KR20220122330A

KR20220122330A - 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법

Info

Publication number: KR20220122330A
Application number: KR1020210026822A
Authority: KR
Inventors: 김숙희; 조병태
Original assignee: (주)마이팜농업회사법인
Priority date: 2021-02-26
Filing date: 2021-02-26
Publication date: 2022-09-02
Also published as: KR102617383B1

Abstract

석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법이 제공된다. 상기 제조방법은, 100 중량부에 대해서 석류 농축액 60%, 마 농축액 1%, 둥굴레 농축액 1%, 가르시니아 캄보지아 추출물 6.95%, 피쉬콜라겐 5.5%, 푸드겔(혼합제제) 1.5%, 이소말토올리고당 19.2% 및 정제수 4.85%를 혼합하여 혼합물을 제조하는 혼합물제조단계; 상기 혼합물을 멸균시키는 멸균단계; 멸균된 상기 혼합물을 여과/충진하는 여과/충진단계; 및 여과/충진된 상기 혼합물을 진공포장하는 진공포장단계;를 포함할 수 있다.

Description

석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법 {ANTI-OBESITY COMPOSITION USING POMEGRANATE, DIOSCOREA RHIZOMA AND POLYGONATUM ODRATUM EXTRACT AS EFFECTIVE COMPONENT AND MANUFACTURING METHOD THEREOF}

본 발명은 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로 항비만의 효능이 우수한 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

생활환경이 고속화됨에 따라 그에 따른 식생활이 고칼로리 위주로 인스턴트화되어 비만증, 고혈압을 비롯하여 각종 성인병에 대한 보고가 급증하고 있다. 핵가족화, 개인주의화, 야간활동의 인구증가, 대중소비시대, 소비패턴의 다양화, 편리성 추구경향, 그리고 여성의 사회진출 증가 등의 사회경제적인 환경의 변화로 식생활 구조의 변화를 겪고 있다.

그리고 이러한 식사 구성에 대한 의식변화와 간편식에 대한 소비자의 요구 증가는 편의성을 추구하는 경향으로 나타나기 시작하였다. 그러나 이러한 현대인의 잘못된 식생활은 영양부족, 영양 과잉 및 잘못된 영양정보에 의한 영양불량을 초래하기 쉽다. 영양부족으로 인한 영양불량은 빈혈 등 여러 질병을 일으키게 되고 영양소의 과잉섭취는 체중 과다 및 비만을 유발하여 오늘날 보건문제로 대두하고 있을 뿐 아니라 동맥경화증, 당뇨병, 고혈압과 같은 만성 퇴행성 질환의 발병을 더욱 가중시키게 된다.

특히, 비만으로 인한 동맥경화, 고혈압, 심장질환, 당뇨병, 고지혈증 등 성인병발병의 증가 및 이로 인해 생기는 각종 암, 악성종양, 심장병, 신장병 등의 발병과 수명단축 등의 심각한 상태에 이르고 있다.

또한 식생활 습관이 질병과 매우 밀접한 관계가 있다는 과학적 증거가 속속 드러나면서 식생활을 포함한 생활양식의 변화를 통해 건강을 증진시키고자 하는 소비자들이 빠르게 늘어나고 있다. 이에 각종 질병을 예방하고 건강에 도움을 주기 위한 건강보조식품 및 기능성 식품에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.

상기의 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이미 알려진 종래기술에 해당함을 인정하는 것으로 받아들여서는 안될 것이다

대한민국 등록특허 10-2112599

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 과제들은 이상에서 언급된 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상술한 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법은, 100 중량부에 대해서 석류 농축액 60%, 마 농축액 1%, 둥굴레 농축액 1%, 가르시니아 캄보지아 추출물 6.95%, 피쉬콜라겐 5.5%, 푸드겔(혼합제제) 1.5%, 이소말토올리고당 19.2% 및 정제수 4.85%를 혼합하여 혼합물을 제조하는 혼합물제조단계; 상기 혼합물을 멸균시키는 멸균단계; 멸균된 상기 혼합물을 여과/충진하는 여과/충진단계; 및 여과/충진된 상기 혼합물을 진공포장하는 진공포장단계;를 포함할 수 있다

