，通过ELISA测试了多克隆噬菌体。
多克隆噬菌体ELISA
将ELISA板用与载剂缀合的抗原或单独的载剂(对照)包被，随后洗涤，封闭，洗涤并添加来自生物淘选步骤的经扩增的洗脱的噬菌体。在额外的洗涤之后，使用抗噬菌体-HRP抗体检测结合的噬菌体。
单克隆噬菌体ELISA
在生物淘选步骤期间随机挑选单个大肠杆菌克隆并进行培养。制备并纯化含有噬菌体的上清液。将ELISA板用与载剂缀合的抗原或单独的载剂(对照)包被，随后洗涤，封闭，洗涤并添加纯化的噬菌体。在额外的洗涤之后，使用抗噬菌体-HRP抗体检测结合的噬菌体。
基因合成与亚克隆
如下制备载体构建(质粒)。化学合成了来自经由噬菌体展示鉴定的噬菌体克隆R4P1-C1的可变重(VH)和可变轻(VL)序列的cDNA，其中优化了哺乳动物在CHO细胞中的表达，然后将其亚克隆到哺乳动物细胞表达载体中，以获得人IgG1的重链(HC)和轻链(LC)的全长序列。
抗体R4P1-C1的序列在本文表U中列出。
该实施例中制备的R4P1-C1抗体的IgG类型是IgG1/κ。
单克隆抗体的表达和纯化
将质粒DNA瞬时共转染到CHO细胞中。14天后收集培养基，然后在蛋白质A/G柱上将重组抗体纯化到PBS缓冲液(pH 7.5)中。通过考马斯蓝染色的还原和非还原SDS-PAGE两者评估了纯度。
结果与讨论
该实施例描述了通过噬菌体展示产生单克隆抗体。在这种情况下使用的噬菌体文库是可商购的人原始LiAb-Fab文库(高度多样性为2x10E10个变体)。在4轮生物淘选和ELISA测试后，选择了80个克隆，并且在这组噬菌体克隆中鉴定了5个不同的序列，表示为R4P1-C1、#1、#2、#3和#4。通过ELISA测试了这些噬菌体克隆中的每一个与单独的肽OTV3、OTV4和OTV5中的每一种的结合，每种肽与BSA、OVA或KLH偶联(总共9种肽偶联物)。这是确保克隆特异性的重要确认步骤，因为由于其性质，噬菌体有时会非特异性结合。在ELISA测试(单克隆噬菌体ELISA测试)中，一个噬菌体Fab克隆R4P1-C1与所有三种肽(所有九种肽-载剂偶联物)特异性且强烈结合，而其他噬菌体Fab克隆似乎是非特异性结合物(见下表GG，所有噬菌体均以相同浓度进行测试)。
表GG
Figure BDA0003788864720001951
Figure BDA0003788864720001961

Claims (33)

1.一种与TRPV1结合的抗体，其中所述抗体与TRPV1的细胞外区域中的TRPV1结合，并且其中所述抗体优先抑制辣椒素诱导的TRPV1激活而不是热诱导的TRPV1激活。
2.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体与由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-656定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合。
3.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述抗体在由TRPV1(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基599-630、氨基酸残基599-606、氨基酸残基519-614、氨基酸残基599-622、氨基酸残基607-630、氨基酸残基615-630、氨基酸残基623-630、氨基酸残基631-643、氨基酸残基644-656或氨基酸残基610-620定义的区域中的表位上与TRPV1结合，或与由TRPV1的氨基酸残基599-601和残基653-655定义的TRPV1的区域中的TRPV1的表位结合。
4.如权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体在由氨基酸残基599-630定义的区域中的表位上与TRPV1结合。
5.如权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述抗体与分离的肽结合，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14，或包含与所述氨基酸序列相比具有1、2、或3个氨基酸取代或添加或缺失的序列。
6.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体与分离的肽结合，所述分离的肽包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28，或包含与所述氨基酸序列相比具有1、2、或3个氨基酸取代或添加或缺失的序列。
7.如权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中所述抗体与分离的肽结合，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28，或由与所述氨基酸序列相比具有1、2、或3个氨基酸取代或添加或缺失的序列组成。
8.如权利要求1至7中任一项所述的抗体，其中所述抗体与分离的肽结合，所述分离的肽由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17。
9.如权利要求5至8中任一项所述的抗体，其中所述分离的肽是线性肽或环状肽。
10.如权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区包含具有SEQ IDNO:448，优选地SEQ ID NO:449的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1。
11.如权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中
(i)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQID NO:78的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(ii)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:43的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:44的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:45的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:46的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(iii)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:105的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:106的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:107的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:108的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(iv)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:123的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:124的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:125的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:126的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:127的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:128的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(v)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:143的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:144的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:145的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:146的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:147的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:148的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(vi)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:184的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:186的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:187的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:188的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(vii)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:203的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:204的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:205的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:206的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:207的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:208的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(viii)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:223的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:224的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:225的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:226的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:227的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:228的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(ix)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:283的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:284的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:285的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:286的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:287的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:288的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(x)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:303的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:304的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:305的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:306的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:307的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:308的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；
(xi)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:323的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:324的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:325的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:326的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:327的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:328的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列；或
(xii)所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:363的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:364的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:365的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:366的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:367的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:368的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列，
其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
12.如权利要求10所述的抗体，其中所述抗体包含VL CDR2、VL CDR3、VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，其具有如权利要求11的部分(i)至(xii)中任一项一起定义的氨基酸序列。
13.如权利要求1至12中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含：
(a)具有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1，
(b)具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VH CDR2，和
(c)具有SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH CDR3；并且
其中所述轻链可变区包含：
(d)具有SEQ ID NO:80的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1，
(e)具有SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL CDR2，和
(f)具有SEQ ID NO:82的氨基酸序列的VL CDR3。
14.如权利要求1至13中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中
(i)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:76的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:75的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(ii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:58的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(iii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:40的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:39的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(iv)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:102的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(v)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:122的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:121的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(vi)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:142的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:141的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(vii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:162的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:161的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(viii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:182的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:181的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(ix)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:202的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:201的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(x)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:222的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:221的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xi)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:242的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:241的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:262的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:261的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xiii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:282的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:281的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xiv)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:302的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:301的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xv)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:322的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:321的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xvi)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:362的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:361的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；
(xvii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:382的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:381的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列；或
(xviii)所述轻链可变区具有SEQ ID NO:402的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:401的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列。
15.如权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ IDNO:343的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:344的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:345的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:346的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:347的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:348的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列，其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
16.如权利要求1至9或权利要求15中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区具有SEQ ID NO:342的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:341的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列。
17.如权利要求1至9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述重链可变区包含具有SEQ IDNO:423的氨基酸序列的可变重(VH)CDR1、具有SEQ ID NO:424的氨基酸序列的VH CDR2和具有SEQ ID NO:425的氨基酸序列的VH CDR3，或与其基本上同源的序列，和/或其中所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:426的氨基酸序列的可变轻(VL)CDR1、具有SEQ ID NO:427的氨基酸序列的VL CDR2和具有SEQ ID NO:428的氨基酸序列的VL CDR3，或与其基本上同源的序列，其中所述基本上同源的序列是与给定CDR序列相比含有1、2或3个氨基酸取代的序列，或所述基本上同源的序列是含有给定CDR序列的保守氨基酸取代的序列。
18.如权利要求1至9或权利要求17中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含至少一个含有三个CDR的重链可变区和至少一个含有三个CDR的轻链可变区，其中所述轻链可变区具有SEQ ID NO:422的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列，和/或其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:421的氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性的序列。
19.如权利要求1至18中任一项所述的抗体，其中所述抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。
20.如权利要求1至19中任一项所述的抗体，其中所述抗体是包含抗体恒定区的完整抗体。
21.如权利要求1至20中任一项所述的抗体，其中所述抗体是IgG抗体。
22.如权利要求1至19中任一项所述的抗体，其中所述抗体是抗体的抗原结合片段。
23.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1至22中任一项所述的抗体和稀释剂、载剂或赋形剂，优选地药学上可接受的稀释剂、载剂或赋形剂。
24.一种核酸分子，所述核酸分子包含编码如权利要求1至22中任一项所述的抗体的核苷酸序列，或一组核酸分子，所述一组核酸分子各自包含核苷酸序列，其中所述一组核酸分子一起编码如权利要求1至22中任一项所述的抗体。
25.一种产生如权利要求1至22中任一项所述的抗体的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)培养包含(i)一种或多种编码如权利要求1至22中任一项所述的抗体的核酸分子或(ii)一组核酸分子，所述一组核酸分子各自包含核苷酸序列，其中所述一组核酸分子一起编码如权利要求1至22中任一项所述的抗体，或(iii)在适合于所编码抗体表达的条件下，一种或多种重组表达载体，所述重组表达载体包含所述核酸分子的一种或多种；以及
(ii)从宿主细胞或从生长培养基/上清液中分离或获得所述抗体。
26.如权利要求1至22中任一项所定义的抗体用于疗法。
27.如权利要求1至22中任一项所定义的抗体用于疼痛疗法。
28.一种治疗疼痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的如权利要求1至22中任一项所定义的抗体。
29.如权利要求1至22中任一项所定义的抗体在制备用于疗法的药物中的用途。
30.如权利要求29所述的用途，其中所述疗法是治疗疼痛。
31.一种分离的肽，其中所述分离的肽如权利要求5至9中任一项所定义。
32.一种偶联物，所述偶联物包含如权利要求5至9中任一项所定义的分离的肽，以及肽载剂。
33.如权利要求32所述的偶联物，其中所述肽载剂是钥孔血蓝蛋白(KLH)、卵清蛋白(OVA)或牛血清白蛋白(BSA)。
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