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 혼합물제조단계는, 60℃ 온도에서 균일하게 혼합하여 상기 혼합물을 제조하고, 상기 멸균단계는, 상기 혼합물을 90℃ 내지 100℃ 온도에서 20분 내지 40분 동안 고압 멸균하고, 상기 여과/충진단계는, 멸균된 상기 혼합물을 40mesh 이상으로 여과하여 충진할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 석류의 추출물, 마의 추출물 및 둥굴레의 추출물을 감압농축하여 농축액을 제조하는 농축액제조단계;를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물은 음료, 과립, 정제, 파우더, 환, 캡슐 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 형성할 수 있다.

또한, 상술한 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물은 상기 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 기타 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.

본 발명에 따르면, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용하여 조성물을 제조함으로써, 체중 감소 및 내장지방 감소에 의해 비만을 억제하여 항비만의 효능이 우수할 수 있다.

이와 더불어 가르시니아 캄보지아 추출물이 함유되어 탄수화물이 지방으로 합성되는 것으로 억제하여 체지방 감소에 효과적일 수 있다.

본 발명의 효과들은 이상에서 언급된 효과로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 제조하는 방법을 설명하기 위한 도면이다.
도 2 및 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 항산화능을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포독성을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 항비만을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 제한되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에게 본 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예들을 설명하기 위한 것이며 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다. 본 명세서에서, 단수형은 문구에서 특별히 언급하지 않는 한 복수형도 포함한다. 명세서에서 사용되는 "포함한다(comprises)" 및/또는 "포함하는(comprising)"은 언급된 구성요소 외에 하나 이상의 다른 구성요소의 존재 또는 추가를 배제하지 않는다. 명세서 전체에 걸쳐 동일한 도면 부호는 동일한 구성 요소를 지칭하며, "및/또는"은 언급된 구성요소들의 각각 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다. 비록 "제1", "제2" 등이 다양한 구성요소들을 서술하기 위해서 사용되나, 이들 구성요소들은 이들 용어에 의해 제한되지 않음은 물론이다. 이들 용어들은 단지 하나의 구성요소를 다른 구성요소와 구별하기 위하여 사용하는 것이다. 따라서, 이하에서 언급되는 제1 구성요소는 본 발명의 기술적 사상 내에서 제2 구성요소일 수도 있음은 물론이다.

다른 정의가 없다면, 본 명세서에서 사용되는 모든 용어(기술 및 과학적 용어를 포함)는 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에게 공통적으로 이해될 수 있는 의미로 사용될 수 있을 것이다. 또한, 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 용어들은 명백하게 특별히 정의되어 있지 않는 한 이상적으로 또는 과도하게 해석되지 않는다.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 상세하게 설명한다.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 제조하는 방법을 설명하기 위한 도면이다.

도 1에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물을 제조하는 방법은 재료준비단계(S10), 추출물제조단계(S20), 농축액제조단계(S30), 혼합물제조단계(S40), 멸균단계(S50), 여과/충진단계(S60) 및 진공포장단계(S70)를 포함할 수 있다. 이때, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물은 외부환경조건에 영향을 받지 않는 별도의 공간에서 제조 조건을 제어할 수 있는 장비가 구비된 챔버 내부에서 이루어질 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.

우선, 재료준비단계(S10)는 주재료인 석류, 마 및 둥굴레를 준비할 수 있다.

석류(Pomegranate, Punica granatum L)는 아시아 서남부, 인도 북서부 및 미국 캘리포니아의 자생 식물로서, 현재는 아열대 및 열대 각지에 널리 퍼져있는 식물이다. 예로부터 석류, 특히 적석류는 강장제로 알려져 왔으며, 특히 고혈압과 동맥경화 예방에 좋은 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다. 또한, 수용성 당질이 38 내지 47%로 다량 포함되어 있으며, 다양한 비타민과 미네랄을 포함한다.

본 발명에 이용되는 석류의 종류에는 특별한 제한은 없지만, 적석류가 바람직하며, 구체적인 예로 이란, 캘리포니아, 대만, 우즈베키스탄, 터키 및 한국산 적석류를 들 수 있다. 본 발명에 따른 석류 추출물은 이용된 석류의 산지 및 수확 시기 등에 따라 차이가 있을 수 있다.

또한, 마(Dioscorea rhizoma)는 외떡잎식물 백합목 마과(Dioscoreaceae)의 덩굴성 여러해살이풀로서, 지상부는 덩굴이며, 지하부 뿌리는 약용 및 식용으로 사용된다. 마는 한국, 중국 및 일본 등에 걸쳐 널리 분포하는 아열대성 식물이며, 일반적으로 줄기는 가늘고 길며 성기게 가지가 갈라지며, 잎은 마주나거나 돌려나는데 삼각형으로서 잎밑은 심장형이며 끝이 날카롭다. 잎자루는 길고, 잎겨드랑이에 둥근 싹이 있으며, 꽃은 6~7 월에 백색으로 피며, 암수딴꽃으로서 수상 꽃차례이다. 수꽃 꽃차례는 곧추서고 백색꽃이 많이 달리며 암꽃 꽃차례는 밑으로 처지고 몇 개의 암꽃이 달린다. 열매는 삭과로 3개의 날개가 있고 둥근 날개가 달린 종자가 들어 있다. 수확은 10월 말에서 11월에 하게 된다. 특히 경북지역은 백두대간과 낙동강을 아우르는 자연환경을 가지는 곳으로, 마가 지역 특산물로서 많이 생산되고 있다. 한편 국내에서 자생하는 종은 마(Dioscorea batatus Decne), 마(Dioscorea pposita Kunth), 둥근마(Dioscorea bulbifera L.), 참마(Dioscorea japonica Thunb.), 부채마(Dioscorea nipponica Makino), 단풍마(Dioscorea quinqueloba Thunb.), 국화마(Dioscorea septemloba Thunb.), 각시마(Dioscorea tenuipes Franch. & Sav.), 도꼬로마(Dioscorea tokoro Makino) 등 1속 9종이 자생하고 있다. 특히 국내에서 주로 분포·재배 되고 있는 마는 Dioscorea japonica와 Dioscorea batata(opposita) 두 종이 주를 이루고 있다. 또한 같은 둥근마라 명명하더라도 D. bulbifera는 덩이줄기(tuber)에 해당하는 부분이 대개 지상부에 달리며 크기가 작은데 반해 D. opposita는 지하부에 열리며 모 양이 다른 마에 비해 매우 둥글고 크기가 크다. 마는 주로 지하부가 식용 또는 약용으로 사용되는데, 특히 마(Dioscorea batatas Decne.) 또는 참마(D. japonica Thunb.)의 뿌리줄기의 주피를 벗기거나, 쪄서 말린 것을 산약(山藥)이라 한다. 마의 주요 성분으로는, 주요 성분으로는 전분(10~15%), 점액성 당단백질인 뮤신 외에도 약리활성을 나타내는 사포닌(saponin), 알란토닌(allantoin), 바타타신(batatasin), 콜린(choline) 및 이의 유도체 등을 함유하고 있다. 마의 경우 전분, 스테로이달 사포닌(steroidal saponin(dioscin, batatasin I-III)), 만난(mannan), 디오스코린(dioscorin), 아미노산(amino acid) 및 고점액성 당단백질 등을 포함한다. 참마의 경우 전분, 점액질(mucilage), 아밀라아제(amylase), 아르지닌(arginine), 콜린(choline), 알란토닌(allantoin), 디오스코란(dioscoran) 및 A-F 글리칸(glycan) 등을 포함한다. 마속 식물에서 항산화 활성을 나타내는 주요 성분으로는 저장성 단백질인 디오스코린(dioscorin), 점액질 다당류 및 다가페놀 등이 있다. 특히, 바타타신 유도체는 마속 식물에서 분리된 대표적인 성분 중 하나로 들 수 있는데, 이 중 특히 디하이드로스틸벤(dihydrostilbene) 모핵을 가진 성분은 세균이나 바이러스 등의 외부침입에 대항하기 위해 합성되는 2차 대사산물(phytoalexin)로 알려져 있으며, 상기와 같은 성분을 포함하는 마는 항산화, 위장관 기능강화, 항염증, 항진균/박테리아, 혈당강하, 항고지혈증, 항고혈압, 항암/세포독성, 인지기 능강화 및 항비만 작용이 보고되고 있다.

그리고, 둥굴레(Polygonatum odoratum)는 북반구 온대지방에서 자라는 백합과(Liliaceae) 둥 굴레속(Polygonatum)의 다년생 식물로, 흔히 전국 산야의 그늘이나 고산의 초원에서 30∼60 cm의 높이로 자라고 6∼7월경에 녹색 꽃이 피며 8월에 종자가 익는다. 우리나라를 비롯하여 러시아, 중국, 몽골에 주로 분포하며, 황무지의 비탈, 산지의 잡목이나 관목의 주변에서 자란다. 봄철에 어린잎과 뿌리를 식용으로 먹기도 하고, 한방 에서는 주로 강장이나 당뇨, 해소, 다한증, 다뇨증 등에 처방하며, 민간에서는 타박상에 뿌리줄기 날 것을 곱게 갈아 붙이기도 한다. 본 발명에서 둥굴레는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다. 둥굴레는 다양한 부위, 즉 잎, 줄기, 열매, 꽃, 씨, 뿌리 중 일부 또는 전부를 의미할 수 있고, 구체적으로는 뿌리를 의미할 수 있다. 이때, 둥굴레 줄기는 약리적으로 혈압과 심장, 혈당에 주로 작용한다. 둥굴레 줄기는 허약 체질, 폐결핵, 마른기침, 갈증에 좋으며, 심장을 튼튼하게 하므로 심장쇠약, 협심증 등 심장 질환이 있는 사람에게도 좋다. 또 식은땀과 원인 모르게 얼굴로 열이 오르면서 가슴이 답답하거나 수족에 열감이 있어 갑갑하게 느껴지는 사람, 노화방지에도 더불어 좋은 천연식품이다.

다음으로, 추출물제조단계(S20)는 준비된 재료를 이용하여 추출용매를 가해서 액상의 추출물을 제조할 수 있다. 여기서, 추출물은 석류, 마 및 둥굴레를 적절한 침출액으로 추출 처리하여 얻어지는 제제를 의미하는 것으로, 석류, 마 및 둥굴레의 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물, 이들의 혼합물 등 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함할 수 있다. 본 발명의 추출물은 석류, 마 및 둥굴레의 천연, 잡종 또는 변종 식물로부터 추출될 수 있고, 식물 조직 배양물로부터도 추출이 가능할 수 있다.

또한, 석류, 마 및 둥굴레의 추출물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 추출방법으로는 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있으며, 이들을 단독으로 수행하거나 2종 이상의 방법을 병용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

예를 들어, 석류 추출물은 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있다.

먼저 석류를 세척한 후, 껍질과 씨를 완전히 제거하고, 펙틴아제(pectinase), 프로테인아제(proteinase), 아밀라제, 셀룰라제 등의 효소를 첨가하여 석류에 포함되어 있는 전분 등 다당류를 분해할 수 있다. 이때, 본 실시예에서 석류 과피와 과씨를 포함하지 않은 석류 과육만을 이용한 추출물을 제공할 수 있다. 석류의 과피와 과씨는 부작용을 초래할 수 있는데, 예를 들면, 석류 과피에 포함된 특정 알칼로이드(alkaloid)는 신체 기능을 저하하는 작용을 하며, 호흡계와 근육에 영향을 미쳐, 중독되면 발작, 경련, 혼수 상태 등이 일어날 수 있다. 또한, 석류 과씨의 추출물 복용시 일부 사람에게서 알러지인 혀 부음(tongue swellin) 등의 부작용이 생길 수 있다.

다음, 선택적으로 젤라틴, 실리콘 디옥사이드, 벤 토나이트, 실리카솔(silicasol), 탄닌, 셀룰로오스, 칼륨 카제이네이트(casseinate) 등의 첨가제를 첨가하여 석류 추출물의 탁도, 색상, 점도 등을 조절하고, 가열 농축하여 석류 추출물을 제조할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 마 추출물 및 둥굴레 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획함으로써 제조할 수 있고, 추출용매는 당해 기술분야에서 공지된 임의의 용매를 사용할 수 있다.

이때, 추출 용매는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매 등을 사용할 수 있고, 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올이나, 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성 용매 또는 이들의 혼합용매를 사용할 수 있으며, 구체적으로 물(증류수)을 사용할 수 있다.

추출 온도는 60℃ 내지 120℃일 수 있고, 구체적으로 80℃ 내지 100℃일 수 있으며, 추출 시간은 2 내지 6시간일 수 있지만, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출은 수회 반복하여 수행될 수 있으며 예를 들어, 3회 반복할 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.

실시예에 따라, 석류, 마 및 둥굴레는 추출물은 분말로 제공될 수 있다. 예를 들어, 추출물은 동결건조 또는 분무건조 방식을 통해 분말형태로 얻을 수 있다.

다음으로, 농축액제조단계(S30)는 추출물을 감압농축하여 농축액을 제조할 수 있다.

예를 들어, 추출된 추출물을 여과한 후 농축하여 농축액을 제조할 수 있다. 이때, 농축액을 제조하는 단계는 진공감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.

다음으로, 혼합물제조단계(S40)는 추출된 석류, 마 및 둥굴레의 추출물을 혼합할 수 있다. 이때, 본 발명의 일실시예에 따른 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물은 가르시니아 캄보지아(Garcinia cambogia) 추출물을 함유할 수 있다.

여기서, 가르시니아 캄보지아(Garcinia cambogia)는 클루시아과(Clusiaceae)의 식물로서 열매의 껍질 부위를 사용하며, 껍질에는 탄수화물이 지방으로 저장되는 것을 억제하는 기능이 있는 하이드록시시트르산(Hydroxycitric acid, HCA)이 풍부하게 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 가르시니아 캄보지아 추출물은 탄수화물이 지방으로 합성되는 것을 억제함으로써 석류 추출물과 함께 시너지 효과를 가져 항염증 및 항비만 기능성을 더욱 향상시킬 수 있다. 가르시니아 캄보지아 추출물은 가르시니아 캄보지아 열매의 껍질로부터 추출한다. 추출방법은 상술한 석류, 마 및 둥굴레 추출물의 추출방법과 동일하므로 구체적인 설명은 생략한다.

본 실시예에서, 가르시니아 캄보지아 추출물, 석류 농축액, 마 농축액, 둥굴레 농축액, 피쉬콜라겐, 푸드겔(혼합제제), 이소말토올리고당 및 정제수를 60℃ 온도에서 균일하게 혼합하여 혼합물을 제조할 수 있다.

예를 들어, 100 중량부에 대해서 가르시니아 캄보지아 추출물 6.95%, 석류 농축액 60%, 마 농축액 1%, 둥굴레 농축액 1%, 피쉬콜라겐 5.5%, 푸드겔(혼합제제) 1.5%, 이소말토올리고당 19.2% 및 정제수 4.85%를 혼합하여 혼합물을 제조할 수 있다. 이때, 석류 농축액의 브릭스(brix)는 64이고, 마 농축액은 흑마 농축액으로 브릭스(brix)가 10일 수 있지만, 이에 한정하지 않는다.

이때, 이소말토올리고당 대신 당으로는 글루코스(glucose)와 같은 단당류, 락토오스(lactose) 또는 수크로스(sucrose)와 같은 이당류 등을 사용할 수 있다.

다음으로, 멸균단계(S50)는 제조된 혼합물을 살균할 수 있다.

구체적으로, 혼합물을 90℃ 내지 100℃ 온도에서 20분 내지 40분 동안 고압 멸균할 수 있다.

실시예에 따라, 혼합물을 오토클레이브(autoclave)에 투입하여 121℃, 1.2기압에서 10 내지 20분간 멸균처리한다. 이때, 멸균된 혼합물은 무균상 내에서 방랭시킬 수 있다.

이와 달리, 저온에서 예를 들어, 50℃온도에서 15~30초동안 살균할 수 있다.

이에 따라, 혼합물을 열처리하여 영양성분의 파괴를 최소화하면서 미생물을 살균할 수 있다.

다음으로, 여과/충진단계(S60)는 멸균된 혼합물을 여과하여 충진할 수 있다.

구체적으로, 멸균된 혼합물을 40mesh 이상으로 여과하여 충진할 수 있다.

예를 들어, 혼합물을 여과기를 이용하여 불순물을 제거할 수 있다.

마지막으로, 진공포장단계(S70)는 혼합물을 소정단위로 밀봉 압착하여 진공 포장할 수 있다.

이하, 대조군과 실시예의 실험 결과를 통하여 혼합물의 폴리페놀 함량과 항비만(전지방분화억제능)을 설명한다.

<폴리페놀함량 실험>

총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis 방법(1915)을 변형하여 정량하였다. 시료 0.1ml에 Folin-Ciocalteu‘s phenol reagent 0.1ml을 가하고 0.75M Na2CO3 1ml을 가하여 혼합한 후 1시간 실온에서 방치하고, 750nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도 측정 후 표준물질인 tannic acid로 미리 작성한 표준곡선의 흡광도 값과 비교하여 폴리페놀 함량을 산출하였다.

천연 식물 자원의 페놀성 화합물은 단순한 페놀류를 비롯하여 플라보노이드, phenylprophanoid류, phenolic acid로 구성되어 있으며, 천연 식물 자원의 항산화, 항암, 항균 등의 효능은 대부분 페놀성 화합물로부터 기인된다고 알려져 있다. 흑마 추출물(70% EtOH) 및 석류, 둥굴레 추출물 및 혼합 시료에 대한 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 표 1을 참조하면, 측정 결과 흑마 추출물(대조군 1) 및 석류 농축액(대조군 2), 둥굴레 추출물(대조군 3)에서는 각각 27.21mg/g, 18.85mg/g, 12.85mg/g 로 측정이 되었다. 이에 따라 혼합 시료는 흑마, 석류의 혼합시료(대조군 4)는 46.50mg/g으로 측정이 되었으며, 석류, 흑마, 둥굴레 추출물 혼합시료는 66.83mg/g 로 측정되었다. 즉, 본 발명의 실시예인 석류, 흑마, 둥굴레 추출물 혼합시료의 폴리페놀 함량이 가장 높을 것을 알 수 있다.

항목		Total polyphenol content (mg/g)
대조군 1	흑마 70% EtOH 추출물	27.21±1.25
대조군 2	석류 농축액	18.85±0,41
대조군 3	둥굴레 농축액	12.85 ±0.25
대조군 4	흑마 + 석류	46.50±0.76
실시예	석류+흑마+둥굴레	66.83±1.21

<항산화능 실험_ABTs>

BTS radical 소거활성을 이용한 항산화력 측정은 Re(1999)에 의하여 시행하였다. 7mM ABTS와 2.45mM potasium persulfate를 최종농도로 혼합하여 실온인 암소에서 24시간 동안 방치하여 ABTs+를 형성시킨 후 734nm에서 흡광도가 0.70(0.02) 이 되도록 99% Ethanol로 희석하였다. 희석된 용액 100μL에 시료 50μL를 가하여 5분 동안 방치한 후 734nm에서 흡광도를 측정하였다

실험 결과, 항산화능 효능 검증을 위해 시료들의 ABTs 라디컬 소거능을 1000μg/mL 농도로 확인하였다.

구체적으로, 표 2 및 도 2를 참조하면 석류 농축액(대조군 2)의 경우 78.59%로 흑마(대조군 1), 석류(대조군 2), 둥굴레(대조군 3)의 단일 추출물 중에서 가장 높은 라디칼 소거능을 확인하였다. 또한 혼합 시료(대조군 4 및 실시예)의 경우 두 시료 모두 높은 라디칼 소거능이 측정되었다. 즉, 본 발명의 실시예인 석류, 흑마, 둥굴레 추출물 혼합시료의 라디칼 소거능이 가장 높을 것을 알 수 있다.

항목		Concentration(μg/mL)	Total polyphenol content (mg/g)
대조군 1	흑마 70% EtOH 추출물	1000	58.28±2.44
대조군 2	석류 농축액	1000	78.59±0.28
대조군 3	둥굴레 농축액	1000	39.30±1.42
대조군 4	흑마 + 석류	1000	98.14±0.68
실시예	석류+흑마+둥굴레	1000	97.95±0.48

<항산화능 실험_DPPH>

DPPH radical 소거 활성은 Bloi(1958)의 방법을 변형하여 측정하였다. 시료 100μL에 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) 용액 50μL를 가하여 10분간 반응시킨 뒤 517nm에서 흡광도 측정을 하였다. DPPH 항산화능은 시료첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 계산하였다.

실험 결과, 항산화능 효능 검증을 위해 시료들의 DPPH 라디컬 소거능을 1000μg/mL 농도로 확인하였다.

구체적으로, 표 3 및 도 3을 참조하면 마(대조군 1), 석류(대조군 2), 둥굴레(대조군 3) 추출물 중에서 석류 농축액(대조군 2)의 라디칼 소거능이 58.06% 로 가장 높게 측정되었다. 그리고 흑마와 석류 혼합 시료(대조군 4)는 77.68%, 흑마, 석류, 둥굴레 혼합시료(실시예)는 80.51% 의 라디칼 소거능을 확인하였다. 즉, 본 발명의 실시예인 석류, 흑마, 둥굴레 추출물 혼합시료의 라디칼 소거능이 가장 높을 것을 알 수 있다.

항목		Concentration(μg/mL)	Total polyphenol content (mg/g)
대조군 1	흑마 70% EtOH 추출물	1000	14.51±1.99
대조군 2	석류 농축액	1000	58.06±0.74
대조군 3	둥굴레 농축액	1000	15.39±4.40
대조군 4	흑마 + 석류	1000	77.68±0.45
실시예	석류+흑마+둥굴레	1000	80.51±0.21

<세포독성 실험>

Nitric oxide 생성량 측정에 사용될 농도 구간을 결정하기 위해 Mosmann(1983)의 방법을 이용하여 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay를 시행하였다. RAW264.7 cell을 96we-ll plate에 100μL의 DMEM 배지와 함께 하루 배양한 다음, 여러 농도의 추출물을 처리하여 24시간 배양하였다. 각 well에 5mg/mL 농도의 MTT 용액을 10μL씩 넣은 후 3시간 동안 배양하면서 환원반응을 유도하였으며, 100μL의 dimethyl sulfoxide(DMSO) 용액을 첨가하여 보라색의 formazan 결정을 완전히 용해하였다. 발색정도는 분광광도계를 이용하여 570nm에서 측정하였으며, 세포독성은 세포만 배양한 무처리군의 생존율 100%를 기준으로 약물처리군의 상대적인 세포 생존율을 계산하였다.

실험결과, 도 4를 참조하면 흑마 70% EtOH 추출물(대조군 1)외 시료 4종이 각 농도 별 3T3-L1 세포에 미치는 독성을 확인하기 위해 200μg/mL의 농도로 세포에 처리하였을 때 나타나는 생존율을 나타내었다. 200μg/mL 농도로 처리하였을 때 시료 모두 80% 이상의 세포 생존율을 나타내어 200μg/mL 이하의 농도에서 실험을 수행하였다.

<항비만 실험>

3T3-L1 cell의 분화 정도를 알아보기 위해 oil red-O로 염색하여 측정하였다. 분화된 세포를 관찰하기 위해서는 배양된 세포를 10% formalin/PBS로 5분간 실온에서 고정 한 후 이를 제거하고 60% isopropanol을 이용하여 1회 세척 후 말렸다. 다음 oil red-O를 30분 동안 넣고 염색한 후 증류수로 4번 세척하였는데 이때 증류수가 담긴 채로 fat droplets를 현미경으로 관찰하였다. 관찰 후 99% isopropanol을 넣고 180 rpm에서 10분간 녹인 뒤 520 nm에서 측정하였다.

전지방세포에 흑마 70% EtOH 추출물(대조군 1) 및 총 5개의 시료를 50, 100, 200 μg/mL의 농도로 처리하고 가르시니아 캄보지아 추출물의 지표성분인 HCA(hydroxycitric acid) 를 Positive control 설정하여 100μg/mL 처리하여 시료와 같이 세포분화유도 억제 및 지방분화 억제능을 확인하였다.

실험 결과, 도 5를 참조하면 지방분화 유도물질 처리군(MDI)의 지방분화능을 100%로 보았을 때 HCA는 40% 지방분화를 억제하였다.

한편, 성인남녀 20명을 체험군으로 하여 본 실시예에 의해 제조된 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물(실시예)과, 석류, 마 및 둥굴레가 함유되지 않는 항비만용 조성물(대조군)에 대한 관능검사를 실시하였다. 이때, 항비만도, 색상, 냄새, 맛 및 씹힙성이 좋은 경우 10점으로 기재하고 10점을 기준으로 낮은 점수일수록, 항비만도, 색상, 냄새, 맛 및 씹힙성이 낮을 수 있다. 이에 대한 결과는 표 4와 같다.

항목	색상	냄새	맛	씹힙성	종합적 기호도
실시예	8.9	8.0	8.1	7.5	8.125
대조군	4.1	2.5	4.7	5.5	4.2

구체적으로, 성인남녀 20명은 실시예와 대조군에 대하여 색상, 냄새, 맛 씹힙성이 월등히 우수하여 대조군에 비해 종합적 기호도가 높을 수 있다. 즉, 항비만용 조성물에 석류, 마 및 둥굴레가 함유됨으로써, 향미가 우수하며 항비만의 효과가 향상되어 전체적으로 선호도가 증가할 수 있다.

실시예에 따라, 본 발명은 상기 조성물 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양의 석류, 마 및 둥굴레 추출물을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 "약학적으로 허용가능한"이란, 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리 톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀루로즈, 메틸 셀 룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테 아레이트 및 광물유 등이 포함될 수 있다.

또한 상기 약학적 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 "약학적으로 유효한 양"이란, 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 갱년기 장애의 예방 및/또는 치료의 효과를 나타내기에 충분한 양을 말한다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 비경구적 투여 경로로는 예를 들어, 경피, 비강, 복강, 근육, 피하 또는 정맥 등의 여러 가지 경로가 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 갱년기 장애의 예방 및/또는 치료 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

또 다른 양태로, 본 발명은 상기 조성물 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 식품 조성물은 식품, 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health feed) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 천연 소재의 가공 형태를 포함한다. 상기 유형의 식품 조성물은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 다라 다양한 형태로 제조할 수 있다.

또 다른 양태로, 본 발명은 상기 조성물 중 어느 하나의 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 석류, 마 및 둥굴레 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명에 따른 화장료는 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데 이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

이상, 첨부된 도면을 참조로 하여 본 발명의 실시예를 설명하였지만, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 제한적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims

100 중량부에 대해서 석류 농축액 60%, 마 농축액 1%, 둥굴레 농축액 1%, 가르시니아 캄보지아 추출물 6.95%, 피쉬콜라겐 5.5%, 푸드겔(혼합제제) 1.5%, 이소말토올리고당 19.2% 및 정제수 4.85%를 혼합하여 혼합물을 제조하는 혼합물제조단계;
상기 혼합물을 멸균시키는 멸균단계;
멸균된 상기 혼합물을 여과/충진하는 여과/충진단계; 및
여과/충진된 상기 혼합물을 진공포장하는 진공포장단계;를 포함하는, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법.

제1항에 있어서,
상기 혼합물제조단계는,
60℃ 온도에서 균일하게 혼합하여 상기 혼합물을 제조하고,
상기 멸균단계는,
상기 혼합물을 90℃ 내지 100℃ 온도에서 20분 내지 40분 동안 고압 멸균하고,
상기 여과/충진단계는,
멸균된 상기 혼합물을 40mesh 이상으로 여과하여 충진하는, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법.

제1항에 있어서,
석류의 추출물, 마의 추출물 및 둥굴레의 추출물을 감압농축하여 농축액을 제조하는 농축액제조단계;를 더 포함하는, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법.

제1항에 있어서,
상기 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물은 음료, 과립, 정제, 파우더, 환, 캡슐 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 형성되는, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물 제조방법.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 기재된 방법에 따라 제조된, 석류, 마 및 둥굴레의 혼합 추출물을 이용한 항비만용 조성물.